СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ГЕПАТОТОКСИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ, ИНДУЦИРОВАННЫХ ИЗОНИАЗИДОМ Российский патент 2016 года по МПК A61K36/21 A61K9/28 A61P43/00 

Изобретение относится к медицине и фармакологии и может быть использовано для коррекции гепатотоксических реакций, индуцированных изониазидом.

Одним из основных методов комплексного лечения больных туберкулезом является курс противотуберкулезной химиотерапия (Мишин В.Ю. Побочное действие противотуберкулезных препаратов при стандартных и индивидуализированных режимах химиотерапии. - М., 2004. - 208 с.), однако по данным аналитического обзора основных статистических показателей по туберкулезу в РФ (2011) он признан эффективным только у 53,5% впервые выявленных и у 43,9% - больных с рецидивом заболевания. Среди причин низких показателей эффективности лечения больных туберкулезом наряду с лекарственной устойчивостью следует выделить высокую частоту развития побочных эффектов, ограничивающих проведение полноценной химиотерапии (Мишин В.Ю. Побочное действие противотуберкулезных препаратов при стандартных и индивидуализированных режимах химиотерапии. - М., 2004. - 208 с.).

Во многих схемах лечения до настоящего времени одним из основных препаратов остается изониазид, который при проведении первичной и вторичной химиопрофилактики контактных по туберкулезу и инфицированных лиц является единственным препаратом, используемым в качестве монотерапии. Наряду с высокой антибактериальной активностью, изониазид обладает специфической органотропностью и высокой токсичностью. По частоте возникновения, тяжести последствий и исхода лечения в спектре осложнений химиотерапии изониазидом доминируют лекарственно-индуцированные (токсические) поражения печени.

Для лечения токсических поражений печени противотуберкулезными средствами известен способ, заключающийся в назначении базисной терапии (щадящий режим, печеночная диета, питье 5% раствора глюкозы) и применение лекарственных средств с гепатопротекторной активностью, содержащих расторопшу пятнистую (легален, карсил и др.) или эссенциальные фосфолипиды (Эссенциале). Однако опубликованы данные, свидетельствующие о нарастании холестаза и недостаточности противовоспалительной активности (Оковитый С.В. Клиническая фармакология гепатопротекторов // Практик, 2002. - №3). Нашли применения гептрал, лив 52, силимарин, галстена.

Известен способ уменьшения и предотвращения гепатотоксических реакций, заключающийся в назначении в качестве дополнительного средства растительного препарата «Популин» (водный экстракт коры осины и солянки холмовой) (RU 2314113 C2, 2006).

Известен способ коррекции эндогенной интоксикации и профилактики нежелательных побочных реакций противотуберкулезных препаратов с использованием энтеросорбентов (Фетисов Ю.И. Изучение механизмов возникновения эндотоксикоза при различных формах туберкулеза легких до и после лечения: автореф. дис… канд. мед. наук / Ю.И. Фетисов. - Новосибирск, 1997. - 23 с. Возможности использования углеродминерального энтеросорбента СУМС-1 в пульмонологии и фтизиатрии: Библиотека практического врача / Колпаков М.А., Колпакова Т.А., Летягина Е.А., Волхонская Т.Е., Данилкина С.Т., Башкирова Ю.В. - Новосибирск: ИД «Манускрипт», 2003. - 32 с.; Энтеросорбция / Под ред. Н.А. Белякова. - Л., 1991. - 336 с.).

Недостатком использования энтеросорбентов является нарушение всасывания поступающих с пищей витаминов, нарушение моторной функции желудочно-кишечного тракта, что может привести к развитию стойких запоров.

Известен другой способ, который заключается в отмене приема противотуберкулезных препаратов и пероральном введении урсосана в дозе 20 мг/кг однократно и энтеросгеля в дозе 10-15 г в течение 3 дней, с последующим снижением дозы урсосана до 12-15 мг/кг в сутки в 2-3 приема и энтеросгеля в возрастных дозировках на фоне возобновления приема противотуберкулезных препаратов и проводят терапию урсосаном до значения аланинаминотрансферазы (АлАТ), не превышающего значения верхней границы нормы (RU 2473346, A61K 31/695, 2013).

Известен способ стимуляции регенерации печеночной ткани, заключающийся во введении комплекса препаратов, содержащих 0,5 мл пиридоксина гидрохлорида, 2 мкг цианкобаламина, 0,5 мг витамина РР на 1 мл экстракта вытяжки коры свиных или фетальных надпочечников человека (RU 2185835, A61K 35/55, 2002).

Для профилактики гепатотоксических реакций вызванных применением препаратов группы гидразида изоникотиновой кислоты (ГИНК) (в том числе изониазида) и рифампицином известен способ, включающий использование препарата Глутоксим (RU 2197984 C1, 2001).

Другой способ ограничения осложнений и побочных явлений при лечении туберкулеза препаратами группы гидразида изоникотиновой кислоты (ГИНК) (в том числе изониазидом), в котором для снижения непереносимости применяемых препаратов используют сульфат закиси железа в терапевтических дозах, который принимают предварительно в течение нескольких, по крайней мере двух, дней до начала противотуберкулезной химиотерапии, затем продолжают его прием с препаратом ГИНК до конца лечения (RU 2217137 C2, 2001).

Однако эффективность перечисленных выше способов лечения токсических поражений печени недостаточно доказана в многоцентровых клинических исследованиях.

Задачей изобретения является коррекция гепатотоксических реакций, индуцированных применением изониазида, и, тем самым, повышение эффективности лечения больных туберкулезом.

Технический результат заключается в снижении симптомов интоксикации, а также нормализации метаболических и морфологических нарушений печени при остром поражении, индуцированном изониазидом в более короткие сроки.

Технический результат достигается тем, что способ коррекции гепатотоксических реакций, индуцированных изониазидом, включает использование наряду с введением изониазида масла семян амаранта, полученного холодным прессованием зародышей и оболочек семян амаранта. в дозе 200 мг (2 желатиновые капсулы) 3 раза в день за 1 час до еды до нормализации клинико-лабораторных показателей и еще 1-2 недели. При продолжении противотуберкулезной терапии используют в качестве постоянного сопровождения с перерывом между курсами 1 месяц.

Выделенное холодным прессованием из зародышей и оболочек семян амаранта масло (RU 94044961, C11B 1/10, A23K 1/14, 1996) содержит фосфолипиды, токоферол (витамин E), ненасыщенные жирные кислоты, сквален, фитостерины и эфиры стеринов и каротиноиды.

Масло семян амаранта обладает широким спектром фармакологической активности. Известны антитоксическая и гепатопротекторная активность масла семян амаранта (Музалевская Е.Н. Первичная оценка антитоксической и гепатопротекторной активности масла семян амаранта хвостатого / Е.Н. Музалевская, В.А. Николаевский // Проблемы разработки новых лекарственных средств: материалы Первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (3-5 июня, 2013). - Москва, 2013. - С. 74), гиполипидемическое и гипохолестеринемическое действие (Корейская И.М. Амарантовое масло снижает содержание общего холестерина в крови / И.М. Корейская, А.П. Салей, A.M. Макеев // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования: мат-лы Межрегион. науч.- мет. конференции «Фармобразование 2003» (21-23 апр. 2003). - Воронеж, 2003. - С. 178-180.; Корейская И.М. Сравнительный фармакологический анализ влияния амарантового и льняного масел на динамику липидного обмена крыс в условиях холестериновой нагрузки / И.М. Корейская, В.Ю. Сулин, Е.Ф. Сафонова, А.Н. Постыка // Вестник Воронежского государственного университета: серия химия, биология, фармация. - №1. - 2006. - С. 204-208), антиоксидантное действие (Близнецова Г.Н. Роль процессов свободнорадикального окисления в механизме гепатопротекторного действия масла семян амаранта / Г.Н. Близнецова, М.И. Рецкий, Н.Д. Полякова-Семенова, И.М. Корейская // Биомедицина. - 2006. - №2. - С. 105-112), антибактериальная активность (Корейская И.М., Изучение антибактериальной активности амарантового масла / И.М. Корейская, И.Е. Измалкова // Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые науч. тенд. в медицине и фармации: мат-лы Междун. конф. (6-7 февраля 2008). - Воронеж, 2008, - С. 226-227), противоожоговое действие (Корейская И.М. Амарантовое масло как противоожоговое средство / И.М. Корейская, Т.А. Горохова, С.Н. Соленникова и др. // Actualni vymozenosti vedy - 2012, Materialy VIII Mexinorodni vedecko-practiKa conference. 27.06.2012 - 05.07.2012 Dil. 17. Biologicke vedy Chemie a chemicka technologiei. - Praha: Publishing House "Education and Science" s.r.o. 2012 - S. 5-6), кардиопротекторное действие (Yelisyeyeva O.P, Semen K.O, Ostrovska G.V, Kaminskyy D.V, Sirota T.V, Zarkovic N, Mazur D, Lutsyk O.D, Rybalchenko K, Bast A. / The effect of Amaranth oil on monolayers of artificial lipids and hepatocyte plasma membranes with adrenalin-induced stress. // Food Chemistry, Vol. 147, №15, 2014, p. 152-159). Предложено средство для профилактики и лечения хронических заболеваний печени (RU 2526172, 2014).

Предложено средство для профилактики и лечения хронических заболеваний печени (RU 2526172, 2014).

Однако нами не обнаружен источник, в котором изложено использование масла семян амаранта для коррекции гепатотоксических реакций, индуцированных изониазидом.

Предлагаемый способ был изучен в эксперименте на белых нелинейных крысах самцах, половозрелых продуктивного возраста (3 мес.), содержащихся в стандартных условиях вивария при естественном освещении, синхронизированных по питанию при свободном доступе к воде. Работу с животными проводят в соответствии с Приказом МЗ РФ №267 от 19.06.2003 г. «Об утверждении правил лабораторной практики».

Моделирование интоксикации осуществляли внутрижелудочным введением животным после пищевой депривации изониазида в виде 1% крахмальной слизи в дозе 542 мг/кг массы тела один раз в сутки в течение 6 суток (контрольная группа). Масло семян амаранта вводили с лечебной целью через 24 часа после последнего введения изониазида в дозе 50 мг/кг 1 раз в сутки в течение 3-х суток (опытная группа). В качестве препарата сравнения (опытная группа) был выбран эталонный гепатопротектор, содержащий эссенциальные фосфолипиды соевых бобов (ЭФЛ) - препарат Эссенциале Н (Санофи-Авентис С.А., Испания), вводимый в виде официнального раствора внутрижелудочно в дозе 80 мг/кг по аналогичной схеме (Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.). Введение перечисленных веществ осуществляли с помощью металлического атравматичного желудочного зонда.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием пакета лицензионных прикладных программ «Statistica 5.0» на персональном компьютере Pentium Dual Core. При помощи общепринятых в биологии и медицине методов математической статистики определяли средние значения по вариационному ряду, ошибку среднего. Достоверность различий между соответствующими показателями в интактных, контрольных и опытных группах оценивали с использованием t-критерия Стьюдента.

На фиг. 1 представлена Таблица 1, включающая данные о влиянии введения масла семян амаранта на изменение уровня потребления корма и воды крысами с острым токсическим поражением печени, индуцированным изониазидом (ЭФЛ - препарат эссенциальных фосфолипидов; AM - масло семян амаранта; ^* - p<0,05; ^** - p<0,01 - достоверность различий при сравнении с исходным; ⁺ - p<0,05; ⁺⁺ - p<0,01 - достоверность различий при сравнении с контролем; ^• - p<0,05 - достоверность различий при сравнении с препаратом сравнения (ЭФЛ); на фиг. 2 - Таблица 2, содержащая данные о изменение биохимических показателей сыворотки крови, протромбинового времени и весового коэффициента печени при остром токсическом поражении печени, индуцированном изониазидом (ЭФЛ - препарат эссенциальных фосфолипидов; AM - масло семян амаранта; ^* - p<0,05; ^** - p<0,01 - достоверность различий при сравнении с интактом; ⁺ - p<0,05; ⁺⁺ - p<0,01 - достоверность различий при сравнении с контролем; ^•• - p<0,01 - достоверность различий при сравнении с препаратом сравнения (ЭФЛ)); на фиг. 3 - гистологическая картина печени крыс при введении масла семян амаранта на фоне острого токсического поражения печени, индуцированного изониазидом, окраска - гематоксилин-эозин, ув. ×100 (А - контроль; Б - препарат эссенциальных фосфолипидов, В - масло семян амаранта).

Изобретение иллюстрируется следующим примером.

Пример 1. Исследование гепатопротекторной активности масла семян амаранта на фоне острого токсического поражения печени, индуцированного изониазидом.

Исследование выполнено на 60 белых аутбредных половозрелых крысах самцах массой 205,0±9,2 г, которые были разделены случайным образом на 10 групп по 6 в каждой: 6 контрольных групп, 2 опытные группы и 2 группы препарата сравнения.

Критериями оценки эффективности служили: динамика потребления корма и воды, показатели биохимического анализа крови: маркеры печеночного цитолиза - аланинаминотрансфераза (АлАТ), аспартатаминотрансфераза (АсАТ); свертываемости крови (протромбиновое время), патолого-морфологическое и гистохимическое исследование печени.

Активность АлАТ и АсАТ в сыворотке крови (Е/л) определяли на биохимическом анализаторе открытого типа Furuno 270 кинетическим методом (УФ-тест в соответствии с методом IFCC) с использованием диагностических наборов «Fluitest GPT».

Определение протромбинового времени осуществляли с использованием диагностического набора «Диагем-П».

Рассчитывали весовой коэффициент печени (отношение массы органа к массе животного). Для гистологических исследований фрагменты печени фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, после чего по общепринятой методике заливали в парафин, из парафиновых блоков готовили серийные срезы толщиной 3-4 мкм. Окраску препаратов для изучения общей морфологической структуры проводили гематоксилином с эозином.

Для гистохимических исследований фрагменты печени фиксировали в 10% растворе формалина с добавлением кальция хлорида, после чего по общепринятой методике на замораживающем микротоме готовили серийные срезы толщиной 3-4 мкм. Окраску препаратов для выявления липидов проводили красителем Red О.

Анализ гистологических и гистохимических препаратов проводили при помощи микроскопа светового биологического Levenhuk (Россия). Съемку выполнялась с помощью фиксированной USB-камеры для микроскопа Levenhuk 8 Mpixels, соединенной с персональным компьютером.

Клиническая картина интоксикации в контрольной группе животных характеризовалась гиподинамией, заторможенностью, взъерошенностью шерсти, выраженным снижением потребления корма и увеличением потребления воды.

Шестикратное введение изониазида начиная с 7 суток наблюдения сопровождалось уменьшением доли потребляемого корма и воды соответственно на 91,0% (p<0,01) и 65,0% (p<0,01) с сохранением показателей на 10 сутки исследования. К 14 суткам доля потребляемого корма составила 60,4% от исходного, однако данный показатель был достоверно ниже показателя интакта (фиг. 1).

В опытных группах животных, получавших Эссенциале Н и масло семян амаранта, к 10 суткам наблюдения животные были активны, доля потребляемого корма соответствует уровню здоровых животных с сохранением показателей на 14 сутки на фоне увеличения потребления воды (фиг. 1).

Таким образом, введение масла семян амаранта с лечебной целью способствует улучшению общего клинического состояния животных и уменьшению выраженности симптомов интоксикации, наблюдаемых при введении высоких доз изониазида (остром токсическом поражении печени).

При проведении биохимических исследований сыворотки крови в контрольной группе животных установлено, что шестикратное введение изониазида на 10 сутки наблюдения сопровождалось снижением активности АлАТ и АсАТ соответственно на 66,7% и 50,5% (p<0,05). Концентрация общего билирубина была достоверно ниже показателя интакта на 33,6% (p<0,01) (фиг. 2). Вместе с тем, гистохимически выявлена диффузная жировая дистрофия печени. При проведении патолого-морфологических исследований установлено, что на 10 сутки исследования желудок животных увеличен в размере и переполнен непереваренными пищевыми массами, масса печени увеличена на 21,7% (p<0,01) относительно показателя интакта. Это сопровождалось морфологическими нарушениями дольково-балочной структуры печени, развитием белковой и жировой дистрофии и некробиозом гепатоцитов на большей части печеночной дольки (фиг. 3A), что в целом свидетельствует о развитии экспериментального острого лекарственного поражения печени (токсического гепатита) изониазидом.

На 14 сутки исследования в сыворотке крови наблюдалось повышение активности АлАТ на 132,4% (p<0,05) по отношению к 10 суткам исследования, однако ее уровень был ниже интакта на 22,6% (p<0,05). При этом активность АсАТ превышала показатель интакта на 39,64% (p<0,01). Протромбиновое время было выше показателя интакта на 57,5% (p<0,05) (фиг. 2). Масса печени достоверно ниже интакта на 13,0% (p<0,01), что свидетельствует о развитии деструктивных процессов в паренхиме печени. При гистологическом исследовании препаратов печени балочная структура была выражена слабо, на срезах, окрашенных Red О - остаточные явления жировой дистрофии.

Введение Эссенциале Н животным с токсическим гепатитом, индуцированным изониазидом на 10 сутки наблюдения сопровождалось нормализацией активности АсАТ, а в отдельных случаях увеличением активности АлАТ на 35,9% (p<0,05) относительно контроля. При этом содержание общего билирубина в сыворотке крови относительно интакта и контроля увеличивалось соответственно в 2,9 раза (p<0,05) и 4,4 раза (p<0,01) (фиг. 2). Выявленные изменения массы печени были статистически незначимы. На препаратах печени балочная структура долек была в пределах нормы, печень полнокровна, признаков некробиоза не обнаружено (фиг. 3Б). На срезах, окрашенных Red О - негенерализованная жировая дистрофия.

На 14 сутки исследования несмотря на выраженную гипербилирубинемию (концентрация общего билирубина достоверно выше интакта и контроля соответственно на 69,1% (p<0,01) и 37,9% (p<0,05)) различия по сравнению с интактом уровня активности аминотрансфераз были не достоверными (фиг. 2). Протромбиновое время было достоверно ниже контроля на 13,1%о (p<0,05). В гистологической картине печени вокруг желчных протоков отмечено наличие лимфоидных инфильтратов.

3-дневное применение масла семян амаранта у животных с токсическим гепатитом, вызванным изониазидом, оказывало положительное влияние на ферменты-маркеры повреждения печени, способствуя нормализации активности АлАт и АсАт на 10 сутки исследования (фиг. 2). Уровень общего билирубина в сыворотке крови, в отличие от группы контроля и препарата сравнения, соответствовал показателям животных интактной группы. Выявленные изменения массы печени были статистически незначимы, желудок нормального размера. Нормализация биохимических показателей сопровождалась восстановлением гистоархитектоники органа. Гепатоциты средних размеров с хорошо структурированным округлым ядром и окрашенной цитоплазмой (фиг. 3В). На срезах, окрашенных Red О - остаточные явления жировой дистрофии. В дальнейшем, то есть на 14 сутки наблюдения, перечисленные выше биохимические показатели практически не отличались от их величины, наблюдаемой нами на 10 сутки (фиг. 2). Кроме того, на 14 сутки исследования величина протромбинового времени была достоверно ниже контроля на 12,8% (p<0,05). Вышеизложенное свидетельствует о том, что введение масла семян амаранта при остром токсическом поражении печени изониазидом достоверно сокращает период регенерации печени на 28,5% (p<0,05), превосходя по эффективности препарат эссенциальных фосфолипидов (Эссенциале Н).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет эффективно снижать тяжесть метаболических и морфологических нарушений печени при остром поражении печени, индуцированном изониазидом.

Пример 2.

С целью стабилизации, увеличения срока хранения, точности дозирования и корригирования неприятного вкуса предлагается использование прессового масла семян амаранта в виде лекарственной формы - твердых желатиновых непрозрачных капсул белого цвета, содержащих масло семян амаранта в количестве 1,0 мл; размер капсулы №000.

Изобретение относится к медицине и предназначено для коррекции гепатотоксических реакций, индуцированных изониазидом. Используют масло семян амаранта, полученное холодным прессованием зародышей и оболочек семян амаранта, в дозе 200 мг (2 желатиновые капсулы) 3 раза в день за 1 час до еды до нормализации клинико-лабораторных показателей и еще 1-2 недели. При продолжении противотуберкулезной терапии используют в качестве постоянного сопровождения с перерывом между курсами 1 месяц. Способ позволяет снизить симптомы интоксикации и нормализовать метаболические и морфологические нарушения печени при остром поражении, индуцированном изониазидом. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.

1. Способ коррекции гепатотоксических реакций, индуцированных изониазидом, включает, наряду с введением изониазида, использование масла семян амаранта, полученного холодным прессованием зародышей и оболочек семян амаранта, в дозе 200 мг 3 раза в день за 1 час до еды до нормализации клинико-лабораторных показателей и еще 1-2 недели.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при продолжении противотуберкулезной терапии используют масло семян амаранта в качестве постоянного сопровождения с перерывом между курсами 1 месяц.