Родственные заявки
[001] Настоящая заявка заявляет приоритет и преимущество относительно Временных заявок США №№ 61/474825, поданной 13 апреля 2011 года, и 61/505676 поданной 08 июля 2011 года, полное содержание каждой из этих заявок включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей их полноте.
Включение посредством ссылки Перечня последовательностей
[002] Содержание текстового файла под названием "41478508001WOST25.txt", который был создан 28 марта 2012 года и имеет размер 2 KB, включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.
Предпосылки изобретения
[003] В эукариотических клетках ДНК упакована с гистонами с образованием хроматина. Изменения в упорядоченной структуре хроматина может привести к изменениям транскрипции связанных с этим генов. Контроль изменений в структуре хроматина (и, следовательно, транскрипции) опосредован ковалентными модификациями в гистонах, особенно их N-концевых участков. Эти модификации часто называют эпигенетическими, поскольку они могут привести к наследственным изменениям генной экспрессии, но не влияют на последовательность ДНК как таковую. Ковалентные модификации (например, метилирование, ацетилирование, фосфорилирование и убихитинирование) боковых цепей аминокислот являются ферментативно опосредованными. Селективное присоединение метильных групп к специфическим аминокислотным сайтам на гистонах контролируется действием уникального семейства ферментов, известных как гистон-метилтрансферазы (HMTs).
[004] Организованное собрание биохимических систем, стоящее за регуляцией транскрипции, должно строго контролироваться для оптимальных процессов клеточного роста и дифференциации. Болезненные состояния возникают, когда эти контроли прерываются путем аберрантной экспрессии и/или активности ферментов, ответственных за модификацию ДНК и гистона. Что касается раковых заболеваний человека, например, постоянно увеличивается число доказательств, говорящих о том, что нарушение регуляции активности эпигенетических ферментов способствует неконтролируемой клеточной пролиферации, ассоциируемой с раком, а также другими связанными с раком фенотипами, такими как повышенная клеточная миграция и инвазия. Помимо рака, растет число доказательств, подтверждающих роль эпигенетических ферментов в ряде других заболеваний человека, включая метаболические заболевания (такие как диабет), воспалительные заболевания (такие как болезнь Крона), нейродегенеративные заболевания (такие как болезнь Альцгеймера) и сердечно-сосудистые заболевания. Поэтому селективная модуляция аберрантного действия эпигенетических ферментов может быть многообещающей для лечения целого ряда заболеваний.
[005] Известно, что белки Polycomb группы (PcG) и Trirorax группы (trxG) являются частью клеточной системы памяти. См., например, Francis et al. (2001) Nat Rev Mol Cell Biol 2:409-21 и Simon et al. (2002) Curr Opin Genet Dev 12:210-8. Как правило, PcG белки являются транскрипционными репрессорами, которые поддерживают "выключенное состояние", и trxG белки являются транскрипционными активаторами, которые поддерживают "включенное состояние". Поскольку члены PcG и trxG белков обладают присущей им гистон-метилтрансферазной (HMTase) активностью, PcG и trxG белки могут участвовать в клеточной памяти через метилирование гистонов ядра. См., например, Beisel et al. (2002) Nature 419:857-62; Cao et al. (2002) Science 298:1039-43; Czermin et al. (2002) Cell 111:185-96; Kuzmichev et al. (2002) Gene Dev 16:2893-905; Milne et al. (2002) Mol Cell 10:1107-17; Muller et al. (2002) Cell 111:197-208; и Nakamura et al. (2002) Mol Cell 10:1119-28.
[006] Биохимические и генетические исследования подтвердили, что PcG белки дрозофилы функционируют в по меньшей мере двух разных белковых комплексах, Polycomb репрессивном комплексе 1 (PRCl) и ESC-E(Z) комплексе (также известный как Polycomb репрессивный комплекс 2 (PRC2)). Otte et al. (2003) Curr Opin Genet Dev 13:448-54. Исследования дрозофилы показали, что ESC-E(Z)/EED-EZH2 (т.е. PRC2) комплексы обладают присущей им гистон-метилтрансферазной активностью. Хотя композиции комплексов, обособленных различными группами, слегка различаются, они, как правило, содержат EED, EZH2, SUZ12 и RbAp48 или их дрозофиловые гомологи. Однако реструктурированный комплекс, включающий только EED, EZH2 и SUZ12, сохраняет гистон-метилтрансферазную активность для лизина 27 гистона H3. Патент США № 7563589.
[007] Из различных белков, составляющих PRC2 комплексы, EZH2 (Энхансер Zeste Гомолога 2) является каталитической субъединицей. Каталитический сайт EZH2, в свою очередь, присутствует в SET домене, который содержит мотив с высококонсервативной последовательностью (получил название от Su(var)3-9, Энхансер Zeste, Trirorax), который обнаружен в некоторых хроматин-ассоциированных белках, включая членов как Trirorax группы, так и Polycomb группы. SET домен является характерным для всех известных гистон-лизин-метилтрансфераз, за исключением H3-K79 метилтрансферазы DOT1.
[008] В дополнение к сайленсингу Hox гена, было показано, что PRC2-опосредованное метилирование гистона H3-K27 участвует в X-инактивации. Plath et al. (2003) Science 300:131-5; Silva et al. (2003) Dev Cell 4:481-95. Рекрутинг PRC2 комплекса к Xi и последующее триметилирование на гистоне H3-K27 происходит в ходе стадии инициации X-инактивации и зависит от Xist РНК. Кроме того, было обнаружено, что EZH2 и ассоциированная с ним гистон H3-K27 метилтрансферазная активность дифференцированно маркируют плюрипотентные эпибластные клетки и дифференцированную трофэктодерму и согласуются с ролью EZH2 в поддержании моделей эпигенетической модификации плюрипотентных эпибластных клеток, Cre-опосредованная делеция EZH2 приводит к потере метилирования гистона H3-K27 в клетках. Erhardt et al. (2003) Development 130:4235-48). Кроме того, исследования в клеточных линиях и тканях рака предстательной железы и молочной железы выявили сильную взаимозависимость между уровнями EZH2 и SUZ12 и инвазивностью этих типов рака, указывающую на то, что дисфункция PRC2 комплекса может способствовать развитию рака. Bracken et al. (2003) EMBOJ22:5323-35; Kirmizis et al. (2003) Mol Cancer Ther 2:113-21; Kleer et al. (2003) Proc Natl Acad Sci USA 100:11606-11; Varambally et al. (2002) Nature 419:624-9.
[009] Недавно было сообщение о том, что соматические мутации тирозина 641 (Y641C, Y641F, Y641N, Y641S и Y641H; иногда также указываемые как Y646C, Y646F, Y646N, Y646S и Y646H, соответственно) EZH2 связаны с фолликулярной лимфомой (FL) и В-клеточно-подобным (GCB) подтипом диффузной крупно-B-клеточной лимфомы (DLBCL) герминативного центра. Morin et al. (2010) Nat Genet 42:181-5. Во всех случаях, было обнаружено, что возникновение мутантного EZH2 гена является гетерозиготным, и экспрессию как дикого типа, так и мутантных аллелей определяли в мутантных образцах, профилированных методом транскриптомного секвенирования. Также было продемонстрировано, что все из мутантных форм EZH2 могут быть включены в мультибелковый PRC2 комплекс, но что образованные таким образом комплексы не обладают способностью катализировать метилирование H3-K27 эквивалентого остатка пептидного субстрата. Следовательно, было сделано заключение, что связанные с заболеванием изменения в Tyr641 EZH2 приводят к потере функции что касается EZH2-катализируемого H3-K27 метилирования.
Краткое описание изобретения
[010] В одном аспекте, настоящее изобретение раскрывает замещенное бензольное соединение формулы (I), представленной ниже, или его фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир.
В этой формуле:
X1 представляет собой N или CR11;
X2 представляет собой N или CR13;
X3 представляет собой N или C, и когда X3 представляет собой N, R6 отсутствует;
Z представляет собой NR7R8, OR7, S(O)aR7, или CR7R8R14, где a имеет значение 0, 1 или 2;
каждый из R1, R5, R9 и R10, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-С1-С6алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
каждый из R2, R3 и R4, независимо, представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T1 представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, азидо или RS1, где RS1 представляет собой C1-C3 алкил, С2-С6 алкенил, C2-C6 алкинил, С1-С6 алкоксил, C(O)O-С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, оксо, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R6 представляет собой H, галоген, циано, азидо, ORa, -NRaRb, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)bRa, -S(O)bNRaRb или RS2, где RS2 представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-C8 циклоалкил или 4-12-членный гетероциклоалкил; b имеет значение 0, 1 или 2; каждый из Ra и Rb, независимо представляет собой H или RS3, и RS3 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, C2-C6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из RS2, RS3 и 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -C(O)NRcRd, -NRdC(O)Rc, -NRdC(O)ORc, -S(O)2RC, -S(O)2NRcRd или RS4, где каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или RS5, каждый из RS4 и RS5, независимо, представляет собой C1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из RS4, RS5 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Rc и Rd, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или С1-С3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T3 выбран из группы, состоящей из галогена, циано, С1-С6 алкила, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила, 5- или 6-членного гетероарила, ORe, COORe, -S(O)2Re, -NReRf и -C(O)NReRf, где каждый из Re и Rf независимо представляет собой H или С1-С6 алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или -Q2-T2 представляет собой оксо;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4 алкильный линкер или C2-C4 алкенильный линкер, где каждый линкер необязательно замещен галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T4 представляет собой H, галоген, циано, NRgRh, -ORg, -C(O)Rg, -C(O)ORg, -C(O)NRgRh, -C(O)NRgORh, -NRgC(O)Rh, -S(O)2Rg, или RS6, где каждый из Rg и Rh, независимо, представляет собой H или RS7, каждый из RS6 и RS7, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-14-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и каждый из RS6 и RS7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2 или C1-C3 алкильный линкер, где Rk представляет собой H или С1-С6 алкил, и T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)qRq, где q имеет значение 0, 1 или 2, и Rq представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T5 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q5-T5 представляет собой оксо;
каждый из R8, R11, R12 и R13, независимо, представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, RS8, ORS8, или COORS8, где RS8 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, или ди-С1-С6 алкиламино, и RS8 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино и ди-С1-С6 алкиламино; или R7 и R8, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, или R7 и R8, вместе с C атомом, с которым они связаны, образуют C3-C8 циклоалкил или 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, и каждый из 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца или С3-C8 циклоалкила, который образуют R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6, где Q6 представляет собой связь, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2 или С1-С3 алкильный линкер, где Rm представляет собой H или С1-С6 алкил, и T6 представляет собой H, галоген, С,-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)PRP, где p имеет значение 0, 1 или 2, и Rp представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, C2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и Т6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T6 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q6-Т6 представляет собой оксо; и
R14 отсутствует или представляет собой H или C1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
при условии, что соединение не может представлять собой
N-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)фуран-2-карбоксамид,
N,N'-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-1,3-фенилен)диацетамид,
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-пиваламидобензамид,
3-(3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-сульфонамидо)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамид,
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,5-диметоксибензамид,
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,4,5-триметоксибензамид,
3-аллил-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4,5-диметоксибензамид,
4-(2-амино-2-оксоэтокси)-3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метоксибензамид,
3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-гидрокси-5-метоксибензамид или
3-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метокси-4-пропоксибензамид.
[011] В другом аспекте, настоящее изобретение раскрывает замещенное бензольное соединение формулы (I), представленной выше, или его фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир, где
X1 представляет собой N или CR11;
X2 представляет собой N или CR13;
X3 представляет собой N или С, и когда X3 представляет собой N, R6 отсутствует;
Z представляет собой NR7R8, OR7, S(O)aR7, или CR7R8R14, где a имеет значение 0, 1 или 2;
каждый из R1, R5, R9 и R10, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-C1-С6 алкиламино, ди-C1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
каждый из R2, R3 и R4, независимо, представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T1 представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, азидо, или RS1, где RS1 представляет собой С1-С3 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, С1-С6 алкоксил, C(O)O-С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, C6-C10 арил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, оксо, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R6 представляет собой H, галоген, циано, азидо, -NRaRb, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)bRa, -S(O)bNRaRb, или RS2, где RS2 представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, С2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил или 4-12-членный гетероциклоалкил, b имеет значение 0, 1 или 2, каждый из Ra и Rb, независимо представляет собой H или RS3, и RS3 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из Rs2, RS3 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или С1-С3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -C(O)NRcRd, -NRdC(O)Rc, -NRdC(O)ORc, -S(O)2RC, -S(O)2NRcRd или RS4, где каждый из Rc и Rd, независимо представляет собой H или RS5, каждый из RS4 и RS5, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, С3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из RS4, RS5 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Rc и Rd, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или С1-С3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T3 выбран из группы, состоящей из галогена, циано, С1-С6 алкила, С3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила, 5- или 6-членного гетероарила, ORe, COORe, -S(O)2Re, -NReRf и -C(O)NReRf, где каждый из Re и Rf независимо представляет собой H или С1-С6 алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или -Q2-T2 представляет собой оксо;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4 алкильный линкер или C2-C4 алкенильный линкер, где каждый линкер необязательно замещен галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T4 представляет собой H, галоген, циано, NRgRh, -ORg, -C(O)Rg, -C(O)ORg, -C(O)NRgRh, -C(O)NRgORh, -NRgC(O)Rh, -S(O)2Rg, или RS6, где каждый из Rg и Rh, независимо представляет собой H или RS7, каждый из RS6 и RS7, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-14-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и каждый из RS6 и RS7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, или С1-С3 алкильный линкер, где Rk представляет собой H или С1-С6 алкил, и T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)qRq, где q имеет значение 0, 1 или 2, и Rq представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C1-С6 алкила, гидроксила, циано, C1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T5 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q5-T5 представляет собой оксо; при условии, что (i) R7 является отличным от C(O)Rg или -S(O)2Rg, когда Z представляет собой NR7R8; (ii) R7 является отличным от С1-С6 алкила, когда Z представляет собой OR7, и (iii) R7 является отличным от H;
каждый из R8, R11, R12 и R13, независимо, представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, RS8, ORS8, или COORS8, где RS8 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, амино, моно-С1-С6 алкиламино или ди-С1-С6 алкиламино, и RS8 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино и ди-С1-С6 алкиламино; или R7 и R8, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, или R7 и R8, вместе с C атомом, с которым они связаны, образуют С3-C8 циклоалкил или 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, и каждый из 4-12-членных гетероциклоалкильных колец или С3-C8 циклоалкила, которые образуют R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими-Q6-Т6, где Q6 представляет собой связь, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2, или С1-С3 алкильный линкер, где Rm представляет собой H или С1-С6 алкил, и T6 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)PRP, где p имеет значение 0, 1 или 2, и Rp представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, C1-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда Т6 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q6-T6 представляет собой оксо; и
R14 отсутствует или представляет собой H или С1-С6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила.
[012] Одна подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (Ia):
[013] Другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (Ib), (Ic) или (Id):
[014] Еще одна подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (Ie), (II) или (IIA):
[015] Соединения формул (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (II) и (IIA) могут включать один или несколько из следующих отличительных признаков:
[016] X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой CR13.
[017] X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой N.
[018] X1 представляет собой N, и X2 представляет собой CR13.
[019] X1 представляет собой N и X2 представляет собой N.
[020] Z представляет собой NR7R8.
[021] Z представляет собой CR7R8R14.
[022] Z представляет собой OR7.
[023] Z представляет собой S(O)aR7, где a имеет значение 0, 1 или 2.
[024] Z представляет собой SR7.
[025] R6 представляет собой галоген, С1-С3 алкил, C2-C6 алкенил, C3-C6 циклоалкил, C(O)H или -C(O)Ra, где
Ra представляет собой C1-С6 алкил или 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил.
[026] R6 представляет собой 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2, где -Q2-T2 представляет собой оксо, или Q2 представляет собой связь и T2 представляет собой С1-С6 алкил, -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -S(O)2RC или 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
[027] -Q2-T2 является отличным от H.
[028] Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T3 выбран из группы, состоящей из С1-C3 алкила, ORe, -S(O)2Re или -NReRf.
[029] R6 представляет собой пиперидинил, 2,2,6,6-тетраметил-пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, 2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, морфолинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил или пирролидинил.
[030] R6 представляет собой F, Br или Cl.
[031] R7 является отличным от H.
[032] R7 представляет собой С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил или 4-14-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими-Q5-T5.
[033] R7 представляет собой пиперидинил, тетрагидропиран, тетрагидротиопиран, оксетанил, азетидинил, пирролидинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-3'-он-4-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-7'-он-4-ил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-3'-он-4-ил, 1-азаспиро[4.5]декан-2-он-8-ил, циклобутил, циклопентил или циклогексил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[034] T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил или 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил.
[035] Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил или 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил.
[036] Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой H, С1-С6 алкил, С3-C8 циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил, амино, моно-С1-С6 алкиламино или ди-С1-С6 алкиламино, при этом T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, С1-С6 алкоксила или C3-C8 циклоалкила.
[037] Q5 представляет собой CO, S(O)2, или NHC(O); и T5 представляет собой С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, C3-C8 циклоалкил или 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил.
[038] Q5 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T5 представляет собой H или С6-С10 арил.
[039] Q5 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T5 представляет собой C3-C8 циклоалкил, 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил или S(O)qRq.
[040] R11 представляет собой H.
[041] R7 представляет собой циклопентил или циклогексил, каждый из которых необязательно замещен одним -Q5-T5.
[042] Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собойС1-С6 алкил или С1-С6 алкокси.
[043] R7 представляет собой изопропил.
[044] Каждый из R2 и R4 независимо представляет собой С1-С3 алкил, необязательно замещенный С1-С6 алкоксилом.
[045] Каждый из R2 и R4 представляет собой метил.
[046] R1 представляет собой H.
[047] R12 представляет собой Н, метил, этил, этенил или галоген.
[048] R12 представляет собой метил.
[049] R12 представляет собой этил.
[050] R12 представляет собой этенил.
[051] R8 представляет собой Н, метил или этил.
[052] R8 представляет собой метил.
[053] R8 представляет собой этил.
[054] R8 представляет собой этенил или пропенил.
[055] R8 представляет собой 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил, такой как пиперидинил или тетрагидропиранил.
[056] Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют кольцо, выбранное из группы, состоящей из пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, азетидинила, пирролидинила, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ила, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканила и циклогексенила, каждый из которых необязательно замещен одним -Q6-T6.
[057] R13 представляет собой Н или метил.
[058] R13 представляет собой H.
[059] R3 представляет собой H.
[060] Z представляет собой NR7R8, OR7 или S(O)aR7; R1 представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из гидроксила, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино и С6-С10 арила; каждый из R2 и R4, независимо, представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из галогена и гидроксила, и T1 представляет собой H, галоген, или азидо; R3 представляет собой H или галоген; R5 представляет собой H или С1-С6 алкил; R6 представляет собой H, галоген, циано, азидо, ORa, -NRaRb, -C(O)NRaRb, -S(O)bRa или RS2; где RS2 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил или 4-12-членный гетероциклоалкил, и где каждый из Ra и Rb, независимо, представляет собой H, С1-С6 алкил, или 4-12-членный гетероциклоалкил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из Ra, RS2 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2; где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T2 представляет собой H, галоген, -ORC, -NRcRd, -C(O)ORC, или С1-С6 алкил, где каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или C1-С6 алкил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом и необязательно замещенное С1-С6 алкилом; R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или C1-C4 алкильный линкер, и T4 представляет собой H, С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, C(O)-С1-С6 алкил, С(О)-C3-C8 циклоалкил или 4-14-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5; R8 представляет собой H, С1-С6 алкил, необязательно замещенный галогеном, гидроксилом или С1-С6 алкоксилом, C2-C6 алкенил, C3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил; или R7 и R8, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, и 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, которое образуют R7 и R8, необязательно замещено одним или несколькими -Q6-T6; и R12 представляет собой галоген, С1-С6 алкоксил, или С1-С6 алкил, необязательно замещенный галогеном, или C2-C6 алкенил.
[061] R1 представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный один или несколько раз заместителем, выбранным из гидроксила, С1-С6 алкоксила и С6-С10 арила; R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или C1-C4 алкильный линкер, и T4 представляет собой С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, C(O)-С1-С6 алкил, C(O)-C3-C8 циклоалкил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил и оксетанил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из оксо и -Q5-T5; R8 представляет собой H или С1-С6 алкил, С1-С6 галогеналкил, С2-С6 алкенил или C3-C8 циклоалкил; и R12 представляет собой галоген, С1-С6 алкил, С1-С6 галогеналкил или С1-С6 алкоксил.
[062] Z представляет собой NR7R8 или SR7; R6 представляет собой H, галоген, циано, ORa, -C(O)NRaRb, -S(O)2Ra или RS2; где RS2 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил или 4-12-членный гетероциклоалкил, и где каждый из Ra и Rb, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из RS2 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2; где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T2 представляет собой H, галоген, -ORC, -NRcRd, -C(O)OC1-С6 алкил, или С1-С6 алкил, где каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом и 0 или 1 C1-С6 алкильный заместитель; R7 представляет собой С1-С6 алкил, С3-C8 циклоалкил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил и оксетанил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из оксо и -Q5-T5; и R12 представляет собой галоген или С1-С6 алкил.
[063] R2, R4 и R12, каждый независимо, представляют собой С1-С6 алкил, и R5 представляет собой H.
[064] R7 представляет собой циклогексил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил, оксетанил, 1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил, 1-оксаспиро[4.5]декан-8-ил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-4-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-4-ил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-4-ил или 1-азаспиро[4.5]декан-8-ил, каждый из которых замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[065] Z выбран из группы, состоящей из пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, азетидинила, пирролидинила, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ила, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ила и циклогексенила, каждый из которых необязательно замещен одним -Q6-T6.
[066] R6 представляет собой галоген, и Z представляет собой S(O)aR7, где a имеет значение 0, 1 или 2, и R7 представляет собой С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[067] R6 представляет собой галоген, и Z представляет собой OR7, где R7 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[068] R6 представляет собой -S(O)bRa или азидо, где b имеет значение 0, 1 или 2, и Ra представляет собой С1-С6 алкил или C3-C8 циклоалкил; и Z представляет собой NR7R8, где R7 представляет собой С3-C8 циклоалкил или 4-14-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5; и R8 представляет собой H или С1-С6 алкил.
[069] R6 представляет собой галоген, и Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, или С3-C8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q6-Т6.
[070] U представляет собой O, S, N-Q5-T5, или CH-Q5-T5.
[071] n имеет значение 0, 1 или 2.
[072] R12 представляет собой Cl, Br или метил.
[073] Один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
[074] U представляет собой CH-Q5-T5, и n имеет значение 0.
[075] Один или несколько -Q6-Т6 представляют собой оксо.
[076] Q6 представляет собой связь или C(O), и T6 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкокси.
[077] Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтические композиции, включающие один или несколько фармацевтически приемлемых носителей и одно или несколько соединений, выбранных из соединений любой из формул, описанных в настоящей заявке, и N-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)фуран-2-карбоксамида, N,N'-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-1,3-фенилен)диацетамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-пиваламидобензамида, 3-(3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-сульфонамидо)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,5-диметоксибензамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,4,5-триметоксибензамида, 3-аллил-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4,5-диметоксибензамида, 4-(2-амино-2-оксоэтокси)-3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метоксибензамида, 3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-гидрокси-5-метоксибензамида и 3-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метокси-4-пропоксибензамида.
[078] Другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ лечения или профилактики рака. Способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений, выбранных из соединений любой из формул, описанных в настоящей заявке, и N-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)фуран-2-карбоксамида, N,N'-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)- 1,3-фенилен)диацетамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-пиваламидобензамида, 3-(3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-сульфонамидо)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,5-диметоксибензамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,4,5-триметоксибензамида, 3-аллил-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4,5-диметоксибензамида, 4-(2-амино-2-оксоэтокси)-3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метоксибензамида, 3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-гидрокси-5-метоксибензамида и 3-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метокси-4-пропоксибензамида.
[079] Если не указано иное, любое описание способа лечения включает применение соединений для обеспечения такого лечения или профилактики, которые описаны в описании изобретения, а также применение соединений для получения лекарственного средства для лечения или профилактики такого состояния. Лечение включает лечение человека или других животных, включая грызунов и другие модели заболеваний.
[080] Например, способ включает стадию введения субъекту, у которого обнаружен рак с аберрантным H3-K27 метилированием, эффективного количества одного или нескольких соединений формул, описанных в настоящей заявке, где соединение (соединения) ингибирует активность гистон-метилтрансферазы EZH2, осуществляя, таким образом, лечение рака. Примеры аберрантного H3-K27 метилирования могут включать глобальное повышение и/или измененную дистрибуцию H3-K27 ди- или три-метилирования хроматина в раковых клетках.
[081] Например, рак выбран из группы, состоящей из типов рака, которые чрезмерно экспрессируют EZH2 или другие PRC2 субъединицы, содержат мутации, приводящие к потере функции, в H3-K27 деметилазах, такие как UTX, или чрезмерно экспрессируют дополнительные белки, такие как PHF19/PCL3, способные к повышению и/или изменению локализации EZH2 активности (см. ссылки в Sneeringer et al. Proc Natl Acad Sci USA 107(49):20980-5, 2010).
[082] Например, способ включает стадию введения субъекту, у которого обнаружен рак с чрезмерной экспрессией EZH2, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений формул, описанных в настоящей заявке, где соединение (соединения) ингибирует активность гистон-метилтрансферазы EZH2, осуществляя, таким образом, лечение рака.
[083] Например, способ включает стадию введения субъекту, у которого обнаружен рак с приводящей к потере функции мутацией в H3-K27 деметилазе UTX, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений формул, описанных в настоящей заявке, где соединение (соединения) ингибирует активность гистон-метилтрансферазы EZH2, осуществляя, таким образом, лечение рака.
[084] Например, способ включает стадию введения субъекту, у которого обнаружен рак с чрезмерной экспрессией дополнительного компонента (компонентов) PRC2, такого как PHF19/PCL3, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений формул, описанных в настоящей заявке, где соединение (соединения) ингибирует активность гистон-метилтрансферазы EZH2, осуществляя, таким образом, лечение рака.
[085] Еще в одном аспекте, настоящее изобретение относится к способу модуляции активности EZH2 дикого типа, каталитической субъединицы PRC2 комплекса, которая катализирует моно - три-метилирование лизина 27 на гистоне НЗ (НЗ-К27). Например, настоящее изобретение относится к способу ингибирования активности EZH2 в клетке. Этот способ можно осуществить либо in vitro, либо in vivo.
[086] В следующем аспекте, настоящее изобретение раскрывает способ ингибирования преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27 у субъекта. Способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений формул, описанных в настоящей заявке, для ингибирования активности гистон-метилтрансферазы EZH2, осуществляя, таким образом, ингибирование преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27 у субъекта.
[087] Например, способ включает стадию введения субъекту, у которого обнаружен рак, экспрессирующий Y641 мутант EZH2, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений формул, описанных в настоящей заявке, где соединение (соединения) ингибирует активность гистон-метилтрансферазы EZH2, осуществляя, таким образом, лечение рака.
[088] Например, рак выбран из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы и диффузной крупно-B-клеточной лимфомы (DLBCL) В-клеточно-подобного (GCB) подтипа герминативного центра. Например, рак представляет собой лимфому, лейкоз или меланому. Предпочтительно, лимфома представляет собой не-ходжкинскую лимфому, фолликулярную лимфому или диффузную крупно-B-клеточную лимфому. Альтернативно, лейкоз представляет собой хронический миелогенный лейкоз (CML), острый миелоцитарный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз или лейкоз смешанного происхождения.
[089] Предраковое состояние представляет собой миелодиспластические синдромы (MDS, ранее известные как пред-лейкоз).
[090] Например, рак представляет собой гематологический рак.
[091] Например, способ включает стадию введения субъекту, у которого обнаружен рак, экспрессирующий Y641 мутант EZH2, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений формул, описанных в настоящей заявке, где соединение (соединения) селективно ингибирует активность гистон-метилтрансферазы Y641 мутанта EZH2, осуществляя, таким образом, лечение рака.
[092] Например, способ дополнительно включает стадии осуществления анализа для определения Y641 мутанта EZH2 в образце, включающем раковые клетки от субъекта, у которого обнаружен рак.
[093] Еще в одном аспекте, настоящее изобретение относится к способу модуляции активности дикого типа и мутантной гистон-метилтрансферазы EZH2, каталитической субъединицы PRC2 комплекса, которая катализирует моно - три-метилирование лизина 27 на гистоне H3 (H3-K27). Например, настоящее изобретение относится к способу ингибирования активности определенных мутантных форм EZH2 в клетке. Мутантные формы EZH2 включают замену тирозина 641 (Y641, также Tyr641) EZH2 дикого типа другим аминокислотным остатком. Способ включает контактирование клетки с эффективным количеством одного или нескольких соединений любой из формул, описанных в настоящей заявке. Этот способ можно осуществить либо in vitro, либо in vivo.
[094] В следующем аспекте, настоящее изобретение раскрывает способ ингибирования преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27 у субъекта. Способ включает введение субъекту, у которого обнаружена экспрессия Y641 мутанта EZH2, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой из формул, описанных в настоящей заявке, для ингибирования активности гистон-метилтрансферазы EZH2, осуществляя, таким образом, ингибирование преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27 у субъекта. Например, активность гистон-метилтрансферазы, которую ингибируют, представляет собой активность Y641 мутанта EZH2. Например, соединение по настоящему изобретению селективно ингибирует активность гистон-метилтрансферазы Y641 мутанта EZH2. Например, Y641 мутант EZH2 выбран из группы, состоящей из Y641C, Y641F, Y641H, Y641N и Y641S.
[095] Способ ингибирования преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27 у субъекта также может включать осуществление анализа для определения Y641 мутанта EZH2 в образце, взятом у субъекта, до введения субъекту, у которого обнаружена экспрессия Y641 мутанта EZH2, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой из формул, описанных в настоящей заявке. Например, осуществление анализа для определения Y641 мутанта EZH2 включает ре-секвенирование полного генома или ре-секвенирование целевого участка, которое выявляет нуклеиновую кислоту, кодирующую Y641 мутант EZH2. Например, осуществление анализа для определения Y641 мутанта EZH2 включает контактирование образца с антителом, которое связывается специфическим образом с полипептидом или его фрагментом характерным для Y641 мутанта EZH2. Например, осуществление анализа для определения Y641 мутанта EZH2 включает контактирование образца в чрезвычайно жестких условиях с нуклеиновокислотным зондом, который гибридизуется с нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид или его фрагмент характерный для Y641 мутанта EZH2.
[096] Кроме того, изобретение также относится к способу идентификации ингибитора Y641 мутанта EZH2. Способ включает стадии объединения изолированного Y641 мутанта EZH2 с гистоновым субстратом, донором метильной группы, и испытываемым соединением, где гистоновый субстрат включает форму H3-K27, выбранную из группы, включающей неметилированный H3-K27, монометилированный H3-K27, диметилированный H3-K27 и любую их комбинацию; и осуществление анализа для определения метилирования H3-K27 (например, образования триметилированного H3-K27) в гистоновом субстрате, идентифицируя, таким образом, испытываемое соединение в качестве ингибитора Y641 мутанта EZH2, когда метилирование H3-K27 (например, образование триметилированного H3-K27) в присутствии испытываемого соединения меньше чем метилирование H3-K27 (например, образование триметилированного H3-K27) в отсутствие испытываемого соединения.
[097] В одном варианте воплощения, осуществление анализа для определения метилирования H3-K27 в гистоновом субстрате включает измерение включения меченых метильных групп.
[098] В одном варианте воплощения меченые метильные группы являются изотопно меченными метильными группами.
[099] В одном варианте воплощения, осуществление анализа для определения метилирования H3-K27 в гистоновом субстрате включает контактирование гистонового субстрата с антителом, которое специфически связывается с триметилированным H3-K27.
[0100] Также объемом настоящего изобретения охватывается способ идентификации селективного ингибитора Y641 мутанта EZH2. Способ включает стадии объединения изолированного Y641 мутанта EZH2 с гистоновым субстратом, донором метильной группы, и испытываемым соединением, где гистоновый субстрат включает форму H3-K27, выбранную из группы, включающей монометилированный H3-K27, диметилированный H3-K27 и комбинацию монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27, с образованием, таким образом, испытываемой смеси; объединения изолированного EZH2 дикого типа с гистоновым субстратом, донором метильной группы, и испытываемым соединением, где гистоновый субстрат включает форму H3-K27, выбранную из группы, включающей монометилированный H3-K27, диметилированный H3-K27 и комбинацию монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27, с образованием, таким образом, контрольной смеси; осуществление анализа для определения триметилирования гистонового субстрата в каждой из испытываемой смеси и контрольной смеси; расчет отношения (a) триметилирования с Y641 мутантом EZH2 и испытываемым соединением (M+) к (b) триметилированию с Y641 мутантом EZH2 без испытываемого соединения (M-); расчет отношения (c) триметилирования с EZH2 дикого типа и испытываемым соединением (WT+) к (d) триметилированию EZH2 дикого типа без испытываемого соединения (WT-); сравнения отношения (a)/(b) с отношением (c)/(d); и идентификации испытываемого соединения в качестве селективного ингибитора Y641 мутанта EZH2, когда отношение (a)/(b) меньше чем отношение (c)/(d).
[0101] Настоящее изобретение также обеспечивает способ идентификации субъекта в качестве кандидата для лечения одним или несколькими соединениями по настоящему изобретению. Способ включает стадии осуществления анализа для определения Y641 мутанта EZH2 в образце, взятом у субъекта; и идентификации субъекта, у которого обнаружена экспрессия Y641 мутанта EZH2, в качестве кандидата для лечения одним или несколькими соединениями по настоящему изобретению, где соединение (соединения) ингибирует активность гистон-метилтрансферазы EZH2.
[0102] Еще один аспект настоящего изобретения представляет собой способ ингибирования преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27. Способ включает стадию контактирования Y641 мутанта EZH2 с гистоновым субстратом, включающим H3-K27, и эффективным количеством соединения по настоящему изобретению, где соединение ингибирует активность гистон-метилтрансферазы EZH2, ингибируя, таким образом, преобразование H3-K27 в триметилированный H3-K27.
[0103] Кроме того, соединения или способы, описанные в настоящей заявке, можно использовать для исследовательских (например, для исследования эпигенетических ферментов) и других нетерапевтических целей.
[0104] Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящей заявке, имеют такое же значение, которое широко известно специалистам в области, к которой относится настоящее изобретение. В описании изобретения, формы единственного числа также включают множественное число, если из контекста явно не следует иное. Хотя способы и вещества, подобные или эквивалентные тем, которые описаны в настоящей заявке, можно использовать для практического осуществления или испытания настоящего изобретения, подходящие способы и вещества описаны ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылочные документы, указанные в настоящей заявке, включены посредством ссылки. Документы, на которые ссылаются в настоящей заявке, не признаны в качестве прототипов настоящего изобретения. В случае конфликта, настоящее описание, включая определения, имеют преимущество. Кроме того, вещества, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения.
[0105] Другие отличительные признаки и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующего подробного описания и формулы изобретения.
Краткое описание рисунков
[0106] Фиг. 1 (A) представляет идеализированный график клеточного счета (т.е. количества клеток) как функцию времени, показывающий экспоненциальную пролиферацию в log-фазе клеточного роста.
[0107] Фиг. 1(B) представляет идеализированный график ln(клеточного счета) как функцию времени для данных из панели (A).
[0108] Фиг. 2 представляет график, показывающий кривые бифазного клеточного роста в присутствии антипролиферативного соединения, где имеется задержка перед тем, как происходит воздействие соединения на клеточный рост. Соединение начинает влиять на клеточный рост в точке времени, помеченной как "начало воздействия". Заштрихованные кружки представляют идеализированные данные для контрольного образца с использованием носителя (или растворителя), которые не обрабатывали соединением. Другие символы представляют кривые бифазного роста для клеток, обработанных различными концентрациями соединения (т.е. лекарственного средства).
[0109] Фиг. 3 представляет перестроенный график kp как функцию концентрации соединения для (A) цитостатического и (B) цитотоксического соединения, иллюстрирующий графическое определение LCC для цитотоксического средства. Следует отметить, что для цитостатического соединения (панель A) значение kp никогда не может опускаться ниже нуля.
[0110] Фиг. 4 представляет диаграмму, показывающий рост опухолей у мышей с WSU-DLCL2 ксенотрансплантатом, которых обрабатывали Соединением 222 в течение 27 дней.
[0111] Фиг. 5 представляет диаграмму, показывающую lobal H3K27me3 метилирование в WSU-DLCL2 опухолях мышей, которых обрабатывали Соединением 222 или носителем в течение 27 дней.
Подробное описание изобретения
[0112] Настоящее изобретение обеспечивает новые замещенные бензольные соединения, способы синтеза для получения соединений, фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, и различные применения соединений.
1. Замещенные бензольные соединения
[0113] Настоящее изобретение обеспечивает соединения формулы (I):
В этой формуле:
X1 представляет собой N или CR11;
X2 представляет собой N или CR13;
X3 представляет собой N или C, и когда X3 представляет собой N, R6 отсутствует;
Z представляет собой NR7R8, OR7, S(O)aR7, или CR7R8R14, где a имеет значение 0, 1 или 2;
каждый из R1, R5, R9 и R10, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-С1-С6алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
каждый из R2, R3 и R4, независимо, представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T1 представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, азидо или RS1, где RS1 представляет собой C1-C3 алкил, С2-С6 алкенил, C2-C6 алкинил, С1-С6 алкоксил, C(O)O-С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, оксо, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R6 представляет собой H, галоген, циано, азидо, ORa, -NRaRb, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)bRa, -S(O)bNRaRb или RS2, где RS2 представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-C8 циклоалкил или 4-12-членный гетероциклоалкил; b имеет значение 0, 1 или 2; каждый из Ra и Rb, независимо представляет собой H или RS3, и RS3 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, C2-C6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из RS2, RS3 и 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -C(O)NRcRd, -NRdC(O)Rc, -NRdC(O)ORc, -S(O)2RC, -S(O)2NRcRd или RS4, где каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или RS5, каждый из RS4 и RS5, независимо, представляет собой C1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из RS4, RS5 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Rc и Rd, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или С1-С3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T3 выбран из группы, состоящей из галогена, циано, С1-С6 алкила, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила, 5- или 6-членного гетероарила, ORe, COORe, -S(O)2Re, -NReRf и -C(O)NReRf, где каждый из Re и Rf независимо представляет собой H или С1-С6 алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или -Q2-T2 представляет собой оксо;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4 алкильный линкер или C2-C4 алкенильный линкер, где каждый линкер необязательно замещен галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T4 представляет собой H, галоген, циано, NRgRh, -ORg, -C(O)Rg, -C(O)ORg, -C(O)NRgRh, -C(O)NRgORh, -NRgC(O)Rh, -S(O)2Rg, или RS6, где каждый из Rg и Rh, независимо, представляет собой H или RS7, каждый из RS6 и RS7, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-14-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и каждый из RS6 и RS7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2 или C1-C3 алкильный линкер, где Rk представляет собой H или С1-С6 алкил, и T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)qRq, где q имеет значение 0, 1 или 2, и Rq представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T5 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q5-T5 представляет собой оксо;
каждый из R8, R11, R12 и R13, независимо, представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, RS8, ORS8, или COORS8, где RS8 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, или ди-С1-С6 алкиламино, и RS8 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино и ди-С1-С6 алкиламино; или R7 и R8, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, или R7 и R8, вместе с C атомом, с которым они связаны, образуют C3-C8 циклоалкил или 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, и каждый из 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца или С3-C8 циклоалкила, который образуют R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6, где Q6 представляет собой связь, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2 или С1-С3 алкильный линкер, где Rm представляет собой H или С1-С6 алкил, и T6 представляет собой H, галоген, С,-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)PRP, где p имеет значение 0, 1 или 2, и Rp представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, C2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и Т6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T6 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q6-Т6 представляет собой оксо; и
R14 отсутствует или представляет собой H или C1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
при условии, что соединение не может представлять собой
N-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)фуран-2-карбоксамид,
N,N'-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-1,3-фенилен)диацетамид,
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-пиваламидобензамид,
3-(3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-сульфонамидо)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамид,
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,5-диметоксибензамид,
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,4,5-триметоксибензамид,
3-аллил-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4,5-диметоксибензамид,
4-(2-амино-2-оксоэтокси)-3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метоксибензамид,
3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-гидрокси-5-метоксибензамид или
3-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метокси-4-пропоксибензамид.
[0114] Например, X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой CR13.
[0115] Например, X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой N.
[0116] Например, X1 представляет собой N, и X2 представляет собой CR11.
[0117] Например, X1 представляет собой N, и X2 представляет собой N.
[0118] Например, X3 представляет собой С.
[0119] Например, Х3 представляет собой N, и R6 отсутствует.
[0120] Например, Z представляет собой NR7R8.
[0121] Например, Z представляет собой CR7R8R14.
[0122] Например, Z представляет собой OR7.
[0123] Например, Z представляет собой S(O)aR7, где a имеет значение 0, 1 или 2.
[0124] Например, Z представляет собой SR7.
[0125] Например, R6 представляет собой H.
[0126] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод).
[0127] Например, R6 представляет собой C1-C3 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
[0128] Например, R6 представляет собой CF3.
[0129] Например, R6 представляет собой С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, или С3-С8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
[0130] Например, R6 представляет собой этенил.
[0131] Например, R6 представляет собой этинил.
[0132] Например, R6 представляет собой этинил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T2 представляет собой С1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил и морфолинил и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
[0133] Например, R6 представляет собой азидо.
[0134] Например, R6 представляет собой циано.
[0135] Например, R6 представляет собой C(O)H.
[0136] Например, R6 представляет собой ORa или -C(O)Ra.
[0137] Например, Ra представляет собой С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), который необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
[0138] Например, R6 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
[0139] Например, R6 представляет собой пиперидинил, 2,2,6,6-тетраметил-пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, 2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, морфолинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, или пирролидинил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
[0140] Например, R6 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2, и -Q2-T2 представляет собой оксо, или Q2 представляет собой связь и T2 представляет собой -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -S(O)2RC, С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, когда Rc или Rd является отличным от H.
[0141] Например, R6 представляет собой -NRaRb, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -SRa, -S(O)2Ra или -S(O)2NRaRb.
[0142] Например, каждый из Ra и Rb, независимо представляет собой H, С1-С6 алкил или С3-C8 циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
[0143] Например, один из Ra и Rb представляет собой H.
[0144] Например, Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 гетероатом в дополнение к N атому (например, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q2-T2.
[0145] Например, -Q2-T2 является отличным от H.
[0146] Например, -Q2-T2 представляет собой оксо.
[0147] Например, Q2 представляет собой связь.
[0148] Например, Q2 представляет собой незамещенный C1-C3 алкильный линкер.
[0149] Например, T2 представляет собой С1-С6 алкил или С6-С10 арил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3.
[0150] Например, T2 представляет собой незамещенный, замещенный линейный C1-С6 или разветвленный С3-С8 алкил, включая но не ограничиваясь этим, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, втор-пентил и н-гексил.
[0151] Например, T2 представляет собой фенил.
[0152] Например, T2 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод).
[0153] Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
[0154] Например, T2 представляет собой -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC или -S(O)2RC.
[0155] Например, Rc представляет собой С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), который необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3.
[0156] Например, каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3
[0157] Например, Rc представляет собой H.
[0158] Например, Rd представляет собой H.
[0159] Например, Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 гетероатом в дополнение к N атому (например, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
[0160] Например, Q2 представляет собой связь, и T2 представляет собой -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -S(O)2RC, С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, когда Rc или Rd является отличным от H.
[0161] Напримепр, -Q3-T3 представляет собой оксо.
[0162] Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или С3-С8 циклоалкил, и один или несколько -Q3-T3 представляют собой оксо.
[0163] Например, Q3 представляет собой связь или незамещенный или замещенный C1-C3 алкильный линкер.
[0164] Например, T3 представляет собой H, галоген, 4-7-членный гетероциклоалкил, C1-C3 алкил, ORe, COORe, -S(O)2Re, -NReRf или -C(O)NReRf.
[0165] Например, один из Rd и Re представляет собой H.
[0166] Например, Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T3 выбран из группы, состоящей из C1-C3 алкила, галогена, ORe, -S(O)2Re, -NReRf и -C(O)NReRf.
[0167] Например, Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T3 выбран из группы, состоящей из C1-C3 алкила, ORe, -S(O)2Re или -NReRf.
[0168] Например, Re представляет собой H.
[0169] Например, Rf представляет собой H.
[0170] Например, R7 является отличным от H.
[0171] Например, R7 представляет собой -C(O)Rg.
[0172] Например, R7 представляет собой -C(O)Rg, где Rg представляет собой С3-С8 циклоалкил, или 4-7-членный гетероциклоалкил, С3-С8 циклоалкил.
[0173] Например, R7 представляет собой С6-С10 арил, замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0174] Например, R7 представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0175] Например, R7 представляет собой С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0176] Например, R7 представляет собой C3-C8 циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0177] Например, R7 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0178] Например, R7 представляет собой 8-14-членный гетероциклоалкил, такой как 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил (например, 1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил), 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил (например, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил), 1-оксаспиро[4.5]деканил (например, 1-оксаспиро[4.5]декан-8-ил или 1-оксаспиро[4.5]декан-2-он-8-ил), 1-азаспиро[4.5]деканил (например, 1-азаспиро[4.5]декан-8-ил или 1-азаспиро[4.5]декан-2-он-8-ил), 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил (например, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-4-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-3'-он-4-ил), 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил (например, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-4-ил или 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-7'-он-4-ил) или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил (например, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-4-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-3'-он-4-ил), каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0179] Например, R7 представляет собой 5-6-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0180] Например, R7 представляет собой изопропил.
[0181] Например, R7 представляет собой пирролидинил, пиперидинил, тетрагидропиран, циклопентил или циклогексил, циклогептил, каждый из которых необязательно замещен одним -Q5-T5.
[0182] Например, R7 представляет собой циклопентил или циклогексил, каждый из которых необязательно замещен одним -Q5-T5.
[0183] Например, Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкокси.
[0184] Например, -Q5-T5 представляет собой оксо.
[0185] Например, T4 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или С3-C8 циклоалкил или С6-С10 арил, и один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
[0186] Например, R7 представляет собой 1-оксид-тетрагидро-2H-тиопиранил или 1,1-диоксид-тетрагидро-2H-тиопиранил.
[0187] Например, R7 представляет собой циклогексанонил, например, циклогексанон-4-ил.
[0188] Например, T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0189] Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой С1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0190] Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой 5- или 6-членный гетероарил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, при этом T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, С1-С6 алкоксила или С3-С8 циклоалкила.
[0191] Например, Q5 представляет собой CO, S(O)2, или NHC(O); и T5 представляет собой С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0192] Например, T5 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкоксил, каждый из которых необязательно замещен галогеном, гидроксил, циано, C1-C6 алкоксилом, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, или С3-С8 циклоалкилом.
[0193] Например, Q5 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T5 представляет собой H или С6-С10 арил.
[0194] Например, Q5 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T5 представляет собой С3-С8 циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)qRq.
[0195] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой S(O)aR7, где a имеет значение 0, 1 или 2, и R7 представляет собой С1-С6 алкил (например, метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил, или трет-бутил), С3-С8 циклоалкил (например, циклопентил, циклогексил, или циклогептил) или 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил, или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0196] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой OR7, где R7 представляет собой 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил, или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0197] Например, R11 представляет собой H.
[0198] Например, каждый из R2 и R4, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный амино, азидо, галогеном, моно-С1-С6 алкиламино, ди-C1-С6 алкиламино или С6-С10 арилом.
[0199] Например, каждый из R2 и R4, независимо, представляет собой C1-C3 алкил, необязательно замещенный С1-С6 алкоксилом.
[0200] Например, каждый из R2 и R4 представляет собой метил.
[0201] Например, R1 представляет собой H.
[0202] Например, R1 представляет собой С1-С6 алкил, необязательно замещенный азидо, галогеном, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино или С6-С10 арилом.
[0203] Например, R12 представляет собой H, метил, этил, этенил или галоген.
[0204] Например, R12 представляет собой метил.
[0205] Например, R12 представляет собой этил или пропенил.
[0206] Например, R12 представляет собой метоксил.
[0207] Например, R12 представляет собой этенил.
[0208] Например, R8 представляет собой H, метил, этил, или этенил.
[0209] Например, R8 представляет собой метил.
[0210] Например, R8 представляет собой этил.
[0211] Например R8 представляет собой пропил.
[0212] Например, R8 представляет собой этенил или пропенил.
[0213] Например, R8 представляет собой С1-С6 алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (например, F, Cl, или Br), гидроксила или С1-С6 алкоксила.
[0214] Например, R8 представляет собой 4-7-членный, необязательно замещенный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил, и подобные).
[0215] Например, R8 представляет собой пиперидинил.
[0216] Например, R8 представляет собой 4-7-членный, необязательно замещенный гетероциклоалкил, и R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или C1-C4 алкильный линкер, и T4 представляет собой H, С1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0217] Например, Z представляет собой NR7R8 или CR7R7R14, где R7 и R8, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, морфолинил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил и подобные), или С3-С8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6.
[0218] Например, кольцо, которое образуют R7 и R8, выбрано из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканила и циклогексенила, каждый из которых необязательно замещен одним -Q6-T6.
[0219] Например, Z представляет собой 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил, пирролидин-2,5-дион-1-ил или пиперидин-2,6-дион-1-ил.
[0220] Например, один или несколько -Q6-T6 представляют собой оксо.
[0221] Например, Т6 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, С3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0222] Например, Q6 представляет собой связь, и T6 представляет собой С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0223] Например, Q6 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T6 представляет собой С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, C3-C% циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0224] Например, Т6 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкоксил, каждый из которых необязательно замещен галогеном, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксилом, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино или С3-C8 циклоалкилом.
[0225] Например, Q6 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и Т6 представляет собой H или С6-С10 арил.
[0226] Например, Q6 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и Т6 представляет собой C3-C8 циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)PRP.
[0227] Например, каждый из Rp и Rq, независимо, представляет собой С1-С6 алкил.
[0228] Например, R6 представляет собой -S(O)bRa или азидо, где b имеет значение 0, 1 или 2, и Ra представляет собой С1-С6 алкил или С3-C8 циклоалкил; и Z представляет собой NR7R8, где R7 представляет собой С3-C8 циклоалкил (например, циклопентил, циклогексил, или циклогептил) или 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил, или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5; и R8 представляет собой H или С1-С6 алкил (например, метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил ли трет-бутил).
[0229] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил, пирролидин-2,5-дион-1-ил, пиперидин-2,6-дион-1-ил и подобные), или С3-С8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6.
[0230] Например, R13 представляет собой H или метил.
[0231] Например, R13 представляет собой H.
[0232] Например, R3 представляет собой H.
[0233] Например, каждый из R5, R9 и R10 представляет собой H.
[0234] В другом аспекте, настоящее изобретение раскрывает замещенное бензольное соединение формулы (I), представленной выше, или его фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир,
где X1 представляет собой N или CR1;
X2 представляет собой N или CR13;
X3 представляет собой N или C, и когда X3 представляет собой N, R6 отсутствует;
Z представляет собой NR7R8, OR7, S(O)aR7, или CR7R8R14, где a имеет значение 0, 1 или 2; каждый из R1, R5, R9 и R10, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
каждый из R2, R3 и R4, независимо, представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и Ti представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, азидо, или RS1, где RS1 представляет собой C1-C3 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, С1-С6 алкоксил, C(O)O-С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, C6-C10 арил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, оксо, COOH, C(O)O-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R6 представляет собой H, галоген, циано, азидо, ORa, -NRaRb, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)bRa, -S(O)bNRaRb или RS2, где RS2 представляет собой C1-C6 алкил, C2-C6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-С8 циклоалкил или 4-12-членный гетероциклоалкил; b имеет значение 0, 1 или 2, каждый из Ra и Rb, независимо, представляет собой H или RS3, и RS3 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из RS2, RS3 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -C(O)NRcRd, -NRdC(O)RC! -NRdC(O)ORc, -S(O)2RC, -S(O)2NRcRd или RS4, где каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или RS5, каждый из RS4 и RS5, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из RS4, RS5 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Rc и Rd, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T3 выбран из группы, состоящей из галогена, циано, С1-С6 алкила, С3-С8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила, 5- или 6-членного гетероарила, ORe, COORe, -S(O)2Re, -NReRf и -C(O)NReRf, где каждый из Re и Rf независимо представляет собой H или C1-С6 алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или -Q2-T2 представляет собой оксо;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4 алкильный линкер, или C2-C4 алкенильный линкер, где каждый линкер необязательно замещен галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T4 представляет собой H, галоген, циано, NRgRh, -ORg, -C(O)Rg, -C(O)ORg, -C(O)NRgRh, -C(O)NRgORh, -NRgC(O)Rh, -S(O)2Rg, или RS6, где каждый из Rg и Rh, независимо, представляет собой H или RS7, каждый из RS6 и RS7, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и каждый из RS6 и RS7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, или C1-C3 алкильный линкер, где Rk представляет собой H или С1-С6 алкил, и T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)qRq, где q имеет значение 0, 1 или 2, и Rq представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-С8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T5 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q5-T5 представляет собой оксо; при условии, что (i) R7 является отличным от C(O)Rg или -S(O)2Rg, когда Z представляет собой NR7R8; (ii) R7 является отличным от С1-С6 алкила, когда Z представляет собой OR7, и (iii) R7 является отличным от H;
каждый из R8, R11, R12 и R13, независимо, представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, RS8, ORS8, или COORS8, где RS8 представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, С2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, амино, моно-С1-С6 алкиламино или ди-С1-С6 алкиламино, и RS8 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино и ди-С1-С6 алкиламино; или R7 и R8, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, или R7 и R8, вместе с C атомом, с которым они связаны, образуют С3-C8 циклоалкил или 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, и каждый из 4-12-членных гетероциклоалкильных колец или С3-C8 циклоалкила, образованных указанными R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6, где Q6 представляет собой связь, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2, или C1-C3 алкильный линкер, где Rm представляет собой H или С1-С6 алкил, и T6 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)PRP, где p имеет значение 0, 1 или 2, и Rp представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, C2-С6 алкинил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, C1-C6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-С8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда Т6 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q6-Т6 представляет собой оксо; и
R14 отсутствует или представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-С8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила.
[0235] Например, X1 представляет собой CRn, и X2 представляет собой CR13.
[0236] Например, X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой N.
[0237] Например, X1 представляет собой N, и X2 представляет собой CR13.
[0238] Например, X1 представляет собой N, и X2 представляет собой N.
[0239] Например, X3 представляет собой С.
[0240] Например, X3 представляет собой N, и R6 отсутствует.
[0241] Например, Z представляет собой NR7R8.
[0242] Например, Z представляет собой CR7R8R14.
[0243] Например, Z представляет собой OR7.
[0244] Например, Z представляет собой S(O)aR7, где a имеет значение 0, 1 или 2.
[0245] Например, Z представляет собой SR7.
[0246] Например, R6 представляет собой H.
[0247] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод).
[0248] Например, R6 представляет собой C1-C3 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
[0249] Например, R6 представляет собой CF3.
[0250] Например, R6 представляет собой C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, или С3-С8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
[0251] Например, R6 представляет собой этенил.
[0252] Например, R6 представляет собой этинил.
[0253] Например, R6 представляет собой этинил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T2 представляет собой С1-С6 алкил, С3-С6 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил и морфолинил и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
[0254] Например, R6 представляет собой азидо.
[0255] Например, R6 представляет собой циано.
[0256] Например, R6 представляет собой C(O)H.
[0257] Например, R6 представляет собой -C(O)Ra.
[0258] Например, Ra представляет собой С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), который необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
[0259] Например, R6 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
[0260] Например, R6 представляет собой пиперидинил, 2,2,6,6-тетраметил-пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, 2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, морфолинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил или пирролидинил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
[0261] Например, R6 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2, и -Q2-T2 представляет собой оксо, или Q2 представляет собой связь и T2 представляет собой -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -S(O)2RC, С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, когда Rc или Rd является отличным от H.
[0262] Например, R6 представляет собой -NRaRb, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -SRa, -S(O)2Ra или -S(O)2NRaRb.
[0263] Например, каждый из Ra и Rb, независимо представляет собой H, С1-С6 алкил или С3-С8 циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
[0264] Например, один из Ra и Rb представляет собой H.
[0265] Например, Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 гетероатом в дополнение к N атому (например, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q2-T2.
[0266] Например, -Q2-T2 является отличным от H.
[0267] Например, -Q2-T2 представляет собой оксо.
[0268] Например, Q2 представляет собой связь.
[0269] Например, Q2 представляет собой незамещенный C1-C3 алкильный линкер.
[0270] Например, T2 представляет собой С1-С6 алкил или С6-С10 арил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3.
[0271] Например, T2 представляет собой незамещенный или замещенный линейный C1-С6 или разветвленный С3-С6 алкил, включая но не ограничиваясь этим, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, втор-пентил и н-гексил.
[0272] Например, T2 представляет собой фенил.
[0273] Например, T2 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод).
[0274] Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
[0275] Например, T2 представляет собой -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, или -S(O)2RC.
[0276] Например, Rc представляет собой С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), который необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3.
[0277] Например, каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
[0278] Например, Rc представляет собой H.
[0279] Например, Rd представляет собой H.
[0280] Например, Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 гетероатом в дополнение к N атому (например, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
[0281] Например, Q2 представляет собой связь, и T2 представляет собой -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -S(O)2RC, C1-C6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, когда Rc или Rd является отличным от H.
[0282] Например, -Q3-T3 представляет собой оксо.
[0283] Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или С3-C8 циклоалкил, и один или несколько -Q3-T3 представляют собой оксо.
[0284] Например, Q3 представляет собой связь или незамещенный или замещенный C1-C3 алкильный линкер.
[0285] Например, T3 представляет собой H, галоген, 4-7-членный гетероциклоалкил, C1-C3 алкил, ORe, COORe,-S(O)2Re, -NReRf- или -C(O)NReRf.
[0286] Например, один из Rd и Re представляет собой H.
[0287] Например, Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T3 выбран из группы, состоящей из C1-C3 алкила, галогена, ORe, -S(O)2Re, -NReRf и-C(O)NReRf.
[0288] Например, Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T3 выбран из группы, состоящей из C1-C3 алкила, ORe, -S(O)2Re, или -NReRf.
[0289] Например, Re представляет собой H.
[0290] Например, Rf представляет собой H.
[0291] Например, R7 является отличным от H.
[0292] Например, R7 представляет собой -C(O)Rg.
[0293] Например, R7 представляет собой -C(O)Rg, где Rg представляет собой C3-C8 циклоалкил, или 4-7-членный гетероциклоалкил, С3-С8 циклоалкил.
[0294] Например, R7 представляет собой С6-С10 арил, замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0295] Например, R7 представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0296] Например, R7 представляет собой С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0297] Например, R7 представляет собой С3-С8 циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0298] Например, R7 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0299] Например, R7 представляет собой 8-14-членный гетероциклоалкил, такой как 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил (например, 1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил), 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил (например, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил), 1-оксаспиро[4.5]деканил (например, 1-оксаспиро[4.5]декан-8-ил или 1-оксаспиро[4.5]декан-2-он-8-ил), 1-азаспиро[4.5]деканил (например, 1-азаспиро[4.5]декан-8-ил или 1-азаспиро[4.5]декан-2-он-8-ил), 3'H-спиро[циклогексан-1,l'-изобензофуран]-ил (например, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-4-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-3'-он-4-ил), 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил (например, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-4-ил или 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-7'-он-4-ил), или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил (например, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-4-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-3'-он-4-ил), каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0300] Например, R7 представляет собой 5-6-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0301] Например, R7 представляет собой изопропил.
[0302] Например, R7 представляет собой пирролидинил, пиперидинил, тетрагидропиран, циклопентил, или циклогексил, циклогептил, каждый из которых необязательно замещен одним -Q5-T5.
[0303] Например, R7 представляет собой циклопентил или циклогексил, каждый из которых необязательно замещен одним -Q5-T5.
[0304] Например, Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкокси.
[0305] Например, -Q5-T5 представляет собой оксо.
[0306] Например, T4 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или C3-C8 циклоалкил или С6-С10 арил, и один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
[0307] Например, R7 представляет собой 1-оксид-тетрагидро-2H-тиопиранил или 1,1-диоксид-тетрагидро-2H-тиопиранил.
[0308] Например, R7 представляет собой циклогексанонил, например, циклогексанон-4-ил.
[0309] Например, T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, С3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0310] Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0311] Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой 5- или 6-членный гетероарил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, при этом T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, С1-С6 алкоксила или С3-С8 циклоалкила.
[0312] Например, Q5 представляет собой CO, S(O)2, или NHC(O); и T5 представляет собой С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, C3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0313] Например, T5 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкоксил, каждый из которых необязательно замещен галогеном, гидроксилом, циано, С1-С6 алкоксилом, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, или С3-С8 циклоалкилом.
[0314] Например, Q5 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T5 представляет собой H или С6-С10 арил.
[0315] Например, Q5 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T5 представляет собой С3-С8 циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил, или S(O)qRq.
[0316] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой S(O)aR7, где a имеет значение 0, 1 или 2, и R7 представляет собой С1-С6 алкил (например, метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил, или трет-бутил), C3-C8 циклоалкил (например, циклопентил, циклогексил, или циклогептил) или 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил, или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0317] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой OR7, где R7 представляет собой 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил, или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0318] Например, R11 представляет собой H.
[0319] Например, каждый из R2 и R4, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный амино, азидо, галоген, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино или С6-С10 арилом.
[0320] Например, каждый из R2 и R4, независимо, представляет собой C1-C3 алкил, необязательно замещенный C1-С6 алкоксилом.
[0321] Например, каждый из R2 и R4 представляет собой метил.
[0322] Например, R1 представляет собой H.
[0323] Например, R1 представляет собой С1-С6 алкил, необязательно замещенный азидо, галогеном, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино или С6-С10 арилом.
[0324] Например, R12 представляет собой H, метил, этил, этенил или галоген.
[0325] Например, R12 представляет собой метил.
[0326] Например, R12 представляет собой этил или пропенил.
[0327] Например, R12 представляет собой метоксил.
[0328] Например, R12 представляет собой этенил.
[0329] Например, R8 представляет собой H, метил, этил или этенил.
[0330] Например, R8 представляет собой метил.
[0331] Например, R8 представляет собой этил.
[0332] Например, R8 представляет собой пропил.
[0333] Например, R8 представляет собой этенил или пропенил.
[0334] Например, R8 представляет собой С1-С6 алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (например, F, Cl, или Br), гидроксила или C1-С6 алкоксила.
[0335] Например, R8 представляет собой 4-7-членный, необязательно замещенный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные).
[0336] Например, R8 представляет собой пиперидинил.
[0337] Например, R8 представляет собой 4-7-членный, необязательно замещенный гетероциклоалкил, и R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или C1-C4 алкильный линкер, и T4 представляет собой H, С1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0338] Например, Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, морфолинил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил и подобные), или С3-C8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6.
[0339] Например, кольцо, которое образуют R7 и R8, выбрано из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканила и циклогексенила, каждый из которых необязательно замещен одним -Q6-T6.
[0340] Например, Z представляет собой 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил, пирролидин-2,5-дион-1-ил или пиперидин-2,6-дион-1-ил.
[0341] Например, один или несколько -Q6-Т6 представляет собой оксо.
[0342] Например, T6 представляет собой H, галоген, C1-C6 алкил, С1-С6 алкоксил, C3-C8 циклоалкил, C6-C10 арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0343] Например, Q6 представляет собой связь, и Т6 представляет собой С1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0344] Например, Q6 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T6 представляет собой С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, C3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0345] Например, Т6 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкоксил, каждый из которых необязательно замещен галогеном, гидроксилом, циано, С1-С6 алкоксилом, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино или С3-С8 циклоалкилом.
[0346] Например, Q6 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T6 представляет собой H или С6-С10 арил.
[0347] Например, Q6 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и Т6 представляет собой C3-C8 циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)PRP.
[0348] Например, каждый из Rp и Rq, независимо, представляет собой С1-С6 алкил.
[0349] Например, R6 представляет собой -S(O)bRa или азидо, где b имеет значение 0, 1 или 2, и Ra представляет собой С1-С6 алкил или C3-C8 циклоалкил; и Z представляет собой NR7R8, где R7 представляет собой С3-С8 циклоалкил (например, циклопентил, циклогексил, или циклогептил) или 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5; и R8 представляет собой H или С1-С6 алкил (например, метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил или трет-бутил).
[0350] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил, пирролидин-2,5-дион-1-ил, пиперидин-2,6-дион-1-ил и подобные), или С3-C8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими - -Q6-T6.
[0351] Например, R11 представляет собой H или метил.
[0352] Например, R13 представляет собой H.
[0353] Например, R3 представляет собой H.
[0354] Например, каждый из R5, R9 и R10 представляет собой H.
[0355] Настоящее изобретение обеспечивает соединения формулы (Ia)
или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры, где:
X1 представляет собой N или CR11;
X2 представляет собой N или CR13;
X3 представляет собой N или C, и когда X3 представляет собой N, R6 отсутствует;
Z представляет собой NR7R8, OR7, S(O)aR7, или CR7R8R14, где a имеет значение 0, 1 или 2;
каждый из R1 и R5, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-C1-С6 алкиламино, С3-С8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
каждый из R2, R3 и R4, независимо, представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T1 представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, азидо или RS1, где RS1 представляет собой C1-C3 алкил, С2-С6 алкенил, C2-C6 алкинил, С1-С6 алкоксил, C(O)O-С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, C6-C10 арил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, оксо, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R6 представляет собой H, галоген, циано, азидо, ORa, -NRaRb, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)bRa, -S(O)bNRaRb, или RS2, где RS2 представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-C8 циклоалкил или 4-12-членный гетероциклоалкил, b имеет значение 0, 1 или 2, каждый из Ra и Rb, независимо, представляет собой H или RS3, и RS3 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из RS2, RS3 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -C(O)NRcRd, -NRdC(O)Rc, -NRdC(O)ORc, -S(O)2RC, -S(O)2NRcRd или RS4, где каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или RS5, каждый из Rs4 и RS5, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из Rs4, RS5 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Rc и Rd, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6 алкокси, и T3 выбран из группы, состоящей из галогена, циано, С1-С6 алкила, C3-C8 циклоалкила, C6-C10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила, 5- или 6-членного гетероарила, ORe, COORe, -S(O)2Re, -NReRf и -C(O)NReRf, где каждый из Re и Rf независимо представляет собой H или С1-С6 алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или -Q2-T2 представляет собой оксо; или
R6 представляет собой H, галоген, циано, азидо, -NRaRb, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)bRa, -S(O)bNRaRb или RS2, где RS2 представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, С2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил или 4-12-членный гетероциклоалкил, b имеет значение 0, 1 или 2, каждый из Ra и Rb, независимо, представляет собой H или RS3, и RS3 представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, C2-С6 алкинил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из RS2, RS3 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -C(O)NRcRd, -NRdC(O)Rc, -NRdC(O)ORc, -S(O)2RC, -S(O)2NRcRd или RS4, где каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или RS5, каждый из RS4 и RS5, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из RS4 и RS5 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Rc и Rd, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T3 выбран из группы, состоящей из галогена, циано, С1-С6 алкила, C3-C8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила, 5- или 6-членного гетероарила, ORe, COORe, -S(O)2Re, -NReRf и -C(O)NReRf, где каждый из Re и Rf независимо представляет собой H или С1-С6 алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или -Q2-T2 представляет собой оксо;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4 алкильный линкер или C2-C4 алкенильный линкер, где каждый линкер необязательно замещен галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T4 представляет собой H, галоген, циано, NRgRh, -ORg, -C(O)Rg, -C(O)ORg, -C(O)NRgRh, -C(O)NRgORh, -NRgC(O)Rh, -S(O)2Rg или RS6, где каждый из Rg и Rh, независимо, представляет собой H или Rs7, каждый из RS6 и RS7, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-14-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и каждый из RS6 и RS7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2 или C1-C3 алкильный линкер, где Rk представляет собой H или С1-С6 алкил, и T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)qRq, где q имеет значение 0, 1 или 2, и Rq представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, C1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, C3-C8 циклоалкила, C6-C10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T5 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q5-T5 представляет собой оксо; или
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4 алкильный линкер или C2-C4 алкенильный линкер, где каждый линкер необязательно замещен галогеном, циано, гидроксилом или С1-С6 алкокси, и T4 представляет собой H, галоген, циано, NRgRh, -ORg, -C(O)Rg, -C(O)ORg, -C(O)NRgRh, -C(O)NRgORh, -NRgC(O)Rh, -S(O)2Rg или RS6, где каждый из Rg и Rh, независимо, представляет собой H или RRS7, каждый из RS6 и RS7, независимо, представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и каждый из RS6 и RS7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2 или C1-C3 алкильный линкер, где Rk представляет собой H или С1-С6 алкил, и T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)qRq, где q имеет значение 0, 1 или 2, и Rq представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-С8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T5 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q5-T5 представляет собой оксо; при условии, что (i) R7 является отличным от C(O)Rg или -S(O)2Rg, когда Z представляет собой NR7R8; (ii) R7 является отличным от С1-С6 алкила, когда Z представляет собой OR7, и (iii) R7 является отличным от H;
каждый из R8, R11, R12 и R13, независимо, представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, RS8, ORS8, или COORS8, где RS8 представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, С3-С8 циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, амино, моно-С1-С6 алкиламино или ди-C1-С6 алкиламино, и RS8 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, С(О)О-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино и ди-С1-С6 алкиламино; или R7 и R8, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, или R7 и R8, вместе с C атомом, с которым они связаны, образуют С3-С8 циклоалкил или 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, и каждый из 4-12-членных гетероциклоалкильных колец или С3-С8 циклоалкила, образованных указанными R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6, где Q6 представляет собой связь, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2 или C1-C3 алкильный линкер, где Rm представляет собой H или С1-С6 алкил, и T6 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, гидроксил, циано, С1-С6 алкоксил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)PRP, где p имеет значение 0, 1 или 2, и Rp представляет собой С1-С6 алкил, С2-С6 алкенил, C2-С6 алкинил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и Т6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, гидроксила, циано, C1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-С8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда Т6 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q6-Т6 представляет собой оксо; и
R14 отсутствует или представляет собой H или C1-C6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-С1-С6 алкила, циано, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, С3-С8 циклоалкила, С6-С10 арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
при условии, что соединение не может представлять собой
N-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)фуран-2-карбоксамид,
N,N'-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-1,3-фенилен)диацетамид,
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-пиваламидобензамид,
3-(3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-сульфонамидо)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамид,
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,5-диметоксибензамид,
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,4,5-триметоксибензамид,
3-аллил-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4,5-диметоксибензамид,
4-(2-амино-2-оксоэтокси)-3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метоксибензамид,
3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-гидрокси-5-метоксибензамид или
3-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метокси-4-пропоксибензамид.
[0356] Например, X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой CR13.
[0357] Например, X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой N.
[0358] Например, X1 представляет собой N и X2 представляет собой CR13.
[0359] Например, X1 представляет собой N, и X2 представляет собой N.
[0360] Например, X3 представляет собой С.
[0361] Например, Х3 представляет собой N, и R6 отсутствует.
[0362] Например, Z представляет собой NR7R8.
[0363] Например, Z представляет собой CR7R8R14.
[0364] Например, Z представляет собой OR7.
[0365] Например, Z представляет собой S(O)aR7, где a имеет значение 0, 1 или 2.
[0366] Например, Z представляет собой SR7.
[0367] Например, R6 представляет собой H.
[0368] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод).
[0369] Например, R6 представляет собой C1-C3 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
[0370] Например, R6 представляет собой CF3.
[0371] Например, R6 представляет собой C2-C6 алкенил, С2-С6 алкинил, или С3-С8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
[0372] Например, R6 представляет собой этенил.
[0373] Например, R6 представляет собой этинил.
[0374] Например, R6 представляет собой этинил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T2 представляет собой С1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил и морфолинил и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
[0375] Например, R6 представляет собой азидо.
[0376] Например, R6 представляет собой циано.
[0377] Например, R6 представляет собой C(O)H.
[0378] Например, R6 представляет собой ORa или -C(O)Ra.
[0379] Например, Ra представляет собой С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), который необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
[0380] Например, R6 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил, и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
[0381] Например, R6 представляет собой пиперидинил, 2,2,6,6-тетраметил-пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, 2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, морфолинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил или пирролидинил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
[0382] Например, R6 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2, и -Q2-T2 представляет собой оксо, или Q2 представляет собой связь и T2 представляет собой -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -S(O)2Rc, С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, когда Rc или Rd является отличным от H.
[0383] Например, R6 представляет собой -NRaRb, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -SRa, -S(O)2Ra или -S(O)2NRaRb.
[0384] Например, каждый из Ra и Rb, независимо представляет собой H, С1-С6 алкил или С3-С8 циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
[0385] Например, один из Ra и Rb представляет собой H.
[0386] Например, Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 гетероатом в дополнение к N атому (например, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил и подобные), и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q2-T2.
[0387] Например, -Q2-T2 является отличным от H.
[0388] Например, -Q2-T2 представляет собой оксо.
[0389] Например, Q2 представляет собой связь.
[0390] Например, Q2 представляет собой незамещенный C1-C3 алкильный линкер.
[0391] Например, T2 представляет собой C1-C6 алкил или С6-С10 арил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3.
[0392] Например, T2 представляет собой незамещенный или замещенный линейный С1-С6 или разветвленный С3-С8 алкил, включая но не ограничиваясь этим, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, втор-пентил и н-гексил.
[0393] Например, T2 представляет собой фенил.
[0394] Например, T2 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод).
[0395] Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил, и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
[0396] Например, T2 представляет собой -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, или -S(O)2RC.
[0397] Например, Rc представляет собой С1-С6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил, и подобные), который необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3.
[0398] Например, каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
[0399] Например, Rc представляет собой H.
[0400] Например, Rd представляет собой H.
[0401] Например, Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 гетероатом в дополнение к N атому (например, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил, и подобные), и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
[0402] Например, Q2 представляет собой связь, и T2 представляет собой -ORC, -NRcRd, -C(O)RC, -C(O)ORC, -S(O)2RC, C1-C6 алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, когда Rc или Rd является отличным от H.
[0403] Напримепр, -Q3-T3 представляет собой оксо.
[0404] Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или C3-C8 циклоалкил, и один или несколько -Q3-T3 представляют собой оксо.
[0405] Например, Q3 представляет собой связь или незамещенный или замещенный C1-C3 алкильный линкер.
[0406] Например, T3 представляет собой H, галоген, 4-7-членный гетероциклоалкил, C1-C3 алкил, ORe, COORe, -S(O)2Re -NReRf или -C(O)NReRf.
[0407] Например, один из Rd и Re представляет собой H.
[0408] Например, Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T3 выбран из группы, состоящей из C1-C3 алкила, галогена, ORe, -S(O)2Re, -NReRf и -C(O)NReRf.
[0409] Например, Q3 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T3 выбран из группы, состоящей из C1-C3 алкила, ORe, -S(O)2Re или -NReRf.
[0410] Например, Re представляет собой H.
[0411] Например, Rf представляет собой H.
[0412] Например, R7 является отличным от H.
[0413] Например, R7 представляет собой -C(O)Rg.
[0414] Например, R7 представляет собой -C(O)Rg, где Rg представляет собой С3-С8 циклоалкил, или 4-7-членный гетероциклоалкил, С3-C8 циклоалкил.
[0415] Например, R7 представляет собой С6-С10 арил, замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0416] Например, R7 представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0417] Например, R7 представляет собой С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0418] Например, R7 представляет собой С3-С8 циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0419] Например, R7 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил, и подобные), необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
[0420] Например, R7 представляет собой 8-14-членный гетероциклоалкил, такой как 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил (например, 1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил), 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил (например, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил), 1-оксаспиро[4.5]деканил (например, 1-оксаспиро[4.5]декан-8-ил или 1-оксаспиро[4.5]декан-2-он-8-ил), 1-азаспиро[4.5]деканил (например, 1-азаспиро[4.5]декан-8-ил или 1-азаспиро[4.5]декан-2-он-8-ил), 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил (например, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-4-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-3'-он-4-ил), 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил (например, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-4-ил или 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-7'-он-4-ил) или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил (например, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-4-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-3'-он-4-ил), каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0421] Например, R7 представляет собой 5-6-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5
[0422] Например, R7 представляет собой изопропил.
[0423] Например, R7 представляет собой пирролидинил, пиперидинил, тетрагидропиран, циклопентил, или циклогексил, циклогептил, каждый из которых необязательно замещен одним - Q5-T5.
[0424] Например, R7 представляет собой циклопентил или циклогексил, каждый из которых необязательно замещен одним -Q5-T5.
[0425] Например, Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собой С1-С6 алкил или C1-C6 алкокси.
[0426] Например, -Q5-T5 представляет собой оксо.
[0427] Например, T4 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или С3-C8 циклоалкил или C6-C10 арил, и один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
[0428] Например, R7 представляет собой 1-оксид-тетрагидро-2H-тиопиранил или 1,1-диоксид-тетрагидро-2H-тиопиранил.
[0429] Например, R7 представляет собой циклогексанонил, например, циклогексанон-4-ил.
[0430] Например, T5 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, C1-C6 алкоксил, C3-C8 циклоалкил, С6-С10 арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0431] Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0432] Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой 5- или 6-членный гетероарил, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино, при этом T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, С1-С6 алкоксила или С3-С8 циклоалкила.
[0433] Например, Q5 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T5 представляет собой С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, C3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0434] Например, T5 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкоксил, каждый из которых необязательно замещен галогеном, гидроксилом, циано, С1-С6 алкоксилом, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино или С3-С8 циклоалкилом.
[0435] Например, Q5 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T5 представляет собой H или С6-С10 арил.
[0436] Например, Q5 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T5 представляет собой C3-C8 циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)qRq.
[0437] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой S(O)aR7, где a имеет значение 0, 1 или 2, и R7 представляет собой С1-С6 алкил (например, метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил, или трет-бутил), С3-С8 циклоалкил (например, циклопентил, циклогексил, или циклогептил) или 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0438] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой OR7, где R7 представляет собой 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0439] Например, R11 представляет собой H.
[0440] Например, каждый из R2 и R4, независимо, представляет собой H или C1-С6 алкил, необязательно замещенный амино, азидо, галогеном, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино или С6-С10 арилом.
[0441] Например, каждый из R2 и R4, независимо, представляет собой C1-C3 алкил, необязательно замещенный С1-С6 алкоксилом.
[0442] Например, каждый из R2 и R4 представляет собой метил.
[0443] Например, R1 представляет собой H.
[0444] Например, R1 представляет собой С1-С6 алкил, необязательно замещенный азидо, галогеном, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино или С6-С10 арилом.
[0445] Например, R12 представляет собой H, метил, этил, этенил или галоген.
[0446] Например, R12 представляет собой метил.
[0447] Например, R12 представляет собой этил или пропенил.
[0448] Например, R12 представляет собой метоксил.
[0449] Например, R12 представляет собой этенил.
[0450] Например, R8 представляет собой H, метил, этил или этенил.
[0451] Например, R8 представляет собой метил.
[0452] Например, R8 представляет собой этил.
[0453] Например, R8 представляет собой пропил.
[0454] Например, R8 представляет собой этенил или пропенил.
[0455] Например, R8 представляет собой С1-С6 алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (например, F, Cl, или Br), гидроксила или С1-С6 алкоксила.
[0456] Например, R8 представляет собой 4-7-членный, необязательно замещенный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил и морфолинил, и подобные).
[0457] Например, R8 представляет собой пиперидинил.
[0458] Например, R8 представляет собой 4-7-членный, необязательно замещенный гетероциклоалкил, и R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или C1-C4 алкильный линкер, и T4 представляет собой H, С1-С6 алкил, С3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0459] Например, Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют 4-11 -членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, морфолинил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил и подобные), или С3-С8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6.
[0460] Например, кольцо, которое образуют R7 и R8, выбрано из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканила и циклогексенила, каждый из которых необязательно замещен одним -Q6-T6.
[0461] Например, Z представляет собой 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил, пирролидин-2,5-дион-1-ил или пиперидин-2,6-дион-1-ил.
[0462] Например, один или несколько -Q6-T6 представляют собой оксо.
[0463] Например, Т6 представляет собой H, галоген, С1-С6 алкил, C1-C6 алкоксил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0464] Например, Q6 представляет собой связь, и Т6 представляет собой С1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0465] Например, Q6 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T6 представляет собой С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, C3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
[0466] Например, Т6 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкоксил, каждый из которых необязательно замещен галогеном, гидроксилом, циано, C1-C6 алкоксилом, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино или С3-С8 циклоалкилом.
[0467] Например, Q6 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и Т6 представляет собой H или С6-С10 арил.
[0468] Например, Q6 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T6 представляет собой С3-C8 циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)PRP.
[0469] Например, каждый из Rp и Rq, независимо, представляет собой С1-С6 алкил.
[0470] Например, R6 представляет собой -S(O)bRa или азидо, где b имеет значение 0, 1 или 2, и Ra представляет собой С1-С6 алкил или С3-С8 циклоалкил; и Z представляет собой NR7R8, где R7 представляет собой С3-С8циклоалкил (например, циклопентил, циклогексил, или циклогептил) или 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5; и R8 представляет собой H или С1-С6 алкил (например, метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил или трет-бутил).
[0471] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил, пирролидин-2,5-дион-1-ил, пиперидин-2,6-дион-1-ил и подобные), или С3-С8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q6-Т6.
[0472] Например, R13 представляет собой H или метил.
[0473] Например, R13 представляет собой H.
[0474] Например, R3 представляет собой H.
[0475] Например, каждый из R5, R9 и R10 представляет собой H.
[0476] Другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (Ib), (Ic), или (Id):
или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры, где Z, X2, X3, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R11 и R12 имеют значения, определенные в настоящей заявке для Формулы (I).
[0477] Еще одна подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (Ie):
где
Z представляет собой NR7R8, OR7 или S(O)aR7;
R1 представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из гидроксила, С1-С6 алкоксила, амино, моно-С1-С6 алкиламино, ди-С1-С6 алкиламино и С6-С10 арила;
каждый из R2 и R4 независимо, представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из галогена и гидроксила, и T1 представляет собой H, галоген или азидо;
R3 представляет собой H или галоген;
R5 представляет собой H или С1-С6 алкил;
R6 представляет собой H, галоген, циано, азидо, ORa, -NRaRb, -C(O)NRaRb, -S(O)bRa или RS2; где RS2 представляет собой С1-С6 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6алкинил или 4-12-членный гетероциклоалкил, и где каждый из Ra и Rb, независимо представляет собой H, С1-С6 алкил или 4-12-членный гетероциклоалкил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из Ra, RS2 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2; где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T2 представляет собой H, галоген, -ORC, -NRcRd, -C(O)ORC, или С1-С6 алкил, где каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом и необязательно замещенное С1-С6 алкилом;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или C1-C4 алкильный линкер, и T4 представляет собой H, С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, C6-C10 арил, C(O)-C1-C6алкил, C(O)-C3-С6 циклоалкил или 4-14-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5;
R8 представляет собой H, С1-С6 алкил, необязательно замещенный галогеном, гидроксилом или C1-C6 алкоксилом, С2-С6 алкенил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил; или R7 и R8, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, и 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, которое образуют R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6; и
R12 представляет собой галоген, С1-С6 алкоксил или С1-С6 алкил, необязательно замещенный галогеном или C2-C6 алкенилом.
[0478] В дополнение к описанным выше отличительным признакам соединений по настоящему изобретению, где это является подходящим, соединения формулы (Ie) могут включать один или несколько из следующих отличительных признаков:
[0479] Например, R1 представляет собой H или С1-С6 алкил, необязательно замещенный один или несколько раз заместителем, выбранным из гидроксила, С1-С6 алкоксила и С6-С10 арила; R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или C1-C4 алкильный линкер, и T4 представляет собой С1-С6алкил, С3-С8 циклоалкил, С6-С10 арил, C(O)-С1-С6 алкил, C(O)-С3-С8 циклоалкил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил и оксетанил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из оксо и -Q5-T5; R8 представляет собой H или С1-С6 алкил, С1-С6 галогеналкил, C2-C6 алкенил или С3-C8 циклоалкил; и R12 представляет собой галоген, С1-С6 алкил, С1-С6 галогеналкил или С1-С6алкоксил.
[0480] Например, Z представляет собой NR7R8 или SR7; R6 представляет собой H, галоген, циано, ORa, -C(O)NRaRb, -S(O)2Ra, или RS2; где RS2 представляет собой C1-C6 алкил, С2-С6 алкенил, С2-С6 алкинил или 4-12-членный гетероциклоалкил, и где каждый из Ra и Rb, независимо, представляет собой H или C1-С6 алкил; или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом; и каждый из RS2 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, которое образуют Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2; где Q2 представляет собой связь или C1-C3 алкильный линкер, и T2 представляет собой H, галоген, -ORC, -NRcRd, -C(O)OC1-С6 алкил, или С1-С6 алкил, где каждый из Rc и Rd, независимо, представляет собой H или С1-С6 алкил, или Rc и Rd, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом и 0 или 1 С1-С6 алкильный заместитель; R7 представляет собой С1-С6 алкил, С3-C8 циклоалкил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил и оксетанил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из оксо и -Q5-T5; и R12 представляет собой галоген или С1-С6 алкил.
[0481] Например, R2, R4 и R12, каждый независимо, представляют собой С1-С6 алкил, и R5 представляет собой H.
[0482] Например, R7 представляет собой циклогексил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил, оксетанил, 1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил, 1-оксаспиро[4.5]декан-8-ил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-4-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-4-ил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-4-ил или 1-азаспиро[4.5]декан-8-ил, каждый из которых замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0483] Например, Z выбран из группы, состоящей из пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, азетидинила, пирролидинила, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ила, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ила и циклогексенила, каждый из которых необязательно замещен одним -Q6-T6.
[0484] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой S(O)aR7, где a имеет значение 0, 1 или 2, и R7 представляет собой С1-С6 алкил (например, метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил, или трет-бутил), С3-С8 циклоалкил (например, циклопентил, циклогексил, или циклогептил) или 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0485] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой OR7, где R7 представляет собой 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил, или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
[0486] Например, R6 представляет собой -S(O)bRa или азидо, где b имеет значение 0, 1 или 2, и Ra представляет собой C1-C6 алкил или C3-C8 циклоалкил; и Z представляет собой NR7R8, где R7 представляет собой С3-C8 циклоалкил (например, циклопентил, циклогексил, или циклогептил) или 4-14-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил, или 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные), каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5; и R8 представляет собой H или С1-С6 алкил (например, метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил или трет-бутил).
[0487] Например, R6 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и иод), и Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, морфолинил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил, пирролидин-2,5-дион-1-ил, пиперидин-2,6-дион-1-ил и подобные), или C3-C8 циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q6-Т6.
[0488] Другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (II):
или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры, где R6, R7, R8 и R12 имеют значения, определенные в настоящей заявке.
[0489] Еще одна подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (IIA):
или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры, где n имеет значение 0, 1 или 2; U представляет собой O, S, N-Q5-T5 или CH-Q5-T5; R12 представляет собой Cl, Br или метил; и R6, R7, R8, Q5 и T5 имеют значения, определенные в настоящей заявке.
[0490] В дополнение к описанным выше отличительным признакам соединений по настоящему изобретению, где это является подходящим, соединения формулы (II) или (IIA) могут включать один или несколько из следующих отличительных признаков:
[0491] Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой H, С1-С6 алкил, C3-C8 циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил, амино, моно-С1-С6 алкиламино или ди-С1-С6 алкиламино, при этом T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, С1-С6 алкоксила или С3-С8 циклоалкила.
[0492] Например, Q5 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T5 представляет собой С1-С6 алкил, С1-С6 алкоксил, C3-C8 циклоалкил или 4-12-членный гетероциклоалкил.
[0493] Например, Q5 представляет собой С1-С3 алкильный линкер, и T5 представляет собой H или C6-C10 арил.
[0494] Например, Q5 представляет собой C1-C3 алкильный линкер, и T5 представляет собой С3-С8 циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил или S(O)qRq.
[0495] Например, Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкокси.
[0496] Например, один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
[0497] Например, U представляет собой CH-Q5-T5, и n имеет значение 0.
[0498] Например, один или несколько -Q6-T6 представляют собой оксо.
[0499] Например, Q6 представляет собой связь или C(O), и Т6 представляет собой С1-С6 алкил или С1-С6 алкокси.
[0500] Еще одна подгруппа соединений формулы (1) включает соединения формулы (III):
или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры, где R7 представляет собой 4 или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий один атом азота в кольце, и замещенный одной или двумя метильными группами или одной изопропильной группой; R3 представляет собой H или F; R4 представляет собой метил, этил, н-пропил, изопропил или CF3, и R6 представляет собой CF3, Cl, или F, при условии, что когда R4 представляет собой метил, (1) R6 представляет собой CF3, или (2) R3 представляет собой F, или (3) R6 представляет собой CF3 и R3 представляет собой F, или (4) R6 представляет собой F или Cl и R7 представляет собой 6-членный гетероциклоалкил, содержащий только один атом азота и замещенный двумя метильными группами.
[0501] В дополнение к описанным выше отличительным признакам соединений по настоящему изобретению, где это является подходящим, соединения формулы (III) могут включать один или несколько из следующих отличительных признаков:
[0502] Например, R7 представляет собой 4 или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий один, и только один, гетероатом в кольце, и этот гетероатом представляет собой азот.
[0503] Например, R7 не содержит дополнительных заместителей помимо одной или двух метильных групп или одной изопропильной группы.
[0504] Например, R7 представляет собой
.
[0505] Например, R7 представляет собой
.
[0506] Например, R7 представляет собой 
.
[0507] Репрезентативные соединения по настоящему изобретению включают соединения, представленные в Таблице 1. В представленной ниже таблице, в каждом случае 
следует рассматривать как 
.
† MS- Масс-спектрометрия образца. Данные могут быть получены в режимах положительной и отрицательных ионов, и потенциальные ионы включают M, M+1, M+23 (M+Na) и M-1.
[0508] Как используется в настоящей заявке, "алкил", "C1, C2, C3, C4, C5 или C6 алкил" или "C1-C6 алкил" предполагает включение C1, C2, C3, C4, C5 или C6 линейных (с прямой цепью) насыщенных алифатических углеводородных групп и C3, C4, C5 или С6 разветвленных насыщенных алифатических углеводородных групп. Например, С1-С6 алкил предполагает включение C1, C2, C3, C4, C5 или C6 алкильных групп. Примеры алкила включают группы, содержащие от одного до шести атомов углерода, такие как, но не ограничиваясь этим, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, втор-пентил или н-гексил.
[0509] В некоторых вариантах воплощения, линейный или разветвленный алкил содержит шесть или меньше атомов углерода (например, C1-С6 для линейной, С3-С8 для разветвленной цепи), и в других вариантах воплощения, линейный или разветвленный алкил содержит четыре или меньше атомов углерода.
[0510] Как используется в настоящей заявке, термин "циклоалкил" относится к насыщенной или ненасыщенной неароматической углеводородной моно- или полициклической системе (например, конденсированные, связанные мостиковой связью или спиро кольца), содержащей от 3 до 30 атомов углерода (например, C3-C10). Примеры циклоалкила включают, но не ограничиваются этим, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил и адамантил. Термин "гетероциклоалкил" относится к насыщенной или ненасыщенной неароматическо 3-8 членной моноциклической, 7-12 членной бициклической (конденсированные, связанные мостиковой связью, или спиро кольца), или 11-14 членной трициклической кольцевой системе (конденсированные, связанные мостиковой связью или спиро кольца), содержащей один или несколько гетероатомов (таких как O, N, S или Se), если не указано иное. Примеры гетероциклоалкильных групп включают, но не ограничиваются этим, пиперидинил, пиперазинил, пирролидинил, диоксанил, тетрагидрофуранил, изоиндолинил, индолинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, оксиранил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, тетрагидропиранил, дигидропиранил, пиранил, морфолинил, тетрагидротиопиранил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 1,4-диоксаспиро[4.5]деканил, 1-оксаспиро[4.5]деканил, 1-азаспиро[4.5]деканил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1!-изобензофуран]-ил, 7'H-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-ил, 3'H-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-c]пиридин]-ил и подобные.
[0511] Термин "необязательно замещенный алкил" относится к незамещенному алкилу или алкилу, содержащему указанные заместители, замещающие один или несколько атомов водорода на одном или нескольких атомах углерода основной углеводородной цепи. Такие заместители могут включать, например, алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино and алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматическую или гетероароматическую группу.
[0512] "Арилалкильная" или "аралкильная" группа представляет собой алкил, замещенный арилом (например, фенилметил (бензил)). "Алкиларильная" группа представляет собой арил, замещенный алкилом (например, метилфенил).
[0513] Как используется в настоящей заявке, "алкильный линкер" предполагает включение C1, C2, C3, C4, C5 или C6 линейных (с прямой цепью) насыщенных двухвалентных алифатических углеводородных групп и C3, C4, C5 или C6 разветвленных насыщенных алифатических углеводородных групп. Например, С1-С6 алкильный линкер предполагает включение C1, C2, C3, C4, C5 или C6 алкильных линкерных групп. Примеры алкильного линкера включают группы, содержащие от одного до шести атомов углерода, такие как, но не ограничиваясь этим, метил (-CH2-), этил (-CH2CH2-), н-пропил (-CH2CH2CH2-), изопропил (-CHCH3CH2-), н-бутил (-CH2CH2CH2CH2-), втор-бутил (-CHCH3CH2CH2-), изобутил (-C(CH3)2CH2-), н-пентил (-CH2CH2CH2CH2CH2-), втор-пентил (-CHCH3CH2CH2CH2-) или н-гексил (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-).
[0514] "Алкенил" включает ненасыщенные алифатические группы аналогичные по длине и возможному замещению алкилам, описанным выше, но которые содержат по меньшей мере одну двойную связь. Например, термин "алкенил" включает линейные алкенильные группы (например, этенил, пропенил, бутенил, пентенил, гексенил, гептенил, октенил, ноненил, деценил) и разветвленные алкенильные группы. В некоторых вариантах воплощения, линейная или разветвленная алкенильная группа содержит шесть или меньше атомов углерода в своей основной цепи (например, C2-C6 для линейной, С3-С8 для разветвленной цепи). Термин "C2-C6" включает алкенильные группы, содержащие от двух до шести атомов углерода. Термин "С3-С8" включает алкенильные группы, содержащие от трех до шести атомов углерода.
[0515] Термин "необязательно замещенный алкенил" относится к незамещенному алкенилу или алкенилу, содержащему указанные заместители, замещающие один или несколько атомов водорода на одном или нескольких атомах углерода основной углеводородной цепи. Такие заместители могут включать, например, алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, гетероциклил, алкиларил или ароматическую или гетероароматическую группу.
[0516] "Алкинил" включает ненасыщенные алифатические группы аналогичные по длине и возможному замещению алкилам, описанным выше, но которые содержат по меньшей мере одну тройную связь. Например, "алкинил" включает линейные алкинильные группы (например, этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил, гептинил, октинил, нонинил, децинил) и разветвленные алкинильные группы. В некоторых вариантах воплощения, линейная или разветвленная алкинильная группа содержит шесть или меньше атомов углерода в своей основной цепи (например, C2-C6 для линейной, С3-С8 для разветвленной цепи). Термин " C2-C6" включает алкинильные группы, содержащие от двух до шести атомов углерода. Термин " C3-C6" включает алкинильные группы, содержащие от трех до шести атомов углерода.
[0517] Термин "необязательно замещенный алкинил" относится к незамещенному алкинилу или алкинилу, содержащему указанные заместители, замещающие один или несколько атомов водорода на одном или нескольких атомах углерода основной углеводородной цепи. Такие заместители могут включать, например, алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматическую или гетероароматическую группу.
[0518] Другие необязательно замещенные группы (такие как необязательно замещенный циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил) включают как незамещенные группы, так и группы, содержащие один или несколько из указанных заместителей. Например, замещенный гетероциклоалкил включает группы, замещенные одной или несколькими алкильными группами, такие как 2,2,6,6-тетраметил-пиперидинил и 2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6-тетрагидропиридинил.
[0519] "Арил" включает группы с ароматичностью, включая "сопряженные" или полициклические системы с по меньшей мере одним ароматическим кольцом, и не содержат никаких гетероатомов в кольцевой структуре. Примеры включают фенил, бензил, 1,2,3,4-тетрагидронафталенил и т.п.
[0520] "Гетероарильные" группы представляют собой арильные группы, определенные выше, за исключением содержащих от одного до четырех гетероатомов в кольцевой структуре, и также могут быть указаны как "арилгетероциклы" или "гетероароматические группы". Как используется в настоящей заявке, термин "гетероарил" предполагает включение стабильного 5-, 6- или 7-членного моноциклического или 7-, 8-, 9-, 10-, 11- или 12-членного бициклического ароматического гетероциклического кольца, которое состоит из атомов углерода и одного или нескольких гетероатомов, например, 1 или 1-2 или 1-3 или 1-4 или 1-5 или 1-6 гетероатомов или, например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 гетероатомов, независимо выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы. Атом азота может быть замещенным или незамещенным (т.е. N или NR, где R представляет собой H или другие заместители, которые определены). Гетероатомы азота и серы, необязательно, могут быть окислены (т.е. N→O и S(O)p, где p = 1 или 2). Следует отметить, что общее количество S и О атомов в ароматическом гетероцикле составляет не более чем 1.
[0521] Примеры гетероарильных групп включают пиррол, фуран, тиофен, тиазол, изотиазол, имидазол, триазол, тетразол, пиразол, оксазол, изоксазол, пиридин, пиразин, пиридазин, пиримидин и подобные.
[0522] Кроме того, термины "арил" и "гетероарил" включают полициклические арильные и гетероарильные группы, например, трициклические, бициклические, например, нафталин, бензоксазол, бензодиоксазол, бензотиазол, бензоимидазол, бензотиофен, метилендиоксифенил, хинолин, изохинолин, нафтиридин, индол, бензофуран, пурин, бензофуран, деазапурин, индолизин.
[0523] В случае полициклических ароматических колец, только одно из колец обязательно должно быть ароматическим (например, 2,3-дигидроиндол), хотя все кольца могут быть ароматическими (например, хинолин). Второе кольцо также может быть конденсированным или связанным мостиковой связью.
[0524] Циклоалкильное, гетероциклоалкильное, арильное или гетероарильное кольцо может быть замещено по одному или нескольким положениям в кольце (например, образующему кольцо углероду или гетероатому, такому как N) такими заместителями, которые описаны выше, например, алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкокси, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, алкиламинокарбонил, аралкиламинокарбонил, алкениламинокарбонил, алкилкарбонил, арилкарбонил, аралкилкарбонил, алкенилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкилтиокарбонил, фосфат, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматическая или гетероароматическая группа. Арильные и гетероарильные группы также могут быть конденсированными или связанными мостиковой связью с алициклическими или гетероциклическими кольцами, которые не являются ароматическими, с образованием полициклической системы (например, тетралин, метилендиоксифенил).
[0525] Как используется в настоящей заявке, "карбоцикл" или "карбоциклическое кольцо" предполагает включение любого стабильного моноциклического, бициклического или трициклического кольца, содержащего указанное количество атомов углерода, любое из которых может быть насыщенным, ненасыщенным или ароматическим. Карбоцикл включает циклоалкил и арил. Например, C3-C14 карбоцикл предполагает включение моноциклического, бициклического или трициклического кольца, содержащего 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 атомов углерода. Примеры карбоциклов включают, но не ограничиваются этим, циклопропил, циклобутил, циклобутенил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогептенил, циклогептил, циклогептенил, адамантил, циклооктил, циклооктенил, циклооктадиенил, флуоренил, фенил, нафтил, инданил, адамантил и тетрагидронафтил. Связанные мостиковой связью кольца также включены в определение карбоцикла, включая, например, [3.3.0]бициклооктан, [4.3.0]бициклононан и [4.4.0] бициклодекан и [2.2.2] бициклооктан. Связанное мостиковой связью кольцо огбразуется, когда один или несколько атомов углерода связываются с двумя несмежными атомами углерода. В одном варианте воплощения, кольца с мостиковой связью включают один или два атома углерода. Следует отметить, что мостик всегда преобразовывает моноциклическое кольцо в трициклическое кольцо. Когда кольцо связано мостиковой связью, заместители, указанные для кольца, также могут присутствовать на мостике. Конденсированные (например, нафтил, тетрагидронафтил) и спиро кольца также включены.
[0526] Как используется в настоящей заявке, "гетероцикл" или "гетероциклическая группа" включает любую кольцевую структуру (насыщенную, ненасыщенную или ароматическую), которая содержит по меньшей мере один кольцевой гетероатом (например, N, О или S). Гетероцикл включает гетероциклоалкил и гетероарил. Примеры гетероциклов включают, но не ограничиваются этим, морфолин, пирролидин, тетрагидротиофен, пиперидин, пиперазин, оксетан, пиран, тетрагидропиран, азетидин и тетрагидрофуран.
[0527] Примеры гетероциклических групп включают, но не ограничиваются этим, акридинил, азоцинил, бензимидазолил, бензофуранил, бензотиофуранил, бензотиофенил, бензоксазолил, бензоксазолинил, бензтиазолил, бензтриазолил, бензтетразолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, бензимидазолинил, карбазолил, 4аН-карбазолил, карболинил, хроманил, хроменил, циннолинил, декагидрохинолинил, 2Н,6Н-1,5,2-дитиазинил, дигидрофуро[2,3-6]тетрагидрофуран, фуранил, фуразанил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, 1Н-индазолил, индоленил, индолинил, индолизинил, индолил, 3H-индолил, изатиоил, изобензофуранил, изохроманил, изоиндазолил, изоиндолинил, изоиндолил, изохинолинил, изотиазолил, изоксазолил, метилендиоксифенил, морфолинил, нафтиридинил, октагидроизохинолинил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазол5(4H)-он, оксазолидин, оксазолил, оксиндолил, пиримидинил, фенантридинил, фенантролинил, феназинил, фенотиазинил, феноксатинил, феноксазинил, фталазинил, пиперазинил, пиперидинил, пиперидонил, 4-пиперидонил, пиперонил, птеридинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиразолил, пиридазинил, пиридооксазол, пиридоимидазол, пиридотиазол, пиридинил, пиридил, пиримидинил, пирролидинил, пирролинил, 2H-пирролил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, 4Н-хинолизинил, хиноксалинил, хинуклидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, тетразолил, 6Я-1,2,5-тиадиазинил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, тиантренил, тиазолил, тиенил, тиенотиазолил, тиенооксазолил, тиеноимидазолил, тиофенил, триазинил, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил, 1,2,5-триазолил, 1,3,4-триазолил и ксантенил.
[0528] Термин "замещенный", как он используется в настоящей заявке, означает, что любой один или несколько атомов водорода на указанном атоме замещен вариантом, выбранным из указанных групп, при условии, что нормальная валентность указанного атома не превышается, и что такое замещение приводит к стабильному соединению. Когда заместитель представляет собой оксо или кето (т.е. =О), тогда замещены 2 атома водорода на указанном атоме. Кето заместители не присутствуют в ароматических группах. Кольцевые двойные связи, как это используется в настоящей заявке, представляют собой двойные связи, которые образованы между двумя смежными кольцевыми атомами (например, C=C, C=N или N=N). "Стабильное соединение" и "стабильная структура" означают соединение, которое не является достаточно прочным для выживания при его выделении до полезной степени чистоты из реакционной смеси и формулировании в эффективное терапевтическое средство.
[0529] Когда связь с заместителем показана как пересекающая связь, соединяющую два атома в кольце, тогда такой заместитель может быть связан с любым атомом в кольце. Когда заместитель указан без указания атома, через который такой заместитель связан с остальной частью соединения данной формулы, тогда такой заместитель может быть связан через любой атом в этой формуле. Комбинации заместителей и/или переменных допускаются, но только если такие комбинации приводят к стабильным соединениям.
[0530] Когда какая-либо переменная (например, R1) встречается более одного раза в любой составляющей или формуле для соединения, ее определение в каждом случае является независимым от ее определения в каждом другом случае. Так, например, если показано, что группа замещена 0-2 группами R1, тогда эта группа, необязательно, может иметь в качестве заместителей вплоть до двух групп R1, и R1 в каждом случае независимо выбран из определения R1. Также, комбинации заместителей и/или переменных допустимы, но только если так комбинации приводят к стабильным соединениям.
[0531] Термин "гидрокси" или "гидроксил" включает группы с -OH или –O-.
[0532] Как используется в настоящей заявке, "гало" или "галоген" относится к фтору, хлору, брому и иоду. Термин "пергалогенированный", как правило, относится к группе, где все атомы водорода замещены атомами галогена. Термин "галогеналкил" или "галогеналкоксил" относится к алкилу или алкоксилу, замещенному одним или несколькими атомами галогена.
[0533] Термин "карбонил" включает соединения и группы, которые содержат углерод, связанный двойной связью с атомом кислород. Примеры групп, содержащих карбонил, включают, но не ограничиваются этим, альдегиды, кетоны, карбоновые кислоты, амиды, сложные эфиры, ангидриды и т.п.
[0534] Термин "карбоксил" относится к -COOH или его сложному C1-C6 алкиловому эфиру.
[0535] "Ацил" включает группы, которые содержат ацильный радикал (R-C(O)-) или карбонильньную группу. "Замещенный ацил" включает ацильные группы, где один или несколько атомов водорода замещены, например, алкильными группами, алкинильными группами, галогеном, гидроксилом, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилатом, алкилкарбонилом, арилкарбонилом, алкоксикарбонилом, аминокарбонилом, алкиламинокарбонилом, диалкиламинокарбонилом, алкилтиокарбонилом, алкоксилом, фосфатом, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрилом, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилатом, сульфатами, алкилсульфинилом, сульфонато, сульфамоилом, сульфонамидо, нитро, трифторметилом, циано, азидо, гетероциклилом, алкиларилом или ароматической или гетероароматической группой.
[0536] "Ароил" включает группы с арильной или гетероароматической группой связанной с карбонильной группой. Примеры ароильных групп включают фенилкарбокси, нафтил карбокси и т.п.
[0537] "Алкоксиалкил", "алкиламиноалкил", и "тиоалкоксиалкил" включают алкильные группы, описанные выше, где атомы кислорода, азота или серы замещают один или несколько атомов углерода основной углеводороднной цепи.
[0538] Термин "алкокси" или "алкоксил" включает замещенные и незамещенные алкильные, алкенильные и алкинильные группы, ковалентно связанные с атомом кислорода. Примеры алкокси групп или алкоксил радикалов включают, но не ограничиваются этим, метокси, этокси, изопропилокси, пропокси, бутокси и пентокси группы. Примеры замещенных алкокси групп включают галогенированные алкокси группы. Алкокси группы могут быть замещены группами, такими как алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматическая или гетероароматическая группа. Примеры галоген-замещенных алкокси групп включают, но не ограничиваются этим, фторметокси, дифторметокси, трифторметокси, хлорметокси, дихлорметокси и трихлорметокси.
[0539] Термин "простой эфир" или "алкокси" включает соединения или группы, которые содержат атом кислорода, связанный с двумя атомами углерода или гетероатомами. Например, термин включает "алкоксиалкил", который относится к алкильной, алкенильной или алкинильной группе, ковалентно связанной с атомом кислорода, который ковалентно связан с алкильной группой.
[0540] Термин "сложный эфир" включает соединения или группы, которые содержат атом углерода или гетероатом, связанный с атомом кислорода, который связан с углеродом карбонильной группы. Термин "сложный эфир" включает алкоксикарбокси группы, такие как метоксикарбонил, этоксикарбонил, пропоксикарбонил, бутоксикарбонил, пентоксикарбонил и т.п.
[0541] Термин "тиоалкил" включает соединения или группы, которые содержат алкильную группу, связанную с атомом серы. Тиоалкильные группы могут быть замещены группами, такими как алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, карбоновая кислота, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматическая или гетероароматическая группа.
[0542] Термин "тиокарбонил" или "тиокарбокси" включает соединения и группы, которые содержат атом углерода, связанный двойной связью с атомом серы.
[0543] Термин "тиоэфир" включает группы, которые содержат атом серы, связанный с двумя атомами углерода или гетероатомами. Примеры тиоэфиров включают, но не ограничиваются этим алктиоалкилы, алктиоалкенилы и алктиоалкинилы. Термин "алктиоалкилы" включает группы с алкильной, алкенильной или алкинильной группой связанной с атомом серы, который связан с алкильной группой. Подобным образом, термин "алктиоалкенилы" относится к группам, где алкильная, алкенильная или алкинильная группа связана с атомом серы, который ковалентно связан с алкенильной группой; и "алктиоалкинилы" относится к группам, где алкильная, алкенильная или алкинильная группа связана с атомом серы, который ковалентно связан с алкинильной группой.
[0544] Как используется в настоящей заявке, "амин" или "амино" относится к незамещенному или замещенному -NH2. "Алкиламино" включает группы соединений, где азот в -NH2 связан с по меньшей мере одной алкильньной группой. Примеры алкиламино групп включают бензиламино, метиламино, этиламино, фенетиламино и т.п. "Диалкиламино" включает группы, где азот в -NH2 связан с по меньшей мере двумя дополнительными алкильными группами. Примеры диалкиламино групп включают, но не ограничиваются этим, диметиламино и диэтиламино. "Ариламино" и "диариламино" включают группы, где азот связан с по меньшей мере одной или двумя арильными группами, соответственно. "Аминоарил" и "аминоарилокси" относятся к арилу и арилокси, замещенному группой амино. "Алкилариламино", "алкиламиноарил" или "ариламиноалкил" относится к амино группе, которая связана с по меньшей мере одной алкильной группой и по меньшей мере одной арильной группой. "Алкаминоалкил" относится к алкильной, алкенильной или алкинильной группе, связанном с атомом азота, который также связан с алкильной группой. "Ациламино" включает группы, где азот связан с ацильной группой. Примеры ациламино включают, но не ограничиваются этим, алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо группы.
[0545] Термин "амид" или "аминокарбокси" включает соединения или группы, которые содержат атом азота, который связан с углеродом карбонильной или тиокарбонильной группы. Термин включает "алкаминокарбокси" группы, которые включают алкильные, алкенильные или алкинильные группы, связанные с амино группой, которая связана с углеродом карбонильной или тиокарбонильной группы. Он также включает "ариламинокарбокси" группы, которые включают арильные или гетероарильные группы, связанные с амино группой, которая связана с углеродом карбонильной или тиокарбонильной группы. Термины "алкиламинокарбокси", "алкениламинокарбокси", "алкиниламинокарбокси" и "ариламинокарбокси" включают группы, где алкильная, алкенильная, алкинильная и арильная группы, соответственно, связаны с атомом азота, который, в свою очередь, связан с углеродом карбонильной группы. Амиды могут быть замещены заместителями, такими как линейный алкил, разветвленный алкил, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероцикл. Заместители амидных групп могут быть дополнительно замещены.
[0546] Соединения по настоящему изобретению, которые содержат атомы азота, можно преобразовать в N-оксиды путем обработки окислителем (например, 3-хлорпероксибензойной кислотой (mCPBA) и/или пероксидами водорода) с получением других соединений по настоящему изобретению. Таким образом, все показанные и заявленные азот-содержащие соединения рассматриваются, когда это допускает валентность и структура, как включающие соединение как оно показано, а также его N-оксидное производное (которое может быть показано как N→O или N+-O-). Кроме того, в других случаях, атомы азота в соединениях по настоящему изобретению можно преобразовать в N-гидрокси или N-алкокси соединения. Например, N-гидрокси соединения можно получить путем окисления исходного амина окислителем, таким как m-CPBA. Все показанные и заявленные азот-содержащие соединения также рассматриваются, когда это допускает валентность и структура, как включающие соединение как оно показано, а также его N-гидрокси (т.е. N-OH) и N-алкокси (т.е. N-OR, где R представляет собой замещенный или незамещенный C1-C6 алкил, С1-С6 алкенил, С1-С6 алкинил, 3-14-членный карбоцикл или 3-14-членный гетероцикл) производные.
[0547] В настоящем описании, структурная формула соединения представляет определенный изомер, для удобства в некоторых случаях, но настоящее изобретение включает все изомеры, такие как геометрические изомеры, оптические изомеры на основании асимметрического углерода, стереоизомеры, таутомеры и подобные, при этом должно быть понятно, что не все изомеры могут иметь одинаковый уровень активности. Кроме того, кристаллический полиморфизм может присутствовать для соединений, представленных формулой. Следует отметить, что любая кристаллическая форма, смесь кристаллических форм или их ангидрид или гидрат включены в объем настоящего изобретения. Кроме того, так называемый метаболит, который образуется в результате разложения соединения по настоящему изобретению in vivo, включен в объем настоящего изобретения.
[0548] "Изомерия" означает соединения, которые имеют одинаковые молекулярные формулы, но различаются последовательностью связывания их атомов или расположением их атомов в пространстве. Изомеры, которые различаются расположением их атомов в пространстве, называют "стереоизомерами". Стереоизомеры, которые не являются зеркальными отражениеми друг друга, называют "диастереоизомерами", и стереоизомеры, которые не являются совпадающими при наложении зеркальными отражениеми друг друга, называют "энантиомерами" или иногда оптическими изомерами. Смесь, содержащую равные количества индивидуальных энантиомерных форм противоположной хиральности, называют "рацемической смесью".
[0549] Углеродный атом, связанный с четырьмя неидентичными заместителями, называют "хиральным центром".
[0550] "Хиральный изомер" означает соединение с по меньшей мере одним хиральным центром. Соединения с более чем одним хиральным центром могут существовать либо в виде индивидуального диастереомера, либо в виде смеси диастереомеров, называемой "диастереомерной смесью". Когда присутствует один хиральный центр, стереоизомер может быть охарактеризован абсолютной конфигурацией (R или S) этого хирального центра. Абсолютная конфигурация относится к расположению в пространстве заместителей, связанных с хиральным центром. Рассматриваемые заместители, связанные с хиральным центром, расположены в порядке соответствия с Правилом Последовательности Кана, Ингольда и Прелога. (Cahn et al, Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al, Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et al, Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116).
[0551] "Геометрический изомер" означает диастереомеры, которые существуют благодаря затрудненному вращению вокруг двойных связей или циклоалкильного линкера (например, 1,3-циклобутила). Эти конфигурации отличаются по названиям префиксами цис и транс или Z и E, которые указывают, что группы находятся на одной и той же или на противоположных сторонах двойной связи в молекуле в соответствии с правилами Кана-Ингольда-Прелога.
[0552] Должно быть понятно, что соединения по настоящему изобретению могут быть описаны как разные хиральные изомеры или геометрические изомеры. Также должно быть понятно, что, когда соединения имеют хиральные изомерные или геометрические изомерные формы, предполагается, что все изомерные формы включены в объем настоящего изобретения, и название соединений не исключает какую-либо изомерную форму, при этом должно быть понятно, что не все изомеры могут иметь одинаковый уровень активности.
[0553] Кроме того, структуры и другие соединения, обсуждаемые в настоящем изобретении, включают все их атропизомеры, при этом должно быть понятно, что не все атропизомеры могут иметь одинаковый уровень активности. "Атропизомеры представляют собой тип стереоизомера, где атомы двух изомеров имеют разное расположение в пространстве. Атропизомеры существуют благодаря ограниченному вращению, вызванному затруднением вращения больших групп вокруг центральной связи. Такие атропизомеры типично существуют в виде смеси, однако как результат последних достижений в хроматографии, стало возможным разделение смесей двух атропизомеров в избиральных случаях.
[0554] "Таутомер" представляет собой один из двух или более структурных изомеров, которые существуют в равновесии и легко преобразовываются из одной изомерной формы в другую. Это преобразование приводит к формальной миграции атома водорода, сопровождаемой переключением смежных сопряженных двойных связей. Таутомеры существуют в виде смеси ряда таутомеров в растворе. В растворах, где возможна таутомеризация, будет достигаться химическое равновесие таутомеров. Точное соотношение таутомеров зависит от различных факторов, включая температуру, растворитель и pH. Когда таутомеры являются взаимопреобразуемыми путем таутомеризации это понятие называют таутомерией.
[0555] Из различных типов таутомерии, которые возможны, обычно наблюдают два типа. В кето-енольной таутомерии происходит одновременный сдвиг электронов и атома водорода. Кольцевая-цепочечная таутомерия возникает в результате взаимодействия альдегидной группы (-CHO) в сахарной цепи молекулы с одной из гидрокси групп (-OH) в этой же молекуле с приданием ей циклической (кольцевой) формы, как продемонстрировано на примере глюкозы.
[0556] Обычные таутомерные пары представляют собой следующие: кетон-енол, амид-нитрил, лактам-лактим, амид-имидная кислота таутомерия в гетероциклических кольцах (например, в основаниях нуклеиновых кислот, таких как гуанин, тимин и цитозин), имин-енамин и енамин-енамин. Примером кето-енольных равновесий являются равновесия между пиридин-2(1H)-онами и соответствующими пиридин-2(1H)-олами, как показано ниже.
[0557] Должно быть понятно, что соединения по настоящему изобретению могут быть описаны как различные таутомеры. Также должно быть понятно, что, когда соединения имеют таутомерные формы, предполагается, что все таутомерные формы включены в объем настоящего изобретения, и название соединений не исключает какую-либо таутомерную форму. Должно быть понятно, что некоторые таутомеры могут иметь более высокий уровень активности по сравнению с другими.
[0558] Термин "кристаллические полиморфы", "полиморфы" или "кристаллические формы" означает кристаллические структуры, где соединение (или его соль или сольват) может кристаллизоваться в различные кристаллические упаковки, которые все имеют одинаковый состав элементов. Разные кристаллические формы обычно имеют разные рентгеновские дифрактограммы, данные инфракрасного спектрального анализа, температуры плавления, плотность, твердость, кристаллическую форму, оптические и электрические свойства, стабильность и растворимость. Растворитель перекристаллизации, скорость кристаллизации, температура хранения и другие факторы могут привести к доминированию одной кристаллической формы. Кристаллические полиморфы соединений можно получить путем кристаллизации в различных условиях.
[0559] Соединения любой из формул, описанных в настоящей заявке, включают соединения как таковые, а также их соли, их сольваты и их пролекарства, когда это является подходящим. Соль, например, может быть образована между анионом и положительно заряженной группой (например, амино) в замещенном бензольном соединении. Подходящие анионы включают хлорид, бромид, иодид, сульфат, бисульфат, сульфамат, нитрат, фосфат, цитрат, метансульфонат, трифторацетат, глутамат, глюкуронат, глутарат, малат, малеат, сукцинат, фумарат, тартрат, тозилат, салицилат, лактат, нафталинсульфонат и ацетат (например, трифторацетат). Термин "фармацевтически приемлемый анион" относится к аниону, подходящему для образования фармацевтически приемлемой соли. Подобным образом, соль также может быть образована между катионом и отрицательно заряженной группой (например, карбоксилат) в замещенном бензольном соединении. Подходящие катионы включают натриевый ион, калиевый ион, магниевый ион, кальциевый ион и аммониевый катион, такой как ион тетраметиламмония. Замещенные бензольные соединения также включают такие соли, которые содержат четвертичные атомы азота.
[0560] Примеры пролекарств включают сложные эфиры и другие фармацевтически приемлемые производные, которые, при введении субъекту, способны обеспечивать активные замещенные бензольные соединения.
[0561] Кроме того, соединения по настоящему изобретению, например, соли соединений, могут существовать либо в гидратированной, либо в негидратированной (безводной) форме, или в виде сольватов с другими молекулами растворителя. Неограничивающие примеры гидратов включают моногидраты, дигидраты и т.п. Неограничивающие примеры сольватов включают этанольные сольваты, ацетоновые сольваты и т.п.
[0562] "Сольват" означает формы добавления растворителя, которые содержат либо стехиометрические, либо нестехиометрические количества растворителя. Некоторые соединения имеют тенденцию улавливать фиксированное молярное отношение молекул растворителя в кристаллическическом твердом состоянии с образованием, таким образом, сольвата. Когда растворитель представляет собой воду, образуемый сольват представляет собой гидрат; и когда растворитель представляет собой спирт, образуемый сольват представляет собой алкоголят. Гидраты получают путем объединения одной или нескольких молекул воды с одной молекулой вещества, где вода сохраняет свое молекулярное состояние как H2O.
[0563] Как используется в настоящей заявке, термин "аналог" относится к химическому соединению, которое является структурно схожим с другим, но несколько отличается по композиции (например, замещением одного атома атомом другого элемента, или присутствием определенной функциональной группы, или замещением одной функциональной группы другой функциональной группой). Таким образом, аналог представляет собой соединение, которое является подобным или сопоставимым по функции и внешнему виду, но не по структуре или происхождению, с сравнительным соединением.
[0564] Как он определен в настоящей заявке, термин "производное" относится к соединениям, которые имеют общую структуру ядра и являются замещенными различными группами, описанными в настоящей заявке. Например, все соединения, представленные формулой (I), представляют собой замещенные бензольные соединения и имеют Формулу (I) в качестве общего ядра.
[0565] Термин "биоизостера" относится к соединению, полученному в результате обмена атома или группы атомов с другим, в широком смысле подобным, атомом или группой атомов. Целью биоизостерического замещения является создание нового соединения с биологическими свойствами подобными свойствам исходного соединения. Биоизостерическое замещение может быть на физико-химической или топологической основе. Примеры карбоновокислотных биоизостер включают, но не ограничиваются этим, ацилсульфонимиды, тетразолы, сульфонаты и фосфонаты. См., например, Patani and LaVoie, Chem. Rev. 96,3147-3176, 1996.
[0566] Настоящее изобретение предполагает включение всех изотопов атомов, присутствующих в соединениях по настоящему изобретению. Изотопы включают те атомы, которые имеют одинаковый атомный номер, но разное массовое число. В качестве общего примера и без ограничения, изотопы водорода включают тритий и дейтерий, а изотопы углерода включают C-13 и C-14.
2. Синтез замещенных бензольных соединений
[0567] Настоящее изобретение обеспечивает способы синтеза соединений любой из формул, описанных в настоящей заявке. Настоящее изобретение также обеспечивает детально раскрытые способы синтеза различных раскрытых соединений по настоящему изобретению в соответствии со следующими схемами, как показано в примерах.
[0568] В описании изобретения, когда композиции описаны как содержащие, включающие или включающие в себя конкретные компоненты, предусматривается, что композиции также по существу состоят из, или состоят из, указанных компонентов. Подобным образом, когда методы или способы описаны как содержащие, включающие или включающие в себя конкретные стадии способа, эти способы также состоят по существу из, или состоят из, указанных стадий способа. Кроме того, должно быть понятно, что порядок стадий или порядок осуществления определенных действий не имеет значения, при условии, что изобретение остается осуществимым. Кроме того, две или более стадий или действий можно осуществить одновременно.
[0569] Способы синтеза по настоящему изобретению могут допускать множество различных функциональных групп, поэтому можно использовать различные замещенные исходные вещества. Способы, как правило, обеспечивают желаемое конечное соединение в конце или близко к завершению общего способа, хотя в некоторых случаях может быть желательным дальнейшее преобразование соединения в его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство.
[0570] Соединения по настоящему изобретению можно получить различными путями с использованием коммерчески доступных исходных веществ, соединений, известных из литературы, или из легко получаемых промежуточных соединений, с использованием стандартных способов синтеза и процедур, либо известных специалистам в данной области, либо которые будут очевидны специалистам в данной области в свете указаний, содержащихся в настоящей заявке. Стандартные способы синтеза и процедуры получения органических молекул и преобразований функциональных групп и манипуляций с ними можно найти в соответствующей научной литературе или в стандартных справочниках, которые известны в данной области техники. Не ограничиваясь каким-либо одним или несколькими источниками, классические справочники, такие как Smith, M. В., March, J., March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001; Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999; R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Stnthesis, John Wiley and Sons (1994); и L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Stnthesis, John Wiley and Sons (1995), включенные в настоящую заявку посредством ссылки, являются полезными и общепризнанными справочниками в области органического синтеза, которые известны специалистам в данной области. Следующие описания способов синтеза предназначены для иллюстрации, а не для ограничения, общих процедур для получения соединений по настоящему изобретению.
[0571] Соединения по настоящему изобретению легко можно получить различными способами, которые известны специалистам в данной области. Соединения по настоящему изобретению с любой из формул, описанных в настоящей заявке, можно получить в соответствии с процедурами, проиллюстрированными на Схемах 1-10 ниже, из коммерчески доступных исходных веществ или из исходных веществ, которые можно получить с использованием процедур, описанных в литературе. Z и R группы (такие как R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8 и R12) на Схемах 1-10 имеют значения, определенные в любой Формуле, описанной в настоящей заявке, если не указано иное.
[0572] Специалистам в данной области будет понятно, что при последовательном осуществлении реакций и схем синтеза, описанных в настоящей заявке, порядок некоторых стадий может меняться, например введение и удаление защитных групп.
[0573] Специалистам в данной области должно быть понятно, что для некоторых групп может потребоваться защита от реакционных условий через использование защитных групп. Защитные группы также можно использовать для дифференцирования аналогичных функциональных групп в молекулах. Перечень защитных групп и способы введения и удаления этих групп можно найти в Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999.
[0574] Предпочтительные защитные группы включают, но не ограничиваются этим:
[0575] Для гидроксильной группы: TBS, бензил, THP, Ac
[0576] Для карбоновых кислот: бензиловый сложный эфир, метиловый сложный эфир, этиловый сложный эфир, аллиловый сложный эфир
[0577] Для аминов: Cbz, BOC, DMB
[0578] Для диолов: Ac (x2) TBS (x2), или, когда взяты вместе, ацетониды
[0579] Для тиолов: Ac
[0580] Для бензимидазолов: SEM, бензил, PMB, DMB
[0581] Для альдегидов: ди-алкилацетали, такие как диметоксиацеталь или диэтилацетиль.
[0582] В схемах реакций, описанных в настоящей заявке, могут быть получены различные стереоизомеры.
Когда не указан какой-либо конкретный стереоизомер, это означает все возможные стереоизомеры, которые могут быть получены в результате реакции. Специалистам в данной области, имеющим среднюю квалификацию, должно быть понятно, что реакции можно оптимизировать для получения предпочтительным образом одного изомера, или можно разработать новые схемы для получения одного изомера. Если получают смеси, можно использовать такие методы, как препаративная тонкослойная хроматография, препаративная ВЭЖХ, препаративная хиральная ВЭЖХ или препаративная SFC, для разделения изомеров.
[0583] Следующие аббревиатуры используют во всех разделах настоящего описания, и они определены ниже:
[0584] AA ацетат аммония
[0585] ACN ацетонитрил
[0586] Ac ацетил
[0587] AcOH уксусная кислота
[0588] атм. атмосфера
[0589] водн. водный
[0590] BID или b.i.d - bis in die (два раза в день)
[0591] tBuOK трет-бутоксид калия
[0592] Bn бензил
[0593] BOC трет-бутоксикарбонил
[0594] BOP (бензотриазол-1-илокси)трис(диметиламино)-
фосфонийгексафторфосфат
[0595] Cbz бензилоксикарбонил
[0596] CDCl3 дейтерированный хлороформ
[0597] CH2Cl2 дихлорметан
[0598] COMU гексафторфосфат (1-циано-2-этокси-2-
оксоэтилиденаминоокси)-диметиламино-
морфолино-карбения
[0599] d дни
[0600] DBU 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен
[0601] DCE 1,2 дихлорэтан
[0602] DCM дихлорметан
[0603] DEAD Диэтилазодикарбоксилат
[0604] DIAD Диизопропилазодикарбоксилат
[0605] DiBAL-Н Диизобутилалюминий гидрид
[0606] DIPEA N,N-диизопропилэтиламин N,N-
Диизопропилэтиламин (основание Хунига)
[0607] DMA Диметилацетамид
[0608] DMAP N,N диметил-4-аминопиридин
[0609] DMB 2,4 диметоксибензил
[0610] DMF N,N-Диметилформамид
[0611] DMSO Диметилсульфоксид
[0612] DPPA Азид дифенилфосфоновой кислоты
[0613] EA или EtOAc Этилацетат
[0614] EDC или EDCI N-(3-Диметиламинопропил)-N'-
этилкарбодиимид
[0615] Et2O Диэтиловый эфир
[0616] ELS Испарительное светорассеяние
[0617] ESI- Отрицательный режим электрораспыления
[0618] ESI+ Положительный режим электрораспыления
[0619] Et3N или ТЕА Триэтиламин
[0620] EtOH Этанол
[0621] FA Муравьиная кислота
[0622] FC или FCC Флэш-хроматография
[0623] h часы
[0624] H2O Вода
[0625] HATU Гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)-
N,N,N',N'-тетраметилурония
[0626] HOAT 1-Гидрокси-7-азабензотриазол
[0627] HOBt 1-Гидроксибензотриазол
[0628] HO-Su N-Гидроксисукцинимид
[0629] HCl Хлористый водород или хлористоводородная кислота
[0630] ВЭЖХ Высокоэффективная жидкостная хроматография
[0631] K2CO3 Карбонат калия
[0632] KHMDs Гексаметилдисилазид калия
[0633] LC/MS или ЖХ-МС Жидкостная хроматография/масс-спектр
[0634] LDA Диизопропиламид лития
[0635] LiHMDs Гексаметилдисилазид лития
[0636] LG Удаляемая группа
[0637] М Молярный
[0638] m/z отношение масса/заряд
[0639] m-CPBA мета-хлорпероксибензойная кислота
[0640] MeCN Ацетонитрил
[0641] MeOD d4-метанол
[0642] MeI Метилиодид
[0643] MS3Ǻ 3Ǻ молекулярные сита
[0644] MgSO4 Сульфат магния
[0645] мин минуты
[0646] Ms Мезил
[0647] MsCl Мезилхлорид
[0648] MsO Мезилат
[0649] MS Масс-спектр
[0650] MWI микроволновое облучение
[0651] Na2CO3 Карбонат натрия
[0652] Na2SO4 Сульфат натрия
[0653] NaHCO3 Бикарбонат натрия
[0654] NaHMDs Гексаметилдисилазид натрия
[0655] NaOH Гидроксид натрия
[0656] NaHCO3 Бикарбонат натрия
[0657] Na2SO4 Сульфат натрия
[0658] NIS N-иодсукцинимид
[0659] ЯМР Ядерный магнитный резонанс
[0660] o/n или O/N в течение ночи
[0661] Pd/C Палладий на углероде
[0662] Pd(dppf)Cl2.DCM [1,1'-Бис(дифенилфосфино)
ферроцен]дихлорпалладий(II),
комплекс с дихлорметаном
[0663] PPAA Циклический ангидрид 1-пропанфосфоновой
кислоты
[0664] Pd(OH)2 Дигидроксид палладия
[0665] PE Петролейный эфир
[0666] PG Защитная группа
[0667] PMB пара-метоксибензил
[0668] м.д. миллионные доли
[0669] п.о. per os (пероральное введение)
[0670]преп ВЭЖХ Препаративная высокоэффективнаяжидкостная хроматография
[0671] преп ТСХ Препаративная тонкослойная хроматография
[0672] p-TsOH пара-толуолсульфоновая кислота
[0673] PyBOP Гексафторфосфат (бензотриазол-1-илокси)-
трипирролидинофосфония
[0674] QD или q.d. quaque die (один раз в день)
[0675] RBF круглодонная колба
[0673] ОФ-ВЭЖХ Обращенно-фазовая высокоэффективная
жидкостная хроматография
[0677]Rt или RT Комнатная температура
[0678] SEM (Триметилсилил)этоксиметил
[0679] SEMCl (Триметилсилил)этоксиметилхлорид
[0680] SFC Сверхкритическая хроматография
[0681]SGC Хроматография на силикагеле
[0682] STAB Триацетоксиборогидрид натрия
[0683] TBAF тетра-н-бутиламмонийфторид
[0684] ТВМЕ трет-бутил метиловый эфир
[0685] ТЕА Триэтиламин
[0686] TFA Трифторуксусная кислота
[0687] TfO Трифлат
[0688] ТГФ Тетрагидрофуран
[0689] THP Тетрагидропиран
[0690] TID или t.i.d. ter in die (три раза в день)
[0691] ТСХ Тонкослойная хроматография
[0692] TMSCl Триметилсилилхлорид
[0693] Ts Тозил
[0694] TsOH пара-толуолсульфоновая кислота
[0695] УФ ультрафиолет
Схема 1
[0696] Схема 1 показывает синтез бензольных аналогов, где Z = -N(R7)(R8), следуя общему пути, в котором используют общепринятые химические приемы. Замещенные нитробензойные кислоты, многие из которых являются коммерчески доступными или которые можно получить с использованием реакций нитрования соответствующих замещенных бензойных кислот или других химических процедур, известных специалистам в данной области, можно преобразовать в их метиловые сложные эфиры путем обработки метилиодидом в полярном растворителе, таком как DMF, в присутствии подходящего основания, такого как карбонат натрия, при подходящей температуре, такой как 60°C (Стадия 1). Нитро группа может быть восстановлена до амина с использованием подходящего восстановителя, такого как железо, в присутствии кислоты, такой как хлорид аммония, в протонном растворителе, таком как этанол, при подходящей температуре, такой как 80°C (Стадия 2). Введение R7 можно осуществить путем восстановительного аминирования с использованием соответствующего R7-кетона или R7-альдегида в присутствии подходящего восстановителя, такого как цианоборогидрид натрия, и каталитической кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. Ряд R8 групп можно ввести путем алкилирования с использованием R8-LG, где LG представляет собой удаляемую группу, такую как иод, в присутствии слабого основания, такого как карбонат цезия, в подходящем полярном растворителе, таком как ацетонитрил, при подходящей температуре, такой как 80°C (Стадия 4). Альтернативно, R8 группы можно ввести путем восстановительного аминирования с использованием R8-кетона или R8-альдегида в присутствии подходящего восстановителя, такого как цианоборогидрид натрия, и каталитической кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. Сложноэфирную группу можно преобразовать в амид с использованием стандартного двухтадийного протокола. Сложный эфир может быть гидролизован с получением соответствующей кислоты с использованием подходящего основания, такого как гидроксид натрия, в полярном растворителе, таком как этанол (Стадия 5). Кислоту затем можно подвергнуть стандартной реакции амидного связывания, добавляя сразу после этого подходящий амин вместе с подходящим амидным связывающим реагентом, таким как PYBOP, в подходящем растворителе, таком как DMSO, с получением желаемого амида (Стадия 6).
Схема 2
[0697] В зависимости от природы R6 заместителя, можно использовать дальнейшие химические модификации для преобразования R6 заместителя в альтернативный R6 заместитель. Репрезентативные примеры таких модификаций могут включать гидрирование, удаление защитных групп с последующими дополнительными реакциями амидного связывания, катализируемыми палладием реакциями связывания, реакциями восстановительного аминирования или реакциями алкилирования. Например, когда R6 представляет собой бромид, альтернативные R6 заместители затем можно ввести с использованием стандартных протоколов на основании переходных металлов, которые полагаются на удаляемую группу, такую как бромид, в качестве точки соединения.
[0698] В одном таком протоколе, как показано на Схеме 2, неароматические R6 заместители, присоединяемые через углерод-углеродную связь, можно ввести при помощи реакции Сузуки соединения, где R6 = Br, с подходящим ненасыщенным неароматическим сложноэфирным производным бороновой кислоты (например, олефиновым сложноэфирным производным бороновой кислоты, таким как винил 4,4,5,5-тетраметил-2-винил-1,3,2-диоксаборолан), в присутствии слабого основания и палладиевого катализатора в полярном растворителе, таком как диоксан/вода, при повышенной температуре, с получением желаемого нового R6 заместителя. В зависимости от природы R6 заместителя, можно использовать дальнейшие химические модификации для преобразования ненасыщенного R6 заместителя в альтернативный R6 заместитель. Репрезентативные примеры таких модификаций могут включать гидрирование, удаление защитных групп с последующими дополнительными реакциями амидного связывания, катализируемыми палладием реакциями связывания, реакциями восстановительного аминирования или реакциями алкилирования. Например, в случаях, когда осуществляют введение ненасыщенной неароматической R6 группы, дальнейшая модификация путем гидрирования может дать соответствующую насыщенную R6 группу (например, преобразование винильной группы в этильную группу). В случаях, когда вводимые R6 группы содержат защищенную функциональную группу амина, дальнейшие модификации включают удаление защиты с получением аминов, которые на последующих стадиях могут быть далее модифицированы, например, путем образования амида или с использованием реакции восстановительного аминирования.
[0699] В другом протоколе, как показано на Схеме 3, неароматические R6 заместители, присоединяемые через углерод-углеродную связь, можно ввести при помощи реакции Соногашира соединения, где R6 = Br, необязательно с последующими дальнейшими модификациями введенной алкинильной группы. В реакции Соногашира, соединение, где R6 = Br, подвергают связыванию с конечным алкиновым производным в присутствии слабого основания, медного катализатора и палладиевого катализатора в органическом растворителе, таком как толуол, при повышенной температуре. Это приводит к замещению Br группы алкинильной группой. Полученное соединение, где R6 заместитель представляет собой алкинильную группу, можно подвергнуть последующим подходящим модификациям с получением альтернативного R6 заместителя. Репрезентативные примеры таких модификаций могут включать гидрирование, удаление защитных групп с последующими дополнительными реакциями амидного связывания, реакциями восстановительного аминирования или реакциями алкилирования.
Схема 3
[0700] В другом протоколе, неароматические R6 заместители, присоединяемые через углерод-углеродную связь, можно получить с использованием других реакций замещения содержащих атом брома соединений, где R6 = Br, необязательно с последующей дальнейшей модификацией введенной R6 группы. Примеры таких реакций замещения включают реакции связывания с цинковыми реагентами, такие как реакции цианирования и Негиши. В случае реакции цианирования, соединения, где R6 = Br, можно подвергнуть взаимодействию с цианидом цинка в стандартных опосредованных палладиевым катализатором реакционных условиях, с получением соединений, где R6 = CN. Цианогруппу в таких соединениях можно подвергнуть дальнейшей модификации с получением других R6 групп. Такие циано модификации включают i. восстановление до амина, который может быть далее преобразован в амид путем ацилирования или алкилирования, ii. восстановление до альдегида, который можно подвергнуть реакции восстановительного аминирования с получением соответствующих производных. В реакции Негиши алкилцинковые реагенты, которые можно получить из алкилиодидов (например, N-Boc-3-иодазетидин), связывают с соединениями, где R6 = Br, с использованием палладиевых или никелевых катализаторов. В полученных продуктах введенную R6 группу можно преобразовать в альтернативную группу путем дальнейших модификаций R6 группы на последующих стадиях, таких как удаление защиты, образование амида или алкилирование.
[0701] Соединения с R6 заместителями, которые представляют собой амины, присоединяемые через азот-углеродную связь, можно ввести при помощи реакции связывания по Бухвальду соединений, где R6 = Br, с последующей необязательной модификацией R6 группы, как показано на Схеме 4. В реакции Бухвальда соединения, где R6 = Br, обрабатывают первичным или вторичным амином (например, трет-бутилпиперазин-1-карбоксилатом) в присутствии палладиевого катализатора (например, Pd(dba)2/BINAP) и основания (например, карбоната цезия) в органическом растворителе (например, толуоле) при повышенной температуре. Продукт реакции связывания по методу Бухвальда можно подвергнуть дальнейшим подходящим модификациям, с получением альтернативного R6 заместителя. Примеры таких модификаций включают удаление защитных групп, реакции амидного связывания, реакции восстановительного аминирования или реакции алкилирования.
Схема 4
[0702] Соединения с R6 заместителями, которые представляют собой алкилтио группы, присоединяемые через сера-углеродную связь, можно получить при помощи реакции связывания соединений, где R6 = Br, с тиолами в присутствии палладиевого катализатора и слабого основания (например, DIPEA) в органическом растворителе при повышенной температуре. Сульфидные продукты связывания можно подвергнуть дальнейшим подходящим модификациям, с получением альтернативного R6 заместителя. Такие модификации включают реакции окисления серы с получением сульфоксидов и сульфонов, удаление защитных групп, реакции амидного связывания, реакции восстановительного аминирования или реакции алкилирования.
[0703] В модификации общего синтеза на Схеме 1, в зависимости от природы R7 заместителя, дальнейшую химическую модификацию после Стадии 6 Схемы 1 можно использовать для преобразования R7 заместителя в альтернативный R7 заместитель. Например, защищенную аминогруппу, содержащуюся в R7, можно подвергнуть реакции удаления защиты (например, отщепления Boc группы) с получением свободных амино групп. Так свободные амино группы можно подвергнуть реакциям восстановительного аминирования или реакциям алкилирования, с получением замещенных аминов.
[0704] Схема 5 представляет общий синтез пиколинамидных соединений. Исходя из метил 3-бром-6-хлорпиколината, окисление до N-оксида с последующим хлорированием с использованием оксихлорида фосфора дает метил 3-бром-4,6-дихлорпиколинат. 4-хлор группа может быть селективно замещена различными моно и диалкиламинами, которые также могут содержать функциональные или защищенные функциональные группы, защита которых может быть удалена на более поздней стадии. 3-бром группа может быть сохранена или, необязательно, может быть преобразована в альтернативную R12 группу при помощи подходящей реакции замещения и дальнейших модификаций функциональных групп. Такие реакции включают реакции связывания, опосредованные палладиевыми катализаторами. Например, 3-бром группу можно преобразовать в R12 = метильную группу при помощи реакции Стилле с тетраметилоловом. Сложноэфирный гидролиз с последующим амидным связыванием с соответствующими 3-(аминометил)-пиридин-2-онами дает пиколинамидные соединения, где R6 представляет собой группу хлора. Группа хлора, необязательно, может быть преобразована в альтернативные R6 группы при помощи подходящих реакций замещения на конечной стадии или, альтернативно, перед Стадией 6 сложноэфирного гидролиза. Примеры таких реакций замещения включают реакции цианирования и аминирования, осуществляемые либо непосредственно, либо опосредованные палладиевыми катализаторами. Аналогичные соединения, где R12 представляет собой хлор, можно получить аналогичным способом из метил 3,4,6-трихлорпиридин-2-карбоксилата.
Схема 5
[0705] Общие способы синтеза промежуточных соединений 3-(аминометил)-пиридин-2(1Н)-онов для реакции амидного связывания (схема 1) представлены на Схеме 6. В одном способе, дикетон может быть конденсирован с 2-цианоацетамидом в присутствии соответствующего реагента, такого как пиперидинацетат. в полярном растворителе, таком как этанол, с получением цианопиридона (Стадия 9). В другом способе, когда R3 представляет собой H, подходящим образом замещенный алкинилкетон может быть конденсирован с 2-цианоацетамидом в присутствии соответствующего реагента, такого как пиперидинацетат, в полярном растворителе, таком как этанол, с получением цианопиридона (Стадия 11). Цианогруппа может быть восстановлена в подходящих условиях, таких как гидрирование в присутствии каталитического никеля Ренея, в полярном растворителе, таком как аммоний в метаноле, с получением амина (Стадия 10).
Схема 6
[0706] Кроме того, в зависимости от природы R2, R3 или R4 групп, возможна дальнейшая химическая модификация для преобразования каждой из них независимо в альтернативный заместитель. Репрезентативные примеры таких модификаций могут включать гидрирование, удаление защитных групп с последующими дополнительными реакциями амидного связывания, катализируемыми палладием реакциями связывания, реакциями восстановительного аминирования и реакциями алкилирования.
[0707] Схема 7 представляет вариант общего пути синтеза Схемы 1 на основании 2-замещенных (заместитель представляет собой R12 группу) метил 3-амино-5-бром-бензоатных исходных веществ. Эти исходные вещества, в свою очередь, можно получить из 2-замещенных 3-нитро-бензойных кислот, которые являются коммерчески доступными или могут быть получены путем нитрования 2-замещенных бензойных кислот. Таким образом, бромирование 2-замещенных 3-нитро-бензойных кислот подходящим реагентом, таким как 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион, дает соответствующие 2-замещенные 3-нитро-5-бром-бензойные кислоты. Затем можно последовательно осуществить различные способы этерификации и затем восстановления нитрогруппы для получения 2-замещенных метил 3-амино-5-бром-бензоатных исходных веществ из 2-замещенных 3-нитро-5-бром-бензойных кислот.
Схема 7
[0708] Как показано на Схеме 7, R7 группа может быть введена из 2-замещенных метил 3-амино-5-бром-бензоатов на Стадии 1 путем восстановительного аминирования с использованием соответствующего R7-кетона или R7-альдегида в присутствии подходящего восстановителя, такого как цианоборогидрид натрия, и каталитической кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. Подобным образом, R8 группы можно ввести на Стадии 2 путем восстановительного аминирования с использованием R8-кетона или R8-альдегида в присутствии подходящего восстановителя, такого как цианоборогидрид натрия, и каталитической кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. Альтернативно, различные R8 группы можно ввести путем алкилирования с использованием R8-LG, где LG представляет собой удаляемую группу, такую как иод, в присутствии слабого основания, такого как карбонат цезия, в подходящем полярном растворителе, таком как ацетонитрил, при подходящей температуре, такой как 80°C. На Стадии 3, R6 группы, отличные от брома, можно ввести через катализируемые палладием реакции связывания. Примеры таких R6 групп и способов описаны выше. Например, амины можно ввести при помощи реакции Бухвальда, и ненасыщенные группы можно ввести при помощи реакций Сузуки или Соногашира. R6 заместитель можно подвергнуть дальнейшим подходящим модификациям с получением альтернативного R6 заместителя. Репрезентативные примеры таких модификаций могут включать гидрирование (например, для насыщения ненасыщенных групп), удаление защитных групп с последующими дополнительными реакциями амидного связывания, реакциями восстановительного аминирования или реакциями алкилирования. На Стадии 4 сложноэфирная группа может быть гидролизована с получением соответствующей кислоты с использованием подходящего основания, такого как гидроксид натрия, в полярном растворителе, таком как этанол. На Стадии 5, кислоту можно подвергнуть стандартной реакции амидного связывания с использованием соответствующего 3-(аминометил)-пиридин-2-она, который добавляют вместе с подходящим амидным связывающим реагентом, таким как PYBOP, в подходящем растворителе, таком как DMSO, с получением желаемого амида. В зависимости от природы R7 заместителя, возможна дальнейшая химическая модификация после Стадии 5 Схемы 4 для преобразования R7 заместителя в альтернативный R7 заместитель. Например, защищенную аминогруппу, содержащуюся в R7, можно подвергнуть реакции удаления защиты (например, отщепление Boc группы) с получением свободных аминогрупп. Такие свободные аминогруппы можно подвергнуть реакциям восстановительного аминирования или реакциям алкилирования с получением замещенных аминов.
[0709] Схема 8 ниже представляет общий способ синтеза 2-моноалкиламино и 2-диалкиламино-3,6-дизамещенных-изоникотинамидов, где 3-заместитель соответствует группе R12, и 6-заместитель соответствует группе R6. На Стадии 1, 3-заместитель можно ввести способом, описанным Epsztain J. et al. Tetrahedron, 1991, v. 47, 1697-16708, путем металлирования 2-хлор-изоникотинанилида с использованием н-бутиллития с последующим улавливанием при помощи алкилиодида, такого как метилиодид, или альдегида или другой электрофильной группы.
Схема 8
[0710] В случаях, когда улавливающий реагент обеспечивает получение заместителя с функциональной группой, эту группу можно защитить или преобразовать в другую функциональную группу, совместимую с последующими химическими стадиями. На Стадии 2 можно осуществить гидролиз анилидамида в стандартных кислотных условиях, с последующим синтезом сложного метилового эфира в стандартных условиях, например, как показано, с использованием метилиодида и основания, с получением соответствующих метил 2-хлор-3-замещенных изоникотинатов. На Стадии 4 алкиламино группу можно ввести при помощи реакции Бухвальда связывания R7NH2 моноалкиламина с метил 2-хлор-3-замещенными изоникотинатами. Эта реакция хорошо известна для различных 2-хлорпиридиновых систем из химической литературы. На необязательной Стадии 5 для диалкиламино соединений, R8 группы можно ввести путем восстановительного аминирования с использованием R8-кетона или R8-альдегида в присутствии подходящего восстановителя, такого как цианоборогидрид натрия, и каталитической кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. Альтернативно, различные R8 группы можно ввести путем алкилирования с использованием R8-LG, где LG представляет собой удаляемую группу, такую как иод, в присутствии слабого основания, такого как карбонат цезия, в подходящем полярном растворителе, таком как ацетонитрил, при подходящей температуре, такой как 80°C. На Стадии 6, окисление до N-оксида с последующим хлорированием с использованием оксихлорида фосфора дает метил 6-хлор-2-моно или диалкиламино-3-замещенные изоникотинаты. На Стадии 7 сложноэфирная группа может быть гидролизована с получением соответствующей кислоты с использованием подходящего основания, такого как гидроксид натрия, в полярном растворителе, таком как этанол. На Стадии 8 кислоту можно подвергнуть стандартной реакции амидного связывания, где добавляют соответствующий замещенный 3-(аминометил)-пиридин-2-он вместе с подходящим амидным связывающим реагентом, таким как PYBOP, в подходящем растворителе, таком как DMSO, с получением желаемого амида. На Стадии 9 группа хлора, необязательно, может быть преобразована в альтернативные R6 группы при помощи подходящей реакции замещения на конечной стадии или, альтернативно, перед Стадией 6 сложноэфирного гидролиза. Примеры таких реакций замещения включают реакции цианирования и аминирования, осуществляемые либо непосредственно, либо опосредованные палладиевыми катализаторами. R6 заместитель можно подвергнуть дальнейшим подходящим модификациям с получением альтернативного R6 заместителя. Репрезентативные примеры таких модификаций могут включать гидрирование (например, для насыщения ненасыщенных групп), удаление защитных групп с последующими дополнительными реакциями амидного связывания, реакциями восстановительного аминирования или реакциями алкилирования. В зависимости от природы R7 заместителя, возможны дальнейшие стадии химических модификаций для преобразования R7 заместителя в альтернативный R7 заместитель. Например, защищенную аминогруппу, содержащуюся в R7, можно подвергнуть реакции удаления защиты (например, отщепление Boc группы) с получением свободных аминогрупп. Такие свободные аминогруппы можно подвергнуть реакциям восстановительного аминирования или реакциям алкилирования с получением замещенных аминов.
Схема 9
[0711] Схема 9 представляет синтез бензольных аналогов, где Z представляет собой сульфидную, сульфоксидную или сульфоновую группу, следуя общему пути с использованием общепринятых химических приемов. Исходя из замещенной бензойной кислоты, такой как 5-хлор-2-метилбензойная кислота, нитрование с использованием стандартных условий, таких как обработка концентрированной H2SO4 и концентрированной HNO3, может обеспечить нитро аналог. Этерификацию кислоты можно осуществить с использованием алкилирующего агента, такого как метилиодид, в присутствии основания, такого как карбонат натрия, в полярном растворителе, таком как DMF. Нитрогруппа может быть восстановлена с использованием таких условий, как железо и хлорид аммония в протонном растворителе, таком как этанол, с нагреванием до температуры, такой как 80°C. Полученный анилин можно преобразовать в бромид с использованием реакции Сандмейера при помощи обработки CuBr2 и трет-бутилнитритом в растворителе, таком как ацетонитрил. Катализируемое палладием связывание тиола с бромидом можно осуществить с использованием источника палладия, такого как Pd(OAc)2, с лигандом, таким как Xanthphos, в присутствии основания, такого как N,N-диизопропилэтиламин, в растворителе, таком как 1,4-диоксан, необязательно при нагревании до температуры, такой как 100°C. Сложный эфир может быть гидролизован с использованием водного раствора основания, такого как NaOH в воде. Можно осуществить связывание полученной кислоты с подходящим замещенным 3-(аминометил)-пиридин-2-оном (например, 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-оном, как показано на Схеме 9) с использованием стандартных условий аминокислотного связывания, таких как PyBOP в DMSO. Полученный тиоэфир может быть окислен с получением соответствующего сульфоксида или сульфона с использованием соответствующих эквивалентов окислителя, такого как m-CPBA, в растворителе, таком как DCM. R6 хлор группа может быть замещена альтернативной R6 группой на дополнительной Стадии 10 или после Стадии 5 или до амидного связывания. Примеры альтернативных R6 групп включают заместители, которые могут быть включены при помощи реакций связывания с использованием палладия, таких как реакция Бухвальда, с получением аминогрупп (например, морфолино). R6 заместитель можно подвергнуть дальнейшим подходящим модификациям, с получением альтернативного R6 заместителя. Репрезентативные примеры таких модификаций включают удаление защитных групп с последующими дополнительными реакциями амидного связывания, реакциями восстановительного аминирования или реакциями алкилирования.
Схема 10
[0712] Схема 10 представляет синтез модифицированных бензольных аналогов, где Z представляет собой эфирную группу, следуя общему пути с использованием общепринятых химических приемов. Исходя из замещенного анилина, такого как метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоат, анилин может быть преобразован в фенол с использованием реакции Сандмейера, такой как обработка водным раствором NaNO2 в водном растворе кислоты, таком как 50% H2SO4. Фенол может быть алкилирован с использованием алкилирующего агента, такого как тетрагидро-2H-пиран-4-ил 4-метилбензолсульфонат, в присутствии подходящего основания, такого как карбонат цезия, в полярном растворителе, таком как DMF, с необязательным нагреванием до температуры, такой как 80°C. Сложный эфир может быть гидролизован с использованием водного раствора основания, такого как NaOH в воде. Можно осуществить связывание полученной кислоты с подходящим замещенным 3-(аминометил)-пиридин-2-оном с использованием стандартных условий аминокислотного связывания, таких как PyBOP в DMSO. R6 хлор группа может быть замещена альтернативной R6 группой на дополнительной Стадии 10 или после Стадии 5 или до амидного связывания. Примеры альтернативных R6 групп включают заместители, которые могут быть включены при помощи реакций связывания с использованием палладия, таких как реакция Бухвальда, с получением аминогрупп (например, морфолино). R6 заместитель можно подвергнуть дальнейшим подходящим модификациям, с получением альтернативного R6 заместителя. Репрезентативные примеры таких модификаций включают удаление защитных групп с последующими дополнительными реакциями амидного связывания, реакциями восстановительного аминирования или реакциями алкилирования.
[0713] Специалистам в данной области, имеющим среднюю квалификацию, должно быть понятно, что на представленных выше схемах порядок осуществления многих стадий можно менять.
3. Способы лечения
[0714] Соединения по настоящему изобретению ингибируют активность гистон-метилтрансферазы EZH2 или его мутанта, и, соответственно, настоящее изобретение также обеспечивает способы лечения состояний и заболеваний, на развитие которых может влиять модуляция статуса метилирования гистонов или других белков, где указанный статус метилирования опосредован, по меньшей мере частично, активностью EZH2. В одном аспекте настоящего изобретения, некоторые соединения, раскрытые в настоящей заявке, являются кандидатами для лечения или профилактики некоторых состояний и заболеваний. Модуляция статуса метилирования гистонов, в свою очередь, может влиять на уровень экспрессии целевых генов, активируемых метилированием, и/или целевых генов, подавляемых метилированием. Способ включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа, сольвата или стереоизомера.
[0715] Расстройство, где EZH2-опосредованное метилирование белка играет роль, может представлять собой рак или предраковое состояния. Настоящее изобретение, кроме того, обеспечивает применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата в лечении рака или предракового состояния, на развитие которых может влиять модуляция EZH2-опосредованного метилирования белка, или для получения лекарственного средства, полезного для лечения такого рака или предракового состояния. Примеры типов рака, которые можно лечить, включают лимфомы, включая неходжкинскую лимфому, фолликулярную лимфому (FL) и диффузную крупно-B-клеточную лимфому (DLBCL); меланому; и лейкоз, включая CML. Примеры предракового состояния включает миелодиспластический синдром (MDS; ранее известный как предлейкоз).
[0716] Настоящее изобретение также обеспечивает способы защиты против расстройства, где играет роль EZH2-опосредованное метилирование белка, у субъекта, нуждающегося в этом, путем введения терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата субъекту, нуждающемуся в таком лечении. Расстройство может представлять собой рак, например, рак, где играет роль EZH2-опосредованное метилирование белка. Настоящее изобретение также обеспечивает применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа, сольвата или стереоизомера для получения лекарственного средства, полезного для профилактики клеточно-пролиферативного расстройства, связанного, по меньшей мере частично, с EZH2-опосредованным метилированием белка.
[0717] Соединения по настоящему изобретению можно использовать, или возможно их использование, для модуляции метилирования белка (например, гистона), например, для модуляции ферментативной активности гистонметилтрансферазы или гистондеметилазы. По меньшей мере некоторые из соединений по настоящему изобретению можно использовать in vivo или in vitro для модуляции метилирования белка. Были сообщения о том, что метилирование гистона вовлечено в аберрантную экспрессию некоторых генов в раковых заболеваниях и в сайленсинг нейрональных генов в отличных от нервных клетках. По меньшей мере некоторые соединения, описанные в настоящей заявке, являются подходящими кандидатами для лечения этих заболеваний, т.е. для снижения метилирования или восстановления метилирования примерно до уровня в аналогичных нормальных клетках.
[0718] Соединения, которые являются модуляторами метилирования, можно использовать, или возможно их использование, для модуляции клеточной пролиферации. Например, в некоторых случаях чрезмерную пролиферацию можно уменьшить при помощи средств, которые снижают метилирование, тогда как недостаточную пролиферацию можно стимулировать при помощи средств, которые повышают метилирование. Соответственно, заболевания, которые можно лечить соединениями по настоящему изобретению, могут включать гиперпролиферативные заболевания, такие как доброкачественный клеточный рост и злокачественный клеточный рост.
[0719] Как используется в настоящей заявке, “субъект, нуждающийся в этом”, представляет собой субъекта с расстройством, где играет роль EZH2-опосредованное метилирование белка, или субъекта с повышенным риском развития такого расстройства по сравнению с популяцией в целом. Субъект, нуждающийся в этом, может иметь предраковое состояние. Предпочтительно, субъект, нуждающийся в этом, страдает раком. "Субъект" включает млекопитающее. Млекопитающее может представлять собой, например, человека или соответствующее отличное от человека млекопитающее, такое как обезьяна, мышь, крыса, собака, кошка, корова, лошадь, коза, верблюд, овца или свинья. Субъект также может представлять собой птицу или домашнюю птицу. В одном варианте воплощения, млекопитающее представляет собой человека.
[0720] Как используется в настоящей заявке, термин "клеточно-пролиферативное расстройство" относится к состояниям, где нерегулируемый или аномальный рост, или и то и другое, клеток может привести к развитию нежелательного состояния или заболевания, которое может быть или канцерогенным или не канцерогенным. Примеры клеточно-пролиферативных расстройств, которые можно лечить соединениями по настоящему изобретению, включают различные состояния, где клеточное деление не регулируется. Примеры клеточно-пролиферативных расстройств включают, но не ограничиваются этим, новообразования, доброкачественные опухоли, злокачественные опухоли, предраковые состояния, in situ опухоли, инкапсулированные опухоли, метастатические опухоли, жидкие опухоли, солидные опухоли, иммунологические опухоли, гематологические опухоли, раковые заболевания, карциномы, лейкозы, лимфомы, саркомы и быстрое деление клеток. Термин "быстрое деление клеток", как используется в настоящей заявке, означает любую клетку, которая делится со скоростью, превышающей или большей чем ожидаемая или наблюдаемая в соседних или сопредельных клетках в той же самой ткани. Клеточно-пролиферативное расстройство включает предрак или предраковое состояние. Клеточно-пролиферативное расстройство включает рак. Способы и применения, представленные в настоящей заявке, можно использовать, или являются возможными для использования, для лечения или облегчения симптома рака или для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Термин "рак" включает солидные опухоли, а также гематологические опухоли и/или злокачественные заболевания. "Предраковая клетка" или "предканцерогенная клетка" представляет собой клетку, демонстрирующую клеточно-пролиферативное расстройств, которое представляет собой предраковое или предканцерогенное состояние. "Раковая клетка" или "канцерогенная клетка" представляет собой клетку, демонстрирующую клеточно-пролиферативное расстройство, которое представляет собой рак. Любые воспроизводимые средства измерения можно использовать для идентификации раковых клеток или предраковых клеток. Раковые клетки или предраковые клетки можно идентифицировать методом гистологического типирования или анализа образца ткани (например, образца биопсии). Раковые клетки или предраковые клетки можно идентифицировать путем использования соответствующих молекулярных маркеров.
[0721] Примеры неканцерогенных состояний или расстройств, которые можно лечить с использованием одного или нескольких соединений по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются этим, ревматоидный артрит; воспаление; аутоиммунное заболевание; лимфопролиферативные состояния; акромегалию; ревматоидный спондилит; остеоартрит; подагру, другие артритные состояния; сепсис; септический шок; эндотоксический шок; грамотрицательный сепсис; синдром токсического шока; астму; респираторный дистресс-синдром взрослых; хроническое обструктивное легочное заболевание; хроническое воспаление легких; воспалительное заболевание кишечника; болезнь Крона; псориаз; экзему; язвенный колит; фиброз поджелудочной железы; фиброз печени; острое и хроническое почечное заболевание; синдром раздраженной толстой кишки; заболевание, сопровождающееся повышением температуры тела; рестеноз; церебральную малярию; удар и ишемическое поражение; невральную травму; болезнь Альцгеймера; болезнь Гентингтона; болезнь Паркинсона; острую и хроническую боль; аллергический ринит; аллергический конъюнктивит; хроническую сердечную недостаточность; острый коронарный синдром; кахексию; малярию; лепру; лейшманиаз; болезнь Лайма; синдром Рейтера; острый синовит; мышечную дегенерацию, бурсит; тендонит; теносиновит; грыжа, синдром прободения или выпадения межпозвоночного диска; остеопетроз; тромбоз; рестеноз; силикоз; патологическое разрастание мягких тканей легких; заболевания, связанные с резорбцией кости, такие как остеопороз; реакцию трансплантат-против-хозяина; рассеянный склероз; волчанку; фибромиалгию; СПИД и другие вирусные заболевания, такие как опоясывающий герпес, простой герпес I или II, вирус гриппа и цитомегаловирус; и сахарный диабет.
[0722] Примеры рака, который можно лечить с использованием одного или нескольких соединений по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются этим, адренокортикальную карциному, связанные со СПИДом раковые заболевания, связанную со СПИДом лимфому, анальный рак, аноректальный рак, рак анального прохода, рак аппендикса, детскую церебеллярную астроцитому, детскую церебральную астроцитому, базальноклеточную карциному, рак кожи (не меланома), билиарный рак, рак экстрагепатических желчных протоков, рак интрагепатических желчных протоков, рак мочевого пузыря, рак мочевого пузыря, рак костей и суставов, остеосаркому и злокачественную фиброзную гистиоцитому, рак головного мозга, опухоль головного мозга, глиому ствола головного мозга, церебеллярную астроцитому, церебральную астроцитому/злокачественную глиому, эпендиому, медуллобластому, супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, глиому зрительного пути и гипоталамуса, рак молочной железы, бронхиальные аденомы/карциноиды, карциноидную опухоль, рак желудочно-кишечного тракта, рак нервной системы, лимфому нервной систем, рак центральной нервной системы, лимфому центральной нервной системы, цервикальный рак, детские раковые заболевания, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, хронические миелопролиферативные расстройства, рак толстой кишки, колоректальный рак, кожную Т-клеточную лимфому, лимфоидное новообразование, грибовидный микоз, синдром Seziary, эндометриальный рак, эзофагеальный рак, эктракраниальную эмбриональную опухоль, эктрагонадальную эмбриональную опухоль, рак экстрагепатических желчных протоков, рак глаза, внутриглазную меланому, ретинобластому, рак желчного пузыря, гастральный рак (рак желудка), карциноидную опухоль желудочно-кишечного тракта, стромальную опухоль желудочно-кишечного тракта (GIST), эмбриональную опухоль, опухоль половых клеток яичника, гестационную трофобластную опухолевцю глиому, рак головы и шеи, гепатоцеллюлярный рак (рак печени), лимфому Ходжкина, гипофарингеальный рак, внутриглазную меланому, глазной рак, островковоклеточные опухоли (эндокринные опухоли поджелудочной железы), саркому Капоши, рак почки, ренальный рак, рак почки, ларингеальный рак, острый лимфобластный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, волосистоклеточный лейкоз, рак губы и полости рта, рак печени, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, связанную со СПИДом лимфому, не-ходжкинскую лимфому, первичную лимфому центральной нервной систем, макроглобулинемию Вальденстрема: медуллобластому, меланому, внутриглазную (глазную) меланому, осязательно-клеточную карциному, злокачественную мезотелиому, мезотелиому, метастатический сквамозный рак шеи, рак рта, рак языка, множественный эндокринный неопластический синдром, грибовидный микоз, миелодиспластические синдромы, миелодиспластические/миелопролиферативные заболевания, хронический миелогенный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, множественную миелому, хронические миелопролиферативные расстройства, назофарингеальный рак, нейробластому, оральный рак, рак полости рта, орофарингеальный рак, рак яичника, рак эпителия яичника, низкозлокачественную потенциальную опухоль яичника, рак поджелудочной железы, островково-клеточный рак поджелудочной железы, рак параназального синуса и носовой полости, рак паращитовидной железы, рак полового члена, фарингеальный рак, феохромоцитому, пинеобластому и супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, гипофизарную опухоль, новообразование из клеток плазмы/множественную миелому, плевропульмонарную бластому, рак предстательной железы, ректальный рак, рак почечных лоханок и уретры, переходно-клеточный рак, ретинобластому, рабдомиосаркому, рак слюной железы, саркомы, относящиеся к семейству опухолей Юинга, саркому Капоши, саркому мягких тканей, рак матки, саркому матки, кожи рак (не меланома), рак кожи (меланома), осязательно-клеточную карциному кожи, рак тонкого кишечника, саркому мягких тканей, сквамозно-клеточную карциному, рак желудка (гастральный рак), супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, тестикулярный рак, рак горла, тиому, тиому и тимусную карциному, рак щитовидной железы, переходно-клеточный рак почечных лоханок и уретры и других органов мочевыделения, гестационную трофобластную опухоль, рак уретры, рак эндометрия матки, саркому матки, рак тела матки, вагинальный рак, рак вульвы и опухоль Вильмса.
[0723] "Клеточно-пролиферативное расстройство гематологической системы" представляет собой клеточно-пролиферативное расстройство с вовлечением клеток гематологической системы. Клеточно-пролиферативное расстройство гематологической системы может включать лимфому, лейкоз, миелоцитарные новообразования, мастоцитарные новообразования, миелодисплазию, доброкачественную моноклональную гаммопатию, лимфоматоидный грануломатоз, лимфоматоидный папулез, истинную полицитемию, хронический миелоцитарный лейкоз, идиопатическую миелоидную метаплазию и эсспенциальную тромбоцитемию. Клеточно-пролиферативное расстройство гематологической системы может включать гиперплазию, дисплазию и метаплазию клеток гематологической системы. В одном аспекте, композиции по настоящему изобретению можно использовать для лечения рака, выбранного из группы, состоящей из гематологического рака по настоящему изобретению или гематологического клеточно-пролиферативного расстройства по настоящему изобретению, или использовать для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Гематологический рак по настоящему изобретению может включать множественную миелому, лимфому (включая лимфому Ходжкина, не-ходжкинскую лимфому, детские лимфомы и лимфомы лимфоцитарного и кожного происхождения), лейкоз (включая детский лейкоз, волосисто-клеточный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелоцитарный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз и мастоцитарный лейкоз), миелоцитарные новообразования и мастоцитарные новообразования.
[0724] "Клеточно-пролиферативное расстройство легкого" представляет собой клеточно-пролиферативное расстройство с вовлечением клеток легкого. Клеточно-пролиферативные расстройства легких могут включать все формы клеточно-пролиферативных расстройств, поражающих клетки легких. Клеточно-пролиферативные расстройства легких могут включать рак легкого, предрак или предраковое состояние легкого, состояния доброкачественного роста или поражения легких и состояния злокачественного роста или поражения легких и метастатические поражения в тканях и органах организма, отличных от легких. В одном аспекте, композиции по настоящему изобретению можно использовать для лечения рака легкого или клеточно-пролиферативных расстройств легких, или использовать для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Рак легкого может включать злокачественные новообразования в легких, карциному in situ, типичные карциноидные опухоли и атипичные карциноидные опухоли. Рак легкого может включать мелкоклеточный рак легкого ("SCLC"), немелкоклеточный рак легкого ("NSCLC"), сквамозно-клеточную карциному, аденокарциному, мелкоклеточную карциному, крупноклеточную карциному, аденосквамозно-клеточную карциному и мезотелиому. Рак легкого может включать "рубцовую карциному", бронхиоальвеолярную карциному, гигантоклеточную карциному, веретеноклеточную карциному и крупноклеточную нейроэндокринную карциному. Рак легкого может включать новообразования в легких, имеющие гистологическую и ультраструктурную гетерогенность (например, смешанные клеточные типы).
[0725] Клеточно-пролиферативные расстройства легких могут включать все формы клеточно-пролиферативных расстройств, поражающих клетки легких. Клеточно-пролиферативные расстройства легких могут включать рак легкого, предраковое состояние легкого. Клеточно-пролиферативные расстройства легких могут включать гиперплазию, метаплазию и дисплазию легкого. Клеточно-пролиферативные расстройства легких могут включать асбест-индуцированную гиперплазию, сквамозную метаплазию и доброкачественную реактивную мезотелиальную метаплазию. Клеточно-пролиферативные расстройства легких могут включать замену цилиндрического эпителия многослойным сквамозным эпителием и мукозную дисплазию. Индивидуумы, подверженные воздействию вдыхаемых вредных окружающих веществ, таких как сигаретный дым и асбест, могут иметь повышенный риск развития клеточно-пролиферативных расстройств легких. Предшествующие легочные заболевания, которые могут вызывать у индивидуумов предрасположенность к развитию клеточно-пролиферативных расстройств легких, могут включать хроническое интерстициальное легочное заболевание, некрозирующее легочное заболевание, склеродерму, ревматоидное заболевание, маркоидоз, интерстициальный пневмонит, туберкулез, частые пневмонии, идиопатический легочный фиброз, грануломатоз, асбестоз, фиброзирующий альвеолит и болезнь Ходжкина.
[0726] "Клеточно-пролиферативное расстройств толстой кишки" представляет собой клеточно-пролиферативное расстройство с вовлечением клеток толстой кишки. В одном аспекте, композиции по настоящему изобретению можно использовать для лечения рака толстой кишки или клеточно-пролиферативных расстройств толстой кишки, или использовать для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Рак толстой кишки может включать все формы рака толстой кишки. Рак толстой кишки может включать спорадические и наследственные типы рака толстой кишки. Рак толстой кишки может включать злокачественные новообразования толстой кишки, карциному in situ, типичные карциноидные опухоли и атипичные карциноидные опухоли. Рак толстой кишки может включать аденокарциному, сквамозно-клеточную карциному и аденосквамозно-клеточную карциному. Рак толстой кишки может быть связан с наследственным синдромом, выбранным из группы, включающей наследственный неполипозный колоректальный рак, наследственный аденоматозный полипоз, синдром Гарднера, синдром Пейтца-Егерса, синдром Турко и ювенильный полипоз. Рак толстой кишки может быть вызван наследственным синдромом, выбранным из группы, включающей наследственный неполипозный колоректальный рак, наследственный аденоматозный полипоз, синдром Гарднера, синдром Пейтца-Егерса, синдром Турко и ювенильный полипоз.
[0727] Клеточно-пролиферативные расстройства толстой кишки могут включать все формы клеточно-пролиферативных расстройств, поражающих клетки толстой кишки. Клеточно-пролиферативные расстройства толстой кишки могут включать рак толстой кишки, предраковые состояния толстой кишки, аденоматозный полипоз толстой кишки и метахронные поражения толстой кишки. Клеточно-пролиферативное расстройство толстой кишки может включать аденому. Клеточно-пролиферативные расстройства толстой кишки могут характеризоваться гиперплазией, метаплазией и дисплазией толстой кишки. Предшествующие заболевания толстой кишки, которые могут вызвать у индивидуумов предрасположенность к развитию клеточно-пролиферативных расстройств толстой кишки, могут включать предшествующий рак толстой кишки. Текущее заболевание, которое может вызвать у индивидуумов предрасположенность к развитию клеточно-пролиферативных расстройств толстой кишки, может включать болезнь Крона и язвенный колит. Клеточно-пролиферативное расстройство толстой кишки может быть связано с мутацией в гене, выбранном из группы, состоящей из p53, ras, FAP и DCC. Индивидуум может иметь повышенный риск развития клеточно-пролиферативное расстройств толстой кишки из-за присутствия мутации в гене, выбранном из группы, состоящей из p53, ras, FAP и DCC.
[0728] "Клеточно-пролиферативное расстройство поджелудочной железы" представляет собой клеточно-пролиферативное расстройство с вовлечением клеток поджелудочной железы. Клеточно-пролиферативные расстройства поджелудочной железы могут включать все формы клеточно-пролиферативных расстройств, поражающих клетки поджелудочной железы. Клеточно-пролиферативные расстройства поджелудочной железы могут включать рак поджелудочной железы, предрак или предраковое состояние поджелудочной железы, гиперплазию поджелудочной железы и дисплазию поджелудочной железы, состояния доброкачественного роста или поражения поджелудочной железы и состояния злокачественного роста или поражения поджелудочной железы и метастатические поражения в тканях и органах организма, отличных от поджелудочной железы. Рак поджелудочной железы включает все формы рака поджелудочной железы. Рак поджелудочной железы может включать дуктальную аденокарциному, аденосквамозную карциному, плеоморфную гигантоклеточную карциному, муцинозную аденокарциному, остеокласт-подобную гигантоклеточную карциному, муцинозную цистаденокарциному, ацинозную карциному, неклассифицированную крупноклеточную карциному, мелкоклеточную карциному, панкреатобластому, папиллярное новообразование, муцинозную цистаденому, папиллярное кистозное новообразование и серозную цистаденому. Рак поджелудочной железы также включает опухоли поджелудочной железы, имеющие гистологическую и ультраструктурную гетерогенность (например, смешанные клеточные типы).
[0729] "Клеточно-пролиферативное расстройство предстательной железы" представляет собой клеточно-пролиферативное расстройство с вовлечением клеток предстательной железы. Клеточно-пролиферативные расстройства предстательной железы могут включать все формы клеточно-пролиферативных расстройств, поражающих клетки предстательной железы. Клеточно-пролиферативные расстройства предстательной железы могут включать рак предстательной железы, предрак или предраковое состояние предстательной железы, состояния доброкачественного роста или поражения предстательной железы и состояния злокачественного роста или поражения предстательной железы и метастатические поражения в тканях и органах организма, отличных от предстательной железы. Клеточно-пролиферативные расстройства предстательной железы могут включать гиперплазию, метаплазию и дисплазию предстательной железы.
[0730] "Клеточно-пролиферативное расстройство кожи" представляет собой клеточно-пролиферативное расстройство с вовлечением клеток кожи. Клеточно-пролиферативные расстройства кожи могут включать все формы клеточно-пролиферативных расстройств, поражающих клетки кожи. Клеточно-пролиферативные расстройства кожи могут включать предрак или предраковое состояние кожи, состояния доброкачественного роста или поражения кожи, меланому, злокачественную меланому и другие состояния злокачественного роста или поражения кожи и метастатические поражения в тканях и органах организма, отличных от кожи. Клеточно-пролиферативные расстройства кожи могут включать гиперплазию, метаплазию и дисплазию кожи.
[0731] "Клеточно-пролиферативное расстройство яичника" представляет собой клеточно-пролиферативное расстройство с вовлечением клеток яичника. Клеточно-пролиферативные расстройства яичника могут включать все формы клеточно-пролиферативных расстройств, поражающих клетки яичника. Клеточно-пролиферативные расстройства яичника могут включать предрак или предраковое состояние яичника, состояния доброкачественного роста или поражения яичника, рак яичника, состояния злокачественного роста или поражения яичника и метастатические поражения в тканях и органах организма, отличных от яичника. Клеточно-пролиферативные расстройства яичника могут включать гиперплазию, метаплазию и дисплазию клеток яичника.
[0732] "Клеточно-пролиферативное расстройство молочной железы" представляет собой клеточно-пролиферативное расстройство с вовлечением клеток молочной железы. Клеточно-пролиферативные расстройства молочной железы могут включать все формы клеточно-пролиферативных расстройств, поражающих клетки молочной железы. Клеточно-пролиферативные расстройства молочной железы могут включать рак молочной железы, предрак или предраковое состояние молочной железы, состояния доброкачественного роста или поражения молочной железы и состояния злокачественного роста или поражения молочной железы и метастатические поражения в тканях и органах организма, отличных от молочной железы. Клеточно-пролиферативные расстройства молочной железы могут включать гиперплазию, метаплазию и дисплазию молочной железы.
[0733] Клеточно-пролиферативное расстройство молочной железы может представлять собой предраковое состояние молочной железы. Композиции по настоящему изобретению можно использовать для лечения предракового состояния молочной железы. Предраковое состояние молочной железы может включать атипичную гиперплазию молочной железы, дуктальную карциному in situ (DCIS), интрадуктальную карциному, лобулярную карциному in situ (LCIS), лобулярную неоплазию и стадию 0 или степень 0 роста или поражения молочной железы (например, стадию 0 или степень 0 рака молочной железы или карциномы in situ). Предраковое состояние молочной железы можно классифицировать в соответствии с TNM классификационной схемой, принятой the American Joint Committee on Cancer (AJCC), где первичную опухоль (T) классифицируют как стадию T0 или Tis; и где местные лимфоузлы (N) классифицируют как стадию N0; и где отдаленные метастазы (M) классифицируют как стадию M0.
[0734] Клеточно-пролиферативное расстройство молочной железы может представлять собой рак молочной железы. В одном аспекте, композиции по настоящему изобретению можно использовать для лечения рака молочной железы, или использовать для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Рак молочной железы может включать все формы рака молочной железы. Рак молочной железы включает все формы рака молочной железы. Рак молочной железы может включать первичные эпителиальные типы рака молочной железы. Рак молочной железы может включать типы рака, где молочная железа затронута другими опухолями, такими как лимфома, саркома или меланома. Рак молочной железы может включать карциному молочной железы, дуктальную карциному молочной железы, лобулярную карциному молочной железы, недифференцированную карциному молочной железы, филлоидную цистосаркому молочной железы, ангиосаркому молочной железы и первичную лимфому молочной железы. Рак молочной железы может включать Стадию I, II, IIIA, IIIB, IIIC и IV рака молочной железы. Дуктальная карцинома молочной железы может включать invasive карциному, инвазивную карциному in situ с преобладающим интрадуктальным компонентом, воспалительный рак молочной железы и дуктальную карциному молочной железы с гистологическим типом, выбранным из группы, включающей комедон, слизистый (коллоидный), медуллярный с лимфоцитным инфильтратом, папиллярный, скиррозный и тубулярный. Лобулярная карцинома молочной железы может включать инвазивную лобулярную карциному с преобладающим in situ компонентом, инвазивную лобулярную карциному и инфильтрующую лобулярную карциному. Рак молочной железы может включать болезнь Педжета, болезнь Педжета с интрадуктальной карциномой и болезнь Педжета с инвазивной дуктальной карциномой. Рак молочной железы может включать опухоли молочной железы, имеющие гистологическую и ультраструктурную гетерогенность (например, смешанные клеточные типы).
[0735] Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват можно использовать для лечения рака молочной железы, или использовать для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Рак молочной железы, который можно лечить, может включать наследственный рак молочной железы. Рак молочной железы, который можно лечить, может включать спорадический рак молочной железы. Рак молочной железы, который можно лечить, может возникать у субъектов мужского пола. Рак молочной железы, который можно лечить, может возникать у субъектов женского пола. Рак молочной железы, который можно лечить, может возникать у предклимактерических субъектов женского пола или у постклимактерических субъектов женского пола. Рак молочной железы, который можно лечить, может возникать у субъекта возраста 30 лет или старше или у субъекта моложе 30 лет. Рак молочной железы, который можно лечить, может возникать у субъекта возраста 50 лет или старше или у субъекта моложе 50 лет. Рак молочной железы, который можно лечить, может возникать у субъекта возраста 70 лет или старше или у субъекта моложе 70 лет.
[0736] Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать по типам для идентификации наследственной или спонтанной мутации в BRCA1, BRCA2 или p53. Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать по типам как имеющий HER2/neu генную амплификацию, как сверхэкспрессирующий HER2/neu или как имеющий низкий, средний или высокий уровень HER2/neu экспрессии. Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать по типам в соответствии с маркером, выбранным из группы, состоящей из эстрогенового рецептора (ER), прогестеронового рецептора (PR), человеческого рецептора эпидермального ростового фактора-2, Ki-67, CA15-3, CA 27-29 и c-Met. Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать по типам как ER-неизвестный, ER-обогащенный или ER-обедненный. Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать по типам как ER-отрицательный или ER-положительный. ER-типирование рака молочной железы можно осуществить любыми воспроизводимыми средствами. ER-типирование рака молочной железы можно осуществить, как описано в Onkologie 27: 175-179 (2004). Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать по типам как PR-неизвестный, PR-обогащенный или PR-обедненный. Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать как PR-отрицательный или PR-положительный. Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать по типам как рецептор-положительный или рецептор-отрицательный. Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать по типам как связанный с повышенными уровнями в крови СА 15-3 или СА 27-29 или обоих.
[0737] Рак молочной железы, который можно лечить, может включать локализованную опухоль молочной железы. Рак молочной железы, который можно лечить, может включать опухоль молочной железы, которая связана с отрицательной биопсией сторожевого лимфоузла (SLN). Рак молочной железы, который можно лечить, может включать опухоль молочной железы, которая связана с положительной биопсией сторожевого лимфоузла (SLN) биопсии. Рак молочной железы, который можно лечить, может включать опухоль молочной железы, которая связана с одним или несколькими положительными подмышечными лимфоузлами, где подмышечные лимфоузлы были классифицированы по стадиям любым подходящим способом. Рак молочной железы, который можно лечить, может включать опухоль молочной железы, которая была типирована как имеющая узловой отрицательный статус (например, узел-отрицательный) или узловой положительный статус (например, узел-положительный). Рак молочной железы, который можно лечить, может включать опухоль молочной железы, которая метастазировала в другие участки организма. Рак молочной железы, который можно лечить, может быть классифицирован как метастазировавший в область, выбранную из группы, включающей кость, легкое, печень или головной мозг. Рак молочной железы, который можно лечить, может быть классифицирован в соответствии с характеристикой, выбранной из группы, включающей метастатический, локализованный, региональный, локально-региональный, локально прогрессирующий, отдаленный, многоцентровой, билатеральный, ипсилатеральный, контралатеральный, впервые диагностированный, рецидивирующий и неоперабельный.
[0738] Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват можно использовать для лечения или профилактики клеточно-пролиферативного расстройства молочной железы или для лечения или профилактики рака молочной железы у субъекта с повышенным риском развития рака молочной железы по сравнению с популяцией в целом, или использовать для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы по сравнению с популяцией в целом представляет собой субъекта женского пола с семейной историей или персональной историей рака молочной железы. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы по сравнению с популяцией в целом представляет собой субъекта женского пола, имеющего происходящую из зародышевой линии или спонтанную мутацию в BRCA1 или BRCA2 или в обоих. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы по сравнению с популяцией в целом представляет собой субъекта женского пола с семейной историей рака молочной железы и имеющего происходящую из зародышевой линии или спонтанную мутацию в BRCA1 или BRCA2 или в обоих. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы по сравнению с популяцией в целом представляет собой женщину старше 30 лет, старше 40 лет, старше 50 лет, старше 60 лет, старше 70 лет, старше 80 лет или старше 90 лет. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы по сравнению с популяцией в целом представляет собой субъекта с атипичной гиперплазией молочной железы, дуктальной карциномой in situ (DCIS), интрадуктальной карциномой, лобулярной карциномой in situ (LCIS), лобулярной неоплазией или стадией 0 или степень 0 роста или поражения молочной железы (например, стадией 0 или степень 0 рака молочной железы или карциномы in situ).
[0739] Рак молочной железы, который можно лечить, может быть гистологически классифицирован в соответствии с системой Скарфа-Блюма-Ричардсона, где опухоли молочной железы присваивают оценку на основании митоза 1, 2 или 3; ядерного плейоморфизма 1, 2 или 3; образования трубочек 1, 2 или 3; и общую оценку по системе Скарфа-Блюма-Ричардсона от 3 до 9. Рак молочной железы, который можно лечить, можно классифицировать по степени опухоли в соответствии с International Consensus Panel on the Treatment of Breast Cancer, выбранной из группы, включающей степень 1, степень 1-2, степень 2, степень 2-3 или степень 3.
[0740] Рак, который можно лечить, можно классифицировать в соответствии с системой классификации American Joint Committee on Cancer (AJCC) TNM, где опухоль (T) определяют как имеющую стадию TX, T1, T1mic, T1a, T1b, T1c, T2, Т3, Т4, T4a, T4b, T4c или T4d; и где региональные лимфоузлы (N) определяют как имеющие стадию NX, N0, N1, N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3b или N3c; и где отдаленные метастазы (M) можно определить как имеющие стадию MX, M0 или M1. Рак, который можно лечить, можно классифицировать в соответствии с классификацией American Joint Committee on Cancer (AJCC) как Стадия I, Стадия IIA, Стадия IIB, Стадия IIIA, Стадия IIIB, Стадия IIIC или Стадия IV. Рак, который можно лечить, может быть классифицирован по степени в соответствии с классификацией AJCC как Степень GX (например, степень нельзя определить), Степень 1, Степень 2, Степень 3 или Степень 4. Рак, который можно лечить, можно классифицировать в соответствии с патологической классификацией AJCC (pN) как pNX, pN0, PN0(I-), PN0 (I+), PN0 (mol-), PN0 (mol+), PN1, PNl(mi), PN1a, PN1b, PN1c, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b или pN3c.
[0741] Рак, который можно лечить, может включать опухоль, которая была определена как имеющая размер меньше чем или равный примерно 2 сантиметрам в диаметре. Рак, который можно лечить, может включать опухоль, которая была определена как имеющая размер от около 2 до около 5 сантиметров в диаметре. Рак, который можно лечить, может включать опухоль, которая была определена как имеющая размер больше чем или равный примерно 3 сантиметрам в диаметре. Рак, который можно лечить, может включать опухоль, которая была определена как имеющая размер больше чем 5 сантиметров в диаметре. Рак, который можно лечить, можно классифицировать в соответствии с микроскопическим исследованием как высоко дифференцированный, умеренно дифференцированный, плохо дифференцированный или недифференцированный. Рак, который можно лечить, можно классифицировать в соответствии с микроскопическим исследованием на основании оценки митоза (например, количество клеточного деления) или ядерного плейоморфизма (например, изменение в клетках). Рак, который можно лечить, можно классифицировать в соответствии с микроскопическим исследованием как связанный с областями некроза (например, области умирающих или дегенерирующих клеток). Рак, который можно лечить, можно классифицировать как имеющий аномальный кариотип, содержащий аномальное количество хромосом или, содержащий одну или несколько хромосом, которые являются аномальными по внешнему виду. Рак, который можно лечить, можно классифицировать как являющийся анэуплоидным, триплоидным, тетраплоидным или как имеющий чередующуюся плоидность. Рак, который можно лечить, можно классифицировать как имеющий хромосомную транслокацию или делецию или дупликацию всей хромосомы или участок делеции, дупликации или амплификации части хромосомы.
[0742] Рак, который можно лечить, можно оценить методом ДНК цитометрии, проточной цитометрии или визуализирующей цитометрии. Рак, который можно лечить, можно классифицировать как имеющий 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% клеток в стадии синтеза клеточного деления (например, в S фазе клеточного деления). Рак, который можно лечить, можно классифицировать как имеющий низкую долю S-фазы или высокую долю S-фазы.
[0743] Как используется в настоящей заявке, "нормальная клетка" представляет собой клетку, которая не может быть классифицирована как часть "клеточно-пролиферативного расстройства". У нормальной клетки отсутствует нерегулируемый или аномальный рост, или и то и другое, который может привести к развитию нежелательного состояния или заболевания. Предпочтительно, нормальная клетка обладает нормально функционирующими механизмами контроля контрольных точек клеточного цикла.
[0744] Как используется в настоящей заявке, "контактирование клетки" относится к условиям, в которых соединение или другая композиция вещества находится в непосредственном контакте с клеткой или достаточно близко, чтобы вызвать желаемый биологический эффект в клетке.
[0745] Как используется в настоящей заявке, "соединение-кандидат" относится к соединению по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарству, метаболиту, полиморфу или сольвату, которое было или будет испытано в одном или нескольких in vitro или in vivo биологических анализах для определения может ли это соединение вызывать желаемый биологический или медицинский ответ в клетке, ткани, системе, у животного или человека, которого добивается исследователь или клиницист. Соединение-кандидат представляет собой соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват. Биологический или медицинский ответ может представлять собой лечение рака. Биологический или медицинский ответ может представлять собой лечение или профилактику клеточно-пролиферативного расстройства. Биологический ответ или эффект также может включать изменение клеточной пролиферации или роста, которое наблюдают in vitro или в животной модели, а также другие биологические изменения, которые можно наблюдать in vitro. Биологические анализы in vitro или in vivo могут включать, но не ограничиваются этим, анализы ферментативной активности, анализы электрофоретической подвижности, анализы репортерных генов, in vitro анализы жизнеспособности клеток и анализы, описанные в настоящей заявке.
[0746] Как используется в настоящей заявке, "монотерапия" относится к введению одного активного или терапевтического соединения субъекту, нуждающемуся в этом. Предпочтительно, монотерапия включает введение терапевтически эффективного количества активного соединения. Например, монотерапия рака включает введение одного из соединений по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, аналога или производного субъекту, нуждающемуся в лечении рака. Монотерапии можно противопоставить комбинированную терапию, где вводят комбинацию нескольких активных соединений, при этом предпочтительно, чтобы каждый компонент комбинации присутствовал в терапевтически эффективном количестве. Монотерапия с использованием соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата может быть более эффективной, чем комбинированная терапия, для индукции желаемого биологического эффекта.
[0747] Как используется в настоящей заявке, "лечение" или "лечить" описывает лечение и уход за пациентом в целях борьбы с заболеванием, состоянием или расстройством и включает введение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата для облегчения симптомов или осложнений заболевания, состояния или расстройства или для устранения заболевания, состояния или расстройства. Термин "лечить" также может включать обработку клетки in vitro или в животной модели.
[0748] Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват также можно использовать, или возможно их использование, для профилактики соответствующего заболевания, состояния или расстройства, или использовать для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Как используется в настоящей заявке, "профилактика" или "предотвращать" описывает уменьшение или исключение начала развития симптомов или осложнений такого заболевания, состояния или расстройства.
[0749] Как используется в настоящей заявке, термин "облегчение" предназначен для описания способа, посредством которого тяжесть признака или симптома расстройства снижается. Важно, что признак или симптом можно облегчить без его устранения. Введение фармацевтических композиций по настоящему изобретению может привести к устранению признака или симптома, однако устранение не требуется. Следует ожидать, что эффективные дозы будут снижать тяжесть признака или симптома. Например, признак или симптом расстройства, такого как рак, который может возникать на нескольких участках, облегчается, если тяжесть рака снижают по меньшей мере на одном из нескольких участков.
[0750] Как используется в настоящей заявке, термин "тяжесть" предназначен для описания потенциала рака трансформироваться из предракового, или доброкачественного, состояния в злокачественное состояние. Альтернативно, или в дополнение к этому, термин тяжесть предназначен для описания стадии рака, например, в соответствии с TNM системой (принята International Union Against Cancer (UICC) и the American Joint Committee on Cancer (AJCC)) или другими общепринятыми в данной области способами. Стадия рака относится к степени развития или тяжести рака, на основании факторов, таких как локализация первичной опухоли, размер опухоли, количество опухолей и вовлеченность лимфоузлов (распространение рака в лимфоузлы). Альтернативно, или в дополнение к этому, термин тяжесть предназначен для описания степени опухоли общепринятыми в данной области способами (см., National Cancer Institute, www.cancer.gov). Степень опухоли представляет собой систему, используемую для классификации раковых клеток на основании того, насколько аномально они выглядят под микроскопом и как быстро опухоль может расти и распространяться. При определении степени опухоли учитывают многие факторы, включая структуру и тип роста клеток. Специфические факторы, используемые для определения степени опухоли, варьируют в зависимости от типа рака. Тяжесть также описывает гистологическую степень, также называемую дифференциацией, которая относится к тому, сколько опухолевых клеток имеют сходство с нормальными клетками того же самого типа ткани (см., National Cancer Institute, www.cancer.gov). Кроме того, тяжесть описывает ядерную стадию, которая относится к размеру и форме ядра в опухолевых клетках и проценту опухолевых клеток, которые делятся (см., National Cancer Institute, www.cancer.gov).
[0751] Тяжесть также может описывать степень, до которой опухоль секретировала ростовые факторы, разрушила внеклеточный матрикс, стала васкуляризованной, потеряла адгезию с сопредельными тканями или метастазировала. Кроме того, тяжесть может описывать количество участков, на которые метастазировала первичная опухоли. Наконец, тяжесть может включать трудность лечения опухолей различных типов и локализаций. Например, неоперабельные опухоли, те типы рака, которые имеют больший доступ к множеству систем организма (гематологические и иммунологические опухоли), и те, которые являются наиболее резистентными к традиционным лечениям, считаются наиболее тяжелыми. В эти ситуациях, продление ожидаемого срока выживания субъекта и/или снижение боли, уменьшение пропорции раковых клеток или ограничение клеток одной системой, и улучшение стадии рака/степени опухоли/гистологической оценки/ядерной стадии рассматривают как облегчение признака или симптома рака.
[0752] Как используется в настоящей заявке термин "симптом" определяют как указание на заболевание, болезнь, поражение или на то, что что-то неправильно в организме. Симптомы ощущаются или замечаются индивидуумом, у которого присутствует такой симптом, но они могут быть незаметны для других. Другие означают людей, не относящихся к медицинским работникам.
[0753] Как используется в настоящей заявке термин "признак" также определяют как указание на то, что что-то неправильно в организме. Но признаки определяют как то, что может видеть врач, медицинская сестра или другой работник здравоохранения.
[0754] Рак представляет собой группу заболеваний, которые могут вызывать почти любые признаки или симптомы. Признаки и симптома зависят от локализации рака, размера рака и насколько он затрагивает ближайшие органы или структуры. Если рак распространяется (метастазирует), тогда симптомы могут проявляться в разных частях организма.
[0755] По мере роста рака, он начинает давить на близлежащие органы, кровеносные сосуды и нервы. Это давление создает некоторые из признаков и симптомов рака. Когда рак находится в критической области, такой как некоторые части головного мозга, даже самая маленькая опухоль может вызывать ранние симптомы.
[0756] Но иногда рак начинается в местах, где он не вызывает какие-либо симптомы до тех пор, пока не вырастает до достаточно крупных размеров. Рак поджелудочной железы, например, обычно не вырастает до достаточно крупных размеров, чтобы его можно было ощущать снаружи. Некоторые типы рака поджелудочной железы не вызывают симптомов до тех пор, пока они не начинают расти вокруг близлежащих нервов (это вызывает боль в спине). Другие растут вокруг желчных протоков, блокируя поток желчи, что приводит к пожелтению кожи, известному как желтуха. К тому времени, когда рак поджелудочной железы вызывает эти признаки или симптомы, он обычно достигает развитой стадии.
[0757] Рак также может вызывать симптомы, такие как лихорадка, усталость или потеря веса. Это может быть из-за того, что раковые клетки расходуют большую часть энергоснабжения организма или выделяют вещества, которые изменяют метаболизм организма. Либо рак может вызывать такую реакцию иммунной системы, которая вызывает эти симптомы.
[0758] Иногда раковые клетки выделяют вещества в кровоток, вызывая симптомы, которые обычно не связывают с раком. Например, некоторые типы рака поджелудочной железы могут выделять вещества, которые вызывают развитие сгустков крови в венах ног. Некоторые типы рака легкого производят гормоно-подобные вещества, которые влияют на уровни кальция в крови с поражением нервов и мышц и вызывая слабость и головокружение.
[0759] Рак имеет общие признаки или симптомы, которые возникают, когда присутствуют различные подтипы раковых клеток. Большинство страдающих раком людей теряют вес в некоторый период развития их заболевания. Необъяснимая (непреднамеренная) потеря веса 10 фунтов (4,5 кг) или больше может быть первым признаком рака, особенно рака поджелудочной железы, желудка, пищевода или легкого.
[0760] Лихорадка часто наблюдается при раке, но более часто ее наблюдают на поздней стадии заболевания. Почти у всех пациентов в определенное время имеет место лихорадка, особенно если рак или его лечение влияет на иммунную систему и затрудняет борьбу организма с инфекцией. Гораздо реже лихорадка может быть ранним признаком рака, как в случае лейкоза или лимфомы.
[0761] Усталость может быть важным симптомом по мере прогрессирования рака. Однако это может быть на ранней стадии при таких раковых заболеваниях, как лейкоз, или если рак вызывает постоянную потерю крови, как в некоторых случаях рака толстой кишки или желудка.
[0762] Боль может быть ранним симптомом при некоторых раковых заболеваниях, таких как рак кости или тестикулярный рак. Но наиболее часто боль является симптомом поздней стадии заболевания.
[0763] Также как некоторые типы рака кожи (см. следующий раздел), некоторые внутренние раковые заболевания могут вызывать кожные признаки, которые являются видимыми. Эти изменения включают потемнение кожи (гиперпигментация), пожелтение (желтуха) или покраснение (эритема); зуд; или чрезмерный рост волос.
[0764] Альтернативно, или в дополнение к вышеуказанному, некоторые подтипы рак проявляют специфические признаки или симптомы. Изменения в функции кишечника или мочевого пузыря могут быть признаками рака. Длительные запоры, диарея или изменение размера стула могут быть признаками рака толстой кишки. Боль при мочеиспускании, кровь в моче или изменение функции мочевого пузыря (такие как более частое или менее частое мочеиспускание) может быть связано с раком мочевого пузыря или предстательной железы.
[0765] Изменения состояния или внешнего вида кожи или новое состояние кожи могут быть признаками рака. Рак кожи может кровоточить, выглядеть как болячки, которые не заживают. Долго не заживающие язвы во рту могут быть признаками рака, особенно у пациентов, которые курят, жуют табак или часто принимают алкоголь. Язвы полового члена или влагалища могут быть признаками либо инфекции, либо ранней стадии рака.
[0766] Необычное кровотечение или выделения могут быть признаками рака. Необычное кровотечение может происходить как на ранней, так и на поздней стадии рака. Кровь в слюне (мокроте) может быть признаком рака легкого. Кровь в стуле (или темный, или черный) может быть признаком рака толстой кишки или рака прямой кишки. Рак шейки матки или эндометрия (выстилающий слой матки) может вызывать вагинальное кровотечение. Кровь в моче может быть признаком рака мочевого пузыря или почки. Кровянистые выделения из соска может быть признаком рака молочной железы.
[0767] Утолщение или припухлость молочной железы или других частей тела могут быть признаками рака. Многие типы рака можно ощущать через кожу, чаще всего рак молочной железы, мужских половых желез, лимфоузлов (желез) и мягких тканей организма. Припухлость или утолщение могут быть ранними или поздними признаками рака. Любая припухлость или утолщение может быть признаком рака, особенно если образование является новым или увеличивается в размере.
[0768] Нарушенное пищеварение или затрудненное глотание могут быть признаками рака. Хотя эти симптомы часто имеют другие причины, нарушенное пищеварение или проблемы с глотанием могут быть признаками рака пищевода, желудка или глотки (горла).
[0769] Свежие изменения бородавки или родинки могут быть признаками рака. Любая бородавка, родинка или пятно на коже, которые изменили цвет, размер или форму или утратили свои определенные границы, указывают на потенциальное развитие рака. Например, поражение кожи может представлять собой меланому.
[0770] Постоянный кашель или хрипота могут быть признаками рака. Кашель, который не проходит, может быть признаком рака легкого. Хрипота может быть признаком рака гортани (voice box) или щитовидной железы.
[0771] Хотя признаки и симптомы, перечисленные выше, являются наиболее часто наблюдаемыми при раке, могут быть многие другие признаки и симптомы, которые являются менее распространенными и не указаны в настоящей заявке.
[0772] Лечение рака может привести к или должно привести к уменьшению размера опухоли. Уменьшение размера опухоли также может быть указано как "регрессия опухоли". Предпочтительно, после лечения размер опухоли должен уменьшиться на 5% или больше по сравнению с ее размером до лечения; более предпочтительно, размер опухоли уменьшается на 10% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 20% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 30% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 40% или больше; еще более предпочтительно, уменьшается на 50% или больше; и наиболее предпочтительно, уменьшается на больше чем 75% или больше. Размер опухоли можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения. Размер опухоли можно измерить как диаметр опухоли.
[0773] Лечение рака может привести или должно привести к уменьшению объема опухоли. Предпочтительно, после лечения объем опухоли должен уменьшиться на 5% или больше по сравнению с ее размером до лечения; более предпочтительно, объем опухоли уменьшается на 10% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 20% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 30% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 40% или больше; еще более предпочтительно, уменьшается на 50% или больше; и наиболее предпочтительно, уменьшается на более чем 75% или больше. Объем опухоли можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения.
[0774] Лечение рака может привести или должно привести к уменьшению количества опухолей. Предпочтительно, после лечения количество опухолей должно уменьшиться на 5% или больше по сравнению с количеством до лечения; более предпочтительно, количество опухолей уменьшается на 10% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 20% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 30% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 40% или больше; еще более предпочтительно, уменьшается на 50% или больше; и наиболее предпочтительно, уменьшается на больше чем 75%. Количество опухолей можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения. Количество опухолей можно измерить путем подсчета опухолей видимых невооруженным глазом или при определенном увеличении. Предпочтительно, определенное увеличение означает 2x, 3x, 4x, 5x, 10x или 50x.
[0775] Лечение рака может привести, или должно привести, к уменьшению количества метастатических поражений в других тканях или органах, отдаленных от места первичной опухоли. Предпочтительно, после лечения количество метастатических поражений уменьшится на 5% или больше по сравнению с количеством до лечения; более предпочтительно, количество метастатических поражений уменьшается на 10% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 20% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 30% или больше; более предпочтительно, уменьшается на 40% или больше; еще более предпочтительно, уменьшается на 50% или больше; и наиболее предпочтительно, уменьшается на больше чем 75%. Количество метастатических поражений можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения. Количество метастатических поражений можно измерить путем подсчета метастатических поражений видимых невооруженным глазом или при определенном увеличении. Предпочтительно, определенное увеличение означает 2x, 3x, 4x, 5x, 10x или 50x.
[0776] Лечение рака может привести, или должно привести, к увеличению среднего периода выживания популяции субъектов, которые принимали лечение, по сравнению с популяцией, принимавшей только носитель. Предпочтительно, средний период выживания увеличивается на более чем 30 дней; более предпочтительно, на более чем 60 дней; более предпочтительно, на более чем 90 дней; и наиболее предпочтительно, на более чем 120 дней. Увеличение среднего периода выживания популяции можно измерить любыми воспроизводимыми средствами. Увеличение среднего периода выживания популяции можно измерить, например, путем расчета для популяции средней продолжительности выживания после начала лечения активным соединением. Увеличение среднего периода выживания популяции также можно измерить, например, путем расчета для популяции средней продолжительности выживания после завершения первого цикла лечения активным соединением.
[0777] Лечение рака может привести, или должно привести, к увеличению среднего периода выживания популяции субъектов, которые принимали лечение, по сравнению с популяцией не принимавших лечение субъектов. Предпочтительно, средний период увеличивается на более чем 30 дней; более предпочтительно, на более чем 60 дней; более предпочтительно, на более чем 90 дней; и наиболее предпочтительно, на более чем 120 дней. Увеличение среднего периода выживания популяции можно измерить любыми воспроизводимыми средствами. Увеличение среднего периода выживания популяции можно измерить, например, путем расчета для популяции средней продолжительности выживания после начала лечения активным соединением. Увеличение среднего периода выживания популяции также можно измерить, например, путем расчета для популяции средней продолжительности выживания после завершения первого цикла лечения активным соединением.
[0778] Лечение рака может привести, или должно привести, к повышению среднего периода выживания популяции субъектов, которые принимали лечение, по сравнению с популяцией, принимавшей монотерапию лекарственным средством, которое не является соединением по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, пролекарством, метаболитом, аналогом или производным. Предпочтительно, средний период выживания увеличивается на более чем 30 дней; более предпочтительно, на более чем 60 дней; более предпочтительно, на более чем 90 дней; и наиболее предпочтительно, на более чем 120 дней. Увеличение среднего периода выживания популяции можно измерить любыми воспроизводимыми средствами. Увеличение среднего периода выживания популяции можно измерить, например, путем расчета для популяции средней продолжительности выживания после начала лечения активным соединением. Увеличение среднего периода выживания популяции также можно измерить, например, путем расчета для популяции средней продолжительности выживания после завершения первого цикла лечения активным соединением.
[0779] Лечение рака может привести, или должно привести, к уменьшению процента смертности в популяции субъектов, которые принимали лечение, по сравнению с популяцией, принимавшей только носитель. Лечение рака может привести, или должно привести, к уменьшению процента смертности в популяции субъектов, которые принимали лечение, по сравнению с не принимавшей лечение популяцией. Лечение рака может привести, или должно привести, к уменьшению процента смертности в популяции субъектов, которые принимали лечение, по сравнению с популяцией, принимавшей монотерапию лекарственным средством, которое не является соединением по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, пролекарством, метаболитом, аналогом или производным. Предпочтительно, процент смертности уменьшается на более чем 2%; более предпочтительно, на более чем 5%; более предпочтительно, на более чем 10%; и наиболее предпочтительно, на более чем 25%. Снижение процента смертности в популяции субъектов, которые принимали лечение, можно измерить любыми воспроизводимыми средствами. Снижение процента смертности в популяции можно измерить, например, путем расчета для популяции среднего количества связанных с заболеванием смертей на единицу времени после начала лечения активным соединением. Снижение процента смертности в популяции также можно измерить, например, путем расчета для популяции среднего количества связанных с заболеванием смертей на единицу времени после завершения первого цикла лечения активным соединением.
[0780] Лечение рака может привести, или должно привести, к уменьшению скорости роста опухоли. Предпочтительно, после лечения, скорость роста опухоли уменьшается по меньшей мере на 5% по сравнению со скоростью роста до лечения; более предпочтительно, скорость роста опухоли уменьшается по меньшей мере на 10%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 20%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 30%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 40%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 50%; еще более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 50%; и наиболее предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 75%. Скорость роста опухоли можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения. Скорость роста опухоли можно измерить в соответствии с изменением диаметра опухоли на единицу времени.
[0781] Лечение рака может привести, или должно привести, к уменьшению возобновления роста опухоли. Предпочтительно, после лечения возобновление роста опухоли будет меньше чем 5%; более предпочтительно, возобновление роста опухоли будет меньше чем 10%; более предпочтительно, меньше чем 20%; более предпочтительно, меньше чем 30%; более предпочтительно, меньше чем 40%; более предпочтительно, меньше чем 50%; еще более предпочтительно, меньше чем 50%; и наиболее предпочтительно, меньше чем 75%. Возобновление роста опухоли можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения. Возобновление роста опухоли измеряют, например, путем измерения увеличения диаметра опухоли после имевшего место ранее сокращения опухоли, последовавшего после лечения. На снижение возобновления роста опухоли указывает неспособность опухолей возникать снова после прекращения лечения.
[0782] Лечение или профилактика клеточно-пролиферативного расстройства может привести, или должно привести, к уменьшению скорости клеточной пролиферации. Предпочтительно, после лечения скорость клеточной пролиферации уменьшается по меньшей мере на 5%; более предпочтительно, по меньшей мере на 10%; более предпочтительно, по меньшей мере на 20%; более предпочтительно, по меньшей мере на 30%; более предпочтительно, по меньшей мере на 40%; более предпочтительно, по меньшей мере на 50%; еще более предпочтительно, по меньшей мере на 50%; и наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 75%. Скорость клеточной пролиферации можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения. Скорость клеточной пролиферации измеряют, например, путем измерения количества делящихся клеток в образце ткани на единицу времени.
[0783] Лечение или профилактика клеточно-пролиферативного расстройства может привести, или должно привести, к уменьшению пропорции пролиферирующих клеток. Предпочтительно, после лечения пропорция пролиферирующих клеток уменьшается по меньшей мере на 5%; более предпочтительно, по меньшей мере на 10%; более предпочтительно, по меньшей мере на 20%; более предпочтительно, по меньшей мере на 30%; более предпочтительно, по меньшей мере на 40%; более предпочтительно, по меньшей мере на 50%; еще более предпочтительно, по меньшей мере на 50%; и наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 75%. Пропорцию пролиферирующих клеток можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения. Предпочтительно, пропорцию пролиферирующих клеток измеряют, например, путем подсчета количества делящихся клеток по сравнению с количеством неделящихся клеток в образце ткани. Пропорция пролиферирующих клеток может быть эквивалентной митотическому индексу.
[0784] Лечение или профилактика клеточно-пролиферативного расстройства может привести, или должно привести, к уменьшению размера области или зоны клеточной пролиферации. Предпочтительно, после лечения размер области или зоны клеточной пролиферации уменьшается по меньшей мере на 5% по сравнению с размером области или зоны до лечения; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 10%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 20%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 30%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 40%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 50%; еще более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 50%; и наиболее предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 75%. Размер области или зоны клеточной пролиферации можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения. Размер области или зоны клеточной пролиферации можно измерить как диаметр или ширину области или зоны клеточной пролиферации.
[0785] Лечение или профилактика клеточно-пролиферативного расстройства может привести, или должно привести, к уменьшению количества или пропорции клеток, имеющих аномальный внешний вид или морфологию. Предпочтительно, после лечения количество клеток, имеющих аномальную морфологию, уменьшается по меньшей мере на 5% по сравнению с их количеством до лечения; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 10%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 20%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 30%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 40%; более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 50%; еще более предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 50%; и наиболее предпочтительно, уменьшается по меньшей мере на 75%. Аномальный клеточный внешний вид или морфологию можно измерить любыми воспроизводимыми средствами измерения. Аномальный клеточный внешний вид или морфологию можно измерить методом микроскопии, т.е. с использованием инвертированного микроскопа для тканевых культур. Аномальная клеточная морфология может принимать форму ядерного плейоморфизма.
[0786] Как используется в настоящей заявке, термин "селективно" означает тенденцию возникновения с большей частотой в одной популяции по сравнению с другой популяцией. Сравниваемые популяции могут представлять собой клеточные популяции. Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват, может или должно действовать селективно на раковую или предраковую клетку, но не на нормальную клетку. Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват, может или должно действовать селективно для модуляции одной молекулярной мишени (например, являющейся мишенью протеинметилтрансферазы), но не модулируя существенным образом другую молекулярную мишень (например, не являющуюся мишенью протеинметилтрансферазы). Изобретение также обеспечивает способ селективного ингибирования активности фермента, такого как протеинметилтрансфераза. Предпочтительно, событие происходит селективно в популяции A по сравнению с популяцией В, если оно происходит больше чем в два раз чаще в популяции A по сравнению с популяцией B. Событие происходит селективно, если оно происходит больше чем в пять раз чаще в популяции A. Событие происходит селективно, если оно происходит больше чем в десять раз чаще в популяции A; более предпочтительно, больше чем в пятнадцать раз; еще более предпочтительно, больше чем в 100 раз; и наиболее предпочтительно, больше чем в 1000 раз чаще в популяции A по сравнению с популяцией B. Например, можно сказать, что клеточная гибель возникает селективно в раковых клетках, если это происходит больше чем в два раза чаще в раковых клетках по сравнению с нормальными клетками.
[0787] Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват, может или должно модулировать активность молекулярной мишени (например, являющейся мишенью протеинметилтрансферазы). Модуляция относится к стимулированию или ингибированию активности молекулярной мишени. Предпочтительно, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват модулирует активность молекулярной мишени, если оно стимулирует или ингибирует активность молекулярной мишени по меньшей мере 2-кратно по сравнению с активностью молекулярной мишени в тех же самых условиях, но только без присутствия указанного соединения. Более предпочтительно, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват модулирует активность молекулярной мишени, если оно стимулирует или ингибирует активность молекулярной мишени по меньшей мере 5-кратно, по меньшей мере 10-кратно, по меньшей мере 20-кратно, по меньшей мере 50-кратно, по меньшей мере 100-кратно по сравнению с активностью молекулярной мишени в тех же самых условиях, но только без присутствия указанного соединения. Активность молекулярной мишени можно измерить любыми воспроизводимыми средствами. Активность молекулярной мишени можно измерить in vitro или in vivo. Например, активность молекулярной мишени можно измерить in vitro при помощи анализа ферментативной активности или анализа ДНК связывания, или активность молекулярной мишени можно измерить in vivo при помощи анализа экспрессии репортерного гена.
[0788] Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват не модулируют существенным образом активность молекулярной мишени, если добавление соединения не стимулирует или не ингибирует активность молекулярной мишени больше чем на 10% по сравнению с активностью молекулярной мишени в тех же самых условиях, но только без присутствия указанного соединения.
[0789] Как используется в настоящей заявке, термин "изофермент-селективный" означает преимущественное ингибирование или стимуляцию первой изоформы фермента по сравнению со второй изоформой фермента (например, преимущественное ингибирование или стимуляцию альфа изофермента протеинметилтрансферазы по сравнению с бета изоферментом протеинметилтрансферазы). Предпочтительно, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват демонстрируют минимально четырехкратную разницу, предпочтительно десятикратную разницу, более предпочтительно пятидесятикратную разницу в дозе, необходимой для достижения биологического эффекта. Предпочтительно, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват демонстрируют эту разницу в пределах ингибирующих концентраций, и эта разница проиллюстрирована значением ИК50, т.е. 50% ингибирование, для представляющей интерес молекулярной мишени.
[0790] Введение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата в клетку или субъекту, нуждающегося в этом, может привести, или должно привести, к модуляции (т.е. стимуляции или ингибированию) активности протеинметилтрансферазы, которая представляет интерес.
[0791] Настоящее изобретение обеспечивает способы оценки биологической активности соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата или способы идентификации испытываемого соединения в качестве ингибитора Y641 мутанта EZH2. В одном варианте воплощения способ включает объединение выделенного Y641 мутанта EZH2 с гистоновым субстратом, донором метильной группы (таким как S-аденозилметионин (SAM)), и испытываемым соединением, где гистоновый субстрат включает форму H3-K27, выбранную из группы, включающей неметилированный H3-K27, монометилированный H3-K27, диметилированный H3-K27 и любую их комбинацию; и осуществление анализа для определения метилирования H3-K27 в гистоновом субстрате, идентифицируя, таким образом, испытываемое соединение в качестве ингибитора Y641 мутанта EZH2, когда метилирование H3-K27 в присутствии испытываемого соединения меньше чем метилирование H3-K27 в отсутствие испытываемого соединения. Анализ для определения метилирования H3-K27 может быть выбран для измерения скорости метилирования, степени метилирования, или и скорости и степени метилирования.
[0792] Y641 мутант EZH2 выделяют в виде PRC2 комплекса или его функционального эквивалента. Как используется в настоящей заявке, термин "выделенный" означает по существу отделенный от других компонентов, с которыми может быть обнаружен комплекс, как это происходит в природе. Соединение может быть выделенным, при этом оно необязательно является очищенным. В одном варианте воплощения мутантный EZH2 выделяют в виде комплекса Y641 мутанта EZH2 вместе с EED и SUZ12. В другом варианте воплощения мутант EZH2 выделяют в виде комплекса Y641 мутанта EZH2 вместе с EED, SUZ12 и RbAp48. В подходящих условиях PRC2 комплекс или его функциональный эквивалент демонстрирует активность гистон-метилтрансферазы для H3-K27. В одном варианте воплощения комплекс состоит из рекобинантно экспрессируемых полипептидных компонентов, например, EZH2, EED, SUZ12, с или без RbAp48.
[0793] Выделенный Y641 мутант EZH2 объединяют с гистоновым субстратом. Гистоновый субстрат включает любой подходящий источник полипептидов гистонов или их фрагментов, которые могут служить в качестве субстрат для EZH2. В одном варианте воплощения гистоновый субстрат включает гистоны, выделенные у субъекта. Гистоны могут быть выделены из клеток субъекта с использованием любого подходящего способа; такие способы хорошо известны специалистам в данной области и не нуждаются в подробном изложении в настоящей заявке. См., например, Fang et al. (2004) Methods Enzymol 377:213-26. В соответствии с представленными ниже примерами, в одном варианте воплощения гистоновый субстрат обеспечивается в виде нуклеосом. В соответствии с представленными ниже примерами, в одном варианте воплощения гистоновый субстрат обеспечивается в виде нуклеосом эритроцитов птицы (курицы).
[0794] Гистоновый субстрат, обеспечиваемый таким образом, может включать смесь состояний модификации гистонов, включая различные состояния метилирования H3-K27, как можно судить на основании Вестерн-блоттинга с использованием специфических относительно состояния метилирования H3-K27 антител. В одном варианте воплощения гистоновый субстрат может быть представлен в виде очищенного непроцессированного гистона Н3. Такой очищенный непроцессированный гистон Н3 может быть представлен в виде гомогенного препарата, что касается состояний H3-K27 метилирования, или в виде смеси различных состояний H3-K27 метилирования. Гомогенные препараты выделенного гистона H3, что касается состояния H3-K27 метилирования, можно получить, в некоторой степени, пропуская через иммуноаффинную колонку, содержащую подходящие специфические относительно состояния H3-K27 метилирования антитела, или методом иммунопреципитации с использованием магнитных шариков, покрытых подходящими специфическими относительно состояния H3-K27 метилирования антителами. Альтернативно, или в дополнение к этому, состояние метилирования H3-K27 может быть охарактеризовано как часть осуществления анализа. Например, исходное вещество, представляющее собой гистоновый субстрат, может быть охарактеризован как содержащий 50 процентов неметилированного H3-K27, 40 процентов монометилированного H3-K27, 10 процентов диметилированного H3-K27 и 0 процентов триметилированного H3-K27.
[0795] В одном варианте воплощения, гистоновый субстрат включает библиотеку пептидов или подходящий пептид, включающий одну или несколько аминокислотных последовательностей, относящихся к гистону H3, включая, в частности, последовательность, которая охватывает H3-K27. Например, в одном варианте воплощения, гистоновый субстрат представляет собой пептидный фрагмент, который соответствует аминокислотным остаткам 21-44 гистона H3. Библиотеку пептидов или пептид можно получить путем пептидного синтеза в соответствии со способами, хорошо известными из уровня техники, с необязательной модификацией, такой как включение любой желаемой степени метилирования лизина, соответствующего H3-K27. Как описано в примерах ниже, такие пептиды также можно модифицировать для включения метки, такой как биотин, полезной для осуществления анализов по ходу транскрипции. В одном варианте воплощения метку присоединяют к амино (N)-концу пептида(пептидов). В одном варианте воплощения метку присоединяют к карбокси (C)-концу пептида(пептидов).
[0796] Детекцию метилирования H3-K27 можно осуществить с использованием любого подходящего способа. В одном варианте воплощения, источник донорных метильных групп включает метильные группы, которые являются меченными обнаруживаемой меткой. В одном варианте воплощения, обнаруживаемая метка представляет собой изотопную метку, например, тритий. Другие типы меток могут включать, например, флуоресцентные метки.
[0797] Детекцию образования триметилированного H3-K27 можно осуществить с использованием любого подходящего способа. Например, детекцию образования триметилированного H3-K27 можно осуществить с использованием анализа для определения включения меченых метильных групп, как описано выше, необязательно в сочетании с хроматографическим или другим способом для разделения меченых продуктов по размеру, например, электрофорезом в полиакриламидном геле (PAGE), капиллярным электрофорезом (CE) или высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ). Альтернативно, или в дополнение к этому, детекцию образования триметилированного H3-K27 можно осуществить с использованием антител, которые являются специфическими в отношении триметилированного H3-K27.
[0798] Детекцию преобразования монометилированного H3-K27 в диметилированный H3-K27 можно осуществить с использованием любого подходящего способа. В одном варианте воплощения, преобразование измеряют с использованием антител, специфических в отношении монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27. Например, исходные количества или концентрации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27 можно определить с использованием соответствующих антител, специфических в отношении монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27. После получения комбинации фермента, субстрата, донора метильных групп и испытываемого соединения полученные количества или концентрации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27 затем можно определить с использованием соответствующих антител, специфических в отношении монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27. Исходные и полученные в результате количества или концентрации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27 затем можно сравнить. Альтернативно, или в дополнение к этому, исходные и полученные в результате количества или концентрации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27 затем можно сравнить с соответствующими количествами или концентрациями отрицательного контроля. Отрицательную контрольную реакцию, где никакое испытываемое вещество не включено в анализ, можно осуществить параллельно или в виде исторического контроля. Результаты такой контрольной реакции, необязательно, можно вычесть из соответствующих результатов экспериментальной реакции до или в ходе сравнения, указанного выше.
[0799] Поскольку диметилированная форма H3-K27 может быть далее метилирована в этом же самом анализе, может оказаться, что уменьшение количества или концентрации монометилированного H3-K27 не находится в прямой зависимости от увеличения диметилированного H3-K27. В этом случае, однако, можно предположить, что уменьшение количества или концентрации монометилированного H3-K27, само по себе, отражает преобразование монометилированного H3-K27 в диметилированный H3-K27.
[0800] Детекцию преобразования диметилированного H3-K27 в триметилированный H3-K27 можно осуществить с использованием любого подходящего способа. В одном варианте воплощения, преобразование измеряют с использованием антител, специфических в отношении диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27. Например, исходные количества или концентрации диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27 можно определить с использованием соответствующих антител, специфических в отношении диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27. После получения комбинации фермента, субстрата, донора метильных групп и испытываемого соединения полученные количества или концентрации диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27 затем можно определить с использованием соответствующих антител, специфических в отношении диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27. Исходные и полученные в результате количества или концентрации диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27 затем можно сравнить. Альтернативно, или в дополнение к этому, исходные и полученные в результате количества или концентрации диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27 затем можно сравнить с соответствующими количествами или концентрациями отрицательного контроля. Отрицательную контрольную реакцию, где никакое испытываемое вещество не включено в анализ, можно осуществить параллельно или в виде исторического контроля. Результаты такой контрольной реакции, необязательно, можно вычесть из соответствующих результатов экспериментальной реакции до или в ходе сравнения, указанного выше.
[0801] Испытываемое вещество идентифицируют как ингибитор Y641 мутанта EZH2, когда метилирование H3-K27 с испытываемым соединением меньше чем метилирование H3-K27 без испытываемого соединения. В одном варианте воплощения, испытываемое вещество идентифицируют как ингибитор Y641 мутанта EZH2, когда образование триметилированного H3-K27 в присутствии испытываемого соединения меньше чем образование триметилированного H3-K27 в отсутствие испытываемого соединения.
[0802] Настоящее изобретение также обеспечивает способ идентификации селективного ингибитора Y641 мутанта EZH2. В одном варианте воплощения, способ включает объединение выделенного Y641 мутанта EZH2 с гистоновым субстратом, донором метильных групп (например, SAM) и испытываемым соединением, где гистоновый субстрат включает форму H3-K27, выбранную из группы, состоящей из монометилированного H3-K27, диметилированного H3-K27 и комбинации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27, с получением, таким образом, испытываемой смеси; объединение выделенного EZH2 дикого типа с гистоновым субстратом, донором метильных групп (например, SAM) и испытываемым соединением, где гистоновый субстрат включает форму H3-K27, выбранную из группы, состоящей из монометилированного H3-K27, диметилированного H3-K27 и комбинации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27, с получением, таким образом, контрольной смеси; осуществление анализа для определения триметилирования гистонового субстрата в каждой из испытываемой смеси и контрольной смеси; расчет отношения (a) триметилирования с Y641 мутантом EZH2 и испытываемым соединением (M+) к (b) триметилированию с Y641 мутантом EZH2 без испытываемого соединения (M-); расчет отношения (c) триметилирования с EZH2 дикого типа и испытываемым соединением (WT+) к (d) триметилированию с EZH2 дикого типа без испытываемого соединения (WT-); сравнение отношения (a)/(b) с отношением (c)/(d); и идентификацию испытываемого соединения в качестве селективного ингибитора Y641 мутанта EZH2, когда отношение (a)/(b) меньше чем отношение (c)/(d). В одном варианте воплощения, способ дополнительно включает анализ с учетом отрицательного контроля без испытываемого соединения как для испытываемой смеси, так и для контрольной смеси.
[0803] В некоторых анализах используют иммунологические реагенты, например, антитела и антигены. Флуоресценцию можно использовать для измерения ферментативной активности в некоторых анализах. Как используется в настоящей заявке, "флуоресценция" относится к способу, посредством которого молекула испускает фотон в результате поглощения входящего фотона более высокой энергии этой же самой молекулой. Специальные способы оценки биологической активности раскрываемых соединений описаны в примерах.
[0804] Введение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата в клетку или субъекту, нуждающемуся в этом, может или должно привести к модуляции (т.е. стимуляции или ингибированию) активности внутриклеточной мишени (например, субстрата). Некоторые внутриклеточные мишени можно модулировать соединениями по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь этим, протеинметилтрансферазу.
[0805] Активация относится к приведению композиции вещества (например, белка или нуклеиновой кислоты) в состояние, подходящее для осуществления желаемой биологической функции. Композиция вещества, которое может быть активировано, также имеет неактивированное состояние. Активированная композиция вещества может иметь ингибиторную или стимулирующую биологическую функцию, или и ту и другую.
[0806] Повышение относится к возрастанию желаемой биологической активности композиции вещества (например, белка или нуклеиновой кислоты). Повышение может быть результатом увеличения концентрации композиции вещества.
[0807] Как используется в настоящей заявке, "путь контрольной точки клеточного цикла" относится к биохимическому пути, который вовлечен в модуляцию контрольной точки клеточного цикла. Путь контрольной точки клеточного цикла может оказывать стимулирующий или ингибиторный эффект, или оба, на одну или несколько функций, включающих контрольную точку клеточного цикла. Путь контрольной точки клеточного цикла состоит из по меньшей мере двух композиций веществ, предпочтительно белков, которые обе способствуют модуляции контрольной точки клеточного цикла. Путь контрольной точки клеточного цикла можно активировать через активацию одного или нескольких членов пути контрольной точки клеточного цикла. Предпочтительно, путь контрольной точки клеточного цикла представляет собой биохимический сигнальный путь.
[0808] Как используется в настоящей заявке, "регулятор контрольной точки клеточного цикла" относится к композиции вещества, которая может осуществлять функцию, по меньшей мере частично, модуляции точки клеточного цикла. Регулятор контрольной точки клеточного цикла может оказывать стимулирующий или ингибиторный эффект, или оба, на одну или несколько функций, включающих контрольную точку клеточного цикла. Регулятор контрольной точки клеточного цикла может представлять собой белок или может быть отличным от белка.
[0809] Лечение рака или клеточно-пролиферативного расстройства может привести, или должно привести, к клеточной гибели, и предпочтительно клеточная гибель будет приводить к уменьшению, по меньшей мере на 10%, количества клеток в популяции. Более предпочтительно, клеточная гибель означает уменьшение по меньшей мере на 20%; более предпочтительно, уменьшение по меньшей мере на 30%; более предпочтительно, уменьшение по меньшей мере на 40%; более предпочтительно, уменьшение по меньшей мере на 50%; наиболее предпочтительно, уменьшение по меньшей мере на 75%. Количество клеток в популяции можно измерить любыми воспроизводимыми средствами. Количество клеток в популяции можно измерить методом флуоресцентно-активируемого клеточного сортинга (FACS), иммунофлуоресцентной микроскопии и световой микроскопии. Способы измерения клеточной гибели описаны в Li et al, Proc Natl Acad Sci USA. 100(5): 2674-8, 2003. В одном аспекте, клеточная гибель происходит посредством апоптоза.
[0810] Предпочтительно, эффективное количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата не должно быть существенно цитотоксичным для нормальных клеток. Терапевтически эффективное количество соединения не является существенно цитотоксичным для нормальных клеток, если введение соединения в терапевтически эффективном количестве не вызывает клеточную гибель в больше чем 10% нормальных клеток. Терапевтически эффективное количество соединения не влияет существенным образом на жизнеспособность нормальных клеток, если введение соединения в терапевтически эффективном количестве не вызывает клеточную гибель в больше чем 10% нормальных клеток. В одном аспекте, клеточная гибель происходит посредством апоптоза.
[0811] Контактирование клетки с соединением по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, пролекарством, метаболитом, полиморфом или сольватом может или должно индуцировать или активировать клеточную гибель селективно в раковых клетках. Введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата может или должно индуцировать или активировать клеточную гибель селективно в раковых клетках. Контактирование клетки с соединением по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, пролекарством, метаболитом, полиморфом или сольватом может или должно индуцировать клеточную гибель селективно в одной или нескольких клетках, пораженных клеточно-пролиферативным расстройством. Предпочтительно, введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата, будет индуцировать клеточную гибель селективно в одной или нескольких клетках, пораженных клеточно-пролиферативным расстройством.
[0812] Один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения или профилактики рака (например, на развитие которого можно влиять путем модуляции EZH2-опосредованного метилирования белка) путем введения соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата субъекту, нуждающемуся в этом, где введение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата приводит к одному или нескольким из следующих: предотвращению пролиферации раковых клеток путем аккумуляции клеток в одной или нескольких фазах клеточного цикла (например, G1, G1/S, G2/M), или индукции клеточного старения, или промотирования дифференциации опухолевых клеток; промотированию клеточной гибели в раковых клетках через цитотоксичность, некроз или апоптоз, без существенной клеточной гибели в нормальных клетках, противоопухолевой активности у животных с терапевтическим индексом по меньшей мере 2. Как используется в настоящей заявке, "терапевтический индекс" означает максимально переносимую дозу деленную на эффективную дозу. Настоящее изобретение также относится к способу, используемому для идентификации подходящих кандидатов для лечения или профилактики рака.
[0813] Специалисты в данной области могут обратиться к стандартным справочникам, в которых описаны известные методы, обсуждаемые в настоящей заявке, или эквивалентные методы. Эти справочники включают Ausubel et al, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (2005); Sambrook et al, Molecular Cloning, Laboratory Manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2000); Coligan et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N.Y.; Enna et al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N.Y.; Fingl et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition (1990). К этим справочникам конечно можно обращаться при осуществлении или использовании какого-либо аспекта настоящего изобретения.
[0814] Как используется в настоящей заявке, "комбинированная терапия" или "ко-терапия" включает введение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата и по меньшей мере второго средства как части специальной схемы лечения, рассчитанной на обеспечение благоприятного эффекта от совместного действия этих терапевтических средств. Благоприятный эффект комбинации может включать, но не ограничивается этим, фармакокинетическое или фармакодинамическое совместное действие, являющееся результатом комбинации терапевтических средств. Введение этих терапевтических средств в комбинации типично осуществляют в течение определенного периода времени (обычно минут, часов, дней или недель, в зависимости от выбранной комбинации). "Комбинированная терапия" может быть, но, как правило не, предназначена для охвата введения двух или более из этих терапевтических средств в виде части отдельных монотерапевтических схем лечения, которые случайно или произвольно дают комбинации по настоящему изобретению.
[0815] "Комбинированная терапия", как предполагается, охватывает введение этих терапевтических средств последовательным образом, где каждое терапевтическое средство вводят в другое время, а также введение этих терапевтических средств, или по меньшей мере двух из терапевтических средств, по существу одновременно. По существу одновременное введение можно осуществить, например, путем введения субъекту одной капсулы, содержащей фиксированную пропорцию каждого терапевтического средства, или нескольких отдельных капсул для каждого из терапевтических средств. Последовательное или по существу одновременное введение каждого терапевтического средства можно осуществить любым подходящим путем, включая, но не ограничиваясь этим, пероральные пути, внутривенные пути, внутримышечные пути и непосредственную абсорбцию через ткани слизистой оболочки. Терапевтические средства можно вводить одним и тем же путем или разными путями. Например, первое терапевтическое средство выбранной комбинации можно вводить путем внутривенной инъекции, тогда как другие терапевтические средства комбинации можно вводить перорально. Альтернативно, например, все терапевтические средства можно вводить перорально, или все терапевтические средства можно вводить путем внутривенной инъекции. Последовательность введения терапевтических средств не является в узком смысле критической.
[0816] "Комбинированная терапия" также охватывает введение терапевтических средств, описанных выше, в дополнительной комбинации с другими биологически активными ингредиентами и нелекарственными лечениями (например, хирургическая операция или лучевая терапия). Когда комбинированная терапия дополнительно включает нелекарственное лечение, такое нелекарственное лечение можно осуществить в любое подходящее время, при условии достижения благоприятного эффекта от совместного действия комбинации терапевтических средств и нелекарственного лечения. Например, в соответствующих случаях благоприятный эффект достигается даже тогда, когда нелекарственное лечение временно прекращают возможно на несколько дней или даже недель, продолжая при этом введение терапевтических средств.
[0817] Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарства, метаболит, аналог или производное можно вводить в комбинации с вторым химиотерапевтическим средством. Второе химиотерапевтическое средство (также указываемое как противоопухолевое средство или анти-пролиферативное средство) может представлять собой алкилирующее средство; антибиотик; антиметаболит; детоксифицирующее средство; интерферон; поликлональное или моноклональное антитело; ингибитор EGFR; ингибитор HER2; ингибитор гистондеацетилазы; гормон; митотический ингибитор; ингибитор MTOR; ингибитор нескольких киназ; ингибитор сериновой/треониновой киназы; ингибиторы тирозиновой киназы; ингибитор VEGF/VEGFR; таксан- или таксановое производное; ингибитор ароматазы; антрациклин, прицельно действующее на микротрубочки лекарственное средство, топоизозомеразное отравляющее лекарственное средство, ингибитор молекулярной мишени или фермента (например, киназы или протеинметилтрансферазы), лекарственное средство, представляющее собой цитидиновый аналог, или любое химиотерапевтическое, противоопухолевое или анти-пролиферативное средство, указанное в www.cancer.org/docroot/cdg/cdg__0.asp.
[0818] Примеры алкилирующих средств включают, но не ограничиваются этим, циклофосфамид (Cytoxan; Neosar); хлорамбуцил (Leukeran); мелфалан (Alkeran); кармустин (BiCNU); бусульфан (Busulfex); ломустин (CeeNU); дакарбазин (DTIC-Dome); оксалиплатин (Eloxatin); кармустин (Gliadel); ифосфамид (Ifex); мехлоретамин (Mustargen); бусульфан (Myleran); карбоплатин (Paraplatin); цисплатин (CDDP; Platinol); темозоломид (Temodar); тиотепа (Thioplex); бендамустин (Treanda); или стрептозоцин (Zanosar).
[0819] Примеры антибиотиков включают, но не ограничиваются этим, доксорубицин (Adriamycin); доксорубицин липосомный (Doxil); митоксантрон (Novantrone); блеомицин (Blenoxan); даунорубицин (Cerubidine); даунорубицин липосомный (Daunoxome); дактиномицин (Cosmegen); эпирубицин (Ellence); идарубицин (Idamycin); пликамицин (Mithracin); митомицин (Mutamycin); пентостатин (Nipent); или валрубицин (Valstar).
[0820] Примеры антиметаболитов включают, но не ограничиваются этим, фторурацил (Adrucil); капецитабин (Xeloda); гидроксимочевину (Hydrea); меркаптопурин (Purinethol); пеметрексед (Alimta); флударабин (Fludara); неларабин (Arranon); кладрибин (Cladribine Novaplus); клофарабин (Clolar); цитарабин (Cytosar-U); децитабин (Dacogen); цитарабин липосомный (DepoCyt); гидроксимочевину (Droxia); пралатрексат (Folotyn); флоксуридин (FUDR); гемцитабин (Gemzar); кладрибин (Leucstatin); флударабин (Oforta); метотрексат (MTX; Rheumatrex); метотрексат (Trexall); тиогуанин (Tabloid); TS-1 или цитарабин (Tarabin PFS).
[0821] Примеры детоксифицирующих средств включают, но не ограничиваются этим, амифостин (Ethyol) или месна (Mesnex).
[0822] Примеры интерферонов включают, но не ограничиваются этим, интерферон альфа-2b (Intron A) или интерферон альфа-2a (Roferon-A).
[0823] Примеры поликлональных или моноклональных антител включают, но не ограничиваются этим, трастузумаб (Herceptin); офатумумаб (Arzerra); бевацизумаб (Avastin); ритуксимаб (Rituxan); цетуксимаб (Erbitux); панитумумаб (Vectibix); тозитумомаб/иод131 тозитумомаб (Bexxar); алемтузумаб (Campath); ибритумомаб (Zevalin; In-111; Y-90 Zevalin); гемтузумаб (Mylotarg); экулизумаб (Soliris) орденосумаб.
[0824] Примеры ингибиторов EGFR включают, но не ограничиваются этим, гефитиниб (Iressa); лапатиниб (Tykerb); цетуксимаб (Erbitux); эрлотиниб (Tarceva); панитумумаб (Vectibix); PKI-166; канертиниб (CI-1033); матузумаб (Emd7200) или EKB-569.
[0825] Примеры ингибиторов HER2 включают, но не ограничиваются этим, трастузумаб (Herceptin); лапатиниб (Tykerb) или AC-480.
[0826] Ингибиторы гистондеацетилазы включают, но не ограничиваются этим, вориностат (Zolinza).
[0827] Примеры гормонов включают, но не ограничиваются этим, тамоксифен (Soltamox; Nolvadex); ралоксифен (Evista); мегестрол (Megace); леупролид (Lupron; Lupron Depot; Eligard; Viadur); фулвестрант (Faslodex); летрозол (Femara); трипторелин (Trelstar LA; Trelstar Depot); эместан (Aromasin); госерелин (Zoladex); бикалутамид (Casodex); анастрозол (Arimidex); флуоксиместерон (Androxy; Halotestin); медроксипрогестерон (Provera; Depo-Provera); эстрамустин (Emcyt); флутамид (Eulexin); торемифен (Fareston); дегареликс (Firmagon); нилутамид (Nilandron); абареликс (Plenaxis); или теслолактон(Teslac).
[0828] Примеры митотических ингибиторов включают, но не ограничиваются этим, паклитаксел (Taxol; Onxol; Abraxane); доцетаксел (Taxotere); винкристин (Oncovin; Vincasar PFS); винбластин (Velban); этопозид (Toposar; Etopophos; VePesid); тенипозид (Vumon); иксабепилон (Ixempra); нокодазол; эпотилон; винорелбин (Navelbine); капмтотецин (CPT); иринотекан (Camptosar); топотекан (Hycamtin); амсакрин или ламелларин D (LAM-D).
[0829] Примеры ингибиторов MTOR включают, но не ограничиваются этим, эверолимус (Afinitor) или темсиролимус (Torisel); рапамун, ридафоролимус; или AP23573.
[0830] Примеры ингибиторов нескольких киназ включают, но не ограничиваются этим, сорафениб (Nexavar); сунитиниб (Sutent); BIBW 2992; E7080; Zd6474; PKC-412; мотесаниб; или AP24534.
[0831] Примеры ингибиторов сериновых/треониновых киназ включают, но не ограничиваются этим, рубоксистаурин; эрил/иасудил гидрохлорид; флавопиридол; селициклиб (CYC202; Roscovitrine); SNS-032 (BMS-387032); Pkc412; бриостатин; KAI-9803;SFl 126; VX-680; Azdl 152; Arry-142886 (AZD-6244); SCIO-469; GW681323; CC-401; CEP-1347 или PD 332991.
[0832] Примеры ингибиторов тирозиновых киназ включают, но не ограничиваются этим, эрлотиниб (Tarceva); гефитиниб (Iressa); иматиниб (Gleevec); сорафениб (Nexavar); сунитиниб (Sutent); трастузумаб (Herceptin); бевацизумаб (Avastin); ритуксимаб (Rituxan); лапатиниб (Tykerb); цетуксимаб (Erbitux); панитумумаб (Vectibix); эверолимус (Afinitor); алемтузумаб (Campath); нилотиниб (Tasigna); ваталаниб (Ptk787; ZK222584); CEP-701; SU5614; MLN518; XL999; VX-322; Azd0530; BMS-354825; SKI-606 CP-690; AG-490; WHI-P154; WHI-P131; AC-220; или AMG888.
[0833] Примеры ингибиторов VEGF/VEGFR включают, но не ограничиваются этим, бевацизумаб (Avastin); сорафениб (Nexavar); сунитиниб (Sutent); ранибизумаб; пегаптаниб; или вандетиниб.
[0834] Примеры прицельно действующих на микротрубочки лекарственных средств включают, но не ограничиваются этим, паклитаксел, доцетаксел, винкристин, винбластин, нокодазол, эпотилоны и навелбин.
[0835] Примеры топоизозомеразных ядовитых лекарственных средств включают, но не ограничиваются этим, тенипозид, этопозид, адриамицин, камптотецин, даунорубицин, дактиномицин, митоксантрон, амсакрин, эпирубицин и идарубицин.
[0836] Примеры таксанов или таксановых производных включают, но не ограничиваются этим, паклитаксел и доцетаксол.
[0837] Примеры общих химиотерапевтических, противоопухолевых, анти-пролиферативных средств включают, но не ограничиваются этим, алтретамин (Hexalen); изотретиноин (Accutane; Amnesteem; Claravis; Sotret); третиноин (Vesanoid); азацитидин (Vidaza); бортезомиб (Velcade) асапрагиназу (Elspar); левамизол (Ergamisol); митотан (Lysodren); прокарбазин (Matulane); пегаспаргазу (Oncaspar); денилейкин дифтитокс (Ontak); порфимер (Photofrin); алдеслейкин (Proleukin); леналидомид (Revlimid); бексаротен (Targretin); талидомид (THalomid); темсиролимус (Torisel); триоксид мышьяка (Trisenox); вертепорфин (Visudyne); мимозин (Leucenol); (1M тегафур - 0.4 M 5-хлор-2,4-дигидроксипиримидин- 1 M калий оксонат) или ловастатин.
[0838] В другом аспекте, второе химиотерапевтическое средство может представлять собой цитокин, такой как G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор). В другом аспекте, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарство, метаболит, аналог или производное можно вводить в сочетании с лучевой терапией. Лучевую терапию также можно вводить в сочетании с соединением по настоящему изобретению и другим химиотерапевтическим средством, описанным в настоящей заявке, как часть терапии, включающей применение нескольких разных средств. В следующем аспекте, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарство, метаболит, аналог или производное можно вводить в комбинации с стандартными химиотерапевтическими комбинациями, такими как, но не ограничиваясь этим, CMF (циклофосфамид, метотрексат и 5-фторурацил), CAF (циклофосфамид, адриамицин и 5-фторурацил), АС (адриамицин и циклофосфамид), FEC (5-фторурацил, эпирибицин и циклофосфамид), ACT или АТС (адриамицин, циклофосфамид и паклитаксел), ритуксимаб, Xeloda (капецитабин), Цисплатин (CDDP), Карбоплатин, TS-1 (тегафур, гиместат и отастат калий в молярном отношении 1:0, 4:l), Камптотецин-11 (CPT-11, Иринотекан или Камптосар™), CHOP (циклофосфамид, гидроксидаунорубицин, онковин и преднизон или преднизолон), R-CHOP (ритуксимаб, циклофосфамид, гидроксидаунорубицин, онковин, преднизон или преднизолон) или CMFP (циклофосфамид, метотрексат, 5-фторурацил и преднизон).
[0839] В предпочтительных вариантах воплощения, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват можно вводить с ингибитором фермента, такого как рецепторная или нерецепторная киназа. Рецепторные и нерецепторные киназы представляют собой, например, тирозиновые киназы или сериновые/треониновые киназы. Ингибиторы киназ, описанные в настоящей заявке, представляют собой малые молекулы, полинуклеиновые кислоты, полипептиды или антитела.
[0840] Примеры ингибиторов киназы включают, но не ограничиваются этим, Бевацизумаб (мишени VEGF), BIBW 2992 (мишени EGFR и Erb2), Цетуксимаб/Эрбитукс (мишени Erbl), Иматиниб/Гливик (мишени Bcr-Abl), Трастузумаб (мишени Erb2), Гефитиниб/Иресса (мишени EGFR), Ранибизумаб (мишени VEGF), Пегаптаниб (мишени VEGF), Эрлотиниб/Тарсева (мишени Erbl), Нилотиниб (мишени Bcr-Abl), Лапатиниб (мишени Erbl и Erb2/Her2), GW-572016/лапатиниб дитозилат (мишени HER2/Erb2), Панитумумаб/Вектибикс (мишени EGFR), Вандетиниб (мишени RET/VEGFR), E7080 (множество мишеней, включая RET и VEGFR), Герсептин (мишени HER2/Erb2), PKI-166 (мишени EGFR), Канертиниб/CI-1033 (мишени EGFR), Сунитиниб/SU-11464/Сутент (мишени EGFR и FLT3), Матузумаб/Emd7200 (мишени EGFR), EKB-569 (мишени EGFR), Zd6474 (мишени EGFR и VEGFR), PKC-412 (мишени VEGR и FLT3), Ваталаниб/Ptk787/ZK222584 (мишени VEGR), CEP-701 (мишени FLT3), SU5614 (мишени FLT3), MLN518 (мишени FLT3), XL999 (мишени FLT3), VX-322 (мишени FLT3), Azd0530 (мишени SRC), BMS-354825 (мишени SRC), SKI-606 (мишени SRC), CP-690 (мишени JAK), AG-490 (мишени JAK), WHI-P154 (мишени JAK), WHI-P131 (мишени JAK), сорафениб/Нексавар (мишени RAF киназа, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-B, KIT, FLT-3 и RET), Дасатиниб/Спрайсел (BCR/ABL и Src), AC-220 (мишени Flt3), AC-480 (мишени все HER белки, "panHER"), Мотесаниб дифосфат (мишени VEGF1-3, PDGFR и c-kit), Деносумаб (мишени RANKL, ингибирует SRC), AMG888 (мишени HER3) и AP24534 (множество мишеней, включая Flt3).
[0841] Примеры ингибиторов сериновых/треониновых киназ включают, но не ограничиваются этим, Рапамун (мишени mTOR/FRAPl), Дефоролимус (мишени mTOR), Цертикан/Эверолимус (мишени mTOR/FRAPl), AP23573 (мишени mTOR/FRAPl), Эрил/Фасудил гидрохлорид (мишени RHO), Флавопиридол (мишени CDK), Селициклиб/CYC202/Росковитрин (мишени CDK), SNS-032/BMS-387032 (мишени CDK), Рубоксистаурин (мишени PKC), Pkc412 (мишени PKC), Бриостатин (мишени PKC), KAI-9803 (мишени PKC), SF1126 (мишени PI3K), VX-680 (мишени киназа Aurora), Azdl 152 (мишени киназы Aurora), Arry-142886/AZD-6244 (мишени MAP/MEK), SCIO-469 (мишени MAP/MEK), GW681323 (мишени MAP/MEK), CC-401 (мишени JNK), CEP-1347 (мишени JNK) и PD 332991 (мишени CDK).
[0842] Расстройство, где играет роль EZH2-опосредованное метилирование белка, может представлять собой неврологическое заболевание. Соединения по настоящему изобретению, таким образом, также можно использовать для лечения или исследования неврологических заболеваний, таких как эпилепсия, шизофрения, биполярное расстройство или другие психологические и/или психиатрические расстройства, невропатии, скелетно-мышечная атрофия, и нейродегенеративных заболеваний, например, нейродегенеративного заболевания. Примеры нейродегенеративных заболеваний включают: болезнь Альцгеймера, амиотрофический боковой склероз (ALS) и болезнь Паркинсона. Другой класс нейродегенеративных заболеваний включает заболевания, вызванные, по меньшей мере частично, агрегацией поли-глутамина. Заболевания этого класса включают: болезнь Гентингтона, спиналбульбарную мышечную атрофию (SBMA или болезнь Кеннеди) дентатопаллидорубральную атрофию (DRPLA), спиноцеребеллярную атаксию 1 (SCA1), спиноцеребеллярную атаксию 2 (SCA2), болезнь Machado-Joseph (MJD; SCA3), спиноцеребеллярную атаксию 6 (SCA6), спиноцеребеллярную атаксию 7 (SCA7) и спиноцеребеллярную атаксию 12 (SCA12).
[0843] Любое другое заболевание, где играет роль эпигенетическое метилирование, которое опосредовано EZH2, можно лечить или предотвратить с использованием соединений и способов, описанных в настоящей заявке, или такие заболевания и их потенциальные лечения можно исследовать с использованием соединений, описанных в настоящей заявке.
4. Фармацевтические композиции
[0844] Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтические композиции, включающие соединение любой из формул, описанных в настоящей заявке, в комбинации с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем.
[0845] "Фармацевтическая композиция" представляет собой композицию, содержащую соединения по настоящему изобретению в форме, подходящей для введения субъекту. В одном варианте воплощения, фармацевтическая композиция представлена нерасфасованной или в стандартной лекарственной форме. Стандартная лекарственная форма представляет собой любую из множества различных форм, включая, например, капсул, пакет, включающий внутривенный препарат, таблетку, доза, доставляемая путем одного надавливания на аэрозольный ингалятор или ампула. Количество активного ингредиента (например, композиции раскрытого соединения или его соли, гидрата, сольвата или изомера) в стандартной дозе композиции представляет собой эффективное количество, и варьируется в соответствии с конкретным применяемым лечением. Специалистам в данной области должно быть понятно, что иногда необходимы рутинные изменения дозы в зависимости от возраста и состояния пациента. Доза также зависит от пути введения. Предусматриваются различные пути, включая пероральный, внутрилегочный, ректальный, парентеральный, чрескожный, подкожный, внутривенный, внутримышечный, интраперитонеальный, путем ингаляции, буккальный, сублингвальный, интраплевральный, интратекальный, интраназальный и подобные. Лекарственные формы для местного или чрескожного введения соединения по настоящему изобретению включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и препараты для ингаляций. В одном варианте воплощения, активное соединение смешивают в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и с любыми консервантами, буферами или пропеллентами, которые необходимы.
[0846] Как используется в настоящей заявке, фраза "фармацевтически приемлемый" относится к таким соединениям, анионам, катионам, веществам, композициям, носителям и/или лекарственным формам, которые, согласно взвешенное медицинской оценке, являются подходящими для использования в контакте с тканями человека и животных, без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергических реакций или других проблем или осложнений, и соответствуют разумному соотношению польза/риск.
[0847] "Фармацевтически приемлемый эксципиент" означает эксципиент, который является полезным для получения фармацевтической композиции, который, как правило, является безопасным, нетоксичным и не является биологически или каким-либо иным образом нежелательным, и включает эксципиент, который является приемлемым для использования в ветеринарии, а также в фармацевтических препаратах, предназначенных для человека. "Фармацевтически приемлемый эксципиент", как это используется в описании настоящего изобретения и в формуле изобретения, включает как один, так и более одного таких эксципиентов.
[0848] Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению формулируют таким образом, чтобы она была совместима с предполагаемым путем ее введения. Примеры путей введения включают парентеральный, например, внутривенный, внутрикожный, подкожный, пероральный (например, путем ингаляции), чрескожный (местный) и введение через слизистую оболочку. Растворы или суспензии, используемые для парентерального, внутрикожного или подкожного применения, могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и средства для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. pH можно регулировать с использованием кислот или оснований, таких как хлористоводородная кислота или гидроксид натрия. Парентеральный препарат может быть представлен в ампулах, одноразовых шприцах или в содержащих несколько доз флаконах из стекла или пластика.
[0849] Соединение или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить субъекту различными хорошо известными способами, которые используют для химиотерапевтического лечения. Например, для лечения рака, соединение по настоящему изобретению можно вводить путем инъекции непосредственно в опухоли, вводить путем инъекции в кровоток или полости тела или принимать перорально или наносить при помощи пластырей для чрескожной доставки. Выбранная доза должна быть достаточной для эффективного лечения, но не настолько высокой, чтобы вызывать неприемлемые побочные эффекты. Состояние заболевания (например, рак, предрак и т.п.) и здоровье пациента предпочтительно следует тщательно контролировать в процессе лечения и в течение подходящего периода после лечения.
[0850] Термин "терапевтически эффективное количество", как он используется в настоящей заявке, относится к количеству фармацевтического средства для лечения, облегчения или профилактики выявленного заболевания или состояния или для проявления поддающегося определению терапевтического или ингибиторного эффекта. Эффект можно определить при помощи любого анализа, известного из уровня техники. Точное эффективное количество для субъекта зависит от массы тела, размера и состояния здоровья субъекта; природы и степени развития состояния; и терапевтического средства или комбинации терапевтических средств, выбранных для введения. Терапевтически эффективные количества для конкретной ситуации можно определить путем рутинного экспериментирования, что зависит от практического опыта и оценки клинициста. В предпочтительном аспекте, заболевание или состояние, подлежащее лечению, представляет собой рак. В другом аспекте, заболевание или состояние, подлежащее лечению, представляет собой клеточно-пролиферативное расстройство.
[0851] Для любого соединения терапевтически эффективное количество можно первоначально определить либо в анализах клеточной культуры, например, в опухолевых клетках, либо с использованием животных моделей, обычно крыс, мышей, кроликов, собак или свиней. Животную модель также можно использовать для определения подходящих пределов концентраций и пути введения. Такую информацию затем можно использовать для определения полезных доз и путей для введения человеку. Терапевтическую/профилактическую эффективность и токсичность можно определить при помощи стандартных фармацевтических процедур в клеточных культурах или с использованием экспериментальных животных, например, ED50 (доза, которая является терапевтически эффективной в 50% популяции) и LD50 (доза, которая является летальной для 50% популяции). Дозовое отношение между токсическим терапевтическим эффектами представляет собой терапевтический индекс, и его можно выразить как LD50/ED50. Фармацевтические композиции, которые демонстрируют большие терапевтические индексы, являются предпочтительными. Доза может варьироваться в этих пределах в зависимости от используемой лекарственной формы, чувствительности пациента и пути введения.
[0852] Дозу и введение регулируют для обеспечения достаточных уровней активного средства (средств) или для поддержания желаемого эффекта. Факторы, которые могут быть приняты во внимание, включают тяжесть болезненного состояния, общее состояние здоровья субъекта, возраст, массу тела и пол субъекта, режим питания, время и частоту введения, комбинацию(комбинации) лекарственных средств, чувствительность и переносимость/ответ на терапию. Фармацевтические композиции пролонгированного действия можно вводить через каждые 3-4 дня, через неделю или раз в две недели, в зависимости от периода полужизни и скорости выведения из организма конкретной композиции.
[0853] Фармацевтические композиции, содержащие активные соединения по настоящему изобретению, можно получить способом, который, как правило, является известным, например, путем обычного смешивания, растворения, гранулирования, получения драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, заключения в какое-либо вещество или лиофилизации. Фармацевтические композиции можно сформулировать традиционным способом с использованием одного или нескольких фармацевтически приемлемых носителей, включающих эксципиенты и/или вспомогательные вещества, которые способствуют переработке активных соединений в препараты, которые могут иметь фармацевтическое применение. Конечно, подходящая композиция зависит от выбранного пути введения.
[0854] Фармацевтические композиции, подходящие для введения путем инъекции, включают стерильные водные растворы (в случае водорастворимых композиций) или дисперсии и стерильные порошки для получения стерильных растворов или дисперсий для инъекций непосредственно перед введением. Для внутривенного введения, подходящие носители включают физиологический солевой раствор, бактериостатическую воду, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) или фосфатно-буферный солевой раствор (PBS). Во всех случаях, композиция должна быть стерильной и должна быть текучей в той степени, чтобы ее можно быть легко вводить через шприц. Она должна быть стабильной в условиях изготовления и хранения и должна быть защищена против загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может представлять собой растворитель или среду для диспергирования, включающие, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и подобные) и подходящие смеси таких веществ. Подходящую текучесть можно поддерживать, например, путем использования покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем использования поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов достигают с использованием противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тимеросала и подобных. Во многих случаях предпочтительно включение в композицию изотонических веществ, например, сахаров, полиспиртов, таких как манит и сорбит, и хлорида натрия. Пролонгированную абсорбцию вводимых путем инъекции композиций можно получить путем включения в композицию веществ, которые замедляют абсорбцию, например, алюминиймоностеарата и желатина.
[0855] Стерильные растворы для инъекций можно получить путем включения активного соединения в необходимом количестве в соответствующий растворитель с одним или комбинацией ингредиентов, перечисленных выше, как это необходимо, с последующей стерилизацией путем фильтрования. Как правило, дисперсии получают путем включения активного соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из тех, которые перечислены выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных растворов для инъекций, способы получения представляют собой вакуумную сушку и сушку замораживанием, которая дает порошок активного ингредиента плюс любого дополнительного желаемого ингредиента из полученного ранее путем стерильного фильтрования раствора таких ингредиентов.
[0856] Пероральные композиции, как правило, включают инертный разбавитель или пищевой фармацевтически приемлемый носитель. Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или спрессованы в таблетки. Для перорального терапевтического введения, активное соединение может быть включено с эксципиентами для использования в форме таблеток, пастилок или капсул. Пероральные композиции также можно получить с использованием жидкого носителя для использования в виде жидкости для полоскания рта, где соединение в жидком носителе применяют перорально и сплевывают или проглатывают. Фармацевтически совместимые связующие и/или адъюванты могут быть включены как часть композиции. Таблетки, пилюли, капсулы, пастилки и т.п. могут содержать любой из следующих ингредиентов или соединения аналогичного типа: связующее, такое как микрокристаллическическая целлюлоза, камедь трагаканта или желатин; эксципиент, такой как крахмал или лактоза, разрыхлитель, такой как альгиновая кислота, Primogel или кукурузный крахмал; смазывающее вещество, такое как стеарат магния или Sterotes; агент скольжения, такой как коллоидный диоксид кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; отдушку, такую как перечная мята, метилсалицилат или апельсиновая отдушка.
[0857] Для введения путем ингаляции доставку соединений осуществляют в форме аэрозольного спрея из контейнера или дозирующего устройства высокого давления, которое содержит подходящий пропеллент, например, газ, такой как диоксид углерода, или небулайзера.
[0858] Системное введение также может включать введение через слизистую оболочку или чрескожными средствами. Для введения через слизистую оболочку или чрескожного введения в композиции используют агенты пенетрации, подходящие для барьера, проникновение через который необходимо осуществить. Такие агенты пенетрации в основном известны из уровня техники, и включают, например, для введения через слизистую оболочку, детергенты, соли желчных кислот и производные фусидовой кислоты. Введение через слизистую оболочку можно осуществить с использованием назальных спреев или суппозиториев. Для чрескожного введения, активные соединения формулируют в виде мазей, бальзамов, гелей или кремов, которые в основном известны из уровня техники.
[0859] Активные соединения могут быть сформулированы с фармацевтически приемлемыми носителями, которые будут защищать соединение против быстрого выведения из организма, например, в виде композиции контролируемого высвобождения, включая имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Можно использовать биоразлагаемые биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Способы получения таких композиций будут очевидны для специалистов в данной области. Такие вещества также могут быть коммерчески доступными от Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc. Липосомные суспензии (включая липосомы, прицельно направленные на инфицированные клетки, с моноклональными антителами к вирусным антигенам) также можно использовать в качестве фармацевтически приемлемых носителей. Их можно получить в соответствии со способами, известными специалистам в данной области, например, описанными в Патенте США № 4522811.
[0860] Особенно выгодно формулировать пероральные или парентеральные композиции в виде стандартной лекарственной формы для простоты введения и равномерного дозирования. Стандартная лекарственная форма, как это используется в настоящей заявке, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве стандартных доз для субъекта, подлежащего лечению; при этом каждая единица содержит предварительно определенное количество активного соединения, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, в ассоциации с необходимым фармацевтическим носителем. Требования к стандартным лекарственным формам по настоящему изобретению продиктованы, и непосредственно зависят от этого, уникальными характеристиками активного соединения и конкретным терапевтическим эффектом, достижение которого необходимо.
[0861] В терапевтических применениях дозы фармацевтических композиций, используемых в соответствии с настоящим изобретением, варьируются в зависимости от средства, возраста, массы тела и клинического состояния пациента, который является реципиентом, и опыта и мнения клинициста или специалиста, осуществляющего введение такой терапии, среди других факторов, влияющих на выбор дозы. Как правило, доза должна быть достаточной, чтобы обеспечить снижение и, предпочтительно, регрессию роста опухолей, а также, предпочтительно, полную регрессию рака. Дозы могут находиться в пределах от около 0,01 мг/кг в день до около 5000 мг/кг в день. В предпочтительных аспектах, дозы могут находиться в пределах от около 1 мг/кг в день до около 1000 мг/кг в день. В одном аспекте, доза находится в пределах от около 0,1 мг/день до около 50 г/день; от около 0,1 мг/день до около 25 г/день; от около 0,1 мг/день до около 10 г/день; от около 0,1 мг до около 3 г/день; или от около 0,1 мг до около 1 г/день, в виде разовой, дробных или непрерывных доз (при этом доза может быть отрегулирована в соответствии с массой тела пациента в кг, площадью поверхности тела в м2 и возрастом (количество лет)). Эффективное количество фармацевтического средства представляет собой такое, которое обеспечивает объективно идентифицируемое улучшение, отмечаемое клиницистом или другим квалифицированным наблюдателем. Например, регрессию опухоли у пациента можно измерить по диаметру опухоли. Уменьшение диаметра опухоли указывает на регрессию. На регрессию также указывает неспособность опухолей возникать снова после прекращения лечения. Как используется в настоящей заявке, термин "дозо-эффективным образом" относится к количеству активного соединения для получения желаемого биологического эффекта у субъекта или в клетке.
[0862] Фармацевтические композиции могут быть включены в контейнер, упаковку или дозирующее устройство вместе с инструкциями по введению.
[0863] Соединения по настоящему изобретению способны к последующему образованию солей. Все эти формы также предусмотрены как охватываемые объемом заявленного изобретения.
[0864] Как используется в настоящей заявке, "фармацевтически приемлемые соли" относятся к производным соединений по настоящему изобретению, где исходное соединение модифицировано путем получения его кислотных или основных солей. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются этим, соли щелочных остатков, таких как амины, образованные с минеральными или органическими кислотами, щелочные или органические соли кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты, и подобные. Фармацевтически приемлемые соли включают традиционные нетоксичные соли или четвертичные аммониевые соли исходного соединения, образованные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Например, такие традиционные нетоксичные соли включают, но не ограничиваются этим, соли, образованные из неорганических и органических кислот, выбранных из 2-ацетоксибензойной, 2-гидроксиэтансульфоновой, уксусной, аскорбиновой, бензолсульфоновой, бензойной, биугольной, угольной, лимонной, эдетиновой, этандисульфоновой, 1,2-этансульфоновой, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, гликолевой, гликоллиарсаниловой, гексилрезорциновой, гидрабамой, бромистоводородной, хлористоводородной, иодистоводородной, гидроксималеиновой, гидроксинафтойной, изетионовой, молочной, лактобионовой, лаурилсульфоновой, малеиновой, яблочной, миндальной, метансульфоновой, напсиловой, азотной, щавелевой, пасовой, пантотеновой, фенилуксусной, фосфорной, полигалактуроновой, пропионовой, салициловой, стеариновой, субуксусной, янтарной, сульфаминовой, сульфаниловой, серной, дубильной, винной, толуолсульфоновой и распространенными аминокислотами, например, глицином, аланином, фенилаланином, аргинином и т.п.
[0865] Другие примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли гексановой кислоты, циклопентанпропионовой кислоты, пирувиновой кислоты, малоновой кислоты, 3-(4-гидроксибензоил)бензойной кислоты, коричной кислоты, 4-хлорбензолсульфоновой кислоты, 2-нафталинсульфоновой кислоты, 4-толуолсульфоновой кислоты, камфорсульфоновой кислоты, 4-метилбицикло-[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновой кислоты, 3-фенилпропионовой кислоты, триметилуксусной кислоты, третичной бутилуксусной кислоты, муконовой кислоты и подобные. Настоящее изобретение также охватывает соли, образованные когда кислотный протон, присутствующий в исходном соединении, либо замещен ионом металла, например, ионом щелочного металла, ионом щелочно-земельного металла или ионом алюминия; либо координационно связывается с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, N-метилглюкамин и подобные. Должно быть понятно, что в солевой форме отношение соединения к катиону или аниону соли может быть 1:1 или может представлять собой любое другое отношение, отличное от 1:1, например, 3:1, 2:1, 1:2 или 1:3.
[0866] Должно быть понятно, что все ссылки на фармацевтически приемлемые соли включают формы добавления растворителя (сольваты) или кристаллические формы (полиморфы), определенные в настоящей заявке, одной и той же соли.
[0867] Соединения по настоящему изобретению также можно получить в форме сложных эфиров, например, фармацевтически приемлемых сложных эфиров. Например, карбоновокислотную функциональную группу в соединении можно преобразовать в ее соответствующий сложный эфир, например, метиловый, этиловый или другой эфир. Также, спиртовую группу в соединении можно преобразовать в ее соответствующий сложный эфир, например, ацетат, пропионат или другой эфир.
[0868] Соединения по настоящему изобретению также можно получить в виде пролекарств, например, фармацевтически приемлемых пролекарств. Термины "про-лекарство" и "пролекарство" используют взаимозаменяемо в настоящей заявке, и они относятся к любому соединению, которое высвобождает активное исходное лекарственное средство in vivo. Поскольку известно, что пролекарства усиливают различные желательные качества фармацевтических средств (например, растворимость, биодоступность, технологические свойства и т.п.), можно обеспечить доставку соединений по настоящему изобретению в форме пролекарств. Таким образом, предусматривается, что настоящее изобретение охватывает пролекарства заявленных в настоящем изобретении соединений, способы их доставки и содержащие их композиции. Предусматривается, что "пролекарства" включают любые ковалентно связанные носители, которые высвобождают активное исходное лекарственное средство по настоящему изобретению in vivo, когда такое пролекарство вводят субъекту. Пролекарства в соответствии с настоящим изобретением получают путем модификации функциональных групп, присутствующих в соединении, таким образом, чтобы полученные модификации расщеплялись либо при рутинной манипуляции, либо in vivo, до исходного соединения. Пролекарства включают соединения по настоящему изобретению, где гидрокси, амино, сульфгидрильная, карбокси или карбонильньная группа связана с любой группой, которая может отщепляться in vivo с образованием свободной гидроксильной, свободной амино, свободной сульфгидрильной, свободной карбокси или свободной карбонильной группы, соответственно.
[0869] Примеры пролекарств включают, но не ограничиваются этим, сложные эфиры (например, ацетатные, диалкиламиноацетатные, формиатные, фосфатные, сульфатные и бензоатные производные) и карбаматы (например, N,N-диметиламинокарбонил) функциональных гидроксигрупп, сложные эфиры (например, этиловые эфиры, морфолиноэтанольные эфиры) функциональных карбоксильных групп, N-ацил-производные (например, N-ацетил) N-оснований Манниха, оснований Шиффа и енаминоны функциональных аминогрупп, оксимы, ацетали, кетали и сложные еноловые эфиры кетоновых и альдегидных функциональных групп в соединениях по настоящему изобретению и подобные, см. Bundegaard, H., Design of Prodrugs, p1-92, Elesevier, New York-Oxford (1985).
[0870] Соединения или их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры или пролекарства вводят перорально, назально, чрескожно, внутрилегочно, путем ингаляции, буккально, сублингвально, интраперитонеально, подкожно, внутримышечно, внутривенно, ректально, интраплеврально, интратекально и парентерально. В одном варианте воплощения, соединение вводят перорально. Специалистам в данной области должны быть понятны преимущества некоторых путей введения.
[0871] Схему введения соединений выбирают в соответствии с различными факторами, включающими тип, вид, возраст, массу тела, пол и медицинское состояние пациента; тяжесть состояния, подлежащего лечению; путь введения; функцию почек и печени пациента; и конкретное используемое соединение или его соль. Лечащий врач или ветеринар со средней квалификацией смогут легко определить и прописать эффективное количество лекарственного средства, необходимое для профилактики, противодействия или прекращения развития состояния.
[0872] Процедуры формулирования и введения соединений, раскрытых в настоящем изобретении, можно найти в Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). В одном варианте воплощения, соединения, описанные в настоящей заявке, и их фармацевтически приемлемые соли используют в фармацевтических препаратах в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают инертные твердые наполнители или разбавители и стерильные водные или органические растворы. Соединения должны присутствовать в таких фармацевтических композициях в количествах, достаточных для обеспечения достаточной дозы в пределах, описанных в настоящей заявке.
[0873] Все проценты и отношения, используемые в настоящей заявке, если не указано иное, указаны в расчете на массу. Другие отличительные признаки и преимущества настоящего изобретения очевидны из различных примеров. Представленные примеры иллюстрируют различные компоненты и процедуры, полезные для осуществления настоящего изобретения. Примеры не ограничивают заявленное изобретение. На основании представленного раскрытия специалист в данной области сможет определить и использовать другие компоненты и процедуры, полезные для осуществления настоящего изобретения.
[0874] В схемах синтеза, описанных в настоящей заявке, соединения могут быть показаны в одной конкретной конфигурации, для простоты их представления. Такие конкретные конфигурации не должны рассматриваться как ограничивающие настоящее изобретение тем или другим изомером, таутомером, региоизомером или стереоизомером, это также не исключает смеси изомеров, таутомеров, региоизомеров или стереоизомеров; однако должно быть понятно, что данный изомер, таутомер, региоизомер или стереоизомер может иметь более высокий уровень активности по сравнению с другим изомером, таутомером, региоизомером или стереоизомером.
[0875] Соединения, разработанные, выбранные и/или оптимизированные способами, описанными выше, после их получения могут быть охарактеризованы с использованием различных анализов, известных специалистам в данной области, для определения, обладают или не обладают соединения биологической активностью. Например, молекулы можно охарактеризовать при помощи традиционно используемых анализов, включая, но не ограничиваясь этим, анализы, описанные ниже, для определения обладают или не обладают они прогнозируемой активностью, активностью связывания и/или специфичностью связывания.
[0876] Кроме того, высокопроизводительный скрининг можно использовать для ускорения осуществления таких анализов. Как результат, возможно быстрое скринирование молекул, описанных в настоящей заявке, на активность с использованием методов, известных из уровня техники. Общие процедуры осуществления высокопроизводительного скрининга описаны, например, в Devlin (1998) High Throughput Screening, Marcel Dekker; и в Патенте США № 5763263. Высокопроизводительные анализы могут включать использование одного или нескольких различных аналитических методов, включая, но не ограничиваясь этим, методы, описанные ниже.
[0877] Все публикации и патентные документы, на которые ссылаются в настоящей заявке, включены в настоящую заявку посредством ссылки, как если бы каждая такая публикация или документ были специально и отдельно указаны как включенные в настоящую заявку посредством ссылки. Цитирование публикаций и патентных документов не следует рассматривать как допущение, что какой-либо из этих документов является прототипом, имеющим отношение к настоящему изобретению, это также касается содержания и даты этих документов. Изобретение было раскрыто при помощи письменного описания, но специалистам в данной области должно быть понятно, что изобретение можно осуществить в различных вариантах его воплощения, и что представленное выше описание и представленные ниже примеры предназначены только для иллюстрации, а не для ограничения формулы изобретения, представленной далее.
5. Примеры
[0878] Общая экспериментальная часть
ЯМР
[0879] 1H-ЯМР спектры получали с использованием CDCl3, если не указано иное, и регистрировали при 400 или 500 МГц с использованием магнитных устройств Varian или Oxford (500 МГц). Мультиплетности указаны как с = синглет, д = дублет, т = триплет, кв. = квартет, квинт. = квинтет, секст. = секстет, м = мультиплет, дд = дублет дублетов, дт = дублет триплетов; шир. указывает широкий сигнал.
ЖХМС и ВЭЖХ
[0880] Shimadzu LC-Q, Shimadzu LCMS-2010EV или Waters Acquity Ultra Performance LC. ВЭЖХ: Продукты анализировали на системе Shimadzu SPD-20A с колонкой 150×4,5 мм YMC ODS-M80 или колонкой 150×4,6 мм YMC-Pack Pro С18, при скорости потока 1,0 мл/мин.
[0881] Подвижная фаза представляла собой MeCN:H2O=3:2 (содержащая 0,3% SDS и 0,05% H3PO4),
[0882] 0,05% TFA в воде, 0,05% TFA в ацетонитриле (градиент сначала 20%, затем 0,05% TFA/MeCN до концентрации до 95% в течение 3 мин, удерживание в течение 0,5 мин, от 3,51 до 4,50 мин затем 0,05%TFA/MeCN конц. 20%).
[0883] Альтернативно ЖХМС, использовали 2 разных способа; наиболее часто используемый способ включал высокий уровень pH (METCR1600), а другой способ для более стандартных соединений (METCR1416).
[0884] 0,1% Муравьиной кислоты в воде - Подвижная фаза "A" 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле - Подвижная фаза "B" с использованием колонки Waters Atlantis dC18, 2,1 мм × 100 мм, 3 мкм, со скоростью потока = 0,6 мл/мин; Температура колонки = 40°C; Время (минуты) %B 0,00 мин 5% B. 5,0 мин 100% B, 5,4 мин 100% В и 42 мин 5% B.
[0885] 3,5 мин способ относится к колонке Atlantis dC18, 2,1 мм × 50 мм, 3 мкм, скорость потока 1 мл/мин при 40°C. Подвижная фаза А Муравьиная кислота (водн.) 0,1% подвижная фаза В муравьиная кислота (MeCN) 0,1%, вводимая проба 3 мкл, градиент 0 мин (5% органический), 2,5 мин (100% органический), 2,7 мин (100% органический), 2,71 мин (5% органический), 3,5 мин (5% органический).
[0886] 7,0 мин способ относится к колонке Atlantis dC18, 2,1 мм × 100 мм, 3 мкм, скорость потока 0,6 мл/мин при 40°C. Подвижная фаза А Муравьиная кислота (водн.) 0,1% подвижная фаза В муравьиная кислота (MeCN) 0,1%, вводимая проба 3 мкл, градиент 0 мин (5% органический), 5 мин (100% органический), 5,42 мин (5% органический), 7 мин (5% органический).
[0887] Оба способа 3, 5 и 7 мин осуществляли на системе MS18 Shimadzu LCMS-2010EV или MS19 Shimadzu LCMS-2010EV с использованием LC-20AB насосов и SPD-M20A PDA детекторов.
[0888] Продукты очищали методом ВЭЖХ/MS с использованием автоматической системы очистки Waters с 3100 масс-детектором.
[0889] ВЭЖХ анализы также можно осуществить на системе Shimdazu LC-2010 CHT с использованием колонки YMC ODS-A, C18, (150×4,6×5 мкм) при температуре окружающей среды со скоростью потока 1,4 мл/мин. Использовали объем вводимой пробы 10 мкл, и детекцию осуществляли при помощи UV/PDA. Подвижная фаза A представляла собой 0,05% TFA в воде, и подвижная фаза В представляла собой 0,05% TFA в ацетонитриле с программой градиента: сначала 5% В до 95% В в течение 8 мин, удерживание в течение 1,5 мин, от 9,51 до 12 мин B. конц. 0,5%. Разбавитель представлял собой подвижную фазу
Другие
[0890] Автоматическую колоночную флэш-хроматографию осуществляли на Biotage Isolera version 4. Использовали 10 г SNAP картридж со скоростью потока 12 мл/мин или 25 г SNAP картридж со скоростью потока 25 мл/мин и детекцией при 254 нм и 280 нм.
[0891] Избирательные Нитрильные восстановления можно осуществить на ThalesNano H-Cube® в соответствии с условиями, описанными в экспериментальное процедуре.
Общая процедура для синтеза пиридонаминов
[0892] К раствору цианосоединения (1 экв.) в MeOH, добавляли каталитическое количество никеля Ренея и раствор аммиака. Смесь перемешивали при комнатной температуре под давлением водорода (баллон) в течение 1 часа. После завершения реакции смесь фильтровали через слой целита с промывкой при помощи MeOH. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого амина. Эту процедуру можно применять для множества различных R групп, описанных в примерах. Как правило, цианопиридины являются доступными от коммерческих поставщиков, или их можно синтезировать способами, известными рядовым специалистам в данной области.
Способы синтеза исходных веществ или промежуточных соединений
[0893] 3-(Аминометил)-6-метил-4-пропил-1,2-дигидропиридин-2-он, HCl соль
[0894] К перемешиваемому раствору t-BuOK (20,0 г, 179 ммоль) и цианоацетамида (16,5 г, 196 ммоль) в DMSO (300 мл) добавляли (3E)-3-гептен-2-он (20,0 г, 178 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 30 минут и затем к реакционной смеси добавляли дополнительное количество t-BuOK (60,0 г, 712 ммоль). Реакционную смесь помещали в атмосферу кислорода и перемешивали в течение 16 часов. Реакционную смесь затем продували аргоном и охлаждали до 0°C. Смесь разбавляли водным раствором HCl и образовавшийся осадок собирали. Твердое вещество промывали водой и сушили с получением 6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (15,0 г, 47% выход).
[0895] К перемешиваемому раствору 6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (15,0 г, 85,1 ммоль) в метаноле (600 мл) и концентрированной HCl (15 мл) добавляли Pd(OH)2 (15,0 г). Смесь перемешивали в течение 48 часов в атмосфере H2. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. К остатку добавляли этанол, образовавшийся осадок собирали и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (13,0 г, 60% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 11,86 (шир.с, 1H), 6,00 (с, 1H), 3,78 (кв., J=5,5 Гц, 2H), 3,61 (шир.с, 2H), 2,46 (м, 2H), 2,17 (с, 3H), 1,50 (секстет, J=7,4 Гц, 2H), 0,91 (т, J=7,4 Гц, 3H).
[0896] 6-Метил-2-оксо-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрил
[0897] К раствору 2-цианоацетамида (35,1 г, 417 ммоль) и t-BuOK (42,5 г, 379 ммоль) в DMSO (631 мл) добавляли 5-метил-3-гексен-2-он (50,0 мл, 379 ммоль) в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 23°C в течение 30 минут и затем добавляли дополнительное количество t-BuOK (127 г, 1137 ммоль). Газообразный N2 замещали газообразным О2 и смесь перемешивали в течение 45 часов при 23°C в атмосфере кислорода. Смесь охлаждали до 0°С, разбавляли при помощи H2O (200 мл) и HCl (5н, 227 мл, добавляли медленно). Смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°C и твердое вещество фильтровали через воронку Бюхнера. Твердое вещество промывали при помощи H2O (1500 мл) и сушили горячим воздухом (55°C, 16 часов) с получением 6-метил-2-оксо-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (26,6 г, 40% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ м.д. 6,14 (с, 1H), 3,25-3,29 (м, 1H), 2,45 (с, 3H), 1,26 (д, J=6,8 Гц, 6H); LC-MS: m/z 177,1 [M+1], 198,9 [M+23].
[0898] 3-(Аминометил)-6-метил-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-2-он, HCl соль
[0899] К раствору 6-метил-2-оксо-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (5,00 г, 28,4 ммоль) в MeOH (400 мл) и HCl (8,8 мл, 12 M) добавляли 10% Pd(OH)2 (5,17 г, 3,68 ммоль) в атмосфере N2. Газообразный N2 замещали газообразным Н2 и смесь перемешивали в течение 24 часов при 23°C в атмосфере водорода. Газообразный Н2 замещали газообразным N2 и смесь фильтровали через целит, промывали при помощи MeOH и концентрировали. Остаток растирали в порошок с EtOH-TBME, твердое вещество собирали через воронку Бюхнера и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (6,15 г, 100%). 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ м.д. 11,9 (шир.с, 1H), 8,03 (шир.с, 2H), 6,12 (с, 1H), 3,82-3,84 (м, 2H), 3,08-3,12 (м, 1H), 2,19 (с, 3H), 1,12 (д, J=6,8 Гц, 6H).
[0900] 6-Метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрил
[0901] К раствору 2-цианоацетамида (14,0 г, 166 ммоль) и трифторацетилацетона (20,0 мл, 166 ммоль) в H2O (332 мл) добавляли K2CO3 (6,60 г, 47,9 ммоль). Смесь перемешивали при 23°C в течение 15 часов. Осажденное твердое вещество фильтровали через воронку Бюхнера, промывали ледяной H2O и сушили горячим воздухом (60°C, 16 час) с получением указанного в заголовке соединения (17,6 г, 52%). 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ м.д. 2,38 (с, 3H), 6,66 (с, 1H).
[0902] 3-(Аминометил)-6-метил-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-2-он гидрохлорид, HCl соль
[0903] К раствору 6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (400 мг, 1,98 ммоль) в MeOH (19,8 мл) и HCl (436 мкл, 12M) добавляли 10% Pd(OH)2 (361 мг, 0,257 ммоль) в атмосфере N2. Газообразный N2 замещали газообразным Н2 и смесь перемешивали в течение 18 часов при 23°C в атмосфере водорода. Газообразный Н2 замещали газообразным N2. Смесь фильтровали через Целит, промывали при помощи MeOH и концентрировали. Остаток растирали в порошок с MeOH-Et2O, собирали через воронку Бюхнера и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (433 мг, 100%). 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ м.д. 2,31 (с, 3H), 3,88 (с, 2H), 6,43 (с, 1H).
[0904] 5-Фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрил
[0905] К перемешиваемому раствору 6-метил-2-оксо-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (225 мг, 1,277 ммоль) в MeCN (6 мл) добавляли Selectfluor (620 мг, 1,75 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 3 часов. После охлаждения до 23°C реакционную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией (50% до 100% EtOAc-гептан) с получением указанного в заголовке соединения (90 мг, 36%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 3,39 (м, 1H), 2,44 (д, J=3,1 Гц, 3H), 1,41 (дд, J=7,0, 3,1 Гц, 6H); LCMS E-S (M+H) = 195,2.
[0906] 5-Фтор-6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрил
[0907] Указанное в заголовке соединение получали таким же способом, как описано для 5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (20% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 2,80 (дт, J=7,9, 1,9 Гц 2H), 2,31 (д, J=2,1 Гц, 3H), 1,73 (ткв., J=7,4, 7,4 Гц, 2H), 1,06 (т, J=7,3 Гц, 3H); LCMS E-S (M+H) = 195,2.
[0908] 5-Фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрил
[0909] Указанное в заголовке соединение получали таким же способом, как описано для 5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (15% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 2,46 (д, J=3,1 Гц, 3H), 2,44 (д, J=7,4, 3,1 Гц, 3H); LCMS E-S (M+H) = 167,2.
[0910] 3-(Аминометил)-5-фтор-4-изопропил-6-метилпиридин-2(1H)-он
[0911] 5-Фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрил (100 мг, 0,515 ммоль) в 100-мл колбе растворяли в смеси MeOH (6 мл) и 2 мл NH3 (2 мл, 25% водный раствор). Осуществляли восстановление с использованием H-Cube с Ni Ренея в качестве катализаторов при комнатной температуре в течение 3-4 часов. После завершения реакции (отслеживали методом ТСХ) реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде серого твердого вещества (90 мг, 90%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 4,04 (с, 2H), 3,22 (м, 1H), 2,24 (д, J=3,4 Гц, 3H), 1,32 (дд, J=7,0, 1,8 Гц, 6H); LCMS E-S (M+H) = 199,2.
[0912] 3-(Аминометил)-5-фтор-6-метил-4-пропилпиридин-2(1H)-он
[0913] Указанное в заголовке соединение получали таким же способом, как описано для 3-(аминометил)-5-фтор-4-изопропил-6-метилпиридин-2(1H)-она (92% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 3,76 (с, 2H), 2,61 (дт, J=7,2, 1,8 Гц 2H), 2,31 (д, J=2,8 Гц, 3H), 1,57 (ткв., J=7,6, 7,6 Гц, 2H), 1,00 (т, J=7,3 Гц, 3H); LCMS E-S (M+H) = 199,2.
[0914] 3-(Аминометил)-5-фтор-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он
[0915] Указанное в заголовке соединение получали таким же способом, как описано для 3-(аминометил)-5-фтор-4-изопропил-6-метилпиридин-2(1H)-она (92% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 3,79 (с, 2H), 2,29 (д, J=3,3 Гц, 3H), 2,24 (д, J=2,1 Гц, 3H); LCMS E-S (M+H) = 171,2.
[0916] 2-Метил-3-нитро-5-(трифторметил)бензойная кислота
[0917] К перемешиваемому раствору 2-метил-5-(трифторметил)бензойной кислоты (2,00 г, 9,80 ммоль) в H2SO4 (20 мл, 12н) добавляли HNO3 (2 мл, 12н) при 0°C. После перемешивания в течение 3 часов добавляли воду и образовавшийся осадок собирали. Твердое вещество промывали водой и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (1,90 г, 76% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 8,43 (с, 1H), 8,15 (с, 1H), 2,77 (с, 3H); MS (ES) [M-H] 247,8.
[0918] Метил 2-метил-3-нитро-5-(трифторметил)бензоат
[0919] К раствору 2-метил-3-нитро-5-(трифторметил)бензойной кислоты (21,0 г, 84,3 ммоль) в DMF (200 мл) добавляли карбонат калия (35,0 г, 253 ммоль) и метилиодид (24,0 г, 169 ммоль). Смесь перемешивали при 60°C и после перемешивания в течение 6 часов реакционную смесь охлаждали до 23°C и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток растворяли в EtOAc и воде. Водную фазу экстрагировали при помощи EtOAc (2×250 мл) и объединенные органические слои концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией (SiO2 гептан/EtOAc = 4/1) с получением указанного в заголовке соединения (20 г, 90% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ (м.д.); 8,27 (с, 1H), 8,11 (с, 1H), 3,99 (с, 3H), 2,71 (с, 3H); MS (ES) [M-H] 261,9.
[0920] Метил 3-амино-2-метил-5-(трифторметил)бензоат
[0921] К перемешиваемому раствору метил 2-метил-3-нитро-5-(трифторметил)бензоата (20,0 г, 76,0 ммоль) в MeOH (400 мл) добавляли Pd(OH)2 (2,00 г). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов в атмосфере водорода. После продувки азотом смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде оранжевого твердого вещества (10,2 г, 58% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,47 (шир.с, 1H), 7,01 (д, J=2,0 Гц, 1H), 3,92 (м, 2H), 3,91 (с, 3H), 2,39 (с, 3H).
[0922] трет-Бутил-4-{[3-(метоксикарбонил)-2-метил-5-(трифторметил)фенил]амино}пиперидин-1-карбоксилат
[0923] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (6,00 г, 25,7 ммоль) в CH2Cl2 (120 мл) и AcOH (6 мл) добавляли N-Boc пиперидинон (6,70 г, 33,4 ммоль) и триацетоксиборогидрид натрия (13,6 г, 64,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 20 часов. Затем добавляли насыщенный раствор NaHCO3 и смесь разделяли. Водный слой экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×50 мл) и объединенные органические слои концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (SiO2 гептан/EtOAc = 4/1) с получением указанного в заголовке соединения (10,6 г, 98% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,37 (с, 1H), 6,88 (с, 1H), 4,05 (м, 2H), 3,90 (с, 3H), 3,01 (м, 3H), 2,32 (с, 3H), 1,71 (м, 2H), 1,48-1,61 (м, 2H), 1,45 (с, 9H); MS (ES) [M-H] 415,1.
[0924] трет-Бутил-4-{этил[3-(метоксикарбонил)-2-метил-5-(трифторметил)фенил]амино}пиперидин-1-карбоксилат
[0925] К перемешиваемому раствору трет-бутил 4-{[3-(метоксикарбонил)-2-метил-5-(трифторметил)фенил]амино}пиперидин-1-карбоксилата (10,6 г, 25,4 ммоль) в CH2Cl2 (200 мл) и AcOH (10 мл) добавляли ацетальдегид (2,80 г, 63,5 ммоль) и триацетоксиборогидрид натрия (13,4 г, 63,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 24 часов. Затем добавляли насыщенный раствор NaHCO3 и смесь разделяли. Водный слой экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×50 мл) и объединенный органический слой концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (SiO2 Гептан/EtOAc = 5/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (4,50 г, 40% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,82 (шир.с,, 1H), 7,45 (д, J=1,6 Гц, 1H), 3,96-4,18 (м, 2H), 3,92 (с, 3H), 3,08 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,89 (тт, J=11,0, 3,7 Гц, 1H), 2,69 (м, 2H), 2,55 (с, 3H), 1,73 (м, 2H), 1,49-1,56 (м, 2H), 1,45 (с, 9H), 0,86 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) [M+Na] 467,0.
[0926] Метил 3-[этил(пиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензоат, TFA соль
[0927] К перемешиваемому раствору трет-бутил 4-{этил[3-(метоксикарбонил)-2-метил-5-(трифторметил)фенил]амино}пиперидин-1-карбоксилата (4,50 г, 10,1 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавляли TFA (5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Затем реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенного продукта (7,70 г).
[0928] Метил 3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензоат
[0929] К перемешиваемому раствору TFA соли метил 3-[этил(пиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (неочищенное вещество, 5,30 г, 12,0 ммоль) в CH2Cl2 (150 мл) и AcOH (10 мл) добавляли формальдегид (15 мл, 44% водный раствор) и триацетоксиборогидрид натрия (6,40 г, 30,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 2,5 дней. Затем добавляли насыщенный раствор NaHCO3 и смесь разделяли. Водный слой экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×50 мл) и объединенные органические слои концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 гептан/EtOAc=2/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (1,20c г, 28% выход).
[0930] 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,81 (шир.с, 1H), 7,45 (д, J=2,0 Гц, 1H), 3,92 (с, 3H), 3,10 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,83 (м, 2H), 2,66-2,77 (м, 1H), 2,54 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,84-1,94 (м, 2H), 1,63-1,78 (м, 4H), 0,86 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) [M+H] 359,1.
[0931] Метил 3-{этил[1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоат
[0932] К перемешиваемому раствору TFA соли метил 3-[этил(пиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (неочищенное вещество, 1,30 г, 3,36 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл) и AcOH (5 мл) добавляли ацетон (590 мг, 10,1 ммоль) и триацетоксиборогидрид натрия (1,80 г, 8,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 6 дней и затем добавляли насыщенный раствор NaHCO3 и смесь разделяли. Водный слой экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×30 мл) и объединенный органический слой концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 гептан/этилацетат=5/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (220 мг, 17% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,79 (шир.с, 1H), 7,44 (д, J=1,6 Гц, 1H), 3,91 (с, 3H), 3,10 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,86 (м, 2H), 2,61-2,75 (м, 2H), 2,53 (с, 3H), 2,06 (м, 2H), 1,70-1,80 (м, 2H), 1,58-1,69 (м, 2H), 1,00 (c×2, 6H), 0,84 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) [M+H] 387,2.
[0933] 3-[Этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензойная кислота
[0934] К перемешиваемому раствору метил 3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (700 мг, 1,95 ммоль) в метаноле (15 мл) добавляли водный раствор NaOH (5M, 590 мкл, 2,93 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 3 часов. После охлаждения до 23°С к смеси добавляли HCl (2 M) добавляли. Смесь подкисляли до pH=5 и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенных продуктов (1,26 г).
[0935] Следуя такому же способу получения, как описано для 3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензойной кислоты, получали следующие указанные в заголовке соединения из метил 3-амино-2-метил-5-(трифторметил)бензоата и трет-бутил 3-оксоазетидин-1-карбоксилата.
[0936] трет-бутил 3-((3-(метоксикарбонил)-2-метил-5-(трифторметил)фенил)амино)азетидин-1-карбоксилат
[0937] 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,49 (с, 1H), 6,60 (с, 1H), 4,39 (дд, J=7,2 Гц, 8,8 Гц, 2H), 4,26 (м, 1H), 4,19 (шир., д, J=5,6 Гц, 1H), 3,93 (с, 3H), 3,78 (м, 2H), 2,41 (с, 3H), 1,47 (с, 9H).
[0938] трет-бутил 3(этил(3-метоксикарбонил)-2-метил-5-(трифторметил)фенил)амино)азетидин-1-карбоксилат
[0939] 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,86 (с, 1H), 7,20 (с, 1H), 4,15) (м, 1H), 3,99 (дд, J=8,4 Гц, J=8,4 Гц, 2H), 3,94 (с, 3H), 3,65 (шир., 2H), 3,00 (кв., J=7,2 Гц, 2H), 2,60 (с, 3H), 1,43 (с, 9H), 0,90 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+1) 417,41.
[0940] Метил 3-(азетидин-3-ил(этил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоат
[0941] 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,89 (с, 1H), 7,20 (с, 1H), 4,39 (м, 1H), 3,94 (с, 3H), 3,87 (м, 2H), 3,68 (шир., 2H), 2,99 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 2,64 (с, 3H), 0,92 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+1) 317,32.
[0942] Метил 3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоат
[0943] 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,83 (с, 1H), 7,24 (с, 1H), 4,03) (м, 1H), 3,94 (с, 3H), 3,60 (шир., дд, J=7,2, 7,2 Гц, 2H), 2,94 (кв., J=7,6 Гц, 2H), 2,72 (шир., т, J=6,8 Гц, 2H), 2,59 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 0,90 (т, J=7,2 Гц, 3H); MS (ES) (M+1) 331,09.
[0944] 3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензойная кислота
[0945] 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 7,83 (с, 1H), 7,37 (с, 1H), 4,44 (шир., 1H), 3,86 (шир., 2H), 3,33 (с, 2H), 3,04 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 3,03 (с, 3H), 2,64 (с, 3H), 0,90 (т, J=7,2 Гц, 3H); MS (ES) (M+1) 317,32.
[0946]
[0947] трет-бутил 3-((5-Хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амино)азетидин-1-карбоксилат
[0948] 1H-ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ м.д. 7,05 (д, J=2,0 Гц, 1H), 6,48 (д, J=2,0 Гц, 1H), 4,31 (дд, J=7,2, 7,8 Гц, 2H), 4,26-4,21 (м, 1H), 3,87 (с, 3H), 3,82 (дд, J=4,4, 8,3 Гц, 2H), 2,29 (с, 3H), 1,45 (с, 9H).
[0949] трет-бутил 3-((5-Хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)(этил)амино)азетидин-1-карбоксилат
[0950] 1H-ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ м.д. 7,57 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,18 (д, J=2,0 Гц, 1H), 4,19-4,14 (м, 1H), 3,98 (дд, J=8,0, 7,5 Гц, 2H), 3,89 (с, 3H), 3,62-3,56 (шир., 2H), 2,98 (кв., J=6,7 Гц, 2H), 2,49 (с, 3H), 1,42 (с, 9H), 0,88 (т, J=7,2 Гц, 3H).
[0951] Метил 5-хлор-3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метилбензоат
[0952] 1H-ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ м.д. 7,53 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,17 (д, J=2,0 Гц, 1H), 4,01 (м, 1H), 3,89 (с, 3H), 3,57 (дд, J=6,5, 8,0 Гц, 2H), 2,93 (кв., J=7,5 Гц, 2H), 2,83 (шир.т, J=7,0 Гц, 2H), 2,49 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 0,90 (т, J=7,0 Гц, 3H); LCMS (M+H)=297,30.
[0953] 3-{Этил[1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензойная кислота
[0954] К перемешиваемому раствору метил 3-{этил[1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (220 мг, 0,569 ммоль) в метаноле (4 мл) добавляли водный раствор NaOH (5M, 170 мкл, 0,854 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 2 часов. После охлаждения до 23°C к смеси добавляли HCl (2 M). Смесь подкисляли до pH=5 и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенных продуктов (510 мг).
[0955] Метил 3-{[(2R*,6R*)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоат
[0956] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (400 мг, 1,72 ммоль) в ТГФ (15 мл) и TFA (491 мкл) добавляли (2R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-он (410 мг, 1,89 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа в атмосфере азота. Затем смесь охлаждали до 0°C на ледяной бане, добавляли триацетоксиборогидрид натрия (765 мг, 3,43 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -23°С в течение 2 часов. Затем добавляли водный раствор NaHCO3 при 0°С до доведения до рН 8-9 и экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над MgSO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2; гептан/этилацетат=3/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. (278 мг, 37% выход). 1H-ЯМР (400M Гц, CDCl3) δ м.д. 7,21-7,40 (м, 6H), 6,90 (с, 1H), 3,95 (д, J=14,0 Гц, 1H), 3,90 (с, 3H), 3,60-3,73 (м, 2H), 3,46 (д, J=14,0 Гц, 1H), 3,08-3,12 (м, 1H), 2,98-3,03 (м, 1H), 2,30 (с, 3H), 2,02-2,08 (м, 1H), 1,83-1,88 (м, 1H), 1,52-1,60 (м, 1H), 1,17-1,26 (м, 1H), 1,11 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,13 (д, J=6,4 Гц, 3H).
[0957] Метил 3-{[(2R*,6S*)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоат (диастереомерная смесь)
[0958] К перемешиваемой смеси MS3A (1,0 г), метил 3-амино-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (350 мг, 1,50 ммоль) и (2R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-она (359 мг, 1,65 ммоль) в хлороформе (10 мл) добавляли уксусную кислоту (500 мкл) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 7 часов. К реакционной смеси добавляли триацетоксиборогидрид натрия (670 мг, 3,00 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 1,5 часов. Затем реакцию гасили водным раствором NaHCO3 до доведения до pH 8-9. MS3A удаляли путем фильтрования через Целит и содержимое экстрагировали этилацетатом, сушили над MgSO4, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гептан/этилацетат=5/1 до 3/1). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2; гептан/этилацетат=5/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого масла (223 мг, 62% выход.). Для основного изомера; 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,40-7,21 (м, 6H), 6,85 (с, 1H), 4,00-3,95 (м, 1H), 3,91 (с, 3H), 3,88 (д, 2H), 3,84-3,76 (м, 1H), 2,83-2,73 (м, 2H), 2,25 (с, 3H), 1,83-1,69 (м, 4H), 1,13 (д, J=6,4 Гц, 6H).
[0959] Метил 3-{[(2R*,6R*)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоат
[0960] К перемешиваемому раствору метил 3-{[(2R,6R)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (278 мг, 0,640 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) и AcOH (500 мкл) добавляли ацетальдегид (359 мг, 6,40 ммоль) и триацетоксиборогидрид натрия (428 мг, 1,92 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 7 часов. Затем реакцию гасили водным раствором NaHCO3 до доведения до pH8-9. Содержимое экстрагировали этилацетатом, сушили над MgSO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2; гептан/этилацетат=5/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого масла (236 мг, 80% выход.). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,79 (с, 1H), 7,43 (с, 1H), 7,21-7,36 (м, 5H), 3,92 (с, 3H), 3,87 (д, J=14,0 Гц, 1H), 3,38 (д, J=14,0 Гц, 1H), 3,04-3,15 (м, 4H), 2,73-2,80 (м, 1H), 2,53 (с, 3H), 1,76-1,82 (м, 1H), 1,51-1,63 (м, 2H), 1,34-1,42 (м, 1H), 1,06 (д, J=6,0 Гц, 3H), 0,93 (д, J=6,8 Гц, 3H), 0,86 (т, J=6,8 Гц, 3H).
[0961] Метил 3-{[(2R*,6S*)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоат (диастереомерная смесь)
[0962] К перемешиваемому раствору метил 3-{[(2R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (223 мг, 0,513 ммоль) в хлороформе (4 мл) и уксусной кислоте (500 мкл) добавляли ацетальдегид (1,0 мл) и перемешивали в течение 30 мин при 0°С. Затем к реакционной смеси добавляли триацетоксиборогидрид натрия (343 мг, 1,54 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 4 часов. Затем реакцию гасили водным раствором NaHCO3 до доведения до pH 8-9. Содержимое экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над MgSO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гептан/этилацетат=4/1 до 1/2) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. (105,5 мг, 44% выход). MS (ES) [M+H]463,3.
[0963] 3-{[(2R*,4S*,6R*)-1-Бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-5-(трифторметил)бензамид
[0964] К перемешиваемому раствору метил 3-{[(2R,6R)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (236 мг, 0,510 ммоль) в этаноле (5 мл) добавляли водный раствор NaOH (5 M, 269 мкл, 1,02 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали в вакууме и сушили при пониженном давлении с получением неочищенной натриевой соли карбоновой кислоты.
[0965] К перемешиваемому раствору неочищенной натриевой соли карбоновой кислоты и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она, HCl соли (125 мг, 0,664 ммоль) в DMSO (5 мл) добавляли PyBOP (398 мг, 0,766 ммоль) и основание Хунига (445 мкл, 2,55 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 19 часов. Реакцию гасили водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой (два раза) и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над MgSO4 и фильтровали. Объединенный органический слой концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2; этилацетат/MeOH=50/1-8/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого аморфного вещества (267 мг,выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,14-7,36 (м, 8H), 5,94 (с, 1H), 4,53-4,56 (м, 2H), 3,85 (д, J=14,0 Гц, 1H), 3,58 (д, J=14,0 Гц, 1H), 3,02-3,14 (м, 4H), 2,72-2,80 (м, 1H), 2,40 (с, 3H), 2,32 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 1,32-1,82 (м, 4H), 1,05 (д, J=6,4 Гц, 3H), 0,92 (д, J=6,8 Гц, 3H), 0,84 (т, J=6,8 Гц, 3H).
[0966] 3-{[(2R*,4R*,6S*)-1-Бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-5-(трифторметил)бензамид
[0967] К перемешиваемому раствору метил 3-{[(2R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (106 мг, 0,228 ммоль) в этаноле (2,0 мл) добавляли водный раствор NaOH (5 M, 91,2 мкл, 0,456 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 1,5 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали в вакууме и сушили при пониженном давлении. К перемешиваемому раствору этого остатка и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она, HCl соли (55,9 мг, 0,297 ммоль) в DMSO (2 мл) добавляли основание Хунига (199 мкл, 1,14 ммоль), PyBOP (178 мг, 0,342 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакцию гасили водой. Содержимое экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой (два раза) и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над MgSO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2; этилацетат/MeOH=50/1 до 40/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (35,6 мг, 27% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,34-7,08 (м, 7H), 5,96 (с, 1H), 4,54 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,81 (с, 2H), 3,53 (м, 1H), 2,99-2,91 (м, 2H), 2,81 (м, 2H), 2,41 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 1,82-1,47 (м, 4H), 1,00 (д, J=6,4 Гц, 6H), 0,81 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS(ES) [M+H] 583,0.
[0968] трет-Бутил 4-{[5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил]амино}пиперидин-1-карбоксилат
[0969] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (1,40 г, 7,04 ммоль) в CH2Cl2 (30 мл) и AcOH (2,50 г, 42,2 ммоль) добавляли N-Boc пиперидинон (1,96 г, 9,85 ммоль) и триацетоксиборогидрид натрия (4,40 г, 21,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 18 часов и затем добавляли насыщенный раствор NaHCO3 и смесь разделяли. Водный слой экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×20 мл) и объединенные органические слои концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (SiO2 гептан/этилацетат=10/1 до 1/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (2,40 г, 89% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,09 (с, 1H), 6,69 (с, 1H), 4,05 (м, 2H), 3,88 (с, 3H), 3,63 (м, 1H), 3,42 (м, 1H), 2,97 (м, 2H), 2,23 (с, 3H), 2,05 (м, 2H), 1,45 (с, 9H), 1,27 (м, 2H).
[0970] трет-Бутил 4-{[5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил](этил)амино}пиперидин-1-карбоксилат
[0971] К перемешиваемому раствору трет-бутил 4-{[5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил]амино}пиперидин-1-карбоксилата (2,40 г, 6,28 ммоль) в дихлорметане (50 мл) и уксусной кислоте (1,8 мл) добавляли ацетальдегид (830 мкл, 12,6 ммоль) и триацетоксиборогидрид натрия (4,00 г, 18,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Затем добавляли водный раствор NaHCO3 и смесь разделяли. Водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенный органический слой концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (SiO2 гептан/этилацетат=10/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (2,40 г, 89% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,56 (с, 1H), 7,21 (д, J=1,6 Гц, 1H), 4,04 (м, 2H), 3,89 (с, 3H), 3,02 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,88 (м, 1H), 2,68 (м, 2H), 2,44 (с, 3H), 1,71 (м, 2H), 1,48-1,61 (м, 2H), 1,45 (с, 9H), 0,83-0,89 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS(ES) [M+Na] 433,0.
[0972] Метил 5-хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метилбензоат
[0973] К перемешиваемому раствору трет-бутил 4-{этил[3-(метоксикарбонил)-2-метил-5-хлорфенил]амино}пиперидин-1-карбоксилата (2,20 г, 5,35 ммоль) в дихлорметане (20 мл) добавляли TFA (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением TFA соли в виде неочищенного продукта.
[0974] К перемешиваемому раствору TFA соли в ТГФ (20 мл) и уксусной кислоте (305 мкл) добавляли формальдегид (3 мл, 44% водный раствор) и триацетоксиборогидрид натрия (3,40 г, 16,1 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 19 часов и затем добавляли насыщенный раствор NaHCO3 и смесь разделяли. Водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (50 мл) и объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na2SO4 и фильтровали, и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 гептан/этилацетат=1/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (1,54 г, 89% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,54 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,21 (д, J=2,4 Гц, 1H), 3,89 (с, 3H), 3,07 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 2,81-2,85 (м, 2H), 2,66-2,70 (м, 1H), 2,44 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,86-1,93 (м, 2H), 1,65-1,75 (м, 4H), 0,86 (т, J=6,8 Гц, 3H).
[0975] 5-Хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метилбензойная кислота
[0976] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метилбензоата (1,06 г, 3,26 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли водный раствор NaOH (5 M, 780 мкл, 3,92 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 18 часов. После охлаждения до 23°C к смеси добавляли HCl (2 М, 2 мл)) и смесь подкисляли до pH=5 и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде неочищенных продуктов (1,80 г).
[0977] Метил 3-{[(2R,6R)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил]амино}-5-фтор-2-метилбензоат
[0978] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-фтор-2-метилбензоата (520 мг, 2,84 ммоль) в ТГФ (20 мл) и TFA (813 мкл) добавляли (2R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-он (679 мг, 3,12 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа в атмосфере азота. Затем смесь охлаждали до 0°C на ледяной бане, добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,27 г, 5,68 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляли водный раствор NaHCO3 при 0°C до доведения до pH 8-9 и содержимое экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над MgSO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2; гептан/этилацетат=5/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (331 мг, 30% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,35-7,39 (м, 2H), 7,27-7,30 (м, 2H), 7,21-7,26 (м, 1H), 6,76 (дд, J=2,4, 9,2 Гц, 1H), 6,45 (дд, J=2,4, 11,2 Гц, 1H), 3,94 (д, J=14,4 Гц, 1H), 3,87 (с, 3H), 3,58-3,65 (м, 2H), 3,46 (д, J=14,4 Гц, 1H), 3,06-3,12 (м, 1H), 2,94-3,01 (м, 1H), 2,21 (с, 3H), 2,02-2,07 (м, 1H), 1,82-1,89 (м, 1H), 1,15-1,22 (м, 1H), 1,12 (д, J=6,0 Гц, 3H), 1,09 (д, J=7,2 Гц, 3H).
[0979] Метил 3-{[(2R,4R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил]амино}-5-фтор-2-метилбензоат
[0980] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-фтор-2-метилбензоата (171 мг, 0,931 ммоль) в хлороформе (6 мл) и AcOH (266 мкл) добавляли (2R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-он (212 мг, 0,980 ммоль) и MS3A (500 мг) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов в атмосфере азота. Затем смесь охлаждали до 0°C на ледяной бане и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (415 мг, 1,86 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Затем добавляли водный раствор NaHCO3 при 0°C до доведения до pH 8-9 и содержимое экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над MgSO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (1. SiO2; гептан/этилацетат=5/1 до 3/1, 2. NH-SiO2; гептан/этилацетат=5/1, 3. NH-SiO2; гептан/этилацетат=10/1 до 6/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (85,0 мг, 24% выход.). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,38-7,20 (м, 5H), 6,77 (дд, J=2,4, 9,2 Гц, 1H), 6,40 (дд, J=2,4, 11,6 Гц, 1H), 3,95-3,90 (м, 1H), 3,88 (с, 3H), 3,87 (с, 2H), 2,84-2,74 (м, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,81-1,66 (м, 4H), 1,11 (д, J=6,0 Гц, 6H).
[0981] Метил 3-{[(2R,6R)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил] (этил)амино}-5-фтор-2-метилбензоат
[0982] К перемешиваемому раствору метил 3-{[(2R,6R)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил]амино}-5-фтор-2-метилбензоата (269 мг, 0,701 ммоль) в дихлорметане (5 мл) и уксусной кислоте (500 мкл) добавляли ацетальдегид (124 мг, 2,80 ммоль) и триацетоксиборогидрид натрия (469 мг, 2,10 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Затем реакцию гасили водным раствором NaHCO3 до доведения до pH 8-9. Содержимое экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над MgSO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2; гептан/этилацетат=5/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого масла (277 мг, 96% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,19-7,36 (м, 6H), 6,97 (дд, J=2,4, 10,4 Гц, 1H), 3,89 (с, 3H), 3,86 (д, J=10,4 Гц, 1H), 3,39 (д, J=10,4 Гц, 1H), 3,02-3,10 (м, 4H), 2,74-2,80 (м, 1H), 2,43 (с, 3H), 1,74-1,82 (м, 1H), 1,51-1,63 (м, 2H), 1,32-1,40 (м, 1H), 1,05 (д, J=6,4 Гц, 3H), 0,93 (д, J=7,2 Гц, 3H), 0,86 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) [M+H] 413,0.
[0983] Метил 3-{[(2R,4R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-5-фтор-2-метилбензоат
[0984] К перемешиваемому раствору метил 3-{[(2R,4R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил]амино}-5-фтор-2-метилбензоата (84,9 мг, 0,221 ммоль) и ацетальдегида (124 мг, 2,21 ммоль) в хлороформе (2 мл) добавляли уксусную кислоту (200 мкл) при 0°C и перемешивали при 23°C в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляли триацетоксиборогидрид натрия (148 мг, 0,662 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3,5 часов. К реакционной смеси добавляли MS 3А (200 мг) и ацетальдегид (500 мкл) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 25 минут. К реакционной смеси добавляли триацетоксиборогидрид натрия (148 мг, 0,662 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Затем реакционную смесь гасили насыщенным раствором NaHCO3 до доведения до pH=8-9. Содержимое экстрагировали при помощи EtOAc. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над MgSO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2; гептан/этилацетат=5/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (48,5 мг, 53% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,36-7,19 (м, 6H), 6,96 (дд, J=2,8, 9,6 Гц, 1H), 3,90 (с, 3H), 3,82 (с, 2H), 3,44 (м, 1H), 2,98-2,91 (м, 2H), 2,88-2,87 (м, 2H), 2,31 (с, 3H), 1,82-1,70 (м, 2H), 1,57-1,47 (м, 2H), 0,99 (д, J=6,4 Гц, 6H), 0,83 (т, J=6,8 Гц, 3H).
[0985] 3-{[(2R,6R)-1-Бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил]-(этил)амино}-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-5-фтор-2-метилбензамид
[0986] К перемешиваемому раствору метил 3-{[(2R,6R)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-5-фтор-2-метилбензоата (277 мг, 0,672 ммоль) в этаноле (5 мл) добавляли водный раствор NaOH (5 M, 269 мкл, 1,35 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали в вакууме и сушили при пониженном давлении с получением неочищенной натриевой соли карбоновой кислоты.
[0987] К перемешиваемому раствору неочищенной натриевой соли карбоновой кислоты и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она, HCl соли (165 мг, 0,874 ммоль) в DMSO (5 мл) добавляли PyBOP (525 мг, 1,01 ммоль) и основание Хунига (586 мкл, 3,36 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 5 часов. Реакцию гасили водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой (2×10 мл) и насыщенным солевым раствором (1×10 мл). Органический слой сушили над MgSO4 и фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2; только этилацетат до этилацетат/MeOH=50/1-8/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (378 мг, количественный выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,20-7,38 (м, 5H), 7,02-7,10 (м, 1H), 6,80-6,84 (м, 1H), 6,73-6,78 (м, 1H), 5,93 (с, 1H), 4,51 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,85 (д, J=10,0 Гц, 1H), 3,38 (д, J=10,0 Гц, 1H), 3,01-3,05 (м, 4H), 2,67-2,81 (м, 1H), 2,40 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 1,52-1,83 (м, 3H), 1,32-1,39 (м, 1H), 1,05 (д, J=6,4 Гц, 3H), 0,93 (д, J=6,8 Гц, 3H), 0,84 (т, J=6,8 Гц, 3H).
[0988] 3-{[(2R,4R,6S)-1-Бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил] (этил)амино}-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-фтор-2-метилбензамид
[0989] К перемешиваемому раствору метил 3-{[(2R,4R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-5-фтор-2-метилбензоата (48,5 мг, 0,118 ммоль) в этаноле (1,5 мл) добавляли водный раствор NaOH (5 M, 47,0 мкл, 0,235 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 1,5 часов. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляли в вакууме и сушили при пониженном давлении. К перемешиваемому раствору этого остатка и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она, HCl соли (28,8 мг, 0,153 ммоль) в DMSO (1 мл) добавляли PyBOP (91,8 мг, 0,176 ммоль) и основание Хунига (102 мкл, 0,588 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 13,5 часов. Реакцию гасили водой и смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой (2×10 мл) и насыщенным солевым раствором (1×10 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2, этилацетат/MeOH=50/1 до 8/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (50,1 мг, 79% выход). MS(ES) [M+H] 533,3.
[0990] Пример 1: Синтез соединения 1: 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 1
[0991] Стадия 1: Синтез метил 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата
[0992] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (0,5 г, 1,75 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли Cs2CO3 (1,02 г, 2,63 ммоль) и метилиодид (1,45 г, 3,5 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 4 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток растворяли в воде и экстрагировали этилацетатом. Полученное неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением продукта, представляющего собой желаемое соединение, без дополнительной очистки (0,39 г).
[0993] Стадия 2: Синтез 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[0994] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата (1 экв.) в этаноле (5 мл) добавляли водный раствор NaOH (1 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 4 часов. После завершения этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли при помощи 1н HCl до pH 6. Водную фазу экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением чистой кислоты (выход 50-60%). К раствору этой кислоты (1 экв.) в DMSO (1,5 мл) добавляли PyBOP (1,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (2 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения добавляли воду и полученнный твердый осадок фильтровали и промывали водой. Затем это твердое вещество перемешивали с ацетонитрилом в течение 10 минут и снова фильтровали с получением чистой целевой молекулы (выход 50-60%). ЖХМС: 446,15 (M + 1)+; ВЭЖХ: 94,48% (@ 254 нм) (Rt; 5,257); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,20 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,25 (с, 1H), 7,04 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,37-3,45 (м, 1H), 2,49 (3H сливается с пиком растворителя), 2,17 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,53-1,67 (м, 4H), 1,38-1,50 (м, 4H).
[0995] Пример 2: Синтез соединения 2: 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)бензамид
Соединение 2
[0996] Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
[0997] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276,2 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли по порциям 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, полученный остаток промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (71,7 г, 99,9%), которое использовали для следующей реакции.
[0998] Стадия 2: метил 5-бром-2-метил-3-нитробензол
[0999] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилиодид (626,63 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения осажденное твердое вещество фильтровали, остаток промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения (302 г, 99%), которое использовали для следующей реакции.
[01000] Стадия 3: метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоат
[01001] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и порошок железа (93,3 г, 1636 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали через целит с промывкой водой и этилацетатом, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения.
[01002] Стадия 4: трет-бутил 4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)амино)пиперидин-1-карбоксилат
[01003] К перемешиваемому раствору полученного выше неочищенного метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5 г, 20,57 ммоль) и трет-бутил 4-оксопиперидин-1-карбоксилата (8,2 г, 41,15 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (1,2 г, 20,57 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (1,55 г, 24,6 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением соединения 5 (5 г, 57%).
[01004] Стадия 5: трет-бутил 4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилат
[01005] К перемешиваемому раствору трет-бутил 4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (3 г, 7,06 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) добавляли карбонат цезия (4,57 г, 14,11 ммоль) и метилиодид (5 г, 35,2 ммоль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (2,5 г, 81%).
[01006] Стадия 6: трет-бутил 4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилат
[01007] Водный раствор NaOH (0,37 г, 9,38 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил 4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил (метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (2 г, 4,69 ммоль) в MeOH (20 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6 и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (1,7 г, 90%).
[01008] Кислоту (1,7 г, 4,22 ммоль) затем растворяли в DMSO (10 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (1,42 г, 9,38 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (3,66 г, 7,04 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей очисткой колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (1,3 г, 50%).
[01009] Стадия 7: 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)бензамид
[01010] Перемешиваемый раствор трет-бутил 4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (1,3 г, 2,39 ммоль) в DCM (10 мл) охлаждали до 0°C и к смеси добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия до доведения до pH 8 и водный слой экстрагировали при помощи 20% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением желаемого соединения (0,9 г, 85%). ЖХМС: 461,15 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,52% (@ 254 нм) (Rt; 4,673; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 8,22 (т, 1H), 7,19 (с, 1H), 7,01 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4 Гц), 2,91 (д, 2H, J=11,6 Гц), 2,78 (шир.с, 1H), 2,55 (с, 3H), 2,32-2,35 (м, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 6H), 1,44-1,50 (м, 4H).
[01011] Пример 3: Синтез соединения 3: 5-хлор-3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 3
[01012] Стадия 1: 5-хлор-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01013] 5-Хлор-2-метилбензойную кислоту (4 г, 23,39 ммоль) добавляли к охлажденной концентрированной H2SO4 (27 мл) при -10°C по порциям. Через 10 минут добавляли по каплям нитрующую смесь {полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (3,3 г, 52,68 ммоль) с концентрированной H2SO4 (4,4 мл)} при -10°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 30 минут. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (4,95 г, 99%).
[01014] Стадия 2: метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоат
[01015] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (6,75 г, 31,25 ммоль) в DMF (33 мл) добавляли карбонат натрия (13,23 г, 125,18 ммоль) и метилиодид (17,77 г, 125,2 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния (размер 60-120 меш) с получением желаемого соединения (6 г, 83%).
[01016] Стадия 3: метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоат
[01017] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6 г, 26,13 ммоль) в этаноле (60 мл) добавляли хлорид аммония (6 г, 112,1 ммоль), растворенный в воде (60 мл), и порошок железа (11,88 г, 208,4 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через целит, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения.
[01018] Стадия 4: метил 5-хлор-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоат
[01019] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (1 г, 5,025 ммоль) и циклогексанона (0,739 г, 7,75 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,301 г, 5,02 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (390 мг, 0,00621 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (1,4 г, с примесью циклогексанона).
[01020] Стадия 5: метил 5-хлор-3-(циклогексил(метил)амино)-2-метилбензоат (6):
[01021] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоата (1,4 г, 0,0049 моль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли карбонат цезия (3,2 г, 0,0099 моль) и метилиодид (3,5 г, 0,0024 моль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 13 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (800 мг, 55%).
[01022] Стадия 6: 5-хлор-3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01023] Водный раствор NaOH (0,16 г, 4,06 ммоль) добавляли к раствору соединения 6 (0,8 г, 2,71 ммоль) в EtOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6 и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,7 г, 91%).
[01024] Кислоту (0,7 г, 2,49 ммоль) затем растворяли в DMSO (2 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,752 г, 4,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (1,9 г, 3,73 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей колоночной очисткой с получением указанного в заголовке соединения (0,250 г, 25%).
[01025] ЖХМС: 416,35 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,01% (@ 254 нм) (Rt; 5,408; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,20 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,05 (д, 1H, J=2 Гц), 6,88 (д, 1H, J=2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,8 Гц), 2,70 (м, 1H), 2,56 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,12 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,75-1,35 (м, 7H), 1,25-1,05 (м, 3H).
[01026] Пример 4: Синтез соединения 4: 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(1-пивалоилпиперидин-4-ил)амино)бензамид
Соединение 4
[01027] К перемешиваемому раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)бензамида (0,05 г, 0,112 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли EDCI.HCl (0,064 г, 0,336 ммоль), HOBt (0,03 г, 0,22 ммоль), триэтиламин (0,03 г, 0,336 ммоль) и пивалиновую кислоту (0,023 г, 0,224 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали при этой температуре в течение 18 часов. После завершения добавляли воду и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,03 г, 56%). ЖХМС: 545,20 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,60% (@ 254 нм) (Rt; 6,355; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,20 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,25 (д, 1H, J=2,8 Гц), 7,05 (д, 1H, J=1,2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,23-4,25 (м, 4H), 3,00 (м, 1H), 2,76 (т, 2H, J=12,4 Гц), 2,54 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,62-1,65 (м, 2H), 1,42-1,48 (м, 2H), 1,18 (с, 9H).
[01028] Пример 5: Синтез соединения 5: 5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 5
[01029] Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01030] К смеси 2-метил-3-нитробензойной кислоты (15 г, 82,80 ммоль) в концентрированной H2SO4 (60 мл) добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (13,07 г, 45,71 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Затем реакционную смесь медленно выливали в 400 мл ледяной воды. Твердое вещество, которое осаждалось, фильтровали, промывали и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (21 г, 98,22%).
[01031] Стадия 2: метил 3-бром-5-нитробензоат (3):
[01032] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (16 г, 61,54 ммоль) в DMF (160 мл) добавляли иодметан (35,72 г, 248 ммоль) и карбонат натрия (26,28 г, 248 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 8 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали и неорганический твердый остаток промывали этилацетатом. Объединенные фильтраты концентрировали в вакууме досуха. Остаток снова растворяли в этилацетате и промывали 5% раствором бикарбоната натрия (700 мл), затем раствором 5M HCl (300 мл). Органический слой в конце промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением желаемого соединения (16 г, 95%).
[01033] Стадия 3: этил 3-амино-5-бромбензоат
[01034] К перемешиваемому раствору метил 3-бром-5-нитробензоата (17 г, 62,04 ммоль) в этаноле (85 мл) добавляли раствор NH4Cl (17 г в 85 мл воды, 317,8 ммоль) с последующим добавлением Fe порошка (27,82 г, 498,12 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 90° С в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали досуха с получением твердого вещества, которое растворяли в насыщенном растворе бикарбоната натрия. Водный слой экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением желаемого соединения (15 г, 99,14%).
[01035] Стадия 4: метил 3-бром-5-(циклопентиламино)-бензоат
[01036] К перемешиваемому раствору этил 3-амино-5-бромбензоата (2 г, 8,73 ммоль) и циклопентанона (2,2 г, 26,1 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту (1,04 г, 17,4 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (1,37 21,83 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (1,6 г, 61%).
[01037] Стадия 5: метил 5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-2-метилбензоат
[01038] К перемешиваемому раствору метил 3-бром-5-(циклопентиламино)бензоата (0,3 г, 0,96 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли карбонат цезия (0,628 г, 1,92 ммоль) и этилиодид (0,748 г, 4,8 ммоль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 24 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,150 г, 46%).
[01039] Стадия 6: 5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01040] Водный раствор NaOH (0,03 г, 0,75 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,170 г, 0,75 ммоль) в EtOH (10 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,15 г, 92,59%).
[01041] Кислоту (0,15 г, 0,461 ммоль) затем растворяли в DMSO (5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,14 г, 0,923 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,35 г, 0,692 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей очисткой при помощи ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (0,050 г, 24%) в виде TFA соли: ЖХМС: 460,10(M+1)+; ВЭЖХ: 99,22% (@ 254 нм) (Rt; 5,115; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,24 (с, 1H), 7,32 (с, 1H), 7,09 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,47-3,48 (м, 1H), 2,96 (м, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,33-1,63 (м, 8H), 0,78 (т, 3H, J=6,4 Гц).
[01042] Пример 6: Синтез соединения 7: 5-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 7
[01043] Стадия 1: Синтез 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01044] 5-хлор-2-метилбензойную кислоту (4 г, 23,4 ммоль) добавляли к охлажденной концентрированной H2SO4 (27 мл) при -10°C небольшими порциями и перемешивали в течение 10 минут. Нитрующую смесь {полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (3,3 г, 52,68 ммоль) с концентрированной H2SO4 (4,4 мл)} добавляли по каплям при -10°C. Полученную смесь перемешивали при -10°C в течение 30 минут. После завершения реакционную смесь выливали в ледяную воду, твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и сушили в вакууме с получением 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (4,95 г, 99%).
[01045] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата
[01046] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты, полученной способом, аналогичным описанному выше, (6,75 г, 31,3 ммоль) в DMF (33 мл) добавляли карбонат натрия (13,2 г, 125 ммоль) и метилиодид (17,8 г, 125 ммоль). Полученную смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения к смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с получением метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6 г, 83,6%).
[01047] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата
[01048] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6 г, 26,1 ммоль) в этаноле (60 мл) добавляли хлорид аммония (6 г, 112 ммоль), растворенный в воде (60 мл), и порошок железа (11,9 г, 208 ммоль). Полученную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения к смеси добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата.
[01049] Стадия 4: Синтез метил 5-хлор-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата
[01050] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метил бензоата (1 г, 5,0 ммоль) и циклопентанона (2,1 г, 25,0 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,6 г, 5,0 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,78 г, 12,5 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с получением метил 5-хлор-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (1,2 г, 89%).
[01051] Стадия 5: Синтез метил 5-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата
[01052] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (0,5 г, 1,86 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли карбонат цезия (1,22 г, 3,7 ммоль) и метилиодид (1,32 г, 9,33 ммоль). Полученную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата (0,5 г, 95%).
[01053] Стадия 6: Синтез 5-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01054] Водный раствор NaOH (0,106 г, 2,66 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата (0,5 г, 1,77 ммоль) в MeOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции метанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6 и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,4 г, 84%).
[01055] Кислоту (0,1 г, 0,37 ммоль) затем растворяли в DMSO (0,5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,114 г, 0,74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,29 г, 0,56 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей колоночной очисткой с получением 5-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (100 мг, 66%). ЖХМС: 402,15 (M + 1)+; ВЭЖХ: 96,46% (@ 254 нм) (Rt; 5,289; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% В); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,13 (д, 1H, J=2 Гц), 6,91 (д, 1H, J=2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=5,2 Гц), 3,41-3,45 (м, 1H), 2,50 (3H сливается с пиком растворителя), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,38-1,67 (м, 8H).
[01056] Пример 7: Синтез соединения 8: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)бензамид
Соединение 8
[01057] Стадия 1: 5-хлор-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01058] 5-Хлор-2-метилбензойную кислоту (4 г, 23,39 ммоль) добавляли к охлажденной концентрированной H2SO4 (27 мл) при -10°C по порциям. Через 10 минут нитрующую смесь {полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (3,3 г, 52,68 ммоль) с концентрированной H2SO4 (4,4 мл)} добавляли по каплям при -10°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 30 минут. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (4,95 г, 99%).
[01059] Стадия 2: метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоат
[01060] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (6,75 г, 31,25 ммоль) в DMF (33 мл) добавляли карбонат натрия (13,23 г, 125,18 ммоль) и метилиодид (17,77 г, 125,2 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния (размер 60-120 меш) с получением желаемого соединения (6 г, 84%).
[01061] Стадия 3: метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоат
[01062] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6 г, 26,13 ммоль) в этаноле (60 мл) добавляли хлорид аммония (6 г, 112,1 ммоль), растворенный в воде (60 мл), и порошок железа (11,88 г, 208,4 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через целит, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения.
[01063] Стадия 4: трет-бутил 4-((5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилат
[01064] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (6 г, 30,15 ммоль) и трет-бутил 4-оксопиперидин-1-карбоксилата (29 г, 150 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (1,8 г, 30,1 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (4,7 г, 75,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (4 г, 30%).
[01065] Стадия 5: трет-бутил 4-((5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилат
[01066] К перемешиваемому раствору трет-бутил 4-((5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амин)пиперидин-1-карбоксилата (4 г, 9,09 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавляли карбонат цезия (5,9 г, 18,09 ммоль) и метилиодид (6,95 г, 48,94 ммоль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (2,2 г, 53%).
[01067] Стадия 6: трет-бутил 4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилат
[01068] Водный раствор NaOH (0,75 г, 1,86 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил 4-((5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил) (метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (0,5 г, 1,26 ммоль) в MeOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,4 г, 84%).
[01069] Кислоту (0,4 г, 1,04 ммоль) затем растворяли в DMSO (1 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,316 г, 2,09 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,816 г, 1,56 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей колоночной очисткой с получением желаемого соединения (0,225 г, 41%).
[01070] Стадия 7: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)бензамид
[01071] Перемешиваемый раствор трет-бутил 4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (0,2 г, 0,632 ммоль) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C и к смеси добавляли TFA (0,15 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток очищали путем нескольких промывок растворителем с получением желаемого соединения (0,14 г, 53%) в виде его TFA соли. ЖХМС: 417,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 96,16% (@ 254 нм) (Rt; 4,677; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,49 (шир.с, 1H), 8,20 (т, 1H), 8,18 (шир.с, 1H), 7,19 (с, 1H), 6,96 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,25 (д, 2H, J=12 Гц), 3,08 (м, 1H), 2,88 (шир.с, 2H), 2,56 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,76 (шир.с, 4H).
[01072] Пример 8: Синтез соединения 10: 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамид:
Соединение 10
[01073] Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01074] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 152 ммоль) по порциям при комнатной температуре и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения смесь выливали в ледяную воду, полученное твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (71,7 г, 99,9%).
[01075] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола
[01076] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты, полученной способом, аналогичным описанному выше, (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилиодид (626,6 г, 4415 ммоль). Полученную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения твердое вещество удаляли фильтрованием и остаток промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола (302 г, 99%).
[01077] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата
[01078] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензола (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) добавляли раствор хлорида аммония (150 г, 2777 ммоль) в воде (750 мл) и порошок железа (93,3 г, 1636 ммоль). Полученную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения смесь фильтровали через целит, целит промывали водой и этилацетатом и фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата.
[01079] Стадия 4: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
[01080] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (2 г, 8,23 ммоль) и дигидро-2H-пиран-4(3)-она (1,06 г, 10,6 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту(0,5 г, 8,23 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,622 г, 9,87 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (1,6 г, 61%).
[01081] Стадия 5: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
[01082] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,4 г, 1,26 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) добавляли карбонат цезия (0,79 г, 2,44 ммоль) и метилиодид (0,86 г, 6,11 ммоль); полученную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-бром-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,33 г, 80%).
[01083] Стадия 6: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида:
[01084] Водный раствор NaOH (0,19 г, 4,89 ммоль) добавляли к раствору соединения 6 (0,8 г, 2,4 ммоль) в MeOH (20 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,70 г, 92%).
[01085] Кислоту (0,7 г, 2,24 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,74 г, 4,89 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (1,9 г, 3,6 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения смесь выливали на лед с получением твердого вещества. Твердое вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей очисткой колоночной хроматографией с получением 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (0,53 г, 54%). ЖХМС: 462,23 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,57% (@ 254 нм) (Rt; 5,276; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,20 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,24 (д, 1H, J=2 Гц), 7,04 (д, 1H, J=2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,84 (д, 2H, J=10,8 Гц), 3,22-3,28 (м, 2H), 2,96 (м, 1H), 2,56 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,52-1,61 (м, 4H).
[01086] Пример 9: Синтез соединения 13: 2,5-дихлор-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида
Соединение 13
[01087] Стадия 1: Синтез 2,5-дихлор-3-нитробензойной кислоты:
[01088] 2,5-Дихлорбензойную кислоту (5 г, 26,2 ммоль) добавляли к охлажденной концентрированной H2SO4 (50 мл) при -10°C небольшими порциями. Через 10 минут нитрующую смесь (полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (2,5 мл) с концентрированной H2SO4 (10 мл)} добавляли по каплям при -10°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 2 часов. После завершения реакционную смесь выливали в ледяную воду, и происходило осаждение твердого вещества. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и сушили в вакууме с получением 2,5-дихлор-3-нитробензойной кислоты (3,4 г, 65%).
[01089] Стадия 2: Синтез метил 2,5-дихлор-3-нитробензоата:
[01090] К перемешиваемому раствору 2,5-дихлор-3-нитробензойной кислоты (3,2 г, 13,67 ммоль) в DMF (30 мл) добавляли карбонат натрия (4,3 г, 40,56 ммоль) и метилиодид (9,7 г, 68,30 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 18 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и продукт экстрагировали с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением метил 2,5-дихлор-3-нитробензоата (3 г, 90%).
[01091] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-2,5-дихлорбензоата:
[01092] К перемешиваемому раствору метил 2,5-дихлор-3-нитробензоата (3,3 г, 13,1 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляли хлорид аммония (3,5 г, 64,81 ммоль), растворенный в воде (20 мл), и порошок железа (7 г, 82,35 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 3 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и твердые вещества удаляли фильтрованием через целит. Фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением метил 3-амино-2,5-дихлорбензоата (2,5 г, 66%).
[01093] Стадия 4: Синтез метил 2,5-дихлор-3-(циклопентиламино)бензоата:
[01094] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2,5-дихлорбензоата (2,5 г, 11,5 ммоль) и циклопентанона (4,8 г, 57,1 ммоль) в метаноле (5 мл) добавляли уксусную кислоту (0,6 г, 11,3 ммоль) и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (1,4 г, 22,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и продукт очищали колоночной хроматографией с получением метил 2,5-дихлор-3-(циклопентиламино)бензоата (0,275 г, 8%).
[01095] Стадия 5: Синтез метил 2,5-дихлор-3-(циклопентил (метил)амино)бензоата:
[01096] К перемешиваемому раствору метил 2,5-дихлор-3-(циклопентиламино)бензоата (0,275 г, 0,958 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли карбонат цезия (0,622 г, 1,9 ммоль) и метилиодид (0,689 г, 4,78 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 18 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали с получением метил 2,5-дихлор-3-(циклопентил(метил)амино)бензоата (0,27 г, 93%).
[01097] Стадия 6: Синтез 2,5-дихлор-3-(циклопентил-(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида
[01098] Водный раствор NaOH (0,50 г, 1,24 ммоль) добавляли к раствору метил 2,5-дихлор-3-(циклопентил(метил)амино)бензоата (0,25 г, 0,83 ммоль) в MeOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции метанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Продукт экстрагировали с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением желаемой кислоты (0,21 г, 88%).
[01099] Кислоту (0,21 г, 0,755 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,3 г, 1,97 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,757 г, 1,45 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества. Твердое вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом. Соединение дополнительно очищали препаративной ВЭЖХ с получением 2,5-дихлор-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида (0,1 г, 36%) в виде TFA соли. ЖХМС: 422,10 (M + 1)+; ВЭЖХ: 97,58% (@ 254 нм) (Rt; 6,973; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,35 (т, 1H), 7,23 (с, 1H), 6,98 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,66 (м, 1H), 2,59 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,70 (шир.с, 2H), 1,61 (шир.с, 2H), 1,48 (шир.с, 4H).
[01100] Пример 10: Синтез соединения 14: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамид
Соединение 14
[01101] Стадия 1: 5-хлор-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01102] 2-Метил-3-нитробензойную кислоту (4 г, 23,39 ммоль) добавляли к охлажденной концентрированной H2SO4 (27 мл) при -100C по порциям. Через 10 минут добавляли по каплям нитрующую смесь {полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (3,3 г, 52,68 ммоль) с концентрированной H2SO4 (4,4 мл)} при -10°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 30 минут. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (4,95 г, 99%).
[01103] Стадия 2: метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоат
[01104] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (6,75 г, 31,25 ммоль) в DMF (33 мл) добавляли карбонат натрия (13,23 г, 125,18 ммоль) и метилиодид (17,77 г, 125,2 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния (размер 60-120 меш) с получением желаемого соединения (6 г, 84%).
[01105] Стадия 3: метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоат
[01106] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6 г, 26,13 ммоль) в этаноле (60 мл) добавляли хлорид аммония (6 г, 112,1 ммоль), растворенный в воде (60 мл), и порошок железа (11,88 г, 208,4 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через целит, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения, которое использовали как таковое.
[01107] Стадия 4: метил 5-хлор-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоат
[01108] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (1 г, 5,025 ммоль) и дигидро-2H-пиран-4(3H)-она (753 мг, 7,537 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (301 мг, 5,025 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (373 мг, 6,03 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (700 мг, 49%).
[01109] Стадия 5: метил 5-хлор-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоат
[01110] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (700 мг, 2,473 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли карбонат цезия (1,61 г, 4,946 ммоль) и метилиодид (1,82 г, 0,8 мл, 12,36 ммоль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 13 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (480 мг, 65%).
[01111] Стадия 6: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамид
[01112] Водный раствор NaOH (96 мг, 2,424 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,48 г, 1,616 ммоль) в EtOH (2 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,4 г, 87%).
[01113] Кислоту (0,4 г, 1,41 ммоль) затем растворяли в DMSO (1 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,429 г, 2,82 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (1,10 г, 2,12 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей колоночной очисткой с получением указанного в заголовке соединения (0,17 г, 29%): ЖХМС: 418,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 97,72% (@ 254 нм) (Rt; 5,022; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,48 (с, 1H), 8,21 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,13 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,84 (д, 2H, J=10,8 Гц), 3,25 (т, 2H, J=11,2 Гц), 2,96 (м, 1H), 2,56 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,52 (м, 4H).
[01114] Пример 11: Синтез соединения 15: трет-бутил (4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамат
Соединение 15
[01115] Стадия 1: Синтез метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата
[01116] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5 г, 20,6 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (5,6 г, 26,7 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (1,2 г, 20,6 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (1,6 г, 26,7 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и продукт очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (3 г, 33,3%).
[01117] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)- 2-метилбензоата
[01118] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (1,5 г, 4,6 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) добавляли карбонат цезия (2,63 г, 8,1 ммоль) и метилиодид (2,86 г, 20,32 ммоль). Смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали и остаток промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали с получением метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,5 г).
[01119] Стадия 3: Синтез трет-бутил (4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
[01120] Водный раствор NaOH (0,26 г, 6,62 ммоль) добавляли к раствору 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,5 г, 3,3 ммоль) в MeOH (20 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции метанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Продукт экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением желаемой кислоты (1,33 г, 92%).
[01121] Кислоту (1,3 г, 2,96 ммоль) затем растворяли в DMSO (10 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,34 г, 2,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,88 г, 1,7 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции смесь выливали на лед с получением твердого вещества. Твердое вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей очисткой колоночной хроматографией с получением трет-бутил (4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата. (0,5 г, 26%). ЖХМС: 575,80 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,99% (@ 254 нм) (Rt; 6,094, 7,065 [смесь диастереомеров]; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,20 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,21 (с, 1H), 7,18 (с, 1H), 7,01 (с, 1H), 6,66 (д, 1H, J=7,2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=3,2 Гц), 3,44 (шир.с, 1H), 3,15 (шир.с, 1H), 2,55-2,66 (м, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 6H), 1,76-1,79 (м, 2H), 1,51-1,63 (м, 3H), 1,36-1,38 (м, 11H), 1,07-1,16 (м, 1H).
[01122] Пример 12: Синтез соединения 16: 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)бензамид
Соединение 16
[01123] Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01124] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276,2 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли по порциям 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, полученный остаток промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (71,7 г, 100%)
[01125] Стадия 2: метил 5-бром-2-метил-3-нитробензол
[01126] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилиодид (626,63 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения осажденное твердое вещество фильтровали, остаток промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого неочищенного соединения (302 г, 99%), которое использовали без дополнительной очистки.
[01127] Стадия 3: метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоат
[01128] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и порошок железа (93,3 г, 1636 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали через целит с промывкой водой и этилацетатом, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения, которое использовали далее как таковое.
[01129] Стадия 4: метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоат
[01130] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (0,3 г, 1,33 ммоль) и циклопентанона (0,56 г, 6,6 ммоль) в метаноле (3 мл) добавляли уксусную кислоту (0,159 г, 2,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,208 г, 3,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество использовали как таковое на следующей стадии.
[01131] Стадия 5: Синтез метил 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата
[01132] Раствор метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (1 г, 3,22 ммоль), CS2CO3 (2,10 г, 6,45 ммоль) и метилиодида (2,3 г, 16,12 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) нагревали при 80°C в течение 14 часов. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, реакционную смесь фильтровали. Фильтрат концентрировали и полученный остаток очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,9 г, 86%).
[01133] Стадия 6: 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01134] Водный раствор NaOH (0,166 г, 4,15 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата (0,9 г, 2,76 ммоль) в воде (2,2 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,85 г, 98%).
[01135] Кислоту (0,85 г, 2,73 ммоль) затем растворяли в DMSO (10 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,83 г, 5,46 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (2,13 г, 4,09 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом, затем простым эфиром с получением желаемого соединения (0,450 г, 37%).
[01136] Стадия 7: трет-бутил 4-(3-(циклопентил(метил)амино)-5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенил)-5,6-дигидропиридин-l(2H)-карбоксилат
[01137] К дегазированному раствору 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1,0 г, 2,24 ммоль) и бороновой кислоты (0,833 г, 2,69 ммоль) в диоксане (20 мл) добавляли Pd(PPh3)4 (0,260 г, 0,224 ммоль, 0,1 экв.) и раствор снова продували аргоном в течение 20 минут. К реакционной смеси добавляли водный раствор Na2CO3 (0,857, 8,08 ммоль) в 1 мл воды и реакционную смесь снова продували аргоном в течение 20 минут. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 90 минут. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и выливали в холодную воду и экстрагировали дихлорметаном. Неочищенное соединение очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,900 г, 64%).
[01138] Стадия 8: 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)бензамид
[01139] К перемешиваемому раствору трет-бутил 4-(3-(циклопентил(метил)амино)-5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (0,800 г, 1,45 ммоль) в DCM добавляли TFA (3 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия до доведения до pH 8 и водный слой экстрагировали при помощи 20% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали препаративной ВЭЖХ, с получением желаемого соединения (0,620 г, 95%).
[01140] Стадия 9: 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(l -метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)бензамид
[01141] 3-(Циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)бензамид (0,100 г, 0,223 ммоль) растворяли в метаноле (5 мл), охлаждали до 0°C и добавляли формалин (0,067 г, 0,19 мл, 2,23 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли цианоборогидрид натрия (0,041 г, 0,66 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду, экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,065 г, 63%): ЖХМС: 463,40 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,79% (@ 254 нм) (Rt; 3,911; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,43 (с, 1H), 8,04 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,17 (с, 1H), 6,95 (с, 1H), 6,07 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,45 (м, 1H), 2,98 (шир.с, 2H), 2,53 (м, 2H), 2,42 (шир.с, 2H), 2,26 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,67 (м, 2H), 1,59 (м, 2H), 1,49 (м, 2H), 1,40 (м, 2H).
[01142] Пример 13: Синтез соединения 17: 3-((1-ацетилпиперидин-4-ил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 17
[01143] 5-Бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидине-4-ил)амино)бензамид (0,2 г, 0,447 ммоль) растворяли в DMSO (2 мл) и к смеси добавляли уксусную кислоту (0,054 г, 0,896 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,342 г, 0,672 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем очищали колоночной хроматографией с использованием диоксида кремния (размер 100-200 меш) с получением желаемого соединения (0,15 г, 17%). ЖХМС: 503,20 (M + 1)+; ВЭЖХ: 96,06% (@ 254 нм) (Rt; 5,143; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,48 (с, 1H), 8,21 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,23 (д, 1H, J=1,6 Гц), 7,04 (д, 1H, J=1,6 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,32 (д, 1H, J=12,4 Гц), 4,23 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,77 (д, 1H, J=13,2 Гц), 2,98 (т, 2H, J=11,2 Гц), 2,54 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,97 (с, 3H), 1,53-1,60 (м, 4H), 1,38-1,41 (м, 1H).
[01144] Пример 14: Синтез Соединения 18: 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метилпиперидин-4-ил)бензамид
[01145] К раствору 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)бензамида (0,045 г, 0,097 ммоль) в этаноле добавляли 10% Pd/C и реакционную смесь перемешивали под давлением баллона Н2. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, реакционную смесь фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали и растирали в порошок с ацетонитрилом и фильтровали с получением желаемого соединения (0,030 г, 66%): ЖХМС: 465,40 (M + 1)+; ВЭЖХ: 95,39% (@ 254 нм) (Rt; 3,884; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 7,98 (т, 1H), 7,00 (с, 1H), 6,77 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,42 (м, 1H), 2,84 (д, 2H, J=11,2 Гц), 2,47 (с, 3H), 2,37 (м, 1H), 2,18 (с, 6H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,93 (т, 2H, J=10,8 Гц), 1,70-1,55 (м, 8H), 1,48 (м, 2H), 1,38 (м, 2H).
[01146] Пример 15: Синтез соединения 20: 3-(циклопентил-(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)-метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид
Соединение 20
[01147] Стадия 1: Синтез 2-метил-3-нитро-5-(трифторметил)-бензойной кислоты
[01148] 2-метил-5-(трифторметил)бензойную кислоту (4 г, 19,6 ммоль) добавляли к охлажденной концентрированной H2SO4 (27 мл) при -10°C небольшими порциями. Через 10 минут нитрующую смесь {полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (2,77 г, 44,44 ммоль) с концентрированной H2SO4 (3,6 мл)} добавляли по каплям при -10°C. Полученный раствор перемешивали при -10°C в течение 30 минут. После завершения реакционную смесь выливали в ледяную воду. Твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением 2-метил-3-нитро-5-(трифторметил)-бензойной кислоты (4,95 г, 99%).
[01149] Стадия 2: Синтез метил 2-метил-3-нитро-5-(трифторметил)бензоата
[01150] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитро-5-(трифторметил) бензойной кислоты (1 г, 4,01 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли карбонат натрия (0,63 г, 6,02 ммоль) и метилиодид (1,14 г, 8,03 ммоль). Полученную смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и продукт экстрагировали с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с получением метил 2-метил-3-нитро-5-(трифторметил)бензоата (1 г, 95,2%).
[01151] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-2-метил-5-(трифторметил)бензоата
[01152] К перемешиваемому раствору метил 2-метил-3-нитро-5-(трифторметил)бензоата (5,6 г, 20,97 ммоль) в этаноле (40 мл) добавляли хлорид аммония (5,6 г, 104,6 ммоль), растворенный в воде (30 мл), и порошок железа (4,67 г, 85,16 ммоль). Полученную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения к реакционной смеси добавляли воду, затем смесь фильтровали через целит. Фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, затем концентрировали при пониженном давлении с получением метил 3-амино-2-метил-5-(трифторметил)бензоата.
[01153] Стадия 4: Синтез метил 3-(циклопентиламино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата
[01154] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (2,5 г, 10,7 ммоль) и циклопентанона (4,5 г, 53,49 ммоль) в метаноле (25 мл) добавляли уксусную кислоту (1,98 г, 21,44 ммоль). Через 3 часа добавляли цианоборогидрид натрия (1,68 г, 24,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением метил 3-(циклопентиламино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (1,8 г, 55,9%).
[01155] Стадия 5: Синтез метил 3-(циклопентил(метил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата
[01156] К перемешиваемому раствору метил 3-(циклопентиламино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (1,6 г, 5,38 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) добавляли карбонат цезия (3,5 г, 10,7 ммоль) и метилиодид (3,8 г, 26,8 ммоль). Смесь нагревали при 80°C в течение 8 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали с получением метил 3-(циклопентил(метил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата.
[01157] Стадия 6: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамида
[01158] Водный раствор NaOH (0,762 г, 15,4 ммоль) добавляли к раствору метил 3-(циклопентил(метил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (2 г, 6,34 ммоль) в MeOH (20 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции метанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Продукт экстрагировали с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением желаемой кислоты (1,5 г, 78%).
[01159] Кислоту (0,5 г, 1,69 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,505 г, 3,32 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем добавляли PYBOP (1,29 г, 2,49 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции смесь выливали на лед с получением твердого вещества. Твердое вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом, затем простым эфиром с получением 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамида (100 мг, 14%).
Аналитические данные: ЖХМС: 436,20 (M + 1)+; ВЭЖХ: 89,22% (@ 254 нм) (Rt; 6,094; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,30 (т, 1H), 7,37 (с, 1H), 7,18 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,51 (м, 1H), 2,53 (с, 3H), 2,25 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,41-1,69 (м, 8H).
[01160] Пример 16: Синтез соединения 21: 3-(циклопентил-(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
Соединение 21
[01161] Стадия 1: Синтез метил 3-амино-2-метилбензоата
[01162] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-метилбензойной кислоты (5 г, 33,1 ммоль) в метаноле (50 мл), добавляли концентрированную H2SO4 (5 мл) при 0°С и смесь нагревали при 70°C в течение 22 часов. После завершения метанол удаляли при пониженном давлении и затем добавляли насыщенный раствор бикарбоната натрия и продукт экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением метил 3-амино-2-метилбензоата (5 г, 91%).
[01163] Стадия 2: Синтез метил 3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата
[01164] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-метилбензоата (2 г, 12,1 ммоль) и циклопентанона (5 г, 60,6 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту (0,72 г, 12,12 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли цианоборогидрид натрия (1,13 г, 18,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и продукт очищали колоночной хроматографией с получением метил 3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (2,2 г, 78%).
[01165] Стадия 3: Синтез метил 3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата
[01166] К перемешиваемому раствору метил 3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (2,2 г, 9,44 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) добавляли карбонат цезия (6,13 г, 18,8 ммоль) и метилиодид (6,7 г, 47,2 ммоль). Полученную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали с промывкой этилацетатом. Фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением метил 3-(циклопентил (метил)амино)-2-метилбензоата (2 г, 85%).
[01167] Стадия 4: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01168] Водный раствор NaOH (0,48 г, 12,14 ммоль) добавляли к раствору метил 3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата (2 г, 8,09 ммоль) в MeOH (20 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции метанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением желаемой кислоты (1,3 г, 69%).
[01169] Кислоту (0,3 г, 1,28 ммоль) затем растворяли в DMSO (5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,39 г, 2,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,99 г, 1,92 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей колоночной очисткой с получением 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,020 г, 4%).
[01170] Аналитические данные: ЖХМС: 368,15 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,49% (@ 254 нм) (Rt; 4,186; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,43 (с, 1H), 8,00 (т, 1H, J=4 Гц), 7,09-7,16 (м, 2H), 6,90 (д, 1H, J=6,8 Гц), 5,84 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=5,2 Гц), 3,41 (т, 1H, J=6,8 Гц), 2,47 (с, 3H), 2,18 (д, 6H, J=4,4 Гц), 2,10 (с, 3H), 1,58-1,67 (м, 4H),1,37-1,52 (м, 4H).
[01171] Пример 17: Синтез соединения 23: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)бензамид
Соединение 23
[01172] 5-Хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)бензамид (0,08 г, 0,192 ммоль) растворяли в метаноле (5 мл), охлаждали до 0°C и добавляли формалин (0,028 г, 0,965 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли цианоборогидрид натрия (0,023 г, 0,38 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду, экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,02 г, 24%): ЖХМС: 431,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,80% (@ 254 нм) (Rt; 4,757; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,15 (д, 1H, J=1,2 Гц), 6,94 (д, 1H, J=2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,05 (шир.с, 2H), 2,88 (шир.с, 1H), 2,55 (с, 3H), 2,44 (шир.с, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,68 (шир.с, 4H).
[01173] Пример 18: Синтез соединения 25: 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)бензамид
Соединение 25
[01174] Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01175] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276,2 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли по порциям 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, полученный остаток промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (71,7 г, 100%).
[01176] Синтез метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола
[01177] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилиодид (626,63 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения осажденное твердое вещество фильтровали, остаток промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого неочищенного соединения (302 г, 99%).
[01178] Стадия 2: метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоат
[01179] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и порошок железа (93,3 г, 1636 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали через целит с промывкой водой и этилацетатом, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения.
[01180] Стадия 3: метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоат
[01181] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (0,3 г, 1,33 ммоль) и циклопентанона (0,56 г, 6,6 ммоль) в метаноле (3 мл) добавляли уксусную кислоту(0,159 г, 2,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,208 г, 3,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении с получением желаемого соединения.
[01182] Стадия 4: метил 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоат
[01183] К перемешиваемому раствору неочищенного метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-мэтилбензоата (0,7 г, 2,25 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) добавляли карбонат цезия (1,47 г, 4,50 ммоль) и метилиодид (1,6 г, 11,26 ммоль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,6 г, 82%).
[01184] Стадия 5: 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01185] Водный раствор NaOH (0,11 г, 2,75 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата (0,6 г, 1,8 ммоль) в MeOH (1,5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,5 г, 87%).
[01186] Кислоту (0,5 г, 1,60 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,49 г, 3,22 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (1,25 г, 2,41 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом, затем простым эфиром с получением желаемого соединения (0,315 г, 44%).
[01187] Стадия 6: 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)бензамид
[01188] Раствор 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 экв.), (2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)бороновой кислоты (1,2 экв.) и Pd(PPh3)4 (0,1 экв.) в 1,4-диоксане (4 мл) продували аргоном в течение 10 минут. Затем к смеси добавляли раствор 2 M Na2CO3 (3,6 экв.) и снова продували аргоном в течение 10 минут. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 часов. После завершения реакции к смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали препаративной ВЭЖХ, с получением желаемого соединения в виде его TFA соли (0,045, 23%). ЖХМС: 505,39 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,95% (@ 254 нм) (Rt; 4,091; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/B; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (MeOD, 400 МГц) δ 7,70 (с, 1H), 7,46 (с, 1H), 6,21 (с, 1H), 6,13 (с, 1H), 4,48 (с, 2H), 4,23 (шир.с, 1H), 3,14 (с, 3H), 2,69 (с, 2H), 2,42 (с, 3H), 2,39 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,92 (, 2H), 1,81 (м, 2H), 1,67 (м, 4H), 1,60 (с, 6H), 1,53 (с, 6H).
[01189] Пример 19: Синтез соединения 26: трет-бутил (4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)амино)циклогексил)карбамат
Соединение 26
[01190] Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01191] К смеси 2-метил-3-нитробензойной кислоты (15 г, 82,80 ммоль) в концентрированной H2SO4 (60 мл) добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (13,07 г, 45,71 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения реакции реакционную смесь медленно выливали на ледяную воду (400 мл). Осадок собирали фильтрованием с получением желаемого соединения (21 г, 98,22%).
[01192] Стадия 2: метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоат
[01193] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (16 г, 61,54 ммоль) в DMF (160 мл) добавляли иодметан (35,72 г, 248 ммоль) и карбонат натрия (26,28 г, 248 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 8 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали и неорганический твердый остаток промывали этилацетатом. Объединенный фильтрат концентрировали в вакууме досуха. Остаток снова растворяли в этилацетате и промывали 5% раствором бикарбоната натрия (700 мл), затем раствором 5M HCl (300 мл). Органический слой в конце промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением желаемого соединения (16 г, 94,50%).
[01194] Стадия 3: метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоат
[01195] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоата (17 г, 62,04 ммоль) в этаноле (85 мл), добавляли раствор NH4Cl (17 г в 85 мл воды, 317,8 ммоль) с последующим добавлением Fe порошка (27,82 г, 498,11 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали досуха с получением твердого вещества, которое растворяли в насыщенном растворе бикарбоната натрия. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением желаемого соединения 4 (15 г, 99%).
[01196] Стадия 4: метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоат
[01197] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5 г, 20,57 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (5,67 г, 26,74 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (1,2 г, 20,57 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (1,68 г, 26,74 ммоль) и реакционную смесь перемешивали 18 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении; добавляли воду и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией с использованием диоксида кремния (размер 100-200 меш) с получением желаемого соединения (3 г, 33%).
[01198] Стадия 5: трет-бутил (4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)амино)циклогексил)карбамат
[01199] Водный раствор NaOH (0,247 г, 6,83 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (1,5 г, 3,41 ммоль) в MeOH (20 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6 и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (1,28 г, 89%).
[01200] Кислоту (1,28 г, 3,01 ммоль) затем растворяли в DMSO (10 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (1,03 г, 6,83 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (2,6 г, 5,12 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 5% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенного твердого вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,75 г, 45%). ЖХМС: 561,15 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,99% (@ 254 нм) (Rt; 6,876,7,080 [смесь диастереомеров]; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,07 (т, 1H, J=4,8 Гц), 6,77 (д, 1H, J=7,6 Гц), 6,66 (с, 1H), 6,51-6,54 (м, 1H), 5,84 (с, 1H), 4,71 (д, 1H, J=7,6 Гц), 4,21-4,22 (м, 2H), 3,44 (шир.с, 1H), 3,19 (шир.с, 1H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,93-2,03 (м, 5H), 1,78 (с, 1H), 1,56-1,72 (м, 3H), 1,37 (с, 9H), 1,26-1,31 (м, 2H).
[01201] Пример 20: Синтез соединения 28: 5-бром-3-(циклогексиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 28
[01202] Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01203] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276,2 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли по порциям 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, полученный остаток промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (71,7 г, 100%).
[01204] Стадия 2: метил 5-бром-2-метил-3-нитробензол
[01205] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилиодид (626,63 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения осажденное твердое вещество фильтровали, остаток промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения (302 г, 99%).
[01206] Стадия 3: метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоат
[01207] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и порошок железа (93,3 г, 1636 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали через целит с промывкой водой и этилацетатом, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединени, которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[01208] Стадия 4: метил 5-бром-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоат
[01209] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (0,3 г, 1,33 ммоль) и циклогексанона (0,64 г, 6,6 ммоль) в метаноле (3 мл) добавляли уксусную кислоту(0,159 г, 2,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,208 г, 3,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и использовали непосредственно на следующей стадии.
[01210] Стадия 5: 5-бром-3-(циклогексиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01211] Водный раствор NaOH (0,049 г, 1,23 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоата (0,2 г, 0,61 ммоль) в MeOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,17 г, 89%).
[01212] Кислоту (0,17 г, 0,54 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,099 г, 0,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,42 г, 0,817 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество очищали препаративной ВЭЖХ с получением желаемого соединения в виде его TFA соли (0,042 г, 15%). ЖХМС: 446,16 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,85% (@ 254 нм) (Rt; 6,918; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,08 (с, 1H), 6,66 (с, 1H), 6,51 (д, 1H, J=0,8 Гц), 5,84 (с, 1H), 4,70 (с, 1H), 4,21 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,24 (с, 1H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,94 (с, 3H), 1,88 (д, 2H, J=10 Гц), 1,69-1,72 (м, 3H), 1,22-1,36 (м, 5H).
[01213] Пример 21: Синтез соединения 30: 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)бензамид
Соединение 30
[01214] Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01215] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276,2 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли по порциям 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, полученный остаток промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (71,7 г, 99,9%), которое использовали для следующей реакции.
[01216] Стадия 2: метил 5-бром-2-метил-3-нитробензол
[01217] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилиодид (626,63 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения осажденное твердое вещество фильтровали, остаток промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения (302 г, 99).
[01218] Стадия 3: метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоат
[01219] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и порошок железа (93,3 г, 1636 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали через целит с промывкой водой и этилацетатом, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения.
[01220] Стадия 4: метил 5-бром-2-метил-3-((1-метилпиперидин-4-ил)амино)бензоат
[01221] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (2 г, 8,23 ммоль) и 1-метилпиперидин-4-она (1,86 г, 16,46 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту (0,5 г, 8,23 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,622 г, 9,87 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,9 г, 33%).
[01222] Стадия 5: метил 5-бром-2-метил-3-(метил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)бензоат
[01223] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-((1-метилпиперидин-4-ил)амино)бензоата (0,6 г, 1,76 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) добавляли карбонат цезия (1,14 г, 3,52 ммоль) и метилиодид (1,2 г, 8,8 ммоль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,5 г, 80%).
[01224] Стадия 6: 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)бензамид
[01225] Водный раствор NaOH (0,11 г, 2,75 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-2-метил-3-(метил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)бензоата (0,5 г, 1,4 ммоль) в MeOH (20 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,42 г, 90%).
[01226] Кислоту (0,5 г, 0,974 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,45 г, 2,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (1,1 г, 2,1 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей очисткой колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,2 г, 30%). ЖХМС: 475,02 (M + 1)+; ВЭЖХ: 94,25% (@ 254 нм) (Rt; 4,570; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,13 (т, 1H, J=4,8 Гц), 6,78 (д, 1H, J=0,8 Гц), 6,60 (д, 1H, J=1,6 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,94 (д, 1H, J=8,8 Гц), 4,22 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,62-3,64 (м, 1H), 3,37-3,46 (м, 3H), 3,11 (с, 3H), 3,09 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,99-2,09 (м, 2H), 1,98 (с, 3H), 1,86-1,93 (м, 2H).
[01227] Пример 22: Синтез соединения 31: 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(изопропил(метил)амино)-2-метилбензамид
Соединение 31
[01228] Стадия 1: Синтез метил 5-бром-3-(изопропиламино)-2-метилбензоат
[01229] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (1 экв.) в метаноле (5 мл) добавляли ацетон (5 экв.) и уксусную кислоту (2 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляли NaBH3CN (3 экв.) при 0°C. Полученную реакционную смесь перемешивали еще в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения растворитель выпаривали и к остатку добавляли воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (выход 80-90%).
[01230] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-3-(изопропил(метил)амино)-2-метилбензоата
[01231] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-(изопропиламино)-2-метилбензоата (0,5 г, 1,75 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли Cs2CO3 (1,02 г, 2,63 ммоль) и метилиодид (1,45 г, 3,5 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 4 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток растворяли в воде и экстрагировали этилацетатом. Полученное неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением продукта, представляющего собой желаемое соединение, без дополнительной очистки (0,39 г).
[01232] Стадия 3: 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(изопропил(метил)амино)-2-метилбензамид
[01233] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-(изопропил(метил)амино)-2-метилбензоата (1 экв.) в этаноле (5 мл) добавляли водный раствор NaOH (1 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 4 часов. После завершения этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли при помощи 1н HCl до pH 6. Водную фазу экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением чистой кислоты (выход 50-60%). К раствору этой кислоты (1 экв.) в DMSO (1,5 мл) добавляли PyBOP (1,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (2 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения добавляли воду и полученнный твердый осадок фильтровали и промывали водой. Затем это твердое вещество перемешивали с ацетонитрилом в течение 10 минут и фильтровали снова с получением чистой целевой молекулы (выход 50-60%).
[01234] ЖХМС: 420,15 (M + 1)+; ВЭЖХ: 93,04% (@ 254 нм) (Rt; 4,791); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,14 (д, 1H, J=1,6 Гц), 7,00 (д, 1H, J=1,2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,16-3,20 (м, 1H), 2,52 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 6H), 1,01 (д, 6H, J=6,4 Гц).
[01235] Пример 23: Синтез соединения 32: 5-бром-N-((4,6-дигидро-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоат
Соединение 32
[01236] Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
[01237] К смеси 2-метил-3-нитробензойной кислоты (15 г, 82,80 ммоль) в концентрированной H2SO4 (60 мл) добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (13,07 г, 45,71 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду (400 мл), осажденное твердое вещество фильтровали и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (21 г, 98%).
[01238] Стадия 2: метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоат
[01239] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (16 г, 61,54 ммоль) в DMF (160 мл) добавляли иодметан (35,72 г, 248 ммоль) и карбонат натрия (26,28 г, 248 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 8 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали и неорганический твердый остаток промывали этилацетатом. Объединенный фильтрат концентрировали в вакууме досуха. Остаток снова растворяли в этилацетате и промывали 5% раствором бикарбоната натрия (700 мл), затем раствором 5M HCl (300 мл). Органический слой в конце промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением желаемого соединения (16 г, 95%).
[01240] Стадия 3: метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоат
[01241] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоата (17 г, 62,04 ммоль) в этаноле (85 мл), добавляли раствор NH4Cl (17 г в 85 мл воды, 317,8 ммоль) с последующим добавлением порошка Fe (27,82 г, 498,11 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали досуха с получением твердого вещества, которое растворяли в насыщенном растворе бикарбоната натрия. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением желаемого соединения (15 г, 99%).
[01242] Стадия 4: метил 5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоат
[01243] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (2 г, 8,23 ммоль) и тетрагидропиран-4-она (1,06 г, 10,66 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту (0,5 г, 8,23 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,62 г, 9,83 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении; добавляли воду и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией с использованием диоксида кремния (размер 100-200 меш) с получением желаемого соединения (1,6 г, 62%).
[01244] Стадия 5: 5-бром-N-((4,6-дигидро-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоат
[01245] Водный раствор NaOH (0,146 г, 3,66 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,6 г, 1,88 ммоль) в MeOH (8 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,515 г, 90%).
[01246] Кислоту (0,515 г, 1,67 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,50 г, 3,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (1 г, 1,98 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 5% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенного твердого вещества, которое очищали колоночной хроматографией, с получением желаемого соединения (0,30 г, 37%). ЖХМС: 447,84 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,78% (@ 254 нм) (Rt:55,753; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,09 (т, 1H, J=4,8 Гц), 6,76 (с, 1H), 6,53 (д, 1H, J=1,6 Гц), 5,84 (с, 1H), 4,82 (д, 1H, J=8 Гц), 4,42 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,85 (д, 2H, J=11,2 Гц), 3,37-3,53 (м, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,95 (с, 3H), 1,81 (д, 2H, J=12,8 Гц), 1,44-1,54 (м, 2H).
[01247] Пример 24: Синтез соединения 33: 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 33
[01248] Стадия 1: Синтез метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата
[01249] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (1 экв.) в метаноле (5 мл) добавляли циклопентанон (5 экв.) и уксусную кислоту (2 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляли NaBH3CN (3 экв.) при 0°C. Полученную реакционную смесь перемешивали еще в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения растворитель выпаривали и к остатку добавляли воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (выход 80-90%).
[01250] Стадия 2: Синтез 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01251] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (1 экв.) в этаноле (5 мл) добавляли водный раствор NaOH (1 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 4 часов. После завершения этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли при помощи 1н HCl до pH 6. Водную фазу экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением чистой кислоты (выход 50-60%). К раствору этой кислоты (1 экв.) в DMSO (1,5 мл) добавляли PyBOP (1,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (2 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения добавляли воду и твердый осадок фильтровали и промывали водой. Это твердое вещество затем перемешивали с ацетонитрилом в течение 10 минут и фильтровали снова с получением чистой целевой молекулы (50-60% выход).
[01252] ЖХМС: 432,10 (M + 1)+; ВЭЖХ: 97,15% (@ 254 нм) (Rt; 6,834); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,09 (т, 1H, J=4,4 & 5,2 Гц), 6,65 (д, 1H, J=1,6 Гц), 6,54 (д, 1H, J=1,6 Гц), 5,84 (с, 1H), 4,85 (д, 1H, J=6 Гц), 4,22 (д, 2H, J=5,2 Гц), 3,73 (м, 1H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,95 (с, 3H), 1,91 (м, 2H), 1,70-1,62 (м, 2H), 1,60-1,45 (м, 4H).
[01253] Пример 25: Синтез соединения 36: 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2,4-диметилбензамид
Соединение 36
[01254] Стадия 1: 5-бром-2,4-диметилбензойная кислота
[01255] К перемешиваемому раствору NaOH (60 г) в воде (1152 мл) добавляли бром (36 мл) по каплям при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение 45 минут при этой же температуре. К реакционной смеси добавляли 2,4-диметилбензойную кислоту (12 г, 79,9 ммоль) при 0°C по порциям и перемешивали реакцию при комнатной температуре в течение 3 часов. После завершения реакции (ТСХ) реакционную смесь подкисляли с использованием концентрированной HCl, твердое вещество фильтровали через воронку Бюхнера и промывали водой и сушили с получением желаемого соединения (12 г, 65%), которое использовали без дополнительной очистки.
[01256] Стадия 2: 5-бром-2,4-диметил-3-нитробензойная кислота
[01257] 5-Бром-2,4-диметилбензойную кислоту (12 г, 52,17 ммоль) добавляли к охлажденной концентрированной H2SO4 (48 мл) при -10°C по порциям. Через 10 минут нитрующую смесь {полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (6 мл,) с концентрированной H2SO4 (24 мл)} добавляли по каплям при -10°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 30 минут. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (13 г, 91%).
[01258] Стадия 3: метил 3-бром-5-нитробензоат
[01259] К перемешиваемому раствору 5-бром-2,4-диметил-3-нитробензойной кислоты (13 г, 47,44 ммоль) в DMF (120 мл) добавляли карбонат натрия (15 г, 142,2 ммоль) и метилиодид (4,4 мл, 71,16 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои промывали насыщенным бикарбонатным раствором и 5н HCl, сушили над сульфатом натрия, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения (12,9 г, 86%).
[01260] Стадия 4: метил 3-амино-5-бром-2,4-диметилбензоат
[01261] К перемешиваемому раствору метил 3-бром-5-нитробензоата (12,9 г, 44,79 ммоль) в этаноле (65 мл) добавляли хлорид аммония (13 г, 223,95 ммоль), растворенный в воде (65 мл), и порошок железа (20 г, 358,33 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь фильтровали через слой целита, слой целита промывали этанолом, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения (11,0 г, 95%).
[01262] Стадия 5: метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2,4-диметилбензоат
[01263] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2,4-диметилбензоата (1,4 г, 5,42 ммоль) и циклопентанона (2,4 мл, 27,13 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту (0,650 г, 10,84 ммоль) реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,85 г, 13,56 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли, добавляли воду и соединение экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой собирали, сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (1,2 г, 68%).
[01264] Стадия 6: метил 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2,4-диметилбензоат
[01265] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2,4-диметилбензоата (0,3 г, 1,07 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли карбонат цезия (0,697 г, 2,14 ммоль) и этилиодид (0,3 мл, 5,38 ммоль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 12 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,3 г, 82%).
[01266] Стадия 7: 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2,4-диметилбензамид
[01267] Водный раствор NaOH (0,022 г, 0,553 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2,4-диметилбензоата (0,125 г, 0,368 ммоль) в EtOH (10 мл) и H2O (1 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении с получением соответствующей кислоты (0,1 г, 84,03%).
[01268] Кислоту (0,1 г, 0,308 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,07 г, 0,462 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,320 г, 0,616 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей очисткой при помощи ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (0,018 г, 12,7%) в виде его TFA соли: ЖХМС: 460,10 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,10% (@ 254 нм) (Rt; 8,291; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,18 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,20 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,51-3,52 (м, 1H), 2,64 (с, 3H), 2,30 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,48-1,59 (м, 6H), 1,31-1,32 (м, 2H).
[01269] Пример 26: Синтез соединения 48: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(N-метилциклопентанкарбоксамидо)бензамид
Соединение 48
[01270] Стадия 1: Синтез 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01271] К перемешиваемой охлажденной льдом (-10 до -15°C) концентрированной H2SO4 (136 мл) добавляли 5-хлор-2-метилбензойную кислоту (20 г, 0,117 ммоль) по порциям. Добавляли по каплям нитрующую смесь [концентрированная H2SO4 (22 мл) и HNO3 (11,05 мл] при температуре -10 до -15°C и полученную смесь оставляли для перемешивания в течение 30 минут. Полученный осадок фильтровали и сушили. Твердое вещество растворяли в этилацетате и сушили (Na2SO4) и концентрировали с получением желаемого продукта (23,6 г, 93%) в виде белого твердого вещества.
[01272] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата
[01273] К раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (23,5 г, 0,109 ммоль) в DMF (120 мл) добавляли карбонат натрия (46,21, 0,436 ммоль) и метилиодид (27,2 мл, 0,43 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 3 часов. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, реакционную смесь фильтровали и остаток промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (16 г, 64%) в виде вязкого масла, которое отверждалось при выстаивании.
[01274] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата
[01275] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (16 г, 69 ммоль) в этаноле (160 мл) добавляли хлорид аммония (16 г, 53,4 ммоль), растворенный в воде (160 мл), и порошок железа (31,2 г, 55,85 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через целит. Фильтрат экстрагировали этилацетатом и объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения (12,10 г, 86%) без дополнительной очистки.
[01276] Стадия 4: Синтез метил 5-хлор-3-(циклопентанкарбоксамидо)-2-метилбензоата
[01277] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (0,4 г, 2,0 ммоль) в пиридине (2 мл) добавляли циклопентилхлорид (0,39 мл, 3,00 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, реакцию гасили ледяной водой. Образовавшийся осадок отфильтровывали с получением желаемого продукта (0,5 г, 84%).
[01278] Стадия 5: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-(N-метилциклопентанкарбоксамидо)бензоата
[01279] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(циклопентанкарбоксамидо)-2-метилбензоата (0,3 г, 1,01 ммоль) в DMF добавляли гидрид натрия (0,060 г, 0,0015 ммоль) при 0°C и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 15 минут. К реакционной смеси добавляли метилиодид (0,32 мл, 0,50 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, реакцию гасили путем добавления воды и экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали. Неочищенное соединение использовали на следующей стадии.
[01280] Стадия 6: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(N-метилциклопентанкарбоксамидо)бензамида
[01281] Водный раствор NaOH (0,077 г, 1,94 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-2-метил-3-(N-метилциклопентанкарбоксамидо)бензоата (0,4 г, 1,2 ммоль) в 4:1 EtOH:Вода (15 мл) и перемешивали при 65°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли при помощи 1н HCl. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,35 г, 91%).
[01282] Кислоту (0,3 г, 0,10 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,309 г, 0,20 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,826 г, 0,155 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом. Конечную очистку осуществляли с использованием препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта в виде TFA соли (0,120 г, 27%).
[01283] ЖХМС: 430,20 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,79% (@ 254 нм) (Rt; 6,086); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,55 (шир.с, 1H), 8,43 (т, 1H), 7,46 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,25 (с, 2H), 3,01 (с, 3H), 2,35 (м, 1H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,06 (с, 3H), 1,70-1,45 (м, 6H), 1,35 (м, 2H).
[01284] Пример 27: Синтез соединения 49: 3-((2аминоэтил)(метил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 49
[01285] Перемешиваемый раствор трет-бутил (2-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)этил)карбамата (0,2 г, 4,2 ммоль) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C и к смеси добавляли TFA (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь концентрировали досуха. Половину полученного вещества очищали путем нескольких промывок растворителем с получением чистого 3-((2-аминоэтил)(метил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида в виде TFA соли (0,060 г, 76%).
[01286] ЖХМС: 377,15 (M + 1)+; ВЭЖХ: 97,57% (@ 254 нм) (Rt; 4,611); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,69 (шир.с, 3H), 7,16 (с, 1H), 6,97 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,07 (т, 2H), 2,96 (м, 2H), 2,59 (с, 3H), 2,18 (с, 6H), 2,10 (с, 3H).
[01287] Остальное количество вещества подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия до доведения до pH 8 и водный слой экстрагировали при помощи 20% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением желаемого соединения в виде свободного основания, которое использовали для следующей реакции (0,075 г).
[01288] Пример 28: Синтез соединения 50: трет-бутил (2-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)этил)карбамат
Соединение 50
[01289] Стадия 1: Синтез метил 3-((2-((трет-бутоксикарбонил)амино)этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[01290] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (1 г, 4,6 ммоль) и трет-бутил (2-оксоэтил)карбамата (1,4 г, 8,8 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,027 г, 4,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,352 г, 4,68 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением желаемого продукта (0,62 г, 38%).
[01291] Стадия 2: Синтез метил 3-((2-((трет-бутоксикарбонил)амино)этил)(метил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[01292] К перемешиваемому раствору метил 3-((2-((трет-бутоксикарбонил)амино)этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (0,5 г, 1,46 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли карбонат цезия (0,95 г, 2,92 ммоль) и метилиодид (1 г, 7,3 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали, затем осуществляли очистку колоночной хроматографией с получением желаемого продукта (0,325 г, 62%).
[01293] Стадия 3: Синтез трет-бутил (2-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)этил)карбамата
[01294] Водный раствор NaOH (0,071 г, 1,79 ммоль) добавляли к раствору метил 3-((2-((трет-бутоксикарбонил)амино)этил)(метил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (0,425 г, 1,19 ммоль) в MeOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата и объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,34 г, 84%).
[01295] Кислоту (0,34 г, 0,99 ммоль) затем растворяли в DMSO (1,5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,300 г, 1,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,77 г, 1,48 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей колоночной очисткой с получением трет-бутил (2-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)этил)карбамата (0,27 г, 58%).
[01296] ЖХМС: 477,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 97,92% (@ 254 нм) (Rt; 6,229); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,17 (т, 1H), 7,07 (с, 1H), 6,88 (с, 1H), 6,78 (шир.с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,07 (т, 2H), 2,84 (т, 2H), 2,62 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,35 (с, 9H).
[01297] Пример 29: Синтез соединения 51: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)-2-метилбензамид
Соединение 51
[01298] 3-((2-Аминоэтил)(метил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид (0,075 г, 0,199 ммоль) растворяли в метаноле (5 мл) и охлаждали до 0°C, добавляли формальдегид (0,056 г, 1,86 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 30 минут, затем к реакционной смеси добавляли цианоборогидрид натрия (0,023 г, 0,366 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и добавляли воду, затем экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)-2-метилбензамида (0,040 г, 50%). ЖХМС: 405,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 89,93% (@ 254 нм) (Rt; 4,634); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,21 (с, 1H), 7,08 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (шир.с, 2H), 2,91 (т, 2H), 2,63 (с, 3H), 2,33-2,35 (м, 2H), 2,11-2,18 (м, 15H).
[01299] Пример 30: Синтез соединения 52: 3-(аллил(циклопентил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 52
[01300] Стадия 1: Синтез метил 3-(аллил(циклопентил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[01301] Метил 5-хлор-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоат (1,2 г, 4,46 ммоль) растворяли в DMF (12 мл) и охлаждали до 0°C. Через 10 минут добавляли NaH (0,21 г, 8,92 ммоль) и аллилбромид (1,07 г, 8,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов и затем нагревали при 80°C в течение 18 часов. Реакцию гасили ледяной водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного метил 3-(аллил(циклопентил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (0,4 г, 29,4%).
[01302] Стадия 2: Синтез 3-(аллил(циклопентил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01303] Водный раствор NaOH (0,078 г, 1,95 ммоль) добавляли к раствору метил 3-(аллил(циклопентил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (0,4 г, 1,30 ммоль) в MeOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата и объединенные органические слои концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,37 г, 97,6%).
[01304] Кислоту (0,25 г, 0,85 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,259 г, 1,74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,66 г, 1,27 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей колоночной очисткой с получением желаемого 3-(аллил(циклопентил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,175 г, 48%).
[01305] ЖХМС: 428,30 (M + 1)+; ВЭЖХ: 96,37% (@ 254 нм) (Rt; 6,357); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,16 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 5,63-5,69 (м, 1H), 4,98 (м, 2H), 4,23 (д, 2H, J=4 Гц), 3,54 (д, 2H, J=5,6 Гц), 3,46-3,50 (м, 1H), 2,18 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,67 (м, 2H), 1,59 (м, 2H), 1,47 (м, 2H), 1,36 (м, 2H).
[01306] Пример 31: Синтез соединения 53: 3-(циклопентил (метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил) метил)-2-метил-5-(пиперазин-1-ил)бензамид
Соединение 53
[01307] Стадия 1: Синтез метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата
[01308] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (3 г, 13,3 ммоль) и циклопентанона (5,6 г, 66 ммоль) в метаноле (30 мл) добавляли уксусную кислоту (1,59 г, 26,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (2,08 г, 29,4 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество использовали без дополнительной очистки.
[01309] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-3-(циклопентил-(метил)амино)-2-метилбензоата
[01310] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (1,6 г, 5,38 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) добавляли карбонат цезия (3,5 г, 10,73 ммоль) и метилиодид (3,87 г, 27,25 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (1,6 г, 95%).
[01311] Стадия 3: Синтез трет-бутил 4-(3-(циклопентил-(метил)амино)-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенил)пиперазин-1-карбоксилата
[01312] Раствор метил 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата (1 г, 3,07 ммоль), трет-бутил пиперазин-1-карбоксилата (0,85 г, 4,61 ммоль) и CS2CO3 (0,5 г, 1,53 ммоль) в толуоле (25 мл) продували аргоном в течение 10 минут. Затем к смеси добавляли Pd2(dba)3 (0,31 г, 0,307 ммоль) и BINAP (0,038 г, 0,061 ммоль) и снова продували аргоном в течение 10 минут. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 8 часов. После завершения к смеси добавляли воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,44 г, 33,3%).
[01313] Стадия 4: Синтез трет-бутил 4-(3-(циклопентил-(метил)амино)-5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенил)пиперазин-1-карбоксилат
[01314] Водный раствор NaOH (0,061 г, 1,53 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил 4-(3-(циклопентил(метил)амино)-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенил)пиперазин-1-карбоксилата (0,44 г, 1,02 ммоль) в MeOH (10 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,3 г, 70%).
[01315] Кислоту (0,3 г, 0,71 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,215 г, 1,43 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,56 г, 1,07 ммоль и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом, затем простым эфиром с получением трет-бутил 4-(3-(циклопентил(метил)амино)-5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенил)пиперазин-1-карбоксилата (0,30 г, 75,7%).
[01316] Стадия 5: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(пиперазин-1-ил)бензамид
[01317] Перемешиваемый раствор трет-бутил 4-(3-(циклопентил(метил)амино)-5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенил)пиперазин-1-карбоксилата (0,30, 0,54 ммоль) в DCM (10 мл) охлаждали до 0°C и к смеси добавляли TFA (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения смесь концентрировали досуха. Половину неочищенного вещества очищали путем промывки растворителем с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (0,01 г, 8,33%).
[01318] ЖХМС: 452,39 (M + 1)+; ВЭЖХ: 83,92% (@ 254 нм) (Rt; 3,825); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,71 (с, 2H), 7,98 (с, 1H), 6,79 (с, 1H), 6,55 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=3,2 Гц), 3,46 (1H в пике растворителя), 3,22-3,26 (м, 8H), 2,50 (3H в пике растворителя), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 6H), 1,41-1,67 (м, 8H).
[01319] Половину неочищенного вещества подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия до доведения до pH 8 и водный слой экстрагировали при помощи 20% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде свободного основания.
[01320] Пример 32: Синтез соединения 54: 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(4-метилпиперазин-1-ил)бензамид
Соединение 54
[01321] 3-(Циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(пиперазин-1-ил)бензамид (свободное основание) (0,100 г, 0,223 ммоль) растворяли в метаноле (5 мл) и охлаждали до 0°С, затем добавляли формалин (0,033 г, 1,1 мл, 2,23 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли цианоборогидрид натрия (0,013 г, 0,22 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением желаемого 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(4-метилпиперазин-1-ил)бензамида (0,037 г, 36%).
[01322] ЖХМС: 466,40 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,18% (@ 254 нм) (Rt; 3,871); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 7,94 (т, 1H), 6,71 (с, 1H), 6,48 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=3,2 Гц), 3,39-3,43 (м, 1H), 3,07 (шир.с, 4H), 2,46 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,08 (с, 3H), 1,66 (м, 2H), 1,59 (м, 2H), 1,39-1,48 (м, 4H).
[01323] Пример 33: Синтез соединения 55: 5-хлор-3-(циклогексил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 55
[01324] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоата
[01325] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (1 г, 5,02 ммоль) и циклогексанона (2,45 г, 25 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,3 г, 5,02 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,63 г, 10,05 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-хлор-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоата (1,2 г, 89,92%).
[01326] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-3-(циклогексил-(этил)амино)-2-метилбензоата
[01327] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоата (1,2 г, 4,3 ммоль) в безводном DMF (15 мл) добавляли карбонат цезия (2,78 г, 8,5 ммоль) и этилиодид (3,35 г, 21,47 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 18 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали и остаток промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-хлор-3-(циклогексил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,25 г, 22,7%).
[01328] Стадия 3: Синтез 5-хлор-3-(циклогексил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01329] Водный раствор NaOH (0,065 г, 1,61 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(циклогексил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,25 г, 0,809 ммоль) в EtOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,22 г, 92%).
[01330] Кислоту (0,22 г, 0,745 ммоль) затем растворяли в DMSO (2 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,246 г, 1,49 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,58 г, 1,11 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции смесь выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом. Конечная колоночная очистка давала 5-хлор-3-(циклогексил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид (0,200 г, 46,6%). ЖХМС: 430,20 (M + 1)+; ВЭЖХ: 92,49% (@ 254 нм) (Rt; 5,264); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,12 (с, 1H), 6,91 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,01-3,03 (м, 2H), 2,64-2,66 (м, 1H), 2,18 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,68 (м, 4H), 1,51-1,53 (м, 1H), 1,07-1,34 (м, 5H), 0,78 (т, 3H, J=6,8 Гц).
[01331] Пример 34: Синтез соединения 56: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамид
Соединение 56
[01332] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
[01333] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (1 г, 5,02 ммоль) и тетрагидропиран-4-она (2,5 г, 25 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,3 г, 5,02 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,63 г, 10,05 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-хлор-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,5 г, 35,5%).
[01334] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
[01335] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,5 г, 1,76 ммоль) в безводном CAN (15 мл) добавляли карбонат цезия (1,2 г, 3,68 ммоль) и этилиодид (2,7 г, 17,3 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 18 часов. После завершения смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, и остаток промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого метил 5-хлор-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (0,180 г, 34%).
[01336]
[01337] Стадия 3: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
[01338] Водный раствор NaOH (0,05 г, 1,22 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (0,18 г, 0,608 ммоль) в EtOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата и объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,15 г, 87%).
[01339] Кислоту (0,15 г, 0,530 ммоль) затем растворяли в DMSO (1 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,160 г, 1,06 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,413 г, 0,79 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и очищали на колонке с силикагелем с получением 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,100 г, 43,88%). ЖХМС: 432,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 90,46% (@ 254 нм) (Rt; 4,833); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,22 (т, 1H), 7,19 (с, 1H), 6,96 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4 Гц), 3,81 (д, 2H, J=10 Гц), 3,20-3,21 (м, 2H), 2,94-3,02 (м, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,48-1,61 (м, 4H), 0,78 (т, 3H, J=6,4 Гц).
[01340] Пример 35: Синтез соединения 57: 5-хлор-3-(циклогептил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 57
[01341] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-(циклогептиламино)-2-метилбензоата
[01342] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (1 г, 5,02 ммоль) и циклогептанона (2,81 г, 25 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту(0,3 г, 5,02 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,65 г, 10,05 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением 5-хлор-3-(циклогептиламино)-2-метилбензоата (0,8 г, 56,2%).
[01343] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-3-(циклогептил (этил)амино)-2-метилбензоат
[01344] К перемешиваемому раствору 5-хлор-3-(циклогептиламино)-2-метилбензоата (0,8 г, 2,70 ммоль) в безводном DMF (10 мл) добавляли карбонат цезия (1,76 г, 5,4 ммоль) и этилиодид (2,11 г, 13,5 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 18 часов. После завершения смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали, затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого метил 5-хлор-3-(циклогептил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,220 г, 25%).
[01345] Стадия 3: Синтез 5-хлор-3-(циклогептил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01346] Водный раствор NaOH (0,04 г, 1,02 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(циклогептил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,22 г, 0,68 ммоль) в EtOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,18 г, 85%).
[01347] Кислоту (0,18 г, 0,585 ммоль) затем растворяли в DMSO (1,5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,177 г, 1,16 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,45 г, 0,87 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом, затем подвергали колоночной очистке с получением 5-хлор-3-(циклогептил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,100 г, 38,7%). ЖХМС: 444,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 89,74% (@ 254 нм) (Rt; 5,933); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,07 (с, 1H), 6,88 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4 Гц), 3,02-3,03 (м, 2H), 2,77 (шир.с, 1H), 2,18 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,76 (м, 2H), 1,59-1,62 (м, 4H), 1,46 (м, 4H), 1,28 (м, 2H), 0,78 (т, 3H, J=6 Гц).
[01348] Пример 36: Синтез соединения 58: Цис-3-((4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 58
[01349] Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01350] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276,2 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли по порциям 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, осажденное твердое вещество фильтровали, полученный остаток промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого соединения (71,7 г, 100%), которое использовали как таковое на последующих стадиях.
[01351] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола
[01352] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилиодид (626,63 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения осажденное твердое вещество фильтровали, остаток промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения (302 г, 99%), которое использовали как таковое на последующих стадиях.
[01353] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата
[01354] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и порошок железа (93,3 г, 1636 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали через целит; остаток промывали водой и этилацетатом, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого соединения, которое использовали на последующих стадиях без дополнительной очистки.
[01355] Стадия 4: Синтез цис и транс метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата
[01356] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5 г, 20,57 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (5,6 г, 26,7 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (1,2 г, 20,57 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (1,6 г, 26,74 ммоль) при 0oC и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией два раза, элюируя смесью этилацетат:гексан, с получением (4 г, 44%) менее полярного цис-изомера и (3 г, 33%) чистого более полярного транс изомера.
[01357] Стадия 5: Синтез цис-изомера метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата
[01358] К перемешиваемой смеси цис-изомера метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (4 г, 9,09 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавляли карбонат цезия (5,9 г, 18,18 ммоль) и метилиодид (6,45 г, 45,45 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали с получением желаемого неочищенного соединения, которое затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (1,4 г, 34%).
[01359] Стадия 6: Синтез цис-трет-бутил (4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
[01360] Водный раствор NaOH (0,23 г, 5,72 ммоль) добавляли к раствору цис-метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,3 г, 2,86 ммоль) в MeOH (20 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (1,13 г, 90,1%).
[01361] Кислоту (1,13 г, 2,57 ммоль) затем растворяли в DMSO (10 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,87 г, 5,72 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (2,23 г, 4,28 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей очисткой колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,8 г, 49%).
[01362] Стадия 7: Синтез Цис-3-((4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01363] Перемешиваемый раствор цис-трет-бутил (4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,8 г, 1,39 ммоль) в DCM (25 мл) охлаждали до 0°C и к смеси добавляли TFA (5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия до доведения до pH 8 и водный слой экстрагировали при помощи 20% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением желаемого соединения (600 мг, 91% выход). ЖХМС: 475,15 (M + 1)+; ВЭЖХ% 95,88(@ 254 нм) (Rt; 4,832; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 8,22 (т, 1H), 7,20 (с, 1H), 7,01 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=3,6 Гц), 2,82-2,86 (м, 2H), 2,53 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,82-1,84 (м, 2H), 1,34-1,44 (м, 6H).
[01364] 100 мг цис-3-((4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (свободное основание) затем растворяли в метанольном растворе HCl (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения образования соли растворитель удаляли при пониженном давлении и полученное твердое вещество очищали путем промывки диэтиловым эфиром с получением соответствующей HCl соли. Аналитические данные HCl соли: ЖХМС: 475,20(M + 1)+; ВЭЖХ% 96,09(@ 254 нм) (Rt; 4,818; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,51 (с, 1H), 8,28 (т, 1H), 8,08 (с, 3H), 7,31 (с, 1H), 7,08 (с, 1H), 5,90 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,05-3,13 (м, 2H), 2,54 (с, 3H), 2,19 (с, 6H), 2,12 (с, 3H), 1,83 (м, 2H), 1,66 (м, 2H), 1,59-1,60 (м, 2H), 1,46 (м, 2H).
[01365] Пример 37: Синтез соединений 59: Транс-3-((4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 59
[01366] Стадия 1: Синтез транс-метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата
[01367] К перемешиваемому раствору транс-метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (3 г, 6,81 ммоль) в ацетонитриле (40 мл) добавляли карбонат цезия (4,4 г, 13,62 ммоль) и метилиодид (4,83 г, 34,05 ммоль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали с получением желаемого неочищенного соединения, которое затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (1,3 г, 43%).
[01368] Стадия 2: Синтез транс-трет-бутил (4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
[01369] Водный раствор NaOH (0,23 г, 5,72 ммоль) добавляли к раствору транс-метил 5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,3 г, 2,86 ммоль) в MeOH (20 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6 и до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, фильтровали и концентрировали с получением соответствующей кислоты (1 г, 83%).
[01370] Кислоту (1 г, 2,27 ммоль) затем растворяли в DMSO (5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,65 г, 4,54 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (1,7 г, 3,4 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей очисткой колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,7 г, 54%).
[01371] Стадия 3: Синтез транс-3-((4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01372] Перемешиваемый раствор транс-трет-бутил (4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,7 г, 1,21 ммоль) в DCM (8 мл) охлаждали до 0°C и к смеси добавляли TFA (2,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия до доведения до pH 8 и водный слой экстрагировали при помощи 20% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем очищали путем нескольких промывок растворителем, с получением желаемого соединения (0,5 г, 86%). ЖХМС: 475,20 (M + 1)+; ВЭЖХ% 92,35(@ 254 нм) (Rt; 4,416; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5%B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 8,21 (т, 1H), 7,18 (с, 1H), 7,01 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H), 2,63-2,66 (м, 2H), 2,55 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 6H), 1,79-1,82 (м, 2H), 1,60 (м, 2H), 1,46-1,49 (м, 2H), 1,06-1,09 (м, 2H).
[01373] 100 мг транс-3-((4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (свободное основание) затем растворяли в метанольном растворе HCl (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения образования соли растворитель удаляли при пониженном давлении и полученное твердое вещество очищали путем промывки диэтиловым эфиром с получением соответствующей HCl соли. Аналитические данные HCl соли: ЖХМС: 475,20(M + 1)+; ВЭЖХ% 91,40(@ 254 нм) (Rt; 4,408; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,51 (с, 1H), 8,28 (т, 1H), 8,06 (с, 3H), 7,31 (с, 1H), 7,08 (с, 1H), 5,89 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,4 Гц), 2,92 (шир.с, 1H), 2,62-2,91 (м, 4H), 2,19 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,97 (д, 2H, J=10,8 Гц), 1,70 (м, 2H), 1,53-1,56 (м, 2H), 1,31-1,34 (м, 2H).
[01374] Пример 38: Синтез соединения 60: цис-3-((4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
Соединение 60
[01375] К перемешиваемому раствору соединения цис-3-((4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (свободное основание) (0,225, 0,474 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли EDCI.HCl (0,138 г, 0,718 ммоль), HOBt (0,064 г, 0,47 ммоль), триэтиламин (0,1 г, 0,99 ммоль) и уксусную кислоту (0,057 г, 0,949 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали при этой же температуре в течение 18 часов. После завершения добавляли воду и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества; которое затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,17 г, 72%). ЖХМС: 517,25(M + 1)+; ВЭЖХ% 95,83(@ 254 нм) (Rt; 4,894; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,22 (т, 1H), 7,76 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,23 (с, 1H), 7,03 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,71 (шир.с, 1H), 2,89 (м, 1H), 2,53 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (с, 3H), 1,74-1,76 (м, 2H), 1,53 (м, 2H), 1,39 (м, 4H).
[01376] Пример 39: Синтез соединений 61: Транс-3-((4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 61
[01377] К перемешиваемому раствору транс-3-((4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,225, 0,474 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли EDCI.HCl (0,138 г, 0,718 ммоль), HOBt (0,064 г, 0,47 ммоль), триэтиламин (0,1 г, 0,99 ммоль) и уксусную кислоту (0,057 г, 0,949 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали при этой же температуре в течение 18 часов. После завершения добавляли воду и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества; которое затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого соединения (0,13 г, 53%).
[01378] ЖХМС: 517,20 (M + 1)+; ВЭЖХ% 93,92(@ 254 нм) (Rt; 4,713; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,65 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,18 (с, 1H), 7,01 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,42-3,44 (м, 1H), 2,68-2,71 (м, 1H), 2,56 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 6H), 1,77-1,80 (м, 2H), 1,74 (с, 3H), 1,62-1,65 (м, 2H), 1,46-1,54 (м, 2H), 1,07-1,23 (м, 2H).
[01379] Пример 40: Синтез соединения 62: 2-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамид
Соединение 62
[01380] Стадия 1: метил 2-бром-3-нитробензоат
[01381] К перемешиваемому раствору 2-бром-3-нитробензоата (3 г, 12,19 ммоль) в DMF (33 мл) добавляли карбонат натрия (5,16 г, 48,67 ммоль) и метилиодид (6,92 г, 48,67 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения к смеси добавляли воду и экстрагирование осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного метил 2-бром-3-нитробензоата (4 г, неочищенный).
[01382] Стадия 2: Синтез метил 3-амино-2-бромбензоата
[01383] К перемешиваемому раствору метил 2-бром-3-нитробензоата (4 г, 15,38 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляли хлорид аммония (4 г, 74,07 ммоль), растворенный в воде (20 мл), и порошок железа (6,88 г, 123 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения к смеси добавляли воду и фильтровали через целит. Фильтрат экстрагировали этилацетатом и объединенные органические слои промывали водой и раствором бикарбоната натрия, сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого метил 3-амино-2-бромбензоата (3 г, 85%), который использовали без дополнительной очистки.
[01384] Стадия 3: Синтез метил 2-бром-3-(циклопентиламино)бензоата
[01385] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-бромбензоата (3 г, 13,0 ммоль) и циклопентанона (5,4 г, 64,28 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту (1,56 г, 26 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (2 г, 31,7 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением метил 2-бром-3-(циклопентиламино)бензоата (1,4 г, 36%).
[01386] Стадия 4: Синтез метил 2-бром-3-(циклопентил (метил)амино)бензоата
[01387] К перемешиваемому раствору метил 2-бром-3-(циклопентиламино)бензоата (1,4 г, 4,69 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли карбонат цезия (3 г, 9,2 ммоль) и метилиодид (3,38 г, 23,3 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали и остаток промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением метил 2-бром-3-(циклопентил (метил)амино)бензоата (1,1 г, 75%).
[01388] Стадия 5: Синтез 2-бром-3-(циклопентил (метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида
[01389] Водный раствор NaOH (0,064 г, 1,6 ммоль) добавляли к раствору метил 2-бром-3-(циклопентил(метил)амино)бензоата (0,25 г, 0,801 ммоль) в MeOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,2 г, 84%).
[01390] Кислоту (0,2 г, 0,67 ммоль) затем растворяли в DMSO (1,5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,204 г, 1,34 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,516 г, 1,00 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции смесь выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом. Конечная очистка препаративной ВЭЖХ давала 2-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамид в виде TFA соли (0,02 г, 6,89%). ЖХМС: 432,10 (M + 1)+; ВЭЖХ% 96,05(@ 254 нм) (Rt; 4,908); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,26-7,29 (м, 2H), 6,94 (д, 1H, J=8 Гц), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, 2H), 3,59 (м, 1H), 2,56 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,61-1,67 (м, 4H), 1,46 (шир.с, 4H).
[01391] Пример 41: Синтез соединения 63: 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-винилбензамида
Соединение 63
[01392] Стадия 1: метил 2-бром-3-нитробензоата
[01393] К перемешиваемому раствору 2-бром-3-нитробензойной кислоты (3 г, 12,19 ммоль) в DMF (30 мл) добавляли карбонат натрия (5,16 г, 48,6 ммоль) и метилиодид (6,92 г, 48,7 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения осажденное твердое вещество фильтровали, остаток промывали этилацетатом (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого неочищенного 2-бром-3-нитробензоата (4 г, 99%), который использовали без дополнительной очистки.
[01394] Стадия 2: Синтез метил 3-амино-2-бромбензоата
[01395] К перемешиваемому раствору указанного выше неочищенного 2-бром-3-нитробензоата (4 г, 15,38 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляли хлорид аммония (4 г, 74,0 ммоль), растворенный в воде (20 мл), и порошок железа (6,87 г, 123 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали через целит, с промывкой водой и этилацетатом и фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением желаемого неочищенного продукта (3 г).
[01396] Стадия 3: Синтез метил 2-бром-3-(циклопентиламино)бензоата
[01397] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-бромбензоата (3 г, 13,01 ммоль) и циклопентанона (5,6 г, 66 ммоль) в метаноле (30 мл) добавляли уксусную кислоту (1,59 г, 26,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (2,08 г, 29,4 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением метил 2-бром-3-(циклопентиламино)бензоата (1,4 г, 36%).
[01398] Стадия 4: Синтез метил 2-бром-3-(циклопентил (метил)амино)бензоата
[01399] К перемешиваемому раствору метил 2-бром-3-(циклопентиламино)бензоата (1,4 г, 4,69 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) добавляли карбонат цезия (3,0 г, 9,2 ммоль) и метилиодид (3,38 г, 23,4 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали и остаток промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением желаемого метил 2-бром-3-(циклопентил(метил)амино)бензоата (1,1 г, 75%).
[01400] Стадия 5: Синтез метил 3-(циклопентил(метил)амино)-2-винилбензоата
[01401] К перемешиваемому раствору метил 2-бром-3-(циклопентил(метил)амино)бензоата (1 экв.) и 4,4,5,5-тетраметил-2-винил-1,3,2-диоксаборолана (1,2 экв.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл), Na2CO3 (3,6 экв.) и раствор продували аргоном в течение 15 минут. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.) и продували аргоном в течение 10 минут и реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 часов. После завершения реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением желаемого метил 3-(циклопентил(метил)амино)-2-винилбензоата.
[01402] Стадия 6: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-винилбензамида
[01403] К перемешиваемому раствору метил 3-(циклопентил(метил)амино)-2-винилбензоата (1 экв.) в этаноле (10 мл) добавляли водный раствор NaOH (1,5 экв. в 10 мл воды) и реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 4 часов. После завершения этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли при помощи 1н HCl до pH 6. Осадок фильтровали, промывали водой и сушили с получением соответствующей чистой кислоты.
[01404] К раствору этой соответствующей кислоты (1 экв.) в DMSO (10 мл) добавляли PyBOP (1,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (2 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения добавляли воду и полученное твердое вещество фильтровали и промывали водой. Это твердое вещество перемешивали с ацетонитрилом в течение 10 минут и фильтровали снова с получением 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-винилбензамида, который очищали препаративной ВЭЖХ, с получением TFA соли (0,045 г, 10,39%). ЖХМС: 380,25 (M + 1)+; ВЭЖХ% 98,00(@254 нм)(Rt; 4,323); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,51 (с, 1H), 8,01 (с, 1H), 7,25 (шир.с, 2H), 6,81-6,88 (м, 2H), 5,85 (с, 1H), 5,49 (д, 1H, J=18 Гц), 5,40 (шир.с, 1H), 4,34 (3H сливается с пиком растворителя), 4,19 (д, 3H, J=4,8 Гц), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,61 (м, 4H), 1,47 (шир.с, 4H).
[01405] Пример 42: Синтез соединения 64: 5-хлор-3-(циклопентил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Соединение 64
[01406] Стадия 1: Синтез 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01407] 5-Хлор-2-метилбензойную кислоту (4 г, 23,39 ммоль) добавляли к охлажденной концентрированной H2SO4 (27 мл) при -10°C по порциям. Через 10 минут нитрующую смесь [полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (3,3 г, 52,68 ммоль) с концентрированной H2SO4 (4,4 мл)] добавляли по каплям при -10°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 30 минут. После завершения смесь выливали на ледяную воду и полученнный твердый осадок фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемой хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (4,95 г, 99%).
[01408] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата
[01409] К перемешиваемому раствору хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (6,75 г, 31,25 ммоль) в DMF (33 мл) добавляли карбонат натрия (13,23 г, 125,18 ммоль) и метилиодид (17,77 г, 125,2 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения добавляли воду и экстрагировали с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния (размер 60-120 меш) с получением метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6 г, 83,65%).
[01410] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-хлор-2-метил бензоата
[01411] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6 г, 26,13 ммоль) в этаноле (60 мл) добавляли хлорид аммония (6 г, 112,1 ммоль), растворенный в воде (60 мл), и порошок железа (11,88 г, 208,4 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и смесь фильтровали через целит. Фильтрат экстрагировали этилацетатом и объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата, который использовали без дополнительной очистки.
[01412] Стадия 4: Синтез метил 5-хлор-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата
[01413] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (1 г, 5,02 ммоль) и циклопентанона (2,1 г, 25 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,3 г, 5,02 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (0,37 г, 5,90 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-хлор-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (0,62 г, 46,2%).
[01414] Стадия 5: Синтез метил 5-хлор-3-(циклопентил (этил)амино)-2-метилбензоата
[01415] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (0,62 г, 2,32 ммоль) в безводном DMF (10 мл) добавляли карбонат цезия (3,78 г, 11,6 ммоль) и этилиодид (5,43 г, 34,8 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 18 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением желаемого метил 5-хлор-3-(циклопентил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,101 г, 15%).
[01416] Стадия 6: Синтез 5-хлор-3-(циклопентил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01417] Водный раствор NaOH (0,1 г, 2,5 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(циклопентил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,5 г, 1,69 ммоль) в EtOH (10 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата и объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,41 г, 86%).
[01418] Кислоту (0,10 г, 0,355 ммоль) затем растворяли в DMSO (1,5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,104 г, 0,77 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,277 г, 0,533 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции смесь выливали на лед и полученное твердое вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующими промывками растворителем с получением 5-хлор-3-(циклопентил (этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,107 г, 72%). ЖХМС: 416,25 (M + 1)+; ВЭЖХ% 91,83(@ 254 нм) (Rt; 5,021); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,19 (с, 1H), 6,95 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4 Гц), 3,45 (т, 1H), 2,94-2,96 (м, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,58-1,64 (м, 4H), 1,47 (м, 2H), 1,32 (м, 2H), 0,77 (т, 3H, J=6,8 Гц).
[01419] Пример 43: Синтез соединения 19: 5-бром-2-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида
Соединение 19
[01420] Стадия 1: Синтез 5-бром-2-хлор-3-нитробензойной кислоты:
[01421] 5-бром-2-хлорбензойную кислоту (5 г, 27,3 ммоль) добавляли к охлажденной концентрированной H2SO4 (20 мл) при -10°C небольшими порциями. Через 10 минут нитрующую смесь {полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (2,5 мл) с концентрированной H2SO4 (10 мл)} добавляли по каплям при -10°C. Реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 30 минут. После завершения реакционную смесь выливали в ледяную воду и твердое вещество собирали фильтрованием. Твердое вещество промывали водой и сушили в вакууме с получением 5-бром-2-хлор-3-нитробензойной кислоты: (3,6 г, 60,5%).
[01422] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-2-хлор-3-нитробензоата:
[01423] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-хлор-3-нитробензойной кислоты (3,6 г, 12,9 ммоль) в DMF (40 мл) добавляли карбонат натрия (4,1 г, 38,6 ммоль) и метилиодид (4 мл, 64,3 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и продукт экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным бикарбонатным раствором и 5н HCl. Органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением метил 5-бром-2-хлор-3-нитробензоата (3,4 г, 89,9%).
[01424] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-бром-2-хлорбензоата:
[01425] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-хлор-3-нитробензоата (3,4 г, 11,6 ммоль) в этаноле (19 мл) добавляли хлорид аммония (3,4 г, 57,8 ммоль), растворенный в воде (30 мл), и порошок железа (5,16 г, 92,5 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь фильтровали через целит с промывкой этанолом и этилацетатом. Фильтрат экстрагировали этилацетатом и объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением метил 3-амино-5-бром-2-хлорбензоата (2,8 г, 92,1%).
[04426] Стадия 4: Синтез метил 5-бром-2-хлор-3-(циклопентиламино)бензоата:
[01427] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-хлорбензоата (2,8 г, 10,6 ммоль) и циклопентанона (4,47 г, 53,2 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту (1,3 мл, 21,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (1,7 г, 26,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и продукт очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-бром-2-хлор-3-(циклопентиламино)бензоата (0,5 г, 14,2%).
[01428] Стадия 5: Синтез метил 5-бром-2-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)бензоата:
[01429] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-хлор-3-(циклопентиламино)бензоата (0,550 г, 1,65 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) добавляли карбонат цезия (1,08 г, 3,31 ммоль) и метилиодид (1,17 г, 8,25 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением метил 5-бром-2-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)бензоата (0,350 г, 61%).
[01430] Стадия 6: Синтез 5-бром-2-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида
[01431] Водный раствор NaOH (0,06 г, 1,52 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-2-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)бензоата (0,350 г, 1,01 ммоль) в EtOH (4 мл) и воде (1 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Продукт экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением желаемой кислоты (0,266 г, 79,4%).
[01432] Кислоту (0,265 г, 0,80 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,243 г, 1,60 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем добавляли PYBOP (0,624 г, 1,20 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества. Твердое вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с последующей очисткой колоночной хроматографией и препаративной ВЭЖХ с получением 5-бром-2-хлор-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида (0,012 г, 3,22%).
[01433] Аналитические данные: ЖХМС: 466,05 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,28% (@ 254 нм) (Rt; 6,917; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (CD3OD, 400 МГц) δ 7,42 (д, 1H, J=2 Гц), 7,24 (д, 1H, J=1,6 Гц), 6,16 (с, 1H), 4,66 (с, 2H), 3,71 (м, 1H), 2,70 (с, 3H), 2,37 (с, 3H), 2,25 (с, 3H), 1,79 (м, 2H), 1,70 (м, 2H), 1,56 (м, 4H).
[01434] Пример 44: Способы синтеза соединений 91, 92, 97, 98, 102, 104, 105, 117-123, 126, 127, 137, 144, 157, 191, 192, 205-209, 212, 213, 222, 243-245, 268, 269, 273, 276-279, 282-287, 290, 301, 302, 306, 308-311, 313, 315, 319-322, 328, 332-336, 339, 340, 344, 347-349, 356, 386, 387, 389, 390 и 392-417
[01435] Соединения 91, 92, 97, 98, 102, 104, 105, 117-123, 126, 127, 137, 144, 157, 191, 192, 205-209, 212, 213, 222, 243-245, 268, 269, 273, 276-279, 282-287, 290, 301, 302, 306, 308-311, 313, 315, 319-322, 328, 332-336, 339, 340, 344, 347-349, 356, 386, 387, 389, 390, и 392-417 синтезировали как описано ниже.
[01436] Соединение 91: 3-(аллил (пиперидин-4-ил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01437] Стадия 1: Синтез 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01438] 5-Хлор-2-метилбензойную кислоту (4,0 г, 23 ммоль) добавляли по порциям к охлажденной концентрированной H2SO4 (27 мл) при -10°C. Через 10 минут нитрующую смесь {состоящую из концентрированной HNO3 (3,3 г, 52 ммоль) и концентрированной H2SO4 (4,4 мл)} добавляли по каплям при -10°C. Смесь перемешивали при -10°C в течение 30 минут и выливали на ледяную воду. Твердый осадок фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (4,95 г, 99%).
[01439] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата
[01440] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (6,75 г, 31,3 ммоль) в DMF (33 мл), добавляли карбонат натрия (13,23 г, 125 ммоль) и метилиодид (17,77 г, 125 ммоль). Смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (6,0 г, 83%).
[01441] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата
[01442] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6,0 г, 26 ммоль) в этаноле (60 мл) добавляли хлорид аммония (6,0 г, 110 ммоль), растворенный в воде (60 мл), и порошок железа (11,9 г, 208 ммоль) при перемешивании. Смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через целит. Фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.
[01443] Стадия 4: Синтез трет-бутил 4-((5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
[01444] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (5,0 г, 25 ммоль) и трет-бутил 4-оксопиперидин-1-карбоксилата (25,3 г, 127 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (1,5 г, 25 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (1,89 г, 30,1 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (5,0 г, 52%).
[01445] Стадия 5: Синтез трет-бутил 4-(аллил(5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
[01446] К перемешиваемому раствору трет-бутил 4-((5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (0,70 г, 1,82 ммоль) в DMF (7 мл) добавляли NaH (0,052 г, 2,19 ммоль) при 0°C. После перемешивания в течение 20 минут добавляли 3-бромпроп-1-ен (0,44 г, 3,64 ммоль) и смесь нагревали при 80°C в течение 15 часов. После завершения реакционную смесь гасили ледяной водой и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,3 г, 39%).
[01447] Стадия 6: Синтез трет-бутил 4-(аллил (5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
[01448] Водный раствор NaOH (0,113 г, 2,83 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил 4-(аллил(5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (0,60 г, 1,41 ммоль) в этаноле (15 мл). После перемешивания при 60°C в течение 1 часа этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,5 г, 86%). Полученную кислоту (0,5 г, 1,22 ммоль) затем растворяли в DMSO (5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,37 г, 2,44 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,95 г, 1,83 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,2 г, 30%).
[01449] Стадия 7: Синтез 3-(аллил(пиперидин-4-ил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01450] Перемешиваемый раствор трет-бутил 4-(аллил(5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (0,2 г, 0,36 ммоль) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C и добавляли TFA (0,5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и концентрировали досуха. Остаток промывали диэтиловым эфиром и затем очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (0,06 г, 37%). ЖХМС: 443,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 97,14% (@ 254 нм) (Rt; 5,074; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,38 (шир.с, 1H), 8,21 (т, 1H), 8,05 (д, 1H), 7,21 (д, 1H, J=4,4 Гц), 6,97 (д, 1H, J=1,6 Гц), 5,86 (с, 1H), 5,56-5,64 (м, 1H), 4,97-5,09 (м, 2H), 4,24 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,62 (д, 2H, J=5,2 Гц), 3,23 (м, 2H), 3,10-3,16 (м, 1H), 2,85-2,88 (м, 2H), 2,19 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,83-1,86 (м, 2H), 1,68-1,73 (м, 2H).
[01451] Соединение 97: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(пиперидин-4-ил (пропил)амино)бензамид
[01452] К перемешиваемому раствору 3-(аллил (пиперидин-4-ил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,04 г, 0,09 ммоль) в MeOH (3 мл) добавляли 10% Pd/C (0,01 г) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре под давлением водорода (баллон) в течение 2 часов. Смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали при пониженнлм давлени с получением неочищенного твердого вещества, которое очищали при помощи ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (0,012 г, 40%). ЖХМС: 445,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 95,52% (@ 254 нм) (Rt; 5,102; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,39 (шир.с, 1H), 8,22 (т, 1H), 8,03 (шир.с, 1H), 7,25 (с, 1H), 6,98 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,24-3,27 (м, 2H), 3,00 (м, 1H), 2,92 (м, 2H), 2,83-2,86 (м, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,79-1,82 (м, 2H), 1,67-1,71 (м, 2H), 1,18-1,23 (м, 2H), 0,75 (т, 3H, J=8 Гц).
[01453] Соединение 144: 3,6-дихлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-4-[метил(пиперидин-4-ил)амино]-пиридин-2-карбоксамид
[01454] Стадия 2: Синтез метил 3,4,6-трихлорпиридин-2-карбоксилата
[01455] К перемешиваемому раствору метил 3,6-дихлорпиридин-2-карбоксилата (0,96 г, 4,66 ммоль) в TFA (5 мл) добавляли пероксид водорода (30% масс/масс водный раствор, 435 мкл, 2,5 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 20 часов. Реакционную смесь затем охлаждали и медленно выливали на насыщенный раствор K2CO3 (100 мл), с последующим экстрагированием водного слоя при помощи EtOAc (2×200 мл), с промывкой объединенных органических фаз насыщенным солевым раствором (2×50 мл), сушкой (Na2SO4) и упариванием. Желаемый 3,6-дихлор-2-(метоксикарбонил)пиридин-1-ий-1-олат использовали неочищенным на следующей стадии синтеза без какой-либо дополнительной очистки. К неочищенному 3,6-дихлор-2-(метоксикарбонил)пиридин-1-ий-1-олату (чистота ~70%, 2,40 г, 7,7 ммоль) добавляли POCl3 (3,5 мл, 38 ммоль) и раствор нагревали до 100°C в течение 4 часов. После охлаждения POCl3 удаляли в вакууме с получением белого твердого вещества, которое хроматографировали на силикагеле с элюированием смесью 0% до 10% EtOAc в гептане с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветных игольчатых кристаллов (340 мг, 30% для двух стадий). ЖХ-МС 100%, 2,20 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 239,8/241,7, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,51 (1H, с), 3,92 (3H, с).
[01456] Стадия 2: Синтез метил 4-({1-[(трет-бутокси)карбонил]пиперидин-4-ил}(метил)амино)-3,6-дихлорпиридин-2-карбоксилата
[01457] К перемешиваемому раствору метил 3,4,6-трихлорпиридин-2-карбоксилата (310 мг, 1,29 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли TEA (359 мкл, 2,58 ммоль) с последующим добавлением трет-бутил 4-(метиламино)пиперидин-1-карбоксилата (276 мг, 1,29 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 часов. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и выливали на воду (50 мл) с последующим экстрагированием продукта в TBME (3×50 мл), с промывкой объединенных органических слоев насыщенным солевым раствором (50 мл), сушкой при помощи Na2SO4 и упариванием. Неочищенный продукт затем очищали на колонке Isolute с 10 г диоксида кремния, элюируя с использованием градиента 0% до 50% EtOAc в гептане, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (95 мг, 18%). ЖХ-МС 95%, 2,29 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 418,1/419,8 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 6,87 (с, 1H), 4,12-4,34 (м, 2H), 3,99 (с, 3H), 3,69-3,80 (м, 1H), 2,79 (с, 3H), 2,64-2,77 (м, 2H), 1,75 (шир.с, 4H), 1,48 (с, 9H).
[01458] Стадия 3: Синтез 4-({l-[(трет-бутокси)карбонил] пиперидин-4-ил}(метил)амино)-3,6-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты
[01459] К перемешиваемому раствору метил 4-({l-[(трет-бутокси)карбонил]пиперидин-4-ил}(метил)амино)-3,6-дихлорпиридин-2-карбоксилата (95 мг, 0,23 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляли 2M водный раствор NaOH (2,3 мл, 4,54 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 16 часов, после этого ТГФ выпаривали в вакууме. Водную фазу затем обрабатывали 10% водным раствором лимонной кислоты до pH 5-6 и затем экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл), объединенные органические фазы затем сушили при помощи Na2SO4 и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка (77 мг, 84%). ЖХ-МС 100%, 2,02 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 403,9/405,6, 1H ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 7,09 (с, 1H), 4,14-4,22 (м, 2H), 3,80-3,89 (м, 1H), 2,84 (с, 5H), 1,74-1,81 (м, 4H), 1,46 (с, 9H).
[01460] Стадия 4: Синтез трет-бутил 4-[(3,6-дихлор-2-{[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]карбамоил}пиридин-4-ил)(метил)амино]пиперидин-1-карбоксилата
[01461] К перемешиваемому раствору 4-({1-[(трет-бутокси)карбонил]пиперидин-4-ил}(метил)амино)-3,6-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты (75 мг, 0,19 ммоль) в DMF (2 мл), охлажденному до 0°C, добавляли DIPEA (48 мкл, 0,28 ммоль) с последующим добавлением PyBOP (116 мг, 0,22 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она (чистота 89%, 35 мг, 0,2 ммоль). Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов, после этого реакционную смесь выливали на воду (30 мл) и экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл), затем объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный продукт очищали на колонке Isolute с 5 г диоксида кремния, элюируя с использованием градиента 0% до 100% EtOAc в гептане, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества, которое содержало ~45% масс/масс трипирролидинофосфен оксида, по данным ЯМР - это соединение использовали на следующей стадии синтеза без дополнительной очистки. ЖХ-МС 93%, 1,97 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 538,0/539,45/542,05, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 10,03 (шир.с, 1H), 8,13-7,97 (м, 1H), 6,79 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,50 (д, J=6,1 Гц, 2H), 4,16 (шир.м, 2H), 3,78-3,62 (м, 1H), 2,72 (с, 3H), 2,65 (шир.м, 2H), 2,35 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 1,73-1,63 (м, 4H), 1,44 (с, 9H).
[01462] Стадия 5: Синтез 3,6-дихлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-4-[метил(пиперидин-4-ил)амино]пиридин-2-карбоксамид гидрохлорида
[01463] Трет-бутил 4-[(3,6-дихлор-2-{[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]карбамоил}пиридин-4-ил) (метил)амино]пиперидин-1-карбоксилат (310 мг, 1,29 ммоль) растворяли в растворе 4M HCl в диоксане (3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов, после этого растворитель выпаривали и соединение очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого порошка (13 мг, 14%). ЖХ-МС 100%, 2,41 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 438,1/439,8, 1H ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 7,12 (с, 1H), 6,11 (с, 1H), 4,46 (с, 2H), 4,01-3,81 (м, 1H), 3,45 (д, J=12,9 Гц, 2H), 3,12-2,97 (м, 2H), 2,82 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 2,13-1,93 (м, 4H).
[01464] Соединение 386: 3,6-дихлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-4-[метил(оксан-4-ил)амино]-пиридин-2-карбоксамид
[01465] Стадия 1: Синтез метил 3,6-дихлор-4-[метил(оксан-4-ил)амино]пиридин-2-карбоксилата
[01466] К перемешиваемому раствору метил 3,4,6-трихлорпиридин-2-карбоксилата (600 мг, 2,50 ммоль) в DMF (12 мл) добавляли TEA (696 мкл, 4,99 ммоль) с последующим добавлением N-метилоксан-4-амина (287 мг, 2,50 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 20 часов. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и выливали на воду (100 мл) с последующим экстрагированием продукта в EtOAc (3×100 мл), с промывкой объединенных органических слоев насыщенным солевым раствором (50 мл), сушкой при помощи Na2SO4 и упариванием. Неочищенный продукт затем очищали на колонке Isolute с 10 г диоксида кремния, элюируя с использованием градиента 0% до 60% EtOAc в гептане, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (114 мг, 14%). ЖХ-МС 100%, 1,91 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 319,3/320,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 6,87 (с, 1H), 4,15-4,00 (м, 2H), 3,98 (с, 3H), 3,93-3,71 (м, 1H), 3,54-3,24 (м, 2H), 2,82 (с, 3H), 1,94 (дд, J=12,1, 4,7 Гц, 2H), 1,70 (д, J=10,2 Гц, 2H), (шир.с, 4H) 1,48 (с, 9H).
[01467] Стадия 2: Синтез 3,6-дихлор-4-[метил(оксан-4-ил)амино]пиридин-2-карбоновой кислоты
[01468] К перемешиваемому раствору метил 3,6-дихлор-4-[метил(оксан-4-ил)амино]пиридин-2-карбоксилата (114 мг, 0,36 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляли 2M водный раствор NaOH (0,89 мл, 1,79 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 20 часов, после этого ТГФ выпаривали в вакууме. Водную фазу затем обрабатывали 10% водным раствором лимонной кислоты до pH 5-6 и затем экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл), затем раствором 1:1 IPA/CHCl3 (2×50 мл), объединенные органические фазы затем промывали насыщенным солевым раствором (50 мл) сушили при помощи Na2SO4 и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (85 мг, 78%). ЖХ-МС 100%, 1,47 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 305,5/306,9, 1H ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 7,10 (с, 1H), 4,03 (дд, J=11,5, 4,4 Гц, 2H), 3,99-3,86 (м, 1H), 3,47 (т, J=11,0 Гц, 2H), 2,90 (с, 3H), 2,05-1,90 (м, 2H), 1,74 (д, J=12,4 Гц, 2H).
[01469] Стадия 3: Синтез 3,6-дихлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-4-[метил(оксан-4-ил)амино] пиридин-2-карбоксамида
[01470] К перемешиваемому раствору 3,6-дихлор-4-[метил(оксан-4-ил)амино]пиридин-2-карбоновой кислоты (85 мг, 0,28 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли DIPEA (73 мкл, 0,42 ммоль) и HATU (127 мг, 0,33 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут, после этого добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 52 мг, 0,31 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь затем выливали на 50 мл воды и водную фазу экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл), промывали насыщенным солевым раствором (50 мл) сушили (Na2SO4) и упаривали с получением масла. Продукт затем очищали с использованием на колонке Isolute с 5 г диоксида кремния, элюируя смесью 0% до 5% MeOH в DCM, и упаривали с получением стекловидного твердого вещества, которое растирали в порошок с диэтиловым эфиром и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка (50 мг, 41%). ЖХ-МС 95%, m/z = 439,0/440,8, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 11,33 (шир.с, 1H), 8,20 (шир.с, 1H), 6,79 (с, 1H), 5,93 (с, 1H), 4,51 (с, 2H), 4,02 (дд, J=11,4, 3,8 Гц, 2H), 3,92-3,72 (м, 1H), 3,39 (т, J=11,3 Гц, 2H), 2,78 (с, 3H), 2,38 (с, 3H), 2,27 (с, 3H), 1,89 (тт, J=12,0, 6,2 Гц, 2H), 1,83-1,52 (м, 2H).
[01471] Соединение 387: 3-бром-6-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-4-[метил(оксан-4-ил)амино] пиридин-2-карбоксамид
[01472] Стадия 1: Синтез метил 3-бром-6-хлорпиридин-2-карбоксилата
[01473] К перемешиваемому раствору 3-бром-6-хлорпиридин-2-карбоновой кислоты (2,00 г, 8,46 ммоль) в MeOH (40 мл) добавляли H2SO4 (189 мкл, 3,55 ммоль) и раствор нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали и MeOH удаляли при пониженном давлении, полученное твердое вещество растворяли в EtOAc (100 мл) и промывали насыщенным раствором NaHCO3 (2×50 мл), затем насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили (Na2SO4) и упаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (1,97 г, 93%), которое использовали без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ-МС 98%, m/z = 249,8/251,7/253,7.
[01474] Стадия 2: Синтез метил 3-бром-4,6-дихлорпиридин-2-карбоксилата
[01475] К перемешиваемому раствору метил 3-бром-6-хлорпиридин-2-карбоксилата (1,92 г, 7,67 ммоль) в TFA (18 мл) добавляли пероксид водорода (30% масс/масс водный раствор, 5,22 мл, 53,7 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 21 часа. Реакционную смесь затем охлаждали и медленно выливали на насыщенный раствор К2СО3 (100 мл) с последующим экстрагированиемм водного слоя при помощи EtOAc (3×100 мл), с промывкой объединенных органических фаз насыщенным солевым раствором (2×50 мл), сушкой (Na2SO4) и упариванием. Желаемый 3-бром-6-хлор-2-(метоксикарбонил)пиридин-1-ий-1-олат (2,61 г, чистота ~75%) использовали неочищенным на следующей стадии синтеза без какой-либо дополнительной очистки. К неочищенному 3-бром-6-хлор-2-(метоксикарбонил)пиридин-1-ий-1-олату (чистота ~75%, 2,61 г, 7,35 ммоль) добавляли POCl3 (3,42 мл, 36,7 ммоль) и раствор нагревали до 100°C в течение 4 часов. После охлаждения POCl3 удаляли в вакууме с получением белого твердого вещества, которое очищали на колонке с диоксидом кремния, элюируя смесью 0% до 10% EtOAc в гептане, с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого порошка (1,07 г, 49% для двух стадий). ЖХ-МС 99%, 2,02 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 283,7/285,7/287,7, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,56 (с, 1H), 4,00 (с, 3H).
[01476] Стадия 3: Синтез метил 3-бром-6-хлор-4-[метил(оксан-4-ил)амино]пиридин-2-карбоксилат
[01477] К перемешиваемому раствору метил 3-бром-4,6-дихлорпиридин-2-карбоксилата (600 мг, 2,1 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли TEA (587 мкл, 4,21 ммоль) с последующим добавлением N-метилоксан-4-амина (240 мг, 2,1 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 20 часов. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и выливали на воду (100 мл) с последующим экстрагированием продукта в EtOAc (3×100 мл), с промывкой объединенных органических слоев насыщенным солевым раствором (50 мл), сушкой при помощи Na2SO4 и упариванием. Неочищенный продукт затем очищали на колонке Isolute с 10 г диоксида кремния, элюируя с использованием градиента 0% до 100% EtOAc в гептане, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (110 мг, 14%). ЖХ-МС 100%, 1,94 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 362,8/365,2/346,8, 1H ЯМР (250 МГц, Хлороформ-d) δ 6,87 (с, 1H), 4,17-3,99 (м, 2H), 3,98 (с, 3H), 3,93-3,70 (м, 1H), 3,41 (т, J=10,9 Гц, 2H), 2,81 (с, 3H), 1,93 (дд, J=11,9, 4,6 Гц, 2H), 1,71 (д, J=10,3 Гц, 2H).
[01478] Стадия 4: Синтез 3-бром-6-хлор-4-[метил(оксан-4-ил)амино] пиридин-2-карбоновой кислоты
[01479] К перемешиваемому раствору метил 3-бром-6-хлор-4-[метил(оксан-4-ил)амино]пиридин-2-карбоксилата (102 мг, 0,28 ммоль) в ТГФ (2 мл) добавляли 2M водный раствор NaOH (0,70 мл, 1,40 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 18 часов, после этого ТГФ выпаривали в вакууме. Водную фазу затем обрабатывали 10% водным раствором лимонной кислоты до pH 5-6 и затем экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл), затем раствором 1:1 IPA/CHCl3 (2×50 мл), объединенные органические фазы затем промывали насыщенным солевым раствором (50 мл) сушили при помощи Na2SO4 и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (72 мг, 73%). ЖХ-МС 100%, 1,49 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 349,0/351,0/352,9, 1H ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 7,07 (с, 1H), 4,02 (дд, J=11,3, 4,3 Гц, 2H), 3,96-3,87 (м, 1H), 3,46 (т, J=11,0 Гц, 2H), 2,85 (с, 3H), 1,96 (дд, J=12,3, 4,3 Гц, 2H), 1,77 (с, 2H).
[01480] Стадия 5: Синтез 3-бром-6-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-4-[метил(оксан-4-ил)амино]-пиридин-2-карбоксамида
[01481] К перемешиваемому раствору 3-бром-6-хлор-4-[метил(оксан-4-ил)амино]пиридин-2-карбоновой кислоты (73 мг, 0,21 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли DIPEA (56 мкл, 0,31 ммоль) и HATU (95 мг, 0,25 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 5 минут, после этого добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 52 мг, 0,31 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь затем выливали на 50 мл воды, водную фазу экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл), промывали насыщенным солевым раствором (50 мл) сушили (Na2SO4) и упаривали с получением масла. Продукт затем очищали на колонке Isolute с 5 г диоксида кремния, элюируя смесью 0% до 4% MeOH в DCM, и упаривали с получением стекловидного твердого вещества, которое растирали в порошок с диэтиловым эфиром и фильтровали, и сушили в вакуумной печи при 40°C в течение 24 часов, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка (50 мг, 41%). ЖХ-МС 99%, m/z = 483,1/485,0/486,9, 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 10,94 (шир.с, 1H), 8,14-7,98 (м, 1H), 6,83 (с, 1H), 5,92 (с, 1H), 4,55 (д, J=6,1 Гц, 2H), 4,15-3,94 (м, 2H), 3,93-3,70 (м, 1H), 3,40 (т, J=11,0 Гц, 2H), 2,78 (с, 3H), 2,39 (с, 3H), 2,28 (с, 3H), 1,99-1,82 (м, 2H), 1,79-1,64 (м, 2H).
[01482] Соединение 213: 5-(азетидин-3-ил)-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензамид
[01483] Стадия 1: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата
[01484] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-метил-5-бромбензоата (4,06 г, 16,6 ммоль) в DCE (60 мл) в атмосфере азота добавляли оксан-4-он (3,07 мл, 33,3 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (5,71 мл, 99,8 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (10,6 г, 49,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре, затем добавляли дистиллированную воду (50 мл) и раствор нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Фазы разделяли и водную фазу промывали при помощи EtOAc (2×100 мл), объединенные органические слои затем сушили при помощи Na2SO4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали при помощи FCC на диоксиде кремния, элюируя с использованием градиента 10% до 40% EtOAc в гептане, с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (3,88 г, 71%). ЖХ-МС 100%, 2,10 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 327,9/329,8, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,23 (д, J=1,9 Гц, 1H), 6,84 (д, J=1,7 Гц, 1H), 4,02 (дт, J=11,7, 3,5 Гц, 2H), 3,87 (с, 3H), 3,65 (д, J=7,2 Гц, 1H), 3,59-3,45 (м, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,05 (д, J=13,8 Гц, 2H), 1,51 (ддд, J=24,1, 10,8, 4,2 Гц, 2H).
[01485] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоата
[01486] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (2,0 г, 6,1 ммоль) в DCE (10 мл) в атмосфере азота добавляли ацетальдегид (1,0 мл, 18 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (2,1 мл, 37 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (6,6 г, 31 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре, после этого добавляли дополнительное количество ацетальдегида (1,0 мл, 22 ммоль) и триацетоксиборогидрида натрия (3,0 г, 14 ммоль) и реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, затем добавляли дистиллированную воду (100 мл) и фазы разделяли. Водную фазу промывали при помощи EtOAc (3×100 мл), объединенные органические слои затем сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (2,10 г, 93%), которое было подходящим для использования без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ-МС 96%, 2,38 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 356,1/357,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,70 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,36 (д, J=2,0 Гц, 1H), 3,95 (д, J=11,3 Гц, 2H), 3,88 (д, J=9,1 Гц, 3H), 3,32 (тд, J=11,5, 2,5 Гц, 2H), 3,04 (кв., J=7,1 Гц, 2H), 2,98-2,87 (м, 1H), 2,44 (с, 3H), 1,77-1,55 (м, 4H), 0,86 (т, J=7,1 Гц, 3H).
[01487] Стадия 3: Синтез трет-бутил 3-{3-[этил(оксан-4-ил)амино]-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенил}азетидин-1-карбоксилата
[01488] В высушенную колбу добавляли цинковую пыль (40 мг, 0,61 ммоль) с последующим добавлением безводного DMA (2 мл) и сосуд продували азотом при интенсивном перемешивании и нагревании до 65°C. Добавляли TMS-Cl (9 мкл, 0,07 ммоль) и 1,2-дибромэтан (6 мкл, 0,07 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 65°C в течение 30 минут, с последующим добавлением по каплям N-Boc-3-иодазетидина (133 мг, 0,47 ммоль) в виде раствора в безводном DMA (1 мл). Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли метил 5-бром-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоат (100 мг, 0,28 ммоль) в виде раствора в безводном DMA (2 мл). Полученный раствор дегазировали азотом в течение 5 минут, затем добавляли Pd(dppf)Cl2-DCM (7 мг, 0,01 ммоль) и иодид меди(I) (3 мг, 0,02 ммоль) в виде твердых веществ. Реакционную смесь нагревали до 80°C в течение 16 часов и затем охлаждали до комнатной температуры с последующим добавлением насыщенного раствора NH4Cl (50 мл). Водную фазу экстрагировали при помощи EtOAc (3×100 мл) и затем объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (2×50 мл), сушили при помощи Na2SO4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали на 5 г колонке Isolute с использованием 10-30% EtOAc в гептане в качестве элюента с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (77 мг, 62%). ЖХ-МС 98%, 2,19 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 433,2, 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7,49 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,16 (д, J=1,6 Гц, 1H), 4,31 (т, J=8,7 Гц, 2H), 3,94 (дд, J=14,4, 5,5 Гц, 4H), 3,89 (с, 3H), 3,77-3,64 (м, 1H), 3,31 (тд, J=11,4, 2,7 Гц, 2H), 3,06 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,99-2,87 (м, 1H), 2,46 (с, 3H), 1,65 (ддд, J=11,1, 8,6, 6,0 Гц, 4H), 1,46 (с, 9H), 0,85 (дд, J=13,1, 6,1 Гц, 3H).
[01489] Стадия 4: Синтез 5-{ 1-[(трет-бутокси)карбонил] азетидин-3-ил}-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензойной кислоты
[01490] К перемешиваемому раствору трет-бутил 3-{3-[этил(оксан-4-ил)амино]-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенил}азетидин-1-карбоксилата (78 мг, 0,18 ммоль) в ТГФ (2 мл) и MeOH (0,1 мл) добавляли 2M раствор NaOH (0,9 мл, 1,8 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов с последующим нагреванием при 50°C в течение 22 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли в вакууме, затем водный раствор доводили до pH 5 с использованием 1M HCl. Продукт экстрагировали в DCM (2×50 мл), сушили при помощи Na2SO4 и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (54 мг, 72%). ЖХ-МС 100%, 1,70 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 419,2, 1H ЯМР (500 МГц, MeOD) δ 7,77 (с, 1H), 7,55 (с, 1H), 4,36 (т, J=8,2 Гц, 2H), 3,90 (д, J=27,0 Гц, 5H), 3,71 (т, J=6,5 Гц, 1H), 3,36 (т, J=11,3 Гц, 3H), 2,55 (с, 3H), 1,92-1,81 (м, 1H), 1,64 (д, J=55,8 Гц, 3H), 1,49-1,42 (м, 10H), 0,93 (с, 3H).
[01491] Стадия 5: Синтез 5-(азетидин-3-ил)-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензамида
[01492] К перемешиваемому раствору 5-{1-[(трет-бутокси)карбонил]азетидин-3-ил}-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензойной кислоты (54 мг, 0,13 ммоль) в DMF (2 мл) и реакционную смесь охлаждали с использованием ледяной бани с последующим добавлением DIPEA (45 мкл, 0,26 ммоль) и HATU (59 мг, 0,15 ммоль)). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 5 минут, после этого добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 24 мг, 0,14 ммоль) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры в течение 16 часов. Реакционную смесь затем выливали на 50 мл воды и водную фазу экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл), промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили (Na2SO4), фильтровали и упаривали с получением масла. Продукт затем очищали на колонке Isolute с 5 г диоксида кремния, элюируя смесью 0% до 2,5% MeOH в DCM, и упаривали с получением трет-бутил 3-(3-{[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]- карбамоил}-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-4-метилфенил)азетидин-1-карбоксилата в виде бесцветного масла (29 мг). ЖХ-МС 90%, m/z = 553,3. Это вещество растворяли в 4M растворе HCl в диоксане (3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 90 минут, затем растворитель выпаривали досуха и соединение очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (11 мг, 8% для 2 стадий). ЖХ-МС 97%, 2,17 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 453,2, 1H ЯМР (500 МГц, MeOD) δ 7,26 (с, 1H), 7,18 (с, 1H), 6,14 (с, 1H), 4,48 (с, 2H), 4,39 (с, 2H), 4,22 (с, 3H), 3,93 (д, J=10,5 Гц, 2H), 3,40-3,33 (м, 2H), 3,29-2,90 (м, 3H), 2,40 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 1,68 (д, J=26,3 Гц, 4H), 0,87 (с, 3H).
[01493] Соединение 245: 5-(азетидин-3-ил)-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензамид
[01494] Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензотата
[01495] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (1,20 г, 3,66 ммоль) в DCE (10 мл) в атмосфере азота добавляли параформальдегид (659 мг, 21,9 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (1,26 мл, 21,9 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (4,65 г, 21,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре, после этого добавляли дополнительное количество параформальдегида (325 мг, 10,8 ммоль) и триацетоксиборогидрида натрия (2,40 г, 11,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали еще в течение 18 часов, затем добавляли дистиллированную воду (30 мл) и добавляли твердый NaHCO3 до доведения водной фазы до pH 7 и фазы разделяли, водную фазу промывали при помощи EtOAc (3×50 мл), объединенные органические слои затем промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали. Неочищенный остаток очищали с использованием FCC на диоксиде кремния, элюируя смесью 0-10% EtOAc в гептане, с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (728 мг, 52%). ЖХ-МС 87%, m/z = 341,9/343,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,60 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,25 (д, J=1,9 Гц, 1H), 3,92 (д, J=11,1 Гц, 2H), 3,82 (с, 3H), 3,27 (тд, J=11,5, 2,0 Гц, 2H), 2,94-2,79 (м, 1H), 2,57 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 1,74-1,52 (м, 4H).
[01496] Стадия 2: Синтез 5-{1-[(трет-бутокси)карбонил] азетидин-3-ил}-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты
[01497] В высушенную колбу добавляли цинковую пыль (436 мг, 6,67 ммоль) и колбу нагревали с использованием струйного воздушного нагревателя в течение нескольких минут. Затем добавляли безводный DMA (20 мл) в атмосфере азота при интенсивном перемешивании и нагревании до 65°C. Добавляли TMS-Cl (102 мкл, 0,8 ммоль) и 1,2-дибромэтан (70 мкл, 0,8 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 65°C в течение 30 минут с последующим добавлением по каплям N-Boc-3-иодазетидина (1,46 г, 5,16 ммоль) в виде раствора в безводном DMA (15 мл). Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и добавляли метил 5-бром-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензоат (1,06 г, 3,09 ммоль) в виде раствора в безводном DMA (15 мл). Полученный раствор дегазировали азотом в течение 10 минут, затем добавляли Pd(dppf)Cl2.DCM (76 мг, 0,09 ммоль) и иодид меди(I) (35 мг, 0,19 ммоль) в виде твердых веществ. Реакционную смесь нагревали до 80°C в течение 90 минут и затем охлаждали до комнатной температуры с последующим добавлением дистиллированной воды (100 мл) и насыщенного раствора NH4Cl (10 мл). Водную фазу экстрагировали при помощи TBME (3×50 мл) и затем объединенные органические фазы сушили при помощи Na2SO4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали на 25 г колонке Isolute с использованием 0%-40% EtOAc в гептане в качестве элюента с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого масла (507 мг). ЖХ-МС 97%, m/z = 420,0. К перемешиваемому раствору трет-бутил 3-[3-(метоксикарбонил)-4-метил-5-[метил(оксан-4-ил)амино]фенил]азетидин-1-карбоксилата (85 мг, 0,2 ммоль) в ТГФ (2 мл) и MeOH (0,1 мл) добавляли 2M раствор NaOH (1,02 мл, 2,03 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 16 часов, после этого добавляли 4M раствор NaOH (0,5 мл, 2,0 ммоль) и реакционную смесь нагревали еще в течение 24 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли в вакууме, затем водный раствор доводили до pH 3 с использованием 1M HCl. Продукт экстрагировали в DCM (2×50 мл), промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили при помощи Na2SO4 и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (47 мг, 21% для двух стадий). ЖХ-МС 95%, m/z = 405,1, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,66 (т, J=7,0 Гц, 1H), 7,19 (д, J=1,3 Гц, 1H), 4,34 (т, J=8,7 Гц, 2H), 3,98 (дд, J=16,6, 10,2 Гц, 4H), 3,79-3,69 (м, 2H), 3,35 (дд, J=11,5, 10,0 Гц, 2H), 2,97 (тд, J=10,8, 5,3 Гц, 1H), 2,67 (с, 3H), 2,55 (д, J=6,6 Гц, 3H), 1,74 (ддд, J=15,5, 12,1, 4,3 Гц, 2H), 1,66 (д, J=11,1 Гц, 2H), 1,48 (с, 9H).
[01498] Стадия 3: Синтез трет-бутил 3-(3-{[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]карбамоил}-4-метил-5-[метил(оксан-4-ил)амино]фенил)азетидин-1-карбоксилата
[01499] К перемешиваемому раствору 5-{l-[(трет-бутокси)карбонил]азетидин-3-ил}-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты (47 мг, 0,12 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли DIPEA (40 мкл, 0,23 ммоль) и HATU (53 мг, 0,14 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 5 минут, после этого добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 22 мг, 0,13 ммоль) и реакционную смесь нагревали комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь затем выливали на дистиллированную воду (50 мл) и водную фазу экстрагировали при помощи DCM (3×50 мл), промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили (Na2SO4), фильтровали и упаривали с получением масла. Продукт затем очищали на колонке Isolute с 5 г диоксида кремния, элюируя смесью 0% до 5% MeOH в DCM, и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (44 мг, 67%). ЖХ-МС 96%, m/z = 539,4, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 11,68 (с, 1H), 6,95 (т, J=5,8 Гц, 1H), 6,92 (д, J=4,2 Гц, 2H), 5,88 (с, 1H), 4,47 (д, J=5,8 Гц, 2H), 4,20 (т, J=8,7 Гц, 2H), 3,90 (д, J=11,2 Гц, 2H), 3,86-3,73 (м, 2H), 3,62-3,50 (м, 1H), 3,26 (т, J=10,8 Гц, 2H), 2,89 (ддд, J=14,6, 10,8, 3,7 Гц, 1H), 2,55 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 1,75-1,47 (м, 4H), 1,39 (д, J=5,7 Гц, 9H).
[01500] Стадия 4: Синтез 5-(азетидин-3-ил)-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензамида
[01501] К перемешиваемому раствору трет-бутил 3-(3-{[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]карбамоил}-4-метил-5-[метил(оксан-4-ил)амино]фенил)азетидин-1-карбоксилата (29 мг, 1,29 ммоль) в DCM (4 мл) добавляли TFA (1 мл) и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 90 минут, затем растворитель выпаривали и добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3 до доведения до pH 7-8. Водную фазу экстрагировали 1:1 смесью IPA:CHCl3 (2×50 мл) и объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (30 мл, сушили при помощи Na2SO4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (15 мг, 42%). ЖХ-МС 100%, m/z = 439,3, 1H ЯМР (500 МГц, MeOD) δ 7,19 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,10 (д, J=1,5 Гц, 1H), 6,12 (с, 1H), 4,46 (с, 2H), 4,41-4,27 (м, 2H), 4,26-4,13 (м, 3H), 3,93 (д, J=11,4 Гц, 2H), 3,36 (тд, J=11,3, 3,3 Гц, 2H), 3,06 (дкв., J=14,6, 5,0 Гц, 1H), 2,65 (с, 3H), 2,39 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,75-1,60 (м, 4H).
[01502] Соединение 269: N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]-5-(1-метилазетидин-3-ил)бензамид
[01503] Стадия 1: Синтез метил 5-(азетидин-3-ил)-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензоата
[01504] К перемешиваемому раствору трет-бутил 3-[3-(метоксикарбонил)-4-метил-5-[метил(оксан-4-ил)амино]фенил]-азетидин-1-карбоксилата (400 мг, 0,96 ммоль) в DCM (4 мл) добавляли TFA (1 мл) и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 45 минут, затем растворитель выпаривали досуха и добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3 до доведения до pH 7-8. Водную фазу экстрагировали при помощи DCM (3×30 мл), промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили при помощи MgSO4, фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде оранжевого масла (370 мг, 95%). ЖХ-МС 96%, m/z = 319,1, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,49 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,20 (д, J=1,3 Гц, 1H), 4,32-4,10 (м, 5H), 3,98 (д, J=11,0 Гц, 2H), 3,90 (д, J=8,4 Гц, 3H), 3,34 (т, J=10,8 Гц, 2H), 2,99 (ддд, J=14,7, 10,9, 3,8 Гц, 1H), 2,65 (д, J=8,3 Гц, 3H), 2,51-2,41 (м, 3H), 1,73 (ддд, J=15,7, 12,1, 4,3 Гц, 2H), 1,64 (д, J=11,2 Гц, 2H).
[01505] Стадия 2: Синтез метил 2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]-5-(1-метилазетидин-3-ил)бензоата
[01506] К перемешиваемому раствору метил 5-(азетидин-3-ил)-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензоата (320 мг, 1,01 ммоль) в DCE (10 мл) в атмосфере азота добавляли параформальдегид (151 мг, 5,03 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,115 мл, 2,01 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (852 мг, 4,02 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре, после этого добавляли дополнительное количество параформальдегида (21 мг) и триацетоксиборогидрида натрия (98 мг) и реакционную смесь перемешивали еще в течение 4 часов, затем добавляли дистиллированную воду (20 мл) и твердый NaHCO3 до доведения водной фазы до pH 7. Фазы разделяли, водную фазу промывали при помощи DCM (3×20 мл), объединенные органические фазы затем промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили с использованием MgSO4, фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (296 мг, 89%). ЖХ-МС 100%, m/z = 333,1, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,42 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,09 (с, 1H), 3,96 (д, J=11,2 Гц, 2H), 3,92-3,82 (м, 5H), 3,74 (д, J=7,2 Гц, 1H), 3,30 (дт, J=22,2, 15,0 Гц, 4H), 3,00-2,89 (м, 1H), 2,62 (с, 3H), 2,49-2,39 (м, 6H), 1,75-1,59 (м, 4H).
[01507] Стадия 3: Синтез N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]-5-(1-метилазетидин-3-ил)бензамида
[01508] К перемешиваемому раствору метил 2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]-5-(1-метилазетидин-3-ил)бензоата (296 мг, 0,89 ммоль) в ТГФ (10 мл) и MeOH (l мл) добавляли 2M раствор NaOH (4,5 мл, 8,9 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 16 часов, после этого добавляли 4M раствор NaOH (1 мл, 4,5 ммоль) и реакционную смесь нагревали еще в течение 24 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и продукт нейтрализовали при помощи 1M HCl и упаривали досуха с последующей азеотропной перегонкой с толуолом для удаления остаточной воды. Неочищенную кислоту использовали на следующей стадии без какой-либо очистки. Неочищенный остаток 2-метил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]-5-(1-метилазетидин-3-ил)бензойной кислоты суспендировали в DMF (10 мл) и раствор охлаждали с использованием ледяной бани с последующим добавлением DIPEA (433 мкл, 2,49 ммоль) и HATU (567 мг, 1,49 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 5 минут, после этого добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 221 мг, 1,29 ммоль) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры в течение 16 часов. Реакционную смесь затем выливали на дистиллированную воду (50 мл) и водную фазу экстрагировали при помощи DCM (3×50 мл), промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили (Na2SO4), фильтровали и упаривали с получением масла. Продукт затем очищали с использованием препаративной ВЭЖХ (и упаривали досуха с последующим растиранием в порошок с простым эфиром и фильтрованием, с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (51 мг, 10%). ЖХ-МС 91%, m/z = 453,2, 1H ЯМР (500 МГц, MeOD) δ 7,14 (д, J=1,7 Гц, 1H), 7,09 (д, J=1,7 Гц, 1H), 6,12 (с, 1H), 4,46 (с, 2H), 4,41 (т, J=9,2 Гц, 2H), 4,22 (т, J=9,3 Гц, 2H), 4,14 (дд, J=17,4, 8,5 Гц, 1H), 3,98-3,89 (м, 2H), 3,36 (тд, J=11,3, 3,4 Гц, 2H), 3,06 (ддд, J=14,6, 9,8, 4,9 Гц, 1H), 2,97 (с, 3H), 2,64 (с, 3H), 2,39 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,73-1,62 (м, 4H).
[01509] Соединение 389: N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-4-метилпиридин-3-карбоксамид
[01510] Стадия 1: Синтез метил 5-амино-4-метилпиридин-3-карбоксилата
[01511] К перемешиваемому раствору 5-амино-4-метилпиридин-3-карбоновой кислоты (0,94 г, 6,18 ммоль) в MeOH (20 мл) при 0°C добавляли тионилхлорид по каплям. Раствор затем нагревали до 50°C в течение 3,5 часов, добавляли еще 10 мл MeOH и реакционную смесь нагревали при 50°C в течение 5 часов с последующим перемешивание при комнатной температуре в течение 64 часов. Растворитель затем выпаривали при пониженном давлении и добавляли насыщенный раствор NaHCO3 до доведения до pH 7-8. Продукт экстрагировали в EtOAc (2×50 мл) и объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого порошка (824 мг, 80%), который был подходящим для использования на следующей стадии без какой-либо очистки. ЖХ-МС m/z = 167,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,52 (д, J=34,2 Гц, 1H), 8,16 (с, 1H), 3,95 (д, J=4,8 Гц, 3H), 3,78 (с, 2H), 2,42 (с, 3H).
[01512] Стадия 2: Синтез метил 4-метил-5-[(оксан-4-ил)амино]пиридин-3-карбоксилата
[01513] К перемешиваемому раствору метил 5-амино-4-метилпиридин-3-карбоксилата (805 мг, 4,84 ммоль) в DCE (20 мл) в атмосфере азота добавляли оксан-4-он (537 мкл, 5,80 ммоль) с последующим добавлением трифторуксусной кислоты (742 мкл, 9,69 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,54 г, 7,27 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре, после этого добавляли дополнительное количество оксан-4-она (100 мкл) и триацетоксиборогидрида натрия (300 мг) и реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов. Добавляли дистиллированную воду (20 мл) и добавляли твердый NaHCO3 до доведения до pH 8. Фазы разделяли и затем водную фазу промывали при помощи EtOAc (2×50 мл), объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (1,11 г, 88%), которое использовали на следующей стадиию без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ-МС 96%, m/z = 251,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,40 (с, 1H), 8,10 (с, 1H), 4,03 (дт, J=11,9, 3,5 Гц, 2H), 3,92 (с, 3H), 3,68-3,58 (м, 1H), 3,54 (тт, J=8,1, 4,1 Гц, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,12-2,05 (м, 2H), 1,53 (ддд, J=23,8, 11,0, 4,3 Гц, 2H).
[01514] Стадия 3: Синтез метил 5-[этил(оксан-4-ил)амино]-4-метилпиридин-3-карбоксилата
[01515] К перемешиваемому раствору метил 4-метил-5-[(оксан-4-ил)амино]пиридин-3-карбоксилата (600 мг, 2,40 ммоль) в DCE (20 мл) в атмосфере азота добавляли ацетальдегид (1,07 мл, 19,2 ммоль) с последующим добавлением трифторуксусной кислоты (367 мкл, 4,79 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (3,05 г, 14,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре, после этого добавляли дополнительное количество ацетальдегида (500 мкл) и триацетоксиборогидрида натрия (1,0 г) и реакционную смесь перемешивали еще в течение 16 часов. Добавляли дистиллированную воду (20 мл) и добавляли твердый NaHCO3 до доведения до pH 8. Фазы разделяли и затем водную фазу промывали при помощи DCM (2×50 мл), объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали на колонке Isolute с 25 г диоксида кремния с использованием градиента 0% до 50% EtOAc в гептане, с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (418 мг, 60%). ЖХ-МС 96%, m/z = 279,1, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,76 (с, 1H), 8,44 (с, 1H), 3,97 (д, J=11,0 Гц, 2H), 3,93 (с, 3H), 3,33 (тд, J=11,6, 2,1 Гц, 2H), 3,13 (кв., J=7,1 Гц, 2H), 3,04 (тт, J=10,9, 4,0 Гц, 1H), 2,54 (с, 3H), 1,76-1,59 (м, 4H), 0,89 (т, J=7,1 Гц, 3H).
[01516] Стадия 4: Синтез 5-[этил(оксан-4-ил)амино]-4-метилпиридин-3-карбоновой кислоты
[01517] К перемешиваемому раствору метил 5-[этил(оксан-4-ил)амино]-4-метилпиридин-3-карбоксилата (415 мг, 1,49 ммоль) в ТГФ (7 мл) и MeOH (3 мл) добавляли 4M раствор NaOH (932 мкл, 3,73 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4,5 часов, после этого раствор нейтрализовали путем добавления 1M HCl и растворитель удаляли при пониженном давлении, с последующим добавлением насыщенного солевого раствора (10 мл). Водную фазу экстрагировали при помощи 1:1 IPA:CHCl3 (3×50 мл), объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (305 мг, 77%), которое было подходящим для использования на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ-МС 99%, m/z = 265,1, 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,57 (с, 1H), 8,46 (с, 1H), 3,82 (д, J=11,6 Гц, 2H), 3,25 (т, J=10,9 Гц, 2H), 3,16-2,99 (м, 3H), 2,45 (с, 3H), 1,64 (д, J=11,0 Гц, 2H), 1,48 (дт, J=11,9, 5,7 Гц, 2H), 0,81 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01518] Стадия 5: Синтез N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-4- метилпиридин-3-карбоксамида
[01519] К перемешиваемому раствору 5-[этил(оксан-4-ил)амино]-4-метилпиридин-3-карбоновой кислоты (300 мг, 1,13 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли DIPEA (395 мкл, 2,27 ммоль) и HATU (518 мг, 1,36 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут, после этого добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 214 мг, 1,25 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь затем выливали на 500 мл воды и продукт экстрагировали в EtOAc (3×200 мл), объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (2×100 мл), сушили (Na2SO4) и упаривали. Неочищенный продукт затем очищали с использованием препаративной ВЭЖХ и полученное твердое вещество растирали в порошок с диэтиловым эфиром и выделяли фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (115 мг, 25%). ЖХ-МС 100%, m/z = 399,2, 1H ЯМР (500 МГц, ацетон) δ 10,97 (с, 1H), 8,32 (с, 1H), 8,22 (с, 1H), 7,73 (с, 1H), 5,92 (с, 1H), 4,41 (д, J=5,3 Гц, 2H), 3,85 (дд, J=11,3, 3,0 Гц, 2H), 3,28 (тд, J=11,7, 1,9 Гц, 2H), 3,15 (кв., J=7,1 Гц, 2H),3,09 (ддд, J=11,1, 7,2, 3,9 Гц, 1H), 2,32 (д, J=1,5 Гц, 6H), 2,23 (с, 3H), 1,69 (дд, J=12,6, 1,7 Гц, 2H), 1,55 (ддд, J=24,3, 12,2, 4,4 Гц, 2H), 0,85 (т, J=7,1 Гц, 3H).
[01520] Соединение 322: N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метил-5-(1-метилазетидин-3-ил)бензамид
[01521] Стадия 1: Синтез метил 5-бром-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоата
[01522] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоата (622 мг, 1,90 ммоль) в DCE (10 мл) в атмосфере азота добавляли ацетальдегид (318 мкл, 5,69 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (650 мкл, 11,4 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2,00 г, 9,48 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре, после этого добавляли дополнительное количество ацетальдегида (300 мкл) и триацетоксиборогидрида натрия (1,2 г). Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, затем добавляли дистиллированную воду (100 мл) и твердый NaHCO3 до доведения водной фазы до pH 7. Фазы разделяли, водную фазу промывали при помощи DCM (2×50 мл), объединенные органические фазы затем промывали насыщенным солевым раствором (100 мл), сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали. Неочищенный остаток очищали с использованием FCC на диоксиде кремния, элюируя смесью 0-5% EtOAc в гептане с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (470 мг, 70%). ЖХ-МС 100 m/z = 356,0/357,9. 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,64 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,29 (д, J=2,0 Гц, 1H), 3,89 (д, J=11,3 Гц, 2H), 3,83 (с, 3H), 3,26 (тд, J=11,5, 2,6 Гц, 2H), 2,98 (кв., J=7,1 Гц, 2H), 2,86 (дд, J=9,7, 5,2 Гц, 1H), 2,38 (с, 3H), 1,67-1,52 (м, 4H), 0,80 (т, J=7,1 Гц, 3H).
[01523] Стадия 2: Синтез метил 5-(азетидин-3-ил)-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоата
[01524] В высушенную колбу добавляли цинковую пыль (186 мг, 2,85 ммоль) и колбу нагревали с использованием струйного воздушного нагревателя в течение нескольких минут. Затем добавляли безводный DMA (15 мл) в атмосфере азота при интенсивном перемешивании и нагревании до 65°C. Добавляли TMSCl (44 мкл, 0,34 ммоль) и 1,2-дибромэтан (30 мкл, 0,34 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 65°C в течение 30 минут с последующим добавлением по каплям N-Boc-3-иодазетидина (624 мг, 2,20 ммоль) в виде раствора в безводном DMA (5 мл). Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и добавляли метил 5-бром-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоат (470 мг, 1,32 ммоль) в виде раствора в безводном DMA (10 мл). Полученный раствор дегазировали азотом в течение 10 минут, затем добавляли Pd(dppf)Cl2.DCM (32 мг, 0,04 ммоль) и иодид меди(I) (15 мг, 0,08 ммоль) в виде твердых веществ. Реакционную смесь нагревали до 80°C в течение 60 минут и затем охлаждали до комнатной температуры с последующим добавлением дистиллированной воды (50 мл) и насыщенного раствора NH4Cl (10 мл). Водную фазу экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл) и затем объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили при помощи Na2SO4, фильтровали и упаривали досуха с последующей азеотропной перегонкой с гептаном для удаления какого-либо остаточного DMA. Остаток очищали на 10 г колонке Isolute с использованием 0%-25% EtOAc в гептане в качестве элюента, с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого масла (565 мг). ЖХ-МС 100%, 2,12 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 433,2. К этому маслу добавляли DCM (4 мл) с последующим добавлением TFA (1 мл) и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, затем растворитель выпаривали и добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3 до доведения до pH 7-8. Водную фазу экстрагировали при помощи DCM (3×30 мл), промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили при помощи MgSO4, фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (440 мг). ЖХ-МС 100%, m/z = 333,1.
[01525] Стадия 3: Синтез N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метил-5-(1-метилазетидин-3-ил)бензамида
[01526] К перемешиваемому раствору метил 5-(азетидин-3-ил)-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоата (440 мг, 1,32 ммоль) в DCE (10 мл) в атмосфере азота добавляли параформальдегид (278 мг, 9,27 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,15 мл, 2,65 ммоль) и реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,40 г, 6,62 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре, после этого добавляли дистиллированную воду (20 мл) и добавляли твердый NaHCO3 до доведения водной фазы до pH 8 и фазы разделяли, водную фазу промывали при помощи DCM (3×30 мл), объединенные органические слои затем промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали хроматографией на колонке Isolute 10 г (элюировали при помощи 0% до 5% MeOH в DCM) и упаривали с последующей очисткой на оксиде алюминия (элюировали при помощи 0% до 1% MeOH в DCM), с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла, которое использовали непосредственно на следующей стадии синтеза. ЖХ-МС 77%, m/z = 347,1.
[01527] Метил 3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метил-5-(1-метилазетидин-3-ил)бензоат (103 мг, 0,30 ммоль) растворяли в ТГФ (20 мл) и MeOH (5 мл) и добавляли 2M NaOH (1,49 мл, 2,97 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 16 часов, охлаждали, подкисляли до pH 4 с использованием 6M HCl и растворитель выпаривали при пониженном давлении и остаток сушили в вакуумной печи при 40°C в течение 5 часов, с получением неочищенной кислоты. К этой кислоте в DMF (10 мл) добавляли HATU (170 мг, 0,45 ммоль) и DIPEA (130 мкл, 0,74 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут и затем добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 66 мг, 0,39 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов, после этого добавляли дополнительное количество HATU (80 мг) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она (30 мг) и смесь перемешивали еще в течение 5 часов. Реакционную смесь выливали на дистиллированную воду (50 мл), экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл), промывали насыщенным солевым раствором (2×20 мл), сушили при помощи Na2SO4, фильтровали и упаривали. Неочищенный остаток очищали с использованием препаративной ВЭЖХ и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (28 мг, 5% для трех стадий). ЖХ-МС 95%, m/z = 467,3, 1H ЯМР (500 МГц, Ацетон-d6) δ 10,73 (с, 1H), 7,61 (с, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 5,97 (с, 1H), 4,74 (т, J=9,9 Гц, 2H), 4,60 (т, J=9,6 Гц, 2H), 4,38 (кв., J=6,2 Гц, 3H), 3,83 (д, J=11,6 Гц, 2H), 3,27 (с, 3H),3,23 (т, J=11,6 Гц, 2H), 3,10 (дд, J=14,1, 7,0 Гц, 2H), 3,04-2,97 (м, 1H), 2,34 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 2,25 (с, 3H), 1,67 (д, J=11,1 Гц, 2H), 1,56 (тд, J=11,8, 4,1 Гц, 2H), 0,83 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01528] Соединение 332: 3-[бензил(метил)амино]-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-(трифторметил)бензамид
[01529] Стадия 1: Синтез N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-фтор-2-(трифторметил)бензамида
[01530] К перемешиваемому раствору 3-фтор-2-(трифторметил)бензойной кислоты (1,00 г, 4,81 ммоль) в DMF (25 мл), охлажденному на ледяной бане, добавляли HATU (2,19 г, 5,77 ммоль) и DIPEA (1,67 мл, 9,61 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 5 минут, после этого добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 904 мг, 5,29 ммоль) и реакционную смесь нагревали при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь затем выливали на дистиллированную воду (300 мл) и перемешивали в течение 1 часа, после этого осадок собирали путем фильтрования в вакууме с использованием микроволокнистой бумаги. Полученное твердое вещество растирали в порошок с диэтиловым эфиром и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого твердого вещества (1,19 г, 72%). ЖХ-МС 100%, m/z = 343,0, 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 11,48 (с, 1H), 8,54 (т, J=4,8 Гц, 1H), 7,71 (дд, J=13,3, 8,0 Гц, 1H), 7,56-7,45 (м, 1H), 7,20 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, J=4,9 Гц, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,11 (с, 3H).
[01531] Стадия 2: Синтез 3-(бензиламино)-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-(трифторметил)бензамида
[01532] Суспензию N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-фтор-2-(трифторметил)бензамида (0,80 г, 2,34 ммоль) в бензиламине (2,6 мл, 23,4 ммоль) нагревали в микроволновом реакторе при 210°C в течение 4 часов. После охлаждения к суспензии добавляли дистиллированную воду (20 мл) и добавляли 2M HCl до доведения суспензии до pH 5 и смесь экстрагировали при помощи EtOAc (3×50 мл). Объединенные органические слои промывали pH 5 раствором HCl (2×50 мл), насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили при помощи Na2SO4, фильтровали и упаривали. Полученное масло очищали на колонке с 50 г диоксид кремния Isolute, элюируя с использованием градиента 0% до 5% MeOH в DCM, с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (313 мг, 29%). ЖХ-МС 94%, m/z = 430,2, 1H ЯМР (500 МГц, Ацетон-d6) δ 7,41-7,16 (м, 8H), 6,69 (д, J=8,5 Гц, 1H), 6,50 (д, J=7,4 Гц, 1H), 5,87 (с, 1H), 5,84 (с, 1H), 4,53 (д, J=5,7 Гц, 2H), 4,35 (д, J=5,6 Гц, 2H), 2,28, (д, J=4,0 Гц, 3H), 2,21 (с, 3H).
[01533] Стадия 3: Синтез 3-[бензил(метил)амино]-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-(трифторметил)бензамида
[01534] К раствору 3-(бензиламино)-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-(трифторметил)бензамида (100 мг, 0,23 ммоль) в DCE (5 мл) добавляли уксусную кислоту (27 мкл, 0,47 ммоль) с последующим добавлением параформальдегида (7 мг, 0,23 ммоль), затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (74 мг, 0,35 ммоль) одной порцией и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Затем осуществляли дополнительную обработку ацетальдегидом (35 мг), триацетоксиборогидридом натрия (250 мг) и AcOH (100 мл). Еще через 24 часа снова добавляли ацетальдегид (445 мг) и триацетоксиборогидрид натрия (250 мг) и реакционную смесь перемешивали еще в течение 3 часов. К реакционной смеси затем добавляли воду (20 мл) и водную фазу нейтрализовали путем добавления по порциям NaHCO3. Водную фазу экстрагировали при помощи DCM (2×50 мл), затем объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором, сушили (Na2SO4) и упаривали. Продукт очищали с использованием FCC на 5 г Isolute, элюируя смесью 0-5% MeOH в DCM, с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого порошка (24 мг, 22%). ЖХ-МС 95%, 4,12 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 444,2, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 11,10 (шир.с, 1H), 7,44 (т, J=7,8 Гц, 1H), 7,38-7,29 (м, 5H), 7,27-7,23 (м, 1H), 7,12 (д, J=7,4 Гц, 1H), 7,04 (т, J=5,6 Гц, 1H), 5,92 (с, 1H), 4,52 (д, J=5,9 Гц, 2H), 4,09 (с, 2H), 2,60 (с, 3H), 2,38 (с, 3H), 2,19 (с, 3H).
[01535] Соединение 333: 3-[бензил(этил)амино]-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-(трифторметил)бензамид
[01536] К раствору 3-(бензиламино)-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-(трифторметил)бензамида (198 мг, 0,46 ммоль) в DCE (5 мл) добавляли уксусную кислоту (80 мкл, 1,38 ммоль) с последующим добавлением ацетальдегида (129 мкл, 2,31 ммоль), затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (490 мг, 2,31 ммоль) одной порцией и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Дополнительные 4×130 мкл обработки ацетальдегидом и 4×0,5 г триацетоксиборогидридом натрия осуществляли в течение 3 дней для завершения реакции. К реакционной смеси затем добавляли воду (100 мл) и водную фазу нейтрализовали путем добавления по порциям NaHCO3. Водную фазу экстрагировали при помощи DCM (2×50 мл), затем объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором, сушили (Na2SO4) и упаривали. Продукт очищали с использованием FCC на 5 г Isolute, элюируя смесью 0-5% MeOH в DCM, с последующей очисткой при помощи ОФ-ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого порошка (76 мг, 34%). ЖХ-МС 100%, m/z = 458,3, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 11,70 (с, 1H), 7,42 (т, J=7,8 Гц, 1H), 7,36-7,27 (м, 5H), 7,24 (д, J=7,1 Гц, 1H), 7,12 (д, J=7,4 Гц, 1H), 7,03 (д, J=5,4 Гц, 1H), 5,90 (с, 1H), 4,50 (д, J=5,7 Гц, 2H), 4,05 (с, 2H), 2,96 (кв., J=7,1 Гц, 2H), 2,36 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 0,89 (т, J=7,1 Гц, 3H).
[01537] Соединение 334: 3-[бензил(этил)амино)-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метилбензамид
[01538] Стадия 1: Синтез этил 3-(бензиламино)-2-метилбензоата
[01539] К перемешиваемому раствору этил 3-амино-2-метилбензоата (1,00 г, 5,58 ммоль) в DCE (20 мл) добавляли бензальдегид (569 мкл, 5,58 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,64 мл, 11,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа и затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,77 г, 8,37 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов. Добавляли дистиллированную воду (20 мл) и добавляли твердый NaHCO3 до доведения водной фазы до pH 7 и фазы разделяли. Водную фазу промывали при помощи DCM (2×5 0 мл), объединенные органические слои затем промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (1,52 г, 96%), которое использовали на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ-МС 95%, m/z = 270,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,42-7,32 (м, 4H), 7,32-7,28 (м, 1H), 7,17-7,06 (м, 2H), 6,73 (дд, J=7,8, 1,1 Гц, 1H), 4,40 (с, 2H), 4,36 (кв., J=14,3, 5,3 Гц, 2H), 4,08 (шир.с, 1H), 2,35, (с, 3H), 1,39 (т, 3H).
[01540] Стадия 2: Синтез этил 3-[бензил(этил)амино]-2-метилбензоата
[01541] К перемешиваемому раствору этил 3-(бензиламино)-2-метилбензоата (396 мг, 1,47 ммоль) в DCE (10 мл) добавляли ацетальдегид (164 мкл, 2,94 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,17 мл, 2,94 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут и затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,62 г, 2,94 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов. Добавляли дистиллированную воду (30 мл) и затем добавляли твердый NaHCO3 до доведения водной фазы до pH 7, фазы разделяли, водную фазу промывали при помощи DCM (2×50 мл), объединенные органические слои затем промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили с использованием Na2SO4, фильтровали и упаривали. Полученный остаток затем очищали с использованием на колонке с 25 г диоксида кремния Isolute, элюируя с использованием градиента 0% до 5% EtOAc в гептане, с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (372 мг, 81%). ЖХ-МС 94%, m/z = 298,1, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,48 (дд, J=7,5, 1,3 Гц, 1H), 7,29-7,08 (м, 8H), 4,32 (кв., J=7,1 Гц, 2H), 4,05 (с, 2H), 2,92 (кв., J=7,1 Гц, 2H), 2,56 (с, 3H), 1,35 (т, J=7,1 Гц, 3H), 0,92 (т, J=7,1 Гц, 3H).
[01542] Стадия 3: Синтез 3-[бензил(этил)амино]-2-метилбензойной кислоты
[01543] К перемешиваемому раствору этил 3-[бензил(этил)амино]-2-метилбензоата (370 мг, 1,24 ммоль) в ТГФ (20 мл) и MeOH (5 мл) добавляли 2M NaOH (3,11 мл, 6,22 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли в вакууме, затем водный раствор доводили до pH 1 с использованием 1M HCl. Продукт экстрагировали в DCM (3×50 мл), промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили при помощи Na2SO4, концентрировали и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения в виде оранжевого масла (296 мг, 80%), которое использовали на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ-МС 91%, m/z = 270,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,73 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,34-7,30 (м, 4H), 7,23 (дт, J=15,4, 6,9 Гц, 3H), 4,12 (д, J=13,5 Гц, 2H), 3,04-2,94 (м, 2H), 2,69 (с, 3H), 0,99 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01544] Стадия 4: Синтез 3-[бензил(этил)амино]-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метилбензамида
[01545] К перемешиваемому раствору (3-[бензил(этил)амино]-2-метилбензойной кислоты (чистота 91%, 296 мг, 1,0 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли DIPEA (440 мкл, 2,5 ммоль) и HATU (570 мг, 1,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут, после этого добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 222 мг, 1,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь затем выливали на 150 мл воды и перемешивали в течение 20 минут. Продукт фильтровали, сушили на воздухе в вакууме и затем очищали при помощи ОФ-ВЭЖХ. Полученное твердое вещество растирали в порошок с диэтиловым эфиром и выделяли фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (86 мг, 21%). ЖХ-МС 99%, m/z = 404,3, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 12,04 (с, 1H), 7,33-7,23 (м, 4H), 7,21 (т, J=6,8 Гц, 1H), 7,14-7,05 (м, 3H), 7,05-6,99 (м, 1H), 5,92 (с, 1H), 4,53 (д, J=5,9 Гц, 2H), 4,06 (с, 2H), 2,92 (кв., J=6,9 Гц, 2H), 2,41 (с, 3H), 2,39 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 0,92 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01546] Соединение 191: 2-бром-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамид
[01547] Стадия 1: Синтез метил 2-бром-5-хлор-3-нитробензоата
[01548] Раствор метил 2-бром-5-хлорбензоата (10 г, 40 ммоль) в концентрированной H2SO4 (48 мл, 910 ммоль) охлаждали до -5°C на бане ацетон/лед на воздухе. К реакционной смеси добавляли по каплям смесь концентрированной азотной кислоты (3,35 мл, 52 ммоль) и концентрированной H2SO4 (3,4 мл, 64 ммоль) при 0°C в течение 30 минут. Желтую реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1,5 часа, затем выливали на лед. Добавляли EtOAc (150 мл) и фазы разделяли. Органическую фазу промывали деионизированной водой (3×50 мл), затем насыщенным солевым раствором (50 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 12,0 г (60%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла, которое отверждалось при выстаивании. Это вещество содержало 40% 6-нитро изомера. Это вещество использовали без дополнительной очистки. ЖХ-МС 91%, m/z = отсутствие ионизации, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,86 (1H, д, J=2,52 Гц), 7,77 (1H, д, J=2,52 Гц), 3,99 (3H, c).
[01549] Стадия 2: Синтез метил 3-амино-2-бром-5-хлорбензоата
[01550] К раствору метил 2-бром-5-хлор-3-нитробензоата (4,0 г, 14 ммоль) в метаноле (130 мл) при комнатной температуре добавляли хлорид аммония (7,13 г, 136 ммоль) с последующим добавлением деионизированной воды (65 мл). Смесь нагревали до 70°C на воздухе, затем добавляли железо (4,55 г, 81,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 3 часов, давали охладиться до комнатной температуры и фильтровали через Kieselgel. Фильтровальную лепешку промывали при помощи MeOH (65 мл) и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в насыщенном растворе NaHCO3 (50 мл) и EtOAc (100 мл). Фазы разделяли и органическую фазу промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн) (3×50 мл), затем сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (50г диоксид кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 95:5 Гептан:EtOAc до 7:3 Гептан:EtOAc) с получением 1,92 г (48%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. ЖХ-МС 92%, m/z = 268,8/265,8/267,6, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,08 (1H, д, J=2,36 Гц), 6,86 (1H, д, J=2,36 Гц), 4,34-4,49 (2H, м), 3,93 (3H, c).
[01551] Стадия 3: Синтез метил 2-бром-5-хлор-3-(оксан-4-иламино)бензоата
[01552] К раствору метил 3-амино-2-бром-5-хлорбензоата (1,0 г, 3,8 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (15 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли оксан-4-он (0,7 мл, 7,6 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (1,3 мл, 23 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2,4 г, 11 ммоль) при комнатной температуре. Через 21 час добавляли дополнительное количество оксан-4-она (0,7 мл, 7,6 ммоль) к реакционной смеси при перемешивании в течение 10 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2,4 г, 11 ммоль). После перемешивания в течение 20 часов добавляли деионизированную воду (30 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×30 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (25 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 9:1 Гептан:EtOAc до 8:2 Гептан:EtOAc) с получением 903 мг (68%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 92%, 2,11 мин (3 мин ЖХ-МС способ), m/z = 348,2/350,2/351,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 6,94-7,07 (1H, м), 6,70 (1H, д, J=2,36 Гц), 4,72 (1H, д, J=7,57 Гц), 3,96-4,15 (2H, м), 3,87-3,96 (3H, м), 3,40-3,67 (3H, м), 2,05 (2H, д, J=13,08 Гц), 1,49-1,69 (2H, м).
[01553] Стадия 4: Синтез метил 2-бром-5-хлор-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензоата
[01554] К раствору метил 2-бром-5-хлор-3-(оксан-4-иламино)бензоата (300 мг, 0,86 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (3 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли ацетальдегид (96 мкл, 1,7 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,3 мл, 5,16 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,55 г, 2,6 ммоль) при комнатной температуре и реакцию отслеживали при помощи ЖХМС. Через 22 часа к реакционной смеси добавляли дополнительное количество ацетальдегида (96 мкл, 1,7 ммоль) и смесь перемешивали в течение 10 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,55 г, 2,6 ммоль). Через 3 дня реакционную смесь разбавляли 1,2-дихлорэтаном (5 мл). К реакционной смеси добавляли ацетальдегид (962 мкл, 17,2 ммоль) и смесь перемешивали в течение 10 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,82 г, 8,6 ммоль). Через 15 часов к реакционной смеси снова добавляли ацетальдегид (960 мкл, 17,2 ммоль) и смесь перемешивали в течение 10 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,82 г, 8,6 ммоль). Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре еще в течение 22 часов, затем добавляли деионизированную воду (25 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Добавляли EtOAc (25 мл) и фазы разделяли. Водный слой затем экстрагировали при помощи EtOAc (2×25 мл) и объединенный остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 99:1 Гептан:EtOAc до 8:2 Гептан:EtOAc) с получением 122 мг (38%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. ЖХ-МС 85%, m/z = 376,3/378,2/379,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,31 (д, J=2,5 Гц, 1H), 7,18 (д, J=2,4 Гц, 1H), 3,98 (дд, J=8,7, 5,5 Гц, 2H), 3,94 (с, 3H), 3,35 (тд, J=11,6, 5,5 Гц, 2H), 3,19 (т, J=7,1 Гц, 1H), 3,12 (кв., J=7,1 Гц, 2H), 1,75 (тд, J=10,1, 8,8, 3,9 Гц, 4H), 0,92 (т, J=7,1 Гц, 3H).
[01555] Стадия 5: Синтез 2-бром-5-хлор-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты
[01556] К раствору метил 2-бром-5-хлор-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензоата (122 мг, 0,32 ммоль) в тетрагидрофуране (3 мл) добавляли 4M NaOH (3,2 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 20 часов. Реакционную смесь подкисляли до pH 2-3 при помощи 6M HCl и экстрагировали при помощи DCM (3×100 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 109 мг (93%, 83% скорректированные выходы) 2-бром-5-хлор-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты в виде бледно-желтого пенистого вещества. ЖХ-МС 89%, m/z = 361,9/364,2/365,8, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,50 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,23 (д, J=2,4 Гц, 1H), 4,00 (д, J=11,5 Гц, 2H), 3,49-3,27 (м, 2H), 3,21 (т, J=7,4 Гц, 1H), 3,14 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 1,78 (дд, J=7,4, 3,4 Гц, 4H), 0,93 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01557] Стадия 6: Синтез 2-бром-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида
[01558] К раствору 2-бром-5-хлор-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты (109 мг, 0,3 ммоль) в DMF (3 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли PyBOP (187 мг, 0,36 ммоль) с последующим добавлением N-этил-N-(пропан-2-ил)пропан-2-амина (78 мкл, 0,45 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она (89%, 56 мг, 0,33 ммоль). После перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре к реакционной смеси добавляли EtOAc (30 мл) и затем промывали деионизированной водой (2×10 мл), затем насыщенным раствором NaHCO3 (водный) (2×10 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали два раза при помощи FCC (5 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 100% DCM до 98:2 DCM:MeOH). Образец сушили в вакуумной печи в течение 18 часов с получением 103 мг (65%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества. ЖХ-МС 94%, m/z = 496,0/498,0/500,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 11,00 (с, 1H), 7,20-7,10 (м, 1H), 7,10-7,05 (м, 2H), 5,94 (с, 1H), 4,54 (д, J=5,9 Гц, 2H), 3,96 (д, J=11,4 Гц, 2H), 3,42-3,26 (м, 2H), 3,28-3,12 (м, 1H), 3,09 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,39 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 1,72 (тд, J=8,5, 3,8 Гц, 4H), 0,90 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01559] Соединение 102: 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(пиперидин-4-ил)амино]-2-метилбензамид
[01560] Стадия 1: Синтез 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01561] Раствор 5-хлор-2-метилбензойной кислоты (9,9 г, 58 ммоль) в концентрированной H2SO4 (70 мл, 1310 ммоль) охлаждали до -5°C на бане ацетон/лед. К реакционной смеси добавляли по каплям смесь концентрированной азотной кислоты (4,9 мл, 75 ммоль) и концентрированной H2SO4 (5,0 мл, 94 ммоль) при -5°C в течение 30 минут. Реакционную смесь перемешивали при -5°C в течение 2 часов, затем выливали на лед (150 г) и осадок собирали фильтрованием. Осадок растворяли в EtOAc (100 мл) и промывали насыщенным солевым раствором (100 мл), затем сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 11,9 г указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества. Это вещество использовали без дополнительной очистки. ЖХ-МС 57%, m/z = 214,0/216,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 10,37 (1H, шир.с), 8,19 (1H, д, J=2,21 Гц), 7,91 (1H, д, J=2,21 Гц), 2,67 (2H, с).
[01562] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата
[01563] К раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (1,17 г, 5,43 ммоль) в DMF (11 мл) при комнатной температуре и в атмосфере азота добавляли Na2CO3 (862 мг, 8,14 ммоль) с последующим добавлением иодметана (0,51 мл, 8,14 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 19 часов, затем разбавляли деионизированной водой (30 мл) и экстрагировали при помощи EtOAc (3×30 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (30 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 99:1 Гептан:EtOAc до 95:5 Гептан:EtOAc) с получением 900 указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла. ЖХ-МС 89%, m/z = отсутствие ионизации, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,00 (1H, д, J=2,21 Гц), 7,86 (1H, д, J=2,21 Гц), 3,96 (3H, с), 2,60 (3H, с).
[01564] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата
[01565] К раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (9,19 г, 40 ммоль) в метаноле (200 мл) при комнатной температуре добавляли хлорид аммония (21 г, 400 ммоль) с последующим добавлением деионизированной воды (100 мл). Смесь нагревали до 70°C, затем добавляли железо (13,4 г, 240 ммоль). Реакционная смесь становилась темной в течение 2,5 часов, смесь перемешивали при 70°C. Этой смеси давали охладиться до комнатной температуры и фильтровали через Kieselgel. Фильтровальную лепешку промывали при помощи MeOH (100 мл) и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи EtOAc (2×100 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором (100 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 7,6 г указанного в заголовке соединения в виде вязкого оранжевого масла, которое отверждалось при выстаивании. Это вещество использовали без дополнительной очистки. ЖХ-МС 63%, m/z = 200,3/202,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,20 (1H, д, J=2,21 Гц), 6,80 (1H, д, J=2,05 Гц), 3,89 (3H, с), 3,74-3,87 (2H, м), 2,30 (3H, с).
[01566] Стадия 4: Синтез трет-бутил 4-{[5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил]амино}пиперидин-1-карбоксилата
[01567] К раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (100 мг, 0,50 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2,5 мл) при комнатной температуре и в атмосфере азота добавляли трет-бутил 4-оксопиперидин-1-карбоксилат (200 мг, 1,0 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,17 мл, 3,0 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,32 г, 1,5 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали в течение 20 часов в атмосфере азота. Добавляли деионизированную воду (5 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×5 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 99:1 Гептан:EtOAc до 7:3 Гептан:EtOAc) с получением 131 мг (68%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 98%, m/z = 405,4/406,9 (M+Na), 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,10 (1H, д, J=2,05 Гц), 6,70 (1H, д, J=1,89 Гц), 3,98-4,16 (2H, м), 3,88 (3H, с), 3,58-3,72 (1H, м), 3,37-3,52 (1H, м), 2,97 (2H, шир.т, J=11,50, 11,50 Гц), 2,24 (3H, с), 2,06 (2H, шир.д, J=10,60 Гц), 1,44-1,51 (9H, м), 1,32-1,44 (2H, м).
[01568] Стадия 5: Синтез трет-бутил 4-{[5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил](этил)амино}пиперидин-1-карбоксилата
[01569] К раствору трет-бутил 4-{[5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил]амино}пиперидин-1-карбоксилата (125 мг, 0,33 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (1,6 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли ацетальдегид (37 мкл, 0,65 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,11 мл, 1,96 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,21 г, 0,98 ммоль) при комнатной температуре. Реакцию отслеживали при помощи ЖХМС и через 4,5 часа к реакционной смеси добавляли дополнительное количество ацетальдегида (73 мкл, 1,31 ммоль) и триацетоксиборогидрида натрия (0,28 г, 1,31 ммоль). Смесь перемешивали еще в течение 18 часов, затем добавляли деионизированную воду (10 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×10 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 99:1 Гептан:EtOAc до 8:2 Гептан:EtOAc) с получением 131 мг (98%) указанного в заголовке соединения в виде вязкого бесцветного масла. ЖХ-МС 98%, m/z = 433,5/435,1 (M+Na), 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,57 (1H, д, J=2,21 Гц), 7,22 (1H, д, J=2,05 Гц), 3,97-4,14 (2H, м), 3,90 (3H, с), 3,04 (2H, кв., J=6,99 Гц), 2,81-2,91 (1H, м), 2,70 (2H, шир.т, J=11,50, 11,50 Гц), 2,45 (3H, с), 1,69-1,80 (2H, м), 1,47-1,56 (2H, м), 1,46 (9H, с), 0,87 (3H, т, J=7,09 Гц).
[01570] Стадия 6: Синтез 3-({1-[(трет-бутокси)карбонил] пиперидин-4-ил}(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензойной кислоты
[01571] К раствору трет-бутил 4-{[5-хлор-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил](этил)амино}пиперидин-1-карбоксилата (131 мг, 0,32 ммоль) в тетрагидрофуране (2 мл) добавляли LiOH (8,4 мг, 0,35 ммоль) в деионизированной воде (2 мл). Реакционную смесь перемешивали на воздухе при комнатной температуре в течение 24 часов. К реакционной смеси добавляли 1M NaOH (3,19 мл) и смесь перемешивали еще в течение 24 часов. Реакционную смесь затем нагревали до 40°C в течение 25 часов. Реакционную смесь подкисляли до pH 2-3 при помощи 1M HCl и экстрагировали при помощи EtOAc (3×20 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 122 мг указанного в заголовке соединения в виде вязкого оранжевого масла. ЖХ-МС 76%, m/z = 397,5/399,4, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,74 (1H, с), 7,20-7,35 (2H, м), 3,92-4,11 (2H, м), 2,97-3,13 (2H, м), 2,81-2,95 (1H, м), 2,62-2,79 (2H, м), 2,53 (3H, с), 1,75 (2H, шир.s,), 1,48-1,61 (2H, м), 1,46 (9H, с), 0,89 (3H, т, J=6,86 Гц).
[01572] Стадия 7: Синтез трет-бутил 4-[(5-хлор-3-{[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]карбамоил}-2-метилфенил)(этил)амино]пиперидин-1-карбоксилата
[01573] К раствору 3-({l-[(трет-бутокси)карбонил]пиперидин-4-ил}(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензойной кислоты (60 мг, 0,15 ммоль) в DMF (2 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли PyBOP (94 мг, 0,18 ммоль) с последующим добавлением N-этил-N-(пропан-2-ил)пропан-2-амина (40 мкл, 0,23 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она (89%, 28 мг, 0,17 ммоль). После перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре к реакционной смеси добавляли EtOAc (30 мл) и смесь затем промывали деионизированной водой (5 мл), затем насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (3×5 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (2 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 100% EtOAc до 96:4 EtOAc:MeOH) с получением 71 мг (88%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества. ЖХ-МС 97%, m/z = 531,1/533,1, 1H ЯМР (250 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 11,17 (1H, шир.c), 7,11-7,18 (1H, м), 7,06 (2H, дд, J=7,46, 2,28 Гц), 5,96 (1H, с), 4,53 (2H, д, J=5,94 Гц), 3,93-4,14 (2H, м), 2,97-3,08 (2H, м), 2,78-2,88 (1H, м), 2,68 (2H, т, J=11,57 Гц), 2,39 (3H, с), 2,26 (3H, с), 2,24 (3H, с), 1,71 (2H, д, J=11,27 Гц), 1,52 (2H, шир.с), 1,45 (9H, с), 0,86 (3H, т, J=6,93 Гц).
[01574] Стадия 8: Синтез 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(пиперидин-4-ил)амино]-2-метилбензамида
[01575] К раствору трет-бутил 4-[(5-хлор-3-{[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]карбамоил}-2-метилфенил)(этил)амино]пиперидин-1-карбоксилата (140 мг, 0,26 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл) при комнатной температуре добавляли HCl (4M в диоксан) (1,32 мл). После перемешивания в течение небольшого периода времени образовывалась смола, которую затем растворяли путем добавления деионизированной воды (2 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 21 часа, затем концентрировали при пониженном давлении с получением вязкого масла. Добавляли DCM (3 мл), и проиходило образование твердого вещества. Эту смесь концентрировали с получением 105 мг желтого твердого вещества, которое перемешивали в DCM (10 мл) в течение 1 часа, затем фильтровали и сушили в условиях высокого вакуума в вакуумной печи в течение 24 часов. Образец затем растворяли в деионизированной воде (0,2 мл) и лиофилизировали с получением 86 мг (70%) указанного в заголовке соединения в виде бежевого твердого вещества. ЖХ-МС 100%, m/z = 431,2/433,2, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,44 (шир.с, 1H), 7,26 (шир.с, 1H), 6,69 (шир.с, 1H), 4,55 (с, 2H), 3,53-3,34 (м, 3H), 3,28-3,08 (м, 2H), 3,01 (т, J=11,8 Гц, 2H), 2,51 (с, 3H), 2,43 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,16-1,96 (м, 2H), 1,91-1,76 (м, 2H), 0,92 (т, J=6,9 Гц, 3H).
[01576] Соединение 192: 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метоксибензамид
[01577] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-2-метокси-3-нитробензоата
[01578] К концентрированной H2SO4 (90 мл) добавляли по порциям 5-хлор-2-метилбензойную кислоту (13,2 г, 77,6 ммоль) при 0°C. Затем добавляли по каплям смесь концентрированной HNO3 (10,5 г, 1740 ммоль) в концентрированной H2SO4 (15 мл) при 0°C в течение около 1,5 часов. После завершения добавления смесь перемешивали при этой температуре в течение 2 часов. Смесь выливали на ледяную воду при интенсивном перемешивании и осадок собирали фильтрованием. Осадок растворяли в EtOAc, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (13,2 г), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС 95%, m/z = 245,9/247,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 8,01 (1H, д, J=2,68 Гц), 7,91 (1H, д, J=2,68 Гц), 4,01 (3H, с), 3,97-3,99 (3H, с).
[01579] Стадия 2: Синтез метил 3-амино-5-хлор-2-метоксибензоата
[01580] К раствору метил 5-хлор-2-метокси-3-нитробензоата (1,21 г, 4,93 ммоль) в метаноле (50 мл) при комнатной температуре добавляли хлорид аммония (2,59 г, 49,2 ммоль) с последующим добавлением деионизированной воды (25 мл). Смесь нагревали до 70°C, затем добавляли железо (1,65 г, 29,6 ммоль). Реакционная смесь становилась темной в течение 2 часов, и смесь перемешивали при 70°C. Этой смеси давали охладиться до комнатной температуры и фильтровали через Kieselgel. Фильтровальную лепешку промывали при помощи MeOH (50 мл) и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в деионизированной воде (25 мл) и EtOAc (25 мл). Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи EtOAc (2×25 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором (25 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 892 мг (67%) указанного в заголовке соединения в виде вязкого коричневого масла. Это вещество использовали без дополнительной очистки. ЖХ-МС 89%, 1,75 мин (3 мин ЖХ-МС способ), m/z = 216,3/218,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,16 (1H, д, J=2,52 Гц), 6,87 (1H, д, J=2,52 Гц), 4,03 (2H, шир.с), 3,89-3,94 (3H, м), 3,84 (3H, с).
[01581] Стадия 3: Синтез метил 5-хлор-2-метокси-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата
[01582] К раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метоксибензоата (440 мг, 2 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (8 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли оксан-4-он (0,38 мл, 4,0 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,7 мл, 12 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,3 г, 6,1 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 23 часов добавляли деионизированную воду (16 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×16 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 9:1 Гептан:EtOAc до 7:3 Гептан:EtOAc) с получением 439 мг (72%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 97%, m/z = 300,3/302,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,06 (1H, д, J=2,52 Гц), 6,73 (1H, д, J=2,52 Гц), 4,38-4,45 (1H, м), 4,02 (2H, дт, J=11,78, 3,49 Гц), 3,91 (3H, с), 3,81 (3H, с), 3,54 (2H, тд, J=11,47, 2,13 Гц), 3,40-3,50 (1H, м), 2,03 (2H, шир.д, J=13,70 Гц), 1,48-1,55 (2H, м).
[01583] Стадия 4: Синтез метил 5-хлор-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метоксибензоата
[01584] К раствору метил 5-хлор-2-метокси-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (220 мг, 0,73 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли ацетальдегид (82 мкл, 1,47 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,25 мл, 4,4 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,47 г, 2,2 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 16 часов к реакционной смеси добавляли ацетальдегид (82 мкл, 1,47 ммоль) и перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,47 г, 2,2 ммоль). После перемешивания в течение 24 часов, к реакционной смеси добавляли дополнительное количество ацетальдегида (82 мкл, 1,47 ммоль) и перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,47 г, 2,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 24 часов, после этого добавляли деионизированную воду (10 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×10 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 95:5 Гептан:EtOAc до 7:3 Гептан:EtOAc) с получением 127 мг (53%) указанного в заголовке соединения в виде желтого масла. ЖХ-МС 93%, m/z = 328,4/330,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,35 (д, J=2,6 Гц, 1H), 7,09 (д, J=2,6 Гц, 1H), 3,98 (дд, J=11,3, 4,2 Гц, 2H), 3,91 (с, 3H), 3,85 (с, 3H), 3,48 (тт, J=11,6, 4,0 Гц, 1H), 3,36 (тд, J=11,8, 1,9 Гц, 2H), 3,15 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 1,78 (кв.д, J=12,2, 4,6 Гц, 2H), 1,72-1,59 (м, 2H), 0,99 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01585] Стадия 5: Синтез 5-хлор-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метоксибензойной кислоты
[01586] К раствору метил 5-хлор-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метоксибензоата (127 мг, 0,39 ммоль) в ТГФ (4 мл) добавляли 4M NaOH (3,87 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 24 часов. Реакционную смесь подкисляли до pH 2-3 при помощи 6M HCl и экстрагировали при помощи DCM (5×15 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 111 мг (91%) указанного в заголовке соединения в виде желтого масла. ЖХ-МС 80%, 1,25 мин (3 мин ЖХ-МС способ), m/z = 314,4/315,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 10,02-9,55 (м, 1H), 8,01-7,47 (м, 1H), 7,36-6,96 (м, 1H), 4,15-3,86 (м, 5H), 3,76 (т, J=6,6 Гц, 2H), 3,55-3,12 (м, 3H), 1,95-1,59 (м, 4H), 1,15-0,88 (м, 3H).
[01587] Стадия 6: Синтез 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метоксибензамида
[01588] К раствору 5-хлор-3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метоксибензойной кислоты (111 мг, 0,35 ммоль) в DMF (3 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли PyBOP (220 мг, 0,42 ммоль) с последующим добавлением N-этил-N-(пропан-2-ил)пропан-2-амина (92 мкл, 0,53 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она (89%, 66 мг, 0,39 ммоль). После перемешивания в течение 1,5 часа при комнатной температуре не оставалось никакого исходного вещества согласно данным ЖХМС. К реакционной смеси добавляли деионизированную воду (20 мл) и полученный осадок сушили. Твердое вещество промывали деионизированной водой (3×5 мл) и затем сушили на воздухе. Твердое вещество дополнительно очищали при помощи FCC (5 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 100% DCM до 97:3 DCM:MeOH). Образец сушили в вакуумной печи в течение 18 часов с получением 105 мг (64%) указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ-МС 98%, m/z = 449,5/452,1, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 11,47 (с, 1H), 8,79 (т, J=5,8 Гц, 1H), 7,73 (д, J=2,6 Гц, 1H), 7,05 (д, J=2,6 Гц, 1H), 5,92 (с, 1H), 4,55 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,98 (дд, J=11,3, 3,8 Гц, 2H), 3,78 (с, 3H), 3,35 (т, J=11,6 Гц, 3H), 3,12 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,42 (с, 3H), 2,28 (с, 3H), 1,92-1,61 (м, 4H), 0,94 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01589] Соединение 212: 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метокси-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензамид
[01590] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-2-метокси-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензоата
[01591] К раствору метил 5-хлор-2-метокси-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (500 мг, 1,67 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (16 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли параформальдегид (300 мг, 10 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,57 мл, 10 ммоль). Эту смесь перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2,12 г, 10 ммоль). После перемешивания в течение 64 часов добавляли деионизированную воду (30 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3 и фазы разделяли. Водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (3×15 мл) и объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксид кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 9:1 Гептан:EtOAc до 7:3 Гептан:EtOAc) с получением 431 мг (82%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. ЖХ-МС 98%, m/z = 314,0/316,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,30 (д, J=2,5 Гц, 1H), 7,04 (д, J=2,5 Гц, 1H), 4,00 (дд, J=11,3, 4,3 Гц, 2H), 3,90 (с, 3H), 3,82 (с, 3H), 3,70 (ддт, J=11,7, 7,7, 3,8 Гц, 1H), 3,39 (т, J=11,1 Гц, 2H), 2,71 (с, 3H), 1,84 (кв.д, J=12,3, 4,6 Гц, 2H), 1,66-1,55 (м, 2H).
[01592] Стадия 2: Синтез 5-хлор-2-метокси-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты
[01593] К раствору метил 5-хлор-2-метокси-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензоата (413 мг, 1,32 ммоль) в ТГФ (13 мл) и MeOH (2 мл) добавляли 4M NaOH (13,16 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 16 часов. Реакционную смесь подкисляли до pH 2-3 при помощи 6M HCl и экстрагировали при помощи DCM (5×10 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 385 мг (98%) указанного в заголовке соединения в виде вязкого желтого масла. ЖХ-МС 94%, m/z = 300,0/302,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,74 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,30-7,12 (м, 1H), 4,11-4,02 (м, 2H), 4,01 (с, 3H), 3,54 (т, J=11,6 Гц, 1H), 3,40 (т, J=11,3 Гц, 2H), 2,76 (с, 3H), 1,97-1,78 (м, 2H), 1,63 (д, J=11,8 Гц, 2H).
[01594] Стадия 3: Синтез 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метокси-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензамида
[01595] К раствору 5-хлор-2-метокси-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты (200 мг, 0,67 ммоль) в DMF (2 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли HBTU (304 мг, 0,80 ммоль) с последующим добавлением N-этил-N-(пропан-2-ил)пропан-2-амина (174 мкл, 1,0 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она (89%, 125 мг, 0,73 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре к реакционной смеси добавляли EtOAc (30 мл) и смесь затем промывали деионизированной водой (5 мл), затем насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (3×5 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксид кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 100% DCM до 96:4 DCM:MeOH) с получением 182 мг (63%) указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ-МС 98%, m/z = 434,1/436,1, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 12,52 (шир.с, 1H), 8,76 (т, J=5,8 Гц, 1H), 7,69 (д, J=2,6 Гц, 1H), 7,01 (д, J=2,6 Гц, 1H), 5,94 (с, 1H), 4,56 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,99 (дд, J=11,2, 3,9 Гц, 2H), 3,72 (с, 3H), 3,49 (тт, J=11,5, 3,7 Гц, 1H), 3,36 (т, J=11,2 Гц, 2H), 2,67 (с, 3H), 2,42 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 1,93-1,73 (м, 2H), 1,64-1,52 (м, 2H).
[01596] Соединение 205: 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензамид
[01597] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-2-[2-(триметилсилил)этинил]бензоата
[01598] К раствору метил 2-бром-5-хлорбензоата (14,8 г, 59 ммоль) в TEA (124 мл, 890 ммоль) добавляли иодид меди(I) (338 мг, 1:78 ммоль) и трифенилфосфин (778 мг, 2,97 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота. Эту смесь барботировали азотом в течение 10 минут, затем добавляли этинил(триметил)силан (12,45 мл, 89 ммоль) и Pd(OAc)2 (266 мг, 1,19 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 20 часов, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в деионизированной воде (50 мл) и EtOAc (50 мл) и фильтровали через целит. Фильтровальную лепешку промывали при помощи EtOAc (50 мл), затем фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×50 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксид кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 99:1 Гептан:EtOAc до 85:15 Гептан:EtOAc) с получением 16,2 г (102,4%) указанного в заголовке соединения в виде оранжевого масла, которое отверждалось при выстаивании и содержало остаточный гептан. ЖХ-МС 91%, m/z = 267,4/268,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,89 (д, J=2,2 Гц, 1H), 7,51 (д, J=8,3 Гц, 1H), 7,41 (дд, J=8,3, 2,3 Гц, 1H), 3,92 (с, 3H), 0,27 (с, 9H).
[01599] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-этинилбензоата
[01600] К раствору метил 5-хлор-2-[2-(триметилсилил)этинил]бензоата (10 г, 37,5 ммоль) в MeOH (150 мл) добавляли K2CO3 (10,4 г, 75 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в деионизированной воде (50 мл) и EtOAc (50 мл). Фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×50 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (50 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 95:5 Гептан:EtOAc до 9:1 Гептан:EtOAc) с получением 5,75 г (55%) указанного в заголовке соединения в виде оранжевого масла, которое отверждалось при выстаивании. Это вещество содержало 30% этилового эфира и было подходящим для использования без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ-МС 38%, m/z = 195,0/196,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,93 (д, J=2,2 Гц, 1H), 7,55 (д, J=8,3 Гц, 1H), 7,45 (дд, J=8,3, 2,3 Гц, 1H), 3,94 (с, 3H), 3,43 (с, 1H).
[01601] Стадия 3: Синтез метил 5-хлор-2-этилбензоата
[01602] К раствору метил 5-хлор-2-этинилбензоата (5,34 г, 27 ммоль) в этилацетате (135 мл) добавляли Pd/C (10%) (50% воды, 2,92 г, 1,37 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 3 часов. Смесь фильтровали через Целит. Фильтровальную лепешку промывали при помощи EtOAc (50 мл) и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 5,12 г (94%) указанного в заголовке соединения в виде коричневого масла, которое было подходящим для использования без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ-МС 56%, m/z = 198,9/200,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,84 (д, J=2,3 Гц, 1H), 7,39 (дд, J=8,3, 2,3 Гц, 1H), 7,21 (д, J=8,3 Гц, 1H), 3,90 (с, 3H), 2,94 (кв., J=7,5 Гц, 2H), 1,21 (т, J=7,5 Гц, 3H).
[01603] Стадия 4: Синтез метил 5-хлор-2-этил-3-нитробензоата
[01604] Раствор метил 5-хлор-2-этилбензоата (5,12 г, 25,8 ммоль) в концентрированной H2SO4 (31 мл, 587 ммоль) охлаждали до -5°C на бане ацетон/лед. К реакционной смеси добавляли по каплям смесь концентрированной азотной кислоты (2,15 мл, 33,5 ммоль) и концентрированной H2SO4 (2,0 мл, 37,5 ммоль) при -5°C в течение 15 минут. Бледно-желтую реакционную смесь перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем выливали на лед (500 мл) и смесь экстрагировали при помощи EtOAc (3×100 мл). Объединенные органические фазы промывали деионизированной водой (100 мл) и затем насыщенным солевым раствором (100 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. ЖХМС и ЯМР показали ~30% гидролиз сложного эфира. Неочищенное вещество растворяли в метаноле (30 мл) и охлаждали до 0°C в атмосфере азота, при этом медленно добавляли SOCl2 (2,25 мл, 30,93 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в течение 6 часов, затем концентрировали при пониженном давлении с получением 6,18 г (98%) указанного в заголовке соединения, содержащего вещество в виде оранжевого масла, которое представляло собой 1:1 смесь 3-нитро:6-нитро изомеров вместе с некоторым количеством этилового эфира. Вещество было подходящим для использования на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.
[01605] Стадия 5: Синтез метил 3-амино-5-хлор-2-этилбензоата
[01606] К раствору метил 5-хлор-2-этил-3-нитробензоата (6,18 г, 25,4 ммоль) в метаноле (250 мл) при комнатной температуре добавляли хлорид аммония (13,3 г, 253 ммоль) с последующим добавлением деионизированной воды (125 мл). Смесь нагревали до 70°C, затем добавляли железо (8,50 г, 152 ммоль). Реакционная смесь становилась темной в течение 2,5 часов, и смесь перемешивали при 70°C. Этой смеси давали охладиться до комнатной температуры и фильтровали через Kieselgel. Фильтровальную лепешку промывали при помощи MeOH (250 мл) и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в насыщенном растворе NaHCO3 (водн.) (50 мл) и EtOAc (150 мл). Фазы разделяли и органическую фазу промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (2×50 мл), затем сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (50 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 95:5 Гептан:EtOAc до 75:25 Гептан:EtOAc) с получением 2,42 г неочищенного метил 3-амино-5-хлор-2-этилбензоата в виде желтого масла. Это вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС 31%, m/z = 295,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,17 (д, J=2,1 Гц, 1H), 6,79 (д, J=2,1 Гц, 1H), 3,87 (с, 3H), 3,86-3,81 (м, 2H), 2,74 (кв., J=7,5 Гц, 2H), 1,20 (т, J=7,5 Гц, 3H).
[01607] Стадия 6: Синтез метил 5-хлор-2-этил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата
[01608] К раствору метил 3-амино-5-хлор-2-этилбензоата (1,5 г, 7,02 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (28 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли оксан-4-он (1,3 мл, 14 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (2,41 мл, 42 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (4,46 г, 21 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 20 часов добавляли деионизированную воду (28 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×28 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (50 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 95:5 Гептан:EtOAc до 8:2 Гептан:EtOAc) с получением 1,76 г неочищенного метил 5-хлор-2-этил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата в виде белого твердого вещества. Это вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС 60%, m/z = 298,0/300,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,07 (д, J=2,0 Гц, 1H), 6,71 (д, J=1,9 Гц, 1H), 4,01 (дт, J=11,8, 3,4 Гц, 2H), 3,87 (с, 3H), 3,82-3,76 (м, 1H), 3,64-3,47 (м, 3H), 2,79-2,63 (м, 2H), 2,06 (д, J=13,2 Гц, 2H), 1,55-1,46 (м, 2H), 1,18 (т, J=7,5 Гц, 3H).
[01609] Стадия 7: Синтез метил 5-хлор-2-этил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензоата
[01610] К раствору метил 5-хлор-2-этил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (350 мг, 1,18 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (10 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли параформальдегид (212 мг, 7,05 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,4 мл, 7,05 ммоль). Эту смесь перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,49 г, 7,05 ммоль). После перемешивания в течение 23 часов к реакционной смеси добавляли дополнительное количество параформальдегида (212 мг, 7,05 ммоль) и смесь перемешивали в течение 10 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,49 г, 7,05 ммоль). После перемешивания в течение 3 часов добавляли деионизированную воду (15 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3 и фазы разделяли. Водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×15 мл) и объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 99:1 Гептан:EtOAc до 85:15 Гептан :EtOAc) с получением 334 мг указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. Продукт содержал ~22% этилового эфира. Это вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС 56%, m/z = 312,0/314,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,52 (д, J=2,2 Гц, 1H), 7,24 (д, J=2,2 Гц, 1H), 4,01-3,93 (м, 2H), 3,89 (с, 3H), 3,34 (тд, J=11,7, 2,3 Гц, 2H), 3,06-2,96 (м, 2H), 2,94-2,85 (м, 1H), 2,61 (с, 3H), 1,76-1,59 (м, 4H), 1,10 (т, J=7,4 Гц, 3H).
[01611] Стадия 8: Синтез 5-хлор-2-этил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты
[01612] К раствору метил 5-хлор-2-этил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензоата (334 мг, 1,07 ммоль) в ТГФ (11 мл) добавляли 4M NaOH (10,7 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 27 часов. К реакционной смеси добавляли MeOH (5 мл) и смесь перемешивали еще в течение 21 часов при 50°C. Реакционную смесь подкисляли до pH 2-3 при помощи 6M HCl и экстрагировали при помощи DCM (5×10 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 311 мг указанного в заголовке соединения в виде оранжевого масла, которое отверждалось при выстаивании. Это вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС 79%, 2,01 мин (3 мин ЖХ-МС способ), m/z = 298,0/300,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,72 (д, J=2,1 Гц, 1H), 7,37-7,27 (м, 1H), 4,00 (brd, J=11,1 Гц, 2H), 3,36 (тд, J=11,6, 2,0 Гц, 2H), 3,11 (кв., J=7,4 Гц, 2H), 2,94 (т, J=10,6 Гц, 1H), 2,64 (с, 3H), 1,78-1,56 (м, 4H), 1,15 (т, J=7,4 Гц, 3H).
[01613] Стадия 9: Синтез 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензамида
[01614] К раствору 5-хлор-2-этил-3-[метил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты (100 мг, 0,34 ммоль) в DMF (2 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли HBTU (153 мг, 0,4 ммоль) с последующим добавлением N-этил-N-(пропан-2-ил)пропан-2-амина (88 мкл, 0,5 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она (89%, 63 мг, 0,37 ммоль). После перемешивания в течение 3 часов при комнатной температуре к реакционной смеси добавляли EtOAc (30 мл) и смесь затем промывали деионизированной водой (5 мл), затем насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (3×5 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (5 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 100% DCM до 96:4 DCM:MeOH) с получением 94 мг (65%) указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ-МС 95%, m/z = 432,1/434,1, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 11,34 (с, 1H), 7,14-7,08 (м, 2H), 7,03 (д, J=2,0 Гц, 1H), 5,95 (с, 1H), 4,52 (д, J=5,8 Гц, 2H), 3,96 (д, J=11,2 Гц, 2H), 3,33 (тд, J=11,4, 2,3 Гц, 2H), 2,96-2,85 (м, 1H), 2,79 (кв., J=7,4 Гц, 2H), 2,58 (с, 3H), 2,39 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 1,73-1,62 (м, 4H), 1,05 (т, J=7,4 Гц, 3H).
[01615] Соединение 206: 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензамид
[01616] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-2-этил-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензоата
[01617] К раствору метил 5-хлор-2-этил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (350 мг, 1,18 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (10 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли ацетальдегид (0,66 мл, 11,8 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,4 мл, 7,05 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2,49 г, 11,8 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 23 часов к темной реакционной смеси добавляли ацетальдегид (0,66 мл, 11,8 ммоль) и смесь перемешивали в течение 10 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2,49 г, 11,8 ммоль). После перемешивания в течение 3 часов добавляли деионизированную воду (15 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×15 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (10 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 99:1 Гептан:EtOAc до 85:15 Гептан :EtO Ac) с получением 317 мг указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. Продукт содержал ~25% этилового эфира. Это вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС 55%, 2 m/z = 326,0/328,0, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,52 (д, J=2,2 Гц, 1H), 7,23 (д, J=2,2 Гц, 1H), 3,97 (д, J=11,1 Гц, 2H), 3,90 (с, 3H), 3,32 (тд, J=11,6, 2,5 Гц, 2H), 3,04 (кв., J=7,1 Гц, 4H), 2,93 (ддд, J=15,1, 10,8, 4,3 Гц, 1H), 1,76-1,62 (м, 4H), 1,08 (т, J=7,4 Гц, 3H), 0,88 (т, J=7,1 Гц, 3H).
[01618] Стадия 2: Синтез 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензамида
[01619] К раствору метил 5-хлор-2-этил-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензоата (317 мг, 0,97 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавляли 4M NaOH (9,73 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 27 часов. К реакционной смеси добавляли MeOH (5 мл) и смесь перемешивали еще в течение 21 часа при 50°C. Реакционную смесь подкисляли до pH 2-3 при помощи 6M HCl и экстрагировали при помощи DCM (5×10 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 289 мг указанного в заголовке соединения в виде оранжевого масла, которое отверждалось при выстаивании. Это вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС 79%, m/z = 311,95/313,95, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,73 (д, J=1,7 Гц, 1H), 7,29 (д, J=1,8 Гц, 1H), 3,99 (д, J=11,0 Гц, 2H), 3,38-3,29 (м, 2H), 3,20-3,03 (м, 4H), 3,02-2,91 (м, 1H), 1,78-1,61 (м, 4H), 1,13 (т, J=7,4 Гц, 3H), 0,91 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01620] Стадия 3: Синтез 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензамид
[01621] К раствору 5-хлор-2-этил-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты (100 мг, 0,32 ммоль) в DMF (2 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли HBTU (146 мг, 0,38 ммоль) с последующим добавлением N-этил-N-(пропан-2-ил)пропан-2-амина (84 мкл, 0,48 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она (89%, 60,3 мг, 0,35 ммоль). После перемешивания в течение 3 часов при комнатной температуре к реакционной смеси добавляли EtOAc (30 мл) и смесь затем промывали деионизированной водой (5 мл), затем насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (3×5 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи FCC (5 г диоксида кремния, Isolute картридж, градиент элюентов; 100% EtOAc до 97:3 EtOAc:MeOH) с получением 90 мг (63%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 97%, m/z = 446,1/448,2, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 11,93 (с, 1H), 7,14 (т, J=5,7 Гц, 1H), 7,10 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,04 (д, J=2,0 Гц, 1H), 5,95 (с, 1H), 4,52 (д, J=5,8 Гц, 2H), 3,95 (д, J=11,2 Гц, 2H), 3,30 (тд, J=11,3, 3,6 Гц, 2H), 3,01 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,93 (ддд, J=15,3, 10,0, 5,3 Гц, 1H), 2,83 (кв., J=7,4 Гц, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 1,71-1,63 (м, 4H), 1,02 (т, J=7,5 Гц, 3H), 0,86 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01622] Соединение 243: 5-бром-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензамид
[01623] Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01624] Раствор 5-бром-2-метилбензойной кислоты (5,0 г, 23 ммоль) в концентрированной H2SO4 (27 мл, 512 ммоль) охлаждали до 5°C на бане ацетон/лед. К реакционной смеси добавляли по каплям смесь концентрированной азотной кислоты (1,9 мл, 30 ммоль) и концентрированной H2SO4 (2,8 мл, 52 ммоль) при -5°C в течение 15 минут. Желтую реакционную смесь перемешивали при -5°C в течение 2 часов, за это время происходило образование желтого осадка. Реакционную смесь выливали на лед (150 г) и осадок затем собирали фильтрованием. Осадок сушили на воздухе с получением указанного в заголовке соединения (5,5 г, 52%) в виде бледно-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ м.д. 8,29 (с, 1H) 8,13 (д, J=1,58 Гц, 1H) 2,43 (с, 3H).
[01625] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоата
[01626] К раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (5,5 г, 21 ммоль) в DMF (42 мл) в атмосфере азота добавляли Na2CO3 (3,4 г, 32 ммоль) с последующим добавлением иодметана (2,0 мл, 32 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь разбавляли деионизированной водой (150 мл) и экстрагировали при помощи EtOAc (4×50 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (2×50 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (6,3 г, 61%) в виде желтого масла. 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,38 (д, J=2,05 Гц, 1H) 7,23 (д, J=2,05 Гц, 1H) 3,20 (с, 3H) 1,82 (с, 3H).
[01627] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата
[01628] К раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоата (6,3 г, 21 ммоль) в метаноле (150 мл) добавляли хлорид аммония (11,0 г, 210 ммоль) с последующим добавлением деионизированной воды (75 мл). Смесь нагревали до 70°C, затем добавляли железо (7,0 г, 125 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 часов, затем давали охладиться до комнатной температуры и фильтровали через Kieselgel. Фильтровальную лепешку промывали при помощи MeOH (150 мл) и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в насыщенном растворе NaHCO3 (водн.) (50 мл) и EtOAc (150 мл). Фазы разделяли и органическую фазу промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (3×50 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (50 г диоксида кремния, Isolute картридж, 5-20% EtOAc:Гептан) с получением указанного в заголовке соединения (3,0 г, 51%) в виде вязкого бледно-желтого масла. ЖХ-МС 87%, m/z = 243,9, 244,9, 245,9, 246,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,34 (д, J=1,89 Гц, 1H) 6,95 (д, J=1,89 Гц, 1H) 3,88 (с, 3H) 3,80 (шир.с, 2H) 2,29 (с, 3H).
[01629] Стадия 4: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата
[01630] К раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (3,0 г, 12 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (48 мл) в атмосфере азота добавляли оксан-4-он (2,3 мл, 25 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (4,2 мл, 74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (7,8 г, 37 ммоль). После перемешивания в течение 64 часов добавляли деионизированную воду (100 мл) и смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3. Фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (4×50 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (50 г диоксида кремния, Isolute картридж, 10-30% EtOAc:Гептан) с получением указанного в заголовке соединения (3,5 г 85%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 99,8% m/z = 327,9, 328,9, 329,9, 330,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,24 (д, J=1,73 Гц, 1H) 6,85 (д, J=1,58 Гц, 1H) 4,03 (дт, J=11,82, 3,31 Гц, 2H) 3,88 (с, 3H) 3,66 (шир.с, 1H) 3,56 (тд, J=11,55, 1,97 Гц, 2H) 3,47-3,55 (м, 1H) 2,24 (с, 3H) 2,06 (д, J=13,56 Гц, 2H) 1,47-1,60 (м, 2H).
[01631] Стадия 5: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензоата
[01632] К раствору метил 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (500 мг, 1,5 ммоль) и TFA 915 мл) порциями в течение 5 минут добавляли NaBH4 (1,0 г, 26 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и затем нагревали до 50°C в течение 3 часов и обрабатывали с использованием еще одной аликвоты NaBH4 (300 мг) в течение 25 минут. Реакционную смесь затем нагревали до 60°C в течение 2 часов и оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 17 часов. Реакционную смесь обрабатывали при помощи TFA (5 мл) и NaBH4 (200 мг) и нагревали снова до 60°C в течение 3,5 часов. Добавляли еще одну аликвоту NaBH4 (200 мг) в течение 15 минут вместе с TFA (5 мл) и нагревание продолжали еще в течение 3 часов, затем оставляли выстаиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выливали на лед (75 мл) и перемешивали до тех пор, пока лед не растаял. Реакционную смесь затем подщелачивали путем добавления 6M NaOH (водн.) (40 мл) и снова доводили до pH 7 с использованием 1M HCl (водн.) (40 мл). Полученную белую суспензию собирали фильтрованием, твердое вещество промывали водой (20 мл) и сушили в вакууме при 40°C в течение 3 часов с получением указанного в заголовке соединения (577 мг, 91%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 98%, m/z = 409,90, 410,9, 411,90, 412,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,80 (д, J=1,73 Гц, 1H) 7,41 (д, J=1,73 Гц, 1H) 4,01 (дд, J=11,51, 4,10 Гц, 2H) 3,91 (с, 3H) 3,64 (д,J=5,20 Гц, 2H) 3,32 (т, J=11,82 Гц, 2H) 2,99 (тт, J=11,43, 3,63 Гц, 1H) 2,48 (с, 3H) 1,80 (дд, J=12,53, 1,50 Гц, 2H) 1,54-1,62 (м, 2H).
[01633] Стадия 6: Синтез 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензойной кислоты
[01634] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензоата (572 мг, 1,4 ммоль) в смеси ТГФ (14 мл) и MeOH (2,1 мл) добавляли 4M NaOH (водн.) (13,9 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 5,5 часов и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 17 часов. ТГФ удаляли путем концентрирования в вакууме и водный остаток подкисляли до pH 4 при помощи 6M HCl (9,5 мл). Полученной суспензии давали выстояться при комнатной температуре в течение 20 минут, затем твердое вещество собирали фильтрованием. Твердую лепешку промывали водой (20 мл) и сушили в условиях высокого вакуума в течение 2 часов с получением указанного в заголовке соединения (507 мг, 90%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 98%, m/z = 395,9, 396,9, 397,9, 398,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,97 (д, J=1,73 Гц, 1H) 7,48 (д, J=1,73 Гц, 1H) 4,02 (дд, J=11,35, 3,94 Гц, 2H) 3,65 (шир.с, 2H) 3,33 (т, J=11,59 Гц, 2H) 3,00 (тт, J=11,49, 3,80 Гц, 1H) 2,55 (с, 3H) 1,82 (д, J=11,98 Гц, 2H) 1,55-1,69 (м, 2H). OH не видимый.
[01635] Стадия 7: Синтез 5-бром-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензамида
[01636] Перемешиваемый раствор метил 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензоата (250 мг, 0,63 ммоль) в безводном DMF (3,0 мл) при 0°C в атмосфере азота обрабатывали при помощи HATU (288 мг, 0,76 ммоль) и DIPEA (220 мкл, 1,3 ммоль) по каплям. Полученный раствор перемешивали в течение 5 минут и затем обрабатывали 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (89%, 119 мг, 0,69 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°C в течение 20 минут и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 16,5 часов. Реакционную смесь обрабатывали 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (30 мг). Перемешивание продолжали в течение 23 часов и реакционную смесь затем распределяли между водой (30 мл) и CH2Cl2 (20 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NaHCO3 (50 мл), водой (60 мл), насыщенным солевым раствором (2×40 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (10г SNAP картридж, Isolera, 0-10% МеОН/CH2Cl2) и растирали в порошок с простым эфиром (10 мл) при обработке ультразвуком. Образовавшийся осадок собирали фильтрованием и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (249 мг, 74%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 100%, m/z = 530,0, 531,0, 532,0, 533,0; 1H ЯМР (500 МГц, ацетон) δ 10,67 (с, 1H), 7,55 (д, J=1,8 Гц, 2H), 7,27 (д, J=1,9 Гц, 1H), 5,90 (с, 1H), 4,40 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,90 (дд, J=11,2, 4,6 Гц, 4H), 3,28 (т, J=11,6 Гц, 2H), 3,07-2,97 (м, 1H), 2,32 (с, 3H), 2,29 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,76 (дд, J=12,3, 1,6 Гц, 2H), 1,61 (кв.д, J=12,0, 4,5 Гц, 2H).
[01637] Соединение 244: 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метилбензамид
[01638] Стадия 1: Синтез метил 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоата
[01639] Перемешиваемый раствор метил 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)амино]-бензоата (500 мг, 1,5 ммоль) в дифторуксусной кислоте (15 мл) обрабатывали тетрагидроборатом натрия (1000 мг, 26 ммоль) по порциям в течение 12 минут. Реакционную смесь нагревали до 50°C и перемешивали в течение 4 часов. Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры и затем выливали на лед (130 мл) и оставляли на 5 минут. Смесь подщелачивали путем добавления 6M NaOH (водн.) (35 мл) и pH доводили до 7 с использованием 1M HCl (водн.) (20 мл). Полученной суспензии давали выстояться до получения прозрачного раствора и полученное твердое вещество собирали фильтрованием и сушили в вакууме при 40°C с получением указанного в заголовке соединения (572 мг, 96%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 100%, m/z = 391,9, 392,9, 393,9, 394,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,79 (д, J=1,89 Гц, 1H) 7,44 (д, J=1,89 Гц, 1H) 5,44-5,71 (м, 1H) 4,00 (дд, J=11,51, 4,10 Гц, 2H) 3,91 (с, 3H) 3,41 (тд, J=13,99, 4,18 Гц, 2H) 3,32 (т, J=11,27 Гц, 2H) 2,97 (тт, J=11,37, 3,84 Гц, 1H) 2,47 (с, 3H) 1,72-1,81 (м, 2H) 1,59-1,67 (м, 2H).
[01640] Стадия 2: Синтез 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензойной кислоты
[01641] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоата (571 мг, 1,5 ммоль) в смеси ТГФ (14,6 мл) и MeOH (2,2 мл) добавляли 4M NaOH (14,6 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 7 часов. Нагрев отключали и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16,5 часов. ТГФ удаляли в вакууме и водный остаток подкисляли до pH 4 путем добавления 6M HCl (водн.) (10 мл) при охлаждении льдом. Полученное твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой (20 мл) и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (526 мг, 96%) в виде светло-бежевого твердого вещества. ЖХ-МС 100%, m/z = 377,9, 378,9, 379,9, 380,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,91 (д, J=1,58 Гц, 1H) 7,49 (д, J=1,58 Гц, 1H) 5,43-5,75 (м, 1H) 4,01 (дд, J=11,43, 3,55 Гц, 2H) 3,42 (тд, J=13,95, 3,78 Гц, 2H) 3,32 (т, J=11,35 Гц, 2H) 2,98 (тт, J=11,37, 3,53 Гц, 1H) 2,52 (с, 3H) 1,77 (д, J=10,88 Гц, 2H) 1,56-1,69 (м, 2H). OH не видимый.
[01642] Стадия 3: Синтез 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метилбензамида
[01643] Перемешиваемый раствор 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензойной кислоты (250 мг, 0,66 ммоль) в безводном DMF (3,0 мл) при 0°C в атмосфере азота, обрабатывали при помощи HATU (327 мг, 0,86 ммоль) и DIPEA (230 мкл, 1,3 ммоль) по каплям. Полученный раствор перемешивали в течение 5 минут и затем обрабатывали 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (89%, 136 мг, 0,79 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°C в течение 20 минут и затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Через 18 часов добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (25 мг) и перемешивание продолжали еще в течение 25 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (30 мл) и CH2Cl2 (30 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (45 мл), водой (2×50 мл), насыщенным солевым раствором (2×50 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-3% МеОН:CH2Cl2) и затем растирали в порошок с простым эфиром. Полученное твердое вещество собирали фильтрованием и сушили в вакууме при 40°C с получением указанного в заголовке соединения (259 мг, 77%) в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ-МС 100%, m/z = 512,0, 513,0, 514,0, 515,0; 1H ЯМР (500 МГц, ацетон) δ 10,71 (с, 1H), 7,57-7,49 (м, 2H), 7,25 (д, J=1,9 Гц, 1H), 5,91 (с, 1H), 5,76 (тт, J=56,2, 4,3 Гц, 1H), 4,40 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,88 (дд, J=11,3, 4,2 Гц, 2H), 3,52 (тд, J=14,6, 4,2 Гц, 2H), 3,33-3,23 (м, 2H), 3,02 (тт, J=11,6, 3,9 Гц, 1H), 2,32 (с, 3H), 2,28 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,73 (дд, J=12,4, 1,9 Гц, 2H), 1,59 (кв.д, J=12,2, 4,5 Гц, 2H).
[01644] Соединение 328: N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-[этил(оксан-4-ил)амино]-3-метилпиридин-4-карбоксамид
[01645] Стадия 1: Синтез 2-хлор-N-фенилпиридин-4-карбоксамида
[01646] К перемешиваемой суспензии 2-хлоризоникотиновой кислоты (5,0 г, 0,03 моль) в безводном толуоле (100 мл) и 4 каплях DMF добавляли по каплям тионилхлорид (7,4 мл, 0,10 моль) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 2,5 часов и температуру постепенно повышали до 100°C в течение 1,5 часа и поддерживали при этой температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 65 часов, затем обрабатывали с использованием еще одного эквивалента тионилхлорида (2,3 мл) и нагревали до 95°C в течение 40 минут. Реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры и затем концентрировали досуха в вакууме и подвергали азеотропной перегонке с безводным толуолом (2×10 мл) с получением желтого подвижного масла, которое использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
[01647] К перемешиваемому раствору анилина (2,9 мл, 0,03 моль) и N-этил-N-(пропан-2-ил)пропан-2-амина (13,6 мл, 83 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) добавляли хлорангидрид кислоты, полуученный выше, по каплям. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 19 часов. Реакцию затем гасили путем добавления насыщенного раствора гидрокарбоната натрия (водн.) (100 мл) и перемешивали в течение 35 минут. Слои разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом (3×55 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой (3×66 мл), насыщенным солевым раствором (80 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток суспендировали в диэтиловом эфире (100 мл), быстро обрабатывали ультразвуком и продукт собирали фильтрованием. Продукт сушили в условиях высокого вакуума в течение 3 часов при комнатной температуре, затем оставляли в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения (6,1 г, 83%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 100%, m/z = 233,0, 234,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 8,58 (д, J=5,04 Гц, 1H) 7,81 (шир.с, 1H) 7,77 (с, 1H) 7,63 (д, J=7,41 Гц, 3H) 7,42 (т, J=7,96 Гц, 2H) 7,19-7,26 (м, 1H).
[01648] Стадия 2: Синтез 2-хлор-N,3-диметил-N-фенилпиридин-4-карбоксамида
[01649] К перемешиваемому раствору 2-хлор-N-фенилпиридин-4-карбоксамида (2,0 г, 8,6 ммоль) в безводном ТГФ (40 мл) при -78°C в атмосфере азота добавляли по каплям раствор 1,6M бутиллития в н-гексане (11,8 мл, 18,9 ммоль) в течение 24 минут. Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 50 минут и затем обрабатывали иодметаном (1,8 мл, 28 ммоль) по каплям в течение 8 минут. Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 1 часа и затем оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 часов. Реакцию гасили водой (20 мл) и слои разделяли. Водную фазу экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×20 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (60 мл), сушили (MgSO4), фильтровали, концентрировали в вакууме, с получением указанного в заголовке соединения (2,2 г, 93%) в виде вязкого коричневого масла. ЖХ-МС 95%, m/z = 261,0, 263,0; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 8,03 (д, J=4,89 Гц, 1H) 7,23 (д, J=7,88 Гц, 2H) 7,16-7,21 (м, 1H) 7,02 (д, J=7,25 Гц, 2H) 6,89 (д, J=4,89 Гц, 1H) 3,51 (с, 3H) 2,34 (с, 3H).
[01650] Стадия 3: Синтез 2-хлор-3-метилпиридин-4-карбоновой кислоты
[01651] 2-хлор-N,3-диметил-N-фенилпиридин-4-карбоксамид (2,2 г, 8,5 ммоль) обрабатывали смесью концентрированной H2SO4 (23,2 мл) и воды (16,8 мл) и затем нагревали до 130°C в течение 46 часов. Затем реакционную смесь оставляли для доведения до комнатной температуры и выливали на лед (200 мл) и перемешивали до тех пор, пока лед не растаял. Смесь подщелачивали (pH 8) путем добавления твердого Na2CO3 (50,3 г) по порциям. Суспензию фильтровали и фильтрат подкисляли до pH 3 путем добавления 6M HCl (водн.) (~1,5 мл). Полученное твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой (20 мл) и сушили в вакууме при 40°C в течение 10 часов с получением указанного в заголовке соединения (779 мг, 54%) в виде ярко-розового твердого вещества. ЖХ-МС 100%, m/z = 171,9, 173,9; 1H ЯМР (500 МГц, MeOD) δ м.д. 8,30 (д, J=4,89 Гц, 1H) 7,64 (д, J=5,04 Гц, 1H) 2,58 (с, 3H).
[01652] Стадия 4: Синтез метил 2-хлор-3-метилпиридин-4-карбоксилата
[01653] К перемешиваемому раствору 2-хлор-3-метилпиридин-4-карбоновой кислоты (780 мг, 4,5 ммоль) в безводном DMF (5,0 мл) добавляли карбонат калия (1,25 г, 9,1 ммоль) с последующим добавлением метилиодида (0,42 мл, 6,8 ммоль) по каплям. Добавляли еще 4 мл DMF и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 18,5 часов. Растворитель удаляли в вакууме и остаток затем распределяли между CH2Cl2 (20 мл) и водой (20 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические слои промывали водой (2×30 мл), насыщенным солевым раствором (40 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-6% этилацетат:гептан) с получением указанного в заголовке соединения (591 мг, 59%) в виде бесцветного масла. ЖХ-МС 84%, m/z = 185,9, 187,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 8,33 (д, J=5,04 Гц, 1H) 7,54 (д, J=5,04 Гц, 1H) 3,95 (с, 3H) 2,60 (с, 3H).
[01654] Стадия 5: Синтез метил 3-метил-2-[(оксан-4-ил)амино]пиридин-4-карбоксилата
[01655] Суспензию Pd(OAc)2 (77 мг, 0,34 ммоль) и 1,1'-бинафталин-2,2'-диилбис(дифенилфосфан) (430 мг, 0,69 ммоль) в 1,4-диоксане (11 мл) продували азотом и нагревали при 40°C в течение 1 часа. Затем добавляли оксан-4-амин (237 мкл, 2,3 ммоль), раствор метил 2-хлор-3-метилпиридин-4-карбоксилата (213 мг, 1,2 ммоль) в дегазированном диоксане (2 мл) и Cs2CO3 (562 мг, 1,7 ммоль) и красную суспензию нагревали при 100°C в течение 6 часов. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли при помощи CH2Cl2 (30 мл) и воды (20 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (25 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (25 г SNAP картридж, Isolera, 0-28% этилацетат:гептан), затем препаративной ВЭЖХ (MeCN/Вода) с получением указанного в заголовке соединения (112 мг, 39%) в виде белого кристаллическического твердого вещества. ЖХ-МС 100%, m/z = 251,0; 1H ЯМР (500 МГц, MeOD) δ м.д. 7,91 (д, J=5,20 Гц, 1H) 6,77 (д, J=5,36 Гц, 1H) 4,07-4,17 (м, 1H) 3,98 (дд, J=12,06, 1,81 Гц, 2H) 3,88 (с, 3H) 3,55 (тд, J=11,78, 1,66 Гц, 2H) 2,22 (с, 3H) 1,97 (дд, J=12,69, 1,97 Гц, 2H) 1,62 (кв.д, J=12,03, 4,41 Гц, 2H). NH не наблюдается.
[01656] Стадия 6: Синтез 2-[этил(оксан-4-ил)амино]-3-метилпиридин-4-карбоновой кислоты
[01657] Раствор метил 3-метил-2-[(оксан-4-ил)амино]пиридин-4-карбоксилата (67 мг, 0,27 ммоль) в безводном DMF (1,0 мл) добавляли к перемешиваемой суспензии гидрида натрия (60% дисперсия в минеральном масле, 16 мг, 0,4 ммоль) в DMF (0,3 мл) при 0°C в атмосфере азота. Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 30 минут. Реакционную смесь затем обрабатывали иодэтаном (16 мкл, 0,20 ммоль) и перемешивали в течение 30 минут и затем обрабатывали снова иодэтаном (16 мкл, 0,20 ммоль) и перемешивали еще в течение 30 минут. Реакционную смесь добавляли к суспензии гидрида натрия (16 мг, 0,4 ммоль) в DMF (0,3 мл) при 0°C. После завершения добавления реакционную смесь оставляли для доведения до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 часа, затем обрабатывали иодэтаном (2×16 мкл, 0,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивали еще в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли гидрид натрия (16 мг, 0,4 ммоль) и смесь перемешивали в течение 45 минут, затем обрабатывали иодэтаном (2×16 мкл, 0,40 ммоль) и перемешивали в течение 15 минут, затем добавляли в атмосфере азота к раствору 4M HCl/диоксан (5,0 мл) при охлаждении.
[01658] Реакционную смесь затем концентрировали в вакууме при 40°C и обрабатывали при помощи 1M NaOH (водн.) (5 мл) и подщелачивали путем добавления 10 NaOH гранул до pH 12 при охлаждении. pH снова доводили до pH 10 путем добавления 6M HCl. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь затем подкисляли до pH 5 путем добавления 1M HCl (80 капель). Полученный раствор экстрагировали при помощи CHCl3/IPA (1:1) (6×10 мл). Объединенные экстракты концентрировали в вакууме с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (207 мг) в виде желтого масла. ЖХ-МС 100%, m/z = 265,1. Это вещество использовали непосредственно в реакции связывания, как описано ниже.
[01659] Стадия 7: Синтез N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-[этил(оксан-4-ил)амино]-3-метилпиридин-4-карбоксамид
[01660] Перемешиваемый раствор 2-[этил(оксан-4-ил)амино]-3-метилпиридин-4-карбоновой кислоты (20 мг, 0,08 ммоль) в безводном DMF (1,0 мл) при 0°C в атмосфере азота обрабатывали при помощи HATU (37 мг, 0,1 ммоль) и DIPEA (26 мкл, 0,15 ммоль) по каплям. Полученный раствор перемешивали в течение 10 минут и затем обрабатывали 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (89%, 15 мг, 0,09 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°C в течение 20 минут и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 18,5 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и снова обрабатывали при помощи HATU (120 мг, 0,31 ммоль) и DIPEA (84 мкл, 0,48 ммоль). После перемешивания в течение 10 минут добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 49 мг, 0,29 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при 0°C и затем извлекали из ледяной бани и перемешивали при комнатной температуре в течение 48 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (20 мл) и CH2Cl2 (20 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические фазы промывали водой (2×25 мл), насыщенным солевым раствором (2×25 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-40% MeOH:CH2Cl2 и 0-25% MeOH (содержащий 10% NH4OH): CH2Cl2) с получением 6,7 мг (22% выход) указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ-МС 100%, m/z = 399,1; 1H ЯМР (250 МГц, DMSO) δ 11,49 (с, 1H), 8,32 (т, J=4,9 Гц, 1H), 8,14 (д, J=4,9 Гц, 1H), 6,84 (д, J=4,9 Гц, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,26 (д, J=4,7 Гц, 2H), 3,84 (дд, J=10,3, 3,5 Гц, 2H), 3,21 (дт, J=13,6, 4,6 Гц, 5H), 2,19 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,62 (дт, J=21,1, 6,6 Гц, 4H), 0,80 (т, J=6,9 Гц, 3H).
[01661] Соединение 356: 5-хлор-3-{этил[(1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}-N-[(5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метилбензамид
[01662] Стадия 1: Синтез 5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила
[01663] К перемешиваемому раствору 2-цианоацетамида (689 мг, 8,2 ммоль) в безводном EtOH (7,0 мл) при 75°C добавляли 3-фторпентан-2,4-дион (880 мг, 7,5 ммоль), с последующим добавлением пиперидина (96 мкл, 0,97 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при этой температуре в течение 3 часов и реакционную смесь оставляли для достижения комнатной температуры, затем хранили в холодильнике в течение 4 дней. Бежевое твердое вещество собирали фильтрованием и промывали холодным EtOH (4×0,4 мл) до тех пор, пока фильтрат не становился прозрачным. Полученное бежевое твердое вещество сушили в вакууме при 40°C в течение 5 часов с получением указанного в заголовке соединения (733 мг, 58%) в виде бежевого твердого вещества. ЖХ-МС 97%, m/z = 166,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 13,67 (шир.с, 1H) 2,46 (д, J=2,05 Гц, 3H) 2,45 (д, J=2,84 Гц, 3H).
[01664] Стадия 2: Синтез 3-(аминометил)-5-фтор-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она
[01665] Раствор 0,05M 5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (731 мг, 4,4 ммоль) в 1,75M NH3/MeOH (87 мл) пропускали через H-Cube проточный гидрогенизатор при 80°C и 50 бар при скорости потока 1 мл/мин. Полученный раствор концентрировали в вакууме. Полученное твердое вещество разделяли на 2 партии и 350 мг неочищенного продукта очищали колоночной хроматографией (25 г SNAP картридж, Isolera, 0-25% MeOH (содержащий 10% NH4OH):CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения (307 мг, 20%) в виде не совсем белого твердого вещества и 1:1 смесь продукт:исходное вещество. ЖХ-МС (ELS) 100%, m/z = 170,9, 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 3,79 (с, 2H) 2,31 (д, J=2,84 Гц, 3H) 2,25 (д, J=2,05 Гц, 3H).
[01666] Стадия 3: Синтез 5-хлор-3-{этил[(1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}-2-метилбензойной кислоты
[01667] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-{этил[(1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}-2-метилбензоата (1,0 г, 2,8 ммоль) в ТГФ (21 мл) добавляли раствор 4М NaOH (водн.) (21,3 мл, 85,0 ммоль), затем МеОН (8,0 мл). Полученный раствор перемешивали при 50°C в течение 16,5 часов и охлаждали до комнатной температуры. Органические растворители удаляли в вакууме и оставшуюся водную фазу обрабатывали раствором 6M HCl (водн.) (14 мл) для доведения pH до 7 и затем 0,1 M HCl (водн.) (24 мл) для доведения pH до 4. Смесь экстрагировали этилацетатом (3×35 мл). Водный экстракт дополнительно экстрагировали смесью CHCl3:IPA (1:1) (3×30 мл). Объединенные CHCl3:IPA экстракты сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме и затем тщательно сушили в условиях высокого вакуума. Полученное твердое вещество подвергали азеотропной перегонке с толуолом (3×20 мл). Затем к образцу добавляли CH2Cl2 (10 мл), концентрировали в вакууме и снова сушили в условиях высокого вакуума в течение нескольких часов. Это давало указанное в заголовке соединение (831 мг, 88%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 92% m/z = 339,0, 341,0; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 12,21 (с, 1H) 7,69 (д, J=2,05 Гц, 1H) 7,22-7,26 (м, 1H) 2,99-3,11 (м, 3H) 2,69-2,79 (м, 7H) 2,47 (с, 3H) 2,28 (д, J=11,98 Гц, 2H) 2,05 (д, J=13,08 Гц, 2H) 1,35-1,65 (м, 4H) 0,88 (т, J=7,01 Гц, 3H).
[01668] Стадия 4: Синтез 5-хлор-3-{этил[(1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}-N-[(5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метилбензамид
[01669] К перемешиваемому раствору 5-хлор-3-{этил[(1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}-2-метилбензойной кислоты (100 мг, 0,27 ммоль) в безводном DMF (2,0 мл) при 0°C в атмосфере азота добавляли HATU (121 мг, 0,32 ммоль) и DIPEA (93 мкл, 0,53 ммоль) по каплям. Полученный раствор перемешивали в течение 10 минут и затем обрабатывали 3-(аминометил)-5-фтор-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (50%, 99 мг, 0,29 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°C в течение 1 часа и затем перемешивали в течение 17 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь распределяли между водой (15 мл) и CH2Cl2 (20 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи CH2Cl2 (2×15 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (30 мл), водой (2×25 мл), насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-29% MeOH:CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения (68 мг, 52%) в виде бежевого твердого вещества. ЖХ-МС 99%, m/z = 491,1, 493,1; 1H ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 7,17 (д, J=1,9 Гц, 1H), 7,02 (д, J=2,0 Гц, 1H), 4,59 (с, 1H), 4,44 (с, 2H), 3,06 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,69 (тт, J=12,1, 3,2 Гц, 1H), 2,41-2,29 (м, 10H), 2,24 (д, J=2,8 Гц, 3H), 2,20 (с, 3H), 1,91 (дд, J=27,7, 12,2 Гц, 4H), 1,44 (кв., J=12,3, 11,1 Гц, 2H), 1,30-1,20 (м, 2H), 0,83 (т, J=7,0 Гц, 3H). Предполагают, что один протон совпадает с пиком растворителя.
[01670] Соединение 347: 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-{этил[(1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}бензамид и Соединение 348: 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-{этил[(1s,4s)-4-диметиламино)циклогексил]амино}бензамид
[01671] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-2-[2-(триметилсилил)этинил]бензоата
[01672] К перемешиваемому раствору метил 2-бром-5-хлорбензоата (14,8 г, 59 ммоль) в триэтиламине (124 мл, 890 ммоль) добавляли иодид меди (339 мг, 1,8 ммоль) и трифенилфосфин (778 мг, 3,0 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота. Эту смесь продували азотом, затем добавляли этинил(триметил)силан (12,5 мл, 89 ммоль) и Pd(OAc)2 (266 мг, 1,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 20 часов и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в деионизированной воде (50 мл) и EtOAc (50 мл) и фильтровали через Целит. Фильтровальную лепешку промывали при помощи EtOAc (50 мл), затем фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи EtOAc (2×50 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (10 г диоксида кремния, Isolute картридж, 1-15% EtOAc:Гептан) с получением указанного в заголовке соединения (16,2 г, 93%) в виде оранжевого твердого вещества. ЖХ-МС 91%, m/z = 267,4, 268,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,90 (д, J=2,21 Гц, 1H) 7,52 (д, J=8,35 Гц, 1H) 7,42 (дд, J=8,28, 2,29 Гц, 1H) 3,93 (с, 3H) 0,28 (с, 9H).
[01673] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-этинилбензоата
[01674] Суспензию карбоната калия (5,0 г, 36 ммоль) в метаноле (20 мл) перемешивали в атмосфере азота при добавлении раствора метил 5-хлор-2-[2-(триметилсилил)этинил]бензоата (4,8 г, 18,0 ммоль) в метаноле (50 мл). Полученную смесь перемешивали при 20°C в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали и твердое вещество промывали метанолом. Фильтрат концентрировали в вакууме и затем снова растворяли в метаноле (50 мл) и осторожно обрабатывали ацетилхлоридом (4,0 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи и концентрировали в вакууме. К остатку добавляли TBME (50 мл) и полученную суспензию фильтровали. Фильтрат промывали насыщенным раствором NaHCO3 (40 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи TBME (3×40 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (50 г Isolute картридж, 0-10% TBME:Гептан) с получением указанного в заголовке соединения (1,2 г, 33%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС 93%, m/z = 194,9, 196,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,94 (с, 1H), 7,56 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,46 (д, J=8,4 Гц, 1H), 3,95 (с, 3H), 3,44 (с, 1H).
[01675] Стадия 3: Синтез метил 5-хлор-2-этилбензоата
[01676] К раствору метил 5-хлор-2-этинилбензоата (1,13 г, 5,8 ммоль) в TBME (50 мл) добавляли Pd/C (10%) (50% воды, 0,61 г, 0,29 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода в течение 130 минут. Смесь фильтровали через Целит и фильтровальную лепешку промывали при помощи TBME. Фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (1,08 г, 74%) в виде бледно-коричневого масла. ЖХ-МС 79%, m/z = 198,9/200,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,85 (с, 1H) 7,40 (д, J=8,20 Гц, 1H) 7,22 (д, J=8,20 Гц, 1H) 3,91 (с, 3H) 2,95 (кв., J=7,46 Гц, 2H) 1,22 (т, J=7,49 Гц, 3H).
[01677] Стадия 4: Синтез метил 5-хлор-2-этил-3-нитробензоата
[01678] Раствор метил 5-хлор-2-этилбензоата (1,08 г, 5,4 ммоль) в концентрированной серной кислоте (7,0 мл) охлаждали до -5°C на бане ацетон/лед. К реакционной смеси добавляли по каплям смесь 70% азотной кислоты (0,45 мл, 7,1 ммоль) и концентрированной серной кислоты (0,5 мл) при -5°C в течение 15 минут. Полученную бледно-желтую реакционную смесь перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем выливали на лед (100 мл) и экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×20 мл). Объединенные органические фазы промывали деионизированной водой (20 мл), насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Полученное масло добавляли к раствору, содержащему метанол (25 мл) и тионилхлорид (0,75 мл), при 0°C. После добавления смесь нагревали при слабом кипячении с обратным холодильником в течение 6 часов, затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (1,2 г) в виде оранжевого масла, которое использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.
[01679] Стадия 5: Синтез метил 3-амино-5-хлор-2-этилбензоата
[01680] К раствору метил 5-хлор-2-этил-3-нитробензоата (1,2 г, 5,0 ммоль) в метаноле (50 мл) и деионизированной воде (25 мл) добавляли хлорид аммония (2,6 г, 50 ммоль). Смесь нагревали до 70°C, затем добавляли железо (1,7 г, 30 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 3,5 часов, фильтровали горячей через Целит и фильтровальную лепешку промывали при помощи MeOH (20 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме и водный остаток растворяли в насыщенном растворе NaHCO3 (водн.) (50 мл) и EtOAc (100 мл). Фазы разделяли и органическую фазу промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (2×65 мл), насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией (25 г SNAP картридж, Isolera, 0-11% этилацетат/гептан) с получением указанного в заголовке соединения (372 мг, 33%) в виде желтого масла. ЖХ-МС 94%, m/z = 213,9, 215,9; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,18 (д, J=2,21 Гц, 1H) 6,80 (д, J=2,05 Гц, 1H) 3,88 (с, 3H) 3,85 (д, J=2,52 Гц, 2H) 2,75 (кв., J=7,57 Гц, 2H) 1,21 (т, J=7,49 Гц, 3H).
[01681] Стадия 6: Синтез метил 3-[(4-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}циклогексил)амино]-5-хлор-2-этилбензоата
[01682] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-этилбензоата (365 мг, 1,7 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (20 мл) в атмосфере азота добавляли трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамат (364 мг, 1,7 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (587 мкл, 10,3 ммоль). Раствор перемешивали в течение 10 минут, затем добавляли по порциям триацетоксиборогидрид натрия (1,09 г, 5,1 ммоль) в течение 1 часа. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 17 часов, затем обрабатывали трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбаматом (364 мг, 1,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут и затем обрабатывали триацетоксиборогидридом натрия(1,09 г, 5,1 ммоль) в течение 2,5 часов. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре еще в течение 26 часов, затем добавляли деионизированную воду (40 мл). Смесь нейтрализовали при помощи твердого NaHCO3 (2,95 г) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором (35 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (25 г SNAP картридж, Isolera, 0-18% EtOAc/Гептан) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (623 мг, 85%) в виде смеси цис/транс изомеров. ЖХ-МС 46,1%, 2,61 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 411,1, 413,1 и 50,2%, 2,66 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 411,1, 413,1; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,05 (дд, J=7,09, 2,05 Гц, 1H) 6,68 (т, J=2,36 Гц, 1H) 4,36-4,63 (м, 1H) 3,88 (д, J=3,31 Гц, 3H) 3,62-3,78 (м, 1H) 3,49 (шир.с, 1H) 3,23 (шир.с, 1H) 2,63-2,76 (м, 2H) 2,07-2,18 (м, 2H) 1,77-1,89 (м, 2H) 1,69 (шир.с, 1H) 1,46 (с, 9H) 1,27 (м, 3H) 1,13-1,24 (м, 3H).
[01683] Стадия 7: Синтез метил 3-[(4-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}циклогексил)(этил)амино]-5-хлор-2-этилбензоата
[01684] К перемешиваемому раствору метил 3-[(4-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}циклогексил)амино]-5-хлор-2-этилбензоат а(200 мг, 0,49 ммоль) в безводном 1,2-дихлорэтане (5,0 мл), добавляли ацетальдегид (54 мкл, 1,0 ммоль), с последующим добавлением уксусной кислоты (167 мкл, 2,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 50 минут, добавляли триацетоксиборогидрид натрия (309 мг, 1,5 ммоль) в течение 2 часов и реакционную смесь перемешивали в течение 20 часов. Реакционную смесь обрабатывали ацетальдегидом (54 мкл, 1,0 ммоль), перемешивали в течение 1 часа и добавляли по порциям триацетоксиборогидрид натрия (309 мг], 5 ммоль) в течение 2 часов. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 22 часов и затем обрабатывали ацетальдегидом (136 мкл, 2,4 ммоль) и перемешивали в течение 1 часа, с последующей обработкой триацетоксиборогидридом натрия (516 мг, 2,4 ммоль) в течение 1,5 часов и перемешиванием в течение 22 часов. Реакционную смесь обрабатывали ацетальдегидом (109 мкл, 2,0 ммоль) и перемешивали в течение 1,5 часов, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (413 мг, 2,0 ммоль) в течение 2 часов вместе с дихлорэтаном (5,0 мл) для облегчения перемешивания. Реакционную смесь перемешивали в течение 19 часов, затем добавляли ацетальдегид (82 мкл, 1,5 ммоль), перемешивали в течение 1,5 часов, с последующим добавлением триацетоксиборогидрида натрия (309 мг, 1,5 ммоль) в течение 45 минут. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 70 часов, затем разбавляли водой (20 мл) и pH доводили до 8 путем постепенного добавления твердого NaHCO3 (2,53 г). Слои разделяли и водный слой экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×20 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (60 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-30% EtO Ac/Гептан) с получением указанного в заголовке соединения (163 мг, 73%) в виде желтого масла и смеси цис/транс изомеров. ЖХ-МС 100%, 5,83 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 439,2, 441,2; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,45-7,55 (м, 1H) 7,22 (дд, J=4,33, 2,13 Гц, 1H) 4,25-4,67 (м, 1H) 3,90 (д, J=2,21 Гц, 3H) 3,29-3,76 (м, 1H) 2,95-3,11 (м, 4H) 2,58-2,96 (м, 1H) 1,62-2,03 (м, 4H) 1,38-1,53 (м, 11H) 1,01-1,14 (м, 4H) 0,81-0,94 (м, 4H).
[01685] Стадия 8: Синтез 3-[(4-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}циклогексил)(этил)амино]-5-хлор-2-этилбензойной кислоты
[01686] К перемешиваемому раствору метил 3-[(4-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}циклогексил)(этил)амино]-5-хлор-2-этилбензоата (156 мг, 0,36 ммоль) в ТГФ (4,0 мл) и MeOH (0,29 мл) добавляли раствор 4M NaOH (водн.) (2,7 мл, 10,7 ммоль). Полученный раствор перемешивали при 50°C в течение 17 часов. Реакционную смесь обрабатывали при помощи 4M NaOH (водн.) (0,5 мл, 2,0 ммоль) и перемешивание продолжали при 50°C в течение 32 часов. Нагрев удаляли и реакционную смесь оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 65 часов. Реакционную смесь обрабатывали при помощи 4M NaOH (водн.) (1,0 мл, 4,0 ммоль) и нагревали снова до 50°C в течение 24 часов. Органические растворители удаляли в вакууме и водную фазу обрабатывали раствором 0,5M лимонной кислоты (20 мл) для доведения pH до 4/5. Продукт экстрагировали этилацетатом (3×25 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме и затем снова сушили в условиях высокого вакуума в течение 4 часов с получением указанного в заголовке соединения (142 мг, 92%) в виде белого твердого вещества и смеси цис/транс изомеров. ЖХ-МС 98%, 5,49 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 425,1, 427,1. 1H ЯМР показывает смесь цис/транс изомеров.
[01687] Стадия 9: Синтез трет-бутил N-{4-[(5-хлор-3-{[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]карбамоил}-2-этилфенил)(этил)амино]циклогексил}карбамата
[01688] Перемешиваемый раствор 3-[(4-{[(трет-бутокси)карбонил]амино}циклогексил)(этил)амино]-5-хлор-2-этилбензойной кислоты (139 мг, 0,33 ммоль) в безводном DMF (2,0 мл) при 0°С в атмосфере азота обрабатывали при помощи HATU (149 мг, 0,39 ммоль) и DIPEA (114 мкл, 0,65 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 10 минут и затем обрабатывали 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (89%, 61 мг, 0,36 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°C в течение 1 часа и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 98,5 часов. Реакционную смесь обрабатывали при помощи HATU (37 мг, 0,1 ммоль), перемешивали в течение 1 часа и затем добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 11 мг, 0,07 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре еще в течение 23 часов и затем распределяли между водой (20 мл) и CH2Cl2 (20 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (40 мл), водой (20 мл), насыщенным солевым раствором (2×20 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-13% MeOH/CH2Cl2) и растирали в порошок с простым эфиром/гептаном (2,0 мл) при обработке ультразвуком и жидкость сливали. Оставшееся твердое вещество сушили в условиях высокого вакуума с получением указанного в заголовке соединения (101 мг, 52%) в виде бежевого твердого вещества. ЖХ-МС 93%, 4,54 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 559,2, 561,2. 1H ЯМР показывает смесь цис/транс изомеров.
[01689] Стадия 10: Синтез 3-[(4-аминоциклогексил)(этил)амино]-5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этилбензамида
[01690] К перемешиваемому раствору трет-бутил N-{4-[(5-хлор-3-{[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]карбамоил}-2-этилфенил)(этил)амино]циклогексил}карбамата (100 мг, 0,18 ммоль) в CH2Cl2 (4,0 мл) при 0°C добавляли трифторуксусную кислоту (1,0 мл). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 40 минут и затем перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток подщелачивали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (10 мл) до доведения до pH 8. Водный остаток экстрагировали при помощи 20% МеОН/CH2Cl2 (4×15 мл). Объединенные органические слои сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (108 мг, 113%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ-МС 48%, 2,88 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 459,1 и 39%, 2,96 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 459,1. 1H ЯМР показывает смесь цис/транс изомеров.
[01691] Стадия 11: Синтез 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-{этил[(1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}бензамида и 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-{этил[(1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}бензамида.
[01692] Перемешиваемый раствор 3-[(4-аминоциклогексил)(этил)амино]-5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этилбензамида (80 мг, 0,18 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (3,0 мл), обрабатывали уксусной кислотой (60 мкл, 1,0 ммоль) и параформальдегидом (31 мг, 1,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 35 минут в атмосфере азота, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (222 мг, 1,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16,5 часов, затем добавляли параформальдегид (16 мг, 0,52 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 1 часа, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (111 мг, 0,52 ммоль). Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов и затем обрабатывали параформальдегидом (10 мг, 0,35 ммоль), перемешивали в течение 10 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (74 мг, 0,35 ммоль) и 1,2-дихлорэтан (1,0 мл) и перемешивали еще в течение 89 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (20 мл) и подщелачивали до pH 8 путем добавления твердого NaHCO3 (1,45 г). Добавляли CH2Cl2 (20 мл) и слои разделяли. Водную фазу экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×10 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали препаративной-ВЭЖХ (MeCN/вода + 0,2% гидроксида аммония) с получением чистого транс изомера указанного в заголовке соединения 347: 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил}-2-этил-3-{этил[(1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}бензамида (22 мг, 26%) в виде белого твердого вещества, и чистого цис изомера указанного в заголовке соединения 348: 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-{этил[(1s,4s)-4-диметиламино)циклогексил]амино}бензамида (18 мг, 21%) в виде белого твердого вещества.
[01693] 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-{этил[(1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}бензамид
[01694] ЖХ-МС 100%, 3,07 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 487,2, 489,2; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 11,09 (с, 1H), 7,11-7,04 (м, 2H), 7,00 (д, J=2,1 Гц, 1H), 5,94 (с, 1H), 4,51 (д, J=5,9 Гц, 2H), 3,00 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,79 (кв., J=7,4 Гц, 2H), 2,65 (т, J=11,5 Гц, 1H), 2,38 (с, 3H), 2,24 (с, 6H), 2,22 (с, 3H), 2,14 (т, J=11,4 Гц, 1H), 1,87 (д, J=10,3 Гц, 4H), 1,37 (кв., J=12,1 Гц, 2H), 1,17 (кв., J=11,5 Гц, 2H), 1,02 (т, J=7,4 Гц, 3H), 0,85 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01695] 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-{этил[(1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил]амино}бензамид ЖХ-МС 100%, 3,13 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 487,2, 489,2; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 10,72 (с, 1H), 7,09 (д, J=2,0 Гц, 2H), 7,01 (д, J=2,1 Гц, 1H), 5,93 (с, 1H), 4,51 (д, J=5,9 Гц, 2H), 3,01 (кв., J=6,7 Гц, 3H), 2,89 (кв., J=7,4 Гц, 2H), 2,39 (с, 3H), 2,23 (с, 9H), 2,06 (с, 1H), 1,87-1,72 (м, 4H), 1,43 (тд, J=8,3, 3,8 Гц, 2H), 1,33 (дд, J=12,6, 9,2 Гц, 2H), 1,01 (т, J=7,5 Гц, 3H), 0,84 (т, J=7,0 Гц, 3H).
[01696] Соединение 92: 3-(аллил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01697] Стадия 1: Синтез 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01698] 5-хлор-2-метилбензойную кислоту (4,0 г, 23 ммоль) добавляли по порциям к охлажденной концентрированной H2SO4 (27 мл) при -10°C. Через 10 минут добавляли по каплям нитрующую смесь {полученную путем смешивания концентрированной HNO3 (3,3 г, 52,68 ммоль) с концентрированной H2SO4 (4,4 мл)} при -10°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 30 минут. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, твердый осадок фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (4,95 г, 99%).
[01699] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата
[01700] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (6,75 г, 31,3 ммоль) в DMF (33 мл) добавляли карбонат натрия (13,2 г, 125 ммоль) и метилиодид (17,8 г, 125 ммоль). Смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (6,0 г, 83%).
[01701] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-хлор-2-метил бензоата
[01702] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6,0 г, 26 ммоль) в этаноле (60 мл) добавляли хлорид аммония (6,0 г, 110 ммоль), растворенный в воде (60 мл), и порошок железа (11,9 г, 208 ммоль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через целит, фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали как таковое.
[01703] Стадия 4: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
[01704] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (5,0 г, 19 ммоль) и дигидро-2H-пиран-4(3H)-он (2,86 г, 28,6 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (2,3 г, 38 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (3,0 г, 48 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (3,0 г, 42%).
[01705] Стадия 5: Синтез метил 3-(аллил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[01706] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (1,0 г, 3,3 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли NaH (0,25 г, 10 ммоль) при 0°C и смесь перемешивали в течение 20 минут. Добавляли 3-бромпроп-1-ен (1,7 г, 14,13 ммоль) и смесь нагревали при 80°C в течение 15 часов. После завершения реакцию гасили ледяной водой и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и полученное неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,50 г, 44%).
[01707] Стадия 6: Синтез 3-(аллил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01708] Водный раствор NaOH (0,092 г, 2,32 ммоль) добавляли к раствору метил 3-(аллил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (0,50 г, 1,54 ммоль) в этаноле (15 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6 и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,47 г, 98%).
[01709] Указанную выше кислоту (0,47 г, 1,52 ммоль) затем растворяли в DMSO (5 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,462 г, 3,04 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (1,18 г, 2,28 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и сушили с получением указанного в заголовке соединения (0,40 г, 59%). ЖХМС: 444,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 96,85% (@ 254 нм) (Rt; 6,310; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,22 (т, 1H), 7,16 (с, 1H), 6,93 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 5,56-5,62 (м, 1H), 5,02-5,07 (м, 1H), 4,94-4,96 (м, 1H), 4,23 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,83 (д, 2H, J=9,6 Гц), 3,64 (д, 2H, J=4 Гц), 3,23 (т, 2H, J=10 Гц), 2,97 (м, 1H), 2,18 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,54-1,60 (м, 4H).
[01710] Соединение 98: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(пропил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамид
[01711] К перемешиваемому раствору 3-(аллил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,10 г) в MeOH (10 мл) добавляли 10% Pd/C (0,03 г) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре под давлением водорода (баллон) в течение 2 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного твердого вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,02 г, 20%). ЖХМС: 445,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 90,40% (@ 254 нм) (Rt; 5,609; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,23 (т, 1H), 7,19 (с, 1H), 6,93 (д, 1H, J=1,6 Гц), 5,88 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,83 (д, 2H, J=10,4 Гц), 3,22-3,25 (м, 2H), 2,94 (т, 2H, J=7,2 Гц), 2,88-2,90 (м, 1H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,56 (м, 4H), 1,14-1,23 (м, 2H), 0,75 (т, 3H, J=8 Гц).
[01712] Соединение 104: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(изобутил(метил)амино)-2-метилбензамид
[01713] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-(изобутиламино)-2-метилбензоата
[01714] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (5,0 г, 25 ммоль) и изобутиральдегида (4,5 г, 62 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (3,0 г, 50 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (3,94 г, 62 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (6,0 г, 94%).
[01715] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-3-(изобутил (метил)амино)-2-метилбензоата
[01716] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(изобутиламино)-2-метилбензоата (1,0 г, 3,9 ммоль) в безводном ацетонитриле (10 мл) добавляли карбонат цезия (2,55 г, 7,8 ммоль) и метилиодид (5,55 г, 39 ммоль). Смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (1,0 г, 95%).
[01717] Стадия 3: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(изобутил(метил)амино)-2-метилбензамида
[01718] Водный раствор NaOH (0,22 г, 5,5 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(изобутил(метил)амино)-2-метилбензоата (1,0 г, 3,7 ммоль) в EtOH (5 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении. Остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6? и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,900 г, 95%). Кислоту (0,30 г, 1,17 ммоль) затем растворяли в DMSO (1,5 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,357 г, 2,34 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,915 г, 1,76 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,245 г, 53%). ЖХМС: 390,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 97,59% (@ 254 нм) (Rt; 6,063; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,07 (с, 1H), 6,90 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4,4 Гц), 2,63 (д, 2H, J=7,2 Гц), 2,54 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,75-1,78 (м, 1H), 0,85 (д, 6H, J=6 Гц).
[01719] Соединение 105: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(изобутил)амино)-2-метилбензамид
[01720] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-(этил (изобутил)амино)-2-метилбензоата
[01721] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(изобутиламино)-2-метилбензоата (1,0 г, 3,9 ммоль) в безводном DMF (10 мл) добавляли карбонат цезия (2,55 г, 7,82 ммоль) и этилиодид (6,09 г, 39,1 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем использовали на следующей стадии как таковое (1,0 г, 91%).
[01722] Стадия 2: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(изобутил)амино)-2-метилбензамида
[01723] Водный раствор NaOH (0,212 г, 5,28 ммоль) добавляли к раствору соединения 7 (1,0 г, 3,50 ммоль) в EtOH (5 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6 и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,900 г).
[01724] Кислоту (0,90 г, 3,33 ммоль) затем растворяли в DMSO (4,5 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (1,01 г, 6,67 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (2,60 г, 4,9 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и очищали путем промывки ацетонитрилом и диэтиловым эфиром с получением указанного в заголовке соединения (1,0 г, 75%). ЖХМС: 404,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 90,28% (@ 254 нм) (Rt; 6,063; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,10 (с, 1H), 6,90 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,8 Гц), 2,86 (кв., 2H, J=7,2 Гц), 2,73 (д, 2H, J=7,6 Гц), 2,18 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,57-1,61 (м, 1H), 0,91 (т, 3H, J=6,8 Гц), 0,82 (д, 6H, J=6,4 Гц).
[01725] Соединение 117: 5-хлор-3-((циклопентилметил) (метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01726] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-((циклопентилметил)амино)-2-метилбензоата
[01727] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (3,0 г, 15 ммоль) и циклопентанкарбальдегида (2,2 г, 22 ммоль) в метаноле (30 мл) добавляли уксусную кислоту (1,8 г, 30 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (2,4 г, 37 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (4,2 г, 99%).
[01728] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-3-((циклопентилметил)(метил)амино)-2-метилбензоата
[01729] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-((циклопентилметил)амино)-2-метилбензоата (1,0 г, 3,5 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли карбонат цезия (2,3 г, 7,1 ммоль) и метилиодид (5,0 г, 35 ммоль). Смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов, охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали и затем очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,0 г, 95%).
[01730] Стадия 3: Синтез 5-хлор-3-((циклопентилметил) (метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01731] Водный раствор NaOH (0,206 г, 15,1 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-((циклопентилметил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,0 г, 3,38 ммоль) в этаноле (10 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. Этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,9 г). Эту кислоту (0,3 г, 1,06 ммоль) затем растворяли в DMSO (1,5 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,324 г, 2,12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,831 г, 1,57 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с получением указанного в заголовке соединения (0,25 г, 56%). ЖХМС: 416,15 (M + 1)+; ВЭЖХ: 92,58% (@ 254 нм) (Rt; 6,169; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,08 (с, 1H), 6,89 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4,4 Гц), 2,77 (д, 2H, J=7,2 Гц), 2,57 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,04-2,06 (м, 1H), 1,63-1,65 (м, 2H), 1,49-1,52 (м, 2H), 1,45-1,46 (м, 2H), 1,15-1,18 (м, 2H).
[01732] Соединение 118: 5-хлор-3-((циклопентилметил) (этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01733] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-((циклопентилметил) (этил)амино)-2-метилбензоата
[01734] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-((циклопентилметил)амино)-2-метилбензоата (1,0 г, 3,54 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли карбонат цезия (2,31 г, 7,09 ммоль) и этилиодид (5,53 г, 35,4 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали с получением остатка, который очищали колоночной хроматографией, с получением указанного в заголовке соединения (1,0 г, 91%).
[01735] Стадия 2: Синтез 5-хлор-3-((циклопентилметил) (этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01736] Водный раствор NaOH (0,193 г, 15,1 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-((циклопентилметил)(этил)амино)-2-метилбензоата (1,0 г, 3,22 ммоль) в этаноле (10 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,9 г).
[01737] Эту кислоту (0,3 г, 1,01 ммоль) затем растворяли в DMSO (1,5 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,308 г, 2,12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,791 г, 1,52 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это вещество фильтровали и промывали ацетонитрилом с получением указанного в заголовке соединения (0,25 г, 57%). ЖХМС: 430,2 (M + 1)+; ВЭЖХ: 91,54% (@ 210 нм) (Rt; 9,378; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,12 (с, 1H), 6,91 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=3,6 Гц), 2,83-2,89 (м, 4H), 2,18 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,85-1,89 (м, 1H), 1,51-1,58 (м, 4H), 1,41-1,46 (м, 2H), 1,14-1,15 (m 2H), 0,91 (т, 3H, J=8 Гц).
[01738] Соединение 123: 5-хлор-3-(циклобутил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01739] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-(циклобутиламино)-2-метилбензоата
[01740] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (2,0 г, 10 ммоль) и циклобутанона (1,4 г, 20 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) добавляли уксусную кислоту (3,6 г, 60 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (6,3 г, 30 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,4 г, 56%).
[01741] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-3-(циклобутил(метил)амино)-2-метилбензоата
[01742] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(циклобутиламино)-2-метилбензоата (0,7 г, 2,8 ммоль) в ацетонитриле добавляли карбонат цезия (2,2 г, 6,8 ммоль) и этилиодид (3,9 г, 28 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при при 80°C в течение 8 часов. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (0,62 г, 84%).
[01743] Стадия 3: Синтез 5-хлор-3-(циклобутил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01744] Водный раствор NaOH (0,134 г, 3,34 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(циклобутил(метил)амино)-2-метилбензоата (0,60 г, 2,23 ммоль) в этаноле (10 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,5 г).
[01745] Эту кислоту (0,25 г, 0,98 ммоль) затем растворяли в DMSO (5 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,22 г, 1,41 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,767 г, 1,47 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое затем очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,36 г, 95%). ЖХМС:388,09 (M + 1)+; ВЭЖХ: 96,62% (@ 254 нм) (Rt; 5,461; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 6,90 (д, 2H, J=7,2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,65 (м, 1H), 2,45 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,03 (шир.с, 2H), 1,76-1,81 (м, 2H), 1,61-1,62 (м, 2H).
[01746] Соединение 137: 5-хлор-3-(циклобутил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01747] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-(циклобутил (этил)амино)-2-метилбензоата
[01748] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(циклобутиламино)-2-метилбензоата (0,70 г, 2,73 ммоль) и ацетальдегида (0,36 г, 8,20 ммоль) в дихлорэтане (15 мл) добавляли уксусную кислоту (0,98 г, 16,4 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,7 г, 8,2 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,71 г, 91%).
[01749] Стадия 3: Синтез 5-хлор-3-(циклобутил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01750] Водный раствор NaOH (0,149 г, 3,7 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(циклобутил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,70 г, 2,48 ммоль) в этаноле (10 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,6 г,).
[01751] Эту кислоту (0,6 г, 2,2 ммоль) затем растворяли в DMSO (5 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,67 г, 4,44 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (1,7 г, 3,33 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед; экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое затем очищали путем нескольких промывок растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,45 г, 50%). ЖХМС:402,20 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,73% (@ 254 нм) (Rt; 4,096; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,22 (т, 1H, J=4,4 Гц), 6,97 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,75-3,79 (м, 1H), 2,87-2,93 (м, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,99 (м, 2H), 1,58-1,69 (м, 4H), 0,77 (т, 3H, J=6,8 Гц).
[01752] Соединение 126: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)бензамид
[01753] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-(((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)бензоата
[01754] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (2,0 г, 10 ммоль) и тетрагидро-2H-пиран-4-карбальдегида (1,71 г, 15 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту (1,2 г, 20 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 часов. Затем добавляли цианоборогидрид натрия (2,11 г, 25,1 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,8 г, 60%).
[01755] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-(метил ((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)бензоата
[01756] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-(((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)бензоата (0,80 г, 2,71 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) добавляли карбонат цезия (1,75 5,42 ммоль) и метилиодид (1,93 г, 13,6 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 8 часов. После завершения смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Остаток промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,70 г, 84%).
[01757] Стадия 3: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)бензамида
[01758] Водный раствор NaOH (0,18 г, 4,5 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-2-метил-3-(метил((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)бензоата (0,70 г, 2,25 ммоль) в этаноле (10 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. Этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,2 г).
[01759] Эту кислоту (0,2 г, 0,68 ммоль) затем растворяли в DMSO (0,5 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,206 г, 1,35 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,528 г, 1,01 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Смесь выливали на лед и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,2 г, 69%). ЖХМС: 432,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,95% (@ 254 нм) (Rt; 5,750; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,10 (д, 1H, J=1,6 Гц), 6,90 (д, 1H, J=2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,80 (д, 2H, J=8,4 Гц), 3,21-3,27 (м, 2H), 2,73 (д, 2H, J=7,2 Гц), 2,55 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,74-1,75 (м, 1H), 1,58-1,61 (м, 2H), 1,07-1,16 (м, 2H).
[01760] Соединение 127: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)-2-метилбензамид
[01761] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-(этил((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)-2-метилбензоата
[01762] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-(((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)бензоата (0,40 г, 1,35 ммоль) и ацетальдегида (0,120 г, 2,71 ммоль) в дихлорэтане (5 мл) добавляли уксусную кислоту (0,48 г, 8,1 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,663 г, 4,05 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,38 г, 86%).
[01763] Стадия 2: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)-2-метилбензамида
[01764] Водный раствор NaOH (0,099 г, 2,46 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(этил((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)амино)-2-метилбензоата (0,38 г, 1,2 ммоль) в этаноле (20 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6 и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,2 г).
[01765] Эту кислоту (0,2 г, 0,64 ммоль) затем растворяли в DMSO (2 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,196 г, 1,29 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (0,504 г, 0,97 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Смесь выливали на лед и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,15 г, 52%). ЖХМС: 446,20 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,89% (@ 254 нм) (Rt; 5,381; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,14 (с, 1H), 6,91 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,78 (д, 2H, J=8,8 Гц), 3,18 (т, 2H, J=11,6 Гц), 2,82-2,89 (м, 4H), 2,18 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,54-1,57 (м, 3H), 1,09-1,15 (м, 2H), 0,91 (т, 3H, J=6,8 Гц).
[01766] Соединение 157: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2,5-диметилбензамид
[01767] Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01768] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли по порциям 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 152 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. и выливали на ледяную воду. Осадок фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (71 г, 99%).
[01769] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола
[01770] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1100 ммоль) в DMF (150 мл), добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилиодид (627 г, 4415 ммоль). Смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. Осадок фильтровали и промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (302 г, 99%), которое использовали непосредственно без дополнительной очистки.
[01771] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата
[01772] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензола (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и порошок железа (93,3 г, 1636 ммоль) при перемешивании. Смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов и фильтровали через целит. Твердые вещества промывали водой и этилацетатом и объединенные фильтраты экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (175 г), которое использовали без дополнительной очистки.
[01773] Стадия 4: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
[01774] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (15 г, 61 ммоль) и дигидро-2H-пиран-4(3H)-она (9,2 г, 92 ммоль) в дихлорэтане (300 мл) добавляли уксусную кислоту (22 г, 368,4 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (39 г, 184 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (14 г, 69%).
[01775] Стадия 5: Синтез метил 5-бром-3-(этил (тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
[01776] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (14 г, 43 ммоль) и ацетальдегида (3,75 г, 85 ммоль) в дихлорэтане (150 мл), добавляли уксусную кислоту (15,4 г, 256 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (27,0 г, 128 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду. Экстракцию осуществляли с использованием DCM и объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией, с получением указанного в заголовке соединения (14 г, 93%).
[01777] Стадия 6: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
[01778] Водный раствор NaOH (2,36 г, 59 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (14 г, 39 ммоль) в этаноле (100 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. Этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (13,9 г).
[01779] Эту кислоту (10 г, 29 ммоль) затем растворяли в DMSO (25 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (8,8 г, 58 ммоль) и триэтиламин (5,6 г, 58 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (22 г, 43,8 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали путем нескольких промывок растворителем, с получением указанного в заголовке соединения (14 г, 74%).
[01780] Стадия 7: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2,5-диметилбензамида
[01781] К перемешиваемому раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,30 г, 0,63 ммоль) в DMF (2 мл), добавляли дихлорбис(трифенилфосфин) палладий (II) (0,028 г, 0,034 ммоль) с последующим добавлением тетраметилолова (0,124 г, 0,69 ммоль). Смесь нагревали при 160°C в течение 30 минут в микроволновом реакторе. Реакционную смесь гасили водой и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенного вещества. Очистка колоночной хроматографией и затем препаративной ВЭЖХ давала указанное в заголовке соединение в виде соответствующей TFA соли (0,15 г, 57,7%). ЖХМС: 412,15 (M + 1)+; ВЭЖХ: 94,29% (@ 254 нм) (Rt; 4,245; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (CD3OD, 400 МГц) δ 7,54 (с, 1H), 7,33 (с, 1H), 6,13 (с, 1H), 4,47 (с, 2H), 3,95-3,98 (м, 4H), 3,74 (шир.с, 2H), 3,37 (м, 1H), 2,42 (с, 3H), 2,38 (с, 3H), 2,37 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,61-1,91 (шир.с, 4H), 1,01 (т, 3H, J=3,2 Гц).
[01782] Соединение 222: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((ls,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамид
[01783] Стадия 1: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[01784] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (5,0 г, 25 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (6,95 г, 32,6 ммоль) в 25 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (9,0 мл, 450,75 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (22,8 г, 108 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и полученные изомеры разделяли колоночной хроматографией на силикагеле (100-200) с получением менее полярного цис-изомера, метил 3-(((ls,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (5,2 г, 52%) и более полярного транс-изомера указанного в заголовке соединения, метил 3-(((lr,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (3,5 г, 35%).
[01785] Стадия 2: Синтез метил 3-(((lr,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[01786] К перемешиваемому раствору метил 3-(((lr,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (3,0 г, 7,6 ммоль) и ацетальдегида (0,66 г, 15 ммоль) в 15 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (2,72 мл, 45,45 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (4,81 г, 22,72 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200) с получением указанного в заголовке соединения (3,5 г, 96%).
[01787] Стадия 3: Синтез трет-бутил((1r,4r)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
[01788] Смесь метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (3,5 г, 8,2 ммоль) и NaOH (0,49 г, 12 ммоль) в 20 мл этанола:воды (4:1) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и подкисляли до pH 6 с использованием 1н HCl. Смесь концентрировали и остаток распределяли между водой и этилацетатом. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 3,2 г неочищенной кислоты. Смесь неочищенной кислоты (3,2 г, 7,8 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (2,36 мг, 15,5 ммоль) и PyBOP (6,07 мг, 11,7 ммоль) перемешивали в 15 мл DMSO при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали при помощи 10% MeOH в DCM. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200) с получением указанного в заголовке соединения (3,0 г, 71%).
[01789] Стадия 4: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01790] К охлажденному раствору трет-бутил((1r,4r)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил) карбамата (400 мг, 0,73 ммоль) в 5 мл DCM добавляли 2 мл TFA и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в 10% MeOH в DCM и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (320 мг, 98%).
[01791] Стадия 5: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида
[01792] К перемешиваемому раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (300 мг, 0,67 ммоль) и формальдегида (0,5 мл 38% раствора, 6,75 ммоль) в 3 мл метанола добавляли триацетоксиборогидрид натрия (83,0 мг, 1,35 ммоль) при 0°C и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха и распределяли между водой и 10% MeOH в DCM. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали на щелочном оксиде алюминия с получением указанного в заголовке соединения (120 мг, 32%).
[01793] Соединение 268: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамид
[01794] К раствору 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (80 мг, 0,16 ммоль) в 5 мл метанола добавляли каталитическое количество 10% палладия на углероде. Смесь перемешивали в атмосфере водорода при давлении баллона в течение 13 часов. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, концентрировали при пониженном давлении с получением вязкого масла, которое после эфирной промывки давало указанное в заголовке соединение (40 мг, 54%) в виде не совсем белого твердого вещества.
[01795] ЖХМС: 439,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 88,61% (@ 254 нм) (R,4,084; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 8,03 (т, 1H), 7,15-7,13 (м, 2H), 6,94 (д, 1H), 4,26 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,02 (д, 2H, J=6,8 Гц), 2,61 (с, 6H),2,18 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,97-1,83 (м, 4H), 1,39 (м, 4H), 0,8 (т, 3H, J=6,8 Гц). (3H сливается с пиком растворителя).
[01796] Соединение 273: 5-хлор-3-(((1s,4s)-4-(диэтиламино)циклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01797] К перемешиваемому раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (150 мг, 0,33 ммоль) и ацетальдегида (0,15 мл, 2,70 ммоль) в 5 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (0,14 мл, 2,36 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (286 мг, 1,35 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM, сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очистка препаративной ВЭЖХ давала указанное в заголовке соединение (100 мг, 59%). ЖХМС: 501,50 (M + 1)+; ВЭЖХ: 93,90% (@ 210-370 нм) (Rt; 4,543; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир.с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,03-3,01 (м, 2H), 2,67-2,61 (м, 2H), 2,42-2,33 (м, 4H), 2,19 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,73 (м, 4H), 1,39-1,19 (м, 4H), 0,92 (м, 6H), 0,78 (т, 3H).
[01798] Соединение 277: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-этинил-2-метилбензамид
[01799] Стадия 1: Синтез метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоат.
[01800] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата 6,0 г, 13,0 ммоль) и ацетальдегида (1,5 мл, 27,0 ммоль) в дихлорэтане (60 мл) добавляли уксусную кислоту (5,4 мл, 82 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (8,6 г, 41 ммоль) при 0°C и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200) с получением указанного в заголовке соединения (5,0 г, 79%).
[01801] Стадии 2 и 3: Синтез метил 3-(((1 r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-этинил-2-метилбензоата
[01802] Раствор метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (1,5 г, 3,20 ммоль), триметилсилилацетилена (0,52 мл, 3,84 ммоль), иодида меди (12 мг, 0,06 ммоль) и N,N-диизопропиламина (1,0 мл, 8,38 ммоль) в 20 мл толуола продували аргоном. Добавляли дихлор-бис(трифенил фосфин)палладий (II) (44 мг, 0,06 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 1,8 г неочищенного силил-защищенного соединения. Это соединение растворяли в 15 мл ТГФ и добавляли тетра-бутиламмонийфторид (7,5 мл 1M раствора в ТГФ, 7,40 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов, разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200) с получением указанного в заголовке соединения (800 мг, 52%).
[01803] Стадии 4 и 5: Синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-этинил-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата.
[01804] Смесь метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-этинил-2-метилбензоата (800 мг, 1,92 ммоль) и NaOH (115 мг, 2,89 ммоль) в 12 мл этанола:воды (3:1) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха и остаток распределяли между водой и DCM. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 700 мг неочищенной кислоты. Неочищенную кислоту (700 мг, 1,75 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (532 мг, 3,5 ммоль) и PyBOP (1,36 г, 2,62 ммоль) перемешивали в 7 мл DMSO при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и осажденный продукт фильтровали и очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (750 мг, 80%).
[01805] Стадия 6: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-этинил-2-метилбензамида.
[01806] К охлажденному раствору трет-бутил ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-этинил-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (750 мг, 1,40 ммоль) в 10 мл DCM добавляли 3 мл TFA. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в 10% MeOH в DCM и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (600 мг, 98%).
[01807] Стадия 7: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-этинил-2-метилбензамида.
[01808] К перемешиваемому раствору неочищенного 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-этинил-2-метилбензамида (600 мг, 1,38 ммоль) и формальдегида (0,4 мл 38% раствора, 6,75 ммоль) в 10 мл дихлорэтана добавляли триацетоксиборогидрид натрия (731 мг, 3,45 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и распределяли между водой и 10% MeOH в DCM. Органический слой отделяли, сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на щелочном оксиде алюминия с получением указанного в заголовке соединения (450 мг, 70%).
[01809] Аналитические данные для N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-этинил-2-метилбензамида -TFA соли: ЖХМС: 463,65 (M + 1)+; ВЭЖХ: 92,65% (@ 254 нм) (Rt; 4,748; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 9,43 (шир.с, 1H), 8,23 (т, 1H), 7,36 (с, 1H), 7,12 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=4,0 Гц), 3,17-3,03 (м, 4H), 2,69-2,68 (м, 6H), 2,50 (1H сливается с пиком растворителя), 2,21 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,96-1,84 (м, 4H), 1,43 (м, 4H), 0,79 (т, 3H).
[01810] Соединение 278: 5-циано-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамид
[01811] Стадия 1: Синтез метил 3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-циано-2-метилбензоата
[01812] Раствор соединения метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (1,0 г, 2,13 ммоль) и Zn(CN)2 (370 мг, 3,19 ммоль) в 6 мл DMF дегазировали аргоном в течение 20 минут с последующим добавлением Pd(PPh3)4 (240 мг, 0,21 ммоль). Смесь нагревали при 100°C в течение ночи, разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (280 мг, 82%).
[01813] Стадии 2 и 3: Синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-циано-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил) карбамата.
[01814] Смесь метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-циано-2-метилбензоата (735 мг, 1,78 ммоль) и NaOH (85 мг, 2,13 ммоль) в 12 мл этанола:воды (3:1) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Смесь концентрировали досуха и неочищенный продукт распределяли между водой и DCM. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 380 мг неочищенной кислоты. Смесь неочищенной кислоты (380 мг, 0,94 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (287 мг, 1,89 ммоль) и PyBOP (737 мг, 1,41 ммоль) в 4 мл DMSO перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали при помощи 10% MeOH в DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с получением указанного в заголовке соединения (350 мг, 75%).
[01815] Стадия 4: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-циано-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида.
[01816] К охлажденному раствору соединения трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-циано-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (350 мг, 0,80 ммоль) в 5 мл DCM добавляли 1 мл TFA. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в растворе 10% MeOH в DCM и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 284 мг неочищенного указанного в заголовке соединения.
[01817] Стадия 5: Синтез 5-циано-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида.
[01818] К перемешиваемому раствору неочищенного 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-циано-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (325 мг, 0,74 ммоль) и формальдегида (0,3 мл 38% раствора, 3,72 ммоль) в 10 мл метанола добавляли цианоборогидрид натрия (100 мг, 1,49 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов и распределяли между водой и 10% MeOH в DCM. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали на колонке с щелочным оксидом алюминия с получением указанного в заголовке соединения (75 мг, 22%).
[01819] Аналитические данные 5-циано-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида: ЖХМС: 464,30 (M + 1)+; ВЭЖХ: 87,24% (@ 254 нм) (Rt; 4,540; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир.с, 1H), 8,31 (т, 1H), 7,61 (с, 1H), 7,35 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,07-3,05 (м, 3H), 2,73-2,63 (м, 7H), 2,25 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,96-1,82 (м, 4H), 1,41-1,37 (м, 4H), 0,78 (т, 3H).
[01820] Соединение 279: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензамид
[01821] Стадия 1: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензамида.
[01822] К перемешиваемому раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (300 мг, 0,67 ммоль) и дигидро-2H-пиран-4(3H)-она (99 мг, 1,01 ммоль) в 5 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (0,24 мл, 4,05 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Смесь охлаждали до 0°C и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (429 мг, 2,02 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (175 мг, 57%).
[01823] Стадия 2: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензамида.
[01824] К перемешиваемому раствору 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензамида (175 мг, 0,33 ммоль) и формалина (99 мг, 3,31 ммоль) в 2 мл метанола добавляли цианоборогидрид натрия (41 мг, 0,66 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (70 мг, 39%).
[01825] ЖХМС: 543,65 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,19% (@ 210-370 нм) (Rt; 4,515; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир.с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4 Гц), 3,84-3,82 (м, 2H), 3,26-3,23 (м, 3H), 3,03-3,01 (м, 2H), 2,67-2,53 (м, 2H), 2,19 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,11 (с, 6H), 1,75-1,57 (м, 6H), 1,41-1,24 (м, 6H), 0,78 (т, 3H).
[01826] Соединение 276: Синтез соединения 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида
[01827] Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01828] К перемешиваемому раствору соединения 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50,0 г, 276 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли по порциям 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 152 ммоль) при комнатной температуре и перемешивание продолжали в течение 5 часов. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, твердый осадок фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (71,7 г, 99,9%), которое использовали без дополнительной очистки.
[01829] Стадия 2: Синтез метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоата.
[01830] К перемешиваемому раствору неочищенной 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилиодид (626 г, 4415 ммоль). Смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов, охлаждали до комнатной температуры. Твердый осадок фильтровали и промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (302 г, 99%), которое использовали непосредственно.
[01831] Стадия 3: Синтез метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата.
[01832] К перемешиваемому раствору полученного выше неочищенного соединения метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоата (150 г, 0,54 моль) в этаноле (750 мл) добавляли хлорид аммония (150 г, 2,78 моль), растворенный в 750 мл воды, с последующим добавлением порошка железа (93,3 г, 1,64 моль) при интенсивном перемешивании. Смесь нагревали при 80°C в течение 7 часов и фильтровали через целит. Фильтровальную лепешку промывали водой и этилацетатом и фильтраты экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (175 г не очищенный).
[01833] Стадия 4: Синтез метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата.
[01834] К перемешиваемому раствору неочищенного соединения метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (15 г, 62 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (17 г, 8 ммоль) в дихлорэтане (200 мл) добавляли уксусную кислоту (23 мл, 368 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (40 г, 185ммоль) при 0°C и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Разделение неочищенной изомерной смеси колоночной хроматографией давало желаемое указанное в заголовке соединение (6,0 г, 22%).
[01835] Стадия 5: Синтез метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата.
[01836] К перемешиваемому раствору соединения метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (6,0 г, 13,0 ммоль) и ацетальдегида (1,5 мл, 27,0 ммоль) в дихлорэтане (60 мл) добавляли уксусную кислоту (5,4 мл, 82 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (8,6 г, 40,9 ммоль) при 0°C и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (5,0 г, 79%).
[01837] Стадии 6 и 7: Синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата.
[01838] Смесь метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (1,00 г, 2,13 ммоль) и NaOH (102 мг, 2,56 ммоль) в 6 мл этанола:воды (2:1) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха и остаток распределяли между водой и DCM. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 1,0 г неочищенной кислоты. Неочищенную кислоту (1,0 г, 2,20 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (669 мг, 4,40 ммоль), PyBOP (1,71 г, 3,30 ммоль) и 1 мл триэтиламина перемешивали в 2 мл DMSO при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (1,0 г, 83%).
[01839] Стадия 8: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида.
[01840] К охлажденному раствору соединения трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (1,0 г, 1,60 ммоль) в 10 мл DCM добавляли 2 мл TFA. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в 10% растворе MeOH в DCM и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (650 мг, 81%).
[01841] Стадия 9: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида.
[01842] К перемешиваемому раствору неочищенного 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (650 мг, 1,32 ммоль) и формальдегида (0,5 мл 38% раствора, 13,3 ммоль) в 10 мл метанола добавляли цианоборогидрид натрия (82 мг, 1,32 ммоль при 0°C и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь распределяли между водой и 10% раствором MeOH в DCM. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с щелочным оксидом алюминия с получением указанного в заголовке соединения (450 мг, 65%). Аналитические данные 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида: ЖХМС: 519,30 (M+l)+; ВЭЖХ: 98,35% (@ 254 нм)(Rt; 4,392); Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 9,39 (шир.с, 1H), 8,23 (т, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,09 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4,0 Гц),3,03-3,01 (м, 3H), 2,69-2,69 (м, 6H), 2,50 (1H сливается с пиком растворителя), 2,18 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,94-1,84 (м, 4H), 1,42 (м, 4H), 0,79 (т, 3H, J=6,8 Гц).
[01843] Соединение 282: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-этил-2-метилбензамид
[01844] Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-винилбензамида.
[01845] Смесь 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (200 мг, 0,38 ммоль), 4,4,5,5-тетраметил-2-винил-1,3,2-диоксаборолана (71 мг, 0,46 ммоль) и карбоната натрия (147 мг, 1,39 ммоль) в 10 мл диоксана дегазировали аргоном в течение 20 минут, добавляли Pd(PPh3)4 (44 мг, 0,04 ммоль) и смесь нагревали при 100°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой. Смесь экстрагировали при помощи 10% MeOH в DCM, объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали. Остаток очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (150 мг, 83%).
[01846] Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-этил-2-метилбензамида.
[01847] К раствору соединения N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-винилбензамида (150 мг, 0,32 ммоль) в 5 мл метанола добавляли каталитическое количество 10% палладия на углероде. Смесь перемешивали в атмосфере водорода под давлением баллона в течение 12 часов, фильтровали через целит и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (65 мг, 43%).
[01848] ЖХМС: 467,35 (M+l)+; ВЭЖХ: 93,41% (@ 254 нм)(Rt; 10,946; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 10 M формиата аммония в воде + 0,1% NH3, B; Ацетонитрил + 5% растворителя A + 0,1% NH3; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,0 мл/мин; Градиент: 15% В до 95% В в течение 6,0 мин, Удерживание до 8,0 мин, 15% В к 8,5 мин удерживание до 15 мин); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир.с, 1H), 9,45 (с, 1H), 8,38 (с, 1H), 8,03 (с, 2H), 7,26-6,84 (м, 2H), 5,87 (с, 1H), 4,26 (д, J=4,0 Гц, 2H), 3,17-2,89 (м, 3H), 2,70, 2,68 (2s, 6H), 2,19, 2,11 (3s, 9H), 1,96-1,87 (м, 4H), 1,42 (м, 4H), 1,15 (т, J=7,2 Гц, 3H), 0,80 (с, 3H).
[01849] Соединение 283: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)бензамид
[01850] Стадия 1: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)бензоата.
[01851] Раствор метил 5-(3-бромпроп-1-ин-1-ил)-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (500 мг, 1,0 ммоль) и 1-метилпиперазина (0,49 мл, 4,9 ммоль) в 5 мл DMF перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (550 мг).
[01852] Стадии 2 и 3: Синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата.
[01853] Смесь соединения метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)бензоата (550 мг, 1,0 ммоль) и NaOH (83 мг, 2,1 ммоль) в 8 мл этанола:воды (3:1) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха и остаток распределяли между водой и DCM. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении с получением 470 мг кислоты. Неочищенную кислоту (470 мг, 0,92 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (279 мг, 1,83 ммоль), PyBOP (716 мг, 1,37 ммоль) и триэтиламин (0,38 мл, 2,75 ммоль) перемешивали в 5 мл DMSO при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и соединение экстрагировали в 10% раствор MeOH в DCM. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (350 мг, 50%).
[01854] Стадия 4: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)бензамида.
[01855] К охлажденному раствору трет-бутил ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (350 мг, 0,54 ммоль) в 5 мл DCM добавляли 2 мл TFA. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в 10% растворе MeOH в DCM и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (250 мг, 84%).
[01856] Стадия 5: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)бензамида.
[01857] К перемешиваемому раствору неочищенного 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(3-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)бензамид (250 мг, 0,45 ммоль) и формальдегида (0,35 мл 38% раствора, 4,56 ммоль) в 3 мл метанола добавляли цианоборогидрид натрия (85 мг, 1,37 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов и распределяли между водой и 10% раствором MeOH в DCM. Органический слой отделяли, сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (40 мг, 15%).
[01858] ЖХМС: 575,45 (M+l)+; ВЭЖХ: 99,30% (@ 254 нм)(Rt; 3,849; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (D2O, 400 МГц) δ 7,75 (с, 1H), 7,60 (с, 1H), 6,28 (с, 1H), 4,45 (д, J=4,0 Гц, 2H), 3,80-3,63 (м, 5H), 3,40-3,21 (м, 9H), 2,92 (с, 3H), 2,79 (2с, 6H), 2,35 (м, 3H), 2,32 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,19-2,05 (м, 4H), 1,65-1,57 (м, 4H), 0,97 (т, J=7,2 Гц, 3H).
[01859] Соединение 284: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(метиламино)циклогексил)амино)-2-метилбензамид
[01860] Стадия 1: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата.
[01861] К перемешиваемому раствору соединения метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (5,0 г, 25 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (6,95 г, 32,7 ммоль) в 25 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (9,0 мл, 450 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Смесь охлаждали и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (22,8 г, 108 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением (3,5 г, 35%) более полярного транс-изомера указанного в заголовке соединения 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата вместе с (5,2 г, 52%) менее полярным цис-изомером 3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата.
[01862] Стадия 2: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата.
[01863] К перемешиваемому раствору метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (3,0 г, 7,6 ммоль) и ацетальдегида (0,66 г, 15 ммоль) в 15 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (2,7 мл, 45 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Смесь охлаждали до 0°C, добавляли триацетоксиборогидрид натрия (4,8 г, 22 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (3,5 г, 96%).
[01864] Стадия 3: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата.
[01865] К охлажденному раствору метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (1,1 г, 3,3 ммоль) в 12 мл ТГФ добавляли гидрид натрия (410 мг, 10 ммоль) с последующим добавлением метилиодида (2,1 мл, 34 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, гасили путем медленного добавления ледяной воды и подкисляли раствором лимонной кислоты. Экстрагирование при помощи 10% MeOH в DCM с последующей сушкой и концентрированием объединенных органических фаз при пониженном давлении давали указанное в заголовке соединение (1,0 г, 88%).
[01866] Стадии 4 и 5: Синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)(метил)карбамата.
[01867] Смесь метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (1,0 г, 2,4 ммоль) и NaOH (140 мг, 3,5 ммоль) в 10 мл этанола:воды (4:1) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха и остаток распределяли между водой и DCM. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 1,0 г неочищенной кислоты. Смесь неочищенной кислоты (1,0 г, 2,4 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (716 мг, 4,71 ммоль), PyBOP (1,83 г, 3,53 ммоль) и 2 мл триэтиламина перемешивали в 5 мл DMSO при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляли водой и экстрагировали при помощи 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (700 мг, 53%).
[01868] Стадия 6: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(метиламино)циклогексил)амино)-2-метилбензамида.
[01869] К охлажденному раствору трет-бутил ((1s,4s)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)(метил)карбамата (700 мг, 1,25 ммоль) в 20 мл DCM добавляли 3 мл TFA. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в 10% растворе MeOH в DCM и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде его TFA соли (500 мг, 87%).
[01870] ЖХМС: 459,35 (M+l)+; ВЭЖХ: 97,63% (@ 254 нм)(Rt; 4,565; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 8,32 (с, 2H), 8,22 (м, 1H), 7,20 (с, 1H), 7,00 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, J=4,0 Гц, 2H), 3,74 (м, 3H), 3,03-3,01 (м, 3H), 2,67 (м, 1H), 2,19 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,33 (м, 2H), 1,82-1,80 (м, 2H), 1,42-1,23 (м, 2H+2H), 0,78 (т, J=7,2 Гц, 3H).
[01871] Соединение 285: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(этил(метил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензамид
[01872] Стадия 1: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(этил(метил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензамида.
[01873] К перемешиваемому раствору соединения 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(метиламино)циклогексил)амино)-2-метилбензамида (200 мг, 0,45 ммоль) и ацетальдегида (0,03 мл, 0,43 ммоль) в 5 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (0,15 мл, 2,62 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Смесь охлаждали до 0°C и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,28 г, 1,31 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (80 мг, 37%). ЖХМС: 487,35 (M+l)+; ВЭЖХ: 99,87% (@ 254 нм)(Rt; 4,711; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир.с, 1H), 9,15 (с, 1H), 8,22 (с, 1H), 7,19 (с, 1H), 6,97 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,24 (д, J=4,0 Гц, 2H), 3,16-3,01 (м, 5H), 2,64-2,63 (м, 4H), 2,19 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,91-1,83 (м, 4H), 1,47 (м, 4H), 1,19 (м, 3H), 0,79 (т, J=7,2 Гц, 3H).
[01874] Соединение 286: 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-((циклопропилметил)(метил)амино)циклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01875] Стадия 1: Синтез 5-хлор-3-(((1r,r)-4-((циклопропилметил)(метил)амино)циклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида.
[01876] К перемешиваемому раствору 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(метиламино)циклогексил)амино)-2-метилбензамида (200 мг, 0,43 ммоль) и циклопропанкарбальдегида (0,03 г, 0,43 ммоль) в 5 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (0,15 мл, 2,62 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Смесь охлаждали до 0°C и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,277 г, 1,31 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (100 мг, 44%). ЖХМС: 513,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 94,81% (@ 254 нм)(Rt; 4,924; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5%B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир.с, 1H), 9,09 (с, 1H), 8,21 (с, 1H), 7,18 (с, 1H), 6,97 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, J=4,0 Гц, 2H), 3,24 (м, 1H), 3,03-3,01 (м, 3H), 2,89-2,87 (м, 1H), 2,71-2,70 (м, 4H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,93-1,83 (м, 4H), 1,46-1,44 (м, 4H), 1,05 (м, 1H), 0,79 (т, J=7,2 Гц, 3H), 0,63 (м, 2H),0,38-0,31 (м, 2H).
[01877] Соединение 287: Синтез соединения 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(циклобутил(метил)амино)циклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01878] Стадии 1 и 2: Синтез трет-бутил((1r,4r)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата.
[01879] Смесь соединения метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (3,5 г, 8,2 ммоль) и NaOH (0,5 г, 12 ммоль) в 20 мл этанола:воды (4:1) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и подкисляли до pH 6 с использованием 1н HCl и концентрировали. Остаток распределяли между водой и этилацетатом, органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 3,2 г неочищенной кислоты. Неочищенную кислоту (3,2 г, 7,8 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (2,36 мг, 15,6 ммоль) и PyBOP (6,1 мг, 11 ммоль) перемешивали в 15 мл DMSO при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали при помощи 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (3,0 г, 71%).
[01880] Стадия 3: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида.
[01881] К охлажденному раствору трет-бутил(1s,4s)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (400 мг, 0,73 ммоль) в 5 мл DCM добавляли 2 мл TFA. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в 10% растворе MeOH в DCM и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (320 мг, 98%).
[01882] Стадия 4: Синтез 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(циклобутиламино)циклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида.
[01883] К перемешиваемому раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (300 мг, 0,67 ммоль) и циклобутанона (141 мг, 2,02 ммоль) в 20 мл метанола добавляли цианоборогидрид натрия (127 мг, 2,02 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (260 мг, 77%).
[01884] Стадия 5: Синтез 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(циклобутил(метил)амино)циклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида.
[01885] К перемешиваемому раствору 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(циклобутиламино)циклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (230 мг, 0,46 ммоль) и формалина (138 мг, 4,61 ммоль) в 10 мл метанола добавляли цианоборогидрид натрия (43 мг, 0,69 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (150 мг, 63%).
[01886] Аналитические данные 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(циклобутил(метил)амино)циклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида -TFA соли: ЖХМС: 513,25 (M+l)+; ВЭЖХ: 96,89% (@ 254 нм)(Rt; 4,886; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир.с, 1H), 9,40 (с, 1H), 8,21 (с, 1H), 7,18 (с, 1H), 6,97 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, J=4,0 Гц, 2H), 3,77-3,75 (м, 1H), 3,12-3,02 (м, 3H), 2,69 (м, 1H), 2,50 (4H сливается с пиком растворителя), 2,18, 2,15, 2,11 (3s, 6H+3H+3H), 1,83-1,44 (м, 10H), 0,78 (т, 3H).
[01887] Соединение 290: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(3-(диметиламино)проп-1-ин-1-ил)-2-метилбензамид
[01888] Стадии 1 и 2: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(3-гидроксипроп-1-ин-1-ил)-2-метилбензоата:
[01889] Раствор метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (1,5 г, 3,2 ммоль), трет-бутилдиметил(проп-2-ин-1-илокси)силана (1,6 г, 9,6 ммоль), иодида меди (183 мг, 0,96 ммоль) и триэтиламина (1,30 мл, 9,60 ммоль) в 10 мл DMF продували газообразным аргоном в течение 20 минут. К реакционной смеси добавляли тетракис-(трифенилфосфин)палладий (369 мг, 0,32 ммоль) и смесь нагревали при 100°C в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. Смесь разбавляли этилацетатом, промывали водой и органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного 1,9 г силил-защищенного промежуточного продукта. Продукт растворяли в 15 мл ТГФ и добавляли тетра-бутиламмонийфторид (6,81 мл 1M раствора в ТГФ, 6,81 ммоль) при комнатной температуре и смесь перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (950 мг, 630%).
[01890] Стадия 3: Синтез метил 5-(3-бромпроп-1-ин-1-ил)-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата.
[01891] К раствору метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(3-гидроксипроп-1-ин-1-ил)-2-метилбензоата (950 мг, 2,14 ммоль) в 13 мл DCM добавляли трифенилфосфин (840 мг, 3,21 ммоль) и тетрабромид углерода (1,06 г, 3,21 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 3 часов, разбавляли при помощи DCM и промывали водой. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали на колонке с силикагелем с получением указанного в заголовке соединения (900 мг, 82%).
[01892] Стадия 4: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(3-(диметиламино)проп-1-ин-1-ил)-2-метилбензоата.
[01893] Раствор метил 5-(3-бромпроп-1-ин-1-ил)-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (500 мг, 0,98 ммоль) и 2M раствора в ТГФ N,N-диметиламина (2,5 мл, 4,9 ммоль) в 5 мл DMF перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали при пониженном давлении, разбавляли водой и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (450 мг, 96%).
[01894] Стадии 5 и 6: Синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(3-(диметиламино)проп-1-ин-1-ил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата.
[01895] Смесь метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(3-(диметиламино)проп-1-ин-1-ил)-2-метилбензоата (450 мг, 0,95 ммоль) и NaOH (57 мг, 1,40 ммоль) в 10 мл этанола:воды (4:1) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха и остаток распределяли между водой и DCM. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 430 мг кислоты. Неочищенную кислоту (430 мг, 0,94 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (280 мг, 1,88 ммоль), PyBOP (733 мг, 1,40 ммоль) и триэтиламин (0,1 мл, 0,94 ммоль) перемешивали в 7 мл DMSO при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой, осажденное соединение фильтровали и сушили в вакууме с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (450 мг, 81%).
[01896] Стадия 7: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(3-(диметиламино)проп-1-ин-1-ил)-2-метилбензамида.
[01897] К охлажденному раствору метил 3-(((1 r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(3-(диметиламино)проп-1-ин-1-ил)-2-метилбензоата (450 мг, 0,76 ммоль) в 6 мл DCM добавляли 1 мл TFA. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в 10% растворе MeOH в DCM и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (350 мг, 93%).
[01898] Стадия 8: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(3-(диметиламино)проп-1-ин-1-ил)-2-метилбензамида.
[01899] К перемешиваемому раствору неочищенного соединения 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(3-(диметиламино)проп-1-ин-1-ил)-2-метилбензамида (350 мг, 0,71 ммоль) и формальдегида (0,56 мл 38% раствора, 7,10 ммоль) в 8 мл метанола добавляли цианоборогидрид натрия (132 мг, 2,10 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов и распределяли между водой и 10% раствором MeOH в DCM. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на щелочном оксиде алюминия с получением указанного в заголовке соединения (120 мг, 32%).
[01900] ЖХМС: 520,6 (M + 1)+; ВЭЖХ: 92,27% (@ 254 нм)(Rt; 3,886; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир.с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,15 (с, 1H), 6,96 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, 2H), 3,02-3,00 (м, 2H), 2,50 (13 протонов сливаются с пиком растворителя), 2,33 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,82 (м, 4H), 1,39-1,28 (м, 4H), 0,77 (т, 3H).
[01901] Соединение 301: N-((1-бензил-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамид
[01902] 5-Хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензойную кислоту (1 экв.) растворяли в DMSO и к смеси добавляли 3-(аминометил)-1-(2-гидроксиэтил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (2 экв.) и триэтиламин (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (1,5 экв.) и перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали препаративной ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения (0,011 г, 16%) в виде TFA соли. ЖХМС: 563,40 (M + 1)+; ВЭЖХ: 90,27% (@ 210 нм-370 нм)(Rt; 6,122; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (MeOD, 400 МГц) δ 7,31-7,26 (м, 2H), 7,24-7,04 (м, 5H), 6,23 (с, 1H), 5,40 (д, 2H), 4,50 (с, 2H), 3,34 (1 протон сливается с пиком растворителя), 3,11-3,08 (м, 2H+1H), 2,81 (с, 3H+3H), 2,42 (с, 3H), 2,29 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,08-1,99 (м, 2H+2H), 1,52-1,49 (м, 4H), 0,86 (т, 3H, J=7,2 Гц).
[01903] Соединение 302: 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-N-((1-(2-гидроксиэтил)-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[01904] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата
[01905] К перемешиваемому раствору этил 3-((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (3,4 г, 8,0 ммоль) в DCM (35 мл) добавляли TFA (10 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, растворитель удаляли при пониженном давлении и добавляли насыщенный раствор NaHCO3. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM и объединенные органические слои промывали водой и насыщенным солевым раствором и сушили над безводным Na2SO4. Выпаривание растворителя при пониженном давлении давало метил 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоат (2,5 г, 96%).
[01906] Полученное соединение (2,4 г, 7,4 ммоль) растворяли в метаноле (25 мл) и смесь охлаждали до 0°C. Добавляли формалин (2,21 г, 73,95 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 20 минут. Добавляли цианоборогидрид натрия (0,92 г, 14,8 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляли при пониженном давлении, к остатку добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (2,3 г, 88), которое использовали далее без дополнительной очистки.
[01907] Стадия 2: Синтез 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензойной кислоты
[01908] Водный раствор NaOH (0,73 г,18,35 ммоль) добавляли к раствору этил 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (2,3 г, 9,1 ммоль) в этаноле (25 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. Этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (2,0 г, 92%).
[01909] Стадия 3: Синтез 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-N-((1-(2-гидроксиэтил)-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01910] 5-Хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензойную кислоту (1 экв.) растворяли в DMSO и добавляли 3-(аминометил)-1-(2-гидроксиэтил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (2 экв.) и триэтиламин (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (1,5 экв.) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали препаративной ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения (0,07 г,20%) в виде TFA соли. ЖХМС: 517,35 (M + 1)+; ВЭЖХ: 91,15% (@ 254 нм)(Rt; 5,134; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-D2O обмен, 400 МГц) δ 7,17 (с, 1H), 6,94 (с, 1H), 6,01 (с, 1H), 4,26 (м, 2H), 3,99 (с, 2H), 3,01-2,99 (м, 3H), 2,67 (с, 3H+3H), 2,35 (1 протон сливается с пиком растворителя), 2,33 (м, 2H+2H), 2,19 (с, 3H), 2,12 (с, 3H), 1,94-1,81 (м, 5H) 1,40 (м, 4H), 0,77 (т, 3H).
[01911] Соединение 306: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид
[01912] Стадия 1: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата
[01913] Уксусную кислоту (3,28 г,54,8 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (2,0 г, 9,1 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (2,52 г, 11,87 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (5,80 г, 27,4 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу разделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (2,8 г, 82%).
[01914] Стадия 2: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата
[01915] Уксусную кислоту (0,85 г, 14,2 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (0,9 г,2,40 ммоль) и ацетальдегида (0,21 г, 4,80 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,53 г, 7,21 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,8 г, 83%).
[01916] Стадия 3: Синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(трифторметил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
[01917] Водный раствор гидроксида натрия (0,12 г, 2,97 ммоль) добавляли к раствору соединения метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензоата (0,80 г, 1,98 ммоль) в этаноле (8 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и затем доводили до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,7 г). Кислоту (0,7 г, 1,8 ммоль) затем растворяли в DMSO (10 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,54 г, 3,59 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (1,40 г, 2,69 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного продукта, который затем очищали путем промывки ацетонитрилом, с получением указанного в заголовке соединения (0,7 г, 74%).
[01918] Стадия 4: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамида
[01919] К раствору трет-бутил ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(трифторметил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (0,7 г, 1,3 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли TFA (3 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и добавляли насыщенный раствор NaHCO3. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM; объединенные органические слои промывали водой и насыщенным солевым раствором; сушили над безводным Na2SO4; фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,56 г,98%), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[01920] Стадия 5: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензамида
[01921] К раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамида (0,5 г, 1,2 ммоль) в DCM (5 мл) при 0°C добавляли формалин (0,124 г, 4,13 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 20 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,63 г, 2,95 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали ацетонитрилом и простым эфиром с получением указанного в заголовке соединения (0,4 г, 67%). ЖХМС: 507,45 (M + 1)+; ВЭЖХ: 96,81% (@ 210-370 нм)(Rt; 4,857; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкл; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 8,34 (с, 1H), 7,38 (с, 1H), 7,20 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,27 (д, 2H), 3,08 (м, 2H), 2,67 (м, 1H), 2,40 (с, 6H), 2,24 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,85 (м, 2H), 1,80 (м, 2H), 1,42 (м, 2H), 1,25 (м, 2H), 0,78 (т, 3H).
[01922] Соединение 390: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метилникотинамид
[01923] Стадия 1: Синтез метил 5-амино-4-метилникотината
[01924] К перемешиваемому раствору 5-амино-4-метилникотиновой кислоты (5,0 г, 32 ммоль) в метаноле (75 мл) медленно добавляли концентрированную H2SO4 (5 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 70°С в течение 12 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3. Экстракцию осуществляли с использованием EtOAc; объединенные органические слои промывали водой, насыщенным солевым раствором и сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (4,1 г, 75%), который использовали без дополнительной очистки.
[01925] Стадия 2: Синтез метил 5-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-4-метилникотината
[01926] К перемешиваемому раствору метил 5-амино-4-метилникотината (1,20 г, 7,22 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (2,30 г, 10,8 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) добавляли уксусную кислоту (2,59 г, 43 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (4,59 г, 21,56 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное соединение очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,65 г, 25%).
[01927] Стадия 3: Синтез метил 5-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-4-метилникотината
[01928] К перемешиваемому раствору метил 5-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-4-метилникотината (0,65 г, 1,79 ммоль) и ацетальдегида (0,39 г, 8,95 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) добавляли уксусную кислоту (0,64 г, 10,7 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,13 г, 5,33 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,55 г, 79%).
[01929] Стадия 4: Синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилпиридин-3-ил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
[01930] Водный раствор NaOH (0,11 г, 2,81 ммоль) добавляли к раствору метил 5-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)-циклогексил)(этил)амино)-4-метилникотината (0,55 г, 1,40 ммоль) в этаноле (7 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей кислоты (0,5 г). Эту кислоту (0,5 г, 1,3 ммоль) затем растворяли в DMSO (5 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,48 г, 2,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (1,02 г, 1,58 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением остатка, который очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,5 г, 74%).
[01931] Стадия 5: Синтез 5-(((1r,r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метилникотинамида
[01932] К перемешиваемому раствору трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилпиридин-3-ил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (0,5 г, 0,97 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли TFA (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли насыщенный раствор NaHCO3 и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои промывали водой и насыщенным солевым раствором; сушили над безводным Na2SO4; фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,35 г, 88%).
[01933] Стадия 6: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метилникотинамида
[01934] 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метилникотинамид (0,35 г,0,85 ммоль) растворяли в DCM (5 мл) и добавляли формалин (0,089 г, 2,96 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали в течение 20 минут, добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,45 г, 2,12 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения смесь разбавляли водой и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество дополнительно очищали путем промывки ацетонитрилом и простым эфиром с получением указанного в заголовке соединения (0,3 г, 80%). ЖХМС: 440,45 (M + 1)+; ВЭЖХ: 73,44% & 21,34% (@ 210-370 нм)(Rt; 3,769 & 3,965); Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир.с, 1H), 8,34 (с, 1H), 8,29 (с, 1H), 8,07 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,27 (д, 2H), 3,18 (м, 1H), 3,01 (м, 2H), 2,22 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,12 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,74 (м, 2H), 1,64 (м, 2H), 1,40-1,20 (м, 4H), 0,81 (т, 3H).
[01935] Соединение 308: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-метокси-2-метилбензамид
[01936] Стадия 1: Синтез метил 5-метокси-2-метил-3-нитробензоата
[01937] К перемешиваемому раствору 5-гидрокси-2-метил-3-нитробензойной кислоты (1,50 г, 7,61 ммоль) в DMF (15 мл) добавляли карбонат натрия (3,23 г, 30,5 ммоль) и метилиодид (1,88 мл, 30,5 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения реакционную смесь разбавляли водой и экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (1,7 г), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[01938] Стадия 2: Синтез метил 3-амино-5-метокси-2-метилбензоата
[01939] К перемешиваемому раствору метил 5-метокси-2-метил-3-нитробензоата (1,7 г, 7,6 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляли хлорид аммония (1,7 г, 32 ммоль), растворенный в воде (20 мл), и порошок железа (3,38 г, 60,44 ммоль). Смесь нагревали при 80°C в течение 3 часов, фильтровали и остаток тщательно промывали горячим этанолом. Фильтрат концентрировали и остаток подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия. Водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (1,2 г), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[01940] Стадия 3: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-метокси-2-метилбензоата
[01941] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-метокси-2-метилбензоата (1,2 г, 6,15 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (1,70 г, 7,99 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) добавляли уксусную кислоту (2,21 г, 36,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (3,91 г, 18,4 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакционную смесь гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,35 г, 14%).
[01942] Стадия 4: Синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-метокси-2-метилбензоата
[01943] К перемешиваемому раствору 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-метокси-2-метилбензоата (0,35 г, 0,89 ммоль) и ацетальдегида (0,2 г, 4,46 ммоль) в дихлорэтане (5 мл) добавляли уксусную кислоту (0,32 г, 5,35 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,57 г, 2,67 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,3 г, 80%).
[01944] Стадия 5: Синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-метокси-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
[01945] Водный раствор NaOH (0,06 г, 1,42 ммоль) добавляли к раствору метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)-(этил)амино)-5-метокси-2-метилбензоата (0,3 г, 0,71 ммоль) в этаноле (4 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением неочищенной кислоты (0,25 г).
[01946] Кислоту (0,25 г, 0,62 ммоль) растворяли в DMSO (3 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,19 г, 1,23 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (0,48 г, 0,92 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи. Реакцию гасили, выливая смесь на лед, и смесь экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,2 г, 60%).
[01947] Стадия 6: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-метокси-2-метилбензамида
[01948] К раствору трет-бутил ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-метокси-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (0,2 г,0,37 ммоль) в DCM (4 мл) добавляли TFA (2 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и добавляли насыщенный раствор NaHCO3. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM; объединенные органические слои промывали водой и насыщенным солевым раствором; сушили над безводным Na2SO4; фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения с удаленной защитной Boc-группой (0,15 г).
[01949] Соединение с удаленной защитной Boc-группой (0,15 г, 0,34 ммоль) растворяли в DCM (2 мл) и к смеси добавляли формалин (0,035 г, 1,19 ммоль) при 0°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 10 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,18 г, 0,85 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали препаративной ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (0,02 г,12%). ЖХМС: 469,80 (M + 1)+; ВЭЖХ: 96,80% (@ 210-370 нм)(Rt; 3,802); Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 9,42 (с, 1H), 8,06 (с, 1H), 6,75 (с, 1H), 6,58 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=4 Гц), 3,72 (с, 3H), 3,09 (м, 3H), 2,69 (с, 3H), 2,68 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 6H), 1,95 (м, 2H), 1,87 (м, 2H), 1,41 (м, 4H), 0,801 (т, 3H).
[01950] Соединение 309: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензамид
[01951] Стадия 1: синтез метил 5-гидрокси-2-метил-3-нитробензоата
[01952] К перемешиваемому раствору 5-гидрокси-2-метил-3-нитробензойной кислоты (3,50 г, 17,8 ммоль) в метаноле (40 мл) добавляли тионилхлорид (3,9 мл, 53 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в течение 3 часов. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении. Добавляли водный раствор бикарбоната натрия с последующим экстрагированием этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (3,0 г, 80%)
[01953] Стадия 2: синтез метил 5-(2-гидроксиэтокси)-2-метил-3-нитробензоата
[01954] К перемешиваемому раствору метил 5-гидрокси-2-метил-3-нитробензоата (1,5 г, 7,1 ммоль) в ACN (15 мл) добавляли карбонат цезия (4,6 г, 14 ммоль) и 2-бромэтанол (2,5 мл, 35 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение ночи. После завершения реакционную смесь разбавляли водой и экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (1,35 г, 74%).
[01955] Стадия 3: синтез метил 3-амино-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензоата
[01956] К перемешиваемому раствору метил 5-(2-гидроксиэтокси)-2-метил-3-нитробензоата (1,5 г, 5,88 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляли хлорид аммония (1,5 г, 28 ммоль), растворенный в воде (20 мл), и порошок железа (1,3 г, 23 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 3 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали и остаток тщательно промывали горячим этанолом. Фильтрат концентрировали и остаток подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия. Водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (1,3 г), которое использовали непосредственно.
[01957] Стадия 4: синтез метил 3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензоата
[01958] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензоата (1,3 г, 5,77 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (1,6 г, 7,5 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) добавляли уксусную кислоту (2,07 г, 34,66 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (3,7 г, 17 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (2,0 г, 82%) в виде смеси цис/транс-изомеров, которую использовали далее в качестве смеси для получения конечного соединения 309, которое также выделяли в виде смеси цис/транс-изомеров.
[01959] Стадия 5: синтез метил 3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензоата
[01960] К перемешиваемому раствору метил 3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензоата (2,0 г, 4,7 ммоль) и ацетальдегида (0,63 г, 14,2 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) добавляли уксусную кислоту (1,7 г, 28 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (3,0 г, 14,2 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении; Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,9 г, 89%).
[01961] Стадия 6: синтез трет-бутил (4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
[01962] Водный раствор NaOH (0,25 г, 6,33 ммоль) добавляли к раствору метил 3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)-(этил)амино)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензоата (1,9 г, 4,2 ммоль) в этаноле (20 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей неочищенной кислоты (1,8 г).
[01963] Кислоту (1,8 г, 4,1 ммоль) затем растворяли в DMSO (15 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (1,25 г, 8,25 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (3,22 г, 6,19 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,4 г, 59%).
[01964] Стадия 7: синтез 3-((4-аминоциклогексил)(этил)-амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензамида
[01965] К раствору трет-бутил (4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (0,80 г, 1,40 ммоль) в DCM (5 мл) добавляли TFA (2 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и добавляли насыщенный раствор NaHCO3. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM; объединенные органические слои промывали водой и насыщенным солевым раствором; сушили над безводным Na2SO4; фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,5 г,76%).
[01966] Стадия 8: синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензамида
[01967] К раствору 3-((4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензамида (0,30 г, 0,63 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли формалин (0,07 г, 2,23 ммоль) при 0°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 20 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,34 г, 1,59 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество дополнительно очищали путем промывки ацетонитрилом и простым эфиром с получением указанного в заголовке соединения N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(2-гидроксиэтокси)-2-метилбензамида в виде смеси цис/транс-изомеров (0,25 г, 78%). ЖХМС: 499,55 (M + 1)+; ВЭЖХ: 51,61 & 47,78% (@ 210-370 нм)(Rt; 3,539 & 3,751); Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир.с, 1H), 8,04 (с, 1H), 6,68 (с, 1H), 6,51 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H), 3,92 (т, 2H), 3,67 (т, 2H), 2,97 (м, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,12 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,08 (с, 3H), 1,89 (с, 3H), 1,76 (м, 3H), 1,65 (шир.с, 1H), 1,33 (м, 3H), 1,10 (м, 1H), 0,788 (шир.с, 3H).
[01968] Соединение 310: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)-(этил)-амино)-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензамид
[01969] Стадия 1: синтез метил 5-(2-метоксиэтокси)-2-метил-3-нитробензоата
[01970] К перемешиваемому раствору метил 5-гидрокси-2-метил-3-нитробензоата (1,50 г, 7,61 ммоль) в ACN (15 мл) добавляли карбонат цезия (4,96 г, 15,2 ммоль) и 1-бром-2-метоксиэтан (1,57 г, 11,4 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение ночи. После завершения реакционную смесь разбавляли водой и экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,3 г, 68).
[01971] Стадия 2: синтез метил 3-амино-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензоата
[01972] К перемешиваемому раствору метил 5-(2-метоксиэтокси)-2-метил-3-нитробензоата (1,35 г, 4,83 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляли хлорид аммония (1,35 г, 25,0 ммоль), растворенный в воде (20 мл), и порошок железа (1,07 г, 19,3 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 3 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали и остаток тщательно промывали горячим этанолом. Фильтрат концентрировали и остаток подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия. Водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (1,23 г), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[01973] Стадия 3: синтез метил 3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензоата
[01974] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензоата (1,23 г, 5,14 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (1,42 г, 6,69 ммоль) в дихлорэтане (15 мл) добавляли уксусную кислоту (1,8 г, 31 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (3,2 г, 15 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,6 г, 72%) в виде смеси цис/транс-изомеров, которую использовали далее для получения конечного соединения в виде смеси цис/транс-изомеров.
[01975] Стадия 4: синтез метил 3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензоата
[01976] К перемешиваемому раствору метил 3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензоата (1,60 г, 3,67 ммоль) и ацетальдегида (0,48 г, 10,9 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) добавляли уксусную кислоту (1,3 г, 22 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2,33 г, 11,0 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении, неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,6 г, 94%).
[01977] Стадия 5: синтез трет-бутил (4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
[01978] Водный раствор NaOH (0,2 г, 5,3 ммоль) добавляли к раствору метил 3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)-(этил)амино)-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензоата (1,6 г, 3,5 ммоль) в этаноле (20 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои концентрировали с получением соответствующей неочищенной кислоты (1,4 г).
[01979] Кислоту (1,4 г, 3,1 ммоль) затем растворяли в DMSO (15 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,95 г, 6,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (2,4 г, 4,6 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,9 г, 95%).
[01980] Стадия 5: синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)-(этил)амино)-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензамида
[01981] К раствору метил 3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензоата (1,2 г, 2,67 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли TFA (2 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли насыщенный раствор NaHCO3. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM; объединенные органические слои промывали водой и насыщенным солевым раствором; сушили над безводным Na2SO4; фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения с удаленной защитной Boc-группой (0,78 г).
[01982] Соединение с удаленной защитной Boc-группой (0,30 г, 0,62 ммоль) растворяли в DCM (3 мл) и добавляли формалин (0,07 г, 2,33 ммоль) при 0°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 20 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,33 г, 1,56 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду, экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали препаративной ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(2-метоксиэтокси)-2-метилбензамида в виде смеси цис/транс-изомеров (0,02 г,6,3%). ЖХМС: 513,60 (M + 1)+; ВЭЖХ: 44,48% & 50,77% (@ 210-370 нм)(Rt; 3,879 & 4,316); Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,04 (с, 1H), 6,68 (с, 1H), 6,52 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4,4 Гц), 4,03 (шир.с, 2H), 3,61 (шир.с, 2H), 3,28 (с, 3H), 3,10 (м, 1H), 2,95 (м, 2H), 2,18 (с, 6H), 2,12 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,08 (с, 3H), 1,77 (м, 2H), 1,65 (шир.с, 2H), 1,33 (м, 3H), 1,15 (м, 1H), 0,78 (т, 3H, J=4 Гц).
[01983] Соединение 311: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(этилтио)-2-метилбензамид
[01984] Стадия 1: синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[01985] К перемешиваемому раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50,0 г, 276 ммоль) в концентрированной H2SO4 (200 мл) добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль) по порциям при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду, образовавшийся осадок фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением желаемого неочищенного указанного в заголовке соединения (71,7 г, 99,9%), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[01986] Стадия 2: синтез метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоата
[01987] К перемешиваемому раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (285 г, 1104 ммоль) в DMF (2,8 л) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) с последующим добавлением метилиодида (626 г, 4415 ммоль) при комнатной температуре. Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали и промывали этилацетатом. Объединенные фильтраты промывали водой и водную фазу обратно экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (290 г,97% выход). Выделенное соединение использовали непосредственно на следующей стадии.
[01988] Стадия 3: синтез метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата
[01989] К перемешиваемому раствору метил 5-бром-2-метил-3-нитробензоата (290 г, 1060ммоль) в этаноле (1,5 л) добавляли водный раствор хлорида аммония (283 г, 5290 ммоль, растворенные в 1,5 л воды). Полученную смесь перемешивали и нагревали при 80°C с последующим добавлением порошка железа (472 г, 8450 ммоль) по порциям при 80°C. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 часов. После завершения горячую реакционную смесь фильтровали через целит и слой целита промывали метанолом (5 л) с последующей промывкой при помощи 30% MeOH в DCM (5 л). Объединенный фильтрат концентрировали в вакууме, полученный остаток разбавляли водным раствором бикарбоната и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого твердого вещества (220 г, 89% выход).
[01990] Стадия 4: синтез метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата
[01991] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-бром-2-метилбензоата (15,0 г, 617 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (17,1 г, 80,2 ммоль) в дихлорэтане (150 мл) добавляли уксусную кислоту (22,2 г,370 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (39,3 г, 185 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (10,5 г, 39%).
[01992] Стадия 5: синтез метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата
[01993] К перемешиваемому раствору 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (10,0 г, 22,7 ммоль) и ацетальдегида (2,99 г, 68 ммоль) в дихлорэтане (100 мл) добавляли уксусную кислоту (8,18 г, 136 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (14,5 г, 68,1 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении, неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (9,0 г, 84%).
[01994] Стадия 6: синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
[01995] Водный раствор NaOH (1,15 г, 28,8 ммоль) добавляли к раствору метил 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)-амино)-циклогексил)-(этил)-амино)-2-метилбензоата (9,0 г, 19 ммоль) в этаноле (100 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, доводили до pH 4 при помощи лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенной кислоты (8,6 г,).
[01996] Кислоту (8,6 г, 19 ммоль) затем растворяли в DMSO (10 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (5,74 г, 37,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (14,7 г, 2845 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали путем промывки ацетонитрилом, с получением указанного в заголовке соединения (10,2 г, 92%).
[01997] Стадия 7: синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)-(этил)-амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[01998] К раствору трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (3,0 г, 5,10 ммоль) в DCM (20 мл) добавляли TFA (5 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли насыщенный раствор NaHCO3. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM; объединенные органические слои промывали водой и насыщенным солевым раствором; сушили над безводным Na2SO4; фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (2,2 г, 88%), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[01999] Стадия 8: синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида
[02000] К раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)-(этил)-амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (2,20 г, 4,50 ммоль) в DCM (25 мл) добавляли формалин (0,49 г, 16,3 ммоль) при 0°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 20 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2,39 г, 11,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (2,3 г, 98%), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[02001] Стадия 9: синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(этилтио)-2-метилбензамида
[02002] К перемешиваемому раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (0,40 г, 0,77 ммоль) в диоксане добавляли этантиол (0,048 г, 0,77 ммоль) и DIPEA (2,70 мл, 1,55 ммоль) и реакционную смесь затем продували аргоном в течение 10 минут. Затем добавляли Pd (OAc)2 (0,009 г, 0,038 ммоль) и Xantphos (0,045 г, 0,077 ммоль) добавляли и реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение ночи. После завершения реакции добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,17 г, 44%). ЖХМС: 499,55 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,30% (при 210-370 нм)(Rt; 4,264); Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% B до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% В); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 9,37 (с, 1H), 8,14 (с, 1H), 7,08 (с, 1H), 6,89 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4 Гц), 3,15-2,90 (м, 6H), 2,69 (с, 3H), 2,68 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,94 (м, 2H), 1,85 (м, 2H), 1,41 (м, 4H), 1,20 (т, 3H, J=7,2), 0,78 (т, 3H, J=6 Гц).
[02003] Соединение 313: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-гидроксициклогексил)-амино)-2-метилбензамид
[02004] Стадия 1: синтез метил 3-(1,4-диоксаспиро[4,5] декан-8-иламино)-5-хлор-2-метилбензоата
[02005] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (5,0 г, 25 ммоль) и 1,4-диоксаспиро[4,5]декан-8-она (5,86 г, 37,8 ммоль) в дихлорэтане (50 мл) добавляли уксусную кислоту (9,0 г, 150 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (15,9 г, 752 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (6,6 г, 76%).
[02006] Стадия 2: синтез метил 5-хлор-3-(этил(1,4-диоксаспиро[4,5] декан-8-ил)амино)-2-метилбензоата
[02007] К перемешиваемому раствору метил 3-(1,4-диоксаспиро[4,5]декан-8-иламино)-5-хлор-2-метилбензоата (6,6 г, 19 ммоль) и ацетальдегида (2,56 г, 58,4 ммоль) в дихлорэтане (70 мл) добавляли уксусную кислоту (7,0 г, 120 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (12 г, 57 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (4,0 г, 56%).
[02008] Стадия 3: синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(1,4-диоксаспиро[4,5]декан-8-ил)амино)-2-метилбензамида
[02009] Водный раствор NaOH (1,5 г, 38 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(этил(1,4-диоксаспиро[4,5]декан-8-ил)амино)-2-метилбензоата (6,9 г, 19 ммоль) в этаноле (70 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили при помощи лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением неочищенной кислоты (6,5 г).
[02010] Неочищенную кислоту (6,5 г, 18 ммоль) растворяли в DMSO (50 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (5,6 г, 37 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (14,3 г, 27,5 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (5,9 г 66%), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[02011] Стадия 4: синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-оксоциклогексил)амино)-2-метилбензамида
[02012] К перемешиваемому раствору 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(1,4-диоксаспиро[4,5] декан-8-ил)амино)-2-метилбензамида (2,0 г, 4,1 ммоль) в ацетоне:воде (14 мл + 6 мл) добавляли PTSA (3,1 г, 16 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение ночи. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия. Водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,5 г, 83%), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
[02013] Стадия 5: синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-гидроксициклогексил)-амино)-2-метилбензамида
[02014] К перемешиваемому раствору 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-оксоциклогексил)амино)-2-метилбензамида (0,30 г, 0,68 ммоль) в MeOH медленно добавляли NaBH4 (0,038 г, 1,01 ммоль) при 0°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 часов. После завершения реакцию гасили водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении и полученное неочищенное вещество очищали, осуществляя промывки ацетонитрилом и простым эфиром, с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси изомеров (175 мг, 58%). ЖХМС: 446,35 (M + 1)+; ВЭЖХ: 74,32% & 24,18% (@ 210-370 нм)(Rt; 5,157 & 5,276); Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% В); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,49 (с, 1H), 8,25 (с, 1H), 7,17 (с, 1H), 6,96 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4 Гц), 3,33 (м, 1H), 3,04 (м, 2H), 2,19 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,78 (м, 2H), 1,66 (м, 2H), 1,38 (м, 3H), 1,10 (м, 2H), 0,78 (т, 3H).
[02015] Соединение 315: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)бензамид
[02016] Стадия 1: Синтез 5-(3,6-дигидро-2H-пиран-4-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида
[02017] К перемешиваемому раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (0,30 г, 0,58 ммоль) и 2-(3,6-дигидро-2H-пиран-4-ил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана (0,18 г, 0,88 ммоль) в смеси диоксан-вода добавляли Na2CO3 (0,22 г, 2,07 ммоль). Раствор продували аргоном в течение 15 минут, добавляли Pd(PPh3)4 (0,067 г, 0,05 ммоль) и раствор снова продували аргоном в течение 10 минут. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 3 часов. После завершения реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,30 г, 98%).
[02018] Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)бензамида
[02019] К перемешиваемому раствору 5-(3,6-дигидро-2H-пиран-4-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (0,3 г, 0,576 ммоль) в метаноле добавляли каталитическое количество 10% Pd/C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре под давлением баллона водорода в течение 1 часа. После завершения реакционную смесь фильтровали через слой целита, целит промывали метанолом и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, с получением неочищенного соединения, которое очищали препаративной ВЭЖХ, с получением целевого соединения N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)бензамида в виде TFA соли (0,08 г, 26%).
[02020] ЖХМС: 523,60 (M + 1)+; ВЭЖХ: 48,41+51,05% (@ 210 нм - 370 нм)(Rt; 3,93& 3,99); Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир.с, 1H), 8,39 (т, 1H), 8,08 (с, 1H), 7,07 (с, 1H), 6,86 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=2,8 Гц), 3,94-3,92 (м, 2H), 3,41 (м, 2H), 3,09-2,89 (м, 3H), 2,69 (с, 3H+3H), 2,19 (с, 3H+3H), 2,11 (с, 3H), 1,99-1,86 (м, 5H), 1,64 (м, 4H), 1,42 (м, 3H), 1,25 (м, 2H), 0,79 (т, 3H).
[02021] Соединение 319: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(этилсульфонил)-2-метилбензамид
[02022] Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(этилтио)-2-метилбензамида
[02023] К перемешиваемому раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (0,4 г, 0,77 ммоль) в диоксане добавляли этантиол (0,048 г, 0,77 ммоль) и DIPEA (2,7 мл, 1,55 ммоль). Раствор продували аргоном в течение 10 минут, к смеси добавляли Pd(OAc)2 (0,009 г, 0,038 ммоль) и Xantphos (0,045 г, 0,077 ммоль) и снова продували аргоном в течение 10 минут. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение ночи, добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией, с получением указанного в заголовке соединения (0,17 г, 44%). ЖХМС: 499,55 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,30% (@ 210-370 нм)(Rt; 4,264); Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 9,37 (с, 1H), 8,14 (с, 1H), 7,08 (с, 1H), 6,89 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4 Гц), 3,15-2,90 (м, 6H), 2,69 (с, 3H), 2,68 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,94 (м, 2H), 1,85 (м, 2H), 1,41 (м, 4H), 1,20 (т, 3H, J=7,2), 0,78 (т, 3H, J=6 Гц).
[02024] Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(этилсульфонил)-2-метилбензамида
[02025] К перемешиваемому раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(этилтио)-2-метилбензамида (0,085 г, 0,17 ммоль.) в метаноле добавляли оксон (0,105 г,0,34 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов, добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали препаративной ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (0,07 г,77%). ЖХМС: 531,60 (M + 1)+; ВЭЖХ: 89,24% (@ 210 нм -370 нм)(Rt; 4,082; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 9,36 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 7,53 (с, 1H), 7,38 (с, 1H), 7,22 (м, 1H), 7,09 (с, 1H), 6,96 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,29-4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,0-3,20 (м, 4H), 2,60-2,80 (м, 8H), 2,27 (с, 9H), 2,20 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,90-2,0 (м, 2H), 1,80-1,90 (м, 2H), 1,40-1,50 (м, 4H), 1,05-1,15 (т, 3H, J=7,6 Гц), 0,75-0,85 (т, 3H, J=6,8 Гц).
[02026] Соединение 320: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-изопропил-2-метилбензамид
[02027] Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(проп-1-ен-2-ил)бензамида
[02028] К перемешиваемому раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (0,30 г, 0,58 ммоль) и 4,4,5,5-тетраметил-2-(проп-1-ен-2-ил)-1,3,2-диоксаборолана (0,147 г, 0,875 ммоль) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (0,22 г, 2,07 ммоль) и раствор продували аргоном в течение 15 минут. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,067 г, 0,058 ммоль) и снова продували аргоном в течение 10 минут. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 часов разбавляли водой и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (0,20 г, 71%).
[02029] Стадия 2: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-изопропил-2-метилбензамида
[02030] К перемешиваемому раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(проп-1-ен-2-ил)бензамида (0,20 г, 0,41 ммоль) в метаноле добавляли каталитическое количество 10% Pd/C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре под давлением водорода (давление баллона) в течение 2 часов. Смесь фильтровали через слой целита, промывали метанолом и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное соединение очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (0,07 г, 35%). ЖХМС: 481,40 (M + 1)+; ВЭЖХ: 97,01% (@ 210 нм - 370 нм)(Rt; 3,996; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,5-12 мин 5%В); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 9,37 (шир.с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,01 (с, 1H), 6,83 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,26-4,25 (д, 2H, J=4,0 Гц), 3,0-3,25 (м, 3H), 2,70-2,8 (м, 1H), 2,60-2,75 (м, 6H), 2,19 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,90-2,0 (м, 2H), 1,80-1,90 (м, 2H), 1,35-1,50 (м, 4H), 1,16-1,20 (д, 6H, J=6,8 Гц), 0,75-0,85 (т, 3H).
[02031] Соединение 321: 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)-(этил)-амино)-N-((4-этил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[02032] Стадия 1: синтез метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата
[02033] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (126 г, 0,59 моль) в DMF (1,0 л) добавляли карбонат натрия (249 г, 2,34 моль) и метилиодид (145 мл, 2,34 моль). Реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали и остаток промывали при помощи DCM. Водную фазу отделяли и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния, элюируя смесью этилацетат:гексан, с получением указанного в заголовке соединения (85 г, 63%).1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц): δ 8,25 (д, 1H), 8,05 (с, 1H), 3,9 (с, 1H), 2,4 (с, 1H).
[02034] Стадия 2: синтез метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата
[02035] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метилбензоата (85 г, 0,37 моль) в этаноле (425 мл) добавляли хлорид аммония (85 г, 112 ммоль), растворенный в воде (425 мл), и порошок железа (169 г, 2,96 моль) при перемешивании. Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 16 часов, фильтровали и остаток тщательно промывали горячим этанолом. Фильтрат концентрировали и остаток подщелачивали водным раствором бикарбоната натрия. Водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении, с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (70 г), которое использовали непосредственно. 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц): δ 6,8 (с, 2H), 5,45 (с, 2H), 3,75 (с, 3H), 2,15 (с, 3H).
[02036] Стадия 3: синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутокси-карбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[02037] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (12 г, 60 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (15,4 г,72 ммоль) в дихлорэтане (120 мл) добавляли уксусную кислоту (21 г, 360 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (38,2 г, 180 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали раствором бикарбоната, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое затем очищали на колонке с получением транс-изомера указанного в заголовке соединения метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (8,0 г, 33%).
[02038] Стадия 4: синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)-циклогексил)-(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[02039] К перемешиваемому раствору метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (11,4 г, 28,8 ммоль) и ацетальдегида (2,5 г, 56 ммоль) в дихлорэтане (120 мл) добавляли уксусную кислоту (10,7 г, 169 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (17,95 г, 84,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения к реакционной смеси добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали раствором бикарбоната, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое затем очищали на колонке, с получением указанного в заголовке соединения (9,8 г, 80%).
[02040] Стадия 5: синтез метил 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата
[02041] К перемешиваемому раствору метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (9,8 г, 23 ммоль) в DCM (50 мл) при 0°C добавляли TFA (10 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток затем подщелачивали насыщенным водным раствором бикарбоната (100 мл) до pH 8 и водный слой экстрагировали при помощи 20% метанола в DCM (100 мл ×4). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного амина (7,4 г), который использовали как таковой для следующей реакции.
[02042] К перемешиваемому раствору амина (7,4 г, 23 ммоль) в DCM (70 мл) при 0°C добавляли 37-41% водный раствор формалина (2,4 г, 81 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли NaBH(OAc)3 (12,1 г, 57 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов. После завершения реакцию гасили водой. Добавляли MeOH (8 мл) и слои разделяли. Экстракцию осуществляли при помощи 10% MeOH в DCM и объединенные органические фазы сушили и концентрировали. Остаток очищали на колонке с щелочным оксидом алюминия, с получением указанного в заголовке соединения (8,0 г, 99%).
[02043] Стадия 6: синтез 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)~2-метил-бензойной кислоты
[02044] Водный раствор NaOH (1,8 г,45 ммоль в 7 мл H2O) добавляли к раствору соединения метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (8,0 г, 23 ммоль) в этаноле (70 мл) и перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили при помощи лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (7,6 г, 99%).
[02045] Стадия 7: синтез 3-(аминометил)-4-этил-6-метилпиридин-2(1H)-она
[02046] К раствору 4-этил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (1 экв.) в метаноле и водном растворе аммиака (9:1) добавляли каталитическое количество никеля Ренея. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре под давлением водорода (баллон) в течение 2-5 часов. После завершения реакции смесь фильтровали через слой целита и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения.
[02047] Стадия 8: синтез 5-хлор-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-N-((4-этил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[02048] Указанную выше кислоту, 5-хлор-3-(((транс)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензойную кислоту, (1 экв.) растворяли в DMSO и добавляли 3-(аминометил)-4-этил-6-метилпиридин-2(1H)-он (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (1,5 экв.) и триэтиламин (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь затем выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением вещества, которое очищали колоночной хроматографией, затем препаративной ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения в виде TFA соли (0,1 г, 70%). ЖХМС: 487,45 (M + 1)+; ВЭЖХ: 96,17% (@ 254 нм)(Rt; 6,026; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 9,33 (с, 1H), 8,22 (с, 1H), 7,19 (с, 1H), 6,97 (с, 1H), 5,88 (с, 1H), 4,20-4,25 (д, 2H), 3,0-3,15 (м, 1H+2H), 2,60-2,75 (м, 1H+3H+3H), 2,35-2,45 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 1,90-2,0 (м, 2H), 1,80-1,90 (м, 2H), 1,35-1,50 (м, 4H), 1,10-1,20 (т, 3H, J=7,2 Гц), 0,75-0,85 (т, 3H).
[02049] Соединение 335: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)тио)-2-метилбензамид
[02050] Стадия 1: Синтез метил 3-бром-5-хлор-2-метилбензоата
[02051] К перемешиваемому раствору CuBr2 (12,3 г, 55,3 ммоль) в ацетонитриле (150 мл) добавляли трет-бутилнитрит (7,77 г, 75,4 ммоль) при 0°C и затем к смеси добавляли метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоат (10,0 г, 50,3 ммоль), растворенный в ацетонитриле. Полученную реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 часов и затем при комнатной температуре в течение 18 часов. После завершения реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (6,6 г, 50%).
[02052] Стадия 2: Синтез 3-бром-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[02053] Водный раствор NaOH (0,45 г,11,4 ммоль) добавляли к раствору метил 3-бром-5-хлор-2-метилбензоата (2,0 г, 7,6 ммоль) в EtOH (20 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и остаток подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 8 и затем с использованием лимонной кислоты до доведения до pH 6. Водную фазу экстрагировали при помощи 10% метанола в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением промежуточного соединения в виде соответствующей неочищенной кислоты (1,5 г).
[02054] Кислоту (1,5 г, 6,2 ммоль) растворяли в DMSO (15 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (1,67 г, 12,43 ммоль) и триэтиламин (0,61 г, 6,01 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (4,81 г, 9,26 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакционную смесь выливали на ледяную воду. Суспендированное твердое вещество собирали фильтрованием, тщательно промывали водой и сушили. Полученное твердое вещество дополнительно очищали путем промывки ацетонитрилом с получением указанного в заголовке соединения (2,18 г, 92%).
[02055] Стадия 3: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-((4-оксоциклогексил)тио)бензамида
[02056] Раствор 3-бром-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)-метил)-2-метилбензамида (0,35 г, 0,91 ммоль.), 4-меркаптоциклогексанона (0,142 г, 1,09 ммоль) и DIPEA (0,235 г, 1,82 ммоль) в диоксане продували аргоном в течение 10 минут. Затем добавляли Pd(OAc)2 (0,01 г, 0,044 ммоль) и Xantphos (0,052 г, 0,089 ммоль) и снова продували аргоном в течение 10 минут. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение ночи. После завершения реакции добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией, с получением указанного в заголовке соединения (0,50 г, 88%).
[02057] Стадия 4: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)тио)-2-метилбензамида
[02058] К перемешиваемому раствору 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-((4-оксоциклогексил)тио)бензамида (0,45 г, 1,03 ммоль) и диметиламина (0,14 г, 3,11 ммоль) в дихлорэтане (5 мл) добавляли уксусную кислоту (0,37 г,6,16 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,66 г, 3,11 ммоль) при 0°C и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли воду и экстракцию осуществляли с использованием 5% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией, с получением указанного в заголовке соединения (0,016 г, 3,3%). Аналитические данные: ЖХМС: 462,35 (M + 1)+; ВЭЖХ: 89,00% (@ 210-370 нм)(Rt; 4,949; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 7,44 (с, 1H), 7,16 (с, 1H), 6,10 (с, 1H), 4,44 (с, 2H), 3,63 (м, 1H), 3,13 (м, 1H), 2,38 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,75-2,08 (м, 8H).
[02059] Соединение 336: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-гидроксициклогексил)тио)-2-метилбензамид
[02060] Это соединение также было выделено в виде дополнительного продукта при очистке соединения 335 (0,235 г, 50%) Аналитические данные: ЖХМС: 435,30 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,37% (@ 210-370 нм)(Rt; 5,900; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир.с, 1H), 8,31 (т, 1H), 7,72-7,68 (м, 1H), 7,41 (с, 1H), 7,07 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,58 (д, 1H, J=4 Гц), 4,24 (д, 2H, J=4 Гц), 4,13 (м, 1H), 3,43 (м, 1H), 2,20 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,95-1,80 (м, 1H), 1,75-1,55 (м, 1H), 1,40-1,20 (м, 4H), 0,87 (м, 2H).
[02061] Соединение 339: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензамид
[02062] Стадия 1: синтез метил 2-метил-3-нитробензоата
[02063] К раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты 10,0 г, 55,0 ммоль) в 120 мл метанола добавляли концентрированную H2SO4 (15 мл) при комнатной температуре и смесь перемешивали при 60°C в течение ночи. Смесь концентрировали при пониженном давлении, неочищенное вещество нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (10 г).
[02064] Стадия 2: синтез метил 3-амино-2-метилбензоата
[02065] К перемешиваемому раствору метил 2-метил-3-нитробензоата (10,0 г, 56,4 ммоль) в 60 мл этанола добавляли хлорид аммония (18,0 г, 338 ммоль), растворенный в 60 мл воды, и порошок железа (18,8 г, 338,2 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 3 часов. К реакционной смеси добавляли воду и затем смесь фильтровали через целит. Фильтрат экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (7,0 г, 83%).
[02066] Стадия 3: синтез метил 3-((4-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензоата
[02067] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-2-метилбензоата (1,5 г, 9,1 ммоль) и 4-гидрокси-4-метилциклогексанона (1,51 мл, 11,8 ммоль) в 10 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (3,2 мл, 55 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (5,78 г, 27,3 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3, экстрагировали при помощи DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали далее в виде смеси цис и транс изомеров (1,4 г, 56%).
[02068] Стадия 4: синтез метил 3-(этил(4-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензоата
[02069] К перемешиваемому раствору метил 3-((4-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензоата (1,4 г, 5,05 ммоль) и ацетальдегида (0,7 мл, 13 ммоль) в 20 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (1,7 мл, 30 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли триацетоксиборогидрид натрия (3,2 г, 15 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (1,42 г, 94%).
[02070] Стадия 5: синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензамида
[02071] Смесь метил 3-(этил(4-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензоата (300 мг, 0,98 ммоль) и NaOH (58 мг, 1,47 ммоль) в 5 мл этанола и воды (3:2) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха и остаток распределяли между водой и этилацетатом. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 270 мг неочищенной кислоты. Неочищенную кислоту (270 г, 0,92 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (282 мг, 1,85 ммоль), PyBOP (717 мг, 1,38 ммоль) и триэтиламин (0,12 мл, 0,92 ммоль) перемешивали в 3 мл DMSO при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали при помощи 10% MeOH в DCM. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензамида в виде смеси изомеров (120 мг, 30%). ЖХМС: 426,45 (M + 1)+; ВЭЖХ: 62,09 & 33,24% (@ 210-370 нм)(Rt; 3,982 & 4,164; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,04 (м, 1H), 7,12 (с, 2H), 6,91 (м, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=4 Гц), 4,15 (м, 1H), 3,00 (м, 2H), 2,84 (м, 1H), 2,18 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,75-1,60 (м, 2H), 1,55-1,35 (м, 4H), 1,35-1,15 (м, 4H), 1,08 & 1,03 (с, 3H), 0,87 & 0,77 (т, 3H).
[02072] Соединение 340: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-метокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензамид
[02073] Стадия 1: синтез метил 3-(этил(4-метокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензоата
[02074] К охлажденному раствору метил 3-(этил(4-гидрокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензоата (300 мг, 0,98 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляли по порциям гидрид натрия (235 мг, 5,89 ммоль) с последующим добавлением метилиодида (0,61 мл, 9,8 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, охлаждали до 0°C, гасили ледяной водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 300 мг неочищенного указанного в заголовке соединения.
[02075] Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-метокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензамида
[02076] Смесь 3-(этил(4-метокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензоата (300 мг, 0,94 ммоль) и NaOH (56 мг, 1,41 ммоль) в 5 мл этанола и воды (4:1) нагревали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха и неочищенное вещество распределяли между водой и этилацетатом. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении с получением 280 мг неочищенной кислоты. Смесь неочищенной кислоты (280 мг, 0,91 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (279 мг, 1,83 ммоль), PyBOP (716 мг, 1,37 ммоль) и триэтиламина (0,12 мл, 0,91 ммоль) в DMSO (3 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой, экстрагировали при помощи 10% MeOH в DCM, сушили над Na2SO4 и концентрировали с получением остатка, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(4-метокси-4-метилциклогексил)амино)-2-метилбензамида в виде смеси изомеров (70 мг, 17%). ЖХМС: 440,45 (M + 1)+; ВЭЖХ: 45,77 & 48,47% (@ 210-370 нм)(Rt; 4,297 & 4,430; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,03 (шир.с, 1H), 7,15 (шир.с, 2H), 6,91 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=2,8 Гц), 3,10-2,90 (м, 7H), 2,19 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,72-1,10 (м, 8H), 1,08 & 0,99 (с, 3H), 0,77 (т, 3H).
[02077] Соединение 344: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1s,4s)-4-метоксициклогексил)амино)-2-метилбензамид
[02078] Стадия 1: Синтез метил 5-хлор-3-(((1s,4s)-4-метоксициклогексил)амино)-2-метилбензоата
[02079] К перемешиваемому раствору метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (1,0 г, 5,0 ммоль) и 4-метоксициклогексанона (1,28 г, 10,0 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (1,8 г, 30 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (3,2 г, 15 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле и цис-изомер указанного в заголовке соединения выделяли в виде менее полярного изомерного продукта (0,60 г, 38%). Транс изомер также можно использовать далее для получения соответствующего конечного транс-продукта, соединения 343.
[02080] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-3-(этил((1s,4s)-4-метоксициклогексил)амино)-2-метилбензоата
[02081] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(((1s,4s)-4-метоксициклогексил)амино)-2-метилбензоата (0,60 г, 1,92 ммоль) и ацетальдегида (0,25 г, 5,78 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,69 г,11,6 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,22 г, 5,78 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,60 г, 92%).
[02082] Стадия 3: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1s,4s)-4-метоксициклогексил)амино)-2-метилбензамида
[02083] Водный раствор NaOH (0,07 г, 1,76 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(этил((1r,4r)-4-метоксициклогексил)амино)-2-метилбензоата (0,4 г, 1,17 ммоль) в этаноле (5 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата и объединенные органические слои сушили путем концентрирования с получением соответствующей неочищенной кислоты (0,35 г).
[02084] Полученную неочищенную кислоту (0,35 г, 1,1 ммоль) растворяли в DMSO (4 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,33 г, 2,14 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляли PYBOP (0,84 г, 1,61 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (0,55 г, 79%). ЖХМС: 460,30 (M + 1)+; ВЭЖХ: 97,37% (@ 210-370 нм)(Rt; 5,026; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,44 (шир.с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,93 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25 (д, 2H, J=3,2 Гц), 3,27 (м, 1H), 3,18 (с, 3H), 2,99 (кв., 2H), 2,79 (м, 1H), 2,18 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,77 (м, 2H), 1,60 (м, 2H), 1,45 (м, 2H), 1,33 (м, 2H), 0,78 (т, 3H, J=6 Гц).
[02085] Соединение 349: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-((1-метилазетидин-3-ил)окси)бензамида
[02086] Стадия 1: Синтез метил 5-гидрокси-2-метил-3-нитробензоата
[02087] К перемешиваемому раствору 5-гидрокси-2-метил-3-нитробензойной кислоты (3,50 г, 17,8 ммоль) в метаноле (40 мл), добавляли тионилхлорид (3,9 мл, 53 ммоль) при 0°C. Смесь нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 3 часов и концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли водный раствор бикарбоната натрия и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (3,0 г, 80%).
[02088] Стадия 2: Синтез трет-бутил 3-(3-(метоксикарбонил)-4-метил-5-нитрофенокси)азетидин-1-карбоксилата
[02089] К перемешиваемому раствору 5-гидрокси-2-метил-3-нитробензоата (1,5 г, 7,1 ммоль) в ACN (15 мл) добавляли карбонат цезия (4,64 г, 14,2 ммоль) и трет-бутил 3-иодазетидин-1-карбоксилат (3,0 г, 11 ммоль). Полученную смесь нагревали при 80°C в течение ночи. После завершения реакционную смесь разбавляли водой и экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (1,2 г, 46%).
[02090] Стадия 3: Синтез трет-бутил 3-(3-амино-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенокси)азетидин-1-карбоксилата
[02091] К перемешиваемому раствору трет-бутил 3-(3-(метоксикарбонил)-4-метил-5-нитрофенокси)азетидин-1-карбоксилата (1,0 г, 2,7 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли каталитическое количество 10% Pd/C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода (давление баллона) в течение 3 часов. После завершения реакционную смесь фильтровали через слой целита, который затем промывали метанолом. Объединенные фильтраты концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,90 г, 98%).
[02092] Стадия 4: Синтез трет-бутил 3-(3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенокси)азетидин-1-карбоксилата
[02093] К перемешиваемому раствору трет-бутил 3-(3-амино-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенокси)азетидин-1-карбоксилата (0,90 г, 2,67 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (0,741 г, 3,47 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,96 г, 16,1 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,7 г, 8,0 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения (0,9 г, 63%) в виде смеси цис/транс изомеров.
[02094] Стадия 5: Синтез трет-бутил 3-(3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенокси)азетидин-1-карбоксилата
[02095] К перемешиваемому раствору трет-бутил 3-(3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенокси)азетидин-1-карбоксилата (0,90 г, 1,69 ммоль) и ацетальдегида (0,22 г, 5,06 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,61 г, 10 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (1,07 г, 5,05 ммоль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали водой, сушили, концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки (0,85 г).
[02096] Стадия 6: Синтез трет-бутил 3-(3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенокси)азетидин-1-карбоксилата
[02097] Водный раствор NaOH (0,12 г, 3,03 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил 3-(3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенокси)азетидин-1-карбоксилата (0,85 г, 1,52 ммоль) в этаноле (10 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и смесь подкисляли с использованием разбавленной HCl до доведения до pH 6, и до pH 4 доводили с использованием лимонной кислоты. Экстракцию осуществляли с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,75 г).
[02098] Эту кислоту (0,75 г, 1,37 ммоль) затем растворяли в DMSO (7 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,42 г, 2,74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, к смеси добавляли PYBOP (1,06 г, 2,05 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакционную смесь выливали на лед, экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,80 г, 85%).
[02099] Стадия 7: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-((1-метилазетидин-3-ил)окси)бензамида
[02100] К охлажденному перемешиваемому раствору трет-бутил 3-(3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенокси)азетидин-1-карбоксилата (0,80 г, 1,17 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли TFA (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, концентрировали при пониженном давлении и к остатку добавляли насыщенный раствор NaHCO3. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM и объединенные органические слои промывали водой и насыщенным солевым раствором и сушили над безводным Na2SO4. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением промежуточного соединения с удаленной защитной Boc-группой (0,5 г).
[02101] Полученное промежуточное соединение (0,5 г, 1,0 ммоль) растворяли в MeOH (3 мл) и добавляли формалин (0,16 г, 5,33 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при этой же температуре в течение 20 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (0,55 г, 2,59 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду. Экстракцию осуществляли с использованием 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией, с получением указанного в заголовке соединения (0,03 г, 5,5%).
[02102] ЖХМС: 524,55 (M + 1)+; ВЭЖХ: 37,93+61,46% (@ 210-370 нм)(Rt; 3,462 и 3,810; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир.с, 1H), 8,05 (шир.с, 1H), 6,56 (с, 1H), 6,36 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,69 (шир.с, 1H), 4,24 (шир.с, 2H), 3,67 (м, 2H), 3,08-2,92 (м, 4H), 2,33-2,11 (м, 20H), 1,73-1,65 (м, 4H), 1,35-1,29 (м, 4H), 0,77 (т, 3H).
[02103] Соединение 119: 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[02104] Стадия 1: синтез 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты
[02105] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метилбензойной кислоты (4,0 г, 24 ммоль) в концентрированной H2SO4 (27 мл) при -10°C добавляли нитрующий раствор, состоящий из концентрированной HNO3 (3,3 г, 53 ммоль), растворенной в концентрированной H2SO4 (4,4 мл). Полученную смесь перемешивали при -10°C в течение 3 часов и выливали на ледяную воду. Образовавшийся осадок фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (4,95 г, 99%).
[02106] Стадия 2: синтез метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата
[02107] К перемешиваемому раствору 5-хлор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (6,75 г, 31,3 ммоль) в DMF (33 мл), добавляли карбонат натрия (13,2 г, 125 ммоль) и метилиодид (17,8 г, 125 ммоль). Смесь нагревали при 60°C в течение 4 часов. К реакционной смеси добавляли воду с последующим экстрагированием дихлорметаном. Объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (6,0 г, 84%).
[02108] Стадия 3: синтез метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата
[02109] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-нитробензоата (6,0 г, 26 ммоль) в этаноле (60 мл) добавляли раствор хлорида аммония (6,0 г, 112 ммоль) в воде (60 мл) и порошок железа (11,9 г, 208 ммоль). Смесь нагревали при 80°C в течение 1 часа. Добавляли воду и полученную смесь фильтровали через целит с последующим экстрагированием этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (5,0 г).
[02110] Стадия 4: синтез метил 3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[02111] К перемешиваемому раствору 3-амино-5-хлор-2-метилбензоата (5,0 г, 25 ммоль) и трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (6,95 г, 32,7 ммоль) в дихлорэтане (25 мл) добавляли уксусную кислоту (9,0 г, 150 ммоль) при комнатной температуре. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (15,97 г, 75,4 ммоль) и реакционную смесь перемешивали 1 час при комнатной температуре. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением 5,2 г (52%) первого элюирующего указанного в заголовке соединения, представляющего собой цис-изомерный продукт метил 3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата, и 3,5 г (35%) более полярного изомера, представляющего собой транс-изомерный продукт метил 3-(((b',4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата.
[02112] Стадия 5: синтез метил 3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[02113] К перемешиваемому раствору 3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (5,20 г, 13,1 ммоль) и ацетальдегида (1,15 г, 26,3 ммоль) в дихлорэтане (15 мл) добавляли уксусную кислоту (4,72 г, 78,8 ммоль) при комнатной температуре. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (8,35 г, 39,4 ммоль) и смесь перемешивали в течение 1 часа. Добавляли воду и смесь экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (5,3 г, 99%).
[02114] Стадия 6: синтез трет-бутил ((1s,4s)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
[02115] К перемешиваемому раствору 3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)-циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (5,20 г, 12,2 ммоль) в этаноле (15 мл) добавляли водный раствор NaOH (0,73 г, 18,4 ммоль). Смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа, концентрировали при пониженном давлении и затем подкисляли до pH 4 путем добавления разбавленной HCl с последующим добавлением лимонной кислоты. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом и объединенные экстракты сушили и концентрировали при пониженном давлении с получением соответствующей неочищенной кислоты (4,4 г). К перемешиваемому раствору кислоты (4,4 г, 10,7 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (3,25 г, 21,4 ммоль) и триэтиламина (1,08 г, 10,70 ммоль) в DMSO (15 мл) добавляли PYBOP (8,34 г, 16,05 ммоль) при 0°С. После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% МеОН/CH2Cl2. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (4,20 г, 72%). ЖХМС: 548,40 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,62% (@ 254 нм)(Rt; 5,736; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,91 (м, 2H), 5,85 (с, 1H), 4,22 (д, 2H), 3,47 (шир.с, 1H), 3,00-3,02 (м, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,71 (м, 2H), 1,53 (м, 2H), 1,39 (м, 4H), 1,37 (с, 9H), 0,78 (т, 3H, J=6,8 Гц).
[02116] Стадия 7: синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)метилбензамида
[02117] К перемешиваемому раствору трет-бутил ((1s,4s)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил) карбамата (0,60 г, 1,10 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (2 мл) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрировали досуха. Остаток растворяли в водном растворе бикарбоната натрия с последующим экстрагированием при помощи 20% МеОН/CH2Cl2. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, который растирали в порошок с получением указанного в заголовке соединения (0,5 г, 100%). ЖХМС:445,30 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,3% (@ 254 нм)(Rt; 4,524; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 8,21 (т, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,91 (д, 1H, J=1,6 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,8 Гц), 2,99-3,04 (м, 2H), 2,82-2,85 (м, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,75-1,77 (м, 2H), 1,36-1,39 (м, 6H), 0,79 (т, 3H, J=6,8 Гц).
[02118] Соединение 121: 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[02119] К перемешиваемому раствору 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,30 г,0,68 ммоль) и EDCI.HCl (0,194 г, 1,01 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли HOBt (0,091 г, 0,675 ммоль) и уксусную кислоту (0,081 г, 1,35 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 18 часов добавляли воду и смесь экстрагировали при помощи 10% МеОН/CH2Cl2. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением остатка, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (0,10 г, 30%). ЖХМС:487,30 (M + 1)+; ВЭЖХ: 91,72% (@ 254 нм)(Rt; 4,585; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 8,22 (т, 1H), 7,75 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,15 (с, 1H), 6,93 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,69 (шир.с, 1H), 3,01-3,03 (м, 2H), 2,94 (м, 1H), 2,18 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,80 (с, 3H), 1,69-1,71 (м, 2H), 1,37-1,51 (м, 6H), 0,79 (т, 3H, J=6,8, Гц).
[02120] Соединение 120: 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[02121] Стадия 1: синтез метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата
[02122] К перемешиваемому раствору метил 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (3,5 г, 8,8 ммоль), полученному как описано выше, и ацетальдегида (0,77 г, 17,7 ммоль) в дихлорэтане (15 мл) добавляли уксусную кислоту (3,17 г, 53 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 10 минут добавляли триацетоксиборогидрид натрия (5,61 г, 26,5 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Добавляли воду и смесь экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (3,5 г, 93%).
[02123] Стадия 2: синтез трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
[02124] К перемешиваемому раствору 3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-5-хлор-2-метилбензоата (3,50 г, 8,23 ммоль) в этаноле (15 мл) добавляли водный раствор NaOH (0,49 г,12,4 ммоль). Смесь перемешивали при 60°C в течение 1 часа, концентрировали при пониженном давлении и смесь подкисляли до pH 4 путем добавления разбавленной HCl с последующим добавлением раствора лимонной кислоты. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом и объединенные органические слои сушили при пониженном давлении с получением соответствующей неочищенной кислоты (3,2 г). К перемешиваемому раствору кислоты (3,2 г, 7,8 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (2,36 г, 15,6 ммоль) и триэтиламина (0,79 г, 7,8 ммоль) в DMSO (15 мл) добавляли PYBOP (6,07 г, 11,7 ммоль) при 0° C. После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре смесь выливали на лед и экстрагировали при помощи 10% MeOH/CH2Cl2. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного вещества, которое очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (3,0 г, 70%). Аналитические данные: ЖХМС: 545,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 99,92% (@ 254 нм)(Rt; 5,677; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,23 (т, 1H), 7,14 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 6,65 (д, 1H, J=7,2 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4 Гц), 3,14 (шир.с, 1H), 3,00-3,02 (м, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,67-1,76 (м, 4H), 1,40 (м, 2H), 1,35 (м, 9H), 1,04-1,13 (м, 2H), 0,77 (т, 3H, J=6 Гц).
[02125] Стадия 3: синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[02126] К перемешиваемому раствору трет-бутил ((1r,4r)-4-((5-хлор-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил) карбамата (0,6 г, 1,10 ммоль) в дихлорметане (2 мл) добавляли TFA (2 мл) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрировали досуха. Остаток растворяли в водном растворе бикарбоната натрия и экстрагировали при помощи 20% MeOH/CH2Cl2. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния, с получением указанного в заголовке соединения (0,40 г, 81%). ЖХМС: 445,18 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,13% (@ 254 нм)(Rt; 4,096; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 8,22 (т, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4 Гц), 3,00-3,01 (м, 2H), 2,59 (м, 1H), 2,18 (с, 3H), 2,12 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,73-1,76 (м, 2H), 1,65-1,68 (м, 2H), 1,36-1,39 (м, 2H), 0,97-1,00 (м, 2H), 0,77 (т, 3H, J=6 Гц), [1H сливается с пиком растворителя].
[02127] Соединение 122: 3-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[02128] К перемешиваемому раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,30 г, 0,68 ммоль) и EDCI.HCl (0,19 г, 1,0 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли HOBt (0,09 г, 0,68 ммоль) и уксусную кислоту (0,081 г, 1,35 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 18 часов добавляли воду и смесь экстрагировали при помощи 10% MeOH/DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния, с получением указанного в заголовке соединения (0,10 г, 30%). ЖХМС:487,25 (M + 1)+; ВЭЖХ: 92,95% (@ 254 нм)(Rt; 4,445; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,64 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,14 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,41-3,43 (м, 1H), 3,01-3,03 (м, 2H), 2,61 (м, 1H), 2,18 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,74 (т, 7H, J=18 Гц), 1,40-1,43 (м, 2H), 1,07-1,12 (м, 2H), 0,77 (т, 3H, J=6,8 Гц).
[02129] Соединение 207: 5-хлор-3-(циклогексилтио)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[02130] Стадия 1: Синтез метил 3-бром-5-хлор-2-метилбензоата
[02131] К перемешиваемому раствору CuBr2 (12,3 г, 55,3 ммоль) в ацетонитриле (100 мл) добавляли трет-бутилнитрит (7,79 г,75,4 ммоль) при 0°C. К этому раствору добавляли метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоат (10 г, 50,3 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) и перемешивали при 0°C в течение 2 часов и при комнатной температуре в течение ночи. После завершения добавляли воду и продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водным раствором NH4Cl и сушили над сульфатом натрия, затем концентрировали при пониженном давлении. Очистка на колонке с силикагелем давала указанное в заголовке соединение (6,6 г, 50%).
[02132] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-3-(циклогексилтио)-2-метилбензоата
[02133] К перемешиваемому раствору метил 3-бром-5-хлор-2-метилбензоата (1,0 г, 3,79 ммоль) в 1,4-диоксане добавляли N,N-диизопропилэтиламин (0,98 г, 7,59 ммоль). Реакционную смесь продували аргоном в течение 20 минут, затем к смеси последовательно добавляли Pd(OAc)2 (0,042 г, 0,189 ммоль), Xanthphos (0,22 г, 0,38 ммоль) и циклогексилтиол (0,44 г, 3,79 ммоль) и снова продували аргоном в течение 10 минут. Реакционную смесь затем нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 16 часов. После завершения добавляли воду и продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом натрия и продукт очищали на колонке с силикагелем с получением указанного в заголовке соединения (1,0 г, 83%)
[02134] Стадия 3: Синтез 5-хлор-3-(циклогексилтио)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
[02135] Водный раствор NaOH (0,2 г в 2,5 мл H2O, 5,02 ммоль) добавляли к раствору метил 5-хлор-3-(циклогексилтио)-2-метилбензоата (1,0 г, 3,35 ммоль) в этаноле (10 мл) и раствор перемешивали при 60°C в течение 1 часа. После завершения реакции этанол удаляли при пониженном давлении и водный слой подкисляли с использованием разбавленной HCl до pH 6 и затем с использованием лимонной кислоты до pH 4. Продукт экстрагировали с использованием 10% метанола в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,91 г, 95%).
[02136] Эту кислоту (0,9l г,3,2 ммоль) затем растворяли в DMSO (2 мл) и к смеси добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,974 г, 6,41 ммоль) и триэтиламин (0,65 г,3,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем к смеси добавляли PYBOP (2,5 г,4,8 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. После завершения реакции раствор выливали на лед и продукт экстрагировали при помощи 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного продукта. Очистка путем нескольких промывок растворителем давала указанное в заголовке соединение (1,3 г, 93%).
[02137] Аналитические данные: ЖХМС: 419,2 (M + 1)+; ВЭЖХ: 98,38% (@ 254 нм)(Rt; 7,989; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир.с, 1H), 8,32 (т, 1H), 7,40 (с, 1H), 7,07 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24-4,25 (д, 1H, J=4 Гц), 2,21 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,88-1,91 (м, 2H), 1,56-1,69 (м, 3H), 1,25-1,38 (м, 5H), 2 протона сливаются с пиком растворителя.
[02138] Соединение 208: 5-хлор-3-(циклогексилсульфинил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[02139] К перемешиваемому раствору 5-хлор-3-(циклогексилтио)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,2 г,0,48 ммоль) в DCM (7 мл) при 0°C добавляли m-CPBA (0,098 г,0,57 ммоль) и перемешивали при 0°C в течение 2 часов. Реакцию отслеживали методом ТСХ. После завершения реакционную смесь разбавляли при помощи DCM и промывали водным раствором NaHCO3. Продукт очищали путем нескольких промывок растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,17 г, 82,3%).
[02140] Аналитические данные: ЖХМС: 435,1 (M + 1)+; ВЭЖХ: 92,68% (@ 220 нм)(Rt; 5,996; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкл; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 11,44 (шир.с, 1H), 7,82 (с, 1H), 7,45 (т, 1H), 7,39 (с, 1H), 5,97 (с, 1H), 4,52 (шир.с, 2H), 2,53-2,59 (м, 1H), 2,38 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 1,85-1,93 (м, 3H), 1,65 (м, 2H), 1,20-1,29 (м, 3H).
[02141] Соединение 209: 5-хлор-3-(циклогексилсульфонил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
[02142] К перемешиваемому раствору 5-хлор-3-(циклогексилтио)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,1 г, 0,238 ммоль) в DCM (4 мл) при 0°C добавляли m-CPBA (0,082 г,0,48 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакцию отслеживали методом ТСХ. После завершения реакционную смесь разбавляли при помощи DCM и промывали водным раствором NaHCO3. Продукт очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (0,075 г, 23%).
[02143] Аналитические данные: ЖХМС: 451,1 (M + 1)+; ВЭЖХ: 83,44% (@ 254 нм)(Rt; 6,547; Способ: Колонка: YMC ODS-A 150 мм × 4,6 мм × 5 мкм; Подвижная фаза: A; 0,05% TFA в воде/ B; 0,05% TFA в ацетонитриле; Объем вводимой пробы: 10 мкл, Температура колонки: 30°C; Скорость потока: 1,4 мл/мин; Градиент: 5% В до 95% В в течение 8 мин, Удерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 11,44 (шир.с, 1H), 7,98 (с, 1H), 7,50 (с, 1H), 7,45 (т, 1H), 5,97 (с, 1H), 4,51 (д, 2H, J=4 Гц), 2,94-3,00 (м, 1H), 2,62 (с, 3H), 2,38 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 1,88-1,95 (м, 4H), 1,70 (м, 1H), 1,52-1,55 (м, 2H), 1,21 (м, 3H).
[02144] Соединение 416: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1s,4s)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)-2-метилбензамид
[02145] Стадия 1: Синтез 4-метансульфонилциклогексан-1-она
[02146] Раствор, содержащий (бута-1,3-диен-2-илокси)(триметил)силан (12,5 мл, 70,7 ммоль) в толуоле (50 мл), обрабатывали (метилсульфонил)этеном (4,1 мл, 47,1 ммоль) и нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 76 часов. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме с получением желтого масла. Это масло растворяли в CH2Cl2 (120 мл) и фильтровали через Целит®. Фильтрат концентрировали в вакууме и полученный остаток затем растворяли в MeOH (8 мл) при охлаждении (лед/вода). Смесь затем обрабатывали при помощи TFA (2,0 мл). Реакционную смесь перемешивали при 0°C еще в течение 10 минут и затем при комнатной температуре в течение 25 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (0-10% MeOH/CH2Cl2), 100 г SNAP картридж, Biotage Isolera, с получением указанного в заголовке соединения 1,2 г (14%) в виде вязкого желтого масла. ЖХ-МС 94%, 0,39 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 177,0 (видимый только ELS). 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 3,24-3,32 (м, 1H) 2,94 (с, 3H) 2,62-2,70 (м, 2H) 2,50-2,56 (м, 2H) 2,38-2,45 (м, 2H) 2,07-2,18 (м, 2H).
[02147] Стадия 2: Синтез метил 5-хлор-2-метил-3-(((1s,4s)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)бензоата
[02148] К перемешиваемому раствору 4-метансульфонилциклогексан-1-она (94%, 0,56 г, 3,0 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (10 мл) под баллоном азота добавляли метил 3-амино-5-хлор-2-метилбензоат (0,60 г, 3,0 ммоль), с последующим добавлением уксусной кислоты (1,0 мл, 18,0 ммоль). Раствор перемешивали в течение 50 минут, затем добавляли по порциям триацетоксиборогидрид натрия (1,9 г, 9,0 ммоль) в течение 4 часов. Полученную суспензию перемешивали в течение ночи, затем добавляли 4-метансульфонилциклогексан-1-он (0,28 г, 1,5 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (1,5 мл) и триацетоксиборогидрид натрия (0,96 г, 4,5 ммоль) в течение 2,5 часов. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 67 часов, затем к реакционной смеси добавляли деионизированную воду (40 мл) и нейтрализовали (pH 8) путем постепенного добавления твердого NaHCO3 (4,8 г). Смесь экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×25 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором (40 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток предварительно абсорбировали на диоксиде кремния и очищали колоночной флэш-хроматографией (0-55% этилацетат/гептан), 100 г SNAP картридж на Biotage Isolera, с получением указанного в заголовке соединения (131 мг, 12%). ЖХ-МС 96%, 2,09 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 359,85, 360,85, 361,90, 362,85; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,12 (шир.с, 1H) 6,68 (шир.с, 1H) 3,89 (с, 3H) 3,82 (шир.с, 1H) 3,71 (шир.с, 1H) 2,93-3,02 (м, 1H) 2,89 (с, 3H) 2,29 (с, 3H) 2,03-2,18 (м, 4H) 1,91-2,02 (м, 2H) 1,71-1,83 (м, 2H).
[02149] Другой изомер метил 5-хлор-2-метил-3-(((1r,4r)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)бензоат также выделяли
[02150] (92 мг, 8%), ЖХ-МС 96%, 2,06 мин (3,5 мин ЖХ-МС способ), m/z = 359,85, 360,90, 361,90, 362,85; 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,11 (шир.с, 1H) 6,68 (шир.с, 1H) 3,89 (с, 3H) 3,62 (шир.с, 1H) 3,27-3,36 (м, 1H) 2,84-2,95 (м, 4H) 2,32-2,42 (м, 4H) 2,24 (шир.с, 3H) 1,72-1,85 (м, 2H) 1,27-1,35 (м, 2H).
[02151] Установление цис и транс конфигурации на основании дополнительных ЯМР экспериментов не могли осуществить, и устанавливали произвольно.
[02152] Стадия 3: Синтез метил 5-хлор-3-(этил((1s,4s)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)-2-метилбензоата
[02153] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-2-метил-3-(((1s,4s)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)бензоата (246 мг, 0,68 ммоль) в безводном 1,2-дихлорэтане (6,0 мл) добавляли ацетальдегид (115 мкл, 2,1 ммоль), с последующим добавлением уксусной кислоты (235 мкл, 4,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 35 минут, затем добавляли по порциям триацетоксиборогидрид натрия (435 мг, 2,1 ммоль) в течение 50 минут и реакционную смесь перемешивали в течение ночи и затем обрабатывали ацетальдегидом (115 мкл, 2,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (435 мг, 2,1 ммоль) по порциям в течение 1 часа и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли ацетальдегид (229 мкл, 4,1 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 часов, с последующим добавлением триацетоксиборогидрида натрия (869 мг, 4,1 ммоль) по порциям в течение 1,5 часов и перемешивание продолжали в течение ночи. Добавляли ацетальдегид (229 мкл, 4,1 ммоль) вместе с 1,2-дихлорэтаном (4,0 мл), чтобы облегчить растворение, и реакционную смесь перемешивали в течение 4 часов. Добавляли по порциям триацетоксиборогидрид натрия (869 мг, 4,1 ммоль) в течение 2 часов и перемешивание продолжали в течение уикэнда. Добавляли ацетальдегид (229 мкл, 4,1 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 часов, с последующим добавлением триацетоксиборогидрида натрия (869 мг, 4,1 ммоль) равными порциями в течение 1 часа вместе с 1,2-дихлорэтаном (5,0 мл) и перемешивание продолжали в течение ночи. Добавляли ацетальдегид (382 мкл, 6,8 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 часов, с последующим добавлением триацетоксиборогидрида натрия (1,4 г, 6,8 ммоль) равными порциями в течение 4 часов вместе с 1,2-дихлорэтаном (10 мл) и перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой (40 мл) и нейтрализовали (до pH 8) путем постепенного добавления твердого NaHCO3 (5,79 г). Слои разделяли и водный слой экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×25 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток предварительно абсорбировали на диоксиде кремния и очищали колоночной хроматографией (0-50% EtOAc/Гептан), 10 г SNAP картридж на Biotage Isolera, с получением указанного в заголовке соединения (140 мг, 51%) в виде бесцветного стекловидного твердого вещества. ЖХ-МС 97%, 2,29 мин (3 мин ЖХ-МС способ), m/z = 387,95, 388,95, 389,90, 390,95. 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,59 (д, J=1,89 Гц, 1H) 7,21 (д, J=1,89 Гц, 1H) 3,91 (с, 3H) 3,45 (шир.с, 1H) 3,01 (м, 2H) 2,86-2,95 (м, 1H) 2,82 (с, 3H) 2,52 (с, 3H) 2,08 (шир.с, 2H) 1,94 (шир.с, 2H) 1,86 (шир.с, 2H) 1,46-1,54 (м, 2H) 0,89 (т, J=7,01 Гц, 3H).
[02154] Стадия 4: Синтез 5-хлор-3-(этил((1s,4s)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)-2-метилбензойной кислоты
[02155] К перемешиваемому раствору метил 5-хлор-3-(этил((1s,4s)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (140 мг, 0,36 ммоль) в ТГФ (5,0 мл) и MeOH (0,3 мл) добавляли раствор 4M NaOH (2,7 мл). Полученный раствор перемешивали при 50°C в течение 21 часа и затем обрабатывали при помощи 4M NaOH (0,9 мл, 3,6 ммоль) и нагревание продолжали еще в течение 4 часов. После этого реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры и затем концентрировали в вакууме. Полученный водный остаток экстрагировали при помощи CH2Cl2 (20 мл) и простого эфира (20 мл). pH водной фазы затем доводили до 3-4 путем добавления 1M HCl (водн.) (13 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×25 мл). Объединенные этилацетатные экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (122 мг, 80% выход) в виде светло-желтого твердого вещества. ЖХ-МС 89%, 4,03 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 373,95, 374,90, 375,95, 377,00. 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ м.д. 7,77 (д, J=1,89 Гц, 1H) 3,47 (шир.с, 1H) 3,03 (шир.с, 2H) 2,88-2,97 (м, 1H) 2,84 (с, 3H) 2,60 (с, 3H) 2,12 (шир.с, 2H) 1,96 (шир.с, 2H) 1,88 (шир.с, 2H) 1,55 (шир.с, 2H) 0,91 (т, J=7,01 Гц, 3H). Предполагали, что 1 × ArH скрыт под CDCl2 пиком, и CO2H пик также невидимый.
[02156] Стадия 5: Синтез 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1s,4s)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)-2-метилбензамида
[02157] Перемешиваемый раствор 5-хлор-3-(этил((1s,4s)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)-2-метилбензойной кислоты (90%, 122 мг, 0,29 ммоль) в безводном DMF (2,0 мл) при 0°C под баллоном N2 обрабатывали при помощи HATU (134 мг, 0,35 ммоль) и DIPEA (102 мкл, 0,59 ммоль) по каплям. Полученный раствор перемешивали в течение 10 минут и затем обрабатывали 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (89%, 60 мг, 0,35 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°C в течение 15 минут и затем перемешивали при комнатной температуре в течение уикэнда. Реакционную смесь распределяли между водой (10 мл) и CH2Cl2 (10 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (10 мл), водой (40 мл), насыщенным солевым раствором (2×25 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (0-9% MeOH/CH2Cl2), 10 г SNAP картридж на Biotage Isolera, с получением указанного в заголовке соединения (120 мг, 76% выход) в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ-МС: 95%, 3,71 мин (7 мин ЖХ-МС способ), m/z = 508,10, 509,10, 510,10, 511,10. 1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 10,84 (с, 1H), 7,07 (с, 2H), 7,00 (м, 1H), 6,10 (с, 1H), 4,53 (д, J=5,8 Гц, 2H), 3,45 (с, 1H), 3,07-2,95 (м, 2H), 2,93-2,85 (м, 1H), 2,81 (с, 3H), 2,45 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 2,29 (с, 3H), 2,14-2,01 (м, 2H), 1,97-1,89 (м, 2H), 1,87-1,80 (м, 2H), 1,50 (br s, 2H), 0,88 (т, J=5,9 Гц, 3H).
[02158] Соединение 417: 5-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил((1r,4r)-4-(метилсульфонил)циклогексил)амино)-2-метилбензамид
[02159] Это соединение получали способом, аналогичным способу получения соединения 416, с использованием другого изомера, полученного на Стадии 2
[02160] Соединение 392: N-[(4,6-Диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензамид
[02161] К перемешиваемому раствору 3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензойной кислоты (неочищенное вещество, 580 мг, 1,68 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она в виде HCl соли (477 мг, 2,53 ммоль) в DMSO (6 мл) добавляли PyBOP (1,57 г, 3,02 ммоль) и основание Хунига (650 мг, 5,04 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 20 часов. Реакцию гасили водой и образовавшийся осадок собирали. Твердое вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 этилацетат/MeOH=25/1)с получением указанного в заголовке соединения в виде белого аморфного вещества (386 мг, 48% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,31 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 7,18 (т, J=5,7 Гц, 1H), 5,95 (с, 1H), 4,55 (д, J=5,9 Гц, 2H), 3,17 (дкв., J=6,4, 3,3 Гц, 2H), 3,08 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,81 (м, 2H), 2,70 (м, 1H), 2,40 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 1,78-1,93 (м, 2H), 1,70 (м, 2H), 0,84 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS(ES) [M+H] 479,2, [M+Na] 501,3; ВЭЖХ чистота 96,8%.
[02162] Соединение 393: 3-[Этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-N-[(6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-5-(трифторметил)бензамид
[02163] К перемешиваемому раствору 3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензойной кислоты (неочищенное вещество, 680 мг, 1,97 ммоль) и 3-(аминометил)-6-метил-4-пропил-1,2-дигидропиридин-2-она в виде HCl соли (642 мг, 2,96 ммоль) в DMSO (7 мл) добавляли PyBOP (1,85 г, 3,55 ммоль) и основание Хунига (764 мг, 5,91 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 20 часов. Реакцию гасили водой и образовавшийся осадок собирали. Твердое вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 этилацетат/MeOH=20/1)с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (224 мг, 22% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,31 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 7,16 (м, 1H), 5,94 (с, 1H), 4,55 (д, J=5,9 Гц, 2H), 3,08 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,82 (м, 2H), 2,66-2,73 (м, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,24 (s x 2, 6H), 1,79-1,98 (м, 2H), 1,67-1,75 (м, 4H), 1,59-1,66 (м, 2H), 1,02 (т, J=7,2 Гц, 3H), 0,84 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) [M-H] 505,2; ВЭЖХ чистота 98,1%.
[02164] Соединение 394: 3-[Этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-N-{[6-метил-2-оксо-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-3-ил]метил}-5-(трифторметил)бензамид
[02165] К перемешиваемому раствору 3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензойной кислоты (неочищенное вещество, ~0,313 ммоль) и 3-(аминометил)-6-метил-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-2-она в виде HCl соли (88,0 мг, 0,407 ммоль) в DMSO (2,4 мл) добавляли PyBOP (244 мг, 0,470 ммоль) и основание Хунига (164 мкл, 0,939 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакцию гасили водой и разбавляли этилацетатом. Водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 этилацетат/MeOH=20/1 + 5% триэтиламина). Неочищенное соединение растворяли в DMSO, разбавляли водой. Осажденное твердое вещество собирали и растирали в порошок с этилацетатом/TBME/гексаном с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (80,0 мг, 51% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,31 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 7,03-7,10 (м, 1H), 6,04 (с, 1H), 4,59 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,49-3,55 (м, 1H), 3,09 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 2,81-2,84 (м, 2H), 2,70-2,78 (м, 1H), 2,32 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,86-1,89 (м, 2H), 1,68-1,71 (м, 4H), 1,22 (д, J=6,4 Гц, 6H), 0,84 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) [M+H] 507,2, [M+Na] 529,2; ВЭЖХ чистота 97,7%.
[02166] Соединение 395: 3-[Этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-N-{[6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил]метил}-5-(трифторметил)бензамид
[02167] К перемешиваемому раствору 3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензойной кислоты (неочищенное вещество, ~0,313 ммоль) и 3-(аминометил)-6-метил-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-2-он гидрохлорида HCl соли (100 мг, 0,91 ммоль) в DMSO (2,4 мл) добавляли PyBOP (248 мг, 1,05 ммоль) и основание Хунига (166 мкл, 2,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакцию гасили водой и образовавшийся осадок собирали. Твердое вещество растирали в порошок с этилацетатом/гексаном. Полученное твердое вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 этилацетат/MeOH=10/1 + 10% триэтиламина). Неочищенное соединение растирали в порошок с этилацетатом/гексаном и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (75,0 мг, 44% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,32 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 6,86-6,89 (м, 1H), 6,34 (с, 1H), 4,73 (д, J=6,4 Гц, 2H), 3,08 (кв., J=7,2 Гц, 2H), 2,80-2,85 (м, 2H), 2,70-2,78 (м, 1H), 2,37 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,85-1,89 (м, 2H), 1,69-1,72 (м, 4H), 0,84 (т, J=7,2 Гц, 3H); MS (ES) [M+H] 533,1, [M+Na] 555,2; ВЭЖХ чистота 95,8%.
[02168] Соединение 395: 3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(трифторметил)бензамид диформиат
[02169] 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,39 (с, 2H), 7,48 (с, 1H), 7,36 (с, 1H), 6,36 (с, 1H), 4,52 (с, 2H), 3,38 (шир., 2H), 3,18 (шир., м, 1H), 3,11 (кв., J=7,2 Гц, 2H), 2,96 (шир., м, 2H), 2,77 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 1,97 (шир., д, J=12,0 Гц, 2H), 1,83 (шир., м, 2H), 0,84 (т, J=7,2 Гц, 3H); MS (ES) (M+H)=533,53.
[02170] Следуя такому же способу получения, как описано выше для 3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-N-{[6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил]метил}-5-(трифторметил)бензамида, получали следующие аналоги с использованием соответствующей карбоновой кислоты и амина, и очистку осуществляли с использованием обращенно-фазовой ВЭЖХ (ACN-H2O с 0,1% муравьиной кислоты).
[02171] Соединение 396: 3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-N-((5-фтор-6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид формиат
[02172] 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,31 (с, 1H), 7,49 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 4,45 (с, 2H), 3,39 (шир., 2H), 3,17 (шир., 1H), 3,10 (кв., J=7,2 Гц, 2H), 2,97 (шир., м, 2H), 2,77 (с, 3H), 2,74 (шир., м, 2H), 2,33 (с, 3H), 2,22 (д, J=2,8 Гц, 3H), 1,97 (шир., м, 2H), 1,85 (шир., м, 2H), 1,60 (м, 2H), 1,02 (т, J=7,2 Гц, 3H), 0,84 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+H)=525,58.
[02173] Соединение 397: 3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид формиат
[02174] ЖХМС ES+ (M+l)=525,58. LCMS ES+ (M+1)=525,58, 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,31 (с, 1H), 7,50 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 4,49 (с, 2H), 3,48 (м, 1H), 3,39 (шир., 2H), 3,18 (шир., м, 1H), 3,09 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 2,97 (шир., м, 2H), 2,78 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,21 (д, J=3,2 Гц, 3H), 1,96 (шир., д, J=12,0 Гц, 2H), 1,86 (шир., м, 2H), 1,32 (дд, J=1,6 Гц, J=7,2 Гц, 6H), 0,84 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+H)=525,58.
[02175] Соединение 398: 3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид формиат
[02176] 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,29 (с, 1H), 7,49 (с, 1H), 7,35 (с, 1H), 4,45 (с, 2H), 3,39 (шир., 2H), 3,19 (шир., 1H), 3,09 (кв., J=7,2 Гц, 2H), 2,97 (шир., м, 2H), 2,77 (с, 3H), 2,34 (д, J=2,4 Гц, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,22 (д, J=3,2 Гц, 3H), 1,97 (шир., м, 2H), 1,86 (шир., м, 2H), 0,84 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+H)=497,51.
[02177] Соединение 399: 3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-N-((5-фтор-6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид диформиат
[02178] 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,32 (с, 2H), 7,50 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 4,59 (с, 2H), 3,40 (шир., 2H), 3,18 (шир., м, 2H), 3,09 (кв., J=6,8, 2H), 2,96 (шир., м, 2H), 2,78 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,29 (д, J=3,2 Гц, 3H), 1,98 (шир., д, J=13,2 Гц, 2H), 1,86 (м, 1H), 1,80 (шир., м, 2H), 0,84 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+H)=551,53.
[02179] Соединение 399: 3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-N-((5-фтор-6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид диформиат
[02180] 6-Метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрил подвергали фторированию, как описано для 5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила. Продукт выделяли в виде 3:1 смеси 6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (исходное вещество) и 5-фтор-6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила. Для 5-фтор-6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила, ЖХМС E-S (M+H) = 221,2. Эту смесь нитрилов подвергали восстановительным условиям, как описано выше для 3-(аминометил)-5-фтор-4-изопропил-6-метилпиридин-2(1H)-она. Для фторированного соединения ЖХМС (ES)(M+H) анализ показал 225,2, а для нефторированного аналога ЖХМС (ES)(M+H) анализ показал 207,2. Последующую реакцию связывания осуществляли с использованием неочищенной смеси аминов без дополнительных очисток. Для 3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-N-((5-фтор-6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид диформиата; 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,32 (с, 2H), 7,50 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 4,59 (с, 2H), 3,40 (шир., 2H), 3,18 (шир., м, 1H), 3,09 (кв., J=6,8, 2H), 2,96 (шир., м, 2H), 2,78 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,29 (д, J=3,2 Гц, 3H), 1,98 (шир., д, J=13,2 Гц, 2H), 1,80 (шир., м, 2H), 0,84 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+H) 551,5.
[02181] Соединение 400: N-[(4,6-Диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-{этил[1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензамид
[02182] К перемешиваемому раствору 3-{этил[1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензойной кислоты (неочищенное вещество, 510 мг, 0,569 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она в виде HCl соли (161 мг, 0,854 ммоль) в DMSO (2 мл) добавляли PyBOP (534 мг, 1,02 ммоль) и основание Хунига (220 мг, 1,71 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 20 часов. Реакцию гасили водой и образовавшийся осадок собирали. Твердое вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 этилацетат/MeOH=20/1)с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (129 мг, 44% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,30 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 7,22 (т, J=5,9 Гц, 1H), 5,95 (с, 1H), 4,54 (д, J=5,9 Гц, 2H), 3,16 (м, 2H), 3,08 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,85 (м, 2H), 2,62-2,74 (м, 1H), 2,38 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,00-2,09 (м, 1H), 1,81 (м, 2H), 1,58-1,76 (м, 2H), 0,99 (с ×2, 6H), 0,83 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) [M+H] 507,2, [M+Na] 529,3; ВЭЖХ чистота 97,2%.
[02183] Соединение 401: N-[(4,6-Диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-{[(2R*,6R*)-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензамид
[02184] К перемешиваемому раствору 3-{[(2R,6R)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-5-(трифторметил)бензамида (267 мг, 0,459 ммоль) в MeOH (5 мл) добавляли Pd/C (250 мг). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (1. NAM-300H силикагель, изготовитель Nagara Science Co., Ltd., этилацетат/MeOH=4/1 до этилацетат/MeOH/триэтиламин=1/1/0,01, 2. NH-SiO2, гептан/этилацетат=30/1 до 8/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (127 мг, 56% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,30 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 7,14 (т, J=6,1 Гц, 1H), 5,94 (с, 1H), 4,54 (дд, J=5,9, 1,6 Гц, 2H), 3,41-3,49 (м, 1H), 3,01-3,13 (м, 3H), 2,85-2,92 (м, 1H), 2,40 (с, 3H), 2,32 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 1,63-1,80 (м, 4H), 1,13 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,02 (д, J=6,2 Гц, 3H), 0,83 чистота (т, J=7,0 Гц, 3H); LC-MS: m/z [M+H] 493,1, [M+Na] 515,3; ВЭЖХ; 97,2%.
[02185] Соединение 402: N-[(4,6-Диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-{[(2R*,4R*,6S*)-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензамид
[02186] К перемешиваемому раствору 3-{[(2R,4R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-5-(трифторметил)бензамида (35,6 мг, 0,0611 ммоль) в MeOH (3,0 мл) добавляли Pd/C (120 мг). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут в атмосфере водорода. После продувки азотом смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали препаративной ТСХ (ТСХ силикагель 60F254, MERCK, MeOH/Et3N=100/1) два раза, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (4,4 мг, 15% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,33 (с, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,18 (м, 1H), 5,96 (с, 1H), 4,54 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,73 (м, 1H), 3,26-2,69 (м, 4H), 2,40 (с, 3H), 2,38 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 1,90-1,10 (м, 4H), 1,10-0,86 (м, 6H), 0,83 (т, J=7,2 Гц, 3H), (-2H); LC-MS: m/z [M+H] 493,2. [M+Na] 515,3; ВЭЖХ; чистота 88,8%.
[02187] Соединение 403: 3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(трифторметил)бензамид формиат
[02188] 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,33 (с, 1H), 7,37 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 6,11 (с, 1H), 4,46 (с, 2H), 4,42 (шир., м, 1H), 4,21 (шир., 2H), 3,82 (шир., 2H), 3,00 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 2,88 (с, 3H), 2,65 (м, 2H), 2,40 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 1,61 (м, 2H), 0,99 (т, J=7,2 Гц, 3H), 0,86 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+1) 480,53.
[02189] Соединение 404: 3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид формиат
[02190] 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,31 (с, 1H), 7,37 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 6,21 (с, 1H), 4,50 (с, 2H), 4,41 (шир., 1H0, 4,21 (шир., 2H), 3,81 (шир., 2H), 3,38 (м, 1H), 3,00 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 2,87 (с, 3H), 2,40 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,20 (д, J=6,4 Гц, 6H), 0,86 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+1) 479,54.
[02191] Соединение 405: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метил-5-(трифторметил)бензамид формиат
[02192] 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,32 (с, 1H), 7,39 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 6,08 (с, 1H), 4,44 (с, 2H), 4,41 (шир., м, 1H), 4,21 (шир., 2H), 3,82 (шир., 2H), 3,00 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 2,88 (с, 3H), 2,39 (с, 3H), 2,34 (д, J=1,2 Гц, 3H), 2,21 (с, 3H), 0,86 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) (M+1) 451,49.
[02193] Соединение 406: 5-Хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-N-[(6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]бензамид
[02194] К перемешиваемому раствору 5-хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метилбензойной кислоты (неочищенное вещество, 1,80 г, 3,26 ммоль) и 3-(аминометил)-6-метил-4-пропил-1,2-дигидропиридин-2-она в виде HCl соли (916 мг, 4,24 ммоль) в DMSO (10 мл) добавляли PyBOP (3,10 г, 5,87 ммоль) и основание Хунига (1,20 г, 9,78 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 16 часов. Реакцию гасили водой и образовавшийся осадок собирали. Твердое вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 Этилацетат/MeOH=10/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (264 мг, 17% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,20 (т, J=5,9 Гц, 1H), 7,06 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,02 (д, J=2,0 Гц, 1H), 5,96 (с, 1H), 4,54 (д, J=5,9 Гц, 2H), 3,02 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,81 (м, 2H), 2,64-2,71 (м, 3H), 2,21-2,27 (s x 3, 9H), 1,84-1,94 (м, 2H), 1,55-1,65 (м, 6H), 1,00 (т, J=7,4 Гц, 3H), 0,84 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) [M+H] 473,1, [M+Na] 495,3; ВЭЖХ чистота 94,7%.
[02195] Соединение 407: 5-Хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-N-{[6-метил-2-оксо-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-3-ил]метил}бензамид
[02196] К перемешиваемому раствору 5-хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метилбензойной кислоты (неочищенное вещество, ~0,7 ммоль) и 3-(аминометил)-6-метил-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-2-он гидрохлорида HCl соли (200 мг, 0,91 ммоль) в DMSO (5,3 мл) добавляли PyBOP (550 мг, 1,05 ммоль) и основание Хунига (366 мкл, 2,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 7 часов. Реакцию гасили водой и образовавшийся осадок собирали. Твердое вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2 Этилацетат/MeOH=10/1 + 10% триэтиламина). Неочищенное соединение растирали в порошок с этилацетатом/гексаном и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (166 мг, 50% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,06 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,01-7,05 (м, 1H), 7,00 (д, J=2,4 Гц, 1H), 6,04 (с, 1H), 4,57 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,49-3,57 (м, 1H), 3,02 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 2,80-2,84 (м, 2H), 2,61-2,69 (м, 1H), 2,29 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 1,86-1,90 (м, 2H), 1,66-1,70 (м, 4H), 1,21 (д, J=6,8 Гц, 6H), 0,84 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) [M+Na] 495,2; ВЭЖХ чистота 95,7%.
[02197] Соединение 408: 5-Хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-N-{[6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил]метил}бензамид
[02198] К перемешиваемому раствору 5-хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метилбензойной кислоты (неочищенное вещество, ~0,7 ммоль) и 3-(аминометил)-6-метил-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-2-он гидрохлорида HCl соли (200 мг, 0,91 ммоль) в DMSO (5,3 мл) добавляли PyBOP (550 мг, 1,05 ммоль) и основание Хунига (366 мкл, 2,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 7 часов. Реакцию гасили водой и разбавляли этилацетатом. Водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (SiO2 Этилацетат/MeOH=10/1 + 5% триэтиламина). Неочищенное соединение растирали в порошок с этилацетатом/гексаном и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (145 мг, 42% выход). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,08 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,03 (д, J=2,4 Гц, 1H), 6,81-6,85 (м, 1H), 6,35 (с, 1H), 4,71 (д, J=5,2 Гц, 2H), 3,03 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 2,81-2,85 (м, 2H), 2,68-2,72 (м, 1H), 2,39 (с, 3H), 2,27 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,88-1,94 (м, 2H), 1,67-1,72 (м, 4H), 0,85 (т, J=6,8 Гц, 3H); MS (ES) [M+H] 499,1, [M+Na] 521,1 ; ВЭЖХ чистота 96,0%.
[02199] Следуя такому же способу получения, как описано выше для 5-хлор-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-N-{[6-метил-2-оксо-4-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил]метил}бензамида, получали следующие аналоги с использованием соответствующих пиридоновых фрагментов, описанных выше, и очистку осуществляли с использованием обращенно-фазовой ВЭЖХ/МС (ACN-H2O с 0,1% муравьиной кислоты).
[02200] Соединение 409: 5-хлор-3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид формиат
[02201] 1H-ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,45-8,25 (шир., 1H), 7,30 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,13 (д, J=2,0 Гц, 1H), 4,47 (с, 2H), 3,50-3,38 (шир., 2H), 3,25-3,15 (шир., 1H), 3,08 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 3,06-2,98 (шир., 2H), 2,83 (с, 3H), 2,38 (д, J=2,0 Гц, 3H), 2,27 (с, 3H), 2,26 (д, J=2,0 Гц, 3H), 2,03 (шир.д, J=14,75 Гц, 2H), 1,90-1,77 (шир., 2H), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) (M+H) 463,50.
[02202] Соединение 410: 5-хлор-3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-N-((5-фтор-6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид формиат
[02203] 1H-ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,43-8,26 (шир., 1H), 7,30 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,12 (д, J=2,0 Гц, 1H), 4,47 (с, 2H), 3,47-3,39 (шир., 2H), 3,23-3,15 (шир., 1H), 3,08 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 3,05-2,96 (шир., 2H), 2,82 (с, 3H), 2,79 (шир.д, J=8,2 Гц, 2H), 2,28-2,26 (шир., 6H), 2,06-1,99 (шир., 2H), 1,93-1,82 (шир., 2H), 1,68-1,59 (м, 2H), 1,06 (т, J=7,5 Гц, 3H), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) (M+H) 491,52.
[02204] Соединение 411: 5-хлор-3-(этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид формиат
[02205] 1H-ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,48-8,34 (шир., 1H), 7,35 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,16 (д, J=2,0 Гц, 1H), 4,57 (с, 2H), 3,61-3,53 (м, 1H), 3,52-3,44 (шир., 2H), 3,30-3,20 (шир., 1H), 3,13 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 3,10-3,01 (шир., 2H), 2,87 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,31 (д, J=2,8 Гц, 3H), 2,10-2,04 (шир., 2H), 1,98-1,87 (шир., 2H), 1,41 (д, J=6,5 Гц, 6H), 0,93 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) (M+H) 491,51.
[02206] Соединение 412: 5-хлор-3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамид формиат
[02207] Метил 5-хлор-3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метилбензоат гидролизовали до 5-хлор-3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метилбензойной кислоты, следуя такому же способу получения, как описано для 3-{этил[1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]амино}-2-метил-5-(трифторметил)бензойной кислоты из ее соответствующего карбоксилата. Неочищенную 5-хлор-3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метилбензойную кислоту затем подвергали сочетанию с 3-(аминометил)-6-метил-4-пропил-1,2-дигидропиридин-2-оном, HCl солью, полученной ранее, следуя способу получения, описанному для N-[(4,6-диметил-2-оксо- 1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-[этил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]-2-метил-5-(трифторметил)бензамида. После очистки обращенно-фазовой ВЭЖХ/МС (CAN-H2O с 0,1% муравьиной кислоты) получали указанное в заголовке соединение. 1H-ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,58-8,24 (шир., 1H), 7,15 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,08 (д, J=2,0 Гц, 1H), 6,14 (с, 1H), 4,48 (с, 2H), 4,41-4,34 (м, 1H), 4,25 (шир., 2H), 3,85 (шир., 2H), 3,00 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,92 (с, 3H), 2,72-2,66 (м, 2H), 2,34 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 1,70-1,61 (м, 2H), 1,04 (т, J=7,2 Гц, 3H), 0,91 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) (M+H) 445,48.
[02208] Соединение 413: 5-хлор-3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид формиат
[02209] Следуя такому же способу получения, как описано выше для соединения 5-хлор-3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамид формиата, указанное в заголовке соединение получали с использованием 5-хлор-3-(этил(1-метилазетидин-3-ил)амино)-2-метилбензойной кислоты и 3-(Аминометил)-6-метил-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-2-она, HCl соли. После очистки обращенно-фазовой ВЭЖХ/МС (CAN-H2O с 0,1% муравьиной кислоты) получали указанное в заголовке соединение. 1H-ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ м.д. 8,43-8,25 (шир., 1H), 7,15 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,08 (д, J=2,0 Гц, 1H), 6,25 (с, 1H), 4,52 (с, 2H), 4,40-4,34 (м, 1H), 4,29-4,21 (шир., 2H), 3,90-3,79 (шир., 2H), 3,48-3,40 (м, 1H), 3,00 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,92 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,28 (с, 3H), 1,24 (д, J=7,0 Гц, 6H), 0,90 (т, J=7,0 Гц, 3H), MS (ES) (M+H) 445,47.
[02210] Соединение 414: N-[(4,6-Диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-{[(2R,6R)-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-5-фтор-2-метилбензамид
[02211] К перемешиваемому раствору 3-{[(2R,6R)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-5-фтор-2-метилбензамида (378 мг, 0,709 ммоль) в MeOH (7 мл) добавляли Pd/C (150 мг). Реакционную смесь перемешивали при 23°C в течение 1 часа в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (1. NAM-300H силикагель, изготовитель Nagara Science Co., Ltd., этилацетат/MeOH=4/1 до этилацетат/MeOH/триэтиламин=1/1/0,01, 2. NH-SiO2, гептан/этилацетат=30/1 до 8/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (235 мг, 75% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,08 (т, J=6,2 Гц, 1H), 6,82 (дд, J=10,7, 2,5 Гц, 1H), 6,75 (дд, J=8,2, 2,7 Гц, 1H), 5,93 (с, 1H), 4,51 (д, J=6,2 Гц, 2H), 3,40-3,48 (м, 1H), 2,95-3,09 (м, 3H), 2,83-2,92 (м, 1H), 2,39 (с, 3H), 2,22 (с×2, 6H), 1,63-1,78 (м, 4H), 1,13 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,02 (д, J=6,2 Гц, 3H), 0,84 (т, J=7,0 Гц, 3H); MS (ES) [M+H] 443,1, [M+Na] 465,2; ВЭЖХ; чистота 99,3%.
[02212] Соединение 415: N-(4,6-Диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-3-{[(2R,4R,6S)-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-5-фтор-2-метилбензамид
[02213] К перемешиваемому раствору 3-{[(2R,4R,6S)-1-бензил-2,6-диметилпиперидин-4-ил](этил)амино}-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-5-фтор-2-метилбензамида (50,1 мг, 0,0860 ммоль) в MeOH (2 мл) добавляли Pd/C (100 мг). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов в атмосфере водорода при 23°C. После продувки азотом смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NAM-300Н силикагель, изготовитель Nagara Science Co., Ltd., этилацетат/MeOH=4/1 до этилацетат/MeOH/триэтиламин=1/1/0,01). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-SiO2, этилацетат/MeOH=30/1 до 20/1 до 8/1). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали препаративной ТСХ (ТСХ силикагель, 60F254, MERCK, MeOH/Et3N=100/1) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (17,2 мг, 45% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ м.д. 7,10 (м, 1H), 6,81 (м, 2H), 5,91 (с, 1H), 4,52 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,61 (м, 1H), 3,23-2,73 (м, 4H), 2,40 (с, 3H), 2,28 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,64-1,05 (м, 4H), 1,05-0,86 (м, 6H), 0,82 (т, J=7,2 Гц, 3H), (-2H); LC-MS: m/z [M+H] 443,2, [M+Na] 465,3; ВЭЖХ; чистота 97,4%.
[02214] Пример 45: Синтез соединений 6, 9, 11-12, 19, 22, 24, 27, 29, 34-35, 37-47, 65-90,93-96,99-101, 103, 106-116, 124, 125, 128-136, 138-143, 145-156, 158-190, 193-204, 210, 211, 214-221, 223-242, 244-267, 270-272, 274, 275, 280, 281, 288, 289, 291-300, 303-305, 307, 312, 314, 316-318, 323-327, 329-331, 337, 338, 341-343, 345, 346, 350-355, 357-385, 388, 391 и 418
[02215] Соединения 6, 9, 11-12, 19, 22, 24, 27, 29, 34-35, 37-47, 65-90, 93-96, 99-101, 103, 106-116, 124, 125, 128-136, 138-143, 145-156, 158-190, 193-204, 210, 211, 214-221, 223-242, 244-267, 270-272, 274, 275, 280, 281, 288, 289, 291-300, 303-305, 307, 312, 314, 316-318, 323-327, 329-331, 337, 338, 341-343, 345, 346, 350-355, 357-385, 388, 391 и 418 синтезировали способами, аналогичными тем, которые описаны для Примеров 1-44, или в соответствии со схемами реакций, представленными на общих схемах.
[02216] Пример 46: Протокол биоанализа и общие способы
Протокол для ферментных анализов дикого типа и мутантного PRC2
[02217] Общие материалы. S-аденозилметионин (SAM), S-аденозилгомоцитеин (SAH), бицин, KC1, Tween20, диметилсульфоксид (DMSO) и бычий кожный желатин (BSG) закупали у компании Sigma-Aldrich при наиболее высоком уровне чистоты, какой был возможен. Дитиотреитол (DTT) закупали у компании EMD. 3H-SAM закупали у компании American Radiolabeled Chemicals с специфической активностью 80 Ки/ммоль. 384-луночные стрептавидиновые Флэшпланшеты закупали у компании PerkinElmer.
[02218] Субстраты. Пептиды, представляющие остатки 21 - 44 гистона H3 человека, содержащие либо немодифицированный лизин 27 (H3K27me0), либо диметилированный лизин 27 (H3K27me2), были синтезированы с C-концевым G(K-биотин)линкер-аффинная метка мотивом и C-концевым амидным кэпом компанией 21st Century Biochemicals. Пептиды очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) до более чем 95% чистоты и подтверждали методом жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Последовательности представлены ниже.
H3K27me0: ATKAARKSAPATGGVKKPHRYRPGGK(биотин)-амид (SEQ ID NO:1)
H3K27me2: ATKAARK(me2)SAPATGGVKKPHRYRPGGK(биотин)-амид (SEQ ID NO:2)
[02219] Олигонуклеосомы эритроцитов цыпленка очищали из крови цыпленка в соответствии с установленными процедурами.
[02220] Рекобинантные PRC2 ферменты. Человеческие PRC2 ферменты очищали в виде 4-компонентных ферментных комплексов, ко-экспрессируемых в клетках Spodoptera frugiperda (sf9), с использованием бакуловирусной системы экспрессии. Экспрессируемые субъединицы представляли собой EZH2 дикого типа (NM_004456) или EZH2 Y641F, N, Н, S или С мутанты, образованные из конструкции EZH2 дикого типа, EED (NM_003797), Suzl2 (NM_015355) и RbAp48 (NM_005610). EED субъединица содержала N-концевую FLAG метку, которую использовали для очистки всего 4-компонентного комплекса из sf9 клеточных лизатов. Чистота комплексов соответствовала или превышала 95% по данным SDS-PAGE и Agilent Bioanalyzer анализа. Концентрации исходных растворов фермента (как правило, 0,3 -1,0 мг/мл) определяли с использованием Bradford анализа против бычьего сывороточного альбумина (BSA), используемого в качестве стандарта.
[02221] Общая процедура для ферментных анализов PRC2 на пептидных субстратах. Все анализы осуществляли в буфере, включающем 20 мМ бицина (pH = 7,6), 0,5 мМ DTT, 0,005% BSG и 0,002% Tween20, полученном в день использования. Соединения в 100% DMSO (1 мкл) наносили на полипропиленовые 384-луночные V-донные планшеты (Greiner) с использованием Platemate 2×3, снабженного 384-канальным пипеточным наконечником (Thermo). DMSO (1 мкл) добавляли в колонки 11, 12, 23, 24, ряды A - Н для контроля максимального сигнала, и SAH, известный продукт и ингибитор PRC2, (1 мкл) добавляли в колонки 11, 12, 23, 24, ряды I - P для контроля минимального сигнала. Коктейль (40 мкл), содержащий фермент PRC2 дикого типа и H3K27meO пептид, или любой из Y641 мутантных ферментов и H3K27me2 пептид, добавляли при помощи Multidrop Combi (Thermo). Соединения инкубировали с PRC2 в течение 30 минут при 25°C, затем добавляли коктейль (10 мкл), содержащий смесь нерадиоактивного и 3H-SAM для инициирования реакции (конечный объем = 51 мкл). Во всех случаях конечные концентрации были следующими: дикого типа или мутантного PRC2 фермента - 4 нМ, SAH в контрольных лунках с минимальным сигналом - 1 мМ, и концентрация DMSO - 1%. Конечные концентрации остальных компонентов указаны в Таблице 2 ниже. Анализы останавливали путем добавления нерадиоактивного SAM (10 мкл) до конечной концентрации 600 мкМ, который разбавляли 3H-SAM до уровня, когда его включение в пептидный субстрат больше не поддавалось определению. 50 мкл реакционной смеси в 384-луночном полипропиленовом планшете затем переносили в 384-луночный Флэшпланшет и биотинилированным пептидам давали связаться с стрепдавидиновой поверхностью в течение по меньшей мере 1 часа, затем промывали три раза при помощи 0,1% Tween20 в устройстве для промывки планшетов Biotek ELx405. Планшеты затем считывали в PerkinElmer TopCount планшет-ридере для измерения количества 3H-меченого пептида, связанного с поверхностью Флэшпланшета, которое измеряли как число распадов в минуту (dpm), или альтернативно, которое указывали как число импульсов в минуту (cpm).
Конечные концентрации компонентов для каждого варианта анализа на основании EZH2 идентичности (дикого типа или Y641 мутантный EZH2)
[02222] Общая процедура для ферментного анализа PRC2 дикого типа на олигонуклеосомном субстрате. Анализы осуществляли в буфере, включающем 20 мМ бицина (pH = 7,6), 0,5 мМ DTT, 0,005% BSG, 100 мМ KCl и 0,002% Tween20, полученном в день использования. Соединения в 100% DMSO (1 мкл) наносили на полипропиленовые 384-луночные V-донные планшеты (Greiner) с использованием Platemate 2×3, снабженного 384-канальным пипеточным наконечником (Thermo). DMSO (1 мкл) добавляли в колонки 11, 12, 23, 24, ряды A - Н для контроля максимального сигнала, и SAH, известный продукт и ингибитор PRC2, (1 мкл) добавляли в колонки 11,12, 23, 24, ряды I - P для контроля минимального сигнала. Коктейль (40 мкл), содержащий фермент PRC2 дикого типа и олигонуклеосомы эритроцитов цыпленка добавляли при помощи Multidrop Combi (Thermo). Соединения инкубировали с PRC2 в течение 30 минут при 25°C, затем добавляли коктейль (10 мкл), содержащий смесь нерадиоактивного и 3H-SAM для инициирования реакции (конечный объем = 51 мкл). Конечные концентрации были следующими: фермента PRC2 дикого типа - 4 нМ, нерадиоактивного SAM - 430 нМ, 3H-SAM - 120 нМ, олигонуклеосом эритроцитов цыпленка - 120 нМ, SAH в контрольных лунках с минимальным сигналом - 1 мМ, и концентрация DMSO - 1%. Анализы останавливали путем добавления нерадиоактивного SAM (10 мкл) до конечной концентрации 600 мкМ, который разбавлял 3H-SAM до уровня, когда его включение в субстрат, представляющий собой олигонуклеосомы эритроцитов цыпленка, больше не поддавалось определению. 50 мкл реакционной смеси в 384-луночном полипропиленовом планшете затем переносили в 384-луночный Флэшпланшет и нуклеосомы эритроцитов цыпленка иммобилизовали на поверхности планшета, который затем промывали три раза при помощи 0,1% Tween20 в устройстве для промывки планшетов Biotek ELx405. Планшеты затем считывали в PerkinElmer TopCount планшет-ридере для измерения количества 3H-меченых олигонуклеосом эритроцитов цыпленка, связанных с поверхностью Флэшпланшета, измеренного как число распадов в минуту (dpm), или альтернативно, указанного как число импульсов в минуту(cpm).
[02223] Расчет % ингибирования
[02224] Где dpm = число распадов в минуту, cmpd = сигнал в анализируемой лунке, и min и max означают соответствующие контроли с минимальным и максимальным сигналом.
[02225] 4-параметрическая подгонка ИК50
Bottom - нижнее значение
[02226] Где верхнее и нижнее значения обычно могут быть плавающими, но могут быть фиксированными при 100 или 0, соответственно, в 3-параметрической подгонке. Коэффициент Хилла обычно является плавающим, но может быть фиксированным при 1 в 3-параметрической подгонке. Y представляет собой % ингибирования, и X представляет собой концентрацию соединения.
[02227] ИК50 значения для PRC2 ферментных анализов на пептидных субстратах (например, EZH2 дикого типа и Y641F) представлены в Таблице 3 ниже.
[02228] Анализ метилирования с использованием WSU-DLCL2
[02229] Суспензию клеток WSU-DLCL2 закупали у компании DSMZ (German Collection of Microorganism and Cell Cultures, Braunschweig, Germany). Среду RPMI/Glutamax, Пенициллин-Стрептомицин, Термоактивированную Фетальную Бычью Сыворотку и D-PBS закупали у компании Life Technologies, Grand Island, NY, USA. Экстракционный Буфер и Нейтрализующий Буфер(5X) закупали у компании Active Motif, Carlsbad, CA, USA. Кроличье анти-Гистон H3 антитело закупали у компании Abeam, Cambridge, MA, USA. Кроличье анти-H3K27me3 и HRP-конъюгированное анти-кроличье-IgG закупали у компании Cell Singling Technology, Danvers, MA, USA. TMB "Суперчувствительный" субстрат получали от BioFX Laboratories, Owings Mills, MD, USA. Бычий Сывороточный Альбумин, не содержащий IgG, закупали у компании Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, USA. PBS с Tween (10X PBST) закупали у компании KPL, Gaithersburg, MD, USA. Серную кислоту закупали у компании Ricca Chemical, Arlington, TX, USA. Immulon ELISA планшеты закупали у компании Thermo, Rochester, NY, USA. V-донные планшеты для культивирования клеток закупали у компании Corning Inc., Corning, NY, USA. V-донные полипропиленовые планшеты закупали у компании Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA.
[02230] Суспендированные WSU-DLCL2 клетки поддерживали в питательной среде (RPMI 1640, дополненной 10% об/об термоактивированной фетальной бычьей сыворотки и 100 единиц/мл пенициллина-стрептомицина) и культивировали при 37°C в атмосфере 5% CO2. В испытываемых условиях клетки инкубировали в среде для количественного определения (RPMI 1640, дополненной 20% об/об термоактивированной фетальной бычьей сыворотки и 100 единиц/мл пенициллина-стрептомицина) при 37°C в атмосфере 5% CO2 на устройстве для встряхивания планшетов.
[02231] WSU-DLCL2 клетки высевали в среду для количественного определения при концентрации 50000 клеток на мл в 96-луночном V-донном культуральном планшете при 200 мкл/лунка. Соединение (1 мкл) из источников, 96-луночных планшетов, добавляли непосредственно в V-донный культуральный планшет. Планшеты инкубировали на встряхивающем устройстве titer-plate при 37°C, 5% CO2 в течение 96 часов. После четырех дней инкубации планшеты центрифугировали при 241 × g в течение пяти минут и среду осторожно аспирировали из каждой лунки культурального планшета, не нарушая клеточный осадок. Клеточный осадок ресуспендировали в 200 мкл DPBS и планшеты центрифугировали снова при 241 × g в течение пяти минут. Супернатант аспирировали и холодный (4°C) Экстракционный буфер (100 мкл) добавляли в каждую лунку. Планшеты инкубировали при 4°C на орбитальном встряхивающем устройстве в течение двух часов. Планшеты центрифугировали при 3427 × g × 10 минут. Супернатант (80 мкл на лунку) переносили в соответствующую лунку 96-луночного V-донного полипропиленового планшета. Нейтрализующий Буфер 5X (20 мкл на лунку) добавляли в V-донный полипропиленовый планшет, содержащий супернатант. V-донные полипропиленовые планшеты, содержащие неочищенный гистоновый препарат (CHP), инкубировали на орбитальном встряхивающем устройстве x пять минут. Неочищенные Гистоновые Препараты добавляли (2 мкл на лунку) в каждую соответствующую лунку в сдвоенные 96-луночные ELISA планшеты, содержащие 100 мкл Покрывающего Буфера (IX PBS + BSA 0,05% вес/об). Планшеты герметично закрывали и инкубировали в течение ночи при 4°C. На следующий день планшеты три раза промывали 300 мкл на лунку 1X PBST. Лунки блокировали в течение двух часов с использованием 300 мкл на лунку ELISA Разбавителя ((PBS (1X) BSA (2% вес/об) и Tween20 (0,05% об/об)). Планшеты промывали три раза при помощи 1X PBST. Для планшета, используемого для детекции гистона H3, добавляли 100 мкл на лунку анти-Гистон-H3 антитела (Abeam, abl791), разведенного 1:10000 в ELISA разбавителе. Для планшета, используемого для детекции H3K27 триметилирования, добавляли 100 мкл на лунку анти-H3K27me3, разведенного 1:2000 в ELISA разбавителе. Планшеты инкубировали в течение 90 минут при комнатной температуре. Планшеты промывали три раза при помощи 300 мкл 1X PBST на лунку. Для планшета, используемого для детекции Гистона H3, в каждую лунку добавляли 100 мкл HRP-конъюгированного анти-кроличьего IgG антитела, разведенного до 1:6000 в ELISA разбавителе. Для детекции H3K27me3, в каждую лунку добавляли 100 мкл HRP-конъюгированного анти-кроличьего IgG антитела, разведенного до 1:4000 в ELISA разбавителе. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 90 минут. Планшеты промывали четыре раза при помощи 1X PBST 300 мкл на лунку. В каждую лунку добавляли 100 мкл TMB субстрата. Планшеты с гистоном H3 инкубировали в течение пяти минут при комнатной температуре. H3K27me3 планшеты инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливали при помощи серной кислоты 1н (100 мкл на лунку). Оптическую плотность для каждого планшета считывали при 450 нм.
[02232] Сначала отношение для каждой лунки определяли следующим образом:
[02233] Каждый планшет включал восемь контрольных лунок, которые обрабатывали только при помощи DMSO (Минимальное Ингибирование), а также восемь контрольных лунок для максимального ингибирования (Фоновые лунки).
[02234] Рассчитывали среднее значение полученных отношений для каждого типа контроля и использовали для определения процента ингибирования для каждой испытываемой лунки в планшете. Осуществляли серийное разведение испытываемого соединения трехкратно в DMSO в общей сложности для десяти испытываемых концентраций, начиная при концентрации 25 мкМ. Определяли процент ингибирования и ИК50 кривые строили с использованием по две лунки на концентрацию соединения. Значения ИК50 для этого анализа представлены в Таблице 3 ниже.
[02235] Процент Ингибирования = 100-
[02236] Анализ клеточной пролиферации
[02237] Суспензию WSU-DLCL2 клеток закупали у компании DSMZ (German Collection of Microorganism and Cell Cultures, Braunschweig, Germany). Среду RPMI/Glutamax, Пенициллин-Стрептомицин, Термоактивированную Фетальную Бычью Сыворотку и D-PBS закупали у компании Life Technologies, Grand Island, NY, USA. V-донные полипропиленовые планшеты закупали у компании Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA. 384-Луночные белые непрозрачные планшеты для культивирования клеток закупали у компании Perkin Elmer, Waltham, MA, USA. Cell-Titer Glo® was закупали у компании Promega Corporation, Madison, WI, USA. SpectraMax M5 планшет-ридер закупали у компании Molecular Devices LLC, Sunnyvale, CA, USA.
[02238] Суспендированные WSU-DLCL2 клетки поддерживали в питательной среде (RPMI 1640, дополненной 10% об/об термоактивированной фетальной бычьей сывороткой) и культивировали при 37°C в атмосфере 5% CO2. В испытываемых условиях клетки инкубировали в среде для количественного определения (RPMI 1640, дополненной 20% об/об термоактивированной фетальной бычьей сыворотки и 100 единиц/мл пенициллина-стрептомицина) при 37°C в атмосфере 5% CO2.
[02239] Для оценки эффекта соединений на пролиферацию WSU-DLCL2 клеточной линии, экспоненциально растущие клетки высевали в 384-луночные белые непрозрачные планшеты при плотности 1250 клеток/мл в конечном объем 50 мкл среды для количественного определения. Планшет в качестве источника соединения получали путем осуществления девяти-точечных 3-кратных серийных разведений в DMSO в трех повторах, начиная при 10 мМ (конечная наибольшая концентрация соединения в анализе была 20 мкМ, и концентрация DMSO была 0,2%). 100 нл аликвоту из планшета, содержащего исходные растворы соединения, добавляли в соответствующую лунку в содержащий клетки планшет. Контроль 100% ингибирования состоял из клеток, обработанных 200 нМ конечной концентрацией стауроспорина, и контроль 0% ингибирования состоял из клеток, обработанных DMSO. После добавления соединений, аналитические планшеты инкубировали в течение 6 дней при 37°C, 5% CO2, относительной влажности >90% в течение 6 дней. Жизнеспособность клеток измеряли путем количественного определения ATP, присутствующего в клеточных культурах, добавляя 35 мкл Cell Titer Glo® реагента в содержащие клетки планшеты. Люминесценцию считывали в SpactraMax M5. Концентрацию, ингибирующую жизнеспособность клеток на 50%, определяли с использованием 4-параметрической подгонки нормализованных кривых доза-ответ. Значения ИК50 для этого анализа также представлены в Таблице 3 ниже.
ИК50 (мкМ)
ИК50 (мкМ)
ИК50 (мкМ)
ИК50 (мкМ)
[02240] Пример 47: Определение наименьшей цитотоксической концентрации (LCC)
[02241] Установлено, что клеточная пролиферация развивается через клеточное деление, которое приводит к удвоению количества клеток после деления по сравнению с количеством клеток до деления. В фиксированных окружающих условиях (например, pH, ионная концентрация, температура, клеточная плотность, содержание белков и ростовых факторов в среде и т.п.) клетки будут пролиферировать путем непрерывного удвоения (т.е. деления) в соответствии со следующим уравнением, при условии доступности достаточного количества питательных веществ и других необходимых факторов.
[02242]
где Nt представляет собой количество клеток на момент времени (t) после начала периода наблюдения, N0 представляет собой количество клеток на начало периода наблюдения, t представляет собой время после начала периода наблюдения, и tD представляет собой временной интервал, необходимый для удвоения клеток, который также называют временем удвоения. Уравнение A.1 можно преобразовать в более удобную форму экспоненциального уравнения с e основанием, пользуясь преимуществом равенства, 0,693 = In(2).
[02243]
[02244] Константа скорости для клеточной пролифераци (kp) находится в обратной зависимости от времени удвоения, как показано ниже.
[02245]
[02246] Объединение уравнений A.2 и A.3 дает,
[02247]
[02248] Таким образом, в соответствии с уравнением A.4, ожидается, что количество клеток будет экспоненциально увеличиваться в зависимости от времени (Фиг. 1 A) в ранний период клеточного роста, который называют log-фазой роста. Экспоненциальные уравнения, такие как уравнение A.4, могут быть линеаризованы, используя натуральный логарифм каждой стороны.
[02249]
[02250] Таким образом, ожидается, что график ln(Nt) как функции времени будет представлять собой восходящую прямую линию с углом наклона равным kp и отсекаемым на координатной y-оси отрезком равным ln(N0), как проиллюстрировано на Фиг. 1B.
[02251] Изменения окружающих условий могут привести к изменению скорости клеточной пролиферации, которое можно количественно выразить как изменения константы скорости пролиферации kp. Условия, которые могут привести к изменению скорости пролиферации, включают введение в систему антипролиферативного соединения в начале периода наблюдения (т.е. при t = 0). Когда антипролиферативное соединение имеет немедленное влияние на клеточную пролиферацию, можно ожидать, что графики ln(Nt) как функции времени будут оставаться линейными при всех концентрациях соединения, с уменьшением значений kp при увеличении концентраций соединения.
[02252] В зависимости от механистической основы антипролиферативного действия, некоторые соединения могут не иметь мгновенного эффекта на изменение скорости пролиферации. Вместо этого, может быть период латентности перед тем как воздействие соединения будет осуществляться. В таких случаях график ln(Nt) как функции времени будет бифазным, и точку времени, когда начинается действие соединения, можно определить как переломную точку между фазами (Фиг. 2). Независимо от того, является ли действие соединения на пролиферацию мгновенным или начинается после периода латентности, константу скорости для пролиферации при каждой концентрации соединения лучше всего определять по углу наклона кривой ln(Nt) против времени, начиная с момента времени, когда начинается действие соединения, до конца периода наблюдения эксперимента.
[02253] Соединение, применяемое к растущим клеткам, может влиять на наблюдаемую пролиферацию одним из двух общих путей: путем ингибирования дальнейшего клеточного деления (цитостаз) или путем киллинга клеток (цитотоксичность). Если соединение является цитостатичным, увеличивающая концентрация соединения будет уменьшать значение kp до тех пор, пока не прекратится дальнейшее клеточное деление. В этой точке скорость клеточного роста, и поэтому значение kp, будут равны нулю. С другой стороны, если соединение является цитотоксическим, тогда значение kp будет состоять из двух констант скорости: константы скорости для продолжающегося клеточного роста в присутствии соединения (kg) и константы скорости для киллинга клеток соединением (kd). Общая константа скорости для пролиферации при фиксированной концентрации соединения будет, таким образом, представлять собой разницу между абсолютными значениями этих противостоящих констант скорости.
[02254]
[02255] При концентрациях соединения, при которых скорость клеточного роста превышает скорость киллинга клеток, kp будет иметь положительное значение (т.е. kp>0). При концентрациях соединения, при которых скорость клеточного роста меньше скорости киллинга клеток, kp будет иметь отрицательное значение (т.е. kp < 0), и количество клеток будет снижаться с течением времени, что является показателем сильной цитотоксичности. Когда kg точно соответствует kd, тогда общая константа скорости пролиферации, kp, будет иметь значение ноль. Таким образом, можно определить наименьшую цитотоксическую концентрацию (LCC) как такую концентрацию соединения, которая приводит к значению kp равному нулю, поскольку любая концентрация больше этой будет приводить к явно наблюдаемой цитотоксичности. Nota bene: при концентрации ниже LCC возможен киллинг клеток, но при скорости, которая меньше чем, скорость остаточной клеточной пролиферации. Здесь, обработка не предназначена для определения биологических деталей действия соединения. Скорее, целью здесь является просто определение практического параметра, при помощи которого возможно объективное количественное определение концентрации соединения, при которой скорость киллинга клеток будет превышать новый клеточный рост. Действительно, LCC представляет собой переломную точку или критическую концентрацию, выше которой наблюдается явная цитотоксичность, а не цитотоксическую концентрацию per se. В этом отношении, LCC можно рассматривать также как другие физические параметры, являющиеся переломными точками, такие как критическая концентрация мицелл (CMC), используемая для определения концентрации липидов, детергентов или других поверхнстно-активных веществ, выше которой все молекулы инкорпорируют в мицеллярные структуры.
[02256] Традиционно, влияние антипролиферативных соединений на клеточный чаще всего определяют количественно по ИК50 значению, которое определяют как такую концентрацию соединения, которая снижает скорость клеточной пролиферации в два раза по сравнению с тем, что наблюдают в отсутствие соединения (т.е. для контрольного образца с использованием носителя или растворителя; Фиг. 2). Однако значение ИК50 не дает возможность исследователю отличать цитостатические и соединения от цитотоксических. В отличие от этого, LCC позволяет легко осуществить такую дифференциацию и затем рассчитать концентрацию, при которой происходит переход к сильному цитотоксическому поведению.
[02257] Если ограничить окно времени наблюдения в пределах от начала воздействия (как определено выше и на Фиг. 2) и до конца эксперимента, тогда данные будут в основном хорошо подходить для линейного уравнения при представлении в виде графика ln(Nt) как функции времени (см.выше). Из подгонок такого типа, значение kp можно определить при каждой концентрации испытываемого соединения. Новых график значения kp как функции концентрации соединения ([I]) будет иметь форму нисходящей изотермы, с максимальным значением при [I] = 0 kmax (определено по контрольному образцу, обработанному носителем или растворителем) и минимальным значением при безграничной концентрации соединения kmin (Фиг. 3).
[02258]
где Imid представляет собой концентрацию соединения, дающую значение kp, которое является средним между значениями kmax и kmin; (следует отметить, что значение Imid не является тем же, что ИК50, за исключением случая полностью и чисто цитостатического соединения). Таким образом, использование данных нового графика для уравнения A.7 обеспечивает оценки kmax, kmin и Imid. Если соединение является цитостатическим (как определено в настоящем описании), значение kmin не может быть меньше нуля. Для цитотоксических соединений kmin будет меньше нуля, и абсолютное значение kmin будет непосредственно относиться к эффективности соединения в киллинге клеток.
[02259] Подобранные значения, выведенные из уравнения A.7, также можно использовать для определения значения LCC. Путем определения, когда [I] = LCC, kp = 0. Таким образом, в этих условиях уравнение A.7 представляет собой
[02260]
[02261] Алгебраическая перестановка уравнения A.8 дает уравнение для LCC.
[02262]
[02263] Этот анализ является простым для осуществления с использованием программы построения нелинейной кривой, и его можно использовать в клеточных анализах активности соединений в процессе выявления и разработки лекарственных средств. Таким образом, LCC может обеспечить ценный показатель для оценки SAR (взаимозавимость структура-активность) соединения.
[02264] Таблица 4 ниже представляет данные LCC и ИК50, полученные для некоторых соединений по настоящему изобретению на WSU-DLCL2 клетках.
11-дневное значение LCC (мкМ)
11-дневное значение ИК50 (мкМ)
[02265] Пример 48: in vivo Анализ
Мыши
[02266] Самки Fox Chase SCID® мышей (CB17/Icr-Prkdcscid/IcrIcoCrl, Charles River Laboratories) или бестимусные “голые” мыши (Crl:NU(Ncr)-Foxnlnu, Charles River Laboratories) имели возраст 8 недель и массу тела (BW) в пределах 16,0-21,1 г в D1(день 1) испытания. Животным давали ad libitum воду (обратный осмос 1 ч/млн Cl) и лабораторный корм NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet®, включающий 18,0% неочищенного белка, 5,0% неочищенного жира и 5,0% неочищенной клетчатки. Мышей размещали на облучаемых Enrich-o'cobs™ подстилках в статических микроизоляторах с 12-часовым циклом освещения при 20-22°C (68-72°F) и 40-60% влажности. Все процедуры соответствовали рекомендациям Guide for Care and Use of Laboratory animals, что касается ограничений, содержания животных, хирургических процедур, регулирования пищи и жидкости и ветеринарной помощи.
Культура опухолевых клеток
[02267] Клеточные линии лимфомы человека получали из разных источников (ATCC, DSMZ) и поддерживали при Piedmont в виде суспендированных культур в RPMI-1640 среде, содержащей 100 единиц/мл пенициллина G натриевой соли, 100 г/мл стрептомицина и 25 г/мл гентамицина. Среду дополняли 10% фетальной бычьей сывороткой и 2 мМ глутамина. Клетки культивировали в колбах с культурой ткани в увлажненном инкубаторе при 37°C, в атмосфере 5% CO2 и 95% воздуха.
In vivo имплантация опухоли
[02268] Клеточные линии лимфомы человека харвестировали в mid-log фазе роста и снова суспендировали в PBS с 50% Matrigel™ (BD Biosciences). Каждая мышь получала 1×107 клеток (0,2 мл клеточной суспензии) подкожно в правый бок. Опухоли измеряли при помощи циркуля в друх измерениях для контроля роста, когда средний объем приближался к желаемому диапазону 80-120 мм3. Размер опухоли в мм3 рассчитывали из уравнения:
где w = ширина и l = длина, в мм, опухоли. Массу опухоли можно определить, допуская, что 1 мг эквивалентен 1 мм3 объема опухоли. Через 10-30 дней (в зависимости от используемой клеточной линии) мышей с 108-126 мм3 опухолями распределяли на восемь групп со средним объемом опухолей 117-119 мм3.
Испытываемые вещества
[02269] Испытываемые соединения хранили при комнатной температуре и защищали от света. В каждый день обработки получали свежие композиции соединений путем суспендирования порошков в 0,5% натрий карбоксиметилцеллюлозе (NaCMC) и 0,1% Tween® 80 в деионизированной воде. EM10 носитель, 0,5% NaCMC и 0,1% Tween® 80 в деионизированной воде использовали для обработки контрольных групп по той же схеме. Композиции хранили защищенными от света при 4°C до введения.
План обработки
[02270] Мышей обрабатывали при дозах соединения в пределах 1-1000 мг/кг и при TID (3 раза в день через каждые 8 часов), BID (два раза в день через каждые 12 часов) или QD (один раз в день) схамах для разного количества дней путем перорального введения через зонд или путем инъекции внутривенным, интраперитонеальным или подкожным путем. Каждую дозу вводили в объеме 0,2 мл/20 г мыши (10 мл/кг), регулировали в соответствии с последней зарегистрированной массой тела индивидуальных животных. Максимальная продолжительность обработки составляла 28 дней.
Средний объем опухоли (MTV) и анализ ингибирования роста опухоли (TGI)
[02271] Эффективность обработки определяли в последний день обработки. MTV(n), средний объем опухоли для количества животных, n, по состоянию на последний день определяли для каждой группы. Процент ингибирования роста опухоли (%TGI) можно определить несколькими путями. Первый, разницу между MTV(n) намеченной контрольной группы и MTV(n) группы обработки лекарственным средством выражают как процент от MTV(n) контрольной группы:
[02272] Другой путь расчета %TGI принимает во внимание изменение размера опухоли, начиная с дня 1 до дня n, где n представляет собой последний день обработки.
Анализ замедления роста опухоли
[02273] Альтернативно, мышей поддерживали живыми после последнего дня обработки для анализа замедления роста опухоли. Опухоли измеряли при помощи циркуля два раза в неделю и каждое испытываемое животное умерщвляли, когда опухоль у него достигала объема 2000 мм3 (конечная точка) или в предварительно определенный последний день испытания, если до этого опухоль не достигнет нужного объема. Время до конечной точки (TTE) для каждой мыши рассчитывали из следующего уравнения:
где b представляет собой отрезок, и m представляет собой угол наклона линии, полученной методом линейной регрессии log-преобразованного набора данных роста опухоли. Наборы данных состояли из данных первого наблюдения, превышающих объем в конечной точке испытании, и трех последовательных наблюдений, которые непосредственно предшествовали достижению конечной точки объема. Животным, которые не достигали конечной точки объема, приписывали TTE значение, полученное в последний день испытания (предварительно определенный). Для любого животного, отнесенного к категории животных, чья смерть была связана с обработкой (TR), TTE значение должно быть равно значению, определенному на день смерти животного. Любое животное, отнесенное к категории животных, чья смерть не была связана с обработкой (NTR), исключали из TTE расчетов и всех последующих анализов.
[02274] Результат обработки определяли на основании замедления роста (TGD), определяемого как увеличение среднего значения TTE в группе обработки по сравнению с контрольной группой:
Выраженный в днях или как процент от среднего ТТЕ в контрольной группе:
где:
T = среднее TTE для группы обработки
С = среднее TTE для контрольной группы
Токсичность
[02275] Животных взвешивали ежедневно в Дни 1-5 и затем два раза в неделю вплоть до завершения испытания. Мышей часто обследовали для выявления очевидных признаков каких-либо связанных с обработкой неблагоприятных побочных эффектов, которые были задокументированы. Приемлемую токсичность для максимальной переносимой дозы (MTD) определяли как среднюю для группы потерю массы тела меньше чем 20% в процессе испытания, и не более чем 10% смертности из-за TR смертей. Смерть нужно было классифицировать как TR, если ее можно было отнести за счет побочных эффектов обработки, подтвержденных клиническими признаками и/или аутопсией, или за счет неизвестных причин в период обработки лекарственным средством. Смерть нужно было классифицировать как NTR, если были подтверждения того, что она не связана с побочными эффектами обработки. NTR смерти в период интервала между обработками типично следует отнести к категории NTRa (как случайные или из-за человеческой ошибки) или NTRm (из-за подтвержденного аутопсией распространения опухоли путем инвазии и/или метастазирования). Перорально обрабатываемых животных, которые умирали от неизвестных причин в период введения лекарственного средства, можно классифицировать как NTRu, когда поведение группы не подтверждает TR классификацию, и отсутствует реальная возможность осуществления аутопсии, чтобы исключить возможность ошибки дозирования.
Отбор образцов
[02276] В некоторые дни в ходе испытания у мышей брали образцы предварительно определенным способом. Отбор образцов включал неокончательное взятие крови (0,25 мл) из мандибулярной вены без анестезии и отбор крови в полном объеме через окончательную сердечную пункцию под CO2 анестезией. Образцы крови обрабатывали для получения плазмы при помощи K2-EDTA в качестве антикоагулянта. Образцы плазмы замораживали при -80°C и хранили до использования в биоанализе для определения уровней соединения.
[02277] Опухоли извлекали у определенных мышей в RNAse-свободных условиях и разрезали на две половины. Срез толщиной 2 мм из одной половины каждой опухоли фиксировали в формалине в течение 24 часов и переносили в 70% этанол. Фиксированные опухолевые ткани погружали в парафин. Остальную опухолевую ткань от каждого животного быстро замораживали в жидком N2 и измельчали при помощи ступки и пестика.
[02278] У определенных мышей брали образцы на суррогатные ткани, включая селезенку, кожу, костный мозг и усы. Каждую ткань отделяли и фиксировали и/или быстро замораживали.
Статистический и графический анализы
[02279] Все статистические и графические анализы осуществляли с использованием Prism 3.03 (GraphPad) для
[02280] Windows. Использовали несколько методов анализа. Средние D29 объемы опухолей сравнивали с использованием критерия Крускала-Уоллиса и post hoc критерий множественного сравнения Данна. Эти тесты осуществляли три раза.
[02281] Двусторонние статистические анализы осуществляли при P = 0,05. Программа Prism сообщает результаты как незначимые(ns) при P > 0,05, значимые (обозначены символом "*") при 0,01 < P < 0,05, очень значимые ("**") при 0,001 <P< 0,01 и чрезвычайно значимые ("***") при P < 0,001.
[02282] Для определения статистической значимости между группами контроля и обработки в ходе всего периода обработки использовали либо анализ ANOVA с повторяющимися измерениями, затем пост-критерий множественного сравнения Даннета или двусторонний анализ ANOVA.
[02283] Для графического представления строили диаграмму "прямоугольники и тонкие линии (усы)", показывающую распределение индивидуальных объемов опухолей для каждой группы. Прямоугольник представляет 25-й - 75-й процентиль наблюдений, горизонтальная линия соответствует среднему значению, и "усы" указывают максимальные и минимальные значения. Средние значения или средние (± SEM) объемы опухолей представляли графически на полулогарифмическом или линейном графике как функции времени. Средние для группы изменения массы тела в ходе испытания наносили на график как процентное изменение, ± SEM, от D1.
[02284] Строили график рассеяния, показывающий TTE значения, для группы. TTE график включает NTR смерти, которые исключены из всех других графических анализов. Когда животное выбывало из испытания из-за размера опухоли, конечный объем опухоли, зарегистрированный для этого животного, включали с данными, используемыми для расчета среднего объема в последующих временных точках. Процент животных в каждой группе, остающихся в испытании, против времени был представлен в графике выживания Каплана-Мейера.
Экстракция гистонов
[02285] Для выделения гистонов 60-90 мг опухолевой ткани гомогенизировали в 1,5 мл буфера для ядерной экстракции (10 мМ Tris-HCl, 10 мМ MgCl2, 25 мМ KCl, 1% Triton X-100, 8,6% сахарозы, плюс таблетка ингибитора протеазы Роше 1836145) и инкубировали на льду в течение 5 минут. Ядра собирали путем центрифугирования при 600 g в течение 5 минут при 4°С и промывали один раз в PBS. Супернатант удаляли и гистоны экстрагировали в течение одного часа, при перемешивании с завихрением через каждые 15 минут, с использованием 0,4н холодной серной кислоты. Экстракты осветляли путем центрифугирования при 10000g в течение 10 минут при 4°C и переносили в свежую микроцентрифужную пробирку, содержащую 10х объем охлажденного льдом ацетона. Гистоны осаждали при -20° С в течение 2 часов - в течение ночи, получали осадок путем центрифугирования при 10000g в течение 10 минут и ресуспендировали в воде.
Вестерн-блот анализ
[02286] Концентрации белка для экстрагированных кислотой гистонов определяли при помощи BCA анализа (Pierce). 400-800 нг каждого лизата фракционировали на 10-20% Tris-глициновом геле (Biorad), переносили с использованием iBlot (7 минут по программе 3, с использованием Нитроцеллюлозных пластин для переноса) и зондировали с использованием следующих антител в блокирующем буфере Odyssey: кроличье анти-H3K27me3 (CST 9733; разведение 1:20000) и мышиное анти-Total H3 (CST 3638; разведение 1:20000). После первичной инкубации Ab, мембраны зондировали с использованием IRDye 800CW ослиного-антимышиного IgG (LiCOR #926-32212) и Alexa Fluor 680 козлиного-антикроличьего IgG (Invitrogen #A-21076) вторичных Ab и осуществляли визуализацию с использованием системы LiCOR Odyssey.
ELISA
[02287] Гистоны получали в эквивалентных концентрациях в покрывающем буфере (PBS+0,05%BSA) с получением 0,5 нг/мкл образца, и 100 мкл образца или стандарта добавляли в двух повторах в 2 96-луночные ELISA планшеты (Thermo Labsystems, Immulon 4HBX #3885). Планшеты герметично закрывали и инкубировали в течение ночи при 4°C. На следующий день планшеты промывали 3x при помощи PBST 300 мкл/лунка (PBS+0,05% Tween 20; 10X PBST, KPL #51-14-02) на устройстве для промывки планшетов Bio Тек. Планшеты блокировали разбавителем 300 мкл/лунка (PBS+2%BSA+0,05% Tween 20), инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов и промывали 3x при помощи PBST. Все антитела разводили в разбавителе. 100 мкл/лунка анти-H3K27me3 (CST #9733, 50% глицериновый исходный раствор 1:1000) или anti-total H3 (Abcam ab17911, 59% глицерина 1:10000) добавляли в каждый планшет. Планшеты инкубировали в течение 90 мин при комнатной температуре и промывали 3x при помощи PBST. 100 мкл/лунка анти-Rb-IgG-HRP (Cell Signaling Technology, 7074) добавляли 1:2000 в H3K27Me3 планшет и 1:6000 в H3 планшет и инкубировали в течение 90 минут при комнатной температуре. Планшеты промывали 4X при помощи PBST. Для детекции добавляли 100 мкл/лунка TMB субстрата (BioFx Laboratories, #TMBS) и планшеты инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 5 минут. Реакцию останавливали при помощи 100 мкл/лунка 1н H2SO4. Оптическую плотность при 450 нм считывали на устройстве для считывания микропланшетов SpectaMax M5.
[02288] In vivo результаты для Соединения 222 представлены в Фиг 4 и 5. Фиг. 4 представляет рост опухоли у мышей с WSU-DLCL2 ксенотрансплантатом, которых обрабатывали Соединением 222 в течение 27 дней. Ингибирование роста опухоли наблюдали при всех 3 дозах 100 мг/кг (два раза в день, 27 дней), 200 мг/кг (два раза в день, 27 дней) и 400 мг/кг (400 мг/кг два раза в день 7 дней, 0 мг/кг в течение 7 дней, и 300 мг/кг два раза в день, 13 дней). Фиг. 5 представляет общее H3K27me3 метилирование в WSU-DLCL2 опухолях у мышей, которых обрабатывали соединением 222 или носителем в течение 27 дней. Эта Фиг. 5 показывает уменьшение H3K27Me3 опухоли для каждой из групп дозирования.
Включение посредством ссылки
[02289] Полное раскрытие каждого из патентных документов и научных статей, на которые имеются ссылки в настоящей заявке, включено посредством ссылки для всех целей.
Эквиваленты
[02290] Изобретение можно осуществить в других специфических формах, без отступления от его сути или существенных характеристик. Описанные выше варианты воплощения поэтому следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не ограничивающие изобретение, описанное в настоящей заявке. Объем настоящего изобретения, таким образом, определяется прилагаемой формулой изобретения, а не представленным выше описанием, и предполагается, что формула изобретения охватывает все изменения, которые подпадают под смысловое содержание и находятся в пределах эквивалентности формулы изобретения.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ЗАМЕЩЕННЫЕ БЕНЗОЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ | 2013 |
|
RU2658919C2 |
| АРИЛ-ИЛИ ГЕТЕРОАРИЛЗАМЕЩЕННЫЕ БЕНЗОЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ | 2012 |
|
RU2632193C2 |
| СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ | 2012 |
|
RU2621148C2 |
| ПРОИЗВОДНОЕ 1,3-БЕНЗОДИОКСОЛА | 2015 |
|
RU2679131C2 |
| СОЕДИНЕНИЯ ПИРИДИНОНА В КАЧЕСТВЕ СЕЛЕКТИВНЫХ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ АГЕНТОВ ПРОТИВ КЛЕТОК, ИНФИЦИРОВАННЫХ ВИЧ | 2020 |
|
RU2816090C2 |
| ИНГИБИТОРЫ ТРАНСГЛУТАМИНАЗЫ 2 (TG2) | 2019 |
|
RU2781370C2 |
| ЦИКЛИЧЕСКИЕ ИНГИБИТОРЫ 11БЕТА-ГИДРОКСИСТЕРОИД-ДЕГИДРОГЕНАЗЫ 1 | 2009 |
|
RU2539979C2 |
| ПИРИДОНОВЫЕ И АЗАПИРИДОНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2011 |
|
RU2617405C2 |
| НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ | 2001 |
|
RU2419608C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПИПЕРИДИНА, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ | 2001 |
|
RU2298550C2 |
Изобретение относится к соединениям формулы (Ie) или его фармацевтически приемлемым солям:
где Z представляет собой NR7R8 или S(O)aR7, где а имеет значение 0; R1 представляет собой Н или C1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из гидроксила, C1-С6 алкоксила; каждый из R2 и R4, независимо, представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или С1-С3 алкильный линкер, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из галогена и гидроксила, и Т1 представляет собой Н, С1-С3 алкил; R3 представляет собой Н или галоген; R5 представляет собой Н или C1-C6 алкил; R6 представляет собой Н, галоген, -C(O)NRaRb или RS2, где RS2 представляет собой C1-С6 алкил или 4-12-членный гетероциклоалкил, содержащий от 0 до 3 гетероатомов в кольце, выбранных из О, N или S, и где каждый из Ra и Rb, независимо, представляет собой Н, C1-С6 алкил или Ra и Rb вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, выбранный из О, N или S; R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или С1-С4 алкильный линкер и Т4 представляет собой Н, C1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил, С(О)-C1-С6алкил или 4-14-членный гетероциклоалкил, содержащий 1-3 гетероатома в кольце, выбранных из О, N или S, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, С(О), C(O)NRk, NRkC(O) или С1-С3 алкильный линкер, где Rk представляет собой Н или C1-С6 алкил, и Т5 представляет собой Н, C1-С6 алкил; R8 представляет собой Н, C1-С6 алкил, необязательно замещенный галогеном или C1-С6 алкоксилом, С2-С6 алкенил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, содержащий 1-3 гетероатома в кольце, выбранных из О, N или S; или R7 и R8 вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, выбранных из О, S или N, и 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, которое образуют R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими -Q6-Т6, где Q6 представляет собой связь или С1-С3 алкильный линкер и Т6 представляет собой Н, галоген, C1-С6 алкил; и R12 представляет собой галоген, C1-C6 алкоксил, С2-С6 алкенил или C1-С6 алкил, необязательно замещенный галогеном. Заявленные соединения применяют для лечения рака. 4 н. и 20 з.п. ф-лы, 4 табл., 47 пр.
1. Соединение формулы (Ie) или его фармацевтически приемлемая соль:
где
Z представляет собой NR7R8 или S(O)aR7, где а имеет значение 0;
R1 представляет собой Н или C1-С6 алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из гидроксила, C1-С6 алкоксила;
каждый из R2 и R4, независимо, представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или С1-С3 алкильный линкер, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из галогена и гидроксила, и Т1 представляет собой Н, С1-С3 алкил;
R3 представляет собой Н или галоген;
R5 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R6 представляет собой Н, галоген, -C(O)NRaRb или RS2, где RS2 представляет собой C1-С6 алкил или 4-12-членный
гетероциклоалкил, содержащий от 0 до 3 гетероатомов в кольце, выбранных из О, N или S, и где каждый из Ra и Rb, независимо, представляет собой Н, C1-С6 алкил или Ra и Rb, вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, выбранный из О, N или S;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или С1-С4 алкильный линкер и Т4 представляет собой Н, C1-С6 алкил, С3-С8 циклоалкил, С(О)-C1-С6алкил или 4-14-членный гетероциклоалкил, содержащий 1-3 гетероатома в кольце, выбранных из О, N или S, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, С(О), C(O)NRk, NRkC(O) или С1-С3 алкильный линкер, где Rk представляет собой Н или C1-С6 алкил, и Т5 представляет собой Н, C1-С6 алкил;
R8 представляет собой Н, C1-С6 алкил, необязательно замещенный галогеном или C1-С6 алкоксилом, С2-С6 алкенил, С3-С8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, содержащий 1-3 гетероатома в кольце, выбранных из О, N или S; или R7 и R8 вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, выбранных из О, S или N, и 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, которое образуют R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими -Q6-Т6, где Q6 представляет собой связь или С1-С3 алкильный линкер и Т6 представляет собой Н, галоген, C1-С6 алкил; и
R12 представляет собой галоген, C1-C6 алкоксил, С2-С6 алкенил или C1-С6 алкил, необязательно замещенный галогеном.
2. Соединение по п. 1, где
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или С1-С4 алкильный линкер и Т4 представляет собой C1-С6 алкил, С3-C8 циклоалкил, С(О)-C1-С6алкил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил и оксетанил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из -Q5-T5;
R8 представляет собой Н или C1-С6 алкил, С2-С6 алкенил или С3-С8 циклоалкил; и
R12 представляет собой галоген, C1-С6 алкил, С1-С6 или C1-C6 алкоксил.
3. Соединение по п. 2, где
Z представляет собой NR7R8;
R6 представляет собой Н, галоген, -C(O)NRaRb или RS2, где RS2 представляет собой C1-С6 алкил или 4-12-членный гетероциклоалкил и где каждый из Ra и Rb, независимо, представляет собой Н или C1-С6 алкил; или Ra и Rb вместе с N атомом, с которым они связаны, образуют 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом;
R7 представляет собой C1-С6 алкил, С3-C8 циклоалкил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил и оксетанил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из оксо и -Q5-T5; и
R12 представляет собой галоген или C1-C6 алкил.
4. Соединение по любому из пп. 1-3, где R2, R4 и R12, каждый независимо, представляют собой C1-С6 алкил и R5 представляет собой Н.
5. Соединение по любому из пп. 1-3, где R7 представляет собой циклогексил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил, оксетанил, 1,4-диоксаспиро[4,5]декан-8-ил, 1-оксаспиро[4,5]декан-8-ил, 3'Н-спиро[циклогексан-1,1'-изобензофуран]-4-ил, 7'Н-спиро[циклогексан-1,5'-фуро[3,4-b]пиридин]-4-ил, 3'Н-спиро[циклогексан-1,1'-фуро[3,4-с]пиридин]-4-ил или 1-азаспиро[4,5]декан-8-ил, каждый замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
6. Соединение по любому из пп. 1-3, где Z выбран из группы, состоящей из пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, азетидинила, пирролидинила, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ила и 1,4-диокса-8-азаспиро[4,5]декан-8-ила, каждый из которых необязательно замещен одним -Q6-Т6.
7. Соединение по любому из пп. 1-3, где R6 представляет собой галоген и Z представляет собой SR7, где R7 представляет собой C1-С6 алкил, С3-C8 циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил и R7 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5.
8. Соединение по любому из пп. 1-3, где Z представляет собой NR7R8, где R7 представляет собой С3-C8 циклоалкил или 4-14-членный гетероциклоалкил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5; и R8 представляет собой Н или C1-С6 алкил.
9. Соединение по п. 1, где соединение представляет собой соединение Формулы (II)
10. Соединение по любому из пп. 1-3 или 9, где R6 представляет собой галоген.
11. Соединение по п. 9, где R12 представляет собой С1-С6 алкил или галоген.
12. Соединение по любому из пп. 1-3 или 8, где Z представляет собой NR7R8, где R8 представляет собой Н и R7 представляет собой C1-С6 алкил.
13. Соединение по п. 1, где соединение представляет собой соединение формулы (IIA)
где n имеет значение 0, 1 или 2; U представляет собой О, S, N-Q5-T5 или CH-Q5-T5; и R12 представляет собой Cl, Br или метил.
14. Соединение по любому из пп. 1-3, 9 или 13, где Q5 представляет собой связь и Т5 представляет собой Н, C1-С6 алкил.
15. Соединение по любому из пп. 1-3, 9 или 13, где Q5 представляет собой СО или NHC(O) и Т5 представляет собой C1-С6 алкил.
16. Соединение по любому из пп. 1-3, 9 или 13, где Q5 представляет собой С1-С3 алкильный линкер и Т5 представляет собой Н.
17. Соединение по любому из пп. 1-3, 9 или 13, где Q5 представляет собой NHC(O) и Т5 представляет собой C1-C6 алкил.
18. Соединение по п. 13, где U представляет собой CH-Q5-T5 и n имеет значение 0.
19. Соединение по любому из пп. 1-3, 9, 13 или 18, где Q6 представляет собой связь и Т6 представляет собой C1-С6 алкил.
20. Соединение, выбранное из соединений, представленных следующими структурами:
21. Фармацевтическая композиция, ингибирующая активность гистон-метилтрансферазы EZH2, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1-3, 9, 13, 18 или 20, N-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)фуран-2-карбоксамида, N,N'-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-1,3-фенилен)диацетамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-
дигидропиридин-3-ил)метил)-3-пиваламидобензамида, 3-(3,4-дигидро-2Н-бензо[b][1,4]диоксепин-7-сульфонамидо)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,5-диметоксибензамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,4,5-триметоксибензамида, 3-аллил-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4,5-диметоксибензамида, 4-(2-амино-2-оксоэтокси)-3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метоксибензамида, 3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-гидрокси-5-метоксибензамида или 3-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метокси-4-пропоксибензамида или фармацевтически приемлемой соли такого соединения и фармацевтически приемлемый носитель.
22. Способ лечения рака, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-3, 9, 13, 18 или 20, N-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)фуран-2-карбоксамида, N,N'-(5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-1,3-фенилен)диацетамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-пиваламидобензамида, 3-(3,4-дигидро-2Н-бензо[b][1,4]диоксепин-7-сульфонамидо)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,5-диметоксибензамида, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3,4,5-триметоксибензамида, 3-аллил-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4,5-диметоксибензамида, 4-(2-амино-2-оксоэтокси)-3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метоксибензамида, 3-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-гидрокси-5-метоксибензамида или 3-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-метокси-4-пропоксибензамида или фармацевтически приемлемой соли такого соединения.
23. Способ по п. 22, где рак представляет собой лимфому, лейкоз, меланому, рак предстательной железы или рак молочной железы.
24. Способ по п. 23, где лимфому выбирают из не-ходжкинской лимфомы, фолликулярной лимфомы (FL) и диффузной крупно-В-клеточной лимфомы (DLBC).
| WO 2007136592,A2,29.11.2007 | |||
| WO 2002053543, A1,11.07.2002 | |||
| МОНОЦИКЛИЧЕСКИЕ ГЕТЕРОЦИКЛЫ, ИНГИБИРУЮЩИЕ КИНАЗУ | 2005 |
|
RU2350603C2 |
