СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК A61K31/519 A61K39/395 A61P35/00 

Область изобретения

Область относится к ингибиторам фосфодиэстеразы 1 (PDE1), применяемым для лечения некоторых видов рака и опухолей, таких как рак толстой кишки. Область также относится к введению ингибиторов фосфодиэстеразы 1 (PDE1) для лечения некоторых видов рака и опухолей, таких как рак толстой кишки.

Уровень изобретения

Колоректальный рак является третьим наиболее часто диагностируемым раком у мужчин и вторым среди женщин во всем мире, и на его долю приходится около 50000 смертей в год. В отличие от тенденций заболеваемости, снижение показателей смертности от колоректального рака наблюдается во многих странах и, скорее всего, связано со скринингом колоректального рака, снижением распространенности факторов риска и/или улучшением методов лечения. Однако, когда встречается распространенное злокачественное новообразование, эти случаи не отвечают на радикальное лечение.

Дополнительно подсчитано, что метастазы вызывают 90% смертей от рака во всем мире. В большинстве случаев метастатические опухолевые клетки развивают пути уклонения от иммунного ответа и становятся устойчивыми к терапии. Устойчивость к терапии рака может быть присуща опухолевым клеткам, но она часто передается или усиливается незлокачественными клетками, составляющими микроокружение опухоли (TME). TME состоит из тканево-резидентных клеток, стромальных клеток и других клеток, рекрутированных опухолью, и поэтому может включать эндотелиальные клетки, перициты, фибробласты, мезенхимальные стволовые клетки и различные иммунные клетки, включая регуляторные T (Treg) клетки, тучные клетки, нейтрофилы, супрессорные клетки миелоидного происхождения и ассоциированные с опухолью макрофаги. Эти клетки способствуют ангиогенезу опухоли, инвазии раковых клеток и/или нарушают иммунный надзор. Макрофаги являются одним из наиболее распространенных типов опухолеассоциированных клеток. Первоначально исследователи предполагали, что эти иммунные клетки являются частью реакции организма на отторжение опухоли, и действительно, основной проверкой развития рака является наблюдение иммунной системы и реакция на наличие рака клетками врожденной иммунной системы (например, макрофаги, нейтрофилы), а также клетками, связанными с адаптивным иммунным ответом (например, Т- и В-клетки).

Однако в некоторых случаях рак способен уклоняться и кооптировать иммунную систему, так что вместо того, чтобы атаковать опухоль, эти клетки иммунной системы становятся частью системы поддержки и защиты опухоли. Иммунное TME может быть модифицировано для поддержки опухоли и содействия ее прогрессированию при одновременном подавлении цитотоксичности, опосредованной иммунными клетками. Существенные клинические и экспериментальные данные указывают на то, что макрофаги, в большом количестве присутствующие в большинстве типов опухолей, играют важную регулирующую роль в содействии прогрессированию опухоли до злокачественного новообразования. Макрофаги как в первичных опухолях (макрофаги, ассоциированные с опухолью, или ТАМ), так и в метастатических опухолях (макрофаги, ассоциированные с метастазами, или МАМ) присутствуют в большинстве солидных опухолей и могут быть связаны с метастазированием опухоли. Накопление ТАМ, МАМ и их клеток-предшественников, по-видимому, обусловлено хемокиновыми лигандами, высвобождаемыми опухолевыми и стромальными клетками. Например, есть доказательства того, что ТАМ и МАМ происходят, по меньшей мере частично, из CCR2-экспрессирующих моноцитов, рекрутированных CCL2-экспрессирующими опухолевыми клетками и/или CCL2-экспрессирующими стромальными клетками. Однако точные механизмы полностью не определены, и другие лиганды CCR2, такие как CCL12, цитокины, такие как VEGF и CSF1, и другие хемоаттрактантные сигналы, такие как CCL5-CCR5, CCL20-CCR6, CXCL12-CXCR4, могут обеспечивать альтернативный или дополнительный хемоаттрактантный путь для рекрутирования ТАМ. Таким образом, усилия по нацеливанию на специфические хемоаттрактантные рецепторы или лиганды, например, специфическое блокирование взаимодействия CCR2-CCL2, не были полностью эффективными, вероятно, потому, что раковые заболевания способны использовать альтернативные пути.

Было идентифицировано одиннадцать семейств фосфодиэстераз (PDE), но только PDE в семействе I, Са2+/кальмодулин-зависимые фосфодиэстеразы (CaM-PDE), которые активируются Са2+/кальмодулином и, как было показано, опосредуют сигнальные пути кальция и циклических нуклеотидов (например, cGMP и cAMP). Три известных гена CaM-PDE, PDE1A, PDE1B и PDE1C, экспрессируются в тканях центральной нервной системы. PDE1A экспрессируется в головном мозге, легком и сердце. PDE1B в основном экспрессируется в центральной нервной системе, но также обнаруживается в моноцитах и нейтрофилах и, как было показано, участвует в воспалительных реакциях этих клеток. PDE1C экспрессируется в обонятельном эпителии, гранулярных клетках мозжечка, стриатуме, сердце и гладкой мускулатуре сосудов. Было показано, что PDE1C является основным регулятором пролиферации гладкой мускулатуры гладкой мускулатуры человека.

Фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов подавляют внутриклеточную передачу сигналов cAMP и cGMP путем гидролиза этих циклических нуклеотидов до соответствующих 5'-монофосфатов (5’AMP и 5’GMP), которые неактивны в отношении внутриклеточных сигнальных путей. Как cAMP, так и cGMP являются центральными внутриклеточными вторичными мессенджерами и играют роль в регуляции многочисленных клеточных функций. PDE1A и PDE1B предпочтительно гидролизуют cGMP по сравнению с cAMP, тогда как PDE1C проявляет примерно одинаковый гидролиз cGMP и cAMP.

Что касается, в частности, PDE1C, последние данные указывают на то, что PDE1C является геном, ассоциированным с пролиферацией, поскольку он экспрессируется исключительно в пролиферирующих сосудистых гладкомышечных клетках. (Rybalkin S.D, et al., Calmodulin-stimulated cyclic nucleotide phosphodiesterase (PDE1C) is induced in human arterial smoothmuscle cells of the synthetic, proliferative phenotype. J Clin Invest 1997;100:2611-2621.) Кроме того, были единичные сообщения об экспрессии PDE1C вместе с другими подтипами PDE в экспериментальных моделях опухолей, таких как меланома (Watanabe Y, et al., Phosphodiesterase 4 regulates the migration of B16-F10 melanoma cells. Exp Ther Med 2012;4:205-210.), нейробластома (Jang IS, Juhnn YS. Adaptation of cAMP signaling system in SH-SY5Y neuroblastoma cells following expression of a constitutively active timulatory G protein alpha, Q227L Gsalpha. Exp Mol Med 2001;33:37-45), и остеосаркома (Ahlström M, et al., Cyclic nucleotide phosphodiesterases (PDEs) in human osteoblastic cells; the effect of PDE inhibition on cAMP accumulation. Cell Mol Biol Lett 2005;10:305-319).

Пролиферация, миграция, инвазия в ткани и воспаление, способствующие развитию опухоли, считаются благоприятными характеристиками развития рака. Каждый из этих процессов является зависящим от времени, переменным и сложным, включающим множество путей передачи сигнала. Считается, что мультитаргетные препараты приносят больше пользы, чем однотаргетные препараты, имеют приемлемые профили переносимости и активны в отношении более широкого спектра типов опухолей. Регуляция передачи сигналов циклических нуклеотидов правильно рассматривается как совокупность нескольких компонентов путей, участвующих в различных аспектах функции опухолевых клеток. Нарушение образования cAMP описано при различных онкологических патологиях. Попытки напрямую регулировать циклические нуклеотиды в раковых клетках, будучи антипролиферативными, не были продуктивными из-за высокой цитотоксичности. Необходимы новые, более безопасные и селективные стратегии модуляции cAMP в раковых клетках.

Сущность изобретения

Авторы изобретения ранее показали, что ингибирование активности PDE1 с использованием раскрытых в настоящее время соединений может безопасно восстановить функцию цАМФ при широком спектре патологических состояний, включая модели нейродегенерации и нейровоспаления, сердечной недостаточности, легочной гипертензии и периферического воспаления, а также у людей с определенными заболеваниями. Совсем недавно авторы изобретения показали, что ингибиторы PDE1 препятствуют клеточной миграции микроглии и моноцитов. Новейшие данные указывают, что PDE1, особенно изоформа PDE1C, сверхэкспрессируется в экспериментальных моделях опухолей, таких как меланома, нейробластома и остеосаркома. Кроме того, было продемонстрировано фокальное геномное избыточное представительство PDE1C в клетках мультиформной глиобластомы (GBM). Геномное усиление PDE1C связано с повышенной экспрессией в клеточных культурах, происходящих из GBM, и имеет важное значение для запуска клеточной пролиферации, миграции и инвазии в раковые клетки.

Многие типы раковых клеток сверхэкспрессируют активность PDE1, которая идентифицируется с помощью различных биомаркеров, таких как повышенная экспрессия РНК, количество копий ДНК, связывание PDE1 (ПЭТ или радиоизотопное удержание молекул ингибитора PDE1) или ферментативная активность. Эти раковые клетки также демонстрируют низкий уровень cAMP, который может быть увеличен ингибиторами PDE1. Такие характеристики можно лечить с помощью ингибиторов PDE-1 отдельно или в сочетании с химиотерапией, генной терапией и/или иммунологическими подходами. Ингибирование PDE1 провоцирует апоптозную гибель клеток, предотвращает миграцию, ограничивает метастазирование и уменьшает воспаление. Таким образом, ингибиторы PDE1 синергичны с химиотерапевтическими и иммунологическими подходами.

Не ограничиваясь какой-либо теорией, считается, что ингибирование изоформ селективных PDE1, повышающее уровень внутриклеточного cAMP (и/или cGMP), индуцирует апоптоз и остановку клеточного цикла в широком спектре опухолевых клеток и регулирует микроокружение опухоли, предотвращая миграцию клеток, воспаление и тканевую инвазию. Таким образом, разработка и клиническое применение ингибиторов, специфичных для отдельных PDE1 и ее изоформ, в частности, PDE1C, может избирательно восстанавливать нормальную внутриклеточную передачу сигналов, обеспечивая противоопухолевую терапию с уменьшенными побочными эффектами. Не ограничиваясь теорией, полагают, что ингибиторы PDE1 по настоящему изобретению ингибируют рекрутинг клеток иммунной системы, включая макрофаги и другие клетки, к раку, и ингибируют метастазирование, опухолевой ангиогенез, инвазию раковых клеток и нарушение иммунного надзора, обеспечиваемого рекрутированными клетками. PDE1 ингибирует не только CCL2, но и другие цитокины и хемокины, которые, как полагают, участвуют в этом рекрутинге, и поэтому ожидается, что они будут более эффективными, чем методы лечения, такие как моноклональные антитела или другие специфические ингибиторы взаимодействия CCR2-CCL2.

Изобретение также предусматривает применение ингибитора PDE1 для лечения рака или опухоли, включая, например, карциномы, меланомы и астроцитомы. Более того, снижение уровней cAMP (или cGMP) может быть результатом сверхэкспрессии изоформ PDE1 при различных онкологических патологиях. Ингибирование изоформ селективных PDE1, которое повышает уровень внутриклеточного cAMP (и/или cGMP), индуцирует апоптоз и остановку клеточного цикла в широком спектре опухолевых клеток и регулирует микроокружение опухоли, предотвращая миграцию клеток, воспаление и тканевую инвазию. Следовательно, разработка и клиническое применение ингибиторов, специфичных для отдельного PDE1, могут избирательно восстанавливать нормальную внутриклеточную передачу сигналов, обеспечивая противоопухолевую терапию с уменьшенными побочными эффектами.

Предыдущие исследования показали, что PDE1 (т.е. PDE1C) значительно сверхэкспрессируется в опухолевой среде пациентов с глиобластомой по сравнению со здоровыми пациентами (т.е. теми, кто не страдает глиобластомой). Было показано, что миРНК-опосредованный сайленсинг PDE1C ингибирует пролиферацию и инвазию в клеточных культурах глиобластомы, полученных от пациента. Без ограничения какой-либо теорией, ингибирование PDE1 может быть эффективным при терапевтическом вмешательстве при некоторых видах рака или опухолях, таких как глиобластома.

В различных вариантах осуществления настоящая заявка обеспечивает способ лечения рака толстой кишки (например, колоректального рака), включающий введение фармацевтически приемлемого количества ингибитора PDE1 субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PDE1 вводят в комбинации с противоопухолевым средством.

В различных вариантах осуществления настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединения по настоящему изобретению, полученные с использованием обычных разбавителей или эксципиентов и методов, известных в данной области техники. Таким образом, пероральные лекарственные формы могут включать таблетки, капсулы, растворы, суспензии и тому подобное.

В различных вариантах осуществления настоящее изобретение также обеспечивает ингибиторы PDE1 в соответствии с формулами I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII, описанными в настоящем документе ниже, в свободной форме или в форме соли для применения при лечении состояния, выбранного из рака или опухоли, ингибирования пролиферации, миграции и/или инвазии опухолевых клеток или лечения рака толстой кишки, например, колоректального рака.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На фиг. 1 показан эффект ингибирования PDE1 на раковые клетки мыши CT26 в образцах, обработанных соединением 1, и необработанном контроле.

На фиг. 2 показано изменение относительных долей иммунных клеток в раковых клетках мыши CT26 в образцах, обработанных соединением 1, и в необработанном контроле.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соединения для применения в способах по настоящему изобретению

В одном варианте осуществления ингибиторы PDE1 для применения в способах лечения и профилактики, описанных в настоящем документе, представляют собой селективные ингибиторы PDE1.

Ингибиторы PDE1

В одном варианте осуществления изобретение предусматривает, что ингибиторы PDE1 для применения в способах лечения и профилактики, описанных в настоящем документе, представляют собой соединения формулы I:

где

(i) R₁ представляет собой Н или C_1-4 алкил (например, метил);

(ii) R₄ представляет собой Н или C_1-4 алкил и R₂ и R₃ независимо представляют собой H или C_1-4 алкил

(например, R₂ и R₃ оба представляют собой метил, или R₂ представляет собой H и R₃ представляет собой изопропил), арил, гетероарил, (необязательно гетеро)арилалкокси или (необязательно гетеро)арилалкил; или

R₂ представляет собой H и R₃ и R₄ вместе образуют ди-, три- или тетраметиленовый мостик

(предпочтительно где R₃ и R₄ вместе имеют цис-конфигурацию, например, где атомы углерода, несущие R₃ и R₄, имеют конфигурации R и S, соответственно);

(iii) R₅ представляет собой замещенный гетероарилалкил, например, замещенный галогеналкилом;

или R₅ присоединен к одному из атомов азота на пиразольном фрагменте формулы I

и представляет собой фрагмент формулы A

где X, Y и Z независимо представляют собой N или C, и R₈, R₉, R₁₁ и R₁₂ независимо представляют собой H или галоген (например, Cl или F), и R₁₀ представляет собой галоген, алкил, циклоалкил, галогеналкил (например, трифторметил), арил (например, фенил), гетероарил (например, пиридил (например, пирид-2-ил), необязательно замещенный галогеном, или тиадиазолил (например, 1,2,3-тиадиазол-4-ил)), диазолил, триазолил, тетразолил, арилкарбонил (например, бензоил), алкилсульфонил (например, метилсульфонил), гетероарилкарбонил или алкоксикарбонил; при условии, что когда X, Y или Z представляет собой азот, R₈, R₉ или R₁₀, соответственно, отсутствуют; и

(iv) R₆ представляет собой H, алкил, арил, гетероарил, арилалкил (например, бензил), ариламино (например, фениламино), гетероариламино, N, N-диалкиламино, N, N-диариламино или N-арил-N-(арилакил)амино (например, N-фенил-N-(1,1’-бифен-4-илметил)амино); и

(v) n=0 или 1;

(vi) когда n=1, A представляет собой -C(R₁₃R₁₄)-

где R₁₃ и R₁₄, независимо представляют собой H или C_1-4 алкил, арил, гетероарил, (необязательно гетеро)арилалкокси или (необязательно гетеро)арилалкил;

в свободной форме, в форме соли или пролекарства, включая его энантиомеры, диастереоизомеры и рацематы.

В другом варианте осуществления изобретение предусматривает, что ингибиторы PDE1 для применения в способах, описанных в настоящем документе, представляют формулу 1a:

где

(i) R₂ и R₅ независимо представляют собой H или гидрокси и R₃ и R₄ вместе образуют три- или тетраметиленовый мостик [преф. с атомами углерода, несущими R₃ и R₄, имеющими R- и S-конфигурацию соответственно]; или R₂ и R₃, каждый, представляют собой метил и R₄ и R₅, каждый, представляют собой H; или R₂, R₄ и R₅ представляют собой H, и R₃ представляет собой изопропил [преф. углерод, несущий R₃, имеющий R-конфигурацию];

(ii) R₆ представляет собой (необязательно галогензамещенный) фениламино, (необязательно галогензамещенный) бензиламино, C_1-4алкил или C_1-4алкилсульфид; например, фениламино или 4-фторфениламино;

(iii) R₁₀ представляет собой C_1-4алкил, метилкарбонил, гидроксиэтил, карбоновую кислоту, сульфонамид, (необязательно галоген- или гидроксизамещенный) фенил, (необязательно галоген- или гидроксизамещенный) пиридил (например, 6-фторпирид-2-ил), или тиадиазолил (например, 1,2,3-тиадиазол-4-ил); и

X и Y независимо представляют собой C или N,

в свободной форме, форме фармацевтически приемлемой соли или пролекарства, включая его энантиомеры, диастереоизомеры и рацематы.

В другом варианте осуществления изобретение предусматривает, что ингибиторы PDE1 для применения в способах лечения и профилактики, описанных в настоящем документе, представляют собой соединения формулы II:

(i) X представляет собой C_1-6алкилен (например, метилен, этилен или проп-2-ин-1-илен);

(ii) Y представляет собой одинарную связь, алкинилен (например, -C≡C-), арилен (например, фенилен) или гетероарилен (например, пиридилен);

(iii) Z представляет собой H, арил (например, фенил), гетероарил (например, пиридил, например, пирид-2-ил), галоген (например, F, Br, Cl), галогенC_1-6алкил (например, трифторметил), -C(O)-R¹, -N(R²)(R³) или C_3-7циклоалкил, необязательно содержащий по меньшей мере один атом, выбранный из группы, состоящей из N или O (например, циклопентил, циклогексил, тетрагидро-2H-пиран-4-ил или морфолинил);

(iv) R¹ представляет собой C_1-6алкил, галогенC_1-6алкил, -OH или -OC_1-6алкил (например, -OCH₃);

(v) R² и R³ независимо представляют собой H или C_1-6алкил;

(vi) R⁴ и R⁵ независимо представляют собой H, C_1-6алкил или арил (например, фенил), необязательно замещенный одним или несколькими галогенами (например, фторфенил, например, 4-фторфенил), гидрокси (например, гидроксифенил, например, 4-гидроксифенил или 2-гидроксифенил) или C_1-6алкокси;

(vii) где X, Y и Z независимо и необязательно замещены одним или несколькими галогенами (например, F, Cl или Br), C_1-6алкилом (например, метил), галогенC_1-6алкилом (например, трифторметил), например, Z представляет собой гетероарил, например, пиридил, замещенный одним или несколькими галогенами (например, 6-фторпирид-2-ил, 5-фторпирид-2-ил, 6-фторпирид-2-ил, 3-фторпирид-2-ил, 4-фторпирид-2-ил, 4,6-дихлорпирид-2-ил), галогенC_1-6алкилом (например, 5-трифторметилпирид-2-ил) или C_1-6-алкилом (например, 5-метилпирид-2-ил), или Z представляет собой арил, например, фенил, замещенный одним или несколькими галогенами (например, 4-фторфенил),

в свободной форме, форме соли или пролекарства.

В еще одном варианте осуществления изобретение предусматривает, что ингибиторы PDE1 для применения в способах лечения и профилактики, описанных в настоящем документе, представляют формулу III:

где

(i) R1 представляет собой Н или C_1-4 алкил (например, метил или этил);

(ii) R₂ и R₃ независимо представляют собой H или C_1-6 алкил (например, метил или этил);

(iii) R₄ представляет собой Н или C_1-4 алкил (например, метил или этил);

(iv) R₅ представляет собой арил (например, фенил), необязательно замещенный одной или несколькими группами, независимо выбранными из -C(=O)-C_1-6 алкила (например, -C(=O)-CH₃) и C_1-6 -гидроксиалкила (например, 1-гидроксиэтил);

(v) R₆ и R₇ независимо представляют собой H или арил (например, фенил), необязательно замещенный одной или несколькими группами, независимо выбранными из C_1-6 алкила (например, метил или этил) и галогена (например, F или Cl), например, незамещенный фенил или фенил, замещенный одним или несколькими галогенами (например, F), или фенил, замещенный одним или несколькими C_1-6 алкилами и одним или несколькими галогенами, или фенил, замещенный одним C_1-6 алкилом и одним галогеном, например, 4-фторфенил, или 3,4-дифторфенил, или 4-фтор-3-метилфенил; и

(vi) n имеет значение 1, 2, 3 или 4,

в свободной форме или форме соли.

В еще одном варианте осуществления изобретение предусматривает, что ингибиторы PDE1 для применения в способах лечения и профилактики, описанных в настоящем документе, представляют собой формулу IV

в свободной форме или форме соли, где

(i) R₁ представляет собой C_1-4алкил (например, метил или этил) или -NH(R₂), где R₂ представляет собой фенил, необязательно замещенный галогеном (например, фтором), например, 4-фторфенил;

(ii) X, Y и Z независимо представляют собой N или C;

(iii) R₃, R₄ и R₅ независимо представляют собой H или C_1-4алкил (например, метил); или R₃ представляет собой H и R₄ и R₅ вместе образуют триметиленовый мостик (преф. где R₄ и R₅ вместе имеют цис-конфигурацию, например, где атомы углерода, несущие R₄ и R₅, имеют конфигурации R и S, соответственно),

(iv) R₆, R₇ и R₈ независимо представляют собой:

H,

C_1-4алкил (например, метил),

пирид-2-ил, замещенный гидрокси, или

-S(O)₂-NH₂;

(v) при условии, что когда X, Y и/или Z представляют собой N, тогда R₆, R₇ и/или R₈, соответственно, отсутствуют; и когда X, Y и Z все представляют собой C, тогда по меньшей мере один из R₆, R₇ или R₈ представляет собой -S(O)₂-NH₂ или пирид-2-ил, замещенный гидрокси.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает, что ингибиторы PDE1 для применения в способах, описанных в настоящем документе, представляют собой формулу V:

где

(i) R₁ представляет собой -NH(R₄), где R₄ представляет собой фенил, необязательно замещенный галогеном (например, фтором), например, 4-фторфенил;

(ii) R₂ представляет собой Н или C_1-6алкил (например, метил, изобутил или неопентил);

(iii) R₃ представляет собой -SO₂NH₂ или -COOH;

в свободной форме, форме фармацевтически приемлемой соли или пролекарства, включая его энантиомеры, диастереоизомеры и рацематы.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает, что ингибиторы PDE1 для применения в способах, описанных в настоящем документе, представляют собой формулу VI:

где

(i) R₁ представляет собой -NH(R₄), где R₄ представляет собой фенил, необязательно замещенный галогеном (например, фтором), например, 4-фторфенил;

(ii) R₂ представляет собой Н или C_1-6алкил (например, метил или этил);

(iii) R₃ представляет собой H, галоген (например, бром), C_1-6алкил (например, метил), арил, необязательно замещенный галогеном (например, 4-фторфенил), гетероарил, необязательно замещенный галогеном (например, 6-фторпирид-2-ил или пирид-2-ил) или ацил (например, ацетил),

в свободной форме, форме фармацевтически приемлемой соли или пролекарства, включая его энантиомеры, диастереоизомеры и рацематы.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает, что ингибиторы PDE1 для применения в способах, описанных в настоящем документе, представляют собой формулу VII:

(i) R₁ представляет собой -NH(R₅), где R₅ представляет собой фенил, необязательно замещенный галогеном (например, фтором), например, 4-фторфенил;

(ii) R₂ и R₃ каждый независимо представляют собой H или C_1-6алкил (например, метил или этил);

(iii) R₄ представляет собой арил, необязательно замещенный галогеном, (например, 4-фторфенил) или гетероарил, необязательно замещенный галогеном, (например, 6-фторпирид-2-ил),

в свободной форме, форме фармацевтически приемлемой соли или пролекарства, включая его энантиомеры, диастереоизомеры и рацематы.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает введение ингибитора PDE1 для применения в способах, описанных в настоящем документе (например, соединения согласно формулам I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII), где ингибитор представляет собой соединение согласно нижеследующему:

или

В одном варианте осуществления изобретение обеспечивает введение ингибитора PDE1 для лечения или профилактики воспаления или связанного с воспалением заболевания или расстройства, где ингибитор представляет собой соединение согласно нижеследующему:

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

В еще одном варианте осуществления изобретение обеспечивает введение ингибитора PDE1 для лечения или профилактики воспаления или связанного с воспалением заболевания или расстройства, где ингибитор представляет собой соединение согласно нижеследующему:

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

В еще одном варианте осуществления изобретение обеспечивает введение ингибитора PDE1 для лечения или профилактики воспаления или связанного с воспалением заболевания или расстройства, где ингибитор представляет собой соединение согласно нижеследующему:

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

В еще одном варианте осуществления изобретение обеспечивает введение ингибитора PDE1 для лечения или профилактики воспаления или связанного с воспалением заболевания или расстройства, где ингибитор представляет собой соединение согласно нижеследующему:

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

В еще одном варианте осуществления изобретение обеспечивает введение ингибитора PDE1 для лечения или профилактики воспаления или связанного с воспалением заболевания или расстройства, где ингибитор представляет собой соединение согласно нижеследующему:

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

В одном варианте осуществления селективные ингибиторы PDE1 любой из предыдущих формул (например, формулы I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII) представляют собой соединения, которые ингибируют фосфодиэстераза-опосредованный (например, PDE1-опосредованный, в частности, PDE1B-опосредованный) гидролиз cGMP, например, предпочтительные соединения имеют IC₅₀ менее 1 мкМ, предпочтительно менее 500 нМ, предпочтительно менее 50 нМ, и предпочтительно менее 5 нМ в анализе PDE с реагентом на аффинные частицы с иммобилизованным металлом, в свободной форме или форме соли.

В других вариантах осуществления изобретение обеспечивает введение ингибитора PDE1 для лечения состояния, выбранного из рака или опухоли; для ингибирования пролиферации, миграции и/или инвазии опухолевых клеток; и/или для лечения глиомы, где ингибитор представляет собой соединение согласно нижеследующему:

или

Дополнительные примеры ингибиторов PDE1, подходящих для применения в способах и методах лечения, описанных в настоящем документе, можно найти в международной публикации WO2006133261A2; патенте США 8273750; патенте США 9000001; патенте США 9624230; международной публикации WO2009075784A1; патенте США 8273751; патенте США 8829008; патенте США 9403836; международной публикации WO2014151409A1, патенте США 9073936; патенте США 9598426; патенте США 9556186; публикации заявки на патент США 2017/0231994A1, международной публикации WO2016022893A1, и публикации заявки на патент США 2017/0226117A1, каждый из которых полностью включен посредством ссылки.

Еще дополнительные примеры ингибиторов PDE1, подходящих для применения в способах и методах лечения, описанных в настоящем документе, можно найти в международной публикации WO2018007249A1; публикации заявки на патент США 2018/0000786; международной публикации WO2015118097A1; патенте США 9718832; международной публикации WO2015091805A1; патенте США 9701665; публикации заявки на патент США 2015/0175584A1; публикации заявки на патент США 2017/0267664A1; международной публикации WO2016055618A1; публикации заявки на патент США 2017/0298072A1; международной публикации WO2016170064A1; публикации заявки на патент США 2016/0311831A1; международной публикации WO2015150254A1; публикации заявки на патент США 2017/0022186A1; международной публикации WO2016174188A1; публикации заявки на патент США 2016/0318939A1; публикации заявки на патент США 2017/0291903A1; международной публикации WO2018073251A1; международной публикации WO2017178350A1; публикации заявки на патент США 2017/0291901A1; международной публикации WO2018/115067; публикации заявки на патент США 2018/0179200A; публикации заявки на патент США US20160318910A1; патенте США 9868741; международной публикации WO2017/139186A1; международной заявке WO2016/040083; публикации заявки на патент США 2017/0240532; международной публикации WO 2016033776A1; публикации заявки на патент США 2017/0233373; международной публикации WO2015130568; международной публикации WO2014159012; патенте США 9034864; патенте США 9266859; международной публикации WO2009085917; патенте США 8084261; международной публикации WO2018039052; публикации заявки на патент США US20180062729; и международной публикации WO2019027783, каждый из которых полностью включен посредством ссылки. В любой ситуации, в которой утверждения любых документов, включенных посредством ссылки, противоречат или несовместимы с любыми заявлениями, сделанными в настоящем раскрытии, положения настоящего раскрытия должны пониматься как определяющие.

Еще дополнительные примеры ингибиторов PDE1 и подходящие способы их применения описаны в международной заявке PCT/US2019/033941 и предварительной заявки на патент США 62/789499, обе из которых включены в настоящий документ посредством ссылки.

Если иное не указано или не ясно из контекста, приведенные ниже термины имеют следующие значения:

(a) «Селективный ингибитор PDE1», используемый в настоящем документе, относится к ингибитору PDE1 с по меньшей мере 100-кратной селективностью в отношении ингибирования PDE1 по сравнению с ингибированием любой другой изоформы PDE.

(b) «Алкил», используемый в настоящем документе, представляет собой насыщенную или ненасыщенную углеводородную группу, предпочтительно насыщенную, предпочтительно имеющую от одного до шести атомов углерода, которая может быть линейной или разветвленной и может быть необязательно моно-, ди- или тризамещена, например, галогеном (например, хлор или фтор), гидрокси или карбокси.

(c) «Циклоалкил», используемый в настоящем документе, представляет собой насыщенную или ненасыщенную неароматическую углеводородную группу, предпочтительно насыщенную, предпочтительно содержащую от трех до девяти атомов углерода, по меньшей мере, некоторые из которых образуют неароматическую моно- или бициклическую или мостиковую циклическую структуру и которая может быть необязательно замещена, например, галогеном (например, хлор или фтор), гидрокси или карбокси. Если циклоалкил необязательно содержит один или несколько атомов, выбранных из N и O и/или S, указанный циклоалкил может также представлять собой гетероциклоалкил.

(d) «Гетероциклоалкил» представляет собой, если не указано иное, насыщенную или ненасыщенную неароматическую углеводородную группу, предпочтительно насыщенную, предпочтительно содержащую от трех до девяти атомов углерода, по меньшей мере некоторые из которых образуют неароматическую моно- или бициклическую или мостиковую циклическую структуру, где по меньшей мере один атом углерода заменен на N, O или S, причем гетероциклоалкил может быть необязательно замещен, например, галогеном (например, хлор или фтор), гидрокси или карбокси.

(e) «Арил», используемый в настоящем документе, представляет собой моно- или бициклический ароматический углеводород, предпочтительно фенил, необязательно замещенный, например, алкилом (например, метилом), галогеном (например, хлором или фтором), галогеналкилом (например, трифторметилом), гидрокси, карбокси или дополнительным арилом или гетероарилом (например, бифенилом или пиридилфенилом).

(f) «Гетероарил», используемый в настоящем документе, представляет собой ароматический фрагмент, где один или несколько атомов, составляющих ароматическое кольцо, представляют собой серу или азот, вместо углерода, например, пиридил или тиадиазолил, которые могут быть необязательно замещенными, например, алкилом, галогеном, галогеналкилом, гидрокси или карбокси.

Соединения по изобретению, например, ингибиторы PDE1, как описано в настоящем документе, могут существовать в свободной форме или форме соли, например, в виде кислотно-аддитивных солей. В настоящем описании, если не указано иное, выражение, такое как «соединения по изобретению», следует понимать как охватывающее соединения в любой форме, например, в свободной форме или в форме кислотно-аддитивной соли, или, если соединения содержат кислотные заместители, в форме соли присоединения основания. Соединения по изобретению предназначены для использования в качестве фармацевтических препаратов, следовательно, предпочтительными являются фармацевтически приемлемые соли. Соли, которые не подходят для фармацевтических применений, могут быть пригодны, например, для выделения или очистки свободных соединений по изобретению или их фармацевтически приемлемых солей, следовательно, поэтому также включены.

Соединения по изобретению могут в некоторых случаях также существовать в форме пролекарств. Форма пролекарства представляет собой соединение, которое преобразуется в организме в соединение по изобретению. Например, если соединения по изобретению содержат гидрокси или карбоксизаместители, то эти заместители могут образовывать физиологически гидролизуемые и приемлемые сложные эфиры. Используемое в настоящем документе выражение «физиологически гидролизуемый и приемлемый сложный эфир» означает сложные эфиры соединений по изобретению, которые являются гидролизуемыми в физиологических условиях с образованием кислот (в случае соединений по изобретению, которые имеют гидроксизаместители) или спиртов (в случае соединений по изобретению, которые имеют карбоксизаместители), которые сами являются физиологически допустимыми при дозах, подлежащих введению. Следовательно, если соединение по изобретению содержит гидроксигруппу, например, соединение-OH, то пролекарство на основе ацилового сложного эфира такого соединения, то есть соединение- O-C(O)-C_1-4алкил, может гидролизоваться в организме с образованием физиологически гидролизуемого спирта (соединение-OH), с одной стороны, и кислоты, с другой стороны (например, HOC(O)-C_1-4алкил). По-другому, если соединение по изобретению содержит карбоновую кислоту, например, соединение-C(O)OH, то сложный эфир кислоты пролекарства такого соединения, соединение- C(O)O-C_1-4алкил может гидролизоваться с образованием соединение-C(O)OH и HO-C_1-4алкил. Как будет понятно, данный термин охватывает, таким образом, общеизвестные фармацевтические формы пролекарства.

В другом варианте осуществления изобретение дополнительно предоставляет фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор PDE1 в комбинации с противоопухолевым средством, каждый в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, в смеси с фармацевтически приемлемым носителем. Термин «комбинация», используемый в настоящем документе, включает совместное, последовательное или одновременное введение ингибитора PDE1 и противоопухолевого средства. В другом варианте осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей такое соединение. В некоторых вариантах осуществления комбинация ингибитора PDE1 и противоопухолевого средства позволяет вводить противоопухолевое средство в дозе ниже, чем было бы эффективно при введении в виде единственной монотерапии.

Способы применения соединений по изобретению

В другом варианте осуществления в настоящей заявке предложен способ (способ 1) лечения рака толстой кишки, включающий введение фармацевтически приемлемого количества ингибитора PDE1 (т.е. ингибитора PDE1 в соответствии с формулами I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII) субъекту, нуждающемуся в этом.

1.1 Способ 1, где рак толстой кишки представляет собой колоректальный рак.

1.2 Любой предшествующий способ, дополнительно включающий стадию введения пациенту противоопухолевого средства.

1.3 Способ 1.2, где противоопухолевое средство вводят одновременно с ингибитором PDE1.

1.4 Способ 1.2, где противоопухолевое средство вводят до введения ингибитора PDE1.

1.5 Способ 1.2, где противоопухолевое средство вводят после введения ингибитора PDE1.

1.6 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и необязательно противоопухолевое средство вводят вместе с лучевой терапией или химиотерапией.

1.7 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и необязательно противоопухолевое средство вводят одновременно с лучевой терапией или химиотерапией.

1.8 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и необязательно противоопухолевое средство вводят перед лучевой терапией или химиотерапией.

1.9 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и необязательно противоопухолевое средство вводят после лучевой терапии или химиотерапии.

1.10 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 вводят вместе с противоопухолевым средством, химиотерапевтической, геннотерапевтической и/или иммунологической терапией.

1.11 Любой из предыдущих способов, где введение ингибитора PDE1 эффективно индуцирует одно или несколько из следующего при раке толстой кишки: апоптотическая гибель клеток, ингибирование миграции, ингибирование метастазирования и/или уменьшение воспаления.

1.12 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 вводят вместе с противоопухолевым средством, химиотерапевтической, геннотерапевтической, иммунологической терапией, кортикостероидом и/или антигистаминным средством.

1.13 Любой из предыдущих способов, где рак толстой кишки опосредуется PDE.

1.14 Любой из предыдущих способов, где рак толстой кишки опосредуется PDE1.

1.15 Любой из предыдущих способов, где рак толстой кишки опосредуется PDE1C.

1.16 Любой из предыдущих способов, где рак толстой кишки характеризуется потерей контроля кальция/кальмодулина.

1.17 Любой из предыдущих способов, где субъектом является человек.

Изобретение дополнительно обеспечивает ингибитор PDE1 для применения в способе лечения рака толстой кишки, например, для применения в любом из способов 1 и след.

Изобретение дополнительно обеспечивает применение ингибитора PDE1 при получении лекарственного средства для применения в способе лечения рака толстой кишки, например, лекарственного средства для применения в любом из способов 1 и след.

Изобретение дополнительно обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор PDE1, например, любое соединение формулы I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII, для применения в любом из способов 1 и след.

В другом варианте осуществления в настоящей заявке предложен способ (способ 2) ингибирования пролиферации, миграции и/или инвазии раковых или опухолевых клеток в толстой кишке, включающий введение фармацевтически приемлемого количества ингибитора PDE1 (т.е. ингибитора PDE1 формулы I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII) субъекту, нуждающемуся в этом.

2.1 Способ 2, где способ предназначен для ингибирования пролиферации раковых или опухолевых клеток.

2.2 Любой предшествующий способ, где субъект страдает раком толстой кишки.

2.3 Любой предшествующий способ, где субъект страдает колоректальным раком.

2.4 Любой предшествующий способ, дополнительно включающий стадию введения пациенту противоопухолевого средства.

2.5 Способ 2.4, где противоопухолевое средство вводят одновременно с ингибитором PDE1.

2.6 Способ 2.4, где противоопухолевое средство вводят до введения ингибитора PDE1.

2.7 Способ 2.4, где противоопухолевое средство вводят после введения ингибитора PDE1.

2.8 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и необязательно противоопухолевое средство вводят вместе с лучевой терапией или химиотерапией.

2.9 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и необязательно противоопухолевое средство, вводят одновременно с лучевой терапией или химиотерапией.

2.10 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и необязательно противоопухолевое средство вводят перед лучевой терапией или химиотерапией.

2.11 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и необязательно противоопухолевое средство вводят после лучевой терапии или химиотерапии.

2.12 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 вводят вместе с противоопухолевым средством, химиотерапевтической, геннотерапевтической и/или иммунологической терапией.

2.13 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 вводят вместе с противоопухолевым средством, химиотерапевтической, геннотерапевтической, иммунологической терапией, кортикостероидом и/или антигистаминным средством.

2.14 Любой из предыдущих способов, где раковые или опухолевые клетки в толстой кишке опосредуются PDE.

2.15 Любой из предыдущих способов, где раковые или опухолевые клетки в толстой кишке опосредуются PDE1.

2.16 Любой из предыдущих способов, где раковые или опухолевые клетки в толстой кишке опосредуются PDE1C.

2.17 Любой из предыдущих способов, дополнительно включающий стадию оценки степени чувствительности субъекта к кальцию/кальмодулину при экспрессируемой PDE1, восстановлении уровней циклических нуклеотидов, экспрессии РНК PDE1 или мутации гена PDE1.

2.18 Любой из предыдущих способов, где субъектом является человек.

Изобретение дополнительно обеспечивает ингибитор PDE1 для применения в способе ингибирования пролиферации, миграции и/или инвазии раковых или опухолевых клеток, например, для применения в любом из способов 2 и след.

Изобретение дополнительно обеспечивает применение ингибитора PDE1 при получении лекарственного средства для применения в способе ингибирования пролиферации, миграции и/или инвазии раковых или опухолевых клеток, например, например, лекарственного средства для применения в любом из способов 2, и см. следующее.

Изобретение дополнительно обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор PDE1, например, любое соединение формулы I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII, для применения в любом из способов 2 и след.

В другом варианте осуществления в настоящей заявке предложен способ (способ 3) лечения состояния, выбранного из рака или злокачественной опухоли, включающий введение фармацевтически приемлемого количества ингибитора PDE1 (т.е. ингибитора PDE1 формулы I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII) и ингибитор контрольных точек субъекту, нуждающемуся в этом.

3.1 Способ 3, где рак представляет собой рак толстой кишки.

3.2 Любой из предыдущих способов, где рак представляет собой колоректальный рак.

3.3 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и ингибитор контрольных точек вводят вместе с лучевой терапией или химиотерапией.

3.4 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и ингибитор контрольных точек вводят одновременно с лучевой терапией или химиотерапией.

3.5 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и ингибитор контрольных точек вводят перед лучевой терапией или химиотерапией.

3.6 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и ингибитор контрольных точек вводят после лучевой терапии или химиотерапии.

3.7 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и ингибитор контрольных точек вводят вместе с дополнительным противоопухолевым средством, химиотерапевтической, геннотерапевтической и/или иммунологической терапией.

3.8 Любой из предыдущих способов, где введение ингибитора PDE1 эффективно индуцирует одно или несколько из следующего при раке толстой кишки: апоптотическая гибель клеток, ингибирование миграции, ингибирование метастазирования и/или уменьшение воспаления.

3.9 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 вводят вместе с противоопухолевым средством, химиотерапевтической, геннотерапевтической, иммунологической терапией, кортикостероидом и/или антигистаминным средством.

3.10 Любой из предыдущих способов, где рак толстой кишки опосредуется PDE.

3.11 Любой из предыдущих способов, где рак толстой кишки опосредуется PDE1.

3.12 Любой из предыдущих способов, где рак толстой кишки опосредуется PDE1C.

3.13 Любой из предыдущих способов, где ингибитор контрольных точек представляет собой ингибитор CTLA-4, PD-1 и/или PD-L1.

3.14 Любой из предыдущих способов, где ингибитор контрольных точек выбран из ниволумаба, пембролизумаба, цемиплимаба, ипилимумаба, авелумаба, дурвалумаба, атезолизумаба, спартализумаба или их комбинаций.

3.15 Любой из предыдущих способов, где рак толстой кишки характеризуется потерей контроля кальция/кальмодулина.

3.16 Любой из предыдущих способов, где субъектом является человек.

3.17 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 вводят в количестве, достаточном для снижения инфильтрации моноцитов и/или макрофагов в микроокружение, связанное с опухолью.

3.18 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 и ингибитор контрольных точек вводят в количествах, вместе достаточных для уменьшения инфильтрации моноцитов и/или макрофагов в микроокружение, связанное с опухолью, и/или для увеличения инфильтрации естественных клеток-киллеров и CD4+ Т-клеток (т.е. TNFα-продуцирующие CD4+ Т-клетки).

3.19 Любой из предыдущих способов, где ингибитор PDE1 вводят в количестве примерно 1-1000 мг/кг, например, примерно 250-750 мг/кг, например, примерно 400-600 мг/кг, например, примерно 500 мг/кг.

Изобретение дополнительно обеспечивает ингибитор PDE1 для применения в способе ингибирования пролиферации, миграции и/или инвазии раковых или опухолевых клеток, например, для применения в любом из способов 3 и след.

Изобретение дополнительно обеспечивает применение ингибитора PDE1 при получении лекарственного средства для применения в способе ингибирования пролиферации, миграции и/или инвазии раковых или опухолевых клеток, например, лекарственного средства для применения в любом из способов 3, и след.

Изобретение дополнительно обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор PDE1, например, любое соединение формулы I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII, для применения в любом из способов 3 и след.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции вводят в комбинации с одним или несколькими противоопухолевыми лекарственными средствами, например, лекарственными средствами, о которых известно, что они действуют при лечении или устранении различных типов рака и/или опухолей. Неограничивающими примерами противоопухолевых лекарственных средств являются абемациклиб, абиратерона ацетат, абитрексат (метотрексат), абраксан (композиция наночастиц, стабилизированная паклитакселом и альбумином), ABVD, ABVE, ABVE-PC, AC, акалабрутиниб, AC-T, адцетрис (брентуксимаб ведотин), ADE, адо-трастузумаб эмтансин, адриамицин (доксорубицина гидрохлорид), афатиниба дималеат, афинитор (эверолимус), акинзео (нетупитант и палоносетрон гидрохлорид), алдара (имихимод), алдеслейкин, алеценза (алектиниб), алектиниб, алемтузумаб, алимта (пеметрексед динатрий), аликопа (копанлисиб гидрохлорид), алкеран для инъекций (мелфалан гидрохлорид), алкеран таблетки (мелфалан), алокси (палоносетрон гидрохлорид), алунбриг (бригатиниб), амбохлорин (хлорамбуцил), амбоклорин (хлорамбуцил), амифостин, аминолевулиновая кислота, анастрозол, апрепитант, аредия, памидронат динатрия), аримидекс (анастрозол), аромазин (экземестан), арранон (неларабин), триоксид мышьяка, арзерра (офатумумаб), аспарагиназа Erwinia chrysanthemi, атезолизумаб, авастин (бевацизумаб), авелумаб, аксикабтаген цилолейсел, акситиниб, азацитидин, бавенсио (авелумаб), BEACOPP, бецен (кармустин), белеодак (белиностат), белиностат, бендамустин гидрохлорид, BEP, биспонса (инотузумаба озогамицин), бевацизумаб, бексаротен, бикалутамид, BiCNU (кармустин), блеомицин, блинатумомаб, блинцито (блинатумомаб), бортезомиб, босулиф (бозутиниб), бозутиниб, брентуксимаб ведотин, бригатиниб, BuMel, бусульфан, бусульфекс (бусульфан), кабазитаксел, кабометикс (кабозантиниб-S-малат), кабозантиниб-S-малат, CAF, калквенс (акалабрутиниб), кампат (алемтузумаб), камптозар (иринотекан гидрохлорид), капецитабин, CAPOX, Carac (фторурацил-местный), карбоплатин, карбоплатин-таксол, карфилзомиб, кармубрис (кармустин), кармустин, кармустин имплантат, касодекс (бикалутамид), CEM, церитиниб, церубидин (даунорубицина гидрохлорид), церварикс (рекомбинантная бивалентная вакцина против ВПЧ), цетуксимаб, CEV, хлорамбуцил, хлорамбуцил-преднизон, CHOP, цисплатин, кладрибин, клафен (циклофосфамид), клофарабин, клофарекс (клофарабин), клолар (клофарабин), CMF, кобиметиниб, кометрик (кабозантиниб-S-малат), копанлисиб гидрохлорид, COPDAC, COPP, COPP-ABV, космеген (дактиномицин), котеллик (кобиметиниб), кризотиниб, CVP, циклофосфамид, цифос (ифосфамид), цирамза (рамуцирумаб), цитарабин, цитарабин липосома, цитозар-U (цитарабин), цитоксан (циклофосфамид), дабрафениб, дакарбазин, дакоген (децитабин), дактиномицин, даратумумаб, дарзалекс (даратумумаб), дазатиниб, даунорубицина гидрохлорид, даунорубицина гидрохлорид и цитарабин липосома, децитабин, дефибротид натрия, дефителио (дефибротид натрия), дегареликс, денилейкин-дифтитокс, деносумаб, депоцит (цитарабин липосома), дексаметазон, дексразоксана гидрохлорид, динутуксимаб, доцетаксел, доксил (липосомы доксорубицина гидрохлорида), доксорубицина гидрохлорид, липосомы доксорубицина гидрохлорида, Dox-SL (липосомы доксорубицина гидрохлорида), DTIC-Dome (дакарбазин), дурвалумаб, эфудекс (фторурацил-местный), элитек (Rasburicase), Ellence (эпирубицина гидрохлорид), элотузумаб, элоксатин (оксалиплатин), элтромбопаг оламин, эменд (апрепитант), эмплисити (элотузумаб), энасидениб мезилат, энзалутамид, эпирубицина гидрохлорид, EPOCH, эрбитукс (цетуксимаб), эрибулина мезилат, эриведж (висмодегиб), эрлотиниба гидрохлорид, эрвиназа (аспарагиназа Erwinia chrysanthemi), этиол (амифостин), этопофос (этопозида фосфат), этопозид, этопозида фосфат, Evacet (липосомы доксорубицина гидрохлорида), эверолимус, эвиста (ралоксифена гидрохлорид), эвомела (мелфалана гидрохлорид), экземестан, 5-FU (фторурацил для инъекций), 5-FU (фторурацил-местный), фарестон (торемифен), фаридак (панобиностат), фаслодекс (фулвестрант), FEC, фемара (летрозол), филграстим, флудара (флударабина фосфат), флударабина фосфат, флюороплекс (фторурацил-местный), фторурацил для инъекций, фторурацил-местный, флутамид, фолекс (метотрексат), фолекс PFS (метотрексат), Folfiri, Folfiri-бевацизумаб, Folfiri-цетуксимаб, фолфиринокс, фолфокс, фолотин (пралатрексат), FU-LV, фулвестрант, гардасил (рекомбинантная четырехвалентная вакцина против ВПЧ), гардасил 9 (рекомбинантная невалентная вакцина против ВПЧ), газива (обинутузумаб), гефитиниб, гемцитабина гидрохлорид, гемцитабин-цисплатин, гемцитабин-оксалиплатин, гемтузумаб озогамицин, гемзар (гемцитабина гидрохлорид), гилотриф (дималеат афатиниба), гливек (иматиниба мезилат), глиадель (имплантат кармустина), капсула-имплантат глиадела (имплантат кармустина), глюкарпидаза, ацетат гозерелина, халавен (эрибулина мезилат), гемангеол (пропранолола гидрохлорид), герцептин (трастузумаб), двухвалентная вакцина против ВПЧ, рекомбинантная, невалентная вакцина против ВПЧ, рекомбинантная, четырехвалентная вакцина против ВПЧ, рекомбинантная, гикамтин (топотекана гидрохлорид), гидреа (гидроксимочевина), гидроксимочевина, гипер-CVAD, ибранс (палбоциклиб), ибритутомаб тиуксетан, ибрутиниб, ICE, иклусиг (понатиниба гидрохлорид), идамицин (идарубицин гидрохлорид), идарубицин гидрохлорид, иделалисиб, Idhifa (энасидениб мезилат), Ifex (ифосфамид), ифосфамид, Ifosfamidum (ифосфамид), IL-2 (алдеслейкин), иматиниба мезилат, имбрувика (ибрутиниб), имфинзи (дурвалумаб), имиквимод, имлигик (талимоген лагерпарепвек), инлита (акситиниб), инотузумаба озогамицин, интерферон альфа-2b, рекомбинантный, интерлейкин-2 (алдеслейкин), интрон A (рекомбинантный интерферон альфа-2b), ипилимумаб, иресса (гефитиниб), иринотекана гидрохлорид, липосомы иринотекана гидрохлорида, истодакс (ромидепсин), иксабепилон, иксазомиба цитрат, иксемпра (иксабепилон), джакафи (руксолитиниба фосфат), JEB, жевтана (кабазитаксел), кадсила (Адо-трастузумаб эмтанзин), кеоксифен (ралоксифена гидрохлорид), кепиванс (палифермин), кейтруда (пембролизумаб), кискали (рибоциклиб), кимрия (тисагенлеклейсел), кипролис (карфилзомиб), ланреотида ацетат, лапатиниба дитозилат, лартруво (оларатумаб), леналидомид, мезилат ленватиниба, ленвима (мезилат ленватиниба), летрозол, лейковорин кальция, лейкеран (хлорамбуцил), лейпролида ацетат, лейстатин (кладрибин), левулан (аминолевулиновая кислота), линфолизин (хлорамбуцил), липодокс (липосомы доксорубицина гидрохлорида), ломустин, лонсурф (трифлуридин и типирацил гидрохлорид), люпрон (лейпролида ацетат), люпрон-депо (лейпролида ацетат), люпрон-депо-Пед (лейпролида ацетат), линпарза (олапариб), маркибо (липосомы винкристина сульфата), матулан (прокарбазина гидрохлорид), мехлорэтамина гидрохлорид, мегестрола ацетат, мекинист (траметиниб), мелфалан, мелфалана гидрохлорид, меркаптопурин, месна, меснекс (месна), метазоластон (темозоломид), метотрексат, метотрексат LPF (метотрексат), метилналтрексона бромид, мексат (метотрексат), мексат-AQ (метотрексат), мидостаурин, митомицин С, митоксантрона гидрохлорид, митозитрекс (митомицин С), MOPP, мозобил (плериксафор), мустарген (мехлорэтамина гидрохлорид), мутамицин (митомицин C), милеран (бусульфан), милосар (азацитидин), милотарг (гемтузумаб озогамицин), паклитаксел в виде наночастиц (композиция наночастиц, стабилизированная паклитакселом и альбумином), навельбин (винорелбина тартрат), нецитумумаб, неларабин, неосар (циклофосфамид), нератиниба малеат, нерлинкс (нератиниба малеат), нетупитант и палоносетрона гидрохлорид, неуласта (пегфилграстим), нейпоген (филграстим), нексавар (сорафениба тозилат), ниландрон (нилутамид), нилотиниб, нилутамид, нинларо (иксазомиба цитрат), нирапариб тозилат моногидрат, ниволумаб, нолвадекс (цитрат тамоксифена), энплейт (ромиплостим), обинутузумаб, одомзо (сонидегиб), OEPA, офатумумаб, OFF, олапариб, оларатумаб, омацетаксин мепесукцинат, онкаспар (пегаспагаза), ондансетрона гидрохлорид, онивид (липосомы иринотекана гидрохлорида), онтак (денилейкин-дифтитокс), опдиво (ниволумаб), OPPA, осимертиниб, оксалиплатин, паклитаксел, композиция наночастиц, стабилизированная паклитакселом и альбумином, PAD, палбоциклиб, палифермин, палоносетрона гидрохлорид, палоносетрона гидрохлорид и нетупитант, памидронат динатрия, панитумумаб, панобиностат, параплат (карбоплатин), параплатин (карбоплатин), пазопаниба гидрохлорид, PCV, PEB, пэгаспаргаза, пегфилграстим, пегинтерферон альфа-2b, PEG-интрон (пегинтерферон Альфа-2b), пембролизумаб, пеметрексед динатрий, перьета (пертузумаб), пертузумаб, платинол (цисплатин), платинол-AQ (цисплатин), плериксафор, помалидомид, помалист (помалидомид), понатиниба гидрохлорид, портрацца (нецитумумаб), пралатрексат, преднизон, прокарбазина гидрохлорид, пролейкин (алдеслейкин), пролиа (деносумаб), промакта (элтромбопаг оламин), пропранолола гидрохлорид, провендж (сипулейцел-T), пуринетол (меркаптопурин), пуриксан (меркаптопурин), радий 223 дихлорид, ралоксифена гидрохлорид, рамуцирумаб, расбуриказа, R-CHOP, R-CVP, рекомбинантная бивалентная вакцина против вируса папилломы человека (ВПЧ), рекомбинантная невалентная вакцина против вируса папилломы человека (ВПЧ), рекомбинантная четырехвалентная вакцина против вируса папилломы человека (ВПЧ), рекомбинантный интерферон альфа-2b, регорафениб, релистор (метилналтрексона бромид), R-EPOCH, ревлимид (леналидомид), ревматрекс (метотрексат), рибоциклиб, R-ICE, ритуксан (ритуксимаб), ритуксан Hycela (ритуксимаб и гиалуронидаза человека), ритуксимаб, ритуксимаб и гиалуронидаза человека, ролапитант гидрохлорид, ромидепсин, ромиплостим, рубидомицин (даунорубицина гидрохлорид), рубрака (рукапариб камсилат), рукапариб камсилат, руксолитиниба фосфат, ридапт (мидостаурин), склерозоль внутриплевральный аэрозоль (тальк), силтуксимаб, сипулейцел-T, соматулин Депо (ланреотида ацетат), сонидегиб, сорафениба тозилат, спрайсел (дазатиниб), СТАНФОРД V, стерильный тальк (тальк), Steritalc (тальк), стиварга (регорафениб), сунитиниб малат, сутент (сунитиниб малат), силатрон (пегинтерферон Альфа-2b), силвант (силтуксимаб), синрибо (омацетаксин мепесукцинат), таблоид (тиогуанин), TAC, тафинлар (дабрафениб), тагриссо (осимертиниб), тальк, талимоген лагерпарепвек, цитрат тамоксифена, тарабин PFS (цитарабин), тарцева (эрлотиниба гидрохлорид), таргретин (бексаротен), тасигна (нилотиниб), таксол (паклитаксел), таксотер (доцетаксел), тецентрик (атезолизумаб), темодар (темозоломид), темозоломид, темсиролимус, талидомид, таломид (талидомид), тиогуанин, тиотепа, тисагенлеклейсел, толак (фторурацил-местный), топотекана гидрохлорид, торемифен, торизел (темсиролимус), тотект (дексразоксана гидрохлорид), TPF, трабектедин, траметиниб, трастузумаб, треанда (бендамустина гидрохлорид), трифлуридин и типирацил гидрохлорид, трисенокс (триоксид мышьяка), тайкерб (лапатиниба дитозилат), унитуксин (динутуксимаб), уридин триацетат, VAC, валрубицин, валстар (валрубицин), вандетаниб, VAMP, варуби (ролапитант гидрохлорид), вектибикс (панитумумаб), VeIP, велбан (винбластина сульфат), велкейд (бортезомиб), велсар (винбластина сульфат), вемурафениб, венклекста (венетоклакс), венетоклакс, верзенио (абемациклиб), виадур (лейпролида ацетат), видаза (азацитидин), винбластина сульфат, Vincasar PFS (винкристин сульфат), винкристин сульфат, липосомы винкристина сульфата, винорелбина тартрат, VIP, висмодегиб, вистогард (уридин триацетат), вораксаз (глюкарпидаза), вориностат, вотриент (пазопаниба гидрохлорид), виксеос (даунорубицина гидрохлорид и цитарабин липосома), велковорин (лейковорин кальция), ксалкори (кризотиниб), кселода (капецитабин), кселири, кселокс, эксджива (деносумаб), ксофиго (радий 223 дихлорид), кстанди (энзалутамид), ервой (ипилимумаб), йескарта (аксикабтаген цилолейсел), йонделис (трабектедин), залтрап (зив-афлиберцепт), зарксио (филграстим), зеджула (нирапариб тозилат моногидрат), зелбораф (вемурафениб), зевалин (ибритутомаб тиуксетан), зинекард (дексразоксана гидрохлорид), зив-афлиберцепт, зофран (ондансетрона гидрохлорид), золадекс (гозерелина ацетат), золедроновая кислота, золинза (вориностат), зомета (золедроновая кислота), зиделиг (иделалисиб), зикадия (церитиниб), зитига (абиратерона ацетат).

Используемый в настоящем документе термин «противоопухолевое средство» относится к любым химическим средствам или лекарственным средствам, эффективным для предотвращения или ингибирования образования или роста злокачественных новообразований или опухолей. Противоопухолевые средства, описываемые в настоящем документе, могут включать алкилирующие средства, антиметаболиты, натуральные продукты, гормоны и/или антитела. Лечение опухолей или рака может включать ограничение пролиферации, миграции и/или инвазии раковых или опухолевых клеток в организме или ограничение симптомов, связанных с указанным раком или опухолью. Как используется в настоящем документе, противоопухолевые средства понимаются как охватывающие и в остальном являющиеся синонимами противоопухолевых средств.

Способы получения соединений по изобретению

Ингибиторы PDE1 по изобретению и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены с использованием способов, описанных и проиллюстрированных в US 8273750, US 2006/0173878, US 8273751, US 2010/0273753, US 8697710, US 8664207, US 8633180, US 8536159, US 2012/0136013, US 2011/0281832, US 2013/0085123, US 2013/0324565, US 2013/0338124, US 2013/0331363, WO 2012/171016 и WO 2013/192556, и способов, подобных им, и способов, известных в области химии. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, описанные ниже. Исходные материалы для этих процессов, если они отсутствуют в продаже, могут быть получены с помощью процедур, выбранных из области химии, с использованием методов, идентичных или аналогичных синтезу известных соединений.

Различные ингибиторы PDE1 и исходные вещества для них могут быть получены с использованием способов, описанных в US 2008-0188492 A1, US 2010-0173878 A1, US 2010-0273754 A1, US 2010-0273753 A1, WO 2010/065153, WO 2010/065151, WO 2010/065151, WO 2010/065149, WO 2010/065147, WO 2010/065152, WO 2011/153129, WO 2011/133224, WO 2011/153135, WO 2011/153136, WO 2011/153138. Все ссылки, цитируемые в настоящем документе, полностью включены в настоящий документ в качестве ссылки.

Дополнительные ингибиторы PDE1 и родственные способы раскрыты в предварительной заявке на патент США 62/833481, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки. Дополнительные родственные ингибиторы PDE1 и родственные способы раскрыты в международной публикации WO2018/049417, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.

Соединения по изобретению включают свои энантиомеры, диастереомеры и рацематы, а также свои полиморфы, гидраты, сольваты и комплексы. Некоторые индивидуальные соединения, входящие в область настоящего изобретения, могут содержать двойные связи. Имеется в виду, что изображения двойных связей в настоящем изобретении включают оба изомера двойной связи, E и Z. Кроме того, некоторые соединения, входящие в область настоящего изобретения, могут содержать один или несколько асимметрических центра. Настоящее изобретение включает применение любого из оптически чистых стереоизомеров, а также любой комбинации стереоизомеров.

Подразумевается также, что соединения по изобретению охватывают их стабильные и нестабильные изотопы. Стабильные изотопы представляют собой нерадиоактивные изотопы, которые содержат один дополнительный нейтрон по сравнению с широко распространенными в природе нуклидами того же вида (т.е. элемента). Ожидается, что активность соединений, содержащих такие изотопы, будет сохраняться, и такое соединение будет также использоваться для измерения фармакокинетики неизотопных аналогов. Например, атом водорода в одном или нескольких положениях соединений по изобретению может быть замещен дейтерием (стабильным изотопом, который не является радиоактивным). Примеры известных стабильных изотопов включают, но не ограничены этим, дейтерий, ¹³C, ¹⁵N, ¹⁸O. В качестве альтернативы, нестабильные изотопы, которые являются радиоактивными изотопами, которые содержат дополнительные нейтроны по сравнению с широко распространенными в природе нуклидами того же вида (т.е. элемента), например, ¹²³I, ¹³¹I, ¹²⁵I, ¹¹C, ¹⁸F, могут заменить соответствующие распространенные виды I, C и F. Другим примером полезного изотопа соединения по настоящему изобретению является изотоп ¹¹C. Эти радиоизотопы можно использовать для радиовизуализации и/или фармакокинетических исследований соединений по настоящему изобретению.

Температуры плавления не скорректированы, и «разл.» обозначает разложение. Температуры приведены в градусах Цельсия (°C); елси не указано по-другому, операции выполняют при комнатной температуре или температуре окружающей среды, то есть при температуре в диапазоне 18-25°C. Хроматография означает флэш-хроматографию на силикагеле; тонкослойная хроматография (TLC) проводится на пластинах с силикагелем. ЯМР-данные представлены с использованием дельта-значений основных диагностических протонов, выраженных в миллионных долях (ppm) относительно тетраметилсилана (TMS) в качестве внутреннего стандарта. Используют общепринятые сокращения для обозначения вида сигнала. Константы взаимодействия (J) даны в Гц. Для масс-спектров (MS) приводят основной ион с наименьшей массой для молекул, где изотопное расщепление дает в результате несколько масс-спектральных пиков. Составы смесей растворителей даны в объемных процентах или посредством объемных соотношений. В случаях, где ЯМР-спектры обозначают как «сложные», приводят только диагностические сигналы.

Слова «терапия» и «лечение» следует понимать соответственно как охватывающие лечение или ослабление симптомов заболевания, а также лечение причины заболевания.

Для способов лечения слово «эффективное количество» предназначено для охвата терапевтически эффективного количества для лечения конкретного заболевания или расстройства.

Термин «пациент» включает человека или пациента, не являющегося человеком (т.е. животное). В конкретном варианте осуществления изобретение охватывает человека и пациентов, отличных от человека. В другом варианте осуществления изобретение охватывает пациентов, отличных от человека. В другом варианте осуществления термин охватывает человека.

Термин «включающий», используемый в настоящем изобретении, является неограничивающим и не исключает дополнительных, неуказанных элементов или стадий способа.

Дозы, используемые при осуществлении настоящего изобретения, будут, конечно, варьироваться в зависимости, например, от конкретного заболевания или состояния, подлежащего лечению, конкретных используемых соединений по изобретению, способа введения и желаемой терапии. Соединения по изобретению можно вводить любым подходящим способом, включая перорально, парентерально, трансдермально или путем ингаляции, но предпочтительно вводятся перорально. В целом, показано, что удовлетворительные результаты, например, для лечения заболеваний, изложенных выше, могут быть получены при пероральном введении в дозах порядка примерно от 0,01 до 2,0 мг/кг. У более крупных млекопитающих, например, человека, указанная суточная доза для перорального введения обоих ингибиторов PDE1, соответственно, будет находиться в диапазоне от примерно 0,50 до 300 мг, обычно вводимых один раз или в разделенных дозах 2-4 раза, ежедневно или в форме с замедленным высвобождением. Стандартные лекарственные формы для перорального введения, например, могут включать примерно от 0,2 до 150 или 300 мг, т.е. от примерно 0,2 или 2,0 до 10, 25, 50, 75, 100, 150 или 200 мг соединения по настоящему изобретению вместе с его фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Соединения по изобретению, в частности, для применения или введения в любом из способов 1 или 2 и далее, можно вводить в более высоких дозах, если это необходимо для лечения рака или опухоли, например, колоректального рака. Предполагается, что введение ингибитора PDE1 для такого способа может находиться в диапазоне примерно от 50 мг до 1000 мг ежедневно. Например, пациенту, которому вводят ингибитор PDE1 для лечения состояния в соответствии с любым из способов 1-6 и далее, можно вводить ингибитор PDE1 в соответствии с формулами I, Ia, II, III, IV, V, VI и/или VII в количестве от 50 мг до 1000 мг ежедневно, от 50 мг до 900 мг ежедневно, от 50 мг до 800 мг ежедневно, от 50 мг до 700 мг ежедневно, от 50 мг до 600 мг ежедневно, от 50 мг до 500 мг ежедневно, от 50 мг до 400 мг ежедневно, от 50 мг до 350 мг ежедневно, от 50 мг до 300 мг ежедневно, от 50 мг до 250 мг ежедневно, от 50 мг до 200 мг ежедневно, от 50 мг до 150 мг ежедневно или от 50 мг до 100 мг ежедневно.

Соединения по изобретению можно вводить любым приемлемым путем, включая пероральный, парентеральный (внутривенный, внутримышечный или подкожный) или чрескожный, но предпочтительно вводят перорально. В некоторых вариантах осуществления соединения по изобретению, например, в составе депо, предпочтительно вводят парентерально, например, путем инъекции.

Соединения по изобретению и фармацевтические композиции по изобретению могут быть использованы в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами, особенно в более низких дозах, чем при применении отдельных средств в качестве монотерапии, чтобы усилить терапевтическую активность комбинированных средств, не вызывая нежелательных побочных эффектов, обычно возникающих при обычной монотерапии. Таким образом, соединения по изобретению можно вводить совместно, раздельно, последовательно или одновременно с другими средствами, полезными для лечения заболевания. В другом примере побочные эффекты могут быть уменьшены или сведены к минимуму путем введения соединения по настоящему изобретению в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами в свободной форме или форме соли, где дозы (i) второго терапевтического средства (средств) или (ii) как соединения по настоящему изобретению, так и второго терапевтического средства ниже, чем если бы средство/соединение вводили в виде монотерапии. В качестве неограничивающего примера такие дополнительные терапевтические средства могут включать ингибиторы ACE, антагонисты рецептора ангиотензина II, блокаторы кальциевых каналов и тому подобное.

Термин «совместно» применительно к терапевтическому применению означает введение двух или более активных ингредиентов примерно в одно и то же время одним и тем же путем введения.

Термин «раздельно» применительно к терапевтическому применению означает введение двух или более активных ингредиентов одновременно или примерно в одно и то же время разными путями введения.

Фармацевтические композиции, содержащие соединения по изобретению, могут быть получены с использованием обычных разбавителей или эксципиентов и способов, известных в области галенов. Таким образом, пероральные лекарственные формы могут включать таблетки, капсулы, растворы, суспензии и тому подобное.

Примеры

Пример 1: Определение способности ингибиторов PDE1 ингибировать рост рака толстой кишки у мышей

Аликвоты раковых клеток вводили в подлопаточное пространство мышей BALB/C, чтобы вызвать карциному толстой кишки. Опухолям дают расти в течение 7 дней, после чего измеряют объем опухоли. После образования опухоли начинают лечение лекарственным средством (50 мг/кг соединения 1, один раз в день, внутрибрюшинно в 0,5% метилцеллюлозном носителе) и ежедневно наблюдают и регистрируют рост опухоли. Соединения 1 показаны ниже:

Мышей умерщвляли через тридцать дней после инъекции, и у мышей выделяли опухоли. Как показано на фиг. 1, соединение 1 значительно замедляло рост опухоли в образцах клеток CT26 через 30 дней.

Затем опухоли ферментативно диссоциировали в суспензиях отдельных клеток, окрашивали меченными флуорофором антителами и анализировали с помощью проточной цитометрии. Клетки сортировали и анализировали на иммунные маркеры. Как показано на фиг. 2, лечение соединением 1 приводило к значительному увеличению количества моноцитов и Т-клеток CD8, но наблюдалось значительное снижение присутствия макрофагов в микроокружении опухоли. Не ограничиваясь теорией, считается, что ингибиторы PDE1 обладают способностью модулировать иммунную функцию в микроокружении опухоли, одним из способов которой является снижение инвазии опухоли макрофагами. В свою очередь считается, что это позволяет врожденной иммунной системе более эффективно нацеливаться на опухолевые клетки, что согласуется с наблюдаемыми в настоящем дкументе результатами (т.е. повышенной активацией Т-клеток в микроокружении опухоли).

Пример 2: Анализ совместного введения ингибиторов PDE1 с ингибиторами контрольных точек для ингибирования роста злокачественного новообразования у мышей

Эффекты соединения 1, отдельно или в комбинации с субэффективными дозами ингибитора контрольных точек, анти-PD-1, оценивали на рост ксенотрансплантатных опухолей CT26 у мышей BALB/c. Мышей с опухолями, ранее не подвергавшихся лечению (т.е. группу изотипа), сравнивали с группами мышей, получавших монотерапию соединением 1, определенным в примере 1, мышей, получавших субэффективную дозу ингибитора контрольных точек (антитела против PD-1), и мышей, получавших как соединение 1, так и субэффективную дозу антитела против PD-1.

Мышам BALB/c подкожно инъецировали клетки CT26 в день 0, а затем в день 7 разделяли на четыре группы: (1) лечение соединением 1 (50 мг/кг, внутрибрюшинно, один раз в день), 5 дней в неделю; (2) группа изотипа, внутрибрюшинно изотип mlgG на 7, 10 и 14 дни; (3) группа анти-PD-1, введение внутрибрюшинно, на 7, 10 и 14 день; и (4) комбинированная группа, получавшая лечение соединением 1 и анти-PD-1 как группа 1 и группа 3. Объемы опухолей измеряли каждые 2 или 3 дня. На 17-18 день опухоли вырезали, разрезали и использовали для приготовления суспензий отдельных клеток. Эти суспензия отдельных клеток опухоли инкубировали с FC-блокатором (eBioscience) и затем окрашивали антителами на льду в темноте. Образцы были получены на FACSCalibur, LSRII или LSRII yellow (BD Biosciences) и проанализированы с помощью FlowJo (Tree Star).

Ни у одной из девяти мышей в группе, обработанной изотипом, не наблюдали исчезновения опухоли (т.е. опухоль имела объем менее 100 мм³), в то время как у одной из пяти мышей в группе, получавшей соединение 1, и у одной из десяти мышей в группе, получавшей лечение анти-PD-1, наблюдали исчезновение опухоли. Однако у семи из пятнадцати мышей в группе, получавшей комбинацию соединения 1 и анти-PD-1, наблюдали исчезновение опухоли. В конце эксперимента опухоли также взвешивали. Результаты показали, что масса опухоли у мышей, получавших комбинированную терапию соединением 1 и анти-PD-1, была значительно меньше, чем у мышей в контрольной группе, обработанной изотипом.

Сортировка клеток с активированной флуоресценцией (FACS) инфильтрирующих опухоль иммунных клеток показала, что в опухолях мышей, получавших монотерапию соединением 1, наблюдали значительно сниженное количество CD45+ опухолевых (инфильтрирующих) макрофагов и моноцитов, и что комбинированная терапия соединением 1 и анти-PD-1 усиливала противоопухолевый иммунитет, вызывая увеличение количества CD45+ естественных клеток-киллеров (NK) и TNFα-продуцирующих CD4 Т-клеток. Результаты показывают, что соединение 1 само по себе способно снижать количество опухолевых макрофагов, что усиливает противоопухолевый иммунитет анти-PD-1.

Альтернативные комбинации и вариации представленных примеров станут очевидными на основании раскрытия. Невозможно предоставить конкретные примеры для всех из множества возможных вариаций описанных вариантов осуществления, но такие комбинации и вариации могут быть пунктами формулы изобретения, которые в конечном итоге будут патентоспособными.

Группа изобретений относится к лечению рака толстой кишки. Предложен способ лечения рака толстой кишки, включающий введение фармацевтически приемлемого количества ингибитора PDE1 субъекту, нуждающемуся в этом, где ингибитором PDE1 является или в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли. Предложены также вариант указанного способа, включающий дополнительно введение ингибитора PD-1, и способ ингибирования пролиферации, миграции и/или инвазии раковых или опухолевых клеток в толстой кишке, включающий введение фармацевтически приемлемого количества указанного ингибитора PDE1 субъекту, нуждающемуся в этом, страдающему раком толстой кишки. Изобретение обеспечивает эффективное лечение рака толстой кишки. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

1. Способ лечения рака толстой кишки, включающий введение фармацевтически приемлемого количества ингибитора PDE1 субъекту, нуждающемуся в этом, где ингибитором PDE1 является

или

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

2. Способ по п. 1, где рак толстой кишки представляет собой колоректальный рак.

3. Способ ингибирования пролиферации, миграции и/или инвазии раковых или опухолевых клеток в толстой кишке, включающий введение фармацевтически приемлемого количества ингибитора PDE1 субъекту, нуждающемуся в этом, где ингибитором PDE1 является

или

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, где субъект страдает раком толстой кишки.

4. Способ по п. 3, где субъект страдает колоректальным раком.

5. Способ по п. 3 или 4, где ингибитор PDE1 вводят в комбинации с противоопухолевым средством.

6. Способ лечения рака толстой кишки, включающий введение фармацевтически приемлемого количества ингибитора PDE1 и ингибитора контрольных точек субъекту, нуждающемуся в этом, где ингибитором PDE1 является

или

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и ингибитором контрольных точек у субъекта является ингибитор PD-1.

7. Способ по п. 6, где рак представляет собой колоректальный рак.

8. Способ по п. 6 или 7, где ингибитором PD1 является анти-PD-1 антитело.

9. Способ по п. 6 или 7, где PD-1 ингибитор выбран из ниволумаба, пембролизумаба, цемиплимаба, спартализумаба или их комбинаций.

10. Способ по п. 6 или 7, где ингибитор PDE1 вводят в количестве, достаточном для снижения инфильтрации моноцитов и/или макрофагов в микроокружение, связанное с опухолью.

11. Способ по п. 6 или 7, где ингибитор PDE1 и ингибитор контрольных точек вводят в количествах, вместе достаточных для уменьшения инфильтрации моноцитов и/или макрофагов в микроокружение, связанное с опухолью, и/или для увеличения инфильтрации естественных клеток-киллеров и CD4+ Т-клеток.