ВАКЦИНА ДЛЯ ЗАЩИТЫ ОТ STREPTOCOCCUS SUIS Российский патент 2023 года по МПК A61K39/09 A61P31/04 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к защите свиней от патогенной инфекции бактериями Streptococcus suis различных серотипов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Streptococcus suis (S. suis) является одним из главных этиологических факторов контагиозного бактериального заболевания у свиней. Этот патоген может вызывать множество клинических синдромов, включая менингит, артрит, перикардит, полисерозит, септицемию, пневмонию и внезапную смерть. S. suis является грамположительным факультативно анаэробным кокком, первоначально определенным как относящийся к группам Лансфилда R, S, R/S или T. Позднее была предложена новая система типирования на основе типоспецифических капсульных полисахаридных антигенов, находящихся на клеточной стенке. Это привело к системе, содержащей 35 серотипа (Rasmussen and Andresen, 1998, "16S rDNA sequence variations of some Streptococcus suis serotypes", Int. J. Syst. Bacteriol. 48, 1063-1065), из которых серотипы 2, 9, 1, 7 и 1/2 наиболее распространены, в то время как серотип 14, в частности распространен в Европе. Контроль Streptococcus suis в стаде свиней оказался очень трудным. Streptococcus suis является комменсальным и оппортунистическим патогеном свиней. Очевидно, иммунная система запускается не в каждом случае инфекции. Далее, Streptococcus suis представляет собой хорошо инкапсулированный патоген и использует арсенал факторов вирулентности для ускользания от иммунной системы хозяина. Взятые вместе, эти характеристики затруднили разработку эффективных вакцин для борьбы с этим важным патогеном. Недавно была опубликована обзорная статья, касающаяся вакцин против Streptococcus suis (Mariela Segura: "Streptococcus suis vaccines: candidate antigens and progress, Expert Review of Vaccines, Volume 14, 2015, Issue 12, pages 1587-1608). В этом обзоре собрана и сравнена информация из клинической области и экспериментальные данные для обзора современного состояния разработки вакцины против Streptoccus suis, как описано в настоящем описании ниже.

Используемые в настоящее время вакцины в основном представляют собой цельноклеточные бактерины. Однако в отчетах с мест применения описана трудность контроля и управления течением заболевания и, в частности, частым является "неуспех вакцины". Основным источником инфекции являются свиньи-переносчики, и в распространение заболевания в стаде вовлечена как вертикальная, так и горизонтальная передача. Объединение животных-переносчиков с восприимчивыми животными в условиях стресса, таких как отнятие и транспортировка, обычно приводит к клиническому заболеванию. Практики раннего отнятия с использованием медикаментов и изолированного раннего отнятия не устраняют инфекцию Streptococcus suis. Таким образом, эффективные меры контроля для предупреждения заболевания зависят от профилактических/метафилактических процедур (когда это допустимо) и от вакцинации. В настоящее время, усилия по иммунизации на местах сфокусированы на применении коммерческих или аутогенных бактеринов. Эти вакцинные стратегии используют либо для поросят, либо для свиноматок. От момента отнятия и далее поросята являются более предрасположенными к инфекциям Streptococcus suis вследствие стрессов, ассоциированных с отнятием, а также с частой последующей транспортировкой. Таким образом, часто используют дородовую иммунизацию в попытках создания и передачи пассивного иммунитета поросятам и обеспечения защиты против Streptococcus suis в этих стрессовых условиях на раннем этапе жизни. Более того, вакцинация свиноматок является менее дорогостоящей и трудоемкой, таким образом, представляя собой экономическую альтернативу вакцинации поросят. Тем не менее, доступные результаты, по-видимому, указывают на то, что вакцинация свиноматок бактеринами также является спорной. Во многих случаях вакцинированные свиноматки, даже если их вакцинируют дважды до родов, отвечают плохо или вообще не отвечают на вакцинацию, что приводит к низкому материнскому иммунитету, передаваемому потомству. И даже если материнский иммунитет передается на достаточном уровне, во многих случаях уровни материнских антител являются слишком низкими для обеспечения защиты в наиболее критический период в возрасте 4-7 недель.

У поросят на местах часто используют аутогенные бактерины, особенно в Европе. Их получают из вирулентного штамма, выделенного на ферме с клиническими проблемами, и применяют на той же ферме. Одним из недостатков аутогенных бактеринов является то, что данные о безопасности вакцины отсутствуют и могут возникнуть тяжелые неблагоприятные реакции. Ошибки взятия образцов (вследствие использования только одной или двух свиней или образцов) могут приводить к невозможности идентифицировать штамм или серотип, ассоциированный с последней вспышкой. Эта невозможность может быть особенно проблематичной в эндемических стадах. Наконец, наиболее важной дилеммой аутогенных бактеринов является то, что их фактическая эффективность плохо исследована. Поскольку применение аутогенных вакцин является эмпирическим, не является неожиданным, что результаты, полученные для этих вакцин, являются противоречивыми.

Также в данной области описаны другие экспериментальные вакцины. Kai-Jen Hsueh et al. показали ("Immunization with Streptococcus suis bacterin plus recombinant Sao protein in sows conveys passive immunity to their piglets": BMC Veterinary Research, BMC series - open, inclusive and trusted, 13:15, 7 January 2017), что бактерин плюс субъединица могут быть основой успешной вакцинации свиноматок для сообщения защитного иммунитета их поросятам.

Также в данной области описаны живые аттенуированные вакцины. Показано, что не инкапсулированные изогенные мутанты Streptococcus suis серотипа 2 являются авирулентными. Тем не менее, живой вакцинный состав на основе не инкапсулированного мутанта 2 серотипа индуцировал только частичную защиту от смерти и не предотвращал развитие клинических признаков у свиней, зараженных штаммом дикого типа (Wisselink HJ, Stockhofe-Zurwieden N, Hilgers LA, et al. "Assessment of protective efficacy of live and killed vaccines based on a non-encapsulated mutant of Streptococcus suis serotype 2": Vet Microbiol. 2002, 84:155-168).

За последние несколько лет был описан обширный перечень иммуногенных молекул Streptococcus suis, и большинство из них открыты посредством иммунопротеомики с использованием либо сыворотки от выздоровевших инфицированных свиней или человека и/либо полученной в лаборатории иммунной сыворотки. В WO2015/181356 (IDT Biologika GmbH) показано, что антигены протеазы IgM (либо целый белок, либо высококонсервативный домен Mac-1, соответствующий только приблизительно 35% полного белка) могут индуцировать защитный иммунный ответ у поросят в схеме вакцинации, состоящей в введении двух доз антигена протеазы IgM, необязательно в комбинации с примирующей вакцинацией, содержащей бактерин. Отмечается, что в WO2017/005913 (Intervacc AB) также описано применение антигена протеазы IgM (в частности, полипептида протеазы IgM, слитого с нуклеотидазой). Однако было показано только свойство, состоящее в способности индуцировать серологический ответ. В этой международной патентной заявке не показан защитный эффект антигена протеазы IgM.

Другим фактором, который усугубляет проблему обеспечения адекватной защиты против Streptococcus suis, является отсутствие гетерологичной защиты у существующих вакцин. Например, Porcilis Strepsuis® является зерегистрированной вакциной (доступной от MSD Animal Health and Coopers Animal Health) для защиты свиней от Streptococcus suis серотипа 2. Он также пассивно защищает потомство от серотипа 2 посредством употребления молозива. Также, как известно из WO 2010/108977, когда вакцину вводят свиноматкам, потомство, по-видимому, имеет некоторый (очень низкий) уровень защиты против гетерологичного заражения. Однако такая пассивная защита является очень кратковременной. Кроме того, эта вакцина никогда не была зарегистрирована для защиты потомства посредством употребления молозива от бактерий Streptococcus suis любого другого серотипа, так что, по-видимому, уровень гетерологичной защиты был слишком низким, чтобы удовлетворять стандартам регистрации. Эта согласуется с общеизвестной информацией, что для вакцин против Streptococcus suis защита против бактерий серотипов, не входящих в вакцину, не возникает. Это подтверждается, среди прочего, в докторской диссертации Hendrikus Jan Wisselink, под названием "Streptococcus suis infection in pigs: Use of virulence-associated markers in diagnostics and vaccines", опубликованной 6 декабря 2001 года. В кратком изложении (стр.129) утверждается, что "стратегией предупреждения заболевания, вызываемого S. suis, является использование вакцин. Убитые цельноклеточные вакцины, по-видимому, индуцируют значительную защиту против заражения штаммов гомологичного серотипа, однако эта защита, вероятно, является серотип-специфической".

Существуют данные, согласующиеся с данными Smith (US 7125548; опубликованная 24 октября 2006 года). Она утверждает, что "антитела являются серотип-специфическим, и часто обеспечивают защиту только против одного из многих серотипов, известных в группе Streptococci. Например, современные доступные вакцины S. suis, которые в основном основаны на цельноклеточных бактериальных препаратах, или на капсульно-обогащенных фракциях S. suis, обеспечивают только ограниченную защиту против гетерологичных штаммов" (столбец 4, строки 42-28 патента США). В исследовании, опубликованном в январе 2008 года (Medycyna Weterynaryjna, Volume 64, issue 1, pages 113-116), описана защита против бактерий S. suis серотипов 2 и 1/2. Если бы существовал какой-либо ожидаемый уровень гетеологичной защиты между различными серотипами, он бы существовал между этими серотипами, поскольку они иммунологически являются очень близкородственными. Тем не менее, оба серотипа содержались в вакцине для обеспечения адекватной защиты. Основанный в Великобритании RUMA (Responsible Use of Medicines in agriculture Alliance) опубликовал руководство по применению вакцин и вакцинации в свиноводстве в ноябре 2006 года. Что касается заболевания, вызываемого S. suis, в этом руководстве утверждается (на стр.19), что защита свиньи может достигаться путем вакцинации свиноматки, но что "маловероятно, что появится защита против заболевания, вызываемого другими серотипами Strep. suis".

ЗАДАЧА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задачей изобретения является поиск вакцины, которая является эффективной для защиты свиней от Streptococcus, в частности, от бактерий двух распространенных серотипов 2 и 14. Следующей задачей является достижение защиты против бактерий обоих серотипов, которая соответствует (по меньшей мере) уровню защиты существующих коммерчески доступных вакцин на основе бактеринов.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Чтобы выполнить основную задачу изобретения было обнаружено, что антиген протеазы IgM Streptococcus suis можно использовать в способе защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 2 и против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 14. Антиген протеазы IgM, как правило, находится в вакцинной композиции, т.е. композиции, безопасной для введения свиньям, в которой антиген смешан с фармацевтически приемлемым носителем для простоты введения. Путем введения антигена свиньям было обнаружено, что свиньи защищены от патогенной инфекции бактериями Streptococcus suis серотипа 2 и серотипа 9. Кроме того, было обнаружено, что уровень защиты против обоих серотипов соответствует уровню гомологичной защиты, которой достигают при использовании общепринятой вакцины на основе бактерина против серотипа 2 (cf Porcilis Strepsuis). Это означает, что была показана гетерологичная защита для антигена протеазы IgM, по меньшей мере между серотипом 2 и серотипом 14. Это является первым разом, когда была показана достаточная активная защита против бактерий Streptococus suis по меньшей мере серотипа 2 и серотипа 14 с использованием только одного антигена, в частности, первым разом, когда она была показана с использованием антигена протеазы IgM. Это обеспечивает уникальную возможность вакцинации самих свиней и индукции активной гетерологичной защиты вместо использования кратковременной пассивной защиты, которая может быть достигнута через молозиво иммунизированных материнских животных, как известно из WO2010/108977. Далее, истинный уровень защиты, как гомологичной, так и гетерологичной, по-видимому, является значительно лучшим, чем достигается с использованием известной вакцины типа бактерина.

Также изобретение относится к применению антигена протеазы IgM Streptococcus suis для получения вакцины для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 2 и против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 14, и к способу защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 2 и против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 14, путем введения вакцины, содержащей антиген протеазы IgM Streptococcus suis, свиньям.

Как отмечалось выше, в вакцине антиген, как правило, комбинирован с фармацевтически приемлемым носителем, т.е. биосовместимой средой, т.е. средой, которая после введения не индуцирует значительные неблагоприятные реакции у рассматриваемого животного, и которая способна презентировать антиген иммунной системе животного-хозяина после введения вакцины. Таким фармацевтически приемлемым носителем может быть, например, жидкость, содержащая воду и/или любой другой биосовместимый растворитель или твердый носитель, такой как носитель, часто используемый для получения лиофилизированных вакцин (на основе сахаров и/или белков), необязательно содержащий иммуностимулирующие вещества (адъюванты). Необязательно добавляют другие вещества, такие как стабилизаторы, модификаторы вязкости или другие компоненты в зависимости от предполагаемого применения и требуемых свойств вакцины.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Антиген протеазы IgM Streptococcus suis представляет собой фермент, который осуществляет специфическую деградацию IgM свиней (но не IgG свиней или IgA свиней; Seele at al, in Journal of Bacteriology, 2013, 195 930-940; и Vaccine 33:2207-2212; 5 May 2015), белка, обозначаемого как IdeSsuis, или его иммуногенной части (как правило, имеющей длину по меньшей мере приблизительно 30-35% от полноразмерного фермента). Целый фермент имеет массу приблизительно 100-125 кДа, соответствующую приблизительно 1000-1150 аминокислот, причем размер зависит от серотипа S. suis. В WO 2015/181356 приведено несколько последовательностей, которые соответствуют антигену протеазы IgM Streptococcus suis, а именно, SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 и SEQ ID NO:5, причем последняя является иммуногенной частью полноразмерного фермента (обозначаемой как домен Mac-1, т.е. аминокислоты 80-414 SED ID NO:7). Другие примеры иммуногенных частей полноразмерного фермента приведены WO2017/005913. В частности, протеаза IgM может представлять собой протеазу согласно SEQ ID NO:1 WO2015/1818356 или белок, обладающий по меньшей мере 90%, или даже 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%, вплоть до 100% идентичностью последовательности в перекрывающихся участках. Идентичность аминокислотных последовательностей может быть установлена посредством программы BLAST с использованием алгоритма blastp с параметрами по умолчанию. Ожидается, что протеазы IgM Streptococcus suis различных серотипов имеют идентичность последовательности выше 90%, в частности, ожидается, что она составляет 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% и вплоть до 100%. Искусственный белок, например, может быть получен для оптимизации выхода рекомбинантной продуцирующей системы для антигена, может иметь более низкую идентичность аминокислотной последовательности, такую как 85%, 80%, 75%, 70% или даже 60% по сравнению с целым ферментом, при сохранении требуемой иммунногенной функции, и в рамках настоящего изобретения он понимается как антиген протеазы IgM Streptococcus suis.

Защита против патогенной инфекции микроорганизмом представляет собой то же самое, что и достижение защитного иммунитета, т.е. способствование предупреждению, смягчению или излечению патогенной инфекции этим микроорганизмом или нарушения в результате этой инфекции, например, предупреждению или снижению истинной инфекции или одного или нескольких клинических признаков патогенной инфекции этим патогеном.

Способ, включающий введение антигена только один раз, означает, что защитный иммунитет сообщается после только одной инъекции антигена и, таким образом, что вспомогательная вакцинация для достижения указанного защитного иммунитета отсутствует. Подразумевается, что в режиме с двумя инъекциями после первой (примирующей) вакцинации обычно следует вспомогательная в пределах 6 недель после первого введения, обычно в пределах 3 или даже 2 недель после первого введения, и только после второго (вспомогательного) введения достигается защитный иммунитет, т.е. успешная защита, как определено в настоящем описании выше.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом варианте осуществления настоящего изобретения способ включает введение антигена свиньям только один раз. Неожиданно, только одна инъекция антигена оказалась способной индуцировать защитный иммунитет у свиней. В данной области неживые вакцины против Streptococcus suis всегда вводили в режиме примирующее введение-вспомогательное введение, и, тем не менее, они имели низкую эффективность. Что касается антигена для применения в рамках настоящего изобретения, в данной области (см. WO2015/181356 и WO2017/005913) этот антиген неизменно использовался в подходе с двумя инъекциями, необязательно с использованием многокомпонентной вакцины (т.е. содержащей более чем только антиген протеазы IgM). Таким образом, неожиданно было обнаружено, что однократная доза с протеазой IgM способна индуцировать иммунитет у свиней.

Во втором варианте осуществления способ включает введение антигена свиньям в возрасте не более 28 суток. Как указано в настоящем описании выше, Streptococcus suis является комменсалом и оппортунистическим патогеном свиней. В частности, в условиях стресса эта бактерия может индуцировать патогенную инфекцию и индуцировать заболевание. В современных условиях свиноводства основной стресс индуцируется на или после достижения свиньями возраста 28 суток, например, индуцируется отнятием поросят (3-4 недели) и транспортировки молодых поросят вскоре после этого. Для защиты против патогенной инфекции Streptococcus suis, свиньи, таким образом, должны получать их вакцину в очень молодом возрасте, как правило, до достижения возраста 28 суток. Было обнаружено, что с использованием антигена протеазы IgM у свиней в возрасте не более 28 суток, т.е. в любом возрасте из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 или 28 суток, может быть достигнута достаточная (гетерологичная) защита. Как известно в данной области, в частности, из WO2017/005913, положительный иммунный ответ против антигена протеазы IgM может быть достигнут у молодых свиней от дня рождения и далее. Это означает, с учетом демонстрации в настоящий момент фактической защиты у свиней в возрасте 25 дней, понятно, что защита может быть достигнута даже в более младшем возрасте.

В другом варианте осуществления способ включает введение антигена до возраста отнятия поросят. Иными словами, антиген вводят до возраста, когда обычно проводят отнятие поросят (как правило, в возрасте 3-4 недель). Было показано, что с использованием антигена на этой ранней стадии может быть достигнута гетерологичная защита против патогенной инфекции Streptococcus suis, индуцированной стрессом в пределах короткого окна, составляющего 2-3 недели, сразу после отнятия. Известно, что в WO2015/181356 представлена успешная вакцинация с использованием протеазы IgM в качестве антигена. Однако, помимо того факта, что гетерологичная защита не показана, вакцину использовали у поросят в возрасте 5-7 недель и им проводили заражение в возрасте 9 недель, таким образом, значительно позже периода риска (т.е. периода максимальной встречаемости патогенных инфекций Streptococcus suis) через 2-3 недели после отнятия/транспортировки, т.е. в возрасте 5-7 недель. Таким образом, без какого-либо доказательства эффективности в практических условиях (т.е. заражение в пределах окна 2-3 недели после стресса отнятия и транспортировки) все еще неочевидно, помимо вопроса о том, может ли быть достигнута гетерологичная защита, является ли эффективной стратегия комбинированной вакцины протеаза IgM/бактерин, как описано в WO 2015/181356, в практических условиях.

В еще одном варианте осуществления способ включает введение антигена свиньям, имеющим антитела против Streptococcus suis материнского происхождения. Активная вакцинация молодых животных имеет риск возможного препятствования материнскими антителам, продуцированным либо посредством природной инфекции, либо посредством активной иммунизации свиноматок (Baums CG, Bruggemann C, Kock C, et al. "Immunogenicity of an autogenous Streptococcus suis bacterin in preparturient sows and their piglets in relation to protection after weaning": Clin Vaccine Immunol. 2010;17:1589-1597). Действительно, ни вакцинация вскармливаемых поросят, ни вакцинация поросят, отнятых от иммунизированных свиноматок, не была ассоциирована с выраженным активным иммунным ответом и защитой в возрасте 8 недель. Этот неуспех был ассоциирован с выраженным ингибиторным эффектом материнских антител или других компонентов молозива. В этом отношении, также стало возможным продемонстрировать препятствование между материнскими антителами и активной продукцией антител против S. suis в исследовании на местах после вакцинации аутологичным вакцинным составом капсульного типа против S. suis 1/2 (Lapointe L, D’Allaire S, Lebrun A, et al.: "Antibody response to an autogenous vaccine and serologic profile for Streptococcus suis capsular type 1/2.": Can J Vet Res. 2002; 66:8-14). Исследование на местах, нацеленное на определение эффективности протокола с однократной дозой бактерина S. suis серотипа 14 у вскармливаемых поросят в возрасте 4 дней, также не показало защиту поросят против гомологичного заражения (Amass SF, Stevenson GW, Knox KE, et al. "Efficacy of an autogenous vaccine for preventing streptococcosis in piglets": Vet Med. 1999, 94, 480-484). Таким образом, стало неожиданным, что с использованием антигена протеазы IgM может быть достигнута достаточная защита в присутствии антител против антигенов Streptococcus suis материнского происхождения.

В другом варианте осуществления способ предназначен для обеспечения защиты против смертности, ассоциированной с патогенной инфекцией Streptococcus suis серотипа 2 и серотипа 14.

В другом варианте осуществления способ предназначен для обеспечения защиты против клинических признаков, ассоциированных с патогенной инфекцией Streptococcus suis серотипа 2 и серотипа 14. Типичными признаками, ассоциированными с патогенной инфекцией Streptococcus suis, является повышенная ректальная температура, снижение двигательной активности (хромота, опухание суставов), увеличенная частота дыхания и неврологические признаки (например, тремор, судороги, кривошея, атаксия). Предупреждение, смягчение или излечение одного или нескольких из этих признаков было бы полезным для свиней, помимо подавления патогенной инфекции.

Изобретение далее объясняется на основе следующих примеров.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1

Целью первого испытания было тестирование того, способен ли антиген протеазы IgM, в этом случае антиген протеазы IgM Streptococcus suis серотипа 2, обеспечивать защиту против заражения Streptococcus suis серотипа 2 по сравнению со стандартной вакциной на основе бактерина, содержащей убитые бактерии S. suis серотипа 2 (cf. Porcilis Strepsuis).

Схема исследования

Использовали тридцать поросят-отъемышей. Поросят распределяли на три группы (равномерно распределяли среди различных пометов) по 10 поросят в каждой. В группе 1 проводили вакцинацию два раза внутримышечно в возрасте 5 и 7 недель посредством рекомбинантного антигена протеазы IgM rIdeSsuis (Seele et al: Vaccine 33:2207-2212; 5 May 2015, par. 2.2.) в количестве 230 мкг на дозу (как определено с использованием анализа белка Брэдфорда с использованием BSA в качестве стандарта) в адъюванте типа "масло в воде". В группе 2 проводили вакцинацию два раза внутримышечно в возрасте 5 и 7 недель цельноклеточным бактерином серотипа 2 (cf Porcilis Strepsuis) в адъюванте типа "масло в воде" (положительный контроль). Группу 3 оставляли невакцинированной и она служила в качестве контроля заражения. В возрасте 9 недель свиней заражали вирулентной культурой S. suis серотипа 2. До и после заражения с регулярными промежутками времени проводили взятие крови в гепарин для повторного выделения заражающего штамма. После заражения свиней наблюдали каждые сутки в отношении клинических признаков инфекции S. suis (таких как депрессия, двигательные проблемы и/или неврологические признаки) и оценивали с использованием стандартной оценочной системы от 0 (без признаков) до 3 для тяжелых случаев. Тяжело пораженных животных умерщвляли и проводили исследование при вскрытии. В конце исследования (7 суток после заражения) всех выживших свиней умерщвляли и проводили исследование при вскрытии.

Результаты

Ни одна из вакцин не индуцировала никаких неприемлемых реакций области инъекций или системных реакций и, таким образом, их можно было считать безопасными. Данные после заражения для периода перед умерщвлением (на 7 сутки) приведены в таблице 1. Следует отметить, что в день заражения одна свинья в группе 1 оказалась малорослой, и было решено не заражать это животное. Средние клинические показатели, количество погибших животных и количество животных, из крови которых патоген мог быть повторно выделен, оказались лучшими для обеих вакцин.

Таблица 1 : Данные после заражения для исследования 1

Группа Средний клинический показатель Погибли после заражения Положительное выделение из крови 1 11 1/9 2/9 2 33 5/10 6/10 3 61 10/10 10/10

Заключение

Как и ожидалось, инактивированная цельноклеточная вакцина индуцировала значительную гомологичную защиту. Антиген протеазы IgM индуцировал еще лучшую защиту против инфекции Streptococcus suis серотипа 2.

ПРИМЕР 2

Целью второго исследования было тестирование того, способен ли антиген протеазы IgM обеспечивать защиту против заражения Streptococcus suis серотипа 14.

Схема исследования

Схема исследования была по существу такой же, как и для первого исследования. Использовали группы по 10, и их вакцинировали два раза в возрасте 5 и 7 недель антигеном протеазы IgM (группа 1), или их оставляли в качестве невакцинированных контрольных животных (группа 2). В возрасте 9 недель свиней заражали вирулентной культурой S. suis серотипа 14.

Результаты

Также в этом исследовании вакцина не индуцировала никаких неприемлемых реакций области инъекции или системных реакций. В день первой вакцинации (возраст 5 недель) большинство свиней имели титр антител (материнского происхождения) приблизительно 4 log 2. После вакцинации группа вакцины продемонстрировала хорошие антительные ответы со средними титрами антител 9,3 log2 после вспомогательной вакцинации. Титры антител у контрольных животных оставались низкими со средними тирами антител 4,1 log2. Данные после заражения для периода перед умерщвлением (на 11 сутки после заражения) указаны в таблице 2 (ACS=средний клинический показатель; APT=средняя максимальная температура; AST=среднее время выживания; DAC=смерть после заражения; PBI=положительное выделение из крови)

Таблица 2 : Данные после заражения для испытания 2

Группа ACS APT AST DAC PBI 1 1,3 40,0 11,0 0/10 0/10 2 16,9 40,5 9,4 2/10 2/10

Заключение

Хотя в исследовании заражение, по-видимому, является менее вирулентным, результаты демонстрируют, что антиген протеазы IgM индуцирует защиту против заражения S. suis серотипа 14. Это было продемонстрировано посредством снижения клинических показателей, количества животных, достигших гуманного конечного результата, и количества животных, из крови которых можно было повторно выделить заражающую бактерию. Далее, оказалось, что среднее время выживания для вакцинированных животных было лучшим. Вместе с данными первого исследования может быть сделано заключение, что антиген протеазы IgM способен обеспечивать защиту против патогенной инфекции Streptococcus suis бактериями серотипа 2 и серотипа 14. Это означает, также учитывая высокую идентичность между протеазой IgM серотипа 2 и протеазой IgM серотипа 14, что была продемонстрирована перекрестная защита между этими серотипами (т.е. протеаза IgM Streptococcus suis серотипа 2 защищает против заражения серотипом 14 и наоборот). Также оказалось, что уровень защиты против обоих серотипов соответствует (или даже лучше), чем уровень гомологичной защиты, достигаемой с использованием общедоступной вакцины на основе бактерина серотипа 2.

ПРИМЕР 3

Поскольку защита против Streptococcus suis для свиней предпочтительно достигается в период риска (как правило, в возрасте 4-7 недель) проводили оценку того, является ли вакцина, содержащая протеазу IgM, эффективной в качестве однократной вакцины у поросят, положительных по антителам против Streptococcus suis материнского происхождения, в возрасте 3 недель.

Схема исследования

Схема исследования была сравнимой со схемой первых двух исследований, причем основное отличие состояло в том, что вместо животных в возрасте 5 недель вакцинировали поросят в возрасте 3 недель, положительных по антителам против Ssuis MDA (оказалось, что только 1 из 10 животных имело уровень MDA ниже предела детекции). Группу 1 вакцинировали один раз внутримышечно антигеном протеазы IgM в адъюванте типа "масло в воде". Группа 2 служила в качестве отрицательной контрольной группы заражения. В возрасте 4 недель проводили отнятие поросят. В возрасте 6 недель поросят транспортировали в помещение для заражения и сразу заражали. Отсутствовал период акклиматизации между транспортировкой и заражения для имитации естественного стресса. Поросят заражали вирулентной культурой Streptococcus suis серотипа 2.

Результаты

Вакцины не индуцировали никаких неприемлемых реакций области введения или системных реакций. Данные после заражения для периода до умерщвления (на 7 сутки) указаны в таблице 3. В день заражения один поросенок в группе 2 оказался малорослым, и было решено не заражать это животное.

Таблица 3 : Данные после заражения для исследования 3

Группа Средний клинический показатель Погибли после заражения Положительное выделение из крови 1 18 3/10 3/10 2 43 7/9 7/9

Заключение

В заключение, результаты демонстрируют, что путем введения антигена протеазы IgM только один раз достаточная защита может быть индуцирована у поросят в возрасте 3 недель, положительных по MDA, против патогенной инфекции Streptococcus suis, даже при заражении через 3 недели после вакцинации, через 2 недели после отнятия и сразу после транспортировки. Хотя это было продемонстрировано только для заражения серотипом 2, поскольку пример 2 показывает, что антиген способен индуцировать защиту также против серотипа 14, понятно, что сравнимые результаты будут получены, когда целью является защита против инфекции серотипом 14 у этого типа поросят.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Предложено применение антигена протеазы IgM Streptococcus suis серотипа 2 в способе защиты свиней против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 2 и против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 14, а также способ защиты свиней против инфекции Streptococcus suis серотипа 2 и против инфекции Streptococcus suis серотипа 14. Изобретение позволяет защитить свиней одновременно против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 2 и против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 14. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

1. Применение антигена протеазы IgM Streptococcus suis серотипа 2 в способе защиты свиней против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 2 и против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 14.

2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что способ включает введение антигена свиньям только один раз.

3. Применение по любому из пп. 1 или 2, отличающееся тем, что способ включает введение антигена свиньям в возрасте не более 28 суток.

4. Применение по любому из пп. 1-3, отличающееся тем, что способ включает введение антигена до возраста отнятия поросят.

5. Применение по любому из пп. 1-4, отличающееся тем, что способ включает введение антигена свиньям, имеющим антитела против Streptococcus suis материнского происхождения.

6. Применение по любому из пп. 1-5, отличающееся тем, что способ предназначен для обеспечения защиты против смертности, ассоциированной с патогенной инфекцией Streptococcus suis серотипа 2 и серотипа 14.

7. Применение по любому из пп. 1-6, отличающееся тем, что способ предназначен для обеспечения защиты против клинических признаков, ассоциированных с патогенной инфекцией Streptococcus suis серотипа 2 и серотипа 14.

8. Применение антигена протеазы IgM Streptococcus suis серотипа 2 для получения вакцины для защиты свиней против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 2 и против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 14.

9. Способ защиты свиней против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 2 и против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 14 путем введения свиньям вакцины, содержащей антиген протеазы IgM Streptococcus suis серотипа 2.