СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИСПИРОИНДОЛИНОНОВ Российский патент 2019 года по МПК C07D487/20 

Область техники

Настоящее изобретение относится к области органической и медицинской химии, а также молекулярной биологии и касается новых соединений биологически активных веществ с улучшенными значениями цитотоксичности - ингибиторов белок-белкового взаимодействия MDM2/p53 и способа их получения, которые могут быть использованы в качестве активных компонентов для фармацевтических композиций и лекарственных средств для лечения онкологических заболеваний.

Уровень техники

Последние несколько лет наблюдается повышенный интерес к поиску непептидных низкомолекулярных соединений способных препятствовать взаимодействию клеточных белков p53-MDM2. Белок р53 является опухолевым супрессором, играющим важную роль в жизненном цикле клетки и апоптозе, а MDM2 - его эндогенный ингибитор [Wu X., Bayle J.Н., Olson D., Levine A.J., Genes DeV., 1993, 7, 1126; Vogelstein В., Lane D., Levine A.J., Nature, 2000, 408, 307]. Если блокировать взаимодействие этих белков, то высвобождающийся р53 активирует процесс разрушения опухоли, что является новым направлением в терапии раковых заболеваний. Как известно, нарушение взаимодействия p53-MDM2 сопутствует большинству онкологических заболеваний [Hock, А. & Vousden, K.Н. Regulation of the р53 pathway by ubiquitin and related proteins. Int. J. Biochem. Cell Biol. 42, 1618-1621 (2010)], а повышенная концентрация белка MDM2 присутствует в 80% раковых клеток [Vogelstein, В., Lane, D. & Levine, A.J. Surfing the p53 network. Nature 408, 307-310 (2000)].

Алкалоиды спиро-оксиндольного типа были впервые выделены из растений семейств Apocynaceae и Rubiacae [Galliford, С.V.; Scheidt, K.A. Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 8748]. Ключевой особенностью этих соединений является наличие индолинонового спиросодержащего фрагмента с различными заместителями в фрагментах пирролидина и индолинона.

Известные биологически активные производные 2-арилиден-гидантоинов являются гетероциклическими соединениями с многообещающей противоопухолевой активностью [Jung, М.Е.; Ouk, S.; Yoo, D.; Sawyers, С.L.; Chen, С; Tran, С; Wongvipat, J. J. Med. Chem. 2010, 53, 2779], [Sawyers, C.L. U.S. Patent 8658681 B2, 2014]. Эти соединения также могут быть использованы в качестве удобных отправных точек или промежуточных продуктов в синтезе широкого спектра структурно различных природных продуктов [Lanman, В.А.; Overman, L.Е.; Paulini, R.; White, N.S. J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 12896].

Так, известны соединения и способы их получения такие как, A1 (Sanofi) [Allen, J.G. et al. Discovery and optimization of chromenotriazolopyrimidines as potent inhibitors of the mouse double minute 2-tumor protein 53 protein-protein interaction. J. Med. Chem. 52, 7044-7053 (2009)], RD-37 (University of California) [Wassman, C.D. et al. Computational identification of a transiently open L1/S3 pocket for reactivation of mutant p53. Nature Commun. 4, 1407 (2013)] со значением IC₅₀=124 нМ на клетках LNCaP, А2 (University of Debrecen) [Noguchi, T. et al. Affinity-based screening of MDM2/MDMX-p53 interaction inhibitors by chemical array: identification of novel peptidic inhibitors. Bioorg. Med. Chem. Lett. 23, 3802-3805 (2013)] со значением IC₅₀<1 мМ на клетках Hep G2, A3 (Johnson & Johnson) [Vu, В. et al. Discovery of RG7112: a small-molecule MDM2 inhibitor in clinical development. ACS Med. Chem. Lett. 4, 466-469 (2013)]. Получение данных производных, на примере соединения A3, возможно из ацилированных 1-дезокси-β-D-глюкопиразонил цианидов путем первоначального радикального бромирования с получением соответствующих бром-производных, в последующим их восстановлением до амидов с использованием TiCl₄ в системе вода-уксусная кислота. После хроматографической очистки продукт вводили в реакцию с незамещенным тиогидантоином в присутствии 4-х эквивалентов цианата серебра или калия, в нитрометане при температуре 80°С. Побочно наблюдали образование гидроксиамида в соотношении с целевым продуктом 1:2.

Основными недостатками способа получения данных соединений является трудоемкий способ синтеза конечных соединений, использование больших количеств высокотоксичных реагентов и элюэнтов при синтезе и очистке, инертных атмосфер, в некоторых случаях при синтезе оптически-активных соединений необходимо использование дорогостоящих неорганических катализаторов, также являющихся токсичными. На некоторых из стадий авторам удавалось выделить Целевые продукты с выходами 4-20%. Также нежелательным является и использование в синтезе радикальных реакций, поскольку в этом случае в смеси наблюдаются не только продукты моно-бромирования, что значительно понижает общий выход и эффективность реакции.

Из уровня техники известен способ получения ряда спиро-индолинонов с перспективной противоопухолевой активностью (например, B1 - В6). Эти соединения были представлены как высокоактивные ингибиторы белок-белкового взаимодействия (PPI) MDM2/p53 [Liu, Jin-Jun; et al World Intellectual Property Organization, WO 2008055812 A1 2008-05-15]. Получение данных производных, на примере соединения В1, возможно из соответствующего рацемического (1R,2S)-6'-хлор-2-(3-хлорфенил)спиро[5-циклогексен-1,3'-[3Н]индол]-2',4(1'H)-диона, CuCl, Ph₃P и фенилмагний бромида в атмосфере аргона в абсолютном ТГФ при 0°С. После экстракции и отделения органической фазы из смеси были выделены два изомера, которые далее были разделены на хиральной колонке. Основными недостатками получаемых производных являются сложный путь синтеза исходного рацемического (1R,2S)-6'-хлор-2-(3-хлорфенил)спиро[5-циклогексен-1,3'-[3Н]индол]-2',4(1'H)-диона, использование дорогостоящих хиральных колонок и токсичных органических растворителей при очистке.

Из уровня техники известен способ получения соединений, содержащих в своей структуре один спиро фрагмент, например, серия MI-43 или ISA-27, которые в настоящее время проходят доклинические испытания и, заключающийся в первоначальной конденсации ароматического альдегида с бензилцианидами, дальнейшей циклизацией совместно с третбутиловым эфиром енамина в присутствии фторида серебра и триметиламина, гидролизом сложного эфира в трифторуксусной кислоте, дальнейшим разделением энантиомеров на хиральной колонке и конденсацией с 2-метокси-4-карбоксианилином совместно с дифенилфосфинил хлоридом. В ходе дальнейших реакций оптимизации стереохимии, замещения бензольных колец на алкильные цепочки, введения амидных связей с подбором алициклического фрагмента была получена целевая структура соединения MI-43 или ISA-27 [Gomez-Monterrey, I.; Bertamino, A.; Porta, A.; et al. J. Med. Chem. 2010, 53, 8319]. MI-43 в настоящее время находится в Фазе I клинических испытаний против рака [http://clinicaltrials.gov/show/NCT01636479]. Основными недостатками способа получения данных соединений является длительный и трудоемкий способ синтеза конечных соединений, включающий более 15 стадий, а также необходимость разделения хиральных препаратов на дорогостоящих оптически-активных препаративных колонках и использование при этом больших объемов токсичных элюэнтов и растворителей.

Также, Daiichi Sankyo сообщает о высоко активных ингибиторах белок-белкового взаимодействия MDM2/p53 со значениями IC₅₀ в диапазоне от 24.1 нМ до 181 мкМ [Zhao, Y.; Liu, L.; Sun, W.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2013, 135, 7223]. Диспиро аналоги среди данных соединений описаны более слабо и включают арил-замещенный (3''R)-4,4-диметилдиспиро[циклогексан-1,2'-пирролидин-3',3''-индол]-2''(1''H)-он В6 [Sugimoto, Y. U.S. 20130165424 А9, 2012]. Эти агенты ингибируют белок-белковое взаимодействие MDM2/p53 со значениями IC₅₀ в диапазоне 0.001-0.05 мкМ и являются ингибиторами р53-MDM2 взаимодействия. На первом этапе синтеза целевого соединения была проведена конденсация 5-замещенного изатина с этиловым эфиром цистеина при помощи микроволнового излучения, на следующем этапе с использованием тиофосгена и триэтиламина и последующим введением производного анилина. Далее, полученное диспиропроизводное ацилировали по атому азота изатина и выделяли нужный изомер на препаративной хиральной колонке. Основными недостатками метода получения данных соединений являются сложный и длительный путь синтеза конечных препаратов, необходимость дополнительных очисток и перекристаллизаций с использованием токсичных растворителей, необходимость использования дорогостоящей препаративной колонки, а также ряд побочных эффектов самих соединений.

Наиболее близкими к заявляемому является способ получения диспиропроизводных соединений на основе 2-тиогидантоинов, являющихся ингибиторами p53-MDM2 взаимодействия, заключающийся в трехкомпонентной реакции 1,3-диполярного циклоприсоединения с изатином, саркозином и 2-тиогидантоином [(1) Yan A. Ivanenkov, et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 25, 2, 2015, 404; (2) Белоглазкина E.К., Белоглазкина A.A. Кукушкин M.E., Мажуга А.Г, Иваненков Я.А. Номер заявки ФИПС 2015113026/04(020403) от 09.04.2015]. Однако, в способе используются эквимолярные соотношения компонентов, все компоненты загружают в реактор и кипятят одновременно. Полученные таким образом соединения обладают низкой цитотоксичностью (около 20 мкМ) и селективностью, а также способ характеризуется низкими выходами (30-60%) соединений. Для всех соединений обсуждается только различные значения по цитотоксичности на клеточных линиях рака простаты LNCap и РС3, отсутствует информация об общей токсичности, а также данные по цитотоксичности на клеточных линиях одной морфологии HCTwt и НСТ-/-.

Раскрытие изобретения

Задачей настоящего изобретения является разработка способа получения низкомолекулярных ингибиторов белок-белкового взаимодействия MDM2/p53.

Техническим результатом заявляемого изобретения является получение диспиропроизводных на основе 5-арилиден-2-тиоксо-имидазолин-4-онов и 5-арилиден-2-оксо-имидазолин-4-онов позволяет получить соединения с более высокими выходами (не менее 62% по сравнению с 30-60%). Также полученые оксодиспиропроизводные на основе 5-арилиден-2-тиоксо-имидазолин-4-онов и 5-арилиден-2-оксо-имидазолин-4-онов, являющихся ингибиторами белок-белкового взаимодействия MDM2/p53 обладают высокой активностью и селективностью действия в отношении клеток экспрессирующих белок р53 как одной морфологии (HCTwt и НСТ-/-.), так и разной (LNCap и РС3). Данное свойство позволяет использовать активный компонент для лечения заболеваний, связанных с нарушением активности белка р53, с меньшей дозировкой при избирательном действии на раковые клетки, не затрагивая при этом здоровые клетки. При этом, полученные заявляемым способом соединения обладают низкой общей токсичностью, о чем свидетельствует отсутствие активности на клеточной линии здоровых клеток фибробластов легких человека VA13.

Поставленная задача решается способом получения диспиро-индолинонов общей формулы 1:

где X S или О, R1 выбран из группы, включающей водород, фенил, фенил, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из атома галогена (фтор, хлор, бром), гидрокси-, низшей алкокси-группы (метокси, этокси, изопропилокси, пропаргилокси) или С1-С6 алкила (метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил); R2 выбран из группы, включающей незамещенный пиридил или фенил, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из атома галогена (фтор, хлор, бром), гидрокси-, низшей алкокси-группы (метокси, этокси, изопропилокси, пропаргилокси), альдегидную группу или С1-С6 алкила (метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил); R3 выбран из группы, включающей атом галогена, водорода или нитро-группу; R4 представляет собой С1-С5 алкил (метил, этил, пропил, бутил, пентил); R5 представляет собой атом водорода или алкил С1-С3 (метил, этил, пропил), характеризующийся тем, что 1±0.1 мольных экв. соответствующего имидазолидин-4-она растворяют в одноатомном спирте, взятого в количестве 10 мл на 0.5±0.1 ммоль и кипятят при температуре 100±10°С в течение 10±2 минут после закипания образовавшегося раствора, затем в кипящую смесь добавляют саркозин, взятый из расчета 2±0.2 экв. и соответствующего изатина, взятого в количестве 2±0.2 экв по отношению к соответствующему имидазолидин-4-ону, полученную смесь кипят до окончания реакции, затем смесь охлаждают до комнатной температуры, выпавший осадок отфильтровывают на вакууме со стеклянным пористым фильтром и колбой Бунзена.

Предметом данного изобретения является активный компонент, обладающий свойством ингибитора белок-белкового взаимодействия MDM2/p53, представляющее собой соединение общей формулы 1.

Осуществление изобретения

Ниже приведены определения терминов, которые используются в описании настоящего изобретения.

«IC₅₀» (ПК₅₀) - концентрация соединения, при которой наблюдается 50% ингибирование ферментативной активности.

«Алифатический заместитель» (алкил, алкенил, алкинил) означает алифатическую углеводородную линейную или разветвленную группу с 1-12 атомами углерода в цепи, необязательно содержащий двойную или тройную связь. Разветвленная означает, что алкильная цепь имеет один или несколько «низших алкильных» заместителей. Алкил, алкенил, алкинил могут иметь один или несколько одинаковых или различных заместителей («алкильных заместителей») включая галоген, алкенилокси, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, ароил, циано, гидрокси, алкокси, карбокси, алкинилокси, аралкокси, арилокси, арилоксикарбнил, алкилтио, гетероарилтио, аралкилтио, арилсульфонил, алкилсульфонилгетероаралкилокси, аннелированный гетероарилциклоалкенил, аннелированный гетероарилциклоалкил, аннелированный гетероарилгетероцикленил, аннелированный гетероарилгетероциклил, аннелированный арилциклоалкенил, аннелированный арилциклоалкил, аннелированный арилгетероцикленил, аннелированный арилгетероциклил, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, гетероаралкилоксикарбонил или R_k^aR_k+1^aN-, R_k^aR_k+1^aNC(=O)-, R_k^aR_k+1^aNC(=S)-, R_k^aR_k+1^aNSO₂-, где R_k^a и R_k+1^a независимо друг от друга представляют собой «заместители амино группы», например, атом водорода, алкил, арил, аралкил, гетероаралкил, гетероциклил или гетероарил, или R_k^a и R_k+1^a вместе с атомом N, с которым они связаны, образуют через R_k^a и R_k+1^a 4-7 членный гетероциклил или гетероцикленил. Предпочтительными алкильными группами являются метил, трифторметил, циклопропилметил, циклопентилметил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил, н-пентил, 3-пентил, метоксиэтил, карбоксиметил, метоксикарбонилметил, этоксикарбонилметил, бензилоксикарбонилметил метоксикарбонилметил и пиридилметилоксикарбнилметил. Предпочтительными «алкильными заместителями» являются циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, гидрокси, алкокси, алкоксикарбонил, аралкокси, арилокси, алкилтио, гетероарилтио, аралкилтио, алкилсульфонил, арилсульфонил, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, гетероаралкилоксикарбонил или R_k^aR_k+1^aN-, R_k^aR_k+1^aNC(=O)-, аннелированный арилгетероцикленил, аннелированный арилгетероциклил.

Предпочтительными алкильными группами в данном изобретении являются аллил, циклопропил, циклогексил и 4-этилморфолин.

«Арил» означает ароматическую моноциклическую или полициклическую систему, включающую от 6 до 14 атомов углерода, преимуществено от 6 до 10 атомов углерода. Арил может содержать один или более «заместителей циклической системы», которые могут быть одинаковыми или разными. Представителями арильных групп являются фенил или нафтил, замещенный фенил или замещенный нафтил. Арил может быть аннелирован с ароматической и неароматической циклической системой или гетероциклом, включая арил, ароил, аралкокси, арилгидрокси, арилокси, арилоксикарбонил, аралкилтио, арилсульфонил, арилгалоген, гетероарил гетероциклил, гетероаралкилокси, гетероарилтио, аннелированный гетероарилциклоалкенил, аннелированный гетероарилциклоалкил, аннелированный гетероарилгетероцикленил, аннелированный гетероарилгетероциклил, аннелированный арилциклоалкенил, аннелированный арилциклоалкил, аннелированный арилгетероцикленил, аннелированный арилгетероциклил, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, гетероаралкилоксикарбонил или R_k^aR_k+1^aN-, R_k^aR_k+1^aNC(=O)-, R_k^aR_k+1^aNC(=S)-, R_k^aR_k+1^aNSO₂-, где R_k^a и R_k+1^a независимо друг от друга представляют собой «заместители амино группы», значение которых определено в данном разделе.

Предпочтительными арильными группами в данном изобретении являются фенил C₆H₅-, 3-хлор-4-фторфенил 3-Cl-4-F-C₆H₃-, 4-этоксифенил 4-C₂H₅O-C₆H₄-, 3-хлор-4-этоксифенил 3-Cl-4- C₂H₅O-C₆H₃-, 2-хлорфенил 2-Cl-C₆H₄-, 4-хлорфенил 4-Cl-C₆H₄-, 4-этилфенил 4-C₂H₅-C₆H₄-, 3,4-диметоксифенил 3,4-ОМе-C₆H₃-,4-метоксифенил 4-СН₃О-C₆H₄-, 4-фторфенил 4-F-C₆H₄-, 4-бромфенил 4-Br-C₆H₄-, 4-пропилоксифенил 4-O(iC₃H₇)C₆H₄, циклопентоксибензил.

«Белок-белковое взаимодействие» означает установление связей между белками р53 и MDM2 в результате их взаимодействий за счет электростатических, гидрофобных или гидрофильных контактов.

«Галоген» означает фтор, хлор, бром и йод. Предпочтительными являются фтор, хлор и бром.

«Гетероциклил» (гетероциклический заместитель) означает ароматическую или неароматическую насыщенную моноциклическую или полициклическую систему, включающую от 3 до 10 атомов углерода, преимущественно от 5 до 6 атомов углерода, в которой один или несколько атомов углерода заменены на гетероатом, такой как азот, кислород, сера. Приставка «аза», «окса» или «тиа» перед гетероциклилом означает наличие в циклической системе, атома азота, атома кислорода или атома серы, соответственно. Гетероциклил может иметь один или несколько «заместителей циклической системы», которые могут быть одинаковыми или разными. Атомы азота и серы, находящиеся в гетероциклиле могут быть окислены до N-оксида, S-оксида или S-диоксида. Представителями гетероциклилов являются пиперидин, пирролидин, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, тиазолидин, 1,4-диоксан, тетрагидрофуран, тетрагидротиофен, гетероаралкил, гетероциклил или гетероарил, или R_k^a и R_k+1^a вместе с атомом N, с которым они связаны, образуют через R_k^a и R_k+1^a 4-7 членный гетероцикл.

Предпочтительной гетероциклической группой в данном изобретении является пиридин.

«Гидрат» означает сольват, в котором вода является молекулой или молекулами растворителя.

«Заместитель» означает химический радикал, который присоединяется к скэффолду (фрагменту), например, «заместитель алкильный», «заместитель амино группы», «заместитель карбамоильный», «заместитель циклической системы», значения которых определен в данном разделе.

«Лекарственное начало» (активный компонент, лекарственная субстанция лекарственное вещество, drug-substance) означает физиологически активное вещество синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного препарата (средства).

«Лекарственное средство (препарат)» - вещество (или смесь веществ в виде фармацевтической композиции), в виде таблеток капсул инъекций, мазей и др. готовых форм предназначенное для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего.

«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя соединение формулы 1 и, по крайней мере, один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлимых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных, распределяющих и воспринимающих средств, средств доставки, таких как консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от природы и способа назначения и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как, парабены, хлорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения. Композиция может включать также изотонические агенты, например, сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например, моностеарат алюминия и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие, как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие, как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, алгиновая кислота и ее соли, силикаты. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения, в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения.

«Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные органические и неорганические соли кислот и оснований, заявленных в настоящем изобретении. Эти соли могут быть получены in situ в процессе синтеза, выделения или очистки соединений или приготовлены специально. В частности, соли оснований могут быть получены специально, исходя из очищенного свободного основания заявленного соединения и подходящей органической или неорганической кислоты. Примерами полученных таким образом солей являются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валериаты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, мезилаты, малонаты, салицилаты, пропионаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, сульфаматы и им подобные (Подробное описание свойств таких солей дано в Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts" J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1-19). Соли заявленных кислот также могут быть специально получены реакцией очищенной кислоты с подходящим основанием, при этом могут быть синтезированы соли металлов и аминов. К металлическим относятся соли натрия, калия, кальция, бария, цинка, магния, лития и алюминия, наиболее желательными из которых являются соли натрия и калия. Подходящими неорганическими основаниями, из которых могут быть получены соли металлов, являются гидроксид, карбонат, бикарбонат и гидрид натрия, гидроксид и бикарбонат калия, поташ, гидроксид лития, гидроксид кальция, гидроксид магния, гидроксид цинка. В качестве органических оснований, из которых могут быть получены соли заявленных кислот, выбраны амины и аминокислоты, обладающие достаточной основностью, чтобы образовать устойчивую соль, и пригодные для использования в медицинских целях (в частности, они должны обладать низкой токсичностью). К таким аминам относятся аммиак, метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, бензиламин, дибензиламин, дициклогексиламин, пиперазин, этилпиперидин, трис(гидроксиметил)аминометан и подобные им. Кроме того, для солеобразования могут быть использованы гидроокиси тетраалкиламмония, например, такие как, холин, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний и им подобные. В качестве аминокислот могут быть использованы основные аминокислоты - лизин, орнитин и аргинин.

«Циклоалкил» означает не ароматическую моно- или полициклическую систему, включающую от 3 до 10 атомов углерода. Циклоалкил может иметь один или несколько «заместителей циклической системы», которые могут быть одинаковыми или разными. Представителями циклоалкильных групп являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, декалин, адамант-1-ил и т.п. Циклоалкил может быть аннелирован с ароматическим циклом или гетероциклом.

Был проведен синтез разнообразных гетероциклических диспиро соединений [Yan A. Ivanenkov, et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 25, 2, 2015, 404.], а также биологические испытания этих соединений в экспериментах с клеточными линиями HepG2, Hek, MCF-7, SiHa, НСТ p53(+,+) и НСТ р53(-,-), РС3 и LNCap. Заявляемые соединения обладают выраженной активностью по отношению к клеточным линиям, экспрессирующим р53. Были найдены новые производные 2-арил-5-арилметилидензамещенных тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов, а также была проведена оптимизация способа получения 2-тиоксо-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов в виде оснований и фармакологически приемлемых солей и гидратов, обладающие свойствами низкомолекулярных ингибиторов белок-белкового взаимодействия MDM2/p53. Получение данных соединений является экономичным и включает в себя три-пять стадий в зависимости от заместителей, не требует применения больших объемов растворителей, в ходе реакции сразу образуется оптически-активная молекула, которая не требует применения дорогостоящих хиральных катализаторов и дальнейшего разделения на хиральных колонках. Эффективность по отношению к белку р53 подтверждается активностью как активностью на опухолевых клеточных линиях, экспрессирующих данный белок (НСТ wt, НСТ -/-, LNCap, РС3), так и полным отсутствием цитотоксического эффекта на нераковых клеточных линиях. Дополнительно, были проведены исследования in vivo, которые также продемонстрировали спосбоность данного класса к торможению роста опухоли лимфолейкоза Р388 на 85%.

Известно, что применяемые ингибиторы белок-белкового взаимодействия р53-MDM2 в экспериментах на аналогичных клеточных линиях показывают худшую активность [Zhao, Y.; Liu, L.; Sun, W.; Lu, J.; McEachern, D.; Li, X.; Yu, S.; Bernard, D.; Ochsenbein, P.; Ferey, V.; Carry, J.-C.; Deschamps, J.R.; Sun, D.; Wang, S. Diastereomeric spirooxindoles as highly potent and efficacious MDM2 inhibitors. J. Am. Chem. Soc. 2013, 135, 7223-7734], однако в настоящее время они проходят дальнейшие клинические испытания в терапии онкологических заболеваний, что свидетельствует о перспективности исследуемых в настоящей заявке ингибиторов. В настоящий момент, на основании предложенной ранее методики получения диспиропроизводных на основе 2-арил-5-арилметилидензамещенных тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов [Yan A. Ivanenkov, et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 25, 2, 2015, 404] была произведена оптимизация и получены новые ингибиторы p53-MDM2 взаимодействия.

Соотношение реагентов на конечной стадии образования диспиропрозводного, заключающееся в двукратном избытке изатина и саркозина по отношению к исходному 2-арил-5-арилметилидензамещенному тетрагидро-4Н-имидазол-4-ону, а также порядок добавления реагентов (первоначальное добавлениие саркозина в кипящий раствор с последующим добавлением изатина), позволяет улучшить выходы конечных ингибиторов в 1,5-3 раза, а также добиться значений цитотоксичности на два порядка, чем у соединений, полученных другим способом.

Для получения заявляемых соединений 1±0.1 экв. соответствующего имидазолидин-4-она растворяют в одноатомном спирте (например, этанол, метанол), взятого в количестве 10 мл на 0.5±0.1 ммоль и кипятят при температуре 100±10°С в течение 10±2 минут после закипания образовавшегося раствора, затем в кипящую смесь добавляют саркозин, взятый из расчета 2±0.2 экв. и, после повторного закипания, соответствующего изатина, взятого в количестве 2±0.2 экв по отношению к соответствующему имидазолидин-4-ону. Полученную смесь кипят до окончания реакции, окончание реакции определяют по возникновению пятна нового продукта на ТСХ в системе петролейный эфир : этилацетат = 3:1. В среднем реакция протекает в течение 7±2 часов. После охлаждения смеси до комнатной температуры на воздухе наблюдают выпадение белого осадка. Затем выпавший осадок отфильтровывают на вакууме со стеклянным пористым фильтром и колбой Бунзена.

Общая схема синтеза получаемых соединений исходя из 2-аридиден-замещенных 2-тиогидантоинов представлена на следующей синтетической схеме:

Таким образом, за счет использования двукратного избытка компонентов на конечной стадии, последовательности введения реагентов, экологичной температуры 100±10°С, были синтезированы диспиропроизводные на основе 5-арилиден-2-тиоксо-имидазолин-4-онов, но также и их оксоаналогов. Цитотоксичность получаемых соединений была оценена не только на линиях рака простаты LNCap и РС3, но также и на клеточных линиях экспрессирующих белок р53 как одной морфологии (HCTwt и НСТ-/-.). По сравнению с близким прототипом значения IC₅₀ которого составляли 10-20 мкМ, для получаемых целевых соединений значения цитотоксичности составили) 0,5-10 мкМ для клеточных линий, экспресиирующих р53 и ≥50 мкМ для неэкспрессирующих; получаемые соединения оксазались нетоксичными по отношению к нераковым линиям фибробластов легких человека VA13 по сравнению с предыдущим методом [Yan A. Ivanenkov, et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 25, 2, 2015, 404].

Для получения солей была использована методика, разработанная авторами ранее [Белоглазкина Е.К., Белоглазкина А.А. Кукушкин М.Е., Мажуга А.Г, Иваненков Я.А., заявка РФ №2015113026/04(020403) от 9.04.2015].

Фармацевтические композиции могут включать фармацевтически приемлемые эксципиенты. Под фармацевтически приемлемым эксципиентами подразумеваются применяемые в сфере фармацевтики разбавители, вспомогательные агенты и/или носители. Фармацевтическая композиция наряду с соединением общей формулы 1, или его фармацевтически приемлемой солью и/или гидратом по настоящему изобретению, может включать и другие активные субстанции, в том числе обладающие противоопухолевой активностью, при условии, что они не вызывают нежелательных эффектов.

При необходимости использования фармацевтической композиции по настоящему изобретению в клинической практике она может смешиваться с традиционными фармацевтическими носителями.

Носители, используемые в фармацевтических композиций по настоящему изобретению, представляют собой носители, которые применяются в сфере фармацевтики для получения распространенных форм, в том числе: в пероральных формах используются связующие вещества, смазывающие агенты, дезинтеграторы, растворители, разбавители, стабилизаторы, суспендирующие агенты, бесцветные агенты, корригенты вкуса; в формах для инъекций используются антисептические агенты, солюбилизаторы, стабилизаторы; в местных формах используются основы, разбавители, смазывающие агенты, антисептические агенты.

Лекарственное средство для профилактики и лечения пролиферативных заболеваний, связанных с белок-белковым взаимодействием MDM2/p53, а именно рак простаты и колоректальный рак, являющиеся наиболее распространенными заболеваниями данного типа, в виде таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, содержащее в эффективном количестве активный компонент или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению.

В соответствии с данным изобретением способ профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с белок-белковым взаимодействием MDM2/p53 у животных и людей, заключается во введении пациенту нового лекарственного средства или новой фармацевтической композиции.

Лекарственные средства могут вводиться перорально или парентерально (например, внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно или местно). Клиническая дозировка средства, содержащего соединение общей формулы 1, у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента, при этом суточная доза у взрослых обычно составляет 10~500 мг, предпочтительно - 50~300 мг. Поэтому во время приготовления из фармацевтической композиции лекарственного средства по настоящему изобретению в виде единиц дозировки необходимо учитывать вышеназванную эффективную дозировку, при этом каждая единица дозировки препарата должна содержать 10~500 мг средства общей формулы 1, предпочтительно - 50~300 мг. В соответствии с указаниями врача или фармацевта данные препараты могут приниматься несколько раз в течение определенных промежутков времени (предпочтительно - от одного до шести раз) до достижения терапевтического эффекта.

Представленные ниже примеры иллюстрируют, но не ограничивают настоящее изобретение.

Пример 1. Получение 1-(3-хлор-4-фторфенил)-4'-(4-изопропилоксифенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.1).

Смесь 0,25 г (0,6 ммоль, 1±0.1 экв.) соответствующего (Z)-3-(4-хлор-3-фторфенил)-5-(4-изопропилоксибензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она растворяли в 10 мл этанола и кипятили в течение 10 минут при температуре 80°С, после чего добавляли 0,11 г (1,2 ммоль, 2±0.2 экв.) саркозина, и 0,18 г (1,2 ммоль, 2±0.2 экв.) изатина и кипятили в течение 7 часов (окончание реакции определяют по ТСХ). Затем выпавший осадок отфильтровывали и промывали при необходимости спиртом. Выход составил 69%. Т_пл=271°C.

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d₆), δ, ppm (J, Hz): 1.25 (s, 3H, CH₃,i-C₃H₇), 1.27 (s, 3H, CH₃,i-C₃H₇), 2.14 (s, 3H, NCH₃), 3.43 (t, J=8.7 Hz, 1H, CH-H), 3.95 (t, J=9.4 Hz, 1H, CH), 4.27 (t, J=9.3 Hz, 1H, CH-H), 4.61 (m, 1H, CH, i-C₃H₇), 6.68 (m, 1H, ArH), 6.78 (m, 1H, ArH), 6.87 (m, 3H, ArH), 7.01 (t, J=7.6 Hz, 1H, ArH), 7.31-7.37 (m, 4H, ArH), 7.46 (t, J=8.9 Hz, 1H, ArH), 10.34 (s, 1H, NH), 10.66 (s, 1H, NH). Найдено, %: С 60.93; H 4.23; N 9.34. C₂₉H₂₆ClFN₄O₃S. Вычислено, %: С 61.64; Н 4.64; N 9.92.

Пример 2. Получение 5''-хлор-1-(3-хлор-4-фторфенил)-4'-(4-хлорфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.2).

Проводят аналогично способу по примеру 1, из 0,25 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-хлор-3-фторфенил)-5-(4-хлорбензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,24 г (1,2 ммоль) 5-хлоризатина и 0,11 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0,42 г целевого соединения. Выход составил 72%. Т_пл=197°С.

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d₆), δ, ppm (J, Hz): 2.14 (s, 3H, NCH₃), 3.48 (t, J=8.6 Hz, 1H, CH-H), 3.99 (t, J=9.0 Hz, 1H, CH), 4.31 (t, J=9.0 Hz, 1H, CH-H), 6.68 (m, 1H, ArH), 6.86 (m, 2H, ArH), 7.0 (t, J=7.7 Hz, 1H, ArH), 7.26 (d, J=7.3 Hz, 1H, ArH), 7.32 (t, J=7.7 Hz, 1H, ArH), 7.41-7.52 (m, 5H, ArH), 10.44 (s, 1H, NH), 10.70 (s, 1H, NH). Найдено, %: С 58.11; H 3.24; N 10.95. C₂₆H₁₉BCl₂FN₄O₂S. Рассчитано, %: С 57.68; Н 3.54; N 10.35.

Пример 3. Получение 5''-бром-1-(3-хлор-4-фторфенил)-4'-(4-изопропилоксифенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.3).

Из 0,25 г (0,7 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-хлор-3-фторфенил)-5-(4-изопропилоксибензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,26 г (1,2 ммоль) 5-бромизатина и 0,12 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0,38 г целевого соединения. Выход составил 62% Т_пл=267°C.

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ, ppm (J, Hz): 1.25 (s, 6H, 2CH₃,i-C₃H₇), 2.16 (s, 3H, NCH₃), 3.46 (t, J=8.7 Hz, 1H, CH-H), 3.91 (t, J=9.4 Hz, 1H, CH), 4.25 (t, J=9.2 Hz, 1H, CH-H), 4.60 (m, 1H, CH, i-C₃H₇), 6.72-6.93 (m, 5H, ArH), 7.28-7.61 (m, 5H, ArH), 10.57 (s, 1H, NH), 10.79 (s, 1H, NH). Найдено, %: С 54.73; H 3.21; N 8.38. C₂₉H₂₅BrClFN₄O₃S. Рассчитано, %: С 54.09; Н 3.91; N 8.70.

Пример 4. Получение 1-(4-этоксифенил)-4'-(4-хлорфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.4).

Из 0,24 г (0,7 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-этоксифенил)-5-(4-хлорбензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,26 г (1,2 ммоль) 5-изатина и 0,12 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0.44 г целевого соединения. Выход составил 78% Т_пл=210°С.

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ, ppm (J, Hz): 1.31 (t, 3H, CH₃), 2.14 (s, 3H, NCH₃), 3.46 (t, J=8.6 Hz, 1H, CH-H), 3.94-4.05 (m, 3H(1H, CH, 2H, OCH₂)), 4.31 (t, J=9.0 Hz, 1H, CH-H), 6.52 (d, J=8.8 Hz, 2H, ArH), 6.84-6.90 (m, 3H, ArH), 7.01 (t, J=7.6 Hz, 1H, ArH), 7.29-7.33 (m, 2H, ArH), 7.41-7.49 (dd, J=8.6 Hz, 4H, ArH) 10.12 (s, 1H, NH), 10.68 (s, 1H, NH). Найдено, %: С 62.41; H 4.82; N 9.96. C₂₈H₂₅ClN₄O₃S. Рассчитано, %: С 63.09; Н 4.73; N 10.51.

Пример 5. Получение 1-(3-хлор-4-фторфенил)-4'-(4-этилфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.5).

Из 0,24 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-хлор-3-фторфенил)-5-(4-этилбензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,22 г (1,2 ммоль) изатина и 0,12 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0.36 г целевого соединения. Выход составил 63% Т_пл=315°C.

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ, ppm (J, Hz): 1.18 (t, 3H, CH₃), 2.14 (s, 3H, NCH₃), 2.58-2.63 (q, 2H, CH₂), 3.44 (t, J=8.8 Hz, 1H, CH-H), 3.99 (t, J=9.4 Hz, 1H, CH), 4.29 (t, J=9.2 Hz, 1H, CH-H), 6.6-7.1 (m, 4H, ArH), 7.19-7.51 (m, 7H, ArH), 10.35 (s, 1H, NH), 10.68 (s, 1H, NH). Найдено, %: С 63.02; H 4.47; N 9.82. C₂₈H₂₄ClFN₄O₂S. Рассчитано, %: С 62.86; Н 4.52; N 10.47.

Пример 6. Получение 5''-бром-1-(4-этоксифенил)-4'-(4-хлорфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.6).

Из 0,24 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-этоксифенил)-5-(4-хлорбензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,25 г (1,2 ммоль) 5-бромизатина и 0,12 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0.48 г целевого соединения. Выход составил 89% Т_пл=301°С.

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ, ppm (J, Hz): 1.31 (t, 3H, CH₃), 2.16 (s, 3H, NCH₃), 3.49 (t, J=8.7 Hz, 1H, CH-H), 3.94 (t, J=9.2 Hz, 1H, CH), 4.0-4.05 (q, J=6.9 Hz, 2H, OCH₂), 4.31 (t, J=9.0 Hz, 1H, CH-H), 6.56 (d, J=8.6 Hz, 2H, ArH), 6.81 (d, J=8.3 Hz, 1H, ArH), 6.90 (d, J=8.6 Hz, 2H, ArH), 7.38-7.54 (m, 6H, ArH), 10.38 (s, 1H, NH), 10.82 (s, 1H, NH). Найдено, %: С 54.47; H 3.89; N 9.27. C₂₈H₂₄BrClN₄O₃S. Вычислено, %: С 54.96; Н 3.95; N 9.16.

Пример 7. Получение 5''-бром-1-(3-хлор-4-фторфенил)-4'-(4-хлорфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.7).

Из 0,24 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(3-хлор-4-фторфенил)-5-(4-хлорбензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,25 г (1,2 ммоль) 5-бромизатина и 0,12 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0.32 г целевого соединения. Выход составил 66% Т_пл=197°C.

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ, ppm (J, Hz): 2.16 (s, 3H, NCH₃), 3.51 (t, J=8.7 Hz, 1H, CH-H), 3.95 (t, J=9.5 Hz, 1H, CH), 4.31 (t, J=9.0 Hz, 1H, CH-H), 6.74-6.9 (m, 3H, ArH), 7.36-7.58 (m, 7H, ArH), 10.65 (s, 1H, NH), 10.84 (s, 1H, NH). Найдено, %: С 50.21; H 3.01; N 8.96. C₂₆H₁₈BrCl₂FN₄O₂S. Рассчитано, %: С 50.34; Н 2.92; N 9.03.

Пример 8. Получение 5''-хлор-1-(3-хлор-4-фторфенил)-4'-(4-этилфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.8).

Из 0,24 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(3-хлор-4-фторфенил)-5-(4-этилбензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,24 г (1,2 ммоль) 5-хлоризатина и 0,12 г (1,2 ммоль) получили 0,49 г целевого соединения. Выход составил 73% Т_пл=210°C.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ, ppm (J, Hz): 1.18 (t, 3H, CH₃), 2.17 (s, 3H, NCH₃), 2.58-2.63 (q, J=7.6 Hz, 2H, CH₂), 3.47 (t, J=8.7 Hz, 1H, CH-H), 3.96 (t, J=9.4 Hz, 1H, CH), 4.27 (t, J=9.2 Hz, 1H, CH-H), 6.72-6.8 (m, 2H, ArH), 6.84 (d, J=8.3 Hz, 1H, ArH), 7.20 (d, J=8.0 Hz, 2H, ArH), 7.38 (d, J=8.0 Hz, 2H, ArH), 7.42-7.54 (m, 3H, ArH), 10.56 (s, 1H, NH), 10.81 (s, 1H, NH). Найдено, %: С 54.63; H 3.91; N 9.28. C₂₈H₂₃BrClFN₄O₂S. Расчитано, %: С 54.78; Н 3.78; N 9.13.

Пример 9. Получение 5''-бром-1'-метил-1-фенил-4'-пиридин-2-ил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.9).

Из 0,24 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-фенил-5-(пиридин-2-илметилен)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,23 г (1,2 ммоль) 5-бромизатина и 0,12 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0,33 г целевого соединения. Выход составил 62% Т_пл=343°С.

¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ, ppm (J, Hz): 2.2 (s, 3H, NCH₃), 3.61 (t, J=8.7 Hz, 1H, CH-H), 4.06 (t, J=9.4 Hz, 1H, CH), 4.55 (t, J=9.3 Hz, 1H, CH-H), 6.81 (d, J=8.3 Hz, 1H, ArH), 6.91 (d, J=6.9 Hz, 2H, ArH), 7.31 (m, 1H, ArH), 7.38-7.47 (m, 5H, ArH), 7.55 (d, J=1.8 Hz, 1H, ArH), 7.83 (t, J¹=1.7, Hz, J²=7.7, Hz, 1H, ArH), 8.50 (d, J=4.2 Hz, 1H, ArH), 10.19 (s, 1H, NH), 10.72 (s, 1H, NH). Найдено, %: С 56.83; H 3.47; N 12.94. C₂₅H₂₀BrN₅O₂S. Рассчитано, %: С 56.19; Н 3.77; N 13.10.

Пример 10. Получение 1-(2-морфолиноэтил)-4'-(3-хлорфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.10).

Из 0,15 г (0,3 ммоль) соответствующего (Z)-5-(3-хлорбензилиден)-3-(2-морфолиноэтил)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,14 г (0,6 ммоль) 5-бромизатина и 0,1 г (0,6 ммоль) саркозина получили 0,27 г целевого соединения. Выход составил 78% Т_пл=219°С.

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.82 (s, 1Н, NH), 10.67 (s, 1H, NH), 7.50 (t, J=8.6 Hz, 3H), 7.37-7.42 (m, 3H), 7.31 (s, 1H), 6.85-6.90 (m, 2H), 6.74-6.78 (m, 1H), 4.33 (t, J=9.7 Hz, 1H), 3.92 (t, J=9.2 Hz, 1H), 3.51 (t, J=9.7 Hz, 1H), 2.15 (s, 3H). HRMS (ESI, m/z) Calcd for C26H18Cl3FN4O2S [M+H]⁺, 575,0200; Found 575.0207.

Пример 11. Получение 5''-бром-1-циклопропил-4'-(4-фторфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.11).

Из 0,15 г (0,3 ммоль) соответствующего (Z)-3-циклопропил-5-(4-фторбензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,14 г (0,6 ммоль) 5-бромизатина и 0,1 г (0,6 ммоль) саркозина получили 0,14 г целевого соединения. Выход составил 66% Т_пл=243°С.

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.69 (s, 1Н, NH), 9.86 (s, 1H, NH), 7.45 (dd, J=2.0 Hz, J₂=8.2 Hz, 1H), 7.42-7.35 (m, 3H), 7.13 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.75 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.18 (t, J=9.2 Hz, 1H), 3.85 (t, J=9.4 Hz, 1H), 3.42 (t, J=8.6 Hz, 1H), 2.45 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 0.82-0.68 (m, 2H), 0.39 (m, 1H), 0.05 (m, 1H). HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₃H₂₀BrFN₄O₂S, [M+K]⁺, 555.0086 found 555.0087.

Пример 12. Получение 5''-бром-1-циклогексил-4'-фенил-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.12).

Из 0,14 г (0,3 ммоль) соответствующего (Z)-3-циклогексил-5-фенил-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,14 г (0,6 ммоль) 5-бромизатина и 0,1 г (0,6 ммоль) саркозина получили 0,17 г целевого соединения. Выход составил 71% Т_пл=253°C.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.71 (s, 1H, NH), 9.91 (s, 1H, NH), 7.49-7.42 (m, 2H), 7.34-7.21 (m, 5H), 6.75 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.17 (t, J=9.2 Hz, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.93 (t, J=9.5 Hz, 1H), 3.42 (t, J=8.4 Hz, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.89 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.72-1.59 (m, 2H), 1.54 (m, 1H), 1.20 (m, 1H), 1.15-0.98 (m, 3H), 0.88 (m, 1H). HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₆H₂₇BrN₄O₂S, [M+H]⁺, 541.1091 found 541.1081.

Пример 13. Получение 1-циклогексил-4'-фенил-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.13).

Из 0,12 г (0,3 ммоль) соответствующего (Z)-3-циклогексил-5-фенил-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,12 г (0,6 ммоль) изатина и 0,1 г (0,6 ммоль) саркозина получили 0,15 г целевого соединения. Выход составил 68% Т_пл=319°C.

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.71 (s, 1Н, NH), 9.91 (s, 1H, NH), 7.49-7.42 (m, 2H), 7.34-7.21 (m, 5H), 6.75 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.17 (t, J=9.2 Hz, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.93 (t, J=9.5 Hz, 1H), 3.42 (t, J=8.4 Hz, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.89 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.72-1.59 (m, 2H), 1.54 (m, 1H), 1.20 (m, 1H), 1.15-0.98 (m, 3H), 0.88 (m, 1H). HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₆H₂₇BrN₄O₂S, [M+H]⁺, 541.1091 found 541.1081.

Пример 14. Получение 1-(4-фторфенил)-4'-(4-этоксифенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.14).

Из 0,13 г (0,3 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-фторфенил)-5-(4-этоксибензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,12 г (0,6 ммоль) изатина и 0,1 г (0,6 ммоль) саркозина получили 0,14 г целевого соединения. Выход составил 62% Т_пл=225°C.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.64 (s, NH, 1H), 10.08 (s, 1H, NH), 7.38-7.32 (m, 3H), 7.29 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.22 (t, J=8.7 Hz, 2H), 7.01 (t, J=7.5 Hz, 1H), 6.89 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.85 (d, J=7.6 Hz, 2H), 6.66 (dd, J=4.9, 8.8 Hz, 2H), 4.28 (t, J=9.1 Hz, 1H), 4.01 (k, J=7.0 Hz, 2H), 3.94 (t, J=9.5 Hz, 1H), 3.43 (t, J=8.0 Hz, 1H), 2.14 (s, 3H), 1.32 (t, J=7.0 Hz, 3H). HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₈H₂₅FN₄O₃S, [M+H]⁺, 517.1704 found 517.1698.

Пример 15. Получение 1-(4-хлорфенил)-4'-(4-метоксифенил)-фенил-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.15).

Из 0,15 г (0,4 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-хлорфенил)-5-(4-метоксибензилиден)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,14 г (0,8 ммоль) изатина и 0,15 г (0,8 ммоль) саркозина получили 0,17 г целевого соединения. Выход составил 73% Т_пл=201°С.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.63 (s, 1H, NH), 10.22 (s, 1H, NH), 7.46 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.34-7.38 (m, 3H), 7.28 (t, J=7.28 Hz, 1H), 7.00 (t, J=8.1 Hz, 1H), 6.90 (d, J=8.7 Hz, 2H), 6.65 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.27 (t, J=8.1 Hz, 1H), 3.93 (t, J=9.3 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.42 (t, J=9.9 Hz, 1H), 2.12 (s, 3H). HRMS (ESI) m/z: Calcd for C27H23ClN4O3S, [M+H]⁺, 519,1179 found 519.12.

Пример 16. Получение 5''-хлор-1-фенил-4'-(3-формилфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.16).

Из 0,15 г (0,4 ммоль) соответствующего (Z)-3-фенил-5-(3-формилфенил)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,15 г (0,8 ммоль) 5-хлоризатина и 0,12 г (0,8 ммоль) саркозина получено 0,18 г целевого соединения. Выход составил 72% Т_пл=170°С.

1Н HMR (400 MHz, DMSO-d6) 10.82 (s, 1Н), 10.54 (s, 1H), 10.02 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.83 (dd, J=14.02, 7.58 Hz, 2H), 7.59 (t, J=7.46 Hz, 1H), 7.34-7.40 (m, 6H), 6.87 (d, J=9.05 Hz, 1H), 6.62-6.67 (m, 2H), 4.44 (t, J=9.66 Hz, 1H), 4.02 (t, J=9.29 Hz, 1H), 3.54 (t, J=8.93, 1H), 2.18 (s, 3H).

Пример 17. Получение 1-(3-хлор-4-фтор)-4'-(4-циклопентоксифенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.17).

Из 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(3-хлор-4-фтор)-5-(4-циклопентоксифенил)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,19 г (1,2 ммоль) изатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получено 0,22 г целевого соединения. Выход составил 73% Т_пл=239°С.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.63 (s, 1H, NH), 10.26 (s, 1H, NH), 7.45 (t, J=9.1, 1H), 7.35 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.33-7.27 (m, 2H), 7.00 (t, J=7.3 Hz, 1H), 6.86 (d, J=8.2 Hz, 3H), 6,77 (dd, J=2.0, 6.4 Hz, 1H), 6.68 (m, 1H), 4.80 (m, 1H), 4,27 (t, J=9.2 Hz, 1H), 3.94 (t, J=9.5 Hz, 1H), 3.43 (t, J=8.8 Hz, 1H), 2.14 (s, 3H), 1.97-1.84 (m, 2H), 1.77-1.63 (m, 4H), 1.63-1.52 (m, 2H). HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₁H₂₈ClFN₄O₃S, [M+H]⁺, 591.1627 found 591.1625.

Пример 18. Получение 5''-нитро-1-фенил-4'-фенил-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.18).

Из 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-фенил-5-фенил-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,2 г (1,2 ммоль) 5-нитроизатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получено 0,28 г целевого соединения. Выход составил 67% Т_пл=201°C.

NMR ¹Н (DMSO-d⁶, 400 Hz): 11,36 (s., 1H), 10,63 (s., 1H), 8,27 (d.d., J1=6,36 Hz, J2=2,32 Hz, 1H), 8,19 (d., J=2,32 Hz, 1H), 7,28-7,45 (m., 8H), 7,04 (d., J=8,68 Hz, 1H), 6,58-6,65 (m., 2H), 4,35 (t., J=9,05 Hz, 1H), 4,00 (t., J=9,34 Hz, 1H), 3,55 (t., J=8,68 Hz, 1H), 2,21 (s., 3H).

Пример 19. Получение 5''-бром-1-(4-метоксифенил)-4'-(3-хлорфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-дион (1.19).

Из 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-метоксифенил)-5-(3-хлорфенил)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,2 г (1,2 ммоль) 5-бромизатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получено 0,29 г целевого соединения. Выход составил 78% Т_пл=230°C.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.79 (s, 1Н, NH), 10.45 (s, 1H, NH), 7.55 (s, 1H), 7.50 (dd, J=1.7, 8.3 Hz, 1H), 7.46 (m, 1H), 7.38 (s, J=7.5 Hz, 1H), 6.93 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.82 (d, J=7.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J=8.8 Hz, 2H), 4.31 (t, J=9.2 Hz, 1H), 3.98 (t, J=9.4 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.47 (t, J=8.6 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H). HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₇H₂₂BrClN₄O₃S, [M+H]⁺, 599.0337 found 599.0353.

Пример 20. Получение 5''-бром-1-(3-хлор-4-метоксифенил)-4'-(3-хлорфенил)-1'-пропаргил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.20).

Из 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(3-хлор-4-метоксифенил)-5-(3-хлорфенил)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,2 г (1,2 ммоль) 5-бромизатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0,28 г целевого соединения. Выход составил 72% Т_пл=214°С.

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.64 (s, 1H, NH), 7.57 (s, 1H), 7.49-7.35 (m, 5H), 7.18-7.10 (m, 3H), 6.64 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.60 (dd, J₁=2.4 Hz, J₂=8.7 Hz, 1H), 4.62-4.49 (m, 2H), 4.39 (t, J=9.2 Hz, 1H), 3.96 (t, J=9.3 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.52 (t, J=9.0 Hz, 1H), 3.24 (t, J=2.2 Hz, 1H), 2.10(s, 3H).

Пример 21. Получение 1-(4-гидроксифенил)-4'-(2-хлорфенил)-1'-метил--2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.21).

Из 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-гидроксифенил)-5-(2-хлорфенил)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,2 г (1,2 ммоль) изатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0,31 г целевого соединения. Выход составил 94% Т_пл=221°C.

ЯМР ¹Н (DMSO-d⁶, 400 Hz): 10,65 (s., 1H), 10,02 (s., 1H), 9,74 (s., 1H), 7,45 (d., J=8,44 Hz, 2H), 7,40 (d., J=8,44 Hz, 2H), 7,25-7,32 (m., 2H), 6,99 (t., J=7,46 Hz, 1H), 6,83 (d., J=7,70 Hz, 1H), 6,68 (d., J=8,56 Hz, 2H), 6,39 (d., J=8,68 Hz, 2H), 4,28 (t., J=9,66 Hz, 1H), 3,95 (t., J=9,29 Hz, 1H), 3,44 (t., J=8,68 Hz, 1H), 2,11 (s., 3H)

Пример 22. Получение 1-фенил-4'-(2-бромфенил)-1'-метил--2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.22).

Из 0,3 г (0,8 ммоль) соответствующего (Z)-3-фенил-5-(2-бромфенил)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,28 г (1,6 ммоль) изатина и 0,18 г (1,6 ммоль) саркозина получили 0,45 г целевого соединения. Выход составил 88% Т_пл=139°С.

1Н HMR (400 MHz, DMSO-d6) 10.71 (s, 1Н), 9.74 (s, 1H), 8.05 (dd, J=6.42, 1.22 Hz, 1H), 7.65 (dd, J=6.85, 1.10 Hz, 1H), 7.51 (t, J=7.58 Hz, 1H), 7.38-7.44 (m, 3H), 7.35 (dt, J=7.70, 1.10 Hz, 1H), 7.28 (dt, J=7.46, 1.10 Hz, 1H), 7.20 (d, J=6.97 Hz, 1H), 7.03 (dt, J=7.58, J=0.86 Hz, 1H), 6.88 (d, J=7.58 Hz, 1H), 6.65-6.71 (m, 2H), 4.61 (t, J=8.56 Hz, 1H), 4.20 (t, J=8.93 Hz, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.49 (t, J=8.44 Hz, 1H).

Пример 23. Получение 5''-хлор-1-(4-этоксифенил)-4'-(3,4-диметоксифенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.23).

Из 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-этоксифенил)-5-(3,4-диметоксифенил)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,2 г (1,2 ммоль) 5-хлорзатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0,34 г целевого соединения. Выход составил 91%. Т_пл=201°С.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.79 (s, 1H, NH), 10.40 (s, 1H, NH), 7.34-7.48 (m, 5H), 6.87-6.91 (m, 3H), 6.55 (d, J=8.8 Hz, 2H), 4.31 (t, J=8.8 Hz, 1H), 3.98-4.03 (m, 2H), 3.93 (t, J=10.5 Hz, 1H), 3.49 (t, J=8.8 Hz, 1H), 2.49-2.50 (m, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.28-1.32 (m, 3H).

Пример 24. Получение 5''-хлор-1-фенил-4'-(3,4-дихлорфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-диона (1.24).

ИЗ 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-фенил-5-(3,4-дихлорфенил)-2-тиоксоимидазолидин-4-она, 0,2 г (1,2 ммоль) 5-хлорзатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получили 0,32 г целевого соединения. Выход составил 66% Т_пл=214°C.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.82 (s, 1Н, NH), 10.64 (s, 1H, NH), 7.80 (s, 1H), 7.61 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.46-7.34 (m, 5H), 7.32 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.88 (d, J=8.22, 1H), 6.73-6.66 (m, 2H), 4.34 (t, J=9.2 Hz, 1H), 3.92 (t, J=9.0 Hz, 1H), 3.51 (t, J=8.6 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H).

Пример 25. Получение 1-фенил-4'-(2-бромфенил)-1'-метил-2-оксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-дион (1.25).

Из 0,1 г (0,3 ммоль) соответствующего (Z)-3-фенил-5-(2-бромфенил)-2-оксоимидазолидин-4-она, 0,1 г (0,6 ммоль) изатина и 0,08 г (0,6 ммоль) саркозина получено 0,15 г целевого соединения. Выход составил 81% Т_пл=202°C.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.60 (s, 1Н, NH), 8.36 (s, 1H, NH),), 8,25 (d.d., J1=6,36 Hz, J2=2,32 Hz, 1H), 8,16 (d., J=2,32 Hz, 1H), 7,28-7,45 (m., 8H), 7,02 (d., J=8,68 Hz, 1H), 6,58-6,65 (m., 2H), 4,35 (t, J=9,05 Hz, 1H), 4,00 (t., J=9,34 Hz, 1H), 3,55 (t., J=8,68 Hz, 1H), 2,21 (s., 3H).

Пример 26. Получение 1-(4-хлорфенил)-4'-фенил-1'-метил-2-оксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-дион (1.26.)

Из 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-хлорфенил)-5-фенил-2-оксоимидазолидин-4-она, 0,2 г (1,2 ммоль) изатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получено 0,25 г целевого соединения. Выход составил 72% Т_пл=226°C.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.60 (s, 1Н, NH), 8.56 (s, 1H, NH), 8,17 (d.d., J1=6,35 Hz, J2=2,32 Hz, 1H), 8,10 (d., J=2,32 Hz, 1H), 7,28-7,49 (m., 7H), 7,08 (d., J=8,68 Hz, 1H), 6,56-6,67 (m., 2H), 4,35 (t., J=9,05 Hz, 1H), 4,00 (t., J=9,34 Hz, 1H), 3,55 (t., J=8,68 Hz, 1H), 2,21 (s., 3H).

Пример 27. Получение 5''-бром-1-(4-этоксифенил)-4'-(4-хлорфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-дион (1.27).

Из 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-этоксифенил)-5-(4-хлорфенил)-2-оксоимидазолидин-4-она, 0,2 г (1,2 ммоль) 5-бромизатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получено 0,22 г целевого соединения. Выход составил 63% Т_пл=210°C.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.60 (s, 1Н, NH), 8.65 (s, 1H, NH), 8,15 (d.d., J1=6,35 Hz, J2=2,32 Hz, 1H), 8,12 (d., J=2,32 Hz, 1H), 7,34-7,53 (m., 6H), 7,08 (d., J=8,68 Hz, 1H), 6,56-6,67 (m., 2H), 4,35 (t., J=9,05 Hz, 1H), 4,00 (t., J=9,34 Hz, 1H), 3,99-4,02 (m., 2H), 3,55 (t., J=8,68 Hz, 1H), 2,21 (s., 3H), 1,29-1,32 (m., 3H).

Пример 28. Получение 1-(4-метоксифенил)-4'-(4-хлорфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-дион (1.28).

Из 0,15 г (0,5 ммоль) соответствующего (Z)-3-(4-метоксифенил)-5-(4-хлорфенил)-2-оксоимидазолидин-4-она, 0,14 г (1,0 ммоль) изатина и 0,09 г (1,0 ммоль) саркозина получено 0,18 г целевого соединения. Выход составил 66% Т_пл=208°C.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.60 (s, 1Н, NH), 8.67 (s, 1H, NH), 8,17 (d.d., J1=6,35 Hz, J2=2,32 Hz, 1H), 8,10 (d., J=2,32 Hz, 1H), 7,28-7,49 (m., 6H), 7,08 (d., J=8,68 Hz, 1H), 6,56-6,67 (m., 2H), 4,35 (t, J=9,05 Hz, 1H), 4,00 (t, J=9,34 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3,55 (t., J=8,68 Hz, 1H), 2,21 (s., 3H).

Пример 29. Получение 1-(3-хлор-4-фторфенил)-4'-(4-этилфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-дион (1.29).

Из 0,2 г (0,6 ммоль) соответствующего (Z)-3-(3-хлор-4-фторфенил)-5-(4-этилфенил)-2-оксоимидазолидин-4-она, 0,19 г (1,2 ммоль) изатина и 0,15 г (1,2 ммоль) саркозина получено 0,28 г целевого соединения. Выход составил 87%. Т_пл=219°C.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.21 (s, 1Н, NH), 8.32 (s, 1H, NH), 8,14 (d.d., J1=6,35 Hz, J2=2,32 Hz, 1H), 8,10 (d., J=2,32 Hz, 1H), 7,32-7,47 (m., 6H), 7,03 (d., J=8,68 Hz, 1H), 6,58-6,69 (m., 2H), 4,32 (t., J=9,05 Hz, 1H), 4,01 (t., J=9,34 Hz, 1H), 3,55 (t., J=8,68 Hz, 1H), 2.58-2.62 (m., 2H), 2,21 (s., 3H), 1,18 (t., 1H).

Пример 30. Получение 5''-бром-1-фенил-4'-(4-бромфенил)-1'-метил-2-тиоксо-5Н-диспиро[имидазолидин-4,3'-пирролидин-2',3''-индол]-2'',5(1''Н)-дион (1.30).

Из 0,15 г (0,5 ммоль) соответствующего (Z)-3-фенил-5-(4-бромфенил)-2-оксоимидазолидин-4-она, 0,14 г (1 ммоль) 5-бромизатина и 0,09 г (1 ммоль) саркозина получено 0,18 г целевого соединения. Выход составил 63%. Т_пл=247°С.

1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.75 (s, 1Н, NH), 10.48 (s, 1H, NH), 7.59 (s, 1H), 7.46-7.21-7.50 (m., 5H), 7.01-7.12 (m., 3H), 6.82 (d, J=7.8 Hz, 2H), 6.58 (d, J=8.8 Hz, 2H), 4.30 (t, J=9.2 Hz, 1H), 3.99 (t, J=9.4 Hz, 1H), 3.47 (t, J=8.6 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H).

Пример 31. Получение солей (в виде гидрохлоридов)

Для получения солей диспиро-индолинонов формулы 1 полученные соединения 1.1-1.30 растворяют в спирте, добавляют к ним насыщенный спиртовой раствор хлороводорода. После окончания реакции выпавший осадок отфильтровывают. Получают кристаллы гидрохлоридов соединений 1.1-1.30.

Пример 32. Биологические испытания.

Все представленные диспиро-индолиноны формулы 1 были протестированы на их способность блокировать клеточный рост и вызывать апоптоз на различных штаммах опухолевых клеточных линий.

Эти модели включают дифференцированные клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (HepG2), эмбриональные клетки почек (НЕК293), линию раковых клеток молочной железы (MCF-7), шейки матки (SiHa) и клетки рака толстой кишки (НСТ116 Р53-/- и НСТ116 Р53+/+), а также клетки рака простаты РС3 и LNCap. Цитотоксичность этих вещества оценивали с помощью стандартного МТТ-теста с (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил тетразолий бромидом. Результаты биологических испытаний представлены в Таблице 1.

Известно, что в клеточной линии LNCAp белок р53 экспрессирован в большей концентрации по сравнению с клеточной линией РС3 [Wassman, С.D. et al. Computational identification of a transiently open L1/S3 pocket for reactivation of mutant p53. Nature Commun. 4, 1407 (2013)]. Таким образом, имея различия в значениях цитотоксичности соединений на этих двух линиях более, чем на один порядок, мы можем судить о эффективности полученных соединений как ингибиторов p53-MDM2 для терапии рака простаты. Как видно из данных Таблицы 1, соединение 1.2 обладает значительным цитототоксическим эффектом на клеточных линиях всех типов, проявляя селективность пот отношению к линии LNCap со значением IC₅₀ 3.45±1.86 мкМ, соединение 1.5, также проявляет селективность по отношению к линии LNCAp со значением IC₅₀ 4.65±2.36 мкМ. Соединение 1.6 проявляет цитотоксический эффект по отношению к линии LNCAp со значением IC₅₀ 4.65±2.36 мкМ, соединение 1.10 имеет значение IC₅₀ 2.41±0.88 мкМ, соединение 1.11 имееет значение IC₅₀ 13.05±1.98 мкМ, соединение 1.12 и 1.13 имеют значения IC₅₀ на клеточных линиях 9.03±1.28 и 9.67±1.56 мкМ соответственно. Для соединений 1.22, 1.24, 1.25 и 1.28 значения цитотоксичности IC₅₀ составляют 6.85±0.75, 12.72±3.90, 3.14±0.72 и 7.5±2.1 мкМ. Данные соединения могут быть использованы как противоопухолевые препараты для терапии рака простаты.

Дополнительно было проведено исследование цитотоксичности на клеточных линиях НСТ116 Р53+/+, экспрессирующей белок р53 и НСТ116 Р53-/- не имеющей данный белок. Данные линии являются клеточными линиями общей морфологии рака прямой и толстой кишки, однако в линии НСТ116 Р53-/ белок р53 генетически модифицирован и содержится в минимальной концентрации. Как видно из Таблицы 1, соединения 1.6, 1.9 и 1.10 имеют значения цитоксичности IC₅₀ на клеточной линии НСТ116 Р53+/+ 16.3±6.7, 2.84±0.77 и 4.50±0.81 мкМ соответственно. Для соединений 1.18, 1.22 и 1.25 значения цитотоксичности на линии НСТ116 Р53+/+ составляют 3.14±1.02, 2.15±0.58 и 4.56±1.51 мкМ. Наилучший цитотоксический эфеект и большую селективность проявляет соединение 1.29, которое имеет IC₅₀ 0.9±0.02 мкМ. Данные соединения могут быть использованы как противоопухолевые препараты для терапии рака толстой и прямой кишки.

Пример 33. Протокол исследования цитотоксичности.

Цитотоксичность тестируемых веществ оценивали с помощью стандартного МТТ-теста с использованием 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил тетразолий бромида [Ciapetti G, Cenni Е, Pratelli L, Pizzoferrato А. 1993. In vitro evaluation of cell/biomaterial interaction by MTT assay. Biomaterials 14: 359-364]. Для этого рассевают 4000 клеток на лунку в 130 мкл среды DMEM в 96-луночном планшете и выдерживают в инкубаторе при температуре 37°C с 5% CO₂ в течение первых 24 ч без обработки. Затем в плашки добавляют 15 мкл растворов вода-ДМСО испытуемых веществ к клеткам (восемь разведений от 50 нМ до 100 мкМ) и инкубируют клетки 72 ч, используя в качестве контроля доксорубицин (восемь разведений от 3 нМ до 6 мкмоль). После этого добавляют МТТ с концентрацией 0,5 мг/мл в среде, инкубируют клетки 2 ч с последующим удалением среды и добавлением 100 мкл ДМСО и измеряют пропускание при 565 нм с использованием планшетного ридера. IC₅₀ рассчитывают с использованием "GraphPad Prism 6" software (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA).

Настоящее изобретение может быть использовано для синтеза соединений для терапии онкологических заболеваний.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к способу получения диспироиндолинонов общей формулы 1, где X - S или О; R1 выбран из группы, включающей водород, фенил, фенил, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из атома галогена (фтор, хлор, бром), гидрокси-, низшей алкокси-группы (метокси, этокси, изопропилокси, пропаргилокси) или С1-С6 алкила (метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил); R2 выбран из группы, включающей незамещенный пиридил или фенил, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из атома галогена (фтор, хлор, бром), гидрокси-, низшей алкокси-группы (метокси, этокси, изопропилокси, пропаргилокси), альдегидной группы или С1-С6 алкила (метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил); R3 выбран из группы, включающей атом галогена, водорода или нитро-группу; R4 представляет собой С1-С5 алкил (метил, этил, пропил, бутил, пентил); R5 представляет собой атом водорода или алкил С1-С3 (метил, этил, пропил), характеризующемуся тем, что 1±0.1 мольных экв. соответствующего имидазолидин-4-она растворяют в одноатомном спирте, взятом в количестве 10 мл на 0.5±0.1 ммоль, и кипятят при температуре 100±10°С в течение 10±2 мин после закипания образовавшегося раствора, затем в кипящую смесь добавляют саркозин, взятый из расчета 2±0.2 экв., и соответствующий изатин, взятый в количестве 2±0.2 экв. по отношению к соответствующему имидазолидин-4-ону, полученную смесь кипят до окончания реакции, затем смесь охлаждают до комнатной температуры, выпавший осадок отфильтровывают на вакууме со стеклянным пористым фильтром и колбой Бунзена. Технический результат: разработан новый способ получения диспиропроизводных на основе 5-арилиден-2-тиоксо-имидазолин-4-онов и 5-арилиден-2-оксо-имидазолин-4-онов, позволяющий получить соединения с высокими выходами. 1 табл., 33 пр.

Способ получения диспироиндолинонов общей формулы 1,

где X - S или О; R1 выбран из группы, включающей водород, фенил, фенил, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из атома галогена (фтор, хлор, бром), гидрокси-, низшей алкокси-группы (метокси, этокси, изопропилокси, пропаргилокси) или С1-С6 алкила (метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил); R2 выбран из группы, включающей незамещенный пиридил или фенил, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из атома галогена (фтор, хлор, бром), гидрокси-, низшей алкокси-группы (метокси, этокси, изопропилокси, пропаргилокси), альдегидной группы или С1-С6 алкила (метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил); R3 выбран из группы, включающей атом галогена, водорода или нитро-группу; R4 представляет собой С1-С5 алкил (метил, этил, пропил, бутил, пентил); R5 представляет собой атом водорода или алкил С1-С3 (метил, этил, пропил), характеризующийся тем, что 1±0.1 мольных экв. соответствующего имидазолидин-4-она растворяют в одноатомном спирте, взятом в количестве 10 мл на 0.5±0.1 ммоль, и кипятят при температуре 100±10°С в течение 10±2 мин после закипания образовавшегося раствора, затем в кипящую смесь добавляют саркозин, взятый из расчета 2±0.2 экв., и соответствующий изатин, взятый в количестве 2±0.2 экв. по отношению к соответствующему имидазолидин-4-ону, полученную смесь кипят до окончания реакции, затем смесь охлаждают до комнатной температуры, выпавший осадок отфильтровывают на вакууме со стеклянным пористым фильтром и колбой Бунзена.