Способ коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки асиалированным эритропоэтином Российский патент 2021 года по МПК A61K38/18 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции нарушения микроциркуляции сетчатки с помощью рекомбинантного эритропоэтина «Способ профилактики ишемии сетчатки эритропоэтином в эксперименте» (RU № 2539629, опубл. 21.01.2015), включающий моделирование патологии сетчатки и профилактика ее введением лабораторному животному рекомбинантного эритропоэтина, отличающийся тем, что рекомбинантный эритропоэтин вводят в качестве прекондиционирующего агента однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозе 50 МЕ/кг, за 30 мин до моделирования патологии.

Недостатком данного способа является то, что во многих клинических ситуациях, требующих цитопротективных эффектов эритропоэтина, необходимо его многократное введение, что приводит к существенному увеличению гематокрита, активации тромбоцитов и тромбообразованию.

Соответственно, перспективным направлением является использование веществ, способных оказывать неэритростимулирующие эффекты рекомбинантного эритропоэтина и прекондиционирующее действие на сетчатку [Mennini T, De Paolo M, Bigini P, et al. Nonhematopoietic erythropoietin derivatives prevent motoneuron degeneration in vitro and in vivo. Mol Med 2006; 12: 153; Wang X, Zhu C, Wang X, et al. The nonerythropoietic asialoerythropoietin protects against neonatal hypoxia-ischemia as potently as erythropoietin. J Neurochem 2004; 91: 900.].

Одним из таких веществ является асиалированный эритропоэтин - производное рекомбинантного эритропоэтина. За счет полного отсутствия сиаловых кислот в асиалированном эритропоэтине происходит кратковременное связывание этой молекулы с гетеродимерным рецептором эритропоэтина и реализация цитопротективных (неэритростимулирующих) эффектов.

Задачей предлагаемого изобретения является способ эффективной коррекции ишемии сетчатки асиалированным эритропоэтином в эксперименте, включающий асиалированный эритропоэтин в качестве прекондиционирующего агента.

Задача достигается тем, что в способе, включающем моделирование патологии сетчатки путем оказания механического давления (110 мм рт.ст.) на переднюю камеру глаза в течение 30 минут и профилактику ее введением лабораторному животному асиалированного эритропоэтина, причем асиалированный эритропоэтин вводят в качестве прекондиционирующего агента однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозировке 2,4 мкг/кг за 30 минут до моделирования патологии.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проведены на 40 белых крысах линии Wistar, половозрелых самцах, массой 210-250г. Экспериментальные животные были разделены на следующие группы, каждая группа включала 10 крыс:

I группа - группа интактных животных;

II группа - с ишемией сетчатки (контроль);

III группа - с введением асиалированного эритропоэтина в дозировке 2,4 мкг/кг;

IV группа - с введением рекомбинантного эритропоэтина в дозировке 50 МЕ/кг (препарат сравнения).

Моделирование ишемии сетчатки проводили путем оказания механического давления (110 мм рт.ст.) на переднюю камеру глаза в течение 30 минут в 1-й день эксперимента.

Асиалированный эритропоэтин (ООО «Протеиновый Контур») вводили в дозировке 2,4 мкг/кг однократно внутрибрюшинно за 30 мин до моделирования ишемии сетчатки. Рекомбинантный эритропоэтин («Эпокрин» эпоэтин альфа; ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых препаратов» Федерального медико-биологического агентства г. Санкт-Петербург, Россия) вводили в дозе 50 МЕ/кг однократно внутрибрюшинно за 30 мин до моделирования ишемии сетчатки. За 15 мин до моделирования ишемии осуществляли наркотизацию внутрибрюшинным введением раствора хлоралгидрата в дозе 300 мг/кг массы тела животного.

О выраженности коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки судили по уровню микроциркуляции при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-150 и датчика игольчатого типа TSD-144 (США) на 72 час реперфузии после моделирования патологии. Регистрация результатов ЛДФ производилась программой Acqknowledge версии 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕд).

Для всех данных была применена описательная статистика. Данные проверены на нормальность распределения. Тип распределения определялся критерием Шапиро-Уилка. В случае нормального распределения были подсчитаны среднее значение (M) и стандартная ошибка среднего (m). Межгрупповые различия анализировались с помощью t-критерий Стьюдента. Различия считаются достоверными при p<0,05.Расчеты выполнены с помощью статистических программ Microsoft Excel 7.0.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Оценку микроциркуляции проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-150 и датчика TSD-144 (США). Для этого под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг массы тела животного, внутрибрюшинно) животное фиксировали и производили регистрацию уровня микроциркуляции в сетчатке в десяти точках по окружности склеры с шагом 1 мм. Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 20 секунд в каждой точке. Из полученных десяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке в данной группе животных.

Результаты оценки уровня микроциркуляции в сетчатке крыс на 72 час реперфузии после моделирования ишемии сетчатки и ее коррекции асиалированным эритропоэтином в дозе 2,4 мкг/кг и рекомбинантным эритропоэтином в дозе 50 МЕ/кг представлены в таблице 1.

Таблица 1

Уровень микроциркуляции в сетчатке интактных крыс составил 761,3±9,6 п.е. (перфузионных единиц). Уровень микроциркуляции после моделирования ишемии в группе контроля составил на 72 ч реперфузии 344,6±10,2 п.е., что достоверно ниже значения в группе интактных животных (р<0,001).

На фоне коррекции патологии асиалированным эритропоэтином в дозе 2,4 мкг/кг уровень микроциркуляции в сетчатке на 72 ч реперфузии достоверно возрастает до 746,8±9,3 п.е. (р<0,001) по сравнению с группой контроля. При этом, достигаемые значения при коррекции патологии асиалированным эритропоэтином приближаются к значениям в группе интактных животных.

При коррекции патологии эритропоэтином в дозе 50 МЕ/кг уровень микроциркуляции в группе возрастает до 710,7±8,6 п.е. и достоверно отличается от значений в группе контроля (р<0,001).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о выраженной коррекции микроциркуляторных нарушений глаза асиалированным эритропоэтином в дозировке 2,4 мкг/кг, в условиях модели ишемии сетчатки крыс, при однократном системном введении за 30 минут до моделирования патологии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и предназначено для коррекции микроциркуляторных нарушений при ишемических состояниях сетчатки. Способ коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки в эксперименте включает введение лабораторному животному асиалированного эритропоэтина в количестве 2,4 мкг/кг однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно за 30 мин до моделирования патологии. Использование изобретения позволяет повысить эффективность коррекции микроциркуляторных нарушений при моделировании ишемии сетчатки. 1 табл., 1 пр.

Способ коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки асиалированным эритропоэтином в эксперименте, включающий моделирование патологии сетчатки и коррекцию микроциркуляторных нарушений сетчатки путем введения лабораторному животному эритропоэтина однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно за 30 мин до моделирования патологии, отличающийся тем, что в качестве эритропоэтина используют асиалированный эритропоэтин в количестве 2,4 мкг/кг.