ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИЙ СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ 1-(2-ФТОРБЕНЗОИЛ)-5-ФЕНИЛ-5-ЭТИЛПИРИМИДИН-2,4,6(1Н,3Н,5Н)-ТРИОНА (ГАЛОНАЛА) Российский патент 2018 года по МПК G01N27/48 

Изобретение относится к аналитической химии, в частности может быть использовано для анализа Галонала в лекарственных препаратах.

Известен способ одновременного определения Галонала с другими противосудорожными препаратами методом жидкостной хроматографии со SP детектором в сыворотке крови [Окуджава В.М. / Одновременное определение Галонала (бензонала), фенобарбитала (бензобамила), карбамазепина и галодифа в сыворотке крови методом микроколоночной ВЭЖХ // Ж. аналит. химии. - 1990, т. 45, №8. - С. 1641-1651]. Подготовка пробы крови осуществляется путем центрифугирования цельной крови в течение 5 минут со скоростью 1500 об/мин, затем добавляют 6М раствор HCl и гексан, встряхивают в течение 5 минут и экстрагируют водным раствором, подщелоченным до pH 8. Разделение веществ проводят на колонке Силасорб-600. Длина колонки - 62 мм. Диаметр гранул - 2 мм при комнатной температуре. Подготовленную пробу вводят в хроматограф. Подвижная фаза состоит из смеси гексана, хлороформа и изопропанола в соотношении 70 к 22 и к 8 по объему со скоростью 0,2 мл/мин. Определение Галонала в пробе производят с помощью спектрофотометрического детектора.

Недостатком способа является то, что в качестве подвижной фазы используется высокотоксичный растворитель.

Предложенное изобретение позволяет количественно определять Галонал вольтамперометрическим способом.

Техническая проблема решается за счет использования двухэлектродной электрохимической системы, где в качестве индикаторного используется стеклоуглеродный электрод, в качестве электрода сравнения насыщенный хлоридсеребряный электрод. Поверхность индикаторного электрода очищают фильтровальной бумагой, затем обезжиривают этиловым спиртом и диметилформамидом, после этого промывают бидистиллированной водой. Далее проводят оценку чистоты электрохимической системы, в емкость помещают 10 дм³ 0,1 М раствора дигидрофосфата натрия с pH 4-5, размещают индикаторный и электрод сравнения; затем содержимое емкости барботируется азотом в течение 300 с для удаления растворенного кислорода. В процессе электролиза содержимое емкости перемешивается. Далее на индикаторный электрод подается ток и производится электронакопление при потенциале -0,75 В в течение 30-40 с относительно насыщенного хлоридсеребряного электрода. Затем производят регистрацию вольтамперограммы в дифференциальном режиме съемки от -1,0 до -1,7 В при скорости развертки потенциала от 30 до 50 мВ/с. Отсутствие пиков в диапазоне потенциалов от -1,5 до -1,1 В свидетельствует о чистоте фонового раствора и электрохимической системы. Далее в емкость вводят 0,02 мл подготовленной пробы, полученной растворением сухой пробы лекарственного препарата в бидистилированной воде, фильтрацией, растворением полученного осадка в диметилформамиде, на индикаторный электрод подается ток в течение 30-40 с при потенциале накопления -0,75 В относительно насыщенного хлоридсеребряного электрода, при этом в процессе электролиза содержимое емкости перемешивается и барботируется азотом. Затем производят регистрацию вольтамперограммы в дифференциальном режиме съемки от -1,0 до -1,7 В при скорости развертки потенциала от 30 до 50 мВ/с. Далее в емкость с пробой вводят 0,02 мл рабочего раствора Галонала с концентрацией 1000 мг/л и на индикаторный электрод подается ток в течение 30-40 с при потенциале накопления -0,75 В относительно насыщенного хлоридсеребряного электрода, при этом в процессе электролиза содержимое емкости перемешивается и барботируется азотом. Затем производят регистрацию вольтамперограммы в дифференциальном режиме съемки от -1,0 до -1,7 В при скорости развертки потенциала от 30 до 50 мВ/с.

На фиг. 1 представлены вольтамперограммы электровосстановления Галонала, время накопления 40 с при потенциале накопления -0,75 В, где кривая 1 соответствует кривой фонового электролита 0,1 М NaH₂PO₄ объемом 10 мл; кривая 2 соответствует 0,1 М NaH₂PO₄ объемом 10 мл с добавкой подготовленной пробы Галонала объемом 0,02 мл; кривая 3 соответствует 10 мл 0,1 М NaH₂PO₄ с добавкой подготовленной пробы Галонала объемом 0,02 мл и 0,02 мл рабочего раствора Галонала с концентрацией 1000 мг/л; кривые 1, 2, 3 получены относительно насыщенного хлоридсеребряного электрода.

На фиг. 2 представлена градуировочная зависимость тока пика электровосстановления Галонала при условии, что фоновый электролит 0,1 М NaH₂PO₄ объемом 10 мл; объем добавки рабочего раствора Галонала 0,02 мл; диапазон концентраций Галонала от 2⋅10^-6 мг/л до 2⋅10^-5 мг/л; потенциал накопления -0,75 В; время накопления 40 с; потенциал развертки от -1,0 до -1,7 В; скорость развертки 30 мВ/с.

В таблице 1 представлена проверка правильности способа измерения методом «введено-найдено» на содержание Галонала в пробах модельных растворов лекарственного препарата «Halonal» состава: галонал 0,1 грамм, крахмал 0,002 грамма, 5% слизь крахмала в пересчете на сухое вещество 0,005 грамм, Твин-80 - 0,0005 грамм, Магния стеарат - 0,0005 грамм.

Вольтамперометрический способ количественного определения 1-(2-фторбензоил)-5-фенил-5-этилпиримидин-2,4,6(1Н,3Н,5Н)-триона может быть реализован следующим образом. Сухую пробу лекарственного препарата «Halonal»состава: галонал 0,1 грамм, крахмал 0,002 грамма, 5% слизь крахмала в пересчете на сухое вещество 0,005 грамм, Твин-80 - 0,0005 грамм, Магния стеарат - 0,0005 грамм [Прищеп Т.П., Хныкина Л.А., Хоружая Т.Г., Чернова Н.А., Михалева Л.К., Белова Л.С., Жолуева Л.Ю. / Разработка технологии получения таблеток галонала и изучение их специфической активности // Фармация. - 1993. №2, стр. 16-18] на уровне 2⋅10^-6 и 4⋅10^-6 мг/л растворяют в бидистиллированной воде, фильтруют, полученный осадок растворяют в диметилформамиде со степенью чистоты не менее чем химически чистый.

В кварцевый стаканчик емкостью 20 дм³ наливают 10 дм³ 0,1 М раствора дигидрофосфата натрия, pH, равный 4. Стаканчик с раствором помещают в электролитическую ячейку и опускают в раствор электроды индикаторный, в качестве которого используется стеклоуглеродный электрод, и электрод сравнения, в качестве которого используется хлорид серебряный. Проводят электролиз при потенциале -0,75 В в течение 40 с при перемешивании раствора током азота на протяжении всего электронакопления. По окончании электролиза начинают регистрацию вольтамперограммы в диапазоне потенциалов от -1,0 до -1,7 В (фиг. 1, кривая 1), со скоростью от 30 до 40 мВ/с. Вольтамперограммы регистрируют в дифференциальном режиме съемки с использованием комплекса аналитического вольтамперометрического типа СТА ТУ 4215-001-20694097-98.

Далее регистрируют фоновую кривую, при этом отсутствие пиков на вольтамперограмме свидетельствует о чистоте фона (фиг. 1, кривая 1). Затем добавляют 0,02 мл подготовленной пробы и проводят электронакопление при потенциале -0,75 В в течение 40 с при перемешивании раствора с последующей регистрацией вольтамперограммы в диапазоне потенциалов от -1,0 до -1,7 В со скоростью от 30 до 40 мВ/с. Пик Галонала находится в диапазоне потенциалов E_hal от -1,5 до -1,1 В (фиг. 1, кривая 2). Проводят разметку вольтамперограмм, высота катодного пика составляет dI_п/dE, равный 16 нА/мВ. Далее в стаканчик с подготовленной пробой с помощью дозатора вносят добавку рабочего раствора Галонала в объеме 0,02 мл с концентрацией 100 мг/л. Электронакопление и регистрацию аналитического сигнала проводят при потенциале -0,75 В в течение 40 с при перемешивании раствора с последующей регистрацией вольтамперограммы в диапазоне потенциалов от -1,0 до -1,7 В со скоростью от 30 до 40 мВ/с. Пик Галонала регистрируют в диапазоне потенциалов от -1,5 до -1,1 В, высота катодного пика составляет dI_п/dE 34 нА/мВ (фиг. 1, кривая 3). Массовую концентрацию оценивают методом добавок, измеряя высоту катодных пиков по формуле:

X₁ - содержание Галонала в анализируемой пробе, мг/мл;

С_д - концентрация Галонала в рабочем растворе, мг/мл;

V_д - объем добавки рабочего раствора Галонала, мл;

I₁ - величина максимального тока в анализируемой пробе, нА/мВ;

I₂ - величина максимального тока в пробе с добавкой рабочего раствора Галонала, нА/мВ;

V_ал - объем пробы, взятой для анализа, мл.

Таким образом, линейный диапазон определяемых концентраций для Галонала составляет от 2⋅10^-6 до 2⋅10^-5 мг/л (фиг. 2).

Вольтамперометрический способ количественного определения 1-(2-фторбензоил)-5-фенил-5-этилпиримидин-2,4,6(1Н,3Н,5Н)-триона (Галонала), заключающийся в использовании двухэлектродной электрохимической системы, где в качестве индикаторного используют стеклоуглеродный электрод, в качестве электрода сравнения насыщенный хлоридсеребряный электрод; поверхность индикаторного электрода очищают, обезжиривают и промывают бидистиллированной водой; далее проводят оценку чистоты электрохимической системы, в емкость помещают 10 дм 0,1 М раствора дигидрофосфата натрия в диапазоне pH от 4 до 5, размещают индикаторный и электрод сравнения; затем содержимое емкости барботируют азотом в течение 300 с, в процессе электролиза содержимое емкости перемешивают, затем на индикаторный электрод подают ток и производят электронакопление при потенциале -0,75 В в течение 30-40 с относительно насыщенного хлоридсеребряного электрода; после чего производят регистрацию вольтамперограммы в дифференциальном режиме съемки от -1,0 до -1,7 В при скорости развертки потенциала от 30 до 50 мВ/с; при отсутствии пиков в диапазоне потенциалов от -1,5 до -1,1 В в емкость вводят 0,02 мл пробы, полученной растворением сухой пробы лекарственного препарата в бидистилированной воде, фильтрацией, растворением полученного осадка в диметилформамиде, на индикаторный электрод подают ток в течение 30-40 с при потенциале -0,75 В относительно насыщенного хлоридсеребряного электрода, при этом в процессе электролиза содержимое емкости перемешивают и барботируют азотом; затем производят регистрацию вольтамперограммы в дифференциальном режиме съемки от -1,0 до -1,7 В при скорости развертки потенциала от 30 до 50 мВ/с; концентрацию Галонала определяют по высоте пика в диапазоне потенциала от -1,5 до -1,1 В методом добавок.