ПИРИДИНИЛПИРАЗОЛОХИНОЛИНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ Российский патент 2018 года по МПК C07D471/04 A61K31/4745 A61P25/28 

Область техники

[0001] Настоящее изобретение относится к пиридинилпиразолохинолиновым соединениям, обладающим ингибирующей активностью в отношении фосфодиэстеразы 9 (PDE9), и их фармацевтически приемлемым солям, и их фармацевтическим применениям.

Уровень техники

[0002] Известно, что циклический гуанозинмонофосфат (далее по тексту называемый cGMP), функционирующий в качестве вторичного мессенджера в клетках, играет важную роль в различных физиологических функциях, в том числе в протекании обучения и развитии памяти.

[0003] На постсинаптическом участке нервных цепей головного мозга монооксид азота (далее по тексту называемый NO), биосинтезируемый синтетазой монооксида азота, активирует гуанилатциклазу, которая является cGMP-синтазой. Активированная гуанилатциклаза биосинтезирует cGMP из гуанозинтрифосфата. cGMP активирует cGMP-зависимую протеинкиназу (далее по тексту называемую PKG), фосфорилирующую различные белки, участвующие в пластичности синапсов. Известно, что активация каскада NO/cGMP/PKG участвует в индукции пластичности синапсов (долговременная потенциация; далее по тексту называемая LTP) гиппокампа, который известен как нейронная основа для протекания обучения и развития памяти (например, см. непатентную литературу 1). Лекарственный препарат, активирующий передачу сигнала по каскаду, известен как улучшающий LTP гиппокампа и протекание обучения у животных, в то же время лекарственный препарат, ингибирующий каскад, известен как оказывающий противоположное действие (непатентная литература 2). Следовательно, исходя из этих фактов, ожидается, что повышение cGMP в головном мозге приведет к улучшению протекания обучения и развитию памяти.

[0004] cGMP метаболизируется до 5'-GMP без PKG-активирующего действия фосфодиэстеразой (далее по тексту называемой PDE). PDE, как известно, имеет 11 семейств, и известно, что PDE9 специфично метаболизирует cGMP и экспрессируется в головном мозге, селезенке, тонком кишечнике и т.п. (например, см. непатентную литературу 3). То есть, ожидается, что ингибирование PDE9 повысит cGMP в головном мозге. Согласно опубликованным данным, ингибитор PDE9 действительно усиливает LTP гиппокампа и улучшает протекание обучения и развитие памяти в тесте по распознанию нового объекта/тесте обучения пассивному избеганию или др. у животных (непатентная литература 4). С клинической точки зрения активность гуанилатциклазы уменьшается, и наблюдают возможность уменьшения уровня cGMP в верхней височной доле у пациентов с болезнью Альцгеймера (непатентная литература 5). Таким образом, есть вероятность, что PDE9 имеет множество тесных взаимосвязей с патологиями нейродегенеративных заболеваний и психиатрических заболеваний, в частности, с патологиями когнитивных дисфункций и др. при болезни Альцгеймера, таких как болезнь Александера, синдром Альперса, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (ALS; известный как болезнь Лу Герига или поражение двигательных нейронов), атаксия-телеангиэктазия, болезнь Баттена (также известная как болезнь Шпильмайера-Фогта-Шегрена-Баттена), деменция Бинсвангера (подкорковая ангиосклеротическая энцефалопатия), биполярное расстройство, губчатая энцефалопатия крупного рогатого скота (BSE), болезнь Канавана, индуцированная химиотерапией деменция, синдром Коккейна, кортико-базальная дегенерация, болезнь Крейтцфельда-Якоба, депрессия, синдром Дауна, дегенерация лобно-височной доли (в том числе лобно-височная деменция, семантическая деменция и прогрессивная небеглая афазия), болезнь Герстманна-Штраусслера-Шейнкера, глаукома, болезнь (хорея) Хантингтона, связанная с ВИЧ деменция, гиперкинез, болезнь Кеннеди, синдром Корсакова (конфабуляторный амнестический синдром), болезнь Краббе, деменция с тельцами Леви, прогрессивная логопеническая афазия, болезнь Мачадо-Джозефа (спиноцеребеллярная атаксия 3 типа), рассеянный склероз, множественная атрофия (оливопонтоцеребеллярная атрофия), тяжелая миастения, болезнь Паркинсона, болезнь Пелицеуса-Мерцбахера, болезнь Пика, пресенильная деменция (легкое когнитивное нарушение), первичный боковой склероз, первичная прогрессивная афазия, вызванная облучением деменция, болезнь Рефсума (заболевание, вызванное накоплением фитановой кислоты), болезнь Сандхоффа, болезнь Шильдера, шизофрения, семантическая деменция, сенильная деменция, синдром Шая-Дрейджера, спиноцеребеллярная атаксия, спинальная мышечная атрофия, болезнь Стила-Ричардсона-Ольшевского (прогрессирующий супрануклеарный паралич), и сосудистый амилоидоз, и сосудистая деменция (деменция вследствие множественных инфарктов).

[0005] Недавно стало известно следующее соединение, которое обладает PDE9-ингибирующей активностью и предназначено для предупреждения или терапии болезни Альцгеймера (патентная литература 1).

[0006] Приведенное выше соединение представляет собой пиразолопиримидиновое производное, и при этом соединение имеет структуру, абсолютно отличную от пиразолохинолинового каркаса.

[0007] С другой стороны, в качестве соединения с пиразолохинолиновым каркасом известно следующее описанное в патентной литературе 2 соединение,

,

где кольцо A является бензольным кольцом или подобным; а R⁶ является прямой связью или подобным.

Тем не менее, кольцо B в вышеприведенном соединении означает бензольное кольцо или подобное. Хотя утверждают, что вышеупомянутое соединение обладает ингибирующей активностью в отношении PDE4 и его используют при различных типах воспалительных заболеваний, нет описания для предпосылок ингибирующей активности в отношении PDE9 и т.п.

[0008] В качестве соединений, обладающих PDE9-ингибирующей активностью, известны следующие описанные в патентной литературе 3 и патентной литературе 4 соединения.

[0009] Любое из вышеупомянутых соединений представляет собой хиноксалиновое производное и является соединением со структурой, абсолютно отличной от пиразолохинолинового каркаса.

[0010] В качестве соединения с пиразолохинолиновым каркасом и PDE9-ингибирующей активностью известно следующее описанное в патентной литературе 5 соединение,

,

где либо R¹, либо R² является группой, представленной формулой

.

[0011] Структура приведенного выше соединения ограничена по R¹ и R², таким образом, соединение является соединением со структурой, абсолютно отличной от соединения по настоящему изобретению.

Список противопоставленных материалов

Патентная литература

[0012] [Патентная литература 1] WO 2008/139293

[Патентная литература 2] WO 2007/032466

[Патентная литература 3] WO 2008/072779

[Патентная литература 4] WO 2010/101230

[Патентная литература 5] WO 2012/033144

Непатентная литература

[0013] [Непатентная литература 1] Domek-Lopacinska et al., "Cyclic GMP metabolism and its role in brain physiology", J Physiol Pharmacol., vol. 56, Suppl 2: pp. 15-34, 2005.

[Непатентная литература 2] Wang X., "Cyclic GMP-dependent protein kinase and cellular signaling in the nervous system", J. Neurochem., vol. 68, pp. 443-456, 1997.

[Непатентная литература 3] Fisher et al., "Isolation and characterization of PDE9A, a novel human cGMP-specific phosphodiesterase", J. Biol. Chem., vol. 273: pp. 15559-15564, 1998.

[Непатентная литература 4] van der Staay et al., "The novel selective PDE9 inhibitor BAY 73-6691 improves learning and memory in rodents", Neuropharmacology, vol. 55: pp. 908-918, 2008.

[Непатентная литература 5] Bonkale et al., "Reduced nitric oxide responsive soluble guanylyl cyclase activity in the superior temporal cortex of patients with Alzheimer's disease", Neurosci. Lett., vol 187, pp. 5-8, 1995.

Краткое описание изобретения

Техническая проблема

[0014] Целью настоящего изобретения является получение нового соединения, или его фармацевтически приемлемой соли, которое обладает PDE9-ингибирующим действием, и содержащей его фармацевтической композиции.

Решение проблемы

[0015] В результате всесторонних исследований для решения вышеупомянутых задач было обнаружено новое пиридинилпиразолохинолиновое соединение или его фармацевтически приемлемая соль, обладающая PDE9-ингибирующим действием.

[0016] То есть, в настоящем изобретении изложены следующие <1>-<14>.

<1> Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль,

,

где R¹ является группой, представленной формулой

,

группой, представленной формулой

,

или группой, представленной формулой

,

и R² является 3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ильной группой или 4-метоксициклогексильной группой.

<2> Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по <1>, где соединение представлено формулой (II)

,

где R³ является группой, представленной формулой

,

или группой, представленной формулой

.

<3> Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по <1>, где соединение представлено формулой (III)

,

где R² является 3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ильной группой или 4-метоксициклогексильной группой.

<4> (-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он((-)-цис) или его фармацевтически приемлемая соль:

<5> (-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс) или его фармацевтически приемлемая соль:

<6> (-)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс) или его фармацевтически приемлемая соль:

<7> (-)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис) или его фармацевтически приемлемая соль:

<8> 7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(транс-4-метоксициклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль:

.

<9> Фармацевтическая композиция, содержащая соединение или фармацевтически приемлемую соль по <1> в качестве активного ингредиента.

<10> Фармацевтическая композиция по <9>, которая является ингибитором PDE9.

<11> Фармацевтическая композиция по <9> для повышения концентрации внутримозгового cGMP.

<12> Средство для облегчения когнитивного нарушения при болезни Альцгеймера, содержащее соединение или его фармацевтически приемлемую соль по <1>.

<13> Способ облегчения когнитивного нарушения при болезни Альцгеймера, включающий введение пациенту соединения или его фармацевтически приемлемой соли по <1>.

<14> Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по <1> для применения для облегчения когнитивного нарушения при болезни Альцгеймера.

Полезные эффекты изобретения

[0017] Пиридинилпиразолохинолиновые соединения (далее про тексту называемые соединение (I)), представленные формулой (I), или их фармацевтически приемлемая соль по настоящему изобретению обладают PDE9-ингибирующим действием, как показано в данных по активности в описанном далее примере фармакологического теста. Соединение (I) по настоящему изобретению в основном характеризуется значением IC₅₀, составляющим 1000 нM или ниже, в качестве PDE9-ингибирующего действия, и предпочтительным является соединение, характеризующееся значением IC₅₀, составляющим 100 нM или ниже.

[0018] Соединение (I) по настоящему изобретению обладает PDE9-ингибирующим действием, поэтому ожидают повышение концентрации внутримозгового cGMP. PDE9-ингибирующее действие и повышение cGMP приводит к улучшению протекания обучения и развития памяти, и соединение (I) характеризуется возможным применением в качестве терапевтического средства от когнитивных дисфункций и подобного при болезни Альцгеймера.

Описание вариантов осуществления

[0019] Далее будет подробно описано содержание настоящего изобретения.

[0020] По всему настоящему описанию структурные формулы соединений для удобства будут демонстрировать только один конкретный изомер, но настоящее изобретение включает все изомеры, такие как геометрические изомеры, оптические изомеры, стереоизомеры и таутомеры, предполагаемые структурами соединения, а также смеси их изомеров, и, таким образом, соединения могут являться изомерами и их смесями в любой необходимой пропорции, не ограничиваясь формулами, которые показаны для удобства. Таким образом, например, соединения по настоящему изобретению могут существовать в виде оптически активных форм или рацемических смесей, все из которых включены без ограничения согласно настоящему изобретению, и независимо от того, являются ли они рацемическими смесями или оптически активными формами, их можно применять в качестве смесей с оптически активными формами в любой необходимой пропорции. Тем не менее, будет понятно, что некоторые изомеры, или рацемические смеси, или другие смеси изомеров могут проявлять большую активность, чем другие.

[0021] Также могут существовать полиморфные кристаллы, и можно использовать любую кристаллическую форму или их смесь без каких-либо ограничений, а также аморфные формы, и соединения по настоящему изобретению также включают как ангидрат, так и сольват (особенно, гидрат).

[0022] Также в настоящее изобретение включены соединения формулы (I), меченные изотопами. Меченное изотопом соединение является таким же, как и соединение (I), за исключением того, что один или несколько атомов заменены атомами с атомными массами или массовыми числами, отличными от обычно встречаемых в природе. Изотопы, которые можно включить в соединение по настоящему изобретению, являются изотопами, например, водорода, углерода, азота, кислорода, фтора, фосфора, серы, йода и хлора, и включают ²H, ³H, ¹¹C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁸F, ³²P, ³⁵S, ¹²³I и ¹²⁵I.

[0023] Вышеупомянутые меченные изотопом соединения, например, соединения, в которых включены такие радиоизотопы, как ³H и/или ¹⁴C, пригодны для анализа распределения в ткани лекарственных препаратов и/или субстратов. Полагают, что ³H и ¹⁴C пригодны для облегчения их получения и выявления. Изотопы ¹¹C и ¹⁸F считаются пригодными для PET (позитронно-эмиссионной томографии); а изотопы ¹²⁵I считаются пригодными для SPECT (однофотонной эмиссионной компьютерной томографии); и все они пригодны для визуализации головного мозга. Замена на более тяжелый изотоп, такой как ²H, обуславливает некоторые терапевтические преимущества, в том числе повышение периода полувыведения in-vivo или понижение необходимой дозы вследствие более высокой метаболической стабильности, и, следовательно, считается пригодной в определенной ситуации. Вышеупомянутые меченные изотопами соединения можно аналогично получить путем осуществления процедур, раскрытых в приведенных далее примерах с применением меченных изотопами реагентов, которые можно легко использовать вместо реагентов, которые не мечены изотопом.

[0024] Далее в данном документе будут описаны значения терминов, символов и т.п., описываемых в настоящем описании, и будет подробно описано настоящее изобретение.

[0025] Ниже будут объяснены определения и предпочтительные примеры R¹ и R² в соединении, представленном формулой (I).

R1 является группой, представленной формулой

,

группой, представленной формулой

,

или группой, представленной формулой

.

[0026] R² является 3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ильной группой или 4-метоксициклогексильной группой.

[0027] "Фармацевтически приемлемая соль" в настоящем описании конкретно не ограничена при условии, что соль образована с помощью соединения по настоящему изобретению, и конкретные примеры включают соли неорганической кислоты, соли органической кислоты, соли неорганического основания, соли органического основания и соли кислых или основных аминокислот.

[0028] Если только "фармацевтически приемлемая соль" в настоящем описании является солью, образованной в подходящем соотношении, за исключением любого особым образом ограничивающего описания, то количество молекул кислоты на одну молекулу соединения в образованной соли, хотя особым образом не ограничено, предпочтительно составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 молекул, предпочтительнее от приблизительно 0,5 до приблизительно 2 молекул и еще предпочтительнее приблизительно 0,5, приблизительно 1 или приблизительно 2 молекулы на одну молекулу соединения.

[0029] Предпочтительные примеры солей неорганических кислот включают гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, нитраты и фосфаты, и предпочтительные примеры солей органических кислот включают ацетаты, сукцинаты, фумараты, малеаты, тартраты, цитраты, лактаты, стеараты, бензоаты, метансульфонаты, п-толуолсульфонаты и бензолсульфонаты.

[0030] Предпочтительные примеры солей неорганических кислот включают соли щелочных металлов, такие как соли натрия и соли калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и соли магния, соли алюминия и соли аммония, и предпочтительные примеры солей органических оснований включают соли диэтиламина, соли диэтаноламина, соли меглюмина и соли N,N'-дибензилэтилендиамина.

[0031] Предпочтительные примеры солей кислых аминокислот включают аспартаты и глутаматы, и предпочтительные примеры солей основных аминокислот включают соли аргинина, соли лизина и соли орнитина.

[0032] [Фармацевтический препарат]Соединение формулы (I) по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль можно фармацевтически получить с помощью общеизвестного способа, и можно сделать лекарственную форму, например, пероральный препарат (таблетка, гранула, порошок, капсула, сироп и т.п.), инъекционный препарат (для внутривенного введения, для внутримышечного введения, для подкожного введения, для внутрибрюшинного введения и для других введений) и препарат для наружного применения (действующий через кожу препарат (мазь, пластырь и т.п.), глазные капли, капли в нос, суппозиторий и т.п.).

[0033] В случае получения перорального твердого препарата к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, при необходимости, добавляют наполнитель, связующее, разрыхлитель, смазывающее вещество, краситель и т.п., и с помощью общеизвестных способов можно получить таблетку, гранулу, порошок и капсулу. При необходимости, таблетку, гранулу, порошок, капсулу и т.п. можно покрыть пленочной оболочкой.

Примеры наполнителя включают лактозу, кукурузный крахмал и кристаллическую целлюлозу; примеры связующего включают гидроксипропилцеллюлозу и гидроксипропилметилцеллюлозу; примеры разрыхлителя включают карбоксиметилцеллюлозу кальция и кроскармеллозу натрия; примеры смазывающего вещества включают стеарат магния и стеарат кальция; примеры красителя включают оксид титана; и примеры пленкообразователя включают гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, но эти добавки, разумеется, не ограничены данными примерами.

Каждый из этих твердых препаратов, таких как таблетки, капсулы, гранулы и порошки, обычно может содержать от 0,001 до 99,5% по весу, предпочтительно от 0,01 до 90% по весу и т.д., соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

[0034] В случае получения инъекционного препарата (для внутривенного введения, для внутримышечного введения, для подкожного введения, для внутрибрюшинного введения или для других введений) к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, при необходимости, добавляют регулятор pH, буферное средство, суспендирующее средство, солюбилизатор, антиоксидант, консервант (антисептик), изотоническое средство и т.п., и инъекционный препарат можно получать с помощью общеизвестного способа. Препараты можно лиофилизировать с получением лиофилизированных препаратов по типу растворяемых непосредственно перед приемом.

Примеры регулятора pH и буферного средства включают органические кислоты или неорганические кислоты или их соли; примеры суспендирующего средства включают метилцеллюлозу, полисорбат 80 и карбоксиметилцеллюлозу натрия; примеры солюбилизатора включают полисорбат 80 и полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат; примеры антиоксиданта включают α-токоферол; примеры консерванта включают метилпараоксибензоат и этилпараоксибензоат; и примеры изотонического средства включают глюкозу, хлорид натрия и маннит, но эти добавки, разумеется, на ограничены данными примерами.

Каждый из этих инъекционных препаратов обычно может содержать от 0,000001 до 99,5% по весу, предпочтительно от 0,00001 до 90% по весу и т.д., соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

[0035] В случае получения препарата для наружного применения сырьевой материал основы добавляют к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и, при необходимости, добавляют, например, консервант, стабилизатор, регулятор pH, антиоксидант, краситель и т.п., и с помощью традиционных способов можно получить, например, действующий через кожу препарат (мазь, пластырь и др.), глазные капли, капли в нос, суппозиторий и др.

В качестве подлежащих применению сырьевых материалов основы можно использовать различные сырьевые материалы, которые обычно используют, например, для лекарственных препаратов, лечебно-профилактической косметики и косметических средств. Конкретные их примеры включают такие сырьевые материалы, как животные и растительные масла, минеральные масла, сложноэфирные масла, воска, эмульгаторы, высшие спирты, жирные кислоты, силиконовые масла, поверхностно-активные вещества, фосфолипиды, спирты, многоатомные спирты, водорастворимые полимеры, глинистые минералы и очищенную воду.

Каждый из этих препаратов для наружного применения обычно может содержать от 0,000001 до 99,5% по весу, предпочтительно от 0,00001 до 90% по весу и т.п., соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

[0036]Из соединения по настоящему изобретению можно получить химический зонд для захвата целевого белка для физиологически активного низкомолекулярного соединения. То есть, соединение по настоящему изобретению можно преобразовать в зонд для аффинной хроматографии, фотоаффинный зонд и т.п. путем введения группы-метки, линкера или т.п. во фрагмент, не относящийся к структурному фрагменту, необходимому для проявления активности соединения, с помощью методики, описанной в J. Mass Spectrum. Soc. Jpn., Vol. 51, No. 5, 2003, p. 492-498, WO2007/139149 и т.д.

[0037] Примеры группы-метки, линкера или т.п., используемых в химическом зонде, включают группы, показанные в группе, состоящей из следующих (1)-(5):

(1) группы-метки для белков, такие как фотоаффинные группы-метки (например, бензоильная группа, бензофеноновая группа, азидогруппа, карбонильная азидогруппа, диазиридиновая группа, еноновая группа, диазогруппа и нитрогруппа) и хемоаффинные группы (например, кетонные группы, в которых атом альфа-углерода заменен атомом галогена, карбамоильная группа, сложноэфирная группа, алкилтиогруппа, акцептор Михаэля из α,β-ненасыщенного кетона, сложного эфира и др. и оксирановая группа);

(2) расщепляемые линкеры, такие как -S-S-, -O-Si-O-, моносахариды (глюкозная группа, галактозная группа и др.), и дисахариды (лактоза и др.), и олигопептидные линкеры, расщепляемые посредством ферментативной реакции;

(3) группы с меткой для флуоресцентной in situ гибридизации, такие как биотин и 3-(4,4-дифтор-5,7-диметил-4H-3a,4a-диаза-4-бора-s-индацен-3-ил)пропионильная группа;

(4) меченные радиоактивным изотопом группы ¹²⁵I, ³²P, ³H, ¹⁴C или т.п.; флуоресцентные группы-метки, такие как флуоресцеин, родамин, дансил, умбеллиферон, 7-нитрофуразанил и 3-(4,4-дифтор-5,7-диметил-4H-3a,4a-диаза-4-бора-s-индецен-3-ил)пропионильная группа; хемилюминесцентные группы, такие как люциферин и люминол; и маркеры, способные обнаруживать ионы тяжелых металлов, такие как ионы металлов-лантаноидов и ионы радия; и

(5) группы для прикрепления к твердым носителям, таким как стеклянные шарики, стеклянные пластины, титровальные микропланшеты, агарозные гранулы, агарозные слои, полистирольные гранулы, полистирольные слои, полиамидные гранулы и полиамидные слои.

Зонды, полученные путем введения групп-меток, выбранных из группы, состоящей из вышеприведенных (1)-(5) и т.д., в соединение по настоящему изобретению согласно способам, описанным в вышеупомянутых документах и т.п., можно применять в качестве химических зондов для выявления меченых белков, что является применимым для поиска мишеней для разработки новых лекарственных средств.

Примеры

[0038] Соединение (I) по настоящему изобретению можно получить, например, с помощью способов, описанных в следующих примерах, и эффекты соединения можно подтверждать с помощью способов, описанных в следующих примерах тестов. Однако эти способы являются лишь иллюстративными, и настоящее изобретение в любом случае не ограничено следующими конкретными примерами, и можно осуществить изменения и модификации, не выходя за объем настоящего изобретения.

[0039] Следует отметить, что соединения, названия которых приведены в литературных источниках и т.п., получали согласно приведенным в литературном источнике сведениям и т.п.

[0040] Сокращения, используемые в настоящем описании, хорошо известны специалистам в данной области техники. В настоящем описании будут использованы следующие сокращения.

CDI: 1,1'-карбонилдиимидазол;

DCM: дихлорметан;

DIPEA: N,N-диизопропилэтиламин;

DMF: N,N-диметилформамид;

DMF-DMA: N,N-диметилформамида диметилацеталь;

DMSO: диметилсульфоксид;

DTT: дитиотреитол;

EDC: 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорид;

EDTA: этилендиаминтетрауксусная кислота;

EGTA: гликолевый эфир диаминтетрауксусной кислоты;

HOBT: 1-гидроксибензотриазол;

KTB: трет-бутоксид калия;

MTBE: трет-бутилметиловый эфир;

н-: нормальный;

п-: пара.

Комплекс Pd(dppf)Cl₂ DCM: комплекс [1,1’-бис(дифенилфосфин)ферроцен]дихлорпалладия(II) DCM

Pd(PPh₃)₄: тетракис(трифенилфосфин)палладий(0),

трет-: третичный;

TEA: триэтиламин;

TFA: трифторуксусная кислота;

THF: тетрагидрофуран;

Tris: трисгидроксиметиламинометан.

¹H-ЯМР: спектрометрия на основе протонного ядерного магнитного резонанса

LC-MS: жидкостная хроматография-масс-спектрометрия

[0041] "Комнатная температура" в следующих примерах и примерах получения обычно означает от приблизительно 10°C до приблизительно 35°C. % означает весовой процент, если не указано иное.

[0042] Химический сдвиг в спектре протонного ядерного магнитного резонанса регистрируют в δ-единицах (ppm) относительно тетраметилсилана; а постоянную взаимодействия регистрируют в герцах (Гц). Сокращения паттернов расщепления являются следующими: s: синглет, d: дуплет, t: триплет, q: квартет, m: мультиплет, brs: широкий синглет и brd: широкий дуплет.

[0043] Для разделения оптических изомеров соединения использовали Parallex Flex^TM, изготовленный Biotage (колонка: одна из CHIRALPAK ^R AD-H, IA, IB и IC, изготовленной Daicel Corp., и CHIRALCEL^R OD-H и OJ-H, изготовленной Daicel Corp.; размер колонки 2 см Ф × 25 см). Вращение плоскости поляризации (+/-) измеряли с помощью хирального детектора OR-2090 (Hg-Xe лампа, 150 Вт), изготовленного JASCO.

Что касается хроматографии, в случае, где приведено описание колоночной хроматографии на силикагеле, использовали Parallel Prep, изготовленный Yamazen Corp., (колонка: колонка Hi-Flash^R (силикагель), изготовленная Yamazen Corp., размер: один из S (16×60 мм),M (20×75 мм), L (26×100 мм), 2L (26×150 мм) и 3L (46×130 мм)) или силикагель сферической формы для хроматографии PSQ60B ^R, изготовленный Fuji Silysia Chemical Ltd., силикагель для хроматографии BW-300^R, изготовленный Fuji Silysia Chemical Ltd., Wakogel^R C-200, изготовленный Wako Pure Chemical Industries, Ltd., или силикагель 60^R (70-230 меш), изготовленный Merck Ltd. Japan. В случае, где приведено описание колоночной хроматографии на NH-силикагеле, использовали Parallel Prep, изготовленный Yamazen Corp., (колонка: колонка Hi-Flash^R(амино), изготовленная Yamazen Corp., размер: один из S (16×60 мм),M (20×75 мм), L (26×100 мм), 2L (26×150 мм) и 3L (46×130 мм)) или NH-силикагель (200-350 меш), изготовленный Fuji Silysia Chemical Ltd.

[0044] (±)- означает рацемическую смесь, а (+)- и (-)- означают (+) тип и (-) тип энантиомера, соответственно.

[0045] Названия следующих соединений использовали, как указано в “E-notebook” версии 12 (Perkin Elmer), за исключением традиционно используемых реагентов.

[0046] Пример получения 1

Синтез 3-бром-6-метокси-2,4-диметилпиридина

[0047] (1) Синтез 5-бром-4,6-диметилпиридин-2-ола

2-Амино-5-бром-4,6-диметилпиридин (15 г) растворяли в смешанном растворе серной кислоты (14,2 мл) и воды (212 мл). К раствору добавляли раствор нитрита натрия (6,18 г) в воде (31 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре и экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, к остатку добавляли MTBE, и осажденное твердое вещество оставляли и затем отфильтровывали. Полученное твердое вещество промывали с помощью MTBE с получением титульного соединения (13,7 г).

ESI-MS масса/заряд 204 [M+H]⁺

[0048] (2) Синтез 3-бром-6-метокси-2,4-диметилпиридина

Смесь 5-бром-4,6-диметилпиридин-2-ола (7 г), метилйодида (21,6 мл) и карбоната серебра (19,1 г) в хлороформе (140 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 36 часов. Реакционную смесь подавали на подушку силикагеля и элюировали смешанным растворителем (этилацетат:н-гептан=2:8). Полученную фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением титульного соединения (6,98 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 2,32-2,35 (м, 3H), 2,56-2,58 (м, 3H), 3,88 (с, 3H), 6,43-6,48 (м, 1H).

ESI-MS масса/заряд 216 [M+H]⁺

[0049] Пример получения 2

Синтез 3-бром-2-метокси-4,6-диметилпиридина

[0050] (1) Синтез 3-бром-2-хлор-4,6-диметилпиридина

2-Хлор-4,6-диметилпиридин-3-амин (2,85 г) растворяли в бромистоводородной кислоте (15 мл, 48% водный раствор), и охлаждали до 0°C. Затем к раствору медленно по каплям добавляли раствор нитрита натрия (1,51 г) в воде (2 мл) и смесь перемешивали при 0°C в течение 15 мин. К этому раствору по каплям добавляли суспензию бромида меди(I) (4,18 г) в бромистоводородной кислоте (5 мл, 48% водный раствор), и после перемешивания при 0°C в течение 10 минут его дополнительно перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой подавали непосредственно на подушку NH-силикагеля и элюировали этилацетатом. Полученную фракцию концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на NH-силикагеле (этилацетат/н-гептан, 0%-30%) с получением титульного соединения (2,97 г).

ESI-MS масса/заряд 220 [M+H]⁺

[0051] (2) Синтез 3-бром-2-метокси-4,6-диметилпиридина

Смесь 3-бром-2-хлор-4,6-диметилпиридина (2,97 г), 28% метанольного раствора метоксида натрия (11,0 мл) и DMF (30 мл) перемешивали при 80°C в течение 36 часов. К реакционной смеси добавляли воду и экстрагировали диэтиловым эфиром. Органический слой концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, от 0 до 10%) с получением титульного соединения (2,33 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 2,33-2,34 (м, 3H), 2,36-2,38 (м, 3H), 3,98 (с, 3H), 6,61-6,64 (м, 1H).

ESI-MS масса/заряд 216 [M+H]⁺

[0052] Пример получения 3

Синтез (2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)бороновой кислоты

[0053] (1) Синтез 2-фтор-3-йод-5-метилпиридина

2,69M гексановый раствор н-бутиллития (224 мл) добавляли по каплям к смеси диизопропиламина (92 мл) и THF (1,2 л) при -18°C в атмосфере азота. После завершения добавления по каплям смесь перемешивали, одновременно повышая температуру до -5°C за период времени 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до -73°C и затем к ней по каплям добавляли раствор 2-фтор-5-метилпиридина (61 г) в THF (240 мл). Реакционную смесь перемешивали при -75°C в течение 3,5 ч. К реакционной смеси по каплям добавляли раствор йода (139 г) в THF (24 мл). Реакционную смесь перемешивали при -75°C в течение 1 ч и 55 мин. По завершении реакции к реакционной смеси добавляли воду (220 мл) при такой же температуре. Смесь перемешивали в течение 5 мин при такой же температуре. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и затем добавляли воду (1,2 л). К смеси добавляли водный раствор (300 мл) пентагидрата тиосульфата натрия (136 г) и воду (300 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 10 мин. Смесь экстрагировали при помощи MTBE (1,2 л). Органический слой промывали солевым раствором (500 мл). Объединенный водный слой экстрагировали при помощи MTBE (1 л). Объединенный органический слой сушили над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После добавления к остатку н-гептана смесь охлаждали. Осажденное твердое вещество отфильтровывали и затем промывали н-гептаном. Фильтрат охлаждали и осажденное твердое вещество отфильтровывали. Данную процедуру повторяли 5 раз с получением титульного соединения (109,69 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 2,29-2,31 (м, 3H), 7,93-8,14 (м, 2H).

ESI-MS масса/заряд 238 [M+H]⁺

[0054] (2) Синтез 2-фтор-4-йод-3,5-диметилпиридина

2,69M гексановый раствор н-бутиллития (215 мл) добавляли по каплям к смеси диизопропиламина (88 мл) и THF (1,2 л) при -18°C в атмосфере азота. После завершения добавления по каплям смесь перемешивали, одновременно повышая температуру до -5°C за период времени 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до -72°C и затем к ней добавляли раствор 2-фтор-3-йод-5-метилпиридина (109,69 г) в THF (240 мл). Реакционную смесь перемешивали при -74°C в течение 1,5 ч. К реакционной смеси по каплям добавляли раствор метилйодида (36 мл) в THF (160 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре от -70°C до -74°C в течение 2 ч. По завершении реакции к реакционной смеси добавляли воду (200 мл) при такой же температуре. Смесь перемешивали в течение 2 мин при такой же температуре. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и затем добавляли воду (1,2 л). Полученную смесь перемешивали в течение 3 мин, к ней дополнительно добавляли воду (300 мл). Смесь экстрагировали при помощи MTBE (1,2 л). Органический слой промывали солевым раствором (500 мл). Объединенный водный слой экстрагировали при помощи MTBE (1 л). Объединенный органический слой сушили над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После добавления к остатку н-гептана (100 мл) смесь охлаждали. Осажденное твердое вещество отфильтровывали и затем промывали н-гептаном. Фильтрат охлаждали и осажденное твердое вещество отфильтровывали. Данную процедуру повторяли 2 раза с получением титульного соединения (86,9 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 2,39-2,40 (м, 6H), 7,80-7,82 (м, 1H).

ESI-MS масса/заряд 252 [M+H]⁺

[0055] (3) Синтез 4-йод-2-метокси-3,5-диметилпиридина

К раствору 2-фтор-4-йод-3,5-диметилпиридина (97,4 г) в THF (954 мл) добавляли 28% метанольный раствор метоксида натрия (185 мл) при 20°C. Смесь перемешивали при температуре от 55 до 65°C в течение 2 ч. После охлаждения реакционной смеси для разделения добавляли MTBE (1 л) и воду (1 л). Органический слой промывали солевым раствором. Объединенный водный слой экстрагировали при помощи MTBE (500 мл × 2). Объединенный органический слой сушили над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После добавления к остатку н-гептана (50 мл) смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч. Осажденное твердое вещество отфильтровывали. Твердое вещество промывали охлажденным н-гептаном (10 мл) с получением титульного соединения (42,6 г). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После добавления к остатку н-гептана (5 мл) смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество отфильтровывали. Твердое вещество промывали охлажденным н-гептаном (2 мл) с получением титульного соединения (20,2 г). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После добавления к остатку н-гептана (5 мл) смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество отфильтровывали. Твердое вещество промывали охлажденным н-гептаном (2 мл) с получением титульного соединения (10,7 г). Все полученные соединения объединяли с получением титульного соединения (73,5 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 2,33-2,34 (м, 3H), 2,36-2,38 (м, 3H), 3,92 (с, 3H), 7,76 (с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 264 [M+H]⁺

[0056] (4) Синтез (2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)бороновой кислоты

2,69M гексановый раствор н-бутиллития (6,5 мл) добавляли по каплям к смеси 4-йод-2-метокси-3,5-диметилпиридина (2,0 г) и THF (40 мл) при -78°C за период времени 10 мин. Смесь перемешивали при -78°C в течение 20 мин. К смеси по каплям добавляли триизопропилборат (5,26 мл) за период времени 5 мин. Смесь перемешивали, одновременно нагревая до 20°C за период времени 1,5 ч. К реакционной смеси добавляли воду и полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Полученный водный слой нейтрализовали лимонной кислотой и экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой сушили над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Для измельчения в порошок к остатку добавляли MTBE. Осажденное твердое вещество отфильтровывали. Данное твердое вещество использовали в качестве первых кристаллов. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Для измельчения в порошок к остатку добавляли MTBE. Осажденное титульное соединение (551 мг) отфильтровывали. Первые кристаллы суспендировали в этилацетате. Для измельчения в порошок добавляли небольшое количество MTBE. Осажденное титульное соединение (553,3 мг) отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Для измельчения в порошок к остатку добавляли MTBE. Осажденное титульное соединение (121,1 мг) отфильтровывали. Все полученные соединения объединяли с получением титульного соединения (1,23 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 2,19-2,20 (м, 3H), 2,23-2,24 (м, 3H), 3,91 (с, 3H), 4,94 (шир.с, 2H), 7,74 (с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 182 [M+H]⁺

[0057] Пример получения 4

Синтез этил-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-5-[2-нитро-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]-1H-пиразол-4-карбоксилата

[0058] (1) Синтез этил-5-(4-бром-2-нитрофенил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилата

Тионилхлорид (1,9 мл) добавляли к смеси 4-бром-2-нитробензойной кислоты (6 г) и ацетонитрила (60 мл) и смесь перемешивали при 50°C в течение 2 ч. К реакционной смеси при охлаждении льдом по каплям добавляли триэтиламин (6,8 мл) и этил-3-диметиламиноакрилат (3,9 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч реакционную смесь фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли этилацетат, полученную суспензию фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Данную процедуру повторяли еще дважды. Полученный фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением этил-2-(4-бром-2-нитробензоил)-3-(диметиламино)акрилата (11 г) в виде неочищенного продукта. Данный этил-2-(4-бром-2-нитробензоил)-3-(диметиламино)акрилат (2,95 г) растворяли в ацетонитриле (20 мл). К данному раствору добавляли (3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)гидразина гидрохлорид (1,3 г) (синтезированный согласно Giovannini, Riccardo et al., международная заявка по PCT (2009), WO 2009121919, примеры 8CA, 8CB) и воду (2 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем перемешивали при 90°C в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли этилацетат и воду и органический слой разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 10-100%) с получением титульного соединения (0,66 г).

ESI-MS масса/заряд 460 [M+Na]⁺

[0059] (2) Синтез этил-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-5-[2-нитро-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]-1H-пиразол-4-карбоксилата

Этил-5-(4-бром-2-нитрофенил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилат (398 мг), бис(пинаколато)дибор (277 мг), ацетат калия (267 мг) и комплекс Pd(dppf)Cl₂·DCM (37,1 мг) добавляли к 1,4-диоксану (10 мл). Данную смесь перемешивали в течение 2 часов при 90°C в атмосфере азота. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем фильтровали через целит. К фильтрату добавляли этилацетат (50 мл) и воду (50 мл) и органический слой и водный слой разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (50 мл). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (50 мл), сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 10-80%) с получением титульного соединения (441,0 мг) в виде неочищенного продукта.

ESI-MS масса/заряд 405 [M-C₆H₁₀+H]⁺

Структуру 4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана в титульном соединении отщепляли и определяли молекулярную массу соединения бороновой кислоты (B(OH)₂).

[0060] Пример получения 5

Синтез (1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)гидразина гидрохлорида

[0061] (1) Синтез бензил-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)гидразинкарбоксилата

К раствору 1,4-циклогександионмоноэтиленкеталя (№ CAS 4746-97-8, 5,0 г) в метаноле (100 мл) добавляли бензилкарбазат (№ CAS 5331-43-1, 5,32 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем реакционную смесь концентрировали. Полученный остаток растворяли в THF и снова концентрировали. Боргидрид натрия (2,42 г) добавляли к раствору полученного остатка в THF (80 мл) при комнатной температуре и затем реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при той же температуре. После охлаждения реакционной смеси льдом к реакционной смеси по каплям добавляли метанол (10 мл) за период времени 30 мин, реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Далее к реакционной смеси по каплям добавляли воду (15 мл) за период времени 15 мин и реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре. К реакционной смеси дополнительно добавляли воду (15 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. THF отгоняли из реакционной смеси при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли этилацетат и после перемешивания смеси в течение 15 мин отделяли органический слой. Полученный органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 50%) и измельчали в порошок с помощью смешанного растворителя из MTBE и гексана (1:1). Полученный порошок фильтровали и сушили при пониженном давлении с получением титульного соединения (7,52 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ (ppm):1,40-1,55 (м, 4H), 1,70-1,85 (м, 4H), 2,84 (шир.с, 1H), 3,90 (с, 4H), 5,10 (с, 2H), 7,24-7,40 (м, 5H).

ESI-MS масса/заряд 329 [M+Na]⁺

[0062] (2) Синтез (1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)гидразина гидрохлорида

К суспензии бензил-2-(1,4-диоксаспиро[4,5]декан-8-ил)гидразинкарбоксилата (4,0 г) в этаноле (40 мл)-хлороформе (3,16 мл) добавляли 10% палладий на угле (содержание воды: 50%, 400 мг) и смесь перемешивали в течение 23,5 ч при комнатной температуре в атмосфере водорода. Палладий на угле отфильтровывали из реакционной смеси. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением титульного соединения (3,06 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ (ppm):1,57-1,90 (м, 8H), 3,06 (шир.с, 1H), 3,91 (с, 4H).

[0063] Пример 1a

Синтез (+)-7-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((+)-цис)

Пример 1b

(-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис)

Пример 1c

(+)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-транс)

Пример 1d

(-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс)

[0064] (1) Синтез этил-5-[4-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-2-нитрофенил]-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилата

Этил-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-5-[2-нитро-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]-1H-пиразол-4-карбоксилат, полученный в примере получения 4 (220 мг), 3-бром-6-метокси-2,4-диметилпиридин, полученный в примере получения 1 (196 мг), и карбонат натрия (144 мг) добавляли к жидкой смеси 1,4-диоксана (3,9 мл) и воды (0,8 мл) при 20°C. После добавления Pd(PPh₃)₄ (52,4 мг) к жидкой смеси ее перемешивали при 110°C в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем к реакционной смеси добавляли этилацетат. Органический слой и водный слой разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (10 мл × 2). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (10 мл), сушили над безводным сульфатом магния и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 30-70%) с получением титульного соединения (137 мг).

ESI-MS масса/заряд 495 [M+H]⁺

[0065] (2) Синтез 7-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

Этил-5-[4-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-2-нитрофенил]-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилат (135 мг) растворяли в уксусной кислоте (1,6 мл). К раствору добавляли порошок железа (45,7 мг) при 20°C. Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 4 ч. Для разведения к реакционной смеси добавляли этилацетат (10 мл) и для нейтрализации добавляли водный раствор гидрокарбоната натрия. Органический слой и водный слой разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (25 мл × 2). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (10 мл), сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 50-100%) с получением титульного соединения (76 мг).

ESI-MS масса/заряд 419 [M+H]⁺

[0066] (3) Синтез (+)-7-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она, (-)-7-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она, (+)-7-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она и (-)-7-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он (12 мг) растворяли в этаноле (10 мл). Раствор очищали в условиях хиральной HPLC (колонка: CHIRALPAK^R IA от Daicel, подвижная фаза: этанол). Смесь (8 мг) (+)-7-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она (транс) и (-)-7-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она (транс) получали в качестве первой фракции. (+)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-цис) (3 мг) получали в качестве второй фракции. (-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис) (3 мг) получали в качестве третьей фракции. Смесь транс-изомеров (8 мг) разделяли в условиях хиральной HPLC (колонка: CHIRALCEL^R OD-H от Daicel, подвижная фаза: этанол). (-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс) (1 мг) получали в качестве первой фракции и (+)-7-(6-метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-транс) (1 мг) получали в качестве второй фракции.

(+)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-цис)

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 0,93 (д, J=6,6 Гц, 3H), 2,01-2,09 (м, 4H), 2,21-2,23 (м, 3H), 2,45-2,54 (м, 1H), 2,93-3,07 (м, 1H), 3,63-3,73 (м, 1H), 3,82-3,89 (м, 1H), 3,97 (с, 3H), 3,98-4,03 (м, 1H), 4,23-4,31 (м, 1H), 5,18-5,26 (м, 1H), 6,55 (с, 1H), 7,12 (дд, J=8,2 Гц, 1,6 Гц, 1H), 7,18-7,31 (м, 1H), 8,01 (д, J=8,2 Гц, 1H), 8,30 (с, 1H), 10,15 (шир.с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 419 [M+H]⁺

Колонка: CHIRALPAK^R IA от Daicel, подвижная фаза: этанол, время удержания: 17,1 минуты.

(-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис)

Колонка: CHIRALPAK^R IA от Daicel, подвижная фаза: этанол, время удержания: 20,4 минуты.

Данные ¹H-ЯМР для (-)-цис-изомера были идентичны данным ¹H-ЯМР для соответствующего (+)-цис-изомера.

(-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс)

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 0,76 (д, J=6,6 Гц, 3H), 2,02-2,05 (м, 3H), 2,10-2,18 (м, 1H), 2,21-2,24 (м, 3H), 2,34-2,48 (м, 1H), 2,79-2,92 (м, 1H), 3,31 (т, J=11,5 Гц, 1H), 3,66-3,75 (м, 1H), 3,97 (с, 3H), 4,13 (дд, J=11,9 Гц, 4,5 Гц, 1H), 4,18-4,26 (м, 1H), 4,68 (тд, J=10,9 Гц, 4,3 Гц, 1H), 6,55 (с, 1H), 7,12 (дд, J=8,2 Гц, 1,6 Гц, 1H), 7,26 (д, J=1,6 Гц, 1H), 8,08 (д, J=8,2 Гц, 1H), 8,36 (с, 1H), 10,57 (шир.с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 419 [M+H]⁺

Колонка: CHIRALCEL^R OD-H от Daicel, подвижная фаза: этанол, время удержания: 13,3 минуты.

(+)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-транс)

Колонка: CHIRALCEL^R OD-H от Daicel, подвижная фаза: этанол, время удержания: 19,7 мин.

Данные ¹H-ЯМР для (+)-транс-изомера были идентичны данным ¹H-ЯМР соответствующего (-)-транс-изомера.

[0067] Пример 2a

Синтез (+)-7-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((+)-транс)

Пример 2b

(-)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис)

Пример 2c

(+)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-цис)

Пример 2d

(-)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс)

[0068] (1) Синтез этил-5-[4-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-2-нитрофенил]-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилата

Этил-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-5-[2-нитро-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]-1H-пиразол-4-карбоксилат, полученный в примере получения 4 (220 мг), 3-бром-2-метокси-4,6-диметилпиридин, полученный в примере получения 2 (196 мг), и карбонат натрия (144 мг) добавляли к жидкой смеси 1,4-диоксана (3,9 мл) и воды (0,8 мл) при 20°C. После добавления Pd(PPh₃)₄ (52,4 мг) к жидкой смеси ее перемешивали при 110°C в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем к реакционной смеси добавляли этилацетат. Органический слой и водный слой разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (10 мл × 2). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (10 мл), сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 30-70%) с получением титульного соединения (133 мг).

ESI-MS масса/заряд 495 [M+H]⁺

[0069] (2) Синтез 7-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

Этил-5-[4-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-2-нитрофенил]-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилат (133 мг) растворяли в уксусной кислоте (1,5 мл). К раствору добавляли порошок железа (45,1 мг) при 20°C. Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 4 ч. Для разведения к реакционной смеси добавляли этилацетат (10 мл) и для нейтрализации добавляли водный раствор гидрокарбоната натрия. Органический слой и водный слой разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (25 мл × 2). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (10 мл), сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 50-100%) с получением титульного соединения (73 мг).

ESI-MS масса/заряд 419 [M+H]⁺

[0070] (3) Синтез (+)-7-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((+)-транс), (-)-7-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((-)-цис), (-)-7-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((-)-транс) и (+)-7-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((+)-цис).

7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он (30 мг) растворяли в этаноле (5 мл). Раствор очищали в условиях хиральной HPLC (колонка: CHIRALPAK^R AD-H от Daicel, подвижная фаза: этанол). Смесь (14 мг) (+)-7-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она (цис) и (-)-7-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она (транс) получали в качестве первой фракции. (+)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-транс) (3 мг) получали в качестве второй фракции. (-)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис) (3 мг) получали в качестве третьей фракции. Смесь (14 мг), описанную выше, разделяли в условиях хиральной HPLC (колонка: CHIRALCEL^R OD-H от Daicel, подвижная фаза: этанол/н-гексан (70%)). (-)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс) (5 мг) получали в качестве первой фракции и (+)-7-(2-метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-цис) (5 мг) получали в качестве второй фракции.

(+)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-транс)

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 0,75 (д, J=6,6 Гц, 3H), 2,11 (с, 3H), 2,11-2,19 (м, 1H), 2,29-2,49 (м, 1H), 2,48 (с, 3H), 2,78-2,89 (м, 1H), 3,29 (т, J=11,3 Гц, 1H), 3,64-3,71 (м, 1H), 3,86 (с, 3H), 4,08-4,15 (м, 1H), 4,17-4,25 (м, 1H), 4,62-4,71 (м, 1H), 6,74 (с, 1H), 7,18 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,27 (с, 1H), 8,06 (д, J=8,0 Гц, 1H), 8,34 (с, 1H), 10,03 (шир.с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 419 [M+H]⁺

Колонка: CHIRALPAK^R AD-H от Daicel, подвижная фаза: этанол, время удержания: 23,8 мин.

(-)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис)

ESI-MS масса/заряд 419[M+H]⁺

Колонка: CHIRALPAK^R AD-H от Daicel, подвижная фаза: этанол, время удержания: 31,4 мин.

Данные ¹H-ЯМР для (-)-цис-изомера были идентичны данным ¹H-ЯМР для соответствующего (+)-цис-изомера.

(-)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс)

Колонка: CHIRALCEL^R OD-H от Daicel, подвижная фаза: этанол/н-гексан (70%), время удержания: 13 мин.

Данные ¹H-ЯМР для (-)-транс-изомера были идентичны данным ¹H-ЯМР для соответствующего (+)-транс-изомера.

(+)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-цис)

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 0,90 (д, J=7,2 Гц, 3H), 2,00-2,09 (м, 1H), 2,10 (с, 3H), 2,49 (с, 3H), 2,48-2,55 (м, 1H), 2,94-3,05 (м, 1H), 3,64-3,71 (м, 1H), 3,77-3,89 (м, 1H), 3,86 (с, 3H), 3,96-4,00 (м, 1H), 4,24-4,30 (м, 1H), 5,19-5,24 (м, 1H), 6,74 (с, 1H), 7,19 (дд, J=8,4 Гц, 1,6 Гц, 1H), 7,31 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,98 (д, J=8,4 Гц, 1H), 8,29 (с, 1H), 10,43(шир.с, 1H).

Колонка: CHIRALCEL^R OD-H от Daicel, подвижная фаза: этанол/н-гексан (70%), время удержания: 14,9 мин.

[0071] Пример 3a

Синтез (-)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((-)-цис)

Пример 3b

(+)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-цис)

Пример 4a

(-)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс)

Пример 4b

(+)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-транс)

[0072] (1) Синтез этил-5-(4-бром-2-нитрофенил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилата

4-Бром-2-нитробензойную кислоту (6 г) растворяли в ацетонитриле (60 мл). К раствору добавляли тионилхлорид (1,9 мл) и смесь перемешивали при 50°C в течение 2 ч. К реакционной смеси при охлаждении льдом по каплям добавляли триэтиламин (6,8 мл). К реакционной смеси также по каплям добавляли этил-3-диметиламиноакрилат (3,9 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч реакционную смесь фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли этилацетат и полученную суспензию отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли этилацетат, полученную суспензию отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли этилацетат, полученную суспензию отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением этил-2-(4-бром-2-нитробензоил)-3-(диметиламино)акрилата (11 г) в виде неочищенного продукта. Полученный этил-2-(4-бром-2-нитробензоил)-3-(диметиламино)акрилат (2,95 г) растворяли в ацетонитриле (20 мл). К раствору добавляли (3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)гидразина гидрохлорид (1,3 г) (синтезированный согласно Giovannini, Riccardo et al., международная заявка по PCT (2009), WO 2009121919, примеры 8CA, 8CB) и воду (2 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем перемешивали при 90°C в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли этилацетат и воду. Отделяли органический слой. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 10-100%) с получением титульного соединения (0,66 г).

ESI-MS масса/заряд 460 [M+Na]⁺

[0073] (2) Синтез этил-5-[4-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-2-нитрофенил]-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилата

После добавления (2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)бороновой кислоты, полученной в примере получения 3 (265 мг), Pd(PPh₃)₄ (85 мг) и карбоната цезия (715 мг) к жидкой смеси этил-5-(4-бром-2-нитрофенил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (320,8 мг), 1,4-диоксана (5 мл) и воды (1,5 мл) реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 2 ч в атмосфере азота. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры ее концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток частично очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 10-100%) с получением титульного соединения (382,8 мг) в виде неочищенного продукта.

ESI-MS масса/заряд 495 [M+H]⁺

[0074] (3) Синтез 7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

После растворения этил-5-[4-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-2-нитрофенил]-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (112,3 мг) в уксусной кислоте (2,5 мл) и воде (0,25 мл), смесь перемешивали при 80°C в течение 15 минут в атмосфере азота. К реакционной смеси за один раз добавляли порошок железа (76 мг) и после перемешивания реакционной смеси при 80°C в течение 2 ч в атмосфере азота ее перемешивали в течение ночи при 90°C в атмосфере азота. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры ее разбавляли этилацетатом и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли хлороформом и промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи хроматографии на короткой колонке с силикагелем (этилацетат) с получением титульного соединения (91,2 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 0,75-0,94 (м, 3H), 1,93-2,00 (м, 6H), 2,05-2,23 (м, 1H), 2,30-2,55 (м, 1H), 2,80-3,08 (м, 1H), 3,32 (т, J=12 Гц, 0,33H), 3,65-3,75 (м, 1H), 3,83-3,90 (м, 0,66H), 3,97-4,00 (м, 0,66H), 4,01 (с, 3H), 4,10-4,15 (м, 0,33H), 4,17-4,32 (м, 1H), 4,63-4,73 (м, 0,33H), 5,20-5,27 (м, 0,66H), 7,07-7,10 (м, 1H), 7,38 (с, 1H), 7,95 (с, 1H), 8,03-8,13 (м, 1H), 8,31 (с, 0,66H), 8,36 (с, 0,33H), 11,92-11,96 (м, 1H).

ESI-MS масса/заряд 419 [M+H]⁺

[0075] (4) Синтез (-)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((-)-цис), (+)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((+)-цис), (-)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((-)-транс) и (+)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((+)-транс)

7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он (91,2 мг) растворяли в 5% хлороформе/этаноле (10,5 мл). Раствор очищали в условиях хиральной HPLC (колонка: CHIRALPAK^R IA от Daicel, подвижная фаза: этанол/н-гексан (50%)). Смесь (17,7 мг) (-)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она и (+)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она ((±)-транс) получали в качестве первой фракции. (+)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-цис) (25,9 мг) получали в качестве второй фракции. (-)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис) (25,9 мг) получали в качестве третьей фракции.

Смесь (±)-транс-изомеров (17,7 мг) разделяли в условиях хиральной HPLC (колонка: CHIRALPAK^R IB от Daicel, подвижная фаза: этанол/н-гексан (15%)). (-)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс) (3,7 мг) получали в качестве первой фракции и (+)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-транс) (3,6 мг) получали в качестве второй фракции.

(-)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис)

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 0,88-0,95 (м, 3H), 1,91-2,00 (м, 6H), 2,03-2,13 (м, 1H), 2,45-2,55 (м, 1H), 2,95-3,07 (м, 1H), 3,65-3,73 (м, 1H), 3,83-3,89 (м, 1H), 3,97-4,00 (м, 1H), 4,01 (с, 3H), 4,24-4,32 (м, 1H), 5,20-5,27 (м, 1H), 7,07-7,10 (м, 1H), 7,33 (с, 1H), 7,95 (с, 1H), 8,04 (д, J=8,4 Гц, 1H), 8,31 (с, 1H), 11,47 (шир.с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 419 [M+H]⁺

Колонка: CHIRALPAK^R IA от Daicel, подвижная фаза: этанол/н-гексан (20%), время удержания: 15 мин.

(+)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-цис)

Колонка: CHIRALPAK^R IA от Daicel, подвижная фаза: этанол/н-гексан (20%), время удержания: 12,5 мин.

Данные ¹H-ЯМР для (+)-цис-изомера были идентичны данным ¹H-ЯМР для соответствующего (-)-цис-изомера.

(-)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс)

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 0,75-0,77 (м, 3H), 1,93-1,98 (м, 6H), 2,09-2,18 (м, 1H), 2,34-2,48 (м, 1H), 2,78-2,92 (м, 1H), 3,31 (т, J=11,4 Гц, 1H), 3,60-3,75 (м, 1H), 4,00 (с, 3H), 4,08-4,17 (м, 1H), 4,20-4,25 (м, 1H), 4,63-4,70 (м, 1H), 7,06-7,08 (м, 1H), 7,16-7,18 (м, 1H), 7,95 (с, 1H), 8,11 (д, J=11,4 Гц, 1H), 8,36 (с, 1H), 10,12 (шир.с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 419 [M+H]⁺

Колонка: CHIRALPAK^R IB от Daicel, подвижная фаза: этанол/н-гексан (10%), время удержания: 6,3 мин.

(+)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((+)-транс)

Колонка: CHIRALPAK^R IB от Daicel, подвижная фаза: этанол/н-гексан (10%), время удержания: 7,8 мин.

Данные ¹H-ЯМР для (+)-транс-изомера были идентичны данным ¹H-ЯМР соответствующего (-)-транс-изомера.

[0076] Пример 5a

Синтез 7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(цис-4-метоксициклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

Пример 5b

Синтез 7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(транс-4-метоксициклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

[0077] (1) Синтез этил-3-(4-бром-2-фторфенил)-3-оксопропаноата

После добавления CDI (8,88 г) к суспензии 4-бром-2-фторбензойной кислоты (№ CAS 112704-79-7) (10 г) в DCM (97 мл) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3,5 ч. Данный раствор использовали в качестве "раствора 1".

TEA (15,9 мл) и хлорид магния (10,9 г) последовательно добавляли к суспензии этилмалоната калия (15,5 г) в ацетонитриле (303 мл) в отдельном сосуде и полученную смесь перемешивали в течение 3 ч и 10 мин при комнатной температуре. Ранее полученный "раствор 1" по каплям добавляли к реакционной смеси за период времени 25 мин и затем реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали до половины ее количества при пониженном давлении. Полученный остаток разбавляли этилацетатом (500 мл), и при охлаждении льдом добавляли 5 н. соляную кислоту (250 мл), и затем смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Отделяли органический слой. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 5-20%) с получением титульного соединения (12,8 г).

ESI-MS масса/заряд 291 [M+H]⁺

[0078] (2) Синтез этил-5-(4-бром-2-фторфенил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилата

Раствор этил-3-(4-бром-2-фторфенил)-3-оксопропаноата (1,5 г) в DMF-DMA (6,89 мл) перемешивали при 50°C в течение 2,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в толуоле (7 мл), полученный раствор концентрировали при пониженном давлении и данную процедуру повторяли. Раствор остатка в этаноле (10 мл) добавляли к раствору (1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)гидразина гидрохлорида, полученному в примере получения 5 (3,06 г), и TEA (3 мл) в этаноле (30 мл). После перемешивания реакционной смеси при 80°C в течение 2,5 часа ее охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли этилацетат и воду и распределяли органический слой. Органический слой промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором в указанном порядке, сушили над безводным сульфатом магния и осушитель отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 15%) с получением титульного соединения (2,10 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 1,18 (т, J=6,8 Гц, 3H), 1,49-1,60 (м, 2H), 1,73-1,94 (м, 4H), 2,30-2,45 (м, 2H), 3,79-3,89 (м, 1H), 3,90-4,00 (м, 4H), 4,15 (q, J=6,8 Гц, 2H), 7,19 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,40-7,46 (м, 2H), 8,03 (с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 475 [M+Na]⁺

[0079] (3) Синтез 5-(4-бром-2-фторфенил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты

5 н. водный раствор гидроксида натрия (2,78 мл) добавляли к суспензии этил-5-(4-бром-2-фторфенил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразол-4-карбоксилата (2,1 г) в этаноле (20 мл) и смесь перемешивали при 50°C в течение 6 часов. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. К полученному водному остатку добавляли воду и MTBE и водный слой отделяли. Полученный водный слой подкисляли 5 н. соляной кислотой и экстрагировали этилацетатом (дважды). Объединенный слой после экстракции этилацетатом промывали водой и солевым раствором в указанном порядке, сушили над безводным сульфатом магния и осушитель отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением титульного соединения (2,03 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 1,48-1,60 (м, 2H), 1,72-1,94 (м, 4H), 2,28-2,45 (м, 2H), 3,77-3,88 (м, 1H), 3,90-3,99 (м, 4H), 7,18 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,39-7,45 (м, 2H), 8,07 (с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 449 [M+Na]⁺

[0080] (4) Синтез 5-(4-бром-2-фторфенил)-N-(2,4-диметоксибензил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразол-4-карбоксамида

После добавления 2,4-диметоксибензиламина (747 мг), DIPEA (1,56 мл), HOBT (724 мг) и EDC (1,03 г) к раствору 5-(4-бром-2-фторфенил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразол-4-карбоновой кислоты (1,90 г) в DMF (40 мл) в указанном порядке, реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали до примерно 1/3 ее количества при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли этилацетат, воду и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и органический слой отделяли. Органический слой промывали водой и солевым раствором, в указанном порядке, сушили над безводным сульфатом магния и осушитель отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением титульного соединения (2,51 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 1,45-1,60 (м, 2H), 1,65-1,94 (м, 4H), 2,23-2,45 (м, 2H), 3,70-3,80 (м, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,80 (с, 3H), 3,90-3,99 (м, 4H), 4,36 (т, J=6,4 Гц, 2H), 5,86 (т, J=6,4 Гц, 1H), 6,38-6,44 (м, 2H), 7,10 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,18 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,34-7,41 (м, 2H), 7,87 (с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 574 [M+H]⁺

[0081] (5) Синтез 7-бром-5-(2,4-диметоксибензил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

После добавления KTB (735 мг) к раствору 5-(4-бром-2-фторфенил)-N-(2,4-диметоксибензил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразол-4-карбоксамида (2,51 г) в THF (30 мл) при охлаждении льдом, смесь перемешивали при той же температуре в течение 5 мин и затем при комнатной температуре в течение 2 ч. К реакционной смеси дополнительно добавляли KTB (400 мг) и смесь перемешивали в течение 40 мин. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония, этилацетат и воду в указанном порядке и органический слой отделяли. Водный слой снова экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния, и осушитель отфильтровывали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли этилацетат (3 мл) и MTBE (9 мл). Полученное твердое вещество фильтровали и сушили при пониженном давлении с получением титульного соединения (2,04 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 1,81 (тд, J=14,0, 4,0 Гц, 2H), 1,97-2,06 (м, 2H), 2,15-2,24 (м, 2H), 2,43-2,55 (м, 2H), 3,76 (с, 3H), 4,01 (с, 7H), 4,73-4,83 (м, 1H), 5,50 (шир.с, 2H), 6,34 (дд, J=8,4, 2,4 Гц, 1H), 6,52 (д, J=2,4 Гц, 1H), 6,99 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,39 (дд, J=8,8, 1,6 Гц, 1H), 7,80 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,82 (д, J=8,8 Гц, 1H), 8,29 (с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 576 [M+Na]⁺

[0082] (6) Синтез 5-(2,4-диметоксибензил)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

Воду (2,5 мл), Pd(PPh₃)₄ (313 мг) и карбонат кальция (2,64 г) добавляли к раствору (2-метокси-3,5-диметилпиридин)бороновой кислоты, полученной в примере получения 1 (783 мг), и 7-бром-5-(2,4-диметоксибензил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она (1,50 г) в 1,4-диоксане (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при 130°C в течение 3 ч с применением реактора с микроволновым излучением. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и затем к реакционной смеси добавляли этилацетат и воду, и органический слой отделяли. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/н-гептан, 40%). К концентрированному остатку добавляли этилацетат и MTBE. Полученное твердое вещество фильтровали и сушили при пониженном давлении с получением титульного соединения (1,52 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 1,73 (с, 3H), 1,76 (с, 3H), 1,87 (тд, J=14,0,4,0 Гц, 2H), 2,00-2,08 (м, 2H), 2,22-2,32 (м, 2H), 2,49-2,62 (м, 2H), 3,68 (с, 3H), 3,73 (с, 3H), 3,97 (с, 3H), 4,02 (с, 4H), 4,85-4,95 (м, 1H), 5,40-5,60 (м, 2H), 6,29 (дд, J=8,4, 2,4 Гц, 1H), 6,42 (д, J=2,4 Гц, 1H), 6,83 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,05 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,24 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 8,07 (д, J=8,4 Гц, 1H), 8,33 (с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 611 [M+H]⁺

[0083] (7) Синтез 5-(2,4-диметоксибензил)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(4-оксоциклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

После добавления 2 н. соляной кислоты (20 мл) к раствору 5-(2,4-диметоксибензил)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она (1,30 г) в THF (20 мл) реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 19,5 ч. После выливания реакционной смеси в насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия (60 мл) ее экстрагировали этилацетатом. Полученный органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением титульного соединения (1,12 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 1,73 (с, 3H), 1,76 (с, 3H), 2,52-2,87 (м, 8H), 3,68 (с, 3H), 3,74 (с, 3H), 3,97 (с, 3H), 5,27-5,37 (м, 1H), 5,37-5,62 (м, 2H), 6,29 (дд, J=8,8, 2,4 Гц, 1H), 6,42 (д, J=2,4 Гц, 1H), 6,84 (д, J=8,8 Гц, 1H), 7,06 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,28 (с, 1H), 7,88 (с, 1H), 8,10 (д, J=8,4 Гц, 1H), 8,35 (с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 567 [M+H]⁺

[0084] (8) Синтез 5-(2,4-диметоксибензил)-1-(4-гидроксициклогексил)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

Боргидрид натрия (57,1 мг) при охлаждении льдом добавляли к раствору 5-(2,4-диметоксибензил)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(4-оксоциклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она (570 мг) в THF (20 мл)-метаноле (10 мл), и смесь перемешивали при той же температуре в течение 5 мин и затем при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали на льду и к реакционной смеси добавляли 1 н. соляную кислоту (2 мл). После концентрирования реакционной смеси до примерно 1/4 ее количества к остатку добавляли этилацетат и воду и органический слой отделяли. Органический слой промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором в указанном порядке, сушили над безводным сульфатом магния и осушитель отфильтровывали. Фильтрат подвергали хроматографии на короткой колонке с силикагелем (этилацетат) с получением титульного соединения (597 мг).

ESI-MS масса/заряд 569 [M+H]⁺

[0085] (9) Синтез 5-(2,4-диметоксибензил)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(4-метоксициклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

После добавления 60% гидрида натрия (дисперсия в масле, 31,7 мг) к раствору 5-(2,4-диметоксибензил)-1-(4-гидроксициклогексил)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она (300 мг) в THF (5 мл) при 0°C смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. К реакционной смеси добавляли йодметан (0,1 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч и при 50°C в течение 2 ч. Далее к реакционной смеси добавляли йодметан (0,1 мл) и ее перемешивали в течение ночи при 50°C. К реакционной смеси добавляли воду и этилацетат и органический слой отделяли. Водный слой снова экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой промывали солевым раствором и сушили над безводным сульфатом магния, осушитель отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (метанол/хлороформ, 2%) с получением титульного соединения (110 мг).

ESI-MS масса/заряд 583 [M+H]⁺

[0086] (10) Синтез 7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(цис-4-метоксициклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она и 7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(транс-4-метоксициклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она

Триэтилсилан (0,09 мл) добавляли к раствору 5-(2,4-диметоксибензил)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(4-метоксициклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-она (109 мг) в TFA (1,5 мл) и реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 4,25 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли хлороформ и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и органический слой отделяли. Водный слой снова экстрагировали хлороформом. Объединенный органический слой сушили над безводным сульфатом магния и отфильтровывали осушитель. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (хлороформ, а затем этилацетат) с получением титульного соединения в виде смеси цис-изомеров и транс-изомеров (68 мг).

Смесь растворяли в хлороформе (1,1 мл)-этаноле (4,4 мл) и фильтровали с помощью фильтра Millipore. Фильтрат очищали при помощи CHIRALCEL^R IB (20 мм Ф × 250 мм) от Daicel в условиях 100% этанол, 10 мл/мин, с получением цис-изомера титульного соединения (10,1 мг) и транс-изомера титульного соединения (47,0 мг).

Цис-изомер

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 1,63-1,74 (м, 2H), 1,94 (с, 3H), 1,97 (с, 3H), 2,00-2,09 (м, 2H), 2,22-2,30 (м, 2H), 2,47-2,60 (м, 2H), 3,39 (с, 3H), 3,60 (шир.с, 1H), 4,00 (с, 3H), 4,80-4,89 (м, 1H), 7,06 (дд, J=8,4,1,6 Гц, 1H), 7,20 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,94 (с, 1H), 8,06 (д, J=8,4 Гц, 1H), 8,30 (с, 1H), 10,42 (шир.с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 433 [M+H]⁺

Транс-изомер

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (ppm): 1,48-1,60 (м, 2H), 1,94 (с, 3H), 1,97 (с, 3H), 2,17-2,40 (м, 6H), 3,32-3,42 (м, 1H), 3,43 (с, 3H), 4,01 (с, 3H), 4,79-4,89 (м, 1H), 7,08 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,25 (с, 1H), 7,94 (с, 1H), 8,04 (д, J=8,4 Гц, 1H), 8,29 (с, 1H), 10,95 (шир.с, 1H).

ESI-MS масса/заряд 433 [M+H]⁺

[0087] [Примеры фармакологических тестов]

Пример теста PDE9-ингибиторной активности

1) Получение рекомбинантного белка PDE9 человека

Амплифицировали кДНК-фрагмент hsPDE9A 1, исходя из последовательности оснований (№ доступа: AF048837) hsPDE9A1, зарегистрированной в базе данных GenBank, и с применением следующих последовательностей (Hokkaido System Science Co., Ltd.) в качества праймера, и кДНК-библиотеки гиппокампа человека (Clontech Laboratories, Inc.) в качестве ДНК-матрицы, и с применением ДНК-полимеразы Pfu50 (Invitrogen Corp.), и с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с приведенными далее условиями.

Праймер hPDE9-1: AGGATGGGATCCGGCTCCTCCA (SEQ No. 1).

Праймер hPDE9A-3: CAGGCACAGTCTCCTTCACTG (SEQ No. 2).

Условия ПЦР: [96°C, 5 мин] × 1 цикл, [(96°C, 10 с), (57°C, 5 с), (72°C, 2 мин)] × 30 циклов.

[0088] Полученный кДНК-фрагмент hsPDE9A 1 встраивали в вектор клонирования TOPO-TA (Invitrogen Corp.) и проверяли последовательность оснований; и после этого продукт реакции трансфицировали в вектор pcDNA 3.1/myc с гистидиновой меткой (Invitrogen Corp.), таким образом, получая вектор экспрессии PDE9 человека для клеток млекопитающих. Вектор экспрессии PDE9 человека для клеток млекопитающих трансфицировали с помощью временной экспрессии в клетку HEK293 с помощью реактива LIPOFETAMINE 2000 (Gibco). С помощью способа вестерн-блоттинга подтверждали, что PDE9A экспрессировалась в клетке HEK293, а затем, кДНК-фрагмент PDE9A 1 трансфицировали в вектор pYNG (Katakura Industries Co., Ltd.), таким образом, получая вектор экспрессии для клеток насекомых. Супернатант гомогенизированного шелкопряда, у которого экспрессировалось большое количество PDE9, очищали с помощью уравновешенной Ni-колонки с применением буфера A (20 ммoль/л Tris-HCl, pH: 8,0, 1 ммоль/л DTT, 10 ммоль/л имидазола). Через 1 час смешивания супернатанта и Ni-колонки проводили очистку с помощью буфера B (20 ммоль/л Tris-HCl, pH: 8,0, 1 ммоль/л DTT) и осуществляли элюирование с помощью буфера C (20 ммоль/л Tris-HCl, pH: 8,0, 1 ммоль/л DTT, 100 ммоль/л имидазола). Препаративно собирали фракцию элюирования, таким образом, получая раствор фермента PDE9.

[0089] 2) Измерение PDE9-ингибирующего действия

К 100 мкл раствора буфера D (40 ммоль/л Tris-HCl, pH: 7,4, 10 ммоль/л MgCl₂, 1 мМ DTT, 2 мкM cGMP), содержащего [³H]-cGMP (0,5 мкКи/мл), 10 мкл раствора соединения для оценки (раствора, в котором соединение растворяли в DMSO и разбавляли так, чтобы концентрация DMSO становилась 5%) и 90 мкл раствора, приготовленного путем разбавления приготовленного как описано выше раствора фермента PDE9 буфером E (40 ммоль/л Tris-HCl, pH: 7,4, 10 ммоль/л MgCl₂, 1 мм DTT, 1 ммоль/л EGTA) добавляли при охлаждении льдом. Полученный смешанный раствор инкубировали при 30°C в течение 2 мин, а после этого нагревали в течение 2 мин в кипящей воде для остановки ферментативной реакции PDE9. Затем, полученному раствору давали остыть до комнатной температуры; к нему добавляли 50 мкл 5'-нуклеотидазы (Biomol GmbH, 10 единиц/мл); и полученный раствор инкубировали при 30°C в течение 10 мин с превращением, таким образом, образовавшегося в результате предыдущей реакции [³H]-5'-GMP в [³H]-гуанозин. 500 мкл анионообменной смолы (смолы Bio-Rad AG1-X2, размер ячейки: 200-400, H₂O:смола=2:1) добавляли к полученной реакционной жидкости и давали отстояться в течение 10 мин, а после этого центрифугировали (2000 об/мин, 10 мин); и супернатант, в котором присутствовал [³H]-гуанозин, переносили в LumaPlate (PerkinElmer, Inc.) и измеряли радиоактивность с помощью сцинтилляционного и люминесцентного счетчика для микропланшета TopCount NXT (PerkinElmer, Inc.).

[0090] Процент ингибирования у оцениваемого соединения рассчитывали с помощью следующей формулы, принимая радиоактивность контроля, не содержащего оцениваемое соединение, за (A), радиоактивность холостой пробы, не содержащей фермент, за (B) и радиоактивность оцениваемого соединения за (C).

Процент ингибирования=100-{[(C)-(B)]/[(A)-(B)]}×100 (%).

Величину IC₅₀ в отношении PDE9 у оцениваемого соединения определяли на основании процента ингибирования для различных концентраций. Величина IC₅₀ у каждого оцениваемого соединения показана в следующей таблице 1.

[0091]

Пример № IC50 PDE9, мкM 1a 0,0480 1b 0,0136 1c 0,0872 1d 0,0069 2a 0,0116 2b 0,0037 2c 0,0123 2d 0,0013 3a 0,0069 3b 0,0256 4a 0,0058 4b 0,0391 5a 0,0098 5b 0,0127

[0092] 3) Влияние на cGMP цереброспинальной жидкости грызунов

Тестируемое соединение вводили самцам мышей ICR (Charles River Laboratories Japan, Inc.), самцам крыс Sprague-Dawley (SD) (Charles River Laboratories Japan, Inc.) или самцам крыс Long-Evans (LE) (Институт разведения животных (Institute for Animal Reproduction)), а затем при анестезии пентобарбиталом собирали цереброспинальную жидкость и хранили при -20°C. cGMP в цереброспинальной жидкости измеряли согласно EIA-процедуре с ацетилированием из набора cGMP EIA (GE Healthcare) или процедуре без ацетилирования из набора cGMP EIA (Cayman). Результатом было повышение (C) количества cGMP у группы, которой вводили тестируемое соединение (B), по отношению к количеству cGMP у группы, которой вводили носитель (A), и рассчитывали с помощью следующей формулы:

Повышение cGMP (C)=[(B)-(A)]/(A)×100 (%).

Результаты показаны в следующей таблице 2.

[0093]

[Таблица 2] Пример № % повышения cGMP CSF относительно контроля с носителем Вид Доза (мг/кг, п.о.) Время забора образца (ч) 1b 147 крыса (LE) 10 2 1d 206 крыса (LE) 10 2 2d 183 крыса (LE) 10 2 3a 200 крыса (LE) 10 2 5b 167 крыса (LE) 10 2

[0094] 4) Влияние на cGMP гиппокампа грызунов

Тестируемое соединение вводили самцам крыс Sprague-Dawley (Charles River Laboratories Japan, Inc.) или самцам крыс Long-Evans (Институт разведения животных (Institute for Animal Reproduction)), а затем животных умерщвляли с помощью микроволн под анестезией пентобарбиталом и извлекали гиппокамп. После измерения сырого веса гиппокамп замораживали с помощью жидкого азота и хранили при -80°C. При измерении cGMP в гиппокампе добавляли раствор 0,5M перхлорной кислоты/1 мМ EDTA из расчета 5% (вес/объем), исходя из сырого веса, и гомогенизировали смесь. После гомогенизации гомогенат центрифугировали (10000 об/мин, 15 мин) и собирали супернатант. Собранный супернатант нейтрализовали с помощью 2M раствора бикарбоната калия и центрифугировали (13000 об/мин, 10 мин). Концентрацию cGMP в супернатанте измеряли согласно EIA-процедуре без ацетилирования из набора cGMP EIA (GE Healthcare). Результатом было повышение (C) количества cGMP у группы, которой вводили тестируемое соединение (B), по отношению к количеству cGMP у группы, которой вводили носитель (A), и рассчитывали с помощью следующей формулы:

Повышение cGMP (C)=[(B)-(A)]/(A)×100 (%).

Результаты показаны в следующей таблице 3.

[0095]

[Таблица 3] Пример № % повышение cGMP гиппокампа относительно контроля с носителем вид Доза (мг/кг, п.о.) Время забора образца (ч) 1b 44 крыса (LE) 10 2 1d 61 крыса (LE) 10 2 2d 23 крыса (LE) 10 2 3a 58 крыса (LE) 10 2 5b 41 крыса (LE) 10 2

Изобретение относится к соединению, представленному формулой (I), или к его фармацевтически приемлемой соли, где R¹ является группами, имеющими формулы, представленные ниже, и R² является 3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ильной группой или 4-метоксициклогексильной группой. Заявленные соединения являются ингибиторами PDE9. Изобретение также относится к конкретным соединениям и фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (Ш), или его фармацевтически приемлемую соль. Кроме того, объектами изобретения являются средство для облегчения когнитивного нарушения при болезни Альцгеймера и способ облегчения указанного нарушения. 10 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 4 пр.

R¹: или или

1. Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль

,

где R¹ является группой, представленной формулой

,

группой, представленной формулой

,

или группой, представленной формулой

,

и R² является 3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ильной группой или 4-метоксициклогексильной группой.

2. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение представлено формулой (II)

,

где R³ является группой, представленной формулой

,

или группой, представленной формулой

.

3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение представлено формулой (III)

,

где R² является 3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ильной группой или 4-метоксициклогексильной группой.

4. (-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис) или его фармацевтически приемлемая соль:

5. (-)-7-(6-Метокси-2,4-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс) или его фармацевтически приемлемая соль:

6. (-)-7-(2-Метокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)-1-((3R^*,4S^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-транс) или его фармацевтически приемлемая соль:

7. (-)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-((3R^*,4R^*)-3-метилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он ((-)-цис) или его фармацевтически приемлемая соль:

8. 7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(транс-4-метоксициклогексил)-1H-пиразоло[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль:

.

9. Фармацевтическая композиция ингибирующая PDE9, содержащая соединение или фармацевтически приемлемую соль по п.1 в качестве активного ингредиента.

10. Фармацевтическая композиция по п.9 для повышения концентрации внутримозгового cGMP.

11. Средство для облегчения когнитивного нарушения при болезни Альцгеймера, содержащее соединение или его фармацевтически приемлемую соль по п.1.

12. Способ облегчения когнитивного нарушения при болезни Альцгеймера, включающий введение пациенту соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п.1.

13. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1 для применения для облегчения когнитивного нарушения при болезни Альцгеймера.