ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Данная заявка испрашивает приоритет Предварительной Патентной заявки США серийный № 61/890756, поданной 14 октября 2013 года, которая явным образом включена в данный документ посредством ссылки.
ДЕКЛАРАЦИЯ ПРАВ ПРАВИТЕЛЬСТВА
[0002] Данное изобретение было сделано с поддержкой правительства под AG018379 и RR025761, предоставленной Национальным Институтом Здоровья. Правительство обладает определенными правами на изобретение.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0003] Аспекты данного раскрытия относятся к модулированию уровня протеинов в сыворотке, выбранных из группы, состоящей из: связанной с внеклеточными сигналами активированной киназы периферических лимфоцитов (ERK1/2), секретируемого белка-предшественника амилоида (sAPP); sAPPα; нейротрофического фактора головного мозга (BDNF) посредством применения соединений, таких как акампросат, для лечения больных с диагностированными специфическими расстройствами развития, выбранными из группы, состоящей из синдрома ломкой X-хромосомы (FXS), расстройства аутистического спектра, связанного с FXS, и идиопатического расстройства аутистического спектра (ASD, аутизм).
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0004] Неврологические расстройства развития расстройства аутистического спектра (ASD: аутизм) и синдром ломкой X-хромосомы (FXS) представляют собой длящиеся с детства всю жизнь нарушения, которые могут привести к выраженному нарушению социального поведения, коммуникативных навыков и когнитивной функции. Выраженность симптомов, демонстрируемых индивидуумом с выявленными данными неврологическими расстройствами развития, широко варьирует. К сожалению, многие люди, страдающие данными нарушениями, демонстрируют тяжелые симптомы, некоторые не в состоянии ухаживать за собой, тогда как другие демонстрируют значительно сниженную способность функционировать в обществе. При том, что причина FXS известна, остаются неизвестными разнообразные нейронные проводящие пути, пораженные данным патологическим состоянием, поскольку представляют собой уровни особых нейроактивных соединений в головном мозге данных людей. Что касается идиопатического аутистического расстройства, то даже основная причина нарушения остается неизвестной. Из-за действия, которые данные нарушения оказывают на людей с диагностированным нарушением, имеется значительное количество преклинических и клинических исследований, посвященных разработке лечения данных патологических состояний. Несмотря на работу, посвященную диагностике и лечению, остается острая необходимость в новых видах терапии для помощи людям, страдающим данными нарушениями, приводящих к более комфортной и независимой жизни. Материалы, методы и системы, раскрытые в данном документе, предназначены для разрешения данных жизненно необходимых потребностей.
[0005] Расстройства аутистического спектра представляют собой длящиеся всю жизнь начинающиеся в детском возрасте неврологические расстройства развития, вызывающие выраженное нарушение в социальном поведении и коммуникации. Согласно министерству здравоохранения и социального обеспечения (DHHS), растущая распространенность ASD, оцениваемая в настоящее время 1 на 110 детей, служит основанием считать ASD национальной эпидемией. Люди с ASD также часто демонстрируют дополнительные приносящие вред симптомы, такие как агрессия, самоповреждение, компульсивность, невнимательность, гиперактивность и тревожность в том числе. Расходы на ASD (оцениваемые в Соединенных Штатах в $95 триллионов в год) являются большими и даже увеличиваются. Проявления аутизма являются гетерогенными. Например, люди с аутизмом могут иметь или могут не иметь интеллектуальные нарушения, припадки или функциональную речь. Данная гетерогенность направляет исследование как причины, так и эффективного лечения проблемы ASD. Понимание причины аутизма остается трудно достижимым, причем лишь приблизительно 10% случаев связано с известными генетическими аномалиями. Касательно лечения, на сегодняшний день нет лекарственных препаратов, показавших эффективность в крупномасштабных исследованиях при лечении ключевых социальных и коммуникативных нарушений ASD. Гетерогенность аутизма привела к тому, что многочисленные методы лечения многообещающими лекарственными препаратами потерпели неудачу в крупномасштабных исследованиях вследствие трудности идентификации соответствующих подгрупп для испытания. Учитывая такие разнообразные проявления, обоснование целесообразности разработки препарата при аутизме будет нуждаться в фокусировании на определении соответствующих подгрупп, в которых польза препарата увеличивается до максимума. Разработка биомаркера при аутизме предоставляет уникальную возможность решения данных проблем разработки терапевтических средств. Стратегический план 2011 года межведомственного координационного комитета по аутизму министерства здравоохранения и социального обеспечения настоятельно подчеркнул потребность в разработке биомаркера аутизма с учетом способности биомаркеров обеспечивать раннее определение заболевания, оценку тяжести заболевания, индикаторов фармакологического ответа и способность задействовать биомаркеры для идентификации подгрупп внутри аутизма для разработки целенаправленного лечения.
[0006] С учетом гетерогенности аутизма, известные причины аутизма предоставляют наилучшее обоснование для фармакотерапии и разработки биомаркеров. Среди данных известных причин, результаты недавних исследований при синдроме ломкой X-хромосомы (FXS) в сочетании со статусом FXS в качестве наиболее частой моногенной причины аутизма делают данное нарушение главным кандидатом на разработку стратегии развития терапевтических средств при аутизме. FXS является наиболее частой врожденной формой задержки развития, поражающей 1 из 4000 человек. Два из трех человек с FXS также страдают аутизмом, а в целом на FXS приходится 5-7% всех случаев аутизма.
[0007] На сегодня, Управлением США по контролю качества продуктов питания и лекарственных средств (FDA) не одобрено никакого лекарственного средства для снижения основных социальных нарушений аутистического расстройства. Множество фармакотерапевтических испытаний, нацеленных на аутистические социальные нарушения, дали равномерно отрицательные результаты. Соответственно, существует потребность в материалах и методах лечения данных патологических состояний. Некоторые аспекты настоящего раскрытия предоставляют материалы и методы исследования, диагностики и лечения идиопатического и связанного с синдромом ломкой X-хромосомы (FXS) расстройства аутистического спектра (ASD).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0008] Первый вариант осуществления включает способы лечения больного, включающие в себя стадии: приведения в контакт первого образца плазмы больного с диагностированным ASD или FXS по меньшей мере с одним реагентом, который селективно связывается с BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα, определяя уровень по меньшей мере одного из BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα в образце плазмы; введения по меньшей мере одного соединения больному; связывания второго образца плазмы больного по меньшей мере с одним реагентом, который селективно связывается по меньшей мере с одним из BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα; определение, имеется ли изменение уровней одного или более следующих соединений: BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα в плазме больного; и подбора количества соединения, вводимого больному в ответ на изменение уровней по меньшей мере одного из BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα, выявленных в образцах плазмы больного.
[0009] Второй вариант осуществления включает способы в соответствии с первым вариантом осуществления, в котором первым реагентом является антитело, которое селективно связывается с BDNF или ERK1/2. Третий вариант осуществления включает способы в соответствии с первым вариантом осуществления, в котором вторым реагентом является антитело, которое селективно связывается с sAPP. Четвертый вариант осуществления включает способы в соответствии с первым вариантом осуществления, в котором реагентом является антитело, которое селективно связывается с sAPPα.
[0010] Пятый вариант осуществления включает способ в соответствии с первым вариантом осуществления, включающий стадии: повышения уровня BDNF в ответ на этап введения; и понижения уровней ERK 1, ERK 2, sAPP и sAPPα в ответ на этап введения.
[0011] Шестой вариант осуществления включает способы в соответствии с первым-пятым вариантами осуществления, в которых соединением является акампросат или фармацевтически приемлемая соль акампросата. Седьмой вариант осуществления включает способы в соответствии с шестым вариантом осуществления, в которых акампросат вводят больному в дозе в диапазоне, составляющем от приблизительно 500 мг/день до приблизительно 1500 мг/день.
[0012] Восьмой вариант осуществления включает системы мониторного наблюдения за больным, включающие в себя: по меньшей мере одно первое антитело, которое селективно связывается с BDNF; по меньшей мере одно второе антитело, которое селективно связывается с sAPP; по меньшей мере одно антитело, которое связывается с ERK 1 и/или ERK 2; и по меньшей мере одно антитело, которое селективно связывается с sAPPα.
[0013] Девятый вариант осуществления включает системы в соответствии с восьмым вариантом осуществления, дополнительно включающий: по меньшей мере один реагент, выбранный из группы, состоящей из: буферного раствора, хелатирующего агента; бактерицидного агента, противогрибкового агента и блокирующего агента.
[0014] Десятый вариант осуществления включает способы скрининга для соединения, пригодного в лечении идиопатического аутизма или ASD, связанного с FXS; включающие в себя стадии: приведения в контакт первого образца плазмы больного с диагностированными ASD или FXS по меньшей мере с одним реагентом, который селективно связывается по меньшей мере с одним из BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα; определения уровней по меньшей мере одного из BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα в образце плазмы; введения по меньшей мере одного соединения больному; связывания второго образца плазмы больного по меньшей мере с одним реагентом, который селективно связывается по меньшей мере с одним из BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα; определения, имеется ли изменение уровня по меньшей мере одного из BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα в плазме больного; и выбора соединения, если данное соединение вызывает изменение уровня по меньшей мере одного из BDNF, ERK 1, ERK 2, sAPP и/или sAPPα в плазме больного.
[0015] Одиннадцатый вариант осуществления включает способы в соответствии с десятым вариантом осуществления, в которых первым реагентом является антитело, которое селективно связывается с BDNF. Двенадцатый вариант осуществления включает способ в соответствии с десятым вариантом осуществления, в котором вторым реагентом является антитело, которое селективно связывается с sAPP. Тринадцатый вариант осуществления включает способ в соответствии с десятым вариантом осуществления, в котором реагентом является антитело, которое селективно связывается с sAPPα.
[0016] Двенадцатый вариант осуществления включает способы в соответствии с десятым вариантом осуществления, включающие стадии: оценки, если изменение, вызванное соединением, представляет собой повышение уровня BDNF, понижение уровней sAPP, понижение уровня ERK 1 и/или ERK 2, и sAPPα. Тринадцатый вариант осуществления включает способы в соответствии с десятым вариантом осуществления, дополнительно включающие этап: изменения количества соединения, вводимого больному.
[0017] Тринадцатый вариант осуществления включает способы в соответствии с десятым вариантом осуществления, включающие стадии: оценки, если изменение, вызванное соединением, представляет собой понижение активности ERK1/2, измеряемого в образцах больного.
[0018] Четырнадцатый вариант осуществления включает способы в соответствии с десятым вариантом осуществления, дополнительно включающие этап: изменения количества соединения, вводимого больному.
[0019] Пятнадцатый вариант осуществления включает способы лечения больного, включающие в себя стадии: введения больному терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли; мониторного наблюдения за периферической кровью больного на изменение по меньшей мере одного из следующих: уровней ERK 1 или ERK 2, BDNF, sAPP и sAPPα в периферической крови больного; и подбора терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли, так чтобы в периферической крови больного изменялся уровень ERK 1 или ERK 2, BDNF и sAPP и sAPPα. Шестнадцатый вариант осуществления включает способы в соответствии с десятым вариантом осуществления, включающие этап изменения количества соединения.
[0020] Семнадцатый вариант осуществления включает способы лечения больного, включающие в себя стадии: введения терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли больному; мониторного наблюдения за периферической кровью больного на изменение уровней ERK 1, ERK 2, BDNF, sAPP и/или sAPPα в периферической крови больного; и подбора терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли, так чтобы в периферической крови больного изменялся уровень ERK 1, ERK 2, BDNF, sAPP и/или sAPPα.
[0021] Восемнадцатый вариант осуществления включает способы в соответствии с шестнадцатым вариантом осуществления, в которых этап мониторного наблюдения включает: приведение в контакт образца периферической крови больного с антителом, которое селективно связывается с BDNF. Девятнадцатый вариант осуществления включает способы в соответствии с шестнадцатым вариантом осуществления, в которых этап мониторного наблюдения включает: культивирование образца периферической крови больного с антителом, которое селективно связывается с sAPP. Двадцатый вариант осуществления включает способы в соответствии с шестнадцатым вариантом осуществления, в которых этап мониторного наблюдения включает: зондирование образца периферической крови больного с антителом, которое селективно связывается с sAPPα.
[0022] Двадцать первый варианты осуществления включает способы в соответствии с шестнадцатым через семнадцатый вариант осуществления, в которых этап подбора включает этап увеличения количества акампросата, так чтобы уровень BDNF в периферической крови больного повышался, а уровни sAPP и активности ERK1/2, и уровни sAPPα в периферической крови больного понижались. Двадцать третий вариант осуществления включает способы в соответствии с двадцатым вариантом осуществления, в которых акампросат вводят больному в дозе в диапазоне, составляющем от приблизительно 500 мг/день до приблизительно 1500 мг/день.
[0023] Некоторые варианты осуществления включают способы лечения больного, включающие в себя стадии: повышения уровня BDNF в сыворотке больного, при этом у указанного больного диагностирован FXS. В некоторых вариантах осуществления этап повышения включает введение больному доз терапевтически эффективного уровня акампросата или фармацевтически приемлемой соли акампросата.
[0024] Некоторые варианты осуществления включают способы лечения больного, включающие в себя стадии: снижения уровня ERK1/2 в сыворотке больного, при этом у указанного больного диагностирован FXS. В некоторых вариантах осуществления этап уменьшения включает введение больному доз терапевтически эффективного уровня акампросата или фармацевтически приемлемой соли акампросата.
[0025] Некоторые варианты осуществления включают способы лечения больного, включающие в себя стадии: приведения в контакт образца плазмы с реагентом, который селективно связывается с BDNF, при этом указанный образец плазмы берут у больного; определения уровня BDNF в образце плазмы; и введения указанному больному по меньшей мере одного соединения, так что соединение повышает уровень BDNF в плазме больного, при этом у указанного больного диагностирован FXS. В некоторых вариантах осуществления реагентом является антитело, которое селективно или по меньшей мере преимущественно связывается с BDNF. В некоторых вариантах осуществления соединение, которое повышает уровень BDNF в сыворотке больного, представляет собой акампросат или фармацевтически приемлемую соль акампросата.
[0026] Некоторые варианты осуществления включают способы мониторного наблюдения за больным, включающие в себя стадии: приведения в контакт образца плазмы больного по меньшей мере с одним реагентом, который селективно связывается с BDNF. В некоторых вариантах осуществления данные способы дополнительно включают стадии: введения больному по меньшей мере одной терапевтически эффективной дозы соединения; и тестирования плазмы больного после этапа введения посредством приведения в контакт сыворотки, взятой у больного, с реагентом, который селективно связывается с BDNF. Еще одни варианты осуществления могут включать этап подбора дозы соединения с целью изменения уровня BDNF, который присутствует в плазме больного. В некоторых из данных вариантов осуществления реагент, который связывается с BDNF, представляет собой антитело, которое специфически или по меньшей мере преимущественно связывается с BDNF. В некотором варианте осуществления соединение, которое изменяет уровень BDNF, представляет собой акампросат или его фармацевтически приемлемую соль.
[0027] Некоторые варианты осуществления включают способы диагностики аутистических нарушений, включающие в себя этап измерения уровней общего секреторного белка-предшественника β-амилоида (sAPP), а также sAPPα, который представляет собой секреторный белок-предшественник β-амилоида после расщепления общего целого-APP ферментом α-секретазой, в периферических текучих средах организма, включая кровь. Общий sAPP включает в себя по меньшей мере три вида, в том числе sAPPα. Повышенные уровни sAPP, измеренные у молодых людей, служат признаком аутистического нарушения, при этом значения в диапазоне, составляющем более чем приблизительно 19 нг/мл, являются диагностическим критерием нарастания поведенческих симптомов, таких как симптомы, используемые в Шкале общего клинического впечатления об улучшении (CGI-I).
[0028] Некоторые варианты осуществления включают способы лечения больных с диагностированным аутистическим нарушением, включающие в себя стадии измерения уровней общего sAPP и/или sAPPα перед, во время, и при необходимости после лечения терапевтической дозой или схемой применения соединения посредством уменьшения симптомов расстройства аутистического спектра. В некоторых вариантах осуществления соединением является акампросат, и терапевтическая доза, применяемая для лечения молодых людей, пропорциональна массе тела больного и может находиться в диапазоне 600-1998 мг/день. Во время лечения дозы могут начинаться с низких уровней и постепенно повышаться до обозначенных диапазонов. Уровни sAPP и/или sAPPα, измеренные в периферической крови больного, являются основанием и увеличивают или уменьшают уровень терапевтического соединения, вводимого больному.
[0029] Некоторые варианты осуществления включают способ упреждающих вариантов лечения больного с идиопатическим или связанным с FXS ASD, причем данные способы включают стадии измерения уровней BDNF, sAPP и sAPPα в плазме у конкретных больных и лечение больного, который имеет BDNF ниже нормального и более высокие, чем нормальные, уровни sAPP и/или sAPPα, соединениями, такими как акампросат, которые повышают уровни BDNF и снижают sAPP у некоторых больных с диагностированными ASD.
[0030] Некоторые варианты осуществления включают анализ фракционного изменения от исходного значения до конечного значения, при этом средние общие уровни sAPP уменьшались с 34,7 (нг/мл) в исходном значении до 19,3 в конечном значении (p=0,02), а средние уровни sAPPα уменьшались с 7,8 (нг/мл) в исходном значении до 4,2 в конечном значении (p=0,03).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
[0031] ФИГ. 1. График, иллюстрирующий отношение между фракционным изменением уровней sAPPα-CP, измеренных в крови больных с диагностированными ASD и пролеченных в течение 10 недель акампросатом.
[0032] ФИГ. 2. График, иллюстрирующий отношение между фракционным изменением уровней sAPP(общего)-CP, измеренных в крови больных с диагностированными ASD и пролеченных в течение 10 недель акампросатом.
[0033] ФИГ. 3A. Микрофотограмма лимфоцитов, помещенных в покрытый PDL 24-луночный планшет и обработанных 10 мМ тамоксифена (положительный контроль).
[0034] ФИГ. 3B. Микрофотограмма лимфоцитов помещенных в покрытый PDL 24-луночный планшет и обработанных 10 мМ тамоксифена ядра, окрашенного красителем Хехста.
[0035] ФИГ. 3C. Микрофотограмма лимфоцитов нелеченного больного, окрашенных антителом ERK/MAPK; антитело показывает 3 клетки с цитоплазматической транслокацией ERK/MAPK.
[0036] ФИГ. 3D. Микрофотограмма лимфоцитов с Фиг. 3C, демонстрирующая клеточные ядра.
[0037] ФИГ. 4. Столбиковая диаграмма активности pERK, измеренной у мышей дикого типа и fmr1 нокаутированных мышей, обработанных акампросатом.
ОПИСАНИЕ
[0038] С целью облегчения понимания принципов новой технологии, далее будет сделана ссылка на предпочтительные варианты ее осуществления, а для ее описания будет использован специфический язык. Тем не менее, должно быть понятно, что посредством этого не предполагается никаких ограничений объема правовых притязаний новой технологии, причем предполагается, что те изменения, модификации и дополнительные варианты применения принципов новой технологии, с которыми обычно сталкивается квалифицированный специалист в области, к которой относится новая технология, находятся в пределах объема правовых притязаний данного раскрытия и формулы изобретения.
[0039] Акампросат был одобрен FDA для лечения алкогольной зависимости у взрослых. Акампросат представляет собой новую молекулу, потенциально влияющую на нейропередачу как посредством глутамата, так и гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК). Предполагается, что акампросат действует как антагонист в NMDA-рецепторах и метаботропных рецепторах глутамата 5 типа (mGluR5) и как агонист в рецепторах к ГАМК типа A (ГАМК(A)). Избыточная глутаматергическая и дефицитная ГАМК(A)-ергическая нейропередача задействована в патофизиологии аутистического расстройства. Возможные фармакодинамические механизмы акампросата хорошо подобраны для патофизиологии аутизма. Дополнительную информацию о соединении можно найти в Патентной Заявке Соединенных Штатов серийный № 13/201014, поданной 11 августа 2011 года, при этом данная патентная заявка включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
[0040] Акампросат представляет собой уникальный лекарственный препарат, который вероятнее всего непосредственно или опосредованно воздействует на ряд нейрорецепторов. Оценка действия акампросата на биомаркеры, имеющие потенциальное значение при FXS, является перспективной для демонстрации включения акампросата в патофизиологию нарушения, несмотря на неполное понимание проксимальных фармакодинамических механизмов такого действия. Дополнительно, улучшение социальных навыков, отмеченные в данном сообщении, соответствуют данным, описанным авторами изобретения в первичном применении акампросата у молодого человека с идиопатичесим ASD (Erickson, et al. 2011). С учетом совпадений между FXS и ASD, в будущем будет являться важной оценка эффективности акампросата, нацеленного на основные социальные нарушения, ассоциированные с идиопатическим ASD.
[0041] Как используется в данном документе, если четко не обозначено иное или ясно не подразумевается иное, термин «приблизительно» относится к диапазону значений плюс или минус 10 процентов, напр., приблизительно 1,0 с охватом значений от 0,9 до 1,1.
[0042] Как используется в данном документе, если четко не обозначено иное или ясно не подразумевается иное, термины «терапевтически эффективная доза», «терапевтически эффективные количества» и тому подобное относятся к части соединения, которая имеет действительное положительное действие на здоровье и самочувствие человека или иного животного. Терапевтические эффекты могут включать улучшение продолжительности жизни, качества жизни и тому подобное. Данные эффекты также могут включать снижение предрасположенности к развитию заболевания или ухудшения здоровья или самочувствия. Эффекты могут реализовываться немедленно после однократной дозы и/или лечения, или они могут реализовываться кумулятивно после ряда доз и/или курсов лечения.
[0043] Фармацевтически приемлемые соли включают соли соединений изобретения, которые являются безопасными и эффективными для использования у млекопитающих и которые обладают необходимой терапевтической активностью. Фармацевтически приемлемые соли включают соли кислотных или основных групп, присутствующих в соединениях изобретения. Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты включают, но без ограничения, соли - гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, нитрат, сульфат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, ацетат, лактат, салицилат, цитрат, тартрат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкаронат, сахарат, формат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензенсульфонат, p-толуенсульфонат и памоат (т.е., 1,1ʹ-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат)). Определенные соединения изобретения могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с различными аминокислотами. Приемлемые основные соли включают, но без ограничения, соли алюминия, кальция, лития, магния, калия, натрия, цинка и диэтаноламина. Для дополнительной информации о некоторых фармацевтически приемлемых солях, которые можно применять для практического осуществления изобретения, пожалуйста, см. обзоры, такие как Berge, et al., 66 J. PHARM. SCI. 1-19 (1977), Haynes, et al., J. Pharma. Sci., Vol. 94, No. 10, Oct. 2005, pgs. 2111-2120 и тому подобное.
[0044] Синдром ломкой X-хромосомы (FXS) является наиболее частой врожденной формой нарушения развития. Генетическая мутация, ответственная за FXS, представляет собой экспансию нестабильных повторов тринуклеотида цистеин-гуанин-гуанин (CGG) (более 200 повторов) внутри гена умственной отсталости 1 ломкой X-хромосомы (fmr1). FXS наследуется через экспансию триплетных повторов от носителя (55-200 CGG повторов) родителя, чаще всего матери. Как и X-связанный синдром, FXS наиболее распространен у лиц мужского пола, и симптомы, ассоциированные с нарушением, более выражены у лиц мужского пола. FXS также является частой моногенной причиной расстройств аутистического спектра (ASD). Оценивается, что 2 из 3 лиц мужского пола с FXS имеют сопутствующий диагноз ASD. Существует очень мало видов лечения, подходящего для данного изнуряющего патологического состояния, соответственно имеется необходимость в дополнительных видах терапии для лечения данного заболевания. Аспекты данного изобретения ориентированы на предоставление таких видов терапии и инструментов для их мониторинга и реализации.
[0045] Экспансия триплетных повторов, ассоциированная с FXS, приводит к транскрипционному сайленсингу гена fmr1, приводя к отсутствию белка задержки умственного развития хрупкой Х-хромосомы (FMRP). FMRP представляет собой мРНК-связывающий белок, важный для созревания дендритов и синаптической пластичности. В головном мозге мышей, FMRP, как было продемонстрировано, связывался с сотнями транскриптов мРНК, важных для пре- и постсинаптической функции.
[0046] В нескольких исследованиях на животных отсутствие FMRP ассоциировано с разрегулированной нейропередачей, отмеченной избыточной глутаматергической передачей сигнала и дефицитной передачей сигнала посредством гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК). Конкретно, чрезмерная активность метаботропных рецепторов глутамата 5 типа (mGluR5) является наиболее изученным элементом разрегулированной нейропередачи при FXS. В мышиной модели с нокаутированным fmr1 чрезмерная гиппокампальная и мозжечковая длительная депрессия (LTD), чрезмерная интернализация AMPA-рецептора, патологическая морфология дендритов и сниженный порог судорожной готовности согласуется с избыточной активацией 1 группы, конкретно mGLuR5, метаботропного рецептора глутамата. Последствия лечения избыточной активации mGluR при FXS прошли всесторонние испытания на животных моделях FXS и первоначально изучены в исследовании с участием людей. В мышиной модели понижающая регуляция mGluR5 с помощью лечения MPEP (2-метил-6-(фенилэтинил)-пиридин) и другими антагонистами mGluR5, как было продемонстрировано, способствует регрессии фенотипических характеристик, включая рефлекторные слуховые эпилептические припадки, измененное преимпульсное ингибирование (PPI) и гиперактивацию в открытом поле. Дополнительно, понижающая регуляция mGluR5 осуществляется посредством скрещивания мыши с нокаутированным fmr1 с гетерозиготой с нокаутированным mGluR5, приводящим к регрессии некоторых характеристик при нокаутированном fmr1, включающих изменения дендритных шипиков и избыточный синтез белка.
[0047] Сообщалось о двух исследованиях с участием людей с применением селективных антагонистов mGluR5 при FXS. В пилотном исследовании однократной дозы с задействованными 12 взрослыми с FXS (6 лиц мужского пола, 6 лиц женского пола; средний возраст= 23,9 лет), антагонист mGluR5 фенобам продемонстрировал изменяющуюся фармакокинетику и хорошую переносимость, отмеченную 3 больными (25%), испытавших легкую седацию. Клинически, сообщается, что 9 больных (75%) испытали клиническую пользу от однократной дозы фенобама, включая уменьшение гиперактивности и тревоги.
[0048] Интересно, что применение селективного антагониста mGluR5 AFQ056 не связано со значительным групповым лечебным эффектом в двойном слепом, плацебо-контролируемом, двухпериодном перекрестном исследовании 30 лиц мужского пола с FXS в возрасте от 18 до 35 лет. В подгруппе 7 больных, отмеченной полным метилированием гена fmr1, значительный ответ на AFQ056 по сравнению с плацебо был замечен по нескольким критериям, включая стереотипию в Листе наблюдения за некорректным поведением (ABC), гиперактивность и дополнительные шкалы неадекватной речевой деятельности и общую сумму балов в ABC, Шкалу общего клинического впечатления об улучшении (CGI-I), Визуальную аналоговую шкалу и Пересмотренную шкалу повторяющегося поведения. Авторы предположили, что AFQ056 может являться перспективным в лечении приносящего вред поведения, ассоциированного с FXS, в подгруппе людей с полным метилированием гена fmr1. В настоящее время AFQ056 является объектом III фазы крупномасштабных клинических испытаний при FXS.
[0049] При FXS задействована аберрантная передача сигнала инотропного рецептора глутамата N-метил-D-аспарагиновой кислоты (NMDA). Сообщалось о повышающей регуляции NMDA-рецепторов на 2 недели жизни мышей с нокаутированным fmr1с разницей, проявляющейся в возрасте 6-7 недель. Применение неконкурентного антагониста NMDA мемантина было ассоциированно с коррекцией развития дендритных шипиков и формированием синапсов в культивируемых зернистых клетках мозжечка у мышей с нокаутированным fmr1. Сообщалось об умеренном эффекте применения мемантина у 6 людей (средний возраст= 18,3±3,8 лет; диапазон 13-22 лет) с FXS и сопутствующим ASD. В данном исследовании четверо больных (67%) продемонстрировали клинический ответ, определенный посредством шкалы CGI-I как «гораздо более улучшенный» или «весьма улучшенный». У двоих больных разработанное лечение ограничило раздражительность во время лечения мемантином.
[0050] При исследованиях FXS на животных была отмечена недостаточность нейропередачи как посредством ГАМК типа A (ГАМК(A)), так и ГАМК типа B (ГАМК(B)). Было показано, что FMRP транскрипционно регулирует экспрессию РНК субъединиц ГАМК(A)-рецептора с сокращением мРНК ГАМК(A)-рецептора, отмеченную у FXS нокаутированных мышей с отсутствующим FMRP. Было показано, что экспрессия ГАМК(A)-рецептора значительно понижающее регулируется в ряде областей головного мозга у мышей с нокаутированным fmr1. В животных моделях FXS агонизм ГАМК(A) показал значительную перспективность в качестве фармакотерапевтической мишени. Агонист ГАМК(A) альфаксалон был связан со снижением тревоги и избавлением от рефлекторных слуховых эпилептических припадков у мышей с нокаутированным fmr1. Также у нокаутированных мышей с FXS агонист ГАМК(A) габоксадол восстанавливал недостаточную возбудимость нейронов в миндалевидном теле, уменьшал гиперактивацию и уменьшал дефицит PPI. Улучшение запоминания и сохранения в памяти было отмечено у нокаутированных мышей с FXS, получавших таурин, агонист ГАМК(A). Авторы изобретения не знают о каких-либо испытаниях селективных агонистов ГАМК(A) с участием людей с FXS, которые были опубликованы.
[0051] Применение селективного агониста ГАМК(B) STX209 (арбаклофена, R-баклофена; единичного энантиомера баклофена) исследовали как на людях с FXS, так и на мышах с нокаутированным fmr1. У нокаутированных мышей STX209 был связан с коррекцией синтеза аберрантного белка и патологических изменений дендритных шипиков. STX209 являлся объектом наиболее крупного опубликованного двойного слепого, плацебо-контролируемого исследования при FXS. В перекрестном исследовании с добавлением STX209 к постоянной дозировке сопутствующих психотропных лекарственных препаратов у 63 больных с FXS в возрасте от 6 до 40 лет, применение STX209 не было связано с улучшением первичного критерия эффективности, дополнительной шкалы раздражимости в ABC (ABC-I). Эффекты в пределах группы также не были отмечены в общемировых показателях, включая шкалы CGI-I и общего клинического впечатления о тяжести заболевания (CGI-S), другие традиционные дополнительные шкалы ABC (социальная самоизоляция, Стереотипия, Гиперактивность, Неадекватная речевая деятельность) или Визуальную аналоговую шкалу (VAS). В целом, STX209 переносился хорошо, причем лишь 8% больных сообщали о седации. При ретроспективном анализе значительное улучшение в пределах группы при применении STX209 было отмечено по Шкале социального избегания (ABC-SA), недавно разработанной дополнительной шкале ABC из 4 пунктов, специально разработанной для предполагаемого применения у людей с FXS. Также при ретроспективном анализе подгруппа из 27 пациентов - людей с FXS и базовой оценкой≥8 на дополнительной шкале социальной самоизоляции в ABC (ABC-SW) - статистически подтверждают связанное с STX209 улучшение критерия социализации на шкалах ABC-SW и адаптивного поведения Вайнленда (VABS) адаптивной функции. В данном исследовании было сделано заключение, что лекарственный препарат является перспективным, нацеливаясь на социальную недостаточность у людей с FXS. Продолжается III фаза крупномасштабных клинических испытаний STX209 при FXS.
[0052] Акампросат, (3-ацетамидопропан-1-сульфоновая кислота, также известная как N-ацетилгомотаурин) представляет собой лекарственный препарат, одобренный Управлением по контролю за продуктами питания и лекарствами США (FDA) для поддержания воздержания от алкоголя. Он предписан для применения у взрослых с алкогольной зависимостью. Одобренная FDA дозировка у взрослых составляет 666 мг три раза в день (по две таблетки три раза в день). У людей с алкогольной зависимостью: понижает уровни некоторых гормонов: лептина, бета-эндорфина, кортизола.
[0053] Научная литература включает сообщения, что данная молекула может являться потенциальным антагонистом mGluR- рецепторов. То есть она может действовать как агонист ГАМК(A)-рецепторов в животных моделях антиоксидантного действия у длительно принимающих внутрь алкоголь крыс. У крыс данный лекарственный препарат повышает уровни внеклеточного допамина в центре подкрепления (зависит от активации глицинового рецептора). Возможные эффекты акампросата включают спермидин-сенситивные NMDA-рецепторы, улучшающие активацию при низких концентрациях глутамата и ингибирование при высоких концентрациях глутамата.
[0054] Есть предположение, что акампросат блокирует нейротоксическое действие агониста mGluR транс-ACPD. Сообщается, что 3-((2-Метил-4-тиазолил)этинил)пиридин (как MTEP, так и акампросат) оба уменьшают всасывание алкоголя в модели пьющей в темноте мыши. Сообщается, что оба, и MTEP, и акампросат, снижают эффект тревоги, связанной с алкогольной абстиненцией у животных. Также сообщалось о сходных эффектах 3-((2-Метил-4-тиазолил)этинил)пиридина (MTEP с увеличенным седативным действием алкогольной абстиненции у мышей. Также сообщалось, что акампросат и MPEP блокируются в mGluR5 у нокаутированных мышей.
[0055] Акампросат, одобренный FDA лекарственный препарат, применяемый для поддержания воздержания от алкоголя, используемый у взрослых, представляет собой биологически активный агент с возможным плейотропным действием, оказывающим воздействие по меньшей мере на глутаматергическую и ГАМК-ергическую нейропередачу. В исследованиях на животных было продемонстрировано, что акампросат связывает и действует как антагонист в рецепторе глутамата NMDA. Было продемонстрировано потенциальное антагонистическое действие на mGluR5 в обеих животных моделях как алкоголизма, так и депрессии. Дополнительно, в исследованиях на животных акампросат демонстрирует ГАМК(A)-агонизм. Тем не менее, точный механизм действия акампросата у людей остается неизвестным, особенно принимая во внимание выводы, содержащиеся в модели ооцитов шпорцевой лягушки, не отмечающие никакого прямого связывания между акампросатом и глутаматом или подтипами рецепторов ГАМК в клинически релевантных концентрациях.
[0056] Сообщалось о первоначальном клиническом опыте в исследовании с акампросатом и патофизиологией FXS (Erickson, Mullett et al. 2010). В данном исследовании 3 взрослых лиц мужского пола (средний возраст=20,9 лет) с диагностированными FXS пролечили акампросатом (средняя доза=1,221 мг/день; средняя продолжительность=21,3 недель). В данном исследовании все 3 больных продемонстрировали значительный положительный клинический ответ, как было оценено посредством CGI-I, с улучшением, отмеченным первично при социальных нарушениях и дефиците коммуникации. Двое больных испытали не ограничивающее лечение желудочно-кишечное расстройство (рвоту и/или тошноту). Затем было проведено первое системное проспективное испытание акампросата у молодых людей с FXS.
[0057] Разработка биомаркера крови в исследовании FXS является потенциально перспективным для прогнозирования ответа на лечение, определения фармакодинамических механизмов лекарственного препарата, включая возможную связь механизма лекарственного препарата с лежащими в основе патофизиологическими особенностями, и чтобы служить потенциальными критериями количественного результата. Ценность этих пособий постоянно возрастает с учетом последних отчетов клинических исследований FXS, отмечающих положительный ответ в подгруппах больных и присущий субъективный характер опирающихся на сообщения родителей опросников о поведении или критериев эффективности по рейтингу врача-клинициста в клинических исследованиях FXS. Подобные маркеры, будучи связанными с эффективными режимами лечения, особенно применимы в популяциях, которые трудно отслеживать и оценивать иным образом.
[0058] Нейротрофический фактор головного мозга (BDNF) представляет собой белок, который поддерживает выживание существующих нейронов и рост и дифференцировку новых нейронов и синапсов. В исследованиях на животных было показано, что BDNF регулирует экспрессию FMRP. Было предемонстрировано, что применение BDNF на гиппокампальных срезах у мышей с нокаутированным fmr1 спасает от дефектов долговременной потенциации (LTP). Было показано, что экспрессия BDNF снижена у мышей с нокаутированным fmr1 по сравнению с однопометными животными дикого типа. Не было сообщений о периферических уровнях BDNF у людей с FXS, и неизвестно влияние применения акампросата на уровни BDNF.
[0059] Как сообщается в данном документе, каждую область улучшения, социальное поведение или невнимательность/гиперактивность фиксировали с использованием множества независимых критериев эффективности, подтверждая таким образом каждый результат. Во время испытания члены семьи часто высказывались об улучшении коммуникативных навыков, результат, потенциально подтверждаемый улучшением, отмечаемым в ходе диагностического использования данных перед и после лечения по VABS. Остается неясным, влияет ли акампросат на многочисленные зоны поражения независимо, или приводит ли улучшение в одной области, например, невнимательности/гиперактивности, к соответствующему улучшению в других областях, таких как социальное поведение и коммуникация. Помимо четко измеряемых улучшений в поведении больных и вновь установленного биомаркера улучшения, механические результаты исследования осложнялись за счет разрешения сопутствующего использования некоторыми больными исследования психотропных лекарственных препаратов. Соответственно, является возможным, что у некоторых больных межлекарственные взаимодействия между акампросатом и сопутствующими вводимыми лекарственными препаратами могут влиять на их ответ на лечение и/или переносимость способами, которые являются не столь очевидными с учетом относительно малого числа больных, задействованных в исследовании.
[0060] Касательно переносимости, несмотря на то, что больные периодически разжевывали таблетки акампросата, покрытые кишечнорастворимой оболочкой, отмечалось ограниченное желудочно-кишечное расстройство. Низкая частота желудочно-кишечных побочных эффектов была неожиданной с учетом того, что желудочно-кишечные побочные эффекты являются наиболее частыми побочными эффектами, замеченными при применении акампросата при исследовании человеческого алкоголизма и в первом отчете авторов изобретения по применению акампросата при FXS. С учетом новизны данного испытания, авторы изобретения не имеют каких-либо исторических данных, на которых базируются дозы введения, за исключением данных литературы по алкоголизму, где лекарственный препарат давали дозами вплоть до возраста 16 лет (Niederhofer and Staffen 2003). Легкая раздражимость, отмечаемая у 4 больных, как представляется, являлась зависимой от дозы, и в каждом случае при уменьшении дозы приводила к быстрому исчезновению данного побочного эффекта. Может случиться, что в молодом возрасте при превышении порогового воздействия лекарственного препарата у некоторых участников с FXS может возникнуть легкая раздражимость. В целом, итоговая средняя доза составляла приблизительно половину дозы, которая одобрена FDA для применения при лечении алкогольной зависимости у взрослых.
[0061] Показатели BDNF показали последовательное увеличение при применении акампросата. Данное общее изменение показателей BDNF является потенциально важным в данных отчетах о FXS у мышей с нокаутированным fmr1 для избавления от дефицита LTP при применении BDNF в мозговых срезах гиппокампа. Данное BDNF открытие также может потенциально обеспечивать некоторое дополнительное объяснение по поводу текущих антидепрессивных качеств акампросата, отмечаемых при исследовании животных (Louhivuori, Vicario et al. 2011), причем данные клеточные и поведенческие модели связывают периферический BDNF с получением антидепрессант-подобных эффектов (Uutela, Lindholm et al. 2012). BDNF может обладать потенциалом в качестве как прогностического фактора, так и критерия ответа на лечение.
[0062] Отсутствие корреляции между изменением BDNF и ответом на лечение, отмеченным при ретроспективном анализе, может быть обусловлено небольшим размером выборки и тем фактом, что только один пациент без лечебного эффекта имел доступные данные BDNF перед и после лечения. Применение сопутствующих лекарств делает интерпретацию BDNF более трудной. Известно, что сопутствующие избирательные ингибиторы обратного захвата серотонина (SSRI), применяемые в данном испытании, аналогичным образом повышали BDNF (Balu, Hoshaw et al. 2008). При применении сопутствующего лекарственного препарата дозировка сохранялась стабильной на протяжении всего этого испытания, чтобы попытаться уменьшить изменчивость, привносимую сопутствующими лекарственными препаратами.
Митоген-активируемые протеинкиназы (MAPK) являются важными молекулами клеточной передачи сигнала, вовлеченными в некоторые биологические пути. MAPK подразделяют на несколько групп, включающих в себя киназу, регулируемую внеклеточными сигналами (ERK), c-Jun аминотерминальную киназу (JNK) и изоформы p38. ERK1 и ERK2 представляют собой хорошо изученные регуляторные киназы, которые вовлечены в большое множество путей клеточной передачи сигнала. ERK 1/2 фосфорилируются на остатках Tyr204 и Thr202, перемещаются в ядро и активируют транскрипцию нескольких генов. Ранее наблюдалось, что субклеточная локализация активированной ERK 1/2 отличается в условиях разных клеток (или клеточных линий) и культур. В культивируемых мононуклеарных клетках (выделенных у больных) авторы изобретения наблюдали цитоплазматическую локализацию ERK 1/2 после обработок тамоксифеном (положительный контроль). Для отдельных больных и контроля авторы изобретения подсчитывали положительные клетки, т.е. фосфо-ERK 1/2, локализованные в цитозольном компартменте, по отношению к общему количеству клеток в области. Ebisuya, M., Kondoh, K. and Nishida, E. (2005) The duration, magnitude and compartmentalization of ERK MAP kinase activity: mechanisms for providing signaling specificity. Journal of cell science, 118, 2997-3002.
[0063] Подсемейство ERK1/2 митоген-активируемой протеинкиназы (MAP) опосредует передачу сигналов от рецепторов клеточной поверхности к эффекторам цитоплазмы и ядра. В головном мозге ERK1/2 больше всего экспрессируется в нейронах по сравнению с другими типами клеток. Некоторые результаты связывают потенциальную дисрегуляцию ERK1/2 с патофизиологией ASD. Было показано, что нокаутированные мыши с обусловленной изоформой 2 (ERK1/2) демонстрируют несколько особенностей, имеющих отношение к ASD, включая редуцированное социальное поведение, дефекты построения семьи и дефекты памяти. В генетических исследованиях человека делеция в хромосоме 16p11.2 и делеция в хромосоме 22q11.2 располагались в гене для ERK2, и обе связаны с аутизмом. Была показана повышающая регуляция активности передачи сигнала ERK1/2 в мышиной модели BTBR аутизма при посмертном исследовании у людей с ASD.
Влияние акампросата на уровни BDNF у больных с диагностированным FXS
Участники
[0064] Данное исследование одобрил институтский наблюдательный совет (IRB) в академическом медицинском центре. Для данного исследования было набрано тринадцать амбулаторных лиц мужского пола и лиц женского пола в возрасте от 5 до 17 лет с массой тела≥15 кг. От законного представителя каждого участника было получено письменное подтверждение согласия (родителей всех детей в данном отчете), а больные давали согласие, когда были в состоянии. Диагноз FXS подтверждали с помощью саузерн-блоттинга и результатов ПЦР, согласующихся с экспансией более чем 200 повторов CGG гена fmr1 по меньшей мере с частичным метилированием гена. Больные не должны иметь другие существенные медицинские патологические состояния. Сопутствующее применение психотропных лекарственных препаратов, в отношении которых отсутствуют основания полагать, что они влияют на нейропередачу глутамата, было дозволено при условии, что больные стабильно получали дозы лекарства по меньшей мере 4 недели перед исходным значением. Требовалось, чтобы больные имели умственное развитие более чем 18 месяцев, которое определяется по Шкале интеллекта Стэнфорд-Бине, 5 издание. Дополнительные критерии включения включали оценку CGI-S (Guy 1976), равную по меньшей мере 4 («Умеренно больной»). Из исследования исключили больных с диагнозом психотического растройства, биполярного нарушения или расстройства, вызванного употреблением психоактивных веществ по Руководству по диагностике и статистике психических расстройств, 4 издание, переработанное (DSM-IV-TR). Дополнительно исключили больных с положительным тестом мочи на беременность, креатининовым клиренсом <30, активной эпилепсией или другим существенным медицинским патологическим состоянием.
Дизайн исследования
[0065] Выбрали дизайн 10-недельного, проспективного, открытого исследования для сбора опытных данных для потенциальных будущих крупномасштабных, двойных слепых, плацебо-контролируемых исследований в данной популяции.
Методика
[0066] Всех больных подвергли скринингу и посещению исходного уровня с последующими контрольными посещениями каждые 2 недели в течение периода 10-недельного открытого исследования. В конце 1, 3 и 5 недели исследователи звонили родителям для оценки переносимости лекарственного препарата и осуществления регулирования дозы, как указано. Все больные получали 333 мг/день акампросата в течение первой недели исследования. Затем исследователи повышали дозировку до максимума, составляющего 1,998 мг/день (масса >50 кг) или 1,332 мг/день (масса <50 кг) в течение первых шести недель исследования, если не возникал оптимальный клинический ответ (CGI-I, равный 1 «очень сильно улучшенный») и не возникали непереносимые побочные эффекты. Фаза сохранения дозы продолжалась 4 недели с оптимальной дозировкой.
Оценки
[0067] Оценку CGI-S вводили при скрининге и в исходном значении в качестве части критерия отбора, описанного выше. В данном исследовании рейтер подсчитывал балл CGI-S в отношении тяжести симптомов, обычно отмечаемых при FXS, включая, но без ограничения, невнимательность/гиперактивность, социальные нарушения, коммуникативное расстройство, повторяющееся поведение, раздражимость и тревожное расстройство. CGI-S оценивают по шкале от 1 до 7 (1=нормально, не болен совсем; 2=погранично болен; 3=слегка болен; 4=умеренно болен; 5=значительно болен; 6=тяжело болен; 7= среди крайне больных FXS). План диагностического наблюдения аутизма (ADOS) (Lord, Rutter et al. 1989) вводили в исходном состоянии для определения потенциального сопутствующего диагноза ASD.
[0068] Первичным критерием эффективности была CGI-I. CGI-I представляет собой шкалу, разработанную для оценки глобального изменения относительно исходных значений. Количество баллов CGI-I колеблется от 1 до 7 (1=очень сильно улучшен; 2=сильно улучшен; 3=минимально улучшен; 4=без изменения; 5=минимально ухудшен; 6=сильно ухудшен; 7=очень сильно ухудшен). Ответ на лечение определяли по шкале CGI-I, равной 1 «очень сильно улучшен» или 2 «очень улучшен». В данном исследовании CGI-I использовали в качестве общего глобального первичного критерия эффективности, учитывая неопределенность в отношении того, какие можно ожидать конкретные симптомы/варианты поведения, связанные с FXS, для улучшения или ухудшения с применением акампросата. CGI-I вводили при всех посещениях после исходного значения.
[0069] Вторичный критерий эффективности включал все дополнительные шкалы ABC (Раздражимость, Социальная самоизоляция, Стереотипия, Гиперактивность и Неадекватная речевая деятельность). ABC представляет собой измерение, оцениваемое опрашиваемым лицом (ответственным опекуном) с подтвержденной надежностью и достоверностью в отношении к факторной структуре, распределению баллов и чувствительности к изменению у людей с инвалидностью вследствие нарушения развития (Aman, Singh et al. 1985). Дополнительно, ABC продемонстрировала хорошую надежность и прогностичность при FXS-специфичном клиническом исследовании. Дополнительные вторичные критерии эффективности включали Шкалу социальной отзывчивости (SRS) (Constantino, Davis et al. 2003), Дополнительную шкалу компульсивности Детской обсессивно-компульсивной шкалы Йеля-Брауна, модифицированной для первазивных расстройств развития (PDD) (CY-BOCS-PDD) (Scahill, McDougle et al. 2006), CGI-S и Шкалу оценки СДВГ, 4 издание (ADHD-RS) (Zhang, Faries et al. 2005). SRS представляет собой заполняемую родителями шкалу из 65 пунктов, которая оценивает некоторые аспекты реципрокного социального поведения. SRS предоставляет общую оценку в баллах, которая пропорциональна уровню нарушения реципрокного социального поведения. CY-BOCS-PDD применяет 5 пунктов тяжести компульсивности из CY-BOCS с применением немного модифицированных опорных точек, которые являются более подходящими для людей с ASD. ADHD-RS представляет собой стандартную оцениваемую врачом-клиницистом оценочную шкалу, широко используемую в испытаниях лекарственных препаратов СДВГ. Все вторичные критерии эффективности вводили при всех посещениях исследования.
[0070] Дополнительные критерии эффективности исследования, вводимые на исходном уровне и на 10 неделе, включали Шкалы адаптивного поведения Вайнленда (VABS) (Sparrow and Cicchetti 1985) и клинической оценки языковых основ, 4-е издание (CELF) (Muma 1984). VABS использовали для выявления потенциального изменения в адаптивном поведении при лечении. PPVT и CELF включали, чтобы уловить потенциальное изменение коммуникации/речи.
[0071] Оценку и мониторинг безопасности начинали при скрининге, когда всех больных подвергали сбору анамнеза, объективному обследованию и всестороннему психиатрическому опросу. Объективное обследование также завершали в конечной стадии. Основные жизненные показатели, включая рост и массу, получали при каждом посещении исследования. При скрининге генетическое тестирование на FXS проводили, если не были доступны зарегистрированные данные молекулярного тестирования с использованием саузерн блоттинга и ПЦР. При скрининге, на 6 неделе и в конечной стадии проводили лабораторные исследования крови и мочи, включающие клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой и тромбоцитами, панель электролитов, печеночные ферменты, липидограмму и исследование мочи на беременность (для лиц женского пола). При скрининге и в конечной стадии также получали электрокардиограмму.
Оценка Биомаркеров
[0072] Образцы крови для BDNF брали при скрининге и на 10 неделе исследования. Для оценки больного (перед и после лечения) проводили слепой анализ BDNF. Приблизительно 4 мл крови собирали в содержащие ЭДТК пробирки. В течение 30 минут после сбора кровь центрифугировали при 1000 g при 2-8°C в течение 15 минут. Плазму собирали и проводили дополнительное центрифугирование собранной плазмы при 1000 g при 2-8°C в течение 10 минут для полного удаления тромбоцитов из образцов. Все образцы плазмы хранили при -80°C. Анализы на BDNF проводили одновременно для всех образцов в трех повторениях. Для определения BDNF в плазме использовали чувствительный метод, основанный на ELISA (твердофазном иммуноферментном анализе) с использованием набора ELISA для человеческого BDNF от R&D systems (Minneapolis, MN; USA), который утвержден для обнаружения BDNF, присутствующего в плазме человека (Grassi-Oliveira et al., 2008). Количество (пг/мл) BDNF, присутствующего в образцах плазмы, определяли из значения в пг, полученного на стандартной кривой, используя известное количество чистого человеческого BDNF, которую одновременно строили для образцов больных.
Анализ Данных
[0073] Все данные регистрировали в SPSS Statistics Professional для статистического анализа. Потенциальные различия средних значений всех используемых критериев эффективности перед и после лечения расчитывали с использованием парного критерия Стьюдента. В случаях, когда данные не соответствовали предположению о нормальности, для оценки потенциального изменения средних значений перед и после лечения использовали знаковые ранговые критерии Уилкоксона. Размеры эффекта расчитывали, беря среднее изменение от исходного значения до конечного значения, деленное на стандартное отклонение исходного значения.
[0074] Из 13 больных, подвергшихся скринингу, 12 (92%) удовлетворяли критериям отбора и были включены в исследование. Отобранная выборка состояла из 10 лиц мужского пола и 2 лиц женского пола (возрастной диапазон 6-17 лет; средний 11,9 лет). Десять больных (83%) удовлетворяли критериям ADOS для дополнительного диагноза аутистического расстройства, и два (17%) удовлетворяли критериям неуточненного первазивного нарушения развития (PDD-NOS). Комплексный показатель умственного развития колебался в пределах 36-61, со средней оценкой в баллах, равной 45. Больные получали среднюю итоговую дозу акампросата, составляющую 1054 мг/день (диапазон 666-1,998 мг/день). Десять больных в ходе исследования принимали сопутствующие психотропные лекарственные препараты (в среднем 2,3 сопутствующих психотропных лекарственных препарата), включая наиболее распространенные атипичные антипсихотические препараты (n=7; Таблица 1) и стимуляторы (n= 4).
[0075] Все больные прошли полное исследование. Девять (75%) из двенадцати больных считались пациентами, у которых получен клинический ответ на основании шкалы CGI-I, равный 1 «очень сильно улучшенный» (n=5) или 2 «сильно улучшенный» (n=4). Среднее CGI-I в конечной стадии составляло 1,9.
[0076] Среди дополнительных критериев эффективности значительные улучшения были отмечены в социальном поведении и невнимательности/гиперактивности. Касательно социального поведения, средние оценки в баллах по дополнительной шкале ABC-SW снижались на 53% от 8,8 в исходном значении до 4,1 в конечном значении (p=0,04; величина эффекта=0,81). Средние оценки в баллах по ABC-SA снижались на 51% от 3,3 в исходном значении до 1,6 в конечном значении (p=0,01; величина эффекта=0,64).
[0077] В дополнение к выводам на основании ABC в соответствии с изменением социального поведения, изменения SRS, отмечаемые при лечении, согласовывались с уменьшением социальных нарушений. Средние общие исходные оценки в баллах SRS снижались на 16% от 91,3 в исходном значении до 76,4 в конечном значении (p=0,005; величина эффекта 0,54). Среди дополнительных шкал лечения SRS отмечалось улучшение социального познания (снижение 19%; p=0,01), социальной коммуникации (снижение 14%; p=0,01) и социальной мотивации (снижение 28%; p=0,003). Не было отмечено улучшение по дополнительным шкалам социальной осведомленности SRS и аутистичной манерности.
[0078] Улучшение гиперактивности отмечалось по дополнительной шкале гиперактивности ABC (ABC-H), где средние оценки в баллах снижались на 35% с 16,8 в исходном значении до 11,0 в конечном значении (p=0,01; величина эффекта=0,64). В соответствии с выводом по дополнительной шкале ABC-H, средние оценки в баллах по ADHD-RS снижались на 29% с 23,6 в исходном значении до 16,7 в конечном значении (p=<0,0001; величина эффекта=0,65).
[0079] Улучшалась общая тяжесть заболевания, что демонстрируется средним изменением CGI-S с 4,25 (между умеренным и тяжелым заболеванием) до 3,33 (между легким и умеренным заболеванием) в конечном значении (p=<0,0001; величина эффекта=2,0). Другие дополнительные шкалы ABC и CY-BOCS-PDD в ходе лечения значительно не изменялись (Таблица 2).
[0080] Среди критериев эффективности исследования оценки в баллах PPVT при лечении не претерпели значительного изменения. CELF оказалось трудно вводить только 3 больным, получившим действительные оценки в баллах перед и после лечения. Среди доменов VABS средние стандартизированные оценки в баллах домена коммуникации улучшались на 5% с 63,4 в исходном значении до 66,6 в конечном значении (p=0,03; величина эффекта=0,3). В пределах субдоменов VABS средние оценки в баллах экспрессивной коммуникации улучшались на 13% с 69,7 в исходном значении до 78,9 в конечном значении (p=0,003; величина эффекта=0,4). Другие изменения по VABS при лечении не были отмечены.
SD= Стандартное Отклонение.
[0081] Десять больных (83%) участвовали во взятии проб BDNF плазмы при скрининге и на 10 неделе. У двух больных на 10 неделе было недостаточное количество крови, необходимое для взятия пробы на биомаркер (приоритет отдавался безопасности лабораторных измерений). Все данные BDNF анализировали с использованием знакового рангового критерия Уилкоксона. У всех больных наблюдалось увеличение BDNF плазмы от скрининга к 10 неделе. Средний BDNF плазмы больного увеличивался при лечении с 790,4±1350,4 пг/мл до 1007,6±1493,2 пг/мл (p=0,01). Провели ретроспективный анализ потенциальной корреляции изменения BDNF и оценки CGI-I в баллах на 10 неделе. У 10 больных, участвующих в исследовании с доступными данными BDNF, 9 из которых были пациенты, у которых получен клинический ответ, отсутствовала корреляция между изменением уровня BDNF и ответом на лечение (P=0,2; знаковый тест).
Критерии Безопасности и Побочные Эффекты
[0082] Не было отмечено никаких клинически значимых изменений массы, пульса или артериального давления. Не было отмечено никаких клинически значимых изменений на ЭКГ, включая отсутствие изменения скорректированного интервала QT. В отношении лабораторных критериев, не было отмечено никаких клинически значимых или изменений среднего значения в исследованиях липидов, электролитов, функции печени или подсчета форменных элементов крови.
[0083] В целом акампросат переносился хорошо без тяжелых или серьезных побочных эффектов, зарегистрированных в ходе исследования. У девяти больных (75%) в ходе исследования наблюдалось легкое неблагоприятное явление. Наиболее частые легкие побочные эффекты по сообщениям ответственных опекунов включали раздражимость (n=4) и участившееся повторяющееся поведение (n=2). Все случаи раздражимости производили впечатление зависимости от дозы, причем раздражимость уменьшалась в каждом случае при уменьшении дозы на 333 мг. Ни одного случая легкой раздражимости не осталось при посещении на 10 неделе. Желудочно-кишечные побочные эффекты включали легкую диарею (n=1) и легкий запор (n=1).
Влияние акампросата на уровни sAPP, sAPPα у больных с диагностированными Расстройство аутистического спектра
Обзор
[0084] Белок-предшественник бета-амилоида (APP) представляет собой белок, вероятно, важный для образования синапса. Амилоидогенетический путь расщепления APP приводит к выработке бета-амилоидного пептида (Aβ), основного компонента бляшек, ассоциированных с болезнью Альцгеймера. Неамилоидогенетический путь приводит к секретируемому нейротрофическому продукту APPα (sAPPα). У молодых людей с аутизмом отмечалась потенциально повышенная активность неамилоидогенетического пути, отмеченная повышенными общим sAPP и sAPPα в сыворотке. Это выглядит так, как будто sAPP изучали в качестве потенциального маркера и прогностического фактора ответа на лечение в клинических испытаниях с вовлечением людей с расстройством аутистического спектра.
[0085] Акампросат представляет собой новую молекулу, вероятно, влияющую на нейропередачу посредством как глутамата, так и гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК). APP является важным для образования синапса. Амилоидогенетический путь расщепления APP приводит к выработке бета-амилоидного пептида (Aβ), основного компонента бляшек, ассоциированных с болезнью Альцгеймера. Неамилоидогенетический путь приводит к секретируемому нейротрофическому продукту APPα (sAPPα). В многочисленных исследованиях было обнаружено, что у молодых людей с ASD повышен общий APP плазмы (общий sAPP) и sAPPα плазмы по сравнению с нейротипичными контрольными больными. Данные открытия, объединенные с доказательством избыточного роста головного мозга, участвующего в патофизиологии идиопатического ASD, привели к гипотезе, что избыточная активность sAPPα может играть роль в патогенезисе ASD2. Конкретно известно, что при FXS белок умственной отсталости ломкой X-хромосомы (FMRP) регулирует трансляцию APP с получающимся в результате увеличением APP, отмечаемым при FXS с учетом отсутствующего FMRP4. В целом, в исследовании, подтверждающем идиопатический и FXS-ассоциированный ASD, имеется доказательство модуляции APP, конкретно sAPPα, в качестве важного потенциального фармакодинамического механизма.
[0086] В первоначальном клиническом опыте с лечением акампросатом молодых людей с симптомaтикой аутистического расстройства пять из шести молодых людей (средний возраст=9,5 лет), получавших лечение акампросатом, рассматривали как пациентов, у которых получен клинический ответ на акампросат (средняя доза=1,110 мг/день) в течение 10-30 недель (средняя продолжительность=20 недель) лечения. Белок-предшественник бета-амилоида (APP) представляет собой белок, вероятно важный для образования синапса. Амилоидогенетический путь расщепления APP приводит к выработке бета-амилоидного пептида (Aβ), основного компонента бляшек, ассоциированных с болезнью Альцгеймера. Неамилоидогенетический путь приводит к секретируемому нейротрофическому продукту APPα (sAPPα). У молодых людей с аутизмом отмечалась потенциальная повышенная активность неамилоидогенетического пути, отмеченная повышенным общим sAPP и sAPPα сыворотки. Выглядит, как будто sAPP является потенциальным маркером и прогностическим фактором ответа на лечение в клинических испытаниях с вовлечением людей с расстройством аутистического спектра. Как раскрыто в данном документе, было обнаружено, что обнаруженный в крови sAPP неожиданно представляет собой биомаркер расстройства аутистического спектра.
Анализы для sAPP и sAPPα
[0087] Тестируемые образцы плазмы измеряли вскоре после сбора. При необходимости тестируемые образцы плазмы замораживали, но не подвергали повторяющимся циклам замораживания/оттаивания. Тестируемые образцы оттаивали непосредственно перед использованием при низкой температуре и полностью их перемешивали. При необходимости образцы плазмы можно было должным образом разбавлять буфером ИФА, и анализ может быть проведен с двойными измерениями для тестируемых образцов и стандартов. Использовали тестируемые образцы в нейтральном диапазоне pH, и были предприняты шаги, чтобы избежать загрязнения органическими растворителями. Касательно стандарта для количественной оценки уровней sAPPα с помощью серийных разбавлений от 0,78 нг/мл до 50 нг/мл приготовили ряд стандартов sAPPα в буфере ИФА.
[0088] Планшеты ELISA предварительно покрывали мышиным моноклональным IgG против sAPPα (2B3) человека аффинно очищенным (IBL). Сначала определяли лунки для холостого реагента, и в каждую из лунок помещали 100 мкл каждого из «ИФА-буфера» или 10 мМ буферного раствора NaHCO3 (pH 9,5). Также, лунки назначали для тестируемых холостых образцов, тестируемых образцов и разведенных стандартов. Затем в соответствующие лунки добавляли 100 мкл каждого холостого тестируемого образца, тестируемого образца и разведений стандарта. Тестируемый образец, включающий образец плазмы от каждого больного, который мог варьировать от 5 до 25 мкл, доводили буфером ИФА до 100 мкл. Предварительно покрытый планшет инкубировали в течение ночи при 4°C после того, как его плотно закрыли крышкой планшета. Планшет сохраняли на встряхивателе-качалке с осторожным встряхиванием. На следующий день каждую лунку предварительно покрытого планшета энергично промывали промывочным буфером, содержащим 0,05% Tween 20 в фосфатном буфере. Это делали посредством наполнения каждой лунки промывочным буфером, оставляя предварительно покрытый планшет лежать в течение 15-30 секунд и полностью удаляя промывочный буфер из планшета посредством постукивания. Данную методику повторяли пять раз. После полного удаления оставшейся жидкости из всех лунок посредством постукивания планшет клали на бумажную салфетку, 100 мкл раствора меченного антитела добавляли в лунки тестируемых образцов, разведенных стандартов и холостых тестируемых образцов. Использовали конъюгированные с пероксидазой хрена и меченые мышиные IgG от IBL против APP (R101A4) человека. Каждый планшет инкубировали в течение 30 минут при 4°C после того, как его закрыли крышкой планшета, и затем промывали планшет 5 раз таким же образом, как описано ранее. Для появления цвета в лунки добавляли 100 мкл хромогена (раствор тетраметилбензидина), и планшет инкубировали в течение 30 минут в темноте при комнатной температуре. Когда жидкость начинала синеть (посредством добавления хромогена), в лунки добавляли 100 мкл стоп-реагента (1N H2SO4). Жидкость перемешивали путем постукивания по стороне планшета, и жидкость становилась желтой посредством добавления стоп-реагента. Были приняты меры, чтобы исключить любую грязь или капли воды на дне планшета, и это обеспечивало отсутствие пузырьков на поверхности жидкости. Использовали спектрофотометр для прочтения планшетов, а измерения представляли собой измерения, проводимые при 450 нм против холостого реагента. Измерение в целом проводили в течение 30 минут после добавления стоп-реагента. Хромоген хранили обязательно в темноте и без содержания металлов.
ELISA sAPP:
[0089] Для уровней sAPP, тестируемые образцы плазмы необходимо было измерять вскоре после сбора. Для хранения тестируемых образцов авторы изобретения хранили образцы их плазмы замороженными и не повторяли циклы замораживания и оттаивания. Тотчас перед анализом авторы изобретения размораживали тестируемые образцы при низкой температуре и полностью их размешивали. При необходимости образцы плазмы должны быть соответствующим образом разбавлены буфером ИФА. Рекомендовано повторное измерение тестируемых образцов и стандарта. Авторы изобретения применяли тестируемые образцы с нейтральным диапазоном pH, и избегали загрязнений органическими растворителями, которые могут повлиять на измерение. Касательно стандарта для количественной оценки уровней sAPP, авторы изобретения приготовили ряд стандартов sAPP в буфер ИФА с помощью серийных разбавлений, от 0,39 нг/мл до 25 нг/мл.
[0090] Планшет ELISA предварительно покрыли IgG мышей (R12A1) против APP человека (IBL). Сначала определяли лунки для холостого реагента, и в каждую из лунок помещали 100 мкл каждого из «ИФА-буфера» или 10 мМ буферного раствора NaHCO3 (pH 9,5). Подобным образом, лунки оценивали на холостые тестируемые образцы, тестируемые образцы и разведенный стандарт. Затем в соответствующие лунки добавляли 100 мкл каждого холостого тестируемого образца, тестируемого образца и разведений стандарта. Образец для испытаний, включающий образец плазмы от каждого больного, который мог варьировать от 5 до 25 мкл, доводили буфером ИФА до 100 мкл. Предварительно покрытый планшет инкубировали в течение ночи при 4°C после того, как его плотно закрыли крышкой планшета. Планшет сохраняли на встряхивателе-качалке с осторожным встряхиванием. На следующий день каждую лунку предварительно покрытого планшета энергично промывали промывочным буфером, содержащим 0,05% Tween 20 в фосфатном буфере. Это делали посредством наполнения каждый лунки промывочным буфером, оставляя предварительно покрытый планшет лежать в течение 15-30 секунд и полностью удаляя промывочный буфер из планшета посредством постукивания. Данную методику повторяли пять раз. После полного удаления оставшейся жидкости из всех лунок посредством постукивания планшет клали на бумажную салфетку, 100 мкл раствора меченного антитела добавляли в лунки тестируемых образцов, разведенного стандарта и холостого тестируемого образца. Использовали меченые пероксидазой хрена IgG мышей (R101A4) против APP человека от IBL. Планшет инкубировали в течение 30 минут при 4°C после того, как его закрыли крышкой планшета, и затем промывали планшет 5 раз таким же образом, как описано ранее. Для появления цвета в лунки добавляли 100 мкл хромогена (раствор тетраметилбензидина), и планшет инкубировали в течение 30 минут в темноте при комнатной температуре.
[0091] Когда жидкость начинала синеть (посредством добавления хромогена), в лунки добавляли 100 мкл стоп-реагента (1N H2SO4). Жидкость перемешивали путем постукивания по стороне планшета, и жидкость становилась желтой посредством добавления стоп-реагента. Удаляли всякую грязь или капли воды на дне планшета, и все планшеты проверяли, чтобы обеспечить отсутствие пузырьков на поверхности жидкости. Использовали спектрофотометр для прочтения планшетов, и измерения проводились при 450 нм против холостого тестируемого образца. Измерение в целом проводили в течение 30 минут после добавления стоп-реагента.
Сущность клинических испытаний
[0092] Были проведены клинические испытания акампросата у молодых людей с ASD. В одном исследовании участвовали 12 молодых людей с идиопатическим ASD. В еще одном исследовании участвовали 12 молодых людей с ASD, ассоциированным с синдромом ломкой Х-хромосомы (FXS). Уровни общего sAPP и sAPPα перед акампросатом и после него были доступны у 15 участников (9 с FXS, 6 с идиопатическим ASD). Средний IQ больных составил 56 (диапазон от 36 до 96). Итоговая дозировка акампросата у больных составила 1,054 мг/день. В целом, с применением акампросата общий sAPP уменьшился от в среднем 32,6±38,3 нг/мл до лечения до 21,4±32,3 нг/мл после лечения (p=0,01). С применением акампросата sAPPα уменьшился от в среднем 8,4±7,9 нг/мл до лечения до 5,5±7,2 нг/мл после лечения (p=0,003). Уменьшение периферических общего sAPP и sAPPα, индуцированное лечением акампросатом, подсказывает механизм для определения патофизиологии ASD.
[0093] Было проведено одно исследование, представляющее собой 12-недельное простое слепое, плацебо-контролируемое испытание акампросата у 12 молодых людей с аутистическим расстройством. Измереным первичным результатом являлась Шкала общего клинического впечатления об улучшении (CGI-I) с несколькими используемыми дополнительными поведенческими вторичными критериями эффективности. В данном исследовании секретируемый белок-предшественник амилоида (sAPP) измеряли перед и после лечения акампросатом в качестве анализа крови на биомаркер. Результат: Двенадцать больных (средний возраст=10,4 л.) приняли участие в исследовании, и девять больных завершили двухнедельное введение плацебо и начали активное лечение (средняя итоговая доза=1,073 мг/день). Шесть из девяти (67%) больных, получавших акампросат, были признаны пациентами, у которых получен клинический ответ, с оценкой CGI-I в баллах, равной 1 «очень сильно улучшенный» или 2 «сильно улучшенный». В целом применение акампросата переносилось хорошо с отсутствием побочных эффектов, приводящих к прекращению приема лекарственного препарата или отмеченным лабораторным нарушениям/патологическим нарушениям показателей жизнедеятельности. Среди анализируемых вторичных критериев эффективности, значительное улучшение, связанное с акампросатом, отмечалось в показателях социального поведения и гиперактивности. Применение акампросата также было связано с уменьшением уровней sAPP. Данные результаты демонстрируют, что акампросат способен уменьшать социальную недостаточность, ассоциированную с аутизмом, у некоторых больных, так что показатель sAPP в крови, является пригодным биомаркером диагностики заболевания и для мониторного наблюдения за эффективностью фармакологических видов лечения нарушения.
[0094] В двух данных пилотных клинических исследованиях участвовали в общей сложности двадцать четыре молодых человека (средний возраст 11,1 лет; диапазон 5-17 лет). Пятнадцать пациентов имели доступные перед акампросатом и после него доступные данные анализа общего sAPP и sAPPα. Образцы крови после лечения не были доступны от 3 больных с FXS, 3 больных с ASD были признаны пациентами, у которых достигнут лечебный эффект на введение плацебо и не получали акампросат, и с 3 больными, получавшими акампросат, в исследовании идиопатического ASD утрачен контакт для последующего наблюдения в ходе активного лечения акампросатом и не доделан анализ крови после лечения. С использованием заранее определенных показателей клинического ответа, 9 из 12 молодых людей с FXS и 6 из 9 молодых людей с идиопатическим ASD были оценены как пациенты, у которых достигнут лечебный эффект на акампросат. В целом, клиническое улучшение отмечалось в социальном поведении и невнимательности/гиперактивности. Объединенный средний IQ больных составил 56 (диапазон от 36 до 96). Объединенная итоговая доза акампросата больных составила 1,054 мг/день. В целом, с применением акампросата общий sAPP уменьшался от среднего 32,6±38,3 нг/мл перед лечением до 21,4±32,3 нг/мл после лечения (p=0,01). С применением акампросата sAPPα уменьшался от среднего 8,4±7,9 нг/мл перед лечением до 5,5±7,2 нг/мл после лечения (p=0,003). Уровни как общего sAPP, так и sAPPα уменьшались при лечении в каждом тестируемом образце за исключением у одного больного с идиопатическим ASD, где sAPPα был неизмененным после лечения. Не было значительных корреляций между процентным изменением общего sAPP или sAPPα и процентные изменения в оценках в баллах по ABC-SW были отмечены в объединенных образцах 15 больных. В пределах подгруппы из 9 больных с FXS, отмечалась значительная корреляция между изменением общего sAPP и оценками в баллах ABC-SW, подразумевая, что большее уменьшение общего sAPP коррелировало с более выраженнным улучшением оценок в баллах ABC-SW (коэффициент корреляции Спирмена=0,853; p=0,003).
[0095] Первый проект задействовал 12 молодых людей в возрасте 5 до 17 лет с синдромом ломкой X-хромосомы и сопутствующим ASD в 10-недельном открытом испытании акампросата. Второй проект задействовал 12 молодых людей в возрасте 5 до 17 лет с диагностированным идиопатическим ASD в 12-недельном простом слепом исследовании акампросата с введением плацебо. В обоих проектах дозировка сопутствующих психотропных лекарственных препаратов оставалась неизменной на протяжении исследования. В каждом пректе перед и после лечения акампросатом получали плазму уровни общего sAPP и sAPPα в плазме. Все образцы для анализа APP были собраны, заморожены и шли в лабораторию для анализа в течение 2 часов после взятия крови. Общий sAPP и sAPPα плазмы определяли раздельно в сыворотке с использованием набора ELISA, полученного от Immuno Biological Laboratories (IBL, Gumma, Japan). Набор ELISA одобрен для определения уровней sAPPα в образцах от человека и способен выявлять всего лишь 0,09 нг/мл sAPPα в обычном образце, только с 0,3% перекрестной специфичностью к sAPPβ. Уровни общего sAPP и sAPPα в плазме были приведены в нанограммах на миллилитр (нг/мл). Статистические анализы уровней общего sAPP и sAPPα перед и после акампросата были проведены с использованием парного критерия Стьюдента. В заключение был проведен поисковый ретроспективный анализ возможной корреляции между процентным изменением общего sAPP или sAPPα и процентным изменением оценок в баллах по Листу наблюдения за некорректным поведением Дополнительной шкалы социальной самоизоляции/заторможенности (ABC-SW). ABC-SW измеряет социальные нарушения, которые являются основным симптомом домена ASD. Ретроспективный анализ проводили с подсчетом корреляции ранговых порядков Спирмена. Все данные анализировали с помощью IBM SPSS Version 20.
[0096] В данном исследовании участвовали двенадцать молодых людей (средний возраст 10,4 лет; диапазон 5-15 лет). Средний IQ больных составил 67 (диапазон 25-96). Девять больных вступили в фазу активного лечения (после посещения 2 недели). Один больной был признан пациентом, у которого достигнут лечебный эффект на введение плацебо, у одного больного развилась значительная раздражимость в ходе лечения плацебо и вышел из исследования, и один больной испытывал значительные рвоту и диарею в ответ на плацебо и вышел из исследования. Среди девяти больных, которые получали акампросат, средняя итоговая доза лекарственного препарата составила 1,073 мг/день (диапазон 600-1,998 мг/день). В целом акампросат переносился хорошо без побочных эффектов, приводящих к прекращению приема лекарственного препарата или отмеченным лабораторным нарушениям/патологическим нарушениям показателей жизнедеятельности. Побочные эффекты в ходе лечения акампросатом включали: легкую преходящую диарею (n=3), дозозависимую преходящую раздражимость, которая уменьшалась с уменьшением дозы (n=2), легкую преходящую головную боль (n=2), легкую преходящую утомляемость (n=2), легкую преходящую бессонницу (n=2), легкий преходящий излишний смех (n=1) и легкую преходящую повышенную гиперактивность (n=1). Касательно поведенческих критериев эффективности, на сегодняшний день авторы изобретения проанализировали данные из CGI-I, CGI-S, все дополнительные шкалы ABC, SRS и ADHD-RS. Все анализы сделаны с использованием метода переноса данных последнего наблюдения вперед, поскольку с тремя больными был утрачен контакт для последующего наблюдения перед 12 неделей (с каждым из них был утрачен контакт после 6, 8 и 10 недель, соответственно). Шесть из девяти больных (67%), вступившие в фазу активного лечения, были признаны пациентами, у которых достигнут лечебный эффект на акампросат, со шкалой CGI-I 1 или 2 (средний CGI-I при последнем посещении=2).
[0097] Среди проанализированных на сегодняшний день данных вторичных критериев эффективности (парного критерия Стьюдента), улучшение с применением акампросата отмечалось в общей исходной оценка в баллах по SRS (средние изменение от 107±28 в исходном значении до 91,4±30 в конечном значении; p=0,002), дополнительной шкале ABC Заторможенности/Социальная самоизоляция (ABC-SW; 14,1±8,5 до 10,0±8,4; p=0,019), ADHD-RS (29,5±10,4 to 20,75±9,7; p=0,002), дополнительной шкале ABC Гиперактивности (25,4±12,6 до 16,6±12,4; p=0,005) и CGI-S (4,22±0,4 to 3,7±0,5; p=0,013). Касательно данных биомаркера крови sAPP, по заключению исследования шесть больных имеют доступные уровни общего sAPP и sAPPα перед и после акампросата. В анализе фракционного изменения от исходного значения до конечного значения, средние общие уровни sAPP уменьшались с 34,7 (нг/мл) в исходном значении до 19,3 в конечном значении (p=0,02), и средние уровни sAPPα уменьшались с 7,8 (нг/мл) в исходном значении до 4,2 в конечном значении (p=0,03).
[0098] Данное начальное пилотное плацебо-контролируемое исследование акампросата, нацеленное на социальные нарушения у молодых людей с аутизмом, продемонстрировало, что лекарственный препарат хорошо переносится с потенциальными признаками эффективности, как отмечено, характерными для уменьшения социальной недостаточности и гиперактивности. Данное исследование демонстрирует, что применение акампросата было связано со значительным и равномерным уменьшением общего sAPP и sAPPα, указывающим на потенциальный фармакодинамический маркер лечебного эффекта при аутизме.
[0099] Было проведено 12-недельное простое слепое, плацебо-контролируемое исследование действия акампросата в лечении 12 молодых людей с аутистическим расстройством в возрасте 5 до 17 лет. С целью пилотного испытания было проведено применение акампросата у молодых людей с аутизмом, нацеленное на основные социальные нарушения. От всех больных и членов их семей был скрыт лечебный статус. Перед 10 неделями лечения акампросатом все больные участвовали в 2-недельной фазе введения плацебо. Для данного проекта коммерчески доступные таблетки акампросата 333 мг с кишечснорастворимым покрытием были заключены в капсулы и изготовлены для проекта идентично плацебо. Пациентов, у которых достигнут лечебный эффект на плацебо, выявленный посредством оценки в баллах, составляющей 1 «очень сильно улучшенный» или 2 «сильно улучшенный» (рейтинги, привязанные к основной социальной недостаточности) по Шкале общего клинического впечатления об улучшении (CGI-I) на 2 неделе попросили выйти из исследования. В ходе активного лечения акампросатом, в течение первых шести недель активного лечения дозировку увеличивали с возрастанием на 333 мг в неделю до максимальной дозы, составляющей 1,332 мг/день (масса< 60 кг) или 1,998 мг/день (масса> 60kg). В течение последних четырех недель активного медикаментозного лечения больных поддерживали стабильной наиболее высокой переносимой (оптимальной) дозой. Первичным критерием эффективности была подсчитанная врачом-клиницистом CGI-I, привязанная к симптомам социальных нарушений. Вторичные критерии эффективности включали CGI для оценки тяжести заболевания, Лист наблюдения за некорректным поведением (ABC), Дополнительную шкалу компульсивности детской обсессивно-компульсивной шкалы Йеля-Брауна, модифицированной для первазивных расстройств развития (CY-BOCS PDD), Оценочную шкалу ADHD, 4-е издание (ADHD-RS), Шкалу социальной отзывчивости (SRS), Дополнительную шкалу коммуникации Вайнленда, Словарный тест в картинках Пибоди (PPVT), Повторяемую батарею тестов по оценке нейропсихологического состояния (RBANS) и исследование экспрессивной речи. Каждый больной завершал тестирование IQ с использованием Шкалы интеллекта Стэнфорд-Бине, 5 издание, при скрининге. Дополнительно, образцы sAPP брали на исходной стадии и при завершении исследования. Лабораторные исследования безопасности делали при скрининге, 6 неделе и 12 неделе. Объективное обследование проводили при скрининге и 12 неделе, и основные жизненные показатели получали во все посещения исследования. Возможные побочные эффекты акампросата устанавливали во все посещения исследования, и в интервал между исследованиями врач звонил по телефону с использованием журнала для записи побочных эффектов.
Действие акампросата на sAPP, sAPPα у больных с диагностированным ASD, связанным с FXS.
[00100] В открытое исследование были включены двенадцать молодых людей в возрасте 5-17 лет. Все 12 больных имели подтвержденные посредством саузерн-блоттинга и/или анализа ПЦР полные мутации FXS. Больных дополнительно подвергали скринингу на IQ (SB5 или Leiter) ADI-R ADOS Вайнленда.
[00101] Пилотное исследование шло в течение 10 недель. Лабораторные скрининги безопасности провели на 6 и 10 неделе. Физиологические параметры, измеренные в ходе скринингов безопасности, были следующими: основные жизненные показатели, функциональные тесты печени, панели электролитов, клинический анализ крови лейкоцитарной формулой/тромбоцитами, липидограмма, глюкоза, анализ мочи и ЭКГ.
[00102] Личные посещения врача были запланированы один раз в две недели. Оценивание по телефону провели на 1, 3 и 5 неделе. У каждого больного оценивали побочные эффекты при каждом взаимодействии с практикующим врачом.
[00103] Был использован гибкий режим дозирования. Применяли покрытые кишечнорастворимой оболочкой таблетки акампросата в количестве 333 мг. В течение первых шести недель лечения дозировку увеличивали с возрастанием на 333 мг в неделю. Для больных с массой тела менее 50 кг максимальная доза составляла 1332 мг (разделенная на 2 или 3 раза в день). Для больных с массой тела более 50 кг максимальная доза составляла 1998 мг (разделенная на 2 или 3 раза в день). Средняя итоговая доза составляла 1054±422 мг в день.
[00104] Для данного исследования скрирингу подвергли тринадцать больных. Один из больных не смог проглатывать таблетки, и был исключен из данного исследования. Оставшиеся больных включали 10 лиц мужского пола и 2 лица женского пола. Их средний возраст составил 11,9 лет, варьируя от 6,25 до 17,75 лет. Средний IQ 12 больных составил 44,6, варьируя от 36 до 61. У десяти больных было диагностировано аутистическое расстройство, и у двоих было диагностировано первазивное нарушение развития NOS.
[00105] к концу исследования 75% больных (9/12) были признаны пациентами, у которых достигнут лечебный эффект. Данные 9 больных имели количество баллов CGI-I, составляющее 1 (очень сильно улучшенный) или 2 (сильно улучшенный). Средние значения CGI-I для пациентов, у которых достигнут лечебный эффект, на 10 неделе составляло 1,92.
[00106] Среди измеренных данных вторичных результатов, проанализированных на сегодняшний день (парный критерий Стьюдента) улучшение с применением акампросата отмечалось по общей исходной оценке в баллах SRS (среднее изменение с 107±28 в исходном значении до 91,4±30 в конечном значении; p=0,002), дополнительной шкале Заторможенности/Социальной самоизоляции ABC (ABC-SW; с 14,1±8,5 до 10,0±8,4; p=0,019), ADHD-RS (с 29,5±10,4 до 20,75±9,7; p=0,002), дополнительной шкале Гиперактивности ABC (с 25,4±12,6 до 16,6±12,4; p=0,005), и CGI-S (с 4,22±0,4 до 3,7±0,5; p=0,013). Касательно данных биомаркеров крови sAPP по заключению исследовании шесть больных имеют доступные уровни общего sAPP и sAPPα перед и после акампросата. При анализе фракционного изменения от исходного значения до конечного значения, средние общие уровни sAPP уменьшались с 34,7 (нг/мл) в исходном значении до 19,3 в конечном значении (p=0,02), а средние sAPPα уровни уменьшались с 7,8 (нг/мл) в исходном значении до 4,2 в конечном значении (p=0,03).
Среднее значение+стандартное отклонение
Среднее значение+стандартное отклонение
[00107] Далее со ссылкой на фигуры 1 и 2. Графики данных в таблицах 7 и 8, собранных у 6 больных с синдромом ломкой X-хромосомы (FXS), которые участвовали в открытом исследовании акампросата. У 6 отдельных больных людей были собраны образцы периферической крови. Все 6 больных имели диагностированный FXS. Образцы брали и анализировали перед лечением акампросатом и после лечения акампросатом для того, чтобы измерить в образцах уровень как общего sAPP-CP, так и sAPPα-CP. Уровни конкретных белков в образцах определяли с помощью ELISA с использованием подходящего антитела.
[00108] Данные, представленные в этих графиках, иллюстрируют, что лечение акампросатом больных с FXS связано с нормализацией (понижением) уровней APP. Эти данные показывают, что акампросат может непосредственно затрагивать нарушенную нейронную активность, ассоциированную с FXS (в данном случае повышенный APP). Уровень APP у пациентов с FXS является хорошим клиническим прогностическим фактором ответа на лечение. Больных с наиболее высокими уровнями APP следует лечить акампросатом. Тех больных, которые демонстрируют снижение APP во время или после лечения акампросатом, следует продолжать лечить соединением. Уровни APP также можно применять в качестве скрининга на другие соединения, которые могут быть эффективными для лечения FXS. Соединения, которые снижают уровни APP, могут быть полезными для лечения FXS.
FXS до и после лечения акампросатом.
[00109] Данное первоначальное пилотное плацебо-контролируемое исследование акампросата, выделившее социальные нарушения у больных с FXS, продемонстрировало, что лекарственный препарат хорошо переносится с отмеченными потенциальными признаками эффективности, специфичными для уменьшения социальной недостаточности и гиперактивности. Данное исследование демонстрирует, что применение акампросата было связано со значительными и равномерными уменьшениями общего sAPP и sAPPα, указывающими на потенциальный фармакодинамический маркер для лечения FXS.
[00110] В общей сложности, в двух данных пилотных клинических исследованиях участвовали двадцать четыре молодых человека (средний возраст 11,1 лет; диапазон 5-17 лет). Пятнадцать пациентов имели доступные данные анализа общего sAPP и sAPPα перед и после акампросата. После лечения образцы крови не были доступны у 3 больных с FXS, 3 больных с ASD расценили как пациентов с введенным плацебо, у которых достигнут лечебный эффект, и не принимавшими акампросат, и с 3 больными, получавшими акампросат в исследовании идиопатического ASD, был утрачен контакт для последующего наблюдения в ходе активного лечения акампросатом, и у них не провели анализ крови после лечения. С использованием заранее определенных показателей клинического ответа, 9 из 12 молодых людей с FXS и 6 из 9 молодых людей с идиопатическим ASD были признаны пациентами, у которых достигнут лечебный эффект на акампросат. В целом, клиническое улучшение отмечалось в социальном поведении и невнимательности/гиперактивности. Объединенный средний IQ больных составлял 56 (диапазон 36-96). Объединенная итоговая дозировка больных акампросата составила 1,054 мг/день. В целом, общий sAPP уменьшался с применением акампросата со средних 32,6±38,3 нг/мл перед лечением до 21,4±32,3 нг/мл после лечения (p=0,01). sAPPα уменьшался с применением акампросата со средних 8,4±7,9 нг/мл перед лечением до 5,5±7,2 нг/мл после лечения (p=0,003). Уровни как общего sAPP, так и sAPPα уменьшались при лечении в каждом тестируемом образце за исключением одного больного с идиопатическим ASD, когда sAPPα остался неизменным после лечения. Никаких существенных корреляций между процентным изменением общего sAPP или sAPPα и процентным изменением оценок в баллах по ABC-SW не было отмечено в объединенных образцах 15 больных. Внутри подгруппы из 9 больных из больных с FXS значительная корреляция отмечалась между изменением общего sAPP и оценками в баллах ABC-SW, означая, что большее уменьшение общего sAPP коррелировало с большим улучшением оценок в баллах ABC-SW (коэффициент корреляции Спирмена=0,853; p=0,003).
Активность ERK1/2, измеренная у мышей
[00111] Краткое изложение данных, собранных с использованием мышиных моделей ASD для измерения воздействия акампросата на уровни активности ERK у нокаутированных мышей дикого типа и fmr1 (ген ломкой X-хромосомы).
[00112] Теперь, со ссылкой на ФИГ. 4. Краткое изложение данных, собранных с использованием мышиных моделей ASD для оценки воздействия акампросата на уровни активности ERK у нокаутированных мышей дикого типа и fmr1 (ген ломкой X-хромосомы).
Активность ERK1/2, измеренная у людей с помощью вестерн-блоттинга
[00113] Непосредственно после взятия крови и выделения мононуклеарных клеток с помощью вестерн-иммуноблоттинга. Образцы цельной крови получали из Riley Autism Clinic. Лимфоциты выделяли из крови посредством центрифугирования образцов в пробирках BD Vacutainer CPT при 2800 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования слой лимфоцитов переносили в свежую коническую пробирку 15 мл и центрифугировали при 1300 об/мин в течение 15 минут. Супернатант аспирировали, и гранулу ресуспендировали в 1 мл 1X PBS. Образцы снова центрифугировали при 1300 об/мин в течение 10 минут. Супернатант аспирировали и гранулу медленно ресуспендировали в 500 мкл PRMI 1640, содержащем 10% FBS. После использования клеток для планшета оставшиеся клетки переносили в пробирку Eppendorf и центрифугировали при 400xg в течение 6 минут. Супернатант удаляли, и гранулу использовали для создания клеточного лизата.
[00114] Общий белок из клеточных лизатов измеряли с использованием анализа белка Брэдфорда. Объемы расчитывали для загрузки 10 мкг в каждую дорожку из 15 гелевых дорожек. Для доведения каждого образца в итоге до 30 мкл использовали образец буфера Лэммли и воду. Образцы денатурировали при 95° в течение 5 минут с использованием термоциклера. Перед загрузкой образца в лунки в кассету добавляли подвижный буфер. В качестве маркера в одну дорожку загружали стандарт белка. Для использования в качестве контроля также загружали лизат фетальных нервных клеток человека (HFN) и лизат головного мозга человека. Гель содержали при 200 В в течение 1 часа.
[00115] Перенос проводили с использованием системы iBlot Invitrogen. Сухой перенос проводили в течение 7 минут, и блот PVDF окрашивали понсо в течение 10 минут, чтобы наблюдать после этого перенос белка. После окрашивания блот промывали в TBST для нейтрализации кислотной природы красителя понсо. Блокирование проводили 5% молоком в TBST в течение 1 часа. Его удаляли, и блот зондировали первичными антителами фосфо-ERK, разбавленными в 5% молоке в TBST в течение ночи при 4°C. На следующий день первичные антитела удаляли, и блот промывали в TBST 3 раза в течение 10 минут каждый. Блот помещали в козьи анти-кроличьи вторичные антитела, разбавленные в 5% молоке в TBST в течение одного часа. Затем блот промывали в TBST 3 раза в течение минуты каждый.
[00116] После промывания в мембрану PDVF добавляли 1:1 усиленный люминисцентный (ECL) реагент и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 минуты. Пленка распространялась в течение 15 минут и 25 минут. Блот отделяли полосами в течение 8 минут, затем промывали TBST в течение 5 минут. Затем блот блокировали в 5% молоке в TBST в течение 1 часа и повторно зондировали первичными антителами пан-ERK (1:1000) в течение ночи при 4°C. В данном случае со вторичными антителами также использовали козьи анти-кроличьи антитела. Блот промывали, и пленка распространялась, как описано ранее. Измерение оптической плотности геля проводили с использованием программного обеспечения ImageJ. определяли соотношение фосфо- и пан-ERK и строили график с использованием программного обеспечения Prism.
Лимфоциты и ICC фиксированных мононуклеарных клеток для активности ERK/MAPK (анти-Фосфо-Thr202/Tyr204 ERK/MAPK)
[00117] Образцы лимфоцитов готовили из крови больных и наносили на покрытый PDL 24-луночный планшет. Клетки фиксировали посредством добавления 4% параформальдегида в растворе PB (при комнатной температуре). Отсасывали излишний раствор параформальдегида. Фиксированные клетки осторожно промывали три раза холодным DPBS (модифицированный Дульбекко забуференный фосфатом солевой раствор). Затем в ячейки при комнатной температуре добавляли 0,12% Triton X-100 (разбавленный в DPBS) и инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре. Излишний раствор Triton X отсасывали, и ячейки три раза промывали (осторожно) охлажденным DPBS. Ячейки блокировали 10% лошадиной сывороткой (HS) (разбавленной в DPBS) в течение 20 минут при комнатной температуре. Несвязанный блокирующий агент смывали. Добавляли первичные антитела, разбавленные в 1% HS в DPBS. Обычно используется разбавление 1:250. Антитела, которые индуцируются у кролика, распознают Фосфо-Thr202/Tyr204 ERK/MAPK, что показывает транслокацию активированных ERK/MAPK в цитозольное отделение.
[00118] Инкубирование с первичными антителами проводили в течение ночи при 4°C. Несвязанные первичные антитела смывали, и на этой стадии планшет можно было хранить при 4°C. Промывали три раза при комнатной температуре холодным DPBS. Добавляли конъюгированные козьи анти-кроличьи Alexa Fluor (разбавленные 1: 200 в DPBS) и инкубировали при комнатной температуре в течение 1-2 ч. Данный реагент и данный этап является светочувствительным. Для наилучших результатов реагент и данный этап методики необходимо укрывать от света. Выключали свет в комнате, и вторичные антитела отсасывали и выбрасывали. Снова промывали три раза DPBS при комнатной температуре. DPBS брали в пробирку 15 мл, и в него добавляли краситель Хехст (разбавление 1:500). В каждую лунку добавляли разбавленный содержащий краситель Хехст раствор. Под микроскопом в темноте создавали картинку с использованием специфических фильтров для Хехст и Alexa Fluor (время захвата камеры следует устанавливать вручную и использовать такое же время захвата для каждого изображения).
[00119] Положительный контроль: Клетки обрабатывали 10 мкМ тамоксифена, который служил в качестве положительного контроля. Тамоксифен индуцирует активацию ERK, и в цитозольном компартменте клеток наблюдают транслокацию ERK/MAPK. Дополнительно, коричневые ядра окрашивали по Хехсту.
[00120] Проводили анализ данных при активации базовых ERK1/2 в периферических лимфоцитах у 37 молодых людей в возрасте 5-17 лет и диагностированным идиопатическим ASD (средний возраст 10,1 лет) по сравнению с нейротипичными контрольными больными 13 лет и с совпадающим полом (средний возраст составил 10,4 лет). Молодые люди с ASD имели значения активации базовых ERK/2, равные 7,1+ 7,1%, по сравнению со скоростью активации, равной 2,8+2,1% у контрольного больного (p=0,01)ʹ d=0,82 Коэна. Повышенная активация ERK1/2 у молодых людей с ASD также подтверждалась анализом вестерн-блотинга (данные не показаны).
[00121] Глутаматергический агент рилузол модифицирует скорости активации ERK1/2 у взрослых с FXS. Эксперименты с жиотными fmr1 демонстрируют, что применение акампросата у нокаутированных fmr1 животных восстанавливает избыточное исходное повышение активации ERK, т.е. акампросат восстанавливает активированный ERK до уровней дикого типа. Данные результаты демонстрируют и то, что акампросат восстанавливает повышенную активацию ERK1/2 до уровней дикого типа в мышиных моделях FXS. Данные результаты показывают, что ERK1/2 представляет собой лекарственно-ориентированную мишень у людей с диагностированным ADS и связанными неврологическими нарушениями. Данные результаты также демонстрируют, что активация ERK может использоваться в качестве биомаркера при применении акампросата для лечения и/или для исследования ломкой X-хромосомы и заболеваний наподобие ломкой X-хромосомы у людей. Ненормальные уровни активации ERK1/2 наблюдаются у больных с ASD и в мышиных моделях данного патологического состояния. Наблюдение, что обработка мышиных моделей FXS акампросатом изменяет скорость акивации ERK1/2, доказывает, что акампросат будет помогать возвращать уровни активности ERK1/2 при ASD до уровней активности ASD у сопоставимых больных, которые не демонстрируют ASD.
[00122] Несмотря на то, что новая технология была проиллюстрирована и подробно описана на фигурах и в вышеизложенном описании, она должна считаться по своему характеру иллюстративной, а не ограничивающей, при этом следует понимать, что были показаны и описаны только предпочтительные варианты осуществления и что должны быть защищены все изменения и модификации, которые попадают в пределы сущности новой технологии. Также, несмотря на то, что новая технология была проиллюстрирована с использованием конкретных примеров, теоретических аргументов, расчетов и иллюстраций, данные иллюстрации и сопровождающее обсуждение никоим образом не следует интерпретировать как ограничение технологии. Все патенты, патентные заявки и ссылки на тексты, научные труды, публикации и тому подобное, приведенные в данной заявке, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| МОДУЛЯЦИЯ УРОВНЕЙ sAPP, sAPPα И BDNF У ИНДИВИДУУМОВ С ДИАГНОЗОМ FXS И ASD | 2013 |
|
RU2675252C2 |
| СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ РАССТРОЙСТВ АУТИСТИЧЕСКОГО СПЕКТРА У ДЕТЕЙ | 2022 |
|
RU2783698C1 |
| СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ СИМПТОМОВ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ И ПСИХИЧЕСКИХ РАССТРОЙСТВ | 2013 |
|
RU2654230C2 |
| СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ СО СНИЖЕННОЙ ПРОДУКЦИЕЙ BDNF | 2013 |
|
RU2555344C2 |
| Способ определения необходимости использования психофармакотерапии у пациентов с расстройствами аутистического спектра на момент их обследования | 2017 |
|
RU2643760C1 |
| Способ дифференциальной диагностики у детей диагнозов детского аутизма легкой степени тяжести течения, атипичного аутизма и шизофрении | 2022 |
|
RU2808675C1 |
| ПРИМЕНЕНИЕ КАРБАМАТНОГО СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ СНИЖЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ РАЗВИТИЯ, ВКЛЮЧАЯ СИНДРОМ ХРУПКОЙ X-ХРОМОСОМЫ, СИНДРОМ АНГЕЛЬМАНА ИЛИ СИНДРОМ РЕТТА | 2018 |
|
RU2793742C2 |
| ПРОИЗВОДНОЕ ХРОМОНА В КАЧЕСТВЕ АНТАГОНИСТА ДОФАМИНОВОГО РЕЦЕПТОРА D3 ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ ПРИ ЛЕЧЕНИИ РАССТРОЙСТВА АУТИСТИЧЕСКОГО СПЕКТРА | 2014 |
|
RU2686110C1 |
| ПРИМЕНЕНИЕ РОЛУПЕРИДОНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НЕГАТИВНЫХ СИМПТОМОВ И ЗАБОЛЕВАНИЙ, ПОВЫШЕНИЯ НЕЙРОПЛАСТИЧНОСТИ И СОДЕЙСТВИЯ НЕЙРОЗАЩИТЕ | 2019 |
|
RU2812786C2 |
| Способ скрининг диагностики риска возникновения расстройств аутистического спектра (РАС) у детей (варианты) | 2016 |
|
RU2655073C2 |
Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы лечения больного с диагностированным расстройством аутистического спектра (ASD) или синдромом ломкой X-хромосомы (FXS), включающие стадии приведения в контакт образца крови больного с антителом, которое селективно связывается с ERK 1 или ERK 2, введения акампросата или фармацевтически приемлемой соли акампросата больному, определения, имеется ли изменение уровней ERK 1 или ERK 2 в крови больного и увеличения количества акампросата или фармацевтически приемлемой соли акампросата таким образом, чтобы снизился уровень по меньшей мере одного из ERK 1 и ERK 2 в периферической крови больного. Предложена система мониторного наблюдения за больным и способ скрининга на соединение, применяемое в лечении идиопатического ASD или ASD, связанного с FXS. Предложенная группа изобретений обеспечивает биомаркеры для разработки целенаправленного лечения ASD или FXS. 4 н. и 14 з.п. ф-лы, 4 ил., 10 табл.
1. Способ лечения больного с диагностированным расстройством аутистического спектра (ASD) или синдромом ломкой X-хромосомы (FXS), включающий стадии:
приведения в контакт первого образца плазмы больного с диагностированными ASD или FXS с первым реагентом, который селективно связывается с ERK 1 или ERK 2;
определения уровня ERK 1 или ERK 2 в образце плазмы;
введения акампросата или фармацевтически приемлемой соли акампросата больному;
связывания второго образца плазмы больного с первым реагентом, который селективно связывается с ERK 1 или ERK 2;
определения, имеется ли изменение уровней ERK 1 или ERK 2 в плазме больного;
увеличения количества акампросата или фармацевтически приемлемой соли акампросата, вводимых больному, таким образом, чтобы снизился уровень по меньшей мере одного из ERK 1 и ERK 2 в периферической крови больного.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий стадии:
приведения в контакт первого образца плазмы больного с диагностированными ASD или FXS с одним или более реагентами, выбранными из группы, состоящей из: реагента, который селективно связывается с BDNF, реагента, который селективно связывается с sAPP, и реагента, который связывается с sAPPα;
определение уровня по меньшей мере одного из BDNF, sAPP и sAPPα в образце плазмы;
связывание второго образца плазмы больного с одним или более реагентами, который селективно связывается с BDNF, sAPP и sAPPα;
определение, имеется ли изменение одного или более уровней BDNF, sAPP и sAPPα в плазме больного; и
увеличение количества акампросата или фармацевтически приемлемой соли акампросата, вводимых больному, таким образом, чтобы изменился уровень по меньшей мере одного из BDNF, sAPP и sAPPα в периферической крови больного, при этом изменение уровня BDNF представляет собой повышение, а изменение уровней sAPP и sAPPα представляет собой понижение.
3. Способ по п. 1, в котором первым реагентом, который селективно связывается с ERK 1 или ERK 2, является антитело, которое селективно связывается с ERK 1 или ERK 2.
4. Способ по п. 2, в котором выбранным реагентом является антитело, которое селективно связывается с BDNF.
5. Способ по п. 2, в котором выбранным реагентом является антитело, которое селективно связывается с sAPP.
6. Способ по п. 2, в котором выбранным реагентом является антитело, которое селективно связывается с sAPPα.
7. Способ по п. 1, в котором акампросат вводят больному в дозе в диапазоне, составляющем приблизительно от 500 мг/день до приблизительно 1500 мг/день.
8. Способ лечения больного с диагностированным расстройством аутистического спектра (ASD) или синдромом ломкой X-хромосомы (FXS), включающий стадии:
введения терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли больному;
мониторного наблюдения за периферической кровью больного на изменение уровней ERK 1 или ERK 2 в периферической крови больного, включающего приведение в контакт образца периферической крови больного по меньшей мере с одним антителом, которое селективно связывается по меньшей мере с одним из ERK 1 и ERK 2, и
увеличения терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли таким образом, чтобы снизился уровень по меньшей мере одного из ERK 1 или ERK 2 в периферической крови больного.
9. Способ по п. 8, дополнительно включающий стадии:
мониторного наблюдения за периферической кровью больного на изменение уровней по меньшей мере одного из BDNF, sAPP и sAPPα в периферической крови больного; и
увеличения терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли таким образом, чтобы изменился уровень по меньшей мере одного из BDNF, sAPP и sAPPα в периферической крови больного, при этом изменение уровня BDNF представляет собой повышение, а изменение уровней sAPP и sAPPα представляет собой понижение.
10. Способ по любому из пп. 8-9, в котором акампросат вводят больному в дозе в диапазоне, составляющем приблизительно от 500 мг/день до приблизительно 1500 мг/день.
11. Система мониторного наблюдения за больным с диагностированным расстройством аутистического спектра (ASD) или синдромом ломкой X-хромосомы (FXS), включающая в себя:
по меньшей мере одно антитело, которое селективно связывается с ERK 1 или ERK 2;
по меньшей мере одно антитело, которое селективно связывается с BDNF;
по меньшей мере одно антитело, которое селективно связывается с sAPP; и
по меньшей мере одно антитело, которое селективно связывается с sAPPα.
12. Система по п. 11, дополнительно включающая по меньшей мере один реагент, выбранный из группы, состоящей из: буферного раствора, хелатирующего агента; бактерицидного агента, противогрибкового агента и блокирующего агента.
13. Способ скрининга на соединение, применяемое в лечении идиопатического расстройства аутистического спектра (ASD) или ASD, связанного с синдромом ломкой X-хромосомы (FXS), включающий стадии:
приведения в контакт первого образца плазмы больного с диагностированным идиопатическим ASD или ASD, связанным с FXS, с первым реагентом, который селективно связывается с ERK 1 или ERK 2;
определения уровня ERK 1 или ERK 2 в образце плазмы;
введения по меньшей мере одного соединения больному;
связывания второго образца плазмы больного с первым реагентом, который селективно связывается с ERK 1 или ERK 2;
определения, имеется ли изменение уровней ERK 1 или ERK 2 в плазме больного;
выбора соединения, если данное соединение вызывает снижение уровней по меньшей мере одного из ERK 1 и ERK 2 в плазме больного.
14. Способ по п. 13, дополнительно включающий стадии:
приведения в контакт первого образца плазмы больного с диагностированными ASD или FXS с одним или более реагентами, выбранными из группы, состоящей из: реагента, который селективно связывается с BDNF, реагента, который селективно связывается с sAPP, и реагента, который связывается с sAPPα;
определения уровня по меньшей мере одного из BDNF, sAPP и sAPPα в образце плазмы;
связывания второго образца плазмы больного с одним или более реагентами, который селективно связывается с BDNF, sAPP и sAPPα;
определения, имеется ли изменение одного или более уровней BDNF, sAPP и sAPPα в плазме больного; и
выбора соединения, если данное соединение вызывает повышение уровня BDNF и снижение уровней sAPP и sAPPα в плазме больного.
15. Способ по п. 13, в котором первым реагентом, который селективно связывается с ERK 1 или ERK 2, является антитело, которое селективно связывается с ERK 1 или ERK 2.
16. Способ по п. 14, в котором выбранным реагентом является антитело, которое селективно связывается с BDNF.
17. Способ по п. 14, в котором выбранным реагентом является антитело, которое селективно связывается с sAPP.
18. Способ по п. 14, в котором выбранным реагентом является антитело, которое селективно связывается с sAPPα.
| POLITTE L.C | |||
| et al | |||
| Phase II and III drugs for the treatment of fragile X syndrome | |||
| Expert Opinion on Orphan Drugs | |||
| Многоступенчатая активно-реактивная турбина | 1924 |
|
SU2013A1 |
| Изложница с суживающимся книзу сечением и с вертикально перемещающимся днищем | 1924 |
|
SU2012A1 |
| Печь-кухня, могущая работать, как самостоятельно, так и в комбинации с разного рода нагревательными приборами | 1921 |
|
SU10A1 |
| WANG X | |||
| et al | |||
| Activation of the extracellular signal-regulated kinase pathway contributes to the behavioral deficit of fragile x-syndrome | |||
| J Neurochem | |||
| Изложница с суживающимся книзу сечением и с вертикально перемещающимся днищем | 1924 |
|
SU2012A1 |
| Изложница с суживающимся книзу сечением и с вертикально перемещающимся днищем | 1924 |
|
SU2012A1 |
| Найдено из Интернет: URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22393900 | |||
| US 2011294879 A1, 01.12.2011 | |||
| МОДУЛИРУЮЩИЕ АПОПТОЗ КОМПОЗИЦИИ С КОНТРОЛИРУЕМЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ УХА | 2009 |
|
RU2493828C2 |
