КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ КОНТРОЛЯ ЗАРАЖЕНИЯ ЧЛЕНИСТОНОГИХ ПАРАЗИТАМИ И ВРЕДИТЕЛЯМИ Российский патент 2021 года по МПК A01N57/16 C12N15/113 

ВКЛЮЧЕНИЕ ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Машиночитаемая форма перечня последовательностей подана вместе с настоящей заявкой путем подачи в электронном виде и полностью включена в настоящую заявку посредством ссылки. Перечень последовательностей содержится в файле, созданном 3 мая 2016 г., имеющем название ʺSEQUENCE_LISTING_61478_ST25.txtʺ, размер которого составляет 67223 байтов (согласно измерению в операционной системе MS-Windows^®).

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Предложены способы и композиции для контроля заражения членистоногих паразитами и вредителями. Также предложены способы и композиции для контроля заражения пчел клещом Varroa.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Различные виды членистоногих во все большем объеме культивируются в коммерческом масштабе. Насекомые и их личинки питательны, и их употребляют в пищу во многих культурах как сырыми, так и приготовленными. Ракообразных, таких как крабы, омары, речные раки, мелкие и крупные креветки, искусственно выращивают в крупном коммерческом масштабе, и они составляют важную часть диеты человека. Дополнительно к культивированию видов членистоногих для употребления в пищу, членистоногих также культивируют в рамках стратегии борьбы с вредителями, включая биологический контроль над другими членистоногими, например, культивирование паразитических ос (наездников) для контроля над тараканами и огненными муравьями. Членистоногие также могут служить источником сырья, такого как красители, лекарственные средства, медикаменты и антибиотики. Наряду с возрастающим значением культивирования членистоногих, растут популяции различных вредителей и паразитов, которые уничтожают колонии членистоногих или сильно уменьшают выход продуктов, полученных из культур членистоногих. Соответственно, существует все возрастающая потребность в способах контроля вредителей и паразитов членистоногих.

Среди наиболее важных видов культивируемых членистоногих находится медоносная пчела. Медоносные пчелы Apis mellifera необходимы для эффективного опыления сельскохозяйственных культур и, следовательно, особо важны для мирового сельского хозяйства. Медоносные пчелы также производят экономически важные продукты, включая мед и пчелиный воск. Медоносные пчелы восприимчивы ко множеству паразитов и патогенов, включая эктопаразитарного клеща Varroa destructor.

Клещи Varroa (Varroa destructor) представляют собой паразита номер один для выращиваемых медоносных пчел (Apis mellifera) и являются основной глобальной угрозой коммерческому пчеловодству (Rosenkranz и др. 2010). Взрослый клещ обычно проникает в ячейки с расплодом рабочей и трутневой пчелы перед тем, как они запечатываются, привлеченный феромоном расплода медоносных пчел. Клещ погружается в пищу расплода, которую пчелы помещают внутрь ячейки в преддверии запечатывания, наиболее вероятно, чтобы избежать распознавания и удаления пчелами-кормилицами. После запечатывания ячеек с расплодом пчелами-кормилицами клещ прикрепляется к личинке и начинает поглощать гемолимфу личинки пчелы. Этот процесс запускает оогенез у клещей, и несколько дней спустя за ним следует откладывание мужских и женских яиц. В конце концов, взрослый Varroa выходит из ячейки и прицепляется к высвободившейся пчеле. Varroa непосредственно повреждает медоносных пчел несколькими путями, наиболее значительно путем истощения их запасов, оказывая неблагоприятное влияние на врожденную иммунную систему медоносных пчел, и вследствие того, что он является очень эффективным переносчиком вирусов (Di Prisco и др. 2011), некоторые из которых, как известно, реплицируются внутри клеща, таким образом резко повышая вирусную нагрузку.

Безопасное, эффективное и долгосрочное решение проблемы Varroa является текущей задачей, которую все еще необходимо решить. В настоящее время пчеловоды используют множество способов контролирования уровней Varroa, которые включают различные химические противоклещевые средства (майтициды), большинство из которых утратили эффективность и являются токсичными и/или проникают в воск и мед. Другие способы включают применение щавелевой или муравьиной кислоты, монотерпенов (тимола) и различных других практик контроля с крайне неустойчивыми результатами, включая токсичность для подвергнутых обработке колоний. Выведение пчел, устойчивых к Varroa, например, селекция на основании гигиеничного поведения, которое приводит к удалению зараженного паразитами расплода, позволила добиться умеренного практического успеха.

Синдром разрушения колоний (CCD) медоносных пчел является угрозой полного уничтожения сельского хозяйства в США и во всем мире. В действительности, во время недавней вспышки CCD в США зимой 2006-2007 г. приблизительно 25% или более из 2,4 миллиона ульев медоносных пчел были утрачены вследствие CCD. По оценке 23% пчеловодных хозяйств в Соединенных Штатах пострадали от CCD за зиму 2006-2007 г., который затронул в среднем 45% хозяйств пчеловодов. Зимой 2007-2008 г. инициативная группа по CCD сельскохозяйственной научно-исследовательской службы Министерства сельского хозяйства США (USDA-ARS) оценила, что всего 36% всех ульев из коммерческих хозяйств были уничтожены CCD.

CCD характеризуется быстрым покиданием колонии популяцией взрослых пчел, при этом на некотором расстоянии от колонии обычно находят мертвых взрослых пчел. На конечной стадии разрушения о матке заботится лишь несколько вновь появившихся взрослых пчел. В разрушенных колониях часто находят значительное количество запечатанного расплода и запасов пищи. О явлении CCD впервые сообщили в 2006 г.; тем не менее, пчеловоды заметили единичные распады колоний, связанные с CCD, еще в 2004 г. В качестве причин были предположительно названы различные факторы, такие как клещи и инфекционные агенты, погодные условия, электромагнитное излучение (антенны сотовой связи), пестициды, недостаточное питание и стресс. На сегодняшний день контроль CCD сосредоточен на контроле клеща Varroa, санации и удалении пораженных ульев, лечении условно патогенных инфекций (таких как нозема (Nosema)) и улучшении питания. На сегодняшний день не разработано эффективных профилактических мер.

Клещи Varroa паразитируют на куколках и взрослых пчелах и репродуцируются в ячейках с куколками. Клещи с помощью рта прокалывают экзоскелет и кормятся за счет гемолимфы пчелы. В таких ранах в экзоскелете скапливаются бактериальные инфекции, такие как Melissococcus pluton, который вызывает Европейский гнилец пчел. Вдобавок к паразитному действию предполагают, что клещи Varroa являются переносчиками множества патогенов медоносных пчел, включая вирус деформации крыла (DWV), кашмирский вирус пчел (KBV), вирус острого паралича пчел (ABPV) и вирус черного маточника (BQCV), и могут ослаблять иммунную систему хозяев, делая их восприимчивыми к инфекциям. Если заражение паразитами Varroa оставить без лечения, то это, как правило, приведет к смертности на уровне колоний.

Современные способы лечения заражений паразитами Varroa оказываются неэффективными, так как у данных клещей развивается устойчивость к существующим майтицидам. Кроме того, применение таких майтицидов может привести к попаданию вредных химических веществ в мед, который предназначен для потребления человеком.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении предложены и включены в него композиции селективного инсектицида, содержащие направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую последовательность, которая по существу комплементарна или по существу идентична участку последовательности гена кальмодулина или РНК, транскрибируемой с него. В некоторых аспектах указанная композиция дополнительно содержит вспомогательное вещество.

В некоторых вариантах реализации предложена направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты, которая по существу комплементарна или по существу идентична участку последовательности гена кальмодулина Varroa, или РНК, транскрибируемой с него, и не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной молекулы нуклеиновой кислоты удалены одна или более нуклеиновых кислот по сравнению с эталонной последовательностью гена кальмодулина Varroa, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93, так что указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации указанная последовательность гена нецелевого организма является ортологом последовательности гена кальмодулина Varroa. В некоторых вариантах реализации указанная последовательность гена нецелевого организма является гомологом последовательности гена кальмодулина Varroa. В некоторых вариантах реализации указанная последовательность гена нецелевого организма неродственна последовательности гена кальмодулина Varroa. В одном аспекте из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной молекулы нуклеиновой кислоты удален по меньшей мере один нуклеотид в указанном участке по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной молекулы нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида в указанном участке по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, по существу идентичную или по существу комплементарную последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94.

В одном аспекте молекула нуклеиновой кислоты в селективной инсектицидной композиции представляет собой двухцепочечную РНК (дцРНК). В некоторых аспектах дцРНК представляет собой малую интерферирующую (миРНК).

В одном аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной молекулы нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93. В другом аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной молекулы нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94. В некоторых аспектах направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты содержит по меньшей мере 18 смежных нуклеотидов из последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35 и 69-93. В некоторых аспектах направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых аспектах направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты состоит из последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35 и 69-93.

В одном аспекте композиция селективного инсектицида дополнительно содержит одну или более направленных против паразитов, против вредителей или инсектицидных молекул нуклеиновой кислоты, которые по существу комплементарны или по существу идентичны первому участку последовательности гена кальмодулина. В некоторых аспектах указанная одна или более молекул нуклеиновой кислоты содержит вторую последовательность нуклеиновой кислоты, комплементарную второму участку последовательности гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной молекулы нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида в указанном первом участке и/или втором участке по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность гена кальмодулина по существу идентична или по существу комплементарна последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93, или ее фрагменту. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, по существу идентичную или по существу комплементарную последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92.

В одном аспекте композиция селективного инсектицида поглощается пчелой, абсорбируется пчелой, поглощается клещом или абсорбируется клещом.

В одном аспекте вспомогательное вещество выбрано из группы, состоящей из белка, пыльцы, углевода, полимера, жидкого растворителя, сахарного сиропа, твердого сахара и полутвердого корма. В некоторых аспектах жидкий растворитель выбран из группы, состоящей из раствора сахарозы и раствора кукурузного сиропа. В некоторых аспектах белок выбран из группы, состоящей из пыльцы и соевого белка. В другом аспекте вспомогательное вещество представляет собой твердое вещество, выбранное из сахара, заменителя сахара или сахарной добавки. В некоторых аспектах твердый сахар включает микрочастицы сахара, пропитанные нуклеиновой кислотой - дцРНК.

В одном аспекте настоящего изобретения предложены композиции для поглощения пчелами, содержащие пчелиный корм и молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой по существу идентична или по существу комплементарна одному или более участкам последовательности гена кальмодулина, или РНК, транскрибируемой с него. В некоторых вариантах реализации молекула нуклеиновой кислоты по существу комплементарна или по существу идентична участку последовательности гена кальмодулина Varroa, или РНК, транскрибируемой с него, и не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации из указанной молекулы нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида в указанном одном или более участках по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина Varroa. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность гена кальмодулина Varroa по существу комплементарна или по существу идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93, или ее фрагменту. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации молекула нуклеиновой кислоты включает последовательность, по существу идентичную или по существу комплементарную последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94. В некоторых аспектах пчелиный корм включает продукт питания пчелы, выбранный из группы, состоящей из кукурузного сиропа, заменителя пыльцы, пыльцы, лепешки из пыльцы и помадки. В некоторых аспектах пчелиный корм дополнительно содержит один или более из следующих компонентов: минеральную соль, эфирное масло, пивные дрожжи, дрожжевой экстракт, трегалозу, триптон, сухое молоко, лецитин и витамин C. Примеры эфирных масел включают, но не ограничены перечисленными: винтергреневое масло, масло кудрявой мяты, масло перечной мяты, масло лемонграсса и масло чайного дерева.

В другом аспекте настоящего изобретения предложена конструкция нуклеиновой кислоты, кодирующая направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную последовательность нуклеиновой кислоты, которая по существу идентична или комплементарна участку последовательности гена кальмодулина, или РНК, транскрибируемой с него, функционально связанную с последовательностью промотора, функционирующей в клетке-хозяине, и способную продуцировать дцРНК при ее внедрении в указанную клетку-хозяина. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота по существу комплементарна или по существу идентична участку целевой последовательности гена кальмодулина, или РНК, транскрибируемой с него, и не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной последовательности нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность гена кальмодулина по существу идентична или по существу комплементарна последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93, или ее фрагменту. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, по существу идентичную или по существу комплементарную последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94. В некоторых аспектах указанная конструкция нуклеиновой кислоты дополнительно содержит по меньшей мере один регуляторный элемент, выбранный из группы, состоящей из лидерных последовательностей трансляции, интронов, энхансеров, структур типа «стебель-петля», связывающих репрессор последовательностей, терминирующих последовательностей, последовательностей паузы и последовательностей узнавания полиаденилирования. В некоторых аспектах клетка-хозяин представляет собой клетку бактерии или дрожжей.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ предоставления композиции медоносной пчеле, включающий предоставление пчеле эффективного количества композиции, содержащей направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна одному или более участкам последовательности гена кальмодулина, или РНК, транскрибируемой с него, в результате чего указанная нуклеиновая кислота присутствует в ткани медоносной пчелы. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота по существу комплементарна или по существу идентична участку целевой последовательности гена кальмодулина, или РНК, транскрибируемой с него, и не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации нецелевой организм представляет собой медоносную пчелу. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида в указанном одном или более участках по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность гена кальмодулина по существу идентична или по существу комплементарна последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93, или ее фрагменту. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, по существу идентичную или по существу комплементарную последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94. В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения или предотвращения заболевания в колонии медоносных пчел, включающий предоставление эффективного количества композиции, содержащей направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна одному или более участкам последовательности гена кальмодулина, медоносной пчеле, в результате чего указанная нуклеиновая кислота присутствует в ткани медоносной пчелы. В некоторых аспектах последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина Varroa destructor. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота по существу комплементарна или по существу идентична участку последовательности гена кальмодулина Varroa, или РНК, транскрибируемой с него, и не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида в одном или более участках по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность гена кальмодулина по существу комплементарна или по существу идентична последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93, или ее фрагменту. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ снижения паразитирования на пчеле клеща Varroa destructor, включающий предоставление пчеле эффективного количества направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты, в которой указанная нуклеиновая кислота по существу идентична или по существу комплементарна одному или более участкам последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, или РНК, транскрибируемой с него, тем самым снижая паразитирование на пчеле клеща Varroa destructor. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, по существу идентичную или по существу комплементарную последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ снижения паразитарной нагрузки на улей медоносных пчел, включающий предоставление указанному улью эффективного количества направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты, которая по существу идентична или по существу комплементарна одному или более участкам последовательности гена кальмодулина паразита, или РНК, транскрибируемой с него, в результате чего снижается паразитарная нагрузка на указанный улей. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной молекулы нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида в одном или более участках по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина паразита. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность гена кальмодулина паразита по существу комплементарна или по существу идентична последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, по существу идентичную или по существу комплементарную последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ селективного лечения вида членистоногих от паразитов, включающий доставку эффективного количества направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты, которая по существу идентична или по существу комплементарна одному или более участкам последовательности гена кальмодулина паразита, или РНК, транскрибируемой с него, в вид членистоногих. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида в одном или более участках по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина членистоногого. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность гена кальмодулина членистоногого по существу комплементарна или по существу идентична последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93, или ее фрагменту. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, по существу идентичную или по существу комплементарную последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен и раскрыт способ лечения или предотвращения синдрома разрушения колоний медоносных пчел, включающий предоставление колонии медоносных пчел эффективного количества композиции, содержащей направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой по существу идентична или по существу комплементарна одному или более участкам последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, в результате чего уровень заражения паразитами Varroa destructor снижается или заражение предотвращается. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида в одном или более участках по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность гена кальмодулина членистоногого по существу комплементарна или по существу идентична последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93, или ее фрагменту. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности гена кальмодулина.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На фиг. 1 представлено филогенетическое дерево генов кальмодулина (CAM) из различных видов. Число, находящееся непосредственно перед названием вида, соответствует идентификационному номеру последовательности (SEQ ID NO).

На фиг. 2 представлен уровень выживаемости клещей, подвергнутых воздействию нуклеиновой кислоты, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 3 (CAM373), в биоанализе кормления напрямую на 3 день после обработки по сравнению с не подвергнутым обработке контролем (CNTR) или обработкой неспецифической последовательностью (SCRAM, SEQ ID NO: 5).

На фиг. 3, панель A, представлен анализ экспрессии генов на пятый день после лечения нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 3 (CAM373), или нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 4 (CAM186), по сравнению с контролями. На панели B показан уровень выживаемости клещей, подвергнутых воздействию нуклеиновых кислот, включающих последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NOS: 3 (CAM373) или 4 (CAM186), по сравнению с контролями.

На фиг. 4 представлена клещевая нагрузка/100 пчел из подвергнутых обработке ульев по сравнению с неподвергнутыми обработке контролями на протяжении различного периода времени.

На фиг. 5 представлен % выживаемости клещей, подвергнутых воздействию нуклеиновых кислот, включающих последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 88 или SEQ ID NO: 89, по сравнению с неподвергнутыми воздействию (NTC) в день 5 (Д%) или день 6 (Д6) после воздействия.

На фиг. 6 представлен % выживаемости клещей, подвергнутых воздействию нуклеиновой кислоты, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 3, или смеси нуклеиновых кислот, содержащей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 88 или SEQ ID NO: 89, по сравнению с неподвергнутыми воздействию (NTC) в день 5 (5), день 6 (6) и день 7 (7).

На фиг. 7 представлена нагрузка клеща Varroa/100 пчел из подвергнутых обработке ульев по сравнению с неподвергнутыми обработке контролями в течение периода времени 17 недель. Крайние слева столбики представляют ульи, подвергнутые обработке неспецифической последовательностью (SCRAM, SEQ ID NO: 5), средние столбики представляют ульи, оставленные необработанными, и крайние справа столбики представляют ульи, подвергнутые обработке нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 3 (CAM 373).

На фиг. 8 представлен % выживаемости клещей, подвергнутых обработке нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 3, нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 90, или нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 92, по сравнению с неподвергнутыми обработке (NTC) в день 5 (Д5) или день 6 (Д6).

На фиг. 9 представлен % выживаемости клещей, подвергнутых обработке нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 3, нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 91, или смесью нуклеиновых кислот, содержащей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 90 или SEQ ID NO: 92, по сравнению с неподвергнутыми обработке контролями (NTC) в день 4 (Д4).

На фиг. 10 представлен анализ экспрессии гена кальмодулина, измеренной с помощью Quantigene^™ (QG), для обработок с помощью SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 91 и смеси последовательностей SEQ ID NO: 90 и SEQ ID NO: 92 по сравнению с неподвергнутыми обработке контролями (NTC) в день 4.

На фиг. 11 представлена нагрузка клеща Varroa/100 пчел из подвергнутых обработке ульев по сравнению с неподвергнутыми обработке контролями в течение периода времени 19 недель. Крайние слева столбики представляют неподвергнутые обработке ульи, средние столбики представляют ульи, подвергнутые обработке нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 94, и крайние справа столбики представляют ульи, подвергнутые обработке нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, идентичную или комплементарную последовательности SEQ ID NO: 91.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Если не указано иначе, технические и научные термины в данном тексте имеют такие же значения, которые обычно подразумевает средний специалист в данной области. Специалисту в данной области известно множество способов, которые можно применять для осуществления настоящего изобретения. В действительности, настоящее описание никаким образом не ограничено описанными способами и материалами. Любые ссылочные материалы, цитируемые в данном тексте, полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки. Для целей настоящего описания ниже приведены определения следующих терминов.

Должно быть очевидно, что любой идентификационный номер последовательности (SEQ ID NO), описанный в данном тексте, может относиться либо к последовательности ДНК, либо к последовательности РНК, в зависимости от контекста, в котором упомянут данный SEQ ID NO, даже если этот SEQ ID NO выражен только в формате последовательности ДНК или в формате последовательности РНК. Например, SEQ ID NO: 1 выражен в формате последовательности ДНК (например, содержит T для обозначения тимина), но он также может относиться либо к последовательности ДНК, которая соответствует зрелой последовательности нуклеиновой кислоты кальмодулина Varroa destructor, либо к последовательности РНК зрелой последовательности нуклеиновой кислоты молекулы кальмодулина Varroa destructor. Аналогично, хотя SEQ ID NO: 3 выражен в формате последовательности РНК (например, содержит U для обозначения урацила), в зависимости от фактического типа молекулы, которую описывают, SEQ ID NO: 3 может относиться либо к смысловой или антисмысловой цепи дцРНК, либо к последовательности молекулы ДНК, которая соответствует показанной последовательности РНК. В любом случае предусмотрены обе молекулы ДНК и РНК с описанными последовательностями, содержащие любые замены.

В данной заявке термин ʺприблизительноʺ относится к ± 10%.

В данном тексте ссылочные материалы в форме единственного числа включают указанные материалы в форме множественного числа, если в контексте явно не указано иное. Например, термин ʺ соединениеʺ или ʺпо меньшей мере одно соединениеʺ может включать множество соединений, включая их смеси.

В данном тексте термин ʺпо существу идентичнаʺ или ʺпо существу комплементарнаʺ относится к нуклеиновой кислоте (или по меньшей мере к одной цепи двухцепочечной нуклеиновой кислоты или ее части, или к части одноцепочечной нуклеиновой кислоты), которая гибридизуется при физиологических условиях с эндогенным геном, с РНК, транскрибируемой с него, или с их фрагментом, чтобы повлиять на регуляцию или подавление (супрессию) эндогенного гена. Например, в некоторых аспектах последовательность нуклеиновой кислоты на 100 процентов идентична или по меньшей мере приблизительно на 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99 процентов идентична при сравнении с участком из 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 или более смежных нуклеотидов в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некоторых аспектах последовательность нуклеиновой кислоты на 100 процентов комплементарна или по меньшей мере приблизительно на 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99 процентов комплементарна при сравнении с участком из 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 или более смежных нуклеотидов в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некоторых аспектах последовательность нуклеиновой кислоты на 100 процентов идентична или комплементарна одной аллели или одному представителю семейства данного целевого гена (кодирующей или некодирующей последовательности гена). В некоторых аспектах последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере приблизительно на 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99 процентов идентична или комплементарна множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некоторых аспектах последовательность нуклеиновой кислоты на 100 процентов идентична или комплементарна множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена.

В некоторых аспектах нуклеиновая кислота по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере приблизительно 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 или более смежным нуклеотидам эндогенного гена кальмодулина целевого вредителя, или РНК, транскрибируемой с него. В некоторых аспектах указанная нуклеиновая кислота не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых аспектах из нуклеиновой кислоты удален по меньшей мере один нуклеотид по сравнению с целевой последовательностью гена кальмодулина, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93. В некотором аспекте из последовательности нуклеиновой кислоты удален по меньшей мере один нуклеотид по сравнению с эндогенной эталонной последовательностью гена кальмодулина целевого вредителя, или РНК, транскрибируемой с него, таким образом, что указанная нуклеиновая кислота не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. Нуклеиновая кислота может представлять собой одноцепочечную ДНК, одноцепочечную РНК, двухцепочечную РНК, двухцепочечную ДНК или двухцепочечный гибрид ДНК/РНК. В некоторых аспектах целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина Varroa destructor. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из SEQ ID NO: 3. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из SEQ ID NO: 4. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из SEQ ID NO: 70. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из SEQ ID NO: 88. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из SEQ ID NO: 89. В некотором аспекте целевая последовательность гена кальмодулина представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из SEQ ID NO: 93. В некотором аспекте из указанной нуклеиновой кислоты удален по меньшей мере один нуклеотид по сравнению с эндогенной последовательностью гена кальмодулина целевого вредителя, или РНК, транскрибируемой с него. В некотором аспекте из нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять или по меньшей мере десять нуклеотидов по сравнению с эндогенной последовательностью гена кальмодулина целевого вредителя, или РНК, транскрибируемой с него. В некоторых аспектах по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять или по меньшей мере десять удаленных нуклеотидов являются смежными в целевых эндогенных последовательностях гена кальмодулина. В других аспектах по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять или по меньшей мере десять удаленных нуклеотидов не являются смежными в целевых эндогенных последовательностях гена кальмодулина. В одном аспекте целевая последовательность гена кальмодулина по существу комплементарна или по существу идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93. В одном аспекте указанная нуклеиновая кислота включает последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 90-92 и 94.

В данном тексте термин ʺлечениеʺ включает прекращение, значительное ингибирование, замедление или обращение прогрессирования состояния, значительное облегчение клинических или эстетических симптомов состояния или значительное предотвращение возникновения клинических или эстетических симптомов состояния. В некотором аспекте настоящего изобретения композицию можно применять для лечения организма или колонии организмов от результатов паразитирования. В некотором аспекте композицию нуклеиновой кислоты можно применять для лечения организма-хозяина или колонии организмов-хозяев от паразитов. В некотором аспекте указанный организм-хозяин представляет собой пчелу и указанный паразит представляет собой клеща Varroa destructor.

В данном тексте формулировка ʺзамалчивание РНКʺ относится к группе регуляторных механизмов (например, РНК-интерференции (РНКи), транскрипционному замалчиванию гена (TGS), посттранскрипционному замалчиванию гена (PTGS), подавлению, косупрессии и репрессии трансляции), опосредуемых молекулами РНК, которые приводят к ингибированию или ʺзамалчиваниюʺ экспрессии соответствующего кодирующего белок гена или последовательности РНК патогена пчелы. Замалчивание РНК наблюдают во многих типах организмов, включая растений, животных и грибов. В аспектах настоящего описания композиции нуклеиновых кислот приводят к замалчиванию РНК. В некоторых аспектах указанные композиции нуклеиновых кислот приводят к замалчиванию РНК и смертности паразита.

В данном тексте термин ʺзамалчивающий РНК агентʺ относится к нуклеиновой кислоте, которая по существу гомологична или комплементарна полинуклеотидной последовательности целевого гена или РНК, экспрессируемой с указанного целевого гена, или их фрагменту, и способна ингибировать или ʺзамалчиватьʺ экспрессию целевого гена. Замалчивающие РНК агенты, как правило, описывают в отношении целевой последовательности, против которой направлен замалчивающий РНК агент. Целевая последовательность может включать, но не ограничена перечисленными последовательностями: область промотора, 5'-нетранслируемые области, кодирующие транскрипт области, которые могут содержать интронные области, 3'-нетранслируемые области или комбинации данных областей. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность может содержать кодирующую или некодирующую последовательность, или обе указанные последовательности. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность идентична или комплементарна информационной РНК, например, в вариантах реализации, в которых целевая последовательность представляет собой кДНК. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность представляет собой нативную последовательность гена кальмодулина, которая эндогенно экспрессируется в целевом вредителе. В некоторых вариантах реализации целевая последовательность представляет собой последовательность гена кальмодулина, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93, или часть указанной последовательности. В некоторых вариантах реализации эталонная последовательность гена кальмодулина содержит по меньшей мере 18 смежных нуклеотидов, по меньшей мере 19 смежных нуклеотидов, по меньшей мере 20 смежных нуклеотидов, по меньшей мере 21 смежный нуклеотид, по меньшей мере 22 смежных нуклеотида или более из последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, 26-35, 69-89 и 93.

В некоторых аспектах замалчивающий РНК агент способен предотвращать полный процессинг (например, полную трансляцию и/или экспрессию) молекулы мРНК посредством механизма посттранскрипционного замалчивания. Замалчивающие РНК агенты могут представлять собой одно- или двухцепочечную РНК, или одно- или двухцепочечную ДНК, или двухцепочечные гибриды ДНК/РНК, или модифицированные аналоги перечисленных молекул. В некоторых аспектах замалчивающие РНК агенты выбраны из группы, состоящей из: (a) молекулы одноцепочечной РНК (оцРНК), (b) молекулы оцРНК, которая самогибридизуется с образованием молекулы двухцепочечной РНК, (c) молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК), (d) молекулы одноцепочечной ДНК (оцДНК), (e) молекулы оцДНК, которая самогибридизуется с образованием молекулы двухцепочечной ДНК, и (f) молекулы одноцепочечной ДНК, содержащей модифицированный ген Pol III, которая транскрибируется с образованием молекулы РНК, (g) молекулы двухцепочечной ДНК (дцДНК), (h) молекулы двухцепочечной ДНК, содержащей модифицированный промотор Pol III, которая транскрибируется с образованием молекулы РНК, (i) двухцепочечной гибридизованной молекулы РНК/ДНК, или комбинации перечисленных молекул. В некоторых аспектах данные полинуклеотиды содержат химически модифицированные нуклеотиды или неканонические нуклеотиды. В некоторых аспектах замалчивающие РНК агенты представляют собой некодирующие молекулы РНК, например, дуплексы РНК, содержащие спаренные цепи, а также РНК-предшественники, из которых можно получить такие малые некодирующие РНК. В некоторых аспектах замалчивающие РНК агенты представляют собой дцРНК, такие как малые интерферирующие РНК (миРНК), микроРНК и малые шпилечные РНК (мшРНК). В одном аспекте замалчивающий РНК агент способен вызывать РНК-интерференцию. В другом аспекте замалчивающий РНК агент способен опосредовать репрессию трансляции. В некотором аспекте замалчивающий РНК агент способен ингибировать экспрессию гена кальмодулина. В другом аспекте замалчивающий РНК агент можно применять в способах ингибирования экспрессии целевого гена и уничтожения посредством этого целевого организма. В некоторых аспектах целевой ген представляет собой ген кальмодулина и целевой организм представляет собой Varroa destructor.

РНК-интерференция относится к процессу специфичного к последовательности посттранскрипционного замалчивания гена у животных, опосредованного малыми РНК. Соответствующий процесс у растений обычно называют посттранскрипционным замалчиванием гена или замалчиванием РНК, и его также называют подавлением у грибов. Без ограничения какой-либо конкретной теорией, процесс посттранскрипционного замалчивания гена считают эволюционно-консервативным механизмом защиты клеток, используемым для предотвращения экспрессии чужеродных генов, и он широко распространен в разнообразной флоре и таксонометрических типах. Такая защита от экспрессии чужеродных генов могла эволюционировать в ответ на продукцию двухцепочечных РНК (дцРНК), возникших в результате вирусной инфекции или в результате произвольного встраивания мобильных элементов - транспозонов - в геном хозяина, посредством клеточного ответа, который специфично уничтожает гомологичную одноцепочечную РНК или вирусную геномную РНК. В аспектах настоящего изобретения композиция нуклеиновой кислоты приводит к РНК-интерференции в целевом организме. В некоторых аспектах указанная композиция нуклеиновой кислоты приводит к РНК-интерференции в Varroa destructor, когда он присутствует в организме-хозяине - пчеле. В соответствии с аспектами настоящего изобретения селективный инсектицид может вызывать РНК-интерференцию в целевом организме и при этом не способен вызывать РНК-интерференцию в нецелевых организмах.

В данном тексте термин ʺмалая РНКʺ относится к любой молекуле РНК, длина которой составляет по меньшей мере 15 пар оснований, обычно составляет 15-30 нуклеотидов, предпочтительно составляет 20-24 нуклеотида. В аспектах настоящего изобретения длина ʺмалой РНКʺ больше, чем 50 пар оснований. В некотором аспекте длина малой РНК больше, чем 50 пар оснований, но меньше, чем приблизительно 500 пар оснований. В некотором аспекте длина малой РНК больше, чем 100 пар оснований, но меньше, чем приблизительно 500 пар оснований. В некотором аспекте длина малой РНК больше, чем 200 пар оснований, но меньше, чем приблизительно 500 пар оснований. Малая РНК может быть либо двухцепочечной, либо одноцепочечной. Малая РНК включает, без ограничения, микроРНК, та-миРНК (трансактивирующую малую интерферирующую РНК), миРНК, активирующую РНК (РНКа), пас-миРНК (природную антисмыловую миРНК), гх-миРНК (гетерохроматическую миРНК), действующую в цис-положении миРНК, дмикроРНК (длинную микроРНК), дмиРНК (длинную миРНК) и эамиРНК (эпигенетически активируемую миРНК), и соответствующие предшественники перечисленных молекул. В некоторых вариантах реализации молекулы миРНК согласно настоящему описанию представляют собой молекулы микроРНК, молекулы та-миРНК и молекулы РНКа, и соответствующие предшественники перечисленных молекул. Малая РНК может подвергнуться процессингу in vivo в организме с образованием активной формы. В соответствии с аспектами настоящего изобретения селективный инсектицид может представлять собой малую РНК.

В аспектах настоящего изобретения малая РНК непосредственно представлена в композиции. В других аспектах малая РНК продуцируется организмом in vivo либо из ДНК-предшественника, либо из РНК-предшественника. В некоторых аспектах малую РНК получают как продукт трансгена в организме, например, в дрожжевой или бактериальной клетке. В некоторых аспектах малую РНК, полученную как продукт трансгена, получают в виде предшественника, который подвергается процессингу in vivo после поглощения или абсорбции организмом. В других аспектах малую РНК, полученную как продукт трансгена, получают в виде предшественника, который подвергается процессингу in vivo после поглощения или абсорбции организмом.

В некоторых аспектах замалчивающий РНК агент может представлять собой искусственную микроРНК. В данном тексте ʺискусственная микроРНКʺ (имикроРНК) представляет собой тип микроРНК, который получают путем замены нативных дуплексов микроРНК из природного предшественника микроРНК. Как правило, искусственная миРНК представляет собой не существующую в природе молекулу микроРНК, полученную из остова молекулы пре-микроРНК, сконструированного путем замены последовательности микроРНК существующей в природе молекулы пре-микроРНК на интересующую последовательность, которая соответствует последовательности искусственной микроРНК. В аспектах настоящего изобретения композиция нуклеиновой кислоты может представлять собой композицию имикроРНК.

В различных исследованиях продемонстрировали, что длинные дцРНК можно применять для замалчивания экспрессии генов, не вызывая стрессовую реакцию или значительных побочных эффектов, см., например Strat и др., Nucleic Acids Research, 2006, том 34, № 13 3803-3810; Bhargava A и др. Brain Res. Protoc. 2004;13:115-125; Diallo M., и др., Oligonucleotides. 2003;13:381-392; Paddison P.J., и др., Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2002;99:1443-1448; Tran N., и др., FEBS Lett. 2004;573:127-134. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции с использованием длинных дцРНК.

В данном тексте, в отношении последовательности нуклеиновой кислоты, молекулы нуклеиновой кислоты или гена, термин ʺприродныйʺ или ʺнативныйʺ означает, что соответствующая последовательность или молекула присутствует в организме дикого типа, который не был генетически модифицирован или изменен человеком. Молекула малой РНК, по природе направленная на целевой ген, означает молекулу малой РНК, присутствующую в организме или клетке дикого типа, которые не были генетически модифицированы или изменены человеком, которая направлена на целевой ген, встречающийся в природе в соответствующем организме.

В данном тексте термины ʺгомологияʺ и ʺидентичностьʺ, когда их используют по отношению к нуклеиновым кислотам, описывают степень подобия между двумя или более последовательностями нуклеотидов. Процент ʺидентичности последовательностейʺ между двумя последовательностями определяют путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей по всему окну сравнения, таким образом, что часть указанной последовательности в окне сравнения может содержать вставки или делеции (разрывы) относительно эталонной последовательности (которая не содержит вставки или делеции) для оптимального выравнивания двух последовательностей. Указанный процент рассчитывают путем определения количества положений, в которых встречается идентичное основание нуклеиновой кислоты или идентичный аминокислотный остаток в обеих последовательностях, с получением количества совпадающих положений, деления указанного количества совпадающих положений на общее количество положений в окне сравнения и умножения полученного результата на 100 с получением процента идентичности последовательностей. Последовательность, которая идентична в каждом положении по сравнению с эталонной последовательностью, называют идентичной эталонной последовательности, и наоборот. Выравнивание двух или более последовательностей можно осуществить, применяя любую подходящую компьютерную программу. Например, широко применяемая и утвержденная компьютерная программа для проведения выравниваний последовательностей представляет собой CLUSTALW версии 1.6 (Thompson, и др. Nucl. Acids Res., 22: 4673-4680, 1994).

В данном тексте термины ʺэкзогенный полинуклеотидʺ и ʺэкзогенная молекула нуклеиновой кислотыʺ по отношению к организмам относятся к гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, которая в природе не экспрессируется в данном организме. Экзогенную молекулу нуклеиновой кислоты можно внедрить в организм стабильным или временным способом. Экзогенная молекула нуклеиновой кислоты может включать последовательность нуклеиновой кислоты, которая идентична или частично гомологична эндогенной последовательности нуклеиновой кислоты указанного организма или вредителя или патогена указанного организма. В некоторых аспектах ʺэкзогенный полинуклеотидʺ и ʺэкзогенная молекула нуклеиновой кислотыʺ может относиться к последовательности нуклеиновой кислоты паразита, экспрессируемой или присутствующей в хозяине, либо временно, либо стабильно. В настоящем изобретении предложены и включены в него композиции, содержащие экзогенные полинуклеотиды и экзогенные молекулы нуклеиновой кислоты, и способы их внедрения в целевой организм. В некоторых аспектах в настоящем изобретении предложены и включены в него композиции, содержащие экзогенные полинуклеотиды и экзогенные молекулы нуклеиновой кислоты и способы их внедрения в нецелевой организм, который представляет собой хозяина целевого организма.

В данном тексте ʺконтрольный организмʺ означает организм, который не содержит рекомбинантную ДНК, малую РНК или другую нуклеиновую кислоту (например, белок, микроРНК, устойчивую к малой РНК целевую мРНК, дцРНК, целевой мимик), который является контролем вредителя или паразита. Контрольные организмы, как правило, относятся к тем же видам и находятся на той же стадии развития, а также выращиваются при таких же условиях роста, как и организм, который лечат. Аналогично ʺконтрольная колонияʺ означает колонии организмов, которые не содержат рекомбинантную ДНК, малую РНК или другую нуклеиновую кислоту (например, белок, микроРНК, устойчивую к малой РНК целевую мРНК, целевой мимик), которые являются контролем вредителя или паразита. Контрольные колонии организмов, как правило, относятся к тем же видам и находятся на той же стадии развития, а также выращиваются при таких же условиях роста, как и подвергнутая лечению колония организмов. В качестве лишь одного из примеров, контрольный организм может представлять собой пчелу, которая получила композицию, не содержащую нуклеиновую кислоту согласно настоящему описанию. В качестве другого лишь одного из примеров, контрольный организм может представлять собой пчелу, которая получила композицию, содержащую нуклеиновую кислоту, которая не способна замалчивать РНК ни в пчеле, ни в паразите, такую как SEQ ID NO: 5.

В данном тексте термины ʺулучшениеʺ, ʺулучшенныйʺ, ʺповышениеʺ и ʺповышенныйʺ относятся к по меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 3%, по меньшей мере приблизительно на 4%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90% или большему увеличению популяции организмов или колонии, повышению производительности организма или колонии (например, повышенной продукции меда), увеличению скорости роста организма или колонии, или увеличению скорости репродукции по сравнению с контрольным организмом или колонией. В настоящем изобретении предложены способы улучшения здоровья организма или колонии путем предоставления им селективной инсектицидной композиции.

В данном тексте ʺснижениеʺ уровня агента, такого как белок или мРНК, означает, что указанный уровень снижен по сравнению с организмом или колонией, в которых нет нуклеиновой кислоты, способной снижать уровень указанного агента. Также в данном тексте ʺснижениеʺ по отношению к паразитированию или паразитарной нагрузке означает, что указанный уровень снижен по сравнению с организмом или колонией, в которых нет нуклеиновой кислоты, такой как молекула дцРНК, способной снижать жизнеспособность, плодовитость или количество паразитов. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для снижения уровня белка или мРНК и снижения уровня или количества паразитов.

В данном тексте термин ʺпо меньшей мере частичное снижениеʺ уровня агента, такого как белок или мРНК, означает, что уровень снижен по меньшей мере на 25% по сравнению с организмом или колонией, в которых нет нуклеиновой кислоты, такой как молекула дцРНК, способной снижать уровень агента. Также в данном тексте ʺпо меньшей мере частичное снижениеʺ по отношению к паразитированию или паразитарной нагрузке означает, что уровень снижен по меньшей мере на 25% по сравнению с организмом или колонией, в которых нет нуклеиновой кислоты, такой как молекула дцРНК, способной снижать жизнеспособность, плодовитость или количество паразитов. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для по меньшей мере частичного снижения уровня белка или мРНК и по меньшей мере частичного снижения уровня или количества паразитов.

В данном тексте ʺсущественное снижениеʺ уровня агента, такого как белок или мРНК, означает, что указанный уровень снижен по сравнению с организмом или колонией, в которых нет нуклеиновой кислоты, такой как молекула дцРНК, способной снижать уровень агента, при этом снижение уровня указанного агента составляет по меньшей мере 75%. Также в данном тексте ʺсущественное снижениеʺ по отношению к паразитированию или паразитарной нагрузке означает, что уровень снижен по меньшей мере на 75% по сравнению с организмом или колонией, в которых нет нуклеиновой кислоты, такой как молекула дцРНК, способной снижать жизнеспособность, плодовитость или количество паразитов. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для существенного снижения уровня белка или мРНК и существенного снижения уровня или количества паразитов.

В данном тексте ʺэффективное элиминированиеʺ агента, такого как белок или мРНК, сравнивают с организмом или колонией, в которых нет молекулы дцРНК, способной снижать уровень агента, при этом снижение уровня указанного агента происходит более чем на 95%. Агент, такой как молекула дцРНК, предпочтительно способен приводить к по меньшей мере частичному снижению, более предпочтительно к существенному снижению или наиболее предпочтительно к эффективному элиминированию другого агента, такого как белок или мРНК, или паразит, при этом указанный агент оставляет уровень второго агента, или организма-хозяина, по существу неизменным, существено не измененным или частично не измененным. Также в данном тексте ʺэффективное элиминированиеʺ по отношению к паразитированию или паразитарной нагрузке означает, что уровень снижен по меньшей мере на 95% по сравнению с организмом или колонией, в которых нет нуклеиновой кислоты, такой как молекула дцРНК, способной снижать жизнеспособность, плодовитость или количество паразитов. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для эффективного элиминирования белка или мРНК и эффективного элиминирования паразитов.

В данном тексте термины ʺподавлятьʺ, ʺрепрессироватьʺ и ʺснижатьʺ по отношению к экспрессии или активности молекулы нуклеиновой кислоты в организме используют эквивалентно, и они означают, что уровень экспрессии или активности молекулы нуклеиновой кислоты в клетке организма после осуществления способа согласно настоящему описанию ниже, чем ее экспрессия или активность в клетке организма до осуществления способа или по сравнению с контрольным организмом, в котором нет молекулы нуклеиновой кислоты согласно настоящему описанию. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для подавления, репрессирования и снижения уровня белка или мРНК и подавления, репрессирования и снижения уровня или количества паразитов.

Термины ʺподавленный,ʺ ʺрепрессированныйʺ и ʺс пониженной экспрессиейʺ в данном тексте синонимичны и означают более низкую, предпочтительно значительно более низкую экспрессию или активность целевой молекулы нуклеиновой кислоты. Также в данном тексте ʺподавленныйʺ, ʺрепрессированныйʺ и ʺсниженныйʺ по отношению к паразитированию или паразитарной нагрузке означает, что уровень паразитирования или паразитарной нагрузки более низкий, предпочтительно значительно более низкий по сравнению с таковым в организме или колонии, в которых нет нуклеиновой кислоты, такой как молекула дцРНК, способной снижать жизнеспособность, плодовитость или количество паразитов. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для подавления, репрессирования и снижения экспрессии или активности белка или мРНК и подавления, репрессирования и снижения активности паразитов.

В данном тексте ʺподавлениеʺ, ʺрепрессияʺ или ʺснижениеʺ уровня или активности агента, такого как белок, мРНК или РНК, означает, что уровень или активность снижена по сравнению с по существу идентичной клеткой, организмом или колонией, которые растили при по существу идентичных условиях, в которых нет молекулы нуклеиновой кислоты согласно настоящему описанию, например, в которых нет участка, комплементарного дцРНК или миРНК, рекомбинантной конструкции или рекомбинантного вектора согласно настоящему описанию. В данном тексте ʺподавлениеʺ, ʺрепрессияʺ или ʺснижениеʺ уровня или активности агента, такого как, например, пре-РНК, мРНК, рРНК, тРНК, мякРНК, мяРНК, экспрессируемого с целевого гена, и/или белкового продукта, кодируемого им, означает, что указанное количество снижено на 10% или более, например, на 20% или более, предпочтительно на 30% или более, более предпочтительно на 50% или более, еще более предпочтительно на 70% или более, наиболее предпочтительно на 80% или более, например, на 90% по сравнению с таковым в клетке, организме или колонии, в которых нет рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты согласно настоящему описанию. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для подавления, репрессии и снижения уровня агента, такого как белок, мРНК, РНК или паразит, по сравнению с неподвергнутым обработке организмом или колонией.

В данном тексте термин ʺчленистоногоеʺ относится как к взрослой особи, так и к куколке беспозвоночных животных, имеющих экзоскелет (внешний скелет), фрагментированное тело и соединенные конечности. Членистоногие являются представителями типа Arthropoda и включают насекомых, паукообразных и ракообразных. Членистоногие согласно настоящему описанию включают, но не ограничены перечисленными: Apis mellifera, Apis cerana, Trigona minima, Halictidae, Bombus sp., блох, мух, вшей, зудней, клещей и полезных насекомых. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для лечения членистоногих либо в качестве хозяев, либо в качестве паразита или вредителя.

В некотором аспекте членистоногое может представлять собой насекомое. В некоторых аспектах насекомое может представлять собой пчелу. В данном тексте термин ʺпчелаʺ относится как к взрослой пчеле, так и к ячейкам с куколкой пчелы. Согласно одному аспекту пчела находится в улье. Взрослую пчелу определяют как любое из имеющих несколько крыльев и мохнатое тело, обычно жалящих насекомых из надсемейства Apoidea в отряде Перепончатокрылые (Hymenoptera), включая как одиночные, так и социальные виды, и характеризуемых сосущим и жующим ротовым аппаратом для сбора нектара и пыльцы. Примеры видов пчел включают, но не ограничены перечисленными: Apis, Bombus, Trigona, Osmia и тому подобные виды. В одном аспекте пчелы включают, но не ограничены перечисленными: шмелей (Bombus terrestris), медоносных пчел (Apis mellifera) (включая пчел-сборщиц и домашних пчел) и Apis cerana. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для лечения пчел как хозяев паразитов, таких как клещи Varroa.

Согласно одному аспекту пчела является частью колонии. Термин ʺколонияʺ относится к популяции пчел, содержащей от дюжин до обычно нескольких десятков тысяч пчел, которые сообща строят ульи, собирают пищу и вскармливают расплод. В колонии обычно есть одна матка, остальные пчелы являются либо ʺрабочими пчеламиʺ (самками), либо ʺтрутнямиʺ (самцами). Общественное устройство колонии поддерживается маткой и рабочими пчелами и зависит от эффективной системы коммуникации. Разделение труда внутри касты рабочих пчел, главным образом, зависит от возраста пчелы, но может изменяться в зависимости от потребности колонии. Размножение и численность колонии зависят от матки, количества запасов пищи и размера армии рабочих пчел. Медоносных пчел также можно подразделить на категории ʺдомашних пчелʺ, обычно, в течение первой части жизни рабочих пчел, во время которой ʺдомашняя пчелаʺ выполняет задачи внутри улья, и ʺпчел-сборщицʺ в течение последней части жизни пчел, во время которой ʺсборщицаʺ находит и собирает пыльцу и нектар за пределами улья и приносит нектар или пыльцу в улей для питания и хранения. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для лечения колоний насекомых.

В данном тексте термин ʺвредительʺ относится как к взрослой, так и к незрелой форме организма, инвазивного или способного к размножению, вредоносного, доставляющего неприятности, токсичного, губительного, доставляющего беспокойство растениям или животным, или экосистемам. Паразит представляет собой тип вредителя. Организм может быть вредителем в одном случае, но быть полезным, одомашненным или приемлемым в другом случае.

В данном тексте термин ʺпаразитʺ относится как к взрослой, так и к незрелой формам организмов, которые напрямую получают пользу за счет другого организма - хозяина, например, путем питания кровью или жидкостями хозяина, проживания внутри клетки организма-хозяина или проживания внутри тела организма-хозяина. Паразиты включают организмы, которые представляют собой животных, грибов, бактерий или растений, и их определяют по отрицательному или вредному взаимодействию с хозяином. В некоторых аспектах паразит, используемый в данном тексте, может, в свою очередь, служить в качестве хозяина для второго паразита. В некоторых аспектах паразит и хозяин могут принадлежать к одному и тому же типу организмов (например, членистоногий хозяин и членистоногий паразит). Паразиты включают, но не ограничены перечисленными: Acari (зудней, клещей), Hippoboscoidea (мух), Ichneumonoidea (паразитических ос), Oestridae (носоглоточных оводов), Phthiraptera (вшей), Siphonaptera (блох), Tantulocarida, краба-горошинку и Sacculina. В данном тексте вредитель может находиться как на паразитарной, так и на непаразитарной стадии жизни. В настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для лечения от паразитов. В некотором аспекте паразит может представлять собой Varroa destructor.

В настоящем изобретении предложены и включены в него паразиты и/или вредители, включающие: Varroa destructor, Ixodes scapularis, Solenopsis invicta, Tetranychus urticae, Aedes aegypti, Culex quinquefasciatus, Acyrthosiphon pisum и Pediculus humanus. В аспектах настоящего изобретения селективные инсектициды могут быть селективны по отношению к Varroa destructor, Ixodes scapularis, Solenopsis invicta, Tetranychus urticae, Aedes aegypti, Culex quinquefasciatus, Acyrthosiphon pisum и Pediculus humanus и неактивны, или значительно менее активны, по отношению к нецелевому организму, такому как организм-хозяин.

В данном тексте термин ʺвспомогательное веществоʺ относится к любому неактивному веществу в лекарственной форме, содержащей активный ингредиент, такой как направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота, включая, без ограничения, дцРНК, малую РНК, миРНК и антисмысловую РНК. В некоторых вариантах реализации вспомогательное вещество включает вещества, которые могут придать композиции дополнительные функциональные возможности, которые отличны от направленных против паразитов, против вредителей или инсектицидных нуклеиновых кислот. Функции вспомогательных веществ включают, но не ограничены перечисленными: ʺобъемообразующие агентыʺ, ʺнаполнителиʺ, ʺразбавителиʺ и ʺносителиʺ. Увеличение объема позволяет удобное и точное распределение композиций согласно настоящему описанию. Вспомогательные вещества также могут служить для того, чтобы способствовать поеданию композиций организмами, и включают различные углеводы, белки, жирные кислоты, пыльцу и заменители пыльцы. Вспомогательные вещества также могут служить для того, чтобы способствовать абсорбции композиций организмами, и включают, например, как водные, так и неводные растворы активных ингредиентов. Лишь некоторые из примеров вспомогательных веществ включают кукурузный сироп, сахарный сироп, твердый сахар, полутвердые сахара, пыльцу, соевый белок, смеси пыльцы и белка. Вспомогательные вещества могут дополнительно включать привлекающие вещества (аттрактанты), буферы и пищевые добавки. Композиции согласно настоящему описанию могут быть покрыты, инкапсулированы, растворены, смешаны или другим способом объединены со вспомогательным веществом. В данном тексте термин вспомогательное вещество может относиться к смеси неактивных веществ.

В настоящей заявке предложены и раскрыты направленные против паразитов, против вредителей или инсектицидные молекулы нуклеиновой кислоты, которые по существу гомологичны или комплементарны полинуклеотидной последовательности целевого гена кальмодулина, или РНК, которая экспрессируется с целевого гена кальмодулина, или их фрагментам, и осуществляют подавление экспрессии целевого гена кальмодулина или приводят к образованию нокдаун-фенотипа. В некоторых аспектах направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых аспектах из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной молекулы нуклеиновой кислоты удалены одна или более нуклеиновых кислот по сравнению с целевым геном кальмодулина, так что указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 19 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. Указанные направленные против паразитов, против вредителей или инсектицидные молекулы нуклеиновой кислоты способны ингибировать или ʺзамалчиватьʺ экспрессию целевого гена кальмодулина у целевого вида. В некоторых вариантах реализации направленные против паразитов, против вредителей или инсектицидные молекулы нуклеиновой кислоты не влияют на экспрессию гена кальмодулина в нецелевом организме, тем не менее, способны ингибировать или ʺзамалчиватьʺ экспрессию целевого гена кальмодулина у целевого вида. Указанные направленные против паразитов, против вредителей или инсектицидные молекулы нуклеиновой кислоты, как правило, описаны в отношении их ʺцелевой последовательностиʺ. В некоторых вариантах реализации целевую последовательность выбирают из последовательностей SEQ ID NO: 1, 2 и 6-77. В некоторых вариантах реализации из направленных против паразитов, против вредителей или инсектицидных молекул нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре нуклеотида по сравнению с целевой последовательностью. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида являются смежными в целевой последовательности. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре удаленных нуклеотида не являются смежными в целевой последовательности. Указанные направленные против паразитов, против вредителей или инсектицидные молекулы нуклеиновой кислоты могут представлять собой одноцепочечную ДНК (оцДНК), одноцепочечную РНК (оцРНК), двухцепочечную РНК (дцРНК), двухцепочечную ДНК (дцДНК) или двухцепочечные гибриды ДНК/РНК. Указанные молекулы нуклеиновой кислоты могут содержать встречающиеся в природе нуклеотиды, модифицированные нуклеотиды, аналоги нуклеотидов или любую комбинацию перечисленных молекул. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты может быть включена в более длинный полинуклеотид, например, в молекулу прай-микроРНК. В некоторых вариантах реализации направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты можно подвергнуть процессингу с получением малой интерферирующей РНК (миРНК). В некоторых вариантах реализации предложены или раскрыты молекулы нуклеиновой кислоты, которые селективно действуют против паразитов или убивают клещей, и способы модуляции экспрессии или активности целевых для них генов для снижения количества или устранения паразитов из колонии или популяции. В некоторых вариантах реализации предложены или раскрыты молекулы нуклеиновой кислоты, которые селективно действуют против паразитов или убивают клещей, модулируя экспрессию или активность гена кальмодулина Varroa, чтобы уменьшить количество или устранить паразитов Varroa из колонии или популяции пчел, при этом не влияя на ген кальмодулина в нецелевых организмах.

В аспектах настоящего изобретения направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты включает последовательность нуклеотидов, идентичную по меньшей мере на 80%, 85%, 88%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% последовательности или части последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-94. В некоторых аспектах молекула нуклеиновой кислоты выбрана из группы, состоящей из оцДНК, оцРНК, дцРНК, дцДНК или гибридов ДНК/РНК. В некоторых вариантах реализации предложена дцРНК, включающая последовательность нуклеотидов, которая идентична по меньшей мере на 80%, 85%, 88%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% последовательности или части последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-94. В некоторых вариантах реализации предложена дцРНК, включающая последовательность нуклеотидов, которая идентична по меньшей мере на 100% последовательности или части последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-94. В другом аспекте предложена ДНК, кодирующая по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, такую как оцРНК или дцРНК, включающая последовательность нуклеотидов или часть последовательности нуклеотидов, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-94, или идентичную по меньшей мере на 80%, 85%, 88%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% последовательностям SEQ ID NO: 1-94 или частям указанных последовательностей. В другом дополнительном аспекте предложена рекомбинантная ДНК, кодирующая по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, такую как оцРНК или дцРНК, которая содержит последовательность нуклеотидов, или часть последовательности нуклеотидов, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-94, последовательность гетерологичного промотора и последовательность терминатора транскрипции. В другом аспекте настоящего изобретения предложена рекомбинантная ДНК, кодирующая по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, такую как оцРНК или дцРНК, которая содержит последовательность нуклеотидов, идентичную по меньшей мере на 80%, 85%, 88%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% последовательности или части последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-94, и дополнительно содержит гетерологичный промотор и терминатор транскрипции.

В аспектах настоящего изобретения композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 10 до 17 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 18 до 25 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 20 до 30 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 25 до 35 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 30 до 40 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 40 до 50 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 50 до 60 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 45 до 60 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 60 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 50 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 40 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 25 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 35 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 40 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 60 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1-89 или 93. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 3. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 4. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 70. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 88. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 6-68.

В аспектах настоящего изобретения композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 10 до 17 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 18 до 25 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 20 до 30 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 25 до 35 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 30 до 40 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 40 до 50 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная композиция содержит молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 50 до 60 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 45 до 60 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 60 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 50 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 40 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 25 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 35 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 40 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 60 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 98 процентов идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 97 процентов идентична участку из целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 96 процентов идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 95 процентов идентична участку из целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 94 процента идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 93 процента идентична участку из целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 92 процента идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 91 процент идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере приблизительно на 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 процентов идентична участку из указанного целевого гена, представленному выше. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1-89 или 93. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 3. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 4. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 70. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 88. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 6-68.

В аспектах настоящего изобретения композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 10 до 17 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена (в кодирующей или в некодирующей последовательности гена). В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 18 до 25 или более смежных нуклеотидов в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 20 до 30 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 25 до 35 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 30 до 40 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 40 до 50 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 50 до 60 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 45 до 60 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 60 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 50 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 40 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 25 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 35 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 40 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 60 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1-89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 3. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 4. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 70. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 88. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 6-68. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 93.

В аспектах настоящего изобретения композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 10 до 17 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 18 до 25 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 20 до 30 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 25 до 35 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 30 до 40 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 40 до 50 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 50 до 60 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 45 до 60 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 60 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 50 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 40 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 25 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 35 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 40 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 60 смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 98 процентов идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 97 процентов идентична участку из целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 96 процентов идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 95 процентов идентична участку из целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 94 процента идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 93 процента идентична участку из целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 92 процента идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 91 процент идентична участку из целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере приблизительно на 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 процентов идентична участку из указанного целевого гена, представленному выше. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1-89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 3. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 4. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 70. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 88. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 6-68. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 93.

В аспектах настоящего изобретения композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 10 до 17 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 18 до 25 или более смежных нуклеотидов, в одной аллели или в одном представителе семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 20 до 30 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 25 до 35 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 30 до 40 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 40 до 50 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 50 до 60 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 45 до 60 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 60 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 50 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 40 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 25 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 35 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 40 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 60 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1-89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 3. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 4. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 70. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 88. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 6-68. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 93.

В аспектах настоящего изобретения композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 10 до 17 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 18 до 25 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 20 до 30 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 25 до 35 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 30 до 40 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 40 до 50 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 50 до 60 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 45 до 60 или более смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 60 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 50 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 40 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 25 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 35 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 40 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 60 смежных нуклеотидов, при этом наблюдается идентичность или комплементарность множеству аллелей или представителей семейства данного целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 98 процентов идентична участку целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 97 процентов идентична участку целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 96 процентов идентична участку целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 95 процентов идентична участку целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 94 процента идентична участку целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 93 процента идентична участку целевого гена. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 92 процента идентична участку целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 91 процент идентична участку целевого гена. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере приблизительно на 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 процентов идентична участку целевого гена, представленному выше. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1-89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 3. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 4. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 70. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 88. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 6-68. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 93.

В аспектах настоящего изобретения композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 10 до 17 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 18 до 25 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 20 до 30 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 25 до 35 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 30 до 40 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 40 до 50 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 50 до 60 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из от 45 до 60 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 60 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 50 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 40 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 25 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 35 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 40 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 100 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 60 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1-89 или 93. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 3. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 4. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 70. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 88. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 6-68.

В аспектах настоящего изобретения композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 10 до 17 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 18 до 25 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 20 до 30 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 25 до 35 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 30 до 40 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 40 до 50 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная композиция содержит молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 50 до 60 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из от 45 до 60 или более смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 60 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 50 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из вплоть до 40 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 25 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 35 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 40 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте композиция содержит направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты, последовательность которой на 99 процентов идентична участку, состоящему из по меньшей мере 60 смежных нуклеотидов, в целевом гене или в РНК, транскрибированной с целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 98 процентов идентична участку из целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 97 процентов идентична участку из целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 96 процентов идентична участку из целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 95 процентов идентична участку из целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 94 процента идентична участку из целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 93 процента идентична участку из целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некоторых аспектах последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 92 процента идентична участку из целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 91 процент идентична участку из целевого гена, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте последовательность направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты по меньшей мере приблизительно на 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 процентов идентична участку из указанного целевого гена, представленному выше, при этом указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность, которая на 100% идентична или комплементарна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежным нуклеотидам в последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1-89 или 93. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 3. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 4. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 70. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 88. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 89. В некотором аспекте целевой ген может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87.

В некоторых вариантах реализации в направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоте по меньшей мере один нуклеотид удален по сравнению с целевой последовательностью гена. В одном аспекте направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательных нуклеотидов, которые идентичны или комплементарны последовательности гена в нецелевом организме. В одном варианте реализации нецелевой организм представляет собой пчелу. В другом варианте реализации нецелевой организм представляет собой человека. В другом варианте реализации нецелевой организм представляет собой бабочку монарх. В некоторых вариантах реализации из направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты удалены по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять, по меньшей мере десять, по меньшей мере одиннадцать, по меньшей мере двенадцать, по меньшей мере тринадцать, по меньшей мере четырнадцать, по меньшей мере пятнадцать или более нуклеотидов по сравнению с целевой последовательностью. В некоторых вариантах реализации указанные по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять или по меньшей мере шесть удаленных нуклеотидов являются смежными в эталонной последовательности гена кальмодулина. В других вариантах реализации указанные по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять, по меньшей мере десять, по меньшей мере одиннадцать, по меньшей мере двенадцать, по меньшей мере тринадцать, по меньшей мере четырнадцать, по меньшей мере пятнадцать или более удаленных нуклеотидов не являются смежными в целевой последовательности. В некотором аспекте целевая последовательность может быть выбрана из последовательностей SEQ ID NO: 1-89, 93 или их частей. В некотором аспекте целевая последовательность может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 1 или ее часть. В некотором аспекте целевая последовательность может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 2 или ее часть. В некотором аспекте целевая последовательность может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 3 или ее часть. В некотором аспекте целевая последовательность может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 4 или ее часть. В некотором аспекте целевая последовательность может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 69 или ее часть. В некотором аспекте целевая последовательность может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 70 или ее часть. В некотором аспекте целевая последовательность может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 88 или ее часть. В некотором аспекте целевая последовательность может представлять собой ген, включающий последовательность SEQ ID NO: 89 или ее часть. В некотором аспекте целевая последовательность может представлять собой ген, включающий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87 или их частей. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100 процентов идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 или 94 или их частей. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает обратный комплемент последовательности, которая по меньшей мере приблизительно на 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100 процентов идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 или 94 или их частей. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота содержит по меньшей мере 18 смежных нуклеотидов из последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 или 94. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 90-92 или 94 или их частей. В некоторых вариантах реализации направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота включает последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 90-92 и 94, и обратный комплемент последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 90-92 и 94.

В настоящей заявке предложены и раскрыты композиции, содержащие направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную молекулу нуклеиновой кислоты и вспомогательное вещество. В некотором аспекте вспомогательное вещество может представлять собой комбинацию одного или более неактивных компонентов. В некоторых аспектах вспомогательное вещество включает сахар. Примеры сахаров включают гексозы, дисахариды, трисахариды и высшие сахара. Вспомогательные сахара включают, например, фруктозу, глюкозу, сахарозу, трегалозу, лактозу, галактозу, рибозу. В других аспектах вспомогательное вещество включает сахар и растворитель. В других аспектах вспомогательное вещество включает белок. В некотором аспекте белок представляет собой соевый белок. В других аспектах вспомогательное вещество может представлять собой пыльцу. В аспектах настоящего изобретения вспомогательное вещество может представлять собой продукт питания пчелы. В некоторых аспектах вспомогательное вещество включает триптон. В некоторых аспектах вспомогательное вещество включает дрожжевой экстракт. В некоторых аспектах вспомогательное вещество включает эфирное масло.

Кормление пчел является обычной практикой среди пчеловодов как для обеспечения их питанием, так и для других, например, дополнительных нужд. Пчелы обычно питаются медом и пыльцой, но также известно, что кроме этого они употребляют неприродные корма. Пчел можно кормить различными продуктами питания, включая, но не ограничиваясь перечисленными: Wheast (молочные дрожжи, выращенные на домашнем сыре), соевую муку, дрожжи (например, пивные дрожжи, дрожжи торула) и дрожжевые продукты, которыми кормят отдельно или в комбинации, и соевую муку, которой кормят в виде сухой смеси или в виде влажной лепешки, находящейся внутри улья, или в виде сухой смеси в открытых кормушках за пределами улья. Также пригоден сахар или сахарный сироп. Добавление от 10 до 12 процентов пыльцы в кормовую добавку, которую дают пчелам, улучшает вкусовые качества. Добавление 25 процентов пыльцы улучшает качество и количество незаменимых питательных веществ, которые необходимы для жизнедеятельности пчел. Тростниковый или свекловичный сахар, изомеризованный кукурузный сироп и сахарный сироп ʺtype-50ʺ являются удовлетворительными заменителями меда в естественном питании медоносных пчел. Последние два можно давать пчелам только в виде жидкости. Жидкий корм можно давать пчелам внутри улья, например, с помощью любого из следующих устройств: бак с притертой крышкой, соты внутри гнездового корпуса улья, рамочная кормушка, кормушка Бордмана и т.д. Сухой сахар можно давать, поместив фунт или два фунта на перевернутую внутреннюю крышку. Запас воды должен быть доступен пчелам в любой момент времени. В одном аспекте предусмотрены поддоны или лотки, в которых присутствуют плавучие опоры, такие как древесные стружки, пробка или пластиковая губка. Подробное описание дополнительных кормов для пчел можно найти, например, в публикации USDA, Standifer, и др., 1977 г., названной ʺSupplemental Feeding of Honey Bee Coloniesʺ (USDA, Agriculture Information Bulletin № 413).

В аспектах настоящего изобретения направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота, например, дцРНК, является абсорбируемой. В данном тексте ʺабсорбируемыйʺ относится к механизмам, с помощью которых осуществляется поглощение нуклеиновой кислоты путем, отличным от приема внутрь. В некотором аспекте направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота может абсорбироваться через кожу организма или через экзоскелет членистоногого. В некотором аспекте абсорбируемая нуклеиновая кислота растворена во вспомогательном веществе. В других аспектах абсорбируемая нуклеиновая кислота суспендирована во вспомогательном веществе. Вспомогательные вещества для растворения или суспенздирования могут быть водными или безводными. В некоторых аспектах направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота абсорбируется организмом-хозяином и переносится в организм паразита в процессе его питания. В других аспектах направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота абсорбируется организмом хозяина и переносится в организм паразита путем абсорбции. В некотором аспекте направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота согласно настоящему описанию абсорбируется непосредственно паразитом.

В аспектах настоящего изобретения направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота, например, дцРНК, объединена со вспомогательным веществом. В некотором аспекте нуклеиновая кислота может быть предложена в виде некоторого отношения нуклеиновой кислоты к вспомогательному веществу. В некотором аспекте отношение может представлять собой одну часть нуклеиновой кислоты к 4 частям вспомогательного вещества. В некотором аспекте отношение нуклеиновой кислоты к вспомогательному веществу может составлять 1:1, 1:2, 1:5 или 1:10. В других аспектах отношение нуклеиновой кислоты к вспомогательному веществу может составлять 1:20, 1: 25, 1:30, 1:40 или более. В некотором аспекте отношение нуклеиновой кислоты к вспомогательному веществу может составлять 1:50. В аспектах настоящего изобретения отношение может быть установлено как отношение объема к объему (об/об), отношение масса:масса (м/м). В некоторых аспектах отношение может быть выражено как отношение масса:объем (м/об). В некоторых аспектах нуклеиновая кислота и вспомогательное вещество могут представлять собой дцРНК и вспомогательное вещество.

В аспектах настоящего изобретения композиция может содержать некоторую массу направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты, объединенную со вспомогательным веществом. В некотором аспекте нуклеиновая кислота может составлять некоторый процент от общей массы композиции. В некотором аспекте нуклеиновая кислота может составлять приблизительно 0,1% от массы композиции. В некотором аспекте нуклеиновая кислота может составлять приблизительно 0,2% от массы композиции. В некотором аспекте нуклеиновая кислота может составлять приблизительно 0,3% от массы композиции. В другом аспекте нуклеиновая кислота может составлять приблизительно 0,4% от массы композиции. В некотором аспекте нуклеиновая кислота может составлять до 0,5% от массы композиции. В некотором аспекте нуклеиновая кислота может составлять до 0,6% от массы композиции. В некотором аспекте нуклеиновая кислота может составлять до 0,7% от массы композиции. В некотором аспекте нуклеиновая кислота может составлять до 0,8% от массы композиции. В другом аспекте нуклеиновая кислота может составлять до 1,0% от массы композиции. В других аспектах нуклеиновая кислота может составлять до 1,5% от массы композиции. В других дополнительных аспектах нуклеиновая кислота может составлять до 2,0% от массы, или до 2,5% от массы композиции. В некоторых аспектах нуклеиновая кислота и вспомогательное вещество могут представлять собой дцРНК и вспомогательное вещество.

В настоящем изобретении предложены и включены в него композиции, содержащие от 0,1% до 5% по массе одной или более направленных против паразитов, против вредителей или инсектицидных нуклеиновых кислот. В других аспектах композиция может содержать от 0,1 до 4%, от 0,1 до 3%, от 0,1 до 2%, от 0,1 до 1%, от 0,1 до 2%, от 0,1 до 3% или от 0,1 до 4% по массе нуклеиновой кислоты. В некотором аспекте композиция может содержать от 0,2% до 5% по массе нуклеиновой кислоты. В других аспектах композиция может содержать от 0,2 до 4%, от 0,2 до 3%, от 0,2 до 2%, от 0,2 до 1%, от 0,2 до 2%, от 0,2 до 3% или то 0,2 до 4% по массе нуклеиновой кислоты. В других аспектах композиция может содержать до 1%, до 2%, до 3%, до 4% или до 5% нуклеиновой кислоты. В других аспектах композиция может содержать до 7,5%, до 10% или до 15% нуклеиновой кислоты. В некоторых аспектах нуклеиновая кислота и вспомогательное вещество могут представлять собой дцРНК и вспомогательное вещество.

В настоящем изобретении предложены и включены в него композиции, содержащие от 0,1 до 10 мг/мл одной или более направленных против паразитов, против вредителей или инсектицидных нуклеиновых кислот. В других аспектах композиция может содержать от 0,1 до 1,0 мг/мл, от 0,1 до 2,0 мг/мл, от 0,1 до 2,5 мг/мл, от 0,1 до 5 мг/мл, от 0,1 до 10 мг/мл, от 0,1 до 15 мг/мл или от 0,1 до 20 мг/мл нуклеиновой кислоты. В некоторых аспектах композиция может содержать по меньшей мере 0,1 мкг/мл нуклеиновой кислоты. В некоторых других аспектах композиция может содержать по меньшей мере 1,0 мкг/мл нуклеиновой кислоты. В других дополнительных аспектах композиция может содержать по меньшей мере 10 мкг/мл нуклеиновой кислоты. В некотором аспекте композиция может содержать от 0,5 до 10 мг/мл нуклеиновой кислоты. В других аспектах композиция может содержать от 0,5 до 1,0 мг/мл, от 0,5 до 2,0 мг/мл, от 0,5 до 2,5 мг/мл, от 0,5 до 5 мг/мл, от 0,5 до 10 мг/мл, от 0,5 до 15 мг/мл или от 0,5 до 20 мг/мл нуклеиновой кислоты. В некотором аспекте композиция может содержать от 1,0 до 10 мг/мл нуклеиновой кислоты. В других аспектах композиция может содержать от 1,0 до 2,0 мг/мл, от 1,0 до 2,5 мг/мл, от 1,0 до 5 мг/мл, от 1,0 до 10 мг/мл, от 1,0 до 15 мг/мл или от 1,0 до 20 мг/мл нуклеиновой кислоты. В некоторых аспектах направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота в указанной композиции включает дцРНК.

В настоящем изобретении предложены и включены в него композиции селективного инсектицида и способы применения композиций селективного инсектицида.

В данном тексте ʺкомпозиция селективного инсектицидаʺ представляет собой композицию, которая более эффективна для одного или более видов членистоногих и менее эффективна для одного или более отличных видов членистоногих. Композиция селективного инсектицида включает композиции, которые убивают взрослых или незрелых членистоногих, и включает композиции, которые убивают личинок (ларвициды) и яйца (овициды) членистоногих. Селективный инсектицид может представлять собой системные инсектициды, входящие в состав обработанной пищи, включая кровь или гемолимфу, полученную из организмов-хозяев. Селективный инсектицид может представлять собой контактные инсектициды, которые токсичны для некоторых насекомых, с которыми они вступили в непосредственный контакт, и нетоксичны или минимально токсичны для некоторых других насекомых. В некоторых вариантах реализации композиция селективного инсектицида направлена против вредителей. В некоторых вариантах реализации композиция селективного инсектицида является противопаразитарной. В некоторых вариантах реализации композиция селективного инсектицида представляет собой майтицид. В некоторых вариантах реализации композиция селективного инсектицида является токсичной для целевого насекомого паразита или вредителя и нетоксичной или минимально токсичной для нецелевых организмов. Примеры нецелевых организмов включают, но не ограничены перечисленными: полезных насекомых, нематод, птиц, млекопитающих и растений. В некоторых вариантах реализации композиция селективного инсектицида токсична для паразитирующего насекомого, например, клеща Varroa, и нетоксична или минимально токсична для организма-хозяина, например, пчелы. В некоторых вариантах реализации композиция селективного инсектицида токсична для одного или более насекомых вредителей или паразитов, выбранных из группы, состоящей из: Varroa destructor, Ixodes scapularis, Solenopsis invicta, Tetranychus urticae, Aedes aegypti, Culex quinquefasciatus, Acyrthosiphon pisum и Pediculus humanus.

В некоторых аспектах настоящего изобретения селективный инсектицид можно внедрить в бактерии или дрожжи путем генетической модификации (например, трансгенные бактерии или дрожжи, сконструированные таким образом, чтобы они экспрессировали нуклеиновую кислоту согласно настоящему описанию). Селективный инсектицид, внедренный путем генетической модификации бактерий или дрожжей, может действовать на организм-вредитель непосредственно или опосредованно после того, как его поглощает хозяин организма вредителя.

В некотором аспекте настоящего изобретения селективный инсектицид может быть более эффективным инсектицидом против одного или более первых насекомых, чем против одного или более вторых насекомых. В некотором аспекте селективный инсектицид может быть токсичным для первого насекомого и не оказывать влияния на второго насекомого. В некотором аспекте селективный инсектицид может быть токсичным для первого насекомого и требовать значительно более высоких концентраций или количеств, чтобы оказать влияние на второе насекомое. В некотором аспекте селективный инсектицид может быть в 2 раза или более токсичным для первого насекомого по сравнению со вторым насекомым. В некотором аспекте селективный инсектицид может быть в 4 раза или более токсичным для первого насекомого по сравнению со вторым насекомым. В некотором аспекте селективный инсектицид может быть в 5 раз или более токсичным для первого насекомого по сравнению со вторым насекомым. В некотором аспекте селективный инсектицид может быть в 10 раз или более токсичным для первого насекомого по сравнению со вторым насекомым.

В некотором аспекте селективный инсектицид может ингибировать рост, развитие или плодовитость первого насекомого и не оказывать влияния на второе насекомое. В некотором аспекте селективный инсектицид может ингибировать рост, развитие или плодовитость первого насекомого и требовать значительно более высоких концентраций или количеств, чтобы оказывать аналогичное действие на второе насекомое. В некотором аспекте может потребоваться большее в 2 раза или более количество активного ингредиента в селективном инсектициде, чтобы ингибировать рост, развитие или плодовитость второго насекомого. В некотором аспекте может потребоваться большее в 4 раза или более количество активного ингредиента в селективном инсектициде, чтобы ингибировать рост, развитие или плодовитость второго насекомого. В некотором аспекте может потребоваться большее в 5 раз или более количество активного ингредиента в селективном инсектициде, чтобы ингибировать рост, развитие или плодовитость второго насекомого. В некотором аспекте может потребоваться большее в 10 раз или более количество активного ингредиента в селективном инсектициде, чтобы ингибировать рост, развитие или плодовитость второго насекомого.

В некоторых вариантах реализации предложен способ изменения направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной молекулы нуклеиновой кислоты для уменьшения или устранения участков комплементарности или идентичности последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации последовательности потенциальных направленных против паразитов, против вредителей или инсектицидных нуклеиновых кислот сравнивают с подходящей базой данных геномов одного или более нецелевых организмов (лишь некоторые из примеров нецелевых организмов включают человека, пчелу, бабочку монарх, мышь, крысу и т.д.), применяя любое программное обеспечение для выравнивания последовательностей, такое как программное обеспечение BLAST, доступное на сервере NCBI (доступно на странице в сети Интернет по адресу www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). В некоторых вариантах реализации предполагаемые направленные против паразитов, против вредителей или инсектицидные молекулы нуклеиновой кислоты, которые проявляют существенную гомологию с последовательностями генов одного или более нецелевых организмов, отсеивают. В некоторых вариантах реализации последовательность нуклеотидов предполагаемых направленных против паразитов, против вредителей или инсектицидных молекул нуклеиновой кислоты, которые содержат участки комплементарности или идентичности с последовательностью гена нецелевого организма, изменяют, чтобы уменьшить, устранить или прервать такие участки комплементарности или идентичности последовательностей. В некоторых вариантах реализации один или более нуклеотидов заменены, вставлены или удалены по сравнению с целевой последовательностью, чтобы прервать последовательности, содержащие 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более смежных нуклеотидов, которые идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некоторых вариантах реализации 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более нуклеотидов заменены, вставлены или удалены по сравнению с целевой последовательностью, так что указанная направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 или более смежных нуклеотидов, которые идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма.

В настоящее изобретение дополнительно включены и предложены способы лечения или предотвращения синдрома разрушения колоний медоносных пчел, включающие предоставление медоносной пчеле эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна участку последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, в результате чего уровень заражения паразитами Varroa destructor снижается. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 19 смежным нуклеотидам в последовательности SEQ ID NO: 1 и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 19 смежным нуклеотидам в последовательности SEQ ID NO: 2 и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 19 смежным нуклеотидам в последовательности SEQ ID NO: 69 и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 19 смежным нуклеотидам в последовательности SEQ ID NO: 70 и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 3 и не содержащей последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 4 и не содержащей последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 88 и не содержащей последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 89 и не содержащей последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 90. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 91. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 92. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 93. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 94. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 90 и нуклеиновую кислоту, которая является обратным комплементом последовательности SEQ ID NO: 90. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 91 и нуклеиновую кислоту, которая является обратным комплементом последовательности SEQ ID NO: 91. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 92 и нуклеиновую кислоту, которая является обратным комплементом последовательности SEQ ID NO: 92. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 93 и нуклеиновую кислоту, которая является обратным комплементом последовательности SEQ ID NO: 93. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту согласно SEQ ID NO: 94 и нуклеиновую кислоту, которая является обратным комплементом последовательности SEQ ID NO: 94. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей две или более нуклеиновых кислот с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 3, 4, 88, 89, 90-93. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 19 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 23 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 30 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 40 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 50 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 60 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 70 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 80 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 90 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 100 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 110 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 120 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 130 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна по меньшей мере 140 смежным нуклеотидам в последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87, и не содержит последовательность из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, которая по существу идентична или по существу комплементарна последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, сответствующую последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 71-87. В некотором аспекте указанный способ включает предоставление эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, сответствующую последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 90-94.

В настоящем изобретении предложены и включены в него способы снижения паразитарной нагрузки на организм хозяина. В некотором аспекте паразитарная нагрузка относится к количеству паразитов на отдельного хозяина. В некотором аспекте паразитарная нагрузка относится к среднему количеству паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте паразитарная нагрузка может относиться к количеству паразитов на колонию паразитов хозяев. В аспектах настоящего изобретения указанный паразит представляет собой Varroa destructor и указанный хозяин представляет собой медоносную пчелу Apis mellifera. В некоторых аспектах паразитарная нагрузка относится к количеству паразитов Varroa destructor на 100 медоносных пчел в колонии. В некоторых вариантах реализации в настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для снижения паразитарной нагрузки до менее чем 6 паразитов Varroa destructor на 100 медоносных пчел в колонии. В некоторых вариантах реализации в настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для снижения паразитарной нагрузки до менее чем 5 паразитов Varroa destructor на 100 медоносных пчел в колонии. В некоторых вариантах реализации в настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для снижения паразитарной нагрузки до менее чем 4 паразитов Varroa destructor на 100 медоносных пчел в колонии. В некоторых вариантах реализации в настоящем изобретении предложены и включены в него способы и композиции для снижения паразитарной нагрузки до менее чем 2 паразитов Varroa destructor на 100 медоносных пчел в колонии.

В некотором аспекте способы снижения паразитарной нагрузки включают предоставление эффективного количества направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты организму-хозяину. Эффективное количество композиции согласно настоящему описанию приводит к снижению паразитарной нагрузки за некоторый период времени. В некотором аспекте снижение паразитарной нагрузки можно измерить в течение одного дня с момента предоставления эффективного количества композиции нуклеиновой кислоты. В некотором аспекте паразитарную нагрузку можно измерить через два дня. В некотором аспекте паразитарную нагрузку можно измерить через 3 дня. В других аспектах паразитарную нагрузку можно измерить через 5 дней или через 1 неделю. В другом аспекте паразитарную нагрузку можно измерить более одного раза, например, раз в 3 дня, раз в 5 дней, раз в неделю или раз в месяц. В некоторых аспектах настоящего изобретения уменьшение количества паразитов можно измерить и сравнить с неподвергнутым обработке контрольным организмом или колонией. В аспектах настоящего изобретения указанный паразит представляет собой Varroa destructor и указанный хозяин представляет собой медоносную пчелу Apis mellifera.

В аспектах настоящего изобретения снижение паразитарной нагрузки через некоторый период времени означает уменьшение количества паразитов. В некотором аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 10%, 20%, 30% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 40% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 50% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 60% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 70% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 80% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 90% или более.

В других аспектах паразитарную нагрузку можно измерить как среднее количество паразитов на организм-хозяин. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 20 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 15 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 10 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 5 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 4 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 3 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 2 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 1 паразита на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 20 паразитов на 1000 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 15 паразитов на 1000 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 10 паразитов на 1000 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 5 паразитов на 1000 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 4 паразитов на 1000 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 3 паразитов на 1000 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 2 паразитов на 1000 организмов-хозяев. В некотором аспекте сниженная паразитарная нагрузка может включать менее 1 паразита на 1000 организмов-хозяев.

В аспектах настоящего изобретения у колонии организмов-хозяев была первоначальная паразитарная нагрузка перед тем, как ей предоставили источник эффективного количества нуклеиновой кислоты. В некотором аспекте первоначальная паразитарная нагрузка может включать менее 20 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте первоначальная паразитарная нагрузка может включать менее 15 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте первоначальная паразитарная нагрузка может включать менее 10 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте первоначальная паразитарная нагрузка может включать менее 5 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте первоначальная паразитарная нагрузка может включать менее 4 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте первоначальная паразитарная нагрузка может включать менее 3 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте первоначальная паразитарная нагрузка может включать менее 2 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте первоначальная паразитарная нагрузка может включать менее 1 паразита на 100 организмов-хозяев.

В аспектах настоящего изобретения эффективное количество можно предоставлять через определенные промежутки времени или непрерывно. В некотором аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять один, два или три раза в день. В других аспектах эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять раз в день. В другом аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять один или более раз в два дня. В некотором аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять раз в два дня, раз в три дня или раз в неделю. В некотором аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять раз в две недели. В некотором аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять раз в три недели. В некотором аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять раз в месяц. В некотором аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять раз в два месяца. В некотором аспекте эффективное количество композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять нуждающемуся организму постоянно, например, предоставляя постоянный источник питания. В одном аспекте эффективное количество композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять постоянно в виде композиции для поглощения пчелами. В аспектах настоящего изобретения указанный паразит представляет собой Varroa destructor и указанный хозяин представляет собой медоносную пчелу Apis mellifera. В аспектах настоящего изобретения направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота может представлять собой дцРНК.

В аспектах настоящего изобретения паразитарная нагрузка может снизиться за некоторый период времени. В некотором аспекте период времени, необходимый для снижения паразитарной нагрузки, может составлять 15 недель. В другом аспекте период времени для снижения паразитарной нагрузки может составлять 12 недель. В некотором аспекте снижение паразитарной нагрузки происходит за период времени, составляющий 10 недель. В некотором аспекте период времени, необходимый для снижения паразитарной нагрузки, может составлять 5 недель. В другом аспекте период времени для снижения паразитарной нагрузки может составлять 2 недели. В некотором аспекте снижение паразитарной нагрузки происходит за период времени, составляющий 1 неделю. В некоторых аспектах паразитарная нагрузка может снизиться через один день, через два дня или через три дня.

В настоящем изобретении предложены способы снижения паразитирования на колонии медоносных пчел, включающие предоставление колонии пчел эффективного количества направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты. Эффективное количество композиции согласно настоящему описанию приводит к снижению паразитирования за некоторый период времени. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования можно измерить в течение одного дня с момента предоставления эффективного количества направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования можно измерить через два дня. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования можно измерить через 3 дня. В других аспектах снижение уровня паразитирования можно измерить через 5 дней или через 1 неделю. В другом аспекте снижение уровня паразитирования можно измерить более одного раза, например, раз в 3 дня, раз в 5 дней, раз в неделю или раз в месяц. В некоторых аспектах настоящего изобретения снижение уровня паразитирования можно измерить и сравнить с неподвергнутым обработке контрольным организмом или колонией.

В аспектах настоящего изобретения снижение уровня паразитирования через некоторый период времени означает уменьшение общего количества паразитов. В некотором аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 10%, 20%, 30% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 40% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 50% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 60% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 70% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 80% или более. В другом аспекте количество паразитов может уменьшиться между измерениями на 90% или более.

В других аспектах снижение уровня паразитирования можно измерить как среднее количество паразитов на организм-хозяин. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования может включать менее 20 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования может включать менее 15 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования может включать менее 10 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования может включать менее 5 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования может включать менее 4 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования может включать менее 3 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования может включать менее 2 паразитов на 100 организмов-хозяев. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования может включать менее 1 паразита на 100 организмов-хозяев.

В аспектах настоящего изобретения эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты, которое приводит к снижению уровня паразитирования, можно предоставлять через определенные промежутки времени или непрерывно. В некотором аспекте эффективное количество композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять один, два или три раза в день. В других аспектах эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять раз в день. В другом аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять один или более раз каждые два дня. В некотором аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять раз в два дня, раз в три дня или раз в неделю. В некотором аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять нуждающемуся организму постоянно, например, предоставляя постоянный источник питания. В одном аспекте эффективное количество направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты можно предоставлять постоянно в виде композиции для поглощения пчелами. В аспектах настоящего изобретения указанный паразит представляет собой Varroa destructor и указанный хозяин представляет собой медоносную пчелу Apis mellifera. В аспектах настоящего изобретения направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота может представлять собой дцРНК.

В аспектах настоящего изобретения снижение уровня паразитирования может уменьшаться за некоторый период времени. В некотором аспекте период времени, необходимый для снижения уровня паразитирования, может составлять 15 недель. В другом аспекте период времени, необходимый для снижения уровня паразитирования, может составлять 12 недель. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования происходит за период времени, составляющий 10 недель. В некотором аспекте период времени, необходимый для снижения уровня паразитирования, может составлять 5 недель. В другом аспекте период времени, необходимый для снижения уровня паразитирования, может составлять 2 недели. В некотором аспекте снижение уровня паразитирования происходит за период времени, составляющий 1 неделю. В некоторых аспектах снижение уровня паразитирования может происходить через один день, через два дня или через три дня.

В аспектах настоящего изобретения снижение уровня паразитирования измеряют по количеству выживших паразитов по сравнению с первоначальным измерением количества паразитов в колонии организмов-хозяев. В некотором аспекте указанный паразит может представлять собой клеща Varroa destructor и указанный хозяин может представлять собой медоносную пчелу Apis mellifera. В некотором аспекте количество выживших паразитов может составлять 25% от первоначального количества паразитов. В некотором аспекте количество выживших паразитов может составлять 15% от первоначального количества паразитов. В некотором аспекте количество выживших паразитов может составлять 10% от первоначального количества паразитов. В некотором аспекте количество выживших паразитов может составлять 5% от первоначального количества паразитов. В некотором аспекте количество выживших паразитов может составлять менее 5% или даже быть недетектируемым после предоставления колонии хозяев эффективного количества направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной композиции нуклеиновой кислоты.

В некотором аспекте в настоящем изобретении предложены способы и композиции для снижения восприимчивости пчел к заражению клещом Varroa. В других аспектах в настоящем изобретении предложены способы и композиции для предотвращения заражения паразитами колоний пчел. В другом аспекте настоящего изобретения предложены способы и композиции для снижения уровня паразитирования клеща Varroa destructor на медоносных пчелах.

Согласно настоящему описанию хозяин, которому предоставили источник направленной против паразитов, против вредителей или инсектицидной нуклеиновой кислоты, может накапливать нуклеиновую кислоту в своем организме, обычно в гемолимфе. Накапливая нуклеиновую кислоту, такие организмы хозяева становятся устойчивыми или менее восприимчивыми к паразитированию. В других аспектах колония организмов-хозяев, которым предоставили источник нуклеиновой кислоты, может накапливать нуклеиновую кислоту в организмах нескольких представителей колонии, что обеспечивет устойчивость или сниженную восприимчивость к паразиту. Нуклеиновую кислоту, находящуюся в организмах-хозяевах, которым предоставили источник нуклеиновой кислоты, можно обнаружить, применяя способы, известные средним специалистам в данной области. В аспектах настоящего изобретения направленная против паразитов, против вредителей или инсектицидная нуклеиновая кислота может представлять собой дцРНК.

В некотором аспекте настоящего изобретения предложены способы и композиции для лечения заражения пчел клещом Varroa путем снижения экспрессии кальмодулина и связанных с кальмодулином продуктов генов варриатозного клеща. В некотором аспекте указанные композиции содержат направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте указанные композиции содержат направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте указанные композиции содержат направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте указанные композиции содержат направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 70. В некоторых аспектах указанные композиции содержат направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87. В другом аспекте указанные композиции содержат направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, соответствующую последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 3, 4 и 88-93. В некотором аспекте указанные композиции содержат малую РНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте указанные композиции содержат малую РНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте указанные композиции содержат малую РНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте указанные композиции содержат малую РНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 70. В некоторых аспектах указанные композиции включают a малая РНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87. В другом аспекте указанные композиции содержат малую РНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 3, 4, 88 и 89. В другом аспекте указанные композиции содержат малую РНК соответствующую последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 90-93. В некотором аспекте указанные композиции содержат дцРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте указанные композиции содержат дцРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте указанные композиции содержат дцРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте указанные композиции содержат дцРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 70. В некоторых аспектах указанные композиции содержат дцРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87. В другом аспекте указанные композиции содержат дцРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 3, 4, 88 и 89. В другом аспекте указанные композиции содержат дцРНК, включающую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 90-93. В некотором аспекте указанные композиции содержат миРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 1. В некотором аспекте указанные композиции содержат миРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 2. В некотором аспекте указанные композиции содержат миРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 69. В некотором аспекте указанные композиции содержат миРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, представленной в SEQ ID NO: 70. В некоторых аспектах указанные композиции содержат миРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 71-87. В другом аспекте указанные композиции содержат миРНК, соответствующую последовательности кальмодулина Varroa destructor, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 3, 4, 88 и 89. В другом аспекте указанные композиции содержат миРНК соответствующую последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 90-93. В аспектах настоящего изобретения композиция может содержать направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, соответствующую участку последовательности SEQ ID NO: 1 или 2. В других аспектах настоящего изобретения композиция может содержать направленную против паразитов, против вредителей или инсектицидную нуклеиновую кислоту, соответствующую участку последовательности SEQ ID NO: 69 или 70. В других дополнительных аспектах настоящего изобретения композиция может содержать нуклеиновую кислоту, соответствующую участку последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 3, 4, 88 и 89. В других дополнительных аспектах настоящего изобретения композиция может содержать нуклеиновую кислоту, соответствующую участку последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 90-94.

Клещи Varroa паразитируют на куколках и взрослых пчелах и репродуцируются в ячейках с куколками. Клещи с помощью рта прокалывают экзоскелет и кормятся за счет гемолимфы пчелы. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что полинуклеотидные агенты, которые вводили пчелам для лечения заражения клещом Varroa, присутствовали в гемолимфе пчелы, благодаря чему становились доступными для клеща.

Авторы настоящего изобретения показали, что нацеленные на кальмодулин фрагменты дцРНК можно успешно передавать клещам Varroa (см., например, ФИГ. 2), что указанная дцРНК может служить для снижения экспрессии генов кальмодулина в клеще Varroa (см., например, ФИГ. 3, панель A) и дополнительно что нацеливание на гены кальмодулина для снижения экспрессии может привести к уменьшению количества клещей Varroa (см., например, ФИГ. 3, панель B).

Таким образом, согласно одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предотвращения или лечения заражения пчелы клещом Varroa destructor, указанный способ включает введение пчеле эффективного количества агента нуклеиновой кислоты, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, которая снижает экспрессию гена кальмодулина клеща Varroa destructor, тем самым предотвращая или вылечивая заражение пчелы клещом Varroa destructor.

Согласно данному аспекту настоящего изобретения агенты согласно настоящему описанию применяют для предотвращения проживания клеща Varroa destructor как паразита на пчеле, или его личинок. Формулировка ʺклещ Varroa destructorʺ относится к внешнему паразитирующему клещу, который нападает на медоносных пчел Apis cerana и Apis mellifera. Указанный клещ может находиться на стадии взрослой особи, кормящейся от пчелы, или на стадии личинки внутри ячейки с расплодом медоносной пчелы.

Как уже было упомянуто, агенты согласно настоящему описанию способны селективно снижать экспрессию продукта гена клеща Varroa destructor. В данном тексте формулировка ʺпродукт генаʺ относится к молекуле РНК или к белку. Согласно одному аспекту продукт гена клеща Varroa destructor представляет собой такой продукт, который необходим для жизнеспособности клеща. Снижение экспрессии такого продукта гена, как правило, будет приводить к гибели клеща Varroa. Согласно другому аспекту продукт гена клеща Varroa destructor представляет собой такой продукт, который необходим для репродукции клеща. Снижение экспрессии такого продукта гена, как правило, будет приводить к предотвращению репродукции варриатозного клеща и к окончательному истреблению популяции клещей. Согласно еще одному аспекту продукт гена клеща Varroa destructor представляет собой такой продукт, который необходим для формирования патогенных симптомов у пчелы. В некоторых аспектах продукт гена Varroa destructor представляет собой продукт гена кальмодулина. В некоторых аспектах ген кальмодулина может включать последовательность нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. В некоторых аспектах ген кальмодулина может включать последовательность нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 69 или SEQ ID NO: 70.

Примеры продуктов генов, экспрессию которых можно снижать в соответствии с данным аспектом настоящего изобретения, включают, но не ограничены геном кальмодулина.

В некотором аспекте настоящего изобретения агенты, способные снижать экспрессию продукта гена клеща Varroa destructor или другого паразита, могут снижать в меньшей степени экспрессию продукта гена у других животных, таких как пчела или другой нецелевой организм. Соответственно, некоторые агенты согласно настоящему изобретению способны различать ген клеща и ген пчелы и снижать экпрессию первого из упомянутых в большей степени, чем последнего. В некоторых аспектах некоторые агенты согласно настоящему изобретению способны различать целевой ген в целевом организме и ортологи в нецелевых организмах, снижая экпрессию первого из упомянутых в большей степени, чем последнего. В других аспектах экспрессия целевого гена указанного паразита снижена, тогда как экспрессия гомологичного гена хозяина - нет. В другом дополнительном аспекте у целевого гена паразита нет гомолога в указанном хозяине. Согласно другому аспекту агенты согласно настоящему изобретению вообще не снижают экпрессию гена пчелы. Например, это можно осуществить, нацеливаясь на ген, который избирательно экспрессируется у клеща, но не у пчелы, например, ген натриевого канала клеща - FJ216963. В качестве альтернативы агенты согласно настоящему изобретению могут быть нацелены на специфичные для клеща последовательности в генах, которые экспрессируются как у клеща, так и у пчелы.

Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 5 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 6 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 7 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 8 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 9 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 10 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 11 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 12 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 13 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 14 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 15 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 16 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 17 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 18 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 19 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 20 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 21 основания, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 22 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 23 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 24 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 25 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 26 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 27 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 28 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 29 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Согласно одному аспекту агенты согласно настоящему изобретению нацелены на фрагменты генов Varroa, длина которых составляет по меньшей мере 100 оснований и которые не несут какую-либо последовательность длиннее 30 оснований, которая полностью гомологична любой последовательности из генома пчелы или последовательности из генома человека. Хотя должно быть очевидно, что мишенью может быть более чем один ген, чтобы максимизировать цитотоксическое действие на клещей Varroa, композиции, которые содержат одну или лишь несколько малых РНК повысят вероятность того, что данная композиция будет представлять собой композицию селективного инсектицида, так как способность вступать в перекрестные реакции с другими насекомыми может быть снижена.

Согласно одному аспекту можно получить композицию дцРНК, соответствующую генам кальмодулина-1 и кальмодулина-2 Varroa destructor (например, применяя агенты нуклеиновые кислоты, последовательность которых представлена в последовательностях SEQ ID NO: 1-4 и с 69 по 89, комплементарные им последовательности или нуклеиновые кислоты, направленные на их участки).

Должно быть очевидно, что наряду со снижением экпрессии некоторого количества генов, в настоящем изобретении дополнительно предложено и включено в него применение некоторого количества агентов для снижения экпрессии одного и того же гена (например, множества нуклеиновых кислот, или дцРНК, каждая из которых гибридизуется с отличным фрагментом одного и того же гена). Например, в некотором аспекте комбинацию одной или более нуклеиновых кислот, соответствующих последовательности, выбранный из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, с 26 по 35 и с 69 по 89, можно применять для увеличения цитотоксического и противопаразитарного действия указанной композиции. для данной цели можно применять средства, которые способны идентифицировать видоспецифические последовательности: например, BLASTN и другие подобные компьютерные программы. В публикациях патентов США с номерами 20090118214 и 20120108497 предложено применение дцРНК для предотвращения и лечения вирусных инфекций у медоносных пчел. В публикациях патентов США с номерами 20120258646 предложено применение дцРНК для контролирования Varroa destructor у медоносной пчелы. Каждая публикация настоящим полностью включена в данную заявку.

В настоящем изобретении предложены и включены в него композиции и способы снижения экспрессии гена в целевом организме. В некотором аспекте целевой организм может представлять собой паразита. В некоторых аспектах паразит может представлять собой Varroa destructor. В данном тексте термин ʺснижение экпрессииʺ относится к непосредственной или опосредованной индукции снижения уровня транскрипции желательного гена, уменьшению количества, стабильности или способности транслироваться продуктов транскрипции гена (например, РНК), и/или к снижению уровня трансляции полипептида(-ов), кодируемого(-ых) желательным геном. Снижение уровня экспрессии продукта гена клеща Varroa destructor можно отслеживать, например, путем непосредственного обнаружения транскриптов гена (например, с помощью ПЦР), путем обнаружения полипептида(-ов), кодируемого(-ых) РНК гена или патогена пчелы (например, с помощью вестерн-блоттинга или иммунопреципитации), путем обнаружения биологической активности полипептидов, кодируемых геном (например, каталитической активности, связывания лиганда и тому подобных активностей), или путем отслеживания изменений в клеще Varroa destructor (например, снижения пролиферации клеща, снижения вирулентности клеща, снижения подвижности клеща и т.д.) и путем анализа инфективности/патогенности для пчелы.

Снижение уровня экспрессии продукта гена вредителя или паразита можно осуществить на уровне генома и/или транскрипта, применяя различные агенты, которые препятствуют транскрипции и/или трансляции (например, замалчивающие РНК агенты, рибозим, дезоксирибозим и антисмысловые молекулы нуклеиновой кислоты). Снижение уровня экспрессии продукта гена клеща Varroa destructor можно осуществить на уровне генома и/или транскрипта, применяя различные агенты, которые препятствуют транскрипции и/или трансляции (например, замалчивающие РНК агенты, рибозим, дезоксирибозим и антисмысловые молекулы нуклеиновой кислоты).

Согласно одному аспекту агент, который снижает уровень экспрессии продукта гена вредителя или паразита, представляет собой малую РНК, такую как замалчивающий РНК агент. Согласно данному аспекту длина малой РНК больше, чем 15 пар оснований. В другом аспекте длина малой РНК больше, чем 50 пар оснований. В некотором аспекте длина малой РНК больше, чем 50 пар оснований, но меньше, чем приблизительно 500 пар оснований. В некотором аспекте длина малой РНК больше, чем 100 пар оснований, но меньше, чем приблизительно 500 пар оснований. В некотором аспекте длина малой РНК больше, чем 200 пар оснований, но меньше, чем приблизительно 500 пар оснований. В некотором аспекте указанный вредитель или паразит может представлять собой клеща Varroa destructor.

Другой способ снижения уровня экпрессии продукта гена вредителя или паразита состоит во внедрении малых ингибиторных РНК (миРНК). Другой способ снижения уровня экпрессии продукта гена клеща Varroa состоит во внедрении малых ингибиторных РНК (миРНК).

В одном аспекте настоящего изобретения, синтез замалчивающих РНК агентов, подходящих для применения в настоящем изобретении, можно осуществить, как описано далее. Во-первых, целевую мРНК вредителя или паразита сканируют по ходу транскрипции от инициирующего кодона AUG для выявления последовательности динуклеотида AA. Местонахождение каждого AA и 19 смежных с ним с 3'-стороны нуклеотидов регистрируют как потенциальные целевые сайты миРНК. Предпочтительно, целевые сайты миРНК выбирают из открытой рамки считывания, так как нетранслируемые области (НТО) более богаты сайтами связывания регуляторных белков. Белки, связывающиеся с НТО, и/или комплексы инициации трансляции могут препятствовать связыванию комплекса эндонуклеазы миРНК (Tuschl ChemBiochem. 2:239-245). Тем не менее, должно быть очевидно, что миРНК, направленные на нетранслируемые области, также могут быть эффективными, что продемонстрировали для GAPDH, где миРНК, направленная на 5'-НТО, опосредовала снижение приблизительно на 90% уровня мРНК клеточного GAPDH и полностью нарушала синтез белка (доступно в сети Интернет по адресу www.ambion.com/techlib/tn/91/912.html).

Во-вторых, потенциальные целевые сайты сравнивают с подходящей базой данных геномов нецелевых организмов (например, человека, пчелы, бабочки монарх, мыши, крысы и т.д.), применяя любое программное обеспечение для выравнивания последовательностей, такое как программное обеспечение BLAST, доступное на сервере NCBI (доступно в сети Интернет по адресу www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). В некоторых вариантах реализации предполагаемые целевые сайты, для которых выявлена существенная гомология с другими кодирующими последовательностями, отсеивают. В некоторых вариантах реализации один или более нуклеотидов заменены или удалены по сравнению с целевой последовательностью, чтобы прервать последовательности, содержащие 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более смежных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма.

Удовлетворяющие требованиям целевые последовательности выбирают для использования в качестве матрицы для синтеза миРНК. Предпочтительные последовательности представляют собой последовательности с низким содержанием G/C, так как было доказано, что такие последовательности более эффективно опосредуют замалчивание гена по сравнению с последовательностями, содержание G/C в которых выше, чем 55%. Предпочтительно для оценки выбирают несколько целевых сайтов по всей длине целевого гена или последовательности. Для лучшей оценки выбранных миРНК, предпочтительно вместе с ней используют отрицательный контроль. МиРНК отрицательного контроля предпочтительно имеют такой же нуклеотидный состав, как и миРНК, но у них нет существенной гомологии с геномом. Таким образом, предпочтительно применяют перемешанную последовательность нуклеотидов миРНК, при условии, что она не проявляет какой-либо существенной гомологии с любым другим геном или целевой последовательностью вредителя или паразита. Пример перемешанной последовательности нуклеотидов представлен в SEQ ID NO. 5.

Например, миРНК, которую можно применять в данном аспекте настоящего изобретения, представляет собой такую миРНК, которая нацелена на специфический для клеща ген кальмодулина. Примеры миРНК представлены в последовательностях SEQ ID NO: 3,4, 88 и 89.

Должно быть очевидно, что замалчивающий РНК агент согласно настоящему описанию не обязательно должен быть ограничен молекулами, содержащими только РНК, и может дополнительно содержать химически модифицированные нуклеотиды и не относящиеся к нуклеотидам молекулы.

В некоторых аспектах замалчивающий РНК агент, предложенный в данной заявке, может быть функционально связан с проникающим в клетку пептидом. В данном тексте ʺпроникающий в клетку пептидʺ представляет собой пептид, который содержит короткую (состоящую приблизительно из 12 остатков) последовательность аминокислот или функциональный мотив, придающий ему способность к транслокации энергетически независимым путем (т.е., не путем эндоцитоза), относящуюся к транспорту проникающего через мембрану комплекса через плазматическую и/или ядерную мембраны клетки. Проникающий в клетку пептид, используемый в проникающем через мембрану комплексе согласно настоящему описанию, предпочтительно содержит по меньшей мере один нефункциональный остаток цистеина, который либо свободен, либо дериватизирован для образования дисульфидной связи с двухцепочечной рибонуклеиновой кислотой, которую модифицируют для такой связи. Примеры мотивов аминокислот, придающих такие свойства, перечислены в патенте США номер 6348185, содержание которого явно включено в данную заявку посредством ссылки. Проникающие в клетку пептиды согласно настоящему описанию предпочтительно включают, но не ограничены перечисленными: пенетратин, транспортан, plsl, TAT(48-60), pVEC, MTS и MAP.

Другой агент, способный снижать уровень экпрессии продукта гена вредителя или паразита, представляет собой молекулу дезоксирибозима, способную специфично расщеплять мРНК-транскрипт или последовательность ДНК полипептида патогена пчелы. Дезоксирибозимы представляют собой одноцепочечные полинуклеотиды, которые способны расщеплять как одноцепочечные, так и двухцепочечные целевые последовательности (Breaker, R.R. и Joyce, G. Chemistry и Biology 1995;2:655; Santoro, S.W. & Joyce, G.F. Proc. Natl, Acad. Sci. USA 1997;943:4262). Была предложена обобщенная модель (модель ʺ10-23ʺ) дезоксирибозима. Дезоксирибозимы ʺ10-23ʺ содержат каталитический домен из 15 дезоксирибонуклеотидов, фланкированный двумя распознающими субстрат доменами, каждый из которых состоит из от семи до девяти дезоксирибонуклеотидов. Данный тип дезоксирибозима может эффективно расщеплять субстрат РНК в местах соединения пурин:пиримидин (Santoro, S.W. & Joyce, G.F. Proc. Natl, Acad. Sci. USA 199; обзор дезоксирибозимов см. в Khachigian, LM, Curr Opin Mol Ther 4:119-21 (2002)). В некотором аспекте продукт гена вредителя или паразита может представлять собой продукт гена клеща Varroa. Снижения уровня экспрессии продуктов генов вредителя или паразита также можно добиться, применяя антисмысловой полинуклеотид, способный специфично гибридизоваться с мРНК-транскриптом, кодирующим продукт гена вредителя или паразита. При разработке антисмысловых молекул, которые можно применять для эффективного снижения уровня экспрессии продукт гена вредителя или паразита, необходимо учитывать два аспекта, важных для антисмыслового подхода. Первый аспект представляет собой доставку олигонуклеотида в цитоплазму подходящих клеток, тогда как второй аспект представляет собой разработку олигонуклеотида, который специфично связывает указанную целевую последовательность мРНК или РНК внутри клетки таким образом, что ингибирует ее трансляцию. В некотором аспекте продукт гена вредителя или паразита может представлять собой продукт гена клеща Varroa. В другом аспекте продукт гена вредителя или паразита может представлять собой продукт гена кальмодулина.

Можно применять множество стратегий доставки для эффективной доставки олигонуклеотидов в большое разнообразие типов клеток (см., например, Luft J Mol Med 76: 75-6 (1998); Kronenwett и др. Blood 91: 852-62 (1998); Rajur и др. Bioconjug Chem 8: 935-40 (1997); Lavigne и др. Biochem Biophys Res Commun 237: 566-71 (1997) и Aoki и др. (1997) Biochem Biophys Res Commun 231: 540-5 (1997)).

Кроме того, также доступны алгоритмы идентификации последовательностей с наиболее высокой предсказанной аффинностью связывания с целевой мРНК на основании термодинамического цикла, который учитывает энергетику структурных изменений как в целевой мРНК, так и в олигонуклеотиде (см., например, Walton и др. Biotechnol Bioeng 65: 1-9 (1999)). Такие алгоритмы успешно применялись для реализации антисмыслового подхода в клетках. Например, алгоритм, разработанный Walton и др., позволил ученым успешно разработать антисмысловые олигонуклеотиды для транскриптов бета-глобина кролика (RBG) и фактора некроза опухоли-альфа (TNF-альфа) мыши. Та же группа исследователей позже сообщила, что антисмысловая активность рационально выбранных олигонуклеотидов против трех модельных целевых мРНК (лактатдегидрогеназы A и B человека и gp1 крысы) в культуре клеток, которую оценивали с помощью методики кинетической ПЦР, оказалась эффективной почти во всех случаях, включая анализы против трех различных мишеней в двух типах клеток с фосфодиэфирными и фосфоротиоатными взаимодействиями олигонуклеотидов. Кроме того, также было опубликовано несколько подходов к разработке и прогнозированию эффективности специфических олигонуклеотидов с применением системы in vitro (Matveeva и др., Nature Biotechnology 16: 1374-1375 (1998)].

Другой агент, способный снижать уровень экпрессии продукта гена вредителя или паразита, представляет собой молекулу рибозима, способную специфично расщеплять мРНК-транскрипт, кодирующий продукт гена клеща Varroa. Рибозимы все чаще применяют для специфического к последовательности ингибирования экспрессии генов путем расщепления мРНК, кодирующей интересующие белки (Welch и др., Curr Opin Biotechnol. 9:486-96 (1998)). Возможность разработки рибозимов для расщепления любой специфической целевой РНК, включая вирусную РНК, сделала их полезными средствами как в фундаментальных исследованиях, так и для применения в терапии. В некотором аспекте продукт гена вредителя или паразита может представлять собой продукт гена клеща Varroa. В другом аспекте продукт гена вредителя или паразита может представлять собой продукт гена кальмодулина.

Дополнительный способ снижения уровня экспрессии продукта гена вредителя или паразита в клетках состоит в использовании образующих триплекс олигонуклеотидов (TFO). Недавние исследования показали, что можно разработать TFO, которые могут распознавать и связываться с участками полипурина/полипиримидина в двухцепочечной спиральной ДНК специфическим к последовательности образом. Такие правила распознавания в общих чертах описаны в Maher III, L. J., и др., Science (1989) 245:725-7; Moser, H. E., и др., Science, (1987) 238:645-6; Beal, P. A., и др., Science (1992) 251:1360-1363; Cooney, M., и др., Science (1988) 241:456-459; и Hogan, M. E., и др., публикация EP 375408. Модификация олигонуклеотидов, такая как внедрение интеркаляторов и замен в остове, и оптимизация условий связывания (pH и концентрация катионов) помогла преодолеть внутренние ограничения, препятствующие активности TFO, такие как отталкивание зарядов и нестабильность, и недавно было показано, что синтетические олигонуклеотиды могут быть нацелены на специфические последовательности (недавний обзор см. в Seidman и Glazer, J Clin Invest 2003;112:487-94). В некотором аспекте продукт гена вредителя или паразита может представлять собой продукт гена клеща Varroa. В другом аспекте продукт гена вредителя или паразита может представлять собой продукт гена кальмодулина.

Как правило, у образующего триплекс олигонуклеотида наблюдают соответствие последовательностей:

олиго 3'--A G G T дуплекс 5'--A G C T дуплекс 3'--T C G A

Тем не менее, было показано, что у триплетов A-AT и G-GC наиболее стабильная тройная спираль (Reither и Jeltsch, BMC Biochem, 12 сентября 2002 г., Epub). Те же авторы продемонстрировали, что TFO, разработанные согласно правилу A-AT и G-GC, не образуют неспецифических триплексов, свидетельствуя о том, что образование триплекса в действительности специфично для последовательности.

Длина образующих триплекс олигонуклеотидов предпочтительно составляет по меньшей мере 15, более предпочтительно 25, еще более предпочтительно или более нуклеотидов, до 50 или 100 п.о.

Трансфекция клеток TFO (например, посредством катионных липосом) и образование структуры тройной спирали с целевой ДНК приводит к стерическим и функциональным изменениям, блокированию инициации и элонгации транскрипции, что позволяет вносить желательные изменения в последовательность эндогенной ДНК и приводит к специфическому снижению уровня экспрессии генов.

Подробное описание разработки, синтеза и внедрения эффективных TFO можно найти в публикациях патентов США с номерами 2003/017068 и 2003/0096980, Froehler и др., и 2002/0128218 и 2002/0123476, Emanuele и др., и патенте США номер 5721138, Lawn.

Агенты, снижающие экпрессию полинуклеотида, согласно настоящему описанию можно получить с помощью любого способа синтеза полинуклеотидов, известного в данной области, такого как ферментативный синтез или твердофазный синтез. Оборудование и реагенты для осуществления твердофазного синтеза доступны для приобретения, например, у Applied Biosystems. Также можно применять любые другие средства для такого синтеза; эффективный синтез полинуклеотидов находится в рамках компетенции специалиста в данной области, и его можно осуществить с помощью общепринятых методик, подробно описанных, например, в ʺMolecular Cloning: A laboratory Manualʺ Sambrook и др., (1989); ʺCurrent Protocols in Molecular Biologyʺ тома I-III Ausubel, R. M., ред. (1994); Ausubel и др., ʺCurrent Protocols in Molecular Biologyʺ, John Wiley and Sons, Балтимор, Мэриленд (1989); Perbal, ʺA Practical Guide to Molecular Cloningʺ, John Wiley & Sons, Нью-Йорк (1988) и ʺOligonucleotide Synthesisʺ Gait, M. J., ред. (1984), используя химические реакции с твердофазными материалами, например, цианоэтилфосфорамидитом, с последующим снятием защитных групп, обессоливанием и очисткой, например, с помощью автоматизированного способа без снятия тритила (trityl-on) или ВЭЖХ.

Полинуклеотидные агенты согласно настоящему изобретению могут содержать гетероциклические нуклеозиды, состоящие из оснований пуринов и пиримидинов, связанных 3' с 5' фосфодиэфирной связью. Предпочтительно применяемые полинуклеотидные агенты представляют собой агенты, с модификациями либо в остове, либо в межнуклеозидных связях, либо в основаниях, что в общих чертах описано ниже в данном тексте.

Конкретные примеры полинуклеотидных агентов, полезных согласно данному аспекту настоящего изобретения, включают полинуклеотидные агенты, содержащие модифицированные остовы или неприродные межнуклеозидные связи. Полинуклеотидные агенты, содержащие модифицированные остовы, включают агенты, в остове которых сохранен атом фосфора, описанные в патентах США с номерами: 4469863; 4476301; 5023243; 5177196; 5188897; 5264423; 5276019; 5278302; 5286717; 5321131; 5399676; 5405939; 5453496; 5455233; 5466677; 5476925; 5519126; 5536821; 5541306; 5550111; 5563253; 5571799; 5587361 и 5625050.

Модифицированные остовы полинуклеотидов включают, например, фосфоротиоаты, хиральные фосфоротиоаты, фосфородитиоаты, фосфотриэфиры, аминоалкилфосфотриэфиры, метилфосфонаты и фосфонаты другого алкила, включая 3'-алкиленфосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, включая 3' аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты, содержащие нормальные связи 3'-5', их аналоги со связями 2'-5', а также указанные молекулы с обратной ориентацией, в которых смежные пары нуклеозидных единиц связаны 3'-5' с 5'-3' или 2'-5' с 5'-2'. Также можно применять формы различных солей, смешанных солей и свободных кислот.

В качестве альтернативы, модифицированные остовы полинуклеотидов, которые не содержат атом фосфора, представляют собой такие остовы, которые образованы алкильными с короткой цепью или циклоалкильными межнуклеозидными связями, смешанными гетероатомными и алкильными или циклоалкильными межнуклеозидными связями или одной или более гетероатомными с короткой цепью или гетероциклическими межнуклеозидными связями. Такие остовы включают остовы, содержащие морфолиновые связи (образованные частично сахаром нуклеозида); силоксановые остовы; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые остовы; формацетильные и тиоформацетильные остовы; метиленформацетильные и тиоформацетильные остовы; алкенсодержащие остовы; сульфаматные остовы; метилениминовые и метиленгидразиновые остовы; сульфонатные и сульфонамидные остовы; амидные остовы; и другие остовы, содержащие смешанные компоненты N, 0, S и СН₂, описанные в патентах США с номерами 5034506; 5166315; 5185444; 5216141; 5235033; 5264562; 5264564; 5405938; 5470967; 5489677; 5541307; 5561225; 5596086; 5602240; 5602240; 5608046; 5610289; 5618704; 5623070; 5663312; 5214134; 5466677; 5610289; 5633360; 5677437 и 5677439.

Другие полинуклеотидные агенты, которые можно применять согласно настоящему описанию, представляют собой агенты, в которых модифицированы как сахар, так и межнуклеозидная связь, т.е. остов, нуклеотидных единиц, которые заменены новыми группами. Основания сохраняют для гибридизации с подходящим целевым полинуклеотидом. Пример такого полинуклеотидного миметика включает пептидо-нуклеиновую кислоту (ПНК). Полинуклеотид ПНК относится к полинуклеотиду, в котором сахарный остов заменен амидсодержащим остовом, в частности, аминоэтилглициновым остовом. Основания сохранены и связаны непосредственно или опосредованно с азотными атомами азагрупп амидной части остова. Патенты Соединенных Штатов, в которых описано получение ПНК-соединений, включают, не ограничиваясь перечисленными, патенты США № 5539082; 5714331 и 5719262, каждый из которых включен в настоящую заявку посредством ссылки. Другие модификации остова, которые можно использовать в настоящем изобретении, раскрыты в патенте США № 6303374.

Полинуклеотидные агенты согласно настоящему изобретению также могут содержать модификации или замены оснований. В данном тексте ʺнемодифицированныеʺ или ʺприродныеʺ основания включают пуриновые основания - аденин (A) и гуанин (G), и пиримидиновые основания - тимин (T), цитозин (C) и урацил (U). Модифицированные основания включают, но не ограничены другими синтетическими и природными основаниями, такими как 5-метилцитозин (5-me-C), 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метильные и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галоген-урацил и -цитозин, 5-пропинил-урацил и -цитозин, 6-азо-урацил, -цитозин и -тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген-, 8-амино-, 8-тиол-, 8-тиоалкил-, 8-гидроксил- и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген-, особенно 5-бром-, 5-трифторметил- и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-деазааденин и 3-деазагуанин и 3- деазааденин. Дополнительные основания включают основания, раскрытые в патенте США № 3687808, основания, раскрытые в The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, страницы 858-859, Kroschwitz, J. I., ред. John Wiley & Sons, 1990, основания, раскрытые в Englisch и др., Angewandte Chemie, международное издание, 1991, 613, и основания, раскрытые в Sanghvi, Y. S., Глава 15, Antisense Research and Applications, страницы 289-2, Crooke, S. T. и Lebleu, B., ред., CRC Press, 1993. Такие основания особенно полезны для повышения аффинности связывания олигомерных соединений согласно настоящему описанию. Они включают содержащие заместители в положении 5 пиримидины, 6-азапиримидины и содержащие заместители в положениях N-2, N-6 и 0-6 пурины, включая 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин. Было показано, что замены на 5-метилцитозин повышают стабильность дуплекса нуклеиновых кислот на 0,6-1,2°C (Sanghvi YS и др. (1993) Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton 276-278) и в настоящее время являются предпочтительными заменами оснований, особенно когда их комбинируют с модификациями сахара 2'-O-метоксиэтилом.

После синтеза полинуклеотидные агенты согласно настоящему изобретению необязательно можно очистить. Например, полинуклеотиды можно очистить из смеси путем экстрагирования растворителем или смолой, преципитации, электрофореза, хроматографии или комбинации перечисленных способов очистки. В качестве альтернативы полинуклеотиды можно применять без очистки или с минимальной очисткой, чтобы избежать потерь при обработке образца. Полинуклеотиды можно сушить для хранения или растворять в водном растворе. Раствор может содержать буферы или соли, способствующие отжигу и/или стабилизирующие цепи дуплекса.

Должно быть очевидно, что полинуклеотидный агент согласно настоящему описанию может быть предложен сам по себе или в виде конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую указанный полинуклеотидный агент. Как правило, конструкция нуклеиновой кислоты содержит последовательность промотора, который функционален в клетке хозяина, что подробно описано ниже в данном тексте.

Полинуклеотидные последовательности согласно настоящему описанию, под контролем функционально связанной с ними последовательности промотора, дополнительно могут быть фланкированы дополнительными последовательностями, которые положительно влияют на транскрипцию и/или стабильность полученного транскрипта. Такие последовательности, как правило, расположены против хода транскрипции от промотора и/или по ходу транскрипции от 3'-конца экспрессирующей конструкции.

Термин ʺфункционально связанныйʺ, используемый по отношению к регуляторной последовательности и структурной последовательности нуклеотидов, означает, что регуляторная последовательность вызывает регулируемую экспрессию связанной с ней структурной последовательности нуклеотидов. ʺРегуляторные последовательностиʺ или ʺконтролирующие элементыʺ относятся к последовательности нуклеотидов, расположенной против хода транскрипции, внутри или по ходу транскрипции от структурной последовательности нуклеотидов, и влияющей на распределение по времени и уровень или величину транскрипции, процессинга РНК или стабильности, или трансляции ассоциированной с ней структурной последовательности нуклеотидов. Регуляторные последовательности могут включать промоторы, лидерные последовательности трансляции, интроны, энхансеры, структуры типа «стебель-петля», связывающие репрессор последовательности, терминирующие последовательности, последовательности паузы, последовательности узнавания полиаденилирования и тому подобные последовательности.

Должно быть очевидно, что агенты нуклеиновой кислоты можно доставлять вредителю или паразиту большим разнообразием способов. Согласно одному аспекту указанные агенты нуклеиновой кислоты доставляют непосредственно вредителю или паразиту (например, путем опрыскивания зараженного клещами улья). Агенты нуклеиновой кислоты или конструкции, кодирующие их, могут проникать в организмы клещей путем диффузии. В данном аспекте промотор конструкции нуклеиновой кислоты обычно функционален в клетках клеща. В некотором аспекте вредитель или паразит может представлять собой Varroa destructor.

Должно быть очевидно, что поскольку многие паразиты с помощью своих ртов прокалывают экзоскелет членистоногого хозяина и кормятся за счет гемолимфы членистоногого, в настоящем описании предложена доставка полинуклеотидных агентов согласно настоящему описанию членистоногому, в результате чего они присутствуют в гемолимфе членистоногого, становясь доступными для вредителя или паразита. Таким образом, согласно другому аспекту агенты нуклеиновой кислоты доставляют опосредованно вредителю или паразиту (например, клещу через пчелу-хозяина). В данном аспекте промотор конструкции нуклеиновой кислоты обычно функционален в клетках хозяина. В некоторых аспектах вредитель или паразит может представлять собой Varroa destructor и хозяин-членистоногое может представлять собой пчелу.

Согласно одному аспекту агенты нуклеиновой кислоты доставляют зараженным паразитами хозяевам путем распыления. Указанные агенты нуклеиновой кислоты или конструкции, кодирующие их, могут проникать в организмы хозяев путем диффузии. В некоторых аспектах вредитель или паразит может представлять собой Varroa destructor и хозяин-членистоногое может представлять собой пчелу.

Согласно другому аспекту агенты нуклеиновой кислоты доставляют хозяину через пищу. Авторы настоящего изобретения считают, что после употребления в пищу агентов нуклеиновой кислоты согласно настоящему описанию, указанные агенты могут присутствовать, например, в гемолимфе указанного хозяина членистоногого, в результате чего они становятся доступными для паразита, например, клеща Varroa.

Таким образом, полинуклеотиды согласно настоящему описанию можно синтезировать in vitro или in vivo, например, в бактериальной или дрожжевой клетке, и добавлять в пищу. Например, двухцепочечную РНК можно синтезировать путем добавления двух противоположно направленных промоторов (например, промоторов T7) к концам фрагментов гена, при этом указанный промотор располагают непосредственно с 5'-стороны от гена и указанный промотор располагают непосредственно с 3'-стороны от фрагмента гена в противоположной ориентации. Затем можно получить дцРНК путем транскрипции in vitro с помощью T7 РНК-полимеразы.

Примеры последовательностей для синтеза нуклеиновых кислот, включая дцРНК, в соответствии с аспектами настоящего описания представлены в SEQ ID NO: 1-4, 6, 23, с 26 по 35 и с 69 по 93.

Должно быть очевидно, что некоторые вредители или паразиты создают раневые поверхности в экзоскелете членистоногого хозяина. В таких раневых поверхностях накапливаются бактериальные инфекции. Например, в раневой поверхности пчелы-хозяина могут накапливаться такие бактерии, как Melissococcus pluton, который вызывает Европейский гнилец пчел. Известно, что помимо паразитного действия паразиты действуют как переносчики для множества других патогенов и паразитов. Например, предполагают, что клещи Varroa действуют как переносчики для множества патогенов медоносных пчел, включая вирус деформации крыла (DWV), Кашмирский вирус пчел (KBV), вирус острого паралича пчел (ABPV) и вирус черного маточника (BQCV), и могут ослаблять иммунную систему хозяев, делая их восприимчивыми к инфекциям.

Таким образом, убивая вредителя или паразита (или предотвращая его репродукцию), направленные против паразитов, против вредителей или инсектицидные агенты согласно настоящему изобретению можно применять для предотвращения и/или лечения бактериального инфицирования организмов-хозяев, например, инфицирования Melissococcus pluton и вирусных инфекций у хозяев-пчел, вызванных перечисленными выше вирусами. Поскольку считают, что заражение клещом Varroa и вирусные инфекции ответственны за синдром разрушения колоний (CCD), агенты согласно настоящему изобретению также можно применять для предотвращения или уменьшения восприимчивости колонии пчел к CCD.

Должно быть очевидно, что дополнительно к кормлению направленными против паразитов, против вредителей или инсектицидными агентами нуклеиновой кислоты для снижения инфицирования патогенами и заражения паразитами пчел, обязательное проведение надлежащей санации (например, отказ от повторного использования зараженных паразитами ульев) может повысить эффективность лечения и предотвращения инфекций.

В настоящем изобретении также предложены и включены в него трансгенные бактериальные и дрожжевые клетки, которые экспрессируют селективный инсектицид. В одном аспекте нуклеиновая кислота, кодирующая малую РНК, дцРНК, микроРНК, или устойчивая к малой РНК или микроРНК целевая молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, функционально связана с промотором и необязательно с терминатором. В некоторых вариантах реализации трансгенные бактериальные и дрожжевые клетки убивают, например, воздействуя на них нагреванием или давлением. В некоторых вариантах реализации трансгенные бактериальные и дрожжевые клетки лизируют перед предоставлением селективного инсектицида целевому организму. В некоторых вариантах реализации трансгенные бактериальные и дрожжевые клетки не лизируют.

В одном аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой или кодирует малую РНК, или, в конкретном аспекте, микроРНК, которая может модулировать экспрессию гена в целевом организме. В некотором аспекте экзогенная нуклеиновая кислота кодирует малую РНК, которая идентична по меньшей мере на 80%, 85%, 88%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-4 и 6-94. В дополнительном аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой или кодирует дцРНК. В другом аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой или кодирует синтетическую микроРНК. В дополнительном аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой или кодирует миРНК. В одном аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой или кодирует предшественник малой РНК. В другом аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой или кодирует предшественник микроРНК или миРНК. В одном аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой встречающуюся в природе молекулу. В другом аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой синтетическую молекулу.

В одном аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой или кодирует предшественник со структурой «петля-на-стебле» малой РНК или, в конкретном аспекте, микроРНК, включающий последовательность, которая идентична по меньшей мере на 80%, 85%, 88%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-4 и 6-94. Предшественник со структурой «петля-на-стебле», применяемый в настоящем изобретении, включает последовательность, которая идентична по меньшей мере на 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-4 и 6-94.

В одном аспекте экзогенная молекула нуклеиновой кислоты, применяемая в настоящем изобретении, представляет собой свободную РНК или экспрессируется с экспрессионной конструкции нуклеиновой кислоты, где она функционально связана с регуляторной последовательностью.

В одном аспекте конструкция рекомбинантной ДНК или трансген, описанный в данном тексте, дополнительно содержит терминатор транскрипции.

Ожидается, что во время действия патента, начиная с настоящей заявки, может быть разработано множество подходящих способов снижения уровня экспрессии продуктов генов, и предполагается, что в объем термина ʺснижение уровня экпрессии продукта гена клеща Varroa destructorʺ априори входят все такие новые методики.

Должно быть очевидно, что некоторые свойства настоящего изобретения, которые для ясности описаны в контексте отдельных аспектов, также могут быть предложены в комбинации в одном аспекте. И наоборот, различные свойства настоящего изобретения, которые для краткости описаны в контексте одного аспекта, также могут быть предложены отдельно или в любой подходящей подкомбинации или подходящим образом в любом другом описанном аспекте настоящего изобретения. Некоторые свойства, описанные в контексте различных аспектов, не должны рассматриваться как необходимые свойства указанных аспектов, за исключением случаев, когда указанный аспект не действует без данных элементов. Различные аспекты и аспекты настоящего описания, описанные в общих чертах выше в данном тексте и заявленные в разделе формулы изобретения ниже, получили экспериментальное подтверждение в следующих примерах.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Последовательности гена кальмодулина клеща Varroa

Гены кальмодулина (CAM), приведенные в таблице 1 (SEQ ID NO: 1 и 2), или соответствующие транскрипты, использовали в качестве мишеней для полинуклеотидных композиций, содержащих полинуклеотид, который представляет собой по меньшей мере 18 смежных нуклеотидов, идентичных или комплементарных указанным генам или транскриптам. Последовательности генов, приведенные в таблице 1, последовательности белков, кодируемых указанными генами, или последовательности, содержащиеся в указанных генах использовали для получения ортологичных генов кальмодулина (CAM) из других видов вредителей и паразитов членистоногих, не перечисленых в таблице 1. Такие ортологичные гены и их транскрипты затем могут служить в качестве мишеней для полинуклеотидов, предложенных в настоящем изобретении, или в качестве источника направленных против паразитов, против вредителей или инсектицидных полинуклеотидов, которые специально разработаны, чтобы нацеливаться на ортологичные гены или транскрипты.

Таблица 1. Целевые гены кальмодулина (CAM) Varroa destructor.

Название гена SEQ ID Открытая рамка считывания последовательности ДНК CAM-1 1 ATGGCTGATCAGCTAACTGAGGAACAGATCGCCGAGTTCAAAGAGGCGTTTAGCCTGTTTGACAAGGACGGAGATGGCACGATCACGACAAAGGAGCTCGGTACGGTAATGCGATCTCTCGGCCAGAACCCCACTGAGGCTGAACTGCAGGACATGATCAACGAGGTCGACGCCGACGGCTCCGGAACGATAGATTTCCCTGAGTTCCTCACAATGATGGCAAGAAAGATGAAGGACACCGACTCGGAGGAGGAGATCCGAGAGGCGTTCCGCGTATTCGACAAGGATGGCAACGGTTTCATTTCGGCGGCCGAGCTCAGGCACGTTATGACCAACCTTGGCGAGAAGCTTACGGACGAGGAGGTAGATGAGATGATTCGGGAGGCAGATATTGACGGTGATGGTCAGGTCAACTACGAGGAGTTCGTCACCATGATGACGTCCAAGTAA CAM-2 2 ATGGCGGATCAGCTGACCGAGGAGCAAATCGCCGAATTCAAGGAGGCTTTCAGCCTGTTCGATAAAGACGGTGATGGCACAATTACGACCAAGGAACTAGGGACCGTCATGCGGTCCCTCGGCCAGAACCCTACTGAGGCTGAGCTTCAAGACATGATCAACGAGGTCGACGCTGACGGTAACGGCACTATTGACTTTCCAGAGTTTCTCACGATGATGGCGCGTAAAATGAAGGACACCGACTCCGAGGAGGAGATCCGGGAAGCTTTTAGGGTTTTTGATAAAGACGGAAATGGCTTCATTTCGGCTGCAGAGCTGAGGCACGTAATGACCAACCTTGGCGAAAAGCTCACGGACGAGGAAGTGGACGAGATGATCCGCGAGGCGGATATCGACGGCGACGGACAGGTCAACTACGAGGAGTTCGTCACGATGATGACATCAAAATGA

Для каждой последовательности ДНК кальмодулина, представленной в SEQ ID NO: 1 и 2, фрагментами одноцепочечной или двухцепочечной ДНК или РНК в смысловой или антисмысловой ориентации, или обоими, вводили in vitro клещам Varroa, выращиваемым на чашке Петри, или наносили на поверхность ульев пчел, чтобы повлиять на экспрессию целевых генов CAM и добиться уменьшения популяции клещей Varroa destructor.

Пример 2. Супрессия генов кальмодулина (CAM) Varroa destructor .

Предложены полинуклеотиды для подавления экспрессии генов кальмодулина (CAM) у клеща Varroa destructor, соответствующие последовательностям SEQ ID NO: 3 и 4 (таблица 2), которые применяли для подавления экспрессии генов кальмодулина (CAM) у клеща Varroa destructor. В последовательностях SEQ ID NO: 3 и 4 описана полинуклеотидная последовательность дцРНК длиной 373 п.о. и полинуклеотидная последовательность дцРНК длиной 186 п.о., соответственно, выбранные из CAM-1 (SEQ ID NO: 1). SEQ ID NO: 3, соответствующая полинуклеотиду дцРНК CAM_L/CAM373, покрывает большую часть открытой рамки считывания гена кальмодулина CAM-1 (SEQ ID NO: 1). SEQ ID NO 4, соответствующая полинуклеотиду дцРНК CAM_S/CAM186, представляет собой частичный фрагмент CAM_L/CAM373 (SEQ ID NO: 3), и она также получена из CAM-1 (SEQ ID NO: 1). SEQ ID NO: 5 в таблице 2 представляет собой контрольную полинуклеотидную последовательность дцРНК, не более чем на 19 п.о. идентичную последовательности любого известного гена Varroa destructor.

Таблица 2. дцРНК, нацеленные на гены кальмодулина (CAM) Varroa destructor.

Название дцРНК SEQ ID Последовательность нуклеиновой кислоты CAM_L/CAM373 3 ACAGAUCGCCGAGUUCAAAGAGGCGUUUAGCCUGUUUGACAAGGACGGAGAUGGCACGAUCACGACAAAGGAGCUCGGUACGGUAAUGCGAUCUCUCGGCCAGAACCCCACUGAGGCUGAACUGCAGGACAUGAUCAACGAGGUCGACGCCGACGGCUCCGGAACGAUAGAUUUCCCUGAGUUCCUCACAAUGAUGGCAAGAAAGAUGAAGGACACCGACUCGGAGGAGGAGAUCCGAGAGGCGUUCCGCGUAUUCGACAAGGAUGGCAACGGUUUCAUUUCGGCGGCCGAGCUCAGGCACGUUAUGACCAACCUUGGCGAGAAGCUUACGGACGAGGAGGUAGAUGAGAUGAUUCGGGAGGCAGAUAUUGAC CAM_S/CAM186 4 ACAAUGAUGGCAAGAAAGAUGAAGGACACCGACUCGGAGGAGGAGAUCCGAGAGGCGUUCCGCGUAUUCGACAAGGAUGGCAACGGUUUCAUUUCGGCGGCCGAGCUCAGGCACGUUAUGACCAACCUUGGCGAGAAGCUUACGGACGAGGAGGUAGAUGAGAUGAUUCGGGAGGCAGAUAUUGAC SCRAM 5 AUACUUACUGGUGCUAAUUUUUAUCGAGGAUGCCCAACUCCCCCCACUUUAAAACUGCGAUCAUACUAACGAACUCCCGAAGGAGUGAAAGGUGUCUAUGUUGAGCUUAAUAACCUACCUUGCGAGCAAAGAAGGACUAGUUGACCCUGGGCACCCUAUAUUGUUAUGUUGUUUCGAACUGAGUUGGCACCCAUGCUGCACAUGCAACAAACAUGUCGGCCUUCGUGUCUAUCCUAGAAAAGUACCUGUGAACUUGGCUGUCUACAUCAUCAUC

Пример 3. Биоанализ Varroa destructor в день 3 после обработки специфическими дцРНК.

Взрослых самок клещей собирали из колоний медоносных пчел и помещали в чашку Петри на поверхность искусственной питательной среды, содержащей смесь 1% триптона, 0,5% дрожжевого экстракта, 1% NaCl и 15 мг/мл агара. В данном примере питательную среду дополняли 50 мкг канамицина на 1 мл питательной среды. Раствор питательной среды/агара также дополняли 200-500 мкг/мл дцРНК, и полученный в результате этого раствор выливали на чашку Петри. дцРНК в данном примере состояла либо из SEQ ID NO: 3 (CAM_L/CAM373), либо из SEQ ID NO: 5 (SCRAM). На каждую чашку наносили по пятнадцать клещей, и эксперимент проводили в трех повторах. Чашки с питательной средой и клещами инкубировали при 29°C и при относительной влажности 50-60%. Через определенные промежутки времени осматривали чашки и мертвых клещей подсчитывали и удаляли. Для исследования летальности клещей подсчитывали через три дня после того, как их помещали на питательную среду (ФИГ. 2). На ФИГ. 2 показано, что все клещи были мертвы через три дня после обработки, по сравнению с неподвергнутыми обработке чашками или чашками, в которых клещи питались средой, дополненной неспецифическим (SCRAM) полинуклеотидом дцРНК.

Пример 4. Биоанализ Varroa destructor в день 5 после обработки дцРНК, направленной на кальмодулин.

Взрослых самок клещей собирали из колоний медоносных пчел и помещали в чашку Петри на поверхность искусственной питательной среды. Искусственная питательная среда содержала смесь 1% триптона, 0,5% дрожжевого экстракта, 1% NaCl и 15 мг/мл агара. В данном примере питательную среду также дополняли противогрибковым раствором (100x, Sigma Aldrich) в конечной 8x концентрации, 500 мкг/мл канамицина и 220 ед/мл нистатина. Раствор питательной среды/агара также дополняли 200-500 мкг/мл дцРНК и полученный в результате этого раствор выливали на чашку Петри. дцРНК в данном примере состояла либо из SEQ ID NO: 3 (CAM_L/CAM373), либо из SEQ ID NO: 4 (CAM_S/CAM186), либо из SEQ ID NO: 5 (SCRAM). На каждую чашку наносили по пятнадцать клещей и эксперимент проводили в трех повторах. Чашки с питательной средой и клещами инкубировали при 29°C и при относительной влажности 50-60%. Через определенные промежутки времени осматривали чашки и мертвых клещей подсчитывали и удаляли. Для исследования летальности клещей подсчитывали через пять дней после того, как их помещали на питательную среду (ФИГ. 3). Для молекулярного анализа живых клещей удаляли с чашек, быстро замораживали в жидком азоте и проводили анализ TAQMAN™, чтобы оценить уровни РНК кальмодулина (CAM). ФИГ. 3, панель A. Уровни РНК генов кальмодулина (CAM) в клещах, подвергнутых воздействию SEQ ID NO: 3 (CAM_L/CAM373) или SEQ ID NO: 4 (CAM_S/CAM186), сильно уменьшились по сравнению с неспецифической (SCRAM) обработкой или отсутствием обработки (CNTR). ФИГ. 3, панель B. Статистически значимую летальность клещей, которые были подвергнуты воздействию дцРНК против кальмодулина (CAM), наблюдали через 5 дней после обработки.

Пример 5. Способ доставки полинуклеотидов дцРНК, нацеленных на гены Varroa , с применением высушенной распылением или полутвердой лекарственной формы.

дцРНК, используемую для того, чтобы подавлять экспрессию целевых генов кальмодулина (CAM) Varroa, получали в лекарственной форме, содержащей 1 часть дцРНК и ~14 частей трегалозы в фосфатном буфере (раствор из 1,15 мМ KH₂PO₄ (одноосновной) и 8 мМ Na₂HPO₄ (двухосновной), pH 8,0), как показано в таблице 3. Применяя устройство для сушки распылением Büchi B-290 mini, жидкую лекарственную форму распыляли с получением капель и нагревали с газом для получения жидкотекучего порошка.

Таблица 3. Получение лекарственной формы.

дцРНК Исходный буфер (X % масса/объем трегалозы+фосфатный буфер) Конечный буфер ( X % масса/объем трегалозы+фосфатный буфер) Общий объем (мл) Исходный буфер (мл) Исходный раствор дцРНК (мл) Отношение Конц. активного ингредиента (АИ) (мг/мл) Конц. активного ингредиента (АИ) (% твердого вещества) Отношение АИ (дцРНК) к буферу (трегалоза+фосфатный буфер) CAM_L/CAM373 40 10 1100 275,00 825,00 ¹/₄ 7,20 0,720 13,9 CAM_S/CAM186 40 10 1285 321,21 963,75 ¹/₄ 6,75 0,675 14,8

Полученные частицы смешивали с порошковым сахаром и равномерно наносили на ульи путем равномерного распределения порошкового сахара по поверхности рамок. В других аспектах полутвердый препарат высушенного распылением материала получали в воде, и сахарно-водную лекарственную форму (ʺконфету для пчелʺ) скармливали ульям пчел, позволяя пчелам ею кормиться.

Пример 6. Уменьшение количества клещей Varroa в ульях пчел in vivo после обработки дцРНК, нацеленной на гены кальмодулина (CAM).

Варриатозных клещей, паразитирующих на взрослых медоносных пчелах в ульях, собирали и подсчитывали, используя стандартную методику подсчета клещей. Ульи подвергали обработке высушенной распылением дцРНК согласно примеру 7, содержащей SEQ ID NO: 3 (CAM-L), SEQ ID NO: 4 (CAM-S), или не подвергали обработке (контроль). Клещевую нагрузку на каждый улей оценивали в начале эксперимента и через 2 недели, 4 недели и 12 недель после обработки. На ФИГ. 4 показана клещевая нагрузка на подвергнутые обработке ульи по сравнению с ульями, которые не подвергали обработке. Подсчитанное количество клещей нормировали на 100 взрослых пчел, и оно представляло собой типичную нагрузку клещом Varroa.

Пример 7. Обнаружение переходных малых РНК в Varroa после обработки дцРНК, нацеленной на гены кальмодулина (CAM).

Клещей Varroa собирали из ульев, подвергнутых обработке полинуклеотидами дцРНК с последовательностью SEQ ID NO: 3, через 7 дней после обработки. Экстрагировали РНК Varroa и проводили анализ секвенирования малых РНК, применяя платформу SOLiD. Большая часть молекул малых РНК была обнаружена за пределами участка последовательности дцРНК и, в частности, в направлении 3'-части участка дцРНК с последовательностью SEQ ID NO: 3. Кроме того, большая часть переходных считываний находилась в антисмысловой ориентации по сравнению с последовательностью транскрипта гена кальмодулина (CAM). Кроме того, в данном эксперименте обнаружили малые РНК, специфичные к CAM-2 (SEQ ID NO: 2), несмотря на то, что ульи были подвергнуты обработке дцРНК против SEQ ID NO: 3, которая, как было предсказано, специфична к CAM-1 (SEQ ID NO: 1). Данное наблюдение подкрепляет гипотезу, состоящую в том, что подавление экспрессии РНК и образования переходных малых РНК в Varroa работает, даже когда лишь малый фрагмент полностью идентичен между двумя генами на уровне ДНК (в данном случае 23 нуклеотида).

Пример 8. Гомологи гена кальмодулина (CAM) из видов вредителей и паразитов членистоногих и соответствующие полинуклеотиды дцРНК.

Применяя стандартную методику биоинформатики и последовательности SEQ ID NO: 1 и 2 для Varroa destructor, идентифицировали набор из 31 консервативной последовательности генов кальмодулина (CAM) у видов вредителей членистоногих, которые паразитируют либо на другом членистоногом, либо на млекопитающем, и которые будут мишенью для регуляции генов. Данные последовательности идентифицировали и представляли в виде филогенетического дерева на ФИГ. 1. Последовательности ДНК на ФИГ. 1 дополнительно анализировали путем идентификации консервативного домена из 373 п.о. внутри каждой последовательности, который соответствует последовательности SEQ ID NO: 3 (CAM_L/CAM373). В таблице 4 приведен перечень SEQ ID NO вновь идентифицированных последовательностей генов кальмодулина (CAM), а также соответствующие триггерные последовательности полинуклеотида дцРНК длиной 373 п.о. Последовательности полинуклеотида дцРНК длиной 373 п.о. тестируют либо отдельно, либо в комбинации в анализах кормления непосредственно на соответствующих видах членистоногих.

Таблица 4. Последовательности генов кальмодулина (CAM), идентифицированные у вредителей или паразитов членистоногих, и соответствующие полинуклеотиды РНК длиной 373 п.о.

SEQ ID NO Название гена Организм/вид Тип 6 CAM-3 Varroa destructor кДНК 7 CAM-1 Ixodes scapularis кДНК 8 CAM-1 Aedes aegypti кДНК 9 CAM-1 Culex quinquefasciatus кДНК 10 CAM-1 Acyrthosiphon pisum кДНК 11 CAM-1 Harpegnathos saltator кДНК 12 CAM-1 Pediculus humanus corporis кДНК 13 CAM-1 Anopheles gambiae кДНК 14 CAM-1 Solenopsis invicta кДНК 15 CAM-1 Ixodes scapularis РНК 16 CAM-1 Aedes aegypti РНК 17 CAM-1 Culex quinquefasciatus РНК 18 CAM-1 Acyrthosiphon pisum РНК 19 CAM-1 Harpegnathos saltator РНК 20 CAM-1 Pediculus humanus corporis РНК 21 CAM-1 Anopheles gambiae РНК 22 CAM-1 Solenopsis invicta РНК 23 CAM-3 Varroa destructor РНК 24 CAM-1 Tetranychus urticae кДНК 25 CAM-1 Tetranychus urticae РНК 26 CAM-4 Varroa destructor кДНК 27 CAM-4 Varroa destructor РНК 28 CAM-5 Varroa destructor кДНК 29 CAM-5 Varroa destructor РНК 30 CAM-7 Varroa destructor кДНК 31 CAM-7 Varroa destructor РНК 32 CAM-8 Varroa destructor кДНК 33 CAM-8 Varroa destructor РНК 34 CAM-9 Varroa destructor кДНК 35 CAM-9 Varroa destructor РНК 36 CAM Ixodes scapularis кДНК 37 CAM Ixodes scapularis РНК 38 CAM Ixodes scapularis кДНК 39 CAM Ixodes scapularis РНК 40 CAM Ixodes scapularis кДНК 41 CAM Ixodes scapularis кДНК 42 CAM Ixodes scapularis РНК 43 CAM Aedes aegypti кДНК 44 CAM Aedes aegypti РНК 45 CAM Aedes aegypti кДНК 46 CAM Aedes aegypti РНК 47 CAM Aedes aegypti кДНК 48 CAM Aedes aegypti РНК 49 CAM Culex quinquefasciatus кДНК 50 CAM Culex quinquefasciatus РНК 51 CAM Culex quinquefasciatus кДНК 52 CAM Culex quinquefasciatus РНК 53 CAM Culex quinquefasciatus кДНК 54 CAM Culex quinquefasciatus РНК 55 CAM Culex quinquefasciatus кДНК 56 CAM Culex quinquefasciatus РНК 57 CAM Acyrthosiphon pisum кДНК 58 CAM Acyrthosiphon pisum РНК 59 CAM Acyrthosiphon pisum кДНК 60 CAM Acyrthosiphon pisum РНК 61 CAM Pediculus humanus кДНК 62 CAM Pediculus humanus РНК 63 CAM Pediculus humanus кДНК 64 CAM Pediculus humanus РНК 65 CAM Pediculus humanus кДНК 66 CAM Pediculus humanus РНК 67 CAM Pediculus humanus кДНК 68 CAM Pediculus humanus РНК

Пример 9. Транскрипты гена кальмодулина (CAM) Varroa и триггерные последовательности дцРНК.

Последовательности кальмодулина (CAM), приведенные в таблице 5 (SEQ ID NO: 69 и 70), или соответствующие транскрипты использовали в качестве мишеней для полинуклеотидных композиций, содержащих полинуклеотид, который представляет собой по меньшей мере 18 смежных нуклеотидов, идентичных или комплементарных указанным генам или транскриптам. Последовательности 5'- и 3'-НТО последовательностей кальмодулина Varroa идентифицировали путем секвенирования РНК.

Таблица 5. Целевые транскрипты генов кальмодулина (CAM) Varroa destructor.

Название гена и вид SEQ ID NO Тип CAM-1; Varroa destructor 69 РНК CAM-2; Varroa destructor 70 РНК

Последовательности SEQ ID NO: 69 и 70 покрывали фрагментами длиной 150 п.о. В таблице 6 проиллюстрирована верхняя цепь (5'-3') для фрагментов длиной 150 п.о., которые целиком покрывают последовательности SEQ ID NO: 69 и 70.

Таблица 6. Покрытые полинуклеотидные последовательности генов CAM-1 и CAM-2.

Название гена SEQ ID NO Положение внутри последовательности транскрипта CAM-1 71 1-150 CAM-1 72 151-300 CAM-1 73 301-450 CAM-1 74 451-600 CAM-1 75 601-750 CAM-1 76 751-900 CAM-1 77 901-1050 CAM-1 78 1051-1200 CAM-1 79 1201-1350 CAM-1 80 1351-1500 CAM-2 81 1-150 CAM-2 82 151-300 CAM-2 83 301-450 CAM-2 84 451-600 CAM-2 85 601-750 CAM-2 86 751-900 CAM-2 87 901-1050

Одну или более дцРНК, включающих последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 71-87, предоставляли in vitro клещам Varroa, которых растили на чашке Петри, или наносили на поверхности ульев пчел, чтобы повлиять на экспрессию целевых генов CAM и добиться уменьшения популяции клещей Varroa destructor.

Пример 10. Биоанализ in vitro нацеленых на кальмодулин (CAM) триггеров в клеще Varroa .

Полинуклеотидные триггерные последовательности, нацеленные на кальмодулин (CAM)-1 и 2, получали на основании перекрывания консервативных последовательностей CAM-1 и CAM-2. Они представлены как последовательности SEQ ID NO: 88 и 89 (нацеленные на CAM-1 и CAM-2, соответственно).

Способность полинуклеотидных последовательностей, выбранных из последовательностей SEQ ID NO: 88 и 89, подавлять жизнеспособность взрослых клещей Varroa исследовали в биоанализе in vitro. Взрослых самок клещей собирали из колоний медоносных пчел и помещали в чашку Петри на поверхность искусственной питательной среды. Искусственная питательная среда содержала смесь 1% триптона, 0,5% дрожжевого экстракта, 1% NaCl и 15 мг/мл агара. В данном примере питательную среду также дополняли противогрибковым раствором (100x, Sigma Aldrich) в конечной 8x концентрации, 500 мкг/мл канамицина и 220 ед/мл нистатина. Раствор питательной среды/агара также дополняли 200-500 мкг/мл дцРНК, и полученный в результате этого раствор выливали на чашку Петри. дцРНК в данном примере состояла либо из SEQ ID NO: 3 (CAM373), либо из SEQ ID NO: 88 (CAM-1), либо из SEQ ID NO: 89 (CAM-2), либо из не подвергнутого обработке контроля (NTC). На каждую чашку наносили по пятнадцать клещей и эксперимент проводили в трех повторах. Чашки с питательной средой и клещами инкубировали при 29°C и при относительной влажности 50-60%. Через определенные промежутки времени осматривали чашки и мертвых клещей подсчитывали и удаляли. Для исследования летальности, клещей подсчитывали через пять и шесть дней после того, как их помещали на питательную среду (ФИГ. 5.). Кроме того, дцРНК для SEQ ID NO: 88 (CAM-1) и SEQ ID NO: 89 (CAM-2) смешивали в эквимолярном количестве и кормили ими клещей, как описано выше. На ФИГ. 6 показан результат настоящего изобретения.

Для молекулярного анализа живых клещей удаляли с чашек, быстро замораживали в жидком азоте и проводили анализ TAQMAN™, чтобы оценить уровни РНК кальмодулина (CAM).

Пример 11. Снижение уровня заражения клещом Varroa in vivo подвергнутых обработке в поле ульев пчел после обработки дцРНК, нацеленной на ген кальмодулина (CAM).

дцРНК, которую используют для подавления экспрессии целевых генов кальмодулина (CAM) Varroa, получали путем смешивания исходного раствора дцРНК в фосфатном буфере с 66% сахарным сиропом. Жидкую лекарственную форму давали в виде сиропа пчелам, позволяли им кормиться до тех пор, пока они его не съели (приблизительно 2-3 дня). Каждая группа полевого испытания состояла из 33 ульев. Указанные группы состояли из неподвергнутых обработке ульев, подвергнутых обработке неспецифическим триггером (SEQ ID NO: 5) ульев и подвергнутых обработке специфическим триггером (SEQ ID NO: 3) ульев. Пчел подвергали двум циклам обработки, каждый цикл состоял из двух кормлений с интервалом в две недели: в начале доставки (неделя 0) и две недели спустя (неделя 2), а затем снова в недели 13 и 15. Оценку выживаемости пчел проводили через 4, 9, 13, 15 и 17 недель (ФИГ. 7). Существенное подавление популяции Varroa наблюдали после обработки специфическим триггером (SEQ ID NO:3) через 9 недель.

Пример 12. Биоанализ in vitro нацеленных на кальмодулин (CAM) триггеров в клеще Varroa .

Полинуклеотидные триггерные последовательности, нацеленные на кальмодулин (CAM)-1 и 2, получали на основании перекрывания консервативных последовательностей CAM-1 и CAM-2. Они представлены в таблице 7 как последовательность SEQ ID NO: 3. Кроме того, указанные полинуклеотидные последовательности модифицировали, чтобы избежать наличия в них непрерывного участка последовательности из 19 оснований, которые идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма. Данные модификации представлены в полинуклеотидных последовательностях SEQ ID NO: 90-92.

Таблица 7. Триггеры, нацеленные на CAM-1 и CAM-2.

Целевой ген SEQ ID NO Нативная или модифицированная CAM-1 3 Нативная CAM-1 90 Делеция 4 п.о. CAM-1 91 Делеция 4 п.о. CAM-2 92 Делеция 1 п.о.

В биоанализе in vitro исследовали способность полинуклеотидных последовательностей подавлять жизнеспособность взрослых клещей Varroa. Взрослых самок клещей собирали из колоний медоносных пчел и помещали в чашку Петри на поверхность искусственной питательной среды. Искусственная питательная среда содержала смесь 1% триптона, 0,5% дрожжевого экстракта, 1% NaCl и 15 мг/мл агара. В данном примере питательную среду также дополняли противогрибковым раствором (100x, Sigma Aldrich) в конечной 8x концентрации, 500 мкг/мл канамицина и 220 ед/мл нистатина. Раствор питательной среды/агара также дополняли 200-500 мкг/мл дцРНК (либо SEQ ID NO: 3 (CAM373), либо SEQ ID NO: 90 (CAM-1), либо SEQ ID NO: 92 (CAM-2)), и полученный в результате этого раствор выливали на чашку Петри. Также получали чашки, содержащие искусственную питательную среду без дцРНК (не подвергнутый обработке контроль (NTC)). На каждую чашку наносили по пятнадцать клещей и эксперимент проводили в трех повторах. Чашки с питательной средой и клещами инкубировали при 29°C и при относительной влажности 50-60%. Через определенные промежутки времени осматривали чашки, и мертвых клещей подсчитывали и удаляли. Клещей подсчитывали через пять и шесть дней после того, как их помещали на питательную среду, чтобы определить смертность.

На ФИГ. 8 показано, что наблюдали повышенную смертность клещей, подвергнутых обработке дцРНК (либо SEQ ID NO: 3 (CAM373), либо SEQ ID NO: 90 (CAM-1), либо SEQ ID NO: 92 (CAM-2)), через 5 и 6 дней после обработки по сравнению с клещами, которые не получали РНК.

Проводили дополнительный биоанализ in vitro, описанный выше, в котором клещей подвергали обработке: эквимолярной смесью дцРНК, содержащей SEQ ID NO: 90 (CAM-1) и SEQ ID NO: 92 (CAM-2); дцРНК, включающей SEQ ID NO: 3 (CAM373), или дцРНК, включающей SEQ ID NO: 91 (CAM-1). На ФИГ. 9 показано, что у клещей, подвергнутых обработке дцРНК, включающей SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 91, или смесью дцРНК, содержащей SEQ ID NO: 90 и SEQ ID NO: 92, выявили пониженную жизнеспособность в день 4 (Д4). Проводили молекулярный анализ на живых клещах. Клещей удаляли с чашки, быстро замораживали в жидком азоте и проводили анализ Quantigene™, чтобы оценить уровни РНК кальмодулина (CAM). Результаты показаны на ФИГ. 10.

Пример 13. Снижение уровня заражения клещом Varroa in vivo подвергнутых обработке в поле ульев пчел после обработки дцРНК, нацеленной на ген кальмодулина (CAM).

дцРНК, которую используют для подавления экспрессии целевых генов кальмодулина (CAM) Varroa, получали путем смешивания исходного раствора дцРНК в фосфатном буфере с 66% сахарным сиропом. Жидкую лекарственную форму давали в виде сиропа пчелам, позволяли им кормиться до тех пор, пока они его не съели (приблизительно 2-3 дня). Каждая группа полевого испытания состояла из 40 ульев. Указанные группы состояли из неподвергнутых обработке ульев и подвергнутых обработке специфическим триггером (SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 94) ульев. Последовательность SEQ ID NO 94 идентична SEQ ID NO 3, за исключением вставки от трех оснований на 5'-конце триггера. Пчел подвергали двум циклам лечения, каждый цикл состоял из двух кормлений с интервалом в две недели: в начале доставки (неделя 0) и две недели спустя (неделя 2), а затем снова в недели 13 и 15. Дозировка составляла приблизительно 200 мг триггера на улей. Оценку выживаемости пчел проводили через 0, 3, 6, 8, 14 и 19 недель (ФИГ. 11). Существенное подавление популяции Varroa наблюдали после обработки специфическими триггерами (SEQ ID NO: 91 и 94) уже в неделю 3.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Beeologics, Inc

Monsanto Technology LLC

Inberg, Alex

Kapoor, Mahak

<120> КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ КОНТРОЛЯ

ЗАРАЖЕНИЯ ЧЛЕНИСТОНОГИХ ПАРАЗИТАМИ И ВРЕДИТЕЛЯМИ

<130> P34304WO00

<160> 94

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 450

<212> ДНК

<213> Varroa destructor

<400> 1

atggctgatc agctaactga ggaacagatc gccgagttca aagaggcgtt tagcctgttt 60

gacaaggacg gagatggcac gatcacgaca aaggagctcg gtacggtaat gcgatctctc 120

ggccagaacc ccactgaggc tgaactgcag gacatgatca acgaggtcga cgccgacggc 180

tccggaacga tagatttccc tgagttcctc acaatgatgg caagaaagat gaaggacacc 240

gactcggagg aggagatccg agaggcgttc cgcgtattcg acaaggatgg caacggtttc 300

atttcggcgg ccgagctcag gcacgttatg accaaccttg gcgagaagct tacggacgag 360

gaggtagatg agatgattcg ggaggcagat attgacggtg atggtcaggt caactacgag 420

gagttcgtca ccatgatgac gtccaagtaa 450

<210> 2

<211> 450

<212> ДНК

<213> Varroa destructor

<400> 2

atggcggatc agctgaccga ggagcaaatc gccgaattca aggaggcttt cagcctgttc 60

gataaagacg gtgatggcac aattacgacc aaggaactag ggaccgtcat gcggtccctc 120

ggccagaacc ctactgaggc tgagcttcaa gacatgatca acgaggtcga cgctgacggt 180

aacggcacta ttgactttcc agagtttctc acgatgatgg cgcgtaaaat gaaggacacc 240

gactccgagg aggagatccg ggaagctttt agggtttttg ataaagacgg aaatggcttc 300

atttcggctg cagagctgag gcacgtaatg accaaccttg gcgaaaagct cacggacgag 360

gaagtggacg agatgatccg cgaggcggat atcgacggcg acggacaggt caactacgag 420

gagttcgtca cgatgatgac atcaaaatga 450

<210> 3

<211> 373

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 3

acagaucgcc gaguucaaag aggcguuuag ccuguuugac aaggacggag auggcacgau 60

cacgacaaag gagcucggua cgguaaugcg aucucucggc cagaacccca cugaggcuga 120

acugcaggac augaucaacg aggucgacgc cgacggcucc ggaacgauag auuucccuga 180

guuccucaca augauggcaa gaaagaugaa ggacaccgac ucggaggagg agauccgaga 240

ggcguuccgc guauucgaca aggauggcaa cgguuucauu ucggcggccg agcucaggca 300

cguuaugacc aaccuuggcg agaagcuuac ggacgaggag guagaugaga ugauucggga 360

ggcagauauu gac 373

<210> 4

<211> 186

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 4

acaaugaugg caagaaagau gaaggacacc gacucggagg aggagauccg agaggcguuc 60

cgcguauucg acaaggaugg caacgguuuc auuucggcgg ccgagcucag gcacguuaug 120

accaaccuug gcgagaagcu uacggacgag gagguagaug agaugauucg ggaggcagau 180

auugac 186

<210> 5

<211> 274

<212> РНК

<213> Неизвестно

<400> 5

auacuuacug gugcuaauuu uuaucgagga ugcccaacuc cccccacuuu aaaacugcga 60

ucauacuaac gaacucccga aggagugaaa ggugucuaug uugagcuuaa uaaccuaccu 120

ugcgagcaaa gaaggacuag uugacccugg gcacccuaua uuguuauguu guuucgaacu 180

gaguuggcac ccaugcugca caugcaacaa acaugucggc cuucgugucu auccuagaaa 240

aguaccugug aacuuggcug ucuacaucau cauc 274

<210> 6

<211> 432

<212> ДНК

<213> Varroa destructor

<400> 6

ctgccggagg aacaggtggc tgaatttaaa gaggcctttc ttttgtttga caaggacgcc 60

gatggaatga ttacggccgc cgaactaggc gtcgtcatgc gatcgcttgg ccagcgacct 120

acggagcaag agctcaagaa aatggttacc atggttgacc aggacggcaa tggtacaatc 180

gagttcaacg agtttttgat gatgatgtct cgcaagatga aggaggcaga ctcggaggaa 240

gaactccggg aggcgttccg tgtgttcgat cgagacggtg acggattcat ctcgcgggac 300

gagctcagtg tcgtcatgaa caacctcggc gagaaattaa gtgacgatga tgttgaggat 360

atgattcgag aggccgatct ggacggcgat ggcaagatta actaccaaga gtttgtgctc 420

attatcacct cc 432

<210> 7

<211> 480

<212> ДНК

<213> Ixodes scapularis

<400> 7

atggctgatc agcttacaga agaacagatt gcagttcaag gaggcgttct tcgctgttcg 60

acaaggacgg aggatggcac catcacgacc aaggagctgg gcacggtcat gcgctcgctc 120

ggccagaacc cgacggaggc ggagctgcag gacatgatca acgaggtgga cgcagacggc 180

aacggaacga tcgacttccc cgagttcctt acgatgatgg cgcgcaagat gaaggacacg 240

gactctgagg aggagatccg ggaggcgttc cgggtgttcg acaaggacgg caacggcttc 300

atctctgcgg cggagctgcg ccacgtcatg accaacctgg gcgagaagct gacggacgag 360

gaggtggacg agatgatccg ggaggcggac atcgacgggg acgggcaggt caactacgaa 420

ggtgggcacg ctttccctcc cttggttatc ctcctgctat gctttctgca gttgctgtga 480

<210> 8

<211> 450

<212> ДНК

<213> Aedes aegypti

<400> 8

atggccgatc aacttacaga agagcagatt gccgaattca aagaagcgtt ttcgctgttc 60

gacaaagacg gtgacggcac aatcacaacc aaggaactgg gaaccgtgat gcgatcgtta 120

ggccagaacc ccacagaagc agaactgcaa gatatgataa acgaagtcga cgcggacggc 180

aacggcacga tcgatttccc cgaattcctg accatgatgg ctcgcaaaat gaaggacacc 240

gatagcgaag aggaaatccg ggaggcgttc cgagtcttcg acaaggacgg caacggcttc 300

atctcggcag ctgagctgcg tcatgtcatg accaatctcg gcgagaagct aacggacgag 360

gaggtggatg agatgatccg cgaagccgac atagatggcg atggccaagt taattatgaa 420

gaattcgtaa caatgatgac atcgaagtga 450

<210> 9

<211> 450

<212> ДНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 9

atggccgatc aacttacaga ggaacagatc gccgagttca aagaagcgtt ctcgctgttc 60

gacaaagacg gtgacggcac gatcacgacc aaggagctgg gcaccgtgat gcgatcgtta 120

ggccagaacc ccacagaagc agagctgcaa gacatgataa acgaggtcga tgcggacggc 180

aacggcacga tcgacttccc cgagtttctc accatgatgg ctcgcaaaat gaaggacacc 240

gatagcgaag aggaaatccg ggaggcgttc cgagtcttcg acaaggacgg caacggcttc 300

atctcggcgg ccgagctgcg ccacgtcatg accaatctcg gcgagaagct cacggacgag 360

gaggtggatg agatgatccg cgaggccgac attgacggcg atggccaagt taattatgaa 420

gaattcgtaa caatgatgac atcgaagtga 450

<210> 10

<211> 450

<212> ДНК

<213> Acyrthosiphon pisum

<400> 10

atggctgatc aactaacaga agaacagatt gccgaattca aagaggcgtt ttcgctattc 60

gacaaggacg gagatggtac catcaccacc aaagaacttg gaaccgtcat gaggtcttta 120

ggccaaaatc cgactgaagc tgaactccaa gatatgatta acgaggtcga tgctgatggc 180

aacggcacga tagatttccc agagttcttg actatgatgg cccgcaaaat gaaggatacc 240

gatagtgagg aagaaatcag agaggctttc cgtgtatttg ataaggatgg aaacggcttt 300

attagtgcag ctgagctgcg tcatgtgatg actaaccttg gagaaaagct caccgatgaa 360

gaggttgatg aaatgatcag ggaagctgac attgatggtg atggtcaagt caactatgaa 420

gagttcgtga ccatgatgac ttctaagtga 450

<210> 11

<211> 441

<212> ДНК

<213> Harpegnathos saltator

<400> 11

caactcacag aggaacagat cgcagagttt aaggaagcct tctcgctatt cgacaaagat 60

ggcgatggca ctataacgac taaagaattg ggtacagtca tgcgatccct gggtcaaaat 120

cccacagagg ccgagttaca agacatgatt aatgaagtag acgcagatgg taacggtaca 180

atcgactttc cggagttctt gaccatgatg gcacgcaaaa tgaaggatac ggacagcgag 240

gaggagatca gggaggcctt cagagtgttc gataaggatg gaaatggttt catatccgca 300

gcggaactca gacatgttat gacaaatctg ggcgagaaac tgaccgatga ggaagtagat 360

gaaatgatac gggaggcaga tatcgacggc gatggccaag tgaattatga agaatttgtg 420

acgatgatga catcaaagtg a 441

<210> 12

<211> 459

<212> ДНК

<213> Pediculus humanus corporis

<400> 12

atggtttctt tttttttgcg agctgatcag ttgaccgaag aacaaattgc cgaattcaag 60

gaagcatttt ccttattcga caaagatggc gatggtacca taacaactaa ggaattgggt 120

acggttatga gatcactcgg tcagaatccc acagaagcag aattacaaga tatgattaat 180

gaagtggatg cagatggtaa tggtaccatc gattttcccg agttcctcac catgatggct 240

agaaaaatga aggatacaga cagcgaagaa gaaattagag aagcattcag agttttcgat 300

aaggatggta atggttttat atcggcagcc gagctaaggc acgtcatgac gaacctgggt 360

gaaaaattaa cagacgaaga agtggatgaa atgattcgag aggctgatat cgacggagat 420

ggacaagtga attacgaaga atttgtggaa aacttgtga 459

<210> 13

<211> 459

<212> ДНК

<213> Anopheles gambiae

<400> 13

atggccgatc aacttacgga agaacagatc gctgaattca aagaagcgtt ctcgctgttc 60

gacaaggacg gcgatggcac aatcaccacc aaggaattag gcaccgtgat gcgatcgcta 120

ggccagaacc ccacagaagc tgaattgcaa gacatgatca acgaagtcga cgcggacggt 180

aacggcacga tcgatttccc cgagtttcta acaatgatgg ctcgtaaaat gaaggacacg 240

gacagtgaag aggaaatccg ggaggcattc cgagtcttcg acaaggacgg caacggtttt 300

atctctgcag ctgagctgcg ccacgtcatg actaatctgg gcgagaagct aacagacgag 360

gaggtcgacg agatgatccg tgaagccgat atagatggcg atggccaggt taattatgaa 420

ggtaagagtt gcctttcgcg cccacaccaa gcattgttt 459

<210> 14

<211> 501

<212> ДНК

<213> Solenopsis invicta

<400> 14

atgatcggca cgataacgac gagaaattcc attatttcag aattcaaaga ggcatttatg 60

cttttcgaca aggacgaaga tggcacgatt acgatggcgg aattaggggt tgtcatgcgg 120

tctctcggtc aaagaccgtc ggagacggaa ctgcgcgata tggtgaatga ggtagatcaa 180

gatggaaatg gtaccatcga gtttaacgaa tttctgcaga tgatgtcgaa gaagatgaaa 240

agcgccgacg gagaggacga acttcgcgag gcgttccgag tgttcgataa gaacaacgat 300

ggcttaatat cttcgaaaga gttgcgacac gtaatgacga atcttggtga aaagctctct 360

gaggaggagg tcgatgatat gattaaggag gcggatctag atggcgacgg aatggtcaac 420

tacgaaggta acattttgtt ttgcctagat gtttattcta taatagattt agaatttatt 480

ctaagcgata tagatgaatt g 501

<210> 15

<211> 364

<212> РНК

<213> Ixodes scapularis

<400> 15

aguucaagga ggcguucuuc gcuguucgac aaggacggag gauggcacca ucacgaccaa 60

ggagcugggc acggucaugc gcucgcucgg ccagaacccg acggaggcgg agcugcagga 120

caugaucaac gagguggacg cagacggcaa cggaacgauc gacuuccccg aguuccuuac 180

gaugauggcg cgcaagauga aggacacgga cucugaggag gagauccggg aggcguuccg 240

gguguucgac aaggacggca acggcuucau cucugcggcg gagcugcgcc acgucaugac 300

caaccugggc gagaagcuga cggacgagga gguggacgag augauccggg aggcggacau 360

cgac 364

<210> 16

<211> 372

<212> РНК

<213> Aedes aegypti

<400> 16

gcagauugcc gaauucaaag aagcguuuuc gcuguucgac aaagacggug acggcacaau 60

cacaaccaag gaacugggaa ccgugaugcg aucguuaggc cagaacccca cagaagcaga 120

acugcaagau augauaaacg aagucgacgc ggacggcaac ggcacgaucg auuuccccga 180

auuccugacc augauggcuc gcaaaaugaa ggacaccgau agcgaagagg aaauccggga 240

ggcguuccga gucuucgaca aggacggcaa cggcuucauc ucggcagcug agcugcguca 300

ugucaugacc aaucucggcg agaagcuaac ggacgaggag guggaugaga ugauccgcga 360

agccgacaua ga 372

<210> 17

<211> 373

<212> РНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 17

acagaucgcc gaguucaaag aagcguucuc gcuguucgac aaagacggug acggcacgau 60

cacgaccaag gagcugggca ccgugaugcg aucguuaggc cagaacccca cagaagcaga 120

gcugcaagac augauaaacg aggucgaugc ggacggcaac ggcacgaucg acuuccccga 180

guuucucacc augauggcuc gcaaaaugaa ggacaccgau agcgaagagg aaauccggga 240

ggcguuccga gucuucgaca aggacggcaa cggcuucauc ucggcggccg agcugcgcca 300

cgucaugacc aaucucggcg agaagcucac ggacgaggag guggaugaga ugauccgcga 360

ggccgacauu gac 373

<210> 18

<211> 372

<212> РНК

<213> Acyrthosiphon pisum

<400> 18

acagauugcc gaauucaaag aggcguuuuc gcuauucgac aaggacggag augguaccau 60

caccaccaaa gaacuuggaa ccgucaugag gucuuuaggc caaaauccga cugaagcuga 120

acuccaagau augauuaacg aggucgaugc ugauggcaac ggcacgauag auuucccaga 180

guucuugacu augauggccc gcaaaaugaa ggauaccgau agugaggaag aaaucagaga 240

ggcuuuccgu guauuugaua aggauggaaa cggcuuuauu agugcagcug agcugcguca 300

ugugaugacu aaccuuggag aaaagcucac cgaugaagag guugaugaaa ugaucaggga 360

agcugacauu ga 372

<210> 19

<211> 373

<212> РНК

<213> Harpegnathos saltator

<400> 19

acagaucgca gaguuuaagg aagccuucuc gcuauucgac aaagauggcg auggcacuau 60

aacgacuaaa gaauugggua cagucaugcg aucccugggu caaaauccca cagaggccga 120

guuacaagac augauuaaug aaguagacgc agaugguaac gguacaaucg acuuuccgga 180

guucuugacc augauggcac gcaaaaugaa ggauacggac agcgaggagg agaucaggga 240

ggccuucaga guguucgaua aggauggaaa ugguuucaua uccgcagcgg aacucagaca 300

uguuaugaca aaucugggcg agaaacugac cgaugaggaa guagaugaaa ugauacggga 360

ggcagauauc gac 373

<210> 20

<211> 373

<212> РНК

<213> Pediculus humanus corporis

<400> 20

acaaauugcc gaauucaagg aagcauuuuc cuuauucgac aaagauggcg augguaccau 60

aacaacuaag gaauugggua cgguuaugag aucacucggu cagaauccca cagaagcaga 120

auuacaagau augauuaaug aaguggaugc agaugguaau gguaccaucg auuuucccga 180

guuccucacc augauggcua gaaaaaugaa ggauacagac agcgaagaag aaauuagaga 240

agcauucaga guuuucgaua aggaugguaa ugguuuuaua ucggcagccg agcuaaggca 300

cgucaugacg aaccugggug aaaaauuaac agacgaagaa guggaugaaa ugauucgaga 360

ggcugauauc gac 373

<210> 21

<211> 372

<212> РНК

<213> Anopheles gambiae

<400> 21

acagaucgcu gaauucaaag aagcguucuc gcuguucgac aaggacggcg auggcacaau 60

caccaccaag gaauuaggca ccgugaugcg aucgcuaggc cagaacccca cagaagcuga 120

auugcaagac augaucaacg aagucgacgc ggacgguaac ggcacgaucg auuuccccga 180

guuucuaaca augauggcuc guaaaaugaa ggacacggac agugaagagg aaauccggga 240

ggcauuccga gucuucgaca aggacggcaa cgguuuuauc ucugcagcug agcugcgcca 300

cgucaugacu aaucugggcg agaagcuaac agacgaggag gucgacgaga ugauccguga 360

agccgauaua ga 372

<210> 22

<211> 364

<212> РНК

<213> Solenopsis invicta

<400> 22

cagaauucaa agaggcauuu augcuuuucg acaaggacga agauggcacg auuacgaugg 60

cggaauuagg gguugucaug cggucucucg gucaaagacc gucggagacg gaacugcgcg 120

auauggugaa ugagguagau caagauggaa augguaccau cgaguuuaac gaauuucugc 180

agaugauguc gaagaagaug aaaagcgccg acggagagga cgaacuucgc gaggcguucc 240

gaguguucga uaagaacaac gauggcuuaa uaucuucgaa agaguugcga cacguaauga 300

cgaaucuugg ugaaaagcuc ucugaggagg aggucgauga uaugauuaag gaggcggauc 360

uaga 364

<210> 23

<211> 373

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 23

acagguggcu gaauuuaaag aggccuuucu uuuguuugac aaggacgccg auggaaugau 60

uacggccgcc gaacuaggcg ucgucaugcg aucgcuuggc cagcgaccua cggagcaaga 120

gcucaagaaa augguuacca ugguugacca ggacggcaau gguacaaucg aguucaacga 180

guuuuugaug augaugucuc gcaagaugaa ggaggcagac ucggaggaag aacuccggga 240

ggcguuccgu guguucgauc gagacgguga cggauucauc ucgcgggacg agcucagugu 300

cgucaugaac aaccucggcg agaaauuaag ugacgaugau guugaggaua ugauucgaga 360

ggccgaucug gac 373

<210> 24

<211> 627

<212> ДНК

<213> Tetranychus urticae

<400> 24

attcatcaga tttaaaatta ttcaccttgt acctgaatta aaacaatagt attatataag 60

atggctgacc agctaactga agagcaaatt gctgaattta aggaggcctt ttcattgttt 120

gataaagatg gtgatggtac aattaccacc aaggaattgg gaactgttat gagaagtcta 180

ggtcaaaatc caacagaagc ggaattacaa gatatgatca atgaagttga tgccgatggt 240

aatggtacta ttgattttcc tgaattcttg actatgatgg ctagaaaaat gaaggataca 300

gactcagagg aggaaatccg tgaagctttc cgtgtttttg ataaagatgg taatggtttt 360

atttctgctg ctgaattgag acatgtaatg accaatttgg gtgaaaaatt gaccgacgaa 420

gaagtagatg aaatgattcg tgaagccgat attgacggtg atggtcaagt taattatgaa 480

gaatttgtaa cgatgatgac atccaaatga ataaaagcac aaggttaatt gttcatttta 540

attagatcca atggatccca tcagtgacag ggataaaaat taatcaataa aagatgaaaa 600

gcaaaaaata catggaagct atcatca 627

<210> 25

<211> 372

<212> РНК

<213> Tetranychus urticae

<400> 25

caaauugcug aauuuaagga ggccuuuuca uuguuugaua aagaugguga ugguacaauu 60

accaccaagg aauugggaac uguuaugaga agucuagguc aaaauccaac agaagcggaa 120

uuacaagaua ugaucaauga aguugaugcc gaugguaaug guacuauuga uuuuccugaa 180

uucuugacua ugauggcuag aaaaaugaag gauacagacu cagaggagga aauccgugaa 240

gcuuuccgug uuuuugauaa agaugguaau gguuuuauuu cugcugcuga auugagacau 300

guaaugacca auuuggguga aaaauugacc gacgaagaag uagaugaaau gauucgugaa 360

gccgauauug ac 372

<210> 26

<211> 1114

<212> ДНК

<213> Varroa destructor

<220>

<221> Неясно

<222> (1)..(1114)

<223> неясно во всех n положениях

<220>

<221> misc_feature

<222> (1100)..(1110)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 26

ggctcgtaca ccgagagaga acggtggact ccattgctgt cctgagtgcg tttctcgtcg 60

gctgtgtcgt attgcgtgtc tgtccgtgct ttcgtgcaca taagttttct ttccacattg 120

gagatattgt gaatagtatc ctttgtgttt agtgcctgaa caatatttga aatcgtcgaa 180

cgtatcaaga cataaaaacg agccaaaatg gctgatcaac ttacggaaga acaaatcgca 240

gaatttaagg aagcattttc actatttgat aaagatggag atggtaccat cacaactaaa 300

gagttgggta cagttatgcg atcactaggt caaaatccca cagaagctga gcttcaggat 360

atgattaatg aagttgatgc agatggtaat ggcacaatcg attttccgga attcttaact 420

atgatggctc gtaaaatgaa agatactgat agtgaggaag aaattaggga ggccttcaga 480

gtatttgata aggatggaaa tggtttcata tccgcagcag aactcagaca tgttatgaca 540

aatcttggcg agaaactcac tgatgaagaa gttgatgaaa tgattcggga ggctgacatt 600

gatggtgatg gccaagttaa ttatgaagaa ttcgtcacaa tgatgacatc aaagtgaatg 660

caacctgtgt aatggaaaaa cttgcaactt ggagtggtgt tgacgtatta agataaatca 720

agaaacaaag aaaaatataa tgttaacaaa aaacgaatcg accagaaagt gaaaaaaatc 780

ttgtatctgg acgcaaagat gtctataaaa cgcgaaaaat taacgtccaa cacgcgttaa 840

tcatcattaa cgataagtaa tacagggcaa ttgtttaatt aaaagagtta taccactaaa 900

aatcattatc tctaaataca caaaacttaa ttacacaaca tgaacataaa aatacatatt 960

actcgcgcac atacatgaat acaaaaaaat atacagcaca cagaaatacc atctacataa 1020

aagataattt atttccgtat taaaaagtat ataattaaaa aatgttagag atatatatat 1080

ataatatata tatatatatn nnnnnnnnnn gtaa 1114

<210> 27

<211> 372

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 27

acaaaucgca gaauuuaagg aagcauuuuc acuauuugau aaagauggag augguaccau 60

cacaacuaaa gaguugggua caguuaugcg aucacuaggu caaaauccca cagaagcuga 120

gcuucaggau augauuaaug aaguugaugc agaugguaau ggcacaaucg auuuuccgga 180

auucuuaacu augauggcuc guaaaaugaa agauacugau agugaggaag aaauuaggga 240

ggccuucaga guauuugaua aggauggaaa ugguuucaua uccgcagcag aacucagaca 300

uguuaugaca aaucuuggcg agaaacucac ugaugaagaa guugaugaaa ugauucggga 360

ggcugacauu ga 372

<210> 28

<211> 822

<212> ДНК

<213> Varroa destructor

<400> 28

tttttttttt ttttcgaaga aatcgtatca tcgaacatcg gatcgaattt cgatccacga 60

cgctcgaatt acatgcaacg aagtgaatgt cagagggggg ggggcagggg aaaagtatgc 120

gacgaacgtg tacgtccgtc gtccgctggc tcgtcgttaa ttcgttctat ctaacacaga 180

cacgagaata agtaagatcc tagtagcccg gggacagcac ctcctcctcc tcgtcctcct 240

cgtcgtcgtc gatccccggc tctccgagcg cgtggacgaa ttcgtagaaa tcgatacggc 300

cgtctccgtc cacgtccact tccttgatca tatcctcgat ctcttcttcc gacaagtcct 360

cgccgagaca ttgcagcact gccctcaaat cggatgcggt gatgtatcct cgattgtgtt 420

tatcgaatac ccggaacgca tccctcagct cctgctcttc ctgatcctga tccgtggggg 480

cggtttcatt cgcacctatg ttgctcacga tttccacgaa ctcttcgaag ctgacatttc 540

catccccgtc gatgtcgatc tcctgcaaca tggtgcgcag ctcctcggcc ctcgcgaatt 600

gccccaacga gcgcatcacc ctcccgagct cctccttcgt gatgctcccg tccccgtcct 660

tgtcgaacag tctgaacgct tccctgaatt ctttcatttg agatttggat atattgctcg 720

gtatcttggt ggacgactca gaggcggatt ttttcggcga cgcaggtaag gagaagagga 780

cgttggtcga caatttgccg gcctccgtgg acgaggaggc cg 822

<210> 29

<211> 300

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 29

aacguguacg uccgucgucc gcuggcucgu cguuaauucg uucuaucuaa cacagacacg 60

agaauaagua agauccuagu agcccgggga cagcaccucc uccuccucgu ccuccucguc 120

gucgucgauc cccggcucuc cgagcgcgug gacgaauucg uagaaaucga uacggccguc 180

uccguccacg uccacuuccu ugaucauauc cucgaucucu ucuuccgaca aguccucgcc 240

gagacauugc agcacugccc ucaaaucgga ugcggugaug uauccucgau uguguuuauc 300

<210> 30

<211> 2577

<212> ДНК

<213> Varroa destructor

<400> 30

ctgctgctgc tgctgctgct gctgctgccg tgttaagaac tagacaaagg caacaaccgg 60

aagacatctg ttaggccagt tgggtgaagg gaaataaact cgcaacaaag agctactgtt 120

gcaaaagcta tctgttctga gtcctagact agactgggat cgactaacaa ctctgcaggc 180

cgtggaccac tatcactgaa caacgccgca ggaccgagcg attgagaagt tggccgcggc 240

tgggacgctc tggctcactt gatctgatta ctacttacac caggtcaatt taaccaagcc 300

gttgaaccac tcctacatgg aaacacacat ctacactctc atccaattgt gtacacgcga 360

agcaaacgac aacggtatta gcagcgacac taacaaaaac gaatctgcca gaaaccgagt 420

aacgctgatt tctgcagcgg cgttcctacg aacttaccac agacccggtc ggcacaatag 480

tttgaaggtt agcatcggcc cgtgaactat agtgaaagga actgagcgaa atactatagt 540

tgttgaacag caggcttcaa agtaaagaag tgaatattct tatggtgaca acaaattttg 600

tctgtagtgg tcaagaccct actcaatgaa gtgagaagcg aattcatatg tgctcagtta 660

tagcagttgt ttgtcgtaat gccgccaata tacgacgtct gtgtgtctcg atactggcgt 720

atctgactga ttccgatcgg tgtcattgat ctgcaaagcc aattgttttc tttacgtccc 780

ggatagagca aacgatcatg gcaacggaaa catttggcct gccggaggaa caggtggctg 840

aatttaaaga ggcctttctt ttgtttgaca aggacgccga tggaatgatt acggccgccg 900

aactaggcgt cgtcatgcga tcgcttggcc agcgacctac ggagcaagag ctcaagaaaa 960

tggttaccat ggttgaccag gacggcaatg gtacaatcga gttcaacgag tttttgatga 1020

tgatgtctcg caagatgaag gaggcagact cggaggaaga actccgggag gcgttccgtg 1080

tgttcgatcg agacggtgac ggattcatct cgcgggacga gctcagtgtc gtcatgaaca 1140

acctcggcga gaaattaagt gacgatgatg ttgaggatat gattcgagag gccgatctgg 1200

acggcgatgg caagattaac taccaagagt ttgtgctcat tatcacctcc gccaagtagg 1260

ccttggagtt gctcgcgcac acacatgcta ttcctcttgt cctacacgac aaacactata 1320

cacgttacaa tacggaaaaa tgaaataaaa gcacagtcac acttattcat tcattcacag 1380

aggatcactg gcgtgtcctc attaatatgg ctgacaaata ctattgattt gtctcgactg 1440

agctatcagg cacacgcata ttgtctgttc cgatacgtgc aataataggt aaagtggtgt 1500

tagcttgagc accttacggt ttacatttat tccgtattaa cggtactatg tctcaatagt 1560

catgtcgcag cattagccag ctaacattaa atttagttga tttttatttt atttttttac 1620

acaacaagaa ttatcttact atttggcaag ctgactgcga gtagtaaaat taccctagta 1680

aaaaaaaaag gctttaaaaa cgatttaaca aaggtgcgtc catttaaaaa agtatgacac 1740

aagctaatgt gttcgatcgc ggtcggttgc attcggccag tttgtgagac gcgaaattta 1800

ccagcagccg tcaacaacga tggaataatt atatattaaa tataaataat aaaatatctg 1860

ttacacattc tatgtgaata aagttataca tatatatata catacaacag caatgatata 1920

tatgatgata cgtatactat atagaagtat ccactgatat aggataatgg gaaattctgg 1980

aaaggagaaa acatattctt ctttcataat taatgaatta tcatcgagca cctcaagaat 2040

ttgcttagac atattacaaa aaaaaaatta attcactata tataaataat cgcaattaat 2100

caaaaaaaaa atacggtcat ttatggcata ccctaggtta ataaacttca taaaggtacc 2160

tatatatata tcttttttac tgtctcttta atcgtcatta tacatagtga cgattaaaga 2220

gagagagtaa aaaagaggtc aaaataaaag acttgaagtc gattgaggtt aatttttatt 2280

ctaggttata tgtgttttag cggatttata gtgtgctcgt tgtaaaagtt gacgtaagga 2340

gttgaaacgc ggagagcagt ataacagtaa aatggagagg aagtttagaa gttgggaaat 2400

aaatgatttg ctactaattg gaaattacaa aaatgaccat ttaaagaact tatcattaga 2460

attttaatat ctgccacact gaaccgtttt gtcattattt cgaccatagc gattttcaca 2520

cagttgtctc acgtttgagg ccttatcgtt taaaggctaa cggaaatttc tctaaag 2577

<210> 31

<211> 373

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 31

acagguggcu gaauuuaaag aggccuuucu uuuguuugac aaggacgccg auggaaugau 60

uacggccgcc gaacuaggcg ucgucaugcg aucgcuuggc cagcgaccua cggagcaaga 120

gcucaagaaa augguuacca ugguugacca ggacggcaau gguacaaucg aguucaacga 180

guuuuugaug augaugucuc gcaagaugaa ggaggcagac ucggaggaag aacuccggga 240

ggcguuccgu guguucgauc gagacgguga cggauucauc ucgcgggacg agcucagugu 300

cgucaugaac aaccucggcg agaaauuaag ugacgaugau guugaggaua ugauucgaga 360

ggccgaucug gac 373

<210> 32

<211> 693

<212> ДНК

<213> Varroa destructor

<400> 32

cgcctctata cagtgaaaaa gtcggataag gttatgttac tcagtaactt aaccttatct 60

tggataacgt tatttgacac gtaaacgaaa agtaataaca aagttttgta ttatggctcg 120

ttattttcga gaggaagata tagatgaatt cagggaatgt ttttatctat ttgcaaggaa 180

tggtcaaata cgtactttgg atgagcttac aatcattatg agatcattag gattaagtcc 240

aactattgca gaattaaata aatatttgaa agataaaggt ggaaaaatgt cttttgccga 300

tttcttggaa gttatgcatc tacaaactag agctgaagat ttaccaaaag aagtgataga 360

tgcttttcaa gctgcagata aatttaggac tggcactata ccagctagac agttagcgca 420

tatgttactc cactggggtg aacaattaag taacaaagaa gtggagcaaa ttttcagaga 480

ggcaaatgtg tctccaaatg gacaagtaaa gtacgaagat tttgttaaaa tagcttgtgc 540

acctgtacct gattactatt aaaataaata tttttcatat tttttaaaga tatttatata 600

ctttttacac aatacacacg tatttaatta ataaaaggat aaaaatgatc ataaaagaaa 660

aagaatttat tcttccagca acttatcttc gac 693

<210> 33

<211> 315

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 33

augcuuuuca agcugcagau aaauuuagga cuggcacuau accagcuaga caguuagcgc 60

auauguuacu ccacuggggu gaacaauuaa guaacaaaga aguggagcaa auuuucagag 120

aggcaaaugu gucuccaaau ggacaaguaa aguacgaaga uuuuguuaaa auagcuugug 180

caccuguacc ugauuacuau uaaaauaaau auuuuucaua uuuuuuaaag auauuuauau 240

acuuuuuaca caauacacac guauuuaauu aauaaaagga uaaaaaugau cauaaaagaa 300

aaagaauuua uucuu 315

<210> 34

<211> 612

<212> ДНК

<213> Varroa destructor

<400> 34

cgttttttta atttcaaaga ctcctgattt tcttttcttt tcctttccta caaaccaaac 60

acaagctaga aagaggttcg atttttgcag gaagaagaag gaacaatggc tgatcagctc 120

accgatgacc agatctctga gtttaaggaa gccttcagcc tcttcgataa ggatggagat 180

ggttgtatca ccaccaagga gcttggaact gtgatgaggt ctcttggcca gaaccccact 240

gaggcagagc tccaggacat gatcaacgag gtggatgctg atggcaatgg aacaattgac 300

tttcctgagt tcttaaacct catggccagg aagatgaagg atactgattc tgaggaggag 360

ctcaaggaag ctttccgcgt gtttgacaag gaccagaatg gcttcatttc tgcggctgag 420

ctccgccatg ttatgacgaa tcttggtgag aagctcacag acgaggaagt tgatgagatg 480

atccgtgagg ctgatgtaga tggtgacggc cagattaact acgaggagtt tgtcaaagtc 540

atgatggcca agtgaggatc attaaccaaa ccttaaaatt tcgaaagcat aaacatttaa 600

aaaaaaaaaa aa 612

<210> 35

<211> 371

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 35

cagaucucug aguuuaagga agccuucagc cucuucgaua aggauggaga ugguuguauc 60

accaccaagg agcuuggaac ugugaugagg ucucuuggcc agaaccccac ugaggcagag 120

cuccaggaca ugaucaacga gguggaugcu gauggcaaug gaacaauuga cuuuccugag 180

uucuuaaacc ucauggccag gaagaugaag gauacugauu cugaggagga gcucaaggaa 240

gcuuuccgcg uguuugacaa ggaccagaau ggcuucauuu cugcggcuga gcuccgccau 300

guuaugacga aucuugguga gaagcucaca gacgaggaag uugaugagau gauccgugag 360

gcugauguag a 371

<210> 36

<211> 659

<212> ДНК

<213> Ixodes scapularis

<400> 36

acaccgcgct cgacgagaac tcgcgcaagg agcgcgtgct aacgccgata gctctcgtac 60

aaaagaaaac taaagacttg acacgctcaa taccgatctt tcacattttc agcaaaattt 120

gagcattccg aatatggacc tgactccgga agagatcgcg gacatcaagg gagcgtttct 180

gctgtttgac cgcaacggcg acggaaccat ctccacgact gagctagaga tggtcctccg 240

cgccatgggc gaacggccca gtccttccca gctggcccgt atagtgcggc aaattgacag 300

cgaccgcaat ggaagcatcg acttccaaga gtttctcttt ttcatggccg gcaggatttc 360

ccacaaaggc ctctccaaaa gcgcagtcct caaggccttc caactcttcg accgcgatgg 420

caatggatac atcaccaggg aggaactcgt ccacattttc acgcacgttg ggcagagcat 480

gagccaagaa gacgccgaaa agataatccg cgaagtggat gtggacaagg acggaaagat 540

ccattacact gaattggtca acaaggtgct gcccaccaag aagcaaaaag aagaaaccaa 600

aacctagaag gtcgtcgctt ggcacggtct ttattattaa acaagtgctt tatcgcttg 659

<210> 37

<211> 374

<212> РНК

<213> Ixodes scapularis

<400> 37

agaucgcgga caucaaggga gcguuucugc uguuugaccg caacggcgac ggaaccaucu 60

ccacgacuga gcuagagaug guccuccgcg ccaugggcga acggcccagu ccuucccagc 120

uggcccguau agugcggcaa auugacagcg accgcaaugg aagcaucgac uuccaagagu 180

uucucuuuuu cauggccggc aggauuuccc acaaaggccu cuccaaaagc gcaguccuca 240

aggccuucca acucuucgac cgcgauggca auggauacau caccagggag gaacucgucc 300

acauuuucac gcacguuggg cagagcauga gccaagaaga cgccgaaaag auaauccgcg 360

aaguggaugu ggac 374

<210> 38

<211> 549

<212> ДНК

<213> Ixodes scapularis

<400> 38

gattcgtcca cttattttgt ccctattctt cgtccgcagt cgtcctcgag gaaaagtgcg 60

tcaggtgcgg gctacaagcg gaaactgagc ggaaagccag aaccgagcga ggagcagaag 120

aatgacatga aggaagcgtt cagtctcttc gatcccagtg gcacgggctt catggagtct 180

aaagatatga agtttgcaat gagagcactg ggttttgaac caaaaaagga ggaagtgaaa 240

aaactgatag cagagattga caagcagggg actggaaaaa ttcccttgga ggagttcatg 300

agcgtcatgt ccacgaggct ggctgagaaa gacataaatg aggagattat gaaggcgttt 360

cagctgtttg atgaggatgg cactgggaag atttctttta agaacctcaa gaatgtggcc 420

aaggaactgt cggagaacct cacagatgag gagcttcagg aaatgatcaa tgaagctgac 480

agggatggag atggcgaagt gaaccaagag gagttcctta ggataatgaa gaagacctgc 540

ctctactga 549

<210> 39

<211> 373

<212> РНК

<213> Ixodes scapularis

<400> 39

ugaaggaagc guucagucuc uucgauccca guggcacggg cuucauggag ucuaaagaua 60

ugaaguuugc aaugagagca cuggguuuug aaccaaaaaa ggaggaagug aaaaaacuga 120

uagcagagau ugacaagcag gggacuggaa aaauucccuu ggaggaguuc augagcguca 180

uguccacgag gcuggcugag aaagacauaa augaggagau uaugaaggcg uuucagcugu 240

uugaugagga uggcacuggg aagauuucuu uuaagaaccu caagaaugug gccaaggaac 300

ugucggagaa ccucacagau gaggagcuuc aggaaaugau caaugaagcu gacagggaug 360

gagauggcga agu 373

<210> 40

<211> 234

<212> ДНК

<213> Ixodes scapularis

<400> 40

atggccaaga acgtccgcgc cctggacacc gaggaggaga ttttggaggc cttcaaagtc 60

ttcgaccgca acggcgacgg cttcgtgagc acagccgagc tccgtcacgt gatgaccacg 120

ttaggcgaga agttgacgca cgaagaagtg gacgagatga tccgcgaggc cgaccgcgac 180

ggcgacggac agatcaacta cgacgagttc gtggccatga tgacttccaa gtga 234

<210> 41

<211> 213

<212> ДНК

<213> Ixodes scapularis

<400> 41

cctggaaccg aggaggagat tctggaggcc ttcaaagtct tcgaccgcaa cggcgacggc 60

ttcgtgagca cggccgagct ccgtcacgtg atgaccacgc taggcgagaa gttgacgcac 120

gaagaagtgg acgagatgat ccgcgaggcc gaccgtgacg gcgacggaca gatcaactac 180

gacgagttcg tggccatgat gacctccaag tga 213

<210> 42

<211> 200

<212> РНК

<213> Ixodes scapularis

<400> 42

gaggaggaga uucuggaggc cuucaaaguc uucgaccgca acggcgacgg cuucgugagc 60

acggccgagc uccgucacgu gaugaccacg cuaggcgaga aguugacgca cgaagaagug 120

gacgagauga uccgcgaggc cgaccgugac ggcgacggac agaucaacua cgacgaguuc 180

guggccauga ugaccuccaa 200

<210> 43

<211> 450

<212> ДНК

<213> Aedes aegypti

<400> 43

atgtccgccc atagtctaac agaggaacaa gggcgccagt tccgtcagat gttcgagatg 60

ttcgacaaaa atggcgacgg ttcgatcagc acatcggaac tgggatcggt cattcgggcc 120

ttgggtatga atccctccat tgcggaaatc gagcaaatga tccacgaggt cgatttggac 180

ggaagtgggt cgattgagtt gaacgaattt ctcatactga tggcacgtaa gtcacgggag 240

ggttccacac aggaagagct acgggatgcg ttcaaaattt ttgacaagga tggagatgga 300

tttctcacgg ttgacgagtt gtcggctgtt atgaagaact ttggcgagag attgaccgat 360

gacgaactag cagatctgct ggaggaagcc gacatcgatg gagacggaaa gatcaactat 420

gaagaatttg tcatcatgtt gagcaagtga 450

<210> 44

<211> 300

<212> РНК

<213> Aedes aegypti

<400> 44

acagaggaac aagggcgcca guuccgucag auguucgaga uguucgacaa aaauggcgac 60

gguucgauca gcacaucgga acugggaucg gucauucggg ccuuggguau gaaucccucc 120

auugcggaaa ucgagcaaau gauccacgag gucgauuugg acggaagugg gucgauugag 180

uugaacgaau uucucauacu gauggcacgu aagucacggg aggguuccac acaggaagag 240

cuacgggaug cguucaaaau uuuugacaag gauggagaug gauuucucac gguugacgag 300

<210> 45

<211> 465

<212> ДНК

<213> Aedes aegypti

<400> 45

atgtccgccc aaaccccgcc agacaagctt tcccaggatc aaatcgaaga actgcgggaa 60

gctttctccc tgttcgacac caacggcgac ggaaccataa cctgttcaga acttggcaca 120

gtccttcgat cccttggcaa aaatgtatcc gacgcggaag tggaagaact gctcaaagaa 180

gtcaacgtcg accacgaagg aatgatccac tttccggact tcgtggcaat gatgtccatc 240

cgattgcggg acttcaatag cgaggaggaa ctcaaggaag ccttccggat cttcgaccgc 300

aacggagatg ggctgatttc ggcggacgaa ttgcgagcgg ctctccaatc tttcggggaa 360

cagctggccg aggaggaaat cgaagaactg ctccgggagg cggatgtcaa ctgcgacgga 420

caaatagact acgaggagtt tgttaaaatg atcacgctga aataa 465

<210> 46

<211> 300

<212> РНК

<213> Aedes aegypti

<400> 46

caaaucgaag aacugcggga agcuuucucc cuguucgaca ccaacggcga cggaaccaua 60

accuguucag aacuuggcac aguccuucga ucccuuggca aaaauguauc cgacgcggaa 120

guggaagaac ugcucaaaga agucaacguc gaccacgaag gaaugaucca cuuuccggac 180

uucguggcaa ugauguccau ccgauugcgg gacuucaaua gcgaggagga acucaaggaa 240

gccuuccgga ucuucgaccg caacggagau gggcugauuu cggcggacga auugcgagcg 300

<210> 47

<211> 1150

<212> ДНК

<213> Aedes aegypti

<400> 47

tcgtcaagga tatccggcaa ctgattatga cccggcaaac caacgatccc aacggccagc 60

aacaggaaca gaacgaacca gaatccagtc agaacaccca gagcgaccaa agcaacaacc 120

agcccacgca gcgattggga ggaaccacct cggacttcag tgtcagctcc gcggccacta 180

atcgaagtat gccccgccac caggaggaca atcccaatca accggccagc gactgttcca 240

gcctcgaggg aaatgtattc gtcgaaggcg gatccggcac cggagcgcac ccgaaaacac 300

gccgctcgca aacttccgat tcgatcacct ccagcaactt caactacagt ctcaaccgga 360

ggttcatatc gaagaaccag atgaaggagt ttcgagaagc gttccggctg ttcgacaagg 420

ataatgacgg ctcaatcacc aaggaagaac tgggaactgt catgaggtcg ttgggacaat 480

ttgctcgcgt ggaagaatta caagagatgt tactggagat tgatgttgat ggcgatggaa 540

acgtaagttt cgaagagttt gtcgacatca tgtccaacat gacggatacc gtggcggaaa 600

catcggccga ccaggaggaa cgtgagctac gtgatgcctt ccgtgtcttc gacaagcaca 660

atcgaggtta cattacggca tcagatctac gggcggttct tcaatgtctg ggcgaagatt 720

tggatgaaga agaaattgaa gacatgatca aagaagtgga cgtggatgga gacggacgga 780

tcgatttcta cgaattcgta catgctcttg gagaaccgga agattcccaa gaaaacgacg 840

acgaagacga ggcagtgtcc ccccattcgc tgtcctgtga cgtgcatgtc taagaaccgc 900

caggagaaaa atagctaacg ccaacgaatc gcattcctaa caaaatgtcg aacaatctag 960

agacattgac cagatttttt ttaaatattt aacacacaaa aaaacttcgc ttaacgccat 1020

tgtacttctc catacgcttg ataacagatt ccagaacacc taatgaattt atcaatctat 1080

acataataac tattcatctc taatcacgaa aaaagtttaa ataaacatat caaattgagc 1140

aaccaataag 1150

<210> 48

<211> 300

<212> РНК

<213> Aedes aegypti

<400> 48

gaguuucgag aagcguuccg gcuguucgac aaggauaaug acggcucaau caccaaggaa 60

gaacugggaa cugucaugag gucguuggga caauuugcuc gcguggaaga auuacaagag 120

auguuacugg agauugaugu ugauggcgau ggaaacguaa guuucgaaga guuugucgac 180

aucaugucca acaugacgga uaccguggcg gaaacaucgg ccgaccagga ggaacgugag 240

cuacgugaug ccuuccgugu cuucgacaag cacaaucgag guuacauuac ggcaucagau 300

<210> 49

<211> 450

<212> ДНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 49

atgtcggccc actcgctcac cgacgaacag cagcgccagt accggcaaat gttcgaaacg 60

ttcgacaagg atggcaacgg ttccatcacg acgacggaac tgggaacgct agtgcgagcg 120

ctaggtctta atccttcgat cgccgagatc gagcagatga tccacgaggt cgacctggac 180

ggaagcggga cgatcgagct gaacgagttt tacgtgctga tggcccggaa gcatcgggaa 240

gcctcgtcgg aggacgagct gaggcaggct ttcaaggtgt ttgacaagaa cgaggatggg 300

ttcttgacgg tggaggaact gtcgatggtg atgaagaact ttggtgagcg gttgagcgat 360

gaagagttgg cggatttgtt ggaggaggcg gatgttgaca aggacggtcg gattaattac 420

gaggaatttg tgaccatgtt gaccaagtag 450

<210> 50

<211> 300

<212> РНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 50

acagcagcgc caguaccggc aaauguucga aacguucgac aaggauggca acgguuccau 60

cacgacgacg gaacugggaa cgcuagugcg agcgcuaggu cuuaauccuu cgaucgccga 120

gaucgagcag augauccacg aggucgaccu ggacggaagc gggacgaucg agcugaacga 180

guuuuacgug cugauggccc ggaagcaucg ggaagccucg ucggaggacg agcugaggca 240

ggcuuucaag guguuugaca agaacgagga uggguucuug acgguggagg aacugucgau 300

<210> 51

<211> 477

<212> ДНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 51

atgtcatcgt cttcccgcca ccccaaaccc accgcggacc ccctgaccaa ggagcaaatc 60

gaagaactgc gcgaagcgtt caccctgttc gacaccaacg gcgacggaac gatttccggc 120

tcggaactgt ccaccgtgct gcgggccctc ggcaagaacg tctcggacgc cgaagtcgag 180

gaactgctga aggaggtccg caccgacgac gagggccgca tccggttcgg ggactttgtg 240

gccatgatga cggtccggtt gaaggacttt aacaacgagg accagctgca ggaggcgttt 300

cggatcttcg atcgggacgg gaatgggcgg atttcggcgg aagagctacg ggtcgcgttg 360

aggtcgtttg gggagcagtt gaccgaagag gagctggagg agttgctgcg cgaggcggac 420

gtcaacagtg acggccagat tgactacggg gagtttgtgc ggatgataac gcagtga 477

<210> 52

<211> 300

<212> РНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 52

gcgaagcguu cacccuguuc gacaccaacg gcgacggaac gauuuccggc ucggaacugu 60

ccaccgugcu gcgggcccuc ggcaagaacg ucucggacgc cgaagucgag gaacugcuga 120

aggagguccg caccgacgac gagggccgca uccgguucgg ggacuuugug gccaugauga 180

cgguccgguu gaaggacuuu aacaacgagg accagcugca ggaggcguuu cggaucuucg 240

aucgggacgg gaaugggcgg auuucggcgg aagagcuacg ggucgcguug aggucguuug 300

<210> 53

<211> 927

<212> ДНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 53

atgaccgatt ttctccagct tccccaatgc aatactcgac aaaccaacga cccaaacagc 60

gccgagcagc aacaacagag cgaacccgaa tcgaaccaga gcagcacgca ccagagcagc 120

agccacagct accagcagcc gtcgtcaacg cagcaccggt tggccggatc tccgtcgagc 180

agtgccaacg cgagtcccgt gatcggccgg aacatgcccc gccaccagca ccaggacacc 240

gcgcccagtg acgatgggac ctcgagcagt ctggacggga gtgtctttgc cgccgacgga 300

actccgaccg ctccgggggc gttggccagg acgcgccgct cgcagacctc ggaatcgatc 360

acctccagca acttcaacta cagtttgaac cggaggttca tctccaagaa ccagatgaaa 420

gagttccggg aggcgttccg gctgtttgac aaggacaacg acgggtcgat cacgaaggag 480

gagctgggca cggtgatgcg atcactgggg cagtttgccc gtgtcgagga actgcaggag 540

atgctgctgg agattgacgt cgatggtgat ggcaacgtca gcttcgagga gtttgtcgac 600

atcatgtcca acatgaccga cacggtggcg gaggcatccg ccgaccagga ggagcgcgaa 660

ctccgggatg cgttccgcgt gtttgacaag cacaaccggg gctacatcac ggcgtctgat 720

ctgcgggcgg ttctgcagtg tctgggagaa gatttggacg aggaagaaat cgaagacatg 780

atcaaggagg tggacgtcga cggcgatgga cggatcgact tttacgagtt tgtgcacgcc 840

ctcggagagc cggaagattc acaggagaac gacgacgagg aggaccccct gtcacctccg 900

tcactgtcgt gtgacgtaaa cgcctaa 927

<210> 54

<211> 300

<212> РНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 54

gaguuccggg aggcguuccg gcuguuugac aaggacaacg acgggucgau cacgaaggag 60

gagcugggca cggugaugcg aucacugggg caguuugccc gugucgagga acugcaggag 120

augcugcugg agauugacgu cgauggugau ggcaacguca gcuucgagga guuugucgac 180

aucaugucca acaugaccga cacgguggcg gaggcauccg ccgaccagga ggagcgcgaa 240

cuccgggaug cguuccgcgu guuugacaag cacaaccggg gcuacaucac ggcgucugau 300

<210> 55

<211> 333

<212> ДНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 55

atggtcggtg tccaagctgg ccatttgata tctcaatcac ggcggggcgg ctccgcgtgc 60

gaaaacgggg aaattttgat tgatgacggc ggcggcgggg agcggcgggt tttaaacctg 120

ttctacaagg ggaataaaaa tgccgatcaa cttacagagg aacagatcgc cgagttcaaa 180

gaagcgttct cgctgttcga caaagacggt gacggcacga tcacgaccaa ggagctgggc 240

accgtgatgc gatcgttagg ccagaacccc acagaagcag agctgcaaga catgataaac 300

gaggtcgatg cggacggact gcatccgctt taa 333

<210> 56

<211> 300

<212> РНК

<213> Culex quinquefasciatus

<400> 56

gucggugucc aagcuggcca uuugauaucu caaucacggc ggggcggcuc cgcgugcgaa 60

aacggggaaa uuuugauuga ugacggcggc ggcggggagc ggcggguuuu aaaccuguuc 120

uacaagggga auaaaaaugc cgaucaacuu acagaggaac agaucgccga guucaaagaa 180

gcguucucgc uguucgacaa agacggugac ggcacgauca cgaccaagga gcugggcacc 240

gugaugcgau cguuaggcca gaaccccaca gaagcagagc ugcaagacau gauaaacgag 300

<210> 57

<211> 934

<212> ДНК

<213> Acyrthosiphon pisum

<400> 57

gctgtgcacg ttttgtttac ccgaaaaatg tgattcaaac tttcagtttt ttaaatctta 60

actgcgttgt ttaagaaaaa aaaaacccta aatttattat tgtttattaa taataaatca 120

atcgatcgaa taatcgtttg cgggtatacc taagtacgaa gtaaaatatg agtgcacaaa 180

atagtgataa tgaccgttat aaaaaggaat attcgagaat aaggaaactg acgagtagat 240

atgacatacg gactcaatca aatgaatttg gtttgtcgga agatcaagtt gcggaattca 300

aagaagcatt tatgttgttc gataaagacc atgatggacg gattactgag gcagaactag 360

gagtggtcat gagatctttg ggtcaaaggc ctactgaaac tgatttgcga ggtatggtta 420

aagaagtgga taaagatggc aatggtagta ttgagtttga tgaattcctg ctaatgatgg 480

ctagaaaact aaaagcagca gatggcgagg aagaaatgca ccaagctttt aaagtatttg 540

acaaaaatgg cgatggattc ataacatttg atgaactcaa acgtgttatg tgcagtatcg 600

gagaaaggct cactgatgaa gaaattgagg acatgataaa agaagcagat ttaaatggtg 660

ataaaaaaat tgattataaa gaatttatta caataataag ttctaagaaa taaaacgaat 720

tacggacttg gatgtaccct catatggcat tcgttcctca tctgcatctg tgtcattggc 780

tgctaagact ttacttaata ataaaccttg atcttctcta ctagaataaa atagctctgg 840

atcctaaagt aaaatataca gtataatttt aaaatagtcg tatacaaatt tttttttaaa 900

tattgagtgt acctcatcca ttccagcaag tttc 934

<210> 58

<211> 372

<212> РНК

<213> Acyrthosiphon pisum

<400> 58

ucaaguugcg gaauucaaag aagcauuuau guuguucgau aaagaccaug auggacggau 60

uacugaggca gaacuaggag uggucaugag aucuuugggu caaaggccua cugaaacuga 120

uuugcgaggu augguuaaag aaguggauaa agauggcaau gguaguauug aguuugauga 180

auuccugcua augauggcua gaaaacuaaa agcagcagau ggcgaggaag aaaugcacca 240

agcuuuuaaa guauuugaca aaaauggcga uggauucaua acauuugaug aacucaaacg 300

uguuaugugc aguaucggag aaaggcucac ugaugaagaa auugaggaca ugauaaaaga 360

agcagauuua aa 372

<210> 59

<211> 2509

<212> ДНК

<213> Acyrthosiphon pisum

<400> 59

gatttttcgt ttaaataacc cccccgggtt tcggataaac tcggtgtgcg tgtggacgcc 60

gccgccgccg cgtgagcgtt atttcgctcg ctgtgattac gaacgctcgt gcagtcgtcg 120

tcatgcagca tctccgagac ccggcgaaag accatcagag tacgtgaaca ctgcacatca 180

cactccatcg cgatatactt atctgtagga cgacaccctt taccgaggac acaatgatat 240

acacgttata atactatcgt acatcgtata tattgtattc ttatcatcta atattatatt 300

atcacaatcg ttatattgta ttatagaatt attgtatatc gttttaattt gacacgatac 360

gacatttggt gttgagaatc gcgcagagag agaaagagag agagaaaaag agagaataga 420

tattttgatg taaataatta ttacaatata atattgtatt tgaaaataga aacagataat 480

tggtcgttga ggcagttctc acctttttaa gatatacata ttatattata tataaacagt 540

attttgtttt actcctttga gtgaacattt cgtttaacta taccacaatt tattaatatt 600

atataatatc tatcatggac ggtaaaatat catcggtatt cgaaaaatac ttttcacctt 660

caccgctggt gaaccaaata aggaattttg tcaatcggca aatagacgag caaacgccac 720

aaaacgtaag cacacaacca accgctgtag cgaaacttca cagtaataat gtagtgaacg 780

gcaccactcc gaaacccatc acaagcaacg aaaaaccaac ggaagtccaa gtacatccac 840

aacccactca gcctgccgat agaaacttag tgcacgttac taaagcacag atgaaagaat 900

ttcaagaagc atttaggtta tttgataaag acggtgacgg cagcatcact aaagaggaat 960

tgggtcgagt tatgcggagt cttggacagt ttgctagaga agaagaattg gagacaatgt 1020

tacaagaagt cgacatcgat ggcgatggag cgttcagttt tcaagagttt gtagaaattg 1080

tgtacaatat gggtggtaca gcagaaaaga cggcggacca agaggaaaaa gagctccgag 1140

acgcatttag ggtatttgac aaacataacc gaggatatat aagtgcgtcg gacttgagag 1200

ctgtccttca atgtttgggt gaagatttgt cagaagaaga aatcgaggat atgatcaagg 1260

aagtagacgt ggacggagat ggaagaatcg atttttacga atttgtgaat gcccttggag 1320

aaccaggaga tgattatgat gaaaacgacg aagatgaaga agatatttat ccccaattgg 1380

acattcaaac ataacttata aacaattaca cgttttagta tgatgcgata acaagttcag 1440

ttaaaattga attatcaaaa atgataacaa tattttttgt aaacttaggt taaaatgtta 1500

aaaacttacc cattttgtaa tttctatcag gaataaacac accaatatct gttttttttt 1560

tgccaactaa tgatctctaa taagtaaaac atattttact ttaatatcaa tgtactactg 1620

tagtattgtt aagtaattta tgtcattttc aatgtttaat gtataaatta atcatttaat 1680

ggtacaatca gtaattcacc ttaagaccca attatttatt aaaaacatat tatatcatta 1740

atttacttaa tgtatacatt ttagtcaaaa aacattcagt tatatgttat aagtcgttat 1800

aactatttat ttaagaaact ataaaaaatt attatttatt ataatagttt acgtatctat 1860

ttacttccat ggaaggtatt tataaataga aaatgttaag gtaacttaat taaaacaata 1920

attatgaaca agtattttta ctttaaaaaa attacataat tatattgtca gtattctttc 1980

aaatacaatt aattcaaatt tgtgaaattg tccattcctc ctttatgctt tgtgaactaa 2040

atttaaatac attaagaacc agagtacaat taaaggaaat agtcagctgc gtgttttttt 2100

gttggcattc ctcggttttc ttgtggtgct gcctcaaata ttgtaaaatc tctttgaagt 2160

gtttcactga gttccaatat tgccgcaacg ttaccacatc tattatttac aattagtatt 2220

aacaattaaa taacagcatt aataaataaa tagtataatg taatttttag agtagtattt 2280

accgataaca atagttgggt gctgaccaaa cagtaagcac ggtttcatca aaatgccatt 2340

tatatccttc catgactagt tgatgagctc gacaaataat atctatatca tttgtagtat 2400

taaactggga gacaacatca gaaccaaata ggtatccagc accccgagga ctcacacccc 2460

atccctgagt atctaaaata attgtgtatg ttaaaaatct atttttttt 2509

<210> 60

<211> 294

<212> РНК

<213> Acyrthosiphon pisum

<400> 60

acagaugaaa gaauuucaag aagcauuuag guuauuugau aaagacggug acggcagcau 60

cacuaaagag gaauuggguc gaguuaugcg gagucuugga caguuugcua gagaagaaga 120

auuggagaca auguuacaag aagucgacau cgauggcgau ggagcguuca guuuucaaga 180

guuuguagaa auuguguaca auaugggugg uacagcagaa aagacggcgg accaagagga 240

aaaagagcuc cgagacgcau uuaggguauu ugacaaacau aaccgaggau auau 294

<210> 61

<211> 477

<212> ДНК

<213> Pediculus humanus

<400> 61

atggccgacg aaacgacgac ggaattaccg gaggaaaatc tttcggttga aaaaatcgca 60

gaattccgcg aagctttcaa ccttttcgac aaagatggcg acggtaacat aacgaccaaa 120

gaattgggta cttgcatgag gtctctcggg cagaatccga cggaagcgga aatcgcggag 180

ctgatttgcg aagtagacgt agagggaaca ggtttaatcg atttcacatc gttcgttttg 240

ataatggcta aaaagataaa agacgtcgac aacgaggaag aactcagaga agcttttaga 300

atattcgata aggaaggtaa cggattcata accgcatccg agctcaggca cataatgatg 360

aacttgggtg aaaaattaac ggaagaagaa tgcgacgaaa tgattaggga agcggatgtc 420

atgggtgacg gaaatatcaa ttacgaagaa ttcgtcacca tgatgatgtc aaagtga 477

<210> 62

<211> 379

<212> РНК

<213> Pediculus humanus

<400> 62

aaaaaucgca gaauuccgcg aagcuuucaa ccuuuucgac aaagauggcg acgguaacau 60

aacgaccaaa gaauugggua cuugcaugag gucucucggg cagaauccga cggaagcgga 120

aaucgcggag cugauuugcg aaguagacgu agagggaaca gguuuaaucg auuucacauc 180

guucguuuug auaauggcua aaaagauaaa agacgucgac aacgaggaag aacucagaga 240

agcuuuuaga auauucgaua aggaagguaa cggauucaua accgcauccg agcucaggca 300

cauaaugaug aacuugggug aaaaauuaac ggaagaagaa ugcgacgaaa ugauuaggga 360

agcggauguc augggugac 379

<210> 63

<211> 537

<212> ДНК

<213> Pediculus humanus

<400> 63

atggatgcta ggaatgaagt ttacaacacc gaatataatc gtttaagaaa attgacgtgt 60

agaacggaaa ttaaattatc ttgctctgaa tatggtctta cggaggaaca agtcgctgaa 120

tttaaagaag cttttatgct ttttgacaaa gatgaagatg gacaaataac aatggccgaa 180

ttaggagtcg ttatgagatc tttgggacaa cgtccgacag aaacggaatt aagagacatg 240

gttaaagagg ttgatcaaga tggaaatggt acaatcgaat tcaatgaatt tttacaaatg 300

atggcaaaaa aaatgaaagg agctgatggt gaagaagaac ttcgagaagc attcagggtg 360

tttgataaaa ataacgatgg actcatttca tccattgaac ttcgacatgt catgacaaat 420

ttaggtgaga aactttcaga cgaagaagtt gatgatatga taaaagaagc agatttagat 480

ggagatggta tggttaacta caatgaattt gtaacgatat taacatcaaa aaattaa 537

<210> 64

<211> 417

<212> РНК

<213> Pediculus humanus

<400> 64

acaagucgcu gaauuuaaag aagcuuuuau gcuuuuugac aaagaugaag auggacaaau 60

aacaauggcc gaauuaggag ucguuaugag aucuuuggga caacguccga cagaaacgga 120

auuaagagac augguuaaag agguugauca agauggaaau gguacaaucg aauucaauga 180

auuuuuacaa augauggcaa aaaaaaugaa aggagcugau ggugaagaag aacuucgaga 240

agcauucagg guguuugaua aaaauaacga uggacucauu ucauccauug aacuucgaca 300

ugucaugaca aauuuaggug agaaacuuuc agacgaagaa guugaugaua ugauaaaaga 360

agcagauuua gauggagaug guaugguuaa cuacaaugaa uuuguaacga uauuaac 417

<210> 65

<211> 648

<212> ДНК

<213> Pediculus humanus

<400> 65

atgactacga aacataatat atctggaaga atacgggacg aaccaggggg acaaagggaa 60

aaaaatggaa atgtaaccgg tcgaacaata acatatccaa caacagggaa caaaagaaat 120

attgatacaa tgacgaaaaa taacatatca aaatcgcaaa tgaaggaatt tcgagaagct 180

tttcgacttt ttgacaaaga tggtgatggt agtataactc aagaagaact tggaagagtt 240

atgagatctt taggacaatt tgccagagaa gaagaactac aagaaatgct taaggaagtt 300

gatatagatg gagatggaaa ttttagcttt gaagaatttg ttgaaatcgt atcaaatatg 360

ggaggtgcag caactgaaaa aacagctgat gaagaagaga aagaacttag agatgctttt 420

agagtatttg ataaacataa tcgaggtttt ataagtgctt ctgatcttcg agctgttttg 480

caatgtctgg gtgaagaatt atcagaagaa gaaaaaatga taagagaagt tgatgtggat 540

ggagatggta gaattgattt tttcgaattt gttcgagctt tgggtacaca ctacaggcaa 600

aatttctttt tcaggtttct atccatttat attattagca cagtttga 648

<210> 66

<211> 449

<212> РНК

<213> Pediculus humanus

<400> 66

aucgcaaaug aaggaauuuc gagaagcuuu ucgacuuuuu gacaaagaug gugaugguag 60

uauaacucaa gaagaacuug gaagaguuau gagaucuuua ggacaauuug ccagagaaga 120

agaacuacaa gaaaugcuua aggaaguuga uauagaugga gauggaaauu uuagcuuuga 180

agaauuuguu gaaaucguau caaauauggg aggugcagca acugaaaaaa cagcugauga 240

agaagagaaa gaacuuagag augcuuuuag aguauuugau aaacauaauc gagguuuuau 300

aagugcuucu gaucuucgag cuguuuugca augucugggu gaagaauuau cagaagaaga 360

aaaaaugaua agagaaguug auguggaugg agaugguaga auugauuuuu ucgaauuugu 420

ucgagcuuug gguacacacu acaggcaaa 449

<210> 67

<211> 648

<212> ДНК

<213> Pediculus humanus

<400> 67

atgatgaaaa acaaaactga cagcagtctc ggagctgagc attcagattt gaaacattcg 60

acgagtgaaa ccgaagaact ccaatcctcg gaactcgaag tgataaaaga tgaagagcct 120

caaatagatc tgagacagtt tctgacgaaa gaacaagtgc aagaattcaa aagaattttc 180

caggcttacg atgtcaacaa cgaagataaa atcccggtca aagccatcgg aatcattttg 240

agaaacatgg gattgaatcc gtccaaggcg attctcaaga gaatgacaaa ggaaatcgat 300

ccggataaaa acggttacgt ggatttcgaa atgtttttac atcccatggc acgaatgata 360

cacgaagtcc cggaaaatca cgaggacata atcgcagcat tcaaagtttt cgacgaagac 420

gacgaaggtt tcgtatccgt taaagctttg accgaatacc tcacgaacct gggcgaagat 480

ttggaagatt tcgaaattga taatttgatt aaaatggcgg atcccaaagg cacgggccga 540

gtctactacg aaggattcgt cgagaaaatt ttcggaatcg taagaaacgg gaaaaaaaag 600

aaaaatctca aagggaaaaa gggaaaaaaa cgaaaaaaaa atgaatga 648

<210> 68

<211> 451

<212> РНК

<213> Pediculus humanus

<400> 68

ucaaauagau cugagacagu uucugacgaa agaacaagug caagaauuca aaagaauuuu 60

ccaggcuuac gaugucaaca acgaagauaa aaucccgguc aaagccaucg gaaucauuuu 120

gagaaacaug ggauugaauc cguccaaggc gauucucaag agaaugacaa aggaaaucga 180

uccggauaaa aacgguuacg uggauuucga aauguuuuua caucccaugg cacgaaugau 240

acacgaaguc ccggaaaauc acgaggacau aaucgcagca uucaaaguuu ucgacgaaga 300

cgacgaaggu uucguauccg uuaaagcuuu gaccgaauac cucacgaacc ugggcgaaga 360

uuuggaagau uucgaaauug auaauuugau uaaaauggcg gaucccaaag gcacgggccg 420

agucuacuac gaaggauucg ucgagaaaau u 451

<210> 69

<211> 1546

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 69

guuuagccca uuuucgcgcu gugucugucg gcgacugcgg aaguacugag cuagcugagu 60

cguggugcuu agaaggcagu ggcagugagu ggcaucagcg guaauaagug agggacaaca 120

gccggagagu cgugucgguu gguaggucgg uucguugccg auuaaugccc cacaugugag 180

uuacgugcgg ugcuuguucc gcugugcauu ggacguuaca uacagagagu cagguguagu 240

uuauuuuaga cgaaaaacua ccagcacuac cugauacagc gacccaacgu agagagggaa 300

agagaaagag cuguuguuuc gcuagguuag uucugaacaa uuggauugau ucgcaaaugu 360

acgcuuguac ggcuaacggu ugaacggacu gugcaaacug cggauagugc gugaacuagc 420

agacaacaua uccaauaacu aacuacacgg uuauuauuga uacaaacacc uaguucagac 480

agacaauuuc gguuugcuuu guuggcacua uaaggaguaa gugauauugu uuuuuguuua 540

ucagucggcc uaguauuguc ggugcacuua cggauaacag gagaggcagu acaaaggcaa 600

cucgauucac uaucguucac gggcgcuaau acagcgaaau auuaauaggc aaagcaagca 660

agccagccgg ccaagcccaa accccgggcg aaacgcagau accaacagcg cugaagugcg 720

uggcaaacga caacgggaca guagggcaua agcuagacag cauauagcuu uucuaaccau 780

ggcugaucag cuaacugagg aacagaucgc cgaguucaaa gaggcguuua gccuguuuga 840

caaggacgga gauggcacga ucacgacaaa ggagcucggu acgguaaugc gaucucucgg 900

ccagaacccc acugaggcug aacugcagga caugaucaac gaggucgacg ccgacggcuc 960

cggaacgaua gauuucccug aguuccucac aaugauggca agaaagauga aggacaccga 1020

cucggaggag gagauccgag aggcguuccg cguauucgac aaggauggca acgguuucau 1080

uucggcggcc gagcucaggc acguuaugac caaccuuggc gagaagcuua cggacgagga 1140

gguagaugag augauucggg aggcagauau ugacggugau ggucagguca acuacgagga 1200

guucgucacc augaugacgu ccaaguaaau auaugauaau guuggcuguc ucguguaaug 1260

ucgugagaaa gaaagcgcgc gcgaaagaaa gagagaaagg aauagaaaac uauaaauagc 1320

uuguuguuaa agcaacgcaa caacaagcug uaagcaacaa acaauauuua cgaaguauac 1380

gauaaugaaa gucgacaggg aagcaagcac ggauauauau gaaaacuaag cgaaaugacg 1440

ucgucaucau caccagcagc agcagcagca gcagcagcag cagcagcagc accaccacca 1500

ccaccaucac gaccaccacc accaccacca ccaucacgac caccac 1546

<210> 70

<211> 1136

<212> РНК

<213> Varroa destructor

<400> 70

guucggcucg gggacuagcu gaucggucgg uguguauugu uggcuauugg caaagaccgu 60

uguugagugg gcucgcugca cugagcguuu aaaucuggug aaaucguugg caauggcgga 120

ucagcugacc gaggagcaaa ucgccgaauu caaggaggcu uucagccugu ucgauaaaga 180

cggugauggc acaauuacga ccaaggaacu agggaccguc augcgguccc ucggccagaa 240

cccuacugag gcugagcuuc aagacaugau caacgagguc gacgcugacg guaacggcac 300

uauugacuuu ccagaguuuc ucacgaugau ggcgcguaaa augaaggaca ccgacuccga 360

ggaggagauc cgggaagcuu uuaggguuuu ugauaaagac ggaaauggcu ucauuucggc 420

ugcagagcug aggcacguaa ugaccaaccu uggcgaaaag cucacggacg aggaagugga 480

cgagaugauc cgcgaggcgg auaucgacgg cgacggacag gucaacuacg aggaguucgu 540

cacgaugaug acaucaaaau gaagggcuca cuauugcgcg ggaaaagcag cccaacaaag 600

aaaccuagag ugcgaaagcg agaacguuaa acacgaugau augcuaauga uaauacauac 660

gacuagagga cagaaagaca gacagacaga cugagcagac gaacgggcaa guugaagaaa 720

agccgaguug aacuggcuaa ccguugggua cucauucaua uucgauaguu acagacaaca 780

acaugaaaaa cgacagcaac aauccgcaac aaacacacgg agauugcaca caaugagggu 840

aaacugaaca uggugcagcg gaaguuggau ggcagcggua cacagugcug cuacugcugc 900

ugcugcaaau gcuaacacuc aauaaugaua auaauaauua uaauuauaga aauaugauua 960

uguuguccaa aagagaaaca aacaacacaa acaaagcuau uaaaaaucug aauaaaagcu 1020

aagaagaaau caaguagcag ucgacauggg gaguggcaaa cgauaagagu ccacagaaaa 1080

cugaagcggc cgaaagaaaa cacgaggcaa aaggcaaugu auucauuaag acgagg 1136

<210> 71

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 71

guuuagccca uuuucgcgcu gugucugucg gcgacugcgg aaguacugag cuagcugagu 60

cguggugcuu agaaggcagu ggcagugagu ggcaucagcg guaauaagug agggacaaca 120

gccggagagu cgugucgguu gguaggucgg 150

<210> 72

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 72

uucguugccg auuaaugccc cacaugugag uuacgugcgg ugcuuguucc gcugugcauu 60

ggacguuaca uacagagagu cagguguagu uuauuuuaga cgaaaaacua ccagcacuac 120

cugauacagc gacccaacgu agagagggaa 150

<210> 73

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 73

agagaaagag cuguuguuuc gcuagguuag uucugaacaa uuggauugau ucgcaaaugu 60

acgcuuguac ggcuaacggu ugaacggacu gugcaaacug cggauagugc gugaacuagc 120

agacaacaua uccaauaacu aacuacacgg 150

<210> 74

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 74

uuauuauuga uacaaacacc uaguucagac agacaauuuc gguuugcuuu guuggcacua 60

uaaggaguaa gugauauugu uuuuuguuua ucagucggcc uaguauuguc ggugcacuua 120

cggauaacag gagaggcagu acaaaggcaa 150

<210> 75

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 75

cucgauucac uaucguucac gggcgcuaau acagcgaaau auuaauaggc aaagcaagca 60

agccagccgg ccaagcccaa accccgggcg aaacgcagau accaacagcg cugaagugcg 120

uggcaaacga caacgggaca guagggcaua 150

<210> 76

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 76

agcuagacag cauauagcuu uucuaaccau ggcugaucag cuaacugagg aacagaucgc 60

cgaguucaaa gaggcguuua gccuguuuga caaggacgga gauggcacga ucacgacaaa 120

ggagcucggu acgguaaugc gaucucucgg 150

<210> 77

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 77

ccagaacccc acugaggcug aacugcagga caugaucaac gaggucgacg ccgacggcuc 60

cggaacgaua gauuucccug aguuccucac aaugauggca agaaagauga aggacaccga 120

cucggaggag gagauccgag aggcguuccg 150

<210> 78

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 78

cguauucgac aaggauggca acgguuucau uucggcggcc gagcucaggc acguuaugac 60

caaccuuggc gagaagcuua cggacgagga gguagaugag augauucggg aggcagauau 120

ugacggugau ggucagguca acuacgagga 150

<210> 79

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 79

guucgucacc augaugacgu ccaaguaaau auaugauaau guuggcuguc ucguguaaug 60

ucgugagaaa gaaagcgcgc gcgaaagaaa gagagaaagg aauagaaaac uauaaauagc 120

uuguuguuaa agcaacgcaa caacaagcug 150

<210> 80

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 80

uaagcaacaa acaauauuua cgaaguauac gauaaugaaa gucgacaggg aagcaagcac 60

ggauauauau gaaaacuaag cgaaaugacg ucgucaucau caccagcagc agcagcagca 120

gcagcagcag cagcagcagc accaccacca 150

<210> 81

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 81

guucggcucg gggacuagcu gaucggucgg uguguauugu uggcuauugg caaagaccgu 60

uguugagugg gcucgcugca cugagcguuu aaaucuggug aaaucguugg caauggcgga 120

ucagcugacc gaggagcaaa ucgccgaauu 150

<210> 82

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 82

caaggaggcu uucagccugu ucgauaaaga cggugauggc acaauuacga ccaaggaacu 60

agggaccguc augcgguccc ucggccagaa cccuacugag gcugagcuuc aagacaugau 120

caacgagguc gacgcugacg guaacggcac 150

<210> 83

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 83

uauugacuuu ccagaguuuc ucacgaugau ggcgcguaaa augaaggaca ccgacuccga 60

ggaggagauc cgggaagcuu uuaggguuuu ugauaaagac ggaaauggcu ucauuucggc 120

ugcagagcug aggcacguaa ugaccaaccu 150

<210> 84

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 84

uggcgaaaag cucacggacg aggaagugga cgagaugauc cgcgaggcgg auaucgacgg 60

cgacggacag gucaacuacg aggaguucgu cacgaugaug acaucaaaau gaagggcuca 120

cuauugcgcg ggaaaagcag cccaacaaag 150

<210> 85

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 85

aaaccuagag ugcgaaagcg agaacguuaa acacgaugau augcuaauga uaauacauac 60

gacuagagga cagaaagaca gacagacaga cugagcagac gaacgggcaa guugaagaaa 120

agccgaguug aacuggcuaa ccguugggua 150

<210> 86

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 86

cucauucaua uucgauaguu acagacaaca acaugaaaaa cgacagcaac aauccgcaac 60

aaacacacgg agauugcaca caaugagggu aaacugaaca uggugcagcg gaaguuggau 120

ggcagcggua cacagugcug cuacugcugc 150

<210> 87

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 87

ugcugcaaau gcuaacacuc aauaaugaua auaauaauua uaauuauaga aauaugauua 60

uguuguccaa aagagaaaca aacaacacaa acaaagcuau uaaaaaucug aauaaaagcu 120

aagaagaaau caaguagcag ucgacauggg 150

<210> 88

<211> 156

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 88

ggcaacgguu ucauuucggc ggccgagcuc aggcacguua ugaccaaccu uggcgagaag 60

cuuacggacg aggagguaga ugagaugauu cgggaggcag auauugacgg ugauggucag 120

gucaacuacg aggaguucgu caccaugaug acgucc 156

<210> 89

<211> 257

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 89

ggcggaucag cugaccgagg agcaaaucgc cgaauucaag gaggcuuuca gccuguucga 60

uaaagacggu gauggcacaa uuacgaccaa ggaacuaggg accgucaugc ggucccucgg 120

ccagaacccu acugaggcug agcuucaaga caugaucaac gaggucgacg cugacgguaa 180

cggcacuauu gacuuuccag aguuucucac gaugauggcg cguaaaauga aggacaccga 240

cuccgaggag gagaucc 257

<210> 90

<211> 420

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 90

ggaacagauc gccgaguuca aagaggcguu uagccuguuu gacaaggacg gagauggcac 60

gaucacgaca aaggagcucg guacgguaau gcgaucucuc ggccagaacc cacugaggcu 120

gaacugcagg acaugaucaa cgaggucgac gccgacggcu ccggaacgau agauuucccu 180

gaguuccuca caaugaugca agaaagauga aggacaccga cucggaggag gagaucgaga 240

ggcguuccgc guauucgaca aggaugcaac gguuucauuu cggcggccga gcucaggcac 300

guuaugacca accuuggcga gaagcuuacg gacgaggagg uagaugagau gauucgggag 360

gcagauauug acggugaugg ucaggucaac uacgaggagu ucgucaccau gaugacgucc 420

<210> 91

<211> 372

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 91

ggaacagauc gccgaguuca aagaggcguu uagccuguuu gacaaggacg gagauggcac 60

gaucacgaca aaggagcucg guacgguaau gcgaucucuc ggccagaacc cacugaggcu 120

gaacugcagg acaugaucaa cgaggucgac gccgacggcu ccggaacgau agauuucccu 180

gaguuccuca caaugaugca agaaagauga aggacaccga cucggaggag gagaucgaga 240

ggcguuccgc guauucgaca aggaugcaac gguuucauuu cggcggccga gcucaggcac 300

guuaugacca accuuggcga gaagcuuacg gacgaggagg uagaugagau gauucgggag 360

gcagauauug ac 372

<210> 92

<211> 477

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 92

ggcggaucag cugaccgagg agcaaaucgc cgaauucaag gaggcuuuca gccuguucga 60

uaaagacggu gauggcacaa uuacgaccaa ggaacuaggg accgucaugc ggucccucgg 120

ccagaacccu acugaggcug agcuucaaga caugaucaac gaggucgacg cugacgguaa 180

cggcacuauu gacuuuccag aguuucucac gaugauggcg cguaaaauga aggacaccga 240

cuccgaggag ggauccggga agcuuuuagg guuuuugaua aagacggaaa uggcuucauu 300

ucggcugcag agcugaggca cguaaugacc aaccuuggcg aaaagcucac ggacgaggaa 360

guggacgaga ugauccgcga ggcggauauc gacggcgacg gacaggucaa cuacgaggag 420

uucgucacga ugaugacauc aaaaugaagg gcucacuauu gcgcgggaaa agcagcc 477

<210> 93

<211> 373

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 93

ggagatcgcc gagttcaaag aggcgtttag cctgtttgac aaggacggag atggcacgat 60

cacgacaaag gagctcggta cggtaatgcg atctctcggc cagaacccca ctgaggctga 120

actgcaggac atgatcaacg aggtcgacgc cgacggctcc ggaacgatag atttccctga 180

gttcctcaca atgatggcaa gaaagatgaa ggacaccgac tcggaggagg agatccgaga 240

ggcgttccgc gtattcgaca aggatggcaa cggtttcatt tcggcggccg agctcaggca 300

cgttatgacc aaccttggcg agaagcttac ggacgaggag gtagatgaga tgattcggga 360

ggcagatatt gac 373

<210> 94

<211> 376

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая последовательность

<400> 94

ggaacagauc gccgaguuca aagaggcguu uagccuguuu gacaaggacg gagauggcac 60

gaucacgaca aaggagcucg guacgguaau gcgaucucuc ggccagaacc ccacugaggc 120

ugaacugcag gacaugauca acgaggucga cgccgacggc uccggaacga uagauuuccc 180

ugaguuccuc acaaugaugg caagaaagau gaaggacacc gacucggagg aggagauccg 240

agaggcguuc cgcguauucg acaaggaugg caacgguuuc auuucggcgg ccgagcucag 300

gcacguuaug accaaccuug gcgagaagcu uacggacgag gagguagaug agaugauucg 360

ggaggcagau auugac 376

<---

Изобретение относится к области биохимии, в частности к композиции селективного инсектицида для борьбы с клещами Varroa destructor. Также раскрыта конструкция нуклеиновой кислоты для борьбы с Varroa destructor, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, которая по существу идентична или по существу комплементарна участку целевой последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, или РНК, транскрибируемой с него. Изобретение также относится к способу предоставления композиции медоносной пчеле, к способу снижения паразитирования Varroa destructor на медоносной пчеле, к способу снижения нагрузки Varroa destructor медоносной пчелы в улье медоносных пчел, а также к способу селективной обработки вида членистоногих от Varroa destructor. Изобретение позволяет эффективно осуществлять борьбу с Varroa destructor. 7 н. и 29 з.п. ф-лы, 11 ил., 7 табл., 13 пр.

1. Композиция селективного инсектицида для борьбы с клещами Varroa destructor, содержащая эффективное количество молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность, которая по существу комплементарна или по существу идентична участку целевой последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, или РНК, транскрибируемой с него, где молекула нуклеиновой кислоты обладает по меньшей мере 90% идентичностью с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94, и где указанная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 19 или более последовательных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма.

2. Композиция для борьбы с Varroa destructor, содержащая пчелиный корм и эффективное количество молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность, которая по существу комплементарна или по существу идентична участку целевой последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, или РНК, транскрибируемой с него, где молекула нуклеиновой кислоты обладает по меньшей мере 90% идентичностью с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94, и где указанная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 19 или более последовательных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма.

3. Конструкция нуклеиновой кислоты для борьбы с Varroa destructor, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, которая по существу идентична или по существу комплементарна участку целевой последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, или РНК, транскрибируемой с него, функционально связанной с последовательностью промотора, функционирующей в клетке-хозяине, и способна продуцировать дцРНК при введении в указанную клетку-хозяина, где молекула нуклеиновой кислоты обладает по меньшей мере 90% идентичностью с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94, и где указанная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 19 или более последовательных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма.

4. Способ предоставления композиции медоносной пчеле, включающий предоставление пчеле эффективного количества композиции, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, которая по существу идентична или по существу комплементарна участку целевой последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, или РНК, транскрибируемой с него, где молекула нуклеиновой кислоты обладает по меньшей мере 90% идентичностью с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94, и где указанная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 19 или более последовательных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма, в результате чего указанная нуклеиновая кислота присутствует в ткани медоносной пчелы.

5. Способ снижения паразитирования Varroa destructor на медоносной пчеле, включающий предоставление пчеле эффективного количества композиции молекулы нуклеиновой кислоты, при этом указанная молекула нуклеиновой кислоты по существу идентична или по существу комплементарна участку целевой последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, или РНК, транскрибируемой с него, где молекула нуклеиновой кислоты обладает по меньшей мере 90% идентичностью с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94, и где указанная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 19 или более последовательных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма, тем самым снижая паразитирование Varroa destructor на указанной пчеле.

6. Способ снижения нагрузки Varroa destructor медоносной пчелы в улье медоносных пчел, включающий предоставление указанной медоносной пчеле эффективного количества молекулы нуклеиновой кислоты, которая по существу идентична или по существу комплементарна участку целевой последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, или РНК, транскрибируемой с него, где молекула нуклеиновой кислоты обладает по меньшей мере 90% идентичностью с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94, и где указанная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 19 или более последовательных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма, в результате чего снижается паразитарная нагрузка на указанную медоносную пчелу.

7. Способ селективной обработки вида членистоногих от Varroa destructor, включающий доставку эффективного количества молекулы нуклеиновой кислоты, которая по существу идентична или по существу комплементарна участку целевой последовательности гена кальмодулина Varroa destructor, или РНК, транскрибируемой с него, в вид членистоногих, где молекула нуклеиновой кислоты обладает по меньшей мере 90% идентичностью с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 90-92 и 94, и где указанная молекула нуклеиновой кислоты не содержит последовательность из 19 или более последовательных нуклеотидов, которые на 100% идентичны или комплементарны последовательности гена нецелевого организма.

8. Композиция по любому из пп. 1 и 2, или способ по любому из пп. 4-7, или конструкция по п. 3, где из указанной молекулы нуклеиновой кислоты удален по меньшей мере один нуклеотид по сравнению с указанной целевой последовательностью гена кальмодулина Varroa destructor.

9. Композиция по любому из пп. 1 и 2, или способ по любому из пп. 4-7, или конструкция по п. 3, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит по меньшей мере одну замену нуклеотида по сравнению с указанной целевой последовательностью гена кальмодулина.

10. Композиция по любому из пп. 1 и 2, или способ по любому из пп. 4-7, или конструкция по п. 3, где указанная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой дцРНК.

11. Композиция или способ по п. 10, где указанная дцРНК представляет собой миРНК.

12. Композиция или способ по п. 10, где указанная дцРНК содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 90-92 или 94.

13. Композиция селективного инсектицида по п. 1, дополнительно содержащая вспомогательное вещество.

14. Композиция селективного инсектицида по п. 13, отличающаяся тем, что указанная композиция поглощается клещом или абсорбируется клещом.

15. Композиция селективного инсектицида по п. 13, отличающаяся тем, что указанное вспомогательное вещество выбрано из группы, состоящей из белка, пыльцы, углевода, полимера, жидкого растворителя, сахарного сиропа, твердого сахара и полутвердого корма.

16. Композиция селективного инсектицида по п. 15, отличающаяся тем, что указанный жидкий растворитель выбран из группы, состоящей из раствора сахарозы и раствора кукурузного сиропа.

17. Композиция селективного инсектицида по п. 15, отличающаяся тем, что указанный белок выбран из группы, состоящей из пыльцы и соевого белка.

18. Композиция селективного инсектицида по п. 13, отличающаяся тем, что указанное вспомогательное вещество выбрано из твердого сахара, заменителя сахара или сахарной добавки.

19. Композиция селективного инсектицида по п. 18, отличающаяся тем, что указанный твердый сахар содержит микрочастицы сахара, пропитанные указанной молекулой нуклеиновой кислоты.

20. Композиция селективного инсектицида по п. 1, отличающаяся тем, что указанная композиция дополнительно содержит одну или более молекул нуклеиновой кислоты.

21. Композиция селективного инсектицида по п. 20, отличающаяся тем, что указанная одна или более молекул нуклеиновой кислоты содержит вторую последовательность нуклеиновой кислоты, комплементарную второму участку целевой последовательности гена кальмодулина.

22. Композиция селективного инсектицида по п. 21, отличающаяся тем, что указанная вторая молекула нуклеиновой кислоты содержит один или более фрагментов нуклеиновой кислоты.

23. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что указанный пчелиный корм содержит продукт питания пчелы, выбранный из группы, состоящей из кукурузного сиропа, заменителя пыльцы, пыльцы, лепешки из пыльцы и помадки.

24. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 3, дополнительно содержащая по меньшей мере один регуляторный элемент, выбранный из группы, состоящей из лидерных последовательностей трансляции, интронов, энхансеров, структур типа «стебель-петля», связывающих репрессор последовательностей, терминирующих последовательностей, последовательностей паузы и последовательностей узнавания полиаденилирования.

25. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из клетки бактерии и клетки дрожжей.

26. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанная медоносная пчела представляет собой пчелу из колонии и указанное кормление уменьшает чувствительность указанной колонии пчел к Varroa destructor.

27. Способ по п. 4 или 5, отличающийся тем, что указанная медоносная пчела представляет собой пчелу-сборщицу или домашнюю пчелу.

28. Способ по п. 5, отличающийся тем, что указанная медоносная пчела представляет собой пчелу из колонии и указанное кормление снижает паразитирование Varroa destructor на указанной колонии пчел.

29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что указанное cнижение уровня паразитирования на указанной колонии пчел включает выживаемость менее чем 25%, 15%, 10% или 5% указанного Varroa destructor.

30. Способ по п. 6, отличающийся тем, что исходная нагрузка Varroa destructor указанного улья медоносных пчел составляет по меньшей мере 1, 2, 3, 5, 10 или более Varroa destructor на 100 пчел.

31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что указанная нагрузка Varroa destructor снижается до менее чем 2, до менее чем 3, до менее чем 5 или до менее 10 Varroa destructor на 100 пчел.

32. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанная обработка снижает паразитарную нагрузку указанного вида членистоногих, снижает смертность указанного вида членистоногих или предотвращает паразитирование на указанном виде членистоногих.

33. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанный вид членистоногих выбран из группы, состоящей из Apis mellifera, Apis cerana, Trigona minima, Halictidae, Bombus sp., Ichneumonoidea (паразитических ос), блох, мух, вшей, зудней и клещей.

34. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанный вид членистоногих представляет собой образующий колонии вид.

35. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанный вид членистоногих представляет собой Apis mellifera.

36. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанная доставка включает способ, выбранный из группы, состоящей из доставки через кормушку, распыления на рамки улья и контактирования с применением находящегося внутри улья устройства, пропитанного указанной композицией.