В данной заявке испрашивается преимущество предварительной заявки США No. 62/270165, поданной 21 декабря 2015 г., которая во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.

Область техники

[001] Настоящее изобретение относится к композициям и к способам для снижения уровня экспрессии мРНК и белка tau. Эти композиции и способы могут быть применены для лечения tau-ассоциированных заболеваний.

Предшествующий уровень техники

[002] Tau представляет собой ассоциированный с микротрубочками белок, который стабилизирует микротрубочки и облегчает транспорт аксонов. Белок Tau взаимодействует с тубулином и стабилизирует микротрубочки, что способствует сборке тубулина в микротрубочки. Сеть микротрубочек участвует во многих важных клеточных процессах, включая формирование цитоскелета и сохранение структуры и морфологии клетки, а также обеспечение платформы для внутриклеточного транспорта везикул, органелл и макромолекул. Поскольку связывание tau с микротрубочками стабилизирует микротрубочки, то tau является ключевым медиатором этих клеточных процессов.

[003] В человеческом мозге присутствуют по меньшей мере шесть изоформ tau длиной в пределах от 352 до 441 аминокислотных остатков. Изоформы tau происходят от одного гена MAPT (белка tau, ассоциированного с микротрубочками), расположенного на хромосоме 17. Транскрипт MAPT подвергается комплексному, регулируемому альтернативному сплайсингу, что приводит к образованию множества видов мРНК. Экзоны 2 и 3 MAPT кодируют последовательность в 29- или 58- аминокислот, соответственно, и, таким образом, альтернативный сплайсинг экзонов 2 и/или 3 приводит к включению 0, 1 или 2 копий N-концевого домена из 29 кислотных аминокислот, которые обозначаются как 0N, 1N или 2N tau, соответственно. Экзон 10 MAPT кодирует домен, связывающийся с микротрубочками, и, таким образом, включение экзона 10 обеспечивает присутствие дополнительного домена, связывающегося с микротрубочками. Поскольку в tau присутствуют три домена, связывающихся с микротрубочками, то изоформы tau, которые включают экзон 10, обозначаются «4R tau», что означает, что белок tau имеет четыре повторяющихся домена, связывающихся с микротрубочками. Изоформы tau без экзона 10 обозначаются «3R tau», а это означает, что белок tau имеет три повторяющихся домена, связывающихся с микротрубочками. Изоформы 4R tau, предположительно, связываются с микротрубочками лучше, чем изоформы 3R tau, поскольку они имеют еще один домен, связывающийся с микротрубочками. Отношение 3R tau к 4R tau регулируется в процессе развития, причем, в тканях плода экспрессируются исключительно 3R tau, а в тканях взрослого человека экспрессируются 3R tau и 4R tau приблизительно на одинаковых уровнях.

[004] Tau представляет собой фосфопротеин, имеющий приблизительно 85 потенциальных сайтов фосфорилирования (Ser, Thr или Tyr) на самой длинной изоформе Tau (Pedersen and Sigurdsson, Trends in Molecular Medicine 2015, 21 (6): 394). Сообщалось, что Фосфорилированию подвергаются приблизительно половина этих сайтов в нормальных белках tau. Tau динамически фосфорилируется и дефосфорилируется во время клеточного цикла. Tau может связываться только с микротрубочками в его дефосфорилированной форме, и, таким образом, фосфорилирование tau действует в качестве прямого переключателя ассоциации-диссоциации микротрубочек в нейроне. В патологических условиях, белок tau становится гиперфосфорилированным, что приводит к потере связывания с тубулином и к дестабилизации микротрубочек, с последующим агрегацей и осаждением tau в патогенных нейрофибриллярных клубках. Фрагменты расщепления tau протеазой (Asp13, Glu391 и Asp421) также были идентифицированы в нейрофибриллярных клубках.

Сущность изобретения

[005] В настоящем изобретении описаны антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на человеческий белок tau, ассоциированный с микротрубочками (MAPT); композиции, содержащие эти антисмысловые олигонуклеотиды, и способы снижения уровня экспрессии мРНК и белка tau с использованием этих антисмысловых олигонуклеотидов. Описанные здесь способы и композиции являются подходящими для лечения tau-ассоциированных заболеваний.

[006] В одном из своих аспектов, настоящее изобретение относится к олигонуклеотидам, содержащим последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 70% (например, на 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентична любым последовательностям нуклеотидных оснований, представленным в таблицах 2-17, где С в любых последовательностях нуклеотидных оснований представляет собой либо цитозин, либо 5-метилцитозин, и где по меньшей мере один нуклеотид этого олигонуклеотида имеет 2'-модификацию. Эти олигонуклеотиды представляют собой антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на человеческий MAPT. 2'-модификация может быть выбрана из группы, состоящей из 2'-фтора, 2'-дезокси-2'-фтора, 2'-О-метила, 2'-О-метоксиэтила (2'-О-МО), 2'-О-аминопропила (2'-О-АP), 2'-О-диметиламиноэтила (2'-О-DMAOE), 2'-О-диметиламинопропила (2'-О-DMAP), 2'-О-диметиламиноэтилоксиэтила (2'-О-DMAEOE) и 2'-О-N-метилацетамидо (2'-О-NMA). В некоторых вариантах осуществления изобретения, 2'-модификацией является 2'-О-метоксиэтил (2'-О-МОE). В некоторых вариантах осуществления изобретения, каждый С в любых последовательностях нуклеотидных оснований представляет собой 5-метилцитозин.

[007] В некоторых вариантах осуществления изобретения, представленные здесь антисмысловые олигонуклеотиды имеют длину от 12 до 30 нуклеотидных оснований. Так, например, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, может включать 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеотидных оснований. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, имеют длину от 12 до 25 нуклеотидных оснований. Так, например, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, может включать 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидных оснований. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, имеют длину от 15 до 20 нуклеотидных оснований. Так, например, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, может включать 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидных оснований.

[008] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, представляют собой стерические блокаторы. Такие антисмысловые олигонуклеотиды снижают уровень экспрессии мРНК и/или белка tau независимо от РНКазы Н. Межнуклеозидными связями стерических блокаторов могут быть фосфодиэфирные или фосфортиоатные связи. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, представляют собой стерические блокаторы, содержащие последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 70% (например, на 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентична любым последовательностям нуклеотидных оснований, представленным в таблицах 2-8, где С в любых последовательностях нуклеотидных оснований представляют собой либо цитозин, либо 5-метилцитозин, и где каждый нуклеотид этого олигонуклеотида имеет 2'-модификацию. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 80% идентична любым последовательностям, представленным в таблицах 2-8. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 90% идентична любым последовательностям, представленным в таблицах 2-8. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит любые последовательности нуклеотидных оснований, представленные в таблицах 2-8. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, состоит из любых последовательностей нуклеотидных оснований, представленных в таблицах 2-8. В некоторых вариантах осуществления изобретения, каждый С в любых последовательностях нуклеотидных оснований представляет собой 5-метилцитозин.

[009] В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, имеет 2'-О-MOE-модификацию в каждой нуклеотидной субъединице.

[0010] В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит линкер, присоединенный к 3'-концу олигонуклеотида посредством фосфатного мостика, и этот олигонуклеотид имеет любую из следующих структур:

, или

.

[0011] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, представляют собой гапмеры, которые имеют центральный гэп-сегмент из смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов, расположенных между двумя сегментами крыла у 5'- и 3'-концов (также называемых 5'-крылом и 3'-крылом, соответственно). Такие антисмысловые олигонуклеотиды снижают уровень экспрессии мРНК и/или белка tau посредством активирующей РНКазы Н. Межнуклеозидной связью гапмеров могут быть фосфортиоатные или фосфодиэфирные связи. В некоторых вариантах осуществления изобретения, гапмеры содержат фрагмент по меньшей мере из пяти (например, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12) смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов, а сегменты 5'- и 3'-крыльев содержат один или более 2'-модифицированных нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения, такой олигонуклеотид содержит по меньшей мере семь (например, 7, 8, 9, 10, 11, 12) смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения, такой олигонуклеотид содержит десять смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов. 2'-модификация может быть выбрана из группы, состоящей из 2'-фтора, 2'-дезокси-2'-фтора, 2'-О-метила, 2'-О-метоксиэтила (2'-О-МОE), 2'-О-аминопропила (2'-О-АP), 2'-О-диметиламиноэтила (2'-О-DMAOE), 2'-О-диметиламинопропила (2'-О-DMAP), 2'-О-диметиламиноэтилоксиэтила (2'-О-DMAEOE) и 2'-О-N-метилацетамидо (2'-О-NMA). В некоторых вариантах осуществления изобретения, гапмеры содержат 2'-О-МОE-модифицированный нуклеотид в 5'-крыле и 3'-крыле.

[0012] В некоторых вариантах осуществления изобретения, гапмеры, нацеленные на tau, представляют собой 5-10-5-гапмеры, которые имеют длину в 20 нуклеозидов, где центральный гэп-сегмент содержит десять смежных 2'-дезоксинуклеозидов, фланкированных 5'-крылом и 3'-крылом, где каждое крыло включает пять нуклеозидов, каждый из которых имеет 2'-О-МОE-модификацию.

[0013] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, представляют собой гапмеры, содержащие последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 70% (например, на 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентична любым последовательностям, представленным в таблицах 9-15 и 17, где С в любых последовательностях нуклеотидных оснований представлеют собой либо цитозин, либо 5-метилцитозин, и где по меньшей мере один нуклеотид этого олигонуклеотида имеет 2'-модификацию. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 80% идентична любым последовательностям, представленным в таблицах 9-15 и 17. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 90% идентична любым последовательностям нуклеотидных оснований, представленным в таблицах 9-15 и 17. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит любые последовательности нуклеотидных оснований, представленные в таблицах 9-15 и 17. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, состоит из любых последовательностей нуклеотидных оснований, представленных в таблицах 9-15 и 17. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, представляют собой 5-10-5-гапмеры, которые содержат любые последовательности нуклеотидных оснований, представленные в таблицах 9-15 и 17, где каждый из 1-5 нуклеотидов содержит 2'-О-MOE-модифицированный нуклеозид; каждый из 6-15 нуклеотидов содержит 2'-дезоксинуклеозид; а каждый из 16-20 нуклеотидов содержит 2'-О-MOE-модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах осуществления изобретения, каждый С в любых последовательностях нуклеотидных оснований представляет собой 5-метилцитозин.

[0014] В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит последовательность нуклеотидных оснований, выбранную из любых SEQ ID NO: 208, 284, 285, 313, 329, 335, 366, 384, 386, 405, 473 и 474. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентична последовательности SEQ ID NO: 284. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит SEQ ID NO: 284. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентична последовательности SEQ ID NO: 285 или 208. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, содержит SEQ ID NO: 285 или 208.

[0015] В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к олигонуклеотидам, содержащим последовательность нуклеотидных оснований, которая комплементарна по меньшей мере 12 смежных нуклеотидным основаниям любой из SEQ ID NO: 487-506 с 1, 2 или 3 несоответствиями, где по меньшей мере один нуклеотид этого олигонуклеотида имеет 2'-модификацию. Эти олигонуклеотиды представляют собой антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT. В некоторых вариантах осуществления изобретения, такой олигонуклеотид содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая на 100% комплементарна по меньшей мере 12 смежных нуклеотидным основаниям любой из SEQ ID NO: 487-506. В некоторых вариантах осуществления изобретения, такой олигонуклеотид содержит один или более 5-метилцитозинов. В некоторых вариантах осуществления изобретения, такой олигонуклеотид имеет 2'-модификацию. 2'-модификация может быть выбрана из группы, состоящей из 2'-фтора, 2'-дезокси-2'-фтора, 2'-О-метила, 2'-О-метоксиэтила (2'-О-МОE), 2'-О-аминопропила (2'-О-АP), 2'-О-диметиламиноэтила (2'-О-DMAOE), 2'-О-диметиламинопропила (2'-О-DMAP), 2'-О-диметиламиноэтилоксиэтила (2'-О-DMAEOE) и 2'-О-N-метилацетамидо (2'-О-NMA). В некоторых вариантах осуществления изобретения, 2'-модификацией является 2'-О-метоксиэтил (2'-О-МОE). В некоторых вариантах осуществления изобретения, такой олигонуклеотид содержит по меньшей мере пять (например, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12) смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения, такой олигонуклеотид содержит по меньшей мере семь (например, 7, 8, 9, 10, 11, 12) смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления такой олигонуклеотид содержит десять смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов.

[0016] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, способны снижать уровень экспрессии мРНК или белка tau по меньшей мере на 30% in vitro.

[0017] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, способны снижать уровень экспрессии мРНК или белка tau по меньшей мере на 30% in vivo.

[0018] В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим любые описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды и фармацевтически приемлемый носитель.

[0019] В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способам снижения уровня экспрессии tau у индивидуума, например, у индивидуума, страдающего tau-ассоциированным заболеванием или восприимчивого к такому заболеванию, путем введения этому индивидууму терапевтически эффективного количества любого описанного здесь антисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления изобретения, такие способы могут включать введение второго агента индивидууму. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, может быть введен индивидууму интратекально, интракраниально, интраназально, перорально, внутривенно или подкожно. В некоторых вариантах осуществления изобретения, индивидуумом является человек.

[0020] Настоящее изобретение относится к описанным здесь антисмысловым олигонуклеотидам для их применения в целях лечения tau-ассоциированного заболевания у индивидуума, нуждающегося в этом, например, у индивидуума, страдающего tau-ассоциированным заболеванием или восприимчивого к такому заболеванию. Также рассматривается применение описанных здесь антисмысловых олигонуклеотидов или фармацевтической композиции для лечения tau -ассоциированного заболевания у индивидуума, нуждающегося в этом. Настоящее изобретение также включает применение описанных здесь антисмысловых олигонуклеотидов в целях приготовления лекарственного препарата для применения в лечении tau-ассоциированного заболевания у индивидуума, нуждающегося в этом.

[0021] Tau-ассоциированное заболевание может быть выбрано из болезни Альцгеймера (БА), амиотрофического бокового склероза/комплекса паркинсонизм-деменция (АБС-КПД), деменции в области аргирофильных зерен (ДАГЗ), амилоидной ангиопатии британского типа, церебральной амилоидной ангиопатии, хронической травматической энцефалопатии (ХТЭ), кортикобазальной дегенерации (КБД), болезни Крейцфельда-Якоба (БКЯ), деменции боксеров, диффузных повреждения нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, синдрома Дауна, синдрома Дравета, эпилепсии, деменции в области лобно-височной доли (ДЛВД), деменции в области лобно-височной доли, ассоциированной с паркинсонизмом, сцепленным с хромосомой 17 (FTDP-17), дегенерации передней лобно-височной доли, ганглиоглиомы, ганглиоцитомы, болезни Герстманна-Штраусслера-Шейнкера, болезни Галервордена-Шпатца, болезни Гентингтона, миозита, вызываемого тельцами включения, энцефалопатии, вызываемой свинцом, болезни Литико-Бодига, менингиоангиоматоза, атрофии многих органов, миотонической дистрофии, болезни Нимана-Пика типа С (НП-С), не-гваманиевомого заболевания двигательных нейронов, ассоциированного с поражением нейрофибриллярных клубков, болезни Пика (БП), постэнцефалитного паркинсонизма, церебральной амилоидной ангиопатии, вызываемой белками прионами, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича (ПНП), подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции, поражающей только область клубков, деменции, преобладающей в области клубков, мультиинфарктной деменции, ишемического инсульта или клубневого склероза.

Краткое описание чертежей

[0022] На фиг. 1А-1Е показана физическая характеризация антисмыслового олигонуклеотида, нацеленного на MAPT. На фиг. 1A показана структура антисмыслового олигонуклеотида (ASO), содержащего SEQ ID NO: 284 и имеющего формулу C₂₃₀H₃₂₁N₇₂O₁₂₀P₁₉S₁₉ с предполагаемой молекулярной массой 7212,3 Да. На фиг. 1B представлены данные, полученные с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометири (ЖХ-МС) для ASO, содержащего SEQ ID NO: 284, с измеренной массой пика 7214,3. На фиг. 1С представлены данные пика обратной свертки в ЖХ-МС для ASO, содержащего SEQ ID NO: 284. На фиг. ID представлены данные ЖХ-МС для ASO, содержащего SEQ ID NO: 285, с измеренной массой пика 7232,5. На фиг. IE представлены данные пика обратной свертки в ЖХ-МС для ASO, содержащего SEQ ID NO: 285.

[0023] На фиг. 2A-2E показан уровень экспрессии мРНК и белка человеческого tau у репрезентативных hTau-трансгенных мышей BAC до и после их обработки антисмысловым олигонуклеотидом. На фиг. 2А представлены репрезентативные результаты ОТ-ПЦР, которые показали, что все шесть транскриптов человеческого tau присутствуют в переднем мозге hTau-трансгенных мышей BAC (трансгенной линии 510, двухмесячных самок мышей). Альтернативный сплайсинг экзонов 2, 3 и 10 давал шесть изоформ tau: 2-3-10-; 2+3-10-; 2+3+10-; 2-3-10+; 2+3-10+; 2+3+10+. 4R представляет собой изоформы tau с экзоном 10, 3R представляет собой изоформы tau без экзона 10; 0N представляет собой представляет собой изоформы tau без экзона 2 и экзона 3; 1N представляет собой представляет собой изоформы tau, содержащие либо экзон 2, либо экзон 3; 2N представляет собой изоформы tau, содержащие экзон 2 и экзон 3. На фиг. 2B проиллюстрирован репрезентативный Вестерн-блот-анализ, указывающий на наличие шести изоформ белка tau длиной в пределах 352-441 аминокислот с молекулярной массой 48-67 кД. Они отличаются (1) включением 0, 1 или 2 вставок в N-концевой части из 29 аминокислот (0N, 1N или 2N), или (2) включением трех или четырех доменов, связывающихся с микротрубочками (3R или 4R). На фиг. 2C проиллюстрирован репрезентативный иммуногистохимический визуализирующий анализ, указывающий на нормальное распределение человеческого tau в аксонах головного мозга hTau-трансгенных мышей BAC, как показало окрашивание человеческим tau-специфическим антителом. На фиг. 2D представлена гистограмма мРНК, иллюстрирующая ингибирование мРНК tau в коре головного мозга hTau-трансгенных мышей BAC через 4 недели после одной обработки антисмысловым олигонуклеотидом, содержащим SEQ ID NO: 285. На фиг. 2Е проиллюстрирован репрезентативный Вестерн-блот-анализ, указывающий на ингибирование белка tau в гиппокампе hTau-трансгенных мышей BAC через 4 недели после одной обработки антисмысловым олигонуклеотидом, содержащим SEQ ID NO: 285.

[0024] На фиг. 3 представлена серия изображений гибридизации in situ, указывающих на широкое распределение антисмыслового олигонуклеотида SEQ ID NO: 285 в головном мозге hTau-трансгенных мышей BAC.

[0025] На фиг. 4А и 4В представлены точечные графики, показывающие дозозависимое ингибирование экспрессии человеческой мРНК (фиг. 4A) и человеческого белка (фиг. 4B) tau у hTau-трансгенной мыши BAC через 4 недели или 12 недель после одной ICV-инъекции 1, 10, 50, 200 или 400 мкг антисмыслового олигонуклеотида SEQ ID NO: 285.

[0026] На фиг. 5А и 5В представлены точечные графики, показывающие время, за которое наблюдался уровень экспрессии человеческой мРНК (фиг. 5A) и человеческого белка (фиг. 5B) tau у hTau-трансгенной мыши BAC после одной ICV-инъекции 200 мкг антисмыслового олигонуклеотида SEQ ID NO: 285.

Подробное описание

[0027] Настоящее изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам, нацеленным на белок tau, ассоциированный с микротрубочками (MAPT); к композициям, содержащим эти антисмысловые олигонуклеотиды, и к способам снижения уровня экспрессии tau с использованием этих антисмысловых олигонуклеотидов. Описанные здесь способы и композиции являются подходящими для лечения tau-ассоциированных заболеваний.

Определения

[0028] Используемые в настоящем описании, а также в прилагаемой формуле изобретения артикли «a», «an» и «the», употребляемые с существительными в единственном числе, могут относиться и к существительным во множественном числе, если из контекста описания не следует обратное. Так, например, термин «клетка» включает множество клеток, в том числе их смеси.

[0029] Все численные параметры, например, рН, температура, время, концентрация и молекулярная масса, включая интервалы их значений, являются приближениями и варьируются на величину ± 0,1. Следует отметить, что слово «приблизительно», хотя это и не всегда четко соблюдается, ставится впереди всех числовых значений. Кроме того, следует также отметить, что описанные здесь реагенты, хотя это и не всегда конкретно указано, приводятся лишь в качестве примеров, и что специалистам известны и эквиваленты таких реагентов.

[0030] Термин «2'-модификация» означает замену Н или ОН в 2'-положении фуранозного кольца нуклеозида или нуклеотида другой группой.

[0031] Используемый здесь термин «2'-О-метоксиэтил», «2'-МОЕ» или «2'-ОСН₂СН₂-ОСН₃» означает О-метоксиэтильную модификацию в 2'-положении фуранозного кольца. Модифицированным сахаром является сахар, модифицированный 2'-О-метоксиэтилом. «2'-МОЕ-нуклеозид/нуклеотид» или «2'-О-метоксиэтилнуклеозид/нуклеотид» означает нуклеозид/нуклеотид, содержащий 2'-МОЕ-модифицированную сахарную группу.

[0032] «5-метилцитозин» означает цитозин, модифицированный метильной группой, присоединенной в 5'-положении.

[0033] Используемый здесь термин «антисмысловый олигонуклеотид» означает одноцепочечный олигонуклеотид, имеющий последовательность нуклеотидных оснований, комплементарную соответствующему сегменту нуклеиновой кислоты-мишени, например, геномной последовательности-мишени, молекуле пре-мРНК или мРНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид имеет длину от 12 до 30 нуклеотидных оснований.

[0034] Термин «комплементарность» или «комплементарный» относится к способности образовывать пары оснований между нуклеотидными основниями первой цепи нуклеиновой кислоты и нуклеотидными основаниями второй цепи нуклеиновой кислоты, посредством водородных связей (например, водородных связей Уотсона-Крика, Хугстена или обратных водородных связей Хугстен) между соответствующим нуклеотидными основаниями. Так, например, в ДНК, аденин (А) является комплементарным тимину (Т); а гуанозин (G) является комплементарным цитозину (С). Так, например, в РНК, аденин (А) является комплементарным урацилу (U); а гуанозин (G) является комплементарным цитозину (С). В некоторых вариантах осуществления изобретения, комплементарное нуклеотидное основание означает нуклеотидное основание антисмыслового олигонуклеотида, способное образовывать пары оснований с нуклеотидным основанием его нуклеиновой кислоты-мишени. Так, например, если нуклеотидное основание в определенном положении антисмыслового олигонуклеотида способно образовывать водородные связи с нуклеотидным основанием в определенном положении нуклеиновой кислоты-мишени, то положение водородных связей между олигонуклеотидом и нуклеиновой кислотой-мишенью рассматривается как комплементарное в этой паре нуклеотидных оснований. Нуклеотидные основания, содержащие определенные модификации, могут сохранять способность спариваться с нуклеотидным основанием-аналогом и, таким образом, способны образовывать комплементарные связи с нуклеотидным основанием.

[0035] Термин «эффективное количество» означает количество, достаточное для достижения эффективных или желаемых результатов. Так, например, терапевтическим количеством является количество, обеспечивающее желаемый терапевтический эффект. Это количество может быть таким же, как профилактически эффективное количество, или оно может отличаться от этого количества, и такое количество является необходимым для предупреждения развития заболевания или его симптомов. Эффективное количество может быть введено за одно или более инъекций, нанесений или доз. «Терапевтически эффективное количество» терапевтического соединения (то есть, эффективная доза) зависит от выбранных терапевтических соединений. Композиции могут быть введены от одного или более раз в день, до одного или более раз в неделю, например, один раз в день. Специалисту в данной области известно, что доза и время, необходимые для эффективного лечения индивидуума, могут зависеть от ряда факторов, включая, но не ограничиваясь ими, тяжесть заболевания или расстройства, предшествующее лечение, общее состояние здоровья и/или возраст индивидуума и другие заболевания. Кроме того, лечение индивидуума терапевтически эффективным количеством описанных здесь терапевтических соединений может включать один курс лечения или повторные курсы лечения.

[0036] Используемый здесь термин «гапмер» означает химерный антисмысловой олигонуклеотид, содержащий центральный гэп-сегмент, состоящий из смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов, которые способны активировать РНКазу H и фланкируются двумя сегментами крыла у 5'- и 3'-концов, каждый из которых содержит один или более модифицированных нуклеотидов, сообщающих повышенную резистентность к разложению нуклеазой.

[0037] Термин «гибридизация» означает спаривание оснований комплементарных цепей нуклеиновой кислоты и образование дуплексной структуры. Гибридизация может происходить между полностью комплементарными цепями нуклеиновой кислоты или между «в основном, комплементарными» цепями нуклеиновой кислоты, которая содержит минорные области ошибочного спаривания. Не ограничиваясь каким-либо конкретным механизмом, авторы лишь отмечают, что наиболее распространенный механизм спаривания включает образование водородных связей, которыми могут быть водородные связи Уотсона-Крика, Хугстена или обратные водородные связи Хугстена между комплементарным нуклеотидными основаниями цепей нуклеиновой кислоты. Так, например, аденин и тимин являются комплементарными нуклеотидными основаниями, которые спариваются посредством образования водородных связей. Гибридизация может происходить при различных условиях жесткости. Используемый здесь термин «гибридизация» означает спаривание оснований комплементарных цепей нуклеиновой кислоты и образование дуплексной структуры по меньшей мере в условиях относительно низкой жесткости, например, гибридизация в 2× SSC (0,3 М хлорида натрия, 0,03 М цитрата натрия), 0,1% ДСН при 37°C, с последующей промывкой в растворе, содержащем 4× SSC, 0,1% ДСН, которая может быть проведена при 37°C, и с конечной промывкой в 1× SSC при 45°C.

[0038] Термин «ингибирующий» или «ингибирование» относится к снижению или блокированию экспрессии или активности нуклеиновой кислоты-мишени или белка-мишени и не обязательно указывает на полное устранение экспрессии или активности мишени.

[0039] Термин «межнуклеозидная связь» означает химическую связь между нуклеозидами.

[0040] Термин «нокдаун» или «подавление экспрессии» означает снижение уровня экспрессии гена мРНК или белка после обработки реагентом, например, антисмысловым олигонуклеотидом. Подавление экспрессии может происходить во время транскрипции, сплайсинга мРНК или трансляции.

[0041] Термин «несоответствие» употребляется в том случае, когда нуклеотидные основания первой цепи нуклеиновой кислоты не является комплементарными соответствующему нуклеотидному основанию второй цепи нуклеиновой кислоты.

[0042] Термин «последовательность нуклеотидных оснований» означает порядок расположения смежных нуклеотидных оснований независимо от любой модификации сахара, связи и/или нуклеотидного основания.

[0043] Термин «олигонуклеотид» означает полимер из связанных дезоксирибонуклеотидов (ДНК) и/или рибонуклеотидов (РНК), каждый из которых является модифицированным или немодифицированным. Этот термин, если это не оговорено особо, охватывает нуклеиновые кислоты, содержащие известные аналоги природных нуклеотидов, которые обладают связывающими свойствами, аналогичными связывающим свойствам природной нуклеиновой кислоты, а также нуклеиновые кислоты, имеющие альтернативные межнуклеозидные связи, не являющиеся фосфодиэфирными связями.

[0044] Термин «фосфортиоатная связь» означает связь между нуклеозидами, где фосфодиэфирная связь модифицирована путем замены одного из не-мостиковых атомов кислорода атомом серы.

[0045] Термин «смысловая цепь» означает кодирующую цепь, плюс-цепь или не-матричную цепь молекулы ДНК, которая состоит из двухцепочечной структуры. Кодирующая цепь имеет такую же последовательность, как и последовательность мРНК за исключением того, что тимин (Т), присутствующий в ДНК, заменен урацилом (U) в РНК. «Антисмысловая цепь» означает некодирующую цепь или матричную цепь молекулы ДНК, которая действует в качестве матрицы для синтеза мРНК. Следовательно, последовательность антисмысловой цепи является комплементарной последовательности смысловой цепи и мРНК (U в РНК вместо Т).

[0046] Используемый здесь термин «стерический блокатор» означает антисмысловой олигонуклеотид, который гибридизуется с нуклеиновой кислотой-мишенью (например, геномной последовательностью-мишенью, молекулой пре-мРНК или мРНК) и блокирует транскрипцию, сплайсинг и/или трансляцию нуклеиновой кислоты-мишени без активации РНКазы H.

[0047] Используемый здесь термин «нацеливание» или «нацеленный» относится к конструированию и отбору антисмыслового олигонуклеотида, который может специфически гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью, например, геномной последовательностью-мишенью, молекулой пре-мРНК или мРНК или его фрагментом или вариантом, и модулирует транскрипцию, сплайсинг, и/или трансляцию нуклеиновой кислоты-мишени.

[0048] Используемый здесь термин «tau» (также известный как «белок tau, ассоциированный с микротрубочками», MAPT, MSTD; PPND; DDPAC; MAPTL; MTBT1; MTBT2; FTDP-17; PPP1R103) означает белок, ассоциированный с микротрубочками и кодируемый геном MAPT. Человеческий ген MAPT картирован в хромосоме в положении 17q21.1, и геномную последовательность человеческого гена MAPT можно найти в GenBank на сайте NG_007398.1 (SEQ ID NO: 304). Последовательности интронов и экзонов MAPT и точки ветвления могут быть определены из базы данных геномов Ensembl на web-сайте с использованием программы Transcript: MAPT-203 ENST00000344290. У человека присутствуют восемь изоформ tau, что обусловлено сложным механизмом альтернативного сплайсинга. Используемый здесь термин «tau» является собирательным термином для всех изоформ tau. Последовательности белка и мРНК для самой длинной человеческой изоформы tau представляют собой:

Ассоциированный с микротрубочками белок tau Homo sapiens (MAPT), вариант транскрипта 6, мРНК (NM_001123066.3)

--->

1 ggacggccga gcggcagggc gctcgcgcgc gcccactagt ggccggagga gaaggctccc

61 gcggaggccg cgctgcccgc cccctcccct ggggaggctc gcgttcccgc tgctcgcgcc

121 tgcgccgccc gccggcctca ggaacgcgcc ctcttcgccg gcgcgcgccc tcgcagtcac

181 cgccacccac cagctccggc accaacagca gcgccgctgc caccgcccac cttctgccgc

241 cgccaccaca gccaccttct cctcctccgc tgtcctctcc cgtcctcgcc tctgtcgact

301 atcaggtgaa ctttgaacca ggatggctga gccccgccag gagttcgaag tgatggaaga

361 tcacgctggg acgtacgggt tgggggacag gaaagatcag gggggctaca ccatgcacca

421 agaccaagag ggtgacacgg acgctggcct gaaagaatct cccctgcaga cccccactga

481 ggacggatct gaggaaccgg gctctgaaac ctctgatgct aagagcactc caacagcgga

541 agatgtgaca gcacccttag tggatgaggg agctcccggc aagcaggctg ccgcgcagcc

601 ccacacggag atcccagaag gaaccacagc tgaagaagca ggcattggag acacccccag

661 cctggaagac gaagctgctg gtcacgtgac ccaagagcct gaaagtggta aggtggtcca

721 ggaaggcttc ctccgagagc caggcccccc aggtctgagc caccagctca tgtccggcat

781 gcctggggct cccctcctgc ctgagggccc cagagaggcc acacgccaac cttcggggac

841 aggacctgag gacacagagg gcggccgcca cgcccctgag ctgctcaagc accagcttct

901 aggagacctg caccaggagg ggccgccgct gaagggggca gggggcaaag agaggccggg

961 gagcaaggag gaggtggatg aagaccgcga cgtcgatgag tcctcccccc aagactcccc

1021 tccctccaag gcctccccag cccaagatgg gcggcctccc cagacagccg ccagagaagc

1081 caccagcatc ccaggcttcc cagcggaggg tgccatcccc ctccctgtgg atttcctctc

1141 caaagtttcc acagagatcc cagcctcaga gcccgacggg cccagtgtag ggcgggccaa

1201 agggcaggat gcccccctgg agttcacgtt tcacgtggaa atcacaccca acgtgcagaa

1261 ggagcaggcg cactcggagg agcatttggg aagggctgca tttccagggg cccctggaga

1321 ggggccagag gcccggggcc cctctttggg agaggacaca aaagaggctg accttccaga

1381 gccctctgaa aagcagcctg ctgctgctcc gcgggggaag cccgtcagcc gggtccctca

1441 actcaaagct cgcatggtca gtaaaagcaa agacgggact ggaagcgatg acaaaaaagc

1501 caagacatcc acacgttcct ctgctaaaac cttgaaaaat aggccttgcc ttagccccaa

1561 acaccccact cctggtagct cagaccctct gatccaaccc tccagccctg ctgtgtgccc

1621 agagccacct tcctctccta aatacgtctc ttctgtcact tcccgaactg gcagttctgg

1681 agcaaaggag atgaaactca agggggctga tggtaaaacg aagatcgcca caccgcgggg

1741 agcagcccct ccaggccaga agggccaggc caacgccacc aggattccag caaaaacccc

1801 gcccgctcca aagacaccac ccagctctgc gactaagcaa gtccagagaa gaccaccccc

1861 tgcagggccc agatctgaga gaggtgaacc tccaaaatca ggggatcgca gcggctacag

1921 cagccccggc tccccaggca ctcccggcag ccgctcccgc accccgtccc ttccaacccc

1981 acccacccgg gagcccaaga aggtggcagt ggtccgtact ccacccaagt cgccgtcttc

2041 cgccaagagc cgcctgcaga cagcccccgt gcccatgcca gacctgaaga atgtcaagtc

2101 caagatcggc tccactgaga acctgaagca ccagccggga ggcgggaagg tgcagataat

2161 taataagaag ctggatctta gcaacgtcca gtccaagtgt ggctcaaagg ataatatcaa

2221 acacgtcccg ggaggcggca gtgtgcaaat agtctacaaa ccagttgacc tgagcaaggt

2281 gacctccaag tgtggctcat taggcaacat ccatcataaa ccaggaggtg gccaggtgga

2341 agtaaaatct gagaagcttg acttcaagga cagagtccag tcgaagattg ggtccctgga

2401 caatatcacc cacgtccctg gcggaggaaa taaaaagatt gaaacccaca agctgacctt

2461 ccgcgagaac gccaaagcca agacagacca cggggcggag atcgtgtaca agtcgccagt

2521 ggtgtctggg gacacgtctc cacggcatct cagcaatgtc tcctccaccg gcagcatcga

2581 catggtagac tcgccccagc tcgccacgct agctgacgag gtgtctgcct ccctggccaa

2641 gcagggtttg tgatcaggcc cctggggcgg tcaataattg tggagaggag agaatgagag

2701 agtgtggaaa aaaaaagaat aatgacccgg cccccgccct ctgcccccag ctgctcctcg

2761 cagttcggtt aattggttaa tcacttaacc tgcttttgtc actcggcttt ggctcgggac

2821 ttcaaaatca gtgatgggag taagagcaaa tttcatcttt ccaaattgat gggtgggcta

2881 gtaataaaat atttaaaaaa aaacattcaa aaacatggcc acatccaaca tttcctcagg

2941 caattccttt tgattctttt ttcttccccc tccatgtaga agagggagaa ggagaggctc

3001 tgaaagctgc ttctggggga tttcaaggga ctgggggtgc caaccacctc tggccctgtt

3061 gtgggggtgt cacagaggca gtggcagcaa caaaggattt gaaacttggt gtgttcgtgg

3121 agccacaggc agacgatgtc aaccttgtgt gagtgtgacg ggggttgggg tggggcggga

3181 ggccacgggg gaggccgagg caggggctgg gcagagggga gaggaagcac aagaagtggg

3241 agtgggagag gaagccacgt gctggagagt agacatcccc ctccttgccg ctgggagagc

3301 caaggcctat gccacctgca gcgtctgagc ggccgcctgt ccttggtggc cgggggtggg

3361 ggcctgctgt gggtcagtgt gccaccctct gcagggcagc ctgtgggaga agggacagcg

3421 ggtaaaaaga gaaggcaagc tggcaggagg gtggcacttc gtggatgacc tccttagaaa

3481 agactgacct tgatgtcttg agagcgctgg cctcttcctc cctccctgca gggtaggggg

3541 cctgagttga ggggcttccc tctgctccac agaaaccctg ttttattgag ttctgaaggt

3601 tggaactgct gccatgattt tggccacttt gcagacctgg gactttaggg ctaaccagtt

3661 ctctttgtaa ggacttgtgc ctcttgggag acgtccaccc gtttccaagc ctgggccact

3721 ggcatctctg gagtgtgtgg gggtctggga ggcaggtccc gagccccctg tccttcccac

3781 ggccactgca gtcaccccgt ctgcgccgct gtgctgttgt ctgccgtgag agcccaatca

3841 ctgcctatac ccctcatcac acgtcacaat gtcccgaatt cccagcctca ccaccccttc

3901 tcagtaatga ccctggttgg ttgcaggagg tacctactcc atactgaggg tgaaattaag

3961 ggaaggcaaa gtccaggcac aagagtggga ccccagcctc tcactctcag ttccactcat

4021 ccaactggga ccctcaccac gaatctcatg atctgattcg gttccctgtc tcctcctccc

4081 gtcacagatg tgagccaggg cactgctcag ctgtgaccct aggtgtttct gccttgttga

4141 catggagaga gccctttccc ctgagaaggc ctggcccctt cctgtgctga gcccacagca

4201 gcaggctggg tgtcttggtt gtcagtggtg gcaccaggat ggaagggcaa ggcacccagg

4261 gcaggcccac agtcccgctg tcccccactt gcaccctagc ttgtagctgc caacctccca

4321 gacagcccag cccgctgctc agctccacat gcatagtatc agccctccac acccgacaaa

4381 ggggaacaca cccccttgga aatggttctt ttcccccagt cccagctgga agccatgctg

4441 tctgttctgc tggagcagct gaacatatac atagatgttg ccctgccctc cccatctgca

4501 ccctgttgag ttgtagttgg atttgtctgt ttatgcttgg attcaccaga gtgactatga

4561 tagtgaaaag aaaaaaaaaa aaaaaaaagg acgcatgtat cttgaaatgc ttgtaaagag

4621 gtttctaacc caccctcacg aggtgtctct cacccccaca ctgggactcg tgtggcctgt

4681 gtggtgccac cctgctgggg cctcccaagt tttgaaaggc tttcctcagc acctgggacc

4741 caacagagac cagcttctag cagctaagga ggccgttcag ctgtgacgaa ggcctgaagc

4801 acaggattag gactgaagcg atgatgtccc cttccctact tccccttggg gctccctgtg

4861 tcagggcaca gactaggtct tgtggctggt ctggcttgcg gcgcgaggat ggttctctct

4921 ggtcatagcc cgaagtctca tggcagtccc aaaggaggct tacaactcct gcatcacaag

4981 aaaaaggaag ccactgccag ctggggggat ctgcagctcc cagaagctcc gtgagcctca

5041 gccacccctc agactgggtt cctctccaag ctcgccctct ggaggggcag cgcagcctcc

5101 caccaagggc cctgcgacca cagcagggat tgggatgaat tgcctgtcct ggatctgctc

5161 tagaggccca agctgcctgc ctgaggaagg atgacttgac aagtcaggag acactgttcc

5221 caaagccttg accagagcac ctcagcccgc tgaccttgca caaactccat ctgctgccat

5281 gagaaaaggg aagccgcctt tgcaaaacat tgctgcctaa agaaactcag cagcctcagg

5341 cccaattctg ccacttctgg tttgggtaca gttaaaggca accctgaggg acttggcagt

5401 agaaatccag ggcctcccct ggggctggca gcttcgtgtg cagctagagc tttacctgaa

5461 aggaagtctc tgggcccaga actctccacc aagagcctcc ctgccgttcg ctgagtccca

5521 gcaattctcc taagttgaag ggatctgaga aggagaagga aatgtggggt agatttggtg

5581 gtggttagag atatgccccc ctcattactg ccaacagttt cggctgcatt tcttcacgca

5641 cctcggttcc tcttcctgaa gttcttgtgc cctgctcttc agcaccatgg gccttcttat

5701 acggaaggct ctgggatctc ccccttgtgg ggcaggctct tggggccagc ctaagatcat

5761 ggtttagggt gatcagtgct ggcagataaa ttgaaaaggc acgctggctt gtgatcttaa

5821 atgaggacaa tccccccagg gctgggcact cctcccctcc cctcacttct cccacctgca

5881 gagccagtgt ccttgggtgg gctagatagg atatactgta tgccggctcc ttcaagctgc

5941 tgactcactt tatcaatagt tccatttaaa ttgacttcag tggtgagact gtatcctgtt

6001 tgctattgct tgttgtgcta tggggggagg ggggaggaat gtgtaagata gttaacatgg

6061 gcaaagggag atcttggggt gcagcactta aactgcctcg taaccctttt catgatttca

6121 accacatttg ctagagggag ggagcagcca cggagttaga ggcccttggg gtttctcttt

6181 tccactgaca ggctttccca ggcagctggc tagttcattc cctccccagc caggtgcagg

6241 cgtaggaata tggacatctg gttgctttgg cctgctgccc tctttcaggg gtcctaagcc

6301 cacaatcatg cctccctaag accttggcat ccttccctct aagccgttgg cacctctgtg

6361 ccacctctca cactggctcc agacacacag cctgtgcttt tggagctgag atcactcgct

6421 tcaccctcct catctttgtt ctccaagtaa agccacgagg tcggggcgag ggcagaggtg

6481 atcacctgcg tgtcccatct acagacctgc agcttcataa aacttctgat ttctcttcag

6541 ctttgaaaag ggttaccctg ggcactggcc tagagcctca cctcctaata gacttagccc

6601 catgagtttg ccatgttgag caggactatt tctggcactt gcaagtccca tgatttcttc

6661 ggtaattctg agggtggggg gagggacatg aaatcatctt agcttagctt tctgtctgtg

6721 aatgtctata tagtgtattg tgtgttttaa caaatgattt acactgactg ttgctgtaaa

6781 agtgaatttg gaaataaagt tattactctg attaaa (SEQ ID NO: 305)

<---

Ассоциированный с микротрубочками белок tau Homo sapiens, изоформа 6 (NP_001116538.2)

MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKESPLQT PTEDGSEEPG SETSDAKSTP TAEDVTAPLV DEGAPGKQAA AQPHTEIPEG TTAEEAGIGD TPSLEDEAAG HVTQEPESGK VVQEGFLREP GPPGLSHQLM SGMPGAPLLP EGPREATRQP SGTGPEDTEG GRHAPELLKH QLLGDLHQEG PPLKGAGGKE RPGSKEEVDE DRDVDESSPQ DSPPSKASPA QDGRPPQTAA REATSIPGFP AEGAIPLPVD FLSKVSTEIP ASEPDGPSVG RAKGQDAPLE FTFHVEITPN VQKEQAHSEE HLGRAAFPGA PGEGPEARGP SLGEDTKEAD LPEPSEKQPA AAPRGKPVSR VPQLKARMVS KSKDGTGSDD KKAKTSTRSS AKTLKNRPCL SPKHPTPGSS DPLIQPSSPA VCPEPPSSPK YVSSVTSRTG SSGAKEMKLK GADGKTKIAT PRGAAPPGQK GQANATRIPA KTPPAPKTPP SSATKQVQRR PPPAGPRSER GEPPKSGDRS GYSSPGSPGT PGSRSRTPSL PTPPTREPKK VAVVRTPPKS PSSAKSRLQT APVPMPDLKN VKSKIGSTEN LKHQPGGGKV QIINKKLDLS NVQSKCGSKD NIKHVPGGGS VQIVYKPVDL SKVTSKCGSL GNIHHKPGGG QVEVKSEKLD FKDRVQSKIG SLDNITHVPG GGNKKIETHK LTFRENAKAK TDHGAEIVYK SPVVSGDTSP RHLSNVSSTG SIDMVDSPQL ATLADEVSAS LAKQGL (SEQ ID NO: 306)

Последовательности мРНК и белка других человеческих изоформ tau можно найти в GenBank под следующими регистрационными номерами:

изоформа tau 1: NM_016835.4 (мРНК) ® NP_058519.3 (белок);

изоформа tau 2: NM_005910.5 (мРНК) ® NP_005901.2 (белок);

изоформа tau 3: NM_016834.4 (мРНК) ® NP_058518.1 (белок);

изоформа tau 4: NM_016841.4 (мРНК) ® NP_058525.1 (белок);

изоформа tau 5: NM_001123067.3 (мРНК) ® NP_001116539.1 (белок);

изоформа tau 7: NM_001203251.1 (мРНК) ® NP_001190180.1 (белок);

изоформа tau 8: NM_001203252.1 (мРНК) ® NP_001190181.1 (белок).

Используемый здесь термин «человеческий белок tau» также охватывает белки, которые по всей их длине по меньшей мере приблизительно на 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательности любой изоформы tau. Последовательности белков tau мышей, собакоподобных обезьян и других животных известны специалистам.

[0049] Используемый здесь термин «tau-ассоциированное заболевание» включает, но не ограничивается ими, заболевание, ассоциированное с аномальной экспрессией, секрецией, фосфорилированием, расщеплением и/или агрегацией белка tau. Tau-ассоциированными заболеваниями являются, но не ограничиваются ими, болезнь Альцгеймера (БА), амиотрофический боковой склероз/комплекс паркинсонизм-деменция (АБС-КПД), деменция в области аргирофильных зерен (ДАГЗ), амилоидная ангиопатия британского типа, церебральная амилоидная ангиопатия, хроническая травматическая энцефалопатия (ХТЭ), кортикобазальная дегенерация (КБД), болезнь Крейцфельда-Якоба (БКЯ), деменция боксеров, диффузные повреждения нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, синдром Дауна, синдром Дравета, эпилепсия, деменция в области лобно-височной доли (ДЛВД), деменция в области лобно-височной доли, ассоциированная с паркинсонизмом, сцепленным с хромосомой 17 (FTDP-17), дегенерация передней лобно-височной доли, ганглиоглиома, ганглиоцитома, болезнь Герстманна-Штраусслера-Шейнкера, болезнь Галервордена-Шпатца, болезнь Гентингтона, миозит, вызываемый тельцами включения, энцефалопатия, вызываемая свинцом, болезнь Литико-Бодига, менингиоангиоматоз, атрофия многих органов, миотоническая дистрофия, болезнь Нимана-Пика типа С (НП-С), не-гваманиевомое заболевание двигательных нейронов, ассоциированное с поражением нейрофибриллярных клубков, болезнь Пика (БП), постэнцефалитный паркинсонизм, церебральная амилоидная ангиопатия, вызываемая белками прионами, прогрессирующий субкортикальный глиоз, прогрессирующий надъядерный паралич (ПНП), подострый склерозирующий панэнцефалит, деменция, поражающая только область клубков, деменция, преобладающая в области клубков, мультиинфарктная деменция, ишемический инсульт или клубневой склероз.

[0050] Термин «гомология» или «идентичность» означает идентичность последовательности субъединиц двух полимерных молекул, например, двух молекул нуклеиновой кислоты, таких как две молекулы ДНК, две молекулы РНК или две молекулы полипептида. Если положение субъединиц в обеих двух молекулах занято однй и той же мономерной субъединицей, например, если положение в каждой из двух молекул ДНК занято аденином, то они являются гомологичными или идентичными в этом положении. Гомология двух последовательностей непосредственно зависит от числа совпадающих или гомологичных положений, например, если половина положений (например, пять положений в полимере длиной в десять субъединиц) в двух последовательностях являются гомологичными, то эти две последовательности являются гомологичными на 50%; а если 90% положений (например, 9 из 10) являются соответствующими или гомологичными, то эти две последовательности гомологичны на 90%. Процент «идентичности последовательностей» может быть определен путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей по окну сравнения, где для такого оптимального выравнивания двух последовательностей, фрагмент аминокислотной последовательности в окне сравнения может содержать добавления или делеции (например, пробелы или выступающие концы) по сравнению с эталонной последовательностью (которая не содержит добавлений или делеций). Процент может быть вычислен путем определения числа положений, в которых присутствуют идентичные аминокислотные остатки в обеих последовательностях, с получением числа совпадающих положений, а затем деления этого числа совпадающих положений на общее число положений в окне сравнения, и умножения результата на 100 с получением процента идентичности последовательностей. Конечный результат представляет собой процент идентичности рассматриваемой последовательности с запрашиваемой последовательностью.

[0051] Термин «выделенный» означает измененный или удаленный из природного окружения. Так, например, нуклеиновая кислота или пептид, присутствующие в природе в организме животного, не являются «выделенными», но та же нуклеиновая кислота или тот же пептид, которые частично или полностью отделены от продуктов, совместно существующих с ними в их природном окружении, являются «выделенными». Выделенная нуклеиновая кислота или белок могут существовать, в основном, в очищенной форме, либо они могут присутствовать в не-нативной среде, такой как, например, клетка-хозяин.

[0052] Термин «лечить» или «лечение» относится как к терапевтическому лечению, так и профилактическим или превентивным мерам, целью которых является предупреждение или замедление нежелательного патологического изменения или расстройства. В соответствии с целями настоящего изобретения, благоприятные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, ослабление симптомов, снижение тяжести заболевания, стабилизацию (т.е., не ухудшение) состояния болезни, задержку или замедление прогрессирования заболевания, улучшение или временное облегчение патологического состояния и ремиссию (частичную или полную), независимо от того, являются ли они детектируемыми или недетектируемыми. «Лечение» может также означать увеличение продолжительности жизни по сравнению с ожидаемой продолжительностью жизни в случае отсутствия лечения.

[0053] Термин «индивидуум» относится к животному, человеку или животному, не являющемуся человеком, которые подвергаются лечению описанными здесь способами согласно изобретению. Настоящее изобретение может быть также применено в ветеринарии и в области, не относящейся к ветеринарии. Этот термин включает, но не ограничивается ими, млекопитающих, например, человека; других приматов, свиней, грызунов, таких как мыши и крысы, кролики, морские свинки, и хомяки; коров, лошадей, кошек, собак, овец и коз. Типичными индивидуумами являются человек, сельскохозяйственные животные и домашние питомцы, такие как кошки и собаки.

[0054] Если это не оговорено особо, то все технические и научные термины, используемые в настоящей заявке, имеют значения, в основном, понятные среднему специалисту в области, к которой относится изобретение. Хотя для осуществления настоящего изобретения могут быть применены методы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным здесь методам и материалам, однако, подходящие методы и материалы описаны ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие упомянутые здесь документы во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки. В случае возникновения каких-либо разночтений, следует отдать предпочтение определениям, данным в настоящей заявке. Кроме того, материалы, способы и примеры приводятся лишь в иллюстративных целях и не рассматриваются как ограничение объема изобретения.

[0055] Подробное описание одного или более вариантов осуществления изобретения приводится в прилагаемых чертежах и в нижеследующем описании. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из описания и чертежей, а также из формулы изобретения.

Антисмысловые олигонуклеотиды

[0056] Антисмысловые олигонуклеотиды (ASO) являются мощными и универсальными агентами, которые находят все большее применение, включая снижение уровня РНК, остановку трансляции, ингибирование миРНК, модуляцию сплайсинга и выбор сайта полиаденилирования. Антисмысловой олигонуклеотид связывается с нуклеиновой кислотой-мишенью, если достаточное число нуклеотидных оснований антисмыслового олигонуклеотида может образовывать водородные связи с соответствующими нуклеотидными основаниями нуклеиновой кислоты-мишени и модулирует транскрипцию и/или трансляцию нуклеиновой кислоты-мишени. Таким образом, последовательность нуклеотидных оснований антисмыслового олигонуклеотида является комплементарной последовательности нуклеотидных оснований нуклеотидной нуклеиновой кислоты-мишени, например, геномной последовательности-мишени, молекулы пре-мРНК, или мРНК. Гибридизация происходит в случае образования водородных связей (например, водородных связей Уотсона-Крика, водородных связей Хугстена или обратных водородных связей Хугстена) между комплементарными нуклеотидными основаниями антисмыслового олигонуклеотида и нуклеиновой кислоты-мишени. При этом могут быть использованы не-комплементарные нуклеотидные основания антисмыслового олигонуклеотида и нуклеиновой кислоты-мишени при условии, что антисмысловой олигонуклеотид будет сохранять способность специфически гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью.

[0057] ASO могут быть сконструированы в целях снижения уровня экспрессии белка-мишени по механизму, зависящему от РНКазы Н или не зависящему от РНКазы Н (см. Watts JK, et al., J Pathol. 2012 January; 226(2): 365-379). Если ASO, содержащий непрерывный фрагмент ДНК, гибридизуется с РНК-мишенью, то гетеродуплекс ДНК-РНК обеспечивает рекрутинг РНКазы Н, которая расщепляет РНК-мишень в дуплексе и способствует последующему разложению РНК-фрагментов клеточными нуклеазами. ASO может также уменьшать уровень экспрессии мишенни независимо от РНКазы H посредством стерического блокирования процессинга пре-мРНК и/или трансляции мРНК в белок.

[0058] Настоящее изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам, нацеленным на белок tau, ассоциированный с микротрубочками, (MAPT). В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды имеют последовательность нуклеотидных оснований, комплементарную сегменту геномной ДНК MAPT, пре-мРНК или мРНК с 1, 2, 3, 4 или 5 несоответствиями. Если происходит полное спаривание оснований (например, спаривание между А и Т, а также между С и G), то несоответствие между олигонуклеотидом и соответствующей нуклеиновой кислотой-мишенью отсутствует. Несоответствие возникает в том случае, когда нуклеотидное основание первой нуклеиновой кислоты неспособно спариваться с соответствующим нуклеотидным основанием второй нуклеиновой кислоты при максимальном выравнивании двух последовательностей. Так, например, если в положении первой последовательности присутствует нуклеотидное основание А, а в соответствующем положении второй последовательности присутствует нуклеотидное основание (например, С или G), которое не может образовывать пару с А, то это указывает на несоответствие. Несоответствие также возникает в том случае, когда в положении в одной последовательности присутствует нуклеотидное основание, а в соответствующем положеним другой последовательности такое нуклеотидное основание отсутствует. Модификация сахарной группы с нуклеотидными или межнуклеозидными связями не считается несоответствием. Таким образом, если одна последовательность содержит G, а соответствующее нуклеотидное основание второй последовательности содержит модифицированный C (например, 5-метилцитозин), то такое несоответствие не будет учитываться.

[0059] Что касается фрагмента нуклеиновой кислоты, то описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды являются комплементарными сегменту геномной ДНК MAPT, пре-мРНК или мРНК, по меньшей мере, на 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% по всей длине сегмента. Процент комплементарности антисмыслового олигонуклеотида с нуклеиновой кислотой-мишенью может быть определен рутинными методами, например, с помощью программ BLAST (пакета программ для поиска локального выравнивания) или программ PowerBLAST, известных специалистам (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды имеют последовательность нуклеотидных оснований, которая на 100% комплементарна (то есть, полностью комплементарна) сегменту геномной ДНК MAPT, пре-мРНК или мРНК. Используемый здесь термин «полностью комплементарный» или «комплементарный на 100%» относится к каждому нуклеотидному основанию антисмыслового соединения, способному точно спариваться с соответствующими нуклеотидными основаниями нуклеиновой кислоты-мишени. Так, например, антисмысловое соединение в 20 нуклеотидных оснований является полностью комплементарным последовательности-мишени длиной в 400 нуклеотидных оснований, при условии, что соответствующая часть нуклеиновой кислоты-мишени в 20 нуклеотидных оснований будет полностью комплементарна антисмысловому соединению.

[0060] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды содержат последовательность нуклеотидных оснований, комплементарную по меньшей мере 12 смежным нуклеотидным основаниям (например, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 смежным нуклеотидным основаниям) любой последовательности, представленной в таблице 1, с 1, 2 или 3 несоответствиями. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды содержат последовательность нуклеотидных оснований, которая на 100% комплементарна по меньшей мере 12 смежным нуклеотидным основаниям (например, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 смежным нуклеотидным основаниям) любой последовательности, представленной в таблице 1.

[0061] Описанные здесь антисмысловые соединения, могут также иметь определенный процент идентичности конкретной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO или его части. Используемый здесь антисмысловый олигонуклеотид идентичен описанной здесь последовательности, если он обладает такой же способностью спариваться с нуклеотидными основаниями. Так, например, РНК, которая содержит урацил вместо тимидина, присутствующего в описанной ДНК-последовательности, будет рассматриваться как последовательность, идентичная последовательности ДНК, поскольку урацил и тимидин спариваются с аденином. Также рассматриваются укороченные и удлиненные варианты описанных здесь антисмысловых олигонуклеотидов, а также олигонуклеотидов, основания которых не идентичны основаниям описанных здесь антисмысловых олигонуклеотидов. Неидентичные основания могут быть смежными друг с другом, либо они могут быть распределены по всем антисмысловым олигонуклеотидам. Процент идентичности последовательностей антисмысловых олигонуклеотидов может быть вычислен по числу оснований, которые имеют пары оснований, идентичные парам оснований в сравниваемой последовательности. Процент идентичности последовательностей может быть определен рутинными методами, например, с помощью программ BLAST (пакета программ для поиска локального выравнивания) или программ PowerBLAST, известных специалистам (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649-656) или программы Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.), с использованием параметров по умолчанию, которые входят в алгоритм Смита и Уотермана (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482-489).

[0062] В некоторых своих вариантах, настоящее изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам, содержащим последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 70% (например, на 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентична любым последовательностям нуклеотидных оснований, представленным в таблицах 2-17, где С в любых последовательностях нуклеотидных оснований представляют собой либо цитозин, либо 5-метилцитозин, и где по меньшей мере один нуклеотид этого олигонуклеотида имеет 2'-модификацию. В некоторых своих вариантах, настоящее изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам, содержащим последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентична любым последовательностям нуклеотидных оснований, представленным в таблицах 2-17. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, включают любые последовательности нуклеотидных оснований, представленные в таблицах 2-17. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, состоят из любых последовательностей нуклеотидных оснований, представленных в таблицах 2-17.

[0063] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды имеют длину от 12 до 30 нуклеотидных оснований. Так, например, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, может включать 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеотидных оснований. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, имеют длину от 12 до 25 нуклеотидных оснований. Так, например, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, может включать 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидных оснований. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, имеют длину от 15 до 20 нуклеотидных оснований. Так, например, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на MAPT, может включать 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидных оснований. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, включают 17 нуклеотидных оснований. Длина антисмыслового олигонуклеотида может быть увеличена или уменьшена, и/или в антисмысловой олигонуклеотид могут быть введены несоответствующие основания (например, 1, 2, 3, 4 или 5 несоответствий) без элиминации их активности.

Химическая модификация антисмысловых олигонуклеотидов

[0064] Олигонуклеотиды состоят из повторяющихся нуклеотидных звеньев, которые связаны между собой межнуклеозидными фосфодиэфирными связями. Каждый нуклеотид состоит из нуклеозида, который включает нуклеотидное основание, связанное с сахарной группой, и одну или более фосфатных групп, ковалентно связанных с сахарной группой. Фосфодиэфирные связи состоят из сахарных остатков (либо рибозы для РНК, либо дезоксирибозы для ДНК, имеющих общее название «фураноза»), связанных гликозидной связью с пуриновым основанием (гуанином и/или аденином) и/или пиримидиновым основанием (тимином и цитозином для ДНК; и урацилом и цитозином для РНК).

[0065] Описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать одну или более модифицированных нуклеотиных субъединиц и/или межнуклеозидных связей. Химические модификации в олигонуклеотидах включают модификации в межнуклеозидных связях, сахарных группах, нуклеотидных основаниях и/или в остовах. Модификации могут повышать стабильность, эффективность и/или снижать иммуногенность антисмысловых олигонуклеотидов. Так, например, олигонуклеотиды могут быть модифицированы так, чтобы это приводило к повышению резистентности к нуклеазам, к повышению аффинности связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью, к повышению уровня клеточного поглощения и/или к повышению ингибирующей активности по сравнению с немодифицированными олигонуклеотидами.

[0066] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды включают природные фосфодиэфирные межнуклеозидные связи. Фосфодиэфирные связи могут быть заменены другими фосфорсодержащими связями, такими как фосфортиоатные, фосфотриэфирные, метилфосфонатные или фосфорамидатные связи, или связи, не содержащие фосфора. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды включают одну или более модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды включают фосфортиоатные связи. В некоторых вариантах осуществления изобретения, каждая межнуклеозидная связь антисмыслового олигонуклеотида представляет собой фосфортиоатную межнуклеозидную связь.

[0067] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды включают химически модифицированные сахарные группы. Так, например, антисмысловые олигонуклеотиды могут включать 2'-модификацию на фуранозном кольце, мостиковую связь не-геминальных кольцевых атомов с образованием бициклических нуклеиновых кислот (BNA), и замену кольцевого атома кислорода сахара другими атомами или их комбинациями. В некоторых вариантах осуществления изобретения, каждый нуклеотид антисмыслового олигонуклеотида имеет 2'-модифицированные фуранозное кольцо. Примерами 2'-модификаций являются 2'-фтор, 2'-дезокси-2'-фтор, 2'-О-метил, 2'-О-метоксиэтил (2'-О-МОE), 2'-О-аминопропил (2'-О-АP), 2'-О-диметиламиноэтил (2'-О-DMAOE), 2'-О-диметиламинопропил (2'-О-DMAP), 2'-О-диметиламиноэтилоксиэтил (2'-О-DMAEOE) и 2'-О-N-метилацетамидо (2'-О-NMA). В некоторых вариантах осуществления изобретения, каждый нуклеотид антисмыслового олигонуклеотида имеет 2'-О-МОE-модификацию в сахарной группе.

[0068] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды могут включать замену нуклеотида в заданном положении модифицированным вариантом того же самого нуклеотида. Так, например, нуклеотид (A, G, С или Т) может быть заменен соответствующим гипоксантином, ксантином, 4-ацетилцитозином, бета-D-галактозилквеозином, инозином, N6-изопентениладенином, 1-метилгуанином, 1-метилинозином, 2,2-диметилгуанином, 2-метиладенином, 2-метилгуанином, 3-метилцитозином, 5-метилцитозином, N6-аденином, 7-метилгуанином, бета-D-маннозилквеозином, 2-метилтио-N6-изопентениладенином, вибутоксозином, квеозином, 2-тиоцитозином или 2,6-диаминопурином.

[0069] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды включают химически модифицированные олигонуклеотиды, которые снижают иммуногенность олигонуклеотидов. Так, например, было показано, что олигонуклеотиды, содержащие 5-метилцитозин или модификации 2'-О-MOE-модификации, обладают пониженной иммунной стимуляцией у мышей (Henry S. et al., J Pharmacol Exp Ther. 2000 Feb; 292(2):468-79). В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды содержат 5-метилцитозины вместо цитозинов. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды включают 2'-O-MOE-модификации. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды включают 5-метилцитозины и 2'-MOE-модификации.

[0070] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, включают С6-линкер у 3'-конца со следующей структурой:

(L1),

которая присоединена к 3'-концу олигонуклеотида посредством фосфатного мостика, где R=PО₂-О-олигонуклеотид (для фосфодиэфирных межнуклеозидных связей) или R=POS-О-олигонуклеотид (для фосфортиоатных межнуклеозидных связей). Такой 3'-C6-линкер может блокировать 3'-экзонуклеазную атаку и, следовательно, повышать стабильность и длительность действия антисмысловых олигонуклеотидов (см. WO 2005/021749 для аналогичной стратегии применительно к киРНК). В некоторых случаях, 3'-C6-линкер может также облегчать синтез и/или очистку антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, могут иметь любую из следующих структур:

, или

.

[0071] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды могут включать альтернативный остов, например, морфолино, блокированную нуклеиновую кислоту (LNA), неблокированную нуклеиновую кислоту (UNA), треозо-содержащую нуклеиновую кислоту (TNA), гликоль-содержащую нуклеиновую кислоту (GNA) и/или пептид-содержащую нуклеиновую кислоту (PNA). В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды могут включать бициклический нуклеозид (BNA), содержащий мостик, соединяющий два атома углерода сахарного кольца. Так, например, такой BNA может включать «стерически затрудненный этил» (или «cEt»), содержащий 4'-CH(CH₃)-О-2'-мостик, соединяющий 4'-углерод и 2'-углерод сахарной группы. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды могут включать блокированную нуклеиновую кислоту (LNA), содержащую мостик, соединяющий два атома углерода между 4'- и 2'-положениями нуклеозидного сахарного звена. Такая LNA может включать альфа-L-метиленокси (4'-CH₂-О-2')-LNA, β-D-метиленокси (4'-CH₂-О-2')-LNA, этиленокси (4'-(СН₂)₂-О-2')-LNA, аминоокси-(4'-CH₂-О-N(R)-О-2')-LNA, оксиамино-(4'-CH₂-N(R)-О-2')-LNA, или любую другую LNA, описанную в патентах США №№ 7053207, 6268490; 6770748; 6794499; 7034133; 6525191; 7696345; 7569575; 7314923; 7217805; 7084125; или 6670461; и в патентных публикациях №№ WO 98/39352 или WO 99/14226. Другие подходящие LNA включают LNA, описанные Braasch et al., Chern. Biol. 8: l-7, 2001; Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs 2: 558-561, 2001; Frieden et al., Nucleic Acids Research, 21: 6365-6372, 2003; Koshkin et al., Tetrahedron, 54: 3607-3630, 1998; Morita et al., Bioorganic Medicinal Chemistry, 11: 2211-2226, 2003; Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther. 3: 239-243, 2001; Singh et al., Chem. Commun. 4: 455-456, 1998; Singh et al., J. Org. Chem., 63: 10035-10039, 1998; или Wahlestedt et al., PNAS 97: 5633-5638, 2000.

Стерические блокаторы

[0072] Антисмысловой олигонуклеотид может связываться с нуклеиновой кислотой-мишенью и стерически блокировать доступ ДНК- или РНК-связывающихся белков, транскрипционных факторов, факторов сплайсинга, рибосомы и/или блокировать механизм трансляции в нуклеиновую кислоту-мишень, и, таким образом, снижать уровень экспрессии мишени без активации РНКазы H. Так, например, такие стерические блокаторы могут снижать уровень экспрессии белка-мишени посредством гибридизации последовательностей, окружающих стар-кодон мишени, блокирования интронных последовательностей точек ветвления, нацеливания на сайты сплайсинга, объединения интронных и/или экзонных последовательностей или нацеливания на регуляторные последовательности, такие как энхансеры сплайсинга экзона. Стерические блокаторы могут быть сконструированы на основе ранее определенных или предсказанных границ интрон-экзон и структуры генов; и панель различных антисмысловых олигонуклеотидов может быть получена для блокирования того же сайта. Для минимизации гибридизации соединений, не являющихся мишенями, для каждого ASO могут быть проведены анализы BLAST.

[0073] Стерические блокаторы могут снижать уровни мРНК посредством использования эндогенных клеточных путей надзора, которые распознают и разлагают аберрантные мРНК. Одним из таких путей является нонсенс-опосредованный распад мРНК (NMD), который модулирует экспрессию гена и предотвращает продуцирование потенциально токсичных белков из мРНК. Дефекты процессинга пре-мРНК могут приводить к потери функции белка, если вводится кодон преждевременной терминации (PTC), который разрушает открытую рамку считывания. Такая PTC-содержащая мРНК может служить субстратом для NMD, который включает взаимосвязь между трансляцией рибосом и компонентами комплекса стыка экзонов, включая основной фактор NMD UPF1, что приводит к разложению РНК под действием эндонуклеазной и экзонуклеазной активности. ASO могут быть рационально сконструированы так, чтобы они снижали уровни мРНК-мишеней посредством нацеливания мРНК-мишени на путь NMD. Это может быть достигнуто путем конструирования последовательностей стерических блокаторов так, чтобы они были комплементарны специфическим кодирующим экзонам, стыкам интрон-экзон или другим последовательностям, необходимым для правильного процессинга пре-мРНК и для введения делеции в экзон, сдвига рамки считывания и/или включения РТС.

[0074] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, представляют собой стерические блокаторы, например, олигонуклеотиды, содержащие последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 70% (например, на 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентична любым последовательностям нуклеотидных оснований, представленным в любых таблицах 2-8. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, представляют собой стерические блокаторы, которые содержат любые последовательности нуклеотидных оснований, представленные в таблицах 2-8. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, представляют собой стерические блокаторы, состоящие из любых последовательностей нуклеотидных оснований, представленных в таблицах 2-8. Как подробно описано в приведенных ниже примерах, стерические блокаторы были сконструированы так, чтобы они были нацелены на конститутивные экзоны tau (например, экзоны 1, 4, 5, 7, 9, 11, 12, 13), последовательности, объединяющие старт-кодон MAPT, акцепторы и доноры сплайсинга, точки ветвления при сплайсинге, последовательности, родственные полипиримидиновому пути, или последовательности-энхансеры или ингибиторы сплайсинга. Нацеливание на старт-кодон и экзон 1 может блокировать инициацию трансляции. ASO, которые препятствуют сплайсингу и/или индуцируют вырезание экзонов, будут способствовать сдвигу рамки считывания и/или введению ниже расположенного преждевременного стоп-кодона, что будет приводить к снижению уровня мРНК и/или белка tau MAPT.

[0075] Химические модификации могут быть включены в стерические блокаторы для повышения стабильности, эффективности и/или поглощения клетками. Стерические блокаторы могут иметь химическую модификацию в каждом положении нуклеотида или в некоторых выбранных положениях. Так, например, введение 2'-модификации сахарного кольца (такой как 2'-О-метоксиэтил, МОЕ), включение блокированной нуклеиновой кислоты (LNA) и/или модификации остова (такого как фосфортиоатный остов) может снижать расщепление нуклеазой и/или повышать аффинность связывания антисмысловых олигонуклеотидов. Стерические блокаторы, кроме модификаций сахара и/или остова, могут состоять из олигомеров, которые значительно отличаются от ДНК или РНК. Пептид-содержащая нуклеиновая кислота (PNA) представляет собой олигонуклеотид-миметик, в котором нуклеотидные основания связаны амидными связями. Поскольку амидный остов является незаряженным, то связывание характеризуется высокими уровнями ассоциации и высокой аффинностью (см. Bentin T, Biochemistry. 1996; 35:8863-8869; Smulevitch SV, Nat Biotech. 1996; 14:1700-1704). Другим незаряженным аналогом ДНК являются фосфордиамидатные морфолино-олигомеры (обычно называемые «PMO или морфолинами»). PMO не способны комплементарно связываться с мишенями с высокой аффинностью, которая характеризуют связывание с PNA, но оказалось, что они являются эффективными агентами внутри клеток (см. Summerton J, Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 1997; 7:187-195; Corey DR, Genome Biol. 2001; 2:REVIEWS1015).

[0076] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой стерические блокаторы, содержащие 2'-модифицированные нуклеотиды. 2'-модификация может быть выбрана из группы, состоящей из 2'-фтора, 2'-дезокси-2'-фтора, 2'-О-метила, 2'-О-метоксиэтила (2'-О-МОE), 2'-О-аминопропила (2'-О-АP), 2'-О-диметиламиноэтила (2'-О-DMAOE), 2'-О-диметиламинопропила (2'-О-DMAP), 2'-О-диметиламиноэтилоксиэтила (2'-О-DMAEOE) и 2'-О-N-метилацетамидо (2'-О-NMA). В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой стерические блокаторы, которые имеют 2'-О-МОE-модификацию в каждой нуклеотидной субъединице.

[0077] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой стерические блокаторы, которые имеют межнуклеозидные фосфодиэфирные или фосфортиоатные связи.

[0078] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой стерические блокаторы, которые содержат модификации остова, препятствующие связыванию с РНКазой Н. Такие стерические блокаторы могут включать модифицированные межнуклеозидные связи, например, метилфосфонатную связь, метилфосфонотиоатную связь, фосформорфолидатную связь, фосфорпиперазидатную связь или фосфорамидитную связь. В некоторых вариантах осуществления, каждая другая межнуклеозидная связь может содержать модифицированный фосфат с 2'-низшей алкильной группой (такой как, например, C₁-C₄, прямой или разветвленный насыщенный или ненасыщенный алкил, такой как метил, этил, этенил, пропил, 1-пропенил, 2-пропенил и изопропил) или их комбинации. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой стерические блокаторы, которые включают одну или более модифицированных межнуклеозидных связей, описанных в патенте США № 5149797.

[0079] В некоторых вариантах осуществления, описанные здесь стерические блокаторы, нацеленные на MAPT, включают С6-линкер у 3'-конца со следующей структурой:

(L1),

которая присоединена к 3'-концу олигонуклеотида посредством фосфатного мостика, где R=PО₂-О-олигонуклеотид (для фосфодиэфирных межнуклеозидных связей) или R=POS-О-олигонуклеотид (для фосфортиоатных межнуклеозидных связей). В соответствии с этим, стерические блокаторы, нацеленные на MAPT и включающие фосфодиэфирные межнуклеозидные связи, могут иметь следующую структуру:

;

а стерические блокаторы, нацеленные на MAPT и включающие фосфортиоатные межнуклеозидные связи, могут иметь следующую структуру:

.

Гапмеры

[0080] Антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие непрерывный фрагмент ДНК, могут осуществлять рекрутинг клеточной эндонуклеазы РНКазы H к целевому гетеродуплексу РНК:ДНК и расщеплять РНК-мишень в дуплексе РНК:ДНК. Гапмеры представляют собой химерные антисмысловые соединения. Химерные антисмысловые соединения обычно содержат, по меньшей мере, одну область, модифицированную так, чтобы она сообщала повышенную резистентность к разложению нуклеазой, повышенный уровнь поглощения клетками, повышенную аффинность связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью и/или повышенную ингибирующую активность, и вторую область, имеющую нуклеотиды, которые химически отличаются от нуклеотидов первой области.

[0081] Гапмеры имеют центральный гэп-сегмент, состоящий из фрагмента смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов, расположенных между двумя сегментами крыла, состоящими из модифицированных нуклеотидов у 5'- и 3'-концов. Гэп-сегмент служит в качестве субстрата для расщепления эндонуклеазой РНКазой Н, а сегменты крыла с модифицированными нуклеотидами сообщают повышенную резистентность к расщеплению другой нуклеазой. Сегмент «крыло- гэп-крыло» может быть обозначен как «X-Y-Z», где «X» означает длину 5'-крыла, «Ύ» означает длину гэпа, а «Z» означает длину длину 3'-крыла. «X» и «Z» могут включать одинаковые, различные или чередующиеся сахарные группы.

[0082] В некоторых вариантах осуществления изобретения, центральный гэп-сегмент гапмера состоит по меньшей мере из пяти (например, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12) смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов, а сегменты 5'- и 3'-крыльев содержат один или более 2'-модифицированных нуклеотидов. Сообщалось, что химерный олигонуклеотид, содержащий фрагмент от одного до четырех смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов, не активирует РНКазу H. См. патент США № 9157081. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой гапмеры, содержащие по меньшей мере семь (например, 7, 8, 9, 10, 11, 12) смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой гапмеры, содержащие десять смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов. 2'-модификация может быть выбрана из группы, состоящей из 2'-фтора, 2'-дезокси-2'-фтора, 2'-О-метила, 2'-О-метоксиэтила (2'-О-МОE), 2'-О-аминопропила (2'-О-АP), 2'-О-диметиламиноэтила (2'-О-DMAOE), 2'-О-диметиламинопропила (2'-О-DMAP), 2'-О-диметиламиноэтилоксиэтила (2'-О-DMAEOE) и 2'-О-N-метилацетамидо (2'-О-NMA).

[0083] В некоторых вариантах осуществления изобретения, гапмеры, нацеленные на МАРТ, представляют собой 5-10-5-гапмеры длиной 20 нуклеозидов, где центральный гэп-сегмент содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов и фланкирован сегментами 5'- и 3'-крыла, каждый из которых содержит пять нуклеозидов с 2'- модификацией. Другими подходящими гапмерами являются, но не ограничиваются ими, 5-9-5-гапмеры, 5-8-5-гапмеры, 4-8-6-гапмеры, 6-8-4-гапмеры или 5-7-6-гапмеры.

[0084] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой гапмеры, например, олигонуклеотиды, содержащие последовательность нуклеотидных оснований, которая по меньшей мере на 70% (например, на 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентична любым последовательностям, представленным в таблицах 9-15 и 17. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой гапмеры, которые содержат любые последовательности нуклеотидных оснований, представленные в таблицах 9-15 и 17. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой гапмеры, которые состоят из любых последовательностей нуклеотидных оснований, представленных в таблицах 9-15 и 17. Как подробно описано ниже в примерах, гапмеры были сконструированы так, чтобы они были нацелены на последовательности, окружающие стар-кодон, экзон 1 или 3'-нетранслируемую область (UTR) транскрипта MAPT. В некоторых вариантах осуществления изобретения, гапмеры были сконструированы так, чтобы они были нацелены на 3'-UTR.

[0085] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на МАРТ, представляют собой 5-10-5-гапмеры, которые содержат любые последовательности нуклеотидных оснований, представленные в таблицах 9-15 и 17, где каждый 1-5 нуклеотид содержит 2'-O-МОE- модифицированный нуклеозид, каждый 6-15 нуклеотид содержит 2'-дезоксинуклеозид, а каждый 16-20 нуклеотид содержит 2'-O-МОE- модифицированный нуклеозид.

Геномные последовательности MAPT, на которые нацелены антисмысловые олигонуклеотиды

[0086] В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды были сконструированы так, чтобы они были нацелены на конкретную область геномной последовательности MAPT (GenBank, pег. № NG_007398.1 (SEQ ID NO: 304) или область соответствующей мРНК или транскрипта tau (SEQ ID NО: 306). Последовательности интронов и экзонов MAPT и точки ветвления были определены исходя из базы данных геномов Ensembl на web-сайте с использованием программы Transcript: MAPT-203 ENST00000344290. Скрининг экзонов, интронов и стыков интрон/экзон человеческого гена MAPT показал, что нацеливание на некоторые области в гене или транскрипте MAPT с помощью антисмысловых олигонуклеотидов является более эффективным для снижения уровня экспрессии tau, чем нацеливание на другие области. Так, например, в таблице 1 перечислены последовательности некоторых предпочтительных областей в гене или транскрипте MAPT, которые могут быть мишенями для антисмысловых олигонуклеотидов.

[0087] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды содержат последовательность нуклеотидных оснований, которая являтся комплементарной по меньшей мере 12 смежным нуклеотидным основаниям (например, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 смежным нуклеотидным основаниям) любой из SEQ ID NO: 487-506, с 1, 2, или 3 несоответствиями. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды содержат последовательность нуклеотидных оснований, которая на 100% комплементарна по меньшей мере 12 смежным нуклеотидным основаниям (например, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 смежным нуклеотидным основаниям) любой из SEQ ID NO: 487-506.

Таблица 1: Выбранные геномные последовательности MAPT, мРНК или пре-мРНК, на которые нацелены антисмысловые олигонуклеотиды tau.

Выбранные геномные последовательности MAPT (антисмысловая цепь), на которые нацелены ASO tau SEQ ID NO Локализация Соответствующая последовательность мРНК или pre-мРНК MAPT, на которую нацелены ASO tau ACGCTGGCCTGAAAGGTTAGTGGAC 292 Стык интрон/экзон 1 GUCCACUAACCUUUCAGGCCAGCGU (SEQ ID NO: 503) AAAAGCCAAGGTAAGCTGACGATGC 293 Стык интрон/экзон 5 GCAUCGUCAGCUUACCUUGGCUUUU (SEQ ID NO: 504) TTTTATATTTTATCAGCTCGCATGG 294 Стык интрон/экзон 5 CCAUGCGAGCUGAUAAAAUAUAAAA (SEQ ID NO: 505) ACCCACAAGCTGACCTTCCG 295 Экзон 13 CGGAAGGUCAGCUUGUGGGU (SEQ ID NO: 487) ACCAGCTGAAGAAGCAGGCATTGGAGACAC 296 Экзон 4 GUGUCUCCAAUGCCUGCUUCUUCAGCUGGU (SEQ ID NO: 488) CTCTCATCTCCAGGTGCAAATAGTC 297 Стык интрон/экзон 11 GACUAUUUGCACCUGGAGAUGAGAG (SEQ ID NO: 506) ATAGTCTACAAACCAGTTGA 298 Экзон 11 UCAACUGGUUUGUAGACUAU (SEQ ID NO: 489) ATTAGGCAACATCCATCATA 299 Экзон 11 UAUGAUGGAUGUUGCCUAAU (SEQ ID NO: 490) GAACCAGGATGGCTGAGCCC 300 Экзон 1 GGGCUCAGCCAUCCUGGUUC (SEQ ID NO: 491) CGTCCCTGGCGGAGGAAA 301 Экзон 12 UUUCCUCCGCCAGGGACG (SEQ ID NO: 492) TGGTCAGTAAAAGCAAAGAC 302 Экзон 5 GUCUUUGCUUUUACUGACCA (SEQ ID NO: 493) CTGGAAGCGATGACAAAAAA 303 Экзон 5 UUUUUUGUCAUCGCUUCCAG (SEQ ID NO: 494) CCTTGCTCAGGTCAACTGGT 479 Экзон 12 ACCAGUUGACCUGAGCAAGG (SEQ ID NO: 495) GGTTGACATCGTCTGCCTGT 480 3'UTR ACAGGCAGACGAUGUCAACC (SEQ ID NO: 496) GTCCCACTCTTGTGCCTGGA 481 3'UTR UCCAGGCACAAGAGUGGGAC (SEQ ID NO: 497) GACATCGTCTGCCTGTGGCT 482 3'UTR AGCCACAGGCAGACGAUGUC (SEQ ID NO: 498) CCCACTCTTGTGCCTGGACT 483 3'UTR AGUCCAGGCACAAGAGUGGG (SEQ ID NO: 499) GTCCCAGGTCTGCAAAGTGG 484 3'UTR CCACUUUGCAGACCUGGGAC (SEQ ID NO: 500) GTCTGCCTGTGGCTCCACGA 485 3'UTR UCGUGGAGCCACAGGCAGAC (SEQ ID NO: 501) AGTCACTCTGGTGAATCCAA 486 3'UTR UUGGAUUCACCAGAGUGACU (SEQ ID NO: 502)

Конъюгаты антисмысловых олигонуклеотидов

[0088] Конъюгирование антисмысловых олигонуклеотидов с другой молекулой может повышать активность, поглощение клетками и/или распределение в тканях антисмысловых олигонуклеотидов. Так, например, антисмысловые олигонуклеотиды могут быть ковалентно связаны с одним или более диагностическими соединениями, репортерной группой, перекрестно-сшивающим агентом, молекулой, сообщающей резистентность к нуклеазе, липофильной молекулой, холестерином, липидом, лектином, линкером, стероидом, уваолом, гецигенином, диосгенином, терпеном, тритерпеном, сарсасапогенином, фриделином, литохолевой кислотой, дериватизированной эпифриделанолом, витамином, биотином, углеводом, декстраном, красителем, пуллуланом, хитином, хитозаном, синтетическии углеводом, 15-мерным олиголактатом, природным полимером, полимером с низкой или средней молекулярной массой, инулином, циклодекстрином, гиалуроновой кислотой, белком, белок-связывающим агентом, молекулой, нацеленной на интегрин, поликатионом, пептидом, полиамином, пептидомиметиком, трансферином, кумаринами, феназином, фолатом, фенантридином, антрахиноном, акридином, флуоресцеинами и/или родаминами.

[0089] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды связаны с линкерной молекулой. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды связаны с липидом или холестерином. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловые олигонуклеотиды связаны с нейтральными липосомами (NL) или липидными наночастицами (LNP). LNP представляют собой самособирающиеся системы на основе катионных липидов, которые могут содержать, например, нейтральный липид (липосомное основание); катионный липид (для загрузки олигонуклеотида); холестерин (для стабилизации липосом); и ПЭГ-липид (для стабилизации композиции, сохранения заряда и увеличения его циркуляции в кровотоке). Нейтральные липосомы (NL) представляют собой частицы на основе некатионных липидов.

[0090] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды связаны с жирной кислотой, например, с жирной кислотой омега-3 или с жирной кислотой омега-6. Подходящими жирными кислотами омега-3 являются, например, альфа-линоленовая кислота (ALA), докозагексаеновая кислота (DHA), эйкозапентаеновая кислота (EPA), докозапентаеновая кислота (DPA), эйкозатетраеновая кислота (ETA), эйкозатриеновая кислота (ETE), эйкозапентаеновая кислота (EPA), гексадекатриеновая кислота (HTA), генеикозапентаеновая кислота (HPA), стеаридоновая кислота (SDA), тетракозапентаеновая кислота и тетракозагексаеновая кислота.

Тестирование активности антисмысловых олигонуклеотидов

[0091] Активность антисмысловых олигонуклеотидов может быть протестирована in vitro или in vivo. Для тестирования in vitro, ASO могут быть введены в культивируемые клетки путем трансфекции или электропорации. После обработки может быть определен уровень экспрессии MAPT (tau) в ASO-обработанных клетках с последующим сравнением этого уровня с уровнем экспрессии MAPT (tau) в необработанных контрольных клетках.

[0092] Уровень экспрессии MAPT может быть определен любым подходящим методом, например, путем количественного определения уровня мРНК MAPT, путем измерения количества кДНК, полученной посредством обратной транскрипции мРНК MAPT или путем определения количества белка tau. Эти методы могут быть осуществлены на образце методом выборки или методом, модифицированным для крупномасштабного анализа.

[0093] Уровень мРНК MAPT может быть детектирован и количественно оценен с помощью зонда, который специфически гибридизуется с сегментом транскрипта MAPT, например, с помощью Нозерн-блот-анализа. Уровень мРНК MAPT может быть также определен и количественно оценен с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием пары праймеров, которые распознают транскрипт MAPT. Общие процедуры для ПЦР описаны MacPherson et al., PCR: A Practical Approach, (IRL Press at Oxford University Press (1991)). Однако условия ПЦР, используемые для каждой проводимой реакции, определяют эмпирически. На успех реакции влияет ряд параметров, например, температура и время отжига, время удлинения, концентрация Mg²⁺ и/или АТФ, рН и относительная концентрация праймеров, матриц и/или дезоксирибонуклеотидов. После амплификации, полученные фрагменты ДНК могут быть детектированы с помощью электрофореза в агарозном геле с последующей визуализацией путем окрашивания этидийбромидом и облучения ультрафиолетом.

[0094] В некоторых вариантах осуществления изобретения, уровень мРНК MAPT может быть детектирован и количественно оценен с помощью количественной ПЦР в реальном времени, которая осуществляет мониторинг амплификации нуклеиновой кислоты-мишени посредством одновременного включения детектируемого красителя или репортера во время стадии амплификации с использованием любой коммерчески доступной ПЦР-системы в реальном времени.

[0095] Альтернативно, метка может быть присоединена непосредственно к исходному образцу нуклеиновой кислоты (например, мРНК, поли-А, мРНК, кДНК и т.п.) или к продукту амплификации после завершения амплификации. Методы присоединения меток к нуклеиновым кислотам хорошо известны специалистам и включают, например, ник-трансляцию или мечение по концам (например, меченной РНК) путем обработки нуклеиновой кислоты киназой и последующего присоединения (лигирования) нуклеиновокислотного линкера, связывающего образец нуклеиновой кислоты с меткой (например, флуорофором).

[0096] Детектируемые метки, подходящие для использования в настоящем изобретении, включают любую композицию, детектируемую спектроскопическими, фотохимическими, биохимическими, иммунохимическими, электрическими, оптическими или химическими средствами. Подходящими метками согласно изобретению являются биотин для окрашивания меченым конъюгатом стрептавидина, магнитные сферы (например, Dynabeads™), флуоресцентные красители (например, флуоресцеин, техасский красный, родамин, зеленый флуоресцентный белок и т.п.), радиоактивные метки (например, ³Н, ¹²⁵I, ³⁵S, ¹⁴C или ³²P), ферменты (например, пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза и другие ферменты, обычно используемые в ELISA) и колориметрические метки, такие как коллоидное золото или цветное стекло или пластиковые сферы (например, полистирол, полипропилен, латекс и т.п.). Патентами, в которых описано использование таких меток, являются патенты США №№ 3817837; 3850752; 3939350; 3996345; 4277437; 4275149 и 4366241.

[0097] Детектирование меток хорошо известно специалистам в данной области. Так, например, радиоактивные метки могут быть детектированы с использованием фотографической пленки или сцинтилляционных счетчиков, а флуоресцентные маркеры могут быть детектированы с использованием фотодетектора для обнаружения излучаемого света. Ферментные метки обычно детектируются посредством обработки фермента субстратом и детектирования продукта реакции, продуцируемого под действием фермента на субстрате, а колориметрические метки детектируются просто путем визуализации окрашенной метки. Подробное описание методов мечения нуклеиновых кислот и детектирования меченых гибридизованных нуклеиновых кислот можно найти в руководстве Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Vol. 24: Hybridization with Nucleic Acid Probes, P. Tijssen, ed. Elsevier, N.Y. (1993).

[0098] Активность антисмысловых олигонуклеотидов может быть также оценена путем измерения уровней белка tau известными методами. Так, например, уровень белка tau может быть количественно оценен с помощью Вестерн-блот-анализа (иммуноблоттинга), твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), иммуногистохимического анализа, иммуноанализов, иммунопреципитации, иммунофлуоресцентных анализов, иммуноцитохимических анализов, клеточного сортинга с активацией флуоресценции (FACS), радиоиммуноанализов, иммунорадиометрических анализов, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), масс-спектрометрии, конфокальной микроскопии, ферментативных анализов или поверхностного плазмонного резонанса (ППР).

[0099] In vivo активность антисмысловых олигонуклеотидов может быть также протестирована на животных-моделях. Тестирование может быть осуществлено на нормальных животных или на животных с экспериментальной моделью заболевания. Антисмысловые олигонуклеотиды могут быть получены в фармацевтически приемлемом разбавителе и доставлены подходящим способом введения. После лечения могут быть взяты образцы ткани, например, ткань головного мозга, цереброспинальная жидкость (CSF), спинной мозг, а затем может быть определен уровень экспрессии tau любыми вышеописанными методами. Для оценки структуры головного мозга и/или для детектирования присутствия нейрофибриллярных клубков может быть проведен гистологический анализ. Может быть также проведен мониторинг и анализ фенотипических изменений у обработанных животных, таких как улучшение познавательной способности или подвижности.

Синтез и характеристика олигонуклеотидов

[00100] Одноцепочечные олигонуклеотиды могут быть синтезированы любыми методами полимеризации нуклеиновых кислот, известными специалистам, например, с помощью твердофазного синтеза с применением фосфорамидитной методики (S. L. Beaucage and R. P. Iyer, Tetrahedron, 1993, 49, 6123; S. L. Beaucage and R. P. Iyer, Tetrahedron, 1992, 48, 2223), Н-фосфонатов, фосфотриэфирной химии или ферментативного синтеза. При этом могут быть использованы автоматизированные коммерчески доступные синтезаторы, например, синтезаторы от BioAutomation (Irving, Texas), или Applied Biosystems (Foster City, California). В некоторых вариантах осуществления изобретения, одноцепочечные олигонуклеотиды получают с использованием стандартных твердофазных фосфорамидитных химических методов, например, описанных в Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry, Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA. Фосфотиоатные связи могут быть введены с использованием сульфирующего реагента, такого как фенилацетилдисульфид или DDTT (((диметиламинометилиден)амино)-3Н-1,2,4-дитиазаолин-3-тион). Хорошо известно применение аналогичных методов и коммерчески доступных модифицированных амидитов и стекла с регулируемым размером пор (CPG), таких как амидиты, модифицированные биотином, флуоресцеином, акридином или псоралином, и/или CPG для синтеза модифицированных олигонуклеотидов или флуоресцентно меченных олигонуклеотидов, конъюгированных с биотином, или других конъюгированных олигонуклеотидов.

[00101] Для минимизации уровней примесей в конечном продукте необходим контроль качества исходных материалов и продуктов после каждой стадии синтеза. Однако, учитывая число стадий синтеза на одно связывание и число связываний, наличие примесей будет неизбежным. Методы очистки могут быть применены для удаления нежелательных примесей из конечного олигонуклеотидного продукта. Обычно применяемыми методами очистки одноцепочечных олигонуклеотидов являются обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография ионных пар (ОФ-ИП-ВЭЖХ), электрофорез в капиллярном геле (ЭКГ), анионообменная ВЭЖХ (AО-ВЭЖХ) и эксклюзионная хроматография (ЭХ).

[00102] После очистки, олигонуклеотиды могут быть проанализированы с помощью масс-спектрометрии и количественно оценены на спектрофотометре на длине волны 260 нм.

Терапевтическое применение и способы лечения

[00103] Настоящее изобретение относится к способам снижения уровня экспрессии tau у индивидуума, например, у человека путем введения указанному индивидууму терапевтически эффективного количества любых описанных здесь антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения, антисмысловой олигонуклеотид может быть введен индивидууму интратекально, интракраниально, интраназально, внутривенно, перорально или подкожно. В некоторых вариантах осуществления изобретения, такие способы также включают идентификацию и отбор индивидуума, страдающего tau-ассоциированным заболеванием или восприимчивого к этому заболеванию.

[00104] Описанные здесь антисмысловые олигонуклеотиды или фармацевтические композиции на их основе могут быть использованы для лечения или профилактики tau-ассоциированного заболевания у индивидуума. В некоторых своих вариантах, настоящее изобретение относится к описанным здесь антисмысловым олигонуклеотидам или к фармацевтическим композициям на их основе для применения в лечении или в профилактике tau-ассоциированного заболевания у пациента. В других своих вариантах, настоящее изобретение относится к применению описанных здесь антисмысловых олигонуклеотидов в целях приготовления лекарственного средства для применения в лечении или в профилактике tau-ассоциированного заболевания у пациента.

[00105] Tau-ассоциированными заболеваниями являются, но не ограничиваются ими, болезнь Альцгеймера (БА), амиотрофический боковой склероз/комплекс паркинсонизм-деменция (АБС-КПД), деменция в области аргирофильных зерен (ДАГЗ), амилоидная ангиопатия британского типа, церебральная амилоидная ангиопатия, хроническая травматическая энцефалопатия (ХТЭ), кортикобазальная дегенерация (КБД), болезнь Крейцфельда-Якоба (БКЯ), деменция боксеров, диффузные повреждения нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, синдром Дауна, синдром Дравета, эпилепсия, деменция в области лобно-височной доли (ДЛВД), деменция в области лобно-височной доли, ассоциированная с паркинсонизмом, сцепленным с хромосомой 17 (FTDP-17), дегенерация передней лобно-височной доли, ганглиоглиома, ганглиоцитома, болезнь Герстманна-Штраусслера-Шейнкера, болезнь Галервордена-Шпатца, болезнь Гентингтона, миозит, вызываемый тельцами включения, энцефалопатия, вызываемая свинцом, болезнь Литико-Бодига, менингиоангиоматоз, атрофия многих органов, миотоническая дистрофия, болезнь Нимана-Пика типа С (НП-С), не-гваманиевомое заболевание двигательных нейронов, ассоциированное с поражением нейрофибриллярных клубков, болезнь Пика (БП), постэнцефалитный паркинсонизм, церебральная амилоидная ангиопатия, вызываемая белками прионами, прогрессирующий субкортикальный глиоз, прогрессирующий надъядерный паралич (ПНП), подострый склерозирующий панэнцефалит, деменция, поражающая только область клубков, деменция, преобладающая в области клубков, мультиинфарктная деменция, ишемический инсульт и клубневой склероз.

Комбинированная терапия

[00106] Различные описанные выше олигонуклеотиды могут быть использованы в комбинации с другими лекарственными средствами. В соответствии с этим, способы лечения описанного здесь tau-ассоциированного заболевания могут также включать введение второго агента индивидууму, нуждающемуся в лечении. Так, например, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на ассоциированный с микротрубочками белок tau (MAPT), могут быть использованы в комбинации с антителом, которое специфически связывается с белком tau и/или с агентом, нацеленным на амилоид бета (Аβ), например, с антителом, которое связывается с Аβ или с ингибитором бета-секретазы (ВАСЕ). В некоторых вариантах осуществления, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, используются в комбинации с антителом, которое специфически связывается с белком tau. В некоторых вариантах осуществления, антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, используются в комбинации с ингибитором ВАСЕ.

[00107] Термин «комбинация» означает фиксированную комбинацию в виде одной унифицированной лекарственной формы или комбинированное введение, где соединение согласно изобретению и другой компонент этой комбинации (например, другое лекарственное средство, описанное ниже и также называемое «терапевтическим средством» или «совместно вводимым агентом») могут быть введены независимо друг от друга в одно и то же время или по отдельности в различные интервалы времени, особенно в те интервалы времени, когда эти компоненты комбинации дают суммарный, например, синергический эффект. Отдельные компоненты могут быть упакованы в виде набора или использованы по отдельности. Один или оба этих компонента (например, порошки или жидкости) могут быть разведены или разбавлены до нужной дозы перед введением. Используемые здесь термины «совместное введение» или «комбинированное введение» или т.п. означают введение выбранного компонента комбинации индивидууму, нуждающемуся в этом (например, пациенту), и включают схемы лечения, в которых агенты необязательно вводят одним и тем же способом или в одно и то же время. Используемый здесь термин «фармацевтическая комбинация» означает продукт, полученный путем смешивания или объединения более чем одного терапевтического средства, и включает фиксированные и нефиксированные комбинации терапевтических средств. Термин «фиксированная комбинация» означает, что терапевтические средства, например, олигонуклеотид согласно изобретению и другой компонент этой комбинации вводят пациенту одновременно в форме единого целого или дозы. Термин «нефиксированная комбинация» означает, что терапевтические средства, например, олигонуклеотид согласно изобретению и другой компонент этой комбинации, вводят пациенту в виде отдельных единиц, либо одновременно, либо параллельно, либо последовательно без каких-либо конкретных временных ограничений, где такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни двух соединений в организме пациента. Последнее также относится к комбинированному лечению, например, путем введения трех или более терапевтических средств.

[00108] Используемый здесь термин «фармацевтическая комбинация» означает либо фиксированную комбинацию в виде одной унифицированной лекарственной форме, либо нефиксированную комбинацию, либо набор частей для комбинированного введения, где два или более терапевтических средств могут быть введены независимо друг от друга в одно и то же время или по отдельности в различные интервалы времени, особенно в те интервалы времени, когда эти компоненты комбинации дают суммарный, например, синергический эффект.

[00109] Термин «комбинированная терапия» означает введение двух или более терапевтических средств для лечения терапевтического состояния или расстройства, описанного в настоящей заявке. Такое введение включает совместное введение этих терапевтических средств, по существу, одновременно, например, в одной капсуле, имеющей фиксированное отношение активных ингредиентов. Альтернативно, такое введение включает совместное введение каждого активного ингредиента в контейнерах для многократных доз или в отдельных лекарственных формах (например, в виде таблеток, капсул, порошков и жидкостей). Порошки и/или жидкости могут быть, перед их введением, разведены или разбавлены до получения нужной дозы. Кроме того, такое введение также включает применение терапевтического средства каждого типа в последовательном порядке, либо приблизительно в одно и то же время, либо в различные периоды времени. В любом случае, схема лечения будет оказывать благотворное действие комбинации лекарственных средств в лечении состояний или расстройств, описанных в настоящей заявке.

Приготовление образцов

[00110] Образцы ткани могут быть получены от индивидуума, которому был введен антисмысловой олигонуклеотид любыми известными методами, например, с помощью биопсии или хирургической операции. Так, например, образец, содержащий цереброспиннальную жидкость, может быть получен путем люмбальной пункции, при которой тонкая игла, прикрепленная к шприцу, вставляется в спинномозговой канал в области поясницы, и таким образом создается вакуум, в результате чего цереброспиннальная жидкость может всасываться через иглу и собираться в шприц. Мониторинг процедуры этого типа может быть проведен с помощью КТ, ультразвука или на эндоскопе.

[00111] Образец может быть подвергнут быстрому замораживанию и положен на хранение при -80°C для последующего использования. Образец может быть также фиксирован с помощью фиксатора, такого как формальдегид, параформальдегид или уксусная кислота/этанол. РНК или белок могут быть экстрагированы из свежего, замороженного или фиксированного образца для анализа.

Фармацевтические композиции, дозы и введение

[00112] Кроме того, настоящее изобретение также относится к описанным здесь композициям, например, фармацевтическим композициям, содержащим один или более описанных здесь антисмысловых олигонуклеотидов. Фармацевтические композиции обычно включают фармацевтически приемлемый носитель. Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает физиологический раствор, растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические агенты и агенты, замедляющие абсорбцию и т.п., подходящие для введения фармацевтического средства. Фармацевтические композиции обычно приготавливают так, чтобы они были совместимы с предполагаемым способом введения. Примерами способов введения являются интратекальное, внутричерепное, интраназальное, внутривенное, пероральное или подкожное введение.

[00113] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанный здесь антисмысловой олигонуклеотид может быть конъюгирован с антителом, способным пересекать гематоэнцефалический барьер (например, с антителом, которое связывается с рецептором трансферина, инсулином, лептином или инсулиноподобным фактором роста 1), и может быть введен внутривенно (Evers et al., Advanced Drug Delivery Reviews 87 (2015): 90-103).

[00114] Способы приготовления подходящих фармацевтических композиций известны специалистам, см., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 21st ed., 2005; and the books in the series Drugs and the Pharmaceutical Sciences: a Series of Textbooks and Monographs (Dekker, NY). Так, например, растворы или суспензии, используемые для парентерального, интрадермального, интратекального или подкожного введения, могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, жирные масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метил парабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатообразующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и агенты для придания тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. рН может бытьо скорректирован с использованием кислот или оснований, таких как соляная кислота или гидроксид натрия. Парентеральный препарат может быть заключен в ампулы, одноразовые шприцы или флаконы с многократными дозами, изготовленные из стекла или пластика.

[00115] Фармацевтические композиции, подходящие для применения в виде инъекций, могут включать стерильные водные растворы (водорастворимые) или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления препарата в виде стерильных инъецируемых растворов или дисперсий. Для внутривенного введения, подходящими носителями являются физиологический раствор, бактериостатическая вода, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ) или забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS). Во всех случаях, композиция должна быть стерильной и жидкой до такой степени, чтобы ее легко можно было забрать в шприц. Она должна быть стабильной в условиях приготовления и хранения и должна быть защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носителем может быть растворитель или дисперсионная среда, содержащая, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.) и их подходящие смеси. Текучесть может поддерживаться, например, за счет покрытия, такого как лецитин, путем сохранения требуемого размера частиц в случае дисперсии и использования поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, таких как, например, парабены, хлорбутанол, фенол, аскорбиновая кислота, тимерозал и т.п. Во многих случаях, в композицию предпочтительно включать изотонические агенты, например, сахара; многоатомные спирты, такие как маннит и сорбит; и хлорид натрия. Пролонгированное поглощение инъецируемых композиций может быть достигнуто путем включения в композицию агента, замедляющего поглощение, например, моностеарата алюминия и желатина.

[00116] Стерильные инъецируемые растворы могут быть приготовлены путем введения активного соединения в нужном количестве в соответствующем растворителе вместе с одним из перечисленных выше ингредиентов или их комбинацией, если это необходимо, с последующей стерилизацией на фильтре.

[00117] Обычно, дисперсии приготовливают путем введения активного соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из тех, которые были перечислены выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъецируемых растворов, предпочтительными методами приготовления являются вакуумная сушка и сушка вымораживанием с получением порошка, содержащего активный ингредиент плюс любой дополнительный нужный ингредиент из предварительно стерилизованного на фильтре раствора.

[00118] Композиции для перорального введения обычно включают инертный разбавитель или пищевой носитель. Для перорального терапевтического введения, активное соединение может быть включено вместе с эксципиентами и использовано в форме таблеток, пастилок или капсул, например, желатиновых капсул. Композиции для перорального введения могут быть также приготовлены с использованием жидкого носителя в виде жидкости для полоскания рта. Фармацевтически приемлемые связывающие агенты и/или адъюванты могут быть включены как часть композиции. Таблетки, драже, капсулы, пастилки и т.п. могут содержать любые из следующих ингредиентов или соединения аналогичной природы: связующее вещество, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; наполнитель, такой как крахмал или лактоза; дезинтегрирующий агент, такой как альгиновая кислота; Примогель или кукурузный крахмал; лубрикант, такой как стеарат магния или Sterotes; вещество, увеличивающее скольжение, такое как коллоидный диоксид кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; или ароматизатор, такой как перечная мята, метилсалицилат или апельсиновая отдушка.

[00119] Для введения путем ингаляции, соединения могут быть доставлены в форме аэрозольного спрея из находящегося под давлением контейнера или дозатора, который содержит подходящий пропеллент, например газ, такой как диоксид углерода, или распылителя. Такие способы включают способы, описанные в патенте США № 6468798. Системное введение описанного здесь терапевтического соединения может быть также осуществлено через слизистую или через кожу. Для введения через слизистую или для трансдермального введения, в препарат вводят пенетранты, способные проникать через соответствующий барьер. Такие пенетранты, по существу, известны специалистам, и включают, например, детергенты, соли желчных кислот и производные фузидиновой кислоты для введения через слизистую. Введение через слизистую может быть осуществлено с помощью интраназальных спреев или суппозиториев. Для трансдермального введения, активные соединения приготавливают в виде жидких мазей, твердых мазей, гелей или кремов методами, по существу, известными специалистам.

[00120] В одном варианте осуществления изобретения, терапевтические соединения приготовливают вместе с носителями, которые будут защищать терапевтические соединения от быстрого выведения из организма, например, в виде композиции с контролируемым высвобождением, включая имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки.

[00121] Фармацевтические композиции могут быть включены в контейнер, упаковку или в раздаточное устройство вместе с инструкцией по применению.

[00122] В неограничивающих примерах, фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере один фармацевтический агент, приготавливают в виде жидкости (например, термореактивной жидкости) в качестве компонента твердого вещества (например, порошка или биологически разлагаемого биосовместимого полимера (например, катионного биоразлагаемого биосовместимого полимера)), или в качестве компонента геля (например, биоразлагаемого биосовместимого полимера). В некоторых вариантах осуществления изобретения, композицию, содержащую по меньшей мере одно фармацевтическое средство, приготавливают в виде геля, выбранного из группы, состоящей из геля альгината (например, альгината натрия), геля на основе целлюлозы (например, карбоксиметилцеллюлозы или карбоксиэтилцеллюлозы) или геля на основе хитозана (например, глицерофосфата хитозана). Кроме того, неограничивающими примерами полимеров, элюирующихся из лекарственного средства, которые могут быть использованы для приготовления любых описанных здесь фармацевтических композиций, являются карагенан, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, декстран в комбинации с поливиниловым спиртом, декстран в комбинации с полиакриловой кислотой, полигалактуроновая кислота, галактуроновый полисахарид, полисалактиновая кислота, полигликолевая кислота, камедь тамаринда, ксантановая камедь, целлюлозная камедь, гуаровая камедь (карбоксиметилгуар), пектин, полиакриловая кислота, полиметакриловая кислота, N-изопропилполиакриламид, полиоксиэтилен, полиоксипропилен, плюроновая кислота, полимолочная кислота, циклодекстрин, циклоамилоза, резилин, полибутадиен, сополимер N-(2-гидроксипропил)метакриламида (HP MA), ангидрат малеиновой кислоты-алкилвиниловый эфир, полидепсипептид, полигидроксибутират, поликапролактон, полидиоксанон, полиэтиленгликоль, полиорганофосфазен, сложный полиортоэфир, поливинилпирролидон, сополимер молочной и гликолевой кислоты (PLGA), полиангидриды, полисиламин, поли-N-винилкапролактам и геллан.

[00123] В некоторых вариантах осуществления изобретения, доставка антисмыслового олигонуклеотида в ткань-мишень может быть улучшена за счет доставки, опосредуемой носителем, включая, но не ограничиваясь ими, катионные липосомы, циклодекстрины, производные порфирина, дендримеры с разветвленной цепью, полиэтилениминовые полимеры, наночастицы и микросферы (Dass CR. J. Pharm. Pharmacal. 2002; 54(1):3-27).

[00124] Термин «эффективное количество» означает количество, достаточное для достижения полезных или желаемых результатов. Так, например, терапевтическим количеством является количество, обеспечивающее желаемый терапевтический эффект. Это количество может быть таким же, как профилактически эффективное количество или оно может отличаться от этого количества, и такое количество является необходимым для предотвращения начала развития заболевания или его симптомов. Эффективное количество может быть введено за одну или более инъекций, нанесений или доз. Терапевтически эффективное количество терапевтического соединения (то есть, эффективная доза) зависит от выбранных терапевтических соединений. Композиции могут быть введены от одного или более раз в день до одного или более раз в неделю; включая один раз в день. Специалисту в данной области очевидно, что доза и время, необходимые для эффективного лечения индивидуума, могут зависеть от ряда факторов, включая, но не ограничиваясь ими, тяжесть заболевания или расстройства, предшествующее лечение, общее состояние здоровья и/или возраст индивидуума и другие заболевания. Кроме того, лечение индивидуума терапевтически эффективным количеством описанных здесь терапевтических соединений может включать один курс лечения или повторные курсы лечения.

[00125] Дозы, токсичность и терапевтическая эффективность терапевтических соединений могут быть определены с помощью стандартных фармацевтических процедур в клеточных культурах или на экспериментальных животных, например, путем определения LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной у 50% популяции). Отношение доз, дающих токсические и терапевтические эффекты, называется терапевтическим индексом, и оно может быть выражено как отношение LD50/ED50. Соединения, которые дают высокие терапевтические индексы, являются предпочтительными. Поскольку могут быть использованы соединения, которые дают токсические побочные эффекты, то следует соблюдать осторожность при разработке системы доставки, которая доставляет такие соединения на участок пораженной ткани, для того, чтобы свести к минимуму потенциальную опасность повреждения неинфицированных клеток и, тем самым, уменьшить побочные эффекты.

[00126] Данные, полученные в анализах на клеточных культурах, и в исследованиях на животных, могут быть использованы при определении интервала доз для их введения человеку. Доза таких соединений составляет, предпочтительно, в пределах диапазона циркулирующих концентраций, которые включают ED50 с небольшой токсичностью или с отсутствием токсичности. Доза может варьироваться в пределах этого интервала в зависимости от используемой лекарственной формы и способа введения. Для любого соединения, используемого в способе согласно изобретению, терапевтически эффективная доза может быть предварительно вычислена с помощью анализов на клеточных культурах. Эта доза может быть приготовлена для введения животным-моделям в целях достижения диапазона циркулирующих концентраций в плазме, которые включают IC50 (т.е. концентрацию тестируемого соединения, при которой достигается полумаксимальное ингибирование симптомов), как было определено в клеточной культуре. Такая информация может быть использована в целях более точного определения доз для введения человеку. Уровни в плазме могут быть измерены, например, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

[00127] В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанный здесь антисмысловой олигонуклеотид растворяют в стерильной воде, физиологическом растворе (например, забуференном фосфатом физиологическом растворе) или цереброспинальной жидкости (CSF) для введения. В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанный здесь антисмысловой олигонуклеотид вводят интратекально, например, посредством болюсной инъекции в межпозвонковое пространство L3 или L4 или путем инфузии с помощью интратекального насоса.

[00128] В некоторых вариантах осуществления изобретения, приблизительно 0,001-1000 мг (например, приблизительно 0,1-800 мг, приблизительно 1-600 мг, приблизительно 10-500 мг, приблизительно 50-450 мг, приблизительно 80-300 мг, приблизительно 100-200 мг) описанного здесь антисмыслового олигонуклеотида вводят индивидууму, нуждающемуся в этом.

Наборы

[00129] Настоящее изобретение также относится к наборам, включающим описанные выше один или более антисмысловых олигонуклеотидов и инструкции по их применению. Инструкции по применению могут включать инструкции по диагностике или лечению tau-ассоциированного заболевания. Описанные выше наборы могут быть использованы в соответствии с любыми описанными здесь методами. Специалистам в данной области известны и другие подходящие способы применения описанных здесь наборов, и специалист будет иметь возможность использовать наборы для таких применений. Описанные выше наборы могут быть также вложены в почтовую посылку (например, в оплаченный на почте конверт или почтовый пакет), которая может быть использована для пересылки образца для анализа, например, в лабораторию. Набор может включать один или более контейнеров для образца, либо образец может находиться в стандартном флаконе для забора крови. Набор может также включать одну или более форм информированного согласия, бланк заявки на проведение теста и инструкции по применению набора в способе, описанном в настоящей заявке. Методы использования таких наборов также описаны в настоящей заявке. Одна или более форм (например, бланк заявки на проведение теста) и контейнер для образца могут быть закодированы, например, с помощью штрих-кода для идентификации индивидуума, который предоставил данный образец.

[00130] Специалистам в данной области техники будут очевидны многочисленные методы и материалы, аналогичные или эквивалентные тем, которые описаны в настоящей заявке, и которые могут быть использованы для практического осуществления настоящего изобретения. Действительно, настоящее изобретение никоим образом не ограничено описанными здесь методами и материалами.

ПРИМЕРЫ

[00131] Настоящее изобретение более подробно описано в нижеследующих примерах, которые не ограничивают объема изобретения, изложенного в формуле изобретения.

Пример 1: Общие материалы и методы

Синтез и очистка антисмысловых олигонуклеотидов

[00132] Описанные здесь модифицированные антисмысловые олигонуклеотиды были получены с использованием стандартной фосфорамидитной химии на синтезаторе Mermadel92 (BioAutomation) для использования in vitro и на Mermade 12 (Bio Automation) для использования in vivo. Фосфорамидиты растворяли в ацетонитриле при концентрации 0,15 М (0,08 М на Mermadel92), а связывание проводили путем активации фосфорамидитов 0,5М раствором 5-этилтиотетразола в ацетонитриле (0,25М на Mermadel92). Время связывания обычно составляло 3-4 минуты. Сульфирование осуществляли с использованием 0,2М раствора фенилацетилдисульфида в течение пяти минут. Окисление осуществляли с использованием 0,02М раствора йода в пиридине (20%)/воде (9,5%)/тетрагидрофуране (70,5%) в течение двух минут. Кэпирование осуществляли с использованием стандартных кэпирующих реагентов. Растущие олигонуклеотидные цепи были подвергнуты детритилированию для последующего связывания с 3% дихлоруксусной кислотой в толуоле. После получения последовательностей, соединения, связанные с носителем, расщепляли и подвергали реакции снятия защиты с использованием жидкого гидроксида аммония при 65°С в течение 2 часов. Полученные неочищенные растворы непосредственно очищали с помощью ВЭЖХ (Akta Explorer). Очищенные фракции анализировали с помощью масс-спектрометрии и количественно оченивали путем УФ-облучения с коэффициентом экстинкции на 260 нм. Собранные фракции обессоливали и лиофилизовали досуха.

In vitro тестирование антисмысловых олигонуклеотидов

[00133] Антисмысловые олигонуклеотиды тестировали in vitro в различных клеточных линиях, включая, но не ограничиваясь ими, человеческие клеточные линии, такие как клетки Huh7, клетки Hela и клетки SH-SY5Y, и клеточные линии зеленой мартышки COS1. Клетки были получены от коммерческих поставщиков (например, из Американской коллекции типовых культур (ATCC), Manassas, VA) и были культивированы в соответствии с инструкциями производителей.

[00134] Антисмысловые олигонуклеотиды также тестировали в человеческих нейронах, полученных из человеческих эмбриональных стволовых клеток (hESC), которые были взяты из Научно-исследовательского института WiCell, Inc., находящегося в городе Мэдисон, штат Висконсин, США. Клетки hESC были превращены в функциональные нейронные клетки путем принудительной экспрессии нейрогенина-2 (Ngn2), то есть, фактора транскрипции, специфичного к линии дифференцировки нейронных клеток. Конструкцию Ngn2 доставляли в hESC с использованием лентивирусов для конститутивной экспрессии rtTA и индуцируемой тетрациклином экспрессии экзогенных белков, стимулируемых промотором tetO. Образцы были получены в соответствии с Руководствами по проведению исследований на человеческих эмбриональных стволовых клетках, установленными Национальным Институтом медицины Национальной Академии («NAS Guidelines) и Организацией по защите прав человека, участвующего в исследованиях, в соответствии с нормами по защите прав человека («DHHS»), одобренными сотрудниками Департамента по охране здоровья человека (ст.45 кодекса законов США, часть 1Q).

[00135] Антисмысловые олигонуклеотиды были введены в культивированные клетки путем трансфекции или нуклеофекции, когда клетки достигали приблизительно 60-80% конфлуэнтности в культуре. Для трансфекции, антисмысловые олигонуклеотиды смешивали с реагентом для трансфекции OptiFect™ (Life Tech Cat # 12579-017) в соответствующих средах для культивирования клеток до достижения желаемой концентрации антисмыслового олигонуклеотида и концентрации OptiFect™ в интервале от 2 до 12 мкг/мл на 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида. Для нуклеофекции, антисмысловые олигонуклеотиды были введены в клетки нейробластомы SH-SY5Y с помощью устройства Amaxa Nucleofector-II (Lonza, Walkersville, MD). Для оценки эффективности ASO нуклеофекцию осуществляли в 96-луночных планшетах. Раствор Nucleofector SF был выбран исходя из высокой жизнеспособности клеток и эффективной трансфекции после предварительных экспериментов. В день нуклеофекции, культуры с 60-80% конфлюэнтностью обрабатывали трипсином, и клетки высевали в каждую лунку. Человеческие нейроны, происходящие от hESC, обрабатывали путем добавления 1 или 10 мкМ антисмысловых олигонуклеотидов в среду, подходящую для пассивного поглощения.

[00136] Клетки собирали через 24-72 часа после обработки антисмысловыми олигонуклеотидами, в затем мРНК или белок tau выделяли и оценивали методами, известными специалистам и описанными в настоящей заявке. Вообще говоря, если обработку проводили с несколькими повторами, то данные были представлены как среднее для повторных обработок. Концентрацию используемого антисмыслового олигонуклеотида изменяли от одной клеточной линии к другой клеточной линии. Методы определения оптимальной концентрации антисмыслового олигонуклеотида для конкретной клеточной линии хорошо известны специалистам. Антисмысловые олигонуклеотиды обычно используют при концентрациях в пределах от 1 нМ до 1000 нМ при трансфекции OptiFect; и при концентрациях в пределах от 25 нМ до 20000 нМ при трансфекции посредством нуклеофекции.

[00137] Количественное определение уровня мРНК MAPT (tau) осуществляли с помощью количественной ПЦР в реальном времени с использованием системы ПЦР в реальном времени (ViiA7 Real-Time PCR) (Life Technologies) в соответствии с инструкциями производителей. Перед проведением ПЦР в реальном времени, выделенную РНК подвергали реакции обратной транскрипции, которая продуцировала комплементарную ДНК (кДНК), и эта ДНК была затем использована в качестве субстрата для ПЦР-амплификации в реальном времени. Реакции обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени проводили последовательно в одних и тех же лунках с образцом. Мультиплексный набор для клеток Fastlane (Qiagen Cat # 216513) использовали для лизиса клеток в лунке и обратной транскрипции мРНК в кДНК непосредственно из культивируемых клеток без очистки РНК. Затем кДНК были использованы для анализа на экспрессию tau с помощью количественной ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК tau, определенные с помощью ПЦР в реальном времени, нормализовали по уровню экспрессии гена «домашнего хозяйства», который является постоянным в клетках, например, такого гена, как человеческий ген глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы (GAPDH), человеческий ген белка, связывающегося с TATA-боксом (TBP), или человеческий ген гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазы (HPRT1).

[00138] Анализы на экспрессию генов TaqMan были проведены с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени в соответствии с протоколом, описанным в наборе для проведения мультиплексной ОТ-ПЦР QuantiTect (Qiagen Cat # 204643) с использованием дуплексной реакции ОТ-ПЦР. Были использованы зонды TaqMan, специфичные к человеческому MAPT (LifeTech AssayID # Hs00902194_m1: FAM-MGB), человеческому GAPDH (LifeTech AssayID # Hs02758991_g1: VIC-MGB), человеческому TBP (LifeTech Cat # 4326322E) или человеческому HPRT1 (LifeTech Cat # 4333768T). Образцы были подвергнуты ПЦР-реакции в реальном времени на системе ViiA7 (Life Technologies) в соответствии с рекоммендованными условиями проведения циклов дуплексной ОТ-ПЦР. Все данные были скорректированы по количеству исходной кДНК, а уровни мРНК tau нормализованы по уровням эндогенного эталонного гена. Ген tau и контрольный ген амплифицировали в одной и той же реакции ПЦР с аналогичной высокой эффективностью, что позволяло проводить относительную количественную оценку методом ΔΔCT. Результаты были представлены как процент остаточной мРНК tau по отношению к контрольным клеткам, обработанным PBS.

Тестирование in vivo антисмысловых олигонуклеотидов

[00139] Антисмысловые олигонуклеотиды для MAPT были протестированы in vivo путем доставки ASO в цереброспинальную жидкость (CSF) мышей через интрацеребральный желудочек (ICV). Мышей анестезировали 5% изофлураном, после чего содержание изофлурана в кислороде/азот-содержащем кислороде снижали до 1,5-2% и сохраняли на этом уровне в течение всей хирургической операции. Температуру прямой кишки поддерживали при 36,9 ± 1,0°C с помощью гомеотермического нагревательного элемента и ректального зонда. Анестезированных мышей помещали в стереотаксический аппарат, шерсть на голове выбривали и дезинфицировали растворм повидона-йода (Betadine). Перед разрезом, мышам вводили бупренорфин (Temgesic, 0,03 мг/кг, 1 мл/кг, подкожно). После этого делали разрез для обнажения черепа в целях определения координат головного мозга для инъекции. Инъекцию (общим объемом 2 мкл) делали с использованием 10 мкл-шприца Гамильтона и иглы калибра 28 с помощью микронасоса (Harvard Apparatus) в правый боковой желудочек для всех животных при следующих координатах: AP=+0,5 мм; ML=1,0 мм; DV=-2,5 мм. Скорость потока составляла 1 мкл/мин, и иглу оставляли на месте в течение 1 минуты после инфузии, а затем вынимали. После этого кожу закрывали и мышей оставляли для восстановления в отдельных клетках, после чего возвращали в клетки их обычного содержания. Затем вводили дополнительные дозы бупренорфина (Temgesic, 0,03 мг/кг, 1 мл/кг, подкожно) два раза в день в течение первых 48 часов.

[00140] Животные подвергались ежедневному мониторингу специалистом по работе с лабораторными животными. Затем был проведен мониторинг общего состояния животных и заживления ран, и ежедневно измеряли массу тела. По окончании этой процедуры, животных глубоко анестезировали пентобарбитал-натрием (60 мг/кг Mebunat, Orion Pharma, Finland). Мышам делали пункцию в области большой цистерны и собирали CSF (3-5 мкл на мышь). После этого, мышам делали сердечную пункцию и брали пробы крови. Приблизительно 0,4-0,5 мл крови собирали в пластиковые 500 мкл- пробирки с антикоагулянтом Lavender K2EDTA и центрифугировали при 2000× g в течение 10 мин при 4°C, а затем плазму разделяли на аликвоты. После этого, мышей обезглавливали, собирали головной мозг и разрезали на различные участки, такие как кора головного мозга, гиппокамп и мозжечок. Кроме того, также был собран спинной мозг.

Пример 2: Ингибирование экспрессии человеческого Tau в клетках Huh7 посредством 18-мерных стерических блокаторов 2'-О-MOE

[00141] Стерические блокаторы антисмысловых олигонуклеотидов были сконструированы так, чтобы они были нацелены на стыки интрон-экзон конститутивных экзонов в человеческом Tau, то есть, инвариабельных экзонов, присутствующих во всех изоформах. Стерические блокаторы антисмысловых олигонуклеотидов конструировали так, чтобы они индуцировали исключение экзона, либо путем гибридизации с интронными последовательностями точек ветвления, либо путем нацеления непосредственно на сайты сплайсинга, объединения интронных и экзонных последовательностей и сайтов усиления сплайсинга экзонов. Стерические блокаторы, нацеленные на MAPT, были сначала сконструированы как последовательности длиной 18 нуклеозидов с 2'-О-(2-метоксиэтил)(2'-О-МОЕ)-модификацией сахара рибозы во всех нуклеозидах, которые действуют за счет стерических затруднений и не активируют РНКазу H или RISC. Все межнуклеозидные связи являются фосфодиэфирными связями. Затем был проведен несмещенной скрининг для 18-мерных однородно модифицированных 2'-МОЕ-ASO с фосфодиэфирным остовом. Были проведены анализы BLAST для каждой последовательности морфолино-олигонуклеотида во избежание гибридизации с элементом, не являющимся мишенью.

[00142] 18-мерные 2'-О-МОЕ-стерические блокаторы, нацеленные на tau, тестировали in vitro на их активность в ингибировании мРНК человеческого tau. Клетки Huh7 высевали при плотности 10000 клеток на лунку и трансфицировали реагентом OptiFect (Lifetech Cat# 12579-017) под действием 25 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После обработки в течение 48 часов, кДНК непосредственно выделяли из культивированных клеток с использованием мультиплексного набора для клеток Fastlane (Qiagen Cat # 216513). Уровни мРНК tau измеряли с помощью количественной ПЦР в реальном времени в дуплексной ОТ-ПЦР с использованием зондов TaqMan, специфичных к человеческому MAPT (LifeTech AssayID # Hs00902194_m1: FAM-MGB) и человеческому TBP (белку, связывающемуся с TATA-боксом), используемому в качестве эндогенного контроля (LifeTech Cat # 4326322E). Все данные были скорректированы по количеству исходной кДНК, а уровни мРНК tau нормализовали по уровням эндогенного эталонного гена ТВР. Ген tau и контрольный ген ТВР амплифицировали в одной и той же реакции ПЦР с аналогичной высокой эффективностью, что позволяло проводить относительную количественную оценку методом ΔΔCT. Результаты были представлены как процент остаточной мРНК tau по отношению к контрольным клеткам, обработанным PBS. В таблице 2 проиллюстрированы активности этих 18-мерных 2'-O-MOE-стерических блокаторов в клетках Huh7.

Таблица 2: Ингибирование мРНК tau 18-мерными 2'-O-MOE-стерическими блокаторами в клетках Huh7.

SEQ ID NO Последовательность ASO¹ % Остаточной мРНК² 1 GTCCACTAACCTTTCAGG 19,5 2 GCATCGTCAGCTTACCTT 27,7 3 TATTTGCACCTGGAGATG 38,4 4 GACTATTTGCACCTGGAG 40,8 5 CATGCGAGCTGATAAAAT 40,9 6 ACCATGCGAGCTGATAAA 41,3 7 CCATGCGAGCTGATAAAA 43,3 8 CGTCAGCTTACCTTGGCT 44,1 9 TGACCATGCGAGCTGATA 47,4 10 ATGCGAGCTGATAAAATA 52,1 11 TTTGCACCTGGAGATGAG 52,3 12 TTGCACCTGGAGATGAGA 52,4 13 ATTTGCACCTGGAGATGA 61,9 14 TCCACTAACCTTTCAGGC 68,2 15 GGTTTCAATCTGCAAGAA 68,8 16 CCACTAACCTTTCAGGCC 71,3 17 CACTAACCTTTCAGGCCA 72,9 18 ACTAACCTTTCAGGCCAG 76,7 19 GCTCAGCCATCCTGGTTC 77,3 20 GTTTCAATCTGCAAGAAG 80,4 21 AGTTCACCTGGGGAAAGA 85,8 22 TTGGAGGTTCACCTGGGA 85,9 23 GGCTACCTGGTTTATGAT 88,8 24 AAAGTTCACCTGGGGAAA 92,1 25 GTTCACTGACCTTGGGTC 96,8 26 CAAAGTTCACCTGGGGAA 98,4 27 CAGCTTACCTTGGCTTTT 99,8 28 GGGCTACCTGGTTTATGA 101,6 29 TCTTCAGCTGGTGTATGT 103,4 30 TTCAAAGTTCACCTGGGG 103,4 31 CCCTTTACCTTTTTATTT 104,7 32 TGCTTCTTCAGCTGGTGT 106,1 33 TCAGCTTACCTTGGCTTT 106,7 34 CTGCTTCTTCAGCTGGTG 107,9 35 GGCCACCTCCTAGAACAC 108,4 36 TCTTACCAGAGCTGGGTG 108,8 37 AAGTTCACCTGGGGAAAG 109,4 38 GTCAGCTTACCTTGGCTT 109,5 39 GGGGCCTGATCACAAACC 109,7 40 AGGTTCACCTGGGAAGGA 110,2 41 GCTTACCTTGGCTTTTTT 111,4 42 TCAAAGTTCACCTGGGGA 111,7 43 CCACTCTCACCTTCCCGC 112,8 44 CCCCCTTTACCTTTTTAT 113 45 GAGGTTCACCTGGGAAGG 113,3 46 GTTCACCTGGGAAGGAAG 113,6 47 CACCTCCTAGAACACAAC 114,1 48 ACTCTCACCTTCCCGCCT 114,5 49 TTCAATCTGCAAGAAGAG 114,6 50 ACTGACCTTGGGTCACGT 114,7 51 TTTCAATCTGCAAGAAGA 115,1 52 TTCTTACCAGAGCTGGGT 115,5 53 CAGGGCTACCTGGTTTAT 116,1 54 GGGCCTGATCACAAACCC 116,5 55 AGGGCTACCTGGTTTATG 117,2 56 CCACCTCCTAGAACACAA 117,6 57 CACTGACCTTGGGTCACG 118,4 58 CCCCTTTACCTTTTTATT 118,4 59 TTCACTGACCTTGGGTCA 118,6 60 GGCCTGATCACAAACCCT 119,6 61 CACTCTCACCTTCCCGCC 119,7 62 CCTGGCCACCTCCTAGAA 120,4 63 CCTTTACCTTTTTATTTC 120,6 64 TCACTGACCTTGGGTCAC 121,7 65 GCCTGATCACAAACCCTG 122 66 CTTTACCTTTTTATTTCC 122,5 67 TTCTTCAGCTGGTGTATG 124 68 GCCACCTCCTAGAACACA 126,5 69 TCTCACCTTCCCGCCTCC 127,4 70 CTTCTTACCAGAGCTGGG 129,8 71 TTCTTCTTACCAGAGCTG 131,2 72 ATCAGCCCCCTGTAAATG 131,3 73 GCTTCTTCAGCTGGTGTA 133,9 74 ACAGGGCTACCTGGTTTA 134,3 75 CTCAGCCATCCTGGTTCA 134,4 76 CAGCCCCCTGTAAATGAA 136,4 77 GGGCTCAGCCATCCTGGT 137,9 78 TCTTCTTACCAGAGCTGG 139 79 CTCTCACCTTCCCGCCTC 143,1 80 TCAGCCCCCTGTAAATGA 145,9 81 CTTCTTCAGCTGGTGTAT 148 82 GGTTCACCTGGGAAGGAA 153,5 83 CATCAGCCCCCTGTAAAT 156,4 84 ACCATCAGCCCCCTGTAA 157,5

1. Каждый нуклеотид имеет 2'-O-метоксиэтильную (2'-O-MOE)-модификацию, а межнуклеозидные связи являются фосфодиэфирами. Каждый олигонуклеотид имеет линкер (L1), присоединенный к 3'-концу ASO посредством фосфатного мостика, и имеет следующую структуру:

.

2: % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в клетках Huh7, обработанных одной дозой 25 нМ ASO tau в течение 48 часов, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках Huh7, обработанных PBS. Так, например, 19,5% остаточная мРНК означает ASO SEQ ID NO: 1, обладающая 80,5% активностью в снижении уровня мРНК tau.

Пример 3: Ингибирование экспрессии человеческого Tau в клетках SH-SY5Y под действием 18-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов

[00143] Стерические блокаторы, которые значительно снижают уровень экспрессии tau, как описано в примере 2, были отобраны и протестированы в человеческих клетках нейробластомы SH-SY5Y. Культивируемые клетки SH-SY5Y подвергали нуклеофекции под действием 1000 нМ выбранного антисмыслового олигонуклеотида. После обработки в течение приблизительно 24 часов, кДНК непосредственно выделяли из культивированных клеток с использованием мультиплексного набора для клеток Fastlane (Qiagen Cat # 216513). Уровни мРНК tau измеряли с помощью количественной ПЦР в реальном времени с использованием дуплексной ОТ-ПЦР. Были использованы зонды Taqman, специфичные к человеческому MAPT (Lifetech AssaylD # Hs00902194_ml: FAM-MGB) и человеческому GAPDH (LifeTech AssayID # Hs02758991_g1: VIC-MGB). Все данные были скорректированы по количеству исходной кДНК, а уровни мРНК tau нормализованы по уровням эндогенного эталонного гена GAPDH. Ген tau и контрольный ген GAPDH амплифицировали в одной и той же реакции ПЦР с аналогичной высокой эффективностью, что позволяло проводить относительную количественную оценку методом ΔΔCT. Результаты были представлены как процент остаточной мРНК tau по отношению к контрольным клеткам, обработанным PBS. В таблице 3 проиллюстрированы активности отобранных 18-мерных 2'-O-MOE-стерических блокаторов в клетках SH-SY5Y.

Таблица 3: Ингибирование мРНК tau 18-мерными 2'-O-MOE-стерическими блокаторами в клетках SH-SY5Y.

ASO SEQ ID NO % Остаточной мРНК³ 6 5,74 7 6,90 9 8,63 2 9,26 5 9,64 4 14,01 8 14,24 10 15,75 12 26,14 3 29,40 11 34,34 1 37,95

3: % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в клетках, SH-SY5Y, обработанных одной дозой 1000 нМ ASO tau в течение 24 часов, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках, обработанных PBS.

[00144] Стерические блокаторы, которые в значительной степени ингибировали in vitro мРНК tau, тестировали при различных дозах. Культивируемые клетки SH-SY5Y были подвергнуты нуклеофекции под действием 0,125 нM, 0,25 нM, 0,5 нМ, 1000 нМ 2000 нM, 4000 нM и 8000 нM одного выбранного антисмыслового олигонуклеотида. После обработки в течение приблизительно 24 часов сразу получали кДНК и определяли уровни мРНК tau с помощью количественной ПЦР в реальном времени, как описано выше. Полумаксимальную ингибирующую концентрацию (IC50) определяли путем построения кривой доза-ответ и оценки влияния различных концентраций антисмысловых олигонуклеотидов на снижение уровня мРНК Tau. Величины IC50 вычисляли путем определения концентрации, необходимой для ингибирования полумаксимального биологического ответа соединения, и эти величины могут быть использованы в качестве меры активности антисмыслового олигонуклеотида. В Таблице 4 указаны величины IC50 для отобранных 18-мерных 2'-O-MOE-стерических блокаторов.

Таблица 4: IC50 отобранных 18-мерных 2'-O-MOE-стерических блокаторов.

ASO SEQ ID NO IC50 (нМ) 7 65 5 88 6 103 2 200 4 288 10 290 12 430 3 490 11 560 1 590

Пример 4: Ингибирование экспрессии человеческого Tau в клетках SH-SY5Y под действием 12-25-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов

[00145] Стерические блокаторы, которые значительно снижали уровень экспрессии tau, как описано в примерах 2 и 3, были отобраны и получены так, чтобы их длина варьировалась от 12 до 25 нуклеозидов. Эти 12-25-мерные 2'-О-MOE-стерические блокаторы были протестированы в клетках SH-SY5Y. Культивируемые клетки SH-SY5Y были подвергнуты нуклеофекции под действием 2000 нМ выбранного антисмыслового олигонуклеотида. После обработки в течение приблизительно 24 часов сразу получали кДНК и определяли уровни мРНК Tau, как описано выше. В Таблице 5 представлены активности 12-25-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов в клетках SH-SY5Y.

Таблица 5: Ингибирование мРНК Tau в клетках SH-SY5Y под действием 12-25-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов

SEQ ID NO Последовательность ASO⁴ % Остаточной мРНК⁵ Длина ASO Нацеливание на экзон Tau 85 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCAGG^mC^mCGTGT^mC 61,7 25 1 86 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCAGG^mC^mCGTGT 61,6 24 1 87 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCAGG^mC^mCGTG 74,7 23 1 88 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCAGG^mC^mCGT 49,2 22 1 89 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCAGG^mC^mCG 60,2 21 1 90 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCAGG^mC^mC 60,6 20 1 91 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCAGG^mC 67,8 19 1 92 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCAGG 61,6 18 1 93 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCAG 58,7 17 1 94 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mCA 65,4 16 1 95 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT^mC 64,2 15 1 96 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTTT 72,5 14 1 97 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCTT 75,3 13 1 98 GT^mC^mCA^mCTAA^mC^mCT 87,1 12 1 99 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCTTGG^mCTTTT 35,4 25 5 100 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCTTGG^mCTTT 35,3 24 5 101 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCTTGG^mCTT 37,8 23 5 102 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCTTGG^mCT 38,7 22 5 103 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCTTGG^mC 50,2 21 5 104 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCTTGG 49,5 20 5 105 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCTTG 42,2 19 5 106 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCTT 25,2 18 5 107 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCT 15,0 17 5 108 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mC 10,6 16 5 109 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC 14,4 15 5 110 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA 11,9 14 5 111 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTT 19,6 13 5 112 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCT 33,8 12 5 113 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGGAGATGAGAG 39,7 25 11 114 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGGAGATGAGA 41,1 24 11 115 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGGAGATGAG 45,7 23 11 116 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGGAGATGA 54,2 22 11 117 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGGAGATG 53,2 21 11 118 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGGAGAT 63,6 20 11 119 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGGAGA 50,6 19 11 120 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGGAG 51,0 18 11 121 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGGA 38,4 17 11 122 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTGG 41,2 16 11 123 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCTG 45,6 15 11 124 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mCT 46,8 14 11 125 GA^mCTATTTG^mCA^mC^mC 47,5 13 11 126 GA^mCTATTTG^mCA^mC 56,2 12 11 127 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAAATATAAAA 20,0 25 5 128 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAAATATAAA 14,7 24 5 129 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAAATATAA 24,9 23 5 130 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAAATATA 20,3 22 5 131 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAAATAT 24,3 21 5 132 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAAATA 27,2 20 5 133 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAAAT 23,7 19 5 134 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAAA 24,0 18 5 135 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAA 19,8 17 5 136 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAA 17,9 16 5 137 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATA 23,9 15 5 138 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGAT 87,6 14 5 139 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGA 24,6 13 5 140 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTG 23,1 12 5

4. Каждый нуклеотид имеет 2'-O-метоксиэтильную (2'-O-MOE)-модификацию, а ^mC означает 5-метилцитозин. Межнуклеозидные связи являются фосфодиэфирами. Каждый олигонуклеотид имеет линкер (L1), присоединенный к 3'-концу ASO посредством фосфатного мостика, и имеет следующую структуру:

.

5: % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в клетках, SH-SY5Y, обработанных одной дозой 2000 нМ ASO tau в течение 24 часов, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках, обработанных PBS.

[00146] Величины IC50 для выбранных 12-25-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов с фосфодиэфирными межнуклеозидными связями были определены, как описано выше и приведены в Таблице 6.

[00147] Был синтезирован ряд 12-25-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов с фосфортиоатными межнуклеозидными связями, и величины IC50 для некоторых из этих стерических блокаторов представлены в Таблице 7.

Таблица 6: IC₅₀ выбранных 12-25-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов с фосфодиэфирными межнуклеозидными связями.

ASO SEQ ID NO IC₅₀ (нМ) Длина ASO 103 2728 21 105 860 19 106 1793 18 107 838 17 108 791 16 109 512 15 110 728 14 131 682 21 133 1074 19 134 1482 18 135 574 17 136 544 16 137 555 15 138 1153 14 117 25610 21 120 4702 18 121 1002 17 122 1851 16 123 1870 15 124 2970 14

Таблица 7: IC50 выбранных 12-25-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов с фосфортиоатными межнуклеозидными связями.

SEQ ID NO Последовательность ASO⁵ IC50 (нМ) Длина ASO 108 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mC 193 16 111 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTT 353 13 109 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC 426 15 107 G^mCAT^mCGT^mCAG^mCTTA^mC^mCT 579 17 140 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTG 877 12 139 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGA 930 13 135 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAA 1201 17 134 ^mC^mCATG^mCGAG^mCTGATAAAA 1398 18

5. Каждый нуклеотид имеет 2'-O-метоксиэтильную (2'-O-MOE)-модификацию, а ^mC означает 5-метилцитозин. Межнуклеозидные связи являются фосфортиоатами. Каждый олигонуклеотид имеет линкер (L1), присоединенный к 3'-концу ASO посредством фосфатного мостика, и имеет следующую структуру:

.

Пример 5: Ингибирование экспрессии человеческого Tau в клетках SH-SY5Y под действием 17-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов

[00148] 2'-MOE-стерические блокаторы, которые имеют длину 17 нуклеозидов, были сконструированы так, чтобы они были нацелены на конститутивные экзоны в человеческом Tau. Эти 17-мерные 2'-О-MOE-стерические блокаторы были протестированы в клетках SH-SY5Y. Культивируемые клетки SH-SY5Y были подвергнуты нуклеофекции под действием 2000 нМ выбранного антисмыслового олигонуклеотида. После обработки в течение приблизительно 24 часов сразу получали кДНК и определяли уровни мРНК tau, как описано выше. В Таблице 8 представлены активности 17-мерных 2'-О-MOE-стерических блокаторов в клетках SH-SY5Y.

Таблица 8: Ингибирование мРНК tau в клетках SH-SY5Y под действием 17-мерных MOE-стерических блокаторов

SEQ ID NO Последовательность ASO ⁶ % Остаточной мРНК⁷ Нацеливание на экзон Tau 141 AG^mC^mCAT^mC^mCTGGTT^mCAAA 131,7 1 142 ^mCAG^mC^mCAT^mC^mCTGGTTCAA 173,6 1 143 T^mCAG^mC^mCAT^mC^mCTGGTT^mCA 148,3 1 144 ^mCT^mCAG^mC^mCAT^mC^mCTGGTT^mC 127,7 1 145 GG^mC^mCAG^mCGT^mC^mCGTGT^mCA 115,9 1 146 G^mC^mCAG^mCGT^mC^mCGTGT^mCA^mC 103,6 1 147 ^mC^mCAG^mCGT^mC^mCGTGT^mCA^mC^mC 96,5 1 148 ^mCAG^mCGT^mC^mCGTGT^mCA^mC^mC^mC 121,9 1 149 GT^mCT^mC^mCAATG^mC^mCTG^mCTT 125,7 4 150 TGT^mCT^mC^mCAATG^mC^mCTG^mCT 120,5 4 151 GTGT^mCT^mC^mCAATG^mC^mCTG^mC 43,5 4 152 GGTGT^mCT^mC^mCAATG^mC^mCTG 114,1 4 153 T^mCA^mCGTGA^mC^mCAG^mCAG^mCT 105,1 4 154 ^mCA^mCGTGA^mC^mCAG^mCAG^mCTT 109,1 4 155 A^mCGTGA^mC^mCAG^mCAG^mCTT^mC 114,6 4 156 ^mCGAAG^mCTG^mCTGGT^mCA^mCG 135,5 4 157 TTTG^mCTTTTA^mCTGA^mC^mCA 18,9 5 158 ^mCTTTG^mCTTTTA^mCTGA^mC^mC 6,8 5 159 T^mCTTTG^mCTTTTA^mCTGA^mC 14,2 5 160 GT^mCTTTG^mCTTTTA^mCTGA 68,2 5 161 TTTTTTGT^mCATCG^mCTT^mC 18,5 5 162 TTTTTGT^mCAT^mCG^mCTT^mC^mC 20,0 5 163 TTTTGT^mCAT^mCG^mCTT^mC^mCA 24,4 5 164 TTTGT^mCAT^mCG^mCTT^mC^mCAG 30,5 5 165 AT^mCTT^mCGTTTTA^mC^mCAT^mC 110,1 7 166 GAT^mCTT^mCGTTTTA^mC^mCAT 111,2 7 167 ^mCGAT^mCTT^mCGTTTTA^mC^mCA 108,4 7 168 G^mCGAT^mCTT^mCGTTTTA^mC^mC 131,1 7 169 TGGGTGGTGT^mCTTTGGA 104,6 7 170 GGGTGGTGT^mCTTTGGAG 101,6 7 171 GGTGGTGT^mCTTTGGAG^mC 105,3 7 172 GTGGTGT^mCTTTGGAG^mCG 107,4 7 173 AT^mC^mC^mC^mCTGATTTTGGAG 130,3 9 174 GAT^mC^mC^mC^mCTGATTTTGGA 117,8 9 175 ^mCGAT^mC^mC^mC^mCTGATTTTGG 99,7 9 176 G^mCGAT^mC^mC^mC^mCTGATTTTG 116,1 9 177 G^mC^mCT^mC^mC^mCGG^mCTGGTG^mCT 129,8 9 178 ^mC^mCT^mC^mC^mCGG^mCTGGTG^mCTT 135,7 9 179 ^mCT^mC^mC^mCGG^mCTGGTG^mCTT^mC 133,8 9 180 T^mC^mC^mCGG^mCTGGTG^mCTT^mCA 153,5 9 181 A^mCTGGTTTGTAGA^mCTAT 32,6 11 182 AA^mCTGGTTTGTAGA^mCTA 51,5 11 183 ^mCAA^mCTGGTTTGTAGA^mCT 29,4 11 184 T^mCAA^mCTGGTTTGTAGA^mC 28,2 11 185 TATGATGGATGTTG^mC^mCT 41,7 11 186 ATGATGGATGTTG^mC^mCTA 46,4 11 187 TGATGGATGTTG^mC^mCTAA 40,9 11 188 GATGGATGTTG^mC^mCTAAT 53,6 11 189 TTTTA^mCTT^mC^mCA^mC^mCTGG^mC 130,4 12 190 ATTTTA^mCTT^mC^mCA^mC^mCTGG 111,2 12 191 GATTTTA^mCTT^mC^mCA^mC^mCTG 119,6 12 192 AGATTTTA^mCTT^mC^mCA^mC^mCT 123,1 12 193 ATTT^mC^mCT^mC^mCG^mC^mCAGGGA 78,0 12 194 TTT^mC^mCT^mC^mCG^mC^mCAGGGA^mC 76,1 12 195 TT^mC^mCT^mC^mCG^mC^mCAGGGA^mCG 71,5 12 196 T^mC^mCT^mC^mCG^mC^mCAGGGA^mCGT 89,0 12 197 AAGGT^mCAG^mCTTGTGGGT 62,1 13 198 GAAGGT^mCAG^mCTTGTGGG 49,9 13 199 GGAAGGT^mCAG^mCTTGTGG 59,3 13 200 ^mCGGAAGGT^mCAG^mCTTGTG 51,9 13 201 A^mC^mC^mCTG^mCTTGG^mC^mCAGGG 116,5 13 202 ^mC^mC^mCTG^mCTTGG^mC^mCAGGGA 106,1 13 203 ^mC^mCTG^mCTTGG^mC^mCAGGGAG 105,3 13 204 ^mCTG^mCTTGG^mC^mCAGGGAGG 133,6 13

6. Каждый нуклеотид имеет 2'-O-MOE-модификацию, а ^mC означает 5-метилцитозин. Межнуклеозидные связи являются фосфордиэфирами. Каждый олигонуклеотид имеет линкер (L1), присоединенный к 3'-концу ASO посредством фосфатного мостика, и имеет следующую структуру:

.

7: % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в клетках SH-SY5Y, обработанных одной дозой 2000 нМ ASO tau в течение 24 часов, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках, обработанных PBS.

Пример 6: Ингибирование экспрессии человеческого Tau в клетках Huh7 посредством 5-10-5-гапмеров

[00149] Последовательности антисмысловых олигонуклеотидов были сконструированы так, чтобы они были комплементарны самой короткой изоформе tau, то есть, мРНК варианта транскрипта 4 (GenBank: NM_016841.4). Анализы BLAST проводили для каждой олигонуклеотидной последовательности во избежание гибридизации с молекулой, не являющейся мишенью. Недавно сконструированные модифицированные химерные антисмысловые олигонуклеотиды представляли собой 5-10-5-гапмеры длиной 20 нуклеозидов, где центральный гэп-сегмент содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов и фланкирован сегментами крыла в 5'-направлении и в 3'-направлении, включающими пять нуклеозидов, каждый из которых имеет 2'-O-МОE-модификацию сахара рибозы. Межнуклеозидными связями в каждом гапмере являются фосфортиоатные (Р=S) связи.

[00150] Гапмеры, нацеленные на tau, были протестированы на ингибирование экспрессии мРНК человеческого tau in vitro. Клетки Huh7 высевали при плотности 10000 клеток на лунку и трансфецировали реагентом OptiFect (Lifetech Cat# 12579-017) под действием 25 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После обработки в течение 48 часов, кДНК непосредственно выделяли из культивированных клеток с использованием мультиплексного набора для клеток Fastlane (Qiagen Cat # 216513). Уровни мРНК tau измеряли с помощью количественной ПЦР в реальном времени в дуплексной ОТ-ПЦР с использованием зондов TaqMan, специфичных к человеческому MAPT (LifeTech AssayID # Hs00902194_m1: FAM-MGB) и человеческому TBP (белку, связывающемуся с TATA-боксом), используемому в качестве эндогенного контроля (LifeTech Cat # 4326322E). Все данные были скорректированы по количеству исходной кДНК, а уровни мРНК tau нормализованы по уровням эндогенного эталонного гена ТВР. Ген tau и контрольный ген ТВР амплифицировали в одной и той же реакции ПЦР с аналогичной высокой эффективностью, что позволяло проводить относительную количественную оценку методом ΔΔCT. Результаты представлены как процент остаточной мРНК tau по отношению к контрольным клеткам, обработанным PBS. В Таблице 9 проиллюстрированы активности этих гапмеров в клетках Huh7.

Таблица 9: Ингибирование мРНК Tau посредством 5-10-5-MOE-гапмеров в клетках Huh7

SEQ ID NO Последовательность ASO⁸ % Остаточной мРНК⁹ 205 C*C*G*T*A*CGTCCCAGCGT*G*A*T*C* 22,5 206 G*G*C*T*C*AGCCATCCTGG*T*T*C*A* 26,4 207 C*C*C*G*T*ACGTCCCAGCG*T*G*A*T* 29 208 G*G*T*T*G*ACATCGTCTGC*C*T*G*T* 29,1 209 G*G*G*C*T*CAGCCATCCTG*G*T*T*C* 30,1 210 G*G*C*C*A*GCGTCCGTGTC*A*C*C*C* 32,8 211 G*G*C*T*C*TCCCAGCGGCA*A*G*G*A* 32,8 212 C*C*C*T*C*TTGGTCTTGGT*G*C*A*T* 33,2 213 C*G*G*G*A*CCTGCCTCCCA*G*A*C*C* 33,6 214 G*C*T*G*G*TCTCTGTTGGG*T*C*C*C* 34,5 215 G*G*G*C*T*CTCTCCATGTC*A*A*C*A* 34,6 216 G*G*T*C*T*CTGTTGGGTCC*C*A*G*G* 34,9 217 G*G*G*A*C*CTGCCTCCCAG*A*C*C*C* 35,2 218 C*C*C*A*A*CCCGTACGTCC*C*A*G*C* 37,4 219 G*C*T*T*C*GTCTTCCAGGC*T*G*G*G* 39 220 C*C*G*T*G*TCACCCTCTTG*G*T*C*T* 40,8 221 C*T*T*G*G*CTCTCCCAGCG*G*C*A*A* 40,8 222 C*G*G*C*C*TCCTTAGCTGC*T*A*G*A* 41,7 223 C*A*G*C*G*TCCGTGTCACC*C*T*C*T* 42,8 224 G*C*T*C*A*GCCATCCTGGT*T*C*A*A* 42,9 225 C*C*T*G*G*ACTTTGCCTTC*C*C*T*T* 43,5 226 G*T*C*C*C*ACTCTTGTGCC*T*G*G*A* 44,1 227 A*C*C*T*G*GCCACCTCCTG*G*T*T*T* 45 228 T*T*G*G*C*TTTGGCGTTCT*C*G*C*G* 45,1 229 C*G*C*T*T*CCAGTCCCGTC*T*T*T*G* 46,4 230 G*G*T*G*A*TCACCTCTGCC*C*T*C*G* 46,4 231 G*G*T*A*C*CTCCTGCAACC*A*A*C*C* 47,7 232 C*A*C*G*T*GGCTTCCTCTC*C*C*A*C* 49,4 233 G*C*G*T*C*CGTGTCACCCT*C*T*T*G* 50,6 234 C*A*C*C*C*TCTTGGTCTTG*G*T*G*C* 52,3 235 G*T*C*C*C*AGCGTGATCTT*C*C*A*T* 52,5 236 G*C*C*A*G*CACTGATCACC*C*T*A*A* 53,1 237 T*G*G*T*C*TCTGTTGGGTC*C*C*A*G* 53,6 238 C*C*G*C*C*TCCCGGCTGGT*G*C*T*T* 55,6 239 G*G*C*C*A*CACGAGTCCCA*G*T*G*T* 58,2 240 G*T*C*C*C*TCAGGGTTGCC*T*T*T*A* 58,5 241 G*G*A*C*C*ACTGCCACCTT*C*T*T*G* 58,8 242 C*A*C*C*T*GGCCACCTCCT*G*G*T*T* 58,9 243 C*C*C*G*C*CTCCCGGCTGG*T*G*C*T* 59,7 244 G*G*T*G*C*CTTGCCCTTCC*A*T*C*C* 60,3 245 C*C*C*G*T*CACACTCACAC*A*A*G*G* 61,1 246 C*C*C*A*A*TCCCTGCTGTG*G*T*C*G* 61,4 247 G*G*G*T*C*CCACTCTTGTG*C*C*T*G* 62,9 248 G*C*T*T*C*CAGTCCCGTCT*T*T*G*C* 63 249 C*C*C*T*T*CTCCCACAGGC*T*G*C*C* 63,1 250 C*T*G*G*T*GCCACCACTGA*C*A*A*C* 63,2 251 G*C*C*A*C*TGCCTCTGTGA*C*A*C*C* 63,3 252 G*T*G*C*C*ACCACTGACAA*C*C*A*A* 63,5 253 C*T*T*G*C*CCTTCCATCCT*G*G*T*G* 63,7 254 G*C*C*T*G*GACTTTGCCTT*C*C*C*T* 64,3 255 G*C*C*T*C*TAACTCCGTGG*C*T*G*C* 65,1 256 G*A*T*C*C*CAGAGCCTTCC*G*T*A*T* 66,3 257 C*A*T*C*C*TCGCGCCGCAA*G*C*C*A* 66,7 258 G*C*C*T*C*CCGGCTGGTGC*T*T*C*A* 66,8 259 G*T*G*C*C*TGGACTTTGCC*T*T*C*C* 67,1 260 C*T*G*C*C*ACTGCCTCTGT*G*A*C*A* 69,7 261 C*C*T*G*G*CCACCTCCTGG*T*T*T*A* 70,3 262 G*G*G*T*G*CCTTGCCCTTC*C*A*T*C* 71,1 263 C*C*A*C*T*CCCACTTCTTG*T*G*C*T* 71,8 264 G*T*G*C*T*TCAGGCCTTCG*T*C*A*C* 74,6 265 C*T*G*^mC*C*AGCTTGCCTTC*T*C*T*T* 75,9 266 C*T*C*C*C*GGCTGGTGCTT*C*A*G*G* 76,2 267 C*G*C*C*T*CCCGGCTGGTG*C*T*T*C* 78 268 C*T*G*G*C*CACCTCCTGGT*T*T*A*T* 78,7 269 G*G*C*C*A*CCTCCTGGTTT*A*T*G*A* 79,1 270 C*C*A*T*C*CTGGTGCCACC*A*C*T*G* 82,9 271 C*C*T*G*C*CAGCTTGCCTT*C*T*C*T* 83,7 272 A*A*T*C*C*CTGCTGTGGTC*G*C*A*G* 83,7 273 G*C*C*A*C*CACTGACAACC*A*A*G*A* 84,1 274 C*T*T*G*T*CGGCCATGAT*A*T*A*G* 87,7 275 T*A*A*G*C*AGTGGGTTCTC*T*A*G*T* 88 276 C*C*T*C*C*CGGCTGGTGCT*T*C*A*G* 88,8 277 C*T*C*C*T*GCCAGCTTGCC*T*T*C*T* 92,2 278 C*T*T*C*T*CCTCCGGCCAC*T*A*G*T* 93,6 279 C*T*C*C*T*CCGGCCACTAG*T*G*G*G* 94,2 280 C*C*T*T*C*TCCTCCGGCCA*C*T*A*G* 94,9 281 G*A*G*C*C*TTCTCCTCCGG*C*C*A*C* 105,7 282 G*C*C*T*T*CTCCTCCGGCC*A*C*T*A* 112,5 283 C*C*T*T*A*CCTGCTAGCTG*G*C*G*T* 128,7

8. Нуклеотиды с * имеют модификации 2'-O-МOE; нуклеотиды без * представляют собой 2'-дезоксинуклеозиды. Межнуклеозидными связями являются фосфортиоатные связи.

9: % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в клетках Huh7, обработанных одной дозой 25 нМ ASO tau в течение 48 часов, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках Huh7, обработанных PBS.

Пример 7: Ингибирование экспрессии человеческого Tau в клетках SH-SY5Y под действием 5-10-5-гапмеров

[00151] Гапмеры, которые значительно снижают уровень экспрессии мРНК tau, как описано в примере 6, были отобраны и протестированы в клетках SH-SY5Y. Культивируемые клетки SH-SY5Y подвергали нуклеофекции под действием 2000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После обработки в течение приблизительно 24 часов, кДНК непосредственно выделяли из культивированных клеток с использованием мультиплексного набора для клеток Fastlane (Qiagen Cat # 216513). Уровни мРНК tau были измерены с помощью количественной ПЦР в реальном времени с использованием дуплексной ОТ-ПЦР. Были использованы зонды Taqman, специфичные к человеческому MAPT (Lifetech AssaylD # Hs00902194_ml: FAM-MGB) и человеческому GAPDH (LifeTech AssayID # Hs02758991_g1: VIC-MGB). Все данные были скорректированы по количеству исходной кДНК, а уровни мРНК tau нормализованы по уровням эндогенного эталонного гена GAPDH. Ген tau и контрольный ген GAPDH амплифицировали в одной и той же реакции ПЦР с аналогичной высокой эффективностью, что позволяло проводить относительную количественную оценку методом ΔΔCT. Результаты представлены как процент остаточной мРНК tau по отношению к контрольным клеткам, обработанным PBS. В таблице 10 проиллюстрированы активности отобранных 5-10-5-гапмеров в клетках SH-SY5Y. Величины IC₅₀ для отобранных 5-10-5-гапмеров с 5-метилцитозинами определяли в клетках SH-SY5Y как описано выше, и эти величины представлены в Таблице 11.

Таблица 10: Ингибирование мРНК Tau под действием 5-10-5-гапмеров в клетках SH-SY5Y

ASO SEQ ID NO % Остаточной мРНК¹⁰ 204 3,0 205 7,6 202 10,7 203 15,3 208 19,2 207 24,6 209 34,3 210 46,9 206 51,4 211 62,1 201 83,2

10: % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в клетках SH-SY5Y, обработанных одной дозой 2000 нМ ASO tau в течение 24 часов, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках, обработанных PBS.

Таблица 11: IC50 выбранных 5-10-5-гапмеров с 5-метилцитозином в клетках SH-SY5Y

SEQ ID NO Последовательность ASO¹¹ IC₅₀ (нМ) 284 ^mC*^mC*G*T*A*^mCGT^mC^mC^mCAG^mCGT*G*A*T*^mC* 331 285 G*G*T*T*G*A^mCAT^mCGT^mCTG^mC*^mC*T*G*T* 170 286 G*G*G*^mC*T*^mCAG^mC^mCAT^mC^mCTG*G*T*T*^mC* 268 287 G*G*^mC*T*^mC*T^mC^mC^mCAG^mCGG^mCA*A*G*G*A* 78 288 ^mC*^mC*^mC*T*^mC*TTGGT^mCTTGGT*G*^mC*A*T* 366 289 G*^mC*T*G*G*T^mCT^mCTGTTGGG*T*^mC*^mC*^mC* 133 290 G*T*^mC*^mC*^mC*A^mCT^mCTTGTG^mC^mC*T*G*G*A* 458 291 G*G*G*^mC*T*^mCT^mCT^mC^mCATGT^mC*A*A*^mC*A* 118

11. Нуклеотиды с * имеют модификацию 2'-O-МOE; нуклеотиды без * представляют собой 2'-дезоксинуклеозиды, а ^mC означает 5-метилцитозин. Межнуклеозидными связями являются фосфортиоатные связи.

Пример 8: Характеризация антисмыслового олигонуклеотида, нацеленного на MAPT

[00152] Антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на MAPT, были охарактеризованы на оборудовании Thermo Scientific для высокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Этот метод был применен для подтверждения предполагаемых масс антисмыслового олигонуклеотида (ASO) и получения информации о чистоте образца и идентификации основных присутствующих компонентов. Так, например, антисмысловой олигонуклеотид, содержащий SEQ ID NO: 284, имеет структуру, показанную на фиг. 1А и формулу C₂₃OH₃₂₁N₇₂O₁₂₀P₁₉S₁₉. Таким образом, предполагаемая молекулярная масса ASO, содержащего SEQ ID NO: 284, составляет приблизительно 7212,3 Да. На фиг. 1В представлена масса пиков для ASO, содержащего SEQ ID NO: 284, как было измерено с помощью ЖХ-МС, и эта масса составляет 7214,3 Да. На фиг. 1С показан пик обратной свертки для ASO, содержащего SEQ ID NO: 284, как было измерено с помощью ЖХ-МС.

[00153] Антисмысловой олигонуклеотид, содержащий SEQ ID NO: 285, имеет формулу С₂₃₀N₆₉О₁₂₄Р₁₉S₁₉H₃₁₈ с предполагаемой молекулярной массой 7231,11 Дa. На фиг. 1D представлена масса пиков для ASO, содержащего SEQ ID NO: 285, как было измерено с помощью ЖХ-МС, и эта масса составляет 7232,5 Да. На фиг. 1Е показан пик обратной свертки для ASO, содержащего SEQ ID NO: 285, как было измерено с помощью ЖХ-МС.

Пример 9: Тестирование in vivo гапмеров, нацеленных на MAPT

Получение мышей, трансгенных по человеческому Tau (hTau)

[00154] Векторы BAC (pBACe3.6), содержащие человеческий ген tau MAPT, были получены из человеческих геномных библиотек, поставляемых компанией Life Technologies. Три вектора, предположимтельно содержащие все регуляторные области гена MAPT, были подверпгнуты скринингу. Человеческую геномную ДНК подвергали стандартной ПЦР для анализа на присутствие каждого экзона и праймеров, охватывающих интроны гена человеческого tau, а регуляторные области также использовали для определения последовательности клонов. Сравнение с человеческой ДНК показало, что один клон (RP11 669E14) был интактным для всех частей гена tau. Этот вектор BAC был использован для получения hTau-трансгенных мышей BAC. Очищенную ДНК вводили в оплодотворенные эмбрионы мышей C57BL/6. Хвостовую часть ДНК, выделенную у детенышей, гидролизовали рестриктирующими ферментами и гибридизовали с экзон-специфическими зондами с использованием аналогичным образом гибридизованной человеческой ДНК в качестве контроля для анализа на целостность трансгена. Было получено потомство позитивных детенышей. Было получено несколько hTau-трансгенных линий BAC, и одна линия указывала на экспрессию мРНК и белка человеческого MAPT (фиг. 2A-2C). Эта линия экспрессировала все шесть транскриптов и изоформ белков, присутствующих в человеческом головном мозге (фиг. 2A-2C). Гетерозиготные hTau-трансгенные мыши BAC несут одну копию трансгена и имеют уровни экспрессии РНК и белка человеческого tau, сравнимые с уровнем экспрессии эндогенного мышиного Tau.

In vitro ингибирование человеческого Tau под действием антисмысловых олигонуклеотидов

[00155] Отобранные антисмысловые олигонуклеотиды были протестированы in vivo. Группам из пяти hTau-трансгенных мышей BAC вводили 1, 10, 50, 200 или 400 мкг отобранного антисмыслового олигонуклеотида с помощью интрацеребровентрикулярной инъекции (ICV) ударной дозы, а группу контрольных мышей не обрабатывали. Все процедуры проводили под анестезией изофлураном в соответствии с требованиями IACUC. Для ICV-инъекции ударной дизы, антисмысловой олигонуклеотид вводили в правый боковой желудочек hTau-трансгенных мышей BAC. Затем инъецировали два или четыре микролитра раствора PBS, содержащего 100 мкг/мкл олигонуклеотида. Ткани собирали непосредственно через 1 час, 4 часа, 24 часа, 2 недели, 4 недели, 12 недель или 24 недели после введения олигонуклеотида. РНК экстрагировали из гиппокампа или коры головного мозга и оценивали на экспрессию мРНК человеческого tau с помощью ПЦР-анализа в реальном времени. Уровни мРНК человеческого tau оценивали как описано выше. Результаты вычисляли как процент ингибирования экспрессии мРНК человеческого tau, нормализованный по уровням GAPDH по сравнению с контрольными необработанными мышами. Белок экстрагировали из гиппокампа или коры головного мозга и оценивали на уровень экспрессии белка человеческого tau с помощью ELISA, а затем нормализовали по уровню общего белка.

[00156] In vivo активность 5-10-5-гапмеров, содержащих SEQ ID NO: 284 или SEQ ID NO: 285, была протестирована методами, описанными выше. Как показано в таблице 12, оба антисмысловых олигонуклеотида в значительной степени ингибировали экспрессию мРНК человеческого tau в коре головного мозга и в гиппокампе через 2 недели после одной ICV-инъекции антисмысловых олигонуклеотидов. Ингибирование мРНК человеческого tau составляло приблизительно 65% в коре головного мозга и гиппокампе для гапмеров, содержащих SEQ ID NO: 285. Ингибирование мРНК человеческого tau составляло приблизительно 42% в коре головного мозга и в гиппокампе для гапмеров, содержащих SEQ ID NO: 284. Что касается уровня белка tau через 2 недели после ASO-обработки, то было обнаружено, что гапмер, содержащий SEQ ID NO: 285, ингибировал экспрессию белка tau в коре головного мозга приблизительно на 50%; а гапмер, содержащий SEQ ID NO: 284, ингибировал экспрессию белка tau в коре головного мозга приблизительно на 36%. Авторами не было обнаружено какого-либо значимого снижения уровня белка tau в гиппокампе через две недели после ASO-обработки.

Таблица 12: Ингибирование экспрессии мРНК и белка Tau под действием 5-10-5-MOE-гапмеров in vivo

ASO SEQ ID NO % Остаточной мРНК tau через две недели после ASO-обработки¹² % Остаточного белка tau через две недели после ASO-обработки¹³ Кора головного мозга Гиппокамп Кора головного мозга Гиппокамп 285 35,26 33,55 50,8 91,1 284 58,8 56,77 64 100

12: % Остаточной мРНК tau означает уровень мРНК tau в указанной ткани головного мозга hTau-трансгенных мышей BAC через две недели после одной ICV-инъекции указанного ASO, по сравнению с уровнем мРНК tau в соответствующей ткани головного мозга контрольных hTau-трансгенных мышей BAC, которые не были обработаны ASO.

13:% % Остаточного белка tau означает уровень белка tau в указанной ткани головного мозга hTau-трансгенных мышей BAC через две недели после одной ICV-инъекции указанного ASO, по сравнению с уровнем белка tau в соответствующей ткани головного мозга контрольных hTau-трансгенных мышей BAC, которые не были обработаны ASO.

[00157] Уровни мРНК и белка tau также тестировали через 4 недели после одной ICV-инъекции гапмеров. Антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие SEQ ID NO: 285, в значительной степени ингибировали экспрессию мРНК (фиг. 2D) и белка (фиг. 2Е) человеческого tau в головном мозге. Ингибирование мРНК человеческого tau составляло приблизительно 60% в коре головного мозга и в гиппокампе для гапмера, содержащего SEQ ID NO: 285 (фиг. 2D, данные не приводятся). Вестерн-блот-анализ показал, что гапмер, содержащий SEQ ID NO: 285, ингибировал уровень белка человеческого tau приблизительно на 50% в гиппокампе через 4 недели после обработки (Фиг. 2Е).

[00158] Для детектирования распределения антисмысловых олигонуклеотидов в головном мозге hTau-трансгенных мышей BAC, проводили эксперименты по гибридизации in situ с использованием зонда на основе блокированной нуклеиновой кислоты, меченной двумя молекулами дигоксигенина (DIG) (LNA™, Exiqon). Зонды LNA с двойной DIG-меткой, комплементарные антисмысловым олигонуклеотидам-мишеням, гибридизовали в течение ночи. Затем зонды детектировали с использованием овечьего анти-DIG антитела, конъюгированого с щелочной фосфатазой (Roche Diagnostics, Cat. # 11093274910), и проводили колориметрическую реакцию с использованием нитротетразолиевого синего, связанного со щелочной фосфатазой, субстратом которой является 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат (BCIP). Распределение антисмыслового олигонуклеотида SEQ ID NO: 285 в головном мозге, оцениваемое в репрезентативном эксперименте, проиллюстрировано на фиг. 3, где показана начальная диффузия ASO из желудочков в паренхиму мышиного головного мозга, при этом, сигнал распределения не изменялся за период времени от 24 часов до 2 недель (Фиг. 3). Антисмысловый олигонуклеотид оставался стабильным в головном мозге даже через 4 недели (данные не приводятся).

[00159] Наблюдалось дозозависимое ингибирование экспрессии мРНК (фиг. 4A) и белка (Фиг. 4В) человеческого tau у hTau-трансгенных мышей BAC под действием антисмыслового олигонуклеотида SEQ ID NO: 285 (фиг 4A и 4B).

[00160] Мониторинг длительности уровня экспрессии мРНК (фиг. 5A) и белка (Фиг. 5В) человеческого tau у hTau-трансгенных мышей BAC после одной ICV-инъекции 200 мкг антисмыслового олигонуклеотида SEQ ID NO: 285 указывал на длительное ингибирование экспрессии мРНК и белка tau вплоть до 12 недель под действием антисмыслового олигонуклеотида SEQ ID NO: 285 (фиг. 5А и 5В).

Пример 10: Ингибирование экспрессии человеческого Tau в клетках Huh7 и SH-SY5Y под действием дополнительных 5-10-5-гапмеров, содержащих 5-метилцитозин

[00161] Дополнительные последовательности гапмеров с 5-метилцитозином, нацеленные на tau, были проанализированы на ингибирование экспрессии человеческой мРНК tau in vitro в клетках Huh7 и SH-SY5Y, как описано выше. Результаты представлены как процент остаточной мРНК tau по отношению к контрольным клеткам, обработанным PBS. В Таблице 13 указаны активности дополнительных скринированных последовательностей 5-10-5-гапмеров в клетках Huh7 и SH-SY5Y.

Таблица 13: Ингибирование мРНК Tau под действием 5-10-5-MOE-гапмеров в клетках HuH7 и SH-SY5Y

SEQ ID NO Последовательность ASO¹⁴ % Остаточной мРНК в клетках SHSY5Y¹⁵ % Остаточной мРНК в клетках Huh7¹⁶ 307 G*^mC*^mC*^mC*T*T^mCTGG^mC^mCTGGA*G*G*G*G* 66,8 34,7 308 T*G*G*^mC*^mC*^mCTT^mCTGG^mC^mCTG*G*A*G*G* 57,7 41,1 309 G*^mC*T*G*G*TG^mCTT^mCAGGTT*^mC*T*^mC*A* 60,4 42,7 310 T*^mC*A*G*G*T^mCAA^mCTGGTTT*G*T*A*G* 30,5 37,3 311 T*G*^mC*T*^mC*AGGT^mCAA^mCTGG*T*T*T*G* 42,6 35,5 312 T*T*G*^mC*T*^mCAGGT^mCAA^mCTG*G*T*T*T* 44,9 44,7 313 ^mC*^mC*T*T*G*^mCT^mCAGGT^mCAA^mC*T*G*G*T* 10,3 20,9 314 ^mC*^mC*^mC*T*^mC*TT^mCTA^mCATGGA*G*G*G*G* 67,7 51,3 315 T*T*^mC*T*^mC*^mC^mCT^mCTT^mCTA^mCA*T*G*G*A* 76,7 95,1 316 ^mC*T*T*^mC*T*^mC^mC^mCT^mCTT^mCTA^mC*A*T*G*G* 68,2 77,6 317 ^mC*^mC*T*T*^mC*T^mC^mC^mCT^mCTT^mCTA*^mC*A*T*G* 50,4 72,3 318 ^mC*A*A*A*T*^mC^mCTTTGTTG^mCT*G*^mC*^mC*A* 33,6 54,4 319 T*^mC*A*A*A*T^mC^mCTTTGTTG^mC*T*G*^mC*^mC* 28,5 44,5 320 T*G*G*^mC*T*^mC^mCA^mCGAA^mCA^mCA*^mC*^mC*A*A* 24,2 55,1 321 G*T*G*G*^mC*T^mC^mCA^mCGAA^mCA^mC*A*^mC*^mC*A* 22,9 51,6 322 T*G*T*G*G*^mCT^mC^mCA^mCGAA^mCA*^mC*A*^mC*^mC* 25,4 62,4 323 ^mC*T*G*T*G*G^mCT^mC^mCA^mCGAA^mC*A*^mC*A*^mC* 31,1 49,2 324 ^mC*^mC*T*G*T*GG^mCT^mC^mCA^mCGAA*^mC*A*^mC*A* 34,8 56,7 325 G*^mC*^mC*T*G*TGG^mCT^mC^mCA^mCGA*A*^mC*A*^mC* 31,4 51,3 326 T*G*^mC*^mC*T*GTGG^mCT^mC^mCA^mCG*A*A*^mC*A* 24,2 50,2 327 ^mC*T*G*^mC*^mC*TGTGG^mCT^mC^mCA^mC*G*A*A*^mC* 18,9 56,7 328 T*^mC*T*G*^mC*^mCTGTGG^mCT^mC^mCA*^mC*G*A*A* 25,0 43,7 329 G*T*^mC*T*G*^mC^mCTGTGG^mCT^mC^mC*A*^mC*G*A* 10,1 35,5 330 ^mC*G*T*^mC*T*G^mC^mCTGTGG^mCT^mC*^mC*A*^mC*G* 12,6 37,9 331 T*^mC*G*T*^mC*TG^mC^mCTGTGG^mCT*^mC*^mC*A*^mC* 9,1 44,6 332 A*T*^mC*G*T*^mCTG^mC^mCTGTGG^mC*T*^mC*^mC*A* 18,8 55,4 333 ^mC*A*T*^mC*G*T^mCTG^mC^mCTGTGG*^mC*T*^mC*^mC* 17,1 62,3 334 A*^mC*A*T*^mC*GT^mCTG^mC^mCTGTG*G*^mC*T*^mC* 14,3 57,7 335 G*A*^mC*A*T*^mCGT^mCTG^mC^mCTGT*G*G*^mC*T* 11,7 33,5 336 T*G*A*^mC*A*T^mCGT^mCTG^mC^mCTG*T*G*G*^mC* 15,2 38,4 337 T*T*G*A*^mC*AT^mCGT^mCTG^mC^mCT*G*T*G*G* 26,2 43,3 338 G*T*T*G*A*^mCAT^mCGT^mCTG^mC^mC*T*G*T*G* 18,0 44,5 285 G*G*T*T*G*A^mCAT^mCGT^mCTG^mC*^mC*T*G*T* 17,2 42,7 339 A*G*G*T*T*GA^mCAT^mCGT^mCTG*^mC*^mC*T*G* 23,4 48,9 340 A*A*G*G*T*TGA^mCAT^mCGT^mCT*G*^mC*^mC*T* 17,2 38,6 341 ^mC*A*A*G*G*TTGA^mCAT^mCGT^mC*T*G*^mC*^mC* 25,7 47,4 342 A*^mC*A*A*G*GTTGA^mCAT^mCGT*^mC*T*G*^mC* 24,3 43,0 343 ^mC*A*^mC*A*A*GGTTGA^mCAT^mCG*T*^mC*T*G* 28,9 52,9 344 A*^mC*A*^mC*A*AGGTTGA^mCAT^mC*G*T*^mC*T* 23,0 51,4 345 ^mC*A*^mC*A*^mC*AAGGTTGA^mCAT*^mC*G*T*^mC* 33,5 78,2 346 T*^mC*A*^mC*A*^mCAAGGTTGA^mCA*T*^mC*G*T* 44,4 60,4 347 ^mC*T*^mC*A*^mC*A^mCAAGGTTGA^mC*A*T*^mC*G* 35,4 67,6 348 A*^mC*T*^mC*A*^mCA^mCAAGGTTGA*^mC*A*T*^mC* 61,9 66,1 349 ^mC*A*^mC*T*^mC*A^mCA^mCAAGGTTG*A*^mC*A*T* 67,3 72,0 350 A*^mC*A*^mC*T*^mCA^mCA^mCAAGGTT*G*A*^mC*A* 64,0 72,7 351 ^mC*A*^mC*A*^mC*T^mCA^mCA^mCAAGGT*T*G*A*^mC* 46,3 64,8 352 T*^mC*A*^mC*A*^mCT^mCA^mCA^mCAAGG*T*T*G*A* 55,9 73,2 353 G*T*^mC*A*^mC*A^mCT^mCA^mCA^mCAAG*G*T*T*G* 31,9 53,3 354 ^mC*G*T*^mC*A*^mCA^mCT^mCA^mCA^mCAA*G*G*T*T* 29,1 57,6 355 ^mC*^mC*G*T*^mC*A^mCA^mCT^mCA^mCA^mCA*A*G*G*T* 33,5 57,7 356 ^mC*^mC*^mC*^mC*G*T^mCA^mCA^mCT^mCA^mCA*^mC*A*A*G* 33,3 70,1 357 ^mC*^mC*^mC*T*T*^mCT^mC^mC^mCA^mCAGG^mC*T*G*^mC*^mC* 40,3 65,4 358 ^mC*A*T*^mC*A*AGGT^mCAGT^mCTT*T*T*^mC*T* 43,5 61,8 359 ^mC*^mC*A*A*^mC*^mCTT^mCAGAA^mCT^mC*A*A*T*A* 30,7 71,0 360 T*^mC*^mC*A*A*^mC^mCTT^mCAGAA^mCT*^mC*A*A*T* 30,7 77,6 361 T*T*^mC*^mC*A*A^mC^mCTT^mCAGAA^mC*T*^mC*A*A* 29,7 66,5 362 G*T*T*^mC*^mC*AA^mC^mCTT^mCAGAA*^mC*T*^mC*A* 22,9 72,7 363 A*G*T*T*^mC*^mCAA^mC^mCTT^mCAGA*A*^mC*T*^mC* 47,6 66,5 364 ^mC*A*G*T*T*^mC^mCAA^mC^mCTT^mCAG*A*A*^mC*T* 63,6 70,0 365 G*^mC*A*G*T*T^mC^mCAA^mC^mCTT^mCA*G*A*A*^mC* 28,6 47,6 366 G*T*^mC*^mC*^mC*AGGT^mCTG^mCAAA*G*T*G*G* 18,1 41,7 367 A*A*G*T*^mC*^mC^mCAGGT^mCTG^mCA*A*A*G*T* 48,5 68,1 368 A*A*A*G*T*^mC^mC^mCAGGT^mCTG^mC*A*A*A*G* 53,0 73,7 369 G*G*^mC*A*^mC*AAGT^mC^mCTTA^mCA*A*A*G*A* 43,7 80,9 370 A*G*G*^mC*A*^mCAAGT^mC^mCTTA^mC*A*A*A*G* 41,8 76,8 371 T*^mC*A*^mC*^mC*^mCT^mCAGTATGGA*G*T*A*G* 35,8 67,9 372 T*T*^mC*A*^mC*^mC^mCT^mCAGTATGG*A*G*T*A* 35,7 58,3 373 T*T*T*^mC*A*^mC^mC^mCT^mCAGTATG*G*A*G*T* 33,9 65,5 374 A*T*T*T*^mC*A^mC^mC^mCT^mCAGTAT*G*G*A*G* 51,1 54,0 375 A*A*T*T*T*^mCA^mC^mC^mCT^mCAGTA*T*G*G*A* 86,4 67,7 376 ^mC*^mC*T*T*A*ATTT^mCA^mC^mC^mCT^mC*A*G*T*A* 35,6 72,8 377 ^mC*^mC*^mC*T*T*AATTT^mCA^mC^mC^mCT*^mC*A*G*T* 32,4 60,4 378 T*^mC*^mC*^mC*T*TAATTT^mCA^mC^mC^mC*T*^mC*A*G* 26,7 71,7 379 T*T*^mC*^mC*^mC*TTAATTT^mCA^mC^mC*^mC*T*^mC*A* 20,4 73,9 380 ^mC*T*T*^mC*^mC*^mCTTAATTT^mCA^mC*^mC*^mC*T*^mC* 28,1 86,4 381 A*^mC*T*^mC*T*TGTG^mC^mCTGGA^mC*T*T*T*G* 32,4 44,6 382 ^mC*A*^mC*T*^mC*TTGTG^mC^mCTGGA*^mC*T*T*T* 33,4 58,2 383 ^mC*^mC*A*^mC*T*^mCTTGTG^mC^mCTGG*A*^mC*T*T* 26,8 68,5 384 ^mC*^mC*^mC*A*^mC*T^mCTTGTG^mC^mCTG*G*A*^mC*T* 16,5 43,4 385 T*^mC*^mC*^mC*A*^mCT^mCTTGTG^mC^mCT*G*G*A*^mC* 10,6 38,9 386 G*T*^mC*^mC*^mC*A^mCT^mCTTGTG^mC^mC*T*G*G*A* 23,0 37,4 387 G*G*T*^mC*^mC*^mCA^mCT^mCTTGTG^mC*^mC*T*G*G* 31,0 36,9 388 G*G*G*T*^mC*^mC^mCA^mCT^mCTTGTG*^mC*^mC*T*G* 45,9 47,5 389 G*T*G*^mC*^mC*^mCTGG^mCT^mCA^mCAT*^mC*T*G*T* 42,8 81,7 390 A*G*T*G*^mC*^mC^mCTGG^mCT^mCA^mCA*T*^mC*T*G* 28,1 51,0 391 ^mC*A*G*T*G*^mC^mC^mCTGG^mCT^mCA^mC*A*T*^mC*T* 49,1 85,8 392 G*^mC*A*G*T*G^mC^mC^mCTGG^mCT^mCA*^mC*A*T*^mC* 34,4 65,8 393 A*G*^mC*A*G*TG^mC^mC^mCTGG^mCT^mC*A*^mC*A*T* 40,5 72,6 394 T*G*A*G*^mC*AGTG^mC^mC^mCTGG^mC*T*^mC*A*^mC* 91,8 57,9 395 G*^mC*A*T*G*G^mCTT^mC^mCAG^mCTG*G*G*A*^mC* 38,5 60,3 396 A*G*^mC*T*G*^mCT^mC^mCAG^mCAGAA*^mC*A*G*A* 80,8 78,5 397 T*A*T*A*T*GTT^mCAG^mCTG^mCT*^mC*^mC*A*G* 89,9 63,2 398 G*T*A*T*A*TGTT^mCAG^mCTG^mC*T*^mC*^mC*A* 55,2 64,3 399 T*G*T*A*T*ATGTT^mCAG^mCTG*^mC*T*^mC*^mC* 59,9 74,6 400 G*^mC*A*G*G*G^mCAA^mCAT^mCTAT*G*T*A*T* 58,3 73,2 401 G*G*^mC*A*G*GG^mCAA^mCAT^mCTA*T*G*T*A* 61,5 74,5 402 G*G*G*^mC*A*GGG^mCAA^mCAT^mCT*A*T*G*T* 48,1 68,0 403 T*^mC*A*^mC*T*^mCTGGTGAAT^mC^mC*A*A*G*^mC* 21,9 54,5 404 G*T*^mC*A*^mC*T^mCTGGTGAAT^mC*^mC*A*A*G* 13,8 61,3 405 A*G*T*^mC*A*^mCT^mCTGGTGAAT*^mC*^mC*A*A* 15,1 55,2 406 T*A*G*T*^mC*A^mCT^mCTGGTGAA*T*^mC*^mC*A* 36,7 70,9 407 A*T*A*G*T*^mCA^mCT^mCTGGTGA*A*T*^mC*^mC* 42,4 76,6 408 ^mC*A*T*A*G*T^mCA^mCT^mCTGGTG*A*A*T*^mC* 57,0 77,2 409 T*^mC*A*T*A*GT^mCA^mCT^mCTGGT*G*A*A*T* 45,8 65,5 410 ^mC*T*G*G*T*^mCT^mCTGTTGGGT*^mC*^mC*^mC*A* 37,2 60,5 411 A*T*^mC*^mC*T*GTG^mCTT^mCAGG^mC*^mC*T*T*^mC* 31,2 66,6 412 A*A*T*^mC*^mC*TGTG^mCTT^mCAGG*^mC*^mC*T*T* 41,2 73,5 413 ^mC*T*A*A*T*^mC^mCTGTG^mCTT^mCA*G*G*^mC*^mC* 38,7 65,1 414 ^mC*^mC*T*A*A*T^mC^mCTGTG^mCTT^mC*A*G*G*^mC* 31,9 64,8 415 T*^mC*^mC*T*A*AT^mC^mCTGTG^mCTT*^mC*A*G*G* 45,9 73,6 416 G*T*^mC*^mC*T*AAT^mC^mCTGTG^mCT*T*^mC*A*G* 50,0 80,9 417 A*G*T*^mC*^mC*TAAT^mC^mCTGTG^mC*T*T*^mC*A* 51,9 77,1 418 ^mC*A*G*T*^mC*^mCTAAT^mC^mCTGTG*^mC*T*T*^mC* 53,2 68,4 419 T*^mC*A*G*T*^mC^mCTAAT^mC^mCTGT*G*^mC*T*T* 58,9 78,3 420 T*T*^mC*A*G*T^mC^mCTAAT^mC^mCTG*T*G*^mC*T* 51,1 72,9 421 ^mC*T*T*^mC*A*GT^mC^mCTAAT^mC^mCT*G*T*G*^mC* 49,4 69,1 422 G*^mC*T*T*^mC*AGT^mC^mCTAAT^mC^mC*T*G*T*G* 39,5 56,8 423 G*G*A*G*T*TGTAAG^mC^mCT^mC^mC*T*T*T*G* 61,8 66,4 424 G*^mC*T*^mC*T*GGT^mCAAGG^mCTT*T*G*G*G* 33,8 49,8 425 T*G*^mC*T*^mC*TGGT^mCAAGG^mCT*T*T*G*G* 37,9 55,5 426 G*T*G*^mC*T*^mCTGGT^mCAAGG^mC*T*T*T*G* 48,0 74,1 427 G*G*T*G*^mC*T^mCTGGT^mCAAGG*^mC*T*T*T* 51,4 68,7 428 T*G*A*G*G*TG^mCT^mCTGGT^mCA*A*G*G*^mC* 38,0 72,9 429 T*T*T*^mC*T*^mCATGG^mCAG^mCAG*A*T*G*G* 87,5 84,7 430 T*G*^mC*T*G*AGTTT^mCTTTAG*G*^mC*A*G* 61,8 94,7 431 ^mC*T*G*^mC*T*GAGTTT^mCTTTA*G*G*^mC*A* 51,5 61,1 432 G*^mC*T*G*^mC*TGAGTTT^mCTTT*A*G*G*^mC* 46,5 94,4 433 G*G*^mC*T*G*^mCTGAGTTT^mCTT*T*A*G*G* 61,8 80,4 434 A*G*G*^mC*T*G^mCTGAGTTT^mCT*T*T*A*G* 68,1 74,7 435 G*A*G*G*^mC*TG^mCTGAGTTT^mC*T*T*T*A* 52,3 83,7 436 T*G*A*G*G*^mCTG^mCTGAGTTT*^mC*T*T*T* 62,3 71,5 437 ^mC*T*G*^mC*^mC*AAGT^mC^mC^mCT^mCAG*G*G*T*T* 43,3 74,6 438 A*^mC*T*G*^mC*^mCAAGT^mC^mC^mCT^mCA*G*G*G*T* 53,4 78,8 439 T*A*^mC*T*G*^mC^mCAAGT^mC^mC^mCT^mC*A*G*G*G* 34,5 74,9 440 ^mC*T*A*^mC*T*G^mC^mCAAGT^mC^mC^mCT*^mC*A*G*G* 35,4 73,6 441 T*^mC*T*A*^mC*TG^mC^mCAAGT^mC^mC^mC*T*^mC*A*G* 65,7 84,0 442 T*T*^mC*T*A*^mCTG^mC^mCAAGT^mC^mC*^mC*T*^mC*A* 47,9 93,1 443 T*T*T*^mC*T*A^mCTG^mC^mCAAGT^mC*^mC*^mC*T*^mC* 53,6 85,3 444 A*T*T*T*^mC*TA^mCTG^mC^mCAAGT*^mC*^mC*^mC*T* 72,4 100,6 445 G*A*T*T*T*^mCTA^mCTG^mC^mCAAG*T*^mC*^mC*^mC* 68,6 79,7 446 G*G*A*T*T*T^mCTA^mCTG^mC^mCAA*G*T*^mC*^mC* 72,1 88,6 447 T*G*G*A*T*TT^mCTA^mCTG^mC^mCA*A*G*T*^mC* 65,7 79,7 448 ^mC*T*G*G*A*TTT^mCTA^mCTG^mC^mC*A*A*G*T* 51,0 68,6 449 A*T*^mC*T*T*AGG^mCTGG^mC^mC^mC^mC*A*A*G*A* 43,6 74,1 450 T*G*A*T*^mC*TTAGG^mCTGG^mC^mC*^mC*^mC*A*A* 38,8 70,0 451 T*T*T*A*T*^mCTG^mC^mCAG^mCA^mCT*G*A*T*^mC* 51,0 76,2 452 A*T*T*T*A*T^mCTG^mC^mCAG^mCA^mC*T*G*A*T* 55,2 77,7 453 A*A*T*T*T*AT^mCTG^mC^mCAG^mCA*^mC*T*G*A* 68,1 71,1 454 T*A*T*A*T*^mC^mCTAT^mCTAG^mC^mC*^mC*A*^mC*^mC* 60,1 88,2 455 G*T*A*T*A*T^mC^mCTAT^mCTAG^mC*^mC*^mC*A*^mC* 64,2 85,2 456 A*G*T*A*T*AT^mC^mCTAT^mCTAG*^mC*^mC*^mC*A* 62,8 86,2 457 A*A*^mC*^mC*^mC*^mCAAGGG^mC^mCT^mCT*A*A*^mC*T* 83,3 90,7 458 G*^mC*A*A*^mC*^mCAGATGT^mC^mCAT*A*T*T*^mC* 50,9 87,2 459 G*G*^mC*T*T*AGGA^mC^mC^mC^mCTGA*A*A*G*A* 59,8 71,1 460 G*G*^mC*A*T*GATTGTGGG^mCT*T*A*G*G* 32,3 51,6 461 A*G*G*^mC*A*TGATTGTGGG^mC*T*T*A*G* 31,0 60,2 462 G*T*A*A*^mC*^mC^mCTTTT^mCAAAG*^mC*T*G*A* 50,2 63,6 463 G*G*T*A*A*^mC^mC^mCTTTT^mCAAA*G*^mC*T*G* 27,1 51,9 464 G*G*G*T*A*A^mC^mC^mCTTTT^mCAA*A*G*^mC*T* 45,6 64,5 465 A*G*G*G*T*AA^mC^mC^mCTTTT^mCA*A*A*G*^mC* 60,3 61,5 466 ^mC*A*G*G*G*TAA^mC^mC^mCTTTT^mC*A*A*A*G* 59,2 82,8 467 ^mC*^mC*A*G*G*GTAA^mC^mC^mCTTTT*^mC*A*A*A* 48,5 57,9 468 ^mC*^mC*^mC*A*G*GGTAA^mC^mC^mCTTT*T*^mC*A*A* 37,8 70,2 469 G*^mC*^mC*^mC*A*GGGTAA^mC^mC^mCTT*T*T*^mC*A* 31,9 58,2 470 T*G*^mC*T*^mC*AA^mCATGG^mCAAA*^mC*T*^mC*A* 42,1 70,5 471 T*^mC*^mC*T*G*^mCT^mCAA^mCATGG^mC*A*A*A*^mC* 45,2 77,7 472 G*T*^mC*^mC*T*G^mCT^mCAA^mCATGG*^mC*A*A*A* 42,9 64,0

14. Нуклеотиды с * имеют модификацию 2'-O-МOE; нуклеотиды без * представляют собой 2'-дезоксинуклеозиды, а ^mC означает 5-метилцитозин. Межнуклеозидными связями являются фосфортиоатные связи.

15. % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в клетках SH-SY5Y, обработанных одной дозой 2000 нМ ASO tau в течение 24 часов, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках, обработанных PBS.

16. % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в клетках Huh7, обработанных одной дозой 25 нМ ASO tau в течение 48 часов, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках, обработанных PBS.

[00162] Гапмеры, которые в значительной степени снижают экспрессию мРНК tau, как показано в Таблице 13, были отобраны и протестированы в клетках SH-SY5Y. Величины IC50 отобранных 5-10-5-гапмеров с 5-метилцитозинами определяли в клетках SH-SY5Y, как описано выше, и результаты представлены в Таблице 14.

Таблица 14: IC50 отобранных 5-10-5-гапмеров с 5-метилцитозином в клетках SH-SY5Y

SEQ ID NO Последовательность ASO¹⁷ IC50 (нМ) 313 ^mC*^mC*T*T*G*^mCT^mCAGGT^mCAA^mC*T*G*G*T* 1115 327 ^mC*T*G*^mC*^mC*TGTGG^mCT^mC^mCA^mC*G*A*A*^mC* 844 329 G*T*^mC*T*G*^mC^mCTGTGG^mCT^mC^mC*A*^mC*G*A* 481 330 ^mC*G*T*^mC*T*G^mC^mCTGTGG^mCT^mC*^mC*A*^mC*G* 555 331 T*^mC*G*T*^mC*TG^mC^mCTGTGG^mCT*^mC*^mC*A*^mC* 818 332 A*T*^mC*G*T*^mCTG^mC^mCTGTGG^mC*T*^mC*^mC*A* 918 333 ^mC*A*T*^mC*G*T^mCTG^mC^mCTGTGG*^mC*T*^mC*^mC* 981 334 A*^mC*A*T*^mC*GT^mCTG^mC^mCTGTG*G*^mC*T*^mC* 608 335 G*A*^mC*A*T*^mCGT^mCTG^mC^mCTGT*G*G*^mC*T* 414 336 T*G*A*^mC*A*T^mCGT^mCTG^mC^mCTG*T*G*G*^mC* 393 338 G*T*T*G*A*^mCAT^mCGT^mCTG^mC^mC*T*G*T*G* 588 340 A*A*G*G*T*TGA^mCAT^mCGT^mCT*G*^mC*^mC*T* 496 366 G*T*^mC*^mC*^mC*AGGT^mCTG^mCAAA*G*T*G*G* 793 384 ^mC*^mC*^mC*A*^mC*T^mCTTGTG^mC^mCTG*G*A*^mC*T* 810 385 T*^mC*^mC*^mC*A*^mCT^mCTTGTG^mC^mCT*G*G*A*^mC* 954 404 G*T*^mC*A*^mC*T^mCTGGTGAAT^mC*^mC*A*A*G* 12035 405 A*G*T*^mC*A*^mCT^mCTGGTGAAT*^mC*^mC*A*A* 743 381 A*^mC*T*^mC*T*TGTG^mC^mCTGGA^mC*T*T*T*G* 2737

17. Нуклеотиды с * имеют модификацию 2'-O-МOE; нуклеотиды без * представляют собой 2'-дезоксинуклеозиды, а ^mC означает 5-метилцитозин. Межнуклеозидными связями являются фосфортиоатные связи.

Пример 11: Ингибирование экспрессии обезьяньего и человеческого tau под действием антисмысловых олигонуклеотидов с 5-метилцитозином

[00163] Некоторые гапмеры, которые значительно снижают экспрессию мРНК tau, отбирали и тестировали в клетках зеленых мартышек СОS1. Результаты представлены как процент остаточной мРНК tau по отношению к контрольным клеткам, обработанным PBS. В Таблице 15 представлены активности отобранных 5-10-5-гапмеров в клетках COS1.

Таблица 15: Ингибирование мРНК Tau зеленой мартышки под действием 5-10-5-MOE-гапмеров в клетках Cos1

SEQ ID NO Последовательность ASO¹⁸ % Остаточной мРНКtau¹⁹ 285 G*G*T*T*G*A^mCAT^mCGT^mCTG^mC*^mC*T*G*T* 39 284 ^mC*^mC*G*T*A*^mCGT^mC^mC^mCAG^mCGT*G*A*T*^mC* 61 473 ^mC*^mC*^mC*G*T*A^mCGT^mC^mC^mCAG^mCG*T*G*A*T* 62 474 G*G*^mC*^mC*A*G^mCGT^mC^mCGTGT^mC*A*^mC*^mC*^mC* 64 386 G*T*^mC*^mC*^mC*A^mCT^mCTTGTG^mC^mC*T*G*G*A* 53 335 G*A*^mC*A*T*^mCGT^mCTG^mC^mCTGT*G*G*^mC*T* 39 384 ^mC*^mC*^mC*A*^mC*T^mCTTGTG^mC^mCTG*G*A*^mC*T* 51 313 ^mC*^mC*T*T*G*^mCT^mCAGGT^mCAA^mC*T*G*G*T* 37 366 G*T*^mC*^mC*^mC*AGGT^mCTG^mCAAA*G*T*G*G* 35 329 G*T*^mC*T*G*^mC^mCTGTGG^mCT^mC^mC*A*^mC*G*A* 34 405 A*G*T*^mC*A*^mCT^mCTGGTGAAT*^mC*^mC*A*A* 37

18. Нуклеотиды с * имеют модификацию 2'-O-МOE; нуклеотиды без * представляют собой 2'-дезоксинуклеозиды, а ^mC означает 5-метилцитозин. Межнуклеозидными связями являются фосфортиоатные связи.

19. % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в клетках Соs1, обработанных одной дозой 2000 нМ ASO tau в течение 24 часов, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках, обработанных PBS.

[00164] Некоторые антисмысловые олигонуклеотиды, которые значительно снижают уровень экспрессии мРНК tau, были отобраны и протестированы в нейронах, происходящих от человеческих эмбриональных стволовых клеток (hESC). Результаты представлены как процент остаточной мРНК tau по отношению к контрольным клеткам, обработанным PBS. В Таблице 16 представлены активности отобранных антисмысловых олигонуклеотидов в человеческих нейронах.

Таблица 16: Ингибирование экспрессии человеческого tau в нейронах, происходящих от hESC, под действием отобранного ASO Tau

SEQ ID NO Последовательность ASO²⁰ % Остаточной мРНК²¹ 285 G*G*T*T*G*A^mCAT^mCGT^mCTG^mC*^mC*T*G*T* 9,8 475 ^mC*^mC*A*T*G*^mC*G*A*G*^mC*T*G*A*T*A*A*A* 20,9 476 G*^mC*A*T*^mC*G*T*^mC*A*G*^mC*T*T*A*^mC*^mC*T* 40,0 477 ^mC*T*T*T*G*^mC*T*T*T*T*A*^mC*T*G*A*^mC*^mC* 16,2 478 T*^mC*A*A*^mC*T*G*G*T*T*T*G*T*A*G*A*^mC* 34,9

20. Нуклеотиды с * имеют модификацию 2'-O-МOE; нуклеотиды без * представляют собой 2'-дезоксинуклеозиды, а ^mC означает 5-метилцитозин. Межнуклеозидными связями являются фосфортиоатные связи.

21. % Остаточной мРНК означает уровень мРНК tau в нейронах, происходящих от hESC и обработанных одной дозой 10 мкМ ASO tau в течение 10-14 дней, по сравнению с уровнем мРНК tau в контрольных клетках, обработанных PBS.

Пример 12: Тестирование in vivo гапмеров, нацеленных на MAPT

[00165] In vivo активность отобранных 5-10-5-гапмеров тестировали методами, описанными в примере 9. Как показано в таблице 17, некоторые антисмысловые олигонуклеотиды в значительной степени ингибировали экспрессию мРНК и белка человеческого tau в коре головного мозга и в гиппокампе.

Таблица 17: Ингибирование экспрессии мРНК и белка Tau под действием 5-10-5-MOE-гапмеров in vivo

SEQ ID NO Доза (мкг) Длительность обработки (недели) % Остаточной мРНК tau после ASO-обработки²² % Остаточного белка tau после ASO-обработки²³ Кора головного мозга Гиппокамп Кора головного мозга Гиппокамп 284 200 4 56 61 98 82 473 200 4 76 44 73 69 474 200 4 48 26 73 66 386 200 4 50 48 69 68 335 50 4 N/T²⁴ 76 N/T 103 384 50 4 N/T 65 N/T 111 313 50 4 N/T 98 N/T 144

22: % Остаточной мРНК tau означает уровень мРНК tau в указанной ткани головного мозга hTau-трансгенных мышей BAC через четыре недели после одной ICV-инъекции указанного ASO, по сравнению с уровнем мРНК tau в соответствующей ткани головного мозга контрольных hTau-трансгенных мышей BAC, которые не были обработаны ASO.

23:% % Остаточного белка tau означает уровень белка tau в указанной ткани головного мозга hTau-трансгенных мышей BAC через четыре недели после одной ICV-инъекции указанного ASO, по сравнению с уровнем белка tau в соответствующей ткани головного мозга контрольных hTau-трансгенных мышей BAC, которые не были обработаны ASO.

24: N/T=не тестировали.

[00166] Все используемые здесь технические и научные термины, если это не оговорено особо, имеют свое общепринятое значение, известное специалистам в области, к которой относится изобретение.

[00167] Если это не оговорено особо, то все методы, стадии, технологии и манипуляции, которые конкретно не описаны в настоящем изобретении, могут быть осуществлены способом, известным per se. В настоящей заявке приводятся ссылки на стандартные руководства и общий предшествующий уровень техники и цитируемые там документы. Если это не оговорено особо, то каждый из цитируемых здесь документов во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.

[00168] Притязания на изобретение не являются ограничивающими и приводятся ниже.

[00169] Хотя в настоящей заявке подробно описаны конкретные аспекты и притязания, однако, они рассматриваются лишь в целях иллюстрации и не ограничивают объема, сформулированного в формуле изобретения или объема предмета притязаний любой соответствующей заявке, которая будет подана в будущем. В частности, авторами настоящего изобретения предполагается, что в настоящую заявку могут быть внесены различные замены, изменения и модификации, не выходящие за рамки существа и объема изобретения, определенного в формуле изобретения. Выбор исходного нуклеиновокислотного материала, представляющего интерес клона или типа библиотеки может быть осуществлен самим специалистом в данной области исходя из информации об описанных здесь аспектах. Считается, что другие аспекты, преимущества и модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения. Специалистам в данной области будет понятно или установлено с использованием не более, чем рутинных экспериментов, что в настоящее изобретение могут быть включены многие эквиваленты конкретных аспектов настоящего изобретения. Такие эквиваленты входят в объем прилагаемой формулы изобретения. Пересмотр объема притязаний позже поданных соответствующих заявок может быть обусловлен ограничениями в патентных законодательствах различных стран и не должен быть истолкован как отказ от предмета изобретения.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> NOVARTIS AG

<120> КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ СНИЖЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ TAU

<130> PAT057142-WO-PCT

<140>

<141>

<150> 62/270,165

<151> 2015-12-21

<160> 506

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1

gtccactaac ctttcagg 18

<210> 2

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2

gcatcgtcag cttacctt 18

<210> 3

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 3

tatttgcacc tggagatg 18

<210> 4

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 4

gactatttgc acctggag 18

<210> 5

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 5

catgcgagct gataaaat 18

<210> 6

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6

accatgcgag ctgataaa 18

<210> 7

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 7

ccatgcgagc tgataaaa 18

<210> 8

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 8

cgtcagctta ccttggct 18

<210> 9

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 9

tgaccatgcg agctgata 18

<210> 10

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 10

atgcgagctg ataaaata 18

<210> 11

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 11

tttgcacctg gagatgag 18

<210> 12

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 12

ttgcacctgg agatgaga 18

<210> 13

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 13

atttgcacct ggagatga 18

<210> 14

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 14

tccactaacc tttcaggc 18

<210> 15

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 15

ggtttcaatc tgcaagaa 18

<210> 16

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 16

ccactaacct ttcaggcc 18

<210> 17

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 17

cactaacctt tcaggcca 18

<210> 18

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 18

actaaccttt caggccag 18

<210> 19

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 19

gctcagccat cctggttc 18

<210> 20

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 20

gtttcaatct gcaagaag 18

<210> 21

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 21

agttcacctg gggaaaga 18

<210> 22

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 22

ttggaggttc acctggga 18

<210> 23

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 23

ggctacctgg tttatgat 18

<210> 24

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 24

aaagttcacc tggggaaa 18

<210> 25

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 25

gttcactgac cttgggtc 18

<210> 26

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 26

caaagttcac ctggggaa 18

<210> 27

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 27

cagcttacct tggctttt 18

<210> 28

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 28

gggctacctg gtttatga 18

<210> 29

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 29

tcttcagctg gtgtatgt 18

<210> 30

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 30

ttcaaagttc acctgggg 18

<210> 31

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 31

ccctttacct ttttattt 18

<210> 32

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 32

tgcttcttca gctggtgt 18

<210> 33

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 33

tcagcttacc ttggcttt 18

<210> 34

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 34

ctgcttcttc agctggtg 18

<210> 35

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 35

ggccacctcc tagaacac 18

<210> 36

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 36

tcttaccaga gctgggtg 18

<210> 37

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 37

aagttcacct ggggaaag 18

<210> 38

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 38

gtcagcttac cttggctt 18

<210> 39

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 39

ggggcctgat cacaaacc 18

<210> 40

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 40

aggttcacct gggaagga 18

<210> 41

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 41

gcttaccttg gctttttt 18

<210> 42

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 42

tcaaagttca cctgggga 18

<210> 43

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 43

ccactctcac cttcccgc 18

<210> 44

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 44

ccccctttac ctttttat 18

<210> 45

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 45

gaggttcacc tgggaagg 18

<210> 46

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 46

gttcacctgg gaaggaag 18

<210> 47

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 47

cacctcctag aacacaac 18

<210> 48

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 48

actctcacct tcccgcct 18

<210> 49

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 49

ttcaatctgc aagaagag 18

<210> 50

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 50

actgaccttg ggtcacgt 18

<210> 51

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 51

tttcaatctg caagaaga 18

<210> 52

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 52

ttcttaccag agctgggt 18

<210> 53

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 53

cagggctacc tggtttat 18

<210> 54

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 54

gggcctgatc acaaaccc 18

<210> 55

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 55

agggctacct ggtttatg 18

<210> 56

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 56

ccacctccta gaacacaa 18

<210> 57

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 57

cactgacctt gggtcacg 18

<210> 58

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 58

cccctttacc tttttatt 18

<210> 59

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 59

ttcactgacc ttgggtca 18

<210> 60

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 60

ggcctgatca caaaccct 18

<210> 61

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 61

cactctcacc ttcccgcc 18

<210> 62

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 62

cctggccacc tcctagaa 18

<210> 63

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 63

cctttacctt tttatttc 18

<210> 64

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 64

tcactgacct tgggtcac 18

<210> 65

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 65

gcctgatcac aaaccctg 18

<210> 66

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 66

ctttaccttt ttatttcc 18

<210> 67

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 67

ttcttcagct ggtgtatg 18

<210> 68

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 68

gccacctcct agaacaca 18

<210> 69

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 69

tctcaccttc ccgcctcc 18

<210> 70

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 70

cttcttacca gagctggg 18

<210> 71

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 71

ttcttcttac cagagctg 18

<210> 72

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 72

atcagccccc tgtaaatg 18

<210> 73

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 73

gcttcttcag ctggtgta 18

<210> 74

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 74

acagggctac ctggttta 18

<210> 75

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 75

ctcagccatc ctggttca 18

<210> 76

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 76

cagccccctg taaatgaa 18

<210> 77

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 77

gggctcagcc atcctggt 18

<210> 78

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 78

tcttcttacc agagctgg 18

<210> 79

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 79

ctctcacctt cccgcctc 18

<210> 80

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 80

tcagccccct gtaaatga 18

<210> 81

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 81

cttcttcagc tggtgtat 18

<210> 82

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 82

ggttcacctg ggaaggaa 18

<210> 83

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 83

catcagcccc ctgtaaat 18

<210> 84

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 84

accatcagcc ccctgtaa 18

<210> 85

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 85

gtccactaac ctttcaggcc gtgtc 25

<210> 86

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 86

gtccactaac ctttcaggcc gtgt 24

<210> 87

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 87

gtccactaac ctttcaggcc gtg 23

<210> 88

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 88

gtccactaac ctttcaggcc gt 22

<210> 89

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 89

gtccactaac ctttcaggcc g 21

<210> 90

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 90

gtccactaac ctttcaggcc 20

<210> 91

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 91

gtccactaac ctttcaggc 19

<210> 92

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 92

gtccactaac ctttcagg 18

<210> 93

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 93

gtccactaac ctttcag 17

<210> 94

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 94

gtccactaac ctttca 16

<210> 95

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 95

gtccactaac ctttc 15

<210> 96

<211> 14

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 96

gtccactaac cttt 14

<210> 97

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 97

gtccactaac ctt 13

<210> 98

<211> 12

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 98

gtccactaac ct 12

<210> 99

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 99

gcatcgtcag cttaccttgg ctttt 25

<210> 100

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 100

gcatcgtcag cttaccttgg cttt 24

<210> 101

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 101

gcatcgtcag cttaccttgg ctt 23

<210> 102

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 102

gcatcgtcag cttaccttgg ct 22

<210> 103

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 103

gcatcgtcag cttaccttgg c 21

<210> 104

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 104

gcatcgtcag cttaccttgg 20

<210> 105

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 105

gcatcgtcag cttaccttg 19

<210> 106

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 106

gcatcgtcag cttacctt 18

<210> 107

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 107

gcatcgtcag cttacct 17

<210> 108

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 108

gcatcgtcag cttacc 16

<210> 109

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 109

gcatcgtcag cttac 15

<210> 110

<211> 14

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 110

gcatcgtcag ctta 14

<210> 111

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 111

gcatcgtcag ctt 13

<210> 112

<211> 12

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 112

gcatcgtcag ct 12

<210> 113

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 113

gactatttgc acctggagat gagag 25

<210> 114

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 114

gactatttgc acctggagat gaga 24

<210> 115

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 115

gactatttgc acctggagat gag 23

<210> 116

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 116

gactatttgc acctggagat ga 22

<210> 117

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 117

gactatttgc acctggagat g 21

<210> 118

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 118

gactatttgc acctggagat 20

<210> 119

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 119

gactatttgc acctggaga 19

<210> 120

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 120

gactatttgc acctggag 18

<210> 121

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 121

gactatttgc acctgga 17

<210> 122

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 122

gactatttgc acctgg 16

<210> 123

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 123

gactatttgc acctg 15

<210> 124

<211> 14

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 124

gactatttgc acct 14

<210> 125

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 125

gactatttgc acc 13

<210> 126

<211> 12

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 126

gactatttgc ac 12

<210> 127

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 127

ccatgcgagc tgataaaata taaaa 25

<210> 128

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 128

ccatgcgagc tgataaaata taaa 24

<210> 129

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 129

ccatgcgagc tgataaaata taa 23

<210> 130

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 130

ccatgcgagc tgataaaata ta 22

<210> 131

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 131

ccatgcgagc tgataaaata t 21

<210> 132

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 132

ccatgcgagc tgataaaata 20

<210> 133

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 133

ccatgcgagc tgataaaat 19

<210> 134

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 134

ccatgcgagc tgataaaa 18

<210> 135

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 135

ccatgcgagc tgataaa 17

<210> 136

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 136

ccatgcgagc tgataa 16

<210> 137

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 137

ccatgcgagc tgata 15

<210> 138

<211> 14

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 138

ccatgcgagc tgat 14

<210> 139

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 139

ccatgcgagc tga 13

<210> 140

<211> 12

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 140

ccatgcgagc tg 12

<210> 141

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 141

agccatcctg gttcaaa 17

<210> 142

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 142

cagccatcct ggttcaa 17

<210> 143

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 143

tcagccatcc tggttca 17

<210> 144

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 144

ctcagccatc ctggttc 17

<210> 145

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 145

ggccagcgtc cgtgtca 17

<210> 146

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 146

gccagcgtcc gtgtcac 17

<210> 147

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 147

ccagcgtccg tgtcacc 17

<210> 148

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 148

cagcgtccgt gtcaccc 17

<210> 149

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 149

gtctccaatg cctgctt 17

<210> 150

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 150

tgtctccaat gcctgct 17

<210> 151

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 151

gtgtctccaa tgcctgc 17

<210> 152

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 152

ggtgtctcca atgcctg 17

<210> 153

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 153

tcacgtgacc agcagct 17

<210> 154

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 154

cacgtgacca gcagctt 17

<210> 155

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 155

acgtgaccag cagcttc 17

<210> 156

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 156

cgaagctgct ggtcacg 17

<210> 157

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 157

tttgctttta ctgacca 17

<210> 158

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 158

ctttgctttt actgacc 17

<210> 159

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 159

tctttgcttt tactgac 17

<210> 160

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 160

gtctttgctt ttactga 17

<210> 161

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 161

ttttttgtca tcgcttc 17

<210> 162

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 162

tttttgtcat cgcttcc 17

<210> 163

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 163

ttttgtcatc gcttcca 17

<210> 164

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 164

tttgtcatcg cttccag 17

<210> 165

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 165

atcttcgttt taccatc 17

<210> 166

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 166

gatcttcgtt ttaccat 17

<210> 167

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 167

cgatcttcgt tttacca 17

<210> 168

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 168

gcgatcttcg ttttacc 17

<210> 169

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 169

tgggtggtgt ctttgga 17

<210> 170

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 170

gggtggtgtc tttggag 17

<210> 171

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 171

ggtggtgtct ttggagc 17

<210> 172

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 172

gtggtgtctt tggagcg 17

<210> 173

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 173

atcccctgat tttggag 17

<210> 174

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 174

gatcccctga ttttgga 17

<210> 175

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 175

cgatcccctg attttgg 17

<210> 176

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 176

gcgatcccct gattttg 17

<210> 177

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 177

gcctcccggc tggtgct 17

<210> 178

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 178

cctcccggct ggtgctt 17

<210> 179

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 179

ctcccggctg gtgcttc 17

<210> 180

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 180

tcccggctgg tgcttca 17

<210> 181

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 181

actggtttgt agactat 17

<210> 182

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 182

aactggtttg tagacta 17

<210> 183

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 183

caactggttt gtagact 17

<210> 184

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 184

tcaactggtt tgtagac 17

<210> 185

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 185

tatgatggat gttgcct 17

<210> 186

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 186

atgatggatg ttgccta 17

<210> 187

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 187

tgatggatgt tgcctaa 17

<210> 188

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 188

gatggatgtt gcctaat 17

<210> 189

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 189

ttttacttcc acctggc 17

<210> 190

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 190

attttacttc cacctgg 17

<210> 191

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 191

gattttactt ccacctg 17

<210> 192

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 192

agattttact tccacct 17

<210> 193

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 193

atttcctccg ccaggga 17

<210> 194

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 194

tttcctccgc cagggac 17

<210> 195

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 195

ttcctccgcc agggacg 17

<210> 196

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 196

tcctccgcca gggacgt 17

<210> 197

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 197

aaggtcagct tgtgggt 17

<210> 198

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 198

gaaggtcagc ttgtggg 17

<210> 199

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 199

ggaaggtcag cttgtgg 17

<210> 200

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 200

cggaaggtca gcttgtg 17

<210> 201

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 201

accctgcttg gccaggg 17

<210> 202

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 202

ccctgcttgg ccaggga 17

<210> 203

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 203

cctgcttggc cagggag 17

<210> 204

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 204

ctgcttggcc agggagg 17

<210> 205

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 205

ccgtacgtcc cagcgtgatc 20

<210> 206

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 206

ggctcagcca tcctggttca 20

<210> 207

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 207

cccgtacgtc ccagcgtgat 20

<210> 208

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 208

ggttgacatc gtctgcctgt 20

<210> 209

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 209

gggctcagcc atcctggttc 20

<210> 210

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 210

ggccagcgtc cgtgtcaccc 20

<210> 211

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 211

ggctctccca gcggcaagga 20

<210> 212

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 212

ccctcttggt cttggtgcat 20

<210> 213

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 213

cgggacctgc ctcccagacc 20

<210> 214

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 214

gctggtctct gttgggtccc 20

<210> 215

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 215

gggctctctc catgtcaaca 20

<210> 216

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 216

ggtctctgtt gggtcccagg 20

<210> 217

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 217

gggacctgcc tcccagaccc 20

<210> 218

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 218

cccaacccgt acgtcccagc 20

<210> 219

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 219

gcttcgtctt ccaggctggg 20

<210> 220

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 220

ccgtgtcacc ctcttggtct 20

<210> 221

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 221

cttggctctc ccagcggcaa 20

<210> 222

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 222

cggcctcctt agctgctaga 20

<210> 223

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 223

cagcgtccgt gtcaccctct 20

<210> 224

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 224

gctcagccat cctggttcaa 20

<210> 225

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 225

cctggacttt gccttccctt 20

<210> 226

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 226

gtcccactct tgtgcctgga 20

<210> 227

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 227

acctggccac ctcctggttt 20

<210> 228

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 228

ttggctttgg cgttctcgcg 20

<210> 229

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 229

cgcttccagt cccgtctttg 20

<210> 230

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 230

ggtgatcacc tctgccctcg 20

<210> 231

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 231

ggtacctcct gcaaccaacc 20

<210> 232

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 232

cacgtggctt cctctcccac 20

<210> 233

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 233

gcgtccgtgt caccctcttg 20

<210> 234

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 234

caccctcttg gtcttggtgc 20

<210> 235

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 235

gtcccagcgt gatcttccat 20

<210> 236

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 236

gccagcactg atcaccctaa 20

<210> 237

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 237

tggtctctgt tgggtcccag 20

<210> 238

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 238

ccgcctcccg gctggtgctt 20

<210> 239

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 239

ggccacacga gtcccagtgt 20

<210> 240

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 240

gtccctcagg gttgccttta 20

<210> 241

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 241

ggaccactgc caccttcttg 20

<210> 242

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 242

cacctggcca cctcctggtt 20

<210> 243

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 243

cccgcctccc ggctggtgct 20

<210> 244

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 244

ggtgccttgc ccttccatcc 20

<210> 245

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 245

cccgtcacac tcacacaagg 20

<210> 246

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 246

cccaatccct gctgtggtcg 20

<210> 247

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 247

gggtcccact cttgtgcctg 20

<210> 248

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 248

gcttccagtc ccgtctttgc 20

<210> 249

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 249

cccttctccc acaggctgcc 20

<210> 250

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 250

ctggtgccac cactgacaac 20

<210> 251

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 251

gccactgcct ctgtgacacc 20

<210> 252

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 252

gtgccaccac tgacaaccaa 20

<210> 253

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 253

cttgcccttc catcctggtg 20

<210> 254

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 254

gcctggactt tgccttccct 20

<210> 255

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 255

gcctctaact ccgtggctgc 20

<210> 256

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 256

gatcccagag ccttccgtat 20

<210> 257

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 257

catcctcgcg ccgcaagcca 20

<210> 258

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 258

gcctcccggc tggtgcttca 20

<210> 259

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 259

gtgcctggac tttgccttcc 20

<210> 260

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 260

ctgccactgc ctctgtgaca 20

<210> 261

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 261

cctggccacc tcctggttta 20

<210> 262

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 262

gggtgccttg cccttccatc 20

<210> 263

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 263

ccactcccac ttcttgtgct 20

<210> 264

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 264

gtgcttcagg ccttcgtcac 20

<210> 265

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 265

ctgccagctt gccttctctt 20

<210> 266

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 266

ctcccggctg gtgcttcagg 20

<210> 267

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 267

cgcctcccgg ctggtgcttc 20

<210> 268

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 268

ctggccacct cctggtttat 20

<210> 269

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 269

ggccacctcc tggtttatga 20

<210> 270

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 270

ccatcctggt gccaccactg 20

<210> 271

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 271

cctgccagct tgccttctct 20

<210> 272

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 272

aatccctgct gtggtcgcag 20

<210> 273

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 273

gccaccactg acaaccaaga 20

<210> 274

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 274

cttgtcggcc atgatatag 19

<210> 275

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 275

taagcagtgg gttctctagt 20

<210> 276

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 276

cctcccggct ggtgcttcag 20

<210> 277

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 277

ctcctgccag cttgccttct 20

<210> 278

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 278

cttctcctcc ggccactagt 20

<210> 279

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 279

ctcctccggc cactagtggg 20

<210> 280

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 280

ccttctcctc cggccactag 20

<210> 281

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 281

gagccttctc ctccggccac 20

<210> 282

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 282

gccttctcct ccggccacta 20

<210> 283

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 283

ccttacctgc tagctggcgt 20

<210> 284

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 284

ccgtacgtcc cagcgtgatc 20

<210> 285

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (1)..(5)

<223> 2'-O-MOE-модифицированный нуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (7)..(7)

<223> 5-метилцитозин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (10)..(10)

<223> 5-метилцитозин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (13)..(13)

<223> 5-метилцитозин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(17)

<223> 5-метилцитозин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2'-O-MOE-модифицированный нуклеотид

<400> 285

ggttgacatc gtctgcctgt 20

<210> 286

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 286

gggctcagcc atcctggttc 20

<210> 287

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 287

ggctctccca gcggcaagga 20

<210> 288

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 288

ccctcttggt cttggtgcat 20

<210> 289

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 289

gctggtctct gttgggtccc 20

<210> 290

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 290

gtcccactct tgtgcctgga 20

<210> 291

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 291

gggctctctc catgtcaaca 20

<210> 292

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 292

acgctggcct gaaaggttag tggac 25

<210> 293

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 293

aaaagccaag gtaagctgac gatgc 25

<210> 294

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 294

ttttatattt tatcagctcg catgg 25

<210> 295

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 295

acccacaagc tgaccttccg 20

<210> 296

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 296

accagctgaa gaagcaggca ttggagacac 30

<210> 297

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 297

ctctcatctc caggtgcaaa tagtc 25

<210> 298

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 298

atagtctaca aaccagttga 20

<210> 299

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 299

attaggcaac atccatcata 20

<210> 300

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 300

gaaccaggat ggctgagccc 20

<210> 301

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 301

cgtccctggc ggaggaaa 18

<210> 302

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 302

tggtcagtaa aagcaaagac 20

<210> 303

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 303

ctggaagcga tgacaaaaaa 20

<210> 304

<211> 140924

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 304

gggattacag gcgtgagcca ccacacccag cccagaatgt ttattagaat gcacaattaa 60

taccagaggc agtggggaag gaaggactga gcagaggagg aagttgagtt gtgattcaac 120

ccaacaactg cctggctggc atggggagct ctggagttaa atagggccat cagactttcc 180

cagtgtgggg ccaacatgac tgggtcttta tacccccacc tctgtcagtc actcaacgtg 240

gtctccctgc aacaaggtga ctcttgcagc cgagacaatc cctgaaggga cagaggctga 300

agcctgtctg ccaacagcac tcccagtggc tggaacaagt ccttccctat aggggaatct 360

gggcggcaca cctccatctc catgtccatc acatacgata tcacagacat ttaaatattt 420

tgataactgt acataagagt ttcctttata atcttataga tcttatttta tgcatttgaa 480

aatattcttc tgagacaggg cttttatcat attgccatag ggtgccacga tataaaaaag 540

gttaaatact ctctgattca gaagtatcca atgatgactt ctctctcatg catttaattg 600

aaaatctggt ttttctcctt ctctgctagt tctctacctc tctccccacc tcccacatca 660

tagcctattc acatatgtct gaatctcatg atagacaagt tcaggttctt ttcccaggtt 720

ctttttacca catcccccca cccccacata aaaagtatat atggcacagc ctaggttcca 780

cccaaatcct ttctcctctt cttcctgggc ccacaactct cctacataca ttggtatacc 840

ttgcgcttag ggatggccat gtgactaagt tctaacagtg gaacatgatc agatgccact 900

tccagcctct aagacagcca gtgtgtttcc tccataagct ccttctcttc ctcccaactg 960

gagactctaa atgatgaccc tgcctcaagc aagcaaacaa caagtccctc aggggtggtg 1020

taggctgcaa atggaaggag cttgagtccc aaaccttcca cggagaaggc tggctaccaa 1080

cctggatcac tcacccaaga ctgctcgaag agttggtttg aaccattgtg ttttggggtc 1140

tatttattac aacagtttag cttgctttgt gaatagattt agtggcagag cctccaaatt 1200

ctatagatac attgatctca gtcctaaccg catctggaac accattaaat aaaggaattg 1260

caaacccaga gaaggtaatg aatttgtcta aggtcataca agatggctag gatcaggacc 1320

caactctcca gttttctttc ttctctgcta ttctgccttc tgtgatccta cataagtggg 1380

catgattgta taacatatgc ggccatgaga tttctctttc agcaagagaa agggacagga 1440

agaaagagag ggaatgcatt ttcttggcct gaattagtgt gagccattag ttacctacat 1500

tgactaaatt atctggaatg aacattcaac tctacatcac atatagttaa aatgacagat 1560

ctgcttaaga ttgtttctag catacgttat ttcaatttag gcaaatgtga ccattcagtg 1620

tgaggggacc atactgtcat taggtccctg tcagttctca attatactgt tatcttagag 1680

ggggaaaaat gtgaaatttg aatgtagacg agtgttgatt tgactgctac agtttatttt 1740

acgtatagaa ataaaataat gtgtagcaaa agcattatta caaagatgat aatgaaataa 1800

ctagtattta taatagtata atagtatagt atttataata gtatgatagt ttaatgacta 1860

tttgtcagat gttgtgtaag aaactttata cacacacaca cacacacctc atttaattcc 1920

tgtatcaatc aggatacagg acgctgtggt aacaactcct caaatctcgg tggcttgcac 1980

aacaaatgct tatttctttt ttttttttga caccaagtct tgctctgtaa caggctggag 2040

tgcaatggtg caatctcggc tcactgcagc ctctgcctcc tgggttcaag cgattctcct 2100

gcctcagtct ctcgagtagc tgggaacaca ggcacgcgcc accacatctg gctaattttt 2160

gtgattttag tagagatggg atttcaccat gttgctcagg ctggccttga actcctgacc 2220

tcaagcgatc cacccacctc agcctcccaa agtgctggga ttacaggcat gagccactgc 2280

gcccagcccc aaatgtttat ttcttgctca tgtgacatgt acttcctcga gtttttcctt 2340

cctgagatct aagctgaagg aacagctctc tggagccacg ccattctggt ggcggaaagg 2400

aagagtaaaa gtggtagaac cttgcaatgc tcttgaagcg cctatttgga atgtctacat 2460

catgtaaatg gtaatggaca agtatgtata atccccacac caaaaaaagg ggacactatt 2520

ggggacaata accacatttc aatgctgcaa gacggatatt gactgcaccc ccttcccact 2580

ttcagaaaga agaagagtaa ttttgctgaa ctccttctag agactggaaa tgtcccttcc 2640

agttggggtg attagggaag gctttggtaa aatttgagct agagtttgaa ggttaggtag 2700

actactggtg ggtgaagaaa gaacaaggac ctttgtaggc aaaggaaaac ctcagaatta 2760

cagaggtgga aaaagagttc tagtcaagcc acttcagctg gctacagagt aggtgggaaa 2820

gaaaatggga ggacaagggc tcagatgatg gggggttggg gcattggggg gacacttgaa 2880

agctaaacta aggggttgaa cttaatttag gaggcagtta gaagctttta catatttttg 2940

agcaagagag tgacataatt aaaatgatct gggccaggtg tggtggctca cacctgtaat 3000

cccagcactt tgggaggctg aggagcttgg gtcacctgag gtcaggagat cgagaccagc 3060

ctggccaaca tggtgaaatc ccgtcctact aaaaatacaa aaattagccg ggagtggtgg 3120

catatgcctg taatcccagt agctgggagg ctgagacagg aaaatcgctt gaacccggga 3180

aacaggttgc agtgagccga gatcgtgcca ctgcactcca gcctgggcaa cagagcgaga 3240

ctccatctca aaaaaacaaa acaaacacac acaaaaaacc aaaaataaat aaataaaatg 3300

atcacttctg aatactgatc taactagggg ttgcagggtg ggctgatata gggagaaact 3360

ggagagcaag gagatcacta aggtccctac atgtccagaa ccaagataga ggtcttgaac 3420

taggatggtg gcagttagaa caacaacaac aaaaagtcaa ttccaggctg agtgcagtgg 3480

ctcatgcttg taatcccaac gctttgggag gctgaggtgg gagttagaaa gcagcctggg 3540

caacactgca agacctcctc tctaaaaaaa aaaaaaaaaa aaagttagcc aggtgtggtg 3600

gtgcccacct gtagtcccag caactcagaa ggctgaggtg ggaagattgc ttgagcccca 3660

ggagttcaag cttgccgtga gctacgattg tgccactgca ctccagcctg agcaagacct 3720

tgtctccaaa aaaaggtcaa ttccactgac ttttctaagg tgtacaccat caaggggcag 3780

ctccatctcc aggccattgg ctcatgagac attctgtagt cagaaggcta gggcagattg 3840

ctttgagcaa gcccccatgg tggttctcac tcctacttct ttgggtatat gcccctctgt 3900

ttaaaaataa agttaatatg catttaaaaa aaaaaaggag aaaaaggtca gttccagaaa 3960

ctgtgtgaat aaagcatttt acttgctttt tctattaatc tataacatat gttgattttt 4020

taaaaagaat ataagagcta tgcaaattgg agcttcaaga caacttccca tctccctagg 4080

aggagatggc tgccctaaac ccccctacat agaaatcatc ccactgcttg ggcttaaact 4140

tgatgttggg gaaatgaaaa atccaagcta aggccgaagc ctggggcctg ggcgaccagc 4200

agaatgagga ccactggtca gtttcaggct gaggtgcgtc ttccagggga caatctctag 4260

ctggccctta aacattcaga cttcaagctc tatttacagc ataaaggtgt ttcaaaagac 4320

gtgatacaaa taactgcaaa tgctctgcga tgtgttaagc actgtttgaa attcgtctaa 4380

tttaagattt ttttttctga cgtaacggtt agattcacgt ttcttttttt ttaagtacag 4440

ttctactgta ttgtaactga gttagcttgc tttaagccga tttgttaagg aaaggattca 4500

ccttggtcag taacaaaaaa ggtgggaaaa aagcaaggag aaaggaagca gcctggggga 4560

aagagacctt agccaggggg gcggtttcgg gactacgaag ggtcggggcg gacggactcg 4620

agggccggcc acgtggaagg ccgctcagga cttctgtagg agaggacacc gccccaggct 4680

gactgaaagt aaagggcagc ggacccagcg gcggagccac tggccttgcc ccgaccccgc 4740

atggcccgaa ggaggacacc cacccccaca acgacacaaa gactccaact acaggaggtg 4800

gagaaagcgc gtgcgccacg gaacgcgcgt gcgcgctgcg gtcagcgccg cggcctgagg 4860

cgtagcggga gggggaccgc gaaagggcag cgccgagagg aacgagccgg gagacgccgg 4920

acggccgagc ggcagggcgc tcgcgcgcgc ccactagtgg ccggaggaga aggctcccgc 4980

ggaggccgcg ctgcccgccc cctcccctgg ggaggctcgc gttcccgctg ctcgcgcctg 5040

cgccgcccgc cggcctcagg aacgcgccct cttcgccggc gcgcgccctc gcagtcaccg 5100

ccacccacca gctccggcac caacagcagc gccgctgcca ccgcccacct tctgccgccg 5160

ccaccacagc caccttctcc tcctccgctg tcctctcccg tcctcgcctc tgtcgactat 5220

caggtaagcg ccgcggctcc gaaatctgcc tcgccgtccg cctctgtgca cccctgcgcc 5280

gccgcccctc gccctccctc tccgcagact ggggcttcgt gcgccgggca tcggtcgggg 5340

ccaccgcagg gcccctccct gcctcccctg ctcgggggct ggggccaggg cggcctggaa 5400

agggacctga gcaagggatg cacgcacgcg tgagtgcgcg cgtgtgtgtg tgctggaggg 5460

tcttcaccac cagattcgcg cagaccccag gtggaggctg tgccggcagg gtggggcgcg 5520

gcggcggtga cttgggggag ggggctgccc ttcactctcg actgcagcct tttgccgcaa 5580

tgggcgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg gaggggtccg 5640

ataacgaccc ccgaaaccga atctgaaatc cgctgtccct gccgctgttc gccatcagct 5700

ctaagaaaga cgtggatcgg gttctagaaa agatgactcc ctgcacgccc ctccctgcac 5760

ctcccgagca gtgattccga cagggccttc actgcccctg attttaggcg ggggccggcc 5820

ccctcccctt ttcctccttc agaaacccgt aggggacatt tgggggctgg gagaaatcga 5880

ggagatgggg aggggtccac gcgctgtcac tttagttgcc cttccccctg cgcacgcctg 5940

gcacagagac gcgagcagcg ccgtgcctga gaacagtgcg cggatcccac tgtgcacgct 6000

cgcaaaggca gggttcacct ggcctggcga tgtggacgga ctcggcggcc gctggtcccc 6060

gttcgcgggc acgcacagcc gcagccacgc acggatgggc gcggggctgc aggtgcatct 6120

cggggcggat ttctttctca gcgctcggag cgcagggcgc ccggcgtgtg cgctccctgc 6180

cggaggcgcg gggctggcgc gcagggctcg cccctcactg cggcagtggg tgtggaccct 6240

ggtgggcgag gaagggggag gataggctgt gcctcctccc actcccgccc ccagcccccc 6300

tttttttccc cctcggaacg cgaggtgcca tcttttttcg gcgtgtcacg tctttacggt 6360

gccatgccaa accgggtggc cgggcttcat aggacagggc ggggcctggc attaaaggga 6420

gggggacaat cagcgctgaa atcttggcgt tttgctgctg cgggcgtgag cactgggggc 6480

gttcgcccag caccttcttc gggggctctt tgctttgtct gtagaggtta cgtgatctgc 6540

gctcccagcc ctggtttctg gcttttattc tgagggtgtt cagtcaacct cccccctacg 6600

cccatgcgcc tctctttcct ttttcgctcc tcatttccga gcccattgtt ggatctcgag 6660

gcttgctggg ttcgatgaac tcgagtcaac cccccgaccc ccggcacgca tggaacgggc 6720

gtgaccgcgc gcagcctcgt ctcggagtct gccggcgccg ggaagcttct gaagggatgg 6780

gattcgagtc tccgtgcgcg ctgcgggcgg cggcagaggg atctcgcccc tccctacacc 6840

ccaagtgtcc tgagggccac gccacaccag gttgcccagc gagggacgct ggctacccat 6900

ccggggatgg gtggggagcc ctggcggggc ctctccggct ttacgccctg ttgcttcgcc 6960

tggccggaga atgtgaggaa ggggcataag gttactggtg cttcggccac acccatcttt 7020

ctgagcccac tggactgggc gcagaggggg gattgccatg gaaaccacag gtgtccggag 7080

aggggatctt ggggctggcc tcaccccttc cctgcggaga ttggggaccc tggggtaggg 7140

ggagccgcgc ccagtcggcc tcctggagga cacgggagga agccccgaac ccccgcgcct 7200

gaggctgttt ctgattggcc cctggaggcc gcagacacgc agataggcgg ccctgggtgt 7260

atttttatta atattatgtc cgtactgatt aatattattt atcttaaata aatttcaccc 7320

gtgtccaagt tcaccgcgcc cccaaaaccg agtctggggc ggcaggggga actcctggcc 7380

aacgaatcca tgcctcgccc tcctgtgatg aacctggtac gcacggtttt ctggttaatt 7440

ctatcgctga aaactggtgc ggggggcgca cttctgagac ggaagagcat ctaggagctg 7500

aatcctccac gcgggtcgcc caggttgatc tgaatttctg gggaatggct tggctgcccg 7560

cccgggacca ggccgaccct ccttgacggt ggcgtagagg gctggagcct gggtactgcg 7620

aggctcctcg catggctggg cccgccgcga ggggttgcag agcggctcag ggatcgattc 7680

aagcatcgtc tctcctccct cgcccccaga cagagctggg cgcggggttc cccttccaga 7740

tggagcgagg gtctcggggt ggccccggaa aaggggagcc cgcggccacg gctacgtatt 7800

gccatctcgc gagcagagat gtcacctcct gcctttggag gaaagggagc ccggtgggga 7860

tgagcgcatt tagcccaatg ctgggaacaa agcgcactcc gcgcttctgc gatttcgctc 7920

cattttgaaa tgtgttggcg ctttggtggg gccgctgcgg tgggcaaggc cgggggcgct 7980

gttaatggag gaacctcagg gggacggtcc ttcgtaggaa actctatcct ggctctgcgc 8040

gcgctttaag gaaatggctt ccctccagga cctcgaggga tgcagctttt gcgcggatga 8100

cggtggggtg ctgaaccagc cggtgcgcct ctggaaatgt ctgggcacgg atcctggggc 8160

catcgacgac tcctccccat tcccagcagg cgggagctct tacattccga gcgagtgacc 8220

cctctcaccc tctggcgctc acacacctgt aactccaaac ctccgtctca gaatggtcca 8280

ggctggaagg gatgatgggg gctccgacag cgactgccta gctcacccct ctgcgtgctc 8340

aggctccagg ctcagcagga ccaatttgag ttctatctga tccccctcgg ccccttaact 8400

gacccatcct acaggagaca gggaaatgtc tttcctaccg cggttgattc tggggtgtca 8460

ttttgtgttt tgtgatggct gcttatattt actgtataag cattgtattt actgtataag 8520

cattgtatta taattactgt ataagctgct tatatttact gtataagcat ctccaaatcc 8580

tccctctacg taaacaaatt aatggataaa cagataagtg tatcccctgc ccccacccct 8640

gctacgcagg tccggagtga ctcttgaagc tcatacattc cttggccaag tttgcttctc 8700

taacagatgt ttatatagca ataacctggc ttggctcttg ggttcacctt tggacgattt 8760

ggggaagggg cttgttggct ttgctgggtt ttggatgagt gacagtccat gactgttcct 8820

gctggaaggg cgtgactttt aagtggtttc taatatcagg cattgctcct ccgacaggaa 8880

caaaagaaat ggatactgcc cataaattgt tagaaaactt agaatcgctt tgattgagga 8940

aaggttagat ttattccggt tggaaaaagt ggcctttcta ttaaacgtgc cctttgaccc 9000

tcatgccctt ggaggtcggt gccagcctgg agatgggata agattgtggt tttccttctg 9060

cctttttaac atctgttgtt acagtccatt tgttgaaaat ttaaagaaac tgttttattc 9120

cactttccct cagcatttat gtgtgtggtt tcagtagctc tgtggctata tgtacgaaca 9180

cgtgttattt ttccaattgg acatgtgata attttccaac tggaccttgc cttctattga 9240

tgtatttatt tagcatcttc cttactccct ccttgaaaaa gaatcactca aaaacaaata 9300

aaaacagccg taggggccta atacagtgct agacatacaa gaggtattcg gtccatacca 9360

aatggatttt atccatgaag gataaatggg gaaatacagt gggaagcagg tgggaaactg 9420

cgtttgactc tgctctttcc tccaccacca ctttcctcat caccgtgttc agagaccccc 9480

aaagccccct cacactccca gaaacacccc cctggccact cctaacttgc catgcccagg 9540

agttaggtgc ttccactagt gacatggagc tggcgtttgg ggggcacctc agcaggtgac 9600

gggaagagaa gaccccagcc tcaccagctg ggctgcagca gggagaggag tcctcatgtt 9660

ccagcaggga ctctcagctg ttttcctgta aaaccatggt tctcaactgg gggccactga 9720

gatgtctaga gagatgtttt tgttttcaca actcggggag ggtgctactg acatcttgtg 9780

ggtagaggcc aggaatgctg ttaaacatcc tacaaggaag gcacaggaca gtctcctaca 9840

tcaaaatatg acccagtccc aatgtcacca ctgctggggt tgacactggc actgctatct 9900

taattacatt cattgagtgt cttttaggag gccctattct aagtgcttgc taagattatc 9960

tcatttaatc ctcacaacac ttccgctatg tagcaggtgc tgttattatc tccgtgatgg 10020

ggaaactgaa gcacagagag ggttagtaac ttgctaaagg tcacagagcc agtgggtggt 10080

ggagctggtt gcctgacact agttccctcc cctctcagcc acatgtgggt ttacttggcc 10140

attgtggact agtctgggaa cccagatatg atctataaca ttgacccagt agaatattga 10200

ttccaaaacc actgtctcac aaatgaattt ttacaagagt ctgtaatcgg agcatgaccc 10260

agaataaggt tagggagatg tggagttaaa gctctcaatt tcttatctgg ccccgacaca 10320

gagagcaagg catttcactc tacattggtg ctctgtttat aaaacaaaga gcaaatatct 10380

cttcctaagg tccttaaacc tcttccccca atccagggtt tctggactgc tctgccatat 10440

gacggggcag ctggtttgat tgacccaggg aaggctggaa atcaagactg ggggatcaag 10500

acgtagattc agtgtggcca aggtcaagtc tctgaggttt agggacatca gatccccagc 10560

ttaggttctg tacctcggca aggtgaaagc gttggcgccc actgatgagg cctgctctga 10620

gattgtgggt gtgggttgag ttgggtgggc ataggcaagt cctcttgtaa gaatcttttg 10680

gcaaagatgg gcctgggagg cttttctcac ttcctggggc ccaggctttg caataagtat 10740

tccattatac tgtggtacct tggggctacc tgagaatcct ctgtctcgcc cctgttgcct 10800

tgccaaagag tttgctgtcc aagaattcct ttcctgtctc caggtgccat gctcctgcca 10860

cctctgccag gttccctgcc tgcccagatg gctcccaact gagtgtgagg aggaatttga 10920

gacaggtttt gagctttctg ggttctccag ttaggaaact ttctgtaagc atgcagatag 10980

aatgggcttc agcaaaatac aaactcgaac aacttccatg tatagtccct taattttctt 11040

tgcttttttc atatttcatc aggctccatg ctgagcccaa tcagggaccc gatagaaatc 11100

caaacaccat gtcagcgagt ccccaagaaa tgcattttgt gccaaggcta ttcaaggaag 11160

gtttgggagc agctcaaggg cagacactgt taccctcccc caggtcccca gtgcagggca 11220

gtgttctgca tgtggaggca gtttggccta atggttaagg aggtaggctc tgatcgggcc 11280

tcctgggcac aaatcccagc tccctgctca ctgtgagacc taagccatat tgtttagctg 11340

cttggagagt tttttgtcat ccacaacttg gagtatgatg gtacctgtct cacgggttgc 11400

catggggttc acacaagcta acccggtact cactagggcc aagcacatag taactgctca 11460

gtaaatggca tcatcggcgg tgtcctgtgg atgagtgctt gtgattggct gaatgaccag 11520

aggggtctaa agatcctggt gatggaatca gttgtacaga taaattgtta cactgagtag 11580

ggatcaagat aggaaaagtc ggcaactacc cagctcccct gcaccaaact gggcagaagt 11640

ggatcctctg aaaattgcac acacccatgt ttaaatgtac acacagaact cttgccacag 11700

gcaagcggag atttgtcatc tgctgtccct gcctcatctt cttcctgaaa tccactccat 11760

gccaggaata aactgcatgc tctccaccag cccaaactga cctgccttcc cgccagccat 11820

cccgggcagg gtgacctggc ttagtacatc gggttcagag atctttccag tttactcgtt 11880

gaataaaaag tgagggctga tcgagaaagt aatggcagtc agggaaggcg aaggaggtaa 11940

agaagagatt ttacaaatga agtaattcaa cagagtgctg acattggtaa actggcaaac 12000

agatttcagg gtggttggtt gagagtagag tagaaaagga ttaaataaag caaacttgtg 12060

gtgtactgaa tcttaggaat tccatgtatc caataagtat agtcatttat gaattaataa 12120

attcggccta agaagccttc ttatcgctta aatcaagact aagtaacaat atatcagttt 12180

taaaaagtca ttatatcaga aaatcattta aatgatacac atagatttcc aagattttac 12240

tttaaccgaa actatataaa tgtgaatttg ttcacccatc ttttgacaca gggctcaggt 12300

cttctcttgg tgtctggatc agccagttga aatttcttgt ctgttttgcc tatgccacat 12360

taataatgca ctgtctgggt cctccgattt cagtttggat tttgggttta cattgtggag 12420

tcatctgaat gcagaatcct tcagggattt tacttttttt tttttttttc atggtcttta 12480

ccatcccatt tgatagtaaa tattactcac ctttatgaag tctttccaaa acattcaact 12540

aaattttctt aaaatcattg aatgatttga agagcttatt cctcagcact tttactccat 12600

cagcttgcac cttatttttt aatctttttt tgagacggag tctcgctcta tcgcccaggc 12660

ttaagtgcaa tggcgcgatc ttggctcact gcgacctcca cctcctgggt tcaagcaatt 12720

ccgcctcagc ctccgccgta gccgggacta caggtacaca ccataatgct cggctgattt 12780

ttgtattttt gtagggatgg ggtatcgcca tgttggccag gctggtcccg aacttctgac 12840

ccaagtgatc cacccacctc ggcctcccaa agtgctggga ttacaggtgt gagccaccgc 12900

gcccggccag cttgcacctt atttaggata tgtgattatt atagcaagtc tggtgtacat 12960

acaagatttt gaatgggcac agatgacctt tagtaagtgc ttggctgtga taagaggcag 13020

tcctgactgc agatcaggct gtgtggaccc cagccttgca tgtttacaga ccttcatgtc 13080

ttattcttac agggtatcag aagaacacct actggggaaa cttataaatt agtaaaaggt 13140

gggcattctc cccgcccatc ttctgtctgt ctgccaggac tagcacagca ctttgaagtc 13200

attcacatag aatcccaact taagagggta aaatcctcct caacagactg aaaataagtt 13260

taaattccct ttgctatatt aactcccctg aggaaagagt cttagatcaa tgtccaacac 13320

taaaaacagt tttaaatcag caagtgagaa ttaaatctga agcaattgat aataatgttt 13380

cattcattcc tctcctttgg ccccgtccac cctactgcta aatccaggca tcaaagagaa 13440

gagggacata attatctcta gtcccagctg ctggttttcc ttccagccta tggcccagtt 13500

ttctgtttta ctgagaaggc tggtgatgtt atcttgggat ctaagtctgc agtttcacca 13560

caaaaagtcc agggatgcac tttcatgctt gtgtcctcct ccctgggata gcaaggatat 13620

tagaagaccc ctggctctgt aattgcttgt catgtgctct acagacgcca cagaatgcca 13680

agaacgaagt gctgggaagg acaaattcat ggaaccgtgg gacggtgctc ctcccccagc 13740

gtaaaggaca gctcctcctc ctgaattgga gccagcgttc taaatcatgt gtcaacagag 13800

ttgtcctgga tcggatccag ttctgccatt gatttgcagg tcatttcagt ggtacctgtt 13860

tccagttgtt cttaattgaa cagtggcacc aaactattgt cttgcctcat ccccctccca 13920

tggcctgtcc cccaaaaaga gacttcttgg gtaattaatc agggcaacat caggcagtct 13980

gggcgcggtg gctcacgcct gtaatcccag cactttggga ggccgaggcg ggcagatcat 14040

gaggttagga gattgagacc atcctggctt tgtgaaaccc cgtctctact aaaaatacaa 14100

aaaattagcc gggcgtggtg gcgggcgcct gtagtcccag ctactcgaga ggctgaggca 14160

ggggaatggc gtgaacccgg gaggtggagg ttgcagtgag ccgagatcgc accactgcac 14220

tctagcctgg gcgacagagc tagacttctt ctcaaaaaaa aaaaaaaaaa ggaatctctt 14280

tggttttata tatttttttt tatatatata atatatatta aaatataata tatatattta 14340

tataatataa tatataaata tattatatat tatatatttt tatatattat atattatata 14400

tattatatat tatatattta tatatttata tattatatat atttatatat tatatattta 14460

tatatattat atatttatat ataatatata ttatatatta tatattatat attatatatt 14520

atatatttat atatattata tattatatat attatatatt atatatttat atattatata 14580

tttatatata ttatatatta tatattatat atttatatat tatatattta tatattatat 14640

atatttatat atattatata ttatatatta tatatgtata tattatatat gttatatatt 14700

atatatattt atatatataa tatattgtat atattatata tctaatatat tatatatatt 14760

atatatatta tatattataa tatatattat atattatata tatttttata tatataatat 14820

gtataatata taatatatat aaaaacatat ataatatata ttatatatta tatatatatt 14880

atatatatta tatatattaa atatatttta tatatattat atatattata tatattaaat 14940

atattttata tatattatat atatatacac atatatatat ataaatgagg ccaggctcgg 15000

tggctcacac ttgtaatccc agcactgtgg gaggatcact tgaagccagg agtctgagac 15060

tagcctgggc aacaaaacaa gatcctgtct ctacaaaagg aaactgtaaa aattagctgg 15120

gcatgatggc atgtgtctgt agccctagct acttgggagg ccgaagcagg aggatcgctt 15180

gagcccagga gttcaaggct acagtgagct atgattgtcc catagcactc cagcctgggt 15240

aacacagcaa ggccctgtct ctaaactttt tttttttaat tctatttata tttacatgta 15300

tttaaatgtg aatattcact acctatttgt tgcatgcctg cattttttat actgggcttg 15360

ccaaaaaccc gaacagcttt ctactttgac aatgtatcag aatttaaatc agcaatatgt 15420

taataagcca agcaaaggtt atatatgcaa ataaaactgt tgtctataac ctcctgttac 15480

actggggcac agcaaaagtc atggtgtagt cgcatgtgaa cctgtccctt tcatagctgc 15540

tcattgccag gaaacatcag gaatagccat ttggaagagt catcagccct cccaccatcc 15600

gttttctgtc ttgtcttttc cctatgagca ggggaaattc cacgctggcc ccaatcccca 15660

gtgcagcggc tcagcctctg cctctgctgc tggtccccat gaggccagct tagaaacgga 15720

ggattttgca gaacatccct aaatccgctt gaataatgaa gtgatcattc ataaactcac 15780

ctgaacctta ttaaaaccta tttaatattt ttcctggata atcctatagg gataacttgc 15840

ctcctgggct tctctccacc gggttcagtt cttcctttag tggtgaagtt cctcccttct 15900

tagcatctca actgtgcctg agaaaaggcc agtggcggct gcactctgtt ccctgtggag 15960

tgttaataaa gactgaataa attgaaataa atccctttca atgtcattaa gtgctataaa 16020

taatcatgaa ccaatgttcg atggctgatg agaaatgcaa gaaaaaattt ttaatcagta 16080

ggattcataa gttgacaatc tgggccaagt taaaaaaaat aaaaataaaa agacttttaa 16140

aaagatctta tcgtttgtta ccagtaagac tgaattccag aagcaagcta ctccctcatt 16200

tgtgggcccc tgttatcact ggctgcttag ggttgccaag ccctgaattc atttgtcaac 16260

taagagattt ttggccaaga ttaagatttc ccatgcctcc atatttccat ctgagaaatg 16320

gagattatac tgtcttcccc ctcagaatgg atgataatgt ggtctctctt ctgttcgcat 16380

agtcatagaa ctgaaataaa acaacttaag agaattcctt tgagcttctc agaagtgctg 16440

cagggctggg ggatgcctcc caggagccgc agtcaggtgc tgatctgaag tctttggtgg 16500

gctgacttta gcctgacctg aaatagtata gctgctgcca cctggctccc ttagcgtcag 16560

tcagacggtg cagctggttc ctaggggtga gggctgagcc agcagggtcc gtgcccagga 16620

gggatgcatg ggtggccaca gcccagcctg cactgatctt gtctgtcccc ttctttggaa 16680

ggaaggagcc ccaaaccagg gtgcaagaca gtgggtgggg gtgccttgag catgacctca 16740

agtgatttcc agcccctgcc agtgctgact tctctgggga agggctggga cttccttctg 16800

ggctcaagtc acgacccttg gatggaattt cctgggagct tttctgtttt ttctggagtt 16860

ttcagttttt tcctaaccag acagggactt ggtacagaat ctcatattct aattatgcct 16920

aggagcagcc tctccccacc actcacagtg tttagcatgt gacaggaatc gattaaggca 16980

tgagtgatta aattaaagcc aggcattgac ttggatggtg taatattctg acatctgttt 17040

ggtgtcaaag gcacggggca ggcgcgttaa ttgaactgct tgcacctggc atttgaattg 17100

agccagagcg gggctaaagt cagtttgcct tcaccctgta aatggagggt ttctccggag 17160

cgtggatggt gggaggtatt tcagggtgta tgcataaccc ccaccctgac aatggcccat 17220

ctcttctcca gcgtggccag gtttgagtgc cagtcctggg tgtccagtgg ccccatagcc 17280

ttgcgtttta gtaaaatgct gcccccatta ccacctggtc tgtgcacttc ggtcactgga 17340

atttgccatc ttccagtccc gaatgtggca agccatggag ccttaagctc ttctccctcc 17400

acatcctgga acagacccgc cagtttcttc caggcattgc ctcagtttgc ccctctgttt 17460

ccagtcacac tctcaccagc gataaaatga ttttagacct tatcatctca ccctcggatc 17520

cttatggaaa caataatgag ttgttccctg tttcaattcc aaaattcata tccaatccgt 17580

tttgcatgcc attgccaaat tcctcccaga gcaaccccgt cacctgccct ggccctctcc 17640

aagtgtggtc ctgccatggg catcgcctgc taagccaagc tggcctcgag ctgcctgccc 17700

gggtccccac accttggctc acctccctgc ccagtcccgc ctcctgccag cctgccctgt 17760

ggctccttca tagatgccgt gctctttctg ccccttgctc acccatggca gccttgcccc 17820

tctctccctg ccccaccccc tatttaaatt gacctgacct tcctcagtgt ccatcttccc 17880

cgaagctttc cccagccttg gcactcaagg tccagaggct acgcgtttcc tctcacctgt 17940

ggcagcgccg tgctccccag tgcctcacag tttccttctt gcccccgctt cctgtgtagg 18000

actcatctgc ccacaggttg cacgtcctgt gagggcaagg actgtgtctt atgtgacttt 18060

ccttctccag tcacagagct gggcacatag atagctcaaa accctcttta ttaacacagt 18120

tggatgttga gaaatcaaac aggccaatgt caaatgagct ctccttattt aaatcaagtc 18180

agttctccac ctcctagcac tcagttccag tactctatat acatggaaat aataaaaaac 18240

acatttcctt tgaaacattc tataatcgtt cctttgccct acttcagacc aacttaacgc 18300

actccccatt ggtccaaatg agttttgcta tacgaagatg ctgataataa tagcagcagt 18360

ggattattct gctaaaacca ttgcctcgtt aatcctcagt cccgaggtgg ggattattat 18420

cctcattttg cagagaagca aactgagact cagagatttc acagctgggg agggagccag 18480

ctcatccctc tgtccaggcc caagctctct cccgcttgcc ttcctgcctc tgcaacctca 18540

gagcatcccc catctggttc tactgcctgt gctagtcgtg caggagccaa aagacacgtc 18600

tttagtgcta aggactggag aagccatgcc ctccagcctc tgtgaatggg tcatatgtaa 18660

catgagcctg gagaaattat ttgaaaccaa aggcaagcct ctaaaccagg ctgctgcttc 18720

atggcgccgg tgacggcaga accaaattta gtgctgtggg caggtccaca cttatcaaat 18780

agagaagctc atttttcttc cggctcacat caagcatgaa aaatgttcac acataccccc 18840

cacacacaca tgctttccgg aggggtccat gtggctagag gctggaagat gtggatgaga 18900

ggagcctggc aggtaagccc agggaagatg acattcagct tcccagacag catctacagg 18960

gagaaattta attaaaagtg gggcggtttc cctgagcaag gcagacaaag tcagccctct 19020

actgttaaga aaaagggtca cagtgagagg ggaggtgagg agactgagtc tgtattttct 19080

agtctgttgg gctacactac ctgatccccc ttcctcaaaa atccacttta ctttccccat 19140

gtctacacca atgtggttca cactctggga ccaggaaaag ggggagtgat ggggaacaga 19200

gaagggagga gctcacacag ctgaggctgg ggttatgcat atcgaattac ttagaatttg 19260

caacctcaca gggtactttc atggcgttga aatacacttc ccacagccac cctccctcta 19320

actaaaagca agagtcattt ctcagttctg gtcttgcctc ccacgttctc ctccacattt 19380

aagaaaatcc accagctaca aagtgaagat accatatgtg atatcccacc ctagtttctg 19440

ttttatcagg gtttggagca ggtggagcag gcagagggat catttcagcc tataaattgt 19500

attaagggtg agtactgagt cattcttcaa gaaaagtttt agaagcatcc aaaactgaag 19560

ggtggagcca cctggagaca gtatcatcag tcctggcccc gagcatggcc tgcataggcc 19620

cccatggatc ccagcgggag ctgcagagtg cgggcacctt ggcacacagc cctgagtgca 19680

aaattaggag ctgggcagag ggcatctctc tgtcgccatt gggcagccca gggcacactg 19740

gtcatagcct tagaccacga acaccctgtg cccgggggac agatgcaacc agtgtgccct 19800

gggctgccca atggcaacag agagatcgac acctggaccc catgtcacgg ggactccact 19860

actaaggctc ctaagactgc caccttccag tgggataagc cctgcctcct actgggccca 19920

caatgtgcag agaacacttg ggactacctg gctttctgga tacacaaata ttgatccaat 19980

ctggactaat tagaaggtca gtcccaataa caaatcgaag tcagctgggc gtgatggctc 20040

actcctataa tcccagcact ttgggaggct gaggtgggca gatcatttga agccagaagt 20100

tcaagaccag cctgggcaac atagcaaaac cctgtctcta ctaaaaatac aaataattag 20160

gctgggtgtg gtggctcatg cctgtaatcc caacagtttg ggaggctgag gcaggtggtc 20220

acctgaggtc aggagtttga gaccagcctg gccaacaggg tgaaaccccg tgtctactaa 20280

aaacataaaa attagccaag catgatggca tgtgcctata atcctggcta ctagggaggc 20340

tgagacagga gagaatcgct tgaatccagg aggtggttgc agtgagctga gatggtgcca 20400

ctgcactcca gcctggttga cagagcaaga ctctgtctca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 20460

aaaagccatg cctggtggag cactacgtgt aatctcagct atttgggagg ctgaggcacg 20520

agaatcactt gaacctggga ggcagtggtt gcagtgagct gagatcgcgc cactgcactc 20580

cagcctgggc gacagagtga gtgagactcc atttcaaaaa aataataaat ctgagtcact 20640

ttaatattgt tatttggatg tcaacctcta ggtgtttgag acaggagagt gatatggggg 20700

cactggaaac acacaggcac ggggtgtcct cacacttggg tagcccacac gatgtgattt 20760

cagggtgctg ggaggtcccc ccactcccca aattactaac aagtggatag tactttacag 20820

tttatatgat ctcatttgat tcttaacatg agcctgtgag tgaaaaattc cttcccctct 20880

tctacagatt aggacgttga gattcaggga ggttcagagg gattcaggga agtcaagtgg 20940

cacctggagt cccgtggcta atttgaggcc ggtaggggat tcgaacccag gatttgtgct 21000

tcttatgcct gggcttctgc tccctggggc atggtcttcc ccctagcttt cccattcact 21060

gctttagcct aggggtccta ccctttatta aactgccagt gcctcactgc ttttctcccc 21120

caaagacaaa aaaaaagtgt ttttgctttt gttttgtttt tcatgggcag agacctggaa 21180

tttcagcttg agaatttgtg ccatatgata aataaatcaa cagatggctt tttccttaaa 21240

aaaaaaaaaa aaaaaaacta agatgtattt gcagtgaggc ataatttgta ccaaaaagtg 21300

ctcaccacac tgtagtcatg ggggcaggag gcagccgcgg gtgaagggag aaatcttgga 21360

gtccaggcag cccccttctg ggctgaactg gggagctggg ggtgctgcca gccctgccag 21420

gttctcctag gaggcggcag ctcatatggc tgtgggagga ggcagaggga gcctcatatg 21480

cacccacatt tccagggatc tagaagacag aaggaggaaa accaccatca tgttaaagca 21540

gacagttagg taacacatcc tgtaatacaa gttatttttt ccacatctaa aggctaaaaa 21600

tagttgttag aatttaaaga taattggtaa atgagtttct atccttctag tttcacatca 21660

aatggaatca tgctgccttc acatcactag tgcccgttat ttgtgtttaa tttccacaat 21720

gttgtctaat tccactcttt gggcttcccc agggatccag cctccctcac tcgcccatcg 21780

cagggagatg ctttattcat ctttgtgtct tctgtgccgg gcatagcgca tggcacagaa 21840

taagcactca gtaattgatt cacgagtgaa taaatggatg agtgggtgag ttcaatattg 21900

actacaaaaa ccctaaggcc acactggtga gtggctgcgc ctgtagtccc agctgctggg 21960

gaatctgagg caggaggatc tcttgagccc aggagtttga aactagcctg ggcgatatag 22020

cgagaacctg tctcaaatga caaaaacagg gccaggtgca gtggctcacg cctggaatcc 22080

cagcacttta ggaggccaag atgggaggat cacttgaggc caggagtccg agaccagcct 22140

gggcaacata gggagaccct gtctctacaa aaaatttttt aaaaattagc tgggcatggc 22200

ggtgtgcgct tgtagtccca gctactcagg aggctgaggc aggaggatca cttgagccca 22260

ggaaattgag gctgcagcga gccatgatgg caccactgca ctgcagcctg ggcgtcagaa 22320

cgagacctgc tctcaaaaaa acaaacaaac aacaaaaaaa aaggctttct taaagagact 22380

tgagaacaga aaggggaaca gatacataac ttatatattt atttgttcat ctttccacct 22440

tcctggaggg tggaggggaa caggtctgta tttggagttt tgaatgctaa aagtgggaat 22500

acatgtactg tttgccatga tctgttcaaa agttaagcca aatgccttag attctcctga 22560

aaactggaat gccactgtaa actataagcc ccacttcaaa gataaaagat cttgatgaac 22620

agggctgggt ctgtggactg ggcctctccc caccacacaa ggaagggtgg tgccagttga 22680

aggaaaatca cttaaatcct tgctgtctcc taataaggtg tggtcccagg tagggctgtc 22740

agaattagca aattaaaaca cagggcatct gtgaaaatta gaatttcaga taacaacaaa 22800

taattggcat aggctgcata atgtccctca aagatatcag gtcctaatct ccagaacctg 22860

taaatgtgat cttatttgga aaaggggtct ttgtagatgt ggttaaatta aggattttga 22920

gatgggggga ttatcctgta ttatctaggt aggtcctaaa tgcagtcaca ctcatccttg 22980

taagaggaag gaagagagag atggaaaaca cagaagagaa gacaatgtgg tgatggaggc 23040

agagattgga gtgaggtggc cacaagccaa ggactgctgg cagctaccag cagccagaaa 23100

agtccaggaa ccaattctct cttggagctc cagagggagt gtggccctgc tgacacctta 23160

gcttcaacct agtgatcctg attttggact ttggccttca gaagtgtgag ggaatgaata 23220

tctgttgttt taagccacca agtttatggt catttcctac agcagccaca ggaatcaaaa 23280

acagtaagta tgtcccatgc aatgtttgtg acacacacca aaaatattac ttgttgttca 23340

cctgaaattc aaatttaact gggtctcctg tattttattt ggccaaccta gttcccaggc 23400

ccaaagaaag aggcttttga aatttgcaag aaagctggtt ggagctgtca gaaagtggac 23460

tttgtaaaca cagtaccacc gaaccaattt gaactgtact acctctagac aaaagagagg 23520

gcagtcagac agttgttcgt gatttcttct ttcaacagtc atttgagcac ttactacaaa 23580

acagaagcta tgtgtaaggg tggaggcgtt agctgttaat caggacctcc aggctaagtt 23640

tctgtattag tccgttttca cgctgctgat aaagacatac ccgagactgg ggaatttaca 23700

aaagaaagag gtttaattgg acttacagtt ccaagtggct ggggaagcct cacaatcatg 23760

gcagaaggca aggaggagca agccacatct tacatggatg gcagcagaca gacagggaga 23820

gagagcttgt gcaggggaac tcctcttttt aaaaccatca gatctcgtta gacttattca 23880

ctatcaagag aacagcacag aaaagacctg cccccatgat tcagttactt cccaccagat 23940

ccctcccaca acatgtggga attcaagatg agatttgtta ccatatcagt taccaaccct 24000

tccagataaa tcacgtgaaa tatcgccatt aacagagtga gctcaggtgg ttcttcagtg 24060

catttctgat acctgaacct tccctgggaa tttcacagac catcaggctc tccacccttt 24120

gatagcagga tagcagggcc caggttctgc aggaggagat gttaccacag gcctgaaagg 24180

gagggagggg cagatgctac aggaagatgc tggctctgga ttcgctggag gagctttcaa 24240

gggaagtaga tacacactgt ctccatcatt tcatgtccat cacactctaa aatgctttgg 24300

acaagaagca aatgttaaag acaaatgtgg cccattttcc tgtacaaaga gggctgctcc 24360

catgccaggc tattggcact ggtgggcatg aggcttctct gctgccctgg ccggggggtt 24420

ctctcactca ccattggctc tctgacacct ggagagacca ccacccttgg gctttcatga 24480

tgctcacaga atccacactg ttggagcttt aaggagcctg gatcaactgg aacaggcagg 24540

gagtactagg acagcccagc attgccccaa aatatccagg cctgataaaa gagaaaaaca 24600

ggtagctcac aggaaaagga taaaaaaagg aggagggatt taacatgaaa aggtgcttga 24660

tctccctcat aataaaaaga ctgctgattc catccaggca agtgacagaa aaaaaaaatt 24720

taatttaaaa agactgctga taaaaccaca gcgagacact gctgctcagg gatctgaggg 24780

tgtgggcagc caggctgcca cgcatcatgg gtcggagagg aagaccacac ccctggagca 24840

gagggcggct gatctgtcag atgccctttg acagcacctc agcttccaag aattaaccct 24900

ttctatgtga gcagaggcat ccatgggggg acacactggt gaatcatctg ttatgtagaa 24960

gtctggaaaa catcaggatg gaactggtga aataagtgtg gcctctgacg gaatggagcg 25020

gtccgtctgc actgctgcgg gtgcccctca gatcctgtgg gtcagtgaga aaagcagtga 25080

ggaacaaggc aggtactgtg tactgtcctc tgcgtgcaag gaaggccagc gcatgcaaca 25140

gagtccacac agacatagcc taactctgga aggaagaatg agaatgcagt ttcagtggtg 25200

gcctctggtg gggagaaact gggtgaaggg agatgtcatt tccatttctc tactattaat 25260

tttgtattac catgcttaaa tgttactttt tacctttttt tttttttttg agacagggtc 25320

tctctctgtt gcccaggcag gagtgcagtg gtacaatcat ggttcactgc agcctgaacc 25380

tcccaggctc aagcaatcct cccacctcag cctcctgagt agctgggact ataggcacgc 25440

ataccaccgt gcccagctat tttttttaat caagatggag tttttctatg ttgcccaggc 25500

tggtctcaag ctcctggact caagcaatcc tcctgcctca gcctcccaaa gggctgagat 25560

taaaacgtga gtcaccctgc ccagccaatt gctttttaaa aaagattaaa tgcatgtata 25620

cgctcaggca tcagcacact tggaaaggat gaaaatatcc ggaagaaggg ttcttttaaa 25680

aggctcctca agtgatgctg gcaggcatga cgaatgtccc tggtcacaaa agctctgatc 25740

tggcctaacc ctgtcatgtt agagactgga gtgcgtgtgt gtgcgcgcaa agtgtggggg 25800

gatgggggtg agtgtgtgtg gtgtgtaagc atgagtgtgt atgtgtgtgg tgtgggggtg 25860

tgtgctgtgt gagcgtgtgt gagtctgtgt gtgtagtgtg tgtgtgaagt atgtggtgtg 25920

tatgtgtgac gtgaggtgtg tgtggtgtgt gagttgtgta tggtgtgtgc atgagcatgt 25980

gtgtgggcat gtgatgtgtg tgtggtgtgt aagcatgtgt gagtgtgtat gtttgagcat 26040

gtgtggtgtg ttgtgatatg tgtgtggtgt gtgagcatgt gtgtgtgatg tgtctgtgtg 26100

tggtgtgtgt gagcatgtgt gttgtgtgtg tggtgcatgt gtgtggcgtg tgagcgtgtg 26160

tgtgcattgt gtctgtgagc atgtgtgagt gtgtgtgtgt tcagcatata taaggcatgt 26220

aactgaacac agcactttag agggctctcc tggagtcaga gggggtgggt aggaggagaa 26280

gggaggtggg ctagtgtgct gaagtatcta ctccttgtca tagtctgtga caacccagac 26340

tagcccatga gccaccctgt tccctgcatt tccaatgaga cctcggtgga catgttccct 26400

gaggtgaggc tgactgatgt catttgacga tcttgatgcc aaatcctttt atatcaaaaa 26460

caaccagaac actctctttt ctcttagtgc tttcacccag atgaccacat ttcatcctcc 26520

cagccactct gggccaggtg gcactgctgg tttgaaaggg aggtctcccc tggagtaact 26580

tccgtgggcg gattcacacc ctgcccacag tcctgtccca gtcagcccac catggtggtc 26640

tccggttcct ccagaattcc cgcttttcag ctcatcccca cattcccgga gggactgaga 26700

gcgcagcccc agggccctgc tctttggggg ccgtctctac acccagagaa gcagcaaggc 26760

attcctaggt ttctctttca gatgcagaac ttcagtgttc agagatgttc ccactggtcc 26820

tgagagggct cagttcagct ttaatgactg cgctgttgcg tgtgctctgc agagggcggg 26880

tggcccagcg tggctgactg cagttttcct gacgtggagc ccgagcctgc cccgctgttt 26940

attaattaag gatcactctg cttgcagaac cctgaactcc ccagaactgt gaggtgggag 27000

aaccccgaga ggccacctgg ccccacttcc cacctgctgc ccaaaccccc tctctgcctt 27060

cctgacagtc accccaactc ccagtgatcc ccatcaacca tctgacaagg ggactgagag 27120

ggaagagaaa ggaggggccc aaagaggaag gtaaaactgt cgggaacagc ccccaaatgt 27180

gtgacagcct tcagtggagt tgcccacttt cccttttctc ctccctgcag gacctccctt 27240

ctccccagtc ctccccaact tctgaggtta cattgagaaa agtctgcaga gaggtgccag 27300

catcacaagg tgttaaggac cacgagtttg gcattttaac agatgccaga gccacttgag 27360

aaatgtggta actaagccca gagaggtaca gttaacctcc ccagagtcac acagcaggtt 27420

catggcaaag ctggactagc acaggtgtcc ttcccctgca gatccccttc tgtgccccac 27480

atcacctccc tccagtgtct gggccacctg gagatgggcc ctcagactca cccggccaga 27540

ggtgccatct catgggagag gtctggccag gaagcatcga tatttgagat cccaagaaat 27600

gaagacttgg cctgtcagat gacagacttc ggtcatggga acacgtgatc tgttttacac 27660

atgcgtcccc tcagcagcag ctttccagaa cattcccact ttcttctgta gtgagaagaa 27720

ctctttccct gcagcctcct gcccaactcc tccttcagtg tctttgcttc agtgtctttg 27780

ataaaccatt ctgctttgca gagtgcgagc tctgccttgc agggttcgca tctgcctgtg 27840

ctgagtaacc aacgctaagg tcgagtggtc ggtcacctct cataagagct agggttgtct 27900

catgctgatg actaggactt gccctcaagg agaaaaataa atcaaaacaa aagcaaaaac 27960

agcaaacatg catctcttaa agaaggctct gagtccaggt aaatttcctt ccactgaagc 28020

agccaggctg aattcgaatt atctttgccc ctgcttaaaa actaatgcaa attttcctag 28080

agaatatcca ctaattcctg gagggggcat gggcattcct gatgcccatg agaggaccat 28140

ttgctcttcc ctcagtatgc taaataacag aagcgacatt tgttgctgga aagtatcagt 28200

gaagttaata aggtttttct tgcccagggt gagggaacag ttcccaatga caaatgctgt 28260

atgggaaggg gctgtagaac tgccagcccc tttggtccat ccgtaaagtg aactctgtgg 28320

atcctggagg attccagcgt cttttttttt ttttcttttt ttttaagaca gagccttgct 28380

gtcacccagg ctggagtgca gtggcacgat ctcagttcac tgcaacctcc gcctcccggg 28440

ttcaagcgat tctcatgtct cggcctcccg agcagcaaga ctacaggtgc gcaccaccat 28500

gcccgactaa tttttgtatt attagtagag acgggggttt cactctgttg gccaggctgg 28560

tctcaaactc ctgacctcag gtgatccacc cgcctcagcc tcccaaagtg ctgggattac 28620

aggcatgagc caccatgccc agccagcatc tttcattttt ctgtctgctt tggccctttc 28680

ctctctcact gtcttccttt tccatttcca aagtcagtcc atctcactat tagcacaaaa 28740

actgctagag cgcttgtcat tggtcatctc tccctgcacc tggctggtct gttcttggcc 28800

actgaagcgt ttcccccagc tgttgcttta atcattttat tgttattatg ccttacttaa 28860

gaaatggata tgagatgcat ttacctgtct cttcctgcca ctctgcagag ccagtaagat 28920

gtggtggaaa gggcccaggc tttggaggag ggctggctgg ggttggatct tggctgcccc 28980

ctactagctg tgtgaccttg ggtaagtagc tggacctctc tgagcctggt tcggaatcat 29040

agcacctctc tttcagggct gctgtaagga atagcagtgg tgtgtataaa gcagagcgca 29100

cagccagcaa ctggccccta gccacactgc tgagcaccta ctgtgataag ctgccattgt 29160

ggtgtgtgaa gcaaagggga aacatgcctg ctgtagtgag cttcctgtag ggcaggttgt 29220

agaaccagag gtgggttcca aggttacaaa gggactctta gtgtattagt ctgttctcac 29280

attactataa agacctacct gagactggat catttataaa gaaaagaggt ttaattggct 29340

cacattggct gggtgcggtg gctcacgcct gtaatcccag cattttggga ggccaaggcc 29400

ggcggatcac ttgaggtcag gaatttgaga ccagcctggc caacatggtg aaaccctgtc 29460

tcttctaaaa taaaatacaa aaattagctg gccatggtgg tgtgcgcctg gaatcccagc 29520

tactcaggag gctgaggtgg aagaattgct tgagcccggg aggtggaggt tgcagtgagc 29580

caagatcgcc ccactgcact ctagcctggg cagcagactg agactctgtc tcaataaaaa 29640

aaaaaaaaaa gaaaagaaaa agaattgcaa gaaataaatt attgtttatg agctatatgg 29700

tctgtggtac cttgttgtgg gactgggagt cttggcgtct ccctgaccct gcctgttgct 29760

gcagcaccgc tcagccctgc ctgctcccta cctgcctccc ctcggcctct cctgcctcca 29820

ccgggcccct ggtgcctcct ctagagacag tcctcctggg accgattgtg ttctcactta 29880

cacgaggcat ccaggactac agataaccag aggaaggggc gccccccccg cctgccctcc 29940

tccctggcat cctcacgctg cagaggtcag agcctcatcc cagcccctta cctgccccta 30000

ctctgtggag aaccgtggtc agttcgccag gccggatcca cgaacggcct tgtggaagat 30060

ggtgagctca cacccagagc tggctccgat gaccctgtct cctttacatg tttctacctt 30120

cccctcccta ccttccccca ctgctgggcg cagagtggag gcagatgagg tttaaagctc 30180

agaagggctt aaacgggttg gggcgcagtg gctcatgcct gtaatcccgg cactttggga 30240

ggccaaggca gaggatcact tgagcccagg agttcgagac caacctgagc aacatagtga 30300

gaccgcgtct ctacaaaaaa taaaataaat aaaattagct ttgcagggtg gcatgcacct 30360

gcagtccctg ctactcagaa ggctgaggtg ggaggatcgc ttgtgcccag gagtttgagg 30420

ctgcagtgag ctatgctggc accacagcac tccagcctga gtaacagaat gagatcctgt 30480

ctcaaaacaa acaaacaaac aaacaaaaga aggcttaaag ggggctccag gtgggcttgg 30540

cagcacaaag ctatgaagtt ctatcttaga cacaagttct gttactgggc ctttgcaggc 30600

tggcctgggt acctggctgc catagacagg gaaccttcca gatgagctgc aggcgtggag 30660

cacaggagcc agggtgctct tcctgggctc tgtccacagg cagaacgtac acagtctttg 30720

tacacgtccg gcggctctgg tgcctatttt tgtttgtgtt tttcttttgt ttggggggat 30780

ggatttggtt tcccccgagc cctctgtcct cctgtcacct ggctggtgct cggcaatgtt 30840

gaccagctgc ctggctggag ttggcagtgg ctaaggctgt gacagctaac atgttcctga 30900

gtcctctcat ttcttcacca taatgccctg ttgagtttgc agatactgtc tctgttttta 30960

tctcccgggg aaactgaggc tcagagtggc taggccacct tcccatggtc cctcagctca 31020

tgagggccac acagggcatt gcggtggcct tctcctcagc cttgaccctc cggccccagc 31080

attgctgcct caaggggtct cctctgctga gccgtgcacc ttctgcctgg cagctccaac 31140

tctgtggctg tgttcagtgg ctcagcactg ccccttgacc ctccctggcc ttctgcggat 31200

gccagactgg agcactctga caaggtctgg ggtggttgta tgggtcctgt gacctctata 31260

cacctcccag tgcctgggaa tcctgcagat acaccctcct tagccgtccc taaccataga 31320

ggacatttct gaggtccccg agagagtggg gcacccctgc aggatccaac tgctgggccc 31380

aggaaggata gcagcagcat gaggggttcc attagccaca aactcacggc atggaacctt 31440

cacccacctc gcccctcatc tgctgtttag cacctggcac gccgtgtata cttactgatt 31500

attacatttt aatggcaaat tatagtggca aacgtatgca tctttgcaca attgttgtac 31560

agcatgatga acaagtcatt aatagtaaag aataaatgtg aaagtgagaa aaatctgact 31620

gccaaagttt ttactccttc cttccctccc cagactttta aatgaaagtt tagggataat 31680

cccttagttg tcctgctagt aggacttgca attaaaagaa ttgggccaag aacacttcta 31740

cgcttctcct tttaggtttg ggtgtaaatt cggggtattt ctcactgatg aaagcctggt 31800

gcagggcaga ccgtgggaag ctttcatttc cggaatggac catcaacatc ccttggagaa 31860

gaattctctt ctccagaccc agacctggtg tcctggcacc cattgggcaa gtgggtccta 31920

gaagacaaac ctggtcagag cctggaggct gcttagcatt ccccacgcac attagcagct 31980

cggagagctc aggaagccgc agcccctcct tgcctcacca gcctggatca ggacagcatc 32040

ccctggaaga cacacagggc ctggcctctg attacccagc ctggagggaa agctcaatcg 32100

agcatcatgt cacccggtgc ccccatgcag ggtggcactg gtgagacccc caagccaatg 32160

ataccacctc acaggagtgc aggcccattg tggccagatc atcttgactt ttcaagataa 32220

atcagaaatc gtatttccat gagatatccc tatttgcaag tgatggtgac taaattagaa 32280

gtttttgaat attgtaacat gttcgtaggc tgtttgtctg gtttaaactc tatctggagg 32340

aattcaagct agacttcagg aataacttct tgaggcaagg attttgagac cttagggaaa 32400

gaaggacgtc ttgggggtat tctgactgtt gtcctcctgg aagggaagaa cagagaacta 32460

gaagactgcc cttagcgaag ttcaaagcac ctaagcccgg gaccctcagc aagtgttctt 32520

gagtcacaga ttctccctga ggcgcctctt tctggctcca tagaatggct gattctgtaa 32580

ctcggtgagt ttgctttttt tttttcctcc atcacccagg ctggagtgca gtgaagctgg 32640

agtgccgtgg agcgatcact gcaacctctg tctcccaggt tcaagcaatt ctccttcctc 32700

agcctcccaa gtagctggga ttacaagcat gcagcaccac acctggctaa tttttgtgtt 32760

tttaatagag acggcccgaa gtgctaggat tacaggcatg agccaccgcg gccagccata 32820

actctgtgac tcttgttaca aaggccttat attttgctct ttgagggtgg ttttggtttg 32880

atgcctgttg gttgccatct tttaactagg gatgttttat caaaatgccc agccaaagtg 32940

tccaaacaaa ttatacctta aagtttgaaa atgtctggca cttctaattc aatgcctgtt 33000

gtgccaggca ctgggctgct gaggaactga gtcccgtccc tgcaggctag ctagagaaca 33060

cacacacaca cacacacaca cacacacaca gagtggtctt acaagtcagt tttatattct 33120

acctatatgc aataaaggta ttattatgtt gaggtgcctt gatataaaaa tttttcttaa 33180

aggagaggat gcctaaaaca ggcattacct gaaacctcct ctctccagca ttggttgtct 33240

tctgtcatga ctcagggttt tcactgagaa tgggatggaa atgtggtcta aagatagggc 33300

caatgttggg actggatccc ctctgggaag tcagaccagg ctagggcagg tccttgaagc 33360

catcaggaaa agcctctgga gccagaaaca aaacaaaaaa aaaatggtgt taactaaact 33420

cagtctcaaa tcctgaatag gactcaagtc aagcaaaata attaaaggag ttagcaaagg 33480

gcaagtcaga gagaccgagc aacaccaatg tcttccggga gccctgtggc gagtgacaga 33540

gcctggactc tggagtagaa ctcatcttgt gtcttcttct gccactcgtt agctgggtga 33600

ccttgagcca agccccttaa cctcttggac cctatgttct tatctctaag taggggctgg 33660

taatatcttc ccctttgagg aatgccctct aaggggtgtt gtgaagattc ggtaaggtgg 33720

caggggtagg actcctggcc agaaacaggc acataataaa tgctaagtct ctccttctct 33780

ccacctgctg gatgctgtag atactaagga tttcgatgtg aatgagacaa aacccctgcc 33840

ttccaggagc ctttgagaat cagagaacta gacccatttc cagaacaagg ggatgcaggg 33900

tctggataaa gttttgggga tcaatagagc agagggctcc cagaggatcc catagggttg 33960

actcctaact caagggcatg agacaacccc caggaagggc accctggaag gggtccggct 34020

gtccctgatt tacttgtggg cactggggga atgcccggag ccatccagcc ctcagggctc 34080

tgtgtgattc tgggttcctc ccataaaaga taatcagatt ctttcacgtt aatgtctttc 34140

tccacctcat tgcacatcat gcagctattc attgactcag caagtatcag ctttgcatgc 34200

gaccttggcc tacccacttt agcttttagt aatagctccc ttcttgaata atacaaccag 34260

tggggaaaca gaacctaact cttacctctg ggaggcttat ttgctttgag aacatatgtc 34320

ctgcagtttt gttcatatgg cagtgaagtt tcgtgcacac actctagagc caggcagcct 34380

gggttcaaag cgcagctctg ccaggtccta actgcatgaa tttgggcaag tcgctcaacc 34440

tctccatgcc tgagtttcct catctgtaag attggagcaa tggtaatacc tgctttttag 34500

ggttgagaag agaattaaat gaattaagat gggtaaagtg cttagagtgg agctttgcaa 34560

gtagtaagtg ctatgtaagt gttcgattta aaatgaaaga cccttaaata cattctttgt 34620

tcatttcaca agcccttcat ttcacaacct tacatttcac aaccaagctc tgtctcccct 34680

ggaatccagc cataactctg ctcacaagtg tgagacaggc cccagcagag ctgcacgaag 34740

aggagagaag gcagcccccc agactcccaa ccccctgtcc aagatggcaa aaccagaaca 34800

cagcctctgt accaccccag caggtattca gaatctgcaa tctccaaagc ccacttcaat 34860

tgtaaatgta gagccacgtg cgctttaagt cacctgtcac tctggaggct cttttgctca 34920

gttcctcacc attagcaggg atgacaggga gtgcaggagt gcggtcgact cccagatatt 34980

ggagagcgct gggctagctg cccattctcc cggcctccac tcctctttgc tgtccagcca 35040

tcacttgctc tttgaaggca aacaaaacag aaaacagtgc caaaagtatg ggaagaaagc 35100

cagcttctcc cctggggtgc ctgtgatgcc atgcccaccc tccctgacca cgcagcccct 35160

gtggaccctc agggccccaa gcccccattt ccatcacatg cgtacaccca tgtgtgtcca 35220

tagccgccca tctcagtcaa taaggctgct cctgcccact tggaatagtg gtgacaacca 35280

ggagtggctt atgggaacta tcccaatggc ctgacagcat gtccgctgca aaccgctgag 35340

gtaggacact gccctcatgt ctagctgatc agcaagaggc gcagttgctt tcttaggtaa 35400

cattgctgct gtgtcctggc cattgctggg gggtggcact taatctacac cagatttttc 35460

cctcctgtat cttccaagct gcttggatct tggtgctgaa ttaggttgga ctttgtcttg 35520

tggggaaggg aggactatag accctcaacg taagcaatgg tcagactatt ctaagaaaac 35580

tcgccgaatt aaagcatgag gtaaatttag ttctgacttc tgtccacccc actgccactg 35640

tcccctttta tcccatgatc ccttgctttt cttttcctcc tctctcccta tctcttgtgt 35700

ttgacgcatg ataggaattc agaaatatat gtttgtggat ttgtttattc acgtagcaaa 35760

ccatttcttg agtgcctacc atgggccagg tagaatgggc ggccccgggc tgcagtggtt 35820

tcttcagccc ctctccaggg tttacactgt gcaagacggt ttgtgatggg tcctcccatc 35880

gaggaccaca ctcttctttc tctgtgcccc ttggtcctca gtctctgacc ccacttcaaa 35940

ggcagcattc actcagggaa gctcccatac aatgctagtc agagtaaaag tttggacaaa 36000

ttgccaggaa gcagcttgtc agtatgcata aacagccttt aaaatattac tactctttga 36060

cccagaattt cacttctagg aatctgtcct aaggaagtag tcacatgcaa aagatttatg 36120

taccaagatg ttcatcaaag tgttgtttta taacaggaag tctcagaagc tggataaata 36180

tccaacctct ggaaatggtt agatagaata gtatgtagcc attagaaaat tatgtctatg 36240

gggtttaaaa tgtcatggga aaacacttct gacataaaag agcatgagaa ctgtatattt 36300

agcataatct taactatgtt ttagaatgca caggaaaaaa atgtacaaac atattcatag 36360

tgatgtctct ggtggtagga ttatgatcag taagtacttc tgtctcttca tattttcctg 36420

tatttgataa tacatgcata tgttgttttt aaaataagaa aaattttaag tttaaaattg 36480

gagctgaaaa gtgtttttag gtcaggcgag gtggctcaca cctgtaatag caccactttg 36540

ggaggctgag gcagtcagat cacttgagcc caggagttcg agaccagcct ggccaacatg 36600

gtgaaacccc atctctacta aaaataaaaa aattagccat gtgtggtggc acacatctgt 36660

aatcccagct acttgggagg ctgaggcatg agaattgctt gaacccagga ggtggaggtt 36720

gcagtgagcc aagatcgtgc cactgcactc tagtctgggc aacagagtaa gactctatgt 36780

caaagaaaaa aaaaaaagaa aagccttttt aaacagtagc agacataact atataatcct 36840

tactaagctg tcggtcaaat ttttatttat atatttattt tattcattta ttatttttag 36900

acagggtctc actctgttgc ccaggctgga gtacagtggc gtgatcatgg ctctcttcaa 36960

acttgacctc ccgggctcaa gtgatcctcc catcttagcc tcccaagtag atgggaccac 37020

aggtgcatac caccacacct ggctaatttt ttttattttt tatttttaga gatggtgttt 37080

actatgttgc ccaggctagt ctcaaactcc tgggctcaag ctatcctccc acctcggcct 37140

cccgaagtgc tggggttacc agcatgagcc actgtaccca gccctcaaat ttttaaaaat 37200

ctataagaga cattattgga caattagaga aattcacata tggacttata atagtatcag 37260

agtgtgtggt gtgatggttc tggagggaat ggactttttc tttggagaca ggcttttcta 37320

tgcccaccct tttatcttgc taacttatca tcatccaggt tccagcagaa acattacttc 37380

ccccaggaaa tttcttaagg gtgcagtatc atgatgtctg cagcaaattc tcaaatagct 37440

caggaaaaaa gtacgtgtgt ggtatgagtg tgtgtatgta tgtgtgtata tatatacaca 37500

tatatacaca tatatataca tatatgtgta tatatataca tatatgtgta tatatataca 37560

cacacataca catatatata cacacacaca tacatacatg tatttttata taattatata 37620

tgcagagagt gcaaatgttg ccaagttaaa gattggtgag tctaggtgaa gggaatatgg 37680

tatttattgt attatttgtg caacttttct taagtttgaa aattttcaaa acaaaaaatt 37740

ggaggaagaa ggcatgccag tctaccccaa gccctccatt ggaatgctga aaatctaaac 37800

aatgtgattt ggcaatttca tttcttttct gttgtgggcc agtagtcctt agatgttggg 37860

gaagggggta gtcgctgagg tgtggttgac ttaggatgga agaagcagaa gtcaagactc 37920

ccagggtcaa agtggtttgc tctgctgacc caagtgtggg aggcccagag tcagcgtttc 37980

aggtgtgcta attcagcatg gttctattca cggccaaagt ccaccctggg cacctctctg 38040

gcagcaatct tgggtgactc tactaaggcc aggcctccat gaccctatgt ctggatccca 38100

tatctccacc tctcccactg tctcaggaac ggtgcttagc tttttctttt ccctctcctg 38160

tcttctttgc cagcatgtag aaagtttaaa taattcccct ctttacaaca aaacaaaaca 38220

tacccccttc agtcaaccac cctagctctc ttctcctttt cccagccaga tttttttaaa 38280

agcatcctag gccaggcgcg gtgactcacg cctgtaattc cagcactttg ggaggccaag 38340

gtgggtggat cacaaggtca ggagatcgag accatcctgg ctaacatggt gaaaccccat 38400

ctctactaaa aatacaaaaa agtagccggg agtggtggca ggtgcctgta gtcccagcta 38460

ctcgggaggc tgaggcagga gaatggcgtg aacctggtag gcggaggttg cagtgagccg 38520

agatggcgcc actgcactcc agcctgggtg acagagtgag actccgtctc aggaaaaaaa 38580

aaaaaaaaaa aaaaaaaagc atcctcagca ctttggcaac tccatctcct cccaacatgt 38640

ccctgttact ggaatccagc caggactcag ccccgatctt tctactctaa ccagttgtct 38700

cagttaacaa ggacaggttt atgctgcagt gacaaacaag atcccaaatt cttgtggctt 38760

cacacatctg gcaccacctc atcttccagc cttaggagtc atcttttagt tccttgaaaa 38820

ctctttacag ttttctgttg gggccttgtc atatactatt cccctggaat gttctttcct 38880

atcccctccc tttcaccttg ctaacttgtg cccatccttc aggtctcagc agaaacatca 38940

cttccttggg gaagttttct ccaacaccca cactacacag gtgtcccatc tacactccta 39000

tgactttgtg gtacttgtct cacttcattt tccactgcct tccccacaag gcacctgcac 39060

aagggcaagg accgtaccac tgtacctatg tcactcattg ctgtggtcac ctgcactctg 39120

gctgcctacc ttaactacac attagaatca cctgaggagc ttttaaagcc acaatgcaag 39180

actccaccct aggccaattg gatccaaatc cctggggtag ggccagacat cagtggagtt 39240

atatatacat atatatattt tgtttgtttg tttgtttgtt ttttgagaca gagttttgct 39300

ctgtcaccca ggctggagtg cagtggcgcg atcttggctc actgcaagct ccgcctctcg 39360

ggttcacacc attctcctgc ctcagcctcc tgagtggctg gaactacaag tgctcgccac 39420

cacgcccagc taattttttt gtgtttttag tagagatggg gtttcaccgt gttagccagg 39480

atggtctcga tctcctgacc tcatgatctg cctgcctcat cagcctccca gagtgctggg 39540

attacaggca tgagccactg cacccggcca tcagtggata tatttttaaa gcactgcaga 39600

gaattctgtt gcatcagctt gagaaccact gatctgcctt gtgcttcaca tttaaaactt 39660

ttttttaatg aataaataaa ccccaaaaaa ttaatctccc taagcctccc tagaagatag 39720

gatggtaagg atattttcct aggtaaaaat atgttaattt catatttcat gaaatttcat 39780

gtttcatttc aatcaagctc tgtcatacac cttacatggg gcaagcccag tgcctgggca 39840

gggtgtaatt atactcatta cacaggcaag gaaaagtcac attaggtgat ggagcacaaa 39900

taggcagtta atggtttcag ggctagttag gatatgtttg tctttcaatt gcaagtaata 39960

gaagcccaaa gaaattggtt atttatataa tataattgat tggttcccaa atttgaaaaa 40020

ttcaggaata gacccagctt aggtacagct ggatccagtc actcaaacaa tgtcacaaag 40080

aaccctttga caggaatgta tcctgtgttg actctacttt gctctgagta gtctttcccc 40140

aggtgatgat aaaaatggtc atcatcgcca ggcttgtgtc ctgtttagta ggaatataca 40200

agaagagctc agtaaatgct ggccccacca ctaagcaaaa acaaaacttt tgttgttgtt 40260

attgttgttt taaataacag cttagacctt tcttctttcc ttgttattct ctttcatctg 40320

taatccagtt ttctacttct gaagtataga atgttctgat gatttattct tcattaccca 40380

caacttgcac atgtttattt aaaaatgcca ggattgcctg gccgttgtgt gctgttaacc 40440

tttgtttgct gttagtggat ccctgaagtt caggctccca ggggagcaga taatgggtat 40500

ccagttcctg caatatccac cctctggcaa gccaagttcc ttcctgggta aggttttgcc 40560

tacctgcatt cctagggaag tttctgggcc tgaccaccaa gccagctctg agaaggggtg 40620

cataagcccc accatgcttt ggctctgtcc ctatagaata ttttatgttg ttactgaaaa 40680

ctaaaggaag atgggtgcgg tggctcatgc ctgtaatccc agcactttgg gaggccaaga 40740

cagattgatc actcgatgcc aggagttcaa gaccagcctg gccaacatgg tgaaaccttg 40800

tctctacaaa aacaaaacaa aacaaaaatt agccgggtat ggtggcatgc acctgtggta 40860

ccagctactc aagaggctga ggcacaagaa tctcttgaac ctgggaggta gaggttgcag 40920

tgagccgaga tcgcactact gcattccagc ctgggtgaca gagcaagatt ctgtctccaa 40980

aaaaaaaaaa aaaaagaaaa ggaaagctaa aggagagaga ctaaaatgat atcaggttcc 41040

tggagaacaa acagacatga ttttgcttca tggcaggaca gccggaagaa gtgggattat 41100

atcctcacat tacaaataag aaaactgaga ctcagaatgg ttaagtcact tgtcccaggc 41160

cacacagcca gtaaattaca gaaacagaat ttgaacccaa atcttccagc tccaaagctt 41220

gtgttctttt cactacctcc tgcttaattt tttaatttct aagattagac ccttcatcta 41280

tccatgacac ctgcctgtca tcccctgaaa aaaggtgaac gccgttcaga aatttttcta 41340

gcctgagctc actcccagtt cacttatttt tgctttgtca tggctgccca gtccccactt 41400

gtagaccagg aataggtcat ggctgcgggg actacacgct gtcgctgctg caagggccgg 41460

cctctgtttc cggggctgag tgggggccag acctgccagg agcaccatct tctgtgggtc 41520

ctgcctggat gtcacatccc ggccccaaga agtcactgca aaccttcgta ttattgagct 41580

tcacatccta gaatttgctg tcactgtggc tgctgcatga agttgtcctg agagaaacgg 41640

gcattgtcat taacagggaa attgatggtc tgggggaaaa gtcatcctca ttctcttgca 41700

gatctatggg tgattgagac tggctgatgt tgaaggggtt tctcagccat cgtgtgccat 41760

gttatggaac agtggtgtag ccagccattt gacacccagc gctgaccttt gtttaacaac 41820

ctcacctata tatgacaaaa tgattgtcag aaataatcgt gtaatgaaat gactgtaata 41880

atggccagaa aagaaacgca gatagtaaaa tgtttctctt gttgaactct gtacatataa 41940

ttgcaccagg atttttttca aataaaaagt aaatattata ctacaaaaaa gggaaaaagc 42000

acaagcattt attaaatagc tttctatatc tttctgagtt ttgatccttt gattgcagac 42060

tgatgtaata ttttatgtaa atcattgctt ggttactaag tgaactttaa gaaaagtgag 42120

acgtctgcag aagttgccca taatttagca gctactgtat tgtaccattg atgtacggct 42180

ttattttctt gattaattat ttaaacaata taattcacaa ttttaaaata ataaatttcc 42240

acttaaaatg gtatttaaac tcagcaaaat atatcatcta tgagtaaaat ttgtatttac 42300

caagcaaaaa tattacagtt tgtggttcac atgctgtctc actgttttaa attttaaata 42360

caaaaactcc aagtaggctg ggtgtggtgg ctcacacctg taatcccagt actttgggag 42420

gctgaggcag gcatatcgct tgagttcagg agttcaagat ttgcctgggc aacatagtga 42480

gatcctgtct ctactgaaaa caattagctg ggtgtggtgg cacatgcctg cggtcccagc 42540

tactcaggag gctgagatag gaggatcact tgaaccctgg gggacagagg ttgcagtgag 42600

gcaagattgc accactgcac tccagcctgg gtgacagatt gagaccctgt ctcaaaaaaa 42660

gaaaaaaaaa aaagaaacac aaaaactcca ggtggtcgca cagaatgaca ggactgaagt 42720

aacttagctc caatttctgt cttcataatc actgtcctac cattgtctgt gcttagaatc 42780

tacttgctta atgcaggaac atgtgttctc acagagatgg aaaatgcaaa tggcgccaga 42840

agcaagctgg aaattctgaa ccattaagaa tttactctct gccaggcacg gtggctcacg 42900

cctgtaatcc caggactttg ggaggctgag gcaggcagat catctgaggt caggagttca 42960

agaccagcct ggccaacatg gtgaaacttc atctctacaa aaatacaaaa attagccagg 43020

catgatggtg ggtgcctgta atcccagcta ctcgggaggc tgaggcagga gaatcgcttg 43080

cacctgagag gtggaggttg cagtgagccg agatctatct gcaccattgc acttcagcct 43140

gggagacaga gtaagactcc atctcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaagaac ttactctcaa 43200

aataaatacg tgtggctgac tccacatatg gtagggccaa ctgtataact agaagttctc 43260

caaataactt ctgtggagaa aaaaaagttt attaaaggtt aactttttta aagtgctaac 43320

tagaacctta ctaacactga gatcgcacca attgtttata acttagacag ggccgggtgc 43380

agtggctcat gcctataatc ccaacacttt gggaggccga ggcaggtgga tcacttgatg 43440

tcaggagttc gagaccagcc taaccaacat gatgaaaccc catctctact aaaaatacaa 43500

aaattagcca ggcacggtgg tacacgcctg taatcccagc tactggggag ggtgaggcag 43560

gagaatctct tgaacccagg aggcggagat tgcagtgggc caagatcgca ccattgcact 43620

ctagccccag caacaagagt gaaactctgt ttcaaacaaa caaacaaaaa aaaaaacctc 43680

ttggaccagg aaaatatttt ttaagggagg agtattttat cactggcatt gtttaggatt 43740

gcaggcacat gatgctaatg aaaagcagac taactattag ttggttttat tactgttttt 43800

gaactctctc tctccctttt tttttttttt gagacagagt ctctctctct gtcacccagg 43860

ctggaatgca gtgactgcag tctcagctca ctacatcctc tgcctcctca gttcaagtga 43920

ttctcgtgcc tcagcctccc gagtagctgg gattacaggg caccacacca ggctaagttt 43980

ttgtattttt agtagaggca gggtttcacc atgttgccca ggctggtctc aaactcctgg 44040

cctcaagcga tctgcccatc ttgacctccc aaagtgttgg gattacaggc gtgagccacc 44100

gtgcctagcc ctgtttttga actctctaga gacagtccag ccccttatta cttgtcctga 44160

ggcagctgct cccttcacct ggccccccgc attgtgttcc ggacccttgt cctggtggtg 44220

ctaaagaata tctctgtcga tcctttgggg actggggaaa ctgaggccca gtgccacgcg 44280

atgccatttg ttcagggaag attaggtcat ctgctaggtc cccagtcact tgaccttctt 44340

cccagacagg aagaagctgc tctgggtctc tcagtgctcc acgtgtcttt gcacattgaa 44400

atgttttctg attttttttt tttttttttt gctgttacat ttacttttaa aaaataacaa 44460

gcaataaaat gttacatttg agaaggttga aatgagaatt gatttgagtt aaattctagc 44520

agatttttct tagaagaatg atatcatcat ctccagctac ctgcaattga tctactctga 44580

attaagaaag agacttccat ttgttgttta tattttgcac tcttgatgtg tttctttaaa 44640

ttatggtcat gggccaggtg taggagctca cacctgtaat cccagcacct tgggactctg 44700

aggagggagg atcactggag gccaggagtt caagacctcg tctgtacagt aaattttaaa 44760

aattagccag gcatggtagc attcacctgt agtcttagct acttgggagg ctgagatggg 44820

aggattgctt gagccagaac tttgaggcta cagtgagtta ttttcacgcc actgccctct 44880

agcctggctg acagagcaag acctgcctca aaaaaataag taaaaaataa attaaatttc 44940

aatcattagc agtcattagg atatttaaat acagtatgtt gaatcaaagt tacgcatgtg 45000

tgtatttttt tttccagaga gttgtttatc atgtgggttt taatttaact ttaaaaaaat 45060

gttggctgga cagttgccca aatggtatca tcagccattt ggttgagaac gtatgtcctg 45120

cgggctcctc tgtcactgga gttttgctag ctgacagcca ctggctagtt agagactgca 45180

gtcagcacag atgcaggcgt ggacttgcgc acgtaaccat gtcaatgcaa agccatcact 45240

tcttaaaaat tctgaaccct gctgtctgag atggtggtgc agcggataga actctgctct 45300

aagaggcagt agctaattcc atgtcttctt tgcccttgac tagctgagtg actttgcaca 45360

tggggcttgc ctctctgttg ccttgtctgc aaagtggaat catcttttcc ttgctagaca 45420

gaaggtggac cctggaccta tggccttttt gagtttcccc cccgcttctt agaaggacct 45480

ctgatcctac tgagtttaat acccacgggt taataattgg gaaaagcaaa ggaagcgctt 45540

ctgtttaggt aattatatgc atgtttttgt ctttttctgg ctggaaagat atccaagcca 45600

ctgggaaggt ccgtggctac ccagggtagc cctctctggg gagggctgct atatccaaga 45660

gcccctcatg agaatttgaa aatcgaccat ggtagggcct gctgactttt gacagctaat 45720

ggtgtgctga gaattgtccc tccaaagatg cctttccatt ccctcgggag agtctgggca 45780

gcccctactg ggggctggga tgctggctct tccctcagcc tccaccccaa ctgctctctt 45840

ccctcctccc ctccccagcc ccctaatttc tctcacaagg ctttgttctg cagcaacctt 45900

tcctaatgca gtcctggcct cttcgcagct tcattacata accttccgtg gactcctggt 45960

ccaaggatca ccccagaaag ccagtcagag gtaggcacgc agctggggtc catttactta 46020

ccttccccac cccctcggaa ctcagaggtg gtgcaggaat ttggactcca agaattaaca 46080

gctccaccac catcaccaga gccaaaactc aggatgcatg tgcttcatct gctgcttatt 46140

tccagctgag agccagtggt gccatggttc cttagggagc cggtcccctg atgccggctc 46200

ctggccccaa atctctctga tccgggctct tccagaatgt cttgtctcca ccatcgcctt 46260

tgaccaatgg tgtccctttg cctggtaatg tcccctttgc ctgatgatgg ccctgtcact 46320

cctctcttta gcacagagga ggctgtttca tcccttcaag cctgccctcc cttcaagtct 46380

tagctcaagt tcaccttctc cgcagagcct tctccaatct tcttgactac gtctcctctc 46440

agctccagca acctctgtct ctggcactga ttccttactt agctaagaga atcacagaca 46500

cttggggctc aggacaatct gctttctctc ttcttaccca tggccttgga ctgtgtgtac 46560

ctctttgtct ccactcccaa acccaacccc cagagggcag agagcatgtt gtctgtccct 46620

ttgctcagca tgaagccatg cgtgtggtag atcggcagag ttccataact tgtgttgacc 46680

gaggggtcac tttgctctga aattacccct gtgtccttca gtatttgcac agatagcttc 46740

ctggccagac cgaatatatc caagggcatg gcccacctct gctcctgttt ccaggtccct 46800

ggtgggggtt agttcatgcc ttcctcataa tctgcccact ggcctggtcc tcaaggtctt 46860

cccaactgct cagccagagt tgagaaaatg ggtcgctcca tcctgtttgt gtcgttctct 46920

ccttcctggc ccactctcct gcccacaggt atccaggggc tgcctgtagc attagaggac 46980

atacatgcac atgcgtgggc atgggacact cacgtagcct ccaagcacag catcaataat 47040

gcattctgtg ctttatagca tggaaagctg ctctaaactt tattacacag tggacatgtc 47100

tgaagcagct cccaaatcca cccctgagtg tgttggaatt ggcaagccta tcacttggga 47160

gtctagtttt tttgttcgtt aataatagat gcttcctgtg gccccagctt ggcaattttg 47220

atttaaagtg atcttaactg aagagactaa tggacgggtc tgaatttgtg ccttttaagc 47280

acaaagtatt gctcttaatt aactggattc tatcctttga gcaggcagag gccttccccc 47340

aagggcgtca ttaacgatcc acatctggac atcttccaaa gccttcttct gtttcaggcc 47400

aaccgcaggt gtgttcctga acacccagga ggctatgaga gccacatatg cctcccaaat 47460

acacacagtg tgcatgccca gggacataga gcagtgtgca aagtcccatt ccatctctct 47520

ccacctggga gaggatggct cttctgtctg attcatggct caaagtggta aaggagctcc 47580

ccactccccg tcccacgcct actcagagtc tgcaaatatg tatgcgatat gagagctcgt 47640

cagttagctg tcttcagtgt ggcgcacatt tgaggagtct gactcccctc cagcacaggc 47700

caatgtgcac tgctctccta tctttgtacc cccactgttg cactgtgcag aggttggagc 47760

catagaagta ccagagctgt gaaaggagag gccccctctc acctctgccc tggtctccat 47820

ccccactttc tctaggaagc tagtaggtgc tgacagggga gagaagggag gggaggggtc 47880

cagaaacagt ggctcatgcc tgcaatccta gcactttggg aggctgaggc aggaggatca 47940

tttgaggtca ggagtttgag accagcctgg gcaatgtagc aagaccctat ctctacaaaa 48000

agaaaaaatg taattagctg ggtgtggtgg tgggcacctg tagtcctagc tacttgggag 48060

gatgaggtgg gaggattgct tgagcccaag agtttgaggt tacagtaagc tgtgattgca 48120

ccactgcact ccagcctggg caacagagct gagaccctat ctcaaaaaaa gaaaaaaaaa 48180

aagaaaggag agagagagaa agaaaagaaa agaaaaaaaa aaaagaaggg aagggaaagc 48240

ccagaagagt gtggggagag gaggcggccg tcattctggg gccctcagtg tgcacaacca 48300

gataacacat gctctgtggg cttttgtacc attttgcttg agcataaaga aaggaaggct 48360

gcccctaaat agaaagcact ctggaggcaa acaaatctga ctccaatcct ggccctgcca 48420

ctttcccagc tgaggactta gacaagcacc ctagcctctt ggacattctc agagccatct 48480

gctgcaagtg ggtgctgcca tacccacctt actgggcagg cttgggggac caagggtggt 48540

aaatggctca gtctttcatg atgcggccac acagcaggtg cgccatccag gtccatttct 48600

ttccttcctt tcccccaaat caagttgtca ttaaagtact agtccacatt aatgaaatca 48660

actgtattaa ttttctattt gctgctataa taaatcatca gaaatttagt ggcttaaacc 48720

aacacaaatg tattacctta cagttctgga ggccagaagc cctccatagg tgtcactggg 48780

ctgaaatcaa ggttttggca aggttgcggt cctttctgga gggtccaggg gagaatccat 48840

tttcttcctt tttccagctt ctaaaggttt catgcattcc ttggctcatg atcttctata 48900

gctatagtca gaaaaatttt ccatcaatca tcttcaaagc cagcaatggc aggatgagtc 48960

ctcacatcac cttgctctga caccagttct ctgcctccct cttccacatg tcaggaccct 49020

catgattact ttgggctcac tctgataatc tgggatgatc tctctatttt agagtcagct 49080

gactgggaac cttaattcca tctacaaccc caattcctct ttgccatgta cagtgacata 49140

ttcacaggtt ctggggatta ggacgagcct gtctctgaaa ggctacttta catgaaaatt 49200

cattttttta attaagattt ttttttcctc ttgagacaag gtctcactct atggttcagg 49260

ctggagtgca gtggtatgat cacagctcac tgcagcctcg acgtctctgg gctcaggtga 49320

tcctcccacc tcagcttccc tagtagctgg aactacaggg gtgagccccc atgcccagct 49380

aatttttttt tttttttttt tttgagacag agtctcactc agtcacccag gctggtgtgc 49440

agtggtgcaa tctcagctca cagcaacctc cgcctcctgg gttcaagtga ttcttgtgcc 49500

tcagcctccc aaggagctgg gactacaggt gtgcaccacc acgcccgact aatttttgta 49560

tttttagtaa agatggggtt tcaccatgtt ggccaggctg gtctcaaact cctgatctca 49620

agtgatccac caacctcagc ctctcaaagt gctgggatta caggtgtaag ccaacatgcc 49680

cggccccagc taatttttaa atattttttt tgtagagatg gggttttacc attttgtcta 49740

ggctggtctt gaactcctgg gctcaagcaa acctcccacc ttggtctccc aaagtgctgg 49800

gattacagca tgagccactg cactcggcct taagagaaga tttaataatt aatactttac 49860

aacaagatct ggaagaggtg ggatgagtaa ctaaatgagg atacaagtaa cccgggtcat 49920

atttgctaat acccttggtc acattgaact tgatatctta tcagattttc ctaatcagct 49980

cctttagcag cagtgttgca gcatcttatc tcattttgtt ttttgttttt ttgcctagca 50040

catgcctgta aatcactgga ttgaggtgtt tagatgtttg ttgtcctttg gatgcttctt 50100

ataaatccat atttcatggc tccctggaaa gtgctatgca aatgataagc tgcaaggatg 50160

gaaaggaaat tgcagtgctc ctgaattgta aatgggcttt tacgaggagg tttctaatta 50220

ctcgctcttt ctcttgaact gaggagttga agtgtaggtg gcagatccat aacagataat 50280

catgtgtgtg atgtgacttc agcctgagcg tcgaggacca agtcacagag caggaacagc 50340

cactctccag tgtccttggg gctacgtctg aggagaacct gggatttcat atatgacctg 50400

cactggctgg ggggctctct tgacgtaacg tgttccctct gagcatgtta cagattctga 50460

cattcttatg ttccttctgt ggagagacat gtacttagtg acctaactca ctttagcata 50520

tttttgctca tcgtttgtgt agcttaaagg aatcagataa ttaccccctc cccactactt 50580

tcggaagcac aaatgcaatg ccctagaatt gtactgggga ctcaaaaaga aaagagagta 50640

gtaaaatcta ttaaagggga caaagacagc ctatatacta caagctttct atttttatgg 50700

cagagaatgc cattttctaa gtaaacagag aactgcattt gacctgcaat atcaaatgca 50760

tggatttgat gctttggaaa gcaactgttt tctgcgttaa tctgggtgtc ttccgtgaaa 50820

tgtcctcctg cctttggctt aaacactagc tttgtctaca gccattccat cctgaacctg 50880

cccaatcttg tctgaatcct ggtttcacca ctgacaagct gtgtgtcctt gggcaagtta 50940

cttcacctgt ctgtgcttca gagtcctcat ctgtgagttg gggaatctgg acagaatcta 51000

ccccataggg cgtagtgagg atgtgttgaa ttatcccaag tggctacaca gagtaagcac 51060

tcaaatgatg tcatcgttgt catgattgct gttaccagag cctagagttc attctgatac 51120

tcgagtctgt ggcccatcca gcccaggtaa ggaatagttg gaggagttgg gcatgttcag 51180

cttgaagagg agacgacagg ggatatggga tagttgaatc tgtgaagggc cccctgggat 51240

gaagaactgg catgttctgt gtggctccag ggcactgagc aggacccatt tgccaaagtc 51300

tcagggacac agtttctagc tatagacaga aaaattttct gtcactcaga ggatgaaaat 51360

agaatgagcc cccttaagag gtaatgagct ccctgtcatt ggaaggattc cagaagagct 51420

aggtaaccac tttaggtgct atcaaggggc ttttttcttt aaagtccttt ccaaaagctt 51480

ctgagattgc ataaacaata ggaagccatc ttggtgcttt aacacaaact ctccccagtg 51540

atgagggttg agccaaagcc agattggcaa gcagagagga gacttgtgta caaggagttc 51600

ctcgagtcaa ttgctttttc cttgttctag ccagccagag ggctcctgtt ggaaaacagg 51660

agaccggaga ggctgaggcc tgaccaaacc agcttctgca ggccagctgg gaggccacaa 51720

ctcctaccta cgggaaaact gaagggcatc tctattttta gattagcaaa agaaaataaa 51780

tttaagtttg agtctccttt gcaactttta aaagacatct ttattgagat gatcattcac 51840

attctataaa attcccccac tttgagttac aattcagtgg ttttagtctt ccttgatgat 51900

tttgatggtc ttttcttaag gctcttggaa gacccagaag cctctcagac acaggtgggt 51960

gtggagggcg tagcacagag gcagacttct catttcctgg gtctcccctt taatgactct 52020

cagagacccc tccttccccc tgcccctggc ttctacccca ggggtgtaga gttttgccat 52080

tttccaagca gaacttcatt tcctcttctg tgtctacact ctttgtgctt ctttcttgcc 52140

agctttttct cctttgcccg cccttccttc cttccttccc tccctccctc cttccctcct 52200

tccctctttc cctccttccc cccttccacc cttcccccct tccccccttc cctccttcct 52260

tccttccctc cttccttcct tccttcctgc cttccttcct tcctgccttc cttccttcct 52320

gccttccttc cttccttcct tccttccttc cttccttcct ggtatgtgac taatttctgt 52380

ttcaggacat aaatgttgtc caggctgttc tttggtcttt ctgttggata atggacattt 52440

ggcattgaga gaggctgctt tttctgaaat catgttcttg gggcccagaa cctaggtgtg 52500

tgcttctgac tttgttttct tcctgatcca aattctgata tgtccattta aattgatcta 52560

gacccacagg gcactgtggg acagatcctc agtggaacat gactctgtaa cgagagcatt 52620

ttgttttgtc aaaatgagaa catattattg cctttcatct gattgtaaac ataatacatg 52680

tttataaaac agtataatga gacaaaaatg tagacactaa taagggaaaa tctccctaat 52740

tgtatttctc ttcacagaga aagcccctgt tgggcatata tactctagtt tgtttatttg 52800

tttgactaca catatatgta ttcttttctt atgtataaaa attctgaaca tgcacatttc 52860

tgcaactact gttttcactt gatgatgcat ggacctctct agagtgtacg tttcttcttc 52920

cttacaaagc agttggcttc gcccagggta caccaggaca cggttttggc tctgtcccca 52980

gggtgtcacg ggaccagggg atgatctcac agggtctgcc atctgccctg cctggccgga 53040

ggctgcatcg agagggccaa ggggcaccac gtgtcgtggg tactgtcaaa caagagcctt 53100

cagagccttc cacagtcttt cttttgcttc ccagcattgc ttccccgctg gtggactctg 53160

aatctagaac tagctccagg cgcctctcca aattcagacg ggagctgggg cactattata 53220

atgcaaatct aggcaaagcc ctcccaatac caggatccag aatggggtgg ggccctttgc 53280

cctgaaaagc tgtttagttt gaaaatacaa acaggagaca gaaaagtttg gctaaattaa 53340

tggataaagt tttaacgatg gtaaccatag tagggttcat cgacagccag cgatggttct 53400

gaacacttga catgtattaa ctcacctaat ccccacattt tacagacaat gcaaaggagg 53460

ctctgggagg ttgagtgact tgccccaaag tcgcacagct cctaagtgaa ggattcggag 53520

tggactccag gcagcctggt ctgactccct gcactgcgct gtgcttatct ctggccccaa 53580

tgccgccatg cagaagtgtc tgggggcact ttgtctctgt cagacagaat tcggagatgt 53640

gtatgcttgc cctggtatgg cacttctctt tttttgagac agaatctcac tctgtcaccc 53700

tggctggagt gcagtggcat gatctcagct cactgcaacc tccgcctccc aggttcaagc 53760

aattcttgtg cctcagcctc ccaagtagct gggattatag atgtgcacca tcgtgcctag 53820

ctaaattttt gtacttttag taaagatgtt gttttgctgt gttggccaag ctgatctcga 53880

acttttggcc tcaagtgatc tgcctacctc agcctcccaa agtgctggga ttacaggcat 53940

gagccaccat gcctggcagt gtggcacttc ttacgtgtgt tcagcggaca ctgtttatct 54000

tctgtccctc caagacggtg ctgagctcag gtcgttcatt actggcagac aactgctgat 54060

ttccaacaga attgccatcc tcttctcccc tgcgactttc agagtgtgac ctcagactca 54120

aaaattagaa gtgaaaacat cttaaaaact atcacctttt cttcctaatc ctcctctccc 54180

ctccctgtct tccttgttgt ccccatctaa tgaactatca tggcaaaaag agcccatttc 54240

tggtcatttt ctgtggcctt tcaaactccc acctacccca ctgctcctgg gtgcattacc 54300

cgaaagctga gacttcagtg cagaaagtgc caggccctct gtccccccag atcgccttcc 54360

ttgtcttccc tgtgcttgcc tgtcacattg tgtgggttcc agcgctggaa ggaatgagga 54420

acagattctc tggttctcct tttgaagttt accttcgctc caccacttct gagaccttcc 54480

cggaagttgc cccttgtttc tctcctctcc agggctgccc cagagctgcc tctcacctct 54540

tcctgctgtc accccaccac catcagggca gaagttggga caaagcctct cctactggct 54600

cctgcttttc tcccttaggt ccagcctcct cttctccatc ttcaggagtc tccttctcca 54660

ctcacacgtc atgacttcag cacctcgcat cagtccagaa tatgactgct tgttcaagtg 54720

ccacctttct catgcatttt tttctagtga caatcacagc caccctgtgg ggcaggagtg 54780

tcatcatccc catgtttcaa atgaagaatt gcagttcaga gagggcaagt gactggccca 54840

gcctcaacag ctagccagtg gaccccacca gggcttctga ctccagtccg ggttcccttt 54900

ccacccaaat ccatggaggg agctgagccg agaacaggtg tccttcagga agacgtgaag 54960

ccaaagcctc cacctccaaa ctcaggggcc cagggagtcc aggcacccat ccactcacaa 55020

ggctggatat ggtgcattcc aggagagggg ttgggggcga gtggcctctc tgtgtacccg 55080

tggggataga tgcgcaagtg gcatcgccac atcgtgagtc ctggcttcat gggtgagctc 55140

caggtccaac gagaagccaa gcagggggcc cttcaagctc agctttgggc ccgggtcggg 55200

gtacagggta gagcgggcct ccccagcccc tgccatgagg ccaaggcagt gcatcgttcg 55260

cagcgtacat tcagaaacca aagcctagga gctggttatc attccggttt acagctgatg 55320

gaagagcagg tgcttccgag aacccacagt gctctttggc cagtgaccca agggtgcctc 55380

tgagaggcct cgcagcaccc ggaggtgctg ctgaggcaac gccctgactg taagaaggac 55440

cattcatcct cagagagtgg ccgtgatgct gctgcgacag tcccaccatc cctcccgact 55500

ctcactccca acagacttcc cactgtaaag ctgaactctc cagcaaatca cctctcgcca 55560

gactctctcc tcactctctc tgggtccact agaggttcct cagcctctct ttgccttggt 55620

tttcccagct gtaaaatgga gcaaagaggg cctatgtacc cacaaaggtg tggttggagc 55680

gactcctcct acattagggc ctcgagtggg gcttcatgat tggttggtgg aggtctccaa 55740

acccacccag tgccaccgaa ggctgagact gcagatgcaa tgccacaggt gtccttcctc 55800

agcctgggca gctgaacatc atgtgtaaaa cggggataat aagataataa cagccccttg 55860

cacctatgtg gctgtgagga ttaaacaaga taaatgtgta acagtgcctg gctatagaaa 55920

tatttactct tgttattaag ggaagaatat gtgtggctaa aaagggatcg aagatgtaaa 55980

agccaatccc tccccctcta gcatatttaa gggtaatgtt gagttggttt gtggaccatt 56040

tgctgcctgt tagagctgga aggtagggac cccctctcaa cagcgatgct acaaattata 56100

cccattggag gtcaaccaaa agacaaagct tattggctgg acatggtggc tcacacctgt 56160

aatcctagca ctttgggagg ccaaggcagg cggatcactt gagatcagga gttcgagacc 56220

agcctggcca acatggtgaa accccatccc tactaaaaat acaaaaatta gctgggcgtg 56280

gtggtgcaca cctgtaatcc cagctactca ggaggctgag gcaggagaat cactagaacc 56340

caggaggtga aggttgcagt gagccgagat cgcaccactg tactcaaacc gaggcaacag 56400

agggagacgc aatctcaaaa aaaagaaaaa aagacaaagc ttgttaatac cagcatattg 56460

ttaagggaat aaagtaggct gcagaacaac tggtgtaata tggtgccatg tagggaaaat 56520

tacatgtgtg cataggagag gggtctgcaa ggttgtgccc taagatgtta gagtggttcc 56580

tttgcttttc tcttttataa ttttgtattt gacttttaaa taaggaccat aaatcacttt 56640

tataaaatac attctctcca gcccctacta ctcctttaaa gaataagagt ggtttgccca 56700

agaaagacag ttttttttgc tctggttttc ttgattctga catcagagga aactccttct 56760

catccacttg gggctctggg ttcaggggat tcatttcagg cagattaaag tggtgaccag 56820

gggcattcgt ggacacaggg agggacagga gcaccatcag tttgtctcac acaaccactg 56880

tcatcctcac tgaaggctgt tgcctgatca aaaacagtat tgggccaggc acggtggctc 56940

acacctgtaa taccaccact ttgggaggct gaggtgagtg gatcacttga ggtcaggagt 57000

tcgagatcaa cctggccaac atggtgaaac cttgtctcta ctaaaagttc aaaaattagc 57060

caggcgtggt gggtgcctgt agtcccagct acttgggagg ctgaggcagg agaattgctt 57120

gaacccgaga ggtagaggtt gcagtgagcc gagatggcac caccacactc cagcctgggc 57180

gaccgagggg gactctgtct taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaatatat atatatatat 57240

atgtcaaaaa tggggtagtt tttagatcta tagtagttct aaaaacaaag gccatccaag 57300

catgacagat ttacaagcac tattggctat tccagtagtt acaatggagg agagaagctt 57360

ttagttaaaa caaacaaaca acacaacaaa cccagaaacc ttaggtcaaa accaaaattg 57420

tcctctcaga cacaatctgg gaattttctc atgacagtgg gcattagcca actgacatca 57480

gcagcaacca tccgtgtgca cacagtggca ccacctcctc ccaaaaagca gccttcatct 57540

atgccctcat acaatcgttg attattctct ttggattgag gcccggaatt atttaagttt 57600

cttcttgcca gcatgagtct ttcctttctg tatgctcctt atcttctctc tttaatttgg 57660

cagttctgct tgaaatctgg gtctttcatt agtagtagtt caatttggtt ccagaacatt 57720

ctgtggtgtg atgcaatgtg accagagctc acacttcaga gctcttcaag ggccagtctt 57780

actgagcacc tcccagtggc tgcctgtgtg ctgggcgcca cttgtggtgg gcaggagaga 57840

ggaggggaca caaaaggaga cacagctcct tcttagaagc tcaaagttgg ggaccagctg 57900

ccacagaaga gtatgtttag catctgagac accaagatcc agcgtcacaa gggtgtttat 57960

taagcctcct catctctttc tttttctttt tttttttttt tttcctcagg cagtcttact 58020

ctgtcaccca ggctggagtg cagtggcatg atctcggctc actgcatgca accaccacct 58080

cccgggttta agcaattctc ctgcctcagc ctccccagta gctgggatta caggtgccca 58140

ccaccacacc cagctaattt ttgtgttttt agtagagaca gggtttcacc atgttggtca 58200

ggctggtctc gaactcctga cctcagatga ttcacccacc tcggcctccc agtgtgctgg 58260

gattacaggt gtgagccacc gcgcctggcc ttgctgttga ttcatctata gtatgtttga 58320

cttgatgacc tccagttacc ttagacagag gttctcatct aagctccaac tttccatttc 58380

ctttgtcctc gtctttcccc ttaacccctc cacatttctc tcaaaatcac cccacttcta 58440

aaaaatactg tttatttttc ttttaaattt caaattatct atactcattg aaataaatca 58500

aaatagcatg gaataagcga aaaaaatgga tcccaccctt ccccactccc attccctagg 58560

gctaaccata gttaaccatt taatgactag gtttttttgt tgttgttatt ttttatttat 58620

ttattttgag acagagtctt actctgtcac ccaggctgga gtgcagtggt gtgatctcgg 58680

ctcactgcaa cctctgcctc ccaggttcaa gcattctcct gcctctgcct cctgagtagc 58740

tgggattaca ggtgcctgcc accacacctg gctaattttt gtacttttgg tagagacagg 58800

gtttctcaat gttagccagg ctggtctcga actcctggcc tcaagtgatc tgcccacctt 58860

ggccttccaa aatactggga ttaaggtatg agccaccgca cccagccctc ctgggctctt 58920

ttcctttagt tgcactcgct ccccgctcct ggagtagagg gatttccgag agactgtggg 58980

ctccagcctt cacctaggcc caggactagg atgcctgccc taacatttat ctttatacct 59040

taaagcaaaa cagctggacc ataagcattc aagaacaaac tgtgaataag gagaaagttc 59100

tcccaggaaa caagagcttt agttatgttg ggccagccct tatattcctt agctgttacc 59160

agtcactgct tgatttaatc tcggctatca cttggcctga caggtctgct gctggtgcca 59220

ggatgtctgg gttttgaagc ctggctccat tacatacttc ctgtgtgacc ttgggcaact 59280

tactcaacct gtctgttcct cagtttcccc agctgtatta tgtcagcata atagtttgtt 59340

gtgtgaatta aatgaggtaa taactggaaa tgcttcaaac atggttccta tcatgagaaa 59400

tcctgctttc cgcctaaatg tgctggaaaa ttcctggtgg tgcagaacag gagaccagag 59460

caaaggaaag acagggtgca gaagccaaaa attaccttgg agaacaaagc gcatgttaag 59520

gttatttttg gattctaggt ttatctctgc ttggtcttca gttacctaca agagatccat 59580

ttaggggatt tttgtttgtt tttaacgata gctttattga gatataattc atatgccata 59640

aaagtcactc ttttaaaatg tttccggtat attcacaagg ctgtgcagcc ttccctgtcc 59700

ttgattccag tctgagtttt taactgaagg gataaggagg accacgcttt ccccagacca 59760

gaaccgcggg ccagggggcg attccgctga gtcaccgcgg gcgcctggtg cgcggcggcg 59820

gagcccggga ccttccttgg ctgcccccta gcgagggccg cagcgcagcc tgagacaccc 59880

gccggggccg ctccacggcc gtcggattta gactggaagc tcggtccagg tccccagctt 59940

gatgcgcccg cggtgtagga gaccagcccg actcgagctt cccctgagcc cctggactct 60000

tgactccagc agggcctggg taatgaacgt cagctcccct ttcccaaagg ggttgctctg 60060

ttgggaaggc acccgtttga tacagtagca tagagatggg ttttagcatc aaaatatcag 60120

aattcaagcc ttgctctctg cttactagct gtgtgaccct aaaaaggttt ctgaacgtct 60180

ctgagcttca gtttcctcat cattccttct cacggggtgg ttgtgagcat tacagagatc 60240

ctctctgtga agcccctgtg agtggctcat cctgagggct gaaataaaca tgttattaat 60300

aatccaaaac tggcaaggga tgttgactgg tccccctccc ttgcccaagg agctttctag 60360

aacctgagtt atcattacca aactgtactg ccttgagtaa gaaagttaga aggaatggga 60420

aggatggtgg caggtggagg aaggcggatt ggtcatcacc tccttgcagc aagaaacagc 60480

cccagatcgt gggaaaccta cagacctgct agacagacta ggagcaaaag ctggggcttt 60540

aagaatcccc agggaggttc tcctgagaga gtagccagtt ggattttgta agcagagatt 60600

tgtttgggga ggaggtgaca acgtagggag cagaggggca aagctgtcgg gaatcctgcc 60660

ttgagggcag ggatgtgtgt tggggggagt tgggtcactg gggctcggtg gccttgggca 60720

agtttctacc tctcaggtcc tttacccacc tagggtcgcc atcctgccca cctcacaggt 60780

tacagtgagc ctggatgcac tgtcatgggc aggtgcccag gaaaatggca gacatgttcc 60840

aaacagcacg cagcattccc cagtgatgcc cagggtcacc ttggaggtgg gcgagatgcc 60900

tggggtttct cgtccacccc acaacacctc aggggacagc caaagctgtc ccttcaggta 60960

agctgcacag aagatgtgaa ctctgctgca aagactctat tctttgggag caaaagggac 61020

ccagggtctc acctgcacat ccctgtccct gagggcctag gggttcttgg aggccccagc 61080

cttggcaaaa tgaggaagaa ggtgaaggtt gtctgggccc ctgccaggct ccttcctcgg 61140

ccacgcactc cccttcctgc acacacaccc ttctccctcc accccatctc cattgttgtc 61200

agaaaagtca caataaaaag gtccatattg tctagttccc atacttttaa tttttaaaat 61260

tttatttatt tatttattta tgtatttttt gagacagagt cttaacccag gctggagttc 61320

agtggcatga tctaggctca ctgcaacctc tccctcctgg gttcaagtga ttctcatgcc 61380

tcagcctccc gagtagctga gattacagat atgtgccact atgcccagct aatttttgta 61440

tttttagtag agacggggtt tcaccatgtt ggccaggctg gtctcgaact cctggcctca 61500

agtgatctgc ctgcctgagc ctccggaagt gctgggattt caggtgtgag ccaccgcact 61560

cggctccaca cttttcactt attaaaagac tgtggtgtcc atcaatggat gaatgaataa 61620

accaatgtgg actatccctc ccattaccca aggaatgaag cacggagccg tgccaagatc 61680

tggattcaca gtgaaagaag ccagtcacca aaagccacgt gctgtgtgac ttcccttata 61740

cgaaatatcc agaagagata catccatggt gacagaaagt agatgagcag ctggggactg 61800

gcgaagggga gaagggggag cagctgtcta tgaggtccag cctttcttct gggtttggtg 61860

agaatgtttt ggaactagat agaggtgata gttgtacaac attgtgaatg tactaaatgc 61920

cactgaatca ttcattttaa atcgttcttt acgttgcatg aattttaagt caatcaaaaa 61980

cagttgtttg aaaagagaaa agcctatggg tagcggcagc agtgattgga tttatgattc 62040

gattccatgg ctcatccctc ccctgcctca ccccctcgcc ctccgacgtc ttcttctttt 62100

actctgaact gttatctttg ttctcatctc tctctctctc tctcaaccct gcagacactt 62160

ttccctttct ttgtctgccc ccaccctcca gatttccgtg tctccagtgt ctccctacga 62220

ggcatgaatt gagactggga gggtgtgatt ctgaagaagg caccaacagt gactcagcta 62280

gccccttccc ccaccccgcc ccccgggcct caatttagct aaaaaaccac agggacggac 62340

tcaggaggca atacctttcc aagggtccct aaaaaatgtc ccattttagt gtccaggttt 62400

cactcaactt tagtgcctcc cctaaaatgt gttccttacc tcccacccca ctgcatctaa 62460

gtcactgcct gagaaaacag gattgaggaa aggagaaagg aagagagaga gagaggagga 62520

gagagagaga gagggaggaa ggctgatgga tttagaaaag aagaaaacaa gtggtctgag 62580

gaaaacagcc ttggtgtgtt tattttcctg tctgtgtatc gcttctcggc cttttggcta 62640

agatcaagtg tattttcctg tctgtgtgtc tcgcttagat tacagggatc tgtgggtgat 62700

gacacgtctg gtccaggctg cgtagtcacc tcaagggcat gcttattgat gtgtttttca 62760

attcactatc tttgcatggg agtcccaggc caagaggcac agctgcgcca tttgtctgtt 62820

ggtttagata tcctttatcc agttcttcca gagaaatcat cctgcccttc tggaggaggt 62880

gggcagcagg ggtcagagat gggagggaaa ggaaggagcc aggtccttgg ctaggatgcc 62940

agggtcccct gcctctcacc tggcctgggc tggaggcctc ctgctgtcct gtcactgatc 63000

actaccccgc cccagcctcc tgagttagaa gacacaggct aaagtagagt atttcttcat 63060

tgaaaaaccc atacaaaata aaggttcata aaaaataaaa atttagactg ggtgctgtgg 63120

ctcacacctg tgatcccagc actttgggag gccaaggcag gtggatcgct tgagccctgg 63180

ggttcatgac cagcctgggc aacatagtga aaccccatct ctacaaaaaa tacaaaaaat 63240

tagccaggca tggtggtgca tacctgtggt cccagcttct cagcctatgg acccacatag 63300

aatacaatgt cagcataaga agggagccct ggggtcacca aatggtttgg gcggcaaaga 63360

acctgaaggt tgagagaagt ggcttggtta cccagctgtt ggatgtgaga cctggccact 63420

gcttcttcca taccctagac ctgcaccctg acatctcaag taaaaagttg ggggatgttt 63480

tatggtccag gatgaaggaa gggcagtgag gggcagcgga gcatcacttt gcatttctgt 63540

ctgcctctta ctggctgtgt gacctggggc aggtaacttc ccagactcct gggaatcata 63600

acacctatga tgatgatgat gatgatgatg atgatgatga tgacacctac ctcaaggatt 63660

gccctgaagg gtcacagaga tgcctgcaag gcacctgcat ggagcaagcg ccccttctct 63720

ggcaggtgct gggtgagcac tacctgctgc caggccctgg ggctatggca ctgcgtgacc 63780

ctgcaagtcc tacctggcga agctgtcgtt cttgtgctca gtcagtgttg gttgtaagac 63840

tgagaagagt cacttcattt tgctctccag ggacatcttt ctgggtccta ttttctgcct 63900

atgtcaagta gcgcctcaag gatgctcctg aaaatgggct tgtctttctt aacatggcag 63960

gtaggtccca aagcattagc atggggcagc tgacctagcc cagccaatgc agtgcagtga 64020

ctcttgcaac cgagtctaat cagaaggtcc atgaacctac gagcatttcc tgtcccagga 64080

tcagggtgga ggctgagcct ccctgcttag agattcttcc catgcattcc acttttttcc 64140

ccaaaagaaa atattgaccc ttgagaggca cacagtttat ttattttgca tagtaaatag 64200

tagcctgtat tttaaggatg agttgatttc tgcatcagcc cctgtaggtc atcagccttc 64260

tattggtgca tctgactctc tctagccctg cagggatggt ggagggggag gggaaggagg 64320

gatctttatt ggaaaccagg acagtgagac tcattgccct gtcatctgct ctgtggtgct 64380

gaatgaggca gcccaacaga gaaataccct gagcgagcat ccccagcctc caaaacagtg 64440

gcgcattgcc ctgagtcctg ggaatgacct ttgattctcc tgctcctgac ttggaaccca 64500

tggaaacctc tagaagcagc tgaggaaaac ccaacatgaa aagcagaact ccacactgag 64560

aatataggag gtgatcggaa catacaatga ttcttgctaa gaccgattca cagtttttct 64620

tttttttcga tcgaagaaat actggagaag cctaaagaag gagtctaaaa actctggcac 64680

gtgggccaaa actgtccttg agctaagaat gattttcaca tttttaagtg gttgaaaaat 64740

gaaataaaat aagatgatgt tttgtgacac atgaaagcta tgggaaattc aaattctaat 64800

atctataaat agtgttttat cagaacacag tcatgctcat ttatttatgc tcgatggctg 64860

ctttcccgct acaattacgt tgagcagtta caacagagac cacgtggccc acaaagcctt 64920

acaatattta ctatctggcc ctttccagaa aaaaatgtgc cgactcttga ccttaacctc 64980

agcaatttgg gaggccgagg caggcggatc gcttgagctc tggagttcat gaccagcctg 65040

ggcaacatag taagactcca tctctacaaa aaatacaaaa cattagccag gcatggtggt 65100

gcacacctgt ggtcctagcc actcgggaga ctgaggtggg aggatcgcct gagcccagga 65160

agtcgaggct gcagtgagct gtgatggcac cactgcacct cagcctgggc gacagagcaa 65220

gaccttgtct ccaaataaat aaataatgca aagtaaaata aataaaacca tataaaaagg 65280

aatcaattta aaattataat gaaagctggc cgggcatggt ggctcacgcc tgtaatccca 65340

gcactttggg aggctgaggt gggtggatca cgaggccagg agatcgagac catcttggct 65400

aacacggtga aaccccgtct ctactaaaaa tacaaaaaaa aaattagccg ggcacagtgg 65460

cgggcgcctg tagtcccagc tactcgggag gctgaggcag gagaatgtct tgaacccggg 65520

aggtggagct tgcagtgagc cgagatcgtg ccacttgcag tccagcctgg gcgaaagagc 65580

gagactccgt ctcaaaaaca aaaacaaaaa caaaaacaaa aaaaaattat aatgaaagcc 65640

aaggggcata gtagaacaaa ttttctagag ctcattaagt caaatgagtc accagttagt 65700

aaaacgcagt cacggggaag agagggcagg attctttgaa gcagcggctc tcctaaaaac 65760

aacccaccct tgtccagctg ccttccctcc tgagggtgtt ccctttgact gtgtgacccc 65820

catcccctat ttcccaaccg tccaagccca cctctagcat aatacgagct tttaatccct 65880

ctccctgacc ccaacccgat tttgaagccc agtctagtat tttctcaaat acacttcttg 65940

gctccattcc ttcctttcca tcacctctgc cttttcactg catgcttgga ccactgcagt 66000

cagctcccta tgaacagttg ctctctaccc atccaatcgg ccccgcctgc tgctgccaaa 66060

ttcaccgagg gcacctctgt ggtgctgcct gtggacaaag tccaagccag ccacctcacc 66120

cacctacagg tgagtgggga gcagccagcg tgtccagtgg tttaccccat cgccacagac 66180

ttggtgatgt gtcgatgtgc agagaagggg tgttggcagc cacaacacaa gcaaccccgc 66240

cccatgtgag atctaagatg ggcgtgctgg gagccacctc tgagaatcca acagaaggca 66300

gaggggagaa cggctcacac ggcacaaaca ctccttcctt tttttttttt ctttttcctt 66360

tttgaaagga gtctcactct attgcccagg caggagtgca gtggtgcaat ctcagctcac 66420

tgcaacctcc gcctcctagg ttcaagcgat tctccagcct cagcttccca agtagctggg 66480

attacaggta cactccacca tgcccggcta atttttgtgt ttttagtaga gacggggttt 66540

ccctatgttg gccaggctgg tcttgagctc ctgacctcag gtgatctgcc tgccttggcc 66600

tcccaaagtg ctgggattac aggtgtgagc catggggcct agcctccttc catttaaatg 66660

tatgcctaat ttgcccattg agaacggctg agacgcattt taagtggcca gggtctactt 66720

agagttagtg ctcatgacca ggcccaggtc aagcctggct ggccagatgg tgcctttgac 66780

ctgctctgtc tctgtgcaaa ggaatgagct gaaggatggg ggtgcagtgt gtgggcagtg 66840

ggctggggct ggcaggactc agtgactaag ggaagagaac tttcctcact accagcctgt 66900

cttttcaggg caccgcgggg ggctttggga cttggtgatg aacacagcac agagagctgt 66960

ccagcatgcg ggtccctggc ttctcacact tcccaggctc cttcagaggc tctctccaaa 67020

gggagctgct ctctctagaa cccatgaatt tggaatatag gcaaccactg cattggggac 67080

cactgacctc aaacatagag accagagcaa atggggctca tcacgtgaaa ctcatctgga 67140

actctagcag gttcttttat atatatatat atatatatat attttttatt attatacttt 67200

aagttctagg gtacatgtgc acaacatgca ggtttgttac atatgtatac atgtgccatg 67260

ttggtgtgct gcacccatta attcatcatt tacattaggt atatctccta atgctatccc 67320

tccccactcc ccccacccca caacaggccc cagtgtgtga tgttcccctt cctgtgtcca 67380

agtgttctca ttgttcaatt cccacctacg agtgagaaca tgctgtgttt ggtttttttg 67440

tccttgcgat agtttgctga gaatgatggt ttccagcttc atccatgtcc ctacaaagga 67500

catgaactca tcatttttta tggctgcata gtattccatg gtgtatatgt gccacatttt 67560

cttaatccag tctatcattg ttggacattt gggttggttc caagtctttg ctattgtgaa 67620

tagtgccgca ataaacatac gtgtgcatgt gtctttataa cagcatgatt tatattcctt 67680

tggttatata cccagtaatg agatggctgg gtcaaatggt atttctagtt ctagatccct 67740

gaggaatcgc cacactgtct tccacaatgg ttgaactagt ttacagtcct accaacagtg 67800

taaaagtgtt cctatttctc cacatcctct ccagcagctg ttgtttcctg actttttaat 67860

gatcgccatt ctaactggtg tgagatgtta tctcatggtg gttttgattt gcatttctct 67920

gatggccagt gatgatgagc attttttcac atgtctgttg gcgaactcta gcagcttctt 67980

ttcacaagtt catggagaga ggtttcccac tgagggaatc acatctgtct gatcaaaaga 68040

ggcttgggaa atggctctcc tgttcattcc ctgaaaacct ctgatggaac cactgccact 68100

gtggcagccc cagcactggc accccagcca tgattggtgc cccagccaca tctctgctgt 68160

gagccccaga gccctggtta attaatcatc cacgtgttga tggggagagg cccattcaca 68220

aaagcgacat aaagcccagg gagacgtggc cgtggcaaga agggtgtggg actacattcc 68280

gcccccaact gagagattca gaaaccagaa aaaaatggaa aaacatactg tgctcttggg 68340

tgggaaaact aaatatcatg aagggagcaa tttttatagt tttggcctat aatacaattc 68400

cagccgaaat cccagtggaa ctttgagaat ttgcaggaaa aaaaaaaatg tctaaagtac 68460

atctggaaga caaacttaca agaaggtcaa ataattttga aaaagaaaat gatatctaag 68520

cccacctaga gaataagact tgagatccaa agctaaatca ggaggctcta gcaaaattga 68580

cagataagca ggacagagtg catggtgcat tcacctgggg aagagggcag attggtctac 68640

aaataggcct gggtccactg actttagctg ttatatttgg ggagaaactt ttcaacctca 68700

ctccatctta aacctaaaaa tattccagat gaattaataa atataaaaaa ttagaccact 68760

aaaaatgtag aagaaaatgg atgatctttc tataccatag agcaatggaa taaatcacaa 68820

aggaaaacag atttgactat ataaaactta aaccctgccc atcaaaaacc atcagaaacc 68880

aaaataaaag gcaaccaact ggagaagata gttgccacaa atatgatcaa gggttaatgt 68940

tattcataaa ttaagagccc acacaagtca ttagaataag cactgagacc tgaacagaca 69000

agcaaaaaga atgagagtgg gtcggcgcgg cggctcatgc ctgtaatccc agcactttgg 69060

aaggctgaag caggcggatc acttgatccc aggagttcca acaccagcct gagcaacatg 69120

gtgaaaccct gcctctacaa aagtcataaa tattagccgg gtgtgatggc acacgcctgt 69180

agtcccagct actcaggagg ctgaggtggg tggatcactt gagcccggga ggtagagtct 69240

gcagtgagcc aagatcacac cgctgcactc cagctggagc aacagagtga gaccctgact 69300

taaaagaaaa aaaaaaaaaa agaggagaaa aatgctgatc tcactagtaa ttaaaacatc 69360

aggccaggcg cagtggctca cacctttaat cccagcactc tgggaggctg aggcaggcag 69420

atcacttgag atcaggagtt ctagaccagc ttggccaaca tggtgaaatc ccgtctctac 69480

aaaaaataca aaaattcgcc aagcgtggtg gcacatgcct gtgatcccag ctactcggga 69540

ggctgagaca ggagaattgc ttgaacacgg gaggcagagg ttgcagtaag ctgagatcgt 69600

accattccag tccagcctgg gctacagagc gagactctgt cccagaaaaa attaaaacat 69660

cacatattta aacaactcta ggatatcatt taaaaaaaca ttaatagact gttttttaga 69720

gcacttttag gttcacagtg aaactgagtg gaaggtacag agacttcccg tatgttccct 69780

gccctccacg tacagcctcc cccactgcca acgtcctgca ccagagtggt acacttgtta 69840

caaccaatga atcctcatta acatatcatt atcacccaag ttcatagttt acattagtaa 69900

aacatcatct ttcatctata agcacaaaaa ttttttggca tttatttagg tgtatgatta 69960

actcagtgtt gacaagactc acacttcata cccacttgca ctgcatctga gaagcaattg 70020

gtgtctacag ccgctacacc ctcaacaagc ccgatcttgt ttgaaaagca attggtgatg 70080

cttctcaaaa ttctatggac aaagtcagcc gggcatggtg gctcatgcct gtaatcccta 70140

aactttggga ggccgaggca ggcagatcac ctgaggtctg gtgaaaccct gtctctacta 70200

aaaatgcaaa aattacccag gcatggtggc tggggcctgt aatcccagct actcgggagg 70260

ctgaggcagg agaatcgctt gaagcaagga ggcggaggtt tcagtgagcc aagattgcac 70320

cactgcactc cagcctgggt gacaagagtg aaactccatc taaaaaaaaa aaattatgga 70380

caaagttttt caaaaagata tttaatgcaa ctttatttgt aatattggaa catctgaggc 70440

catttcagtg ctaactatta ggggatggtt aggaaaatat ggtacatatg tggaaaggaa 70500

catttggtag ttagtgcccc tgatgtttac aaaggctttt agtgaccaac aaatgctcat 70560

gctataatct tatgtgaaaa aagcaagtag cataattgca actatatttt taatgcatag 70620

aataaaaggc tagaaggaaa tatcacagat ccttgacata cattcccaaa cctttgtaaa 70680

tccgcggatt catgaaaaca gacacatttg cacaagtgcc tgatcttttc tgttatacat 70740

tcattagaag tcaagccctg gtgccacaaa gtatctgcct tttcaaatgt gatcagaatg 70800

ttctcttttg cttcaaggcc atttttcacg aagcagtggc atttttgcct cttcatcaga 70860

gtcaccgtgt gccctggagg actgagaaca gcagagccgt tttaggatgg gacagggcag 70920

ccaggaggat tgggctcact ccctactgag tgcctcactc ccgtacagcc cccatagagg 70980

aagaggggtt caaatttatt cctcagccag atggcatgtg ccgcctgtcc tggaatttca 71040

catcacttat gatggaccaa aattccaaaa gctgaatcca tgattgtcaa agtctggtat 71100

ggcaggatgt caacagtaat cgtttctggg cagagggatg attttctctt cccatcttgc 71160

tttgtataaa tacattttct ataataaggt tgtattactt ttctcatcaa gaaatagcaa 71220

agtactgttt tactcaaaat atgaatagag ccaggcatgg tggcagctta tgcctgtaat 71280

cccaacactt tgagaggcgg atatgggagg atcactttag cccaggagtt tgagaccagc 71340

ctgggcaaca tagtgagacc cccgtcccca ctcccccaaa gaaaacccac aaagcattta 71400

tcctggatta ttcacagggg ccaaaaaaaa aaaaaaattc aggcctccta tagccatgag 71460

ctacgaatat gaaaatatgc aaatgtgtaa gaaaagccag cacatccgat ttttactttt 71520

actttcacac ctctgtccac catgttccaa gagaagaaac ttggtcattg aaaggaatag 71580

atcaaatcca aagaacaaaa ccactgtgct cattaaactt cttagtgttc acaaagcttt 71640

agctgcaggt tgaatggggc aacccgaatt ggctggctca cctgggctgc agggagcaga 71700

gatcgcgaca ctgcactcca gcctgggcaa caaagcgaga ctctatctca aaaaaaaaaa 71760

agttcataaa ttcaaagtta tgaattattt ttaaaataat aataatttac aataaagatg 71820

aggacaaagt gtgagtaaat ggtggtttct atccagctct gttgagctga agtggcatct 71880

ccctgctggg gcttttgggg aagaagggtg tgtgttgctc ttcagatccc aagcctcatg 71940

cccctactgg gccctgtggg gtgcttctca gcccaccagg agagccaccg ttggaacaca 72000

cacgtggggg acctggtggg tgccggtgtg gtgaatgggg gccacagcct gactccagga 72060

agccagcaaa ctcggagctg gaggagtcag gacacccccg atgagtcaag agttggtttt 72120

gctgccagtt gacatctgat tgaaccatct cttcacttct ccgtgcctca ctttccttac 72180

cagacaggct ctgctgatgc tgtccctctc ctgttcagtc gtgccctcac cgttaaagag 72240

aaagagcaaa ctgctgggca gcagcattga tttttttaat gaagtggaaa gagagctggg 72300

aataacaagt cgggcccacc tcacctgcct cacctggtgg gtttatttgt tttgtttttt 72360

tttttttgtt ttgagacaga gtttcaccct gtcacccagg ctggagtgca gtggtgtaat 72420

ctcagctcac tgcaacctcc acctgccagg ttcaattgat tctcctgcct cagcctcccc 72480

agtagctggg attacaggca cctgccacat gcctggctaa ttattgtatt tttagtagag 72540

atggggtttt accatgttgg ccaggctggt ctcgatctcc tgacctcagg tgatccaccc 72600

acctcggcct cccaaagtgc tgagatcaca ggcgtgagcc accatgcctg gccgtcacct 72660

ggtggtgttg aatatgaact gctgcggtgt tggtaaatta agcaagcaga tagatgtaaa 72720

taacgcttgg gcaggaatat ggagcacggg atgaggatgg gcggccaact gttagagagg 72780

gtagcaggga ggctgagatc tgcctgccat gaactgggag gagaggctcc tctctctctt 72840

cacccccact ctgcccccca acactcctca gaacttatcc tctcctcttc tttccccagg 72900

tgaactttga accaggatgg ctgagccccg ccaggagttc gaagtgatgg aagatcacgc 72960

tgggacgtac gggttggggg acaggaaaga tcaggggggc tacaccatgc accaagacca 73020

agagggtgac acggacgctg gcctgaaagg ttagtggaca gccatgcaca gcaggcccag 73080

atcactgcaa gccaaggggt ggcgggaaca gtttgcatcc agaattgcaa agaaatttta 73140

aatacattat tgtcttagac tgtcagtaaa gtaaagcctc attaatttga gtgggccaag 73200

ataactcaag cagtgagata atggccagac acggtggctc acgcctgtaa tcccagcact 73260

ttggaaggcc caggcaggag gatcccttga ggccaggaat ttgagaccgg cctgggcaac 73320

atagcaagac cccgtctcta aaataattta aaaattagcc aggtgttgtg gtgcatgtct 73380

atagtcctag ctactcagga tgctgaggca gaaggatcac ttgagcccag gagttcaagg 73440

ttgcagtaag ctgtgattat aaaactgcac tccagcctga gcaacagagc aagaccctgt 73500

caaaaaaaaa agaaaagaaa aaagaaagaa agaaatttac cttgagttac ccacatgagt 73560

gaatgtaggg acagagattt tagggcctta acaatctctc aaatacaggg tactttttga 73620

ggcattagcc acacctgtta gcttataaat cagtggtatt gattagcatg taaaatatgt 73680

gactttaaac attgcttttt atctcttact tagatcaggc ctgagtggcc tctctttagc 73740

aagagttggt tagccctggg attcttactg tagccacatt aataaacaac atcgacttct 73800

aaacattcta taataccatc ttttggccaa attgacttcg cctcttcctc tctctttcca 73860

aatgaaatgt gtttcatttc actgtcagac cacatggttg gggaccccac agagcacaca 73920

gccctccctc tgccttccca tgctggccct tcacccactg ctggagtgcc aggttggtcc 73980

aagggttgga ccaagttgtc tgaggttgtc tcaaggttgg tcgaggctgt ctccgcgctg 74040

ggttgtgcta caaggagccc ttctttccat gggtgtggct ggcagtgagt gctcacagca 74100

acagcccaca gtgcagcccg agggcaggat ggactcagtc cctgcctcca tacccatttc 74160

taaggaggca aaatggcaaa cactctactt ttctctttta atgctaaaaa taagaaaaca 74220

ccttgcagcc cagggtatgg gtagtgcatg gaagccgtgg agttgtgagg tgggaagtga 74280

cctctgctgg atatgtctat tcaggaagat tgctggagtg ggtggggtct ctgggaggtc 74340

ccctgagtgt gggaagctgg gaccaccagc tttctcgcac agggagtggc catcccagct 74400

tggagaggtt ccaggactgg ttgggaggca cgtttcagat ttctatctgt tgaatcagcg 74460

aagatattgg attatgagga atttgggaat taggaaagtg ggtgcaggtg ggttgggggt 74520

aggtgaagga agacatgggc gtattggggg agcaggggct gctcagaggt gttccagaag 74580

ctctgggtga ggaggtgaga gggaccgggg aatgcagctc ggcccagcct ccctgcctga 74640

ggtcagccat cacgtggtga tggcaagatg gaaatgtgct ttctgactgc tccagccagt 74700

gctgccagat tcagctcccc agggagggca cctgagaggc tccaagccag gagatctgtt 74760

ttctcctttg ttttgttttt ttttgttttg ttttgtttta ttatacttta agttctaggg 74820

tacatgtgca caacgtgcag gtttgttaca tatgtataca tgtgccatgt tggtgtgctg 74880

cacccatcaa cttgtcattt acattaggta tatctcctaa tgctatccct cccccctccc 74940

cccaccccct gttttctcct ttgaatcctt cttagaggcc gggtgcggtg gctcacgcct 75000

gtaatcccag cactttggga ggctgcggca ggaggattgc ttgagcccag gagttccaga 75060

ccagcctggg caacatagtg agacctcgtc tctacagata ataattttaa aaattatccg 75120

ggcatagtgg catgcaccta tagtcccagc tactcaagag gcagaggcag gaggatcact 75180

tgagcccagg aggcggaggt tgccgtgagc caagatccca ccactgcact ccagcctggg 75240

cgacagagac ccccatgtca aataataata ataataaata aatccttctc agtcccttcc 75300

tcactgtgtc cccctccact gaatttttcc acctcctctc ccacttcccc cactcccgct 75360

ttccctctcc ttctctcccc actccatctt tttctttctc tgctgtttct cgtccctccc 75420

tcctctccat cccacaacac tgcctaccct gtccctgccc caccctggtg ctcaggatgt 75480

gtgaagtgag gggtggtagc ccccaagacc tcaaccccga aggttagcct gttgaaacca 75540

ctttctccca gctgcccccc tggcagttgg tgctgctggg ggaaactggg attgggggcc 75600

agattttgcc tcttttcctg acaaagagag atgaagagtt ctctcaccag gtgcctggga 75660

ctggggtgtg ggtgtcccag cctatcccag cgcatctgtt ctgcatcatg attaatagtg 75720

ctgctttcag ccgggcgcgg tggctcacac ctgtaatccc agcactttgg gaggctaagg 75780

tgggcagatc acaaggtcag gagttcgaga ccagcctggc caacatggtg aaacctcgtc 75840

tctactaaaa atacaaaaat taaccaggtg tggtggtggg tgcctgtagt cccagctact 75900

tgggaggctg aggcaggaga atcacttgaa tctgggaagc agaggttgca gtgagccaag 75960

atcgtgccac tgcactccag cctgggtgac agagcgagac tccgtcctaa aaaaaaagga 76020

gttttgctct gtcgcccagg ctggagtgta gtggcgccat ctcggctcac cgcaacctgc 76080

gcctcccggg tgcaagcgat tctcctgcct cagcctccca agtagctagg attacaggcg 76140

cctaccacca cgcccggcca gttcttgtat ttttagaaga gacggggttt caccctgttg 76200

gccaggctcg tctgggactc ctgacctcag gtaatccgcc cacctcagcc tcccaaagtg 76260

ctgggattgc aggcatgagc caccgtgccc agtcaactcc ttctcaaaaa aaaaaaaata 76320

gtgctgcttt ctctttcaag tgtcctgatt tgggtgatag taaatgccac tctacttata 76380

agggatctac ctcagaatgc taattgggac atttttgtag cactctactg ttggcagcag 76440

gtgatgctca caacagcccg tgagggtgga tgacgtccgc ttcacagatg acaaaggagc 76500

ctcatgctca gaccgtgggc tgccagagca ggtccatggc tgcagcccca catggaccat 76560

atttccccct tgtcactctt tccaccaagc tcccttggaa cttcagttat taagctctct 76620

tgggtggaat ccaagttaga atcacaacat gtgcctcata tggattgtgc cagtgaaaaa 76680

tgacattcta tttagaggca gggcagcctg gcttagagtc agtttaaaat atgtattatg 76740

ctgcaacaaa tgtaccatga tcctgtaaga tgttcacaac aagggaactg gatgtggggt 76800

atactgtctg tactaacttc acaagttttc tgtaaatcta aaactgttcc aaaataacaa 76860

gttcgtttaa aattaactcc aggagaccag gtacggtagc taatgcctat aatcccagca 76920

cttcggaagg ctgaggcagg tggattgctt gagcccagga gtttgagaca agcctgggca 76980

acatggtgaa atcctgtctc taaaaaaaat cacaaaaatt agccaggtgt ggtggcgcat 77040

tcctgtagtc ccagctactt gcggggctga ggtgggagaa tcatctgagc ccaggagttt 77100

gaggctgcag tgagctgtga ttgtaccact gcactccaac ctgggcaaca gagcaagacc 77160

ctgtctcaaa aaacaaaaat gaaataaagt ccaggaaaga agtaggtttt accactctta 77220

ttttctgaag agaaaactaa atttaatgtg taaagtgagg acaagttcac caagttagtg 77280

tttgagttgc ctaaaatatg tttgctaaaa ctattcaaag ctttcacata aaacatgatc 77340

agaagttcta tgccaaaaca tatgtgtgtg tatatatata tgcactatat atactgtata 77400

taaaaatgca aaatctaaat tgccaacctt ttagaaattg ctctgaaagg aaagcatttc 77460

aagataattt gcttacccaa agaatatact ttccaagaaa gcaagtaata cttaaggtgt 77520

tcataatcct catcaaatta attcttgcta ctgaaagctt acaaggagct gttttgatgt 77580

cgggtgtgac aggtttgact tggcagaagg tgtcacttta ctaacaacat tttaaataag 77640

tgacagaaga caagaaacta cacgttaaat gccagaacaa agagtgtcta agtggatgct 77700

aagagttgaa atatggctgg atacctgccc aagagagctg aaaagtagat gaaagttggt 77760

tacctataaa ctagtgcacc ctaatgaatt aaaaggtgtt gatgagttaa cttgttatgc 77820

cttccagata agacatgcaa atggggcttc ttcctccttc actacttcca agggatttaa 77880

caaggagacc aatgcaaatg ataaggactg tagggctcaa gctggggaca gattggggaa 77940

agggggacca tcatgcccat atagatgtcc ctgtgccctg gcagtcaagg ctgctgaaaa 78000

ataacaaaac ccagaagtct gcgtgatgct gcctctccat ttgtccaaag ccttcttgcg 78060

gcagtttgca ggcttttgca aaagctccag gaccaaggag ctatgttcat gctggaagct 78120

tgttcaggat tagctgttct ttgtgggatg ggtgcagcca gggccaggtg tccagggaca 78180

gtgttttaac aaagggcatg aggtgtctga tctcacagtg gaactccact tgcctttttt 78240

tcatcttctc attctgcttc atgcacagaa ccagccccat cctgaaactg actctaaatt 78300

actcccgccc caggtggagt gcctttctcg gagttcaaca gagccttcct gtcgcccaag 78360

ggacaactcc actgaatgcc caagccacac ccaaaaccta acaagtaaaa accaaattct 78420

gtgctccccc atcctgggcc attcctggtt tctctactgc tgttggtgat accaccatca 78480

gcttgtccat catgaccctg gccagttcct cccacaaccc tccacagcac ccagggacct 78540

cacctccatt ccatccgaca cagatctcct caccacaaac cttggttttg caacagcagc 78600

catgagacct ttacaccctc cgcccttcat cctgtccccc actgaggccc cagagccatt 78660

ccttaaagca gcgcgccaca aactataacc cacaagccaa ttctggtacc cagcctgttt 78720

tgcacagcca gtgaactgac aatgatcttt tcatacagcc agaaaaacaa aacaaaacaa 78780

aaaacaacaa aaaaaaaccc caccattctg agcatgtgac ttccatgttc aagatgtctc 78840

atgttcagaa aggcccctgg aaaaggagga aggggagctg ggcacaaagg gagaccctct 78900

cagctgagct cctcccatcc agacattttc ctggacttcc tatccaatga cttcccttag 78960

cttcttatca gccacccctg tctgcccagg aggctggaag atgtggcctt ttaactgggc 79020

acagctctgt cctctatcat atcagggctc tgttcccaag gagggtagag agaatggaca 79080

ccaggtggac cctcagcagt ctgtgccaca gagggagtgt ttgcaatttc cagactaaaa 79140

gtccccatgt gcttgacggg gtatgtgact acaacgtgat gcttgacttt tcctcatatg 79200

accagagcca ctttgtccat ctggtacaat gtcagctatc tgctaggggc cctccaggat 79260

tcccagtcaa ttccatatct gcatcaccac cattggcact aaataaaata aaatactcaa 79320

gttcctgctg gtgagcatga gcagtgctac actgggccct tcaaccaagg tgacatgata 79380

atgactgaaa ataatcactg ccacttattg gggacgtctc atctgccagg catggtacaa 79440

agtgctttaa ataagcattc aacaatttca tgctgacaga agccctgtga gccagtggag 79500

ctactactat gcccattata caggggagaa aactgaggca gagagaggtt aggtaattcg 79560

ctcagcctca cacaaccaat aggtggtgga gccaggattt gggccccatc tgcctgactc 79620

tctagaggct ctatcttcca gtcttccaga gttgagtcta agccatgaat aggacaatta 79680

gacagcagag gaaacccatt cagccaccat gtgcatgaag agtaaggaat ttctgtcata 79740

cagaggggag tgaattcact gagctgagag ctgaggaacc attgatctga tggctgagac 79800

accactggga agactggaga ggcttttctg ggcatgcagt gccaggcaca ggaggagctg 79860

agggaagatg actaagaggt actggcaaag aattcagaaa ttctgatgga agctttacat 79920

gttaccatca catccatcca tctatccacc catccatcca cccatatctt cctccctcca 79980

cccaatcatg catacatcca gtcatctata caccacccac ccacccatcc atccatccat 80040

ccatcccttc atccatccca tcatccatcc aattatacat acatccaatc atatatctgt 80100

acataatcca ttcttccctc ggttcatcca tccatccatt catccatcca tccacccatc 80160

ccttccttca tccttcctat catccatcca atcatatatc tgtacataat ccattcttcc 80220

ctcggttcat ccatccatcc attcatccat ccatccaccc atcccttcct tcatccttcc 80280

tatcatccat ccaatcatac atatatccaa tcatacatct gcacatcacc agctcatcca 80340

tctatccatt tatccatcca tccttccttc catccatcat tcatccatca tacatacatc 80400

taaccataca tctctacatc attcattctt ccatcgattc atccaattat ccatcattcc 80460

ttcctccatc catcccatta tccatttgat catacatata tcatctatac atcatccatt 80520

catccatcca tccatccatc cacccatatc ttcatccaat caatcataca tacatcgaat 80580

catctacaca tcacccatcc atccatccat ccattcatct atccacccat ccatccatcc 80640

atccatccat tcatctatcc acccatccat ccatccatcc atccatccat ccatgtaacc 80700

atccagtcat atatccaatt acacatccat ccagttatac attcatacat gcatctaatc 80760

attcaattat acatacacac atccatataa ttctacatcc aattatacct ccatccaatt 80820

acacattcat acacccacct aataaattat taattcatat atccatccat ataattatac 80880

atcaattata catccatcta atcattcagt aattcaccca ccatccagtc atctatccaa 80940

taatacattc atccaatcat ccatccatcc atccacccat tcatccatcc atccgtccgt 81000

ccacccatca tggtatgagc catgatttac cacgatggtc ccctgtggac agcccaggtg 81060

gggcagaact gaagggaagc ccagggctgc ccccataaac atttgcctcc tttacatgga 81120

tgagaactag atccacatgt ataaatcctc atgatttgaa ggtgctttta ccaacattca 81180

ctcatgggat tctcccagga gctctaggag gaggcaggta gagttgaggt catctcacgc 81240

attttacaga tgaggaaacg gaggccctga gaggcaggtc caaggccacc tgaccagaaa 81300

gaagtggaac tgggacttga acccagccat cttgcccctt ggtcccatgc tctctagcct 81360

gtaactcctg cttcctggtg gggcatctcc aggaggaccc tatcggctgg ccatgggcct 81420

gccctggagt cttttgctct gtgtggccat ccttcctccc tcaggagagt gtgtgctccc 81480

agagcacagg ctgtatcttc tgagcatttt gtcccttccc agtacctagc actcagctct 81540

gtatacattg ggctctcaag aattctcaac cttccagagt gtaaggcctt gacctgctca 81600

gccctggata ctgcatgatg cattgataag cccataaaat aaccagggca gattgactcc 81660

cagtggccaa agtgccacag ggaagggaca attcagccct tctaggagga ggaggaggta 81720

gttttctcat ttctattaag gcaacaaaag ctgccttact aaggacattc ttggtggagg 81780

gcgtgactgt caaccactgt gatcatttgg gcctctcttg cccaggcttc ccattctgaa 81840

aggacagttt tattgtaggt acacatggct gccatttcaa atgtaactca cagcttgtcc 81900

atcagtcctt ggaggtcttt ctatgaaagg agcttggtgg cgtccaaaca ccacccaatg 81960

tccacttaga agtaagcacc gtgtctgccc tgagctgact ccttttccaa ggaaggggtt 82020

ggatcgctga gtgtttttcc aggtgtctac ttgttgttaa ttaatagcaa tgacaaagca 82080

gaaggttcat gcgtagctcg gctttctggt atttgctgcc cgttgaccaa tggaagataa 82140

acctttgcct caggtggcac cactagctgg ttaagaggca ctttgtcctt tcacccagga 82200

gcaaacgcac atcacctgtg tcctcatctg atggccctgg tgtggggcac agtcgtgttg 82260

gcagggaggg aggtggggtt ggtccccttt gtgggtttgt tgcgaggccg tgttccagct 82320

gtttccacag ggagcgattt tcagctccac aggacactgc tccccagttc ctcctgagaa 82380

caaaaggggg cgctggggag aggccaccgt tctgagggct cactgtatgt gttccagaat 82440

ctcccctgca gacccccact gaggacggat ctgaggaacc gggctctgaa acctctgatg 82500

ctaagagcac tccaacagcg gaaggtgggc cccccttcag acgccccctc catgcctcca 82560

gcctgtgctt agccgtgctt tgagcctccc tcctggctgc atctgctgct ccccctggct 82620

gagagatgtg ctcactcctt cggtgctttg caggacagcg tggtgggagc tgagccttgc 82680

gtcgatgcct tgcttgctgg tgctgagtgt gggcaccttc atcccgtgtg tgctctggag 82740

gcagccaccc ttggacagtc ccgcgcacag ctccacaaag ccccgctcca tacgattgtc 82800

ctcccacacc cccttcaaaa gccccctcct ctctctttct tcaggggcca gtaggtccca 82860

gagcagccat ttggctgagg gaaggggcag gtcagtggac atctgatctt ggtttagtat 82920

ccttcatttt gggggctctg ggtgtggcct gggcctctgg actttggcca cggtgtttgt 82980

tccagccctt ctcctaacct gtcctttcca gacactcggc atctaggtta ttagcacctc 83040

gcatactttc tgacatgctc ctcagtcctg attttgacca tcttctcttg cttcccatct 83100

gtgtcagtca agactgcatt tggctgtaag aaacagaaac cccaactaac tgtggcattt 83160

acatgaagag gtttactttt ctcacataat cagatgtcta gacttggcca gcacctcaag 83220

ggtcattgat gctctcctgt ctttattttc tgtcatcttt agtggttgga ttgttgcctc 83280

atggttacaa agtggctgct gcacttccag gcatcacatc tgcctttgaa gcaggaacaa 83340

gttgcaaagt aaagtggcca aaagggccct gaaactaaat gtgtcccctt aggaaagcag 83400

gagttttctt gcaagtggca atcttctgct tatgtctcat tggccagagc tgggtcttac 83460

ggccacccct tgctgcgagc aaggctggga cattgagcat tttgccgtcc aacctcttta 83520

gcagaataaa ccaaggggga agaacgttaa tagtggcttt tgagtcacta gttggcagta 83580

tctgcccctc tatctttcca tcctccccat ggagtttcaa ggttcctttc tcagtacttc 83640

ttcaggctct gcacgttcat ttggatcttg tgtcttgggg tgaaaaactg gcccaagtgt 83700

ctccccaagc atccaccttt ggattaattt ggaaaatggc tgtcaagtgc ccgcctcttg 83760

cttggtataa tgctacagct ttagaggacg cagcaggcat gggccttgcc gctgaggttc 83820

ttagcctcat gagaatatcc agatcagatt ctcttggctc cttcttagag ccagtgatgc 83880

aagacacttc ctgctcatct tgtcgggacg gttttacaag ttgcctgcca tcctgagaaa 83940

gtctacaaaa cgatgccaga cctcatgcca gcttcccaag ccttgactct cagtgctccc 84000

tcaacaggat tctggaagaa tctcccaaac aagtcgcaat cccctctgga ccctgtgcag 84060

gcatgagact caagagcatt ggctcccacc cctggtggag ggaacactgc tggggctggg 84120

atcttgcctg gttgctccgc ctgcacccaa gacaaccata attaaaatgt ccttcattga 84180

acttggaaag ccttcaaagc tgacaactcc ttatgtgtac ccggaaaggc ctgggagtgt 84240

gccagggcat tgctcgggag ggacgctgat ttggaagcat ttacctgatg agagactgac 84300

agcagctcct ggtagccgag ctttccctcc tgcctctgct gtgaaggtgg acccatccaa 84360

cagtcaaatg cctgactctg gacaggagcg gacctattta ttgccatgca agggactctg 84420

cacttttgaa ttgtgggtca tgggcttgga tttaggggtt agagctggga gaagtcttgg 84480

aagtcaccta gagatgacac tgccattttg cagatgagga aaccgtccaa tcaaaatgga 84540

ccaaggactt gcccaaagcc tcacagcaaa accataggcc cccgcactaa ccccagagtc 84600

cctgtgctgt cttaagaatc aaatagttgt aagcaatcat ctggttttca gtatttcttc 84660

ttttaaaatg cctggggcca tgcccagcag tctgtttcac tgcagcgttt acacagggct 84720

gccgggcttt cctggtggat gagctgggcg gttcatgagc cagaaccact cagcagcatg 84780

tcagtgtgct tcctggggag ctggtagcag gggctccggg ccctacttca gggctgcttt 84840

ctggcatatg gctgatcccc tcctcactcc tcctccctgc attgctcctg cgcaagaagc 84900

aaaggtgagg ggctgggtat ggctcgtcct ggcccctcta aggtggatct cggtggtttc 84960

tagatgtgac agcaccctta gtggatgagg gagctcccgg caagcaggct gccgcgcagc 85020

cccacacgga gatcccagaa ggaaccacag gtgagggtaa gccccagaga cccccaggca 85080

gtcaaggccc tgctgggtgc cccagctgac ctgtgacaga agtgagggag ctttgcgtgt 85140

ttatcctcct gtggggcagg aacatgggtg gattctggct cctgggaatc ttgggttgtg 85200

agtagctcga tgccttggtg ctcagttacc tccctggctg cctgccagcc tctcagagca 85260

tttagggcct tctggacttc tagatgctcc tcatcttgcc tcagtcagcg cgtcagttcc 85320

agagacttct ctgcagggtt ttctggggca ggtggtggca gacccgtgcc ttcttgacac 85380

ctgaggtcag tccaccctcc tgctcagact gcccagcaca gggtcacctc ccaaggggtg 85440

gaccccaaga tcacctgagc gcacagaggg tgcagatgac tggaccacac cttttggtga 85500

tcttaatgag gtggtcccag aggagctcag acatgcaatc tagcatccag ttctgggact 85560

ctgtctcctt ttcaaacgta ttcatgtaga acaggcatga cgagaatgcc ttgtcaacat 85620

gggtgatggg gaatcaatca gacagggcgc cgggctcaag gctgcagtca cccaagagtg 85680

gctcagccca ccaggcccta ggaaacgcct gcacagcctg gagctcctgg agtcatttcc 85740

ttcatgtctt cttcactgca cttacgtaaa gatgccagcc attggtttgg tgatttggag 85800

ggtgcccagt tgcccaacaa gaaatgcaga agaggcctag ccaggatttc accagcagtg 85860

gagagtagag aagatgtggc cagaaaagag tttcctttcc ctcctaaaga tggtactccc 85920

tgcagctact ggggaagcct gcagcattct ctagggctct gtgtgttgag agcagcccca 85980

ccctggcccc ttctgagtgc atttctgctt tgtgacttga tccgtgaagt cccctgagat 86040

gggcagaggg gatgtcctcg aagctggggc agagcctcat ccttgaacgt gaaggacgtt 86100

tgaagactgt ggcatgatca caggatgaga tcacagggaa cttgagtttc tctcctcctc 86160

tcccttcaca gttatttcac tgagggaaat ccctcccctg cccagaatga aaactctagc 86220

caactcttga cttttccatc actccaaagt agttgaaagt acattagtct ccacagtggc 86280

aaaacagtgt gcaaaagcta aataattaga acagccagtc ccatgtgaca gtcaaagctt 86340

ctaactccat tcaaagttgc agccattccc ctcgagggct ggcagggagg ggaggggtaa 86400

gagaaacagg aaggttctta ctgagttggt cctggtgtga gctgcgtcac actccctgca 86460

gaggtttcaa ggagactctc tctctctctg tctccatggg gaccttattt gaattcttct 86520

actcttaccc cagcctgcca tctccagcta tcctcccctg aagagccctt ctgctgcgct 86580

ggattctggt ggccatgtca tctcctcggc cccgtgggag tctgaagatc tggctgcagc 86640

ctcacctctg aggtcctgct agttgccacc tcttaaacat gatctgaggc tcccatgcac 86700

tctgacctgt gcccacatgg ggcccacggg aaacacgctg gcaagcaaac tgtgggtgtg 86760

cagacggttc tcagggctgc agcacctgtc ctttgctctg cccccaaagc aaggccagcc 86820

catcttccat cctctagtgt tccttggtgg ggccctgacc acagtccacc aggtccctaa 86880

ccagagggga cacacaccag gtgtcctcaa tgtattgcct tgaaacagtt gtgctgggac 86940

tgtgatgggg ggtggccatg tagccacccc caccaccccc aagccactct ctccaaggaa 87000

atcctcctaa agatcccttt acatcctcca tgtggtgggg aggttctaga gttgggtgca 87060

tgtgtcttca gctactgaca atgcagacct tagttggcac ctcgctctgg cctatcctgt 87120

ttgctgttct tggcgctcca gtgaaactcc ccatgggcca tccagttggg gtgcagtgtg 87180

gccaccccct tgcaggttcc tgccttgctg gagagcacag ggccctcctg gctcttgtaa 87240

aacactcccc atggtacaga gaggccagca gtgatgtgag gcccaacctc cctccatggt 87300

gttcccaagc agctcccttt ctggggtcaa ggggtggcaa agacagtgca gcgtccaatt 87360

tctgactcaa gccgggcctg gctatcgcag ctctgcactg tgtgtgacag caaggcaact 87420

cacccagtgc cgtggcagtg accgtgtccg aggaagcctc ctcacaccct ctgtctcaag 87480

gactctggca tttagctgga cttgctgtag ctctgagcct ttctgccatt gccatcacct 87540

tgtcagaaac tcaggccgaa tctgcactca gagttgtgcc caggcagttg agccaacact 87600

tgctcagcga tattgtcaca tgacaaggca ctgtcaccac tgggcgtcgt gggtagcgca 87660

gtgtcggctg gatggacccg gagggtgtct gtgtcatgct agtgctagtg atgggagccc 87720

cgtgagccca ttgcccgccc tcccatgccc tcagcagctg cctggggaca gccaatggcc 87780

tgggtgtttc tgaggctacc acatggcttc caggaaactc gagaaccttt ctctcccttg 87840

cctacactct tcacacaggc ctgtgctggc cagcggtggg gatccggcat tcctatctta 87900

ggtgcagaaa gtgactgact cattgcaggc ctgggagata agactgatgg cccagccagc 87960

aagatgtatg gatttctcag aggcagtggc ctctgtcatt gtcctcagga aatgctggtg 88020

attctggtgg cctgaggtca atgcatgtca acgtggccaa cttgccttat aaactttttt 88080

tctggacaat tgcgtgcact gtcctgtaac agtgtcctgt tgtttatgat gcagaaatag 88140

gtgtttttaa agcctattga ttttggtact attaatgtgg tcaggaactt tctcagtctt 88200

tcttgtttgg ggtgagctgt ggcttcctaa acaggaaccc aagacacccc caaaagctgc 88260

tcaccagcac tgccagcctc cctcttacca agtagcaccc gttcaggaca ttctgcgaaa 88320

ggcatttgcc cagaagttgg gaggaaggaa atgtaacatt ttggggcacc taccatatgc 88380

caggcaccag gctaaacgtg ttcacacaaa ttctcttact aaccctcacc atccttctac 88440

aagacaaact agtatcttca tcttggggtt caagatgagg aaatggaggc tcagagaggt 88500

tgaatgaatg ccggtgcctg gatatgaacc ccatctgcct gactccgcaa cccaggcaaa 88560

gtctttcctt gaacttccca gcagccactg cttagacaca gcctccacaa ccatggctca 88620

gcagcaaatt gcttctctga cctcactcag cctgtgtgtc cttgttgagt gaggcattca 88680

ggaccctggt cccaaagtgg agaaagtctt tcctactagg tcatagctac acctgcatgt 88740

gggtgctgtg ccttttgttt agtgaacttt tatcaccagc atcctcagca atgacatttg 88800

cagagaagcc agagctgagg caccttggta ttcttgggat gtgactttcc tgaatgttta 88860

agggaaaatg cccgaaggta cagagagctt ggtttctagt aaacaataac tgtcttgctt 88920

ttacccccct tcatttgctg acacatacac cagctgaaga agcaggcatt ggagacaccc 88980

ccagcctgga agacgaagct gctggtcacg tgacccaagg tcagtgaact ggaattgcct 89040

gccatgactt gggggttggg gggagggaca tggggtgggc tctgccctga aaagatcatt 89100

tggacctgag ctctaattca caagtccagg agattttagg gagttggttc ttatcaaagg 89160

ttggctactc agatatagaa agagccctag tggttttttt ctaataccat ttctgggtaa 89220

ttcctaaggc atttagtgtt ctgaaagatg ctagccttgt ccagcctggg agttgagaat 89280

gaatgtctaa cagaaactct aggccgggcg tggtggctca cgcctctaat cccagcacta 89340

tgggagaccc aggtgggcag atcacctgag gtcaggagtt tgagaccagc ctggccaaca 89400

tgtgaaatcc tgtctcacta caaataaaaa aattagccgg gtgtggtggt aggtgcctat 89460

aatcccagct actcaggagg ctgaggcagg acaatcgctc gaacccagga ggtggacgtt 89520

gcagtgagcc gagatcgcat cattgcactc cagcctgggc aacaaaagca aaactccgtc 89580

tcaaaaaaaa aaaagaaact caaatatgtg tgacaggcga ttctcactgc aggctgccct 89640

gtggctgatc caggagcaag gccttaacca tgtcatcccc aagcgattgc ttgtaaactt 89700

tcttctgtgc agccttcaac ccttattatg attttcttct caggaaccaa actgctgtat 89760

tcaagaaagg cagctttgtg taatcattta tcataaatat cttaagaaaa atcctagaga 89820

ttcctaattt taggaaatgg gagacctatg gtactgatat aatgtgggct gggcttgttt 89880

tctgtcattt gctagataaa tgaacttgag agcctactgt aaaatgtgga agcttctaga 89940

ttgcagaagg gctggaaaga cactgttctt ttctcccgag tgatgggatc tgtccagtat 90000

ttagagctgc ctctgaggcc atctgattct aggagactct gcctcgttga ggatattttg 90060

aggcctaact acacattcct gcccccagag aggtcacagc ctatagcagg ctgatgtttc 90120

tcatgtcaca tggcacagaa aggcacattt tcgttctcag gctaacaaag agcttcaaaa 90180

actattagaa gggacagtgg ctataagaga agaacctcag tcaatgtgtg aaattaacta 90240

ggaacctggc tcctgtttct tttaggtcat gtttttcagc ttaggtaaaa ctagaggctt 90300

tgataaagca tgacctctag aaatcattgc ttttcataaa tggaagtggg tttgagtttt 90360

ttctactgat tgttagtgca ggtgatgtct acatgccccc agaacatatt ccatgcaaca 90420

aaaaaagccc aggtcaccgt ctttgctggg aacttgactt ttgtgctcac tgaattttaa 90480

gctttctgac agcagcctgg aatcatggag ggataaagta cctattagta agatggaaaa 90540

aggtgtttca ggttggagct gcagtctgtt gagagtaagc tatgggaagg cctgtatacg 90600

aggggtggac ttttcttctg taagtgtcca gagaccaggc ctcctgaaga gggcatgggg 90660

gcttaactta cctggactac tgtgtttaca atactcattt atcttgaact cctcctaacc 90720

cctgagaatt gctacattta gtatttgctg agtacttcct agcatcctag ggaatcaata 90780

gaacattctc ccaaccaggc tgggtgcggt ggctcatgtc tgtaatccca gcactttggg 90840

aggccaaggt aggcagatcc cttgaggcca ggagtgcaag actagcctgg ctgacatggt 90900

gaaaccccgt ctttactaaa aatacaaaag ttagccaggc atggtggtac acacctgtaa 90960

tcccagctac atgggaggag taggaggcag gagaattgct tgaacctggg aggtggaggt 91020

tgctgtgagc cgagatcatg ccactgcact ccagcctggg cgacagagtg agtgagactc 91080

tgtttaaaaa aaaaaaaaaa aaagaacatt ctcctaacct ggcttcttcc tccaggggtg 91140

taattaatca tgtcagtttc ctcattgata cacacacaca cacactacaa tcctgtatcc 91200

attacttttc aaggtacatt tactatttac gtttggggtc cttgtctctt ttttaatagt 91260

gtttcttaaa gtcttgtatt atatcagagt acagtaacat cccagtcaag agcactctag 91320

taagctctag gaggaaagcg acttccggaa ggcagtggag acctgtcctg ttggggcagc 91380

ataggggcag cccctgcctc tggtcagttc tggcgctcag gctcagggtt gcctctgggc 91440

tgttcttccc agagactgac aaagggctcc cataaggcac ctgcagagcc tgtgagaagc 91500

tgaagtcaat gttttcctga caccagttga tctgtgcagg atccattgat ttaaccacct 91560

gctgtgtggc atgcactgtg gtcgatgcca ggaacaggaa ttggaggggc ccatgagcat 91620

ggccagtatc acaggctgga ggtgctgctg cgctctgacc gggcctcttg gggatgagcc 91680

catgtcaacc accttgcctc cgatggggtc gggcccacag gttacctttg tgtgtccatg 91740

accacacctt cctccccgac ctcatccaaa tctctttctt ttccaagccc ctgaatcctt 91800

cagggctgca ggttttgttt aaagcagagc tggtgagttg cataggttgt tgcgttggga 91860

ctagatgggg tgttcaaaga gttgggagtt aaaaaacata aagggtattt attaggagaa 91920

ccaaggagtg taattctcct gttcttaata tgcggccagg ttaatgaatg tcacgtgaat 91980

gaaccagaaa aaaatgaagt gtgcccttga tcagctgggt tggtgtgcag caagctgtgt 92040

gaccagggga cagcagtggt cctgagggcc gtcactgtct gccgtgcaga gcccttcctc 92100

ccacgggggc ctacctcacc tgtgccaagg gcttgtctgt ggtcagtgac ctggatagat 92160

ctgaatgggg cttctttttc gaggagtctt atggcaggtc tctcagtaaa gactccattc 92220

ttgatgatca cacattttgg attttccaaa tctgtcagag aatgggcttg aggcggggtt 92280

tgtgggcact agtttcactg gtttcattta ccaaaaaggg gagcagaagt caagtatggt 92340

ggctcatccc tgtaatccca gaggcaagag aattgcttga gcccaggagt tcgagaccag 92400

cctgagcaac ataaggagac cccgtctcca caaaaatgaa aaataacatt ttagtcagac 92460

gtggtggcat gcatctgtgg tcccagctgc ttgggagggt gagatgggag ggttgtttga 92520

gccctggagt taaagttgca atgagctgtg attgcaccac tgcactctag cctgggtgac 92580

agaacgagac cctgtctcaa aaaaaaaaaa aaagaaagaa aaaaaggaaa aaaaaaactc 92640

atgcctgtaa tcccagcact ttggggaccg gggtgggcag atcacgaggt caggagatca 92700

agactatcct agccaacatg gtgaaacccc gtttctacta aaaatacaaa aattagccag 92760

gtgtggtggc acgtgcctgt aatcccagtt actcgggagg ctgaggcagg agaatcgctt 92820

gaaccaggga gtcagaggtt gcagtgagct gagatcgtgc cactgtactc cagcctgggc 92880

gacagagtga gactctgtct caaaccaaaa aaaaggggtg gggggcgggg gcaggagaac 92940

agtgagaggt agggagagga aaggggattc tcgctacacc caaaccagat accatctaga 93000

ggctagaatc tttgggaggc tcaaattccc tagaaagcag gagaagcttc tgtagccctc 93060

ccgctttccc agtagattaa gcccagggcg gctccagatg tgtgacatgc tctgtgccca 93120

accagagccc atcataggca gaggaataac acccacacca gaagggccct cggaggtcac 93180

cacgtccaag aaccctcttt acagatgagg aaactgaggc ccagagaggg gagagccacc 93240

tagcgagctg gtggcggcta gaccaggaga gctgtcattc caagcaagca aaggcaacga 93300

gacgagccca gagctgtgct cccatctctt tgttaggggg cctgggatgc cctctcagtg 93360

tcattttgtc caggatgatg ctccctctct taagcgatta atgcgccctt gctaaccttt 93420

tgctatcgct gcctcttcaa accagaggag ttgagagttc cgggccggca gaggaaggcg 93480

cctgaaaggc ccctggccaa tgagattagc gcccacgtcc agcctggacc ctgcggagag 93540

gcctctgggg tctctgggcc gtgcctcggg gagaaagagc cagaagctcc cgtcccgctg 93600

accgcgagcc ttcctcagca ccgtcccgtt tgcccagcgc ctcctccaac aggaggccct 93660

caggagccct ccctggagtg gggacaaaaa ggcggggact gggccgagaa gggtccggcc 93720

tttccgaagc ccgccaccac tgcgtatctc cacacagagc ctgaaagtgg taaggtggtc 93780

caggaaggct tcctccgaga gccaggcccc ccaggtctga gccaccagct catgtccggc 93840

atgcctgggg ctcccctcct gcctgagggc cccagagagg ccacacgcca accttcgggg 93900

acaggacctg aggacacaga gggcggccgc cacgcccctg agctgctcaa gcaccagctt 93960

ctaggagacc tgcaccagga ggggccgccg ctgaaggggg cagggggcaa agagaggccg 94020

gggagcaagg aggaggtgga tgaagaccgc gacgtcgatg agtcctcccc ccaagactcc 94080

cctccctcca aggcctcccc agcccaagat gggcggcctc cccagacagc cgccagagaa 94140

gccaccagca tcccaggctt cccagcggag ggtgccatcc ccctccctgt ggatttcctc 94200

tccaaagttt ccacagagat cccagcctca gagcccgacg ggcccagtgt agggcgggcc 94260

aaagggcagg atgcccccct ggagttcacg tttcacgtgg aaatcacacc caacgtgcag 94320

aaggagcagg cgcactcgga ggagcatttg ggaagggctg catttccagg ggcccctgga 94380

gaggggccag aggcccgggg cccctctttg ggagaggaca caaaagaggc tgaccttcca 94440

gagccctctg aaaagcagcc tgctgctgct ccgcggggga agcccgtcag ccgggtccct 94500

caactcaaag gtctgtgtct tgagcttctt cgctccttcc ctggggacct cccaggcctc 94560

ccaggctgcg ggcactgcca ctgagcttcc aggcctcccg actcctgctg cttctgacgt 94620

tcctaggacg ccactaaatc gacacctggg tgcagctgct ccactccctc ggcctcctcc 94680

cgtgctcagg ctgtggccgc acgcgcccct cacgcttgcc cgccactctg catgtcacca 94740

gcacccccgc tccgtgctcc ccaccttgtt tgactctctg gccacttgat ttgtccacaa 94800

cggcccatca gcccacagga ggtttggtgg gtgccttcca ccgacaggat gacgggtgcc 94860

ctcatggtgt ctagaactct ccaaccctcc catgtaggca taagcagccc cactttgcag 94920

atgaggaaac ggaggctcag agaagtacag taacttgccg aaggccaatg agtagtaagt 94980

gacagagcca ggtttgggat ccaggtaggt tgtctctgaa agacacgcct gtcctgcatc 95040

ccacaacgcc tcccaggagg tgctggagtg tggacgccta acacagagat gtgcagggca 95100

cacacagcag gtgacacaca cagcatccag aggtggccca gagctcatgc tgtgcctttg 95160

gcccagtgcc ctgcccccac ccactctgcc ttgtggcagg aagacaagga gcagacacaa 95220

gatctccctg gtccacatgc caccacctcc ctctgcagag gacaagggga tcctcatgct 95280

ggcattggag ggggttgagc agggcccacc ttgagccctc aggagcacga ccacagcagc 95340

cctgcaggga gggattggtg ggaggagagt cccaagtatc agggagagga gagttggtgt 95400

cccacaggag acctcagagc cacaaggcga gcttgttcat aaatttggga cccttagcat 95460

ttcacagtta tttgcagagc ccagaaatgg atgttactga agctcacagt tgcaagcatc 95520

tgttaaattt ttattagatt ttacttttag ggaaaacttt gaaatgctat aaagaagcct 95580

gtgtttaaaa gttaagacag aggctggggg cgatggctca cgcctgtaat ctcagcactt 95640

tgggaggcca aggcaggtgg atcatttgag gttaggagtt cgagaccagc ctggccaaca 95700

tggtgagacc ctgtctctac taaaattaca aaaaattagc tgggcgtggt ggcgggcacc 95760

tgtagtccca gctactgggg aggctgaagc aggataagtg cttgaaccca ggaggcggag 95820

gttacagtga gccaagatca caccactgta ccctaagcct gggcgacaga gtgagactct 95880

gtctcaaaaa ataaaataaa ataaagttaa gagagaaaaa aatatatcct atatcctttg 95940

ttaaattcca aaacagtagg ggacaaataa ctgacttgac aggttactac aatatttcct 96000

gaaatgatgt tttcttgaat actggcctac tagaggttca taggtgtgtt tggattaaaa 96060

aagagttcca tggcccagtg actgggggaa aaaaataaaa gactaaagta agttaaacag 96120

gcttttctgc tgcaggactt gtcagagcct ttaatgtact aatggccatt gtgaccctct 96180

gagaaggtca cagagtgggt ttcccaaact tacttgattc tacctgctaa catttcctgg 96240

aggaagtttg ggaaatgccg atttagcaga ttcttttgtt gtgccgtgga tggtgctggt 96300

tgatgtgggc aaaacaaaga acacgtgagt cagatccgcc tggggctctt actaaagtgc 96360

aggttcccag gtgccacttt aggcttacag acccagttgt ggggtaagcc tgggagtctt 96420

ttagcaggtg attctgccac atagtatagt tggaaaacct ctgggcatac tcattgctgg 96480

tccctctaga aatccaggtg acaatagcca atgagaagct ccaagagacc cagttgtcca 96540

tggggtagag ggaatgtgat attgaaacca aagaagaaaa tctatgatca gttttcagca 96600

gtgactgtca agagaaggag aagggtgagt tagcgctgat gctggctgac aggtcagcgg 96660

gttggtttca ccaaggagtg tgatgaaggc tgatgttgtc tgtgggaatg tatgatggta 96720

actggtttgt agctaatttg gggaagcagt gagaattcgt gccctttgaa gaccagtaag 96780

tggcaagaaa cccaccaggc ctggctcagg gctgggctgg gcttggctcg tctcagagca 96840

gctggggctg gtggccaaag ccaccattag tgaggggcag gccctggggg tacaaccagc 96900

aactagggga caaagacaac cctgccagcc tctcctattc tggaggcgtg tgaccagaaa 96960

tggagatggg ttggtcagca taagatggcc aggaaggtgg aaatcaggac tgctggcaat 97020

ctagccacat gggcagggga gccgggtggt tccaggcagt ttccaaggcc aagagggtga 97080

gcaggcacct cacagggaat cagggccaag cctggctgca gtgtggagac aatgcaccca 97140

cccccatcct tggatcttgc aggaggctgg gtcctcactg agctaccaac atccatggcc 97200

ctgaggcttt taaaacaccc atccatggag tggggctggt cccagtgggg tgaggctgac 97260

cctggcagaa acagggcagg agcctgtggg ttagggagac tgcaccttcc ttagatagcc 97320

tccatgccat catgtccccg tgacagtttc tgctgcgtcc cctctgcatg gtcccaccct 97380

cggccagcct gctgccccct cttgccaggt tgcgctaatc agtgacccca gtgtgctgtg 97440

ttgatactaa caatgcgagg cctagcagat tcaagggaaa agagaaccaa ctgggtttcc 97500

accagaccca actaaacaaa catggaccta tcccagagaa atccagcttc accacagctg 97560

gctttctgtg aacagtgaaa atggagtgtg acaagcattc ttattttata ttttatcagc 97620

tcgcatggtc agtaaaagca aagacgggac tggaagcgat gacaaaaaag ccaaggtaag 97680

ctgacgatgc cacggagctc tgcagctggt caagtttaca gagaagctgt gctttatgtc 97740

tgattcattc tcatatataa tgtggggagt atttgtcact aaagtacagc tgtcatttaa 97800

agtgctttgt attttggggc aggcttttaa aaagtccagc atttattagt tttgatactt 97860

accccaggga agagcagttg gcaggttcat gaagtcatgc tcctaattcc agctttctta 97920

gtgtactttc agtgagaccc tgacagtaaa tgaaggtgtg tttgaaaacc aaacccagga 97980

cagtaaatga aggtgtgttt gaaaaccagc cctaggacag taaatgaagc catcttctca 98040

ctgcataaac tgcacccaga tctttgccca tccttctcag tatttcactt cacccattgt 98100

ttactgtctc aatgactggg gaaatgtctg gggaaatgct cccgtaattg cacagtggcg 98160

tttttcctgg aaaatcccac catggctcta gataagacct atttttctta aaggtatcta 98220

aaatttccag cataaattct gtctgaaaca cctgaatttt aatcagtact ggagcccgga 98280

gggcatctcc agttgccaca tagctctgag cattcagtgg tgtgttgagg gctgctcccg 98340

gaagtgcctg cagagtcagg gctccccagc ctcatctagt gaggcagtgg aagggcctgt 98400

ggggatttgg agagctggcc tgggtctctg aagtgatagt gacagctgct tgtcaatcac 98460

ggtgcacatt tagtgccggg ggcagggggc agggaatacc agcctcatgc atgcatgcat 98520

tcatttgttc cttccttcat tcattcattc agtacacatg ggtacaacat ccctgccctg 98580

gagttgccca gagtctaggg aggggaaaga tctattaccc tgggcctcgg ccagctgggg 98640

agtgctgctg gtggagaggg gccgtgtgca gcgagggaag gaggagtcgt caataccccc 98700

accccagctt tgctttcttg tcatcagccc cagggcccca gcctgtgtcc ctcctctccc 98760

attgctactt catctcctgg gtcctcctta ccaagcctga ccacacagag ggccttggcc 98820

gcttccatgg ggaattggaa agcaataaga tagcatcccc tagaagccca gtgaagtctg 98880

ggacaggacc cttctctgag ctctgacttg ctcttggaaa cacttcgagg cttagcctcc 98940

ccactttgtt tcccaagagt gtgacctgtt cccctccaaa cacccccttc tcctccaggg 99000

ccatgcccac ccgtcaaaat cccccacggg caggacgaac tgtgggtgtc agtcaccatc 99060

tatcctgcat cctggttcca gggccccccc cagccccgcc tccataggga caggcgtgca 99120

gacacccgtc cctggctgct tcctcttgtg gaatgggttc aaaagtaagc agtgttgttt 99180

acactgacaa actgaaaaaa aaagaaaaag agataacatt ggaggcttgg cacagtggct 99240

catgcctgta atcccagcac tttgggaggc taaggtggga ggatgtcccc agcccaagag 99300

ttctagacca gcctgggcaa catagcaaga ccccatctca aaaaaaaaat ttaattggcc 99360

aggcagaggt gggaggatca cttgaaccca aagggtggag gctgcagtga gccgtgatgg 99420

caccactgca ctccagccag ggcaacagag ggagaccctg tctctaaaac aaacaaacaa 99480

acaaacaaac aaaagagtta acattggcca gattaggatt caccagatag tgttaatatt 99540

agtttgattt gagactttaa tcagaaagca catgtgtggt gggggtgggt gtaacctaag 99600

tcaggtagaa tctttccaac ttgggggggg cacactcctg attgtagcca tatgagtctg 99660

tcagtgtggt ggaagagacc atgggttaat gggcaggtaa aaaagcacct tgcctggaat 99720

tgagtagaaa gtaaggccct tcagaccccg tgacacactt ggggacattt tcttgagtaa 99780

catcctaaga ttcatgtacc ttgatgatct ccatcaactt actcatgtga agcaccttta 99840

aaccagtcgt ctccaaattc aggggcacag taacatccaa caggctggag aaagaacgta 99900

ctagaacttc cattcctttt tcatgtcctc ttctaaaagc tttgtcaggg ccaggcgcgg 99960

tggctcacgc ctgtaatccc agcactttgg gaggccgaga cgggtggatc acgaggtcag 100020

gagatcgaga ccatcctggc taacacagtg aaaccccatc tctactaaaa atacaaaaaa 100080

acgagccggg cgtggtggtg ggcgcctgta gtcccagcta ctcgggaggc tgaggcagga 100140

gaatggcgtg aacccaggag gcagagcttg cagtgagccg agattgcacc actgcagtcc 100200

agcctgggcg acagagcgag actccgtctc aaaaaagaaa aagaaaaaga aaaagaactg 100260

tgattgggga ggacggtcac tttcctgttc ttactgatca gaagggatat taagggtacc 100320

tgattcaaac agcctggaga tcactgcttt caaccattac ctgccttatt tatttttagt 100380

tactgtcctt ttttcagttt gtttccctcc tccatgtgct gacttttatt ttgattttat 100440

ttatgtttat gtttaagaca tccacacgtt cctctgctaa aaccttgaaa aataggcctt 100500

gccttagccc caaacacccc actcctggta gctcagaccc tctgatccaa ccctccagcc 100560

ctgctgtgtg cccagagcca ccttcctctc ctaaacacgt ctcttctgtc acttcccgaa 100620

ctggcagttc tggagcaaag gagatgaaac tcaaggtaag gaaaccacct ttgaaaagaa 100680

ccaggctgct ctgctgtggt ttgcaaatgt ggggtttgtt tatttgtttt ttagcctcaa 100740

agacctttct tcaaatgagt tctggcatag aagcaccgtg taaaatagtt agaattctgg 100800

gcaaagggga aaagagagct gggggccatc cctctcagca ccccacaggc tctcatagca 100860

gcagctccta agacacctgg tgggaccttg gtttcgaaat cgctactcta aggctgggca 100920

cggtggctca cacctgtaat cccagctctt taggaggccg aggagggtgg atcacctgag 100980

atcaggagtt cgagaccagc ctggctaaca tggcaaaacc ctgtctctac taaaaataca 101040

aaaattagcc gggcgtggtg ttatgcgtgg tggtaatcgc agctactcgg gaggctgagg 101100

cacaaggatt gcttgaaccc cagaggcaga ggttgtagtt agctccagct tgggcgacag 101160

agcaagaccc tgtcgcaaaa attgtttaaa aaacaaaccc aaaattgcta ctctcattgg 101220

gttcctttgc ccattcctga ttttggcaag agaaatgctt ccagattgcc ctgatctggg 101280

taggacagca tcacgccata gcaacactgc cccgtgagct cactgccccc tcaactagct 101340

tgtggtcctt ggttaatgtc agtttctttt ttgagtttgt gttatgtcta agggtcatct 101400

gctgggtaac ggaacccagg gactgcccta gtccctagac tgtgccatgc ccgactctgc 101460

cagctttgtc agtgatgctg gtgctcgcct cctcgggtgc tcgcctggtc tgagcacacc 101520

caaggagttc ttgaggcctt agggttgttt gcgagagaat gaaagaacac gacctagctc 101580

tctttagcat ccttggtcag gttcaacact gcccccaggg gcctctggtg gagccaacca 101640

ccatcagcca aataaatcca taattagagt cagaaaatgg atgtctgcat atgtgtagtg 101700

cactaatgtc ctgccgatga ttgacatgga gtggagagtg acctgatcat tgctgtgagc 101760

tctgctggcc ttggcacaac tcatgctgat aactaatgca cacagttcct ctgggaggaa 101820

atgtcctcag ggaacttgga gtttgggtgg ggatgtgggt ttgtgtgccc agcaagccct 101880

tgtggttgta gcagacacta gtggcatcta ggaggcaaag ggtcacccca gtcttagcca 101940

cgttttgagt caaggtggcg gagtggggct ggtgttgact cttggtggca gtaacttttc 102000

ccaatggtga aaaacccctc tatcatgttt catttacagg gggctgatgg taaaacgaag 102060

atcgccacac cgcggggagc agcccctcca ggccagaagg gccaggccaa cgccaccagg 102120

attccagcaa aaaccccgcc cgctccaaag acaccaccca gctctggtaa gaagaacgtt 102180

ctcttgaatc ttagaggaag ctgaagctct cagaggtaca gccttcattt taggaggcct 102240

taggccactg agaatgaata acccctggca gctggtcagc agcttgcagt ttactaagca 102300

ctggagtctt cattgccttc tcagtccttt tgatttctga ggcaaatgtt gaatccctac 102360

cttttttttt ttttttcttt tgagacagag tttcgctttt gttatccagg ccggagtgca 102420

gtggtgtgat ctcagctcac tgcatcctcc acctcccagg ttcaagcgat tctcctacct 102480

cagcctccct agtagctggg attacaggca cctgccacta tgcccggcta attttttgta 102540

tttttagtag agacagggtt tcaccatgtt ggccaggctg gtctcgaacg cctgacctca 102600

ggtgatccac ctgcctcggc ctcccaaagt gctgggatta caggcatgag ccaccactcc 102660

cagcctgaat cctcactttt tatcaatgaa gaaattgagg ctgattctgc agcatgataa 102720

aaaaaaatac agaaaaagga aaaaaaagaa agaaatcgag cctctgagag tttgcttgac 102780

tgagtctaac cagctcattt taaacccgag gaaaatgcag tcacatgact actaagtggc 102840

agctctcgga gcctctctgg ccccaagtcc agggttccat agaggcagcc ccagcatggc 102900

atgttttcag tccccaaatg agactctgga gacaaatgtc tctggagaca gagcagcagc 102960

ctggataagt cacaatgggt gacgtcactc agggctcaac ccctgggcag cttaacttgc 103020

tagggacgtt aggagtctgc tgcaaaacct gagggtctta gctgagcagt cacaggctgg 103080

gcccgttgcc ctgggctcct gtgagtaaaa cccagtcaat tttgagtacc cagtaaggca 103140

tccattgagt tattttgcag ccaggagtgc tattaagaac agtcgcggct gggcgtggtg 103200

gctcatgcct gtaatcccag cactttggga ggccaaggtg ggcggatcac ctgaggtcag 103260

gagttcgaga ccagcttggc caacatggca aaaccccgtc tctaataaaa atacaaaata 103320

attagctggg cgtggtggcg ggcgcctgta atcccagctt ctcaggaggg tgaggaagga 103380

gaatcacttg aacccaggag gcagaggttg cagtgagctg agatcgcacc attgcactcc 103440

agcctggatg acaaaagtga gattccttct caaaaaaaaa aaaaaaaaaa cagtcgtcct 103500

ctttggggat tagggacagc ctgcctgcct gcccgagcac ttctctcttc cattgcccca 103560

gtgaagtatt ccaggcccct gggtttagac tctgcaccat gtaggggtgt ctgacctgca 103620

cttgctcctt ggtggcacgg gcagcctatg gcacttgctg cgggctgtga ccaaagcctg 103680

gcctggatct tggatcttgg tgactctgct tctccctggc ctgagggagc tgcccagagc 103740

ctgcccacca cctgctgcgt gtctttgcgg tggcatttct cgcacacatg ccgtgcggtg 103800

gcacccccaa ggatggccat tcactaaggc ccattgtttt tgtcttttcg cttcgtgttt 103860

tctggcctgg tgtttttctc atatacatgt gatccaggga taattcccag aattttgaca 103920

ggattttaag tagcgtttgg atcctgctgt ttttttttca cttaacatcg ggccagttga 103980

ctcacactct gttttttgtt gttgtttttt tgagacggag tctcactgtg tcacccaggc 104040

tgaagtgcag tggcacaatc ttggcatact gcaacctctg cttcccaaat tcaagcagtt 104100

ttcctgcctc agcctcctga gtagctggga ctacaggcac aggccaccac gccctgctaa 104160

tttttgtatt tttagtaaag acagggtttc accattttgg ccagcctagt ctcgaactcc 104220

tgacctcaag tgatccgccc acctcggcct cccaaagtgc tgggattaca ggggactcac 104280

actttgtaac aacctgaaac aacgtgatgc atttcccttt gggtcttacc tgctcttcgg 104340

tggctgcctg caggtggaga gaccctcccc cttgggcccc tcgaccttgt ttcagaatgg 104400

ggcccctgct gggccagctg tgggtgcctg ccacgtgaag gactcattaa ggccctgttt 104460

aagcctgatg ataataaggc tttcgtggat ttttctcttt aagcgactaa gcaagtccag 104520

agaagaccac cccctgcagg gcccagatct gagagaggta ctcgggagcc tacttcgctg 104580

ggagcagcct ccctttgcgt gtgtggccat tcactggctt gtgtttctag agccgggagg 104640

acccttttct gcaatgcagg gttcacacag ggttcgcagc ctgaagatgg agcagtccga 104700

attctcttcc ctgtgcagtt tgcgcagctg tgtttgtctg atgggctttc taatcctgtg 104760

tgctctcctt gacttcaggg acaatggcat tacaggcatg agccaccatg cctggctgtc 104820

tccctatgtt tcagatgaag acataggctt aaggaggtca ggtgacttgc ccacgaccac 104880

tctgtaaata agaggcatga aaagtatttg gagccaccac caccaagccc actggtcacc 104940

ctgggtctct gaagtcaggg aggcaggagg atgggaggtc tgaggaggca gagaggctga 105000

gcctggaggc cctggaggcc gaggccccat ctgttgtttc cttatgtgga aaataagagg 105060

cttcatttgt cctattgcca cagagcgtac tacttcagga acatccaaga catggaaatc 105120

cgcagggcac ggtggctcac gtctataatc ccggcacttt gggaggttga ggtgggagaa 105180

tcgcttgagg ccagaagttc aagaccagcc tgagcaacat agtcagaccc cgtctctata 105240

aaaaacatta tttttaaaaa agacatggaa gtcaaattct aaaaactggt gctggctggg 105300

tgcggtggct catgcctata atcccagcac tttgggaggc cgaggcgggt ggatcacctg 105360

aggtcaggag ttcaagacca gcctggccaa catggtaaaa cctctactaa agaaatcttt 105420

actgaaaata caaaaatcca gtctctacta aaataagtct ctactaaaaa tacaaaaatt 105480

agccaggcgt ggtgctgcac acctgtaata tcagctactc gggaggctga ggcaggagac 105540

tcgcttgatc ccatgcagcg gaggttgcag tgagccgaga tcacgccatt gcactccagc 105600

ctgggcatca gaataagact ccgtctcaaa aaaaaaacca caaaaaaaca aaacaacaac 105660

aaaagaaaac tagtgcttat tcgtcactgg ccaagctgcc cattggctac atgggtgctt 105720

caaagagctg cccttctcca ggtctggcca gcaggtatgt gttacagcaa atgcctgggg 105780

cagcggcagg ggcattgctg cgggaagctt ctggacttgc aggaaagcta agttctcaga 105840

ctgcagggga gctaagcaca cctcggcaca gggtgaggcc tgcggttctc agacttcagt 105900

ctttgtggag cttgagaaaa atgaggcttt gcaggtccca cccctagaga ttctgctcta 105960

tccactcttg aaggggatcg agaaatttgc attttgcaac tcccactttc ctccttgaaa 106020

gctccggaga ttctgacgca gggttccgtg ggccacactt tggaaaatac agacccatga 106080

gatagaatac cagactgttg aagtgtaacg ggggcctggg aagtgcagta acagaagcaa 106140

gtttgagggt aaaggacacc cagaggaggg agggacagca tctgcatgga gaggagaaga 106200

gaccccccag cagcttccag ggtgttggaa gggtgcgcta gtaactgcta tgcatggcag 106260

gtggggaact gtacgtcagg gcacagcagc atgaagcggt atggctcgtg tggacagcta 106320

gggacaggca ggcgtggagc aggcatcctg ttctgaaggc caaatcccac agaggagcca 106380

gggtgctggc aggagccctg aactagccga acagctgaac agctgaacat tcaccctgtg 106440

gggaaagggt cagaagcgtc caggcttgag ggcacagctg ggtctcgtca ctgcatcacc 106500

cttatttagg ataaaggccc tgaagaattg tattagaggt tggcaaagca tatctaccac 106560

ctcctggagc cacgctggcc gcagggatta taattatttc cattttcaaa ttaaggcctc 106620

tgagctcaga gaggggaagt tacttgtctg aggccacaca gcttgttgga gcccatctct 106680

tgacccaaag actgtggagc cgagttggcc acctctctgg gagcgggtat tggatggtgg 106740

ttgatggttt tccattgctt tcctgggaaa ggggtgtctc tgtccctaag caaaaaggca 106800

gggaggaaga gatgcttccc cagggcagcc gtctgctgta gctgcgcttc caacctggct 106860

tccacctgcc taacccagtg gtgagcctgg gaatggaccc acgggacagg cagcccccag 106920

ggccttttct gaccccaccc actcgagtcc tggcttcact cccttccttc cttcccaggt 106980

gaacctccaa aatcagggga tcgcagcggc tacagcagcc ccggctcccc aggcactccc 107040

ggcagccgct cccgcacccc gtcccttcca accccaccca cccgggagcc caagaaggtg 107100

gcagtggtcc gtactccacc caagtcgccg tcttccgcca agagccgcct gcagacagcc 107160

cccgtgccca tgccagacct gaagaatgtc aagtccaaga tcggctccac tgagaacctg 107220

aagcaccagc cgggaggcgg gaaggtgaga gtggctggct gcgcgtggag gtgtgggggg 107280

ctgcgcctgg aggggtaggg ctgtgcctgg aagggtaggg ctgcgcctgg aggtgcgcgg 107340

ttgagcgtgg agtcgtggga ctgtgcatgg aggtgtgggg ctccccgcac ctgagcaccc 107400

ccgcataaca ccccagtccc ctctggaccc tcttcaagga agttcagttc tttattgggc 107460

tctccactac actgtgagtg ccctcctcag gcgagagaac gttctggctc ttctcttgcc 107520

ccttcagccc ctgttaatcg gacagagatg gcagggctgt gtctccacgg ccggaggctc 107580

tcatagtcag ggcacccaca gcggttcccc acctgccttc tgggcagaat acactgccac 107640

ccataggtca gcatctccac tcgtgggcca tctgcttagg ttgggttcct ctggattctg 107700

gggagattgg gggttctgtt ttgatcagct gattcttctg ggagcaagtg ggtgctcgcg 107760

agctctccag cttcctaaag gtggagaagc acagacttcg ggggcctggc ctggatccct 107820

ttccccattc ctgtccctgt gcccctcgtc tgggtgcgtt agggctgaca tacaaagcac 107880

cacagtgaaa gaacagcagt atgcctcctc actagccagg tgtgggcggg tgggtttctt 107940

ccaaggcctc tctgtggccg tgggtagcca cctctgtcct gcaccgctgc agtcttccct 108000

ctgtgtgtgc tcctggtagc tctgcgcatg ctcatcttct tataagaaca ccatggcagc 108060

tgggcgtagt ggctcacgcc tataatccca gcactttggg aggctgaggc aggcagatca 108120

cgaggtcagg agttcgagac caacctgacc aacagggtga aacctcgtct ctactaaaaa 108180

tacaaaaata cctgggcgtg gtggtggtgc gcgcctataa tcccagctac tcaggaggct 108240

gaggcaggag aatcgcttga acccaggagg cagaggttgc agtgagccga gatagtgcca 108300

ctgcactcca gtttgagcaa cagagcgaga ctctgtctca aaacaaaata aaacaaacca 108360

aaaaaaccca ccatggctta gggcccagcc tgatgacctc atttttcact tagtcacctc 108420

tctaaaggcc ctgtctccaa atagagtcac attctaaggt acgggggtgt tggggagggg 108480

ggttagggct tcaacatgtg aatttgcggg gaccacaatt cagcccagga ccccgctccc 108540

gccacccagc actggggagc tggggaaggg tgaagaggag gctgggggtg agaaggacca 108600

cagctcactc tgaggctgca gatgtgctgg gccttctggg cactgggcct cggggagcta 108660

gggggctttc tggaaccctg ggcctgcgtg tcagcttgcc tcccccacgc aggcgctctc 108720

cacaccattg aagttcttat cacttgggtc tgagcctggg gcatttggac ggagggtggc 108780

caccagtgca catgggcacc ttgcctcaaa ccctgccacc tccccccacc caggatcccc 108840

cctgcccccg aacaagcttg tgagtgcagt gtcacatccc atcgggatgg aaatggacgg 108900

tcgggttaaa agggacgcat gtgtagaccc tgcctctgtg catcaggcct cttttgagag 108960

tccctgcgtg ccaggcggtg cacagaggtg gagaagactc ggctgtgccc cagagcacct 109020

cctctcatcg aggaaaggac agacagtggc tcccctgtgg ctgtggggac aagggcagag 109080

ctccctggaa cacaggaggg agggaaggaa gagaacatct cagaatctcc ctcctgatgg 109140

caaacgatcc gggttaaatt aaggtccggc cttttcctgc tcaggcatgt ggagcttgta 109200

gtggaagagg ctctctggac cctcatccac cacagtggcc tggttagaga ccttggggaa 109260

ataactcaca ggtgacccag ggcctctgtc ctgtaccgca gctgagggaa actgtcctgc 109320

gcttccactg gggacaatgc gctccctcgt ctccagactt tccagtcctc attcggttct 109380

cgaaagtcgc ctccagaagc cccatcttgg gaccaccgtg actttcattc tccagggtgc 109440

ctggccttgg tgctgcccaa gaccccagag gggccctcac tggcctttcc tgccttttct 109500

cccattgccc acccatgcac ccccatcctg ctccagcacc cagactgcca tccaggatct 109560

cctcaagtca cataacaagc agcacccaca aggtgctccc ttccccctag cctgaatctg 109620

ctgctccccg tctggggttc cccgcccatg cacctctggg ggcccctggg ttctgccata 109680

ccctgccctg tgtcccatgg tggggaatgt ccttctctcc ttatctcttc ccttccctta 109740

aatccaagtt cagttgccat ctcctccagg aagtcttcct ggattcccct ctctcttctt 109800

aaagcccctg taaactctga ccacactgag catgtgtctg ctgctcccta gtctgggcca 109860

tgagtgaggg tggaggccaa gtctcatgca tttttgcagc ccccacaaga ctgtgcaggt 109920

ggccggccct cattgaatgc ggggttaatt taactcagcc tctgtgtgag tggatgattc 109980

aggttgccag agacagaacc ctcagcttag catgggaagt agcttccctg ttgaccctga 110040

gttcatctga ggttggcttg gaaggtgtgg gcaccatttg gcccagttct tacagctctg 110100

aagagagcag caggaatggg gctgagcagg gaagacaact ttccattgaa ggcccctttc 110160

agggccagaa ctgtccctcc caccctgcag ctgccctgcc tctgcccatg aggggtgaga 110220

gtcaggcgac ctcatgccaa gtgtagaaag gggcagacgg gagccccagg ttatgacgtc 110280

accatgctgg gtggaggcag cacgtccaaa tctactaaag ggttaaagga gaaagggtga 110340

cttgactttt cttgagatat tttgggggac gaagtgtgga aaagtggcag aggacacagt 110400

cacagcctcc cttaaatgcc aggaaagcct agaaaaattg tctgaaacta aacctcagcc 110460

ataacaaaga ccaacacatg aatctccagg aaaaaagaaa aagaaaaatg tcatacaggg 110520

tccatgcaca agagccttta aaatgacccg ctgaagggtg tcaggcctcc tcctcctgga 110580

ctggcctgaa ggctccacga gcttttgctg agacctttgg gtccctgtgg cctcatgtag 110640

tacccagtat gcagtaagtg ctcaataaat gtttggctac aaaagaggca aagctggcgg 110700

agtctgaaga atccctcaac cgtgccggaa cagatgctaa caccaaaggg aaaagagcag 110760

gagccaagtc acgtttggga acctgcagag gctgaaaact gccgcagatt gctgcaaatc 110820

attgggggaa aaacggaaaa cgtctgtttt cccctttgtg cttttctctg ttttcttctt 110880

tgtgcttttc tctgttttca ggatttgcta cagtgaacat agattgcttt ggggccccaa 110940

atggaattat tttgaaagga aaatgcagat aatcaggtgg ccgcactgga gcaccagctg 111000

ggtaggggta gagattgcag gcaaggagga ggagctgggt ggggtgccag gcaggaagag 111060

cccgtaggcc ccgccgatct tgtgggagtc gtgggtggca gtgttccctc cagactgtaa 111120

aagggagcac ctggcgggaa gagggaattc ttttaaacat cattccagtg cccgagcctc 111180

ctggacctgt tgtcatcttg aggtgggcct cccctgggtg actctagtgt gcagcctggc 111240

tgagactcag tggccctggg ttcttactgc tgacacctac cctcaacctc aaccactgcg 111300

gcctcctgtg caccctgatc cagtggctca ttttccactt tcagtcccag ctctatccct 111360

atttgcagtt tccaagtgcc tggtcctcag tcagctcaga cccagccagg ccagcccctg 111420

gttcccacat cccctttgcc aagctcatcc ccgccctgtt tggcctgcgg gagtgggagt 111480

gtgtccagac acagagacaa aggaccagct tttaaaacat tttgttgggg ccaggtgtgg 111540

tggctcacac ctaatcccaa cacctgggga ggccaaggca gaaggatcac ttgagtccag 111600

gagttcaaga ccagcctggg caacataggg agaccctgtc tctacaattt tttttttaat 111660

tagctgggcc tgttggcact ctcctgtagt tccagctact ctagaggctg aggtgggagg 111720

actgcttgag cctgggaggt cagggctgca atgagccatg ttcacaccac tgaacgccag 111780

cctgggcgag accctgtatc aaaaaagtaa agtaaaatga atcctgtacg ttatattaag 111840

gtgccccaaa ttgtacttag aaggatttca tagttttaaa tacttttgtt atttaaaaaa 111900

ttaaatgact gcagcatata aattaggttc ttaatggagg ggaaaaagag tacaagaaaa 111960

gaaataagaa tctagaaaca aagataagag cagaaataaa ccagaaaaca caaccttgca 112020

ctcctaactt aaaaaaaaaa atgaagaaaa cacaaccagt aaaacaacat ataacagcat 112080

taagagctgg ctcctggctg ggcgcggtgg cgcatgcctg taatcccaac actttgggag 112140

gccgatgctg gaggatcact tgagaccagg agttcaaggt tgcagtgagc tatgatcata 112200

ccactacacc ctagcctggg caacacagtg agactgagac tctattaaaa aaaaaatgct 112260

ggttccttcc ttatttcatt cctttattca ttcattcaga caacatttat ggggcacttc 112320

tgagcaccag gctctgtgct aagagctttt gcccccaggg tccaggccag gggacagggg 112380

caggtgagca gagaaacagg gccagtcaca gcagcaggag gaatgtagga tggagagctt 112440

ggccaggcaa ggacatgcag ggggagcagc ctgcacaagt cagcaagcca gagaagacag 112500

gcagaccctt gtttgggacc tgttcagtgg cctttgaaag gacagccccc acccggagtg 112560

ctgggtgcag gagctgaagg aggatagtgg aacactgcaa cgtggagctc ttcagagcaa 112620

aagcaaaata aacaactgga ggcagctggg gcagcagagg gtgtgtgttc agcactaagg 112680

ggtgtgaagc ttgagcgcta ggagagttca cactggcaga agagaggttg gggcagctgc 112740

aagcctctgg acatcgcccg acaggacaga gggtggtgga cggtggccct gaagagaggc 112800

tcagttcagc tggcagtggc cgtgggagtg ctgaagcagg caggctgtcg gcatctgctg 112860

gggacggtta agcaggggtg agggcccagc ctcagcagcc cttcttgggg ggtcgctggg 112920

aaacatagag gagaactgaa gaagcaggga gtcccagggt ccatgcaggg cgagagagaa 112980

gttgctcatg tggggcccag gctgcaggat caggagaact ggggaccctg tgactgccag 113040

cggggagaag ggggtgtgca ggatcatgcc cagggaaggg cccaggggcc caagcatggg 113100

ggggcctggt tggctctgag aagatggagc taaagtcact ttctcggagg atgtccaggc 113160

caatagttgg gatgtgaaga cgtgaagcag cacagagcct ggaagcccag gatggacaga 113220

aacctacctg agcagtgggg ctttgaaagc cttggggcgg ggggtgcaat attcaagatg 113280

gccacaagat ggcaatagaa tgctgtaact ttcttggttc tgggccgcag cctgggtggc 113340

tgcttccttc cctgtgtgta ttgatttgtt tctctttttt gagacagagt cttgctgggt 113400

tgcccaggct ggagtgcagt ggtgcgatca tagctcactg cagccttgaa gtcctgagct 113460

caagagatcc ttccacctca gcctcctgag tagttgggac cacaggcttg caccacagtg 113520

cccaactaat ttcttatatt ttttgtagag atggggtttc actgtgtcgc ccaggatggt 113580

cttgaactcc tgggctcaag tgatcctcct gcctcagcct cgcaaattgc tgggattaca 113640

ggtgtgagcc accatgcccg accttctctt tttaagggcg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 113700

tgggcgcact ctcgtcttca ccttccccca gccttgctct gtctctaccc agtcacctct 113760

gcccatctct ccgatctgtt tctctctcct tttacccctc tttcctccct cctcatacac 113820

cactgaccat tatagagaac tgagtattct aaaaatacat tttatttatt tattttgaga 113880

cagagtctca ctctgtcacc caggctggag tgcagtggtg caatctcggc tcactgcaac 113940

ctccgcctcc caggttgaag caactctcct gcctcagcct ccctagtagc tgggattaca 114000

agcacacacc accatgccta gcaaattttt atatttttag tagaggagga gtgtcaccat 114060

gtttgccaag ctggtctcaa actcctggcc tcaggtgatc tgcctacctt ggtctcccaa 114120

agtgctggga ttacaggtgt gagccaccac gcctgccctt aaaaatacat tatatttaat 114180

agcaaagccc cagttgtcac tttaaaaagc atctatgtag aacatttatg tggaataaat 114240

acagtgaatt tgtacgtgga atcgtttgcc tctcctcaat cagggccagg gatgcaggtg 114300

agcttgggct gagatgtcag accccacagt aagtgggggg cagagccagg ctgggaccct 114360

cctctaggac agctctgtaa ctctgagacc ctccaggcat cttttcctgt acctcagtgc 114420

ttctgaaaaa tctgtgtgaa tcaaatcatt ttaaaggagc ttgggttcat cactgtttaa 114480

aggacagtgt aaataattct gaaggtgact ctaccctgtt atttgatctc ttctttggcc 114540

agctgactta acaggacata gacaggtttt cctgtgtcag ttcctaagct gatcaccttg 114600

gacttgaaga ggaggcttgt gtgggcatcc agtgcccacc ccgggttaaa ctcccagcag 114660

agtattgcac tgggcttgct gagcctggtg aggcaaagca cagcacagcg agcaccaggc 114720

agtgctggag acaggccaag tctgggccag cctgggagcc aactgtgagg cacggacggg 114780

gctgtggggc tgtggggctg caggcttggg gccagggagg gagggctggg ctctttggaa 114840

cagccttgag agaactgaac ccaaacaaaa ccagatcaag gtctagtgag agcttagggc 114900

tgctttgggt gctccaggaa attgattaaa ccaagtggac acacaccccc agccccacct 114960

caccacagcc tctccttcag ggtcaaactc tgaccacaga catttctccc ctgactagga 115020

gttccctgga tcaaaattgg gagcttgcaa cacatcgttc tctcccttga tggtttttgt 115080

cagtgtctat ccagagctga agtgtaatat atatgttact gtagctgaga aattaaattt 115140

caggattctg atttcataat gacaaccatt cctcttttct ctcccttctg taaatctaag 115200

attctataaa cggtgttgac ttaatgtgac aattggcagt agttcaggtc tgctttgtaa 115260

atacccttgt gtctattgta aaatctcaca aaggcttgtt gccttttttg tggggttaga 115320

acaagaaaaa gccacatgga aaaaaaattt cttttttgtt tttttgtttg cttgtttttt 115380

tgagacagag tttcactctg tcgcccaggc tggagtgcag tggtgcgatc tccgcccact 115440

gcaagctcca cctcccgggt tcatgctatt ctcctgtctc agcctcccaa gtagctggga 115500

ctgcaggtgc ccgccaccac acctggctaa tttttttgta tttttagtag agacggggtt 115560

tcaccgtgtt agccaggatg gtctcaatct cctgacctcg tcatctgcct gcctcggcct 115620

cccaaagtgc tgagattaca ggcgtgagcc accgtgcccg gccagaaaaa aacatttcta 115680

agtatgtggc agatactgaa ttattgctta atgtcctttg attcatttgt ttaatttctt 115740

taatggatta gtacagaaaa caaagttctc ttccttgaaa aactggtaag ttttctttgt 115800

cagataagga gagttaaata acccatgaca tttccctttt tgcctcggct tccaggaagc 115860

tcaaagttaa atgtaatgat cactcttgta attatcagtg ttgatgccct tcccttcttc 115920

taatgttact ctttacattt tcctgcttta ttattgtgtg tgttttctaa ttctaagctg 115980

ttcccactcc tttctgaaag caggcaaatc ttctaagcct tatccactga aaagttatga 116040

ataaaaaatg atcgtcaagc ctacaggtgc tgaggctact ccagaggctg aggccagagg 116100

accacttgag cccaggaatt tgagacctgg gctgggcagc atagcaagac tctatctcca 116160

ttaaaactat ttttttttat ttaaaaaata atccgcaaag aaggagttta tgtgggattc 116220

cttaaaatcg gagggtggca tgaattgatt caaagacttg tgcagagggc gacagtgact 116280

ccttgagaag cagtgtgaga aagcctgtcc cacctccttc cgcagctcca gcctgggctg 116340

aggcactgtc acagtgtctc cttgctggca ggagagaatt tcaacattca ccaaaaagta 116400

gtattgtttt tattaggttt atgaggctgt agccttgagg acagcccagg acaactttgt 116460

tgtcacatag atagcctgtg gctacaaact ctgagatcta gattcttctg cggctgcttc 116520

tgacctgaga aagttgcgga acctcagcga gcctcacatg gcctccttgt ccttaacgtg 116580

gggacggtgg gcaagaaagg tgatgtggca ctagagattt atccatctct aaaggaggag 116640

tggattgtac attgaaacac cagagaagga attacaaagg aagaatttga gtatctaaaa 116700

atgtaggtca ggcgctcctg tgttgattgc agggctattc acaatagcca agatttggaa 116760

gcaacccaag tgtccatcaa cagacaaatg gataaagaaa atgtggtgca tatacacaat 116820

ggaatactat tcagccatga aaaagaatga gaatctgtca tttgaaacaa catggatgga 116880

actggaggac attatgttaa gtgaaataag ccagacagaa ggacagactt cacatgttct 116940

cacacatttg tgggagctaa aaattaaact catggagata gagagtagaa ggatggttac 117000

cagaggctga ggagggtgga ggggagcagg gagaaagtag ggatggttaa tgggtacaaa 117060

aacgtagtta gcatgcatag atctagtatt ggatagcaca gcagggtgac gacagccaac 117120

agtaatttat agtacattta aaaacaacta aaagagtgta actggactgg ctaacatggt 117180

gaaaccccgt ctctactaaa aatacaaaaa ttagctgggc acggtggctc acgcctgtaa 117240

tcccagcact ttgggaggcc gaggcgggcc gatcacgagg tcaggagatc gagaccatcc 117300

tagctaacat ggtgaaaccc cgtctctact acaaatacaa aaaaaagaaa aaattagccg 117360

ggcatggtgg tgggcgcctg tagtcccagc tactcgggag gctgaggcag gagaatggcg 117420

tgaacccggg aggcggagct tgcagtgagc cgagatcgcg ccactgcact ccagcctggg 117480

cgacaaggca agattctatc tcaaaaaaat aaaaataaaa taaaataaaa taataaaata 117540

aaataaaata aaataaaata aaataaataa aataaaatgt ataattggaa tgtttataac 117600

acaagaaatg ataaatgctt gaggtgatag ataccccatt caccgtgatg tgattattgc 117660

acaatgtatg tctgtatcta aatatctcat gtaccccaca agtatataca cctactatgt 117720

acccatataa atttaaaatt aaaaaattat aaaacaaaaa taaataagta aattaaaatg 117780

taggctggac accgtggttc acgcctgtaa tcccagtgct ttgtgaggct gaggtgagag 117840

aatcacttga gcccaggagt ttgagaccgg cctgggtgac atagcgagac cccatcatca 117900

caaagaattt ttaaaaatta gctgggcgtg gtagcacata ccggtagttc cagctacttg 117960

ggagaccgag gcaggaggat tgcttgagcc caggagttta aggctgcagt gagctacgat 118020

ggcgccactg cattccagcc tgggtgacag agtgagagct tgtctctatt ttaaaaataa 118080

taaaaagaat aaataaaaat aaattaaaat gtaaatatgt gcatgttaga aaaaatacac 118140

ccatcagcaa aaagggggta aaggagcgat ttcagtcata attggagaga tgcagaataa 118200

gccagcaatg cagtttcttt tattttggtc aaaaaaaata agcaaaacaa tgttgtaaac 118260

acccagtgct ggcagcaatg tggtgaggct ggctctctca ccagggctca cagggaaaac 118320

tcatgcaacc cttttagaaa gccatgtgga gagttgtacc gagaggtttt agaatattta 118380

taactttgac ccagaaattc tattctagga ctctgtgtta tgaaaataac ccatcatatg 118440

gaaaaagctc ctttcagaaa gaggttcatg ggaggctgtt tgtatttttt ttttctttgc 118500

atcaaatcca gctcctgcag gactgtttgt attattgaag tacaaagtgg aatcaataca 118560

aatgttggat agcaggggaa caatattcac aaaatggaat gggacatagt attaaacata 118620

gtgcttctga tgaccgtaga ccatagacaa tgcttaggat atgatatcac ttcttttgtt 118680

gttttttgta ttttgagacg aagtctcatt ctgtcaccca ggctggagtt cagtggcgcc 118740

atctcagctc actgcaacct ccatctcccg ggttcaagct attctccttc ctcaacctcc 118800

cgagtagctg ggttgcgcac caccatgcct ggctaacttt tgtattttta gtacagacgg 118860

ggtttcacca cgttggccag gctgctcttg aactcctgac gtcaggtgat ccaccagcct 118920

tgacctccca aagtgctagg attacaggag ccactgtacc cagcctagga tatgatatca 118980

cttcttagag caagatacaa aattgcatgt gcacaataat tctaccaagt ataggtatac 119040

aggggtagtt atatataaat gagacttcaa ggaaatacaa caaaatgcaa tcgtgattgt 119100

gttagggtgg taagaaaacg gtttttgctt tgatgagctc tgttttttaa aatcgttata 119160

ttttctaata aaaatacata gtcttttgaa ggaacataaa agattatgaa gaaatgagtt 119220

agatattgat tcctattgaa gattcagaca agtaaaatta aggggaaaaa aaacgggatg 119280

aaccagaagt caggctggag ttccaacccc agatccgaca gcccaggctg atggggcctc 119340

cagggcagtg gtttccaccc agcattctca aaagagccac tgaggtctca gtgccatttt 119400

caagatttcg gaagcggcct gggcacggct ggtccttcac tgggatcacc acttggcaat 119460

tatttacacc tgagacgaat gaaaaccaga gtgctgagat tacaggcatg gtggcttacg 119520

cttgtaatcg gctttgggaa gccgaggtgg gctgattgct tgagcccagg agtttcaaac 119580

tatcctggac aacatagcat gacctcgtct ctacaaaaaa tacaaaaaat ttgccaggtg 119640

tggtggcatg tgcctgtggt cccagctact tgggaggctg aagtaggaga atcccctgag 119700

ccctgggaag tcgaggctgc actgagccgt gatggtgtca ctgcactcca gcctgggtga 119760

caaagtgaga ccctatctca caaagaaaaa aaacaaaaca aaaaacccaa agcacactgt 119820

ttccactgtt tccagagttc ctgagaggaa aggtcaccgg gtgaggaaga cgttctcact 119880

gatctggcag agaaaatgtc cagtttttcc aactccctaa accatggttt tctatttcat 119940

agttcttagg caaattggta aaaatcattt ctcatcaaaa cgctgatatt ttcacacctc 120000

cctggtgtct gcagaaagaa ccttccagaa atgcagtcgt gggagaccca tccaggccac 120060

ccctgcttat ggaagagctg agaaaaagcc ccacgggagc atttgctcag cttccgttac 120120

gcacctagtg gcattgtggg tgggagaggg ctggtgggtg gatggaagga gaaggcacag 120180

cccccccttg cagggacaga gccctcgtac agaagggaca ccccacattt gtcttcccca 120240

caaagcggcc tgtgtcctgc ctacggggtc agggcttctc aaacctggct gtgtgtcaga 120300

atcaccaggg gaacttttca aaactagaga gactgaagcc agactcctag attctaattc 120360

taggtcaggg ctaggggctg agattgtaaa aatccacagg tgattctgat gcccggcagg 120420

cttgagaaca gccgcaggga gttctctggg aatgtgccgg tgggtctagc caggtgtgag 120480

tggagatgcc ggggaacttc ctattactca ctcgtcagtg tggccgaaca catttttcac 120540

ttgacctcag gctggtgaac gctcccctct ggggttcagg cctcacgatg ccatcctttt 120600

gtgaagtgag gacctgcaat cccagcttcg taaagcccgc tggaaatcac tcacacttct 120660

gggatgcctt cagagcagcc ctctatccct tcagctcccc tgggatgtga ctcgacctcc 120720

cgtcactccc cagactgcct ctgccaagtc cgaaagtgga ggcatccttg cgagcaagta 120780

ggcgggtcca gggtggcgca tgtcactcat cgaaagtgga ggcgtccttg cgagcaagca 120840

ggcgggtcca gggtggcgtg tcactcatcc ttttttctgg ctaccaaagg tgcagataat 120900

taataagaag ctggatctta gcaacgtcca gtccaagtgt ggctcaaagg ataatatcaa 120960

acacgtcccg ggaggcggca gtgtgagtac cttcacacgt cccatgcgcc gtgctgtggc 121020

ttgaattatt aggaagtggt gtgagtgcgt acacttgcga gacactgcat agaataaatc 121080

cttcttgggc tctcaggatc tggctgcgac ctctgggtga atgtagcccg gctccccaca 121140

ttcccccaca cggtccactg ttcccagaag ccccttcctc atattctagg agggggtgtc 121200

ccagcatttc tgggtccccc agcctgcgca ggctgtgtgg acagaatagg gcagatgacg 121260

gaccctctct ccggaccctg cctgggaagc tgagaatacc catcaaagtc tccttccact 121320

catgcccagc cctgtcccca ggagccccat agcccattgg aagttgggct gaaggtggtg 121380

gcacctgaga ctgggctgcc gcctcctccc ccgacacctg ggcaggttga cgttgagtgg 121440

ctccactgtg gacaggtgac ccgtttgttc tgatgagcgg acaccaaggt cttactgtcc 121500

tgctcagctg ctgctcctac acgttcaagg caggagccga ttcctaagcc tccagcttat 121560

gcttagcctg cgccaccctc tggcagagac tccagatgca aagagccaaa ccaaagtgcg 121620

acaggtccct ctgcccagcg ttgaggtgtg gcagagaaat gctgcttttg gcccttttag 121680

atttggctgc ctcttgccag gagtggtggc tcgtgcctgt aattccagca ctttgggaga 121740

ctaaggcggg aggttcgctt gagcccagga gttcaagacc agcctgggca acaatgagac 121800

ccctgtgtct acaaaaagaa ttaaaattag ccaggtgtgg tggcacgcac ctgtagtccc 121860

agctacttgg gaggctgagg tgggaggatt gcctgagtcc gggaggcgga agttgcaagg 121920

agccatgatc gcgccactgc acttcaacct aggcaacaga gtgagacttt gtctcaaaaa 121980

acaatcatat aataatttta aaataaatag atttggcttc ctctaaatgt ccccggggac 122040

tccgtgcatc ttctgtggag tgtctccgtg agattcggga ctcagatcct caagtgcaac 122100

tgacccaccc gataagctga ggcttcatca tcccctggcc ggtctatgtc gactgggcac 122160

ccgaggctcc tctcccacca gctctcttgg tcagctgaaa gcaaactgtt aacaccctgg 122220

ggagctggac gtatgagacc cttggggtgg gaggcgttga tttttgagag caatcacctg 122280

gccctggctg gcagtaccgg gacactgctg tggctccggg gtgggctgtc tccagaaaat 122340

gcctggcctg aggcagccac ccgcatccag cccagagggt ttattcttgc aatgtgctgc 122400

tgcttcctgc cctgagcacc tggatcccgg cttctgccct gaggcccctt gagtcccaca 122460

ggtagcaagc gcttgccctg cggctgctgc atggggctaa ctaacgcttc ctcaccagtg 122520

tctgctaagt gtctcctctg tctcccacgc cctgctctcc tgtcccccca gtttgtctgc 122580

tgtgagggga cagaagaggt gtgtgccgcc cccacccctg cccgggccct tgttcctggg 122640

attgctgttt tcagctgttt gagctttgat cctggttctc tggcttcctc aaagtgagct 122700

cggccagagg aggaaggcca tgtgctttct ggttgaagtc aagtctggtg ccctggtgga 122760

ggctgtgctg ctgaggcgga gctggggaga gagtgcacac gggctgcgtg gccaacccct 122820

ctgggtagct gatgcccaaa gacgctgcag tgcccaggac atctgggacc tccctggggc 122880

ccgcccgtgt gtcccgcgct gtgttcatct gcgggctagc ctgtgacccg cgctgtgctc 122940

gtctgcgggc tagcctgtgt cccgcgctct gcttgtctgc ggtctagcct gtgacctggc 123000

agagagccac cagatgtccc gggctgagca ctgccctctg agcaccttca caggaagccc 123060

ttctcctggt gagaagagat gccagcccct ggcatctggg ggcactggat ccctggcctg 123120

agccctagcc tctccccagc ctgggggccc cttcccagca ggctggccct gctccttctc 123180

tacctgggac ccttctgcct cctggctgga ccctggaagc tctgcagggc ctgctgtccc 123240

cctccctgcc ctccaggtat cctgaccacc ggccctggct cccactgcca tccactcctc 123300

tcctttctgg ccgttccctg gtccctgtcc cagcccccct ccccctctca cgagttacct 123360

cacccaggcc agagggaaga gggaaggagg ccctggtcat accagcacgt cctcccacct 123420

ccctcggccc tggtccaccc cctcagtgct ggcctcagag cacagctctc tccaagccag 123480

gccgcgcgcc atccatcctc cctgtccccc aacgtccttg ccacagatca tgtccgccct 123540

gacacacatg ggtctcagcc atctctgccc cagttaactc cccatccata aagagcacat 123600

gccagccgac accaaaataa ttcgggatgg ttccagttta gacctaagtg gaaggagaaa 123660

ccaccacctg ccctgcacct tgttttttgg tgaccttgat aaaccatctt cagccatgaa 123720

gccagctgtc tcccaggaag ctccagggcg gtgcttcctc gggagctgac tgataggtgg 123780

gaggtggctg cccccttgca ccctcaggtg accccacaca aggccactgc tggaggccct 123840

ggggactcca ggaatgtcaa tcagtgacct gccccccagg ccccacacag ccatggctgc 123900

atagaggcct gcctccaagg gacctgtctg tctgccactg tggagtccct acagcgtgcc 123960

ccccacaggg gagctggttc tttgactgag atcagctggc agctcagggt catcattccc 124020

agagggagcg gtgccctgga ggccacaggc ctcctcatgt gtgtctgcgt ccgctcgagc 124080

ttactgagac actaaatctg ttggtttctg ctgtgccacc tacccaccct gttggtgttg 124140

ctttgttcct attgctaaag acaggaatgt ccaggacact gagtgtgcag gtgcctgctg 124200

gttctcacgt ccgagctgct gaactccgct gggtcctgct tactgatggt ctttgctcta 124260

gtgctttcca gggtccgtgg aagcttttcc tggaataaag cccacgcatc gaccctcaca 124320

gcgcctcccc tctttgaggc ccagcagata ccccactcct gcctttccag caagattttt 124380

cagatgctgt gcatactcat catattgatc acttttttct tcatgcctga ttgtgatctg 124440

tcaatttcat gtcaggaaag ggagtgacat ttttacactt aagcgtttgc tgagcaaatg 124500

tctgggtctt gcacaatgac aatgggtccc tgtttttccc agaggctctt ttgttctgca 124560

gggattgaag acactccagt cccacagtcc ccagctcccc tggggcaggg ttggcagaat 124620

ttcgacaaca catttttcca ccctgactag gatgtgctcc tcatggcagc tgggaaccac 124680

tgtccaataa gggcctgggc ttacacagct gcttctcatt gagttacacc cttaataaaa 124740

taatcccatt ttatcctttt tgtctctctg tcttcctctc tctctgcctt tcctcttctc 124800

tctcctcctc tctcatctcc aggtgcaaat agtctacaaa ccagttgacc tgagcaaggt 124860

gacctccaag tgtggctcat taggcaacat ccatcataaa ccaggtagcc ctgtggaagg 124920

tgagggttgg gacgggaggg tgcagggggt ggaggagtcc tggtgaggct ggaactgctc 124980

cagacttcag aaggggctgg aaaggatatt ttaggtagac ctacatcaag gaaagtgttg 125040

agtgtgaaac ttgcgggagc ccaggaggcg tggtggctcc agctcgctcc tgcccaggcc 125100

atgctgccca agacaaggtg aggcgggagt gaagtgaaat aaggcaggca cagaaagaaa 125160

gcacatattc tcggccgggc gctgtggctc acgcctgtaa ttccagcact ttgggaggcc 125220

aaggtgggtg gatcatgagg tcaggagatt gagaccatcc tggctaacac agtgaaaccc 125280

cgtctctact aaaaatacaa aaaattagcc gggcgtggtg gtgggcgcct gtagtcccag 125340

ctactccgga ggctgaggca ggaaaatggc gtgaacccgg aaggcggagc ttgcagtgag 125400

cggagtgagc agagatcgcg ccactgcact ccagcctggg cgacagagcg agactccgtc 125460

tcaaaaaaaa aaagcacatg ttctcgcttc tttgtgggat ccaggagata gagaatagaa 125520

ggatggttac cagaggctgg gaagggtagt gaggggatgg tggggggatg gtcaatgggt 125580

acaaaaaaaa tagaataaga cctagtattt gatagtgcaa cagggtgact atagtcaata 125640

ataatttaat tgtacattta aaaataacta aaagatagcc gggtgcagtg gcttacgtct 125700

gtaatcccag tactttggga ggctgaggtg ggcgtttgag accagcctgg ccaacatggt 125760

gaaaccccat ctctactaaa aatacaaaaa ttagccaggc atggtggcgg gcgcctgtaa 125820

tcccagctac tcgggaggct gaggcaggag aatcacttga acctgggagg cagaggttgc 125880

agtgagccga gatcttgcca ctgcactcca gcctgggtga cagtgaaact ccgtctcaaa 125940

aataaaaata aaaatacagc tgggcacggt ggctcacgcc tgtaatccca gcactttggg 126000

aggccgaggc gagcggatca caaggtcagg agatatagac catcctggct aacacggtga 126060

aacccggtct ctactaaaaa tacaaaaaat tagccaggcg tggtggcagg tgcctatagt 126120

cccagctact cacaaggctg aggcaggaga atggcatgaa cctgggaggc ggagcttgca 126180

gtgagccgag attgtgccac tgcactccag cctgggcgag agagtgagac tccgtctcaa 126240

aacaaaaaca aaaacaaaaa caaaaacaaa cacacaacaa aaacctaaaa gaatataaat 126300

ggattgtttg taacacaaag gacaaatgtt tgaggggatg gataccccat tttccatgat 126360

gtgattatta tacattgtgt gtctgtatca aaacatctca tgagccccat aaatatatac 126420

acctaactat gtacccacaa aaattaaaaa aatatatttt ttaaggtgaa gagggaggcg 126480

agatgctggc cttaacccct aacccgttgt tctccctgca agctgtccac agggcctctc 126540

agactcgagg ttcagctata tggatgcatg agcttggtcc ccagccaaca tgggagacac 126600

ttcaccatcg gcagcagcta cagcacagga accctgggtc actgccatgt cccctctgtg 126660

actttgttta aacagaaaat gatgctctgg gccggctgtg gtggcccaca cctataatcc 126720

cagcaccttg ggaggcgggg gtgggcagat tgcctgaggt caggagttgg agatcagcct 126780

ggccgacatg gcgaaacccc atgtctacta aaaatacaaa aactagccag gcatggtggc 126840

acatgcctgt aatcccagct acttgggagg ctgaagcagg agaatcactt gaacccagga 126900

ggcagaggct gagtgagcca agatcgtgcc aatgcactcc agcttgggtg agggagtgag 126960

actccgtctc aaaaaaaaaa aaaaagaaag aaaaagaaaa gaaagtgatc ctactggaac 127020

catgcttact cccctcccca cctcacactg tgtagaaatt agtgctgtcg gccaggcgcg 127080

gtggctcatg cctgtaatcg cagcactttg ggaggccaag gcaggcggat cacgaggtca 127140

ggagatcaag accatcctgg ctaacacagt gaaaccctgt ctctactaaa aatacaaaaa 127200

attagccggg catggtggca ggcacctgta gtcccaacta cttgggaggc tgaggcagga 127260

gaatggcatg aacctgggag gcggagcttg cagtgagcca agatcgcgcc actgcatacc 127320

agcctaggtg acagagtgag actcagcaaa aaaagaaaga aagaaagaaa gaaatcagtg 127380

ctgtctatac ttctttctgc agtgatggaa atattctgta tctgtgctgt ccagtatagt 127440

agccactagc tacatgtggc acttgaaaca tggctggtac agttgaggaa gagtggctgc 127500

catatcggac gacacagcta tagattctgt caccccaccc cgagagtcca gagcggggac 127560

ttctgcctta ggccctattc agggctgatt tttacttgaa cccttactgt gggaagagaa 127620

ggccatgaga agttcagtct agaatgtgac tccttatttt ctggctccct tggacacttt 127680

gtgggattta gtctccctgt ggaaagtatt ccacaagtgg tgccactacc ccagctgtga 127740

gagcagctgg gagctgcttt tgtcatcttt ccctggaaag tcctgtgggc tgtctcttcc 127800

tcatgccttg tcccatgctt gggcatggtg tcaagcgtca ggagggagaa agggtcctta 127860

tttatttatt tagagaggga cccttcttct gttcccaggc tggagtgcag tggtgcgatc 127920

tcggctcact gcaacctccg cctcctgggt tcaagtgatt ctcctgcctc agcctcctga 127980

gtagctgaga ttacaggcac atgccaacat gcccggctaa tttttttttt tttttttttt 128040

tttttttttt tttttttttt gagatggagt tgtactctca ttgcccaggc tggaatgtaa 128100

tggcacaatc tcggctcact gcaacctcca cctcctggat tcaagcaatt ctcctgtctc 128160

agcttcccaa gtagctggga ttacaggtgc ccgccaccat gctcaactaa tttttgtatt 128220

ttttttttag tagagacgag gtttcaccat gttggtcaga ctggtctcaa actcctgacc 128280

tcaggtgatc cacctgcctc ggcctcccaa agtgctagga ttacaggcat gagccaccac 128340

gcccggcctg aaagggttct tatttagtgt gcattttgac attcaattta attccaaggt 128400

cttgtggggt catggtttac aggatgttga tatagaaaag acttcactta atgggccggg 128460

cgcagtggct catgcctgta atcccagcac tttgggaggc cgaggcaggc agatcaggag 128520

gtcaggagat tgagaccatc ctggctaaca cagtgaaacc ccatctctac tgaaaataca 128580

aaaaattagc tgggcgtggt ggcaggcacc tgtagtccca gccactcggt tggctgaggc 128640

aggagaatgg catgaacccg ggaggcggag cttgcagtga gcagagacca tgccactgca 128700

ctccagcctg ggcgacagag caagactctg tctcaagaaa aaaaaaaaaa aacagacttt 128760

acttactgga agccaaccaa tgtatattta gagtaatttt tcctgggctg agctgtcatt 128820

tacttttgca gtatctcaag aagaagagtt tacagtgtaa atatttgatg cacactttga 128880

ttatatagat gaagcaaact attttcaaga gctttgcaag gacttacttg tatccaaaca 128940

ccattctaaa aggagtctta cctacttcta aaggctggtc tctacttgga accacttgct 129000

tggccctggt tcaagtcctg ctgcaaacct ggaagtcctg tcattgtctt cttccctcca 129060

gagcagtggc acccaatcta atttttgctg tgccccagca gcccctggca ctttgccctg 129120

tagactgcag acctcatgta atgtatgtta agtccacaga accacagaag atgatggcaa 129180

gatgctcttg tgtgtgttgt gttctaggag gtggccaggt ggaagtaaaa tctgagaagc 129240

ttgacttcaa ggacagagtc cagtcgaaga ttgggtccct ggacaatatc acccacgtcc 129300

ctggcggagg aaataaaaag gtaaaggggg tagggtgggt tggatgctgc ccttgggtat 129360

atgggcatta atcaagttga gtggacaaag gctggtccag ttcccagagg aggaaaacag 129420

aggcttctgt gttgactggc tggatgtggg ccctcagcag catccagtgg gtctccactg 129480

cctgtctcaa tcacctggag ctttagcacg tttcacacct gggccccaac ctggagaggc 129540

tgaccaatgg gtctcagggg cagctcggtt gctggagttt ttgtttttat ttatttttat 129600

gtatttaagg cagggtctct gtattagtcc attctcacac tgctaataaa gacataccca 129660

agactgggta atttataaag gaaagaggtt taatggactc acagttccac atggctgggg 129720

aggcctcaaa atcatggcgg aaggcaaagg agaagcaaag gcatttctta catggcgaca 129780

ggcaagagag cgtgtgcagg ggaactccca tttataaaac catcagacct catgagattt 129840

attcactatc atgagaacag catgggaaag acccgccccc atgattcagt tacctcccac 129900

tgggtccctc ccatgacaca tggaattatg ggagctacaa ttcaagatga gatttgggtg 129960

gggacacagc caaaccatat cagtctccct ctgtcatcca ggctggagtg cactggcatg 130020

atctcggctc actgcagcct ctacctccct gggtcaggtg atcttcccac ctcagcctcc 130080

caggtagctg gaactacagg tacctgccac tatgcctggc taaatatttt gtatttcctg 130140

tggagacgag gttttgccac gttgcccagg ctggtcttga actcctgagg tcaagcaata 130200

tgcccacctc ggcctcccaa ggtgctggga ttacaggtgt gagccacagt gctcggccta 130260

agtcactgca gtttttaaag ctcccaggtg attcttcagt gcagtcaaaa gtgagaactg 130320

gctgggtgcg gtggctcatg cctgtaatcc cagcaccttg ggaggcgaag gtgggcagat 130380

ggcttgaggt caggagttca agaccagcct ggccaacatg gtaaaacccc atctctacta 130440

aaaatacaaa agttagctgg gtgtggtggt gcgtgcctgt aatcccagct acttgggagg 130500

ctgaggcatg agaattgctt gaacccaggg gacagaggtt gtagtgagcc gagatcgtgc 130560

cactgcactc cagcctgggc aacagagtga gattccatct cacaaaaaaa aaaaaaagcg 130620

agaaccactg tcctaggccc tgatgtttgc aggcaactaa aaaaggaagt ggacatcccc 130680

agtcagctgt ggcgcaccaa gaacaagtca tgggaacata acctaatttt ctaaatgggt 130740

tactaggcac ttagagcaaa acaatgatgc cgaaatcctg atttcagcaa agcctctgcc 130800

tgcctgtctt ggaagtatcc acatgaggct gctggggcct tggtgtcccc agcagtttct 130860

agtctctagg tcttgctgtg ggtgtctgtg cagtgagggt gtgtgtggcg ctgggtgagc 130920

tctgtctagg cctggcacag gatgcggtct ggtagctgct gcttctcttc tgcagaagcg 130980

cagccaagca ccctctgggg tttcaggccc acacccagcc tgaagttctg ggagtggctc 131040

actttccaac cttcagggtc tcccagcagc tgactgggga gtggtggagg gaaaagggat 131100

tgtattagtc cgttttcacg ccgctgatga agacataccc gatactgggc agtctaaaag 131160

atagaggtct gatggactca cagttccacg tgactgggga ggcctgacaa tcatggtgga 131220

aggtgaaagg cttgtctcac acggtggcag acaagagaaa agagcttgtg caggggaact 131280

cccctttata aaaccatcag atctcgggag acttattcac tatcatgaga acagcacggg 131340

aaagaccctc ctctatgatt caattacctc ccaccaggtc cctcccacaa catgtaggaa 131400

ttgtgggaac tacaattcaa gatgacattt gggtggggac acagccaaac catatcaggg 131460

cgtcccagaa agggtatagg gtctgagacc caagtcagca tgagaaagta tgcttctcat 131520

ggtggcccag ttgggtggaa gtggcagccg ggccgtcttt ccaccaggcc actcaagtag 131580

cagctgagag acccctgccc tggccagtcc ccgccctccc ctcttgccac tgcctctggt 131640

tctgaacaga tgggcaccct catcttgtat ttgtgattaa tgtctaacaa tgtagttttg 131700

tgagaagggt ttgctgatac agccttgctg cagatgctgc gaactgtggc ctggggcaga 131760

ccttacctcc agacacgccc tgaggcaggg gagggcactg gcccgtagct ggccgagagc 131820

tctcgggttg cgcgacaggg atacttttca gcggctgggt cgctatccaa agtgagaaaa 131880

cgaggaggga ccaggaggct gtccgcctca agagatgtgg gggccaggtc cagttatctg 131940

gggaagcagt aagcttctct gctgtttcta accccaggcc tcccctggtc taaggcaggg 132000

cctcccagcc tcggggcact ttaaagatat ctgggcctgg ccccatcccc acagtctgac 132060

tgagtgggtc tggatagggc ctgagcattg gtgatttcct gggtgaaagg aggcccctca 132120

cagtctctgg aagcttctct gtgttaggaa aagctctggg cttgactctg ctttgaaagt 132180

caagatccgc aaatcctctc agcctcagtt tctccttcag caagatgaaa tggaaatgct 132240

gtacctacgt cccggggtgg ttgtgagacc caaaaaagac aatgttctgg aaggttcctg 132300

gtgcgttgca gtcctctaag aacctgagtt agagccacgc tgagtctcag cttcttggct 132360

ccttctgttt caaactcgtc catgtgatag ctcaggaagg gtaggcaggg ccctgccccc 132420

tactcagaaa acaccatcct ggtcctgggg atccccgcag cattagtccc ctgttttccc 132480

agtgtattga gaaaaattgc taacaagcag tggggcacac caccagcctc ctgggttcct 132540

ttcagtttgg ggatttttgg acattcccag gaatgtctta aaaaacactt caaaaaacat 132600

taacataaat atttttatca aagcctgtat taaatggtct ttcaagaaaa tacagtaaca 132660

ggtcaggcat ggtggctcat gcctgtaacc ccagcacttt gggaggccaa ggcaggcaga 132720

tcacctgaaa tcaggagttc aagaccaacc tggccaacac agccaaatcc catctctaca 132780

aaaaatacaa aaattagctg ggtgtggtgg cacacacctg tagtcccagc tacttgggag 132840

gccgaggcag gagaattgct tgatcccgga ggcggaggtt gcagtgagcc gagatcgtgc 132900

cactgcactc cagcgtgggt gacaaggtga atctttgtct caaaaaaaaa aaaaaaaaaa 132960

agataaaata cagtatacag taatagagaa caatcctttt ttcaaagtag tgaccccaaa 133020

tgaacaaaat atgcatctag cttaaatgcg aacctggttt tctctacgcc cattcaagcc 133080

cctgcaatag gggcccttca ccccgcatcc atggactcct aaaattatat ggaaaatggc 133140

tgtgtgtgag tgtggatgga catgtgcaca catatttttg gctttaccag atgctcaaag 133200

agcctaggac ccaaaaaggg ctgagaatga ccgtgtcggc cacttcaggg tcatcaggaa 133260

ttgctgtgca ctgctcactt ctccagtgaa cactttctgc ttctgtgttt cctggtatcc 133320

tttgggactc ctggctaggt catgtgtttc tctactttca aaagggcttc agccaggcac 133380

gatggcatga gcctgtagtc ccagttgctc tggaggttaa ggtgggaaga ttgcttgagc 133440

ccaggaattt gaggccagcc tgggcaagta gataggtaga tgattgatag atagatagat 133500

agataaatag atggatagat aagtcgctag acagtcatcc atccacccat ccacacataa 133560

aaaggccttt gtcatgtcat gttttgtggc ccacctgcca gtgttgccca cagttgctgc 133620

ccctccaaac tcatcagtca ctggcaaaca ggaggaatgt gtggctcatg tctgggcatc 133680

agtggctgtg ggagacatcc ttgatcttct ccagcttctc cttccacatt ttcctttgca 133740

atctggcaat atctattaaa ataaaatgtg catgcctttt gacctaagag cttcacttct 133800

aggacccact tacacgtgtg tgacatgatg ttcatacggg tttatttatc tgaggttgtt 133860

catacacacc attgcctgta atcactaaag gcgggagcag cctacacatc catccacaga 133920

ggagtagatg ccttttggta catccgtggc gacggaatac taagcagcct gtgtatctat 133980

acactcacac gtgtttgttt atgtgtggaa tatctctgga gggtacacaa gaaacttaaa 134040

atgatcactg tctctgggga gggtacctgg gtgcctggga ggcaggtcag ggaaggagtg 134100

ggcacaggta ttaccaattg gaagacaata aaaacaacag ctcctggcca ggcgcagtgg 134160

ctcacgcctg taatggcagc actctgagag gctgaggcgg gcagattgct tgcgtccagg 134220

agttcaagac cagcctgggc aacatagcaa aaccccgttt ctattaaaaa tacaaaaaat 134280

tagccaggtg tggtggcatg cacctgtaat cccagctact cgggaggctg aggtgggaga 134340

atcacctgag cctgggaggt caaggctgca gtgaggtgag attgtgccac cgcactctag 134400

cctgggcgat agagcaagac cctgtctcaa aaacaaacaa aaaacagtcc ctggcactct 134460

gggccaggcc tggcagggca gttggcaggg ctggtctttc tctggcactt catctcaccc 134520

tccctccctt cctcttcttg cagattgaaa cccacaagct gaccttccgc gagaacgcca 134580

aagccaagac agaccacggg gcggagatcg tgtacaagtc gccagtggtg tctggggaca 134640

cgtctccacg gcatctcagc aatgtctcct ccaccggcag catcgacatg gtagactcgc 134700

cccagctcgc cacgctagct gacgaggtgt ctgcctccct ggccaagcag ggtttgtgat 134760

caggcccctg gggcggtcaa taattgtgga gaggagagaa tgagagagtg tggaaaaaaa 134820

aagaataatg acccggcccc cgccctctgc ccccagctgc tcctcgcagt tcggttaatt 134880

ggttaatcac ttaacctgct tttgtcactc ggctttggct cgggacttca aaatcagtga 134940

tgggagtaag agcaaatttc atctttccaa attgatgggt gggctagtaa taaaatattt 135000

aaaaaaaaac attcaaaaac atggccacat ccaacatttc ctcaggcaat tccttttgat 135060

tcttttttct tccccctcca tgtagaagag ggagaaggag aggctctgaa agctgcttct 135120

gggggatttc aagggactgg gggtgccaac cacctctggc cctgttgtgg gggtgtcaca 135180

gaggcagtgg cagcaacaaa ggatttgaaa cttggtgtgt tcgtggagcc acaggcagac 135240

gatgtcaacc ttgtgtgagt gtgacggggg ttggggtggg gcgggaggcc acgggggagg 135300

ccgaggcagg ggctgggcag aggggagagg aagcacaaga agtgggagtg ggagaggaag 135360

ccacgtgctg gagagtagac atccccctcc ttgccgctgg gagagccaag gcctatgcca 135420

cctgcagcgt ctgagcggcc gcctgtcctt ggtggccggg ggtgggggcc tgctgtgggt 135480

cagtgtgcca ccctctgcag ggcagcctgt gggagaaggg acagcgggta aaaagagaag 135540

gcaagctggc aggagggtgg cacttcgtgg atgacctcct tagaaaagac tgaccttgat 135600

gtcttgagag cgctggcctc ttcctccctc cctgcagggt agggggcctg agttgagggg 135660

cttccctctg ctccacagaa accctgtttt attgagttct gaaggttgga actgctgcca 135720

tgattttggc cactttgcag acctgggact ttagggctaa ccagttctct ttgtaaggac 135780

ttgtgcctct tgggagacgt ccacccgttt ccaagcctgg gccactggca tctctggagt 135840

gtgtgggggt ctgggaggca ggtcccgagc cccctgtcct tcccacggcc actgcagtca 135900

cccctgtctg cgccgctgtg ctgttgtctg ccgtgagagc ccaatcactg cctatacccc 135960

tcatcacacg tcacaatgtc ccgaattccc agcctcacca ccccttctca gtaatgaccc 136020

tggttggttg caggaggtac ctactccata ctgagggtga aattaaggga aggcaaagtc 136080

caggcacaag agtgggaccc cagcctctca ctctcagttc cactcatcca actgggaccc 136140

tcaccacgaa tctcatgatc tgattcggtt ccctgtctcc tcctcccgtc acagatgtga 136200

gccagggcac tgctcagctg tgaccctagg tgtttctgcc ttgttgacat ggagagagcc 136260

ctttcccctg agaaggcctg gccccttcct gtgctgagcc cacagcagca ggctgggtgt 136320

cttggttgtc agtggtggca ccaggatgga agggcaaggc acccagggca ggcccacagt 136380

cccgctgtcc cccacttgca ccctagcttg tagctgccaa cctcccagac agcccagccc 136440

gctgctcagc tccacatgca tagtatcagc cctccacacc cgacaaaggg gaacacaccc 136500

ccttggaaat ggttcttttc ccccagtccc agctggaagc catgctgtct gttctgctgg 136560

agcagctgaa catatacata gatgttgccc tgccctcccc atctgcaccc tgttgagttg 136620

tagttggatt tgtctgttta tgcttggatt caccagagtg actatgatag tgaaaagaaa 136680

aaaaaaaaaa aaaaaggacg catgtatctt gaaatgcttg taaagaggtt tctaacccac 136740

cctcacgagg tgtctctcac ccccacactg ggactcgtgt ggcctgtgtg gtgccaccct 136800

gctggggcct cccaagtttt gaaaggcttt cctcagcacc tgggacccaa cagagaccag 136860

cttctagcag ctaaggaggc cgttcagctg tgacgaaggc ctgaagcaca ggattaggac 136920

tgaagcgatg atgtcccctt ccctacttcc ccttggggct ccctgtgtca gggcacagac 136980

taggtcttgt ggctggtctg gcttgcggcg cgaggatggt tctctctggt catagcccga 137040

agtctcatgg cagtcccaaa ggaggcttac aactcctgca tcacaagaaa aaggaagcca 137100

ctgccagctg gggggatctg cagctcccag aagctccgtg agcctcagcc acccctcaga 137160

ctgggttcct ctccaagctc gccctctgga ggggcagcgc agcctcccac caagggccct 137220

gcgaccacag cagggattgg gatgaattgc ctgtcctgga tctgctctag aggcccaagc 137280

tgcctgcctg aggaaggatg acttgacaag tcaggagaca ctgttcccaa agccttgacc 137340

agagcacctc agcccgctga ccttgcacaa actccatctg ctgccatgag aaaagggaag 137400

ccgcctttgc aaaacattgc tgcctaaaga aactcagcag cctcaggccc aattctgcca 137460

cttctggttt gggtacagtt aaaggcaacc ctgagggact tggcagtaga aatccagggc 137520

ctcccctggg gctggcagct tcgtgtgcag ctagagcttt acctgaaagg aagtctctgg 137580

gcccagaact ctccaccaag agcctccctg ccgttcgctg agtcccagca attctcctaa 137640

gttgaaggga tctgagaagg agaaggaaat gtggggtaga tttggtggtg gttagagata 137700

tgcccccctc attactgcca acagtttcgg ctgcatttct tcacgcacct cggttcctct 137760

tcctgaagtt cttgtgccct gctcttcagc accatgggcc ttcttatacg gaaggctctg 137820

ggatctcccc cttgtggggg caggctcttg gggccagcct aagatcatgg tttagggtga 137880

tcagtgctgg cagataaatt gaaaaggcac gctggcttgt gatcttaaat gaggacaatc 137940

cccccagggc tgggcactcc tcccctcccc tcacttctcc cacctgcaga gccagtgtcc 138000

ttgggtgggc tagataggat atactgtatg ccggctcctt caagctgctg actcacttta 138060

tcaatagttc catttaaatt gacttcagtg gtgagactgt atcctgtttg ctattgcttg 138120

ttgtgctatg gggggagggg ggaggaatgt gtaagatagt taacatgggc aaagggagat 138180

cttggggtgc agcacttaaa ctgcctcgta acccttttca tgatttcaac cacatttgct 138240

agagggaggg agcagccacg gagttagagg cccttggggt ttctcttttc cactgacagg 138300

ctttcccagg cagctggcta gttcattccc tccccagcca ggtgcaggcg taggaatatg 138360

gacatctggt tgctttggcc tgctgccctc tttcaggggt cctaagccca caatcatgcc 138420

tccctaagac cttggcatcc ttccctctaa gccgttggca cctctgtgcc acctctcaca 138480

ctggctccag acacacagcc tgtgcttttg gagctgagat cactcgcttc accctcctca 138540

tctttgttct ccaagtaaag ccacgaggtc ggggcgaggg cagaggtgat cacctgcgtg 138600

tcccatctac agacctgcgg cttcataaaa cttctgattt ctcttcagct ttgaaaaggg 138660

ttaccctggg cactggccta gagcctcacc tcctaataga cttagcccca tgagtttgcc 138720

atgttgagca ggactatttc tggcacttgc aagtcccatg atttcttcgg taattctgag 138780

ggtgggggga gggacatgaa atcatcttag cttagctttc tgtctgtgaa tgtctatata 138840

gtgtattgtg tgttttaaca aatgatttac actgactgtt gctgtaaaag tgaatttgga 138900

aataaagtta ttactctgat taaataaggt ctccattcat ggattccaag gacaagaaag 138960

tcatatagaa tgtctatttt ttaagttctt tcccacgcac ccttagataa tttagctcag 139020

aacaggaaat gatagtatta ataaaagctg gacatcagga ttaacagctc tctctggggc 139080

cctgaaggtg agagttctca gacttgctca tttgcagttg cttctttgtg atgctggcaa 139140

accatcctag tcccattcaa agggcaatac aaagccttgt ggctgacctc acgatgcagc 139200

actcagtttg caagaccggc accagtgtat gcaaacctga gaaggttggg gatgaggata 139260

tgggatcttt catccctgga aatttagtcc agaggcctgg ggctggagca gaacaccaag 139320

ccaatcagct taatgaatgg cttagattcc tgctaggttt gcagagctgc cttctttcct 139380

ttggtacctt attatagatt gaggagtatt tctgctaaac caagataggg ataaccagat 139440

agcatcttca tagcaatgcc acaaaggaaa acaaaaacaa aacagtaatc catcatatta 139500

ttccttagta actatgccaa ggtcatgata ctgaatcctt agattgtttc aaaatactac 139560

ttttctttgc tcttcctgat gtgtttgcca ccgcaggcag atgtttaagt aaaacagatt 139620

ttaactgcag ctacaaaagc agcaacaggc cagcaaaaga gaagtgctat ctcagagagc 139680

atggctttca gagccacaag agacagcctc actggctgtt tcagcttgac tgccatgcaa 139740

agaagagagc agagggagaa ccagccccac ccacttattc atcttgtaca aaaaaaaagc 139800

acctaccagc ctaggctaca tagtgagaca ctatctccac aaaaaaccca cgaaaactag 139860

ctgggtatgg tggcacatgc ctacagtccc agctactggt aaggctgtgg tgggaggatc 139920

tcttgaggcc aggaaggaga tccaggctgc agtgagccaa gattgcacca ctgcactcca 139980

gtctggacaa tcgagcaaga tcccatctca aacaataaaa aaaaaaagcg tgtaacctcc 140040

tcagaagaaa gatgttataa tctcaggcag caggcaagaa ccaatccagg ctctaagcaa 140100

attatgtatc tcactgaccc caccaaacct cagaaaaatt taacagtgag aagcaaaatc 140160

tcctttaaag agcaacttag aacagataga aaatatcata cagctgactt cactagagag 140220

aaagtgcatc aactgctttc actcaacaaa aagaaaaaag agatgatcaa tgcagatccc 140280

ctctcctcct ggcagccctt accctcagtg aaaagccacc accattctct ctctggtggc 140340

catcagatca acctgcggcg ttcccacaag acagaatgga gattttccaa ggtatagagc 140400

aagtcagagt accccaaaga acggcggcag agagccagct ccgaaactgc caacactacc 140460

atgcatacac agttcagtaa gtcaagaaag gcctggtaca cagcattctg taactttttt 140520

ttttattttt ttcaattttt ccttcttttt tttttttaag cactagtctg tgctttgcga 140580

acagaatcaa gacattaaca aagatcagct tctctgaaga aaagcatttc tatagaacaa 140640

agacagctac atgtttcgct gccattacac agctccaaag caggaaaaga aaatatttac 140700

aaaatacaag gttttttttt tccatttttt gtttttgttt tttttttcaa tgctaaaagg 140760

gttattcaga attttcaacc ttataaatag aagaagcact ttatgcatag ggatatggtg 140820

cattattgta ttttttttta aagaaacaat gacaaaccct ttaacttgca aacagaaaaa 140880

aaaatcacta atgttgaaaa ttgtgaaaaa accccaacca ttaa 140924

<210> 305

<211> 6816

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 305

ggacggccga gcggcagggc gctcgcgcgc gcccactagt ggccggagga gaaggctccc 60

gcggaggccg cgctgcccgc cccctcccct ggggaggctc gcgttcccgc tgctcgcgcc 120

tgcgccgccc gccggcctca ggaacgcgcc ctcttcgccg gcgcgcgccc tcgcagtcac 180

cgccacccac cagctccggc accaacagca gcgccgctgc caccgcccac cttctgccgc 240

cgccaccaca gccaccttct cctcctccgc tgtcctctcc cgtcctcgcc tctgtcgact 300

atcaggtgaa ctttgaacca ggatggctga gccccgccag gagttcgaag tgatggaaga 360

tcacgctggg acgtacgggt tgggggacag gaaagatcag gggggctaca ccatgcacca 420

agaccaagag ggtgacacgg acgctggcct gaaagaatct cccctgcaga cccccactga 480

ggacggatct gaggaaccgg gctctgaaac ctctgatgct aagagcactc caacagcgga 540

agatgtgaca gcacccttag tggatgaggg agctcccggc aagcaggctg ccgcgcagcc 600

ccacacggag atcccagaag gaaccacagc tgaagaagca ggcattggag acacccccag 660

cctggaagac gaagctgctg gtcacgtgac ccaagagcct gaaagtggta aggtggtcca 720

ggaaggcttc ctccgagagc caggcccccc aggtctgagc caccagctca tgtccggcat 780

gcctggggct cccctcctgc ctgagggccc cagagaggcc acacgccaac cttcggggac 840

aggacctgag gacacagagg gcggccgcca cgcccctgag ctgctcaagc accagcttct 900

aggagacctg caccaggagg ggccgccgct gaagggggca gggggcaaag agaggccggg 960

gagcaaggag gaggtggatg aagaccgcga cgtcgatgag tcctcccccc aagactcccc 1020

tccctccaag gcctccccag cccaagatgg gcggcctccc cagacagccg ccagagaagc 1080

caccagcatc ccaggcttcc cagcggaggg tgccatcccc ctccctgtgg atttcctctc 1140

caaagtttcc acagagatcc cagcctcaga gcccgacggg cccagtgtag ggcgggccaa 1200

agggcaggat gcccccctgg agttcacgtt tcacgtggaa atcacaccca acgtgcagaa 1260

ggagcaggcg cactcggagg agcatttggg aagggctgca tttccagggg cccctggaga 1320

ggggccagag gcccggggcc cctctttggg agaggacaca aaagaggctg accttccaga 1380

gccctctgaa aagcagcctg ctgctgctcc gcgggggaag cccgtcagcc gggtccctca 1440

actcaaagct cgcatggtca gtaaaagcaa agacgggact ggaagcgatg acaaaaaagc 1500

caagacatcc acacgttcct ctgctaaaac cttgaaaaat aggccttgcc ttagccccaa 1560

acaccccact cctggtagct cagaccctct gatccaaccc tccagccctg ctgtgtgccc 1620

agagccacct tcctctccta aatacgtctc ttctgtcact tcccgaactg gcagttctgg 1680

agcaaaggag atgaaactca agggggctga tggtaaaacg aagatcgcca caccgcgggg 1740

agcagcccct ccaggccaga agggccaggc caacgccacc aggattccag caaaaacccc 1800

gcccgctcca aagacaccac ccagctctgc gactaagcaa gtccagagaa gaccaccccc 1860

tgcagggccc agatctgaga gaggtgaacc tccaaaatca ggggatcgca gcggctacag 1920

cagccccggc tccccaggca ctcccggcag ccgctcccgc accccgtccc ttccaacccc 1980

acccacccgg gagcccaaga aggtggcagt ggtccgtact ccacccaagt cgccgtcttc 2040

cgccaagagc cgcctgcaga cagcccccgt gcccatgcca gacctgaaga atgtcaagtc 2100

caagatcggc tccactgaga acctgaagca ccagccggga ggcgggaagg tgcagataat 2160

taataagaag ctggatctta gcaacgtcca gtccaagtgt ggctcaaagg ataatatcaa 2220

acacgtcccg ggaggcggca gtgtgcaaat agtctacaaa ccagttgacc tgagcaaggt 2280

gacctccaag tgtggctcat taggcaacat ccatcataaa ccaggaggtg gccaggtgga 2340

agtaaaatct gagaagcttg acttcaagga cagagtccag tcgaagattg ggtccctgga 2400

caatatcacc cacgtccctg gcggaggaaa taaaaagatt gaaacccaca agctgacctt 2460

ccgcgagaac gccaaagcca agacagacca cggggcggag atcgtgtaca agtcgccagt 2520

ggtgtctggg gacacgtctc cacggcatct cagcaatgtc tcctccaccg gcagcatcga 2580

catggtagac tcgccccagc tcgccacgct agctgacgag gtgtctgcct ccctggccaa 2640

gcagggtttg tgatcaggcc cctggggcgg tcaataattg tggagaggag agaatgagag 2700

agtgtggaaa aaaaaagaat aatgacccgg cccccgccct ctgcccccag ctgctcctcg 2760

cagttcggtt aattggttaa tcacttaacc tgcttttgtc actcggcttt ggctcgggac 2820

ttcaaaatca gtgatgggag taagagcaaa tttcatcttt ccaaattgat gggtgggcta 2880

gtaataaaat atttaaaaaa aaacattcaa aaacatggcc acatccaaca tttcctcagg 2940

caattccttt tgattctttt ttcttccccc tccatgtaga agagggagaa ggagaggctc 3000

tgaaagctgc ttctggggga tttcaaggga ctgggggtgc caaccacctc tggccctgtt 3060

gtgggggtgt cacagaggca gtggcagcaa caaaggattt gaaacttggt gtgttcgtgg 3120

agccacaggc agacgatgtc aaccttgtgt gagtgtgacg ggggttgggg tggggcggga 3180

ggccacgggg gaggccgagg caggggctgg gcagagggga gaggaagcac aagaagtggg 3240

agtgggagag gaagccacgt gctggagagt agacatcccc ctccttgccg ctgggagagc 3300

caaggcctat gccacctgca gcgtctgagc ggccgcctgt ccttggtggc cgggggtggg 3360

ggcctgctgt gggtcagtgt gccaccctct gcagggcagc ctgtgggaga agggacagcg 3420

ggtaaaaaga gaaggcaagc tggcaggagg gtggcacttc gtggatgacc tccttagaaa 3480

agactgacct tgatgtcttg agagcgctgg cctcttcctc cctccctgca gggtaggggg 3540

cctgagttga ggggcttccc tctgctccac agaaaccctg ttttattgag ttctgaaggt 3600

tggaactgct gccatgattt tggccacttt gcagacctgg gactttaggg ctaaccagtt 3660

ctctttgtaa ggacttgtgc ctcttgggag acgtccaccc gtttccaagc ctgggccact 3720

ggcatctctg gagtgtgtgg gggtctggga ggcaggtccc gagccccctg tccttcccac 3780

ggccactgca gtcaccccgt ctgcgccgct gtgctgttgt ctgccgtgag agcccaatca 3840

ctgcctatac ccctcatcac acgtcacaat gtcccgaatt cccagcctca ccaccccttc 3900

tcagtaatga ccctggttgg ttgcaggagg tacctactcc atactgaggg tgaaattaag 3960

ggaaggcaaa gtccaggcac aagagtggga ccccagcctc tcactctcag ttccactcat 4020

ccaactggga ccctcaccac gaatctcatg atctgattcg gttccctgtc tcctcctccc 4080

gtcacagatg tgagccaggg cactgctcag ctgtgaccct aggtgtttct gccttgttga 4140

catggagaga gccctttccc ctgagaaggc ctggcccctt cctgtgctga gcccacagca 4200

gcaggctggg tgtcttggtt gtcagtggtg gcaccaggat ggaagggcaa ggcacccagg 4260

gcaggcccac agtcccgctg tcccccactt gcaccctagc ttgtagctgc caacctccca 4320

gacagcccag cccgctgctc agctccacat gcatagtatc agccctccac acccgacaaa 4380

ggggaacaca cccccttgga aatggttctt ttcccccagt cccagctgga agccatgctg 4440

tctgttctgc tggagcagct gaacatatac atagatgttg ccctgccctc cccatctgca 4500

ccctgttgag ttgtagttgg atttgtctgt ttatgcttgg attcaccaga gtgactatga 4560

tagtgaaaag aaaaaaaaaa aaaaaaaagg acgcatgtat cttgaaatgc ttgtaaagag 4620

gtttctaacc caccctcacg aggtgtctct cacccccaca ctgggactcg tgtggcctgt 4680

gtggtgccac cctgctgggg cctcccaagt tttgaaaggc tttcctcagc acctgggacc 4740

caacagagac cagcttctag cagctaagga ggccgttcag ctgtgacgaa ggcctgaagc 4800

acaggattag gactgaagcg atgatgtccc cttccctact tccccttggg gctccctgtg 4860

tcagggcaca gactaggtct tgtggctggt ctggcttgcg gcgcgaggat ggttctctct 4920

ggtcatagcc cgaagtctca tggcagtccc aaaggaggct tacaactcct gcatcacaag 4980

aaaaaggaag ccactgccag ctggggggat ctgcagctcc cagaagctcc gtgagcctca 5040

gccacccctc agactgggtt cctctccaag ctcgccctct ggaggggcag cgcagcctcc 5100

caccaagggc cctgcgacca cagcagggat tgggatgaat tgcctgtcct ggatctgctc 5160

tagaggccca agctgcctgc ctgaggaagg atgacttgac aagtcaggag acactgttcc 5220

caaagccttg accagagcac ctcagcccgc tgaccttgca caaactccat ctgctgccat 5280

gagaaaaggg aagccgcctt tgcaaaacat tgctgcctaa agaaactcag cagcctcagg 5340

cccaattctg ccacttctgg tttgggtaca gttaaaggca accctgaggg acttggcagt 5400

agaaatccag ggcctcccct ggggctggca gcttcgtgtg cagctagagc tttacctgaa 5460

aggaagtctc tgggcccaga actctccacc aagagcctcc ctgccgttcg ctgagtccca 5520

gcaattctcc taagttgaag ggatctgaga aggagaagga aatgtggggt agatttggtg 5580

gtggttagag atatgccccc ctcattactg ccaacagttt cggctgcatt tcttcacgca 5640

cctcggttcc tcttcctgaa gttcttgtgc cctgctcttc agcaccatgg gccttcttat 5700

acggaaggct ctgggatctc ccccttgtgg ggcaggctct tggggccagc ctaagatcat 5760

ggtttagggt gatcagtgct ggcagataaa ttgaaaaggc acgctggctt gtgatcttaa 5820

atgaggacaa tccccccagg gctgggcact cctcccctcc cctcacttct cccacctgca 5880

gagccagtgt ccttgggtgg gctagatagg atatactgta tgccggctcc ttcaagctgc 5940

tgactcactt tatcaatagt tccatttaaa ttgacttcag tggtgagact gtatcctgtt 6000

tgctattgct tgttgtgcta tggggggagg ggggaggaat gtgtaagata gttaacatgg 6060

gcaaagggag atcttggggt gcagcactta aactgcctcg taaccctttt catgatttca 6120

accacatttg ctagagggag ggagcagcca cggagttaga ggcccttggg gtttctcttt 6180

tccactgaca ggctttccca ggcagctggc tagttcattc cctccccagc caggtgcagg 6240

cgtaggaata tggacatctg gttgctttgg cctgctgccc tctttcaggg gtcctaagcc 6300

cacaatcatg cctccctaag accttggcat ccttccctct aagccgttgg cacctctgtg 6360

ccacctctca cactggctcc agacacacag cctgtgcttt tggagctgag atcactcgct 6420

tcaccctcct catctttgtt ctccaagtaa agccacgagg tcggggcgag ggcagaggtg 6480

atcacctgcg tgtcccatct acagacctgc agcttcataa aacttctgat ttctcttcag 6540

ctttgaaaag ggttaccctg ggcactggcc tagagcctca cctcctaata gacttagccc 6600

catgagtttg ccatgttgag caggactatt tctggcactt gcaagtccca tgatttcttc 6660

ggtaattctg agggtggggg gagggacatg aaatcatctt agcttagctt tctgtctgtg 6720

aatgtctata tagtgtattg tgtgttttaa caaatgattt acactgactg ttgctgtaaa 6780

agtgaatttg gaaataaagt tattactctg attaaa 6816

<210> 306

<211> 776

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 306

Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly

1 5 10 15

Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His

20 25 30

Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu

35 40 45

Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser

50 55 60

Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val

65 70 75 80

Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu

85 90 95

Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro

100 105 110

Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Glu Pro Glu Ser

115 120 125

Gly Lys Val Val Gln Glu Gly Phe Leu Arg Glu Pro Gly Pro Pro Gly

130 135 140

Leu Ser His Gln Leu Met Ser Gly Met Pro Gly Ala Pro Leu Leu Pro

145 150 155 160

Glu Gly Pro Arg Glu Ala Thr Arg Gln Pro Ser Gly Thr Gly Pro Glu

165 170 175

Asp Thr Glu Gly Gly Arg His Ala Pro Glu Leu Leu Lys His Gln Leu

180 185 190

Leu Gly Asp Leu His Gln Glu Gly Pro Pro Leu Lys Gly Ala Gly Gly

195 200 205

Lys Glu Arg Pro Gly Ser Lys Glu Glu Val Asp Glu Asp Arg Asp Val

210 215 220

Asp Glu Ser Ser Pro Gln Asp Ser Pro Pro Ser Lys Ala Ser Pro Ala

225 230 235 240

Gln Asp Gly Arg Pro Pro Gln Thr Ala Ala Arg Glu Ala Thr Ser Ile

245 250 255

Pro Gly Phe Pro Ala Glu Gly Ala Ile Pro Leu Pro Val Asp Phe Leu

260 265 270

Ser Lys Val Ser Thr Glu Ile Pro Ala Ser Glu Pro Asp Gly Pro Ser

275 280 285

Val Gly Arg Ala Lys Gly Gln Asp Ala Pro Leu Glu Phe Thr Phe His

290 295 300

Val Glu Ile Thr Pro Asn Val Gln Lys Glu Gln Ala His Ser Glu Glu

305 310 315 320

His Leu Gly Arg Ala Ala Phe Pro Gly Ala Pro Gly Glu Gly Pro Glu

325 330 335

Ala Arg Gly Pro Ser Leu Gly Glu Asp Thr Lys Glu Ala Asp Leu Pro

340 345 350

Glu Pro Ser Glu Lys Gln Pro Ala Ala Ala Pro Arg Gly Lys Pro Val

355 360 365

Ser Arg Val Pro Gln Leu Lys Ala Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp

370 375 380

Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Thr Ser Thr Arg Ser Ser

385 390 395 400

Ala Lys Thr Leu Lys Asn Arg Pro Cys Leu Ser Pro Lys His Pro Thr

405 410 415

Pro Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ile Gln Pro Ser Ser Pro Ala Val Cys

420 425 430

Pro Glu Pro Pro Ser Ser Pro Lys Tyr Val Ser Ser Val Thr Ser Arg

435 440 445

Thr Gly Ser Ser Gly Ala Lys Glu Met Lys Leu Lys Gly Ala Asp Gly

450 455 460

Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro Gly Gln Lys

465 470 475 480

Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro Pro Ala Pro

485 490 495

Lys Thr Pro Pro Ser Ser Ala Thr Lys Gln Val Gln Arg Arg Pro Pro

500 505 510

Pro Ala Gly Pro Arg Ser Glu Arg Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp

515 520 525

Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg

530 535 540

Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys

545 550 555 560

Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser

565 570 575

Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val Lys

580 585 590

Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly Gly

595 600 605

Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln Ser

610 615 620

Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly Ser

625 630 635 640

Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys

645 650 655

Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val

660 665 670

Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys

675 680 685

Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys

690 695 700

Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys

705 710 715 720

Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly

725 730 735

Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile

740 745 750

Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser

755 760 765

Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu

770 775

<210> 307

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 307

gcccttctgg cctggagggg 20

<210> 308

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 308

tggcccttct ggcctggagg 20

<210> 309

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 309

gctggtgctt caggttctca 20

<210> 310

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 310

tcaggtcaac tggtttgtag 20

<210> 311

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 311

tgctcaggtc aactggtttg 20

<210> 312

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 312

ttgctcaggt caactggttt 20

<210> 313

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 313

ccttgctcag gtcaactggt 20

<210> 314

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 314

ccctcttcta catggagggg 20

<210> 315

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 315

ttctccctct tctacatgga 20

<210> 316

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 316

cttctccctc ttctacatgg 20

<210> 317

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 317

ccttctccct cttctacatg 20

<210> 318

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 318

caaatccttt gttgctgcca 20

<210> 319

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 319

tcaaatcctt tgttgctgcc 20

<210> 320

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 320

tggctccacg aacacaccaa 20

<210> 321

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 321

gtggctccac gaacacacca 20

<210> 322

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 322

tgtggctcca cgaacacacc 20

<210> 323

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 323

ctgtggctcc acgaacacac 20

<210> 324

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 324

cctgtggctc cacgaacaca 20

<210> 325

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 325

gcctgtggct ccacgaacac 20

<210> 326

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 326

tgcctgtggc tccacgaaca 20

<210> 327

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 327

ctgcctgtgg ctccacgaac 20

<210> 328

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 328

tctgcctgtg gctccacgaa 20

<210> 329

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 329

gtctgcctgt ggctccacga 20

<210> 330

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 330

cgtctgcctg tggctccacg 20

<210> 331

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 331

tcgtctgcct gtggctccac 20

<210> 332

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 332

atcgtctgcc tgtggctcca 20

<210> 333

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 333

catcgtctgc ctgtggctcc 20

<210> 334

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 334

acatcgtctg cctgtggctc 20

<210> 335

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 335

gacatcgtct gcctgtggct 20

<210> 336

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 336

tgacatcgtc tgcctgtggc 20

<210> 337

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 337

ttgacatcgt ctgcctgtgg 20

<210> 338

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 338

gttgacatcg tctgcctgtg 20

<210> 339

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 339

aggttgacat cgtctgcctg 20

<210> 340

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 340

aaggttgaca tcgtctgcct 20

<210> 341

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 341

caaggttgac atcgtctgcc 20

<210> 342

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 342

acaaggttga catcgtctgc 20

<210> 343

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 343

cacaaggttg acatcgtctg 20

<210> 344

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 344

acacaaggtt gacatcgtct 20

<210> 345

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 345

cacacaaggt tgacatcgtc 20

<210> 346

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 346

tcacacaagg ttgacatcgt 20

<210> 347

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 347

ctcacacaag gttgacatcg 20

<210> 348

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 348

actcacacaa ggttgacatc 20

<210> 349

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 349

cactcacaca aggttgacat 20

<210> 350

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 350

acactcacac aaggttgaca 20

<210> 351

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 351

cacactcaca caaggttgac 20

<210> 352

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 352

tcacactcac acaaggttga 20

<210> 353

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 353

gtcacactca cacaaggttg 20

<210> 354

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 354

cgtcacactc acacaaggtt 20

<210> 355

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 355

ccgtcacact cacacaaggt 20

<210> 356

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 356

ccccgtcaca ctcacacaag 20

<210> 357

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 357

cccttctccc acaggctgcc 20

<210> 358

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 358

catcaaggtc agtcttttct 20

<210> 359

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 359

ccaaccttca gaactcaata 20

<210> 360

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 360

tccaaccttc agaactcaat 20

<210> 361

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 361

ttccaacctt cagaactcaa 20

<210> 362

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 362

gttccaacct tcagaactca 20

<210> 363

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 363

agttccaacc ttcagaactc 20

<210> 364

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 364

cagttccaac cttcagaact 20

<210> 365

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 365

gcagttccaa ccttcagaac 20

<210> 366

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 366

gtcccaggtc tgcaaagtgg 20

<210> 367

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 367

aagtcccagg tctgcaaagt 20

<210> 368

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 368

aaagtcccag gtctgcaaag 20

<210> 369

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 369

ggcacaagtc cttacaaaga 20

<210> 370

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 370

aggcacaagt ccttacaaag 20

<210> 371

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 371

tcaccctcag tatggagtag 20

<210> 372

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 372

ttcaccctca gtatggagta 20

<210> 373

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 373

tttcaccctc agtatggagt 20

<210> 374

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 374

atttcaccct cagtatggag 20

<210> 375

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 375

aatttcaccc tcagtatgga 20

<210> 376

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 376

ccttaatttc accctcagta 20

<210> 377

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 377

cccttaattt caccctcagt 20

<210> 378

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 378

tcccttaatt tcaccctcag 20

<210> 379

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 379

ttcccttaat ttcaccctca 20

<210> 380

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 380

cttcccttaa tttcaccctc 20

<210> 381

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 381

actcttgtgc ctggactttg 20

<210> 382

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 382

cactcttgtg cctggacttt 20

<210> 383

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 383

ccactcttgt gcctggactt 20

<210> 384

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 384

cccactcttg tgcctggact 20

<210> 385

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 385

tcccactctt gtgcctggac 20

<210> 386

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 386

gtcccactct tgtgcctgga 20

<210> 387

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 387

ggtcccactc ttgtgcctgg 20

<210> 388

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 388

gggtcccact cttgtgcctg 20

<210> 389

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 389

gtgccctggc tcacatctgt 20

<210> 390

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 390

agtgccctgg ctcacatctg 20

<210> 391

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 391

cagtgccctg gctcacatct 20

<210> 392

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 392

gcagtgccct ggctcacatc 20

<210> 393

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 393

agcagtgccc tggctcacat 20

<210> 394

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 394

tgagcagtgc cctggctcac 20

<210> 395

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 395

gcatggcttc cagctgggac 20

<210> 396

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 396

agctgctcca gcagaacaga 20

<210> 397

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 397

tatatgttca gctgctccag 20

<210> 398

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 398

gtatatgttc agctgctcca 20

<210> 399

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 399

tgtatatgtt cagctgctcc 20

<210> 400

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 400

gcagggcaac atctatgtat 20

<210> 401

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 401

ggcagggcaa catctatgta 20

<210> 402

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 402

gggcagggca acatctatgt 20

<210> 403

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 403

tcactctggt gaatccaagc 20

<210> 404

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 404

gtcactctgg tgaatccaag 20

<210> 405

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 405

agtcactctg gtgaatccaa 20

<210> 406

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 406

tagtcactct ggtgaatcca 20

<210> 407

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 407

atagtcactc tggtgaatcc 20

<210> 408

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 408

catagtcact ctggtgaatc 20

<210> 409

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 409

tcatagtcac tctggtgaat 20

<210> 410

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 410

ctggtctctg ttgggtccca 20

<210> 411

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 411

atcctgtgct tcaggccttc 20

<210> 412

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 412

aatcctgtgc ttcaggcctt 20

<210> 413

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 413

ctaatcctgt gcttcaggcc 20

<210> 414

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 414

cctaatcctg tgcttcaggc 20

<210> 415

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 415

tcctaatcct gtgcttcagg 20

<210> 416

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 416

gtcctaatcc tgtgcttcag 20

<210> 417

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 417

agtcctaatc ctgtgcttca 20

<210> 418

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 418

cagtcctaat cctgtgcttc 20

<210> 419

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 419

tcagtcctaa tcctgtgctt 20

<210> 420

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 420

ttcagtccta atcctgtgct 20

<210> 421

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 421

cttcagtcct aatcctgtgc 20

<210> 422

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 422

gcttcagtcc taatcctgtg 20

<210> 423

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 423

ggagttgtaa gcctcctttg 20

<210> 424

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 424

gctctggtca aggctttggg 20

<210> 425

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 425

tgctctggtc aaggctttgg 20

<210> 426

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 426

gtgctctggt caaggctttg 20

<210> 427

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 427

ggtgctctgg tcaaggcttt 20

<210> 428

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 428

tgaggtgctc tggtcaaggc 20

<210> 429

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 429

tttctcatgg cagcagatgg 20

<210> 430

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 430

tgctgagttt ctttaggcag 20

<210> 431

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 431

ctgctgagtt tctttaggca 20

<210> 432

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 432

gctgctgagt ttctttaggc 20

<210> 433

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 433

ggctgctgag tttctttagg 20

<210> 434

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 434

aggctgctga gtttctttag 20

<210> 435

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 435

gaggctgctg agtttcttta 20

<210> 436

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 436

tgaggctgct gagtttcttt 20

<210> 437

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 437

ctgccaagtc cctcagggtt 20

<210> 438

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 438

actgccaagt ccctcagggt 20

<210> 439

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 439

tactgccaag tccctcaggg 20

<210> 440

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 440

ctactgccaa gtccctcagg 20

<210> 441

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 441

tctactgcca agtccctcag 20

<210> 442

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 442

ttctactgcc aagtccctca 20

<210> 443

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 443

tttctactgc caagtccctc 20

<210> 444

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 444

atttctactg ccaagtccct 20

<210> 445

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 445

gatttctact gccaagtccc 20

<210> 446

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 446

ggatttctac tgccaagtcc 20

<210> 447

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 447

tggatttcta ctgccaagtc 20

<210> 448

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 448

ctggatttct actgccaagt 20

<210> 449

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 449

atcttaggct ggccccaaga 20

<210> 450

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 450

tgatcttagg ctggccccaa 20

<210> 451

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 451

tttatctgcc agcactgatc 20

<210> 452

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 452

atttatctgc cagcactgat 20

<210> 453

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 453

aatttatctg ccagcactga 20

<210> 454

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 454

tatatcctat ctagcccacc 20

<210> 455

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 455

gtatatccta tctagcccac 20

<210> 456

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 456

agtatatcct atctagccca 20

<210> 457

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 457

aaccccaagg gcctctaact 20

<210> 458

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 458

gcaaccagat gtccatattc 20

<210> 459

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 459

ggcttaggac ccctgaaaga 20

<210> 460

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 460

ggcatgattg tgggcttagg 20

<210> 461

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 461

aggcatgatt gtgggcttag 20

<210> 462

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 462

gtaacccttt tcaaagctga 20

<210> 463

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 463

ggtaaccctt ttcaaagctg 20

<210> 464

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 464

gggtaaccct tttcaaagct 20

<210> 465

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 465

agggtaaccc ttttcaaagc 20

<210> 466

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 466

cagggtaacc cttttcaaag 20

<210> 467

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 467

ccagggtaac ccttttcaaa 20

<210> 468

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 468

cccagggtaa cccttttcaa 20

<210> 469

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 469

gcccagggta acccttttca 20

<210> 470

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 470

tgctcaacat ggcaaactca 20

<210> 471

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 471

tcctgctcaa catggcaaac 20

<210> 472

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 472

gtcctgctca acatggcaaa 20

<210> 473

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 473

cccgtacgtc ccagcgtgat 20

<210> 474

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 474

ggccagcgtc cgtgtcaccc 20

<210> 475

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 475

ccatgcgagc tgataaa 17

<210> 476

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 476

gcatcgtcag cttacct 17

<210> 477

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 477

ctttgctttt actgacc 17

<210> 478

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 478

tcaactggtt tgtagac 17

<210> 479

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 479

ccttgctcag gtcaactggt 20

<210> 480

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 480

ggttgacatc gtctgcctgt 20

<210> 481

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 481

gtcccactct tgtgcctgga 20

<210> 482

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 482

gacatcgtct gcctgtggct 20

<210> 483

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 483

cccactcttg tgcctggact 20

<210> 484

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 484

gtcccaggtc tgcaaagtgg 20

<210> 485

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 485

gtctgcctgt ggctccacga 20

<210> 486

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 486

agtcactctg gtgaatccaa 20

<210> 487

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 487

cggaagguca gcuugugggu 20

<210> 488

<211> 30

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 488

gugucuccaa ugccugcuuc uucagcuggu 30

<210> 489

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 489

ucaacugguu uguagacuau 20

<210> 490

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 490

uaugauggau guugccuaau 20

<210> 491

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 491

gggcucagcc auccugguuc 20

<210> 492

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 492

uuuccuccgc cagggacg 18

<210> 493

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 493

gucuuugcuu uuacugacca 20

<210> 494

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 494

uuuuuuguca ucgcuuccag 20

<210> 495

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 495

accaguugac cugagcaagg 20

<210> 496

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 496

acaggcagac gaugucaacc 20

<210> 497

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 497

uccaggcaca agagugggac 20

<210> 498

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 498

agccacaggc agacgauguc 20

<210> 499

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 499

aguccaggca caagaguggg 20

<210> 500

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 500

ccacuuugca gaccugggac 20

<210> 501

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 501

ucguggagcc acaggcagac 20

<210> 502

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 502

uuggauucac cagagugacu 20

<210> 503

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 503

guccacuaac cuuucaggcc agcgu 25

<210> 504

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 504

gcaucgucag cuuaccuugg cuuuu 25

<210> 505

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 505

ccaugcgagc ugauaaaaua uaaaa 25

<210> 506

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 506

gacuauuugc accuggagau gagag 25

<---

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к олигонуклеотидам для снижения уровней мРНК tau, и может быть использовано в медицине для лечения tau-ассоциированных заболеваний. Предложены олигонуклеотиды с последовательностью G*T*^mC*T*G*^mC^mCTGTGG^mCT^mC^mC*A*^mC*G*A* (SEQ ID NO: 329) или A*G*T*^mC*A*^mCT^mCTGGTGAAT*^mC*^mC*A*A* (SEQ ID NO: 405), где нуклеотиды с * имеют 2’-О-МОЕ-модификацию, нуклеотиды без * представляют собой 2’-дезоксинуклеозиды и ^mС означает 5-метилцитозин. Изобретение обеспечивает получение модифицированных антисмысловых олигонуклеотидов, ингибирующих мРНК МАРТ и снижающих, таким образом, уровень tau. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 5 ил., 17 табл., 12 пр.

1. Олигонуклеотид для снижения уровней мРНК tau, состоящий из последовательности нуклеотидных оснований, выбранной из группы

G*T*^mC*T*G*^mC^mCTGTGG^mCT^mC^mC*A*^mC*G*A* (SEQ ID NO: 329) или

A*G*T*^mC*A*^mCT^mCTGGTGAAT*^mC*^mC*A*A* (SEQ ID NO: 405),

где нуклеотиды с * имеют 2’-О-МОЕ-модификацию, нуклеотиды без * представляют собой 2’-дезоксинуклеозиды и ^mС означает 5-метилцитозин.

2. Олигонуклеотид по п. 1, где межнуклеозидной связью олигонуклеотида является фосфодиэфирная или фосфортиоатная связь.

3 Олигонуклеотид по п. 1 или 2, где олигонуклеотид обладает способностью снижать уровень экспрессии мРНК или белка tau по меньшей мере на 30% in vitro или по меньшей мере на 30% in vivo.

4. Композиция для лечения tau-ассоциированного заболевания у субъекта, содержащая олигонуклеотид по любому из пп. 1-3 в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель.

название	год	авторы	номер документа
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ СНИЖЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ TAU	2016	Полидоро Офенгейм, Мануэла Вайлер, Ян	RU2747734C2
СТРУКТУРЫ МИРНК С ВЫСОКОЙ АКТИВНОСТЬЮ И СНИЖЕННЫМ ВОЗДЕЙСТВИЕМ ВНЕ МИШЕНИ	2016	Ин Венбин Миноми Кендзироу Харборт Йенс Сина Сима Чжэн Джейн Ваиш Нарендра	RU2788030C2
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ МОДУЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ TAU	2014	Риго Фрэнк Беннетт С. Фрэнк	RU2745324C2
ДОСТАВКА, ПРИМЕНЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЯ В ТЕРАПИИ СИСТЕМ CRISPR-CAS И КОМПОЗИЦИЙ ДЛЯ ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА НАРУШЕНИЯ И ЗАБОЛЕВАНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВИРУСНЫХ КОМПОНЕНТОВ	2014	Чжан Фэн Цун Лэ Жань Фэй Хайденрайх Маттиас Суич Лукаш	RU2716421C2
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО ПУТИ АРГИНИН/N-ДЕГРОНА	2020	Лебоф Доминик Приказчикова Татьяна Александровна Абакумова Татьяна Олеговна Андерсон Дэниэл Гриффит Зацепин Тимофей Сергеевич Пятков Константин Иванович Рим Люк Хюнсик	RU2787841C2
ОБЪЕДИНЕННАЯ ОЧИСТКА И ИЗМЕРЕНИЕ МЕТИЛИРОВАНИЯ ДНК С СОВМЕСТНЫМ ИЗМЕРЕНИЕМ МУТАЦИЙ И/ИЛИ УРОВНЕЙ ЭКСПРЕССИИ мРНК В АВТОМАТИЧЕСКОМ РЕАКЦИОННОМ КАРТРИДЖЕ	2017	Лаи, Эдвин Вэй-Лунг Колвэй, Эндрю Ван Атта, Руэль Хигути, Рассел Голл, Александр А. Кокмонд, Криштен	RU2780660C2
СПОСОБЫ ТЕРАПИИ НА ОСНОВЕ CAR Т-КЛЕТОК С ПОВЫШЕННОЙ ЭФФЕКТИВНОСТЬЮ	2016	Мотц, Грегори Бушман, Фредерик, Диксон Фрайетта, Джозеф, А. Джун, Карл, Х. Миленхорст, Ян, Дж. Ноблз, Кристофер, Лоурен Янг, Реджина, М.	RU2788131C2
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНОПАТИЙ	2016	Боитано Энтони Эдвард Кук Майкл Кликстейн Ллойд Б. Лескарбо Рейнальд Миканин Крейг Стивен Мулумба Кабунго Полис Сесхидхар Редди Снид Дженнифер Стивенсон Сьюзан К. Стюарт Морег Ян И	RU2812491C2
ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДЫ	2018	Ильг Томас	RU2795701C2
МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2017	Грязнов, Сергей Бейгельман, Леонид Хун, Цзинь Раджванши, Вивек Мартинес Монтеро, Сауль	RU2802836C2

КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ СНИЖЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ TAU Российский патент 2022 года по МПК C12N15/113 A61K31/7125 A61P25/00

Описание патента на изобретение RU2777570C2

Похожие патенты RU2777570C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 777 570 C2

Реферат патента 2022 года КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ СНИЖЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ TAU

Формула изобретения RU 2 777 570 C2

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2022 года RU2777570C2

RU 2 777 570 C2