ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОПУХОЛИ Российский патент 2021 года по МПК A61K31/53 A61K31/47 A61P35/00 

Область техники

[0001] Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения опухоли, которую применяют в комбинированной терапии с использованием ленватиниба и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида.

Уровень техники

[0002] Ленватиниб – это пероральный ингибитор тирозинкиназы, оказывающий ингибирующий эффект на ангиогенез (патентный литературный источник 1) и направленный на рецепторы 1–3 фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR), рецепторы 1–4 фактора роста фибробластов (FGFR), перестроенные во время трансфекции (RET), KIT и рецептор фактора роста тромбоцитов (PDGFR) α (патентные литературные источники 2–5), при этом известен как терапевтическое средство против различных опухолей, таких как рак щитовидной железы, рак легкого, меланома, рак эндометрия, почечноклеточная карцинома, глиома, гепатоцеллюлярная карцинома и рак яичника. Соединение под названием ленватиниб представляет собой 4–(3–хлор–4–(циклопропиламинокарбонил)аминофенокси)–7–метокси–6–хинолинкарбоксамид.

[0003] (6S,9aS)–N–Бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид (далее в данном документе также называемый E7386) известен как соединение, обладающее активностью в отношении модуляции пути Wnt (патентный литературный источник 6).

[0004] Ранее не сообщалось, оказывает ли комбинированная терапия с использованием ленватиниба и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида какой–либо противоопухолевый эффект.

[0005] В целом, если противоопухолевое терапевтическое средство применяется отдельно, то зачастую оно не является эффективным для всех пациентов. Соответственно, до настоящего времени были предприняты попытки улучшить эффективность лечения посредством применения нескольких противоопухолевых терапевтических средств в комбинации и достижения усиления противоопухолевого эффекта или снижения побочных реакций (патентные литературные источники 7–9).

Список использованной литературы

Патентный литературный источник

[0006]

Патентный литературный источник 1: патент США № 7253286

Патентный литературный источник 2: публикация заявки на патент США № 2004–253205

Патентный литературный источник 3: публикация заявки на патент США № 2010–105031

Патентный литературный источник 4: публикация заявки на патент США № 2009–209580

Патентный литературный источник 5: публикация заявки на патент США № 2009–264464

Патентный литературный источник 6: патент США № 9174998

Патентный литературный источник 7: публикация международной заявки № WO 2009/140549

Патентный литературный источник 8: публикация заявки на патент США № 2004–259834

Патентный литературный источник 9: патент США № 6217866

Краткое описание изобретения

Техническая задача

[0007] При таких обстоятельствах ожидается дальнейшее развитие новой комбинированной терапии с использованием противоопухолевых терапевтических средств.

Решение задачи

[0008] Авторы настоящего изобретения провели тщательные исследования и, в результате, завершили настоящее изобретение, обнаружив, что комбинированное введение ленватиниба и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида оказывает неожиданный противоопухолевый эффект.

[0009] В частности, в настоящем изобретении предусмотрено следующее [1] – [33].

[1] Фармацевтическая композиция, содержащая (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид, где (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводится в комбинации с ленватинибом или его фармацевтически приемлемой солью.

[2] Фармацевтическая композиция, содержащая ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль, где ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль вводится в комбинации с (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамидом.

[3] Фармацевтическая композиция для лечения опухоли, содержащая (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид, где (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводится в комбинации с ленватинибом или его фармацевтически приемлемой солью.

[4] Фармацевтическая композиция для лечения опухоли, содержащая ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль, где ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль вводится в комбинации с (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамидом.

[5] Терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, содержащее (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид, где (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводится в комбинации с ленватинибом или его фармацевтически приемлемой солью.

[6] Терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, содержащее ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль, где ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль вводится в комбинации с (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамидом.

[7] Способ лечения опухоли, предусматривающий введение ленватиниба или его фармацевтически приемлемой соли и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида нуждающемуся в этом пациенту.

[8] Применение (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида с целью получения фармацевтической композиции для лечения опухоли, где (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводится в комбинации с ленватинибом или его фармацевтически приемлемой солью.

[9] Применение ленватиниба или его фармацевтически приемлемой соли с целью получения фармацевтической композиции для лечения опухоли, где ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль вводится в комбинации с (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамидом.

[10] (6S,9aS)–N–Бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид для лечения опухоли, где (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводится в комбинации с ленватинибом или его фармацевтически приемлемой солью.

[11] Ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль для лечения опухоли, где ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль вводится в комбинации с (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамидом.

[12] Набор, содержащий состав, содержащий ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль, и состав, содержащий (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид.

[13] Набор в соответствии с пунктом [12], где набор представляет собой набор для лечения опухоли.

[14] Фармацевтическая композиция, содержащая ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид.

[15] Фармацевтическая композиция для лечения опухоли, содержащая ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид.

[16] Терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, содержащее ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид.

[17] Ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид для применения в лечении опухоли.

[18] (6S,9aS)–N–Бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид для применения в лечении опухоли в комбинации с ленватинибом или его фармацевтически приемлемой солью.

[19] Ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении опухоли в комбинации с (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамидом.

[20] Применение ленватиниба или его фармацевтически приемлемой соли и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида с целью получения фармацевтической композиции для лечения опухоли.

[21] Фармацевтическая композиция или терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, дополнительно содержащие вспомогательное вещество.

[22] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор, где ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой ленватиниба мезилат.

[23] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор, где ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводятся одновременно, по отдельности, непрерывно или через определенные интервалы времени.

[24] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор, где опухоль представляет собой рак молочной железы, рак щитовидной железы, гепатоцеллюлярную карциному, колоректальный рак, почечноклеточную карциному, рак головы и шеи, рак эндометрия или меланому.

[25] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор в соответствии с пунктом [24], где опухоль представляет собой рак молочной железы.

[26] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор в соответствии с пунктом [24], где опухоль представляет собой рак щитовидной железы.

[27] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор в соответствии с пунктом [26], где рак щитовидной железы представляет собой анапластический рак щитовидной железы.

[28] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор в соответствии с пунктом [24], где опухоль представляет собой гепатоцеллюлярную карциному.

[29] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор в соответствии с пунктом [24], где опухоль представляет собой колоректальный рак.

[30] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор в соответствии с пунктом [24], где опухоль представляет собой почечноклеточную карциному.

[31] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор в соответствии с пунктом [24], где опухоль представляет собой рак головы и шеи.

[32] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор в соответствии с пунктом [24], где опухоль представляет собой рак эндометрия.

[33] Фармацевтическая композиция, терапевтическое средство, предназначенное для лечения опухоли, способ лечения, применение, соединение или набор в соответствии с пунктом [24], где опухоль представляет собой меланому.

Полезные эффекты изобретения

[0010] Настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию для лечения опухоли, которую применяют в комбинированной терапии с использованием ленватиниба и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида. Данная фармацевтическая композиция для лечения опухоли оказывает неожиданные противоопухолевые эффекты в отношении нуждающихся в этом пациентов.

Краткое описание графических материалов

[0011]

[Фигура 1] Фигура 1 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 12,5 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в моделях спонтанного рака молочной железы при серийной трансплантации у трансгенной мыши (MMTV–Wnt–1). На графике * и *** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, ***: p < 0,001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 2] Фигура 2 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в моделях спонтанного рака молочной железы при серийной трансплантации у трансгенной мыши (MMTV–Wnt–1). На графике **** указывает на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 3] Фигура 3 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в моделях спонтанного рака молочной железы при серийной трансплантации у трансгенной мыши (MMTV–Wnt–1). На графике *** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (***: p < 0,001, ****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 4] Фигура 4 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в ортотопических трансплантационных моделях рака молочной железы мыши 4T1. На графике * и ** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, **: p < 0,01; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 5] Фигура 5 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях рака молочной железы человека MDA–MB–231. На графике * и *** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, ***: p < 0,001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 6] Фигура 6 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 12,5 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях клеточной линии SEKI меланомы человека. На графике * и ** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, **: p < 0,01; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 7] Фигура 7 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях клеточной линии SEKI меланомы человека. На графике * и *** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, ***: p < 0,001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 8] Фигура 8 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 12,5 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях клеточной линии HTC/C3 анапластического рака щитовидной железы человека. На графике ** и *** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01, ***: p < 0,001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 9] Фигура 9 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях клеточной линии HTC/C3 анапластического рака щитовидной железы человека. На графике *** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (***: p < 0,001, ****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 10] Фигура 10 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях клеточной линии HTC/C3 анапластического рака щитовидной железы человека. На графике ** и *** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01, ***: p < 0,001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 11] Фигура 11 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 12,5 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях линии SNU398 гепатоцеллюлярной карциномы человека. На графике * и ** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, **: p < 0,01; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 12] Фигура 12 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях линии SNU398 гепатоцеллюлярной карциномы человека. На графике ** указывает на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 13] Фигура 13 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях линии SNU398 гепатоцеллюлярной карциномы человека. На графике **** указывает на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 14] Фигура 14 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях линии HepG2 гепатоцеллюлярной карциномы человека. На графике ** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01, ****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 15] Фигура 15 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в трансплантационных моделях линии Colo–205 колоректального рака человека. На графике ** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01, ****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 16] Фигура 16 представляет собой график, демонстрирующий противоопухолевый эффект от комбинированного применения 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в моделях подкожной трансплантации линии A–498 почечноклеточной карциномы человека. На графике **** указывает на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[Фигура 17] Фигура 17 представляет собой 10–кратно увеличенную фотографию, демонстрирующую супрессивный эффект в отношении образования микрососудов от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в ортотопических трансплантационных моделях рака молочной железы мыши 4T1, полученную посредством иммуноокрашивания, при котором проводили совместное окрашивание CD31/α–SMA. Фигура 17(a) представляет собой фотографию контрольной группы, фигура 17(b) представляет собой фотографию группы с введением отдельно E7386 (25 мг/кг), фигура 17(c) представляет собой фотографию группы с введением отдельно ленватиниба мезилата (10 мг/кг), и фигура 17(d) представляет собой фотографию группы с комбинированным введением E7386 (25 мг/кг) и ленватиниба мезилата (10 мг/кг).

[Фигура 18] Фигура 18 представляет собой 200–кратно увеличенную фотографию, демонстрирующую супрессивный эффект в отношении покрытия перицитами (покрытие кровеносных сосудов сосудистыми перицитами) от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в ортотопических трансплантационных моделях рака молочной железы мыши 4T1, полученную посредством иммуноокрашивания, при котором проводили совместное окрашивание CD31/α–SMA. Фигура 18(a) представляет собой фотографию контрольной группы, фигура 18(b) представляет собой фотографию группы с введением отдельно E7386 (25 мг/кг), фигура 18(c) представляет собой фотографию группы с введением отдельно ленватиниба мезилата (10 мг/кг), и фигура 18(d) представляет собой фотографию группы с комбинированным введением E7386 (25 мг/кг) и ленватиниба мезилата (10 мг/кг). Микрососуд, окрашенный CD31, обозначен черной стрелкой. Кровеносный сосуд, положительный в отношении как CD31, так и α–SMA, обозначен незакрашенной стрелкой.

[Фигура 19] Фигура 19 представляет собой график, демонстрирующий супрессивный эффект в отношении образования микрососудов от комбинированного применения 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в ортотопических трансплантационных моделях рака молочной железы мыши 4T1. На графике * и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо супрессировали образование микрососудов по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, ****: p < 0,0001; множественное сравнение Даннета).

[Фигура 20] Фигура 20 представляет собой график, демонстрирующий супрессивный эффект в отношении покрытия перицитами (покрытие кровеносных сосудов сосудистыми перицитами) от комбинированного применения 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в ортотопических трансплантационных моделях рака молочной железы мыши 4T1. На графике * и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо супрессировали покрытие перицитами по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, ****: p < 0,0001; множественное сравнение Даннета).

[Фигура 21] Фигура 21 представляет собой график, демонстрирующий супрессивный эффект в отношении образования микрососудов от комбинированного применения 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в моделях с подкожной трансплантацией гепатоцеллюлярной карциномы человека HepG2. На графике ** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо супрессировали образование микрососудов по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01, ****: p < 0,0001; множественное сравнение Даннета).

[Фигура 22] Фигура 22 представляет собой график, демонстрирующий супрессивный эффект в отношении покрытия перицитами (покрытие кровеносных сосудов сосудистыми перицитами) от комбинированного применения 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата в моделях с подкожной трансплантацией гепатоцеллюлярной карциномы человека HepG2. На графике **** указывает на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо супрессировали покрытие перицитами по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (****: p < 0,0001; множественное сравнение Даннета).

Описание вариантов осуществления

[0012] Ниже описаны варианты осуществления настоящего изобретения. Следующие варианты осуществления являются только примерами для описания настоящего изобретения, и не предполагается ограничение настоящего изобретения только данными вариантами осуществления. Настоящее изобретение может быть осуществлено в различных видах без отступления от сущности настоящего изобретения.

Необходимо отметить, что документы, публикации, патентные публикации и другие патентные литературные источники, процитированные в данном описании, включены в данный документ посредством ссылок.

[0013] Ленватиниб относится к 4–(3–хлор–4–(циклопропиламинокарбонил)аминофенокси)–7–метокси–6–хинолинкарбоксамиду, и его структурная формула представлена следующей формулой:

Ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль можно получать с помощью способа, описанного в патентном литературном источнике 1. Одним из примеров фармацевтически приемлемой соли ленватиниба является ленватиниба мезилат. Ленватиниба мезилат также называется E7080 или Lenvima(R).

[0014] Структурная формула (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида представлена следующей формулой:

(6S,9aS)–N–Бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид можно получать с помощью способа, описанного в патентном литературном источнике 6. (6S,9aS)–N–Бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид также называется E7386.

[0015] Хотя термин "фармакологически приемлемая соль" не ограничивается конкретным типом солей, их примеры включают соли неорганических кислот, соли органических кислот, соли неорганических оснований, соли органических оснований и соли кислых или основных аминокислот.

[0016] Примеры солей неорганических кислот включают соли хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, азотной кислоты и фосфорной кислоты. Примеры солей органических кислот включают соли уксусной кислоты, янтарной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты, винной кислоты, лимонной кислоты, молочной кислоты, стеариновой кислоты, бензойной кислоты, метансульфоновой кислоты (мезиловой кислоты), этансульфоновой кислоты и п–толуолсульфоновой кислоты.

[0017] Примеры солей неорганических оснований включают соли щелочных металлов, такие как соль натрия и соль калия; соли щелочноземельных металлов, такие как соль кальция и соль магния; соль алюминия и соль аммония. Примеры солей органических оснований включают соли диэтиламина, диэтаноламина, меглюмина и N,N–дибензилэтилендиамина.

[0018] Примеры солей кислых аминокислот включают соли аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты. Примеры солей основных аминокислот включают соли аргинина, лизина и орнитина.

[0019] Примеры фармакологически приемлемых солей ленватиниба включают соли органических кислот, и одним из вариантов их осуществления является метансульфонат (мезилат).

[0020] В случае, если присутствуют сольваты и оптические изомеры ленватиниба или (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида по настоящему изобретению, то такие сольваты и оптические изомеры включены в него. Примеры сольватов включают гидрат и ангидрид. Примеры растворителей включают воду, спирты (например, метанол, этанол и н–пропанол) и диметилформамид.

[0021] Более того, ленватиниб или (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид по настоящему изобретению может быть кристаллическим или аморфным. В случае, если присутствуют полиморфные кристаллы, то можно применять монокристаллическую форму или смесь любых из этих кристаллических форм.

[0022] Дозу ленватиниба или его фармакологически приемлемой соли можно надлежащим образом подобрать в зависимости от интенсивности симптомов, от развития нежелательных эффектов, от возраста, пола, веса тела и различий в чувствительности пациента, от пути введения, от продолжительности введения, от интервала между введениями, от типа фармацевтического состава и т. п.

[0023] Доза ленватиниба или его фармакологически приемлемой соли не имеет конкретных ограничений, но обычно составляет при пероральном введении взрослому человеку (вес тела: 60 кг) или ребенку 0,1–500 мг, 0,5–300 мг или 1–100 мг в день или составляет 0,1–500 мг/м² (площадь поверхности тела, ниже по тексту то же самое), 0,5–300 мг/м² или 1,0–100 мг/м² в день. Эту дозу обычно можно вводить один раз в день или два–три раза в день. Если пациент подвергся чрезмерному токсическому воздействию, то необходимо снизить дозу. Дозу и схему дозирования можно изменять в случае применения одного или нескольких дополнительных химиотерапевтических средств в дополнение к комбинированной терапии согласно настоящему изобретению. Схему дозирования может определить врач, который проводит лечение конкретного пациента.

[0024] Дозу и схему дозирования (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида можно изменять в соответствии с конкретными симптомами заболевания и совокупностью всех симптомов пациента. Дозу можно надлежащим образом снизить в зависимости от возраста, пола, симптомов, развития нежелательных эффектов и т. п.

[0025] Доза (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида не имеет конкретных ограничений, но обычно составляет 0,1–5000 мг, 0,5–3000 мг или 1,0–1000 мг в день в случае перорального введения взрослому человеку (вес тела: 60 кг) или ребенку. Как правило, ее можно вводить одной порцией или двумя–шестью разделенными порциями в день или в течение нескольких дней. В случае применения одного или нескольких дополнительных химиотерапевтических средств можно изменять дозу и схему дозирования. Схему дозирования может определить врач, который проводит лечение конкретного пациента.

[0026] Доза ленватиниба или (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида при комбинированном введении по настоящему изобретению обычно может быть задана равной дозе при их введении по отдельности или ниже таковой. Конкретную дозу, путь введения, частоту введения, цикл введения и т. п. можно надлежащим образом определить с учетом возраста, пола и симптомов пациента, развития нежелательных эффектов и т. п.

[0027] Способ введения ленватиниба и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида в соответствии с настоящим изобретением не имеет конкретных ограничений, при этом во время введения ленватиниб и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид можно вводить в комбинации. Например, ленватиниб и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводятся пациенту одновременно, по отдельности, непрерывно или через определенные интервалы времени. В данном документе термин "одновременно" означает, что все ингредиенты вводят в один и тот же период времени или точно в одно и то же время, или вводят одним и тем же путем. Термин "по отдельности" означает, что все ингредиенты вводят через определенные интервалы времени или с различной частотой, или вводят различными путями. Термин "непрерывно" означает, что все ингредиенты вводят одним и тем же или различными путями в произвольном порядке в течение предварительно заданного периода времени. Термин "через определенные интервалы времени" означает, что все ингредиенты вводят одним и тем же или различными путями с определенными интервалами для соответствующих ингредиентов. При комбинированном введении ленватиниба и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида, если ленватиниб вводят в течение одного цикла введения (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида, описанного выше, или в течение периода времени, за который данный цикл повторяют, то считается, что ленватиниб и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводятся в комбинации. В одном способе введения для осуществления комбинированного введения в соответствии с настоящим изобретением ленватиниб и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводят перорально. Более того, комбинированное введение по настоящему изобретению можно осуществлять одновременно, по отдельности, непрерывно или через определенные интервалы времени вместе с введением терапевтического средства, предназначенного для лечения опухоли, отличного от ленватиниба и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида.

[0028] Фармацевтическую композицию для лечения опухоли по настоящему изобретению можно составить, например, с помощью способа, описанного в 16–ом издании Японской фармакопеи (JP), в фармакопее США (USP) или в Европейской фармакопее (EP).

[0029] Опухоль, на которую направлено настоящее изобретение, представляет собой, главным образом, например, рак молочной железы, рак щитовидной железы, гепатоцеллюлярную карциному (HCC), колоректальный рак (CRC), почечноклеточную карциному (RCC), рак головы и шеи, рак эндометрия или меланому, хотя конкретно этим не ограничивается. Опухоль, на которую направлен один из аспектов настоящего изобретения, представляет собой рак щитовидной железы. Кроме того, рак щитовидной железы, на который направлен один из аспектов настоящего изобретения, представляет собой анапластический рак щитовидной железы (ATC). Опухоль, на которую направлен еще один аспект настоящего изобретения, представляет собой гепатоцеллюлярную карциному.

Примеры

[0030] Ниже представлены конкретные примеры настоящего изобретения, однако настоящее изобретение не ограничивается ими.

[0031] [Пример 1] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в модели спонтанного рака молочной железы при серийной трансплантации у трансгенной мыши (MMTV–Wnt–1)

Собирали эпителиальные клетки спонтанного рака молочной железы у трансгенной мыши (MMTV–Wnt–1, The Jackson Laboratory), обуславливающего локальную экспрессию Wnt–1 в молочной железе, трансплантировали мыши исходной линии (C57BL/6J, Charles River Laboratories Japan, Inc.) с применением троакара и производили пассажи. Опухоль, трансплантированную и подверженную пассажам таким образом, оперативно удаляли, когда она достигала примерно 1,5 г, и из нее получали фрагмент примерно 30 мг, который подкожно трансплантировали по бокам тел каждой из пяти мышей (C57BL/6J) из контрольной группы, группы с введением отдельно 12,5, 25 или 50 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 12,5, 25 или 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. После подтверждения приживления опухоли вводили E7386 (12,5, 25 или 50 мг/кг, дважды в сутки, 14 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы вводили 0,1 моль/л хлористоводородную кислоту (дважды в сутки, 14 дней).

После того, как день начала введения задали как день 1, с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряли в день 4, день 8, день 11 и день 15 большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши.

Рассчитывали объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0032] Результаты в отношении RTV представлены в таблице 1 и на фигурах 1, 2 и 3. Числа в таблице 1 означают Среднее значение±Стандартное отклонение (SD) RTV. В результате комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный противоопухолевый эффект в моделях спонтанного рака молочной железы при серийной трансплантации у трансгенной мыши (MMTV–Wnt–1). На фигурах 1, 2 и 3 *, *** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, ***: p < 0,001, ****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[0033] [Таблица 1]

Группа День 4 День 8 День 11 День 15 Контрольная группа 2,12±0,64 3,93±1,61 5,82±2,41 8,50±3,10 Группа с введением 12,5 мг/кг E7386 1,34±0,25 1,20±0,40 1,70±0,67 2,12±0,65 Группа с введением 25 мг/кг E7386 1,26±0,28 1,56±0,48 2,40±0,22 3,69±0,92 Группа с введением 50 мг/кг E7386 0,93±0,23 1,05±0,26 1,34±0,35 1,59±1,03 Группа с введением 10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,03±0,13 0,87±0,13 0,98±0,21 1,05±0,25 Группа с введением 12,5 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 0,54±0,06 0,39±0,05 0,42±0,13 0,39±0,11 Группа с введением 25 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 0,52±0,07 0,37±0,10 0,36±0,13 0,32±0,10 Группа с введением 50 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 0,30±0,02 0,23±0,04 0,25±0,05 0,23±0,04

[0034] [Пример 2] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в ортотопической трансплантационной модели рака молочной железы мыши 4T1

Клетки рака молочной железы мыши 4T1 (ATCC) культивировали с применением среды RPMI1640 (Sigma–Aldrich Co. LLC), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигали состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекали с применением трипсина–EDTA. Готовили суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса так, чтобы концентрация составляла 1,0 × 10⁷ клеток/мл. Трансплантировали по 0,1 мл полученной клеточной суспензии в третьи справа жировые подушечки молочных желез каждой из пяти мышей (C57BL/6J, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 25 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 9 дней после трансплантации вводили E7386 (25 мг/кг, дважды в сутки, 14 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы не вводили никакого лекарственного средства.

После того, как день начала введения задали как день 1, с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряли в день 3, день 6, день 9 и день 14 большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши.

Рассчитывали объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0035] Результаты в отношении RTV представлены в таблице 2 и на фигуре 4. Числа в таблице 2 означают Среднее значение±Стандартное отклонение (SD) RTV. В результате комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный противоопухолевый эффект в ортотопических трансплантационных моделях рака молочной железы мыши 4T1. На фигуре 4 * и ** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, **: p < 0,01; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[0036] [Таблица 2]

Группа День 3 День 6 День 9 День 14 Контрольная группа 1,71±0,25 2,30±0,41 3,42±1,48 5,14±2,53 Группа с введением 10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,36±0,28 1,46±0,28 1,75±0,41 1,99±0,26 Группа с введением 25 мг/кг E7386 1,59±0,38 1,75±0,42 2,17±0,76 2,32±0,68 Группа с введением 25 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,06±0,15 0,81±0,13 0,83±0,13 0,99±0,21

[0037] [Пример 3] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в трансплантационной модели рака молочной железы человека MDA–MB–231

Клетки рака молочной железы человека MDA–MB–231 (ATCC) культивировали с применением среды RPMI1640 (Sigma–Aldrich Co. LLC), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигали состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекали с применением трипсина–EDTA. Готовили суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса, содержащего 50% матригеля, к клеткам так, чтобы концентрация составляла 10,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантировали по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из пяти безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 25 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 6 дней после трансплантации вводили E7386 (25 мг/кг, дважды в сутки, 10 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 10 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы не вводили никакого лекарственного средства.

После того, как день начала введения задали как день 1, с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряли в день 4, день 7 и день 10 большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши.

Рассчитывали объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0038] Результаты в отношении RTV представлены в таблице 3 и на фигуре 5. Числа в таблице 3 означают Среднее значение±Стандартное отклонение (SD) RTV. В результате комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный противоопухолевый эффект в трансплантационных моделях рака молочной железы человека MDA–MB–231. На фигуре 5 * и *** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, ***: p < 0,001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[0039] [Таблица 3]

Группа День 4 День 7 День 10 Контрольная группа 2,70±0,26 3,87±0,53 5,19±0,57 Группа с введением 25 мг/кг E7386 2,34±0,11 3,19±0,38 4,49±0,51 Группа с введением 10 мг/кг ленватиниба мезилата 2,01±0,60 2,41±0,60 2,67±1,23 Группа с введением 25 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,07±0,22 1,04±0,37 0,97±0,29

[0040] [Пример 4] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в трансплантационной модели клеточной линии SEKI меланомы человека

Клеточную линию SEKI меланомы человека (клеточный банк JCRB) культивировали с применением среды RPMI1640 (Sigma–Aldrich Co. LLC), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигали состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекали с применением трипсина–EDTA. Готовили суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса, содержащего 50% матригеля, к клеткам так, чтобы концентрация составляла 5,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантировали по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из шести безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 12,5 или 25 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 12,5 или 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 13 дней после трансплантации вводили E7386 (12,5 или 25 мг/кг, дважды в сутки, 14 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы вводили 0,1 моль/л хлористоводородную кислоту (дважды в сутки, 14 дней).

После того, как день начала введения задали как день 1, с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряли в день 4, день 8, день 11 и день 15 большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши.

Рассчитывали объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0041] Результаты в отношении RTV представлены в таблице 4 и на фигурах 6 и 7. Числа в таблице 4 означают Среднее значение±Стандартное отклонение (SD) RTV. В результате комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный противоопухолевый эффект в трансплантационных моделях клеточной линии SEKI меланомы человека. На фигурах 6 и 7 *, ** и *** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, **: p < 0,01, ***: p < 0,001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[0042] [Таблица 4]

Группа День 4 День 8 День 11 День 15 Контрольная группа 1,87±0,12 3,32±0,31 4,96±0,71 7,10±1,02 Группа с введением 12,5 мг/кг E7386 1,65±0,22 3,02±0,31 4,19±0,80 5,53±1,21 Группа с введением 25 мг/кг E7386 1,56±0,21 2,94±0,22 4,35±0,36 5,90±1,34 Группа с введением 10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,60±0,22 2,66±0,46 3,81±0,80 4,67±1,19 Группа с введением 12,5 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,15±0,10 1,64±0,29 2,27±0,47 2,51±0,57 Группа с введением 25 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,21±0,17 1,84±0,30 2,68±0,52 3,31±0,40

[0043] [Пример 5] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в трансплантационной модели клеточной линии HTC/C3 анапластического рака щитовидной железы человека

Клеточную линию HTC/C3 анапластического рака щитовидной железы человека (клеточный банк JCBR) культивировали с применением среды D–MEM с высоким содержанием глюкозы (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигали состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекали с применением трипсина–EDTA. Готовили суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса, содержащего 50% матригеля, к клеткам так, чтобы концентрация составляла 1,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантировали по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из пяти безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 12,5, 25 или 50 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 12,5, 25 или 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 11 дней после трансплантации вводили E7386 (12,5, 25 или 50 мг/кг, дважды в сутки, 14 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы вводили 0,1 моль/л хлористоводородную кислоту (дважды в сутки, 14 дней).

После того, как день начала введения задали как день 1, с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряли в день 4, день 8, день 11 и день 15 большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши.

Рассчитывали объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0044] Результаты в отношении RTV представлены в таблице 5 и на фигурах 8, 9 и 10. Числа в таблице 5 означают Среднее значение±Стандартное отклонение (SD) RTV. В результате комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный противоопухолевый эффект в трансплантационных моделях клеточной линии HTC/C3 анапластического рака щитовидной железы человека. На фигурах 8, 9 и 10 **, *** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01, ***: p < 0,001, ****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[0045] [Таблица 5]

Группа День 4 День 8 День 11 День 15 Контрольная группа 1,70±0,12 4,23±0,86 6,44±1,12 8,78±2,76 Группа с введением 12,5 мг/кг E7386 1,68±0,13 4,02±0,40 6,27±0,93 8,58±2,48 Группа с введением 25 мг/кг E7386 1,72±0,10 3,99±0,62 6,44±1,09 8,81±2,14 Группа с введением 50 мг/кг E7386 1,74±0,09 4,00±0,66 5,85±1,42 7,83±2,28 Группа с введением 10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,71±0,10 3,57±0,54 5,15±1,07 6,23±1,71 Группа с введением 12,5 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,48±0,17 2,21±0,35 2,58±0,57 2,83±0,70 Группа с введением 25 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,40±0,08 1,87±0,29 2,08±0,35 2,04±0,36 Группа с введением 50 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,48±0,14 2,23±0,35 2,23±0,50 2,27±0,45

[0046] [Пример 6] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в трансплантационной модели гепатоцеллюлярной карциномы человека SNU398.

Клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека SNU398 (ATCC) культивируют с применением среды RPMI1640 (Sigma–Aldrich Co. LLC), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигают состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекают с применением трипсина–EDTA. Готовят суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса, содержащего 50% матригеля, к клеткам так, чтобы концентрация составляла 5,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантируют по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно E7386, группы с введением отдельно ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением E7386 и ленватиниба мезилата. После образования опухоли вводят E7386 (пероральное введение) и ленватиниба мезилат (пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения.

Со дня начала введения регулярно с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряют большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши, и рассчитывают объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV). Исходя из результатов в отношении RTV, можно оценить противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата.

Объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) рассчитывают в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0047] [Пример 6–1] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в трансплантационной модели линии SNU398 гепатоцеллюлярной карциномы человека.

Клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека линии SNU398 (ATCC) культивировали с применением среды RPMI1640 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигали состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекали с применением трипсина–EDTA. Готовили суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса, содержащего 50% матригеля, к клеткам так, чтобы концентрация составляла 5,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантировали по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из восьми безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 50 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 12,5, 25 или 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 9 дней после трансплантации вводили E7386 (12,5, 25 или 50 мг/кг, дважды в сутки, 14 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы не вводили никакого лекарственного средства.

После того, как день начала введения задали как день 1, с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряли в день 6, день 9, день 12 и день 15 большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши.

Рассчитывали объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0048] Результаты в отношении RTV представлены в таблице 6 и на фигурах 11, 12 и 13. Числа в таблице 6 означают Среднее значение±Стандартное отклонение (SD) RTV. В результате комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный противоопухолевый эффект в трансплантационных моделях линии SNU398 гепатоцеллюлярной карциномы человека. На фигурах 11, 12 и 13 *, ** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, **: p < 0,01, ****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[0049] [Таблица 6]

Группа День 6 День 9 День 12 День 15 Контрольная группа 6,22±1,70 11,0±3,95 12,3±4,31 14,2±3,91 Группа с введением 50 мг/кг E7386 3,74±0,75 6,31±1,74 7,33±0,89 10,1±1,03 Группа с введением 10 мг/кг ленватиниба мезилата 3,98±1,00 6,48±1,74 8,33±2,08 9,71±2,30 Группа с введением 12,5 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 2,98±0,59 4,07±1,16 6,12±2,34 7,41±2,39 Группа с введением 25 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 2,48±0,50 3,97±0,53 4,64±0,76 7,35±0,98 Группа с введением 50 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 2,06±0,29 2,97±0,61 3,85±0,43 5,50±1,33

[0050] [Пример 7] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в модели с подкожной трансплантацией линии HepG2 гепатоцеллюлярной карциномы человека

Клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека линии HepG2 (клеточный банк JCRB) культивировали с применением среды DMEM с низким содержанием глюкозы (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигали состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекали с применением трипсина–EDTA. Готовили суспензию путем добавления фосфатно–солевого буферного раствора, содержащего 50% матригеля, к клеткам так, чтобы концентрация составляла 10,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантировали по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из пяти безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 50 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 12 дней после трансплантации вводили E7386 (50 мг/кг, дважды в сутки, 14 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы не вводили никакого лекарственного средства.

После того, как день начала введения задали как день 1, с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряли в день 4, день 7, день 9, день 13 и день 15 большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши.

Рассчитывали объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0051] Результаты в отношении RTV представлены в таблице 7 и на фигуре 14. Числа в таблице 7 означают Среднее значение±Стандартное отклонение (SD) RTV. В результате комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный противоопухолевый эффект в трансплантационных моделях линии HepG2 гепатоцеллюлярной карциномы человека. На фигуре 14 ** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01, ****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[0052] [Таблица 7]

Группа День 4 День 7 День 9 День 13 День 15 Контрольная группа 1,45±0,12 2,82±0,46 4,31±1,03 5,38±1,32 6,58±1,93 Группа с введением 50 мг/кг E7386 1,45±0,23 3,05±0,57 3,96±0,53 5,60±1,02 6,23±1,39 Группа с введением 10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,10±0,08 1,60±0,94 2,07±0,88 2,70±1,47 3,43±1,46 Группа с введением 50 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 0,74±0,18 0,81±0,41 0,91±0,47 1,44±0,56 1,97±0,98

[0053] [Пример 8] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в трансплантационной модели линии Colo–205 колоректального рака человека

Клетки колоректального рака человека линии Colo–205 (ATCC) культивировали с применением среды RPMI1640 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигали состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекали с применением трипсина–EDTA. Готовили суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса к клеткам, так чтобы концентрация составляла 5,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантировали по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из пяти безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 50 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 8 дней после трансплантации вводили E7386 (50 мг/кг, один раз в сутки, 11 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 11 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы не вводили никакого лекарственного средства.

После того, как день начала введения задали как день 1, с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряли в день 4, день 8 и день 12 большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши.

Рассчитывали объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0054] Результаты в отношении RTV представлены в таблице 8 и на фигуре 15. Числа в таблице 8 означают Среднее значение±Стандартное отклонение (SD) RTV. В результате комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный противоопухолевый эффект в трансплантационных моделях линии Colo–205 колоректального рака человека. На фигуре 15 ** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01, ****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[0055] [Таблица 8]

Группа День 4 День 8 День 12 Контрольная группа 1,87±0,35 3,82±0,89 4,83±1,16 Группа с введением 50 мг/кг E7386 1,98±0,24 3,87±0,74 4,94±1,41 Группа с введением 10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,41±0,30 1,75±0,13 1,94±0,31 Группа с введением 50 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 0,80±0,18 0,71±0,20 0,77±0,10

[0056] [Пример 9] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в моделях с подкожной трансплантацией линии A–498 почечноклеточной карциномы человека.

Клетки почечноклеточной карциномы человека линии A–498 (ATCC) культивировали с применением среды RPMI1640 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигали состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 100%, клетки извлекали с применением трипсина–EDTA. Готовили суспензию путем добавления среды RPMI1640, содержащей 50% матригеля, к клеткам так, чтобы концентрация составляла 5,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантировали по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из шести безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 50 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 27 дней после трансплантации вводили E7386 (50 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы не вводили никакого лекарственного средства.

После того, как день начала введения задали как день 1, с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряли в день 5, день 8, день 12 и день 15 большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши.

Рассчитывали объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0057] Результаты в отношении RTV представлены в таблице 9 и на фигуре 16. Числа в таблице 9 означают Среднее значение±Стандартное отклонение (SD) RTV. В результате комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный противоопухолевый эффект в моделях с подкожной трансплантацией линии A–498 почечноклеточной карциномы человека. На фигуре 16 **** указывает на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо ингибировали рост опухоли по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (****: p < 0,0001; повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением Даннета).

[0058] [Таблица 9]

Группа День 5 День 8 День 12 День 15 Контрольная группа 1,41±0,14 1,69±0,13 2,11±0,09 2,51±0,16 Группа с введением 50 мг/кг E7386 1,33±0,24 1,70±0,26 2,04±0,29 2,29±0,33 Группа с введением 10 мг/кг ленватиниба мезилата 1,08±0,18 1,35±0,25 1,21±0,18 1,20±0,21 Группа с введением 50 мг/кг E7386+10 мг/кг ленватиниба мезилата 0,69±0,08 0,57±0,06 0,45±0,07 0,29±0,05

[0059] [Пример 10] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в трансплантационной модели рака головы и шеи человека SCC15

Клетки рака головы и шеи человека SCC15 (ATCC) культивируют с применением среды RPMI1640 (Sigma–Aldrich Co. LLC), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигают состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекают с применением трипсина–EDTA. Готовят суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса, содержащего 50% матригеля, к клеткам так, чтобы концентрация составляла 5,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантируют по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно E7386, группы с введением отдельно ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением E7386 и ленватиниба мезилата. После образования опухоли вводят E7386 (пероральное введение) и ленватиниба мезилат (пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения.

Со дня начала введения регулярно с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряют большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши, и рассчитывают объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV). Исходя из результатов в отношении RTV, можно оценить противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата.

Объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) рассчитывают в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0060] [Пример 11] Противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в трансплантационной модели рака эндометрия человека HEC–151

Клетки рака эндометрия человека HEC–151 (клеточный банк JCRB) культивируют с применением среды RPMI1640 (Sigma–Aldrich Co. LLC), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигают состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекают с применением трипсина–EDTA. Готовят суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса, содержащего 50% матригеля, к клеткам так, чтобы концентрация составляла 5,0 × 10⁷ клеток/мл. Подкожно трансплантируют по 0,1 мл полученной клеточной суспензии по бокам тел каждой из безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно E7386, группы с введением отдельно ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением E7386 и ленватиниба мезилата. После образования опухоли вводят E7386 (пероральное введение) и ленватиниба мезилат (пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения.

Со дня начала введения регулярно с помощью электронно–цифрового штангельциркуля (Mitutoyo Corp.) измеряют большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши, и рассчитывают объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV). Исходя из результатов в отношении RTV, можно оценить противоопухолевый эффект от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата.

Объем опухоли и относительный объем опухоли (RTV) рассчитывают в соответствии со следующими уравнениями.

Объем опухоли (мм³) = Большая ось опухоли (мм) × Малая ось опухоли² (мм²) / 2

Относительный объем опухоли (RTV) = Объем опухоли в день измерения/Объем опухоли в день начала введения

[0061] [Пример 12] Супрессивный эффект в отношении образования опухолевых сосудов от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в ортотопической трансплантационной модели рака молочной железы мыши 4T1

Клетки рака молочной железы мыши 4T1 (ATCC) культивировали с применением среды RPMI1640 (Sigma–Aldrich Co. LLC), содержащей 10% FBS, в инкубаторе с 5% CO₂ при условиях температуры 37°C. Когда клетки достигали состояния конфлюэнтности, составляющей примерно 80%, клетки извлекали с применением трипсина–EDTA. Готовили суспензию путем добавления сбалансированного солевого раствора Хенкса так, чтобы концентрация составляла 1,0 × 10⁷ клеток/мл. Трансплантировали по 0,1 мл полученной клеточной суспензии в третьи справа жировые подушечки молочных желез каждой из пяти мышей (C57BL/6J, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 25 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 25 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 9 дней после трансплантации вводили E7386 (25 мг/кг, дважды в сутки, 14 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы не вводили никакого лекарственного средства.

После введения в течение 14 дней у мышей собирали опухолевые ткани, проводили фиксацию опухолевых тканей формалином и заливали опухолевые ткани парафином. Затем залитые парафином опухолевые ткани разрезали на части толщиной 4 мкм и помещали на предметное стекло, и проводили обработку по депарафинизации с помощью ксилола/этанола. Проводили иммуноокрашивание с применением антитела (произведенного Sigma–Aldrich Co. LLC) к α–гладкомышечному актину (α–SMA), который является маркером сосудистых перицитов, и антитела (произведенного Dianova GmbH) к CD31, который является маркером сосудистых эндотелиальных клеток.

[0062] Препараты, полученные в результате совместного окрашивания CD31/α–SMA, преобразовывали в цифровые изображения на слайд–сканере (Aperio, Leica Biosystems Nussloch GmbH), измеряли плотность микрососудов (MVD) и проводили анализ количества CD31–положительных кровеносных сосудов на единицу площади (1 мм²) во всей опухоли с применением программного обеспечения для анализа изображений (Aperio ImageScope, версия 12.3.0.5056, Leica Biosystems Nussloch GmbH).

10–кратно увеличенное изображение, полученное посредством иммуноокрашивания (на цветной фотографии отображено коричневым (CD31) и красным (α–SMA) цветом), в случае которого проводили совместное окрашивание CD31/α–SMA, показано на фигуре 17. На фигурах 17(a), 17(b), 17(c) и 17(d) представлены изображения, полученные посредством иммуноокрашивания, для контрольной группы, группы с введением отдельно E7386, группы с введением отдельно ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением E7386 и ленватиниба мезилата соответственно. В результате при комбинированном применении E7386 и ленватиниба мезилата наблюдали выраженное уменьшение MVD по сравнению с контрольной группой и случаем, когда каждый из них вводили отдельно.

[0063] На 200–кратно увеличенном изображении пять участков в виде квадратов 0,2 мм × 0,2 мм с большой плотностью микрососудов в опухолевом срезе определяли как «горячие» точки для анализа сосудистых свойств. Измеряли PCI (показатель покрытия перицитами), который представляет собой количество кровеносных сосудов, положительных в отношении как CD31, так и α–SMA, относительно количества CD31–положительных кровеносных сосудов, в «горячих» точках, подлежащих проведению анализа, и анализировали с применением программного обеспечения для анализа изображений (Aperio ImageScope ver 12.3.0.5056, Leica Biosystems Nussloch GmbH). PCI представляет собой соотношение кровеносных сосудов, покрытых сосудистыми перицитами, и всех кровеносных сосудов. Среднее значение PCI пяти «горячих» точек для анализа рассматривали как характерное значение среза опухоли.

200–кратно увеличенное изображение, полученное посредством иммуноокрашивания (на цветной фотографии отображено коричневым (CD31) и красным (α–SMA) цветом), в случае которого проводили совместное окрашивание CD31/α–SMA, показано на фигуре 18. На фигурах 18(a), 18(b), 18(c) и 18(d) представлены изображения, полученные посредством иммуноокрашивания, для контрольной группы, группы с введением отдельно E7386, группы с введением отдельно ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением E7386 и ленватиниба мезилата соответственно. Микрососуд, окрашенный CD31, обозначен черной стрелкой. Кровеносный сосуд, положительный в отношении как CD31, так и α–SMA, обозначен незакрашенной стрелкой. В результате при комбинированном применении E7386 и ленватиниба мезилата наблюдали выраженное уменьшение PCI по сравнению с контрольной группой и случаем, когда каждый из них вводили отдельно.

[0064] Результаты в отношении MVD представлены на фигуре 19. На графике показано среднее значение пяти опухолевых срезов для каждой группы, особям которой производили введение, и планки погрешностей показывают стандартное отклонение. Комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный супрессивный эффект в отношении образования микрососудов в ортотопических трансплантационных моделях рака молочной железы мыши 4T1. На фигуре 19 * и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо супрессировали образование микрососудов по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, ****: p < 0,0001; множественное сравнение Даннета).

[0065] Результаты в отношении PCI представлены на фигуре 20. На графике показано среднее значение пяти опухолевых срезов для каждой группы, особям которой производили введение, и планки погрешностей показывают стандартное отклонение. Комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный супрессивный эффект в отношении покрытия перицитами (покрытия кровеносных сосудов сосудистыми перицитами) в ортотопических трансплантационных моделях рака молочной железы мыши 4T1. На фигуре 20 * и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо супрессировали покрытие перицитами по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (*: p < 0,05, ****: p < 0,0001; множественное сравнение Даннета).

[0066] [Пример 13] Супрессивный эффект в отношении образования опухолевых сосудов от комбинированного применения E7386 и ленватиниба мезилата в модели с подкожной трансплантацией HepG2 клеток гепатоцеллюлярной карциномы человека

Подкожно трансплантировали по 0,1 мл клеточной суспензии, полученной с применением клеток гепатоцеллюлярной карциномы человека линии HepG2 (клеточный банк JCRB), как описано в примере 7 выше, по бокам тел каждой из пяти безтимусных мышей (CAnN.Cg–Foxn1^nu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) из контрольной группы, группы с введением отдельно 50 мг/кг E7386, группы с введением отдельно 10 мг/кг ленватиниба мезилата и группы с комбинированным введением 50 мг/кг E7386 и 10 мг/кг ленватиниба мезилата. Через 12 дней после трансплантации вводили E7386 (50 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) и ленватиниба мезилат (10 мг/кг, один раз в сутки, 14 дней, пероральное введение) отдельно или в комбинации особям из группы отдельного введения или группы комбинированного введения. Для того, чтобы осуществить введение, E7386 растворяли в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте и ленватиниба мезилат растворяли в 3 ммоль/л хлористоводородной кислоте. Особям из контрольной группы не вводили никакого лекарственного средства.

После введения в течение 14 дней собранные у мышей опухолевые ткани делили на части и применяли как образцы опухоли для анализа кровеносных сосудов. Разделенные на части опухолевые ткани подвергали фиксации формалином и заливали парафином. Затем залитые парафином опухолевые ткани разрезали на части толщиной 4 мкм и помещали на предметное стекло, и проводили обработку по депарафинизации с помощью ксилола/этанола. Проводили иммуноокрашивание с применением антитела (произведенного Sigma–Aldrich Co. LLC) к α–гладкомышечному актину (α–SMA), который является маркером сосудистых перицитов, и антитела (произведенного Dianova GmbH) к CD31, который является маркером сосудистых эндотелиальных клеток.

[0067] Препараты, полученные в результате совместного окрашивания CD31/α–SMA, преобразовывали в цифровые изображения на слайд–сканере (Aperio, Leica Biosystems Nussloch GmbH), измеряли плотность микрососудов (MVD) и проводили анализ количества CD31–положительных кровеносных сосудов на единицу площади (1 мм²) во всей опухоли с применением программного обеспечения для анализа изображений (HALO v2.0.1145.38). В результате при комбинированном применении E7386 и ленватиниба мезилата наблюдали выраженное уменьшение MVD по сравнению с контрольной группой и случаем, когда каждый из них вводили отдельно.

[0068] На 200–кратно увеличенном изображении шести участков в виде квадратов 0,5 мм × 0,5 мм с большой плотностью микрососудов в опухолевом срезе определяли как «горячие» точки для анализа сосудистых свойств. Измеряли PCI (показатель покрытия перицитами), который представляет собой количество кровеносных сосудов, положительных в отношении как CD31, так и α–SMA, относительно количества CD31–положительных кровеносных сосудов, в «горячих» точках, подлежащих проведению анализа, и анализировали с применением программного обеспечения для анализа изображений (HALO v2.0.1145.38). PCI представляет собой соотношение (%) кровеносных сосудов, покрытых сосудистыми перицитами, и всех кровеносных сосудов. Среднее значение PCI шести «горячих» точек для анализа рассматривали как характерное значение среза опухоли. В результате, PCI заметно повышался вследствие введения ленватиниба мезилата отдельно, тогда как при комбинированном применении E7386 и ленватиниба мезилата наблюдали супрессию повышения PCI до уровня, эквивалентного контрольной группе.

[0069] Результаты в отношении MVD представлены на фигуре 21. График получили путем измерения среднего значения пяти опухолевых срезов для каждой группы введения и затем расчета соотношения (%) со значением контрольной группы, принятым за эталонное значение. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение. Комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный супрессивный эффект в отношении образования микрососудов в моделях с подкожной трансплантацией HepG2 гепатоцеллюлярной карциномы человека. На фигуре 21 ** и **** указывают на то, что E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо супрессировали образование микрососудов по сравнению со случаем, когда каждый из них вводили отдельно (**: p < 0,01, ****: p < 0,0001; множественное сравнение Даннета).

[0070] Результаты в отношении PCI представлены на фигуре 22. На графике показано среднее значение PCI пяти опухолевых срезов для каждой группы, особям которой производили введение, и планки погрешностей показывают стандартное отклонение. Комбинированное применение E7386 и ленватиниба мезилата показало превосходный супрессивный эффект в отношении покрытия перицитами (покрытия кровеносных сосудов сосудистыми перицитами) в моделях с подкожной трансплантацией клеток гепатоцеллюлярной карциномы человека HepG2. На фигуре 22 **** указывает на то, что введение отдельно ленватиниба мезилата статистически значимо увеличивало покрытие перицитами по сравнению с контрольной группой, а E7386 и ленватиниба мезилат при комбинированном применении статистически значимо супрессировали покрытие перицитами по сравнению со случаем, когда вводили отдельно ленватиниба мезилат (****: p < 0,001; множественное сравнение Даннета).

Предусмотрен способ лечения опухоли путем комбинированной терапии с использованием ленватиниба и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида. 11 з.п. ф-лы, 13 пр., 10 табл., 22 ил.

1. Способ лечения опухоли, включающий введение ленватиниба или его фармацевтически приемлемой соли и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамида нуждающемуся в этом пациенту, где опухоль представляет собой рак молочной железы, рак щитовидной железы, гепатоцеллюлярную карциному, колоректальный рак, почечноклеточную карциному, рак головы и шеи, рак эндометрия или меланому.

2. Способ по п. 1, где ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой ленватиниба мезилат.

3. Способ по п. 1 или 2, где ленватиниб или его фармацевтически приемлемая соль и (6S,9aS)–N–бензил–8–({6–[3–(4–этилпиперазин–1–ил)азетидин–1–ил]пиридин–2–ил}метил)–6–(2–фтор–4–гидроксибензил)–4,7–диоксо–2–(проп–2–ен–1–ил)гексагидро–2H–пиразино[2,1–c][1,2,4]триазин–1(6H)–карбоксамид вводят одновременно, по отдельности, непрерывно или через определенные интервалы времени.

4. Способ по любому из пп. 1–3, где опухоль представляет собой рак молочной железы.

5. Способ по любому из пп. 1–3, где опухоль представляет собой рак щитовидной железы.

6. Способ по любому из пп. 1–3, где рак щитовидной железы представляет собой анапластический рак щитовидной железы.

7. Способ по любому из пп. 1–3, где опухоль представляет собой гепатоцеллюлярную карциному.

8. Способ по любому из пп. 1–3, где опухоль представляет собой колоректальный рак.

9. Способ по любому из пп. 1–3, где опухоль представляет собой почечноклеточную карциному.

10. Способ по любому из пп. 1–3, где опухоль представляет собой рак головы и шеи.

11. Способ по любому из пп. 1–3, где опухоль представляет собой рак эндометрия.

12. Способ по любому из пп. 1–3, где опухоль представляет собой меланому.