НОВОЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ТИЕНО[3,2-D]ПИРИМИДИН-4-ОНА Российский патент 2022 года по МПК A61K31/55 A61K31/5377 A61K31/519 C07D495/04 A61P1/16 A61P43/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к фармацевтическому применению соединений тиено[3,2-d]пиримидин-4-она, и, в частности, к применению в производстве лекарственного средства для лечения и/или профилактики фиброза печени и родственных заболеваний.

Уровень техники

Фиброз печени - это реакция восстановления повреждений хронического характера, которая возникает в печени после воздействия на нее различных патогенных факторов. Вирусный гепатит, химическое отравление или заболевание печени, вызванное лекарственными препаратами, алкогольная/неалкогольная жировая болезнь печени, аутоиммунное заболевание печени, врожденное нарушение обмена веществ и т.п. могут вызывать фиброз печени. Неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) и фиброз печени относятся к патологическим изменениям, вызванным аномальной гиперплазией внутрипеченочной соединительной ткани и хроническим поражением печени, вызванным различными патогенными факторами, которые проявляются как чрезмерное аномальное отложение компонентов внеклеточного матрикса в печени и влияют на функции печени, и являются необходимыми стадиями для перерастания хронического заболевания печени в цирроз. Любое повреждение печени связано с процессом фиброза печени в процессе восстановления и заживления печени. Если фактор повреждений невозможно удалить в течение длительного времени, длительный фиброз перерастет в цирроз. В настоящее время в Китае насчитывается более 200 миллионов пациентов с различными типами заболеваний печени, в том числе около 93 миллионов носителей вируса гепатита В, около 40 миллионов носителей вируса гепатита С и около 120 миллионов пациентов с ожирением печени. В связи с изменениями в структуре питания и образе жизни китайцев в последние годы резко возросла заболеваемость ожирением печени, и заболевание все чаще возникает в более молодом возрасте. Распространенность ожирения печени у детей возрастом всего 6 лет достигает 2,6%. 70% пациентов с длительным течением хронического заболевания печени имеют фиброз печени, а у 25% фиброз печени через 10 лет переходит в цирроз, из которых 5% случаев могут развиться в рак печени. Заболевания печени не только приносят большие страдания пациентам и их семьям, но и ложатся тяжелым экономическим бременем на общество.

Патогенез неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) и фиброза печени более сложен и связан с различными ферментами и рецепторами. В настоящее время считается, что фиброз печени - это обратимый патологический процесс аномального отложения волокнистой соединительной ткани в печени, вызванный дисбалансом между производством и разложением внеклеточного матрикса (ВКМ), такого как коллаген в печени, что отражает процесс динамического баланса восстановления печени и образования рубцов. Хотя исследования патогенеза фиброза печени становятся все более обширными, до сих пор нет эффективных методов лечения фиброза печени, а разработка препаратов против фиброза печени идет очень медленно. В настоящее время агонист FXR (фарнезоидный рецептор X) обетихолевая кислота (ОХА) наиболее часто используется в медицине для лечения неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) и фиброза печени. Обетихолевая кислота была оперативно одобрена FDA для лечения холестатического цирроза печени в июне 2016 года. Стероидное соединение обетихолевой кислоты является агонистом FXR (фарнезоидного рецептора X) семейства ядерных рецепторов. Как эндогенный рецептор желчной кислоты, FXR широко участвует в регуляции желчной кислоты, сахара, липидного обмена, воспаления и других процессов. После возбуждения FXR может опосредованно подавлять проявление гена CYP7A1 и ингибировать синтез желчной кислоты для лечения первичного холестатического цирроза и облегчения таких симптомов, как асцит печени, вызванный портальной гипертензией печени. Исследование его применения при неалкогольном стеатогепатите (НАСГ) прошло 3-й, клинический этап.

Однако у 70% пациентов с ожирением и сахарным диабетом 2-го типа наблюдается неалкогольная жировая болезнь печени или НАЖБП, а у 30-40% пациентов - неалкогольный стеатогепатит или НАСГ. Предыдущие эксперименты на животных выявили, что обетихолевая кислота снижает резистентность к инсулину. В завершенных исследованиях 2-го этапа по оценке влияния ОХА на неалкогольную жировую болезнь печени в сочетании с диабетом 2-го типа, хотя количество случаев и время исследования были относительно небольшими, результаты показали, что ОХА активировала FXR, тем самым улучшая чувствительность к инсулину пациентов с неалкогольной жировой болезнью печени и сахарным диабетом. Но эффективность должна быть подтверждена более обширными клиническими испытаниями.

Дипептидилпептидаза-4 (DPP-4) представляет собой поверхностноклеточную сериновую протеазу с молекулярной массой 110 кДа, также известную как поверхностноклеточный антиген Т-клеток CD26. Это многофункциональный фермент, который существует в клеточной мембране в форме гомодимера. Он может распознавать олигопептиды, вторая аминокислота которых на амино-конце представляет собой аланин (Ala) или пролин (Pro), а также вырезать и удалять первые две аминокислоты на амино-конце. Субстраты, которые можно вырезать, включают факторы роста, хемокины, нейропептиды и вазоактивные пептиды. Поскольку он способен вырезать GLP-1, то играет важную роль в метаболизме сахара. Ряд ингибиторов DPP-4 доступны на рынке для лечения диабета 2-го типа. В настоящее время ингибитор DPPIV эвоглиптин (Южная Корея) проходит первый этап клинических испытаний в США для лечения НАСГ. Исследования показали, что ингибиторы DPP-4 обладают хорошим терапевтическим эффектом у пациентов с сахарным диабетом, сопровождающимся неалкогольной жировой болезнью печени (НАЖБП) и неалкогольным стеатогепатитом (НАСГ) при клиническом применении. Следовательно, разработка препаратов с лучшим избирательным подходом к DPP-4, несомненно, будет иметь хорошие рыночные перспективы для лечения неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) и фиброза печени.

Сущность изобретения

Цель настоящего изобретения - создание лекарства для лечения и/или предотвращения фиброза печени и связанных с ним заболеваний.

В одном из аспектов настоящего изобретения предлагается использовать соединение тиено[3,2-d]пиримидин-4-она, представленного следующей общей формулой (I), его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, стереоизомера или таутомера для производства лекарственного средства для лечения и/или профилактики фиброза печени и связанных заболеваний, или для производства ингибитора DPP-4, или для использования в качестве ингибитора DPP-4,

n - целое число от 1 до 3;

R₁ и R₂ идентичны или различны и не являются одновременно водородом, и каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой Н, галоген, CBr₂H, CCl₂H, CF₂H, циано, CF₃, альдегидную группу, (CH₂)_mOR₆, (CH₂)_mNR₆R₇, (CH₂)_mCOORs, CONR₉R₁₀ или где

R₁ и R₂ необязательно могут быть связаны вместе с образованием С3-С6 алкилидена;

m - целое число от 0 до 3;

R₆ и R₇ идентичны или различны, и каждый из R₆ и R₇ независимо выбирается из Н, С1-С6 линейного или разветвленного насыщенного или ненасыщенного гидрокарбила, С3-С7 циклического гидрокарбила, С1-С3 алкокси, 4 7-членного гетероциклического радикала, C1-С4 алкилоила RCO, С5-С7 ароила ArCO, С1-С4 алкилсульфонила RSO₂, С5-С7 арилсульфонила ArSO₂, С5-С7 ароилметилена, 5 7-членного гетероароилметилена, бензила, пиридиндиметилена, С5-С7 арила Ar или 5 7-членного гетероароилметилена; где С1-С6 линейный или разветвленный насыщенный или ненасыщенный гидрокарбил необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбранными из метилсульфонила, циклопропила, гидрокси, С1-С3 алкокси, С1-С3 алкоксикарбонила и эпоксипропила; гетероциклический радикал содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, метилен гетероциклического радикала необязательно замещается карбонилом или сульфонилом, или гетероциклический радикал необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, C1-С4 алкокси, C1-С4 алкоксикарбонила, меркапто, С1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar; арил или бензил необязательно замещаются одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, C1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4-ацила и С5-С7-арила Ar; гетероарил содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, необязательно объединяется с фенилом или С5-С7 гетероарилом или замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, C1-С4 алкокси, меркапто, C1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar;

R₈ выбирается из Н, С1-С6 линейного или разветвленного насыщенного или ненасыщенного гидрокарбила, С3-С7 циклического гидрокарбила;

R₉ и R₁₀ идентичны или различны, и каждый независимо выбирается из Н, С1-С6 линейного или разветвленного насыщенного или ненасыщенного гидрокарбила, С3-С7 циклического гидрокарбила, С4-С7 гетероциклического радикала, С5-С7 ароилметилена, 5- 7-членного гетероароилметилена, бензила, пиридиндиметилена, С5-С7-арила Ar или 5 7-членного гетероарила; где С1-С6 линейный или разветвленный насыщенный или ненасыщенный гидрокарбил необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из метилсульфонила, циклопропила, гидрокси, С1-С3 алкокси, С1-С3 алкоксикарбонила и эпоксипропила; гетероциклический радикал содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, метилен гетероциклического радикала необязательно замещается карбонилом или сульфонилом, или гетероциклический радикал необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar; арил или бензил необязательно замещаются одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4-ацила и С5-С7-арила Ar; гетероарил содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, необязательно объединяется с фенилом или С5-С7 гетероарилом или замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, C1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, C1-С4 алкокси, меркапто, C1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar;

Р - целое число от 0 до 2;

R₁₁, R₁₂ и R₁₃ идентичны или различны, каждый из R₁₁, R₁₂ и R₁₃ независимо выбирается из Н, С1-С6 линейного или разветвленного насыщенного или ненасыщенного гидрокарбила, С3-С7 циклического гидрокарбила, фенила или бензила; где фенил или бензил необязательно замещаются одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С3 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила и C1-C4 алкокси;

представляет собой 3 7-членный азотсодержащий гетероциклический радикал, причем гетероциклический радикал дополнительно содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, а метилен гетероциклический радикал необязательно замещается карбонилом или сульфонилом, и гетероциклический радикал необязательно замещается 1-5 заместителями, выбираемыми из Н, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, галогена, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, ациламино, карбоксилатной группы, С1-С4 алкоксикарбонила, меркапто, С1-С4 алкокси и гидроксамино;

R₃ выбирается из NR₁₄R₁₅ или , где R₁₄ и R₁₅ идентичны или различны, и каждый из R₁₄ и R₁₅ независимо представляет собой Н, C1-С6 линейный или разветвленный насыщенный или ненасыщенный гидрокарбил и гидрокарбоксил, С3-С7 циклический гидрокарбил, C1-С6 гидрокарбиламино, C1-С6 гидрокарбиламиногидрокси, C1-С6 гидрокарбиламидино, C1-С6 гидрокарбилгуанидил, бензил, С5-С7 арил Ar или 5 7-членный гетероарил, и гетероарил содержит 13 гетероатома, выбираемых из О, S и N, необязательно объединяется с фенилом или С5-С7 гетероарилом или замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar;

представляет собой 3-7-членный азотсодержащий гетероциклический радикал, и гетероциклический радикал дополнительно содержит 1-4 гетероатома, выбираемых из О, S и N, и замещается 1-5 заместителями, выбираемыми из Н, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, галогена циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметил, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, ациламино, карбоксилатной группы, С1-С4 алкоксикарбонила, меркапто, амидино, гуанидила и гидроксамино;

R₄ и R₅ идентичны или различны, и каждый из R₄ и R₅ независимо представляет собой Н, галоген, C1-С6 линейный или разветвленный гидрокарбил, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметил, трифторметил, трифторметокси, карбоксил, C1-C4 алкокси, меркапто, C1-C4 ацил, C1-C4 сульфонил, C1-C4 сульфониламино, аминоацил или C1-C4 линейный или разветвленный алкилзамещенный сульфонил;

галоген представляет собой фтор, хлор, бром или йод.

В другом предпочтительном варианте осуществления R₁ и R₂ идентичны или различны и одновременно не являются водородом, R₁ представляет собой водород, CBr₂H, CCl₂H, CF₂H, циано, CF₃, альдегидную группу, (CH₂)_mOR₆, (CH₂)_mNR₆R₇, , (CH₂)_mCOOR₈, CONR₉R₁₀ или R₂ представляет собой водород, галоген, CBr₂H, CCl₂H, CF₂H, циано, CF₃, альдегидную группу, (CH₂)_mOR₆, (CH₂)_mNR₆R₇, , (CH₂)_mCOOR₈, CONR₉R₁₀ или

или R₁ и R₂ могут быть необязательно связаны вместе с образованием С3-С6 алкилидена.

В другом предпочтительном варианте осуществления родственное заболевание выбирается из группы, состоящей из неалкогольной жировой болезни печени, неалкогольного стеатогепатита и фиброза печени.

Предпочтительно в соединении общей формулы (I),

n-1;

R₁ и R₂ идентичны или различны и не являются одновременно водородом, и каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой Н, галоген, CBr₂H, CCl₂H, CF₂H, циано, CF₃, альдегидную группу, (CH₂)_mOR₆, (CH₂)_mNR₆R₇, (CH₂)_mCOOR₈, CONR₉R₁₀ или причем R₁ и R₂ необязательно связаны вместе с образованием С3-С6 алкилидена;

m - целое число от 0 до 3;

R₆ и R₇ идентичны или различны, и каждый из R₆ и R₇ независимо выбирается из Н, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, С3-С7 циклоалкила, С1-С3 алкокси, 4-7-членного гетероциклического радикала, С1-С4 алкилоила RCO, С5-С7 арилоила ArCO, С1-С4 алкилсульфонила RSO₂, С5-С7 арилсульфонила ArSO₂, С5-С7 ароилметилена, 5-7-членного гетероароилметилена, бензила, пиридиндиметилена, С5-С7-арила Ar или 5-7-членного гетероарила, причем С1-С6 линейный или разветвленный алкил необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из метилсульфонила, циклопропила, гидрокси, С1-С3 алкокси, С1-С3 алкоксикарбонила и эпоксипропила, гетероциклический радикал содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, арил или бензил необязательно замещаются одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4-ацила и С5-С7-арила Ar, гетероарил содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, необязательно объединяется с фенилом или С5-С7 гетероарилом или замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar,

R₈ выбирается из водорода, С1-С6 линейного или разветвленного алкила;

R₉ и R₁₀ идентичны или различны, и каждый независимо выбирается из Н, , С1-С6 линейного или разветвленного алкила, С3-С7 циклоалкила, 4-7-членного гетероциклического радикала, С5-С7 ароилметилена, 5-7-членного гетероароилметилена, бензила, пиридиндиметилена, С5-С7 арила Ar или 5-7-членного гетероарила; линейный или разветвленный C1-С6 алкил необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из метилсульфонила, циклопропила, гидрокси, С1-С3 алкокси, С1-С3 алкоксикарбонила и эпоксипропила, гетероциклический радикал содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, метилен гетероциклического радикала необязательно замещается карбонилом или сульфонилом, или гетероциклический радикал необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar; арил или бензил необязательно замещаются одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar; гетероарил содержит 13 гетероатома, выбираемых из О, S и N, необязательно объединяется с фенилом или С5-С7 гетероарилом или замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, C1-C4 алкокси, меркапто, C1-C4 ацила и С5-С7 арила Ar;

р - целое число от 0 до 2;

R₁₁, R₁₂ и R₁₃ идентичны или различны, каждый из R₁₁, R₁₂ и R₁₃ независимо выбирается из Н, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, С3-С7 циклоалкила, фенила или бензила; причем фенил или бензил необязательно замещаются одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С13 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила и С1-С4 алкокси;

представляет собой А 3-7-членный азотсодержащий гетероциклический радикал, гетероциклический радикал дополнительно содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, а метилен гетероциклического радикала необязательно замещается карбонилом или сульфонилом, и гетероциклический радикал необязательно замещается 1-5 заместителями, выбираемыми из Н, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, галогена, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, ациламино, карбоксилатной группы, С1-С4 алкоксикарбонила, меркапто, C1-C4 алкокси и гидроксамино;

R₃ выбирается из NR₁₄R₁₅ или причем R₁₄ и R₁₅ идентичны или различны, и каждый из R₁₄ и R₁₅ независимо представляет собой Н, C1-С6 линейный или разветвленный алкил и алкокси, С3-С7 циклоалкил, C1-С6 алкиламино, C1-С6 алкиламиногидрокси, С1-С6 алкиламидино, C1-С6 алкилгуанидил, бензил, С5-С7 арил Ar или 5 7-членный гетероарил, и гетероарил содержит 13 гетероатома, выбираемых из О, S и N, необязательно объединяется с фенилом или С5-С7 гетероарилом, или замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar;

представляет собой 3 7-членный азотсодержащий гетероциклический радикал, и гетероциклический радикал дополнительно содержит 14 гетероатома, выбираемых из О, S и N, и замещается 15 заместителями, выбираемыми из Н, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, галогена циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметил, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, ациламино, карбоксилатной группы, C1-C4 алкоксикарбонила, меркапто, амидино, гуанидила и гидроксамино;

R₄ и R₅ идентичны или различны, и каждый из R₄ и R₅ независимо представляет собой Н, галоген, C1-С6 линейный или разветвленный гидрокарбил, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметил, трифторметил, трифторметокси, карбоксил, C1-C4 алкокси, меркапто, C1-C4 ацил, C1-C4 сульфонил, C1-C4 сульфониламино, аминоацил или C1-C4 линейный или разветвленный алкилзамещенный сульфонил;

галоген представляет собой фтор, хлор, бром или йод.

Более предпочтительно в соединении общей формулы (I),

n-1;

R₁ и R₂ идентичны или различны и не являются одновременно водородом, и каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой Н, галоген, CBr₂H, CCl₂H, CF₂H, циано, CF₃, альдегидную группу, (CH₂)_mOR₆, (CH₂)_mNR₆R₇, (CH2)_mCOOR₈, CONR₉R₁₀ или причем R₁ и R₂ необязательно связаны вместе с образованием С3-С6 алкилидена;

m - целое число от 0 до 3;

R₆ и R₇ идентичны или различны, и каждый из R₆ и R₇ независимо выбирается из Н, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, С3-С7 циклоалкила, С1-С3 алкокси, 4-7-членного гетероциклического радикала, С1-С4 алкилоила RCO, С5-С7 арилоила ArCO, С1-С4 алкилсульфонила RSO₂, С5-С7 арилсульфонила ArSO₂, С5-С7 ароилметилена, 5-7-членного гетероароилметилена, бензила, пиридиндиметилена, С5-С7-арила Ar или 5-7-членного гетероарила; причем линейный или разветвленный С1-С6 алкил необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из метилсульфонила, циклопропила, гидрокси, С1-С3 алкокси, С1-С3 алкоксикарбонила и эпоксипропила; гетероциклический радикал содержит 13 гетероатома, выбираемых из О, S и N; арил или бензил необязательно замещаются одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1- С4-ацила и С5-С7-арила Ar; гетероарил содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, необязательно объединяется с фенилом или С5-С7 гетероарилом или замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, C1-C4 алкокси, меркапто, C1-C4 ацила и С5-С7 арила Ar;

R₈ выбирается из водорода, С1-С6 линейного или разветвленного алкила;

R₉ и R₁₀ идентичны или различны, и каждый независимо выбирается из Н, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, С3-С7 циклоалкила, 4-7-членного гетероциклического радикала, С5-С7 ароилметилена, 5-7-членного гетероароилметилена, бензила, пиридиндиметилена, С5-С7 арила Ar или 5-7-членного гетероарила; линейный или разветвленный С1-С6 алкил необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из метилсульфонила, циклопропила, гидрокси, С1-С3 алкокси, С1-С3 алкоксикарбонила и эпоксипропила; гетероциклический радикал содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, метилен гетероциклического радикала необязательно замещается карбонилом или сульфонилом, или гетероциклический радикал необязательно замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, C1-C4 алкокси, меркапто, C1-C4 ацила и С5-С7 арила Ar; арил или бензил могут замещаться одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar; гетероарил содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, необязательно объединяется с фенилом или С5-С7 гетероарилом или замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4 ацила и С5-С7 арила Ar;

р - целое число от 0 до 2;

R₁₁, R₁₂ и R₁₃ идентичны или различны, каждый из R₁₁, R₁₂ и R₁₃ независимо выбирается из Н, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, С3-С7 циклоалкила, фенила или бензила; причем фенил или бензил необязательно замещаются одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С3 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила и С1-С4 алкокси;

представляет собой А 3-7-членный азотсодержащий гетероциклический радикал, гетероциклический радикал дополнительно содержит 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, а метилен гетероциклического радикала необязательно замещается карбонилом или сульфонилом, и гетероциклический радикал необязательно замещается 1-5 заместителями, выбираемыми из Н, С1-С6 линейного или разветвленного гидрокарбила, галогена, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, ациламино, карбоксилатной группы, С1-С4 алкоксикарбонила, меркапто, C1-C4 алкокси и гидроксамино;

R₃ выбирается из NR₁₄R₁₅ или причем R₁₄ и R₁₅ идентичны или различны, и каждый из R₁₄ и R₁₅ независимо представляет собой Н, C1-С6 линейный или разветвленный алкил и алкокси, С3-С7 циклоалкил, C1-С6 алкиламино, C1-С6 алкиламиногидрокси, С1-С6 алкиламидино, C1-С6 алкилгуанидил, бензил, С5-С7 арил Ar или 5 7-членный гетероарил, и гетероарил содержит 13 гетероатома, выбираемых из О, S и N, необязательно объединяется с фенилом или С5-С7 гетероарилом, или замещается одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогена, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, С1-С4 алкокси, меркапто, С1 -С4 ацила и С5-С7 арила Ar;

представляет собой 3 7-членный азотсодержащий гетероциклический радикал, и гетероциклический радикал дополнительно содержит 14 гетероатома, выбираемых из О, S и N, и замещается 15 заместителями, выбираемыми из Н, С1-С6 линейного или разветвленного алкила, галогена циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметил, трифторметила, трифторметокси, карбоксила, ациламино, карбоксилатной группы, С1-С4 алкоксикарбонила, меркапто, амидино, гуанидила и гидроксамино;

R₄ и R₅ идентичны или различны, и каждый из R₄ и R₅ независимо представляет собой Н, галоген, С1-С6 линейный или разветвленный гидрокарбил, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметил, трифторметил, трифторметокси, карбоксил, С1-С4 алкокси, меркапто, С1-С4 ацил, С1-С4 сульфонил, С1-С4 сульфониламино, аминоацил или С1-С4 линейный или разветвленный алкилзамещенный сульфонил;

галоген представляет собой фтор, хлор, бром или йод.

Также предпочтительно в соединении общей формулы (I),

n=1,

R₁ и R₂ идентичны или различны и не являются одновременно водородом, и каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой Н, галоген, (CH₂)_mCOOR₈, CONR₉R₁₀, где

m - целое число от 0 до 3;

R₈ выбирается из водорода или С1-С3 линейного или разветвленного алкила;

R₉ и R₁₀ идентичны или различны, и каждый независимо выбирается из Н, С1-С3 линейного или разветвленного алкила, С3-6 циклоалкила, С4-С6 гетероциклила, фенила или 5 7-членного гетероарила; причем С1-С3 линейный или разветвленный алкил необязательно замещается С1-С3 алкоксикарбонилом; гетероциклил содержит один гетероатом, выбираемый из О, S и N; гетероарил содержит один гетероатом, выбираемый из О, S и N;

представляет собой пирролидинил, пиперидинил, морфолинил, пиперазинил, гомопиперазинил или тиоморфолинил и необязательно замещается 1-2 заместителями, выбираемыми из Н, С1-С3 линейного или разветвленного алкила, галогена, гидроксила и С1-С4 алкоксикарбонила;

R₃ представляет собой пирролидинил, пиперидинил, морфолинил, пиперазинил, гомопиперазинил или тиоморфолинил и замещается циано, амино или гидрокси;

R₄ и R₅ идентичны или различны, и каждый из R₄ и R₅ независимо представляет собой Н, фтор, хлор, бром, метил, этил, циано или гидроксил.

Наиболее предпочтительные соединения тиено[3,2-d]пиримидин-4-она в настоящем изобретении и их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, стереоизомеры, таутомеры и пролекарства выбираются из следующих соединений:

Наиболее предпочтительным соединением в настоящем изобретении является (R)-метил-2-(3-аминопиперидин-1-ил)-3-(2-цианобензил)-4-карбонил-3,4-дигидротиено[3,2-(1]пиримидин-6-карбоновая кислота (DC291407) и фармацевтически приемлемые соли, сольваты, стереоизомеры и таутомеры.

Другим предпочтительным соединением в настоящем изобретении являются (R)-2-(3-аминопиперидин-1-ил)-3-(2-цианобензил)-4-карбонил-3,4-дигидротиено[3,2-d]пиримидин-6-карбоновая кислота (DC291410) и фармацевтически приемлемые соли, сольваты, стереоизомеры и таутомеры.

Фармацевтически приемлемые соли включают обычные фармацевтически приемлемые соли, образованные реакцией соединений по настоящему изобретению с неорганическими или органическими кислотами. Например, обычные фармацевтически приемлемые соли могут быть получены путем взаимодействия соединений по настоящему изобретению с неорганическими или органическими кислотами, причем неорганические кислоты включают хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, аминосульфоновую кислоту, фосфорную кислоту и т.д., и органические кислоты включают лимонную кислоту, винную кислоту, молочную кислоту, пировиноградную кислоту, уксусную кислоту, бензолсульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталинсульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, нафталиндисульфоновую кислоту, малеиновую кислоту, яблочную кислоту, малоновую кислоту, фумаровую кислоту, янтарную кислоту, пропионовую кислоту, щавелевую кислоту, трифторуксусную кислоту, стеариновую кислоту, памоевую кислоту, гидроксилмалеиновую кислоту, фенилуксусную кислоту, бензойную кислоту, салициловую кислоту, глутаминовую кислоту, аскорбиновую кислоту, п-аминобензолсульфоновую кислоту, 2-ацетоксибензойную кислоту, изэтионовую кислоту и т.д. Альтернативно солями являются соли натрия, калия, кальция, алюминия или аммония, образованные соединением по настоящему изобретению и неорганическим основанием; или соли метиламина, этиламина или этаноламина, образованные соединением по настоящему изобретению и органическим основанием.

Другой целью настоящего изобретения является создание фармацевтического состава, содержащего терапевтически эффективное количество соединения тиено[3,2-d]пиримидин-4-она, представленного следующей общей формулой (I), фармацевтически приемлемую соль, сольват, стереоизомер, таутомер или его пролекарство; и фармацевтически приемлемый носитель.

«Фармацевтически приемлемый носитель» относится к одному или нескольким совместимым твердым или жидким наполнителям или гелеобразным веществам, которые подходят для использования на людях и которые должны иметь достаточную чистоту и достаточно низкую токсичность. «Совместимость» в настоящем документе означает, что каждый компонент состава может быть смешан с соединением общей формулы I по настоящему изобретению, его фармацевтически приемлемой солью или сольватом и их смесью без значительного снижения эффективности активного ингредиента. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают целлюлозу и ее производные (например, карбоксиметилцеллюлозу натрия, этилцеллюлозу натрия, ацетат целлюлозы и т.д.), желатин, тальк и твердые смазочные вещества (например, стеариновую кислоту, стеарат магния), сульфат кальция, растительные масла (например, соевое масло, кунжутное масло, арахисовое масло, оливковое масло и т.д.), полиолы (например, пропиленгликоль, глицерин, маннит, сорбит и т.д.), эмульгаторы (например, Tween^®), смачивающие реагенты (например, натрий лаурилсульфат), красители, ароматизаторы, стабилизаторы, антиоксиданты, консерванты, апирогенную воду и т.д.

Настоящее изобретение относится к лекарственному средству для лечения и/или профилактики неалкогольного ожирения печени, неалкогольного стеатогепатита и фиброза печени, получаемому с использованием соединения тиено[3,2-d]пиримидин-4-она, представленного общей формулой (I), фармацевтически приемлемой соли, сольвата, стереоизомера, таутомера или пролекарства и их смеси в качестве активного ингредиента.

Лекарственное средство можно вводить в организм, например, в мышечную ткань, внутрикожную ткань, подкожную ткань, вену, слизистую ткань, путем инъекции, распыления, капель в нос, глазных капель, пенетрации, абсорбции, физически или химически опосредованными методами; или оно может смешиваться или объединяться с другими веществами и вводиться в организм.

При необходимости к вышеупомянутому лекарственному средству можно добавить один или несколько фармацевтически приемлемых носителей. Носитель включает фармацевтически распространенные разбавители, эксципиенты, наполнители, связующие, смачиватели, дезинтегранты, стимуляторы абсорбции, поверхностно-активные вещества, носители адсорбции, смазывающие вещества и т.п.

Соединение тиено[3,2-d]пиримидин-4-она, представленное общей формулой (I), фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира, сольвата, стереоизомера, таутомера или пролекарства в качестве активного ингредиента, можно приготовить отдельно или в сочетании с другими лекарственными средствами, адъювантами и т.д. для получения различных лекарственных форм, включая, помимо прочего, таблетки, порошок, пилюли, инъекции, капсулы, пленки, суппозитории, мази, электуарий и другие формы. Вышеупомянутые различные формы лекарственного средства могут быть приготовлены обычными методами в фармацевтической области.

Настоящее изобретение также предлагает способ лечения и/или предотвращения фиброза печени и родственных заболеваний путем введения вышеупомянутого соединения тиено[3,2-d]пиримидин-4-она, представленного общей формулой (I), фармацевтически приемлемой соли, сольвата, стереоизомера или таутомера в нуждающегося в этом субъекта.

Настоящее изобретение также предлагает способ ингибирования DPP-4 путем введения вышеупомянутого соединения тиено[3,2-d]пиримидин-4-она, представленного общей формулой (I), фармацевтически приемлемой соли, сольвата, стереоизомера или таутомера в нуждающегося в этом субъекта.

Следует понимать, что в пределах объема настоящего изобретения все вышеупомянутые технические особенности настоящего изобретения и все технические характеристики, конкретно описанные ниже (например, примеры), могут быть объединены друг с другом для образования нового или предпочтительного технического решения. Каждая особенность, раскрытая в спецификации, может быть заменена любой альтернативной особенностью, которая обеспечивает ту же, равную или аналогичную цель. Из-за ограничений по объему документа это больше не повторяется.

Описание чертежей

На фиг. 1 показаны результаты применения ингибитора DPP-4 из примера 3 настоящего изобретения по ингибированию активации жирозапасающих клеток печени.

На фиг. 2 показаны результаты применения ингибитора DPP-4 в примере 4 настоящего изобретения по улучшению биохимических показателей крови при повреждении печени, экспрессии генов, связанных с фиброзом печени, и характеристических аминокислотных индексов коллагена у мышей на модели фиброза печени, индуцированного CCl₄, где столбики слева направо представляют модельную контрольную группу, DC291407 (20 мг/кг), DC291407 (60 мг/кг), ОХА (20 мг/кг), ОХА (40 мг/кг), WT, соответственно.

На фиг. 3 показаны результаты применения ингибитора DPP-4 в примере 4 настоящего изобретения по уменьшению патологических показателей отложения коллагена в патологических срезах печени у мышей на модели фиброза печени, индуцированного CCl₄, где столбики слева направо представляют модельную контрольную группу, DC291407 (20 мг/кг), DC291407 (60 мг/кг), ОХА (20 мг/кг), ОХА (40 мг/кг), WT, соответственно.

На фиг. 4 показаны результаты применения ингибитора DPP-4 из примера 5 настоящего изобретения по улучшению биохимических показателей крови и триглицеридов печени при неалкогольной жировой болезни печени, индуцированной высоким содержанием жира, на модели мышей с «выключенным» геном лептина.

На фиг. 5 показаны результаты применения ингибитора DPP-4 из примера 5 настоящего изобретения по улучшению стеатоза печени и воспалительных патологических показателей при неалкогольной жировой болезни печени, индуцированной высоким содержанием жира, на модели мышей с «выключенным» геном лептина.

На фиг. 6 показаны результаты применения ингибитора DPP-4 из примера 6 настоящего изобретения по улучшению биохимических показателей крови и характеристических аминокислотных показателей коллагена у мышей на модели фиброза печени, индуцированного CCl₄.

На фиг. 7 показаны результаты применения ингибитора DPP-4 из примера 6 настоящего изобретения по снижению патологических показателей отложения коллагена в печени на модели фиброза печени, индуцированного CCl₄.

Подробное описание

Авторы настоящей заявки провели обширные и интенсивные исследования и обнаружили, что соединения тиено[3,2-d]пиримидин-4-она могут улучшать функцию печени, подавлять экспрессию мРНК α-SMA (альфа-актин 2) и Col1α1 (коллаген, тип I, альфа 1) и снижать отложение коллагена в печени и могут использоваться для лечения и/или предотвращения фиброза печени и связанных с ним заболеваний. На этой основе было создано настоящее изобретение.

Термины

«Алкил» относится к линейной или разветвленной насыщенной алифатической углеводородной группе, например, «C_1-8 алкил» относится к линейной или разветвленной алкильной группе, включающей от 1 до 8 атомов углерода, включая, помимо прочего, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил и т.д.

«Циклический гидрокарбил» относится к насыщенному или частично ненасыщенному моноциклическому или полициклическому циклическому углеводородному заместителю. Например, «С_3-8 циклоалкил» относится к циклоалкильной группе, содержащей от 3 до 8 атомов углерода, которая классифицируется как моноциклический циклоалкил и полициклический циклоалкил, где моноциклический циклоалкил включает, помимо прочего, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогексенил, циклогексадиенил, циклогептил, циклогептатриенил, циклооктил и т.д. Полициклический циклоалкил включает спиро, конденсированные и мостиковые циклоалкилы.

«Гетероциклический радикал (или гетероциклил)» относится к насыщенному или частично ненасыщенному моноциклическому или полициклическому циклическому углеводородному заместителю, в котором один или несколько кольцевых атомов выбираются из N, О или S.

«Арил» относится к полностью углеродной моноциклической или конденсированной полициклической группе (то есть к кольцу, которое разделяет соседние пары атомов углерода), полициклическому кольцу с сопряженной π-электронной системой (то есть к кольцу с соседними парами атомов углерода), включая, помимо прочего, фенил и нафтил.

«Гетероарил» относится к гетероароматической системе, содержащей от 1 до 4 гетероатомов, включая N, О и S, например, 5-7-членный гетероарил относится к гетероароматической системе, содержащей 5-7 кольцевых атомов, 5-10-членный гетероарил относится к гетероароматической системе, содержащей 5-10 кольцевых атомов, включая, помимо прочего, фурил, тиенил, пиридил, пирролил, N-алкилпирролил, пиримидинил, пиразинил, имидазолил, тетразолил и т.д.

«Алкокси» относится к -О-(алкилу), где определение алкила соответствует описанному выше. Например, «C_1-8 алкокси» относится к алкилокси группе, содержащей 18 атомов углерода, включая, помимо прочего, метокси, этокси, пропокси, бутокси и т.д.

Настоящее изобретение будет описано ниже на конкретных примерах. Следует понимать, что эти примеры используются только для иллюстрации настоящего изобретения, а не для ограничения объема настоящего изобретения. Экспериментальные методы, которые не указывают конкретные условия в следующих примерах, обычно следуют обычным условиям (например, условиям, описанным в Sambrook et al., Molecular Cloning: Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)) или соответствуют условиям, предложенным производителем. Если не указано иное, проценты и части являются массовыми процентами и массовыми частями.

Если не указано иное, все используемые здесь профессиональные и научные термины имеют те же значения, что и термины, известные специалистам в этой области. Кроме того, любые способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным, могут быть применены к способу по настоящему изобретению. Описанные здесь предпочтительные варианты осуществления и материалы предназначены только для демонстрационных целей.

Пример 1: получение DC291407

Путь синтезирования:

Соединение 11-12 (100 мг) синтезировали указанным выше способом и затем растворяли в ДМФА. Добавляли 1,5 эквивалента метилиодида и 2 эквивалента карбоната цезия и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь экстрагировали этилацетатом, промывали водой и упаривали досуха с получением 100 мг сырого продукта 38-1.

Соединение 38-1 растворяли в 40 мл ДХМ, добавляли 15 мл ТФУ и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Растворитель удаляли на роторном испарителе и остаток растворяли в 50 мл этилацетата, промывали насыщенным раствором карбоната калия, а затем насыщенным раствором хлорида натрия. Растворитель удаляли с помощью роторного испарителя и остаток отделяли колоночной хроматографией (ДХМ: СН₃ОН=5:1) с получением соединения DC291407.

¹H-NMR (протонный магнитный резонанс) (CDCl₃-d₃): δ=7,761 (s, 1H), 7,610 (d, 1H), 7,493 (t, 1H), 7,320 (t, 1H), 7,180 (d, 1H), 5,500 (квартет, 2H), 3,895 (s,3H), 3,680 (d, 2H), 3,355 (m, 1H), 3,010 (m, 2H), 2,150 (m, 1H), 1,894 (m, 2H), l,644 (m, 1H); LC-MS (жидкостная хроматография с масс-спектрометрией) масса/заряд 424,1 [М+Н]⁺.

Пример 2: Получение DC291410

Путь синтезирования:

Соединение 11-12 (100 мг, 0,237 ммоль) растворяли в 20 мл гидрохлорида эфира, перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа и упаривали досуха с получением соединения DC291410 (70 мг) с выходом 80%, МС: 410,1 [М+Н]⁺.

Пример 3: Лечение фиброза печени ингибитором DPP-4

В экспериментах по клеточной функции использовали линию звездчатых (жирозапасающих) клеток печени человека LX-2. Для активации звездчатых клеток печени был добавлен агент активации и индукции звездчатых клеток печени TGF-β, что значительно увеличило экспрессию множественных внеклеточных матриксов. Путем сравнения уровней экспрессии внеклеточного матрикса в группе TGF-β и группе клеток, в которую одновременно добавлялись TGF-β и испытываемое соединение, была охарактеризована эффективность соединения для уменьшения фиброза печени посредством звездчатых клеток печени.

Процедура эксперимента на клетках была следующей. Линию звездчатых клеток печени человека LX-2 отбирали и инокулировали в обработанный 24-луночный планшет из расчета 7,5×10⁴ на лунку. После прикрепления клеток в течение ночи и их обработки голоданием в течение 12 часов клетки обрабатывали 10 нг/мл TGF-β и соответствующим испытываемым соединением в течение 24 часов, а затем собирали образцы белка. Экспрессию внеклеточного матрикса, представленного α-миофиламентом гладких мышц (α-SMA) и фибронектином, определяли с помощью вестерн-блоттинга.

Все соединения по настоящему изобретению были высокоактивными ингибиторами DPP-4, среди которых два соединения, DC291407 и DC291410, в зависимости от концентрации, ингибировали активацию ГСК звездчатых клеток печени по мере увеличения концентрации, и ингибирующее действие было выше, чем у положительной контрольной пробы с алоглиптином, как показано на фиг. 1. Такие соединения имеют хорошие перспективы применения при лечении фиброза печени, поэтому обладают высокой коммерческой ценностью.

Эффективность DC291407 исследовали при тестировании функции клеток, и было обнаружено, что он оказывает ингибирующее действие на активацию ГСК (ОХА (обетихолевая кислота) и GW4064 использовались в качестве положительной контрольной пробы). Впоследствии на этой клеточной системе оценивали ингибирующее действие DC291410, метаболита DC291407, на активацию звездчатых клеток печени. Результаты показали, что ингибирующее действие DC291410 в отношении активации ГСК было выше, чем у положительной контрольной пробы с алоглиптином.

Пример 4: Тестирование фармакологической активности в отношении фиброза печени in vivo

В этом эксперименте мышей с индуцированным CCl₄ фиброзом печени использовали для исследования эффекта длительного перорального введения соединения DC291407 на фиброз печени у мышиных моделей.

Эксперимент на животных: Самцам мышей C57BL/6j внутрибрюшинно вводили 2 мл/кг 10% CCl₄ (растворенного в оливковом масле) три раза в неделю для индукции модели фиброза печени. Через две недели после моделирования у мышей брали кровь из ретроокулярного венозного сплетения и определяли сывороточные показатели АЛТ и ACT. Согласно показателям АЛТ, ACT, массе тела и другим показателям, мышей случайным образом разделили на 5 групп по 10 мышей в каждой. Была создана модельная контрольная группа (носитель), группа с низкой дозой DC291407 (20 мг/кг), группа с высокой дозой DC291407 (60 мг/кг), группа с низкой дозой положительного соединения ОХА (20 мг/кг), группа с высокой дозой ОХА (40 мг/кг), соответственно, и препарат мышам вводили через желудочный зонд. DC291407 вводили два раза в день, а другим группам вводили один раз в день. Во время периода введения контролировали потребление корма и массу тела животных. Через 3 недели введения у мышей брали кровь из ретроокулярного венозного сплетения и определяли сывороточные показатели АЛТ и ACT. Через 6 недель введения у мышей брали кровь из ретроокулярного венозного сплетения, а затем мышей умерщвляли путем смещения. Печень изымали и взвешивали, часть печени фиксировали 4% параформальдегидом, а часть печени замораживали при -80°С. В течение всего эксперимента еще 10 мышам в той же клетке внутрибрюшинно вводили ту же дозу оливкового масла, что и нормальной контрольной группе (WT). Этот эксперимент показал, оказывает ли соединение эффект ослабления фиброза печени путем определения уровней показателей функции печени АЛТ и ACT в сыворотке, экспрессии уровней гена α-SMA и Col1α1 в печени, содержания гидроксипролина (характерной аминокислоты коллагена) в печени, а также патологические изменения печени (окрашивание в красный Sirius) и т.п.

Результаты исследования показали отсутствие снижения уровней АЛТ и ACT в сыворотке после 3 недель введения соединения DC291407 по настоящему изобретению, и уровень АЛТ и ACT в сыворотке значительно снижался после 6 недель введения. Экспрессия мРНК α-SMA и Col1α1 в тканях печени значительно снижалась после 6 недель введения, и снижалось содержание гидроксипролина в тканях печени (фиг. 2). При количественном анализе патологических срезов печени, окрашенных в красный Sirius, испытываемое соединение DC291407 могло снижать содержание коллагена в печени без статистической разницы (фиг. 3).

Таким образом, длительное введение испытываемого соединения DC291407 значительно улучшало функцию печени у мышей с индуцированным CCl₄ фиброзом печени, подавляло экспрессию мРНК α-SMA и Col1α1, уменьшало отложение коллагена в печени и имело определенное смягчающее действие на фиброз печени.

Пример 5: Тестирование фармакологической активности в отношении фиброза печени in vivo

В этом эксперименте модель НАЖБП у мышей с «выключенным» геном лептина, индуцированная диетой с высоким содержанием жиров, была использована для исследования лечебного эффекта длительного перорального введения соединения DC291407 на НАЖБП.

Эксперимент на животных: мышей с «выключенным» геном лептина с ожирением разделили на 3 группы в зависимости от случайной концентрации глюкозы в крови, случайной массы тела, уровня глюкозы в крови натощак и массы тела натощак в возрасте 8 недель, по 9 мышей в каждой группе. Были созданы модельная контрольная группа (носитель) и группа DC291407 (20 мг/кг), группа положительной контрольной пробы соединения алоглиптина (20 мг/кг), соответственно, и мышам вводили препарат перорально через желудочный зонд дважды в день. Группа из 6 нормальных мышей в одной клетке была создана как нормальная контрольная группа (WT). За исключением группы WT, мышей кормили обычным кормом, а остальные группы кормили кормом с высоким содержанием жира. Введение продолжали 8 недель. Во время введения контролировали потребление корма и массу тела животных. После последнего введения животным давали голодать в течение 6 часов и давали им свободно пить воду. Затем измеряли массу тела, собирали кровь из ретроокулярного венозного сплетения и рассекали печень. Часть печени помещали в 4% параформальдегид, а остальную часть хранили в холодильнике при -80°С. Этот эксперимент показал, оказывает ли соединение лечебный эффект на НАЖБП путем определения уровней показателей функции печени АЛТ и ACT в сыворотке, содержания ТС (общий холестерин) и TG (триглицериды) в печени, оценки патологии печени по шкале NAS (окрашивание НЕ) и т.п.

Результаты показали, что DC291407 может значительно снизить уровень АЛТ и ACT в сыворотке и содержание TG в ткани печени после 8 недель введения, и его эффект был эквивалентен эффекту алоглиптина (см. фиг. 4). Была проведена оценка по шкале NAS на патологических срезах печени, окрашенных НЕ, и результаты показали, что DC291407 может улучшить стеатоз, его эффект был лучше, чем у алоглиптина, и он оказывал определенный смягчающий эффект на лобулярное воспаление, а общий эффект улучшения по шкале NAS был эквивалентен эффекту алоглиптина (см. фиг. 5).

Таким образом, длительное введение DC291407 значительно улучшило функцию печени моделей мышей с НАЖБП, уменьшило стеатоз печени и оказало определенное смягчающее действие на лобулярное воспаление.

Пример 6: Тестирование фармакологической активности в отношении фиброза печени in vivo

В этом эксперименте мышей с индуцированным CCl₄ фиброзом печени использовали для исследования эффекта длительного перорального введения соединения DC291407 в нескольких дозах на фиброз печени у модельных мышей и проводили сравнение с такой же дозой ситаглиптина.

Эксперимент на животных: Самцам мышей C57BL/6j внутрибрюшинно вводили 2 мл/кг 10% CCl₄ (растворенного в оливковом масле) три раза в неделю для индукции модели фиброза печени. Через две недели после моделирования у мышей брали кровь из ретроокулярного венозного сплетения и определяли сывороточные показатели АЛТ и ACT. Согласно показателям АЛТ, ACT, массе тела и другим показателям, мышей случайным образом разделили на 8 групп по 10 мышей в каждой. Были созданы модельная контрольная группа (носитель), группа с низкой дозой DC291407 (6 мг/кг), группа со средней дозой DC291407 (20 мг/кг), группа с высокой дозой DC291407 (60 мг/кг), группа с низкой дозой ситаглиптина (6 мг/кг), группа со средней дозой ситаглиптина (20 мг/кг), группа с высокой дозой ситаглиптина (60 мг/кг) и группа с положительным соединением ОХА (20 мг/кг). Мышам вводили препараты через желудочный зонд. Группе ОХА вводили один раз в день, а другим группам - два раза в день. Во время периода введения контролировали потребление корма и массу тела животных. Через 3 недели введения у мышей брали кровь из ретроокулярного венозного сплетения и определяли сывороточные показатели АЛТ и ACT. Через 6 недель введения у мышей брали кровь из ретроокулярного венозного сплетения, а затем мышей умерщвляли путем смещения. Печень изымали и взвешивали, часть печени фиксировали 4% параформальдегидом, а часть печени замораживали при -80°С. В течение всего эксперимента еще 10 мышам в той же клетке внутрибрюшинно вводили ту же дозу оливкового масла, что и нормальной контрольной группе (WT). Этот эксперимент показал, оказывает ли соединение эффект ослабления фиброза печени путем определения уровней показателей функции печени АЛТ и ACT в сыворотке, содержания гидроксипролина (характерной аминокислоты коллагена) в печени, а также патологические изменения печени (окрашивание в красный Sirius) и т.п.

Результаты исследования показали, что группы с низкой и средней дозами соединения DC291407 по настоящему изобретению могут значительно снизить уровни АЛТ и ACT в сыворотке после 6 недель введения соединения DC291407, а группа с высокой дозой может значительно снизить уровень АЛТ в сыворотке; группа с низкой дозой ситаглиптина не показала влияния на уровни АЛТ и ACT в сыворотке, группа со средней дозой показала значительное снижение уровня ACT в сыворотке, а группа с высокой дозой показала значительное снижение уровней АЛТ и ACT в сыворотке; и группа с низкой дозой DC291407 показала снижение содержания гидроксипролина в тканях печени без статистической значимости (фиг. 6). При количественном анализе патологических срезов печени, окрашенных в красный Sirius, группы с высокой, средней и низкой дозами испытываемого соединения DC291407 показали снижение содержания коллагена в печени без зависимости от дозы; только группа с низкой дозой ситаглиптина показала значительное снижение содержание коллагена в печени (фиг. 7).

Таким образом, длительное введение испытуемого соединения DC291407 в каждой группе дозирования значительно улучшало функцию печени мышей с индуцированным CCl₄ фиброзом печени, уменьшало отложение коллагена в печени и имело определенный смягчающий эффект на фиброз печени, но в этом диапазоне доз не была выявлена зависимость от дозы.

Все документы, упомянутые в настоящем изобретении, включены в настоящую заявку посредством ссылки, и каждый документ индивидуально включен посредством ссылки. Кроме того, следует понимать, что после прочтения вышеупомянутого обучающего содержания настоящего изобретения специалисты в этой области могут внести различные изменения или модификации в настоящее изобретение, и эти эквивалентные формы также попадают в объем, определенный прилагаемой формулой изобретения в настоящей заявке.

Изобретение относится к применению соединения общей формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, стереоизомера или таутомера, для производства лекарственного средства для лечения и профилактики фиброза печени и родственных заболеваний, где родственное заболевание выбрано из группы, состоящей из неалкогольной жировой болезни печени и неалкогольного стеатогепатита. Технический результат: лечение и профилактика фиброза печени, неалкогольной жировой болезни печени и неалкогольного стеатогепатита. 6 з.п. ф-лы, 7 ил., 6 пр.

1. Применение соединения тиено[3,2-d]пиримидин-4-она, представленного следующей общей формулой (I), его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, стереоизомера или таутомера, для производства лекарственного средства для лечения и/или профилактики фиброза печени и родственных заболеваний, где родственное заболевание выбрано из группы, состоящей из неалкогольной жировой болезни печени и неалкогольного стеатогепатита;

где n представляет собой целое число 1;

R₁ и R₂ различны, и каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой Н, или COOR₈,

R₈ выбирается из Н или метила;

R₃ пиперидинил замещенный амино;

R₄ и R₅ различны, и каждый из R₄ и R₅ независимо представляет собой Н или циано.

2. Применение по п. 1, где соединение тиено[3,2-d]пиримидин-4-она общей формулы (I) выбирается из следующих соединений:

3. Применение по п. 1, где лекарственное средство дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.

4. Применение по п. 3, где фармацевтически приемлемый носитель выбирается из группы, состоящей из разбавителя, эксципиента, наполнителя, связующего, смачивающего реагента, разрыхлителя, стимулятора абсорбции, поверхностно-активного вещества, адсорбционного носителя и смазывающего вещества.

5. Применение по п. 1, где соединение тиено[3,2-d]пиримидин-4-она, его фармацевтически приемлемая соль, сольват, стереоизомер или таутомер или лекарственного средства составлено в виде таблетки, порошка, пилюли, инъекции, капсулы, пленки, суппозитория, мази или электуария.

6. Применение по п. 1, отличающееся тем, что лекарственное средство вводят в организм путем инъекции, распыления, в виде капель в нос, глазных капель, путем пенетрации, абсорбции, физически или химически опосредованными методами.

7. Применение по п. 1, отличающееся тем, что лечение и/или профилактика относятся к:

(1) подавлению экспрессии α-SMA;

(2) подавлению экспрессии мРНК Collαl;

(3) уменьшению отложения коллагена в печени;

(4) снижению уровня АЛТ;

(5) снижению уровня ACT;

(6) снижению содержания гидроксипролина в ткани печени; или

(7) ингибированию активации ГСК звездчатых клеток печени.