Способ коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки низкосиалированным эритропоэтином Российский патент 2021 года по МПК G09B23/28 A61K38/18 A61P27/02 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции нарушения микроциркуляции сетчатки с помощью рекомбинантного эритропоэтина «Способ профилактики ишемии сетчатки эритропоэтином в эксперименте» (RU № 2539629, опубл. 21.01.2015), включающий моделирование патологии сетчатки и профилактика ее введением лабораторному животному рекомбинантного эритропоэтина, отличающийся тем, что рекомбинантный эритропоэтин вводят в качестве прекондиционирующего агента однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозе 50 МЕ/кг, за 30 мин до моделирования патологии.

Недостатком указанного способа является то, что связываясь с гомодимерным рецептором эритропоэтин может активировать эритропоэз, что приводит к нарушению реологических свойств крови и является нежелательным явлением при ишемии [Enhancement of ventricular-subventricular zone-derived neurogenesis and oligodendrogenesis by erythropoietin and its derivatives / N. Kaneko, E. Kako, K. Sawamoto // Front Cell Neurosci. – 2013.; Erythropoietin: recent developments in the treatment of spinal cord injury / S. Carelli, G. Marfia, A. Maria Di Giulio].

Данный факт обуславливает невозможность повышения дозы эритропоэтина при его низкой эффективности. Поэтому результаты коррекции микроциркуляции при моделировании ишемии сетчатки с использованием рекомбинантного эритропоэтина неудовлетворительны.

Одним из направлений устранения этого недостатка, является создание производных эритропоэтина с коротким периодом жизни. Для активации цитопротекторных эффектов эритропоэтину достаточно связаться с гетеродимерным рецептором на короткое время (5 минут). Для активации эритропоэза необходимо длительное постоянное нахождение эритропоэтина на гомодимерном рецепторе [ Enhancement of ventricular-subventricular zone-derived neurogenesis and oligodendrogenesis by erythropoietin and its derivatives [Text] / N. Kaneko, E. Kako, K. Sawamoto // Front Cell Neurosci. – 2013; Erythropoietin: recent developments in the treatment of spinal cord injury [Text] / S. Carelli, G. Marfia, A. Maria Di Giulio [et al.] // Neurol Res Int. - 2011; The use of erythropoietin and its derivatives to treat spinal cord injury [Text] / A. Mofidi, A. Bader, S. Pavlica [et al.] // Mini Rev Med Chem. – 2011].

Одним из таких веществ является низкосиалированный эритропоэтин – производное рекомбинантного эритропоэтина. За счет низкого содержания сиаловых кислот происходит кратковременное связывание этой молекулы с гетеродимерным рецептором эритропоэтина и реализация цитопротективных (неэритростимулирующих) эффектов.

Задачей предлагаемого изобретения является эффективный способ коррекции ишемии сетчатки низкосиалированным эритропоэтином в эксперименте, включающий низкосиалированный эритропоэтин в качестве прекондиционирующего агента.

Задача достигается тем, что в способе, включающем моделирование патологии сетчатки путем оказания механического давления (110 мм рт.ст.) на переднюю камеру глаза в течение 30 минут и профилактику ее введением лабораторному животному низкосиалированного эритропоэтина, причем низкосиалированный эритропоэтин вводят в качестве прекондиционирующего агента однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозе 2,4 мкг/кг за 30 минут до моделирования патологии.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проведены на 40 белых крысах линии Wistar, половозрелых самцах, массой 210-250г. Экспериментальные животные были разделены на следующие группы, каждая группа включала 10 крыс:

I группа - группа интактных животных;

II группа - с ишемией сетчатки (контроль);

III группа - с введением низкосиалированного эритропоэтина в дозе 2,4 мкг/кг;

IV группа - с введением рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг (препарат сравнения).

Моделирование ишемии сетчатки проводили путем оказания механического давления (110 мм рт.ст.) на переднюю камеру глаза в течение 30 минут в 1-й день эксперимента.

Низкосиалированный эритропоэтин (ООО «Протеиновый Контур») вводили в дозе 2,4 мкг/кг однократно внутрибрюшинно за 30 мин до моделирования ишемии сетчатки. Рекомбинантный эритропоэтин («Эпокрин» эпоэтин альфа; ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых препаратов» Федерального медико-биологического агентства г. Санкт-Петербург, Россия) вводили в дозе 50 МЕ/кг однократно внутрибрюшинно за 30 мин до моделирования ишемии сетчатки. За 15 мин до моделирования ишемии осуществляли наркотизацию внутрибрюшинным введением раствора хлоралгидрата в дозе 300 мг/кг массы тела животного.

О выраженности коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки судили по уровню микроциркуляции при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-150 и датчика игольчатого типа TSD-144 (США) на 72 час реперфузии после моделирования патологии. Регистрация результатов ЛДФ производилась программой Acqknowledge версии 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (п.е.).

Для всех данных была применена описательная статистика. Данные проверены на нормальность распределения. Тип распределения определялся критерием Шапиро-Уилка. В случае нормального распределения были подсчитаны среднее значение (M) и стандартная ошибка среднего (m). Межгрупповые различия анализировались с помощью t-критерий Стьюдента. Различия считаются достоверными при p<0,05.Расчеты выполнены с помощью статистических программ Microsoft Excel 7.0.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Оценку микроциркуляции проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-150 и датчика TSD-144 (США). Для этого под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг массы тела животного, внутрибрюшинно) животное фиксировали и производили регистрацию уровня микроциркуляции в сетчатке в десяти точках по окружности склеры с шагом 1 мм. Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 20 секунд в каждой точке. Из полученных десяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке в данной группе животных.

Результаты оценки уровня микроциркуляции в сетчатке крыс на 72 час реперфузии после моделирования ишемии сетчатки и ее коррекции низкосиалированным эритропоэтином в дозе 2,4 мкг/кг и рекомбинантным эритропоэтином в дозе 50 МЕ/кг представлены в таблице.

Таблица

Уровень микроциркуляции в сетчатке интактных крыс составил 761,3±9,6 п.е. Уровень микроциркуляции после моделирования ишемии в группе контроля составил на 72 ч реперфузии 344,6±10,2 п.е., что достоверно ниже значения в группе интактных животных (р<0,001).

На фоне коррекции патологии низкосиалированным эритропоэтином в дозе 2,4 мкг/кг уровень микроциркуляции в сетчатке на 72 ч реперфузии достоверно возрастает до 739,4±7,7 п.е. (р<0,001) по сравнению с группой контроля. При этом, достигаемые значения при коррекции патологии низкосиалированным эритропоэтином приближаются к значениям в группе интактных животных.

При коррекции патологии эритропоэтином в дозе 50 МЕ/кг уровень микроциркуляции в группе возрастает до 710,7±8,6 п.е. и достоверно отличается от значений в группе контроля (р<0,001).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о выраженной коррекции микроциркуляторных нарушений глаза низкосиалированным эритропоэтином в дозировке 2,4 мкг/кг, в условиях модели ишемии сетчатки крыс, при однократном системном введении за 30 минут до моделирования патологии.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки. Способ коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки низкосиалированным эритропоэтином в эксперименте включает моделирование патологии сетчатки и коррекцию микроциркуляторных нарушений сетчатки введением лабораторному животному низкосиалированного эритропоэтина. При этом низкосиалированный эритропоэтин вводят однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозе 2,4 мкг/кг за 30 минут до моделирования патологии. Изобретение обеспечивает выраженную коррекцию микроциркуляторных нарушений сетчатки. 1 табл., 1 пр.

Cпособ коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки низкосиалированным эритропоэтином в эксперименте, включающий моделирование патологии сетчатки и коррекцию микроциркуляторных нарушений сетчатки введением лабораторному животному низкосиалированного эритропоэтина, отличающийся тем, что низкосиалированный эритропоэтин вводят однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозе 2,4 мкг/кг за 30 минут до моделирования патологии.