Способ дифференциальной диагностики у детей диагнозов детского аутизма легкой степени тяжести течения, атипичного аутизма и шизофрении Российский патент 2023 года по МПК G01N33/52 G01N33/577 C12Q1/6804 

Настоящее изобретение относится к области медицинской генетики, молекулярной биологии, психиатрии и может быть использовано в детской психиатрии, а именно для выявления тяжести течения расстройств аутистического спектра и шизофрении у детей на основании уровня окислительных повреждений ДНК в клетках периферической крови и характеристик циркулирующей внеклеточной ДНК, и может быть использовано для клинико-биологической оценки необходимости введения психофармакотерапии пациентов детского возраста с расстройством аутистического спектра и детской шизофренией.

Расстройства аутистического спектра (РАС) - одна из наиболее сложных проблем современной психиатрии XXI века [1]. РАС характеризуется наличием нарушений психического развития, отсутствием способности к коммуникации и социальному взаимодействию, наличием стереотипности поведения, социальной дезадаптацией [2]. По данным Минздрава РФ, общая численность детей с расстройством аутистического спектра, согласно мониторингу 2020 года, превысила 32 тысячи человек [3]. Проведенный мониторинг выявил выраженную динамику увеличения численности детей с РАС по сравнению с 2019 годом на 42%, и в 2,3 раза - по сравнению с 2014 годом [3]. В декабре 2018 года Минздраву поручено организовать в России систему раннего выявления детского аутизма и дальнейшей маршрутизации детей с РАС [3]. По последним эпидемиологическим данным в России показатели общей заболеваемости детей шизофренией увеличиваются на 6,5% за два года, так, число детей, больных шизофренией, увеличилось с 13,53 тысяч на 100 тысяч населения в 2000 году до 14,41 тысяч на 100 тысяч населения в 2018 году [13]. На лечение психических расстройств у детей расходуется существенная доля бюджета РФ. Своевременно поставленный правильный диагноз психического расстройства у ребенка позволит назначить эффективное лечение и реабилитационные мероприятия, что может привести к выздоровлению или улучшению состояния у детей с психическими расстройствами [4].

Неоднородность и сложность патогенеза являются основными препятствиями для дифференциальной диагностики степени тяжести шизофрении и расстройств аутистического спектра у детей [4]. Наряду с изучением генетической составляющей психических заболеваний, биологи и клиницисты в настоящее время все больше внимания уделяют анализу патофизиологических изменений, наблюдаемых при РАС и детской шизофрении, что способствует дифференциальной диагностике психических расстройств и пониманию их этиологии и патогенеза [7, 8]. Достижения молекулярной биологии в понимании ключевых биологических механизмов, лежащих в основе окислительного стресса, развитие инструментальных методов визуализации и диагностики головного мозга, привели к возрастающему вниманию исследователей к роли окислительного стресса в патогенезе психических расстройств, в том числе, аутизма и шизофрении [5, 7, 10]. У пациентов с шизофренией и с РАС отмечаются признаки окислительного стресса не только в мозге пациентов, но и системно - в периферической крови [5, 10]. Окислительный стресс возникает в результате дисбаланса между избыточным синтезом активных форм кислорода (АФК) и дефицитом антиоксидантов [6, 9]. Окислительный стресс, вероятно, может увеличивать риск развития психоза в кризовые «уязвимые» периоды онтогенеза, «физиологического апоптоза» [11]. Свободные радикалы, накапливающиеся при развитии окислительного стресса, могут вызывать окислительные модификации и образование разрывов внеклеточной ДНК и ядерной ДНК клеток крови [6]. Маркеры окислительного стресса могут не только свидетельствовать о тяжести течения психических расстройств в континууме РАС и шизофрении с началом в детском возрасте (ШД) [4], но и представлять собой биомаркеры для определения стратегий лечения пациентов с психозами: инфантильным психозом (ИП) при детском аутизме (ДА), атипичным детским психозом (АДП) при атипичном аутизме (АА) и шизофренией с началом в детском возрасте.

Известны способы диагностики психических расстройств у детей (РАС и ШД), основанные на клиническом наблюдении и психометрическом обследовании пациентов, с использованием международных диагностических и оценочных шкал. Клиническое наблюдение включает клиническую оценку психопатологических проявлений психического расстройства у детей, оценивается синдромальное состояние по характерному комплексу симптомов, проводится оценка выраженности позитивных и негативных психических расстройств, что позволяет определить нозологическую принадлежность расстройства психики пациента. Психометрическое обследование с использованием психометрических шкал позволяет разграничить разные нозологии и оценить степень тяжести отдельных симптомов в виде суммы балов [12]. Недостатком данных способов, включающих клиническую и психометрическую оценку, является субъективность методов, поскольку результаты обслуживания зависят от квалификации и опыта врача.

Известен способ диагностики расстройств аутистического спектра у детей с использованием нейрофизиологического маркера РАС, по изменению уровня постоянных потенциалов головного мозга в монополярном отведении от пяти областей: лобной (Fz), центральной (Cz), затылочной (Oz), правой (Td) и левой (Ts) височных. Наличие РАС у ребенка определяют при повышении интенсивности энергообмена в лобном отделе, определяемого по отклонению показателя уровня постоянных потенциалов на одно или более стандартных отклонений [патент РФ №2687580, 2018]. Однако, данный способ позволяет диагностировать РАС, но не обеспечивает дифференциальной диагностики степени тяжести проявления аутизма у детей.

Известен способ выявления группы риска развития психических расстройств у детей на основании мониторинга биометрических показателей, в частности индикаторов сердечного ритма: индекса напряжения и амплитуды моды. Изменение исследуемых показателей относительно здорового контроля делают вывод о соответствии состояния ребенка группе риска по возникновению РАС [патент РФ №2655073, 2018 г.]. Данный способ обеспечивает упрощенное раннее выявление детей группы риска по возникновению РАС среди выборки детей с нарушениями коммуникативных функций, но не позволяет оценить тяжесть течения РАС.

Известен также способ диагностики аутизма и на основе определения высоких концентраций определенных пептидов в плазме или сыворотке крови. Способ предусматривает выявление в плазме крови аминокислотных последовательностей SKITHRIHWESASLL, SSKITHRIHWESASLL и SSKITHRIHWESASLLR, с молекулярной массой соответственно 1779±1 Да, 1865±1 Да и 2022±1 Да. Превышение концентраций данных пептидов в 10 и более раз по сравнению с нормой является маркером для диагностики аутизма. [патент РФ №2340900, 2004 г.].

Известен способ прогнозирования психомоторного развития детей с перинатальным поражением центральной нервной системы, [патент РФ №2475747, 2011 г.]; способ лабораторного выявления последствий перинатальных поражений центральной нервной системы и определения степени их тяжести у детей, [патент РФ №2425371, 2010 г.]; способ определения характера патофизиологических нарушений психомоторного развития детей первого года жизни [патент РФ №2231074, 2003 г.]; способ выявления групп риска развития нервно-психических заболеваний [патент РФ №2218569, 2002 г.], а также лабораторный способ оценки психического состояния пациентов с эндогенными психическими расстройствами по выявлению изменений уровня иммунологических показателей в плазме крови по сравнению с физиологической нормой: активности лейкоцитарной эластазы, функциональной активности α1 протеиназного ингибитора, уровня аутоантител к нейроантигенам - основному белку миелина и белку S100B в комплексе с определением клинических параметров - «Нейро-иммуно-тест» [патент РФ №2643760, 2018 г.], однако ни один из описанных способов не позволяет проводить дифференциальную диагностику тяжести течения аутизма и шизофрении у детей для своевременного назначения эффективной терапии, различающейся при легком и тяжелом течении аутизма, и при шизофрении.

Таким образом, до настоящего времени не существует способа, позволяющего определять тяжесть течения психических расстройств в континууме РАС и ШД, для определения стратегий лечения пациентов с психозами: инфантильным психозом при детском аутизме и атипичным детским психозом при атипичном аутизме и при ШД.

Раскрытие сущности изобретения

Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является получение способа, позволяющего определять тяжесть течения психических расстройств при расстройствах аутистического спектра и шизофрении у детей для дифференциальной диагностики диагнозов детского аутизма, атипичного аутизма и шизофрении с началом в раннем детском возрасте.

Технический результат, получаемый при решении поставленной задачи, выражается в получении способа определения тяжести течения психических расстройств при РАС и ШД с использованием в качестве маркеров: уровней активных форм кислорода (АФК), 8-oxodG и γН2АХ в мононуклеарах периферической крови, а также концентрации и окислительной модификации внеклеточной ДНК плазмы периферической крови.

Предлагаемый способ определения тяжести течения психических расстройств при расстройствах аутистического спектра и шизофрении у детей включает следующие стадии:

А) отбор крови и выделение ДНК: венозную кровь отбирают в вакуумные пробирки с антикоагулянтом; отделяют центрифугированием (400g) плазму; выделяют из плазмы внеклеточную циркулирующую ДНК (вкДНК) экстракцией фенол-хлороформом (однократная экстракция забуференым фенолом рН 8.0, экстракция хлороформом, осаждение изопропиловым спиртом в присутствии 2М ацетата аммония); определяют концентрацию внеклеточной ДНК по флуоресценции ДНК-связывающего красителя (например, методом флуориметрии с ДНК-интеркалирующим красителем PicoGreen (Invitrogen) на планшетном мультиридере EnSpire (PerkinElmer));

Б) определение уровня 8-окси-дезоксигуанозина (8-oxodG) в составе внеклеточной ДНК методом дот-иммуноблоттинга по связыванию соответствующих антител на мембранных фильтрах по следующему оригинальному протоколу: пробы внеклеточной ДНК с предварительно измеренной концентрацией наносятся на нитроцеллюлозный фильтр (Optitran, Whatman), по 1 мкл в нескольких повторах, также на этот фильтр наносятся калибровочные образцы - окисленную под воздействием ультрафиолета ДНК с определенным масс-спектрометрически содержанием 8-oxodG; далее фильтры подсушиваются; ДНК иммобилизуется запеканием (80^°C, 20 мин); проводятся последовательные обработки: блокировка неспецифического связывания (0,5% сухое обезжиренное молоко на PBS, 30 мин при 37^°C), инкубация со специфическими антителами (3 часа в свежеприготовленном растворе мышиных анти-SOHDG антител (SC-66036, SantaCruz, США) 3 мкг/мл в PBS - 0,5% сухое обезжиренное молоко, отмывки (трижды по 5 мин PBS-0,05%TWEEN20), инкубация со вторичными антителами анти-мышь-щелочная фосфатаза (CLCC30008, Cedarline, Канада) в концентрации 1 мкг/мл на PBS-0,05%TWEEN20 30 мин при комнатной температуре, отмывки (дважды по 5 минут PBS-0,05%TWEEN20, один раз 0,05М ТРИС рН 9,5, 0,2М NaCl), проявление в растворе субстрата (BCIP-NBT); обработка полученных сигналов проводится компьютерным анализом изображения фильтра;

В) выделение мононуклеаров периферической крови, которое проводят в системе фиколл-урографин из периферической крови (гепаринизированной);

Г) определение уровня активных форм кислорода (АФК) методом проточной цитометрии осуществляют с помощью красителя 2,7-дихлордигидрофлуоресцеин диацетата (DCFH-DA) («Molecular Probes/Invitrogen», США), который под действием АФК окисляется с образованием флуоресцирующего производного - 2,7-дихлорфлуоресцеина (DCF); краситель добавлют к суспензии клеток (до рабочей концентрации 10 мкМ) и инкубируют 10 минут в темноте, после чего клетки осаждаются и проводят анализ в фосфатно-солевом буфере (PBS, «ПанЭко», Россия) на проточном цитофлуориметре CyFlow® (Sysmex Partec GmbH, Германия);

Д) определение двуцепочечных разрывов ДНК ядер клеток проводят по методу гамма-фокусов: фосфорилирование по остатоку серина 139 высококонсервативного гистона Н2АХ происходит в сайте образования двуцепочечного разрыва ДНК; для проведения анализа клетки фиксируются формальдегидом (3,7% на PBS, 10 мин при 37°C), пермеабилизуются (0,5% Тритон Х-100 («Merck», Германия) 10 мин 24°C), после чего инкубируются с флуоресцентно меченными специфическими антителами к фосфорилированной форме Н2АХ (γН2АХ) (nb100-78356G NovusBio, USA) в рабочей концентрации 1 мкг/мл 2 часа при 24°С; детекция производится методом проточной цитометрии на проточном цитофлуориметре CyFlow® (Sysmex Partec GmbH, Германия);

E) определение 8-окси-дезоксигуанозина (8-oxodG) в клетках с использованием проточной цитофлуориметрии: фиксированные формальдегидом (3,7% на PBS, 10 мин при 37°C) клетки пермеабилизируют (0,5% Тритон Х-100 («Мегск», Германия) 10 мин 24°C) и инкубируют с антителами к 8-oxodG, коньюгированными с флуоресцентной меткой (sc393871 «SantaCruz», США) в рабочей концентрации 1 мкг/мл 2 ч при температуре 24°С; уровень 8-окси-дезоксигуанозина (8-oxodG) в ДНК клеток определяется проточной цитометрией на приборе CyFlow® (Sysmex Partec GmbH, Германия).

Осуществление изобретения

Для осуществления изобретения была привлечена выборка из 96 больных детского возраста (4-12 лет), отнесенных к трем группам, согласно диагнозам, охарактеризованным на основе клинических критериев МКБ-10 [2], DSM-5 (Diagnostic and Statistical Manual of mental disorders, fifth edition - Диагностическое и статистическое руководство по психическим расстройствам 5-го издания) [14]: 1-я группа - больные с диагнозом детский аутизм (ДА); 2-я группа - больные с диагнозом атипичный аутизм (АА), 3-я группа - больные с диагнозом детская шизофрения (ШД); также была сформирована 4-я группа - групп контроля, состоящая из 34 здоровых доноров соответствующего возраста. Первоначальный скрининг пациентов с РАС осуществлялся психиатром с использованием Рейтинговой шкалы детского аутизма - CARS [15]. Больные шизофренией дети оценивались по шкале PANSS [16]. Критерии включения: больные ДА, инфантильным психозом; больные АА, атипичным детским психозом; больные ШД с началом в раннем детском возрасте. Критерии исключения: больные с синдромальными формами АА (врожденные дефекты обмена веществ, хромосомные аномалии); прогрессирующие дегенеративные заболевания.

Выборка детей-аутистов была разбита на 2 группы по тяжести течения заболевания. В первую группу вошли 30 детей, больных легкой и средней степенью тяжести аутизма с диагнозом ДА, «инфантильный психоз» (F84.0). Вторую группу составила выборка больных с тяжелым течение аутизма, с диагнозом «атипичный детский психоз» в рамках АА (F84.1) - 28 человек.

Выборку детей, больных шизофренией с началом в раннем детском возрасте, злокачественным непрерывным течением (F20.8) составили 38 пациентов.

В выделенных мононуклеарах периферической крови всех подгрупп исследовали уровень АФК (фигура 1). В мононуклеарах периферической крови детей группы 1-й группы (ДА) уровень АФК был на 30-40% выше, чем в мононуклеарах детей из контрольной группы, что свидетельствует о наличии компенсируемого окислительного стресса у этих детей. В группе 2-й (АА) уровень АФК был в 2,2-2,5 раз выше (р<0,01), чем в мононуклеарах детей из контрольной группы, а в группе 3-й детей с диагнозом ШД уровень АФК в 3-3,3 раза выше (р<0,01), чем в мононуклеарах детей из контрольной группы (фигура 1). Таким образом, повышение уровня АФК в выделенных мононуклеарах периферической крови в 2-2,8 раз и в 2,8-3,5 раз может служить маркером уровня выраженного окислительного стресса у детей с тяжелым АА и ШД, соответственно.

При оценке уровеня 8-oxodG в мононуклеарах периферической крови детей с РАС, ШД и здоровых детей в мононуклеарах крови пациентов из группы 1 (ДА) медиана уровня 8-oxodG была недостоверно выше этого показателя, чем у детей из контрольной выборки (фигура 2). Однако, уровень 8-oxodG в мононуклеарах крови пациентов из 2-й группы (АА) был в 2 раза выше, чем в контрольной выборке (р<0,01, фигура 2). Уровень 8-oxodG в мононуклеарах крови пациентов из 3-й группы (ШД) был в 2,8-3 раза выше (р<0,01), чем у детей из контрольной выборки (р<0,01, фигура 2). Повышение уровня 8-oxodG в мононуклеарах периферической крови в 2-2,8 раз и в 2,8-3,5 раз также может служить маркером уровня выраженности окислительного стресса у детей, соответственно, с тяжелым АА и ШД.

В мононуклеарах крови пациентов из группы 1 (ДА) медиана уровня γН2АХ, отражающего уровень двунитевых разрывов, в ядрах мононуклеаров была недостоверно выше этого показателя у детей из контрольной выборки (фигура 2). Уровень γН2АХ в ядрах мононуклеаров крови пациентов из 2-й группы (АА) был в 2 раза выше, чем в контрольной выборке (р<0,01, фигура 2). Уровень γН2АХ в мононуклеарах крови пациентов из 3-й группы (ШД) был в 2,6-2,9 раза выше (р<0,01), чем у детей из контрольной выборки (р<0.01, фигура 2). Повышение уровня γН2АХ в мононуклеарах периферической крови в 2-2,5 раз и в 2,6-3,5 раз может служить маркером уровня генотоксического повреждения ДНК мононуклеаров периферической крови у детей, соответственно, с тяжелым АА и ШД.

Таким образом, при тяжелой степени аутизма (АА по МКБ-10), так же, как и при шизофрении в детском возрасте, окислительный стресс имеет геннотоксичный эффект, что проявляется в накопление одно- и двуцепочечных разрывов в ядрах клеток периферической крови.

На фигуре 3 представлены результаты измерения концентрации вкДНК в образцах плазмы пациентов с РАС, шизофренией в детском возрасте и здоровых детей из контрольной выборки. Обнаружили статистически значимое повышение уровня вкДНК в плазме в группах 1 (ДА) и 2 (АА) и в группе 3 (ШД) по сравнению со здоровыми детьми из контрольной группы (р<0,001, фигура 3); кроме того, статистически значимое различие было достигнуто и при сравнении значений концентрации в группе 1 (ДА) и в группе 2 (АА) (р<0,01), а также в группе 1 (ДА) и в группе 3 (ШД) (р<0,01). Во 2-й группе (АА - тяжелая форма РАС) среднее значение концентрации вкДНК было приблизительно в 3,5 раза выше, чем тот же показатель у здоровых людей (р<0,001), в группе 3 (ШД) значение концентрации вкДНК было приблизительно в 3,2 раза выше, чем тот же показатель у здоровых людей (р<0,001). Вероятно, более низкие значения концентрации в выборке детей, больных шизофренией, по сравнению с выборкой детей с тяжелой степенью аутизма обусловлены более высокой активностью компонентов системы элиминации вкДНК из кровотока на фоне повышенного уровня повреждения ДНК лимфоцитов крови. У пациентов группы 1 (легкая и средняя тяжесть РАС), увеличение концентрации вкДНК по сравнению с нормальным исходным уровнем была достоверной, хоть и менее выраженной (р=0,0096). Повышение концентрации вкДНК в плазме крови в 3-4 раза сопровождает течение тяжелой формы РАС и ДШ.

Уровень 8-oxodG в составе вкДНК детей больных аутизмом и шизофренией: количество 8-oxodG в составе вкДНК повышается в 3,3-3,7 раз (р<0,01) в группе 3 (ШД), и в 2,5-3 раза (р<0,01) в группе 2 пациентов с АА (с тяжелым течением РАС); в группе 1 пациентов с ДА (легкой и средним течением РАС) различий с контролем не наблюдается (фигура 3). Повышение уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 2,5-3,3 раза и в 3,3-4 раза также может служить маркером уровня выраженности окислительного стресса у детей с тяжелым АА и ШД соответственно.

Полученные результаты дают основания считать, что окислительный стресс (его маркеры - в периферической крови: уровень АФК, уровень 8-oxodG; уровень γН2АХ; в плазме периферической крови: концентрация вкДНК; 8-oxodG в составе внеклеточной ДНК), его генотоксическое воздействие на ДНК клеток крови входит в число факторов, определяющих тяжесть течения РАС и сопровождает течение ШД. Диагноз атипичного аутизма подтверждается при повышении в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 2-2,8 раз, уровня γН2АХ в 2-2,5 раз, концентрации вкДНК в 3-4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 2,5-3,3 раза по сравнению с контролем. Диагноз шизофрении с началом в детском возрасте подтверждается при повышении в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 2,8-3,5 раз, уровня γН2АХ в 2,6-3,5 раз, концентрации вкДНК в 3-4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 3,3-4 раза по сравнению с контролем.

Статистическую обработку проводили с использованием программы Excel Microsoft Office, Statistica 6.0, StatGraph. При анализе предполагаемых различий между выборками исходили из нуль-гипотезы об отсутствии различий, которую проверяли с помощью расчета U-критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при р<0,01.

Пример 1.

У пациента Д., 9 лет, в процессе обследования с использованием дифференциально-диагностических шкал CARS, BFCRS, PSP был поставлен диагноз детского аутизма (ДА), «инфантильного психоза» (F84.0). Наблюдались кататонические расстройства, которые имели генерализованный гиперкинетический характер, эхопраксия, поведенческие и двигательные стереотипии, моторное возбуждение сопровождалось негативизмом, речь отсутствовала. Для исключения диагноза атипичного аутизма провели молекулярно-биологическое исследование уровня окислительных повреждений ДНК. Повышение уровня АФК и 8-oxodG в мононуклеарах периферической крови по сравнению с контролем было незначительным - в 1,2-1,4 раза, уровня γН2АХ - в 1,3 раз; концентрация вкДНК плазмы периферической крови возрастала в 1,6 раз, однако, уровень 8-oxodG в составе вкДНК не отличался от контроля. Был подтвержден диагноз детского аутизма (ДА), «инфантильного психоза» (F84.0), исключен диагноз атипичного аутизма.

Пример 2.

У пациентки М., 5 лет, с использованием дифференциально-диагностических шкал CARS, BFCRS, PSP был поставлен диагноз «атипичный детский психоз», АА (F84.1). Наблюдался острый психоз с кататонической симптоматикой, гиперкинетическое возбуждение, двигательные стереотипии, отсутствие речи, когнитивный дефект. Для подтверждения диагноза атипичного аутизма провели молекулярно-биологическое исследование уровня окислительных повреждений ДНК. Повышение уровня АФК и 8-oxodG в мононуклеарах периферической крови по сравнению с контролем было в 2,5 и 2,7 раз, соответственно; уровня γН2АХ - в 2,4 раз, концентрации вкДНК в 3,4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 3 раза по сравнению с контролем. Диагноз атипичного аутизма был лабораторными методами подтвержден.

Пример 3.

Пациенту Ф., 4 года, с использованием дифференциально-диагностических шкал PANSS, BFCRS, PSP поставлен диагноз шизофрении с началом в раннем детском возрасте - ШД (F20.8). Речь отсутствовала, наблюдалась кататоничесая симптоматика, астения, снижения энергетического потенциала, эмоциональное оскуднение, олигофреноподобный дефект. Для подтверждения диагноза ДШ провели молекулярно-биологическое исследование уровня окислительных повреждений ДНК. Обнаружено повышение в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 3,2 и 3,5 раз, соответственно; уровня γН2АХ в 3,4 раза, концентрации вкДНК в 4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 3,8 раза по сравнению с контролем, что подтверждает у пациента Ф. диагноз ШД. Краткое описание чертежей

Фигура 1. Уровень флуоресценции DCF (красителя 2,7-дихлорфлуоресцеина), соответствующий уровню синтеза активных форм кислорода (АФК) в мононуклеарах периферической крови детей с ДА, АА, ШД и здоровых детей. Группа 1- с диагнозом ДА, группа 2- с диагнозом АА, группа 3- с диагнозом ШД, контроль - контрольная группа здоровых детей (*- различия с контрольной группой достоверны, р<0,01).

Фигура 2. Уровень 8-oxodG в мононуклеарах (А) и уровень γН2АХ в ядрах мононуклеарах (Б) периферической крови детей с ДА, АА, ШД и здоровых детей. Группа 1- с диагнозом ДА, группа 2- с диагнозом АА, группа 3- с диагнозом ШД, контроль - контрольная группа здоровых детей (*- различия с контрольной группой достоверны, р<0.01).

Фигура 3. Концентрация внеклеточной ДНК (А) и содержание 8-oxodG в образцах внеклеточной ДНК (Б) плазмы периферической крови детей с диагнозом ДА, АА, ШД и здоровых детей. Группа 1- с диагнозом ДА, группа 2- с диагнозом АА, группа 3- с диагнозом ШД, контроль - контрольная группа здоровых детей (*- различия с контрольной группой достоверны, р<0,01).

Список литературы

1. Иванов М.В., Симашкова Н.В., Козловская Г.В. Нарушения психического развития у детей раннего возраста: скрининг, распространенность, профилактика В сборнике: Дети. Общество. Будущее, сборник научных статей по материалам III Конгресса «Психическое здоровье человека XXI века». Москва, 2020. С. 234-236.

2. Психические расстройства и расстройства поведения (F00-F99). Класс V МКБ-10, адаптированный для использования в Российской Федерации. Под общей редакцией Казаковцева Б.А., Голланда В.Б. - М.: Минздрав России; 1998: 512 с.

3. Хаустов А.В., Шумских М.А. Динамика в развитии системы образования детей с расстройствами аутистического спектра в России: результаты Всероссийского мониторинга 2020 года // Аутизм и нарушения развития. 2021. Том 19. №1 (70). С. 4-11. DOI: https://doi.org/10.17759/autdd.202119010.

4. Simashkova NV, Boksha IS, Klyushnik TP, Iakupova LP, Ivanov MV, Mukaetova-Ladinska EB. Diagnosis and Management of Autism Spectrum Disorders in Russia: Clinical-Biological Approaches. Journal Autism and Developmental Disorders. 2019; 49(9):3906-3914.

5. Shmarina GV, Ershova ES, Simashkova NV, Nikitina SG, Chudakova JM, Veiko NN, Porokhovnik LN, Basova AY, Shaposhnikova AF, Pukhalskaya DA, Pisarev VM, Korovina NJ, Gorbachevskaya NL, Dolgikh OA, Bogush M, Kutsev SI, Kostyuk SV. Oxidized cell-free DNA as a stress-signaling factor activating the chronic inflammatory process in patients with autism spectrum disorders. Journal of Neuroinflammation. 2020 Jul 16; 17(1):212.

6. Fraguas D, Arango C. Oxidative Stress and Inflammation in Early Onset First Episode Psychosis: A Systematic Review and Meta-Analysis. International Journal of Neuropsychopharmacology. Jun 2017; 20(6):435-444.

7. Thorsen M. Oxidative stress, metabolic and mitochondrial abnormalities associated with autism spectrum disorder. Progress in Molecular Biology and Translational Science. 2020; 173:331-354.

8. McGrath JJ, Mortensen PB, Visscher PM, Wray NR. Where GWAS and epidemiology meet: opportunities for the simultaneous study of genetic and environmental risk factors in schizophrenia. Schizophrenia Bulletin. Sep 2013; 39(5):955-959.

9. Abdul F, Sreenivas N, Kommu JVS, Banerjee M, Berk M, Maes M, Leboyer M, Debnath M. Disruption of circadian rhythm and risk of autism spectrum disorder: role of immune-inflammatory, oxidative stress, metabolic and neurotransmitter pathways. Reviews in the Neurosciences. 2021 May 17; ():000010151520210022.

10. Koga M, Serritella AV, Sawa A, Sedlak TW. Implications for reactive oxygen species in schizophrenia pathogenesis. Schizophrenia Research. 2016; 176:52-71.

11. Башина B.M., Горбачевская Н.Л., Клюшник Т.П., Симашкова Н.В., Якупова Л.П., Даниловская Е.В., Туркова И.Л. Маркеры критических периодов онтогенеза и их связь с психическими расстройствами у детей// XII Съезд психиатров России. М. 1995, с. 361-363.

12. Тиганов А.С. Психиатрия: Руководство для врачей в двух томах. - М.: Медицина. 2012,808 с.

13. Балакирева Е. Е, Иванов М.В., Коваль-Зайцев А.А, Куликов А.В., Макушкин Е.В., Никитина С.Г., Пережогин Л.О., Симашкова Н.В. Шизофрения у детей. Клинические рекомендации РФ. - М.: МЗ РФ. 2021, 63 с.

14. American Psychiatric Association. Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Fifth Edition (DSM-5). Arlington, VA: American Psychiatric Publishing. 2013: 992 p.

15. Schopler E, Reichler R, Rochen Renner B. The childhood autism rating scale. Western Psychological Services; 1988.

16. Opler LA, Kay SR, Lindenmayer JP, Fiszbein A. Structured Clinical Interview Positive and Negative Syndrome Scale (SCI-PANSS). Multi-Health Systems Inc. 1999, №4:15 p.

17. Bush G, Fink M, Petrides G, Dowling F, Francis A. Catatonia. I. Rating scale and standardized examination, Acta Psychiatrica Scandinavica. Feb 1996; 93(2):129-136.

18. Nasrallah H, Morosini P, Gagnon DD. Reliability, validity and ability to detect change of the Personal and Social Performance scale in patients with stable schizophrenia. Psychiatry Research. Nov 2008; 161(2):213-224.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской генетике, молекулярной биологии, психиатрии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики у детей детского аутизма легкой степени тяжести течения, атипичного аутизма и шизофрении. При повышении в мононуклеарах периферической крови уровня активных форм кислорода (АФК) и 8-oxodG в 1,2-1,4 раза, уровня γН2АХ в 1,3 раза, концентрации внеклеточной ДНК (вкДНК) в 1,6 раз по сравнению с контролем диагностируют детский аутизм легкой степени тяжести течения. При повышении в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 2-2,7 раз, уровня γН2АХ в 2-2,5 раз, концентрации вкДНК в 3,4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 2,5-3,3 раза по сравнению с контролем подтверждается диагноз атипичного аутизма. При повышении в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 2,8-3,5 раз, уровня γН2АХ в 2,6-3,5 раз, концентрации вкДНК в 3,5-4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 3,4-4 раза по сравнению с контролем подтверждается диагноз шизофрении. Способ обеспечивает возможность определения тяжести течения психических расстройств в континууме расстройств аутистического спектра и шизофрении за счет использования маркеров окислительного стресса. 3 ил., 3 пр.

Способ дифференциальной диагностики у детей диагнозов детского аутизма легкой степени тяжести течения, атипичного аутизма и шизофрении, характеризующийся тем, что определяют уровень АФК, 8-oxodG и γН2АХ в мононуклеарах периферической крови и концентрацию вкДНК плазмы периферической крови и уровень 8-oxodG в ее составе: при повышении в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 1,2-1,4 раза, уровня γН2АХ в 1,3 раза, концентрации вкДНК в 1,6 раз по сравнению с контролем диагностируют детский аутизм легкой степени тяжести течения; при повышении в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 2-2,7 раз, уровня γН2АХ в 2-2,5 раз, концентрации вкДНК в 3,4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 2,5-3,3 раза по сравнению с контролем подтверждается диагноз атипичного аутизма; при повышении в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 2,8-3,5 раз, уровня γН2АХ в 2,6-3,5 раз, концентрации вкДНК в 3,5-4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 3,4-4 раза по сравнению с контролем подтверждается диагноз шизофрении с началом в детском возрасте.