СМЕСИ И КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ШТАММЫ PAENIBACILLUS ИЛИ ФУЗАРИЦИДИНЫ И ХИМИЧЕСКИЕ ПЕСТИЦИДЫ Российский патент 2021 года по МПК A01N63/25 A01N37/46 A01P3/00 C12N1/20 C12R1/01 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым смесям, содержащим в качестве активных компонентов, по меньшей мере один выделенный бактериальный штамм, который является членом рода Paenibacillus, или его бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит, и по меньшей мере один химический пестицид.

Настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим по меньшей мере один из таких бактериальных штаммов, цельный культуральный бульон или бесклеточный экстракт или его фракцию или по меньшей мере один его метаболит, и по меньшей мере один химический пестицид. Настоящее изобретение также относится к способу борьбы или подавления патогенов растений или предотвращения инфицирования патогенами растений путем применения такой композиции. Настоящее изобретение также относится к смесям фузарицидинов, которые представляют собой пестицидные метаболиты, продуцируемые вышеуказанными штаммами, и химических пестицидов.

Предпосылки создания изобретения

В технической области борьбы с фитопатогенными грибами, поражающими растения или сельскохозяйственные культуры, хорошо известно применение биопестицидов, например, выбранных из бактерий, таких как спорообразующие бактерии, или грибов, которые не наносят ущерба растениям или подлежащим обработке сельскохозяйственным культурам, и агенты биологического контроля которых могут быть дополнительно объединены с классическими органическими химическими антагонистами патогенов растений.

Биопестициды были определены как вид пестицидов на основе микроорганизмов (бактерий, грибов, вирусов, нематод и т.д.) или природных продуктов (соединения или экстракты из биологических источников) (U.S. Environmental Protection Agency: http://www.epa.gov/pesticides/biopesticides/).

Типично биопестициды создают с помощью выращивания и концентрации встречающихся в природе организмов и/или их метаболитов, включая бактерии и другие микробы, грибы, вирусы, нематоды, белки и т.д. Часто их рассматривают как важные компоненты интегрированных программ управления борьбой с вредителями (IPM), и им уделяют много практического внимания как заменителям синтетических химических продуктов для защиты растений (PPPs).

Биопестициды подразделяют на два основных класса, микробные и биохимические пестициды:

(1) Микробные пестициды состоят из бактерий, грибов или вирусов (и часто включают метаболиты, которые вырабатывают бактерии и грибы). Энтомопатогенные нематоды также классифицируют как микробные пестициды, несмотря на то, что они являются многоклеточными.

(2) Биохимические пестициды представляют собой встречающиеся в природе вещества, которые способны бороться с вредителями или обеспечивают другие применения для защиты культурных растений, как определено ниже, но они относительно нетоксичны для млекопитающих.

Для борьбы с фитопатогенными грибами ранее было описано несколько микробных пестицидов, содержащих спорообразующие бактерии, такие как Bacillus subtilis, см., например, WO 1998/050422; WO 2000/029426; WO 1998/50422 и WO 2000/58442.

В WO 2009/0126473 описаны приемлемые в сельском хозяйстве водные композиции, содержащие споры бактерий или грибов, содержащиеся в водном/органическом растворителе и которые могут дополнительно содержать средства для борьбы с насекомыми, пестициды, фунгициды или их комбинации. Предпочтительным видом являются споры бактерий рода Bacillus.

В WO 2006/017361 описаны композиции для борьбы с патогенами растений и содержащие по меньшей мере одну полезную бактерию, по меньшей мере один полезный гриб, по меньшей мере одно питательное вещество и по меньшей мере одно соединение, продлевающее эффективное время действия такой композиции. Группа полезных бактерий в числе других включает в себя бактерии Paenibacillus polymyxa и Paenibacillus durum.

В WO 1999/059412 описан штамм PKB1 Paenibacillus polymyxa (имеющий учетный номер АТСС 202127), активный против некоторых фитопатогенных грибов.

В WO 2011/069227 раскрыт штамм JB05-01-1 P. polymyxa (имеющий учетный номер АТСС РТА-10436), обладающий сильным ингибирующим действием против патогенных бактерий, преимущественно патогенных бактерий человека, передающихся через пищевые продукты.

У Raza et al. (Brazilian Arch. Biol. Techol. 53, 1145-1154, 2010; Eur. J. Plant Pathol. 125: 471-483, 2009) был описан продуцирующий фузарицидин штамм SQR-21 Paenibacillus polymyxa, эффективный против Fusarium oxysporum.

Еще один штамм Paenibacillus polymyxa, именуемый АС-1, известен из Microbial Research 2016 (в печати ЦИО:10.1016/j.micres.2016.01.004) и продукт Topseed от Green Biotech Co., Ltd. 45-70 Yadang-ri, Gyoha-Eup Paju Kyungki-Do, Корея (Южная) 413-830.

Другой штамм Paenibacillus polymyxa, предположительно именуемый HY96-2 известен из Biocontrol Science и Technology 24 (4), 426-435 (2014) и должен продаваться под названием KangDiLeiDe от Shanghai Zeyuan Marine Biotechnology Co., Ltd.

На настоящий момент был опубликован геном некоторых штаммов Paenibacillus polymyxa: в том числе для штамма М-1 (NCBI учетн. № NC_017542; J. Bacteriol. 193 (29), 5862-63, 2011; ВМС Microbiol. 13, 137, 2013), штамм CR1 (GenBank учетн. № CP006941; Genome Announcements 2 (1), 1, 2014) и штамм SC2 (GenBank учетн. № CP002213 и СР002214; NCBI учетн. № NC_014622; J. Bacteriol. 193 (1), 311-312, 2011), для других штаммов см. перечень условных обозначений Фигуры 12 в настоящей заявке. Штамм P. polymyxa М-1 был депонирован в China General Microbiological Culture Collection Center (CGMCC) под учетн. № CGMCC 7581.

В заявке PCT/EP2015/067925 (WO 2016/020371) были описаны новые штаммы рода Paenibacillus. Указанные бактериальные штаммы Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015 были выделены из посевных площадей в Германии и депонированы в соответствии с Будапештским договором с Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ) 20^-го февраля, 2013 компанией BASF SE, Германия:

1) Paenibacillus штамм Lu 16774, депонирован под учетным № DSM 26969,

2) Paenibacillus штамм Lu 17007, депонирован под учетным № DSM 26970, и

3) Paenibacillus штамм Lu 17015, депонирован под учетным № DSM 26971.

Как используют в настоящей заявке, термин штамм Paenibacillus является тождественным термину штамм Paenibacillus sp. и означает бактериальный штамм из рода Paenibacillus. Род Paenibacillus включает в себя все виды Paenibacillus spp..

В указанной выше заявке РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371), штаммы Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015 были определены как принадлежащие к роду Paenibacillus на следующих морфологических и физиологических наблюдениях (см. Пример 2.3 в РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) и в настоящей заявке):

- палочковидные клетки

- эллипсоидальные споры

- набухший спорангий

- анаэробный рост

- ферментация различных сахаров, включая глюкозу, арабинозу, ксилозу, маннит, фруктозу, раффинозу, трегалозу и глицерин с образованием кислоты

- продуцирование газа из глюкозы

- отрицательная аргининдигидролаза

- без использования цитрата

- отсутствие роста в присутствии 5% или более хлорида натрия

- производство экстраклеточных гидролитических ферментов, разлагающих крахмал, желатин, казеин и эскулин.

Кроме того, эти штаммы Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015 были также определены, как принадлежащие к роду Paenibacillus при помощи анализа рДНК 16S тем, что они имеют Paenibacillus-специфическую последовательность 22-оснований в 16S рДНК (от 5' до 3'):

5'-TCGATACCCTTGGTGCCGAAGT-3'

(см. SEQ ID NO: 1 (нуклеотиды 840-861), SEQ ID NO: 2 (840-861), SEQ ID NO: 3 (844-865) и SEQ ID NO: 4 (840-861) в перечне последовательностей РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) и в настоящей заявке).

Кроме того, секвенирование полной 16S рДНК в сравнении с 24 разными штаммами Paenibacillus, привело к кластеризации штаммов Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015 с типом штаммов Paenibacillus brasiliensis, P. kribbensis, P. jamilae, P. peoriae, и P. polymyxa, более предпочтительно к P. peoriae, в частности Paenibacillus peoriae штамм BD-62 (см. Фиг. 1 и 2 в РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) и в настоящей заявке). Известно, что P. polymyxa и P. peoriae имеют значения идентичности последовательности 16S рДНК от 99.6 до 99.7% (J. Gen. Appl. Microbiol. 48, 281-285 (2002)).

«Процентная идентичность» или «процентное сходство» между двумя нуклеотидными последовательностями означает процентную идентичность остатков по всей длине выровненных последовательностей и определяется путем сравнения двух оптимально локально выровненных последовательностей в окне сравнения, определенного длиной локального выравнивания между двумя последовательностями, такими как, например, подсчитанная идентичность (для довольно сходных последовательностей) после ручного выравнивания с помощью программы АЕ2 (Alignment Editor 2). Локальное выравнивание между двумя последовательностями включает только сегменты каждой последовательности, которые считаются достаточно похожими в соответствии с критерием, который зависит от алгоритма, используемого для выполнения выравнивания (например, АЕ2, BLAST, вторичной структуры молекулы рРНК или аналогичной). Процент идентичности вычисляют путем определения количества позиций, в которых идентичная нуклеиновая кислота встречается в обеих последовательностях, чтобы получить количество согласованных позиций, количество согласованных позиций на общее количество позиций в окне сравнения и умножая результат на 100.

Чтобы определить процентную идентичность последовательности двух последовательностей нуклеиновых кислот (например, одну из нуклеотидных последовательностей из таблицы 1 и ее гомолога), последовательности выровнены для оптимальных целей сравнения (например, промежутки могут быть введены в последовательность одной нуклеиновой кислоты для оптимального выравнивания с другой нуклеиновой кислотой). Затем сравнивают основания в соответствующих положениях. Когда положение в одной последовательности занято основанием в качестве соответствующего положения в другой последовательности, то в этом положении молекулы идентичны. Следует понимать, что в целях определения идентичности последовательностей при сравнении последовательности ДНК с последовательностью РНК, тимидиновый нуклеотид эквивалентен урациловому нуклеотиду.

Для выравнивания данные последовательности были помещены в программу АЕ2 (http://iubio.bio.indiana.edu/soft/molbio/unix/ae2.readme), выровнены вручную в соответствии со вторичной структурой полученной молекулы рРНК и их сравнили с репрезентативными последовательностями генов 16S рРНК организмов, принадлежащих Firmicutes (Nucl. Acids Res. 27, 171-173, 1999). Чтобы получить % значений идентичности для нескольких последовательностей, все последовательности были выровнены друг с другом (множественное выравнивание последовательностей). Кроме того, чтобы получить % значений идентичности между двумя последовательностями на более длинном фрагменте секвенирования выровненных последовательностей по сравнению с множественным выравниванием, ручное парное выравнивание последовательностей осуществляли как описано выше, с использованием АЕ2 (парное выравнивание последовательностей).

Стандартизованное автоматизированное риботипирование проводили с использованием Qualicon RiboPrintersystem со штаммами Paenibacillus Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015 по сравнению с P. peoriae BD-62, применяя рестрикционный фермент EcoRI, что приводило к сходству всех трех штаммов Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015 с P. peoriae BD-62 от 0.24 до 0.5 (см. Пример 2.2, Фиг. 12 в РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) и в настоящей заявке). Штаммы Paenibacillus Lu 16774 и Lu 17007 были признаны принадлежащими к виду Paenibacillus polymyxa.

Согласно результатам филогенетического анализа, представленного в вышеупомянутом документе РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) (Фиг. 12-22 в той заявке и в настоящей заявке) и неопубликованные результаты профессора Borriss, Германии, виду Paenibacillus polymyxa потребовалась новая таксономическая классификация на два подвида: 1) Paenibacillus polymyxa ssp. polymyxa и 2) Paenibacillus polymyxa ssp. plantarum; и 3) новый вид Paenibacillus нов. вид epiphyticus.

Типовой штамм P. polymyxa DSM 36 вместе со штаммами P. polymyxa SQR-21, CF05, CICC 10580, NRRL В-30509 и А18, образовывал в каждой из максимальных дендрограмм вероятности, проанализированных для пяти консервативных конститутивных генов (dnaN, gyrB, recA, recN и rpoA) отдельный кластер (Фиг. 17-21 заявки РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) и в настоящей заявке).

Очень похожие результаты были получены путем определения Средней Аминокислотной Идентичности (AAI), которую часто используют для определения филогенетического родства между бактериальными видами. Этот метод основан на вычислении средней идентичности основного генома на уровне аминокислот (Proc. Natl. Acad. USA 102, 2567-2572, 2005). Согласно полученной AAI-матрице на Фиг. 22 в РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) и в настоящей заявке, P. polymyxa DSM 36 вместе со штаммом P. polymyxa SQR-21 образует под-кластер, который отличается от двух других подкластеров, представленных в той заявке.

Штаммы Lu 16674 и Lu 17007 вместе со штаммом P. polymyxa М-1, 1-43, SC2 и Sb3-1 образуют второй подкластер в каждой из максимальных дендрограмм вероятности, проанализированных для пяти консервативных конститутивных генов (dnaN, gyrB, recA, recN и rpoA) (Фиг. 17-21). Согласно AAI-матрице на Фиг. 22 в РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) и в настоящей заявке основанный на анализе основного генома, этот второй подкластер подтверждается его репрезентативными штаммами Lu 16674 и Lu 17007 вместе со штаммами Р. polymyxa М-1 и SC2.

Различие между двумя подкластерами было обнаружено не столь значительным, чтобы обосновать новый вид, но уровни идентичности AAI между представителями обоих кластеров составляют около 97,5%, что обосновывает классификацию на два отдельных подвида.

Таким образом, в РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) было предложено назвать первый подкластер в соответствии с типом штамма P. polymyxa DSM 36^T Paenibacillus polymyxa ssp. polymyxa. Помимо штамма DSM 36, штаммы P. polymyxa SQR-21, CF05, CICC 10580, NRRL B-30509 и A18 должны принадлежать к подвиду Paenibacillus polymyxa ssp. polymyxa.

Кроме того, было предложено назвать второй подкластер как новый подвид Paenibacillus polymyxa ssp. plantarum. Помимо штаммов Lu 16674 и Lu 17007, штаммы P. polymyxa М-1, 1-43, SC2 и Sb3-1 должны принадлежать к Paenibacillus polymyxa ssp. plantarum.

Штамм Lu17015 обладает только 94,9% AAI идентичностью среди генов основного генома с типовым штаммом Paenibacillus polymyxa DSM36 = АТСС 842 (Фиг. 22 в РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) и в настоящей заявке). Таким образом, штамм Lu 17015 не мог быть отнесен к виду Paenibacillus polymyxa, или к любому другому известному виду Paenibacillus. Подобные значения обнаружены для штаммов Е681 (94,7%) и CR2 (94.9%). Среди других, эти три штамма обладают по меньшей мере 98,1% идентичностью (AAI). Согласно определению видов по Konstantinides и Tiedje (Proc Natl. Acad. Sci. USA. 102, 2567-2572, 2005), штамм Lu 17015, а также штаммы E681 и CR2 могут быть обозначены новым видом. Таким образом, новый вид Paenibacillus spec. нов. epiphyticus был предложен в РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371). Следовательно, штамм Lu 17015 относится к Paenibacillus epiphyticus. Было предложено, что указанный штамм должен быть типовым штаммом. Аналогичным образом, дендрограммы, основанные на сопоставлении последовательностей пяти конститутивных генов (Фиг. 17-21 в РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) и в настоящей заявке), показали, что этот кластер удален от всех других штаммов Р. polymyxa. Помимо Lu 17015, было предложено, чтобы штаммы P. polymyxa Е681, CR2 TD94, DSM 365 и WLY78 относились к Paenibacillus spec. нов. epiphyticus.

Известно, что Paenibacillus производит много метаболитов антибиотиков, которые являются липопептидами, например, полимиксины, октапептины, полипептины, пельгипептины и фузарицидины. Фузарицидины представляют собой группу антибиотиков, выделенных из Paenibacillus spp. из класса циклических липодепсипептидов, которые часто имеют следующие структурные особенности: макроциклическое кольцо, состоящее из 6 аминокислотных остатков, три из которых представляют собой L-Thr, D-allo-Thr и D-Ala, а также хвост 15-гуанидино-3-гидроксипентадекановой кислоты, присоединенный к N-концевому L-Thr остатку амидной связью (ChemMedChem 7, 871-882, 2012; J. Microbiol. Meth. 85, 175-182, 2011, Таблица 1 в настоящей заявке). Эти соединения циклизуются лактонным мостиком между N-концевой гидроксильной группой L-Thr и С-концевой карбонильной группой D-Ala. Положение аминокислотных остатков в депсипептидном цикле обычно нумеруют, начиная с вышеупомянутого L-Thr, который сам также несет цепь GHPD и заканчивается С-концевой D-Ala. Неограничивающие примеры фузарицидинов, выделенных из Paenibacillus обозначены как LI-F03, LI-F04, LI-F05, LI-F07 и LI-F08 (J. Antibiotics 40(11), 1506-1514, 1987; Heterocycles 53(7), 1533-1549, 2000; Peptides 32, 1917-1923, 2011) и фузарицидины А (также именуемые LI-F04a), В (также именуемые LI-F04b), С (также именуемые LI-F03a) и D (также именуемые LI-F03b) (J. Antibiotics 49(2), 129-135, 1996; J. Antibiotics 50(3), 220-228, 1997). Аминокислотная цепь фузарицидина не образуется рибосомно, а генерируется нерибосомной пептидной синтетазой. Структурные формулы известных фузарицидинов представлены в Таблице 1 (Biotechnol Lett. 34, 1327-1334, 2012; Фиг. 1 там). Соединения, обозначенные как LI-F03a, LI-F03b до LI-F08a и LI-F08b и фузарицидины формул I и I.1, как описано в настоящей заявке также упоминаются как фузарицидины LI-F03a, LI-F03b до LI-F08a и LI-F08b из-за их структуры внутри семейства фузарицидинов (см. например, Таблицу 1).

Среди выделенных антибиотиков фузарицидина, фузарицидин А показал наиболее перспективную антимикробную активность против различных клинически значимых грибов и грамположительных бактерий, таких как Staphylococcus aureus (диапазон значений MIC: 0,78-3,12 мкг/мл) (ChemMedChem 7, 871-882, 2012). Был разработан синтез аналогов фузарицидина, который содержит 12-гуанидинододекановую кислоту (12-GDA) или 12-аминододекановую кислоту (12-ADA) вместо встречающегося в природе GHPD, но замена GHPD на 12-ADA привела к полной потере антимикробной активности, в то время как замена GHPD на 12-GDA сохраняла антимикробную активность (Tetrahedron Lett. 47, 8587-8590, 2006; ChemMedChem 7, 871-882, 2012).

где стрелка определяет единственную (амидную) связь или между карбонильной частью GHPD и аминогруппой L-Thr (L-треонин), или между карбонильной группой одной аминокислоты и аминогруппой соседней аминокислоты, причем кончик стрелки указывает присоединение к аминогруппе указанной аминокислоты L-Thr или указанной соседней аминокислоты; и

причем единственная линия без наконечника стрелки определяет единственную (сложноэфирную) связь между карбонильной группой D-Ala (D-аланин) и гидроксильной группой L-Thr; и где GHPD представляет собой 15-гуанидино-3-гидроксипентадекановую кислоту.

* в случае этих двух фузарицидинов 1А и 1В, известных из неопубликованной РСТ заявки РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371), стерео-конфигурация шести аминокислот циклического пептида не была пояснена.

Также сообщается, что фузарицидины А, В, С и D ингибируют патогенные грибы растений, такие как Fusarium oxysporum, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, и Penicillum thomii (J. Antibiotics 49(2), 129-135, 1996; J. Antibiotics 50(3), 220-228, 1997). Было обнаружено, что фузарицидины, такие как Li-F05, LI-F07 и LI-F08 обладают некоторой противогрибковой активностью против различных патогенных грибов растений, таких как Fusarium moniliforme, F. oxysporum, F. roseum, Giberella fujkuroi, Helminthosporium sesamum и Penicillium expansum (J. Antibiotics 40(11), 1506-1514, 1987). Фузарицидины также обладают антибактериальной активностью в отношении грамположительных бактерий, включая Staphylococcus aureus (J. Antibiotics 49, 129-135, 1996; J. Antibiotics 50, 220-228, 1997). К тому же, фузарицидины обладают противогрибковой активностью против Leptosphaeria maculans, которая вызывает черную корневую гниль канолы (Can. J. Microbiol. 48, 159-169, 2002). Помимо этого, было обнаружено, что фузарицидины А и В и два его родственных соединения, где D-asllo-Thr связан через свою гидроксильную группу с дополнительным аланином с использованием сложноэфирного мостика, продуцируемого некоторыми штаммами Paenibacillus, индуцируют реакции резистентности в культивируемых клетках петрушки и ингибируют рост Fusarium oxysporum (WO 2006/016558; ЕР 1788074 A1).

В WO 2007/086645 описан фермент фузарицидинсинтетаза и его кодирующий ген как выделенный из штамма Е681 Paenibacillus polymyxa, который участвует в синтезе фузарицидинов А, В, С, D, LI-F03, LI-F04, LI-F05, LI-F07 и LI-F08.

В приведенной выше заявке РСТ/ЕР2015/067925 (WO 2016/020371) было обнаружено, что цельный культуральный бульон, культуральная среда и бесклеточные экстракты бактериальных штаммов Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015 проявляют ингибирующую активность, среди прочего и против Alternaria spp., Botrytis cinerea и Phytophthora infestans. Фракционирование, управляемое биоактивностью органических экстрактов этих штаммов привело к выделению двух новых соединений фузарицидинового типа (в настоящей заявке упоминаются как фузарицидин 1А и 1В), структура которых была выяснена с помощью 1D- и 2D-ЯМР-спектроскопии, а также масс-спектрометрии:

Биопестициды для применения против заболеваний сельскохозяйственных культур уже сами адаптируются на различных сельскохозяйственных культурах. Например, биопестициды уже играют важную роль в борьбе с заболеваниями ложной мучнистой росы. Их преимущества включают: 0-дневной предуборочный интервал и способность использовать при умеренном или тяжелом давлении заболевания.

Однако биопестициды при определенных условиях также могут иметь недостатки, такие как высокая специфичность (требующая точной идентификации вредителя/патогена и использование нескольких продуктов), медленная скорость действия (таким образом, делая их непригодными, если внезапное массовое появление вредителя является непосредственной угрозой для урожая), переменная эффективность из-за влияния различных биотических и абиотических факторов (поскольку биопестициды обычно являются живыми организмами, которые приводят к борьбе с вредителями/патогенами путем размножения в пределах целевого насекомого вредителя/патогена) и развитие резистентности.

Практический опыт ведения сельского хозяйства показал, что повторное и исключительное применение отдельного активного компонента при борьбе с вредными грибами или насекомыми или другими животными вредителями во многих случаях приводит к быстрой селекции штаммов этих грибов или изолятов вредителей, у которых развилась природная или приспособленная устойчивость к данному активному компоненту. В таком случае уже невозможна эффективная борьба с этими грибами или вредителями при помощи данного активного компонента.

Чтобы уменьшить риск селекции устойчивых штаммов грибов или изолятов насекомых, в настоящее время для борьбы с вредными грибами или насекомыми или другими вредителями обычно используют смеси различных активных компонентов. Объединив пестицидно активные соединения и/или биопестициды, обладающие различными механизмами действия, можно обеспечить успешную борьбу в течение относительно длительного периода времени.

Задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы преодолеть указанные выше недостатки и с целью эффективного управления устойчивостью и эффективной борьбы с фитопатогенными вредными грибами, насекомыми или другими вредителями или эффективного регулирования роста растений, при нормах расхода, которые являются как можно более низкими, обеспечить композиции, которые при сниженном общем количестве применяемых активных соединений обладают улучшенной активностью против вредных грибов или вредителей или улучшенной активностью, регулирующей рост растений (синергетические смеси) и расширенным спектром активности, в частности, для определенных показаний.

Типичная проблема, возникающая в области борьбы с вредителями, заключается в необходимости снижения интенсивности дозы активного вещества, чтобы снизить или избежать неблагоприятных или токсикологических воздействий на окружающую среду, все еще обеспечивая эффективную борьбу с вредителями. Что касается настоящего изобретения, то понятие вредители охватывает животных вредителей и вредные грибы.

Поэтому задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы обеспечить пестицидные смеси, способствующие решению проблем снижения дозировки и/или усиления спектра активности и/или сочетающие в себе сокрушительное действие с продолжительной борьбой и/или управлять устойчивостью и/или стимулировать (увеличивать) жизнеспособность растений.

Описание изобретения

Соответственно изобретателями было обнаружено, что данная задача может быть решена при помощи смесей и композиций, определенных в настоящей заявке, содержащих по меньшей мере один бактериальный штамм рода Paenibacillus (штамм Paenibacillus), или его бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит, и химический пестицид, определенный в настоящей заявке.

Таким образом, настоящее изобретение относится к смесям, содержащим в качестве активных компонентов

1) по меньшей мере один штамм Paenibacillus, культуральную среду или его бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит;

и

2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из групп А) - N):

А) Ингибиторы дыхания

- Ингибиторы комплекса III на Q_o сайте: азоксистробин (А.1.1), куметоксистробин (А.1.2), кумоксистробин (А.1.3), димоксистробин (А.1.4), энестробурин (А.1.5), фенаминстробин (А.1.6), феноксистробин/флуфеноксистробин (А.1.7), флуоксастробин (А.1.8), крезоксим-метил (А.1.9), мандестробин (А.1.10), метоминостробин (А.1.11), оризастробин (А.1.12), пикоксистробин (А.1.13), пираклостробин (А.1.14), пираметостробин (А.1.15), пираоксистробин (А.1.16), трифлоксистробин (А.1.17), 2-(2-(3-(2,6-дихлорфенил)-1-метил-аллилиденаминооксиметил)-фенил)-2-метоксиимино-N-метил-ацетамид (А.1.18), пирибенкарб (А.1.19), триклопирикарб/хлординкарб (А.1.1.20), фамоксадон (А.1.21), фенамидон (А.1.21), метил-N-[2-[(1,4-диметил-5-фенил-пиразол-3-ил)оксилметил]фенил]-N-метокси-карбамат (А.1.22), 1-[3-хлор-2-[[1-(4-хлорфенил)-1Н-пиразол-3-ил]оксиметил]фенил]-4-метил-тетразол-5-он (А.1.23), 1-[3-бром-2-[[1-(4-хлорфенил)пиразол-3-ил]оксиметил]фенил]-4-метил-тетразол-5-он (А.1.24), 1-[2-[[1-(4-хлорфенил)пиразол-3-ил]оксиметил]-3-метил-фенил]-4-метил-тетразол-5-он (А.1.25), 1-[2-[[1-(4-хлорфенил)пиразол-3-ил]оксиметил]-3-фтор-фенил]-4-метил-тетразол-5-он (А.1.26), 1-[2-[[1-(2,4-дихлорфенил)пиразол-3-ил]оксиметил]-3-фтор-фенил]-4-метил-тетразол-5-он (А.1.27), 1-[2-[[4-(4-хлорфенил)тиазол-2-ил]оксиметил]-3-метил-фенил]-4-метил-тетразол-5-он (А.1.28), 1-[3-хлор-2-[[4-(n-толил)тиазол-2-ил]оксиметил]фенил]-4-метил-тетразол-5-он (А.1.29), 1-[3-циклопропил-2-[[2-метил-4-(1-метилпиразол-3-ил)фенокси]метил]фенил]-4-метил-тетразол-5-он (А.1.30), 1-[3-(дифторметокси)-2-[[2-метил-4-(1-метилпиразол-3-ил)фенокси]метил]фенил]-4-метил-тетразол-5-он (А.1.31), 1-метил-4-[3-метил-2-[[2-метил-4-(1-метилпиразол-3-ил)фенокси]метил]фенил]тетразол-5-он (А.1.32), 1-метил-4-[3-метил-2-[[1-[3-(трифторметил)фенил]-этилиденамино]оксиметил]фенил]тетразол-5-он (А.1.33), (Z,2E)-5-[1-(2,4-дихлорфенил)пиразол-3-ил]-окси-2-метоксиимино-N,3-диметил-пент-3-енамид (А.1.34), (Z,2E)-5-[1-(4-хлорфенил)пиразол-3-ил]окси-2-метоксиимино-N,3-диметил-пент-3-енамид (А.1.35), пириминостробин (А.1.36), бифуджунжи (А.1.37), метиловый эфир 2-(орто-((2,5-диметилфенил-оксиметилен)фенил)-3-метокси-акриловой кислоты (А.1.38);

- ингибиторы комплекса III на Q_i сайте: циазофамид (А.2.1), амисульбром (А.2.2), [(6S,7R,8R)-8-бензил-3-[(3-гидрокси-4-метокси-пиридин-2-карбонил)амино]-6-метил-4,9-диоксо-1,5-диоксонан-7-ил] 2-метилпропаноат (А.2.3), [2-[[(7R,8R,9S)-7-бензил-9-метил-8-(2-метилпропаноилокси)-2,6-диоксо-1,5-диоксонан-3-ил]карбамоил]-4-метокси-3-пиридил]оксиметил 2-метилпропаноат (А.2.4), [(6S,7R,8R)-8-бензил-3-[[4-метокси-3-(пропаноилоксиметокси)пиридин-2-карбонил]амино]-6-метил-4,9-диоксо-1,5-диоксонан-7-ил] 2-метилпропаноат (А.2.5);

- ингибиторы комплекса II: беноданил (А.3.1), бензовиндифлупир (А.3.2), биксафен (А.3.3), боскалид (А.3.4), карбоксин (А.3.5), фенфурам (А.3.6), флуопирам (А.3.7), флутоланил (А.3.8), флуксапироксад (А.3.9), фураметпир (А.3.10), изофетамид (А.3.11), изопиразам (А.3.12), мепронил (А.3.13), оксикарбоксин (А.3.14), пенфлуфен (А.3.15), пентиопирад (А.3.16), седаксан (А.3.19), теклофталам (А.3.20), тифлузамид (А.3.21), 3-(дифторметил)-1-метил-N-(1,1,3-триметилиндан-4-ил)пиразол-4-карбоксамид (А.3.22), 3-(трифторметил)-1-метил-N-(1,1,3-триметилиндан-4-ил)пиразол-4-карбоксамид (А.3.23), 1,3-диметил-N-(1,1,3-триметилиндан-4-ил)пиразол-4-карбоксамид (А.3.24), 3-(трифторметил)-1,5-диметил-N-(1,1,3-триметилиндан-4-ил)пиразол-4-карбоксамид (А.3.25), 1,3,5-триметил-N-(1,1,3-триметилиндан-4-ил)пиразол-4-карбоксамид (А.3.26), 3-(дифторметил)-1,5-диметил-N-(1,1,3-триметилиндан-4-ил)пиразол-4-карбоксамид (А.3.27), 3-(дифторметил)-N-(7-фтор-1,1,3-триметил-индан-4-ил)-1-метил-пиразол-4-карбоксамид (А.3.28), метил (Е)-2-[2-[(5-циано-2-метил-фенокси)метил]фенил]-3-метокси-проп-2-еноат (А.3.30);

- другие ингибиторы дыхания: дифлуметорим (А.4.1); производные нитрофенила: бинапакрил (А.4.2), динобутон (А.4.3), динокап (А.4.4), флуазинам (А.4.5), феримзон (А.4.7); металлоорганические соединения: соли фентина, например, фентинацетат (А.4.8), фентинхлорид (А.4.9) или фентингидроксид (А.4.10); аметокрадин (А.4.11); силтиофам (А.4.12);

В) Ингибиторы биосинтеза стеринов (фунгициды ИБС)

- Ингибиторы С14 деметилазы: триазолы: азаконазол (В.1.1), битертанол (В.1.2), бромуконазол (В.1.3), ципроконазол (В.1.4), дифеноконазол (В.1.5), диниконазол (В.1.6), диниконазол-М (В.1.7), эпоксиконазол (В.1.8), фенбуконазол (В.1.9), флуквинконазол (В.1.10), флузилазол (В.1.11), флутриафол (В.1.12), гексаконазол (В.1.13), имибенконазол (В.1.14), ипконазол (В.1.15), метконазол (В.1.17), миклобутанил (В.1.18), окспоконазол (В.1.19), паклобутразол (В.1.20), пенконазол (В.1.21), пропиконазол (В.1.22), протиоконазол (В.1.23), симеконазол (В.1.24), тебуконазол (В.1.25), тетраконазол (В.1.26), триадимефон (В.1.27), триадименол (В.1.28), тритиконазол (В.1.29), униконазол (В.1.30), 1-[rel-(2S;3R)-3-(2-хлорфенил)-2-(2,4-дифторфенил)-оксиранилметил]-5-тиоцианато-1Н-[1,2,4]триазол (В.1.31), 2-[rel-(2S;3R)-3-(2-хлорфенил)-2-(2,4-дифторфенил)-оксиранилметил]-2Н-[1,2,4]триазол-3-тиол (В.1.32), 2-[2-хлор-4-(4-хлорфенокси)фенил]-1-(1,2,4-триазол-1-ил)пентан-2-ол (В.1.33), 1-[4-(4-хлорфенокси)-2-(трифторметил)фенил]-1-циклопропил-2-(1,2,4-триазол-1-ил)этанол (В.1.34), 2-[4-(4-хлорфенокси)-2-(трифторметил)фенил]-1-(1,2,4-триазол-1-ил)бутан-2-ол (В.1.35), 2-[2-хлор-4-(4-хлорфенокси)фенил]-1-(1,2,4-триазол-1-ил)бутан-2-ол (В.1.36), 2-[4-(4-хлорфенокси)-2-(трифторметил)фенил]-3-метил-1-(1,2,4-триазол-1-ил)бутан-2-ол (В.1.37), 2-[4-(4-хлорфенокси)-2-(трифторметил)фенил]-1-(1,2,4-триазол-1-ил)пропан-2-ол (В.1.38), 2-[2-хлор-4-(4-хлорфенокси)фенил]-3-метил-1-(1,2,4-триазол-1-ил)бутан-2-ол (В.1.39), 2-[4-(4-хлорфенокси)-2-(трифторметил)фенил]-1-(1,2,4-триазол-1-ил)пентан-2-ол (В.1.40), 2-[4-(4-фторфенокси)-2-(трифторметил)фенил]-1-(1,2,4-триазол-1-ил)пропан-2-ол (В.1.41), 2-[2-хлор-4-(4-хлорфенокси)фенил]-1-(1,2,4-триазол-1-ил)пент-3-ин-2-ол (В.1.42), 2-(хлорметил)-2-метил-5-(n-толилметил)-1-(1,2,4-триазол-1-илметил)циклопентанол (В.1.43); имидазолы: имазалил (В.1.44), пефуразоат (В.1.45), прохлораз (В.1.46), трифлумизол (В.1.47); пиримидины, пиридины и пиперазины: фенаримол (В.1.49), пирифенокс (В.1.50), трифорин (В.1.51), [3-(4-хлор-2-фтор-фенил)-5-(2,4-дифторфенил)изоксазол-4-ил]-(3-пиридил)метанол (В.1.52);

- Ингибиторы дельта-14-редуктазы: алдиморф (В.2.1), додеморф (В.2.2), додеморфацетат (В.2.3), фенпропиморф (В.2.4), тридеморф (В.2.5), фенпропидин (В.2.6), пипералин (В.2.7), спироксамин (В.2.8);

- Ингибиторы 3-кеторедуктазы: фенгексамид (В.3.1);

- Другие ингибиторы биосинтеза стеринов: хлорфеномизол (В.4.1);

C) Ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот

- фениламиды или фунгициды ациламинокислоты: беналаксил (С.1.1), беналаксил-М (С.1.2), киралаксил (С.1.3), металаксил (С.1.4), металаксил-М (С.1.5), офураце (С.1.6), оксадиксил (С.1.7);

- другие ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот: гимексазол (С.2.1), октилинон (С.2.2), оксолиновая кислота (С.2.3), бупиримат (С.2.4), 5-фторцитозин (С.2.5), 5-фтор-2-(n-толилметокси)пиримидин-4-амин (С.2.6), 5-фтор-2-(4-фторфенилметокси)пиримидин-4-амин (С.2.7), 5-фтор-2-(4-хлорфенилметокси)пиримидин-4 амин (С.2.8);

D) Ингибиторы деления клеток и цитоскелета

- ингибиторы тубулина: беномил (D1.1), карбендазим (D.1.2), фуберидазол (D1.3), тиабендазол (D1.4), тиофанат-метил (D1.5), 3-хлор-4-(2,6-дифторфенил)-6-метил-5-фенил-пиридазин (D.1.6), 3-хлор-6-метил-5-фенил-4-(2,4,6-трифторфенил)пиридазин (D.1.7), N-этил-2-[(3-этинил-8-метил-6-хинолил)окси]бутанамид (D.1.8), N-этил-2-[(3-этинил-8-метил-6-хинолил)окси]-2-метилсульфанил-ацетамид (D.1.9), 2-[(3-этинил-8-метил-6-хинолил)окси]-N-(2-фторэтил)бутанамид (D.1.10), 2-[(3-этинил-8-метил-6-хинолил)окси]-N-(2-фторэтил)-2-метокси-ацетамид (D.1.11), 2-[(3-этинил-8-метил-6-хинолил)окси]-N-пропил-бутанамид (D.1.12), 2-[(3-этинил-8-метил-6-хинолил)окси]-2-метокси-N-пропил-ацетамид (D.1.13), 2-[(3-этинил-8-метил-6-хинолил)окси]-2-метилсульфанил-N-пропил-ацетамид, (D.1.14), 2-[(3-этинил-8-метил-6-хинолил)окси]-N-(2-фторэтил)-2-метилсульфанил-ацетамид (D.1.15), 4-(2-бром-4-фтор-фенил)-N-(2-хлор-6-фтор-фенил)-2,5-диметил-пиразол-3-амин (D.1.16);

- другие ингибиторы деления клеток: диэтофенкарб (D.2.1), этабоксам (D.2.2), пенцикурон (D.2.3), флупиколид (D.2.4), зоксамид (D.2.5), метрафенон (D.2.6), пириофенон (D.2.7);

E) Ингибиторы синтеза аминокислот и белков

- ингибиторы синтеза метионина: ципродинил (Е.1.1), мепанипирим (Е.1.2), пириметанил (Е.1.3);

- ингибиторы синтеза белков: бластицидин-S (Е.2.1), казугамицин (Е.2.2), гидрохлорид-гидрат казугамицина (Е.2.3), милдиомицин (Е.2.4), стрептомицин (Е.2.5), окситетрациклин (Е.2.6);

F) Ингибиторы сигнальной трансдукции

- Ингибиторы МАР-киназы/гистидин-киназы: фторимид (F.1.1), ипродион (F.1.2), процимидон (F.1.3), винклозолин (F.1.4), флудиоксонил (F.1.5);

- Ингибиторы G белков: квиноксифен (F.2.1);

G) Ингибиторы липидного и мембранного синтеза

- Ингибиторы биосинтеза фосфолипидов: эдифенфос (G.1.1), ипробенфос (G.1.2), пиразофос (G.1.3), изопротиолан (G.1.4);

- перекисного окисления липидов: диклоран (G.2.1), квинтозен (G.2.2), текназен (G.2.3), толклофос-метил (G.2.4), бифенил (G.2.5), хлорнеб (G.2.6), этридиазол (G.2.7);

- биосинтеза фосфолипидов и отложения клеточной оболочки: диметоморф (G.3.1), флуморф (G.3.2), мандипропамид (G.3.3), пириморф (G.3.4), бентиаваликарб (G.3.5), ипроваликарб (G.3.6), валифеналат (G.3.7);

- соединения, повреждающие проницаемость клеточной мембраны и жирных кислот: пропамокарб (G.4.1);

- ингибиторы оксистерол-связывающего белка: оксатиапипролин (G.5.1), 2-{3-[2-(1-{[3,5-бис(дифторметил-1Н-пиразол-1-ил]ацетил}пиперидин-4-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-4,5-дигидро-1,2-оксазол-5-ил}фенилметансульфонат (G.5.2), 2-{3-[2-(1-{[3,5-бис(дифторметил)-1Н-пиразол-1-ил]ацетил}пиперидин-4-ил) 1,3-тиазол-4-ил]-4,5-дигидро-1,2-оксазол-5-ил}-3-хлорфенилметансульфонат (G.5.3);

H) Ингибиторы с многосторонним действием

- неорганические действующие вещества: бордосская смесь (Н.1.1), медь (Н.1.2), ацетат меди (Н.1.3), гидроксид меди (Н.1.4), оксихлорид меди (Н.1.5), основный сульфат меди (Н.1.6), сера (Н.1.7);

- тио- и дитиокарбаматы: фербам (Н.2.1), манкозеб (Н.2.2), манеб (Н.2.3), метам (Н.2.4), метирам (Н.2.5), пропинеб (Н.2.6), тирам (Н.2.7), цинеб (Н.2.8), цирам (Н.2.9);

- хлорорганические соединения: анилазин (Н.3.1), хлороталонил (Н.3.2), каптафол (Н.3.3), каптан (Н.3.4), фолпет (Н.3.5), дихлофлуанид (Н.3.6), дихлорофен (Н.3.7), гексахлорбензол (Н.3.8), пентахлорфенол (Н.3.9) и его соли, фталид (Н.3.10), толилфлуанид (Н.3.11);

- гуанидины и другие: гуанидин (Н.4.1), додин (Н.4.2), додин свободное основание (Н.4.3), гуазатин (Н.4.4), гуазатин-ацетат (Н.4.5), иминоктадин (Н.4.6), иминоктадин-триацетат (Н.4.7), иминоктадин-трис(албезилат) (Н.4.8), дитианон (Н.4.9), 2,6-диметил-1Н,5Н-[1,4]дитиино[2,3-с:5,6-с']дипиррол-1,3,5,7(2Н,6Н)-тетраон (Н.4.10);

I) Ингибиторы синтеза клеточной оболочки

- ингибиторы синтеза глюкана: валидамицин (I.1.1), полиоксин В (I.1.2);

- ингибиторы синтеза меланина: пироквилон (I.2.1), трициклазол (I.2.2), карпропамид (I.2.3), дицикломет (I.2.4), феноксанил (I.2.5);

J) Индукторы защиты растений

- ацибензолар-S-метил (J.1.1), пробеназол (J.1.2), изотианил (J.1.3), тиадинил (J.1.4), прогексадион-кальций (J.1.5); фосфонаты: фосэтил (J.1.6), фосэтил-алюминий (J.1.7), фосфористая кислота и ее соли (J.1.8), бикарбонат калия или натрия (J.1.9);

K) Неизвестный механизм действия

- бронопол (K.1.1), хинометионат (K.1.2), цифлуфенамид (K.1.3), цимоксанил (K.1.4), дазомет (K.1.5), дебакарб (K.1.6), диклоцимет (K.1.7), дикломезин (K.1.8), дифензокват (K.1.9), дифензокват-метилсульфат (K.1.10), дифениламин (K.1.11), фенитропан (K.1.12), фенпиразамин (K.1.13), флуметовер (K.1.14), флусульфамид (K.1.15), флутианил (K.1.16), гарпин (K.1.17), метасульфокарб (K.1.18), нитрапирин (K.1.19), нитротал-изопропил (K.1.20), толпрокарб (K.1.21), оксин-медь (K.1.22), проквиназид (K.1.23), тебуфлоквин (K.1.24), теклофталам (K.1.25), триазоксид (K.1.26), N'-(4-(4-хлор-3-трифторметил-фенокси)-2,5-диметил-фенил)-N-этил-N-метилформамидин (K.1.27), N'-(4-(4-фтор-3-трифторметил-фенокси)-2,5-диметил-фенил)-N-этил-N-метилформамидин (K.1.28), N'-[4-[[3-[(4-хлорфенил)метил]-1,2,4-тиадиазол-5-ил]окси]-2,5-диметил-фенил]-N-этил-N-метил-формамидин (K.1.29), N'-(5-бром-6-индан-2-илокси-2-метил-3-пиридил)-N-этил-N-метил-формамидин (K.1.30), N'-[5-бром-6-[1-(3,5-дифторфенил)этокси]-2-метил-3-пиридил]-N-этил-N-метил-формамидин (K.1.31), N'-[5-бром-6-(4-изопропилциклогексокси)-2-метил-3-пиридил]-N-этил-N-метил-формамидин (K.1.32), N'-[5-бром-2-метил-6-(1-фенилэтокси)-3-пиридил]-N-этил-N-метил-формамидин (K.1.33), N'-(2-метил-5-трифторметил-4-(3-триметилсиланил-пропокси)-фенил)-N-этил-N-метилформамидин (K.1.34), N'-(5-дифторметил-2-метил-4-(3-триметилсиланил-пропокси)-фенил)-N-этил-N-метилформамидин (K.1.35), 2-(4-хлор-фенил)-N-[4-(3,4-диметокси-фенил)-изоксазол-5-ил]-2-проп-2-инилокси-ацетамид (K.1.36), 3-[5-(4-хлор-фенил)-2,3-диметил-изоксазолидин-3-ил]-пиридин (пиризоксазол) (K.1.37), 3-[5-(4-метилфенил)-2,3-диметил-изоксазолидин-3-ил]-пиридин (K.1.38), 5-хлор-1-(4,6-диметокси-пиримидин-2-ил)-2-метил-1Н-бензоимидазол (K.1.39), этил (Z)-3-амино-2-циано-3-фенил-проп-2-еноат (K.1.40), пикар-бутразокс (K.1.41), пентил N-[6-[[(Z)-[(1-метилтетразол-5-ил)-фенил-метилен]амино]оксиметил]-2-пиридил]карбамат (K.1.42), 2-[2-[(7,8-дифтор-2-метил-3-хинолил)окси]-6-фтор-фенил]пропан-2-ол (K.1.44), 2-[2-фтор-6-[(8-фтор-2-метил-3-хинолил)окси]фенил]пропан-2-ол (K.1.45), 3-(5-фтор-3,3,4,4-тетраметил-3,4-дигидроизохинолин-1-ил)хинолин (K.1.46), 3-(4,4-дифтор-3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолин-1-ил)хинолин (K.1.47), 3-(4,4,5-трифтор-3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолин-1-ил)хинолин (K.1.48), 9-фтор-2,2-диметил-5-(3-хинолил)-3Н-1,4-бензоксазепин (K.1.49), 2-(6-бензил-2-пиридил)хиназолин (K.1.50), 2-[6-(3-фтор-4-метокси-фенил)-5-метил-2-пиридил]хиназолин (K.1.51), 3-[(3,4-дихлоризотиазол-5-ил)метокси]-1,2-бензотиазол 1,1-диоксид (K.1.52);

L) Регуляторы роста

абсцизовая кислота, амидохлор, анцимидол, 6-бензиламинопурин, брассинолид, бутралин, хлормекват, хлормекват хлорид, холин хлорид, цикланилид, даминозид, дикелугак, диметипин, 2,6-диметилпуридин, этефон, флуметралин, флурпримидол, флутиацет, форхлорфенурон, гибберелловая кислота, инабенфид, индол-3-уксусная кислота, гидразид малеиновой кислоты, мефлуидид, мепикват, мепикват хлорид, нафталинуксусная кислота, N-6-бензиладенин, паклобутразол, прогексадион, прогексадион, прогексадион-кальций, прогидрожасмон, тидиазурон, триапентенол, трибутилфосфортритиоат, 2,3,5-трийодбензойная кислота, тринексапак-этил, униконазол;

М) Гербициды из классов М.1 - М.15

М.1 Ингибиторы биосинтеза липидов: аллоксидим, аллоксидим-натрий, бутроксидим, клетодим, клодинафоп, клодинафоп-пропаргил, циклоксидим, цигалофоп, цигалофоп-бутил, диклофоп, диклофоп-метил, феноксапроп, феноксапроп-этил, феноксапроп-Р, феноксапроп-Р-этил, флуазифоп, флуазифоп-бутил, флуазифоп-Р, флуазифоп-Р-бутил, галоксифоп, галоксифоп-метил, галоксифоп-Р, галоксифоп-Р-метил, метамифоп, пиноксаден, профоксидим, пропаквизафоп, квизалофоп, квизалофопэтил, квизалофоп-тефурил, квизалофоп-Р, квизалофоп-Р-этил, квизалофоп-Р-тефурил, сетоксидим, тепралоксидим, тралкоксидим, 4-(4'-хлор-4-циклопропил-2'-фтор[1,1'-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-дихлор-4-циклопропил[1,1'-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1312337-45-3); 4-(4'-хлор-4-этил-2'-фтор[1,1'-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-дихлор-4-этил[1,1'-бифенил]-3-ил)-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3,5(4Н,6Н)-дион (CAS 1312340-84-3); 5-(ацетилокси)-4-(4'-хлор-4-циклопропил-2'-фтор[1,1'-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2H-пиран-3-он (CAS 1312337-48-6); 5-(ацетилокси)-4-(2',4'-дихлор-4-циклопропил-[1,1'-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он; 5-(ацетилокси)-4-(4'-хлор-4-этил-2'-фтор[1,1'-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1312340-82-1); 5-(ацетилокси)-4-(2',4'-дихлор-4-этил[1,1'-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1033760-55-2); метиловый эфир 4-(4'-хлор-4-циклопропил-2'-фтор[1,1'-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил-карбоновой кислоты (CAS 1312337-51-1); метиловый эфир 4-(2',4'-дихлор-4-циклопропил-[1,1'-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил-карбоновой кислоты; метиловый эфир 4-(4'-хлор-4-этил-2'-фтор[1,1'-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил-карбоновой кислоты (CAS 1312340-83-2); метиловый эфир 4-(2',4'-дихлор-4-этил-[1,1'-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил-карбоновой кислоты (CAS 1033760-58-5); бенфурезат, бутилат, циклоат, далапон, димепиперат, ЕРТС, эспрокарб, этофумезат, флупропанат, молинат, орбенкарб, пебулат, просульфокарб, ТСА, тиобенкарб, тиокарбазил, триаллат и вернолат;

М.2 Ингибиторы АЛС : амидосульфурон, азимсульфурон, бенсульфурон, бенсульфурон-метил, хлоримурон, хлоримурон-этил, хлорсульфурон, циносульфурон, циклосульфамурон, этаметсульфурон, этаметсульфурон-метил, этокси-сульфурон, флазасульфурон, флуцетосульфурон, флупирсульфурон, флупир-сульфурон-метил-натрий, форамсульфурон, галосульфурон, галосульфурон-метил, имазосульфурон, йодосульфурон, йодосульфурон-метил-натрий, иофен-сульфурон, иофенсульфурон-натрий, мезосульфурон, метазосульфурон, метсульфурон, метсульфурон-метил, никосульфурон, ортосульфамурон, оксасульфурон, примисульфурон, примисульфурон-метил, пропирисульфурон, просульфурон, пиразосульфурон, пиразосульфурон-этил, римсульфурон, сульфоме-турон, сульфометурон-метил, сульфосульфурон, тифенсульфурон, тифенсульфурон-метил, триасульфурон, трибенурон, трибенурон-метил, трифлоксисульфурон, трифлусульфурон, трифлусульфурон-метил, тритосульфурон, имазаметабенз, имазаметабенз-метил, имазамокс, имазапик, имазапир, имазаквин, имазетапир; клорансулам, клорансулам-метил, диклосулам, флуметсулам, флорасулам, метосулам, пенокссулам, пиримисульфан и пирокссулам; биспирибак, биспирибак-натрий, пирибензоксим, пирифталид, пириминобак, пириминобак-метил, пиритиобак, пиритиобак-натрий, 1-метил-этиловый эфир 4-[[[2-[(4,6-диметокси-2-пиримидинил)окси]фенил]метил]амино]-бензойной кислоты (CAS 420138-41-6), пропиловый эфир 4-[[[2-[(4,6-диметокси-2-пиримидинил)окси]фенил]метил]амино]-бензойной кислоты (CAS 420138-40-5), N-(4-бромфенил)-2-[(4,6-диметокси-2-пиримидинил)окси]бензолметанамин (CAS 420138-01-8); флукарбазон, флукарбазон-натрий, пропоксикарбазон, пропоксикарбазон-натрий, тиенкарбазон, тиенкарбазон-метил; триафамон;

М.3 Ингибиторы фотосинтеза: амикарбазон; хлортриазин; аметрин, атразин, хлоридазон, цианазин, десметрин, диметаметрин, гексазинон, метрибузин, прометон, прометрин, пропазин, симазин, симетрин, тербуметон, тербутилазин, тербутрин, триэтазин; хлорбромурон, хлортолурон, хлорксурон, димефурон, диурон, флуометурон, изопротурон, изоурон, линурон, метамитрон, метабензтиазурон, метобензурон, метоксурон, монолинурон, небурон, сидурон, тебутиурон, тидиазурон, десмедифам, карбутилат, фенмедифам, фенмедифам-этил, бромфеноксим, бромоксинил и его соли и сложные эфиры, иоксинил и его соли и сложные эфиры, бромацил, ленацил, тербацил, бентазон, бентазон-натрий, пиридат, пиридафол, пентанохлор, пропанил; дикват, дикват-дибромид, паракват, паракват-дихлорид, паракват-диметилсульфат;

М.4 ингибиторы протопорфириноген-IX-оксидазы: ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, азафенидин, бенкарбазон, бензфендизон, бифенокс, бутафенацил, карфентразон, карфентразон-этил, хлометоксифен, цинидон-этил, флуазолат, флуфенпир, флуфенпир-этил, флумиклорак, флумиклорак-пентил, флумиоксазин, фторогликофен, фторогликофен-этил, флутиацет, флутиацет-метил, фомезафен, галозафен, лактофен, оксадиаргил, оксадиазон, оксифлуорфен, пентоксазон, профлуазол, пираклонил, пирафлуфен, пирафлуфен-этил, сафлуфенацил, сульфентразон, тидиазимин, тиафенацил, трифлумидоксазин, этил [3-[2-хлор-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6), N-этил-3-(2,6-дихлор-4-трифтор-метилфенокси)-5-метил-1Н-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452098-92-9), N тетрагидрофурфурил-3-(2,6-дихлор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Н-пиразол-1-карбоксамид (CAS 915396-43-9), N-этил-3-(2-хлор-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Н-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452099-05-7), N-тетрагидрофурфурил-3-(2-хлор-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Н-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452100-03-7), 3-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил]-1,5-диметил-6-тиоксо-[1,3,5]триазинан-2,4-дион (CAS 451484-50-7), 2-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион (CAS 1300118-96-0), 1-метил-6-трифторметил-3-(2,2,7-три-фтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 1304113-05-0), метил (Е)-4-[2-хлор-5-[4-хлор-5-(дифторметокси)-1Н-метил-пиразол-3-ил]-4-фтор-фенокси]-3-метокси-but-2-еноат (CAS 948893-00-3), 3-[7-хлор-5-фтор-2-(трифторметил)-1Н-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4);

М.5 Отбеливающие гербициды: бефлубутамид, дифлуфеникан, флуридон, флурохлоридон, флуртамон, норфлуразон, пиколинафен, 4-(3-трифторметилфенокси)-2-(4-трифторметилфенил)пиримидин (CAS 180608-33-7); бензобициклон, бензофенап, бициклопирон, кломазон, фенквинтрион, изоксафлутол, мезотрион, пирасульфотол, пиразолинат, пиразоксифен, сулькотрион, тефурилтрион, темботрион, толпиралат, топрамезон; аклонифен, амитрол, флуметурон;

М.6 Ингибиторы EPSP-синтазы: глифосат, глифосат-изопропиламмоний, глифосат-калий, глифосат-тримезиум (сульфосат);

М.7 Ингибиторы глутамин-синтазы: биланафос (биалафос), биланафос-натрий, глуфосинат, глуфосинат-Р, глуфосинат-аммоний;

М.8 Ингибиторы DHP-синтазы: азулам;

М.9 Ингибиторы митоза: бенфлуралин, бутралин, динитрамин, эталфлуралин, флухлоралин, оризалин, пендиметалин, продиамин, трифлуралин; амипрофос, амипрофос-метил, бутамифос; хлортал, хлортал-диметил, дитиопир, тиазопир, пропизамид, тебутам; карбетамид, хлорпрофам, фампроп, фампроп-изопропил, фампроп-метил, фампроп-М-изопропил, фампроп-М-метил, профам;

М.10 Ингибиторы VLCFA: ацетохлор, алахлор, бутахлор, диметахлор, диметенамид, диметенамид-Р, метазахлор, метолахлор, метолахлор-S, петоксамид, претилахлор, пропахлор, пропизохлор, тенилхлор, флуфенацет, мефенацет, дифенамид, напроанилид, напропамид, напропамид-М, фентразамид, анилофос, кафенстрол, феноксасульфон, ипфенкарбазон, пиперофос, пироксасульфон, изоксазолиновые соединения формул II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 и II.9:

М.11 Ингибиторы биосинтеза целлюлозы: хлортиамид, дихлобенил, флупоксам, индазифлам, изоксабен, триазифлам, 1-циклогексил-5-пентафторфенилокси-14-[1,2,4,6]тиатриазин-3-иламин (CAS 175899-01-1);

М.12 Разобщающие гербициды: динозеб, динотерб, DNOC и его соли;

М.13 Ауксиновые гербициды: 2,4-D и его соли и сложные эфиры, клацифос, 2,4-DB и его соли и сложные эфиры, аминоциклопирахлор и его соли и сложные эфиры, аминопиралид и его соли, такие как аминопиралид-диметиламмоний, аминопиралид-трис(2-гидроксипропил)аммоний и его сложные эфиры, беназолин, беназолин-этил, хлорамбен и его соли и сложные эфиры, кломепроп, клопиралид и его соли и сложные эфиры, дикамба и его соли и сложные эфиры, дихлорпроп и его соли и сложные эфиры, дихлорпроп-Р и его соли и сложные эфиры, флуроксипир, флуроксипир-бутометил, флуроксипир-мептил, галауксифен и его соли и сложные эфиры (CAS 943832-60-8); МСРА и его соли и сложные эфиры, МСРА-тиоэтил, МСРВ и его соли и сложные эфиры, мекопроп и его соли и сложные эфиры, мекопроп-Р и его соли и сложные эфиры, пиклорам и его соли и сложные эфиры, квинклорак, квинмерак, ТВА (2,3,6) и его соли и сложные эфиры, триклопир и его соли и сложные эфиры, 4-амино-3-хлор-6-(4-хлор-2-фтор-3-метоксифенил)-5-фторпиридин-2-карбоновая кислота, бензил 4-амино-3-хлор-6-(4-хлор-2-фтор-3-метоксифенил)-5-фторпиридин-2-карбоксилат (CAS 1390661-72-9);

М.14 Ингибиторы переноса ауксина: дифлуфензопир, дифлуфензопир-натрий, напталам и напталам-натрий;

М.15 Другие гербициды: бромобутид, хлорфлуренол, хлорфлуренол-метил, цинметилин, кумилурон, циклопириморат (CAS 499223-49-3) и его соли и сложные эфиры, далапон, дазомет, дифензокват, дифензокват-метилсульфат, диметипин, DSMA, димрон, эндотал и его соли, этобензанид, флуренол, флуренол-бутил, флупримидол, фосамин, фосамин-аммоний, инданофан, гидразид малеиновой кислоты, мефлуидид, метам, метиозолин (CAS 403640-27-7), метилазид, метилбромид, метилдимрон, метилйодид, MSMA, олеиновая кислота, оксазикломефон, пеларгоновая кислота, пирибутикарб, квинокламин, триазифлам, тридифан;

N) Инсектициды из классов N.1-N.29

N.1 Ингибиторы ацетилхолинэстеразы (AChE) : алдикарб, аланикарб, бендиокарб, бенфуракарб, бутокарбоксим, бутоксикарбоксим, карбарил, карбофуран, карбосульфан, этиофенкарб, фенобукарб, форметанат, фуратиокарб, изопрокарб, метиокарб, метомил, метолкарб, оксамил, пиримикарб, пропоксур, тиодикарб, тиофанокс, триметакарб, ХМС, ксилилкарб и триазамат; ацефат, азаме-тифос, азинфос-этил, азинфосметил, кадузафос, хлорэтоксифос, хлорфенвинфос, хлормефос, хлорпирифос, хлорпирифос-метил, кумафос, цианофос, деметон-S-метил, диазинон, дихлорвос/ DDVP, дикротофос, диметоат, диметилвинфос, дисульфотон, EPN, этион, этопрофон, фамфур, фенамифос, фенитротион, фентион, фостиазат, гептенофос, имициафос, изофенфос, изопропил O-(метоксиаминотио-фосфорил) салицилат, изоксатион, малатион, мекарбам, метамидофос, метидатион, мевинфос, монокротофос, налед, ометоат, оксидеметон-метил, паратион, паратион-метил, пентоат, форат, фосалон, фосмет, фосфамидон, фоксим, пиримфос-метил, профенофос, пропетамфос, протиофос, пираклофос, пиридафентион, квиналфос, сульфотеп, тебупиримфос, темефос, тербуфос, тетрахлорвинфос, тиометон, триазофос, трихлорфон и вамидотион;

N.2 Антагонисты регулируемых ГАМК хлоридных каналов: эндосульфан, хлордан; этипрол, фипронил, флуфипрол, пирафлупрол, пирипрол;

N.3 Модуляторы натриевых каналов: акринатрин, аллетрин, d-цис-транс аллетрин, d-транс аллетрин, бифентрин, биоаллетрин, биоаллетрин S-циклопентенил, биоресметрин, циклопротрин, цифлутрин, бета-цифлутрин, цигалотрин, лямбда-цигалотрин, гамма-цигалотрин, циперметрин, альфа-циперметрин, бета-циперметрин, тета-циперметрин, зета-циперметрин, цифенотрин, дельтаметрин, эмпентрин, эсфенвалерат, этофенпрокс, фенпропатрин, фенвалерат, флуцитринат, флуметрин, тау-флувалинат, галфенпрокс, имипротрин, меперфлутрин, метофлутрин, перметрин, фенотрин, праллетрин, профлутрин, пиретрин (пиретрум), ресметрин, силафлуофен, тефлутрин, тетраметилфлутрин, тетраметрин, тралометрин и трансфлутрин; DDT, метоксихлор;

N.4 Агонисты никотинового ацетилхолинового рецептора (nAChR): ацета-миприд, клотианидин, циклоксаприд, динотефуран, имидаклоприд, нитенпирам, тиаклоприд, тиаметоксам; (2Е-)-1-[(6-хлорпиридин-3-ил)метил]-N'-нитро-2-пентилиденгидразинкарбоксимидамид; 1-[(6-хлорпиридин-3-ил)метил]-7-метил-8-нитро-5-пропокси-1,2,3,5,6,7-гексагидроимидазо[1,2-а]пиридин; никотин;

N.5 Аллостерические активаторы никотинового ацетилхолинового рецептора: спиносад, спинеторам;

N.6 Активаторы хлоридных каналов: абамектин, эмамектин бензоат, ивермектин, лепимектин, милбемектин;

N.7 Миметики ювенильных гормонов: гидропрен, кинопрен, метопрен; феноксикарб, пирипроксифен;

N.8 Смешанные неспецифические (многостороннего действия) ингибиторы: метилбромид и другие алкилгалогениды, хлорпикрин, сульфурилфторид, бура, виннокислый антимонил-калий;

N.9 Селективные блокаторы питания равнокрылых хоботных: пиметрозин, флоникамид;

N.10 Ингибиторы роста клещей: клофентезин, гекситиазокс, дифловидазин; этоксазол;

N.11 Микробные разрушители мембран средней кишки насекомых: Bacillus thuringiensis, Bacillus sphaericus и инсектицидные белки, которые они производят: Bacillus thuringiensis подвид israelensis, Bacillus sphaericus, Bacillus thuringiensis подвид aizawai, Bacillus thuringiensis подвид kurstaki, Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, Bt белки сельскохозяйственных культур: Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1Fa, Cry2Ab, mCry3A, Cry3Ab, Cry3Bb, Cry34/35Ab1;

N.12 Ингибиторы митохондриальной АТФ-синтазы, диафентиурон, азоциклотин, цигексатин, фенбутатин оксид, пропаргит, тетрадифон;

N.13 Разобщители окислительного фосфорилирования посредством разрушения протонного градиента: хлорфенапир, DNOC, амид серы;

N.14 Блокаторы каналов никотинового ацетилхолинового рецептора (nAChR): бенсультап, картап гидрохлорид, тиоциклам, тиосультап натрия;

N.15 Ингибиторы биосинтеза хитина типа 0: бистрифлурон, хлорфлуазурон, дифлубензурон, флуциклоксурон, флуфеноксурон, гексафлумурон, луфенурон, новалурон, новифлумурон, тефлубензурон, трифлумурон;

N.16 Ингибиторы биосинтеза хитина типа 1: бупрофезин;

N.17 Разрушители линьки двукрылых: циромазин;

N.18 Агонисты рецепторов экдизона: метоксифенозид, тебуфенозид, галофенозид, фуфенозид, хромафенозид;

N.19 Агонисты рецептора октопамина: амитраз;

N.20 Ингибиторы переноса электронов митохондриального комплекса III: гидраметилнон, ацеквиноцил, флуакрипирим;

N.21 Ингибиторы переноса электронов митохондриального комплекса I: феназаквин, фенпироксимат, пиримифиден, пиридабен, тебуфенпирад; толфенпирад, ротенон;

N.22 Блокаторы потенциалзависимых натриевых каналов: индоксакарб, метафлумизон, 2-[2-(4-цианофенил)-1-[3-(трифторметил)фенил]этилиден]-N-[4-(дифторметокси)фенил]-гидразинкарбоксамид, N-(3-хлор-2-метилфенил)-2-[(4-хлорфенил)-[4-[метил(метилсульфонил)амино]фенил]метилен]-гидразинкарбоксамид;

N.23 Ингибиторы ацетил-КоА-карбоксилазы: спиродиклофен, спиромезифен, спиротетрамат;

N.24 Ингибиторы переноса электронов митохондриального комплекса IV: фосфин, фосфид алюминия, фосфид кальция, фосфин, фосфид цинка, цианид;

N.25 Ингибиторы переноса электронов митохондриального комплекса II: циенопирафен или цифлуметофен;

N.28 Модуляторы рианодиновых рецепторов: флубенамид, хлорантранилипрол, циантранилипрол, цикланилипрол, тетранилипрол; (R)-3-хлор-N1-{2-метил-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]фенил}-N2-(1-метил-2-метилсульфонилэтил)фталамид, (S)-3-хлор-N1-{2-метил-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]фенил}-N2-(1-метил-2-метилсульфонилэтил)фталамид, метил-2-[3,5-дибром-2-({[3-бром-1-(3-хлорпиридин-2-ил)-1Н-пиразол-5-ил]карбонил}амино)бензоил]-1,2-диметилгидразинкарбоксилат; N-[4,6-дихлор-2-[(диэтил-лямбда-4-сульфанилиден)карбамоил]-фенил]-2-(3-хлор-2-пиридил)-5-(трифторметил)пиразол-3-карбоксамид; N-[4-хлор-2-[(диэтил-лямбда-4-сульфанилиден)карбамоил]-6-метил-фенил]-2-(3-хлор-2-пиридил)-5-(трифторметил)пиразол-3-карбоксамид; N-[4-хлор-2-[(ди-2-пропил-лямбда-4-сульфанилиден)карбамоил]-6-метил-фенил]-2-(3-хлор-2-пиридил)-5-(трифторметил)пиразол-3-карбоксамид; N-[4,6-дихлор-2-[(ди-2-пропил-лямбда-4-сульфанилиден)карбамоил]-фенил]-2-(3-хлор-2-пиридил)-5-(трифторметил)пиразол-3-карбоксамид; N-[4,6-дибром-2-[(диэтил-лямбда-4-сульфанилиден)карбамоил]-фенил]-2-(3-хлор-2-пиридил)-5-(трифторметил)пиразол-3-карбоксамид; N-[2-(5-амино-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-4-хлор-6-метилфенил]-3-бром-1-(3-хлор-2-пиридинил)-1Н-пиразол-5-карбоксамид; 3-хлор-1-(3-хлор-2-пиридинил)-N-[2,4-дихлор-6-[[(1-циано-1-метилэтил)амино]карбонил]фенил]-1Н-пиразол-5-карбоксамид; 3-бром-N-[2,4-дихлор-6-(метилкарбамоил)фенил]-1-(3,5-дихлор-2-пиридил)-1Н-пиразол-5-карбоксамид; N-[4-хлор-2-[[(1,1-диметилэтил)амино]карбонил]-6-метилфенил]-1-(3-хлор-2-пиридинил)-3-(фторметокси)-1Н-пиразол-5-карбоксамид; цигалодиамид;

N.29. Инсектицидные активные соединения неизвестного или неопределенного механизма действия: афидопиропен, афоксоланер, азадирахтин, амидофлумет, бензоксимат, бифеназат, брофланилид, бромпропилат, хинометионат, криолит, диклоромезотиаз, дикофол, флуфенерим, флометоквин, флуенсульфон, флугексафон, флуопирам, флупирадифурон, флураланер, метоксадиазон, пиперонил бутоксид, пифлубумид, пиридалил, пирифлуквиназон, сульфоксафлор, тиоксазафен, трифлумезопирим, 11-(4-хлор-2,6-диметилфенил)-12-гидрокси-1,4-диокса-9-азадиспиро[4.2.4.2]-тетрадец-11-ен-10-он, 3-(4'-фтор-2,4-диметилбифенил-3-ил)-4-гидрокси-8-окса-1-азаспиро[4.5]дец-3-ен-2-он, 1-[2-фтор-4-метил-5-[(2,2,2-трифторэтил)сульфинил]фенил]-3-(трифторметил)-1Н-1,2,4-триазол-5-амин, Bacillus firmus; (Е/Z)-N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид; (Е/Z)-N-[1-[(6-хлор-5-фтор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид; (Е/Z)-2,2,2-трифтор-N-[1-[(6-фтор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]ацетамид; (E/Z)-N-[1-[(6-бром-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид; (Е/Z)-N-[1-[1-(6-хлор-3-пиридил)этил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид; (Е/Z)-N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2-дифтор-ацетамид; (Е/Z)-2-хлор-N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2-дифтор-ацетамид; (E/Z)-N-[1-[(2-хлорпиримидин-5-ил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-ацетамид; (E/Z)-N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,3,3,3-пентафтор-пропанамид.); N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-тиоацетамид; N-[1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-2-пиридилиден]-2,2,2-трифтор-N'-изопропил-ацетамидин; флуазаиндолизин; 4-[5-(3,5-дихлорфенил)-5-(трифторметил)-4Н-изоксазол-3-ил]-2-метил-N-(1-оксотиэтан-3-ил)бензамид; флуксаметамид; 5-[3-[2,6-дихлор-4-(3,3-дихлопаллилокси)фенокси]пропокси]-1Н-пиразол; 3-(бензоилметиламино)-N-[2-бром-4-[1,2,2,3,3,3-гексафтор-1-(трифторметил)пропил]-6-(трифторметил)фенил]-2-фтор-бензамид; 3-(бензоилметиламино)-2-фтор-N-[2-йод-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]-6-(трифторметил)фенил]-бензамид; N-[3-[[[2-йод-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]-6-(трифторметил)фенил]амино]карбонил]фенил]-N-метил-бензамид; N-[3-[[[2-бром-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]-6-(трифторметил)фенил]амино]карбонил]-2-фторфенил]-4-фтор-N-метил-бензамид; 4-фтор-N-[2-фтор-3-[[[2-йод-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]-6-(трифторметил)фенил]амино]карбонил]фенил]-N-метил-бензамид; 3-фтор-N-[2-фтор-3-[[[2-йод-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]-6(трифторметил)фенил]амино]карбонил]фенил]-N-метил-бензамид; 2-хлор-N-[3-[[[2-йод-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]-6-(трифторметил)фенил]амино]карбонил]фенил]-3-пиридинкарбоксамид; 4-циано-N-[2-циано-5-[[2,6-дибром-4-[1,2,2,3,3,3-гексафтор-1-(трифторметил)пропил]фенил]карбамоил]фенил]-2-метил-бензамид; 4-циано-3-[(4-циано-2-метил-бензоил)амино]-N-[2,6-дихлор-4-[1,2,2,3,3,3-гексафтор-1-(трифторметил)пропил]фенил]-2-фтор-бензамид; N-[5-[[2-хлор-6-циано-4-[1,2,2,3,3,3-гексафтор-1-(трифторметил)пропил]фенил]карбамоил]-2-циано-фенил]-4-циано-2-метил-бензамид; N-[5-[[2-бром-6-хлор-4-[2,2,2-трифтор-1-гидрокси-1-(трифторметил)этил]фенил]карбамоил]-2-циано-фенил]-4-циано-2-метил-бензамид; N-[5-[[2-бром-6-хлор-4-[1,2,2,3,3,3-гексафтор-1-(трифторметил)пропил]фенил]карбамоил]-2-циано-фенил]-4-циано-2-метил-бензамид; 4-циано-N-[2-циано-5-[[2,6-дихлор-4-[1,2,2,3,3,3-гексафтор-1-(трифторметил)пропил]фенил]карбамоил]фенил]-2-метил-бензамид; 4-циано-N-[2-циано-5-[[2,6-дихлор-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]фенил]карбамоил]фенил]-2-метил-бензамид; N-[5-[[2-бром-6-хлор-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторметил)этил]фенил]карбамоил]-2-циано-фенил]-4-циано-2-метил-бензамид; 2-(1,3-диоксан-2-ил)-6-[2-(3-пиридинил)-5-тиазолил]-пиридин; 2-[6-[2-(5-фтор-3-пиридинил)-5-тиазолил]-2-пиридинил]-пиримидин; 2-[6-[2-(3-пиридинил)-5-тиазолил]-2-пиридинил]-пиримидин; N-метилсульфонил-6-[2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]пиридин-2-карбоксамид; N-метилсульфонил-6-[2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]пиридин-2-карбоксамид; N-этил-N-[4-метил-2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]-3-метилтио-пропанамид; N-метил-N-[4-метил-2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]-3-метилтио-пропанамид;] N,2-диметил-]-N-[4-метил-2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]-3-метилтио-пропанамид; N-этил-2-метил-N-[4-метил-2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]-3-метилтио-пропанамид; N-[4-хлор-2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]-N-[-этил-2-метил-3-метилтио-пропанамид;] N-[4-хлор-2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]-N,2-диметил-3-метилтио-пропанамид; N-[4-хлор-2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]-N-метил-3-метилтио-пропанамид; N-[4-хлор-2-(3-пиридил)тиазол-5-ил]-N-этил-3-метилтио-пропанамид; 1-[(6-хлор-3-пиридинил)метил]-1,2,3,5,6,7-гексагидро-5-метокси-7-метил-8-нитро-имидазо[1,2-а]пиридин; 1-[(6-хлорпиридин-3-ил)метил]-7-метил-8-нитро-1,2,3,5,6,7-гексагидроимидазо[1,2-а]пиридин-5-ол; 1-изопропил-N,5-диметил-N-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамид; 1-(1,2-диметилпропил)-N-этил-5-метил-N-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамид; N,5-диметил-N-пиридазин-4-ил-1-(2,2,2-трифтор-1-метил-этил)пиразол-4-карбоксамид; 1-[1-(1-цианоциклопропил)этил]-N-этил-5-метил-N-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамид; N-этил-1-(2-фтор-1-метил-пропил)-5-метил-N-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамид; 1-(1,2-диметилпропил)-N,5-диметил-N-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамид; 1-[1-(1-цианоциклопропил)этил]-N,5-диметил-N-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамид; N-метил-1-(2-фтор-1-метил-пропил]-5-метил-N-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамид; 1-(4,4-дифторциклогексил)-N-этил-5-метил-N-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамид; 1-(4,4-дифторциклогексил)-N,5-диметил-N-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамид, N-(1-метилэтил)-2-(3-пиридинил)-2Н-индазол-4-карбоксамид; N-циклопропил-2-(3-пиридинил)-2Н-индазол-4-карбоксамид; N-циклогексил-2-(3-пиридинил)-2Н-индазол-4-карбоксамид; 2-(3-пиридинил)-N-(2,2,2-трифторэтил)-2Н-индазол-4-карбоксамид; 2-(3-пиридинил)-N-[(тетрагидро-2-фуранил)метил]-2Н-индазол-5-карбоксамид; метил 2-[[2-(3-пиридинил)-2Н-индазол-5-ил]карбонил]гидразинкарбоксилат; N-[(2,2-дифторциклопропил)метил]-2-(3-пиридинил)-2Н-индазол-5-карбоксамид; N-(2,2-дифторпропил)-2-(3-пиридинил)-2Н-индазол-5-карбоксамид; 2-(3-пиридинил)-N-(2-пиримидинилметил)-2Н-индазол-5-карбоксамид; N-[(5-метил-2-пиразинил)метил]-2-(3-пиридинил)-2Н-индазол-5-карбоксамид, N-[3-хлор-1-(3-пиридил)пиразол-4-ил]-N-этил-3-(3,3,3-трифторпропилсульфанил)пропанамид; N-[3-хлор-1-(3-пиридил)пиразол-4-ил]-N-этил-3-(3,3,3-трифторпропилсульфинил)пропанамид; N-[3-хлор-1-(3-пиридил)пиразол-4-ил]-3-[(2,2-дифторциклопропил)метилсульфанил]-N-этил-пропанамид; N-[3-хлор-1-(3-пиридил)пиразол-4-ил]-3-[(2,2-дифторциклопропил)метилсульфинил]-N-этил-пропанамид; сароланер, лотиланер.

Активные вещества, указанные в качестве компонента 2), их получение и их пестицидная активность являются известными (см.:

http://www.alanwood.net/pesticides/); эти вещества являются коммерчески доступными. Соединения, описанные номенклатурой ИЮПАК, их получение и их пестицидная активность также являются известными (например, Can. J. Plant Sci. 48(6), 587-94, 1968; ЕР-А 141317; ЕР-А 152031; ЕР-А 226917; ЕР-А 243970; ЕР-А 256503; ЕР-А 428941; ЕР-А 532022; ЕР-А 1028125; ЕР-А 1035122; ЕР-А 1201648; ЕР-А 1122244, JP 2002316902; DE 19650197; DE 10021412; DE 102005009458; US 3,296,272; US 3,325,503; WO 98/46608; WO 99/14187; WO 99/24413; WO 99/27783; WO 00/29404; WO 00/46148; WO 00/65913; WO 01/54501; WO 01/56358; WO 02/22583; WO 02/40431; WO 03/10149; WO 03/11853; WO 03/14103; WO 03/16286; WO 03/53145; WO 03/61388; WO 03/66609; WO 03/74491; WO 04/49804; WO 04/83193; WO 05/120234; WO 05/123689; WO 05/123690; WO 05/63721; WO 05/87772; WO 05/87773; WO 06/15866; WO 06/87325; WO 06/87343; WO 07/82098; WO 07/90624, WO 10/139271, WO 11/028657, WO 2012/168188, WO 2007/006670, WO 2011/77514; WO 13/047749, WO 10/069882, WO 13/047441, WO 03/16303, WO 09/90181, WO 13/007767, WO 13/010862, WO 13/127704, WO 13/024009, WO 13/024010 и WO 13/047441, WO 13/162072, WO 13/092224, WO 11/135833, CN 1907024, CN 1456054).

Предпочтительно, когда смеси содержат в качестве пестицидов II фунгицидные соединения, независимо друг от друга выбранные из групп А), В), С), D), Е), F), G), Н), I), J) и K).

В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения, в качестве пестицида II смеси содержат соединение, регулирующее рост растений, которое выбирают из группы L).

В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения, в качестве пестицида II смеси содержат гербицидное соединение, которое выбирают из группы М).

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, в качестве пестицида II смеси содержат инсектицидное соединение, которое выбирают из группы N).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из ингибиторов комплекса III на Q_o сайте в группе А), более предпочтительно выбранный из соединений (А.1.1), (А.1.4), (А.1.8), (А.1.9), (А.1.10), (А.1.12), (А.1.13), (А.1.14), (А.1.17), (А.1.21), (А.1.24), (А.1.25), (А.1.26), (А.1.27), (А.1.28), (А.1.29), (А.1.30), (А.1.31), (А.1.32), (А.1.33), (А.1.34) и (А.1.35); особенно выбранный из (А.1.1), (А.1.4), (А.1.8), (А.1.9), (А.1.13), (А.1.14), (А.1.17), (А.1.24), (А.1.25), (А.1.26), (А.1.27), (А.1.28), (А.1.29), (А.1.30), (А.1.31), (А.1.32), (А.1.33), (А.1.34) и (А.1.35).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из ингибиторов комплекса III на Q_i сайте в группе А), более предпочтительно выбранный из соединений (А.2.1), (А.2.3), (А.2.4) и (А.2.5); особенно выбранный из (А.2.3), (А.2.4) и (А.2.5).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из ингибиторов комплекса II в группе А), более предпочтительно выбранный из соединений (А.3.2), (А.3.3), (А.3.4), (А.3.7), (А.3.9), (А.3.11), (А.3.12), (А.3.14), (А.3.16), (А.3.19), (А.3.20), (А.3.21), (А.3.22), (А.3.23), (А.3.24), (А.3.25), (А.3.27) и (А.3.28); особенно выбранный из (А.3.2), (А.3.3), (А.3.4), (А.3.7), (А.3.9), (А.3.12), (А.3.14), (А.3.17), (А.3.19), (А.3.22), (А.3.23), (А.3.24), (А.3.25), (А.3.27), (А.3.28) и (А.3.29).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из других ингибиторов дыхания в группе А), более предпочтительно выбранный из соединений (А.4.4) и (А.4.11); в частности (А.4.11).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из ингибиторов С14 деметилазы в группе В), более предпочтительно выбранный из соединений (В.1.4), (В.1.5), (В.1.8), (В.1.10), (В.1.11), (В.1.12), (В.1.13), (В.1.17), (В.1.18), (В.1.21), (В.1.22), (В.1.23), (В.1.25), (В.1.26), (В.1.29), (В.1.31), (В.1.32), (В.1.33), (В.1.34), (В.1.35), (В.1.36), (В.1.37), (В.1.38), (В.1.39), (В.1.40), (В.1.41), (В.1.42), (В.1.43) и (В.1.46); особенно выбранный из (В.1.5), (В.1.8), (В.1.10), (В.1.17), (В.1.23), (В.1.25), (В.1.31), (В.1.32), (В.1.33), (В.1.34), (В.1.35), (В.1.36), (В.1.37), (В.138), (В.1.39), (В.1.40), (В.1.41), (В.1.42), (В.1.43) и (В.1.46).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из ингибиторов дельта-14-редуктазы в группе В), более предпочтительно выбранный из соединений (В.2.4), (В.2.5), (В.2.6) и (В.2.8); в частности (В.2.4).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из фениламидов и ациламино-кислотных фунгицидов в группе С), более предпочтительно выбранный из соединений (С.1.1), (С.1.2), (С.1.4) и (С.1.5); особенно выбранный из (С.1.1) и (С.1.4).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из других ингибиторов синтеза нуклеиновых кислот в группе С), более предпочтительно выбранный из соединений (С.2.6) и (С.2.7).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из группы D), более предпочтительно выбранный из соединений (D.1.1), (D.1.2), (D.1.5), (D.2.4) и (D.2.6); особенно выбранный из (D.1.2), (D.1.5) и (D.2.6).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из группы Е), более предпочтительно выбранный из соединений (Е.1.1), (Е.1.3), (Е.2.2) и (Е.2.3); в частности (Е.1.3).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из группы F), более предпочтительно выбранный из соединений (F.1.2), (F.1.4) и (F.1.5).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из группы G), более предпочтительно выбранный из соединений (G.3.1), (G.3.3), (G.3.6), (G.5.1), (G.5.2) и (G.5.3); особенно выбранный из (G.3.1), (G.5.1), (G.5.2) и (G.5.3).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из группы Н), более предпочтительно выбранный из соединений (Н.2.2), (Н.2.3), (Н.2.5), (Н.2.7), (Н.2.8), (Н.3.2), (Н.3.4), (Н.3.5), (Н.4.9) и (Н.4.10); особенно выбранный из (Н.2.2), (Н.2.5), (Н.3.2), (Н.4.9) и (Н.4.10).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из группы I), более предпочтительно выбранный из соединений (1.2.2) и (1.2.5).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из группы J), более предпочтительно выбранный из соединений (J.1.2), (J.1.5) и (J.1.8); в частности (J.1.5).

Предпочтение также отдают смесям, содержащим в качестве компонента 2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из группы K), более предпочтительно выбранный из соединений (K.1.41), (K.1.42), (K.1.44), (K.1.45), (K.1.46), (K.1.47), (K.1.48) и (K.1.49); особенно выбранный из (K.1.41), (K.1.44), (K.1.45), (K.1.46), (K.1.47), (K.1.48) и (K.1.49).

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) цельный культуральный бульон, культуральную среду или бесклеточный экстракт или фракцию или по меньшей мере один метаболит по меньшей мере одного из микроорганизмов, определенных выше, которые предпочтительно проявляют антагонистическую активность по отношению к по меньшей мере одному патогену растений.

Применяемое в настоящей заявке понятие «цельный культуральный бульон» относится к жидкой культуре микроорганизмов, содержащей вегетативные клетки и/или споры, суспендированные в культуральной среде и по выбору метаболиты, продуцируемые соответствующим микроорганизмом.

Применяемое в настоящей заявке понятие «культуральная среда» относится к среде, которую можно получить посредством культивирования микроорганизма в указанной среде, предпочтительно жидком бульоне, и которая остается, когда выращенные в среде клетки удаляют, например, супернатант, остающийся, когда клетки, выращенные в жидком бульоне, удаляют путем центрифугирования, фильтрации, осаждения или других способов, хорошо известных в данной области техники; содержащая, например, метаболиты, продуцируемые соответствующим микроорганизмом и секретируемые в культуральную среду. Термин «культуральная среда» иногда также относится к «супернатанту», который можно получить, например, центрифугированием при температурах приблизительно от 2 до 30°С (более предпочтительно при температурах от 4 до 20°С) в течение приблизительно от 10 до 60 мин. (более предпочтительно приблизительно от 15 до 30 мин.) при приблизительно от 5,000 до 20,000 × g (более предпочтительно приблизительно при 15,000 × g).

Применяемое в настоящей заявке понятие «бесклеточный экстракт» относится к экстракту вегетативных клеток, спор и/или цельному культуральному бульону микроорганизма, содержащему клеточные метаболиты, продуцируемые соответствующим микроорганизмом, получаемому с помощью методов разрушения клетки, известных в уровне техники, таких как на основе растворителя (например, органических растворителей, таких как спирты, иногда в комбинации с приемлемыми солями), на основе температуры, применения сдвиговых сил, разрушения клеток с помощью ультразвука. Целевой экстракт можно концентрировать с помощью общепринятых методик концентрации, таких как высушивание, упаривание, центрифугирование или других. Для неочищенного экстракта, предпочтительно перед использованием также можно применять некоторые стадии промывания, используя органические растворители и/или среду на основе воды.

Применяемое в настоящей заявке понятие «метаболит» относится к любому компоненту, соединению, веществу или побочному продукту (включая, но не ограничиваясь только ними, низкомолекулярные вторичные метаболиты, поликетиды, продукты синтазы жирных кислот, нерибосомные пептиды, рибосомные пептиды, белки и ферменты) продуцируемому микроорганизмом (таким как грибы и бактерии, в частности штаммы в соответствии с изобретением) который оказывает любое благоприятное влияние, как описано в настоящей заявке, такое как пестицидная активность или улучшение роста растения, эффективности использования воды растением, жизнеспособности растения, внешнего вида растения, или популяции благоприятных микроорганизмов в почве вокруг активности растения в данном контексте.

Применяемое в настоящей заявке понятие «изолят» относится к чистой микробной культуре, отделенной от ее естественного происхождения, такой как изолят, полученный путем культивирования единичной микробной колонии. Изолят представляет собой чистую культуру, полученную из гетерогенной, дикой популяции микроорганизмов.

Применяемое в настоящей заявке понятие «штамм» относится к бактериальному изоляту или группе изолятов, проявляющему фенотипические и/или генотипические признаки, относящиеся к одной и той же клеточной линии, отличающиеся от таких признаков других изолятов или штаммов других видов.

Применяемое в настоящей заявке понятие «его культуральная среда» относится к культуральной среде бактериального штамма, как определено непосредственно перед понятием «его культуральная среда», как в следующем случае: «штаммы Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015 и их культуральная среда» означает штаммы Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015 и культуральную среду каждого из штаммов Lu 16774, Lu 17007 и Lu 17015. Равным образом, та же логика применена и к аналогичным понятиям, таким как «его бесклеточный экстракт», «его цельный культуральный бульон» и «его метаболит», а также и к комбинациям таких понятий как «бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит».

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один штамм Paenibacillus, обладающий нижеследующими характеристиками:

- палочковидные клетки грамположительной структуры,

- слабая реакция с красителем Грамма, часто даже окраска негативна,

- дифференциация в эллипсоидальные эндоспоры, которые отчетливо вызывают набухание спорангия (материнская клетка),

- факультативный анаэробный рост с сильным ростом в отсутствии воздуха независимо от того, присутствует ли нитрат или нет,

- ферментация различных сахаров,

- образование газа и кислот из различных видов сахара, включая глюкозу,

- отсутствие производства кислоты из адонитола и сорбита,

- уреазо-негативный (за исключением P. validus),

- аргинин-дигидролазо-негативный,

- без использования цитрата,

- отсутствие роста в присутствии 10% хлорида натрия,

- секреция многочисленных экстраклеточных гидролитических ферментов, расщепляющих ДНК, белок, крахмал; и/или

- содержание G+C в ДНК от 40% до 54%;

или его культуральную среду, бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один штамм Paenibacillus, выбранный из видов Paenibacillus polymyxa, Paenibacillus epiphyticus, Paenibacillus peoriae, Paenibacillus terrae, Paenibacillus jamilae, Paenibacillus kribbensis; Paenibacillus amylolyticus, Paenibacillus barcinonensis, Paenibacillus tundra, Paenibacillus illinoisensis, Paenibacillus macquariensis, Paenibacillus taichungensis, Paenibacillus glycanilyticus и Paenibacillus odorifer; или его культуральную среду, бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один Paenibacillus штамм выбранный из видов Paenibacillus polymyxa, Paenibacillus epiphyticus, Paenibacillus peoriae, Paenibacillus terrae, Paenibacillus jamilae and Paenibacillus kribbensis; или его культуральную среду, бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, выбранный из видов Paenibacillus polymyxa, Paenibacillus epiphyticus, Paenibacillus peoriae и Paenibacillus jamilae, или его культуральную среду, бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, выбранный из видов Paenibacillus polymyxa, Paenibacillus epiphyticus и Paenibacillus peoriae, или его культуральную среду, бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, выбранный из видов Paenibacillus polymyxa и Paenibacillus epiphyticus, или его культуральную среду, бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере штамм один Paenibacillus, выбранный из

1) Lu16774 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26969,

2) Lu17007 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26970, и

3) Lu17015 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26971;

или его культуральную среду, бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один штамм Paenibacillus выбранный из

1) Paenibacillus polymyxa ssp. plantarum штамм Lu16774 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26969,

2) Paenibacillus polymyxa ssp. plantarum штамм Lu17007 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26970, и

3) Paenibacillus epiphyticus штамм Lu17015 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26971;

или его культуральную среду, бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит.

В дополнение к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один из штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, изобретение относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) любой штамм Paenibacillus, независимо от того, получен ли он физически из первоначального депозита любого из штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, или независимо выделен, пока они сохраняют по меньшей мере одну из идентифицирующих характеристик депонированных штаммов Paenibacillus Lu16774, Lu17007 и Lu17015. Такие штаммы Paenibacillus в соответствии с изобретением включают любое потомство любого из штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, включая мутанты указанных штаммов.

Понятие «мутант» относится к микроорганизму, полученному прямой селекции мутантов, а также включает микроорганизмы, которые были дополнительно мутированы или обработаны иным образом (например, путем интродукции плазмиды). Таким образом, варианты осуществления включают мутанты, варианты и/или производные соответствующего микроорганизма, как встречающиеся в природе, так и искусственно индуцированные мутанты. Например, мутанты могут быть индуцированы посредством того, что микроорганизм подвергают воздействию известных мутагенов, таких как рентгеновские лучи, УФ излучение, N-метил-нитрозогуанидин, используя общепринятые способы. После указанных обработок может быть проведен скрининг мутантных штаммов, показывающих желаемые характеристики.

Мутантные штаммы могут быть получены с помощью любых способов, известных в уровне техники, таких как прямая селекция мутантов, химический мутагенез или манипуляция с генами (например, путем интродукции плазмиды). Например, такие мутанты получают путем применения известного мутагена, такого как рентгеновские лучи, УФ излучение или N-метил-нитрозогуанидин. После указанных обработок может быть проведен скрининг мутантных штаммов, показывающих желаемые характеристики.

Смесь в соответствии с изобретением представляет собой в частности смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.6%, предпочтительно по меньшей мере 99.8%, еще более предпочтительно по меньшей мере 99.9%, и в частности 100.0% идентичность нуклеотидной последовательности с любой из последовательностей 16S рДНК штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, т.е. с любой из этих нуклеотидных последовательностей, указанных в списке последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность ДНК, имеющую 100% идентичность нуклеотидной последовательности с любой из последовательностей 16S рДНК штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, т.е. с любой из этих нуклеотидных последовательностей, указанных в списке последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, чья полная последовательность 16S рДНК после оптимального выравнивания в выровненном окне последовательности имеет по меньшей мере 99,6% идентичности с по меньшей мере одной из последовательностей SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2 или по меньшей мере 99.8% идентичности с SEQ ID NO: 3; предпочтительно по меньшей мере 99.8% идентичности с по меньшей мере одной из последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID: 2 и SEQ ID NO: 3; более предпочтительно по меньшей мере 99.9% идентичности с по меньшей мере одной из последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3; еще более предпочтительно более чем 99.9% идентичности с по меньшей мере одной из последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID: 2 и SEQ ID NO: 3; в частности 100% идентичности с по меньшей мере одной из последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID: 2 и SEQ ID NO: 3.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм выбранный из группы, включающей:

a) Lu16774 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26969;

b) Lu17007 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26970;

c) Lu17015 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26971; и

d) штамм, который содержит последовательность ДНК, имеющую

d1) по меньшей мере 99.6% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 9; или

d2) по меньшей мере 99.8% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 14; или

d3) по меньшей мере 99.9% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 10; или

d4) по меньшей мере 99.2% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 15; или

d5) по меньшей мере 99.2% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 11; или

d6) по меньшей мере 99.8% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 16; или

d7) по меньшей мере 99.8% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 12; или

d8) по меньшей мере 99.3% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 17; или

d9) 100.0% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 13; или

d10) по меньшей мере 99.9% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 18.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность dnaN ДНК, имеющую по меньшей мере 99.6% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 9 или который содержит последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.8% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 14.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, смесь в соответствии с изобретением представляет собой смесь, которая содержит в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, чья полная последовательность dnaN ДНК после оптимального выравнивания в выровненном окне последовательности имеет по меньшей мере 99.6% идентичность с по меньшей мере одной из последовательностей ДНК SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 9 или по меньшей мере 99.8% идентичности с SEQ ID NO: 14; предпочтительно по меньшей мере 99.9% идентичности с SEQ ID NO: 14; в частности 100% идентичности с SEQ ID NO: 14.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.8%, в частности 100.0% идентичность нуклеотидной последовательности с любой из последовательностей dnaN ДНК штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, т.е. с любой из этих последовательностей ДНК SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 14.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит gyrB последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.9% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 10 или который содержит последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.2% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 15.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, смесь в соответствии с изобретением представляет собой смесь, которая содержит в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, чья полная последовательность gyrB ДНК после оптимального выравнивания в выровненном окне последовательности имеет по меньшей мере 99.9% идентичность с по меньшей мере одной из последовательностей ДНК SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 10 или по меньшей мере 99.9% идентичности с SEQ ID NO: 15; предпочтительно по меньшей мере 99.9% идентичности с SEQ ID NO: 15; в частности 100% идентичности с SEQ ID NO: 15.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность ДНК, имеющую 100.0% идентичность нуклеотидной последовательности с любой из последовательностей gyrB ДНК штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, т.е. с любой из этих последовательностей ДНК SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 15.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность recF ДНК, имеющую по меньшей мере 99.2% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 11 или который содержит последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.8% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 16.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, смесь в соответствии с изобретением представляет собой смесь, которая содержит в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, чья полная последовательность recF ДНК после оптимального выравнивания в выровненном окне последовательности имеет по меньшей мере 99.2% идентичность с по меньшей мере одной из последовательностей ДНК SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 11 или по меньшей мере 99.8% идентичности с SEQ ID NO: 16; предпочтительно по меньшей мере 99.9% идентичности с SEQ ID NO: 16; в частности 100% идентичности с SEQ ID NO: 16.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.8%, в частности 100.0% идентичность нуклеотидной последовательности с любой из последовательностей recF ДНК штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, т.е. с любой из этих последовательностей ДНК SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 16.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность recN ДНК, имеющую по меньшей мере 99.8% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 12 или который содержит последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.3% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 17.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, смесь в соответствии с изобретением представляет собой смесь, которая содержит в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, чья полная последовательность recN ДНК после оптимального выравнивания в выровненном окне последовательности имеет по меньшей мере 99.8% идентичность с по меньшей мере одной из последовательностей ДНК SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 12 или по меньшей мере 99.3% идентичности с SEQ ID NO: 17; предпочтительно по меньшей мере 99.6% идентичности с SEQ ID NO: 17; в частности 100% идентичности с SEQ ID NO: 17.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.8%, в частности 100.0% идентичность нуклеотидной последовательности с любой из последовательностей recN ДНК штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, т.е. с любой из этих последовательностей ДНК SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 17.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность rpoA ДНК, имеющую 100.0% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностями ДНК SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 13 или который содержит последовательность ДНК, имеющую по меньшей мере 99.9% идентичность нуклеотидной последовательности с последовательностью ДНК SEQ ID NO: 18.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, смесь в соответствии с изобретением представляет собой смесь, которая содержит в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, чья полная rpoA последовательность ДНК после оптимального выравнивания в выровненном окне последовательности имеет 100.0% идентичность с по меньшей мере одной из последовательностей ДНК SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 13 или по меньшей мере 99.9% идентичности с SEQ ID NO: 18; предпочтительно по меньшей мере 99.9% идентичности с SEQ ID NO: 17; в частности 100% идентичности с SEQ ID NO: 18.

Смесь в соответствии с изобретением в частности представляет собой смесь, содержащую в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, который содержит последовательность ДНК, имеющую 100.0% идентичность нуклеотидной последовательности с любой из последовательностей rpoA ДНК штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015, т.е. с любой из этих последовательностей ДНК SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 18.

Дополнительный вариант осуществления относится к смеси, содержащей в качестве компонента 1) по меньшей мере один выделенный микроорганизм, являющийся членом рода Paenibacillus, имеющий по меньшей мере одну из идентифицирующих характеристик одного из следующих штаммов:

1) Paenibacillus штамм Lu16774 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26969,

2) Paenibacillus штамм Lu17007 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26970, или

3) Paenibacillus штамм Lu17015 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26971.

Дополнительный вариант осуществления относится к смеси, содержащей в качестве компонента 1) по меньшей мере один штамм Paenibacillus, который выбран из группы, включающей:

1) штамм Lu16774 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26969,

2) штамм Lu17007 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26970,

3) штамм Lu17015 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26971, и

4) штаммы, имеющие по меньшей мере одну из идентифицирующих характеристик одного из указанных штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015.

Дополнительный вариант осуществления относится к смеси, содержащей в качестве компонента 1) по меньшей мере один выделенный микроорганизм, выбранный из штаммов:

1) Paenibacillus штамм Lu16774 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26969,

2) Paenibacillus штамм Lu17007 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26970, и

3) Paenibacillus штамм Lu17015 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26971;

проявляющих антагонистическую активность против по меньшей мере одного патогена растений и способных продуцировать по меньшей мере один фузарицидин; или их мутантный штамм, сохраняющий указанную способность, то есть сохраняющий указанную антагонистическую активность против по меньшей мере одного патогена растений, и сохраняющий указанную способность продуцирования по меньшей мере одного фузарицидина.

Дополнительный вариант осуществления относится к смеси, содержащей в качестве компонента 1) по меньшей мере один микроорганизм, выбранный из:

1) Paenibacillus штамм Lu16774 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26969,

2) Paenibacillus штамм Lu17007 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26970,

3) Paenibacillus штамм Lu17015 депонирован в DSMZ под учетным № DSM 26971;

или их мутантный штамм, обладающий всеми идентифицирующими характеристиками одного из указанных штаммов.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) культуральную среду по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) бесклеточный экстракт по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один метаболит по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше; предпочтительно по меньшей мере один метаболит, представляющий собой липопептид и еще более предпочтительно, выбранный из групп поликсиминов, октапептинов, полипептинов, пелгипептинов и фузарицидинов.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один фузарицидин.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один фузарицидин формулы I

в которой

R выбран из 15-гуанидино-3-гидроксипентадекановой кислоты (GHPD) и 12-гуанидинододекановой кислоты (12-GDA);

X¹ представляет собой треонин;

X² выбран из изолейцина и валина;

X³ выбран из тирозина, валина, изолейцина и фенилаланина;

X⁴ представляет собой треонин;

X⁵ выбран из глутамина и аспарагина;

X⁶ представляет собой аланин; и

где стрелка определяет единственную (амидную) связь или между карбонильной частью R и аминогруппой аминокислоты X¹ или между карбонильной группой одной аминокислоты и аминогруппой соседней аминокислоты, причем кончик стрелки указывает присоединение к аминогруппе указанной аминокислоты X¹ или указанной соседней аминокислоты; и

причем единственная линия без наконечника стрелки определяет единственную (сложноэфирную) связь между карбонильной группой X⁶ и гидроксильной группой X¹.

Дополнительный вариант осуществления относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один фузарицидин формулы I.1

в которой

R выбран из 15-гуанидино-3-гидроксипентадекановой кислоты (GHPD) и 12-гуанидинододекановой кислоты (12-GDA);

X¹ представляет собой треонин;

X² представляет собой изолейцин;

X³ представляет собой тирозин;

X⁴ представляет собой треонин;

X⁵ выбран из глутамина и аспарагина;

X⁶ представляет собой аланин; и

где стрелка определяет единственную (амидную) связь или между карбонильной частью R и аминогруппой аминокислоты X¹ или между карбонильной группой одной аминокислоты и аминогруппой соседней аминокислоты, причем кончик стрелки указывает присоединение к аминогруппе указанной аминокислоты X¹ или указанной соседней аминокислоты; и

причем единственная линия без наконечника стрелки определяет единственную (сложноэфирную) связь между карбонильной группой X⁶ и гидроксильной группой X¹.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, X¹ в формуле I предпочтительно представляет собой L-треонин. В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, X² в формуле I предпочтительно представляет собой D-изолейцин или D-allo-изолейцин. В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, X³ в формуле I предпочтительно представляет собой L-тирозин. В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, X⁴ в формуле I предпочтительно представляет собой D-allo-треонин. В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, X⁵ в формуле I предпочтительно представляет собой D-глутамин или D-аспарагин. В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, R в формуле I предпочтительно представляет собой GHPD.

Эскиз формулы I.1 для фузарицидина формулы I.1 может быть также изображен следующим образом:

в которой

X выбран из -NH-(C=O)-CH₂-CH(OH)-(CH₂)₁₂-NH-C(=NH)NH₂ и -NH-(C=O)-(CH₂)₁₁-NH-C(=NH)NH₂;

R¹ представляет собой 1-гидроксиэтил;

R² представляет собой 1-метилпропил (sec-бутил);

R³ представляет собой 4-гидроксибензил;

R⁴ представляет собой 1-гидроксиэтил;

R⁵ выбран из карбамоилэтила и карбамоилметила;

R⁶ представляет собой метил.

Равным образом, предпочтительные варианты осуществления, основанные на вышеупомянутом альтернативном эскизе формулы I.1, являются следующими:

R¹ в этой формуле I предпочтительно представляет собой (1S,2R)-1-гидроксиэтил.

R² в этой формуле I предпочтительно представляет собой (1R,2R)-1-метилпропил или (1R,2S)-1-метилпропил.

R³ в этой формуле I предпочтительно представляет собой (S)-4-гидрокси-бензил.

R⁴ в этой формуле I предпочтительно представляет собой (1S,2R)-1-гидроксиэтил.

R⁵ в этой формуле I предпочтительно представляет собой (R)-карбамоилэтил и (R)-карбамоилметил.

X в этой формуле I предпочтительно представляет собой -NH-(C=O)-CH₂-CH(OH)-(CH₂)₁₂-NH-C(=NH)NH₂.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, изобретение кроме того относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один фузарицидин, выбранный из фузарицидина 1А и 1В, которые имеют формулу I, причем R представляют собой GHPD и причем X⁵ представляют собой аспарагин в случае фузарицидина 1А и X⁵ представляют собой глутамин в случае фузарицидина 1В:

Кроме того, фузарицидины формулы I, включая фузарицидины, в которых R представляет собой GHTD могут быть синтезированы по аналогии со способами, известными в уровне техники (Biopolymers 80(4), 541, 2005; J. Peptide Sci. 12S, 219, 2006; Tetrаhedron Lett. 47(48), 8587-90, 2006; Biopolymers 88(4), 568, 2007; ChemMedChem 7, 871-882, 2012).

Помимо этого, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей смеси в соответствии с изобретением, которые содержат в качестве компонента 1) штаммы, цельные культуральные бульоны, бесклеточные экстракты, культуральные среды, или фузарицидины формулы I и их соли в соответствии с изобретением, а также к применению указанных композиций для контроля или подавления патогенов растений или предупреждения инфицирования патогенами растений или для защиты материалов от заражения, разрушения вредными микроорганизмами, и к соответствующим способам, которые включают обработку патогенов, их среды обитания или материалов или растений, подлежащих защите от нападения патогенов, или почвы или материала для размножения эффективным количеством композиций, штаммов, цельных культуральных бульонов, бесклеточных экстрактов, культуральных сред, или фузарицидинов формулы I и их солей в соответствии с изобретением.

Кроме того, варианты осуществления в соответствии с изобретением раскрыты в нижеследующем подробном описании изобретения, формуле изобретения и фигурах.

Идентификационным признаком депонированных штаммов Paenibacillus Lu16774, Lu17007 и Lu17015 является то, что они способны продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности продуцировать фузарицидины 1А и 1В, которые являются метаболитами соответствующих штаммов.

Таким образом, в соответствии с одним аспектом настоящего изобретения, штаммы Paenibacillus компонента 1) смесей согласно изобретению способны продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, более предпочтительно продуцировать фузарицидины 1А или 1В, в особенности продуцировать фузарицидины 1А и 1В; более предпочтительно в среде для выращивания, содержащей по меньшей мере один источник углерода и один источник азота, как определено в настоящей заявке.

Таким образом, в соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, штаммы Paenibacillus компонента 1) смесей согласно изобретению продуцируют по меньшей мере один фузарицидин формулы I, более предпочтительно продуцируют фузарицидины 1А или 1В, в особенности продуцируют фузарицидины 1А и 1В; в среде для выращивания, содержащей по меньшей мере один источник углерода и один источник азота, как определено в настоящей заявке.

Другой вариант осуществления изобретения относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один выделенный микроорганизм, выбранный из

1) штамма Paenibacillus Lu16774, депонированного в DSMZ под учетным № DSM 26969,

2) штамма Paenibacillus Lu17007, депонированного в DSMZ под учетным № DSM 26970, и

3) штамма Paenibacillus Lu17015, депонированного в DSMZ под учетным № DSM 26971;

проявляющий антагонистическую активность против по меньшей мере одного патогена растений, и способный продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности продуцировать фузарицидины 1А и 1В; или его мутантный штамм, сохраняющий указанную способность, т.е. сохраняющий указанную антагонистическую активность против по меньшей мере одного патогена растений, и сохраняющий указанную способность продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности продуцировать фузарицидины 1А и 1В.

Другим идентифицирующим признаком штаммов Paenibacillus Lu16774, Lu17007 и Lu17015 или их мутантного штамма является то, что они способны продуцировать по меньшей мере один фузарицидин выбранный из группы, включающей фузарицидин А, фузарицидин В, фузарицидин С, фузарицидин D, LI-F06a, LI-F06b и LI-F08b в дополнение к их способности продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности продуцировать фузарицидины 1А и 1В.

Таким образом, в соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения, штаммы Paenibacillus компонента 1) смесей согласно изобретению способны продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности продуцировать фузарицидины 1А и 1В, как описано в настоящей заявке, и способны продуцировать по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, включающей фузарицидин А, фузарицидин В, фузарицидин С, фузарицидин D, LI-F06a, LI-F06b и LI-F08b.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения, штаммы Paenibacillus компонента 1) смесей согласно изобретению способны продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности продуцировать фузарицидины 1А и 1В, как описано в настоящей заявке, и способны продуцировать по меньшей мере три соединения, выбранных из группы, включающей фузарицидин А, фузарицидин В, фузарицидин С, фузарицидин D, LI-F06a, LI-F06b и LI-F08b.

Другим идентифицирующим признаком штаммов Paenibacillus является их противогрибковая активность. В частности, эти штаммы были признаны эффективными против заражения патогенами растений, включая Alternaria spp., Botrytis cinerea, Phytophthora infestans, и Sclerotinia sclerotiorum; при этом вид Alternaria предпочтительно выбирают из A. solani и A. alternata, в частности А. solani.

Таким образом, в соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения, штаммы Paenibacillus компонента 1) смесей согласно изобретению обладают противогрибковой активностью, в особенности против патогенов растений, выбранных из группы, включающей Alternaria spp., Botrytis cinerea, Phytophthora infestans, и Sclerotinia sclerotiorum, при этом вид Alternaria предпочтительно выбран из A. solani и A. alternata, в частности A. solani. Более предпочтительно, штаммы Paenibacillus согласно изобретению обладают противогрибковой активностью против по меньшей мере двух или против всех четырех из указанных патогенов.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения, штаммы Paenibacillus в соответствии с изобретением обладают противогрибковой активностью против патогенов растений Alternaria solani, Botrytis cinerea, Phytophthora infestans и Sclerotinia sclerotiorum.

Антагонистическая активность штаммов Paenibacillus против патогенов растений может быть продемонстрирована в конфронтационных анализах in vitro с применением целевых фитопатогенных грибов, таких как Alternaria spp., Botrytis cinerea, Phytophthora infestans, и Sclerotinia sclerotiorum, причем вид Alternaria предпочтительно выбирают из A. solani и A. alternata, в частности А. solani:

В качестве среды для выращивания этих фитопатогенных грибов используют среду ISP2, содержащую на литр: 10 г солодового экстракта (Sigma Aldrich, 70167); 4 г бакто-дрожжевого экстракта (Becton Dickinson, 212750); 4 г моногидрата глюкозы (Sigma Aldrich, 16301); 20 г агара (Becton Dickinson, 214510), pH около 7, бидист. вода. В качестве среды для выращивания для PHYTIN, используют среду V8, содержащую на литр: 200 мл овощного сока, 3 г карбоната кальция (Merck Millipore, 1020660250); 30 г агара (Becton Dickinson, 214510), pH 6.8, бидист. вода.

Штаммы Paenibacillus точечно инокулируют с одной стороны пластины агара. В центр пластины был помещен блок агара (около 0,3 см²), содержащий один активно растущий патоген растений. После инкубации в течение 7-14 дней при температуре около 25°C, изучают рост патогена растений, особенно в отношении зон ингибирования. Можно оценить следующие антагонистические эффекты: антибиоз оценивается путем вычисления диаметра зоны, не содержащей грибы (зона ингибирования)). Конкуренцию оценивают путем сравнения диаметра роста грибкового патогена на пластинах с бактериальными штаммами по сравнению с контрольными пластинами. Микопаразитизм может быть задокументирован в случае, когда бактерии перерастают грибковый патоген, а также микопаразит - патогенов. Это можно визуализировать с помощью микроскопии.

Более конкретно, настоящее изобретение относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, выбранный из штаммов Paenibacillus Lu16774, Lu17007 и Lu17015 и любого штамма Paenibacillus, обладающего одним, двумя, тремя или большим количеством идентифицирующих признаков депонированного штамма, причем идентифицирующие признаки выбраны из группы, включающей:

(а) противогрибковую активность против патогена растений, выбранного из группы, включающей Alternaria spp., Botrytis cinerea, Phytophthora infestans, и Sclerotinia sclerotiorum, причем Alternaria spp. предпочтительно выбран из A. solani и A. alternata, в частности A. solani, как описано в настоящей заявке;

(б) способность продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, в частности фузарицидины 1А и/или 1В, как описано в настоящей заявке;

(в) способность продуцировать по меньшей мере один фузарицидин выбранный из группы, состоящей из фузарицидинов А, В, С, D, LI-F06a, LI-F06b и LI-F08b, как описано в настоящей заявке; и

(г) способность продуцировать и секретировать по меньшей мере один литический фермент, выбранный из группы, включающей хитиназу, целлюлозу и амилазу, как описано в настоящей заявке.

Более предпочтительно, указанный штамм Paenibacillus обладает способностями, относящимся к (б), (в) и (г), в среде для выращивания, содержащей по меньшей мере один источник углерода и один источник азота, как определено в настоящей заявке.

В частности, штаммы Paenibacillus компонента 1) смесей согласно изобретению обладают двумя или большим количеством идентифицирующих признаков депонированного штамма, со штаммами, обладающими по меньшей мере признаками (а) и (б), которые являются особенно предпочтительными. Например, в соответствии с предпочтительным вариантом осуществления, штаммы Paenibacillus компонента 1) смесей согласно изобретению (а) обладают противогрибковой активностью против патогена растений, выбранного из группы, включающей Alternaria spp., Botrytis cinerea, Phytophthora infestans, и Sclerotinia sclerotiorum, причем вид Alternaria предпочтительно выбран из A. solani и А. alternata, в частности A. solani и (б) способны продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, и в особенности фузарицидин 1В. В соответствии с дополнительным предпочтительным вариантом осуществления, штаммы Paenibacillus компонента 1) смесей согласно изобретению (а) обладают противогрибковой активностью против трех или против всех патогенов растений, выбранных из группы, включающей виды Alternaria, Botrytis cinerea, Phytophthora infestans, и Sclerotinia sclerotiorum, причем вид Alternaria предпочтительно выбран из A. solani и A. alternata, в частности A. solani и (б) способны продуцировать по меньшей мере один фузарицидин формулы I, более предпочтительно продуцировать фузарицидины 1А или 1В, в частности продуцировать фузарицидины 1А и 1В.

В соответствии с вариантом осуществления изобретения, штаммы Paenibacillus компонента 1) смесей согласно изобретению обеспечивают в выделенном или по существу очищенном виде.

Понятия «выделенный» или «по существу очищенный» означают, что штаммы согласно изобретению были удалены из природной среды и были выделены или отделены, и по меньшей мере на 60% свободны, предпочтительно по меньшей мере на 75%, и более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 99% свободны от других компонентов, с которыми они были природно связаны. Изолят, полученный культивированием одной микробной колонии представляют собой пример выделенного штамма в соответствии с изобретением.

Смеси согласно изобретению содержат в качестве компонента 1) по меньшей мере один штамм Paenibacillus в любом физиологическом состоянии, таком как активный или спящий. Спящие штаммы Paenibacillus могут быть предоставлены, например, замороженными, высушенными, или лиофилизированными или частично высушенными (методики получения частично высушенных организмов указаны в WO 2008/002371) или в виде спор.

В соответствии с вариантом осуществления изобретения, смеси содержат в качестве компонента 1) по меньшей мере один штамм Paenibacillus в виде спор.

В соответствии с вариантом осуществления изобретения, смеси содержат в качестве компонента 1) по меньшей мере один штамм Paenibacillus в виде цельного культурального бульона.

Культура представляет собой предпочтительно выделенную или по существу очищенную культуру.

Понятия «выделенная культура» или «по существу очищенная культура» относятся к культуре штаммов в соответствии с изобретением, которая не включает значительное количество других веществ, которые обычно обнаруживаются в естественной среде обитания, в которой растет штамм и/или из которой обычно можно получить штамм. Следовательно, такая «выделенная культура» или «по существу очищенная культура» по меньшей мере на 60% свободна, предпочтительно по меньшей мере на 75%, и более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 99% свободна от других веществ, которые обычно обнаруживаются в естественной среде обитания, в которой растет штамм и/или из которой обычно можно получить штамм. Такая «выделенная культура» или «по существу очищенная культура» обычно не содержит любой другой микроорганизм в количествах, достаточных для препятствования репликации штамма согласно изобретению.

Используемые штаммы Paenibacillus в смесях согласно изобретению можно культивировать непрерывно или с перерывами в периодическом процессе или в ходе периодического процесса с подпиткой или повторяемого периодического процесса с подпиткой. Обзор известных способов культивирования можно найти в руководстве от Chmiel (Bioprozesstechnik 1. in die Bioverfahrenstechnik (Gustav Fischer Verlag, Stuttgart, 1991)) или в руководстве от Storhas (Bioreaktoren und periphere Einrichtungen (Vieweg Verlag, Braunschweig/Wiesbaden, 1994)).

Среда, которую используют для культивирования микроорганизма, должна соответствовать требованиям для конкретных штаммов соответствующим образом. Описание культуральных сред для различных микроорганизмов представлено в пособии "Manual of Methods for General Bacteriology" Американского общества бактериологии (Washington D.С., USA, 1981).

Эти среды, которые можно использовать в соответствии с изобретением, обычно содержат один или несколько источников углерода, источников азота, неорганические соли, витамины и/или микроэлементы. Предпочтительными источниками углерода являются сахара, такие как моно-, ди- или полисахариды. Очень хорошими источниками углерода являются, например, глюкоза, фруктоза, манноза, галактоза, рибоза, сорбоза, рибулоза, лактоза, мальтоза, сахароза, раффиноза, крахмал или целлюлоза. Сахара также можно добавлять в среду с помощью комплексных соединений, таких как меласса, или других побочных продуктов рафинирования сахара. Также может быть выгодным добавление смесей различных источников углерода. Другими возможными источниками углерода являются масла и жиры, такие как соевое масло, подсолнечное масло, арахисовое масло и кокосовое масло, жирные кислоты, такие как пальмитиновая кислота, стеариновая кислота или линолевая кислота, спирты, такие как глицерин, метанол или этанол, и органические кислоты, такие как уксусная кислота или молочная кислота. Источниками азота обычно являются органические или неорганические азотные соединения или вещества, содержащие эти соединения. Примеры источников азота включают газообразный аммиак или соли аммония, такие как сульфат аммония, хлорид аммония, фосфат аммония, карбонат аммония или нитрат аммония, нитраты, мочевина, аминокислоты или комплексные источники азота, такие как жидкий кукурузный экстракт, соевая мука, соевый белок, дрожжевой экстракт, мясной экстракт и другие. Источники азота можно использовать раздельно или в виде смеси. Неорганические солевые соединения, которые могут присутствовать в средах, содержат хлоридные, фосфатные или сульфатные соли кальция, магния, натрия, кобальта, молибдена, калия, марганца, цинка, меди и железа. В качестве источников серы можно использовать неорганические серосодержащие соединения, например, сульфаты, сульфиты, дитиониты, тетратионаты, тиосульфаты, сульфиды, а также органические соединения серы, такие как меркаптаны и тиолы. В качестве источников фосфора можно использовать фосфорную кислоту, дигидрофосфат калия или гидроортофосфат калия или соответствующие натрий-содержащие соли. В среду можно добавлять хелатирующие агенты для поддержания ионов металлов в растворе. Особенно пригодные хелатирующие агенты содержат дигидроксифенолы, такие как катехол или протокатехат, или органические кислоты, такие как лимонная кислота. Используемые в соответствии с изобретением ферментационные среды также могут содержать другие факторы роста, такие как витамины или стимуляторы роста, которые включают, например, биотин, рибофлавин, тиамин, фолиевую кислоту, никотиновую кислоту, пантотенат и пиридоксин. Факторы роста и соли часто имеют происхождение из комплексных компонентов среды, таких как дрожжевой экстракт, меласса, жидкий кукурузный экстракт и другие. Дополнительно, в культуральную среду можно добавлять приемлемые предшественники. Точный состав соединений в среде существенным образом зависит от конкретного эксперимента и должен быть определен индивидуально для каждого конкретного случая. Информацию относительно оптимизации сред можно найти в руководстве "Applied Microbiol. Physiology, A Practical Approach" (Публ. P.M. Rhodes, P.F. Stanbury, IRL Press (1997) cc. 53-73, ISBN 0199635773). Среды для выращивания также можно получать от коммерческих производителей, таких как Standard 1 (Merck) или BHI (сердечно-мозговой экстракт, DIFCO) и т.д.

Предпочтительные среды для выращивания, которые могут быть использованы в соответствии с изобретением, включают один или несколько источников углерода, выбранных из L-арабинозы, N-ацетил-D-глюкозамина, D-галактозы, L-аспарагиновой кислоты, D-трегалозы, D-маннозы, глицерина, D-глюконовой кислоты, D-ксилозы, D-маннита, D-рибозы, D-фруктозы, α-D-глюкозы, мальтозы, D-мелибиозы, тимидина, α-метил-D-галактозида, α-D-лактозы, лактулозы, сахарозы, уридина, α-гидрокси-глутаровой кислоты-γ-лактона, β-метил-D-глюкозида, адонитола, мальтотриоза, 2-дезоксиаденозина, аденозина, лимонной кислоты, муциновой кислоты, D-целлобиозы, инозина, L-серина, L-аланилглицина, D-галактуроновой кислоты, α-циклодекстрина, β-циклодекстрина, декстрина, инулина, пектина, амигдалина, гентиобиозы, лактитола, D-мелезитоза, α-метил-D-глюкозида, β-метил-D-галактозида, β-метил-D-ксилозида, палатинозы, D-раффинозы, стахиозы, туранозы, γ-аминомасляной кислоты, D-глюозамина, D-молочной кислоты, L-лизина, 3-гидрокси 2-бутанона; и один или несколько источников азота, выбранных из аммиака, нитрита, нитрата, L-аланина, L-аспарагина, L-аспарагиновой кислоты, L-глутаминовой кислоты, L-глутамина, глицина, аминокислот: Ala-Asp, AlaGln, Ala-Glu, Ala-His, Gly-Gln, Gly-Glu, Gly-Met и Met-Ala; в частности нитрата. Эти среды могут быть дополнены неорганическими солями и витаминами, и/или микроэлементами. Штаммы способны продуцировать фузарицидины 1А и 1В в этих средах для выращивания.

Все компоненты среды стерилизуют или путем нагревания (20 мин, при 2,0 бар и 121°C) или путем стерильной фильтрации. Компоненты можно стерилизовать или вместе, или при необходимости, отдельно. Все компоненты среды могут присутствовать в начале выращивания, или необязательно могут быть добавлены непрерывно или путем периодической подачи.

Температура культуры обычно находится в диапазоне от 15°C до 36°C, предпочтительно от 25°C до 33°C и ее можно поддерживать постоянной или можно изменять в течение эксперимента. Значение pH среды должно находиться в диапазоне от 5 до 8.5, предпочтительно около 7,0. Во время выращивания значение pH для роста можно контролировать путем добавления щелочных соединений, таких как гидроксид натрия, гидроксид калия, аммиак или аммиачная вода, или кислотных соединений, таких как фосфорная кислота или серная кислота. Для контроля пенообразования можно применять антивспениватели, например, полигликолевые эфиры кислот жирного ряда. Для поддержания стабильности плазмид, в среду можно добавлять приемлемые вещества с селективным действием, например, антибиотики. Для поддержания аэробных условий в культуру вводят кислород или газовые смеси, содержащие кислород, например, атмосферный воздух. Температура культуры обычно составляет от 20°C до 45°C. Культуру поддерживают до тех пор, пока не образуется максимум желаемого продукта. Обычно этого достигают в течение от 10 часов до 160 часов.

В частности, штаммы согласно изобретению могут быть культивированы в различных стандартных микробиологических средах, таких как бульон Лурия-Бертани (LB), бульон триптиказа-соя (TSB), бульон экстракт дрожжей/солодовый экстракт/глюкоза (YMG, ISP2) при от 15°C до 36°C в течение от 18 до 360 ч. в жидкой среде или в средах с затвердевшим агаром на чашке Петри. Может потребоваться аэрация. Бактериальные клетки (вегетативные клетки и споры) могут быть промыты и сконцентрированы (например, центрифугированием при температурах приблизительно от 15 до 30°C в течение приблизительно 15 мин. при 7,000 × g).

Изобретение также относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) культуральную среду, которую можно получить выращиванием по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше, в среде и отделением среды от культурального бульона (таким образом, оставшегося после того, как выросшие в среде клетки удаляют от цельного культурального бульона), например, супернатант цельного культурального бульона, т.е., жидкий бульон, оставшийся после того, как выросшие в бульоне клетки и другие остатки удаляют путем центрифугирования, фильтрации, осаждения или других способов, хорошо известных в данной области техники. Супернатант может быть получен, например, путем центрифугирования при температурах приблизительно от 2 до 30°C (более предпочтительно при температурах приблизительно от 4 до 20°C) в течение приблизительно от 10 до 60 мин. (более предпочтительно приблизительно от 15 до 30 мин.) приблизительно при от 5,000 до 20,000 × g (более предпочтительно приблизительно при 15,000 × g).

Такая культуральная среда содержит пестицидные метаболиты, которые продуцируются культивированным штаммом.

Изобретение также относится к смесям, содержащим в качестве компонента 1) бесклеточный экстракт, получаемый из по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше. Для получения бесклеточного экстракта, штамм может быть культивирован так, как описано выше. Клетки могут быть также разрушены с помощью высокочастотного ультразвука, под высоким давлением, например, в ячейке высокого давления Френча, с помощью осмолиза, под действием детергентов, литических ферментов или органических растворителей, с помощью гомогенизаторов или комбинации нескольких из перечисленных методов. Экстракцию можно осуществлять предпочтительно посредством органического растворителя или смеси растворителей, более предпочтительно спирта (например, метанола, этанола, н-пропанола, 2-пропанола или т.п.), еще более предпочтительно посредством 2-пропанола (например, в соотношении 1:1 к объему культуры). Разделение фаз может быть усилено добавлением таких солей, как NaCl. Органическая фаза может быть собрана, а растворитель или смесь растворителей можно удалить обычной дистилляцией и/или высушиванием с последующим ресуспендированием в метаноле и фильтрацией.

Такой экстракт содержит пестицидные метаболиты, которые продуцирует культивированный штамм.

Пестицидные метаболиты, которые являются специфическими для предлагаемых в изобретении штаммов, могут быть выделены из такой среды или экстракта в соответствии с обычными способами, в частности, когда штаммы согласно изобретению были культивированы, как описано выше.

Методология настоящего изобретения может дополнительно включать в себя стадию восстановления отдельных пестицидных метаболитов.

Термин «восстановление» включает в себя экстрагирование, сбор, выделение или очистку соединения из культуральных сред или бесклеточных экстрактов. Восстановление соединения может быть осуществлено в соответствии с любой обычной методикой выделения или очистки, известной в данной области, включая, но не ограничиваясь этим, обработку обычной смолой (например, анионо- или катионо-обменной смолой, неионно-адсорбционной смолой и т.д.), обработку обычным адсорбентом (например, активированный уголь, кремниевая кислота, силикагель, целлюлоза, оксид алюминия и т.д.), изменение pH, экстрагирование растворителем (например, с помощью обычного растворителя, такого как спирт, этилацетат, гексан и т.п.), дистилляцию, диализ, фильтрацию, концентрацию, кристаллизацию, перекристаллизацию, регулирование pH, лиофилизацию и тому подобное. Например, метаболиты могут быть восстановлены из культуральных сред путем первоначального удаления микроорганизмов. Оставшийся бульон затем пропускают через или над катионообменной смолой, чтобы удалить нежелательные катионы и затем через или над анионообменной смолой для удаления нежелательных неорганических анионов и органических кислот.

Следовательно, изобретение также относится к смеси, содержащей в качестве компонента 1) цельный культуральный бульон микроорганизма, содержащий по меньшей мере один фузарицидины формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности указанный цельный культуральный бульон содержит фузарицидины 1А и 1В.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, изобретение также относится к смеси, содержащей в качестве компонента 1) цельный культуральный бульон микроорганизма штамма Paenibacillus, содержащий по меньшей мере один фузарицидины формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности указанный цельный культуральный бульон содержит фузарицидины 1А и 1В.

Указанные метаболиты фузарицидинового типа секретируются в культуральную среду соответствующего микроорганизма, способного его продуцировать.

Следовательно, изобретение также относится к смеси, содержащей в качестве компонента 1) культуральную среду и/или бесклеточный экстракт микроорганизма, содержащие по меньшей мере один фузарицидин формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности указанная культуральная среда и/или бесклеточный экстракт содержит фузарицидины 1А и 1В.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, изобретение также относится к смеси, содержащей в качестве компонента 1) культуральную среду и/или бесклеточный экстракт микроорганизма из рода Paenibacillus, содержащий по меньшей мере один фузарицидин формулы I, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности указанная культуральная среда и/или бесклеточный экстракт содержит фузарицидины 1А и 1В.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, изобретение также относится к смеси, содержащей в качестве компонента 1) культуральную среду и/или бесклеточный экстракт по меньшей мере одного штамма Paenibacillus согласно изобретению, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше, содержащие по меньшей мере один фузарицидин формулы I, как определено выше, предпочтительно выбранный из фузарицидинов 1А и 1В, в частности указанная культуральная среда и/или бесклеточный экстракт содержит фузарицидины 1А и 1В.

Кроме того, изобретение относится к агрохимическим композициям, содержащим вспомогательное средство, определенное ниже и к смеси согласно изобретению, содержащей в качестве компонента 1) по меньшей мере один бактериальный штамм, цельный культуральный бульон, бесклеточный экстракт, культуральную среду и/или фузарицидин формулы I, определенные в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше, соответственно.

Применяемый в настоящей заявке, термин «композиция» в отношении продукта (микробный штамм, агент или состав) в соответствии с настоящим изобретением относится к комбинации ингредиентов, причем понятие «составление» представляет собой процесс использования формулы, такой как рецепт, для комбинации ингредиентов, добавляемых для формирования состава. Такая композиция в настоящей заявке также упоминается как состав.

Смеси, содержащие в качестве компонента 1) бактериальные штаммы, цельные культуральные бульоны, бесклеточные экстракты, культуральные среды, фузарицидины формулы I, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше, и в качестве компонента 2) по меньшей мере один химический пестицид, определенный в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше; и композиции согласно изобретению, соответственно, пригодны в качестве противогрибковых средств или фунгицидов. Они отличаются превосходной эффективностью против широкого спектра фитопатогенных грибов, включая почвенные грибы, которые в частности относятся к классам плазмодиофоромицетов, пероноспоромицетов (син. оомицеты), хитридиомицетов, зигомицетов, аскомицетов, базидиомицетов и дейтеромицетов (син. несовершенные грибы). Некоторые являются системно эффективными, и они могут быть применены для защиты растений как листьевые, протравливающие и почвенные фунгициды. Сверх того, они пригодны для борьбы с вредными грибами, которые среди прочего поражают древесину или корни растений.

Смеси и соответственно композиции согласно изобретению являются особенно важными для борьбы с множеством фитопатогенных грибов на различных выращиваемых растениях, таких как зерновые культуры, например, пшеница, рожь, ячмень, тритикале, овес или рис; свекла, например, сахарная или кормовая свекла; фрукты, такие как семечковые, косточковые и ягодные плоды, например, яблони, груши, сливы, персики, миндаль, вишни, клубника, малина, смородина или крыжовник; бобовые растения, такие как, чечевица, горох, люцерна или соевые бобы; масличные растения, такие как, рапс, горчица, оливы, подсолнечник, кокосовый орех, бобы какао, клещевина, пальмы масличные, земляные орехи или соевые бобы; тыквенные, такие как, тыква крупноплодная, огурцы или дыни; волокнистые растения, такие как, хлопчатник, лен, конопля или джут; цитрусовые, такие как, апельсины, лимоны, грейпфруты или мандарины; овощные растения, такие как, шпинат, латук, спаржа, капустные растения, морковь, лук, томаты, картофель, тыква или стручковый перец; лавровые растения, такие как, авокадо, корица или камфора; энергетические и сырьевые растения, такие как, кукуруза, соя, рапс, сахарный тростник или пальма масличная; кукуруза; табак; орехи; кофе; чай; бананы; виноград (столовый виноград и виноград для сока, винный виноград); хмель; дерн; сладкая трава (также называемая стевией); растения природного каучука или декоративные и лесные растения, такие как цветы, кустарники, лиственные деревья или вечнозеленые, например, хвойные, и на материале для размножения растений, таком как, семена и собранный урожай этих растений.

Предпочтительно, смеси и соответственно композиции согласно изобретению, применяют для борьбы с множеством грибов на полеводческих культурах, таких как, картофель, свекла, табак, пшеница, рожь, ячмень, овес, рис, кукуруза, хлопчатник, соевые бобы, рапс, бобовые, подсолнечник, кофе или сахарный тростник; фруктах, виноградных лозах; декоративных растениях; или овощных культурах, таких как, огурцы, томаты, бобы или тыква крупноплодная.

Понятие «материал для размножения растений» следует понимать, как означающий все генеративные части растения, такие как, семена и вегетативные части растений, такие как черенки и клубни (например, картофель), которые могут быть использованы для размножения растения. К ним относят семена, корни, плоды, клубни, луковицы, корневища, побеги и другие части растений, включая саженцы и молодые растения, которые после прорастания или всхода пересаживают. Эти молодые растения могут быть также защищены перед пересаживанием путем полной или частичной обработки посредством окунания или полива.

Предпочтительно обработку материалов для размножения растений штаммами, цельными культуральными бульонами, бесклеточными экстрактами, культуральными средами, фузарицидинами формулы I; и соответственно их композициями используют для борьбы с целым рядом грибов на зерновых культурах, таких как пшеница, рожь, ячмень и овес; рис, кукуруза, хлопчатник и соевые бобы.

Понятие «культурные растения» также охватывает те растения, которые были модифицированы благодаря выращиванию, мутагенезу или методам генной инженерии, включая, но ограничиваясь ними, биотехнологические аграрные продукты, находящиеся на рынке или в разработке (см., http://cera-gmc.org/, см. там базу данных ГМ культур). Генетически модифицированные растения представляют собой растения, генетический материал которых был изменен таким образом с использованием технологий рекомбинантной ДНК, который в природных условиях не может быть получен быстро путем скрещивания, мутаций или природной рекомбинации. Обычно, один или несколько генов были интегрированы в генетический материал генетически модифицированного растения для того, чтобы улучшить некоторые свойства растения. Подобные генетические модификации также включают, но не ограничиваются ними, посттрансляционные модификации белка(ов), олиго- или полипептидов, например, с помощью гликозилирования или присоединений полимеров, таких как пренилированные, ацетилированные или фарнезилированные части или ПЭГ части.

Растения, которые были модифицированы благодаря селекции, мутагенезу или методам генной инженерии, например, приобрели устойчивость к применениям определенных классов гербицидов, таких как ауксиновые гербициды, такие как дикамба или 2,4-D; отбеливающие гербициды, такие как ингибиторы гидроксифенилпируват диоксигеназы (HPPD) или ингибиторы фитоендесатуразы (PDS); ингибиторы ацетолактатсинтазы (ALS), такие как сульфонилмочевины или имидазолиноны; ингибиторы енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы (EPSP), такие как глифосат; ингибиторы глутаминсинтетазы (GS), такие как глуфосинат; ингибиторы протопорфириноген-IX оксидазы; ингибиторы биосинтеза липидов, такие как ингибиторы ацетил-КоА-карбоксилазы (ACCase); или оксиниловые гербициды (т.е., бромоксинил или иоксинил) в результате обычных методов выращивания или генной инженерии. К тому же были получены растения, которые благодаря различным генетическим модификациям, являются устойчивыми ко многим классам гербицидов, например, устойчивы к глифосату и глуфосинату, или к глифосату и к гербициду из другого класса, таким как ингибиторы ALS, ингибиторы HPPD, ауксиновые гербициды и ингибиторы ACCase. Эти технологии устойчивости к гербицидам описаны, например, в Pest Managem. Sci. 61, 2005, 246; 61, 2005, 258; 61, 2005, 277; 61, 2005, 269; 61, 2005, 286; 64, 2008, 326; 64, 2008, 332; Weed Sci. 57, 2009, 108; Austral. J. Agricult. Res. 58, 2007, 708; Science 316, 2007, 1185; и в процитированных там ссылках. Благодаря обычным методам выращивания (мутагенезу) некоторые культурные растения приобрели устойчивость к гербицидам, например, сурепица Clearfield® (Канола, BASF SE, Германия), которая обладает устойчивостью к имидазолинонам, например, имазамоксу или подсолнечник ExpressSun® (DuPont, США), который обладает устойчивостью к сульфонилмочевинам, например, к трибенурону. Методы генной инженерии были использованы для придания культурным растениям, таким как соевые бобы, хлопчатник, кукуруза, свекла и рапс, устойчивости к гербицидам, таким как глифосат, дикамба, имидазолиноны и глуфосинат, некоторые из них находятся в разработке или имеются в продаже под торговыми наименованиями RoudupReady® (устойчивые к глифосату, Monsanto, США), Cultivance® (устойчивые к имидазолинону, BASF SE, Германия) и Liberty Link® (устойчивые к глуфосинату, Bayer CropScience, Германия).

Кроме того, также включены растения, которые благодаря использованию технологий рекомбинантной ДНК способны синтезировать один или несколько инсектицидных белков, в особенности известных из рода бактерий Bacillus, в частности Bacillus thuringiensis, такие как δ-эндотоксины, например, CryIA(b), CryIA(c), CryIF, CryIF(a2), CryIIA(b), CryIIIA, CryIIIB(b1) или Cry9c; вегетативные инсектицидные белки (VIP), например, VIP1, VIP2, VIP3 или VIP3A; инсектицидные белки колонизированных бактериями нематод, например, виды Photorhabdus или виды Xenorhabdus; токсины, продуцируемые животными, такие как скорпионовые токсины, пауковые токсины, осиные токсины или другие присущие насекомым нейротоксины; токсины, продуцируемые грибами, такие как токсины стрептомицетов; растительные лектины, такие как гороховые или ячменные лектины; агглютинины; ингибиторы протеиназы, такие как, ингибиторы трипсина, ингибиторы серинпротеазы, ингибиторы пататина, цистатина или папаина; рибосом-инактивирующие белки (РИБ), такие как рицин, РИБ кукурузы, абрин, луффин, сапорин или бриодин; ферменты метаболизма стероидов, такие как 3-гидроксистероид-оксидаза, экдистероид-IDP-гликозил-трансфераза, холестериноксидаза, ингибиторы экдизона или HMG-CoA-редуктазы; блокаторы ионных каналов, такие как ингибиторы натриевых или кальциевых каналов; эстераза ювенильного гормона; рецепторы диуретического гормона (геликокининовые рецепторы); стилбенсинтаза, бибензилсинтаза, хитиназы и глюканазы. В контексте настоящего изобретения эти инсектицидные белки или токсины следует явно понимать также как претоксины, гибридные белки, укороченные или по-другому модифицированные белки. Гибридные белки отличаются новой комбинацией доменов белков, (см., например, WO 02/015701). Другие примеры подобных токсинов или генетически измененных растений, способных синтезировать такие токсины, раскрыты, например, в ЕР-А 374753, WO 93/007278, WO 95/34656, ЕР-А 427529, ЕР-А 451878, WO 03/18810 и WO 03/52073. Способы получения таких генетически модифицированных растений в основном известны специалисту в данной области и описаны, например, в указанных выше публикациях. Эти инсектицидные белки, содержащиеся в генетически модифицированных растениях, придают растениям, которые их вырабатывают, устойчивость к животным вредителям из всех таксономических классов артроподов, в частности, к жукам (Coeloptera), к двукрылым насекомым (Diptera), и к чешуекрылым (Lepidoptera) и к нематодам (Nematoda). Генетически модифицированные растения, способные синтезировать один или несколько инсектицидных белков, описаны, например, в указанных выше публикациях, и некоторые из них являются коммерчески доступными, такие как YieldGard^® (сорта кукурузы, которые вырабатывают токсин Cry1Ab), YieldGard^® Plus (сорта кукурузы, которые вырабатывают токсины Cry1Ab и Cry3b1), Starlink^® (сорта кукурузы, которые вырабатывают токсин Cry9c), Herculex^® RW (сорта кукурузы, которые вырабатывают токсины Cry34Ab1, Cry35Ab1 и фермент фосфинотрицин-N-ацетилтрансфераза [PAT]); NuCOTN^® 33В (сорта хлопчатника, которые вырабатывают токсин Cry1Ac), Bollgard^® I (сорта хлопчатника, которые вырабатывают токсин Cry1Ac), Bollgard^® II (сорта хлопчатника, которые вырабатывают токсины Cry1Ac и Cry2Ab2); VIPCOT^® (сорта хлопчатника, которые вырабатывают VIP токсин); NewLeaf^® (сорта картофеля, которые вырабатывают токсин Cry3A); Bt-Xtra^®, NatureGard^®, KnockOut^®, BiteGard^®, Protecta^®, Bt11 (например, Agrisure^® CB) и Bt176 от Syngenta Seeds SAS, Франция, (сорта кукурузы, которые вырабатывают токсин Cry1Ab и фермент PAT), MIR604 от Syngenta Seeds SAS, Франция (сорта кукурузы, которые вырабатывают модифицированную версию токсина Cry3A, см. WO 03/018810), MON 863 от Monsanto Europe S.A., Бельгия (сорта кукурузы, которые вырабатывают токсин Cry3b1), IPC 531 от Monsanto Europe S.A., Бельгия (сорта хлопчатника, которые вырабатывают модифицированную версию токсина Cry1Ac) и 1507 от Pioneer Overseas Corporation, Бельгия (сорта кукурузы, которые вырабатывают токсин Cry1F и фермент PAT).

К тому же включены растения, которые благодаря использованию технологий рекомбинантной ДНК способны синтезировать один или несколько белков, которые вызывают повышенную устойчивость или сопротивляемость к бактериальным, вирусным или грибковым патогенам. Примерами подобных белков являются так называемые «патогенез-зависимые белки» (PR белки, см., например, ЕР-А 392225), гены устойчивости к заболеваниям растений (например, сорта картофеля, которые экспрессируют резистентные гены, действующие против Phytophthora infestans, выведенные из дикого мексиканского картофеля Solanum bulbocastanum) или Т4-лизоцим (например, сорта картофеля, которые способны синтезировать эти белки с повышенной устойчивостью к бактериям, таким как Erwinia amylvora). Способы получения таких генетически модифицированных растений, в общем, известны специалисту в данной области и описаны, например, в указанных выше публикациях.

Кроме этого, также включены растения, которые благодаря использованию технологий рекомбинантной ДНК способны синтезировать один или несколько белков для повышения продуктивности (например, выработки биомассы, урожая зерна, содержания крахмала, содержания масла или содержания белка), устойчивости к засухе, засоленности или другим ограничивающим факторам окружающей среды или устойчивости таких растений к животным вредителям и грибковым, бактериальным и вирусным патогенам.

Кроме того, также включены растения, которые благодаря применению технологий рекомбинантной ДНК содержат измененное количество содержащихся веществ или новых веществ, в особенности для улучшения питания людей и животных, например, масличные зерновые культуры, которые вырабатывают оздоровительные длинноцепочечные омега-3-жирные кислоты или ненасыщенные омега-9-жирные кислоты (например, рапс Nexera^®, DOW Agro Sciences, Канада).

Кроме того, также включены растения, которые благодаря применению технологий рекомбинантной ДНК содержат измененное количество содержащихся веществ или новых веществ, в особенности, для улучшения выработки сырьевого материала, например, картофель, который вырабатывает повышенные количества амилопектина (например, картофель Amflora^®, BASF SE, Германия).

Смеси и соответственно композиции согласно изобретению в особенности пригодны для борьбы с нижеследующими заболеваниями растений:

Виды Albugo (белая ржавчина) на декоративных растениях, овощных культурах (например, A. candida) и подсолнечнике (например, A. tragopogonis); виды Alternaria (альтернариозная пятнистость листьев) на овощных культурах, рапсе (A. brassicola или brassicae), сахарной свекле (A. tenuis), плодах, рисе, соевых бобах, картофеле (например, A. solani или A. alternata), томатах (например, А. solani или A. alternata) и пшенице; виды Aphanomyces на сахарной свекле и овощных культурах; виды Ascochyta на зерновых и овощных культурах, например, A. tritici (антракноз) на пшенице и A. hordei на ячмене; виды Bipolaris и Drechslera (телеоморф: виды Cochliobolus), например, глазковая пятнистость листьев кукурузы (например, D. maydis), или гельминтоспориоз листьев (В. zeicola) на кукурузе, например, гельминтоспориозная корневая гниль (В. sorokiniana) на зерновых и, например, В. oryzae на рисе и дернине; Blumeria (ранее Erysiphe) graminis (настоящая мучнистая роса) на зерновых (например, на пшенице или ячмене); Botrytis cinerea (телеоморф: Botryotinia fuckeliana: серая плесень) на плодах и ягодах (например, клубнике), овощных культурах (например, латуке, моркови, сельдерее и капусте), рапсе, цветах, виноградных лозах, лесных культурах и пшенице; Bremia lactucae (ложная мучнистая роса) на латуке; виды Ceratocystis (син. Ophiostoma) (гниль или увядание) на лиственных и вечнозеленых деревьях, например, С. ulmi (голландская болезнь ильмовых пород) на вязах; Cercospora виды (церкоспорозная пятнистость листьев) на кукурузе (например, серая пятнистость листьев: С. zeae-maydis), рисе, сахарной свекле (например, С. beticola), сахарном тростнике, овощных культурах, кофе, соевых бобах (например, С. sojina или С. kikuchii) и рисе; виды Cladosporium на томатах (например, С. fulvum: плесень листвы) и зерновых, например, С. herbarum (оливковая плесень) на пшенице; Claviceps purpurea (спорынья) на зерновых; виды Cochliobolus (анаморф: Helminthosporium от Bipolaris) (пятнистость листьев) на кукурузе (С. carbonum), зерновых (например, С. sativus, анаморф: В. sorokiniana) и рисе (например, С. miyabeanus, анаморф: Н. oryzae); виды Colletotrichum (телеоморф: Glomerella) (антракноз) на хлопчатнике (например, С. gossypii), кукурузе (например, С. graminicola: антракноз гниль стебля), ягодах, картофеле (например, С. coccodes: антракноз картофеля и томатов), бобах (например, С. lindemuthianum) и соевых бобах (например, виды С. truncatum или С. gloeosporioides); Corticium, например, С. sasakii (ризоктониоз стеблей и влагалищ) на рисе; Corynespora cassiicola (черная пятнистость) на соевых бобах и декоративных растениях; виды Cycloconium, например, С. oleaginum на оливковых деревьях; виды Cylindrocarpon (например, некроз плодовых деревьев или виноградной лозы, телеоморф: Nectria или Neonectria виды) на плодовых деревьях, виноградных лозах (например, С. liriodendri, телеоморф: Neonectria liriodendri: заболевание черная ножка) и декоративных растениях; Dematophora necatrix (телеоморф: Rosellinia) (корневая и стеблевая гниль) на соевых бобах; виды Diaporthe, например, D. phaseolorum (черная ножка) на соевых бобах; виды Drechslera (син. Helminthosporium, телеоморф: Pyrenophora) на кукурузе, зерновых, таких как ячмене (например, D. teres, сетчатая пятнистость) и пшенице (например, D. tritici-repentis: пиренофороз), рисе и дёрне; Esca (отмирание, апоплексия) на виноградных лозах, вызванное Formitiporia (син. Phellinus) punctata, F. mediterranea, Phaeomoniella chlamydospora (ранее Phaeoacremonium chlamydosporum), Phaeoacremonium aleophilum и/или Botryosphaeria obtusa; виды Elsinoe на семечковых плодах (E. pyri), ягодных (E. veneta: антракноз) и виноградных лозах (Е. ampelina: антракноз); Entyloma oryzae (головня листьев) на рисе; Epicoccum виды (черная плесень) на пшенице; виды Erysiphe (настоящая мучнистая роса) на сахарной свекле (Е. betae), овощных культурах (например, Е. pisi), таких как тыквенные (например, Е. cichoracearum), капусте, рапсе (например, Е. cruciferarum); Eutypa lata (эутипоз, рак или отмирание, анаморф: Cytosporina lata, син. Libertella blepharis) на плодовых деревьях, виноградных лозах и декоративных кустарниках; виды Exserohilum (син. Helminthosporium) на кукурузе (например, Е. turcicum); виды Fusarium (телеоморф: Gibberella) (увядание, корневая или стеблевая гниль) на различных растениях, такие как F. graminearum или F. culmorum (корневая гниль, парша или фузариоз) на зерновых (например, пшенице или ячмене), F. oxysporum на томатах, F. solani (сл. вид глицины сейчас син. F. virguliforme) и F. tucumaniae и F. brasiliense, каждый вызывающий синдром внезапной гибели на соевых бобах и F. verticillioides на кукурузе; Gaeumannomyces graminis (выпревание) на зерновых (например, пшенице или ячмене) и кукурузе; виды Gibberella на зерновых (например, G. zeae) и рисе (например, G. fujikuroi: болезнь Баканае); Glomerella cingulata на виноградных лозах, семечковых плодах и других растениях и G. gossypii на хлопчатнике; комплекс окрашивания зерна на рисе; Guignardia bidwellii (черная гниль) на виноградных лозах; виды Gymnosporangium на розоцветных растениях и можжевеловых, например, G. sabinae (ржавчина) на грушах; Helminthosporium виды (син. Drechslera, телеоморф: Cochliobolus) на кукурузе, зерновых и рисе; виды Hemileia, например, Н. vastatrix (ржавчина кофейных листьев) на кофе; Isariopsis clavispora (син. Cladosporium vitis) на виноградных лозах; Macrophomina phaseolina (син. phaseoli) (корневая и стеблевая гниль) на соевых бобах и хлопчатнике; Microdochium (син. Fusarium) nivale (розовая снежная плесень) на зерновых (например, пшенице или ячмене); Microsphaera diffusa (настоящая мучнистая роса) на соевых бобах; Monilinia виды, например, М. laxa, М. fructicola и М. fructigena (сухость цветков и кончиков листьев, бурая гниль) на косточковых плодах и других розоцветных растениях; виды Mycosphaerella на зерновых, бананах, ягодных и земляном орехе, такие как, например, М. graminicola (анаморф: Septoria tritici, септориозная пятнистость) на пшенице или М. fijiensis (болезнь черная Сигатока) на бананах; Peronospora виды (ложная мучнистая роса) на капусте (например, P. brassicae), рапсе (например, P. parasitica), луковичных растениях (например, P. destructor), табаке (P. tabacina) и соевых бобах (например, P. manshurica); Phakopsora pachyrhizi и P. meibomiae (ржавчина соевых бобов) на соевых бобах; виды Phialophora, например, на виноградных лозах (например, P. tracheiphila и P. tetraspora) и соевых бобах (например, P. gregata: стеблевая гниль); Phoma lingam (корневая и стеблевая гниль) на рапсе и капусте и P. betae (корневая гниль, черная пятнистость и черная ножка) на сахарной свекле; виды Phomopsis на подсолнечнике, виноградных лозах (например, P. viticola: черная пятнистость) и соевых бобах (например, стеблевая гниль: P. phaseoli, телеоморф: Diaporthe phaseolorum); Physoderma maydis (бурая пятнистость) на кукурузе; виды Phytophthora (увядание, гниль корня, листьев, плодов и стебля) на различных растениях, таких как паприка и тыквенные (например, P. capsici), соевых бобах (например, P. megasperma, син. P. sojae), картофеле и томатах (например, Р. infestans: фитофтороз) и деревьях лиственных пород (например, P. ramorum: внезапная гибель дуба); Plasmodiophora brassicae (кила) на капусте, рапсе, редисе и других растениях; виды Plasmopara, например, P. viticola (ложная мучнистая роса виноградной лозы) на виноградных лозах и P. halstedii на подсолнечнике; виды Podosphaera (настоящая мучнистая роса) на розоцветных растениях, хмеле, семечковых плодах и ягодных, например, P. leucotricha на яблонях; виды Polymyxa, например, на зерновых, такие как ячмене и пшенице (P. graminis) и сахарной свекле (P. betae) и перенесенные вследствие этого вирусные заболевания; Pseudocercosporella herpotrichoides (глазковая пятнистость, телеоморф: Tapesia yallundae) на зерновых, например, пшенице или ячмене; Pseudoperonospora (ложная мучнистая роса) на различных растениях, например, P. cubensis на тыквенных или P. humili на хмеле; Pseudopezicula tracheiphila (краснуха листьев винограда, анаморф: Phialophora) на виноградных лозах; виды Puccinia (ржавчина) на различных растениях, например, P. triticina (бурая или листовая ржавчина), P. striiformis (полосатость или желтая ржавчина), P. hordei (карликовая ржавчина), P. graminis (стеблевая или черная ржавчина) или Р. recondita (бурая или листовая ржавчина) на зерновых, такие как, например, пшенице, ячмене или ржи, P. kuehnii (оранжевая ржавчина) на сахарном тростнике и P. asparagi на спарже; Pyrenophora (анаморф: Drechslera) tritici-repentis (пиренофороз) на пшенице или P. teres (сетчатая пятнистость) на ячмене; виды Pyricularia, например, P. oryzae (телеоморф: Magnaporthe grisea, пирикуляриоз риса) на рисе и P. grisea на дёрне и зерновых; виды Pythium (черная ножка) на дерне, рисе, кукурузе, пшенице, хлопчатнике, рапсе, подсолнечнике, соевых бобах, сахарной свекле, овощных культурах и других растениях (например, Р. ultimum или P. aphanidermatum); виды Ramularia, например, R. collo-cygni (рамуляриозная черная пятнистость, физиологическая черная пятнистость) на ячмене и R. beticola на сахарной свекле; виды Rhizoctonia на хлопчатнике, рисе, картофеле, дерне, кукурузе, рапсе, томатах, сахарной свекле, овощных культурах и других растениях, например, R. solani (корневая и стеблевая гниль) на соевых бобах, R. solani (ризоктониоз стеблей и влагалищ) на рисе или R. cerealis (ризоктониоз) на пшенице или ячмене; Rhizopus stolonifer (черная плесень, мягкая гниль) на клубнике, моркови, капусте, виноградных лозах и томатах; Rhynchosporium secalis (ринхоспорозный ожог) на ячмене, ржи и тритикале; Sarocladium oryzae и S. attenuatum (гниль влагалищ) на рисе; виды Sclerotinia (стеблевая гниль или белая гниль) на овощных культурах и полевых культурах, таких как рапсе, подсолнечнике (например, S. sclerotiorum) и соевых бобах (например, S. rolfsii или S. sclerotiorum); виды Septoria на различных растениях, например, S. glycines (бурая пятнистость) на соевых бобах, S. tritici (септориозная пятнистость) на пшенице и S. (син. Stagonospora) nodorum (стагоноспорная пятнистость) на зерновых; Uncinula necator (син. Erysiphe) (настоящая мучнистая роса, анаморф: Oidium tuckeri) на виноградных лозах; виды Setospaeria (пятнистость листьев) на кукурузе (например, S. turcicum, син. Helminthosporium turcicum) и дёрне; виды Sphacelotheca (головня) на кукурузе, (например, S. reiliana: головня сорго), сорго и сахарном тростнике; Sphaerotheca fuliginea (настоящая мучнистая роса) на тыквенных; Spongospora subterranea (порошистая парша) на картофеле и перенесенные вследствие этого вирусные заболевания; виды Stagonospora на зерновых, например, S. nodorum (стагоноспорная пятнистость, телеоморф: Leptosphaeria [син. Phaeosphaeria] nodorum) на пшенице; Synchytrium endobioticum на картофеле (рак картофеля); Taphrina виды, например, Т. deformans (курчавость листьев) на персиках и Т. pruni (кармашки сливы) на сливах; виды Thielaviopsis (черная корневая гниль) на табаке, семечковых плодах, овощных культурах, соевых бобах и хлопчатнике, например, Т. basicola (син. Chalara elegans); виды Tilletia (твердая или вонючая головня) на зерновых, такие как, например, Т. tritici (син. Т. caries, твердая головня пшеницы) и Т. controversa (карликовая головня) на пшенице; Typhula incarnata (серая снежная плесень) на ячмене или пшенице; виды Urocystis, например, U. occulta (стеблевая головня) на ржи; виды Uromyces (ржавчина) на овощных культурах, такие как бобах (например, U. appendiculatus, син. U. phaseoli) и сахарной свекле (например, U. betae); виды Ustilago (пыльная головня) на зерновых (например, U. nuda и U. avaenae), кукурузе (например, U. maydis: пузырчатая головня) и сахарном тростнике; виды Venturia (парша) на яблонях (например, V. inaequalis) и грушах; и виды Verticillium (увядание) на различных растениях, такие как плодах и декоративных растениях, виноградных лозах, ягодных, овощных культурах и полевых культурах, например, V. dahliae на клубнике, рапсе, картофеле и томатах.

Смеси и композиции в соответствии с изобретением, соответственно, также пригодны для борьбы с вредными патогенами, в особенности грибами, при защите запасов или собранного урожая и при защите материалов. Понятие «защита материалов» следует понимать, как включающее защиту технических и неживых материалов, таких как, например, клеящие вещества, клеи, древесина, бумага и картон, текстильные изделия, кожа, дисперсии для окрашивания, синтетические материалы, смазочно-охлаждающие жидкости, волокна и ткани, от поражения и разрушения вредными микроорганизмами, такими как грибы и бактерии. При защите древесины и материалов в частности принимают во внимание следующие вредные грибы: аскомицеты, такие как Ophiostoma spp., Ceratocystis spp., Aureobasidium pullulans, Sclerophoma spp., Chaetomium spp., Humicola spp., Petriella spp., Trichurus spp.; базидиомицеты, такие как Coniophora spp., Coriolus spp., Gloeophyllum spp., Lentinus spp., Pleurotus spp., Poria spp., Serpula spp. и Tyromyces spp., дейтеромицеты, такие как Aspergillus spp., Cladosporium spp., Penicillium spp., Trichorma spp., Alternaria spp., Paecilomyces spp. и зигомицеты, такие как Mucor spp., и кроме того, при защите хранящихся продуктов следующие дрожжевые грибки: Candida spp. и Saccharomyces cerevisiae. Способ обработки в соответствии с изобретением также может быть применен в области защиты хранящихся продуктов или урожая от заражения грибами и микроорганизмами. В соответствии с настоящим изобретением, понятие «хранящиеся продукты» следует понимать как природные вещества растительного или животного происхождения и их обработанные формы, которые были взяты из естественного жизненного цикла, и которым необходима долгосрочная защита. Хранящиеся продукты, имеющие происхождение от сельскохозяйственных культур, такие как растения или их части, например, стебли, листья, клубни, семена, плоды или зерна, можно подвергать защите в свежесобранном состоянии или в обработанном виде, как например, предварительно подсушенными, увлажненными, измельченными, размолотыми, спрессованными или поджаренными, такой процесс также известен как послеуборочная обработка. Также под понятие хранящихся продуктов подпадает лесоматериал, или в виде сырого лесоматериала, такого как строительный лесоматериал, электрические столбы и шлагбаумы, так и в виде готовых изделий, таких как мебель или предметы, сделанные из древесины. Хранящимися продуктами животного происхождения являются кожевенное сырье, кожа, меха, шерсть и т.п. Комбинации в соответствии с настоящим изобретением могут предотвратить такие неблагоприятные эффекты, как разложение, обесцвечивание или гниение. Предпочтительно «хранящиеся продукты» представляют собой природные вещества растительного происхождения и их обработанные формы, более предпочтительно плоды и их обработанные формы, такие как яблоки, косточковые плоды, ягоды и цитрусовые плоды, и их обработанные формы.

Смеси и композиции в соответствии с изобретением в особенности важны для борьбы с множеством фитопатогенных насекомых или других животных вредителей (например, чешуекрылые, жуки, двукрылые, трипсы, разнокрылые, полужесткокрылые, равнокрылые хоботные, термиты, прямокрылые, паукообразные и нематоды) на различных выращиваемых растениях, таких как зерновые культуры, например, пшеница, рожь, ячмень, тритикале, овес или рис; свекла, например, сахарная или кормовая свекла; фруктовые культуры, такие как семечковые, косточковые и ягодные плоды, например, яблони, груши, сливы, персики, миндаль, вишни, клубника, малина, смородина или крыжовник; бобовые растения, такие как, чечевица, горох, люцерна или соевые бобы; масличные растения, такие как, рапс, горчица, оливы, подсолнечник, кокосовый орех, бобы какао, клещевина, пальмы масличные, земляные орехи или соевые бобы; тыквенные, такие как, тыква крупноплодная, огурцы или дыни; волокнистые растения, такие как, хлопчатник, лен, конопля или джут; цитрусовые, такие как, апельсины, лимоны, грейпфруты или мандарины; овощные растения, такие как, шпинат, салат-латук, спаржа, капустные растения, морковь, лук, томаты, картофель, тыква или стручковый перец; лавровые растения, такие как, авокадо, корица или камфора; энергетические и сырьевые растения, такие как, кукуруза, соя, рапс, сахарный тростник или пальма масличная; кукуруза; табак; орехи; кофе; чай; бананы; виноград (столовый виноград и виноград для сока, винный виноград); хмель; дерн; растения природного каучука или декоративные и лесные растения, такие как цветы, кустарники, лиственные деревья или вечнозеленые, например, хвойные, и на материале для размножения растений, таком как, семена и собранный урожай этих растений.

Предпочтительно предлагаемые в изобретении смеси и композиции применяют для борьбы с множеством вредителей на полеводческих культурах, таких как, картофель, сахарная свекла, табак, пшеница, рожь, ячмень, овес, рис, кукуруза, хлопчатник, соя, рапс, бобовые, подсолнечник, кофе или сахарный тростник; плодовых, виноградных; декоративных растениях; или овощных культурах, таких как, огурцы, томаты, бобы или тыква крупноплодная.

Предлагаемые в изобретении смеси и соответственно их композиции в особенности пригодны для борьбы со следующими вредными насекомыми из отряда

чешуекрылых (Lepidoptera), например, Agrotis ypsilon, Agrotis segetum, Alabama argillacea, Anticarsia gemmatalis, Argyresthia conjugella, Autographa gamma, Bupalus piniarius, Cacoecia murinana, Capua reticulana, Cheimatobia brumata, Choristoneura fumiferana, Choristoneura occidentalis, Cirphis unipuncta, Cydia pomonella, Dendrolimus pini, Diaphania nitidalis, Diatraea grandiosella, Earias insulana, Elasmopalpus lignosellus, Eupoecilia ambiguella, Evetria bouliana, Feltia subterranea, Galleria mellonella, Grapholitha funebrana, Grapholitha molesta, Heliothis armigera, Heliothis virescens, Heliothis zea, Hellula undalis, Hibernia defoliaria, Hyphantria cunea, Hyponomeuta malinellus, Keiferia lycopersicella, Lambdina fiscellaria, Laphygma exigua, Leucoptera coffeella, Leucoptera scitella, Lithocolletis blancardella, Lobesia botrana, Loxostege sticticalis, Lymantria dispar, Lymantria monacha, Lyonetia clerkella, Malacosoma neustria, Mamestra brassicae, Orgyia pseudotsugata, Ostrinia nubilalis, Panolis flammea, Pectinophora gossypiella, Peridroma saucia, Phalera bucephala, Phthorimaea operculella, Phyllocnistis citrella, Pieris brassicae, Plathypena scabra, Plutella xylostella, Pseudoplusia includens, Rhyacionia frustrana, Scrobipalpula absoluta, Sitotroga cerealella, Sparganothis pilleriana, Spodoptera frugiperda, Spodoptera littoralis, Spodoptera litura, Thaumatopoea pityocampa, Tortrix viridana, Trichoplusia ni и Zeiraphera canadensis,

жуков (Coleoptera), например, Agrilus sinuatus, Agriotes lineatus, Agriotes obscurus, Amphimallus solstitialis, Anisandrus dispar, Anthonomus grandis, Anthonomus pomorum, Atomaria linearis, Blastophagus piniperda, Blitophaga undata, Bruchus rufimanus, Bruchus pisorum, Bruchus lentis, Byctiscus betulae, Cassida nebulosa, Cerotoma trifurcata, Ceuthorrhynchus assimilis, Ceuthorrhynchus napi, Chaetocnema tibialis, Conoderus vespertinus, Crioceris asparagi, Diabrotica longicornis, Diabrotica speciosa, Diabrotica 12-punctata, Diabrotica virgifera, Diloboderus abderus, Epilachna varivestis, Epitrix hirtipennis, Eutinobothrus brasiliensis, Hylobius abietis, Hypera brunneipennis, Hypera postica, Ips typographus, Lema bilineata, Lema melanopus, Leptinotarsa decemlineata, Limonius californicus, Lissorhoptrus oryzophilus, Melanotus communis, Meligethes aeneus, Melolontha hippocastani, Melolontha melolontha, Oulema oryzae, Ortiorrhynchus sulcatus, Oryazophagus oryzae, Otiorrhynchus ovatus, Phaedon cochleariae, Phyllotreta chrysocephala, Phyllophaga sp., Phyllophaga cuyabana, Phyllophaga triticophaga, Phyllopertha horticola, Phyllotreta nemorum, Phyllotreta striolata, Popillia japonica, Sitona lineatus и Sitophilus granaria,

двукрылых (Diptera), например, Aedes aegypti, Aedes vexans, Anastrepha ludens, Anopheles maculipennis, Ceratitis capitata, Chrysomya bezziana, Chrysomya hominivorax, Chrysomya macellaria, Contarinia sorghicola, Cordylobia anthropophaga, Culexpipiens, Dacus cucurbitae, Dacus oleae, Dasineura brassicae, Fannia canicularis, Gasterophilus intestinalis, Glossina morsitans, Haematobia irritans, Haplodiplosis equestris, Hylemyia platura, Hypoderma lineata, Liriomyza sativae, Liriomyza trifolii, Lucilia caprina, Lucilia cuprina, Lucilia sericata, Lycoria pectoralis, Mayetiola destructor, Musca domestica, Muscina stabulans, Oestrus ovis, Oscinella frit, Pegomya hysocyami, Phorbia antiqua, Phorbia brassicae, Phorbia coarctata, Rhagoletis cerasi, Rhagoletis pomonella, Tabanus bovinus, Tipula oleracea и Tipula paludosa,

трипсов (Thysanoptera), например, Frankliniella fusca, Frankliniella occidentalis, Frankliniella tritici, Scirtothrips citri, Thrips oryzae, Thrips palmi и Thrips tabaci,

перепончатокрылых (Hymenoptera), например, Acromyrmex ambuguus, Acromyrmex crassispinus, Acromyrmex heiery, Acromyrmex landolti, Acromyrmex subterraneus, Athalia rosae, Atta capiguara, Atta cephalotes, Atta laevigata, Atta robusta, Atta sexdens, Atta texana, Hoplocampa minuta, Hoplocampa testudinea, Monomorium pharaonis, Solenopsis geminata и Solenopsis invicta,

клопов (Heteroptera), например, Acrosternum hilare, Blissus leucopterus, Cyrtopeltis notatus, Dichelops furcatus, Dysdercus cingulatus, Dysdercus intermedins, Euchistos heros, Eurygaster integriceps, Euschistus impictiventris, Leptoglossus phyllopus, Lygus lineolaris, Lygus pratensis, Nezara viridula, Piesma quadrata, Piezodorus guildini, Solubea insularis и Thyanta perditor,

полужесткокрылых и равнокрылых, например, Acrosternum hilare, Blissus leucopterus, Cyrtopeltis notatus, Diaphorina citri, Dysdercus cingulatus, Dysdercus intermedins, Eurygaster integriceps, Euschistus impictiventris, Leptoglossus phyllopus, Lygus lineolaris, Lygus pratensis, Nezara viridula, Piesma quadrata, Solubea insularis, Thyanta perditor, Acyrthosiphon onobrychis, Adelges laricis, Aphidula nasturtii, Aphis fabae, Aphis forbesi, Aphis pomi, Aphis gossypii, Aphis grossulariae, Aphis schneideri, Aphis spiraecola, Aphis sambuci, Acyrthosiphon pisum, Aulacorthum solani, Brachycaudus cardui, Brachycaudus helichrysi, Brachycaudus persicae, Brachycaudus prunicola, Brevicoryne brassicae, Capitophorus horni, Cerosipha gossypii, Chaetosiphon fragaefolii, Cryptomyzus ribis, Dreyfusia nordmannianae, Dreyfusia piceae, Dysaphis radicola, Dysaulacorthum pseudosolani, Dysaphis plantaginea, Dysaphis pyri, Empoasca fabae, Hyalopterus pruni, Hyperomyzus lactucae, Macrosiphum avenae, Macrosiphum euphorbiae, Macrosiphon rosae, Megoura viciae, Melanaphis pyrarius, Metopolophium dirhodum, Myzodes persicae, Myzus ascalonicus, Myzus cerasi, Myzus varians, Nasonovia ribis-nigri, Nilaparvata lugens, Pemphigus bursarius, Perkinsiella saccharicida, Phorodon humuli, Psylla mali, Psylla piri, Rhopalomyzus ascalonicus, Rhopalosiphum maidis, Rhopalosiphum padi, Rhopalosiphum insertum, Sappaphis mala, Sappaphis mali, Schizaphis graminum, Schizoneura lanuginosa, Sitobion avenae, Trialeurodes vaporariorum, Toxoptera aurantiiand, Viteus vitifolii, Cimex lectularius, Cimex hemipterus, Reduvius senilis, Triatoma spp., и Arilus critatus,

термитов (Isoptera), например, Calotermes flavicollis, Cornitermes cumulans, Heterotermes tenuis, Leucotermes flavipes, Neocapritemes opacus, Procornitermes triacifer; Reticulitermes lucifugus, Syntermes molestus, и Termes natalensis,

прямокрылых (Orthoptera), например, Acheta domestica, Blatta orientalis, Blattella germanica, Forficula auricularia, Gryllotalpa gryllotalpa, Locusta migratoria, Melanoplus bivittatus, Melanoplus femurrubrum, Melanoplus mexicanus, Melanoplus sanguinipes, Melanoplus spretus, Nomadacris septemfasciata, Periplaneta americana, Schistocerca americana, Schistocerca peregrina, Stauronotus maroccanus и Tachycines asynamorus,

паукообразных, таких как пауки, например, из семейств Argasidae, Ixodidae и Sarcoptidae, таких как Amblyomma americanum, Amblyomma variegatum, Argas persicus, Boophilus annulatus, Boophilus decoloratus, Boophilus microplus, Dermacentor silvarum, Hyalomma truncatum, Ixodes ricinus, Ixodes rubicundus, Ornithodorus moubata, Otobius megnini, Dermanyssus gallinae, Psoroptes ovis, Rhipicephalus appendiculatus, Rhipicephalus evertsi, Sarcoptes scabiei, и Eriophyidae spp., таких как Aculus schlechtendali, Phyllocoptrata oleivora и Eriophyes sheldoni; Tarsonemidae spp., таких как Phytonemus pallidus и Polyphagotarsonemus latus; Tenuipalpidae spp., таких как Brevipalpus phoenicis; Tempanychidae spp., таких как Tempanychus cinnabarinus, Tempanychus kanzawai, Tempanychus pacificus, Tempanychus telarius и Tempanychus urticae, Panonychus ulmi, Panonychus citri и Oligonychus pratensis.

В частности, смеси в соответствии с изобретением пригодны для борьбы с вредителями из отрядов Coleoptera, Lepidoptera, Thysanoptera, Homoptera, Isoptera и Orthoptera.

Также они пригодны для подавления следующих паразитирующих на растениях нематод, таких как яванские галловые нематоды, Meloidogyne arenaria, Meloidogyne chitwoodi, Meloidogyne exigua, Meloidogyne hapla, Meloidogyne incognita, Meloidogyne javanica и другие виды Meloidogyne; цистообразующие нематоды, Globodera rostochiensis, Globodera pallida, Globodera tabacum и другие виды Globodera, Heterodera avenae, Heterodera glycines, Heterodera schachtii, Heterodera trifolii, и другие виды Heterodera; галлообразующие нематоды, Anguina funesta, Anguina tritici и другие виды Anguina; стеблевые и лиственные нематоды, Aphelenchoides besseyi, Aphelenchoides fragariae, Aphelenchoides ritzemabosi и другие виды Aphelenchoides; жалящие нематоды, Belonolaimus longicaudatus и другие виды Belonolaimus; сосновые нематоды, Bursaphelenchus xylophilus и другие виды Bursaphelenchus; кольчатые нематоды, виды Criconema, виды Criconemella, Criconemoides виды, и виды Mesocriconema; стеблевые и луковичные нематоды, Ditylenchus destructor, Ditylenchus dipsaci, Ditylenchus myceliophagus и другие виды Ditylenchus; шилоносые нематоды, виды Dolichodorus улиткоподобные нематоды, Helicotylenchus dihystera, Helicotylenchus multicinctus и другие виды Helicotylenchus, Rotylenchus robustus и другие виды Rotylenchus; оболочковые нематоды, виды Hemicycliophora и виды Hemicriconemoides; виды Hirshmanniella; ланцетоподобные нематоды, Hoplolaimus columbus, Hoplolaimus galeatus и другие виды Hoplolaimus; нематоды ненастоящих корневых наростов, Nacobbus aberrans и другие виды Nacobbus; иглоподобные нематоды, Longidorus elongates и другие виды Longidorus; игольчатые нематоды, виды Paratylenchus; вредные нематоды, Pratylenchus brachyurus, Pratylenchus coffeae, Pratylenchus curvitatus, Pratylenchus goodeyi, Pratylencus neglectus, Pratylenchus penetrans, Pratylenchus scribneri, Pratylenchus vulnus, Pratylenchus zeae и другие виды Pratylenchus; Radinaphelenchus cocophilus и другие виды Radinaphelenchus; норовые нематоды, Radopholus similis и другие виды Radopholus; почковидные нематоды, Rotylenchulus reniformis и другие виды Rotylenchulus; виды Scutellonema; нематоды щетинистых корнеплодов, Trichodorus primitivus и другие Trichodorus виды; Paratrichodorus minor и другие виды Paratrichodorus; карликовые нематоды, Tylenchorhynchus claytoni, Tylenchorhynchus dubius и другие виды Tylenchorhynchus и виды Merlinius; цитрусовые нематоды, Tylenchulus semipenetrans и другие виды Tylenchulus; кинжальные нематоды, Xiphinema americanum, Xiphinema index, Xiphinema diversicaudatum и другие виды Xiphinema; и другие виды нематод, паразитирующих на растениях.

В равным образом предпочтительном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к способу борьбы с животными вредителями (насекомых, акарид или нематод), в котором животных вредителей (насекомых, акарид или нематод), их место обитания, места размножения, их местоположение или растения, подлежащие защите от нападения животных вредителей (насекомых, акарид или нематод), обрабатывают эффективным количеством смеси в соответствии с изобретением, содержащей штамм Paenibacillus, как определено выше и пестицид II.

Как правило, понятие «пестицидно эффективное количество» означает количество смесей или композиций, содержащих смеси согласно изобретению, необходимое для достижения видимого воздействия на рост, включая эффекты некроза, гибели, задержки, предотвращения и удаления, разрушения, или уничтожения иным образом уменьшения возникновения и активности целевого организма. Пестицидно эффективное количество может изменяться для различных смесей/композиций, используемых в изобретении. Пестицидно эффективное количество смесей/композиций будет также изменяться в зависимости от преобладающих условий, таких как необходимый пестицидный эффект и продолжительность, погодные условия, целевые виды, местоположение, способ применения и т.д.

Материал для размножения растений можно обрабатывать смесями и композициями согласно изобретению в профилактических целях, или же во время или перед посадкой или пересаживанием.

В частности, настоящее изобретение относится к способу защиты материала для размножения растений от животных вредителей, в котором материал для размножения растений обрабатывают эффективным количеством предлагаемой в изобретении смеси.

В равным образом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу защиты материала для размножения растений от вредных грибов, причем в котором материал для размножения растений обрабатывают эффективным количеством предлагаемой в изобретении смеси.

В равным образом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу улучшения жизнеспособности растения, в котором растения обрабатывают эффективным количеством предлагаемой в изобретении смеси.

Понятие «эффективное количество для жизнеспособности растения» означает количество смесей в соответствии с изобретением, которого достаточно для осуществления воздействия на жизнеспособность растения, как определено в данной заявке ниже. Более подробная информация относительно количеств, способов применения и пригодных соотношений, которые можно использовать, представлена ниже. В любом случае, специалист в данной области техники хорошо осведомлен, что такое количество может изменяться в широком диапазоне, и зависит от различных факторов, например, обработанного выращиваемого растения или материала и климатических условий.

Предпочтение отдают более жизнеспособным растениям, поскольку они среди других дают лучшие урожаи и/или лучшее качество растений или сельскохозяйственных культур, в частности лучшее качество собранных частей растений. Более жизнеспособные растения также обладают лучшей устойчивостью к биотическому и/или абиотическому стрессу. В свою очередь высокая устойчивостью к биотическим стрессам позволяет квалифицированному специалисту в данной области техники уменьшать количество применяемых пестицидов и, вследствие этого, замедлять развитие резистентности к соответствующим пестицидам.

Таким образом, задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы обеспечить пестицидную композицию, при помощи которой решаются изложенные выше проблемы и которая, в частности, сможет улучшить жизнеспособность растений, в особенности урожайность растений.

Термин «жизнестойкость растений» или «жизнеспособность растений» определяется как состояние растения и/или его продуктов, которое определяется несколькими аспектами отдельно или в комбинации друг с другом, такими как повышенная урожайность, сила растения, качество собранных частей растений и устойчивость к абиотическому и/или биотическому стрессу.

Следует подчеркнуть, что вышеуказанные эффекты смесей согласно изобретению, то есть увеличенная жизнеспособность растения, также присутствуют, если растение не подвергается биотическому стрессу и, в особенности, растение не находится под давлением вредителей.

Для обработки семян, например, в виде инокулянта и/или форм для нанесения на листья, является очевидным, что растение, страдающее от нападения грибов или насекомых, производит меньшее количество биомассы и это приводит к уменьшенной урожайности по сравнению с материалом для размножения растений, который подвергали лечебной или профилактической обработке по отношению к релевантному вредителю и который может расти без поражения, вызываемого биотическим стрессовым фактором. Тем не менее, способы в соответствии с изобретением обеспечивают увеличенную жизнеспособность растения даже при отсутствии какого-либо биотического стресса. Это означает, что положительные эффекты смесей согласно изобретению не могут быть объяснены только пестицидной активностью бактериальных штаммов компонента 1) и пестицида II, но дополнительно основываются на других профилях активности. Таким образом, применение смесей согласно изобретению также можно осуществлять при отсутствии давления вредителей.

Каждый из индикаторов состояния растений, перечисленных ниже, который выбран из групп, включающих урожайность, силу растений, качество и устойчивость растений к абиотическому и/или биотическому стрессу следует понимать как предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения или каждый сам по себе, или предпочтительно в сочетании друг с другом.

В соответствии с настоящим изобретением понятие «повышенная урожайность» растения означает, что выход продукта соответствующего растения увеличивается на измеряемое количество по сравнению с выходом такого же продукта растения, вырабатываемого в аналогичных условиях, но без применения смеси согласно изобретению.

Для обработки семян, например, в виде инокулянта и/или форм для нанесения на листья, повышенная урожайность среди прочего может характеризоваться следующими улучшенными свойствами растения: увеличенная масса растения; и/или повышенная высота растения; и/или увеличенная биомасса, такая как более высокий общий вес в сыром виде (СВ); и/или увеличенное количество цветков на растение; и/или более высокий урожай зерна и/или плодов; и/или больше отростков или боковых побегов (ветвей); и/или более крупные листья; и/или усиленный рост корней; и/или увеличенное содержание белка; и/или увеличенное содержание масла; и/или увеличенное содержание крахмала; и/или увеличенное содержание пигмента; и/или увеличенное содержание хлорофилла (содержание хлорофилла имеет положительную корреляцию со скоростью фотосинтеза растения и, соответственно, чем больше содержание хлорофилла, тем больше урожайность растения) и/или повышенное качество растения.

Под понятиями «зерно» и «плод» следует понимать как любой растительный продукт, который в дальнейшем используют после сбора урожая, например, фрукты в прямом значении, овощи, орехи, зерна, семена, древесину (например, в случае лесоводческих растений), цветы (например, в случае садоводческих растений, декоративных растений) и т.д., имеющий любую экономическую ценность, который вырабатывается растением.

В соответствии с настоящим изобретением, урожай увеличивается по меньшей мере на 4%. Как правило, увеличение урожая может быть еще выше, например, от 5 до 10%, более предпочтительно на от 10 до 20%, или даже на от 20 до 30%

В соответствии с настоящим изобретением урожай - при измерении в отсутствии давления вредителей - повышается по меньшей мере на 2%. В целом, повышение урожая может быть еще большим, например, вплоть от 4% до 5% или даже больше.

Другим индикатором состояния растения является сила растения. Сила растения проявляется в нескольких аспектах, таких как общий внешний вид.

Для применений на листьях улучшенная сила растения может характеризоваться, в частности, следующими улучшенными свойствами растения: улучшенная жизнестойкость растения; и/или улучшенный рост растения; и/или улучшенное развитие растения; и/или улучшенный внешний вид; и/или улучшенное стояние растения (меньшее опадение/полегание растения и/или большая листовая пластинка; и/или больший размер; и/или повышенная высота растения; и/или увеличенное количество отростков; и/или увеличенное количество боковых побегов; и/или увеличенное количество цветков на растение; и/или увеличенный рост корней; и/или усиленная фотосинтетическая активность (например, исходя из повышенной устьичной проводимости и/или увеличенной скорости усвоения СО₂)); и/или ранее цветение; и/или более раннее плодоношение; и/или более раннее созревание зерна; и/или меньше непродуктивных отростков; и/или меньше погибших базальных листьев; и/или меньше необходимых расходов (таких как удобрения или вода); и/или более зеленые листья; и/или полное созревание за более короткий вегетационный период; и/или легкий сбор урожая; и/или более быстрое и более однородное созревание; и/или более длительный срок хранения; и/или более длинные метелки; и/или замедление старения; и/или более сильные и/или более продуктивные отростки; и/или лучшая возможность экстракции ингредиентов; и/или улучшенное качество семян (возможность посевов в последующие времена года для получения семян); и/или уменьшенная выработка этилена и/или ингибирование его рецепции растением.

Другим индикатором состояния растения является «качество» растения и/или его продуктов. В соответствии с настоящим изобретением улучшенное качество означает, что некоторые характеристики растения, такие как содержание или состав определенных ингредиентов увеличены или улучшены на измеряемое или заметное количество по сравнению с тем же фактором растения, продуцируемым при одинаковых условиях, но без применения смесей согласно настоящему изобретению. Улучшенное качество может характеризоваться, в частности, следующими свойствами растения или его продукта: повышенное содержание питательных веществ; и/или повышенное содержание белка; и/или повышенное содержание масла; и/или повышенное содержание крахмала; и/или повышенное содержание жирных кислот; и/или повышенное содержание метаболитов; и/или повышенное содержание каротиноидов; и/или повышенное содержание сахара; и/или повышенное количество незаменимых аминокислот; и/или улучшенный состав питательных веществ; и/или улучшенный состав белков; и/или улучшенный состав жирных кислот; и/или улучшенный состав метаболитов; и/или улучшенный состав каротиноидов; и/или улучшенный состав сахаров; и/или улучшенный состав аминокислот; и/или улучшенный или оптимальный цвет плодов; и/или улучшенный цвет листьев; и/или повышенная способность к хранению; и/или улучшенная обрабатываемость собранных продуктов.

Другим индикатором состояния растения является толерантность или резистентность растения к биотическим и/или абиотическим стрессовым факторам. Биотический и абиотический стресс, в особенности в течение длительного времени, может оказывать неблагоприятное воздействие на растения.

Биотический стресс вызывается живыми организмами, в то время как абиотический стресс вызывается, например, экстремальными условиями окружающей среды. В соответствии с настоящим изобретением «усиленная устойчивость или резистентность к биотическим и/или абиотическим стрессовым факторам» обозначает (1.) что определенные отрицательные факторы, вызываемые биотическим и/или абиотическим стрессом, уменьшаются на измеряемое или заметное количество по сравнению с растениями, которые подвергались тем же условиям, но без обработки смесью в соответствии с изобретением и (2.) что отрицательные воздействия не уменьшаются путем прямого действия смеси согласно изобретению на стрессовые факторы, например, путем ее фунгицидного или инсектицидного действия, которое непосредственно уничтожает микроорганизмы или вредителей, но скорее путем стимулирования собственных защитных реакций растений на указанные стрессовые факторы.

Отрицательные факторы, вызываемые биотическим стрессом, таким как патогены и вредители, хорошо известны и вызываются живыми организмами, такими как конкурирующие растения (например, сорные травы), микроорганизмы (такие как фитопатогенные грибы и/или бактерии) и/или вирусы.

Отрицательные факторы, вызываемые абиотическим стрессом, также хорошо известны и часто могут наблюдаться в виде уменьшенной силы растения (см. выше), например:

меньшей урожайности и/или меньшей силы, для обоих эффектов примерами среди прочих могут являться, обожженные листья, меньшее количество цветов, преждевременное созревание, позднее созревание урожая, уменьшенная пищевая ценность.

Абиотический стресс может быть вызван, например: экстремальными температурами, такими как жара или холод (тепловой стресс/холодовый стресс); и/или сильными перепадами температур; и/или температурами, необычными для определенного сезона; и/или засухой (стресс, вызванный засухой); и/или экстремальной влажностью; и/или высокой засоленностью (солевой стресс); и/или облучением (например, повышенным УФ облучением следствие снижения озонового слоя); и/или повышенными уровнями озона (озоновый стресс); и/или органическим загрязнением (например, фитотоксическими количествами пестицидов); и/или неорганическим загрязнением (например, загрязнениями тяжелыми металлами).

В результате действия биотических и/или абиотических стрессовых факторов, снижается количество и качество растений, подвергнутых стрессу. Что касается качества (как определено выше), то репродуктивное развитие, как правило, сильно поражается с последствиями для культурных растений, которые важны для цветов или семян. Синтез, накопление и хранение белков главным образом повреждается вследствие действия температур; рост замедляется почти при всех типах стрессов; синтез полисахаридов, как структурный, так и хранение, замедляется или модифицируется: эти эффекты приводят к снижению биомассы (урожаю) и к изменениям пищевой ценности продукта.

Как было отмечено выше, установленные выше индикаторы для состояния жизнеспособности растения могут быть взаимозависимыми, и могут быть следствием друг друга. Например, повышенная резистентность к биотическому и/или абиотическому стрессу может приводить к лучшей силе растения, например, к лучшим и большим сельскохозяйственным культурам и следовательно, к повышенному урожаю. И наоборот, более развитая корневая система может приводить к увеличенной резистентности к биотическому и/или абиотическому стрессу. Тем не менее, эти взаимозависимости и взаимодействия являются ни хорошо известными, ни полностью изученными и поэтому различные индикаторы описаны раздельно.

В одном варианте осуществления смеси согласно изобретению обеспечивают повышенную урожайность растения или его продукта. В другом варианте осуществления смеси согласно изобретению обеспечивают повышенную силу растения или его продукта. В другом варианте осуществления смеси согласно изобретению обеспечивают повышенное качество растения или его продукта. В еще одном варианте осуществления смеси согласно изобретению обеспечивают повышенную устойчивость и/или резистентность растения или его продукта к биотическому стрессу. В еще другом варианте осуществления смеси согласно изобретению обеспечивают повышенную устойчивость и/или резистентность растения или его продукта к абиотическому стрессу.

Изобретение также относится к агрохимическим композициям, содержащим вспомогательное средство и по меньшей мере один штамм Paenibacillus, определенный в настоящей заявке, или его бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит, и по меньшей мере один пестицид II в соответствии с изобретением.

Агрохимическая композиция содержит фунгицидно или инсектицидно эффективное количество по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в настоящей заявке, или его бесклеточного экстракта или по меньшей мере одного его метаболита и по меньшей мере один пестицид II. Понятие «эффективное количество» означает количество композиции или по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в настоящей заявке, или его бесклеточного экстракта или по меньшей мере одного его метаболита, и по меньшей мере одного пестицида II, которого достаточно для стимулирования жизнеспособности растений, борьбы с вредными грибами или животными вредителями на культурных растениях или для защиты материалов и, которое не приводит к существенному повреждению подлежащих обработке растений или материалов. Такое количество может изменяться в широком диапазоне и зависит от различных факторов, таких как виды грибов или вредителей, подлежащие уничтожению, обрабатываемые растения или материалы, климатические условия.

По меньшей мере один штамм Paenibacillus, определенный в настоящей заявке, или его бесклеточный экстракт или по меньшей мере один его метаболит, и по меньшей мере один пестицид II могут быть переведены в обычные типы агрохимических композиций, например, растворы, эмульсии, суспензии, тонкие порошки, порошки, пасты, гранулы, спрессованные продукты, капсулы и их смеси. Примерами типов композиций являются суспензии (например, SC, OD, FS), эмульгируемые концентраты (например, ЕС), эмульсии (например, EW, ЕО, ES, ME), капсулы (например, CS, ZC), пасты, пастилки, смачиваемые порошки или тонкие порошки (например, WP, SP, WS, DP, DS), спрессованные продукты (например, BR, ТВ, DT), гранулы (например, WG, SG, GR, FG, GG, МГ), инсектицидные изделия (например, LN), а также гелевые составы для обработки материала для размножения растений, такого как семена (например, GF). Эти и другие типы композиций определены в "Catalogue of pesticide formulation types and international coding system", Technical Monograph №2, 6^-e изд. май 2008, CropLife International.

Смеси согласно изобретению могут быть приготовлены в виде инокулянта для растения. Понятие «инокулянт» означает композицию, включающую выделенный штамм согласно изобретению и по выбору носитель, который может содержать биологически приемлемую среду.

Такие инокулянты и другие пригодные композиции могут быть приготовлены в виде композиций, содержащих кроме активных веществ по меньшей мере одно вспомогательное средство (инертное вещество) обычными способами (см. например, H.D. Burges: Formulation of Microbial Biopesticides, 30°C, 1998).

Для получения сухой композиции, бактериальные клетки, предпочтительно споры, можно суспендировать в пригодном сухом носителе (например, глине). Для получения жидкой композиции, клетки, предпочтительно споры, можно повторно суспендировать в приемлемом жидком носителе (например, на водной основе) до требуемой плотности спор. Плотность спор, количество спор на мл быть определено путем выяснения количества колониеобразующих единиц (КОЕ) на агаровой среде, например, картофельном декстрозном агаре после инкубации в течение нескольких дней при температуре от приблизительно 20 до приблизительно 30°С.

В соответствии с одним вариантом осуществления, отдельные компоненты композиции в соответствии с изобретением, такие как части набора или части бинарной или трехкомпонентной смеси могут быть смешаны самим пользователем в баке для опрыскивания или в любом другом виде сосуда, используемого для нанесений (например, барабаны для протравливания семян, оборудование для гранулирования семян, ранцевый опрыскиватель) и при необходимости могут быть добавлены другие вспомогательные вещества. Если живые микроорганизмы, такие как штаммы Paenibacillus согласно изобретению, являются частью такого набора, то следует принимать во внимание, что выбор и количество других частей набора (например, химических пестицидных средств) и других вспомогательных веществ не должны влиять на жизнеспособность микробных пестицидов в композиции, смешанной пользователем. Особенно для бактерицидов и растворителей необходимо учитывать совместимость с соответствующим микробным пестицидом.

Штаммы Paenibacillus, определенные в настоящей заявке, цельные культуральные бульоны, бесклеточные экстракты, культуральные среды и/или фузарицидины формулы I, вместе с по меньшей мере одним пестицидом могут быть переведены в обычные типы агрохимических композиций, например, растворы, эмульсии, суспензии, тонкие порошки, порошки, пасты, гранулы, спрессованные продукты, капсулы и их смеси. Примерами типов композиций являются суспензии (например, SC, OD, FS), эмульгируемые концентраты (например, ЕС), эмульсии (например, EW, ЕО, ES, ME), капсулы (например, CS, ZC), пасты, пастилки, смачиваемые порошки или тонкие порошки (например, WP, SP, WS, DP, DS), спрессованные продукты (например, BR, ТВ, DT), гранулы (например, WG, SG, GR, FG, GG, МГ), инсектицидные изделия (например, LN), а также гелевые составы для обработки материала для размножения растений, такого как семена (например, GF). Эти и другие типы композиций определены в «Catalogue of pesticide formulation types and international coding system», Technical Monograph №2, 6^-е изд. май 2008, CropLife International.

Композиции получают известным образом, как описано у Mollet and Grubemann, Formulation technology, Wiley VCH, Weinheim, 2001; или Knowles, New developments in crop protection product formulation, Agrow Reports DS243, T&F Informa, London, 2005.

Пригодными вспомогательными веществами являются растворители, жидкие носители, твердые носители или наполнители, поверхностно-активные вещества, диспергаторы, эмульгаторы, смачивающие агенты, адъюванты, солюбилизаторы, вещества, способствующие проникновению, защитные коллоиды, вещества улучшающие адгезию, загустители, увлажнители, репелленты, аттрактанты, стимуляторы поедания, улучшающие совместимость агенты, бактерициды, антифризы, антивспениватели, красители, вещества для повышения клейкости и связующие вещества.

Пригодными растворителями и жидкими носителями являются вода и органические растворители, такие как фракции минеральных масел от средней до высокой точек кипения, такие как керосин, дизельное масло; масла растительного или животного происхождения, алифатические, циклические или ароматические углеводороды, например, толуол, парафин, тетрагидронафталин, алкилированные нафталины; спирты, например, этанол, пропанол, бутанол, бензиловый спирт, циклогексанол; гликоли; ДМСО; кетоны, например, циклогексанон; сложные эфиры, например, лактаты, карбонаты, сложные эфиры жирной кислоты, гамма-бутиролактон; жирные кислоты; фосфонаты; амины; амиды, например, N-метилпирролидон, диметиламиды жирных кислот; и их смеси.

Пригодные твердые носители или наполнители представляют собой минеральные земли, например, силикаты, силикагели, тальк, каолины, известняк, известь, мел, болюс, лесс, глины, доломит, диатомовую землю, бентонит, сульфат кальция, сульфат магния, оксид магния; полисахаридные порошки, например, целлюлозу, крахмал; удобрения, например, сульфат аммония, фосфат аммония, нитрат аммония, мочевины; продукты растительного происхождения, такие как мука зерновых культур, мука древесной коры, древесная мука, мука ореховой скорлупы и их смеси.

Пригодными поверхностно-активными веществами являются поверхностно-активные соединения, такие как анионные, катионные, неионогенные и амфотерные поверхностно-активные вещества, блок-полимеры, полиэлектролиты и их смеси. Такие поверхностно-активные вещества можно применять в качестве эмульгатора, диспергатора, солюбилизатора, смачивающего агента, вещества, способствующего проникновению, защитного коллоида или адъюванта. Примеры поверхностно-активных веществ приведены в McCutcheon's, том 1: Emulsifiers & Detergents, McCutcheon's Directories, Glen Rock, USA, 2008 (Международное изд. или Североамериканское изд.).

Пригодными анионными поверхностно-активными веществами являются щелочные, щелочноземельные или аммониевые соли сульфонатов, сульфатов, фосфатов, карбоксилатов и их смеси. Примерами сульфонатов являются алкиларилсульфонаты, дифенилсульфонаты, альфа-олефиновые сульфонаты, лигнинсульфонаты, сульфонаты кислот жирного ряда и масел, сульфонаты этоксилированных алкилфенолов, сульфонаты алкоксилированных арилфенолов, сульфонаты конденсированных нафталинов, сульфонаты додецил- и тридецилбензолов, сульфонаты нафталинов и алкилнафталинов, сульфосукцинаты или сульфосукцинаматы. Примерами сульфатов являются сульфаты жирных кислот и масел, этоксилированных алкилфенолов, спиртов, этоксилированных спиртов или сложных эфиров жирных кислот. Примерами фосфатов являются сложные эфиры фосфатов. Примерами карбоксилатов являются алкилкарбоксилаты и карбоксилированные этоксилаты спирта или алкилфенола.

Пригодными неионогенными поверхностно-активными веществами являются алкоксилаты, N-замещенные амиды кислот жирного ряда, аминоксиды, сложные эфиры, поверхностно-активные вещества на основе сахара, полимерные поверхностно-активные вещества и их смеси. Примерами алкоксилатов являются соединения, такие как спирты, алкилфенолы, амины, амиды, арилфенолы, жирные кислоты или эфиры жирных кислот, которые были алкоксилированы посредством от 1 до 50 эквивалентов. Для алкоксилирования может использоваться этиленоксид и/или пропиленоксид, предпочтительно этиленоксид. Примерами N-замещенных амидов кислот жирного ряда являются глюкамиды кислот жирного ряда или алканоламиды кислот жирного ряда. Примерами сложных эфиров являются эфиры кислот жирного ряда, сложные эфиры глицерина или моноглицериды. Примерами поверхностно-активных веществ на основе сахара являются сорбитаны, сложные эфиры сахарозы и глюкозы или алкилполиглюкозиды. Примеры полимерных поверхностно-активных веществ являются гомо- или сополимеры винилпирролидона, виниловые спирты или винилацетат.

Пригодными катионными поверхностно-активными веществами являются четвертичные поверхностно-активные вещества, например, четвертичные аммониевые соединения с одной или двумя гидрофобными группами или соли длинноцепочечных первичных аминов. Пригодными амфотерными поверхностно активными веществами являются алкилбетаины и имидазолины. Пригодными блок-полимерами являются блок-полимеры типа А-В или А-В-А, включающие блоки из полиэтиленоксида и полипропиленоксида или типа А-В-С, включающие алканол, полиэтиленоксид и полипропиленоксид.

Пригодными адъювантами являются соединения, которые сами по себе обладают весьма незначительной или даже не обладают пестицидной активностью, и которые улучшают биологическую эффективность целевых соединений I. Примерами являются поверхностно-активные вещества, минеральные или растительные масла и другие вспомогательные вещества. Дополнительные примеры приведены у Knowles, Adjuvants and additives, Agrow Reports DS256, T&F Informa UK, 2006, глава 5.

Пригодными загустителями являются полисахариды (например, ксантановая смола, карбоксиметилцеллюлоза), неорганические глины (органически модифицированные или немодифицированные), поликарбоксилаты и силикаты. Пригодными бактерицидами являются бронопол и производные изотиазолинона, такие как алкилизотиазолиноны и бензизотиазолиноны. Пригодными антифризами являются этиленгликоль, пропиленгликоль, мочевина и глицерин. Пригодными антивспенивателями являются силиконы, длинноцепочечные спирты и соли кислот жирного ряда. Пригодными красителями (например, красного, синего или зеленого цвета) являются пигменты с низкой растворимостью в воде и водорастворимые красители. Примерами являются неорганические красители (например, оксид железа, оксид титана, гексацианоферрат железа) и органические красители (например, ализариновые, азокрасители и фталоцианиновые красители). Пригодными веществами для повышения клейкости или связующими веществами являются поливинилпирролидоны, поливинилацетаты, поливиниловые спирты, полиакрилаты, биологические или синтетические воски и простые эфиры целлюлозы.

Если живые микроорганизмы, такие как бактериальные штаммы рода Paenibacillus в виде клеток или спор, являются частью композиций, то такие композиции могут быть получены в виде композиций, содержащих помимо активных веществ по меньшей мере одно вспомогательное средство (инертное вещество) обычными способами (см. например, H.D. Burges: Formulation of Microbial Biopesticides, Springer, 1998). Пригодными обычными типами таких композиций являются суспензии, тонкие порошки, порошки, пасты, гранулы, спрессованные продукты, капсулы и их смеси. Примерами типов композиций являются суспензии (например, SC, OD, FS), капсулы (например, CS, ZC), пасты, пастилки, смачиваемые порошки или тонкие порошки (например, WP, SP, WS, DP, DS), спрессованные продукты (е. g. BR, ТВ, DT), гранулы (например, WG, SG, GR, FG, GG, МГ), инсектицидные изделия (например, LN), а также гелевые составы для обработки материала для размножения растений, такого как семена (например, GF). В данном случае, необходимо учитывать, что каждый тип состава или выбор вспомогательного средства не должны влиять на жизнеспособность микроорганизма во время хранения композиции и когда его в конечном итоге наносят на почву, растение или материал для размножения растений. Пригодные составы указаны, например, в WO 2008/002371, US 6,955,912, US 5,422,107.

Примерами приемлемых вспомогательных средств являются упомянутые ранее в настоящей заявке, при этом следует позаботиться о том, чтобы выбор и количество таких вспомогательных средств не оказывали влияния на жизнеспособность микробных пестицидов в композиции. Особенно для бактерицидов и растворителей, должна быть принята во внимание совместимость с соответствующим микроорганизмом соответствующего микробного пестицида. Кроме того, композиции с микробными пестицидами могут дополнительно содержать стабилизаторы или питательные вещества и УФ протекторы. Пригодные стабилизаторы или питательные вещества представляют собой, например, альфа-токоферол, трегалозу, глутамат, сорбат калия, различные сахара, такие как глюкоза, сахароза, лактоза, мальтодекстрин (H.D. Burges: Formulation of Microbial Biopesticides, Springer, 1998). Пригодные УФ протекторы представляют собой например, неорганические соединения, такие как титан диоксида, оксид цинка и пигменты оксида железа или органические соединения, такие как бензофеноны, бензотриазолы, фенилтриазины. В дополнение к вспомогательных средствам, указанным для композиций в настоящей заявке композиции по выбору могут содержать 0.1-80% стабилизаторов или питательных веществ и 0,1-10% УФ протекторов.

Как правило, агрохимические композиции содержат от 0,01 до 95 мас. %, предпочтительно от 0,1 до 90 мас. %, и в частности от 0,5 до 75 мас. % активного вещества. Активные вещества применяют с чистотой от 90% до 100%, предпочтительно от 95% до 100% (по спектру ЯМР).

Примерами типов композиций и их получения являются:

I) Водорастворимые концентраты (SL, LS)

10-60 мас. % смеси в соответствии с изобретением и 5-15 мас. % смачивающего агента (например, алкоксилатов спиртов) растворяют в воде и/или водорастворимом растворителе (например, спиртах) до 100 мас. %. При разбавлении в воде активное вещество растворяется.

II) Диспергируемые концентраты (DC)

5-25 мас. % смеси в соответствии с изобретением и 1-10 мас. % диспергатора (например, поливинилпирролидона) растворяют в органическом растворителе (например, циклогексаноне) до 100 мас. %. При разбавлении с водой образуется дисперсия.

III) Эмульгируемые концентраты (ЕС)

15-70 мас. % смеси в соответствии с изобретением и 5-10 мас. % эмульгаторов (например, додецилбензолсульфонат кальция и этоксилат касторового масла) растворяют в нерастворимом в воде органическом растворителе (например, ароматический углеводород) до 100 мас. %. При разбавлении с водой образуется эмульсия.

IV) Эмульсии (EW, ЕО, ES)

5-40 мас. % смеси в соответствии с изобретением и 1-10 мас. % эмульгаторов (например, додецилбензолсульфонат кальция и этоксилат касторового масла) растворяют в 20-40 мас. % нерастворимого в воде органического растворителя (например, ароматический углеводород). Эту смесь вводят в воду до 100 мас. % с помощью эмульгирующего устройства и доводят до гомогенной эмульсии. При разбавлении с водой образуется эмульсия.

V) Суспензии (SC, OD, FS)

В шаровой мельнице с мешалкой измельчают до тонкой суспензии активного вещества 20-60 мас. % смеси в соответствии с изобретением с добавлением 2-10 мас. % диспергаторов и смачивающих агентов (например, лигносульфоната натрия и этоксилата спирта), 0,1-2 мас. % загустителя (например, ксантановая смола) и воды до 100 мас. %. При разбавлении с водой образуется стабильная суспензия активного вещества. Для композиции типа FS добавляют до 40 мас. % связывающего вещества (например, поливиниловый спирт).

VI) Диспергируемые в воде и водорастворимые гранулы (WG, SG)

50-80 мас. % смеси в соответствии с изобретением тонко измельчают при добавлении диспергаторов и смачивающих агентов (например, лигносульфоната натрия и этоксилата спирта) до 100 мас. % и посредством технических устройств (например, экструзионного устройства, распылительной башни, псевдоожиженного слоя) получают диспергируемые в воде или водорастворимые гранулы. При разбавлении с водой образуется стабильная дисперсия или раствор активного вещества.

VII) Диспергируемые в воде и водорастворимые порошки (WP, SP, WS)

50-80 мас. % смеси в соответствии с изобретением перемалывают в роторно-статорной мельнице при добавлении 1-5 мас. % диспергаторов (например, лигносульфоната натрия), 1-3 мас. % смачивающих агентов (например, этоксилат спирта) и твердого носителя (например, силикагель) до 100 мас. %. При разбавлении с водой образуется стабильная дисперсия или раствор активного вещества.

VIII) Гель (GW, GF)

В шаровой мельнице с мешалкой измельчают до тонкой суспензии активного вещества 5-25 мас. % смеси в соответствии с изобретением при добавлении 3-10 мас. % диспергаторов (например, лигносульфоната натрия), 1-5 мас. % загустителя (например, карбоксиметилцеллюлозы) и воды до 100 мас. %. При разбавлении с водой образуется стабильная суспензия активного вещества.

IX) Микроэмульсия (ME)

5-20 мас. % смеси в соответствии с изобретением добавляют до 5-30 мас. % смеси органических растворителей (например, диметиламид жирной кислоты и циклогексанон), 10-25 мас. % смеси поверхностно-активных веществ (например, этоксилат спирта и этоксилат арилфенола), и воды до 100 мас. %. Эту смесь перемешивают в течение 1 ч., чтобы самопроизвольно получить термодинамически устойчивую микроэмульсию.

X) Микрокапсулы (CS)

Масляную фазу, содержащую 5-50 мас. % смеси в соответствии с изобретением, 0-40 мас. % нерастворимого в воде органического растворителя (например, ароматический углеводород), 2-15 мас. % акриловых мономеров (например, метилметакрилат, метакриловая кислота и ди- или триакрилат) диспергируют в водном растворе защитного коллоида (например, поливинилового спирта). Радикальная полимеризация, инициированная радикальным инициатором, приводит к образованию поли(мет)акрилатных микрокапсул.

Альтернативно, масляную фазу, содержащую 5-50 мас. % цельного культурального бульона, бесклеточного экстракта, культуральной среды или метаболита в соответствии с изобретением, 0-40 мас. % нерастворимого в воде органического растворителя (например, ароматический углеводород), и изоцианатный мономер (например, дифенилметан-4,4'-диизоцианат) диспергируют в водном растворе защитного коллоида (например, поливинилового спирта). Добавление полиамина (например, гексаметилендиамина) приводит к образованию полимочевинных микрокапсул. Количество мономеров до 1-10 мас. %. Мас. % относится к общей CS композиции.

XI) Тонкие порошки (DP, DS)

1-10 мас. % цельного культурального бульона, бесклеточного экстракта, культуральной среды или метаболита в соответствии с изобретением тонко измельчают и тщательно перемешивают с твердым носителем (например, тонкодисперсный каолин) до 100 мас. %.

XII) Гранулы (GR, FG)

0,5-30 мас. % цельного культурального бульона, бесклеточного экстракта, культуральной среды или метаболита в соответствии с изобретением тонко измельчают и связывают с твердым носителем (например, силикатом) до 100 мас. %. Грануляция достигается путем экструзии, распылительной сушки или псевдоожиженного слоя.

XIII) Жидкости ультранизкого объема (UL)

1-50 мас. % цельного культурального бульона, бесклеточного экстракта, культуральной среды или метаболита в соответствии с изобретением растворяют в органическом растворителе (например, ароматическом углеводороде) до 100 мас. %.

Типы композиций от I) до XIII) при необходимости могут содержать другие вспомогательные вещества, такие как 0,1-1 мас. % бактерицидов, 5-15 мас. % антифризов, 0,1-1 мас. % антивспенивателей и 0,1-1 мас. % красителей.

Для обработки материалов для размножения растений, в особенности семян, обычно применяют растворы для обработки семян (LS), суспоэмульсии (SE), текучие концентраты (FS), порошки для сухой обработки (DS), диспергируемые в воде порошки для суспензионной обработки (WS), водорастворимые порошки (SS), эмульсии (ES), эмульгируемые концентраты (ЕС) и гели (GF).

Предпочтительные примеры типов составов для обработки семян или нанесения на почву для предварительно смешанных композиций представляют собой типы WS, LS, ES, FS, WG или CS.

Как правило, предварительно смешанный состав, используемый для обработки семян содержит от 0,5 до 99,9 процента, особенно от 1 до 95 процентов, целевых ингредиентов и от 99,5 до 0,1 процента, особенно от 99 до 5 процентов, твердого или жидкого адъюванта (в том числе, например, растворитель, такой как вода), где вспомогательные вещества могут быть поверхностно-активным веществом в количестве от 0 до 50%, особенно от 0,5 до 40%, в пересчете на предварительно смешанный состав. В то время как коммерческие продукты предпочтительно должны быть составлены в виде концентратов (например, предварительно смешанная композиция (состав)), конечный пользователь обычно будет использовать разбавленные составы (например, композицию для смеси в баке).

Способы обработки семян для нанесения или обработки штаммов, цельных культуральных бульонов, бесклеточных экстрактов, культуральных сред, фузарицидинов формулы I и соответственно композиций в соответствии с изобретением на материал для размножения растений, особенно семена, известны в данной области техники, и включают в себя способы протравливания, нанесения покрытия, пленочного покрытия, гранулирования и замачивания материала для размножения. Такие способы также применимы к комбинациям в соответствии с изобретением. В предпочтительном варианте осуществления, смеси и соответственно композиции согласно изобретению обрабатывают или наносят на материал для размножения растений таким способом, чтобы это не отразилось негативно на прорастании. Соответственно, примерами пригодных способов нанесения (или обработки) на материал для размножения растений, такой как семена, являются протравливание семян, покрытие семян или гранулирование семян и т.п.

Предпочтительно, если материал для размножения растений представляет собой семена, части семян (т.е. черенки) или семенную луковицу.

Хотя считается, что данный способ может быть применен к семенам в любом физиологическом состоянии, но предпочтительно, чтобы семена находились в достаточно стабильном состоянии и не повреждались во время процесса обработки. Как правило, семя должно быть семенем, которое было собрано с поля; извлечено из растения и отделено от початка, стебля, наружной шелухи и окружающих волокон или другого не семенного материала. Семена предпочтительно должны быть биологически стабильны в такой степени, чтобы обработка не вызвала никаких биологических повреждений семени. Считается, что обработка может быть применена к семенам в любое время в период от сбора семян и посева семян или во время высевания (применение, направленное на семена). Семена также могут быть внесены в грунт или до, или после обработки.

Во время обработки материала для размножения предпочтительным является равномерное распределение ингредиентов в смесях и соответственно композициях согласно изобретению, и их прилипание к семенам. Обработка может варьироваться от покрытия тонкой пленкой (протравливания) состава, содержащего комбинацию, например, смеси активного вещества (веществ) на материал для размножения растений, такой как семена, где первоначальный размер и/или форма различимы в промежуточном состоянии (например, покрытие), а затем до покрытия более толстой пленкой (например, гранулирование с большим количеством слоев различных веществ (таких как носители, например, глины, различные составы, такие как другие активные ингредиенты, полимеры, и красители), где первоначальная форма и/или размер семени больше не узнаваемы.

Один аспект настоящего изобретения включает в себя применение смеси и соответственно композиции согласно изобретению, целенаправленно на материал для размножения растений, включая нанесение ингредиентов в комбинации на весь материал для размножения растений или только на его части, в том числе только на одну сторону или часть одной стороны. Специалисту в данной области техники стандартного уровня подготовки известны эти способы применения из описания, представленного в ЕР 954213 В1 и WO 06/112700.

Штаммы, цельные культуральные бульоны, бесклеточные экстракты, культуральные среды, фузарицидины формулы I и соответственно композиции согласно изобретению можно также применять в виде «таблеток» или «пеллет», или в пригодном субстрате, путем помещения, посева обработанной таблетки или субстрата рядом с материалом для размножения растений. Такие методики известны в данной области техники, в частности, из ЕР 1124414, WO 07/67042, и WO 07/67044. Применение штаммов, цельных культуральных бульонов, бесклеточных экстрактов, культуральных сред, фузарицидинов формулы I и соответственно композиций, описанных в настоящей заявке на материал для размножения растений, также включает в себя защиту материала для размножения растений, обработанного комбинацией в соответствии с настоящим изобретением, путем помещения одного или большего количества частиц, содержащих пестицид рядом с посевным материалом, обработанным пестицидами, причем количество пестицида является таким, что обработанный пестицидом посевной материал и содержащие пестицид частицы вместе содержат эффективную дозу пестицида и доза пестицида, содержащаяся в обработанном пестицидом посевном материале является меньше или равна максимальной нефитотоксической дозе пестицида. Такие методики известны из уровня техники, в частности из заявки WO 2005/120226.

Применение штаммов, цельных культуральных бульонов, бесклеточных экстрактов, культуральных сред, фузарицидинов формулы I и соответственно композиций согласно изобретению на семена также включает в себя покрытия семян составом с контролируемым высвобождением, причем ингредиенты комбинаций включены в материалы, которые высвобождают ингредиенты с течением времени. Примеры технологий обработки семян покрытиями с контролируемым высвобождением, как правило, известны из уровня техники и включают в себя полимерные пленки, воски или другие покрытия семян, причем ингредиенты могут быть включены в материал с контролируемым высвобождением или нанесены между слоями материалов, или и то и другое вместе.

Семена можно обрабатывать путем нанесения на них смеси и соответственно композиции согласно изобретению в любой желаемой последовательности или одновременно.

Обработку семян осуществляют на незасеянных семенах, и понятие «незасеянные семена» означает внесение семян в любой период между урожаем семян и посевом семян в почву с целью прорастания и роста растения.

Обработка незасеянных семян не подразумевает включение тех методов, в которых активное вещество вносят в почву или заменители почвы, но включает любой метод внесения, который был бы нацелен на семена в процессе посадки.

Предпочтительно обработку осуществляют до посева семян, так чтобы посеянные семена предварительно были обработаны комбинацией. В частности, при обработке смесями и соответственно композициями в соответствии с изобретением, предпочтение отдают покрытию семян или дражированию семян. В результате обработки ингредиенты прилипают к семени и таким образом доступны для борьбы с вредителями.

Обработанные семена можно хранить, транспортировать, высевать и культивировать таким же образом, как и любые семена, обработанные другими активными веществами.

В частности, настоящее изобретение относится к способу защиты материала для размножения растений от животных вредителей, вредных грибов и/или улучшения жизнеспособности растений, которые вырастают из указанного материала для размножения растений, в котором почву, в которую высевают материал для размножения растений, обрабатывают эффективным количеством смеси или соответственно композиции в соответствии с изобретением.

Как правило, пользователь применяет композиции в соответствии с изобретением из устройства предварительного дозирования, ранцевого опрыскивателя, бака для опрыскивания, самолета для опрыскивания или оросительной системы. Обычно агрохимическую композицию разбавляют водой, буфером и/или другими вспомогательными средствами до желаемой концентрации применения, и таким образом получают готовую к применению жидкость для опрыскивания или агрохимическую композицию в соответствии с изобретением. Обычно применяют от 20 до 2000 литров, предпочтительно от 50 до 400 литров готовой к применению жидкости для опрыскивания на гектар сельскохозяйственных угодий.

Когда дело доходит до обработки материала для размножения растений, в особенности семян, то композиции, описанные в настоящей заявке, после от двух- до десятикратного разбавления, дают концентрации активного вещества от 0,01 to 60 мас. %, предпочтительно от 0,1 до 40 мас. %, в готовых к применению препаратах. Применение можно осуществлять как перед, так и во время посева. Способы применения штамма, бесклеточного экстракта, культуральной среды, метаболита или соответственно композиции в соответствии с изобретением на материал для размножения растений, в особенности семена, включают протравливание, покрытие, дражирование, опудривание, пропитывание и способы бороздового внесения материала для размножения. Предпочтительно, штаммы, цельные культуральные бульоны, бесклеточные экстракты, культуральные среды, фузарицидины формулы I или соответственно композиции согласно изобретению применяют на материал для размножения растений таким образом, что не вызывается прорастание семян, например, протравливание семян, дражирование, покрытие и опудривание.

При применении бактериальных штаммов для защиты растений, причем штаммы применяют в виде обработки листьев или почвы, нормы расхода обычно варьируются приблизительно от 1×10⁶ до 5×10¹⁶ (или более) КОЕ/га, предпочтительно приблизительно от 1×10⁷ до приблизительно 1×10¹⁶ КОЕ/га, еще более предпочтительно от 1×10¹² до 5×10¹⁵ КОЕ/га.

Если штаммы согласно изобретению применяют для обработки семян, то нормы расхода по отношению к материалу для размножения растений обычно варьируется приблизительно от 1×10¹ до 1×10¹² (или более) КОЕ/семена, предпочтительно приблизительно от 1×10³ до приблизительно 1×10¹⁰ КОЕ/семена, и еще более предпочтительно приблизительно от 1×10³ до приблизительно 1×10⁶ КОЕ/семена. Альтернативно, нормы применения по отношению к материалу для размножения растений предпочтительно варьируются приблизительно от 1×10⁷ до 1×10¹⁶ (или более) КОЕ на 100 кг семян, предпочтительно от 1×10⁹ до приблизительно 1×10¹⁵ КОЕ per 100 кг семян, еще более предпочтительно от 1×10¹¹ до приблизительно 1×10¹⁵ КОЕ на 100 кг семян.

Если применяют бесклеточные экстракты, культуральные среды и/или метаболиты, такие как фузарицидины формулы I, твердое вещество (сухое вещество) рассматривают в качестве активных компонентов, например, которые должны быть получены после высушивания или выпаривания экстракционной среды или суспензионной среды в случае жидких составов. При использовании в защите растений количество применяемых активных компонентов зависит от желаемого эффекта и составляет от 0.001 до 2 кг на га, предпочтительно от 0.005 до 2 кг на га, более предпочтительно от 0.05 до 0.9 кг на га, и в частности от 0.1 до 0.75 кг на га. При обработке материалов для размножения растений, таких как семена, например, опудриванием, покрытием или пропитывания семян, как правило, требуемые количества активных компонентов составляют от 0.1 до 1000 г, предпочтительно от 1 до 1000 г, более предпочтительно от 1 до 100 г и наиболее предпочтительно от 5 до 100 г, на 100 килограмм материала для размножения растений (предпочтительно семян). При использовании в защите материалов или хранящихся продуктов количество применяемых активных компонентов зависит от типа области применения и желаемого эффекта. Обычно применяемые количества при защите материалов составляют от 0.001 г до 2 кг, предпочтительно 0.005 г до 1 кг активных компонентов на кубический метр обрабатываемого материала.

В соответствии с одним вариантом осуществления, отдельные компоненты композиции в соответствии с изобретением, такие как части набора или части бинарной или трехкомпонентной смеси могут быть смешаны самим пользователем в баке для опрыскивания или в любом другом виде сосуда, используемого для нанесений (например, барабаны для протравливания семян, оборудование для гранулирования семян, ранцевый опрыскиватель) и при необходимости могут быть добавлены другие вспомогательные вещества.

Если живые микроорганизмы, такие как бактериальные штаммы Paenibacillus являются частью такого набора, то следует принимать во внимание, что выбор и количество компонентов (например, химических пестицидных средств) и других вспомогательных веществ не должны влиять на жизнеспособность микробных пестицидов в композиции, смешанной пользователем. Особенно для бактерицидов и растворителей необходимо учитывать совместимость с соответствующим микробным пестицидом

Следовательно, один вариант осуществления изобретения представляет собой набор для получения пригодной пестицидной композиции, набор, содержащий а) композицию, которая содержит компонент 1), как определено в настоящей заявке и по меньшей мере одно вспомогательное средство; и б) композицию, которая содержит компонент 2), как определено в настоящей заявке и по меньшей мере одно вспомогательное средство; и по выбору в) композицию, которая содержит по меньшей мере одно вспомогательное средство и по выбору другой активный компонент 3), как определено в настоящей заявке.

К штаммам, бесклеточным экстрактам, культуральным средам, метаболитам, фузарицидинам формулы I и соответственно композиции согласно изобретению можно добавлять различные типы масел, смачивающие агенты, добавки, удобрения или питательные микроэлементы, и другие пестициды (например, гербициды, инсектициды, фунгициды, регуляторы роста, сафенеры, биопестициды), в виде премикса или при необходимости только непосредственно перед применением (смесь в баке). Такие агенты можно смешивать с композициями в соответствии с изобретением в весовом соотношении от 1:100 до 100:1, предпочтительно от 1:10 до 10:1. Предпочтительно, композиция в соответствии с изобретением содержит дополнительный биопестицид. Еще более предпочтительно, композиция в соответствии с изобретением содержит помимо вспомогательного средства и по меньшей мере одного из фузарицидинов формулы I, микробный пестицид.

Как правило, пестицид представляет собой химическое или биологическое средство (вирус, бактерия, антимикробное или дезинфицирующее средство), которое вследствие его воздействия отпугивает, делает недееспособным, убивает или по-иному обезвреживает вредителей. К целевым вредителям относят насекомых, патогенов растений, сорные травы, моллюсков, птиц, млекопитающих, рыбу, нематод (круглые черви) и микробов, которые уничтожают имущество, причиняют неудобства, распространяют заболевания или являются переносчиками заболевания. Термин «пестициды» также охватывает регуляторы роста растений, которые изменяют ожидаемый рост, цветение или скорость воспроизведения растений; дефолианты, которые вызывают опадание листьев или другой листвы в растения, как правило, чтобы облегчить сбор урожая; десиканты, которые ускоряют высушивание живых тканей, таких как нежелательные верхушки растений; активаторы растений, активирующие физиологию растений для защиты от некоторых вредителей; сафенеры, которые снижают нежелательное гербицидное воздействие пестицидов на сельскохозяйственные культуры; и стимуляторы роста растений, влияющие на физиологию растений, чтобы увеличить рост растений, биомассу, урожай или любой другой параметр качества продуктов сельскохозяйственных растений, пригодных для сбора.

Путем применения по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше, или культуральной среды или его бесклеточного экстракта или по меньшей мере одного его метаболита совместно с по меньшей мере одним пестицидом II из групп А) - N) может быть получен синергетический эффект, т.е. получают более чем простое сложение отдельных эффектов (синергетические смеси).

В соответствии с одним вариантом осуществления, смеси содержат компонент 1) и компонент 2) в синергетически эффективном количестве.

Понятие «синергетический эффект» следует понимать как в частности относящееся к понятию, определенному формулой Колби (Colby, S.R., "Calculating synergistic and antagonistic responses of herbicide combinations", Weeds, 15, cc. 20-22, 1967).

Понятие "синергетический эффект" также следует понимать как в частности относящееся к понятию, определенному применением способа Таммеса, (Tammes, P. М. L., "Isoboles, a graphic representation of synergism in pesticides", Netherl. J. Plant Pathol. 70, 1964).

Этого можно достичь путем применения по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше, или культуральной среды или его бесклеточного экстракта или по меньшей мере одного его метаболита и по меньшей мере одного пестицида II одновременно, или совместно (например, как смесь в баке) или отдельно, или по очереди, причем временной интервал между отдельными применениями выбирают так, чтобы гарантировать, что активное вещество, применяемое первым, все еще находится в месте действия в достаточном количестве во время применения другого активного вещества (веществ). Последовательность применения не является определяющей для действия настоящего изобретения.

При применении штамма Paenibacillus, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше, или культуральной среды или его бесклеточного экстракта или его метаболита и пестицида II последовательно временной интервал между обоими применениями может колебаться, например, от 2 часов до 7 дней. Также возможен более широкий диапазон в пределах от 0,25 часа до 30 дней, предпочтительно от 0,5 часа до 14 дней, особенно от 1 часа до 7 дней или от 1,5 часа до 5 дней, еще более предпочтительно от 2 часов до 1 дня. Предпочтительно, чтобы пестицид II применяли в качестве первой обработки.

Общие весовые соотношения композиций, содержащих по меньшей мере один микробный пестицид в виде жизнеспособных микробных клеток, включая спящие формы, можно определить, используя количество КОЕ соответствующего микроорганизма для вычисления общей массы соответствующего активного компонента при помощи следующего уравнения, когда 1×10¹⁰ КОЕ равно одному грамму общей массы соответствующего активного компонента. Колониеобразующая единица является мерой жизнеспособных микробных клеток, в частности, грибковых и бактериальных клеток.

В смесях и композициях в соответствии с изобретением весовое соотношение компонента 1) и компонента 2), как правило, зависит от свойств применяемых активных компонентов, обычно оно находится в пределах от 1:10,000 до 10,000:1, часто оно находится в пределах от 1:100 до 100:1, обычно в пределах от 1:50 до 50:1, предпочтительно в пределах от 1:20 до 20:1, более предпочтительно в пределах от 1:10 до 10:1, еще более предпочтительно в пределах от 1:4 до 4:1 ив частности в пределах от 1:2 до 2:1.

В соответствии с дополнительными вариантами осуществления смесей и композиций, весовое соотношение компонента 1) и компонента 2), как правило, находится в пределах от 1000:1 до 1:1, часто в пределах от 100:1 до 1:1, обычно в пределах от 50:1 до 1:1, предпочтительно в пределах от 20:1 до 1:1, более предпочтительно в пределах от 10:1 до 1:1, еще более предпочтительно в пределах от 4:1 до 1:1 ив частности в пределах от 2:1 до 1:1.

В соответствии с дополнительными вариантами осуществления смесей и композиций, весовое соотношение компонента 1) и компонента 2), как правило, находится в пределах от 20,000:1 до 1:10, часто в пределах от 10,000:1 до 1:1, обычно в пределах от 5,000:1 до 5:1, предпочтительно в пределах от 5,000:1 до 10:1, более предпочтительно в пределах от 2,000:1 до 30:1, еще более предпочтительно в пределах от 2,000:1 до 100:1 и в частности в пределах от 1,000:1 до 100:1.

В соответствии с дополнительными вариантами осуществления смесей и композиций, весовое соотношение компонента 1) и компонента 2), как правило, находится в пределах от 1:1 до 1:1000, часто в пределах от 1:1 до 1:100, обычно в пределах от 1:1 до 1:50, предпочтительно в пределах от 1:1 до 1:20, более предпочтительно в пределах от 1:1 до 1:10, еще более предпочтительно в пределах от 1:1 до 1:4 и в частности в пределах от 1:1 до 1:2.

В соответствии с дополнительными вариантами осуществления смесей и композиций, весовое соотношение компонента 1) и компонента 2), как правило, находится в пределах от 10:1 до 1:20,000, часто в пределах от 1:1 до 1:10,000, обычно в пределах от 1:5 до 1:5,000, предпочтительно в пределах от 1:10 до 1:5,000, более предпочтительно в пределах от 1:30 до 1:2,000, еще более предпочтительно в пределах от 1:100 до 1:2,000 и в частности в пределах от 1:100 до 1:1,000.

Смеси и их композиции в соответствии с изобретением, в форме применения в виде фунгицидов и/или инсектицидов, также могут присутствовать вместе с другими активными веществами, например, с гербицидами, инсектицидами, регуляторами роста, фунгицидами или же с удобрениями, в виде премикса или, при необходимости, непосредственно перед применением (смесь в баке).

Смешивание бинарных смесей согласно изобретению или содержащих их композиций с другими фунгицидами в большинстве случаев приводит к расширению фунгицидного спектра активности или к предотвращению развития устойчивости к фунгицидам. Кроме того, в некоторых случаях получают синергетические эффекты.

Смешивание бинарных смесей согласно изобретению или содержащих их композиций с инсектицидами в большинстве случаев приводит к расширению инсектицидного спектра активности или к предотвращению развития устойчивости к инсектицидам. Кроме того, в некоторых случаях получают синергетические эффекты.

В соответствии с настоящим изобретением может быть предпочтительным, что смеси и содержащие их композиции, содержат помимо по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, определенного в одном из предпочтительных вариантов осуществления выше, или культуральной среды или его бесклеточного экстракта или по меньшей мере одного его метаболита (компонент 1), и пестицида II (компонент 2), в качестве компонента 3) дополнительный пестицид, предпочтительно в синергетически эффективном количестве. Другой вариант осуществления относится к смесям, где компонент 3) представляет собой пестицид III, выбранный из групп SF) и SI), которые определены ниже, при условии, что в каждой из этих трехкомпонентых смесей пестицид III отличается от выбранного пестицида. Эти трехкомпонентые смеси в особенности пригодны для обработки материалов для размножения растений (т.е. обработки семян).

Нижеследующий список пестицидов III, в сочетании с которыми можно использовать бинарные смеси в соответствии с изобретением, предназначен для иллюстрации возможных комбинаций, но не ограничивает их:

SF) Фунгициды

- ингибиторы комплекса III на Q_o сайте, выбранные из: пираклостробин, азоксистробин, пикоксистробин, трифлоксистробин, димоксистробин, энестробурин, фенаминстробин, флуоксастробин, крезоксимметил, мандестробине, метоминостробин, оризастробин, пираметостробин, пираоксистробин;

- ингибиторы широкого спектра пиридина и пиразола комплекса II, выбранные из: флуксапироксад, боскалид, бензовиндифлупир, пенфлуфен, пентиопирад, седаксан, флуопирам, биксафен, изопиразам;

- специфические к базидиомицетам ингибиторы комплекса II, выбранные из: карбоксин, беноданил, фенфурам, флутоланил, фураметпир, мепронил, оксикарбоксин, тифлузамид;

ингибитор продуцирования АТФ силтиофам;

- фунгицидные соединения азола, выбранные из: ипконазол, дифеноконазол, протиоконазол, прохлораз, тритиконазол, флутриафол, ципроконазол, диниконазол, диниконазол-М, флуквинконазол, флузилазол, гексаконазол, имазалил, имибенконазол, метконазол, миклобутанил, симеконазол, тебуконазол, триадименол, униконазол, тиабендазол;

- специфические к оомицетам фунгициды, выбранные из: оксатиапипролин, валифеналат, металаксил, металаксил-М, этабоксам, диметоморф, зоксамид, флуморф, мандипропамид, пириморф, бентиаваликарб, ипроваликарб;

- ингибитор МАР/гистидинкиназы: флудиоксонил;

- соединения бензимидазола, выбранные из: тиофанат-метил, карбендазим;

- соединения дитиокарбамата, выбранные из: тирам, цирам;

SI) Инсектициды

- соединения, антагонисты ГАМК, выбранные из: фипронил, этипрол, ванилипрол, пирафлупрол, пирипрол, амид 5-амино-1-(2,6-дихлор-4-метил-фенил)-4-сульфинамоил-1Н-пиразол-3-тиокарбоновой кислоты;

- специфические к чешуекрылым ингибиторы рианодиновых рецептров, выбранные из: хлорантранилипрол и флубендиамид;

- ингибитор рианодиновых рецепторов кросс-спектра: циантранилипрол;

- пиретроидные модуляторы натриевых каналов, выбранные из: тефлутрин, бифентрин, циперметрин, альфа-циперметрин, цифлутрин, бета-цифлутрин, лямбда-цигалотрин, дельтаметрин, эсфенвалерат, этофенпрокс, фенвалерат, флуцитринат, перметрин;

- системно активные неоникотиноидные соединения: клотианидин, имидаклоприд, тиаметоксам, динотефуран, ацетамиприд, флупирадифлурон, тиаклоприд, трифлумезопирим, нитенпирам;

- ингибиторы ацетилхолинэстеразы, активаторы хлоридных каналов и сульфоксимины: сульфоксафлор, ацефат, хлорпирифос, тиодикарб, абамектин, спиносад;

- другие инсектициды: тиоксазафен.

Более предпочтительно, пестициды III выбирают из следующих групп SF) и SI):

SF) Фунгициды

азоксистробин, трифлоксистробин, пикоксистробин, пираклостробин, седаксан, пентиопирад, пенфлуфен, флуопирам, флуксапироксад, боскалид, оксатиапипролин, металаксил, металаксил-М, этабоксам, диметоморф, валифеналат, ципроконазол, цифеноконазол, протиоконазол, флутриафол, тиабендазол, ипконазол, тебуконазол, триадименол, прохлораз, флуквинконазол, тритиконазол, флудиоксинил, карбоксин, силтиофам, цирам, тирам, карбендазим, тиофанатметил;

SI) Инсектициды

фипронил, клотианидин, тиаметоксам, ацетамиприд, динотефуран, имидаклоприд, тиаклоприд, сульфоксафлор, метиокарб, тефлутрин, бифентрин, циперметрин, альфа-циперметрин, спиносад, хлорантранилипрол, циантранилипрол, тиодикарб, трифлумезопирим, ацефат, хлорпирифос, флупирадифлурон, абамектин, тиоксазафен.

Примеры

Настоящее изобретение будет описано более подробно с помощью следующих примеров. Нижеследующие примеры приведены в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения объема изобретения.

Примеры, касающиеся штаммов Paenibacillus и их метаболитов

Пример 1: Выделение штаммов Paenibacillus

Были собраны образцы почвы из разных мест в Европе, включая Германию. Применяя общеизвестные методики микробиологического выделения этих почв, изобретатели получили множество бактерий, которые далее подвергали обычным методам выделения для обеспечения чистых изолятов, как описано в настоящей заявке.

Была соблюдена стандартная методика микробного обогащения (С.А. Reddy, Т.J. Beveridge, J.A. Breznak, G.A. Marzluf, Т.М. Schmidt, and L.R. Snyder (eds.). Methods for General and Molecular Microbiology, Am. Soc. Microbiol., Washington, District of Columbia) для выделения каждого типа бактерий.

Следующие штаммы были выделены и депонированы согласно Будапештскому договору вместе с Немецкой коллекцией микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) 20 февраля 2013 года:

а) Lu16774 как депонирован в DSMZ с номером депонирования DSM 26969

б) Lu17007 как депонирован в DSMZ с номером депонирования DSM 26970

в) Lu17015 как депонирован в DSMZ с номером депонирования DSM 26971.

Пример 2 - Характеризация штаммов Paenibacillus

Пример 2.1: Секвенирование 16S-рДНК

Последовательности генов 16S рРНК штаммов Paenibacillus определяли путем прямого секвенирования ПЦР-амплифицированной 16S рДНК в DSMZ, Брауншвейг, Германия.

Выделение геномной ДНК проводили с использованием набора для грамположительной очистки ДНК MasterPure™ от Epicentre Biotechnologies в соответствии с инструкциями производителя. ПЦР-опосредованную амплификацию 16S рДНК и очистку продукта ПЦР осуществляли, как описано ранее (Int. J. Syst. Bacteriol. 46, 1088-1092, 1996). Очищенные продукты ПЦР секвенировали с использованием набора для циклического секвенирования BigDye^® Terminator v1.1 (Applied Biosystems), как указано в протоколе изготовителя. Реакции последовательностей подвергали электрофорезу с использованием генетического анализатора 3500xL от Applied Biosystems. Неоднозначность последовательности может быть связана с существованием нескольких цистронов, кодирующих 16S рРНК с различными последовательностями в пределах одного генома (J. Bacteriol. 178(19), 5636-5643, 1996).

Полученные данные последовательностей из штаммов помещали в редактор выравнивания АЕ2 (http://iubio.bio.indiana.edu/soft/molbio/unix/ae2.readme), выравнивали вручную в соответствии с вторичной структурой полученной молекулы рРНК и сравнивали с репрезентативными последовательностями генов 16S рРНК организмов, принадлежащих к Firmicutes (Nucl. Acids Res. 27, 171-173, 1999). Для сравнения, последовательности 16S рРНК были получены из баз данных EMBL и RDP.

Последовательности 16S рДНК штаммов согласно изобретению изложены в Перечне последовательностей, как указано в Таблице 2.

Значения идентичности генов 16S рДНК в % были вычислены путем парного сравнения последовательностей в выравнивании сравниваемых последовательностей.

Сравнение, выполненное только из двух последовательностей на основе парного выравнивания последовательностей, обозначается в настоящей как двоичные значения. Другие значения основаны на многократном выравнивании последовательностей всех последовательностей в сравнении. Более высокие значения идентичности из многопоследовательных сравнений являются результатом проблемы, заключающейся в том, что данные последовательностей сравниваемых последовательностей имели разную длину, что приводит к более короткому выравниванию.

% идентичности из парных сравнений полных последовательностей рДНК среди трех штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015 составлял от 99,5 до 99,9% (Таблица 3, двоичные значения).

Сравнение полной последовательности 16S рРНК трех штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015 с родственными таксонами (см. Фиг. 9 показало высокий процент идентичности с Paenibacillus peoriae (типовой штамм DSM 8320) в 99.8%. Бинарные значения для парных выравниваний последовательностей Р. peoriae со штаммами Lu16774, Lu17007 и Lu17015 были следующими: Lu16774: 99.5%, Lu17007: 99.5%; и Lu17015: 99.7% идентичности, соответственно.

Окончательная оценка видов, к которым принадлежат штаммы Paenibacillus штаммы Lu16774, Lu17015 и Lu17007, основанная на данных последовательности 16S рРНК, была невозможна.

Секвенирование полной рДНК дало в результате для Paenibacillus peoriae NRRL BD-62 100.0% идентичность с P. peoriae (типовой штамм DSM 8320), что подтверждает обозначение вида P. peoriae для этого штамма BD-62 (см. Фиг. 9).

Тесная связь всех трех штаммов Paenibacillus Lu16774, Lu17007 и Lu17015 с P. peoriae была подтверждена сравнением с последовательностью 16S рРНК штамма P. peoriae BD-62, что в результате дала значения идентичности в 99.8% (см. Фиг. 9).

Для построения филогенетических дендрограмм использовали пакет ARB (Nucl. Acids Res. 35, 7188-7196, 2007): исходя из значений эволюционных расстояний, филогенетическое дерево было построено методом соседнего соединения (Jukes, Т.Н. & Cantor С.R. (1969). Evolution of protein molecules. In Mammalian protein metabolism, cc. 21-132. Edited by H.N. Munro. New York: Academic press) с использованием коррекции Jukes и Cantor (Mol. Biol. Evol. 4, 406-425, 1987). Корень дерева определяли путем включения последовательности генов 16S рРНК Cohnella thermotolerans в анализ. Шкала под дендрограммой показывает 1 нуклеотидную замену на 100 нуклеотидов. Результаты приведены на Фигуре 10.

Филогенетическая дендрограмма этих последовательностей (Фиг. 10) показывает, что три штамма Lu16774, Lu17007 и Lu17015 наиболее тесно связаны друг с другом и что их ближайшим родственником, известным каждому из них, является Paenibacillus peoriae штамм NRRL BD-62.

Пример 2.2: Анализ RiboPrint

Стандартизованное автоматическое риботипирование осуществляют с использованием системы Qualicon RiboPrinter. Система RiboPrinter сочетает в себе этапы молекулярной обработки для риботирования в автономном, автоматизированном приборе. Процедура включает лизис клеток, расщепление хромосомной ДНК рестрикционным ферментом EcoRI, отделение фрагментов электрофорезом, перенос фрагментов ДНК на нейлоновую мембрану, гибридизацию с зондом, полученным из оперона rrnB из Е. coli, хемилюминесцентное обнаружение зонда в фрагментами, содержащими последовательности оперона rrn, обнаружение изображения и компьютеризированный анализ рисунков RiboPrint (Food Technology 50(1), 77-81, 1996; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 5229-5233, 1995; Int. Journ. Syst. Bact. 44(3), 454-460, 1994).

Риботипирование было выполнено в DSMZ, Германия со штаммами Paenibacillus Lu16774, Lu17007 и Lu17015 в сравнении со штаммом P. peoriae BD-62 с использованием рестрикционного фермента EcoRI. Полученные изображения сравнивали, используя программное обеспечение от RiboPrinter system, интегрированной библиотеки идентификации DuPont, а также программного обеспечения BioNumerics (Applied Maths, Belgium).

Сходство всех трех штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015 с BD-62 составляло от 0.24 до 0.5 (Фиг. 11). Три штамма группируют в две группы, первая содержит Lu17015, тогда как вторая группа содержит штаммы Lu16774 и Lu17007. Ни один из штаммов не имеет сходства выше 0.84 с любым штаммом в библиотеке идентификации DuPont и поэтому не был идентифицирован автоматически.

Штамм BD-62 был идентифицирован как Paenibacillus peoriae на основании записи DUP-13142 библиотеки идентификации DuPont (запись на основе Paenibacillus peoriae DSM 8320).

Пример 2.3: Морфологическая и физиологическая характеристика

Штаммы были охарактеризованы в DSMZ по аналогии с методами, описанными в Gordon, R.E., Haynes, W.C. & Pang. C.H.-N. (1973): The Genus Bacillus, Agriculture Handbook no. 427. Washington DC: US Department of Agriculture. Результаты приведены в Таблице 4.

Анализ клеточных жирных кислот, осуществленный в DSMZ, привел к тому, что все штаммы показали типичный профиль для Paenibacillus spp.

Используя доступные генетические, физиологические и биохимические данные, показано, что штаммы Lu16774, Lu17007 и Lu17015 относятся к роду Paenibacillus. Поскольку штаммы Lu16774, Lu17007 и Lu17015, а также BD-62 действительно продуцируют газ из глюкозы, то ни один из них не относится к Paenibacillus jamilae.

Фенотипическая дифференциация между Paenibacillus peoriae и Paenibacillus polymyxa в первую очередь возможна с использованием характеристик получения кислот из определенных субстратов (Int. J. Syst. Bacteriol. 43(2), 388-390, 1993; In. J. Syst. Bacteriol. 46(6), 988-1003, 1996). Ни один из штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015 полностью не соответствовал характеристикам, изложенным в Таблице 4, ни одному из этих двух видов, но в совокупности с доступными генетическими, физиологическими и биохимическими данными, скорее всего, дает основание указывать на виды Paenibacillus peoriae и P. polymyxa или по меньшей мере на другой вид, очень близко схожий с Paenibacillus peoriae и P. polymyxa.

Из-за множества описанных на настоящий момент видов Paenibacillus, невозможно определить правильные таксономические виды трех изолятов, проверенных на основе физиологических и морфологических критериев из Таблицы 4 (Rainer Borriss, Humboldt University Berlin, неопубликованные результаты).

Тем не менее, невозможно было полностью определить виды в этом роде. Было обнаружено, что наиболее близкородственным видом и штаммом является Paenibacillus peoriae BD-62 на основе анализа 16S рДНК (см. например, Фиг. 11).

Пример 2.4: Филогенетический анализ на основе генов, кодирующих DnaN, GyrB, RecF, RecN и RpoA

Нуклеотидные последовательности генов, кодирующих DnaN, GyrB, RecF, RecN и RpoA были извлечены из полных последовательностей генома или из публичных баз данных (Перечни последовательностей, как указано в Таблице 28).

Таблицы идентичности (Фиг. 12-16) были созданы с использованием подхода «все против всех», где каждая последовательность выровнена с каждой другой последовательностью. Выравнивание последовательности выполняли с помощью программной иглы (EMBOSS пакет 6.6.0; Trends in Genetics 16 (6), 276-277). Применяли стандартные параметры (создание разрыва 10.0; расширение разрыва 0.5). Шкалы идентичности Scores рассчитывают исходя из выравниваний без учета каких-либо разрывов.

Для филогенетических деревьев (Фиг. 17-21), были проведены множественные выравнивания последовательности при помощи Clustal Omega (версия 1.2.0; Molecular Systems Biology 7: 539, ЦИО:10.1038/msb.2011.75). Филогенетические деревья подсчитывают методом максимального правдоподобия с помощью программного обеспечения Dnaml (реализовано в пакете Phylip 3.696; Felsenstein 1981, http://evolution.genetics.washington.edu/phylip.html). Дендрограммы были установлены с использованием модели расстояния F84 при применении соотношения транзиция - трансверсия двух (2). Деревья изображают с помощью инструмента Dendroscope (http://dendroscope.org/).

Пример 2.5: Сравнения основного генома и матрицы AAI

Сравнение генома осуществляли с использованием программного пакета EDGAR Университета Gieβen (ВМС Bioinformatics 10, 154, 2009; (https://edgar.computational.bio.uni-giessen.de/cgi-bin/edgar.cgi). Определение основного генома, t филогенетических дендрограмм на основе полных последовательностей генома и значений матрицы AAI было осуществлено с использованием программного пакета EDGAR. Результаты показаны на Фиг. 22.

Пример 3: Рост (способность к ферментации) штаммов для тестов in vivo

Для исследований в теплице и в поле, штаммы Paenibacillus сначала выращивали на пластинах ISP2 (готовый к применению агар из BD [США], каталожный номер 277010). Впоследствии, встряхиваемые колбы с перегородкой, содержащие жидкую среду ISP2, инокулировали колонией из пластины агара и инкубировали в течение 5-7 дней при 150 об./мин. и 25°С. В зависимости от теста, на растения наносили или цельный культуральный бульон, или центрифугированный и промыты посредством Н₂О клеточный осадок, или супернатант. Возможно увеличение до объема 10 л ферментаторов.

Штаммы Paenibacillus росли в жидкой среде ISP2 (10 г/л солодового экстракта, 4 г/л экстракта бактодрожжей, 4 г/л моногидрата глюкозы) в течение 6 дней при 22°С со скоростью 150 об./мин. Указывающий на рост бактерий OD_600нм измеряли в разные моменты времени.

Пример 4 - Конфронтационный анализ противогрибковой активности in vitro

Антагонистическая активность штаммов Paenibacillus против патогенов растений была показана в конфронтационном анализе in vitro. Используемые фитопатогенные грибы представляют собой Sclerotina sclerotiorum (SCLSCL), Botrytis cinerea (BOTRCI), Alternaria sp. (ALTESP) и Phytophthora infestans (PHYTIN).

В качестве среды для выращивания BOTRCI, ALTESP, SCLSCL, используют среду ISP2, содержащую на литр: 10 г солодового экстракта (Sigma Aldrich, 70167); 4 г экстракта бактодрожжей (Becton Dickinson, 212750); 4 г моногидрата глюкозы (Sigma Aldrich, 16301); 20 г агара (Becton Dickinson, 214510), рН приблизительно 7, бидист. вода. В качестве среды для выращивания PHYTIN, используют среду V8, содержащую на литр: 200 мл овощного сока, 3 г карбоната кальция (Merck Millipore, 1020660250); 30 г Agar (Becton Dickinson, 214510), рН 6.8, бидист. вода.

Штаммы Paenibacillus точечно инокулируют с одной стороны пластины агара. В центр пластины был помещен блок агара (около 0,3 см²), содержащий один активно растущий патоген растений. После инкубации в течение 7-14 дней при 25°С, изучают рост патогена растений, особенно в отношении зон ингибирования.

Антибиоз оценивается путем вычисления диаметра зоны, не содержащей грибы (зона ингибирования). Конкуренцию оценивают путем сравнения диаметра роста грибкового патогена на пластинах с бактериальными штаммами по сравнению с контрольными пластинами. Микопаразитизм может быть задокументирован в случае, когда бактерии перерастают грибковый патоген, а также паразитируют патогены. Это можно визуализировать с помощью микроскопии.

Штаммы Paenibacillus показали противогрибковую активность против всех тестируемых патогенов растений.

Пример 5 - Тесты в оранжерее на активность против патогенных грибов растений

Пример применения 5.1: Активность против фитофтороза на томатах, вызванного посредством Phytophthora infestans с защитным применением

Коммерчески доступные молодые саженцы томатов были использованы для описанного испытания в теплице. На обработку применяли 2 повторности (горшки с 1 растением каждый). Растения выращивали в коммерчески доступном субстрате (Universal, Floragard) прибл. при 22°С в теплице. Влажность контролировали с помощью специального устройства (~90% влажность). Растения опрыскивали до образования стекающих капель сырым цельным культуральным бульоном 6-дневных культур соответствующего штамма Paenibacillus (в зависимости от установки) с использованием распылительного шкафа. Культуральные условия для штаммов описаны в Примере 3. Через один день после применения обработанные растения инокулировали суспензией спорангии Phytophthora infestans (PHYTIN). После инокуляции опытные растения немедленно переносили во влажную камеру. Степень поражения грибами на листья оценивали визуально через 5-7 дней после инокуляции. Поражение грибами в необработанном контроле составляло между 80-100% и установлено до 100% для сравнения.

Пример применения 5.2: Активность против серой гнили на перце, вызванной посредством Botrytis cinerea с защитным применением

Коммерчески доступные молодые саженцы перца ("Neusiedler Ideal") были использованы для описанного испытания в теплице. На обработку применяли 2 повторности (горшки с 1 растением каждый). Растения выращивали в коммерчески доступном субстрате (Universal, Floragard) прибл. при 22°С в теплице. Влажность контролировали с помощью специального устройства (~90% влажность). Растения опрыскивали до образования стекающих капель сырым цельным культуральным бульоном 6-дневных культур соответствующего штамма Paenibacillus (в зависимости от установки) с использованием распылительного шкафа. Культуральные условия для штаммов описаны в Примере 3. Через один день после применения обработанные растения инокулировали суспензией спор Botrytis cinerea (BOTRCI). После инокуляции опытные растения немедленно переносили во влажную камеру. Степень поражения грибами на листья оценивали визуально через 5-7 дней после инокуляции. Поражение грибами в необработанном контроле составляло между 80-100% и установлено до 100% для сравнения.

Пример применения 5.3: Активность против альтернариоза на томатах, вызванного посредством Alternaria solani с защитным применением

Коммерчески доступные молодые саженцы томатов были использованы для описанного испытания в теплице. На обработку применяли 2 повторности (горшки с 1 растением каждый). Растения выращивали в коммерчески доступном субстрате (Universal, Floragard) прибл. при 22°С в теплице. Влажность контролировали с помощью специального устройства (~90% влажность). Растения опрыскивали до образования стекающих капель сырым/цельным культуральным бульоном 6-дневных культур соответствующего Paenibacillus штамм (в зависимости от установки) с использованием распылительного шкафа. Культуральные условия для штаммов описаны в Примере 3. Через один день после применения обработанные растения инокулировали суспензией спор Alternaria solani (ALTESO). После инокуляции опытные растения немедленно переносили во влажную камеру. Степень поражения грибами на листья оценивали визуально через 5-7 дней после инокуляции. Поражение грибами в необработанном контроле составляло между 80-100% и установлено до 100% для сравнения.

Пример применения 5.4: Активность против ржавчины сои на соевых бобах, вызванной посредством Phakopsora pachyrhizi с защитным применением

Коммерчески доступные молодые саженцы соевых бобов ("Mentor") были использованы для описанного испытания в теплице. На обработку применяли 2 повторности (горшки с 1 растением каждый). Растения выращивали в коммерчески доступном субстрате (Universal, Floragard) прибл. при 22°С в теплице. Влажность контролировали с помощью специального устройства (~90% влажность). Растения опрыскивали до образования стекающих капель сырым культуральным бульоном 2-6-дневных культур Paenibacillus spp. (в зависимости от установки) с использованием распылительного шкафа. Через один день после применения обработанные растения инокулировали суспензией спор Phakopsora pachyrhizi (РНАКРА). После инокуляции опытные растения немедленно переносили во влажную камеру. Степень поражения грибами на листья оценивали визуально через 5-7 дней после инокуляции.

Пример применения 5.5: Активность против фузариозной гнили на пшенице, вызванной Fusarium graminearum с защитным применением

Коммерчески доступные молодые саженцы пшеницы были использованы для описанного испытания в теплице. На обработку применяли 2 повторности (горшки с 1 растением каждый). Растения выращивали в коммерчески доступном субстрате (Universal, Floragard) прибл. при 22°С в теплице. Влажность контролировали с помощью специального устройства (~90% влажность). Растения опрыскивали до образования стекающих капель сырым культуральным бульоном 2-6-дневных культур Paenibacillus spp. (в зависимости от установки) с использованием распылительного шкафа. Культуральные условия описаны в Примере 3. Через один день после применения обработанные растения инокулировали суспензией спор Fusarium graminearum (GIBBZE). После инокуляции опытные растения немедленно переносили во влажную камеру. Степень поражения грибами на листья оценивали визуально через 5-7 дней после инокуляции.

Пример применения 5.6: Активность против септориозной пятнистости листьев на пшенице, вызванной посредством Septoria tritici с защитным применением

Коммерчески доступные молодые саженцы пшеницы были использованы для описанного испытания в теплице. На обработку применяли 2 повторности (горшки с 1 растением каждый). Растения выращивали в коммерчески доступном субстрате (Universal, Floragard) прибл. при 22°С в теплице. Влажность контролировали с помощью специального устройства (~90% влажность). Растения опрыскивали до образования стекающих капель сырым культуральным бульоном 2-6-дневных культур Paenibacillus spp. (в зависимости от установки) с использованием распылительного шкафа. Культуральные условия описаны в Примере 3. Через один день после применения обработанные растения инокулировали суспензией спор Septoria tritici (SEPTTR). После инокуляции опытные растения немедленно переносили во влажную камеру. Степень поражения грибами на листьях визуально оценивали через 21-28 дней после инокуляции.

Пример применения 5.7: Активность клеток Paenibacillus и супернатанта против различных патогенов с защитным применением

Цельный культуральный бульон из 6-дневных культур штамма Paenibacillus Lu 17007 получали в соответствии с Примером применения 3 и применяли в экспериментальной установке Примера применения 5.1-5.3. Альтернативно, такой цельный культуральный бульон фильтровали через фильтр с размером пор 0,2 мкм, чтобы получить культуральную среду и неочищенную клеточную фракцию. Неочищенную клеточную фракцию можно дополнительно промыть три раза исходными объемами забуференного фосфатом физиологического раствора для получения промытых клеток.

Испытания в теплице проводили, как описано в Примерах применения 5.1, 5.2 и 5.3 выше для соответствующих патогенов Phytophthora infestans, Botrytis cinerea и Alternaria solani. Степень поражения грибами на листья оценивали визуально через 5-7 дней после инокуляции. Поражение грибами в необработанном контроле составляло между 80-100% и установлено до 100% для сравнения.

Пример 6 - Ферментативные тесты

Пример применения 6.1: Хитиназа

Тест с хитиназой в твердой среде:

2 г/л NaNO₃, 1 г/л K₂HPO₄, 0.5 г/л MgSO₄, 0.5 г/л KCl, 0.2 г/л пептона, 15 г/л агара, 10 г/л хитина из крабовых оболочек (Sigma-Aldrich С7170).

Исследуемую твердую среду подвергают автоклавированию и заполняют в 9 см чашки Петри. Штаммы Paenibacillus инокулируют в центр чаш и инкубируют в течение двух дней при 27°С. После этого, чаши окрашивают а 1:3 разбавленным раствором Люголя (Carl Roth N052.2) в течение от 5 до 10 мин. Раствор Люголя выливают и чаши фотографируют и оценивают. Рост различных штаммов составил не более 5-10 мм. Неокрашенные зоны (коррелирующие с активностью хитиназы) варьировали от 0 мм (без активности; "-" в Таблице 11) до нескольких см ("+" в Таблице 11).

Пример применения 6.2: Целлюлаза

Тест с целлюлазой в твердой среде:

2 г/л NaNO₃, 1 г/л K₂HPO₄, 0.5 г/л MgSO₄, 0.5 г/л KCl, 0.2 г/л пептона, 15 г/л агара, карбоксиметилцеллюлозы, натриевой соли (Sigma-Aldrich 419273).

Среду подвергают автоклавированию, выливают в 9 см чашки Петри. Штаммы Paenibacillus инокулируют в центр чаш и инкубируют в течение двух дней при 27°С. После инкубации чаши окрашивают 1:3 разбавленным раствором Люголя (Carl Roth N052.2) в течение от 5 до 10 мин. Раствор Люголя выливают и чаши фотографируют.

Пример применения 6.3: Амилаза

Тест с амилазой в твердой среде:

2 г/л NaNO₃, 1 г/л K₂HPO₄, 0.5 г/л MgSO₄, 0.5 г/л KCl, 0.2 г/л пептона, 15 г/л агара, 10 г/л растворимого крахмала (Merck 1.01252).

Среду подвергают автоклавированию, выливают в 9 см чашки Петри. Штаммы Paenibacillus инокулируют в центр чаш и инкубируют в течение двух дней при 27°С. После инкубации чаши окрашивают 1:3 разбавленным раствором Люголя (Carl Roth N052.2) в течение от 5 до 10 мин. Раствор Люголя выливают и чаши фотографируют.

Пример 7 - Метаболиты фузарицидинового типа, полученные из штаммов Paenibacillus

Пример 7.1: Крупномасштабное культивирование бактериальных изолятов и извлечение метаболитов фузарицидинового типа

а) Культивирование

Штаммы Paenibacillus культивировали на агаровых чашках, содержащих среду GYM (10 г/л глюкозы, 4 г/л дрожжевого экстракта, 10 г/л солодового экстракта; рН 5.5, отрегулированное до автоклавирования) и 20 г/л агара. Культивирование осуществляли в течение от 10 до 20 дней при комнатной температуре. Для поддержания использовали скошенный агар с такой же средой и хранили при 4°С.

Жидкие культуры мелкого масштаба (250 мл среды GYM в 500 мл колбах) инокулировали с 4-5 кусочками хорошо выращенной культуры агара и культивировали в орбитальном шейкере при 120 об./мин. при комнатной температуре (20-23°С).

Крупномасштабные ферментации проводили в 20 л ферментерах с 15 л среды GYM (общую емкость ферментеров не использовали из-за образования пены), инокулированной посредством 250 мл хорошо выращенной жидкой культуры и ферментацию проводили при комнатной температуре (20-23°С) с перемешиванием (120 об./мин.) и аэрацией (3 л/мин.) в течение от 5 до 8 дней.

б) Извлечение

Один равный объем изопропанола добавляли к цельному культуральному бульону (отделение биомассы от жидкой культуры не осуществляли). После перемешивания и инкубации в течение от 2 до 16 часов, к смеси добавляли столовую поваренную соль (хлорид натрия - от 100 до 200 г/л) до тех пор, пока не было видно разделение фаз на органическую и водную фазы.

Фазу изопропанола концентрировали под вакуумом. Полученный экстракт, все еще содержащий большое количество соли, растворяли в метаноле, центрифугировали для лучшего осаждения остатков соли, и органическую фазу снова концентрировали. Эту стадию повторяли до тех пор, пока уже больше не присутствовал солевой осадок.

в) Очистка

i) Хроматография на силикагеле

30 г экстракта растворяли в метаноле и связывали с 50 г силикагеля (Merck, K60, 70-230 меш), сушили при 40°С и наносили на 1 кг силикагеля (колонка 10 см диаметром, высотой прибл. 30 см).

Элюирование проводили в четыре этапа следующим образом:

Стадия 1-4 1 этилацетат

Стадия 2-4 1 этилацетат : метанол (3:1, объемн./объемн.)

Стадия 3-7 1 этилацетат : метанол (1:1, объемн./объемн.)

Стадия 4-4 1 метанол

Третью фракцию (промежуточное соединение 1), содержащую активные соединения, сушат в вакууме и растворяют в 40% метаноле (МеОН) в 0,1% муравьиной кислоте (FA) (концентрация: 100 мг/мл). Остальные фракции были отброшены.

ii) Фракционирование Chromabond HR-X

20 мл промежуточного соединения 1 загружали на предварительно уравновешенный (посредством 40% МеОН в 0.1% FA) картридж Chromabond HR-X (Macherey-Nagel, 1000 мг, ссылка 730941). Картридж промывали посредством 100 мл 40% МеОН в 0.1% FA и элюировали при помощи 60 мл 70% МеОН в 0,1% FA. Это промежуточное соединение 1-1 затем сушили в вакууме.

iii) Препаративная ВЭЖХ на колонке Sunfire С18

Промежуточное соединение 1-1 растворяли в ДМСО (концентрация: 200 мг/мл) и 300 мкл промежуточного соединения 1-1 хроматографировали на колонке Sunfire С18 (19×250 мм, 5 мкм, Waters) следующим образом:

16 мин. при 10 мл/мин, изократическая 70% 0,2 FA; 30% ацетонитрил (ACN),

1 мин. при 14 мл/мин, градиент до 65% 0.2% FA; 35% ACN,

5 мин. при 14 мл/мин, изократическая 65% 0.2% FA; 35% ACN.

Можно было определить пять фракций. Все пять полученных фракций сушили в вакууме и растворяли в ДМСО (концентрация: 125 мг/мл). Дальнейшую очистку проводили, используя ту же колонку и изократические условия (поток: 10.5 мл/мин), скорректированные для каждой фракции (12.5 мг на один проход):

Фракция 1: 69% 0.2 FA; 31% ACN; обнаружены два пика (1-1 и 1-2)

Фракция 2: 69% 0.2 FA; 31% ACN; обнаружены два пика (2-1 и 2-2)

Фракция 3: 69% 0.2 FA; 31% ACN; обнаружены три пика (3-1, 3-2 и 3-3)

Фракция 4/5: 67% 0.2 FA; 33% ACN; обнаружен один пик (4/5)

Фракция 6: 65% 0.2 FA; 35% ACN; обнаружены два пика (6-1 и 6-2)

Чистота и количество следующих образцов были достаточными для анализа ЯМР и выяснения структуры: пики 1-2, 2-1, 3-2, 4/5 и 6-1.

Пример 7.2: Выяснение структуры соединений 1А и 1В

Из пика 2-1 фракции 2, смесь соединений 1А и 1В (соотношение приблизительно 3:7) получали в виде коричневого масла ([α]_D²⁵=+20.9 (с=0.6, ДМСО-d₆)).

Молекулярная формула C₄₇H₇₈N₁₀O₁₂ основного компонента, соединения 1В, была выведена из спектра HR-ESI-MS, который дал пик при m/z 975.5863 [М+Н]⁺; ESI-MS: 975.6 (100%, [М+Н]⁺), 488.4 (51%, [М+2Н]²⁺).

Кроме того, смесь также содержала в качестве второстепенного компонента, более легкий гомолог 1А, и разность масс между обоими соединениями составляла 14 а.е.м. Это наблюдение подтверждено вторым пиком, наблюдаемым в спектре ESI-MS при m/z 961.6.

Спектры ЯМР (Таблица 12), в дополнение к сигналам обменных протонов между δ 6.83 и 8.58, включали резонансы карбонила в диапазоне δ 166.0-174.5 и сигналы метина между δ 47.8 и δ 60.4 указывающие на пептид.

Обширный анализ 1D- и 20-ЯМР данных соединения 1В показал наличие шести аминокислот, включая тирозин (Tyr), глутамин (Gln), аланин (Ala), два треонина (Thr1 и Thr2) и изолейцин (Ile). Их последовательность была обнаружена с использованием двух или трех связей корреляции по амидным функциям. Таким образом, спектры COSY, NOESY (Фиг. 2) и НМВС (Фиг. 3) изображали корреляционные отношения от азота-протона Thr2 при δ 8.58 к сигналу протона метина Thr2 при δ 3.84 и карбонила при δ 166.7 Tyr, в то время как было обнаружено то же отношение между азотом-протоном Tyr при δ 8.52 и сигналом протона метилена Tyr при δ 2.60 и карбонилом при δ 170.4 Ile. Кроме того, метановый водород Ile при δ 4.16 имел сильную корреляцию с карбонильным сигналом Ile при δ 170.4 и слабый контакт с сигналом Thr1 при δ 168.6; сигнал протона β-метина при δ 5.30 Thr1 коррелировал с карбонильным сигналом при δ 170.4 Ala. Помимо вышеупомянутых корреляций другие были воспроизведены из N-протона при δ 7.27 Ala до протона метина при δ 4.20 той же аминокислоты, в то время как этот последний протон имел такое же взаимодействие с карбонилом его аминогруппы и одним из Gln. Кроме того, был обнаружен перекрестный пик от сменного протона при δ 8.20 Gln до водорода метина при δ 3.87 Gln карбонила Thr2 при δ 170.6; эти вышеупомянутые данные предполагают циклодепсипептидную структуру для соединения 1В.

Этот циклодепсипептид 1В содержал концевую гуанидин β-гидрокси жирную кислоту, присоединенную к Thr1, поскольку была обнаружена ключевая корреляция между сигналом его α-метинового протона при δ 4.39 и резонансом карбонила при δ 171.9; были дополнительно обнаружены НМВС контакты от этого карбонила при δ 171.9 к протонам α-метилен при δ 2.35 и протону β-метина при δ 3.77, а также между протонами метилена при δ 3.03 и гуанидиновым углеродом при δ 157.2. Было установлено, что боковая цепь содержит двенадцать метиленовых групп между β-гидрокси и гуанидиновой группой на основе фрагментного иона, наблюдаемого в спектре APCI-MS-MS родительского [М+Н]⁺ иона при m/z 256.2. Равным образом, этот спектр предоставил информацию (Фиг. 4b), которая подтвердила последовательность соединений аминокислот и привела к выяснению структуры соединения 1В, как показано на Фиг. 1.

Сигналы группы СН₂ при 2.80, 2.52/36.3 в 1D- и 2D-спектрах соответствовали предположительно группе β-СН₂ аспарагина (Asn) в соединении 1А. Этот вывод подтверждался данными (Heterocycles 53, 1533-1549, 2000) в связи с фрагментами, полученными из МС/МС родительского пика при m/z 961.6 (Фиг. 4а). Равным образом, последние анализы дают информацию (Фиг. 4а, 4b), которая подтвердила последовательность соединений аминокислот в обоих соединениях и привела к выяснению структуры соединений 1А и 1В, как показано на Фиг. 1.

Пример 7.3: Структурная идентификация соединений 2А и 2В как фузарицидинов С и D

Из пика 1-2 фракции 1, смесь соединений 2А и 2В (соотношение приблизительно 1:1) была получена в виде коричневого масла. Молекулярная формула более тяжелого компонента, соединения 2В, была определена как C₄₆H₇₆N₁₀O₁₂ на основе масс-спектрометрии с низким разрешением. Анализ данных ЯМР (Таблица 13) позволил идентифицировать соединение 2В как фузарицидин D. Более легкий компонент смеси, соединение 2А, было равным образом идентифицировано как фузарицидин С, в котором остаток Gln фузарицидина С заменен на Asn.

Масс-спектрометрическая картина фрагментации исходных ионов m/z 961.6 и 947.6 для соединений 2В и 2А, соответственно, (Фиг. 5а, 5b) подтвердила, что длина боковой цепи замещенной жирной кислоты была идентичной, как в соединении 1В. О фузарицидинах С и D было ранее сообщено у Kajimura et al. (J. Antibiot. 50, 220-228, 1997).

Пример 7.4: Структурная идентификация соединения 3 как LI-F08b

Из пика 6-1 фракции 6, соединение 3 выделяли в виде коричневого масла, а его низкое разрешение представляло пик при m/z 925.6 [М+Н]⁺, который в сочетании с данными (Таблица 14), приводил к молекулярной формуле C₄₄H₈₀N₁₀O₁₁. Соединение 3 показало сходные особенности в спектрах ЯМР в виде соединения 1В и соединения 2В (фузарицидин D), за исключением присутствия ароматических сигналов (Таблица 14). Таким образом, наблюдали характерные резонансы пептида, а именно десять сигналов протонов, связанных с азотом между δ 6.89 и 8.49, восемь резонансов карбонила, варьирующих между δ 168.1 и 174.3, и шесть сигналов N-метина, в диапазоне между δ 48.0 и 59.5. Детальный анализ спектров HMQC, COSY и TOCSY показал наличие шести аминокислот, включая Gln, двух единиц Thr, двух единиц Ile и Ala. Кроме того, эти спектры показали химические сдвиги, свойственные той же β-гидроксилльной жирной кислоте с концевым гуанидином как в соединениях 1А, 1В и фузарицидинах С (2А) и D (2В). Положение этой боковой цепи определяли на основе корреляции длинного диапазона, обнаруженной в спектре НМВС между протонным сигналом N-метинина при δ 4.44 Thr1 и карбонильным сигналом при δ 172.1 жирной кислоты. Последовательность аминокислот была выведена из взаимодействия NOESY и спектров фрагментации (Фиг. 6).

Комбинация данных ЯМР (Таблица 14) и масс-спектрометрии привела к идентификации метаболита соединение 3 как LI-F08b, в настоящей заявке также называется фузарицидин LI-F08b, о котором впервые сообщено у Kuroda et al. (Heterocycles 53, 1533-1549, 2000).

Пример 7.5: Структурная идентификация соединений 4А и 4В как LI-F06a и LI-F06b и соединений 5А и 5В как фузарицидин А и В, соответственно

Из пика 4/5 фракции 4/5, получали смесь из двух других метаболитов, соединения 4А и 4В (соотношение приблизительно 1:3), которая дала два пика при m/z 897.5 (4А) и 911.6 (4В) в спектре ESI-MS, предлагая два дополнительных гомологичных циклодепсипептида. Показатели резонансов для пептидов наблюдали в их спектрах ЯМР (Таблица 15), а также в отношении β-гидроксильных жирных кислот, заканчивающихся в гуанидиновой группе. Спектры фрагментации обоих родительских ионов, обнаруженные для соединений 4А и 4В (Фиг. 7а, 7b) позволили определить последовательность аминокислот и идентифицировать составные части смеси как LI-F06a (4А) и LI-F06b (4 В), соответственно.

Полученную из пика 3-2 фракции 3, смесь соединений 5А и 5В (соотношение приблизительно 1:3) анализировали аналогичным образом. Масс-спектр ESI смеси показал два пика m/z 883.6 (5А) и 897.5 (5В) и спектры фрагментации этих исходных ионов (Фиг. 8а, 8b) в сочетании с данными ЯМР (Таблица 16) позволили идентифицировать компоненты как фузарицидин А (5А) и фузарицидин В (5В). Данные, обнаруженные для 4А, 4В, 5А и 5В, совпадают с данными, о которых сообщалось ранее. (J. Antibiot. 50, 220-228, 1997; Heterocycles 53, 1533-1549, 2000).

Эксперименты по гидролизу для определения конфигурации составляющих аминокислот не проводили.

Пример 8 - Метаболиты, продуцируемые штаммами Paenibacillus

Пример 8.1: Выработка метаболитов штаммами Paenibacillus

Присутствие фузарицидинов в целом и в частности фузарицидинов А, В, С, D, LI-F06a, LI-F06b, LI-F08b, 1А и 1B было определено для штаммов Paenibacillus штаммы, следуя процедурным стадиям, которые описаны в Примере 7.1 выше.

Перечень условных обозначений:

-, соединение не обнаруживается; +, соединение обнаруживается; ++, соединение обнаруживается при больших количествах по сравнению со шкалой +.

Цельный культуральный бульон всех штаммов Paenibacillus Lu16774, Lu17007 и Lu17015 содержал по меньшей мере один фузарицидин, идентифицированный в Примере 7 (Таблица 17). Ни один из этих фузарицидинов не был обнаружен в цельном культуральном бульоне штамма P. peoriae BD-62.

Цельный культуральный бульон штаммов Paenibacillus Lu16774, Lu17007 и Lu17015 содержал фузарицидины 1А и 1В. Кроме того, цельный культуральный бульон штаммов Paenibacillus Lu16774, Lu17007 и Lu17015 содержал фузарицидины А, В, С и D, а также LI-F08b. К том уже, цельный культуральный бульон штаммов Paenibacillus Lu17007 и Lu17015 содержал фузарицидины LI-F06a и LI-F06b.

Фузарицидины 1А и 1В не были обнаружены в цельном культуральном бульоне близко родственного штамма P. peoriae BD-62. Фузарицидины А, В, С и D, LI-F06a, LI-F06b и LI-F08b также не присутствовали в цельном культуральном бульоне штамма P. peoriae BD-62.

Пример 9: Активность метаболитов штаммами Paenibacillus против различных грибковых патогенов

Полученные фузарицидины А, В, D, 1А и 1В применяли в нижеследующих экспериментах.

Тесты на рост грибов осуществляли в 96-луночных планшетах с суспензией спор патогена Botrytis cinerea (BOTRCI, в YBA [10 г Бактопептона (Becton Dickinson 211677), 10 г дрожжевого экстракта (Becton Dickinson 212750), 20 г ацетата натрия, до 1000 мл бидистил. воды] или Alternaria solani (ALTESO, в YBG [10 г Бактопептона (Becton Dickinson 211677), 10 г дрожжевого экстракта (Becton Dickinson 212750), 20 г глицерина 99%, до 1000 мл бидистил. воды]). Фузарицидины и соединения 1А и 1В растворяли и разбавляли в ДМСО. Различные концентрации в пределах от 60 мкМ до 0.3 мкМ пипетировали в микро-титрационный планшет. Добавляли водную суспензию 10⁴ спор/мл. Планшеты инкубировали при приблизительно 18°С. Рост грибов определяли путем измерения оптической плотности при 600 нм в считывателе микропланшетов через 3 и 7 дней после инокуляции спор и сравнивали с необработанным контролем (ДМСО). После этого была определена IC₅₀ (концентрация [мкМ] соответствующего метаболита, требуемая для 50% ингибирования роста грибов).

В частности, соединения 1А и 1В показали наивысшую противогрибковую эффективность со значениями IC₅₀ 0.4-0.6 мкМ (Tab. 18).

Кроме того, испытания в теплицах проводили с фузарицидинами 1А и 1В, как описано в Примерах применения 5.1-5.5 выше для соответствующих патогенов Botrytis cinerea (BOTRCI), Alternaria solani (ALTESO), Phytophthora infestans (PHYTIN), Phakopsora pachyrhizi (PHAKPA) и Fusarium graminearum (GIBBZE). Степень поражения грибами на листья оценивали визуально через 5-7 дней после инокуляции.

В частности, соединения 1А и 1В были эффективны для борьбы с важными грибковыми заболеваниями на сельскохозяйственных растениях уже на уровнях доз всего лишь в 7.2 част, на млн. и показали более высокую противогрибковую эффективность, чем Фузарицидин А, В и D (Таблицы 19-21).

Пример 10: Сравнение активности Paenibacillus polymyxa нов. вид plantarum штаммы Lu16674 и Lu17007 с Paenibacillus polymyxa нов. вид plantarum М-1 против различные патогены в испытаниях в теплицах

Цельный культуральный бульон из 6-дневных культур штамма Paenibacillus Lu17007, Lu16674 и M1 получали в соответствии с Примером применения 3 и применяли в экспериментальной установке Примера применения 5.1-5.5. Испытания в теплицах осуществляли как описано в Примерах применения 5.1-5.5 выше для соответствующих патогенов. Степень поражения грибами на листья оценивали визуально через 5-7 дней после инокуляции.

В частности, штаммы Paenibacillus Lu16774 и Lu17007 были эффективны для борьбы с важными грибковыми заболеваниями на сельскохозяйственных растениях даже при высоких коэффициентах разбавления и показали более высокую противогрибковую эффективность, чем близко родственный штамм М-1 (Таблицы 22-27).

Пример 11: Примеры, относящиеся к смесям и композициям в соответствии с изобретением

Активные соединения приготавливали отдельно в виде маточного раствора с концентрацией в 10000 част, на млн. в диметилсульфоксиде. Paenibacillus LU17007 использовали как экспериментальный состав и разбавляли водой до указанной концентрации активного соединения. Продукт пикарбутразокс использовали в качестве готовых коммерческих композиций и разбавляли водой до указанной концентрации активного соединения.

1. Активность против серой гнили Botrytis cinerea в микротитрационном тесте (Botrci)

Маточные растворы смешивали в соответствии с соотношением, пипетировали в микротитрационный планшет (МТР) и разбавляли водой до указанных концентраций. Затем добавляли суспензию спор Botrci cinerea в водный раствор биосолода или раствор дрожжи-бактопептон-ацетат натрия. Планшеты помещали в насыщенную водяным паром камеру при температуре в 18°С. Путем применения абсорбциофотометра МТП измеряли при 405 нм через 7 дней после инокуляции. Результаты представлены в Таблице 28.

2. Активность против пирикуляриоза риса Pyricularia oryzae в микро-титрационном тесте (Pyrior)

Маточные растворы смешивали в соответствии с соотношением, пипетировали в микротитрационный планшет (МТР) и разбавляли водой до указанных концентраций. Затем добавляли суспензию спор Pyricularia oryzae в водный раствор биосолода или раствор дрожжи-бактопептон-глицерин. Планшеты помещали в насыщенную водяным паром камеру при температуре в 18°С. Путем применения абсорбциофотометра МТП измеряли при 405 нм через 7 дней после инокуляции. Результаты представлены в Таблице 29.

3. Активность против септориозной пятнистости листьев на пшенице, вызванной Septoria tritici (Septtr)

Маточные растворы смешивали в соответствии с соотношением, пипетировали в микротитрационный планшет (МТР) и разбавляли водой до указанных концентраций. Суспензию спор Septoria tritici в водный раствор биосолода или раствор дрожжи-бактопептон-глицерин затем добавляли. Планшеты помещали в насыщенную водяным паром камеру при температуре в 18°С. Путем применения абсорбциофотометра МТП измеряли при 405 нм через 7 дней после инокуляции. Результаты представлены в Таблице 30.

4. Активность против альтернариоза, вызванного посредством Alternaria solani (Alteso)

Маточные растворы смешивали в соответствии с соотношением, пипетировали в микротитрационный планшет (МТР) и разбавляли водой до указанных концентраций. Суспензию спор Alternaria solani в водный раствор биосолода или раствор дрожжи-бактопептон-глицерин затем добавляли. Планшеты помещали в насыщенную водяным паром камеру при температуре в 18°С. Путем применения абсорбциофотометра МТП измеряли при 405 нм через 7 дней после инокуляции. Результаты представлены в Таблице 31.

5. Активность против пятнистости листьев пшеницы, вызванной Leptosphaeria nodorum (Leptno)

Маточные растворы смешивали в соответствии с соотношением, пипетировали в микротитрационный планшет (МТР) и разбавляли водой до указанных концентраций. Суспензию спор Leptosphaeria nodorum в водный раствор биосолода или затем добавляли раствор дрожжи-бактопептон-глицерин. Планшеты помещали в насыщенную водяным паром камеру при температуре в 18°С. Путем

применения абсорбциофотометра МТП измеряли при 405 нм через 7 дней после инокуляции. Результаты представлены в Таблице 32.

Измеренные параметры сравнивали с ростом не содержащего активное соединение контрольного варианта (100%) и нулевым значением без грибов и без активных соединений, чтобы определить относительный рост в % патогенов в соответствующих активных соединениях.

Эти проценты были преобразованы в эффективность.

Подсчет ожидаемой эффективности (Е_Колби) с использованием формулы Колби

Ожидаемые эффективности комбинаций активных соединений определяли с использованием формулы Колби (Colby, S.R. "Calculating synergistic и antagonistic responses of herbicide combinations", Weeds 15, cc. 20-22, 1967) и сравнивали с наблюдаемой эффективностью.

Е_Kолби наблюдаемая эффективность, выраженная в % необработанного контроля, при использовании смеси активных соединений А и В при концентрациях а и b

P_A эффективность, выраженная в % необработанного контроля, при использовании активного соединения А в концентрации а

P_B эффективность, выраженная в % необработанного контроля, при использовании активного соединения В в концентрации b.

Подсчет синергетического фактора (SF)

Для определения синергизма Синергетический Фактор (SF) между наблюдаемой экспериментальной эффективностью смесей Е_{измеренная} и ожидаемой эффективностью смеси Е_Колби подсчитывают как

SF=Е_{измеренная}/Е_Колби

Синергетический Фактор больше или меньше, чем 1 указывает на отклонение от гипотезы независимого действия, что означает, что биологически два компонента действуют сообща или друг против друга. Если SF>1, то наблюдают синергизм; если SF<1, то наблюдают антагонизм.

Процитированные в настоящей заявке документы включены в ее объем путем ссылки.

Краткое описание фигур:

Фигура 1. Соединения 1А, 1В, 2А, 2В, 3, 4А, 4В, 5А и 5В. Фигура 2. Key NOESY и COSY корреляции соединения 1В.

Фигура 3. НМВС корреляции соединения 1В.

Фигура 4. Фрагментационные спектры а) соединения 1А и b) соединения 1В.

Фигура 5. Фрагментационные спектры а) соединения 2А (фузарицидин С) и b) соединения 2В (фузарицидин D).

Фигура 6. Фрагментационные спектры соединения 3 (LI-F08b).

Фигура 7. Фрагментационные спектры а) соединения 4А (LI-F06a) и b) соединения 4В (LI-F06b).

Фигура 8. Фрагментационные спектры а) соединения 5А (фузарицидин А) и b) соединения 5В (фузарицидин В).

На Фигуре 9 представлена процентная идентичность полной последовательности 16S рДНК штаммов Paenibacillus согласно изобретению с родственными таксонами после многократного выравнивания последовательности.

Перечень условных обозначений: Штаммы 6-28 являются типичными штаммами для соответствующих видов.

Сходства штаммов Lu16774, Lu17007 и Lu17015 с Paenibacillus peoriae (NRRL BD-62 и DSM 8320) выделены жирным шрифтом.

На Фигуре 10 представлена филогенетическая дендрограмма, рассчитанная из % идентичности последовательностей 16S-рДНК штаммов Paenibacillus согласно изобретению с другими таксонами (Фиг. 9). Корень дерева определяли путем включения в анализ последовательности гена 16S рРНК Cohnella thermotolerans. Масштабная линейка под дендрограммой указывает на 1 нуклеотидную замену на 100 нуклеотидов.

На Фигуре 11 представлено изображение RiboPrint, полученное из образцов штаммов Paenibacillus в соответствии с изобретением в сравнении с образцом близко родственного штамма P. peoriae BD-62 с применением RiboPrinter Microbial Characterization System и полученная из него филогенетическая дендрограмма.

На Фигуре 12 представлена процентная идентичность последовательности ДНК гена dnaN штаммов Paenibacillus в соответствии с изобретением с родственными штаммами Paenibacillus после многократного выравнивания последовательности.

Перечень условных обозначений:

На Фигуре 13 представлена процентная идентичность последовательности ДНК полного гена gyrB штаммов Paenibacillus в соответствии с изобретением с родственными штаммами Paenibacillus после многократного выравнивания последовательности. Номера штаммов описаны в Перечне условных обозначений к Фиг. 12.

На Фигуре 14 представлена процентная идентичность последовательности ДНК полного гена recF штаммов Paenibacillus в соответствии с изобретением с родственными штаммами Paenibacillus после многократного выравнивания последовательности. Номера штаммов описаны в Перечне условных обозначений к Фиг. 12.

На Фигуре 15 представлена процентная идентичность последовательности ДНК полного гена recN штаммов Paenibacillus в соответствии с изобретением с родственными штаммами Paenibacillus после многократного выравнивания последовательности. Номера штаммов описаны в Перечне условных обозначений к Фиг. 12.

На Фигуре 16 представлена процентная идентичность последовательности ДНК полного гена rpoA штаммов Paenibacillus в соответствии с изобретением с родственными штаммами Paenibacillus после многократного выравнивания последовательности. Номера штаммов описаны в Перечне условных обозначений к Фиг. 12.

На Фигуре 17 представлена дендрограмма максимального правдоподобия на основе полной последовательности гена dnaN штаммов комплекса Р. polymyxa. Шкала представленного 0.1 соответствует 1% обменов нуклеотидов.

На Фигуре 18 представлена дендрограмма максимального правдоподобия на основе полной последовательности гена gyrB штаммов комплекса Р. polymyxa. Шкала представленного 0.1 соответствует 1% обменов нуклеотидов.

На Фигуре 19 представлена дендрограмма максимального правдоподобия на основе полной последовательности гена recF штаммов комплекса Р. polymyxa. Шкала представленного 0.1 соответствует 1% обменов нуклеотидов.

На Фигуре 20 представлена дендрограмма максимального правдоподобия на основе полной последовательности гена recN штаммов комплекса Р. polymyxa. Шкала представленного 0.1 соответствует 1% обменов нуклеотидов.

На Фигуре 21 представлена дендрограмма максимального правдоподобия на основе полной последовательности гена rpoA штаммов комплекса Р. polymyxa. Шкала представленного 0.1 соответствует 1% обменов нуклеотидов.

На Фигуре 22 представлена матрица Аминокислотного Индекса (AAI) репрезентативных геномов комплекса P. polymyxa, осуществленная в соответствии с изобретением Примером 2.5. Номера штаммов описаны в Перечне условных обозначений к Фиг. 12.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> БАСФ СЕ

<120> штаммы Paenibacillus

<130> 160069

<150> 2016-02-09

<151> EP16154807.8

<160> 3

<170> BiSSAP 1.2

<210> 1

<211> 1539

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1539

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu16774 полная 16S рДНК"

/мол_тип="другая ДНК"

<220>

<221> неустановленная

<222> 37,58,60,65,82,87,89,204,263,645,1020,1264,1457

<400> 1

tttgatcctg gctcaggacg aacgctggcg gcgtgcntaa tacatgcaag tcgagcgngn 60

ttatntagaa gcttgcttct anaattncna gcggcggacg ggtgagtaac acgtaggcaa 120

cctgcccaca agacagggat aactaccgga aacggtagct aatacccgat acatcctttt 180

cctgcatggg agaaggagga aagncggagc aatctgtcac ttgtggatgg gcctgcggcg 240

cattagctag ttggtggggt aanggcctac caaggcgacg atgcgtagcc gacctgagag 300

ggtgatcggc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg 360

gaatcttccg caatgggcga aagcctgacg gagcaacgcc gcgtgagtga tgaaggtttt 420

cggatcgtaa agctctgttg ccagggaaga acgtcttgta gagtaactgc tacaagagtg 480

acggtacctg agaagaaagc cccggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg 540

gggcaagcgt tgtccggaat tattgggcgt aaagcgcgcg caggcggctc tttaagtctg 600

gtgtttaatc ccgaggctca acttcgggtc gcactggaaa ctggngagct tgagtgcaga 660

agaggagagt ggaattccac gtgtagcggt gaaatgcgta gagatgtgga ggaacaccag 720

tggcgaaggc gactctctgg gctgtaactg acgctgaggc gcgaaagcgt ggggagcaaa 780

caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatga atgctaggtg ttaggggttt 840

cgataccctt ggtgccgaag ttaacacatt aagcattccg cctggggagt acggtcgcaa 900

gactgaaact caaaggaatt gacggggacc cgcacaagca gtggagtatg tggtttaatt 960

cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatccct ctgaccggtc tagagatagn 1020

cctttccttc gggacagagg agacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag 1080

atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttatgct tagttgccag caggtcaagc 1140

tgggcactct aagcagactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc 1200

atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac gtactacaat ggccggtaca acgggaagcg 1260

aagncgcgag gtggagccaa tcctagaaaa gccggtctca gttcggattg taggctgcaa 1320

ctcgcctaca tgaagtcgga attgctagta atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg 1380

ttcccgggtc ttgtacacac cgcccgtcac accacgagag tttacaacac ccgaagtcgg 1440

tgaggtaacc gcaaggngcc agccgccgaa ggtggggtag atgattgggg tgaagtcgta 1500

acaaggtagc cgtatcggaa ggtgcggctg gatcacctc 1539

<210> 2

<211> 1545

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1545

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa ssp. plantarum"

/запись="штамм Lu17007 полная 16S рДНК"

/мол_тип="другая ДНК"

<220>

<221> неустановленная

<222> 58,60,65,82,87,645,1020

<400> 2

tttgatcctg gctcaggacg aacgctggcg gcgtgcctaa tacatgcaag tcgagcgngn 60

ttatntagaa gcttgcttct anataancta gcggcggacg ggtgagtaac acgtaggcaa 120

cctgcccaca agacagggat aactaccgga aacggtagct aatacccgat acatcctttt 180

cctgcatggg agaaggagga aagacggagc aatctgtcac ttgtggatgg gcctgcggcg 240

cattagctag ttggtggggt aawggcctac caaggcgacg atgcgtagcc gacctgagag 300

ggtgatcggc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg 360

gaatcttccg caatgggcga aagcctgacg gagcaacgcc gcgtgagtga tgaaggtttt 420

cggatcgtaa agctctgttg ccagggaaga acgtcttgta gagtaactgc tacaagagtg 480

acggtacctg agaagaaagc cccggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg 540

gggcaagcgt tgtccggaat tattgggcgt aaagcgcgcg caggcggctc tttaagtctg 600

gtgtttaatc ccgaggctca acttcgggtc gcactggaaa ctggngagct tgagtgcaga 660

agaggagagt ggaattccac gtgtagcggt gaaatgcgta gagatgtgga ggaacaccag 720

tggcgaaggc gactctctgg gctgtaactg acgctgaggc gcgaaagcgt ggggagcaaa 780

caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatga atgctaggtg ttaggggttt 840

cgataccctt ggtgccgaag ttaacacatt aagcattccg cctggggagt acggtcgcaa 900

gactgaaact caaaggaatt gacggggacc cgcacaagca gtggagtatg tggtttaatt 960

cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatccct ctgaccggtc tagagatagn 1020

cctttccttc gggacagagg agacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag 1080

atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttatgct tagttgccag caggtcaagc 1140

tgggcactct aagcagactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc 1200

atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac gtactacaat ggccggtaca acgggaagcg 1260

aagccgcgag gtggagccaa tcctagaaaa gccggtctca gttcggattg taggctgcaa 1320

ctcgcctaca tgaagtcgga attgctagta atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg 1380

ttcccgggtc ttgtacacac cgcccgtcac accacgagag tttacaacac ccgaagtcgg 1440

tgaggtaacc gcaaggagcc agccgccgaa ggtggggtag atgattgggg tgaagtcgta 1500

acaaggtagc cgtatcggaa ggtgcggctg gatcacctcc tttct 1545

<210> 3

<211> 1547

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1547

<223> /организм="Paenibacillus epiphyticus"

/запись="штамм Lu17015 полная 16S рДНК"

/мол_тип="другая ДНК"

<220>

<221> неустановленная

<222> 68,87,1024

<400> 3

tgagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc 60

ggggttgntt agaagcttgc ttctaancaa cctagcggcg gacgggtgag taacacgtag 120

gcaacctgcc cacaagacag ggataactac cggaaacggt agctaatacc cgatacatcc 180

ttttcctgca tgggagaagg aggaaagacg gagcaatctg tcacttgtgg atgggcctgc 240

ggcgcattag ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc gacgatgcgt agccgacctg 300

agagggtgat cggccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag 360

tagggaatct tccgcaatgg gcgaaagcct gacggagcaa cgccgcgtga gtgatgaagg 420

ttttcggatc gtaaagctct gttgccaggg aagaacgtct tgtagagtaa ctgctacaag 480

agtgacggta cctgagaaga aagccccggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg 540

tagggggcaa gcgttgtccg gaattattgg gcgtaaagcg cgcgcaggcg gctctttaag 600

tctggtgttt aatcccgagg ctcaacttcg ggtcgcactg gaaactgggg agcttgagtg 660

cagaagagga gagtggaatt ccacgtgtag cggtgaaatg cgtagatatg tggaggaaca 720

ccagtggcga aggcgactct ctgggctgta actgacgctg aggcgcgaaa gcgtggggag 780

caaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atgaatgcta ggtgttaggg 840

gtttcgatac ccttggtgcc gaagttaaca cattaagcat tccgcctggg gagtacggtc 900

gcaagactga aactcaaagg aattgacggg gacccgcaca agcagtggag tatgtggttt 960

aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat ccctctgacc ggtctagaga 1020

tagncctttc cttcgggaca gaggagacag gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg 1080

tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccctta tgcttagttg ccagcaggtc 1140

aagctgggca ctctaagcag actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca 1200

aatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtacta caatggccgg tacaacggga 1260

agcgaaatcg cgaggtggag ccaatcctag aaaagccggt ctcagttcgg attgtaggct 1320

gcaactcgcc tacatgaagt cggaattgct agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa 1380

tacgttcccg ggtcttgtac acaccgcccg tcacaccacg agagtttaca acacccgaag 1440

tcggtggggt aacccgcaag ggagccagcc gccgaaggtg gggtagatga ttggggtgaa 1500

gtcgtaacaa ggtagccgta tcggaaggtg cggctggatc acctcct 1547

<210> 4

<211> 1143

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1143

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu16774 dnaN"

/мол_тип="ДНК"

<400> 4

atgaagatta gcattctgaa aaacgttttg aacgaggcca tacaacatgt atccaaagcg 60

atatccagtc gaacgacaat tccaattttg agtggtatta agctggatgt gaatcaccag 120

ggagtcacac tgaccgccag cgatacagac atctctattc aatcctttat tccgatggag 180

gatggtgacc aaacggtcgt tcagatcgaa caacccggca gtgtagtgct acccgctaaa 240

ttctttgtcg aaattatcaa aaagttgccg tctcaggaga tccgtatgga ggtaaaagac 300

caattccaaa cctttatctc atccggtgct actgaaattc agatcgttgg tttggaccct 360

gaagaatttc cggtgcttcc caacattgaa gaaaatcaag tgatctctgt gccaggtgat 420

ttgcttaaaa atatgattaa acagacggta ttctccatct ctacccatga aacgacacct 480

attttgactg gtgtattgtg gaatctggct gagggcgaat tgaaatttgt cgcaacggac 540

cgccaccgcc ttgccacccg cagcgctcat ttggagacgt ctgaaggctt gcgttttagc 600

aatgttgtca ttgcaggcaa aacgctcaat gagctgagca gaattattcc ggatcaaaat 660

atgcttgtgg atatcgtcgt agcggacaat caggtattat ttaaggtgga tcgcgtgtta 720

ttttactctc gcatcttgga cggcacctat cctgatactt ctagaattat tccgacttcc 780

tacaaaacag aactgattgt ggacacaaaa agtttgagcg agtctattga ccgtgcttat 840

ttgctgtccc gtgaggaaaa aacgaatatt gtaaaaatgc aatcgttgga aaacggtgat 900

ctagagattt cctccagctc atctgaactt ggtaaagtgc gtgaggaagt aaatgtatcc 960

aaatttgagg gagagccact caaaatctcg ttcaactcca aatatatgct cgacgtgctg 1020

aaggtaattg acagcgagca gctgacgatt gcttttaccg gcattatgag ccccattatt 1080

ttaaaaccgg cagattccag caatgcgctg tatatcatcc tgccatatcg cacaaccaac 1140

tag 1143

<210> 5

<211> 1980

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1980

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu16774 gyrB"

/мол_тип="ДНК"

<400> 5

atggtcgaca aaatcgactt gtctgcggga gcttccggta cacagaacgg agcttcagaa 60

tatggcgcgg acgacattca agtgctcgaa gggcttgtgg cagttcgcaa acggccgggc 120

atgtacatcg ggagcaccag ttcttcggga ctgcatcatt tggtatggga aattgtagac 180

aacgcggtgg atgaacatct cgccaagttt tgctctcgca ttgatatcac aatgcataag 240

gacggttctg ttacagtatc agacaacggg cgcggtattc ctacgggaat gcacaaaatg 300

ggaattccta cgcctcaagt tgtattcacc attttgcacg ccggaggtaa gtttggcggt 360

tcgggatata aaaagtccgg gggtctgcat ggggtaggtg cgtctgtaac gaacgctctt 420

tcggaatggc ttgaagtgga aatctaccgg gacggcaaga ttcaccgtca gcggtttgaa 480

tattggcagg acaagaaggg cgtggagcat gtcggtgaac cgaccacagg ccttgaagtg 540

ctgggcaata ctaacaagac gggctcgaaa attacattta aaccggatat tcgcgttttt 600

cagtcaggaa ttcattttaa ctacgatacg ctggctgaac gccttcagga gattgctttt 660

ctgaattccg gccttcgtat tcagcttaaa gacgaacgca gcggaaagtc agatgaatat 720

ttttatgagg gtggagcaag tcagtttgtt tcttttttga atgagggtaa ggatgtactg 780

catgatgtta ttcactttaa tgccgagaaa gaagacattg aagtggagat tgccatccaa 840

tacaatgccg gctacacaga gacgattgct tcgttcgtta actccattcc gacacgtggc 900

gggggtacgc atgaaacagg cttcaaaacc gcttacactc gtatcatgaa cgactatgca 960

cgcaaaacag cgatgttgaa ggaaaaggat aaaaacctgg aaggtaacga tctgcgtgag 1020

ggtatgatgg ctgtaatcag tgtcaagatg gccgaggttg aatttgtcgg tcagacaaaa 1080

gatcagctgg gtagtgcttc ggcgcggagt acagtggatg ccatcgtatc tgaacaaatg 1140

cagcgctttt tggaggaaaa tccacagata gcgcaaacct tgatcagaaa ggcagttcaa 1200

gcatccaaag cgcgtgaagc tgcacgtaag gctcgggacg aaatgcgttc tggcaagaaa 1260

cgcagtgaaa gttctaattt gaatggcaaa ctgtcgcctg cgcagtctaa ggattttaca 1320

cgtaatgagt tatttatcgt ggaaggcgat tcggctggag gatcggccaa acaaggacgg 1380

gattccaaaa tccaggcaat tttgccgtta aagggcaagc cgatgaatcc ggaaaaatca 1440

aagttggcgg atattatgaa aaatgatgag tatcgtgcga ttacggcagc gattggcgcg 1500

ggggtaggaa ctgagttcac gctggaagac agcaattatt ccaaaatcat cattatgacc 1560

gatgcagata cagatggcgc gcacattcaa gtactgttgt tgacgttctt ttatcggtac 1620

atgaaagaac tcattgatgc aggacgcata tttattgctc agccgccatt gtataaaata 1680

acccgcaagt cgggtaagct cgaaacggtt cgttatgcct ggactgacga gcagcttgat 1740

aattacttaa aagaatttgg acgaaatttt gagcttcaac gttataaagg actcggggag 1800

atgaaccctg atcagttatg ggaaacgaca atgaatcccg agtcacgcac cctgttgcgc 1860

gttcagattg aggatgctgc caaagctgaa cgccgtgtgt ccacattgat gggtgataag 1920

gtggatccac gtaagcgctg gatcgtggaa aacgtggatt tcacggaata cgtagagtag 1980

<210> 6

<211> 1116

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1116

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu16774 recF"

/мол_тип="ДНК"

<400> 6

gtgtttgtga acaacattgt tttgcagcag taccggaact ataaacagct ggagctgaat 60

gaattcgggc ccgttaattt gctgatcgga caaaatgcgc aaggcaaaac gaatctggtt 120

gaggcgattt ttgtattagc cttaactaaa agtcaccgaa cgtcccgtga caaggaatta 180

atttctttcg gggctacttc cacacatcta gctgctgatg tggataagaa atacgggaaa 240

atcagattgg atctctcgtt atccacacaa ggcaaaaaag caaagatcaa cgggctagag 300

cagcgaaagc tgagcgattt tatcggttcg ttaaacgtgg tcatgtttgc gcccgaggat 360

ctggaaattg tcaaaggaac accgggggtt cgccgccggt ttcttgacat ggaaattgga 420

caagttgcgc caggatattt gtatcatttg cagcaatatc agaaagtgct ggttcagcgg 480

aataacctgc tcaagcaagc ttgggggaaa gatatggcgt ccgtgcagct gatgctggag 540

gtatggaatg agcaacttgt tgagcatggt gttaaaattg taaaaaagcg gaaacaattt 600

ataacaaagc tacaaaagtg ggcccaagcc attcatgaag ggattgcagg tgggacagaa 660

gagttaaaat tagcctatgt tccctctttc ggtgagccag aggaagaaga tgaagctgtc 720

ttattggagc gatttatgat aaagttatcc caaatgaggg aacaggaaat ccgccgtggc 780

atgactttgg cgggacccca tcgtgatgat ttggcctttg ccattaacgg cagagaagtg 840

catacgtatg gctctcaggg gcagcagcgg acgacggccc tgtctttgaa gctggccgaa 900

atagaattaa ttcatgagga aattggggag tatcctatcc tgctgctgga tgatgtattg 960

tccgagctgg acccctatcg tcagactcag ctgatcgaga ctttccaaag caaggtacag 1020

acctttatca cggcaaccgg gattgagacg ttgaacgcag aacgacttaa gggtgcccat 1080

atttatcacg tccacgacgg gcatgtggaa cactaa 1116

<210> 7

<211> 1719

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1719

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu16774 recN"

/мол_тип="ДНК"

<400> 7

atgctggtca ctttgtctat acggaatttg gcagtcgtag aagctgtcga tgttcatttt 60

tataaaggat ttcatgtatt gagcggagaa actggtgctg gtaaatccat tattatcgac 120

gcacttgggc tgattgcggg cggcagggga tctgctgatc tagtgcgtta cggatgtgat 180

aaagccgaaa tggaagcctt gtttgaattg ccggtcaaac atcccgtttg gaatacgttg 240

gaggaacaag ggattaaggc taatccagaa gagcatttgc tgattcgtcg agaacttaca 300

gttcagggga aaagctcatc tcgaattaac ggtcagatgg ttaatttaac gatgctgcgt 360

gaggtaggtg agcaactcgt taatatccac gggcagcatg agcatcaaag cttgctgcgt 420

gcggatcgcc atcttgcgct gctggatacg ttcggtgact cggtcattgg tccagtcaaa 480

gcgctttacc gggagcgcta caatgctttt gtcaaagcgg aaaaagaagt aagagaattg 540

caaagctcca gtcaaaaggc ttatcagcta ttggacatgt atcgcttcca attggaagag 600

atcgctgcgg cggagttaaa attgggtgaa gatgaattat tggcagagga acgggtcaag 660

ctatcccata gtgagaaaat gatggatgga gtatcaggag catacgagct gttaagtggc 720

agaggtggtc tggatacggt caataacgtg ttgtccagat taaatgatgt tcagagctac 780

gacagtaaaa gccttcagcc cattgcggag cagattcaat ctgctttcta tcagttggag 840

gatgcagcgt ttcaattacg ctcttatcgt gaggatattg aatttaatcc gggcaagctg 900

catgaggtgg agcaacgttt gaatcaaatt accgggttac agcgaaaata tggtgatagt 960

atagagcaga ttttggaata ctatagccgt attgagcagg aaaccgatct gttggaaaat 1020

aaagatgagc ggctggagca gctcattgca aagcgggatg agttgctttc gaatttgctg 1080

gagattgctg aagagcttac agaggcacgt gaaatttgtg ctgaagagct tgcagagcaa 1140

gtagagcagg aattaaaaga tcttcaaatg gaaagaacgt cactcaaggt gcgtattgat 1200

ccaattgaag atccacgtgg atatgaatat aaaggtctaa aggtacgacc taccaagcaa 1260

gggatagata atgcggaatt tctgatttcg cccaatccag gtgagccact tcgcccactc 1320

ggtaaaatcg cttccggtgg tgagttatca cgtatcatgt tggcgatgaa aagtattttt 1380

gcgcgtcatg atcaaattcc ggtgctcatt tttgacgagg tggataccgg ggtaagtggt 1440

cgtgcagctc agtccatagc cgagaagctt tatcgtttgt cttccgtttg tcaggtgttt 1500

tccattactc atttgccgca ggtggcatgt atggcagatc atcagtacct gattgagaaa 1560

aatgttcatg acggacggac catgactcaa attgagggac taacggagga aggtcgtgtt 1620

aaggaattgg cacggatgct gggtggggta gaaattaccg aaaaaacatt gcatcacgca 1680

caggaaatgc tgaatttggc ggaaggaaag aaagcctga 1719

<210> 8

<211> 945

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..945

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu16774 rpoA"

/мол_тип="ДНК"

<400> 8

gtgatagaaa tcgaaaagcc gaaaattgag acggttgacg tcaatgatga tggcacctat 60

ggaaaattcg tagtagaacc gctggaacgc ggatacggta cgacgcttgg gaactcgctt 120

cgccgtattc tgttatcctc gttaccgggg gcagcagtca catcggttca gatcgatggg 180

gttctgcacg agtttgcaac ggttcccggt gtgaaggaag acgtaacgga gatcattctg 240

aacttgaaag ctttatcgct taaaatccac tcagatgaag agaaagtact tgaaatcgat 300

gcggaaggcg aaggagttgt aacggcaggt gatatccgtg cggatagtga tgtggaaatt 360

cttaatccgg atcttcacat tgcaacgctc ggaccgggtt cgagacttca catgcgtatt 420

tttgccaatc gcggtcgcgg ttacgttaag caggatcgga ataaacgtga tgaccagccg 480

atcggcgtca ttcccgtcga ctccatctac actccgattg cacgcgtgaa ctacggcgta 540

gaaaatacgc gtgtcggcca ggttacgaat tatgacaagc tgacacttga ggtttggact 600

gacggaacta ttcgtcctga agaagctgtg agccttggag ccaaaatttt gaccgagcat 660

gtgatgctat tcgtgggtct cacggatgaa gcaaaagatg cagaaattat ggtcgaaaaa 720

gaagaagaca aaaaagaaaa agttcttgaa atgacgatcg aagagctgga tctctccgtc 780

cgttcctata actgccttaa gcgcgctggt atcaatacgg tacaagaact cacgactaaa 840

tctgaagaag atatgatgaa ggtccgtaac ttgggtcgca aatctttgga agaagtacaa 900

gagaagctcg aggaacttgg tttaggactt cgtacggaag aatag 945

<210> 9

<211> 1143

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1143

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu17007 dnaN"

/мол_тип="ДНК"

<400> 9

atgaagatta gcattctgaa aaacgttttg aacgaggcca tacaacatgt atccaaagcg 60

atatccagtc gaacgacaat tccaattttg agtggtatta agctggatgt gaatcaccag 120

ggagtcacac tgaccgccag cgatacagac atctctattc aatcctttat tccgatggag 180

gatggtgacc aaacggtcgt tcagatcgaa caacccggca gtgtagtgct acccgctaaa 240

ttctttgtcg aaattatcaa aaagttgccg tctcaggaga tccgtatgga ggtaaaagac 300

caattccaaa cctttatctc atccggtgct actgaaattc agatcgttgg tttggaccct 360

gaagaatttc cggtgcttcc caacattgaa gaaaatcaag tgatctctgt gccaggtgat 420

ttgcttaaaa atatgattaa acagacggta ttctccatct ctacccatga aacgacacct 480

attttgactg gtgtattgtg gaatctggct gagggcgaat tgaaatttgt cgcaacggac 540

cgccaccgcc ttgccacccg cagcgctcat ttggagacgt ctgaaggctt gcgttttagc 600

aatgttgtca ttgcaggcaa aacgctcaat gagctgagca gaattattcc ggatcaaaat 660

atgcttgtgg atatcgtcgt agcggacaat caggtattat ttaaggtgga tcgcgtgtta 720

ttttactctc gcatcttgga cggcacctat cctgatactt ctagaattat tccgacttcc 780

tacaaaacag aactgattgt ggacacaaaa agtttgagcg agtctattga ccgtgcttat 840

ttgctgtccc gtgaggaaaa aacgaatatt gtaaaaatgc aatcgttgga aaacggtgat 900

ctagagattt cctccagctc atctgaactt ggtaaagtgc gtgaggaagt aaatgtatcc 960

aaatttgagg gagagccact caaaatctcg ttcaactcca aatatatgct cgacgtgctg 1020

aaggtaattg acagcgagca gctgacgatt gcttttaccg gcattatgag ccccattatt 1080

ttaaaaccgg cagattccag caatgcgctg tatatcatcc tgccatatcg cacaaccaac 1140

tag 1143

<210> 10

<211> 1980

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1980

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu17007 gyrB"

/мол_тип="ДНК"

<400> 10

atggtcgaca aaatcgactt gtctgcggga gcttccggta cacagaacgg agcttcagaa 60

tatggcgcgg acgacattca agtgctcgaa gggcttgtgg cagttcgcaa acggccgggc 120

atgtacatcg ggagcaccag ttcttcggga ctgcatcatt tggtatggga aattgtagac 180

aacgcggtgg atgaacatct cgccaagttt tgctctcgca ttgatatcac aatgcataag 240

gacggttctg ttacagtatc agacaacggg cgcggtattc ctacgggaat gcacaaaatg 300

ggaattccta cgcctcaagt tgtattcacc attttgcacg ccggaggtaa gtttggcggt 360

tcgggatata aaaagtccgg gggtctgcat ggggtaggtg cgtctgtaac gaacgctctt 420

tcggaatggc ttgaagtgga aatctaccgg gacggcaaga ttcaccgtca gcggtttgaa 480

tattggcagg acaagaaggg cgtggagcat gtcggtgaac cgaccacagg ccttgaagtg 540

ctgggcaata ctaacaagac gggctcgaaa attacattta aaccggatat tcgcgttttt 600

cagtcaggaa ttcattttaa ctacgatacg ctggctgaac gccttcagga gattgctttt 660

ctgaattccg gccttcgtat tcagcttaaa gacgaacgca gcggaaagtc agatgaatat 720

ttttatgagg gtggagcaag tcagtttgtt tcttttttga atgagggtaa ggatgtactg 780

catgatgtta ttcactttaa tgccgagaaa gaagacattg aagtggagat tgccatccaa 840

tacaatgccg gctacacaga gacgattgct tcgttcgtta actccattcc gacacgtggc 900

gggggtacgc atgaaacagg cttcaaaacc gcttacactc gtatcatgaa cgactatgca 960

cgcaaaacag cgatgttgaa ggaaaaggat aaaaacctgg aaggtaacga tctgcgtgag 1020

ggtatgatgg ctgtaatcag tgtcaagatg gccgaggttg aatttgtcgg tcagacaaaa 1080

gatcagctgg gtagtgcttc ggcgcggagt acagtggatg ccatcgtatc tgaacaaatg 1140

cagcgctttt tggaggaaaa tccacagata gcgcaaacct tgatcagaaa ggcagttcaa 1200

gcatccaaag cgcgtgaagc tgcacgtaag gctcgggacg aaatgcgttc tggcaagaaa 1260

cgcagtgaaa gttctaattt gaatggcaaa ctgtcgcctg cgcagtctaa ggattttaca 1320

cgtaatgagt tatttatcgt ggaaggcgat tcggctggag gatcggccaa acaaggacgg 1380

gattccaaaa tccaggcaat tttgccgtta aagggcaagc cgatgaatcc ggaaaaatca 1440

aagttggcgg atattatgaa aaatgatgag tatcgtgcga ttacggcagc gattggcgcg 1500

ggggtaggaa ctgagttcac gctggaagac agcaattatt ccaaaatcat cattatgacc 1560

gatgcagata cagatggcgc gcacattcaa gtactgttgt tgacgttctt ttatcggtac 1620

atgaaagaac tcattgatgc aggacgcata tttattgctc agccgccatt gtataaaata 1680

acccgcaagt cgggtaagct cgaaacggtt cgttatgcct ggactgacga gcagcttgat 1740

aattacttaa aagaatttgg acgaaatttt gagcttcaac gttataaagg actcggggag 1800

atgaaccctg atcagttatg ggaaacgaca atgaatcccg agtcacgcac cctgttgcgc 1860

gttcagattg aggatgctgc caaagctgaa cgccgtgtgt ccacattgat gggtgataag 1920

gtggatccac gtaagcgctg gatcgtggaa aacgtggatt tcacggaata cgtagagtag 1980

<210> 11

<211> 1116

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1116

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu17007 recF"

/мол_тип="ДНК"

<400> 11

gtgtttgtga acaacattgt tttgcagcag taccggaact ataaacagct ggagctgaat 60

gaattcgggc ccgttaattt gctgatcgga caaaatgcgc aaggcaaaac gaatctggtt 120

gaggcgattt ttgtattagc cttaactaaa agtcaccgaa cgtcccgtga caaggaatta 180

atttctttcg gggctacttc cacacatcta gctgctgatg tggataagaa atacgggaaa 240

atcagattgg atctctcgtt atccacacaa ggcaaaaaag caaagatcaa cgggctagag 300

cagcgaaagc tgagcgattt tatcggttcg ttaaacgtgg tcatgtttgc gcccgaggat 360

ctggaaattg tcaaaggaac accgggggtt cgccgccggt ttcttgacat ggaaattgga 420

caagttgcgc caggatattt gtatcatttg cagcaatatc agaaagtgct ggttcagcgg 480

aataacctgc tcaagcaagc ttgggggaaa gatatggcgt ccgtgcagct gatgctggag 540

gtatggaatg agcaacttgt tgagcatggt gttaaaattg taaaaaagcg gaaacaattt 600

ataacaaagc tacaaaagtg ggcccaagcc attcatgaag ggattgcagg tgggacagaa 660

gagttaaaat tagcctatgt tccctctttc ggtgagccag aggaagaaga tgaagctgtc 720

ttattggagc gatttatgat aaagttatcc caaatgaggg aacaggaaat ccgccgtggc 780

atgactttgg cgggacccca tcgtgatgat ttggcctttg ccattaacgg cagagaagtg 840

catacgtatg gctctcaggg gcagcagcgg acgacggccc tgtctttgaa gctggccgaa 900

atagaattaa ttcatgagga aattggggag tatcctatcc tgctgctgga tgatgtattg 960

tccgagctgg acccctatcg tcagactcag ctgatcgaga ctttccaaag caaggtacag 1020

acctttatca cggcaaccgg gattgagacg ttgaacgcag aacgacttaa gggtgcccat 1080

atttatcacg tccacgacgg gcatgtggaa cactaa 1116

<210> 12

<211> 1719

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1719

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu17007 recN"

/мол_тип="ДНК"

<400> 12

atgctggtca ctttgtctat acggaatttg gcagtcgtag aagctgtcga tgttcatttt 60

tataaaggat ttcatgtatt gagcggagaa actggtgctg gtaaatccat tattatcgac 120

gcacttgggc tgattgcggg cggcagggga tctgctgatc tagtgcgtta cggatgtgat 180

aaagccgaaa tggaagcctt gtttgaattg ccggtcaaac atcccgtttg gaatacgttg 240

gaggaacaag ggattaaggc taatccagaa gagcatttgc tgattcgtcg agaacttaca 300

gttcagggga aaagctcatc tcgaattaac ggtcagatgg ttaatttaac gatgctgcgt 360

gaggtaggtg agcaactcgt taatatccac gggcagcatg agcatcaaag cttgctgcgt 420

gcggatcgcc atcttgcgct gctggatacg ttcggtgact cggtcattgg tccagtcaaa 480

gcgctttacc gggagcgcta caatgctttt gtcaaagcgg aaaaagaagt aagagaattg 540

caaagctcca gtcaaaaggc ttatcagcta ttggacatgt atcgcttcca attggaagag 600

atcgctgcgg cggagttaaa attgggtgaa gatgaattat tggcagagga acgggtcaag 660

ctatcccata gtgagaaaat gatggatgga gtatcaggag catacgagct gttaagtggc 720

agaggtggtc tggatacggt caataacgtg ttgtccagat taaatgatgt tcagagctac 780

gacagtaaaa gccttcagcc cattgcggag cagattcaat ctgctttcta tcagttggag 840

gatgcagcgt ttcaattacg ctcttatcgt gaggatattg aatttaatcc gggcaagctg 900

catgaggtgg agcaacgttt gaatcaaatt accgggttac agcgaaaata tggtgatagt 960

atagagcaga ttttggaata ctatagccgt attgagcagg aaaccgatct gttggaaaat 1020

aaagatgagc ggctggagca gctcattgca aagcgggatg agttgctttc gaatttgctg 1080

gagattgctg aagagcttac agaggcacgt gaaatttgtg ctgaagagct tgcagagcaa 1140

gtagagcagg aattaaaaga tcttcaaatg gaaagaacgt cactcaaggt gcgtattgat 1200

ccaattgaag atccacgtgg atatgaatat aaaggtctaa aggtacgacc taccaagcaa 1260

gggatagata atgcggaatt tctgatttcg cccaatccag gtgagccact tcgcccactc 1320

ggtaaaatcg cttccggtgg tgagttatca cgtatcatgt tggcgatgaa aagtattttt 1380

gcgcgtcatg atcaaattcc ggtgctcatt tttgacgagg tggataccgg ggtaagtggt 1440

cgtgcagctc agtccatagc cgagaagctt tatcgtttgt cttccgtttg tcaggtgttt 1500

tccattactc atttgccgca ggtggcatgt atggcagatc atcagtacct gattgagaaa 1560

aatgttcatg acggacggac catgactcaa attgagggac taacggagga aggtcgtgtt 1620

aaggaattgg cacggatgct gggtggggta gaaattaccg aaaaaacatt gcatcacgca 1680

caggaaatgc tgaatttggc ggaaggaaag aaagcctga 1719

<210> 13

<211> 945

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..945

<223> /организм="Paenibacillus polymyxa spp. plantarum"

/запись="штамм Lu17007 rpoA"

/мол_тип="ДНК"

<400> 13

gtgatagaaa tcgaaaagcc gaaaattgag acggttgacg tcaatgatga tggcacctat 60

ggaaaattcg tagtagaacc gctggaacgc ggatacggta cgacgcttgg gaactcgctt 120

cgccgtattc tgttatcctc gttaccgggg gcagcagtca catcggttca gatcgatggg 180

gttctgcacg agtttgcaac ggttcccggt gtgaaggaag acgtaacgga gatcattctg 240

aacttgaaag ctttatcgct taaaatccac tcagatgaag agaaagtact tgaaatcgat 300

gcggaaggcg aaggagttgt aacggcaggt gatatccgtg cggatagtga tgtggaaatt 360

cttaatccgg atcttcacat tgcaacgctc ggaccgggtt cgagacttca catgcgtatt 420

tttgccaatc gcggtcgcgg ttacgttaag caggatcgga ataaacgtga tgaccagccg 480

atcggcgtca ttcccgtcga ctccatctac actccgattg cacgcgtgaa ctacggcgta 540

gaaaatacgc gtgtcggcca ggttacgaat tatgacaagc tgacacttga ggtttggact 600

gacggaacta ttcgtcctga agaagctgtg agccttggag ccaaaatttt gaccgagcat 660

gtgatgctat tcgtgggtct cacggatgaa gcaaaagatg cagaaattat ggtcgaaaaa 720

gaagaagaca aaaaagaaaa agttcttgaa atgacgatcg aagagctgga tctctccgtc 780

cgttcctata actgccttaa gcgcgctggt atcaatacgg tacaagaact cacgactaaa 840

tctgaagaag atatgatgaa ggtccgtaac ttgggtcgca aatctttgga agaagtacaa 900

gagaagctcg aggaacttgg tttaggactt cgtacggaag aatag 945

<210> 14

<211> 1143

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1143

<223> /организм="Paenibacillus epiphyticus"

/запись="штамм Lu17015 dnaN"

/мол_тип="ДНК"

<400> 14

atgaagatca gcattctgaa aaacgttttg aacgaggcta tacaacatgt atccaaagcg 60

atatcaagtc ggactacgat tccaattctg agtggtatta agctggatgt gaatcaccag 120

ggagtaacgc tgaccgccag cgatacagac atctccattc aatcctttat tccgatggag 180

gatggtgacc aaactgttgt tcaggtcgaa caacccggca gtgttgtgct gcctgccaaa 240

ttctttgtcg aaattatcaa aaagttgccg tcgcaggaga tccatatgga ggtaaaagac 300

caatttcaaa cctttatctc gtctggcgca actgaaattc agattgttgg cttggaccct 360

gaagaattcc cggtgcttcc caacattgaa gaaaatcaag tcatctctgt accaggagat 420

ttacttaaaa atatgattaa acagacggta ttctccatct ccacccacga aacgacaccg 480

attttaactg gcgtgttgtg gaatctggct gagggtgaat tgaagtttgt ggcaacggac 540

cgccaccgcc ttgccacccg tagcgctcat ttggagacgt ctgaaggctt gcgttttagc 600

aatgttgtca ttgcgggcaa aacgctgaat gagctgagca gaattattcc agatcaaaat 660

atgcttgtgg atatcgtagt agcggacaat caggtattat tcaaagtaga tcgggtgcta 720

ttttattccc gcatcttgga cggcacctat cctgatactt ctagaattat tccgacctcc 780

tacaaaacag aactgattgt ggatacaaaa agtttaagtg agtcaattga ccgtgcttat 840

ttgctgtccc gtgaggaaaa aacgaatatt gtaaaaatgc agtcgctgga aaatggcggt 900

ttggagattt cctctagttc ctctgagctt ggcaaagtgc gtgaggaagt aactgtgtcc 960

aaatttgagg gagagccgct caaaatttcg ttcaactcta aatacatgct cgacgtgctg 1020

aaggtgattg acagcgagca gctgacgatt gcttttaccg gcattatgag ccccattatt 1080

ttaaaaccgg ctgattccag caatgcgctg tatatcatcc tgccatatcg cacaaccaac 1140

tga 1143

<210> 15

<211> 1980

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1980

<223> /организм="Paenibacillus epiphyticus"

/запись="штамм Lu17015 gyrB"

/мол_тип="ДНК"

<400> 15

atggtcgaca aaatcgactt gtctgcggga gtgtccggca cacaaagcgg agcttcggaa 60

tatggcgcgg acgacattca agtgctcgaa gggcttgtgg cagttcgcaa acggccgggc 120

atgtacatcg ggagcaccag ttcttcgggg ctgcatcatt tggtatggga aattgtagac 180

aacgcggtgg atgaacatct cgccaagttt tgctctcgca ttgatattac aatgcataag 240

gacggttccg ttacagtatc agacaacggg cgcggtattc ctacgggaat gcacaaaacg 300

ggaattccta cgcctcaggt tgtattcacc attttgcacg ccggaggtaa gtttggcggt 360

tcgggatata aaaaatccgg gggtctgcac ggtgtaggtg cgtctgtaac gaacgctctt 420

tcggaatggc ttgaagtaga aatttaccgg gacggcaaga ttcaccgtca gcggtttgaa 480

tattggcagg acaagaaggg cgtggagcat gtcggggaac cgaccacagg ccttgaagtg 540

ctgggcaata ctaacaagac gggctcgaaa attacattta aaccggatat tcgtgttttt 600

caggcaggca ttcattttaa ctacgatacg ttggctgagc gccttcagga aattgctttt 660

ctaaattcgg gccttcgtat tcaacttaaa gacgaacgca gcggaaagtc agatgagtat 720

ttttatgagg gtggcgcaag tcagtttgtt gcttttctga atgagggcaa ggatgtgctg 780

catgacgtta ttcactttaa tgccgagaaa gaagacattg aagtagagat tgccatccag 840

tacaatgctg gttatacaga gacgattgct tcgttcgtta actccattcc gacacgtgga 900

ggaggtacgc atgaaacggg attcaaaacc gcttacactc gtgtcatgaa cgactatgcc 960

cggaaaacgg tgatgttgaa agaaaaggat aaaaacttgg agggcaacga tctacgtgag 1020

ggcatgatgg ctgtaatcag tgtcaagatg gctgaggttg aatttgtcgg ccagacaaag 1080

gatcagctgg gaagcgcttc ggcacggagt acagtggatg ccatcgtatc tgagcagatg 1140

cagcgttttt tggaagaaaa tccgcagata gcacaaactt tgatcaagaa ggcagttcaa 1200

gcatccagag cacgtgaagc tgcacgtaaa gctcgggatg aaatgcgttc cggtaaaaag 1260

cgcagtgaaa gttccaattt gaatggtaaa ctatcgcctg cgcagtccaa ggattttaca 1320

cgtaatgagt tgtttattgt ggaaggcgat tcggctggag gatcagccaa gcagggacgg 1380

gattccaaaa ttcaggccat attgccgcta aagggcaagc cgatgaatcc ggaaaaatcc 1440

aaactggcgg atattatgaa gaatgatgag taccgtgcta ttacagcagc tattggtgcg 1500

ggagtaggaa cagagttttc gctggaagac agcaattatt ccaaaatcat cattatgacc 1560

gatgcagata cagatggtgc gcacattcaa gtgctgttgt tgacgttctt ttatcggtac 1620

atgaaagagc ttattgatgc aggacgcata tttattgctc aaccgccatt gtataaaata 1680

actcgaaagt cgggtaagct cgaaacggtg cgttatgctt ggactgacga gcagcttgat 1740

aattatttaa aagaatttgg acgaaatttt gagcttcagc gctataaagg acttggggaa 1800

atgaaccctg atcagttatg ggaaacaacg atgaatcccg attcacgcac cttgctacgc 1860

gttcagatag aggatgcagc caaggctgaa cgcagggtgt ccactttgat gggtgataag 1920

gtggatccgc gcaagcgctg gatcgtggaa aacgtagatt ttacggaata cgtagagtag 1980

<210> 16

<211> 1116

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1116

<223> /организм="Paenibacillus epiphyticus"

/запись="штамм Lu17015 recF"

/мол_тип="ДНК"

<400> 16

gtgtttgtga acaacattgt tttgcagcag taccggaact atgaacagct ggagctgaat 60

gaatttgggc ccgttaattt gctgatcgga caaaatgcgc agggcaaaac gaatctggta 120

gaggcaattt ttgtactggc tttaaccaaa agtcatcgaa cgtcccgcga caaggagtta 180

atctctttcg gggctacttc cactcaccta gctgcggatg tggataaaaa atacgggaaa 240

atcagactgg atctcgcgtt atccacacaa ggcaaaaaag caaagatcaa cggactggag 300

cagcgcaaac tgagcgattt tatcggttcg ttaaatgtgg tcatgtttgc acctgaggat 360

ctggaaattg tgaaaggaac accgggggtt cgccgccggt ttcttgacat ggaaatcgga 420

caggttgcgc caggatatct gtatcatttg cagcaatatc agaaagtatt ggttcagcga 480

aacaacctgc tcaagcaagc ttggggtaag gatatggcgt cagtgcagct gatgctggag 540

gtatggaatg agcaacttgt tgagcatggt gttaaaattg ttaaaaagcg gaaacaattt 600

ataacaaagc tacaaaagtg ggctcaggcc attcatgaag ggatcgcagg tgggacagaa 660

gagttaaaat taacctatgt tccctccttc agtgagccag aggaagaaga tgaagctgtc 720

ttattggagc gatttatgat aaagttatcc caaatgaggg aacaggaaat ccgccgtggc 780

atgactttgg cgggacccca tcgtgacgat ttggcctttg ccattaacgg cagagaagtg 840

catacgtatg gctctcaggg gcagcagcgg acgacggccc tgtccttgaa gttggccgaa 900

atagagttaa ttcatgagga aattggtgaa tatcctgtct tgctgctgga tgatgttttg 960

tccgagctgg acccctatcg tcagacccag ctgatcgaga ctttccaaag caaggtacag 1020

acctttatca cggcaaccgg ggttgagact ttgaacgcag aacgactcaa ggatgccaat 1080

atttatcacg tccacgacgg gcatgtggaa cactaa 1116

<210> 17

<211> 1719

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..1719

<223> /организм="Paenibacillus epiphyticus"

/запись="штамм Lu17015 recN"

/мол_тип="ДНК"

<400> 17

atgctggtca ctttgtctat acggaatttg gcggtcgtag aggccgtcga tgttcatttt 60

tataaagggt ttcatgtctt gagcggggaa acaggtgctg gtaaatccat tattatcgat 120

gcgcttggcc tgattgcagg cggtaggggc tctgctgatc tagtgcgtta cggttgtgat 180

aaagcagaga tggaagcctt gtttgagctg ccggtaaaac atccagtttg gaaaacactt 240

gaggaacaag ggattaaggc caatgcggag gagcatttgc tgattcgtcg cgaacttacg 300

gttcagggga aaagctcttc tcgaattaac ggtcagatgg ttaatttaac gatgctgcgt 360

gaggtaggtg agcagctcgt caatatccac gggcaacatg agcatcaaag cctgctacgt 420

gcagatcgcc atctggcgct gctggatacg ttcggtgatt cggtgatcgg tccagtcaaa 480

acgctttacc gtgagcgtta caatgctttt gtcaaagcgg aaaaagaagt aagagaactg 540

caaagctcca gtcaaaaggc ttatcagctt ttggatatgt accgatttca attagaagag 600

atcgctgcgg cggagttgaa attgggagaa gatgaattat tggcagagga acgggtcaag 660

ctatcccata gtgagaaaat gatggatggg atatcaggag catacgaact gctaagcggc 720

agaggtgggc tggatacgat caataacgta ttgtctagat tgaacgatgt ccaaagctat 780

gacagcaaaa gccttcagcc cattgcggag cagattcagt ctgcttttta ccagttagag 840

gacgcagcat tccaattacg ttcttatcgt gaggatattg aatttaatcc aggcaagctg 900

catgaagtgg agcaacgttt gaatcaaatt accggattac agcgaaaata tggtgatagt 960

atagagcaga ttttggaata ctatagccgt attgagcagg aaaccgatct gctggaaaat 1020

aaagatgagc ggctggagca gctcattgca aaacgggatg agttgctttc cgatttgctg 1080

gagatttcag aagagcttac agaagcacgt gaaatttgtg ctgaagagct tgcagagcaa 1140

gtggagcagg agttaaaaga cctgcagatg gaaagaacgt cactcaaggt gcgcattgat 1200

ccaattgaag atccacgcgg atatgagtat aaaggtctga aggtaaggcc taccaagcaa 1260

ggaattgata atgcggaatt tcttatttca cccaatccag gtgagccact acgtccactt 1320

ggtaagatcg cttcaggcgg tgagctatca cgtatcatgt tggcgatgaa aagtattttt 1380

gcgcgtcatg atcaaattcc agtactcatt tttgacgagg tggataccgg ggtgagtggt 1440

cgtgcagctc aatccattgc cgagaagcta tatcgtttat cttccgtttg tcaggtgttt 1500

tccattactc atttgccaca ggtggcatgt atggcagatc atcagtacct tattgagaaa 1560

aatgttcatg atggacggac catgactcaa attgagggac ttacggagga cgggcgtgtc 1620

aaggaattgg cacggatgct gggcggcgtg gaaattaccg aaaaaacatt gcatcacgca 1680

caggaaatgc tgaatttggc ggaaggaaag aaagcctga 1719

<210> 18

<211> 945

<212> ДНК

<213> Paenibacillus sp.

<220>

<221> источник

<222> 1..945

<223> /организм="Paenibacillus epiphyticus"

/запись="штамм Lu17015 rpoA"

/мол_тип="ДНК"

<400> 18

gtgatagaaa tcgaaaagcc gaaaattgag acggttgacg tcaatgatga tggcacctat 60

ggaaaattcg tagtagaacc gctggaacgc ggatacggta cgacgttggg aaactcgctt 120

cgccgtattc tgttatcctc gttaccgggg gcagcagtca catcggttca gatcgatggg 180

gttctgcacg agtttgcaac ggttcccggt gtgaaggaag acgtaacgga gatcattctg 240

aacttgaaag ctttatcgct taaaatccac tcggatgaag agaaagtact cgaaatcgat 300

gcggaaggcg aaggagttgt aacggcagga gatatccgtg cggatagtga tgtggaaatt 360

cttaatccgg atcttcacat tgctacgctc ggaccgggtt cgagacttca catgcgtatt 420

tttgccaatc gcggtcgcgg ttacgttaag caggatcgga acaaacgtga tgaccagccg 480

atcggcgtca ttcccgtcga ctccatctac actccgattg cacgcgtgaa ctacggcgta 540

gaaaatacgc gtgtcggcca ggttacgaat tacgacaagc tgacacttga ggtttggact 600

gacggaagta ttcgtcccga ggaagcagtg agccttggag ccaaaatttt gaccgagcat 660

gtgatgttgt tcgtgggtct cacggacgag gcaaaagatg ctgaaattat ggttgaaaaa 720

gaagaagaca agaaagaaaa agttcttgaa atgacgatcg aagagctgga tctctccgtc 780

cgttcctata actgccttaa gcgcgctggt atcaatacgg tacaagaact cacgactaaa 840

tctgaagaag atatgatgaa ggtccgtaac ttgggtcgca aatctttgga agaagtacaa 900

gagaagctcg aggaacttgg tttaggactt cgtacggaag aatag 945

<---

Группа изобретений относится к биопестицидным смесям, содержащим в качестве активных компонентов по меньшей мере один выделенный бактериальный штамм рода Paenibacillus или его бесклеточный экстракт и по меньшей мере один химический пестицид. Предложена фунгицидная смесь, содержащая по меньшей мере один Paenibacillus штамм, выбранный Paenibacillus DSM 26969, Paenibacillus DSM 26970 и Paenibacillus DSM 26971, причем по меньшей мере один штамм Paenibacillus способен продуцировать фузарицидин со структурой 1А и/или 1В, и по меньшей мере один химический пестицид. Также предложен способ контроля, подавления фитопатогенных грибов или предупреждения инфицирования грибами, в котором грибы, их место обитания, почву, материалы или растения, подлежащие защите от поражения грибами, обрабатывают эффективным количеством фунгицидной смеси или фунгицидной композиции, включающей указанную фунгицидную смесь и сельскохозяйственно приемлемое вспомогательное средство. Изобретения приводят к расширению фунгицидного спектра активности предложенных бинарных смесей с синергетическим эффектом. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 22 ил., 35 табл., 11 пр.

1. Фунгицидная смесь, содержащая в качестве активных компонентов

1) по меньшей мере один Paenibacillus штамм,

причем по меньшей мере один Paenibacillus штамм выбран из группы, включающей:

a) Paenibacillus штамм Lu16774, депонированный в DSMZ под учетным № DSM 26969;

b) Paenibacillus штамм Lu17007, депонированный в DSMZ под учетным № DSM 26970; и

c) Paenibacillus штамм Lu17015, депонированный в DSMZ под учетным № DSM 26971; и

в которой указанный по меньшей мере один штамм Paenibacillus способен продуцировать по меньшей мере одно из следующих соединений:

в среде для выращивания, содержащей по меньшей мере один источник углерода и один источник азота; и

2) по меньшей мере один пестицид II, выбранный из групп A)-Е):

A) азоксистробин, димоксистробин, пираклостробин, бензовиндифлупир, флуксапироксад;

B) дифеноконазол, метконазол, тритиконазол, 2-[4-(4-хлорфенокси)-2-(трифторметил)фенил]-1-(1,2,4-триазол-1-ил)пропан-2-ол (мефенотрифлуконазол);

C) металаксил, металаксил-M;

D) пириметанил;

Е) флудиоксонил;

в синергетически эффективном количестве.

2. Смесь по п. 1, в которой указанный по меньшей мере один штамм Paenibacillus обладает противогрибковой активностью против по меньшей мере двух из патогенов растений, выбранных из группы, включающей Alternaria spp., Botrytis cinerea, Phytophthora infestans и Sclerotinia sclerotiorum.

3. Смесь по любому из пп. 1, 2, в которой компонент 1) содержит по существу очищенную культуру по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, как определено в любом из пп. 1, 2.

4. Смесь по любому из пп. 1-3, в которой компонент 1) содержит цельный культуральный бульон, культуральную среду или бесклеточный экстракт по меньшей мере одного штамма Paenibacillus, как определено в любом из пп. 1, 2.

5. Смесь по любому из пп. 1-4, в которой компонент 1) содержит по меньшей мере один метаболит, выбранный из групп поликсиминов, октапептинов, полипептинов, пелгипептинов и фузарицидинов.

6. Смесь по п. 5, в которой по меньшей мере один метаболит выбран из фузарицидинов формулы I

причем

R представляет собой 15-гуанидино-3-гидроксипентадекановую кислоту (GHPD);

X¹ представляет собой треонин;

X² выбран из изолейцина и валина;

X³ выбран из тирозина, валина, изолейцина и фенилаланина;

X⁴ представляет собой треонин;

X⁵ выбран из глутамина и аспарагина;

X⁶ представляет собой аланин; и

где стрелка определяет единственную (амидную) связь или между карбонильной частью R и аминогруппой аминокислоты X¹ или между карбонильной группой одной аминокислоты и аминогруппой соседней аминокислоты, причем кончик стрелки указывает присоединение к аминогруппе указанной аминокислоты X¹ или указанной соседней аминокислоты; и

причем единственная линия без наконечника стрелки определяет единственную (сложноэфирную) связь между карбонильной группой X⁶ и гидроксильной группой X¹.

7. Смесь по п. 6, в которой по меньшей мере один метаболит выбран из фузарицидинов формулы I

в которой

R представляет собой 15-гуанидино-3-гидроксипентадекановую кислоту (GHPD);

X¹ представляет собой треонин;

X² представляет собой изолейцин;

X³ представляет собой тирозин;

X⁴ представляет собой треонин;

X⁵ выбран из глутамина и аспарагина;

X⁶ представляет собой аланин; и

где стрелка определяет единственную (амидную) связь, или между карбонильной частью R и аминогруппой аминокислоты X¹, или между карбонильной группой одной аминокислоты и аминогруппой соседней аминокислоты, причем кончик стрелки указывает присоединение к аминогруппе указанной аминокислоты X¹ или указанной соседней аминокислоты; и

причем единственная линия без наконечника стрелки определяет единственную (сложноэфирную) связь между карбонильной группой X⁶ и гидроксильной группой X¹.

8. Смесь по п. 7, в которой по меньшей мере один метаболит выбран из фузарицидинов 1A и 1B:

9. Фунгицидная композиция, содержащая смесь, определенную в любом из пп. 1-8 и сельскохозяйственно приемлемое вспомогательное средство.

10. Композиция по п. 9, дополнительно содержащая пестицид III, выбранный из групп SF) и SI):

SF) фунгициды

- ингибитор комплекса III на Q_o-сайте, выбранный из: пираклостробина, азоксистробина, пикоксистробина, трифлоксистробина, димоксистробина, энестробурина, фенаминстробина, флуоксастробина, крезоксим-метила, мандестробина, метоминостробина, оризастробина, пираметостробина, пираоксистробина;

- ингибитор широкого спектра пиридина и пиразола комплекса II, выбранный из: флуксапироксада, боскалида, бензовиндифлупира, пенфлуфена, пентиопирада, седаксана, флуопирама, биксафена, изопиразама;

- специфические к базидиомицетам ингибиторы комплекса II, выбранные из: карбоксина, беноданила, фенфурама, флутоланила, фураметпира, мепронила, оксикарбоксина, тифлузамида;

- ингибитор продуцирования АТФ: силтиофам;

- фунгицидные соединения азола, выбранные из: ипконазола, дифеноконазола, протиоконазола, прохлораза, тритиконазола, флутриафола, ципроконазола, диниконазола, диниконазола-M, флуквинконазола, флузилазола, гексаконазола, имазалила, имибенконазола, метконазола, миклобутанила, симеконазола, тебуконазола, триадименола, униконазола, тиабендазола;

- специфические к оомицетам фунгициды, выбранные из: оксатиапипролина, валифеналата, металаксила, металаксила-M, этабоксама, диметоморфа, зоксамида, флуморфа, мандипропамида, пириморфа, бентиаваликарба, ипроваликарба;

- ингибитор МАP/гистидинкиназы: флудиоксонил;

- соединения бензимидазола, выбранные из: тиофанат-5 метила, карбендазима;

- соединения дитиокарбамата, выбранные из: тирама, цирама;

SI) инсектициды

- соединения, антагонисты ГАМК, выбранные из: фипронила, этипрола, ванилипрола, пирафлупрола, пирипрола, амида 5-амино-1-(2,6-дихлор-4-метил-фенил)-4-сульфинамоил-1H-пиразол-3-тиокарбоновой кислоты;

- специфические к чешуекрылым ингибиторы рианодиновых рецептров, выбранные из: хлорантранилипрола и флубендиамида;

- ингибитор рианодиновых рецепторов кросс-спектра: циантранилипрол;

- пиретроидные модуляторы натриевых каналов, выбранные из: тефлутрина, бифентрина, циперметрина, альфа-циперметрина, цифлутрина, бета-цифлутрина, лямбда-цигалотрина, дельтаметрина, эсфенвалерата, этофенпрокса, фенвалерата, флуцитрината, перметрина;

- системно активные неоникотиноидные соединения: клотианидин, имидаклоприд, тиаметоксам, динотефуран, ацетамиприд, флупирадифлурон, тиаклоприд, трифлумезопирим, нитенпирам;

- ингибиторы ацетилхолинэстеразы, активаторы хлоридных каналов и сульфоксимины: сульфоксафлор, ацефат, хлорпирифос, тиодикарб, абамектин, спиносад;

- другие инсектициды: тиоксазафен.

11. Материал для размножения растений, имеющий покрытие, содержащее композицию, определенную в любом из пп. 9, 10, где указанный материал для размножения растений представляет собой семена или вегетативный растительный материал.

12. Применение смеси, определенной в любом из пп. 1-8, или композиции, определенной в любом из пп. 9, 10, для контроля или подавления фитопатогенных грибов, или предупреждения инфицирования фитопатогенными грибами, или для защиты материалов от заражения, разрушения вредными грибами.

13. Способ контроля, подавления фитопатогенных грибов или предупреждения инфицирования грибами, в котором грибы, их место обитания, или материалы или растения, подлежащие защите от поражения грибами, или почву или материал для размножения обрабатывают эффективным количеством смеси, определенной в любом из пп. 1-8, или эффективным количеством композиции, определенной в любом из пп. 9, 10.