КОМБИНИРОВАННАЯ ВАКЦИНА Российский патент 2022 года по МПК A61K39/108 A61K39/08 A61K39/09 A61K39/00 

ОСНОВНАЯ ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к комбинированной вакцине для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к области ветеринарной вакцинологии, а именно, к комбинированным вакцинам для свиней. В частности, изобретение относится к комбинированной вакцине, содержащей антигены из Streptococcus suis (S. suis), Escherichia coli (E. coli) и Clostridium.

В настоящее время интенсивное свиноводство сильно зависит от ветеринарных медицинских продуктов для поддержания здоровья животных и возможности экономических действий. После оптимизации корма и систем управления сельскохозяйственного производства регулярно используют различные медицинские средства: фармацевтические препараты, такие как гормоны или антибиотики, и вакцинация против бактериальных или вирусных патогенов.

Используемые в настоящее время вакцины для защиты от бактериальных патогенов в основном являются цельноклеточными бактеринами. Однако в отчетах о наблюдениях на местах описаны трудности контроля и управления течением заболеваний и, в частности, является частым "неуспех вакцин". Свиньи-переносчики являются основным источником инфекций, и в распространение заболевания в стаде вовлечена как вертикальная, так и горизонтальная передача. Объединение животных-носителей с восприимчивыми животными в условиях стресса, таких как отлучение от матери и транспортировка, обычно приводят к клиническому заболеванию. Таким образом, эффективные меры контроля для предупреждения заболевания напрямую зависят от профилактических/метафилактических процедур (где это допустимо) и от вакцинации. В настоящее время усилия полевой иммунизации сфокусированы на применении коммерческих или аутогенных бактеринов. Эти вакцинные стратегии применяются в отношении либо поросят, либо свиноматок. Вакцинация свиноматок является менее дорогостоящей и трудозатратной, таким образом, являясь экономической альтернативой вакцинации поросят. Тем не менее, доступные результаты, по-видимому, указывают на то, что вакцинация маток бактеринами тяже является предметом споров. Во многих случаях вакцинированные свиноматки, даже когда их вакцинируют дважды перед родами, отвечают плохо или не отвечают вовсе на вакцинацию, что приводит к низкому материнскому иммунитету, передаваемому потомству. Даже если материнский иммунитет передается на достаточном уровне, во многих случаях уровень материнских антител является слишком низким для обеспечения защиты в наиболее критический период в возрасте 4-7 недель. Вакцинацию свиноматок обычно используют для защиты против различных патогенных инфекций, таких как инфекции, вызываемые E. coli, Clostridium, Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica, цирковирусом свиней и т.п.

Streptococcus suis является коммерческим и оппортунистическим патогеном свиней. В частности, в условиях стресса, бактерии могут индуцировать патогенную инфекцию и индуцировать заболевание. Ранний сопровождающийся медикаментозным воздействием отъем и практики сегрегированного раннего отъема не устраняют инфекцию Streptococcus suis. С момента отъема и далее поросята является более подверженными инфекциям Streptococcus suis вследствие стрессов, ассоциированных с отъемом, а также частой последующей транспортировкой. Таким образом, часто используют предродовую иммунизацию свиноматок, и она сообщает пассивный иммунитет поросятам и обеспечивает защиту от Streptococcus suis в этих стрессовых условиях на ранних этапах жизни.

В современных условиях свиноводства основной стресс индуцируется, например, отъемом поросят и транспортировкой молодых поросят. Это привело к тому, что Streptococcus suis стали основным патогеном свиней. Они также являются возможным зоонозным агентом менингита человека и стрептококкового подобного токсическому шоку синдрома. Streptococcus suis является в значительной степени инкапсулированным патогеном, и было описано множество серотипов на основе антигенного разнообразия капсульных полисахаридов. Streptococcus suis использует арсенал факторов вирулентности для ускользания от иммунной системы хозяина. Взятые вместе, эти характеристики затруднят разработку эффективных вакцин для борьбы с этим важным патогеном. Недавно был опубликован обзор, касающийся вакцин против Streptococcus suis (Mariela Segura: "Streptococcus suis vaccines: candidate antigens and progress, Expert Review of Vaccines, Volume 14, 2015, Issue 12, pages 1587-1608). В этом обзоре объедена и сравнивается информация о клинике на местах и экспериментальные данные для обзора текущего состояния разработки вакцин против Streptococcus suis, как описано в настоящем описании ниже.

У свиней в области защиты против Streptococcus suis часто используют аутогенные бактерины, особенно в Европе. Их получают из вирулентного штамма, выделенного на ферме с клиническими проблемами, и применяют в той же ферме. Одним из недостатков аутогенных бактеринов является то, что данные о безопасности вакцины отсутствуют и могут возникнуть серьезные неблагоприятные реакции. Ошибки взятия образцов (вследствие использования только одной или двух свиней или образцов) могут приводить к невозможности идентифицировать штамм или серотип, ассоциированный с последней вспышкой. Эта невозможность может быть особенно проблематичной в эндемичных стадах. Наконец, наиболее важная дилемма аутогенных бактерий состоит в том, что их истинная эффективность исследована плохо. Поскольку применение аутогенных вакцин является эмпирическим, неудивительно, что результаты, полученные для этих вакцин, являются противоречивыми.

Также в данной области описаны другие экспериментальные вакцины. Kai-Jen Hsueh et al. показывают ("Immunization with Streptococcus suis bacterin plus recombinant Sao protein in sows conveys passive immunity to their piglets", в BMC Veterinary Research, BMC series - open, inclusive and trusted, 13:15, 7 January 2017), что бактерин плюс субъединица могут быть основой для успешной вакцинации у свиноматок для обеспечения защитного иммунитета у их поросят.

Также в данной области рассматриваются живые аттенуированные вакцины. Было четко показано, что неинкапсулированные изогенные мутанты Streptococcus suis серотипа 2 являются авирулентными. Тем не менее, живой вакцинный состав на основе неинкапсулированного мутанта серотипа 2 индуцировал только частичную защиту от смертности и не предупреждал развитие клинических признаков у свиней, зараженных штаммом дикого типа (Wisselink HJ, Stockhofe-Zurwieden N, Hilgers LA, et al. "Assessment of protective efficacy of live and killed vaccines based on a non-encapsulated mutant of Streptococcus suis serotype 2." в Vet Microbiol. 2002, 84:155-168).

За последние пару лет описан широкий перечень антигенных и иммуногенных молекул Streptococcus suis, и большинство из них открыты посредством иммунопротеомики с использованием либо реконвалесцентной сыворотки от инфицированных свиней или людей и/либо лабораторно продуцированной иммунной сыворотки. В WO2015/181356 (IDT Biologika GmbH) показано, что антигены протеазы IgM (либо цельный белок или высококонсервативный домен Mac-1, составляющий только приблизительно 35% полного белка) может индуцировать защитный иммунный ответ у поросят в схеме вакцинации, включающей введение двух доз антигена протеазы IgM, необязательно в комбинации с первичной вакцинацией, включающей бактерин. Следует отметить, что в WO2017/005913 (Intervacc AB) также описано применение антигена протеазы IgM (в частности, полипептида протеазы IgM, слитого с нуклеотидазой), однако показано только свойство возможности индуцировать серологический ответ. В этой международной патентной заявке не показан защитный эффект для антигена протеазы IgM.

Escherichia coli представляют собой грамотрицательные кругоресничные жгутиковые бактерии, принадлежащие семейству Enterobatteriaceae, и они являются этиологическим фактором широкого диапазона заболеваний у свиней, которые являются важными причинами смерти по всему миру у молочных и отнятых поросят, соответственно. Инфекция E. coli, или колибактериоз, поражает как стада, содержащиеся в помещении, так и стада на выгульном содержании, возникая как постоянно, так и спорадически. Инфекции E. coli имеют три основных стадии: диарея новорожденных (в первые несколько суток после рождения), диарея молодых поросят (от первой недели после рождения до отъема) и диарея после отъема (первые недели после отъема). Также они могут присутствовать в комбинации с другими патогенами, включая ротавирус, и вызывать другие заболевания, такие как отечная болезнь и инфекции мочевыводящих путей.

Некоторые штаммы E. coli имеют фимбрии или пили, которые позволяют им прикрепляться к или колонизировать всасывающие эпителиальные клетки тощей кишки и подвздошной кишки. Обычными антигенными типами пилей, ассоциированными с патогенностью, являются F4 (=K88), F5 (=K99), F6 (987P) и F41. Патогенные штаммы продуцируют энтеротоксины, которые вызывают секрецию жидкости и электролитов в просвет кишечника, что приводит к диарее, дегидратации и ацидозу. Инфекция у новорожденных часто вызывается штаммами K88 и 987P, в то время как колибактериоз практически всегда является результатом штамма K88. См. Vet Rec. 2002 Jan12; 150(2): 35-7.

Для предотвращения колибактериоза, в частности, диареи после отъема, использовались различные подходы, включая пассивное введение специфических антител, дополнение пищи, такое как пребиотики и пробиотики, и пищевые профилактические меры, генетическое выведение ETEC-резистентных стад и пероральная вакцина с живыми нетоксигенными E.coli (Luppi A., Swine enteric colibacillosis: diagnosis, therapy and antimicrobial resistance, Porcine Health Manag. 2017; 3: 16; Zhang W. Progress and Challenges in Vaccine development against enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) - Associated porcine Post-weaning Diarrhea (PWD) J Vet Med Res. 2014;1(2):1006). Доступны коммерческие вакцины, например, Porcilis® ColiClos (MSD Animal Health), Gletvax® и Litterguard® (обе от Zoetis), Clostricol® (IDT Biologika), Entericolix® (Boehringer Ingelheim). Поросята могут быть адекватно защищены против E. coli посредством употребления молозива вакцинированных материнских животных.

Clostridium, анаэробная грамположительная спорообразующая палочка, является важным новым патогеном, который вызывает диарею, в основном у новорожденных свиней. Этот агент был впервые признан причиной ассоциированной с антибиотиками диареи у людей. Наиболее часто он вызывает заболевание у поросят в возрасте 1-7 суток и у домашних и лабораторных животных. Инфекция Clostridium включает инфекции C. difficile и C. perfringens. Организм может быть обнаружен в кишечнике путем прямого окрашивания мазков по Граму. Полагают, что выживаемость Clostridium в окружающей среде и выделение свиноматками-носителями являются важными при передаче. Важными патогенами свиней являются Clostridium perfringens типа C и в меньшей степени типа B. Известно, что соответствующие токсоиды способны индуцировать защитный иммунный ответ у свиней. Доступны различные коммерческие вакцины, Porcilis^® ColiClos (MSD Animal Health), Gletvax^® и Litterguard^® (обе от Zoetis), Clostricol^® (IDT Biologika), Entericolix^® (Boehringer Ingelheim). Поросята могут быть в достаточной степени защищены от Clostridium посредством употребления молозива вакцинированных материнских животных.

Для ограничения стресса у животных и затрат и труда скотников, обычно является желательным обеспечение защиты от более чем одного заболевания. Таким образом, существует необходимость в предоставлении вакцины для свиней для защиты от Streptococcus suis в дополнение к защите от других заболеваний свиней. Однако эффективность комбинированной вакцины невозможно предсказать заранее вследствие возможной несовместимости компонентов вакцины, такой как негативное взаимное влияние между антигенами или другими компонентами вакцины, которое может приводить к снижению эффективности вакцинации или усиленным неблагоприятным явлениям. Хотя комбинирование антигенов в одной вакцине по существу было и все еще является всеобщим желанием, для любой комбинированной вакцины в частности очень частой проблемой является негативное взаимное влияние между антигенами, которое препятствует разработке многих, или даже большинства, комбинаций антигенов в поливалентных вакцинах. В этом отношении авторы изобретения ссылаются на лекцию Michel De Wilde в марте 2016 года под названием "Combination vaccines: how and why? Lessons learned", которая доступна на веб-сайте Всемирной организации здравоохранения. Данная лекция подтверждает, что существует всеобщее желание стремиться в направлении комбинированных вакцин, но также что, среди прочих проблем, существует множество научных и технических проблем, которые предстоит преодолеть. Приводятся примеры неуспешной разработки комбинированных вакцин с использованием типичных антигенов.

ЗАДАЧА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Таким образом, задачей настоящего изобретения является поиск комбинированной вакцины для защиты свиньи, в частности, поросенка, против патогенной инфекции, включая Streptococcus suis. Кроме того, задачей изобретения является поиск комбинированной вакцины для защиты поросенка против более чем одной патогенной инфекции, где защита поросенка против этих инфекций достигается посредством вакцинации свиноматок.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Неожиданно в рамках настоящего изобретения было обнаружено, что можно получить комбинированную вакцину для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium. Кроме того, неожиданно было обнаружено, что вакцину можно вводить самкам свиней для защиты поросят против патогенной инфекции Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium посредством употребления молозива вакцинированных самок свиней.

Чтобы удовлетворить задаче изобретения, изобретение относится к вакцине по п.1 формулы изобретения, содержащей следующие компоненты (a), (b) и (c):

(a) иммунологически эффективное количество антигена протеазы IgM Streptococcus suis,

(b) иммунологически эффективное количество фимбриального антигена Escherichia coli, и

(c) иммунологически эффективное количество токсоида Clostridium.

Предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения определены в зависимых пунктах формулы изобретения.

Таким образом, настоящее изобретение впервые относится к комбинированной вакцине (для краткости: вакцина в соответствии с настоящим изобретением), которая обеспечивает защиту против нескольких патогенных инфекций, включая инфекцию, вызываемую S. suis. Кроме того, стало возможным с помощью настоящего изобретения защитить поросенка от нескольких патогенных инфекций, включая инфекцию, вызываемую S. suis, посредством вакцинации свиноматок.

Таким образом, изобретение также относится к набору, содержащему несколько отдельных контейнеров с вакциной, один из которых содержит иммунологически эффективное количество антигена протеазы IgM Streptococcus suis, и один или более дополнительных контейнеров в комбинации содержат иммунологически эффективное количество фимбриального антигена Escherichia coli и иммунологически эффективное количество токсоида Clostridium (например, один контейнер, содержащий антигены как E. coli, так и клостридий, или два или более отдельных контейнеров, каждый из которых содержит один или более соответствующих антигенов).

Изобретение также относится к вакцине, содержащей иммунологически эффективное количество антигена протеазы IgM Streptococcus suis, для применения в способе защиты животного против инфекции Streptococcus suis, инфекции Escherichia coli и инфекции Clostridium, где антиген протеазы IgM смешивают с иммунологически эффективным количеством фимбриального антигена Escherichia coli и иммунологически эффективным количеством токсоида Clostridium перед введением вакцины.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Вакцина представляет собой фармацевтическую композицию, которая является безопасной для введения рассматриваемому животному и способна индуцировать защитный иммунитет у этого животного против патогенного микроорганизма, т.е. индуцировать успешную защиту против микроорганизма.

Антиген протеазы IgM Streptococcus suis представляет собой фермент, который осуществляет специфическую деградацию IgM свиней (но не IgG свиней IgA свиней; Seele et al, Journal of Bacteriology, 2013, 195 930-940; и Vaccine 33:2207-2212; 5 May 2015), белок, обозначаемый как Ide_Ssuis, или его иммуногенную часть (как правило, имеющую длину по меньшей мере приблизительно 30-35% от полноразмерного фермента). Целый фермент имеет массу приблизительно 100-125 кДа, что соответствует приблизительно 1000-1150 аминокислотам, причем размер зависит от серотипа S. suis. В WO 2015/181356 приведено несколько последовательностей, которые соответствуют антигену протеазы IgM Streptococcus suis, а именно, SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 и SEQ ID NO:5, причем последняя из них является иммуногенной частью полноразмерного фермента (обозначаемой как домен Mac-1, т.е. аминокислоты 80-414 SED ID NO:7). Другие примеры иммуногенных частей полноразмерного фермента приведены в WO2017/005913. В частности, протеаза IgM может представлять собой протеазу согласно SEQ ID NO:1 из WO2015/1818356 или белок, обладающий по меньшей мере 90% или даже 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% вплоть до 100% идентичностью последовательности в перекрывающихся областях. Идентичность аминокислотных последовательностей может быть установлена посредством программы BLAST с использованием алгоритма blastp с параметрами по умолчанию. Предполагается, что протеаза IgM Streptococcus suis различных серотипов обладает идентичностью последовательности выше 90%, в частности, предполагается, что она составляет 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% вплоть до 100%. Искусственный белок, например, изготовленный для оптимизации выхода в рекомбинантной продуцирующей антиген системе, может приводить к более низкой идентичности аминокислотных последовательностей, такой как 85%, 80%, 75%, 70% или даже 60% по сравнению с целым ферментом при сохранении требуемой иммуногенной функции, и в рамках настоящего изобретения подразумевается, что он является антигеном протеазы IgM Streptococcus suis.

Защита против микроорганизма представляет собой способствование предупреждению, смягчению или излечению патогенной инфекции этим микроорганизмом или нарушения в результате этой инфекции, например, для предупреждения или снижения одного или нескольких клинических признаков инфекции патогеном.

"Иммунологически эффективное количество", как используют в рамках изобретения, относится к количеству антигена или токсоида, которое необходимо для индукции иммунного ответа у свиней до той степени, при которой происходит уменьшение инфекции или вызываемых инфекцией патологических эффектов инфекционного агента дикого типа, т.е. S. suis, E. coli или Clostridium, по сравнению с патологическими эффектами, вызываемыми инфекцией инфекционным агентом дикого типа у неиммунизированных свиней. Иммунологически эффективное количество может быть установлено специалистом в данной области стандартными способами, обычно известными в данной области, например, путем осуществления экспериментальной контрольной инфекции у вакцинированных животных, а затем определения клинических признаков заболевания, серологических параметров или путем определения повторного выделения патогена у данного животного с последующим сравнением этих данных с данными, наблюдаемыми у свиней, инфицированных на местах.

ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Компонент (a) вакцины по изобретению содержит иммунологически эффективное количество антигена протеазы IgM Streptococcus suis для обеспечения защиты против инфекции S. suis.

Компонент (a), таким образом, обычно включают для обеспечения защиты против клинических признаков, ассоциированных с патогенной инфекцией Streptococcus suis. Типичными клиническими признаками, ассоциированными с патогенной инфекцией Streptococcus suis, является повышение ректальной температуры, снижение подвижности (хромота, опухшие суставы), увеличенная частота дыхания и неврологические признаки (например, тремор, судороги, кривошея, атаксия). Предупреждение, смягчение или излечение одного из этих признаков было бы полезным для свиньи не только потому, что это указывает на подавление патогенной инфекции. В другом варианте осуществления вакцина предназначена для обеспечения защиты против увеличенной смертности, ассоциированной с патогенной инфекцией Streptococcus suis.

Вакцина в соответствии с настоящим изобретением, как правило, содержит антиген протеазы IgM в количестве менее 250 мкг на дозу вакцины, предпочтительно 120 мкг на дозу вакцины или менее. Минимальное количество представляет собой количество, при котором все еще достигается защитный иммунитет. Это может быть установлено стандартным экспериментированием и зависит, среди прочего, от иммуногенных свойств выбранного антигена протеазы, а также от требуемого уровня защиты. Полагают, что для современной вакцины минимальное количество составляет 1 мкг антигена на дозу, однако оно может представлять собой любую дозу, такую как 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 или любое более высокое целое число в диапазоне 61-119 вплоть до и включая 120 мкг на дозу.

Компонент (b) вакцины по изобретению содержит иммунологически эффективное количество фимбриального антигена E. coli и необязательно токсоид для обеспечения защиты против инфекции E. coli. Таким образом, компонент (b) обычно включают для обеспечения защиты против клинических признаков, ассоциированных с патогенной инфекцией E. coli, включающих профузную водянистую диарею с быстрой дегидратацией, ацидозом и часто смертью. Изредка свиньи могут ослабевать и умирать до начала диареи.

Патогенная инфекция E. coli, как правило, включает, но не ограничивается ими, инфекцию, вызываемую энтеротоксигенными E. coli, а также инфекцию, вызываемую энтеропатогенными штаммами E. coli.

E. coli могут быть разделены на категории на основе элементов, которые могут индуцировать иммунный ответ у животных, т.е. антигенов E. coli. Эти антигены могут использоваться для вакцинации по отдельности или в комбинации для обеспечения защиты против инфекции E. coli. Антигены E. coli содержат O-антигены, образующие часть липополисахаридного слоя, K-антиген, образующий капсулу, H-антигены, образующие флагеллин, и фимбриальные F-антигены. Компонент (b) вакцины по изобретению по меньшей мере содержит один или более F-антигенов.

Кроме того, в вакцине по изобретению в качестве токсоидов можно использовать один или более токсинов E. coli, таких как энтеротоксины. Энтеротоксины E. coli включают, но не ограничиваются ими, энтеротоксин ST и энтеротоксин LT. Наиболее важные антигены и энтеротоксины, вызывающие кишечный колибактериоз описаны, например, в Luppi A., Swine enteric colibacillosis: diagnosis, therapy and antimicrobial resistance, Porcine Health Manag. 2017; 3: 16; Zhang W. Progress and Challenges in Vaccine development against enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) - Associated porcine Post-weaning Diarrhea (PWD) J Vet Med Res. 2014;1(2):1006. Кроме того, в вакцине по изобретению в качестве токсоидов можно использовать один или более токсинов E. coli, таких как энтеротоксины. Энтеротоксины E. coli включают, но не ограничиваются ими, энтеротоксин ST и энтеротоксин LT. Наиболее важные антигены и энтеротоксины, вызывающие кишечный колибактериоз описаны, например, в Luppi A., Swine enteric colibacillosis: diagnosis, therapy and antimicrobial resistance, Porcine Health Manag. 2017; 3: 16; Zhang W. Progress and Challenges in Vaccine development against enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) - Associated porcine Post-weaning Diarrhea (PWD) J Vet Med Res. 2014;1(2):1006.

Как правило, вакцина по изобретению содержит один или более F-антигенов E. coli и необязательно токсоид LT E. coli. В предпочтительном варианте осуществления вакцина содержит один или более антигенов, выбранных из фимбриальных белков F4, включая F4ab(=K88ab) и F4ac(=K88ac), F5(=K99), F6(=987P), F18, F41 и необязательно токсоида LT Escherichia coli. Более предпочтительно, она содержит по меньшей мере фимбриальные антигены F4 E. coli, включая F4ab(=K88ab) и F4ac(=K88ac), F5 и F6. В другом предпочтительном варианте осуществления вакцина содержит фимбриальные антигены F4, включая F4ab(=K88ab) и F4ac(=K88ac), F5, F6, и необязательно токсоид LT E. coli.

Компонент (c) вакцины по изобретению содержит иммунологически эффективное количество токсоида Clostridium для обеспечения защиты против инфекции Clostridium. Компонент (c), таким образом, обычно включают для обеспечения защиты против клинических признаков, ассоциированных с патогенной инфекцией Clostridium, включающих диарею, диспноэ, вздутие живота и скротальный отек.

Предпочтительно, компонент (c) содержит один или более токсоидов Clostridium, выбранных из токсоида B Clostridium и токсоида C Clostridium. Более предпочтительно, компонент (c) содержит один или более токсоидов, выбранных из токсоида типа B Clostridium perfringens (perfB), токсоида типа C Clostridium perfringens (perfC) и токсоида типа B Clostridium novyi (novyiB), и наиболее предпочтительно токсоида типа C Clostridium perfringens (perfC). В наиболее предпочтительном варианте осуществления компонент (c) содержит токсоид типа C Clostridium perfringens и необязательно может дополнительно содержать токсоид типа B Clostridium perfringens.

В особенно предпочтительном варианте осуществления в соответствии с изобретением компонент (b) содержит по меньшей мере фимбриальные антигены F4, F5 и F6 E. coli и компонент (c) содержит токсоид типа С Clostridium perfringens.

В следующем предпочтительном варианте осуществления иммунологически эффективный компонент вакцины по изобретению состоит из антигена протеазы IgM Streptococcus suis, антигенов F4, F5 и F6 E. coli и необязательно токсоида LT, и токсоида типа C Clostridium perfringens.

В вакцине по изобретению антиген, как правило, комбинируют с фармацевтически приемлемым носителем, т.е. биосовместимой средой, т.е. средой, которая после введения не индуцирует значительных неблагоприятных реакций у данного животного, способной презентировать антиген иммунной системе животного-хозяина после введения вакцины. Такой фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой, например, жидкость, содержащую воду и/или любой другой биосовместимый растворитель или твердый носитель, такие как обычно используются для получения лиофилизированных вакцин (на основе сахаров и/или белков), необязательно содержащих иммуностимулирующие агенты (адъюванты). Необязательно добавляют другие вещества, такие как стабилизаторы, модификаторы вязкости или другие компоненты, в зависимости от предполагаемого применения или требуемых свойств вакцины.

Вакцина в соответствии с настоящим изобретением, как правило, содержит адъювант. Общепринятые адъюванты, хорошо известные в данной области, представляют собой, например, полный и неполный адъювант Фрейнда, токоферол-альфа, витамин E, неионные блок-полимеры, мурамилдипептиды, Quill A^®, минеральное масло, например Bayol^® или Markol^®, растительное масло, и Carbopol^® (гомополимер) или Diluvac^® Forte.

Вакцина также может содержать так называемый "носитель". Носитель представляет собой соединение, с которым связывается полипептид, без ковалентного присоединения к нему. Часто используемыми соединениями-носителями являются, например, гидроксид, фосфат или оксид алюминия, диоксид кремния, каолин и бентонит.

Вакцину в соответствии с настоящим изобретением можно вводить любым подходящим путем введения, включая парентеральное введение, например, все способы инъекции в или через кожу, например внутримышечную, внутривенную, внутрибрюшинную, внутрикожную, подслизистую или подкожную, однако, как правило, она адаптирована, т.е. пригодна, для внутримышечной инъекции.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к вакцине, как описано в настоящем описании, для применения в способе защиты свиней против патогенной инфекции Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению вакцины, как описано в настоящем описании, для производства лекарственного средства для применения для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium.

Вакцину по настоящему изобретению, в частности, используют для пассивной иммунизации потомства посредством активной иммунизации свиноматок и молодых свиней для снижения смертности и/или клинических признаков патогенных инфекций, вызываемых S. suis, вызываемых штаммами E. coli, которые экспрессируют, в частности, адгезины F4ab (K88ab), F4ac (K88ac), F5 (K99) и/или F6 (987P), и вызываемых C. perfringens типа C.

Коммерчески доступная вакцина для обеспечения защиты против таких инфекций, вызываемых E. coli и Clostridium, представляет собой Porcilis ColiClos^®, доступную от MSD Animal Health, включая компоненты E. coli фимбриальный адгезин F4ab, фимбриальный адгезин F4ac, фимбриальный адгезин F5, фимбриальный адгезин F6, токсоид LT; и компонент Clostridium perfringens типа C (штамм 578) бета. Таким образом, в другом предпочтительном варианте осуществления вакцина по изобретению может быть получена путем смешения коммерчески доступной вакцины Porcilis ColiClos^® с подходящим количеством антигена IgM S. suis.

Неожиданно, было обнаружено, что при использовании антигена протеазы IgM (таким образом даже при использовании вакцины, которая содержит в качестве антигена свиней только антиген протеазы IgM Streptococcus suis) для индукции антител у самки животного, поросята достигают достаточной защиты против Streptococcus suis посредством употребления молозива вакцинированного животного. Таким образом, было показано, что антиген, для которого был показан защитный эффект у поросят, является пригодным для вакцинации свиноматок для обеспечения заметного защитного эффекта у поросят, как правило, по меньшей мере в период 2-3 недель после отъема.

Изобретение, таким образом, также относится к применению антигена протеазы IgM Streptococcus suis для получения комбинированной вакцины для защиты поросенка против Streptococcus suis, E. coli и Clostridium путем введения комбинированной вакцины самке свиньи и позволения поросенку употреблять молозиво вакцинированной самки свиньи. Как указано в настоящем описании выше, для достижения оптимальной защиты молозиво, как правило, должно употребляться в пределах 48 часов, в частности, в пределах 24 часов, после рождения поросенка.

В другом предпочтительном варианте осуществления вакцину по изобретению вводят самке свиньи для защиты поросенка от патогенной инфекции Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium посредством употребления молозива вакцинированных самок свиней.

Кроме того, настоящее изобретение описано посредством следующих неограничивающих примеров.

ПРИМЕРЫ

Пример 1:

ЗАДАЧА

Задачей этого исследования было тестирование эффективности субъединичной вакцины с протеазой IgM у беременных свиноматок против заражения Streptococcus suis потомства различных возрастов, а именно, 4, 6, 8 и 10 недель.

СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ

Для этого исследования использовали 12 беременных свинок. Шесть свинок вакцинировали за 6 и 2 недель до оцениваемого времени родов рекомбинантным антигеном протеазы IgM rIde_Ssuis (Seele et al: Vaccine 33:2207-2212; 5 May 2015, par. 2,2.) в количестве 120 мкг на дозу (как определено посредством анализа Брэдфорда для определения белков с использованием BSA в качестве стандарта) в адъюванте XSolve (MSD Animal Health, Boxmeer, Нидерланды). Шесть свинок оставляли в качестве невакцинированных контролей. После родов поросят от свиноматок разделяли на четыре группы заражения по 20 поросят в каждой (10 поросят от вакцинированных свиноматок и 10 поросят от контрольных свиноматок), обеспечивая равномерное распределение животных различных пометов в группы. В четырех группах проводили заражение в возрасте 4, 6, 8 и 10 недель, соответственно, посредством вирулентной культуры S. suis серотипа 2. В течение 9-11 суток после заражения поросят наблюдали каждые сутки в отношении клинических признаков инфекции S. suis, таких как угнетенное состояние, проблемы с подвижностью и/или неврологические признаки, с использованием стандартной оценочной системы от 0 (без признаков) до 3 для тяжелых случаев. Для каждого параметра использовали одну и ту же оценочную систему (0 для не наблюдаемого параметра, наиболее высокое число для тяжелых случаев). Животных, достигших конечного с точки зрения гуманности состояния, умерщвляли. С регулярными промежутками времени до и после вакцинации (свиноматки) и непосредственно перед заражением (поросята) проводили взятие сыворотки крови для определения антител. Через регулярные промежутки времен до и после заражения у поросят проводили взятие крови в гепарин для повторного выделения штамма, которым заражали. Через тринадцать недель после вспомогательной вакцинации 4 свиноматок умерщвляли и область инъекции исследовали в отношении локальных реакций или остатков вакцины.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Четырех вакцинированных свиноматок подвергали посмертному исследованию области инъекции. Два животных имели небольшую (диаметром 2-3 см) локальную реакцию в области вспомогательной инъекции, состоящую в обесцвечивании с увеличенной плотностью ткани. Не наблюдалось абсцессов или остатков вакцины. Таким образом, можно сделать заключение, что введение вакцины было безопасным.

В день первой вакцинации (6 недель до оцениваемого срока родов) свинки имели (низкие) титры IgG-антител против антигена. После вакцинации вакцинированные свинки продемонстрировали заметную сероконверсию, в то время как контрольные животные оставались на низком уровне. Средние титры IgG в молозиве были в 8,8 log₂ выше у вакцинированных животных по сравнению с контролями. После вскармливания поросята вакцинированных самок имели приблизительно в 7,7 log₂ более высокие сывороточные титры по сравнению с контрольными животными. Различие в среднем титре в возрасте 4, 6, 8 и 10 недель составляло 6,7, 5,3, 4,8 и 3,6 log₂, соответственно. Данные после заражения для периода до умерщвления (сутки 9-11) указаны в таблице 1.

Таблица 1 Результаты после заражения

Возраст группа Клинический показатель (среднее значение) Количество умерщвленных на общее количество Время выживания (среднее значение количества дней) 4 недели Вакцина
Контроль 17,1
31,6 3/10
6/10 9,5
8,0 6 недель Вакцина
Контроль 5,8^a
59,7 2/10^b
9/10 8,8^a
2,7 8 недель Вакцина
Контроль 2,3^a
59,5 0/10^b
8/10 11,0^a
4,7 10 недель Вакцина
Контроль 0,7^a
15,6 0/10
2/10 10,0
8,8

^a значимо отличается от контрольной группы (U-критерий Манна-Уитни test, p<0,05)

^b значимо отличается от контрольной группы (точный критерий Фишера, p<0,05)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Из результатов можно сделать заключение, что вакцинация свиноматок субъединичной вакциной на основе протеазы IgM является адекватной стратегией вакцинации для контроля инфекций Streptococcus suis у поросят. Вакцина индуцировала значительно лучшую защиту против заражения Streptococcus suis вплоть до возраста 10 недель по сравнению с защитой, достигаемой у поросят, которым вводили молозиво естественным образом инфицированных материнских животных. Это демонстрирует, что поросята могут быть защищены в течение всего периода 2-3 недель после отъема, т.е. в пределах периода, когда возраст поросят составляет 4-7 недель, и даже за пределами этого периода.

Пример 2:

ЗАДАЧА

Целью этого исследования было тестирование серологического ответа на различные комбинированные вакцины, включающие рекомбинантный антиген IgM rIde_Ssuis S. suis по сравнению с единичными вакцинами. В частности, оценивали комбинацию с комбинированной вакциной против E coli/Clostridium (содержащей фимбриальные антигены E. coli и токсоид типа Type C Clostridium perfringens), а также комбинированной вакциной против Pasteurella/Bordetella (содержащей токсин Pasteurella и инактивированные клетки Bordetalla). В частности, серологический ответ тестировали после ассоциированного совместного применения субъединичной вакцины rIde_Ssuis с коммерческими вакцинами Porcilis^® ColiClos или Porcilis^® AR-T DF по сравнению с единичными вакцинами.

СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ

Для этого исследования использовали 48 здоровых свиней в возрасте 17 недель, распределенных на шесть групп по 8 животных в каждой. В группе 1 проводили вакцинацию субъединичным антигеном в адъюванте Diluvac^® Forte, в группе 2 проводили вакцинацию субъединичным антигеном в Porcilis^® ColiClos, в группе 3 проводили вакцинацию субъединичным антигеном в Porcilis^® AR-T DF, и в группах 4 и 5 проводили вакцинацию либо Porcilis^® ColiClos, либо Porcilis^® AR-T DF, соответственно. Вакцинацию проводили внутримышечно в шею в возрасте 17 недель и в возрасте 21 неделя. В возрасте 23 недель всем животным проводили посмертное исследование в отношение локальных реакций в области инъекции. Взятие образцов крови проводили непосредственно перед каждой вакцинации и после умерщвления при вскрытии.

МАТЕРИАЛЫ И СПОСОБЫ

Концентрированный антиген субъединцы rIde_Ssuis

Название продукта: субъединичный антиген (rIde_Ssuis)

Фармацевтическая форма: суспензия, содержащая 0,64 мг/мл антигена

Форма выпуска: заполнение 1,50 мл (криопробирки объемом 1,8 мл)

Адъювант Diluvac ^® Forte

Название продукта: Diluvac^® Forte

Фармацевтическая форма: Эмульсия внутримышечного применения

Форма выпуска: заполнение 20 мл (флакон PET объемом 20 мл)

Вакцина Porcilis ^® ColiClos

Название продукта: Porcilis^® ColiClos

Фармацевтическая форма: эмульсия для внутримышечного применения

Форма выпуска: заполнение 20 мл (флакон PET объемом 20 мл)

Вакцина Porcilis ^® AR-T DF

Название продукта: Porcilis^® AR-T DF

Фармацевтическая форма: эмульсия для внутримышечного применения

Форма выпуска: заполнение 20 мл (флакон PET объемом 20 мл)

Вакцины rIde_Ssuis

Вакцины rIde_Ssuis в Diluvac Forte, Porcilis ColiClos и Porcilis AR-T DF приготавливали непосредственно применением путем добавления 1,3 мл очищенного rIde_Ssuis (концентрация 0,64 мг/мл) в один флакон (20 мл) какого-либо из Diluvac Forte, Porcilis ColiClos или Porcilis AR-T DF, с получением вакцины, содержащей 40 мкг/мл=80 мкг на дозу. Вакцину транспортировали при 2-8°C.

Система тестирования

Животные, идентификация, содержание и условия

Использовали сорок восемь свиней, идентифицируемых посредством пронумерованных ушных бирок. В день первой вакцинации возраст свиней составлял 17 недель. Свиней содержали в помещении за одну неделю до первого введения. В ходе эксперимента свиней кормили в соответствии со стандартными методиками, и они имели доступ к свежей водопроводной воде без ограничений. Акклиматизация составляла одну неделю. В эксперимент были включены только здоровы животные. Свиней распределяли на 5 групп введения и вакцинировали, когда было удобно.

Введение

Свиней вакцинировали, как описано ниже.

вакцинация группа # свиней вакцина объем/путь/возраст Взятие крови 1 8 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 2 мл/в.м./
17w и 21w 17w, 21w, 23w 2 8 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 3 8 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 4 8 Porcilis ColiClos 5 8 Porcilis AR-T DF

Таким образом, группа 2 соответствует комбинированной вакцине по изобретению, в то время как группы 1 и 3-5 соответствуют сравнительным вакцинам (контрольные группы).

Экспериментальные методики на животных

В ходе эксперимента свиней наблюдал каждые сутки в отношении каких-либо аномалий общего состояния здоровья и поведения ответственный зоотехник или скотник в соответствии со стандартными методиками. Регистрировали все аномалии (включая присутствие каких-либо местных реакций). В случае аномалий проводилась консультация ответственного ветеринара. Взятие образцов крови (сыворотки) проводили непосредственно перед каждой вакцинацией и через две недели после вспомогательной вакцинации. Образцы переносили для отбора проб в условия температуры окружающей среды. После свертывания сыворотку хранили замороженной до тестирования в экспериментальном ELISA с антителом против rIde_Ssuis. Через три недели после вспомогательной вакцинации проводили исследование области инъекции при вскрытии в соответствии со стандартными методиками.

Лабораторные экспериментальные методики

Серология rIde_Ssuis

Образцы сыворотки тестировали в экспериментальном ELISA для rIde_Ssuis. В кратком изложении антигеном rIde_Ssuis покрывали микропланшеты для титрования. После покрытия планшеты промывали и проводили серийные разведения сывороток. После инкубации и последующего промывания связанные антитела количественно определяли с использованием конъюгата против IgG свиньи и TMB в качестве субстрата. Титры выражали в log₂. В этом тесте значение <4,3 считалось отрицательным. Для целей вычисления <4,3 заменяли на 3,3.

Серология E. coli

Образцы сыворотки тестировали в отношении титров антител против K88ab, K88ac, K99, 987P и LT. В кратком изложении, соответствующими антигенами E. coli покрывали планшеты для микротитрования. После покрытия планшеты промывали и получали серийные разведения сывороток. После инкубации и последующего промывания связанные антитела количественно определяли с использованием конъюгата против IgG свиньи и TMB в качестве субстрата. Титры выражали в log₂. В этом тесте титры <5,6 считались отрицательными. Для целей вычисления <5,6 заменяли на 4,6.

Серология C. perfringens

Для C. perfringens титры антител против бета-токсина тестировали в способе ELISA. В кратком изложении, β-токсином C. perfringens (штамм 578) покрывали планшеты для микротитрования. После покрытия и последующего блокирования планшетов планшеты промывали и получали двукратные серийные разведения сывороток. После инкубации и последующего промывания связанные антитела количественно определяли с использованием конъюгата против антител жвачных животных и TMB в качестве субстрата. Титры выражали в значениях log₂. В этом тесте титры <4,6 считались отрицательными. Для целей вычисления <4,6 заменяли на 3,6.

Серология P. multocida

Нейтрализующие антитела против токсина P. multocida (PMT) количественно определяли следующим образом: двукратные серийные разведения сывороток предварительно инкубировали с токсином 1 типа P. multocida в микропланшетах для титрования, а затем ими инокулировали монослой VERO. Клетки инкубировали и измеряли ингибирование цитопатического эффекта (CPE) токсина. Титры выражали в качестве log₂ для обратной величины наивысшего разведения, где не наблюдалось CPE. В этом тесте титр <3 считался отрицательным. Для целей вычисления <3 заменяли на 2.

Серология B. bronchiseptica

Агглютинирующие антитела против B. bronchiseptica количественно определяли в тесте Blobel. В кратком изложении два серийных разведения сывороток инкубировали с суспензией B. bronchiseptica и проводили определение агглютинации. Титры выражали в качестве log₂ обратного значения наибольшего разведения сыворотки, которое обеспечивало полную агглютинацию. В этом тесте титр <1 считался отрицательным. Для целей вычисления <1 заменяли на 0.

Оценка результатов и статистический анализ

Серологические результаты для всех компонентов вакцины сравнивают между группами, т.е. группы ассоциированного смешанного применения сравнивают с соответствующими группами единичных вакцин. Выбранные группы сравнивали с использованием двухстороннего t-критерия для двух выборок и статистической программы Minitab 17. Критерий считали валидным, если наблюдали отчетливую сероконверсию в группах единичной вакцины после вакцинации.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Серология rIdeSsuis

В начале исследования все свиньи были серонегативными по rIde_Ssuis (таблица 2). Две группы совместного применения с Porcilis ColiClos и Porcilis AR-T DF имели результаты на 3,3 и 2,1 log₂ ниже по сравнению с единичными вакцинами, соответственно. Эти отличия были статистически значимыми: p=0,003 и p=0,020, соответственно. Две контрольных группы 4 и 5 оставались серонегативными в ходе исследования.

Серология Porcilis ColiClos: K88ab, K88ac, K99, 987P, LT и антигены β-токсина

Добавление rIde_S.suis не имело негативного эффекта на серологический ответ против антигенов Porcilis ColiClos (таблица 3-8). Наблюдали негативную тенденцию в отношении ответа 987P в группе совместного смешанного применения (p=0,061), однако отличия в титре 987P были очень небольшими (только 1log₂) и, вероятно, биологически не значимыми.

Соответствующие контрольные группы были серонегативными в начале исследования и имели результаты на низком уровне в ходе исследования.

Серология Porcilis AR-T DF: токсин PMT и B. bronchiseptica

В начале исследования свиньи были серонегативными в отношении токсина PMT (таблица). Был обнаружен кажущийся статистически значимый негативный эффект антигена rIde_Ssuis на формирование антител к токсину PMT (p=0,021), который препятствует комбинированному применению этих двух вакцинных антигенов.

После вакцинации не наблюдали негативного эффекта совместного смешанного применения на титры антител против Bordetella.

Локальные реакции в области инъекции

Некропсию областей инъекции вакцин проводили через 2 недели после вакцинации, когда ожидались максимальные/пиковые реакции, и она продемонстрировала наличие локальных реакций после первичной (правая сторона) и/или вспомогательной (левая сторона) вакцинации (не показано). Добавление rIde_Ssuis к Porcilis ColiClos или Porcilis AR-T DF не усиливало локальную реакцию по сравнению с локальной реакцией единичных вакцин.

Результаты тестов серологии представлены в таблицах 2-10 ниже. Поскольку каждая группа состояла из восьми свиней титры антител, приведенные в таблицах для групп 1-5 (группы 1 и 3-5 соответствуют сравнительным примерам) представляют собой среднее значение для восьми величин.

Таблица 2 титр антител против rIde_Ssuis

Титр антител (log₂) на определенный день после вакцинации Группа 0 28 42 Группа 1 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 3,3 7,8 10,1 Группа 2 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 3,8 7,4 8,7 Группа 3 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 3,6 5,1 8,0 Группа 4 Porcilis ColiClos 3,4 3,3 3,3 Группа 5 Porcilis AR-T DF 3,7 3,6 3,4

Таблица 3 титр антител против F4ab E. coli (=K88ab)

Титр антител (log₂) на определенный день после вакцинации Группа 0 28 42 Группа 1 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 4,6 4,6 4,8 Группа 2 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 4,6 6,8 9,9 Группа 3 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 4,6 4,6 4,6 Группа 4 Porcilis ColiClos 4,6 5,7 9,1 Группа 5 Porcilis AR-T DF 4,6 4,6 4,6

Таблица 4 титр антител против F4ac E. coli (=K88ac)

Титр антител (log₂) на определенный день после вакцинации Группа 0 28 42 Группа 1 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 4,7 4,8 4,9 Группа 2 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 4,6 5,5 9,7 Группа 3 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 4,6 5,9 4,6 Группа 4 Porcilis ColiClos 4,6 5,1 9,0 Группа 5 Porcilis AR-T DF 4,6 4,6 4,6

Таблица 5 Титр антител против F5 E. coli (=K99)

Титр антител (log₂) на определенный день после вакцинации Группа 0 28 42 Группа 1 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 5,5 5,6 6,3 Группа 2 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 4,6 7,3 9,8 Группа 3 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 4,6 5,0 5,3 Группа 4 Porcilis ColiClos 4,6 7,0 9,5 Группа 5 Porcilis AR-T DF 4,6 5,0 5,6

Таблица 6 Титр антител против F6 E. coli (=987P)

Титр антител (log₂) на определенный день после вакцинации Группа 0 28 42 Группа 1 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 6,3 8,5 9,7 Группа 2 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 5,5 10,4 14,1 Группа 3 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 5,0 7,1 8,6 Группа 4 Porcilis ColiClos 4,8 10,8 15,3 Группа 5 Porcilis AR-T DF 4,7 7,9 8,6

Таблица 7 Титр антител против LT E. coli

Титр антител (log₂) на определенный день после вакцинации Группа 0 28 42 Группа 1 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 6,1 7,2 7,5 Группа 2 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 5,6 7,8 10,1 Группа 3 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 5,1 5,6 6,1 Группа 4 Porcilis ColiClos 4,9 7,6 9,6 Группа 5 Porcilis AR-T DF 5,2 6,0 5,9

Таблица 8 Титр антител против бета-токсина C. perfringens

Титр антител (log₂) на определенный день после вакцинации Группа 0 28 42 Группа 1 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 3,6 3,6 3,6 Группа 2 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 3,6 5,7 8,9 Группа 3 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 3,6 3,6 3,6 Группа 4 Porcilis ColiClos 3,6 6,0 8,7 Группа 5 Porcilis AR-T DF 3,6 3,6 3,8

Таблица 9 Титр антител против токсина типа 1 P. multocida

Титр антител (log₂) на определенный день после вакцинации Группа 0 28 42 Группа 1 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 0,0 0,0 0,0 Группа 2 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 0,0 0,0 0,0 Группа 3 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 0,0 0,0 1,0 Группа 4 Porcilis ColiClos 0,0 0,0 0,0 Группа 5 Porcilis AR-T DF 0,0 0,0 2,8

Таблица 10 Титр агглютинирующих антител против B. bronchiseptica

Титр антител (log₂) на определенный день после вакцинации Группа 0 28 42 Группа 1 rIde_Ssuis+Diluvac Forte 1,8 2,3 2,1 Группа 2 rIde_Ssuis+Porcilis ColiClos 1,6 1,0 0,8 Группа 3 rIde_Ssuis+Porcilis AR-T DF 1,0 4,6 7,1 Группа 4 Porcilis ColiClos 0,8 0,4 0,0 Группа 5 Porcilis AR-T DF 1,4 5,3 8,1

ЗАКЛЮЧЕНИЯ

Как можно видеть из результатов, приведенных в таблицах 2-10, добавление rIde_S.suis не оказывало негативного эффекта на серологический ответ на антигены Porcilis ColiClos. Добавление rIde_Ssuis также не оказывало негативного эффекта на серологический ответ против антигена Bordetella в Porcilis AR-T DF, но оказывало значительный негативный эффект на титр против P. multocida.

В частности, в первый момент времени через 28 суток после вакцинации ответ против антигена rIde_S.suis был практически на том же уровне для комбинированной вакцины с Porcilis ColiClos по сравнению с положительным контролем (только rIde_S.suis), но был существенно более низким для комбинированной вакцины с Porcilis ART-DF (таблица 2). Таким образом, антигены Porcilis ColiClos имели менее негативное влияние на ответ против rIde_S.suis, чем антигены Porcilis ART. Кроме того, во второй момент времени через 42 дня после вакцинации ответ против P. multocida был существенно более низким для комбинации rIde_S.suis и Porcilis AR-T DF по сравнению с Porcilis AR-T DF (таблица 9). Таким образом, присутствие rIde_S.suis в комбинированной вакцине оказывает значительное негативное влияние на ответ против P. multocida.

Эти данные показывают, что комбинация антигена rIde_S.suis с антигенами и токсоидами P. multocida и B. bronchisepta, включенными в Porcilis AR-T DF, не осуществима, в то время как комбинация rIde_S.suis с антигенами и токсоидами E. coli и Clostridium, включенная в Porcilis ColiClos, приводит к превосходным результатам, делая эту комбинацию особенно пригодной для предоставления комбинированной вакцины. В сущности, то же самое заключение может быть сделано для комбинированной вакцины, содержащей меньшее количество антигенов, например, только фимбриальные антигены Eschericha coli, которые являются необходимыми антигенами для обеспечения адекватной защиты против E. coli.

Таким образом, на основе результатов может быть сделано заключение, что комбинация rIde_S.suis с антигенами и токсоидами E. coli и Clostridium является пригодной для комбинированной вакцины для обеспечения защиты против патогенных инфекций, вызываемых S. suis, E. coli и Clostridium. Таким образом, в рамках настоящего изобретения неожиданно стало возможным предоставление вакцины, которая обеспечивает защиту против комбинации заболеваний, включая патогенные инфекции, вызываемые S. suis, E. coli и Clostridium, и которая является пригодной для вакцинации свиноматок. Также, учитывая тот факт, что было показано, что потомство может быть адекватно защищено против инфекции Streptococcus suis посредством употребления молозива (для других антигенов этот эффект известен из документов уровня техники), полагают, что комбинированная вакцина, обеспечивающая высокие титры у вакцинированных животных, способна обеспечить адекватную защиту против всех трех патогенов посредством употребления молозива.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Представлена вакцина для защиты свиней против Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium, содержащая (a) иммунологически эффективное количество антигена протеазы IgM Streptococcus suis, (b) иммунологически эффективное количество фимбриального антигена Escherichia coli, и (c) иммунологически эффективное количество токсоида Clostridium. Представлено применение вакцины в способе защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium. Изобретение позволяет получить комбинированную вакцину для защиты поросенка против более чем одной патогенной инфекции, где защита поросенка против этих инфекций достигается посредством вакцинации свиноматок. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 11 табл., 2 пр.

1. Вакцина для защиты свиней против Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium, содержащая компоненты (a), (b) и (c):

(a) иммунологически эффективного количества антигена протеазы IgM Streptococcus suis,

(b) иммунологически эффективного количества фимбриального антигена Escherichia coli, и

(c) иммунологически эффективного количества токсоида Clostridium.

2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что компонент (b) содержит один или более фимбриальных антигенов Escherichia coli, выбранных из F4, F5, F6, F18 и F41.

3. Вакцина по п. 2, отличающаяся тем, что компонент (b) содержит по меньшей мере фимбриальные антигены F4, F5 и F6 Escherichia coli.

4. Вакцина по любому из пп. 1-3, отличающаяся там, что компонент (b) дополнительно содержит токсоид Escherichia coli.

5. Вакцина по п. 4, отличающаяся тем, что токсоид Escherichia coli представляет собой токсоид LT Escherichia coli.

6. Вакцина по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что компонент (c) содержит токсоид типа C Clostridium perfringens.

7. Вакцина по п. 6, отличающаяся тем, что компонент (c) дополнительно содержит токсоид типа B Clostridium perfringens.

8. Вакцина по любому из пп. 1-7, отличающаяся тем, что компонент (b) содержит фимбриальные антигены F4, F5 и F6 Escherichia coli, и компонент (c) содержит токсоид типа C Clostridium perfringens.

9. Вакцина по любому из пп. 1-8, отличающаяся тем, что вакцина содержит адъювант.

10. Вакцина по любому из пп. 1-9, отличающаяся тем, что вакцина адаптирована для внутримышечной инъекции.

11. Применение вакцины по любому из пп. 1-10 в способе защиты свиней против Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium.

12. Применение по п. 11 в способе защиты свиней против патогенной инфекции Streptococcus suis, Escherichia coli и Clostridium, отличающееся тем, что вакцину вводят самке свиньи для защиты поросенка против патогенной инфекции Streptococcus suis посредством употребления молозива вакцинированной самки свиньи.