СРЕДСТВО ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ МИКРОЦИРКУЛЯТОРНЫХ ПРОЦЕССОВ В ОРГАНИЗМЕ И СПОСОБ ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Российский патент 2018 года по МПК A61K36/21 A61K131/00 A61P9/00 

Изобретение относится к области медицины, экспериментальной биологии и фармакологии и может быть использовано для улучшения процессов микроциркуляции в организме.

Препараты, улучшающие микроциркуляцию, способствуют улучшению тока крови в сосудах микроциркулярного русла (артериолы, венулы, капилляры). Механизм данного действия связан с расширением сосудов микроциркуляторного русла (расширение артериол и расслабление сфинктеров прекапилляров) и улучшением реологических свойств крови (повышение гибкости эритроцитов, уменьшение вязкости крови, влияние на гемокоагуляцию), а его адекватная работа способствует нормализации обменных процессов в периферических тканях, восстановлению утилизации кислорода, тормозит процессы перекисного окисления липидов (Петрищев Н.Н. Тромборезистентность сосудов. СПб: АНТ-М, 1994, 130 с.).

Так для улучшения микроциркуляции в альвеолах и снятия спазма бронхиол используют наружно раствор ацетилсалициловой кислоты в растворе диметоксида (SU 822834, A61N 1/30, 1981). Для воздействия на микроциркуляцию крови при лечении рассеянного склероза используют супрастин, витамины В6 и В1, дипиридамол, глютаминовую и никотиновую кислоты (SU 950391, А61К 1/30, 1982).

Известен в качестве вспомогательного наружного средства состав для улучшения микроциркуляции при нарушениях капиллярной и венозной циркуляции различной этиологии, который содержит экстракт конского каштана, хитозан и эфирные масла различных растений: пихта, розмарин, лимон, лаванда, кориандр, базилик (RU 2287996, А61К 36/752, 36/15, 2006; 2195922, 2003).

Предложено средство для наружного применения при хронической венозной недостаточности нижних конечностей, предназначенное для уменьшения усталости ног, нормализации и восстановления микроциркуляторного русла кожи и подкожно жировой клетчатки, уменьшения отечности и болезненности (RU 2359690, А61К 36/48, 2006).

Предложена композиция, содержащая полифенолы какао, для возбуждения вазодилатации периферических кровеносных сосудов (RU 2435578, А61К 31/35, 2006).

Известны средства для приема внутрь, например, биологически активная добавка (RU 2207146, А61К 35/78, А61К 31/375, А61Р 25/28), способствующая нормализации периферического кровообращения.

Известно использование масла семян амаранта при онкологических, инфекционных, грибковых заболеваниях, вирусе герпеса, псориазе, нейродермите, экземе, шрамах, порезах, ранах и прочем.

Известны антитоксическая и гепатопротекторная активность масла семян амаранта (Музалевская Е.Н. Первичная оценка антитоксической и гепатопротекторной активности масла семян амаранта хвостатого / Е.Н. Музалевская, В.А. Николаевский // Проблемы разработки новых лекарственных средств: материалы Первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (3-5 июня, 2013). - Москва, 2013. - С. 74), гиполипидемическое и гипохолестеринемическое действие (Коренская И.М. Амарантовое масло снижает содержание общего холестерина в крови / И.М. Коренская, А.П. Салей, A.M. Макеев // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования: мат-лы Межрегион. науч.-мет. конференции «Фармобразование 2003» (21-23 апр. 2003). - Воронеж, 2003. - С. 178-180.; Коренская И.М. Сравнительный фармакологический анализ влияния амарантового и льняного масел на динамику липидного обмена крыс в условиях холестериновой нагрузки / И.М. Коренская, В.Ю. Сулин, Е.Ф. Сафонова, А.Н. Постыка // Вестник Воронежского государственного университета: серия химия, биология, фармация. - №1. - 2006. - С. 204-208), антиоксидантное действие (Близнецова Г.Н. Роль процессов свободнорадикального окисления в механизме гепатопротекторного действия масла семян амаранта / Г.Н. Близнецова, М.И. Рецкий, Н.Д. Полякова-Семенова, И.М. Коренская // Биомедицина. - 2006. - №2. - С. 105-112), антибактериальная активность (Коренская И.М. Изучение антибактериальной активности амарантового масла / И.М. Коренская, И.Е. Измалкова // Проблемы здоровьезбережения школьников и студентов. Новые науч. тенд. в медицине и фармации: мат-лы Междун. конф. (6-7 февраля 2008). - Воронеж, 2008, - С. 226-227), противоожоговое действие (Коренская И.М. Амарантовое масло как противоожоговое средство / И.М. Коренская, Т.А. Горохова, С.Н. Соленникова и др. // Actualni vymozenosti vedy - 2012, Materialy VIII Mexinorodni vedecko-practiKa conference. 27.06.2012 - 05.07.2012 Dil. 17. Biologicke vedy Chemie a chemicka technologiei. - Praha: Publishing House "Education and Science" s.r.o. 2012 - S. 5-6), кардиопротекторное действие (Yelisyeyeva O.P, Semen K.O, Ostrovska G.V, Kaminskyy D.V, Sirota T.V, Zarkovic N, Mazur D, Lutsyk O.D, Rybalchenko K, Bast A. / The effect of Amaranth oil on monolayers of artificial lipids and hepatocyte plasma membranes with adrenalin-induced stress. // Food Chemistry, Vol. 147, №15, 2014, p. 152-159).

Известен препарат, полученный путем экстракции семян амаранта, который обладает противоопухолевой активностью (RU 2131913, 1997), а также мазь для лечения при обморожениях (RU 2478368, А61К 9/06, 36/21, 1997), в состав которой входит воск, глицерин и амарантовое масло.

Известны растительные средства на основе амарантового масла для лечения атеросклеротических поражений сосудов нижних конечностей (RU 2214264, А61К 35/78, 2003), обладающие иммуномодулирующей (RU 2170096, А61К 35/78, 2001) и адаптогенной (RU 2155060, А61К 35/78, А61К 35/64, 2000) активностью. Предложено средство для профилактики и лечения хронических заболеваний печени (RU 2526172, 2014).

В известных источниках информации отсутствуют сведения об использовании масла семян амаранта, как самостоятельно, так и в составе с другими ингредиентами, в качестве средства для улучшения микроциркуляторных процессов в организме как человека, так и животных.

Задачей изобретения является расширение арсенала природных средств, способствующих улучшению микроциркуляторных процессов в организме.

Технический результат заключается в реализации поставленной задачи.

Технический результат достигается тем, что в качестве средства улучшающего микроциркуляторные процессы в организме, применяют масло, выделенное холодным прессованием зародышей и оболочек семян амаранта.

Для улучшения микроциркуляторных процессов в организме вводят внутрижелудочно животным масло амаранта, выделенное холодным прессованием зародышей и оболочек семян амаранта, в диапазоне доз 50 мг/кг - 150 мг/кг массы тела в пересчете на фосфолипиды. За пределами принятого интервала доз технический результат не достигается.

Выделенное холодным прессованием из зародышей и оболочек семян амаранта масло (RU 94044961, C11B 1/10, А23К 1/14, 1996), содержит (мас. %): фосфолипиды (7-9%), токоферол (витамин Е) (0,3%), ненасыщенные жирные кислоты (51,25%), сквален (3-12%), фитостерины (2%) и эфиры стеринов (1,7%) и каротиноиды. Высокое содержание токоферолов в масле свидетельствует о высокой стойкости его к окислению, а в сочетании со скваленом и фитостеринами, относящихся к физиологически активным соединениям, обладает ранозаживляющим и противоопухолевым свойствами (RU 2325069, 2009), гепатопротекторным действием (RU 2526172, 2014).

На фиг. 1 представлена таблица 1 с результатами влияния масла семян амаранта на микрососуды брыжейки тонкой кишки крыс при местном нанесении (^* - р<0,05 - достоверность различий при сравнении с исходным; ⁺ - р<0,05 - достоверность различий при сравнении с контролем); на фиг. 2 представлена брыжейка тонкой кишки крыс на фоне профилактики маслом семян амаранта интоксикации, индуцированной тетрахлорметаном (А, Б - через 24 часа после интоксикации; В, Г - 14 сутки после интоксикации; А, В - контроль; Б, Г - масло семян амаранта; 1 - кровоизлияния; 2 - расширение магистральных сосудов); на фиг. 3 представлена микроциркуляторное русло брыжейки тонкой кишки крыс при профилактическом введении масла семян амаранта на фоне интоксикации, индуцированной тетрахлорметаном. Биомикроскопия, ув 40 (А, Б - через 24 часа после интоксикации; В, Г - 14 сутки после интоксикации; А, В - контроль; Б, Г - масло семян амаранта; 1 - кровоизлияния; 3 - выход форменных элементов крови за пределы сосудистой стенки; 4 - замедление тока крови (сладж-синдром); 5 - увеличение извитости контуров микрососудов); на фиг. 4 представлена таблица 2 Изменение диаметра микрососудов микроциркуляторного русла брыжейки крыс при применении масла семян амаранта на фоне интоксикации, индуцированной тетрахлорметаном (AM - масло семян амаранта; ^* - р<0,05; ^** - р<0,01 - достоверность различий при сравнении с интактом; ⁺ - р<0,05; ⁺⁺ - р<0,01 - достоверность различий при сравнении с контролем); на фиг. 5 представлена таблица 3. Изменение общей эффективной обменной поверхности капилляров в брыжейке крыс при применении масла семян амаранта на фоне интоксикации, индуцированной тетрахлорметаном (AM - масло семян амаранта; ^* - р<0,05; ^** - р<0,01 - достоверность различий при сравнении с интактом; ⁺ - р<0,05; ⁺⁺ - р<0,01 - достоверность различий при сравнении с контролем).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Исследование влияния масла семян амаранта, полученного методом холодного прессования зародышей и оболочек семян амаранта (далее - масло семян амаранта), на функционирование микроциркуляторного русла брыжейки тонкой кишки крыс.

Исследование выполнено на 30 белых аутбредных половозрелых крысах самцах массой 346,2±12,9 г, которые были разделены случайным образом на 2 группы: опытная (20 голов) и контрольная (10 голов).

При биомикроскопии было проведено исследование состояния микроциркуляторного русла брыжейки тонкой кишки наркотизированных животных, предварительно находившихся на 24-часовой депривации, при местном нанесении нативного масла семян амаранта (при следующем соотношении компонентов, мас. %: фосфолипиды 8, токоферол 0,3, ненасыщенные жирные кислоты 75, сквален 6, фитостерины 2, эфиры стеринов 1,7, каротиноиды 0,005) - опытная группа и препарата сравнения (контрольная группа) - нерафинированного недезодорированного кукурузного масла в дозе 1 мг на исследуемый сегмент брыжейки площадью 95 мм с помощью модифицированной микропипетки.

Анестезия осуществлялась внутрибрюшинным введением свежеприготовленного раствора хлоролозы (40 мг/кг) и уретана (6 мг/кг).

Наблюдение за функционированием микроциркуляторного русла брыжейки тонкой кишки осуществляли в течение 20 минут с использованием способа мониторирования микрососудов брыжейки у лабораторных животных с помощью биомикроскопии (Патент РФ №2555136) с последующим анализом видеоизображения, полученного с использованием цифровой камеры Levenhuk C-Series и компьютерной программы ToupView. Регистрировали изменение диаметра микрососудов до нанесения на брыжейку исследуемых веществ (исходно) и через 5, 10, 15 и 20 минут после непосредственного нанесения.

При помощи методов математической статистики, общепринятых в биологии и медицине, определяли средние значения диаметра всех сосудов исследуемого сегмента брыжейки по следующим функциональным группам: 1) артериолы; 2) метартериолы; 3) прекапилляры; 4) капилляры (Чернух A.M., Александров П.Н., Алексеев О.В. Микроциркуляция. - М.: Медицина, 1984. - 432 с.). Среднее значение диаметра сосудов каждого функционального подразделения определяли при выборке, насчитывающей от 20 до 40 сосудов в каждой.

В результате проведенного исследования установлено, что через 5 минут после нанесения масла семян амаранта на брыжейку тонкой кишки крыс наблюдалось стойкое достоверное расширение сосудов (табл. 1, фиг. 1).

Наиболее выраженные изменения наблюдались через 15 минут после нанесения на брыжейку крыс масла семян амаранта. При этом диаметр артериол достоверно (р<0,05) относительно исходного и контроля увеличивался соответственно на 44,5% и 42,5%; метартериол - на 22,6% и 22,6%; прекапилляров - на 17,7% и 15,9%; капилляров - на 22,6% и 22,6%.

Через 20 минут после нанесения масла семян амаранта разница диаметра артериол с исходным и контролем составляла соответственно 39,9% и 38,2% (р<0,05). Диаметр метартериол относительно исходного и контроля увеличился соответственно на 29,7% и 27,5% (р<0,05); диаметр прекапилляров увеличивался относительно интакта на 16,9% (р<0,05); диаметр капилляров увеличивался относительно интакта и контроля соответственно на 19,4% и 16,2% (р<0,05).

Таким образом, впервые доказана способность масла семян амаранта, получаемого методом холодного прессования, вызывать стойкое достоверное увеличение диаметра микрососудов брыжейки крыс при местном нанесении на брыжейку крыс.

Пример 2. Изменение состояния микроциркуляторного русла брыжейки крыс при внутрижелудочном введении прессового масла семян амаранта на фоне острой пероральной интоксикации тетрахлорметаном.

Исследование выполнено на 96 белых аутбредных половозрелых крысах самцах массой 210,0±8,10 г, которые были разделены случайным образом на 3 группы - интактная (6 голов), контрольная (36 голов), 2 опытные группы (36 голов и 18 голов), отличающиеся дозами и схемами введения масла семян амаранта.

Моделирование интоксикации осуществляли однократным внутрижелудочным введением животным после пищевой депривации тетрахлорметана в виде 50% масляного раствора в дозе 4 мл/кг массы тела. Масло семян амаранта вводили с профилактической целью однократно внутрижелудочно в дозе 150 мг/кг (в пересчете на фосфолипиды) за 1 час до интоксикации; с лечебной целью через 24 часа после интоксикации в дозе 50 мг/кг (в пересчете на фосфолипиды) в течение 3-х дней 1 раз в день. Введение перечисленных веществ осуществляли с помощью металлического атравматичного желудочного зонда.

Анестезия осуществлялась внутрибрюшинным введением свежеприготовленного раствора хлоралозы (40 мг/кг) и уретана (6 мг/кг).

Изменение состояния микроциркуляторного русла брыжейки крыс регистрировали с использованием способа мониторирования микрососудов брыжейки у лабораторных животных с помощью биомикроскопии (Патент РФ №2555136) с последующим анализом видеоизображения, полученного с использованием цифровой камеры Levenhuk C-Series и компьютерной программы ToupView.

Регистрировали: наличие кровоизлияний, изменение диаметра микрососудов; изменение интенсивности кровотока в микрососудах, сосудистые (нарушение проницаемости стенок микрососудов, диапедез форменных элементов крови, микрокровоизлияния) и внутрисосудистые (гемодинамические) нарушения.

В результате исследования через 24 часа после интоксикации в контрольной группе животных при наружном осмотре окошек брыжейки отмечено наличие кровоизлияний диаметром 2-7 мм, в среднем 1,8±1,0 на 1 окошко брыжейки (фиг. 2А). При биомикроскопии в 50% наблюдений было выявлено наличие кровоизлияний площадью 4,9×10^-3-11,7×10^-3 мм², а вдоль венул и артериол и в непосредственной близости от них - выход форменных элементов крови за пределы сосудистой стенки, что свидетельствует о развитии деструктивных нарушений стенок сосудов (фиг. 3А). Кроме того, сужение просвета артериол на 14,9% (р<0,01) сопровождалось достоверным относительно интакта сокращением количества капилляров на 1 мм² брыжейки на 29,7% (р<0,01). В 50% наблюдений в метартериолах был слабый маятникообразный ток крови, синхронный с перистальтическими волнами, а в отдельных сосудах определялись эритроцитарные агрегаты. Выявлено умеренное нарастание емкости микроциркуляторного русла (на 22,8% относительно интакта) за счет увеличения диаметра капилляров относительно показателей интакта на 21,1% (р<0,01), что вероятно носит адаптивный характер ввиду наличия внутрисосудистых изменений в резистивных сосудах (табл. 2, фиг. 4).

Через 14 суток после интоксикации при наружном осмотре окошек брыжейки было выявлено наличие кровоизлияний диаметром 1-2 мм (в среднем 0,2±0,4 на 1 окошко) (фиг. 2B). При биомикроскопии - повышение извитости контуров резистивных сосудов. В 70% наблюдений отмечалось повышение лимфообразования и увеличение скорости движения лимфы, периваскулярный отек. Вдоль венул и артериол и в непосредственной близости от них обнаружен интенсивный диапедез форменных элементов крови (преимущественно эритроцитов) (фиг. 3B). В 50% наблюдений в области артериол были обнаружены кровоизлияния площадью 24,0×10^-3-35×10^-3 мм², а в области прекапилляров - кровоизлияния площадью 0,14×10^-3-0,54×10^-3 мм². Отмечено умеренное нарастание емкости микроциркуляторного русла за счет увеличения средней длины и количества капилляров (табл. 3, фиг. 5). Морфометрическое исследование выявило уменьшение относительно интакта диаметра артериол на 14,6% (р<0,01) и увеличение диаметра прекапилляров на 27,3% (р<0,01).

В опытной группе животных, получавших внутрижелудочно масло семян амаранта с профилактической целью через 24 часа после интоксикации, при наружном осмотре окошек брыжейки зафиксировано наличие кровоизлияний диаметром 1-2 мм, в среднем 0,3±0,5 на 1 окошко, что в 6 раз ниже показателя животных контрольной группы (фиг. 2Б). При биомикроскопии во всех наблюдениях кровоизлияния и признаки диапедеза выявлены не были, что свидетельствует о наличии ангиопротекторной активности у масла семян амаранта. При этом было отмечено повышение извитости контуров резистивных сосудов, а в 20% наблюдений в метартериолах были выявлены признаки сладжа (фиг. 3Б). Морфометрическое исследование выявило достоверное относительно интакта сужение просвета артериол на 11,5% (р<0,01). Диаметр прекапилляров был достоверно меньше показателя интакта на 17,2% (р<0,01), однако находился в пределах известных значений видово-возрастной нормы для крыс (Чернух A.M., Александров П.Н., Алексеев О.В. Микроциркуляция. - М.: Медицина, 1984. - 432 с.). Количество капилляров на 1 мм² брыжейки крыс было достоверно выше контроля на 51,1% (р<0,01) (табл. 3, фиг. 5).

На 14 сутки исследования наблюдалось сохранение тока крови во всех звеньях микроциркуляторного русла. Данные морфометрии не выявили достоверных относительно интакта различий в диаметре микрососудов. Наблюдалось умеренное нарастание емкости микроциркуляторного русла за счет увеличения общей обменной поверхности капилляров относительно интакта в 1,3 раза (табл. 3, фиг. 5).

В опытной группе животных, получавших масло семян амаранта с лечебной целью, на 14 сутки наблюдения отмечено отсутствие кровоизлияний в окошках брыжейки. Данные морфометрии выявили достоверное относительно интакта увеличение диаметра метартериол и прекапилляров соответственно на 18,1% и 35,9% (р<0,01) (табл. 3, фиг. 5). Диаметр капилляров был достоверно выше контроля на 29,4% (р<0,01), а количество капилляров на 1 мм брыжейки - выше интакта и контроля соответственно на 19,7% и 39,3% (р<0,05). При этом общая эффективная обменная поверхность капилляров была выше показателя интакта и контроля соответственно в 1,4 раза и 1,2 раза (табл. 3, фиг. 5), что свидетельствует об увеличении емкости микроциркуляторного русла и улучшении микроциркуляторных процессов в брыжейке крыс.

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности, а именно к способу улучшения микроциркуляторных процессов в организме. Способ улучшения микроциркуляторных процессов в организме, включающий внутрижелудочное введение животным масла амаранта, полученного холодным прессованием зародышей и оболочек семян амаранта, в диапазоне доз 50-150 мг/кг массы тела в пересчете на фосфолипиды. Вышеописанный способ способствует эффективному нарастанию микроциркуляторного русла за счет увеличения общей обменной поверхности капилляров, увеличения емкости кровеносного русла. 5 ил., 2 пр.

Способ улучшения микроциркуляторных процессов в организме, включающий внутрижелудочное введение животным масла амаранта, полученного холодным прессованием зародышей и оболочек семян амаранта, в диапазоне доз 50-150 мг/кг массы тела в пересчете на фосфолипиды.