СПОСОБ ОТБОРА ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАССЧИТАННЫХ ЭНЕРГИЙ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С ФЕРМЕНТАМИ ЦИКЛООКСИГЕНАЗ 1 И 2 Российский патент 2019 года по МПК G01N33/15 

Изобретение относится к биологии и медицине и касается способа поиска новых противовоспалительных средств.

Известен способ отбора противовоспалительных средств из химических соединений, содержащих общий фармакофорный фрагмент: карбонил - фенильный радикал - вторичная или третичная аминогруппа, в котором все вещества разделены на четыре ряда: NH-замещенные антраниловые кислоты, ариламиды и гидразиды NH-алкенилантраниловых кислот, ариламиды N-ацетил-N-алкенилантраниловых кислот и аллиламиды NH-ацилантраниловых кислот [1]. Данный способ взят за прототип. Этот способ позволяет количественно определить уровень противовоспалительной активности на модели «каррагенинового отека» лапы крыс с помощью уравнений многопараметровой регрессии (четырех- и пятипараметровых).

Патентуемый способ заключается в прогнозе количественной оценки уровня экспериментального противовоспалительного действия ПВД (ПВД_эксп.) с помощью многопараметровых (двух- и четырехпараметровых) уравнений зависимости ПВД_эксп. от рассчитанных скоринговых функций - энергий взаимодействия с ферментами циклооксигеназ (ЦОГ) 1 и 2. Для достижения результата необходимо выполнить следующие действия:

I. Разбить 64 соединения из ряда производных антраниловой кислоты на гомологические ряды.

II. Для данных соединений экспериментально определить ПВД (ПВД_эксп.) на модели «каррагенинового отека» на крысах.

III. Рассчитать энергии взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2 для каждого соединения.

IV. Составить уравнения регрессии, по которым определить теоретически рассчитанную величину противовоспалительного действия (ПВД_рассч.).

V. Используя полученные уравнения регрессии (табл. 7), по структурной формуле выбрать соединения, торможение отека которых превышает 30%.

VI. Оценить качество прогноза ПВД_рассч. с ПВД_эксп..

Предлагаемая в способе последовательность действий над структурными формулами химических соединений, лабораторными животными и расчетными уравнениями позволяет получить технический результат - способ количественной прогнозной оценки уровня ПВД, который заключается в уменьшении затрат на синтез и сокращении числа химических соединений для испытания на биологическую активность.

Патентуемый способ предусматривает изучение связи данных ПВД_эксп. с рассчитанными параметрами: энергия связывания Be (Ве_ЦОГ1 и Ве_ЦОГ2) и межмолекулярная энергия Ime (Ime_ЦОГ1 и Ime_ЦОГ2) по ферментам ЦОГ 1 и 2. Расчет параметров проводили методом молекулярной стыковки (докинга) с помощью программы AutoDock 4, которая использует в качестве мишеней кристаллографические копии ферментов, полученные рентгеноструктурным анализом и представленные в виде pdb-файлов, взятых из базы данных Brookhaven Protein Data Bank: ЦОГ 1 (PDB ID code: 3N8X [2]) и ЦОГ 2: (PDB ID code: 1PXX [3]).

Все исследуемые 64 соединения обладают различным уровнем противовоспалительного действия экспериментального (ПВД_эксп.) (среди которых встречаются и запатентованные), разделены на три ряда:

1) N-замещенные антраниловые кислоты (табл. 1 и 2);

2) гидразиды и амиды N-ацилантраниловых кислот (табл. 3 и 4);

3) ариламиды N-ацил-N-алкенилантраниловых кислот (табл. 5 и 6).

Исследование противовоспалительного действия ПВД_эксп. выполнено на беспородных белых крысах массой 180-220 г на модели «каррагенинового отека» лапы. Исследуемые соединения в дозе 50 мг/кг вводили внутрибрюшинно в виде взвеси в 2% крахмальной слизи за 1 ч до введения каррагенина. Величину воспалительной реакции оценивали онкометрически по изменению объема воспаленной конечности через 4 ч после введения 0,1 мл 1% водного раствора каррагенина [4].

Проведен расчет энергий взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2 (Ве_ЦОГ1, Ве_ЦОГ2, Ime_ЦОГ1 и Ime_ЦОГ2) для каждого соединения.

На основе полученных данных составляют уравнения многопараметровой регрессии для соединений по каждому ряду и выбирают наиболее значимое уравнение (табл. 7).

N-Замещенные антраниловые кислоты

В таблице 1 для 22 соединений из ряда N-замещенных антраниловых кислот приведены ПВД_эксп. и рассчитанные энергии взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2.

Х=Н, Y=Н, R=СН₂СН=СН₂, R₁=Н (1); Х=Н, Y=Н, R=Н, R₁=COCONHCH₂CH=CH₂ (2); Х=Н, Y=Н, R=Н, R₁=СО (2-Фурил) (3); Х=Н, Y=Н, R=Н, R₁=СОС₆Н₄(2-ОСН₃) (4); Х=Н, Y=Н, R=Н, R₁=СОСН₂С₆Н₅ (5); Х=Br, Y=Н, R=Н, R₁=CO-Ad (6); Х=Br, Y=Br, R=Н, R₁=CO-Ad (7); X=H, Y=H, R=H, R₁=COCH₃ (8); X=H, Y=H, R=CH₂CH=CClCH₃, R₁=СОСН₃ (9); X=H, Y=H, R=CH₂CH=CClCH₃, R₁=CO (2-Фурил) (10); X=H, Y=H, R=CH₂CH=CClCH₃, R₁=COC₆H₅ (11); X=H, Y=H, R=CH₂C₆H₅, R₁=H (12); X=Br, Y=H, R=H, R₁=COC₆H₅ (13); X=Br, Y=H, R=H, R₁=CO C₆H₄ (3-NO₂) (14); X=Br, Y=H, R=H, R₁=COCH₂C₆H₅ (15); X=Br, Y=H, R=H, R₁=CO (2-Фурил) (16); X=I, Y=H, R=H, R₁=COCH=CHCOOH (17); X=I, Y=H, R=H, R₁=CO(n-C₃H₆Cl) (18); X=I, Y=H, R=H, R₁=COC₆H₄(4-Cl) (19); X=I, Y=H, R=H, R₁=COC₆H₄(4-CH₃) (20); X=I, Y=H, R=H, R₁=COCH(C₆H₅)₂ (21); X=I, Y=H, R=H, R₁=СО(2-Фурил) (22).

Затем методом пошагового включения параметров с использованием программы Statistica 6, было составлено двухпараметровое уравнение 1 (табл. 7). Установлено, что уравнение зависимости экспериментально определенного ПВД от таких параметров как энергия связывания по ферменту ЦОГ 1 (Ве_ЦОГ1)» и межмолекулярная энергия по ЦОГ 2 (Ime_ЦОГ2), имеет наибольшие значения коэффициента корреляции (R), критерия Фишера (F) и критерия оценки методом перекрестного контроля исключением по одному (Q²_LOO), и минимальное значение среднеквадратичной ошибки (S):

ПВД_рассч = -1,315+6,661 × Ве_ЦОГ1 - 9,129 × Ime_ЦОГ2

Уравнение 1 апробировано для теоретического расчета ПВД на 5 примерах соединений 23-27 из ряда N-замещенных антраниловых кислот (табл. 2).

Х=Н, Y=Н, R=Н, R₁=СО С₆Н₄ (4-NO₂) (23); Х=Н, Y=Н, R=СН₂СН=CClCH₃, R₁=СОСН₂С₆Н₅ (24); Х=Н, Y=Н, R=СН₂СН=CClCH₃, R₁=COC₆H₄(4-NO₂) (25); Х=Br, Y=Н, R=Н, R₁=СО С₆Н₄ (4-Br) (26); Х=I, Y=Н, R=Н, R₁=СОС₆Н₅ (27).

Вначале были проведены расчеты энергий взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2: Ве_ЦОГ1 и Ime_ЦОГ2, и на их основе было рассчитано ПВД_рассч., а затем результаты расчетов были подтверждены экспериментально на лабораторных животных и определена ПВД_эксп..

Расчет прогнозируемого ПВД (ПВД_рассч.) для 5 соединений показал, что целесообразно провести синтез 3 соединений: 24, 25 и 27, интервал ПВД_рассч. которых будет лежать от 32,99% до 35,37%. При исследовании на лабораторных животных определено ПВД_эксп., которое составляет 46,85%, 41,90% и 37,35%, соответственно.

Для оценки качества прогноза ПВД (ПВД_рассч.) составлено линейное уравнение взаимосвязи с экспериментальными значениями ПВД (ПВД_эксп.):

ПВДр_ассч. = 0,28 × ПВД_эксп. + 22,49; R_прогн. = 0,948.

Линейная зависимость уравнения с коэффициентом корреляции (R_прогн. = 0,948), показывает очень высокую степень связи ПВД_рассч. с ПВД_эксп..

Таким образом, уравнение 1 можно использовать для прогнозирования ПВД в ряду N-замещенных антраниловых кислот.

Гидразиды и амиды N-ацилантраниловых кислот

В таблице 3 для 24 соединений из ряда гидразидов и амидов N-ацилантраниловых кислот приведены ПВД_эксп. и рассчитанные энергии взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2.

Х=Н, Y=H, R₁-СООС₂Н₅, R₂=NHNHCOCOOC₂H₅ (1); Х=Н, Y=H, R₁=CONHCH₂CH=CH₂, R₂=NHNH₂ (2); X=H, Y=H, R₁=CONHCH₂CH=CH₂, R₂=NHCH₂CH=CH₂ (3); X=H, Y=H, R₁=COOH, R₂=NHCH₂CH=CH₂ (4); X=H, Y=H, R₁=CONHCH₂CH=CH₂, R₂ = NH(CH₂)₂N(C₂H₅)₂ (5); X=H, Y=H, R₁=COOC₂H₅, R₂=NHCH₂CH=CH₂ (6); X=H, Y=H, R₁=CONHCH₂CH=CH₂, R₂=NHCH₂C(CH₃)₃ (7); X=Br, Y=Br, R₁=CH₃, R₂=NHNH₂ (8); X=Br, Y=Br, R₁=CH₃, R₂=NHCH₃ (9); X=Br, Y=Br, R₁=CH₃, R₂=NHCH₂CH₂OH (10); X=Br, Y=Br, R₁=CH₃, R₂=NH(CH₂)₂CH(CH₃)₂ (11); X=Br, Y=Br, R₁=CH₃, R₂=NHCH₂C₆H₅ (12); X=H, Y=H, R₁=Ad, R₂=NHCH₂CH=CH₂ (13); X=Br, Y=H, R₁=CH₂CH₂COOH, R₂=NH₂ (14); X=Br, Y=H, R₁=CH=CHCOOH, R₂=NH₂ (15); X=Br, Y=H, R₁=C₂H₄Cl, R₂=NH₂ (16); X=Br, Y=H, R₁=C(CH₃)=CH₂, R₂=NH₂ (17); X=Br, Y=H, R₁=CH₂Cl, R₂=NHC₆H₅ (18); X=Br, Y=H, R₁=CH₃, R₂=NH₂ (19); X=Br, Y=H, R₁=CH₂Cl, R₂=NH₂ (20); X=Br, Y=H, R₁=CH₂CH₂CH₂Cl, R₂=NH₂ (21); X=Br, Y=H, R₁=CH₂Cl, R₂=NHCH₂CH=CH₂ (22); X=Br, Y=H, R₁=CH₂CH₂Cl, R₂=NHCH₂CH=CH₂ (23); X=I, Y=H, R₁=CH₂C₆H₅, R₂=NHCH₂C₆H₅ (24).

Затем методом пошагового включения параметров с использованием программы Statistica 6, было составлено двухпараметровое уравнение 2 (табл. 7). Установлено, что уравнение зависимости экспериментально определенного ПВД от таких параметров как энергия связывания по ферментам ЦОГ 1 и 2: Ве_ЦОГ1 и Ве_ЦОГ2, имеет наибольшие значения коэффициента корреляции (R), критерия Фишера (F) и критерия оценки методом перекрестного контроля исключением по одному (Q²_LOO), и минимальное значение среднеквадратичной ошибки (S):

ПВД_рассч. = -60,487-5,642 × Ве_ЦОГ1 - 10,263 × Ве_ЦОГ2

Уравнение 2 апробировано для теоретического расчета ПВД на 7 примерах соединений 25-31 из ряда гидразидов и амидов N-ацилантраниловых кислот (табл. 4).

Х=Н, Y=H, R₁=СООС₂Н₅, R₂=NHC₆H₁₁ (циклогексил) (25); X=H, Y=H, R₁=CONHCH₂CH=CH₂, R₂=NH(CH₂)₂CH(CH₃)₂ (26); X=Br, Y=Br, R₁=CH₃, R₂=NHCH₂CH=CH₂ (27); X=Br, Y=H, R₁=CH₂C₆H₅, R₂=NHC₆H₅ (28); X=H, Y=H, R₁=CH₂Cl, R₂=NHCH₂CH=CH₂ (29); X=H, Y=H, R₁=CONHCH₂CH=CH₂, R₂=NHCH₂CH₂OH (30); X=H, Y=H, R₁=CONHCH₂CH=CH₂, R₂=NHCH₂C₆H₅ (31).

Вначале были проведены расчеты энергий взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2: Ве_ЦОГ1 и Ве_ЦОГ2, и на их основе было рассчитано ПВД_рассч., а затем результаты расчетов были подтверждены экспериментально на лабораторных животных и определена ПВД_эксп..

Расчет прогнозируемого ПВД (ПВД_рассч.) для 7 соединений, показал, что экспериментально синтезировать целесообразно 6 соединений 25-30, интервал ПВД_рассч. которых будет лежать от 35% до 64,20%. При исследовании на лабораторных животных определено ПВД_эксп., которое для соединений 25-30 составляет 32,4%, 35,60%, 33,10%, 44,45%, 39,85% и 39%, соответственно.

Для оценки качества прогноза ПВД (ПВД_рассч.) составлено линейное уравнение взаимосвязи с экспериментальными значениями ПВД (ПВД_эксп.):

ПВД_рассч. = 1,011 × ПВД_эксп. + 8,788; R_прогн. = 0,796.

Линейная зависимость уравнения с коэффициентом корреляции (R_прогн. = 0,796), показывает высокую степень связи ПВД_рассч. с ПВД_эксп..

Таким образом, уравнение 2 можно использовать для прогнозирования ПВД ряду гидразидов и амидов N-ацилантраниловых кислот.

Ариламиды N-ацил-N-алкенилантраниловых кислот

В таблице 5 для 18 соединений из ряда ариламидов N-ацил-N-алкенилантраниловых кислот приведены ПВД_эксп. и рассчитанные энергии взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2.

R₁=C₆H₄(4-Br), R₂=Ad, R₃=CH₂CH=CH₂ (1); R₁=C₆H₄(4-Br), R₂=Ad, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (2); R₁=C₆H₄(4-Cl), R₂=CH₃, R₃=CH₂CH=CH₂ (3); R₁=C₆H₄(4-Br), R₂=CH₃, R₃=CH₂CH=CH₂ (4); R₁=C₆H₄(4-Br), R₂=2-фурил, R₃=CH₂CH=CH₂ (5); R₁=C₅H₃(4-Br) 2-N, R₂=CH₃, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (6); R₁=C₆H₄(2-CH₃), R₂=CH₃, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (7); R₁=C₆H₄(4-CH₃), R₂=CH₃, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (8); R₁=C₆H₄(4-OCH₃), R₂=CH₃, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (9); R₁=C₆H₅, R₂=CH₂Cl, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (10); R₁=C₆H₅, R₂=C₂H₅, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (11); R₁=C₆H₄(3-CH₃), R₂=C₆H₅, R₃=CH₂CH=CH₂ (12); R₁=C₆H₅, R₂=2-фурил, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (13); R₁=C₆H₄(3-СН₃), R₂=H, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (14); R₁=C₆H₄(4-CH₃), R₂=H, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (15); R₁=C₆H₄(4-Br), R₂=H, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (16); R₁=C₆H₄(4-Cl), R₂=H, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (17); R₁=C₆H₄(4-OCH₃), R₂=H, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (18).

Затем методом пошагового включения параметров с использованием программы Statistica 6, было составлено четырехпараметровое уравнение 3 (табл. 7). Установлено, что уравнение зависимости экспериментально определенного ПВД по ферментам ЦОГ 1 и 2 от таких параметров как энергия связывания (Ве_ЦОГ1 и Ве_ЦОГ2) и межмолекулярная энергия (Ime_ЦОГ1 и Ime_ЦОГ2), имеет наибольшие значения коэффициента корреляции (R), критерия Фишера (F) и критерия оценки методом перекрестного контроля исключением по одному (Q²_LOO), и минимальное значение среднеквадратичной ошибки (S):

ПВДр_ассч. = -65,639 - 0,067 × Ве_ЦОГ1 - 0,071 × Ime_ЦОГ1 - 1,752 × Ве_ЦОГ2 - 10,111 × Ime_ЦОГ2

Уравнение 3 апробировано для теоретического расчета ПВД на 6 примерах, соединениях 19-24 из ряда ариламидов N-ацил-N-алкенилантраниловых кислот (табл. 6).

R₁=С₆Н₄(4-Br), R₂=С₆Н₄(4-СН₃), R₃=СН₂СН=СН₂ (19); R₁=C₆H₄(4-Br), R₂=СН₃, R₃=СН₂СН=CClCH₃ (20); R₁=С₆Н₅, R₂=СН₃, R₃=CH₂CH=CClCH₃ (21); R₁=С₆Н₄(3-СН₃), R₂=СН₃, R₃=СН₂СН=CClCH₃ (22); R₁=С₆Н₄(2-СН₃), R₂=Н, R₃=СН₂СН=CClCH₃ (23); R₁=С₆Н₄(3-СН₃), R₂=CH₂Cl, R₃=СН₂СН=СН₂ (24).

Вначале были проведены расчеты энергий взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2: Ве_ЦОГ1, Ве_ЦОГ2, Ime_ЦОГ1, Ime_ЦОГ2, и на их основе было рассчитано ПВД_рассч., а затем результаты расчетов были подтверждены экспериментально на лабораторных животных и определена ПВД_эксп..

Расчет прогнозируемого ПВД (ПВД_рассч.) для 6 соединений, показал, что экспериментально синтезировать целесообразно 5 соединений 20-24, интервал ПВД_рассч. которых будет лежать от 37,10% до 52,81%. При исследовании на лабораторных животных определено ПВД_эксп., которое составляет 40,40%, 57,30%, 49,70%, 59,00% и 58,40%, соответственно.

Для оценки качества прогноза ПВД (ПВД_рассч.) составлено линейное уравнение взаимосвязи с экспериментальными значениями ПВД (ПВД_эксп.):

ПВД_рассч. = 0,518 × ПВД_эксп. + 19,844; R_прогн. = 0,865.

Линейная зависимость уравнения с коэффициентом корреляции (R_прогн. = 0,865), показывает высокую степень связи ПВД_рассч. с ПВД_эксп..

Таким образом, уравнение 3 можно использовать для прогнозирования ПВД в ряду ариламидов N-ацил-N-алкенилантраниловых кислот.

Предлагаемый способ экономически выгоден и прост, так как позволяет по структурной формуле рассчитать энергии взаимодействия по ферментам циклооксигеназ 1 и 2, и с достаточно высокой достоверностью спрогнозировать уровень ПВД (по R 0,843÷0,920, F 18,01÷29,61, S 6,97÷9,84 по уравнениям 1-3 (табл. 7) и по методу перекрестной проверки исключением по одному (Q²_LOO) 0,61÷0,74). В отличие от патента [1], где используются четырех- и пятипараметровые уравнения регрессии, выборки составлены на примерах от 8 до 9 соединений и апробированы по 1 соединению для каждого ряда, в данном способе предлагаются двухпараметровые уравнения 1 и 2 и четырехпараметровое уравнение 3, уравнения составлены на примере от 18 до 24 соединений в каждом ряду и апробированы на примере от 5 до 7 соединений. Описанный принцип отбора противовоспалительных средств можно использовать и для других рядов химических соединений.

Литература

1. Патент 2242754. Рос. Федерация. Способ отбора противовоспалительных средств / Коркодинова Л.М., Вахрин М.И., Данилов Ю.Л., Фешин В.П., Марданова Л.Г. №2003115080; заявл. 20.05.2003; опубл. 20.11.2004.

2. Sidhu R.S., Lee, J.Y., Yuan С.. Comparison of Cyclooxygenase-1 Crystal Structures: Cross-Talk between Monomers Comprising Cyclooxygenase-1 Homodimers. // Journal Biochemistry., 49: 7069-7079 (2010).

3. Rowlinson S.W., Kiefer J.R.. A Novel Mechanism of Cyclooxygenase-2 Inhibition Involving Interactions with Ser-530 and Tyr-385. // Journal Biol. Chem., 278: 45763-45769 (2003).

4. Тринус Ф.П., Клебанов Б.М., Кондратюк В.И. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармакологических веществ. М., Минздрав СССР, с. 16 (1983).

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для отбора противовоспалительных средств, что позволяет осуществлять поиск биологически активных веществ с противовоспалительным действием в рядах производных антраниловой кислоты: N-замещенные антраниловые кислоты (1 ряд); гидразиды и амиды N-ацилантраниловых кислот (2 ряд); ариламиды N-ацил-М-алкенилантраниловых кислот (3 ряд). При этом рассчитывают энергии взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2: энергия связывания Be (Ве_ЦОГ1 и Ве_ЦОГ2) и межмолекулярная энергия Ime (Ime_ЦОГ1 и Ime_ЦОГ2), затем с помощью двух- и четырехпараметровых уравнений прогнозируют противовоспалительное действие (ПВД_рассч) и отбирают соединения, у которых теоретически рассчитанное ПВД превышает 30%, выбранные соединения синтезируют и подтверждают расчетные данные экспериментально на лабораторных животных (ПВД_эксп). Изобретение обеспечивает экспериментальные скрининговые исследования на животных не на всем объеме синтезированных веществ, а только тех, торможение отека которых превосходит 30%. 7 табл.

Способ отбора противовоспалительных средств, отличающийся тем, что позволяет осуществлять поиск биологически активных веществ с противовоспалительным действием в рядах производных антраниловой кислоты: N-замещенные антраниловые кислоты (1 ряд); гидразиды и амиды N-ацилантраниловых кислот (2 ряд); ариламиды N-ацил-М-алкенилантраниловых кислот (3 ряд), у которых рассчитывают энергии взаимодействия по ферментам ЦОГ 1 и 2: энергия связывания Be (Ве_ЦОГ1 и Ве_ЦОГ2) и межмолекулярная энергия Ime (Ime_ЦОГ1 и Ime_ЦОГ2), затем с помощью двух- и четырехпараметровых уравнений следующих видов:

1 ряд: ПВД_рассч= -1,315 + 6,661 × Ве_ЦОГ1 - 9,129 × Ime _ЦОГ2 (R=0,843, F=23,49, S=6,97, Q²_LOO=0,61) (1);

2 ряд: ПВД_рассч= -60,487 - 5,642 × Ве_ЦОГ1 - 10,263 × Ве_ЦОГ2 (R=0,859, F=29,61, S=9,84, Q²_LOO=0,61) (2);

3 ряд: ПВД_рассч= -65,639 - 0,067 × Ве_ЦОГ1 - 0,071 × Ime_ЦОГ1 - 1,752 × Ве_ЦОГ2 - 10,111 × Ime_ЦОГ2 (R=0,920, F=18,01, S=8,14, Q²_LOO=0,74) (3);

прогнозируют противовоспалительное действие (ПВД_рассч) и отбирают соединения, у которых теоретически рассчитанное ПВД превышает 30%, выбранные соединения синтезируют и подтверждают расчетные данные экспериментально на лабораторных животных (ПВД_эксп).