КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ УМЕНЬШЕНИЯ ПОПУЛЯЦИИ Bilophila wadsworthia ИЛИ ИНГИБИРОВАНИЯ ЕЕ РОСТА Российский патент 2021 года по МПК A61K35/747 C12N1/20 A61P3/00 

БЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к композициям и способам уменьшения популяции Bilophita wadsworthia или ингибирования ее роста.

Область техники

За последние три десятилетия распространенность ожирения, а также связанные с ним метаболические осложнения, такие как диабет 2 типа и несвязанные с ожирением заболевания печени, значительно возросли. Эпидемический рост был связан с изменениями в выборе образа жизни, в частности, с увеличением потребления «рациона западного типа», богатого насыщенными жирами и сахаром.

Тем не менее, в рамках пересмотра рациона и метаболического здоровья, в большое количество исследований также вовлечена кишечная микробиота при модулировании этих заболеваний.

Таким образом, то наблюдение, что стерильные мыши защищены от ожирения, вызванного рационом питания с высоким содержанием насыщенных жиров (HFD), а также продемонстрированное улучшение гликемического контроля и фенотипа печени по сравнению с колонизированными аналогами, подчеркивает роль кишечной микробиоты в опосредовании воздействия рациона питания на метаболический статус хозяина. Важность этих исходных данных подтверждается эпидемиологическими исследованиями, показывающими, что ожирение связано с изменениями микробиоты кишечника, и фенотип микробиоты человека с ожирением может быть передан мышам путем трансплантации микробиоты ожирения стерильным мышам.

Кроме того, было показано, что различные рационы быстро и воспроизводимо изменяют как состав, так и функцию микробиоты. Определенные группы или штаммы бактерий были ассоциированы с различными типами рационов питания. Например, Bilophila wadsworthia ассоциируется с животным рационом питания, а также с рационом, богатым жирами.

Таким образом, изменения в микробиоте кишечника, по–видимому, являются признаком метаболического нарушения, и, хотя причинно–следственные связи, лежащие в основе этого процесса, являются сложными и не до конца понятны, предпринимались попытки перепрограммировать состав и функцию микробиоты с целью улучшения состояния здоровья индивидуумов.

В связи с этим Odamaki et al. (2016) Beneficial Microbes 7: 473–484 сообщают, что потребление йогурта, дополненного Bifidobacterium longum, сыграло свою роль в поддержании нормального состава микробиоты, в частности, путем предотвращения увеличения кишечной популяции Bilophila wadsworthia, у индивидуумов, потреблявших мясной (т.е. животный) рацион питания. Однако эти авторы не показывают, что контроль популяции Bilophila wadsworthia с помощью Bifidobacterium longum связан с пользой для здоровья индивидуумов. Кроме того, всегда существует необходимость в альтернативных агентах для контроля бактериальных популяций.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение следует из неожиданного открытия, что бактерии Lactobacillus обладают способностью уменьшать или ингибировать Bilophila wadsworthia in vivo, тем самым приводя к улучшению связанных метаболических нарушений и дисфункций хозяина, включая, но не ограничиваясь этим, желчную кислоту.

Соответственно, настоящее изобретение относится к применению, в частности, к нетерапевтическому применению, по меньшей мере, одной бактерии Lactobacillus или композиции, содержащей ее или кондиционированной таким образом, для уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста у индивидуума. Кроме того, настоящее изобретение раскрывает применение, в частности нетерапевтическое применение, по меньшей мере, одной бактерии Lactobacillus для снижения желчных кислот у индивидуума.

Настоящее изобретение также относится к способу, в частности, к нетерапевтическому способу уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста у индивидуума и/или к способу снижения желчных кислот у индивидуума, включающему питание, обеспечение или введение индивидуальной композиции, как определено выше, в частности, в эффективном количестве.

Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей или кондиционированной, по меньшей мере, одной бактерией Lactobacillus для применения в способе уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста у индивидуума и/или для уменьшения желчных кислот у индивидуума. Кроме того, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей или кондиционированной, по меньшей мере, одной бактерией Lactobacillus, для применения в лечении, предотвращении или облегчении расстройства, связанного с Bilophila wadsworthia или вызванного Bilophila wadsworthia.

Настоящее изобретение также относится к применению, по меньшей мере, одной бактерии Lactobacillus или композиции, содержащей ее или кондиционированной таким образом, для производства пищевого продукта, предназначенного для уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста у индивидуума, и/или для снижения желчных кислот у индивидуума. Кроме того, настоящее изобретение относится к применению, по меньшей мере, одной бактерии Lactobacillus или композиции, содержащей ее или кондиционированной таким образом, для производства пищевого продукта для применения при лечении, для предотвращения или для облегчения расстройства, связанного с Bilophila wadsworthia или вызванного Bilophila wadsworthia у индивидуума.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Как подразумевается в настоящем описании, «по меньшей мере, одна бактерия Lactobacillus или композиция, содержащая ее, должна означать композицию, содержащую, по меньшей мере, одну бактерию Lactobacillus».

Как подразумевается в настоящем описании, композиция, «кондиционированная таким образом», означает, что эта композиция содержит выделения из молочнокислых бактерий согласно изобретению. Например, композиция, кондиционированная молочнокислыми бактериями в соответствии с изобретением, может содержать супернатант культуры молочнокислых бактерий или может быть молочным продуктом, ферментированным молочнокислыми бактериями, из которого были удалены молочнокислые бактерии.

Используемый в настоящем описании термин «супернатант» будет означать культуральную среду, в которой бактерии были выращены в условиях, подходящих для роста. Культуральная среда может быть отделена от бактериальных клеток и их фрагментов центрифугированием.

Используемый в настоящем описании термин «стабильная композиция» следует понимать как композицию, которая не вызывает седиментации и/или отделения сыворотки.

Используемый в настоящем описании термин «x% (масс./масс.)» эквивалентен «x г на 100 г».

Используемый в настоящем описании термин «употребляемый ложкой» должен означать твердое или полутвердое вещество, которое можно употреблять с помощью ложки или других приборов.

Используемый в настоящем описании термин «ферментация» следует понимать как означающий метаболизм вещества бактериями, дрожжами или другими микроорганизмами.

Используемый в настоящем описании термин «кое» или «КОЕ» следует понимать как сокращение термина «колониеобразующая единица».

Используемый в настоящем описании термин «избыточная масса» следует понимать как значение BMI (индекс массы тела) 25–30.

Используемый в настоящем описании термин «ожирение» означает BMI (индекс массы тела) более 30.

Используемый в настоящем описании термин «CNCMI–», за которым следует четырехзначное число, используется для обозначения штамма, депонированного в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM) улица доктора Ру, 25, Париж, Франция, в соответствии с Будапештским договором с номером доступа, соответствующем указанному 4–значному номеру, например, CNCM I–3690.

Используемая в настоящем описании ссылка на бактериальный штамм или вид должна включать функционально эквивалентные бактерии, полученные из них, такие как, но не ограничиваясь ими, мутанты, варианты или генетически трансформированные бактерии. Эти мутанты или генетически трансформированные штаммы могут быть штаммами, в которых один или более эндогенных генов родительского штамма были мутированы, например, для модификации некоторых их метаболических свойств (например, их способность ферментировать сахара, их устойчивость к подкислению, их выживаемость при переносе в желудочно–кишечном тракте, их свойства после подкисления или продукция метаболитов). Они также могут представлять собой штаммы, полученные в результате генетической трансформации родительского штамма с добавлением одного или более представляющих интерес генов, например, для того, чтобы придать указанным генетически трансформированным штаммам дополнительные физиологические признаки или позволить им экспрессировать белки терапевтического действия или профилактического интереса, которые целесообразно применять посредством указанных штаммов. Эти мутанты или генетически трансформированные штаммы могут быть получены из родительского штамма с помощью общепринятых методов случайного или сайт–направленного мутагенеза и генетической трансформации бактерий или с помощью методики, известной как «перетасовка генома». В настоящем тексте штаммы, мутанты и варианты, полученные из родительского вида или штамма, будут рассматриваться как охватываемые ссылкой на указанный родительский вид или штамм, например, подразумевается, что выражения «L rhamnosus» и «штамм CNCM I–3690» будут включать штаммы, мутанты и полученные из них варианты.

Соответственно, при использовании в настоящем описании в отношении бактериального штамма, указанного с помощью номера доступа или номера депозита, штамм должен охватывать его варианты, имеющие по меньшей мере 80% идентичности с последовательностью 16S рРНК указанного штамма, предпочтительно по меньшей мере 85% идентичности, более предпочтительно, по меньшей мере, 90% идентичности, более предпочтительно, по меньшей мере, 95% идентичности (см.: Stackebrandt & Goebel, 1994, Int. J. Syst. Bacteriol. 44: 846–849). В особенно предпочтительном варианте осуществления указанный вариант имеет, по меньшей мере, 97% идентичности с последовательностью 16S рРНК указанного определенного штамма, более предпочтительно, по меньшей мере, 98% идентичности, более предпочтительно, по меньшей мере, 99% идентичности.

Молочнокислые бактерии, содержащиеся в композиции по изобретению, могут быть живыми или мертвыми бактериями. Предпочтительно, по меньшей мере, некоторые из молочнокислых бактерий, содержащихся в композиции по изобретению, являются живыми бактериями. Более предпочтительно, композиция по изобретению содержит от 10⁵ до 10¹⁰ колониеобразующих единиц молочнокислых бактерий на грамм композиции (КОЕ/г), более предпочтительно, по меньшей мере, 10⁷, 10⁸ 10⁹ колониеобразующих единиц молочной кислоты бактерий на грамм композиции (КОЕ/г).

Композиция по изобретению предпочтительно представляет собой пищевую или питательную композицию, то есть пищевой продукт, более предпочтительно молочный продукт и наиболее предпочтительно ферментированный молочный продукт, в частности ферментированный молочнокислыми бактериями согласно изобретению.

Согласно настоящему изобретению ферментированный молочный продукт представляет собой продукт ферментации композиции на основе молока посредством заквасочной культуры ферментирующих микроорганизмов, в частности бактерий, в частности молочнокислых бактерий. Таким образом, ферментированный молочный продукт в соответствии с изобретением может представлять собой кисломолочный продукт, йогурт, в частности, йогурты с начинкой, перемешанный или питьевой йогурт, или свежий сыр, такой как белый сыр или petit–Suisse. Это может быть также отфильтрованный ферментированный молочный продукт, такой как творог, также называемый концентрированным йогуртом или йогуртом по–гречески.

Термины «кисломолочный продукт» и «йогурт» имеют свои обычные значения в области молочной промышленности, то есть продуктов, предназначенных для потребления человеком и происходящих из подкисляющей молочной ферментации молочного субстрата. Эти продукты могут содержать вторичные ингредиенты, такие как фрукты, овощи, сахар и т. д.

Таким образом, выражение «кисломолочный продукт» предназначено в настоящей заявке для молочного продукта, приготовленного с молочным субстратом, который подвергся обработке, по меньшей мере, эквивалентной пастеризации, засеян микроорганизмами, принадлежащими к характерным видам или видам каждого продукта.

Термин «йогурт» предназначен для кисломолочного продукта, полученного, в соответствии с местным использованием, развитием специфических термофильных молочнокислых бактерий, известных как Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus и Streptococcus thermophilus, которые должны находиться в живом состоянии в готовом продукте, в минимальном соотношении. В некоторых странах нормативные акты требуют добавления других молочнокислых бактерий для производства йогурта, и особенно дополнительного использования штаммов Lactobacillus rhamnosus и/или Lactobacillus acidophilus и/или Lactobacillus casei. Эти дополнительные молочные штаммы предназначены для придания конечному продукту различных свойств, таких как способствовать равновесию кишечной флоры или модулирование иммунной системы.

Поэтому на практике выражение «кисломолочный продукт» обычно используется для обозначения кисломолочных продуктов, отличных от йогурта. Кроме того, в зависимости от страны, он может быть известен под такими разнообразными названиями, как, например, «Кефир», «Kumtss», «Lassi», «Dahi», «Leben», «Filmjolk», «Villi», «ацидофильное молоко».

Термин «белый сыр» или «petit–Suisse» в настоящей заявке предназначен для нерафинированного несоленого сыра, который подвергался ферментации только молочнокислыми бактериями (и никакой ферментации, кроме молочнокислой ферментации).

Ферментированный молочный продукт может быть изготовлен из цельного молока и/или полностью или частично обезжиренного молока, которое может быть использовано в виде порошка, который может быть восстановлен путем добавления воды. Могут быть добавлены другие компоненты молока, такие как сливки, казеин, казеинат (например, казеинат кальция или натрия), сывороточные белки, особенно в форме концентрата (WPC), молочные белки, в частности, в форме концентрата (MPC), молочный белок гидролизаты и их смеси.

Как предполагается в настоящем описании, «молочнокислая бактерия» представляет собой грамположительную, кислотоустойчивую, обычно не спорулирующую и анаэробную, палочковидную или кокковидную бактерию, способную ферментировать сахара в молочной кислоте.

В настоящем описании «увеличение или поддержание» бактериальной популяции, в частности ее кишечной популяции, означает защиту, поддержку или стимулирование роста указанных бактерий, так что количество указанных бактерий или относительное количество указанных бактерий по отношению к другим бактериям, поддерживается или увеличивается.

В настоящем описании «уменьшение» бактериальной популяции, в частности, кишечной популяции, означает уменьшение роста указанных бактерий, так что количество указанных бактерий или относительное количество указанных бактерий по отношению к другим бактериям уменьшается.

В настоящем описании «ингибирование» бактериальной популяции, в частности, кишечной популяции, означает предотвращение роста указанных бактерий, так что количество указанных бактерий или относительное количество указанных бактерий по отношению к другим бактериям не увеличивается.

В настоящем описании, кишечная популяция Bilophila wadsworthia относится к бактериям Bilophila wadsworthia, присутствующим в кишечнике или кишке, в частности в толстой кишке, индивидуума.

Определение количества бактерий Bilophila wadsworthia в образце может быть выполнено многочисленными способами, хорошо известными специалисту в данной области. Определение кишечного количества бактерий Bilophila wadsworthia у индивидуума может быть выполнено путем культивирования образцов стула индивидуума.

Предпочтительно, индивидуумом согласно изобретению является человек. В одном варианте осуществления индивидуумом согласно изобретению является здоровый индивидуум или индивидуум, который не страдает кишечными заболеваниями или заболеваниями желудочно–кишечного тракта.

В настоящем описании «нетерапевтический» означает, что индивидуум, получающий или потребляющий композицию согласно изобретению, не подвергается лечению от заболевания с помощью композиции. Другими словами, в рамках нетерапевтических применений и способов в соответствии с изобретением композиция в соответствии с изобретением не является ни лекарственным средством, ни фармацевтической композицией.

Описанное в настоящем документе изобретение относится, по меньшей мере, к одной бактерии Lactobacillus для применений или способов, как описано ниже, и в дополнительных вариантах осуществления к композициям и продуктам. Предпочтительно, указанная, по меньшей мере, одна бактерия Lactobacillus в соответствии с вариантами осуществления изобретения представляет собой L. rhamnosus. Кроме того, предпочтительно, чтобы молочнокислой бактерией была Lactobacillus rhamnosus CNCM I–3690. Штамм Lactobacillus rhamnosus CNCM I–3690 был депонирован в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM) (Институт Пастера, улица доктора Ру, 25, Париж, Франция) по Будапештскому договору 9 ноября 2006 года под номером 1 –3690.

Применения и способы

В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению, по меньшей мере, одной бактерии Lactobacillus или композиции, содержащей ее или кондиционированной таким образом, для уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста. Как правило, популяция Bilophila wadsworthia является кишечной популяцией индивидуума.

Предпочтительно, по меньшей мере, одна бактерия Lactobacillus по изобретению представляет собой Lactobacillus rhamnosus.

Предпочтительно молочнокислой бактерией является Lactobacillus rhamnosus CNCM I–3690.

Штамм Lactobacillus rhamnosus CNCM I–3690 был депонирован в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM) (Институт Пастера, улица доктора Ру, 25, Париж, Франция) по Будапештскому договору 9 ноября 2006 года под номером I–3690. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению, по меньшей мере, одной бактерии Lactobacillus или композиции, содержащей их или кондиционированной таким образом, для улучшения метаболической дисфункции, связанной с Bilophila wadsworthia или вызванной Bilophila wadsworthia. Предпочтительно указанное улучшение метаболической дисфункции является одним или более, выбранными из группы, состоящей из:

– снижение уровня глюкозы натощак и/или уровня инсулина натощак и/или резистентности к инсулину у индивидуума

– уменьшение воспаления у индивидуума, предпочтительно воспаление кишечника

– уменьшение кишечной проницаемости и

– увеличение короткоцепочечных жирных кислот.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к применению, по меньшей мере, одной бактерии Lactobacillus или композиции, содержащей ее или кондиционированной таким образом, для снижения желчных кислот у индивидуума. В одном варианте осуществления указанные желчные кислоты представляют собой желчные кислоты сыворотки или слепой кишки. Особенно предпочтительно, чтобы указанные желчные кислоты были тауро–конъюгированными, в еще одном предпочтительном варианте осуществления указанные желчные кислоты выбраны из группы, состоящей из таурохолевой кислоты (TCA) и UDCA.

Предпочтительно, по меньшей мере одна бактерия Lactobacillus по изобретению представляет собой Lactobacillus rhamnosus.

Предпочтительно, молочнокислой бактерией является Lactobacillus rhamnosus CNCM I–3690.

Штамм Lactobacillus rhamnosus CNCM I–3690 был депонирован в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM) (Институт Пастера, улица доктора Ру, 25, Париж, Франция) по Будапештскому договору 9 ноября 2006 года под номером I–3690. В альтернативном варианте осуществления настоящее изобретение также относится к способу уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста, включающий питание, обеспечение или введение индивидууму композиции, как определено выше, в частности, в ее эффективном количестве. Как правило, популяция Bilophila wadsworthia является кишечной популяцией индивидуума.

В дополнительном альтернативном варианте осуществления настоящее изобретение также относится к способу снижения желчных кислот у индивидуума, включающему питание, обеспечение или введение индивидууму композиции, как определено выше, в частности, в ее эффективном количестве. В одном варианте осуществления указанные желчные кислоты представляют собой желчные кислоты сыворотки или слепой кишки. Особенно предпочтительно, чтобы указанные желчные кислоты были тауро–конъюгированными, в еще одном предпочтительном варианте осуществления указанные желчные кислоты выбраны из группы, состоящей из таурохолевой кислоты (TCA) и UDCA. Специалист в данной области может определить эффективное количество, особенно с учетом раскрытия, приведенного в настоящем документе.

Особенно предпочтительно, чтобы описанные в настоящем документе применения и способы были нетерапевтическими применениями и способами.

Предпочтительно, индивидуум имеет невегетарианский рацион питания и/или рацион с высоким содержанием жиров. Особенно предпочтительно, чтобы по меньшей мере 25%, 30%, 35% или, более предпочтительно, по меньшей мере, 40% калорий в рационе индивидуума были из жира. Кроме того, предпочтительно, чтобы по меньшей мере 25%, 30%, 35% или более предпочтительно по меньшей мере 40% калорий в рационе индивидуума составляли углеводы.

Предпочтительно, индивидуум имеет избыточную массу или ожирение.

Композиции

Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей или кондиционированной, по меньшей мере, одной бактерией Lactobacillus для использования для уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста, в частности, кишечной популяции Bilophila wadsworthia, и/или для уменьшения желчных кислот. Кроме того, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей или кондиционированной, по меньшей мере, одной бактерией Lactobacillus, для применения в лечении, профилактике или облегчении расстройства, связанного с Bilophila wadsworthia или вызванного Bilophila wadsworthia у индивидуума.

Композиция для применения в соответствии с вариантами осуществления изобретения пригодна для потребления или приема внутрь, предпочтительно пероральным путем. Соответственно, композиция содержит или состоит из съедобного вещества. Особенно предпочтительно, чтобы композиции вариантов осуществления изобретения по существу не содержали патогенных или токсикогенных веществ. Композиция согласно вариантам осуществления изобретения может представлять собой лекарственное средство или фармацевтическую композицию. В особенно предпочтительном варианте осуществления композиция по изобретению может представлять собой нетерапевтическую композицию, предпочтительно нутрицевтическую композицию, питательную композицию, и/или пищевую композицию.

Настоящее изобретение также относится к предполагаемому применению, по меньшей мере, одной бактерии Lactobacillus, как предусмотрено в настоящем документе, для изготовления пищевой композиции для уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста, в частности, кишечной популяции Bilophila wadsworthia у индивидуума, и/или для уменьшения желчных кислот, в частности, кишечной продукции бутирата у человека. Кроме того, настоящее изобретение относится к применению, по меньшей мере, одной бактерии Lactobacillus или композиции, содержащей ее или кондиционированной таким образом, для производства пищевого продукта для применения при лечении, для предотвращения или для облегчения расстройства, связанного с Bilophila wadsworthia или вызванного Bilophila wadsworthia у индивидуума.

В одном варианте осуществления указанные желчные кислоты представляют собой желчные кислоты сыворотки или слепой кишки, особенно предпочтительно, чтобы указанные желчные кислоты были тауро–конъюгированными, в дополнительном предпочтительном варианте осуществления указанные желчные кислоты выбраны из группы, состоящей из таурохолевой кислоты (TCA) и UDCA.

В одном варианте осуществления указанное расстройство, связанное с Bilophila wadsworthia или вызванное Bilophila wadsworthia, представляет собой расстройство, связанное с Bilophila wadsworthia или вызванное кишечной Bilophila wadsworthia.

Указанное расстройство, связанное с Bilophila wadsworthia или вызванное ими, может быть выбрано из группы, состоящей из инфекции, вызванной Bilophila wadsworthia, метаболических дисфункций, связанных с Bilophila wadsworthia, дисметаболизма желчных кислот, дисфункции кишечного барьера и системного воспаления, вызванных Bilophila wadsworthia .

Метаболические дисфункции, связанные с Bilophila wadsworthia, могут быть дисфункцией уровня глюкозы натощак и/или уровня инсулина натощак и/или резистентности к инсулину.

Системное воспаление, вызванное Bilophila wadsworthia, может представлять собой, например, кишечное воспаление, вызванное Bilophila wadsworthia, воспалительное заболевание кишечника (IBD) и/или синдром воспалительного кишечника (IBS).

Кишечной барьерной дисфункцией может быть увеличение проницаемости кишечного барьера. Особенно предпочтительно, чтобы пищевая композиция представляла собой ферментированную пищевую композицию, предпочтительно ферментированную молочную композицию. Другие композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения также включают детское питание, молочные смеси для младенцев и детское питание для детей.

Предпочтительно композиция содержит, по меньшей мере, 10⁶, более предпочтительно, по меньшей мере, 10⁷ и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 10⁸ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно L. rhamnosus, согласно вариантам осуществления изобретения на грамм (г) композиции согласно вариантам осуществления изобретения. Предпочтительно, также композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения содержит, по меньшей мере, примерно 10¹¹, более предпочтительно, по меньшей мере, 10¹⁰ и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 10⁹ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретение на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения. В следующем воплощении молочнокислые бактерии представляют собой Lactobacillus rhamnosus CNCM I–3690.

В вариантах осуществления композиция содержит от 10⁶ до 10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно, Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения. В вариантах осуществления композиция содержит от 10⁷ до 10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения. В вариантах осуществления композиция содержит от 10⁸ до 10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно, Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения, в вариантах осуществления, композиция содержит от 10⁹ до 10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно, Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения. В вариантах осуществления композиция содержит от 10¹⁰ до 10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения.

В вариантах осуществления композиция содержит от 10⁶ до 10¹⁰ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно, Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения. В вариантах осуществления композиция содержит от 10⁶ до 10⁹ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно, Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения. В вариантах осуществления композиция содержит от 10⁶ до 10⁸ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения. В вариантах осуществления композиция содержит от 10⁶ до 10⁷ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения, особенно предпочтительно, что молочнокислые бактерии представляли Lactobacillus rhamnosus CNCM I–3690.

Предпочтительно, композиция, подходящая для применений и способов вариантов осуществления изобретения, включает молоко, более предпочтительно, кисломолочный продукт. Предпочтительно, композиция содержит, по меньшей мере, примерно 30% (масс/масс) молока, более предпочтительно, по меньшей мере, примерно 50% (масс/масс) молока и еще более предпочтительно, по меньшей мере, примерно 70% (масс/масс) молока. В вариантах осуществления композиция содержит от 30 до 100% (масс/масс) молока, в вариантах осуществления композиция содержит от 50 до 100% (масс/масс) молока. В вариантах осуществления композиция содержит от 70 до 100% (масс/масс) молока. Предпочтительно указанное молоко представляет собой растительное и/или животное молоко, более предпочтительно соевое, миндальное, овсяное, конопляное, пшеничное, кокосовое, рисовое, козье, овечье, верблюжье, кобылье или коровье молоко и, наиболее предпочтительно, коровье молоко. Предпочтительно, указанное молоко подвергают термической обработке, как правило, пастеризуют для обеспечения стерильности. Предпочтительно, указанную термическую обработку проводят перед приготовлением ферментированной молочной композиции.

Предпочтительно, указанное молоко включает одно или более из обезжиренного, частично обезжиренного или не обезжиренного молока. Предпочтительно, указанное молоко может быть в жидкой, порошкообразной и/или концентрированной форме. В одном варианте осуществления указанное молоко дополнительно содержит компоненты молока, предпочтительно выбранные из группы, состоящей из сливок, казеина, казеината (например, казеината кальция или натрия), белков молочной сыворотки, в частности, в форме концентрата (WPC), белков молока, особенно в форме концентрата (MPC), гидролизата молочного белка и их смеси. В одном варианте осуществления указанная смесь дополнительно содержит растительные и/или фруктовые соки. В одном варианте осуществления указанное молоко может быть обогащено дополнительными компонентами молока или другими питательными веществами, такими как, но не ограничиваясь этим, витамины, минералы, микроэлементы или другие микроэлементы.

Предпочтительно, композиция содержит более примерно 0,3 г на 100 г по массе свободной молочной кислоты, более предпочтительно более примерно 0,7 г или 0,6 г на 100 г по массе свободной молочной кислоты. В вариантах осуществления композиция содержит от 0,3 г до 0,7 г на 100 г по массе свободной молочной кислоты.

Предпочтительно, композиция имеет содержание белка, по меньшей мере, эквивалентное содержанию белка в молоке, из которого оно получено, предпочтительно, по меньшей мере, примерно 2,5%, более предпочтительно, по меньшей мере, примерно 3% или 3,5% (масс/масс). Предпочтительно, композиция имеет рН, равное или ниже 5, предпочтительно, от примерно 3 до примерно 4,5 и, более предпочтительно, от примерно 3,5 до примерно 4,5.

Предпочтительно, композиция имеет вязкость ниже 200 мПа.с, более предпочтительно, ниже 100 мПа.с и, наиболее предпочтительно, ниже 60 мПа.с при 10°С при скорости сдвига 64 с^–1. В вариантах осуществления изобретения композиция имеет вязкость в диапазоне от 1 до 200 мПа.с, от 1 до 100 мПа.с или от 1 до 60 мПа.с при 10°C при скорости сдвига 64 с^–1. В вариантах осуществления композиция имеет вязкость в диапазоне от 10 до 200 мПа.с, от 10 до 100 мПа.с или от 10 до 60 мПа.с, при 10°C при скорости сдвига 64 с^–1. В вариантах осуществления композиция имеет вязкость в диапазоне от 30 до 200 мПа.с, от 30 до 100 мПа.с или от 30 до 60 мПа.с при 10°С при скорости сдвига 64 с^–1.

Композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения предпочтительно представляет собой продукт, выбранный из группы, включающей йогурт, неперемешиваемый йогурт, перемешиваемый йогурт, разливной йогурт, йогуртовый напиток, замороженный йогурт, кефир, пахту, творог, сметану, свежий сыр и сыр. В одном варианте осуществления композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения представляет собой питьевую композицию, более предпочтительно, кисломолочный напиток, такой как, помимо прочего, йогуртовый напиток, кефир и т. д. В альтернативном варианте осуществления композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения представляет собой композицию, которую можно потреблять ложкой, такую как не перемешиваемый или перемешиваемый йогурт или его эквивалент.

Предпочтительно, композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения может храниться, транспортироваться и/или распространяться при температуре от 1°С до 10°С в течение, по меньшей мере, примерно 30 дней, по меньшей мере, примерно 60 дней или, по меньшей мере, примерно 90 дней после упаковки и остается пригодной для употребления.

Предпочтительно, композиция представляет собой упакованный продукт, который содержит по меньшей мере 10⁶, более предпочтительно, по меньшей мере 10⁷ и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере 10⁸ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно Lactobacillus rhamnosus, в соответствии с вариантами осуществления изобретения на грамм (г) композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения после хранения, транспортировки и/или распределения при температуре от 1 до 10°С в течение, по меньшей мере, примерно 30 дней, по меньшей мере, примерно 60 дней или, по меньшей мере, примерно 90 дней после упаковки. Особенно предпочтительно, чтобы молочнокислая бактерия представляла собой Lactobacillus rhamnosus CNCM i–3690.

В вариантах осуществления композиция представляет собой упакованный продукт, который содержит от 10⁶ до 10⁸ или от 10⁶ до 10⁷ колониеобразующих единиц (КОЕ) молочнокислых бактерий, предпочтительно Lactobacillus rhamnosus, согласно вариантам осуществления изобретения на грамм (г) композиции согласно вариантам осуществления изобретения после хранения, транспортировки и/или распределения при температуре от 1°С до 10°С в течение, по меньшей мере, примерно 30 дней, по меньшей мере, примерно 60 дней или в течение, по меньшей мере, примерно 90 дней с момента упаковки. Особенно предпочтительно, чтобы молочнокислые бактерии представляли собой Lactobacillus rhamnosus CNCM I–3690.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления композиция дополнительно содержит промежуточный препарат, включающий препарат из фруктов и/или злаков и/или добавок, таких как ароматизаторы и/или красители. Указанный промежуточный препарат может, в частности, содержать загустители (растворимые и нерастворимые волокна, альгинаты, каррагинаны, ксантановую камедь, пектин, крахмал, в частности, желатинизированные, гелевую камедь, целлюлозу и ее производные, гуаровую и рожковую камедь, инулин) или подсластители (аспартам, ацесульфам К, сахарин, сукралозу, цикламат) или консерванты. Примерами ароматизаторов являются: яблоко, апельсин, клубника, киви, какао и т. д. Примерами красителей являются: бета–каротин, кармин, кошенильный красный. Кроме того, препарат из вышеупомянутых фруктов может включать фрукты, которые являются цельными или кусочками, или в желе, или в джеме, что позволяет, например, получать фруктовые йогурты.

Предпочтительно, композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения содержит до примерно 30% (масс/масс) указанного промежуточного препарата, например, до примерно 10%, 15%, 20%, 25% (масс/масс). В одном варианте осуществления композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения содержит от 1 до 30% (масс/масс) указанного промежуточного препарата. В альтернативных вариантах осуществления композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения содержит от 1 до 25% (масс/масс) указанного промежуточного препарата. В других альтернативных вариантах осуществления композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения содержит от 1 до 20% (масс/масс) указанного промежуточного препарата. В дополнительных вариантах осуществления композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения содержит от 1 до 15% (масс/масс) указанного промежуточного препарата. В дополнительных вариантах осуществления композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения содержит от 1 до 10% (масс/масс) указанного промежуточного препарата.

Предпочтительно, композиция согласно вариантам осуществления изобретения предоставляется в герметичном или герметизированном контейнере, содержащем примерно 50 г, 60 г, 70 г, 75 г, 80 г, 85 г, 90 г, 95 г, 100 г, 105 г, 110 г, 115 г, 120 г, 125 г, 130 г, 135 г, 140 г, 145 г, 150 г, 200 г, 300 г, 320 г или 500 г или примерно 1 унцию, 2 унции, 3 унции, 4 унции, 5 унций, 6 унций или 12 унций продукта по массе.

в вариантах осуществления композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения предоставляется в герметичном или герметизированном контейнере, содержащем от примерно 50 г до 500 г, от 60 г до 500 г, от 70 г до 500 г, от 75 г до 500 г, от 80 г до 500 г, от 85 г до 500 г, от 90 г до 500 г, от 95 г до 500 г, от 100 г до 500 г, от 105 г до 500 г, от 110 г до 500 г, от 115 г до 500 г, от 120 г до 500 г, от 125 г до 500 г, от 130 г до 500 г, от 135 г до 500 г, от 140 г до 500 г, от 145 г до 500 г, от 150 г до 500 г, от 200 г до 500 г, от 300 г до 500 г, от 320 г до 500 г или 500 г продукта по массе, в вариантах осуществления, композиция в соответствии с вариантами осуществления изобретения предоставляется в герметичном или герметизированном контейнере, содержащем примерно от 1 до 12 унций, от 2 до 12 унций, от 3 до 12 унций, от 4 до 12 унций, от 5 до 12 унций, от 6 до 12 унций или 12 унций продукта по массе.

Способы приготовления кисломолочных продуктов

Способы приготовления кисломолочных продуктов, таких как йогурты или их эквиваленты, хорошо известны в данной области.

Предпочтительно, кисломолочные продукты готовят с использованием молока, которое было подвергнуто термической обработке, по меньшей мере, эквивалентной пастеризации. Предпочтительно, указанная термическая обработка проводится перед приготовлением композиции.

Как правило, молоко пастеризуется с помощью следующих последовательных стадий:

1) стандартизация жирных веществ в сырье с целью получения стандартизированного вещества,

2) обогащение сухим веществом стандартизированного вещества, полученного на предыдущей стадии, с целью получения обогащенного вещества,

3) предварительный нагрев обогащенного вещества, полученного на предыдущей стадии, с целью получения исходного вещества,

4) пастеризация и выдерживание исходного вещества, полученного на предыдущей стадии, с целью получения пастеризованного и выдержанного вещества,

5) необязательная стадия гомогенизации пастеризованного и выдержанного вещества, полученного на предыдущей стадии, с целью получения пастеризованного, выдержанного и необязательно гомогенизированного вещества,

6) первоначальное охлаждение пастеризованного, выдержанного и необязательно гомогенизированного вещества, полученного на предыдущей стадии, с тем чтобы получить пастеризованное исходное вещество, которое было выдержано, необязательно гомогенизировано и охлаждено.

Используемый в настоящем описании термин «стандартизация жирных веществ» означает стадию доведения количества жиров, присутствующих в исходном веществе, до заранее определенного уровня. Обогащение сухим веществом включает добавление белков и жирного вещества для изменения твердости творога.

Используемый в настоящем описании термин «выдержка» означает быструю термализацию молока и позволяет уничтожить растительную микробную флору, включая патогенные формы. Ее типичная продолжительность составляет от 4 до 10 минут, в частности, от 5 до 8 минут, и, в частности, приблизительно 6 минут.

Используемый в настоящем описании термин «гомогенизация» означает дисперсию жирных веществ в веществе молочного типа в маленькие жировые шарики. Гомогенизацию проводят, например, при давлении от 100 до 280 бар, в частности от 100 до 250 бар, в частности от 100 до 200 бар, в частности, приблизительно 200 бар. Эта стадия гомогенизации является совершенно необязательной. В частности, она отсутствует в процессе производства продуктов с 0% жирных веществ.

Обычно кисломолочный продукт готовят путем культивирования молока при подходящей температуре с подходящими микроорганизмами, чтобы обеспечить снижение рН, предпочтительно до рН, равного или ниже 5, предпочтительно от примерно 3 до 4,5; более предпочтительно от примерно 3,5 до примерно 4,5. РН можно регулировать, контролируя ферментацию микроорганизмом и останавливая ее при необходимости, например, путем охлаждения.

Выбор подходящих штаммов молочнокислых бактерий входит в компетенцию специалиста и обычно штаммы представляют собой термофильные молочнокислые бактерии. Примеры молочнокислых бактерий, которые могут быть использованы, включают, но не ограничиваются ими, Lactobacilli (например, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillusbuchneri, Lactobacillusdelbruckei, в частности, Lactobacillus brevis, Lactobacillus rhamnosus); Стрептококки (например, Streptococcus thermophilus); Лактококки (например, Lactococcus lactis, обычно Lactococcus lactis subsp. Lactis или Lactococcus lactis subsp. Cremoris). Обычно можно использовать смесь или ассоциацию множества видов молочнокислых бактерий, обычно смесь или ассоциацию Lactobacillus и Streptococcus. Для приготовления йогурта они обычно включают Lactobacillus bulgaricus (также называемый Lactobacillus delbruckei subsp. Bulgaricus) и Streptococcus thermophilus, необязательно с дополнительными микроорганизмами, такими как, но не ограничиваясь, пробиотические виды или другие виды, которые могут обеспечивать желательные органолептические или другие качества для композиции, например, Lactococcus lactis.

Подходящие температуры для ферментации молока обычно составляют от примерно 36 до примерно 44 °С, и температуру поддерживают в течение времени инкубации, достаточного для обеспечения желаемого снижения рН.

Для приготовления кисломолочного продукта температура в начале ферментации обычно составляет от примерно 36°С до примерно 43°С, в частности, от примерно 37°С до примерно 40°С, температура в конце ферментации обычно составляет примерно от 37°С до примерно 44°С, в частности от примерно 38°С до примерно 41°С. Время ферментации обычно составляет примерно от 6 примерно до 11 часов.

После ферментации кисломолочный продукт охлаждают. Необязательно стадия промежуточного охлаждения кисломолочного продукта может быть выполнена, чтобы обеспечить предварительное охлаждение кисломолочного продукта, имеющего температуру от примерно 22°С до примерно 4°C. Обычно промежуточное время охлаждения составляет от примерно 1 часа до примерно 4 часов, в частности, от примерно 1 часа 30 минут до примерно 2 часов. Предварительно охлажденный кисломолочный продукт обычно хранится до 40 часов или менее.

Предпочтительно, стадия конечного охлаждения кисломолочного продукта выполняется таким образом, что температура в начале конечного охлаждения составляет менее чем примерно 22°С, а температура в конце конечного охлаждения составляет от примерно 4°С до примерно 10°С. Затем охлажденный продукт можно хранить, транспортировать и/или распределять при температуре от примерно 1 до примерно 10°С в течение, по меньшей мере, примерно 30 дней, по меньшей мере, примерно 60 дней или, по меньшей мере, примерно 90 дней.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления способ приготовления кисломолочного продукта, как определено выше, необязательно включает стадию перемешивания при давлении по меньшей мере 20 бар или выполнение динамического сглаживания для получения композиции, имеющей желаемую вязкость, обычно вязкость до 20 мПа.с. Операции перемешивания или динамического сглаживания обеспечивают некоторый сдвиг для состава, который обычно позволяет снизить вязкость. Такие операции известны специалисту в данной области техники и могут выполняться с обычным соответствующим оборудованием. Эту стадию обычно проводят при холодной температуре, например, при температуре от 1 до 20°С. Безотносительно к какой–либо теории считается, что применение некоторого сдвига при низкой температуре, обычно путем перемешивания при высоком давлении или путем динамического сглаживания, может привести к образованию жидкого геля в композиции, что обеспечивает улучшенную стабильность даже при низкой вязкости до 20 мПа.с.

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления способ приготовления кисломолочного продукта, как определено выше, необязательно включает стадию добавления промежуточного препарата перед ферментацией или после нее, причем указанный промежуточный препарат включает препарат фруктов и/или злаков и/или добавки, такие как ароматизаторы и/или красители.

Изобретение будет дополнительно проиллюстрировано следующими неограничивающими чертежами и примером.

Описание чертежей

Фигуры 1–12. B. wadsworthia синергически взаимодействует с HFD, вызвая более сильное метаболическое ухудшение.

Фигура 1: Кратное изменение B. wadsworthia относительно 0–го дня у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулировали B. wadsworthia (Bw +) и обрабатывали L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+) (n=16–28/на группу).

Фигура 2: B, wadsworthia нагрузка в тонком кишечнике (SI), фекалиях и в слепой кишке после 9 недель CD или HFD.

Фигура 3: Прибавка массы тела (n=37–40 на группу) у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD), инокулировали B. wadsworthia (Bw+) и обрабатывали L. rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 4: Глюкоза в крови у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированные B. wadsworthia (Bw+) и обработанные L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 5: Инсулин у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированные B. wadsworthia (Bw+) и обработанные L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 6: Гомеостатическая модель оценки инсулинорезистентности (HOMA–IR) после 6 ч голодания у мышей, получавших контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L. rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 7: Уровень глюкозы в крови до и после перорального введения толерантности к глюкозе (OGGT; 2 г/кг мыши; n=27–40 на группу) у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жира (HFD) и инокулированные B. wadsworthia (Bw+) и обработанные L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 8: Площадь под кривой (AUC) OGGT у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жира (HFD) и инокулированные B. wadsworthia (Bw+) и обработанные L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 9: Площадь липидов, рассчитанная как % интересующей площади (AOI), в поперечных срезах печени, окрашенных H & E, у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жира (HFD) и инокулированные B. wadsworthia (Bw+) и обработанные L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 10: Репрезентативные изображения печени, окрашенной H & E, у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жира (HFD) и инокулированные B. wadsworthia (Bw+) и обработанные L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 11: Триглицериды печени после 6–часового голодания у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированные B. wadsworthia (Bw+) и обработанные L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 12: Спирмен корреляция уровня глюкозы натощак и нагрузки B. wadsworthia в содержимом слепой кишки. Статистическое сравнение было выполнено сначала тестом на нормальность с использованием теста Колмогорова–Смирнова, а затем теста ANOVA или теста Крускала–Уоллиса с помощью теста Бонферрони или Данна полученных результатов на мышах, получавших контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигуры 13–17. B. wadsworthia усиливает HFD–индуцированный метаболизм желчных кислот.

Фигура 13: Соотношение первичных и вторичных желчных кислот в слепой кишке у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 14: Столбчатая диаграмма, показывающая концентрацию желчных кислот в слепой кишке у мышей, получавших контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 15: Концентрация разницы желчных кислот в слепой кишке. (*p <0,05 против HFD–ASF, *p <0,05 против HFD–ASF^Bw+; n=5–6/группа) у мышей, получавших контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жира (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 16: Столбчатая диаграмма, показывающая концентрацию желчных кислот в сыворотке у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 17: Концентрация разницы желчных кислот в сыворотке крови (*р <0,05, **р <0,05; n=5–6/группа). Статистическое сравнение было выполнено сначала тестом на нормальность с использованием теста Коимогорова–Смирнова, а затем с помощью теста ANOVA или теста Крускала–Уоллиса с использованием теста Бонферрони или теста Данна по полученным результатам у мышей, получавших контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. Wadsworthia (Bw+) и обработанных L. rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигуры 18–25. B. wadsworthia потенцирует вызванную HFD дисфункцию кишечного барьера и воспаление.

Фигура 18: Растворимый CD14 (sCD14) в сыворотке у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 19: Концентрация FITC–декстрана в плазме через 3 ч после введения через желудок у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 20: Концентрация липокалина в фекалиях у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 21: Продукция цитокинов клетками брыжеечного лимфатического узла после 48–часовой стимуляции PMA–иономицином у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных S. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 22: Цитокины из идеальных гомогенатов у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 23: Цитокины из гомогенатов тонкой кишки у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 24: Цитокины из гомогенатов печени у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жира (HFD) и инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Фигура 25: Продукция цитокинов клетками селезенки после 48–часовой стимуляции PMA–иономицином. Статистическое сравнение было выполнено сначала проверкой нормальности с использованием теста Колмогорова–Смирнова, а затем тестом ANOVA или Крускала–Уоллиса с помощью специального теста Бонферрони или теста Данна полученных результатов(*p–значение против HFD, *p–значение против HFD^Bw+ ; n=6–16/группа) у мышей, которые получали контрольный рацион (CD) или рацион с высоким содержанием жиров (HFD), инокулированных B. wadsworthia (Bw+) и обработанных L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr+).

Примеры

Животные и план исследования

Для обычного эксперимента самцов мышей C57BL/6J приобретали у Janvier (Франция) и использовали через 1 неделю после получения. Мышам в возрасте 5 недель давали очищенный контрольный рацион ad libitum (CD, Envigo MD. 120508) или рацион с высоким содержанием жира (HFD, 18% молочный жир, Envigo MD.97222) или в течение 9 недель. Для преднамеренной инокуляции B. wadsworthia после содержания мышей на HFD или CD в течение 2 недель, мышей инокулировали через пероральный зонд с помощью ~10⁷ КОЕ B. wadsworthia ATCC 49260, суспендированного в 200 мкл среды (Желчно–эскулиновый агар для бактероидов с 1% таурином и 0,5 мг/мл цистеина) или только средой в течение 3 дней подряд. Для обработки L. rhamnosus CNCM I–3690 через 1 неделю после последней инокуляции B. wadsworthia мышам ежедневно вводили через зонд 10⁹ КОЕ L. rhamnosus CNCM I–3690, суспендированных в 200 мкл носителя (фосфатно–буферный солевой раствор с 15% глицерином) или носитель в течение 5 недель. В эксперименте с циклоспорином через 1 неделю после последней инокуляции B. wadsworthia мышам вводили внутрибрюшинно циклоспорин (25 мг/кг; Sandimmum Novartis) или носитель (PBS) 3 раза в неделю в течение 5 недель.

Для эксперимента по измененной флоре Шадлера (ASF) стерильных самцов мышей C57BL/6J (GF) получали из Transgenese et Archivage Animaux Modeies (CNRS, UPS44, Орлеан, Франция) и использовали через 1 неделю после получения. Стерильность подтверждена микроскопически и микробиологическим методом. Колонизированных мышей ASF любезно предоставил Э. Верду (E. Verdu) из Университета МакМастер (Канада). Свежие образцы слепой кишки от ASF–колонизированных мышей суспендировали и разбавляли в предварительно восстановленном стерильном 0,9% NaCl с 15% глицерином (1 г в 10 мл) в анаэробных условиях. Аликвоты ASF фекальных суспензий хранили при –80°С. Мышам GF (5–недельного возраста) инокулировали перорально через зонд 200 мкл ASF фекальной суспензии и поддерживали на HFD или CD. Через 3 недели после инокуляции ASF мышам перорально вводили через зонд B. wadsworthia или среду в течение 3 дней подряд. Через 1 неделю после последней инокуляции B. wadsworthia мышам ежедневно вводили через зонд 10⁹ КОЕ L. rhamnosus CNCM I–3690 или носитель в течение 4 недель.

Еженедельное потребление пищи измеряли по клеткам. Мыши голодали в течение 6 часов до умерщвления и затем их усыпляли изофлураном. Мышей отбирали путем смещения шейных позвонков и собирали соответствующие ткани. Все эксперименты проводили в соответствии с Comite d'Ethique en Experimentation Animale.

Тест на толерантность к пероральному введению глюкозы

Тест на толерантность к пероральному введению глюкозы проводили за 3–5 дней до умерщвления. Мышей не кормили, убирая еду и подстилку за 1 час до начала светового цикла. После 6 часов голодания раствор глюкозы (2 г/кг) вводили перорально через зонд. Уровень глюкозы в крови в момент времени 0 (уровень глюкозы натощак, взятый до измерения глюкозы) и через 15, 30, 60 и 120 минут после измерения уровня глюкозы анализировали с использованием глюкометра OneTouch (Roche). Уровень глюкозы наносили на график в зависимости от времени, а площади под кривой глюкозы (AUC) рассчитывали по трапециевидному правилу. Концентрацию инсулина в плазме (собирали в пробирки с покрытием EDTA) в момент времени 0 (инсулин натощак) и 30 мин анализировали из крови хвостовой вены (собирали в пробирки с покрытием EDTA) с использованием набора для ИФА сверхчувствительного мышиного инсулина (Alpco). Гомеостатическая модель оценки инсулинорезистентности (HOMA–IR) рассчитывалась по формуле: глюкоза натощак (нмоль/л) x инсулин натощак (микроЕ/л) /22,5.

Измерения параметров плазмы

Образцы крови собирали в пробирки, покрытые гепарином, через пункцию сердца, центрифугировали и затем образцы плазмы хранили при –80°C. Измерение уровня холестерина в плазме, триглицеридов, липопротеинов высокой плотности (HDL), аспартаттрансаминазы (AST) и аланин трансаминазы (ALT) проводили с помощью Plateforme de Biochimie (CRI, UMR 1149, Paris) с использованием анализатора Olympus AU400 Chemistry Analyzer.

Измерения желчных кислот

Измерение состава и концентрации желчных кислот (BA) в плазме и содержимом кишечника проводили химическим отделением больницы Святой Антуан (UMR 7203, Франция) с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ, Agilent 1100, Франция), соединенной последовательно с масс–спектрометром. (QTRAP 2000, Канада), как описано ранее.

Измерения SCFA

Измерение короткоцепочечных жирных кислот (SCFA) из содержимого фекалий проводили с помощью масс–спектрометра на платформе Университета Нанта (iRS–UN, Франция) с использованием газовой хроматографии в сочетании с масс–спектрометрией, как описано ранее.

Количественное определение цитокинов.

Суспензии одиночных клеток из брыжеечного лимфатического узла (MLN) и селезенки выделяли путем разрушения клеток в сетке 70 мкм меш. 1×106 клеток высевали в 24–луночный планшет и затем стимулировали форбол–12–миристат–13–ацетатом (PMA, 50 нг/мл; Sigma–Aldrich) и иономицином (1 мкМ; Sigma Aidrich) в течение 48 часов при 37°C. Супернатанты собирали и использовали для анализа цитокинов.

50 мг тканей кишечника и образцов печени суспендировали в реагенте для экстракции белка T–PER (Thermo Scientific) и гомогенизировали в соответствии с FastPrep (6 м/с за 40 с). Гомогенаты центрифугировали и супернатанты использовали для анализа концентрации цитокинов и общего белка. Концентрацию общего белка в гомогенатах тканей анализировали с использованием набора для анализа белка Pierce BCA (Thermo Scientific). Концентрации цитокинов были нормализованы в соответствии с измеренной концентрацией белка.

Цитокины измеряли с использованием панели воспаления мыши Legendplex (Biolegend) или индивидуального набора для ИФА (R & D Mouse DuoSet IL–6; наборов для ИФА IFN–γ Mabtech, IL–17α; набора для ИФА для TNF–α Ebioscience).

Гистология печени и измерение уровня триглицеридов в печени

Срез левой доли печени фиксировали в 4% PFA в течение 48 часов, а затем переносили в этанол, фиксировали в парафине, обрезали, обрабатывали, разрезали на кусочки толщиной примерно 3 мкм, устанавливали на предметное стекло и окрашивали гематаоксилином и эозином. (ОН). Липиды печени оценивали и определяли количественно, как описано ранее.

Кишечная проницаемость in vivo и измерение sCD14 в плазме Анализ барьерной функции кишечника in vivo проводили с использованием флуоресцеин–конъюгированного декстрана (FiTC–декстран, 3–5kDA), как описано ранее (Martin etai, 2015). Вкратце, в день умерщвления мышам вводили FITC–декстран (0,6 мг/г массы тела) через пероральный зонд и через 3 часа образцы крови собирали в пробирки с гепариновым покрытием. Интенсивность флуоресценции измеряли в плазме с использованием ридера для микропланшетов (Tecan). Концентрацию растворимого CD14 в плазме (sCD14) измеряли с помощью набора для ИФА CD14 (R & D).

Количественное определение фекального LCN2

Замороженные фекальные образцы взвешивали и восстанавливали в холодном PBS. Затем образцы перемешивали на машине с взбиванием шариков FastPrep в течение 40 с при установке 6 с использованием стеклянных шариков диаметром 4,5 мм для получения гомогенной фекальной суспензии. Затем образцы центрифугировали в течение 5 минут при 10000 g (40°C), и супернатанты собирали и хранили при –20°C до анализа. Уровни LCN2 оценивали с использованием набора Duoset для ИФА мышиного LCN2 (R & D) в соответствии с инструкциями производителя и выражали в пг/мг стула.

B. wadsworthia усугубляет нарушение метаболизма у хозяина на рационе с высоким содержанием жиров.

Чтобы определить влияние избытка B. wadsworthia на метаболический статус хозяина, у мышей после периода на рационе с высоким содержанием жиров (HFD) оценивали метаболические параметры. Мыши HFDBw+ показали более высокий уровень глюкозы натощак. Кроме того, значительное увеличение сывороточных концентраций аспартаттрансаминазы (AST) и аланинтрансаминазы (ALT) наблюдали во всех группах с HFD по сравнению с мышами, получавшими рацион (CD), но не было значимого различия между группами HFD и HFDBw+. Анализ гистологии печени показал, что содержание липидов в печени значительно увеличилось у мышей HFDBw+. Параллельно, общий уровень триглицеридов в печени был значительно выше в группе HFDBw+, чем в группе HFD, что позволяет предположить, что B. wadsworthia оказывает пагубное влияние на этот метаболический признак. Все мыши, получавшие HFD, независимо от обработки, имели значительно повышенный уровень общего холестерина и HDL в плазме. Наконец, наблюдалась сильная положительная корреляция между уровнем глюкозы натощак и нагрузкой B. wadsworthia в слепой кишке. Взятые вместе, эти результаты показали, что высокая распространенность B. wadsworthia потенцирует специфический HFD–индуцированный метаболический синдром хозяина с заметной дисрегуляцией гомеостаза глюкозы и функции печени.

Предотвращение избыточного содержания B, wadsworthia при HFD устраняет метаболические дисфункции, связанные с B. wadsworthia.

Авторы изобретения проверили способность штамма L. rhamnosus CNCM I–3690 в вышеупомянутой модели. Ежедневное пероральное введение через зонд L rhamnosus CNCM I–3690 (Lr) вызывало значительное снижение фекальной нагрузки B. wadsworthia (Фигура 1). Точно так же L. rhamnosus CNCM I–3690 были способны дополнительно уменьшить экспансию B. wadsworthia в слепой кишке и тонкой кишке (Фигура 2).

У мышей HFDBw+, обработанных L. rhamnosus (HFDBw+Lr+), наблюдалось снижение уровня глюкозы натощак, инсулина в плазме крови и ответа HOMA–IR (Фигуры 3–6). OGGT также выявил, что мыши HFDBw+Lr+ имели тенденцию контролировать уровень глюкозы лучше, чем HFDBw + (Фигуры 7–8). L. rhamnosus CNCM I–3690 также корректировал влияние HFD на уровень инсулина (S4B)

B. wadsworthia дополнительно усиливает дисметаболизм желчных кислот, вызванный рационом с высоким содержанием жиров.

Транскриптомные данные хозяина показали, что B. wadsworthia модулирует ряд генов, участвующих в метаболизме таурина, что связано с гомеостазом желчных кислот. Желчные кислоты все чаще признаются в качестве важных сигнальных факторов и регуляторов обмена веществ. Таким образом, авторы изобретения исследовали профиль желчных кислот у мышей с комплексной микробиотой. Авторы изобретения обнаружили, что пиатние HFD приводит к изменениям состава желчных кислот в слепой кишке, характеризующимся значительно более высоким общим содержанием желчных кислот и конъюгатов с повышенным содержанием первичных желчных кислот, в отличие от вторичных конъюгатов, и уменьшением доли желчных кислот, таких как DCA и HDCA (Фигуры 13–15). B. wadsworthia имеет тенденцию к дальнейшему нарушению регуляции состава желчных кислот в слепой кишке с более высокими уровнями таурохолевой кислоты (TCA), таурин–конъюгированной желчной кислоты, а также других желчных кислот, таких как UDCA и MCA–β. Кроме того, в сыворотке мышей, получавших HFD, концентрация желчной кислоты, конъюгированной с таурином, была более чем в 100 раз выше, чем у CD, с еще более сильным увеличением в группе HFDBw+ (Фигуры 16–17). Напротив, HFDBw+Lr+ показали более низкое содержание общих и таурин–конъюгированных желчных кислот по сравнению с HFDBw+, что свидетельствует об эффективности L. rhamnosus CNCM I–3690 в отношении обращения вспять влияния HFD и B. wadsworthia на желчные кислоты.

B. wadsworthia вызывает дисфункцию кишечного барьера и усиливает воспаление, вызванное HFD, которое можно устранить с помощью L. rhamnosus CNCM I–3690.

Основываясь на том, что авторы изобретения упростили исследования микробиоты, присутствие B. wadsworthia оказывало положительную регуляцию на глобальный синтез LPS кишечными микробными сообществами и в дальнейшем было связано с более высоким системным LPS. Руководствуясь этими результатами, авторы изобретения также оценили доступность LPS в системном компартменте на модели обычных мышей с HFD.В соответствии с результатами, полученными у мышей, колонизированных ASF, уровень sCD14 в сыворотке был значительно выше у HFDBw+, чем у мышей с HFD (Фигура 18). L rhamnosus CNCM I–3690 улучшил этот фенотип.

Дисфункция кишечного барьера является важной особенностью при ожирении и метаболическом синдроме. Авторы изобретения предположили, что этот параметр может лежать в основе повышенной системной биодоступности LPS. Таким образом, авторы изобретения оценили кишечную проницаемость, используя классический маркер проницаемости FITC–декстран. У мышей HFDBw+ наблюдалась повышенная проницаемость кишечника, о чем свидетельствует более высокий уровень FITC–декстрана в сыворотке после перорального введения через зонд (Фигура 19). Этот фенотип был уменьшен L. rhamnosus CNCM I–3690. В целом, эти результаты показывают, что увеличение численности B. wadsworthia усиливает влияние изменений в кишечном барьере, вызванных HFD, и L rhamnosus CNCM I–3690 частично обращает этот эффект вспять.

Нарушение кишечного барьера может привести к повышенной проницаемости кишечника для бактериальных эндотоксинов, таких как LPS, и, в свою очередь, может увеличить воспаление слизистой оболочки и привести к системному воспалению. Следовательно, авторы изобретения далее исследовали, усиливает ли B. wadsworthia воспалительный ответ, вызванный HFD, у обычных мышей. Авторы изобретения впервые охарактеризовали состояние воспаления слизистой оболочки путем количественного определения уровней липокалина в кале в различные моменты времени в течение всего периода эксперимента (Фигура 20). Рацион HFD, как правило, показывал более высокие уровни липокалина в кале по сравнению с CD, но у мышей HFDBw+ он было дополнительно и значительно увеличен, особенно на 7 и 9 неделе. Количество цитокинов в MLN, подвздошной кишке и тощей кишке у HFDBw+ было одинаково выше по сравнению с CD или HFD или в обеих группах, что подчеркивает состояние повышенного иммунного ответа слизистой в группе HFDBw+ (Фигуры 21–23). Обработка L rhamnosus CNCM I–3690 смогла ослабить некоторые из этих реакций, особенно на уровень фекального липокалина, TNF–α и IFN–γ (Фигуры 20–23).

Авторы изобретения дополнительно оценили состояние системного воспаления и наблюдали сходную картину со значительно увеличенной продукцией нескольких провоспалительных цитокинов, таких как IFN–γ, TNF–α и IL–6, в селезенке и печени мышей HFDBw+ (Фигуры 24–25). Подобно иммунному ответу слизистой оболочки, введение L. rhamnosus CNCM I–3690 глобально исправляло системное воспаление, вызванное B. wadsworthia. Взятые вместе, эти результаты показали, что B. wadsworthia синергически взаимодействует с HFD, вызывая более высокие состояния системного воспаления и воспаления слизистой оболочки, которые, по меньшей мере, частично могут быть устранены L rhamnosus CNCM I–3690.

ОБСУЖДЕНИЕ

Рацион с высоким содержанием насыщенных жиров (HFD) постоянно ассоциировался с увеличением численности B. wadsworthia, бактерии, вовлеченной в увеличение тяжести колита у мышей IL–10 –/–. Тем не менее, влияние В. wadsworthia на генетически невосприимчивого хозяина, а также на то, может ли и как их экспансия способствовать нарушенной метаболической функции, остается недостаточно изученным. Здесь авторы изобретения использовали подход, основанный на гипотезах, чтобы проанализировать, как B. wadsworthia способны модулировать метаболический ответ хозяина на HFD. Затем авторы изобретения проверили гипотезу на обычной мышиной модели HFD. Результаты показали, что, помимо провоспалительных эффектов на кишечник, B. wadsworthia способствует дефектам кишечного барьера, системному воспалению, дисметаболизму желчных кислот и изменениям в функциональном профиле микробиома, что приводит к ухудшению метаболических эффектов, вызванных HFD. Более того, авторы изобретения показали, что L. rhamnosus CNCM I–3960 был способен обратить вспять большинство метаболических и воспалительных нарушений хозяина, вызванных B. wadsworthia .

Ранее было показано, что B. wadsworthia наращивается в присутствии конъюгированных с таурином желчных кислот, особенно таурохолевой кислоты (TCA). Аналогичным образом, авторы изобретения наблюдали, что В. wadsworthia выращивают in vitro на 1 log колониеобразующих единиц больше в присутствии таурина (1%). Таким образом, в сочетании с предыдущими результатами это говорит о том, что таурин и его производные, в частности TCA, могут быть необязательными для выживания В. wadsworthia, но это важно для его улучшенной приспособляемости и роста.

Желчные кислоты синтезируются из холестерина. В печени таурин вместе с глицином используются для конъюгирования желчных кислот с образованием первичных желчных кислот. Желчные кислоты подвергаются энтерогепатической циркуляции, которая включает циркуляцию в кишечнике, где первичные желчные кислоты деконъюгируются и превращаются во вторичные желчные кислоты посредством микробиоты. Ранее было показано, что насыщенные жиры животного происхождения способствуют выработке тауро–конъюгированных желчных кислот, таких как ТСА. Авторы изобретения показали, что HFD оказывает значительную положительную регуляцию на гены, участвующие в метаболизме таурина, с увеличением концентрации таурин–конъюгированных желчных кислот и снижением доли вторичных желчных кислот. B. wadsworthia дополнительно регулирует диспропорцию желчных кислот в контексте HFD, и это можно обратить вспять путем обработки L rhamnosus CNCM 1–3690. Вторичные желчные кислоты играют важную роль отрицательной обратной связи в снижении синтеза желчных кислот; следовательно, увеличение общего количества сывороточных желчных кислот и желчных кислот слепой кишкив группе HFDBw+ может усугубляться снижением доли вторичных желчных кислот. Кроме того, в отличие от конъюгированных желчных кислот, неконъюгированные желчные кислоты, такие как желчная кислота и хенодезоксихолевая кислота, являются сильным агонистом рецепторов желчных кислот, таких как рецептор фарнезоида X и трансмембранный рецептор, сопряженный с G–белком. Передача сигналов через эти рецепторы активирует транскрипционные сети и сигнальные каскады, имеющие значение для холестеринового и липидного обмена, поддержания глюкозы и гомеостаза печени, а также генов, участвующих в подавлении воспаления и усилении барьерной функции кишечника. Аналогично, предыдущие исследования показали провоспалительные свойства первичных желчных кислот. Все вместе, это говорит о том, что влияние B. wadsworthia на метаболизм желчных кислот может лежать в основе механизма, посредством которого бактерия потенцирует индуцированные HFD метаболические нарушения и дисфункции хозяина, в частности, воспаление и барьерную дисфункцию.

Чтобы дополнительно определить механистическую основу, по которой B. wadsworthia влияет на метаболизм хозяина и как L. rhamnosus CNCM I–3690 модулирует эти эффекты, авторы изобретения провели транскриптомный анализ как хозяина, так и микробиоты. Чтобы полностью понять систему, авторы изобретения решили работать в среде с контролируемой микробиотой, в которой бактериальная функция и функция хозяина могут быть приведены к конкретному микробу или состоянию. Один из ключевых результатов указанных исследований метатранскриптомики показал, что путь синтеза LPS подвергается сильной положительной регуляции у микробиоты мышей HFDBw+. Это сопровождалось более высокой транслокацией LPS, которая может, по меньшей мере, частично объяснить усиление системного воспалительного ответа, который авторы изобретения наблюдали в HFDBw+, как у колонизированных ASF, так и у обычных мышей. L. rhamnosus CNCM I–3690 может модулировать провоспалительный фенотип у мышей HFDBw+ путем уменьшения численности B. wadsworthia и/или благодаря своим внутренним противовоспалительным эффектам.

В дополнение к синтезу LPS присутствие B. wadsworthia индуцировало пониженную экспрессию микробных генов, участвующих в метаболизме бутаноата, у мышей, колонизированных ASF. Кроме того, снижение производства бутирата было подтверждено дозировкой в просвете толстой кишки. Помимо влияния на модулирование воспалительного ответа, бутират, как было показано, обращает вспять повышенную проницаемость кишечника путем сборки плотных соединений. Кроме того, ранее было показано на животных моделях ожирения и инсулинорезистентности, что пищевые добавки с бутиратом имеют профилактические и терапевтические преимущества.

Изобретение относится средствам, содержащим бактерии рода Lactobacillus, для уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста у индивидуума и/или для снижения желчных кислот и обеспечения улучшения соответствующих метаболических нарушений у пациента. Предложено применение ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690 в качестве средства для уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста у индивидуума. Применение ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690, также обеспечивает уменьшение желчных кислот сыворотки или слепой кишки индивидуума. Применение указанных средств обеспечивает улучшение соответствующих метаболических нарушений у индивидуума. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 25 ил., 1 пр.

1. Применение ферментированного молочного продукта, содержащего, по меньшей мере, Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690, для уменьшения популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста у индивидуума.

2. Применение по п.1 для уменьшения кишечной популяции Bilophila wadsworthia или ингибирования ее роста у индивидуума.

3. Применение ферментированного молочного продукта, содержащего, по меньшей мере, Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690, для уменьшения желчных кислот.

4. Применение по п.3, отличающееся тем, что указанные желчные кислоты представляют собой желчные кислоты сыворотки или слепой кишки.

5. Применение по п.3, отличающееся тем, что указанные желчные кислоты являются тауро-конъюгированными.

6. Применение по любому из пп.1-5, отличающееся тем, что индивидуум имеет невегетарианский рацион и/или рацион с высоким содержанием жира.