ВАКЦИНА ДЛЯ ЗАЩИТЫ ОТ STREPTOCOCCUS SUIS Российский патент 2022 года по МПК A61K39/02 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к защите молодых поросят от патогенной инфекции, вызываемой Streptococcus suis.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Streptococcus suis является комменсальным и условно патогенным микроорганизмом у свиней. В частности, в условиях стресса бактерия может вызывать патогенную инфекцию и индуцировать развитие заболевания. В современных условиях производства свиней основной стресс возникает, например, при отлучении поросят и транспортировке молодых поросят. По этой причине Streptococcus suis является основным патогеном у свиней. Он также является новым зоонозным агентом человеческого менингита и синдрома стрептококкового токсического шока. Streptococcus suis является хорошо инкапсулированным патогеном, и описано множество серотипов, в основе которых лежит антигенное разнообразие капсульного полисахарида. Streptococcus suis обладает набором факторов вирулентности, позволяющих обойти иммунную систему хозяина. В совокупности, эти характеристики стали причиной разработки эффективных вакцин для борьбы с этим важным патогеном. Недавно была опубликована обзорная статья о вакцинах против Streptococcus suis (Mariela Segura: “Streptococcus suis vaccines: candidate antigens and progress, in Expert Review of Vaccines, Volume 14, 2015, Issue 12, pages 1587-1608). В этом обзоре собраны данные, полученные в клинике и в ходе экспериментов, и проведено их сравнение, дающее представление о текущем состоянии дел в области разработки вакцины против Streptoccus suis, в общих чертах представленное ниже в настоящем описании.

Используемые в настоящее время вакцины в основном представляют собой цельноклеточные бактерии. Тем не менее, в имеющихся в данной области отчетах описаны трудности, связанные с контролем и лечением заболеваний, и наиболее распространенные «причины неудач при разработке вакцин». Свиньи-носители являются основным источником инфекции, и распространение заболевания в стаде происходит как за счет вертикальной, так и горизонтальной передачи инфекции. Смешение животных-носителей с восприимчивыми животными в стрессовых условиях, таких как отъем от груди и транспортировка, обычно приводит к развитию клинического заболевания. Ранний перевод с грудного кормления на питание с добавлением лекарственных препаратов и практика раздельного размещения после раннего отъема от груди не устраняют инфицирование Streptococcus suis. Таким образом, эффективные меры борьбы с заболеванием будут зависеть от профилактических/метафилактических процедур (где это возможно) и от вакцинации. В настоящее время усилия в области иммунизации сосредоточены на использовании коммерческих или аутогенных бактериальных вакцин. Эти стратегии вакцинации применяются либо к поросятам, либо к свиноматкам. С момента отъема и далее поросята становятся более восприимчивыми к инфекциям Streptococcus suis из-за стрессов, связанных с отъемом от груди, а также обычно следующего за ним процесса транспортировки. Таким образом, предродовая иммунизация свиноматок часто используется в попытках передать пассивный иммунитет поросятам и обеспечить их защитой от Streptococcus suis в этих стрессовых обстоятельствах в раннем возрасте. Кроме того, вакцинация свиноматок является менее дорогостоящей и менее трудоемкой процедурой, таким образом, являясь экономической альтернативой вакцинации поросят. Тем не менее, имеющиеся результаты свидетельствуют о том, что вакцинация свиноматок бактеринами также является спорным вопросом. Во многих случаях у вакцинированных, даже дважды вакцинированных до родов, свиноматок наблюдается слабая реакция на вакцинацию или полное ее отсутствие, вызывая низкий материнский иммунитет, передаваемый помету. И даже если материнский иммунитет передается на достаточном уровне, во многих случаях уровень материнских антител является слишком низким, чтобы обеспечить защиту в самый критический возрастной период от 4 до 7 недель.

В данной области техники, особенно в Европе, поросятам часто вводят аутогенные бактерины. Их готовят из вирулентного штамма, выделенного на ферме с клиническими проблемами, и применяют на той же ферме. Одним из недостатков аутогенных бактеринов является отсутствие данных о безопасности вакцин и риск возникновения серьезных побочных реакций. Ошибки выборки (из-за использования только одной или двух свиней или образцов) могут привести к неудачной попытке идентифицировать штамм или серотип, связанный с недавней вспышкой. Такая неудачная попытка может привести к очень серьезным проблемам в эндемичных стадах. Наконец, наиболее важной проблемой, связанной с аутогенными бактеринами, является то, что их фактическая эффективность является мало изученной. Поскольку применение аутогенных вакцин является эмпирическим, неудивительно, что результаты, полученные с этими вакцинами, являются противоречивыми.

Однако при вакцинации поросят возникает другая проблема. Для защиты сразу после отъема поросята должны быть вакцинированы до отъема и, следовательно, они должны быть вакцинированы в очень молодом возрасте, обычно до достижения 28 дней. Активная вакцинация таких молодых животных связана с возможной интерференцией материнских антител, продуцированных в результате естественной инфекции или в результате активной иммунизации свиноматок (Baums CG, Bruggemann C, Kock C, et al.”Immunogenicity of an autogenous Streptococcus suis bacterin in preparturient sows and their piglets in relation to protection after weaning”, in: Clin Vaccine Immunol. 2010; 17:1589-1597). Действительно, вакцинация ни молочных поросят, ни поросят-отъемышей от иммунизированных свиноматок не давала выраженного активного иммунного ответа и не обеспечивала защиту в возрасте 8 недель. Эта неудача была связана с сильным ингибирующим действием материнских антител или других компонентов молозива. В качестве демонстрации можно привести исследование, в котором после вакцинации 1/2 состава автогенной вакцины S. suis капсульного типа наблюдалась интерференция между материнскими антителами и активным продуцированием антител против S. suis (Lapointe L, D’Allaire S, Lebrun A, et al.: “Antibody response to an autogenous vaccine and serologic profile for Streptococcus suis capsular type 1/2.”in: Can J Vet Res. 2002; 66:8-14.) Исследование, направленное на определение эффективности протокола введения единичной дозы бактерина S. suis серотипа 14 4-дневным поросятам также продемонстрировало неспособность обеспечить поросят защитой от гомологичного заражения (Amass SF, Stevenson GW, Knox KE, et al. “Efficacy of an autogenous vaccine for preventing streptococcosis in piglets” in: Vet Med. 1999, 94, 480-484). Таким образом, знание кинетики антител, по-видимому, является ключевым параметром перед реализацией рациональной программы вакцинации поросят. Принятая стратегия должна приводить к минимальной интерференции между пассивным материнским иммунитетом и активной иммунизацией поросят, и обеспечивать свиней максимальной защитой примерно в момент, появления клинических признаков, обычно через 2-3 недели после отъема.

В данной области техники также описаны другие экспериментальные вакцины. Kai-Jen Hsueh et al. показал (“Immunization with Streptococcus suis bacterin plus recombinant Sao protein in sows conveys passive immunity to their piglets”, in: BMC Veterinary Research, BMC series - open, inclusive and trusted, 13:15, 7 January 2017), что субъединица плюс бактерина может послужить основой для успешной вакцинации свиноматок и обеспечить поросят защитным иммунитетом.

В данной области техники также рассматриваются живые аттенуированные вакцины. Было четко показано, что неинкапсулированные изогенные мутанты Streptococcus suis серотипа 2 являются авирулентными. Тем не менее, состав живой вакцины на основе неинкапсулированного мутанта серотипа 2 обеспечивал только частичную защиту от смертности и не мог предотвратить развитие клинических признаков у свиней, зараженных штаммом дикого типа (Wisselink HJ, Stockhofe-Zurwieden N, Hilgers LA, et al. “Assessment of protective efficacy of live and killed vaccines based on a non-encapsulated mutant of Streptococcus suis serotype 2.” in: Vet Microbiol. 2002, 84:155-168).

За последние годы опубликован обширный список антигенных или иммуногенных молекул Streptococcus suis, большинство из которых были обнаружены с помощью иммунопротеомики с использованием либо сывороток фазы выздоровления, полученных от инфицированных свиней или людей, и/либо иммунных сывороток, полученных в лабораторных условиях. В WO2015/181356 (IDT Biologika GmbH) показано, что антигены, представляющие собой IgM-протеазу, (в виде либо цельного белка, либо высококонсервативного домена Mac-1, составляющего только примерно 35% полного белка) могут вызывать защитный иммунный ответ у поросят в схеме вакцинации с введением двух доз антигена, являющегося IgM-протеазой, активностью в комбинации с первичной вакцинацией, содержащей бактерин. Не ясно, способен ли один антиген, являющийся IgM-протеазой, обеспечивать защитный иммунитет. Кроме того, данные представлены только для успешной вакцинации поросят в возрасте 5-7 недель, которые были инфицированы в возрасте 9 недель, т.е. после периода риска (т.е. периода пиковой заболеваемости инфекциями, вызываемыми патогенным Streptococcus suis) через 2-3 недели после отъема, т.е. 5-7 недель. Нет никаких указаний на то, что антиген, являющийся IgM-протеазой, способен обеспечить решение общей проблемы, связанной с интерференцией материнского иммунитета. Напротив, выбор животных, подлежащих вакцинации в возрасте 5-7 недель, является четким свидетельством того, что желательно избегать интерференции MDA, если таковые присутствуют. Таким образом, без каких-либо доказательств эффективности на практике (наличие MDA во время вакцинации и инфицирование в течение 2-3 недель после отъема или стресса при транспортировке) практическая эффективность продемонстрированной стратегии вакцинации IgM-протеазой/бактерином все еще остается сомнительной. Аналогично, по сути, было продемонстрировано, что многие лицензированные имеющиеся в продаже бактерины являются эффективными в исследованиях на животных (в противном случае, они не были бы одобрены для применения), но на практике, в реальных жизненных условиях, часто не обеспечивают защиту. Следует отметить, что в WO2017/005913 (Intervacc AB) также описано использование антигена, являющегося IgM-протеазой (в частности, полипептидом с IgM-протеазной активностью, слитым с нуклеотидазой), при этом была продемонстрирована способность вызывать только гуморальный иммунный ответ. В этой международной заявке на патент не показано защитное действие, обеспечиваемое антигеном, являющимся IgM-протеазой.

ЦЕЛЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задача изобретения заключается в поиске стратегии вакцинации, которая была бы эффективной для защиты молодых поросят от Streptococcus suis (Ssuis), в частности от клинических признаков, связанных с патогенной инфекцией этой бактерией и/или вызванной ею смертности, в реальных условиях, при которых подлежащие вакцинации животные (т.е. свиноматки и/или их потомство) являются серопозитивными по отношению к анти-Ssuis антителам.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для достижения цели изобретения была разработана вакцина для введения поросятам, в частности вакцина, содержащая антиген, представляющий собой IgM-протеазу Streptococcus suis, (предпочтительно содержащая антиген, представляющий собой IgM-протеазу, в качестве единственного Ssuis-специфического антигена в вакцине) для применения в способе (профилактического) лечения поросят, имеющих материнские антитела против Streptococcus suis, путем введения вакцины поросятам в возрасте не более 28 дней для защиты поросят от Streptococcus suis. Возраст при вакцинации антигеном, являющимся IgM-протеазой, может составлять 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 или 28 дней. Из уровня техники, в частности из WO2017/005913, известно, что положительный иммунный ответ к антигену, являющемуся IgM-протеазой, у молодых поросят может быть получен, начиная со дня рождения и далее.

Неожиданно было обнаружено, что при использовании антигена, являющегося IgM-протеазой, (таким образом, даже при использовании в вакцине только этого антигена, специфического к Ssuis) интерференция материнских антител к Ssuis не является проблемой для достижения защиты от Streptococcus suis, даже когда поросят вакцинируют в возрасте не более 28 дней, и когда животные подвержены вызванному стрессом заражению патогенной бактерией в раннем возрасте, через 2-3 недели после отъема. Это обеспечивает уникальную возможность вакцинации самих поросят и индуцирования активной защиты вместо того, чтобы полагаться на короткую пассивную защиту, инициированную живыми бактериями, которую можно получить через молозиво иммунизированных материнских животных. Было показано, что вакцинация возможна даже до отъема поросят, чтобы защитить их от заболевания, вызванного Streptococcus suis и обусловленного стрессом при отъеме или перевозке молодых животных сразу или вскоре после отъема. Впервые было продемонстрировано, что антиген, который, как было показано, обладает защитным эффектом у пожилых животных, у которых интерференция MDA, как правило, не вызывает никаких проблем, является полезным при вакцинации животных, являющихся MDA положительными, с получением, как правило, явно выраженного защитного эффекта от стресса, получаемого в раннем возрасте в течение 2-3 недель после отъема.

Настоящее изобретение также относится к применению антигена, представляющего собой IgM-протеазу Streptococcus suis, для изготовления вакцины для защиты поросят, имеющих полученные от матери антитела против Streptococcus suis, от Streptococcus suis путем введения вакцины поросятам в возрасте не более 28 дней и к способу защиты поросят, имеющих материнские антитела против Streptococcus suis, от Streptococcus suis путем введения вакцины, содержащей антиген, являющийся IgM-протеазой Streptococcus suis, поросятам в возрасте не более 28 дней.

Следует отметить, что в вакцине антиген обычно объединен с фармацевтически приемлемым носителем, т.е. биосовместимой средой, а именно, средой, которая после введения не вызывает значительных побочных реакций у животного, который способен презентировать антиген иммунной системе животного-хозяина после введения вакцины. Такой фармацевтически приемлемый носитель может, например, представлять собой жидкость, содержащую воду и/или любой другой биосовместимый растворитель, или твердый носитель, такой как обычно используемый для получения лиофилизированных вакцин (на основе сахаров и/или белков), необязательно содержащий иммуностимулирующие агенты (адъюванты). В зависимости от предполагаемого использования или требуемых свойств вакцины необязательно добавляют другие вещества, такие как стабилизаторы, модификаторы вязкости или другие компоненты.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Вакцина представляет собой фармацевтическую композицию, которая является безопасной для введения субъекту-животному, и которая способна индуцировать у этого животного защитный иммунитет против патогенного микроорганизма, т.е. индуцировать успешную защиту от микроорганизма.

Антиген, представляющий собой IgM-протеазу Streptococcus suis, является ферментом, который специфически разрушает IgM свиньи (а не IgG свиньи или IgA свиньи; Seele at al, in Journal of Bacteriology, 2013, 195 930-940; и Vaccine 33:2207-2212; 5 May 2015), белком, обозначенным IdeSsuis, или его иммуногенной частью (обычно длиной по меньшей мере примерно 30-35% от полноразмерного фермента). Весь фермент имеет массу примерно 100-125 кДа, что соответствует примерно 1000-1150 аминокислотам, причем размер зависит от серотипа S. suis. В WO 2015/181356 приведено несколько последовательностей, которые представляют антиген, являющийся IgM-протеазой Streptococcus suis, а именно SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 5, причем последний является иммуногенной частью полноразмерного фермента (обозначенной как домен Mac-1, т.е. аминокислоты 80-414 из SED ID NO: 7). Другие примеры иммуногенных частей полноразмерного фермента приведены в WO2017/005913. В частности, IgM-протеаза может представлять собой протеазу в соответствии с SEQ ID NO: 1 WO 2015/1818356 или белок, имеющий по меньшей мере 90%, или даже 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%, до 100% идентичности последовательности в перекрывающихся областях. Идентичность аминокислотной последовательности может быть установлена с помощью программы BLAST с использованием алгоритма blastp с параметрами по умолчанию. Ожидается, что различные серотипы IgM-протеазы Streptococcus suis имеют идентичность последовательности более 90%, в частности ожидается, что идентичность будет составлять 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%, вплоть до 100%. Искусственный белок, например, полученный для оптимизации выхода в рекомбинантной системе для продуцирования антигена, может иметь более низкую идентичность аминокислотной последовательности, например 85%, 80%, 75%, 70% или даже 60%, с последовательностью целого фермента, сохраняя при этом требуемую иммуногенность, и в контексте настоящего изобретения такой белок рассматривается как представляющий собой антиген, которым является IgM-протеаза Streptococcus suis.

Защита от микроорганизма помогает предотвратить, ослабить или излечить вызванную этим микроорганизмом патогенную инфекцию или расстройство, вызванное этой инфекцией, например, предотвратить или ослабить один или более клинических признаков, возникающих в результате заражения этим патогеном.

Способ вакцинации, состоящий из одного укола вакцины, означает, что защитный иммунитет приобретается после всего лишь одного укола вакцины, и, таким образом, для достижения указанного защитного иммунитета не требуется бустерная вакцинация. В режиме двукратного введения первая (первичная) вакцинация обычно инициирует бустер-эффект в течение 6 недель после первого введения, обычно в течение 3 или даже 2 недель после первого введения, и только после второго (бустерного) введения получают защитный иммунитет, т.е. успешную защиту, как определено выше.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом варианте осуществления настоящего изобретения способ состоит из введения одного укола вакцины. Неожиданным оказалось то, что один укол вакцины, по-видимому, способен вызывать защитный иммунитет у MDA-положительных поросят. В данной области техники вакцины с неживыми Streptocossus suis всегда вводили в режиме первичной бустерной иммунизации, который, тем не менее, давал относительно низкую эффективность. Что касается антигена, используемого по настоящему изобретению, в данной области (см. WO2015/181356 и WO2017/005913) этот антиген использовали в режиме последовательного двукратного введения. Поэтому неожиданным оказалось то, что даже однократная доза вакцины, содержащей (только) IgM-протеазу в качестве антигена, способна индуцировать защитный иммунитет у животных, которые имеют антитела против Streptococcus suis, в частности антитела, полученные от матери.

В другом варианте осуществления вакцину вводят до достижения возраста, в котором поросят отнимают от груди. Другими словами, вакцину вводят до того, как поросята будут фактически отняты от груди. Было показано, что вакцинация в этом раннем возрасте может защитить от вызванной стрессом патогенной инфекции Streptococcus suis в течение короткого 2-3 недельного периода сразу после отъема.

В другом варианте осуществления вакцина предназначена для обеспечения защиты от появления клинических признаков, ассоциированных с патогенной инфекцией, вызванной Streptococcus suis. Типичными клиническими признаками, ассоциированными с патогенной инфекцией, вызванной Streptococcus suis, являются повышение ректальной температуры, нарушение двигательной активности (хромота, опухшие суставы), увеличение частоты дыхания и неврологические признаки (например, тремор, судороги, кривошея, атаксия). Профилактика, облегчение одного или более из этих симптомов будет полезна для свиньи не только потому, что это свидетельствует о подавлении патогенной инфекции.

В другом варианте осуществления вакцина предназначена для обеспечения защиты от повышенной смертности, связанной с патогенной инфекцией, вызванной Streptococcus suis.

В другом варианте осуществления антиген, являющийся IgM-протеазой, присутствует в количестве менее 250 мкг на дозу вакцины, предпочтительно менее 120 мкг на дозу вакцины. Минимальное количество представляет собой количество, при котором все еще можно получить защитный иммунитет. Оно может быть определено с помощью рутинных экспериментов и зависит, среди прочего, от иммуногенных свойствах выбранного антигена, являющегося IgM-протеазой, а также от необходимого уровня защиты. Предполагается, что для предлагаемой вакцины минимальное количество составляет 1 мкг антигена на дозу, но это может быть любая более высокая доза, такая как 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 , 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 или любое более высокое целочисленное значение в диапазоне от 61 до 119, вплоть до 120 мкг на дозу.

Далее настоящее изобретение описано со ссылками на приведенные ниже неограничивающие примеры.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Поскольку защита от Streptococcus suis для поросят требуется в период риска (как правило, в возрасте 4-7 недель), выполняли оценку, является ли вакцина, содержащая IgM-протеазу, эффективной в качестве одноразовой вакцины для анти-Ssuis-положительных поросят в возрасте 3 недель. Целью настоящего исследования была проверка, является ли вакцина эффективной в качестве одноразовой вакцины (в двух разных составах) по сравнению с обычной бактериальной вакциной.

1. Структура исследования

В эксперименте использовали тридцать 3-недельных анти-Ssuis MDA-положительных поросят. Поросят делили на три группы (с равномерным распределением разных пометов) по 10 поросят в каждой группе. Группу 1 вакцинировали один раз внутримышечно в возрасте 3 недель рекомбинантным антигеном, представляющим собой IgM-протеазу rideSsuis (Seele et al: Vaccine 33:2207-2212; 5 May 2015, par. 2.2.), дозой 250 мкг (определенной в результате анализа белка по Брэдфорду с использованием BSA в качестве стандарта) в коммерчески доступном адъюванте Emulsigen (Phibro Animal Health, Teaneck, USA). Группу 2 вакцинировали однократно внутримышечно (2 мл) в возрасте 3 недель рекомбинантной IgM-протеазой rideSsuis (250 мкг на дозу; анализ белка по Брэдфорду с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта) в коммерчески доступном адъюванте X-Solve (MSD Animal Health, Boxmeer, The Netherlands). Группу 3 вакцинировали один раз внутримышечно в возрасте 3 недель бактериальной вакциной (2×10⁹ клеток) в X-Solve с использованием инактивированных бактерий Streptococcus suis серотипа 2, сравнимых с антигеном, присутствующим в коммерчески доступной вакцине Porcilis Strepsuis (MSD Animal Health). В возрасте 4 недель поросят отлучали от груди. В возрасте 6 недель поросят перевозили в комнату для заражения и немедленно заражали. Между транспортировкой и имитацией естественного стресса не было периода акклиматизации. Поросят заражали вирулентной культурой Ssuis серотипа 2. После заражения свиней ежедневно наблюдали на наличие клинических признаков, связанных с патогенной инфекцией Ssuis, таких как депрессия, двигательные проблемы, учащенное дыхание и неврологические признаки, используя обычную систему подсчета от 0 (без признаков) до 3 при наличии тяжелых случаев. Ту же самую систему оценки (от 0 для непроявленного параметра до максимального показателя при наличии серьезных случаев) использовали для других параметров. Непосредственно перед вакцинацией и заражением собирали кровь для определения антител с помощью метода ELISA, используя антитела против Ssuis в цельных клетках. До и после заражения в один и тот же момент времени собирали кровь в пробирки с гепарином для повторного выделения патогенного штамма. В конце исследования (7 дней после заражения) всех выживших свиней умерщвляли и исследовали.

Результаты

Ни одна из вакцин не вызывала каких-либо неприемлемых локальных или системных реакций и, таким образом, может считаться безопасной. Данные после заражения за период до эвтаназии (в день 7) приведены в таблице 1.

Таблица 1: Данные после заражения

Группа Время выживания (дни) Пик температуры (°C) Клинический показатель Показатель при повторном выделении из крови 1 5,4 40,6 27,2 1,9 2 5,9 40,5 17,8 1,4 3 3,2 41,2 59,2 4,7

Оценка суставов после эвтаназии (показатель от 0 до 3, если присутствует фибриновый материал), повторное выделение из суставов (показатель от 0 до 4, когда количество КОЕ превышает 1000), внутренних органов (баллы от 0 до 3 для легких и брюшной полости/плевры и перикарда и от 0 до 4 для мозговых оболочек) и повторное выделение из органов (баллы от 0 до 4, когда количество КОЕ превышает 1000) приведены в таблице 2.

Таблица 2: Средний показатель после вскрытия

Группа Сустав Повторное выделение из суставов Внутренние органы Повторное выделение внутренних органов 1 0,8 6,1 2,0 7,1 2 0,4 3,4 1,4 4,4 3 5,3 17,4 4,2 13,9

Заключение

Все параметры улучшились в двух группах, получавших IgM-протеазную вакцину: в группе 1 (адъювант Emulsigen) и группе 2 (адъювант X-Solve), по сравнению с группой 3, получавшей бактериальную вакцину. Оказалось, что вакцина, приготовленная с XSolve, обеспечивает более лучшую защиту, чем вакцина, использованная в группе 1: во 2-й группе все 8 протестированных параметров были значительно лучше по сравнению с 3-й группой, а в группе 1 три из 8 параметров (т.е. «время выживания», «показатель повторного выделения из суставов» и «показатель для внутренних органов») были значительно лучше по сравнению с группой 3.

В заключение следует отметить, что полученные результаты свидетельствуют о том, что однократная вакцина субъединицы IgM-протеазы в дозе 250 мкг/доза индуцировала защиту у 3-недельных MDA-положительных поросят от патогенной инфекции, вызываемой Streptococcus suis серотипа 2, при заражении через 3 недели после вакцинации, через 2 недели после отъема и сразу после транспортировки.

Пример 2

Выполняли второй эксперимент, который в основном был таким же, как и первый (см. выше Пример 1), с использованием MDA-положительных поросят в раннем возрасте, до отъема, но при этом использовали более низкую дозу IgM-протеазы (120 мкг на дозу в каждом случае), причем в первой группе (группа 1) использовали альтернативный адъювант Xsolve (содержащий такие же компоненты, что и адъювант Xsolve в примере 1, но только в концентрации 60%, т.е. являющимся более мягким). Группа 2 получала антиген, приготовленный с адъювантом Emunade на основе квасцов (MSD Animal Health, Boxmeer, The Netherlands). Группа 3 служила группой отрицательного контроля. В этом эксперименте группа положительного контроля не использовалась.

Другие различия между этими двумя экспериментами заключаются в том, что в этом эксперименте поросята были немного старше в день вакцинации (3,5 недели) и на одну неделю старше (7 недель) в день заражения.

Вакцины оказались безопасными после введения. Результаты эксперимента по заражению приведены ниже.

Таблица 3: Данные после заражения

Группа Случаи ранней эвтаназии (#) Пик температуры (°C) Клинический показатель Показатель при повторном выделении из крови 1 2/10 40,4 16,4 0,5 2 3/10 40,6 13,2 1,1 3 8/10 40,9 52,0 2,7

Результаты, полученные во время клинической фазы, показывают, что для каждой вакцины все параметры улучшены. Данные, полученные после эвтаназии, приведены в Таблице 4. Также из полученных после эвтаназии данных видно, что вакцины, хотя и в более низких дозах, и с более мягкими адъювантами по сравнению с адъювантами, использованными в первом эксперименте, способны обеспечивать защиту от Streptococcus suis. На основании этих данных можно предположить, что защита от Streptococcus suis также может быть получена в случае использования дозы ниже 120 мкг, в частности дозы от 1 до 120 мкг в соответствии с конкретным вариантом осуществления вакцины для применения по изобретению, как указано выше.

Таблица 4: Средний показатель после вскрытия

Группа Сустав Повторное выделение из суставов Внутренние органы Повторное выделение внутренних органов 1 0,4 0,3 0,4 0,6 2 0,8 1,3 0,3 1,6 3 2,1 1,5 1,7 3,9

Настоящее изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу защиты от Streptococcus suis поросят, имеющих материнские анти-Streptococcus suis антитела против Streptococcus suis. Способ предусматривает введение вакцины, содержащей антиген, представляющий собой IgM-протеазу Streptococcus suis, поросятам в возрасте не более 28 дней. Заявлено применение антигена, представляющего собой IgM-протеазу Streptococcus suis, для получения вакцины для защиты поросят, имеющих материнские анти-Streptococcus suis антитела против Streptococcus suis. Изобретение позволяет защитить от Streptococcus suis поросят, имеющих материнские анти-Streptococcus suis антитела против Streptococcus suis. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.

1. Способ защиты поросят от Streptococcus suis, имеющих материнские анти-Streptococcus suis антитела против Streptococcus suis, включающий введение вакцины, содержащей антиген, представляющий собой IgM-протеазу Streptococcus suis, поросятам в возрасте не более 28 дней.

2. Способ по п.1, где способ включает осуществление одного укола вакцины.

3. Способ по п.1 или 2, где вакцина вводится до достижения возраста, при котором происходит отъем от груди.

4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где способ предназначен для обеспечения защиты от появления клинических признаков, ассоциированных с патогенной инфекцией, вызываемой Streptococcus suis.

5. Способ по любому из предшествующих пунктов, где способ предназначен для обеспечения защиты от повышенной смертности, связанной с патогенной инфекцией, вызываемой Streptococcus suis.

6. Способ по любому из предшествующих пунктов, где антиген, представляющий собой IgM-протеазу, присутствует в количестве менее 250 мкг на дозу вакцины, предпочтительно менее 120 мкг на дозу.

7. Применение антигена, представляющего собой IgM-протеазу Streptococcus suis, для получения вакцины для защиты поросят, имеющих материнские анти-Streptococcus suis антитела против Streptococcus suis, путем введения вакцины поросятам в возрасте не более 28 дней.