Способ получения наноразмерной фитосомальной системы Российский патент 2019 года по МПК A61K31/352 B82B1/00 A61K36/48 B01D11/02 

Изобретение относится к фармации, а точнее к технологии получения новой лекарственной формы - фитосомы.

Фитосомы относятся к инновационным способам доставки лекарственных средств. В этих структурах водорастворимые растительные компоненты вступают в реакцию с фосфолипидами, при достижении равновесия между гидрофильными и гидрофобными радикалами, увеличивается способность преодоления липидного слоя клеточных мембран и растворения в желудочно-кишечных жидкостях. Особый интерес представляют фитосомы с флавоноидами из-за широкого спектра фармакологической активности этих соединений. Однако гидрофильность данного класса существенно снижает их проницаемость через кожный барьер и всасывание в желудочно-кишечный тракт, следовательно, снижается биодоступность флавоноидов и оказываемый эффект. В связи с этим актуальным является вопрос разработки простого и быстрого способа получения фитосомы, состоящей из активного компонента - кверцетина и фосфолипидов сои.

На сегодняшний день известны фитосомы с экстрактами гинкго билоба, расторопши, виноградных косточек, боярышника, зеленого чая и женьшеня (An overview of phytosomes as an advanced herbal drug delivery system / Jagruti Patela, et al. / Asian journal of pharmaceutical sciences. - 2009. - 4(6). - p. 363-371.).

Известны комплексы индивидуальных флавоноидов с фосфотидилхолином или фосфатидилсерином таких как кверцетин, рутин, гиперозид. В литературе присутствуют данные о фитосомах, включающих силимарин и соевый лецитин; экстракт расторопши пятнистой с экстрактом эхинацеи с липидной частью, представленной фосфатидилхолином или ресвератролом с фосфотидилхолин (Phytosomes - a review / Nagasamy Venkatesh Dhandapani, et al. // International journal of pharma sciences. - 2014. - Vol. 4. - №4. - p. 622-625).

Технология получения фитосом предполагает включение фосфолипидов (таких как фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин) в стандартизованные растительные экстракты (Phytosome and liposome: the beneficial encapsulation systems in drug delivery and food application / Nayyer Karimi, et al. // Applied food biotechnology. - 2015. - 2(3). P. 17-27).

Известен следующий способ получения фитосомы. Фитосомы получают реакцией взаимодействия между 1-2 молями фосфолипида с 1 молем активного растительного компонента (флавоноиды или терпеноиды) в апротонном растворителе (диоксан, ацетон, метиленхлорид, этилацетат). Затем комплекс выделяют путем выпаривания растворителя в вакууме или осаждением с реагентом, таким как алифатические углеводороды, путем лиофилизации, или методом распылительной сушки. Наиболее оптимальное соотношение компонентов в фитосоме 1:1 [5, 10, 16].

В литературе встречается ряд методик получения фитосом. Например, для образования комплекса силимарина с соевым фосфатидилхолином 1:1 поступают следующим образом: к раствору 5 г силимарина в 100 мл ацетона добавляют 8 г реактива "Липоид S 100 ^(R)", при перемешивании при комнатной температуре. После полной солюбилизации, реакционную смесь концентрируют в вакууме до объема 30 мл и приливают к 300 мл лигроина, при перемешивании. Осадок отстаивают в течение ночи, затем его отделяют фильтрованием, промывают лигроином и сушат в вакууме при 40°С. Выход составляет 11,2 г комплекса. При изучении спектральных характеристик полученного фитосомального комплекса было установлено, что удельный показатель поглощения составляет 170,2 при 288 нм (растворитель - метанол) (Bombardelli, Ezlo Via Ripamonti. Pharmaceutical and cosmetic compositions containing complexes of flavanolignans with phospholipids European Patent, no. 0300282 B1, 1992.).

Вторым примером может служить методика получения фитосомы силибина с соевым фосфатидилхолином в соотношении 1:2. К суспензии, содержащей 4,82 г (0,010 моль) силибина в 75 мл диоксана добавляют при перемешивании 15,4 г (0,020 моль) "Липоид S 100 ^(R)". Через 4 часа реакционную смесь лиофилизируют. Выход составил 20 г комплекса светло-желтого цвета с удельным показателем поглощения равным 106 при 288 нм в растворе метанола (Bombardelli, Ezlo Via Ripamonti. Pharmaceutical and cosmetic compositions containing complexes of flavanolignans with phospholipids European Patent, no. 0300282 B1, 1992.)..

Для получения комплекс силибин с соевого фосфатидилхолина 1:0,3 раствор силибина в диоксане (2,41 г (0,005 моль) силибина на 100 мл диоксана) обрабатывают при 60°С реактивом "Липоид S 100 ^(R)" массой 0,770 г (0,001 моль) в течение 1 часа. Реакционную смесь упаривают досуха в вакууме и остаток переносят в 100 мл хлороформа. Избыток силибина, присутствующий в виде осадка, удаляют фильтрованием, а маточный раствор, содержащий комплекс выпаривают досуха в вакууме. Полученный остаток, сушат при 30°С под вакуумом. Выход составляет 2,3 г комплекса, в виде белого желтоватого порошка. Удельный показатель поглощения метанольного раствора полученного комплекса равен 300 при 288 нм (СН₃ОН) (Bombardelli, Ezlo Via Ripamonti. Pharmaceutical and cosmetic compositions containing complexes of flavanolignans with phospholipids European Patent, no. 0300282 B1, 1992.).

Методика получения фитосомы экстракта гинкго билоба с соевым фосфатидилсерином заключается в следующем: 1,87 кг 20% фосфатидилсерина суспендируют в 17,5 л этилацетата при комнатной температуре. Добавляют сухой экстракт гинкго билоба (0,65 кг) и перемешивают. Суспензию выдерживают в течение 1 часа при перемешивании при кипячении с обратным холодильником, затем фильтруют при 70-75°С и концентрируют при давлении окружающей среды до получения мягкого осадка. Осадок сушат при 40°С в течение 48 часов. Выход продукта: 2,23 кг комплекса экстракт гинкго билоба-фосфатидилсерин (Патент №2006127272/15, 27.09.2009. Мораццони Паоло, Петрини Орландо, Скоули Эндрю, Кеннеди Дэвид. Применение комплексов гинкго для усиления когнитивных функций и снижения умственного утомления // Патент России №2368385. 2005.).

Интерес представляют фитосомы с индивидуальными флавоноидами, поскольку из-за разнообразия фармакологических эффектов этих соединений, можно существенно расширить ассортимент лекарственных средств, обладающих хорошей биодоступностью.

Описан способ получения фитосомы кверцетина с фофотидилхолином и холестерином с использованием метода тонкослойной гидратации с различным молярным отношением кверцетина, фосфатидилхолина и холестерина. Кверцетин и фосфотидилхолин растворяют в метаноле, а холестерин - в дихлорметане. Смесь помещают в круглодонную колбу и упаривают на роторном испарителе при 45°С до образования пленки. Затем с помощью вакуумной сушки полностью удаляют органические растворители. Дополнительно готовый липидый тонкий слой подвергают воздействию потока газообразного азота и выдерживают в течение ночи при комнатной температуре, чтобы обеспечить полное удаление органических растворителей. Пленку увлажняют дистиллированной водой в роторном аппарате при 45°С. Для уменьшения размера фитосомы применяют: диспергирование в ультразвуковой ванне с при 45°С, гомогенизацию в центрифуге с 20000 оборотов в минуту и метод ультразвуковой обработки (Malay K Das. Design and evaluation of phyto-phospholipid complexes (phytosomes) of rutin for transdermal application / Malay K Das, Bhupen Kalita // Journal of applied pharmaceutical science. - 2014. - Vol. 4. - (10). p. 51-570); (Nano phytosomes of quercetin: a promising formulation for fortification of food products with antioxidants / Solmaz Rasaie, et al. // Pharmaceutical sciences. - 2014. - 20. - p. 96-101).

Все перечисленные способы требуют задействования большого числа устройств и реактивов; они длительны и трудоемки; нет данных, подтверждающих достаточную однородность по размерам получаемых фитосом.

Техническим результатом предложенного изобретения является упрощение и ускорение процесса получения наноразмерной фитосомальной системы, содержащей кверцетин с высокой однородностью по размерам.

Технический результат достигается тем, что способ получения наноразмерной фитосомальной системы с узким распределением частиц по размерам включает экстракцию семян сои в смеси хлороформ-этанол при воздействии в течение 20 минут ультразвуком с частотой 22 кГц, кипячение полученного экстракта, после остывания добавление в полученный экстракт 1% раствора кверцетина в 95% этиловом спирте и последующее отделение этанольного слоя, на который воздействуют ультразвуком частотой 44 кГц в течение 20-30 минут.

Способ осуществляется следующим образом.

Точную навеску воздушно-высушенных семян сои массой около 2 г помещают в коническую колбу, приливают 50 мл смеси хлороформ - этанол 1:1 и экстрагируют в течение 20 минут под действием ультразвука частотой 22 кГц. Обработка ультразвуком обеспечивает разрушение клеточных стенок и облегчает в последующем выделение фосфолипидов, а также сокращает время экстракции. При дальнейшем увеличении времени экспонирования ультразвуком выход продукта не повышается. Затем колбу соединяют с обратным холодильником и содержимое кипятят, поддерживая слабое кипение в течение 20 мин для более полной экстракции фосфолипидов. После остывания, полученный экстракт помещают в делительную воронку, приливают 50 мл 1% раствора кверцетина в спирте этиловом с концентрацией 95% и интенсивно встряхивают. Отделяют этанольный слой, который подвергают воздействию ультразвуком частотой 44 кГц в течение 20 минут. За это время в результате ультразвукового дробления получают частицы с узким распределением по размерам.

Пример. Точную навеску воздушно- высушенных семян сои массой 2,0822 г поместили в коническую колбу, прилили 50 мл смеси хлороформ - этанол 1:1 и экстрагировали в течение 20 минут под действием ультразвука частотой 22 кГц. Затем колбу соединили с обратным холодильником и кипятили, поддерживая слабое кипение в течение 20 минут для более полной экстракции фосфолипидов. После остывания, полученный экстракт помещали в делительную воронку, приливали 50 мл 1% раствора кверцетина в спирте этиловом с концентрацией 95% и интенсивно встряхивали. Этанольный слой отделяли и подвергали воздействию ультразвуком частотой 44 кГц в течение 20 минут.

На фиг. 1 показаны абсорбционные спектры фитосомальной наносистемы 1 и липидного экстракта 2. На фиг 2 представлена кривая распределения фитосом по размерам.

Анализ спектров поглощения раствора, содержащего фитосомы 1 и раствора липидной фракции 2 (фиг. 1) показал, что при длине волны 254 нм на спектре поглощения липидного экстракта 2 имеется максимум поглощения, свойственный сложно-эфирным группам. После получения фитосомальной наносистемы 1 этот максимум поглощения исчезает (А=0), что свидетельствует об образовании комплекса между фосфатидилхолином и флавоноидами.

Средний размер полученных фитосом, определенный методом динамического рассеяния (кросс- корреляции фотонов), равен 5 нм. Распределение частиц по размерам - от 2 до 12 нм. Это подтверждает то, что полученные фитосомы относятся к наночатицам (фиг. 2).

Согласно данным литературы нано- и микроразмерные формы отличаются большей биодоступностью.

Предложенный способ позволяет ускорить и упростить процесс получения наноразмерной фитосомальной системы и обеспечивает высокую однородность получаемых частиц по размерам.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения фитосом, содержащих кверцетин. Способ получения фитосом, содержащих кверцетин, с размером частиц фитосом 2-12 нм, включает экстракцию 2 г семян сои 50 мл смеси хлороформ-этанол, взятых в соотношении 1:1, под воздействием в течение 20 мин ультразвуком с частотой 22 кГц, кипячение полученного экстракта в течение 20 мин, после остывания добавление в полученный экстракт 50 мл 1%-ного раствора кверцетина в 95%-ном этиловом спирте и последующее отделение этанольного слоя, на который воздействуют ультразвуком частотой 44 кГц в течение 20-30 мин. Вышеописанный способ позволяет упростить и ускорить процесс получения наноразмерной фитосомальной системы, содержащей кверцетин с высокой однородностью по размерам. 2 ил.

Способ получения фитосом, содержащих кверцетин, с размером частиц фитосом 2-12 нм, включающий экстракцию 2 г семян сои 50 мл смеси хлороформ-этанол, взятых в соотношении 1:1, под воздействием в течение 20 мин ультразвуком с частотой 22 кГц, кипячение полученного экстракта в течение 20 мин, после остывания добавление в полученный экстракт 50 мл 1%-ного раствора кверцетина в 95%-ном этиловом спирте и последующее отделение этанольного слоя, на который воздействуют ультразвуком частотой 44 кГц в течение 20-30 мин.