Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем Российский патент 2018 года по МПК G01N33/15 

Описание патента на изобретение RU2643934C2

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармации, и может быть использовано для надежного и достоверного определения фармакологической активности лекарственных средств, в том числе и приготовленных по гомеопатической технологии.

Из уровня техники известен способ выявления биологической активности (RU 2181890 C1, G01N 33/68, 2002), в котором in vitro определяют соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества при «оптимальных концентрациях вещества в пробе». При этом данный способ не применим для определения активности лекарственных средств, приготовленных, например, по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного последовательного уменьшения концентрации - разведения исходного вещества в носителе (водном или водно-спиртовом растворителе) в сочетании с многократным встряхиванием каждого разведения (RU 2191601 C1, A61K 39/395, 2002; RU 2192888 C1, A61K 39/395, 2002; RU 2332236 C1, A61K 39/395, 2008; RU 2438707 C2, A61K 39/395, 2012), которые при разбавлении близким и выше числа Авогадро (NA=6,02252×1023 моль-1) содержат малые и сверхмалые дозы исходного лекарственного вещества.

Из уровня техники также известно, что в процессе активирования (потенцирования) при обработке исходного вещества путем многократного последовательного уменьшения концентрации (разведения или растирания) в носителе по гомеопатической технологии, носитель приобретает модифицирующую активность, которая проявляется в способности изменения физико-химических и/или биологических свойств исходного вещества при воздействии на него указанным активированным (потенцированным) носителем (RU 2161955 C1, A61K 9/00, 2001).

Известен способ определения качества гомеопатических лекарственных средств путем освещения когерентным линейно поляризованным оптическим излучением гомеопатического множественного разведения лекарственного вещества, не содержащего его молекул, которое размещают в постоянном магнитном поле и производят регистрацию рассеянного прошедшего излучения посредством временного накопления значений интенсивности его поляризованной компоненты в режиме оптического смещения от разных точек исследуемой среды, а анализ осуществляют при вычислении частотного спектра сверхмедленных флуктуаций интенсивности прошедшего излучения и сравнении его с эталонным образцом (RU 2112976 C1, G01N 33/15, 1998).

Кроме того, известен способ качественного определения гомеопатического лекарственного препарата или потенцированной формы вещества, включающий воздействие эталонным реагентом на исследуемую среду и регистрацию изменения физико-химических параметров, в котором в качестве эталонного реагента используют набор известных веществ, близких или сходных по структуре и/или составу к определяемому гомеопатическому лекарственному препарату или веществу в потенцированной форме, и антител к этим известным веществам, при этом идентификацию гомеопатического лекарственного препарата или потенцированной формы вещества производят по тому известному веществу, реакция которого с соответствующим антителом при введении в реакционную среду гомеопатического лекарственного препарата или потенцированной формы вещества протекает с изменениями, регистрируемыми иммунохимическим методами анализа, основанными на реакции "антиген-антитело" (RU 2195648 C2, G01N 33/15, 2002).

Однако известные вышеуказанные способы не обеспечивают надежного и достоверного качественного и количественного определения подлинности лекарственного средства и активности, ассоциированной с носителем лекарственных средств, в том числе и приготовленных, преимущественно, по гомеопатической технологии.

Технический результат, на получение которого направлено изобретение, заключается в повышении надежности и достоверности определения «in vitro» (вне организма) подлинности и фармакологической модифицирующей активности, ассоциированной с носителем лекарственных средств, в том числе и приготовленных, преимущественно, по гомеопатической технологии и практически не содержащих молекул исходного (активного) вещества.

Решение поставленной задачи с достижением заявленного технического результата обеспечивается тем, что в способе определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, приобретенной в процессе активирования при технологической обработке исходного вещества в виде многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с использованием в носителе, которая проявляется в способности непосредственно изменять (или влиять на) физико-химические и/или биологические свойства исходного вещества при воздействии на него указанным активированным носителем, согласно изобретению, аналитическими методами определяют наличие или отсутствие молекул исходного вещества в указанном активированном носителе и измеряют аналитическими методами один или несколько характерных параметров исходного вещества до и после взаимодействия с ним указанного активированного носителя, при этом степень выраженности модифицирующей активности определяют по величине изменения характерного параметра в относительных единицах.

Кроме того, при наличии в модифицированном растворителе молекул исходного вещества перед измерением характерного параметра исходного вещества при взаимодействии с ним указанного активированного носителя из последнего удаляют молекулы исходного вещества.

При этом в качестве носителя используют жидкий растворитель или при тритурации твердый носитель.

Кроме того, дополнительно регистрируют аналитическими методами влияние на физико-химические свойства исходного вещества неактивированного исходного носителя и/или другого вещества, которые обработаны путем многократного последовательного разведения или тритурации с промежуточным встряхиванием каждого разведения по гомеопатической технологии, и/или исходного вещества.

При этом степень выраженности модифицирующей активности определяют по величине изменения характерного параметра в относительных единицах активности (релиз -активности):

где X - количество единиц активности;

C - безразмерный коэффициент пропорциональности, который зависит от аналитической методики, используемой для измерения характерного параметра, отображающего исходного физико-химические и/или биологические свойства и величины характерного параметра. В частном случае, например, C=10к, где к - целое число из ряда 1, 2, 3, … и т.д.;

A - значение характерного параметра исходного вещества до взаимодействия с ним указанного технологически обработанного носителя;

Am - значение того же характерного параметра исходного вещества после взаимодействия с ним указанного технологически обработанного носителя.

При реализации заявленного способа могут быть использованы различные методы качественного и количественного анализа, обеспечивающие высокую чувствительность и достоверность при сверхнизких концентрациях вещества, в том числе методы спектрометрии, включая масс-спектрометрию, хромато-масс-спектрометрию (газожидкостную (ГЖХ) и высокоэффективную жидкостную (ВЭЖХ) хроматографию), спектроскопию ядерного магнитного резонанса ( ЯМР); методы иммуноферментного анализа (ИФА); биологические методы и другие, пригодные для реализации заявленного способа методы (см., например, Золотов Ю.А. (ред.). Основы аналитической химии в двух книгах. Учебник для вузов. 3-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. шк. , 2004; Васильев В.П. Аналитическая химия. 1989; Отто М. Современные методы аналитической химии том. 2003).

Кроме того, при наличии в модифицированном растворителе молекул исходного вещества их удаляют известными методами, например, при использовании в качестве исходного вещества белка его молекулы удаляют нагреванием до денатурации с последующим фильтрованием, или методом ультрафильтрации (молекулярной фильтрацией) с предварительным фильтрованием через более крупные поры и т.п. (см., например, "The Production of High-Purity Water" В.М. Stewart The production of high-purity water in the clinical laboratory // Laboratory Medicine. - 2000. - V.31 (11) - P.605-611; "Review of Electro-assisted methods for water purification" J. Grimm, D. Bessarabov, R. Sanderson Review of electro-assisted methods for water purification // Desalination. - 1998. - V.I 15 (3) - P.285-294; "reverse flow filtration" I.A. Koznacheev et al. Water purification of organic inclusions in a reverse flow filtration combustion reactor // International Journal of Heat and Mass Transfer - 1998. 54 - P.932-937).

Благодаря сочетанию процесса определения аналитическими методами наличия или отсутствия молекул исходного вещества в указанном активированном носителе с измерением аналитическими методами по крайней мере одного характерного параметра исходного вещества до и после взаимодействия с ним указанного активированного носителя, подтверждается (обосновывается), во-первых, что ассоциированная с носителем модифицирующая активность обусловлена не наличием молекул исходного вещества, а физико-химические и/или биологические свойства указанного носителя отличаются от физико-химических и/или биологических свойств исходного вещества, и во-вторых, что активированный носитель получен с использованием исходного вещества, а его модифицирующая активность обусловлена именно процессом технологической обработки исходного вещества в виде многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с использованием указанного носителя, и, соответственно, «in vitro» (вне организма) доказывается достоверность и подлинность лекарственного средства, приготовленного на основе указанного активированного носителя с использованием исходного вещества, преимущественно, по гомеопатической технологии не содержащего молекул исходного (активного) вещества. Кроме того, заявленное измерение аналитическими методами по крайней мере одного характерного параметра исходного вещества до и после взаимодействия с ним указанного активированного носителя обеспечивает возможность количественно определить степень выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем в относительных безразмерных единицах активности (релиз - активности). Заявленный способ реализуется следующим образом.

Для определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, осуществляют последовательно следующие операции:

a. представление носителя с модифицирующей активностью, активированного в процессе технологической обработки исходного вещества путем многократного последовательного уменьшения концентрации с использованием указанного носителя, при котором указанный носитель не содержит молекулярной формы указанного исходного вещества,

b. проверка указанного в шаге a. раствора на специфичность вещества, при этом проверка включает в себя

i. воздействие указанным в шаге a. носителем на молекулярную форму исходного вещества

ii. предпочтительно, воздействие указанным в шаге a. носителем на молекулярную форму другого вещества и/или растворителя

iii. измерение аналитическими методами по крайней мере одного физико-химического и/или биологического характерного параметра указанной молекулярной формы исходного вещества (A) и указанной комбинации по п. b.i. (Aм), при которой указанный носитель специфически модифицирует эффект-способность изменять физико-химические и/или биологические свойства исходного вещества, считается специфичной к веществу, если указанный характерный параметр статистически достоверно изменяется при осуществлении п. b.i. (и не изменяется статистически достоверно при осуществлении п. b.ii.)

c. определение модифицирующей активности, ассоциированной с носителем в относительных единицах активности по формуле:

где C преимущественно равно 100 или 1000.

Носитель ассоциированной с модифицирующей активностью приготовляют, преимущественно по гомеопатической технологии, путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части матричного раствора исходного вещества в 9 частях (для десятичного разведения) или в 99 частях (для сотенного разведения) или в 999 частях (для тысячного разведения) нейтрального растворителя с многократным промежуточным вертикальным встряхиванием ("динамизацией или активированием") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой кратности разведения, например, по гомеопатическому методу (см., например, В. Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с. 14-29).

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С 12, в соответствии с гомеопатической технологией, одну часть упомянутого матричного раствора исходного вещества, например, с концентрацией 2,5 мг/мл, разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 70% этилового спирта) и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное C1 разведение. Из 1-го сотенного C1 разведения приготовляют 2-ое сотенное разведение C2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение C12. Таким образом, 12-е сотенное разведение C12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-ой части матричного раствора исходного вещества с концентрацией 2,5 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, приготовленный из матричного раствора, разведенного в 10012 раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений C30, C50 или C200.

При использовании в качестве биологически активного жидкого компонента смеси различных гомеопатических, преимущественно сотенных, разведений, исходного вещества каждый компонент состава (например, C12, C30, C50 или C200) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно, до получения C11, C29, C49 или C199) и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированный носитель, приготовленный из матричного раствора, разведенного в 10012, в 10030, в 10050 или в 100200, что эквивалентно смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 или C200.

Если в качестве исходного вещества используют твердое, плохо растворимое в нейтральном носителе вещество, приготовляют активированный носитель, ассоциированный с модифицирующей активностью, в виде порошкового растирания (тритурации), при этом исходное вещество растирают до получения порошка, одну часть которого растирают в течение часа с 99 частями твердого нейтрального носителя (например, лактозы или изомальта) до получения 1-го сотенного растирания. Затем одну часть полученной смеси аналогичным образом растирают с 99 частями лактозы и т.д. до получения заданной кратности, или, например, после получения тритурации 3-го сотенного растирания (эквивалентного C3), и растворяют в 79 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 70% этилового спирта) и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают, потенцируют, получая 4-е сотенное разведение C4. Дальнейшие разведение производят по вышеуказанной гомеопатической технологии.

Пример 1

Для определения выраженности модифицирующей активности, использовали активированный носитель, приготовленный из исходного вещества - матричного раствора кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ) в процессе многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с многократным промежуточным встряхиванием и использованием исходного носителе в виде водно-спиртового раствора, путем разведения в 10012, в 10030 и в 10050, что эквивалентно смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50. Изменение физико-химических и/или биологических свойств исходного вещества кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ)) определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а в качества характерного параметра измеряли количество вещества.

Список сокращений:

AT – антитела,

ИФН гамма - интерферон гамма,

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография,

АН - активированный носитель,

ФСБ - фосфатно-солевой буфер,

АФСБ - активированный по гомеопатической технологии фосфатно-солевой буфер,

IgG - иммуноглобулин человека класса G, включающий ИФН гамма-интерферон гамма.

А воды - активированная по гомеопатической технологии вода

Определение количества вещества проводилось по оценке площади пика методом ВЭЖХ. В качестве тестируемого образца была выбрана смесь IgG + АН. В качестве контрольных образцов были взяты следующие смеси: IgG + А воды, IgG + вода, IgG + АФСБ.

Тестируемые образцы готовили, смешивая IgG (50 мг/мл) и АН (или А воды, или АФСБ, или воду) с соотношением 1:2 по объему. Полученные смеси фильтровали с использованием целлюлозно-ацетатных фильтров с размером пор 0.45 мкм.

Анализ проводили на системе высокоэффективного жидкостного хроматографического разделения в градиентном режиме. В качестве стационарной фазы использовали анионобменную колонку, в качестве подвижной фазы - смесь двух фаз (1 фаза - ацетонитрил, 2 фаза - растворы гидрофосфата калия и хлорида калия). Детектирование производили с использованием UV-Vis детектора, длина волны сканирования - 280 нм.

Калибровку и обнуление базовой линии UV-Vis детектора осуществляли перед и после каждого анализа.

Приготовленные смеси помещали в виалы и с помощью автосэмплера вводили хроматографическую систему. Время анализа каждого тестируемого образца составляло примерно 23 минуты.

По окончании анализа хроматографическую колонку уравновешивали в начальных условиях градиента подвижной фазы при постоянной скорости потока.

Сигнал от тестируемых образцов регистрировали в виде хроматограммы пиков, соответствующих, предположительно, легкой и тяжелой цепям IgG. Рассчитывали площади спектрофотометрических пиков первого максимума (Max-1 - соответствует тяжелым цепям иммуноглобулинов) и второго максимума (Max-2 — соответствует легким цепям иммуноглобулинов). Результаты исследования представлены в таблице 1.

Табл.1 Площади максимумов хроматографического пика Тестируемый образец Площади максимумов хроматографического пика Модифицирующая активность вещества в единицах ЕА при C=100 Max-1 Max-2 Max-1 Max-2 1 IgG + АН 17207,9±434,7 45860,6±9427,3 2 IgG + вода 30270,2±980,6 5577,4±467,5 43,2 722,3 3 IgG + А воды 28704,0±4265,3 5626±686,6 40,1 715,2 4 IgG + АФСБ 25888,7±1514Д 7135,7±746,0 33,5 542,7

Эксперементально показано, что АН к ИФН гамма снижают площади пика IgG первого максимума (Max-1 — соответствует тяжелым цепям иммуноглобулинов) и повышают площади пика IgG второго максимума (Max-2 - соответствует легким цепям иммуноглобулинов) по сравнению с контролями.

Таким образом, можно констатировать, что:

1. априори активированный носитель в силу используемой технологии при приготовленных гомеопатических разведениях C12, C30, С50 не содержит молекул исходного вещества;

2. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем достоверно подтверждает, что указанный активированный носитель приготовлен на основе исходного вещества ИФН гамма-интерферон гамма.

3. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем подтверждает наличие выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, и обеспечивает возможность выражения указанной модифицированной активности, определенной с использованием метода (ВЭЖХ), в безразмерных единицах активности по формуле (1) (см. Таблицу 1).

Пример 2

Для определения выраженности модифицирующей активности использовали активированный носитель, приготовленный из исходного вещества - матричного раствора кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ) в процессе многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с многократным промежуточным встряхиванием и использованием исходного в носителе в виде водно-спиртового раствора, путем разведений в 10012, в 10030 и в 10050, что эквивалентно смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50. Изменение физико-химических и/или биологических свойства исходного вещества кроличьих антител к гамма-интерферону человека (AT к ИФН-γ)) определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а в качества характерного параметра измеряли количество вещества.

Список сокращений:

AT — антитела

ИФН гамма - интерферон гамма

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

АН - активированный носитель

А воды — активированная по гомеопатической технологии вода.

Определение количества вещества проводилось по оценке площади пика методом ВЭЖХ. В качестве тестируемого образца была выбрана смесь AT к ИФН гамма + АН. В качестве контрольных образцов были взяты следующие смеси: AT к ИФН гамма + А воды, AT к ИФН гамма + вода.

Тестируемые образцы готовили, смешивая AT к ИФН гамма и АН (или А воды, или воду) с соотношением 1:2 по объему. Полученные смеси перемешивали на Vortex в течение 15 с, инкубировали при комнатной температуре в течение 18 ч, а затем добавляли АН (или А воды, или воду).

Анализ проводили на системе высокоэффективного жидкостного хроматографического разделения в градиентном режиме. В качестве стационарной фазы использовали октадецилсилановую колонку с обращенной фазой, в качестве подвижной фазы - смесь двух фаз (1 фаза - ацетонитрил с добавками метиловой и трифторуксусной кислот, 2 фаза - вода деионизованная с добавками метиловой и трифторуксусной кислот). Детектирование производили с использованием UV-Vis детектора, длина волны сканирования - 280 нм.

Калибровку и обнуление базовой линии UV-Vis детектора осуществляли перед и после каждого анализа.

Приготовленные смеси помещали в виалы и с помощью автосэмплера вводили хроматографическую систему. Время анализа каждого тестируемого образца составляло примерно 15 минут.

По окончании анализа хроматографическую колонку уравновешивали в начальных условиях градиента подвижной фазы при постоянной скорости потока.

Сигнал от тестируемых образцов регистрировали в виде хроматограммы пика, соответствующего белку. Рассчитывали площадь спектрофотометрического пика. Результаты исследования представлены в таблице 2.

Таблица 2 Площади максимумов хроматографического пика Тестируемый образец Площадь хроматографического пика Модифицирующая активность вещества в единицах EA при C=100 1 AT к ИФН гамма + PAP AT к ИФН гамма 113,1±3,6 2 AT к ИФН гамма + РАР воды 123,2±3,6 8,2 3 AT к ИФН гамма + вода 128,3±0,3 11,8

Было показано, что PAP AT к ИФН гамма снижают площади пика AT к ИФН гамма по сравнению с контролями.

Таким образом, можно констатировать, что:

1. априори активированный носитель в силу используемой технологии при приготовленных гомеопатических разведениях C12, C30, C50 не содержит молекул исходного вещества;

2. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем достоверно подтверждает, что указанный активированный носитель приготовлен на основе исходного вещества ИФН гамма — интерферон гамма;

3. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем подтверждает наличие выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, и обеспечивает возможность выражения указанной модифицированной активности, определенной с использованием метода (ВЭЖХ), в безразмерных единицах активности по формуле (1) (см.Таблицу 2).

Пример 3

Для определения выраженности модифицирующей активности использовали активированный носитель, приготовленный из исходного вещества - диклофенака натрия в процессе многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с многократным промежуточным встряхиванием и использованием исходного носителе в виде водно-спиртового раствора, путем разведения в 10012, в 10030 и в 100200, что эквивалентно смеси сотенных гомеопатических разведении C12, C30, C200. Изменение физико-химических и/или биологических свойства исходного вещества диклофенака определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а в качества характерного параметра измеряли количество вещества.

Список сокращений

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

АН - активированный носитель

ФСБ - фосфатно-солевой буфер

АФСБ - активированный по гомеопатической технологии фосфатно-солевой буфер

Количественное определение диклофенака проводилось по оценке площади пика методом ВЭЖХ. В качестве тестируемого образца была выбрана смесь диклофенак + лактоза, насыщенная АН. В качестве контрольных образцов были взяты следующие смеси: диклофенак + лактоза, насыщенная АФСБ, диклофенак + лактоза ненасыщенная.

Тестируемые образцы были представлены в виде порошка диклофенака натрия, лактозы ненасыщенной и лактозы, насыщенной АН (или АФСБ). Порошки растворяли в воде дистиллированной (соотношения массы навески диклофенака к массе навески лактозы составляло 1:3, объем воды для растворения был одинаковый). Приготовленные растворы смешивали с раствором диклофенака натрия 1:3 по объему. Растворы перемешивали, вертикально встряхивая флаконы вручную 15 секунд. Смеси растворов разбавляли бидистиллятом до конечной концентрации диклофенака 0,3 мкг/мл. Растворы перемешивали вручную в течение 15 секунд, вертикально встряхивая колбы. Полученные смеси инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 18 ч.

Анализ проводили на системе высокоэффективного жидкостного хроматографического разделения в градиентном режиме. В качестве стационарной фазы использовали колонку на основе силикагеля, модифицированную октадецилом, в качестве подвижной фазы - смесь двух фаз (1 фаза - вода дистиллированная с добавками муравьиной и трифторуксусной кислот, 2 фаза - ацетонитрил с добавками муравьиной и трифторуксусной кислот). Детектирование производили с использованием диодноматричного детектора, длина волны сканирования - 276 нм.

Обнуление базовой линии UV-Vis детектора осуществляли перед каждым анализом.

Приготовленные смеси помещали в виалы и с помощью автосэмплера вводили хроматографическую систему. Время анализа каждого тестируемого образца составляло примерно 15 минут.

По окончании анализа хроматографическую колонку уравновешивали в начальных условиях градиента подвижной фазы при постоянной скорости потока.

Сигнал от тестируемых образцов регистрировали в виде хромато граммы пика, соответствующего диклофенаку. Рассчитывали площадь спектрофотометрического пика. Результаты исследования представлены в таблице 3 (детектирование при 276 нм).

Таблица 3 Площади максимумов хроматографического пика Тестируемый образец Площадь хроматографического пика Модифицирующая активность вещества в единицах ЕА при C=100 1 Диклофенак + лактоза, насыщенная АН 66039,3±549,1 2 Диклофенак + лактоза, насыщенная АФСБ 42652,0±484,2 54,8 3 Диклофенак + лактоза ненасыщенная 32004,3±1113,7 106,3

Было показано, что площадь пика диклофенака, смешанного с АН, превышает площадь пика диклофенака, смешанного с контролями: лактозой ненасыщенной и лактозой, насыщенной АФСБ.

Таким образом, можно констатировать, что:

1. априори активированный носитель в силу используемой технологии при приготовленных гомеопатических разведениях C12, C30, C50 не содержит молекул исходного вещества;

2. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем достоверно подтверждает, что указанный активированный носитель приготовлен на основе исходного вещества ИФН гамма — интерферон гамма

3. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем подтверждает наличие выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем и обеспечивает возможность выражения указанной модифицированной активности, определенной с использованием метода ВЭЖХ, в безразмерных единицах активности по формуле (1) (см. Таблицу 3).

Пример 4

Для определения выраженности модифицирующей активности использовали активированный носитель, приготовленный из исходного вещества - матричного раствора кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ) в процессе многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с многократным промежуточным встряхиванием и использованием исходного в носителе в виде водно-спиртового раствора, путем разведения в 10012, в 10030 и в 10050, что эквивалентно смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50. Изменение физико-химических и/или биологических свойств исходного вещества кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ) ) определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), а в качества характерного параметра измеряли изменение количества комплексов антиген-антитело.

Список сокращений

AT – антитела,

ИФА - твердофазный иммуноферментный анализ,

ИФН гамма - интерферон гамма,

АН - активированный носитель,

ОП - оптическая плотность,

ФСБ - фосфатно-солевой буфер,

АФСБ - активированный по гомеопатической технологии фосфатно-солевой буфер.

Подлинность препаратов на основе активированного носителя, ассоциированного с модифицирующей активностью, может быть подтверждена с помощью ИФА посредством определения изменения физико-химических свойств исходного вещества ИФН гамма-интерферон гамма после воздействия на него указанным активированным носителем, которая выражается в изменении количества комплексов антиген-антитело.

Перед проведением анализа AT к ИФН гамма и АН (или АФСБ в качестве плацебо) предварительно инкубировали в течение суток при 4°C, в ходе чего AT к ИФН гамма связывались с ИФН гамма-раствора. После инкубации определяли количество AT к ИФН гамма, связывающихся с ИФН гамма, адсорбированным на твердой фазе ИФА планшета, и оставшихся после связывания с ИФН гамма в растворе. Анализ проводили с использованием планшета, на поверхности которого был абсорбирован антиген ИФН гамма.

После преинкубации полученные образцы тестировали в соответствии со стандартной схемой проведения ИФА. Количество образовавшихся комплексов антиген-антитело, адсорбированных на твердой фазе, определяли путем измерения в лунках планшета оптической плотности растворов, учитывая реакцию по экстинции раствора хромогена, изменяющего при разложении субстрата ферментом свою окраску. Экстинкцию раствора определяли спектрофотометрически на длине волны 490 нм в одноволновом режиме. Чем больше комплексов антиген-антитело образовалось на планшете, тем меньше AT к ИФН гамма связалось с ИФН гамма в растворе.

Средняя ОП образцов для двух аналогичных экспериментов, проинкубированных с АН, составила 0,603±0,075 (в случае, когда АН или плацебо сразу смешивали с антигеном и с AT к ИФН гамма и инкубировали сутки) или 0,251±0,027 (в случае, если смешивали АН или плацебо смешивали с AT к ИФН гамма, а через 40 мин инкубации сбавляли антиген и инкубировали сутки), тогда как для ИФН гамма, проинкубированного с АФСБ, оптические плотности составили 0,812±0,084 и 0,391±0,023 соответственно.

В результате эксперимента выявлено, что водные растворы АН снижают количество комплексов антиген-антитело в растворе по сравнению с контролем, что подтверждает подлинность препарата, приготовленного на основе кроличьих антител к гамма-интерферону человека (AT к ИФН-γ).

Таким образом, можно констатировать, что:

1. априори активированный носитель в силу используемой технологии при приготовленных гомеопатических разведениях C12, C30, С50 не содержит молекул исходного вещества;

2. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем достоверно подтверждает, что указанный активированный носитель приготовлен на основе исходного вещества ИФН гамма - интерферон гамма;

3. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем подтверждает наличие выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, и обеспечивает возможность выражения указанной модифицированной активности, определенной с использованием метода твердофазного иммуноферментного анализа, в безразмерных единицах активности по формуле (1). Выраженность модифицирующей активности, рассчитанная (по сравнению с плацебо) по формуле (1), составила 25,7-35,8 ЕА.

Пример 5

Для определения выраженности модифицирующей активности использовали активированный носитель, приготовленный из исходного вещества - матричного раствора кроличьих антител к гамма-интерферону человека (AT к ИФН-γ) в процессе многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с многократным промежуточным встряхиванием и использованием исходного в носителе в виде водно-спиртового раствора, путем разведения в 10012, в 10030 и в 10050, что эквивалентно смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, С50. Изменение физико-химических и/или биологических свойств исходного вещества кроличьих антител к гамма-интерферону человека (AT к ИФН-γ) определяли биологическим методом пьезокварцевого иммуносенсора с измерением изменения в связывании антител, адсорбированных на поверхности иммуносенсора, с антигеном под действием указанного выше активированного носителя.

Список сокращений

Δf - изменение частоты колебаний пьезокварцевого резонатора,

APTS - гамма-аминопропилтриэтоксисилан,

Sr - стандартное отклонение,

AT – антитела,

ИФН гамма – интерферон-гамма,

АН - активированный носитель,

ФСБ - фосфатно-солевой буфер,

АФСБ — активированный по гомеопатической технологии фосфатно-солевой буфер.

Аналитическим сигналом пьезокварцевого иммуносенсора служит изменение частоты колебаний пьезокварцевого резонатора (Δf) при увеличении или уменьшении массы биорецепторного покрытия за счет образования или разрушения на его поверхности иммунного комплекса. В данном исследовании изучали влияние состава анализируемых проб на аналитический сигнал сенсора. В качестве тестируемого образца была выбрана смесь ИФН гамма и АН. В качестве контрольного образца взята смесь ИФН гамма и АФСБ. Образцы тестировались в виде водных растворов.

Для создания иммуносенсора биораспознающий рецепторный слой формировали на основе APTS. При помощи микрошприца на поверхность золотого электрода сенсора, диаметром 8 мм, последовательно наносили 0.8 мкл APTS (высушивали при 80°C в сушильном шкафу в течение 20 мин), 5 мкл глутарового альдегида (2,5%-ный раствор в бидистиллированной воде) и затем 5 мкл раствора антител к ИФН гамма (9,6 нг/мл). Для каждого измерения формировали новый биорецепторный слой.

Предварительная подготовка пробы включала смешивание 50 мкл ИФН гамма (30 мг/мл) с 50 мкл тестируемого образца. Затем пробу нагревали при 37°C в течение 45 минут и перемешивали 10 минут при помощи центрифуги (1000 об/мин). Затем 2,5 мкл полученного раствора наносили на поверхность сенсора с иммобилизованными AT к ИФН гамма, выдерживали в течение 30 мин, промывали дистиллированной водой, высушивали до постоянной массы и измеряли сигнал сенсора в статическом режиме. Изменение связывания антигена и антител фиксируется по изменению массы молекулы интерферона.

В качестве сенсоров использовались пьезокварцевые резонаторы АТ-среза с золотыми электродами диаметром 8 мм (ЗАО «Этна», Москва). Аналитический сигнал регистрировали с помощью компьютера и преобразователя «Дископ» («Бафика», Москва).

Результаты эксперимента представлены в таблице 4.

Таблица 4 Влияние состава анализируемых проб на аналитический сигнал сенсора Состав пробы Δf (M±SD) Модифицирующая активность вещества в единицах ЕА при С=100 ИФН гамма + АН 89±4 ИФН гамма + АФСБ 123±5 2764,2

В результате эксперимента выявлено, что водные растворы АН оказывают влияние на частоту колебаний пьезокварцевого резонатора, вызывая ее снижение по сравнению с контролями.

Таким образом, можно констатировать, что:

1. априори активированный носитель в силу используемой технологии при приготовленных гомеопатических разведениях C12, C30, C50 не содержит молекул исходного вещества;

2. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем достоверно подтверждает, что указанный активированный носитель приготовлен на основе исходного вещества ИФН гамма - интерферон гамма;

3. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем подтверждает наличие выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, и обеспечивает возможность выражения указанной модифицированной активности в безразмерных единицах активности по формуле (1), которая при измерении с использованием метода пьезокварцевого иммуносенсора составила 2764,2 ЕА.

Пример 6

Исследование изменения нейтрализующей активности антител к интерферону гамма под действием релиз-активных антител к интерферону гамма (Анаферон детский), метод - измерение нейтрализующей активности.

Для определения выраженности модифицирующей активности, использовали активированный носитель, приготовленный из исходного вещества - матричного раствора кроличьих антител к гамма-интерферону человека (AT к ИФН-γ) в процессе многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с многократным промежуточным встряхиванием и использованием исходного носителе в виде водно-спиртового раствора, путем разведения в 10012, в 10030 и в 10050, что эквивалентно смеси сотенных гомеопатических разведении C12, C30, C50. Изменение физико-химических и/или биологических свойств исходного вещества кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ) определяли методом изменения нейтрализующей активности антител к интерферону гамма под действием указанного активированного носителя, ассоциированного с модифицирующей активностью, а в качестве характерного параметра определяли по количеству выживших клеток, после инфицирования вирусом.

Список сокращений

R(X) - RPMI-1640 культурная среда, содержащая Х% фетальной телячьей сыворотки,

AT – антитела,

ИФН гамма – интерферон-гамма,

НЕ - нейтрализующая активность,

АН - активированный носитель,

ЦПЭ — цитопатический эффект,

ФСБ - фосфатно-солевой буфер.

Нейтрализующая активность (НЕ/мл) препаратов на основе антител основана на ингибировании связывания ИФН-гамма с его рецептором, экспрессированым на клеточной мембране.

Нейтрализующая активность образцов кроличьих поликлональных антител к ИФН гамма определялась в культурной среде [R(1)] в присутствии АН или контрольного образца (дистиллированная вода).

Выращенные клетки фибробластов легких эмбриона человека НЕр-2 трипсинизировали, суспендировали в 10 мл R( 10) и наносили на планшет в концентрации 2,3×105 клеток/лунка (100 мкл/лунка). Клетки инкубировали 24 часа при 37°C во влажной камере, содержащей 7% CO2. ИФН гамма постадийно разводили в R(l), начиная с 500 пг/мл до 3,9 пг/мл, и помещали в лунки. Кроличьи поликлональные антитела к ИФН гамме (последовательно 2-кратно разбавленные в R(l), начиная с разбавления в 1000 раз) смешивали с ИФН гамма в фиксированной концентрации (250 пг/мл) и АН (10% (об/об) в R(l)) или дистиллированной водой (10% (об/об) в R(l)). Планшеты инкубировали 1 ч при 37°С.

После инкубации лунки опустошали и добавляли вирус везикулярного стоматита в R(l) в количестве 100 мкл/лунка. После этого клетки инкубировали до момента, пока ЦПЭ в линии контроля не достигнет >90% в течение 20-24 ч при 37°С.

После удаления культурной среды оставшиеся клетки промывали ФСБ (200 мкл/ячейка) и обрабатывали кристаллическим фиолетовым в формалине (50 мкл/ячейка) в течение 15 мин при КТ. 100% окрашивание монослоя происходило в том случае, если все клетки живы, если же клетки мертвы (ЦПЭ), окрашивание монослоя не наблюдалось.

Планшет промывали водой. Лунки с разведениями, которые показали 50% ЦПЭ, определяли визуально, а потом проверяли спектрофотометрически.

Эффект оценивается по количеству выживших клеток (доля выживших клеток от общего количества клеток). Оценка эффекта АН осуществляется по снижению нейтрализующей активности AT к ИФН гамма. Нейтрализующую активность препаратов определяли по формуле F×А×10/С, в которой F - обратно разведению антител, А - ЭЕ/мл стандартного препарата при 50% ЦПЭ, а С - концентрация антител в мг/мл.

В результате эксперимента установлено:

- при инкубации ИФН гамма человека (500 пг на 1 мл культуральной среды) с клеточной линией фибробластов легких эмбриона человека НЕр-2 (2,3⋅105 клеток/лунка), инфицированных вирусом везикулярного стоматита (1,6⋅105 БОЕ/мл), наблюдалось полное предотвращение цитопатического действия вируса (100% инфицированных клеток выжило);

- при инкубации ИФН гамма человека (500 пг на 1 мл культуральной среды) и кроличьих поликлональных AT к ИФН гамма (0,525 мкг на 1 мл культуральной среды) с клеточной линией фибробластов легких эмбриона человека НЕр-2 (2,3⋅105 клеток/лунка), инфицированных вирусом везикулярного стоматита (1,6⋅105 БОЕ/мл), наблюдалось 50% предотвращение цитопатического действия вируса (50% инфицированных клеток выжило);

- при инкубации ИФН гамма человека (500 пг на 1 мл культуральной среды) и кроличьих поликлональных AT к ИФН гамма (0,525 мкг на 1 мл культуральной среды), а также АН (10% (об/об) культуральной среды) с клеточной линией фибробластов легких эмбриона человека НЕр-2 (2,3⋅105 клеток/лунка), инфицированных вирусом везикулярного стоматита (1,6⋅105 БОЕ/мл), наблюдалось 75% предотвращение цитопатического действия вируса (75% инфицированных клеток выжило).

При этом выявлено, что АН оказывает модулирующий эффект на нейтрализующую активность поликлональных антител.

Таким образом, можно констатировать, что:

1. априори активированный носитель в силу используемой технологии при приготовленных гомеопатических разведениях C12, C30, C50 не содержит молекул исходного вещества;

2. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем достоверно подтверждает, что указанный активированный носитель приготовлен на основе исходного вещества ИФН гамма - интерферон гамма;

3. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем, подтверждает наличие выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем и обеспечивает возможность выражения указанной модифицированной активности в безразмерных единицах активности по формуле (1), которая при измерении с использованием метода пьезокварцевого иммуносенсора составила 50 ЕА.

Пример 7

Для определения выраженности модифицирующей активности, использовали активированный носитель, приготовленный из исходного вещества - матричного раствора кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ) в процессе многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с многократным промежуточным встряхиванием и использованием исходного носителе в виде водно-спиртового раствора, путем разведения в 10012, в 10030 и в 10050, что эквивалентно смеси сотенных гомеопатических разведении C12, C30, C50. Изменение физико-химических и/или биологических свойств исходного вещества - кроличьих антител к гамма-интерферону человека (AT к ИФН-γ) определяли методом спектроскопии и ядерного магнитного резонанса (ЯМР), а в качестве характерного параметра о молекулярном строении вещества.

Список сокращений

AT - антитела

ИФН гамма - интерферон гамма

ЯМР - ядерный магнитный резонанс

АН — активированный носитель.

Определение изменения конформации антител к интерферону гамма (AT к ИФН гамма) под действием АН проводилось методом спектроскопии ЯМР. В качестве плацебо были использованы гомеопатические разведения воды очищенной.

Для приготовления тестируемых образцов АН или плацебо смешивали с раствором AT к ИФН гамма в соотношении 2:1, при этом конечная концентрация AT к ИФН гамма в каждой пробе составила 0,8 мг/мл.

Эксперименты проводили на ЯМР-спектрометре Brucker Avance 700 с рабочей частотой 700 МГц. Тестируемые образцы помещали в магнитное поле прибора. При этом происходило возбуждение магнитоактивных изотопов водорода 1H. Сигнал от тестируемых образцов регистрировали в виде спектров ЯМР (накопление сигнала в течение 12 часов), характеризующих структуру и конформационное состояние AT к ИФН гамма.

Оценка конформационного состояния AT к ИФН гамма проводилась в рамках сравнительного анализа спектров, полученных от образца, содержащего AT к ИФН гамма + АН или AT к ИФН гамма + плацебо. Сравнение осуществляли наложением спектров друг на друга после соответствующего масштабирования.

В результате проведенного исследования было показано, что при добавлении АН к AT к ИФН гамма наблюдаются изменения спектра AT к ИФН гамма в диапазонах 8-8.5 ppm, 7.6-7.8 ppm, 6-6.6 ppm по сравнению со спектром AT к ИФН гамма + плацебо (фиг.1).

В результате эксперимента установлено, что АН влияют на конформацию AT к ИФН гамма в растворе.

Таким образом, можно констатировать, что:

1. априори активированный носитель в силу используемой технологии при приготовленных гомеопатических разведениях C12, C30, C50 не содержит молекул исходного вещества;

2. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем достоверно подтверждает, что указанный активированный носитель приготовлен на основе исходного вещества ИФН гамма - интерферон гамма

3. Изменение физико-химических свойств исходного вещества после воздействия на него указанным активированным носителем подтверждает наличие выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем.

Похожие патенты RU2643934C2

название год авторы номер документа
Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем 2013
  • Эпштейн Олег Ильич
RU2643936C2
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 2014
  • Эпштейн Олег Ильич
  • Тарасов Сергей Александрович
RU2579262C1
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И КОМПЛЕКСНОЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 2011
  • Эпштейн Олег Ильич
  • Тарасов Сергей Александрович
RU2577299C2
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО 2013
  • Эпштейн Олег Ильич
RU2595809C2
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО СИНДРОМА И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА 2011
  • Эпштейн Олег Ильич
RU2519196C2
КОМПЛЕКСНОЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ 2010
  • Эпштейн Олег Ильич
RU2502521C2
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ИНФИЦИРОВАНИЯ ВИЧ, ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ВИЧ ИЛИ АССОЦИИРОВАННЫХ С ВИЧ, В ТОМ ЧИСЛЕ СПИДА 2010
  • Эпштейн Олег Ильич
  • Тарасов Сергей Александрович
RU2535033C2
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 2014
  • Эпштейн Олег Ильич
  • Тарасов Сергей Александрович
RU2595807C2
СПОСОБ И КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИНФИЦИРОВАНИЯ ВИЧ, ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ВИЧ ИЛИ АССОЦИИРОВАННЫХ С ВИЧ, В ТОМ ЧИСЛЕ СПИДА 2010
  • Эпштейн Олег Ильич
  • Тарасов Сергей Александрович
  • Стрыгин Андрей Валерьевич
RU2516931C2
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ НЕЙРОТОКСИЧЕСКИМИ НАРУШЕНИЯМИ, И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ НЕЙРОТОКСИЧЕСКИМИ НАРУШЕНИЯМИ 2010
  • Эпштейн Олег Ильич
RU2446821C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 643 934 C2

Реферат патента 2018 года Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано для определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, приобретенной в процессе технологической обработки исходного вещества в виде многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с использованием носителя, которая проявляется в способности непосредственно изменять физико-химические и/или биологические свойства исходного вещества при воздействии на него указанным носителем. Для этого аналитическими методами определяют наличие или отсутствие молекул исходного вещества в указанном носителе и, при наличии молекул исходного вещества, перед измерением характерного параметра из носителя удаляют молекулы исходного вещества, и измеряют аналитическими методами один или несколько характерных параметров исходного вещества до и после взаимодействия с ним указанного носителя, при этом степень выраженности модифицирующей активности определяют по величине изменения характерного параметра в относительных единицах активности, рассчитываемых по формуле (1):

где X - количество единиц активности (ЕА); С - безразмерный коэффициент пропорциональности; А - значение характерного параметра исходного вещества до взаимодействия с ним указанного активированного носителя; Ам - значение того же характерного параметра исходного вещества после взаимодействия с ним указанного активированного носителя. Изобретение позволяет определить выраженность модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, приобретенной в процессе технологической обработки исходного вещества в виде многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с использованием носителя. 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 7 пр.

Формула изобретения RU 2 643 934 C2

1. Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, приобретенной в процессе технологической обработки исходного вещества в виде многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с использованием носителя, которая проявляется в способности непосредственно изменять физико-химические и/или биологические свойства исходного вещества при воздействии на него указанным носителем, характеризующийся тем, что аналитическими методами определяют наличие или отсутствие молекул исходного вещества в указанном носителе и при наличии молекул исходного вещества, перед измерением характерного параметра из носителя удаляют молекулы исходного вещества, и измеряют аналитическими методами один или несколько характерных параметров исходного вещества до и после взаимодействия с ним указанного носителя, при этом степень выраженности модифицирующей активности определяют по величине изменения характерного параметра в относительных единицах активности, рассчитываемых по формуле (1):

где X - количество единиц активности (ЕА);

С - безразмерный коэффициент пропорциональности;

А - значение характерного параметра исходного вещества до взаимодействия с ним указанного активированного носителя;

Ам - значение того же характерного параметра исходного вещества после взаимодействия с ним указанного активированного носителя.

2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве носителя используют жидкий растворитель.

3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве носителя используют твердый носитель.

4. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что дополнительно регистрируют аналитическими методами влияние на физико-химические свойства исходного вещества неактивированного носителя и/или другого вещества, которые обработаны путем многократного последовательного разведения или тритурации с промежуточным встряхиванием каждого разведения по гомеопатической технологии, и/или исходного вещества.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2018 года RU2643934C2

RU 2009106496 A, 27.08.2010
СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОМЕОПАТИЧЕСКОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ИЛИ ПОТЕНЦИРОВАННОЙ ФОРМЫ ВЕЩЕСТВА 2000
  • Эпштейн О.И.
  • Мягкова М.А.
RU2195648C2
СПОСОБ ИЗМЕНЕНИЯ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ИЛИ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ВЕЩЕСТВА 1999
  • Эпштейн О.И.
RU2161955C1
БУРЛАКОВА Е.Б
и др
Действие сверхмалых доз биологически активных веществ и низкоинтенсивных физических факторов// Хим
Физика
Способ и приспособление для нагревания хлебопекарных камер 1923
  • Иссерлис И.Л.
SU2003A1
Машина для добывания торфа и т.п. 1922
  • Панкратов(-А?) В.И.
  • Панкратов(-А?) И.И.
  • Панкратов(-А?) И.С.
SU22A1
РЫЖКИНА И.С
и др
Свойства супермолекулярных наноассоциатов, образующихся в водных растворах низких и сверхнизких концентраций биологически активных веществ
// Доклады академии наук, 2009, Т
Способ получения сульфокислот из нефтяных масел 1911
  • Петров Г.С.
SU428A1
РЫЖКИНА И.С
и др
Супрамолекулярные системы на основе амфифильных производных биологически активных фенолов: самоорганизация и реакционная способность в широкой области концентраций.// Доклады академии наук, 2009, Т.428, N 5, с.628-632.

RU 2 643 934 C2

Авторы

Эпштейн Олег Ильич

Даты

2018-02-06Публикация

2013-02-19Подача