Применение пептида Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro для достижения анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением Российский патент 2019 года по МПК A61K38/08 A61P25/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, патофизиологии и физиологии, и может быть использовано для получения анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением.

Трипептид Gly-His-Lys является плазменным медь-связывающим пептидом человека. В настоящее время установлено, что он обладает антиоксидантным, нейротропным, анксиолитическим эффектами, участвует в процессе регенерации тканей посредством активации синтеза фибриногена фибробластами. [Effects of copper tripeptide on the growth and expression of growth factors by normal and irradiated fibroblasts / J.D. Pollard, S. Quan, T. Kang, R.J. Koch // Arch. Facial Plast. Surg. - 2005. - 7. - C. 27-31].

Недостатком природных регуляторных пептидов является непродолжительный период их действия вследствие деградации протеазами. Обогащение пептидной последовательности пролином является одним из способов повышения устойчивости к действию протеолитических ферментов и увеличения периода активности пептида [пат. 2443711 Рос. Федерация: МПК C07K 14/00 / Андреева Л.А, Гривенников И.А., Гаврилова С.А., Долотов О.В., Каменский А.А., Кошелев В.Б., Левицкая Н.Г., Мясоедов Н.Ф.; патентообладатель: Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН (ИМГ РАН). - №2011103680/10; заявл. 02.02.2011; опубл 27.02.2012, Бюл. №6].

Аминокислотная последовательность Pro-Gly-Pro, присоединенная к С-концу трипептида Gly-His-Lys, обладает нейротропным, а также нейропротективным эффектами. [Ашмарин И.П. Глипролины в составе регуляторных трипептидов / И.П. Ашмарин // Нейрохимия. - 2007. - Т. 24, №1. - С. 5-7].

Однако на настоящее время в литературных источниках отсутствуют данные об анальгетическом эффекте пептида Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro при боли, вызванной температурным раздражением. Данное исследование было проведено впервые.

Технический результат изобретения: применение пептида Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro, имеющего формулу (NH2) Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro (СООН), для достижения анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением.

Технический результат изобретения достигается путем применения пептида Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro для анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением.

Нами был использован препарат, разработанный и синтезированный в НИИ молекулярной генетики РАН. Растворенный в изотоническом растворе хлорида натрия пептид Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro вводился экспериментальным животным (крысы) парентерально (внутрибрюшинно) однократно в дозах 0,5, 5,0 и 50,0 мкг/кг массы тела за 15 минут до начала болевого раздражения, получаемого путем использования установки «Hot plate». Достигнутый эффект оценивался через 15, 30 и 45 минут после введения пептида.

Пример конкретного выполнения.

Эксперимент был выполнен на белых лабораторных крысах-самцах линии Wistar массой 170-190 г. Животные содержались в стандартных условиях при температуре 22-24°С, двенадцатичасовом световом режиме и на стандартном рационе питания и питья без ограничения. Для проведения эксперимента животные были разделены на группы по 11 особей в каждой.

Температурная болевая чувствительность оценивалась согласно имеющимся на настоящее время рекомендациям при помощи теста горячей пластины. [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. / под. ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.]. Согласно данной методике, животное помещалось на разогретую до 52°С пластину, затем регистрировалась продолжительность латентного периода до появления поведенческой реакции облизывания задних лап, что свидетельствовало о наличии болевых ощущений. Анальгетический эффект оценивался как достоверное увеличение времени латентного периода.

С использованием экспериментальной установки LE7406 Hot plate (Panlab, Испания) испытания проводились пятикратно, первые две посадки были проведены до введения пептида для определения исходного болевого порога экспериментальных животных, последующие три - через 15, 30 и 45 минут после введения пептида соответственно.

В связи с тем, что животные внутри группы обладали различным исходным порогом болевой чувствительности, для обработки результатов использовалась величина максимально возможного эффекта (МВЭ), которая рассчитывается по формуле:

где ЛПоп - латентный период реакции после введения вещества, ЛПконтр - латентный период реакции до введения вещества, МАХ время - максимальное время нанесения раздражителя (30 секунд).

Пептид, растворенный в физиологическом растворе, животным вводился внутрибрюшинно, однократно в дозах 0,5, 5,0 и 50,0 мкг/кг массы тела. Контрольным животным вводился физиологический раствор в эквивалентном объеме.

Для выявления достоверных различий результатов использовался непараметрический критерий Манна-Уитни для сравнения двух независимых выборок.

В результате проведенного исследования наличие анальгетического эффекта пептида Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro отмечалось во всех вводимых дозах по сравнению с контрольной группой (Таб. 1).

Таблица 1. Анальгетический эффект пептида Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro (GHK-PGP) при боли, вызванной температурным раздражением.

Примечание: * - достоверные отличия (p<0,05) в сравнении с контрольной группой.

Таким образом, результаты исследования наглядно демонстрируют, что пептид Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro обладает достоверно подтвержденным анальгетическим эффектом в дозах 0,5, 5,0 и 50,0 мкг/кг массы тела при боли, вызванной температурным раздражением.

Данный способ основан на применении регуляторного пептида, относящегося к классу биологически активных веществ, обладающих выраженным модуляторным эффектом и биологической полифункциональностью, не является трудоемким и не требует использования сложного оборудования.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, патофизиологии и физиологии. Предложено применение гексапептида Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro, имеющего формулу (NH2) GLy-His-Lys-Pro-Gly-Pro (СООН), для достижения анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением. Технический результат: анальгетический эффект достигнут при использовании малых доз пептида Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro и наблюдался 45 мин после парентерального введения. 1 табл., 1 пр.

Применение пептида Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro, имеющего формулу (NH2) Gly-His-Lys-Pro-Gly-Pro (СООН), для достижения анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением.