Способ прогнозирования течения хронической сердечной недостаточности Российский патент 2019 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии.

Аналоги

Известны работы о роли полиморфизма ряда генов в развитии и течении сердечнососудистых заболеваний, однако они отличаются значительной противоречивостью (Chen S, Zhang L, Wang HW, Wang XY, et al. The M235T polymorphism in the angiotensinogen gene and heart failure: a meta-analysis. J. Renin Angiotensin Aldosterone Syst. 2012. - Vol. 15. - P. 190-195., Стецкая Т.А., Бушуева О.Ю., Булгакова И.В. Проявление полового диморфизма в ассоциации полиморфного варианта М235Т гена AGT с риском развития артериальной гипертензии в популяции центрально - черноземного региона России. // Международный научно-исследовательский журнал. 2013. - 8-4(15). - С. 36-39.)

Критика аналогов

Современные прогностические алгоритмы нуждаются в дальнейшей доработке в связи с их невысокой эффективностью при выявлении генетического полиморфизма тех или иных генов отвечающих за развитие течения хронической сердечной недостаточности.

Прототип

В качестве прототипа нами взят «Способ прогнозирования течения ХСН» патент №2357250 от 27.05.2009. Известный способ заключается в следующем: Данное изобретение относится к области кардиологии, в частности к прогнозированию течения хронической сердечной недостаточности. Для осуществления способа определяют количество CD133+-клеток в образцах цельной крови и оценивают их колониеобразующую способность при культивировании in vitro. Риск развития неблагоприятного исхода: ранней смерти и/или госпитализации крайне высок, если при обследовании пациента с хронической сердечной недостаточностью представительство CD133+-клеток в цельной крови меньше или равно 1×10⁵/л и количество колониеобразующих единиц меньше или равно 2/мм². Благоприятный исход прогнозируют, если представительство CD133+-клеток в цельной крови более 1×10⁵/л и количество колониеобразующих единиц более 2/мм².

Критика прототипа

Предлагаемый способ имеет патогенетическое обоснование, а способ-прототип фактически отражает процессы воспаления и иммунитета, которые могут иметь косвенное значение, а процессы воспаления и иммунитета могут так же определяться более простым методом, например СРБ.

Цель изобретения

Целью изобретения является повышение эффективности прогнозирования течения хронической сердечной недостаточности (ХСН) ишемической этиологии. Адекватное включение в прогностические алгоритмы новых предикторов, в том числе и генетических, позволят повысить их чувствительность и специфичность.

Сущность изобретения

Предлагаемый способ заключается в следующем: Геномную ДНК выделяли из 1 мл цельной крови экспресс-методом, наборами компании ООО НПФ «Литех». Кровь, объемом 5 мл, забирали в вакутейнеры с ЭДТА. Для амплификации готовили реакционную смесь: 17,5 мкл буфлера, 2,5 мкл смесь праймеров и dNTP, 0,2 мкл Taq-полимеразы, 0,2 мкл syber green, 20 мкл минерального масла, 5 мкл геномной ДНК.

Исследование полиморфизма генов проводили методом ПЦР - в режиме реального времени (real-timepcr) с использованием наборов тест систем ООО НПФ «Литех» (Россия-Москва) на ампфликаторе DT-Lite ООО «НПО ДНК-Технология» в лаборатории медицинского центра “Гепар” (г. Махачкала).

При оценке тяжести ХСН нами использовалась функциональная классификация, предложенная в 1964 году Нью-Йоркской ассоциацией сердца (New York Heart Association NYHA). Всем пациентам проводилось клинико-лабораторное обследование, объективизация функционального класса. Оценивались эхокардиографические показатели: фракция выброса (ФВ) конечно-систолический (КСР) и конечно-диастолический размер (КДР), степень укорочения передне-заднего размера левого желудочка (%ΔS). В качестве критерия диастолической дисфункции использовалось отношение ранней (Е) фазы заполнения левого желудочка к предсердному (А) компоненту его диастолического заполнения (Е/А).

Повышенный риск развития ХСН ишемической этиологии ассоциирован с носительством аллеля D I/D полиморфного маркера гена АСЕ. Генотип ТТ полиморфного маркера Met235Thr гена AGT ассоциируется с наличием известных факторов риска ИБС -повышением содержания триглицеридов, ЛПНП, более выраженным нарушением геометрии сердца с увеличением размеров левого желудочка и с нарушением систолической функции. По предлагаемому в качестве изобретения способу наличие мутированного гена AGT и АСЕ у больных ИБС прогнозирует неблагоприятное течение хронической сердечной недостаточности.

Пример конкретного выполнения способа

Больной А. обследован на наличие гена (Met235Thr)-ACE, (D I/D)-AGT, (А1166С)-AGTR1. Геномную ДНК выделяли из 1 мл цельной крови экспресс-методом, наборами компании ООО НПФ «Литех». Кровь, объемом 5 мл, забирали в вакутейнеры с ЭДТА. Для амплификации готовили реакционную смесь: 17,5 мкл буфлера, 2,5 мкл смесь праймеров и dNTP, 0,2 мкл Taq-полимеразы, 0,2 мкл syber green, 20 мкл минерального масла, 5 мкл геномной ДНК. Исследование полиморфизма генов проводили методом ПЦР - в режиме реального времени (real-timepcr) с использованием наборов тест систем ООО НПФ «Литех» (Россия-Москва) на ампфликаторе DT-Lite ООО «НПО ДНК-Технология» в лаборатории медицинского центра "Гепар" (г. Махачкала).

Признаки изобретения, отличительные от прототипа

Метод имеет патогенетическое обоснование, а рассматриваемый метод Карелкиной Е.В., фактически отражает процессы воспаления и иммунитета, которые могут иметь косвенное значение, а так же определяться более простым методом, например СРБ

1. Признаки изобретения

- выделяют геномную ДНК из 1 мл цельной крови экспресс-методом, кровь, объемом 5 мл, забирают в вакутейнеры с ЭДТА. Для амплификации готовили реакционную смесь: 17,5 мкл буфлера, 2,5 мкл смесь праймеров и dNTP, 0,2 мкл Taq-полимеразы, 0,2 мкл syber green, 20 мкл минерального масла, 5 мкл геномной ДНК.

- при определении генетического полиморфизма наличие генотипа ММ полиморфного маркера Met235Thr гена AGT снижает риск развития ХСН, а носительство аллели D и Т ассоциировано с более высоким, уровнем липопротеидов низкой плотности, более низкой фракции выброса и меньшей степень укорочения переднезаднего размера левого желудочка.

2. Признаки прототипа

- определяют количество CD133+-клеток в образцах цельной крови и оценивают их колониеобразующую способность при культивировании in vitro.

Положительный эффект от применения предлагаемого способа

Представлены результаты исследований генетического полиморфизма генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС): АСЕ, AGT, AGTR1 у больных хронической сердечной недостаточностью (ХСН) ишемической этиологии. Обследовано 103 пациента с ХСН ишемической этиологии, 2-3 ФК NYNA, и 36 человек без заболеваний сердечно-сосудистой системы. Снижает риск развития ХСН носительство генотипа ММ полиморфного маркера Met235Thr гена AGT, аллеля Т полиморфного маркера Thr174Met гена AGT и аллеля А полиморфного маркера А1166С гена AGTR1. Использование предлагаемого способа позволяет с высокой степенью достоверности прогнозировать развитие течения хронической сердечной недостаточности. На основании проведенного исследования выявлены следующие закономерности: отмечается тенденция к ассоциации аллели D гена АСЕ с повышением вероятности развития ХСН ишемической этиологии, носительство аллели D ассоциировано с более высоким, уровнем липопротеидов низкой плотности, более низкой фракции выброса и меньшей степень укорочения переднезаднего размера левого желудочка.

Информация, принятая во внимание:

1. Chen S, Zhang L, Wang HW, Wang XY, et al. The M235T polymorphism in the angiotensinogen gene and heart failure: a meta-analysis. J. Renin Angiotensin Aldosterone Syst. 2012. - Vol. 15. - P. 190-195.

2. Стецкая T.A., Бушуева О.Ю., Булгакова И.В. Проявление полового диморфизма в ассоциации полиморфного варианта М235Т гена AGT с риском развития артериальной гипертензии в популяции центрально - черноземного региона России. // Международный научно-исследовательский журнал. 2013. - 8-4(15). - С. 36-39.

3. «Способ прогнозирования течения ХСН» патент №2357250 от 27.05.2009. - прототип

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии. Способ прогнозирования течения хронической сердечной недостаточности (ХСН) заключается в исследовании цельной крови, при этом в цельной крови исследуют полиморфизм генов AGT и АСЕ и при наличии генотипа ТТ полиморфного маркера Met235Thr и аллели D гена АСЕ прогнозируют неблагоприятное течение ХСН. 1 пр.

Способ прогнозирования течения хронической сердечной недостаточности (ХСН), заключающийся в исследовании цельной крови, отличающийся тем, что в цельной крови исследуют полиморфизм генов AGT и АСЕ и при наличии генотипа ТТ полиморфного маркера Met235Thr и аллели D гена АСЕ прогнозируют неблагоприятное течение ХСН.