КОМБИНИРОВАННЫЙ ИММУНОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ПОДХОД К ЛЕЧЕНИЮ РАКА Российский патент 2020 года по МПК A61K35/12 A61K39/395 C12N5/10 A61P35/00 

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0001] Рак является второй после болезней сердца наиболее распространенной причиной смерти в Соединенных Штатах. В Соединенных Штатах рак служит причиной 1 из каждых 4 смертей. Показатель относительной 5-летней выживаемости для всех больных раком, диагностированных в 1996-2003 годах, составляет 66%, по сравнению с 50% в 1975-1977 годах (Cancer Facts & Figures American Cancer Society: Atlanta, GA (2008)). Открытие высокоэффективных способов лечения рака является основной целью исследований по раку.

[0002] Гипотеза стволовых опухолевых клеток может объяснить устойчивость некоторых опухолей к традиционным методам лечения. В данной модели определенное множество опухолевых клеток с характеристиками, аналогичными некоторым стволовым клеткам, способно продуцировать различные типы клеток, которые составляют основную массу опухоли. Необходим эффективный подход для уничтожения этих клеток.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] Настоящее изобретение относится в целом к лечению рака человека и, более конкретно, к использованию нескольких способов лечения в комбинации для индукции эффективных противоопухолевых иммунных ответов.

[0004] В некоторых вариантах реализации изобретения в данном документе раскрыт способ лечения солидной опухоли или гемобластоза у субъекта, включающий два или более из следующего: (а) сенсибилизации опухоли путем назначения субъекту лечения, которое будет: (i) индуцировать апоптоз в клетках опухоли, (ii) модифицировать опухолевую среду, (iii) стимулировать иммунные клетки, проникающие в опухоль, или (iv) их комбинацию; (b) введение субъекту: (i) модифицированной стволовой клетки, причем модифицированная стволовая клетка содержит цитотоксическую полезную нагрузку; (ii) вирус дикого типа или генетически модифицированный; (iii) бактерии дикого типа или генетически модифицированные; или (iv) их комбинации; и (с) назначение лечения субъекту, который активирует Т-клеточный ответ у субъекта. В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (а) выполняется перед стадией (b) и стадией (с). В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (b) выполняется после стадии (с). В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (b) выполняется перед стадией (с). В некоторых вариантах реализации изобретения любая из стадий выполняется одновременно.

[0005] В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое будет индуцировать апоптоз в клетках опухоли, выбрано из группы, состоящей из: лучевой терапии, химиотерапии, иммунотерапии, фототерапии или их комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое будет индуцировать апоптоз в клетках, представляет собой иммунотерапию. В некоторых вариантах реализации изобретения иммунотерапия выбрана из пептид-вакцинной терапии с использованием опухолевых антигенных пептидов; адоптивной иммунотерапии с использованием лимфоцитов, таких как цитотоксические Т-клетки или естественные клетки-киллеры; ДНК-вакцинотерапии, которая включает введение организмов, содержащих векторы, экспрессирующие опухолевые антигенные белки или опухолевые антигенные пептиды; и вакцинотерапии дендритными клетками, которая включает введение дендритных клеток, презентирующие опухолевые антигенные пептиды. В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое индуцирует апоптоз в клетках, представляет собой химиотерапию. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапия включает введение химиотерапевтического средства, выбранного из алкилирующего лекарственного средства, антиметаболита, антимитотического цитостатического средства, ингибитора топоизомеразы, противоопухолевого антибиотика и любой другого цитостатика и/или лучевой терапии. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой алкилирующий агент. В некоторых вариантах реализации изобретения алкилирующий агент выбран из цисплатина, оксалиплатина, циклопрофосфата, ифосфамида, трофосфамида, мелфалана, хлорамбуцила, эстрамустина, бусульфана, треосульфана, кармустина, ломустина, нимустина, стрептозоцина, прокарбазина, дакарбазина, темозоломида и тиотепа. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой антиметаболит. В некоторых вариантах реализации изобретения антиметаболит выбран из 5-фторурацила, метотрексата, азацитидина, капецитабина, доксифлуридина, цитарабина, гемцитабина, 6-тиогуанина, пентостатина, азатиоприна, 6-меркаптопурина, флударабина и кладрибина. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой ингибитор топоизомеразы. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор топоизомеразы выбран из доксорубицина, камптотецина, топотекана, иринотекана, этопозида и тенипозида. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтическое средство представляет собой противоопухолевый антибиотик. В некоторых вариантах реализации изобретения противоопухолевый антибиотик выбран из тамоксифена, 5-фтор-5'-дезоксиуридина, блеомицина, актиномицина D и митомицина. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой цитостатик. В некоторых вариантах реализации изобретения цитостатик представляет собой L-аспарагиназу или гидроксикарбамид. В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое индуцирует апоптоз в клетках, представляет собой фототерапию. В некоторых вариантах реализации изобретения фототерапия выбрана из фототерапии ультрафиолетовыми лучами спектра В (UVB) и ультрафиолетовой фотохимиотерапии ПУВА (PUVA). В некоторых вариантах реализации изобретения фототерапия дополнительно включает применение псоралена. В некоторых вариантах реализации изобретения сенсибилизация опухоли включает применение облучения к субъекту. В некоторых вариантах реализации изобретения облучение представляет собой ионизирующее облучение. В некоторых вариантах реализации изобретения облучение представляет собой высокодозную гипофракционную лучевую терапию (high-dose hypofractionation radiation therapy - HDHRT). В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (а) включает модификацию микроокружения опухоли. В некоторых вариантах реализации изобретения модификация микроокружения опухоли включает введение цитокин-блокирующего агента. В некоторых вариантах реализации изобретения цитокин-блокирующий агент, выбран из Устекинумаба, Адалимумаба, Инфликсимаба, Этанерцепта и Голимумаба.

[0006] В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (b) включает инъекцию субъекту модифицированной стволовой клетки, причем модифицированная стволовая клетка содержит цитотоксическую полезную нагрузку. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка несет одну или более отображающих полезных нагрузок. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка несет один или более вирусов, антител или цитокинов в качестве цитотоксической полезной нагрузки. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка экспрессирует цитокин в качестве цитотоксической полезной нагрузки. В некоторых вариантах реализации изобретения цитокин выбран из колониестимулирующего фактора (КСФ), интерферона (ИФН), интерлейкина (ИЛ), фактора стволовых клеток (ФСК), факторов роста опухоли (ФРО) и фактора некроза опухоли (ФНО). В некоторых вариантах реализации изобретения цитокин представляет собой КСФ. В некоторых вариантах реализации изобретения КСФ представляет собой Г-КСФ ((Гранулоцитарный КСФ), М-КСФ (КСФ макрофагов) или ГМ-КСФ. В некоторых вариантах реализации изобретения КСВ выбирают из анцестима, гарноцестима, пегацаристима, леридистима, милодистима, филграстима, ленограстима, нартограстима, пегфилграстима, пегнартограстима, экограмостима, молграмостима, реграмостима, сарграмостима, килмостима, ланимостима, миримостима, даниплестима, муплестима или их производных. В некоторых вариантах реализации изобретения цитокин представляет собой интерлейкин (ИЛ). В некоторых вариантах реализации изобретения интерлейкин выбран из интерлейкинов ИЛ-1- ИЛ-35 и их производных. В некоторых вариантах реализации изобретения интерлейкин представляет собой ИЛ-2, ИЛ-4 или их производные. В некоторых вариантах реализации изобретения цитотоксическая полезная нагрузка содержит литический вирус. В некоторых вариантах реализации изобретения литический вирус представляет собой вирус осповакцины. В некоторых вариантах реализации изобретения цитотоксическая полезная нагрузка содержит химиотерапевтический агент. В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (b) приводит к in situ вакцинации субъекта против опухоли.

[0007] В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка представляет собой стволовую клетку взрослого организма. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка трансформируется лентивирусом или ретровирусом. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированную стволовую клетку временно трансфицируют искусственной хромосомой, вирусом или плазмидной ДНК. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка способна локализовать опухоль. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка является аутологичной. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка является аллогенной. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка выбрана из группы, состоящей из взрослых стволовых клеток, эмбриональных стволовых клеток, фетальных стволовых клеток, мезенхимальных стволовых клеток, нервных стволовых клеток, тотипотентных стволовых клеток, плюрипотентных стволовых клеток, мультипотентных стволовых клеток, олигопотентных стволовых клеток, унипотентных стволовых клеток, стромальных клеток жировой ткани, эндотелиальных стволовых клеток и их комбинаций. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная клетка была получена из стромальной сосудистой фракции (SVF), полученной из жировой ткани, которая содержит взрослые стволовые клетки, моноциты/макрофаги, регуляторные Т-лимфоциты, эндотелиальные клетки и их комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка вводится субъекту в сочетании с SVF, полученной из жировой ткани. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка представляет собой мезенхимальноподобную клетку, полученную из пуповины. В некоторых вариантах реализации изобретения мезенхимальноноподобная клетка, полученная из пуповины, представляет собой клетку Immstem™.

[0008] В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (b) дополнительно включает обработку модифицированной стволовой клетки, выбранной из: агониста TLR; внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ); кондиционированной моноцитами среды; супернатанта из мононуклеарных клеток периферической крови, подвергнутых воздействию внеклеточных ловушек нейтрофилов; совместного культивирования с моноцитами; совместного культивирования с моноцитами, которые были предварительно обработаны ВВИГ; совместного культивирования с Т-клетками; совместного культивирования с Т-клетками, которые подвергаются воздействию Т-клеточного стимула; совместного культивирования с естественными клетками-киллерами; пептидогликана, выделенного из грамположительных бактерий; липоарабиноманнана, выделенного из микобактерий; зимозана, выделенного из клеточной стенки дрожжей; полиаденилово-полиуридиловой кислоты; поли (IC); липополисахарида; монофосфорилового липида А; флагеллина; гардиквимода; имиквимода; R848; олигонуклеозидов, содержащих CpG-мотивы; и 23S рибосомальной РНК.

[0009] В некоторых вариантах реализации стадия (с) включает введение стволовых клеток субъекту. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка представляет собой стволовую клетку взрослого организма. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка способна выделять факторы роста. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка вводится в область опухоли. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка вводится в опухоль. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка продуцирует антитела или факторы роста, способные стимулировать рост и распространение Т-клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовую клетку трансформируют при помощи лентивируса или ретровируса. В некоторых вариантах реализации изобретения лентивирус или ретровирус содержит гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую белок, вовлеченный в активацию Т-клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовую клетку временно трансфицируют искусственной хромосомой, вирусом или плазмидной ДНК.

[00010] В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (с) включает стимуляцию одновременного сигналинга через Т-клеточный рецептор и костимулирующую молекулу. В некоторых вариантах реализация изобретения костимулирующая молекула представляет собой CD28.

[00011] В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (с) включает введение в опухоль одной или более Т-клеток, экспрессирующих один или более факторов роста.

[00012] В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (с) включает введение агонистических антител, направленных против активирующих костимулирующих молекул. В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (с) включает введение агонистических антител против костимулирующей молекулы, выбранной из группы, состоящей из: CD28, ОХ40, GITR, CD137, CD27 и HVEM.

[00013] В некоторых вариантах реализация изобретения стадия (с) включает введение блокирующих антител против отрицательных костимулирующих молекул. В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (с) включает введение блокирующих антител против отрицательной костимулирующей молекулы, выбранной из группы, состоящей из: CTLA-1; PD-1, TIM-3, VISTA и LAG-3. В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (с) включает введение CTLA-4-блокирующих антител. В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (с) включает введение ингибиторов сигнального пути PD-1. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор сигнального пути PD-1 выбран из антител против PD-1 и растворимого PD-1-лиганда. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибиторы сигнального пути PD-1 выбраны из АМР-244, MEDI-4736, MPDL328 OA и MIH1.

[00014] В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль выбрана из: глиобластомы, карциномы молочной железы, карциномы легкого, карциномы предстательной железы, карциномы толстой кишки, карциномы яичника, нейробластомы, опухоли центральной нервной системы, меланомы и гемобластозов.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[00015] На фиг. 1 показан неограничивающий вариант реализации способа комбинированной иммунотерапии рака, состоящий из трех элементов: Сенсибилизация локализации опухоли; In situ вакцинация или иммунизация с использованием собственных опухолевых клеток пациента; Т-клеточная индукция [S.I.T.]. В проиллюстрированном варианте реализации изобретения сенсибилизацию опухоли осуществляют путем облучения (этап 1), хотя можно использовать любую другую подходящую методологию сенсибилизации, in situ вакцинацию или иммунизацию индуцируют путем введения в здоровые стволовые клетки опухоли, имеющие цитотоксическую полезную нагрузку (этап 2), могут быть введены ингибиторы контрольных точек иммунного ответа, ингибиторы фактора роста и т.д. (например, одновременно) (этап 2+3) и индуцировать активацию Т-клеток, в опухоли вводят здоровые стволовые клетки, содержащие факторы роста, которые продуцируют длительный противоопухолевый и клинический ответ (этап 3).

[00016] На фиг. 2. показаны неограничивающие примеры того, как один или более вариантов реализации данной технологии могут преодолевать различные проблемы, связанные с другими подходами нацеливания на рак.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[00017] Ускользание опухоли от иммунного контроля (ускользание от иммунологического надзора) все чаще признается как жизненно важная способность, обеспечивающая распространение и клиническое проявление опухоли. Механизмы ускользания от иммунного надзора включают антигенные потери, подавление молекул МНС, секрецию иммуносупрессорных цитокинов, рекрутирование регуляторных, толерогенных и подавляющих врожденные и адаптивные иммунные клетки, и усиление иммуносупрессорных рецепторов и другие. Кроме того, нехватка эндотелиальных адгезивных молекулах в сосудистой сети опухоли и аномальной структуре представляет собой значительные барьеры для проникновения Т-клеток в опухоли. Поэтому микроокружение опухоли активно поддерживает рост опухоли и предотвращает отторжение опухоли.

[00018] Преобразование иммуносупрессивного микроокружения опухоли в иммуногенную среду может быть успешной иммунотерапевтической стратегией против рака.

[00019] Многие из вариантов реализации изобретения, описанные в данном документе, способны преодолевать одну или более проблем, или ограничений, обычно связанных с другими подходами к нацеливанию на рак (см. фиг. 2). Например, сенсибилизация делает нормальное иммуносупрессивное микроокружение опухоли иммуногенным. Кроме того, внутриутробное введение нагруженных защитных стволовых клеток (доставка полезной нагрузки) предотвращает инактивацию иммунной системы полезной нагрузкой. Такая точная временная инактивация иммунных компонентов конкретного хозяина обеспечивает долговременное присутствие полезной нагрузки, которая способна одновременно убивать как опухолевые клетки, так и раковые стволовые клетки, тогда как другие подходы ограничены неэффективным лизисом опухолевых клеток и неэффективным нацеливанием на раковые стволовые клетки. Наконец, подавление контрольных точек и высвобождение фактора роста приводят к эффективной активации Т-клеток и значительному распространению, тогда как другим подходам препятствует неэффективная индукция Т-клеток и ограниченное распространение.

[00020] Соответственно, варианты реализации настоящего изобретения обычно относятся к способам «лечения рака человека» и, более конкретно, в некоторых вариантах реализации изобретения к применению множества способов лечения в комбинации для индукции эффективного противоопухолевого иммунного ответа.

Определения

[00021] Как используется в данном документе субъект включает любое животное, для которого предусмотрена диагностика, скрининг, мониторинг или лечение. Животные включают млекопитающих, таких как приматы и одомашненные животные. Примером приматов является человек. Пациент относится к субъекту, такому как млекопитающее, примат, человек или субъект животноводства, страдающему патологическим состоянием, или для которого необходимо определить заболевание или определить риск заболевания.

[00022] Используемый в данном документе термин «антитело» используется в самом широком смысле и, конкретно, включает моноклональные антитела (в том числе полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), биспецифические активаторы Т-клеток (BiTE)-антитела, и фрагменты антител (например, одноцепочечные, нанотела и т.д.), при условии, что они проявляют желаемую биологическую активность.

[00023] Используемый в данном документе термин «вирус» относится к любому из большой группы объектов, называемых вирусами. Вирусы обычно содержат белковое покрытие, окружающее РНК или ДНК-ядро генетического материала, но без полупроницаемой мембраны, и способны к росту и размножению только в живых клетках. Вирусы для применения в предлагаемых в данном документе способах включают, но без ограничений, поксвирус, аденовирус, вируса простого герпеса, вирус болезни Ньюкасла, вирус везикулярного стоматита, вирус свинки, вирус гриппа, вирус кори, реовирус, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), хантавирус, вирус миксомы, цитомегаловирус (ЦМВ), лентивирус и любой вирус растений или насекомых.

[00024] Используемый в данном документе термин «вирусный вектор» используется в соответствии с его принятым в данной области техники значением. Он относится к векторной конструкции нуклеиновой кислоты, которая включает по меньшей мере один элемент вирусного происхождения и может быть упакована в частицу вирусного вектора. Вирусные векторные частицы могут быть использованы для переноса ДНК, РНК или других нуклеиновых кислот в клетки как in vitro, так и in vivo. Вирусные векторы включают, без ограничений, ретровирусные векторы, векторы вируса осповакцины, лентивирусные векторы, векторы вируса герпеса (например, ВПГ), бакуловивирусные векторы, цитомегаловирусные векторы (ЦМВ), папилломовирусные векторы, векторы вакуолизирующего обезьянего вируса (ОВ40), векторы вируса леса Семлики, фаговые векторы, аденовирусные векторы и векторы аденоассоциированного вируса (ААВ).

[00025] Используемый в данном документе термин «гемабластоз» относится к опухолям крови и лимфатической системы (например, болезнь Ходжкина, неходжкинская лимфома, лимфома Беркитта, СПИД-ассоциированные лимфомы, злокачественные иммунопролиферативные заболевания, множественная миелома и злокачественные новообразования клеток плазмы, лимфоидный лейкоз, миелоидный лейкоз, острый или хронический лимфоцитарный лейкоз, моноцитарный лейкоз, другие лейкемии определенного типа клеток, лейкемии неуточненного типа клеток, другие и неуточненные злокачественные новообразования лимфоидных, гематопоэтических и связанных тканей, например, диффузная крупноклеточная лимфома, Т-клеточная лимфома или кожная Т-клеточная лимфома).

Комбинированная иммунотерапия

[00026] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает стратегию комбинированной иммунотерапии рака, состоящую по меньшей мере из трех элементов: Сенсибилизация локализации опухоли; In-situ вакцинация с использованием собственных опухолевых клеток пациента; Т-клеточная индукция (технология S.I.T.). Следует понимать, что элементы могут быть использованы индивидуально, в двухэлементной комбинации и с другими способами лечения и воздействия, а также в соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения. В одном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает способы сенсибилизации локализации опухолей в процессе подготовки к последующим составляющим лечения. В другом варианте реализации настоящее изобретение относится к способам уничтожения опухолевых клеток вследствие вакцинации in situ. В еще одном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает способы создания носителя для доставки агентов, убивающих опухолевые клетки (технология доставки «Троян Хорс»). В еще одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способам индукции и распространения опухолеспецифических Т-клеток. Такие способы можно применять вместе или в любой комбинации. Один или более описанных способов могут быть специально исключены из некоторых вариантов реализации изобретения.

[00027] Растущее число фактов подтверждает, что персонализированная иммунотерапия, использующая множество антигенов и подходы к лечению, приводит к эффективному нацеливанию на опухоль. Важно отметить, что вакцинация in situ с помощью собственных убитых опухолевых клеток пациента будут обеспечивать полное антигенное разнообразие собственной опухоли пациента. Такой подход, в сочетании с другими иммунотерапевтическими стратегиями, будет вызывать широкий, долговременный и мощный противоопухолевый иммунный ответ, который приведет к уничтожению как обработанных опухолей, так и необработанных отдаленных метастатических опухолевых отложений.

[00028] Способы, раскрытые в данном документе, могут быть использованы для лечения любой солидной опухоли или гематологической злокачественной опухоли. Опухоли, которые могут быть вылечены описанными в данном документе способами, включают, но без ограничений, опухоль мочевого пузыря, опухоль молочной железы, опухоль предстательной железы, карциному, базально-клеточный рак, рак желчных путей, рак мочевого пузыря, рак кости, рак мозга, рак ЦНС, глиому, рак шейки матки, хориокарциному, рак толстой кишки и прямой кишки, рак соединительной ткани, рак пищеварительной системы, рак эндометрия, рак пищевода, рак глаз, рак головы и шеи, рак желудка, внутриэпителиальное новообразование, рак почки, рак гортани, рак печени, рак легких, лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, меланому, миелому, нейробластому, рак полости рта, рак поджелудочной железы, ретинобластому, рабдомиосаркому, рак прямой кишки, рак почки, рак органов дыхания, саркому, рак кожи, рак желудка, рак яичек, рак щитовидной железы, рак матки и рак мочевой системы, такой как лимфосаркому, остеосаркому, опухоли молочной железы, мастоцитому, опухоль головного мозга, меланому, аденоскомическую карциному, карциноидную опухоль легких, опухоль бронхиальной железы, бронхиолярную аденокарциному, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, фиброму, миксохондрому, легочную саркому, нейросаркому, остеому, папиллому, ретинобластому, саркому Юинга, опухоль Вильмса, лимфомы Беркитта, микроглиомы, нейробластомы, остеокластомы, новообразование ротовой полости, фибросаркомы, остеосаркомы и рабдомиосаркомы, генитальную плоскоклеточную карциному, трансмиссивную венерическую саркому, опухоль яичка, семиномы, опухоли клеток Сертоли, гемангиоперицитомы, гистиоцитомы, хлоромы, гранулоцитарные саркомы, корнеальную папиллому, плоскоклеточную карциному роговицы, гемангиосаркому, плевральную мезотелиому, базально-клеточную опухоль, тимому, опухоль желудка, карциному надпочечников, папилломатоз ротовой полости, гемангиоэндотелиому, цистаденому, фолликулярную лимфому, лимфосаркому в кишечнике, фибросаркому и легочную плоскоклеточную карциному, лейкемию, гемангиоперицитому, новообразование глаза, препуциальную фибросаркому, язвенную плосколкеточную карциному, препуциальную карциному, неоплазию соединительной ткани, мастоцитому, гепатоцеллюлярную карциному, лимфому, легочный аденоматоз, саркому легкого, саркому Рауса, ретикуло-эндотелиоз, фибросаркому, нефробластому, лимфому В-клеток, лимфоидный лейкоз, ретинобластому, неоплазию печени, лимфосаркому, плазмоцитоидный лейкоз, саркому плавательного пузыря (у рыб), казеозный люмфаденит, карциному легкого, инсулиному, лимфому, саркому, нейрому, опухоль островковых клеток поджелудочной железы, MALT-лимфому желудка и аденокарциному желудка. В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль выбрана из: глиобластомы, карциномы молочной железы, карциномы легких, карциномы предстательной железы, карциномы толстой кишки, карциномы яичников, нейробластомы, опухоли центральной нервной системы и меланомы.

Сенсибилизация опухоли

[00029] В некоторых вариантах реализации изобретения в данном документе раскрыт способ сенсибилизации опухоли к последующим способам лечения. Сенсибилизирующая часть технологии в соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения может быть выполнена с использованием любого из подходов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль сенсибилизируют путем назначения субъекту лечения, которое будет: (i) индуцировать апоптоз в клетках в опухоли, (ii) модифицировать окружение опухоли, (iii) стимулировать иммунные клетки, инфильтрирующие опухоль, или (iv) комбинации из двух или более из них.

[00030] В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое будет индуцировать апоптоз в клетках опухоли, выбрано из группы, состоящей из: лучевой терапии, химиотерапии, иммунотерапии, фототерапии или их комбинации.

[00031] В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое будет индуцировать апоптоз в клетках, представляет собой иммунотерапию. В некоторых вариантах реализации изобретения иммунотерапия выбрана из пептид-вакцинной терапии с использованием опухолевых антигенных пептидов; адоптивной иммунотерапии с использованием лимфоцитов, таких как цитотоксические Т-клетки или естественные клетки-киллеры; ДНК-вакцинотерапии, которая включает введение организмов, содержащих векторы, экспрессирующие опухолевые антигенные белки или опухолевые антигенные пептиды; и вакцинотерапии дендритными клетками, которая включает введение дендритных клеток, презентирующие опухолевые антигенные пептиды.

[00032] В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое индуцирует апоптоз в клетках, представляет собой фототерапию. В некоторых вариантах реализации изобретения фототерапия выбрана из фототерапии ультрафиолетовыми лучами спектра В (UVB) и ультрафиолетовой фотохимиотерапии ПУВА (PUVA). В некоторых вариантах реализации изобретения фототерапия дополнительно включает применение псоралена.

[00033] В некоторых вариантах реализации изобретения сенсибилизация опухоли включает применение облучения к субъекту. В некоторых вариантах реализации изобретения облучение представляет собой ионизирующее облучение. В одном варианте реализации изобретения сенсибилизация может быть достигнута местным облучением опухоли, например, высокодозной гипофракционной лучевой терапией (high-dose hypofractionation radiation therapy - HDHRT).

[00034] Ионизирующее излучение имеет значительный потенциал для изменения микроокружения опухоли и облегчения иммуноопосредованного отторжения опухоли. В частности, ионизирующее излучение может индуцировать ремоделирование аномальных опухолевых сосудов и повышение уровня молекул адгезии сосудистых клеток (например, VCAM-1) и секрецию хемокина (например, CXCL16), что приводит к эффективной инфильтрации Т-клеток в опухоль. Другие важные эффекты ионизирующего излучения включают повышение экспрессии молекул МНС класса I, лигандов NKG2D и Fas/CD95, тем самым увеличивая связывание Т-клеток и уничтожение раковых клеток. Однако, несмотря на эти значительные проиммуногенные эффекты, ионизирующее излучение само по себе недостаточно для того, чтобы вызывать долговременные и достаточно мощные противоопухолевые иммунные ответы, приводящие к уничтожению опухоли.

[00035] Лучевая терапия включает, но без ограничений, фотодинамическую терапию, радионуклиды, радиоиммунотерапию и протонную лучевую терапию.

[00036] В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое будет индуцировать апоптоз в клетках внутри опухоли, включает введение химиотерапевтических соединений. Химиотерапевтические соединения включают, но без ограничений, платину; платиновые аналоги (например, координационные комплексы платины), такие как цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, DWA2114R, NK121, IS 3295 и 254-S; антрацендионы; винбластин; алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбокен, метендопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, в том числе алтретамин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфаорамид и азотистые иприты триметилоломелаламина, такие как хиорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, нонбичин, фенстерин, преднимустин, трофосфамид, урациловый иприт; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как аклациномизины, актиномицин, автрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, калихеамицин, карбабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторбицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин, эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, микофенольная кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептоигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, циностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-ФУ); аналоги фолиевой кислоты, таких как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамитрин, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флуксуридин; андрогены, такие как каластоун, пропионат дромоностанола, эпитиотонол, мепитиостан, тестолактон; средства, угнетающие функции надпочечников, такие как аминоглютетимид, митотан, трилостан; заменитель фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамидгликозид; аминолевулинову кислота; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфорнитин; эллиптиний ацетат; этоглюцид; нитрат галлия; заменитель мочевины; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; подофиллиновую кислоту; 2-этилгидразид; прокарбазин; противораковые полисахариды; полисахарид-К; разоксан; сизофиран; спирогерманий; тенуазонову кислоту; триазиквон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; цитозина арабинозид; циклофосфамид; тиотепу; таксоиды, такие как паклитаксел и доксетаксел; хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; этопозид (VP-16); ифосфамид; митомицин С; митоксантрон; винкристин; винорелбин; навелбин; новантрон; тенипозид; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; СРТ11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноевую кислоту; эсперамицины; капецитабин; производные метилгидразина; эрлотиниб (TARCEVA); сунитиниб малат (SUTENT); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных. Также в это определение включены антигормональные агенты, которые действуют, чтобы регулировать или ингибировать действие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены, включая, например, тамоксифен, ралоксифен, ароматазу, ингибирующую 4(5)-имидазолы, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онипристон и торемифен (FARESTON); адренокортикальные супрессивные средства; и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалютамид, лейпролид и госерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных. Такие химиотерапевтические соединения, которые могут быть использованы в данном документе, включают соединения, токсичность которых исключает использование соединения в общих системных химиотерапевтических методах. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапия включает введение химиотерапевтического средства, выбранного из апеллирующего лекарственного средства, антиметаболита, антимитотического цитостатика, ингибитора топоизомеразы, противоопухолевого антибиотика и любого другого цитостатика и/или лучевой терапии. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой алкилирующий агент. В некоторых вариантах реализации изобретения алкилирующий агент выбран из цисплатина, оксалиплатина, циклопрофосфата, ифосфамида, трофосфамида, мелфалана, хлорамбуцила, эстрамустина, бусульфана, треосульфана, кармустина, ломустина, нимустина, стрептозоцина, прокарбазина, дакарбазина, темозоломида и тиотепа. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой антиметаболит. В некоторых вариантах реализации изобретения антиметаболит выбран из 5-фторурацила, метотрексата, азацитидина, капецитабина, доксифлуридина, цитарабина, гемцитабина, 6-тиогуанина, пентостатина, азатиоприна, 6-меркаптопурина, флударабина и кладрибина. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой ингибитор топоизомеразы. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор топоизомеразы выбран из доксорубицина, камптотецина, топотекана, иринотекана, этопозида и тенипозида. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтическое средство представляет собой противоопухолевый антибиотик. В некоторых вариантах реализации изобретения противоопухолевый антибиотик выбран из тамоксифена, 5-фтор-5'-дезоксиуридина, блеомицина, актиномицина D и митомицина. В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой цитостатик. В некоторых вариантах реализации изобретения цитостатик представляет собой L-аспарагиназу или гидроксикарбамид.

[00037] В некоторых вариантах реализации изобретения микроокружение опухоли модифицируют при помощи терапии, выбранной из: местного облучения опухоли, инъекций цитокинов, агентов, блокирующих цитокин (например, Устекинмумаб, Адалимумаб, Инфликсимаб, Этанерцепт, Голимумаб), инъекций антител и инъекции стволовых клеток, секретирующих цитокины и/или хемокины.

[00038] В некоторых вариантах реализации изобретения стимулирование проникающих в опухоль иммунных клеток в фазе сенсибилизации осуществляют посредством лечения, выбранного из: местного облучения опухоли, инъекций цитокинов, инъекций антител и инъекции стволовых клеток, секретирующих цитокины и/или хемокинов.

Вакцинация In Situ

[00039] В некоторых вариантах реализации изобретения в данном документе раскрыт способ лечения солидной опухоли, включающий применение лечения, которое приведет к in situ вакцинации субъекта против опухоли его собственными опухолевыми антигенами. В некоторых вариантах реализации изобретения способ включает введение субъекту: (i) модифицированной стволовой клетки, в которой модифицированная стволовая клетка содержит цитотоксическую полезную нагрузку; (ii) вирус дикого типа или генетически модифицированный; (iii) бактерии дикого типа или генетически модифицированные; или (iv) комбинации двух или более из них (технология доставки «Троян Хорс»).

[00040] Часть вакцинации in situ согласно настоящему изобретению может быть выполнена с использованием любого из описанных в настоящем изобретении подходов, включая вирусы и специфические химиотерапевтические агенты, используемые непосредственно или в носителях для доставки взрослых стволовых клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения взрослые стволовые клетки постоянно трансформируются (например, с помощью лентивируса или ретровируса) или временно изменяются с помощью искусственных хромосом, вирусов или плазмидной ДНК для получения вирусов, антител, цитокинов или других белков в качестве полезных нагрузок для уничтожения опухолевых клеток и раковых стволовых клеток.

[00041] В иммунной системе возникли точные сенсоры для различения гибели клеток по причине физиологического тканевого оборота от патогенной гибели клеток. Врожденные иммунные клетки имеют важный класс рецепторов, паттерн-распознающих рецепторов (ПРР), специально предназначенные для этой функции. ПРР связываются с молекулами патоген-ассоциированного молекулярного паттерна (ПАМП), полученными от инфекционных агентов и молекул молекулярной структуры, ассоциированной с повреждениями (ДАМП), полученных из клеток, умирающих от стрессовой/иммуногенной смерти.

[00042] Индукторы иммуногенной клеточной гибели (ИКГ) (например, химиотерапевтические средства и ионизирующее излучение) и вирусы вызывают аналогичную реакцию на опасность, приводящую к противораковому иммунитету. ИКГ, индуцированное ионизирующим излучением и специфическими химиотерапевтическими агентами, приводит к образованию активных форм кислорода (АФК) и к стрессовой реакции эндоплазматического ретикулума (ЭР). Активное заражение опухолевых клеток вирусами подавляет клеточный механизм, что приводит к стрессу ЭР и смерти опухолевых клеток. Во время этих последовательных событий опухолевые клетки экспрессируют кальретикулин (КРТ) на поверхности клетки, который привлекает антигенпредставляющие клетки (АПК). Кроме того, умирающие клетки высвобождают иммуномодулирующие молекулы, такие как группы белков В1 с высокой подвижностью (HMGB1) и аденозинтрифосфат (АТФ) во внеклеточное микроокружение опухоли, что приводит к сильному представлению антигена. АПК, которые принимают опухолесодержащие антигены, мигрируют в лимфатические узлы, чтобы представить эти антигены наивным Т-клеткам для установления противоракового иммунитета. В дополнение к дистресс-ассоциированным молекулярным паттернам (ДАМП), инфицированные вирусом опухолевые клетки высвобождают патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (ПАМП) (чужеродные вирусные белки и вирусную ДНК/РНК), которые являются мощными активаторами врожденных иммунных клеток для секреции цитокинов, таких как ИФН I типа. Эти цитокины помогают контролировать противораковый адаптивный иммунный ответ. Таким образом, ИКГ представляет собой важный путь активации иммунной системы против рака, что, в свою очередь, определяет долгосрочный успех всех противораковых терапий.

[00043] Разработка оптимальных носителей для доставки индукторов ИКГ к локализации опухоли является важным элементом общей стратегии комбинированной иммунотерапии. Некоторые индукторы ИКГ, такие как химиотерапевтические агенты и вирусы, подвергаются значительной элиминации и/или нейтрализации после системного применения. Поэтому первостепенное значение имеет разработка подходящих носителей для их защиты от элементов гуморального и клеточного иммунитета в кровотоке, а также способов их целенаправленной доставки к опухолевым очагам. Недавние исследования продемонстрировали широкое распространение стволовых клеток в глиомы и потенциал вставки гена в стволовые клетки с использованием вирусных векторов. В этих исследованиях показано, что стволовые клетки являются перспективными кандидатами в качестве объекта для доставки индукторов ИКГ в опухолевые очаги.

[00044] Соответственно, в некоторых вариантах реализации изобретения вакцинация in situ включает введение субъекту модифицированной стволовой клетки, причем модифицированная стволовая клетка содержит цитотоксическую полезную нагрузку (технология доставки «Троян Хорс»). В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка несет одну или более отображающих полезных нагрузок. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка несет один или более вирусов, антител или цитокинов в качестве цитотоксической полезной нагрузки. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка экспрессирует цитокин в качестве цитотоксической полезной нагрузки. В некоторых вариантах реализации изобретения цитокин выбран из колониестимулирующего фактора (КСФ), интерферона (ИФН), интерлейкина (ИЛ), фактора стволовых клеток (ФСК), факторов роста опухоли (ФРО) и фактора некроза опухоли (ФНО). В некоторых вариантах реализации изобретения цитокин представляет собой КСФ. В некоторых вариантах реализации изобретения КСФ представляет собой Г-КСФ (Гранулоцитарный КСФ), М-КСФ (КСФ макрофагов) или ГМ-КСФ. В некоторых вариантах реализации изобретения КСВ выбирают из анцестима, гарноцестима, пегацаристима, леридистима, милодистима, филграстима, ленограстима, нартограстима, пегфилграстима, пегнартограстима, экограмостима, молграмостима, реграмостима, сарграмостима, килмостима, ланимостима, миримостима, даниплестима, муплестима или их производных. В некоторых вариантах реализации изобретения цитокин представляет собой интерлейкин (ИЛ). В некоторых вариантах реализации изобретения интерлейкин выбран из интерлейкинов ИЛ-1-ИЛ-35 и их производных. В некоторых вариантах реализации изобретения интерлейкин представляет собой ИЛ-2, ИЛ-4 или их производные. В некоторых вариантах реализации изобретения цитотоксическая полезная нагрузка содержит литический вирус. В некоторых вариантах реализации изобретения литический вирус представляет собой вирус осповакцины. В некоторых вариантах реализации изобретения цитотоксическая полезная нагрузка содержит химиотерапевтический агент. В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (b) приводит к in situ вакцинации субъекта против опухоли.

[00045] В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка представляет собой стволовую клетку взрослого организма. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка трансформируется лентивирусом или ретровирусом. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированную стволовую клетку временно трансфицируют искусственной хромосомой, вирусом или плазмидной ДНК. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка способна локализовать опухоль. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка является аутологичной. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка является аллогенной. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка выбрана из группы, состоящей из взрослых стволовых клеток, эмбриональных стволовых клеток, фетальных стволовых клеток, мезенхимальных стволовых клеток, нервных стволовых клеток, тотипотентных стволовых клеток, плюрипотентных стволовых клеток, мультипотентных стволовых клеток, олигопотентных стволовых клеток, унипотентных стволовых клеток, стромальных клеток жировой ткани, эндотелиальных стволовых клеток и их комбинаций. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная клетка получена из стромальной сосудистой фракции (SVF), полученной из жировой ткани, содержащей взрослые стволовые клетки, моноциты/макрофаги, регуляторные Т-лимфоциты, эндотелиальные клетки и их комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка вводится субъекту в сочетании с SVF, полученной из жировой ткани. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированная стволовая клетка представляет собой мезенхимальноподобную клетку, полученную из пуповины. В некоторых вариантах реализации изобретения мезенхимальноноподобная клетка, полученная из пуповины, представляет собой клетку Immstem™.

[00046] ImmStem представляют собой мезенхимальноподобные клетки, полученные из пуповины, которые обладают плюрипотентной дифференцировочной способностью и характеризуются уникальными поверхностными маркерами и продуцированием факторов роста. ImmStem обладает многочисленными преимуществами по сравнению с другими источниками стволовых клеток, включая легкость сбора, более высокую скорость пролиферации, очень низкую иммуногенность и способность дифференцироваться в тканях, представляющие все три компонента зародышевого слоя. По сравнению с другими подтипами мезенхимальных стволовых клеток (MCK), ImmStem продемонстрировал повышенную противовоспалительную и миграционную способность из-за стадии «примирования цитокинов», которую выполняют до введения. Клетки ImmStem получают из пуповины человека, которые получают от женщины с полным сроком беременности сразу после родов. Чтобы стимулировать стрессовую реакцию, клетки культивируют в течение 48 часов с гамма-интерфероном.

[00047] Другие агенты могут быть использованы в практике настоящего изобретения для усиления иммуномодулирующей, миграционной активности или активности продукции фактора роста указанной модифицированной стволовой клетки, которые включают а) агонист TLR; b) внутривенный иммуноглобулин (ВВИГ); с) кондиционированную моноцитами среду; d) супернатант из мононуклеарных клеток периферической крови, подвергнутых воздействию внеклеточных ловушек нейтрофило; е) совместное культивированиес моноцитами; f) совместное культивированиес моноцитами, которые были предварительно обработаны при помощи ВВИГ; g) совместное культивированиес Т-клетками; h) совместное культивированиес Т-клетками, которые подвергаются воздействию Т-клеточного стимула; i) совместное культивирование с NK-клетками; j) пептидогликан, выделенный из грамположительных бактерий; k) липотейхоевую кислоту, выделенную из грамположительных бактерий; l) липопротеин, выделенный из грамположительных бактерий; m) липоарабиноманнан, выделенный из микобактерий, n) зимозан, выделенный из клеточной стенки дрожжей; O) полиаденилово-полиуридиловую кислоту; р) поли (IC); q) липополисахарид; r) монофосфорильный липид A; s) флагеллин; t) гардиквимод; u) имиквимод; v) R848; w) олигонуклеозиды, содержащие CpG-мотивы; и х) 23S рибосомальную РНК.

[00048] В некоторых вариантах реализации изобретения in situ вакцинация субъекта против опухоли включает введение субъекту вируса дикого типа или генетически модифицированного вируса.

[00049] В некоторых вариантах реализации изобретения in situ вакцинация субъекта против опухоли включает введение субъекту генетически модифицированных бактерий дикого типа.

Т-клеточная индукция

[00050] В некоторых вариантах реализации изобретения в данном документе раскрыта комбинация активации Т-клеточного ответа у субъекта, нуждающегося в этом, в сочетании с лечением, описанным в данном документе.

[00051] Цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ) являются одними из самых прямых и эффективных элементов иммунной системы, которые способны генерировать противоопухолевые иммунные ответы. Опухолевые клетки, экспрессирующие соответствующие ассоциированные с опухолью антигены, могут быть эффективно распознаны и уничтожены этими иммунными эффекторными клетками, что может привести к поразительным клиническим ответам. Сообщалось, что как адоптивный перенос опухолереактивных ЦТЛ, так и активная иммунизация, направленная на выявление ответов ЦТЛ, приводят к значимым терапевтическим противоопухолевым ответам у пациентов с раком.

[00052] Часть Т-клеточной индукции согласно настоящему изобретению может быть выполнена с использованием любого из подходов, описанных в настоящем изобретении, включая цитокины и Т-клеточные модулирующие средства, которые используются непосредственно или в носителях для доставки взрослых стволовых клеток.

[00053] В некоторых вариантах реализации изобретения индукции Т-клеточного ответа внутри субъекта включает введение стволовых клеток субъекту. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка представляет собой стволовую клетку взрослого организма. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка способна выделять факторы роста. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка продуцирует антитела или факторы роста, способные стимулировать рост и распространение Т-клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовую клетку трансформируют при помощи лентивируса или ретровируса. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовую клетку временно трансфицируют искусственной хромосомой, вирусом или плазмидной ДНК. В некоторых вариантах реализации изобретения лентивирус или ретровирус содержит гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую белок, вовлеченный в активацию Т-клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения взрослые стволовые клетки постоянно трансформируются (например, с помощью лентивируса или ретровируса) или временно изменяются с помощью искусственных хромосом, вирусов или плазмидной ДНК, что приводит к получению антител, факторов роста или других белков в виде полезных нагрузок, которые стимулируют рост и распространение Т-клеток.

[00054] В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка вводится в область опухоли. В некоторых вариантах реализации изобретения стволовая клетка вводится в опухоль.

[00055] Оптимальная Т-клеточная активация требует одновременных сигналов через Т-клеточный рецептор и костимулирующие молекулы. Костимулирующая молекула CD28 при взаимодействии с ее лигандами В7-1 и В7-2 играет важнейшую роль в начальном примировании Т-клеток. Однако СВ28-опосредованное распространение Т-клеток противопоставляется В7-1/2 контррецептору, цитотоксическому Т-лимфоцитарному антигену 4 (CTLA-4), который уменьшает пролиферацию недавно активированных Т-клеток. Эта последовательная регуляция экспрессии CD28 и CTLA-4 уравновешивает активирующие и ингибирующие сигналы и обеспечивает индукцию эффективного иммунного ответа, одновременно защищая от развития аутоиммунной реакции. Блокирование CTLA-4 моноклональными антителами продемонстрировало некоторый успех в клинических испытаниях с участием людей. Были идентифицированы дополнительные члены семейства CD28 и В7: PD-1 (белок запрограммированной смерти клетки-1), PD-L1 (лиганд запрограммированной смерти клетки-1 или В7-Н1) и PD-L2 (В7-DC). Как и в системе CTLA-4/B7, взаимодействия PD-1 с PD-L1 и PD-L2 подавляют как центральный, так и периферический иммунный ответ, и поэтому в клинических испытаниях также исследуют блокаду PD-1. Кроме того, в активной разработке многочисленные новые агенты, нацеленные на пути ингибирования и активации, участвующие в модуляции Т-клеток, такие как LAG-3, В7-Н3, CD40, ОХ40, CD137 и другие.

[00056] Соответственно, в некоторых вариантах реализации изобретения индукция Т-клеток включает введение агониста активации костимулирующей молекулы. В некоторых вариантах реализации изобретения способ включает введение агонистических антител, направленных против активирующих костимулирующих молекул. В некоторых вариантах реализации изобретения индукция Т-клеток включает введение агонистических антител против костимулирующей молекулы, выбранной из группы, состоящей из: CD28, ОХ40, GITR, CD137, CD27 и HVEM.

[00057] В некоторых вариантах реализации изобретения индукция Т-клеток включает применение лечения, которое вызывает антагонизм к отрицательным костимулирующим молекулам. В некоторых вариантах реализации изобретения способ включает введение блокирующих антител против отрицательных костимулирующих молекул. В некоторых вариантах реализации изобретения индукция Т-клеток включает введение блокирующих антител против отрицательной костимулирующей молекулы, выбранной из группы, состоящей из: CTLA-1; PD-1, TIM-3, VISTA и LAG-3. В некоторых вариантах реализации изобретения индукция Т-клеток включает введение CTLA-4-блокирующих антител. В некоторых вариантах реализации изобретения индукция Т-клеток включает введение ингибиторов сигнального пути PD-1. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор сигнального пути PD-1 выбран из антител против PD-1 и растворимого PD-1-лиганда. В некоторых вариантах реализации изобретения ингибиторы сигнального пути PD-1 выбраны из АМР-244, MEDI-4736, MPDL328 OA и MIH1.

[00058] В некоторых вариантах реализации изобретения индукция Т-клеток включает применение лечения, которое стимулирует распространение Т-клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое стимулирует распространение Т-клеток, включает введение цитокинов. В некоторых вариантах реализации изобретения лечение, которое стимулирует распространение Т-клеток, включает введение стволовых клеток, экспрессирующих цитокин.

Применение способов лечения

[00059] Следует понимать, что способы лечения согласно настоящему изобретению можно применять в любом порядке. В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (а) выполняется перед стадией (b) и стадией (с). В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (b) выполняется после стадии (с). В некоторых вариантах реализации изобретения стадия (b) выполняется перед стадией (с). В некоторых вариантах реализации изобретения любые из стадий выполняются одновременно.

[00060] Эффективная доза для каждого из способов лечения, используемых в комбинированной терапии согласно настоящему изобретению, может варьироваться в зависимости от особенности лечения, применяемого соединения или фармацевтической композиции, способа введения, патологического состояния, подвергаемого лечению, тяжести патологического состояния, подвергаемого лечению. Таким образом, схему приема лекарственного средства комбинации согласно настоящему изобретению выбирают в соответствии с различными факторами, включая путь введения и почечную и печеночную функцию пациента. Врач, клиницист или ветеринар обычной квалификации может легко определить и назначить эффективное количество отдельных активных ингредиентов, необходимых для профилактики, противодействия или задержки развития патологического состояния. Оптимальная точность в достижении концентрации активных ингредиентов в пределах диапазона, который дает эффективность без токсичности, требует режима, основанного на кинетике доступности активных ингредиентов для целевых сайтов.

[00061] Способы получения фармацевтических композиций, включающие соответствующие способы лечения, описанные в данном документе, известны в данной области техники и будут очевидны из уровня техники из известных стандартных источников, таких как Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 18-е издание (1990).

[00062] Следует понимать, что описанные в данном документе варианты реализации изобретения не ограничиваются вакцинацией или вакцинацией как таковой, но также связаны с генерацией иммунного ответа или реакции на раковые клетки. Хотя для удобства используются слова «вакцина», «вакцинация» или другие подобные термины следует понимать, что такие варианты реализации изобретения также относятся к иммунным композициям, иммуногенным композициям, генерированию иммунного ответа, иммунизации и т.д., причем абсолютный профилактический иммунитет не требуется или не генерируется. Например, варианты реализации изобретения, относящиеся к вакцинации, также могут относиться к генерированию или к содействию в создании иммуногенного или иммунного ответа против опухолевой клетки или опухоли независимо от того, приводит ли этот ответ к абсолютной эрадикации или иммунизации против такой опухолевой клетки, опухоли или рака.

[00063] Раскрытия, иллюстративно описанные в данном документе, могут соответствующим образом осуществлены в отсутствие какого-либо элемента или элементов, ограничения или ограничений, конкретно не раскрытых в данном документе. Таким образом, например, термины «содержащий», «включающий», «состоящий» и т.д., следует понимать более широко и без ограничений. Кроме того, используемые в данном документе термины и выражения использовали как термины описания, а не ограничения, и использование таких терминов и выражений не предполагает исключения каких-либо эквивалентов, представленных и описанных признаков или их частей, напротив, следует учитывать возможность различных модификаций в пределах объема заявленного изобретения.

[00064] Другие варианты реализации настоящего изобретения изложены в следующей формуле изобретения.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для лечения рака. Для этого способ лечения рака, включающего солидную опухоль или гемобластоз у субъекта, вводят композицию, содержащую модифицированные стволовые клетки, где модифицированные стволовые клетки являются стромальными стволовыми клетками жировой ткани. При этом модифицированные стволовые клетки содержат цитотоксическую полезную нагрузку; цитотоксическая полезная нагрузка содержит литический вирус, а литический вирус представляет собой вирус осповакцины. Проводят назначение субъекту лечения, которое активирует Т-клеточный ответ внутри субъекта, где лечение включает введение блокирующего антитела против отрицательной костимулирующей молекулы или ингибитора отрицательной костимулирующей молекулы или включает введение агонистического антитела, направленного против костимулирующей молекулы. Группа изобретений относится также к комбинации для лечения рака. Использование данной группы изобретений позволяет повысить эффективность лечения рака при добавлении терапии ингибитором контрольных точек иммунного ответа к терапии стволовыми клетками, содержащими литический вирус осповакцины. 2 н. и 43 з.п. ф-лы, 2 ил.

1. Способ лечения рака, включая солидную опухоль или гемобластоз у субъекта, включающий:

(a) введение композиции, содержащей модифицированные стволовые клетки, где:

модифицированные стволовые клетки являются стромальными стволовыми клетками жировой ткани;

модифицированные стволовые клетки содержат цитотоксическую полезную нагрузку;

цитотоксическая полезная нагрузка содержит литический вирус; и

литический вирус представляет собой вирус осповакцины; и

(b) назначение субъекту лечения, которое активирует Т-клеточный ответ внутри субъекта, где лечение включает введение блокирующего антитела против отрицательной костимулирующей молекулы или ингибитора отрицательной костимулирующей молекулы или включает введение агонистического антитела, направленного против костимулирующей молекулы.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что стадию (а) выполняют перед стадией (b).

3. Способ по п. 1 отличающийся тем, что на стадии (b) лечение включает введение блокирующего антитела против отрицательной костимулирующей молекулы.

4. Способ по п. 3, где блокирующее антитело направлено против отрицательной костимулирующей молекулы, выбранной из группы, состоящей из: CTLA-1; CTLA-4; PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA и LAG-3.

5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что на стадии (b) лечение включает введение ингибитора сигнального пути PD-1, где сигнальный путь PD-1 включает PD-1 и его лиганды PD-L1 и PD-L2.

6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что ингибитор сигнального пути PD-1 выбран из антител против PD-1 и растворимого PD-1-лиганда.

7. Способ по п. 5, отличающийся тем, что ингибитор сигнального пути PD-1 выбран из АМР-244, MEDI-4736, MPDL3280A и MIH1.

8. Способ по п. 3, где на стадии (b) блокирующее антитело содержит антитело против CTLA-4, антитело против PD-L1 или антитело против PD-1.

9. Способ по п. 3, где на стадии (b) блокирующее антитело направлено против отрицательной костимулирующей молекулы, выбранной из PD-L1 и CTLA-4.

10. Способ по п. 1, где на стадии (b) лечение включает введение агонистического антитела, направленного против костимулирующей молекулы.

11. Способ по п. 10, где костимулирующая молекула выбрана из CD28, ОХ40, GITR, CD137, CD27 и HVEM.

12. Способ по любому из пп. 1-11, дополнительно включающий лечение, которое индуцирует апоптоз в клетках в опухоли, где это лечение выбрано из лучевой терапии, химиотерапии, иммунотерапии и фототерапии или их комбинации.

13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что лечение, которое индуцирует апоптоз в клетках, включает лучевую терапию.

14. Способ по любому из пп. 1-13, дополнительно включающий лечение, модифицирующее микроокружение опухоли.

15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что лечение, модифицирующее микроокружение опухоли, включает введение цитокин-блокирующего агента.

16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что цитокин-блокирующий агент выбран из Устекинумаба, Адалимумаба, Инфликсимаба, Этанерцепта и Голимумаба.

17. Способ по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что модифицированные стволовые клетки являются аутологичными для субъекта, подвергающегося лечению.

18. Способ по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что модифицированные стволовые клетки являются аллогенными для субъекта, подвергающегося лечению.

19. Способ по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что стадия (а) приводит к in situ вакцинации субъекта против опухоли.

20. Способ по любому из пп. 1-19, отличающийся тем, что модифицированные стромальные стволовые клетки жировой ткани получены из стромальной сосудистой фракции (SVF), выделенной из жировой ткани.

21. Способ по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что на стадии (а):

модифицированные стволовые клетки обрабатывают воздействием, выбранным из: агониста Toll-подобного рецептора (TLR); внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ); кондиционированной моноцитами среды; супернатанта мононуклеарных клеток периферической крови, подвергнутых воздействию внеклеточных ловушек нейтрофилов; пептидогликана, выделенного из грамположительных бактерий; липоарабиноманнана, выделенного из микобактерий; зимозана, выделенного из клеточной стенки дрожжей; полиаденилово-полиуридиловой кислоты; поли (IС); липополисахарида; монофосфорилового липида А; флагеллина; гардиквимода; имиквимода; R848; олигонуклеозидов, содержащих CpG-мотивы, и 23S рибосомальной РНК; или

модифицированные стволовые клетки были совместного культивированы с моноцитами; с моноцитами, которые были предварительно обработаны ВВИГ; с Т-клетками; с Т-клетками, подвергнутые воздействию Т-клеточного стимула; или с естественными клетками-киллерами;.

22. Способ по любому из пп. 1-21, где солидная опухоль или гемобластоз выбраны из группы, включающей опухоль молочной железы, опухоль предстательной железы, карциному, базально-клеточный рак, рак желчных путей, рак мочевого пузыря, рак кости, рак мозга, рак ЦНС, глиому, рак шейки матки, хориокарциному, рак толстой кишки и ободочной кишки, рак соединительной ткани, рак пищеварительной системы, рак эндометрия, рак пищевода, рак глаз, рак головы и шеи, рак желудка, внутриэпителиальное новообразование, рак почки, рак гортани, лейкемию, рак печени, рак легких, лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, меланому, миелому, нейробластому, рак полости рта, рак яичников, рак поджелудочной железы, ретинобластому, рабдомиосаркому, рак прямой кишки, рак почки, рак органов дыхания, саркому, рак кожи, рак желудка, рак яичек, рак щитовидной железы, рак матки, рак мочевой системы, лимфосаркому, остеосаркому, опухоли молочной железы, мастоцитому, опухоль головного мозга, аденоскомическую карциному, карциноидную опухоль легких, опухоль бронхиальной железы, бронхиолярную аденокарциному, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, фиброму, миксохондрому, легочную саркому, нейросаркому, остеому, папиллому, саркому Юинга, опухоль Вильмса, лимфомы Беркитта, микроглиомы, остеокластомы, новообразование ротовой полости, фибросаркомы, генитальную плоскоклеточную карциному, трансмиссивную венерическую саркому, опухоль яичка, семиномы, опухоли клеток Сертоли, гемангиоперицитомы, гистиоцитомы, хлоромы, гранулоцитарные саркомы, корнеальную папиллому, плоскоклеточную карциному роговицы, гемангиосаркому, плевральную мезотелиому, базально-клеточную опухоль, тимому, карциному надпочечников, папилломатоз ротовой полости, гемангиоэндотелиому, цистаденому, фолликулярную лимфому, рак кишечника, легочную плоскоклеточную карциному, новообразование глаза, препуциальную фибросаркому, язвенную плосколкеточную карциному, препуциальную карциному, неоплазию соединительной ткани, гепатоцеллюлярную карциному, легочный аденоматоз, саркому Рауса, ретикуло-эндотелиоз, фибросаркому, нефробластому, лимфому В-клеток, лимфоидный лейкоз, неоплазию печени, плазмоцитоидный лейкоз, саркому плавательного пузыря (у рыб), казеозный люмфаденит, карциному легкого, инсулиному, лимфому, нейрому, опухоль островковых клеток поджелудочной железы, MALT-лимфому желудка и аденокарциному желудка.

23. Способ по любому из пп. 1-21, отличающийся тем, что опухоль выбрана из глиобластомы, карциномы молочной железы, карциномы легкого, карциномы предстательной железы, карциномы толстой кишки, карциномы яичников, нейробластомы, опухоли центральной нервной системы, рака поджелудочной железы и меланомы.

24. Комбинация для использования в лечении рака, включая солидную опухоль или гемобластоз у субъекта, где комбинация включает:

(а) композицию, содержащую модифицированные стволовые клетки для введения, где:

модифицированные стволовые клетки являются стромальными стволовыми клетками жировой ткани;

модифицированные стволовые клетки содержат цитотоксическую полезную нагрузку; и

цитотоксическая полезная нагрузка содержит литический вирус, который представляет собой вирус осповакцины; и

(b) лечение, которое активирует Т-клеточный ответ внутри субъекта, где лечение содержит блокирующее антитело против отрицательной костимулирующей молекулы или ингибитор отрицательной костимулирующей молекулы или включает агонистическое антитело, направленное против костимулирующей молекулы.

25. Комбинация по п. 24, отличающаяся тем, что на стадии (b) лечение содержит блокирующее антитело против отрицательной костимулирующей молекулы.

26. Комбинация по п. 25, где блокирующее антитело направлено против отрицательной костимулирующей молекулы, выбранной из CTLA-1, CTLA-4, PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA и LAG-3.

27. Комбинация по п. 24, отличающаяся тем, что на стадии (b) лечение включает ингибитор сигнального пути PD-1, где сигнальный путь PD-1 включает PD-1 и его лиганды PD-L1 и PD-L2.

28. Комбинация по п. 27, отличающаяся тем, что ингибитор сигнального пути PD-1 выбран из антител против PD-1 и растворимого PD-1-лиганда.

29. Комбинация по п. 27, отличающаяся тем, что ингибитор сигнального пути PD-1 выбран из АМР-244, MEDI-4736, MPDL3280A и MIH1.

30. Комбинация по п. 25, где на стадии (b) блокирующее антитело содержит антитело против CTLA-4, антитело против PD-L1 или антитело против PD-1.

31. Комбинация по п. 25, где на стадии (b) блокирующее антитело направлено против отрицательной костимулирующей молекулы, выбранной из PD-L1 и CTLA-4.

32. Комбинация по п. 24, отличающаяся тем, что на стадии (b) лечение включает агонистическое антитело, направленное против костимулирующей молекулы.

33. Комбинация по п. 32, отличающаяся тем, что костимулирующая молекула выбрана из CD28, ОХ40, GITR, CD 137, CD27 и HVEM.

34. Комбинация по любому из пп. 24-33, дополнительно включающая лечение, которое индуцирует апоптоз в клетках в опухоли, где это лечение выбрано из лучевой терапии, химиотерапии, иммунотерапии и фототерапии или их комбинации.

35. Комбинация по п. 34, отличающаяся тем, что лечение, которое индуцирует апоптоз, включает лучевую терапию.

36. Комбинация по любому из пп. 24-35, дополнительно включающая лечение, модифицирующее микроокружения опухоли.

37. Комбинация по п. 36, отличающаяся тем, что лечение, модифицирующее микроокружения опухоли, включает цитокин-блокирующий агент.

38. Комбинация по п. 37, отличающаяся тем, что цитокин-блокирующий агент выбран из Устекинумаба, Адалимумаба, Инфликсимаба, Этанерцепта и Голимумаба.

39. Комбинация по любому из пп. 24-38, отличающаяся тем, что модифицированные стромальные стволовые клетки жировой ткани получены из стромальной сосудистой фракции (SVF), выделенной из жировой ткани.

40. Комбинация по любому из пп. 24-38, отличающийся тем, что на стадии (а):

модифицированные стволовые клетки получены в композиции, содержащей агент, выбранный из: агониста Toll-подобного рецептора (TLR); внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ); кондиционированной моноцитами среды; супернатанта мононуклеарных клеток периферической крови, подвергнутых воздействию внеклеточных ловушек нейтрофилов; пептидогликана, выделенного из грамположительных бактерий; липоарабиноманнана, выделенного из микобактерий; зимозана, выделенного из клеточной стенки дрожжей; полиаденилово-полиуридиловой кислоты; поли (1С); липополисахарида; монофосфорилового липида А; флагеллина; гардиквимода; имиквимода; R848; олигонуклеозидов, содержащих CpG-мотивы; и 23S рибосомальной РНК; или

модифицированные стволовые клетки были совместного культивированы с моноцитами; с моноцитами, которые были предварительно обработаны ВВИГ, с Т-клетками, с Т-клетками, подвергнутыми воздействию Т-клеточного стимула, или с естественными клетками-киллерами.

41. Комбинация по любому из пп. 24-40, где солидная опухоль или гемобластоз выбраны из группы, включающей опухоль молочной железы, опухоль предстательной железы, карциному, базально-клеточный рак, рак желчных путей, рак мочевого пузыря, рак кости, рак мозга, рак ЦНС, глиому, рак шейки матки, хориокарциному, рак толстой кишки и ободочной кишки, рак соединительной ткани, рак пищеварительной системы, рак эндометрия, рак пищевода, рак глаз, рак головы и шеи, рак желудка, внутриэпителиальное новообразование, рак почки, рак гортани, лейкемию, рак печени, рак легких, лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, меланому, миелому, нейробластому, рак полости рта, рак яичников, рак поджелудочной железы, ретинобластому, рабдомиосаркому, рак прямой кишки, рак почки, рак органов дыхания, саркому, рак кожи, рак желудка, рак яичек, рак щитовидной железы, рак матки, рак мочевой системы, лимфосаркому, остеосаркому, опухоли молочной железы, мастоцитому, опухоль головного мозга, аденоскомическую карциному, карциноидную опухоль легких, опухоль бронхиальной железы, бронхиолярную аденокарциному, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, фиброму, миксохондрому, легочную саркому, нейросаркому, остеому, папиллому, саркому Юинга, опухоль Вильмса, лимфомы Беркитта, микроглиомы, остеокластомы, новообразование ротовой полости, фибросаркомы, генитальную плоскоклеточную карциному, трансмиссивную венерическую саркому, опухоль яичка, семиномы, опухоли клеток Сертоли, гемангиоперицитомы, гистиоцитомы, хлоромы, гранулоцитарные саркомы, корнеальную папиллому, плоскоклеточную карциному роговицы, гемангиосаркому, плевральную мезотелиому, базально-клеточную опухоль, тимому, карциному надпочечников, папилломатоз ротовой полости, гемангиоэндотелиому, цистаденому, фолликулярную лимфому, рак кишечника, легочную плоскоклеточную карциному, новообразование глаза, препуциальную фибросаркому, язвенную плосколкеточную карциному, препуциальную карциному, неоплазию соединительной ткани, гепатоцеллюлярную карциному, легочный аденоматоз, саркому Рауса, ретикуло-эндотелиоз, фибросаркому, нефробластому, лимфому В-клеток, лимфоидный лейкоз, неоплазию печени, плазмоцитоидный лейкоз, саркому плавательного пузыря (у рыб), казеозный люмфаденит, карциному легкого, инсулиному, лимфому, нейрому, опухоль островковых клеток поджелудочной железы, MALT-лимфому желудка и аденокарциному желудка.

42. Комбинация по любому из пп. 24-40, отличающаяся тем, что рак включает солидную опухоль.

43. Комбинация по п. 42, отличающаяся тем, что опухоль выбрана из глиобластомы, карциномы молочной железы, карциномы легкого, карциномы предстательной железы, карциномы толстой кишки, карциномы яичников, нейробластомы, опухоли центральной нервной системы, рака поджелудочной железы и меланомы.

44. Комбинация по любому из пп. 24-43, отличающаяся тем, что модифицированные стволовые клетки являются аутологичными для субъекта, подвергающегося лечению.

45. Комбинация по любому из пп. 24-43, отличающаяся тем, что модифицированные стволовые клетки являются аллогенными для субъекта, подвергающегося лечению.