СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЫШЕНИЯ АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЫ IN VITRO МОЛОЧНОКИСЛОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКОЙ, СОДЕРЖАЩЕЙ КУЛЬТУРУ МИКРООРГАНИЗМОВ STREPTOCOCCUS TERMOPHILUS TH-4 Российский патент 2019 года по МПК G01N33/04 C12Q1/00 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано в лабораторной практике при изучении антибиотикочувствительности микроорганизмов.

Известен «Препарат для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта "ТоксиБиоВит"» (патент РФ №2475254, кл. A61K 35/74 от 13.12.2011) и способ его применения, включающий введение в организм веществ, тормозящих развитие патогенной микрофлоры, стимулирующих ферментную активность и антиоксидантную защиту, а также обладающих широким спектром микроэлементов и стимулирующих развитие полезных микроорганизмов, а именно метаболитов микроорганизмов Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Halobacterium halobium, иммобилизованных на активном носителе, представляющем собой смесь глауконита с клеточными оболочками пивных дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

К недостаткам известного способа является отсутствие данных по росту антибиотикочувствительности к конкретному виду антибактериального вещества, а так же отсутствие данных по росту показателей зон задержки роста тест-культуры до и после контакта с испытуемым супернатантом (надосадочная жидкость) культуры пробиотика.

Оценку антибиотикочувствительности микроорганизмов проводили в соответствии с методическими указаниями «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (МУК №4.2.1890-04, 2004 г.).

Сущность изобретения состоит в том, что в предлагаемом способе используют супернатант Streptococcus termophilus ТН-4, полученный в разные сроки культивирования и введенный в состав молочно-кислой кормовой добавки.

Задача изобретения - расширение арсенала способов повышения антибиотикочувствительности микроорганизмов in vitro.

Указанная задача достигается тем, что в способе повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочно-кислой кормовой добавкой содержащей культуру микроорганизмов Streptococcus termophilus ТН-4, включающем использование супернатанта молочно-кислой кормовой добавкой содержащей культуру микроорганизмов Streptococcus termophilus ТН-4 полученного в разные сроки культивирования.

Согласно предлагаемому способу, к 0,5 мл среды МПБ (мясо-пептонный бульон) добавляют 0,5 мл супернатанта молочно-кислой кормовой добавки, после чего вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры условно-патогенной микрофлоры, полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°С, после чего проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов на МПА (мясо-пептонный агар) с 24 видами антибактериальных препаратов дискодиффузионным методом.

Молочнокислая кормовая добавка включает: молоко, штамм Streptococcus termophilus ТН-4 содержащий 11*10⁸ КОЕ / на 1 мл при рН=3,41, изготавливаемая по ТУ 9224-001-014185347608.

Пример 1. Анализ изменения зоны задержки роста микроорганизмов, при определении антибиотикочувствительности после контакта с молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов разных сроков культивирования, показал разную чувствительность у исследуемых представителей условно-патогенной микрофлоры. Так, наибольший рост антибиотикочувствительности микроорганизмов отмечается после культивирования с десяти и тридцати дневными культурами (табл. 1).

Р<0,05

Наибольшее увеличение антибиотикочувствительности (на 92%) отмечено у E. fecalis 200 после контакта с десятидневной культурой молочнокислой кормовой добавки Streptococcus termophilus ТН-4.

Таким образом, рост антибиотикочувствительности Е. fecalis 200, St. albus АТСС 25923, Е. coli АТСС 25222, Pr vulgaris 192, Kl. pneumonia 71 после контакта с супернатантом молочно-кислой кормовой добавки Streptococcus termophilus ТН-4 первого дня культивирования составил от 16,1 до 50%, десятого дня - от 25,7 до 92%, двадцатого дня от 22,2 до 33% и тридцатого дня от 50 до 74,2% соответственно.

Пример 2. Установлено, что на протяжении всего эксперимента, супернатант молочно-кислой кормовой добавки Streptococcus termophilus ТН-4 разного срока культивирования, вызывает устойчивый рост количества антибактериальных препаратов, к которым чувствительны изучаемые штаммы условно-патогенной микрофлоры. Кроме того, увеличение срока инкубирования пробиотика совпадает со снижением количества малочувствительных препаратов у штаммов условно-патогенной микрофлоры (табл.2).

Примечание: число антибактериальных препаратов, к которым микрофлора устойчива - У (зона задержки роста менее 10 мм), малочувствительна - М (зона задержки роста менее 15 мм), чувствительна - Ч (зона задержки роста более 15 мм).

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано в лабораторной практике при изучении антибиотикочувствительности микроорганизмов. Способ исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Streptococcus termophilus ТН-4, включает использование супернатанта молочнокислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Streptococcus termophilus ТН-4, полученного в разные сроки культивирования - на 1, 10, 20 и 30 день, после чего к 0,5 мл среды МПБ добавляют 0,5 мл супернатанта молочнокислой кормовой добавки, далее вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры одного из штаммов Е. fecalis 200, St. albus АТСС 25923, Е. coli АТСС 25222, Pr. vulgaris 192, Kl. pneumonia 71 условно-патогенной микрофлоры, полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°С, затем проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов дискодиффузионным методом на МПА с 24 видами антибактериальных препаратов. Данный способ позволяет расширить арсенал методов повышения антибиотикочувствительности микроорганизмов in vitro. 2 табл., 2 пр.

Способ исследования повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Streptococcus termophilus ТН-4, включающий использование супернатанта молочнокислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Streptococcus termophilus ТН-4, полученного в разные сроки культивирования - на 1, 10, 20 и 30 день, после чего к 0,5 мл среды МПБ добавляют 0,5 мл супернатанта молочнокислой кормовой добавки, далее вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры одного из штаммов Е. fecalis 200, St. albus АТСС 25923, Е. coli АТСС 25222, Pr. vulgaris 192, Kl. pneumonia 71 условно-патогенной микрофлоры, полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°С, затем проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов дискодиффузионным методом на МПА с 24 видами антибактериальных препаратов.