СПОСОБ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КЛЕТОЧНЫХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 2022 года по МПК G01N33/48 

Описание патента на изобретение RU2775382C1

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной онкологии и может быть использовано при фотодинамической обработке клеток для приготовления клеточных препаратов.

Известен способ фотодинамической обработки клеток для приготовления клеточных препаратов, состоящий из двухэтапной фотодинамической обработки клеток ex vivo (WO 2016/131960, опубл. 25.08.2016).

Недостатком данного способа является введение фотосенсибилизатора непосредственно в культуральную клеточную среду, что не учитывает фармакокинетику фотосенсибилизатора в организме животного.

Техническим результатом изобретения является возможность создания клеточных препаратов из опухолевых клеток с учетом фармакокинетики фотосенсибилизатора в организме животного, исследование зависимости уровня накопления фотосенсибилизатора от введенной дозы и времени накопления.

Указанный технический результат достигается в способе фотодинамической обработки опухолевых клеток для приготовления клеточных препаратов, включающий обработку клеток фотосенсибилизатором и последующую их фотоактивацию, отличающийся тем, что перевиваемые клетки опухоли Эрлиха вводят в организм мыши подкожно, после достижения размера опухоли 10х10 мм вводят фотосенсибилизатор радахлорин в дозе 10 мг/кг или фотодитазин в дозе 5 мг/кг в организм мыши, после извлечения опухоли из организма животного, до или послеприготовления из опухоли взвеси опухолевых клеток, проводят фотоактивацию клеток опухоли путем облучения лазером с длиной волны 662 нм в дозе 300 Дж/см2.

Способ подтверждается следующими экспериментальными примерами.

Пример 1. Способ фотодинамической обработки клеток карциномы Эрлиха ex vivo при введении фотосенсибилизатора (ФС, Радахлорин, ООО «РАДА-ФАРМА», Россия) мышам-самкам линии BALB/c с привитой подкожно опухолью Эрлиха.

Мышам-самкам линии BALB/c проводили подкожную перевивку опухоли Эрлиха в область бедра в количестве 5×105 опухолевых клеток. При достижении размера опухоли 10×10 мм животным однократно вводили фотосенсибилизатор (Радахлорин, 10 мг/кг). Накопление ФС оценивается с помощью системы неинвазивной визуализации флуоресценции «Флуовизор» (ООО «Аткус», Россия) с длиной волны возбуждения - 660 нм и регистрацией флуоресценции в инфракрасном диапазоне длин волн. Через 6 часов после накопления фотосенсибилизатора в опухолевой ткани при высокой интенсивности флуоресценции фотосензибилизатора в опухоли (Табл.) проводится эвтаназия, выделяется опухоль. Из выделенной опухоли готовится взвесь опухолевых клеток. Опухолевые кусочки измельчают с помощью ножниц, протирают через простерилизованное мелкоячеистое металлическое сито. К полученной измельченной опухолевой ткани добавляют стерильный 0,9% раствор натрия хлорида. Взвесь клеток собирают в стерильный шприц и дополнительно измельчают путем пропускания ее с помощью шприца через иглы меньших диаметров. Проводят контроль клеточности полученной суспензии (подсчет в камере Горяева). Полученная взвесь клеток подвергается фотоактивации облучением лазером Алод (ООО «Алком медика», Россия) с длиной волны 662 нм. Лазерное излучение подводят световодом с линзой для наружного облучения (ООО «Полироник», Россия), которая формирует равномерное пятно в зоне воздействия диаметром от 10 до 20 мм в зависимости от размера опухоли. Мощность излучения составляла от 0,5 до 1,2 Вт, время - от 8 до 13 мин. Плотность энергии или доза энергии во всех экспериментах составила 300 Дж/см3. Получали препарат клеток для последующего применения.

Гибель всех или части клеток подтверждается следующими экспериментальными примерами.

Пример 2. Способ фото динамической обработки клеток карциномы Эрлиха ex vivo при введении фотосенсибилизатора (Фотодитазин) с получением препарата клеток в виде взвеси после фотоактивации лазерным облучением и последующей имплантацией мышам с оценкой приживаемости.

На первом этапе девяти мышам подкожно имплантировали 106 клеток опухоли Эрлиха. Через 7-10 дней после перевивки, когда размеры опухоли составляли 10×10 мм, мышам вводили Фотодитазин (5 мг/кг, ООО «Вета Гранд», Россия) внутрибрюшинно однократно за 4 часа до выделения клеток и их фотоактивации (время определено как оптимальное в дополнительных опытах по накоплению ФС). Спустя 4 часа от введения ФС опухоль выделяли из организма мыши. Далее из опухолевой ткани без макроскопических признаков некроза готовили препарат в виде взвеси опухолевых клеток (как в примере 1), проводили подсчет в камере Горяева. Затем по 4,5 млн клеток от каждой опухоли помещали в 2 лунки 6-луночного плоскодонного культурального планшета с низкой адгезией. В одной лунке опухолевые клетки подвергали лазерной фотоактивации, а вторая служила контролем. Фотоактивация ФС осуществлялась с помощью лазерного аппарата Алод (ООО «Алком медика», Россия), длина волны лазера - 662 нм. Световодом с линзой для наружного облучения (ООО «Полироник», Россия) формировали равномерное пятно в зоне воздействия диаметром от 11 до 25 мм в зависимости от размера объекта облучения, мощность излучения составляла от 0,6 до 1,5 Вт, плотность энергии, или доза облучения во всех экспериментах составила 300 Дж/см2.

На втором этапе по 1,5 млн опухолевых клеток из каждой лунки перевивали трем здоровым мышам подкожно. За мышами вели наблюдение с регистрацией размеров опухоли в течение 32 суток. Приживаемость опухолевой взвеси в данной модификации способа составила 100% во всех группах. При введении мышам-реципиентам препарата клеток без фотоактивации фотодитазина объем опухоли к 32-м суткам составил 3,14±1,47 см3, а при его фотоактивации уменьшался до 1,67±0,26 см3. В группе контроль с воздействием лазером к 32-м суткам объем опухоли достигал 2,74±0,29 см3. Таким образом, получено торможение роста опухоли 39% по сравнению с контролем с фотоактивацией, свидетельствующее о гибели большой части клеток в полученном препарате и/или цитостатическом эффекте в отношении опухолевых клеток в полученном препарате.

Пример 3. Способ фото динамической обработки клеток карциномы Эрлиха ex vivo при введении фотосенсибилизатора (Фотодитазин) с выделением кусочка ткани опухоли из организма мыши, проведения фотоактивации лазерным облучением и приготовлением препарата клеток в виде взвеси с последующей имплантацией их мышам с оценкой приживаемости.

На первом этапе девяти мышам подкожно имплантировали 106 клеток опухоли Эрлиха. Через 7-10 дней после перевивки, когда размеры опухоли составляли 10×10 мм, мышам вводили Фотодитазин (5 мг/кг, ООО «Вета Гранд», Россия) внутрибрюшинно однократно за 4 часа до выделения кусочка опухоли и его фотоактивации (время определено как оптимальное в дополнительных опытах по накоплению ФС). Спустя 4 часа от введения ФС опухоль выделяли из организма мыши, получали кусочек без макроскопических признаков некроза.

После проведения фотоактивации из кусочка опухоли готовили препарат в виде взвеси опухолевых клеток (как в примере 1), проводили подсчет клеточности в камере Горяева.

На втором этапе по 1,5 млн опухолевых клеток из каждой лунки перевивали трем здоровым мышам подкожно. За мышами вели наблюдение с регистрацией размеров опухоли в течение 32 суток. Приживаемость опухолевой взвеси второй модификации в группе с фотоактивацией составила 33,3%, в группе без лазерного воздействия - 83,3%, что свидетельствует о цитотоксическом эффекте в отношении опухолевых клеток в полученном препарате.

Способ обеспечивает возможность создания клеточных препаратов из опухолевых клеток с учетом фармакокинетики фотосенсибилизатора в организме животного, исследование зависимости уровня накопления фотосенсибилизатора от введенной дозы и времени накопления.

Похожие патенты RU2775382C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ПЕРЕВИВНОЙ ОПУХОЛИ КАРЦИНОМА ЭРЛИХА МЫШЕЙ С ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОМ ХЛОРИНОВОГО РЯДА 2022
  • Абрамова Ольга Борисовна
  • Дрожжина Валентина Владимировна
  • Козловцева Екатерина Александровна
  • Сивоволова Татьяна Петровна
  • Островерхов Петр Васильевич
  • Грин Михаил Александрович
  • Кирин Никита Сергеевич
  • Иванов Сергей Анатольевич
  • Каприн Андрей Дмитриевич
RU2788766C2
ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ ЖИВОТНОГО 2015
  • Давыдов Евгений Владимирович
RU2604412C2
СПОСОБ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ СУБЪЕКТОВ, СТРАДАЮЩИХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ОПУХОЛЯМИ 2010
  • Белый Юрий Александрович
  • Кукушкин Николай Ильич
  • Склифас Алла Николаевна
  • Темнов Андрей Александрович
  • Терещенко Александр Владимирович
RU2440158C2
ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ ДИАГНОСТИКА ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ ЖИВОТНОГО 2015
  • Давыдов Евгений Владимирович
  • Коробов Сергей Сергеевич
RU2604388C2
СПОСОБ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ПЕРЕВИВНОЙ ПОВЕРХНОСТНОЙ СОЛИДНОЙ СОЕДИНИТЕЛЬНОТКАННОЙ САРКОМЫ М-1 КРЫС 2021
  • Абрамова Ольга Борисовна
  • Чурикова Татьяна Петровна
  • Козловцева Екатерина Александровна
  • Дрожжина Валентина Владимировна
  • Каплан Михаил Александрович
  • Иванов Сергей Анатольевич
  • Каприн Андрей Дмитриевич
RU2776449C1
СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ 2008
  • Ширманова Марина Вадимовна
  • Загайнова Елена Вадимовна
  • Балалаева Ирина Владимировна
  • Сироткина Марина Александровна
  • Турчин Илья Викторович
  • Клешнин Михаил Сергеевич
RU2373973C1
ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОР И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2001
  • Решетников А.В.
  • Залевский И.Д.
  • Кемов Ю.В.
  • Иванов А.В.
  • Карменян А.В.
  • Градюшко А.Т.
  • Лаптев В.П.
  • Неугодова Н.П.
  • Абакумова О.Ю.
  • Привалов В.А.
  • Лаппа А.В.
  • Романов В.А.
RU2183956C1
СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ МЕТОДОМ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ 2006
  • Соловьева Анна Борисовна
  • Иванов Андрей Валентинович
  • Коноплянников Анатолий Георгиевич
  • Филинова Елена Юрьевна
  • Глаголев Николай Николаевич
  • Мелик-Нубаров Николай Сергеевич
  • Пономарев Гелий Васильевич
  • Жиентаев Тимур Махмедович
  • Кирюхин Юрий Иванович
  • Поляков Дмитрий Константинович
  • Роговина Светлана Захаровна
RU2314806C1
ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОР ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2017
  • Филоненко Елена Вячеславовна
  • Каприн Андрей Дмитриевич
  • Пономарев Гелий Васильевич
  • Негримовский Владимир Михайлович
RU2646477C1
СПОСОБ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ОПУХОЛЕЙ 2012
  • Ширманова Марина Вадимовна
  • Загайнова Елена Вадимовна
  • Лукьянов Сергей Анатольевич
  • Серебровская Екатерина Олеговна
  • Снопова Людмила Борисовна
  • Лукьянов Константин Анатольевич
  • Бугрова Марина Леонидовна
  • Турчин Илья Викторович
  • Сироткина Марина Александровна
  • Каменский Владислав Антониевич
RU2519936C2

Реферат патента 2022 года СПОСОБ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КЛЕТОЧНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной онкологии, и может быть использовано при фотодинамической обработке клеток для приготовления клеточных препаратов. Способ включает обработку клеток фотосенсибилизатором и последующую их фотоактивацию. Перевиваемые клетки опухоли Эрлиха вводят в организм мыши подкожно, после достижения размера опухоли 10х10 мм вводят в организм мыши фотосенсибилизатор радахлорин в дозе 10 мг/кг или фотодитазин в дозе 5 мг/кг. После извлечения опухоли из организма животного, до или после приготовления из опухоли взвеси опухолевых клеток, проводят фотоактивацию клеток опухоли путем облучения лазером с длиной волны 662 нм в дозе 300 Дж/см2. Использование изобретения обеспечивает возможность создания клеточных препаратов из опухолевых клеток с учетом фармакокинетики фотосенсибилизатора в организме животного, исследование зависимости уровня накопления фотосенсибилизатора от введенной дозы и времени накопления. 1 табл., 2 пр.

Формула изобретения RU 2 775 382 C1

Способ фотодинамической обработки опухолевых клеток для приготовления клеточных препаратов, включающий обработку клеток фотосенсибилизатором и последующую их фотоактивацию, отличающийся тем, что перевиваемые клетки опухоли Эрлиха вводят в организм мыши подкожно, после достижения размера опухоли 10х10 мм вводят фотосенсибилизатор радахлорин в дозе 10 мг/кг или фотодитазин в дозе 5 мг/кг в организм мыши, после извлечения опухоли из организма животного, до или после приготовления из опухоли взвеси опухолевых клеток, проводят фотоактивацию клеток опухоли путем облучения лазером с длиной волны 662 нм в дозе 300 Дж/см2.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2022 года RU2775382C1

СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ 2008
  • Ширманова Марина Вадимовна
  • Загайнова Елена Вадимовна
  • Балалаева Ирина Владимировна
  • Сироткина Марина Александровна
  • Турчин Илья Викторович
  • Клешнин Михаил Сергеевич
RU2373973C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ 2020
  • Абрамова Ольга Борисовна
  • Дрожжина Валентина Владимировна
  • Чурикова Татьяна Петровна
  • Береговская Екатерина Александровна
  • Каприн Андрей Дмитриевич
RU2738301C2
СПОСОБ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ПЕРЕВИВНОЙ ЭКТОДЕРМАЛЬНОЙ ОПУХОЛИ МЕЛАНОМЫ B16 МЫШЕЙ 2020
  • Абрамова Ольга Борисовна
  • Дрожжина Валентина Владимировна
  • Чурикова Татьяна Петровна
  • Береговская Екатерина Александровна
  • Каприн Андрей Дмитриевич
RU2724867C2
БЕРЕЗОВСКАЯ И
В
Система фотодинамической диагностики и терапии // ВЕЖПТ
Колосоуборка 1923
  • Беляков И.Д.
SU2009A1
Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды 1921
  • Богач Б.И.
SU4A1
Способ использования делительного аппарата ровничных (чесальных) машин, предназначенных для мериносовой шерсти, с целью переработки на них грубых шерстей 1921
  • Меньщиков В.Е.
SU18A1
STEINER R
Working out of early diagnostic and control for the cancer treatment method with the use of photosensitiser of modelling action
Proceeding SPIE, 1994,

RU 2 775 382 C1

Авторы

Круглов Степан Сергеевич

Панченко Андрей Владимирович

Гельфонд Марк Львович

Киреева Галина Сергеевна

Тындык Маргарита Леонидовна

Майдин Михаил Александрович

Губарева Екатерина Александровна

Беляев Алексей Михайлович

Даты

2022-06-30Публикация

2021-05-17Подача