ПРОИЗВОДНЫЕ ЦИКЛОГЕКСИЛПИРИДИНА Российский патент 2019 года по МПК C07D213/75 A61K31/4418 A61P1/08 

Область техники

[0001] Настоящее изобретение относится к производным циклогексилпиридина, полезным в качестве лекарственных средств.

[0002] В частности, настоящее изобретение относится к производным циклогексилпиридина или их фармацевтически приемлемым солям, которые обладают антагонистической активностью относительно рецептора вещество P/нейрокинин 1 (NK₁), и которые полезны в качестве средства для профилактики или лечения тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией (CINV), и так далее.

Уровень техники

[0003] CINV происходит, когда рвотный центр, расположенный в боковой ретикулярной формации продолговатого мозга, получает стимул. Область самого заднего поля и одиночного ядра продолговатого мозга содержат рецепторы NK₁, и считается, что рецепторы NK₁ активно вовлечены в вызывание рвоты.

Введение противоопухолевого средства способствует секреции серотонина из энтерохромаффиных клеток (EC) в пищеварительном тракте, и серотонин непосредственно стимулирует рвотный центр через 5-гидрокситриптаминовые₃ (5-HT₃) рецепторы в ЖКТ. Кроме того, когда серотонин стимулирует рвотный центр через хеморецепторные триггерные зоны (CTZ), расположенные в области самого заднего поля четвертого желудочка, возникает тошнота и рвота. Вещество Р, подобно серотонину, обнаруживается в клетках ЕС в желудочно-кишечном тракте, и его секреция промотируется введением противоопухолевого средства. Недавно было выявлено, что вещество P вызывает рвоту через рецепторы NK₁ в CTZ или путем связывания с рецепторами NK₁ в ЦНС, и поэтому рецепторы NK₁ привлекают внимание в качестве мишени для разработки противорвотных средств (непатентная литература 1).

[0004] Апрепитант является первым селективным антагонистом рецепторов NK₁ в мире, который был утвержден в качестве профилактического средства против тошноты и рвоты, вызванных введением противоопухолевых средств. Что касается механизма действия апрепитанта, считается, что апрепитант селективно ингибирует связывание вещества P и рецепторов NK₁ в ЦНС, которое является одним из путей, вызывающих CINV, и, таким образом, предотвращает CINV. Апрепитант был выпущен на рынок в качестве профилактического средства для CINV (непатентная литература 2).

[0005] Известно, что апрепитант метаболизируется цитохромом P450 (CYP) 3A4. Кроме того, апрепитант известен, как обладающий дозозависимым ингибирующим эффектом на CYP3A4, вызывая CYP3A4 эффект и вызывая CYP2C9 эффект. Соответственно, апрепитант может вызывать межлекарственное взаимодействие с препаратами, которые ингибируют или вызывают CYP3A4, или с препаратами, которые метаболизируются посредством CYP3A4 или CYP2C9. Например, сообщается, что ингибирующий эффект апрепитанта на CYP3A4 иногда тормозит метаболизм дексаметазона, и, таким образом, доза должна быть скорректирована, когда дексаметазон комбинирован с апрепитантом (непатентная литература 3).

Поэтому, когда используется апрепитант, с достаточной осторожностью следует контролировать межлекарственные взаимодействия, основанные на ингибирующем эффекте апрепитанта на CYP3A4.

[0006] По указанным выше причинам в области профилактики или лечения CINV требуется новый антагонист рецептора NK₁ с меньшими межлекарственными взаимодействиями.

[0007] Известны соединения с активностью антагонистов рецепторов NK₁, такие как касопитант, нетупитант, эзлопитант, ролапитант, вестипитант, вофопитант и так далее.

Однако, касопитант, как сообщается, обладает ингибирующим эффектом на CYP3A4 и вызывает межлекарственное взаимодействие из-за данного эффекта (непатентная литература 4). В США и Европе были проведены клинические испытания касопитанта в качестве профилактического средства против тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией; однако его разработка была приостановлена после подачи заявки. Нетупитант находится в стадии разработки в качестве превентивного средства против тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией; однако нетупитант, как сообщается, обладает ингибирующим эффектом на CYP3A4 и вызывает межлекарственное взаимодействие из-за данного эффекта (непатентная литература 5). В США были проведены клинические испытания эзлопитанта в качестве профилактического средства против тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией; однако его разработка была приостановлена. Клинические испытания вофопитанта в качестве профилактического средства против тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией, были проведены в Европе; однако его разработка была приостановлена.

В результате разработка многих из указанных выше соединений приостановлена. Все указанные выше соединения еще не выпущены на рынок.

[0008] Производные пиридина, обладающие антагонистической активностью в отношении рецепторов NK₁, описаны в патентной литературе 1-16. И пролекарства производных пиридина описаны в патентной литературе 17 и 18.

[0009] Однако производные циклогексилпиридина согласно настоящему изобретению не описаны в приведенных выше литературных источниках.

Перечень ссылок

Патентная литература

[0010] Патентная литература 1: патент США 6479483

Патентная литература 2: патент США 6770637

Патентная литература 3: патент США 7939533

Патентная литература 4: Европейский патент 1103545

Патентная литература 5: патент США 7211579

Патентная литература 6: патентная публикация США № 2006/0030600

Патентная литература 7: патент США 6576762

Патентная литература 8: патент США 6225316

Патентная литература 9: патент США 7683056

Патентная литература 10: патент США 8344005

Патентная литература 11: международная патентная публикация № WO2011/054773

Патентная литература 12: патентная публикация США № 2007/0071813

Патентная литература 13: патентная публикация США № 2003/0083345

Патентная литература 14: патентная публикация США № 2003/0004157

Патентная литература 15: патент США 6849624

Патентная литература 16: патент США 6297375

Патентная литература 17: патент США 6593472

Патентная литература 18: патент США 8426450

Непатентная литература

[0011] Непатентная литература 1: P. J. Hesketh et al., European Journal of Cancer, 2003, Vol. 39, pp. 1074-1080

Непатентная литература 2: Toni M. Dando et al., Drugs, 2004, Vol. 64, No. 7, pp. 777-794

Непатентная литература 3: Jacqueline B. McCrea et al., CLINICAL PHARMACOLOGY & THERAPEUTICS, 2003, Vol. 74, No. 1, pp. 17-24

Непатентная литература 4: Stefano Zamuner et al., British Journal of Clinical Pharmacology, 2010, Vol. 70, No. 4, pp. 537-546

Непатентная литература 5: Corinna Lanzarotti et al., Support Care Cancer, 2013, Vol. 21, No. 10, pp. 2783-2791

Сущность изобретения

Задачи, решаемые настоящим изобретением

[0012] Задачей настоящего изобретения является предоставление нового соединения, которое обладает антагонистической активностью в отношении рецепторов NK₁, чья CYP3A4 ингибирующая активность снижена по сравнению с апрепитантом, и которое полезно для профилактики или лечения тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией. Предпочтительной задачей настоящего изобретения является обеспечение указанного выше соединения, свойства центрального переноса которого и лечебный эффект длительного действия являются отличными.

Средства для решения указанной задачи

[0013] Настоящее изобретение относится к соединению, представленному следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли.

[0014] Таким образом, настоящее изобретение относится к следующим пунктам [1]-[12] и подобным.

[1] Соединение, представленное формулой (I):

[Хим. формула 1]

Где

кольцо А является группой, представленной следующей формулой:

[Хим. формула 2]

или

X представляет собой атом водорода, циано, галоген, C_1-6алкил или гидроксиметил;

R¹ является группой, представленной следующей формулой:

[Хим. формула 3]

или

где

R^1a и R^1b, каждый независимо друг от друга, представляет собой атом водорода, атом фтора или C_1-6алкил;

m равен 0, 1 или 2;

когда m равен 2, тогда R^1a и R^1b необязательно отличаются друг от друга;

R² представляет собой C_1-6алкил, гидроксигруппу или C_1-6алкокси;

U является группой, представленной следующей формулой:

[Хим. формула 4]

где

R^3a и R^3b, каждый независимо, представляет собой атом водорода, C_1-6алкил, гидроксиC_1-6алкил или C_1-6алкоксиC_1-6алкил;

Y равен 0, 1 или 2;

когда Y равен 2, два R² необязательно отличаются друг от друга;

или его фармацевтически приемлемая соль.

[2] Соединение, представленное формулой (Ia), по указанному выше пункту [1]:

[Хим. формула 5]

где

кольцо A и X имеют такие же значения, как указано в пункте [1];

R^1c и R^1d, каждый независимо, представляет собой атом водорода или метил;

U¹ является группой, представленной следующей формулой:

[Хим. формула 6]

в которой

R^3c и R^3d, каждый независимо, представляет собой атом водорода, метил или гидроксиметил;

n равен 0, 1 или 2;

когда n равен 2, тогда R^1c и R^1d необязательно отличаются друг от друга;

или его фармацевтически приемлемая соль.

[3] Соединение, представленное формулой (Ib), по указанному выше пункту [2]:

[Хим. формула 7]

где

R^1c и R1^d имеют такие же значения, как указано в пункте [2];

или его фармацевтически приемлемая соль.

[4] Соединение, представленное следующей формулой, по указанному выше пункту [1]:

[Хим. формула 8]

или его фармацевтически приемлемая соль.

[5] Соединение, представленное следующей формулой, по указанному выше пункту [1]:

[Хим. формула 9]

или его фармацевтически приемлемая соль.

[6] Соединение, представленное следующей формулой, по указанному выше пункту [1]:

[Хим. формула 10]

или его фармацевтически приемлемая соль.

[7] Соединение, представленное следующей формулой, по указанному выше пункту [1]:

[Хим. формула 11]

или его фармацевтически приемлемая соль.

[8] Соединение, представленное следующей формулой, по указанному выше пункту [1]:

[Хим. формула 12]

или его фармацевтически приемлемая соль.

[9] Соединение, представленное следующей формулой, по указанному выше пункту [1]:

[Хим. формула 13]

или его фармацевтически приемлемая соль.

[10] Соединение, представленное следующей формулой, по указанному выше пункту [1]:

[Хим. формула 14]

или его фармацевтически приемлемая соль.

[11] Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента соединение по любому из указанных выше пунктов [1]-[10] или его фармацевтически приемлемую соль.

[12] Фармацевтическая композиция по указанному выше пункту [11], для применения при профилактике тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией.

Эффект изобретения

[0015] Соединения настоящего изобретения обладают превосходной антагонистической активностью в отношении рецептора NK₁. И CYP3A4 ингибирующая активность соединения настоящего изобретения снижена по сравнению с апрепитантом. Предпочтительные соединения настоящего изобретения выделяются свойствами центрального переноса. Более предпочтительно, соединения настоящего изобретения отличаются превосходными свойствами центрального переноса и лечебным эффектом длительного действия.

Таким образом, соединения настоящего изобретения или их фармацевтически приемлемые соли полезны в качестве средств для профилактики или лечения тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией.

Краткое описание фигур

[0016] [Фиг.1] На фиг.1 показано воздействие на острый и задержанный рвотный ответ, индуцированный цисплатином, в примере тестирования 6. На данной фигуре каждая прямоугольная диаграмма показывает значение для контрольной группы (контроль), группы с внутривенным введением 0,01 мг/кг смеси соединения примера 13 (пр. № 13, 0,01 мг/кг, в.в.) и группы с внутривенным введением 0,1 мг/кг соединения примера 13 (пр. № 13, 0,1 мг/кг, в.в.) в острой фазе, и значение для контрольной группы, группы с внутривенным введением 0,01 мг/кг смеси соединения примера 13 (пр. № 13, 0,01 мг/кг, в.в.) и группы с внутривенным введением 0,1 мг/кг соединения примера 13 (пр. № 13, 0,1 мг/кг, в.в.) в фазе с задержкой слева на право, соответственно. На вертикальной оси показано количество рвотных позывов и рвоты (тошнота+рвота) (среднее±стандартная ошибка для соединения примера 13 у контрольной группы, среднее±стандартная ошибка для соединения примера 13 у группы с внутривенным введением дозы 0,01 мг/кг и среднее±стандартная ошибка для соединения примера 13 у группы с внутривенным введением дозы 0,1 мг/кг).

Способ осуществления изобретения

[0017] Далее, варианты осуществления настоящего изобретения будут описаны более подробно.

[0018] В настоящем изобретении каждый термин имеет следующие значения, если специально не указано иное.

[0019] Термин ʺC_1-6алкилʺ означает алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, имеющей 1-6 атомов углерода, и может быть проиллюстрирован, например, метилом, этилом, пропилом, изопропилом, бутилом, изобутилом, втор-бутилом, трет-бутилом и тому подобное.

Термин ʺC_1-6алкоксиʺ означает алкоксигруппу с прямой или разветвленной цепью, имеющей 1-6 атомов углерода, и может быть проиллюстрирован, например, метокси, этокси, пропокси, изопропокси и тому подобное.

[0020] Термин ʺгидроксиC_1-6алкилʺ означает C_1-6алкильную группу, замещенную гидроксигруппой, такую как гидроксиметильная группа, 1-гидроксиэтильная группа, 1-гидрокси-1,1-диметилметильная группа, 2-гидроксиэтильная группа, 2-гидрокси-2-метилпропильная группа, 3-гидроксипропильная группа и тому подобное.

Термин ʺC_1-6алкоксиC_1-6алкилʺ означает указанный выше C_1-6алкил, замещенный указанным выше C_1-6алкокси.

[0021] В случае, когда соединения настоящего изобретения, представленные формулой (I), содержат один или несколько асимметричных атомов углерода, все стереоизомеры в R или S-конфигурации на каждом асимметричном углероде и их смеси включены в настоящее изобретение. В таких случаях, рацемические соединения, рацемические смеси индивидуальных энантиомеров и смеси диастереоизомеров включены в объем настоящего изобретения. В случае, когда соединения настоящего изобретения, представленные формулой (I), имеют цис-транс-изомеры, все цис-транс-изомеры включены в настоящее изобретение.

[0022] В настоящем изобретении стереохимические признаки также могут быть определены в соответствии с известными в данной области методами. Например, см. также "Tokuron NMR rittai kagaku", Kodansha, 2012, p. 59.

[0023] Соединение настоящего изобретения, представленное формулой (I), также может быть преобразовано в его фармацевтически приемлемые соли в соответствии с общим методом. В качестве таких солей могут быть представлены кислотно-аддитивные соли и соли с основаниями.

[0024] В качестве кислотно-аддитивной соли может быть представлена кислотно-аддитивная соль с неорганической кислотой, такой как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобное, и кислотно-аддитивная соль с органической кислотой, такой как муравьиная кислота, уксусная кислота, трифторуксусная кислота, метансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислоты, пропионовая кислота, лимонная кислота, янтарная кислота, винная кислота, фумаровая кислота, уксусная кислота, щавелевая кислота, малоновая кислота, малеиновая кислота, молочная кислота, яблочная кислота, угольная кислота, бензойная кислота, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота и тому подобное.

[0025] В качестве соли с основанием можно привести соль, образованную с неорганическим основанием, например, соли лития, натриевую соль, калиевую соль, соль кальция, соль магния и тому подобное, и соли, образованные с органическим основанием, таким как N-метил-D-глюкамин, N,N'-дибензилэтилендиамин, триэтиламин, пиперидин, морфолин, пирролидин, аргинин, лизин, холин и тому подобное.

[0026] В настоящем изобретении фармацевтически приемлемая соль также включает ее сольват с фармацевтически приемлемым растворителем, таким как вода, этанол или подобное.

[0027] В соединении настоящего изобретения, представленном формулой (I), символ R¹ и R² означает заместитель на циклогексановом кольце.

[0028] В одном из вариантов осуществления соединения настоящего изобретения, представленного формулой (I), в качестве циклогексанового кольца, имеющего заместитель на кольце, можно привести группу, представленную следующими формулами:

[0029] [Хим. формула 15]

,

где связи с (*) указывают на место связывания в пиридиновом кольце, и R¹ и R² имеют такие же значения, как указано в пункте [1].

[0030] Соединение настоящего изобретения, представленное формулой (I), также может быть получено, например, способом, описанным ниже или аналогичным ему способом, или способом, описанным в литературе или аналогичным ему способом.

[0031] [Хим. формула 16]

Схема 1

В приведенных формулах L¹ и L², каждый независимо, является уходящей группой, такой как атом хлора, атом брома, атом йода, трифторметансульфонилоксигруппа или подобная, кольцо A, X, R¹, R², R^3a, R^3b и Y имеют такие же значения, как определено выше.

[0032] Стадия 1

Соединение (4) также может быть получено путем проведения реакции сочетания соединения (2) с соединением (3) в инертном растворителе в присутствии основания и палладиевого катализатора.

[0033] Стадия 2

Соединение (6) также может быть получено путем проведения реакции конденсации соединения (4) с соединением (5) в инертном растворителе в присутствии основания.

[0034] Стадия 3

Соединение (8) также может быть получено путем проведения реакции сочетания соединения (6) с соединением (7) в инертном растворителе в присутствии основания и палладиевого катализатора.

В качестве инертного растворителя, например, можно привести N,N-диметилформамид, N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, 1,2-диметоксиэтан, бензол, толуол, ксилол, этанол, воду и смесь указанных растворителей. В качестве основания, например, можно привести карбонат калия, карбонат натрия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития, фторид калия, фторид цезия, триэтиламин, пиридин, N,N-диизопропилэтиламин, 2,6-лютидин и 1,8-диазабицикло[5,4,0]-7-ундецен. В качестве палладиевого катализатора можно привести комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)дихлорид-дихлорметан (1:1), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) и тому подобное. Температура реакции обычно составляет от 0°C до температуры кипячения с обратным холодильником. Время реакции обычно составляет от 30 минут до 7 дней, обычно в зависимости от используемых исходных веществ, растворителя и температуры реакции или подобных.

Указанная выше реакция сочетания также может быть проведена при использовании микроволнового реактора (Biotage). При использовании микроволнового реактора, данную реакцию проводят при давлении в интервале: 1-0 бар, диапазоне мощности: 1-400 В, температуре реакции: комнатная температура до 300°C, и времени реакции: минута до 1 дня, в зависимости от используемых исходных веществ, растворителя и методики.

Кроме того, когда требуется защита для функциональных групп R¹ или R², указанная выше реакция сочетания может быть проведена после введения защитной группы.

[0035] Стадия 4

Соединение, представленное формулой (I), также может быть получено путем проведения реакции восстановления, такой как метод каталитического восстановления олефинового соединения (8). Реакция каталитического восстановления может быть проведена, например, путем взаимодействия соединения (8) при использовании катализатора в атмосфере газообразного водорода в инертном растворителе. В качестве инертного растворителя, например, можно привести метанол, этанол, этилацетат, тетрагидрофуран и уксусную кислоту. В качестве катализатора, например, можно привести палладий на угольном порошке, родий на угольном порошке, платину на угольном порошке, платину на угольном порошке с нанесенным ванадием. Температура реакции обычно составляет от комнатной температуры до температуры кипячения с обратным холодильником. Время реакции обычно составляет от 30 минут до 7 дней, обычно в зависимости от используемых исходных веществ, растворителя и температуры реакции или подобных.

[0036] Кроме того, когда требуется защита для функциональных групп на указанной выше стадии 3, соединение, представленное формулой (I), также может быть получено путем проведения реакции введения защитных групп после указанной выше реакции восстановления.

[0037] [Хим. формула 17]

Схема 2

В указанных формулах R¹, R² и Y имеют такие же значения, как определено выше.

[0038] Стадия 5

Соединение (10) также может быть получено путем взаимодействия соединения (9) с трифторметансульфоновым ангидридом в инертном растворителе в присутствии основания. В качестве инертного растворителя, например, можно привести N,N-диметилформамид, N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, 1,2-диметоксиэтан, бензол, толуол, ксилол и смесь указанных растворителей. В качестве основания, например, можно привести карбонат калия, карбонат натрия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития, фторид калия, фторид цезия, триэтиламин, пиридин, N,N-диизопропилэтиламин, 2,6-лютидин, 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридин и 1,8-диазабицикло[5,4,0]-7-ундецен. Температура реакции обычно составляет от 0°C до температуры кипячения с обратным холодильником. Время реакции обычно составляет от 30 минут до 7 дней, обычно в зависимости от используемых исходных веществ, растворителя и температуры реакции или подобных.

[0039] Стадия 6

Соединение (7) также может быть получено путем проведения реакции сочетания соединения (10) с соединением (11) в инертном растворителе в присутствии основания и палладиевого катализатора. В качестве инертного растворителя, например, можно привести N,N-диметилформамид, N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, 1,2-диметоксиэтан, бензол, толуол, ксилол и смесь указанных растворителей. В качестве основания, например, можно привести карбонат калия, ацетат калия, карбонат натрия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития, фторид калия, фторид цезия, триэтиламин, пиридин, N,N-диизопропилэтиламин, 2,6-лютидин и 1,8-диазабицикло[5,4,0]-7-ундецен. В качестве палладиевого катализатора, например, можно привести комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)дихлорид-дихлорметан (1:1), бис(трифенилфосфин)палладий(II)дихлорид. Температура реакции обычно составляет от комнатной температуры до температуры кипячения с обратным холодильником. Время реакции обычно составляет от 30 минут до 7 дней, обычно в зависимости от используемых исходных веществ, растворителя и температуры реакции или подобных.

[0040] Приведенные выше схемы являются иллюстративными для получения соединений настоящего изобретения, представленных формулой (I), и их синтетических промежуточных продуктов. Приведенные выше схемы могут быть изменены или модифицированы в схемы, которые будут легко понятны специалисту в данной области техники.

[0041] На приведенных выше схемах, когда необходима защита основных вариаций функциональных групп, операции введения и удаления защитных групп можно также проводить при необходимости в соответствии с общим способом.

[0042] Соединения настоящего изобретения, представленные формулой (I), и их промежуточные соединения также могут быть выделены и очищены, при необходимости, согласно общепринятым методам выделения и очистки, известным специалисту в данной области техники, таким как экстракция растворителем, кристаллизация, перекристаллизация, хроматография, препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография или тому подобное.

[0043] Соединения настоящего изобретения обладают превосходной антагонистической активностью в отношении рецептора NK1 и, таким образом, могут быть использованы в качестве средства для профилактики или лечения различных заболеваний, опосредованных рецептором NK₁. Например, соединения настоящего изобретения полезны в качестве противорвотного средства, особенно полезны в качестве превентивного средства при химиотерапии рака, например, индуцированных цисплатином желудочно-кишечных симптомов (например, тошнота и рвота). Предпочтительно, соединения настоящего изобретения не только полезны при острой тошноте и рвоте, вызванных противораковой химиотерапией, но также при замедленной тошноте и рвоте, вызванных противораковой химиотерапией

[0044] В одном из вариантов осуществления соединения настоящего изобретения обладают превосходной антагонистической активностью в отношении рецептора NK1 и, таким образом, также могут использоваться в качестве средств для профилактики послеоперационной тошноты и рвоты (PONV), тошноты и рвоты, связанных с лучевой терапией, рвоты, вызванной морфином или укачиванием в транспорте, и при лечении шизофрении, социальной фобии, тревоги и депрессии, алкоголизма, синдрома раздраженного кишечника, неспецифического язвенного колита, кашля, астмы, атопического дерматита, псориаза, зуда, боли, мигрени, шума в ушах, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, гиперактивного мочевого пузыря или недержания мочи.

[0045] Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть введены в различных дозированных формах в зависимости от их применения. В качестве таких дозированных форм, например, можно привести порошки, гранулы, тонкие гранулы, сухие сиропы, таблетки, капсулы, инъекции, жидкости, мази, суппозитории и припарки, которые вводятся перорально или парентерально.

[0046] Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть получены с использованием соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере одной фармацевтической добавки. Такие фармацевтические композиции могут быть сформулированы путем примешивания, разведения или растворения с соответствующими фармацевтическими добавками, такими как эксципиенты, дезинтегранты, связующие, лубриканты, разбавители, буферы, тонизирующие агенты, консерванты, смачивающие вещества, эмульгаторы, диспергаторы, стабилизаторы, солюбилизаторы и тому подобное, согласно общепринятой методике составления композиций в зависимости от их лекарственных форм.

[0047] При применении фармацевтической композиции настоящего изобретения для профилактики или лечения, доза соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента соответствующим образом подбирается в зависимости от возраста, пола, массы тела, степени расстройств и лечения для каждого пациента и тому подобное. В случае перорального введения, доза для взрослого пациента может быть подобрана в интервале, например, 0,1-1000 мг в день, 0,1-500 мг в день, 0,1-100 мг в день или 0,1-50 мг в день, и ежедневная доза может быть разделена и введена один, два, три или четыре раза в день. И в случае парентерального введения, доза для взрослого пациента может быть подобрана в интервале, например, 0,1-1000 мг в день, 0,1-500 мг в день, 0,1-100 мг в день или 0,1-50 мг в день, и ежедневная доза может быть разделена и введена один, два, три или четыре раза в день.

[0048] При применении фармацевтической композиции настоящего изобретения для предупреждения тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией, такую композицию также можно вводить перед введением противоопухолевых средств. Например, данная фармацевтическая композиция может быть введена непосредственно за полтора часа перед проведением химиотерапии, и фармацевтическая композиция может быть введена на второй день утром.

[0049] В одном из вариантов осуществления соединение настоящего изобретения, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль также может быть использовано в комбинации с любым другим лекарственным средством, отличным от антагонистов рецептора NK₁. В качестве таких других лекарственных средств, используемых в комбинации, можно привести, например, кортикостероид и противорвотное средство антагонист рецепторов 5-HT₃.

[0050] При использовании соединения настоящего изобретения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в комбинации с другим лекарственным средством, его можно вводить в виде объединенного состава, содержащего все активные ингредиенты вместе, или в виде составов, каждый из которых сформулирован отдельно с каждым активным ингредиентом. При таком отдельном составлении композиции могут быть введены по-отдельности или одновременно.

[0051] Кроме того, дозировка соединения, представленного формулой (I), по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли может быть уменьшена в зависимости от дозы других лекарственных средств, используемых в комбинации.

Примеры

[0052] Настоящее изобретение далее проиллюстрировано более подробно при помощи следующих ссылочных примеров, примеров и примеров тестирования. Однако настоящее изобретение ими не ограничивается.

[0053] Ссылочный пример 1

Этиловый эфир 4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)циклогекс-3-енкарбоновой кислоты

К раствору этилового эфира 4-оксоциклогексанкарбоновой кислоты (1,00 г) и 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридина (1,39 г) в дихлорметане (40 мл) добавляли трифторметансульфоновый ангидрид (1,74 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Не растворившиеся вещества удаляли фильтрованием и затем промывали дихлорметаном (5 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и к полученному остатку добавляли дихлорметан (5 мл). Не растворившиеся вещества удаляли фильтрованием и затем промывали дихлорметаном (3 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и к полученному остатку добавляли дихлорметан (3 мл). Не растворившиеся вещества удаляли фильтрованием и затем промывали дихлорметаном (2 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, с получением этилового эфира 4-трифторметансульфонилоксициклогекс-3-енкарбоновой кислоты (1,57 г). В атмосфере газообразного аргона суспензию этилового эфира 4-трифторметансульфонилоксициклогекс-3-енкарбоновой кислоты (1,57 г), бис(пинаколато)диборана (1,39 г), комплекса дихлорид-дихлорметан [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(II) (1:1) (0,13 г) и ацетата калия (1,53 г) в диметисульфоксиде (26 мл) перемешивали при 50°C в течение 4,5 часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-85/15), с получением указанного в заголовке соединения (0,84 г).

[0054] Ссылочные примеры 2-7

Соединения ссылочных примеров 2-7 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 1, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0055] Ссылочный пример 8

трет-Бутиловый эфир (6-хлор-4-йодопиридин-3-ил)карбаминовой кислоты

В атмосфере газообразного аргона к раствору трет-бутилового эфира (6-хлорпиридин-3-ил)карбаминовой кислоты (5,0 г) и N,N,N',N'-тетраметилэтан-1,2-диамина (7,7 г) в диэтиловом эфире (120 мл) по каплям добавляли н-бутиллитий (2,65 моль/л тетрагидрофурановый раствор, 25 мл) при -78°C. После перемешивания смеси при -10°C в течение 2 часов, к полученной смеси по каплям добавляли раствор йода (11,4 г) в диэтиловом эфире (40 мл) при -78°C, и полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 дня. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор аммонийхлорида, и полученную в результате смесь экстрагировали диэтиловым эфиром. Органический слой промывали 10% водным раствором пиросульфита натрия и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-60/40), с получением указанного в заголовке соединения (2,59 г).

[0056] Ссылочный пример 9

трет-Бутиловый эфир (6-хлор-4-йодопиридин-3-ил)метилкарбаминовой кислоты

К раствору трет-бутилового эфира (6-хлор-4-йодопиридин-3-ил)карбаминовой кислоты (2,59 г) в N,N-диметилформамиде (30 мл) добавляли гидрид натрия (60%, 0,32 г) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. К полученной смеси добавляли йодометан (2,60 г) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-70/30), с получением указанного в заголовке соединения (2,66 г).

[0057] Ссылочный пример 10

(6-хлор-4-йодопиридин-3-ил)метиламин

К раствору трет-бутилового эфира (6-хлор-4-йодопиридин-3-ил)метилкарбаминовой кислоты (2,66 г) в дихлорметане (10 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (8,23 г) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Полученную реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и к полученному остатку добавляли насыщенный водный раствор карбоната натрия, и полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (1,89 г).

[0058] Ссылочный пример 11

[6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]метиламин

К смеси (6-хлор-4-йодопиридин-3-ил)метиламина (1,89 г), 4-фтор-2-метилфенилбороновой кислоты (1,30 г), 1,2-диметоксиэтана (20 мл) и воды (20 мл) добавляли ацетат палладия(II) (0,16 г), трифенилфосфин (0,37 г) и карбонат натрия (3,73 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при 90°C в течение ночи. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-50/50), с получением указанного в заголовке соединения (1,56 г).

[0059] Ссылочный пример 12

(6-хлор-4-орто-толилпиридин-3-ил)метиламин

К смеси (6-хлор-4-йодопиридин-3-ил)метиламина (0,70 г), 2-метилфенилбороновой кислоты (0,42 г), 1,2-диметоксиэтана (10 мл) и воды (10 мл) добавляли ацетат палладия(II) (0,058 г), трифенилфосфин (0,14 г) и карбонат натрия (1,38 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при 90°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-70/30), с получением указанного в заголовке соединения (0,54 г).

[0060] Ссылочный пример 13

6-хлор-3-нитропиридин-2-карбонитрил

К раствору 2,6-дихлор-3-нитропиридина (2,50 г) в N-метилпирролидоне (25 мл) добавляли цианид меди(I) (2,32 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при 180°C в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и к полученной смеси добавляли этилацетат и воду. Не растворившиеся вещества удаляли фильтрованием. Фильтрат промывали насыщенным раствором соли, и отделенный водный слой повторно экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=90/10-70/30), с получением указанного в заголовке соединения (0,90 г).

[0061] Ссылочный пример 14

3-Амино-6-хлорпиридин-2-карбонитрил

К раствору 6-хлор-3-нитропиридин-2-карбонитрила (0,32 г) и концентрированной хлористоводородную кислоту (1,2 мл) в этаноле (3,6 мл) добавляли порошок железа (0,34 г) при комнатной температуре, и полученную смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 30 минут. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и подщелачивали добавлением насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия. К реакционной смеси добавляли этилацетат, и полученную в результате смесь фильтровали через рыхлый слой целита (зарегистрированная торговая марка). Фильтрат экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,24 г).

[0062] Ссылочный пример 15

3-Амино-4-бром-6-хлорпиридин-2-карбонитрил

К раствору 3-амино-6-хлорпиридин-2-карбонитрила (0,24 г) в N,N-диметилформамиде (8 мл) добавляли N-бромсукцинимид (0,37 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор тиосульфата натрия, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=75/25-50/50), с получением указанного в заголовке соединения (0,30 г).

[0063] Ссылочный пример 16

3-Амино-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-карбонитрил

Смесь 3-амино-4-бром-6-хлорпиридин-2-карбонитрила (0,15 г), 4-фтор-2-метилфенилбороновой кислоты (0,08 г), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,07 г), карбоната натрия (0,20 г), 1,2-диметоксиэтана (3,2 мл) и воды (0,8 мл) перемешивали при 100°C при микроволновом облучении в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=50/50-0/100), с получением указанного в заголовке соединения (0,14 г).

[0064] Ссылочный пример 17

3-Бензилокси-2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионовая кислота

В атмосфере газообразного аргона к раствору метилового эфира 2-(3,5-бистрифторметилфенил)пропионовой кислоты (0,60 г) в тетрагидрофуране (5 мл) по каплям добавляли диизопропиламид лития (1,09 моль/л раствор тетрагидрофуран/н-гексан, 2 мл) при -78°C, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 15 минут. К реакционной смеси добавляли раствор простого бензилхлорметилового эфира (0,34 г) в тетрагидрофуране (2 мл) при -78°C, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор аммонийхлорида, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-70/30), с получением метилового эфира 3-бензилокси-2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионовой кислоты (0,78 г). К раствору полученного соединения (0,78 г) в этаноле (3 мл) добавляли 5,0 моль/л водный раствор гидроксида натрия (1 мл) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. К реакционной смеси добавляли 2,0 моль/л хлористоводородную кислоту (3 мл), и полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель удаляли при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,77 г).

[0065] Ссылочный пример 18

2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламид

К раствору 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионовой кислоты (0,66 г) в дихлорметане (10 мл) добавляли оксалилхлорид (0,56 г) и N,N-диметилформамид (2 капли) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 1 часа. Полученную реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, с получением остатка. В атмосфере газообразного аргона к раствору [6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]метиламина (0,50 г) в тетрагидрофуране (10 мл) по каплям добавляли бис(триметилсилил)амид калия (0,5 моль/л толуольный раствор, 5,0 мл) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. К реакционной смеси по каплям добавляли раствор полученного выше остатка в тетрагидрофуране (5 мл) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. К реакционной смеси добавляли 1,0 моль/л водный раствор гидрокарбоната натрия, и полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-60/40), с получением указанного в заголовке соединения (1,03 г).

[0066] Ссылочные примеры 19 и 20

Соединения ссылочных примеров 19 и 20 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 18, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0067] Ссылочный пример 21

2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-N-[6-хлор-2-циано-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]изобутиламид

К раствору 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионовой кислоты (0,31 г) в дихлорметане (2,6 мл) добавляли оксалилхлорид (0,26 г) и N,N-диметилформамид (2 капли) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, с получением остатка. К раствору 3-амино-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-карбонитрила (0,14 г) в тетрагидрофуране (5 мл) добавляли бис(триметилсилил)амид натрия (1,0 моль/л тетрагидрофурановый раствор, 1,1 мл) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 30 минут. К реакционной смеси по каплям добавляли раствор полученного выше остатка в тетрагидрофуране (2,0 мл) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=85/15-40/60), с получением указанного в заголовке соединения (0,21 г).

[0068] Ссылочный пример 22

2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-N-[6-хлор-2-циано-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламид

К раствору 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[6-хлор-2-циано-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]изобутиламида (0,21 г) в N,N-диметилформамиде (2,4 мл) добавляли гидрид натрия (60%, 0,018 г) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 5 минут. К реакционной смеси добавляли йодометан (0,11 г) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли воду, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=90/10-50/50), с получением указанного в заголовке соединения (0,09 г).

[0069] Ссылочный пример 23

Этиловый эфир 4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-3-енкарбоновой кислоты

Смесь 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламида (0,08 г), этилового эфира 4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)циклогекс-3-енкарбоновой кислоты (0,08 г), карбоната натрия (0,05 г), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,02 г), 1,2-диметоксиэтана (1,0 мл), воды (0,2 мл) и этанола (0,2 мл) перемешивали при 120°C при микроволновом облучении в течение 1 часа. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-80/20), с получением указанного в заголовке соединения (0,03 г).

[0070] Ссылочные примеры 24-26

Соединения ссылочных примеров 24-26 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 23, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0071] Ссылочный пример 27

2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-N-[6-(1,4-диоксаспиро[4.5]дек-7-ен-8-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламид

Смесь 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламида (0,53 г), 8-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1,4-диоксаспиро[4.5]дек-7-ена (0,29 г), карбоната натрия (0,32 г), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,12 г), 1,2-диметоксиэтана (7,5 мл), воды (1,5 мл) и этанола (1,5 мл) перемешивали при 120°C при микроволновом облучении в течение 30 минут. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=90/10-10/90), с получением указанного в заголовке соединения (0,52 г).

[0072] Ссылочные примеры 28-30

Соединения ссылочных примеров 28-30 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 23, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0073] Ссылочный пример 31

Этиловый эфир 2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-3-енил}-2-метилпропионовой кислоты

Смесь 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламида (0,11 г), этилового эфира 2-метил-2-[4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)циклогекс-3-енил]пропионовой кислоты (0,12 г), карбоната натрия (0,06 г), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,02 г), 1,2-диметоксиэтана (1,5 мл), воды (0,3 мл) и этанола (0,3 мл) перемешивали при 120°C при микроволновом облучении в течение 30 минут. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-60/40), с получением указанного в заголовке соединения (0,12 г).

[0074] Ссылочный пример 32

Метиловый эфир {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-3-енил}уксусной кислоты

Смесь 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламида (2,00 г), метилового эфира [4-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)циклогекс-3-енил]уксусной кислоты (1,26 г), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,22 г), 2,0 моль/л водного раствора карбоната натрия (5,6 мл), 1,2-диметоксиэтана (22,5 мл) и этанола (5,6 мл) перемешивали при 120°C при микроволновом облучении в течение 30 минут. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-50/50), с получением указанного в заголовке соединения (2,14 г).

[0075] Ссылочный пример 33

2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-(1-метил-3-оксоциклогексил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламид

К суспензии йодида меди (I) (0,05 г) в диэтиловом эфире (2 мл) добавляли метиллитий (1,13 моль/л диэтиловый раствор, 0,45 мл) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 15 минут. К реакционной смеси по каплям добавляли 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-(3-оксоциклогекс-1-енил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламид (0,10 г) в диэтиловом эфире (1 мл) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор аммонийхлорида, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=85/15-50/50), с получением указанного в заголовке соединения (0,50 г).

[0076] Ссылочный пример 34

Этиловый эфир {3-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-2-енилиден}уксусной кислоты

К суспензии гидрида натрия (60%, 0,012 г) в тетрагидрофуране (2 мл) добавляли диэтилфосфоноацетат (0,08 г) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-(3-оксоциклогекс-1-енил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламид (0,10 г) в тетрагидрофуране (1 мл) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи и при 50°C в течение 24 часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=85/15-40/60), с получением указанного в заголовке соединения (0,05 г).

[0077] Ссылочный пример 35

Соединение ссылочного примера 35 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 34, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0078] Ссылочный пример 36

2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-N-[6-(1,4-диоксаспиро[4.5]дек-8-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламид

В атмосфере газообразного водорода суспензию 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[6-(1,4-диоксаспиро[4.5]дек-7-ен-8-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламида (0,52 г) и 10% палладия на углероде (0,10 г, влажный) в метаноле (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь фильтровали через рыхлый слой целита (зарегистрированная торговая марка), и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,50 г).

[0079] Ссылочный пример 37

2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-(4-оксоциклогексил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламид

К раствору 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[6-(1,4-диоксаспиро[4.5]дек-8-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламида (0,50 г) в ацетоне добавляли 1,0 моль/л хлористоводородную кислоту (3,0 мл) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при 50°C в течение 2 часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=90/10-10/90), с получением указанного в заголовке соединения (0,41 г).

[0080] Ссылочный пример 38

Этиловый эфир {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]-1-гидроксициклогексил}уксусной кислоты

В атмосфере газообразного аргона к раствору этилацетата (0,021 г) в тетрагидрофуране (1 мл) по каплям добавляли раствор литий диизопропиламида (1,09 моль/л раствор тетрагидрофуран/н-гексан, 0,20 мл) при -78°C, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 20 минут. К реакционной смеси добавляли раствор 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-(4-оксоциклогексил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламида (0,10 г) в тетрагидрофуране (1 мл) при -78°C, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор аммонийхлорида, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=90/10-10/90), с получением указанного в заголовке соединения (0,10 г).

[0081] Ссылочный пример 39

Этиловый эфир 2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексилиден}пропионовой кислоты

К суспензии гидрида натрия (60%, 0,017 г) в тетрагидрофуране (2 мл) добавляли триэтиловый эфир 2-фосфонопропионовой кислоты (0,11 г) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляли раствор 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-(4-оксоциклогексил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламида (0,14 г) в тетрагидрофуране (1 мл) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при 50°C в течение ночи. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли насыщенный водный раствор аммонийхлорида. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-50/50), с получением указанного в заголовке соединения (0,13 г).

[0082] Ссылочный пример 40

Этиловый эфир {3-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты

В атмосфере газообразного водорода суспензию этилового эфира {3-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-2-енилиден}уксусной кислоты (0,03 г) и 10% палладия на углероде (0,01 г, влажный) в метаноле (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь фильтровали через рыхлый слой целита (зарегистрированная торговая марка), и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=85/15-40/60), с получением указанного в заголовке соединения (0,02 г).

[0083] Ссылочный пример 41

Соединение ссылочного примера 41 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 40, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0084] Ссылочный пример 42

Этиловый эфир 2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}пропионовой кислоты

В атмосфере газообразного водорода суспензию этилового эфира 2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексилиден}пропионовой кислоты (0,13 г) и 10% палладия на углероде (0,025 г, влажный) в метаноле (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь фильтровали через рыхлый слой целита (зарегистрированная торговая марка), и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,11 г).

[0085] Ссылочный пример 43

Этиловый эфир 4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексанкарбоновой кислоты

В атмосфере газообразного водорода суспензию этилового эфира 4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-3-енкарбоновой кислоты (0,03 г) и 10% палладия на углероде (0,010 г, влажный) в этаноле (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Полученную реакционную смесь фильтровали через рыхлый слой целита (зарегистрированная торговая марка), и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=70/30-50/50), с получением указанного в заголовке соединения (0,02 г).

[0086] Ссылочные примеры 44-47

Соединения ссылочных примеров 44-47 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 43, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0087] Ссылочный пример 48

{4-[5-{[3-Бензилокси-2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-3-енил}уксусная кислота

К смеси этилового эфира {4-[5-{[3-бензилокси-2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-3-енил}уксусной кислоты (0,11 г), тетрагидрофурана (1 мл), метанола (0,5 мл) и воды (0,5 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,03 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли 2,0 моль/л хлористоводородную кислоту (0,4 мл), и растворитель удаляли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли воду и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: этилацетата/метанол=100/0-90/10), с получением указанного в заголовке соединения (0,05 г).

[0088] Ссылочные примеры 49 и 50

Этиловый эфир транс-2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}-2-метилпропионовой кислоты (ссылочный пример 49) и этиловый эфир цис-2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}-2-метилпропионовой кислоты (ссылочный пример 50)

В атмосфере газообразного водорода смесь этилового эфира 2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-3-енил}-2-метилпропионовой кислоты (0,11 г), 10% палладия на углероде (0,03 г, влажный), метанола (2 мл) и тетрагидрофурана (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь фильтровали через рыхлый слой целита (зарегистрированная торговая марка), и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-60/40), с получением соединения ссылочного примера 49 (0,05 г) и соединения ссылочного примера 50 (0,04 г). При приведенной выше хроматографии соединение ссылочного примера 49 было в стороне высокой полярности, и соединение ссылочного примера 50 было в стороне низкой полярности.

[0089] Ссылочный пример 51

Метиловый эфир {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты

В атмосфере газообразного водорода суспензию метилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-3-енил}уксусной кислоты (2,14 г) и 10% палладия на углероде (типа E101 NE/W (EVONIK)) (0,21 г) в метаноле (96 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь фильтровали через рыхлый слой целита (зарегистрированная торговая марка), и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на аминопропилсилилированном силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=100/0-40/60), с получением указанного в заголовке соединения (2,13 г).

[0090] Ссылочный пример 52

Метиловый эфир {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]-1-метилциклогексил}уксусной кислоты

К суспензии гидрида натрия (60%, 0,020 г) в тетрагидрофуране (2 мл) добавляли метиловый эфир диметифосфоноуксусной кислоты (0,09 г) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляли раствор 2-(3,5-бистрифторметилфенил)-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-(4-оксоциклогексил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутиламида (0,15 г) в тетрагидрофуране (1 мл) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при 50°C в течение 30 минут. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и добавляли насыщенный водный раствор аммонийхлорида. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=90/10-30/70), с получением метилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексилиден}уксусной кислоты (0,15 г).

К суспензии йодида меди (I) (0,05 г) в диэтиловом эфире (0,40 мл) добавляли метиллитий (1,13 моль/л диэтиловый раствор, 0,50 мл) при охлаждении льдом, полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 10 минут, и растворитель концентрировали при пониженном давлении. В атмосфере газообразного аргона к полученному остатку добавляли дихлорметан (0,40 мл) при охлаждении льдом, полученную смесь перемешивали в течение 5 минут, и растворитель концентрировали при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли дихлорметан (0,40 мл) и охлаждали до -78°C. К смеси добавляли триметилсилилхлорид (0,03 г), и в полученную в результате смесь по каплям добавляли раствор метилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексилиден}уксусной кислоты (0,09 г) в дихлорметане (1,0 мл). Полученную в результате смесь перемешивали при охлаждении льдом в течение 1 часа и при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор аммонийхлорида, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=90/10-40/60), с получением указанного в заголовке соединения (0,08 г).

[0091] Ссылочный пример 53

Соединение ссылочного примера 53 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 16, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0092] Ссылочный пример 54

Соединение ссылочного примера 54 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 21, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0093] Ссылочный пример 55

Соединение ссылочного примера 55 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 22, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0094] Ссылочные примеры 56 и 57

Соединения ссылочных примеров 56 и 57 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 23, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0095] Ссылочные примеры 58 и 59

Соединения ссылочных примеров 58 и 59 получали по методике, аналогично описанной в ссылочном примере 43, с использованием соответствующих исходных веществ.

[0096] Ссылочный пример 60

Этиловый эфир {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-1-оксипиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты

К раствору этилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,37 г) в дихлорметане добавляли м-хлорпероксибензойную кислоту (чистота 70%, 0,55 г) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали льдом, и к полученной смеси добавляли 1,0 моль/л водный раствор гидроксида натрия. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=40/60-0/100), с получением указанного в заголовке соединения (0,35 г).

[0097] Ссылочный пример 61

Этиловый эфир {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты

Смесь этилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-1-оксипиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,20 г) и фосфорилхлорида (0,60 мл) перемешивали при 120°C в течение 2 часов. Полученную реакционную смесь охлаждали льдом, и подщелачивали добавлением воды и водного аммиака. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=90/10-50/50), с получением указанного в заголовке соединения (0,16 г).

[0098] Ссылочный пример 62

Этиловый эфир {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-метилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты

Смесь этилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,04 г), 2,4,6-триметилциклотрибороксана (0,014 г), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,007 г), карбоната натрия (0,016 г) и 1,2-диметоксиэтана (2,9 мл) перемешивали при 120°C при микроволновом облучении в течение 1 часа. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=80/20-20/80), с получением указанного в заголовке соединения (0,019 г).

[0099] Ссылочный пример 63

Этиловый эфир {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-гидроксиметилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты

К раствору этилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-1-оксипиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,15 г) в дихлорметане (2,0 мл) добавляли триметилоксонийтетрафторбората (0,04 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и к полученному остатку добавляли метанол (2,0 мл). К смеси добавляли раствор персульфата аммония (0,01 г) в воде (0,02 мл) при 65°C, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляли раствор персульфата аммония (0,01 г) в воде (0,02 мл) при 65°C, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 13 часов. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры, растворитель концентрировали при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли водный раствор карбоната натрия, и полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением смеси указанного в заголовке соединения и метилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-гидроксиметилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,06 г).

[0100] Пример 1

4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексанкарбоновая кислота

К смеси этилового эфира 4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексанкарбоновой кислоты (0,022 г), тетрагидрофурана (0,375 мл), метанола (0,375 мл) и воды (0,150 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,014 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 72 часов. К реакционной смеси добавляли 2,0 моль/л хлористоводородную кислоту (0,170 мл) и воду, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, и сушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,018 г).

[0101] Пример 2

3-{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}пропионовая кислота

К смеси этилового эфира 3-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}пропионовой кислоты (0,019 г), тетрагидрофурана (0,375 мл), метанола (0,375 мл) и воды (0,150 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,012 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 6 часов. К реакционной смеси добавляли 2,0 моль/л хлористоводородную кислоту (0,140 мл) и воду, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, и сушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,017 г).

[0102] Пример 3

{3-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота

К смеси этилового эфира {3-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,023 г), тетрагидрофурана (0,50 мл), метанола (0,25 мл) и воды (0,25 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,007 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь нейтрализовали добавлением уксусной кислоты. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат/метанол=50/50/0-0/100/0-0/90/10), с получением указанного в заголовке соединения (0,003 г).

[0103] Пример 4

{3-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]-3-метилциклогексил}уксусная кислота

К смеси этилового эфира {3-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]-3-метилциклогексил}уксусной кислоты (0,022 г), тетрагидрофурана (0,40 мл), метанола (0,20 мл) и воды (0,20 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,006 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь нейтрализовали добавлением уксусной кислоты. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат/метанол=50/50/0-0/100/0-0/90/10), с получением указанного в заголовке соединения (0,007 г).

[0104] Пример 5

{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-3-гидрокси-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота

В атмосфере газообразного водорода суспензию {4-[5-{[3-бензилокси-2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогекс-3-енил}уксусной кислоты (0,045 г) и 10% палладия на углероде (0,03 г, влажный) в метаноле (1,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. К реакционной смеси добавляли 10% палладия на углероде (0,03 г, влажный). В атмосфере газообразного водорода полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь фильтровали через рыхлый слой целита (зарегистрированная торговая марка), и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,04 г).

[0105] Пример 6

{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]-1-гидроксициклогексил}уксусная кислота

К смеси этилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]-1-гидроксициклогексил}уксусной кислоты (0,05 г), тетрагидрофурана (1,00 мл), метанола (0,50 мл) и воды (0,50 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,015 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли 2,0 моль/л хлористоводородную кислоту (0,20 мл), и растворитель удаляли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли воду, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,046 г).

[0106] Пример 7

6-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]спиро[2.5]октан-1-карбоновая кислота

Смесь этилового эфира 6-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]спиро[2.5]октан-1-карбоновой кислоты (0,020 г), 1,0 моль/л водного раствора гидроксида натрия (0,09 мл), тетрагидрофурана (0,60 мл) и метанола (0,30 мл) перемешивали при 140°C при микроволновом облучении в течение полутора часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат/метанол=40/60/0-0/100/0-0/90/10), с получением указанного в заголовке соединения (0,005 г).

[0107] Пример 8

{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-циано-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота

К смеси метилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-циано-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,017 г), тетрагидрофурана (0,30 мл), метанола (0,15 мл) и воды (0,15 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,005 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 2 дней. Полученную реакционную смесь нейтрализовали добавлением уксусной кислоты. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=50/50-0/100), с получением указанного в заголовке соединения (0,008 г).

[0108] Пример 9

{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-орто-толилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота

К смеси метилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-орто-толилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,08 г), тетрагидрофурана (1,00 мл), метанола (0,50 мл) и воды (0,50 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,021 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 3 часов. К реакционной смеси добавляли 2,0 моль/л хлористоводородную кислоту (0,28 мл), и растворитель удаляли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли воду, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,071 г).

[0109] Пример 10

2-{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}пропионовая кислота

Смесь этилового эфира 2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}пропионовой кислоты (0,11 г), 1,0 моль/л водного раствора гидроксида натрия (0,50 мл), тетрагидрофурана (0,50 мл) и метанола (1,50 мл) перемешивали при 140°C при микроволновом облучении в течение полутора часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 1,0 моль/л хлористоводородную кислоту (0,60 мл). Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,10 г).

[0110] Пример 11

транс-2-{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}-2-метилпропионовая кислота

Смесь этилового эфира транс-2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}-2-метилпропионовой кислоты (0,054 г), 1,0 моль/л водного раствора гидроксида натрия (0,25 мл), тетрагидрофурана (0,25 мл) и метанола (0,75 мл) перемешивали при 140°C при микроволновом облучении в течение полутора часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 1,0 моль/л водный раствор гидроксида натрия (0,25 мл). Полученную в результате смесь перемешивали при 140°C при микроволновом облучении в течение полутора часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 1,0 моль/л хлористоводородную кислоту (0,60 мл). Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,022 г).

[0111] Пример 12

цис-2-{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}-2-метилпропионовая кислота

Смесь этилового эфира цис-2-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}-2-метилпропионовой кислоты (0,044 г), 1,0 моль/л водного раствора гидроксида натрия (0,20 мл), тетрагидрофурана (0,20 мл) и метанола (0,60 мл) перемешивали при 140°C при микроволновом облучении в течение полутора часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 1,0 моль/л водный раствор гидроксида натрия (0,20 мл). Полученную в результате смесь перемешивали при 140°C при микроволновом облучении в течение полутора часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 1,0 моль/л хлористоводородную кислоту (0,50 мл). Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат=90/10-10/90), с получением указанного в заголовке соединения (0,014 г).

[0112] Пример 13 и 14

транс-{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота (пример 13) и цис-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота (пример 14).

(1) Синтез смеси транс и цис изомеров

К смешанному раствору метилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (2,13 г) в смеси тетрагидрофуран (32 мл)-метанол (16 мл)-вода (16 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,41 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 17 часов. К реакционной смеси добавляли 2,0 моль/л хлористоводородную кислоту (4,9 мл), и растворитель удаляли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли воду, и полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением неочищенного продукта (смесь транс- и цис-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты) (2,08 г).

(2) Разделение транс и цис изомеров

Смесь транс- и цис-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (36,6 г) разделяли жидкостной хроматографией в следующих условиях, с получением соединения примера 13 (17,0 г) и примера 14 (16,2 г), соответственно.

[Условия разделения жидкостной хроматографией]

(A) Препаративная разделительная система

Название устройства: K-Prep (KYOTO CHROMATO Co., Ltd.);

(B) Условия разделения

Колонка: CHIRALPAK (зарегистрированная торговая марка) IA;

Размер: 5 см внутр. диаметр×25 см длина;

Размер частиц: 5 мкм;

Подвижная фаза: н-гексан/этанол/уксусная кислота=85/15/0,1 <об./об./об.>

Скорость потока: 35 мл/мин;

Температура: 30°C;

Длина волны детектирования: 254 нм;

Метод введения пробы: введение пробы с помощью петлевого дозатора;

Вводимый объем: 10-20 мл (20 г/л раствор).

(C) Время удерживания

Соединение примера 13: приблизительно 21 мин, соединение примера 14: приблизительно 17 мин.

[0113] Соединения примеров 13 и 14 анализировали в следующих аналитических условиях.

[Аналитические условия жидкостной хроматографии]

(A) Аналитическая система

Насос: LC-20AD (Shimadzu Corporation);

Детектор: SPD-20A (Shimadzu Corporation);

Автоматический пробоотборник: SIL-20A (Shimadzu Corporation)

(B) Аналитические условия

Колонка: CHIRALPAK (зарегистрированная торговая марка) IA;

Размер: 0,46 см внутр. диаметр×25 см длина;

Подвижная фаза: н-гексан/этанол/уксусная кислота=85/15/0,1 <об./об./об.>

Скорость потока: 1,0 мл/мин;

Температура: 40°C;

Длина волны детектирования: 254 нм;

Вводимый объем: 10 мкл.

(C) Время удерживания

Соединение примера 13: 6,164 мин, соединение примера 14: 5,016 мин.

[0114] Пример 15

{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]-1-метилциклогексил}уксусная кислота

К смеси метилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]-1-метилциклогексил}уксусной кислоты (0,078 г), тетрагидрофурана (0,60 мл), метанола (0,30 мл) и воды (0,30 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,022 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 1 часа и при 50°C в течение 3 часов. Полученную реакционную смесь нейтрализовали добавлением уксусной кислоты. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат/метанол=20/80/0-0/100/0-0/90/10), с получением указанного в заголовке соединения (0,069 г).

[0115] Пример 16

[4-(5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-циано-4-орто-толилпиридин-2-ил)циклогексил]уксусная кислота

К смеси этилового эфира [4-(5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-циано-4-орто-толилпиридин-2-ил)циклогексил]уксусной кислоты (0,018 г), тетрагидрофурана (0,40 мл), метанола (0,20 мл) и воды (0,20 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,005 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь нейтрализовали добавлением уксусной кислоты. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,016 г).

[0116] Пример 17

{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота

К смеси этилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,020 г), тетрагидрофурана (0,50 мл), метанола (0,25 мл) и воды (0,25 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,005 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 2 часов. Полученную реакционную смесь нейтрализовали добавлением уксусной кислоты. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,018 г).

[0117] Пример 18

{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-метилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота

К смеси этилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-метилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,019 г), тетрагидрофурана (0,50 мл), метанола (0,25 мл) и воды (0,25 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,005 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь нейтрализовали добавлением уксусной кислоты. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,018 г).

[0118] Пример 19

{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-гидроксиметилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота

К смеси этилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-гидроксиметилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты и метилового эфира {4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-гидроксиметилпиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (0,025 г), тетрагидрофурана (0,50 мл), метанола (0,25 мл) и воды (0,25 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (0,007 г) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. Полученную реакционную смесь нейтрализовали добавлением уксусной кислоты. Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (0,023 г).

[0119] Пример 20 и 21

транс-{4-[5-{[2-(3,5-Бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-циано-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота (пример 20) и цис-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-циано-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусная кислота (пример 21)

Смесь транс- и цис-{4-[5-{[2-(3,5-бистрифторметилфенил)-2-метилпропионил]метиламино}-6-циано-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-2-ил]циклогексил}уксусной кислоты (пример 8) (0,18 г) разделяли жидкостной хроматографией в следующих условиях, с получением соединения примера 20 (0,035 г) и соединения примера 21 (0,037 г), соответственно.

[Условия разделения жидкостной хроматографией]

(A) Препаративная разделительная система

Название устройства: Препаративная ВЭЖХ система (Gilson, Inc.)

(B) Условия разделения

Колонка: InertSustain (зарегистрированная торговая марка) C18;

Размер: 20 мм внутр. диаметр×50 мм длина;

Размер частиц: 5 мкм;

Подвижная фаза: ацетонитрил/10 мМ водный раствор ацетата аммония=45/55 <об./об.>;

Скорость потока: 30 мл/мин;

Температура: комнатная температура;

Длина волны детектирования: 220 нм.

(C) Время удерживания

Соединение примера 20: приблизительно 10,4 мин, соединение примера 21: приблизительно 9 мин.

[0120] Соединения примеров 20 и 21 анализировали в следующих аналитических условиях.

[Аналитические условия жидкостной хроматографии]

(A) Аналитическая система

Насос: LC-10AT (Shimadzu Corporation);

Детектор: SPD-10A (Shimadzu Corporation);

Автоматический пробоотборник: SIL-10A (Shimadzu Corporation)

(B) Аналитические условия

Колонка: Inertsil (зарегистрированная торговая марка) ODS-3;

Размер: 4,6 мм внутр. диаметр×250 мм длина;

Подвижная фаза: ацетонитрил/10 мМ водный раствор ацетата аммония=40/60-80/20 <об./об.>;

Скорость потока: 1,0 мл/мин;

Температура: 40°C;

Длина волны детектирования: 225 нм;

Вводимый объем: 5 мкл.

(C) Время удерживания

Соединение примера 20: 16,786 мин, соединение примера 21: 17,286 мин.

[0121] В таблицах 1-11 показаны химические структуры соединений приведенных выше ссылочных примеров 1-63, и химические структуры и физические свойства соединений приведенных выше примеров 1-21. Аббревиатуры в данных таблицах: ʺСсылочн. №ʺ, ʺ№ примераʺ, ʺструктураʺ, ʺфизические данныеʺ, ʺ¹H-ЯМРʺ, ʺДМСО-d6ʺ и ʺCDCl₃ʺ представляют номер ссылочного примера, номер примера, химическую структуру, физические свойства, спектр ядерно-магнитного резонанса, диметилсульфоксид-d6 и хлороформ-d1, соответственно. И ʺМСʺ и ʺESI-APCIʺ представляют масс-спектрометрию и измерение ионизации при электрораспылении и ионизации при атмосферном давлении, соответственно.

[0122]

Таблица 1 Ссылочн. № Структура Ссылочн. № Структура 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

[0123]

Таблица 2 Ссылочн. № Структура Ссылочн. № Структура 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24

[0124]

Таблица 3 Ссылочн. № Структура Ссылочн. № Структура 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34

[0125]

Таблица 4 Ссылочн. № Структура Ссылочн. № Структура 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44

[0126]

Таблица 5 Ссылочн. № Структура Ссылочн. № Структура 45 46 47 48 49 50 51 52

[0127]

Таблица 6 Ссылочн. № Структура Ссылочн. № Структура 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63

[0128]

Таблица 7 № примера Структура Физические данные 1 ¹H-ЯМР δ м.д. (ДМСО-d6): 1,00-3,00 (22H, м), 6,80-7,30 (4H, м), 7,50-7,90 (2H, м), 8,04 (1H, с), 8,30 (1H, с), 12,17 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 625 (M+H)⁺ 2 ¹H-ЯМР δ м.д. (ДМСО-d6): 0,90-2,90 (26H, м), 6,80-7,30 (4H, м), 7,55-7,95 (2H, м), 8,04(1H, с), 8,20-8,40 (1H, м),12,03 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 653 (M+H)⁺ 3 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 0,80-3,10 (24H, м), 6,75-7,30 (4H, м), 7,65 (2H, ушир.с), 7,77 (1H, ушир.с), 8,37 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 639(M+H)⁺ 4 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 0,80-2,80 (26H, м), 6,80-7,35 (4H, м), 7,67 (2H, ушир.с), 7,78 (1H, ушир.с), 8,39 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 653 (M+H)⁺ 5 ¹H-ЯМР δ м.д. (ДМСО-d6): 1,00-2,90 (21H, м), 3,20-3,90 (2H, м), 4,40-5,00 (1H, м), 6,90-7,35 (4H, м), 7,40-8, 15 (3H, м), 8,20-8,45 (1H, м), 12, 11 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 655 (M+H)⁺

[0129]

Таблица 8 № примера Структура Физические данные 6 ¹H-ЯМР δ м.д. (ДМСО-d6): 1,10-2,90 (24H, м), 6,90-7,35 (4H, м), 7,65-7,85 (2H, м), 8,04 (1H, с), 8,30 (1H, с)
МС (ESI-APCI, m/z): 655 (M+H)⁺ 7 ¹H-ЯМР м.д. (CDCl₃): 0,90-2,95 (24H, м), 6,75-7,35 (4H, м), 7,65 (2H, ушир.с), 7,77 (1H, с), 8,30-8,60 (1H, м)
МС (ESI-APCI, m/z): 651(M+H)⁺ 8 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 1,05-2,95 (24H, м), 6,80-7,35 (4H, м), 7,50-7,80 (3H, м)
МС (ESI-APCI, m/z): 664 (M+H)⁺ 9 ¹H-ЯМР δ м.д. (DМСO-d6): 1,00-2,90 (24H, м), 7,00-7,40 (5H, м), 7,70-7,90 (2H, м), 8,04 (1H, с), 8,25-8,35 (1H, м), 12,00 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 621 (M+H)⁺ 10 ¹H-ЯМР δ м.д. (DМСO-d6): 1,00-3,00 (26H, м), 6,90-7,30 (4H, м), 7,65-7,85 (2H, м), 8,04 (1H, с), 8,25-8,35 (1H, м), 12,03 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 653 (M+H)⁺

[0130]

Таблица 9 № примера Структура Физические данные 11 ¹H-ЯМР δ м.д. (ДМСО-d6): 1,05 (с, 6H), 1,10-2,80 (22H, м), 6,90-7,30 (4H, м), 7,65-7,85 (2H, м), 8,03 (1H, с), 8,30 (1H, с), 12,07 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 667 (M+H)⁺ 12 ¹H-ЯМР δ м.д. (DМСO-d6): 0,95 (с, 611), 1,00-3,20 (22H, м), 6,90-7,30 (4H, м), 7,65-7,85 (2H, м), 8,04 (1H, с), 8,36 (1H, с), 12,01 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 667 (M+H)⁺ 13 ¹H-ЯМР δ м.д. (ДМСО-d6): 0,90-2,80 (24H, м), 6,80-7,30 (4H, м), 7,60-7,90 (2H, м), 8,04 (1H, с), 8,30 (1H, с), 12,01 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 639 (M+H)⁺ 14 ¹H-ЯМР δ м.д. (DМСO-d6): 0,90-2,90 (24H, м), 6,80-7,40 (4H, м), 7,60-7,90 (2H, м), 8,04 (1H, с), 8,31 (1H, с), 11,99 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 639 (M+H)⁺ 15 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 1,16 (3H, с), 1,20-2,80 (23H, м),6,80-7,35 (4H, м), 7,66 (2H, ушир.с), 7,78 (1H, с), 8,46 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 653 (M+H)⁺

[0131]

Таблица 10 № примера Структура Физические данные 16 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 0,90-2,95 (24H, м), 6,85-7,40 (4H, м), 7,62 (1H, м), 7,72 (2H, м), 7,75 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 646 (M+H)⁺ 17 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 1,05-2,95 (24H, м), 6,80-7,25 (4H, м), 7,68 (1H, м), 7,74 (1H, м), 7,78 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 674 (M+H)⁺ 18 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 1,05-2,95 (27H, м), 6,90-7,25 (4H, м), 7,65 (1H, м), 7,69 (1H, м), 7,78 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 653 (M+H)⁺ 19 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 1,05-2,95 (25H, м), 4,40-4,50 (1H, м), 4,60-4,75(1H, м), 6,90-7,25 (4H, м), 7,61 (1H, м), 7,66 (1H, м), 7,79 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 669 (M+H)⁺

[0132]

Таблица 11 № примера Структура Физические данные 20 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 1,10-2,90 (24H, м), 6,85-7,25 (4H, м), 7,61 (1H, м), 7,69 (1H, м), 7,77 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 664 (M+H)⁺ 21 ¹H-ЯМР δ м.д. (CDCl₃): 1,20-2,95 (24H, м), 6,85-7,25 (4H, м), 7,62 (1H, м), 7,69 (1H, м), 7,77 (1H, ушир.с)
МС (ESI-APCI, m/z): 664 (M+H)⁺

[0133] Пример тестирования 1

Аффинность в отношении рецептора NK₁ человека

(1) Получение вектора экспрессии рецептора NK₁ человека

PCR выполняли с использованием cDNA нормальных тканей, полученных из мозга взрослого человека (BioChain) в качестве матрицы с прямым праймером SEQ ID NO:1 и обратным праймером SEQ ID NO:2, при использовании PCR-фермента, PrimeSTAR Max ДНК полимеразы или PrimeSTAR GXL ДНК-полимеразы (зарегистрированная торговая марка, Takara Bio). Амплифицированный продукт вставляли в плазмиду (pCR-BluntII-TOPO (зарегистрированная торговая марка), Life Technologies) с использованием набора для клонирования Zero Blunt PCR (зарегистрированная торговая марка, Life Technologies). Общим методом Escherichia coli (одна инъекция TOP10 компетентных клеток, Life Technologies) трансформировали плазмидой, в которую был вставлен амплифицированный продукт. Клетки Escherichia coli культивировали на агарозной среде LB, содержащей 50 мкг/мл канамицина, в течение дня. После культивирования, колонию собирали и культивировали в LB среде, содержащей 50 мкг/мл канамицина. После культивирования, плазмиду очищали с использованием набора для плазмид Quantum Prep Plasmid Miniprep (Bio-Rad). Полученную плазмиду дважды расщепляли в течение примерно двух часов с использованием ферментов рестрикции XhoI и HindIII (New England Biolabs). Затем проводили электрофорез с использованием 1% агарозного геля, и подвергнутый расщеплению фрагмент отделяли и очищали с использованием TaKaRa RICOCHIP (Takara Bio). Отдельно, плазмиду также очищали от Escherichia coli, которые были трансформированы вектором (pcDNA3.1(-) (зарегистрированная торговая марка), Life Technologies), и полученную плазмиду дважды расщепляли в течение примерно двух часов, с использованием ферментов рестрикции XhoI и HindIII (New England Biolabs). Затем проводили электрофорез с использованием 1% агарозного геля, и подвергнутый расщеплению вектор отделяли и очищали с использованием TaKaRa RICOCHIP (Takara Bio). Вырезанный фрагмент вектора pCR-Blunt-II и pcDNA3.1(-), обработанный ферментами рестрикции, лигировали с использованием набора для лигирования ДНК <Mighty Mix> (Takara Bio). Общим методом, Escherichia coli (одна инъекция TOP10 компетентных клеток, Life Technologies) трансформировали плазмидой, полученной лигированием. Клетки Escherichia coli культивировали в агарозной среде LB, содержащей 50 мкм/мл ампициллина, в течение дня. После культивирования, колонию собирали и культивировали в среде LB, содержащей 50 мкм/мл ампициллина, и затем полученную плазмиду очищали с использованием набора для плазмид Quantum Prep Plasmid Miniprep (Bio-Rad). Кодирующая белок нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:3) полученной плазмиды была полностью идентична нуклеотидной последовательности (NM_001058.3) тахикининового рецептора 1 человека (TACR1, NK₁R), зарегистрированного в известной базе данных (NCBI). Таким образом, было подтверждено, что последовательность клонированного гена представляла собой нуклеотидную последовательность рецептора NK₁ человека, и что аминокислотная последовательность, которая будет транслирована, является рецептором NK₁ человека. PcDNA3.1(-) (зарегистрированная торговая марка), в которую вставлена нуклеотидная последовательность SEQ ID NO:3, была использована в качестве плазмиды экспрессии рецептора NK₁ человека.

[0134] (2) Получение клеток, экспрессирующих рецептор NK₁ человека

(2-1) Культивирование клеток 293T

При использовании жидкой среды D-MEM (среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко) (низкий уровень глюкозы, содержащая L-глутамин, Wako Pure Chemical Industries), дополненной раствором антибиотиков пенициллина-стрептомицина (Life Technologies, конечная концентрация пенициллина 100 ед/мл и конечная концентрация стрептомицина 100 мкм/мл) и фетальной телячьей сывороткой (конечная концентрация 10%), клетки 293T (RIKEN) культивировали в инкубаторе в условиях 5% газа СО₂ при 37°С.

(2-2) Субкультивирование клеток 293T

Почти слившиеся клетки промывали PBS (забуференный фосфатом солевой раствор, Wako Pure Chemical Industries), разделяли с использованием 0,05% трипсина-EDTA (Life Technologies) и суспендировали в жидкой среде. Суспензию клеток разводили указанной выше жидкой средой таким образом, чтобы коэффициент пропорциональности составлял 1:10, и затем полученные клетки культивировали.

(2-3) Получение клеток, экспрессирующих рецептор NK₁ человека

Конфлюэнтные клетки промывали PBS, разделяли с использованием 0,05% трипсин-EDTA (Life Technologies) и суспендировали в жидкой среде D-MEM (низкий уровень глюкозы, содержащая L-глутамин, Wako Pure Chemical Industries), дополненной раствором антибиотиков пенициллина-стрептомицина (конечная концентрация 10%). Суспензию клеток разводили жидкой средой, и полученные клетки высевали в лунки 96-луночного микропланшета, покрытого поли-D-лизином (BD Biocoat (зарегистрированная торговая марка), Nippon Becton Dickinson) при плотности 5×10⁴ клеток/лунка и объеме жидкой среды 100 мкл/лунка. После высевания, клетки культивировали в инкубаторе в условиях 5% газа CO₂ при 37°C в течение примерно четырех-пяти часов, и таким образом получали клетки, трансфицированные с плазмидой экспрессии рецептора NK₁ человека.

(2-4) Трансфекция плазмиды экспрессии рецептора NK₁ человека в 293T клетки

Для трансфекции плазмиды экспрессии рецептора NK1 человека, использовали липофектамин 2000 (зарегистрированная торговая марка, Life Technologies). Плазмиду экспрессии рецептора NK₁ человека разводили в среде Opti-MEM ((зарегистрированная торговая марка) I среда со сниженным содержанием сыворотки (Reduced-Serum Medium (Life Technologies)) до конечной концентрации 0,2 мкг/25 мкл/лунка. В это же самое время, разводили липофектамин 2000 (зарегистрированная торговая марка, Life Technologies) в среде Opti-MEM ((зарегистрированная торговая марка) I Reduced-Serum Medium (Life Technologies)) до конечной концентрации 0,4 мкл/25 мкл/лунка и инкубировали при комнатной температуре в течение пяти минут. Спустя пять минут, для формирования комплекса плазмида экспрессии рецептора NK₁ человека/липофектамин 2000, разведенную плазмиду экспрессии рецептора NK1 человека и разведенный липофектамин 2000 смешивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 20-25 минут. После инкубации, 50 мкл/лунка раствора комплекса добавляли к клеткам для трансфекции плазмиды экспрессии рецептора NK₁ человека, и полученные клетки культивировали в инкубаторе в условиях 5% газа CO₂ при 37°C в течение примерно 48 часов. Культивированные в течение 48 часов клетки использовали для анализов в качестве клеток, экспрессирующих рецептор NK₁ человека.

[0135] (3) Измерение аффинности связывания рецептора NK₁ человека

(3-1) Получение фракции мембран для клеток, экспрессирующих рецептор NK₁ человека

Клетки, экспрессирующие рецептор NK₁ человека, получали в 175 см² колбе для культивирования (Nippon Becton Dickinson). Формирование комплекса плазмиды экспрессии рецептора NK₁ человека и липофектамина 2000 осуществляли путем вычисления соотношения площади культуры и увеличивая масштаба метода, описанного выше в 2-4, по соотношению. Клетки, экспрессирующие рецептор NK₁ человека, собирали в буферный раствор для получения фракции мембран (50 мМ Tris (Wako Pure Chemical), 120 мМ хлорид натрия (Wako Pure Chemical Industries), 5 мМ хлорид калия (Wako Pure Chemical Industries), 1 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (Sigma), 0,002 мг/мл химостатин (Peptide Institute), 0,04 мг/ бацитрацин (Wako Pure Chemical Industries), 0,005 мг/мл фосфорамидон (Peptide Institute) и 0,5 мМ феннилметилсульфонилфторид (Wako Pure Chemical Industries), pH7,4) и центрифугировали при 1880 g в течение 10 минут, и осажденные клетки суспендировали в буферном растворе, с получением фракции мембран. После однократного замораживания и отмораживания клеток, полученные клетки гомогенизировали с использованием гомогенизатора типа Dounce (охлажденные на льду, 1000 об/мин, 20 раз). Суспензию гомогенизированных клеток центрифугировали при 20000 об/мин в течение 10 минут, и супернатант удаляли, с получением осажденных клеток. Осадок клеток снова суспендировали в буферном растворе, с получением фракции мембран, и гомогенизировали с использованием гомогенизатора типа Dounce (охлаждение на льду, 1000 об/мин, 30 раз). Суспензию клеток центрифугировали при 20000 об/мин в течение 10 минут, и супернатант удаляли, с получением осажденных клеток. Такую же гомогенизацию и центрифугирование снова повторяли, и получали конечный клеточный осадок. Конечный клеточный осадок суспендировали в буферном растворе для теста на связывание рецептора (50 мМ Tris (Wako Pure Chemical Industries), 3 мМ хлорид магния (Wako Pure Chemical Industries), 0,002 мг/мл химостатин (Peptide Institute), 0,04 мг/мл бацитрацин (Wako Pure Chemical Industries) и 0,02% бычий сывороточный альбумин (Sigma), pH 7,4), и измеряли концентрацию белка с использованием набора для анализа белка BCA Protein Assay (Pierce).

(3-2) Тест на связывание рецептора

Буферный раствор для теста на связывание рецептора распределяли в лунки 96-луночного планшета для анализов (Greiner) при 22,5 мкл/лунка. ДМСО растворы тестируемого соединения, которые получали в 80-кратной повышенной концентрации при использовании 100% диметилсульфоксида (ДМСО), добавляли в лунки при 2,5 мкл/лунка (при конечных концентрациях от 1 нм до 100 нм), и полученные растворы смешивали. В качестве радиомеченного лиганда использовали ¹²⁵I-вещество P (вещество P, [¹²⁵I]Tyr⁸-, PerkinElmer). ¹²⁵I-вещество P разводили в среде буферного раствора для теста на связывание рецептора до конечной концентрации 125 пмоль/25 мкл/лунка и добавляли в 96-луночный планшет для анализов, и полученные растворы смешивали. Полученную фракцию мембран из клеток, экспрессирующих рецептор NK₁ человека, разводили в среде буферного раствора для теста на связывание рецептора до конечной концентрации 8-10 мкг/лунка, суспендировали до тех пор, пока суспензия не становилась гомогенной до такого состояния, при котором суспензия плавно проходила через инъекционную иглу 27G, и затем добавляли в 96-луночный планшет для анализов при 150 мкл/лунка. Затем планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут при встряхивании планшета. Полученные реакционные растворы фильтровали при всасывании через многоэкранный фильтр для 96-луночных планшетов (Millipore), который был предварительно обработан 0,3% полиэтиленимином, и реакцию заканчивали промывкой раствором для промывания (50 мМ Tris и 0,02% бычий сывороточный альбумин, pH 7,4) четыре раза. Дно микропланшета сушили при 60°C, и затем распределяли по 100 мкл/лунка MicroScint 20 (PerkinElmer) в лунки. Верхнюю часть планшета герметизировали TopSeal A (PerkinElmer), и планшет встряхивали в течение 5-10 минут. Затем радиоактивность измеряли при помощи TopCount NXT (зарегистрированная торговая марка) (PerkinElmer). Радиоактивность каждой лунки рассчитывали путем вычитания радиоактивности лунки, в которую добавляли 10 мкм апрепитант (неспецифическое связывание). Вычисляли уровень связывания по уравнению:

Уровень связывания (%) ¹²⁵I-вещества P=(радиоактивность группы, к которой добавляли тестируемое соединение)/(радиоактивность группы, к которой добавляли носитель)×100.

При использовании программного обеспечения для анализа, GraphPad Prism (GraphPad Software), строили график зависимости уровня связывания (%) от концентрации тестируемого соединения, производя приблизительный линейный расчет, и рассчитывали концентрацию, необходимую для 50% ингибирования, IC₅₀. Результаты показаны в таблицах 12 и 13. В данных таблицах № примера обозначает номер примера, и IC₅₀ (нм) обозначает концентрацию, необходимую для 50% ингибирования.

(4) Результаты

[0136]

Таблица 12 № примера IC₅₀ (нМ) 1 1,45 2 1,78 3 2,10 4 2,35 5 0,98 6 1,00 7 1,63 8 4,01 9 2,35 10 2,79 11 6,75 12 4,46 13 1,62 14 2,21

[0137]

Таблица 13 № примера IC₅₀ (нМ) 16 2,78 17 5,51 18 6,45 19 4,96 20 3,27 21 2,36

Как показано в таблицах 12 и 13, было продемонстрировано, что соединения настоящего изобретения проявляют высокую аффинность связывания в отношении рецептора NK₁ человека.

[0138] Пример тестирования 2

Ингибирующий эффект на рецептор NK₁ человека

(1) Получение клеток, экспрессирующих рецептор NK₁ человека

Клетки, экспрессирующие рецептор NK₁ человека, получали по методике, аналогично описанной в 2-3 примера тестирования 1.

[0139] (2) Исследование ингибирующего эффекта на увеличение концентрации внутриклеточного кальция

Клетки, экспрессирующие рецептор NK1 человека, промывали 300 мкл/лунка раствора для промывки (20 мМ HEPES/сбалансированный солевой раствор Хэнка (HBSS) pH 7,3). Флуоресцентный индикатор кальция (набор для анализа кальция Fluo-4 Direct Calcium Assay, Life Technologies, содержащий 0,42 мМ пробенецид и 0,1% бычий сывороточный альбумин, полученный согласно протоколу производителя) добавляли в лунки при 150 мкл/лунка, и планшет инкубировали при 37°C в течение 30 минут в инкубаторе. Затем ДМСО растворы тестируемого соединения, которые получали при 80-кратной повышенной концентрации с использованием 100% диметилсульфоксида (ДМСО), добавляли в лунки при 2,5 мкл/лунка (при конечных концентрациях 0,1, 1 и 10 мкм), и полученные растворы смешивали. Затем планшет дополнительно инкубировали при 37°C в течение 30 минут в инкубаторе. Спустя 30 минут, сразу измеряли внутриклеточную концентрацию кальция.

Внутриклеточную концентрацию кальция каждый раз измеряли в виде флуоресцентного сигнала при использовании FDSS (зарегистрированная торговая марка) 7000 (Hamamatsu Photonics). Раствор вещества P (Peptide Institute, Inc.), который получали при 0,4 мкм или 4 мкм с использованием буфера для анализа (20 мМ HEPES/сбалансированный солевой раствор Хэнка (HBSS) pH 7,3, содержащий 0,1% бычий сывороточный альбумин) автоматически добавляли в каждую лунку при 50 мкл/лунка (конечная концентрация 0,1 или 1 мкм) через 10 секунд после начала считывания, и измеряли флуоресцентный сигнал до 120 секунд.

Концентрации внутриклеточного кальция (%) клеток, к которым добавляли тестируемое соединение, рассчитывали с помощью уравнения ниже, где флуоресцентный сигнал группы, к которой добавляли носитель (ДМСО) принимался за 100%, и флуоресцентный сигнал перед добавлением вещества P принимался за 0%.

Концентрации внутриклеточного кальция (%)=(Флуоресцентный сигнал группы с добавленным тестируемым соединением)/(Флуоресцентный сигнал группы с добавленным носителем)×100

Внутриклеточную концентрацию кальция (%) рассматривали как оставшуюся агонистическую активность вещества P (вещество P-остаточный ответ: SPRR). Результаты показаны в таблицах 14 и 15. В данных таблицах № примера обозначает номер примера. SPRR (%) является значением, полученным, когда концентрация вещества P составляла 1 мкм, и концентрация соединения составляла 0,1 мкм.

(3) Результаты

[0140]

Таблица 14 № примера SPRR (%) 1 20 2 7,5 3 36 4 57 5 26 6 21 7 9,4 8 31 9 42 10 8,6 11 5,4 12 53 13 5,1 14 22 15 3,7

[0141]

Таблица 15 № примера SPRR (%) 16 37 19 26 20 2,8 21 36

Как показано в таблицах 14 и 15, было продемонстрировано, что соединения настоящего изобретения проявляют мощную антагонистическую активность в отношении рецептора NK₁ человека.

[0142] Пример тестирования 3

Ингибирующий эффект на CYP3A4

Получали диметилсульфоксидный (ДМСО) раствор тестируемого соединения с концентрацией в 1000 раз выше, чем оцененная выше концентрация, и реакционный раствор получали разведением данного раствора. Ферментативную реакцию осуществляли путем инкубации в забуференном фосфатом калиевом растворе (pH 7,4), содержащем от 1 нм до 20 мкм тестируемого соединения, 3,2 мМ хлорида магния, 0,2 пмоль CYP3A4 человека (BD Biosciences), 0,5 мМ восстановленный никотинамид-аденин-динуклеотидфосфат (NADPH) и 3 мкм люцефирин-IPA (Promega) при 37°C в течение 10 минут. Объем раствора реакции составлял 50 мкл/лунка. Группу с 30-минутным предварительным инкубированием инкубировали при 37°C в течение 30 минут перед добавлением субстрата, раствора люцефирин-IPA (12,5 мкл/лунка). В конце ферментативной реакции в лунки добавляли 50 мкл/лунка реагента детектирования люцефирина (Promega), и планшет оставляли при комнатной температуре на 20 минут. Затем измеряли интенсивность испускания при помощи Infinite M1000 (TECAN). Рассчитывали ферментативную активность (%) по отношению к группе, к которой не было добавлено тестируемое соединение. Строили кривую доза-ответ с использованием программного обеспечения для анализа, GraphPad Prism (GraphPad Software), и рассчитывали концентрацию каждого соединения, которое проявляет 50% ингибирование, IC₅₀. В качестве сравнительного примера таким же образом испытывали также апрепитант, который является антагонистом рецепторов NK₁.

Значения IC₅₀ для подвергшихся 30-минутной предварительной инкубации групп с использованием тестируемых соединений измеряли описанным выше методом измерения, и результаты показаны в таблицах 16 и 17. В данных таблицах № примера обозначает номер примера, и IC₅₀ (мкм) обозначает концентрацию, необходимую для 50% ингибирования.

[0143]

Таблица 16 № примера IC₅₀ (мкМ) 1 13 2 6,8 3 9,4 4 7,1 5 13 6 6,1 7 11 8 6,1 9 6,9 10 11 11 2,7 12 2,2 13 8,2 14 7,5 Апрепитант 0,02

[0144]

Таблица 17 № примера IC₅₀ (мкМ) 16 3,1 17 3,3 18 4,9 20 5,5 21 4,2

Как показано в таблице 16 и 17, было продемонстрировано, что CYP3A4 ингибирующая активность соединений настоящего изобретения снижена по сравнению с апрепитантом. Таким образом, ожидается, что соединения настоящего изобретения проявляют меньше межлекарственных взаимодействий, основанных на ингибирующем эффекте на CYP3A4, чем апрепитант.

[0145] Пример тестирования 4

Воздействие на постукивание лап

(1) Воздействие на постукивание лап

Раствор тестируемого соединения получали растворением тестируемого соединения в носителе (смесь 50% N,N-диметилацетамида (Wako Pure Chemical Industries), 30% пропиленгликоля (Wako Pure Chemical Industries), 4% 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина (Wako Pure Chemical Industries) и 16% дистиллированной воды).

Самцов песчанки (Япония SLC) анестезировали изофлюраном и вводили 0,1 мг/кг тестируемого соединения через яремную вену. Спустя четыре часа, GR73632 (5 пмоль/5 мкл физиологического раствора), который является агонистом рецепторов NK₁, вводили в желудочек головного мозга через латеральную часть 1 мм и 4,5 мм ниже брегмы под изофлюрановой анестезией. После введения, песчанок переносили в клетку наблюдения, и измеряли период постукивания лап через 30 минут после восстановления рефлекса переворачивания. Скорость торможения постукивания лап (%) для каждого тестируемого соединения рассчитывали по следующей формуле:

Скорость торможения постукивания лап (%)={1-(Период постукивания лап при введении тестируемого соединения)/(Период постукивания лап при введении растворителя)}×100

[0146] (2) Измерение концентраций лекарственного средства

После того, как постукивание лап было закончено, сразу проводили лапаротомию под эфирным наркозом, и отбирали образец крови из брюшной полой вены. В то же самое время, экстрагировали головной мозг. Посредством количественного анализа с использованием жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ/МС), измеряли концентрации тестируемого соединения в плазме и головном мозге.

(3) Результаты

Воздействие на постукивание лап измеряли по методике приведенного выше тестирования, и результаты показаны в таблицах 18 и 19. В данных таблицах № примера обозначает номер примера. Ингибирование (%) обозначает скорость торможения постукивания лап, и концентр. (нм) обозначает концентрацию лекарственного средства в головном мозге.

[0147]

Таблица 18 № примера Ингибирование (%) Концентр. (нМ) 1 98 24 2 100 19 3 100 48 4 77 35 7 90 24 8 100 59 9 75 47 10 97 42 11 95 72 13 100 51 14 99 40 15 100 39

[0148]

Таблица 19 № примера Ингибирование (%) Концентр. (нМ) 16 93 64 17 96 57 18 100 47 19 95 24 20 100 92 21 100 92

Как показано в таблице 18 и 19, соединения настоящего изобретения проникали в центральную нервную систему, а также проявляли отличную антагонистическую активность в отношении рецепторов NK₁ in vivo.

[0149] Пример тестирования 5

Фармакокинетический тест на хорьках

(1) Методики

Раствор тестируемого соединения для внутривенного введения получали растворением тестируемого соединения в носителе (смесь 50% N,N-диметилацетамида (Wako Pure Chemical Industries), 30% пропиленгликоля (Wako Pure Chemical Industries), 4% 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина (Wako Pure Chemical Industries) и 16% дистиллированной воды). В качестве раствора для перорального введения использовали суспензию (0,5% метилцеллюлоза).

При анестезии изофлюраном, внутривенно вводили 0,1 мг/кг тестируемого соединения самцам хорьков (Marshall BioResources Japan) через бедренную вену. В случае перорального введения, 1 мг/кг тестируемого соединения перорально вводили животным, находящимся в активном состоянии. После введения тестируемого соединения, последовательно отбирали образцы крови из плечевой вены вплоть до 7 дней после введения. С помощью количественного анализа с использованием жидкостной хроматографии-масс спектрометрии (ЖХ/МС), измеряли концентрации тестируемого соединения в плазме.

(2) Результаты

Фармакокинетический тест на хорьках был проведен по методике приведенного выше тестирования, и результаты показаны в таблицах 20 и 21. В указанных таблицах № примера обозначает номер примера. t_1/2, CL_tot и V_ss обозначают период полувыведения, общий клиренс организма и объем устойчивого состояния распределения, на основе концентрации в плазме в случае внутривенного введения, соответственно. C_max, AUC и BA обозначают максимальную концентрацию тестируемого соединения в плазме, площадь под кривой концентрация тестируемого соединения в плазе-время в течение 7 дней после введения и биодоступность, в случае перорального введения, соответственно.

[0150]

Таблица 20 № примера T_1/2 (мин) CL_tot (мл/мин/кг) V_ss (мл/кг) 13 2,489 0,13 401

[0151]

Таблица 21 № примера C_max (нг/мл) AUC (нг*мин/мл) BA (%) 13 1,258 5,294, 066 66

Как показано в таблице 20 и таблице 21, соединение настоящего изобретения проявляет великолепную пероральную всасываемость с низким клиренсом.

[0152] Пример тестирования 6

Воздействие на острый и задержанный рвотный ответ, индуцированный цисплатином

(1) Методики

Раствор тестируемого соединения получали растворением тестируемого соединения в носителе (смесь 50% N,N-диметилацетамида (Wako Pure Chemical Industries), 30% пропиленгликоля (Wako Pure Chemical Industries), 4% 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина (Wako Pure Chemical Industries) и 16% дистиллированной воды). Контрольной группе вводили только носитель.

При анестезии изофлюраном, самцам хорьков внутривенно вводили 0,01 мг/кг и 0,1 мг/кг тестируемого соединения (Marshall BioResources Japan) через яремную вену. Цисплатин в физиологическом растворе, который был нагрет до 40-50°C, внутрибрюшинно вводили при 5 мг/кг через один час после введения лекарственного средства. За хорьками наблюдали в течение 72 часов сразу после введения цисплатина, и подсчитывали число рвотных позывов (периодическое сужение брюшины без рвоты содержимого желудка) и рвоты.

(2) Результаты

Результаты показаны на фиг.1. В контрольной группе увеличение числа рвотных позывов и рвоты был замечен в острой фазе (до 24 часов после приема цисплатина) и в фазе с задержкой (от 24 часов до 72 часов после приема цисплатин). В группе, которой соединение примера 13 вводили внутривенно, ингибирование числа рвотных позывов и рвоты наблюдалось в острой фазе и в фазе с задержкой.

Было продемонстрировано, что соединение настоящего изобретения имеет лечебный эффект длительного действия и ингибирующий эффект на острый и с задержкой рвотный ответ, индуцированный цисплатином.

[0153] Пример тестирования 7

Оценка тока калиевых каналов hERG

(1) Методики

Получали диметилсульфоксидный (ДМСО) раствор тестируемого соединения с концентрацией в 1000 раз выше, чем оцененная концентрация (10 мкм), и раствор применяемой конечной концентрации получали разведением данного раствора. Ток калиевых каналов hERG измеряли методом цельных клеток с использованием системы пэтч-клемпа, по которой стеклянную крышку, на которой высеяны экспрессирующие hERG каналы клетки почки эмбриона человека (HEK) 293Т, помещали в перфузионную камеру, и перфузионный раствор приводили в движущийся поток. Измеряли изменение тока калиевых каналов hERG, вызванных по импульсному протоколу (исходный потенциал -80 мВ, импульс деполяризации +20 мВ на 1,9 секунд, импульс реполяризации -50 мВ в течение 2 секунд, стимулируется каждые 15 секунд), с использованием программного обеспечения для сбора/анализа данных, pCLAMP9 (Axon Instruments, Inc.). Условиями измерения были скорость потока около 1,5 мл/мин и температура около 33°C. Две волновые формы непосредственно перед применением тестируемого соединения и две волновые формы сразу после применения в течение 10 минут анализировали и проводили статистический анализ. Значение перед применением тестируемого соединения принимали за 100%, и определяли изменение скорости на основе полученного значения.

(2) Результаты

Оценивали воздействие тестируемого соединения на ток калиевых каналов hERG по приведенной выше методике (результаты показаны в таблице 22). В данной таблице № примера обозначает номер примера, и изменение скорости приведено как среднее±стандартная ошибка.

[0154]

Таблица 22 № примера (%) (n=3) 13 81,1±5,6 14 80,3±3,9

Соединение настоящего изобретения не вызывает каких-либо изменений в токе калиевых каналов hERG со статистической значимостью по сравнению с контрольным носителем (0,1% ДМСО).

Промышленная применимость

[0155] Соединения настоящего изобретения или их фармацевтически приемлемые соли обладают великолепной антагонистической активностью в отношении рецептора NK₁ и, таким образом, полезны в качестве средства для профилактики или лечения тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией.

Перечень последовательностей в виде свободного текста

[0156] <Перечень последовательностей 1>

SEQ ID NO:1 представляет собой последовательность прямого праймера, который используется для амплификации ДНК SEQ ID NO:3.

<Перечень последовательностей 2>

SEQ ID NO:2 представляет собой последовательность обратного праймера, который используется для амплификации ДНК SEQ ID NO:3.

Изобретение относится к соединению формулы (I):

[Хим. формула 1]

,

где кольцо А является группой, представленной следующей формулой: [Хим. формула 2]

или ,

X представляет собой атом водорода, циано, галоген, C_1-6алкил или гидроксиметил; R¹ является группой, представленной следующей формулой: [Хим. формула 3]

или ,

где R^1a и R^1b, каждый независимо друг от друга, представляет собой атом водорода или C_1-6алкил; m равен 0, 1 или 2; когда m равен 2, тогда R^1a и R^1b необязательно отличаются друг от друга; R² представляет собой C_1-6алкил или гидроксигруппу; U является группой, представленной следующей формулой: [Хим. формула 4]

,

где R^3a и R^3b, каждый независимо, представляет собой атом водорода, C_1-6алкил или гидроксиC_1-6алкил; Y равен 0 или 1; или его фармацевтически приемлемым солям, которые обладают антагонистической активностью в отношении рецептора NK₁. 9 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 22 табл., 7 пр.

1. Соединение, представленное формулой (I):

[Хим. формула 1]

,

где кольцо А является группой, представленной следующей формулой:

[Хим. формула 2]

или ,

X представляет собой атом водорода, циано, галоген, C_1-6алкил или гидроксиметил;

R¹ является группой, представленной следующей формулой:

[Хим. формула 3]

или ,

где R^1a и R^1b, каждый независимо друг от друга, представляет собой атом водорода или C_1-6алкил;

m равен 0, 1 или 2;

когда m равен 2, тогда R^1a и R^1b необязательно отличаются друг от друга;

R² представляет собой C_1-6алкил или гидроксигруппу;

U является группой, представленной следующей формулой:

[Хим. формула 4]

,

где R^3a и R^3b, каждый независимо, представляет собой атом водорода, C_1-6алкил или гидроксиC_1-6алкил;

Y равен 0 или 1;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение, представленное формулой (Ia), по п.1:

[Хим. формула 5]

,

где кольцо A и X имеют такие же значения, как определено в п.1;

R^1c и R^1d, каждый независимо, представляет собой атом водорода или метил;

U¹ является группой, представленной следующей формулой:

[Хим. формула 6]

,

в которой

R^3c и R^3d, каждый независимо, представляет собой атом водорода, метил или гидроксиметил;

n равен 0, 1 или 2;

когда n равен 2, тогда R^1c и R^1d необязательно отличаются друг от друга;

или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение, представленное формулой (Ib), по п.2:

[Хим. формула 7]

,

где R^1c и R^1d имеют такие же значения, как определено в п.2,

или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение, представленное следующей формулой:

[Хим. формула 8]

,

или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Соединение, представленное следующей формулой:

[Хим. формула 9]

,

или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Соединение, представленное следующей формулой:

[Хим. формула 10]

,

или его фармацевтически приемлемая соль.

7. Соединение, представленное следующей формулой:

[Хим. формула 11]

,

или его фармацевтически приемлемая соль.

8. Соединение, представленное следующей формулой:

[Хим. формула 12]

,

или его фармацевтически приемлемая соль.

9. Соединение, представленное следующей формулой:

[Хим. формула 13]

,

или его фармацевтически приемлемая соль.

10. Соединение, представленное следующей формулой:

[Хим. формула 14]

,

или его фармацевтически приемлемая соль.

11. Фармацевтическая композиция, обладающая антагонистической активностью относительно рецептора NK₁, содержащая в качестве активного ингредиента соединение по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемую соль.

12. Фармацевтическая композиция по п.11 для применения при предупреждении тошноты и рвоты, вызванных противораковой химиотерапией.