ВАКЦИНА ДЛЯ ЗАЩИТЫ ОТ STREPTOCOCCUS SUIS СЕРОТИПА 9, ТИП ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 16 Российский патент 2025 года по МПК A61K39/09 A61P31/04 

ОБЩЕЕ ОПИСАНИЕ ОБЛАСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к защите свиней от патогенной инфекции бактериями Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОМУ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Streptococcus suis (S. suis) является одним из главных этиологических факторов контагиозного бактериального заболевания у свиней. Этот патоген может вызывать множество клинических синдромов, включая менингит, артрит, перикардит, полисерозит, септицемию, пневмонию и внезапную смерть. S. suis является грамположительным факультативно анаэробным кокком, первоначально определенным как относящийся к группам Лансфилда R, S, R/S или T. Позднее была предложена новая система типирования на основе типоспецифических капсульных полисахаридных антигенов, находящихся на клеточной стенке. Это привело к системе, содержащей 35 серотипа (Rasmussen and Andresen, 1998, "16S rDNA sequence variations of some Streptococcus suis serotypes", Int. J. Syst. Bacteriol. 48, 1063-1065), из которых серотипы 2, 9, 1, 7 и 1/2 наиболее распространены. Однако считается, что капсульный серотип является плохим маркером вирулентности. В связи с этим была разработана альтернативная система, чтобы помочь понять эпидемиологию инфекции S. suis и биологическое значение подхода серотипирвоания, т.е. так называемое мультилокусное типирование последовательности (MLST), как описано King et al. в Journal of Clinical Microbiology, Oct. 2002, p. 3671-3680 (Development of a Multilocus Sequence Typing Scheme for the pig pathogen Streptococcus suis: Identification of virulent clones and potential capsular serotype exchange"). В этом исследовании было идентифицировано 92 типа последовательностей, среди которых ST-комплексы ST1, ST27 и ST87, каждый из которых содержит множество типов последовательностей, преобладают в популяции. Также см. веб-сайт по MLST для Streptococcus suis (https://pubmlst.org/ ssuis/) размещенный University of Oxford (Jolley et al. Wellcome Open Res 2018, 3:124 (сайт, финансируемый Wellcome Trust), где приводится ссылка на статью King et al. и возможно легко идентифицировать тип последовательности любого штамма Streptococcus suis.

Контроль Streptococcus suis в стаде свиней оказался очень трудным. Streptococcus suis является комменсальным и оппортунистическим патогеном свиней. Очевидно, иммунная система запускается не в каждом случае инфекции. Более того, Streptococcus suis представляет собой хорошо инкапсулированный патоген и использует арсенал факторов вирулентности для ускользания от иммунной системы хозяина. Взятые вместе, эти характеристики затруднили разработку эффективных вакцин для борьбы с этим важным патогеном. Недавно была опубликована обзорная статья, касающаяся вакцин против Streptococcus suis (Mariela Segura: "Streptococcus suis vaccines: candidate antigens and progress, Expert Review of Vaccines, Volume 14, 2015, Issue 12, pages 1587-1608). В этом обзоре собрана и сравнена информация из клинической области и экспериментальные данные для обзора современного состояния разработки вакцины против Streptoccus suis, как описано в настоящем описании ниже.

Используемые в настоящее время коммерческие вакцины в основном представляют собой цельноклеточные бактерины. Однако в отчетах с мест применения описана трудность контроля и управления течением заболевания и, в частности, частым является "неуспех вакцины" при применении вакцин на основе бактеринов. Основным источником инфекции являются свиньи-переносчики, и в распространение заболевания в стаде вовлечена как вертикальная, так и горизонтальная передача. Объединение животных-переносчиков с восприимчивыми животными в условиях стресса, таких как отъем и транспортировка, обычно приводит к клиническому заболеванию. Практики раннего отнятия с использованием медикаментов и изолированного раннего отъема не устраняют инфекцию Streptococcus suis. Таким образом, эффективные меры контроля для предупреждения заболевания зависят от профилактических/метафилактических процедур (когда это допустимо) и от вакцинации. В настоящее время, усилия по иммунизации на местах сфокусированы на применении коммерческих или аутогенных бактеринов. Эти вакцинные стратегии используют либо для поросят, либо для свиноматок. От момента отъема и далее поросята являются более предрасположенными к инфекциям Streptococcus suis вследствие стрессов, ассоциированных с отъемом, а также с частой последующей транспортировкой. Таким образом, часто используют дородовую иммунизацию в попытках создания и передачи пассивного иммунитета поросятам и обеспечения защиты против Streptococcus suis в этих стрессовых условиях на раннем этапе жизни. Более того, вакцинация свиноматок является менее дорогостоящей и трудоемкой, таким образом, представляя собой экономическую альтернативу вакцинации поросят. Тем не менее, доступные результаты, по-видимому, указывают на то, что вакцинация свиноматок бактеринами также является спорной. Во многих случаях вакцинированные свиноматки, даже если их вакцинируют дважды до родов, отвечают плохо или вообще не отвечают на вакцинацию, что приводит к низкому материнскому иммунитету, передаваемому потомству. И даже если материнский иммунитет передается на достаточном уровне, во многих случаях уровни материнских антител являются слишком низкими для обеспечения защиты в наиболее критический период в возрасте 4-7 недель.

У поросят на местах часто используют аутогенные бактерины, особенно в Европе. Их получают из вирулентного штамма, выделенного на ферме с клиническими проблемами, и применяют на той же ферме. Одним из недостатков аутогенных бактеринов является то, что данные о безопасности вакцины отсутствуют и могут возникнуть тяжелые неблагоприятные реакции. Ошибки взятия образцов (вследствие использования только одной или двух свиней или образцов) могут приводить к невозможности идентифицировать штамм или серотип, ассоциированный с последней вспышкой. Эта невозможность может быть особенно проблематичной в эндемических стадах. Наконец, наиболее важной дилеммой аутогенных бактеринов является то, что их фактическая эффективность плохо исследована. Поскольку применение аутогенных вакцин является эмпирическим, не является неожиданным, что результаты, полученные для этих вакцин, являются противоречивыми и часто разочаровывающими.

Также в данной области описаны другие экспериментальные вакцины. Kai-Jen Hsueh et al. показали ("Immunization with Streptococcus suis bacterin plus recombinant Sao protein in sows conveys passive immunity to their piglets": BMC Veterinary Research, BMC series - open, inclusive and trusted, 13:15, 7 January 2017), что бактерин плюс субъединица могут быть основой успешной вакцинации свиноматок для сообщения защитного иммунитета их поросятам.

Также в данной области описаны живые ослабленные вакцины. Показано, что не инкапсулированные изогенные мутанты Streptococcus suis серотипа 2 являются авирулентными. Тем не менее, живой вакцинный состав на основе не инкапсулированного мутанта 2 серотипа индуцировал только частичную защиту от смерти и не предотвращал развитие клинических признаков у свиней, зараженных штаммом дикого типа (Wisselink HJ, Stockhofe-Zurwieden N, Hilgers LA, et al. "Assessment of protective efficacy of live and killed vaccines based on a non-encapsulated mutant of Streptococcus suis serotype 2": Vet Microbiol. 2002, 84:155-168).

За последние несколько лет был описан обширный перечень иммуногенных молекул Streptococcus suis, и большинство из них открыты посредством иммунопротеомики с использованием либо сыворотки от выздоровевших инфицированных свиней или человека и/либо полученной в лаборатории иммунной сыворотки. В WO2015/181356 (IDT Biologika GmbH) показано, что антигены протеазы IgM (либо целый белок, либо высококонсервативный домен Mac-1, соответствующий только приблизительно 35% полного белка) могут индуцировать защитный иммунный ответ у поросят в схеме вакцинации, состоящей в введении двух доз антигена протеазы IgM, необязательно в комбинации с примирующей вакцинацией, содержащей бактерин. Отмечается, что в WO2017/005913 (Intervacc AB) также описано применение антигена протеазы IgM (в частности, полипептида протеазы IgM, слитого с нуклеотидазой). Однако было показано только свойство, состоящее в способности индуцировать серологический ответ. В этой международной патентной заявке не показан защитный эффект антигена протеазы IgM.

Недавно была опубликована WO 2019/115741 (закрепленная за заявителем настоящей заявки). В этой патентной заявке показано, что антиген протеазы IgM является эффективным для защиты против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9. Однако защита является не очень высокой и, по-видимому, осуществляется на уровне, достижимом посредством обычной вакцины на основе бактерина, т.е. на уровне снижения смертности приблизительно на 50% и с положительным выделением из крови в эксперименте с искусственным заражением (не исключая, что на практике защита может достигать более высокого уровня). На первый взгляд эта в некоторой степени разочаровывающая защита, по-видимому, противоречит высокому уровню защиты, достигнутому с антигеном протеазы IgM против инфекции Streptococcus suis серотипа 9, как сообщалось Rieckmann et al. in Vaccine, 3 (2019) 100046 ("Vaccination with the immunoglobulin M-degrading enzyme of Streptococcus suis, IdeSsuis, leads to protection against a highly virulent serotype 9 strain"), также в эксперименте с искусственным заражением.

ЗАДАЧА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задачей изобретения является поиск композиции и способа лечения, которые являются более эффективными для защиты свиней от Streptococcus suis различных серотипов, включая серотип 9.

СУЩНОСТЬ ИЗОРЕТЕНИЯ

Известно, что с использованием антигена протеазы IgM может быть достигнута очень хорошая защита среди различных серотипов, включая серотипы 1, 2, 9 и 14. В этом отношении результаты, описанные в WO 2019/115741, в отношении уровня защиты, достигаемого против серотипа 9, по-видимому, противоречат результатам, описанным в Rieckmann. Однако, при детальном изучении оказывается, что в испытании Rieckmann использовался штамм Streptococcus suis с типом последовательности 94. В WO 2019/115741, хотя и не указано, использовался штамм Streptococcus suis с типом последовательности 16. Это было обнаружено позднее путем типирования используемого штамма для заражения путем мультилокусного типирования последовательности, как описано King et al (см. выше). По-видимому, против последнего типа (S. suis серотипа 9, тип последовательности 16) антиген протеазы IgM обеспечивает защиту на значительно более низком уровне. Причина этого неясна, однако это является большим недостатком, поскольку во многих странах, особенно в европейских странах, таких как Нидерланды, Streptococcus suis с типом последовательности 16 является наиболее распространенным (вплоть до приблизительно 95%) патогенным типом бактерий Streptococcus suis серотипа 9 (Willemse et al. Scientific Reports, 2019, 9: 15429, "Clonal expansion of a virulent Streptococcus suis serotype 9 lineage distinguishable from carriage subpopulations"). Таким образом, хотя протеаза IgM может обеспечивать широкую защиту против серотипов, было обнаружено, что существует брешь в эффективной защите, в частности, в отношении Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16.

После обнаружения этой бреши было обнаружено, что эта брешь может быть устранена путем использования в комбинации антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, и что может быть достигнут уровень защиты, который является лучшим, чем уровень, достигаемый посредством только протеазы IgM (в частности, в отношении чисел смертности и показателей выделения из крови значительно ниже 50% относительно невакцинированных контрольных животных в модели с искусственным заражением). Это является в высокой степени неожиданным, поскольку эти два антигена перекрываются (бактерин по своей природе также содержит все из его субъединиц) и каждый антиген по существу обеспечивает меньшую защиту, в то время как в комбинации они обеспечивают защиту на уровне, достижимом с использованием наиболее эффективной известной вакцины против других штаммов S. suis, т.е. защиту на уровне, который вакцина на основе антигена протеазы IgM способна обеспечить против различных (не серотипа 9, тип последовательности 16) штаммов Streptococcus suis. Таким образом, показано, что антигены в комбинации обеспечивают лучшую защиту, чем ожидалось. Было показано, что этот эффект обеспечивается одновременным введением двух антигенов, как в качестве отдельных единичных вакцин (посредством двух отдельных введений), так и при составлении в одной (единой) вакцине для однократного применения для введения обоих антигенов за раз.

Иными словами, изобретение также относится к антигену протеазы IgM Streptococcus suis для применения в способе, где протеазу IgM вводят одновременно с бактерином Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16. Альтернативно, изобретение относится к бактерину Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для применения в способе, где указанный бактерин вводят одновременно с антигеном протеазы IgM Streptococcus suis для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16. Указанное одновременное введение может проводиться в форме двух отдельных введений двух отдельных составов (один из которых содержит антиген протеазы IgM, а другой содержит бактерин) или одного введения одной единой комбинированной вакцины, содержащей оба антигена в одном едином составе.

С использованием настоящего изобретения брешь в защите от бактерий Streptococcus suis может быть устранена. Изобретение позволяет не только достигнуть наилучшей возможной защиты от Streptococcus suis серотипа 9, включая тип последовательности 16 в качестве важного репрезентативного примера, но также обеспечить способ достижения очень широкой защиты от всех серотипов. Было показано, что антиген протеазы IgM обеспечивает широкую защиту среди серотипов и что защита обязательно будет присутствовать при использовании данной комбинации антигенов.

Также изобретение относится к наборам, содержащим в комбинации антиген протеазы IgM Streptococcus suis, бактерин Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, и фармацевтически приемлемый носитель.

Также изобретение относится к единой вакцинной композиции, содержащей в комбинации антиген протеазы IgM Streptococcus suis, бактерин Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, и фармацевтически приемлемый носитель.

Также изобретение относится к применению антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для производства вакцины для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16.

Наконец, изобретение относится к способу защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, путем введения свиньям антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Антиген протеазы IgM Streptococcus suis представляет собой фермент, который осуществляет специфическую деградацию IgM свиней (но не IgG свиней или IgA свиней; Seele at al, in Journal of Bacteriology, 2013, 195 930-940; и Vaccine 33:2207-2212; 5 May 2015), белка, обозначаемого как IdeSsuis, или его иммуногенной части (как правило, имеющей длину по меньшей мере приблизительно 30-35% от полноразмерного фермента). Целый фермент имеет массу приблизительно 100-125 кДа, соответствующую приблизительно 1000-1150 аминокислот, причем размер зависит от серотипа S. suis. В WO 2015/181356 приведено несколько последовательностей, которые соответствуют антигену протеазы IgM Streptococcus suis, а именно, SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 и SEQ ID NO:5, причем последняя является иммуногенной частью полноразмерного фермента (обозначаемой как домен Mac-1, т.е. аминокислоты 80-414 SED ID NO:7). Другие примеры иммуногенных частей полноразмерного фермента приведены WO2017/005913. В частности, протеаза IgM может представлять собой протеазу согласно SEQ ID NO:1 WO2015/1818356 или белок, обладающий по меньшей мере 90%, или даже 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%, вплоть до 100%, идентичностью последовательности в перекрывающихся участках. Идентичность аминокислотных последовательностей может быть установлена посредством программы BLAST с использованием алгоритма blastp с параметрами по умолчанию. Ожидается, что протеазы IgM Streptococcus suis различных серотипов имеют идентичность последовательности выше 90%, в частности, ожидается, что она составляет 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% и вплоть до 100%. Искусственный белок, например, полученный для оптимизации выхода рекомбинантной продуцирующей системы для антигена, может иметь более низкую идентичность аминокислотной последовательности, такую как 85%, 80%, 75%, 70% или даже 60%, по сравнению с целым ферментом, при сохранении требуемой иммунногенной функции, и в рамках настоящего изобретения он понимается как антиген протеазы IgM Streptococcus suis.

Вакцина представляет собой состав, подходящий для применения у индивидуума, включающий один или несколько антигенов в иммунологически эффективном количестве (т.е. способный стимулировать иммунную систему данного индивидуума в достаточной степени, чтобы по меньшей мере уменьшить негативные эффекты заражения микроорганизмами дикого типа), как правило, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, который при введении индивидууму индуцирует иммунный ответ для лечения инфекции, т.е. способствуя предупреждению, облегчению или излечению инфекции или любого заболевания или нарушения, возникшего в результате этой инфекции.

Защита против патогенной инфекции микроорганизмом представляет собой то же самое, что и достижение защитного иммунитета, т.е. способствование предупреждению, смягчению или излечению патогенной инфекции этим микроорганизмом или нарушения в результате этой инфекции, например, предупреждению или снижению истинной инфекции или одного или нескольких клинических признаков патогенной инфекции этим патогеном.

Бактерин представляет собой суспензию убитых бактерий для применения в качестве вакцины.

Комбинация антигенов представляет собой совместное применение этих (индивидуально различающихся) антигенов в одной стратегии вакцинации, либо путем объединения разных антигенов в одном вакцинном составе, либо путем использования отдельных антигенных составов для одновременного введения отдельных составов.

Единая вакцинная композиция представляет собой вакцину, которая составляет единое целое, как например, единую жидкость, содержащую все из ингредиентов вакцины, объединенные в единой смеси.

Фармацевтически приемлемый носитель представляет собой биосовместимую среду, а именно, среду, которая после введения не индуцирует значительных неблагоприятных реакций у подвергаемого лечению индивидуума и способна презентировать антиген иммунной системе индивидуума после введения композиции, содержащей носитель. Такой фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой, например, жидкость, содержащую воду и/или любой другой биосовместимый растворитель или твердый носитель, такие как обычно используются для получения лиофилизированных вакцин (на основе сахаров и/или белков), необязательно содержащие иммуностимулирующие средства (адъюванты). Необязательно добавляют другие вещества, такие как стабилизаторы, модификаторы вязкости или другие компоненты, в зависимости от предполагаемого применения или требуемых свойств соответствующей вакцины.

ДРУГИЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Хотя два антигена комбинации по настоящему изобретению можно вводить по отдельности, в следующем варианте осуществления антиген протеазы IgM Streptococcus suis и бактерин Streptococcus suis содержатся в единой композиции для введения свиньям. Было обнаружено, что комбинированный эффект улучшается, когда оба антигена присутствуют в одной композиции, которая может быть введена посредством однократного введения.

В другом варианте осуществления комбинация для применения согласно изобретению содержит антиген протеазы IgM Streptococcus suis серотипа 2. Хотя известно, что протеаза IgM способна индуцировать перекрестную защиту против серотипов 2 и 9 (см. WO 2019/115741 для протеазы IgM), было обнаружено, что комбинация протеазы IgM серотипа 2 и бактерина серотипа 9 преимущественно является пригодной для обеспечения защиты против Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16. Сопутствующим преимуществом является то, что комбинация обеспечивает широкую перекрестную защиту среди различных серотипов, таких как 2, 9, 7 и 14, как известно для антигена протеазы IgM серотипа 2. Соответственно, также для набора, единой вакцины, применения антигенов для производства вакцины и способа лечения, все из которых идентифицированы в настоящем описании в разделе "Сущность изобретения" в качестве других вариантов осуществления той же идеи изобретения, антигены преимущественно выбраны из протеазы IgM серотипа 2.

В другом варианте осуществления антигены вводят свиньям в возрасте в возрасте не более 35 суток. Как указано в настоящем описании выше, Streptococcus suis является комменсалом и оппортунистическим патогеном свиней. В частности, в условиях стресса эта бактерия может индуцировать патогенную инфекцию и индуцировать заболевание. В современных условиях свиноводства основной стресс индуцируется в возрасте или после достижения свиньями возраста 28 суток, например, индуцируется отъемом поросят (3-4 недели) и транспортировкой молодых поросят вскоре после этого. Для защиты против патогенной инфекции Streptococcus suis, свиньи, таким образом, должны получать их вакцину в очень молодом возрасте, как правило, до достижения возраста 35 суток. Было обнаружено, что с использованием комбинации антигенов согласно изобретению у свиней в возрасте не более 35 суток, т.е. в любом возрасте из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 или 35 суток может быть достигнута достаточная защита. Как известно в данной области, положительный иммунный ответ против антигена протеазы IgM (WO2017/005913) и бактеринов (которые обычно применяются у поросят до отъема) может быть достигнут у молодых свиней от дня рождения и далее. Это означает, что, понятно, что после демонстрации на настоящий момент фактической защиты у свиней в возрасте 3-5 недель, защита может быть достигнута даже в более младшем возрасте.

В другом варианте осуществления антигены вводят до возраста отъема поросят. Иными словами, антиген вводят до возраста, когда обычно проводят отъем поросят (как правило, в возрасте 3-4 недель). Было показано, что путем введения антигенов на этой ранней стадии может быть достигнута гетерологичная защита против патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, индуцированной стрессом в пределах короткого окна, составляющего 2-3 недели, сразу после отъема. Известно, что в WO2015/181356 представлена успешная вакцинация с использованием протеазы IgM в качестве антигена. Однако вакцину использовали у поросят в возрасте 5-7 недель, и им проводили заражение в возрасте 9 недель, таким образом, значительно позже периода риска (т.е. периода максимальной встречаемости патогенных инфекций Streptococcus suis) через 2-3 недели после отъема/транспортировки, т.е. в возрасте 5-7 недель. Таким образом, без какого-либо доказательства эффективности в практических условиях (т.е. заражение в пределах окна 2-3 недели после стресса отнятия и транспортировки) все еще неочевидно, является ли эффективной стратегия комбинированной вакцины протеаза IgM/бактерин, как описано в WO 2015/181356, в практических условиях.

Все из описанных выше вариантов осуществления, соответственно, также являются вариантами осуществления изобретения, как определено в настоящем описании выше в разделе "Сущность изобретения", т.е. соответствующего применения антигена протеазы IgM и бактерина, набора, единой вакцины и применения для производства и способа защиты.

Изобретение далее дополнительно объяснено на основе следующего примера.

ПРИМЕР

Целью этого испытания было тестирование того, способно ли комбинированное введение антигена протеазы IgM и бактерина серотипа 9, тип последовательности 16, в этом примере антигена протеазы IgM Streptococcus suis серотипа 2, обеспечивать защиту против заражения Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, так чтобы в модели с искусственным заражением, как используется в WO2019/115741, уровень защиты был лучшим, чем достигается с использованием известной протеазы IgM или широко используемого бактерина отдельно (т.е. лучше, чем приблизительно 50% чисел смертности и повторного выделения из крови после заражения).

Используемые антигены представляют собой антигены, как описано в документах уровня техники. Протеаза IgM соответствует антигену, как описано в WO2019/115741, а именно, экспрессируемому E. coli антигену протеазы IgM rIdeSsuis, как описано Seele et al в Vaccine 33:2207-2212; 5 May 2015, par. 2.2, но без His-метки. Бактерин представляет собой обычную убитую холекрезолом бактерию Streptococcus suis.

Схема испытания

Схема испытания была такой же, как и в WO2019/115741, за исключением того, что в текущей схеме доза протеазы IgM была значительно более низкой (80 мкг против 230 мкг). Также вакцинацию и заражение проводили на две недели раньше, чтобы более соответствовать критическому периоду для инфицирования патогенными Streptococcus suis. Это означает, что в настоящей схеме, скорее наоборот, будет труднее достигнуть той же эффективности вакцины, которая была достигнута в испытании, как описано в WO2019/115741.

В испытании использовали тридцать шесть поросят в возрасте 3 недель. Поросят распределяли на три группы (равномерно распределенные из разных пометов) по 12 поросят в каждой. Группы 1 и 2 вакцинировали два раза внутримышечно в возрасте 3 и 5 недель посредством каждой из двух различных комбинированных вакцин. Группу 1 вакцинировали единой вакцинной композицией (2 мл на дозу), содержавшей в комбинации антиген протеазы IgM Streptococcus suis серотипа 2 (в количестве 80 мкг/доза) и бактерин Streptococcus suis серотипа 9, ST16 (в количестве 2×10⁹ клеток/доза) в адъюванте типа "масло в воде". Группу 2 вакцинировали каждый раз двумя отдельными вакцинами, одну из которых, содержавшую протеазу IgM (та же доза), в правую сторону шеи, а другую, содержавшую бактерин (в той же дозе), в левую сторону шеи, обе из которых составлены в одном адъюванте типа "масло в воде", который использовался для группы 1. Группа 3 оставалась невакцинированной. В возрасте 7 недель свиней подвергали интратрахеальному заражению вирулентной культурой S. suis серотипа 9, тип последовательности ST16.

После заражения свиней наблюдали каждые сутки в отношении клинических признаков инфекции S. suis, таких как подавленность, двигательные нарушения и/или неврологические признаки, в течение 11 суток и оценивали с использованием обычной оценочной системы от 0 (без признаков) до 3 для тяжелых случаев. Животных, достигавших предела, исходя из гуманных соображений, умерщвляли. Непосредственно перед вакцинацией и заражением проводили взятие сыворотки крови для определения антител. С регулярными промежутками до и после заражения проводили взятие крови в гепарин для повторного выделения заражающего штамма.

Результаты

Ни одна из вакцин не индуцировала какие-либо неприемлемые реакции в области инъекции или системные реакции и, таким образом, могла считаться безопасной. Перед заражением одно животное в группе 1 было покалечено и подвергнуто лечению соответствующим образом. Животное не выздоровело и, таким образом, было умерщвлено и исключено из испытания.

Данные после заражения для периода до умерщвления (на 11 сутки) приведены в таблице 1. Средние клинические показатели, длительность выживания, количество погибших животных после заражения и количество животных, из крови которых могли повторно выделить патоген, оказалось лучшим для обеих схем вакцинации по сравнению с контролями. Уровень защиты от заражения штаммом серотипа 9, ST16, оказался сравнимым с уровнем защиты, достигаемым с использованием протеазы IgM, против гомологичного заражения штаммом серотипа 2, как описано в WO2019/115741, и оказался значительно лучшим, чем защита, достигаемая против серотипа 9, ST16, как описано в патенте ‘741. Это указывает на то, что существует синергический эффект этих двух антигенов. Этот эффект, по-видимому, является более выраженным, когда их комбинируют в единой вакцине, в частности, учитывая более низкие клинические показатели и более высокое среднее время выживания.

Таблица 1 : Данные после заражения

Группа Клинический показатель Время выживания (сутки) Погибшие после заражения Положительное выделение из крови 1 14 9.4 2/11 2/11 2 22 8.5 3/12 3/12 3 52 5.0 8/12 9/12

Заключение

Схема настоящего исследования была более критической, чем схема, использованная в WO2019/115741. Таким образом, даже если бы сравнимая эффективность была достигнута при применении альтернативной вакцины, это уже было бы признаком того, что альтернативная вакцина лучше, чем вакцины, описанные в WO2019/115741 (т.е. вакцины на основе одновалентной протеазы IgM или бактерина). Однако было обнаружено, что с использованием новой комбинированной вакцины может быть достигнута значительно более высокая эффективность вакцины, что указывает на то, что антигены имеют синергичное действие. Этот эффект, по-видимому, является более высоким, когда антигены комбинируют в одном (едином) составе.

Группа изобретений относится к области ветеринарной фармацевтики, а именно к применению комбинации антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, единой вакцинной композиции для защиты свиней от указанной патогенной инфекции, применению указанных антигена и бактерина для получения вакцины указанного назначения, способу защиты свиней от указанной патогенной инфекции, применению указанного бактерина для защиты свиней от указанной патогенной инфекции. Применение комбинации антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16. Единая вакцинная композиция для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, содержащая в комбинации антиген протеазы IgM Streptococcus suis, бактерин Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, и фармацевтически приемлемый носитель. Применение антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для получения вакцины для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16. Способ защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, путем введения свиньям антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16. Применение бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, где указанный бактерин вводят одновременно с антигеном протеазы IgM Streptococcus suis. Указанная группа изобретений обеспечивает эффективную защиту свиней от заражения Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16. 5 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.

1. Применение комбинации антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16.

2. Применение по п.1, отличающееся тем, что антиген протеазы IgM Streptococcus suis и бактерин Streptococcus suis содержатся в одной композиции для введения свиньям.

3. Применение по любому из пп. 1 или 2, отличающееся тем, что антиген протеазы IgM Streptococcus suis представляет собой протеазу IgM Streptococcus suis серотипа 2.

4. Применение по любому из пп. 1-3, отличающееся тем, что способ включает введение антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis свиньям в возрасте не более 35 суток.

5. Применение по любому из пп. 1-4, отличающееся тем, что способ включает введение антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis до возраста отъема свиней.

6. Единая вакцинная композиция для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, содержащая в комбинации антиген протеазы IgM Streptococcus suis, бактерин Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, и фармацевтически приемлемый носитель.

7. Применение антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для получения вакцины для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16.

8. Способ защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, путем введения свиньям антигена протеазы IgM Streptococcus suis и бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16.

9. Применение бактерина Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, для защиты свиней от патогенной инфекции Streptococcus suis серотипа 9, тип последовательности 16, где указанный бактерин вводят одновременно с антигеном протеазы IgM Streptococcus suis.