ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ AADC ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА Российский патент 2020 года по МПК C12N15/86 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на выдачу патента США № 62/075298, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 5 ноября 2014 года, предварительной заявке на патент США № 62/155692, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 1 мая 2015 года, предварительной заявке на патент США № 62/199578, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 31 июля 2015 года, и предварительной заявке на патент США № 62/243537, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 19 октября 2015 года; причем содержание каждой из них включено в данный документ во всей их полноте посредством ссылки.

ССЫЛКА НА ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0002] Данная заявка подана вместе с перечнем последовательностей в электронном формате. Файл с перечнем последовательностей с названием 1010PCTSEQLST.txt был создан 5 ноября 2015 года и его размер составляет 178144 байта. Информация из перечня последовательностей в электронном формате включена в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0003] Настоящее изобретение относится к композициям, в частности, к молекулам нуклеиновых кислот, например, полинуклеотидам, кодирующим AADC, для применения при лечении болезни Паркинсона. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления такие полинуклеотиды AADC могут кодироваться рекомбинантными аденоассоциированными вирусами (AAV) или быть закодированными в них.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0004] Декарбоксилаза ароматических L-аминокислот (AADC) представляет собой гомодимерный пиридоксальфосфат-зависимый фермент, ответственный за синтез дофамина и серотонина. Кодируемый белок катализирует декарбоксилирование L-3,4-дигидроксифенилаланина (L-DOPA или леводопы) в дофамин; L-5-гидрокситриптофана в серотонин; и L-триптофана в триптамин. Дефекты в этом гене являются причиной дефицита декарбоксилазы ароматических L-аминокислот (AADCD), который является врожденным нарушением метаболизма нейромедиаторов, которое приводит к совместному дефициту серотонина и катехоламинов, что в результате приводит к серьезным нарушениям двигательных и вегетативных функций.

[0005] Болезнь Паркинсона (PD) представляет собой прогрессирующее нейродегенеративное заболевание центральной нервной системы (ЦНС), вызывающее сенсорные и двигательные симптомы. Дофаминовое замещение (т. е. леводопа) является стандартной фармакотерапией для лечения нарушения двигательных функций при БП. Однако, польза от дофаминовой терапии с течением времени становится менее заметной отчасти в связи с прогрессирующей гибелью вырабатывающих дофамин клеток и соответствующей утратой AADC-активности. Кроме того, системное введение высоких доз дофамина осложняется побочными эффектами, такими как флуктуации в двигательной активности, дискинезии и галлюцинации, возникающие в результате дофаминергической стимуляции мезолимбической системы. Одной стратегией восстановления дофаминергической функции и сведения к минимуму побочных эффектов является применение генной терапии для доставки AADC непосредственно в целевой участок ЦНС.

[0006] Аденоассоциированный вирус (AAV) проявил себя как перспективный вектор для генной терапии в связи с его длительной экспрессией генов, неспособностью к автономной репликации без вируса-помощника, способностью к трансфекции делящихся и неделящихся клеток, а также отсутствием патогенности, в отличие от инфекций дикого типа (см., например, Hadaczek et al. Mol. Ther. 18(8), 1458-1461, Aug. 2010). AAV является зависимым от помощника ДНК-парвовирусом, который принадлежит к роду Dependovirus.

[0007] Настоящее изобретение относится к таким усовершенствованным конструкциям нуклеиновых кислот, например, полинуклеотидам, для применения с помощью полученных из AAV векторов, содержащих последовательность гена дофа-декарбоксилазы («DDC»), которая кодирует полноразмерный белок AADC, для генной терапии при лечении болезни Паркинсона.

[0008] Описанные в настоящем документе конструкции нуклеиновых кислот содержат по меньшей мере 5'-ITR и 3'-ITR, каждый или оба из которых могут быть полученными из AAV, расположены около последовательности гена DDC, а также дополнительные компоненты, необходимые для экспрессии гена и отбора клонов.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0009] Настоящее изобретение относится к описываемым в настоящем документе композициям, способам, процессам, наборам и устройствам для разработки, получения, производства и/или составления полинуклеотидов AADC.

[00010] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления такие полинуклеотиды AADC могут быть закодированы плазмидами, или векторами, или рекомбинантными аденоассоциированными вирусами (AAV) или содержаться в них.

[00011] Подробности различных вариантов осуществления настоящего изобретения изложены в описании ниже. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут понятны из описания и формулы изобретения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Композиции согласно настоящему изобретению

[00012] В соответствии с настоящим изобретением предлагаются полинуклеотиды AADC, которые функционируют сами по себе или в комбинации с дополнительной последовательностью(-ями) нуклеиновой кислоты, кодируя белок AADC. В контексте настоящего описания «полинуклеотид AADC» представляет собой любой полимер нуклеиновой кислоты, который кодирует белок AADC и при наличии в векторе, плазмиде или транслируемой конструкции экспрессирует такой белок​AADC в клетке, ткани, органе или организме.

[00013] Полинуклеотиды AADC включают в себя молекулы-предшественники, которые процессируются внутри клетки. Полинуклеотиды AADC или их процессированные формы могут быть закодированы в плазмиде, векторе, геноме или другом векторе экспрессии нуклеиновой кислоты для доставки в клетку.

[00014] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды AADC разработаны в качестве компонентов вирусных геномов AAV и упакованы в вирусных частицах AAV, которые процессируются в клетке с образованием белка AADC дикого типа.

[00015] В контексте настоящего описания белок AADC дикий тип может представлять собой любую или любой из встречающихся в природе изоформ или вариантов, полученных от гена DDC. Было идентифицировано несколько получаемых путем альтернативного сплайсинга вариантов транскриптов, кодирующих различные изоформы AADC. В частности, ген DDC дает семь вариантов транскриптов, которые кодируют шесть различных изоформ. Варианты 1 и 2 транскрипта DDC кодируют изоформу 1 AADC. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды AADC кодируют вариант 2 транскрипта DDC, таким образом кодируя нативную изоформу 1 AADC (эталонная последовательность в NCBI: NP_000781.1). Данная последовательность имеет вид: MNASEFRRRGKEMVDYVANYMEGIEGRQVYPDVEPGYLRPLIPAAAPQEPDTFEDIINDVEKIIMPGVTHWHSPYFFAYFPTASSYPAMLADMLCGAIGCIGFSWAASPACTELETVMMDWLGKMLELPKAFLNEKAGEGGGVIQGSASEATLVALLAARTKVIHRLQAASPELTQAAIMEKLVAYSSDQAHSSVERAGLIGGVKLKAIPSDGNFAMRASALQEALERDKAAGLIPFFMVATLGTTTCCSFDNLLEVGPICNKEDIWLHVDAAYAGSAFICPEFRHLLNGVEFADSFNFNPHKWLLVNFDCSAMWVKKRTDLTGAFRLDPTYLKHSHQDSGLITDYRHWQIPLGRRFRSLKMWFVFRMYGVKGLQAYIRKHVQLSHEFESLVRQDPRFEICVEVILGLVCFRLKGSNKVNEALLQRINSAKKIHLVPCHLRDKFVLRFAICSRTVESAHVQRAWEHIKELAADVLRAERE (SEQ ID NO:1)

[00016] Полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению могут быть сконструированы так, чтобы они содержали модульные элементы и/или мотивы последовательности, которые в сборке создают конструкции на основе полинуклеотида AADC.

Конструкции на основе полинуклеотида AADC

[00017] В соответствии с настоящим изобретением представлены полинуклеотиды AADC. Такие полинуклеотиды содержат полимеры нуклеиновых кислот, которые содержат участок связанных нуклеозидов, кодирующих одну или более изоформ или вариантов белка AADC.

[00018] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит кодон-оптимизированный транскрипт, кодирующий белок AADC.

[00019] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит участок последовательности, кодирующий одну или более изоформ или вариантов белка AADC дикого типа. Такие полинуклеотиды также могут содержать участок последовательности, кодирующей любую одну или более из следующих: 5'-ITR, энхансер цитомегаловируса (CMV), промотор CMV, ie1 экзон 1, ie1 интрон 1, hbBglobin интрон 2, hBglobin экзон 3, 5'-UTR, 3'-UTR, сигнал поли(A) hGH и/или 3'-ITR. Такие участки последовательности раскрыты в настоящем описании или могут представлять собой любые, которые известны из уровня техники.

[00020] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит последовательность любой из SEQ ID NO. 2-23.

[00021] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая имеет некоторых процент идентичности с любой из SEQ ID NO: 2-23. Полинуклеотид AADC может иметь 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с SEQ ID NO: 2-23. Полинуклеотид AADC может иметь 1-10%, 10-20%, 30-40%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-99%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-99%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-99%, 70-100%, 80-85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-100%, 90-95%, 90-99% или 90-100% с любой из SEQ ID NO: 2-23. В качестве неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 80% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 85% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 90% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 95% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 99% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23.

[00022] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участок, кодирующий AADC, имеет длину 1440 нуклеотидов. Такой полинуклеотид AADC может быть кодон-оптимизированным по всему или части полинуклеотида.

[00023] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участок, кодирующий AADC, имеет длину 1443 нуклеотидов. В таком случае на 3'-конце полинуклеотида может присутствовать дополнительный кодон.

[00024] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участок, кодирующий AADC, имеет длину 1449 нуклеотидов. В таком случае на 3'-конце полинуклеотида могут присутствовать дополнительные кодоны.

[00025] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит любую из SEQ ID NO: 6-9, 17-23, но без 5'- и/или 3'-ITR. Такой полинуклеотид может быть встроен в плазмиду или вектор и использован для экспрессии кодируемого белка AADC.

[00026] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC могут быть получены в клетках насекомых (например, клетках Sf9).

[00027] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC могут быть получены при помощи тройной трансфекции.

[00028] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотид AADC может содержать кодон-оптимизированную открытую рамку считывания мРНК AADC, по меньшей мере один 5'-ITR и по меньшей мере один 3'-UTR, где один или более из 5'-ITR могут быть расположены на 5'-конце промоторного участка, а один или более 3'-ITR могут быть расположены на 3'-конце сигнала поли(A). мРНК AADC может содержать промоторный участок, 5'-нетранслируемый участок (UTR), 3'-UTR и сигнал поли(A). Промоторный участок может включать в себя без ограничения энхансерный элемент, промоторный элемент, первый экзонный участок, первый интронный участок, второй интронный участок и второй экзонный участок. В качестве неограничивающего примера энхансерный элемент и промоторный элемент получены из CMV. В качестве другого неограничивающего примера первым экзонным участком является ie1 экзон 1 или его фрагменты, первым интронным участком является ie1 интрон 1 или его фрагменты, вторым интронным участком является hbBglobin интрон 2 или его фрагменты, а вторым экзонным участком является hbBglobin экзон 3 или его фрагменты. В качестве еще одного неограничивающего примера сигнал поли(A) получен из гормона роста человека.

[00029] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотид AADC кодируется в плазмиде или векторе, которые могут быть полученными из аденоассоциированного вируса (AAV). ААВ может представлять собой рекомбинантный AAV-вирус и может содержать капсид такого серотипа, как без ограничения AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ и AAV-DJ8. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV2. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAVrh10. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV9(hu14). В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV-DJ. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV9.47. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV-DJ8.

Промоторы

[00030] Специалист в данной области техники может понять, что целевая клетка может требовать специфического промотора, включающего, без ограничения, промотор, который является видоспецифическим, индуцируемым, тканеспецифическим или специфическим в отношении фазы клеточного цикла; Parr et al., Nat. Med.3:1145-9 (1997); содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки).

[00031] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор представляет собой промотор, который считается эффективным для полинуклеотида AADC.

[00032] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор представляет собой промотор, эффективный для клетки, подвергающейся целенаправленному воздействию.

[00033] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор представляет собой слабый промотор, который обеспечивает экспрессию полезного груза в течение периода времени в целевых тканях, таких как без ограничения тканях нервной системы. Экспрессия может осуществляться в течение периода длительностью 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 13 часов, 14 часов, 15 часов, 16 часов, 17 часов, 18 часов, 19 часов, 20 часов, 21 час, 22 часа, 23 часа, 1 сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 1 неделя, 8 суток, 9 суток, 10 суток, 11 суток, 12 суток, 13 суток, 2 недели, 15 суток, 16 суток, 17 суток, 18 суток, 19 суток, 20 суток, 3 недели, 22 суток, 23 суток, 24 суток, 25 суток, 26 суток, 27 суток, 28 суток, 29 суток, 30 суток, 31 суток, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год, 13 месяцев, 14 месяцев, 15 месяцев, 16 месяцев, 17 месяцев, 18 месяцев, 19 месяцев, 20 месяцев, 21 месяц, 22 месяца, 23 месяца, 2 года, 3 года, 4 года, 5 лет, 6 лет, 7 лет, 8 лет, 9 лет, 10 лет или более 10 лет. Экспрессия может может осуществляться в течение 1-5 часов, 1-12 часов, 1-2 суток, 1-5 суток, 1-2 недель, 1-3 недель, 1-4 недель, 1-2 месяцев, 1-4 месяцев, 1-6 месяцев, 2-6 месяцев, 3-6 месяцев, 3-9 месяцев, 4-8 месяцев, 6-12 месяцев, 1-2 лет, 1-5 лет, 2-5 лет, 3-6 лет, 3-8 лет, 4-8 лет или 5-10 лет. В качестве неограничивающего примера, промотор представляет собой слабый промотор для устойчивой экспрессии полезного груза в нервных тканях. В качестве еще одного неограничивающего примера промотор является слабым промотором для непрерывной экспрессии фратаксина в ткани нервной системы, такой как без ограничения нейронная ткань и глиальная ткань.

[00034] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC применяют промотор FRDA.

[00035] В соответствии с одним вариантом осуществления имеет место участок, расположенный примерно на ~5 т. о. выше первого экзона полезного груза. В качестве неограничивающего примера имеет место участок из 17 т. о., расположенный примерно на 4,9 т. о. выше первого экзона гена фратаксина, для обеспечения экспрессии с промотором FRDA (см., например, Puspasari et al. Long Range Regulation of Human FXN Gene Expression, PLOS ONE, 2011; содержание которых включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки).

[00036] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор может представлять собой промотор, который имеет длину менее 1 т. о. Промотор может иметь длину 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 или боле 800. Промотор может иметь длину 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 или 700-800.

[00037] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор может представлять собой комбинацию двух или более компонентов, таких как, без ограничения, CMV и CBA. Каждый компонент может иметь длину 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 или более 800. Каждый компонент может иметь длину 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 или 700-800. В качестве неограничивающего примера, промотор представляет собой комбинацию 382-нуклеотидной энхансерной последовательности CMV и 260-нуклеотидной промоторной последовательности CBA.

[00038] В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере один элемент можно применять с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC для усиления целевой специфичности и экспрессии трансгена (см., например, Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки). Неограничивающие примеры элементов для повышения специфичности трансгена в отношении мишени и усиления экспрессии включают промоторы, эндогенные miRNA, посттранскрипционные регуляторные элементы (PRE), последовательности сигнала полиаденилирования (полиA) и вышележащие энхансеры (USE), энхансеры CMV и интроны.

[00039] В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере один элемент можно применять с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC для усиления целевой специфичности и экспрессии трансгена (см., например, Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки), такой как промоторы. Промоторы, которые стимулируют экспрессию в большинстве тканей, включают в себя без ограничения промотор 1α-субъединицы фактора элонгации (EF1α) человека, предранний промотор цитомегаловируса (CMV), промотора β-актина курицы (CBA) и его производного CAG, β-глюкуронидазы (GUSB) или убиквитина C (UBC). Для ограничения экспрессии определенными типами клеток можно применять тканеспецифические экспрессионные элементы, такие как, без ограничения, промоторы, специфические в отношении нервной системы, которые можно применять для ограничения экспрессии нейронами, астроцитами или олигодендроцитами. Неограничивающий пример тканеспецифических экспрессионных элементов для нейронов включает промоторы нейрон-специфической енолазы (NSE), фактора роста тромобоцитов (PDGF), B-цепи фактора роста тромбоцитов (PDGF-β), синапсина (Syn), метил-CpG связывающего белка 2 (MeCP2), CaMKII, mGluR2, NFL, NFH, nβ2, PPE, Enk и EAAT2. Неограничивающий пример тканеспецифических экспрессионных элементов для астроцитов включает промоторы глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) и EAAT2. Неограничивающий пример тканеспецифического экспрессионного элемента для олигодендроцитов включает промотор основного белка миелина (MBP).

[00040] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять убиквитарный промотор. Неограничивающие примеры убиквитарных промоторов включают CMV, CBA (в том числе производные CAG, CBh и т.д.), EF-1α, PGK, UBC, GUSB (hGBp) и UCOE (промотор HNRPA2B1-CBX3). Yu et al. (Molecular Pain 2011, 7:63; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) оценивали экспрессию eGFP под контролем промоторов CAG, EFIα, PGK и UBC в крысиных DRG клетках и первичных DRG клетках с использованием векторов на основе лентивируса, и обнаружили, что UBC показывал более слабую экспрессию, чем 3 другие промотора, и для всех промоторов наблюдали экспрессию только в 10-12% глии. Soderblom et al. (E. Neuro 2015; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) исследовали экспрессию eGFP в AAV8 с промоторами CMV и UBC и AAV2 с промотором CMV после инъекции в двигательную кору. Интраназальное введение плазмиды, содержащей промотор UBC или EFIα, показывало устойчивую экспрессию в дыхательных путях, большую, чем экспрессия с промотором CMV (см., например, Gene Therapy 2001, Vol. 8, 1539-1546; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки). Husain et al. (Gene Therapy 2009; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) оценивали конструкцию HβH с промотором hGUSB, промотором HSV-1LAT и промотором NSE и выяснили, что конструкция HβH показывала более слабую экспрессию в головном мозге мышей, чем NSE. Passini и Wolfe (J. Virol. 2001, 12382-12392, содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) оценивали долговременные эффекты вектора HβH после внутрижелудочковой инъекции у новорожденных мышей и выяснили, что присутствует устойчивая экспрессия в течение по меньшей мере 1 года. Низкая экспрессия во всех областях головного мозга была обнаружена Xu et al. (Gene Therapy 2001, 8, 1323-1332; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) в случае, когда использовали промоторы NF-L и NF-H в сравнении с CMV-lacZ, CMV-luc, EF, GFAP, hENK, nAChR, PPE, PPE+wpre, NSE (0,3 т. о.), NSE (1,8 т. о.) и NSE (1,8 т. о.+wpre). Xu et al. выяснили, что активность промоторов убывала в следующем порядке: NSE (1,8 т. о.), EF, NSE (0,3 т. о.), GFAP, CMV, hENK, PPE, NFL и NFH. NFL представляет собой 650-нуклеотидный промотор, и NFH представляет собой 920-нуклеотидный промотор, причем оба из них отсутствуют в печени, но NFH является распространенным в проприоцептивных сенсорных нейронах, головном и спинном мозге, а NFH присутствует в сердце. Scn8a представляет собой 470-нуклеотидный промотор, который экспрессируется везде в DRG, спинном мозге и головном мозге, причем особенно высокая экспрессия наблюдается в нейронах гиппокампа и мозжечковых клетках Пуркинье, коре головного мозга, таламусе и гипоталамусе (см., например, Drews et al. 2007; и Raymond et al. 2004; причем содержание каждой из которых включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки).

[00041] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор UBC. Промотор UBC может иметь размер 300-350 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор UBC имеет размер 332 нуклеотида.

[00042] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор GUSB. Промотор GUSB может иметь размер 350-400 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор GUSB имеет размер 378 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарныим, и AAV может представлять собой серотип DJ.

[00043] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор NFL. Промотор NFL может иметь размер 600-700 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор NFL имеет размер 650 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарныим, и AAV может представлять собой серотип DJ.

[00044] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор NFH. Промотор NFH может иметь размер 900-950 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор NFH имеет размер 920 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарным, и AAV может представлять собой серотип DJ.

[00045] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор scn8a. Промотор scn8a может иметь размер 450-500 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор scn8a имеет размер 470 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарныим, и AAV может представлять собой серотип DJ.

[00046] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор FXN.

[00047] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор PGK.

[00048] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор CBA.

[00049] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор CMV.

[00050] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор печени или скелетных мышц. Неограничивающие примеры промоторов, специфичных в отношении печени, включают hAAT и TBG. Неограничивающие примеры промоторов, специфичных в отношении скелетных мышц, включают десминовый промотор, MCK и C5-12.

[00051] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять энхансерный элемент, промотор и/или 5'-UTR интрон. Энхансер может представлять собой, без ограничения, энхансер CMV, промотор может представлять собой, без ограничения, промотор CMV, CBA, UBC, GUSB, NSE, синапсина, MeCP2 и GFAP, и 5'UTR/интрон может представлять собой, без ограничения, SV40 и CBA-MVM. В качестве неограничивающего примера, энхансер, промотор и/или интрон, применяемые в комбинации, могут представлять собой: (1) энхансер CMV, промотор CMV, интрон 5'UTR SV40; (2) энхансер CMV, промотор CBA, интрон 5'UTR SV 40; (3) энхансер CMV, промотор CBA, интрон 5'UTR CBA-MVM; (4) промотор UBC; (5) промотор GUSB; (6) промотор NSE; (7) промотор синапсина; (8) промотор MeCP2 и (9) промотор GFAP.

[00052] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять сконструированный промотор.

Интроны

[00053] В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере один элемент можно применять с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC для усиления целевой специфичности и экспрессии трансгена (см., например, Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки), такой как интрон. Неограничивающие примеры интронов включают MVM (67-97 п.о.), F.IX усеченный интрон 1 (300 п.о.), SD β-глобина /акцепторный сайт сплайсинга тяжелой цепи иммуноглобулина (250 п.о.), донорный сайт сплайсинга аденовируса/акцепторный сайт сплайсинга иммуноглобулина (500 п.о.), донорный сайт сплайсинга/акцепторный сайт сплайсинга поздних генов SV40 (19S/16S) (180 п.о.) и донорный сайт сплайсинга гибридного аденовируса/акцепторный сайт сплайсинга IgG (230 п.о.).

[00054] В соответствии с одним вариантом осуществления интрон может иметь длину 100-500 нуклеотидов. Интрон может иметь длину 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490 или 500. Интрон может иметь длину в диапазоне 80-100, 80-120, 80-140, 80-160, 80-180, 80-200, 80-250, 80-300, 80-350, 80-400, 80-450, 80-500, 200-300, 200-400, 200-500, 300-400, 300-500 или 400-500.

Введение в клетки

[00055] Полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно встраивать в клетки-хозяева с помощью любого из множества подходов. Можно осуществить заражение вирусным вектором, содержащим полинуклеотид AADC. Примеры подходящих вирусных векторов включают векторы на основе ретровируса с дефектной репликацией, векторы на основе аденовируса, векторы на основе аденоассоциированного вируса и векторы на основе лентивируса.

[00056] В соответствии с настоящим изобретением вирусные векторы для применения при лечении и/или диагностике представляют собой вирус, который был очищен или сокращен до минимальных компонентов, необходимых для трансдукции переносимого или полезного груза представляющей интерес нуклеиновой кислоты.

[00057] Таким образом, вирусные векторы конструируют в качестве средств для специфической доставки при отсутствии вредных признаков репликации и/или интеграции, обнаруживаемых у вируса дикого типа.

[00058] В контексте настоящего описания термин «вектор» означает любую молекулу или фрагмент, который транспортирует, трансдуцирует или иным образом действует как носитель гетерологичной молекулы, такой как полинуклеотиды согласно настоящему изобретению. «Вирусный вектор» представляет собой вектор, который содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих представляющую интерес молекулу полезного груза, например, трансген, полинуклеотид, кодирующий полипептид или несколько полипептидов. Вирусные векторы согласно настоящему изобретению могут быть получены рекомбинантными способами и могут иметь в своей основе исходную или эталонную последовательность аденоассоциированного вируса (AAV). Серотипы, которые могут быть пригодны согласно настоящему изобретению, включают любые из берущих начало от AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ и AAV-DJ8.

[00059] В соответствии с одним вариантом осуществления серотип, который может быть пригодным в настоящем изобретении, может представлять собой AAV-DJ8. Аминокислотная последовательность AAV-DJ8 может содержать две или более мутации с целью удаления гепарин-связывающего домена (HBD). В качестве неограничивающего примера последовательность AAV-DJ, описанная как SEQ ID NO: 1 в патенте США № 7588772, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки, могут содержать две мутации: (1) R587Q, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 587 заменен на глутамин (Q; gln), и (2) R590T, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 590 заменен на треонин (T; thr). В качестве другого неограничивающего примера может содержать три мутации: (1) K406R, где лизин (K; lys) в положении аминокислоты 406 заменен на аргинин (R; arg), (2) R587Q, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 587 заменен на глутамин (Q; gln), и (3) R590T, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 590 заменен на треонин (T; thr).

[00060] AAV-векторы также могут содержать векторы на основе самокомплементарного AAV (scAAV). Векторы на основе scAAV содержат обе цепи ДНК, которые комплементарно соединены вместе с образованием двухцепочечной ДНК. За счет пропуска синтеза второй цепи scAAV обеспечивают возможность быстрой экспрессии в клетке.

Фармацевтические композиции

[00061] Несмотря на то, что описания фармацевтических композиций, например, таких полинуклеотидов (включая кодирующие плазмиды или векторы экспрессии, такие как вирусы, например, AAV), которые содержат подлежащий доставке полезный груз, например, последовательности, кодирующие AADC, преимущественно направлены на фармацевтические композиции, которые являются подходящими для введения людям, причем специалисту в данной области техники будет понятно, что такие композиции обычно являются подходящими для введения любому другому животному, например, животным, отличным от человека, например, млекопитающим, отличным от человека. Модификация фармацевтических композиций, подходящих для введения людям, для того, чтобы сделать композиции подходящими для введения различным животным, является хорошо понятной, и средний специалист в области ветеринарной фармакологии может разработать и/или выполнить такую модификацию с использованием только стандартного экспериментирования, если оно вообще будет необходимо. Субъекты, для которых предполагается введение фармацевтических композиций, включают, без ограничения, людей и/или других приматов; млекопитающих, в том числе коммерчески значимых млекопитающих, таких как крупный рогатый скот, свиньи, лошади, овцы, кошки, собаки, мыши и/или крысы; и/или птиц, в том числе коммерчески значимых птиц, таких как домашняя птица, куры, утки, гуси и/или индейки.

[00062] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиции вводят людям, пациентам-людям или субъектам-людям. В контексте настоящего раскрытия фраза «активный ингредиент» обычно относится либо к вирусному вектору, несущему полезный груз, либо к полинуклеотидной молекуле полезного груза, доставляемой вирусным вектором, который описан в настоящем документе.

[00063] Составы фармацевтических композиций, описанных в данном документе, можно получить с помощью любого способа, известного или который будет разработан в будущем в области фармакологии. В целом, такие способы получения включают стадию обеспечения объединения активного ингредиента со вспомогательным веществом и/или одним или более другими дополнительными ингредиентами, а затем, если необходимо и/или желательно, разделение, придание формы и/или упаковку продукта в предпочтительную единицу с однократной дозой или единицу с несколькими дозами.

[00064] Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением будут варьировать в зависимости от индивидуальных особенностей, размера и/или состояния субъекта, получающего лечение, а также в зависимости от пути, которым следует вводить композицию.

[00065] В соответствии с одним вариантом осуществления фармацевтическая композиция содержит вектор на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (AAV), содержащего капсид AAV и AAV-векторный геном. AAV-векторный геном может содержать по меньшей мере один описанный в настоящем документе полинуклеотид AADC, такой как без ограничения SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23, или варианты, обладающие по меньшей мере 95% идентичности с ним. В число векторов на основе рекомбинантного AAV в фармацевтической композиции могут входить по меньшей мере 70%, которые содержат AAV-векторный геном.

Состав

[00066] Полинуклеотиды AADC или кодирующие их вирусные векторы можно составить с применением одного или более вспомогательных веществ для (1) повышения стабильности; (2) повышения уровня трансфекции или трансдукции клеток; (3) обеспечения возможности длительного или замедленного высвобождения или (4) изменения биораспределения (например, целенаправленного воздействия вирусного вектора на конкретные ткани или типы клеток).

[00067] Составы согласно настоящему изобретению могут включать, без ограничения, солевой раствор, липидоиды, липосомы, липидные наночастицы, полимеры, липоплексы, наночастицы по типу ядро-оболочка, пептиды, белки, клетки, трансфицированные вирусными векторами (например, для трансплантации субъекту), средства, имитирующие наночастицы, и их комбинации. Кроме того, вирусные векторы согласно настоящему изобретению можно составить с применением самособирающихся наночастиц нуклеиновой кислоты.

[00068] Составы фармацевтических композиций, описанных в данном документе, можно получить с помощью любого способа, известного или который будет разработан в будущем в области фармакологии. В целом, такие способы получения включают стадию объединения активного ингредиента со вспомогательным веществом и/или одним или более другими дополнительными ингредиентами.

[00069] Фармацевтическую композицию в соответствии с настоящим раскрытием можно получить, упаковать и/или реализовать нерасфасованной, в виде единичной стандартной дозы и/или в виде нескольких единичных стандартных доз. В контексте настоящего описания «стандартная доза» относится к дискретному количеству, фармацевтической композиции, содержащей заранее определенное количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента обычно равно дозе активного ингредиента, которую можно вводить субъекту, и/или подходящей части такой дозы, такой как, например, половина или треть такой дозы.

[00070] Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим раскрытием могут варьировать в зависимости от индивидуальных особенностей, размера и/или состояния субъекта, получающего лечение, а также в зависимости от пути, которым следует вводить композицию. Например, композиция может содержать от 0,1% до 99% (вес/вес) активного ингредиента. В качестве примера, композиция может содержать от 0,1% до 100%, например, от 0,5 до 50%, 1-30%, 5-80%, по меньшей мере 80% (вес/вес) активного ингредиента.

[00071] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления описанные в настоящем документе составы могут содержать по меньшей мере одну молекулу полезного груза, например, полинуклеотид AADC. В качестве неограничивающего примера составы могут содержать 1, 2, 3, 4 или 5 молекул полезного груза, представляющих собой полинуклеотид AADC.

[00072] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество может иметь чистоту по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100%. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество одобрено для применения у людей и для применения в ветеринарии. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество может быть одобрено Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество может иметь фармацевтическую степень чистоты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество может отвечать стандартам Фармакопеи США (USP), Европейской фармакопеи (EP), Британской фармакопеи и/или Международной фармакопеи.

[00073] Вспомогательные вещества, которые в контексте данного описания включают, без ограничения, любые и все растворители, дисперсионные среды, разбавители или другие жидкие среды, вспомогательные средства для диспергирования или суспендирования, поверхностно-активные средства, средства для обеспечения изотоничности, загущающие или эмульгирующие средства, консерванты и т.п., которые подходят для конкретной необходимой лекарственной формы. Различные вспомогательные вещества для составления фармацевтических композиций и методики получения композиции известны из уровня техники (см. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21^st Edition, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; включенную в данный документ в своей полноте посредством ссылки). Применение традиционной среды для лекарственного средства может предполагаться в объеме настоящего раскрытия, за исключением того случая, когда какая-либо традиционная среда для лекарственного средства может быть несовместима с веществом или его производными, как например, являясь причиной какого-либо нежелательного биологического эффекта или иным образом пагубно взаимодействуя с любым другим компонентом(компонентами) фармацевтической композиции.

[00074] Иллюстративные разбавители включают, без ограничения, карбонат кальция, карбонат натрия, фосфат кальция, фосфат дикальция, сульфат кальция, гидрофосфат кальция, фосфат натрия, лактозу, сахарозу, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, каолин, маннит, сорбит, инозит, хлорид натрия, сухой крахмал, кукурузный крахмал, сахарную пудру и т.д. и/или их комбинации.

[00075] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC перед введением можно составить в гидрогеле. Гидрогели имеют степень пластичности, которая схожа с пластичностью естественной ткани по причине значительного содержания в них воды.

[00076] В соответствии с другим вариантом осуществления гидрогель можно вводить субъекту до введения состава с полинуклеотидом AADC. В качестве неограничивающего примера место введения гидрогеля может находиться в пределах 3 дюймов (например, в пределах 2,9, 2,8, 2,7, 2,6, 2,5, 2,4, 2,3, 2,2, 2,1, 2,0, 1,9, 1,8, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,2, 1,1, 1,0, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1 или менее 0,1 дюйма) от места введения состава с полинуклеотидом AADC.

[00077] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC можно вводить в физиологическом растворе. В качестве неограничивающего примера состав может представлять собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) с 0,001% плюрониловой кислоты (F-68). Кроме того, состав может быть стерилизованным.

Неактивные компоненты

[00078] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления составы с полинуклеотидом AADC могут содержать по меньшей мере одно вспомогательное вещество, которое является неактивным ингредиентом. В контексте настоящего описания термин «неактивный ингредиент» относится к одному или более неактивным средствам, включенным в составы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления все, ни один или некоторые из неактивных ингредиентов, которые можно применять в составах согласно настоящему изобретению, могут быть одобрены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA).

[00079] Составы с вирусными векторами, несущими раскрытые в настоящем документе полинуклеотиды AADC, могут включать в себя катионы или анионы. В соответствии с одним вариантом осуществления составы включают катионы металлов, такие как, без ограничения, Zn2+, Ca2+, Cu2+, Mg+ и их комбинации. В качестве неограничивающего примера составы могут включать в себя полимеры и полинуклеотиды AADC в комплексе с катионом металла (см., например, патент США № 6265389 и № 6555525, каждый из которых включен в данный документ во всей своей полноте при помощи ссылки).

Введение

[00080] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, можно вводить любым путем, который приведет к терапевтически эффективному результату. Они включают без ограничения эпидуральный (в твердую мозговую оболочку), пероральный (через ротовую полость), трансдермальный, перидуральный, внутримозговой (в головной мозг), интрацеребровентрикулярный (в желудочки мозга), подкожный (под кожу), назальное введение (через нос), внутривенный (в вену), внутривенное струйное введение, внутривенное капельное введение, внутриартериальный (в артерию), интратекальный (в спинномозговой канал), эндоцервикальный, интракаудальный (в область конского хвоста спинного мозга), интрацистернальный (в мостомозжечковую цистерну), внутридисковый (в диск), интрадуральный (внутрь или под твердую мозговую оболочку), межоболочечный (в мозговые оболочки), внутриплевральный (в плевру), интраспинальный (в позвоночный столб), интратекальный (в спинномозговую жидкость на любом уровне цереброспинальной оси), внутригрудной (в грудную клетку), интрастриарный (в стриатум, хвостатое ядро и/или скорлупу), спинномозговую блокаду, блокаду нервов или спинальный. В соответствии с конкретными вариантами осуществления композиции можно вводить таким образом, который позволяет им преодолевать гематоэнцефалический барьер, сосудистый барьер или другой эпителиальный барьер. В соответствии с одним вариантом осуществления состав для некоторого пути введения может включать по меньшей мере один неактивный компонент.

[00081] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, можно вводить в скорлупу правого полушария и/или скорлупу левого полушария. Введение можно осуществлять в одном или более местах скорлупы, как например, без ограничения в 2 местах, 3 местах, 4 местах или более чем в 4 местах. В качестве неограничивающего примера вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, доставляют в 2 места скорлупы левого полушария и 2 места скорлупы правого полушария.

[00082] В соответствии с одним вариантом осуществления введение субъекту состава с вирусными векторами, содержащими полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, обеспечивает охват скорлупы субъекта (например, скорлупы левого и/или правого полушария). В соответствии с одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 8%, 9%, 10%, 13%, 14%, 15%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охвата скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с другим аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 8%, 9%, 10%, 13%, 14%, 15%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охвата площади поверхности скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с еще одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать 10-40%, 20-40%, 20-30%, 20-35%, 20-50%, 30-40%, 35-40%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или 60-90% охват скорлупы левого и/или правого полушария субъекта или общей площади поверхности скорлупы левого и/или правого полушария субъекта.

[00083] В соответствии с одним вариантом осуществления введение субъекту состава с вирусными векторами, содержащими полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, обеспечивает охват задней части скорлупы субъекта (например, задней части скорлупы левого и/или правого полушария). В соответствии с одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охвата задней части скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с другим аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охват площади поверхности задней части скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с еще одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или 60-90% охват задней части скорлупы левого и/или правого полушария субъекта или общей площади скорлупы левого и/или правого полушария субъекта.

[00084] В соответствии с одним вариантом осуществления субъекту можно вводить вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, безопасно доставляемые в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA) с помощью двусторонних инфузий, или, в качестве альтернативы, интрастриарно (в хвостатые ядра и скорлупу) или в гипоталамическое ядро​(STN).

[00085] В соответствии с одним вариантом осуществления описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC можно вводить путем остроконечного двустороннего размещения катетеров в каждой скорлупе. При размещении можно применять известные из уровня техники или описанные в настоящем документе стереотаксические нейрохирургические методики с контролем по магнитно-резонансной томограмме (MRI). Кроме того, в составе можно применять контраст, такой как без ограничения гадолиниевый контраст (например, PROHANCE®), для отслеживания и подтверждения распространения состава.

[00086] В соответствии с одним вариантом осуществления субъекту можно вводить вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, в двусторонней стереотаксической пошаговой CED-инфузии в скорлупу (например, посткомиссуральную часть скорлупы).

[00087] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) предусматривает скорость доставки, определяемую выражением [вг/час=мл/ч * вг/мл], где вг представляет собой количество вирусных геномов, вг/мл представляет собой концентрацию композиции, и мл/час представляет собой скорость пролонгированной инфузии.

[00088] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию до 1 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может включать инфузию 0,001, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,010, 0,015, 0,020, 0,025, 0,030, 0,040, 0,050, 0,060, 0,070, 0,080, 0,090, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 или 0,9 мл.

[00089] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию, составляющую от приблизительно 1 мл до приблизительно 120 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может включать инфузию 0,1, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 или 120 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию по меньшей мере 3 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) заключается в инфузии 3 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию по меньшей мере 10 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) заключается в инфузии 10 мл.

[00090] В соответствии с одним вариантом осуществления объем фармацевтической композиции c вирусными векторами, доставляемой в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) субъекта, составляет 50 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл, 500 мкл, 600 мкл, 700 мкл, 800 мкл, 900 мкл, 1000 мкл, 1100 мкл, 1200 мкл, 1300 мкл, 1400 мкл, 1500 мкл, 1600 мкл, 1700 мкл, 1800 мкл, 1900 мкл, 2000 мкл или более 2000 мкл.

[00091] В соответствии с одним вариантом осуществления объем фармацевтической композиции c вирусными векторами, доставляемой в участок обоих полушарий головного мозга субъекта, составляет 50 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл, 500 мкл, 600 мкл, 700 мкл, 800 мкл, 900 мкл, 1000 мкл, 1100 мкл, 1200 мкл, 1300 мкл, 1400 мкл, 1500 мкл, 1600 мкл, 1700 мкл, 1800 мкл, 1900 мкл, 2000 мкл или более 2000 мкл. В качестве неограничивающего примера объем, доставляемый в участок обоих полушарий, составляет 200 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в участок обоих полушарий, составляет 900 мкл. В качестве еще одного неограничивающего примера объем, доставляемый в участок обоих полушарий, составляет 1800 мкл.

[00092] В соответствии с одним вариантом осуществления объем фармацевтической композиции c вирусными векторами, доставляемой в скорлупу обоих полушарий головного мозга субъекта, составляет 50 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл, 450 мкл, 500 мкл, 600 мкл, 700 мкл, 800 мкл, 900 мкл, 1000 мкл, 1100 мкл, 1200 мкл, 1300 мкл, 1400 мкл, 1500 мкл, 1600 мкл, 1700 мкл, 1800 мкл, 1900 мкл, 2000 мкл или более 2000 мкл. В качестве неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 100 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 200 мкл. В качестве неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 300 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 450 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 900 мкл. В качестве еще одного неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 1800 мкл.

[00093] В соответствии с одним вариантом осуществления общий объем, доставляемый субъекту, можно разделить между одним или более местами введения, например, 1, 2, 3, 4, 5 или более 5 местами. В качестве неограничивающего примера общий объем разделяют между введением в скорлупу левого и правого полушария. В качестве еще одного неограничивающего примера общий объем разделяют между двумя местами введения в скорлупу каждого из левого и правого полушария.

[00094] В соответствии с одним вариантом осуществления фармацевтическую композицию с вирусным вектором вводят с помощью иглы с несколькими отверстиями. Неограничивающие примеры игл с несколькими отверстиями описаны в патентах США №№ 8333734, 7135010, 7575572, 7699852, 4411657, 6890319, 6613026, 6726659, 6565572, 6520949, 6382212, 5848996, 5759179, 5 674267, 5588960, 5484401, 5199441, 5012818, 4474569, 3766907, 3552394, причем содержание каждого из них включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.

[00095] В соответствии с одним вариантом осуществления композиция содержит описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC, и полинуклеотиды AADC являются компонентами AAV-вирусного генома, упакованного в вирусную частицу AAV. Процентное (%) соотношение вирусных частиц AAV, содержащих полинуклеотид AADC (также называемых в настоящем документе AADC-частицами) к вирусным частицам AAV без полинуклеотида AADC (также называемым в настоящем документе пустыми капсидами) в композиции может составлять 0:100, 1:99, 0:90, 15:85, 25:75, 30:70, 50:50, 70:30, 85:15, 90:10, 99:1 или 100:0. В качестве неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 50:50. В качестве другого неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 70:30. В качестве другого неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 85:15. В качестве другого неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 100:0.

[00096] В соответствии с одним вариантом осуществления описанная в настоящем документе композиция содержит по меньшей мере 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или более 99% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 50% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 52% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 58% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 70% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 83% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 85% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 99% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит 100% AADC-частиц.

[00097] В соответствии с одним вариантом осуществления описанная в настоящем документе композиция содержит 1-10%, 10-20%, 30-40%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-99%, 50 -100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-99%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-99%, 70-100%, 80 -85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-100%, 90-95%, 90-99% или 90-100% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 50-100% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 50-60% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-99% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-90% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-95% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-85% AADC-частиц.

[00098] В соответствии с одним вариантом осуществления описанная в настоящем документе композиция содержит менее 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 50% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 45% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 40% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 35% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 30% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 25% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 20% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 15% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 10% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 5% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 1% пустых частиц.

[00099] Описанная в настоящем документе композиция содержит 1-10%, 10-20%, 30-40%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-99%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-99%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-99%, 70-100%, 80-85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-100%, 90-95%, 90-99% или 90-100% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-40% пустых частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-50% пустых частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-60% пустых частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-70% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-80% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-90% пустых частиц.

[000100] В соответствии с одним вариантом осуществления описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC можно вводить субъекту, который также проходит терапию леводопой. В качестве неограничивающего примера у субъекта может быть положительная реакция на терапию леводопой, и уменьшается по меньшей мере один симптом PD. В качестве еще одного неограничивающего примера у субъекта может быть реакция на терапию леводопой, при которой испытываемые субъектом симптомы PD остаются стабильными. В качестве еще одного неограничивающего примера у субъекта может быть отрицательная реакция на терапию леводопой, при которой испытываемые субъектом симптомы PD усиливаются.

[000101] В соответствии с одним вариантом осуществления доза леводопы, вводимая субъекту до введения полинуклеотидов AADC, составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более 25 мг/кг. В качестве неограничивающего примера доза составляет 3 мг/кг. В качестве другого неограничивающего примера доза составляет 10 мг/кг. В качестве еще одного неограничивающего примера доза составляет 20 мг/кг. Реакцию субъекта (например, поведенческую реакцию) на леводопу можно оценить до введения полинуклеотидов AADC. Кроме того, субъекту можно снова вводить леводопу после введения полинуклеотидов AADC (например, через 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год или более 1 года после введения полинуклеотидов AADC). Для определения влияний полинуклеотидов AADC, можно повторно оценить поведенческую реакцию и сравнить ее с первоначальной реакцией. Субъект может иметь 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% улучшение поведенческой реакции.

[000102] В соответствии с одним вариантом осуществления леводопу можно вводить многократно после введения полинуклеотидов AADC. Леводопу можно вводить по повторяющейся схеме (например, каждые 5 дней, еженедельно, каждые 10 дней, каждые 15 дней, каждые 30 дней, ежемесячно, раз в два месяца, каждые 3 месяца, каждые 4 месяца, каждые 5 месяцев, каждые 6 месяцев, каждые 7 месяцев, каждые 8 месяцев, каждые 9 месяцев, каждые 10 месяцев, каждые 11 месяцев или раз в год) или по мере возникновения симптомов. В качестве неограничивающего примера через 3 года после введения полинуклеотидов AADC субъект может иметь 1-10%, 5-15%, 10-20%, 15-30%, 20-40%, 25-50%, 30-50%, 40-50%, 40-60%, 50-70%, 50-80%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-90%, 70-80%, 70-90%, 75-90%, 80-90%, 90-100% стриарных нейронов в участке введения инфузией в скорлупу, который должен быть иммунореактивным к AADC. В качестве неограничивающего примера через 6 лет после введения полинуклеотидов AADC субъект может иметь 1-10%, 5-15%, 10-20%, 15-30%, 20-40%, 25-50%, 30-50%, 40-50%, 40-60%, 50-70%, 50-80%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-90%, 70-80%, 70-90%, 75-90%, 80-90%, 90-100% стриарных нейронов в участке введения инфузией в скорлупу, который должен быть иммунореактивным к AADC. В качестве неограничивающего примера через 9 лет после введения полинуклеотидов AADC субъект может иметь 1-10%, 5-15%, 10-20%, 15-30%, 20-40%, 25-50%, 30-50%, 40-50%, 40-60%, 50-70%, 50-80%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-90%, 70-80%, 70-90%, 75-90%, 80-90%, 90-100% стриарных нейронов в участке введения инфузией в скорлупу, который должен быть иммунореактивным к AADC.

[000103] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC, имеет задокументированную реакцию на терапию леводопой, но имеет рефракторные с медицинской точки зрения флуктуации и считается потенциальным кандидатом на хирургическое вмешательство. Решение, является ли субъект потенциальным кандидатом на хирургическое вмешательство, может принимать врач, осуществляющий лечение субъекта от PD, или врач, назначающий введение полинуклеотидов AADC, который принимает во внимание соотношения общий риск к пользе для пациента в отношении хирургического вмешательства, необходимого для доставки полинуклеотидов AADC.

[000104] В соответствии с одним вариантом осуществления соотношение объема распределения в паренхиме поля у субъекта к инфузионному объему поля у субъекта может составлять 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0 или более 6,0. В качестве неограничивающего примера соотношение объема распределения в паренхиме к инфузионному объему составляло 1,6 в хвостатом ядре. В качестве неограничивающего примера соотношение объема распределения в паренхиме к инфузионному объему составляло 3,1 в скорлупе. В качестве неограничивающего примера распределение полинуклеотидов AADC в скорлупе может в 2-3 раза превышать вводимый инфузией объем.

Дозировка

[000105] Настоящее изобретение относится к способам, предусматривающим введение вирусных векторов и их полезного груза в виде полинуклеотидов AADC или комплексов в соответствии с настоящим изобретением нуждающемуся в том субъекту. Фармацевтические, визуализирующие, диагностические или профилактические композиции с вирусными векторами могут быть введены субъекту в любом количестве и любым путем введения, эффективным для предупреждения, лечения, диагностики или визуализации заболевания, нарушения и/или состояния (например, заболевания, нарушения и/или состояния, связанного с нарушением кратковременной памяти). Точное необходимое количество будет варьировать от субъекта к субъекту в зависимости от вида, возраста и общего состояния субъекта, тяжести заболевания, конкретной композиции, способа ее введения, механизма ее действия и т.п. Композиции согласно настоящему изобретению, как правило, составляют в единичной лекарственной форме для облегчения введения и равномерности дозировки. Тем не менее, будет понятно, что общее суточное потребление композиций согласно настоящему изобретению может определяться лечащим врачом по результатам тщательной клинической оценки. Конкретный терапевтически эффективный, профилактически эффективный или соответствующий для визуализации уровень дозы для каждого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, в том числе от нарушения, подлежащего лечению, и тяжести нарушения; активности конкретного используемого соединения; конкретной используемой композиции; возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола и рациона пациента; времени введения, пути введения, а также скорости выведения из организма используемого полезного груза в виде конкретных полинуклеотидов; длительности лечения; лекарственных средств, применяемых в комбинации или совместно с конкретным используемым соединением; и подобных факторов, хорошо известных в области медицины.

[000106] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтические композиции c вирусными векторами согласно настоящему изобретению можно вводить с уровнями дозировки полинуклеотида AADC, достаточными для доставки от приблизительно 0,0001 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, от приблизительно 0,001 мг/кг до приблизительно 0,05 мг/кг, от приблизительно 0,005 до приблизительно 0,05 мг/кг, от приблизительно 0,001 мг/кг до приблизительно 0,005 мг/кг, от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 0,5 мг/кг, от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг, от приблизительно 0,1 до приблизительно 40 мг/кг, от приблизительно 0,5 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг, от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг массы тела субъекта в день, один или более раз в день, для получения желаемого терапевтического, диагностического, профилактического или визуального эффекта. Необходимую дозировку полинуклеотида AADC можно доставлять три раза в день, два раза в день, один раз в день или в за период 24 часа дозировку можно доставлять один, два, три или более трех раз. В соответствии с определенными вариантами осуществления необходимую дозировку полинуклеотида AADC можно доставить с помощью нескольких введений (например, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти, одиннадцати, двенадцати, тринадцати, четырнадцати или большего числа введений). Если используют несколько введений, можно применять режимы дозирования с разделением дозы, такие как описанные в данном документе. В контексте настоящего описания «раздельная доза» относится к разделению единичной стандартной дозы или общей дозы на две или более доз, например, два или более введений единичной стандартной дозы. В контексте настоящего описания «единичная стандартная доза» относится к дозе любого терапевтического средства на основе полинуклеотида, вводимого в одной дозе/в одно время/одним путем/через одну точку контакта, т. е. при одном событии введения. В контексте настоящего описания «общая суточная доза» относится к количеству, которое дают или прописывают на 24 часовой период. Его можно вводить в виде единичной стандартной дозы. В соответствии с одним вариантом осуществления вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, вводят субъекту раздельными дозами. Их можно составить только в буфере или в составе, описанном в данном документе.

[000107] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может предусматривать общую концентрацию от приблизительно 1×10⁶ вг/мл до приблизительно 1×10¹⁶ вг/мл. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления доставка может предусматривать концентрацию композиции, составляющую приблизительно 1×10⁶, 2×10⁶, 3×10⁶, 4×10⁶, 5×10⁶, 6×10⁶, 7×10⁶, 8×10⁶, 9×10⁶, 1×10⁷, 2×10⁷, 3×10⁷, 4×10⁷, 5×10⁷, 6×10⁷, 7×10⁷, 8×10⁷, 9×10⁷, 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 2×10¹⁰, 3×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1.8×10¹¹, 2×10¹¹, 3×10¹¹, 4×10¹¹, 5×10¹¹, 5.5×10¹¹, 6×10¹¹, 7×10¹¹, 8×10¹¹, 9×10¹¹, 0.8×10¹², 0.83×10¹², 1×10¹², 1,1×10¹², 1,2×10¹², 1,3×10¹², 1,4×10¹², 1,5×10¹², 1,6×10¹², 1,7×10¹², 1,8×10¹², 1,9×10¹², 2×10¹², 2,1×10¹², 2,2×10¹², 2,3×10¹², 2,4×10¹², 2,5×10¹², 2,6×10¹², 2,7×10¹², 2,8×10¹², 2,9×10¹², 3×10¹², 3,1×10¹², 3,2×10¹², 3,3×10¹², 3,4×10¹², 3,5×10¹², 3,6×10¹², 3,7×10¹², 3,8×10¹², 3,9×10¹², 4×10¹², 4,1×10¹², 4,2×10¹², 4,3×10¹², 4,4×10¹², 4,5×10¹², 4,6×10¹², 4,7×10¹², 4,8×10¹², 4,9×10¹², 5×10¹², 6×10¹², 7×10¹², 8×10¹², 9×10¹², 1×10¹³, 2×10¹³, 3×10¹³, 4×10¹³, 5×10¹³, 6×10¹³, 7×10¹³, 8×10¹³, 9×10¹³, 1×10¹⁴, 2×10¹⁴, 3×10¹⁴, 4×10¹⁴, 5×10¹⁴, 6×10¹⁴, 7×10¹⁴, 8×10¹⁴, 9×10¹⁴, 1×10¹⁵, 2×10¹⁵, 3×10¹⁵, 4×10¹⁵, 5×10¹⁵, 6×10¹⁵, 7×10¹⁵, 8×10¹⁵, 9×10¹⁵ или 1×10¹⁶ вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1×10¹³ вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 3×10¹² вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1,1×10¹² вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 3,7×10¹² вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 8×10¹¹ вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 2,6×10¹² вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 4,9×10¹² вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 0,8×10¹² вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 0,83×10¹² вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет максимальную итоговую дозу, которая может содержаться в ампуле.

[000108] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может предусматривать общую концентрацию на субъекта от приблизительно 1×10⁶ VG до приблизительно 1×10¹⁶ вг. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления доставка может предусматривать концентрацию композиции, составляющую приблизительно 1×10⁶, 2×10⁶, 3×10⁶, 4×10⁶, 5×10⁶, 6×10⁶, 7×10⁶, 8×10⁶, 9×10⁶, 1×10⁷, 2×10⁷, 3×10⁷, 4×10⁷, 5×10⁷, 6×10⁷, 7×10⁷, 8×10⁷, 9×10⁷, 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 1.5×10¹⁰, 2×10¹⁰, 3×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1,3×10¹¹, 2×10¹¹, 2,1×10¹¹, 2,2×10¹¹, 2,3×10¹¹, 2,4×10¹¹, 2,5×10¹¹, 2,6×10¹¹, 2,7×10¹¹, 2,8×10¹¹, 2,9×10¹¹, 3×10¹¹, 4×10¹¹, 5×10¹¹, 5,4×10¹¹, 6×10¹¹, 7×10¹¹, 7,1×10¹¹, 7,2×10¹¹, 7,3×10¹¹, 7,4×10¹¹, 7,5×10¹¹, 7,6×10¹¹, 7,7×10¹¹, 7,8×10¹¹, 7,9×10¹¹, 8×10¹¹, 9×10¹¹, 9,4×10¹¹, 1×10¹², 1,1 x10¹², 1,2×10¹², 1,3×10¹², 1,4×10¹², 1,5×10¹², 1,6×10¹², 1,7×10¹², 1,8×10¹², 1,9×10¹², 2×10¹², 2,3×10¹², 2,4×10¹², 3×10¹², 4×10¹², 4,1×10¹², 4,2×10¹², 4,3×10¹², 4,4×10¹², 4,5×10¹²,4,6×10¹², 4,7×10¹², 4,8×10¹², 4,9×10¹², 5×10¹², 6×10¹², 7×10¹², 8×10¹², 8,1×10¹², 8,2×10¹², 8,3×10¹², 8,4×10¹², 8,5×10¹², 8,6×10¹², 8,7×10¹², 8,8 x10¹², 8,9×10¹², 9×10¹², 1×10¹³, 2×10¹³, 3×10¹³, 4×10¹³, 5×10¹³, 6×10¹³, 7×10¹³, 8×10¹³, 9×10¹³, 1×10¹⁴, 2×10¹⁴, 3×10¹⁴, 4×10¹⁴, 5×10¹⁴, 6×10¹⁴, 7×10¹⁴, 8×10¹⁴, 9×10¹⁴, 1×10¹⁵, 2×10¹⁵, 3×10¹⁵, 4×10¹⁵, 5×10¹⁵, 6×10¹⁵, 7×10¹⁵, 8×10¹⁵, 9×10¹⁵ или 1×10¹⁶ вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1×10¹³ вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 3×10¹² вг/субъект. В качестве неограничивающего примера вводимая субъекту композиция имеет концентрацию, составляющую приблизительно 3×10¹¹ вг/субъект. В качестве неограничивающего примера вводимая субъекту композиция имеет концентрацию, составляющую приблизительно 9×10¹¹ вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 2,3×10¹¹ вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 7,2×10¹¹ вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 7,5×10¹¹ вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1,4×10¹² вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 4,8×10¹² вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 8,8×10¹² вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 2,3×10¹² вг/субъект.

[000109] В соответствии с одним вариантом осуществления эффективность дозы, пути введения и/или объема введения можно оценить с помощью различных способов, описываемых в настоящем документе, таких как без ограничения PET-визуализация, тест с нагрузкой L-DOPA (например, см. Forsayeth et al. 2006, Mol. Ther. 14(4): 571-577), оценки по шкале UPDRS и журналы пациентов. В качестве неограничивающего примера у субъекта после введения композиции с полинуклеотидом AADC может быть сниженная дискинезия или периоды сниженной дискинезии. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть снижение симптомов, связанных с болезнью Паркинсона, в том числе ограниченной подвижности и дискинезии. В качестве еще одного неограничивающего примера у субъекта может наблюдаться улучшению показателей периода «выключения» и двигательных флуктуаций. Улучшение может составлять по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или более 90%. Улучшение может продолжаться в течение нескольких минут (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или более 55), часов (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или более 24), дней (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более 7), недель (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или более 7), месяцев (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или более 11) или лет (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более 9).

[000110] В соответствии с одним вариантом осуществления выбор субъектов для введения описываемых в настоящем документе вирусных векторов и/или эффективности дозы, пути введения и/или объема введения можно оценить с помощью визуализации периваскулярных пространств (PVS), которые также известны как пространства Вирхова-Робина. PVS окружают артериолы и венулы, по мере их проникновения в паренхиму мозга, и они заполнены спинномозговой жидкостью (CSF)/интерстициальной жидкостью. PVS распространены в среднем мозге, BG и полуовальном центре. Без привязки к теории, PVS могут играть некоторую роль в нормальном выведении метаболитов, и была установлена их ассоциация с ухудшением когнитивных функций и некоторыми болезненными состояниями, в том числе с болезнью Паркинсона. Обычно PVS имеют нормальный размер, но они могут увеличиваться в размере при ряде болезненных состояний. Potter et al. (Cerebrovasc Dis. 2015 Jan; 39(4): 224-231; содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки) разработали способ ранжирования, при этом они исследовали весь спектр PVS и ранжировали PVS базальных ганглиев, полуовального центра и среднего мозга. Они использовали частоту и диапазон PVS, которые были использованы в работе Mac и Lullich et al. (J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2004 Nov;75(11):1519-23; содержание которой включено в данный документ в его полноте посредством ссылки) и Potter et al. разделили PVS базальных ганглиев и полуовального центра на 5 рангов: 0 (отсутствуют), 1 (1-10), 2 (11-20), 3 (21-40) и 4 (>40); и PVS среднего мозга на 2 ранга: 0 (не видимы) или 1 (видимы). Руководство пользователя для системы ранжирования по Potter et al. можно найти по следующей ссылке: www.sbirc.ed.ac.uk/documents/epvs-rating-scale-user-guide.pdf.

[000111] В соответствии с одним вариантом осуществления выбор субъектов для введения описываемых в настоящем документе вирусных векторов и/или эффективности дозы, пути введения и/или объема введения можно оценить с путем измерения с помощью позитронно-эмиссионной томографии (PET) нейровизуализационных биомаркеров, таких как без ограничения [¹⁸F]FDOPA. Нейровизуализационные биомаркеры, такие как [¹⁸F]FDOPA, можно применять для идентификации пораженных индивидуумов и/или можно применять для выявления нигростриального поражения до начала клинических проявлений. Кроме того, PET-критерии можно применять для категоризации субъектов по функциональности их нигростриальных нейронов (например, аномальной, нормальной или неопределенной функциональности нигростриальных нейронов) (Rachette et al. Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 2006 Apr 5; 141B(3): 245-249; содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки).

[000112] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, может иметь прогрессирующую PD и все еще отвечать на терапию леводопой, но субъект также испытывает рефрактерные с медицинской точки зрения двигательные осложнения (например, серьезные двигательные флуктуации и/или дискинезии, возникающие во время терапии леводопой и другой дофаминергической терапии, несмотря на корректировки и оптимизацию лечения лекарственными препаратами). Субъект может быть достаточно здоров для прохождения нейрохирургической процедуры, которая может быть определена способами, известными из уровня техники. В качестве неограничивающего примера субъект может соответствовать критериям отбора для глубокой стимуляции головного мозга (DBS). Субъект может иметь идиопатическую PD, быть в возрасте моложе 69 лет, иметь выраженные реакции на леводопу, иметь рефракторные к лечению лекарственными препаратами симптомы (например, двигательную флуктуацию и/или дискинезию) и/или иметь незначительную когнитивную дисфункцию или вообще ее не иметь.

[000113] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, также может страдать от деменции или когнитивного нарушения.

[000114] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, мог быть ранее подвергнут лечению с помощью такого же или схожего терапевтического средства. В соответствии с другим вариантом осуществления субъект мог быть подвергнут лечению с помощью терапевтического средства, для которого было показано уменьшение симптомов болезни Паркинсона.

[000115] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, мог не получить надлежащий полезный эффект от стандартной лекарственной терапии. В качестве неограничивающего примера субъект мог не отвечать на лечение. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть остаточное нарушение функций, несмотря на лечение.

[000116] В соответствии с одним вариантом осуществления субъекта, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, можно подвергать тестированию для оценки уровней нейромедиаторных аналитов для определения эффективности дозы. В качестве неограничивающего примера можно проанализировать нейромедиаторы CSF, активность AADC в плазме и/или VLA в моче.

[000117] В соответствии с одним вариантом осуществления субъекта, которому можно вводить дозу описываемого в настоящем документе полинуклеотида AADC, можно записывать на видео или аудио для отслеживания прогресса у субъекта в ходе курса лечения.

Комбинации

[000118] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC, можно применять в комбинации с одним или более другими терапевтическими, профилактическими, диагностическими или визуализирующими средствами. Под выражением «в сочетании с» не подразумевается, что средства нужно вводить одновременно и/или составлять для совместной доставки, хотя эти способы доставки находятся в пределах объема настоящего раскрытия. Композиции можно вводить одновременно с одним или более другими необходимыми терапевтическими средствами или медицинскими процедурами, до или после них. В целом, каждое средство будут вводить в дозе и/или по временному графику, определенным для каждого средства. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее раскрытие охватывает доставку фармацевтических, профилактических, диагностических или визуализирующих композиций в комбинации со средствами, которые могут повысить их биодоступность, снизить и/или модифицировать их метаболизм, подавить их выведение из организма и/или модифицировать их распределение в организме.

Доставка

[000119] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки вирионов AAV, описанных в Европейской патентной заявке № EP1857552, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.

[000120] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки белков с использованием векторов на основе AAV, описанных в Европейской патентной заявке № EP2678433, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.

[000121] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки молекул ДНК с использованием векторов на основе AAV, описанных в патенте США № US 5858351, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.

[000122] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки ДНК в кровоток, описанных в патенте США № US 6211163, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.

[000123] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки вирионов AAV, описанных в патенте США № US 6325998, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.

[000124] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза в центральную нервную систему, описанных в патенте США № US 7588757, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.

[000125] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза, описанных в патенте США № US 8283151, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.

[000126] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза с использованием вектора для доставки глутаматдекарбоксилазы (GAD), описанных в Международной патентной публикации № WO2001089583, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.

[000127] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза в нервные клетки, описанных в международной патентной публикации № WO2012057363, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.

[000128] Фармацевтические композиции с описанными в данном документе вирусными векторами могут быть охарактеризованы с помощью одного или более из биодоступности, терапевтического окна и/или объема распределения.

Биодоступность

[000129] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, при составлении в композиции со средствами для доставки/составления или средами, которые описаны в настоящем документе, могут иметь повышенную биодоступность по сравнению с композициями без средств для доставки, которые описаны в настоящем документе. В контексте настоящего описания термин «биодоступность» относится к системной доступности заданного количества определенного средства, вводимого субъекту. Биодоступность может быть оценена путем измерения площади под кривой (AUC) или максимальной концентрации в сыворотке или плазме (C_max) неизмененной формы соединения после введения соединения млекопитающему. AUC представляет собой определение площади под кривой, графически представляющей концентрацию соединения в сыворотке или плазме по оси ординат (оси Y) в зависимости от времени по оси абсцисс (оси X). Как правило, AUC для определенного соединения может быть рассчитана при помощи способов, известных специалистам в данной области техники и описанных в G. S. Banker, Modern Pharmaceutics, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, v. 72, Marcel Dekker, New York, Inc., 1996, содержание которой включено в данный документ при помощи ссылке во всей своей полноте.

[000130] Значения C_max представляют собой максимальные концентрации соединений, достигаемые в сыворотке или плазме субъекта после введения соединений субъекту. Значения C_max определенных соединений могут быть измерены при помощи способов, известных специалистам в данной области техники. В контексте настоящего описания выражения «повышение биодоступности» или «улучшение фармакокинетики» относятся к действиям, которые могут повышать системную доступность вирусного вектора согласно настоящему изобретению (по результатам измерения по AUC, C_max или C_min) у субъекта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления такие действия могут предусматривать совместное введение с одним или более средствами для доставки, которые описаны в данном документе. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биодоступность вирусных векторов может повышаться по меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 95% или приблизительно на 100%.

Терапевтическое окно

[000131] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, при составлении с одним или более средствами для доставки, которые описаны в настоящем документе, могут характеризоваться увеличением терапевтического окна введения соединения и/или композиции по сравнению с терапевтическим окном вирусных векторов, вводимых без одного или более средств для доставки, которые описаны в настоящем документе. В контексте настоящего описания термин «терапевтическое окно» относится к диапазону концентраций в плазме или диапазону уровней терапевтически активного вещества в месте действия с высокой вероятностью получения терапевтического эффекта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтические окна вирусных векторов при введении в составе могут повышаться по меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 95% или приблизительно на 100%.

Объем распределения

[000132] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, при составлении с одним или более средствами для доставки, которые описаны в настоящем документе, могут характеризоваться улучшенным объемом распределения (V_распр.), например, сниженным или направленным, относительно составов без одного или более средств для доставки, которые описаны в настоящем документе. V_распр. относится к количеству средства в организме по отношению к концентрации того же самого средства в крови или плазме. В контексте настоящего описания термин «объем распределения» относится к объему жидкости, которое потребовалось бы для содержания всего количества средства в организме в такой же концентрации, что и в крови и в плазме: V_распр. равняется количеству средства в организме/концентрации средства в крови или плазме. Например, для дозы 10 мг заданного средства и концентрации в плазме 10 мг/л объем распределения составил бы 1 литр. Объем распределения отражает степень, в которой средство присутствует во внесосудистой ткани. Большие объемы распределения отражают тенденцию средств связываться с тканевыми компонентами, а не с белками плазмы. В клинических условиях V_распр. может быть использован для определения нагрузочных доз для достижения концентраций в равновесном состоянии. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления объемы распределения композиций с вирусными векторами по настоящему изобретению при совместном введении с одним или более средствами доставки, которые описаны в данном документе, могут снижатьсяпо меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%.

Наборы и устройства

[000133] Настоящее изобретение предлагает ряд наборов для удобного и/или эффективного осуществления способов по настоящему изобретению. Как правило, наборы будут содержать достаточные количества и/или числа компонентов, с тем чтобы позволить пользователю осуществить несколько процедур обработки субъекта(субъектов) и/или провести несколько экспериментов.

[000134] В состав набора можно включить любой из векторов AADC, конструкций AADC, полинуклеотидов AADC или полипептидов AADC согласно настоящему изобретению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы могут дополнительно включать реагенты и/или инструкции для получения и/или синтеза соединений и/или композиций по настоящему изобретению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы также могут включать один или более буферов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы по настоящему изобретению могут включать компоненты для получения массивов или библиотек белков или нуклеиновых кислот и, таким образом, могут включать, например, твердые подложки.

[000135] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления компоненты наборов могут быть упакованы либо в водных средах, либо в лиофилизированной форме. Емкость в наборе обычно будет включать по меньшей мере одну ампулу, пробирку, колбу, бутылку, шприц или другую емкость, в которую можно поместить компонент и предпочтительно в виде соответствующей аликвоты. В случае, если в наборе присутствует более одного компонента (метящий реагент и метка могут быть упакованы вместе), наборы, как правило, также могут содержать вторые, третьи или другие дополнительные емкости, в которые могут быть отдельно помещены дополнительные компоненты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы также могут содержать вторую емкость для хранения стерильных фармацевтически приемлемых буферов и/или других разбавителей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления в одной или более ампулах могут содержаться различные комбинации компонентов. Наборы по настоящему изобретению также обычно могут включать средства хранения соединений и/или композиций по настоящему изобретению, например, емкости для белков, нуклеиновых кислот и любых других реагентов исключительно для коммерческой продажи. Такие емкости могут включать емкости для инъекций или пластиковые емкости, полученные методом выдувания, в которых хранятся необходимые ампулы.

[000136] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления компоненты наборов представлены в одном и/или более жидких растворах. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления жидкими растворами являются водные растворы, при этом стерильные водные растворы являются особенно предпочтительными. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления компоненты наборов могут быть представлены в виде сухого(сухих) порошка(порошков). Если реагенты и/или компоненты представлены в виде сухих порошков, то такие сухие порошки могут быть разведены при добавлении подходящих объемов растворителя. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предполагается, что растворители также могут быть представлены в другой емкости. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления метящие красители представлены в виде сухих порошков. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предполагается, что 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 микрограмм или по меньшей мере или по большей мере эти количества сухого красителя представлены в наборах по настоящему изобретению. В соответствии с такими вариантами осуществления краситель может также быть ресуспендирован в любом подходящем растворителе, таком как DMSO.

[000137] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы могут включать инструкции для использования компонентов наборов, а также применения любого другого реагента, не включенного в набор. Инструкции могут включать вариации, которые могут быть осуществляться.

Устройства

[000138] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединения AADC и/или композиции AADC согласно настоящему изобретению можно объединять в комбинации с устройством, нанести на него или поместить в него. Устройства могут включать без ограничения стенты, помпы и/или другое имплантируемое терапевтическое устройство. Кроме того, соединения AADC и/или композиции AADC можно доставлять субъекту при использовании субъектом компрессионного устройства, такое как без ограничения компрессионное устройство для уменьшения вероятности тромбоза глубоких вен (DVT) у субъекта.

[000139] Настоящее изобретение относится к устройствам, которые могут содержать вирусные векторы, которые кодируют одну или более молекул полезного груза, представляющих собой полинуклеотид AADC. Эти изделия содержат в стабильном составе вирусные векторы, которые могут быть незамедлительно доставлены нуждающемуся в том субъекту, такому как пациент-человек.

[000140] Устройства для введения можно использовать для доставки вирусных векторов, содержащих полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, согласно режиму однократного, множественного или разделенного дозирования, который раскрыт в настоящем документе.

[000141] Предусмотрены способы и устройства, известные в данной области техники для многократного введения в клетки, органы и ткани для применения в сочетании со способами и композициями, раскрытыми в данном документе в виде вариантов осуществления настоящего изобретения. В их число входят, например, такие способы и устройства, в которых предусмотрено использование нескольких игл, гибридные устройства с использованием, например, полостей или катетеров, а также устройства с использованием механизмов, работающих от источников тепла, электрического тока или излучения.

[000142] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение АADC и/или композицию AADC согласно настоящему изобретению можно доставить с помощью устройства, такого как без ограничения стент, пробирка, катетер, трубка, трубочка, игла и/или капилляр. Способы применения таких устройств описаны в настоящем документе и известны из уровня техники.

[000143] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью систем доставки, которые объединяют терапию и визуализацию с контролем по изображениям, такие как без ограничения лазерные, MRgFUS, эндоскопические устройства и устройства для роботизированной хирургии.

[000144] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью системы для нейровмешательства CLEARPOINT® от MRI Interventions, Inc. Систему для нейровмешательства CLEARPOINT® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов или устройств для введения. Система для нейровмешательства CLEARPOINT® помогает обеспечивать стереотаксический контроль при размещении приборов или устройств и манипуляции с ними в ходе планирования и осуществления неврологических процедур.

[000145] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью роботизированной системы NEUROMATE® для стереотаксиса от Renishaw PLC. Систему NEUROMATE® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. В качестве неограничивающего примера систему NEUROMATE® можно применять с держателями головы, локализаторами изображения CT, каркасными креплениями, устройствами дистанционного управления и программным обеспечением.

[000146] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью устройства Elekta MICRODRIVE™ от Elekta AB. Устройство MICRODRIVE™ можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. В качестве неограничивающего примера устройство MICRODRIVE™ можно применять для размещения электродов (например, при имплантации электродов для микроэлектродной записи (MER), макростимуляции и глубокой стимуляции мозга (DBS)), имплантации катетеров, трубок или электродов для DBS с использованием крестообразных и A-P фиксаторов для проверки положения, биопсий, инъекций и аспираций, воздействия на очаги поражения головного мозга, контроля эндоскопа и радиохирургии GAMMA KNIFE®.

[000147] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью амагнитной рамки для стереотаксиса AXIIIS® от MONTERIS® Medical, Inc. Амагнитную рамку для стереотаксиса AXIIIS® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. Амагнитная рамка для стереотаксиса AXIIIS® является устройством для выравнивая траектории, которое можно применять для лазерной коагуляции, биопсий, размещения катетера, имплантации электрода, эндоскопии и удаления тромбов. Амагнитная рамка обеспечивает 360-градусную область взаимодействия и с помощью простой регулировки обеспечивает доступ к множеству внутричерепным целевым точкам. Кроме того, амагнитная рамка совместима с MRI.

[000148] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью системы INTEGRA™ CRW® от Integra LifeSciences Corporation. Систему INTEGRA™ CRW® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. Систему CRW® можно использовать для различных целей, таких как без ограничения стереотаксическая хирургия, микрохирургия, катетеризация и биопсия. Система CRW® выполнена так, чтобы для использующих такую систему обеспечивалась точность (например, крыльчатые затворные винты, наличие шкалы верньера, двойная фиксация болта и жесткая рамка).

[000149] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью системы-решения EPOCH® от Stereotaxis, Inc., которая может включать магнитную навигационную систему NIOBE® ES, роботизированную навигационную систему VDRIVE® и/или информационное решение ODYSSEY® (все от Stereotaxis, Inc.). Систему-решение EPOCH® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. В качестве неограничивающего примера магнитную навигационную систему NIOBE® ES можно применять для проведения взаимодействия с субъектом с высокой степенью точности. В качестве другого неограничивающего примера магнитную систему NIOBE® ES можно применять с роботизированной системой навигации VDRIVE® для обеспечения точного движения и стабильности.

[000150] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью рабочей станции NeuroStation, в работе которой применяются бескаркасные стереотаксические способы, обеспечивающие визуальный контроль для таких целей, как без ограничения планирование хирургической операции, биопсии, краниотомии, эндоскопия, ультразвуковая и лучевая терапия во время хирургической операции.

[000151] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью роботизированной стереотаксической системы, такой как без ограничения устройство, описанное в патенте США № 5078140, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки. Для точного ориентирования хирургических инструментов или другого оборудования, используемого для осуществления процедуры, можно применять манипулятор устройства.

[000152] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью автоматической системы доставки, такой как без ограничения устройство, описанное в патенте США № 5865744, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки. На основе изображений, собранных с помощью системы доставки, компьютер корректирует введение иглы на соответствующую глубину для конкретного субъекта.

[000153] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту, который одновременно применяет в ходе введения и/или применяет в течение периода времени до и/или после введения компрессионное устройство, такое как без ограничения компрессионное устройство, которое уменьшает вероятность тромбоза глубоких вен (DVT) у субъекта. Компрессионное устройство можно применять по меньшей мере за 5 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов или более 8 часов до введения субъекту полинуклеотидов AADC. Компрессионное устройство можно применять по меньшей мере через 5 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 13 часов, 14 часов, 15 часов, 16 часов, 17 часов, 18 часов, 19 часов, 20 часов, 21 час, 22 часа, 23 часов, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 1 неделю, 2 недели, 3 недели или через месяц после введения полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера компрессионное устройство применяют одновременно с процедурой доставки полинуклеотидов AADC. В качестве другого неограничивающего примера компрессионное устройство применяют до введения полинуклеотидов AADC. В качестве другого неограничивающего примера компрессионное устройство применяют после введения полинуклеотидов AADC. В качестве другого неограничивающего примера компрессионное устройство применяют в ходе или до введения полинуклеотидов AADC.

[000154] В число неограничивающих примеров компрессионных устройств входят компрессионное устройство периодического действия ActiveCare+SFT, пневматическое компрессионное устройство ActiveCare+SFT, DVTlite's Venowave, KCl системный компрессор, система Aircast VenaFlow, пневматическое оборудование для компрессионной терапии от SCD Compression System Express или Bio Compression Systems, Inc. (например, помпу можно выбрать из модели модели SC-2004, модели SC-2004-FC, модели SC-3004, модели SC-3004-FC, модели SC-2008, модели SC-2008-DL, модели SC-3008-T, системы BioCryo, модели IC-ВАР-DL или multi-flo DVT combo IC_1545-DL, а используемое с помпой надеваемое на тело изделие может быть 4-камерным, 8-камерным, надеваемым на тело изделием BioCryo, Multi-Flo или BioArterial).

Заболевания ЦНС

[000155] Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению можно применять для лечения, профилактики или облегчения любого заболевания или нарушения, характеризующегося аберрантной или нежелательной экспрессией целевой последовательности. В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к композициям, в частности, к молекулам нуклеиновых кислот, например, полинуклеотидам, кодирующим AADC, для применения при лечении болезни Паркинсона.

[000156] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды согласно настоящему изобретению можно применять для лечения, профилактики или облегчения любого заболевания или нарушения, характеризующегося аберрантной или нежелательной экспрессией целевой последовательности, при этом полезный груз, т. е. AADC, замещается альтернативным полезным грузом.

[000157] Настоящее раскрытие относится к способу лечения заболевания, нарушения и/или состояния у субъекта-млекопитающего, в том числе человека-субъекта, предусматривающему введение субъекту любой из вирусных частиц, например, описываемых в настоящем документе AAV, полинуклеотидов AAV или геномов AAV (т. е. вирусных геномов или «вг»), или введение субъекту частицы, содержащей указанный полинуклеотид AAV или геном AAV, или введение субъекту любой из описанных композиций, в том числе фармацевтических композиций.

[000158] В соответствии с одним вариантом осуществления заболевание, нарушение и/или состояние представляет собой неврологическое заболевание, нарушение и/или состояние. Заболевания ЦНС могут быть заболеваниями, которые затрагивают любой компонент головного мозга (в том числе полушария головного мозга, таламус, ствол головного мозга и мозжечок) или спинного мозга.

[000159] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусные частицы согласно настоящему изобретению, посредством доставки функционального полезного груза, который является терапевтическим продуктом, который может модулировать уровень или функцию генного продукта в ЦНС, можно применять для лечения нейродегенеративных заболеваний и/или заболеваний или нарушений, которые характеризуются нейродегенерацией, нервно-мышечных заболеваний, лизосомных заболеваний, травмы, травм костного мозга, боли (включая невропатическую боль), злокачественных опухолей нервной системы, демиелинизирующих заболеваний, аутоиммунных заболеваний нервной системы, нейротоксических синдромов, нарушений сна, генетических нарушений головного мозга и нарушений развития ЦНС. Функциональный полезный груз может облегчить или уменьшить симптомы, которые являются результатом аномального уровня и/или функции генного продукта (например, отсутствие или дефект белка) у нуждающегося в том субъекта или, в противном случае, обеспечивает полезный эффект в отношении нарушения ЦНС у нуждающегося в том субъекта.

[000160] В качестве неограничивающих примеров терапевтические продукты, доставляемые с помощью вирусных частиц согласно настоящему изобретению, могут включать без ограничения факторы роста и трофические факторы, цитокины, гормоны, нейромедиаторы, ферменты, антиапоптические факторы, ангиогенные факторы, а также любой белок, мутантная форма которого известна при патологических нарушениях, такой как белок «выживания двигательных нейронов» (SMN); антисмысловую РНК или средства для RNAi информационных РНК, кодирующих белки, представляющие терапевтический интерес при любом из рассматриваемых в настоящем документе заболеваний ЦНС; или микроРНК, которые функционируют при сайленсинге генов и посттранскрипционной регуляции экспрессии генов в ЦНС (например, специфическая для головного мозга Mir-128a, см., Adlakha and Saini, Molecular cancer, 2014, 13:33). Например, средство для RNAi, целью которого является фермент супероксиддисмутаза, может быть упаковано в вирусные частицы согласно настоящему изобретению для лечения ALS.

[000161] Факторы роста и трофические факторы могут включать без ограничения мозговой фактор роста (BDNF), эпидермальный фактора роста (EGF), основной фактор роста фибробластов (bFGF), цилиарный нейротрофический фактор (CNTF), кортикотропин-рилизинг-фактор (CRF), глиальный фактор роста (GDNF), инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1), фактор роста нервов (NGF), нейротрофин-3 (NT-3), нейротрофин-4 (NT-4) и фактор роста эндотелия сосудов (VEGF). Цитокины могут включать интерлейкин-10 (IL-10), интерлейкин-6, интерлейкин-8, хемокин CXCL12 (SDF-1), TGF-бета и фактор роста и дифференцировки (GDF-1/10).

[000162] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут быть нейродегенеративными нарушениями, включая без ограничения болезни Альцгеймера (AD); боковой амиотрофический склероз (ALS); болезнь Крейтцфельда-Якоба (CJD); болезнь Хантингтона (HD); атаксия Фридрейха (FA); болезнь Паркинсона (PD); множественную системную атрофию (MSA); спинальную мышечную атрофию (SMA), рассеянный склероз (MS); первичную прогрессирующую афазию; прогрессирующий надъядерный паралич (PSP); деменцию; злокачественную опухоль головного мозга, нейродегенеративные заболевания, энцефалит, эпилепсию, генетические нарушения головного мозга, которые вызывают нейродегенерацию, пигментный ретинит (RP), мальформации головы и головного мозга, гидроцефалию, инсульт, прионную болезнь, детский нейрональный цероид-липофусциноз (INCL) (нейродегенеративное заболевание детей, вызванное дефицитом лизосомального фермента пальмитоил-протеинтиоэстеразы-1 (PPT1)) и другие.

[000163] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусные частицы согласно настоящему изобретению можно применять для лечения заболеваний, которые ассоциированы с нарушениями роста и развития ЦНС, т. е. нарушений неврологического развития. В соответствии с некоторыми аспектами такие нарушения неврологического развития могут быть вызванными генетическими мутациями, включая без ограничения синдром ломкой Х-хромосомы (вызываемый мутациями в гене FMR1), синдром Дауна (вызываемый трисомией 21-й хромосомы), синдром Ретта, синдром Уильямса, синдром Эйнджелмена, синдром Смита-Магениса, синдром ATR-Х, синдром Барта, иммунную дисфункцию и/или инфекционные заболевания в раннем детстве, такие как хорея Сиденгама, шизофрения, спровоцированная врожденным токсоплазмозом, синдром врожденной краснухи, нарушения обмена веществ, такие как сахарный диабет и фенилкетонурия; нарушения питания и/или травма головного мозга, аутизм и его разнообразные формы.

[000164] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусные частицы согласно настоящему изобретению можно применять для лечения опухоли в ЦНС, включая без ограничения невриному слухового нерва, астроцитому (I, II, III и IV класса), хордому, лимфому ЦНС, краниофарингиому, глиомы (например, глиому ствола головного мозга, эпендимому, глиому зрительного нерва, субэпендимому), медуллобластому, менингиому, метастатические опухоли головного мозга, олигодендроглиому, опухоли гипофиза, примитивную нейроэктодермальную опухоль (PNET) и шванному.

[000165] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут быть функциональными неврологическими нарушениями с двигательными и/или сенсорными симптомами, которые имеют неврологическое происхождение в ЦНС. В качестве неограничивающих примеров функциональные неврологические нарушения могут представлять собой хроническую боль, судороги, нарушения речи, непроизвольные движения и нарушения сна.

[000166] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут представлять собой нарушения белого вещества (группа заболеваний, которая затрагивает нервные волокна в ЦНС), включая без ограничения болезнь Пелицеуса-Мерцбахер, гипомиелинизацию с атрофией базальных ганглиев и мозжечка, синдром Айкарди-Гутьереса, мегалэнцефалическую лейкоэнцефалопатию с подкорковыми кистами, врожденную мышечную дистрофию, миотоническую дистрофию, болезнь Вильсона, синдром Лоу, синдром Шегрена-Ларссона, PIBD или синдром Тэй, болезнь Коккейна, церебротендинальный ксантоматоз, синдром Зельвегера, неонатальную адренолейкодистрофию, детскую болезнь Рефсума, синдром, подобный синдрому Зеллвегера, псевдо-синдром Зельвегера, псевдо-неонатальную адренолейкодистрофию, бифункциональный дефицит белка, адренолейкодистрофию, сцепленную с Х-хромосомой, и адреномиелоневропатию и болезнь Рефсума.

[000167] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут представлять собой лизосомальные болезни накопления (LSD), вызванные неспособностью клеток в ЦНС разрушать конечные продукты метаболизма, включая без ограничения болезнь Ниманна-Пика (LSD, развивающуюся в результате наследственного дефицита кислой сфингомиелиназы (АНМ); метахроматическую лейкодистрофию (MLD) (LSD, которая характеризуется накоплением сульфатидов в глиальных клетках и нейронах, в результате наследственного дефицита арилсульфатазы А (ARSA)); глобоидную-клеточную лейкодистрофию (GLD) (LSD, вызываемую мутациями в галактозилцерамидазы); болезнь Фабри (LSD, вызываемую мутациями в гене альфа-галактозидазы А (GLA)); болезнь Гоше (вызываемую мутациями в гене бета-глюкоцереброзидазы (GBA)); ганглиозидоз GM1/GM2; мукополисахаридоз; болезнь Помпе и неврональный цероид-липофусциноз.

[000168] В соответствии с одним вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является болезнь Паркинсона. В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения болезни Паркинсона полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на AADC или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения болезни Паркинсона. В качестве неограничивающего примера состоянием является ранняя стадия болезни Паркинсона. В качестве другого неограничивающего примера состоянием является поздняя стадия болезни Паркинсона.

[000169] В соответствии с одним вариантом осуществления субъектом является пациент-человек, который имеет минимальный показатель двигательной активности от приблизительно 30 до максимального показателя приблизительно 100, от приблизительно 10 до максимального показателя приблизительно 100, от приблизительно 20 до максимального показателя приблизительно 100 в унифицированной оценочной шкале болезни Паркинсона.

[000170] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта была диагностирована болезнь Паркинсона в пределах последних 5 лет до начала лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций. В качестве неограничивающего примера у субъекта могла быть диагностирована болезнь Паркинсона в пределах недели, 2 недель, 3 недель, 4 недель, 5 недель, 6 недель, 7 недель, 8 недель, 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев, 13 месяцев, 14 месяцев, 15 месяцев, 16 месяцев, 17 месяцев, 18 месяцев, 1 года, 2 лет, 3 лет, 4 лет или менее 5 лет до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций.

[000171] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта была диагностирована болезнь Паркинсона за 5-10 лет до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций. В качестве неограничивающего примера у субъекта могла быть диагностирована болезнь Паркинсона за 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 или 10 лет до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций.

[000172] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта была диагностирована болезнь Паркинсона за более чем 10 лет до начала лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций. В качестве неограничивающего примера у субъекта могла быть диагностирована болезнь Паркинсона за 10,5, 11, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5, 20, 20,5, 21, 21,5, 22, 22,5, 23, 23,5, 24 или более чем 24 года до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций.

[000173] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описываемой в настоящем документе композиции наблюдали изменение двигательных симптомов, таких как формы тремора и движений. Неограничивающие примеры форм тремора включают односторонние или двусторонние легкие формы тремора, двусторонние или средне-умеренные формы тремора или тяжелые формы тремора. Неограничивающие примеры движений включают мягкую брадикинезию, умеренную брадикинезию, тяжелую брадикинезию и утреннюю акинезию.

[000174] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть изменения равновесия, такие как без ограничения нарушение равновесия, нарушение установочных рефлексов, существенное нарушение или отсутствие равновесия.

[000175] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта может быть ухудшенное качество жизни. В качестве неограничивающего примера у субъекта может умеренно затрагиваться качество его жизни, например, он может испытывать некоторые ограничения в повседневной деятельности. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть качество жизни, которое ухудшилось по причине болезни.

[000176] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до ведения описываемой в настоящем документе композиции наблюдали изменение недвигательных симптомов. В качестве неограничивающего примера у субъекта до введения описываемой в настоящем документе композиции может быть легкое-умеренное когнитивное нарушение. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть значительное когнитивное нарушение, такое как деменция, которая также может включать поведенческие нарушения психического равновесия, такие как галлюцинации.

[000177] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описанных в данном документе композиций может быть удовлетворительная реакция с ограниченными флуктуациями на один или более дофаминергических лекарственных препаратов.

[000178] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описанных в данном документе композиций могут быть двигательные флуктуации, обуславливающие легкое-умеренное ограничение жизнедеятельности, на один или более дофаминергических лекарственных препаратов.

[000179] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описанных в данном документе композиций могут быть рефракторные с медицинской точки двигательные флуктуации, состоящие из «истощения» и/или индуцированных леводопой дискинезий, обуславливающих значительное ограничение жизнедеятельности.

[000180] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть умеренные симптомы, ассоциированные с болезнью Паркинсона, такие как без ограничения отсутствие диагностированного за последние 5 лет когнитивного нарушения, приемлемая реакция с ограниченными флуктуациями на один или более дофаминергических лекарственных препаратов, односторонние или двусторонние легкие формы тремора, незначительное или полное отсутствие влияния на качество жизни и/или отсутствие нарушения равновесия.

[000181] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть умеренные симптомы, ассоциированные с болезнью Паркинсона, такие как без ограничения легкое-умеренное когнитивное нарушение, первые признаки нарушения равновесия и установочных рефлексов, двигательные флуктуации, вызывающие легкое-умеренное ограничение жизнедеятельности, на один или более дофаминергических лекарственных препаратов, диагностированные за последние 5-10 лет двусторонние или средне-умеренные формы тремора, умеренная брадикинезия, и/или субъект испытывает некоторые ограничения в повседневной деятельности.

[000182] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть дополнительные симптомы, ассоциированные с болезнью Паркинсона, такие как без ограничения, если болезнь Паркинсона была диагностирована более чем 10 лет до того, средние рефракторные двигательные флуктуации, истощение и/или индуцированная леводопой дискинезия, вызывающая значительное ограничение жизнедеятельности, тяжелые формы тремора, значительное нарушение равновесия и/или отсутствие равновесия, значительное нарушение когнитивных функций (например, деменция с нарушениями поведения или без них), тяжелая брадикинезия, качество жизни, которое заметно ухудшилось с болезнью и/или утренней акинезией.

[000183] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект был направлен к специалисту по двигательным расстройствам (MDS), но не подвергался глубокой стимуляции головного мозга.

[000184] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект применяет DUOPA™ в комбинации с описанными в настоящем документе композициями. В качестве неограничивающего примера у субъекта может быть успешным лечение с помощью только DUOPA™. В качестве неограничивающего примера у субъекта может не быть успешным или может быть лишь частично успешным лечение с помощью только DUOPA™.

[000185] В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является атаксия Фридрейха. В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения атаксии Фридрейха полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на фратаксин или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения атаксии Фридрейха.

[000186] В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является боковой амиотрофический склероз (ALS). В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения ALS полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на hRNA, miRNA, siRNA, RNAi для SOD1 или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения ALS.

[000187] В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является болезнь Хантингтона. В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения болезни Хантингтона полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на hRNA, miRNA, siRNA, RNAi для Htt или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения болезни Хантингтона.

[000188] В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением или состоянием является спинальная мышечная атрофия (SMA). В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения SMA полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на SMN или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения SMA.

Циркадный ритм и циклы сон-бодрствование

[000189] Циркадный ритм представляет собой физические, психические и поведенческие изменения, которые имеют склонность соответствовать 24-часовому циклу. Циркадные ритмы могут влиять на циклы сон-бодрствование, секрецию гормонов, температуру тела и другие функции организма. Изменения циркадного ритма могут вызывать состояния и/или нарушения, такие как без ограничения нарушения сна (например, инсомнию), депрессию, биполярное расстройство, сезонное аффективное расстройство, ожирение и диабет.

[000190] В соответствии с одним вариантом осуществления описываемые в настоящем документе полинуклеотиды AADC можно применять для лечения инсомнии.

[000191] Цикл сон-бодрствование включает периоды сна и периоды бодрствования. Как правило, в 24-часовом периоде общее количество часов сна меньше, чем общее количество часов бодрствования. В качестве неограничивающего примера цикл сон-бодрствование включает 7-9 часов сна и 15-17 часов бодрствования. В качестве неограничивающего примера цикл сон-бодрствование включает 8 часов сна и 16 часов бодрствования. В качестве неограничивающего примера цикл сон-бодрствование включает 8-10 часов сна и 14-16 часов бодрствования.

[000192] В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта улучшают путем введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC.

[000193] В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта регулируют путем введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера регуляция может представлять собой коррекцию большего количества периодов сна, имеющих место за ночь, и меньшего количества имеющих место периодов сна.

[000194] В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта, которому вводят описываемые в настоящем документе полинуклеотиды AADC, улучшается по сравнению с циклом сон-бодрствование у субъекта до введения полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера субъект имеет увеличенный период сна и уменьшенный период бодрствования. В качестве неограничивающего примера субъект имеет уменьшенный период сна и увеличенный период бодрствования.

[000195] В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта, которому вводят описываемые в настоящем документе полинуклеотиды AADC, регулируется по сравнению с циклом сон-бодрствование у субъекта до введения полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера длительность периодов сна и периодов бодрствования может быть приблизительно одинаковой (например, +/- 1 час) на протяжении по меньшей мере 2 дней. В качестве еще одного неограничивающего примера длительность периодов сна и периодов бодрствования, в случае 24 часового периода, может варьировать в пределах 10 минут, 15 минут, 20 минут, 25 минут, 30 минут, 35 минут, 40 минут, 45 минут, 50 минут, 55 минут, 1 часа, 1,5 часа или 2 часов от предыдущего 24-часового периода.

[000196] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал сна с быстрым движением глаз (REM), который субъект переживает в 24-часовом периоде, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. REM-сон, как правило, рассматривают как активный период сна, характеризуемый интенсивной активностью головного мозга, при котором мозговые волны являются динамичными и десинхронизированными. Взрослый человек в среднем проводит приблизительно 20-25% своего общего суточного периода сна в REM-сне. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.

[000197] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал не-REM (NREM) сна, который субъект переживает в 24-часовом периоде, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. NREM-сон, как правило, характеризуется снижением физиологической активности, поскольку мозговые волны, измеренные с помощью EEG, становятся медленнее и имеют большую амплитуду. NREM содержит четыре стадии: стадия 1 представляет собой время сомнолентности или перехода от бодрствования к засыпанию, при котором мозговые волны и мышечная активность начинают замедляться; стадия 2 представляет собой период легкого сна, в течение которого останавливается движение глаз, а мозговые волны замедляются со случайными вспышками быстрых волн (иногда называемых сонными веретенами); стадия 3 и стадия 4 (совместно называемые медленноволновым сном) характеризуются наличием медленных мозговых волн (дельта-волн), чередующихся с меньшими, более быстрыми волнами, при этом движения глаз отсутствуют. Взрослый человек в среднем проводит приблизительно 75-80% своего общего суточного периода сна в NREM-сне и приблизительно половину своего общего суточного времени сна в стадии 2 NREM-сна.

[000198] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.

[000199] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал стадии 1 NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.

[000200] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал стадии 2 NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.

[000201] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал стадии 3 и 4 NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.

[000202] В соответствии с одним вариантом осуществления периоды циклов NREM и REM более согласованы у субъекта после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. Обычно циклы NREM и REM чередуются каждые 90-110 минут четыре-шесть раз за ночь.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

[000203] В различных местах настоящего описания заменители соединений по настоящему раскрытию раскрыты в группах или в диапазонах. В частности предполагается, что настоящее раскрытие включает в себя все без исключения отдельные подкомбинации членов таких групп и диапазонов.

[000204] Приблизительно: в контексте настоящего описания термин «приблизительно» означает +/- 10% от указанного значения.

[000205] Активность: в контексте настоящего описания термин «активность» относится к состоянию, при котором нечто происходит и осуществляется. Описываемые в настоящем документе композиции могут обладать активностью, и эта активность может участвовать в одном или более биологических событий.

[000206] Аденоассоциированный вирус: термин «аденоассоциированный вирус» или «AAV» в контексте настоящего описания относится к представителям рода Dependovirus, в том числе к любой частице, последовательности, гену, белку или их производному компоненту. В контексте настоящего описания термин «частица AAV» содержит капсид и полинуклеотид. Частица AAV может быть получена из любого описываемого в настоящем документе или известного из уровня техники серотипа, в том числе из комбинаций серотипов (т. е. «псевдотипированный» AAV), или из различных геномов (например, одноцепочечный или самокомплементарный). Кроме того, частица AAV может быть дефектной по репликации и/или подвергшейся целенаправленному воздействию.

[000207] Вводимый в комбинации: в контексте настоящего описания термин «вводимый в комбинации» или «комбинированное введение» означает, что два или более средства (например, AAV) вводят субъекту в одно и то же время или в пределах такого интервала, чтобы могло иметь место перекрытие эффекта от каждого средства на пациента, и/или чтобы субъект в некоторый момент времени одновременно подвергался воздействию обоих средств. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления их вводят в пределах приблизительно 60, 30, 15, 10, 5 или 1 минуты друг от друга или в пределах приблизительно 24 часов, 12 часов, 6 часов, 3 часов от по меньшей мере одной дозы одного или более других средств. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления введение происходит согласно перекрывающимся режимам дозирования. В контексте настоящего описания термин «режим дозирования» относится к множеству разделенных по времени доз. Такие дозы могут вводиться через равные промежутки времени или могут включать один или более перерывов при введении. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления интервал между введением средств очень незначителен, поэтому достигается комбинаторный (например, синергический) эффект.

[000208] Ослабление: в контексте настоящего описания термины «ослабление» или «ослабляющий» относятся к снижению тяжести по меньшей мере одного показателя состояния или заболевания. Например, в контексте нейрогенеративного заболевания, ослабление включает уменьшение потери нейронов.

[000209] Животное: в контексте настоящего описания термин «животное» относится к любому представителю царства Животные. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления «животное» относится к людям на любой стадии развития. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления «животное» относится к отличным от человека животным на любой стадии развития. В соответствии с определенными вариантами осуществления отличным от человека животным человека является млекопитающее (например, грызун, мышь, крыса, кролик, обезьяна, собака, кошка, овца, крупный рогатый скот, примат или свинья). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления животные включают без ограничения млекопитающих, птиц, рептилий, амфибий, рыб и червей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления животным является трансгенное животное, животное, полученное методами генной инженерии, или клон.

[000210] Антисмысловая цепь: в контексте настоящего описания термины «антисмысловая цепь», или «первая цепь», или «направляющая цепь» молекулы siRNA относится к цепи, которая практически комплементарна участку из приблизительно 10-50 нуклеотидов, например, из приблизительно 15-30, 16-25, 18-23 или 19-22 нуклеотидов, в мРНК гена, подвергающемуся целенаправленному воздействию с целью сайленсинга. Антисмысловая цепь или первая цепь имеет последовательность, в достаточной степени комплементарную последовательности необходимой целевой мРНК для непосредственного мишень-специфического сайленсинга, например, комплементарную в достаточной степени для запуска разрушения необходимой целевой мРНК с помощью аппарата или процесса RNAi.

[000211] Примерно: в контексте настоящего описания термин «примерно» или «приблизительно», применительно к одному или более представляющим интерес значениям, относится к значению, которое является схожим с приведенным эталонным значением. В соответствии с определенными вариантами осуществления термин «примерно» или «приблизительно» относится к диапазону значений, которые находятся в пределах 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или менее в любом направлении (больше или меньше) от указанного референтного значения, если только не указано иное или не очевидно иное из контекста (кроме случаев, когда такое число превышало бы 100% от возможного значения).

[000212] Ассоциированный с: в контексте настоящего описания термины «ассоциированный с», «конъюгированный», «соединенный», «прикрепленный» и «связанный», при использовании в отношении двух или более фрагментов, означают, что фрагменты физически ассоциированы или соединены друг с другом, либо непосредственно, либо посредством одного или более дополнительных фрагментов, которые служат связывающим средством, с образованием структуры, которая является достаточно стабильной, чтобы фрагменты оставались физически ассоциированными в условиях использования структуры, например, физиологических условиях. «Ассоциация» не обязательно должна осуществляться при помощи прямой ковалентной химической связи. Она может также предполагать ионную или водородную связь или гибридизацию на основе связности, достаточно стабильной для того, чтобы «ассоциированные» молекулярные частицы оставались физически ассоциированными.

[000213] Бифункциональный: в контексте настоящего описания термин «бифункциональный» относится к любому веществу, молекуле или фрагменту, который способен к поддержанию или поддерживает по меньшей мере две функции. Функции могут затрагивать один и тот же результат или различный результат. Структура, которая выполняет такую функцию, может быть одной и той же или различной.

[000214] Биологически активный: в контексте настоящего описания фраза «биологически активный» относится к характеристике любой материи (например, AAV), которая обладает активностью в биологической системе и/или организме. Например, вещество, которое при введении в организм обладает биологическим эффектом на этот организм, считают биологически активным. В соответствии с конкретными вариантами осуществления полинуклеотид согласно настоящему изобретению можно считать биологически активным, если хотя бы часть полинуклеотидов является биологически активными или имитируют активность, которая считается биологически релевантной.

[000215] Биологическая система: в контексте настоящего описания термин «биологическая система» относится к группе органов, тканей, клеток, внутриклеточных компонентов, белков, нуклеиновых кислот, молекул (включая без ограничения биомолекулы), которые совместно функционируют, выполняя определенную биологическую задачу в клеточных мембранах, клеточных компартментах, клетках, тканях, органах, системах органов, многоклеточных организмах или любых биологических организмах. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биологические системы представляют собой клеточные сигнальные пути, содержащие межклеточные и/или внеклеточные сигнальные биомолекулы клетки. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биологические системы включают сигнальные события фактора роста во внеклеточном/клеточном матриксе и/или клеточных нишах.

[000216] Биомолекула: в контексте настоящего описания термин «биомолекула» представляет собой любую природную молекулу, в основе которой лежат аминокислоты, нуклеиновые кислоты, углеводы или липиды и т. п.

[000217] Комплементарный и практически комплементарный: в контексте настоящего описания термин «комплементарный» относится к способности полинуклеотидов к образованию пар оснований друг с другом. Пары оснований, как правило, образуются с помощью водородных связей между нуклеотидными звеньями в антипараллельных полинуклеотидных цепях. Комплементарные полинуклеотидные цепи могут образовывать пары оснований посредством образования уотсон-криковских пар (например, A с T, A с U, C с G) или любым другим способом, который обеспечивает возможность образования дуплексов. Поскольку специалисты в данной области техники осведомлены, что при использовании РНК в отличие от ДНК урацил, а не тимин является основанием, которое считается комплементарным аденозину. Тем не менее, если U обозначен в контексте настоящего изобретения, предполагается возможность замены T, если не указано иное. Полная комплементарность или 100% комплементарность относится к ситуации, в которой каждое нуклеотидное звено в одной полинуклеотидной цепи может образовать водородную связь с нуклеотидным звеном во второй полинуклеотидной цепи. Менее чем полная комплементарность относится ситуации, в которой некоторые, но не все нуклеотидные звенья в двух цепях могут образовывать водородные связи друг с другом. Например, в случае двух последовательностей из 20 мономерных звеньев, если только две пары оснований на каждой цепи могут образовывать водородные связи друг с другом, полинуклеотидные цепи проявляют 10% комплементарность. В том же примере, если 18 пар оснований на каждой цепи могут образовывать водородные связи друг с другом, полинуклеотидные цепи проявляют 90% комплементарность. В контексте настоящего описания термин «практически комплементарный» означает, что siRNA имеет последовательность (например, в антисмысловой цепи), которая является достаточной для связывания необходимой целевой мРНК и для запуска РНК-сайленсинга целевой мРНК.

[000218] Соединение: в контексте настоящего описания термин «соединение» относится к индивидуальной химической структурной единице. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления конкретное соединение может существовать в одной или более изомерных или изотопных формах (включая без ограничения стереоизомеры, геометрические изомеры и изотопы). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение представлено или используется только в одной такой форме. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение представлено или используется в виде смеси из двух или более таких форм (включая без ограничения рацемическую смесь стереоизомеров). Специалисты в данной области техники знают, что некоторые соединения существуют в различных таких формах и характеризуются различными свойствами и/или активностями (включая без ограничения биологические активности). В таких случаях рядовой специалист в данной области техники без труда подберет или исключит определенные формы соединения для применения в соответствии с настоящим изобретением. Например, соединения, которые содержат асимметрично замещенные атомы углерода, можно выделить в оптически активной или рацемической форме. Из уровня техники известны способы получения оптически активных форм из оптически активных исходных материалов, такие как разделение рацемических смесей или стереоселективный синтез. Многие геометрические изомеры олефинов, C=N двойных связей и подобного также могут присутствовать в описанных в данном документе соединениях, и в настоящем раскрытии предусматриваются все такие стабильные изомеры. Цис- и транс-геометрические изомеры соединений по настоящему раскрытию описаны и могут быть выделены в виде смеси изомеров или в виде разделенных изомерных форм.

[000219] Соединения по настоящему раскрытию также включают таутомерные формы. Таутомерные формы образуются в результате обмена одинарной связи на соседнюю двойную связь и сопутствующей миграции протона. Таутомерные формы включают прототропные таутомеры, которые представляют собой изомерные протонированные состояния с той же эмпирической формулой и суммарным зарядом.

[000220] Соединения по настоящему раскрытию также включают все изотопы атомов, встречающихся в промежуточных или конечных соединениях. Выражение «изотопы» относится к атомам с одним атомным числом, но другими массовыми числами, образующимся из различного числа нейтронов в ядрах. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий.

[000221] Соединения и соли по настоящему раскрытию могут быть получены при помощи стандартных способов в комбинации с молекулами растворителей или воды с образованием сольватов и гидратов.

[000222] Консервативный: в контексте настоящего описания термин «консервативный» относится к нуклеотидам или аминокислотным остаткам соответственно полинуклеотидной последовательности или полипептидной последовательности, которые встречаются неизмененными в одном и том же положении у двух или более сравниваемых последовательностей. Нуклеотиды или аминокислоты, которые являются сравнительно консервативными, представляют собой такие, которые консервативны в более родственных последовательностях по сравнению с нуклеотидами или аминокислотами, встречающимися в других местах в последовательностях.

[000223] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «полностью консервативными», если они на 100% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «высококонсервативными», если они по меньшей мере на 70% идентичны, по меньшей мере на 80% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны или по меньшей мере на 95% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «высококонсервативными», если они приблизительно на 70% идентичны, приблизительно на 80% идентичны, приблизительно на 90% идентичны, приблизительно на 95% идентичны, приблизительно на 98% идентичны или приблизительно на 99% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «консервативными», если они по меньшей мере на 30% идентичны, по меньшей мере на 40% идентичны, по меньшей мере на 50% идентичны, по меньшей мере на 60% идентичны, по меньшей мере на 70% идентичны, по меньшей мере на 80% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны или по меньшей мере на 95% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательности являются «консервативными», если они по меньшей мере на 30% идентичны, по меньшей мере на 40% идентичны, по меньшей мере на 50% идентичны, по меньшей мере на 60% идентичны, по меньшей мере на 70% идентичны, по меньшей мере на 80% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны или по меньшей мере на 95% идентичны, по меньшей мере на 98% идентичны или по меньшей мере на 99% идентичны друг другу. Консервативность последовательности может быть применима ко всей длине олигонуклеотида, полинуклеотида или полипептида или может быть применима к его части, участку или элементу.

[000224] В соответствии с одним вариантом осуществления консервативные последовательности не являются непрерывными. Специалист в настоящей области техники может понять как осуществить выравнивание при наличии в последовательностях при непрерывном выравнивании гэпов и выровнять соответствующие остатки, несмотря на присутствующие вставки или делеции.

[000225] В соответствии с одним вариантом осуществления консервативные последовательности не являются непрерывными. Специалист в настоящей области техники может понять как осуществить выравнивание при наличии в последовательностях при непрерывном выравнивании гэпов и выровнять соответствующие остатки, несмотря на присутствующие вставки или делеции.

[000226] Доставка: в контексте настоящего описания термин «доставка» относится к процессу или способу доставки соединения, такого как парвовирус, например, AAV и/или соединение, вещество, молекулярная частица, фрагмент, груз или полезный груз на основе AAV, к цели. Такой целью может быть клетка, ткань, орган, организм или система (как биологическая, так и произведенная).

[000227] Средство доставки: в контексте настоящего описания «средство доставки» относится к любому средству или веществу, которое облегчает, по меньшей мере частично, in vivo и/или in vitro доставку полинуклеотида и/или одного или более веществ (включая без ограничения соединения и/или композиции согласно настоящему изобретению, например, вирусные частицы или векторы экспрессии) к целевым клеткам.

[000228] Дестабилизированный: в контексте настоящего описания термин «дестабилизированный», «дестабилизировать» или «дестабилизирующий участок» означает участок или молекулу, которая является менее стабильной, чем исходная, эталонная, дикого типа или нативная форма того же участка или молекулы.

[000229] Детектируемая метка: в контексте настоящего описания термин «детектируемая метка» относится к одному или более маркерам, сигналам или фрагментам, которые присоединены, включены или ассоциированы с другой молекулярной частицей, которая легко детектируется известными в настоящей области техники способами, включая радиографию, флуоресценцию, хемилюминесценцию, ферментативную активность, абсорбционную иммунологическую детекцию и т. п. Детектируемые метки могут включать радиоизотопы, флуорофоры, хромофоры, ферменты, красители, ионы металла, лиганды, такие как биотин, авидин, стрептавидин и гаптены, квантовые точки и т. п. Детектируемые метки могут быть иметь любое расположение в молекулярной частице, к которой они присоединены, в которую включены или с которой ассоциированы. Например, при присоединении, включении в или ассоциировании с пептидом или белком, они могут находиться среди аминокислот, пептидов или белков или быть расположенными на N- или С-конце.

[000230] Режим дозирования: в контексте настоящего описания «режим дозирования» представляет собой график введения или определенный врачом режим лечения, профилактики или паллиативной терапии.

[000231] Эффективное количество: в контексте настоящего описания термин «эффективное количество» средства, представляет собой такое количество, которое достаточно для обеспечения полезных или желаемых результатов, например, при введении однократной дозы или множества доз в подвергаемую воздействию клетку, при излечении, снижении, облегчении или уменьшении одного или более симптомов нарушения, клинических результатов, и само по себе «эффективное количество» зависит от контекста, в котором это выражение употребляется. Например, в контексте введения средства, которое обеспечивает лечение болезни Паркинсона, эффективное количество средства представляет собой, например, количество, достаточное для осуществления лечения болезни Паркинсона, которое определено в данном документе, по сравнению с ответом, полученным без введения средства.

[000232] Инкапсулировать: в контексте настоящего описания термин «инкапсулировать» означает включать, окружать или заключать.

[000233] Сконструированный: в контексте настоящего описания варианты осуществления характеризуют как «сконструированные», если они разработаны такими, чтобы имели признак и свойство, либо структурное, либо химическое, которое отличается от такового у первоначальной, дикого типа или нативной молекулы. Таким образом, сконструированные средства или молекулярные частицы являются такими, чья разработка и/или получение включают действие при участии человека.

[000234] Эпитоп: в контексте настоящего описания «эпитоп» относится к поверхности или участку на молекуле, которые могут взаимодействовать с биомолекулой. Например, белок может содержать одну или более аминокислот, например, эпитоп, который взаимодействует с антителом, например, с биомолекулой. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, если речь идет о белке или белковом модуле, эпитоп может представлять собой линейный отрезок аминокислот или трехмерную структуру, образованную уложенными аминокислотными цепями.

[000235] Экспрессия: в контексте настоящего описания «экспрессия» последовательности нуклеиновой кислоты относится к одному или более из следующих событий: (1) производству матрицы РНК с последовательности ДНК (например, путем транскрипции); (2) процессингу РНК-транскрипта (например, путем сплайсинга, редактирования, образование 5′-кэпа и/или процессинга 3′-конца); (3) трансляции РНК в полипептид или белок; (4) укладке полипептида или белка; и (5) посттрансляционной модификации полипептида или белка.

[000236] Признак: в контексте настоящего описания «признак» относится к характеристике, свойству или отличительному элементу.

[000237] Состав: в контексте настоящего описания термин «состав» включает по меньшей мере один полинуклеотид, и/или соединение, и/или композицию согласно настоящему раскрытию (например, вектор, частицу AAV и т. д.) и средство доставки.

[000238] Фрагмент: «фрагмент», в контексте настоящего описания, относится к непрерывной части целого. Например, фрагменты белков могут представлять собой полипептиды, полученные при расщеплении полноразмерного белка, выделенного из культивируемых клеток. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фрагмент белка включает по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250 или более аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фрагменты антитела включают части антитела, подвергаемые ферментативному расщеплению или синтезированные таким образом.

[000239] Функциональный: в контексте настоящего описания «функциональная» биологическая молекула представляет собой биологическую молекулу и/или молекулярную частицу со структурой и в форме, в которой она проявляет свойство и/или активность, которыми она характеризуется.

[000240] Экспрессия гена: термин «экспрессия гена» относится к процессу, при котором последовательность нуклеиновой кислоты подвергается успешной транскрипции и, в большинстве случаев, трансляции с образованием белка или пептида. Для ясности, в случае, когда упоминается измерение «экспрессии гена», это следует понимать как означающее, что измерения могут относиться к продукту транскрипции нуклеиновой кислоты, например, РНК или мРНК, или к состоящему из аминокислот продукту трансляции, например, полипептидам или пептидам. Способы измерения количества или уровней РНК, мРНК, полипептидов и пептидов хорошо известны в уровне техники.

[000241] Гомология: в контексте настоящего описания термин «гомология» относится к общему родству между полимерными молекулами, например, между молекулами нуклеиновых кислот (например, молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между полипептидными молекулами. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полимерные молекулы считаются «гомологичными» друг другу, если их последовательности являются по меньшей мере на 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% идентичными или схожими. Выражение «гомологичный» обязательно относится к сравнению между по меньшей мере двумя последовательностями (полинуклеотидными или полипептидными последовательностями). В соответствии с настоящим изобретением две полинуклеотидные последовательности считаются гомологичными, если полипептиды, которые они кодируют, по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или даже 99% идентичны по меньшей мере на одном отрезке по меньшей мере из приблизительно 20 аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления гомологичные полинуклеотидные последовательности характеризуются способностью кодировать отрезок, содержащий по меньшей мере 4-5 однозначно указанных аминокислот. Для полинуклеотидных последовательностей длиной менее 60 нуклеотидов гомология обычно определяется способностью кодировать отрезок, содержащий по меньшей мере 4-5 однозначно указанных аминокислот. В соответствии с настоящим изобретением две белковые последовательности считаются гомологичными, если белки по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80% или 90% идентичны по меньшей мере на одном отрезке по меньшей мере из приблизительно 20 аминокислот. В множестве вариантов осуществления гомологичный белок может характеризоваться большой общей степенью гомологии и высокой степенью гомологии на протяжении по меньшей мере одного короткого отрезка по меньшей мере из 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 или более аминокислот. В множестве вариантов осуществления гомологичные белки имеют один или более характерных элементов последовательности. В контексте настоящего описания термин «характерный элемент последовательности» относится к мотиву, присутствующему в родственных белках. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления присутствие таких мотивов коррелирует с конкретной активностью (такой как биологическая активность).

[000242] Идентичность: в контексте настоящего описания термин «идентичность» относится к общему родству между полимерными молекулами, например, между олигонуклеотидными и/или полинуклеотидными молекулами (например, молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между полипептидными молекулами. Расчет процента идентичности двух полинуклеотидных последовательностей, например, можно осуществить путем выравнивания двух последовательностей в контексте оптимального сравнения (например, можно внести гэпы в одну или обе из первой и второй последовательности нуклеиновых кислот для оптимального выравнивания, а неидентичные последовательности в контексте сравнения можно не учитывать). В соответствии с определенными вариантами осуществления длина выравниваемой последовательности для сравнения составляет по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% от длины эталонной последовательности. Затем сравнивают нуклеотиды в соответствующих нуклеотидных положениях. Если положение в первой последовательности занято тем же самым нуклеотидом, что и соответствующее положение во второй последовательности, то молекулы являются идентичными по этому положению. Процент идентичности между двумя последовательностями представляет собой зависимость числа идентичных положений, общих для последовательностей, с учетом числа гэпов и длины каждого гэпа, который необходим для введения с целью оптимального выравнивания двух последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности между двумя последовательностями может быть выполнено при помощи математического алгоритма. Например, процент идентичности между двумя нуклеотидными последовательностями можно определить с помощью способов, таких как описанные в работах Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; и Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; каждая из которых включена в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки. Например, процент идентичности между двумя нуклеотидными последовательностями можно определить, например, с помощью алгоритма Майера и Миллера (CABIOS, 1989, 4: 11-17), который был включен в программу ALIGN (версия 2.0) с использованием матрицы вероятности мутаций PAM120, штрафа за удлинение гэпа 12 и штрафа за открытие гэпа 4. Процент идентичности между двумя нуклеотидными последовательностями альтернативно можно определить с помощью программы GAP в пакете компьютерной программы GCG с использованием матрицы NWSgapdna.CMP. Способы, обычно используемые для определения процента идентичности между последовательностями, включают без ограничения способы, раскрытые в работе Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J Applied Math., 48: 1073 (1988); включенной в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки. Методики определения идентичности закодированы в общедоступных компьютерных программах. Иллюстративные компьютерные программы для определения гомологии между двумя последовательностями включают без ограничения программный пакет GCG, Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1), 387 (1984)), BLASTP, BLASTN и FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215, 403 (1990)).

[000243] Ингибировать экспрессию гена: в контексте настоящего описания фраза «ингибировать экспрессию гена» означает, что это приводит к снижению количества продукта экспрессии гена. Продукт экспрессии может представлять собой РНК, транскрибируемую с гена (например, мРНК), или полипептид, транслируемый с мРНК, которая транскрибируется с гена. Как правило, снижение уровня мРНК приводит в результате к снижению уровня полипептида, транслируемого с нее. Уровень экспрессии можно определить с применением стандартных методик для измерения уровня мРНК или белка.

[000244] In vitro: в контексте настоящего описания «in vitro» относится к событиям, которые происходят в искусственной среде, например, в пробирке или реакционном сосуде, в клеточной культуре, в чашке Петри и т. д., а не внутри организма (например, животного, растения или микроба).

[000245] In vivo: в контексте настоящего описания термин «in vivo» относится к событиям, которые происходят внутри организма (например, животного, растения или микроба или в их клетке или ткани).

[000246] Выделенный: в контексте настоящего описания термин «выделенный» является синонимом «отделенный», но охватывает вместе с тем базирующееся на умозаключении отделение, осуществляемое при участии человека. В соответствии с одним вариантом осуществления выделенное вещество или молекулярная частица представляет собой вещество или молекулярную частицу, которые были отделены по меньшей мере от некоторых компонентов, с которыми они ранее были ассоциированы (либо в природе, либо в экспериментальных условиях). Выделенные вещества могут иметь различные уровни чистоты по отношению к веществам, с которыми они были ассоциированы. Выделенные вещества и/или молекулярные частицы могут быть отделены по меньшей мере приблизительно от 10%, приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90% или более других компонентов, с которыми они были изначально ассоциированы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления выделенные средства имеют степень чистоты более чем приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 91%, приблизительно 92%, приблизительно 93%, приблизительно 94%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98%, приблизительно 99% или более приблизительно 99%. В контексте настоящего описания вещество является «чистым», если оно практически не содержит других компонентов.

[000247] Практически выделенный: «практически выделенный» означает, что соединение практически отделено от среды, в которой оно было образовано или обнаружено. Частичное отделение может включать, например, композицию с высоким содержанием соединения по настоящему раскрытию. Практическое отделение может включать композиции, содержащие по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% по массе соединения по настоящему раскрытию или его соли. Способы выделения соединений и их солей общеизвестны в данной области техники. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления выделение вещества или молекулярной частицы включает разрушение химических ассоциаций и/или связей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления выделение включает только отделение от компонентов, с которыми выделенное вещество или молекулярная частица ранее были объединены, и не предусматривает такое разрушение.

[000248] Модифицированный: в контексте настоящего описания термин «модифицированный» относится к измененному состоянию или структуре молекулы или молекулярной частицы согласно настоящему изобретению по сравнению с исходной или эталонной молекулой или частицей. Молекулы можно модифицировать разнообразными путями, в том числе химически, структурно и функционально. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединения и/или композиции согласно настоящему раскрытию модифицированы путем внесения не встречающихся в природе аминокислот или не встречающихся в природе нуклеотидов.

[000249] Мутация: в контексте настоящего описания термин «мутация» относится к модификации и/или изменению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления мутации могут представлять собой модификации и/или изменения в белках (включая пептиды и полипептиды) и/или нуклеиновых кислотах (включая полинуклеиновые кислоты). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления мутации включают модификации и/или изменения в последовательности белка и/или нуклеиновой кислоты. Такие модификации и/или изменения могут включать добавление, замену и/или делецию одной или более аминокислот (в случае белков и/или пептидов) и/или нуклеотидов (в случае нуклеиновых кислот и/или полинуклеиновых кислот). В соответствии с вариантами осуществления, где мутации включают добавление и/или замену аминокислот и/или нуклеотидов, такие добавления и/или замены могут включать 1 или более аминокислотных и/или нуклеотидных остатков и могут включать модифицированные аминокислоты и/или нуклеотиды.

[000250] Встречающийся в природе: в контексте настоящего описания термин «встречающийся в природе» означает существующие в природе без искусственной помощи или участия человека

[000251] Отличное от человека позвоночное: в контексте настоящего описания термин «отличное от человека позвоночное» включает всех позвоночных, за исключением Homo sapiens, включая дикие и одомашненные виды животных. Примеры отличных от человека позвоночных включают без ограничения таких млекопитающих, как альпака, бантенг, бизон, верблюд, кошка, крупный рогатый скот, олень, собака, осел, гаял, коза, морская свинка, лошадь, лама, мул, свинья, кролик, северный олень, овца, буйвол и як.

[000252] Нуклеиновая кислота: в контексте настоящего описания термины «нуклеиновая кислота», «полинуклеотид» и «олигонуклеотид» относятся к любым полимерам нуклеиновой кислоты, состоящим или из полидезоксирибонуклеотидов (содержащих 2-дезокси-D-рибозу), или из полирибонуклеотидов (содержащих D-рибозу), или из полинуклеотида любого другого типа, который представляет собой N-гликозид пуринового или пиримидинового основания или модифицированных пуриновых или пиримидиновых оснований. Не предполагаются различия по длине между терминами «нуклеиновая кислота», «полинуклеотид» и «олигонуклеотид», и эти термины используются взаимозаменяемо. Эти термины относятся только к первичной структуре молекулы. Таким образом, эти термины включают двух- и одноцепочечную ДНК, а также двух- и одноцепочечную РНК.

[000253] Нецелевой: в контексте настоящего описания «нецелевой» относится к любому непредусмотренному эффекту в отношении любой одной или более мишени, гена и/или клеточного транскрипта.

[000254] Открытая рамка считывания: в контексте настоящего описания «открытая рамка считывания» или «ORF» относится к последовательности, которая не содержит стоп-кодона в указанной рамке считывания.

[000255] Функционально связанный: в контексте настоящего описания термин «функционально связанный» относится к функциональному соединению между двумя или более молекулами, конструкциями, транскриптами, молекулярными частицами, фрагментами и т. п.

[000256] Частица: в контексте настоящего описания термин «частица» представляет собой вирус, содержащий в своем составе по меньшей мере два компонента: белковый капсид и полинуклеотидную последовательность, заключенную внутри капсида.

[000257] Пациент: в контексте настоящего описания «пациент» относится к субъекту, который может обратиться за помощью или нуждаться в лечении, требовать лечения, проходить лечение, будет проходить лечение, или к субъекту, который находится под наблюдением обученного специалиста по конкретному заболеванию или состоянию, такому как, например, болезнь Паркинсона.

[000258] Полезный груз: в контексте настоящего описания «полезный груз» относится к одному или более полинуклеотидам или полинуклеотидным участкам, закодированным посредством вирусного генома или в вирусном геноме, или продукту экспрессии такого полинуклеотида или полинуклеотидного участка, например, трансгена, полинуклеотида, кодирующего полипептид или несколько полипептидов, или модулирующей нуклеиновой кислоты или регуляторной нуклеиновой кислоты.

[000259] Конструкция полезного груза: в контексте настоящего описания «конструкция полезного груза» представляет собой один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих полезный груз, который фланкирован на одной или обеих сторонах последовательностью инвертированных концевых повторов (ITR). Конструкция полезного груза представляет собой матрицу, которая реплицируется в клетке для вирусного производства с образованием вирусного генома.

[000260] Вектор с конструкцией полезного груза: в контексте настоящего описания «вектор с конструкцией полезного груза» представляет собой вектор, кодирующий или содержащий конструкцию полезного груза и регуляторные участки для репликации и экспрессии в бактериальных клетках.

[000261] Вектор экспрессии конструкции полезного груза: в контексте настоящего описания, «вектор экспрессии конструкции полезного груза» представляет собой вектор, кодирующий или содержащий конструкцию полезного груза и дополнительно содержащий один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих компоненты для вирусной экспрессии в клетке вирусной репликации.

[000262] Пептид: в контексте настоящего описания «пептид» имеет длину менее 50 аминокислот или равную 50 аминокислотам, например, приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислотам.

[000263] Фармацевтически приемлемый: фраза «фармацевтически приемлемый» используется в данном документе для обозначения тех соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые, по результатам тщательной клинической оценки, являются подходящими для применения в контакте с тканями человеческих организмов и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соизмеримых с разумным соотношением выгоды и риска.

[000264] Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества: фраза «фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества» в контексте настоящего описания относится к любому ингредиенту, отличному от соединений и/или активных средств (например, которые описаны в настоящем документе), присутствующих в фармацевтических композициях и обладающих свойствами, практически не вызывающими токсичность и воспаление у субъекта, такого как пациент. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества представляют собой среды, способные суспендировать и/или растворять активные средства. Вспомогательные вещества могут включать, например, антиадгезивы, антиоксиданты, связующие вещества, покрытия, средства для спрессовывания, разрыхлители, красители (пигменты), смягчающие вещества, эмульгаторы, наполнители (разбавители), пленкообразователи или покрытия, ароматизаторы, отдушки, скользящие вещества (усилители текучести), смазывающие вещества, консерванты, краски для печати, сорбенты, суспензионные или диспергирующие средства, подсластители и гидратационную воду. Иллюстративные вспомогательные вещества включают без ограничения: бутилированный гидрокситолуол (BHT), карбонат кальция, фосфат кальция (двухосновный), стеарат кальция, кроскармеллозу, перекрестно сшитый поливинилпирролидон, лимонную кислоту, кросповидон, цистеин, этиленцеллюлозу, желатин, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, лактозу, стеарат магния, мальтит, маннит, метионин, метилцеллюлозу, метилпарабен, микрокристаллическую целлюлозу, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, повидон, прежелатинизированный крахмал, пропилпарабен, ретинилпальмиат, шеллак, диоксид кремния, карбоксиметилцеллюлозу натрия, цитрат натрия, натрия крахмала гликолят, сорбит, крахмал (кукурузный), стеариновую кислоту, сахарозу, тальк, диоксид титана, витамин A, витамин E, витамин C и ксилит.

[000265] Фармацевтически приемлемые соли: фармацевтически приемлемые соли соединений, которые описаны в настоящем документе. В контексте настоящего описания термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к производным или формах раскрытых соединений, где исходное соединение модифицировано посредством превращения существующего кислотного или основного фрагмента в его солевую форму (например, которые получены путем осуществления реакции группы свободного основания с подходящей органической кислотой). Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, без ограничения, соли основных остатков, таких как амины, с минеральными или органическими кислотами; соли кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты, с щелочами или органическими основаниями и т.п. Типичные соли присоединения кислоты включают ацетат, соли уксусной кислоты, адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, соли бензолсульфоновой кислоты, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидробромид, гидрохлорид, гидройодид, 2-гидрокси-этансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, толуолсульфонат, ундеканоат, валерат и т.п. Типичные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают катионы натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п., а также нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и амина, в том числе, без ограничения, катионы аммония, тетраметиламмония, тетраэтиламмония, метиламина, диметиламина, триметиламина, триэтиламина, этиламина и т.п. Фармацевтически приемлемые соли согласно настоящему раскрытию включают традиционные нетоксичные соли, образованные исходным соединением, например, с нетоксичными неорганическими или органическими кислотами. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему раскрытию может быть синтезированной солью, полученной из исходного соединения, которое содержит основный или кислотный фрагмент, посредством традиционных химических способов. Обычно такие соли можно получить посредством проведения реакции этих соединений в форме свободной кислоты или основания со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе или же в их смеси; обычно предпочтительными являются неводные среды, подобные эфиру, этилацетату, этанолу, изопропанолу или ацетонитрилу. Перечень подходящих солей можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, и Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977); каждый из которых включен в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.

[000266] Фармацевтически приемлемый сольват: термин «фармацевтически приемлемый сольват» в контексте настоящего описания относится к кристаллической форме соединения согласно настоящему изобретению, где молекулы подходящего растворителя включены в кристаллическую решетку. Подходящий растворитель является физиологически переносимым во вводимой дозе. Например, сольваты можно получить посредством кристаллизации, перекристаллизации или осаждения из раствора, который включает органические растворители, воду или их смесь. Примерами подходящих растворителей являются этанол, вода (например, моно-, ди- и тригидраты), N-метилпирролидинон (NMP), диметилсульфоксид (DMSO), N,N'-диметилформамид (DMF), N,N'-диметилацетамид (DMAC), 1,3-диметил-2-имидазолидинон (DMEU), 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2-(1H)-пиримидинон (DMPU), ацетонитрил (ACN), пропиленгликоль, этилацетат, бензиловый спирт, 2-пирролидон, бензилбензоат и т. п. Если растворителем является вода, сольват называется «гидратом». В соответствии с некоторыми вариантами осуществления включенный в сольват растворитель относится к типу или находится на уровне, который является физиологически переносимым для организма, в который вводят такой сольват (например, в единичной лекарственной форме из фармацевтической композиции).

[000267] Фармакокинетический: в контексте настоящего описания «фармакокинетический» относится к любому одному или более свойствам молекулы или соединения, когда оно относится к определению поведения веществ, вводимых в живой организм. Фармакокинетика разделена на несколько областей, в том числе степень и скорость всасывания, распределение, метаболизм и выведение из организма. В целом это обозначается как ADME, где: (A) всасывание представляет собой процесс проникновения вещества в кровоток; (D) распределение представляет собой распространение или рассредоточение веществ в жидкостях и тканях организма; (M) метаболизм (или биотрансформация) представляет собой необратимое превращение исходных соединений в дочерние метаболиты; и (E) выведение из организма (или элиминация) относится к удалению веществ из организма. В редких случаях некоторые лекарственные препараты необратимо накапливаются в ткани организма.

[000268] Физико-химический: в контексте настоящего описания «физико-химический» означает физическое и/или химическое свойство или относится к физическому и/или химическому свойству.

[000269] Предупреждение: в контексте настоящего описания термин «предупреждение» относится к частичной или полной задержке проявления инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичной или полной задержке проявления одного или более симптомов, признаков или клинических проявлений конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичной или полной задержке проявления одного или более симптомов, признаков или проявлений конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичной или полной задержке прогрессирования инфекции, конкретного заболевания, нарушения и/или состояния; и/или снижению риска развития патологии, ассоциированной с инфекцией, заболеванием, нарушением и/или состоянием, таким как, например, болезнь Паркинсона.

[000270] Пролекарство: настоящее раскрытие также включает пролекарства соединений, которые описаны в данном документе. В контексте настоящего описания «пролекарства» относятся к любому веществу, молекуле или молекулярной частице, которые находятся в форме, предшествующей для такого вещества, молекулы или молекулярной частицы, начиная действовать в качестве лекарства при химическом или физическом изменении. Пролекарства могут быть ковалентно связаны или секвестированы некоторым образом и высвобождают или превращаются в активный лекарственный фрагмент до введения, при введении или после введения субъекту-млекопитающему. Получение и применение пролекарств рассмотрено в работе T. Higuchi and V. Stella, ʺPro-drugs as Novel Delivery Systems,ʺ Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, и в работе Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, обе из которых включены в данный документ во всей своей полноте при помощи ссылки.

[000271] Пролиферировать: в контексте настоящего описания термин «пролиферировать» означает расти, размножаться, реплицироваться или увеличиваться в количестве или вызывать рост, размножение, репликацию или увеличение в количестве. «Пролиферативный» означает наличие способности к пролиферации. «Антипролиферативный» означает наличие свойств, которые противоположны или противодействуют пролиферативным свойствам.

[000272] Профилактический: в контексте настоящего описания «профилактический» относится к лекарству или способу воздействия, используемому для предупреждения распространения заболевания.

[000273] Профилактика: в контексте настоящего описания «профилактика» относится к мере, предпринимаемой для поддержания здоровья и предупреждения распространения заболевания.

[000274] Представляющий интерес белок: в контексте настоящего описания термины «представляющие интерес белки» или «необходимые белки» включают предлагаемые в данном документе белки, а также их фрагменты, мутанты, варианты и измененнные формы.

[000275] Очищенный: в контексте настоящего описания «очищать», «очищенный», «очистка» означает делать практически чистым или очищенным от нежелательных компонентов, загрязнителя, примеси или дефекта. «Очищенный» относится к состоянию чистоты. «Очистка» относится к способу получения чистого продукта.

[000276] Участок: в контексте настоящего описания термин «участок» относится к зоне или общей площади. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, если речь идет о белке или белковом модуле, участок может содержать линейную последовательность аминокислот вдоль белка или белкового модуля или может содержать трехмерную область, эпитоп и/или кластер из эпитопов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участки включают в себя концевые участки. В контексте настоящего описания термин «концевой участок» относится к участкам, расположенным на краях или концах данного средства. Если речь идет о белках, концевые участки могут включать в себя N- и/или C-концы. N-концы относятся к краю белка, содержащему аминокислоту со свободной аминогруппой. С-концы относятся к краю белка, содержащему аминокислоту со свободной карбоксильной группой. Таким образом, N- и/или С-концевые участки могут включать в себя N- и/или С-концы, а также окружающие аминокислоты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления N- и/или С-концевые участки содержат от приблизительно 3 аминокислот до приблизительно 30 аминокислот, от приблизительно 5 аминокислот до приблизительно 40 аминокислот, от приблизительно 10 аминокислот до приблизительно 50 аминокислот, от приблизительно 20 аминокислот до приблизительно 100 аминокислот и/или по меньшей мере 100 аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления N-концевые участки могут содержать любую протяженность аминокислот, которая включает в себя N-конец, но не включает С-конец. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления С-концевые участки могут содержать любую протяженность аминокислот, которая включает в себя С-конец, но не включает N-конец.

[000277] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, если речь идет о полинуклеотиде, участок может содержать линейную последовательность из нуклеотидов вдоль полинуклеотида или может характеризоваться трехмерной областью, вторичной структурой или третичной структурой. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участки включают в себя концевые участки. В контексте настоящего описания термин «концевой участок» относится к участкам, расположенным на краях или концах данного средства. Если речь идет о полинуклеотидах, концевые участки могут включать в себя 5' и 3'-концы. 5'-концы относятся к краю полинуклеотида, содержащему нуклеотид со свободной фосфатной группой. 3'-концы относятся к краю полинуклеотида, содержащему нуклеотид со свободной гидроксильной группой. Таким образом, 5'- и 3'-участки могут включать в себя 5'- и 3'-концы, а также окружающие нуклеотиды. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 5'- и 3'-концевые участки содержат от приблизительно 9 нуклеотидов до приблизительно 90 нуклеотидов, от приблизительно 15 нуклеотидов до приблизительно 120 нуклеотидов, от приблизительно 30 нуклеотидов до приблизительно 150 нуклеотидов, от приблизительно 60 нуклеотидов до приблизительно 300 нуклеотидов и/или по меньшей мере 300 нуклеотидов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 5'-концевые участки могут содержать любую протяженность нуклеотидов, которая включает в себя 5'-конец, но не включает 3'-конец. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 3'-концевые участки могут содержать любую протяженность нуклеотидов, которая включает в себя 3'-конец, но не включает 5'-конец.

[000278] РНК или молекула РНК: в контексте настоящего описания термин «РНК», или «молекула РНК», или «молекула рибонуклеиновой кислоты» относится к полимеру из рибонуклеотидов; термин «ДНК», или «молекула ДНК», или «молекула дезоксирибонуклеиновой кислоты» относится к полимеру из дезоксирибонуклеотидов. ДНК и РНК могут синтезироваться в естественных условиях, например, при репликации ДНК и транскрипции ДНК, соответственно; или их можно химически синтезировать. ДНК и РНК могут быть одноцепочечными (т.е. ssRNA или ssDNA, соответственно) или многоцепочечными (например, двухцепочечными, т.е. dsRNA и dsDNA, соответственно). Термины «мРНК» или «информационная РНК», которые используются в данном документе, относятся к одноцепочечной РНК, которая кодирует аминокислотную последовательность одной или более полипептидных цепей.

[000279] РНК-интерференция: в контексте настоящего описания термин «РНК-интерференция» или «RNAi» относится к специфичному в отношении последовательности регуляторному механизму, опосредованному молекулами РНК, который приводит в результате к ингибированию, или препятствованию, или «сайленсингу» экспрессии соответствующего гена, кодирующего белок.

[000280] Образец: в контексте настоящего описания термин «образец» относится к аликвоте, подмножеству или части, взятой из источника и/или предоставленной для анализа или обработки. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления образец получен из биологического источника, например, ткань, клетка или составная часть (например, жидкость организма, в том числе без ограничения кровь, слизь, лимфатическая жидкость, синовиальная жидкость, спинномозговая жидкость, слюна, амниотическая жидкость, амниотическая пуповинная кровь, моча, влагалищные выделения и сперма). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления образец может представлять собой или содержать гомогенат, лизат или экстракт, полученный из целого организма или подмножества его тканей, клеток или составных частей, или их фракции или доли, в том числе без ограничения, например, плазмы, сыворотки, цереброспинальной жидкости, лимфы, внешних участков кожи, дыхательных, кишечных и мочеполового трактов, слез, слюны, молока, клеток крови, опухолей или органов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления образец представляет собой или содержит среду, такую как питательный бульон или гель, которая может содержать клеточные компоненты, такие как белки или молекулы нуклеиновой кислоты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления «первичный» образец представляет собой аликвоту источника. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления первичный образец подвергают одной или более стадиям обработки (например, разделению, очистке и т.д.) для подготовки образца для анализа или другого применения.

[000281] Самокомплементарная вирусная частица: в контексте настоящего описания «самокомплементарная вирусная частица» представляет собой частицу, состоящую по меньшей мере из двух компонентов: белкового капсида и полинуклеотидной последовательности, кодирующей самокомплементарный геном, заключенный внутри капсида.

[000282] Смысловая цепь: в контексте настоящего описания термин «смысловая цепь», или «вторая цепь», или «сопровождающая цепь» молекулы siRNA относится к цепи, которая комплементарна антисмысловой цепи или первой цепи. Антисмысловая и смысловая цепи молекулы siRNA гибридизируются с образованием дуплексной структуры. В контексте настоящего описания «дуплекс siRNA» включает в себя цепь siRNA, характеризующуюся достаточной комплементарностью с участком приблизительно из 10-50 нуклеотидов в мРНК гена, подвергающегося целенаправленному воздействию с целью сайленсинга, и цепь siRNA, характеризующуюся достаточной комплементарностью для образования дуплекса с цепью siRNA.

[000283] Сигнальные последовательности: в контексте настоящего описания фраза «сигнальные последовательности» относится к последовательности, которая может управлять транспортом или локализацией.

[000284] Единичная стандартная доза: в контексте настоящего описания «единичная стандартная доза» относится к дозе любого терапевтического средства, вводимого в одной дозе/в одно время/одним путем/через одну точку контакта, т. е. при одном событии введения. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления единичная стандартная доза представлена в виде дискретной лекарственной формы (например, таблетки, капсулы, пластыря, заряженного шприца, ампулы и т. д.).

[000285] Схожесть: в контексте настоящего описания термин «схожесть» относится к общему родству между полимерными молекулами, например, между полинуклеотидными молекулами (например, молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между полипептидными молекулами. Расчет процента схожести полимерных молекул друг с другом может быть выполнен таким же образом, как и расчет процента идентичности, за исключением того, что при расчете процента схожести учитываются консервативные замены, как понимается в данной области техники.

[000286] Малая/короткая интерферирующая РНК: в контексте настоящего описания термин «малая/короткая интерферирующая РНК» или «siRNA» относится к молекуле РНК (или аналога РНК), содержащей приблизительно 5-60 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов), которая способна управлять или опосредовать RNAi. Предпочтительно молекула siRNA содержит приблизительно 15-30 нуклеотидов или нуклеотидных аналогов, более предпочтительно приблизительно 16-25 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов), еще более предпочтительно приблизительно 18-23 нуклеотида (или нуклеотидных аналога) и еще более предпочтительно приблизительно 19-22 нуклеотида (или нуклеотидных аналога) (например, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида или нуклеотидного аналога). Термин «короткая» siRNA относится к siRNA, содержащей 5-23 нуклеотида, предпочтительно 21 нуклеотид (или нуклеотидный аналог), например, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида. Термин «длинная» siRNA относится к siRNA, содержащей 24-60 нуклеотидов, предпочтительно приблизительно 24-25 нуклеотидов, например, 23, 24, 25 или 26 нуклеотидов. Короткие siRNA в некоторых случаях могут включать в себя менее 19 нуклеотидов, например, 16, 17 или 18 нуклеотидов, или всего лишь 5 нуклеотидов при условии, что более короткая siRNA сохраняет способность опосредовать RNAi. Аналогичным образом, длинные siRNA в некоторых случаях могут включать в себя более 26 нуклеотидов, например, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или даже 60 нуклеотидов, при условии, что более длинная siRNA сохраняет способность опосредовать RNAi или трансляционную репрессию при отсутствии дополнительного процессинга, например, ферментативного процессинга, в короткие siRNA. siRNA могут представлять собой молекулы одноцепочечной РНК (ss-siRNA) или молекулы двухцепочечной РНК (ds-siRNA), содержащие смысловую цепь и антисмысловую цепь, которые гибридизируются с образованием дуплексной структуры, называемой дуплексом siRNA.

[000287] Раздельная доза: в контексте настоящего описания «раздельная доза» представляет собой разделение единичной стандартной дозы или общей суточной дозы на две или более доз.

[000288] Стабильный: в контексте настоящего описания термин «стабильный» относится к соединению или молекулярной частице, которые достаточно устойчивы, чтобы выдержать выделение до пригодной степени чистоты из реакционной смеси, и предпочтительно могут быть составлены в эффективное терапевтическое средство.

[000289] Стабилизированный: в контексте настоящего описания термин «стабилизировать», «стабилизированный», «стабилизированный участок» означает делать или становиться стабильным. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления стабильность измеряют по отношению к абсолютному значению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления стабильность измеряют по отношению к эталонному соединению или молекулярной частице.

[000290] Субъект: в контексте настоящего описания термин «субъект» или «пациент» относятся к любому организму, которому можно вводить композицию в соответствии с настоящим изобретением, например, для экспериментальных, диагностических, профилактических и/или терапевтических целей. Типичные субъекты включают в себя животных (например, млекопитающих, таких как мыши, крысы, кролики, отличные от человека приматы и люди), и/или растения. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъектом может быть младенец, новорожденный или ребенок в возрасте до 12 лет. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъект может находиться в утробе матери.

[000291] Практически: в контексте настоящего описания термин «практически» относится к качественному состоянию проявления полной или почти полной степени или порядка представляющей интерес характеристики или свойства. Специалисту в биологии в данной области техники будет понятно, что биологические и химические явления редко, если вообще, доходят до завершения и/или продолжаются до завершенности или приводят к достижению или избежанию абсолютного результата. Таким образом, выражение «практически» используют в данном документе для отражения потенциального отсутствия завершенности, свойственного многим биологическим и химическим явлениям.

[000292] Практически равный: в контексте настоящего описания это относится к временным различиям между дозами, при этом выражение означает плюс/минус 2%.

[000293] Практически одновременно: в контексте настоящего описания, и поскольку он относится к нескольким дозам, этот термин обычно означает в течение приблизительно 2 секунд.

[000294] Страдающий от: у индивидуума, который «страдает от» заболевания, нарушения и/или состояния, было диагностировано заболевание, нарушение и/или состояние, такое как, например, болезнь Паркинсона, или проявляется один или более его симптомов.

[000295] Подвержен развитию: у индивидуума, который «подвержен развитию» заболевания, нарушения и/или состояния, не было диагностировано заболевание, нарушение и/или состояние или не могут проявляться его симптомы, но он имеет предрасположенность к развитию заболевания или его симптомов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления индивид, который подвержен развитию заболевания, нарушения и/или состояния (например, злокачественной опухоли), может быть охарактеризован одним или более из следующего: (1) генетической мутацией, ассоциированной с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (2) генетическим полиморфизом, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (3) повышенной и/или сниженной экспрессией и/или активностью белка и/или нуклеиновой кислоты, ассоциированной с заболеванием, нарушением и/или состоянием; (4) привычками и/или образом жизни, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (5) семейным анамнезом заболевания, нарушения и/или состояния; и (6) воздействием микроорганизма и/или заражением микроорганизмом, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления у индивида, который подвержен развитию заболевания, нарушения и/или состояния, разовьется заболевание, нарушение и/или состояние. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления у индивида, который подвержен развитию заболевания, нарушения и/или состояния, не разовьется заболевание, нарушение и/или состояние.

[000296] Замедленное высвобождение: в контексте настоящего описания термин «замедленное высвобождение» относится к профилю высвобождения фармацевтической композиции или соединения, который соответствует скорости высвобождения в течение определенного периода времени.

[000297] Синтетический: термин «синтетический» означает полученный, приготовленный и/или произведенный руками человека. Синтез полинуклеотидов, или полипептидов, или других молекул согласно настоящему изобретению может быть химическим или ферментативным.

[000298] Нацеливание: в контексте настоящего описания термин «нацеливание» означает процесс разработки и подбора последовательности нуклеиновой кислоты, которая будет гибридизироваться с целевой нуклеиновой кислотой и индуцировать желаемый эффект.

[000299] Целевые клетки: в контексте настоящего описания термин «целевые клетки» относится к любой одной или более представляющим интерес клеткам. Клетки могут находиться in vitro, in vivo, in situ или в ткани или органе организма. Организмом может быть животное, предпочтительно млекопитающее, более предпочтительно человек и наиболее предпочтительно пациент.

[000300] Терапевтическое средство: термин «терапевтическое средство» относится к любому средству, которое при введении субъекту оказывает терапевтический, диагностический и/или профилактический эффект и/или вызывает необходимый биологический и/или фармакологический эффект.

[000301] Терапевтически эффективное количество: в контексте настоящего описания термин «терапевтически эффективное количество» означает количество средства, подлежащего доставке (например, нуклеиновой кислоты, лекарственного средства, терапевтического средства, диагностического средства, профилактического средства и т. д.), которое является достаточным, при введении субъекту, страдающему от или подверженному развитию инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния, для лечения, уменьшения симптомов, диагностики, предупреждения и/или задержки проявления инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния, такого как, например, болезнь Паркинсона. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтически эффективное количество представлено в виде единичной дозы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтически эффективное количество вводят согласно режиму дозирования, предусматривающему введение множества доз. Специалистам в настоящей области техники будет понятно, что, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления, единичную лекарственную форму можно рассматривать как содержащую терапевтически эффективное количество конкретного средства или молекулярной частицы, если она содержит количество, которое является эффективным при введении в качестве части такого режима дозирования.

[000302] Терапевтически эффективный результат: в контексте настоящего описания термин «терапевтически эффективный результат» означает результат, который является достаточным у субъекта, который страдает инфекцией, заболеванием, нарушением и/или состоянием или подвержен развитию инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния, для лечения, нормализации симптомов, диагностики, предупреждения и/или задержки проявления инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния.

[000303] Общая суточная доза: в контексте настоящего описания «общая суточная доза» относится к количеству, которое дают или прописывают на 24 часовой период. Его можно вводить в виде единичной стандартной дозы.

[000304] Трансфекция: в контексте настоящего описания термин «трансфекция» относится к способам введения в клетку экзогенных нуклеиновых кислот. Способы трансфекции включают, без ограничения, химические способы, физическую обработку и обработку катионными липидами или смесями.

[000305] Лечение: в контексте настоящего описания термин «лечение» относится к частичному или полному снижению, ослаблению, уменьшению, облегчению, задержке проявления, ингибированию прогрессирования, уменьшению тяжести и/или снижению частоты возникновения одного или более симптомов или признаков конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния. Например, «лечение злокачественной опухоли» может относиться к ингибированию выживаемости, роста и/или распространения опухоли. Лечение можно назначать субъекту, у которого не наблюдаются признаки заболевания, нарушения и/или состояния, и/или субъекту, у которого наблюдаются только ранние признаки заболевания, нарушения и/или состояния, с целью снижения риска развития патологии, ассоциированной с заболеванием, нарушением и/или состоянием, таким как, например, болезнь Паркинсона.

[000306] Немодифицированный: в контексте настоящего описания термин «немодифицированный» относится к любому веществу, соединению или молекуле до ее изменения каким-либо образом. Немодифицированный может, но не всегда, относиться к форме дикого типа или нативной форме биомолекулы или молекулярной частицы. Молекулы или молекулярные частицы могут быть подвергнуты ряду модификаций, в силу чего каждое модифицированное вещество, соединение, молекула или молекулярная частица может служить в качестве «немодифицированной» исходной молекулы для последующей модификации.

[000307] Вектор: в контексте настоящего описания термин «вектор» означает любую молекулу или фрагмент, который транспортирует, трансдуцирует или иным образом действует как носитель гетерологичной молекулы. Векторы по настоящему раскрытию могут быть получены рекомбинантными способами и могут иметь в своей основе и/или могут содержать исходную или эталонную последовательность аденоассоциированного вируса (AAV). Такие исходные или эталонные последовательности AAV могут служить в качестве изначальной, второй, третьей или последующей последовательности для конструирования векторов. В неограничивающих примерах такие исходные или эталонные последовательности AAV могут включать в себя любую одну или более из следующих последовательностей: полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид или несколько полипептидов, последовательность которой может быть дикого типа или модифицированной от дикого типа и последовательность которой может кодировать полноразмерную или частичную последовательность белка, белкового домена или одной или более субъединиц белка; причем полинуклеотид содержит модулирующую или регуляторную нуклеиновую кислоту, последовательность которой может быть дикого типа или модифицированной от дикого типа; и трансген, который может быть или не быть последовательностью, модифицированной от дикого типа. Эти последовательности AAV могут служить либо «донорной» последовательностью одного или более кодонов (на уровне нуклеиновой кислоты) или аминокислот (на уровне полипептида), либо «акцепторными» последовательностями одного или более кодонов (на уровне нуклеиновой кислоты) или аминокислот (на уровне полипептида).

[000308] Вектор на основе вирусной конструкции: в контексте настоящего описания «вектор на основе вирусной конструкции» представляет собой вектор, который содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих белок Rep и или Cap.

[000309] Вектор экспрессии на основе вирусной конструкции: в контексте настоящего описания «вектор экспрессии на основе вирусной конструкции» представляет собой вектор, который содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих Rep и или Cap, который дополнительно содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих компоненты для вирусной экспрессии в клетке вирусной репликации.

[000310] Вирусный геном: в контексте настоящего описания «вирусный геном» представляет собой полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере один инвертированный концевой повтор (ITR), по меньшей мере одну регуляторную последовательность и по меньшей мере один полезный груз. Вирусный геном получен путем репликации конструкции полезного груза из вектора экспрессии конструкции полезного груза. Вирусный геном кодирует по меньшей мере одну копию конструкции полезного груза.

ЭКВИВАЛЕНТЫ И ОБЪЕМ

[000311] Специалисты в данной области техники поймут или будут способны установить с использованием не более чем стандартного экспериментирования многие эквиваленты конкретным вариантам осуществления в соответствии с настоящим изобретением, описанным в данном документе. Не предполагается, чтобы объем настоящего изобретения ограничивался вышеизложенным описанием, вместо этого он изложен в прилагаемой формуле изобретения.

[000312] В пунктах формулы изобретения формы единственного числа, такие как «некоторый», «некий» и «данный», могут означать один или более чем один, если не указано обратное, или это иным образом очевидно из контекста. Пункты формулы изобретения или описания, которые включают «или» между одним или более членами группы, считаются удовлетворительными, если один, более чем один или все из членов группы присутствуют в, используются в или иным образом относятся к заданному продукту или процессу, если не указано обратное, или это иным образом очевидно из контекста. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых именно один член группы присутствует в, используется в или иным образом относится к заданному продукту или процессу. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых более одного или все члены группы присутствуют в, используются в или иным образом относятся к заданному продукту или процессу.

[000313] Также отмечается, что термин «содержащий» предполагается открытым и позволяет, но не требует включения дополнительных элементов или стадий. Если термин «содержащий» используется в данном документе, термин «состоящий из», следовательно, также охватывается и раскрывается.

[000314] Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понятно среднему специалисту в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Способы и материалы описаны в данном документе для применения в настоящем раскрытии; также могут быть использованы другие подходящие способы и материалы, известные в данной области техники.

[000315] В случае, если приведены диапазоны, конечные значения включены. Более того, следует понимать, что если не указано иное, или это в иных условиях не является очевидным из контекста и понимания специалиста в данной области техники, величины, которые выражены в виде диапазонов, могут предполагать любое конкретное значение или поддиапазон в приведенных диапазонах в разных вариантах осуществления настоящего изобретения, до десятой части единицы измерения на нижней границе диапазона, если контекст явно не предписывает иное.

[000316] Кроме того, следует понимать, что любой конкретный вариант осуществления настоящего изобретения, который попадает в уровень техники, может быть явно исключен из любого одного или более пунктов формулы изобретения. Поскольку такие варианты осуществления считаются известными специалисту в данной области техники, их можно исключить, даже если исключение явно не изложено в данном документе. Любой определенный вариант осуществления композиций по настоящему изобретению (например, любая нуклеиновая кислота или кодируемый ею белок; любой способ получения; любой способ применения; и т. д.) может быть исключен из любого одного или более пунктов формулы изобретения по любой причине, связанной или не связанной с его присутствием в уровне техники.

[000317] Все упоминаемые источники, например, ссылки, публикации, базы данных, записи в базах данных и источники из уровня техники, цитируемые в данном документе, включены в настоящую заявку при помощи ссылки, даже если явным образом не указываются при цитировании. В случае противоречивых утверждений из цитируемого источника и настоящей заявки, утверждение в настоящей заявке должно иметь преимущественную силу.

[000318] Названия разделов и таблиц не подразумеваются как ограничивающие.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Разработка полинуклеотидов AADC

[000319] Полинуклеотиды AADC были разработаны с включением как минимум последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок AADC.

[000320] После разработки последовательность конструировали, или синтезировали, или вставляли в вектор и вводили в клетку или организм. Подходящими плазмидами или векторами являлись любые, которые трансдуцируют или трансфицируют целевую клетку.

[000321] Можно было использовать векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV), вирусные частицы или целые вирусы.

[000322] Введение приводит к процессированию полинуклеотида AADC с образованием белка AADC, который изменяет этиологию заболевания, в данном случае болезни Паркинсона.

[000323] В соответствии с одним неограничивающим примером плазмиды, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, приведены в таблице 1. Эти полинуклеотиды AADC из таблицы содержатся в плазмиде Fastback, и имеют промотор CMV, и кодируют AADC. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления открытая рамка считывания мРНК белка AADC является кодон-оптимизированной (например, кодоп).

Таблица 1. Содержащие полинуклеотид AADC плазмиды/векторы.

Конструкция SEQ ID NO pFB CMV hAADC-1 2 pFB CMV hAADC-2 3 pFB CMV hAADC-3 4 pFB CMV hAADC-4 5

Пример 2. Полинуклеотиды AADC: ITR к ITR

[000324] Полинуклеотиды AADC, пригодные для применения в вирусном векторе на основе AAV, включают приведенные в таблице 2.

[000325] В таблице 2 приведены последовательности ITR к ITR из таблицы 1.

Таблица 2. Полинуклеотиды AADC ITR к ITR

Конструкция SEQ ID NO pFB CMV hAADC-1 (ITR к ITR) 6 pFB CMV hAADC-2 (ITR к ITR) 7 pFB CMV hAADC-3 (ITR к ITR) 8 pFB CMV hAADC-4 (ITR к ITR) 9

Пример 3. По отношению к исходной последовательности ITR к ITR,

[000326] полинуклеотиды AADC разработаны согласно таблице 3 и таблице 4. Положения старт- и стоп-кодонов даны по отношению полинуклеотидам AADC ITR к ITR, описанным в таблице 2.

Таблица 3. Составляющие модули или участки последовательности полинуклеотидов AADC

pFB CMV hAADC-1 (ITR к ITR) pFB CMV hAADC-2
(ITR к ITR) pFB CMV hAADC-3
(ITR к ITR) pFB CMV hAADC-4
(ITR к ITR) Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон 5'-ITR 1 130 1 130 1 130 1 130 Энхансер CMV 263 566 263 566 263 566 296 599 Промотор CMV 567 769 567 769 567 769 600 802 ie1 экзон 1 784 917 784 917 784 917 817 950 ie1 интрон 1 918 949 918 949 918 949 951 982 hbBglobin, интрон 2 950 1296 950 1296 950 1296 983 1329 hBglobin, экзон 3 1297 1349 1297 1349 1297 1349 1330 1382 5'-UTR -- -- -- -- -- -- 1398 1468 hAADC 1374 2822 -- -- 1374 2822 1473 2921 кодоп hAADC -- -- 1374 2816 -- -- -- -- 3'-UTR -- -- -- -- 2823 3221 2922 3361 сигнал поли(A) hGH 2841 3317 2835 3311 3240 3716 3380 3856 3'-ITR 3417 3535 3416 3534 3822 3940 3961 4079

Таблица 4. Составляющие модули или участки последовательности полинуклеотидов AADC

hAADC_1k hAADC_2k hAADC_3k hAADC_4 Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон 5'-ITR 1 141 1 141 1 141 1 141 Энхансер CMV 245 548 245 548 245 548 245 548 Промотор CMV 549 751 549 751 549 751 549 751 ie1 экзон 1 766 899 766 899 766 899 766 899 ie1 интрон 1 900 931 900 931 900 931 900 931 hbBglobin, интрон 2 932 1278 932 1278 932 1278 932 1278 hBglobin, экзон 3 1279 1331 1279 1331 1279 1331 1279 1331 5'-UTR -- -- -- -- -- -- 1347 3310 hAADC 1356 2804 1356 2804 -- -- 1422 2864 кодоп hAADC -- -- -- -- 1356 2798 -- -- 3'-UTR -- -- -- -- -- -- 2865 3310 сигнал поли(A) hGH 2823 3299 2823 3299 2817 3293 3329 3805 3'-ITR 3357 3497 3357 3497 3351 3491 3863 4003

Таблица 5. Составляющие модули или участки последовательности полинуклеотидов AADC

hAADC_5k hAADC_6k hAADC_9k Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон 5'-ITR 1 145 1 141 1 130 Энхансер CMV 249 552 245 548 234 537 Промотор CMV 553 755 549 751 538 740 ie1 экзон 1 770 903 766 899 755 888 ie1 интрон 1 904 935 900 931 889 920 hbBglobin, интрон 2 936 1282 932 1278 921 1267 hBglobin, экзон 3 1283 1335 1279 1331 1268 1320 5'-UTR -- -- -- -- -- -- hAADC 1356 2798 1345 2793 кодоп hAADC 1360 2802 -- -- -- -- 3'-UTR -- -- 2799 3203 -- -- сигнал поли(A) hGH 2821 3297 3222 3698 2812 3288 3'-ITR 3355 3499 3756 3896 3346 3475

Пример 4. Разработка полинуклеотидов AADC

[000327] Полинуклеотиды AADC были разработаны с включением как минимум последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок AADC.

[000328] После разработки последовательность конструировали, или синтезировали, или вставляли в вектор и вводили в клетку или организм. Подходящими плазмидами или векторами являлись любые, которые трансдуцируют или трансфицируют целевую клетку.

[000329] Можно было использовать векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV), вирусные частицы или целые вирусы.

[000330] Введение приводит к процессированию полинуклеотида AADC с образованием белка AADC, который изменяет этиологию заболевания, в данном случае болезни Паркинсона.

[000331] В соответствии с одним неограничивающим примером плазмиды, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, приведены в таблице 6. Эти полинуклеотиды AADC из таблицы содержатся в плазмиде Fastback, и имеют промотор CMV, и кодируют AADC. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления открытая рамка считывания мРНК белка AADC является кодон-оптимизированной (например, кодоп).

Таблица 6. Содержащие полинуклеотид AADC плазмиды/векторы.

Конструкция SEQ ID NO phAADC_1k 10 phAADC_2k 11 phAADC_3k 12 phAADC_4 13 phAADC_5k 14 phAADC_6k 15 phAADC_9k 16

[000332] В таблице 7 приведены последовательности ITR к ITR из таблицы 6.

Таблица 7. Полинуклеотиды AADC ITR к ITR

Конструкция SEQ ID NO phAADC_1k (ITR к ITR) 17 phAADC_2k (ITR к ITR) 18 phAADC_3k (ITR к ITR) 19 phAADC_4 (ITR к ITR) 20 phAADC_5k (ITR к ITR) 21 phAADC_6k (ITR к ITR) 22 phAADC_9k (ITR к ITR) 23

Пример 5. Введение композиций с полинуклеотидами AADC пациентам для генной терапии

[000333] Композиции с векторами на основе рекомбинантных AAV, содержащими полинуклеотид AADC, вводили инфузией в черную субстанцию и, в частности, Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA) пациентов, у которых есть болезнь Паркинсона и которые идентифицированы как подходящие для лечения в соответствии с известными в настоящей области техники способами.

[000334] Одним способом введения, рассматриваемым для применения в описываемых в настоящем документе способах, является конвективная доставка в режиме реального времени (RCD) композиций с векторами на основе AAV, содержащими полинуклеотид AADC, путем совместной инфузии гадотеридола (контраста, используемого для магнитного резонанса (MR)) и магнитно-резонансной томографии T1 или Т2 (MRT), с помощью которой можно прогнозировать области последующей экспрессии гена AADC. Как описано в Richardson, et al., 2011, точность размещения канюли и начального распределение инфузата можно безопасно определять путем инфузии солевого раствора без существенного изменения последующего распределения радиоактивного индикатора (Richardson, et al., 2011, Neurosurgery, 69(1):154-163). RCD Т2 позволяет производить детекцию интрапаренхиматозной конвективной доставки в неповрежденном головном мозге, и с помощью нее можно прогнозировать последующее распределение трансгена после инфузии вирусного вектора. Субъектам вводили инфузию солевого раствора/получали T2-изображения, сразу же с последующей инфузией гадотериола/получением T1-изображений в скорлупе и стволе головного мозга. Анализировали объемы распределения и пространственные паттерны. Гадотеридол и AVV-кодируемые AADC совместно вводили инфузией при переменном получении T2/T1-изображений в таламусе, а гиперинтенсивные области сравнивали с областями последующей экспрессии трансгена. Ожидалось, что соотношения объема распределения к объему инфузии должны были быть схожими для RCD солевого раствора и гадотеридола. Пространственное перекрытие должно было хорошо коррелировать между T2- и T1-изображениями. Второй инфузат должен был повторять пространственно-временной паттерн, аналогичный первому, заполняя целевую область до появления дополнительного целераспределения. Области экспрессии AADC должны были хорошо коррелировать с областями гиперинтенсивности как на Т1-, так и на Т2-изображениях, наблюдаемой в ходе RCD (Richardson, et al., 2011, Neurosurgery, 69(1):154-163).

[000335] Конвективная доставка (CED) макромолекул непосредственно в паренхиму головного мозга известна на протяжении более двух десятилетий. CED - это термин, который обозначает использование градиента давления для создания объемного потока внутри паренхимы головного мозга, т. е. конвекции макромолекул внутри интерстициальной жидкости, управляемой путем инфузии раствора через канюлю, размещенную непосредственно в целевой структуре. Этот способ делает возможным равномерное распределение терапевтических средств по большим объемам ткани головного мозга, минуя гематоэнцефалический барьер и превосходя простую диффузию (Richardson,et al., 2011, Stereotact. Funct. Neurosurg. 89:141-151).

[000336] Salegioet al. недавно продемонстрировали распределение наночастиц различных размеров, в том числе мицелл (~15 нм по размеру), ААV (~20-25 нм) и липосом (~65 нм), в ЦНС грызунов и NHP (Salegio et al., 2014, Frontiers in Neuroanatomy, vol. 8, article 9: pp. 1-8). Простые инъекции не могут задействовать периваскулярную систему, и необходимы специализированные инфузионные канюли, позволяющие поддерживать постоянное давление на кончике канюли, благодаря чему превышается интерстициальное гидростатическое давление, а инфузат может вытекать в ткань. Простые иглы создают значительный противоток; поэтому для противодействия такой тенденции были разработаны устойчивые к противотоку канюли. Появление платформ для конвективных инфузий с контролем по MRI дополнительно усовершенствовало понимание механики периваскулярного потока, и было продемонстрировано, что периваскулярное распределение липосом было линейным относительно времени, наклон кривой возрастал в миелинизированных участках, а прекращение инфузии предотвращало дальнейшее увеличение объема распределения. (Richardson,et al., 2011, Stereotact. Funct. Neurosurg. 89:141-151;Salegio et al., 2014, Frontiers in Neuroanatomy, vol. 8, article 9: pp. 1-8).

[000337] Известно, что интрапаренхимальные инъекции rAAV приводят к устойчивой, но относительно локальной трансдукции. Такие способы локальной доставки являются преимущественными при проведении генной терапии неврологических нарушений, которые обусловлены невропатологией, которая локализована в конкретном анатомическом участке или анатомической цепи, например, как в случае болезни Паркинсона. Тем не менее, в способах лечения, предусматривающих трансдукцию более широких областей ЦНС, интрапаренхимальные инъекции являются практически нецелесообразными. Лечение неврологических нарушений, относящихся к врожденным аномалиям обмена веществ и/или моногенным нарушениям, или таким, которые затрагивают двигательные нейроны спинного мозга, может предусматривать трансдукцию больших частей соответственно головного мозга или спинного мозга. Разработка малоинвазивных способов доставки через гематоэнцефалический барьер для векторов является чрезвычайно важной задачей. Сообщалось о многочисленных попытках с различными результатами применять молекулы, о которых известно, что они взаимодействуют с различными механизмами активного транспорта (вероятно, рецептор-опосредованного) для переноса белков через гематоэнцефалический барьер. Учитывая большое количество доступных серотипов AAV, один или более серотипов могут связываться с рецептором входа в клетку, способным транспортировать капсид AAV через гематоэнцефалический барьер (Manfredsson, et al., 2009, ʺAAV9: a potential blood brain barrier buster.ʺ Molecular Therapy 17(3):403-405).

Вектор и стереотаксическая инфузия

[000338] Стереотаксической подход можно применять для хирургической доставки полинуклеотидов AADC. Хотя у индивидуумов с дефицитом AADC присутствует недостаток адреналина и норадреналина, у этих пациенты должны сохраняться стабильное кровяное давление и частота сердечных сокращений во время хирургической операции. Не должно быть никаких заметных внутримозговых кровоизлияний на послеоперационных сканах компьютерной томографии (СТ) или MRI. Следы от укола иглы, которые видны на MRI, должны свидетельствовать о точной инъекции в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA). Пациенты должны быть выписаны из больницы приблизительно через одну неделю после хирургической операции (Hwu, W.L., et al., 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency. Sci. Transl. Med. Vol. 4, 134ra61).

[000339] Назначенные на лечение субъекты получают вектор в композиции с AAV-вектором, безопасно доставляемый в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA) с помощью двусторонних инфузий или, в качестве альтернативы, в полосатое тело (в хвостатые ядра и скорлупу) или в гипоталамическое ядро​(STN), например, необязательно с использованием FDA-утвержденных нейровентрикулярных канюль SMARTFLOW® (SurgiVision, Inc), специально разработанных для клинического применения, с или без помощи системы CLEARPOINT®, для того, чтобы помочь лечащему нейрохирургу(-ам) направлять и отслеживать доставку терапевтического средства в головной мозг (см., например, San Sebastian, et al., 2014, Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 3: 14049; см., например, Feng and Maguire-Zeiss, 2010, CNS Drugs 24(3):177-192).

[000340] Так, например, во время хирургической операции определяют две целевые точки в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральной области покрышки (ВТА), которые достаточно отделены друг от друга в дорсолатеральных направлениях и идентифицировали на магнитно-резонансной томограмме. Пробуривают одно трепанационное отверстие на каждой стороне кости черепа, через которое вектор вводят инъекцией в две целевые точки по двойному пути введения. Содержащий AAV-вектор раствор готовят в концентрации 1,5 × 10¹² векторного генома/мл, и 50 мкл на каждую точку раствора вводят инъекцией в количестве 1 мкл/мин.; каждый пациент получает 3 × 10¹¹ векторного генома AAV-векторной конструкции.

[000341] Титры нейтрализующих антител к AAV2 определяют путем измерения β-галактозидазных активностей в клетках НЕК293, трансдуцированных 5 × 10³ векторного генома/клетка векторов AAV2, экспрессирующих β-галактозидазу, в различных разведениях сыворотки.

PET

[000342] Уровень экспрессии AADC в черной субстанции оценивают на PET с визуализацией FMT за шесть дней до хирургической операции и через один и шесть месяцев после переноса гена. Все пациенты прекращают принимать дофаминергические лекарственные препараты за 18 часов до PET и принимали 2,5 мг/кг карбидопы перорально за один час до FMT-инъекции. Затем 0,12 мКи/кг средства для FMT в солевом растворе вводят инфузией в локтевую вену и получают 90-минутную динамическую последовательность изображений. Данные PET и магнитно-резонансной томографии совместно регистрируют с помощью программы обработки наложения (Syntegra; Philips, Амстердам, Нидерланды) для получения наложенных изображений. Значения радиоактивности в пределах представляющих интерес объемов, задействованных в нигростриарном пути, рассчитывают между 80 и 90 минутами после инъекции индикатора. Изменение поглощения в FMT нигростриатного пути от исходной точки до 24 недель оценивают с использованием соотношения значений радиоактивности черной субстанции к полосатому телу.

Статистический анализ

[000343] Значения в исходной точке и через 6 месяцев после переноса гена сравнивают с помощью t-критерия Стьюдента (спаренные анализы). Двустороннее Р-значение <0,05 берут для обозначения значимых различий. Двусторонний дисперсионный анализ с поправкой по методу Бонферрони P-значений используют для оценки кратковременного ответа к леводопе. (См., например, Muramatsu, et al., 2010, ʺA phase I study of aromatic L-amino acid decarboxylase gene therapy for Parkinson's disease.ʺ Mol. Ther. 18:1731-1735).

[000344] Безопасность и переносимость двустороннего введения композиций с вектором на основе AAV с использованием инфузии в режиме реального времени с контролем по изображениям в головной мозг субъектов с болезнью Паркинсона можно отслеживать сроком до 9 месяцев после операции или дольше. Широкий охват целевых областей (Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральной области покрышки (VTA)) и широкое распределение белка AADC в стриатуме должны достигаться без каких-либо побочных эффектов.

[000345] Изменения роста и двигательных навыков: пациенты должны набирать массу и характеризоваться улучшением их двигательных показателей после переноса гена в течение года после лечения. Массу измеряют через 3-6 месяцев после переноса гена. Все пациенты изначально должны иметь предварительные показатели, равные нулю, по Шкале развития моторики младенцев Альберта (AIMS) и очень низкие предварительные показатели по Шкале развития моторики Пибоди, второй редакции (PDMS-II). После переноса гена у всех пациентов должны наблюдаться непрерывные увеличения их предварительных показателей по этим двум шкалам, что свидетельствует о том, что их двигательные функции улучшились. Анкета сравнительной оценки развития для младенцев и детей (CDIIT) охватывает развитие как когнитивных так и двигательных функций. У всех пациентов должны наблюдаться низкие предварительные показатели CDIIT перед переносом гена, а последующее увеличение показателей свидетельствует об улучшении как двигательных, так и когнитивных функций.

Субъективные улучшения после переноса гена

[000346] Для документирования симптомов, которые труднее поддаются количественной оценке, супругов, опекунов или попечителей пациентов в конце исследования просят заполнить анкету. Симптомы окулогирных кризов должны уменьшаться, а некоторыми умеренными симптомами при окулогирных кризах, которые могли оставаться после генной терапии являются, например, девиации глаза и нарушения сна. Субъекты могут испытывать повышенную эмоциональную стабильность, и/или некоторые улучшения в потоотделения и гипертермии (общее проявление нестабильности температуры тела в жаркую погоду). Не должно быть никаких детектируемых аномалий в колебательности сердечного ритма, оцениваемых по 24-часовому холтеровскому мониторированию ЭКГ, либо до, либо после переноса гена. У пациентов, которые до генной терапии были прикованы к постели и у которых наблюдали небольшое спонтанное движение, может наблюдаться менее серьезный птоз (опущение верхнего века) через одну-две недели после переноса гена. В соответствии с предыдущими исследованиями, через один месяц после переноса гена может появляться дискинезия, но в случае, если наблюдалось уменьшение дискинезии, должно начинаться развитие двигательных функций (Hwu, W.L., et al., 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency. Sci. Transl. Med. Vol. 4, 134ra61). У субъектов можно наблюдать, например, улучшенное удержание головы спустя три месяца, способность сидеть с поддержкой спустя шесть - девять месяцев, способность садиться из лежачего положения спустя тринадцать месяцев и способность удерживать игрушки и стоять с поддержкой спустя шестнадцать месяцев после переноса гена. Антитело к AAV2 должно быть отрицательным у пациентов до генной терапии, и титры могут слегка возрастать после переноса гена.

PET-сканирование и CSF-анализ

[000347] Для подвергаемых лечению пациентов проводят PET-сканирование и CSF-анализ. Через шесть месяцев после переноса гена на PET-сканах должно быть видно, что поглощение 6-[18F]-фтордопы (FDOPA) увеличивается от исходного уровня в объединенных (справа и слева) участках обработки. CSF-анализ должен выявить увеличение уровней гомованилиновой кислоты (HVA, метаболита дофамина) и 5-оксииндолуксусной кислоты (HIAA, метаболита серотонина). Однако уровни L-DOPA и 3-О-метилдопы могут оставаться повышенными (Hwu, W.L., et al., 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency. Sci. Transl. Med. Vol. 4, 134ra61).

Пример 6. Введение полинуклеотидов AADC

[000348] Композицию с векторами на основе рекомбинантного AAV, содержащими полинуклеотид AADC, вводят инфузией в скорлупу пациентов с болезнью Паркинсона с помощью способов введения, описанных в Примере 5. Доза, число пациентов и объем приведены в таблице 8.

Таблица 8. Схема исследования

Исследование № Количество пациентов Доза Объем 1 6 3×10¹¹ вг 100 мкл на скорлупу 2 6 9×10¹¹ вг 300 мкл на скорлупу 3 10 2,3×10¹¹ вг 100 мкл на скорлупу 4 10 7,5×10¹¹ вг 100 мкл на скорлупу 5 5 7,5×10¹¹ вг 450 мкл на скорлупу 6 До 20 1,4×10¹² вг До 900 мкл на скорлупу 7 До 20 4,8×10¹² вг До 900 мкл на скорлупу 8 До 20 8,8×10¹² вг До 900 мкл на скорлупу

[000349] В ходе исследования оценивали безопасность и переносимость инфузии композиций с векторами на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (AAV), содержащим полинуклеотид AADC, у пациентов-людей с диагностированной болезнью Паркинсона. Пациентов оценивали до операции и ежемесячно в послеоперационном периоде в течение шести месяцев с использованием нескольких показателей, в том числе шкалы общей оценки дистонии (GDS) (см. Comella, et al., 2003, Movement Disorders, 18(3):303-312), теста с нагрузкой L-DOPA, оценок по шкале UPDRS, журналов статуса двигательных функций и результатов лабораторных тестов. С помощью журналов, в которых день разделен на получасовые сегменты, опекуны пациентов регистрировали их подвижность в течение четырех дней до поступления и в течение еще четырех дней через шесть месяцев после поступления в исследовательский центр. Опекунов пациента обучали оценивать состояние субъекта как спящего, неподвижного, подвижного без вызывающей беспокойство дискинезии или подвижного с вызывающей беспокойство дискинезией. Подсчитывали общее количество часов, проведенных в каждой из этих категорий, и различие между исходной оценкой и шестимесячными оценками сравнивали между группами. Кратковременный ответ на леводопу оценивали на исходном уровне и через 6 месяцев после переноса гена; субъекты принимали 100 мг леводопы перорально с 25 мг бенсеразида спустя 20 часов без дофаминергического лекарственного препарата. Двигательные симптомы, на основе GDS и концентрации леводопы в плазме, оценивали на исходном уровне и через 30 мин, 1, 2, 3 и 4 часа после приема леводопы (см., например, Muramatsu, et al., 2010, ʺA phase I study of aromatic L-amino acid decarboxylase gene therapy for Parkinson's disease.ʺ Mol. Ther. 18:1731-1735).

Пример 7. In vivo введение полинуклеотидов AADC

[000350] Две композиции с векторами на основе рекомбинантного AAV, содержащими полинуклеотид AADC (плазмиду, SEQ ID NO: 10 и 12; ITR к ITR SEQ ID NO: 17 и 19), контроль и стандарт вводили крысам (n=5) с помощью двустороннего интрастриарного введения (10 мкл/сторона) с уровнем дозы 2×10¹² вг/мл. Экспрессию AADC в стриатуме крыс определяли с помощью ELISA через 4 и 8 недель. Наблюдали разброс среди животных и полушарий из-за отличающейся доставки среди участков инфузий. Обе конструкции экспрессировали AADC, но для конструкции phAADC_3k (плазмида SEQ ID NO: 12; ITR к ITR SEQ ID NO: 19) наблюдали до 200% увеличения экспрессии по сравнению со стандартной конструкцией.

Пример 8. Дозозависимое исследование полинуклеотидов AADC

[000351] Крысам с поражениями, вызванными 6-OHDA, вводили композиции с векторами на основе рекомбинантного AAV, содержащими полинуклеотид AADC (плазмида SEQ ID NO: 10; ITR к ITR SEQ ID NO: 17) с пятью различными уровнями доз в диапазоне от 1×10¹¹ вг/мл до 1×10¹³ вг/мл и контроль. Поведенческий ответ на введение низкой дозы леводопы количественно оценивали до и после (на 3-ю и 4-ю неделю) доставки композиции. Спустя 5 недель после введения дозы проводили аутопсию и измеряли ферментативную активность AADC в ex vivo анализе ткани стриатума и с помощью иммуногистохимического (IHC) окрашивания определяли распределение AADC в головном мозге.

Пример 9. Влияние пустых частиц на интрастриарную трансдукцию

[000352] Взрослым крысам (п=6) вводили различные соотношения заполненных:пустых векторных частиц, 0% заполненных, 50% заполненных, 85% заполненных или 99% заполненных. В постоянной дозе и объеме (5 мкл и 1×10 вг) интрастриарно вводили вектор на основе рекомбинантного AAV, содержащий полинуклеотид AADC (плазмида SEQ ID NO: 10; ITR к ITR SEQ ID NO: 17). Крыс оценивали через 4 недели после введения. Низкая доза вектора доза приводила к ограниченной экспрессии вектора AADC. Объем распределения для частиц показан в таблице 9 (ELISA), а стриарные уровни экспрессии AADC показаны в таблице 10 (гистология).

Таблица 9. Объем распределения

% отношения заполненной AAV2-AADC-частицы к пустым капсидам Примерный объем распределения (мм³) 50:50 2 70:30 2.4 85:15 2.5 100:0 3

Таблица 10. Стриарные уровни

% заполненных AAV2-AADC-частиц пг AADC/мкг белка 0 0.4 52 1.1 58 1.7 83 2 >99 2.1

[000353] Распределение было сравнимым для всех групп. Относительно низкая доза вектора приводила к ограниченной экспрессии AADC. Также имела место тенденция к снижению уровней экспрессии AADC при >30% пустых частиц.

[000354] Хотя настоящее изобретение было описано в некотором объеме и с некоторыми подробностями в отношении нескольких описанных вариантов осуществления, не предполагается, что оно должно ограничиваться любыми такими подробностями или вариантами осуществления или любым конкретным вариантом осуществления, а его следует толковать с учетом прилагаемой формулы изобретения для того, чтобы обеспечить наиболее широкую возможную интерпретацию таких пунктов формулы изобретения в связи с уровнем техники и, следовательно, чтобы эффективно охватить предусмотренный объем настоящего изобретения.

Все публикации, патентные заявки, патенты и другие источники, упомянутые в данном документе, включены во всей своей полноте посредством ссылки. В случае конфликта настоящее описание, в том числе определения, будет иметь преимущество. Кроме того, заголовки разделов, материалы, способы и примеры являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> VOYAGER THERAPEUTICS, INC.

<120> ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ AADC ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА

<130> 2057.1010PCT

<140> PCT/US2015/XXXXXX

<141> 2015-11-05

<150> 62/243,537

<151> 2015-10-19

<150> 62/199,578

<151> 2015-07-31

<150> 62/155,692

<151> 2015-05-01

<150> 62/075,298

<151> 2014-11-05

<160> 23

<170> PatentIn, версия 3.5

<210> 1

<211> 480

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Asn Ala Ser Glu Phe Arg Arg Arg Gly Lys Glu Met Val Asp Tyr

1 5 10 15

Val Ala Asn Tyr Met Glu Gly Ile Glu Gly Arg Gln Val Tyr Pro Asp

20 25 30

Val Glu Pro Gly Tyr Leu Arg Pro Leu Ile Pro Ala Ala Ala Pro Gln

35 40 45

Glu Pro Asp Thr Phe Glu Asp Ile Ile Asn Asp Val Glu Lys Ile Ile

50 55 60

Met Pro Gly Val Thr His Trp His Ser Pro Tyr Phe Phe Ala Tyr Phe

65 70 75 80

Pro Thr Ala Ser Ser Tyr Pro Ala Met Leu Ala Asp Met Leu Cys Gly

85 90 95

Ala Ile Gly Cys Ile Gly Phe Ser Trp Ala Ala Ser Pro Ala Cys Thr

100 105 110

Glu Leu Glu Thr Val Met Met Asp Trp Leu Gly Lys Met Leu Glu Leu

115 120 125

Pro Lys Ala Phe Leu Asn Glu Lys Ala Gly Glu Gly Gly Gly Val Ile

130 135 140

Gln Gly Ser Ala Ser Glu Ala Thr Leu Val Ala Leu Leu Ala Ala Arg

145 150 155 160

Thr Lys Val Ile His Arg Leu Gln Ala Ala Ser Pro Glu Leu Thr Gln

165 170 175

Ala Ala Ile Met Glu Lys Leu Val Ala Tyr Ser Ser Asp Gln Ala His

180 185 190

Ser Ser Val Glu Arg Ala Gly Leu Ile Gly Gly Val Lys Leu Lys Ala

195 200 205

Ile Pro Ser Asp Gly Asn Phe Ala Met Arg Ala Ser Ala Leu Gln Glu

210 215 220

Ala Leu Glu Arg Asp Lys Ala Ala Gly Leu Ile Pro Phe Phe Met Val

225 230 235 240

Ala Thr Leu Gly Thr Thr Thr Cys Cys Ser Phe Asp Asn Leu Leu Glu

245 250 255

Val Gly Pro Ile Cys Asn Lys Glu Asp Ile Trp Leu His Val Asp Ala

260 265 270

Ala Tyr Ala Gly Ser Ala Phe Ile Cys Pro Glu Phe Arg His Leu Leu

275 280 285

Asn Gly Val Glu Phe Ala Asp Ser Phe Asn Phe Asn Pro His Lys Trp

290 295 300

Leu Leu Val Asn Phe Asp Cys Ser Ala Met Trp Val Lys Lys Arg Thr

305 310 315 320

Asp Leu Thr Gly Ala Phe Arg Leu Asp Pro Thr Tyr Leu Lys His Ser

325 330 335

His Gln Asp Ser Gly Leu Ile Thr Asp Tyr Arg His Trp Gln Ile Pro

340 345 350

Leu Gly Arg Arg Phe Arg Ser Leu Lys Met Trp Phe Val Phe Arg Met

355 360 365

Tyr Gly Val Lys Gly Leu Gln Ala Tyr Ile Arg Lys His Val Gln Leu

370 375 380

Ser His Glu Phe Glu Ser Leu Val Arg Gln Asp Pro Arg Phe Glu Ile

385 390 395 400

Cys Val Glu Val Ile Leu Gly Leu Val Cys Phe Arg Leu Lys Gly Ser

405 410 415

Asn Lys Val Asn Glu Ala Leu Leu Gln Arg Ile Asn Ser Ala Lys Lys

420 425 430

Ile His Leu Val Pro Cys His Leu Arg Asp Lys Phe Val Leu Arg Phe

435 440 445

Ala Ile Cys Ser Arg Thr Val Glu Ser Ala His Val Gln Arg Ala Trp

450 455 460

Glu His Ile Lys Glu Leu Ala Ala Asp Val Leu Arg Ala Glu Arg Glu

465 470 475 480

<210> 2

<211> 8150

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 2

cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac 60

gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt 120

ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg 180

ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta 240

tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa 300

attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg 360

cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca 420

actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt 480

gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt 540

caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt 600

atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca 660

gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg 720

gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc 780

agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca 840

tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcac gcgtggagct agttattaat 900

agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 960

ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 1020

tgacgtatgt tcccatagta acgtcaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 1080

atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 1140

ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 1200

gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc 1260

ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc 1320

tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttgcaccaa aatcaacggg actttccaaa 1380

atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt 1440

ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg 1500

ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cgcggattcg aatcccggcc 1560

gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag tgacgtaagt accgcctata 1620

gagtctatag gcccacaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat 1680

ttctaatact ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct 1740

ctttgcacca ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt 1800

ctgcatataa atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa 1860

tagcagctac aatccagcta ccattctgct tttattttat ggttgggata aggctggatt 1920

attctgagtc caagctaggc ccttttgcta atcatgttca tacctcttat cttcctccca 1980

cagctcctgg gcaacgtgct ggtctgtgtg ctggcccatc actttggcaa agaattggga 2040

ttcgaacatc ggccgccacc atgaacgcaa gtgaattccg aaggagaggg aaggagatgg 2100

tggattacgt ggccaactac atggaaggca ttgagggacg ccaggtctac cctgacgtgg 2160

agcccgggta cctgcggccg ctgatccctg ccgctgcccc tcaggagcca gacacgtttg 2220

aggacatcat caacgacgtt gagaagataa tcatgcctgg ggtgacgcac tggcacagcc 2280

cctacttctt cgcctacttc cccactgcca gctcgtaccc ggccatgctt gcggacatgc 2340

tgtgcggggc cattggctgc atcggcttct cctgggcggc aagcccagca tgcacagagc 2400

tggagactgt gatgatggac tggctcggga agatgctgga actaccaaag gcatttttga 2460

atgagaaagc tggagaaggg ggaggagtga tccagggaag tgccagtgaa gccaccctgg 2520

tggccctgct ggccgctcgg accaaagtga tccatcggct gcaggcagcg tccccagagc 2580

tcacacaggc cgctatcatg gagaagctgg tggcttactc atccgatcag gcacactcct 2640

cagtggaaag agctgggtta attggtggag tgaaattaaa agccatcccc tcagatggca 2700

acttcgccat gcgtgcgtct gccctgcagg aagccctgga gagagacaaa gcggctggcc 2760

tgattccttt ctttatggtt gccaccctgg ggaccacaac atgctgctcc tttgacaatc 2820

tcttagaagt cggtcctatc tgcaacaagg aagacatatg gctgcacgtt gatgcagcct 2880

acgcaggcag tgcattcatc tgccctgagt tccggcacct tctgaatgga gtggagtttg 2940

cagattcatt caactttaat ccccacaaat ggctattggt gaattttgac tgttctgcca 3000

tgtgggtgaa aaagagaaca gacttaacgg gagcctttag actggacccc acttacctga 3060

agcacagcca tcaggattca gggcttatca ctgactaccg gcattggcag ataccactgg 3120

gcagaagatt tcgctctttg aaaatgtggt ttgtatttag gatgtatgga gtcaaaggac 3180

tgcaggctta tatccgcaag catgtccagc tgtcccatga gtttgagtca ctggtgcgcc 3240

aggatccccg ctttgaaatc tgtgtggaag tcattctggg gcttgtctgc tttcggctaa 3300

agggttccaa caaagtgaat gaagctcttc tgcaaagaat aaacagtgcc aaaaaaatcc 3360

acttggttcc atgtcacctc agggacaagt ttgtcctgcg ctttgccatc tgttctcgca 3420

cggtggaatc tgcccatgtg cagcgggcct gggaacacat caaagagctg gcggccgacg 3480

tgctgcgagc agagagggag taggagtgag ctgctcgaga gatctacggg tggcatccct 3540

gtgacccctc cccagtgcct ctcctggccc tggaagttgc cactccagtg cccaccagcc 3600

ttgtcctaat aaaattaagt tgcatcattt tgtctgacta ggtgtccttc tataatatta 3660

tggggtggag gggggtggta tggagcaagg ggcaagttgg gaagacaacc tgtagggcct 3720

gcggggtcta ttgggaacca agctggagtg cagtggcaca atcttggctc actgcaatct 3780

ccgcctcctg ggttcaagcg attctcctgc ctcagcctcc cgagttgttg ggattccagg 3840

catgcatgac caggctcagc taatttttgt ttttttggta gagacggggt ttcaccatat 3900

tggccaggct ggtctccaac tcctaatctc aggtgatcta cccaccttgg cctcccaaat 3960

tgctgggatt acaggcgtga accactgctc ccttccctgt ccttctgatt ttgtaggtaa 4020

ccccggacca cgtgcggacc gagcggccgc tctagagcat ggctacgtag ataagtagca 4080

tggcgggtta atcattaact acaaggaacc cctagtgatg gagttggcca ctccctctct 4140

gcgcgctcgc tcgctcactg aggccgggcg accaaaggtc gcccgacgcc cgggcggcct 4200

cagtgagcga gcgagcgcgc agctgcctgc aggtctgaga caataaccct gataaatgct 4260

tcaataatgt agccaaccac tagaactata gctagagtcc tgggcgaaca aacgatgctc 4320

gccttccaga aaaccgagga tgcgaaccac ttcatccggg gtcagcacca ccggcaagcg 4380

ccgcgacggc cgaggtcttc cgatctcctg aagccagggc agatccgtgc acagcacctt 4440

gccgtagaag aacagcaagg ccgccaatgc ctgacgatgc gtggagaccg aaaccttgcg 4500

ctcgttcgcc agccaggaca gaaatgcctc gacttcgctg ctgcccaagg ttgccgggtg 4560

acgcacaccg tggaaacgga tgaaggcacg aacccagttg acataagcct gttcggttcg 4620

taaactgtaa tgcaagtagc gtatgcgctc acgcaactgg tccagaacct tgaccgaacg 4680

cagcggtggt aacggcgcag tggcggtttt catggcttgt tatgactgtt tttttgtaca 4740

gtctatgcct cgggcatcca agcagcaagc gcgttacgcc gtgggtcgat gtttgatgtt 4800

atggagcagc aacgatgtta cgcagcagca acgatgttac gcagcagggc agtcgcccta 4860

aaacaaagtt aggtggctca agtatgggca tcattcgcac atgtaggctc ggccctgacc 4920

aagtcaaatc catgcgggct gctcttgatc ttttcggtcg tgagttcgga gacgtagcca 4980

cctactccca acatcagccg gactccgatt acctcgggaa cttgctccgt agtaagacat 5040

tcatcgcgct tgctgccttc gaccaagaag cggttgttgg cgctctcgcg gcttacgttc 5100

tgcccaagtt tgagcagccg cgtagtgaga tctatatcta tgatctcgca gtctccggcg 5160

agcaccggag gcagggcatt gccaccgcgc tcatcaatct cctcaagcat gaggccaacg 5220

cgcttggtgc ttatgtgatc tacgtgcaag cagattacgg tgacgatccc gcagtggctc 5280

tctatacaaa gttgggcata cgggaagaag tgatgcactt tgatatcgac ccaagtaccg 5340

ccacctaaca attcgttcaa gccgagatcg gcttcccggc cgcggagttg ttcggtaaat 5400

tgtcacaacg ccgcgaatat agtctttacc atgcccttgg ccacgcccct ctttaatacg 5460

acgggcaatt tgcacttcag aaaatgaaga gtttgcttta gccataacaa aagtccagta 5520

tgctttttca cagcataact ggactgattt cagtttacaa ctattctgtc tagtttaaga 5580

ctttattgtc atagtttaga tctattttgt tcagtttaag actttattgt ccgcccacac 5640

ccgcttacgc agggcatcca tttattactc aaccgtaacc gattttgcca ggttacgcgg 5700

ctggtctatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg 5760

ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt 5820

atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa 5880

gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc 5940

gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag 6000

gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt 6060

gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg 6120

aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg 6180

ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg 6240

taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac 6300

tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg 6360

gcctaactac ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt 6420

taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg 6480

tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc 6540

tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt 6600

ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt 6660

taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag 6720

tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt 6780

cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc 6840

gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc 6900

cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg 6960

ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac 7020

aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg 7080

atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc 7140

tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact 7200

gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc 7260

aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat 7320

acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc 7380

ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac 7440

tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa 7500

aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact 7560

catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg 7620

atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg 7680

aaaagtgcca cctaaattgt aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt 7740

taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa 7800

gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc actattaaag 7860

aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg cccactacgt 7920

gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact aaatcggaac 7980

cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt ggcgagaaag 8040

gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc ggtcacgctg 8100

cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc 8150

<210> 3

<211> 8149

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 3

cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac 60

gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt 120

ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg 180

ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta 240

tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa 300

attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg 360

cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca 420

actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt 480

gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt 540

caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt 600

atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca 660

gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg 720

gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc 780

agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca 840

tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcac gcgtggagct agttattaat 900

agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 960

ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 1020

tgacgtatgt tcccatagta acgtcaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 1080

atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 1140

ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 1200

gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc 1260

ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc 1320

tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttgcaccaa aatcaacggg actttccaaa 1380

atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt 1440

ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg 1500

ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cgcggattcg aatcccggcc 1560

gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag tgacgtaagt accgcctata 1620

gagtctatag gcccacaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat 1680

ttctaatact ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct 1740

ctttgcacca ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt 1800

ctgcatataa atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa 1860

tagcagctac aatccagcta ccattctgct tttattttat ggttgggata aggctggatt 1920

attctgagtc caagctaggc ccttttgcta atcatgttca tacctcttat cttcctccca 1980

cagctcctgg gcaacgtgct ggtctgtgtg ctggcccatc actttggcaa agaattggga 2040

ttcgaacatc ggccgccacc atgaacgcca gcgagttcag gaggaggggc aaggagatgg 2100

tggactacgt ggccaactac atggagggca tcgagggcag gcaggtgtac cccgacgtgg 2160

agcccggcta cctgaggccc ctgatccccg ccgccgcccc ccaggagccc gacaccttcg 2220

aggacatcat caacgacgtg gagaagatca tcatgcccgg cgtgacccac tggcacagcc 2280

cctacttctt cgcctacttc cccaccgcca gcagctaccc cgccatgctg gccgacatgc 2340

tgtgcggcgc catcggctgc atcggcttca gctgggccgc cagccccgcc tgcaccgagc 2400

tggagaccgt gatgatggac tggctgggca agatgctgga gctgcccaag gccttcctga 2460

acgagaaggc cggcgagggc ggcggcgtga tccagggcag cgccagcgag gccaccctgg 2520

tggccctgct ggccgccagg accaaggtga tccacaggct gcaggccgcc agccccgagc 2580

tgacccaggc cgccatcatg gagaagctgg tggcctacag cagcgaccag gcccacagca 2640

gcgtggagag ggccggcctg atcggcggcg tgaagctgaa ggccatcccc agcgacggca 2700

acttcgccat gagggccagc gccctgcagg aggccctgga gagggacaag gccgccggcc 2760

tgatcccctt cttcatggtg gccaccctgg gcaccaccac ctgctgcagc ttcgacaacc 2820

tgctggaggt gggccccatc tgcaacaagg aggacatctg gctgcacgtg gacgccgcct 2880

acgccggcag cgccttcatc tgccccgagt tcaggcacct gctgaacggc gtggagttcg 2940

ccgacagctt caacttcaac ccccacaagt ggctgctggt gaacttcgac tgcagcgcca 3000

tgtgggtgaa gaagaggacc gacctgaccg gcgccttcag gctggacccc acctacctga 3060

agcacagcca ccaggacagc ggcctgatca ccgactacag gcactggcag atccccctgg 3120

gcaggaggtt caggagcctg aagatgtggt tcgtgttcag gatgtacggc gtgaagggcc 3180

tgcaggccta catcaggaag cacgtgcagc tgagccacga gttcgagagc ctggtgaggc 3240

aggaccccag gttcgagatc tgcgtggagg tgatcctggg cctggtgtgc ttcaggctga 3300

agggcagcaa caaggtgaac gaggccctgc tgcagaggat caacagcgcc aagaagatcc 3360

acctggtgcc ctgccacctg agggacaagt tcgtgctgag gttcgccatc tgcagcagga 3420

ccgtggagag cgcccacgtg cagagggcct gggagcacat caaggagctg gccgccgacg 3480

tgctgagggc cgagagggag tgagctgctc gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc 3540

cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc 3600

taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc cttctataat attatggggt 3660

ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg 3720

tctattggga accaagctgg agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca atctccgcct 3780

cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca 3840

tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc atattggcca 3900

ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg 3960

gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc ctgtccttct gattttgtag gtaacgtaac 4020

cccggaccac gtgcggaccg agcggccgct ctagagcatg gctacgtaga taagtagcat 4080

ggcgggttaa tcattaacta caaggaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg 4140

cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggcggcctc 4200

agtgagcgag cgagcgcgca gctgcctgca ggtctgagac aataaccctg ataaatgctt 4260

caataatgta gccaaccact agaactatag ctagagtcct gggcgaacaa acgatgctcg 4320

ccttccagaa aaccgaggat gcgaaccact tcatccgggg tcagcaccac cggcaagcgc 4380

cgcgacggcc gaggtcttcc gatctcctga agccagggca gatccgtgca cagcaccttg 4440

ccgtagaaga acagcaaggc cgccaatgcc tgacgatgcg tggagaccga aaccttgcgc 4500

tcgttcgcca gccaggacag aaatgcctcg acttcgctgc tgcccaaggt tgccgggtga 4560

cgcacaccgt ggaaacggat gaaggcacga acccagttga cataagcctg ttcggttcgt 4620

aaactgtaat gcaagtagcg tatgcgctca cgcaactggt ccagaacctt gaccgaacgc 4680

agcggtggta acggcgcagt ggcggttttc atggcttgtt atgactgttt ttttgtacag 4740

tctatgcctc gggcatccaa gcagcaagcg cgttacgccg tgggtcgatg tttgatgtta 4800

tggagcagca acgatgttac gcagcagcaa cgatgttacg cagcagggca gtcgccctaa 4860

aacaaagtta ggtggctcaa gtatgggcat cattcgcaca tgtaggctcg gccctgacca 4920

agtcaaatcc atgcgggctg ctcttgatct tttcggtcgt gagttcggag acgtagccac 4980

ctactcccaa catcagccgg actccgatta cctcgggaac ttgctccgta gtaagacatt 5040

catcgcgctt gctgccttcg accaagaagc ggttgttggc gctctcgcgg cttacgttct 5100

gcccaagttt gagcagccgc gtagtgagat ctatatctat gatctcgcag tctccggcga 5160

gcaccggagg cagggcattg ccaccgcgct catcaatctc ctcaagcatg aggccaacgc 5220

gcttggtgct tatgtgatct acgtgcaagc agattacggt gacgatcccg cagtggctct 5280

ctatacaaag ttgggcatac gggaagaagt gatgcacttt gatatcgacc caagtaccgc 5340

cacctaacaa ttcgttcaag ccgagatcgg cttcccggcc gcggagttgt tcggtaaatt 5400

gtcacaacgc cgcgaatata gtctttacca tgcccttggc cacgcccctc tttaatacga 5460

cgggcaattt gcacttcaga aaatgaagag tttgctttag ccataacaaa agtccagtat 5520

gctttttcac agcataactg gactgatttc agtttacaac tattctgtct agtttaagac 5580

tttattgtca tagtttagat ctattttgtt cagtttaaga ctttattgtc cgcccacacc 5640

cgcttacgca gggcatccat ttattactca accgtaaccg attttgccag gttacgcggc 5700

tggtctatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc 5760

tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta 5820

tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag 5880

aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg 5940

tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg 6000

tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg 6060

cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga 6120

agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc 6180

tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt 6240

aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact 6300

ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg 6360

cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt 6420

accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt 6480

ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct 6540

ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg 6600

gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt 6660

aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt 6720

gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc 6780

gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg 6840

cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc 6900

gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg 6960

gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca 7020

ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga 7080

tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct 7140

ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg 7200

cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca 7260

accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata 7320

cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct 7380

tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact 7440

cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa 7500

acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc 7560

atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga 7620

tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga 7680

aaagtgccac ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt 7740

aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag 7800

aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga 7860

acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg 7920

aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc 7980

ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg 8040

aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc 8100

gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtc 8149

<210> 4

<211> 8555

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 4

cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac 60

gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt 120

ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg 180

ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta 240

tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa 300

attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg 360

cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca 420

actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt 480

gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt 540

caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt 600

atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca 660

gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg 720

gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc 780

agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca 840

tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcac gcgtggagct agttattaat 900

agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 960

ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 1020

tgacgtatgt tcccatagta acgtcaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 1080

atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 1140

ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 1200

gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc 1260

ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc 1320

tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttgcaccaa aatcaacggg actttccaaa 1380

atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt 1440

ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg 1500

ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cgcggattcg aatcccggcc 1560

gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag tgacgtaagt accgcctata 1620

gagtctatag gcccacaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat 1680

ttctaatact ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct 1740

ctttgcacca ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt 1800

ctgcatataa atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa 1860

tagcagctac aatccagcta ccattctgct tttattttat ggttgggata aggctggatt 1920

attctgagtc caagctaggc ccttttgcta atcatgttca tacctcttat cttcctccca 1980

cagctcctgg gcaacgtgct ggtctgtgtg ctggcccatc actttggcaa agaattggga 2040

ttcgaacatc ggccgccacc atgaacgcaa gtgaattccg aaggagaggg aaggagatgg 2100

tggattacgt ggccaactac atggaaggca ttgagggacg ccaggtctac cctgacgtgg 2160

agcccgggta cctgcggccg ctgatccctg ccgctgcccc tcaggagcca gacacgtttg 2220

aggacatcat caacgacgtt gagaagataa tcatgcctgg ggtgacgcac tggcacagcc 2280

cctacttctt cgcctacttc cccactgcca gctcgtaccc ggccatgctt gcggacatgc 2340

tgtgcggggc cattggctgc atcggcttct cctgggcggc aagcccagca tgcacagagc 2400

tggagactgt gatgatggac tggctcggga agatgctgga actaccaaag gcatttttga 2460

atgagaaagc tggagaaggg ggaggagtga tccagggaag tgccagtgaa gccaccctgg 2520

tggccctgct ggccgctcgg accaaagtga tccatcggct gcaggcagcg tccccagagc 2580

tcacacaggc cgctatcatg gagaagctgg tggcttactc atccgatcag gcacactcct 2640

cagtggaaag agctgggtta attggtggag tgaaattaaa agccatcccc tcagatggca 2700

acttcgccat gcgtgcgtct gccctgcagg aagccctgga gagagacaaa gcggctggcc 2760

tgattccttt ctttatggtt gccaccctgg ggaccacaac atgctgctcc tttgacaatc 2820

tcttagaagt cggtcctatc tgcaacaagg aagacatatg gctgcacgtt gatgcagcct 2880

acgcaggcag tgcattcatc tgccctgagt tccggcacct tctgaatgga gtggagtttg 2940

cagattcatt caactttaat ccccacaaat ggctattggt gaattttgac tgttctgcca 3000

tgtgggtgaa aaagagaaca gacttaacgg gagcctttag actggacccc acttacctga 3060

agcacagcca tcaggattca gggcttatca ctgactaccg gcattggcag ataccactgg 3120

gcagaagatt tcgctctttg aaaatgtggt ttgtatttag gatgtatgga gtcaaaggac 3180

tgcaggctta tatccgcaag catgtccagc tgtcccatga gtttgagtca ctggtgcgcc 3240

aggatccccg ctttgaaatc tgtgtggaag tcattctggg gcttgtctgc tttcggctaa 3300

agggttccaa caaagtgaat gaagctcttc tgcaaagaat aaacagtgcc aaaaaaatcc 3360

acttggttcc atgtcacctc agggacaagt ttgtcctgcg ctttgccatc tgttctcgca 3420

cggtggaatc tgcccatgtg cagcgggcct gggaacacat caaagagctg gcggccgacg 3480

tgctgcgagc agagagggag taggagtgaa gccagctgca ggaatcaaaa attgaagaga 3540

gatatatctg aaaactggaa taagaagcaa ataaatatca tcctgccttc atggaactca 3600

gctgtctgtg gcttcccatg tctttctcca aagttatcca gagggttgtg attttgtctg 3660

cttagtatct catcaacaaa gaaatattat ttgctaatta aaaagttaat cttcatggcc 3720

atagctttta ttcattagct gtgatttttg ttgattaaaa cattatagat tttcatgttc 3780

ttgcagtcat cagaagtggt aggaaagcct cactgatata ttttccaggg caatcaatgt 3840

tcacgcaact tgaaattata tctgtggtct tcaaattgtc ttttgtcatg tggctaaatg 3900

cctaataagc tgctcgagag atctacgggt ggcatccctg tgacccctcc ccagtgcctc 3960

tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc ccaccagcct tgtcctaata aaattaagtt 4020

gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct ataatattat ggggtggagg ggggtggtat 4080

ggagcaaggg gcaagttggg aagacaacct gtagggcctg cggggtctat tgggaaccaa 4140

gctggagtgc agtggcacaa tcttggctca ctgcaatctc cgcctcctgg gttcaagcga 4200

ttctcctgcc tcagcctccc gagttgttgg gattccaggc atgcatgacc aggctcagct 4260

aatttttgtt tttttggtag agacggggtt tcaccatatt ggccaggctg gtctccaact 4320

cctaatctca ggtgatctac ccaccttggc ctcccaaatt gctgggatta caggcgtgaa 4380

ccactgctcc cttccctgtc cttctgattt tgtaggtaac cgtaaccccg gaccacgtgc 4440

ggaccgagcg gccgctctag agcatggcta cgtagataag tagcatggcg ggttaatcat 4500

taactacaag gaacccctag tgatggagtt ggccactccc tctctgcgcg ctcgctcgct 4560

cactgaggcc gggcgaccaa aggtcgcccg acgcccgggc ggcctcagtg agcgagcgag 4620

cgcgcagctg cctgcaggtc tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatgtagcca 4680

accactagaa ctatagctag agtcctgggc gaacaaacga tgctcgcctt ccagaaaacc 4740

gaggatgcga accacttcat ccggggtcag caccaccggc aagcgccgcg acggccgagg 4800

tcttccgatc tcctgaagcc agggcagatc cgtgcacagc accttgccgt agaagaacag 4860

caaggccgcc aatgcctgac gatgcgtgga gaccgaaacc ttgcgctcgt tcgccagcca 4920

ggacagaaat gcctcgactt cgctgctgcc caaggttgcc gggtgacgca caccgtggaa 4980

acggatgaag gcacgaaccc agttgacata agcctgttcg gttcgtaaac tgtaatgcaa 5040

gtagcgtatg cgctcacgca actggtccag aaccttgacc gaacgcagcg gtggtaacgg 5100

cgcagtggcg gttttcatgg cttgttatga ctgttttttt gtacagtcta tgcctcgggc 5160

atccaagcag caagcgcgtt acgccgtggg tcgatgtttg atgttatgga gcagcaacga 5220

tgttacgcag cagcaacgat gttacgcagc agggcagtcg ccctaaaaca aagttaggtg 5280

gctcaagtat gggcatcatt cgcacatgta ggctcggccc tgaccaagtc aaatccatgc 5340

gggctgctct tgatcttttc ggtcgtgagt tcggagacgt agccacctac tcccaacatc 5400

agccggactc cgattacctc gggaacttgc tccgtagtaa gacattcatc gcgcttgctg 5460

ccttcgacca agaagcggtt gttggcgctc tcgcggctta cgttctgccc aagtttgagc 5520

agccgcgtag tgagatctat atctatgatc tcgcagtctc cggcgagcac cggaggcagg 5580

gcattgccac cgcgctcatc aatctcctca agcatgaggc caacgcgctt ggtgcttatg 5640

tgatctacgt gcaagcagat tacggtgacg atcccgcagt ggctctctat acaaagttgg 5700

gcatacggga agaagtgatg cactttgata tcgacccaag taccgccacc taacaattcg 5760

ttcaagccga gatcggcttc ccggccgcgg agttgttcgg taaattgtca caacgccgcg 5820

aatatagtct ttaccatgcc cttggccacg cccctcttta atacgacggg caatttgcac 5880

ttcagaaaat gaagagtttg ctttagccat aacaaaagtc cagtatgctt tttcacagca 5940

taactggact gatttcagtt tacaactatt ctgtctagtt taagacttta ttgtcatagt 6000

ttagatctat tttgttcagt ttaagacttt attgtccgcc cacacccgct tacgcagggc 6060

atccatttat tactcaaccg taaccgattt tgccaggtta cgcggctggt ctatgcggtg 6120

tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc 6180

gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa 6240

ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa 6300

aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct 6360

ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac 6420

aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc 6480

gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc 6540

tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg 6600

tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga 6660

gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag 6720

cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta 6780

cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag 6840

agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg 6900

caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac 6960

ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc 7020

aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag 7080

tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc 7140

agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac 7200

gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc 7260

accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg 7320

tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag 7380

tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc 7440

acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac 7500

atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag 7560

aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac 7620

tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg 7680

agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc 7740

gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact 7800

ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg 7860

atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa 7920

tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt 7980

tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg 8040

tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctaa 8100

attgtaagcg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat cagctcattt 8160

tttaaccaat aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata gaccgagata 8220

gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat taaagaacgt ggactccaac 8280

gtcaaagggc gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc atcaccctaa 8340

tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa agggagcccc 8400

cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg gaagaaagcg 8460

aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt aaccaccaca 8520

cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtc 8555

<210> 5

<211> 8694

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 5

cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac 60

gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt 120

ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg 180

ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta 240

tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa 300

attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg 360

cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca 420

actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt 480

gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt 540

caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt 600

atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca 660

gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg 720

gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc 780

agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca 840

tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcaa cgcgtaaact tcgtcgacga 900

tctgcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 960

atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 1020

cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa 1080

tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 1140

tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 1200

ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 1260

acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg 1320

gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt 1380

tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 1440

gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa 1500

ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga 1560

ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc 1620

cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt 1680

tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct 1740

ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt 1800

gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa 1860

ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct 1920

gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg 1980

ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt 2040

gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcgaattcg ggcacgaggg 2100

aggacagaga gcaagtcact cccggctgcc tttttcacct ctgacagagc ccagacacca 2160

tgaacgcaag tgaattccga aggagaggga aggagatggt ggattacgtg gccaactaca 2220

tggaaggcat tgagggacgc caggtctacc ctgacgtgga gcccgggtac ctgcggccgc 2280

tgatccctgc cgctgcccct caggagccag acacgtttga ggacatcatc aacgacgttg 2340

agaagataat catgcctggg gtgacgcact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc 2400

ccactgccag ctcgtacccg gccatgcttg cggacatgct gtgcggggcc attggctgca 2460

tcggcttctc ctgggcggca agcccagcat gcacagagct ggagactgtg atgatggact 2520

ggctcgggaa gatgctggaa ctaccaaagg catttttgaa tgagaaagct ggagaagggg 2580

gaggagtgat ccagggaagt gccagtgaag ccaccctggt ggccctgctg gccgctcgga 2640

ccaaagtgat ccatcggctg caggcagcgt ccccagagct cacacaggcc gctatcatgg 2700

agaagctggt ggcttactca tccgatcagg cacactcctc agtggaaaga gctgggttaa 2760

ttggtggagt gaaattaaaa gccatcccct cagatggcaa cttcgccatg cgtgcgtctg 2820

ccctgcagga agccctggag agagacaaag cggctggcct gattcctttc tttatggttg 2880

ccaccctggg gaccacaaca tgctgctcct ttgacaatct cttagaagtc ggtcctatct 2940

gcaacaagga agacatatgg ctgcacgttg atgcagccta cgcaggcagt gcattcatct 3000

gccctgagtt ccggcacctt ctgaatggag tggagtttgc agattcattc aactttaatc 3060

cccacaaatg gctattggtg aattttgact gttctgccat gtgggtgaaa aagagaacag 3120

acttaacggg agcctttaga ctggacccca cttacctgaa gcacagccat caggattcag 3180

ggcttatcac tgactaccgg cattggcaga taccactggg cagaagattt cgctctttga 3240

aaatgtggtt tgtatttagg atgtatggag tcaaaggact gcaggcttat atccgcaagc 3300

atgtccagct gtcccatgag tttgagtcac tggtgcgcca ggatccccgc tttgaaatct 3360

gtgtggaagt cattctgggg cttgtctgct ttcggctaaa gggttccaac aaagtgaatg 3420

aagctcttct gcaaagaata aacagtgcca aaaaaatcca cttggttcca tgtcacctca 3480

gggacaagtt tgtcctgcgc tttgccatct gttctcgcac ggtggaatct gcccatgtgc 3540

agcgggcctg ggaacacatc aaagagctgg cggccgacgt gctgcgagca gagagggagt 3600

aggagtgaag ccagctgcag gaatcaaaaa ttgaagagag atatatctga aaactggaat 3660

aagaagcaaa taaatatcat cctgccttca tggaactcag ctgtctgtgg cttcccatgt 3720

ctttctccaa agttatccag agggttgtga ttttgtctgc ttagtatctc atcaacaaag 3780

aaatattatt tgctaattaa aaagttaatc ttcatggcca tagcttttat tcattagctg 3840

tgatttttgt tgattaaaac attatagatt ttcatgttct tgcagtcatc agaagtggta 3900

ggaaagcctc actgatatat tttccagggc aatcaatgtt cacgcaactt gaaattatat 3960

ctgtggtctt caaattgtct tttgtcatgt ggctaaatgc ctaataaaca attcaagtga 4020

aatactaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaagc tgctcgagag atctacgggt ggcatccctg 4080

tgacccctcc ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc ccaccagcct 4140

tgtcctaata aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct ataatattat 4200

ggggtggagg ggggtggtat ggagcaaggg gcaagttggg aagacaacct gtagggcctg 4260

cggggtctat tgggaaccaa gctggagtgc agtggcacaa tcttggctca ctgcaatctc 4320

cgcctcctgg gttcaagcga ttctcctgcc tcagcctccc gagttgttgg gattccaggc 4380

atgcatgacc aggctcagct aatttttgtt tttttggtag agacggggtt tcaccatatt 4440

ggccaggctg gtctccaact cctaatctca ggtgatctac ccaccttggc ctcccaaatt 4500

gctgggatta caggcgtgaa ccactgctcc cttccctgtc cttctgattt tgtaggtaac 4560

gtaaccccgg accacgtgcg gaccgagcgg ccgctctaga gcatggctac gtagataagt 4620

agcatggcgg gttaatcatt aactacaagg aacccctagt gatggagttg gccactccct 4680

ctctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg ggcgaccaaa ggtcgcccga cgcccgggcg 4740

gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagctgc ctgcaggtct gagacaataa ccctgataaa 4800

tgcttcaata atgtagccaa ccactagaac tatagctaga gtcctgggcg aacaaacgat 4860

gctcgccttc cagaaaaccg aggatgcgaa ccacttcatc cggggtcagc accaccggca 4920

agcgccgcga cggccgaggt cttccgatct cctgaagcca gggcagatcc gtgcacagca 4980

ccttgccgta gaagaacagc aaggccgcca atgcctgacg atgcgtggag accgaaacct 5040

tgcgctcgtt cgccagccag gacagaaatg cctcgacttc gctgctgccc aaggttgccg 5100

ggtgacgcac accgtggaaa cggatgaagg cacgaaccca gttgacataa gcctgttcgg 5160

ttcgtaaact gtaatgcaag tagcgtatgc gctcacgcaa ctggtccaga accttgaccg 5220

aacgcagcgg tggtaacggc gcagtggcgg ttttcatggc ttgttatgac tgtttttttg 5280

tacagtctat gcctcgggca tccaagcagc aagcgcgtta cgccgtgggt cgatgtttga 5340

tgttatggag cagcaacgat gttacgcagc agcaacgatg ttacgcagca gggcagtcgc 5400

cctaaaacaa agttaggtgg ctcaagtatg ggcatcattc gcacatgtag gctcggccct 5460

gaccaagtca aatccatgcg ggctgctctt gatcttttcg gtcgtgagtt cggagacgta 5520

gccacctact cccaacatca gccggactcc gattacctcg ggaacttgct ccgtagtaag 5580

acattcatcg cgcttgctgc cttcgaccaa gaagcggttg ttggcgctct cgcggcttac 5640

gttctgccca agtttgagca gccgcgtagt gagatctata tctatgatct cgcagtctcc 5700

ggcgagcacc ggaggcaggg cattgccacc gcgctcatca atctcctcaa gcatgaggcc 5760

aacgcgcttg gtgcttatgt gatctacgtg caagcagatt acggtgacga tcccgcagtg 5820

gctctctata caaagttggg catacgggaa gaagtgatgc actttgatat cgacccaagt 5880

accgccacct aacaattcgt tcaagccgag atcggcttcc cggccgcgga gttgttcggt 5940

aaattgtcac aacgccgcga atatagtctt taccatgccc ttggccacgc ccctctttaa 6000

tacgacgggc aatttgcact tcagaaaatg aagagtttgc tttagccata acaaaagtcc 6060

agtatgcttt ttcacagcat aactggactg atttcagttt acaactattc tgtctagttt 6120

aagactttat tgtcatagtt tagatctatt ttgttcagtt taagacttta ttgtccgccc 6180

acacccgctt acgcagggca tccatttatt actcaaccgt aaccgatttt gccaggttac 6240

gcggctggtc tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca 6300

ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag 6360

cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag 6420

gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc 6480

tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc 6540

agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc 6600

tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt 6660

cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg 6720

ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat 6780

ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag 6840

ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt 6900

ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc 6960

cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta 7020

gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag 7080

atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga 7140

ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa 7200

gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa 7260

tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc 7320

ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga 7380

taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa 7440

gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt 7500

gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg 7560

ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc 7620

aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg 7680

gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag 7740

cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt 7800

actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt 7860

caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac 7920

gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac 7980

ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag 8040

caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa 8100

tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga 8160

gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc 8220

cccgaaaagt gccacctaaa ttgtaagcgt taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt 8280

ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc 8340

aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt 8400

aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact 8460

acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg 8520

gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag 8580

aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac 8640

gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg cgtc 8694

<210> 6

<211> 3535

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 6

ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60

ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120

aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct 180

agagcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 240

atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 300

cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa 360

tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 420

tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 480

ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 540

acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg 600

gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt 660

tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 720

gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa 780

ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga 840

ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc 900

cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt 960

tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct 1020

ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt 1080

gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa 1140

ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct 1200

gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg 1260

ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt 1320

gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcggccgcc accatgaacg 1380

caagtgaatt ccgaaggaga gggaaggaga tggtggatta cgtggccaac tacatggaag 1440

gcattgaggg acgccaggtc taccctgacg tggagcccgg gtacctgcgg ccgctgatcc 1500

ctgccgctgc ccctcaggag ccagacacgt ttgaggacat catcaacgac gttgagaaga 1560

taatcatgcc tggggtgacg cactggcaca gcccctactt cttcgcctac ttccccactg 1620

ccagctcgta cccggccatg cttgcggaca tgctgtgcgg ggccattggc tgcatcggct 1680

tctcctgggc ggcaagccca gcatgcacag agctggagac tgtgatgatg gactggctcg 1740

ggaagatgct ggaactacca aaggcatttt tgaatgagaa agctggagaa gggggaggag 1800

tgatccaggg aagtgccagt gaagccaccc tggtggccct gctggccgct cggaccaaag 1860

tgatccatcg gctgcaggca gcgtccccag agctcacaca ggccgctatc atggagaagc 1920

tggtggctta ctcatccgat caggcacact cctcagtgga aagagctggg ttaattggtg 1980

gagtgaaatt aaaagccatc ccctcagatg gcaacttcgc catgcgtgcg tctgccctgc 2040

aggaagccct ggagagagac aaagcggctg gcctgattcc tttctttatg gttgccaccc 2100

tggggaccac aacatgctgc tcctttgaca atctcttaga agtcggtcct atctgcaaca 2160

aggaagacat atggctgcac gttgatgcag cctacgcagg cagtgcattc atctgccctg 2220

agttccggca ccttctgaat ggagtggagt ttgcagattc attcaacttt aatccccaca 2280

aatggctatt ggtgaatttt gactgttctg ccatgtgggt gaaaaagaga acagacttaa 2340

cgggagcctt tagactggac cccacttacc tgaagcacag ccatcaggat tcagggctta 2400

tcactgacta ccggcattgg cagataccac tgggcagaag atttcgctct ttgaaaatgt 2460

ggtttgtatt taggatgtat ggagtcaaag gactgcaggc ttatatccgc aagcatgtcc 2520

agctgtccca tgagtttgag tcactggtgc gccaggatcc ccgctttgaa atctgtgtgg 2580

aagtcattct ggggcttgtc tgctttcggc taaagggttc caacaaagtg aatgaagctc 2640

ttctgcaaag aataaacagt gccaaaaaaa tccacttggt tccatgtcac ctcagggaca 2700

agtttgtcct gcgctttgcc atctgttctc gcacggtgga atctgcccat gtgcagcggg 2760

cctgggaaca catcaaagag ctggcggccg acgtgctgcg agcagagagg gagtaggagt 2820

gagctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg 2880

ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca 2940

ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca 3000

aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga 3060

gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc 3120

tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt 3180

tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat 3240

ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg 3300

ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccccgga ccacgtgcgg accgagcggc 3360

cgctctagag catggctacg tagataagta gcatggcggg ttaatcatta actacaagga 3420

acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg 3480

gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggcgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcag 3535

<210> 7

<211> 3534

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 7

ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60

ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120

aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct 180

agagcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 240

atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 300

cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa 360

tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 420

tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 480

ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 540

acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg 600

gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt 660

tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 720

gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa 780

ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga 840

ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc 900

cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt 960

tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct 1020

ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt 1080

gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa 1140

ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct 1200

gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg 1260

ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt 1320

gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcggccgcc accatgaacg 1380

ccagcgagtt caggaggagg ggcaaggaga tggtggacta cgtggccaac tacatggagg 1440

gcatcgaggg caggcaggtg taccccgacg tggagcccgg ctacctgagg cccctgatcc 1500

ccgccgccgc cccccaggag cccgacacct tcgaggacat catcaacgac gtggagaaga 1560

tcatcatgcc cggcgtgacc cactggcaca gcccctactt cttcgcctac ttccccaccg 1620

ccagcagcta ccccgccatg ctggccgaca tgctgtgcgg cgccatcggc tgcatcggct 1680

tcagctgggc cgccagcccc gcctgcaccg agctggagac cgtgatgatg gactggctgg 1740

gcaagatgct ggagctgccc aaggccttcc tgaacgagaa ggccggcgag ggcggcggcg 1800

tgatccaggg cagcgccagc gaggccaccc tggtggccct gctggccgcc aggaccaagg 1860

tgatccacag gctgcaggcc gccagccccg agctgaccca ggccgccatc atggagaagc 1920

tggtggccta cagcagcgac caggcccaca gcagcgtgga gagggccggc ctgatcggcg 1980

gcgtgaagct gaaggccatc cccagcgacg gcaacttcgc catgagggcc agcgccctgc 2040

aggaggccct ggagagggac aaggccgccg gcctgatccc cttcttcatg gtggccaccc 2100

tgggcaccac cacctgctgc agcttcgaca acctgctgga ggtgggcccc atctgcaaca 2160

aggaggacat ctggctgcac gtggacgccg cctacgccgg cagcgccttc atctgccccg 2220

agttcaggca cctgctgaac ggcgtggagt tcgccgacag cttcaacttc aacccccaca 2280

agtggctgct ggtgaacttc gactgcagcg ccatgtgggt gaagaagagg accgacctga 2340

ccggcgcctt caggctggac cccacctacc tgaagcacag ccaccaggac agcggcctga 2400

tcaccgacta caggcactgg cagatccccc tgggcaggag gttcaggagc ctgaagatgt 2460

ggttcgtgtt caggatgtac ggcgtgaagg gcctgcaggc ctacatcagg aagcacgtgc 2520

agctgagcca cgagttcgag agcctggtga ggcaggaccc caggttcgag atctgcgtgg 2580

aggtgatcct gggcctggtg tgcttcaggc tgaagggcag caacaaggtg aacgaggccc 2640

tgctgcagag gatcaacagc gccaagaaga tccacctggt gccctgccac ctgagggaca 2700

agttcgtgct gaggttcgcc atctgcagca ggaccgtgga gagcgcccac gtgcagaggg 2760

cctgggagca catcaaggag ctggccgccg acgtgctgag ggccgagagg gagtgagctg 2820

ctcgagagat ctacgggtgg catccctgtg acccctcccc agtgcctctc ctggccctgg 2880

aagttgccac tccagtgccc accagccttg tcctaataaa attaagttgc atcattttgt 2940

ctgactaggt gtccttctat aatattatgg ggtggagggg ggtggtatgg agcaaggggc 3000

aagttgggaa gacaacctgt agggcctgcg gggtctattg ggaaccaagc tggagtgcag 3060

tggcacaatc ttggctcact gcaatctccg cctcctgggt tcaagcgatt ctcctgcctc 3120

agcctcccga gttgttggga ttccaggcat gcatgaccag gctcagctaa tttttgtttt 3180

tttggtagag acggggtttc accatattgg ccaggctggt ctccaactcc taatctcagg 3240

tgatctaccc accttggcct cccaaattgc tgggattaca ggcgtgaacc actgctccct 3300

tccctgtcct tctgattttg taggtaacgt aaccccggac cacgtgcgga ccgagcggcc 3360

gctctagagc atggctacgt agataagtag catggcgggt taatcattaa ctacaaggaa 3420

cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccggg 3480

cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc gcag 3534

<210> 8

<211> 3940

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 8

ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60

ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120

aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct 180

agagcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 240

atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 300

cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa 360

tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 420

tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 480

ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 540

acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg 600

gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt 660

tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 720

gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa 780

ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga 840

ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc 900

cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt 960

tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct 1020

ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt 1080

gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa 1140

ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct 1200

gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg 1260

ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt 1320

gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcggccgcc accatgaacg 1380

caagtgaatt ccgaaggaga gggaaggaga tggtggatta cgtggccaac tacatggaag 1440

gcattgaggg acgccaggtc taccctgacg tggagcccgg gtacctgcgg ccgctgatcc 1500

ctgccgctgc ccctcaggag ccagacacgt ttgaggacat catcaacgac gttgagaaga 1560

taatcatgcc tggggtgacg cactggcaca gcccctactt cttcgcctac ttccccactg 1620

ccagctcgta cccggccatg cttgcggaca tgctgtgcgg ggccattggc tgcatcggct 1680

tctcctgggc ggcaagccca gcatgcacag agctggagac tgtgatgatg gactggctcg 1740

ggaagatgct ggaactacca aaggcatttt tgaatgagaa agctggagaa gggggaggag 1800

tgatccaggg aagtgccagt gaagccaccc tggtggccct gctggccgct cggaccaaag 1860

tgatccatcg gctgcaggca gcgtccccag agctcacaca ggccgctatc atggagaagc 1920

tggtggctta ctcatccgat caggcacact cctcagtgga aagagctggg ttaattggtg 1980

gagtgaaatt aaaagccatc ccctcagatg gcaacttcgc catgcgtgcg tctgccctgc 2040

aggaagccct ggagagagac aaagcggctg gcctgattcc tttctttatg gttgccaccc 2100

tggggaccac aacatgctgc tcctttgaca atctcttaga agtcggtcct atctgcaaca 2160

aggaagacat atggctgcac gttgatgcag cctacgcagg cagtgcattc atctgccctg 2220

agttccggca ccttctgaat ggagtggagt ttgcagattc attcaacttt aatccccaca 2280

aatggctatt ggtgaatttt gactgttctg ccatgtgggt gaaaaagaga acagacttaa 2340

cgggagcctt tagactggac cccacttacc tgaagcacag ccatcaggat tcagggctta 2400

tcactgacta ccggcattgg cagataccac tgggcagaag atttcgctct ttgaaaatgt 2460

ggtttgtatt taggatgtat ggagtcaaag gactgcaggc ttatatccgc aagcatgtcc 2520

agctgtccca tgagtttgag tcactggtgc gccaggatcc ccgctttgaa atctgtgtgg 2580

aagtcattct ggggcttgtc tgctttcggc taaagggttc caacaaagtg aatgaagctc 2640

ttctgcaaag aataaacagt gccaaaaaaa tccacttggt tccatgtcac ctcagggaca 2700

agtttgtcct gcgctttgcc atctgttctc gcacggtgga atctgcccat gtgcagcggg 2760

cctgggaaca catcaaagag ctggcggccg acgtgctgcg agcagagagg gagtaggagt 2820

gaagccagct gcaggaatca aaaattgaag agagatatat ctgaaaactg gaataagaag 2880

caaataaata tcatcctgcc ttcatggaac tcagctgtct gtggcttccc atgtctttct 2940

ccaaagttat ccagagggtt gtgattttgt ctgcttagta tctcatcaac aaagaaatat 3000

tatttgctaa ttaaaaagtt aatcttcatg gccatagctt ttattcatta gctgtgattt 3060

ttgttgatta aaacattata gattttcatg ttcttgcagt catcagaagt ggtaggaaag 3120

cctcactgat atattttcca gggcaatcaa tgttcacgca acttgaaatt atatctgtgg 3180

tcttcaaatt gtcttttgtc atgtggctaa atgcctaata agctgctcga gagatctacg 3240

ggtggcatcc ctgtgacccc tccccagtgc ctctcctggc cctggaagtt gccactccag 3300

tgcccaccag ccttgtccta ataaaattaa gttgcatcat tttgtctgac taggtgtcct 3360

tctataatat tatggggtgg aggggggtgg tatggagcaa ggggcaagtt gggaagacaa 3420

cctgtagggc ctgcggggtc tattgggaac caagctggag tgcagtggca caatcttggc 3480

tcactgcaat ctccgcctcc tgggttcaag cgattctcct gcctcagcct cccgagttgt 3540

tgggattcca ggcatgcatg accaggctca gctaattttt gtttttttgg tagagacggg 3600

gtttcaccat attggccagg ctggtctcca actcctaatc tcaggtgatc tacccacctt 3660

ggcctcccaa attgctggga ttacaggcgt gaaccactgc tcccttccct gtccttctga 3720

ttttgtaggt aaccgtaacc ccggaccacg tgcggaccga gcggccgctc tagagcatgg 3780

ctacgtagat aagtagcatg gcgggttaat cattaactac aaggaacccc tagtgatgga 3840

gttggccact ccctctctgc gcgctcgctc gctcactgag gccgggcgac caaaggtcgc 3900

ccgacgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag 3940

<210> 9

<211> 4079

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 9

ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60

ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120

aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct 180

agagcggccg caacgcgtaa acttcgtcga cgatctgcgg ccgcacgcgt ggagctagtt 240

attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc atatatggag ttccgcgtta 300

cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa cgacccccgc ccattgacgt 360

caataatgac gtatgttccc atagtaacgt caatagggac tttccattga cgtcaatggg 420

tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca agtgtatcat atgccaagta 480

cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg gcattatgcc cagtacatga 540

ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg 600

tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg gtttgactca cggggatttc 660

caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg caccaaaatc aacgggactt 720

tccaaaatgt cgtaacaact ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc gtgtacggtg 780

ggaggtctat ataagcagag ctcgtttagt gaaccgtcag atcgcctgga gacgccatcc 840

acgctgtttt gacctccata gaagacaccg ggaccgatcc agcctccgcg gattcgaatc 900

ccggccggga acggtgcatt ggaacgcgga ttccccgtgc caagagtgac gtaagtaccg 960

cctatagagt ctataggccc acaaaaaatg ctttcttctt ttaatatact tttttgttta 1020

tcttatttct aatactttcc ctaatctctt tctttcaggg caataatgat acaatgtatc 1080

atgcctcttt gcaccattct aaagaataac agtgataatt tctgggttaa ggcaatagca 1140

atatttctgc atataaatat ttctgcatat aaattgtaac tgatgtaaga ggtttcatat 1200

tgctaatagc agctacaatc cagctaccat tctgctttta ttttatggtt gggataaggc 1260

tggattattc tgagtccaag ctaggccctt ttgctaatca tgttcatacc tcttatcttc 1320

ctcccacagc tcctgggcaa cgtgctggtc tgtgtgctgg cccatcactt tggcaaagaa 1380

ttgggattcg aacatcgaat tcgggcacga gggaggacag agagcaagtc actcccggct 1440

gcctttttca cctctgacag agcccagaca ccatgaacgc aagtgaattc cgaaggagag 1500

ggaaggagat ggtggattac gtggccaact acatggaagg cattgaggga cgccaggtct 1560

accctgacgt ggagcccggg tacctgcggc cgctgatccc tgccgctgcc cctcaggagc 1620

cagacacgtt tgaggacatc atcaacgacg ttgagaagat aatcatgcct ggggtgacgc 1680

actggcacag cccctacttc ttcgcctact tccccactgc cagctcgtac ccggccatgc 1740

ttgcggacat gctgtgcggg gccattggct gcatcggctt ctcctgggcg gcaagcccag 1800

catgcacaga gctggagact gtgatgatgg actggctcgg gaagatgctg gaactaccaa 1860

aggcattttt gaatgagaaa gctggagaag ggggaggagt gatccaggga agtgccagtg 1920

aagccaccct ggtggccctg ctggccgctc ggaccaaagt gatccatcgg ctgcaggcag 1980

cgtccccaga gctcacacag gccgctatca tggagaagct ggtggcttac tcatccgatc 2040

aggcacactc ctcagtggaa agagctgggt taattggtgg agtgaaatta aaagccatcc 2100

cctcagatgg caacttcgcc atgcgtgcgt ctgccctgca ggaagccctg gagagagaca 2160

aagcggctgg cctgattcct ttctttatgg ttgccaccct ggggaccaca acatgctgct 2220

cctttgacaa tctcttagaa gtcggtccta tctgcaacaa ggaagacata tggctgcacg 2280

ttgatgcagc ctacgcaggc agtgcattca tctgccctga gttccggcac cttctgaatg 2340

gagtggagtt tgcagattca ttcaacttta atccccacaa atggctattg gtgaattttg 2400

actgttctgc catgtgggtg aaaaagagaa cagacttaac gggagccttt agactggacc 2460

ccacttacct gaagcacagc catcaggatt cagggcttat cactgactac cggcattggc 2520

agataccact gggcagaaga tttcgctctt tgaaaatgtg gtttgtattt aggatgtatg 2580

gagtcaaagg actgcaggct tatatccgca agcatgtcca gctgtcccat gagtttgagt 2640

cactggtgcg ccaggatccc cgctttgaaa tctgtgtgga agtcattctg gggcttgtct 2700

gctttcggct aaagggttcc aacaaagtga atgaagctct tctgcaaaga ataaacagtg 2760

ccaaaaaaat ccacttggtt ccatgtcacc tcagggacaa gtttgtcctg cgctttgcca 2820

tctgttctcg cacggtggaa tctgcccatg tgcagcgggc ctgggaacac atcaaagagc 2880

tggcggccga cgtgctgcga gcagagaggg agtaggagtg aagccagctg caggaatcaa 2940

aaattgaaga gagatatatc tgaaaactgg aataagaagc aaataaatat catcctgcct 3000

tcatggaact cagctgtctg tggcttccca tgtctttctc caaagttatc cagagggttg 3060

tgattttgtc tgcttagtat ctcatcaaca aagaaatatt atttgctaat taaaaagtta 3120

atcttcatgg ccatagcttt tattcattag ctgtgatttt tgttgattaa aacattatag 3180

attttcatgt tcttgcagtc atcagaagtg gtaggaaagc ctcactgata tattttccag 3240

ggcaatcaat gttcacgcaa cttgaaatta tatctgtggt cttcaaattg tcttttgtca 3300

tgtggctaaa tgcctaataa acaattcaag tgaaatacta aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3360

agctgctcga gagatctacg ggtggcatcc ctgtgacccc tccccagtgc ctctcctggc 3420

cctggaagtt gccactccag tgcccaccag ccttgtccta ataaaattaa gttgcatcat 3480

tttgtctgac taggtgtcct tctataatat tatggggtgg aggggggtgg tatggagcaa 3540

ggggcaagtt gggaagacaa cctgtagggc ctgcggggtc tattgggaac caagctggag 3600

tgcagtggca caatcttggc tcactgcaat ctccgcctcc tgggttcaag cgattctcct 3660

gcctcagcct cccgagttgt tgggattcca ggcatgcatg accaggctca gctaattttt 3720

gtttttttgg tagagacggg gtttcaccat attggccagg ctggtctcca actcctaatc 3780

tcaggtgatc tacccacctt ggcctcccaa attgctggga ttacaggcgt gaaccactgc 3840

tcccttccct gtccttctga ttttgtaggt aacgtaaccc cggaccacgt gcggaccgag 3900

cggccgctct agagcatggc tacgtagata agtagcatgg cgggttaatc attaactaca 3960

aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 4020

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg agcgcgcag 4079

<210> 10

<211> 9266

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 10

gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc 60

ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac 120

agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa 180

ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg 240

cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc 300

aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct 360

agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc 420

tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt 480

ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg 540

cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct 600

atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag 660

ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag 720

tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg 780

gcggagccta tggaaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa 840

cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat 900

ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aagcccaatc tgaataatgt tacaaccaat 960

taaccaattc tgaaaacgcg cgatgcagct ctggcccgtg tctcaaaatc tctgatgtta 1020

cattgcacaa gataaaaata tatcatcatg aacaataaaa ctgtctgctt acataaacag 1080

taatacaagg ggtgttatga gccatattca acgggaaacg tcgaggccgc gattaaattc 1140

caacatggat gctgatttat atgggtataa atgggctcgc gataatgtcg ggcaatcagg 1200

tgcgacaatc tatcgcttgt atgggaagcc cgatgcgcca gagttgtttc tgaaacatgg 1260

caaaggtagc gttgccaatg atgttacaga tgagatggtc agactaaact ggctgacgga 1320

atttatgcct cttccgacca tcaagcattt tatccgtact cctgatgatg catggttact 1380

caccactgcg atccccggaa aaacagcatt ccaggtatta gaagaatatc ctgattcagg 1440

tgaaaatatt gttgatgcgc tggcagtgtt cctgcgccgg ttgcattcga ttcctgtttg 1500

taattgtcct tttaacagcg atcgcgtatt tcgtctcgct caggcgcaat cacgaatgaa 1560

taacggtttg gttgatgcga gtgattttga tgacgagcgt aatggctggc ctgttgaaca 1620

agtctggaaa gaaatgcata aacttttgcc attctcaccg gattcagtcg tcactcatgg 1680

tgatttctca cttgataacc ttatttttga cgaggggaaa ttaataggtt gtattgatgt 1740

tggacgagtc ggaatcgcag accgatacca ggatcttgcc atcctatgga actgcctcgg 1800

tgagttttct ccttcattac agaaacggct ttttcaaaaa tatggtattg ataatcctga 1860

tatgaataaa ttgcagtttc atttgatgct cgatgagttt ttctaatcag aattggttaa 1920

ttggttgtaa cattattcag attgggcttg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga 1980

tctaggtgaa gatccttttt gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt 2040

tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcaacaccc cttgtattac 2100

tgtttatgta agcagacagt tttattgttc atgatgatat atttttatct tgtgcaatgt 2160

aacatcagag attttgagac acgggccaga gctgcatcgc gcgtttcggt gatgacggtg 2220

aaaacctctg acacatgcag ctcccgtatc tggaggctat aaatgattac gatacttcga 2280

aaacatcctt atcctggaaa actccccgtt catttcccac tctcctgcca ttcgacactc 2340

gtgcgtccat tcaagtctgt gctaatttct acgcatttcc ctctgccatt gactttgctt 2400

gcgtgggata ataactatta agccaacttg attcaactca ggcattcaaa aggcattttg 2460

attagtcgaa aagtggcacg gctgacgagt ggagctgcca tttcacgttt atttcgaact 2520

tttgattaca tggtatattt agtaatacac atatttttta gccagcaggt taatacttca 2580

aagttgtttc gattttcaac gaataaaagg aatttggcat ggtgtttttt ctggtctttg 2640

gtattgacaa atcagggata tacaatatgt attaacaaaa ttggattgct acatatattt 2700

aatgattttc attattagaa tgggtggaat aaagttttaa attacattat taatttcatt 2760

agggttggct gattgattac tatttcctca ttgaattgca ttcgatatta gcagtattta 2820

tctggcccat tttggaagtt acttaaattt cgaaccttaa gtcattatta gagctaatat 2880

acaacagagt tgtcaacttg gtttgatcag cattgaaatt aaactgattt cttgttcgtt 2940

cttatttcgt ttggttttgt atctcgtatt ttatatgcag gagggcatat attggcacaa 3000

gacaaataat cacagcaccc attctcaact ttgtcctgtt tctcagttta gtgtaaatag 3060

aatgttgcaa aaaattgaat ataagcatta tcatagtgtc aaattcgaga ggatgagttt 3120

gctgtgggtc ttcgaggttc tttccctgtg tttgccacgg ttcgttgcac gttgccactg 3180

attggacaca tgtccgcagt gaaaaatcta cggtcaggta ccacccaact aaaccggaag 3240

gcggcacgtg tgtgggcgtt gagcggtgtg ggcgtggcag ccatataatg agacatttat 3300

ttaaaaagaa cattcgaaca tttttgatgg gccatatctt ggcttgtcaa gctccagggc 3360

agacattttc ctcgactcca ccgccttttt catttgaatg gaggaggtgt agggcacaaa 3420

aaacgtttcc tgccttttta agcagcacaa aggatatgag ccattaaatt agttaatttc 3480

gagtgcattt cattttaaat aagtgttgga aagggaataa aaaagcgact gatagaaaag 3540

ttgcagacac caagagaatg ttaaatattt taataatagc tacatttttc tatctctgtg 3600

acaaggcctg tgtactttaa tgttatatta cttctttgtg tttgatttct gttaaaagtt 3660

tatgattttg gcatgtacaa atcttacaac ccttttttgt catcatgaca aaatcaaaat 3720

cgtgcaatat ttccattctc atcttttagc cgattcataa cattcgtaga aattaatatg 3780

aaatcaatca tgtataattt tcatgcacgt tatgccgatt tggtatcgtc gatttgccgg 3840

ctcatcgtcg ccattgtgtt aatggaaaag ttatgctttt cgcaggaaaa aagagttgaa 3900

aattccaatt tttgtcatgc tcatcaaaat gttatacatt cggtaatttg agctggccaa 3960

acgttaaccc cttatcgccc cgcgcaagca ttcattaact gcccccagag cgtaattaat 4020

ctctttctcg cagaatttcc ttcacagcca cgtcttgggt aaaagtcacc cctcaaagtg 4080

gcagttgcat gttgtaaatt agattttcgt ccgtcatgac aaccctcgtg cgagggttgc 4140

tgcagcattt gaatgcaaaa ctgcttttgg tcattaacct gtctgaggca ctttgctgca 4200

aaacttctat tagaattcgg tttggactcg aattcggatt tcttccccca aaatgcgatg 4260

gctacagcaa aatgctttca gcttccgaag ttttgcaacc ccaaagtcca gagtttccac 4320

gctgtcacga ttccaaagcg gcgccatttt tggctcacgc aaaacttatt aatgaacttt 4380

aagcagacta cgaggaaagg gctataatgg ccacacaaaa gggttaagca agtgttaagg 4440

gctggtggga gggaaaaatc atcaatcata ttttctgcat agctgaatca tttgcgccga 4500

tcagttgggg ttacttaatg ggtttatttc aagaagaaaa ctgtgggaaa ctaactgact 4560

ctaaacttaa tcagattaaa tgtaacctgg agatgatttt caaaatatta aaagagtttt 4620

atggaggtaa ttttaaagaa aactgaaaaa ctttgaagaa gtctataata gatccagtct 4680

taatcgtagc actgattatt tgtttttaaa ttggaaaaaa ttaaatgata catcatgctt 4740

aaatgcgatg tccaacaaat cccaagacgg taatttccgt gcgttccaaa ctcatctgaa 4800

gaatcttaca aatacatttc gtgtatcccc aggctcagcg tgcaaataaa tcttttggat 4860

ctttgcaaat gcgaaatgct tatttttatg cgttttcaat gccaattcga tggcaaaacc 4920

aacaaaatca catggaaata atggaaaagc aatttccatt tctacaaggg aggcagtgag 4980

acacaagagc agcgtataca attccccagc agcgatttga ccattaaaat tatacccaca 5040

ggacgagcag gcataaaaag cagaggatgc gaggtgttca ggggactgtc tatatctcca 5100

acttgaatat atgaaatcgt ttggaaatag ccaagcgacc aaattggcat ttggaaaatt 5160

gcacaacgac agaagaagat gtttgaaaag agaaattgaa ataataaacc aagatatatg 5220

taaacggttg gtcacatttg ggttctgaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg 5280

ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggctggctta 5340

actatgcggc atcagagcag attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc 5400

acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggcgccattc gccattcagg ctgcgcaact 5460

gttgggaagg gcgatcggtg cgggcctctt cgctattacg ccagctggcg aaagggggat 5520

gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa 5580

cgacggccag tgaattcgag ctcggtacca tttaaatcgt cttggccact ccctctctgc 5640

gcgctcgctc gctcactgag gccgcccggg caaagcccgg gcgtcgggcg acctttggtc 5700

gcccggcctc agtgagcgag cgagcgcgca gagagggagt ggccaactcc atcactaggg 5760

gttccttcgc gagcttaatt aactgcggcc gctcggtccg cacgtggtta cctacaaaat 5820

cagaaggaca gggaagggag cagtggttca cgcctgtaat cccagcaatt tgggaggcca 5880

aggtgggtag atcacctgag attaggagtt ggagaccagc ctggccaata tggtgaaacc 5940

ccgtctctac caaaaaaaca aaaattagct gagcctggtc atgcatgcct ggaatcccaa 6000

caactcggga ggctgaggca ggagaatcgc ttgaacccag gaggcggaga ttgcagtgag 6060

ccaagattgt gccactgcac tccagcttgg ttcccaatag accccgcagg ccctacaggt 6120

tgtcttccca acttgcccct tgctccatac cacccccctc caccccataa tattatagaa 6180

ggacacctag tcagacaaaa tgatgcaact taattttatt aggacaaggc tggtgggcac 6240

tggagtggca acttccaggg ccaggagagg cactggggag gggtcacagg gatgccaccc 6300

gtagatctct cgagcagctc actcctactc cctctctgct cgcagcacgt cggccgccag 6360

ctctttgatg tgttcccagg cccgctgcac atgggcagat tccaccgtgc gagaacagat 6420

ggcaaagcgc aggacaaact tgtccctgag gtgacatgga accaagtgga tttttttggc 6480

actgtttatt ctttgcagaa gagcttcatt cactttgttg gaacccttta gccgaaagca 6540

gacaagcccc agaatgactt ccacacagat ttcaaagcgg ggatcctggc gcaccagtga 6600

ctcaaactca tgggacagct ggacatgctt gcggatataa gcctgcagtc ctttgactcc 6660

atacatccta aatacaaacc acattttcaa agagcgaaat cttctgccca gtggtatctg 6720

ccaatgccgg tagtcagtga taagccctga atcctgatgg ctgtgcttca ggtaagtggg 6780

gtccagtcta aaggctcccg ttaagtctgt tctctttttc acccacatgg cagaacagtc 6840

aaaattcacc aatagccatt tgtggggatt aaagttgaat gaatctgcaa actccactcc 6900

attcagaagg tgccggaact cagggcagat gaatgcactg cctgcgtagg ctgcatcaac 6960

gtgcagccat atgtcttcct tgttgcagat aggaccgact tctaagagat tgtcaaagga 7020

gcagcatgtt gtggtcccca gggtggcaac cataaagaaa ggaatcaggc cagccgcttt 7080

gtctctctcc agggcttcct gcagggcaga cgcacgcatg gcgaagttgc catctgaggg 7140

gatggctttt aatttcactc caccaattaa cccagctctt tccactgagg agtgtgcctg 7200

atcggatgag taagccacca gcttctccat gatagcggcc tgtgtgagct ctggggacgc 7260

tgcctgcagc cgatggatca ctttggtccg agcggccagc agggccacca gggtggcttc 7320

actggcactt ccctggatca ctcctccccc ttctccagct ttctcattca aaaatgcctt 7380

tggtagttcc agcatcttcc cgagccagtc catcatcaca gtctccagct ctgtgcatgc 7440

tgggcttgcc gcccaggaga agccgatgca gccaatggcc ccgcacagca tgtccgcaag 7500

catggccggg tacgagctgg cagtggggaa gtaggcgaag aagtaggggc tgtgccagtg 7560

cgtcacccca ggcatgatta tcttctcaac gtcgttgatg atgtcctcaa acgtgtctgg 7620

ctcctgaggg gcagcggcag ggatcagcgg ccgcaggtac ccgggctcca cgtcagggta 7680

gacctggcgt ccctcaatgc cttccatgta gttggccacg taatccacca tctccttccc 7740

tctccttcgg aattcacttg cgttcatggt ggcggccgat gttcgaatcc caattctttg 7800

ccaaagtgat gggccagcac acagaccagc acgttgccca ggagctgtgg gaggaagata 7860

agaggtatga acatgattag caaaagggcc tagcttggac tcagaataat ccagccttat 7920

cccaaccata aaataaaagc agaatggtag ctggattgta gctgctatta gcaatatgaa 7980

acctcttaca tcagttacaa tttatatgca gaaatattta tatgcagaaa tattgctatt 8040

gccttaaccc agaaattatc actgttattc tttagaatgg tgcaaagagg catgatacat 8100

tgtatcatta ttgccctgaa agaaagagat tagggaaagt attagaaata agataaacaa 8160

aaaagtatat taaaagaaga aagcattttt tgtgggccta tagactctat aggcggtact 8220

tacgtcactc ttggcacggg gaatccgcgt tccaatgcac cgttcccggc cgggattcga 8280

atccgcggag gctggatcgg tcccggtgtc ttctatggag gtcaaaacag cgtggatggc 8340

gtctccaggc gatctgacgg ttcactaaac gagctctgct tatatagacc tcccaccgta 8400

cacgcctacc gcccatttgc gtcaatgggg cggagttgtt acgacatttt ggaaagtccc 8460

gttgattttg gtgcaaaaca aactcccatt gacgtcaatg gggtggagac ttggaaatcc 8520

ccgtgagtca aaccgctatc cacgcccatt gatgtactgc caaaaccgca tcaccatggt 8580

aatagcgatg actaatacgt agatgtactg ccaagtagga aagtcccata aggtcatgta 8640

ctgggcataa tgccaggcgg gccatttacc gtcattgacg tcaatagggg gcgtacttgg 8700

catatgatac acttgatgta ctgccaagtg ggcagtttac cgtaaatact ccacccattg 8760

acgtcaatgg aaagtcccta ttgacgttac tatgggaaca tacgtcatta ttgacgtcaa 8820

tgggcggggg tcgttgggcg gtcagccagg cgggccattt accgtaagtt atgtaacgcg 8880

gaactccata tatgggctat gaactaatga ccccgtaatt gattactatt aataactagc 8940

tccacgcgtg cggccgcaga tcgtcgacga agtttaaact caggaacccc tagtgatgga 9000

gttggccact ccctctctgc gcgctcgctc gctcactgag gccgcccggg caaagcccgg 9060

gcgtcgggcg acctttggtc gcccggcctc agtgagcgag cgagcgcgca gagagggagt 9120

ggccaacgtc atttaaatgc atgcaagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt 9180

gtgaaaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg 9240

cattaatgaa tcggccaacg cgcggg 9266

<210> 11

<211> 9236

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 11

cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60

ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120

ttgcatgcat ttaaatgacg cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa 180

agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag 240

agggagtggc caactccatc actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc 300

gcacgcgtgg agctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 360

atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 420

acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt 480

tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 540

tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 600

attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 660

tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt 720

ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca 780

ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg 840

cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat 900

cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag 960

cctccgcgga ttcgaatccc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca 1020

agagtgacgt aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt 1080

aatatacttt tttgtttatc ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca 1140

ataatgatac aatgtatcat gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc 1200

tgggttaagg caatagcaat atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg 1260

atgtaagagg tttcatattg ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt 1320

ttatggttgg gataaggctg gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg 1380

ttcatacctc ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc 1440

catcactttg gcaaagaatt gggattcgaa catcggccgc caccatgaac gcaagtgaat 1500

tccgaaggag agggaaggag atggtggatt acgtggccaa ctacatggaa ggcattgagg 1560

gacgccaggt ctaccctgac gtggagcccg ggtacctgcg gccgctgatc cctgccgctg 1620

cccctcagga gccagacacg tttgaggaca tcatcaacga cgttgagaag ataatcatgc 1680

ctggggtgac gcactggcac agcccctact tcttcgccta cttccccact gccagctcgt 1740

acccggccat gcttgcggac atgctgtgcg gggccattgg ctgcatcggc ttctcctggg 1800

cggcaagccc agcatgcaca gagctggaga ctgtgatgat ggactggctc gggaagatgc 1860

tggaactacc aaaggcattt ttgaatgaga aagctggaga agggggagga gtgatccagg 1920

gaagtgccag tgaagccacc ctggtggccc tgctggccgc tcggaccaaa gtgatccatc 1980

ggctgcaggc agcgtcccca gagctcacac aggccgctat catggagaag ctggtggctt 2040

actcatccga tcaggcacac tcctcagtgg aaagagctgg gttaattggt ggagtgaaat 2100

taaaagccat cccctcagat ggcaacttcg ccatgcgtgc gtctgccctg caggaagccc 2160

tggagagaga caaagcggct ggcctgattc ctttctttat ggttgccacc ctggggacca 2220

caacatgctg ctcctttgac aatctcttag aagtcggtcc tatctgcaac aaggaagaca 2280

tatggctgca cgttgatgca gcctacgcag gcagtgcatt catctgccct gagttccggc 2340

accttctgaa tggagtggag tttgcagatt cattcaactt taatccccac aaatggctat 2400

tggtgaattt tgactgttct gccatgtggg tgaaaaagag aacagactta acgggagcct 2460

ttagactgga ccccacttac ctgaagcaca gccatcagga ttcagggctt atcactgact 2520

accggcattg gcagatacca ctgggcagaa gatttcgctc tttgaaaatg tggtttgtat 2580

ttaggatgta tggagtcaaa ggactgcagg cttatatccg caagcatgtc cagctgtccc 2640

atgagtttga gtcactggtg cgccaggatc cccgctttga aatctgtgtg gaagtcattc 2700

tggggcttgt ctgctttcgg ctaaagggtt ccaacaaagt gaatgaagct cttctgcaaa 2760

gaataaacag tgccaaaaaa atccacttgg ttccatgtca cctcagggac aagtttgtcc 2820

tgcgctttgc catctgttct cgcacggtgg aatctgccca tgtgcagcgg gcctgggaac 2880

acatcaaaga gctggcggcc gacgtgctgc gagcagagag ggagtaggag tgagctgctc 2940

gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag 3000

ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg 3060

actaggtgtc cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag 3120

ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg tctattggga accaagctgg agtgcagtgg 3180

cacaatcttg gctcactgca atctccgcct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc 3240

ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt 3300

ggtagagacg gggtttcacc atattggcca ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga 3360

tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc 3420

ctgtccttct gattttgtag gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagt taattaagct 3480

cgcgaaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga 3540

ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga 3600

gcgagcgcgc agctggacga tttaaatggt accgagctcg aattcactgg ccgtcgtttt 3660

acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc 3720

ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt 3780

gcgcagcctg aatggcgaat ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg 3840

tatttcacac cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag 3900

ccagccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc 3960

atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc agaacccaaa tgtgaccaac cgtttacata 4020

tatcttggtt tattatttca atttctcttt tcaaacatct tcttctgtcg ttgtgcaatt 4080

ttccaaatgc caatttggtc gcttggctat ttccaaacga tttcatatat tcaagttgga 4140

gatatagaca gtcccctgaa cacctcgcat cctctgcttt ttatgcctgc tcgtcctgtg 4200

ggtataattt taatggtcaa atcgctgctg gggaattgta tacgctgctc ttgtgtctca 4260

ctgcctccct tgtagaaatg gaaattgctt ttccattatt tccatgtgat tttgttggtt 4320

ttgccatcga attggcattg aaaacgcata aaaataagca tttcgcattt gcaaagatcc 4380

aaaagattta tttgcacgct gagcctgggg atacacgaaa tgtatttgta agattcttca 4440

gatgagtttg gaacgcacgg aaattaccgt cttgggattt gttggacatc gcatttaagc 4500

atgatgtatc atttaatttt ttccaattta aaaacaaata atcagtgcta cgattaagac 4560

tggatctatt atagacttct tcaaagtttt tcagttttct ttaaaattac ctccataaaa 4620

ctcttttaat attttgaaaa tcatctccag gttacattta atctgattaa gtttagagtc 4680

agttagtttc ccacagtttt cttcttgaaa taaacccatt aagtaacccc aactgatcgg 4740

cgcaaatgat tcagctatgc agaaaatatg attgatgatt tttccctccc accagccctt 4800

aacacttgct taaccctttt gtgtggccat tatagccctt tcctcgtagt ctgcttaaag 4860

ttcattaata agttttgcgt gagccaaaaa tggcgccgct ttggaatcgt gacagcgtgg 4920

aaactctgga ctttggggtt gcaaaacttc ggaagctgaa agcattttgc tgtagccatc 4980

gcattttggg ggaagaaatc cgaattcgag tccaaaccga attctaatag aagttttgca 5040

gcaaagtgcc tcagacaggt taatgaccaa aagcagtttt gcattcaaat gctgcagcaa 5100

ccctcgcacg agggttgtca tgacggacga aaatctaatt tacaacatgc aactgccact 5160

ttgaggggtg acttttaccc aagacgtggc tgtgaaggaa attctgcgag aaagagatta 5220

attacgctct gggggcagtt aatgaatgct tgcgcggggc gataaggggt taacgtttgg 5280

ccagctcaaa ttaccgaatg tataacattt tgatgagcat gacaaaaatt ggaattttca 5340

actctttttt cctgcgaaaa gcataacttt tccattaaca caatggcgac gatgagccgg 5400

caaatcgacg ataccaaatc ggcataacgt gcatgaaaat tatacatgat tgatttcata 5460

ttaatttcta cgaatgttat gaatcggcta aaagatgaga atggaaatat tgcacgattt 5520

tgattttgtc atgatgacaa aaaagggttg taagatttgt acatgccaaa atcataaact 5580

tttaacagaa atcaaacaca aagaagtaat ataacattaa agtacacagg ccttgtcaca 5640

gagatagaaa aatgtagcta ttattaaaat atttaacatt ctcttggtgt ctgcaacttt 5700

tctatcagtc gcttttttat tccctttcca acacttattt aaaatgaaat gcactcgaaa 5760

ttaactaatt taatggctca tatcctttgt gctgcttaaa aaggcaggaa acgttttttg 5820

tgccctacac ctcctccatt caaatgaaaa aggcggtgga gtcgaggaaa atgtctgccc 5880

tggagcttga caagccaaga tatggcccat caaaaatgtt cgaatgttct ttttaaataa 5940

atgtctcatt atatggctgc cacgcccaca ccgctcaacg cccacacacg tgccgccttc 6000

cggtttagtt gggtggtacc tgaccgtaga tttttcactg cggacatgtg tccaatcagt 6060

ggcaacgtgc aacgaaccgt ggcaaacaca gggaaagaac ctcgaagacc cacagcaaac 6120

tcatcctctc gaatttgaca ctatgataat gcttatattc aattttttgc aacattctat 6180

ttacactaaa ctgagaaaca ggacaaagtt gagaatgggt gctgtgatta tttgtcttgt 6240

gccaatatat gccctcctgc atataaaata cgagatacaa aaccaaacga aataagaacg 6300

aacaagaaat cagtttaatt tcaatgctga tcaaaccaag ttgacaactc tgttgtatat 6360

tagctctaat aatgacttaa ggttcgaaat ttaagtaact tccaaaatgg gccagataaa 6420

tactgctaat atcgaatgca attcaatgag gaaatagtaa tcaatcagcc aaccctaatg 6480

aaattaataa tgtaatttaa aactttattc cacccattct aataatgaaa atcattaaat 6540

atatgtagca atccaatttt gttaatacat attgtatatc cctgatttgt caataccaaa 6600

gaccagaaaa aacaccatgc caaattcctt ttattcgttg aaaatcgaaa caactttgaa 6660

gtattaacct gctggctaaa aaatatgtgt attactaaat ataccatgta atcaaaagtt 6720

cgaaataaac gtgaaatggc agctccactc gtcagccgtg ccacttttcg actaatcaaa 6780

atgccttttg aatgcctgag ttgaatcaag ttggcttaat agttattatc ccacgcaagc 6840

aaagtcaatg gcagagggaa atgcgtagaa attagcacag acttgaatgg acgcacgagt 6900

gtcgaatggc aggagagtgg gaaatgaacg gggagttttc caggataagg atgttttcga 6960

agtatcgtaa tcatttatag cctccagata cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc 7020

gtcatcaccg aaacgcgcga tgcagctctg gcccgtgtct caaaatctct gatgttacat 7080

tgcacaagat aaaaatatat catcatgaac aataaaactg tctgcttaca taaacagtaa 7140

tacaaggggt gttgaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga 7200

aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct 7260

tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaag cccaatctga ataatgttac aaccaattaa 7320

ccaattctga ttagaaaaac tcatcgagca tcaaatgaaa ctgcaattta ttcatatcag 7380

gattatcaat accatatttt tgaaaaagcc gtttctgtaa tgaaggagaa aactcaccga 7440

ggcagttcca taggatggca agatcctggt atcggtctgc gattccgact cgtccaacat 7500

caatacaacc tattaatttc ccctcgtcaa aaataaggtt atcaagtgag aaatcaccat 7560

gagtgacgac tgaatccggt gagaatggca aaagtttatg catttctttc cagacttgtt 7620

caacaggcca gccattacgc tcgtcatcaa aatcactcgc atcaaccaaa ccgttattca 7680

ttcgtgattg cgcctgagcg agacgaaata cgcgatcgct gttaaaagga caattacaaa 7740

caggaatcga atgcaaccgg cgcaggaaca ctgccagcgc atcaacaata ttttcacctg 7800

aatcaggata ttcttctaat acctggaatg ctgtttttcc ggggatcgca gtggtgagta 7860

accatgcatc atcaggagta cggataaaat gcttgatggt cggaagaggc ataaattccg 7920

tcagccagtt tagtctgacc atctcatctg taacatcatt ggcaacgcta cctttgccat 7980

gtttcagaaa caactctggc gcatcgggct tcccatacaa gcgatagatt gtcgcacctg 8040

attgcccgac attatcgcga gcccatttat acccatataa atcagcatcc atgttggaat 8100

ttaatcgcgg cctcgacgtt tcccgttgaa tatggctcat aacacccctt gtattactgt 8160

ttatgtaagc agacagtttt attgttcatg atgatatatt tttatcttgt gcaatgtaac 8220

atcagagatt ttgagacacg ggccagagct gcatcgcgcg ttttcagaat tggttaattg 8280

gttgtaacat tattcagatt gggcttgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct 8340

aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc 8400

actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc tttccatagg ctccgccccc 8460

ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat 8520

aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc 8580

cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct 8640

cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg 8700

aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc 8760

cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga 8820

ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa 8880

gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta 8940

gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc 9000

agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc 9060

tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg 9120

ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc 9180

gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat acgcaaaccg cctctc 9236

<210> 12

<211> 6260

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 12

cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60

ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120

ttgcatgcat ttaaatgacg ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 180

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 240

gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt 300

cgacgatctg cggccgcacg cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat 360

tagttcatag cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg 420

gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa 480

cgtcaatagg gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact 540

tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta 600

aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt 660

acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg 720

ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg 780

ggagtttgtt ttgcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc 840

attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt 900

agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca 960

ccgggaccga tccagcctcc gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc 1020

ggattccccg tgccaagagt gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa 1080

atgctttctt cttttaatat acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct 1140

ctttctttca gggcaataat gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat 1200

aacagtgata atttctgggt taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca 1260

tataaattgt aactgatgta agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac 1320

cattctgctt ttattttatg gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc 1380

cttttgctaa tcatgttcat acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg 1440

gtctgtgtgc tggcccatca ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca 1500

tgaacgccag cgagttcagg aggaggggca aggagatggt ggactacgtg gccaactaca 1560

tggagggcat cgagggcagg caggtgtacc ccgacgtgga gcccggctac ctgaggcccc 1620

tgatccccgc cgccgccccc caggagcccg acaccttcga ggacatcatc aacgacgtgg 1680

agaagatcat catgcccggc gtgacccact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc 1740

ccaccgccag cagctacccc gccatgctgg ccgacatgct gtgcggcgcc atcggctgca 1800

tcggcttcag ctgggccgcc agccccgcct gcaccgagct ggagaccgtg atgatggact 1860

ggctgggcaa gatgctggag ctgcccaagg ccttcctgaa cgagaaggcc ggcgagggcg 1920

gcggcgtgat ccagggcagc gccagcgagg ccaccctggt ggccctgctg gccgccagga 1980

ccaaggtgat ccacaggctg caggccgcca gccccgagct gacccaggcc gccatcatgg 2040

agaagctggt ggcctacagc agcgaccagg cccacagcag cgtggagagg gccggcctga 2100

tcggcggcgt gaagctgaag gccatcccca gcgacggcaa cttcgccatg agggccagcg 2160

ccctgcagga ggccctggag agggacaagg ccgccggcct gatccccttc ttcatggtgg 2220

ccaccctggg caccaccacc tgctgcagct tcgacaacct gctggaggtg ggccccatct 2280

gcaacaagga ggacatctgg ctgcacgtgg acgccgccta cgccggcagc gccttcatct 2340

gccccgagtt caggcacctg ctgaacggcg tggagttcgc cgacagcttc aacttcaacc 2400

cccacaagtg gctgctggtg aacttcgact gcagcgccat gtgggtgaag aagaggaccg 2460

acctgaccgg cgccttcagg ctggacccca cctacctgaa gcacagccac caggacagcg 2520

gcctgatcac cgactacagg cactggcaga tccccctggg caggaggttc aggagcctga 2580

agatgtggtt cgtgttcagg atgtacggcg tgaagggcct gcaggcctac atcaggaagc 2640

acgtgcagct gagccacgag ttcgagagcc tggtgaggca ggaccccagg ttcgagatct 2700

gcgtggaggt gatcctgggc ctggtgtgct tcaggctgaa gggcagcaac aaggtgaacg 2760

aggccctgct gcagaggatc aacagcgcca agaagatcca cctggtgccc tgccacctga 2820

gggacaagtt cgtgctgagg ttcgccatct gcagcaggac cgtggagagc gcccacgtgc 2880

agagggcctg ggagcacatc aaggagctgg ccgccgacgt gctgagggcc gagagggagt 2940

gagctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg 3000

ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca 3060

ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca 3120

aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga 3180

gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc 3240

tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt 3300

tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat 3360

ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg 3420

ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagtt 3480

aattaagctc gcgaaggaac ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg 3540

ctcgctcact gaggccgggc gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc 3600

ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agtggccaag acgatttaaa tggtaccgag 3660

ctcgaattca ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca 3720

acttaatcgc cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg 3780

caccgatcgc ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta 3840

ttttctcctt acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat 3900

ctgctctgat gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgcc 3960

ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccg tctccgggag 4020

ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgatgcagc tctggcccgt 4080

gtctcaaaat ctctgatgtt acattgcaca agataaaaat atatcatcat gaacaataaa 4140

actgtctgct tacataaaca gtaatacaag gggtgttgaa gatcctttga tcttttctac 4200

ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc 4260

aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caagcccaat 4320

ctgaataatg ttacaaccaa ttaaccaatt ctgattagaa aaactcatcg agcatcaaat 4380

gaaactgcaa tttattcata tcaggattat caataccata tttttgaaaa agccgtttct 4440

gtaatgaagg agaaaactca ccgaggcagt tccataggat ggcaagatcc tggtatcggt 4500

ctgcgattcc gactcgtcca acatcaatac aacctattaa tttcccctcg tcaaaaataa 4560

ggttatcaag tgagaaatca ccatgagtga cgactgaatc cggtgagaat ggcaaaagtt 4620

tatgcatttc tttccagact tgttcaacag gccagccatt acgctcgtca tcaaaatcac 4680

tcgcatcaac caaaccgtta ttcattcgtg attgcgcctg agcgagacga aatacgcgat 4740

cgctgttaaa aggacaatta caaacaggaa tcgaatgcaa ccggcgcagg aacactgcca 4800

gcgcatcaac aatattttca cctgaatcag gatattcttc taatacctgg aatgctgttt 4860

ttccggggat cgcagtggtg agtaaccatg catcatcagg agtacggata aaatgcttga 4920

tggtcggaag aggcataaat tccgtcagcc agtttagtct gaccatctca tctgtaacat 4980

cattggcaac gctacctttg ccatgtttca gaaacaactc tggcgcatcg ggcttcccat 5040

acaagcgata gattgtcgca cctgattgcc cgacattatc gcgagcccat ttatacccat 5100

ataaatcagc atccatgttg gaatttaatc gcggcctcga cgtttcccgt tgaatatggc 5160

tcataacacc ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt catgatgata 5220

tatttttatc ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacgggccag agctgcatcg 5280

cgcgttttca gaattggtta attggttgta acattattca gattgggctt gatttaaaac 5340

ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa 5400

tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat 5460

cttctttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 5520

ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 5580

tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 5640

gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 5700

gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 5760

gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 5820

ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 5880

ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 5940

ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 6000

gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caaaacgcca 6060

gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc 6120

ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg 6180

ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc 6240

caatacgcaa accgcctctc 6260

<210> 13

<211> 6442

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 13

cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60

ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120

ttgcatgcat ttaaatgacg cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa 180

agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag 240

agggagtggc caactccatc actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc 300

gcacgcgtgg agctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 360

atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 420

acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt 480

tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 540

tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 600

attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 660

tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt 720

ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca 780

ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg 840

cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat 900

cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag 960

cctccgcgga ttcgaatccc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca 1020

agagtgacgt aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt 1080

aatatacttt tttgtttatc ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca 1140

ataatgatac aatgtatcat gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc 1200

tgggttaagg caatagcaat atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg 1260

atgtaagagg tttcatattg ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt 1320

ttatggttgg gataaggctg gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg 1380

ttcatacctc ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc 1440

catcactttg gcaaagaatt gggattcgaa catcgaattc gggcacgagg gaggacagag 1500

agcaagtcac tcccggctgc ctttttcacc tctgacagag cccagacacc atgaacgcaa 1560

gtgaattccg aaggagaggg aaggagatgg tggattacgt ggccaactac atggaaggca 1620

ttgagggacg ccaggtctac cctgacgtgg agcccgggta cctgcggccg ctgatccctg 1680

ccgctgcccc tcaggagcca gacacgtttg aggacatcat caacgacgtt gagaagataa 1740

tcatgcctgg ggtgacgcac tggcacagcc cctacttctt cgcctacttc cccactgcca 1800

gctcgtaccc ggccatgctt gcggacatgc tgtgcggggc cattggctgc atcggcttct 1860

cctgggcggc aagcccagca tgcacagagc tggagactgt gatgatggac tggctcggga 1920

agatgctgga actaccaaag gcatttttga atgagaaagc tggagaaggg ggaggagtga 1980

tccagggaag tgccagtgaa gccaccctgg tggccctgct ggccgctcgg accaaagtga 2040

tccatcggct gcaggcagcg tccccagagc tcacacaggc cgctatcatg gagaagctgg 2100

tggcttactc atccgatcag gcacactcct cagtggaaag agctgggtta attggtggag 2160

tgaaattaaa agccatcccc tcagatggca acttcgccat gcgtgcgtct gccctgcagg 2220

aagccctgga gagagacaaa gcggctggcc tgattccttt ctttatggtt gccaccctgg 2280

ggaccacaac atgctgctcc tttgacaatc tcttagaagt cggtcctatc tgcaacaagg 2340

aagacatatg gctgcacgtt gatgcagcct acgcaggcag tgcattcatc tgccctgagt 2400

tccggcacct tctgaatgga gtggagtttg cagattcatt caactttaat ccccacaaat 2460

ggctattggt gaattttgac tgttctgcca tgtgggtgaa aaagagaaca gacttaacgg 2520

gagcctttag actggacccc acttacctga agcacagcca tcaggattca gggcttatca 2580

ctgactaccg gcattggcag ataccactgg gcagaagatt tcgctctttg aaaatgtggt 2640

ttgtatttag gatgtatgga gtcaaaggac tgcaggctta tatccgcaag catgtccagc 2700

tgtcccatga gtttgagtca ctggtgcgcc aggatccccg ctttgaaatc tgtgtggaag 2760

tcattctggg gcttgtctgc tttcggctaa agggttccaa caaagtgaat gaagctcttc 2820

tgcaaagaat aaacagtgcc aaaaaaatcc acttggttcc atgtcacctc agggacaagt 2880

ttgtcctgcg ctttgccatc tgttctcgca cggtggaatc tgcccatgtg cagcgggcct 2940

gggaacacat caaagagctg gcggccgacg tgctgcgagc agagagggag taggagtgaa 3000

gccagctgca ggaatcaaaa attgaagaga gatatatctg aaaactggaa taagaagcaa 3060

ataaatatca tcctgccttc atggaactca gctgtctgtg gcttcccatg tctttctcca 3120

aagttatcca gagggttgtg attttgtctg cttagtatct catcaacaaa gaaatattat 3180

ttgctaatta aaaagttaat cttcatggcc atagctttta ttcattagct gtgatttttg 3240

ttgattaaaa cattatagat tttcatgttc ttgcagtcat cagaagtggt aggaaagcct 3300

cactgatata ttttccaggg caatcaatgt tcacgcaact tgaaattata tctgtggtct 3360

tcaaattgtc ttttgtcatg tggctaaatg cctaataaac aattcaagtg aaatactaaa 3420

aaaaaaaaaa aaaaaaaaag ctgctcgaga gatctacggg tggcatccct gtgacccctc 3480

cccagtgcct ctcctggccc tggaagttgc cactccagtg cccaccagcc ttgtcctaat 3540

aaaattaagt tgcatcattt tgtctgacta ggtgtccttc tataatatta tggggtggag 3600

gggggtggta tggagcaagg ggcaagttgg gaagacaacc tgtagggcct gcggggtcta 3660

ttgggaacca agctggagtg cagtggcaca atcttggctc actgcaatct ccgcctcctg 3720

ggttcaagcg attctcctgc ctcagcctcc cgagttgttg ggattccagg catgcatgac 3780

caggctcagc taatttttgt ttttttggta gagacggggt ttcaccatat tggccaggct 3840

ggtctccaac tcctaatctc aggtgatcta cccaccttgg cctcccaaat tgctgggatt 3900

acaggcgtga accactgctc ccttccctgt ccttctgatt ttgtaggtaa ccacgtgcgg 3960

accgagcggc cgcagttaat taagctcgcg aaacccctag tgatggagtt ggccactccc 4020

tctctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gggcgaccaa aggtcgcccg acgcccgggc 4080

tttgcccggg cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagct ggacgattta aatggtaccg 4140

agctcgaatt cactggccgt cgttttacaa cgtcgtgact gggaaaaccc tggcgttacc 4200

caacttaatc gccttgcagc acatccccct ttcgccagct ggcgtaatag cgaagaggcc 4260

cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc agcctgaatg gcgaatggcg cctgatgcgg 4320

tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca tatggtgcac tctcagtaca 4380

atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc cgctgacgcg 4440

ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac cgtctccggg 4500

agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgatgca gctctggccc 4560

gtgtctcaaa atctctgatg ttacattgca caagataaaa atatatcatc atgaacaata 4620

aaactgtctg cttacataaa cagtaataca aggggtgtta tgagccatat tcaacgggaa 4680

acgtcgaggc cgcgattaaa ttccaacatg gatgctgatt tatatgggta taaatgggct 4740

cgcgataatg tcgggcaatc aggtgcgaca atctatcgct tgtatgggaa gcccgatgcg 4800

ccagagttgt ttctgaaaca tggcaaaggt agcgttgcca atgatgttac agatgagatg 4860

gtcagactaa actggctgac ggaatttatg cctcttccga ccatcaagca ttttatccgt 4920

actcctgatg atgcatggtt actcaccact gcgatccccg gaaaaacagc attccaggta 4980

ttagaagaat atcctgattc aggtgaaaat attgttgatg cgctggcagt gttcctgcgc 5040

cggttgcatt cgattcctgt ttgtaattgt ccttttaaca gcgatcgcgt atttcgtctc 5100

gctcaggcgc aatcacgaat gaataacggt ttggttgatg cgagtgattt tgatgacgag 5160

cgtaatggct ggcctgttga acaagtctgg aaagaaatgc ataaactttt gccattctca 5220

ccggattcag tcgtcactca tggtgatttc tcacttgata accttatttt tgacgagggg 5280

aaattaatag gttgtattga tgttggacga gtcggaatcg cagaccgata ccaggatctt 5340

gccatcctat ggaactgcct cggtgagttt tctccttcat tacagaaacg gctttttcaa 5400

aaatatggta ttgataatcc tgatatgaat aaattgcagt ttcatttgat gctcgatgag 5460

tttttctaat cagaattggt taattggttg taacattatt cagattgggc ttgatttaaa 5520

acttcatttt taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa 5580

aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg 5640

atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc 5700

gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac 5760

tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca 5820

ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt 5880

ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc 5940

ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg 6000

aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc 6060

cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac 6120

gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct 6180

ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc 6240

cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt 6300

tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac 6360

cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg 6420

cccaatacgc aaaccgcctc tc 6442

<210> 14

<211> 9260

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 14

cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60

ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120

ttgcatgcat ttaaatgacg ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 180

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 240

gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt 300

cgacgatctg cggccgcacg cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat 360

tagttcatag cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg 420

gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa 480

cgtcaatagg gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact 540

tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta 600

aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt 660

acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg 720

ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg 780

ggagtttgtt ttgcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc 840

attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt 900

agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca 960

ccgggaccga tccagcctcc gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc 1020

ggattccccg tgccaagagt gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa 1080

atgctttctt cttttaatat acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct 1140

ctttctttca gggcaataat gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat 1200

aacagtgata atttctgggt taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca 1260

tataaattgt aactgatgta agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac 1320

cattctgctt ttattttatg gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc 1380

cttttgctaa tcatgttcat acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg 1440

gtctgtgtgc tggcccatca ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca 1500

tgaacgccag cgagttcagg aggaggggca aggagatggt ggactacgtg gccaactaca 1560

tggagggcat cgagggcagg caggtgtacc ccgacgtgga gcccggctac ctgaggcccc 1620

tgatccccgc cgccgccccc caggagcccg acaccttcga ggacatcatc aacgacgtgg 1680

agaagatcat catgcccggc gtgacccact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc 1740

ccaccgccag cagctacccc gccatgctgg ccgacatgct gtgcggcgcc atcggctgca 1800

tcggcttcag ctgggccgcc agccccgcct gcaccgagct ggagaccgtg atgatggact 1860

ggctgggcaa gatgctggag ctgcccaagg ccttcctgaa cgagaaggcc ggcgagggcg 1920

gcggcgtgat ccagggcagc gccagcgagg ccaccctggt ggccctgctg gccgccagga 1980

ccaaggtgat ccacaggctg caggccgcca gccccgagct gacccaggcc gccatcatgg 2040

agaagctggt ggcctacagc agcgaccagg cccacagcag cgtggagagg gccggcctga 2100

tcggcggcgt gaagctgaag gccatcccca gcgacggcaa cttcgccatg agggccagcg 2160

ccctgcagga ggccctggag agggacaagg ccgccggcct gatccccttc ttcatggtgg 2220

ccaccctggg caccaccacc tgctgcagct tcgacaacct gctggaggtg ggccccatct 2280

gcaacaagga ggacatctgg ctgcacgtgg acgccgccta cgccggcagc gccttcatct 2340

gccccgagtt caggcacctg ctgaacggcg tggagttcgc cgacagcttc aacttcaacc 2400

cccacaagtg gctgctggtg aacttcgact gcagcgccat gtgggtgaag aagaggaccg 2460

acctgaccgg cgccttcagg ctggacccca cctacctgaa gcacagccac caggacagcg 2520

gcctgatcac cgactacagg cactggcaga tccccctggg caggaggttc aggagcctga 2580

agatgtggtt cgtgttcagg atgtacggcg tgaagggcct gcaggcctac atcaggaagc 2640

acgtgcagct gagccacgag ttcgagagcc tggtgaggca ggaccccagg ttcgagatct 2700

gcgtggaggt gatcctgggc ctggtgtgct tcaggctgaa gggcagcaac aaggtgaacg 2760

aggccctgct gcagaggatc aacagcgcca agaagatcca cctggtgccc tgccacctga 2820

gggacaagtt cgtgctgagg ttcgccatct gcagcaggac cgtggagagc gcccacgtgc 2880

agagggcctg ggagcacatc aaggagctgg ccgccgacgt gctgagggcc gagagggagt 2940

gagctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg 3000

ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca 3060

ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca 3120

aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga 3180

gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc 3240

tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt 3300

tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat 3360

ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg 3420

ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagtt 3480

aattaagctc gcgaaggaac ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg 3540

ctcgctcact gaggccgggc gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc 3600

ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agtggccaag acgatttaaa tggtaccgag 3660

ctcgaattca ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca 3720

acttaatcgc cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg 3780

caccgatcgc ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta 3840

ttttctcctt acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat 3900

ctgctctgat gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgcc 3960

ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccg tctcagaacc 4020

caaatgtgac caaccgttta catatatctt ggtttattat ttcaatttct cttttcaaac 4080

atcttcttct gtcgttgtgc aattttccaa atgccaattt ggtcgcttgg ctatttccaa 4140

acgatttcat atattcaagt tggagatata gacagtcccc tgaacacctc gcatcctctg 4200

ctttttatgc ctgctcgtcc tgtgggtata attttaatgg tcaaatcgct gctggggaat 4260

tgtatacgct gctcttgtgt ctcactgcct cccttgtaga aatggaaatt gcttttccat 4320

tatttccatg tgattttgtt ggttttgcca tcgaattggc attgaaaacg cataaaaata 4380

agcatttcgc atttgcaaag atccaaaaga tttatttgca cgctgagcct ggggatacac 4440

gaaatgtatt tgtaagattc ttcagatgag tttggaacgc acggaaatta ccgtcttggg 4500

atttgttgga catcgcattt aagcatgatg tatcatttaa ttttttccaa tttaaaaaca 4560

aataatcagt gctacgatta agactggatc tattatagac ttcttcaaag tttttcagtt 4620

ttctttaaaa ttacctccat aaaactcttt taatattttg aaaatcatct ccaggttaca 4680

tttaatctga ttaagtttag agtcagttag tttcccacag ttttcttctt gaaataaacc 4740

cattaagtaa ccccaactga tcggcgcaaa tgattcagct atgcagaaaa tatgattgat 4800

gatttttccc tcccaccagc ccttaacact tgcttaaccc ttttgtgtgg ccattatagc 4860

cctttcctcg tagtctgctt aaagttcatt aataagtttt gcgtgagcca aaaatggcgc 4920

cgctttggaa tcgtgacagc gtggaaactc tggactttgg ggttgcaaaa cttcggaagc 4980

tgaaagcatt ttgctgtagc catcgcattt tgggggaaga aatccgaatt cgagtccaaa 5040

ccgaattcta atagaagttt tgcagcaaag tgcctcagac aggttaatga ccaaaagcag 5100

ttttgcattc aaatgctgca gcaaccctcg cacgagggtt gtcatgacgg acgaaaatct 5160

aatttacaac atgcaactgc cactttgagg ggtgactttt acccaagacg tggctgtgaa 5220

ggaaattctg cgagaaagag attaattacg ctctgggggc agttaatgaa tgcttgcgcg 5280

gggcgataag gggttaacgt ttggccagct caaattaccg aatgtataac attttgatga 5340

gcatgacaaa aattggaatt ttcaactctt ttttcctgcg aaaagcataa cttttccatt 5400

aacacaatgg cgacgatgag ccggcaaatc gacgatacca aatcggcata acgtgcatga 5460

aaattataca tgattgattt catattaatt tctacgaatg ttatgaatcg gctaaaagat 5520

gagaatggaa atattgcacg attttgattt tgtcatgatg acaaaaaagg gttgtaagat 5580

ttgtacatgc caaaatcata aacttttaac agaaatcaaa cacaaagaag taatataaca 5640

ttaaagtaca caggccttgt cacagagata gaaaaatgta gctattatta aaatatttaa 5700

cattctcttg gtgtctgcaa cttttctatc agtcgctttt ttattccctt tccaacactt 5760

atttaaaatg aaatgcactc gaaattaact aatttaatgg ctcatatcct ttgtgctgct 5820

taaaaaggca ggaaacgttt tttgtgccct acacctcctc cattcaaatg aaaaaggcgg 5880

tggagtcgag gaaaatgtct gccctggagc ttgacaagcc aagatatggc ccatcaaaaa 5940

tgttcgaatg ttctttttaa ataaatgtct cattatatgg ctgccacgcc cacaccgctc 6000

aacgcccaca cacgtgccgc cttccggttt agttgggtgg tacctgaccg tagatttttc 6060

actgcggaca tgtgtccaat cagtggcaac gtgcaacgaa ccgtggcaaa cacagggaaa 6120

gaacctcgaa gacccacagc aaactcatcc tctcgaattt gacactatga taatgcttat 6180

attcaatttt ttgcaacatt ctatttacac taaactgaga aacaggacaa agttgagaat 6240

gggtgctgtg attatttgtc ttgtgccaat atatgccctc ctgcatataa aatacgagat 6300

acaaaaccaa acgaaataag aacgaacaag aaatcagttt aatttcaatg ctgatcaaac 6360

caagttgaca actctgttgt atattagctc taataatgac ttaaggttcg aaatttaagt 6420

aacttccaaa atgggccaga taaatactgc taatatcgaa tgcaattcaa tgaggaaata 6480

gtaatcaatc agccaaccct aatgaaatta ataatgtaat ttaaaacttt attccaccca 6540

ttctaataat gaaaatcatt aaatatatgt agcaatccaa ttttgttaat acatattgta 6600

tatccctgat ttgtcaatac caaagaccag aaaaaacacc atgccaaatt ccttttattc 6660

gttgaaaatc gaaacaactt tgaagtatta acctgctggc taaaaaatat gtgtattact 6720

aaatatacca tgtaatcaaa agttcgaaat aaacgtgaaa tggcagctcc actcgtcagc 6780

cgtgccactt ttcgactaat caaaatgcct tttgaatgcc tgagttgaat caagttggct 6840

taatagttat tatcccacgc aagcaaagtc aatggcagag ggaaatgcgt agaaattagc 6900

acagacttga atggacgcac gagtgtcgaa tggcaggaga gtgggaaatg aacggggagt 6960

tttccaggat aaggatgttt tcgaagtatc gtaatcattt atagcctcca gatacgggag 7020

ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgatgcagc tctggcccgt 7080

gtctcaaaat ctctgatgtt acattgcaca agataaaaat atatcatcat gaacaataaa 7140

actgtctgct tacataaaca gtaatacaag gggtgttgaa gatcctttga tcttttctac 7200

ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc 7260

aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caagcccaat 7320

ctgaataatg ttacaaccaa ttaaccaatt ctgattagaa aaactcatcg agcatcaaat 7380

gaaactgcaa tttattcata tcaggattat caataccata tttttgaaaa agccgtttct 7440

gtaatgaagg agaaaactca ccgaggcagt tccataggat ggcaagatcc tggtatcggt 7500

ctgcgattcc gactcgtcca acatcaatac aacctattaa tttcccctcg tcaaaaataa 7560

ggttatcaag tgagaaatca ccatgagtga cgactgaatc cggtgagaat ggcaaaagtt 7620

tatgcatttc tttccagact tgttcaacag gccagccatt acgctcgtca tcaaaatcac 7680

tcgcatcaac caaaccgtta ttcattcgtg attgcgcctg agcgagacga aatacgcgat 7740

cgctgttaaa aggacaatta caaacaggaa tcgaatgcaa ccggcgcagg aacactgcca 7800

gcgcatcaac aatattttca cctgaatcag gatattcttc taatacctgg aatgctgttt 7860

ttccggggat cgcagtggtg agtaaccatg catcatcagg agtacggata aaatgcttga 7920

tggtcggaag aggcataaat tccgtcagcc agtttagtct gaccatctca tctgtaacat 7980

cattggcaac gctacctttg ccatgtttca gaaacaactc tggcgcatcg ggcttcccat 8040

acaagcgata gattgtcgca cctgattgcc cgacattatc gcgagcccat ttatacccat 8100

ataaatcagc atccatgttg gaatttaatc gcggcctcga cgtttcccgt tgaatatggc 8160

tcataacacc ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt catgatgata 8220

tatttttatc ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacgggccag agctgcatcg 8280

cgcgttttca gaattggtta attggttgta acattattca gattgggctt gatttaaaac 8340

ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa 8400

tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat 8460

cttctttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 8520

ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 8580

tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 8640

gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 8700

gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 8760

gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 8820

ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 8880

ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 8940

ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 9000

gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caaaacgcca 9060

gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc 9120

ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg 9180

ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc 9240

caatacgcaa accgcctctc 9260

<210> 15

<211> 9665

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 15

cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60

ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120

ttgcatgcat ttaaatgacg ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 180

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 240

gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt 300

cgacgatctg cggccgcacg cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat 360

tagttcatag cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg 420

gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa 480

cgtcaatagg gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact 540

tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta 600

aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt 660

acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg 720

ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg 780

ggagtttgtt ttgcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc 840

attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt 900

agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca 960

ccgggaccga tccagcctcc gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc 1020

ggattccccg tgccaagagt gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa 1080

atgctttctt cttttaatat acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct 1140

ctttctttca gggcaataat gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat 1200

aacagtgata atttctgggt taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca 1260

tataaattgt aactgatgta agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac 1320

cattctgctt ttattttatg gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc 1380

cttttgctaa tcatgttcat acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg 1440

gtctgtgtgc tggcccatca ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca 1500

tgaacgcaag tgaattccga aggagaggga aggagatggt ggattacgtg gccaactaca 1560

tggaaggcat tgagggacgc caggtctacc ctgacgtgga gcccgggtac ctgcggccgc 1620

tgatccctgc cgctgcccct caggagccag acacgtttga ggacatcatc aacgacgttg 1680

agaagataat catgcctggg gtgacgcact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc 1740

ccactgccag ctcgtacccg gccatgcttg cggacatgct gtgcggggcc attggctgca 1800

tcggcttctc ctgggcggca agcccagcat gcacagagct ggagactgtg atgatggact 1860

ggctcgggaa gatgctggaa ctaccaaagg catttttgaa tgagaaagct ggagaagggg 1920

gaggagtgat ccagggaagt gccagtgaag ccaccctggt ggccctgctg gccgctcgga 1980

ccaaagtgat ccatcggctg caggcagcgt ccccagagct cacacaggcc gctatcatgg 2040

agaagctggt ggcttactca tccgatcagg cacactcctc agtggaaaga gctgggttaa 2100

ttggtggagt gaaattaaaa gccatcccct cagatggcaa cttcgccatg cgtgcgtctg 2160

ccctgcagga agccctggag agagacaaag cggctggcct gattcctttc tttatggttg 2220

ccaccctggg gaccacaaca tgctgctcct ttgacaatct cttagaagtc ggtcctatct 2280

gcaacaagga agacatatgg ctgcacgttg atgcagccta cgcaggcagt gcattcatct 2340

gccctgagtt ccggcacctt ctgaatggag tggagtttgc agattcattc aactttaatc 2400

cccacaaatg gctattggtg aattttgact gttctgccat gtgggtgaaa aagagaacag 2460

acttaacggg agcctttaga ctggacccca cttacctgaa gcacagccat caggattcag 2520

ggcttatcac tgactaccgg cattggcaga taccactggg cagaagattt cgctctttga 2580

aaatgtggtt tgtatttagg atgtatggag tcaaaggact gcaggcttat atccgcaagc 2640

atgtccagct gtcccatgag tttgagtcac tggtgcgcca ggatccccgc tttgaaatct 2700

gtgtggaagt cattctgggg cttgtctgct ttcggctaaa gggttccaac aaagtgaatg 2760

aagctcttct gcaaagaata aacagtgcca aaaaaatcca cttggttcca tgtcacctca 2820

gggacaagtt tgtcctgcgc tttgccatct gttctcgcac ggtggaatct gcccatgtgc 2880

agcgggcctg ggaacacatc aaagagctgg cggccgacgt gctgcgagca gagagggagt 2940

aggagtgaag ccagctgcag gaatcaaaaa ttgaagagag atatatctga aaactggaat 3000

aagaagcaaa taaatatcat cctgccttca tggaactcag ctgtctgtgg cttcccatgt 3060

ctttctccaa agttatccag agggttgtga ttttgtctgc ttagtatctc atcaacaaag 3120

aaatattatt tgctaattaa aaagttaatc ttcatggcca tagcttttat tcattagctg 3180

tgatttttgt tgattaaaac attatagatt ttcatgttct tgcagtcatc agaagtggta 3240

ggaaagcctc actgatatat tttccagggc aatcaatgtt cacgcaactt gaaattatat 3300

ctgtggtctt caaattgtct tttgtcatgt ggctaaatgc ctaataagct gctcgagaga 3360

tctacgggtg gcatccctgt gacccctccc cagtgcctct cctggccctg gaagttgcca 3420

ctccagtgcc caccagcctt gtcctaataa aattaagttg catcattttg tctgactagg 3480

tgtccttcta taatattatg gggtggaggg gggtggtatg gagcaagggg caagttggga 3540

agacaacctg tagggcctgc ggggtctatt gggaaccaag ctggagtgca gtggcacaat 3600

cttggctcac tgcaatctcc gcctcctggg ttcaagcgat tctcctgcct cagcctcccg 3660

agttgttggg attccaggca tgcatgacca ggctcagcta atttttgttt ttttggtaga 3720

gacggggttt caccatattg gccaggctgg tctccaactc ctaatctcag gtgatctacc 3780

caccttggcc tcccaaattg ctgggattac aggcgtgaac cactgctccc ttccctgtcc 3840

ttctgatttt gtaggtaacc acgtgcggac cgagcggccg cagttaatta agctcgcgaa 3900

ggaaccccta gtgatggagt tggccactcc ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc 3960

cgggcgacca aaggtcgccc gacgcccggg ctttgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg 4020

agcgcgcaga gagggagtgg ccaagacgat ttaaatggta ccgagctcga attcactggc 4080

cgtcgtttta caacgtcgtg actgggaaaa ccctggcgtt acccaactta atcgccttgc 4140

agcacatccc cctttcgcca gctggcgtaa tagcgaagag gcccgcaccg atcgcccttc 4200

ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg gcgcctgatg cggtattttc tccttacgca 4260

tctgtgcggt atttcacacc gcatatggtg cactctcagt acaatctgct ctgatgccgc 4320

atagttaagc cagccccgac acccgccaac acccgctgac gcgccctgac gggcttgtct 4380

gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctca gaacccaaat gtgaccaacc 4440

gtttacatat atcttggttt attatttcaa tttctctttt caaacatctt cttctgtcgt 4500

tgtgcaattt tccaaatgcc aatttggtcg cttggctatt tccaaacgat ttcatatatt 4560

caagttggag atatagacag tcccctgaac acctcgcatc ctctgctttt tatgcctgct 4620

cgtcctgtgg gtataatttt aatggtcaaa tcgctgctgg ggaattgtat acgctgctct 4680

tgtgtctcac tgcctccctt gtagaaatgg aaattgcttt tccattattt ccatgtgatt 4740

ttgttggttt tgccatcgaa ttggcattga aaacgcataa aaataagcat ttcgcatttg 4800

caaagatcca aaagatttat ttgcacgctg agcctgggga tacacgaaat gtatttgtaa 4860

gattcttcag atgagtttgg aacgcacgga aattaccgtc ttgggatttg ttggacatcg 4920

catttaagca tgatgtatca tttaattttt tccaatttaa aaacaaataa tcagtgctac 4980

gattaagact ggatctatta tagacttctt caaagttttt cagttttctt taaaattacc 5040

tccataaaac tcttttaata ttttgaaaat catctccagg ttacatttaa tctgattaag 5100

tttagagtca gttagtttcc cacagttttc ttcttgaaat aaacccatta agtaacccca 5160

actgatcggc gcaaatgatt cagctatgca gaaaatatga ttgatgattt ttccctccca 5220

ccagccctta acacttgctt aacccttttg tgtggccatt atagcccttt cctcgtagtc 5280

tgcttaaagt tcattaataa gttttgcgtg agccaaaaat ggcgccgctt tggaatcgtg 5340

acagcgtgga aactctggac tttggggttg caaaacttcg gaagctgaaa gcattttgct 5400

gtagccatcg cattttgggg gaagaaatcc gaattcgagt ccaaaccgaa ttctaataga 5460

agttttgcag caaagtgcct cagacaggtt aatgaccaaa agcagttttg cattcaaatg 5520

ctgcagcaac cctcgcacga gggttgtcat gacggacgaa aatctaattt acaacatgca 5580

actgccactt tgaggggtga cttttaccca agacgtggct gtgaaggaaa ttctgcgaga 5640

aagagattaa ttacgctctg ggggcagtta atgaatgctt gcgcggggcg ataaggggtt 5700

aacgtttggc cagctcaaat taccgaatgt ataacatttt gatgagcatg acaaaaattg 5760

gaattttcaa ctcttttttc ctgcgaaaag cataactttt ccattaacac aatggcgacg 5820

atgagccggc aaatcgacga taccaaatcg gcataacgtg catgaaaatt atacatgatt 5880

gatttcatat taatttctac gaatgttatg aatcggctaa aagatgagaa tggaaatatt 5940

gcacgatttt gattttgtca tgatgacaaa aaagggttgt aagatttgta catgccaaaa 6000

tcataaactt ttaacagaaa tcaaacacaa agaagtaata taacattaaa gtacacaggc 6060

cttgtcacag agatagaaaa atgtagctat tattaaaata tttaacattc tcttggtgtc 6120

tgcaactttt ctatcagtcg cttttttatt ccctttccaa cacttattta aaatgaaatg 6180

cactcgaaat taactaattt aatggctcat atcctttgtg ctgcttaaaa aggcaggaaa 6240

cgttttttgt gccctacacc tcctccattc aaatgaaaaa ggcggtggag tcgaggaaaa 6300

tgtctgccct ggagcttgac aagccaagat atggcccatc aaaaatgttc gaatgttctt 6360

tttaaataaa tgtctcatta tatggctgcc acgcccacac cgctcaacgc ccacacacgt 6420

gccgccttcc ggtttagttg ggtggtacct gaccgtagat ttttcactgc ggacatgtgt 6480

ccaatcagtg gcaacgtgca acgaaccgtg gcaaacacag ggaaagaacc tcgaagaccc 6540

acagcaaact catcctctcg aatttgacac tatgataatg cttatattca attttttgca 6600

acattctatt tacactaaac tgagaaacag gacaaagttg agaatgggtg ctgtgattat 6660

ttgtcttgtg ccaatatatg ccctcctgca tataaaatac gagatacaaa accaaacgaa 6720

ataagaacga acaagaaatc agtttaattt caatgctgat caaaccaagt tgacaactct 6780

gttgtatatt agctctaata atgacttaag gttcgaaatt taagtaactt ccaaaatggg 6840

ccagataaat actgctaata tcgaatgcaa ttcaatgagg aaatagtaat caatcagcca 6900

accctaatga aattaataat gtaatttaaa actttattcc acccattcta ataatgaaaa 6960

tcattaaata tatgtagcaa tccaattttg ttaatacata ttgtatatcc ctgatttgtc 7020

aataccaaag accagaaaaa acaccatgcc aaattccttt tattcgttga aaatcgaaac 7080

aactttgaag tattaacctg ctggctaaaa aatatgtgta ttactaaata taccatgtaa 7140

tcaaaagttc gaaataaacg tgaaatggca gctccactcg tcagccgtgc cacttttcga 7200

ctaatcaaaa tgccttttga atgcctgagt tgaatcaagt tggcttaata gttattatcc 7260

cacgcaagca aagtcaatgg cagagggaaa tgcgtagaaa ttagcacaga cttgaatgga 7320

cgcacgagtg tcgaatggca ggagagtggg aaatgaacgg ggagttttcc aggataagga 7380

tgttttcgaa gtatcgtaat catttatagc ctccagatac gggagctgca tgtgtcagag 7440

gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcgat gcagctctgg cccgtgtctc aaaatctctg 7500

atgttacatt gcacaagata aaaatatatc atcatgaaca ataaaactgt ctgcttacat 7560

aaacagtaat acaaggggtg ttgaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca 7620

gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac 7680

ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaagc ccaatctgaa taatgttaca 7740

accaattaac caattctgat tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat 7800

tcatatcagg attatcaata ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa 7860

actcaccgag gcagttccat aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc 7920

gtccaacatc aatacaacct attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga 7980

aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg agaatggcaa aagtttatgc atttctttcc 8040

agacttgttc aacaggccag ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac 8100

cgttattcat tcgtgattgc gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac 8160

aattacaaac aggaatcgaa tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat 8220

tttcacctga atcaggatat tcttctaata cctggaatgc tgtttttccg gggatcgcag 8280

tggtgagtaa ccatgcatca tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca 8340

taaattccgt cagccagttt agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac 8400

ctttgccatg tttcagaaac aactctggcg catcgggctt cccatacaag cgatagattg 8460

tcgcacctga ttgcccgaca ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca 8520

tgttggaatt taatcgcggc ctcgacgttt cccgttgaat atggctcata acaccccttg 8580

tattactgtt tatgtaagca gacagtttta ttgttcatga tgatatattt ttatcttgtg 8640

caatgtaaca tcagagattt tgagacacgg gccagagctg catcgcgcgt tttcagaatt 8700

ggttaattgg ttgtaacatt attcagattg ggcttgattt aaaacttcat ttttaattta 8760

aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt 8820

tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct ttccataggc 8880

tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga 8940

caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc 9000

cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt 9060

ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct 9120

gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg 9180

agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta 9240

gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct 9300

acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa 9360

gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt 9420

gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaaa cgccagcaac gcggcctttt 9480

tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg 9540

attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa 9600

cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc 9660

ctctc 9665

<210> 16

<211> 6236

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 16

cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60

ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120

ttgcatgcat ttaaatgacg cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa 180

agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag 240

agggagtggc caactccatc actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc 300

gcacgcgtgg agctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 360

atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 420

acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt 480

tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 540

tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 600

attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 660

tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt 720

ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca 780

ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg 840

cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat 900

cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag 960

cctccgcgga ttcgaatccc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca 1020

agagtgacgt aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt 1080

aatatacttt tttgtttatc ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca 1140

ataatgatac aatgtatcat gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc 1200

tgggttaagg caatagcaat atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg 1260

atgtaagagg tttcatattg ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt 1320

ttatggttgg gataaggctg gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg 1380

ttcatacctc ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc 1440

catcactttg gcaaagaatt gggattcgaa catcggccgc caccatgaac gcaagtgaat 1500

tccgaaggag agggaaggag atggtggatt acgtggccaa ctacatggaa ggcattgagg 1560

gacgccaggt ctaccctgac gtggagcccg ggtacctgcg gccgctgatc cctgccgctg 1620

cccctcagga gccagacacg tttgaggaca tcatcaacga cgttgagaag ataatcatgc 1680

ctggggtgac gcactggcac agcccctact tcttcgccta cttccccact gccagctcgt 1740

acccggccat gcttgcggac atgctgtgcg gggccattgg ctgcatcggc ttctcctggg 1800

cggcaagccc agcatgcaca gagctggaga ctgtgatgat ggactggctc gggaagatgc 1860

tggaactacc aaaggcattt ttgaatgaga aagctggaga agggggagga gtgatccagg 1920

gaagtgccag tgaagccacc ctggtggccc tgctggccgc tcggaccaaa gtgatccatc 1980

ggctgcaggc agcgtcccca gagctcacac aggccgctat catggagaag ctggtggctt 2040

actcatccga tcaggcacac tcctcagtgg aaagagctgg gttaattggt ggagtgaaat 2100

taaaagccat cccctcagat ggcaacttcg ccatgcgtgc gtctgccctg caggaagccc 2160

tggagagaga caaagcggct ggcctgattc ctttctttat ggttgccacc ctggggacca 2220

caacatgctg ctcctttgac aatctcttag aagtcggtcc tatctgcaac aaggaagaca 2280

tatggctgca cgttgatgca gcctacgcag gcagtgcatt catctgccct gagttccggc 2340

accttctgaa tggagtggag tttgcagatt cattcaactt taatccccac aaatggctat 2400

tggtgaattt tgactgttct gccatgtggg tgaaaaagag aacagactta acgggagcct 2460

ttagactgga ccccacttac ctgaagcaca gccatcagga ttcagggctt atcactgact 2520

accggcattg gcagatacca ctgggcagaa gatttcgctc tttgaaaatg tggtttgtat 2580

ttaggatgta tggagtcaaa ggactgcagg cttatatccg caagcatgtc cagctgtccc 2640

atgagtttga gtcactggtg cgccaggatc cccgctttga aatctgtgtg gaagtcattc 2700

tggggcttgt ctgctttcgg ctaaagggtt ccaacaaagt gaatgaagct cttctgcaaa 2760

gaataaacag tgccaaaaaa atccacttgg ttccatgtca cctcagggac aagtttgtcc 2820

tgcgctttgc catctgttct cgcacggtgg aatctgccca tgtgcagcgg gcctgggaac 2880

acatcaaaga gctggcggcc gacgtgctgc gagcagagag ggagtaggag tgagctgctc 2940

gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag 3000

ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg 3060

actaggtgtc cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag 3120

ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg tctattggga accaagctgg agtgcagtgg 3180

cacaatcttg gctcactgca atctccgcct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc 3240

ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt 3300

ggtagagacg gggtttcacc atattggcca ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga 3360

tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc 3420

ctgtccttct gattttgtag gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagt taattaagct 3480

cgcgaaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga 3540

ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga 3600

gcgagcgcgc agctggacga tttaaatggt accgagctcg aattcactgg ccgtcgtttt 3660

acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc 3720

ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt 3780

gcgcagcctg aatggcgaat ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg 3840

tatttcacac cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag 3900

ccagccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc 3960

atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc 4020

gtcatcaccg aaacgcgcga tgcagctctg gcccgtgtct caaaatctct gatgttacat 4080

tgcacaagat aaaaatatat catcatgaac aataaaactg tctgcttaca taaacagtaa 4140

tacaaggggt gttgaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga 4200

aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct 4260

tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaag cccaatctga ataatgttac aaccaattaa 4320

ccaattctga ttagaaaaac tcatcgagca tcaaatgaaa ctgcaattta ttcatatcag 4380

gattatcaat accatatttt tgaaaaagcc gtttctgtaa tgaaggagaa aactcaccga 4440

ggcagttcca taggatggca agatcctggt atcggtctgc gattccgact cgtccaacat 4500

caatacaacc tattaatttc ccctcgtcaa aaataaggtt atcaagtgag aaatcaccat 4560

gagtgacgac tgaatccggt gagaatggca aaagtttatg catttctttc cagacttgtt 4620

caacaggcca gccattacgc tcgtcatcaa aatcactcgc atcaaccaaa ccgttattca 4680

ttcgtgattg cgcctgagcg agacgaaata cgcgatcgct gttaaaagga caattacaaa 4740

caggaatcga atgcaaccgg cgcaggaaca ctgccagcgc atcaacaata ttttcacctg 4800

aatcaggata ttcttctaat acctggaatg ctgtttttcc ggggatcgca gtggtgagta 4860

accatgcatc atcaggagta cggataaaat gcttgatggt cggaagaggc ataaattccg 4920

tcagccagtt tagtctgacc atctcatctg taacatcatt ggcaacgcta cctttgccat 4980

gtttcagaaa caactctggc gcatcgggct tcccatacaa gcgatagatt gtcgcacctg 5040

attgcccgac attatcgcga gcccatttat acccatataa atcagcatcc atgttggaat 5100

ttaatcgcgg cctcgacgtt tcccgttgaa tatggctcat aacacccctt gtattactgt 5160

ttatgtaagc agacagtttt attgttcatg atgatatatt tttatcttgt gcaatgtaac 5220

atcagagatt ttgagacacg ggccagagct gcatcgcgcg ttttcagaat tggttaattg 5280

gttgtaacat tattcagatt gggcttgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct 5340

aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc 5400

actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc tttccatagg ctccgccccc 5460

ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat 5520

aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc 5580

cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct 5640

cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg 5700

aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc 5760

cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga 5820

ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa 5880

gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta 5940

gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc 6000

agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc 6060

tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg 6120

ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc 6180

gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat acgcaaaccg cctctc 6236

<210> 17

<211> 3497

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 17

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180

gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240

tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300

cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360

gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420

tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480

agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540

ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600

ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660

acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720

tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780

acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840

attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900

taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960

ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020

caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080

gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140

gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200

ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260

cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320

ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgcaagtgaa ttccgaagga 1380

gagggaagga gatggtggat tacgtggcca actacatgga aggcattgag ggacgccagg 1440

tctaccctga cgtggagccc gggtacctgc ggccgctgat ccctgccgct gcccctcagg 1500

agccagacac gtttgaggac atcatcaacg acgttgagaa gataatcatg cctggggtga 1560

cgcactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac tgccagctcg tacccggcca 1620

tgcttgcgga catgctgtgc ggggccattg gctgcatcgg cttctcctgg gcggcaagcc 1680

cagcatgcac agagctggag actgtgatga tggactggct cgggaagatg ctggaactac 1740

caaaggcatt tttgaatgag aaagctggag aagggggagg agtgatccag ggaagtgcca 1800

gtgaagccac cctggtggcc ctgctggccg ctcggaccaa agtgatccat cggctgcagg 1860

cagcgtcccc agagctcaca caggccgcta tcatggagaa gctggtggct tactcatccg 1920

atcaggcaca ctcctcagtg gaaagagctg ggttaattgg tggagtgaaa ttaaaagcca 1980

tcccctcaga tggcaacttc gccatgcgtg cgtctgccct gcaggaagcc ctggagagag 2040

acaaagcggc tggcctgatt cctttcttta tggttgccac cctggggacc acaacatgct 2100

gctcctttga caatctctta gaagtcggtc ctatctgcaa caaggaagac atatggctgc 2160

acgttgatgc agcctacgca ggcagtgcat tcatctgccc tgagttccgg caccttctga 2220

atggagtgga gtttgcagat tcattcaact ttaatcccca caaatggcta ttggtgaatt 2280

ttgactgttc tgccatgtgg gtgaaaaaga gaacagactt aacgggagcc tttagactgg 2340

accccactta cctgaagcac agccatcagg attcagggct tatcactgac taccggcatt 2400

ggcagatacc actgggcaga agatttcgct ctttgaaaat gtggtttgta tttaggatgt 2460

atggagtcaa aggactgcag gcttatatcc gcaagcatgt ccagctgtcc catgagtttg 2520

agtcactggt gcgccaggat ccccgctttg aaatctgtgt ggaagtcatt ctggggcttg 2580

tctgctttcg gctaaagggt tccaacaaag tgaatgaagc tcttctgcaa agaataaaca 2640

gtgccaaaaa aatccacttg gttccatgtc acctcaggga caagtttgtc ctgcgctttg 2700

ccatctgttc tcgcacggtg gaatctgccc atgtgcagcg ggcctgggaa cacatcaaag 2760

agctggcggc cgacgtgctg cgagcagaga gggagtagga gtgagctgct cgagagatct 2820

acgggtggca tccctgtgac ccctccccag tgcctctcct ggccctggaa gttgccactc 2880

cagtgcccac cagccttgtc ctaataaaat taagttgcat cattttgtct gactaggtgt 2940

ccttctataa tattatgggg tggagggggg tggtatggag caaggggcaa gttgggaaga 3000

caacctgtag ggcctgcggg gtctattggg aaccaagctg gagtgcagtg gcacaatctt 3060

ggctcactgc aatctccgcc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccgagt 3120

tgttgggatt ccaggcatgc atgaccaggc tcagctaatt tttgtttttt tggtagagac 3180

ggggtttcac catattggcc aggctggtct ccaactccta atctcaggtg atctacccac 3240

cttggcctcc caaattgctg ggattacagg cgtgaaccac tgctcccttc cctgtccttc 3300

tgattttgta ggtaaccacg tgcggaccga gcggccgcag ttaattaagc tcgcgaagga 3360

acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg 3420

gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc 3480

gcgcagctgc ctgcagg 3497

<210> 18

<211> 3497

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 18

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180

gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240

tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300

cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360

gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420

tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480

agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540

ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600

ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660

acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720

tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780

acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840

attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900

taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960

ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020

caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080

gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140

gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200

ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260

cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320

ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgcaagtgaa ttccgaagga 1380

gagggaagga gatggtggat tacgtggcca actacatgga aggcattgag ggacgccagg 1440

tctaccctga cgtggagccc gggtacctgc ggccgctgat ccctgccgct gcccctcagg 1500

agccagacac gtttgaggac atcatcaacg acgttgagaa gataatcatg cctggggtga 1560

cgcactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac tgccagctcg tacccggcca 1620

tgcttgcgga catgctgtgc ggggccattg gctgcatcgg cttctcctgg gcggcaagcc 1680

cagcatgcac agagctggag actgtgatga tggactggct cgggaagatg ctggaactac 1740

caaaggcatt tttgaatgag aaagctggag aagggggagg agtgatccag ggaagtgcca 1800

gtgaagccac cctggtggcc ctgctggccg ctcggaccaa agtgatccat cggctgcagg 1860

cagcgtcccc agagctcaca caggccgcta tcatggagaa gctggtggct tactcatccg 1920

atcaggcaca ctcctcagtg gaaagagctg ggttaattgg tggagtgaaa ttaaaagcca 1980

tcccctcaga tggcaacttc gccatgcgtg cgtctgccct gcaggaagcc ctggagagag 2040

acaaagcggc tggcctgatt cctttcttta tggttgccac cctggggacc acaacatgct 2100

gctcctttga caatctctta gaagtcggtc ctatctgcaa caaggaagac atatggctgc 2160

acgttgatgc agcctacgca ggcagtgcat tcatctgccc tgagttccgg caccttctga 2220

atggagtgga gtttgcagat tcattcaact ttaatcccca caaatggcta ttggtgaatt 2280

ttgactgttc tgccatgtgg gtgaaaaaga gaacagactt aacgggagcc tttagactgg 2340

accccactta cctgaagcac agccatcagg attcagggct tatcactgac taccggcatt 2400

ggcagatacc actgggcaga agatttcgct ctttgaaaat gtggtttgta tttaggatgt 2460

atggagtcaa aggactgcag gcttatatcc gcaagcatgt ccagctgtcc catgagtttg 2520

agtcactggt gcgccaggat ccccgctttg aaatctgtgt ggaagtcatt ctggggcttg 2580

tctgctttcg gctaaagggt tccaacaaag tgaatgaagc tcttctgcaa agaataaaca 2640

gtgccaaaaa aatccacttg gttccatgtc acctcaggga caagtttgtc ctgcgctttg 2700

ccatctgttc tcgcacggtg gaatctgccc atgtgcagcg ggcctgggaa cacatcaaag 2760

agctggcggc cgacgtgctg cgagcagaga gggagtagga gtgagctgct cgagagatct 2820

acgggtggca tccctgtgac ccctccccag tgcctctcct ggccctggaa gttgccactc 2880

cagtgcccac cagccttgtc ctaataaaat taagttgcat cattttgtct gactaggtgt 2940

ccttctataa tattatgggg tggagggggg tggtatggag caaggggcaa gttgggaaga 3000

caacctgtag ggcctgcggg gtctattggg aaccaagctg gagtgcagtg gcacaatctt 3060

ggctcactgc aatctccgcc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccgagt 3120

tgttgggatt ccaggcatgc atgaccaggc tcagctaatt tttgtttttt tggtagagac 3180

ggggtttcac catattggcc aggctggtct ccaactccta atctcaggtg atctacccac 3240

cttggcctcc caaattgctg ggattacagg cgtgaaccac tgctcccttc cctgtccttc 3300

tgattttgta ggtaaccacg tgcggaccga gcggccgcag ttaattaagc tcgcgaagga 3360

acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg 3420

gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc 3480

gcgcagctgc ctgcagg 3497

<210> 19

<211> 3491

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 19

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180

gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240

tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300

cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360

gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420

tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480

agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540

ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600

ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660

acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720

tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780

acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840

attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900

taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960

ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020

caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080

gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140

gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200

ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260

cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320

ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgccagcgag ttcaggagga 1380

ggggcaagga gatggtggac tacgtggcca actacatgga gggcatcgag ggcaggcagg 1440

tgtaccccga cgtggagccc ggctacctga ggcccctgat ccccgccgcc gccccccagg 1500

agcccgacac cttcgaggac atcatcaacg acgtggagaa gatcatcatg cccggcgtga 1560

cccactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac cgccagcagc taccccgcca 1620

tgctggccga catgctgtgc ggcgccatcg gctgcatcgg cttcagctgg gccgccagcc 1680

ccgcctgcac cgagctggag accgtgatga tggactggct gggcaagatg ctggagctgc 1740

ccaaggcctt cctgaacgag aaggccggcg agggcggcgg cgtgatccag ggcagcgcca 1800

gcgaggccac cctggtggcc ctgctggccg ccaggaccaa ggtgatccac aggctgcagg 1860

ccgccagccc cgagctgacc caggccgcca tcatggagaa gctggtggcc tacagcagcg 1920

accaggccca cagcagcgtg gagagggccg gcctgatcgg cggcgtgaag ctgaaggcca 1980

tccccagcga cggcaacttc gccatgaggg ccagcgccct gcaggaggcc ctggagaggg 2040

acaaggccgc cggcctgatc cccttcttca tggtggccac cctgggcacc accacctgct 2100

gcagcttcga caacctgctg gaggtgggcc ccatctgcaa caaggaggac atctggctgc 2160

acgtggacgc cgcctacgcc ggcagcgcct tcatctgccc cgagttcagg cacctgctga 2220

acggcgtgga gttcgccgac agcttcaact tcaaccccca caagtggctg ctggtgaact 2280

tcgactgcag cgccatgtgg gtgaagaaga ggaccgacct gaccggcgcc ttcaggctgg 2340

accccaccta cctgaagcac agccaccagg acagcggcct gatcaccgac tacaggcact 2400

ggcagatccc cctgggcagg aggttcagga gcctgaagat gtggttcgtg ttcaggatgt 2460

acggcgtgaa gggcctgcag gcctacatca ggaagcacgt gcagctgagc cacgagttcg 2520

agagcctggt gaggcaggac cccaggttcg agatctgcgt ggaggtgatc ctgggcctgg 2580

tgtgcttcag gctgaagggc agcaacaagg tgaacgaggc cctgctgcag aggatcaaca 2640

gcgccaagaa gatccacctg gtgccctgcc acctgaggga caagttcgtg ctgaggttcg 2700

ccatctgcag caggaccgtg gagagcgccc acgtgcagag ggcctgggag cacatcaagg 2760

agctggccgc cgacgtgctg agggccgaga gggagtgagc tgctcgagag atctacgggt 2820

ggcatccctg tgacccctcc ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc 2880

ccaccagcct tgtcctaata aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct 2940

ataatattat ggggtggagg ggggtggtat ggagcaaggg gcaagttggg aagacaacct 3000

gtagggcctg cggggtctat tgggaaccaa gctggagtgc agtggcacaa tcttggctca 3060

ctgcaatctc cgcctcctgg gttcaagcga ttctcctgcc tcagcctccc gagttgttgg 3120

gattccaggc atgcatgacc aggctcagct aatttttgtt tttttggtag agacggggtt 3180

tcaccatatt ggccaggctg gtctccaact cctaatctca ggtgatctac ccaccttggc 3240

ctcccaaatt gctgggatta caggcgtgaa ccactgctcc cttccctgtc cttctgattt 3300

tgtaggtaac cacgtgcgga ccgagcggcc gcagttaatt aagctcgcga aggaacccct 3360

agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc 3420

aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag 3480

ctgcctgcag g 3491

<210> 20

<211> 4003

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 20

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180

gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240

tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300

cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360

gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420

tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480

agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540

ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600

ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660

acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720

tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780

acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840

attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900

taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960

ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020

caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080

gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140

gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200

ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260

cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320

ggcaaagaat tgggattcga acatcgaatt cgggcacgag ggaggacaga gagcaagtca 1380

ctcccggctg cctttttcac ctctgacaga gcccagacac catgaacgca agtgaattcc 1440

gaaggagagg gaaggagatg gtggattacg tggccaacta catggaaggc attgagggac 1500

gccaggtcta ccctgacgtg gagcccgggt acctgcggcc gctgatccct gccgctgccc 1560

ctcaggagcc agacacgttt gaggacatca tcaacgacgt tgagaagata atcatgcctg 1620

gggtgacgca ctggcacagc ccctacttct tcgcctactt ccccactgcc agctcgtacc 1680

cggccatgct tgcggacatg ctgtgcgggg ccattggctg catcggcttc tcctgggcgg 1740

caagcccagc atgcacagag ctggagactg tgatgatgga ctggctcggg aagatgctgg 1800

aactaccaaa ggcatttttg aatgagaaag ctggagaagg gggaggagtg atccagggaa 1860

gtgccagtga agccaccctg gtggccctgc tggccgctcg gaccaaagtg atccatcggc 1920

tgcaggcagc gtccccagag ctcacacagg ccgctatcat ggagaagctg gtggcttact 1980

catccgatca ggcacactcc tcagtggaaa gagctgggtt aattggtgga gtgaaattaa 2040

aagccatccc ctcagatggc aacttcgcca tgcgtgcgtc tgccctgcag gaagccctgg 2100

agagagacaa agcggctggc ctgattcctt tctttatggt tgccaccctg gggaccacaa 2160

catgctgctc ctttgacaat ctcttagaag tcggtcctat ctgcaacaag gaagacatat 2220

ggctgcacgt tgatgcagcc tacgcaggca gtgcattcat ctgccctgag ttccggcacc 2280

ttctgaatgg agtggagttt gcagattcat tcaactttaa tccccacaaa tggctattgg 2340

tgaattttga ctgttctgcc atgtgggtga aaaagagaac agacttaacg ggagccttta 2400

gactggaccc cacttacctg aagcacagcc atcaggattc agggcttatc actgactacc 2460

ggcattggca gataccactg ggcagaagat ttcgctcttt gaaaatgtgg tttgtattta 2520

ggatgtatgg agtcaaagga ctgcaggctt atatccgcaa gcatgtccag ctgtcccatg 2580

agtttgagtc actggtgcgc caggatcccc gctttgaaat ctgtgtggaa gtcattctgg 2640

ggcttgtctg ctttcggcta aagggttcca acaaagtgaa tgaagctctt ctgcaaagaa 2700

taaacagtgc caaaaaaatc cacttggttc catgtcacct cagggacaag tttgtcctgc 2760

gctttgccat ctgttctcgc acggtggaat ctgcccatgt gcagcgggcc tgggaacaca 2820

tcaaagagct ggcggccgac gtgctgcgag cagagaggga gtaggagtga agccagctgc 2880

aggaatcaaa aattgaagag agatatatct gaaaactgga ataagaagca aataaatatc 2940

atcctgcctt catggaactc agctgtctgt ggcttcccat gtctttctcc aaagttatcc 3000

agagggttgt gattttgtct gcttagtatc tcatcaacaa agaaatatta tttgctaatt 3060

aaaaagttaa tcttcatggc catagctttt attcattagc tgtgattttt gttgattaaa 3120

acattataga ttttcatgtt cttgcagtca tcagaagtgg taggaaagcc tcactgatat 3180

attttccagg gcaatcaatg ttcacgcaac ttgaaattat atctgtggtc ttcaaattgt 3240

cttttgtcat gtggctaaat gcctaataaa caattcaagt gaaatactaa aaaaaaaaaa 3300

aaaaaaaaaa gctgctcgag agatctacgg gtggcatccc tgtgacccct ccccagtgcc 3360

tctcctggcc ctggaagttg ccactccagt gcccaccagc cttgtcctaa taaaattaag 3420

ttgcatcatt ttgtctgact aggtgtcctt ctataatatt atggggtgga ggggggtggt 3480

atggagcaag gggcaagttg ggaagacaac ctgtagggcc tgcggggtct attgggaacc 3540

aagctggagt gcagtggcac aatcttggct cactgcaatc tccgcctcct gggttcaagc 3600

gattctcctg cctcagcctc ccgagttgtt gggattccag gcatgcatga ccaggctcag 3660

ctaatttttg tttttttggt agagacgggg tttcaccata ttggccaggc tggtctccaa 3720

ctcctaatct caggtgatct acccaccttg gcctcccaaa ttgctgggat tacaggcgtg 3780

aaccactgct cccttccctg tccttctgat tttgtaggta accacgtgcg gaccgagcgg 3840

ccgcagttaa ttaagctcgc gaaggaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg 3900

cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc 3960

cgggcggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agctgcctgc agg 4003

<210> 21

<211> 3499

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 21

ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60

cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120

gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt cgacgatctg cggccgcacg 180

cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat tagttcatag cccatatatg 240

gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc caacgacccc 300

cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgtcaatagg gactttccat 360

tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca tcaagtgtat 420

catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc ctggcattat 480

gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc 540

gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac 600

tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttgcaccaaa 660

atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa atgggcggta 720

ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt cagatcgcct 780

ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca ccgggaccga tccagcctcc 840

gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc ggattccccg tgccaagagt 900

gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa atgctttctt cttttaatat 960

acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct ctttctttca gggcaataat 1020

gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat aacagtgata atttctgggt 1080

taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca tataaattgt aactgatgta 1140

agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac cattctgctt ttattttatg 1200

gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc cttttgctaa tcatgttcat 1260

acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg gtctgtgtgc tggcccatca 1320

ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca tgaacgccag cgagttcagg 1380

aggaggggca aggagatggt ggactacgtg gccaactaca tggagggcat cgagggcagg 1440

caggtgtacc ccgacgtgga gcccggctac ctgaggcccc tgatccccgc cgccgccccc 1500

caggagcccg acaccttcga ggacatcatc aacgacgtgg agaagatcat catgcccggc 1560

gtgacccact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc ccaccgccag cagctacccc 1620

gccatgctgg ccgacatgct gtgcggcgcc atcggctgca tcggcttcag ctgggccgcc 1680

agccccgcct gcaccgagct ggagaccgtg atgatggact ggctgggcaa gatgctggag 1740

ctgcccaagg ccttcctgaa cgagaaggcc ggcgagggcg gcggcgtgat ccagggcagc 1800

gccagcgagg ccaccctggt ggccctgctg gccgccagga ccaaggtgat ccacaggctg 1860

caggccgcca gccccgagct gacccaggcc gccatcatgg agaagctggt ggcctacagc 1920

agcgaccagg cccacagcag cgtggagagg gccggcctga tcggcggcgt gaagctgaag 1980

gccatcccca gcgacggcaa cttcgccatg agggccagcg ccctgcagga ggccctggag 2040

agggacaagg ccgccggcct gatccccttc ttcatggtgg ccaccctggg caccaccacc 2100

tgctgcagct tcgacaacct gctggaggtg ggccccatct gcaacaagga ggacatctgg 2160

ctgcacgtgg acgccgccta cgccggcagc gccttcatct gccccgagtt caggcacctg 2220

ctgaacggcg tggagttcgc cgacagcttc aacttcaacc cccacaagtg gctgctggtg 2280

aacttcgact gcagcgccat gtgggtgaag aagaggaccg acctgaccgg cgccttcagg 2340

ctggacccca cctacctgaa gcacagccac caggacagcg gcctgatcac cgactacagg 2400

cactggcaga tccccctggg caggaggttc aggagcctga agatgtggtt cgtgttcagg 2460

atgtacggcg tgaagggcct gcaggcctac atcaggaagc acgtgcagct gagccacgag 2520

ttcgagagcc tggtgaggca ggaccccagg ttcgagatct gcgtggaggt gatcctgggc 2580

ctggtgtgct tcaggctgaa gggcagcaac aaggtgaacg aggccctgct gcagaggatc 2640

aacagcgcca agaagatcca cctggtgccc tgccacctga gggacaagtt cgtgctgagg 2700

ttcgccatct gcagcaggac cgtggagagc gcccacgtgc agagggcctg ggagcacatc 2760

aaggagctgg ccgccgacgt gctgagggcc gagagggagt gagctgctcg agagatctac 2820

gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg ccctggaagt tgccactcca 2880

gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca ttttgtctga ctaggtgtcc 2940

ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca aggggcaagt tgggaagaca 3000

acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga gtgcagtggc acaatcttgg 3060

ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagttg 3120

ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt tgtttttttg gtagagacgg 3180

ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat ctcaggtgat ctacccacct 3240

tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg ctcccttccc tgtccttctg 3300

attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagtt aattaagctc gcgaaggaac 3360

ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgggc 3420

gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc 3480

gcagagaggg agtggccaa 3499

<210> 22

<211> 3896

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 22

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180

gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240

tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300

cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360

gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420

tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480

agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540

ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600

ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660

acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720

tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780

acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840

attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900

taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960

ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020

caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080

gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140

gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200

ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260

cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320

ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgcaagtgaa ttccgaagga 1380

gagggaagga gatggtggat tacgtggcca actacatgga aggcattgag ggacgccagg 1440

tctaccctga cgtggagccc gggtacctgc ggccgctgat ccctgccgct gcccctcagg 1500

agccagacac gtttgaggac atcatcaacg acgttgagaa gataatcatg cctggggtga 1560

cgcactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac tgccagctcg tacccggcca 1620

tgcttgcgga catgctgtgc ggggccattg gctgcatcgg cttctcctgg gcggcaagcc 1680

cagcatgcac agagctggag actgtgatga tggactggct cgggaagatg ctggaactac 1740

caaaggcatt tttgaatgag aaagctggag aagggggagg agtgatccag ggaagtgcca 1800

gtgaagccac cctggtggcc ctgctggccg ctcggaccaa agtgatccat cggctgcagg 1860

cagcgtcccc agagctcaca caggccgcta tcatggagaa gctggtggct tactcatccg 1920

atcaggcaca ctcctcagtg gaaagagctg ggttaattgg tggagtgaaa ttaaaagcca 1980

tcccctcaga tggcaacttc gccatgcgtg cgtctgccct gcaggaagcc ctggagagag 2040

acaaagcggc tggcctgatt cctttcttta tggttgccac cctggggacc acaacatgct 2100

gctcctttga caatctctta gaagtcggtc ctatctgcaa caaggaagac atatggctgc 2160

acgttgatgc agcctacgca ggcagtgcat tcatctgccc tgagttccgg caccttctga 2220

atggagtgga gtttgcagat tcattcaact ttaatcccca caaatggcta ttggtgaatt 2280

ttgactgttc tgccatgtgg gtgaaaaaga gaacagactt aacgggagcc tttagactgg 2340

accccactta cctgaagcac agccatcagg attcagggct tatcactgac taccggcatt 2400

ggcagatacc actgggcaga agatttcgct ctttgaaaat gtggtttgta tttaggatgt 2460

atggagtcaa aggactgcag gcttatatcc gcaagcatgt ccagctgtcc catgagtttg 2520

agtcactggt gcgccaggat ccccgctttg aaatctgtgt ggaagtcatt ctggggcttg 2580

tctgctttcg gctaaagggt tccaacaaag tgaatgaagc tcttctgcaa agaataaaca 2640

gtgccaaaaa aatccacttg gttccatgtc acctcaggga caagtttgtc ctgcgctttg 2700

ccatctgttc tcgcacggtg gaatctgccc atgtgcagcg ggcctgggaa cacatcaaag 2760

agctggcggc cgacgtgctg cgagcagaga gggagtagga gtgaagccag ctgcaggaat 2820

caaaaattga agagagatat atctgaaaac tggaataaga agcaaataaa tatcatcctg 2880

ccttcatgga actcagctgt ctgtggcttc ccatgtcttt ctccaaagtt atccagaggg 2940

ttgtgatttt gtctgcttag tatctcatca acaaagaaat attatttgct aattaaaaag 3000

ttaatcttca tggccatagc ttttattcat tagctgtgat ttttgttgat taaaacatta 3060

tagattttca tgttcttgca gtcatcagaa gtggtaggaa agcctcactg atatattttc 3120

cagggcaatc aatgttcacg caacttgaaa ttatatctgt ggtcttcaaa ttgtcttttg 3180

tcatgtggct aaatgcctaa taagctgctc gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc 3240

cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc 3300

taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc cttctataat attatggggt 3360

ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg 3420

tctattggga accaagctgg agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca atctccgcct 3480

cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca 3540

tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc atattggcca 3600

ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg 3660

gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc ctgtccttct gattttgtag gtaaccacgt 3720

gcggaccgag cggccgcagt taattaagct cgcgaaggaa cccctagtga tggagttggc 3780

cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg 3840

cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagctgcc tgcagg 3896

<210> 23

<211> 3475

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

<400> 23

cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa agcccgggcg tcgggcgacc 60

tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag agggagtggc caactccatc 120

actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc gcacgcgtgg agctagttat 180

taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 240

taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 300

ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 360

gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 420

ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 480

ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg 540

atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca 600

agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca ccaaaatcaa cgggactttc 660

caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg cggtaggcgt gtacggtggg 720

aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat cgcctggaga cgccatccac 780

gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag cctccgcgga ttcgaatccc 840

ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca agagtgacgt aagtaccgcc 900

tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt aatatacttt tttgtttatc 960

ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca ataatgatac aatgtatcat 1020

gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc tgggttaagg caatagcaat 1080

atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg atgtaagagg tttcatattg 1140

ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt ttatggttgg gataaggctg 1200

gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg ttcatacctc ttatcttcct 1260

cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc catcactttg gcaaagaatt 1320

gggattcgaa catcggccgc caccatgaac gcaagtgaat tccgaaggag agggaaggag 1380

atggtggatt acgtggccaa ctacatggaa ggcattgagg gacgccaggt ctaccctgac 1440

gtggagcccg ggtacctgcg gccgctgatc cctgccgctg cccctcagga gccagacacg 1500

tttgaggaca tcatcaacga cgttgagaag ataatcatgc ctggggtgac gcactggcac 1560

agcccctact tcttcgccta cttccccact gccagctcgt acccggccat gcttgcggac 1620

atgctgtgcg gggccattgg ctgcatcggc ttctcctggg cggcaagccc agcatgcaca 1680

gagctggaga ctgtgatgat ggactggctc gggaagatgc tggaactacc aaaggcattt 1740

ttgaatgaga aagctggaga agggggagga gtgatccagg gaagtgccag tgaagccacc 1800

ctggtggccc tgctggccgc tcggaccaaa gtgatccatc ggctgcaggc agcgtcccca 1860

gagctcacac aggccgctat catggagaag ctggtggctt actcatccga tcaggcacac 1920

tcctcagtgg aaagagctgg gttaattggt ggagtgaaat taaaagccat cccctcagat 1980

ggcaacttcg ccatgcgtgc gtctgccctg caggaagccc tggagagaga caaagcggct 2040

ggcctgattc ctttctttat ggttgccacc ctggggacca caacatgctg ctcctttgac 2100

aatctcttag aagtcggtcc tatctgcaac aaggaagaca tatggctgca cgttgatgca 2160

gcctacgcag gcagtgcatt catctgccct gagttccggc accttctgaa tggagtggag 2220

tttgcagatt cattcaactt taatccccac aaatggctat tggtgaattt tgactgttct 2280

gccatgtggg tgaaaaagag aacagactta acgggagcct ttagactgga ccccacttac 2340

ctgaagcaca gccatcagga ttcagggctt atcactgact accggcattg gcagatacca 2400

ctgggcagaa gatttcgctc tttgaaaatg tggtttgtat ttaggatgta tggagtcaaa 2460

ggactgcagg cttatatccg caagcatgtc cagctgtccc atgagtttga gtcactggtg 2520

cgccaggatc cccgctttga aatctgtgtg gaagtcattc tggggcttgt ctgctttcgg 2580

ctaaagggtt ccaacaaagt gaatgaagct cttctgcaaa gaataaacag tgccaaaaaa 2640

atccacttgg ttccatgtca cctcagggac aagtttgtcc tgcgctttgc catctgttct 2700

cgcacggtgg aatctgccca tgtgcagcgg gcctgggaac acatcaaaga gctggcggcc 2760

gacgtgctgc gagcagagag ggagtaggag tgagctgctc gagagatcta cgggtggcat 2820

ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc 2880

agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc cttctataat 2940

attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg 3000

gcctgcgggg tctattggga accaagctgg agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca 3060

atctccgcct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagtt gttgggattc 3120

caggcatgca tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc 3180

atattggcca ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc 3240

aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc ctgtccttct gattttgtag 3300

gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagt taattaagct cgcgaaaccc ctagtgatgg 3360

agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg 3420

cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agctg 3475

<---

Изобретение относится к области биотехнологии и молекулярной биологии. Предложен векторный геном на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки в клетку нуклеотидной последовательности, кодирующей декарбоксилазу ароматических L-аминокислот (AADC). Изобретение может быть использовано для лечения болезни Паркинсона. 4 н. и 20 з.п. ф-лы, 10 табл., 9 пр.

1. Векторный геном на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки в клетку нуклеотидной последовательности, кодирующей декарбоксилазу ароматических L-аминокислот (AADC), который содержит в следующем порядке:

а) 5'-инвертированный концевой повтор (ITR) длиной 141 нуклеотид,

b) участок последовательности цитомегаловируса (CMV) длиной по меньшей мере 500 нуклеотидов, содержащий в направлении от 5'- к 3'-концу:

энхансер CMV или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 250 нуклеотидов, и

промотор CMV или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 150 нуклеотидов,

c) участок последовательности непосредственно раннего 1 гена (IE1), содержащий:

экзон 1 IE1 или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 50 нуклеотидов, и

интрон 1 IE1 или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 20 нуклеотидов,

d) участок последовательности бета глобина (HB) человека, содержащий

интрон 2 НВ или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 250 нуклеотидов, и

экзон 3 НВ или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 40 нуклеотидов,

e) участок последовательности AADC, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую SEQ ID NO:1 или его изоформу,

f) участок сигнальной последовательности поли(A), содержащий сигнальную последовательность поли(А) гена гормона роста человека (hGH) или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 200 нуклеотидов, и

g) 3'-ITR длиной 141 нуклеотид.

2. AAV-векторный геном по п.1, где 5'-ITR и 3'-ITR получены из AAV2.

3. AAV-векторный геном по п.1, где участок последовательности CMV имеет длину 507 нуклеотидов.

4. AAV-векторный геном по п.2, содержащий нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична нуклеотидам 1332-1355 последовательности SEQ ID NO:17.

5. AAV-векторный геном по п.1, содержащий нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична нуклеотидам 2796-2822 последовательности SEQ ID NO:17.

6. AAV-векторный геном по п.1, содержащий нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична нуклеотидам 1332-1355 последовательности SEQ ID NO:17, и нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична нуклеотидам 2796-2822 последовательности SEQ ID NO:17.

7. AAV-векторный геном по п.1, где участок последовательности IE1 имеет длину 166 нуклеотидов.

8. AAV-векторный геном по п.1, где участок последовательности HB имеет длину 400 нуклеотидов.

9. AAV-векторный геном по п.1, где участок сигнальной последовательности поли(A) имеет длину 477 нуклеотидов.

10. AAV-векторный геном по п.1, где участок последовательности CMV имеет длину 507 нуклеотидов, участок последовательности IE1 имеет длину 166 нуклеотидов, участок последовательности HB имеет длину 400 нуклеотидов и участок сигнальной последовательности поли(A) имеет длину 477 нуклеотидов.

11. AAV-векторный геном по п.1, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO:17 или вариантов, которые по меньшей мере на 95% идентичны ей.

12. AAV-векторный геном по п.2, содержащий кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность, кодирующую SEQ ID NO:1.

13. AAV-векторный геном по п.12, содержащий нуклеотидную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:19 или вариантов, которые по меньшей мере на 95% идентичны ей.

14. AAV-векторный геном по п.1, где 5'-ITR состоит из нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из нуклеотидов 1-141 SEQ ID NO:17 или вариантов, которые по меньшей мере на 95% идентичны ей.

15. AAV-векторный геном по п.1 или 14, где 3'-ITR состоит из нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из нуклеотидов 3357-3497 SEQ ID NO:17 или вариантов, которые по меньшей мере на 95% идентичны ей.

16. AAV-векторный геном по п.1, где 5'-ITR состоит из нуклеотидов 1-141 SEQ ID NO:17.

17. AAV-векторный геном по п.1 или 16, где 3'-ITR состоит из нуклеотидов 3357-3497 SEQ ID NO:17.

18. Рекомбинантный AAV (rAAV) для доставки в клетку нуклеотидной последовательности, кодирующей декарбоксилазу ароматических L-аминокислот (AADC), содержащий AVV-векторный геном по любому из пп.1-17.

19. rAAV по п.18, где капсид AAV выбран из: AAV2, AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ и AAV-DJ8.

20. rAAV по п.18, где капсид AAV представляет собой капсид AAV2.

21. Фармацевтическая композиция для повышения уровня белка AADC у индивида, содержащая эффективное количество rAAV по любому из пп.18-20.

22. Фармацевтическая композиция для лечения неврологического заболевания, расстройства или состояния у пациента, содержащая эффективное количество rAAV по любому из пп.18-20.

23. Фармацевтическая композиция по п.22, где неврологическое заболевание, расстройство или состояние представляет собой болезнь Паркинсона.

24. Фармацевтическая композиция по любому из пп.21-23, в которой по меньшей мере 70% rAAV содержат AAV-векторный геном.