АНКСИОЛИТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2019 года по МПК C07D295/16 A61K31/495 A61P25/22 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и может быть использовано для устранения эмоциональной неустойчивости, тревоги, повышенной раздражительности, страхов при невротических состояниях.

Анксиолитические средства (транквилизаторы) представлены в основном производными 3,4-бензодиазепина (диазепам, феназепам, лоразепам, оксазепам и др.), которые наряду с сильным психотропным эффектом могут вызывать нарушение дыхания и функции сердечнососудистой системы, угнетение центральной нервной системы, парадоксальные реакции, привыкание, синдром последействия [Регистр лекарственных средств России (РЛС). Энциклопедия лекарств. - 15-й вып./ Гл. ред. Г.Л. Вышковский. - М., 2007, стр. 1156-1159], а также оказывать выраженное периферическое холинолитическое действие, проявляющееся множеством побочных эффектов (слабость, сухость слизистых оболочек, повышение внутриглазного давления, нарушение аккомодации, задержка мочеиспускания), негативно влияющих на качество жизни пациентов [М.Д. Машковский, Лекарственные средства 16-е изд., Умеренков: Новая волна, Москва, 2014].

В связи с этим выявление соединений с анксиолитической активностью, не имеющих побочных эффектов, свойственных бензодиазепинам, актуально для разработки новых транквилизаторов.

Изобретение касается расширения арсенала средств, оказывающих анксиолитическое действие при невротических состояниях для устранения эмоциональной неустойчивости, тревоги, страхов.

Для этой цели предлагается использовать соединение - 9-окси-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлорид (именуемый в представленных далее тексте и таблицах как соединение А).

Это структурный аналог М-холиноблокатора амизила. Амизил (бенактизин) является одним из первых М-холиноблокаторов центрального действия, включенных в группу транквилизаторов [М.Д. Машковский, Лекарственные средства 16-е изд., Умеренков: Новая волна, Москва, 2014].

Важным является и тот факт, что проявляя выраженное психотропное действие, включающее анксиолитическую и антидепрессантную активность, аналоги амизила не оказывают побочных периферических холинолитических эффектов.

Схема синтеза 9-окси-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлорида [Hromatka, О.; Kraupp, О.; Stentzel, L. The syntheses of new acylpiperazines. Monatsh. (1954) 85: 1215-1222]. (C.A. 1956, 50: 361-d) представлена на фиг. 1.

Этап I. 9-хлор-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлорид (3)

К раствору 5.26 г (0.02 м) хлорангидрида 9-хлор-9-флуоренкарбоновой кислоты (2) в 25 мл бензола добавляют несколькими порциями и при охлаждении в бане с холодной водой раствор 2.28 г (0.02 м) N-этилпиперазина (фирма Aldrich) в 20 мл бензола. Затем смесь кипятят 1 час, осадок отфильтровывают, сушат, получают 5.9 г (78%) 9-хлор-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлорида (3), т.пл. 180-182°С. Данные элементного анализа соответствуют вычисленным для C₂₀H₂₂Cl₂N₂O.

Этап II. 9-окси-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен (4) [по методу: Hromatka, О.; Kraupp, О.; Stentzel, L. The syntheses of new acylpiperazines. Monatsh. (1954) 85: 1215-1222]. (C.A. 1956, 50: 361-d).

Раствор 3.2 г (0.01 м) 9-хлор-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлорида (3) в 30 мл воды кипятят 2 часа, затем реакционную массу выливают в раствор 10 г углекислого калия в 15 мл воды, осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат и кристаллизуют из гептана, получают 9-хлор-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен [основание (4)], выход 1 г (31%), т.пл. 138-140°С (лит.т.пл. 141-142°С). Элементный анализ соответствует брутто-формуле C₂₀H₂₂N₂O₂.

Этап III. Соль в виде гидрохлорида [целевое соединение (5)] получена путем добавления HCl к основанию (4). Т.пл. 135-137°С. Данные элементного анализа соответствуют вычисленным для C₂₀H₂₃ClN₂O₂.

Спектр ЯМР 1Н, 5, м.д. (ДМСО-d6): 11.44 (s, 1H, HCl); 7.85 (d, 2Н, Ar); 7.47-7.33 (m, 6Н, Ar); 6.47 (s, 1Н, ОН); 4.22 (bs, 2Н, NCH2); 3.23 (bs, 4Н, 2NCH2); 2.64 (bs, 2Н, CH2N); 2.99(q, 2Н, NCH2); 1.17(1, 3Н, СН3).

Результаты фармакологического изучения структурного аналога амизила - 9-окси-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлорида

Исследована сравнительная анксиолитическая активность структурного аналога амизила - 9-окси-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлорида при моделировании тревожно-депрессивного состояния у крыс. В качестве препарата сравнения использован диазепам.

Для демонстрации анксиолитического действия заявленного соединения использовали метод измерения двигательной активности в тесте "открытое поле" и уровень тревожности с использованием общепринятого теста «приподнятый крестообразный лабиринт», позволяющие не только оценить силу анксиолитического эффекта, но и степень его селективности.

Влияние заявленного соединения на ориентировочно-двигательную реакцию, локомоторный и вегетативный статус крыс

Опыты выполнены на 80 самцах крыс породы Вистар массой 180-200 г, полученных из питомника «Рапполово», которые содержались в условиях вивария на стандартном сбалансированном рационе, со свободным доступом к воде при 12 часовом световом дне. Для поведенческих тестов были отобраны животные, имеющие средний уровень спонтанной двигательной активности. В работе использовали методические приемы в соответствии с «Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств» [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, А.Н. Миронов, Н.Д. Бунатян (ред.), Ч. 1-2, Гриф и К, Москва (2012)].

Влияние соединения А при курсовом внутрибрюшинном введении (30 дней) на характер поведения крыс в тесте «открытое поле» и «приподнятый крестообразный лабиринт» было исследовано на 4 группах животных (по 10 животных в каждой группе). Первую группу составили интактные животные, которых содержали в стандартных условиях вивария. Крысам второй (контрольной) группы вводили физиологический раствор. Крысы третьей группы получали раствор соединения 9-окси-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлорида в дозе 10 мг/кг ( ЛД₅₀). Эта доза подобрана из нескольких в предварительных опытах с хроническим введением препарата, как оптимально эффективная и не вызывающая побочных явлений. Животным четвертой группы вводили препарат сравнения диазепам в дозе 0,5 мг/кг (сибазон, раствор для внутривенного и внутримышечного введения, ФГУП «Московский эндокринный завод», Россия).

Исследуемое соединение и препарат сравнения вводили ежедневно один раз в день в течение 30 дней. На 30-й день эксперимента через 1 час после последней инъекции тестируемого соединения или препарата сравнения у крыс 2, 3 и 4 групп моделировали депрессивно-подобное состояние внутрибрюшинным однократным введением резерпина в дозе 4 мг/кг [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, А.Н. Миронов, Н.Д. Бунатян (ред.), Ч. 1-2, Гриф и К, Москва (2012)]. При появлении признаков депрессивного поведения, максимально развивающихся через 4 часа после инъекции резерпина, оценивали анксиолитический эффект в тесте «открытое поле» и «приподнятый крестообразный лабиринт».

Тест «открытое поле» в модификации «Real Timen»: арена, используемая нами, представляла собой круглую площадку, диаметром 92 см и боковыми стенками высотой 41 см. Пол площадки был расчерчен на 18 одинаковых секторов, расположенных в три ряда. За единицу перемещения принимали один пересеченный сектор. На пересечении секторов имелись небольшие округлые отверстия. Площадка равномерно освещалась источником света.

Горизонтальную двигательную активность грызунов регистрировали на периферии, в наружных арены и в ее центре. Помимо горизонтальной локомоторной активности регистрировали вертикальную двигательную активность (представленную двумя видами стоек: с опорой передними лапами на стенку и без нее); груминг; обследование (обнюхивание) отверстий (норок) как показатель исследовательской способности и уровень дефекации, который считается индексом эмоциональности животного [File S.E. - J. Pharm. Pharmacol., 1984, 36, pp. 837-840; Я. Буреш, О. Бурешова, Д.П. Хьюстон. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. 1991. Москва. «Высшая школа», стр. 119-122]. Параллельно отмечали наличие замираний животного как показатель крайней степени тревожности и эмоционального напряжения.

Результаты проведенного исследования, представленные в таблице 1, показали, что при курсовом введении 9-окси-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлорида наблюдаются достоверные изменения показателей двигательной, исследовательской активности, эмоциональных и вегетативных реакций, по сравнению с их значениями у интактных и контрольных животных.

Горизонтальная и вертикальная локомоторная активность после курсового введения соединения А усиливалась (табл. 1). Об этом свидетельствует увеличение количества пересеченных квадратов в наружном секторе открытого поля (на 57%), в средней трети поля (на 46%) и в центре поля (на 57%) по сравнению с контрольными животными.

Следует отметить, что в тесте «открытое поле» курсовые (30 дней) внутрибрюшинные инъекции соединения А предупреждали возникновение таких проявлений повышенной тревожности, как замирания, имеющие место у животных контрольной и интактной групп. Полученные данные позволяют сделать вывод, что тестируемый аналог амизила оказывает транквилизирующее действие.

Общую эмоциональность и вегетативный статус оценивали по актам дефекаций и количеству груминговых реакций. Установлено, что инъекции тестируемого соединения А снижали число актов дефекации и груминговых реакций, указывающее на снижение эмоциональности.

Таким образом, на основании результатов теста «открытое поле» можно заключить, что соединение А при курсовом введении оказывает анксиолитическое действие, стимулирует «исследовательскую» активность и корректирует вегетативные реакции экспериментальных животных.

Оценка анксиолитической (транквилизирующей) активности заявленного соединения

Уровень тревожности у крыс оценивали с использованием общепринятого теста «приподнятый крестообразный лабиринт», который состоял из двух «открытых» без стенок и двух «закрытых» (темных) рукавов, расположенных крестообразно и приподнятых над полом на 50 см. Ширина рукавов составляла 10 см, высота стенок в закрытых рукавах - 45 см. В месте перпендикулярного пересечения рукавов находилась площадка размером 10×10 см, на которую сажали тестируемую крысу. Поведение животных регистрировали в течение 5 мин по количеству заходов в «открытые», «закрытые» рукава и продолжительности нахождения в них [Воронина Т.А., Середенин С.Б. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств, 2000, стр. 127-128].

Исследуемое соединение А (10 мг/кг) и препарат сравнения диазепам (0,5 мг/кг) вводили, как и в предыдущей серии опытов, в течение 30 дней ежедневно однократно. На 30-й день эксперимента через 1 час после последней инъекции тестируемого соединения или препарата сравнения у крыс моделировали депрессивно-подобное состояние внутрибрюшинным однократным введением резерпина в дозе 4 мг/кг [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, А.Н. Миронов, Н.Д. Бунатян (ред.), Ч. 1-2, Гриф и К, Москва (2012)]. Анксиолитический эффект оценивали при появлении признаков депрессивного поведения, максимально развивающихся через 4 часа после инъекции резерпина.

Результаты экспериментов, представленные в таблице 2 показали, что курсовое введение соединения А (10 мг/кг) оказывало анксиолитическое действие, проявляющееся увеличением числа заходов в «открытые» рукава и длительностью пребывания в них и уменьшением количества заходов и продолжительностью пребывания в «закрытых» рукавах, по сравнению с аналогичными показателями у контрольных животных. Следует отметить, что выраженность противотревожного эффекта соединения А сопоставима с действием препарата сравнения диазепама. Так, по количеству заходов в «открытые» и «закрытые» рукава лабиринта, а также по времени, проведенному в них, после курсового введения соединения А или препарата сравнения (диазепам) достоверных различий не выявлено.

Таким образом, на основании анализа полученных результатов можно заключить, что заявленное соединение проявляет анксиолитическую активность, сопоставимую по выраженности противотревожного эффекта с действием препарата сравнения - диазепам.

Изобретение относится к новому соединению - 9-окси-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлориду.

Технический результат: получено новое соединение, которое может быть использовано для устранения эмоциональной неустойчивости, тревоги, страхов при невротических состояниях и, кроме того, обладает низкой токсичностью и проявляет выраженную анксиолитическую активность, сопоставимую с действием препарата сравнения - диазепама. 2 табл., 1 ил.

Анксиолитическое средство, характеризующееся тем, что является 9-окси-9-(4-этилпиперазинокарбонил)-флуорен гидрохлоридом формулы

проявляющее анксиолитическое (противотревожное) свойство, сопоставимое с аналогичным действием препарата сравнения - производного 3,4-бензодиазепина – диазепама.