2-Амино-1-бензамидо-5-[2-(нафталин-1-ил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-4,5-дигидро-1Н-пиррол-3-карбоксамид, обладающий цитотоксическими и проапоптогенными свойствами в отношении клеток солидных опухолей человека, в том числе резистентных к химиопрепаратам Российский патент 2021 года по МПК C07D207/50 A61K31/4015 A61P35/00 

Описание патента на изобретение RU2753479C1

Изобретение относится к области органической химии, производным пиррола, а именно, новому биологически активному - 2-амино-1-бензамидо-5-[2-(нафталин-1-ил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоксамиду I формулы:

который может найти применение в медицине в качестве лекарственного противоопухолевого препарата.

Ближайшим структурным аналогом к заявленному соединению являются соединения - этиловые эфиры 2-амино-1-бензоиламино-4-оксо-5-(2-оксо-2-арил-этилиден)-4,5-дигидро-1H-пирролидин-3-карбоновых кислот общей формулы II, проявляющие противоопухолевую активность [Патент №2607920 Российская Федерация, МПК C07D 417/00, А61К 31/195. Этиловые эфиры 2-амино-1-бензоиламино-4-оксо-5-(2-оксо-2-арил-этилиден)-4,5-дигидро-1H-пирролидин-3-карбоновых кислот, проявляющие противоопухолевую активность, и способ их получения: №2015120527: заявл. 29.05.2015: опубл. 11.01.2017 / С.С. Зыкова, Н.М. Игидов, М.В. Киселев, С.В. Бойчук, А.Р. Галембикова].

В качестве эталона сравнения нами взят противоопухолевый препарат - паклитаксел [Патент №2059631, МПК C07D 305/14, A61K 31/195. Производные таксола и фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью: №91 5010248: заявл. 29.11.1991: опубл. 10.05.1996 / Валентине Дж. Стелла, Абрахам Е. Мэтью], ЛД 50 которого составляет 48 мг/кг.

В тесте острой токсичности ЛД 50 2-АНПК имеет токсичность более 1000 мг/кг.

Таким образом, токсичность 2-АНПК гораздо меньше, чем у прототипа биологической активности - паклитаксела.

Целью предлагаемого изобретения является синтез нового, ранее не описанного 2-амино-1-бензамидо-5-[2-(нафталин-1-ил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоксамида (I), обладающего цитотоксическими и проапоптогенными свойствами в отношении клеток солидных опухолей человека, в том числе резистентным к химиопрепаратам.

Поставленная цель достигается получением 2-амино-1-бензамидо-5-[2-(нафталин-1-ил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоксамида (2-АНПК) (I), взаимодействием N-(5-(нафталин-1-ил)-2-оксофуран-3(2Н)-илиден)бензогидразида (II) с цианоацетамидом в присутствии триэтиламина в среде толуола по схеме:

Методика получения 2-амино-1-бензамидо-5-(2-нафталин-1-ил)-2-оксоэтилиден)-4-оксо-4,5-дигидро-1Н-пиррол-3-карбоксамида (I). Смесь 1.71 г (0.005 моль) N-(5-(нафталин-1-ил)-2-оксофуран-3(2Н)-илиден)бензогидразида (II), 0.42 г (0.005 моль) цианоацетамида и 0.5 г (0.005 моль) триэтиламина кипятили в 60 мл толуола в течение 35 минут. Выпавший при охлаждении осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали из смеси пропанол-2 - уксусная кислота (1:1). Получали 1.27 г (60%) кристаллического вещества (I) с Тпл 260-261°С. C24H18N4O4. ИК-спектр, ν/см-1, вазелиновое масло: 3406 (NH), 3337 (NH), 3206 (NH), 1701 (С=O), 1679 (С=O), 1628 (С=С) Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-d6), δ, м.д.: 6.69 с (1H, СН), 7.06 с (1Н, NH), 7.70 м (13Н, аром.), 8.80 уш. с (1Н, NH), 9.25 уш. с (1Н, NH), 11.11 с (1H, NH), 11.86 уш. с (1Н, NH). Спектр ЯМР 13С, δ, м.д., ДМСО-d6: 20.90, 87.64, 105.46, 124.71, 125.01, 126.27, 127.59, 127.90, 128.38, 129.27, 129.85, 130.95, 131.89, 132.96, 133.26, 134.99, 141.26, 165.30, 165.54, 166.96, 171.82, 176.00, 192.63.

Заявляемое соединение представляет собой светло-желтое кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО, ДМФА, уксусной кислоте, при нагревании - в этиловом спирте, устойчивое при хранении.

Цитотоксическое и проапоптогенное действие соединения 2-АБПК устанавливали предварительно при помощи микроскопии, а затем количественно - с помощью МТТ-теста.

Изобретение подтверждается следующими графическими материалами, на которых представлено:

На фиг. 1 - морфология клеток ГИСО (GIST - T1-R), инкубированных с 2-АНПК и паклитакселом (положительный контроль) в течение 24 часов.

На фиг. 2 - дозо-зависимое повышение уровня расщепленных форм ПАРП и каспазы-3 в клеточной линии RD в присутствии 2-АНПК (5 и 10 μМ). Паклитаксел (1 μМ) использован в качестве положительного контроля. Клеточная линия проинкубирована с препаратами в течение 48 часов. В качестве контроля белковой загрузки был использован β-актин.

На фиг. 3 - цитотоксическая активность паклитаксела в отношении паклитаксел-наивных (GIST Т1 и НСС1806) и паклитаксел-резистентных клеточных линий (GIST T1-Tx-R и HCC1806-Tx-R). По оси абсцисс отражены дозы паклитаксела (0,000001-1000000 nM), по оси ординат - % жизнеспособности.

Микроскопическое исследование клеточной линии гастроинтестинальной стромальной опухоли (ГИСО) GIST - T1-R выявило выраженное снижение конфлюэнтности и усиление гибели клеток под действием 2-АНПК, аналогичное эффекту паклитаксела (Фигура 1). Подобные результаты были получены при исследовании других клеточных линий, в том числе клеток рака молочной железы, чувствительных и резистентных к паклитакселу (НСС1806 и HCC1806-TaxR), клеток ГИСО, чувствительных и резистентных к паклитакселу (GIST Т1 и GIST T1-TaxR), а также клеток лейомиосаркомы (SK-LMS-1), рабдомиосаркомы (RD) и остеосаркомы (U2OS).

Для дальнейшего определения механизма клеточной гибели был проведен анализ клеточных культур методом иммуноблоттинга. В клетках рабдомиосаркомы линии RD были определены следующие маркеры апоптоза: расщепленная форма эффекторной каспазы-3, расщепленная форма поли-АДФ-рибоза-полимеразы (ПАРП). Повышенные уровни указанных маркеров апоптоза были выявлены в образцах, инкубированных с 2-АНПК, паклитакселом (положительный контроль), при этом уровень маркеров в образце, инкубированном с исследуемым соединением, был сопоставим с эффектом препарата, используемого в качестве положительного контроля (Фигура 2). Аналогичные результаты были получены при исследовании других клеточных линий.

Цитотоксическая активность исследуемого соединения и паклитаксела была оценена при помощи МТТ-теста (Табл. 1).

Было подтверждено, что половинная ингибирующая доза (IC50) паклитаксела для паклитаксел-резистентных клеточных линий (GIST Т1-Тх-R и HCC1806-Tx-R) была существенно выше, чем для паклитаксел-наивных клеток (GIST T1, GIST T1-R и НСС1806) (Фигура 3). В то же время, IC50 2-АНПК для паклитаксел-резистентных линий была сопоставима с IC50 для паклитаксел-наивных клеточных линий. Это свидетельствует о потенциальном преимуществе исследуемого соединения для лечения паклитаксел-резистентных опухолей.

Подтверждение гибели клеток GIST T1-IM-R по механизму апоптоза и анализ клеточного цикла был произведен методом проточной цитометрии (Flow Cytometer BD FACSCanto II). В образцах, инкубированных 48 часов с 2-АНПК и паклитакселом, выбранного в качестве положительного контроля, наблюдалось повышенное количество гиподиплоидных клеток (subG1). Результаты количественной оценки приведены в таблице 2.

Представленные результаты исследований показывают, что 2-АНПК обладает цитотоксической и проапоптогенной активностью в отношении клеток солидных опухолей человека, в том числе резистентным к химиопрепаратам.

Литература:

1. Патент №2607920 Российская Федерация, МПК C07D 417/00, А61К 31/195. Этиловые эфиры 2-амино-1-бензоиламино-4-оксо-5-(2-оксо-2-арил-этилиден)-4,5-дигидро-1Н-пирролидин-3-карбоновых кислот, проявляющие противоопухолевую активность, и способ их получения: №2015120527: заявл. 29.05.2015: опубл. 11.01.2017 / С.С. Зыкова, Н.М. Игидов, М.В. Киселев, С.В. Бойчук, А.Р. Галембикова.

2. Патент №2059631, МПК C07D 305/14, А61К 31/195. Производные таксола и фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью: №91 5010248: заявл. 29.11.1991: опубл. 10.05.1996 / Валентине Дж. Стелла, Абрахам Е. Мэтью.

Похожие патенты RU2753479C1

название год авторы номер документа
2-Амино-1-бензамидо-5-(3,3-диметил-2-оксобутилиден)-4-оксо-4,5-дигидро-1Н-пиррол-3-карбоксамид, вызывающий нарушения фаз клеточного цикла и проявляющий цитотоксическую активность в отношении сарком мягких тканей и гастроинтестинальных стромальных опухолей (ГИСО) 2020
  • Зыкова Светлана Сергеевна
  • Бойчук Сергей Васильевич
  • Игидов Назим Мусабекович
  • Галембикова Айгуль Рафиковна
  • Аухадиева Аида Маратовна
  • Бикиниева Фирюза Фанисовна
  • Нургатина Ильмира Ильязовна
  • Ганькова Ксения Леонидовна
  • Шустов Максим Вадимович
RU2765545C1
2-Амино-1-(4-бромфенил)-5-(3,3-диметил-2-оксобутилиден)-4-оксо-4,5-дигидро-1Н-пиррол-3-карбоксамид, проявляющий цитотоксическую активность в отношении опухолевых клеток человека 2020
  • Игидов Назим Мусабекович
  • Бойчук Сергей Васильевич
  • Зыкова Светлана Сергеевна
  • Галембикова Айгуль Рафиковна
  • Аухадиева Аида Маратовна
  • Бикиниева Фирюза Фанисовна
  • Нургатина Ильмира Ильязовна
  • Ганькова Ксения Леонидовна
  • Шустов Максим Вадимович
RU2753480C1
ЭТИЛОВЫЕ ЭФИРЫ 2-АМИНО-1-БЕНЗОИЛАМИНО-4-ОКСО-5-(2-ОКСО-2-АРИЛ-ЭТИЛИДЕН)-4,5-ДИГИДРО-1H-ПИРРОЛИДИН-3-КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ 2015
  • Бойчук Сергей Васильевич
  • Зыкова Светлана Сергеевна
  • Галембикова Айгуль Рафиковна
  • Рамазанов Булат Рашитович
  • Игидов Назим Мусабекович
  • Одегова Татьяна Федоровна
  • Киселев Максим Александрович
  • Семина Ирина Ивановна
RU2607920C2
2-АМИНО-1-АРИЛ-5-(3,3-ДИМЕТИЛ-2-ОКСОБУТИЛИДЕН)-4-ОКСО-N-(ТИАЗОЛ-5-ИЛ)-4,5-ДИГИДРО-1Н-ПИРРОЛ-3-КАРБОКСАМИДЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ И АНТИРАДИКАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ 2015
  • Зыкова Светлана Сергеевна
  • Бойчук Сергей Васильевич
  • Игидов Назим Мусабекович
  • Одегова Татьяна Федоровна
  • Захматов Антон Викторович
  • Галембикова Айгуль Рафиковна
  • Рамазанов Булат Рашитович
RU2605091C2
Этиловый эфир (5Z)-2-амино-5-[1-бром-2-(4-бромфенил)-2-оксоэтилиден]- 4-оксо-1Н-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты, проявляющий противогрибковую активность 2018
  • Иванов Дмитрий Владимирович
  • Махмудов Рамиз Рагибович
  • Игидов Назим Мусабекович
  • Новикова Валентина Васильевна
RU2654207C1
(e)-5-амино-2-оксо-1-(2-(нафталин-2-ил)-2-оксоэтилиден)-1,2,6,7,8,9-гексагидробензо[4,5]тиено[3,2-e]пирроло[1,2-a]пиримидин-3-карбоксамид, обладающий противораковой активностью в терапии рака молочной железы 2023
  • Карпов Тимофей Евгеньевич
  • Рогова Анна
  • Тимин Александр Сергеевич
  • Шипиловских Сергей Александрович
RU2820661C1
Применение нитрила (5Z)-2-амино-5-бром-5-(1-бром-2-оксо-2-фенилэтилиден)-4-оксо-1H-4,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты в качестве средства, проявляющего противогрибковую активность 2021
  • Иванов Дмитрий Владимирович
  • Игидов Назим Мусабекович
  • Новикова Валентина Васильевна
  • Махмудов Рамиз Рагибович
RU2815046C2
N-АЛКИЛ-N-{ [3-АЛКИЛ-3,8-ДИАЗАБИЦИКЛО[3.2.1]ОКТА-1(7),5-ДИЕН-8-ИЛ]МЕТИЛ} АМИНЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ НЕК 293 2019
  • Ахметова Внира Рахимовна
  • Бикбулатова Эльмира Минуровна
  • Ахмадиев Наиль Салаватович
  • Абдуллина Зиля Ямиловна
  • Ибрагимов Асхат Габдрахманович
  • Джемилев Усеин Меметович
RU2726120C1
ЭТИЛОВЫЙ ЭФИР (5Е)-2-АМИНО-5-[2-(4-МЕТИЛФЕНИЛ)-2-ОКСОЭТИЛИДЕН]-1-(3-НИТРОФЕНИЛ)-4-ОКСО-1Н-4,5-ДИГИДРОПИРРОЛ-3-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИНОЦИЦЕПТИВНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2021
  • Рубцов Александр Евгеньевич
  • Махмудов Рамиз Рагибович
RU2771031C1
Замещенные этиловые эфиры (E)-2-(5-амино-4-R-3-оксо-2-(2-оксо-2-(п-толил)этилиден)-2,3-дигидро-1H-пиррол-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-4H-циклогепта[b]тиофен-3-карбоновой кислоты, обладающие противораковой активностью в терапии меланомы легких 2023
  • Шипиловских Сергей Александрович
  • Тимин Александр Сергеевич
RU2806324C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 753 479 C1

Реферат патента 2021 года 2-Амино-1-бензамидо-5-[2-(нафталин-1-ил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-4,5-дигидро-1Н-пиррол-3-карбоксамид, обладающий цитотоксическими и проапоптогенными свойствами в отношении клеток солидных опухолей человека, в том числе резистентных к химиопрепаратам

Изобретение относится к новому 2-амино-1-бензамидо-5-[2-(нафталин-1-ил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-4,5-дигидро-1Н-пиррол-3-карбоксамиду формулы I, обладающему цитотоксическими и проапоптогенными свойствами в отношении клеток солидных опухолей человека, в том числе резистентных к химиопрепаратам. Технический результат: получено новое соединение, проявляющее противоопухолевую активность и низкую токсичность. 3 ил., 2 табл.

Формула изобретения RU 2 753 479 C1

2-Амино-1-бензамидо-5-[2-(нафталин-1-ил)-2-оксоэтилиден]-4-оксо-4,5-дигидро-1Н-пиррол-3-карбоксамид формулы I:

,

обладающий цитотоксическими и проапоптогенными свойствами в отношении клеток солидных опухолей человека, в том числе резистентных к химиопрепаратам.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2021 года RU2753479C1

ЭТИЛОВЫЕ ЭФИРЫ 2-АМИНО-1-БЕНЗОИЛАМИНО-4-ОКСО-5-(2-ОКСО-2-АРИЛ-ЭТИЛИДЕН)-4,5-ДИГИДРО-1H-ПИРРОЛИДИН-3-КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ 2015
  • Бойчук Сергей Васильевич
  • Зыкова Светлана Сергеевна
  • Галембикова Айгуль Рафиковна
  • Рамазанов Булат Рашитович
  • Игидов Назим Мусабекович
  • Одегова Татьяна Федоровна
  • Киселев Максим Александрович
  • Семина Ирина Ивановна
RU2607920C2
WO 2010091650 A1, 19.08.2010
S
S
Zykova et al., SYNTHESIS AND CYTOSTATIC ACTIVITY OF (E)-ETHYL-2-AMINO-5-(3,3-DIMETHYL-4-OXOBUTYLIDEN)-4-OXO-1-(2-PHENYLAMINOBENZAMIDO)-4,5-DIHYDRO-1H-PYRROL-3-CARBOXYLATE, Pharmaceutical Chemistry Journal,Vol
Веникодробильный станок 1921
  • Баженов Вл.
  • Баженов(-А К.
SU53A1
Печь-кухня, могущая работать, как самостоятельно, так и в комбинации с разного рода нагревательными приборами 1921
  • Богач В.И.
SU10A1
Способ многократной радиопередачи 1922
  • Татаринов В.В.
SU895A1

RU 2 753 479 C1

Авторы

Бойчук Сергей Васильевич

Игидов Назим Мусабекович

Зыкова Светлана Сергеевна

Галембикова Айгуль Рафиковна

Аухадиева Аида Маратовна

Бикиниева Фирюза Фанисовна

Нургатина Ильмира Ильязовна

Ганькова Ксения Леонидовна

Шустов Максим Вадимович

Даты

2021-08-17Публикация

2020-10-14Подача