Способ получения лиофилизированного препарата для иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок Российский патент 2018 года по МПК A61K35/16 

Изобретение относится к методам получения препаратов для диагностики беременности и бесплодия коров и телок.

Известен метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок (см. патент на изобретение РФ №2298791, МПК G01N 33/48, опубл. 10.05.2007 г.), включающий установление стельности и бесплодия на основании обнаружения в сыворотке крови плацентарного; гормона - хорионического гонадотропина в реакции ализариновых суспензионных антихориогонин-антител.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известного метода относится то, что жидкие препараты, полученные по известному методу требуют определенного режима хранения и транспортирования - от +2°С до +4°С, нарушение которых как в сторону повышения, так и в сторону понижения температуры могут приводить к снижению их активности.

Одним из способов повышения сохранности препаратов является лиофилизация. Лиофилизации, как правило, подвергаются микроорганизмы и бактериофаги. Она широко применяется для получения способной к долговременному хранению плазмы крови (сухая плазма) и ее отдельных фракций, иммунных сывороток, иммуноглобулинов, вакцин, антибиотиков, гормонов, трансплантатов тканей, поэтому для них отработаны разнообразные режимы замораживания и высушивания.

Сущность предлагаемого способа получения лиофилизированного препарата, заключается в том, что полученную ранее смесь в качестве формообразующего компонента, криопротектора и стабилизатора добавляют 6% сахарозы, затем полученную смесь разливают в стерильные пробирки в объеме 2 мл, помещают в морозильную камеру при температуре +20°С, затем температура снижают до температуры - 20°С и выдерживают в течение 1 часа, после этого температуру понижают от -20°С до -30°С со временем экспозиции 1 час, далее температуру снижают от -30°С до -40°С с экспозицией еще 1 час, затем камеру охлаждают до температуры образца -45 …-50°С, время выдержки при данной температуре составляет 3 часа, затем в течение 3 часов образцы выдерживают в сублимационной камере при температуре - 50°С с наименьшим давлением (5,0×10^-2 мбар), после чего со скоростью 4°С/час температуру повышают от -50°С до -10°С, далее температуру в камере повышают от -10°С до +4°С при скорости 2°С/час и от +4°С до +20°С при скорости 5°С/час, затем препарат досушивают 3 часа при температуре +20°С, затем пробирки закрывают стерильными колпачками.

Использование предлагаемого изобретения обеспечивает следующий технический результат: лиофилизации препарата для дальнейшего использования.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что способ получения лиофилизированного препарата для иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок, для изготовления которого кролик массой 1,5-2 кг 4-кратно с интервалом 7 дней подкожно в область лопатки иммунизируют антигеном «Гонадотропин хорионический человека» в дозе 2000 ЕД, разведенным в 1 мл стерильного адъюванта Фрейда, через 10 дней после последней инъекции гормона получают сыворотку методом отстаивания, затем 2 мл полученной иммунной сыворотки, разведенной 1:5 в 1%-ном растворе борной кислоты, добавляют к 10 мл суспензии мелкодисперсных частиц (1-1,6 мкм) ализарина, смесь выдерживают 2 часа при температуре 37°С и еще 13 часов при температуре 4-8°С, затем смесь центрифугируют до просветления, к осадку добавляют 10 мл 2%-ного раствора нормальной кроличьей сыворотки в 0,5%-ной борной кислоте на физиологическом растворе и консервируют хинозолом (мертиолятом) в соотношении 1 часть консерванта на 10000 частей реактива.

Особенность заключается в том, что в полученную смесь в качестве формообразующего компонента, криопротектора и стабилизатора добавляют 6% сахарозы, затем полученную смесь разливают в стерильные пробирки в объеме 2 мл, помещают в морозильную камеру при температуре +20°С, затем температура снижают до температуры - 20°С и выдерживают в течение 1 часа, после этого температуру понижают от - 20°С до - 30°С со временем экспозиции 1 час, далее температуру снижают от -30°С до -40°С с экспозицией еще 1 час, затем камеру охлаждают до температуры образца -45 …-50°С, время выдержки при данной температуре составляет 3 часа, затем в течение 3 часов образцы выдерживают в сублимационной камере при температуре -50°С с наименьшим давлением (5,0×10-2 мбар), после чего со скоростью 4°С/час температуру повышают от -50°С до -10°С, далее температуру в камере повышают от -10°С до +4°С при скорости 2°С/час и от +4°С до +20°С при скорости 5°С/час, затем препарат досушивают 3 часа при температуре +20°С, затем пробирки закрывают стерильными колпачками.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентам и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявленного изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил аналог, характеризующийся признаками, тождественными всем существенным признакам заявленного изобретения.

Следовательно, заявленное изобретение соответствует условию «новизна».

Сушка продукта и герметизация его в ампулах существенно повышает сохранность препарата, исключает отрицательное воздействие высоких и низких температур на активность препарата.

Таким образом, выше изложенное описание свидетельствует о выполнении при использовании заявленного изобретения следующей совокупности условий:

- средство, воплощающее заявленное изобретение, при его осуществлении предназначено для диагностики беременности и бесплодия коров и телок;

- для заявленного способа в том виде, как он охарактеризован в изложенной формуле изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке средств и методов;

- средство, воплощающее заявленное изобретение при осуществлении, способно обеспечить достижение усматриваемого заявителем поставленных технических задач: лиофилизация препарата для дальнейшего использования.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к методам получения препаратов для диагностики беременности и бесплодия коров и телок. Для изготовления препарата кролика массой 1,5-2 кг 4-кратно с интервалом 7 дней подкожно в область лопатки иммунизируют антигеном «Гонадотропин хорионический человека» в дозе 2000 ЕД, разведенным в 1 мл стерильного адъюванта Фрейда. Через 10 дней после последней инъекции гормона получают сыворотку методом отстаивания, затем 2 мл полученной иммунной сыворотки, разведенной 1:5 в 1%-ном растворе борной кислоты, добавляют к 10 мл суспензии мелкодисперсных частиц размером 1-1,6 мкм ализарина. Смесь выдерживают 2 часа при температуре 37°С и еще 13 часов при температуре 4-8°С, затем смесь центрифугируют до просветления, к осадку добавляют 10 мл 2%-ного раствора нормальной кроличьей сыворотки в 0,5%-ной борной кислоте на физиологическом растворе и консервируют хинозолом (мертиолятом) в соотношении 0,01 г консерванта на 100 мл полученной после растворения осадка жидкости. В полученную смесь в качестве формообразующего компонента, криопротектора и стабилизатора добавляют 6% сахарозы, затем полученную смесь разливают в стерильные пробирки в объеме 2 мл, помещают в морозильную камеру при температуре +20°С. Затем температуру снижают до температуры -20°С и выдерживают в течение 1 часа, после этого температуру понижают от -20°С до -30°С со временем экспозиции 1 час, далее температуру снижают от -30°С до -40°С с экспозицией еще 1 час, затем камеру охлаждают до температуры образца -45…-50°С, время выдержки при данной температуре составляет 3 часа, затем в течение 3 часов образцы выдерживают в сублимационной камере при температуре -50°С с наименьшим давлением 5,0×10^-2 мбар. После чего со скоростью 4°С/час температуру повышают от -50°С до -10°С, далее температуру в камере повышают от -10°С до +4°С при скорости 2°С/час и от +4°С до +20°С при скорости 5°С/час, затем препарат досушивают 3 часа при температуре +20°С, затем пробирки закрывают стерильными колпачками. Использование данного способа позволяет получить лиофиолизированнй препарат для диагностики беременности.

Способ получения препарата для иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок, для изготовления которого кролика массой 1,5-2 кг 4-кратно с интервалом 7 дней подкожно в область лопатки иммунизируют антигеном «Гонадотропин хорионический человека» в дозе 2000 ЕД, разведенным в 1 мл стерильного адъюванта Фрейда, через 10 дней после последней инъекции гормона получают сыворотку методом отстаивания, затем 2 мл полученной иммунной сыворотки, разведенной 1:5 в 1%-ном растворе борной кислоты, добавляют к 10 мл суспензии мелкодисперсных частиц размером 1-1,6 мкм ализарина, смесь выдерживают 2 часа при температуре 37°С и еще 13 часов при температуре 4-8°С, затем смесь центрифугируют до просветления, к осадку добавляют 10 мл 2%-ного раствора нормальной кроличьей сыворотки в 0,5%-ной борной кислоте на физиологическом растворе и консервируют хинозолом (мертиолятом) в соотношении 0,01 г консерванта на 100 мл полученной после растворения осадка жидкости, отличающийся тем, что в полученную смесь в качестве формообразующего компонента, криопротектора и стабилизатора добавляют 6% сахарозы, затем полученную смесь разливают в стерильные пробирки в объеме 2 мл, помещают в морозильную камеру при температуре +20°С, затем температуру снижают до температуры -20°С и выдерживают в течение 1 часа, после этого температуру понижают от -20°С до -30°С со временем экспозиции 1 час, далее температуру снижают от -30°С до -40°С с экспозицией еще 1 час, затем камеру охлаждают до температуры образца -45…-50°С, время выдержки при данной температуре составляет 3 часа, затем в течение 3 часов образцы выдерживают в сублимационной камере при температуре -50°С с наименьшим давлением 5,0×10^-2 мбар, после чего со скоростью 4°С/час температуру повышают от -50°С до -10°С, далее температуру в камере повышают от -10°С до +4°С при скорости 2°С/час и от +4°С до +20°С при скорости 5°С/час, затем препарат досушивают 3 часа при температуре +20°С, затем пробирки закрывают стерильными колпачками.