GDF-15 КАК ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЙ БИОМАРКЕР ТОКСИЧНОСТИ Российский патент 2021 года по МПК A61K31/496 G01N33/50 G01N33/52 A61P35/00 

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к применению биомаркера безопасности для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2; к способу ex vivo определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 у индивидуума, а в частности, для определения вероятности развития тромбоцитопении у индивидуума в ответ на введение дозы ингибитора Mdm2; к способам применения ингибитора Mdm2 для лечения рака у индивидуума; к набору для использования в целях предсказания вероятности развития тромбоцитопении у пациента, страдающего раком, в ответ на лечение путем введения дозы ингибитора Mdm2; к набору для использования в целях лечения пациента, страдающего раком, и к родственным вариантам осуществления изобретения.

Предшествующий уровень техники

Белок р53 является фактором транскрипции, который регулирует экспрессию множества генов-мишеней, участвующих в репарации повреждения ДНК, в апоптозе и в остановке клеточного цикла. Мутации, которые приводят к потере активности р53 дикого типа, часто обнаруживаются во многих опухолях различных типов. Ген ТР53 является одним из наиболее часто мутируемых генов в раковых опухолях человека. Таким образом, супрессор опухолей р53 функционально разрушается в результате мутации или делеции почти у 50% пациентов с раком. У остальных пациентов с раком, белок р53 сохраняет статус дикого типа, но его функция подавляется его основным клеточным ингибитором, мышиным белком 2 с двумя небольшими мутациями (Mdm2, MDM2; HDM2 (человеческим гомологом мышиного белка 2 с двумя небольшими мутациями)). Mdm2 является негативным регулятором опухолевого супрессора р53. Белок Mdm2 функционирует как убихитинлигаза E3, приводящая к протеосомной деградации р53, и как ингибитор активации транскрипции р53. Было обнаружено, что Mdm2 часто амплифицируется в опухолях дикого типа р53.

Поскольку взаимодействие между Mdm2 и р53 является основным механизмом ингибирования функции p53 в раковых опухолях, которые сохраняют p53 дикого типа, то нацеливание на взаимодействие Mdm2-p53, и, тем самым, реактивация р53, представляет собой новую перспективную терапевтическую стратегию. Было разработано несколько ингибиторов Mdm2, которые ингибируют взаимодействие Mdm2-p53, и, таким образом, могут вызывать противоопухолевый эффект. Самыми первыми из описанных активных низкомолекулярных ингибиторов Mdm2 были нутлины (Vassilev LT, et al., Science. 2004 Feb 6; 303(5659):844-8). После открытия нутлинов было получено несколько других низкомолекулярных ингибиторов Mdm2, таких как MI-63 (Ding K, et al., J Med Chem. 2006 Jun 15; 49(12):3432-5) и MI219 (Shangary S, et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2008 Mar 11; 105(10):3933-8).

При использовании лекарственных средств в клиниках следует обратить внимание на некоторые токсикологические эффекты этих лекарственных средств. Некоторые лекарственные средства могут вызвать развитие медикаментозной тромбоцитопении, то есть, состояния, при которых у пациента наблюдается относительное снижение числа тромбоцитов. Результаты, полученные в исследованиях по подтверждению данной концепции, проводимых с участием пациентов с липосаркомами, подвергнутых монотерапии RG-7112, ингибитором семейства нутлинов, показали, что RG-7112 индуцировал тромбоцитопению у 40% пациентов. Это открытие подтвердило, что одной из главных дозоограничивающих токсичностей, связанных с введением RG7112, является тромбоцитопения (Ray-Coquard I, et al. Lancet Oncol, 2012, 13: 1133-1140). Исследования, проводимые на животных-моделях, показали, что RG7112-индуцированная тромбоцитопения возникает достаточно поздно во время лечения и сохраняется после прекращения приема лекарственных средств, и это дает основание предположить, что такое лекарственное средство действует на ранние гемопоэтические клетки-предшественники (Iancu-Rubun, C., et al., Experimental Hematology 2014;42:137-145). При этом следует иметь в виду, что вызывать тромбоцитопению могут и другие ингибиторы Mdm2, а не только RG-7112.

Важно скорректировать курс лечения восприимчивых пациентов до развития или в самом начале развития у них тромбоцитопении, либо путем прерывания лечения с использованием конкретного лекарственного средства, которое может вызывать тромбоцитопению, или путем соответствующего изменения курса лечения. Невозможность диагностировать тромбоцитопению на ранней стадии и продолжать лечение рассматриваемым лекарственным средством может привести к летальному исходу. Таким образом, в настоящее время существует постоянная потребность в прогнозировании, определении, мониторинге медикаментозной тромбоцитопении замедленного типа, а также в устранении токсичности у индивидуума после лечения лекарственным средством, в частности, после введения ингибитора Mdm2.

Сущность изобретения

Целью настоящего изобретения является получение GDF-15 как биомаркера безопасности для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2, а в частности гемотоксичности ингибитора Mdm2. В частности, настоящее изобретение относится к применению GDF-15 в качестве биомаркера безопасности для определения вероятности развития тромбоцитопении у индивидуума в ответ на введение ингибитора MDM2.

В соответствии с настоящим изобретением было неожиданно обнаружено, что существует корреляция между (i) относительным повышением уровня экспрессии GDF-15 у индивидуума после введения дозы ингибитора Mdm2 по сравнению с базовым уровнем экспрессии GDF-15 у того же самого индивидуума, и (ii) токсикологическим эффектом введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2, а в частности гемотоксичностью ингибитора Mdm2. Было установлено, что для данной схемы введения доз существует корреляция между уровнем экспрессии GDF-15 после введения дозы ингибитора Mdm2 индивидууму и вероятностью развития тромбоцитопении у индивидуума в ответ на указанную дозу ингибитора Mdm2. В частности, было установлено, что по меньшей мере 25%-ное увеличение, а в частности, по меньшей мере 50%-ное увеличение экспрессии GDF-15 в образце после введения, взятом у индивидуума после введения дозы ингибитора Mdm2 по сравнению с образцом до введения, полученным от индивидуума до введения ингибитора Mdm2, указывает на повышение вероятности развития у пациента тромбоцитопении в ответ на указанную дозу ингибитора Mdm2. Использование GDF-15 в качестве биомаркера безопасности может помочь врачу контролировать процесс лечения индивидуума (пациента) ингибитором Mdm2 и предсказать медикаментозную тромбоцитопению замедленного типа достаточно рано, чтобы принять нужные меры для сведения тромбоцитопении к минимуму или полного ее предотвращения.

В одном из своих аспектов, настоящее изобретение относится к способу ex vivo определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 у индивидуума, где указанный способ включает стадии:

(i) получения биологического образца, взятого у индивидуума до введения указанного ингибитора Mdm2;

(ii) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения;

(iii) введения дозы указанного ингибитора Mdm2 индивидууму;

(iv) получения биологического образца, взятого у индивидуума после введения указанного ингибитора Mdm2;

(v) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце после введения;

(vi) сравнения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения, в частности, для определения вероятности развития тромбоцитопении у индивидуума в ответ на введение указанной дозы ингибитора Mdm2.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к ингибитору Mdm2 для использования в целях лечения рака у индивидуума, где указанное лечение включает:

(i) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума до введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(ii) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума после введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(iii) сравнение уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения; и

(iv) изменение курса лечения указанного индивидуума, если уровнь экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 25%, а предпочтительно, по меньшей мере на 50% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения; или

(v) проведение курса лечения указанного индивидуума указанным ингибитором Mdm2 без изменений, если уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения менее, чем на 50%, а предпочтительно, менее, чем на 25% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к набору для использования в целях предсказания вероятности развития у пациента, страдающего раком, тромбоцитопении в ответ на лечение дозой ингибитора Mdm2, где указанный набор включает:

(i) по меньшей мере один зонд, способный детектировать экспрессию GDF-15; и

(ii) инструкции по использованию зонда для анализа взятого у пациента биологического образца на экспрессию GDF-15, где:

(а) по меньшей мере 25%-ное увеличение, а более предпочтительно, по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 после введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2 указанному пациенту свидетельствует о повышении вероятности того, что у указанного пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на лечение указанной дозой ингибитора Mdm2 и

(b) менее чем 50%-ное увеличение, а более предпочтительно менее чем 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 после введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2 указанному пациенту свидетельствует о снижении вероятности того, что у указанного пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на лечение указанной дозой ингибитора Mdm2.

В еще одном своем аспекте, настоящее изобретение относится к набору для использования в целях лечения пациента, страдающего раком, где указанный набор включает:

(i) терапевтически эффективное количество ингибитора Mdm2;

(ii) по меньшей мере один зонд, способный детектировать экспрессию GDF-15;

(iii) инструкции по использованию зонда для анализа взятого у пациента биологического образца на экспрессию GDF-15, и

(iv) инструкции по введению этих средств пациенту, если в биологическом образце, взятом у пациента после введения указанному пациенту терапевтически эффективного количества ингибитора Mdm2, наблюдалось по меньшей мере 25%-ное увеличение, а более предпочтительно, по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии по сравнению с уровенм экспрессии GDF-15 в образце до введения этого ингибитора указанному пациенту.

В частности, в настоящем изобретении описаны нижеследующие аспекты, преимущественные признаки и конкретные варианты осуществления изобретения, соответственно, отдельно или в комбинации, как указано в следующих пунктах:

1. Применение GDF-15 в качестве биомаркера безопасности для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2.

2. Способ ex vivo для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 у индивидуума, где указанный способ включает стадии:

(i) получения биологического образца, взятого у указанного индивидуума до введения указанного ингибитора Mdm2;

(ii) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения;

(iii) введения дозы указанного ингибитора Mdm2 индивидууму;

(iv) получения биологического образца, взятого у индивидуума после введения указанного ингибитора Mdm2;

(v) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце после введения;

(vi) сравнения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения.

3. Способ в соответствии с пунктом 2, где определяют вероятность развития тромбоцитопении у указанного индивидуума в ответ на введение указанной дозы ингибитора Mdm2.

4. Способ по пункту 2 или пункту 3, где менее, чем 50%-ное увеличение, а более предпочтительно менее, чем 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о снижении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на введение указанной дозы ингибитора Mdm2.

5. Способ по любому из пунктов 2-4, где по меньшей мере 25%-ное увеличение, а более предпочтительно 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о повышении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на введение указанной дозы ингибитора Mdm2.

6. Ингибитор Mdm2 для использования в целях лечения рака у индивидуума, где указанное лечение включает:

(i) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума до введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(ii) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума после введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(iii) сравнение уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения; и

(iv) изменение курса лечения указанного индивидуума, если уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 25%, а предпочтительно, по меньшей мере на 50% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения; или

(v) проведение курса лечения указанного индивидуума указанным ингибитором Mdm2 без изменений, если уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения менее, чем на 50%, а предпочтительно, менее, чем на 25% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения.

7. Ингибитор Mdm2 в соответствии с пунктом 6, где указанное изменение лечения включает изменение схемы введения указанного ингибитора Mdm2 индивидууму и/или введение указанного средства для снижения влияния ингибитора Mdm2 на тромбоциты.

8. Ингибитор Mdm2 в соответствии с пунктом 6 или пунктом 7, где указанное изменение лечения включает снижение дозы указанного ингибитора Mdm2 и/или уменьшение частоты введения указанного ингибитора Mdm2.

9. Ингибитор Mdm2 в соответствии с пунктом 6 или пунктом 8, где способ уменьшения влияния ингибитора Mdm2 на тромбоциты включает переливание тромбоцитов и/или введение тромбопоэтина, и/или введение агониста рецептора тромбопоэтина, а предпочтительно переливание тромбоцитов.

10. Ингибитор Mdm2 в соответствии с любым из пунктов по 6-9, где способ уменьшения влияния ингибитора Mdm2 на тромбоциты включает включает введение агониста рецептора тромбопоэтина, и где указанным агонистом рецептора тромбопоэтина является элтромбопаг.

11. Ингибитор Mdm2 для применения в лечении рака в соответствии с любым из пунктов 6-10, где указанное изменение лечения включает прерывание лечения указанным ингибитором Mdm2.

12. Ингибитор Mdm2 для применения в лечении рака в соответствии с любым из пунктов 6-10, где указанное изменение лечения включает «лекарственные каникулы».

13. Способ по любому из пунктов 2-5 или ингибитор Mdm2 по любому из пунктов 6-12, где указанный образец, взятый после введения, получают в течение периода времени приблизительно от 30 мин до приблизительно 24 часов, предпочтительно приблизительно от 1 часа до приблизительно 12 часов, приблизительно от 2 часов до приблизительно 12 часов, приблизительно от 3 часов до приблизительно 12 часов, приблизительно от 4 часов до приблизительно 8 часов, приблизительно от 5 часов до приблизительно 8 часов, приблизительно от 5 часов до приблизительно 7 часов, приблизительно от 6 часов до приблизительно 7 часов после введения ингибитора Mdm2.

14. Способ по пункту 13 или ингибитор Mdm2 по пункту 13, где указанный образец, взятый после введения, получают приблизительно через 30 минут, приблизительно через 1 час, приблизительно через 2 часа, приблизительно через 3 часа, приблизительно через 4 часа, приблизительно через 5 часов, приблизительно через 6 часов, приблизительно через 7 часов, приблизительно через 8 часов, приблизительно через 10 часов, приблизительно через 12 часов, приблизительно через 24 часа после введения ингибитора Mdm2.

15. Способ по пункту 14 или ингибитор Mdm2 по пункту 13, где указанный образец, взятый после введения, получают приблизительно через 3 часа после введения ингибитора Mdm2.

16. Способ по пункту 14 или ингибитор Mdm2 по пункту 13, где указанный образец, взятый после введения, получают приблизительно через 6 часов после введения ингибитора Mdm2.

17. Способ по пункту 14 или ингибитор Mdm2 по пункту 13, где указанный образец, взятый после введения, получают приблизительно через 12 часов после введения ингибитора Mdm2.

18. Способ в соответствии с любым из пунктов 2-5, 13-17 или ингибитор Mdm2 в соответствии с любым из пунктов 6-17, где указанную экспрессию GDF-15 анализируют путем измерения уровня транскрипции гена GDF-15.

19. Способ в соответствии с пунктом 18 или ингибитор Mdm2 в соответствии с пунктом 18, где указанную экспрессию гена GDF-15 анализируют посредством олигонуклеотидного зонда, который специфически гибридизуется с областью нуклеиновой кислоты, кодирующей GDF-15.

20. Способ по любому из пунктов 2-5, 13-17 или ингибитор Mdm2 по любому из пунктов 6-17, где указанную экспрессию GDF-15 анализируют путем измерения уровня белка GDF-15 в биологическом образце.

21. Способ в соответствии с пунктом 20 или ингибитор Mdm2 в соответствии с пунктом 20, где указанный уровень белка GDF-15 анализируют с помощью антитела, которое связывается с белком GDF-15.

22. Способ по любому из пунктов 20-21 или ингибитор Mdm2 по любому из пунктов 20-21, где биологическим образцом является кровь, плазма, сыворотка или моча.

23. Способ по любому из пунктов 20-21 или ингибитор Mdm2 по любому из пунктов 20-21, где биологическим образцом является кровь.

24. Способ по любому из пунктов 2-5, 13-23 или ингибитор Mdm2 по любому из пунктов 6-23, где уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения, по меньшей мере на 75%, 100% или 150% превышающий уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения, свидетельствует о повышении вероятности развития тромбоцитопении.

25. Набор для использования в целях предсказания вероятности развития у пациента, страдающего раком, тромбоцитопении в ответ на лечение дозой ингибитора Mdm2, где указанный набор включает:

(i) по меньшей мере один зонд, способный детектировать экспрессию GDF-15; и

(ii) инструкции по использованию зонда для анализа взятого у пациента биологического образца на экспрессию GDF-15, где:

(а) по меньшей мере 25%-ное увеличение, а более предпочтительно, по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 после введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2 указанному пациенту свидетельствует о повышении вероятности того, что у указанного пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на лечение указанной дозой ингибитора Mdm2 и

(b) менее чем 50%-ное увеличение, более предпочтительно менее, чем 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 после введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2 указанному пациенту свидетельствует о снижении вероятности того, что у указанного пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на лечение указанной дозой ингибитора Mdm2.

26. Набор для использования в целях лечения пациента, страдающего раком, где указанный набор включает:

(i) терапевтически эффективное количество ингибитора Mdm2;

(ii) по меньшей мере один зонд, способный детектировать экспрессию GDF-15;

(iii) инструкции по использованию зонда для анализа взятого у пациента биологического образца на экспрессию GDF-15, и

(iv) инструкции по введению этих средств пациенту, если в биологическом образце, взятом у пациента после введения указанному пациенту терапевтически эффективного количества ингибитора Mdm2, наблюдалось по меньшей мере 25%-ное увеличение, а более предпочтительно, по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии по сравнению с уровнем экспрессии GDF-15 в образце до введения этого ингибитора указанному пациенту.

27. Набор в соответствии с любым из пунктов 25-26, где зонд представляет собой олигонуклеотид, который специфически гибридизуется с областью нуклеиновой кислоты, кодирующей GDF-15, или антитело, которое связывается с белком GDF-15.

28. Применение в соответствии с пунктом 1, или способ в соответствии с любым из пунктов 2-5 или 12-24, или ингибитор Mdm2 в соответствии с любым из пунктов 6-24, или набор в соответствии с любым из пунктов 25-27, где указанный ингибитор Mdm2 выбран из группы, состоящей из:

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(6-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}пиридин-3-ил)-l,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(6-{метил-[4-(3-метил-4-оксо-имидазолидин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}пиридин-3-ил)-l,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(5-{метил-[4-(3-метил-4-оксо-имидазолидин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}пиразин-2-ил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

l-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2Н-изохинолин-3-она;

(S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-она;

4-[(S)-5-(3-хлор-2-фторфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-3-изопропил-6-оксо-3,4,5,6-тетрагидропирроло[3,4-d]имидазол-4-ил]бензонитрила;

(S)-5-(5-хлор-2-оксо-2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-она;

(S)-5-(3-хлор-4-фторфенил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-l-((R)-l-метоксипропан-2-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-d]имидазол-4(1H)-она;

и

(S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-d6-пиримидин-5-ил)-l-((R)-1-метоксипропан-2-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-d]имидазол-4(1H)-она; или фармацевтически приемлемой соли любого из вышеуказанных соединений.

29. Применение в соответствии с пунктом 1, или способ в соответствии с любым из пунктов 2-5 или 12-24, или ингибитор Mdm2 в соответствии с любым из пунктов 6-24, или набор в соответствии с любым из пунктов 25-27, где указанным ингибитором Mdm2 является (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он или его фармацевтически приемлемая соль.

30. Применение в соответствии с пунктом 1, или способ в соответствии с любым из пунктов 2-5 или 12-24, или ингибитор Mdm2 в соответствии с любым из пунктов 6-24, или набор в соответствии с любым из пунктов 25-27, где указанным ингибитором Mdm2 является (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2Н-изохинолин-3-он или его фармацевтически приемлемая соль.

31. Агонист рецептора тромбопоэтина для применения в целях профилактики или лечения индуцированной лекарственным средством тромбоцитопении у индивидуума, у которого уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 25%, а предпочтительно, по меньшей мере на 50% пренышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения,

где «экспрессия GDF-15 в образце до введения» означает экспрессию GDF-15, измеренную в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума до введения ему дозы лекарственного средства, которое может вызывать индуцированную лекарственным средством тромбоцитопению у указанного индивидуума; и

где «экспрессия GDF-15 в образце после введения» означает экспрессию GDF-15, измеренную в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума после введения ему дозы лекарственного средства, которое может вызывать индуцированную лекарственным средством тромбоцитопению у указанного индивидуума.

32. Агонист рецептора тромбопоэтина для применения в соответствии с пунктами 31 или 32, где лекарственным средством, которое может вызывать развитие медикаментозной тромбоцитопении, является ингибитор Mdm2.

33. Комбинация ингибитора Mdm2 и агониста рецептора тромбопоэтина.

34. Комбинация в соответствии с пунктом 33 для применения в медицине.

35. Комбинация в соответствии с пунктами 33 для применения в целях лечении рака и профилактики или лечения медикаментозной тромбоцитопении.

36. Агонист рецептора тромбопоэтина, его комбинация или комбинация для применения в соответствии с любым из пунктов 31-35, где агонистом рецептора тромбопоэтина является элтромбопаг.

37. Агонист рецептора тромбопоэтина, его комбинация или комбинация для применения в соответствии с любым из пунктов 31-36, где ингибитором Mdm2 является (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-l-изопропил-5,6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d]-имидазол-4-он или его фармацевтически приемлемая соль.

38. Агонист рецептора тромбопоэтина, его комбинация или комбинация для применения в соответствии с любым из пунктов 31-36, где ингибитором Mdm2 является (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он или его фармацевтически приемлемая соль.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Наблюдаемый и индивидуально подобранный временной профиль числа тромбоцитов у пациента, которому вводили (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он непрерывно три раза в неделю по схеме перорального введения доз. На этом графике показано первое введение на время 400 ч. Пациенту было проведено 3 переливания тромбоцитов.

Фиг. 2. Наблюдаемый и индивидуально подобранный временной профиль уровня GDF-15 белка у пациента, которому вводили (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он непрерывно три раза в неделю по схеме введения доз.

Фиг. 3. Предварительный анализ данных влияния (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она на уровень GDF-15 и число тромбоцитов у 21 пациента, которым непрерывно три раза в неделю перорально вводили (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он. Каждая точка соответствует отдельному пациенту; на оси координат Х представлено увеличение процентного изменения (%) уровня GDF-15 от базового значения; на оси координат Y показано самое низкое наблюдаемое число тромбоцитов у того же самого пациента во время курса лечения.

Фиг. 4. ФК/ФД-модель, используемая для описания кинетики тромбоцитов. ММТ означает среднее время созревания, Е([C]) означает зависимость эффекта лекарственного средства от его концентрации. Компартмент Circ. представляет циркулирующие тромбоциты, компартмент Prol. представляет пролиферирующие незрелые клетки, а блоки A2, A3, A4 представляют созревание клеток.

Фиг. 5. Схематическое представление ФК/ФД-модели, используемой для описания кинетики GDF-15. Tlag и kа означают параметры задержки и скорости всасывания лекарственного средства первого порядка соответственно. kl2 и k21 означают скорости между компартментами, ke означает скорость выведения, Vm и km означают параметры элиминации Михаэлиса-Ментена. kout означает скорость преобразования модели непрямого ответа, а kin означает продуцирование нулевого порядка. V означает кажущийся объем центрального компартемента, а Qc/V означает концентрацию лекарственного средства.

Фиг. 6. Созданная ФК/ФД-модель. Был построен график зависимости активности конкретного лекарственного средства от продуцирования slGi GDF-15, и на этом графике проиллюстрирована зависимость активности конкретного лекарственного средства от числа незрелых гемопоэтических клеток slPi.

Фиг. 7 и фиг. 8. Максимальное изменение числа тромбоцитов (фиг.7) и числа нейтрофилов (фиг.8) по сравнению с кратным изменением уровня GDF-15 у пациентов с солидными опухолями, которым вводили соединение формулы I в первый день трехнедельного цикла (в данном описании также называемого схемой 1А или q3w) в дозах 12,5 мг (а), 25 мг (B), 50 мг (С), 100 мг (D), 200 мг (Е), 250 мг (F), 350 мг (G) или на первый и восьмой дни 4-недельного цикла (в данном описании также называемого схемой 1B) в дозе 120 мг (I). Левые графики: Максимальное изменение числа тромбоцитов по сравнению с кратным изменением уровня GDF-15, где уровень GDF-15 измеряли в 1-й день первого цикла (C1D1). Правые графики: Максимальное изменение числа тромбоцитов по сравнению с кратным изменением уровня GDF-15.

Подробное описание изобретения

Введение ингибитора Mdm2 пациенту может вызвать у него развитие тромбоцитопении. Предыдущие исследования показали, что ингибитор Mdm2 RG7112 подавляет тромбопоэз. Авторами настоящего изобретения был идентифицирован GDF-15 как биомаркер безопасности для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2. Настоящее изобретение основано на выявлении корреляции между (i) относительным увеличением уровня экспрессии GDF-15 у индивидуума по сравнению с базовым уровнем экспрессии GDF-15 у того же самого индивидуума после введения ему ингибитора Mdm2 и (ii) токсикологическим эффектом указанного ингибитора Mdm2, в частности, гемотоксичности ингибитора Mdm2. Наклон кривой взаимодействия может варьироваться в зависимости от активности Mdm2 и схемы введения доз. В частности, авторами настоящего изобретения было установлено, что для данной схемы введения доз существует корреляция между уровнем экспрессии GDF-15 после введения дозы ингибитора Mdm2 и вероятностью развития тромбоцитопении у индивидуума в ответ на введение указанной дозы ингибитора Mdm2. Настоящее изобретение может быть преимущественно использовано для определения вероятности развития тромбоцитопении у индивидуума при данной схеме введения доз ингибитора Mdm2 на очень ранней стадии развития тромбоцитопении или даже до ее развития. В частности, настоящее изобретение может быть использовано для определения вероятности развития тромбоцитопении у индивидуума при данной схеме введения доз ингибитора Mdm2 уже после 1-го дня 1-го цикла введения терапевтически эффективного количества ингибитора Mdm2. В другом примере, настоящее изобретение может быть использовано для определения вероятности развития тромбоцитопении у индивидуума при данной схеме введения доз ингибитора Mdm2 начиная с 1-го дня 1-го и вплоть до 7-го дня 1-го цикла введения терапевтически эффективного количества ингибитора Mdm2, а в частности, после 1-го дня 1-го цикла, после 2-го дня 1-го цикла или после 3-го дня 1-го цикла введения терапевтически эффективного количества ингибитора Mdm2. Исходя из описания настоящего изобретения, специалист в данной области может самостоятельно определить параметры корреляции взаимодействия между относительным увеличением уровня экспрессии GDF-15 в образцах, взятых у индивидуума до и после введения, и вероятностью развития тромбоцитопении в ответ на лечение того же самого индивидуума данным ингибитором Mdm2.

В одном из своих аспектов, настоящее изобретение относится к применению GDF-15 в качестве биомаркера безопасности для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2, а в частности, гемотоксичности ингибитора Mdm2. В одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к применению GDF-15 в качестве биомаркера для определения безопасности для определения вероятности развития тромбоцитопении у индивидуума в ответ на введение дозы ингибитора Mdm2.

Используемые здесь термины «субъект», «индивидуум» или «пациент» являются синонимами и относятся к позвоночному, предпочтительно, к млекопитающему, а более предпочтительно, к человеку. Млекопитающими являются, но не ограничиваются ими, мыши, обезьяны, человек, сельскохозяйственные животные, животные, участвующие в спортивных состязаниях, и домашние питомцы.

Используемый здесь термин «токсикологический эффект» означает токсикологическое влияние на весь организм, а также влияние на субструктуру организма. В частности, этот термин относится к эффекту, который приводит к развитию тромбоцитопении в организме. Используемый здесь термин «гемотоксичность» означает токсичность гемопоэтической системы, приводящую к повреждению кроветворных тканей и к снижению числа лейкоцитов и/или абсолютного числа нейтрофилов.

Используемый здесь термин «тромбоцитопения» означает снижение числа тромбоцитов до значения ниже нормального числа тромбоцитов в крови (т.е., ниже 150000 тромбоцитов на микролитр). Это может быть вызвано нарушением регуляции мегакариоцитопоэза, что приводит к сокращению числа тромбоцитов. Мегакариоцитопоэз представляет собой процесс пролиферации гемопоэтических клеток-предшественников костного мозга, созревание, образование тромбоцитов и высвобождение тромбоцитов в кровоток. Нормальное количество тромбоцитов у взрослых составляет от 150000 до 450000 тромбоцитов на микролитр крови (Ross DW; Ayscue LH; Watson J; Bentley SA (1988). «Stability of hematologic parameters in healthy subjects. Intraindividual versus interindividual variation». American journal of clinical pathology 90 (3): 262-7). Число тромбоцитов менее, чем 150000 тромбоцитов на микролитр, является ниже нормы и свидетельствует о тромбоцитопении. При количестве тромбоцитов <10000/мкл, спонтанные кровотечения возрастают. При количестве тромбоцитов <50000/мкл, хирургические процедуры часто осложняется кровотечением. При количестве тромбоцитов <100000/мкл, химиотерапию и лучевую терапию необходимо назначать с осторожностью, так как, при этом риск ухудшения показателей тромбоцитопении и увеличения кровотечения возрастает. В соответствии с критериями Общей терминологии NCI для побочных эффектов v3.0, тромбоцитопения классифицируется следующим образом: тромбоцитопения 1-ой степени (слабый побочный эффект) характеризуются числом тромбоцитов <LLN (нижний предел нормы) -75000/мм³; тромбоцитопения 2-й степени (умеренный побочный эффект) характеризуются числом тромбоцитов <75000/мм³-50000/мм³, тромбоцитопения 3-й степени (тяжелый побочный эффект) характеризуются числом тромбоцитов <50000/мм³-25000/мм³, а тромбоцитопения 4-ой степени (побочный эффект, представляющий угрозу для жизни или приводящий к инвалидности) характеризуется числом тромбоцитов <25000/мм³ (в соответствии с критериями Общей терминологии для побочных эффектов v3.0 (CTCAE), 9 августа 2006, HTTP://ctep.cancer.gov/protocolDevelopment/electronic_applications/docs/ctcaev3.pdf).

Используемые здесь термины «вероятность» и «вероятно» относятся к определению вероятности события, которое может произойти. Этот термин является синонимом термина «предположение». Вероятность означает предположение, что данное событие является более правдоподобным, чем гипотеза, но менее вероятным, чем достоверное событие. Таким образом, событие является вероятным, если оно может быть предсказано специалистом в данной области на основе общей интуиции, опыта или квалификации. В некоторых вариантах осуществления изобретения, после определения такой вероятности пациент может быть подвергнут лечению (или это лечение может быть продолжено) соединением, либо лечение может быть изменено или прервано. В одном из вариантов осуществления изобретения, термины «вероятность» и «вероятно» означают степень риска того, что это событие произойдет, в процентах.

Термин «повышение вероятности» относится к увеличению вероятности того, что данное событие произойдет. Так, например, некоторые описанные здесь способы позволяют предсказать повышение вероятности развития у пациента тромбоцитопении в ответ на введение указанного ингибитора Mdm2. В одном вариантов осуществления изобретения, повышенная вероятность означает, что данное событие произойдет с вероятностью более, чем 50%, более, чем 60%, более, чем 70%, или более, чем 80%. Аналогичным образом, «уменьшение вероятности» означает риск, что данное событие произойдет с вероятностью менее, чем 50%, менее, чем 60%, менее, чем 70% или менее, чем 80%, соответственно.

Термин «введение», «применение» или т.п. относится к однократному введению терапевтического средства, и этот термин также подразумевает введение терапевтического средства в соответствии с полным курсом терапии или схемой введения доз. Термин «введение» также подразумевает проведение курса лечения, при котором терапевтические средства необязательно вводят одним и тем же способом или в одно и то же время.

Используемый здесь термин «непрерывное введение» означает схему лечения путем введения указанной дозы терапевтического средства.

Используемый здесь термин «схема лечения» или «схема введения доз» относится к схеме введения доз, где терапевтическое средство может быть введено один раз через каждые 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,..21,.., 26, 27, 28, 29, 30.., 35, 42, 49, 56, 57, 58, 59, 60 дней. Этот термин включает, например, схемы введения доз, где (i) периодичность введения доз составляет в пределах приблизительно от одного раза в день до приблизительно одного раза в каждые 60 дней, (ii) периодичность введения доз составляет в пределах приблизительно от одного раза в каждые 2 дня до приблизительно одного раза в каждые 40 дней или 6 недель, (iii) периодичность введения доз составляет в пределах приблизительно от одного раза в каждые 5 дней до приблизительно одного раза в месяц или приблизительно один раз в каждые 4 недели или приблизительно один раз в каждые 30 дней, (iv) периодичность введения доз составляет в пределах приблизительно от одного раза в неделю или приблизительно от одного раза в каждые 7 дней до приблизительно одого раза в каждые 3 недели или приблизительно один раз в каждые 20 дней, (v) периодичность введения доз составляет в пределах приблизительно от одного раза в неделю или приблизительно от одного раза в каждые 7 дней до приблизительно одого раза в две недели или один раз в каждые 10 дней, или (vi) периодичность введения доз составляет в пределах от 2 раз в неделю до 4 раз в неделю, а в частности 3 раза в неделю. В каждом случае, после введения доз могут быть назначены «лекарственные каникулы». Предпочтительной схемой введения доз является введение один раз в каждые 3 недели.

«Схема лечения» или «схема введения доз» также включают введение терапевтического средства в течение определенного периода времени, а затем «лекарственные каникулы». Так, например, ингибитор Mdm2 может быть введен непрерывно 3 раза в неделю, или 3 раза в неделю в течение 2 недель, а затем назначают «лекарственные каникулы» в течение 1 недели (3-недельный цикл). В другом примере, ингибитор может быть введен один раз в день, один раз в 2 недели или с пропуском в 2 недели. В еще одном примере, лекарственное средство может быть введено один раз в день в течение 3-х недель с однонедельными «лекарственными каникулами» (1 раз в день/3 недели; «лекарственные каникулы»/1 неделя), а затем следующий(ие) цикл(ы) введения лекарственного средства (1 в день/3 недели, «лекарственные каникулы»/1 неделя).

Используемый здесь термин «GDF-15» (или «GDF15») означает фактор роста/дифференцировки 15, также известный как MIC-1, TGF-PL, PDF, PLAB и PTGFB. GDF-15 имеет регистрационные номера Q99988, BC008962, GI: 38196924, AAH08962. GDF-15 представляет собой дивергентный член суперсемейства трансформирующих факторов роста-бета. мРНК GDF-15 наиболее часто встречается в печени, а в других тканях она присутствует на более низких уровнях.

Используемый здесь термин «экспрессия GDF-15», «уровень экспрессии GDF-15» или т.п., относится к транскрипции гена GDF-15 или экспрессии белка GDF-15. Экспрессия гена GDF-15 может быть проанализирована или измерена, например, с помощью олигонуклеотидного зонда, который специфически гибридизуется с областью нуклеиновой кислоты, кодирующей GDF-15. Уровень белка GDF-15 может быть проанализирован или измерен, например, с помощью антитела, которое связывается с белком GDF-15, например, с помощью анализа ELISA. В большинстве случаев, результаты измерения уровня экспрессии гена GDF-15 или белка GDF-15 сравнивают друг с другом, например, до и после лечения, и релевантной величиной может быть только относительная величина или уровень транскрипции гена GDF-15 или уровень экспрессии белка GDF-15.

Используемый здесь термин «ингибитор Mdm2» или «ингибитор HDM2» означает любое соединение, ингибирующее взаимодействие HDM2/p53 (Mdm2/p53). HDM2 (человеческий гомолог мышиного белка 2 с двумя небольшими мутациями) представляет собой негативный регулятор p53. Ингибиторы Mdm2 могут быть использованы в фармацевтических композициях для введения человеку или животному, которое показано для ингибирования взаимодействия Mdm2/p53, например, для лечения опухолей и/или при росте раковых клеток. В частности, ингибиторы Mdm2 могут быть использованы для лечения рака у человека, поскольку прогрессирование этих раковых заболеваний может по меньшей мере частично зависеть от блокирования «сторожевой» функции р53, например сверхэкспрессии Mdm2.

Альтернативно, вместо или в дополнение к ингибитору Mdm2, в описанных здесь аспектах настоящего изобретения в качестве суррогатного маркера активации р53 может быть использован любой другой прямой активатор p53-пути как часть их фармакологического способа действия. Так, например, в описанных здесь аспектах изобретения, в качестве альтернативы или в дополнение к ингибитору Mdm2 может быть использован ингибитор Mdm4.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения, «ингибитор Mdm2» или «ингибитор HDM2», как уже упоминалось, ингибирует взаимодействие Mdm2/p53 с IC50 менее 10 мкМ, предпочтительно менее 1 мкМ, а предпочтительно в диапазоне нМ, как было измерено с помощью анализа методом переноса флуоресцентной энергии с временным разрешением (TR-FRET). Перенос флуоресцентной энергии (или перенос резонансной энергии Ферстера) означает перенос энергии между флуоресцентными молекулами донора и акцептора 5. В этом анализе, белок MDM2 (аминокислоты 2-188), меченный биотином у С-конца, используют в комбинации со стрептавидином, помеченым европием (Perkin Elmer, Inc., Waltham, MA, USA), где такая метка служит в качестве донорного флуорофора. Происходящий от Р53 и Су5-меченный пептид Cy5-TFSDLWKLL (р53, а.к. l8-26) является акцептором энергии. После возбуждения донорной молекулы 10 на 340 нм, связывание между MDM2 и пептидом р53 индуцирует перенос энергии и повышенный ответ на длине волны излучения акцептора 665 нм. Нарушение образования комплекса р53-MDM2 в результате связывания молекулы ингибитора с р53-связывающим сайтом MDM2 приводит к усилению излучения донора на 615 нм. Результаты логометрического FRET-анализа вычисляют по 15 исходным данным двух различных флуоресцентных сигналов, измеренных в режиме временного разрешения (излучение на 665 нм/615 нм × 1000). Этот анализ может быть осуществлен в соответствии со следующей процедурой: испытание проводят в белых микротитрационных планшетах 1536w (Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany) в общем объеме 3,1 мкл путем объединения 100 нл соединений, разведенных в 90% ДМСО/10% Н₂O (конечная концентрация ДМСО 3,2%) с 2 мкл стрептавидина, меченного европием 20 (конечная концентрация 2,5 нМ) в реакционном буфере (PBS, 125 мм NaCl, 0,001% Novexin (состоит из углеводных полимеров (полимеров Novexin), предназначенном для повышения растворимости и стабильности белков; Novexin Ltd., ambridgeshire, United Kingdom), желатин 0,01%, 0,2% Pluronic (блок-сополимер этиленоксида и пропиленоксида, BASF, Ludwigshafen, Germany, 1 мМ DTT), с последующим добавлением 0,5 мкл MDM2-Bio или MDM4-Bio, разведенного в аналитическом буфере (конечная концентрация 10 нМ). Раствор предварительно инкубируют в течение 15 минут при комнатной температуре, а затем добавляют 0,5 мкл пептида Cy5-р53 в аналитическом буфере (конечная концентрация 20 нМ). После инкубирования в течение 10 минут при комнатной температуре считывают данные планшета. Для анализа образцов используют мультимодальный микропланшет-ридер Analyst GT (Molecular Devices) со следующими параметрами 30: дихроичное зеркало на 380 нм, возбуждение на 330 нм, излучение донора на 615 нм и излучение акцептора на 665 нм. Величины IC50 вычисляют путем построения кривой с помощью программы XLfit. Если это не оговорено особо, то реагенты закупают у компании Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA.

MDM2 (Mdm2) в частности относится к MDM2, как описано в EMBO J. 10, 1565-9, Fakharzadeh et al., 1991. MDM2 (Mdm2) имеют регистрационные номера Q86WA3, AJ550519, GL29125746. Вариант MDM2 (Mdm2) относится к варианту, который еще связывается с р53 в описанной ниже аналитической системе (например, к варианту сплайсинга, к изоформе, к фрагменту, к мутанту или онкогену, образованным в результате делеции, инсерции и/или замены одной или более, например, от одной до 430 аминокислот), что соответствует аффинности связывания первоначально описанных полноразмерных белков MDM2 с p53, предпочтительно по меньшей мере на 0,5%, более предпочтительно, по меньшей мере на 5%, 10%, 20%, 30%, 40% или, в частности, 50% или более, и идентичности первоначально описанных или конкретно указанных ниже последовательностей MDM2 или HDM2 по меньшей мере на 20%, более предпочтительно, по меньшей мере, на 25%. Если это не оговорено особо, то MDM2, по существу, означает MDM2, Mdm2, HDM2 или Hdm2 или их варианты, соответственно, определенные выше.

Процент идентичности последовательностей, часто также называемый гомологией между белком и его вариантом, предпочтительно, определяют с помощью компьютерной программы, обычно применяемой для этой цели, такой как программа Gap (пакет программ для анализа последовательностей Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Reseach Park, Madison Wisconsin, USA, в котором используется алгоритм Смита и Уотермана (Adv. Appl. Math. 2: 482-489 (1981), а в частности, с помощью программы поиска аффинности с использованием «пробелов» со штрафом на «пропуск»=12 и штрафом на удлинение=1.

Термин «их варианты», если они упоминаются, означает один или более вариантов.

В соответствии с настоящим изобретением, ингибитором Mdm2 может быть, например, соединение любой из следующих формул:

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1, 4-дигидро-2Н-изохинолин-3-он;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино} фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(6-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино} пиридин-3-ил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(6-{метил-[4-(3-метил-4-оксо-имидазолидин-1-ил)-транс-циклогексилметил] амино}пиридин-3-ил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(5-{метил-[4-(3-метил-4-оксо-имидазолидин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино} пиразин-2-ил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он;

l-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он;

(S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он;

4-[(S)-5-(3-хлор-2-фторфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-3-изопропил-6-оксо-3,4,5,6-тетрагидро-пирроло[3,4-d]имидазол-4-ил]бензонитрил;

(S)-5-(5-хлор-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он;

(S)-5-(3-хлор-4-фторфенил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-((R)-1-метоксипропан-2-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-d]имидазол-4(1Н)-он;

или

(S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-d6-пиримидин-5-ил)-1-((R)-1-метоксипропан-2-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-d]имидазол-4(1Н)-он; или фармацевтически приемлемая соль любого из указанных выше соединений.

Термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединения при использовании в соответствии с настоящим изобретением и, которые обычно являются неприемлемыми с биологической или какой-либо другой точки зрения. Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли могут быть образованы неорганическими кислотами и органическими кислотами, например, такими солями являются ацетат, аспартат, бензоат, безилат, бромид/гидробромид, бикарбонат/карбонат, бисульфат/сульфат, камфорсульфонат, хлорид/гидрохлорид, хлортеофиллонат, цитрат, этандисульфонат, фумарат, глюцептат, глюконат, глюкуронат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, фосфат/гидрофосфат/дигидрофосфат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфосалицилат, тартрат, тозилат, трифторацетат или т.п. Неорганические кислоты, из которых могут быть получены соли, включают, например, соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.п.

В своем предпочтительном варианте, настоящее изобретение относится к ингибитору Mdm2 (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-ону или к его фармацевтически приемлемой соли. Ингибитор Mdm2 (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он принадлежит к новому классу соединений имидазопирролидинона, и обнаруживает сильное ингибирующее влияние на взаимодействие MDM2/p53 (этот термин включает, в частности, взаимодействие HDM2/p53). В частности, это соединение действует как ингибитор взаимодействия MDM2 с р53 посредством связывания с MDM2. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения, ингибитор Mdm2 (S)-5-(5-хлорметил-2-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он представляет собой соединение формулы I и описан в примере 102 WO2013/111105:

(I).

Кристаллические формы (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-она описаны как EX6, EX7 и EX8 в WO2013/111105. Настоящее изобретение охватывает янтарную кислоту, кристаллизованную с соединением (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5, 6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-она.

В другом своем предпочтительном варианте, настоящее изобретение относится к ингибитору Mdm2 (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-ону или к его фармацевтически приемлемой соли. Ингибитор Mdm2 (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он представляет собой соединение формулы II и описан в примере 106 WO2011/076786:

(II).

В одном из вариантов осуществления изобретения, фармацевтически приемлемая соль (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она представляет собой бисульфатную соль (описанную в WO2011/076786). Кристаллическая форма бисульфатной соли (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-l-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она описана в WO2012/066095.

Термин «введение» также подразумевает схемы лечения, в которых терапевтические средства необязательно вводят одним и тем же способом введения или в одно и то же время.

В одном из вариантов осуществления изобретения, ингибитор Mdm2 (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он вводят ежедневно в течение первых 21 дня каждого 28-дневного цикла. В другом варианте осуществления изобретения, ингибитор Mdm2 (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он вводят ежедневно в течение первой недели, а затем с перерывами в 3 недели («лекарственные каникулы») каждого 28-дневного цикла. В дополнительном варианте осуществления изобретения, ингибитор Mdm2 (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он вводят ежедневно в течение первых двух недель, а затем, с двухнедельным перерывом («лекарственные каникулы») каждого 28-дневного цикла. В еще одном варианте осуществления изобретения, ингибитор Mdm2 (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он вводят ежедневно в течение 3 или 5 дней с последующим перерывом в 25 или 23 дня («лекарственные каникулы»), соответственно, каждого 28-дневного цикла. В еще одном варианте осуществления изобретения, ингибитор Mdm2 (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он вводят один раз каждые три недели.

В одном из вариантов осуществления изобретения, ингибитор Mdm2 (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино} фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он вводят 3 раза в неделю в течение первых 2-х недель каждого 21-дневного цикла (3 раза в течение 2 недели/перерыв в 1 неделю).

Термин «после введения указанного ингибитора Mdm2» может относиться к введению указанного ингибитора Mdm2 в первый день первого цикла или к последовательному введению указанного ингибитора Mdm2 в любом порядке. Таким образом, термин «после введения указанного ингибитора Mdm2» может относиться к любому введению ингибитора Mdm2, осуществляемому в течение одного цикла введения.

Используемый здесь термин «доза ингибитора Mdm2» относится к терапевтически эффективному количеству указанного ингибитора Mdm2. Термин «терапевтически эффективное количество» ингибитора Mdm2 означает количество соединения, которое будет вызывать биологический или терапевтический ответ у индивидуума, например, ослабление симптомов, улучшение состояния, снижение или замедление прогрессирования заболевания, замедление роста опухоли или уменьшение размера опухоли или т.п. В одном из вариантов осуществления изобретения, терапевтически эффективное количество in vivo может варьироваться в зависимости от способа введения и составляет приблизительно 0,1-500 мг/кг или приблизительно 1-100 мг/кг.

В одном из вариантов осуществления изобретения, терапевтическое количество или доза (S)-5-(5-хлор-2-метил-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d] имидазол-4-она могут быть введены перорально в пределах от 100 до 1500 мг каждые три недели, а в частности, от 100 до 800 мг каждые три недели или от 50 до 600 мг ежедневно. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапевтическое количество или доза (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-она составляет 400 мг, а более предпочтительно 300 мг для ежедневного введения в течение первых 21 дня каждого 28-дневного цикла. Альтернативно, общее терапевтическое количество или общая доза (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-она составляет 560 мг на 4 цикла (40 мг ежедневно в течение 2 недель/с перерывом в 2 недели, или 80 мг ежедневно в течение 1 недели/с перерывом в 3 недели). Внутривенные дозы должны быть соответственно снижены.

В одном из вариантов осуществления изобретения, терапевтическое количество или доза (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-л-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она, при пероральном введении, составляет в пределах от 500 до 2000 мг, а в частности от 500 до 1200 мг. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапевтическое количество или доза (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она составляет 500 мг, а более предпочтительно 800 мг. Внутривенные дозы должны быть соответственно снижены.

Совершенно очевидно, что каждое терапевтическое средство более удобно вводить, например, в одной отдельной унифицированной лекарственной форме или в дробных унифицированных лекарственных формах. Следует также отметить, что каждое терапевтическое средство более удобно вводить в дозах один раз в день или в дозах от одного до четырех раз в день.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к ex vivo способу определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 у индивидуума in vivo.

В одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к способу ex vivo определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 у индивидуума in vivo, где указанный способ включает стадии:

(i) получения биологического образца, взятого у указанного индивидуума до введения указанного ингибитора Mdm2;

(ii) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения;

(iii) введения дозы указанного ингибитора Mdm2 индивидууму;

(iv) получения биологического образца, взятого у индивидуума после введения указанного ингибитора Mdm2;

(v) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце после введения;

(vi) сравнения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения.

В одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к способу ex vivo определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 у индивидуума in vivo, где указанный способ включает стадии:

(i) получения биологического образца, взятого у указанного индивидуума до введения указанного ингибитора Mdm2;

(ii) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения;

(iii) введения дозы указанного ингибитора Mdm2 индивидууму;

(iv) получения биологического образца, взятого у индивидуума после введения указанного ингибитора Mdm2;

(v) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце после введения;

(vi) сравнения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения, в частности, для определения вероятности развития тромбоцитопении у указанного индивидуума в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2.

В одном из вариантов осуществления изобретения, менее чем 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о снижении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, менее, чем 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15, а более предпочтительно, менее, чем 10%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15, в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о снижении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2. В одном из вариантов осуществления изобретения, по меньшей мере 20%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о повышении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2. В другом варианте осуществления изобретения, по меньшей мере 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о повышении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о повышении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2. В другом варианте осуществления изобретения, уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 100% или по меньшей мере на 150% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения, что свидетельствует о повышении вероятности развития тромбоцитопении.

Используемый здесь термин «биологический образец» относится к биологическому образцу, взятому путем отбора проб так, чтобы он представлял собой любой другой репрезентативный образец, взятый из источника. В одном варианте осуществления изобретения, биологическим образцом являются клетка, ткань, кровь, плазма, сыворотка, моча, жидкость для полоскания рта, кал, слюна и их комбинации. В другом варианте осуществления изобретения, биологическим образцом является кровь, плазма, сыворотка или моча. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, биологическим образцом является кровь. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, биологическим образцом является сыворотка.

Используемый здесь термин «биологический образец, взятый до введения», означает биологический образец, взятый у индивидуума до введения ингибитора Mdm2. В одном варианте осуществления изобретения, биологический образец, взятый до введения, получают непосредственно до введения ингибитора Mdm2 указанному индивидууму. Альтернативно, биологический образец предварительно берут у индивидуума в период времени приблизительно от 10 мин и до приблизительно 7 дней до введения ингибитора Mdm2 указанному индивидууму. В другом варианте осуществления изобретения, биологический образец, взятый до введения, берут у индивидуума предварительно за 10 минут, или приблизительно за 20 минут, или приблизительно за 30 минут, или приблизительно за 1 час, или приблизительно за 2 часа, или приблизительно за 3 часа, или приблизительно за 5 часов, или приблизительно за 10 часов, или приблизительно за 15 часов или приблизительно за 1 день, или приблизительно за 2 дня, или приблизительно за 3 дня, или приблизительно за 4 дня, или приблизительно за 5 дней, или приблизительно за 6 дней, или приблизительно за 7 дней до введения ингибитора Mdm2 указанному индивидууму.

Используемый здесь термин «биологический образец после введения», означает биологический образец, взятый у индивидуума после введения ингибитора Mdm2. В одном из вариантов осуществления изобретения, образец, взятый после введения, получают от индивидуума в течение периода времени приблизительно от 30 минут до приблизительно 24 часов, предпочтительно приблизительно от 1 часа до приблизительно 12 часов, приблизительно от 2 часов до приблизительно 12 часов, приблизительно от 3 часов до приблизительно 12 часов, приблизительно от 4 часов до приблизительно 8 часов, приблизительно от 5 часов до приблизительно 8 часов, приблизительно от 5 часов приблизительно от 7 часов, приблизительно от 6 часов до приблизительно 7 часов после введения ингибитора Mdm2 указанному индивидууму. В другом варианте осуществления, образец, взятый после введения, получают от индивидуума приблизительно через 30 минут, приблизительно через 1 час, приблизительно через 2 часа, приблизительно через 3 часа, приблизительно через 4 часа, приблизительно через 5 часов, приблизительно через 6 часов, приблизительно через 7 часов, приблизительно через 8 часов, приблизительно через 10 часов, приблизительно через 12 часов, приблизительно через 24 часа после введения ингибитора Mdm2. В предпочтительном варианте осуществления, образец, взятый после введения, получают от индивидуума приблизительно через 3 часа после введения ингибитора Mdm2. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения, образец, взятый после введения, получают от индивидуума приблизительно через 6 часов после введения ингибитора Mdm2. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, образец, взятый после введения, получают от индивидуума приблизительно через 12 часов после введения ингибитора Mdm2.

Термин «приблизительно», употребляемый с численной величиной х, не означает точную величину х, и эта величина может, например, составлять х ± 10%.

Используемый здесь термин «анализ» или «измерение» относится к идентификации, скринингу, зондированию, определению или измерению, которые могут быть осуществлены любыми стандартными способами. Так, например, образец может быть проанализирован на присутствие конкретного маркера и уровень этого конкретного биомаркера может быть измерен с помощью анализа E1ISA, Нозерн-блот-анализа, визуализации и т.п. для детектирования присутствия этого маркера в образце. Термины «анализ» или «измерение» подразумевают преобразование рассматриваемого образца, например, преобразование биологического образца, например, пробы крови или другого образца ткани из одного состояния в другое путем физического испытания этого образца.

В некоторых вариантах осуществления изобретения измеряют уровень экспрессии нуклеиновой кислоты GDF-15. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень экспрессии нуклеиновой кислоты GDF-15 измеряют путем гибридизации. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень экспрессии нуклеиновой кислоты GDF-15 измеряют путем амплификации. В других вариантах осуществления изобретения, методом амплификации для измерения уровня экспрессии нуклеиновой кислоты GDF-15 является ОТ-ПЦР-амплификация. В других вариантах осуществления изобретения, метод, применяемый для измерения уровня экспрессии нуклеиновой кислоты GDF-15, выбран из группы, состоящей из амплификации на основе последовательности нуклеиновой кислоты (NASBA); амплификации, опосредуемой транскрипцией (ТМА); количественной ПЦР (кол.ПЦР); ПЦР в реальном времени; изотермической амплификации, опосредуемой петлей (LAMP); методов TaqMan, Invader, InvaderPlus; метода «катящегося кольца»; амплификации с заменой цепи (SDA); метода с использованием Q-бета-репликазы; амплификации, зависимой от геликазы (HAD); метода с использованием разветвленной ДНК; метода гидролиза с использованием FRET-зондов; лигазной цепной реакции (LCR); ПЦР с использованием праймированных вырожденных олигонуклеотидов или других методы, известных специалистам. В одном из вариантов осуществления изобретения, уровень экспрессии GDF-15 анализируют путем измерения уровня транскрипции гена GDF-15. В одном из вариантов осуществления изобретения, экспрессия гена GDF-15 может быть проанализирована с помощью олигонуклеотидного зонда, который специфически гибридизуется с областью нуклеиновой кислоты, кодирующей GDF-15.

В некоторых вариантах осуществления изобретения измеряют уровень экспрессии белка GDF-15. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень экспрессии белка GDF-15 измеряют путем проведения иммунного анализа с использованием одного или более антител, которые специфически связываются с белком GDF-15 или с его фрагментом, в частности, путем проведения ELISA. В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень экспрессии белка GDF-15 измеряют путем проведения электрофореза в 2D-геле. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, экспрессию GDF-15 анализируют путем измерения уровня белка GDF-15 в биологическом образце. Уровень белка GDF-15 может быть проанализирован с помощью антитела, которое связывается с белком GDF-15 или с его фрагментом.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к ингибитору Mdm2 для применения в лечении рака у индивидуума, где указанное лечение включает:

(i) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума до введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(ii) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума после введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(iii) сравнение уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения; и

(iv) изменение курса лечения указанного индивидуума, если уровнь экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 25%, а предпочтительно, по меньшей мере на 50% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения; или

(v) проведение курса лечения указанного индивидуума указанным ингибитором Mdm2 без изменений, если уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения менее, чем на 50%, а предпочтительно, менее, чем на 25% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения.

В одном из вариантов осуществления изобретения, уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 25%, а предпочтительно, по меньшей мере на 50% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения, что свидетельствует о повышении вероятности развития тромбоцитопении.

В другом варианте осуществления изобретения, уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 100% или по меньшей мере на 150% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения, что свидетельствует о повышении вероятности развития тромбоцитопении.

В одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к ингибитору Mdm2 для применения в лечении рака у индивидуума, где указанное лечение включает:

(i) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума до введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(ii) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума после введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(iii) сравнение уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения; и

(iv) изменение курса лечения указанного индивидуума, если уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 75%, а предпочтительно, по меньшей мере на 100%, а более предпочтительно, по меньшей мере на 150% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения; или

(v) проведение курса лечения указанного индивидуума указанным ингибитором Mdm2 без изменений, если уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения менее, чем на 150%, а предпочтительно, менее, чем на 100%, а более предпочтительно, по меньшей мере на 75% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения.

В одном из вариантов осуществления изобретения, используемые здесь термины «лечить», «лечение» или «терапия» любого заболевания или расстройства относятся к облегчению тяжести заболевания или расстройства (т.е., к замедлению или прекращению или ослаблению развития заболевания или, по меньшей мере, одного из его клинических симптомов). В другом варианте осуществления изобретения, термины «лечить», «лечение» или «терапия» относятся к уменьшению или к снижению по меньшей мере одного физического параметра, включая параметры, которые могут быть не замечены самим пациентом. В еще одном варианте осуществления изобретения, термины «лечить», «лечение» или «терапия» относятся к изменению течения заболевания или расстройства, либо физически (например, стабилизации детектируемого симптома), либо физиологически (например, стабилизации физического параметра), либо того и другого. В еще одном варианте осуществления изобретения, термины «лечить», «лечение» или «терапия» относятся к предупреждению или замедлению начала развития, либо развития или прогрессирования заболевания или расстройства.

Термин «рак» означает раковые заболевания, включая, например, рак молочной железы, легких, поджелудочной железы, яичника, центральной нервной системы (ЦНС), эндометрия, желудка, толстой кишки, ободочной кишки, пищевода, кости, мочевых путей, кроветворной системы, лимфоидной системы, печени, кожи; меланому; рак почек; саркому мягких тканей; и рак плевры.

В одном варианте осуществления изобретения, изменение лечения включает изменение схемы введения указанного ингибитора Mdm2 индивидууму и/или введение средств для снижения влияния ингибитора Mdm2 на тромбоциты. В еще одном варианте осуществления изобретения, изменение лечения включает уменьшение дозы указанного ингибитора Mdm2, и/или уменьшение частоты введения указанного ингибитора Mdm2, и/или лекарственные каникулы и/или полное прекращение лечения. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, способ уменьшения влияния ингибитора Mdm2 на тромбоциты при лечении включает переливание тромбоцитов. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, способ уменьшения влияния ингибитора Mdm2 на тромбоциты включает введение агониста рецептора тромбопоэтина, где указанным агонистом рецептора тромбопоэтина является элтромбопаг. Элтромбопаг (rINN, кодовое название SB-497115-GR, торговые знаки: Promacta, Revolade) представляет собой низкомолекулярный агонист рецептора c-mpl (TpoR), который представляет собой физиологическую мишень, направленную на гормон тромбопоэтин.

В другом варианте осуществления изобретения, изменение лечения включает прекращение лечения указанным ингибитором Mdm2. В еще одном варианте осуществления изобретения, изменение лечения включает «лекарственные каникулы». Используемый здесь термин «лекарственные каникулы», иногда также называемый перерывом в приеме лекарственных средств, перерывом в мекаментозном лечении, прерыванием основной схемы лечения или прерыванием стратегического лечения, относится к прекращению лечения в течение определенного периода времени от нескольких дней до нескольких месяцев или нескольких лет. В одном варианте осуществления изобретения, «лекарственные каникулы» представляет собой прерывание лечения ингибитором Mdm2 на 1 неделю, 2 недели, 3 недели или 4 недели.

В одном из вариантов осуществления изобретения, биологическим образцом являются клетка, ткань, кровь, плазма, сыворотка, моча, жидкость для полоскания рта, кал, слюна и их комбинации. В другом варианте осуществления изобретения, биологическим образцом является кровь, плазма, сыворотка или моча. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, биологическим образцом является кровь.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к набору для использования в целях предсказания вероятности развития у пациента, страдающего раком, тромбоцитопении в ответ на непрерывное лечение ингибитором Mdm2, где указанный набор включает:

(i) по меньшей мере один зонд, способный детектировать экспрессию GDF-15; и

(ii) инструкции по использованию зонда для анализа биологического образца, взятого у пациента, на экспрессию GDF-15, где:

(а) по меньшей мере 25%-ное увеличение, а более предпочтительно, по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 после введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2 указанному пациенту свидетельствует о повышении вероятности того, что у указанного пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное лечение указанной дозой ингибитора Mdm2 и

(b) менее чем 50%-ное увеличение, более предпочтительно менее чем 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 после введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2 указанному пациенту свидетельствует о снижении вероятности того, что у указанного пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное лечение указанной дозой ингибитора Mdm2.

Используемый здесь термин «предсказание» означает, что лечащий врач с применением описанных здесь способов может получить информацию, позволяющую определить повышенную вероятность развития у индивидуума, подвергаемого лечению, тромбоцитопении. Этот термин не относится к предсказанию такого ответа со 100%-ной точностью. Скорее всего он указывает на способность специалиста прогнозировать увеличение вероятности.

В одном из вариантов осуществления изобретения, набор содержит зонд, который представляет собой олигонуклеотид, специфически гибридизующийся с областью нуклеиновой кислоты, кодирующей GDF-15, или антитело, которое связывается с белком GDF-15.

В еще одном своем аспекте, настоящее изобретение относится к набору для использования в целях лечения пациента, страдающего раком, где указанный набор включает:

(i) терапевтически эффективное количество ингибитора Mdm2;

(ii) по меньшей мере один зонд, способный детектировать экспрессию GDF-15;

(iii) инструкции по использованию зонда для анализа биологического образца, взятого у пациента, на экспрессию GDF-15, и

(iv) инструкции по введению этих средств пациенту, если в биологическом образце, взятом у пациента после введения указанному пациенту терапевтически эффективного количества ингибитора Mdm2, наблюдалось по меньшей мере 25%-ное увеличение, а более предпочтительно, по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 по сравнению с уровнем экспрессии GDF-15 в образце до введения этого ингибитора указанному пациенту.

В одном из вариантов осуществления изобретения, набор содержит зонд, который представляет собой олигонуклеотид, специфически гибридизующийся с областью нуклеиновой кислоты, кодирующей GDF-15, или антитело, которое связывается с белком GDF-15.

Если аспекты настоящего изобретения относятся к применению в медицине или к способу лечения, включающему введение активного фармацевтического ингредиента (API, например, ингибитора Mdm2, агониста рецептора тромбопоэтина) и показания (например, рака, тромбоцитопении), то эти аспекты могут быть сформулированы в следующих альтернативных форматах:

[API] для использования в лечении [ПОКАЗАНИЯ].

Способ лечения [ПОКАЗАНИЯ] у пациентов, нуждающихся в таком лечении, который включает введение эффективного количества [API].

[API] для приготовления лекарственного препарата для лечения [ПОКАЗАНИЯ].

Лекарственный препарат для лечения [ПОКАЗАНИЯ], содержащий [API].

Кроме того, было неожиданно обнаружено, что экспрессия GDF-15 указывают не только на вероятность развития у пациента, страдабщего раком, тромбоцитопении, но также и на вероятность развития у пациента, страдающего раком, нейтроцитопении, то есть, аномально низкой концентрации нейтрофилов, например, числа нейтрофилов менее, чем 1,5 × 10⁹ клеток/л [см., Hsieh MM, et al. (April 2007): «Prevalence of neutropenia in the U.S. population: age, sex, smoking status, and ethnic differences». Ann. Intern. Med. 146 (7): 486-92].

Настоящее изобретение, разработанное на основе этого неожиданного открытия, также позволяет охватить все описанные здесь аспекты, относящиеся к тромбоцитам/числу тромбоцитов/тромбоцитопении, а также соответствующий альтернативный вариант, относящийся к нейтрофилам/числу нейтрофилов/нейтропении.

В нижеследующих примерах проиллюстрировано раскрытие описанного выше изобретения, однако, эти примеры не должны рассматриваться как ограничение объема изобретения. Другие тестируемые модели, известные специалистам в данной области, также позволяют определить преимущественные эффекты заявленного изобретения.

Примеры

Пример 1

Метод:

Пациентам вводили (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-l-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-l,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он (Соединение А). Схема введения доз включала введение дозы 10-500 мг три раза в неделю (3QW) путем непрерывного введения или введения в течение 2 недель с перерывом в 1 неделю. Пробы сыворотки брали у каждого индивидуума до введения дозы и через 0,5-6 часов после введения дозы в первый день лечения.

Уровень экспрессии GDF-15 в сыворотке измеряли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA; R&D Systems kit DGD150).

Клинические данные (включая число тромбоцитов) брали у всех пациентов в течение всего курса лечения.

Максимальный период наблюдения составлял 448 дней по имеющимся данным тромбоцитов.

Результаты:

На фигуре 1, на примере одного пациента, представлен типичный наблюдаемый и индивидуально предсказанный временной профиль числа тромбоцитов у пациента, которому вводили (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он 3 раза в неделю по непрерывной схеме введения доз. Эта модель также включает любые перерывы во введении доз через 4 недели, а также влияние переливания тромбоцитов. На графике, представленном на фиг. 1, первое введение проводили на 400 ч. На фигуре 2, так же, как и на фигуре 1, на примере того же самого пациента проиллюстрирован наблюдаемый и индивидуально предсказанный временной профиль уровня белка GDF-15 у пациента, которому вводили (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он 3 раза в неделю по непрерывной схеме введения доз.

Был проведен предварительный анализ данных влияния (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она на уровень GDF-15 и число тромбоцитов у 21 пациента, которым непрерывно три раза в неделю перорально вводили (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он. Данные проведенного анализа представлены на графике на фигуре 3. На этом графике, каждая точка соответствует отдельному пациенту. На оси Х представлено увеличение процентного изменения (%) уровня GDF-15 на 1-й день цикла 1 от базового значения. На оси Y показано самое низкое наблюдаемое число тромбоцитов у того же самого пациента во время курса лечения. Как показано на этом графике, увеличение уровней GDF-15 более, чем на 25% от базового значения, ассоциируется с более высокой вероятностью снижения числа тромбоцитов до значения ниже 150 г/л (тромбоцитопения 1-й степени CTCAE V4).

Пример 2

Метод:

Такой подход позволяет проанализировать данные, полученные при неоднородной схеме введения доз и в различное время взятия образцов GDF-15. Была разработана ФК/ФД-модель, полностью описывающая зависимость концентрации лекарственного средства, уровней GDF-15 и числа тромбоцитов (PLT) от времени проведения курса лечения. Из-за высокой вариабельности между индивидуумами, весь анализ моделирования проводили в случае нелинейного моделирования смешанных эффектов.

- Взаимосвязь между концентрацией лекарственного средства (ФК) и кинетикой GDF-15 была описана на непрямой модели ответа при стимуляции продуцирования (тип III, Br., J. Clin. Pharmacol., 1998; 45: 229-239). С применением такого подхода была оценена индивидуальная активность лекарственного средства в отношении продуцирования GDF-15 slG_i.

- Взаимосвязь между ФК и PLT во время курса лечения была описана на ФК/ФД-модели, имитирующей гемопоэз (Friberg 1. et al. J. Clin. Oncol. 2002 Dec. 15;20(24):4713-21.). Эта модель включает локальную и системную регуляцию продуцирования PLT с учетом числа событий переливания тромбоцитов как числа вливаний в компартменте циркулирующих тромбоцитов. Была оценена индивидуальная активность лекарственного средства в отношении продуцирования незрелых гемопоэтических клеток slP_i.

Данные, используемые для создания ФК/ФД-модели:

Пациентам вводили (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-l-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-l,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он. Для ФК/ФД-моделирования тромбоцитопении было взято всего 45 индивидуумов. Дозы вводили в пределах от 10 до 500 мг 3 раза в неделю (3QW) с непрерывным введением доз или введением дозы 2 раза в неделю с перерывом в одну неделю. Пробы сыворотки брали у каждого индивидуума до введения дозы и через 0,5-8 часов после введения дозы на C1D1, C1D8 и C2D1. Уровни белка GDF-15 в сыворотке измеряли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA; R&D Systems kit DGD150). Клинические данные (включая число тромбоцитов) брали у всех пациентов в течение всего курса лечения. Максимальный период наблюдения составлял 448 дней по имеющимся данным тромбоцитов.

Результаты:

ФК/ФД-модель описана на фигурах 4 и 5, а код модели представлен в приложении A1.

На фигуре 5 схематически представлена ФК/ФД-модель, используемая для описания кинетики GDF-15. Tlag и kа означают параметры задержки и скорости всасывания лекарственного средства первого порядка, соответственно. kl2 и k21 означают межкомпартментные скорости, ke означает скорость выведения, а Vm и km означают параметры элиминации Михаэлиса-Ментена. kout означает скорость преобразования модели непрямого ответа, а kin означает продуцирование нулевого порядка. V означает кажущийся объем центрального компартемента, а Qc/V означает концентрацию лекарственного средства.

На фигуре 4 представлена ФК/ФД-модель, используемая для описания кинетики тромбоцитов. ММТ означает среднее время созревания, Е([C]) означает зависимость эффекта лекарственного средства от концентрации лекарственного средства. Компартмент Circ. представляет циркулирующие тромбоциты, Prol. - пролифирирующие незрелые клетки, а A2, A3, A4 - компартменты созревания. Связь между оцениваемыми активностями лекарственных средств в отношении GDF-15 и костного мозга была впервые исследована путем построения графика зависимости slG_i (индивидуальной активности лекарственного средства в отношении продуцирования GDF-15 slG_i) от slP_i (индивидуальной активности лекарственного средства в отношении незрелых гемопоэтических клеток).

На фигуре 6 показан предварительный результат оценки взаимосвязи между 2 параметрами, а именно, взаимосвязи между индивидуальной активностью лекарственного средства в отношении продуцирования GDF-15 (slG_i) и индивидуальной активностью лекарственного средства в отношении незрелых гемопоэтических клеток (slP_i). Этот анализ проводили на основе данных, полученных для 45 пациентов.

Ниже в приложении Al представлено репрезентативное описание ФК/ФД-модели. Все модели были получены с использованием нелинейной компьютерной программы моделирования смешанных эффектов MONOLIX (Ver. 4.3.2) (как описано, например, в публикации «Estimation of population pharmacokinetic parameters of saquinavir in HIV patients with the MONO1IX software. J Pharmacokinet Pharmacodyn. 2007 Apr;34(2):229-49. 1avielle M, Mentré F.» или http://www.lixoft.eu/).

Приложение A1: Код ФК/ФД-модели на языке MLXTRAN имеется в MONOLIX 4.3.2

DESCRIPTION: PKPD model PK, P1T and GDF-15

INPUT:

parameter={ka, V, ke, Vm, PKlag, P1Tz, MMTP, alp, SEP, slP, Sg, sPW, lPW, gdfZ, kinG, koutG, km, k12, k21}

PK:

compartment(cmt=1, amount=Ag)

compartment(cmt=2, amount=P5)

iv(adm=1, cmt=1, Tlag=PKlag)

Tk0=0.5

oral(adm=2, cmt=2, Tk0, p=alp)

EQUATION:

hv=1

odeType=stiff

t0=0

; PK model

Cc=max(1e-16,Ac/V)

ddt_Ag=-ka*Ag

ddt_Ac=ka*Ag - ke*Ac -k12*Ac+k21*Ad -(Vm^hv)/((km*V)^hv+Ac^hv)*Ac

ddt_Ad=k12*Ac - k21*Ad

; P1T MODE1

ktrP=4/MMTP

phiP=ktrP

EP=slP * Cc ^SEP

sfbkP=(P1Tz/P5)^sPW

lfbkP =(P1Tz*phiP/ktrP/P1)^lPW

P1_0=P1Tz*phiP/ktrP

P2_0=P1Tz*phiP/ktrP

P3_0=P1Tz*phiP/ktrP

P4_0=P1Tz*phiP/ktrP

P5_0=P1Tz

ddt_P1=ktrP*(sfbkP-EP)*P1 - ktrP*P1

ddt_P2=ktrP*lfbkP *P1 - ktrP*P2

ddt_P3=ktrP*lfbkP *P2 - ktrP*P3

ddt_P4=ktrP*lfbkP *P3 - ktrP*P4

ddt_P5=ktrP*lfbkP *P4 - phiP*P5

;GDF-15 model

Egdf=Sg*Cc

kin=kinG;koutG*gdfZ

gdf_0=gdfZ

ddt_gdf=kin*(1+Egdf) - koutG*gdf

OUTPUT:

output={Cc, P5, gdf}

Пример 3

Как описано выше, ФК/ФД-модель тромбоцитопении была использована для установления взаимосвязи между активностью лекарственного средства, а именно, соединения А, в отношении GDF-15 и костного мозга. Такой подход дополнительно подтверждает важную роль GDF-15 как биомаркера в улучшении достаточно раннего прогнозирования медикаментозной тромбоцитопении замедленного типа, что позволяет вовремя принять нужные меры для минимизации тромбоцитопении или ее полного предотвращения. Эти данные также подтверждают мнение, что подобная корреляция между GDF-15 и тромбоцитопенией, индуцированной лекарственным средством, будет существовать и в случае других ингибиторов MDM2, включая (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он. Принимая во внимание данные исследования соединения А, описанный аналогичный подход может быть использован в качестве руководства, которое можно было бы применить и в случае других ингибиторов MDM2. Так, например, при использовании другого ингибитора Mdm2, корреляция между относительным увеличением уровня экспрессии GDF-15 у индивидуума после введения дозы ингибитора Mdm2 (то есть, уровня экспрессии GDF-15 в образце после введения, взятом у индивидуума) по сравнению с базовым уровнем экспрессии GDF-15 у того же самого индивидуума (то есть, уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения, взятом у индивидуума) и вероятностью развития тромбоцитопении у того же самого индивидуума может быть достигнута путем проведения следующих стадий:

1) получения биологического образца, взятого у указанного индивидуума до введения указанного ингибитора Mdm2;

2) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения;

3) введения дозы указанного другого ингибитора Mdm2 индивидууму;

4) получения биологического образца, взятого у индивидуума после введения указанного ингибитора Mdm2;

5) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце после введения;

6) выбора ФK-модели, специфичной для указанного ингибитора Mdm2 и описывающей индивидуальный профиль ФK;

7) установления ФК/ФД-взаимосвязи с помощью описания влияния указанного ингибитора Mdm2 на зависимое от времени число тромбоцитов (PLT) с использованием полумеханистической модели с цепью из пяти компартментов, воспроизводящих процесс созревания гемопоэтических клеток (как это было описано для соединения А в Приложении Al), с сохранением некоторых ФД-параметров в модели, таких как базовый уровень тромбоцитов и время их созревания, а также их параметров обратной связи, используемых в модели соединения А. Активность лекарственного средства будет специфичной для нового препарата и оценивается исходя из имеющейся модели. Схема введения доз ингибитора Mdm2 рассматривается в описании ФК/ФД-модели;

8) установления ФК/ФД-взаимосвязи для GDF-15. Структура и физиологические параметры (базовый уровень GDF-15, скорость преобразования) должны быть такими же, как в модели соединения А. Активность лекарственного средства в отношении продуцирования GDF-15 и тромбоцитов считывают из этой модели как фиксированные величины, которые являются специфичными для данного Mdm2i и не зависят от схемы введения доз;

9) установления корреляции между активностью лекарственного средства в отношении продуцирования тромбоцитов и индивидуальных параметров GDF-15 для определения увеличения уровня экспрессии GDF-15 (на ранней стадии), необходимого для предсказания тромбоцитопении замедленного типа. Кроме того, активность лекарственного средства по отношению GDF-15 может рассматриваться также при оценке влияния препарата на продуцирование PLT в целях сокращения вариабельности действия лекарственного средства на PLT у различных индивидуумов.

В конечном счете, созданная ФК/ФД-модель должна быть использована для определения соответствующего уменьшения доз или любых мер по предотвращению тромбоцитопении.

Каждый специалист в этой области должен быть знаком с общим руководством по созданию ФK и ФК/ФД-модели, например, в отношении минимального числа экспериментальных точек и, таким образом, пациентов, которые необходимы для построения удовлетворительной модели, или по определению зависимости требуемого числа экспериментальных точек (то есть, пациентов) от изменчивости набора данных или от токсичности лекарственного средства (то есть, зависимости от уровня изменений числа PLT или дифференциальной экспрессии GDF-15). Выбранная ФК-модель должна наилучшим образом представлять ФК-профиль соответствующего ингибитора Mdm2. Специалист в данной области имеет достаточную компетенцию для подготовки ФK-модели данного фармацевтического соединения, а в данном случае, ингибитора Mdm2, в частности, (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-она или его соли. Общие принципы создания ФК-модели можно найти в публикации «Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Data Analysis: Concepts and Applications», Fourth Edition, 2007, Swedish Pharmaceutical Press, by Johan Gabrielsson and Daniel Weiner.

Пример 4

Максимальное изменение числа тромбоцитов (фмг.7), числа нейтрофилов (фиг.8) и уровней GDF-15 было определено у пациентов с солидными опухолями, которым вводили соединение формулы I, то есть, (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он, в первый день трехнедельного цикла (в данном описании также называемого схемой 1A или q3w) в дозах 12,5 мг (А), 25 мг (B), 50 мг (С), 100 мг (D), 200 мг (Е), 250 мг (F), 350 мг (G), или на первый и восьмой дни 4-недельного цикла (в данном описании также называемого схемой 1B) в дозе 120 мг (I). На левых графиках показано максимальное изменение числа тромбоцитов и кратное изменение уровня GDF-15, измеренного на день 1 первого цикла (C1D1). На правых графиках показано максимальное изменение числа тромбоцитов и кратное изменение уровня GDF-15.

Число тромбоцитов/нейтрофилов было определено до введения первой дозы (базовой) и на дни 1, 7 и 15 первого и второго цикла схемы 1A (A-G) или на дни 1, 8, 14, 22 первого и второго цикла 1B (I), а затем было выбрано максимальное значение изменения числа тромбоцитов по сравнению с базовым уровнем. Величина «изменения числа тромбоцитов/нейтрофилов» была вычислена как величина, полученная после введения за вычетом базовой величины и выражена как число тромбоцитов/нейтрофилов на микролитр крови.

Уровень GDF-15 был определен до введения первой дозы (базового уровня, ClDl до введения дозы) и через 24 часа после введения первой дозы в первый день первого цикла (ClDl, через 24 часа после введения дозы) и через 24 часа после введения дозы в первый день второго цикла (C2D1, через 24 часа после введения дозы) по схеме 1А (А-G) и по схеме 1B (I). Для схемы 1B было дополнительно определено еще одно значение GDF-15 через 8 часов после введения дозы на 8-й день первого цикла (C1D8, через 8 часов после введения дозы). Термин «кратное изменение GDF-15 ClDl» определяют как ClDl через 24 часа после введения дозы/ ClDl до введения дозы. Термин «максимальное кратное изменение GDF-15» определяют как максимальную величину после введения дозы, деленную на величину ClDl до введения дозы.

Это свидетельствует о том, что увеличение уровня биомаркера GDF-15 коррелирует с уменьшением числа тромбоцитов и нейтрофилов в процессе лечения соединением формулы I. Эта корреляция наблюдалась уже при значениях ClDl GDF-15, определенных через 24 часа после введения первой дозы соединения формулы I (см. левые графики на фиг. 7 и фиг. 8). Следовательно, увеличение значений GDF-15 на ранней стадии лечения ингибитором Mdm2 является показателем уменьшения числа тромбоцитов и нейтрофилов во время указанного лечения.

Группа изобретений относится к области медицины и предназначена для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 у индивидуума, страдающего раком. В качестве биомаркера безопасности для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 применяют GDF-15. Для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 у индивидуума осуществляют: (i) получение биологического образца, взятого у указанного индивидуума до введения ингибитора Mdm2; (ii) определение уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения; (iii) введение дозы ингибитора Mdm2 индивидууму; (iv) получение биологического образца, взятого у индивидуума после введения указанного ингибитора Mdm2; (v) определение уровня экспрессии GDF-15 в образце после введения; и (vi) сравнение уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения. При увеличении уровня экспрессии GDF-15 на по меньшей мере 25% в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения судят о повышении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2. Кроме того, представлено применение ингибитора Mdm2 в лечении рака у индивидуума, где либо изменяют курс лечения указанного индивидуума, если уровнь экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 25% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения; либо проводят курс лечения указанного индивидуума указанным ингибитором Mdm2 без изменений, если уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения менее чем на 25% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения. Также, обеспечены наборы для предсказания вероятности развития у пациента, страдающего раком, тромбоцитопении в ответ на лечение дозой ингибитора Mdm2, и для лечения паципента, страдающего раком. Использование группы изобретений позволяет предсказать повышение вероятности развития у пациента тромбоцитопении в ответ на введение ингибитора Mdm2, а также скорректировать схему лечения пациента, страдающего раком. 6 н. и 32 з.п. ф-лы, 4 пр., 8 ил.

1. Применение GDF-15 в качестве биомаркера безопасности для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2.

2. Способ ex vivo для определения токсикологического эффекта ингибитора Mdm2 у индивидуума in vivo, где указанный способ включает стадии:

(i) получения биологического образца, взятого у указанного индивидуума до введения указанного ингибитора Mdm2;

(ii) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения;

(iii) введения дозы указанного ингибитора Mdm2 индивидууму;

(iv) получения биологического образца, взятого у индивидуума после введения указанного ингибитора Mdm2;

(v) определения уровня экспрессии GDF-15 в образце после введения;

(vi) сравнения уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения,

где по меньшей мере 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о повышении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2.

3. Способ по п. 2, где определяют вероятность развития тромбоцитопении у указанного индивидуума в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2.

4. Способ по п. 2 или 3, где менее чем 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о снижении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2.

5. Способ по любому из пп. 2-4, где по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 в указанном образце после введения по сравнению с указанным образцом до введения свидетельствует о повышении вероятности того, что у пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное введение указанной дозы ингибитора Mdm2.

6. Применение ингибитора Mdm2 в лечении рака у индивидуума, где указанное применение включает:

(i) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума до введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(ii) измерение уровня экспрессии GDF-15 в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума после введения указанному индивидууму дозы ингибитора Mdm2;

(iii) сравнение уровня экспрессии GDF-15 в образце до введения с уровнем экспрессии GDF-15 в образце после введения; и

(iv) изменение курса лечения указанного индивидуума, если уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 25% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения; или

(v) проведение курса лечения указанного индивидуума указанным ингибитором Mdm2 без изменений, если уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения менее чем на 25% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения.

7. Применение по п. 6, где указанное изменение лечения включает изменение схемы введения указанного ингибитора Mdm2 индивидууму и/или введение указанного средства для снижения влияния ингибитора Mdm2 на тромбоциты.

8. Применение по п. 6 или 7, где указанное изменение лечения включает снижение дозы указанного ингибитора Mdm2 и/или уменьшение частоты введения указанного ингибитора Mdm2.

9. Применение по п. 6 или 8, где способ уменьшения влияния ингибитора Mdm2 на тромбоциты включает переливание тромбоцитов, и/или введение тромбопоэтина, и/или введение агониста рецептора тромбопоэтина, а предпочтительно переливание тромбоцитов.

10. Применение по любому из пп. 6-9, где способ уменьшения влияния ингибитора Mdm2 на тромбоциты включает введение агониста рецептора тромбопоэтина, и где указанным агонистом рецептора тромбопоэтина является элтромбопаг.

11. Применение по любому из пп. 6-10, где указанное изменение лечения включает прерывание лечения указанным ингибитором Mdm2.

12. Применение по любому из пп. 6-10, где указанное изменение лечения включает «лекарственные каникулы».

13. Способ по любому из пп. 2-5 или применение по любому из пп. 6-12, где указанный образец, взятый после введения, получают в течение периода времени приблизительно от 30 минут до приблизительно 24 часов, предпочтительно приблизительно от 1 часа до приблизительно 12 часов, приблизительно от 2 часов до приблизительно 12 часов, приблизительно от 3 часов до приблизительно 12 часов, приблизительно от 4 часов до приблизительно 8 часов, приблизительно от 5 часов до приблизительно 8 часов, приблизительно от 5 часов до приблизительно 7 часов, приблизительно от 6 часов до приблизительно 7 часов после введения ингибитора Mdm2.

14. Способ по п. 13 или применение по п. 12, где указанный образец, взятый после введения, получают приблизительно через 30 минут, приблизительно через 1 час, приблизительно через 2 часа, приблизительно через 3 часа, приблизительно через 4 часа, приблизительно через 5 часов, приблизительно через 6 часов, приблизительно через 7 часов, приблизительно через 8 часов, приблизительно через 10 часов, приблизительно через 12 часов, приблизительно через 24 часа после введения ингибитора Mdm2.

15. Способ по п. 14 или применение по п. 13, где указанный образец, взятый после введения, получают приблизительно через 3 часа после введения ингибитора Mdm2.

16. Способ по п. 14 или применение по п. 13, где указанный образец, взятый после введения, получают приблизительно через 6 часов после введения ингибитора Mdm2.

17. Способ по п. 14 или применение по п. 13, где указанный образец, взятый после введения, получают приблизительно через 12 часов после введения ингибитора Mdm2.

18. Способ по любому из пп. 2-5, 13-17 или применение по любому из пп. 6-17, где указанную экспрессию GDF-15 анализируют путем измерения уровня транскрипции гена GDF-15.

19. Способ по п. 18 или применение по п. 18, где указанную экспрессию гена GDF-15 анализируют посредством олигонуклеотидного зонда, который специфически гибридизуется с областью нуклеиновой кислоты, кодирующей GDF-15.

20. Способ по любому из пп. 2-5, 13-17 или применение по любому из пп. 6-17, где указанную экспрессию GDF-15 анализируют путем измерения уровня белка GDF-15 в биологическом образце.

21. Способ по п. 20 или применение по п. 20, где указанный уровень белка GDF-15 анализируют с помощью антитела, которое связывается с белком GDF-15.

22. Способ по п. 20 или 21 или применение по п. 20 или 21, где биологическим образцом является кровь, плазма, сыворотка или моча.

23. Способ по п. 20 или 21 или применение по п. 20 или 21, где биологическим образцом является кровь.

24. Способ по любому из пп. 2-5, 13-23 или применение по любому из пп. 6-23, где уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения, по меньшей мере на 75%, 100% или 150% превышающий уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения, свидетельствует о повышении вероятности развития тромбоцитопении.

25. Набор для предсказания вероятности развития у пациента, страдающего раком, тромбоцитопении в ответ на лечение дозой ингибитора Mdm2, включающий:

(i) по меньшей мере один зонд, способный детектировать экспрессию GDF-15; и

(ii) инструкции для применения зонда для анализа биологического образца, взятого у пациента, на экспрессию GDF-15, где:

(а) по меньшей мере 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 после введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2 указанному пациенту свидетельствует о повышении вероятности того, что у указанного пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на лечение указанной дозой ингибитора Mdm2, и

(b) менее чем 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 после введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2 указанному пациенту свидетельствует о снижении вероятности того, что у указанного пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное лечение указанной дозой ингибитора Mdm2.

26. Набор по п. 25, где по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 после введения указанной дозы указанного ингибитора Mdm2 указанному пациенту свидетельствует о повышении вероятности того, что у указанного пациента будет развиваться тромбоцитопения в ответ на непрерывное лечение указанной дозой ингибитора Mdm2.

27. Набор для лечения пациента, страдающего раком, включающий:

(i) терапевтически эффективное количество ингибитора Mdm2;

(ii) по меньшей мере один зонд, способный детектировать экспрессию GDF-15;

(iii) инструкции для применения зонда для анализа взятого у пациента биологического образца на экспрессию GDF-15, и

(iv) инструкции по введению этих средств пациенту, если в биологическом образце, взятом у пациента после введения указанному пациенту терапевтически эффективного количества ингибитора Mdm2, наблюдалось по меньшей мере 25%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 по сравнению с уровнем экспрессии GDF-15 в образце до введения этого ингибитора, полученном от указанного пациента.

28. Набор по п. 27, где указанный пациент имеет по меньшей мере 50%-ное увеличение уровня экспрессии GDF-15 по сравнению с уровнем экспрессии GDF-15 в образце до введения этого ингибитора, полученном от указанного пациента.

29. Набор по любому из пп. 25-28, где зонд представляет собой олигонуклеотид, который специфически гибридизуется с областью нуклеиновой кислоты, кодирующей GDF-15, или антитело, которое связывается с белком GDF-15.

30. Применение по п. 1, или способ по любому из пп. 2-5 или 12-24, или применение по любому из пп. 6-24, или набор по любому из пп. 25-29, где указанный ингибитор Mdm2 выбран из группы, состоящей из:

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(6-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}пиридин-3-ил)-l,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(6-{метил-[4-(3-метил-4-оксо-имидазолидин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}пиридин-3-ил)-l,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

(S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(5-{метил-[4-(3-метил-4-оксо-имидазолидин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}пиразин-2-ил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-она;

l-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2Н-изохинолин-3-она;

(S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-она;

4-[(S)-5-(3-хлор-2-фторфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-3-изопропил-6-оксо-3,4,5,6-тетрагидропирроло[3,4-d]имидазол-4-ил]бензонитрила;

(S)-5-(5-хлор-2-оксо-2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-она;

(S)-5-(3-хлор-4-фторфенил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-l-((R)-l-метоксипропан-2-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-d]имидазол-4(1H)-она;

и

(S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-d6-пиримидин-5-ил)-l-((R)-1-метоксипропан-2-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-d]имидазол-4(1H)-она; или фармацевтически приемлемой соли любого из вышеуказанных соединений.

31. Применение по п. 1, или способ по любому из пп. 2-5 или 12-24, или применение по любому из пп. 6-24, или набор по любому из пп. 25-29, где указанным ингибитором Mdm2 является (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-H-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он или его фармацевтически приемлемая соль.

32. Применение по п. 1, или способ по любому из пп. 2-5 или 12-24, или применение по любому из пп. 6-24, или набор по любому из пп. 25-29, где указанным ингибитором Mdm2 является (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2Н-изохинолин-3-он или его фармацевтически приемлемая соль.

33. Применение агониста рецептора тромбопоэтина в профилактике или лечении индуцированной лекарственным средством тромбоцитопении у индивидуума, у которого уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 25% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения,

где «экспрессия GDF-15 в образце до введения» означает экспрессию GDF-15, измеренную в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума до введения ему дозы лекарственного средства, которое может вызывать индуцированную лекарственным средством тромбоцитопению у указанного индивидуума; и

где «экспрессия GDF-15 в образце после введения» означает экспрессию GDF-15, измеренную в биологическом образце, взятом у указанного индивидуума после введения ему дозы лекарственного средства, которое может вызывать индуцированную лекарственным средством тромбоцитопению у указанного индивидуума.

34. Применение по п. 33, где уровень экспрессии GDF-15 в образце после введения по меньшей мере на 50% превышает уровень экспрессии GDF-15 в образце до введения.

35. Применение по п. 33 или 34, где лекарственным средством, которое может вызывать развитие медикаментозной тромбоцитопении, является ингибитор Mdm2.

36. Применение по любому из пп. 33-35, где агонистом рецептора тромбопоэтина является элтромбопаг.

37. Применение по любому из пп. 33-36, где ингибитором Mdm2 является (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметокси-пиримидин-5-ил)-l-изопропил-5,6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d]-имидазол-4-он или его фармацевтически приемлемая соль.

38. Применение по любому из пп. 33-36, где ингибитором Mdm2 является (S)-1-(4-хлорфенил)-7-изопропокси-6-метокси-2-(4-{метил-[4-(4-метил-3-оксо-пиперазин-1-ил)-транс-циклогексилметил]амино}фенил)-1,4-дигидро-2H-изохинолин-3-он или его фармацевтически приемлемая соль.