ПРОИЗВОДНЫЕ ВИТАМИНА В6 НУКЛЕОТИДОВ, АЦИКЛИЧЕСКИХ НУКЛЕОТИДОВ И АЦИКЛИЧЕСКИХ НУКЛЕОЗИДНЫХ ФОСФОНАТОВ Российский патент 2018 года по МПК A61K31/675 A61P35/00 C07F9/38 C07F9/36 C07H19/20 

Настоящая заявка была подана 1 августа 2012 г. как международная патентная заявка РСТ от имени МВС Pharma, Inc., национальной корпорацией США, заявитель для всех стран, за исключением США, и Александра Карпейского и Шона Циннена, граждан США, Мурали Урлама, гражданина Индии, и Владимира Ю. Введенского и Андрея П. Гузаева, граждан США, заявители только для США, и по ней испрашивается приоритет на основании предварительной заявки на патент США с серийным номером 61/513741, поданной 1 августа 2011 г., содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.

Область техники

В настоящем документе представлены соединения и способы их применения, связанные с областью химии, биохимии и медицины. Более конкретно, в настоящем документе раскрыты нуклеотидные аналоги, аналоги ациклического нуклеотида и ациклические нуклеозидфосфонатные (ANP) аналоги с замещенной фосфатной группой, фармацевтические композиции, содержащие один или несколько указанных фосфатзамещенных нуклеотидных или ANP аналогов, способы их синтеза, а также способы лечения заболеваний и/или состояний с их применением.

Уровень техники

Доставка активных соединений нуждающемуся в лечении пациенту типично осуществляется посредством системной доставки лекарственного средства, например внутривенная доставка или пероральная доставка. Системная доставка подвергает здоровые клетки и ткани воздействию лекарственного средства, даже если лекарственное средство необходимо только в определенной области организма. В результате лекарственное средство может негативно сказываться на здоровых клетках и тканях, и являются необходимыми более высокие концентрации лекарственного средства для доставки подходящих уровней участку, которому необходимо лечение.

Представленные в настоящем описании композиции и способы обращаются к этим и другим проблемам настоящей области техники.

Сущность изобретения

В настоящем документе представлены соединения, содержащие эти соединения композиции, способы получения этих соединений и способы применения этих соединений.

Один аспект относится к соединениям формулы I или их фармацевтически приемлемым солям.

Другой аспект относится к соединениям формулы II или их фармацевтически приемлемым солям.

Еще один аспект относится к соединениям формулы III или их фармацевтически приемлемым солям.

Другой аспект относится к соединениям формулы IV или их фармацевтически приемлемым солям.

Далее в настоящем описании раскрыты способы синтеза соединений формул I-IV.

Далее в настоящем описании еще раскрыты способы доставки нуклеотидов, ациклических нуклеотидов и ANP внутрь клетки путем конъюгирования указанных соединений с формами и/или фрагментами витамина В6 (подразумевается, что термины фрагмент, форма, остаток, и т.д. при использовании по отношению к витамину В6 являются взаимозаменяемыми; витамин В6, конъюгированный с нуклеотидами, ациклическими нуклеотидами или ANP, называется производное В6 нуклеотидов, ациклических нуклеотидов или ANP).

Также в настоящем описании раскрыты фармацевтические композиции, содержащие одно или несколько соединений формул I-IV, один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавляющих наполнителей или их комбинаций.

Некоторые аспекты раскрытых в настоящем описании способов относятся к лечению заболеваний и/или облегчению симптомов заболевания, включая вирусные, бактериальные, грибковые, злокачественную опухоль, воспалительные или паразитарные заболевания, и лечению боли путем введения терапевтически эффективных количеств одного или нескольких соединений формул I-IV или фармацевтической композиции, содержащей соединения. Такие соединения могут быть использованы при изготовлении медикаментов, применяемых для лечения указанных заболеваний. Такие соединения могут быть использованы при лечении различных заболеваний.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Антипролиферация различных панкреатических раковых клеток и раковых клеток предстательной железы через 48 ч в присутствии цитарабина, или 5'-арацитидиловой кислоты N-пиридоксиламида (соединение 3 = В6-araCMP), или гемцитабина или N-пиридоксиламида 2'-деокси-2',2'-дифтор-5'-цитидиловой кислоты (соединение 16 = B6-GemMP).

Фиг. 2. Сравнение 10- или 60-минутного импульсного воздействия на панкреатические раковые клетки и раковые клетки предстательной железы гемцитабина или соединения 16.

Фиг. 3. Антипролиферация раковых клеток множественной миеломы через 72 ч в присутствии цитарабина или 5'-арацитидиловой кислоты N-пиридоксиламида (соединение 3 = MU004-26 = В6-araCMP).

Фиг. 4. Подтверждение эффективности in vivo в ксенографте мышиной модели рака поджелудочной железы с соединением 16 (В6-GemMP).

Подробное описание изобретения

Аналоги нуклеозида представляют собой класс соединений с широким терапевтическим применением и биологической активностью, например противовирусными, антибиотическими, противогрибковыми, противопаразитарными, противораковыми, противовоспалительными и аналгетическими активностями. Аналоги нуклеозида представляют собой терапевтически неактивные соединения, которые превращены клеточными или вирусными ферментами в их активные формы, и далее ингибируют нуклеотид-полимеризирующие ферменты и другие нуклеотид-зависимые ферменты, включенные в клеточный или вирусный метаболизм и выживание. Эта активация возникает при помощи метаболического превращения аналогов нуклеозида в свои соответствующие 5'-моно-, ди- и трифосфаты. Первая стадия этого процесса - 5'-монофосфорилирование - часто скорость-лимитирующая.

В настоящем документе раскрыты новые производные витамина В6 нуклеотидов, ациклических нуклеотидов и ANP для применения при лечении, например, опухолевых, вирусных, воспалительных и паразитарных заболеваний. Поглощение витамина В6 человеческими клетками представляет собой опосредованный носителем процесс [Said H.M., Ortiz A., and Ma T.Y. (2003). A carrier-mediated mechanism for pyridoxine uptake by human intestinal epithelial Caco-2 cells: regulation by a PKA-mediated pathway. Am J Physiol Cell Physiol 285, C. 1219-1225].

В настоящем документе было определено и раскрыто, что дериватизация витамина В6 нуклеотидов и их аналогов хорошо подходит для маскировки отрицательного заряда фосфатной группы и, таким образом, усиливает проницаемость через клеточную мембрану. Тем не менее для специалистов настоящей области техники является неизвестным, может ли быть высвобожден фрагмент витамина В6 ферментативным путем или метаболически, когда он внутри клетки, для того, чтобы аналоги нуклеотида были активированы в свои 5'-ди- и/или трифосфатные производные, которые были эффективны.

Если не отмечено иное, все используемые по настоящей заявке технические и научные термины обладают такими значениями, которые обычно понятны специалистам настоящей области техники.

Используемый в настоящем описании термин "алкильная" группа относится к насыщенному алифатическому углеводороду, включая алкильные группы с неразветвленной цепью или разветвленной цепью. Предпочтительно алкильная группа содержит от 1 до 20 атомов углерода. Более предпочтительно она представляет собой низший алкил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода и более предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода. Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной. Когда она замещена, замещающая(ие) группа(ы) может(гут) включать в себя гидрокси, циано, алкокси, NO₂ или N(СН₃)₂, амино, N₃ или SH.

Используемый в настоящем описании термин "алкенил" относится к алкильной группе, которая содержит в неразветвленной или разветвленной углеводородной цепи одну или несколько двойных связей. Алкенильная группа может быть незамещенной или замещенной.

Используемый в настоящем описании термин "алкинил" относится к алкильной группе, которая содержит в неразветвленной или разветвленной углеводородной цепи одну или несколько тройных связей. Алкинильная группа может быть незамещенной или замещенной.

Используемый в настоящем описании термин "циклоалкильная" группа относится к циклической алкильной группе, содержащей от трех до десяти и предпочтительно пять или шесть атомов углерода, образующей алкильное кольцо.

Используемый в настоящем описании термин "арильная" группа относится к ароматической группе, которая содержит по меньшей мере одно кольцо, содержащее конъюгированную пи-электронную систему, и включает в себя карбоциклические арильные, гетероциклические арильные и биарильные группы; все из которых могут быть необязательно замещены. Заместитель(и) на этих группах может(гут) включать в себя галоген, тригалогенметил, гидроксил, SH, циано, алкокси, алкил, алкенил, алкинил и аминогруппы.

Используемый в настоящем описании термин "гетероарил" относится к ароматическому кольцу, содержащему от 1 до 3 гетероатомов в ароматическом кольце с остатком атомов в кольце, которые были атомами углерода. Подходящие гетероатомы включают в себя кислород, серу и азот, и типичные гетероарилы включают в себя фуранил, тиенил, пиридил, пирролил, пирроло, пиримидинил, пиразинил и имидазолил. Эти гетероарильные кольца также могут быть замещены. Заместители на этих гетероарильных группах могут включать в себя галоген, тригалогенметил, гидроксил, SH, циано, алкокси, алкил, алкенил, алкинил и аминогруппы.

Используемый в настоящем описании термин "противораковое соединение" или "соединение с активностью против злокачественного заболевания" относится к любому соединению, демонстрирующему преклиническую или клиническую активность против злокачественного заболевания, или его использовали в клиниках для лечения пациентов, страдающих от злокачественной опухоли.

Используемый в настоящем описании термин "противоинфекционное соединение" или "соединение с противоинфекционной активностью" относится к любому соединению, демонстрирующему преклиническую или клиническую противовирусную, противобактериальную, противогрибковую активность, или его использовали для лечения пациентов, страдающих от заболеваний, вызванных вирусом, бактерией или грибком соответственно.

Используемый в настоящем описании термин "противовоспалительное соединение" или "соединение с противовоспалительной активностью" относится к любому соединению, демонстрирующему преклиническую или клиническую противовоспалительную активность, или его использовали для лечения пациентов, страдающих от воспалительных заболеваний.

Используемый в настоящем описании термин "противопаразитарное соединение" или "соединение с противопаразитарной активностью" относится к любому соединению, демонстрирующему преклиническую или клиническую противопаразитариную активность, или его использовали для лечения пациентов, страдающих от паразитарных заболеваний.

Используемый в настоящем описании термин "аналгезирующее соединение" или "соединение с аналгетической активностью" относится к любому соединению, демонстрирующему преклиническое или клиническое снижение или устранение боли, или его использовали для лечения пациентов, страдающих от боли.

Используемый в настоящем описании термин "немодифицированное основание нуклеиновой кислоты (или гетероциклическое)" или "природное основание нуклеиновой кислоты" представляет собой любое основание, обнаруженное в нуклеиновой кислоте, включая аденин, цитозин, гуанин, урацил и тимин, не содержащее дополнительных заместителей или модификаций.

Используемый в настоящем описании термин "модифицированное основание нуклеиновой кислоты (или гетероциклическое)" представляет собой любое основание, обнаруженное в нуклеиновой кислоте, которая содержит любую модификацию в химической структуре по отношению к немодифицированному основанию нуклеиновой кислоты.

Используемый в настоящем описании термин "немодифицированный сахар" представляет собой бета-D-рибофуранозу или 2-деокси-бета-D-рибофуранозу.

Используемый в настоящем описании термин "модифицированный сахар" представляет собой любой фрагмент сахара, содержащий любую модификацию в химической структуре немодифицированного сахара.

5'-нуклеозид или ациклический нуклеозид присоединен к химическим структурам, представленным в настоящем описании как остаток или фрагмент 5'-нуклеозида или ациклического нуклеозида (другими словами 5'-нуклеозидильный или ациклический нуклеозидильный остаток). Термины 5'-нуклеозид и 5'-нуклеозидил, а также ациклический нуклеозид и ациклический нуклеозидил, использовали взаимозаменяемо по всей заявке, хотя подразумевается, что специалист настоящей области техники будет понимать, что это представляет собой остаток, который присоединен с обеспечением описанных в настоящем документе химических структур. Такие остатки включают в себя, например, О^-, СН₂^- и т.д.

Следует понимать, что в любом описанном в настоящем документе соединении с одним или несколькими хиральными центрами, если абсолютная стереохимия специально не отмечена, тогда каждый центр независимо может быть R-конфигурации или S-конфигурации, или смесью этого. Следовательно, представленные в настоящем документе соединения могут быть энантиомерно чистыми или быть стереоизомерными смесями. Также следует понимать, что в любой описанной в настоящем документе комбинации с одной или несколькими двойной(ыми) связью(ями), образующей(ими) изомеры, которые могут быть определены как Е или Z, каждая двойная связь независимо моет представлять собой Е или Z или их смесь. Аналогичным образом, также подразумевается, что включены все таутомерные формы.

Согласно некоторым вариантам осуществления раскрытые в настоящем описании соединения характеризуются химической структурой I

где R¹ представляет собой 5'-нуклеозидильный или ациклический нуклеозидильный остаток или его аналог, обладающий противораковой, противовирусной, противовоспалительной, противоинфекционной, аналгезирующей или противопаразитарной активностью;

Х и Y независимо представляют собой О, S или N;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, фенила, алкила, арила и гетероарила и форм/фрагментов витамина В6, характеризующихся одной из структур

где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой фрагмент витамина В6. Фрагмент витамина В6 присоединен к Х или Y при СН₂.

Иллюстративные R¹ соединения включают в себя без ограничения цитарабин, флударабин, гемцитабин, клофарабин, кладрибин, видазу, дакоген, пентостатин, аристеромицин, ацикловир, ганцикловир, пенцикловир, адефовир, нидофовир, тенофовир, зидовудин, ламивудин и кладрибин.

Примеры 5'-нуклеозидов и их аналогов включают в себя без ограничения следующее:

или

где В представляет собой модифицированное или немодифицированное основание нуклеиновой кислоты;

Е представляет собой О, С, N или S;

А представляет собой С, S или О; и

R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ независимо представляют собой Н, ОН, F, NH₂, N₃, алкил, алкенил или алкинил.

Примеры ациклических нуклеозидов включают в себя без ограничения

или

где В представляет собой модифицированное или немодифицированное основание нуклеиновой кислоты;

Е представляет собой О или С; и

R¹⁰ и R¹¹ независимо представляют собой Н, ОН, F, NH₂, N₃, алкил, алкенил или алкинил.

Другой вариант осуществления относится к соединениям, характеризующимся химической структурой II

где R¹ представляет собой 5'-нуклеозидильный или ациклический нуклеозидильный остаток или его аналог, обладающий противораковой, противовирусной, противовоспалительной, противоинфекционной, аналгезирующей или противопаразитарной активностью;

Х и Y независимо представляют собой О, S или N;

R¹² представляет собой фрагмент витамина В6, характеризующийся структурой

где фрагмент витамина В6 присоединен к Х и Y при СН₂ молекулах на фрагменте В6.

Иллюстративные R¹ соединения включают в себя без ограничения цитарабин, флударабин, гемцитабин, клофарабин, кладрибин, видазу, дакоген, пентостатин, аристеромицин, ацикловир, ганцикловир, пенцикловир, адефовир, цидофовир, тенофовир, зидовудин, ламивудин и кладрибин.

Примеры 5'-нуклеозидов и их аналогов включают в себя без ограничения следующее:

или

где В представляет собой модифицированное или немодифицированное основание нуклеиновой кислоты;

Е представляет собой О, С, N или S;

А представляет собой С, S или О; и

R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, ОН, F, NH₂, N₃, алкила, алкенила и алкинила.

Примеры ациклических нуклеозидов включают в себя без ограничения

или

где В представляет собой модифицированное или немодифицированное основание нуклеиновой кислоты;

Е представляет собой О или С; и

R¹⁰ и R¹¹ независимо выбраны из группы, состоящей из H, ОН, F, NH₂, N₃, алкила,алкенила и алкинила.

Другой вариант осуществления относится к соединениям, характеризующимся химический структурой III

где R¹ представляет собой 5'-нуклеозидильный или ациклический нуклеозидильный остаток, обладающий противораковой, противовирусной, противовоспалительной, противоинфекционной, аналгезирующей или противопаразитарной активностью;

X, Y и Z независимо представляют собой О, S или N;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, фенила, алкила, арила, гетероарила и фрагментов витамина В6, характеризующихся структурой

где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой фрагмент витамина В6. Фрагмент витамина В6 присоединен к Z или Y при CH₂; и

L представляет собой алкил, алкенил или алкинил.

Иллюстративные R¹ соединения включают в себя без ограничения цитарабин, флударабин, гемцитабин, клофарабин, кладрибин, видазу, дакоген, пентостатин, аристеромицин, ацикловир, ганцикловир, пенцикловир, адефовир, цидофовир, тенофовир, зидовудин, ламивудин и кладрибин.

Примеры 5'-нуклеозидов и их аналогов включают в себя без ограничения следующее:

или

где В представляет собой модифицированное или немодифицированное основание нуклеиновой кислоты;

Е представляет собой О, С, N или S;

А представляет собой С, S или О;

R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, ОН, F, NH₂, N₃, алкила, алкенила и алкинила.

Примеры ациклических нуклеозидов включают в себя без ограничения

или

где В представляет собой модифицированное или немодифицированное основание нуклеиновой кислоты;

Е представляет собой О или С;

R¹⁰ и R¹¹ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, ОН, F, NH₂, N₃, алкила, алкенила и алкинила.

Другой вариант осуществления относится к соединениям, характеризующимся химической структурой IV

где R¹ представляет собой 5'-нуклеозидильный или ациклический нуклеозидильный остаток, обладающий противораковой, противовирусной, противовоспалительной, противоинфекционной, аналгезирующей или противопаразитарной активностью;

X, Y и Z независимо представляют собой О, S или N;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, фенила, алкила, арила, гетероарила и фрагментов витамина В6, характеризующихся структурой

где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой фрагмент витамина В6. Фрагмент витамина В6 присоединен к Z или Y при СН₂; и

L представляет собой алкил, алкенил или алкинил.

Иллюстративные R¹ соединения включают в себя без ограничения цитарабин, флударабин, гемцитабин, клофарабин, кладрибин, видазу, дакоген, пентостатин, аристеромицин, ацикловир, ганцикловир, пенцикловир, адефовир, цидофовир, тенофовир, зидовудин, ламивудин и кладрибин.

Примеры 5'-нуклеозидов и их аналогов включают в себя без ограничения следующее:

или

где В представляет собой модифицированное или немодифицированное основание нуклеиновой кислоты;

Е представляет собой О, С, N или S;

А представляет собой С, S или О;

R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, ОН, F, NH₂, N₃, алкила, алкенила и алкинила.

Примеры ациклических нуклеозидов включают в себя без ограничения

или

где В представляет собой модифицированное или немодифицированное основание нуклеиновой кислоты;

Е представляет собой О или С;

R¹⁰ и R¹¹ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, ОН, F, NH₂, N₃, алкила, алкенила и алкинила.

Таблица 1: Иллюстративные нуклеозиды

Таблица 2: Иллюстративные ациклические нуклеозиды

Иллюстративные нуклеозиды и ациклические нуклеозиды, представленные в таблицах 1 и 2, будут присоединяться как R¹ в своем 5'-нуклеозидильном или ациклическом нуклеозидильном остатке или формах аналога, например будут присоединяться через 5'-O^- (соединения таблицы 1), через любой из О^- ациклочасти (соединения в первом ряду таблицы 2) или через СН₂^- фосфонатной части (соединения во втором раду таблицы 2).

Также в настоящем описании рассматривали фармацевтически приемлемые нетоксичные кислотно-аддитивные соли описанных в настоящем документе соединений и содержащие их фармацевтически приемлемые составы. Такие соли включают в себя соли, полученные из органических и неорганических кислот, таких как без ограничения хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, метансульфоновая кислота, уксусная кислота, виннокаменная кислота, молочная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, сорбиновая кислота, аконитиновая кислота, салициловая кислота, фталевая кислота, эмбоновая кислота, энантовая кислота и т.п.

Описанные в настоящем документе фармацевтические композиции предпочтительно составлены в единичной лекарственной форме, что означает физически дискретные единицы, подходящие в качестве единичной дозировки, или предопределенную фракцию единичной дозы, вводимую в однократном или многократном режиме дозирования человеку и другим млекопитающим, причем каждая единица содержит предопределенное количество активного вещества, рассчитанное с получением желаемого терапевтического эффекта совместно с подходящим фармацевтическим наполнителем или наполнителями. Композиции могут быть составлены с тем, чтобы обеспечить длительное или замедленное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту с использованием методик, хорошо известных из области техники.

Описанные в настоящем документе фармацевтические композиции содержат одно или несколько соединений формул I-IV, связанных по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем. При получении таких композиций активные ингредиенты, как правило, смешаны с или разбавлены наполнителем или заключены в пределах такого носителя, который может быть в форме капсулы или саше. Если наполнитель служит в качестве разбавителя, он может быть твердым, полутвердым или жидким веществом, который действует как переносчик, носитель или среда для активного ингредиента. Таким образом, композиции могут быть в форме таблеток, пилюль, порошков, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, мягких и твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных инъецируемых растворов и стерильных упакованных порошков.

Примеры подходящих наполнителей включают в себя лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, гуммиарабик, силикат кальция, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, микрокристаллическую целлюлозу, поивинилпирролидинон, целлюлозу, воду, сироп и метилцеллюлозу. Дополнительно составы могут включать в себя: смазывающие агенты, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие агенты; эмульгаторы и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подсластители; и ароматизаторы.

При получении фармацевтического состава, содержащего одно или несколько описанных в настоящем документе соединений, может быть необходимо измельчать активное соединение с получением частиц подходящего размера перед объединением с другими ингредиентами. Если активное соединение в основном нерастворимо, его обычно измельчают до частиц размером менее чем 200 меш. Если активное соединение в основном растворимо в воде, размер частиц обычно регулировали измельчением с получением в основном однородного распределения в составе, например, приблизительно 40 меш.

Таблетки или пилюли, содержащие предусмотренные в настоящем описании соединения, могут быть покрыты или иным образом составлены с получением лекарственной формы, обеспечивающей преимущество в пролонгированном действии. Например, таблетка или пилюля может содержать внутренний слой с дозирующим компонентом и наружный слой с дозирующим компонентом, последнее находилось в форме оболочки поверх первого. Два компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который служит для препятствия распада в желудке и для позволения внутреннему компоненту проходить нетронутым в двенадцатиперстную кишку или быть длительного высвобождения. Для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий может быть использован ряд веществ, такие вещества включают в себя число полимерных кислот и смеси полимерных кислот с такими веществами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.

Композиции для ингаляции или инсуффляции включают в себя растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях, или их смеси, и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые наполнители, как описано выше. Предпочтительно композиции вводили пероральным или назальным дыхательным путем для локального или системного эффекта. Композиции в фармацевтически приемлемых растворителях могут быть распылены с применением инертных газов. Распыленные растворы можно вдыхать сразу из распыляющего устройства, или распыляющее устройство может быть присоединено к маскам для лица или аппарату для дыхания с перемежающимся положительным давлением. Композиции раствора, суспензии или порошка могут быть введены предпочтительным пероральным или назальным путем из устройств, которые доставляют состав подходящим образом.

Другой представленный в настоящем описании вариант осуществления относится к способу доставки нуклеотидов, ациклических нуклеотидов и ANP внутрь клетки путем маскировки заряженной фосфатной группы указанных соединений различными формами витамина В6 (т.е. различными фрагментами, различными остатками) и/или с применением механизмов включения клеткой, недоступных для нуклеотидов, ациклических нуклеотидов и ANP. Механизмы включения предусматривают без ограничения облегченные транспортеры витамина В6 и будут функцией фрагмента витамина В6, давая возможность прохождению нуклеотидов через клеточную мембрану. Предпочтительно полученные коныогаты или пролекарства характеризуются общими структурами, раскрытыми в формулах I-IV.

Другой представленный в настоящем описании вариант осуществления представляет собой новое соединение формул I-IV или фармацевтическую композицию, содержащую новое соединение формул I-IV для применения при облегчении или лечении новообразований, инфекционных заболеваний, вызванных вирусными, бактериальными или грибковыми инфекциями или паразитарными заболеваниями.

Другой представленный в настоящем описании вариант осуществления представляет собой новое соединение формул I-IV или фармацевтическую композицию, содержащую новое соединение формул I-IV для применения при облегчении или лечении боли.

Используемые в настоящем описании термины "облегчение" или "облегчать" обозначают усовершенствование или улучшение заболевания, инфекции, состояния или боли, например, сделать более терпимой.

Используемые в настоящем описании термины "лечить" или "лечение" относятся как к терапевтическому, так и профилактическому лечению, поддерживающим или профилактическим мерам, причем целью является предупреждение нежелаемого физиологического состояния или получение лечебных или желаемых клинических результатов, включая снижение серьезности симптомов или уменьшение первопричин симптомов. Лечение предусматривает выявление клинически значимого ответа без избыточных уровней побочных эффектов.

Новообразования включают в себя без ограничения злокачественную опухоль и лейкоз. Вирусные заболевания включают в себя без ограничения те заболевания, которые вызваны вирусом, выбранным из группы, состоящей из аденовируса, альфавируса, арбовируса, астровируса, буньявируса, коронавируса, филовируса, флавивируса, гепаднавируса, герпесвируса, альфагерпесвируса, бетагерпесвируса, гаммагерпесвируса, норовируса, астровируса, калицивируса, ортомиксовируса, парамиксовируса, парамиксовирусов, рубулавируса, морбилливируса, паповавируса, парвовируса, пикорнавируса, афтовируса, кардиовируса, энтеровируса, коксаки-вируса, полиовируса, риновируса, вируса хлорелл, поксвируса, реовируса, ротавируса, ретровируса, ретровируса А-типа, вируса иммунодефицита, вирусов лейкемии, вирусов саркомы птиц, рабдовирусов, рубивируса и тогавируса. Воспалительные заболевания включают в себя без ограничения множественный склероз. Паразитарные заболевания включают в себя без ограничения болезнь Чагаса.

Другие представленные в настоящем описании варианты осуществления представляют собой новые соединения формул I-IV или их фармацевтические композиции для применения при облегчении или лечении боли.

Согласно другим вариантам осуществления любое из соединений согласно формулам I-IV или их фармацевтические композиции могут быть использованы в качестве медикамента.

Согласно дополнительным вариантам осуществления любое из соединений согласно формулам I-IV или их фармацевтические композиции могут быть использованы в терапии заболевания, вызванного бактериальной инфекцией, грибковой инфекцией, вирусным заболеванием, новообразованием, воспалительным заболеванием, паразитарным заболеванием или болью.

Согласно дополнительным вариантам осуществления любое из соединений согласно формулам I-IV или их фармацевтические композиции могут быть использованы для изготовления медикамента для лечения заболевания, вызванного бактериальной инфекцией, грибковой инфекцией, вирусным заболеванием, новообразованием, воспалительным заболеванием, паразитарным заболеванием или болью.

Другой представленный в настоящем описании вариант осуществления представляет собой способ доставки нуклеозид- или ациклический нуклеозид-монофосфатов или ANP в клетку с применением соединений формул I-IV или фармацевтических композиций, содержащих такие соединения. Этот способ может быть осуществлен in vitro или in vivo.

Дополнительные объекты, преимущества и новые признаки по изобретению станут очевидными специалистам настоящей области техники при рассмотрении их следующих примеров, которые не предусмотрены для ограничения.

В настоящем документе цитированы различные публикации, раскрытие которых включено в настоящий документ посредством ссылки. Такие публикации могут обеспечить иллюстративные, процедурные или другие подробности, дополнительные к изложенным выше. Ничего из этого не следует рассматривать как признание того, что настоящее раскрытие не уполномочено датировать прошедшим числом такую публикацию на основании предшествующего изобретения. Кроме того, даты представленной в настоящем описании публикации могут отличаться от дат существующей публикации, которую следует независимо подтвердить.

В то время как были представлены и описаны варианты осуществления изобретения, их модификации могут быть сделаны специалистом настоящей области техники без отклонения от сущности и идей раскрытия. Описанные в настоящем документе варианты осуществления являются только иллюстративными и не предусмотрены для ограничения. Многие изменения и модификации раскрытых в настоящем документе соединений и способов являются возможными и они находятся в пределах объема изобретения. Если диапазоны или ограничения точно заявлены, следует понимать, что такие точные диапазоны или ограничения включают в себя повторяющиеся диапазоны или ограничения подобной величины, подпадающие в точно заявленные диапазоны или ограничения. Следует понимать, что применение более широких терминов, таких как содержит, включает в себя, предусматривает, и т.п. обеспечивает поддержку ограничивающих терминов, таких как состоит из, состоит в основном из, состоит в большей степени из, и т.п. Следовательно, объем защиты не ограничен изложенным выше описанием, он ограничен только формулой изобретения, которая представлена далее, этот объем включает в себя все эквиваленты объекта формулы изобретения. Вся без исключения ранее заявленная формула изобретения включена в описание в качестве варианта осуществления изобретения. Таким образом, формула изобретения описана далее и вдобавок к раскрытым в настоящем документе вариантам осуществления.

ПРИМЕРЫ

1. 5'-арацитидиловая кислота N-пиридоксиламид

К раствору 2,02 г NaHCO₃ в 20 мл воды добавляли 2,41 г пиридоксамина дигидрохлорид с перемешиванием. В полученном прозрачном растворе при отстаивании в течение ночи образовался кристаллический осадок. Осадок собирали фильтрацией, промывали водой и сушили.

К раствору 1-β-D-арабинофуранозилцитоин 5'-монофосфата 1 (230 мг, 0,71 ммоль) в H₂O/трет-BuOH (1:1; 15 мл) добавляли пиридоксамин 2 (480 мг, 2,85 ммоль, 4 экв.), и реакционную смесь нагревали до температуры дефлегмации. Раствор дициклогексилкарбодиимида (588 мг, 2,85 ммоль, 4 экв.) медленно добавляли в трет-BuOH (11,4 мл, 0,25М) и кипятили с обратным холодильником всю ночь. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и образованные твердые вещества отфильтровывали. Выпариванием растворителей с последующей очисткой колоночной флеш-хроматографией (CH₂Cl₂/MeOH 9:1-1:1) получали желаемый продукт 3 (85 мг, 0,179 ммоль, 25% выход).

¹Н ЯМР (500 МГц, DMSO/D₂O обмен): δ 7,7 (s, 1H), 7,67 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 6,03 (d, J=4 Гц, 1H), 5,78 (d, J=7 Гц, 1H), 4,47 (s, 2H), 3,99 (m, 3H), 3,93 (m, 1H), (3,86-3,80 (m, 3H), 2,8 (s, 3H).

Удаление противоиона пиридоксамин-N,N'-дициклогексилкарбоксамидина

При вышеописанных условиях реакции при использовании H₂O/трет-BuOH в соотношении 1:5 получали продукт в виде соли карбоксамидина 4. Противоион удаляли с получением свободной кислоты следующим образом. Стеклянную колону загружали 5 мл Dowex 50WX8 (Н + форма) и тщательно промывали ДИ водой (5 CV). В колону загружали 0,2 ммоль соли карбоксамидина и колону промывали дополнительно водой (2 CV). В заключение продукт элюировали 2,5% раствором NH₄OH. Подходящие фракции выпаривали, и продукт сушили под высоким вакуумом с получением делаемого продукта 3.

2. N-пиридоксил-лизин-Fmoc (5)

К перемешиваемому холодному раствору H-Lys(Fmoc)-OMe HCl (1,047 г, 2,5 ммоль) в МеОН (10 мл) добавляли КОН (0,2 г) и пиридоксаль гидрохлорид (560 мг, 2,75 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч и затем при 0°С медленно добавляли NaBH₄ (133 мг, 3,5 ммоль). Смесь далее перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре и затем добавляли воду. Неочищенную смесь экстрагировали при помощи CH₂Cl₂, промывали солевым раствором, сушили (Na₂SO₄) и выпаривали под вакуумом. Очищением колоночной флеш-хроматографией (CH₂Cl₂/МеОН 9:1) получали желаемое соединение 5 (300 мг, 30% выход).

¹Н ЯМР (500 МГц, CDCl₃): δ 7,89 (s, 1H), 7,78 (d, J=5 Гц, 2Н), 7,60 (d, J=5 Гц, 2Н), 7,41 (m, 2Н), 7,32 (m, 2Н), 4,90 (s, 1H), 4,60 (m, 2Н), 4,43 (d, J=5 Гц, 2Н), 4,22 (m, 1H), 4,10 (dd, J=15, 80 Гц, 2Н), 3,79 (s, 3H), 3,34 (m, 1H), 3,20 (d, J=5 Гц, 1H), 2,48 (s, 3Н), 1,76 (m, 2Н), 1,53 (m, 2Н), 1,28 (m, 2Н).

3. Удаление Fmoc защиты

Fmoc защищенное соединение 5 (200 мг, 0,374 ммоль) добавляли к пиперидину (0,074 мл, 0,748 ммоль) в DMF (0,3 мл) при к. т. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем растворители выпаривали. Неочищенный продукт 6 использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.

4. Конъюгат пиридоксиллизина и арабиноцитидин-5'-фосфата (7)

Соединение 7 получали аналогично соединению 3.

5. N-пиридоксиламид 2'-деокси-2',2'-дифтор-5'-цитидиловая кислота (16, В6-GemMP)

Названное соединение получали согласно схеме, представленной ниже:

Реагенты и условия: i) Ac₂O/MeOH; ii) DMTCl/Py; iii) NH₄OH; iv) изо-PrCOCl/Py; v) Cl₂CHCOOH/DCM/MeOH; vi) (PhO)₂P(O)H/Py/MeCN; vii) TMSCl/Py, затем I₂, затем 2 (пиридоксамин)/TMSCl/Et₃N; вода; viii) NH₄OH

2'-деокси-2',2'-дифторцитидин 8 закупали у Carbosynth Ltd. Производное N-ацетила 9 получали аналогично описанному в [Ludwig, Peter S.; Schwendener, Reto A.; Schott, Herbert. Synthesis, 2002(16), 2387-2392]: смесь соединения 8 (6,94 г), Ас₂О (4,03 мл), воды (15,5 мл) и диоксана (126 мл) нагревали при 70°С в течение 2 ч 20 мин, концентрировали в вакууме и смешивали с ацетонитрилом. Осадок отфильтровывали, промывали ацетонитрилом и сушили в вакууме при 60°С в течение 18 ч с получением 6,30 г соединения 9. Концентрирование фильтрата и разбавление его ацетонитрилом повторяли еще дважды с получением 0,608 г и 0,112 г соединения 9. Объединенный выход составлял 7,02 г.

К раствору соединения 9 (7,02 г) в пиридине (37 г) добавляли DMTCl (8,18 г, 1,05 экв.) при 0°С и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь, концентрировали в вакууме при 50°С, распределяли между этилацетатом и 5% водным NaHCO₃. Органическую фазу сушили над Na₂SO₄, концентрировали в вакууме и очищали на колонке с силикагелем с применением градиента от 50% гексанов в DCM до 5% МеОН в DCM. Выход составлял 11,01 г (70,6%) чистого соединения 10. Соединение 10 (11,01 г) нагревали в запаянной пробирке с пиридином (33 мл) и концентрированным водным раствором аммиака (8 г) при 50°С в течение 3 ч, концентрировали в вакууме, распределяли между этилацетатом и 5% водным NaHCO₃. Органическую фазу отделяли, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме с получением чистого соединения 11 в количественном выходе.

Соединение 11 (2,6 г, 4,28 ммоль) растворяли в смеси пиридина (2,5 мл) и ацетонитрила (2,5 мл), и обрабатывали изо-PrCOCl (0,994 мл, 1,1 экв.) при 0-25°С до завершения бис-ацилирования согласно ТСХ-анализу (5% МеОН в DCM) (приблизительно 2 ч). Реакционную смесь распределяли между этилацетатом и 5% водным NaHCO₃, органическую фазу отделяли, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме с получением соединения 12 в виде белой твердой пены (3,00 г), которую использовали без дальнейшей очистки.

Для удаления защитной группы DMT соединение 12 (3,00 г) обрабатывали 10% раствором МеОН в DCM (40 мл), содержащим Cl₂HCCOOH (3% об./об.) до завершения снятия защитных групп с соединения 12 (6 ч при комнатной температуре и всю ночь при 0°С).

Реакционную смесь нейтрализовали 5% водным NaHCO₃ и экстрагировали DCM. Органическую фазу отделяли, сушили над Na₂SO₄, концентрировали в вакууме и очищали на силикагеле с применением градиента МеОН (0-4%) в DCM с получением соединения 13 с 68% выходом.

Соединение 13 (1,17 г) обрабатывали (PhO)₂P(O)H (1,66 мл, 3 экв.) в пиридине при 0-25°С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, затем трижды совместно выпаривали с толуолом, дважды с ацетонитрилом, дважды с DCM и в заключение совместно выпаривали с 5 г силикагеля и DCM с получением образца, предварительно загруженного в силикагель. Это вещество использовали в начальной зоне флеш-колонки и элюировали градиентом от 2% TEA, 48% гексанов в DCM до 2% TEA, 4% МеОН в DCM. После сушки в вакууме над P₂O₅ получали ТСХ-чистое соединение 14 с выходом 2,09 г. Тем не менее 31Р ЯМР спектр показывал ~25% загрязнения соединения 14 PhOPO₂H. Эту смесь использовали как есть на следующей стадии.

Соединение 14 (1,83 г) растворяли в пиридине (6,5 мл) и обрабатывали Me₃SiCl (1,2 мл) в течение 0,5 ч при 0-25°С с энергичным перемешиванием с получением суспензии белого твердого вещества. Затем при 0°С по каплям добавляли концентрированный раствор йода в THF в течение ~1 мин с энергичным перемешиванием. Первые капли йода обесцвечивались моментально, тем не менее готовый раствор был коричневатым. Еще через 2 мин перемешивания реакционную смесь обрабатывали смесью, состоящей из свободного основания пиридоксамина (0,793 г), Me₃SiCl (0,75 мл), TEA (2,1 мл) и пиридина (полученный предварительно с перемешиванием в течение 0,5 ч при комнатной температуре перед применением). Через 0,5 ч объединенную реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали на силикагеле (DCM→DCM, 15% МеОН, 2% TEA) с получением амидата 15 с выходом 0,189 г.

Соединение 15 (0,189 г) обрабатывали смесью конц. водн. аммиака и метанола (1:2 об./об.) при комнатной температуре в течение 48 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали на силикагеле (изо-PrOH, 4% NH₄OH→изо-PrOH, 4% NH₄OH, 40% МеОН) с получением 0,134 г соединения 16 в виде сольвата с изо-PrOH. Для удаления изопропанола соединение 16 неоднократно лиофилизировали из водного раствора, пока не станет ни одной изо-Pr группы, определяемой в спектре 1Н ЯМР (5 раз). Конечный выход 0,054 г.

6. Антипролиферативная активность 3 и 16, устойчивость в среде роста и активность in vivo

Краткое описание

Получали N-пиридоксиламид 5'-арацитидиловой кислоты (В6-araCMP, соединение 3) и N-пиридоксиламид 2'-деокси-2',2'-дифтор-5'-цнтидиновой кислоты (В6-GemMP), представленные как стабильные в буферах и среде в течение времени курса экспериментов, проявляющие ускоренное поглощение клетками, улучшенную противопролиферативную активность и ингибированное развитие опухоли in vivo. Предварительные данные на основе клетки были произведены из трех клеточных линий, относящихся к поджелудочной железе (Capan2, Panc1 и MiaPaca), двух клеточных линий, относящихся к раку предстательной железы (РС3 и 22Rv1) и клеточной линии множественной миеломы грызуна 5TGM1; данные in vivo были произведены у мышей с ослабленным иммунитетом с подкожными имплантатами клеток Capan2.

Способы и данные

Сильная наблюдаемая антипролиферация (клеточные линии рака предстательной железы и рака поджелудочной железы): В каждую лунку 96-луночного планшета вносили 50000 клеток в 50 мкл среды (модифицированный HyClone IMDM + 4 мМ L-Glu, HEPES с 10% эмбриональной бычьей сывороткой), к которой добавляли 50 мкл среды, содержащей или свободный нуклеозид (цитарабин или гемцитабин), или конъюгат (соединение 3 или 16), что достигает следующих конечных концентраций: 0, 0,1, 0,2, 0,5, 1,3, 10 или 100 мкМ. Клетки инкубировали при 37°С с 5% CO₂ в течение 24, 48 или 72 ч (направления данные одинаковые для всех инкубационных периодов, несмотря на то, что представлены данные для 48 ч). Набор для пролиферативного анализа Promega на основе MTS (Promega; CellTiter 96® AQ_ueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTS)) использовали согласно инструкциям производителя. Кратко в каждую лунку добавляли 100 мкл реагента MTS/PMS и оставляли инкубироваться приблизительно 2 ч при 37°С с получением колориметрического индикатора активного метаболизма клетки. Проводили количественный анализ считыванием поглощения в видимой области при 415 нм. Данные (фиг. 1) нормализовали к диапазону поглощения, определенному из диапазона от минимального поглощения (среда без клеток с лекарственным средством) до максимального поглощения (среда с клетками при отсутствии лекарственного средства). Все точки измеряли по три раза и усредняли перед нормализацией до 0-100% диапазона. Данные наносили на график (фиг. 1) как процент ингибирования против логарифма концентрации соединения. Если возможен сигмоидальный подбор кривой, использовали логическое модельное уравнение нелинейной регрессии с четырьмя параметрами для образования кривых и значений IC₅₀. Как показано на вставках фиг. 1 и таблицы, конъюгаты пиридоксамина часто проявляют значительно улучшенную силу в некотором количестве клеточных линий. Представленный на фиг. 2 эксперимент "пульс-чейз" проводили, как описано выше, с одним изменением, что или при 10 или 60 моменте времени после добавления лекарственного средства среду заменяли средой без лекарственного средства и клетки оставляли далее инкубироваться в целом 48 ч. На фиг. 2 на левом графике представлены результаты 10 или 60 минут воздействия на Gem или В6-GemMP в 22Rv1 клетках с 48-часовой после-инкубации в свежей среде перед анализом MTS. Точки данных собирали в пяти экземплярах; «усы» показывали стандартные отклонения. На правом графике представлены результаты 60-минутного пульса соединений в диапазоне концентраций в клетках Capan2. При сигмодальном подборе кривой использовали логическое модельное уравнение нелинейной регрессии с четырьмя параметрами.

Сильная наблюдаемая антипролиферация (клеточная линия множественной миеломы грызуна): В каждую лунку 96-луночного планшета вносили 50000 5TGM1 клеток в 50 мкл среды (модифицированный HyClone IMDM + 4 мМ L-Glu, HEPES с 10% эмбриональной бычьей сывороткой), к которой добавляли 50 мкл среды, содержащей цитарабин или соединение 3 (MU004-26), что достигает следующих конечных концентраций: 0, 0,1, 0,2, 0,5, 1, 3, 10 или 100 мкМ. Клетки инкубировали при 37°С с 5% CO₂ в течение 24, 48 или 72 ч (направления данные одинаковые для всех инкубационных периодов, несмотря на то, что представлены данные для 72 ч). Набор для пролиферативного анализа Promega на основе MTS использовали согласно инструкциям производителя. Кратко, в каждую лунку добавляли 100 мкл реагента MTS/PMS и оставляли инкубироваться приблизительно 2 ч при 37°С с получением колориметрического индикатора активного метаболизма клетки. Проводили количественный анализ считыванием поглощения в видимой области при 415 нм. Данные (фиг. 3) нормализовали к диапазону поглощения, определенному из диапазона от минимального поглощения - среда без клеток с лекарственным средством - до максимального поглощения - среда с клетками при отсутствии лекарственного средства. Все точки измеряли по три раза и усредняли перед нормализацией до 0-100% диапазона. Данные наносили на график (фиг. 3) как процент ингибирования против логарифма концентрации соединения. Как представлено на фиг.3, цитарабин IC₅₀=0,5 мкМ, тогда как конъюгат IC₅₀=1 мкМ.

Наблюдаемая в среде стойкость коньюгата: Видимо, быстрое высвобождение нуклеозида или нуклеотида из конъюгата в среду для роста было исключено. Для исследования этого случая конъюгат 3 инкубировали в изотоническом солевом растворе, стерильной среде или среде, кондиционированной 3-дневным клеточным ростом. В кондиционированной среде клетки удаляли из среды центрифугированием, и в среду добавляли конъюгат и инкубировали при 37°С в течение 0,25, 24 и 72 ч. Белки и большие молекулы удаляли путем осаждения 5:4:1 объем : объем : объем смесью ацетонитрила : метанола : 1% муравьиной кислоты и последующим центрифугированием. Супернатант (100 мкл инъекционного объема) подвергали анализу ВЭЖХ на колонке DNA Рас РА 200 (Dionex, USA) с градиентом 400 мМ ацетата аммония в 20% ацетонитриле (3-40% за 10 мин). При инкубировании три раза не было обнаружено ни свободного цитарабина, ни свободного пиридоксамина (или любое другое соединение на основе пиридоксила).

На фиг. 1 показано, что соединение В6-GemMP в клеточных линиях поджелудочной железы является в 2-100 раз более сильным, чем Gem отдельно (верхний ряд); и до 7 раз более сильным в клеточной линии рака предстательной железы 22Rv1. Кроме того, соединение В6-araCMP выглядит в >10 раз более сильным, чем araC в клетках 22Rv1. Не все клеточные линии являются более чувствительными к конъюгатам, чем исходное лекарственное средство, как показано в линии рака предстательной железы РС3 с Gem (чувствительность + 3 раза). Тем не менее такие клетки все еще чувствительны к соединениям подобным образом, что и исходное лекарственное средство, и это выделяет тот факт, что конъюгирование не блокирует чувствительность к лекарственному средству; при этом все еще допускается новый путь включения клеткой.

На фиг. 2 конъюгаты были предназначены для использования альтернативных механизмов включения и для обеспечения фосфорилированной формы аналогов нуклеозида, из которого они получены, тем самым потенциально позволяя более быстрое влияние на клетки. Проводили испытание с использованием 10- или 60-минутного пульсирующего воздействия соединений на клетки 22Rv1 с последующим 48-часовым инкубированием в свежей среде. Как представлено на фиг. 2, пульс в течение всего 10 мин выявил измеримую антипролиферацию в клетках 22Rv1 только с конъюгатом. В случае при 100 мкМ пульса в течение 60 мин конъюгат снижал пролиферацию более чем на 40%, чем свободный гемцитабин. Что интересно, при 100 мкМ пульс свободного гемцитабина стимулировал 10% пролиферацию, как было видно при 48-часовом воздействии на более низкие концентрации (0,1-10 мкМ). В клетках Capan2 при всех исследуемых концентрациях наблюдается тенденция повторного предположения более быстрого эффекта в случае конъюгата по сравнению со свободным Gem. Конъюгаты относительно большей силы с более коротким воздействием на клетку могут быть частично функцией обеспечения монофосфорилированной формы лекарственного средства; тем не менее неожиданное наблюдение повышенной силы только при 10-минутном воздействии конъюгата дает предположение о том, что транспортер витамина может более быстро перемещать конъюгат в клетку относительно традиционного пути включения нуклеозида. Ожидается, что преобладающий путь включения нуклеозида, человеческого уравновешивающего транспортера нуклеозида (hENT), будет более медленно транспортировать конъюгат (если вообще будет) относительно неконъюгированного нуклеозида и, таким образом, обеспечит неожиданное новое свойство подхода конъюгирования витамина-В6.

На фиг. 4 представлен конъюгат витамина В6, и гемцитабин является эффективным в мышиной модели рака поджелудочной железы человека. В этой модели голым мышам с нарушенным иммунитетом вводили подкожно клеточную линию поджелудочной железы человека Capan-2 (~10^∧6 клеток/100 мкл). После того, как был обнаружен рост опухоли, животных располагали в случайном порядке и вводили или изотонический солевой раствор для контроля носителем отдельно, или вместе с конъюгатом гемцитабина (20 мг/кг; 3 раза в неделю). Это показывало стабилизированный рост опухоли при конъюгате гемцитабина относительно необработанного роста статистически значимым способом.

Источники информации

Stryer L. "Flow of Genetic Information". Biochemistry, Fourth Ed., Ch. 5, pp. 95-97(1995).

Stryer L. "DNA and RNA: Molecules of Heredity", Biochemistry, Fourth Ed., Ch. 4. pp. 75, 76, 80-83 (1995).

Siddiqui et al. "Design and Synthesis of Lipophilic Phosphoramidate d4T-MP Prodrugs Expressing High Potency Against HIV in Cell Culture: Structural Determinants for in Vitro Activity and QSAR", J Med Chem 42 (1999), pp. 4122-4128.

Remy et al. "Studies on fluroinated pyrimidines. XIV. The synthesis of derivatives of 5-fluoro-2'-deoxyuridine 5'-phosphate and related compounds"; J Org Chem 27: 2491-2500 (1962).

Lehsten et al. "An improved procedure for the synthesis of nucleoside amidates"; Organic Process Research & Development 6: 819-822 (2002).

Juodka et al. "Oligonucleotides and nucleotide-peptide. XXXIV. Synthesis and some properties of complex nucleotidyl (oligonucleotidyl)-(P→N)-aminoacids (peptides) and their ehtyl esters"; J Carbohydrates Nucleosides Nucleotides 6(4): 333-357 (1979).

McGuigan et al. "Synthesis and Evaluation of some masked phosphate esters of the anti-herpesvirus drug 882C (Netivudine) as potential antiviral agents", Antiviral Cheimistry & Chemotherapy 9: 233-243 (1998).

Juodka et al. "Oligonucleotides and nucleotide-peptides. XXXVII. On the Mechanism of Hydrolysis of Uridylyl-(5'…N)-amino acids. Intramolecular catalysis by the α-carboxyl group of amino acids"; J Carbohydrates Nucleosides Nucleotides 8(6): 519-535 (1981).

Negishi et al. "N4-Aminocytidine, a Nucleoside Analog that has an Exceptionally High Mutagenic Activity", Nucleic Acids Research 11(15): 5223-5233 (1993).

Liorancaite et al. "Synthesis and Some Properties of Oligonucleotidyl-(Pm→N)-Serines", Nucleic Acids Symposium Series 9: 215-18 (1981).

Zhou et al. "Simultaneous Formation of Peptides and Nucleotides from N-Phosphothreonine", Origins of Life and Evolution of the Bioshphere 26: 547-560 (1996).

Gromova et al. "Optical Rotary Dispersion and Circular Dichroism of Mono-and Oligonucleotide-Amino Acids (Amidates)", Biochim Biophys Acta 240: 1-11 (1971).

Joudka et al. "Oligonucleotides and Nucleotide-Peptides. XXXV. Some Properties of Nucleotidyl-(5'→N)-Amino Acid Esters Differing in Amino Acid and Nucleotide Components 1)", J Carbohydrates Nucleosides Nucleotides 8 (1): 19-39 (1981).

Abraham et al. "Synthesis and Biological Activity of Aromatic Amino Acid Phosphoramidates of 5-Fluoro-2'-deoxyuridine and l-beta-Arabinofuranosylcytosine: Evidence of Phosphoramidase Activity", J Med Chem 39: 4569-4575 (1996).

Sa Harris et al. "Synthesis and antiviral evaluation of phosphoramidate derivatives of (E)-5-(2-bromovinyl)-2'-deoxyuridine", Antiviral Chemistry and Chemotherapy, vol. 12 (2001), pp. 293-300.

Edward J. McIntee et al. "Amino Acid Phosphoramidate Nucleosides: Potential ADEPT/GDEPT Substrates", Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 11 (2001), pp. 2803-2805.

Lisa J. Whalen et al. "Synthesis and Evaluation of Phosphoramidate Amino Acid-Based Inhibitors of Sialyltransferases", Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 13 (2003), pp. 301-304.

David В. Lackey et al. "Enzyme-catalyzed therapeutic agent (ECTA) design: activation of the antitumor ECTA compound NB 1011 by thymidylate synthase". Biochemical Pharacology, 61 (2001), pp. 179-189.

Harris et al. Antiviral Chemistry and Chemotherapy, vol. 12, 2001, pp. 293-300.

Изобретение относится к соединениям, композициям на их основе для лечения инфекций и новообразований со структурами

где R¹ представляет собой остаток соединения, выбранного из группы, состоящей из цитарабина, флударабина, гемцитабина, клофарабина, кладрибина, видазы, дакогена, пентостатина и кладрибина или аристеромицина, ацикловира, ганцикловира, пенцикловира, адефовира, цидофовира, тенофовира, зидовудина и ламивудина; X и Y независимо представляют собой О, S или NH; и R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, фенила, гетероарила и остатка фрагмента витамина В6, выбранного из

где гетероарил представляет собой ароматическое кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой остаток фрагмента витамина В6, L представляет собой алкил. Предложены новые эффективные вещества для лечения вирусных и онкологических заболеваний. 12 н. и 4 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл., 6 пр.

1. Соединение общей структуры

где R¹ представляет собой остаток соединения, выбранного из группы, состоящей из цитарабина, флударабина, гемцитабина, клофарабина, кладрибина, видазы, дакогена, пентостатина и кладрибина;

X и Y независимо представляют собой О, S или NH; и

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, фенила, гетероарила и остатка фрагмента витамина В6, выбранного из

где гетероарил представляет собой ароматическое кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и

где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой остаток фрагмента витамина В6.

2. Соединение общей структуры

где R¹ представляет собой остаток соединения, выбранного из группы, состоящей из аристеромицина, ацикловира, ганцикловира, пенцикловира, адефовира, цидофовира, тенофовира, зидовудина и ламивудина;

X и Y независимо представляют собой О, S или NH; и

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, фенила, гетероарила и остатка фрагмента витамина В6, выбранного из

где гетероарил представляет собой ароматическое кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и

где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой остаток фрагмента витамина В6.

3. Соединение общей структуры

где R¹ представляет собой остаток соединения, выбранного из группы, состоящей из цитарабина, флударабина, гемцитабина, клофарабина, кладрибина, видазы, дакогена, пентостатина, и кладрибина;

X, Y и Z независимо представляют собой О, S или NH;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, фенила, гетероарила и остатка фрагмента витамина В6, выбранного из

где гетероарил представляет собой ароматическое кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и

где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой остаток фрагмента витамина В6; и

L представляет собой алкил; или

соединение общей структуры

где R¹ представляет собой остаток соединения, выбранного из группы, состоящей из цитарабина, флударабина, гемцитабина, клофарабина, кладрибина, видазы, дакогена, пентостатина и кладрибина;

X, Y и Z независимо представляют собой О, S или NH;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, фенила, гетероарила и остатка фрагмента витамина В6, выбранного из

где гетероарил представляет собой ароматическое кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и

где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой остаток фрагмента витамина В6; и

L представляет собой алкил; или

соединение общей структуры

4. Соединение общей структуры

где R¹ представляет собой остаток соединения, выбранного из группы, состоящей из аристеромицина, ацикловира, ганцикловира, пенцикловира, адефовира, цидофовира, тенофовира, зидовудина и ламивудина;

X, Y и Z независимо представляют собой О, S или NH;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, фенила, гетероарила и остатка фрагмента витамина В6, выбранного из

где гетероарил представляет собой ароматическое кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и

где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой остаток фрагмента витамина В6; и

L представляет собой алкил; или

соединение общей структуры

где R¹ представляет собой остаток соединения, выбранного из группы, состоящей из аристеромицина, ацикловира, ганцикловира, пенцикловира, адефовира, цидофовира, тенофовира, зидовудина и ламивудина;

X, Y и Z независимо представляют собой О, S или NH;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, фенила, гетероарила и остатка фрагмента витамина В6, выбранного из

где гетероарил представляет собой ароматическое кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота, и

где по меньшей мере один из R² и R³ представляет собой остаток фрагмента витамина В6; и

L представляет собой алкил.

5. Фармацевтическая композиция для облегчения или лечения новообразования, содержащая соединение по любому из пп. 1 и 3 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, наполнитель или их комбинацию.

6. Фармацевтическая композиция для облегчения или лечения вирусного заболевания, содержащая соединение по любому из пп. 2 и 4 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, наполнитель или их комбинацию

7. Способ доставки соединения в клетку с применением соединений по любому из пп. 1 и 3, где соединение, которое должно быть доставлено, выбрано из группы, состоящей из цитарабина, флударабина, гемцитабина, клофарабина, кладрибина, видазы, дакогена, пентостатина и кладрибина.

8. Способ доставки соединения в клетку с применением соединений по любому из пп. 2 и 4, где соединение, которое должно быть доставлено, выбрано из группы, состоящей из аристеромицина, ацикловира, ганцикловира, пенцикловира, адефовира, цидофовира, тенофовира, зидовудина и ламивудина.

9. Способ облегчения или лечения вирусного заболевания, включающий введение страдающему от указанного заболевания субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 2 и 4 или композиции по п. 6.

10. Способ по п. 9, при котором указанное вирусное заболевание вызвано вирусом, выбранным из группы, состоящей из альфавируса, арбовируса, астровируса, буньявируса, коронавируса, филовируса, флавивируса, гепаднавируса, герпесвируса, альфагерпесвируса, бетагерпесвируса, гаммагерпесвируса, норовируса, астровируса, калицивируса, ортомиксовируса, парамиксовируса, парамиксовирусов, рубулавируса, морбилливируса, паповавируса, парвовируса, пикорнавируса, афтовируса, кардиовируса, энтеровируса, коксаки-вируса, полиовируса, риновируса, вируса хлорелл, поксвируса, реовируса, ротавируса, ретровируса, ретровируса А-типа, вируса иммунодефицита, вируса лейкемии, вируса саркомы птиц, рабдовируса, рубивируса и тогавируса.

11. Способ по п. 9, при котором вирусное заболевание представляет собой вирусную инфекцию гепатита С или вирусную инфекцию ВИЧ.

12. Способ облегчения или лечения новообразования, включающий введение страдающему от указанного заболевания субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1 и 3 или композиции по п. 5.

13. Способ по п. 12, при котором указанное новообразование представляет собой злокачественную опухоль.

14. Способ по п. 12, при котором новообразование представляет собой лейкоз.

15. Применение соединения по любому из пп. 1 и 3 или фармацевтической композиции по п. 5 для лечения новообразования.

16. Применение соединения по любому из пп. 2 и 4 или фармацевтической композиции по п. 6 для лечения вирусного заболевания.