Способ прогнозирования течения органических поражений ЦНС у детей с герпесвирусными инфекциями Российский патент 2020 года по МПК G01N33/577 

Изобретение относится к медицине, а именно к области клинико-лабораторного прогнозирования нейропатологических состояний, и может быть использовано для прогноза течения органических поражений ЦНС, ассоциированных с сочетанными герпесвирусными инфекциями у детей.

Исследования последних лет показали неуклонный рост частоты органических поражений ЦНС у детей, в частности герпесвирусных энцефалитов, а также возросла роль герпесвирусных инфекций в генезе перинатального поражения ЦНС с формированием неврологической патологии и инвалидизации детей. В раннем возрасте наиболее значимыми причинами развития поражений ЦНС могут являться герпесвирусы, имеющие высокую тропность к клеткам и тканям головного мозга. Несмотря на большие достижения в области изучения герпесвирусных инфекций, на современном этапе абсолютно не выявлена роль различных типов герпесвирусов и их сочетаний в формировании особенностей течения инфекционного процесса, в частности приводящего к поражению головного мозга, и вызывающего инвалидизацию с возможной летальностью от 4 до 30%. Отмечено, что одним из малоизученных герпесвирусов, участвующих в развитии нейропатологии, является вирус герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6) Поэтому прогноз течения органического поражения ЦНС у детей, ассоциированного с ВГЧ-6, с последующим определением генотипов А, В обуславливает актуальность изучения данной проблемы.

В настоящее время известен способ идентификации вирусов ВГЧ-6А и ВГЧ-6 В. (RU 2627607 С1) Способ позволяет определять специфические для ВГЧ-6А и ВГЧ-6В однонуклеотидные полиморфизмы в гене U67 ВГЧ-6 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в формате реального времени, где о наличии ВГЧ-6А или ВГЧ-6В судят в случае регистрации экспоненциального накопления сигнала флуоресценции в соответствующих зондам каналах. Изобретение может быть использовано для генотипирования вируса герпеса 6-го типа, однако не предусматривает возможности обеспечения своевременного прогноза характера течения и тяжести органического поражения ЦНС.

Известен способ обнаружения генотипов вируса ВГЧ-6(А/В). (CN 104975113) В соответствии с изобретением применяются цифровая технология ПЦР и двухцветный флуоресцентный зонд для двух подтипов HHV-6, обнаруживающихся одновременно. Набор обладает точностью и возможностью количественного определения вируса, отвечает требованиям для ранней, точной диагностики с подтверждением диагноза инфекции, вызванной ВГЧ-6, однако авторы не используют его в целях прогнозирования течения органического поражения ЦНС у детей и не дают оценки клинических проявлений при инфицировании пациентов различными генотипами ВГЧ-6.

Способ дифференциальной диагностики органических поражений ЦНС у детей в остром периоде (RU 2648215) предлагает проводить точную дифференциальную диагностику энцефалита, диссеминированного энцефаломиелита и рассеянного склероза с уточнением особенностей течения, возможности прогрессирования данных заболеваний. Однако, несмотря на обязательное введение в диагностический процесс тестирования наличия герпесвирусов в биологических материалах пациентов, авторы не проводят дополнительное генотипирование ВГЧ-6 с определением тропного к клеткам нервной ткани генотипа А для прогноза характера течения заболевания, а также не определяют количественные характеристики, что не обеспечивает полноту и точность дифференциальной диагностики со своевременной оценкой степени риска развития прогредиентного течения нейроинфекционного заболевания.

Способ диагностики активной инфекции, вызванной ВГЧ-6 у детей, поступающих в стационар с диагнозом направления ОРИ, описанный группой авторов (Милехина Е.В., Музыка А.Д., Петухова Е.Д. и др. Методы этиологической диагностики инфекции вируса герпеса 6 типа у детей с острыми респираторными инфекциями // Молекулярная диагностика. - 2017. - 1. - С. 222-223), выявляет роль ВГЧ-6 в развитии заболевания. Определяются методом ПЦР количество вирусного ДНК в крови и в мазке ротоглотки, дополнительно методом ИФА в сыворотке периферической крови определяются вирусоспецифические антитела к герпесвирусным инфекциям классов IgM (качественное), IgG (полуколичественное, количественное) для подтверждения активности вирусного процесса. Однако, авторы не приводят данных о влиянии генотипов ВГЧ-6 на течение и исход болезни, а также не предполагается прогнозирование течения заболевания с органическим поражения ЦНС у детей с герпесвирусными инфекциями. В статье не рассматриваются клинические случаи и примеры, где непосредственное влияние на развитие нейроинфекционной патологии может оказывать именно генотип ВГЧ-6. Таким образом, известный способ не обеспечивает точности прогнозирования течения органического поражения ЦНС.

Наиболее близким к предлагаемому способу является «Способ прогнозирования течения инфекции вируса герпеса 6 типа у детей» (RU 2695323), где авторами установлена зависимость развития клинических проявлений ВГЧ-6 инфекции, у детей младше 4-х лет, от ген интерферониндуцированного белка Mx1 - СА для Mx1: -123 С>A, который определяет чувствительность клеток к стимулирующему действию интерферонов I типа; а в возрастной группе 4 года и старше - от гомозиготного варианта GG гена С-С-рецептора хемокина 5 (CCR5: - -2554 G>T. Авторы считают данные генетические параметры определяющими для прогнозирования манифестных клинических форм инфекции вируса герпеса человека 6 типа у детей разного возраста с клиническими проявлениями острого респираторного заболевания, протекающего с поражением верхних дыхательных путей. В данном способе определение необходимости проведения противовирусной терапии зависит от прогнозирования течения герпес-вирусной инфекции - ВГЧ-6 у детей, основанной на определении наличия одиночных нуклеотидных полиморфизмов генов интерферониндуцированного белка Mx1 и С-С-рецептора хемокина 5 (CCR5). Однако прогноз течения инфекции, вызванной ВГЧ-6, в данном изобретении проводился только у детей с ОРВИ без неврологических осложнений. Представленные генетические параметры были справедливы только для пациентов с клиническими проявлениями острой респираторной и не применимы в качестве основополагающих показателей для прогнозирования течения органического поражения ЦНС у детей с герпесвирусными инфекциями. Таким образом, данный способ не обеспечивает точности прогнозирования течения органических поражений ЦНС у детей с герпесвирусными инфекциями.

С целью устранения вышеуказанных недостатков авторы предлагают принципиально новый способ прогнозирования течения органического поражения ЦНС у детей с герпесвирусными инфекциями. Технический результат, достигаемый в разработанном способе, заключается в повышении точности прогноза за счет проведения типирования ВГЧ-6 с выявлением генотипов А, В и определения вирусной нагрузки для установления степени участия ВГЧ-6 в развитии патологического процесса и прогноза дальнейшего течения заболевания.

Это достигается тем, что, путем клинического, вирусологического и генетического обследования, дополнительно выявляют в цельной крови и ликворе ребенка ДНК вируса герпеса человека 6 типа, генотипы А, В, их количественные характеристики с определением концентрации 10⁴ и более ДНК копий/мл, и при обнаружении вируса герпеса человека 6 типа генотипа А прогнозируют неблагоприятное прогредиентное течение, а при обнаружении вируса герпеса человека 6 типа генотипа В прогнозируют благоприятный исход заболевания.

В отличие от прототипа, авторы предлагают принципиально новый способ прогнозирования течения органического поражения ЦНС у детей с герпесвирусными инфекциями путем комплексного клинического, вирусологического и генетического обследования с дополнительным определением количественных характеристик ВГЧ-6 в крови и ликворе и учетом генотипа вируса. Подобного способа в доступной литературе нами не обнаружено.

Известно, что ВГЧ-6 имеет два генотипа А и В, различающихся по своим патогенетическим свойствам. Установлено, что ВГЧ-6А чаще обуславливает инфицирование астроцитов с цитопатическим эффектом и формированием высокой вирусной нагрузки, в то время как ВГЧ-6 В чаще выявляется при ОРЗ и не связан с прямой деструкцией основных компонентов нервной системы.

Авторами показано, что при прогнозировании тяжести течения заболевания органических поражений ЦНС, важную роль играет выделение генотипа вируса ВГЧ-6 А, который обладает выраженным тропизмом к линиям глио- и нейробластомы, а также к эмбриональной глии, с чем и связаны поражения ЦНС.

В процессе исследований авторами была обнаружена и доказана зависимость между развитием клинических проявлений заболевания, вызванного ВГЧ-6, и количеством копий ДНК в исследуемых материалах. Выявленная концентрация вируса при проведении количественной ПЦР в случаях манифестации ВГЧ-6 была равна или превышала 10⁴ и более ДНК копий/мл.

В процессе исследований впервые было обнаружено, что высокие концентрации ДНК копий ВГЧ-6 А в диагностических титрах 10⁴ и более ДНК копий/мл в крови и ликворе таких пациентов однозначно доказывали наличие активного вирусного процесса и коррелировали с неблагоприятным прогредиентным течением заболевания.

Напротив, в случаях развития органических поражений ЦНС у детей с выявлением ВГЧ-6 генотипа В и подтверждением активного вирусного процесса путем обнаружения высоких концентраций вируса в аналогичных диагностических титрах, прогноз был благоприятный и не был связан с деструкцией основных компонентов нервной системы.

В результате проведенного обследования 87 детей с наличием инфицированности ВГЧ-6, авторами было обнаружено, что при поражении ЦНС у детей в 60-65% отмечалась микст-герпесвирусная инфекция с высокой частотой персистенции и последующей хронизацией инфекционного процесса, поэтому рекомендовано у детей с очаговой симптоматикой определять в ликворе и крови ДНК актуальных герпесвирусных возбудителей методами ПЦР.

Способ осуществляется следующим образом. Способ осуществляется следующим образом:

При госпитализации ребенка с органическим поражением ЦНС на фоне обострения нейроинфекционного заболевания проводится первичный клинико-неврологический осмотр, оценивается степень выраженности общеинфекционных проявлений, нарушения сознания, наличие судорожного синдрома, кроме того методом ПЦР оценивают также наличие в ликворе и крови пациента ДНК возможных герпесвирусов (вируса ветряной оспы, Эпштейна-Барр, герпеса 1, 2, 6 типа, цитомегаловируса), и при выявлении ВГЧ-6 дополнительно определяют его количественные характеристики, а также проводят генетическое исследование на обнаружение генотипов А, В и при обнаружении ВГЧ-6 генотипа генотипа А в количестве более 10⁴ ДНК копий/мл прогнозируют неблагоприятное прогредиентное течение в ближайшем периоде инфекционного процесса, а при обнаружении ВГЧ-6 типа генотипа В в аналогичном количестве, прогнозируют благоприятный исход заболевания.

Высокая эффективность заявляемого способа прогнозирования течения органического поражения ЦНС у детей с герпесвирусными инфекциями проиллюстрирована нижеследующими примерами.

Пример 1.

Пациент М, 22 дня. Находилась в ПЦ СПбГПМУ с 25.12.18 по 20.02.19 (в ОАРИТН с 25.12.18 по 21.01.19, в отделении патологии новорожденных и детей грудного возраста ПЦ СПбГПМУ с 21.01.19 г по 20.02.19 г) с диагнозом: Перинатальное поражение ЦНС, гипоксически-ишемического генеза, острый период. Синдром мышечной дистонии. Эпилепсия (со статусным течением купирована). Недоношенность 35 недель 5/7 дней (ПКВ 43 2/7нед). Р07.3 Из анамнеза:

С рождения состояние тяжелое, тяжесть обусловлена асфиксией, дыхательной недостаточностью, гемодинамическими нарушениями, водянкой, недоношенностью. В родзале интубирована, переведена на ИВЛ. В первые сутки жизни переведена в ОАРИТН ПЦ СПбГПМУ.

За время нахождения в ОАРИТН состояние крайне тяжелое за счет полиорганной недостаточности (ДН Зет, НК, церебральная недостаточность, обменно-метаболические нарушения, отечный синдром) на фоне инфекционного процесса.

С 1-го дня нахождения в ОАРИТН (25.12 в 5-00) отмечены генерализованные клонические судороги в верхних и нижних конечностях. Методом ПЦР проведено обследование на выявление всех вирусов герпетической группы. Выделен вирус герпеса 6 типа в буккальном соскобе и крови. Посевы из локусов стерильные. Рекомендовано дополнительное обследование биологических материалов больного на базе ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России. При обследовании в связи с наличием судорожного синдрома для исключения течения ВУИ с поражением ЦНС выполнена люмбальная пункция и забор крови для проведения расширенного вирусологического обследования с применением ИФА, ПЦР анализа и генетическим типированием. В крови пациента обнаружена ДНК ВГЧ-6 в количестве 10⁹ ДНК копий/мл; ИФА крови на ВГЧ-6 IgG - положительно (КП=4,0); в ликворе обнаружена ДНК ВГЧ-6 в количестве 10⁴ ДНК копий/мл. При определении генотипа - подтвержден ВГЧ-6 генотип А. В динамике частота и продолжительность судорожных приступов увеличились. Исходя из полученных данных дополнительного обследования, прогнозировали неблагоприятное прогредиентное течение, в связи с чем была назначена специфическая противовирусная терапия.

По согласованию с неврологом была начата также поддерживающая терапия. В динамике эпитлептиформных изменений нет, очаговых изменений нет. Лабораторно диагностирована инфекция, вызванная ВГЧ-6 генотип А, получила этиотропное лечение своевременно.

Пример 2.

Пациент Ш., 2 года, госпитализирована в клинику ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России в период с 16.10.2018 по 29.11.2018. Диагноз: Острая респираторная вирусная инфекция, энцефалит?

Ранний анамнез не отягощен. Из анамнеза: с октября наблюдались катаральные симптомы со стороны верхних дыхательных путей, длительная фебрильная лихорадка, получала амбулаторное лечение по поводу острой респираторной инфекции и лакунарной ангины. С 29.09. по 09.10. лечилась в Тихвинской ЦРБ с диагнозом фарингит, афтозный стоматит, была выписана. С 12.10. периодически стало появляться расходящееся косоглазие, с 16.10. неврологическая симптоматика наросла, появилась атаксия при ходьбе, госпитализирована в ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России. Сознание при поступлении ясное. Судорожный синдром отсутствует. Мышечный тонус удовлетворительный. Пирамидных знаков нет. Менингеальные симптомы - отрицательные.

Вирусологические исследования.

ПЦР ликвора на ВЭБ - положительно, ПЦР крови на ВЭБ - положительно; ИФА крови на ВЭБ Ig М (VCA) - отриц., Ig G (VCA) - полож., индекс авидности 40% (низкоавидные антитела), Ig G (NA) - отриц.

ПЦР крови и ликвора на ВПГ 1,2, ЦМВ, ВВ3-отрицательно;

ПЦР ликвора на ВГЧ-6 - отрицательно; кровь на ВГЧ-6 -положительно.

ИФА крови на ВГЧ-6 IgG -положительно (КП=12,6). Для уточнения количественных характеристик и генотипа ВГЧ-6, кровь пациента отправлена на дополнительное обследование с применением ПЦР анализа; проведено генетическое типирование. Количественные показатели ДНК ВГЧ-6 в крови составили 10⁴ ДНК копий/мл. При проведение генотипирования установлена циркуляция ВГЧ-6 генотипа В на фоне Эпштейна-Барр вирусной инфекции, вызвавшей основной патологический процесс. На основании данных о наличии общеинфекционных проявлений, клинико-ликворологических, нейрофизиологических данных (МРТ обследования), а также полученных лабораторных показателей: наличие ДНК ВЭБ в крови и ликворе, специфических низкоавидных IgG антител в крови к ВЭБ, а также выявление ВГЧ-6 генотипа В только в крови в концентрации 10⁴ ДНК копий/мл, был своевременно установлен диагноз: энцефалит ВЭБ этиологии (сочетанная инфекция - ВГЧ-6 генотип В). Таким образом, прогноз течения заболевания - благоприятный. Получала этиотропную терапию. Больная была выписана с клиническим улучшением.

Использование данного способа позволяет прогнозировать течение инфекционного заболевания в случае прогрессирования осложнений и на основе выявленных патогенетических особенностей возбудителя определять своевременную тактику дальнейшего ведения пациента с применением адекватной терапии.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к области клинико-лабораторного прогнозирования нейропатологических состояний, и может быть использовано для прогноза течения органического поражения ЦНС, ассоциированного с сочетанными герпесвирусными инфекциями у детей. Путем клинического, вирусологического и генетического обследования авторы предлагают дополнительно определять в цельной крови и ликворе ребенка ДНК вируса герпеса человека 6 типа, генотипы А, В, их количественные характеристики с определением концентрации 10⁴ и более ДНК копий/мл, и при обнаружении вируса герпеса человека 6 типа генотипа А прогнозируют неблагоприятное прогредиентное течение, а при обнаружении вируса герпеса человека 6 типа генотипа В прогнозируют благоприятный исход заболевания. 2 пр.

Способ прогнозирования течения органических поражений ЦНС у детей с герпесвирусными инфекциями путем клинического, вирусологического и генетического обследования, отличающийся тем, что дополнительно выявляют в цельной крови и ликворе ребенка ДНК вируса герпеса человека 6 типа, генотипы А, В, их количественные характеристики с определением концентрации 10⁴ и более ДНК копий/мл, и при обнаружении вируса герпеса человека 6 типа генотипа А прогнозируют неблагоприятное прогредиентное течение, а при обнаружении вируса герпеса человека 6 типа генотипа В прогнозируют благоприятный исход заболевания.