Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к 6-хлорбензоксазиновым соединениям, способам их получения, фармацевтическим композициям, содержащим 6-хлорбензоксазиновые соединения, и к их применению при лечении различных состояний или расстройств, таких как острый панкреатит и другие состояния или расстройства, опосредованные KMO.
Предпосылки создания изобретения
Кинуренин монооксигеназа (KMO) представляет собой флавин-аденин-динуклеотид (FAD) зависимой монооксигеназы, локализованной на внешней митохондриальной мембране. KMO известна в качестве окислителя L-кинуренина (KYN) в 3-гидроксикинуренине (3HK) в части основного пути катаболизма триптофана. 3HK затем преобразовывается в 3-гидроксиантраниловую кислоту и хинолиновую кислоту при помощи кинурениназы (KYNU) и 3-гидроксиантранилата 3,4-диоксигеназы (3-HAAO).
KMO представляет собой сверхэкспрессированные в тканях, включая печень, плаценту, почки [Alberati-Giani, FEBS Lett. 410:407-412(1997)], эндотелиальные клетки и моноциты, и на более низком уровне в микроглии и макрофагах головного мозга.
Повышенные уровни 3HK и хинолиновой кислоты и пониженные уровни кинуреновой кислоты (KYNA), которая формируется из кинуренина альтернативным путем, вовлечены в ряд заболеваний, включая болезнь Хантингтона, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (ALS) [Amaral, Outeiro et Al. Journal of Molecular medicine 2013: 91(6): 705-713] и острый панкреатит [Mole, McFerran et al. British Journal of Surgery 2008: 95: 855-867]. В ЦНС 3-HK и хинолиновая кислота показаны, как обладающие нейротоксичностью, и KYNA, как обладающая нейропротекторными эффектами. Ингибирование окислительной активности KMO, как предполагается, может привести к понижению уровней 3-HK и хинолиновой кислоты и повышению уровней KYNA, и потенциально показать преимущество при этих заболеваниях.
Существует большой объем доказательств, показывающий, что метаболизм триптофана также изменяется в диапазоне параметров острой травмы. Например, увеличение уровней кинуренина связано с развитием сепсиса после травмы [Pellegrin, 2005, Logters, 2009], вместе с тем, повышенные уровни кинуренина и 3-HK коррелирует с развитием недостаточности органа при остром панкреатите [Mole, McFerran et al. British Journal of Surgery 2008: 95: 855-867]. Такая разрегуляции метаболизма триптофана отчасти объясняется индуцированием индоламина 2,3 диоксигеназы (IDO, фермент, который преобразовывает триптофан в N-формилкинуренин)) в части воспалительного каскада, но появление развития дисфункции органа зависит от уменьшения метаболитов [Mole, McFerran et al. British Journal of Surgery 2008: 95: 855-867].
Острый панкреатит (AP) в результате местной травмы органа, зависит от таких факторов, как чрезмерное потребление алкоголя или желчекаменная болезнь. Возникшая боль в животе является крайне тяжелой, и пациентов неизменно направляют в отделение неотложной помощи непосредственно сразу после начала обострения, при подъеме сывороточной амилазы, используемой в качестве диагностика. В большинстве случаев, данное заболевание является самоизлечивающимся, и боль проходит в течение 24-36 часов. Однако у оставшихся 20-30% пациентов происходит системная воспалительная реакция, что приводит к быстрому прогрессированию полиорганной недостаточности (MOD). Это приводит к длительному пребыванию в отделении интенсивной терапии (в среднем 17 дней), с коэффициентом смертности более чем 30%. Несмотря на высокие нереализованные потребности и серьезность заболевания, отсутствуют доступные эффективные методы лечения с современной, полностью поддерживаемой стандартной клинической практикой.
В WO2013016488, WO2011091153, WO2010017132, WO2010017179, WO2010011302, WO2008022286 и WO2008022281 описаны ингибиторы KMO, направленные против нейродегенеративных расстройств или заболеваний; в EP1475385, EP1424333 описаны ингибиторы KMO, направленные против дегенеративных и воспалительных состояний. По-прежнему существует потребность в ингибиторах KMO для применения при лечении различных состояний или расстройств, опосредованных KMO, таких как острый панкреатит и другие состояния, связанные с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS).
В настоящее время обнаружен класс соединений, которые являются ингибиторами KMO. Ингибиторы KMO могут быть полезны при лечении различных состояний или расстройств, таких как, например, острый панкреатит и острые состояния, связанные с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS).
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):
(I)
где R1 и R2 являются такими, как определено ниже;
или их солям.
Некоторые соединения показаны в качестве ингибиторов KMO. Соединения, которые ингибируют KMO, могут быть полезны при лечении различных расстройств, например, острого панкреатита, хронической болезни почек, острой болезни почек, острой травмы почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности.
Соответственно, настоящее изобретение дополнительно направлено на способы лечения состояния или расстройства, опосредованного KMO, включающие введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Настоящее изобретение дополнительно направлено на фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый эксципиент.
Настоящее изобретение дополнительно направлено на соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для применения в терапии.
Настоящее изобретение дополнительно направлено на применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для лечения состояния или расстройства, опосредованного KMO.
Подробное описание изобретения
В первом аспекте предоставляются соединения формулы (I):
(I)
где
R1 представляет собой гетероарил, необязательно замещенный метилом, этилом, галогеном или =O; и
R2 представляет собой H, метил или этил,
или их соли.
В одном из вариантов осуществления R1 представляет собой 5-членный гетероарил, содержащий один атом азота или один атом кислорода и дополнительно содержащий атом азота, или 6-членный гетероарил, содержащий один, два или три атома азота, где указанный гетероарил необязательно замещен метилом, этилом, галогеном или =O.
В одном из вариантов осуществления R1 выбран из группы, состоящей из оксазолила, пиридинила, пиримидинила, пиридазинила и имидазолила, где оксазолил, пиридинил, пиримидинил и пиридазинил могут быть необязательно замещены метилом, этилом, хлором или фтором.
В одном из вариантов осуществления R1 выбран из группы, состоящей из оксазолила (необязательно замещенного метилом), пиридинила (необязательно замещенного метилом, этилом, хлором или фтором), пиримидинила (необязательно замещенного метилом или хлором), пиридазинила (необязательно замещенного метилом или хлором) и имидазолила.
В одном из вариантов осуществления R1 выбран из группы, состоящей из пиридин-2-ила, 6-метилпиридазин-3-ила, 5-метилпиримидин-2-ила, пиримидин-2-ила, имидазол-2-ила, 6-хлорпиридазин-3-ила, пиридазин-3-ила, 5-метилпиридин-2-ила, 5-хлорпиримидин-2-ила, 2-метилоксазол-5-ила, оксазол-2-ила, 5-хлорпиридин-2-ила, 5-этилпиридин-2-ил и 5-фторпиридин-2-ила.
В одном из вариантов осуществления R1 представляет собой пиридинил, необязательно замещенный метилом, этилом, хлором или фтором.
В одном из вариантов осуществления R1 представляет собой 2-пиридинил, необязательно замещенный метилом, этилом, хлором или фтором.
В одном из вариантов осуществления R1 представляет собой 5-хлорпиридин-2-ил.
В одном из вариантов осуществления R2 представляет собой метил.
В одном из вариантов осуществления R2 представляет собой этил.
В одном из вариантов осуществления R1 представляет собой 5-хлорпиридин-2-ил, и R2 представляет собой этил.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из:
(3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(2-метил-1,3-оксазол-5-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(1,3-оксазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(1H-имидазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-[6-хлор-3-оксо-7-(пиридин-2-илметокси)-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил]пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-хлорпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-фторпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридазин-3-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(6-метилпиридазин-3-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(6-метилпиридазин-3-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиридин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(5-хлорпиридин-2-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(5-метилпиридин-2-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-этилпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-хлорпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридазин-3-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты и
3-{6-хлор-7-[1-(6-метилпиридазин-3-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
или их соли.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из:
(R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(2-метил-1,3-оксазол-5-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-7-[1-(1,3-оксазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-7-[1-(1,3-оксазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(1H-имидазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-[6-хлор-3-оксо-7-(пиридин-2-илметокси)-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил]пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-метилпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-хлорпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-фторпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридазин-3-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(6-метилпиридазин-3-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(6-метилпиридазин-3-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-метилпиридин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(5-хлорпиридин-2-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(5-метилпиридин-2-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-этилпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-7-[1-(5-хлорпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-7-[1-(5-хлорпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридазин-3-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридазин-3-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-7-[1-(6-метилпиридазин-3-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты и
(S)-3-{6-хлор-7-[1-(6-метилпиридазин-3-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
или их соли, например, фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления соединение настоящего изобретения выбрано из группы, состоящей из:
(R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты;
2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
гидрохлорида 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(2S)-2-амино-5-карбамимидамидопентановая кислота; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(2S)-2,6-диаминогексановая кислота; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
бензил[2-(бензиламино)этил]амин; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
серная кислота; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
метансульфоновая кислота; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
4-метилбензол-1-сульфоновая кислота; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
бензил(2-фенилэтил)амин; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
бис(2-аминоэтил)амин; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(2R,3R,4R,5S)-6-(метиламино)гексан-1,2,3,4,5-пентол; 3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропаноата натрия;
2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол; 3-{6-хлор-7-[1-(2-метил-1,3-оксазол-5-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол; (R)-3-{6-хлор-7-[1-(1,3-оксазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол; (S)-3-{6-хлор-7-[1-(1,3-оксазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол; 3-{6-хлор-7-[1-(1H-имидазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол; (R)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол; (S)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-[6-хлор-3-оксо-7-(пиридин-2-илметокси)-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил]пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-метилпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-хлорпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-фторпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридазин-3-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(6-метилпиридазин-3-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(6-метилпиридазин-3-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-метилпиридин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[(1R)-1-(пиридин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(5-хлорпиридин-2-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(5-метилпиридин-2-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(1R)-1-(5-этилпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-7-[1-(5-хлорпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-7-[1-(5-хлорпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридазин-3-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(S)-3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридазин-3-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
(R)-3-{6-хлор-7-[1-(6-метилпиридазин-3-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты и
(S)-3-{6-хлор-7-[1-(6-метилпиридазин-3-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) представляет собой:
3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовую кислоту или ее соль.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) представляет собой:
3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) представляет собой:
3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовую кислоту.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) представляет собой:
3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовую кислоту в форме фармацевтически приемлемый соли.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) представляет собой:
(R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовую кислоту или ее соль.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) представляет собой:
(R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) представляет собой:
(R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовую кислоту.
В одном из вариантов осуществления соединение формулы (I) представляет собой:
(R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовую кислоту в форме фармацевтически приемлемой соли.
Термины и определения
Соединения формулы (I) и их соли называются в данном описании ʺсоединениями настоящего изобретенияʺ.
Термин ʺгалогенʺ или ʺгалоʺ, как использовано в данном описании, относится к фтору (F), хлору (Cl), брому (Br) или йоду (I). Примерами подходящих галогенов является фтор и хлор.
Термин ʺгетероарилʺ, как использовано в данном описании, относится к 5- или 6-членному ароматическому кольцу, которое содержит один или более (например, 1, 2 или 3) гетероатомов, независимо выбранных из кислорода, азота или серы. Например, когда ʺгетероарилʺ представляет собой 5-членное кольцо, данное кольцо содержит гетероатом, выбранный из кислорода, азота или серы, и необязательно может дополнительно содержать один, два или три атома азота. Когда ʺгетероарилʺ представляет собой 6-членное кольцо, данное кольцо может содержать один, два или три атома азота. Примеры таких 5- или 6-членных гетероарильных колец включают, но, не ограничиваясь ими, пирролил, триазолил, тиадиазолил, тетразолил, имидазолил, пиразолил, изотиазолил, тиазолил, изоксазолил, оксазолил, оксадиазолил, фуразанил, фуранил, тиенил, пиридил, пиримидинил, пиразинил, пиридазинил и триазинил.
'Энантиомерный избыток' (э.и.) представляет собой избыток одного энантиомера по сравнению с избытком другого в виде процента. При рацемической модификации, поскольку оба энантиомера присутствуют в равных количествах, энантиомерный избыток является нулевым (0% э.и.). Однако если энантиомерное обогащение одним энантиомером является таким, что оно составляет 95% продукта, то энантиомерный избыток будет составлять 90% э.и. (количество обогащенного энантиомера, 95%, за вычетом количества других энантиомеров, 5%).
'Энантиомерно обогащенный' относится к продуктам, у которых энантиомерный избыток (э.и.) превышает ноль. Например, 'энантиомерно обогащенный' относится к продуктам, у которых энантиомерный избыток составляет больше, чем 50% э.и., больше, чем 75% э.и. и больше, чем 90% э.и.
'Энантиомерно чистый относится к продуктам, у которых энантиомерный избыток составляет 99% или больше.
'Необязательно замещенный' означает замещенный или незамещенный.
Соединения настоящего изобретения способны образовывать аддитивные соли оснований. Такие соли могут быть образованы путем взаимодействия с подходящим основанием, необязательно в подходящем растворителе, таком как органический растворитель, с получением соли, которая может быть выделена кристаллизацией и фильтрованием.
Соединения настоящего изобретения также способны образовывать кислотно-аддитивные соли. Такие соли могут быть образованы путем взаимодействия с подходящей кислотой, необязательно в подходящем растворителе, таком как органический растворитель, с получением соли, которая может быть выделена кристаллизацией и фильтрованием.
Следует понимать, что ссылки в данном описании на соединения формулы (I) и их соли относятся к соединениям формулы (I) в виде свободных оснований, свободных кислот или в виде их солей, например, в виде фармацевтически приемлемых солей. Таким образом, в одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) в виде свободной кислоты. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) в виде свободного основания. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их солям. В следующем варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям.
Из-за их потенциально возможного применения в медицине следует иметь в виду, что для применения в медицине соли соединений настоящего изобретения должны быть фармацевтически приемлемыми. Фармацевтически приемлемые соли будут очевидны специалисту в данной области техники и включают такие, как описано в Berge, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19. Фармацевтически приемлемые аддитивные соли оснований включают, но, не ограничиваясь ими, аммониевые соли, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, и соли с органическими основаниями, включая соли первичных, вторичных и третичных аминов, таких как трет-бутиламин, циклогексмламин, диметиламин, триметиламин, диэтилтриамин, 2-амино-2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (TRIS), этаноламин, холин и N-метил-D-глюкамин. Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли включают, но, не ограничиваясь ими, гидрохлорид, гидробромид, нитрат, метилнитрат, сульфат, бисульфат, сульфамат, фосфат, ацетат, гидроксиацетат, фенилацетат, пропионат, бутират, изобутират, валерат, малеат, гидроксималеат, акрилат, фумарат, малат, тартрат, цитрат, салицилат, п-аминосалицилат, гликолат, лактат, гептаноат, фталат, оксалат, сукцинат, бензоат, o-ацетоксибензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, манделат, таннат, формат, стеарат, аскорбат, пальмитат, олеат, пируват, памоат, малонат, лаурат, глютарат, глутамат, эстолат, метансульфонат (мезилат), этансульфонат (эзилат), 2-гидроксиэтансульфонат, бензолсульфонат (безилат), п-аминобензолсульфонат, п-толуолсульфонат (тозилат), нафталин-2-сульфонат, этандисульфонат и 2,5-дигидроксибензоат.
В одном из вариантов осуществления данная соль представляет собой фармацевтически приемлемую соль.
Некоторые соединения настоящего изобретения могут содержать асимметрический центр (также называемый хиральным центром) и может, таким образом, существовать в виде индивидуального энантиомера или в виде их смеси. Где в формуле (I) или в любой химической структуре, проиллюстрированной в данном описании, присутствующая стереохимия хирального центра не указана, структура предназначена для охвата любых стереоизомеров и всех их смесей. Таким образом, соединения, соответствующие формуле (I), содержащие один или более хиральных центров, могут быть использованы в виде рацемических модификаций, включая рацемические смеси и рацематы, энантиомерно обогащенные смеси, или в виде энантиомерно чистых индивидуальных стереоизомеров. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает все геометрические и оптические изомеры таких соединений, и их смеси, включая рацематы. Настоящее изобретение также распространяется на любые таутомерные формы и их смеси.
Индивидуальные стереоизомеры соединений соответствующих формуле (I), которые содержат асимметрический центр, могут быть разделены способами, известными специалистам в данной области техники. Например, такое разделение может быть осуществлено (1) путем образования диастереоизомерных солей, комплексов или других производных; (2) селективного взаимодействия с стереоизомерно-специфическим реагентом, например, ферментативным окислением или восстановлением; или (3) путем газожидкостной или жидкостной хроматографии в хиральной окружающей среде, например, на хиральном носителе, таком как диоксид кремния, со связующим хиральным лигандом и в присутствии хирального растворителя. Следует иметь в виду, что при преобразовании требуемого стереоизомера в другую химическую структуру одним из методов разделения, описанных выше, требуется дополнительная стадия для выделения желаемой формы. Альтернативно, конкретные стереоизомеры могут быть синтезированы асимметрическим синтезом при использовании оптически активных реагентов, субстратов, катализаторов или растворителей, или путем преобразования одного энантиомера в другой асимметрическим превращением.
В одном аспекте предоставлено соединение формулы (I), где R2 не является H, и где (R) энантиомер присутствует в больше, чем 90% энантиомерном избытке (ʺэ.и.ʺ).
В одном из вариантов осуществления (R) энантиомер присутствует в больше, чем 95% э.и.
В одном из вариантов осуществления (R) энантиомер присутствует в больше, чем 99% э.и.
Настоящее изобретение включает в свой объем все возможные стехиометрические и нестехиометрические формы солей соединений формулы (I).
Некоторые соединения настоящего изобретения могут существовать в форме сольватов. Как использовано в данном описании, термин ʺсольватʺ относится к комплексу с переменной стехиометрией, сформированному растворенным веществом (в настоящем изобретении соединением формулы (I) или его солью) и растворителем. Такие растворители для целей настоящего изобретения не должны влиять на биологическую активность растворенного вещества. Примеры подходящих растворителей включают воду, метанол, этанол и уксусную кислоту. Если в качестве растворителя используется вода, сольват называется гидратом.
Далее следует иметь в виду, что некоторые соединения настоящего изобретения, которые существуют в кристаллической форме, включая различные их сольваты, могут проявлять полиморфизм (т.е. способность существовать в различных кристаллических структурах). Такие различные кристаллические формы обычно известны как 'полиморфы'. Настоящее изобретение включает такие полиморфы. Полиморфы имеют такой же самый химический состав, но отличаются упаковочным, геометрическим расположением и другими дескриптивными свойствами кристаллического состояния твердых веществ. Полиморфы, поэтому, могут обладать различными физическими свойствами, такими как форма, плотность, твердость, деформируемость, стабильность и растворимость. Полиморфы обычно демонстрируют различные точки плавления, ИК спектры и картину порошковой рентгеновской дифракции, которые могут быть использованы для идентификации. Следует иметь в виду, что различные полиморфы могут быть произведены, например, путем изменения или корректировки условий реакции или реактивов, используемых при получении соединения. Например, изменения температуры, давления или растворителя может в результате привести к полиморфам. Кроме того, в определенных условиях один полиморф может спонтанно преобразоваться в другой полиморф.
Соединения формулы (I) и их соли могут быть изотопно-меченными и, таким образом, идентичны соединениям настоящего изобретения, но у которых один или более атомов заменены атомом, атомная масса или массовое число отличается от атомной массы или массового числа, наиболее часто встречающегося в природе. Примерами изотопов, которые могут быть включены в соединения настоящего изобретения, являются изотопы водорода, углерода, азота, фтора, такие как 3H, 11C, 14C и 18F. Такие изотопно-меченные соединения полезны в распределительных анализах лекарственных средств и/или субстратов тканей. Например, 11C и 18F изотопы особенно полезны при ПЭТ (позитронно-эмиссионная томография). ПЭТ полезна в обследовании головного мозга. Изотопно-меченные соединения настоящего изобретения обычно могут быть получены путем осуществления методик, представленных ниже, путем замены немеченых изотопами реагентов легкодоступными изотопно-меченными реагентами.
Аббревиатуры
Получение соединений
Соединения формулы (I) (где R1 и R2 являются такими, как определено выше) могут быть синтезированы по существу согласно схеме реакций 1 из соответствующего эфира формулы (II) (где R представляет собой, например, метил или этил) опосредованным кислотой гидролизом или омылением. Эфир формулы (II) может быть получен обработкой алкил 3-(6-хлор-7-гидрокси-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноата спиртом формулы (IV) в условиях Митсонобу.
Схема реакций 1
Мезилат формулы (III) может быть синтезирован по существу согласно схеме реакций 2 из карбоновой кислоты формулы (VIII). Обработка карбоновой кислоты формулы (VIII) N,O-диметилгидроксиламином в присутствии подходящего агента сочетания, например, HOBT и EDCI, с получением амида Вайнреба формулы (VII), с последующей обработкой реактивом Гриньяра формулы (VI) приводит к кетону формулы (V). Восстановление кетона формулы (V) подходящим восстанавливающим агентом, например, боргидридом натрия, приводит к ахиральному спирту (IV), который может быть необязательно активирован, например, в виде мезилата формулы (III), путем введения подходящей активирующей группы, например, мезилатной, обработкой активирующим агентом, например, обработкой мезилхлоридом (MsCl), в подходящем растворителе, например, дихлорметане (ДХМ), с использованием подходящего основания, например, триэтиламина (Et3N), при подходящей температуре, например, окружающей температуре.
Схема реакций 2
Альтернативно, мезилат формулы (III) может быть синтезирован по существу согласно схеме реакций 3 обработкой цианосоединения формулы (IX) реактивом Гриньяра формулы (VII) в подходящем растворителе, например ТГФ, при подходящей температуре, например 0°C, с получением кетона или альдегида формулы (V).
Восстановление альдегида или кетона формулы (V) в ахиральных условиях, например, с использованием боргидрида натрия в подходящем растворителе, например метаноле, приводит к ахиральному спирту формулы (IV).
Восстановление кетона формулы (V) (R2 не является H) в хиральных условиях, например, при использовании R-CBS ((R)-3,3-дифенил-1-метилпирролидино[1,2-c]-1,3,2-оксазаборола) и боран-диметилсульфида в подходящем растворителе, например, ТГФ, приводит к хиральному спирту (IVA).
Хиральный спирт формулы (IV) или ахиральный спирт формулы (IVA) могут быть необязательно активированы, например, в виде соответствующего мезилата формулы (III) или формулы (IIIA), путем введения подходящей активирующей группы, например, мезилатной, обработкой активирующим агентом, например обработкой мезилхлоридом (MsCl), в подходящем растворителе, например, дихлорметане (ДХМ), с использованием подходящего основания, например, триэтиламина (Et3N), при подходящей температуре, например, окружающей температуре.
Схема реакций 3
Активированный спирт CH(R1)(R2)OMs формулы (III) или (IIIA) может быть синтезирован из рацемического спирта формулы (IV), полученного из восстановленного альдегида или кетона формулы (VI), по существу согласно схеме реакций 4 (для получения рацемически активированного спирта формулы (III)) или из хирального спирта формулы (IVA), полученного из хирально восстановленного кетона формулы (V), по существу согласно схеме реакций 5 (для получения по существу хирально чистого активированного спирта CH(R1)(R2)OMs формулы (IIIA)).
Схема реакций 4
Схема реакций 5
Алкиловый эфир формулы (II) также может быть получен обработкой алкил 3-(6-хлор-7-гидрокси-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноата активированным спиртом формулы (III) или (IIIA) в условиях алкилирования, в подходящем растворителе, например, ацетонитриле, в присутствии подходящего основания, например, карбоната калия.
Как будет очевидно специалисту в данной области техники, может быть необходима зашита реакционно-активных заместителей в ходе проведения некоторых, приведенных выше реакций. Могут быть использованы такие методики проведения стандартной защиты и снятия защиты, как описано в ʺGreene T.W. Protective groups in organic synthesis, New York, Wiley (1981)ʺ. Например, первичные амины могут быть защищены в виде фталимидных, трифторацетильных, бензильных, трет-бутилоксикарбонильных, бензилоксикарбонильных или тритильных производных. Группы карбоновых кислот могут быть защищены в виде их эфиров. Альдегидные или кетонные группы могут быть защищены в виде ацеталей, кеталей, тиоацеталей или тиокеталей. Удаление таких защитных групп осуществляют при использовании общепринятых методик, известных специалистам в данной области техники. Например, защитные группы, такие как трет-бутилоксикарбонил, могут быть удалены при использовании кислот, таких как хлористоводородная или трифторуксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, диэтиловый эфир, 1,4-диоксан, изопропанол или их смеси.
Для любых из описанных в данном описании реакций или процессов, могут быть использованы общепринятые методы нагревания или охлаждения, например регулирующие температуру масляные бани или регулирующие температуру нагревательные блоки, и лед/солевые бани или сухой лед/ацетоновые бани, соответственно. Могут быть использованы общепринятые методы выделения, например, экстракция из или в водные или неводные растворители. Могут быть использованы общепринятые методы сушки органических растворителей, растворов или экстрактов, такие как встряхивание с безводным сульфатом магния или безводным сульфатом натрия, или пропускание через гидрофобную фритту. Могут быть использованы общепринятые методы очистки, например, кристаллизация и хроматография, например, хроматография на диоксиде кремния или хроматография с обращенной фазой, при необходимости. Кристаллизация может быть осуществлена с использованием растворителей, таких как этилацетат, метанол, этанол или бутанол, или их водные смеси. Следует иметь в виду, что время конкретной реакции и температуру обычно можно определить техникой мониторинга реакций, например, тонкослойной хроматографией и ЖХМС.
Общие способы
Если не указано иное, исходные вещества были коммерчески доступными. Все растворители и коммерческие реагенты были лабораторного качества и использовались в том виде, как получены.
Там где представлены диастереоизомеры и упоминается только относительная стереохимия, или где представлен энантиомер, а абсолютная стереохимия неизвестна, использование «или 1» в хиральном центре обозначает, что абсолютная стереохимия конкретного соединения неизвестна, т.е. изображенное соединение может представлять собой R-энантиомер или S-энантиомер. Где абсолютная стереохимия известна, и соединение представляет собой индивидуальный энантиомер, при необходимости, используется полужирный или заштрихованный клинообразный символ (
) без использования «или 1» в хиральном центре.
Аналитические методы
Условия ЖХМС
Agilent 1200-6110,
Таблица сигналов: сигнал A: 214 нм, сигнал B: 254 нм;
Температура колонки: 40°C
Колонка: HALO C18 4,6*50 мм, 2,7 мкм
H2O (0,1% муравьиная кислота)
Растворитель B:
CH3CN (0,1% муравьиная кислота)
1,00 мин: A: 5,0% B: 95,0%
2,00 мин: A: 5,0% B: 95,0%
2,01 мин: A: 95,0% B: 5,0%
2,50 мин: A: 95,0% B: 5,0%
Названия промежуточных соединений и соединений примеров присваивались с использованием программного обеспечения для названий соединений ʺChemBioDraw Ultra v12ʺ или альтернативным использованием ʺACD Name Pro 6,02ʺ.
Промежуточное соединение 1: 4-Бром-5-хлор-2-метоксианилин
К 5-хлор-2-метоксианилину (132 г, 0,84 моль) в ацетонитриле (1000 мл) порциями добавляли N-бромсукцинимид (150 г, 0,84 моль) при 0°C около 1 часа. После добавления, полученную смесь перемешивали при окружающей температуре в течение 16 часов. Данную реакцию повторяли 3 раза, и продукты, полученное за 4 реакции, объединяли. Полученную смесь выливали в смесь лед/вода (4 кг ×2) и перемешивали в течение 1 часов. Полученную смесь подщелачивали добавлением твердого бикарбоната натрия до pH от 7 до 8. Водный слой экстрагировали этилацетатом (2 л ×3), объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали, и растворитель выпаривали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния, 200-300 меш, 4 кг, смесью петролейный эфир/этилацетат 50:1 для удаления дибромного побочного продукта, затем смесью петролейный эфир/этилацетат 10:1), с получением 4-бром-5-хлор-2-метоксианилина в виде светло-коричневого твердого вещества (380 г).
ЖХМС: Rt 1,57 мин, MH+ 236/238.
Промежуточное соединение 2: 2-Амино-5-бром-4-хлорфенол
В каждую из 2, охлажденных смесью лед/вода колб, содержащих 4-бром-5-хлор-2-метоксианилин (120 г, 507,42 ммоль) в ДХМ (1000 мл) добавляли трибромид бора (382 г, 1522,26 ммоль). После добавления, полученную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 часов. Полученную реакционную смесь выливали в смесь лед/вода (2 л), подщелачивали добавлением твердого бикарбоната натрия до pH 7 и экстрагировали этилацетатом (1000 мл ×6). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, и растворитель удаляли, с получением 2-амино-5-бром-4-хлорфенола в виде коричневого твердого вещества (220 г).
ЖХМС: Rt 1,35 мин, MH+ 222/224.
Промежуточное соединение 3: 7-Бром-6-хлор-2H-бензо[b][1,4]оксазин-3(4H)-он
К 2-амино-5-бром-4-хлорфенолу (218 г, 979,9 ммоль) в ДМФА (1000 мл) добавляли 2-хлорацетилхлорид (121,7 г, 1077,9 ммоль) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 3 часов. К полученной смеси добавляли карбонат калия (270,5 г, 1959,8 ммоль), и перемешивание продолжали в течение 16 часов. К полученной смеси добавляли карбонат калия (135 г, 979,9 ммоль), и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 16 часов. Добавляли воду (2 л), и продукт выделяли фильтрованием, с получением 7-бром-6-хлор-2H-бензо[b][1,4]оксазин-3(4H)-она в виде коричневого твердого вещества (225 г).
ЖХМС: Rt 1,56 мин, MH+ 261.
Промежуточное соединение 4: 3-(7-Бром-6-хлор-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаннитрил
К 7-бром-6-хлор-2H-бензо[b][1,4]оксазин-3(4H)-ону (227 г, 865 ммоль) в MeCN (1000 мл) добавляли акрилонитрил (138 г, 2,595 моль) и карбонат калия (358,11 г, 2,595 моль). После добавления, полученную реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 16 часов, растворитель удаляли, и остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния: 200-300 меш, 1000 г, смесь петролейный эфир/этилацетат 5:1), с получением 3-(7-бром-6-хлор-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаннитрила в виде коричневого твердого вещества (230 г).
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 7,28 (с, 1H), 7,10 (с, 1H), 4,63 (с, 2H), 4,19 (т, J=7,0 Гц, 2H), 2,78 (т, J=7,1 Гц, 2H).
Промежуточное соединение 5: Метил 3-(7-бром-6-хлор-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат
К 3-(7-бром-6-хлор-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаннитрилу (100 г, 317 ммоль) в метаноле (600 мл) добавляли тионилхлорид (300 мл) при 0°C. После добавления, реакционную смесь нагревали при 70°C в течение 16 часов. Растворитель удаляли, и остаток выливали в воду (1000 мл), экстрагировали ДХМ (800 мл ×4), концентрировали и очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния: 200-300 меш, 800 г, ДХМ/MeOH 100:1), с получением метил 3-(7-бром-6-хлор-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноата в виде коричневого твердого вещества (108 г).
ЖХМС: Rt 1,59 мин, MH+ 348/350;
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 7,24 (с, 1H), 7,12 (с, 1H), 4,60 (с, 2H), 4,18 (т, J=6, 2H), 3,71 (с, 3H), 3,65 (с, 1H), 2,70 (т, J=6, 2H).
Промежуточное соединение 6: Метил 3-(6-хлор-3-оксо-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат
К метил 3-(7-бром-6-хлор-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноату (108 г, 310 ммоль) в 1,4-диоксане (600 мл) добавляли 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (236 г, 930 ммоль), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II) (11,34 г, 15,5 ммоль), ацетат калия (61 г, 620 ммоль), и полученную реакционную смесь перемешивали при 100°C в атмосфере аргона в течение 16 часов.
Дополнительно добавляли 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (131,2 г, 516.4 ммоль), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II) (6.4 г, 8,6 ммоль) и ацетат калия (34 г, 344,24 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали при 100°C в атмосфере аргона в течение 16 часов. Растворитель удаляли, и остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния, 200-300 меш, 2000 г, смесь петролейный эфир/этилацетат=30:1 до ДХМ/MeOH=200:1), с получением метил 3-(6-хлор-3-оксо-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноата в виде желтого твердого вещества (86 г, неочищенный).
ЖХМС: Rt 1,75 мин, MH+ 396.
Промежуточное соединение 7: Метил 3-(6-хлор-7-гидрокси-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат
К метил3-(6-хлор-3-оксо-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноату (86 г, 217,4 ммоль) в ТГФ (1000 мл) добавляли уксусную кислоту (150 мл), пероксид водорода (30%, 150 мл), и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Полученную смесь выливали в воду (1000 мл), экстрагировали дихлорметаном (500 мл ×3), и объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия. Остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния, 200-300 меш, 600 г, смесь петролейный эфир/этилацетат 5:1 до ДХМ/MeOH 200:1). Полученное в результате желтое твердое вещество (25,5 г) перекристаллизовывали из этилацетата (200 мл), с получением метил 3-(6-хлор-7-гидрокси-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноата в виде желтого твердого вещества (13,89 г).
ЖХМС: Rt 1,41 мин, MH+ 286.
Промежуточное соединение 8: 1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропан-1-он
К раствору 5-хлорпиколинонитрила (12,5 г, 90,2 ммоль), растворенного в ТГФ (200 мл), при 0°C по каплям добавляли этилмагнийбромид (3M в ТГФ, 54 мл, 162 ммоль). После добавления, полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 часов. После завершения реакции, по каплям добавляли воду (500 мл) при 0°C, полученную смесь экстрагировали этилацетатом (100 мл ×3), и объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия. Полученную смесь фильтровали, и растворитель удаляли. Остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния: 200-300 меш, 40 г, смесь петролейный эфир/этилацетат 10:1, 800 мл), с получением 1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропан-1-она в виде желтого масла (10 г).
ЖХМС: Rt 1,59 мин, MH+ 170/172.
Промежуточное соединение 9: 1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропан-1-ол
К раствору 1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропан-1-она (9,5 г, 56 ммоль) в метаноле (100 мл) при комнатной температуре медленно добавляли боргидрид натрия (2,12 г, 56 ммоль). Добавляли воду (500 мл), полученную смесь экстрагировали этилацетатом (100 мл ×4), и объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли, с получением 1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропан-1-ола в виде желтого масла (9,6 г).
Промежуточное соединение 10: 1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропилметансульфонат
1-(5-Хлорпиридин-2-ил)пропан-1-ол (9,6 г, 56,1 ммоль), триэтиламин (6,8 г, 67,4 ммоль) смешивали в ДХМ (150 мл) при 0°C. По каплям добавляли метансульфонилхлорид (6.43 г, 56,1 ммоль), и после добавления, полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляли, и остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния: 200-300 меш, 40 г, смесь петролейный эфир/этилацетат 4:1, 1500 мл), с получением 1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропилметансульфоната в виде желтого масла (13,97 г).
Промежуточные соединения 11 и 12: (R)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат (промежуточное соединение 11) и (S)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат (промежуточное соединение 12)
1-(5-Хлорпиридин-2-ил)пропилметансульфонат (13,97 г, 56,1 ммоль), метил 3-(6-хлор-7-гидрокси-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат (16 г, 56,1 ммоль), карбонат калия (9,3 г, 67,3 ммоль) и MeCN (250 мл) смешивали и перемешивали при 80°C в течение 16 часов. Растворитель удаляли, и остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния: 200-300 меш, 80 г, смесь петролейный эфир/этилацетат 4:1, 2500 мл), с получением метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноата в виде желтого масла (23 г).
Энантиомеры разделяли препаративной хиральной ВЭЖХ [chiralpak-AD-H, 250×20 мм, 5 мкм, элюент: диоксид углерода, IPA (муравьиная кислота+DEA)], с получением (R)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноата в виде желтого масла (9,0 г) и (S)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноата в виде желтого масла (8.4 г).
(R)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат (промежуточное соединение 11). Хиральная ВЭЖХ: Rt=3,33 мин.
(S)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат (промежуточное соединение 12). Хиральная ВЭЖХ: Rt=5,55 мин.
Промежуточное соединение 13: (S)-1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропан-1-ол
(R)-3,3-Дифенил-1-метилпирролидино[1,2-c]-1,3,2-оксазаборол (1N в толуоле, 10,61 мл, 10,61 ммоль) в ТГФ (50 мл) охлаждали до 0°C, добавляли комплекс боран-метилсульфид (2N в ТГФ, 5,3 мл, 10,6 ммоль), и полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Добавляли 1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропан-1-он (1,8 г, 10,61 моль) в ТГФ (5 мл) при 0°C, и полученную реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. Добавляли метанол (2 мл), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Растворитель удаляли, и остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния, 200-300 меш, 30 г, смесь петролейный эфир/этилацетат 5:1), с получением (S)-1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропан-1-ола в виде бесцветного масла (0,52 г).
ЖХМС: Rt 1,33 мин, MH+ 172.
Промежуточное соединение 14: (R)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат
К метил 3-(6-хлор-7-гидрокси-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноату (промежуточное соединение 7; 1,3 г) в ТГФ (100 мл) при 0°C добавляли (S)-1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропан-1-ол (520 мг, 3,03 ммоль), трифенилфосфин (1,6 г, 6,06 ммоль,) и диэтилазодикарбоксилат (1,1 г, 6,06 ммоль). После добавления, полученную реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. Растворитель удаляли, и остаток очищали колоночной хроматографией [диоксид кремния, 200-300 меш, 50 г, смесь петролейный эфир/этилацетат 4:1], с получением (R)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноата в виде желтого масла (10,8 г).
ЖХМС: Rt 1,70 мин, MH+ 439/441.
Пример 1: (R)-3-(6-Хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовая кислота
Смешивали (R)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат (9,0 г, 20,5 ммоль), ТГФ (50 мл) и гидроксид лития (0,5N в воде, 50 мл), и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли воду (150 мл), и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл ×3). Отделенную водную фазу доводили до pH 6-7 добавлением хлористоводородной кислоты (0,5N). Полученную смесь фильтровали, и твердое вещество собирали и сушили на воздухе, с получением (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты в виде белого твердого вещества (6,5 г).
ЖХМС: Rt 1,59 мин, MH+ 425/427;
1H ЯМР (300 МГц, d6-ДМСО) δ 12,37 (с, 1H), 8,63 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,95 (дд, J=8,4, 2,5 Гц, 1H), 7,46 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,38 (с, 1H), 6,66 (с, 2H), 5,36 (т, J=6,2 Гц, 1H), 4,04 (т, J=7,4 Гц, 2H), 2,10-1,88 (м, 3H), 0,92 (т, J=7,3 Гц, 3H).
Пример 1 (альтернативное получение): (R)-3-(6-Хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовая кислота
К (R)-метил 3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноату (0,8 г, 2,05 ммоль) в ТГФ (50 мл) добавляли гидроксид лития (1N, 8,2 мл, 8,2 ммоль), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляли, добавляли хлористоводородную кислоту (0,5N) для доведения полученной смеси до pH 5, и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл ×5). Объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия, растворитель удаляли, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ (колонка: Diasogel C18 250×50 мм, 10 мкм; элюент: ACN-H2O=50-80, 0,1% муравьиная кислота), с получением (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты в виде белого твердого вещества (590 мг).
ЖХМС: Rt 1,60 мин, MH+ 425/427;
1H ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,54 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,83 (дд, J=8,4, 2,5 Гц, 1H), 7,46 (д, J=8,5 Гц, 1H), 7,27 (с, 1H), 6,52 (с, 1H), 5,27-5,16 (м, 1H), 4,51 (д, J=1,5 Гц, 2H), 4,20-4,09 (м, 2H), 2,66-2,54 (м, 2H), 2,04 (дд, J=13,0, 5,9 Гц, 2H), 1,03 (т, J=7,4 Гц, 3H).
Соединения примеров 2-30 получали по существу согласно схеме реакции 1, используя метил 3-(6-хлор-7-гидрокси-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропаноат и подходящий спирт или мезилат, которые могут быть коммерчески доступными или получены согласно схемам реакций 2, 3, 4 или 5.
383 (MH+)
369 (MH+)
369 (MH+)
365 (MH+)
380 (MH+)
399 (MH+)
379 (MH+)
394 (MH+)
394 (MH+)
408 (MH+)
408 (MH+)
428 (MH+)
428 (MH+)
Способы применения
Некоторые соединения настоящего изобретения являются ингибиторами KMO. Соединения, которые ингибируют KMO, могут быть полезны при лечении различных состояний или расстройств, опосредованных KMO, например, острого панкреатита, хронической болезни почек, острой болезни почек, острой травмы почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности.
Дополнительные состояния или расстройства включают гиперпролиферативные заболевания, доброкачественного или злокачественного происхождения, при которых клетки различных тканей или органов проявляют аберрантные картины роста, пролиферации, миграции, передачи сигналов, старения и смерти. Как правило, гиперпролиферативные заболевания относятся к заболеваниям и расстройствам, связанным с бесконтрольной пролиферацией клеток, включая, но, не ограничиваясь ими, бесконтрольный рост клеток органа или ткани, являющийся результатом развития раковых и доброкачественных опухолей. Гиперпролиферативные расстройства, связанные с эндотелиальными клетками, могут привести к ангиогенным заболеваниям, таким как ангиомы, эндометриоз, ожирение, возрастная макулярная дегенерация и различные ретинопатии, а также к пролиферации EC и гладких мышечных клеток, которые вызывают рестеноз вследствие стентирования при лечении атеросклероза. Гиперпролиферативные расстройства с участием фибробластов (например, фиброгенез) включают, но, не ограничиваясь ими, расстройства избыточного рубцевания (т.е. фиброз), такие как возрастная макулярная дегенерация, ремодулирование миокарда и недостаточность, связанная с инфарктом миокарда, избыточное заживление ран, такое как обычно происходит вследствие операции или травмы, келоидных рубцов и фиброидной опухоли, и при стентировании.
Далее, такие состояния или расстройства включают отторжение трансплантата (супрессия Т-клеток) и болезнь трансплантат против хозяина, системные воспалительные расстройства, воспалительные расстройства мозга, включая малярию и африканский трипаносомоз, и пневмококковый менингит.
Далее, такие состояния или расстройства включают цирроз печени, хронический панкреатит, фиброз печени, фиброз легких и ишемически-реперфузионные повреждения.
В дальнейшем, такие состояния или расстройства включают, например, нейродегенеративные заболевания, психические или неврологические заболевания или расстройства, болезнь Крейцфильда-Якоба, индуцированную травмой нейродегенерацию, неврологический синдром высокого давления, дистонию, оливопонтоцеребральную атрофию, рассеянный склероз, эпилепсию, последствия инсульта, церебральную ишемию, ишемические расстройства, включая инсульт (фокальная ишемия), гипоксию, мульти-инфарктную деменцию, последствия церебральной травмы или повреждения, повреждения спинного мозга, деменцию, такую как старческое слабоумие, индуцированную СПИД энцефалопатию, другие инфекции, связанные с энцефалопатией, вирусный или бактериальный менингит, инфекционные заболевания, вызванные вирусами, бактериями и другими паразитами (например, инфекции центральной нервной системы (ЦНС), такие как вирусная, бактериальная или паразитарные инфекции, например, полиомиелит, болезнь Лайма (инфекция Borrelia burgdorferi)), септический шок и различные типы рака, типы рака с церебральной локализацией, печеночную энцефалопатию, системную волчанку, обезболивающий и опиатный абстинентный синдром, пищевое поведение, психиатрические расстройства, такие как бессонница, серьезный дефицит рабочей памяти, серьезный дефицит долгосрочной памяти хранения, снижение познавательной способности, серьезный дефицит внимания, серьезный дефицит способности к целенаправленной деятельности, замедление обработки информации, замедление нейронной активности, тревогу, генерализованные тревожные расстройства, паническую тревогу, обсессивно-компульсивные расстройства, социальную фобию, страх перед возможной неудачей, посттравматический стресс, острую стрессовую реакцию, реакцию на адаптацию, разделение тревожного расстройства, похмельный синдром, депрессивные расстройства, развивающиеся или возрастные расстройства мозга, диабет и их осложнения, синдром Туретта, синдром умственной отсталости, расстройства аутистического спектра, расстройства, вызванные серьезными и широко распространенными нарушениями чувства мышления, речь и способность общения с другими, расстройства настроения, психологические расстройства, характеризуемые аномалиями эмоционального состояния, такими как, но без ограничения, биполярное расстройство, однополюсная депрессия, основная депрессия, эндогенная депрессия, инволюционная депрессия, реактивная депрессия, психотическая депрессия, депрессия, вызванная общим состоянием здоровья, циклотимические расстройства, дистимические расстройства, расстройства настроения вследствие общего состояния здоровья, расстройства настроения не указанной специфики и индуцированные веществом расстройства настроения.
В дальнейшем, такие состояния или расстройства также включают, например, острый некротический панкреатит, СПИД (заболевание), асептический менингит, болезнь головного мозга, например, синдром Жиль де ла Туретта, синдром Аспергера, синдром Ретта, первазивные расстройства развития, заболевания головного мозга, связанные со старением, и болезнь развития мозга, синдром эмоционального выгорания, отравление угарным газом, инфаркт миокарда или сердечная недостаточность и геморрагический шок (глобальная ишемия мозга), катаракту и старение глаз, болезни центральной нервной системы, цереброваскулярные болезни, синдром хронической усталости, хронический стресс, когнитивные расстройства, конвульсивные расстройства, такие как варианты большого судорожного и малого судорожного припадка эпилепсии и частичный комплекс эпилепсии, сахарный диабет, болезни нервной системы (например, дискинезия, индуцированные L-допа расстройства движения, наркомания, боль и катаракта), лекарственную зависимость, синдром отмены препарата, расстройства питания, синдром Гийена Барра и другие нейропатии, иммунные заболевания, иммунные расстройства и терапевтическое лечение, направленное на изменение биологических реакций (например, введение интерферонов или интерлейкинов), воспалительные расстройства центральной или периферической нервной системы, повреждения (травма, множественная травма), психические и поведенческие расстройства, метаболические заболевания, болезненные боли или расстройства, выбранные из группы воспалительной боли, невропатической боли или мигрени, аллодинию, гипералгезиционную боль, фантомную боль, невропатическую боль, связанную с диабетической невропатией, множественную недостаточность органа, почти утопление, некроз, новообразования головного мозга, опухолевые расстройства, включая лимфомы и другие злокачественные расстройства крови, болезнь нервной системы (неврологический синдром высокого давления, инфекции), расстройства, связанные с никотиновой зависимостью и другими зависимостями, включая алкоголизм, зависимость от каннабиоидов, бензодиазепина, барбитуратов, морфина и кокаина, с изменениями аппетита, расстройства сна, связанные с изменением модели сна, недостатком энергии, усталостью, низкой самооценкой, неуместными упреками вины, с частыми мыслями о смерти или самоубийстве, планами или попытками совершить самоубийство, чувством безнадежности и бесполезности, с психомоторным возбуждением или замедлением, с уменьшением возможности мышления, концентрации или решительности как нейропротекторного препарата, с болезнями позвоночника, атопической системной волчанкой, травматическими повреждениями головного мозга и спинного мозга, и тремор синдромами, низким балансом, брадикинезией, напряженностью, тремором, изменениями в речи, потерей выражения лица, микрографией, трудностью при глотании, слюноотделением, путаницей, страхом, сексуальной дисфункцией, расстройством речи, нарушениями в процессе принятия решений, вспышками насилия, агрессии, галлюцинаций, апатии, с разрушениями абстрактного мышления.
В дальнейшем, такие состояния или расстройства также включают, например, сердечно-сосудистые заболевания, которые относятся к заболеваниям и расстройствам сердца и системы кровообращения. Такие заболевания часто связаны с дислипопротеинемией и/или дислипидемией. Сердечно-сосудистые заболеваний включают, но, не ограничиваясь ими, кардиомегалию, атеросклероз, инфаркт миокарда и застойную сердечную недостаточность, ишемическую болезнь сердца, гипертензию и гипотонию.
В частности, такие состояния или расстройства включают состояния или расстройства, которые связывают повышенные уровни метаболитов триптофана с тяжестью заболевания и плохим прогнозом, включая шок, травмы у пациентов с множественной недостаточностью органа, тяжелым острым панкреатитом и хронической болезнью почек (Logters, T.T., et al. (2009) Shock 32: 29-34, Dabrowski et al (2014) Inflammation 37: 223-234, Changsirivathanathamrong et al (2011) Critical Care Medicine 39: 2678-2683, Mole, D.J., et al.(2008) Br J Surg 95: 855-867, Zhao (2013) Renal Failure 35: 648-653, Pawlak, K. et al (2009) Blood Coagulation and Fibrinolysis 20: 590-594, Kabayashi, T. et al (2014) Biochemical and Biophysical Research Communications 445: 412-416).
Способы лечения по настоящему изобретению включают введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли пациенту, нуждающемуся в этом. Отдельные варианты осуществления настоящего изобретения включают способы лечения любого из указанных выше расстройств путем введения терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли пациенту, нуждающемуся в этом.
Как использовано в данном описании, 'лечить' или 'лечение' относительно расстройства означает: (1) смягчить или предотвратить расстройство или одно или более биологических проявлений расстройства, (2) препятствовать (a): одному или более контактам в биологическом каскаде, что приводит к или отвечает за расстройство, или (b): одному или более биологическим проявлениям заболевания, (3) облегчить один или более симптомов или воздействий, связанных с расстройством, или (4) замедлить прогрессирование расстройства или одного или более биологических проявлений заболевания.
Как определено выше, 'лечение' расстройства включает предотвращение или профилактику заболевания. Следует иметь в виду, что 'предупреждение' не является абсолютным термином. В медицине 'предупреждение' понимается как имеющее отношение к профилактическому введению препарата, по существу уменьшающего вероятность или серьезность расстройства или его биологических проявлений, или к сдерживанию начала такого расстройства или его биологических проявлений.
Как использовано в данном описании, 'эффективное количество', относительно соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или другого фармацевтически активного средства, означает количество соединения, достаточное для лечения состояния пациента с медицинской точки зрения. Эффективное количество соединения будет зависеть от конкретно выбранного соединения (например, при рассмотрении активности, эффективности и периода полувыведения соединения); выбранного пути введения; подвергаемого лечению расстройства; тяжести подвергаемого лечению заболевания; возраста, роста, массы и физического состояние подвергаемого лечению пациента; истории болезни подвергаемого лечению пациента; продолжительности лечения; природы сопутствующих терапий; желаемого терапевтического эффекта; и подобных факторов, но, тем не менее, обычно определяется квалифицированным специалистом.
Как использовано в данном описании, ʺпациентʺ относится к человеку (включая взрослых и детей) или другим млекопитающим. В одном из вариантов осуществления ʺпациентʺ относится к человеку.
Настоящее изобретение в дополнительном аспекте предоставляет способ лечения состояния или расстройства, опосредованного KMO (такого как приведенные выше расстройства), включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления предоставлен способ лечения острого панкреатита, хронической болезни почек, острой болезни почек, острой травмы почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления предоставлен способ лечения острого панкреатита, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления предоставлен способ лечения хронической болезни почек, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления предоставлен способ лечения острого панкреатита, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли.
В одном из вариантов осуществления предоставлен способ лечения хронической болезни почек, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли.
В дополнительном аспекте предоставлено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.
В одном из вариантов осуществления предоставлено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении состояния или расстройства, опосредованного KMO.
В одном из вариантов осуществления предоставлено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении острого панкреатита, хронической болезни почек, острой болезни почек, острой травмы почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности.
В одном из вариантов осуществления предоставлено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении острого панкреатита.
В одном из вариантов осуществления предоставлено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении хронической болезни почек.
В одном из вариантов осуществления предоставлена (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении острого панкреатита.
В одном из вариантов осуществления предоставлена (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении хронической болезни почек.
В дополнительном аспекте предоставлено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для лечения состояния или расстройства, опосредованного KMO.
В одном из вариантов осуществления предоставлено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для применения при лечении острого панкреатита, хронической болезни почек, острой болезни почек, острой травмы почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности.
В одном из вариантов осуществления предоставлено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для применения при лечении острого панкреатита.
В одном из вариантов осуществления предоставлено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для применения при лечении хронической болезни почек.
В одном из вариантов осуществления предоставлено применение (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для применения при лечении острого панкреатита.
В одном из вариантов осуществления предоставлено применение (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для применения при лечении хронической болезни почек.
Особым соединением настоящего изобретения для применения в представленных способах лечения является (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль.
Композиции
Соединения настоящего изобретения обычно, но не обязательно, могут быть сформулированы в фармацевтические композиции перед введением пациенту. Соответственно, в другом аспекте предоставлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов. Фармацевтическая композиция настоящего изобретения, которая может быть получена соответствующим смешиванием при окружающей температуре и атмосферном давлении, обычно адаптирована для перорального, парентерального или ректального введения, и как таковая может быть в форме таблеток, капсул, пероральных жидких препаратов, порошков, гранул, таблеток для рассасывания, восстанавливаемых порошков, инъекционных или инфузионных растворов или суспензий или суппозиториев.
Подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты варьируются в зависимости от выбранной дозированной формы. Кроме того, подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты могут быть выбраны в зависимости от конкретной функции, которой они могут служить в данной композиции. Например, некоторые фармацевтически приемлемые эксципиенты могут быть выбраны в зависимости от их способности содействовать изготовлению единых дозированных форм. Некоторые фармацевтически приемлемые эксципиенты могут быть выбраны в зависимости от их способности обеспечивать изготовление стабильных дозированных форм. Некоторые фармацевтически приемлемые эксципиенты могут быть выбраны в зависимости от их способности обеспечивать доставку или транспортировку соединения или соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, однажды введенных пациенту, из одного органа или части тела в другой орган или часть тела. Некоторые фармацевтически приемлемые эксципиенты могут быть выбраны в зависимости от их способности усиливать комплаентность.
Подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты включают следующие типы эксципиентов: разбавители, наполнители, связующие вещества, дезинтеграторы, лубриканты, глиданты, гранулирующие агенты, покрывающие агенты, смачивающие агенты, растворители, co-растворители, суспендирующие агенты, эмульгаторы, подсластители, придающие вкус агенты, маскирующие вкус агенты, красители, противослеживающие агенты, увлажнители, хелатирующие агенты, пластификаторы, повышающие вязкость агенты, антиоксиданты, консерванты, стабилизаторы, поверхностно-активные вещества и буферирующие агенты. Специалисту в данной области будет очевидно, что некоторые фармацевтически приемлемые эксципиенты могут служить более чем одной функции и могут служить альтернативным функциям в зависимости от того, сколько эксципиентов присутствует в данной композиции и какие другие эксципиенты находятся в данной композиции.
Квалифицированный специалист, обладающий знаниями, и специалист в данной области смогут выбрать подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты в соответствующих количествах для использования в настоящем изобретении. Кроме того, имеется ряд источников, которые могут быть использованы специалистом в данной области, в которых описаны фармацевтически приемлемые эксципиенты и которые могут быть полезны при выборе подходящих фармацевтически приемлемых эксципиентов. Примеры включают Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited), и The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press).
Фармацевтические композиции настоящего изобретения получают с использованием технологий и способов, известных специалистам в данной области техники. Некоторые способы, обычно используемые в данной области, описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company).
Фармацевтические композиции настоящего изобретения, которые могут быть получены смешиванием, стабильно при окружающей температуре и атмосферном давлении, обычно адаптированы для перорального, парентерального или ректального введения и, как таковые, могут быть в форме таблеток, капсул, пероральных жидких препаратов, порошков, гранул, таблеток для рассасывания, восстанавливаемых порошков, инъекционных или инфузионных растворов или суспензий, или суппозиториев.
Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может содержать от 0,1% до 99% по массе активного вещества, в зависимости от способа введения. Доза соединения, используемого при лечении приведенного выше состояния или расстройства, будет варьироваться обычным методом в зависимости от серьезности данного состояния или расстройства, массы субъекта и других аналогичных факторов. Однако согласно инструкциям по общему применению подходящие единичные дозы могут составлять 0,05-5000 мг, 1,0-500 мг или 1,0-200 мг, и каждая единичная доза может вводиться более чем раз в сутки, например, два или три раза в сутки. Такая терапия может продолжаться в течение нескольких недель, месяцев или лет.
В одном из вариантов осуществления инъекционные или инфузионные растворы или восстанавливаемые порошки являются предпочтительными.
В одном из вариантов осуществления композиция, адаптированная для перорального формулирования, является предпочтительной.
Таблетки и капсулы для перорального введения могут быть в единичной дозированной и могут содержать обычные эксципиенты, такие как связующие агенты (например, предварительно желатинизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или гидрофосфат кальция); таблетирующие лубриканты (например, стеарат магния, тальк или диоксид кремния); дезинтегранты (например, картофельный крахмал или натрийгликоляткрахмал); и приемлемые смачивающие агенты (например, лаурилсульфат натрия). Таблетки могут быть покрыты согласно способам, хорошо известным в обычной фармацевтической практике.
Пероральные жидкие препараты могут быть в форме, например, водной или масляной суспензии, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров, или могут быть в форме сухого продукта, для восстановления водой или другим подходящим наполнителем перед применением. Такие жидкие препараты могут содержать обычные добавки, такие как суспендирующие агенты (например, сорбитоловый сироп, производные целлюлозы или гидрогенизированные пищевые жиры), эмульгирующие агенты (например, лецитин или аравийская камедь), безводные наполнители (которые могут включать пищевые масла, например, миндальное масло, эфирные масла, этиловый спирт или фракционированные растительные масла), консерванты (например, метил или пропил-п-гидроксибензоаты или сорбиновая кислота), и, при желании, обычные ароматизаторы или красители, при необходимости, буферные соли и подсластители. Препараты для перорального введения могут быть надлежащим образом сформулированы, с получением активного соединения с контролируемым высвобождением.
Для парентерального введения жидкие единичные дозированные формы получают с использованием соединения настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемой соли и стерильного наполнителя. Составы для инъекций могут быть представлены в единичной дозированной форме, например, в ампулах, или во множественных дозах, используя соединение настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемую соль и стерильный наполнитель, необязательно с добавленным консервантом. Данные композиции могут быть взяты в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляном или водном наполнителе, и могут содержать формулирующие агенты, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, активный ингредиент в порошковой форме для восстановления с подходящим наполнителем, например, стерильной апирогенной водой, перед применением. Соединение, в зависимости от используемого наполнителя и концентрации, может быть либо суспендировано, либо растворено в наполнителе. При получении растворов, соединение может быть растворено для инъекции и подвергнуто стерильной фильтрации перед заполнением подходящих флаконов или ампул и их герметизацией. Предпочтительно, адъюванты, такие как местные анестетики, консерванты и буферирующие агенты, растворяют в наполнителе. Для усиления стабильности, данная композиция может быть подвергнута замораживанию после заполнения флаконов, и воду удаляют в вакууме. Парентеральные суспензии получают по существу таким же образом, за исключением того, что соединение суспендируют в наполнителе, вместо того чтобы растворять, и стерилизация не может быть выполнена фильтрованием. Соединение можно стерилизовать под воздействием этиленоксида перед суспендированием в стерильном наполнителе. Предпочтительно, поверхностно-активное вещество или смачивающий агент включают в композицию для обеспечения равномерного распределения данного соединения.
Лосьоны могут быть сформулированы на водной или масляной основе и будут, как правило, также содержать один или более эмульгирующих агентов, стабилизирующих агентов, диспергирующих агентов, суспендирующих агентов, сгущающих агентов или подкрашивающих агентов. Капли могут быть сформулированы на водной или неводной основе, также содержащей один или более диспергирующих агентов, стабилизирующих агентов, солюбилизирующих агентов или суспендирующих агентов. Они также могут содержать консервант.
Соединения настоящего изобретения также могут быть сформулированы в ректальные композиции, такие как суппозитории или удерживающие клизмы, например, содержащие обычные суппозиторные основы, такие как масло какао или другие глицериды.
Соединения настоящего изобретения также могут быть сформулированы в виде депо препаратов. Такие долго действующие составы могут вводиться имплантацией (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. Так, например, соединения настоящего изобретения могут быть сформулированы с подходящими полимерными или гидрофобными веществами (например, в виде эмульсий в подходящем масле) или ионообменными смолами, или в виде умеренно растворимых производных, таких, например, как умеренно растворимые соли.
Для интраназального введения, соединения настоящего изобретения могут быть сформулированы в виде растворов для введения через подходящие дозирующие или унитарно дозирующие устройства или, альтернативно, в виде порошка, смешанного с подходящим носителем для введения с помощью подходящего устройства доставки. Таким образом, соединения формулы (I) могут быть сформулированы для перорального, бокального, парентерального, местного (включая офтальмологическое и назальное), депо или ректального введения или в форме, подходящей для введения ингаляцией или инсуффляцией (либо через рот или нос).
Соединения настоящего изобретения могут быть сформулированы для местного введения в форме мази, кремов, гелей, лосьонов, вагинальных суппозиториев, аэрозолей или капель (например, глазных, ушных или капель в нос). Мази и кремы могут быть, например, сформулированы на водной или масляной основе с добавлением подходящих сгущающих и/или гелеобразующих агентов. Мази для введения в глаза могут быть изготовлены в стерильных условиях с использованием стерильных компонентов.
Настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для применения при лечении острого панкреатита, хронической болезни почек, острой болезни почек, острой травмы почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.
Биологические данные
Ингибирование KMO может быть определено путем сверхбыстрого непрерывного МС анализа (МС Rapidfire анализ), проводимого на клонированном ферменте человека, как описано в данном описании ниже. Соединения формулы (I) продемонстрировали ингибирующую активность в отношении КМО фермента, используя функциональный МС Rapidfire анализ, описанный в данном описании, или по существу аналогичный анализ.
Протокол МС Rapidfire анализа KMO
Материалы и методы
Материалы
L-Кинуренин (Kyn), 3-гидрокси-DL-кинуренин (3-HK), восстановленную форму β-2'-никотинамидадениндинуклеотидфосфата нитрата тетранатриевой соли (NADPH), 4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновую кислоту (HEPES), DL- дитиотреитол (DTT), этилендиаминтетрауксусную кислоту (EDTA), CHAPS и трифторуксусную кислоту (ТФУК) приобретали у фирмы Sigma-Aldrich Ltd. (Gillingham, Dorset, UK). ВЭЖХ-класса ацетонитрил и муравьиная кислота были поставлены фирмой Fisher Scientific (Loughborough, UK).
Клонирование и экспрессия KMO человека
Полноразмерную KMO человека амплифицировали при помощи PCR из pcДНК5/FRT/V5-His-TOPO/hKMO (вектор, поставленный университетом Эдинбурга) в pGEX6P-1 (GE Healthcare) с использованием BamH1 и Sal1 сайтов рестрикции. Маркерную ДНК, кодирующую N-терминальную глутатион-S-трансферазу (GST), с последующим предварительным расщеплением сайта расщепления протеазы, и полноразмерную KMO амплифицировали при помощи PCR из pGEX6P-1-KMO и клонировали pFastbac1 (Invitrogen) с использованием Xbal и EcoR1 сайтов рестрикции.
pFastbac1 GST-KMO транспортировали в геноме бакуловирусов с использованием BAC-to-BAC технологии (Invitrogen), и получали бакмид ДНК и трансфицировали в клетки Spodoptera frugiperda (Sf9) с использованием целфектина II (Invitrogen). Экспрессия белка ожидаемой молекулярной массы (Mr 82634) была показана Вестерн-блот анализом с использованием конъюгата анти-GST-пероксидазы.
Получение мембран из Sf9 клеток, экспрессирующих GST-KMO человека
Исходный вирусный материал P1 формировали из отдельного клона и использовали для инфицирования 3× 1,5 л культур клеток Sf9 в 3-л флаконах Corning Fernbach. Клетки Sf9 выращивали в среде Hyclone SFX (Thermo Scientific) до примерно 3×106 клеток/мл и инфицировали номинальным множественным заражением 3. Клетки собрали спустя 48 часов и разрушали смешиванием в 50 мМ HEPES, pH 7,4, 1 мМ EDTA буфере, содержащем ингибиторы протеазы. Использовали низкую скорость вращения (400 g) для удаления клеточного дебриса, с последующим вращением при высокой скорости (75000 g) для осаждения мембран. Мембраны очищали при градиенте разрывной плотности сахарозы ресуспендированием в 10% (масс./об.) сахарозы и расслоении около 40% (масс./об.) сахарозы, оба в указанном выше буфере. Полученный продукт центрифугировали при 150000 g, и очищенные мембраны брали из интерфейса, отделяли центрифугированием при 100000 g, ресуспендировали в буфере и разделяли на аликвоты для хранения при -80°C. Активность KMO обнаруживали только в отношении мембранной фракции, и активность KMO не детектировалась у мембран, полученных из неинфицированных клеток Sf9. Получали партию 104 мг очищенных Sf9 KMO-мембран (как определено при помощи анализа Pierce BCA белка с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта) и проверяли в RapidFire анализе масс-спектрометрией с высокой пропускной способностью (RF МС).
RapidFire анализ масс-спектрометрией с высокой пропускной способностью
Метод 1
Получали 11-критичных значений 3-кратных серийных разведений тестируемого соединения в ДМСО, и по 100 нл этих растворов подавали в 384-луночные V-образные полипропиленовые планшеты (Greiner Bio-он, Stonehouse, UK) с использованием акустической пипетки-дозатора Echo 555 (Labcyte, Sunnyvale, CA). Это давало конечную концентрацию в интервале от 100 мкМ до 1,7 нМ в 10 мкл конечного аналитического объема (см. ниже). По 100 нл ДМСО подавали в колонки 6 и 18 для высокого и низкого контроля, соответственно, с предварительной инактивацией фермента в колонке 18 при помощи предварительной подачи 30 мкл 0,5% (об./об.) ТФУК.
Условия анализа KMO человека с использованием изолированных KMO-мембран составляли 50 мМ HEPES, pH 7,5, 2 мМ DTT, 1 мМ EDTA, 100 мкМ CHAPS, 200 мкМ NADPH, 10 мкМ кинуренин и 8 мкг/мл KMO-мембран в общем реакционном объеме 10 мкл.
Анализ проводили путем первоначальной подачи 5 мкл 2× ферментного раствора (16 мкг/мл KMO-мембран в 50 мМ HEPES, pH 7,5, 2 мМ DTT, 2 мМ EDTA, 200 мкМ CHAPS) в планшеты, содержащие по 100 нл соединения, и инкубировали в течение 10 мин при окружающей температуре. Реакции инициировали добавлением 5 мкл 2× субстратного раствора (400 мкМ NADPH, 20 мкМ кинуренин в 50 мМ HEPES, pH 7,5, 2 мМ DTT) и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре с последующим гашением реакции добавлением 30 мкл 0,5% (об./об.) ТФУК. Планшеты центрифугировали при 2500 об/мин в течение 10 мин перед анализом. Все добавления производили с использованием пипетки-дозатора Multidrop Combi (Thermo Fisher Scientific).
Погашенные аналитические планшеты передавали в систему с высокой пропускной способностью RapidFire200 интегрированный автоматический пробоотборник/твердофазная экстракция (SPE) (Agilent Technologies, Wakefield, MA). Образцы аспирировали из каждой лунки в течение 500 мс, и по 10 мкл непосредственно загружали в картридж RapidFire микромасштабной SPE C18 (типа C), который промывали в течение 3 с водой ВЭЖХ класса, содержащей 0,1% (об./об.) муравьиную кислоту, для удаления неорганических компонентов. Аналиты затем смывали в масс-спектрометр, за 3-х сек цикл элюирования, с использованием смеси 80% (об./об.) ацетонитрил/вода, содержащая 0,1% (об./об.) муравьиную кислоту, и картридж затем уравновешивали промыванием водой, содержащей 0,1% (об./об.) муравьиную кислоту, в течение 500 мс. Это давало время полного цикла 7 с, давая возможность проведения анализа 384-луночного планшета приблизительно за 45 мин.
Как Kyn, так и 3-HK детектировали с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра Sciex API4000 (Applied Biosystems, Concord, Ontario, Canada), оборудованного интерфейсом с электрораспылением и работающего в режиме положительных ионов. Использовали мониторинг множественных реакций (MRM) для детектирования как Kyn, так и 3-HK, с использованием Q1/Q3 трансформации при m/z 209,4-192,0 и m/z 225,3-208,2, соответственно. В масс-спектрометре использовали напряжение ESI 5500 В и температуру источника 600°C, со временем выдержки 50 мс для каждой трансформации.
Аналитические данные
MRM индивидуальных трансформаций был сохранен в виде текстовых файлов, и хроматограммы экстрагированных ионов были интегрированы и обработаны с использованием программного обеспечения RapidFire® для интеграции пиков (version 3,6).
Используя интегрированную площадь пика, полученные данные для 3-HK анализировали в рамках ActivityBase (ID Business Solutions Ltd, Surrey, UK). Кривые зависимости доза-ответ строили по уравнению (1):
где a обозначает ингибированный ответ, d обозначает полностью ингибированный ответ, [I] обозначает ингибирующую концентрацию, IC50 обозначает [I], которая дает 0,5×(a-d), и S обозначает угловой коэффициент Хилла.
Метод 2
Получали 11-критичных значений 3-кратных серийных разведений тестируемого соединения в ДМСО, и по 100 нл этих растворов подавали в 384-луночные V-образные полипропиленовые планшеты (Greiner Bio-он, Stonehouse, UK) с использованием акустической пипетки-дозатора Echo 555 (Labcyte, Sunnyvale, CA). Это давало конечную концентрацию в интервале от 10 мкМ до 0,17 нМ в 10 мкл конечного аналитического объема (см. ниже). По 100 нл ДМСО подавали в колонки 6 и 18 для высокого и низкого контроля, соответственно, с предварительной инактивацией фермента в колонке 18 при помощи предварительной подачи 50 мкл 0,5% (об./об.) ТФУК.
Условия анализа KMO человека с использованием изолированных KMO-мембран составляли 50 мМ Hepes, pH 7,5, 2 мМ DTT, 1 мМ EDTA, 100 мкМ CHAPS, 200 мкМ NADPH, 10 мкМ кинуренин и 4 мкг/мл KMO-мембран в общем реакционном объеме 10 мкл.
Анализ проводили путем первоначальной подачи 5 мкл 2× ферментного раствора (8 мкг/мл KMO-мембран в 50 мМ Hepes, pH 7,5, 2 мМ DTT, 2 мМ EDTA, 200 мкМ CHAPS) в планшеты, содержащие по 100 нл соединения, и инкубировали в течение 30 мин при окружающей температуре. Реакции инициировали добавлением 5 мкл 2× субстратного раствора (400 мкМ NADPH, 20 мкМ кинуренин в 50 мМ Hepes, pH 7,5, 2 мМ DTT) и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре с последующим гашением реакции добавлением 50 мкл 0,5% (об./об.) ТФУК. Планшеты центрифугировали при 3000 об.мин. в течение 10 мин перед анализом. Все добавления производили с использованием пипетки-дозатора Multidrop Combi (Thermo Fisher Scientific).
Погашенные аналитические планшеты передавали в систему с высокой пропускной способностью RapidFire200 интегрированный автоматический пробоотборник/твердофазная экстракция (SPE) (Agilent Technologies, Wakefield, MA). Образцы аспирировали из каждой лунки в течение 650 мс и примерно по 10 мкл непосредственно загружали в картридж RapidFire микромасштабной SPE C18 (типа C), который промывали в течение 1500 мс водой ВЭЖХ класса, содержащей 0,1% (об./об.) муравьиную кислоту, для удаления неорганических компонентов. Аналиты затем смывали в масс-спектрометр за 1500 мс цикл элюирования с использованием смеси 80% (об./об.) ацетонитрил/вода, содержащая 0,1% (об./об.) муравьиную кислоту, и картридж затем уравновешивали промыванием водой, содержащей 0,1% (об./об.) муравьиную кислоту, в течение 500 мс. Это давало время полного цикла 7 с, давая возможность проведения анализа 384-луночного планшета приблизительно за 45 мин.
Как Kyn, так и 3-HK детектировали с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра Sciex API4000 (Sciex, Warrington, Cheshire, UK), оборудованного интерфейсом с электрораспылением и работающего в режиме положительных ионов. Использовали мониторинг множественных реакций (MRM) для детектирования как Kyn, так и 3-HK, с использованием Q1/Q3 трансформации при m/z 209,2-192,0 и m/z 225,2-208,1, соответственно. В масс-спектрометре использовали напряжение ESI 5500 В и температуру источника 650°C, со временем выдержки 50 мс для каждой трансформации.
Аналитические данные
MRM индивидуальных трансформаций был сохранен в виде текстовых файлов, и хроматограммы экстрагированных ионов были интегрированы и обработаны с использованием программного обеспечения RapidFire® для интеграции пиков (version 4,0).
Используя интегрированную площадь пика, полученные данные для 3-HK анализировали в рамках ActivityBase (ID Business Solutions Ltd, Surrey, UK). Кривые зависимости доза-ответ строили по уравнению (1):
где a обозначает ингибированный ответ, d обозначает полностью ингибированный ответ, [I] обозначает ингибирующую концентрацию, IC50 обозначает [I], которая дает 0,5×(a-d), и S обозначает угловой коэффициент Хилла.
Соединения примеров 1-30 были протестированы по существу, как описано по меньшей мере в одном из указанных выше анализов. Специалисту в данной области будет очевидно, что связанные in vitro анализы и анализы на основе клеток для определения функциональной активности обладают изменчивостью показаний от эксперимента к эксперименту. Соответственно, следует понимать, что значения pIC50, приведенные ниже, являются только иллюстративными.
Проиллюстрированные соединения настоящего изобретения имеют средние значения pIC50≥5,5 по меньшей мере в одном из приведенных выше анализах МС Rapidfire.
Соединения примеров 1, 2, 2a-2l, 3, 4, 6, 7, 9, 10-20, 21, 23, 26, 28 и 29 имеют средние значения pIC50≥7,5 по меньшей мере в одном из приведенных выше анализах Rapidfire.
Соединение примера 1 имеет среднее значение pIC50 9,0 по меньшей мере в одном из приведенных выше анализах Rapidfire.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ПРОИЗВОДНЫЕ 3-(5-ХЛОР-2-ОКСОБЕНЗО[D]ОКСАЗОЛ-3(2Н)-ИЛ)ПРОПАНОВОЙ КИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ КМО ИНГИБИТОРОВ | 2014 |
|
RU2693016C1 |
| СОЕДИНЕНИЯ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2009 |
|
RU2561109C2 |
| БЕНЗОКСАЗИН-ОКСАЗОЛИДИНОНОВОЕ СОЕДИНЕНИЕ, ЗАМЕЩЕННОЕ АЗОТСОДЕРЖАЩИМ ГЕТЕРОЦИКЛОМ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ | 2018 |
|
RU2744784C1 |
| АНТИБИОТИЧЕСКИЕ ПРОИЗВОДНЫЕ 2-ОКСО-ОКСАЗОЛИДИН-3, 5-ДИИЛА | 2012 |
|
RU2616609C2 |
| КОНДЕНСИРОВАННОЕ ПРОИЗВОДНОЕ БЕНЗАМИДА И ИНГИБИТОР АКТИВНОСТИ ПОДТИПА 1 РЕЦЕПТОРА ВАНИЛЛОИДА (VR1) | 2005 |
|
RU2392278C2 |
| СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ КОГНИТИВНЫХ ФУНКЦИЙ | 2012 |
|
RU2665021C2 |
| СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ С ПОМОЩЬЮ СОЕДИНЕНИЙ 2,4-ПИРИМИДИНДИАМИНА | 2013 |
|
RU2659777C2 |
| N-(ФЕНИЛСУЛЬФОНИЛ) БЕНЗАМИДЫ И РОДСТВЕННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ BCL-2 | 2017 |
|
RU2744358C2 |
| ДЕСТРУКТОРЫ БЕЛКА MDM2 | 2017 |
|
RU2743432C2 |
| N-(ФЕНИЛСУЛЬФОНИЛ) БЕНЗАМИДЫ И РОДСТВЕННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ BCL-2 | 2017 |
|
RU2722560C1 |
Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), фармацевтическим композициям на их основе, применению и способу лечения состояния или расстройства, опосредованного КМО. Технический результат: получены новые соединения, которые являются ингибиторами KMO и могут быть применимы для лечения расстройств, опосредованных КМО, например острого панкреатита, хронической болезни почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности. 8 н. и 6 з.п. ф-лы, 30 пр.
1. Соединение формулы (I):
(I)
где
R1 представляет собой 5-6-членный гетероарил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O или N, где указанный гетероарил является необязательно замещенным метилом, этилом или галогеном; и
R2 представляет собой H, метил или этил,
или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где R1 выбран из группы, состоящей из оксазолила, пиридинила, пиримидинила, пиридазинила и имидазолила, где оксазолил, пиридинил, пиримидинил и пиридазинил могут быть необязательно замещены метилом, этилом, хлором или фтором.
3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1 или 2, где R1 представляет собой пиридинил, необязательно замещенный этилом, метилом, хлором или фтором.
4. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из предшествующих пунктов, где R2 представляет собой этил.
5. Соединение, выбранное из группы, состоящей из:
(3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(2-метил-1,3-оксазол-5-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(1,3-оксазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(1H-имидазол-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-[6-хлор-3-оксо-7-(пиридин-2-илметокси)-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил]пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-хлорпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-фторпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридазин-3-ил)этокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(6-метилпиридазин-3-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(6-метилпиридазин-3-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиридин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(5-хлорпиридин-2-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[(5-метилпиридин-2-ил)метокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-этилпиридин-2-ил)этокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиримидин-2-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-метилпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-7-[1-(5-хлорпиримидин-2-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
3-{6-хлор-3-оксо-7-[1-(пиридазин-3-ил)пропокси]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты и
3-{6-хлор-7-[1-(6-метилпиридазин-3-ил)пропокси]-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-4-ил}пропионовой кислоты;
или его фармацевтически приемлемой соли.
6. Соединение, представляющее собой (R)-3-(6-хлор-7-(1-(5-хлорпиридин-2-ил)пропокси)-3-оксо-2H-бензо[b][1,4]оксазин-4(3H)-ил)пропионовую кислоту формулы:
или ее фармацевтически приемлемую соль.
7. Соединение по п.6 в виде свободной кислоты.
8. Фармацевтическая композиция для лечения состояния или расстройства, опосредованного KMO, содержащая: a) терапевтически эффективное количество соединения, как определено в любом из пп.1-7, или его фармацевтически приемлемой соли; и b) фармацевтически приемлемый эксципиент.
9. Соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении состояния или расстройства, опосредованного KMO.
10. Соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении состояния или расстройства, опосредованного KMO, выбранного из острого панкреатита, хронической болезни почек, острой болезни почек, острой травмы почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности.
11. Применение соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для лечения состояния или расстройства, опосредованного KMO.
12. Применение соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для лечения состояния или расстройства, опосредованного KMO, выбранного из острого панкреатита, хронической болезни почек, острой болезни почек, острой травмы почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности.
13. Способ лечения состояния или расстройства, опосредованного KMO, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли.
14. Способ лечения состояния или расстройства, опосредованного KMO, выбранного из острого панкреатита, хронической болезни почек, острой болезни почек, острой травмы почек, других состояний, связанных с синдромом системной воспалительной реакции (SIRS), болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, спиноцеребральной атаксии, болезни Паркинсона, комплекса СПИД-деменции, ВИЧ-инфекции, амиотрофического латерального склероза (ALS), депрессии, шизофрении, сепсиса, кардиогенного шока, тяжелой травмы, острого повреждения легких, острого респираторного дистресс-синдрома, острого холецистита, тяжелых ожогов, пневмонии, обширных хирургических вмешательств, ишемической болезни кишечника, тяжелой острой болезни печени, тяжелой острой печеночной энцефалопатии или острой почечной недостаточности, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли.
| EA201491606A1, 31.03.2015 | |||
| WO9717317A1, 15.05.1997 | |||
| КОМПОЗИЦИИ, СИНТЕЗ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ АРИЛПИПЕРАЗИНА | 2010 |
|
RU2506262C2 |
