МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2023 года по МПК C12N15/113 A61K31/712 A61K31/7125 C07H21/02 

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает преимущество приоритета по предварительной заявке на патент США №62/394,738, поданной 14 сентября 2016 г., и предварительной заявке на патент США №62/394,739, поданной 14 сентября 2016 г., каждая из которых полностью включена в настоящий документ путем ссылки.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Рассматривается возможность использования терапии антисмысловыми олигонуклеотидами для лечения или профилактики различных заболеваний и состояний, таких как вирусные заболевания, неврологические заболевания, нейродегенеративные заболевания, фиброзные заболевания, гиперпролиферативные заболевания.

[0003] Некоторые вирусные заболевания, такие как гепатит B (ВГВ), до сих пор не поддаются лечению стандартными видами терапии, продолжая инфицировать примерно 240 миллионов человек (инфицирование определяется как наличие поверхностного антигена ВГВ в течение по меньшей мере 6 месяцев) и каждый год приводя к смерти более 686 000 человек. Стандартные способы терапии, включая пероральное противовирусное введение аналогов нуклеотида, таких как тенофовир или энтекавир, только подавляют репликацию вируса и не излечивают инфекцию ВГВ. Таким образом, даже те, кто лечатся доступными средствами терапии ВГВ, должны продолжать лечение на протяжении всей жизни.

[0004] Олигонуклеотиды могут связываться с комплиментарной последовательностью РНК или ДНК. Эта особенность позволяет олигонуклеотидам связываться со специфическими мишенями, представляющими собой нуклеиновые кислоты, участвующие во многих аспектах клеточных процессов, таких как метаболизм, дифференцировка, пролиферация, вирусная репликация и т.п. Олигонуклеотиды также могут быть сконструированы таким образом, чтобы расщеплять целевую РНК посредством механизма РНКазы H или через пути RISC; блокировать связывание с микроРНК, изменять схему сплайсинга РНК или связываться с мишенями в качестве аптамеров после их связывания с их специфической мишенью. Например, химерные олигонуклеотиды, такие как «гэпмеры», включают в себя часть олигонуклеотида, который привлекает фермент РНКазу H к участку, в котором олигонуклеотид связывается с областью РНК. Последующая активация РНКазы H приводит к расщеплению генетической мишени, таким образом ингибируя функцию генетической мишени, такую как генная экспрессия или репликация вируса.

[0005] Соответственно, в данной области существует потребность в поиске и разработке новых видов терапии, имеющих различные механизмы действия, повышенную активность, повышенную аффинность и/или меньше побочных эффектов.

ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0006] Настоящее описание относится к соединениям и композициям, содержащим олигонуклеотиды, и их применению для профилактики или лечения заболеваний и состояний, таких как ВГВ.

[0007] Некоторые варианты осуществления включают в себя олигонуклеотид, содержащий один или более нуклеотидов формулы (I):

(I), где R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B представляет собой нуклеотидное основание,

R₁ представляет собой -(CR'₂)₂OCR'₃, а R' независимо представляет собой в каждом случае H или F. В некоторых вариантах осуществления каждый нуклеотид указанного олигонуклеотида представляет собой нуклеотид формулы (I). В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит от 2 до 40 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит 2-26 нуклеотидов формулы (I). В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит 5-10 нуклеотидов формулы (I). В некоторых вариантах осуществления B представляет собой немодифицированное нуклеотидное основание в по меньшей мере одном нуклеотиде формулы (I). В некоторых вариантах осуществления B представляет собой модифицированное нуклеотидное основание в по меньшей мере одном нуклеотиде формулы (I). В некоторых вариантах осуществления B представляет собой немодифицированное нуклеотидное основание в каждом нуклеотиде формулы (I). В некоторых вариантах осуществления B представляет собой модифицированное нуклеотидное основание в каждом нуклеотиде формулы (I). В некоторых вариантах осуществления R' представляет собой H в по меньшей мере одном нуклеотиде формулы (I). В некоторых вариантах осуществления каждый R' представляет собой H в каждом нуклеотиде формулы (I). В некоторых вариантах осуществления каждый R₁ представляет собой -(CH₂)₂OCH₃ в по меньшей мере одном нуклеотиде формулы (I). В некоторых вариантах осуществления каждый R₁ представляет собой -(CH₂)₂OCH₃ в каждом нуклеотиде формулы (I). В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид дополнительно содержит один или более нуклеотидов формулы (II):

(II),

где Y представляет собой S или O, R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B представляет собой нуклеотидное основание, R₂ представляет собой -CR'₃, -CR'₂OCR'₃, -(CR'₂)₃OCR'₃ или -(CR'₂)_1–2CR'₃, или R₂ представляет собой -(CR'₂)₂OCR'₃, и Y представляет собой O, а R' независимо в каждом случае представляет собой H или F. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит по меньшей мере один нуклеотид формулы (II), где R₂ представляет собой -CR'₃. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит по меньшей мере один нуклеотид формулы (II), где R₂ представляет собой -(CR'₂)_1–2OCR'₃. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит по меньшей мере один нуклеотид формулы (II), где R₂ представляет собой -(CR'₂)_1–2CR'₃. В некоторых вариантах осуществления B представляет собой модифицированное нуклеотидное основание в по меньшей мере одном нуклеотиде формулы (II). В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой S в по меньшей мере одном нуклеотиде формулы (II). В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой O в по меньшей мере одном нуклеотиде формулы (II). В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой S в каждом нуклеотиде формулы (II). В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой O в каждом нуклеотиде формулы (II). В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид дополнительно содержит один или более нуклеотидов формулы (IIIa) или формулы (IIIb):

(IIIa) (IIIb),

где Y представляет собой S или O, R представляет собой H или положительно заряженный противоион, а B представляет собой нуклеотидное основание. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид дополнительно содержит один или более нуклеотидов формулы (V'):

(V'),

где Y представляет собой S или O, R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание, A представляет собой -(CR''R'')_1–2–, а R'' независимо в каждом случае представляет собой H, F или Me. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид расположен в конструкции формулы (VI): 5' X-Y-Z 3' (VI), где каждый из X, Y и Z представляет собой домен, содержащий 2-14 нуклеотидов, по меньшей мере один из доменов X и Z содержит по меньшей мере один нуклеотид формулы (I), и при этом каждый из нуклеотидов домена Y представляет собой 2'-дезоксинуклеотид. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит от 18 до 22 нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления каждый из доменов X и Z содержит 5-10 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления домен Y содержит 5-10 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления каждый из доменов X и Z содержит 5-10 нуклеотидов, и домен Y содержит 5-10 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления каждый из доменов X и Z содержит 5 нуклеотидов, а домен Y содержит 10 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления каждый нуклеотид доменов X и Z представляет собой нуклеотид формулы (I). В некоторых вариантах осуществления каждый из по меньшей мере одного нуклеотида домена X и по меньшей мере одного нуклеотида домена Z независимо выбран из группы, состоящей из нуклеотида формулы (II), нуклеотида формулы (IIIa) и нуклеотида формулы (IIIb). В некоторых вариантах осуществления каждый из по меньшей мере одного нуклеотида доменов X и Z представляет собой один и тот же нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления каждый нуклеотид домена Y связан посредством тиофосфатных связей между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид является одноцепочечным. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид представляет собой антисмысловой олигонуклеотид. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид является комплементарным последовательности генома ВГВ.

[0008] Другие варианты осуществления включают химерный олигонуклеотид, представленный формулой (VI):

5'-X-Y-Z-3' (VI),

где X-Y-Z представляют собой химерный олигонуклеотид, содержащий последовательность из 18-22 нуклеозидов и необязательно конъюгированный на 5'- и/или 3'-конце с лигандной нацеливающей группой или фармакофором; X представляет собой домен, содержащий последовательность модифицированных нуклеозидов, которая имеет длину 3-10 нуклеозидов; Z представляет собой домен, содержащий последовательность модифицированных нуклеозидов, которая имеет длину 3-10 нуклеозидов; а Y представляет собой домен, содержащий последовательность из 2-14 2'-дезоксинуклеозидов, связанных посредством тиофосфатных связей между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен Y имеет длину 6-10 нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления домены X и/или Z содержат последовательность модифицированных нуклеозидов, соединенных посредством N3'→P5' фосфорамидатных или N3'→P5' тиофосфорамидатных связей между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен Y содержит по меньшей мере одну фосфодиэфирную связь между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен Y состоит из 2'-дезоксинуклеозидов, связанных тиофосфатными связями между субъединицами и необязательно одной или двумя фосфодиэфирными связями между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен X содержит модифицированные нуклеозиды, где модификация независимо выбрана из группы, состоящей из 2'-F, 2'-F-N3'→P5', 2'-OMe, 2'-OMe-N3'→P5', 2'-O-метоксиэтокси, 2'-O-метоксиэтокси-N3'→P5', конформационно ограниченных нуклеозидов, 2'-OH-N3'→P5' тиофосфорамидата и 2'-OH-N3'→P5′ фосфорамидата. В некоторых вариантах осуществления функциональный домен Z содержит модифицированные нуклеозиды, где модификация выбрана из группы, состоящей из 2'-F, 2'-F-N3'→P5', 2'-OMe, 2'-OMe-N3'→P5', 2'-O-метоксиэтокси, 2'-O-метоксиэтокси-N3'→P5', конформационно ограниченных нуклеозидов, 2'-OH-N3'→P5' тиофосфорамидата и 2'-OH-N3'→P5' фосфорамидата. В некоторых вариантах осуществления домены X и/или Z содержат один или более 2'-дезоксинуклеозидов, соединенных посредством N3'→P5' фосфорамидатной связи между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домены X и Z содержат один или более 2'-арабино-F- и/или 2'-рибо-F-модифицированных нуклеозидов, причем каждый указанный нуклеозид независимо связан посредством по меньшей мере одной из N3'→P5' фосфорамидатной или N3'→P5' тиофосфорамидатной связи между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домены X и Z содержат один или более 2'-OMe-модифицированных нуклеозидов, причем каждый указанный нуклеозид независимо связан посредством по меньшей мере одной из N3'→P5' фосфорамидатной, N3'→P5' тиофосфорамидатной или тиофосфатной связи между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды в каждом из доменов X и Z представляют собой 2'O-Me-модифицированные нуклеозиды, связанные посредством тиофосфатных связей между субъединицами, и при этом модифицированные нуклеозиды включают в себя 5-метилцитозиновые нуклеотидные основания, но необязательно не цитозиновые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды включают в себя 2,6-диаминопуриновые нуклеотидные основания, но необязательно не адениновые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды включают в себя 5-метилурациловые нуклеотидные основания, но необязательно не урациловые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды включают в себя 2,6-диаминопуриновые нуклеотидные основания, но не адениновые и 5-метилурациловые нуклеотидные основания, но необязательно не урациловые. В некоторых вариантах осуществления домен Y содержит 6-8 2'-дезоксинуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды в каждом из доменов X и Z содержат 2'-OMe-модифицированные нуклеозиды и конформационно ограниченные нуклеозиды, необязательно связанные посредством тиофосфатных связей между субъединицами, и при этом 2'-OMe-модифицированные нуклеозиды включают в себя 5-метилцитозиновые нуклеотидные основания, но необязательно не цитозиновые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды в каждом из доменов X и Z содержат 2'-OMe-модифицированные и конформационно ограниченные нуклеозиды. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды в каждом из доменов X и Z содержат конформационно ограниченные нуклеозиды, и при этом по меньшей мере один модифицированный нуклеозид включает в себя N3'→P5' фосфорамидатную или N3'→P5' тиофосфорамидатную связь между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен Y содержит 7-8 2'-дезоксинуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления 2'-OMe-модифицированные нуклеозиды включают в себя 5-метилурациловые нуклеотидные основания, но необязательно не урациловые. В некоторых вариантах осуществления домен Y содержит 9-10 2'-дезоксинуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления домены X и Z содержат нуклеотиды, представленные формулой (Ix):

(Ix),

где A независимо в каждом случае представляет собой NH или O; B независимо в каждом случае представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; W независимо в каждом случае представляет собой OR или SR, где R представляет собой H или положительно заряженный противоион; каждый из R' и R'' независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, OH, OMe, Me и O-метоксиэтокси; R''' представляет собой H, или R' и R''' совместно образуют -O-CH₂- или -O-(CH₂)₂-, и a представляет собой целое число от 3 до 9, причем если каждый из R', R'' и R''' представляет собой H, то A представляет собой NH, и необязательно, если A представляет собой O, W представляет собой SR. В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа или фармакофор выбраны из группы, состоящей из линкера Chol., Toco, Palm, GalNAc, MGB-1, MGB-2, Acr, Pyr, Steroyl, HEG, аминолинкера C7 и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления домен X и/или Z содержит один или более олигонуклеотидов, где модификация представляет собой 2'-O-метоксиэтокси-N3'→P5'. В некоторых вариантах осуществления домен X содержит один или более олигонуклеотидов, где модификация представляет собой 2'-O-метоксиэтокси-N3'→P5'. В некоторых вариантах осуществления домен Z содержит один или более олигонуклеотидов, где модификация представляет собой 2'-O-метоксиэтокси-N3'→P5'. В некоторых вариантах осуществления конструкция указанного олигонуклеотида соответствует конструкции, представленной в таблице B.

[0009] Другие варианты осуществления включают химерный олигонуклеотид, представленный формулой (VII):

5'-X'-Y'-Z'-3' (VII),

где X-Y-Z представляют собой химерный олигонуклеотид, содержащий последовательность из 16-22 нуклеозидов и необязательно конъюгированный на 5'- и/или 3'-конце; X' представляет собой домен, содержащий последовательность модифицированных нуклеозидов, которая имеет длину 3-10 нуклеозидов; Z' представляет собой домен, содержащий последовательность модифицированных нуклеозидов, которая имеет длину 3-10 нуклеозидов; и Y' представляет собой домен, содержащий последовательность из 2-4 2'-дезоксинуклеозидов, связанных посредством связей между субъединицами, причем домены X' и/или Z' содержат последовательность модифицированных нуклеозидов, связанных посредством N3'→P5′ фосфорамидатной или N3'→P5' тиофосфорамидатной связи между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен Y состоит из 2'-дезоксинуклеозидов, связанных посредством тиофосфатных связей между субъединицами и необязательно одной фосфодиэфирной связью между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен X' имеет длину 9 или 10 нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления домен X' содержит модифицированные нуклеозиды, где модификация выбрана из группы, состоящей из 2'-F, 2'-F-N3'→P5', 2'-OMe, 2'-OMe-N3'→P5', 2'-O-метоксиэтокси, 2'-O-метоксиэтокси-N3'→P5' и конформационно ограниченных нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления домен Z' содержит модифицированные нуклеозиды, где модификация выбрана из группы, состоящей из 2'-F, 2'-F-N3'→P5', 2'-OH, 2'-OMe, 2'-OMe-N3'→P5', 2'-O-метоксиэтокси, 2'-O-метоксиэтокси-N3'→P5' и конформационно ограниченных нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления домены X' и/или Z' содержат один или более 2'-арабино-F- и/или 2'-рибо-F-модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды в каждом из доменов X' и/или Z' содержат 2'-OMe-модифицированные и конформационно ограниченные нуклеозиды. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды в доменах X' и/или Z' содержат конформационно ограниченные нуклеозиды и модификацию N3'→P5'. В некоторых вариантах осуществления последовательность выбрана из последовательностей из таблицы C, имеющих домен Y из 2-4 нуклеотидов. Другие варианты осуществления включают химерный олигонуклеотид, причем последовательность указанного олигонуклеотида соответствует последовательности, приведенной в таблице C.

[0010] Другие варианты осуществления включают олигонуклеотид, содержащий один или более нуклеотидов следующей формулы (A):

(VIII),

где X_A представляет собой NH или O, Y представляет собой OR или SR, а R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B_A независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание, каждый из R_A' и R_A'' независимо в каждом случае выбран из H, F, ОН, OMe, Me, O-метоксиэтокси, а R_A''' представляет собой H, или R_A' и R_A''' вместе образуют -O-CH₂- или -O-(CH₂)₂-. В некоторых вариантах осуществления R_A' и R_A''' представляют собой H; и R_A'' представляет собой F. В некоторых вариантах осуществления R_A' и R_A'' представляют собой H; и R_A''' представляет собой F, OH, H или OMe. В некоторых вариантах осуществления X_A представляет собой NH; B_A представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R_A' и R_A''' вместе образуют конформационно ограниченный нуклеозид (например, -O-CH₂- или -O-(CH₂)₂-); и R_A'' представляет собой H. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из R_A' и R_A'' представляет собой H. В некоторых вариантах осуществления, если B_A представляет собой пуриновое нуклеотидное основание, то по меньшей мере один из R_A' и R_A'' представляет собой OH или F, и/или если B_A представляет собой пиримидиновое нуклеотидное основание, то по меньшей мере один из R_A' и R_A'' представляет собой OMe, OH или F. В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание выбрано из 5-метилцитозина, 2,6-диаминопурина, 5-метилурацила и G-зажима. В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды формулы (A) включают нуклеотиды из таблицы G. В некоторых вариантах осуществления нуклеотид формулы (A) включает в себя последовательность, приведенную в таблице H. В некоторых вариантах осуществления нуклеотид формулы (A) включает в себя последовательность из 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидных оснований, отличную от последовательности, выбранной из последовательностей из таблицы B.

[0011] Другие варианты осуществления включают олигонуклеотид, содержащий десять или более нуклеотидов следующей формулы (IX):

(IX),

где R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B_B независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание, каждый из R_B' и R_B'' независимо в каждом случае выбран из H, F, OMe, Me, O-метоксиэтокси, а R_B''' представляет собой H, или R_B' и R_B''' вместе образуют -O-CH₂- или -O-(CH₂)₂-. В некоторых вариантах осуществления R_B' и R_B''' представляют собой H; и R_B'' представляет собой F. В некоторых вариантах осуществления R_B' и R_B'' представляют собой H; и R_B''' представляет собой F, OH, H или OMe. В некоторых вариантах осуществления B_B представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R_B' и R_B''' вместе образуют конформационно ограниченный нуклеозид (например, -O-CH₂- или -O-(CH₂)₂-); и R_B'' представляет собой H. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из R_B' и R_B'' представляет собой H. В некоторых вариантах осуществления, если B_B представляет собой пуриновое нуклеотидное основание, то по меньшей мере один из R_B' и R_B'' представляет собой OH или F, и/или если B_B представляет собой пиримидиновое нуклеотидное основание, то по меньшей мере один из R_B' и R_B'' представляет собой OMe, OH или F. В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание выбрано из 5-метилцитозина, 2,6-диаминопурина, 5-метилурацила и G-зажима. В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды формулы (B) включают в себя нуклеотиды из таблицы A, где X_A представляет собой NH. В некоторых вариантах осуществления нуклеотид формулы (B) включает в себя последовательность, приведенную в таблице B. В некоторых вариантах осуществления нуклеотид формулы (B) включает в себя последовательность из 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидных оснований, отличную от последовательности, выбранной из таблицы B. В некоторых вариантах осуществления каждый олигонуклеотид представляет собой нуклеотид формулы (B).

[0012] Другие варианты осуществления включают в себя фармацевтическую композицию, содержащую олигонуклеотид по любому из предшествующих вариантов осуществления, а также фармацевтически приемлемый эксципиент. В некоторых вариантах осуществления композиция является приемлемой для внутривенной или подкожной доставки. Другие варианты осуществления включают в себя способ ингибирования экспрессии гена вируса гепатита B (ВГВ) в клетке, включающий приведение клетки в контакт с олигонуклеотидом или композицией по любому из предшествующих вариантов осуществления. Другие варианты осуществления включают в себя способ ингибирования репликации вируса гепатита B (ВГВ) в клетке, включающий приведение клетки в контакт с олигонуклеотидом или композицией по любому из предшествующих вариантов осуществления. Другие варианты осуществления включают в себя способ лечения субъекта с инфекцией вируса гепатита B (ВГВ), включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции по любому из предшествующих вариантов осуществления. Другие варианты осуществления включают в себя олигонуклеотид по любому из предшествующих вариантов осуществления, причем указанный олигонуклеотид в комплексе с последовательностью генома ВГВ имеет температуру плавления (Tm)>37°C. Другие варианты осуществления включают в себя способ лечения субъекта с инфекцией вируса гепатита B (ВГВ), включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции по любому из предшествующих вариантов осуществления. Другие варианты осуществления включают способ ингибирования экспрессии целевой РНК в клетке, включающий приведение клетки в контакт с олигонуклеотидом или композицией, содержащей указанный олигонуклеотид по любому из предшествующих вариантов осуществления, причем химерный олигонуклеотид содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая комплементарна части вирусной целевой РНК или гибридизируется с ней. Другие варианты осуществления включают способ ингибирования репликации вируса в клетке, включающий приведение клетки в контакт с олигонуклеотидом или композицией, содержащей указанный олигонуклеотид по любому из предшествующих вариантов осуществления, содержащей указанный олигонуклеотид содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая комплементарна части вирусной целевой РНК или гибридизируется с ней. Другие варианты осуществления включают способ лечения субъекта, имеющего вирусную инфекцию, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции, содержащей указанный олигонуклеотид по любому из предшествующих вариантов осуществления, причем олигонуклеотид содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая комплементарна части вирусной целевой РНК или гибридизируется с ней. Другие варианты осуществления включают способ модуляции экспрессии мишени путем приведения целевой нуклеиновой кислоты в контакт с антисмысловым соединением, содержащим олигонуклеотид или композицию, содержащую указанный олигонуклеотид по любому из предшествующих вариантов осуществления, причем олигонуклеотид содержит последовательность нуклеотидных оснований, которая комплементарна части целевой нуклеиновой кислоты или гибридизируется с ней.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0013] На ФИГ. 1A показаны сывороточные концентрации HBsAg. На ФИГ. 1B показаны сывороточные концентрации HBeAg. На ФИГ. 1C показаны сывороточные концентрации ДНК.

[0014] На ФИГ. 2A показаны результаты измерения сывороточных концентраций HBsAg при в/в введении конъюгированного с GalNAc соединения настоящего изобретения. На ФИГ. 2B показаны сывороточные концентрации HBsAg при п/к введении конъюгированного с GalNAc соединения настоящего изобретения.

[0015] На ФИГ. 3 показано снижение концентраций HBsAg при введении конъюгированного с GalNAc соединения настоящего изобретения.

[0016] На ФИГ. 4A-4C показаны данные о HBsAg, HBeAg и сывороточной ДНК ВГВ, полученные in vivo в мышиной модели AAV-HBV, для соединений настоящего описания. На ФИГ. 4A показаны сывороточные концентрации HBsAg. На ФИГ. 4B показаны сывороточные концентрации HBeAg. На ФИГ. 4C показаны концентрации ДНК ВГВ.

[0017] На ФИГ. 5A-5C показаны данные о HBsAg, HBeAg и сывороточной ДНК ВГВ, полученные in vivo в мышиной модели AAV-HBV, для соединений настоящего описания. На ФИГ. 5A показаны сывороточные концентрации HBsAg. На ФИГ. 5B показаны сывороточные концентрации HBeAg. На ФИГ. 5C показаны концентрации ДНК ВГВ.

[0018] На ФИГ. 6A-6C показаны данные о HBsAg, HBeAg и сывороточной ДНК ВГВ, полученные in vivo в мышиной модели AAV-HBV, для соединений настоящего описания. На ФИГ. 6A показаны сывороточные концентрации HBsAg. На ФИГ. 6B показаны сывороточные концентрации HBeAg. На ФИГ. 6C показаны концентрации ДНК ВГВ.

[0019] На ФИГ. 7 показаны различные соединения настоящего описания и их соответствующие комплементарные участки для положительной (+) цепи генома ВГВ.

[0020] На ФИГ. 8 показана концентрация HBsAg в сыворотке при введении двух олигонуклеотидов, описанных в таблице 29.

[0021] На ФИГ. 9A показана концентрация HBsAg в сыворотке при введении двух олигонуклеотидов, описанных в таблице 30. На ФИГ. 9B показана концентрация HBeAg в сыворотке при введении двух олигонуклеотидов, описанных в таблице 30.

[0022] На ФИГ. 10A показана концентрация HBsAg в сыворотке при введении двух олигонуклеотидов, описанных в таблице 31. На ФИГ. 10B показана концентрация HBeAg в сыворотке при введении двух олигонуклеотидов, описанных в таблице 31.

[0023] На ФИГ. 11A показана концентрация HBsAg в сыворотке при введении олигонуклеотидов, описанных в таблице 33, в виде одной дозы. На ФИГ. 11B показана концентрация HBsAg в сыворотке при введении олигонуклеотидов, описанных в таблице 33, при использовании схемы дозирования 3×3,3 мг/кг на 0, 2, 4 сутки.

[0024] На ФИГ. 12A показана концентрация HBsAg в сыворотке при введении олигонуклеотидов, описанных в таблице 37, в виде одной дозы. На ФИГ. 12B показана концентрация HBsAg в сыворотке при введении олигонуклеотидов, описанных в таблице 38, в виде одной дозы. На ФИГ. 12C показана концентрация HBsAg в сыворотке при введении олигонуклеотидов, описанных в таблице 40, в виде одной дозы.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[0025] Настоящее описание относится к модифицированным нуклеотидам и олигонуклеотидам, содержащим модифицированные нуклеотиды и модифицированные связи между нуклеотидами. Настоящее описание также относится к конструкциям олигонуклеотидов, которые включают в себя домены, области или участки в пределах олигонуклеотида, имеющие общие элементы и дополнительные компоненты, конъюгированные с олигонуклеотидами, такие как нацеливающие группы. Настоящее описание дополнительно относится к способам применения и получения олигонуклеотидов и их конструкций.

[0026] Как известно в данной области и изложено в настоящем описании, модифицированный нуклеотид представляет собой любой нуклеотид, который не является дезоксирибонуклеотидом. Например, углерод 2' дезоксирибозы может быть замещен заместителем, отличным от гидрокси (OH); углерод 3' дезоксирибозы может быть замещен заместителем, отличным от атома кислорода (O). Как известно в данной области и изложено в настоящем описании, модифицированная связь между двумя нуклеотидами представляет собой любую связь, которая не является фосфодиэфирной связью между углеродом 3' дезоксирибозы первого нуклеотида и углеродом 5' дезоксирибозы второго нуклеотида.

1. 2', 3'-модифицированные нуклеотиды и родственные олигонуклеотиды

[0027] Соединения настоящего изобретения включают в себя модифицированные нуклеотиды с определенными модификациями 2' и 3'. В вариантах осуществления соединения настоящего описания включают замещение гидрокси или замену на углероде 2' сахара дезоксирибозы. Кроме того, эти соединения настоящего описания включают в себя модификации связи между двумя нуклеозидами, которые включают замещение атома кислорода или замену атомом азота (N) на углероде 3' сахара дезоксирибозы. Модификации связи дополнительно включают в себя замещение другого атома кислорода или замену в фосфодиэфирной связи.

[0028] Эти модифицированные нуклеотиды можно применять, например, в олигонуклеотидах, таких как химерные олигонуклеотиды, что позволяет осуществлять ферментативное расщепление генетической мишени с помощью РНКазы H или модифицированных антисмысловых олигонуклеотидов.

A. 2', 3'-модифицированные нуклеотиды

[0029] Соответственно, соединения настоящего описания включают в себя нуклеотиды формулы (I):

(I),

где R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание, R₁ представляет собой -(CR'₂)₂OCR'₃, а R' независимо в каждом случае представляет собой H или F.

[0030] В нуклеотидах формулы (I) R₁ представляет собой -(CR'₂)₂OCR'₃. В некоторых вариантах осуществления R' в каждом случае представляет собой H. В других вариантах осуществления по меньшей мере один R' представляет собой F, например 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 R представляют собой F. В некоторых вариантах осуществления CR'₃ содержит 1, 2 или 3 функциональные группы F. Например, в вариантах осуществления R₁ выбран из группы, состоящей из -CH₂CH₂OCH₃ (или MOE), -CF₂CH₂OCH₃, -CH₂CF₂OCH₃, -CH₂CH₂OCF₃, -CF₂CF₂OCH₃, -CH₂CF₂OCF₃, -CF₂CH₂OCF₃, -CF₂CF₂OCF₃, -CHFCH₂OCH₃, -CHFCHFOCH₃, -CHFCH₂OCFH₂, -CHFCH₂OCHF₂ и -CH₂CHFOCH₃. В некоторых вариантах осуществления нуклеотид формулы I представляет собой:

.

[0031] В вариантах осуществления соединения настоящего описания включают в себя по меньшей мере один нуклеотид формулы (I) и по меньшей мере один нуклеотид формулы (II):

(II),

где Y представляет собой S или O, R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B представляет собой нуклеотидное основание, R₂ представляет собой -CR'₃, -CR'₂OCR'₃, -(CR'₂)₃OCR'₃ или -(CR'₂)_1–2CR'₃, или R₂ представляет собой -(CR'₂)₂OCR'₃, и Y представляет собой O, а R' независимо в каждом случае представляет собой H или F.

[0032] В нуклеотиде формулы (II) R₂ представляет собой -CR'₃, -(CR'₂)_1–3OCR'₃ или -(CR'₂)_1–2CR'₃. В некоторых вариантах осуществления R₂ представляет собой -CR'₃ или -CR'₂CR'₃. В некоторых вариантах осуществления R' в каждом случае представляет собой H. В других вариантах осуществления по меньшей мере один R' представляет собой F, например 1, 2, 3, 4 или 5 R представляют собой F. В некоторых вариантах осуществления CR'₃ содержит 1, 2 или 3 функциональные группы F. Например, в вариантах осуществления R₁ выбран из группы, состоящей из -CH₃ (или Me), -CFH₂, -CHF₂, CF₃, -CH₂OCH₃, -CFH₂OCH₃, -CHF₂OCH₃, -CF₃OCH₃, -CH₂OCFH₂, -CH₂OCHF₂, -CH₂OCF₃, -CFH₂OCH₃, -CFH₂OCFH₂, -CFH₂OCHF₂, -CFH₂OCF₃, -CHF₂OCH₃, -CHF₂OCFH₂, -CHF₂OCHF₂, -CHF₂OCF₃, -(CR'₂)₃OCR'₃, -CH₂CH₃ (или Et), -CFH₂CH₃, -CHF₂CH₃, -CF₃CH₃, -CH₂CFH₂, -CH₂CHF₂, –CH₂CF₃, -CFH₂CH₃, -CFH₂CFH₂, -CFH₂CHF₂, -CFH₂CF₃, -CHF₂CH₃, -CHF₂CFH₂, -CHF₂CHF₂, -CHF₂CF₃, -CH₂CH₂CH₃, CF₂CH₂CH₃, CH₂CF₂CH₃, CH₂CH₂CF₃, CF₂CF₂CH₃, CH₂CF₂CF₃, CF₂CH₂CF₃, CF₂CF₂CF₃, CHFCH₂CH₃, CHFCHFOCH₃, CHFCH₂CFH₂, CHFCH₂CHF₂ и CH₂CHFCH₃. В вариантах осуществления R₁ представляет собой -CH₃ (или Me) или –CH₂CH₃ (или Et). В вариантах осуществления нуклеотиды формулы II выбраны из группы, состоящей из

, и .

[0033] В соединениях формулы (I) или (II) Y может представлять собой O или S. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой S в по меньшей мере одном случае (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 и т.д.). В других вариантах осуществления Y представляет собой S в по меньшей мере одном случае и O в по меньшей мере другом случае. В других вариантах осуществления Y в каждом случае представляет собой S. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой O в по меньшей мере одном случае (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 и т.д.).

[0034] Описанные олигонуклеотиды содержат по меньшей мере один нуклеотид формулы (I). В вариантах осуществления описанные олигонуклеотиды содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 нуклеотида формулы (I). В вариантах осуществления описанные олигонуклеотиды содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 нуклеотида формулы (II). В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит от 2 до 40 нуклеотидов, например от 8 до 26 нуклеотидов или целые числа в этом диапазоне.

[0035] В вариантах осуществления, в которых включен более чем один нуклеотид формулы (I), нуклеотиды могут быть одинаковыми или разными. В некоторых вариантах осуществления включены один или более нуклеотидов формулы (II), которые могут быть одинаковыми или разными. Например, в некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит по меньшей мере один нуклеотид формулы (I) и по меньшей мере один нуклеотид формулы (II). В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит по меньшей мере один нуклеотид формулы (I), в котором по меньшей мере один R₁ представляет собой MOE, и по меньшей мере один нуклеотид формулы (II), в котором R₂ представляет собой Me или Et. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит по меньшей мере 2 чередующихся нуклеотида формулы (I) и формулы (II). Например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 нуклеотида с чередующейся 2'-модификацией (например, Me-MOE-Me-MOE… или Et-MOE-Et-MOE-Et-MOE…).

[0036] В некоторых вариантах осуществления нуклеотид формулы (I) и/или формулы (II) имеет следующую структуру:

(I') (II'),

[0037] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид, содержащий нуклеотид формулы (I), дополнительно содержит 2'-фторнуклеотид формулы (IIIa) и/или (IIIb):

(IIIa) (IIIb),

где Y представляет собой S или O, R представляет собой H или положительно заряженный противоион, а B представляет собой нуклеотидное основание.

[0038] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит по меньшей мере 4 чередующихся нуклеотида формул (I) и (IIIa). Например, олигонуклеотид содержит 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 чередующихся нуклеотида.

[0039] Некоторые варианты осуществления включают олигонуклеотид, содержащий 4-40 нуклеотидов и содержащий формулу (IV):

(IV),

где Y представляет собой S или O, R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B представляет собой нуклеотидное основание, R₁ представляет собой -(CR'₂)₂OCR'₃, R₂ выбран из -OCR'₃, -OCR'₂OCR'₃, -O(CR'₂)₃OCR'₃ или -O(CR'₂)_1–2CR'₃, и F, R' независимо в каждом случае представляет собой H или F, и a представляет собой целое число от 1 до 10, а b представляет собой целое число от 1 до 10, где до 20 означает, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20.

[0040] Соединения настоящего изобретения включают в себя соединения, содержащие следующую формулу (III'):

(III'),

где Y представляет собой S или O, R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание; и необязательно содержащие одну или более из формул (I), (II) и/или (IV).

[0041] Каждое из нуклеотидных оснований B нуклеотидов формул (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IV) и (V) может независимо представлять собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды включают в себя 2,6-диаминопуриновые нуклеотидные основания, но необязательно не адениновые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды включают в себя 5-метилурациловые нуклеотидные основания, но необязательно не урациловые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды включают в себя 2,6-диаминопуриновые нуклеотидные основания, но не адениновые и 5-метилурациловые нуклеотидные основания, но необязательно не урациловые.

[0042] Y в каждом нуклеотиде формул (II), (IIIa), (IIIb), (IV) и (V) может независимо представлять собой O или S. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой S в по меньшей мере одном случае (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 и т. д.). В других вариантах осуществления Y представляет собой S в по меньшей мере одном случае и O в по меньшей мере другом случае. В других вариантах осуществления Y в каждом случае представляет собой S. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой O в по меньшей мере одном случае (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 и т.д.).

[0043] В вариантах осуществления, в которых включен более чем один нуклеотид каждой из формул (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IV) и (V), более чем один нуклеотид таких формул может быть одинаковым или разным. Например, в некоторых вариантах осуществления нуклеотид содержит по меньшей мере один нуклеотид формулы (II), (III), (IV), (V) и/или (V') в дополнение к по меньшей мере одному нуклеотиду формулы (I). В некоторых вариантах осуществления нуклеотид содержит по меньшей мере 2 чередующихся нуклеотида формулы (I) и/или формулы (II), и/или (III), и/или (IV), (V) и/или (V'). Например, описанные олигонуклеотиды могут включать в себя 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 нуклеотида с чередующимися 2'-модификациями.

[0044] В вариантах осуществления нуклеотиды олигонуклеотида выбраны из группы, состоящей из:

, , ,

, и

, где B может представлять собой любое природное или модифицированное основание.

[0045] Соединения настоящего изобретения включают в себя соединения, содержащие следующую формулу (V'):

(V'),

где Y представляет собой S или O, R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание, A представляет собой -(CR''R'')_1–2-, а R'' независимо в каждом случае представляет собой H, F или Me, и необязательно содержащие одну или более формул (I), (II), (III), (IV) или (V).

[0046] В соединении, содержащем формулу (V'), A представляет собой -(CR''R'')_1–2-. В некоторых вариантах осуществления A представляет собой -(CR''R'')-, в других вариантах осуществления A представляет собой -(CR''R'')₂-. R'' независимо в каждом случае представляет собой H или Me. В некоторых вариантах осуществления один R'' представляет собой Me, а остальные представляют собой H. В других вариантах осуществления все R'' представляют собой H.

[0047] В некоторых вариантах осуществления, если A представляет собой CH₂, то Y представляет собой S. В других вариантах осуществления, если A представляет собой CH₂CH₂, то Y представляет собой O или S. В некоторых вариантах осуществления A представляет собой CH₂CH(Me) или CH(Me), а Y представляет собой O или S.

[0048] В соединении, содержащем формулу (V'), Y представляет собой O или S. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой S в по меньшей мере одном случае (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 и т. д.). В других вариантах осуществления Y представляет собой S в по меньшей мере одном случае и O в по меньшей мере другом случае. В других вариантах осуществления Y в каждом случае представляет собой S. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой O в по меньшей мере одном случае (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 и т. д.).

[0049] Соединение формулы (V') (и необязательно формул (I), (II), (III), (IV), (V) и/или (V')) может являться частью олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления соединение, содержащее формулу (IV) (и необязательно формулы (I), (II), (III), (IV), (V) и/или (V')), представляет собой олигонуклеотид, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 нуклеотидов формулы (V') (и формул (I), (II), (III), (IV), (V) и/или (V')). В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит от 2 до 40 нуклеотидов, например от 8 до 26 нуклеотидов или целые числа в этом диапазоне.

[0050] В вариантах осуществления, в которых включен более чем один нуклеотид формулы (V'), более чем один нуклеотид формулы (V') может быть одинаковым или разным. В некоторых вариантах осуществления включены один или более нуклеотидов формулы (I), (II), (III), (IV), (V) и/или (V'), и они могут быть одинаковыми или разными. Например, в некоторых вариантах осуществления нуклеотид содержит по меньшей мере один нуклеотид формулы (V') и по меньшей мере один нуклеотид формул (I), (II), (III), (IV), (V) и/или (V'). В некоторых вариантах осуществления нуклеотид содержит по меньшей мере 2 чередующихся нуклеотида формулы (V') и формулы (I) и/или (II). Например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 нуклеотида с чередующейся 2'-модификацией.

[0051] В некоторых вариантах осуществления нуклеотид, содержащий нуклеотид формулы (V') (и необязательно формул (I), (II), (III), (IV), (V) и/или (V')), дополнительно содержит 2-фторнуклеотид следующих структур:

или , где Y, R и B такие же, как и в формуле (I). В некоторых вариантах осуществления нуклеотид содержит по меньшей мере 4 чередующихся нуклеотида формулы (V') и 2-фторнуклеотиды.

[0052] Соединения настоящего изобретения включают в себя соединения, содержащие следующую формулу (V):

,

где Y представляет собой S или O, R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание; и необязательно содержащие одну или более из формул (I), (II), (III), (IV) и/или (V').

B. Химерные олигонуклеотиды

[0053] Настоящее описание относится к конструкциям олигонуклеотидов, которые включают в себя домены, области или участки в пределах олигонуклеотида, имеющие общие элементы. Олигонуклеотиды, имеющие эти домены, в настоящем документе называются химерными олигонуклеотидами. В некоторых вариантах осуществления химерные олигонуклеотиды представлены формулой (VI):

5'-X-Y-Z-3' (VI),

причем химерный олигонуклеотид содержит последовательность из 14-22 нуклеотидов, при этом X представляет собой домен, содержащий последовательность модифицированных нуклеотидов, которая имеет длину 3-10 нуклеотидов; Z представляет собой домен, содержащий последовательность модифицированных нуклеотидов, которая имеет длину 3-10 нуклеозидов; и Y представляет собой домен, содержащий последовательность из 2-10 2'-дезоксинуклеотидов или немодифицированных нуклеотидов. Каждый из нуклеозидов в каждом из доменов связан посредством связей между субъединицами.

[0054] В некоторых вариантах осуществления химерные олигонуклеотиды представлены формулой (VI'):

5'-X-Y-Z-3' (VI'),

причем химерный олигонуклеотид содержит последовательность из 14-22 нуклеотидов, при этом X представляет собой домен, содержащий последовательность модифицированных нуклеотидов, которая имеет длину 2-10 нуклеотидов; Z представляет собой домен, содержащий последовательность модифицированных нуклеотидов, которая имеет длину 2-10 нуклеозидов; и Y представляет собой домен, содержащий последовательность из 6-14 2'-дезоксинуклеотидов или немодифицированных нуклеотидов. Каждый из нуклеозидов в каждом из доменов связан посредством связей между субъединицами.

[0055] Нуклеотиды формулы (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IV), (V) и/или (V') могут присутствовать в домене X и/или Z. Химерный олигонуклеотид может быть конъюгирован на 5'- и/или 3'-конце с лигандной нацеливающей группой или фармакофором.

[0056] В некоторых вариантах осуществления домен Y содержит 2'-дезоксинуклеозиды, связанные тиофосфатными связями между субъединицами. В вариантах осуществления домен Y содержит 2'-дезоксинуклеозиды, связанные по меньшей мере одной фосфодиэфирной связью между субъединицами. В вариантах осуществления домен Y содержит 2'-дезоксинуклеозиды, связанные двумя фосфодиэфирными связями между субъединицами. В вариантах осуществления домен Y содержит 2'-дезоксинуклеозиды, связанные тиофосфатными связями между субъединицами и одной или двумя фосфодиэфирными связями между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен Y имеет длину 6-10 нуклеотидов.

[0057] В некоторых вариантах осуществления домен X содержит нуклеотиды формул (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IV), (V) и/или (V'). В некоторых вариантах осуществления домен X содержит модифицированные нуклеотиды, где модификация независимо выбрана из 2'-OMe, 2'-OEt, 2'-O-метоксиэтокси и конформационно ограниченных нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления домен X имеет длину 9 или 10 нуклеотидов.

[0058] В некоторых вариантах осуществления домен Z содержит нуклеотиды формул (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IV), (V) и/или (V'). В некоторых вариантах осуществления домен Z содержит 2'-модифицированные нуклеотиды, где модификация представляет собой 2'-OMe, 2'-OEt или 2'-MOE. В некоторых вариантах осуществления домен Z имеет длину 9 или 10 нуклеотидов.

[0059] В вариантах осуществления химерный олигонуклеотид содержит последовательность из 14-22 нуклеотидов. Например, олигонуклеотид может включать в себя 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида.

[0060] В вариантах осуществления X представляет собой домен, состоящий из последовательности, содержащей один или более модифицированных нуклеотидов, которая имеет длину 3-10 нуклеотидов; Z представляет собой домен, состоящий из последовательности, содержащей один или более модифицированных нуклеотидов, которая имеет длину 3-10 нуклеотидов; а Y представляет собой домен, состоящий из последовательности 2-10 2'-дезоксинуклеозидов, связанных тиофосфатными связями между субъединицами и необязательно одной или двумя фосфодиэфирными связями между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления X имеет длину 5-9 нуклеотидов, Y имеет длину 6-10 нуклеотидов, а Z имеет длину 5-9 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления число нуклеотидов в каждом из X, Y и Z соответственно составляет: 6/6/6, 6/6/7, 6/6/8, 6/7/6, 6/7/7, 6/7/8, 6/8/6, 6/8/7, 6/8/8, 3/10/3, 4/10/4, 5/10/5, 5/10/6, 2/12/2, 3/12/3, 2/14/2, 5/9/5, 5/9/6, 5/8/5, 5/8/6, 5/8/7, 7/5/7, 7/5/8, 7/5/9,7/6/6, 7/6/7, 7/6/8, 7/6/9, 7/7/6, 7/7/7, 7/7/8, 7/7/9, 7/5/7, 7/5/8, 7/5/9, 7/4/7, 7/4/8, 7/4/9, 8/4/7, 8/4/8, 8/4/9, 7/3/7, 7/3/8, 7/3/9, 8/3/7, 8/3/8, 8/3/9, 8/3/10, 9/3/7, 9/3/8, 9/3/9, 9/3/10, 8/2/7, 8/2/8, 8/2/9, 8/2/10, 9/2/7, 9/2/8, 9/2/9, 9/2/10, 10/2/8, 10/2/9, 10/2/10. Каждый домен X и домен Z соответственно содержит последовательность модифицированных нуклеотидов, причем домен имеет длину 4-10 нуклеотидов. Например, домен X и/или домен Z может содержать последовательность из 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов. Один или более из этих нуклеотидов являются модифицированными (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10). Например, в некоторых вариантах осуществления все нуклеотиды в каждом из домена X и/или домена Z являются модифицированными.

[0061] Нуклеотиды доменов X и Z могут быть модифицированными в соответствии с формулами (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IV), (V) и/или (V') в отношении одного или более их нуклеотидных оснований, 2'- и/или 3'-положений на сахаре рибозе и их связей между субъединицами. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления также включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано OMe, а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а также Me или OMe, а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано O-метоксиэтокси, а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления также включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'- и 4'-положения модифицированы связующей группой (как описано в другом месте настоящего документа) с образованием конформационно ограниченного нуклеотида, а 3'-положение представляет собой O или NH. Каждый из этих вариантов осуществления может включать в себя тиофосфатную (или тиофосфорамидатную, в зависимости от 3'-замены) и фосфорамидатную связи между субъединицами.

[0062] Варианты осуществления также включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение представляет собой H, а 3'-положение представляет собой NH. Каждый из этих вариантов осуществления может включать в себя тиофосфорамидатную и/или фосфорамидатную связи между субъединицами.

[0063] В некоторых вариантах осуществления каждый из модифицированных нуклеотидов домена X и домена Z соответственно включает в себя модификацию, независимо выбранную из по меньшей мере одного из 2'-F, 2'-F-N3'→P5', 2'-OMe, 2'-OMe-N3'→P5', 2'-O-метоксиэтокси, 2'-O-метоксиэтокси-N3'→P5', конформационно ограниченных нуклеотидов.

[0064] В некоторых вариантах осуществления модифицированный нуклеотид содержит нуклеозид, представленный следующей формулой (A):

(A),

где A независимо в каждом случае представляет собой NH или O, B независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание, а каждый из R' и R'' независимо в каждом случае выбран из H, F, OH, OMe, OEt, O-метоксиэтокси, а R''' представляет собой H, или R' и R''' вместе образуют мостик из 2-4 атомов с образованием конформационно ограниченного нуклеозида (например, -O-CH₂-, -O-CH(Me)- или -O-(CH₂)₂-).

[0065] В некоторых вариантах осуществления R' выбран из F, OH, -OMe, -OEt, O-метоксиэтокси; R'' представляет собой H или F; а R''' представляет собой H, Me или -OMe. В других вариантах осуществления R'' и R''' представляют собой H; а R' выбран из F, OMe, OEt и O-метоксиэтокси. В некоторых вариантах осуществления A в каждом случае представляет собой NH.

[0066] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеозидов, представленных формулой (A), где A представляет собой NH; B представляет собой G-зажим; R' представляет собой F или OMe, а R'' представляет собой H; или R' представляет собой H, а R'' представляет собой H или F; а R''' представляет собой H.

[0067] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеозидов, представленных формулой (A), где A представляет собой NH; B представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R' и R''' вместе образуют конформационно ограниченный нуклеозид (например, -O-CH₂-, -O-CH(Me)- или -O-(CH₂)₂-); а R'' представляет собой H. В некоторых вариантах осуществления B представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание, выбранное из группы, состоящей из 5-метилцитозина, 2,6-диаминопурина и 5-метилурацила.

[0068] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеозидов, представленных формулой (A), где A представляет собой NH; B представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R' представляет собой F или OMe, R'' представляет собой H, и R''' представляет собой H.

[0069] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеозидов, представленных формулой (A), где A представляет собой NH; B представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R' представляет собой H, R'' представляет собой F, а R''' представляет собой H.

[0070] В некоторых вариантах осуществления домены X и Z имеют формулу (Ix):

(Ix),

причем W независимо в каждом случае представляет собой OR или SR, где R представляет собой H или положительно заряженный противоион; R', R'', R''', A и B соответствуют описанию для формулы (A). В других вариантах осуществления A представляет собой O, а R', R'' независимо представляют собой H или OEt, причем по меньшей мере один из R', R'' представляет собой OEt.

[0071] Например, нуклеотиды X и/или Z могут включать в себя один или более нуклеотидов в таблице A в дополнение к по меньшей мере одному нуклеотиду в каждом из доменов X и Z, причем A представляет собой NH, W представляет собой S, а R' представляет собой MOE.

Таблица A

№ нуклеотида R' R'' R''' A W 1 F H H NH S 2 F H H NH O 3 F H H O S 4 F H H O O 5 H F H NH S 6 H F H NH O 7 H F H O S 8 H F H O O 9 OMe H H NH S 10 OMe H H NH O 11 OMe H H O S 12 OMe H H O O 13 H F H NH S 14 H F H NH O 15 H F H O S 16 H F H O O 17 O-метоксиэтокси H H NH S 18 O-метоксиэтокси H H NH O 19 O-метоксиэтокси H H O S 20 O-метоксиэтокси H H O O 21 H H H NH S 22 H H H NH O 23 OH H H NH S 24 OH H H NH O

25 OH H H O S 26 H OH H NH O 27 H OH H NH S 28 H OEt H NH O 29 H OEt H NH S 30 H OEt H O O 31 H OEt H O S 32 OEt H H NH O 33 OEt H H NH S 34 OEt H H O O 35 OEt H H O S

№ нуклеотида C A W 36 -O-CH₂- NH S 37 -O-CH₂- NH O 38 -O-CH₂- O S 39 -O-CH₂- O O 40 -O-(CH₂)₂- NH S 41 -O-(CH₂)₂- NH O 42 -O-(CH₂)₂- O S 43 -O-(CH₂)₂- O O 44 -O-CH(Me)- NH S 45 -O-CH(Me)- NH O 46 -O-CH(Me)- O S 47 -O-CH(Me)- O O

[0072] В некоторых вариантах осуществления каждый домен X и домен Z независимо содержат два, три или более различных нуклеотидов 1-47.

[0073] Нуклеозиды домена X связаны посредством связей между субъединицами, например N3'→P5' фосфорамидатной, N3'→P5' тиофосфорамидатной, тиофосфатной, фосфодиэфирной связей или их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления домен X связан посредством связей между субъединицами, выбранными из N3'→P5' фосфорамидатной, N3'→P5' тиофосфорамидатной и их комбинаций.

[0074] Домен X химерного олигонуклеотида может включать в себя определенную конструкцию модифицированных нуклеотидов. Например, в некоторых вариантах осуществления домен X содержит один или более конформационно ограниченных нуклеотидов. Конформационно ограниченные нуклеотиды могут включать в себя BNA, например LNA и ENA (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 конформационно ограниченных нуклеотидов). В некоторых вариантах осуществления домен X содержит один или более 2'-F- и/или 2'-OMe-модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления домен X содержит чередующиеся конформационно ограниченные нуклеотиды, например, каждый второй нуклеотид представляет собой конформационно ограниченный нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления домен X содержит один или более 2'-F- и/и/или 2'-OMe-модифицированных нуклеотидов (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 2'-F- и/или 2'-OMe-модифицированных нуклеотидов). В некоторых вариантах осуществления домен X содержит чередующиеся 2'-F- и 2'-OMe-модифицированные нуклеотиды. В вариантах осуществления домен X содержит 2'-F- или 2'-OMe- и конформационно ограниченные нуклеотиды, например, в чередующемся порядке.

[0075] Домен Y содержит последовательность из 2-14 2'-дезоксинуклеотидов. Например, домен Y может содержать последовательность из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 2'-дезоксинуклеотидов. Один или более из 2'-дезоксинуклеозидов могут быть связаны посредством тиофосфатных связей между субъединицами (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 тиофосфатных связей между субъединицами). В некоторых вариантах осуществления каждый из 2'-дезоксинуклеозидов связан посредством тиофосфатной связи между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен Y содержит по меньшей мере одну фосфодиэфирную связь между субъединицами (например, 1, 2 или 3 фосфодиэфирные связи между субъединицами). В других вариантах осуществления домен Y состоит из 2'-дезоксинуклеозидов, связанных тиофосфатными связями между субъединицами и необязательно одной или двумя фосфодиэфирными связями между субъединицами.

[0076] В вариантах осуществления домен Y содержит нуклеотиды, которые индуцируют расщепление РНКазы H.

[0077] В некоторых вариантах осуществления 2'-дезоксинуклеозид, связанный посредством тиофосфатной связи между субъединицами, может быть представлен следующей формулой (B):

(B),

где B независимо в каждом случае представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание. В некоторых вариантах осуществления B представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание, выбранное из группы, состоящей из 5-метилцитозина, 2,6-диаминопурина и 5-метилурацила.

[0078] В других вариантах осуществления 2'-дезоксинуклеозид, связанный посредством тиофосфатной связи между субъединицами, содержит модифицированный 2'-дезоксинуклеозид, который может быть модифицирован так же, как в домене X и Z. Например, модифицированный 2'-дезоксинуклеозид, связанный посредством тиофосфатной связи между субъединицами, может быть представлен следующей формулой (C):

(C),

где B независимо в каждом случае представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание, а каждый из R'' и R''' независимо в каждом случае выбран из H, F, Cl, OH, OMe, Me, O-метоксиэтокси, или R' и R''' вместе образуют мостик из 2-4 атомов с образованием конформационно ограниченного нуклеозида. В некоторых вариантах осуществления B представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание, выбранное из группы, состоящей из 5-метилцитозина, 2,6-диаминопурина и 5-метилурацила.

[0079] Домен Z содержит последовательность модифицированных нуклеотидов и имеет длину 4-10 нуклеотидов. Например, домен Z может содержать последовательность из 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов. Один или более из этих нуклеотидов являются модифицированными (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22). Например, в некоторых вариантах осуществления все нуклеотиды в домене Z являются модифицированными.

[0080] Модифицированные нуклеотиды в домене Z включают в себя, например, модификацию, независимо выбранную из по меньшей мере одного из 2'-F, 2'-F-N3'→P5', 2'-OMe, 2'-OMe-N3'→P5', 2'-OEt-N3'→P5', 2'-O-метоксиэтокси, 2'-O-метоксиэтокси-N3'→P5', конформационно ограниченных нуклеотидов, 2'-OH-N3'→P5' тиофосфорамидата и 2'-OH-N3'→P5' фосфорамидата.

[0081] В некоторых вариантах осуществления модифицированный нуклеотид может включать в себя нуклеозид, представленный формулой (A).

[0082] Нуклеотиды домена Z связаны посредством связей между субъединицами, например N3'→P5' фосфорамидатной, N3'→P5' тиофосфорамидатной, тиофосфатной или фосфодиэфирной связей субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен Z связан посредством N3'→P5' фосфорамидатной, N3'→P5' тиофосфорамидатной связей между субъединицами и их комбинаций.

[0083] Домен Z химерного олигонуклеотида может включать в себя определенную конструкцию модифицированных нуклеотидов. Например, в некоторых вариантах осуществления домен Z содержит один или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более) конформационно ограниченных нуклеотидов (например, BNA, таких как LNA, ENA, каждый из которых может быть необязательно замещен). В некоторых вариантах осуществления домен Z содержит чередующиеся конформационно ограниченные нуклеотиды, например, каждый второй нуклеотид представляет собой конформационно ограниченный нуклеотид (например, BNA, такой как LNA, ENA, каждый из которых может быть необязательно замещен). В некоторых вариантах осуществления домен Z содержит один или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более) 2'-F- и/или 2'-OMe-модифицированных нуклеотидов. Например, некоторые варианты осуществления включают в себя домен Z, который содержит чередующиеся 2'-F- и/или 2'-OMe-модифицированные нуклеотиды, или домен Z содержит чередующиеся 2'-F- и/или 2'-OMe- и конформационно ограниченные нуклеотиды.

[0084]В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды формулы (VI) или (VI') включают в себя 5-метилцитозиновые нуклеотидные основания, но не цитозиновые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды формулы (VI) или (VI') включают в себя 2,6-диаминопуриновые нуклеотидные основания, но не адениновые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды формулы (VI) или (VI') включают в себя 5-метилурациловые нуклеотидные основания, но не урациловые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды формулы (VI) или (VI') включают в себя 2'-OMe- и конформационно ограниченные нуклеотиды и связаны посредством тиофосфатных связей между субъединицами, а модифицированные нуклеотиды включают в себя 5-метилцитозиновые нуклеотидные основания, но не цитозиновые. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды формулы (VI) или (VI') включают в себя 2'-OMe-модифицированные нуклеотиды с 5-метилурациловыми нуклеотидными основаниями, но не урациловыми.

[0085] В некоторых вариантах осуществления химерный олигонуклеотид, представленный формулой (VI) или (VI'), сконструирован в соответствии с по меньшей мере одной из конструкций из таблицы B, причем по меньшей мере одна связь между субъединицами в доменах X и Z представляет собой связь NPS.

Таблица B

Домен X Домен Y Домен Z Число нуклеотидов Связи между субъединицами Замещения нуклеотидного основания Число нуклеотидов Связи между субъединицами Нуклеотидное основание Число нуклеотидов Связи между субъединицами Замещения нуклеотидного основания 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 ps A, G, C, T, U 11 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP, 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим 2 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 9 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 10 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 11 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 12 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 13 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 2 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 3 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 10 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 4 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 9 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 5 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 7 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 6 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP 14 ps A, G, C, T, U 8 np, nps, ps, PO A, G, C, T, U, DAP, 5meC, 5meU, G-зажим, DAP

[0086] В таблице B нуклеотиды в каждом из доменов X и Z могут представлять собой один или более из пронумерованных нуклеотидов из таблицы A. В некоторых вариантах осуществления химерные олигонуклеотиды из таблицы B включают в себя по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более модифицированных нуклеотидов из таблицы A. В некоторых вариантах осуществления все нуклеотиды X и/или Z представляют собой модифицированные нуклеотиды. В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды в таблице B выбраны из некоторых модифицированных нуклеотидов, перечисленных в таблице A, таких как номера нуклеотидов 1-4, или 5-8, или 9-12, или 13-16, или 17-20, или 21-24, или 25-28, или 29-30, или 31-32, или 33. В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды в таблице B выбраны из некоторых модифицированных нуклеотидов, перечисленных в таблице A, таких как номера нуклеотидов 9-12 и 21-28, или 9-12 и 21-24, или 1-4 и 21-28, или 1-4 и 21-24, или 5-8 и 21-28, или 5-8 и 21-24. В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды в таблице B выбраны из одного или двух или трех модифицированных нуклеотидов, перечисленных в таблице A, таких как номера нуклеотидов 29-31, или 31-32, или 33. В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды в таблице B выбраны из некоторых модифицированных нуклеотидов, перечисленных в таблице A, таких как номера нуклеотидов 29, или 31, или 33. Нуклеотиды в домене Y из таблицы B могут включать в себя нуклеотиды формулы B.

[0087] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид из таблицы B может быть конъюгирован на 5'- и/или 3'-конце с лигандной нацеливающей группой или фармакофором.

[0088] В некоторых вариантах осуществления нуклеотидные соединения настоящего описания включают в себя одну из следующих последовательностей: 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' или другие последовательности из таблицы H (ниже).

[0089] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид содержит последовательность из таблицы C. В таблице C X независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание. В некоторых вариантах осуществления каждый X независимо выбран из A, C, G, U, T, 2,6-диаминопурина, 5-Me пиримидина (например, 5-метилцитозина, 5-метилурацила) и G-зажима.

Таблица C

Модифицированная последовательность (5'-3') 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXps-Chol-3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-GalNAc-3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-Chol-3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-GalNAc-3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-Chol-3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-GalNAc-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnps-3-NH₂-X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3-NH₂-X-3 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3-NH₂-X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnps-3-NH₂-X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3-NH₂-X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂-X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂-X-3'

5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂-X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂-X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂–X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂–X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂–X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂–X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂–X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂–X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂–X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3 NH₂-X-3' 5'-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXnps-3-NH₂-X-3'

5'-mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-3' 5'-mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmeXps mX-GalNAc-3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpoGalNAc-3' 5'-mXpsmXpsmXpsmXmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpo GalNAc-3' 5'-mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXps mXpsmXpoGalNAc-3' 5'-mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXps mXpsmXpoGalNAc-3' 5'fXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnps-3-NH₂-fX-3' 5'-fXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnps-3-NH₂–fX-3' 5'-fXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnps-3-NH₂-fX-3' 5'-XnpXnpXnpXnpXnpXnpXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpXnpXnpXnpXnpXnpXnp-3 NH₂–X-3' 5'-XnpsfXnpsfXnpsXnpsfXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsXnpsfXnpsfXnpsXnpsfXnpsXnps-3 NH₂–fX-3' 5'-XnpfXnpfXnpXnpfXnpXnpXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpXnpfXnpfXnpXnpfXnpXnp-3 NH₂-fX-3'

5'XnpsXfXnpsXfXnpsXnspXfXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXfXnpsXnpsXfXnpsXfXnpsXnpsXfXnpsXnpsXfX-3' 5'XnpXfXnpXfXnpXnpXfXnpXnpXpsXpsXpsXpsXpsXpsXfXnpXnpXfXnpXfXnpXnpXfXnpXnpXfX-3' 5'-XnpXfXnpXfXnpXnpXfXnpXnpXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpXfXnpXfXnpXnpXfXnpXnpXfX-3' 5mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-GalNAc-3 5'-mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX 3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX 3' 5'-mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmeXpsmX 3' 5'mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmeXpsmX 3' 5'-mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX 3' 5'-mXpsmXpsmXpsmXmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX 3' 5'-mXpsmXpsmXpsmXmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX 3' 5'GalNAcNHC6-psmXpsm5meXpsm5meXpsmXpsm5meXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsmXpsmXpsm5meXpsmXpsmX 3' 5'GalNAcNHC6-psm5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXps5meXps5meXpsXps5meXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX 3'

5'GalNAcNHC6-psmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsXps5meXps5meXps5meXpsm5meXpsmXpsmXpsmXpsmX 3' 5'-GalNAcNHC6-psmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXps5meXpsXps5meXps5meXps5meXps5meXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsm5meXpsmX 3' 5'GalNAcNHC6-psmXpsmXpsm5meXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX 3' mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX/GalNAc/ mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX/GalNAc/ mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX/3CholTEG/ mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX/3CholTEG/ mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX/3CholTEG/ 5'mXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXp5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsm5meX-3 5'mXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXps5mmX-CholesXerol-3' 5'mXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXp5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXps5mmX-TEG-CholesXerol-3' 5'mXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXps5mmX-Tocopherol-3'

5'mXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXps5mmX-TEG-Tocopherol-3' 5'mXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXps5mmX-GalNAc-3' 5'mXpsm5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsm5meX-3' 5'mXpsm5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsm5meX-po-Chol-3' 5'mXpsm5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsm5meX-po-Tocopherol-3' 5'mXpsm5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsm5meX-po-GalNAc-3' 5'mXpsm5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsm5meX-3' 5'mXpsm5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsm5meX-po-Chol3' 5'mXpsm5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsm5meX-po-Tocopherol-3' 5'mXpsm5meXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5meXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmXpsm5meX-po-GalNAc-3' 5-mXps2-4-OXH₂-XpsmXps 2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-Xps mX-3 5-mXps2-4-OXH₂-XpsmXps 2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH₂-Xps mX-Chol-3 5-mXps2-4-OXH₂-XpsmXps 2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH_2-Xps mX-XoXo-3 5-mXps2-4-OXH₂-XpsmXps 2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-Xps mX-GalNAc-3 5-mXps2-4-OXH₂-XpsmXps 2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-Xps mX-3 5-mXps2-4-OXH₂-XpsmXps 2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH₂-Xps mX-Chol-3 5-mXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH₂-Xps mX-XoXo-3 5-mXps2-4-OXH₂-XpsmXps 2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH_2-XpsmXps2-4-OXH₂-Xps mX-GalNAc-3 5-mXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsmXps2-4-OXH₂-XpsmX-3 5-dXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXn–3 5-dXnpsfXnpsXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXn 3' 5fXnpsXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXn-3' 5-fXnpsXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXn-3' 5'dXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnp-3' 5'dXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnp-3' 5'dXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpmXnpmXnpmXnpmXnp-3' 5'dXnpmXnpmXnpmXnpmXnpXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnp-3' 5'dXnpmXnpmXnpmXnpmXnpXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpmXnpmXnpmXnpmXnpmXnp-3' mXnpsmoeXnpsmoeXnpsmXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmXnpsmoeXnpsmXnpsmoeXnp-C6-NH-GalNAc-6 moeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeX-po-GalNAc2 mXnpsmoeXnpsmoeXnpsmXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmXnpsmoeXnpsmXnpsmoeXnpo-C6-NH-GalNAc-6 GalNAc 2pofXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXn GalNAc2moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXn moeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeX-GalNAc2 GalNAc2moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXn GalNacmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXn GalNAc2-mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXn GalNac6NHC6-moeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeX GalNAc2-mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXn GalNAc2-etoXnpsetoXnpsetoXnpsetoXnpsetoXnpsXps XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsetoXnpsetoXnpsetoXnpsetoXnpsetoXn GalNAc2-moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXn moeXpsmoemXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5mXpsXpsXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoemX moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXn mXps5mmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps5mXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXps5mmX mXnpsmXnpsmXnpsmXnps mXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXn GalNAc2-moeXnpsmoeXnpsmoeXnps moeXnpsmoeXnpsXps XpsXpsXps XpsXpsXps XpsXpsXps moeXnpsmoeXnpsmoeXnps moeXnpsmoeXn GalNAc6NHC6moeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeX 5'moeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeX-GalNAc2 GalNAc2-mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXn' mXpsmXpsmXpsmXpsmXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXpsmXpsmXpsmXpsmX-GalNAc GalNAc2-moeXnpsmoeXnpsmoeXnps moeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps XpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnps moeXnpsmoeXn moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnp-C6-NH-GalNAc6 GalNAc2-moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnps moeXnpsmoeXn GalNAc-XnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXps XpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnpsXn GalNAc-mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXn GalNAc-fXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnps-3nh2-fX GalNAc-afXnpsafXnpsafXnpsafXnpsafXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsafXnpsafXnpsafXnpsafXnpsafXn GalNAc-dXnpsXnpsXnpsXnpsXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXnpsXnpsXnpsXnps-3nh2-X GalNAc-mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps XpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXn GalNAc-fXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnps-3nh2-fX GalNAcmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXps5MeXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXn GalNAcmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXps5MeXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXn moeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeXpsmoeX moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXn fXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfX-C6-NH-GalNAc6 fXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnpsfXnp-C6-NH-GalNAc6

mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnps mXnpsmXnp-C6-NH-GalNAc6 mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmX-C6-NH-GalNAc6 moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnp-C6-NH-GalNAc6 moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeX-C6-NH-GalNAc6 GalNAc2-moeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps XpsXpsXpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXnpsmoeXn GalNAc2-etoXnpsetoXnpsetoXnpsetoXnpsetoXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps etoXnpsetoXnpsetoXnps etoXnpsetoXn mXnpsmXnps2-4-OCH₂XnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps2-4-OCH₂XnpsmXnpsmXnpsmXnps3-NH₂mX mXnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsmXnps3-NH₂mX mXnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnps2-4OCH₂CH₂XnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsmXnps3-NH₂mX mXnpsmXnpsmXnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsmXnps3-NH₂mX 5-mXnpsmCnpsmXnpsmXnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps mXnpsmXnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnps3-NH₂mX-3 mXnpsmXnpsmXnpsmCnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnps2-4-OCH₂ CH₂XnpsmXnpsmXnps3-NH₂mX mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps2-4-OCH₂ CH₂XnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsmXnps3-NH₂mX 2-4OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnps2-4OCH₂CH₂Xnps3-NH₂mX 2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnps2-4OCH₂CH₂XnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnps2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnps2-4OCH₂CH₂Xnps3-NH₂mX 2-4OCH₂CH₂XnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnps3-NH₂mX 2-4OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnps2-4-OCH₂CH₂XnpsmXnpsm2-4OCH₂CH₂Xnps3-NH₂mX 2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXps mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsm2-4 OCH₂CH₂Xnps3-NH₂mX

mXnpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnpsmXnpsmXnps3-NH₂mX mXnps2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnps2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnps2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnps3-NH₂mX 2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnps2-4OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnpsmXnps2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnps2-OCH₂CH₂3-NH₂X 2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnps2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnpsmCnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnps2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnpsmXnps2-4 OCH₂CH₂Xnps3-NH₂mX mXnps2-4OCH₂CH₂XnpsmXnps2-4 OCH₂CH₂ XnpsmXnpsmXnpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsXpsmXnps2-4 OCH₂CH₂XnpsmXnpsmXnps2-4OCH₂CH₂XnpsmXnps3-NH₂mX

[0090] В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов домена модифицирован. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов домена имеет одинаковые модификации. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов доменов X и Z модифицирован. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов доменов X и Z имеет одинаковые модификации. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов домена модифицирован 2' MOE. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов доменов X и Z модифицирован 2' MOE. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов домена модифицирован 2' OMe. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов доменов X и Z модифицирован 2' OMe. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов домена модифицирован 2' OEt. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов доменов X и Z модифицирован 2' OEt. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов доменов X и Z связан посредством связи NPS. В вариантах осуществления домены X и Z имеют одинаковое число нуклеотидов. В вариантах осуществления каждый из доменов X и Z имеет 4-8 нуклеотидов. В вариантах осуществления каждый из доменов X и Z имеет 5-6 нуклеотидов. В вариантах осуществления каждый из доменов X и Z имеет 5 нуклеотидов. В вариантах осуществления домен Y имеет по меньшей мере в два раза больше нуклеотидов, чем каждый из доменов X и Z. В вариантах осуществления домен Y имеет 8-12 нуклеотидов. В вариантах осуществления домен Y имеет 10 нуклеотидов. В вариантах осуществления каждый из нуклеотидов домена Y связан посредством связи PS. В вариантах осуществления по меньшей мере одно нуклеотидное основание олигонуклеотида модифицировано. В вариантах осуществления по меньшей мере одно нуклеотидное основание, смежное с 3' концом олигонуклеотида, модифицировано. В вариантах осуществления по меньшей мере одно нуклеотидное основание в домене Z олигонуклеотида модифицировано. В вариантах осуществления по меньшей мере одно нуклеотидное основание в домене Y олигонуклеотида модифицировано.

[0091]В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид, представленный формулой (VI) или (VI'), выбран из таблицы D. В других вариантах осуществления олигонуклеотид, представленный формулой (VI) или (VI'), имеет последовательность, которая отличается от химерного олигонуклеотида из таблицы D одним модифицированным нуклеотидом. В других вариантах осуществления олигонуклеотид, представленный формулой (VI) или (VI'), имеет последовательность, которая отличается от олигонуклеотида из таблицы D на 1, 2, 3 или 4 нуклеотида. Конкретные варианты осуществления химерного олигонуклеотида, представленный формулой (VI) или (VI'), перечислены ниже в таблице D.

Таблица D

Ид. номер Модифицированная последовательность (5'3') 101 5'-mGpsmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGpsmCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsmC-3' 102 5'-mGpsmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGpsmCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsmCps-Chol-3' 103 5'-mGpsmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGpsmCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsmC-GalNAc-3' 104 mGpsmApsmUpsmUpsmApsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG

105 5'-mGpsmApsmUpsmUpsmApsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG-Chol-3' 106 5'-mGpsmApsmUpsmUpsmApsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG-GalNAc-3' 107 5'-mGpsmApsmUpsmUpsmApsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG 108 5'-mGpsmApsmUpsmUpsmApsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG-Chol-3' 109 5'-mGpsmApsmUpsmUpsmApsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG-GalNAc-3' 110 5'mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG-3' 111 5'mGpsmApsmUpsmUpsmApsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG-3' 112 5'mGpsmApsmUpsmUpsmApsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG-3' 113 5'mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG-3' 114 5'mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG-3' 115 5'mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG-3' 116 5'mGpsmApsmUpsmUpsmApsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG-3' 117 5'mGpsmApsmUpsmUpsmApsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG-3' 118 5'mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG-3' 119 5'mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG-3' 120 5'-mGpsmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGpsmCpsmGpsmApsmDAPpsmGpsmUpsmGpsmC-3' 121 5'mGpsmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGpsmCpsmGpsmDAPpsmDAPpsmGpsmUpsmGpsmC-3' 122 5'mGpsmCpsmApsmGpsmDAPpsmGpsGpsTpsGpsApsApsGpsmCpsmGpsmDAPpsmDAPpsmGpsmUpsmGpsmC-3' 123 5'mGpsmCpsmDAPpsmGpsmDAPpsmGpsGpsTpsGpsApsApsGpsmCpsmGpsmDAPpsmDAPpsmGpsmUpsmGpsmC-3' 124 5'-CnpsGnpsTnpsGnpsCnpsApsGpsApsGpsGpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnps-3-NH₂-G-3' 125 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGnpsCnpsGnpsAnpsAnps-3-NH₂-G-3 126 5'-CnpsGnpsAnpsCnpsGnpsTnpsGpsCpsApsGpsApsGpsGnpsTnpsGnpsAnpsAnpsGnps-3-NH_2-C-3' 127 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3-NH_2-C-3' 128 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsApsGpsGpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnps-3-NH₂-G-3' 129 5'-CnpsGnpsTnpsGnpsCnpsApsGpsApsGpsGpsTnpsGnpsAnpsAnpsGnps-3-NH₂-C-3' 130 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGpsApsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH_2-C-3' 131 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH_2-C-3' 132 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGnpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH_2-C-3'

133 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsApsApsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' 134 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsAnpsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' 135 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' 136 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGpsApsApsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' 137 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTpsGpsApsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' 138 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' 139 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' 140 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTpsGpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' 141 5'-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' 142 5'mApsmApsmGpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGps5mCpsGps5mCps5mCps5mCps5mmCpsmGpsmUpsmGpsmG-3' 143 5'mGpsmGpsmUpsmGpsmApsApsGps5mCpsGpsApsApsGpsTpsGps5mCpsmAps5mmCpsmAps5mmCpsmG-3' 144 5'-5mmCpsmGpsmUpsmGps5mmCpsApsGpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mmCpsmGpsmApsmApsmG-3' 145 5'-mApsmGpsmApsmGpsmGpsTpsGpsApsApsGps5mCpsGpsApsApsGpsmUpsmGps5mmCpsmAps5mmC-3' 146 5'mUpsmGpsmGps5mmCpsmAps5mCpsTpsApsGpsTpsApsApsAps5mCpsTpsmGpsmApsmGps5mmCps5mmC-3' 147 5'5mmCpsmUpsmApsmGpsmGpsApsGpsTpsTps5mCps5mCpsGps5mCpsApsGpsmUpsmApsmUpsmGpsmG-3' 148 5'mApsmGpsmApsmGpsmGpsTpsGps5mCpsGps5mCps5mCps5mCps5mCpsGpsTpsmGpsmGpsmUps5mmCpsmG-3' 149 5'mGpsmApsmGpsmGpsmUpsGps5mCpsGps5mCps5mCps5mCps5mCpsGpsTpsGpsmGpsmUps5mmCpsmGpsmG-3' 150 5'mGpsmApsmApsmApsmGps5mCps5mCps5mCpsTpsAps5mCpsGpsApsAps5mCps5mmCpsmAps5mmCpsmUpsmG-3' 151 5'mGpsmUpsmUps5mmCps5mmCpsGps5mCpsApsGpsTpsApsTpsGpsGpsApsmUps5mmCpsmGpsmGps5mmC-3' 152 5'mUps5mmCps5mmCpsmGps5mmCpsApsGpsTpsApsTpsGpsGpsApsTps5mCpsmGpsmGps5mmCpsmApsmG-3' 153 5'mAps5mmCps5mmCpsmAps5mmCpsTpsGpsApsAps5mCpsApsApsApsTpsGpsmGps5mmCpsmAps5mmCpsmU-3' 154 5'-mUpsmGps5mmCpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mCpsGpsmApsmApsmGpsmUpsmG-3' 155 5'mAps5mmCpsmUpsmGpsmApsAps5mCpsApsApsApsTpsGpsGps5mCpsAps5mmCpsmUpsmApsmGpsmU-3' 156 5'mApsmGpsmUps5mmCps5mmCpsAps5mCps5mCpsAps5mCpsGpsApsGpsTps5mCpsmUpsmApsmGpsmAps5mmC-3' 157 5'5mmCpsmAps5mmCpsmUpsmGpsApsAps5mCpsApsApsApsTpsGpsGps5mCpsmAps5mmCpsmUpsmApsmG-3' 158 5'-5mmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mCpsGpsApsApsmGpsmUpsmGps5mmCpsmA-3' 159 5'mApsmApsmGpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5meCps5meCps5memCpsmGpsmUpsmGpsmG-GalNAc-3' 160 5'mGpsmGpsmUpsmGpsmApsApsGps5meCpsGpsApsApsGpsTpsGps5mCpsmAps5memCpsmAps5memeCps mG-GalNAc-3' 161 5'mUpsmGpsmGps5memCpsmAps5meCpsTpsApsGpsTpsApsApsAps5meCpsTpsmGpsmApsmGps5memCps5memCpoGalNAc-3' 162 5'5memCpsmUpsmApsmGmGpsApsGpsTpsTps5meCps5meCpsGps5meCpsApsGpsmUpsmApsmUpsmGpsmGpoGalNAc-3' 163 5'-mApsmGpsmApsmGpsmGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5meCps5meCps5meCpsGpsTpsmGpsmGpsmUps 5memCpsmGpoGalNAc-3' 164 5'-mUps5memCps5memCpsmGps5memCpsApsGpsTpsApsTpsGpsGpsApsTps5meCpsmGpsmGps5memCps mApsmGpoGalNAc-3' 165 5'mUpsmGps5memCpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpoGalNAc-3' 166 5'mApsmGpsmUps5memCps5memCpsAps5meCps5meCAps5meCpsGpsApsGpsTps5meCpsmUpsmApsmGps mAps5memCpoGalNAc-3' 167 5'-fGnpsfCnpsfAnpsfGnpsfAnpsfGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsfCnpsfGnpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnpsfGnps-3-NH₂-fC-3' 168 5'-fGnpsfCnpsfAnpsfGnpsfAnpsfGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsfGnpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnpsfGnps-3-NH₂-fC-3' 169 5'-fGnpsfCnpsfAnpsfGnpsfAnpsfGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnpsfGnps-3-NH₂-fC-3' 170 5'-GnpCnpAnpGnpAnpGnpGpsTpsGpsApsApsGpsCnpGnpAnpAnpGnpTnpGnp-3 NH₂-C-3' 171 5'-GnpsfCnpsfAnpsGnpsfAnpsGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsfCnpsGnpsfAnpsfAnpsGnpsfTnpsGnps-3 NH₂-fC-3' 172 5'-GnpfCnpfAnpGnpfAnpGnpGpsTpsGpsApsApsGpsfCnpGnpfAnpfAnpGnpfTnpGnp-3 NH₂-fC-3' 173 5'GnpsafCnpsafAnpsGnspafAnpsGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsafCnpsGnpsafAnpsafAnpsGnpsafUnpsGnpsafC-3' 174 5'-GnpafCnpafAnpGnpafAnpGnpGpsTpsGpsApsApsGpsafCnpGnpafAnpafAnpGnpafUnpGnpafC-3' 175 5'-GnpafCnpafAnpGnpafAnpGnpGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGnpafAnpafAnpGnpafUnpGnpafC-3' 176 5-mGpsmCpsmUpsmCpsmCpsmApsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsApsmUpsmApsmApsmGpsmGpsmG-GalNAc-3 177 5'mApsmApsmGpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGps5mCpsGps5mCps5mCps5mCps5mmCpsmGpsmUpsmGpsmG-3' 178 5'mGpsmGpsmUpsmGpsmApsApsGps5mCpsGpsApsApsGpsTpsGps5mCpsmAps5mmCpsmAps5mmCpsmG-3' 179 5-5mmCpsmGpsmUpsmGps5mmCpsApsGpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mmCpsmGpsmApsmApsmG-3' 180 5'mGpsmUpsmGpsmApsmApsGps5mCpsGpsApsApsGpsTpsGps5mCpsAps5mmCpsmAps5mmCpsmGpsmG-3' 181 5'-mApsmGpsmApsmGpsmGpsTpsGpsApsApsGps5mCpsGpsApsApsGpsmUpsmGps5mmCpsmAps5mmC-3' 182 5'mUpsmGpsmGps5mmCpsmAps5mCpsTpsApsGpsTpsApsApsAps5mCpsTpsmGpsmApsmGps5mmCps5mmC-3' 183 5'5mmCpsmUpsmApsmGpsmGpsApsGpsTpsTps5mCps5mCpsGps5mCpsApsGpsmUpsmApsmUpsmGpsmG-3' 184 5'-mGps5mmCpsmApsmGpsmApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mCpsGpsApsmApsmGpsmUpsmGps5mmC-3' 185 5'mApsmGpsmApsmGpsmGpsTpsGps5mCpsGps5mCps5mCps5mCps5mCpsGpsTpsmGpsmGpsmUps5mmCpsmG-3' 186 5'mGpsmApsmGpsmGpsmUpsGps5mCpsGps5mCps5mCps5mCps5mCpsGpsTpsGpsmGpsmUps5mmCpsmGpsmG-3' 187 5'mGpsmApsmApsmApsmGps5mCps5mCps5mCpsTpsAps5mCpsGpsApsAps5mCps5mmCpsmAps5mmCpsmUpsmG-3' 188 5'mGpsmUpsmUps5mmCps5mmCpsGps5mCpsApsGpsTpsApsTpsGpsGpsApsmUps5mmCpsmGpsmGps5mmC-3' 189 5'mUps5mmCps5mmCpsmGps5mmCpsApsGpsTpsApsTpsGpsGpsApsTps5mCpsmGpsmGps5mmCpsmApsmG-3' 190 5'mAps5mmCps5mmCpsmAps5mmCpsTpsGpsApsAps5mCpsApsApsApsTpsGpsmGps5mmCpsmAps5mmCpsmU-3' 191 5'-mUpsmGps5mmCpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mCpsGpsmApsmApsmGpsmUpsmG-3' 192 5'mAps5mmCpsmUpsmGpsmApsAps5mCpsApsApsApsTpsGpsGps5mCpsAps5mmCpsmUpsmApsmGpsmU-3' 193 5'mApsmGpsmUps5mmCps5mmCpsAps5mCps5mCpsAps5mCpsGpsApsGpsTps5mCpsmUpsmApsmGpsmAps5mmC-3' 194 5'5mmCpsmAps5mmCpsmUpsmGpsApsAps5mCpsApsApsApsTpsGpsGps5mCpsmAps5mmCpsmUpsmApsmG-3' 195 5'-5mmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mCpsGpsApsApsmGpsmUpsmGps5mmCpsmA-3' 196 5'mApsmApsmGpsmApsmGpsmApsGpsGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5meCps5memCps5memCpsmGpsmUpsmGpsmG 3' 197 5'mApsmApsmGpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5memCps5memCps5memCpsmGpsmUpsmGpsmG 3' 198 5'mGpsmGpsmUpsmGpsmApsmApsGps5meCpsGpsApsApsGpsTpsGps5memCpsmAps5memCpsmAps5memeCpsmG 3' 199 5'mGpsmGpsmUpsmGpsmApsmApsmGps5meCpsGpsApsApsGpsTpsGps5memCpsmAps5memCpsmAps5memeCpsmG 3' 200 5'mUpsmGpsmGps5memCpsmAps5memCpsTpsApsGpsTpsApsApsAps5meCpsTpsmGpsmApsmGps5memCps5memC 3' 201 5'mUpsmGpsmGps5memCpsmAps5meCpsTpsApsGpsTpsApsApsAps5meCpsTpsmGpsmApsmGps5memCps5memC 3' 202 5'5memCpsmUpsmApsmGmGpsmApsGpsTpsTps5meCps5meCpsGps5meCpsApsmGpsmUpsmApsmUpsmGpsmG 3' 203 5'5memCpsmUpsmApsmGmGpsmApsmGpsTpsTps5meCps5meCpsGps5meCpsApsmGpsmUpsmApsmUpsmGpsmG 3' 204 5'GalNAcNHC6psmUpsm5meCpsm5meCpsmGpsm5meCpsApsGpsTpsApsTpsGpsGpsApsTps5meCpsmGpsmGpsm5meCpsmApsmG 3' 205 5'GalNAcNHC6psm5meCpsmUpsmApsmGpsmGpsApsGpsTpsTps5meCps5meCpsGps5meCpsApsGpsmUpsmApsmUpsmGpsmG 3' 206 5'GalNAcNHC6psmApsmApsmGpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5meCps5meCpsm5meCpsmGpsmUpsmGpsmG 3' 207 5' GalNAcNHC6psmApsmGpsmApsmGpsmGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5meCps5meCps5meCpsGpsTpsmGpsmGpsmUpsm5meCpsmG 3' 208 5' GalNAcNHC6psmUpsmGpsm5meCpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsGpsmApsmApsmGpsmUpsmG 3' 209 mGpsmCpsmUpsmCpsmCpsmApsmApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsmApsmUpsmApsmApsmGpsmG 210 mGpsmCpsmUpsmCpsmCpsmApsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsmApsmUpsmApsmApsmGpsmG 211 mGpsmCpsmUpsmCpsmCpsmApsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsApsmUpsmApsmApsmGpsmGpsmG 212 mGpsmCpsmUpsmCpsmCpsmApsmApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsmApsmUpsmApsmApsmGpsmG/GalNAc/ 213 mGpsmCpsmUpsmCpsmCpsmApsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsmApsmUpsmApsmApsmGpsmG/GalNAc/ 214 mGpsmCpsmUpsmCpsmCpsmApsmApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsmApsmUpsmApsmApsmGpsmG/3CholTEG/ 215 mGpsmCpsmUpsmCpsmCpsmApsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsmApsmUpsmApsmApsmGpsmG/3CholTEG/ 216 mGpsmCpsmUpsmCpsmCpsmApsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsApsmUpsmApsmApsmGpsmGpsmG/3CholTEG/ 217 5'mGps5mmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGp5mmCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsm5meC-3 218 5'mGps5mmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mmCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGps5mmC-Cholesterol-3' 219 5'mGps5mmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGp5mmCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGps5mmC-TEG-Cholesterol-3' 220 5'mGps5mmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mmCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGps5mmC-Tocopherol-3' 221 5'mGps5mmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mmCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGps5mmC-TEG-Tocopherol-3' 222 5'mGps5mmCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mmCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGps5mmC-GalNAc-3' 223 5'mGpsm5meCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsm5meC-3' 224 5'mGpsm5meCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsm5meC-po-Chol-3' 225 5'mGpsm5meCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsm5meC-po-Tocopherol-3' 226 5'mGpsm5meCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsmGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsm5meC-po-GalNAc-3' 227 5'mGpsm5meCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsm5meC-3' 228 5'mGpsm5meCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsm5meC-po-Chol-3' 229 5'mGpsm5meCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsm5meC-po-Tocopherol-3' 230 5'mGpsm5meCpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsGpsmApsmApsmGpsmUpsmGpsm5meC-po-GalNAc-3' 231 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH_2-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH_2-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-3 232 5-mGps2-4-OCH_2-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-Chol-3 233 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH_2-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH_2-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-Toco–3 234 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-GalNAc-3 235 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-3 236 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH_2-GpsmAps2-4-OCH_2-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH_2-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-Chol-3 237 5-mGps2-4-OCH_2-(5m)CpsmAps 2-4-OCH_2-GpsmAps2-4-OCH_2-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH_2-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-Toco–3 238 5-mGps2-4-OCH_2-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH_2-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH_2-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-GalNAc-3 239 5-mGps2-4-OCH_2-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-3 240 5-dTnpsGnpsCnpsAnpsGnpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAnpsAnpsGnpsTnpsGn-3 241 5-dTnpsfGnpsCnpsfAnpsfGnpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnpsfGn 3' 242 5-fGnpsCnpsfAnpsfGnpsfAnpsfGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCnpsfGnpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnpsfGnpsCn-3' 243 5-fGnpsCnpsfAnpsfGnpsfAnpsfGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnpsfGnpsCn-3' 244 5'dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpmGnpGpsTpsGpsApsApsGpsmCnpmGnpmAnpmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' 245 5'-dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpmGnpGpsTpsGpsApsApsGpsCpsmGnpmAnpmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' 246 5'-dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpmGnpGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsmAnpsmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' 247 5'-dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsmGnpmAnpmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' 248 5'-dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsmAnpmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' 249 GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsG 250 GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnpsC 251 CnpsGnpsTnpsGnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsAnpsAnpsGnpsCnpsG 252 CnpsGnpsTnpsGnpsCnpsApsGpsApsGpsGpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnpsG 253 GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsG 254 CnpsGnpsAnpsCnpsGnpsTnpsGpsCpsApsGpsApsGpsGnpsTnpsGnpsAnpsAnpsGnpsC 255 GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnpsC 256 GnpsCnpsAnpsGnpsApsGpsGpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnpsG 257 CnpsGnpsTnpsGnpsCnpsApsGpsApsGpsGpsTnpsGnpsAnpsAnpsGnpsC 258 mGnpsmoeCnpsmoeAnpsmGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmoeAnpsmGnpsmoeUnpsmGnpsmoeCnp-C6-NH-GalNAc6 259 moeGps(5me)moeCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5me)CpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGps(5me)moeC-po-GalNAc2

260 mGnpsmoeCnpsmoeAnpsmGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5me)CpsGpsApsmoeAnpsmGnpsmoeUnpsmGnpsmoeCnpo-C6-NH-GalNAc-6 261 GalNAc2pofGnpsfCnpsfAnpsfGnpsfAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5me)CpsGpsApsfAnpsfGnpsfUnpsfGnpsfCn 262 GalNAc2moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCn 263 moeGps(5me)moeCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5me)CpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGps(5me)moeC-GalNAc2 264 GalNac2moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCn 265 GalNacmoeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCn 266 GalNAc2mGnpsmCnpsmAnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCn 267 GalNac6NHC6moeGps(5m)moeCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGps(5m)moeC 268 GalNAc2mGnpsmCnpsmAnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmAnpsmGnpsmUnpsmGnpsmCn 269 GalNAc2etoGnps(5m)etoCnpsetoAnpsetoGnpsetoAnpsGps GpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsetoAnpsetoGnpsetoTnpsetoGnps(5m)etoCn 270 GalNAc2moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmAnpsmGnpsmUnpsmGnpsmCn 271 moeGpsmoemCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mCpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGpsmoemC 272 moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCn 273 mGps5mmCpsmApsmGpsmApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5mCpsGpsApsmApsmGpsmUpsmGps5mmC 274 mGnpsmCnpsmAnpsmGnps mAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmAnpsmGnpsmUnpsmGnpsmCn

275 GalNAc2-moeGnpsmoeCnpsmoeAnps moeGnpsmoeAnpsGps GpsTpsGps ApsApsGps (5m)CpsGpsAps moeAnpsmoeGnpsmoeUnps moeGnpsmoeCn 276 GalNac6NHC6moeGps(5m)moeCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGps(5m)moeC 277 5'moeGps(5m)moeCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGps(5me)moeC-GalNAc2 278 GalNAc2mGnpsmCnpsmAnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmAnpsmGnpsmUnpsmGnpsmCn' 279 mGps(5m)mCpsmApsmGpsmApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmApsmGpsmUpsmGps(5m)mC-GalNAc 280 GalNAc2moeGnpsmoeCnpsmoeAnps moeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps (5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnps moeGnpsmoeCn 281 moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCnp-C6-NH-GalNAc6 282 GalNAc2moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnps moeGnpsmoeCn 283 GalNAc-GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGps GpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsAnpsGnpsTnpsGnpsCn 284 GalNAcmGnpsmCnpsmAnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmAnpsmGnpsmUnpsmGnpsmCn 285 GalNAc-fGnpsfCnpsfAnpsfGnpsfAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsfAnpsfGnpsfUnpsfGnps-3nh2-fC 286 GalNAcafGnpsafCnpsafAnpsafGnpsafAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsafAnpsafGnpsafTnpsafGnpsafCn 287 GalNAc-dTnpsGnpsCnpsAnpsGnpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAnpsAnpsGnpsTnps-3nh2-G

288 GalNAc-mUnpsmGnpsmCnpsmAnpsmGnpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCps GpsmAnpsmAnpsmGnpsmUnpsmGn 289 GalNAc-fUnpsfGnpsfCnpsfAnpsfGnpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnps-3nh2-fG 290 GalNAcmGnpsmCnpsmUnpsmCnpsmCnpsApsApsApsTpsTps5MeCpsTpsTpsTpsApsmUnpsmAnpsmAnpsmGnpsmGnpsmGn 291 GalNAcmoeGnpsmoeCnpsmoeUnpsmoeCnpsmoeCnpsApsApsApsTpsTps5MeCpsTpsTpsTpsApsmoeUnpsmoeAnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeGnpsmoeGn 292 moeGps(5m)moeCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGps(5m)moeC 293 moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCn 294 fGnps(5m)fCnpsfAnpsfGnpsfAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsfAnpsfGnpsfTnpsfGnpsfC-C6-NH-GalNac6 295 fGnpsfCnpsfAnpsfGnpsfAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsfAnpsfGnpsfUnpsfGnpsfCnp-C6-NH-GalNAc6 296 mGnpsmCnpsmAnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsAps mAnpsmGnpsmUnps mGnpsmCnp-C6-NH-GalNAc6 297 mGnpsmCnpsmAnpsmGnpsmAnpsGpGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsAps mAnpsmGnpsmUnpsmGnpsmC-C6-NH-GalNAc6 298 moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGps GpsTpsGps ApsApsGps (5m)CpsGpsAps moeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCnp-C6-NH-GalNAc6 299 moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnps(5m)moeC-C6-NH-GalNAc6 300 GalNAc2-moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGps ApsApsGps (5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCn 301 GalNAc2-etoGnpseto(5m)CnpsetoAnps etoGnpsetoAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps (5m)CpsGpsAps etoAnpsetoGnpsetoTnps etoGnpseto(5m)Cn 302 mGnpsmCnps2-4-OCH₂AnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAps2-4-OCH₂AnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC

303 mGnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC 304 mGnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnps2-4OCH₂CH₂AnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC 305 mGnpsmCnpsmAnpsmGnps2-4-OCH₂CH₂AnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC 306 5-mGnpsmCnpsmUnpsmCnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTps mAnpsmUnpsmAnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmGnps3-NH₂mG-3 307 mGnpsmCnpsmUnpsmCnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTps2-4-OCH₂CH₂AnpsmUnpsmAnps2-4-OCH₂ CH₂AnpsmGnpsmGnps3-NH₂mG 308 mGnpsmCnpsmUnpsmCnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTps2-4-OCH₂ CH₂AnpsmUnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmAnpsmGnpsmGnps3-NH₂mG 309 24OCH₂CH₂GnpsmCnpsmAnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmAnpsmGnpsmUnps2-4OCH₂CH₂Gnps3-NH₂mC 310 2-4 OCH₂CH₂GnpsmCnpsmAnps2-4OCH₂CH₂GnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmAnps2-4 OCH₂CH₂GnpsmUnps2-4OCH₂CH₂Gnps3-NH₂mC 311 2-4OCH₂CH₂GnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmAnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC 312 2-4OCH₂CH₂GnpsmCnpsmUnpsmCnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsmAnpsmUnpsmAnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsm2-4OCH₂CH₂Gnps3-NH₂mG 313 2-4 OCH₂CH₂GnpsmCnpsmUnpsmCnpsmCnpsmAnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTps mAnpsmUnpsmAnpsmAnpsmGnpsm2-4 OCH₂CH₂Gnps3-NH₂mG 314 mGnpsmCnpsmAnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmAnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC 315 mGnps2-4 OCH₂CH₂(5me)CnpsmAnps2-4 OCH₂CH₂GnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmAnpsmGnps2-4 OCH₂CH₂TnpsmGnps3-NH₂mC 316 2-4 OCH₂CH₂GnpsmCnps2-4OCH₂CH₂AnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsmAnpsmGnps2-4 OCH₂CH₂TnpsmGnps2-OCH₂CH₂3-NH₂(5me)C 317 2-4 OCH₂CH₂GnpsmCnps2-4 OCH₂CH₂TnpsmCnpsmCnpsmAnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsmAnps2-4 OCH₂CH₂TnpsmAnpsmAnpsmGnps2-4 OCH₂CH₂Gnps3-NH₂mG 318 mGnps2-4OCH₂CH₂(5me)CnpsmUnps2-4 OCH₂CH₂ (5me)CnpsmCnpsmAnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTpsmAnps2-4 OCH₂CH₂TnpsmAnpsmAnps2-4OCH₂CH₂GnpsmGnps3-NH₂mG

[0092] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид, представленный формулой (VI) или (VI'), выбран из приведенной выше таблицы C. В других вариантах осуществления олигонуклеотид, представленный формулой (VI) или (VI'), имеет последовательность, которая отличается от химерного олигонуклеотида из приведенного выше списка на один нуклеотид. В других вариантах осуществления олигонуклеотид, представленный формулой (VI) или (VI'), имеет последовательность, которая отличается от химерного олигонуклеотида из приведенного выше списка на 1, 2, 3 или 4 нуклеотида. В вариантах осуществления олигонуклеотид, представленный формулой (VI) или (VI'), имеет последовательность, которая отличается от химерного олигонуклеотида из приведенного выше списка, но имеет ту же конструкцию, что и химерный олигонуклеотид из приведенного выше списка. В вариантах осуществления описанные олигонуклеотиды проявляют повышенную аффинность к целевой нуклеотидной последовательности по сравнению с немодифицированным олигонуклеотидами с той же последовательностью. Например, в некоторых последовательностях описанные олигонуклеотиды имеют последовательность нуклеотидных оснований, которая комплементарна целевой нуклеотидной последовательности с более высокой аффинностью, чем немодифицированный олигонуклеотид с той же последовательностью, или гибридизируется с ней. В вариантах осуществления описанный олигонуклеотид в комплексе с комплементарной целевой нуклеотидной последовательностью имеет температуру плавления (Tm) > 37°C. Комплекс может быть образован в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, таких как фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). В вариантах осуществления Tm комплекса составляет > 50°C. В вариантах осуществления Tm комплекса составляет 50-100°C. В вариантах осуществления Tm описанного олигонуклеотида, спаренного с целевой нуклеотидной последовательностью в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, составляет > 50°C.

[0093] В определенных вариантах осуществления целевая нуклеотидная последовательность может быть выбрана из нуклеотидной последовательности, представляющей собой известную последовательность вирусной ДНК или РНК, такую как геном ВГВ, например, последовательность, перечисленную в таблице E, F или J.

[0094] В вариантах осуществления описанные олигонуклеотиды проявляют аффинность по меньшей мере к одной из следующих шести последовательностей генома ВГВ или их РНК-эквивалентов и/или демонстрируют стабильность в комплексе по меньшей мере с одной из следующих шести последовательностей генома ВГВ (таблица E) или их РНК-эквивалентов (таблица F). В вариантах осуществления олигонуклеотид в комплексе с комплементарной последовательностью генома ВГВ имеет температуру плавления (Tm) > 37°C. Геном ВГВ может представлять собой последовательность РНК, такую как последовательность РНК DR-1 и/или DR-2. Комплекс может быть образован в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, таких как фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). В вариантах осуществления Tm комплекса составляет > 50°C. В вариантах осуществления Tm комплекса составляет 50-100°C. В вариантах осуществления Tm описанного олигонуклеотида, спаренного с РНК ВГВ в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, составляет > 50°C.

[0095] Соединения настоящего изобретения включают в себя соединения, содержащие следующую формулу (VII):

5'-X'-Y'-Z'-3' (VII),

где X'-Y'-Z' представляют собой химерный олигонуклеотид, содержащий последовательность из 14-22 нуклеозидов и необязательно конъюгированный на 5'- и/или 3'-конце с лигандной нацеливающей группой или фармакофором, X' представляет собой домен, содержащий последовательность модифицированных нуклеозидов длиной 3-14 нуклеозидов; Y' представляет собой домен, содержащий последовательность размером от 2 до 4 2'-дезоксинуклеозидов, связанных посредством связей между субъединицами; и Z' представляет собой домен, содержащий последовательность из модифицированных нуклеозидов длиной 3-14 нуклеозидов, причем домены X' и/или Z' содержат один или более модифицированных нуклеозидов, которые связаны посредством N3'→P5' фосфорамидатной или N3'→P5′ тиофосфорамидатной связи между субъединицами.

[0096] Химерный олигонуклеотид, представленный формулой (VII) X'-Y'-Z', содержит последовательность из 14-22 нуклеотидов, например 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления число нуклеотидов в каждом из X', Y' и Z' соответственно составляет: 8/2/10, 9/2/10, 10/2/10, 7/3/10, 8/3/10, 9/3/10, 8/4/8, 9/4/9, 6/4/8. В некоторых вариантах осуществления X' имеет длину 6-10 нуклеотидов, Y' имеет длину 2-4 нуклеотида, а Z' имеет длину 8-10 нуклеотидов.

[0097] В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (VII) состоит из химерного олигонуклеотида X'-Y'-Z', состоящего из последовательности из 14-22 нуклеотидов, и необязательно конъюгированного на 5'- и/или 3'-конце (например, на 5'- и/или 3'-конце или как на 5'-конце, так и на 3'-конце) с лигандной нацеливающей группой и/или фармакофором, причем X' представляет собой домен, состоящий из последовательности, содержащей один или более модифицированных нуклеотидов длиной 3-10 нуклеотидов; Z' представляет собой домен, состоящий из последовательности, содержащей один или более модифицированных нуклеотидов, которая имеет длину 3-10 нуклеотидов; и Y' представляет собой домен, состоящий из последовательности размером от 2 до 4 2'-дезоксинуклеотидов, связанных посредством тиофосфатных связей между субъединицами и необязательно одной фосфодиэфирной связи между субъединицами, причем домены X' и/или Y' содержат один или более модифицированных нуклеотидов, которые связаны посредством N3'→P5' фосфорамидатной или N3'→P5' тиофосфорамидатной связи между субъединицами.

[0098] Домен X' содержит последовательность модифицированных нуклеотидов и имеет длину 4-10 нуклеотидов. Например, домен X' может содержать последовательность из 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов. Один или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22) из этих нуклеотидов являются модифицированными. Например, в некоторых вариантах осуществления все нуклеотиды в домене X' являются модифицированными.

[0099] Модифицированные нуклеотиды домена X' могут быть такими же, как описано для X в формуле (VI) или (VI'). Например, нуклеотиды домена X' могут быть модифицированными в отношении одного или более их нуклеотидных оснований, 2'- и/или 3'-положений на сахаре рибозе и их связей между субъединицами. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления также включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано OMe, а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а также Me или OMe, а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано O-метоксиэтокси, а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления также включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'- и 4'-положения модифицированы связующей группой (как описано в другом месте настоящего документа) с образованием конформационно ограниченного нуклеотида, а 3'-положение представляет собой O или NH. Каждый из этих вариантов осуществления может включать в себя тиофосфатную (или тиофосфорамидатную, в зависимости от 3'-замены) и фосфорамидатную связи между субъединицами.

[0100] Варианты осуществления также включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение представляет собой OH, а 3'-положение представляет собой NH, или в которых 2'-положение представляет собой H, а 3'-положение представляет собой NH. Каждый из этих вариантов осуществления может включать в себя тиофосфорамидатную и/или фосфорамидатную связи между субъединицами.

[0101] Нуклеотиды домена X' связаны посредством связей между субъединицами, например N3'→P5' фосфорамидатной, N3'→P5' тиофосфорамидатной, тиофосфатной или фосфодиэфирной связей между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен X' связан посредством связей между субъединицами, выбранными из N3'→P5' фосфорамидатной, N3'→P5' тиофосфорамидатной и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления домен X' содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 из N3'→P5' фосфорамидатной и/или N3'→P5' тиофосфорамидатной связей между субъединицами.

[0102] Домен Y' содержит последовательность из 2-4 2'-дезоксинуклеотидов. Например, домен Y' может содержать последовательность из 2, 3 или 4 2'-дезоксинуклеотидов. Один или более из 2'-дезоксинуклеотидов могут быть связаны посредством тиофосфатных или фосфодиэфирных связей между субъединицами (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 связей). В некоторых вариантах осуществления каждый из 2'-дезоксинуклеотидов связан посредством тиофосфатной связи между субъединицами. В других вариантах осуществления каждый из 2'-дезоксинуклеотидов связан посредством фосфодиэфирной связи между субъединицами. В других вариантах осуществления домен Y' состоит из 2'-дезоксинуклеотидов, связанных посредством тиофосфатных связей между субъединицами и необязательно одной фосфодиэфирной связью между субъединицами.

[0103] Домен Z' содержит последовательность модифицированных нуклеотидов и имеет длину 4-10 нуклеотидов. Например, домен Z' может содержать последовательность из 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов. Один или более из этих нуклеотидов являются модифицированными (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22). Например, в некоторых вариантах осуществления все нуклеотиды в домене Z' являются модифицированными.

[0104] Модифицированные нуклеотиды домена Z' могут быть такими же, как описано для Z в формуле (VI) или (VI'). Например, нуклеотиды домена Z' могут быть модифицированными в отношении одного или более их нуклеотидных оснований, 2'- и/или 3'-положений на сахаре рибозе и их связей между субъединицами. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления также включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано OMe, а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а также Me или OMe, а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано O-метоксиэтокси, а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления также включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение модифицировано F (рибо или арабино), а 3'-положение представляет собой O или NH. Варианты осуществления включают в себя нуклеотиды, в которых 2'- и 4'-положения модифицированы связующей группой (как описано в другом месте настоящего документа) с образованием конформационно ограниченного нуклеотида, а 3'-положение представляет собой O или NH. Каждый из этих вариантов осуществления может включать в себя тиофосфатную (или тиофосфорамидатную, в зависимости от 3'-замены) и фосфорамидатную связи между субъединицами.

[0105] Варианты осуществления также включают в себя нуклеотиды, в которых 2'-положение представляет собой OH, а 3'-положение представляет собой NH, или в которых 2'-положение представляет собой H, а 3'-положение представляет собой NH. Каждый из этих вариантов осуществления может включать в себя тиофосфорамидатную и/или фосфорамидатную связи между субъединицами.

[0106] Нуклеотиды домена Z' связаны посредством связей между субъединицами, например N3'→P5' фосфорамидатной, N3'→P5' тиофосфорамидатной, тиофосфатной или фосфодиэфирной связей между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления домен Z' связан посредством связей между субъединицами, выбранными из N3'→P5' фосфорамидатной, N3'→P5' тиофосфорамидатной и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления домен Z' содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 из N3'→P5' фосфорамидатной и/или N3'→P5' тиофосфорамидатной связей между субъединицами.

C. Модифицированные антисмысловые олигонуклеотиды

[0107] Другие соединения включают в себя модифицированные антисмысловые олигонуклеотиды. В некоторых вариантах осуществления ASO включает в себя нуклеотиды формулы (I), (II), (IIIa), (IIIb), (IV), (V) и/или (V').

[0108] Другие соединения настоящего описания включают в себя соединения, содержащие следующую формулу (VIII):

(VIII),

где X_A представляет собой NH или O, Y представляет собой OR или SR, а R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B_A независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание, каждый из R_A' и R_A'' независимо в каждом случае выбран из H, F, ОН, OMe, O-метоксиэтокси, а R_A''' представляет собой H, или R_A' и R_A''' вместе образуют -O-CH₂-, -O-CH(Me)- или -O-(CH₂)₂-.

[0109] В некоторых вариантах осуществления R_A' и R_A''' представляют собой H; а R_A'' выбран из F, OH, OMe, Me, O-метоксиэтокси. В других вариантах осуществления R_A'' и R_A''' представляют собой H; а R_A' выбран из F, OMe, Me, O-метоксиэтокси. В некоторых вариантах осуществления X_A в каждом случае представляет собой NH.

[0110] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеотидов, представленных формулой (VIII), где X_A представляет собой NH; B_A представляет собой G-зажим; R_A' представляет собой F или OMe, а R_A'' представляет собой H; или R_A' представляет собой H, а R_A'' представляет собой H или F; и R_A''' представляет собой H.

[0111] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеотидов, представленных формулой (VIII), где X_A представляет собой NH; B_A представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R_A' и R_A''' вместе образуют конформационно ограниченный нуклеотид (например, -O-CH_2- или –O-(CH₂)_2-); а R_A'' представляет собой H. В некоторых вариантах осуществления B_A представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание, выбранное из группы, состоящей из 5-метилцитозина, 2,6-диаминопурина и 5-метилурацила.

[0112] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеотидов, представленных формулой (VIII), где X_A представляет собой NH; B представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R_A' представляет собой F или OMe, R_A'' представляет собой H, а R_A''' представляет собой H.

[0113] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеотидов, представленных формулой (VIII), где X_A представляет собой NH; B_A представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R_A' представляет собой H, R_A'' представляет собой F, а R_A''' представляет собой H.

[0114] В некоторых вариантах осуществления X_A представляет собой NH. В других вариантах осуществления Y представляет собой O- или S^– (с положительно заряженным противоионом). В некоторых вариантах осуществления один из R_A' или R_A'' представляет собой H, а второй представляет собой F, OH, OMe, Me, O-метоксиэтокси (например, арабино-F или рибо-F или OMe).

[0115] В некоторых вариантах осуществления B_A выбран из A, C, G, U и T. В дополнительных вариантах осуществления B_A выбран из A, C, G, U, T, 2,6-диаминопурина, 5-Me пиримидина (например, 5-метилцитозина, 5-метилурацила). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из R_A' и R_A'' представляет собой H. Например, в некоторых вариантах осуществления R_A' представляет собой F, OH, OMe, Me, O-метоксиэтокси, а R_A'' представляет собой H. В других вариантах осуществления R_A' представляет собой H, а R_A'' представляет собой F.

[0116] В некоторых вариантах осуществления, если B_A представляет собой пуриновое нуклеотидное основание, по меньшей мере один из R_A' и R_A'' представляет собой OH или F, и/или если B_A представляет собой пиримидиновое нуклеотидное основание, по меньшей мере один из R_A' и R_A'' представляет собой OMe, OH или F.

[0117] В других вариантах осуществления нуклеотидные основания включают в себя один или более нуклеотидов из таблицы G.

Таблица G

№ нуклеотида R' R'' R''' A W 48 F H H NH S 49 F H H NH O 50 F H H O S 51 F H H O O 52 H F H NH S 53 H F H NH O 54 H F H O S 55 H F H O O 56 OMe H H NH S 57 OMe H H NH O 58 OMe H H O S 59 OMe H H O O 60 H F H NH S 61 H F H NH O 62 H F H O S 63 H F H O O 64 O-метоксиэтокси H H NH S 65 O-метоксиэтокси H H NH O 66 O-метоксиэтокси H H O S 67 O-метоксиэтокси H H O O 68 H H H NH S 69 H H H NH O 70 OH H H NH S

71 OH H H NH O 72 OH H H O S 73 H OH H NH O 74 H OH H NH S 75 H OEt H NH O 76 H OEt H NH S 77 H OEt H O O 78 H OEt H O S 79 OEt H H NH O 80 OEt H H NH S 81 OEt H H O O 82 OEt H H O S

№ нуклеотида C A W 83 -O-CH₂- NH S 84 -O-CH₂- NH O 85 -O-CH₂- O S 86 -O-CH₂- O O 87 -O-(CH₂)₂- NH S 88 -O-(CH₂)₂- NH O 89 -O-(CH₂)₂- O S 90 -O-(CH₂)₂- O O 91 -O-CH(Me)- NH S 92 -O-CH(Me)- NH O 93 -O-CH(Me)- O S 94 -O-CH(Me)- O O

[0118] Соединения настоящего описания также включают в себя олигонуклеотиды, содержащие десять или более нуклеотидов следующей формулы (IX):

(IX),

где R представляет собой H или положительно заряженный противоион, B_B независимо в каждом случае представляет собой природное или немодифицированное нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание, каждый из R_B' и R_B'' независимо в каждом случае выбран из H, F, OMe, O-метоксиэтокси, а R_B''' представляет собой H, или R_B' и R_B''' вместе образуют –O-CH_2-, -O-CH(Me)- или –O-(CH₂)₂-.

[0119] В некоторых вариантах осуществления каждый олигонуклеотид представляет собой нуклеотид формулы (IX).

[0120] В некоторых вариантах осуществления R_B' и R_B''' представляют собой H, а R_B'' выбран из F, OH, OMe, Me, O-метоксиэтокси. В других вариантах осуществления R_B'' и R_B''' представляют собой H; а R_B' выбран из F, OMe, Me, O-метоксиэтокси.

[0121] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеотидов, представленных формулой (IX), где B_A представляет собой G-зажим; R_B' представляет собой F или OMe, а R_B'' представляет собой H; или R_B' представляет собой H, а R_B'' представляет собой H или F; а R_B''' представляет собой H.

[0122] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеотидов, представленных формулой (IX), где B_A представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R_B' и R_B''' вместе образуют конформационно ограниченный нуклеотид (например, -O-CH_2- или -O-(CH₂)₂-); а R_B'' представляет собой H. В некоторых вариантах осуществления B_A представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание, выбранное из группы, состоящей из 5-метилцитозина, 2,6-диаминопурина и 5-метилурацила.

[0123] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеотидов, представленных формулой (IX), где B представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R_B' представляет собой F или OMe, R_B'' представляет собой H, и R_B''' представляет собой H.

[0124] Некоторые варианты осуществления включают в себя один или более модифицированных нуклеотидов, представленных формулой (IX), где B_A представляет собой немодифицированное или модифицированное нуклеотидное основание; R_B' представляет собой H, R_B'' представляет собой F, и R_B''' представляет собой H.

[0125] В других вариантах осуществления Y представляет собой S^– (с положительно заряженным противоионом). В некоторых вариантах осуществления один из R_B' или R_B'' представляет собой H, а второй представляет собой F, OH, OMe, Me, O-метоксиэтокси (например, арабино-F или рибо-F или OMe).

[0126] В некоторых вариантах осуществления B_B выбран из A, C, G, U и T. В дополнительных вариантах осуществления B_B выбран из A, C, G, U, T, 2,6-диаминопурина, 5-Me пиримидина (например, 5-метилцитозина). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из R_B' и R_B'' представляет собой H. Например, в некоторых вариантах осуществления R_A' представляет собой F, OH, OMe, Me, O-метоксиэтокси, и R_B'' представляет собой H. В других вариантах осуществления R_B' представляет собой H, а R_B'' представляет собой F.

[0127] В некоторых вариантах осуществления, если B_B представляет собой пуриновое нуклеотидное основание, по меньшей мере один из R_B' и R_B'' представляет собой OH или F, и/или если B_B представляет собой пиримидиновое нуклеотидное основание, по меньшей мере один из R_B' и R_B'' представляет собой OMe, OH или F.

[0128] В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеотидных оснований олигонуклеотида формул (VIII) или (IX) содержит последовательность, выбранную из последовательностей в таблице A. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеотидных оснований олигонуклеотида формул (VIII) или (IX) содержит последовательность из 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидных оснований, отличную от последовательности, выбранной из таблицы H.

Таблица H

Последовательность нуклеотидных оснований (5'-3') SEQ. ID NO 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 1 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-Chol-3' 2 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-GalNAc-3' 3 5'-GAUUAGGCAGAGGTGAAAAAG-3' 4 5'-GAUUAGGCAGAGGTGAAAAAG-Chol-3' 5 5'-GAUUAGGCAGAGGTGAAAAAG-GalNAc-3' 6 5'-GAUUAGGCAGAGGTGAAAAAG-3' 7 5'-GAUUAGGCAGAGGTGAAAAAG-Chol-3' 8 5'-GAUUAGGCAGAGGTGAAAAAG-GalNAc-3' 9 5'-GDAPUUDAPGGCAGAGGTGAAAAAG-3' 10 5'-GAUUAGGCAGAGGTGAADAPDAPDAPG-3' 11 5'-GAUUAGGCAGAGGTGDAPDAPDAPDAPDAPG-3' 12 5'-GDAPUUDAPGGCAGAGGTGAADAPDAPDAPG-3' 13 5'-GDAPUUDAPGGCAGAGGTGDAPDAPDAPDAPDAPG-3' 14 5'-GDAPUUDAPGGCAGAGGTGAAAAAG-3' 15 5'-GAUUAGGCAGAGGTGAADAPDAPDAPG-3' 16 5'-GAUUAGGCAGAGGTGDAPDAPDAPDAPDAPG-3' 17 5'-GDAPUUDAPGGCAGAGGTGAADAPDAPDAPG-3' 18 5'-GDAPUUDAPGGCAGAGGTGDAPDAPDAPDAPDAPG-3' 19 5'-GCAGAGGTGAAGCGADAPGUGC-3' 20 5'-GCAGAGGTGAAGCGDAPDAPGUGC-3' 21 5'-GCAGDAPGGTGAAGCGDAPDAPGUGC-3' 22 5'-GCDAPGDAPGGTGAAGCGDAPDAPGUGC-3' 23 5'-CGTGCAGAGGTGAAGC-3-NH_2-G-3' 24 5'-GCAGAGGTGAAGCGAA-3-NH_2-G-3 25 5'-CGACGTGCAGAGGTGAAG-3-NH_2-C-3' 26 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3-NH_2-C-3' 27 5'-GCAGAGGTGAAGC-3-NH_2-G-3' 28 5'-CGTGCAGAGGTGAAG-3-NH_2-C-3' 29 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 30 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 31 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 32

5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 33 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 34 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 35 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 36 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 37 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 38 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 39 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 40 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 41 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3-NH₂-C-3' 42 5'-AAGAGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGUGG-3' 43 5'-GGUGAAG5meCGAAGTG5meCA5meCA5meCG-3' 44 5'-5meCGUG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAG-3' 45 5'-AGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meCA5meC-3' 46 5'-UGG5meCA5meCTAGTAAA5meCTGAG5meC5meC-3' 47 5'-5meCUAGGAGTT5meC5meCG5meCAGUAUGG-3' 48 5'-AGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGTGGU5meCG-3' 49 5'-GAGGUG5meCG5meC5meC5meC5meCGTGGU5meCGG-3' 50 5'-GAAAG5meC5meC5meCTA5meCGAA5meC5meCA5meCUG-3' 51 5'-GUU5meC5meCG5meCAGTATGGAU5meCGG5meC-3' 52 5'-U5meC5meCG5meCAGTATGGAT5meCGG5meCAG-3' 53 5'-A5meC5meCA5meCTGAA5meCAAATGG5meCA5meCU-3' 54 5'-UG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG-3' 55 5'-A5meCUGAA5meCAAATGG5meCA5meCUAGU-3' 56 5'-AGU5meC5meCA5meC5meCA5meCGAGT5meCUAGA5meC-3' 57 5'-5meCA5meCUGAA5meCAAATGG5meCA5meCUAG-3' 58 5'-5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meCA-3' 59 5'-AAGAGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGUGG-GalNAc-3' 60 5'-GGUGAAG5meCGAAGTG5meCA5meCA5meCG-GalNAc-3' 61 5'-UGG5meCA5meCTAGTAAA5meCTGAG5meC5meC-GalNAc-3' 62 5'-5meCUAGGAGTT5meC5meCG5meCAGUAUGGGalNAc-3' 63 5'-AGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGTGGU5meCGGalNAc-3' 64 5'-U5meC5meCG5meCAGTATGGAT5meCGG5meCAG-GalNAc-3' 65 5'-UG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUGGalNAc-3' 66

5'-AGU5meC5meCA5meC5meCA5meCGAGT5meCUAGA5meC-GalNAc-3' 67 5'-GCGGGTGAAGCGGUG-3-NH₂-C-3' 68 5'-GCGGGTGAAGCGGUG-3-NH₂-C-3' 69 5'-GCGGGTGAAGCGGUG-3-NH₂-C-3' 70 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 71 5'-GCAGAGGTGAAGCGAGTG-3NH₂-C-3' 72 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3NH₂-C-3' 73 5'-GCAGnspAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 74 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 75 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 76 5-GCUCCAAATTCTTTAUAAGGG-GalNAc-3 77 5'-AAGAGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGUGG-3' 78 5'-GGUGAAG5meCGAAGTG5meCA5meCA5meCG-3' 79 5-5meCGUG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAG-3' 80 5'-GUGAAG5meCGAAGTG5meCA5meCA5meCGG-3' 81 5'-AGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meCA5meC-3' 82 5'-UGG5meCA5meCTAGTAAA5meCTGAG5meC5meC-3' 83 5'-5meCUAGGAGTT5meC5meCG5meCAGUAUGG-3' 84 5'-G5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-3' 85 5'-AGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGTGGU5meCG-3' 86 5'-GAGGUG5meCG5meC5meC5meC5meCGTGGU5meCGG-3' 87 5'-GAAAG5meC5meC5meCTA5meCGAA5meC5meCA5meCUG-3' 88 5'-GUU5meC5meCG5meCAGTATGGAU5meCGG5meC-3' 89 5'-U5meC5meCG5meCAGTATGGAT5meCGG5meCAG-3' 90 5'-A5meC5meCA5meCTGAA5meCAAATGG5meCA5meCU-3' 91 5'-UG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG-3' 92 5'-A5meCUGAA5meCAAATGG5meCA5meCUAGU-3' 93 5'-AGU5meC5meCA5meC5meCA5meCGAGT5meCUAGA5meC-3' 94 5'-5meCA5meCUGAA5meCAAATGG5meCA5meCUAG-3' 95 5'-5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meCA-3' 96 5'-AAGAGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGUGG3' 97 5'-AAGAGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGUGG-3' 98 5'-GGUGAAG5meCGAAGTG5meCA5meCA5meCG3' 99

5'-GGUGAAG5meCGAAGTG5meCA5meCA5meCG3' 100 5'-UGG5meCA5meCTAGTAAA5meCTGAG5meC5meC3' 101 5'-UGG5meCA5meCTAGTAAA5meCTGAG5meC5meC3' 102 5'-5meCUAGGAGTT5meC5meCG5meCAGUAUGG3' 103 5'-5meCUAGGAGTT5meC5meCG5meCAGUAUGG3' 104 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAG-3' 105 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC-3' 106 5'-CGTGCAGAGGTGAAGCG-3' 107 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAG-3' 108 5'-CGACGTGCAGAGGTGAAGC-3' 109 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC-3' 110 5'-GCAGAGGTGAAGCG-3' 111 5'-CGTGCAGAGGTGAAGC-3' 112 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3nh2-C-3' 113 5'-GalNAc-NHC6-U5meC5meCG5meCAGTATGGAT5meCGG5meCAG3' 114 5'-GalNAc-NHC6-5meCUAGGAGTT5meC5meCG5meCAGUAUGG3' 115 5'-GalNAc-NHC6-AAGAGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGUGG3' 116 5'GalNAc-NHC6-AGAGGTG5meCG5meC5meC5meC5meCGTGGU5meCG3' 117 5'GalNAc-NHC6-UG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG3' 118 mGCUCCAAATTCTTTAUAAGG 119 mGCUCCAAATTCTTTAUAAGG 120 mGCUCCAAATTCTTTAUAAGGG 121 mGCUCCAAATTCTTTAUAAGG/GalNAc/ 122 mGCUCCAAATTCTTTAUAAGG/GalNAc/ 123 mGCUCCAAATTCTTTAUAAGG/3CholTEG/ 124 mGCUCCAAATTCTTTAUAAGG/3CholTEG/ 125 mGCUCCAAATTCTTTAUAAGGG/3CholTEG/ 126 5'-mG5mCAGAGGTGAAGp5mCGAAGUG5meC-3 127 5'-mG5mCAGAGGTGAAG5mCGAAGUG5mC-Cholesterol-3' 128 5'-mG5mCAGAGGTGAAGp5mCGAAGUG5mC-TEG-Cholesterol-3' 129 5'-mG5mCAGAGGTGAAG5mCGAAGUG5mC-Tocopherol-3' 130 5'-mG5mCAGAGGTGAAG5mCGAAGUG5mC-TEG-Tocopherol-3' 131 5'-mG5mCAGAGGTGAAG5mCGAAGUG5mC-GalNAc-3' 132 5'-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-3' 133 5'-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-po-Chol-3' 134 5'-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-po-Tocopherol-3' 135 5'-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-po-GalNAc-3' 136 5'-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-3' 137 5'-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-po-Chol-3' 138 5'-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-po-Tocopherol-3' 139 5'-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-po-GalNAc-3' 140 5-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-3 141 5-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-Chol-3 142 5-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-TocO-3 143 5-mG5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-GalNAc-3 144 5-G5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-3 145 5-G5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-Chol-3 146 5-G5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-TocO-3 147 5-G5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-GalNAc-3 148 5-G5meCAGAGGTGAAG5meCGAAGUG5meC-3 149 5-dTGCAGAGGTGAAGCGAAGTG-3 150 5-dTGCAGAGGTGAAGCGAAGUG3' 151 5-GCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 152 5-GCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 153 5'-GCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 154 5'-dGCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 155 5'-dGCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 156 5'-dGCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 157 5'-dGCAGAGGTGAAGCGAAGUGC-3' 158

[0129] В вариантах осуществления описанные олигонуклеотиды проявляют аффинность по меньшей мере к одной из шести последовательностей генома ВГВ или их РНК-эквивалентов и/или демонстрируют стабильность в комплексе по меньшей мере с одной из следующих шести последовательностей генома ВГВ (таблица E) или их РНК-эквивалентов (таблица F). В вариантах осуществления олигонуклеотид в комплексе с комплементарной последовательностью генома ВГВ имеет температуру плавления (Tm) > 37°C. Геном ВГВ может представлять собой последовательность РНК, такую как последовательность РНК DR-1 и/или DR-2. Комплекс может быть образован в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, таких как фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). В вариантах осуществления Tm комплекса составляет > 50°C. В вариантах осуществления Tm комплекса составляет 50-100°C. В вариантах осуществления Tm описанного олигонуклеотида, спаренного с РНК ВГВ в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, составляет > 50°C.

[0130] В некоторых аспектах описания последовательность нуклеотидных оснований олигонуклеотида формулы (VIII) или (IX) содержит последовательность из 12-22 нуклеотидов, например из 14-20 нуклеотидов или 16-19 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеотидных оснований олигонуклеотида формулы (VIII) или (IX) состоит из 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 нуклеотидов.

[0131] В другом аспекте настоящего описания олигонуклеотиды, описанные в настоящем документе, конъюгированы или модифицированы на одном или более концах.

[0132] Например, в некоторых вариантах осуществления конец цепи олигонуклеотида защищен от гидролитического расщепления по меньшей мере одним модифицированным нуклеотидом на указанном конце цепи. В некоторых вариантах осуществления модифицированный нуклеотид представляет собой модифицированный нуклеотид, содержащий модифицированный нуклеотид, содержащий модификацию 3'-N, и может включать в себя тиофосфорамидатную связь между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды формул (VIII) и (IX) дополнительно содержат по меньшей мере один нуклеотид (например, 1 или 2) на 3'- и/или 5'-конце, который содержит тиофосфатную связь между субъединицами и тиминовое нуклеотидное основание. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды формул (VIII) и (IX) дополнительно содержат по меньшей мере один нуклеотид (например, 1 или 2) на 3'- и/или 5'-конце, который содержит 2'-OMe-модифицированный нуклеотид и тиминовое нуклеотидное основание. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды формул (VIII) и (IX) дополнительно содержат по меньшей мере один 2'-OMe-модифицированный нуклеотид на 3'- и/или 5'-конце, который содержит тиофосфатную связь между субъединицами и урациловое нуклеотидное основание. В некоторых вариантах осуществления на 3'-конце олигонуклеотидов формул (VIII) и (IX) может быть введен инвертированный dT, что приводит к образованию связи 3'-3', которая может ингибировать разрушение 3'-экзонуклеазами и/или удлинение ДНК-полимеразами.

D. Конъюгированные олигонуклеотиды

[0133] Настоящее описание также относится к дополнительным компонентам, конъюгированным с олигонуклеотидом, таким как нацеливающие группы и олигонуклеотиды, модифицированные на одном или более концах.

[0134] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды, описанные в настоящем документе, конъюгированы с одной или более лигандными нацеливающими группами или фармакофорами, необязательно посредством связывающей функциональной группы, такой как линкер HEG или аминолинкер C6 или C7. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды, описанные в настоящем документе, дополнительно содержат лигандную нацеливающую группу или фармакофор, конъюгированный на 5'- и/или 3'-конце посредством необязательного линкера. В предпочтительных вариантах осуществления олигонуклеотиды, описанные в настоящем документе, дополнительно содержат лигандную нацеливающую группу, конъюгированную на 5'- и/или 3'-конце посредством необязательного линкера. В некоторых вариантах осуществления конъюгация выполнена на 3'-конце олигонуклеотидов, описанных в настоящем документе.

[0135] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа или фармакофор усиливает активность, клеточное распределение или клеточный захват олигонуклеотида конкретным типом клетки, таким как гепатоциты.

[0136] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа может представлять собой липидную функциональную группу, например холестериновую функциональную группу, токоферолы, холевую кислоту, тиоэфир, например, берил-S-тритилтиол, тиохолестерин, алифатическую цепь, например додекандиол или ундециловые остатки, фосфолипид, например дигексадецил-рац-глицерол или триэтиламмония-1,2-ди-О-гексадецил-рац-глицеро-3-фосфонат, полиамин или полиэтиленгликолевую цепь или адамантан уксусную кислоту, пальмитоиловую функциональную группу или октадециламиновую или гексиламинокарбонилоксихолестериновую функциональную группу.

[0137] Например, в некоторых вариантах осуществления конец цепи олигонуклеотида защищен от гидролитического расщепления по меньшей мере одним модифицированным нуклеотидом на конце цепи. В некоторых вариантах осуществления модифицированный нуклеотид представляет собой модифицированный нуклеотид, содержащий модифицированный нуклеотид, содержащий модификацию 3'-N, и может включать в себя тиофосфорамидатную связь между субъединицами. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотидная цепь дополнительно содержит по меньшей мере один нуклеотид (например, 1 или 2) на 3'- и/или 5'-конце, который содержит тиофосфатную связь между субъединицами и тиминовое нуклеотидное основание. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотидная цепь дополнительно содержит по меньшей мере один нуклеотид (например, 1 или 2) на 3'- и/или 5'-конце, который содержит 2'-F-, 2'-OMe-, 2'-OEt-, или 2'-MOE-модифицированный нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотидная цепь дополнительно содержит по меньшей мере один 2'-OMe-модифицированный нуклеотид на 3'- и/или 5'-конце, который содержит тиофосфатную связь между субъединицами и урациловое нуклеотидное основание. В вариантах осуществления 3'-конец ASO соединен посредством связи np или po с аминолинкером C6, дополнительно связанным с GalNAc-6. Например, в качестве примера такой конструкции можно привести следующие структуры:

В некоторых вариантах осуществления на 3'-конце олигонуклеотидной цепи может быть введен инвертированный dT, что приводит к образованию связи 3'-3', которая может ингибировать разрушение 3'-экзонуклеазами и/или удлинение ДНК-полимеразами.

[0138] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды, описанные в настоящем документе, конъюгированы с одной или более лигандными нацеливающими группами или фармакофорами, необязательно посредством связывающей функциональной группы, такой как линкер HEG или аминолинкер C6. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотидная цепь дополнительно содержит лигандную нацеливающую группу или фармакофор, конъюгированный на 5'- и/или 3'-конце посредством необязательного линкера. В некоторых вариантах осуществления конъюгация выполнена на 3'-конце олигонуклеотидной цепи.

[0139] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа или фармакофор усиливает активность, клеточное распределение или клеточный захват олигонуклеотида конкретным типом клетки, таким как гепатоциты.

[0140] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа может представлять собой липидную функциональную группу, например холестериновую группу, токоферолы, холевую кислоту, тиоэфир, например, берил-S-тритилтиол, тиохолестерин, алифатическую цепь, например додекандиол или ундециловые остатки, фосфолипид, например дигексадецил-рац-глицерол или триэтиламмония-1,2-ди-О-гексадецил-рац-глицеро-3-фосфонат, полиамин или полиэтиленгликолевую цепь или адамантан уксусную кислоту, пальмитоиловую функциональную группу или октадециламиновую или гексиламинокарбонилоксихолестериновую функциональную группу.

[0141] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа может представлять собой природное вещество, такое как белок (например, человеческий сывороточный альбумин (HSA), липопротеин низкой плотности (ЛПНП) или глобулин).

[0142] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа может представлять собой углевод (например, декстран, пуллулан, хитин, хитозан, инулин, циклодекстрин, N-ацетилгалактозамин или гиалуроновую кислоту). Углеводы включают в себя моносахариды, такие как N-ацетилгалактозамин (GalNAc), дисахариды, трисахариды, тетрасахариды, олигосахариды и полисахариды. В некоторых вариантах осуществления композиций и способов настоящего изобретения лиганд представляет собой одно или более производных GalNAc, например два или более производных GalNAc, соединенных с олигонуклеотидом посредством двухвалентного или трехвалентного разветвленного линкера соответственно.

[0143] В вариантах осуществления олигонуклеотид связан с нацеливающей функциональной группой посредством линкера, такого как аминоалкильный линкер (например, C6-NH₂). Например, GAlNAc-1-6 может быть связан с олигонуклеотидом посредством данного типа линкера.

[0144] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа может представлять собой рекомбинантную или синтетическую молекулу, такую как синтетический полимер, например, синтетическую полиаминокислоту. Примеры полиаминокислот включают в себя полилизин (PLL), поли-L-аспарагиновую кислоту, поли-L-глутаминовую кислоту, сополимер стирола и ангидрида малеиновой кислоты, сополимер поли(L-лактида и гликолида), сополимер дивинилового эфира и ангидрида малеиновой кислоты, N-(2-гидроксипропил)метакриламидный сополимер (HMPA), полиэтиленгликоль (ПЭГ), поливиниловый спирт (ПВС), полиуретан, поли(2-этилакриловую кислоту), N-изопропилакриламидные полимеры или полифосфазен. Примеры полиаминов включают в себя полиэтиленимин, полилизин (PLL), спермин, спермидин, полиамин, псевдопептидный полиамин, пептидомиметический полиамин, дендримерный полиамин, аргинин, амидин, протамин, катионный липид, катионный порфирин, четвертичную соль полиамина или альфа-спиральный пептид. Лигандная нацеливающая группа может также включать в себя нацеливающие группы, например агент, нацеливающий на клетку или ткань, например лектин, гликопротеин, липид или белок, например антитело, которое связывается с клеткой определенного типа, такой как гепатоцит.

[0145] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа представляет собой GalNAc или его производное. Например, в некоторые варианты осуществления включены следующие производные GalNAc.

GalNAc-1 GalNAc-2-CPG GalNAc-3 GalNAc-4 GalNAc-5 GalNAc-6 GalNAc-7

GalNAc-8 GalNAc-9 GalNAc-10

GalNAc-11 GalNAc-12 GalNAc-13

[0146] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа может представлять собой аптамер. Термин «аптамер» относится к молекуле олигонуклеотида или пептида молекуле, которая связывается со специфической молекулой-мишенью. Например, аптамер можно выбрать так, чтобы он был нацелен на клетку конкретного типа в теле. При конъюгировании с описанным олигонуклеотидом он может направлять олигонуклеотид к клеткам-мишеням. В другом примере аптамер может быть нацелен на вирусный белок, такой как капсидный белок ВГВ. См., например, Oncogene, 2001 Oct 4; 20(45):6579-86; WO 2011060557. Аптамер может специфически связываться с праймером обратной транскриптазы или обратной транскриптазой ВГВ или с сердцевинной последовательностью энхансера I ВГВ, например, как описано в WO 2002081494.

[0147] В некоторых вариантах осуществления лигандная нацеливающая группа может быть выбрана из одного или более из тиротропина, меланотропина, лектина, гликопротеина, поверхностного белка А, углевода муцина, поливалентной лактозы, поливалентной галактозы, N-ацетилгалактозамина, N-ацетилглюкозамина, поливалентной маннозы, поливалентной фруктозы, гликозилированных полиаминокислот, поливалентной галактозы, трансферрина, бисфосфоната, полиглутамата, полиаспартата, липида, холестерина, стероида, желчной кислоты, фолата, витамина В12, витамина А, биотина, пептида RGD или пептидомиметика RGD.

[0148] Дополнительные лигандные нацеливающие группы описаны, например, в публикации WO 2016077321, которая полностью включен в настоящий документ путем ссылки.

2. Композиции

[0149] Настоящее описание также включает фармацевтические композиции, содержащие олигонуклеотиды настоящего описания. Один вариант осуществления представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую олигонуклеотид формулы (I), (II), (III), (IV), (V) или (VI) или другой олигонуклеотид настоящего описания и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.

[0150] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция, содержащая олигонуклеотид настоящего описания, составлена для системного введения посредством парентеральной доставки. Парентеральный способ введения включает внутривенное, внутриартериальное, подкожное, внутрибрюшинное или внутримышечное введение, или инъекцию, или инфузию; кроме того, подкожное введение, например посредством имплантированного устройства. В предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция, содержащая олигонуклеотид настоящего описания, составлена для подкожной (п/к) или внутривенной (в/в) доставки. Составы для парентерального введения могут включать в себя стерильные водные растворы, которые также могут содержать буферные растворы, разбавители и другие фармацевтически приемлемые добавки, как будет понятно специалисту в данной области. При внутривенном применении можно контролировать общую концентрацию растворенных веществ, чтобы обеспечить изотоничность препарата.

[0151] Фармацевтические композиции, содержащие олигонуклеотид настоящего описания, можно использовать для лечения заболевания или расстройства, например, связанного с экспрессией или активностью гена ВГВ.

3. Способы применения

[0152] Один аспект настоящей технологии включает в себя способы лечения субъекта, у которого диагностировано наличие, предполагается наличие или имеется риск развития инфекции ВГВ и/или ВГВ-ассоциированного расстройства. В терапевтических сферах применения композиции, содержащие олигонуклеотиды настоящей технологии, вводят субъекту с подозрением или уже страдающему от такого заболевания (такого как, например, наличие поверхностного антигена ВГВ и антигенов оболочки (например, HBsAg и/или HBeAg) в сыворотке и/или печени субъекта или повышение концентрации ДНК ВГВ или уровня вирусной нагрузки ВГВ) в количестве, достаточном для лечения или по меньшей мере частичного прекращения симптомов заболевания, включая его осложнения и промежуточные патологические фенотипы при развитии заболевания.

[0153] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды настоящей технологии демонстрируют аффинность к по меньшей мере одной из следующих областей или РНК-транскриптов ВГВ из таблицы J.

Таблица J

Область Целевые РНК-транскрипты ВГВ Затронутые белки ВГВ Pol/S Pre-Core, Pg, Pre-S1, Pre-S2 HBeAg, HBcAg, полимераза, большой HBsAg, средний HBsAg, малый HBsAg Pol Pre-Core, Pg, Pre-S1, Pre-S2 HBeAg, HBcAg, полимераза, большой HBsAg, средний HBsAg, малый HBsAg Pol/X Pre-Core, Pg, Pre-S1, Pre-S2, X HBeAg, HBcAg, полимераза, большой HBsAg, средний HBsAg, малый HBsAg, HBxAg DR1 Pre-Core, Pg, Pre-S1, Pre-S2, X HBeAg, HBcAg, полимераза, большой HBsAg, средний HBsAg, малый HBsAg, HBxAg

DR2 Pre-Core, Pg, Pre-S1, Pre-S2, X HBeAg, HBcAg, полимераза, большой HBsAg, средний HBsAg, малый HBsAg, HBxAg Pre-PolyA Pre-Core, Pg, Pre-S1, Pre-S2, X HBeAg, HBcAg, полимераза, большой HBsAg, средний HBsAg, малый HBsAg, HBxAg

[0154] Субъекты, страдающие инфекцией ВГВ и/или ВГВ-ассоциированным расстройством, могут быть идентифицированы с помощью любого из диагностических или прогностических анализов, известных в данной области, или их комбинации. Например, типичные симптомы инфекции ВГВ и/или ВГВ-ассоциированного расстройства включают в себя, без ограничений, наличие сывороточного и/или печеночного антигена ВГВ (например, HBsAg и/или HBeAg), повышение АЛТ, повышение АСТ, отсутствие или низкую концентрацию антител к ВГВ, поражение печени, цирроз печени, гепатит дельта, острый гепатит В, острый молниеносный гепатит В, хронический гепатит В, фиброз печени, заболевание печени в конечной стадии, гепатоцеллюлярную карциному, сывороточно-подобный синдром, анорексию, тошноту, рвоту, субфебрильную температуру тела, миалгию, утомляемость, нарушение остроты вкуса и обоняния (отвращение к пище и сигаретам), боль в правом верхнем квадранте и эпигастрии (перемежающаяся, слабая или умеренная), печеночную энцефалопатию, сонливость, нарушения структуры сна, спутанность сознания, кому, асцит, желудочно-кишечное кровотечение, коагулопатию, желтуху, гепатомегалию (слегка увеличенная, мягкая печень), спленомегалию, ладонную эритему, звездчатые невусы, мышечную атрофию, звездчатые гемангиомы, васкулит, варикозное кровотечение, периферический отек, гинекомастию, атрофию яичек, коллатеральные вены на животе (голова медузы), высокие концентрации аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ) (в пределах диапазона 1000-2000 Ед/мл), концентрации АЛТ больше концентраций АСТ, повышение концентраций гамма-глутамилтранспептидазы (ГГТ) и/или щелочной фосфатазы (ЩФ), снижение концентрации альбумина, повышение концентрации сывороточного железа, лейкопению (т. е. гранулоцитопению), лимфоцитоз, увеличение скорости оседания эритроцитов (СОЭ), сокращение времени жизни эритроцитов, гемолиз, тромбоцитопению, удлинение международного нормализованного отношения (МНО), наличие ДНК ВГВ в сыворотке, повышение аминотрансфераз (< 5 раз по отношению к верхней границе нормы), увеличение концентрации билирубина, увеличение протромбинового времени (ПТ), гиперглобулинемию, наличие тканенеспецифических антител, таких как антитела к гладким мышцам (ASMA) или антитела к ядрам (ANA), наличие тканеспецифических антител, таких как антитела к щитовидной железе, повышение концентрации ревматоидного фактора (РФ), гипербилирубинемию, снижение количества тромбоцитов и лейкоцитов, концентрация АСТ больше концентрации АЛТ, лобулярный гепатит, сопровождающийся дегенеративными и регенеративными изменениями печеночных клеток, и преимущественно центролобулярный некроз печени.

[0155] В некоторых вариантах осуществления у субъектов, по отношению к которым проводили лечение содержащей нуклеотид композицией настоящей технологии, будет наблюдаться облегчение или исчезновение одного или более из следующих состояний или симптомов: наличие сывороточного и/или печеночного антигена ВГВ (например, HBsAg и/или HBeAg), отсутствие или низкая концентрация антител к ВГВ, поражение печени, цирроз печени, гепатит дельта, острый гепатит В, острый молниеносный гепатит В, хронический гепатит В, фиброз печени, заболевание печени в конечной стадии, гепатоцеллюлярная карцинома, сывороточно-подобный синдром, анорексия, тошнота, рвота, субфебрильная температура тела, миалгия, утомляемость, нарушение остроты вкуса и обоняния (отвращение к пище и сигаретам), боль в правом верхнем квадранте и эпигастрии (перемежающаяся, слабая или умеренная), печеночная энцефалопатия, сонливость, нарушения структуры сна, спутанность сознания, кома, асцит, желудочно-кишечное кровотечение, коагулопатия, желтуха, гепатомегалия (слегка увеличенная, мягкая печень), спленомегалия, ладонная эритема, звездчатые невусы, мышечная атрофия, звездчатые гемангиомы, васкулит, варикозное кровотечение, периферический отек, гинекомастия, атрофия яичек, коллатеральные вены на животе (голова медузы), концентрации АЛТ больше концентраций АСТ, лейкопения (т. е. гранулоцитопения), снижение концентрации альбумина, повышение концентрации сывороточного железа, лимфоцитоз, увеличение скорости оседания эритроцитов (СОЭ), сокращение времени жизни эритроцитов, гемолиз, тромбоцитопения, увеличение международного нормализованного отношения (МНО), наличие ДНК ВГВ в сыворотке, увеличение протромбинового времени (ПТ), гиперглобулинемия, наличие тканенеспецифических антител, таких как антитела к гладким мышцам (ASMA) или антитела к ядрам (ANA), наличие тканеспецифических антител, таких как антитела к щитовидной железе, гипербилирубинемия, снижение количества тромбоцитов и лейкоцитов, концентрация АСТ больше концентрации АЛТ, лобулярный гепатит, сопровождающийся дегенеративными и регенеративными изменениями печеночных клеток, и преимущественно центролобулярный некроз печени.

[0156] В некоторых вариантах осуществления у субъектов, по отношению к которым проводили лечение содержащей олигонуклеотид композицией настоящей технологии, будет наблюдаться снижение уровней экспрессии одного или более биомаркеров, выбранных из аланинаминофрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), гамма-глутаминтранспептидазы (ГГТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), билирубина и ревматоидного фактора (РФ), по сравнению с субъектами, по отношению к которым не проводили лечение, страдающими инфекцией ВГВ и/или ВГВ-ассоциированным расстройством.

[0157] В настоящем описании предложен способ лечения субъекта, у которого диагностировано или предполагается наличие инфекции ВГВ и/или ВГВ-ассоциированного расстройства, включающий введение субъекту эффективного количества содержащей олигонуклеотид композиции настоящей технологии.

[0158] Олигонуклеотиды и композиции настоящего изобретения могут использоваться в антисмысловой терапии. Например, олигонуклеотид может содержать последовательность нуклеотидных оснований, которая комплементарна целевой нуклеотидной последовательности известной вирусной ДНК или РНК, например, в ВГВ, или гибридизируется с ней.

[0159] Некоторые варианты осуществления включают способ модулирования экспрессии мишени путем приведения целевой нуклеиновой кислоты в контакт с антисмысловым соединением, содержащим олигонуклеотид настоящего описания. В некоторых вариантах осуществления целевая нуклеиновая кислота находится в клетке, например, в животном, таком как человек.

[0160] Некоторые варианты осуществления включают способ ингибирования экспрессии целевой РНК у животного, включающий введение животному антисмыслового соединения, содержащего олигонуклеотид настоящего описания. Олигонуклеотид может быть комплементарным или гибридизированным с частью целевой РНК.

[0161] Некоторые варианты осуществления включают способ снижения вирусной нагрузки у субъекта, инфицированного вирусом, включающий введение терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции настоящего описания нуждающемуся в этом субъекту, тем самым со снижением вирусной нагрузки у субъекта. Олигонуклеотид может быть комплементарным или гибридизированным с частью целевой РНК в вирусе.

[0162] Некоторые варианты осуществления включают способ ингибирования экспрессии вирусного гена в клетке или субъекте, включающий приведение клетки в контакт с олигонуклеотидом или композицией настоящего описания или введение терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции настоящего описания нуждающемуся в этом субъекту. Олигонуклеотид может быть комплементарным или гибридизированным с частью целевой РНК в вирусе.

[0163] Другие варианты осуществления включают способ снижения концентрации вирусного антигена у субъекта, инфицированного вирусом, включающий введение терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции настоящего описания нуждающемуся в этом субъекту, тем самым со снижением концентрации вирусного антигена у субъекта. Олигонуклеотид может быть комплементарным или гибридизированным с частью целевой РНК в вирусе.

[0164] Олигонуклеотиды и композиции настоящего описания можно применять, например, для ингибирования или снижения экспрессии гена вируса гепатита B (ВГВ), или ингибирования репликации вируса ВГВ, или для лечения субъекта, имеющего ВГВ, или для снижения вирусной нагрузки вирусом гепатита B (ВГВ) у субъекта, инфицированного ВГВ. В вариантах осуществления описанные химерные олигонуклеотиды используются для индуцирования активности РНКазы H в целевом гене.

[0165] Олигонуклеотиды и композиции настоящего описания можно применять, например, для конкуренции за сайт связывания микроРНК с РНК HCV, таким образом ингибируя репликацию.

[0166] Настоящее описание также относится к способам стабилизации олигонуклеотида для доставки субъекту. Стабилизация олигонуклеотида характеризуется [количественно оценивается] в настоящем документе по увеличению температуры плавления или температуры T_m олигонуклеотида.

[0167] Описанные конструкции олигонуклеотида можно вводить отдельно или в комбинации с одним или более дополнительными средствами нацеленной терапии. Описанные конструкции олигонуклеотида можно вводить отдельно или в комбинации с одним или более дополнительными средствами лечения инфекции ВГВ. При комбинированной терапии следует понимать, что конструкции олигонуклеотида и одно или более дополнительных средств лечения инфекции ВГВ можно вводить одновременно в одной или отдельных композициях или вводить отдельно, одновременно или последовательно.

[0168] В некоторых вариантах осуществления описанные конструкции олигонуклеотида вводят в комбинации с ингибиторами репликации ВГВ или иммуномодулирующими агентами или в схемах, которые сочетают олигонуклеотидные агенты к ВГВ как с ингибиторами репликации ВГВ, так и иммуномодулирующими агентами. В вариантах осуществления описанные конструкции олигонуклеотида вводят в комбинации со стандартным средством лечения инфекции ВГВ. Стандартные средства лечения инфекции ВГВ могут включать в себя ингибиторы вирусной полимеразы, такие как нуклеотиды/нуклеотидные аналоги (например, ламивудин, телбувидин, энтекавир, адефовир, тенофовир и клевудин, тенофовира алафенамид (TAF), CMX157 и AGX-1009) и интерфероны (например, PeG-IFN-2a и IFN-A-2b, интерферон лямбда). В вариантах осуществления описанные конструкции олигонуклеотида вводят в комбинации с одним или более олигонуклеотидами после одновременного (совместное введение) или последовательного дозирования. Олигонуклеотиды могут включать в себя миРНК, такие как ALN-HBV, ARB-1467, ARC-520 и ARC-521, антисмысловые олигонуклеотиды, такие как RG6004 (LNA HBV), IoniS-HBV_Rx и IoniS-HBV-L_Rx, миметики или ингибиторы миРНК, аптамеры, стерические ингибиторы, saRNA, shRNA, иммуномодулирующие и/или ингибирующие высвобождение HBsAg олигонуклеотиды, такие как REP 2139 и REP 2165. В вариантах осуществления описанные конструкции олигонуклеотида вводят в комбинации с одним или более противовирусными агентами, такими как ингибиторы репликации вируса. В вариантах осуществления описанные конструкции олигонуклеотида вводят в комбинации с ингибиторами капсида ВГВ. Ингибиторы капсида ВГВ могут включать в себя NVR 3-778, AB-423, GLS-4, Bayer 41-4109, HAP-1 и AT-1. В вариантах осуществления описанные конструкции олигонуклеотида вводят в комбинации с одним или более иммуномодуляторами, такими как агонисты TLR. Агонисты TLR могут включать в себя GS-9620, ARB-1598, ANA975, RG7795 (ANA773), MEDI9197, PF-3512676 и IMO-2055. В вариантах осуществления описанные конструкции олигонуклеотида вводят в комбинации с ингибиторами вакцины против ВГВ. Вакцины против ВГВ могут включать в себя Heplislav, ABX203 и INO-1800. В вариантах осуществления описанные конструкции олигонуклеотида вводят в комбинации.

[0169] Некоторые варианты осуществления включают ингибирование экспрессии гена ВГВ в клетке или субъекте, включающий приведение клетки в контакт с олигонуклеотидом или композицией настоящего описания или введение терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции настоящего описания нуждающемуся в этом субъекту.

[0170] Некоторые варианты осуществления включают лечение заболевания или расстройства, ассоциированного с экспрессией или активностью гена ВГВ, включающее введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции настоящего описания.

[0171] Некоторые варианты осуществления включают способ снижения вирусной нагрузки вирусом гепатита В (ВГВ) у субъекта, инфицированного ВГВ, включающий введение терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции настоящего описания нуждающемуся в этом субъекту, тем самым со снижением вирусной нагрузки ВГВ у субъекта. В некоторых вариантах осуществления также предложены способы снижения вирусной нагрузки вирусом гепатита D (HDV) у субъекта, инфицированного HDV.

[0172] Другие варианты осуществления включают способ снижения концентрации антигена вируса гепатита B (ВГВ) у субъекта, инфицированного ВГВ, включающий введение терапевтически эффективного количества олигонуклеотида или композиции настоящего описания нуждающемуся в этом субъекту, тем самым со снижением концентрации антигена ВГВ у субъекта. В некоторых вариантах осуществления также предложены способы снижения концентрации антигена вируса гепатита D (HDV) у субъекта, инфицированного HDV. В некоторых вариантах осуществления антиген ВГВ представляет собой HBsAg или HBeAg.

[0173] В одном варианте осуществления олигонуклеотид или композицию настоящего описания, нацеленную на ВГВ, вводят субъекту, имеющему инфекцию ВГВ, или инфекцию ВГВ и HDV, и/или ВГВ-ассоциированное заболевание так, что экспрессия одного или более генов ВГВ, концентрация кзкДНК ВГВ, концентрация антигена ВГВ, уровень вирусной нагрузки ВГВ, концентрация АЛТ и/или АСТ, например, в клетке, ткани, крови или другой ткани или жидкости субъекта уменьшается по меньшей мере на около 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 62%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или по меньшей мере на около 99% или более, или на значение, находящееся между этими числами, при введении субъекту олигонуклеотида или композиции настоящего описания. В некоторых вариантах осуществления концентрация антигена ВГВ снижена на ранее указанную величину. В некоторых вариантах осуществления антиген представляет собой HBsAg или HBeAg. В некоторых вариантах осуществления уровень вирусной нагрузки ВГВ снижен на ранее указанную величину.

[0174] В одном варианте осуществления олигонуклеотид или композицию настоящего описания, нацеленную на ВГВ, вводят субъекту, имеющему инфекцию ВГВ, или инфекцию ВГВ и HDV, и/или ВГВ-ассоциированное заболевание так, что концентрация антител к ВГВ, например, в клетке, ткани, крови или другой ткани или жидкости субъекта увеличивается по меньшей мере на около 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 62%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или по меньшей мере на около 99% или более, или на значение, находящееся между этими числами, при введении субъекту олигонуклеотида или композиции настоящего описания.

[0175] Введение олигонуклеотида или композиции настоящего описания в соответствии со способами и типами применения описания может приводить к снижению тяжести, признаков, симптомов и/или маркеров таких заболеваний или расстройств у пациента с инфекцией ВГВ, или с инфекцией ВГВ и HDV, и/или с ВГВ-ассоциированным заболеванием. Под «снижением» в данном контексте подразумевается статистически значимое снижение такой концентрации. Снижение может составлять, например, по меньшей мере около 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или около 100% или значение между двумя этими величинами.

[0176] Количество олигонуклеотида или композиции настоящего описания может быть определено медицинским специалистом. Суточная доза препаратов может варьироваться в широких пределах, составляющих от 0,001 до 1000 мг/кг в сутки для взрослого пациента или в иных дозах в этих пределах. Для перорального введения композиции предпочтительно предложены в форме таблеток, содержащих 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100, 150, 200, 250 и 500 миллиграмм активного компонента для симптоматического регулирования дозы у нуждающегося в лечении пациента. Эффективное количество лекарства обычно обеспечивается дозой на уровне приблизительно от 0,01 мг/кг до 100 мг/кг веса тела в сутки или в иных дозах в этих пределах. Предпочтительными являются дозы от около 0,01 до около 50,0 мг/кг веса тела в сутки или в иных дозах в этих пределах. Более предпочтительными являются дозы от около 0,01 до около 10,0 мг/кг веса тела в сутки в иных дозах в этих пределах. Более предпочтительными являются дозы от около 0,01 до около 1,0 мг/кг веса тела в сутки в иных дозах в этих пределах. Олигонуклеотиды можно вводить в режиме от 1 до 4 раз в сутки. Например, олигонуклеотиды настоящего описания можно вводить в одной или более дозах от около 0,1 мг/кг до около 100 мг/кг. Например, описанные олигонуклеотиды можно вводить в дозе около 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10, 10,5, 11, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5, 20, 20,5, 21, 21,5, 22, 22,5, 23, 23,5, 24, 24,5, 25, 25,5, 26, 26,5, 27, 27,5, 28, 28,5, 29, 29,5, 30, 31, 32, 33, 34, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 100 мг/кг. Значения и диапазоны, промежуточные по отношению к указанным значениям, также являются частью настоящего описания. Эти значения могут применяться к внутривенной инфузии и/или подкожной доставке. Эти дозы можно использовать также для других форм доставки, описанных в настоящем документе. Дозировки могут варьироваться в зависимости от потребностей пациентов, тяжести заболевания, по отношению к которому осуществляется лечение, и используемых олигонуклеотидов. Можно применять ежедневное введение или периодическую ревизию дозы.

[0177] Олигонуклеотиды настоящего описания можно вводить путем внутривенной инфузии в течение некоторого периода времени, например, в течение 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или в течение около 25 минут. Введение можно повторять, например, на регулярной основе, например еженедельно, дважды в месяц (т.е. каждые две недели) в течение одного месяца, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев или дольше. После завершения начальной схемы лечение можно проводить реже. Например, после введения еженедельно или один раз в две недели в течение трех месяцев введение можно повторять один раз в месяц, в течение шести месяцев, или в течение года, или дольше.

[0178] Олигонуклеотиды настоящего описания также можно вводить путем подкожной доставки. Введение можно повторять, например, на регулярной основе, например еженедельно, дважды в месяц (т. е. каждые две недели) в течение одного месяца, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев или дольше. После завершения начальной схемы лечение можно проводить реже. Например, после введения еженедельно или один раз в две недели в течение трех месяцев введение можно повторять один раз в месяц, в течение шести месяцев, или в течение года, или дольше.

[0179] Эффективность лечения или профилактики заболевания можно оценить, например, путем измерения прогрессирования заболевания, ремиссии заболевания, тяжести симптомов, снижения боли, качества жизни, дозы лекарственного средства, необходимой для поддержания терапевтического эффекта, концентрации маркера заболевания или любого другого измеряемого параметра, имеющего отношение к данному заболеванию, лечение или профилактика которого осуществляется. Специалист в данной области вполне способен отслеживать эффективность лечения или профилактики путем измерения любого одного из таких параметров или любой комбинации параметров. Например, эффективность лечения CHB можно оценить, например, путем периодического контроля уровня вирусной нагрузки и концентрации трансаминаз. Сравнение последующих показаний с исходными показаниями дает представление о том, является ли лечение эффективным.

4. Определения

[0180] Следует понимать, что в настоящем документе терминология служит только для цели описания конкретных вариантов осуществления и не должна рассматриваться как ограничивающая объем настоящего изобретения. Если не указано иное, применяются следующие определения.

[0181] При использовании в настоящем документе термины «комплементарный» или «комплементарность» в отношении полинуклеотидов (т. е. последовательности нуклеотидов, такой как олигонуклеотид или целевая нуклеиновая кислота) относятся к правилам спаривания оснований. При использовании в настоящем документе термин «комплементарный нуклеотидной последовательности» относится к олигонуклеотиду, который при выравнивании с нуклеотидной последовательностью так, что 5'-конец одной последовательности объединяется с 3'-концом другого, находится в «антипараллельной ассоциации». Например, последовательность 5'-A-G-T-3' комплементарна последовательности 3'-T-C-A-5. Некоторые основания, редко встречающиеся в нуклеиновых кислотах природного происхождения, могут быть включены в нуклеиновые кислоты, описанные в настоящем документе. Они включают в себя, например, инозин, 7-деазагуанин, закрытые нуклеиновые кислоты (LNA) и пептидные нуклеиновые кислоты (PNA). Комплементарность не обязательно должна быть идеальной; стабильные дуплексы могут содержать несовпадающие пары оснований, дегенеративные или несоответствующие основания. Специалисты в области технологии нуклеиновых кислот могут определить дуплексную стабильность эмпирически с учетом ряда переменных, включая, например, длину олигонуклеотида, состав основания и последовательность олигонуклеотида, ионную силу и частоту несовпадающих пар оснований. Комплементарная последовательность может также представлять собой последовательность РНК, комплементарную последовательности ДНК или ее комплементарной последовательности, а также может представлять собой кДНК.

[0182] Используемый в настоящем документе термин «гибридизация» относится к способу, в котором две по существу комплементарные цепи нуклеиновых кислот (по меньшей мере приблизительно на 65% комплементарные на протяжении по меньшей мере от 14 до 25 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно на 75% или по меньшей мере приблизительно на 90% комплементарные) соединяют друг с другом в соответствующих жестких условиях с образованием дуплекса или гетеродрекса путем образования водородных связей между комплементарными парами оснований. Гибридизации, как правило и предпочтительно, проводят с молекулами нуклеиновых кислот длиной зонда, предпочтительно длиной 15-100 нуклеотидов, более предпочтительно длиной 18-50 нуклеотидов. Методики гибридизации нуклеиновых кислот хорошо известны в данной области. См., например, Sambrook, et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Press, Plainview, N.Y. На гибридизацию и прочность гибридизации (т.е. на прочность связи между нуклеиновыми кислотами) влияют такие факторы, как степень комплементарности между нуклеиновыми кислотами, жесткость используемых условий и температура плавления (T_m) образованного гибрида. Специалистам в данной области понятно, как оценить и скорректировать жесткость условий гибридизации так, что последовательности, имеющие по меньшей мере желаемый уровень комплементарности, будут стабильно гибридизироваться, в то время как те, которые имеют меньшую комплементарность, не будут стабильно гибридизироваться. Примеры условий и параметров гибридизации см., например, в Sambrook, et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Press, Plainview, N.Y.; Ausubel, F. M. et al. 1994, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Secaucus, N.J. В некоторых вариантах осуществления специфическая гибридизация происходит в жестких условиях гибридизации. Олигонуклеотид или полинуклеотид (например, зонд или праймер), специфичный к целевой нуклеиновой кислоте, будет «гибридизироваться» с целевой нуклеиновой кислотой в приемлемых условиях.

[0183] Используемый в настоящем документе термин «жесткие условия гибридизации» относится к условиям гибридизации, по меньшей мере не менее жестким, чем следующие условия: гибридизация в 50% формамиде, 5xSSC, 50 мМ NaH₂PO₄, pH 6,8, 0,5% SDS, 0,1 мг/мл обработанной ультразвуком ДНК молоки лососевых и 5x раствора Денхардта при 42°C в течение ночи; промывка 2x SSC, 0,1% SDS при 45°C; и промывка 0,2x SSC, 0,1% SDS при 45°C. В другом примере жесткие условия гибридизации не должны обеспечивать гибридизацию двух нуклеиновых кислот, которые отличаются на протяжении 20 смежных нуклеотидов более чем на два основания.

[0184] При использовании в настоящем документе термин «по существу комплементарный» означает, что две последовательности гибридизируются в жестких условиях гибридизации. Специалисту в данной области будет понятно, что по существу комплементарные последовательности не обязательно должны гибридизироваться по всей их длине. В частности, по существу комплементарные последовательности могут содержать непрерывную последовательность оснований, которая не гибридизируется с целевой последовательностью, расположенной к 3'- или к 5'-концу по отношению к непрерывной последовательности оснований, которая гибридизируется в жестких условиях гибридизации с целевой последовательностью.

[0185] Термин «фармацевтически приемлемый» относится к материалу, который не является биологически или иным образом нежелательным, например, материал может быть включен в фармацевтическую композицию, вводимую пациенту, так, чтобы он не вызывал каких-либо нежелательных биологических эффектов или не вступал в негативное взаимодействие с любыми другими компонентами композиции, в состав которой он входит. Если термин «фармацевтически приемлемый» используется для обозначения фармацевтического носителя или эксципиента, подразумевается, что носитель или эксципиент удовлетворяет необходимым стандартам токсикологического и производственного тестирования или что он включен в руководство по неактивным компонентам, разработанное Управлением по надзору за пищевыми продуктами и медикаментами США.

[0186] «Конструкции» олигонуклеотидов могут относиться к олигонуклеотиду настоящего описания и, например, к (1) конъюгированной группе, такой как описанная в настоящем документе (например, нацеливающие функциональные группы) или (2) доменам модифицированных/немодифицированных нуклеотидов, таким как присутствующие в некоторых химерных олигонуклеотидах.

[0187] Термин «химерный олигонуклеотид» означает олигонуклеотид, имеющий более одного домена, например, как показано в формулах (VI) и (VII). Химерный олигонуклеотид может включать в себя дополнительные компоненты, например лигандную нацеливающую группу или фармакофор, или дополнительные нуклеотиды, линкеры и т.п.

[0188] Термин «модифицированный нуклеозид» означает нуклеозид, имеющий независимо модифицированную сахарную функциональную группу и/или модифицированное нуклеотидное основание. Следует понимать, что нуклеозиды могут быть связаны посредством связей между субъединицами, таких как фосфодиэфирные связи между субъединицами, тиофосфатные связи между субъединицами, фосфорамидатные связи между субъединицами и тиофосфорамидатные связи между субъединицами. Термин «модифицированные нуклеотиды» может означать нуклеозид вместе со связью между субъединицами.

[0189] Термин «немодифицированные» или «природные» нуклеотидные основания включает в себя пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G) и пиримидиновые основания тимин (Т), цитозин (С) и урацил (U). Термин «модифицированные нуклеотидные основания» включает в себя другие синтетические и природные нуклеотидные основания, такие как 5-метилцитозин (5-Me-C), 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил и цитозин, 5-пропинил (-C≡C-CH₃) урацил и цитозин и другие алкинильные производные пиримидиновых оснований, 6-азоурацил, цитозин и тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген, особенно 5-бром, 5-трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 2-F-аденин, 2-аминоаденин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин, и 7-деазааденин, и 3-деазагуанин, и 3-деазааденин. Дополнительные модифицированные нуклеотидные основания включают в себя триклические пиримидины, такие как феноксиазинцитидин (1H–пиримидо[5,4-b][l,4]бензоксазин-2(3H)-он), фенотиазинцитидин (1H–пиримидо[5,4-b][l,4]бензотиазин-2(3H)-он), G-зажимы, такие как замещенный феноксазинцитидин (например, 9-(2-am-oe1hoxy)-H–пиримидо[5,4-b][l,4]бензоксазин-2(3H)-он), карбазолцитидин (2H–пиримидо[4,5-b]индол-2-он), пиридоиндолцитидин (H–пиридо[3,2,5]пирроло[2,3-d]пиримидин-2-он). Модифицированные нуклеотидные основания также могут включать в себя те, в которых пуриновое или пиримидиновое основание замещено другими гетероциклами, например, 7-деазааденин, 7-деазагуанозин, 2-аминопиридин и 2-пиридон.

[0190] В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание выбрано из группы, состоящей из 5-метилцитозина, 2,6-диаминопурина, 5-метилурацила и G-зажима. В некоторых вариантах осуществления G-зажим представляет собой

.

[0191] Термин «лигандная нацеливающая группа» означает группу, которая способствует доставке олигонуклеотида к инфицированным ВГВ гепатоцитам посредством связывания с рецептором. Эти группы включают в себя «нацеливающие на рецептор лиганды», такие как GalNAc и холестерин, которые нацелены на рецептор клеточной поверхности ASGPR и рецептор ЛПНП на клеточной поверхности соответственно. Другие нацеливающие на рецептор лиганды, которые связываются с этими рецепторами на клеточной поверхности, также входят в объем настоящего термина.

[0192] Термин «фармакофор» означает последовательность олигонуклеотидного лекарственного средства, которая взаимодействует с молекулами ДНК или РНК ВГВ в клетках, инфицированных HBV/HDV или ВГВ, и запускает противовирусные ответы.

[0193] Термин «конформационно ограниченный нуклеозид» означает нуклеозиды, имеющие мостиковую или бициклическую сахарную структуру, причем конформация нуклеозида может быть фиксирована в конкретной конфигурации. Например, конформационно ограниченные нуклеозиды включают в себя нуклеозиды с фиксированной конформацией сахара C₃'-эндо. Примеры осуществления включают в себя мостиковые нуклеиновые кислоты (BNA), например, 2', 4'-BNA нуклеозиды, такие как α-L-метиленокси (4'-CH₂-O-2') LNA, β-D-метиленокси (4'-CH_2-O-2) LNA, этиленокси (4'-(CH₂)₂-O-2') ENA, 2',4'-BNA^NC[NH], 2',4'-BNA^NC[NMe], 2',4'–BNA^NC[NBn], аминоокси (4'-CH2-O-N(R)-2') BNA и оксиамино (4'-CH₂-N(R)-O-2') BNA. Другие примеры структур BNA включают в себя, без ограничений, олигонуклеотиды, имеющие по меньшей мере один мостик между 4'- и 2'-положениями сахара, причем каждый из мостиков независимо содержит 1 или 2-4 связанные группы, независимо выбранные из -[C(R₁)(R₂)]_N-, -C(R₁)=C(R₂)-, -C(R₁)=N-, -C(=NR₁)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(R₁)_2-, -S(=O)_X- и -N(R₁)-; где x равно 0, 1 или 2; n равно 1, 2, 3 или 4; каждый R₁ и R₂ независимо представляет собой H, защитную группу, гидроксил, C_1-C₁₂ алкил, замещенный C_1-C₁₂ алкил, C_2-C₁₂ алкенил, замещенный C_2-C₁₂ алкенил, C_2-C₁₂ алкинил, замещенный C_2-C₁₂ алкинил, C_5-C₂₀ арил, замещенный C_5-C₂₀ арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, C_5-C₇ алициклический радикал, замещенный C_5-C₇ алициклический радикал, галоген, OJ₁, NJ₁J₂, SJ₁, N₃, COOJ₁, ацил (C(=O)-H), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=O)_2-J₁) или сульфоксил (S(=O)-J₁); и каждый J₁ и J₂ независимо представляет собой H, C_1-C₁₂ алкил, замещенный C_1-C₁₂ алкил, C_2-C₁₂ алкенил, замещенный C_2-C₁₂ алкенил, C_2-C₁₂ алкинил, замещенный C_2-C₁₂ алкинил, C_5-C₂₀ арил, замещенный C_5-C₂₀ арил, ацил (C(=O)-H), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, C_1-C₁₂ аминоалкил, замещенный C_1-C₁₂ аминоалкил или защитную группу. Определенные BNA были получены и описаны в патентной литературе, а также в научной литературе (см., например, публикации патента США №7,053,207; 6,268,490; 6,770,748; 6,794,499; 7,034,133; 6,525,191; 7,696,345; 7,569,575; 7,314,923; 7,217,805; и 7,084,125, которые полностью включены в настоящий документ путем ссылки. Термин «конформационно ограниченный нуклеотид» относится к конформационно ограниченным нуклеозидам, связанным посредством связи между субъединицами.

[0194] В некоторых вариантах осуществления конформационно ограниченный нуклеозид выбран из необязательно замещенной LNA или необязательно замещенной ENA. Необязательно замещенная LNA или ENA может быть замещена алкильной функциональной группой, например метилом или этилом на одной из групп -CH_2-.

[0195] Термин «ингибирование экспрессии» относится к уменьшению или блокированию экспрессии или активности и необязательно указывает на полное исчезновение экспрессии или активности.

[0196] Термин «ингибирование репликации вируса» относится к уменьшению или блокированию репликации вируса и не обязательно означает полное прекращение репликации вируса.

[0197] Термин «субъект» относится к млекопитающим и включает в себя людей и не относящихся к человеку млекопитающих. В некоторых вариантах осуществления субъект является человеком, например взрослым человеком.

[0198] Термин «лечение» заболевания у субъекта относится к (1) профилактике заболевания у субъекта, который предрасположен к нему или у которого еще не развились симптомы заболевания; (2) подавлению заболевания или прекращению его развития; или (3) облегчению или инициированию обратного развития заболевания.

[0199] Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество фармацевтического агента, которое обеспечивает терапевтическое благоприятное воздействие на субъекта.

[0200] Термин «фармацевтически приемлемая соль» означает физиологически и фармацевтически приемлемые соли соединений настоящего описания, т.е. соли, которые сохраняют желаемую биологическую активность исходного олигонуклеотида/соединения и не оказывают нежелательного токсического воздействия.

[0201] В настоящем описании используются следующие аббревиатуры. 2'-H (дезоксирибозные) нуклеозиды обозначаются заглавной буквой, соответствующей нуклеотидному основанию, например, A, C, G и T. 2'-OH (рибозные) нуклеозиды обозначаются строчной буквой r и заглавной буквой, соответствующей нуклеотидному основанию, например, rA, rC, rG и rU. Нуклеозиды 2'-O-Me обозначаются строчной буквой m и заглавной буквой, соответствующей нуклеотидному основанию, например, mA, mC, mG и mU. Нуклеозиды 2'-MOE обозначаются строчными буквами moe и заглавной буквой, соответствующей нуклеотидному основанию, например, moeA, moeC, moeG и moeU. Нуклеозиды 2'-рибо-F обозначаются строчной буквой f и заглавной буквой, соответствующей нуклеотидному основанию, например, fA, fC, fG и fU. Нуклеозиды 2'-арабино-F обозначаются строчными буквами af и заглавной буквой, соответствующей нуклеотидному основанию, например, afA, afC, afG и afU. mA* представляет собой 3'-амино-2'-OMe-2,6-диаминопурин. A* представляет собой 3'-амино-2'-дезокси-2,6-диаминопурин. fA* представляет собой 3'-амино-2'-F-2,6-диаминопурин. Нуклеозиды LNA обозначаются буквой L и заглавной буквой, соответствующей нуклеотидному основанию, например, LA, LC, LG, LT.

[0202] Что касается основной цепи и связей между субъединицами нуклеотидов, фосфодиэфирные связи между субъединицами обозначаются как PO или, как правило, не включаются в информацию о последовательности; тиофосфатные связи между субъединицами обозначаются строчными буквами ps; фосфорамидатные связи между субъединицами обозначаются строчными буквами np; и тиофосфорамидатные связи между субъединицами обозначаются строчными буквами nps;

[0203] N3'→P5' означает модифицированные нуклеотиды, имеющие связи между субъединицами, где 3'-функциональная группа содержит N (например, NH) и связана посредством P. Например, следующая структура имеет связь N3'→P5':

.

[0204] Следует отметить, что в рамках настоящего документа и формулы изобретения использование формы единственного числа включает объекты во множественном числе, если из контекста явно не следует иное. Следует дополнительно отметить, что формула изобретения может быть составлена с исключением любого необязательного элемента. Таким образом, данное утверждение призвано служить в качестве априорного основания для применения такой исключающей терминологии, как «исключительно», «только» и т. п., в связи с перечислением элементов формулы изобретения или применения «негативного» ограничения.

[0205] Термин «около» будет понятен специалистам в данной области, и его значение будет в некоторой степени зависеть от контекста, в котором он применяется. При использовании периода, величина которого не понятна средним специалистам в данной области из контекста, в котором он используется, «около» будет означать до плюс или минус 10% от конкретного периода. Определенные диапазоны представлены в настоящем документе с числовыми значениями, которым предшествует термин «около». В настоящем документе термин «около» используется для буквального подтверждения точного числа, которому оно предшествует, а также какого-либо числа, которое является близким или приблизительно равным числу, которому предшествует данный термин. При определении того, является ли какое-либо число близким или приблизительно равным точно указанному числу, близким или приблизительно равным некомпенсированным может быть число, которое, в контексте его представления, обеспечивает существенный эквивалент точно указанного числа.

[0206] Следует также понимать, что различные режимы лечения или профилактики заболеваний или состояний, описанных в настоящем документе, означают «существенное» лечение или профилактику, что включает в себя полное, но также неполное лечение или профилактику, и при этом достигается некоторый значимый с биологической или медицинской точки зрения результат. Лечение может представлять собой непрерывное длительное лечение хронического заболевания или введение один или несколько раз для лечения острого состояния.

[0207] Если приводится диапазон значений, следует понимать, что каждое промежуточное значение до десятой единицы нижнего предела (если контекстом явно не указывается иное) между верхним и нижним пределами этого диапазона, а также любое другое указанное или промежуточное значение в этом указанном диапазоне охватываются изобретением. Верхний и нижний пределы этих меньших диапазонов могут быть независимо включены в меньшие диапазоны и также охватываются изобретением, при наличии любого специально исключенного предела в указанном диапазоне. Если фактический диапазон значений включает один или оба предела, диапазоны, исключающие любой из двух или оба предела сразу, также включены в объем изобретения.

[0208] Настоящее описание не ограничено описанными вариантами осуществления, так как они могут быть изменены. Следует также понимать, что терминология, используемая в настоящем документе, служит только для цели описания конкретных вариантов осуществления и не является ограничивающей объем настоящего изобретения, который может быть ограничен только прилагаемой формулой изобретения.

[0209] Как будет очевидно обычным специалистам в данной области после прочтения настоящего описания, каждый из отдельных вариантов осуществления, описанных и показанных в настоящем документе, имеет отдельные составляющие и признаки, которые можно легко отделять от признаков любого из нескольких других вариантов осуществления или же объединять с ними без отступления от объема или сущности настоящего изобретения. Любой упомянутый способ можно осуществлять в порядке следования перечисленных событий или в любом другом логически возможном порядке.

[0210] Все публикации и патенты, процитированные в настоящем описании, включены в настоящий документ путем ссылки, как если бы каждая индивидуальная публикация или патент были конкретно и по отдельности указаны как включаемые путем ссылки, и включены в настоящий документ путем ссылки для раскрытия и описания способов и/или материалов, применительно к которым данные публикации цитируются. Цитирование любой публикации дается для ее описания до даты подачи заявки, и его не следует рассматривать как допущение того, что настоящее изобретение не имеет правомочности предвосхищать такую публикацию путем предшествующего изобретения. Кроме того, приведенные даты публикации могут отличаться от фактических дат публикации, и может потребоваться их подтверждение независимыми агентами.

5. Примеры

[0211] Следующие примеры демонстрируют определенные варианты осуществления настоящего описания для того, чтобы помочь специалисту в данной области в реализации изобретения. Соответственно, примеры никоим образом не рассматриваются как ограничивающие объем настоящего описания.

Способы получения

[0212] Все мономеры сушили в вакуумной сушилке с осушителями (KOH и P₂O₅, комп. темп. 24 ч). Синтез твердых подложек (CPG), присоединенных к первому 5'-остатку, осуществляли с использованием доступных на рынке источников. Все другие реагенты для синтеза и растворители получали из доступных на рынке источников и использовали в качестве таковых. Химические вещества и растворители для постсинтетических работ приобретали у доступных на рынке источников и использовали без какой-либо очистки или обработки. Растворитель (ацетонитрил) и растворы (амидит и активатор) хранили на молекулярных ситах во время синтеза.

[0213] Контрольные, стабилизированные нуклеазой, 3'-холестерин-, 3'-токоферол- и 3'-GalNAc-конъюгированные антисмысловые олигонуклеотиды, использованные в данном исследовании, показаны, например, в таблицах 10-13. Антисмысловые олигонуклеотиды синтезировали на синтезаторе ABI-394 с использованием стандартного 93-стадийного цикла, предложенного производителем. Твердая подложка представляла собой стекло с заданным размером пор, а мономеры содержали стандартные защитные группы. Каждый олигонуклеотид синтезировали отдельно с использованием доступных на рынке 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-3'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил) ДНК и/или 2'–O-Me фосфорамидитных мономеров 6-N-бензоиладенозина (A^Bz), 4-N-ацетилцитидина (C^Ac), 2-N-изобутирилгуанозина (G^iBu) и тимидина (T) согласно стандартным протоколам твердофазного синтеза олигонуклеотида. Фосфорамидиты приобретали у доступных на рынке источников. 2'-O-Me-2,6,диаминопуринфосфорамидит приобретали у доступных на рынке источников. DDTT ((диметиламино-метилиден)амино)-3H–1,2,4-дитиазолин-3-тион использовали в качестве агента переноса серы для синтеза фосфоротиоатов олигонуклеотида. Модифицированные олигонуклеотиды получали с помощью расширенной реакции сочетания 0,1 M раствора фосфамидита в CH₃CN в присутствии 5-(этилтио)-1H–тетразольного активатора с твердым связанным олигонуклеотидом с последующим стандартным блокированием, окислением и снятием защиты. Эффективность постадийного связывания всех модифицированных фосфорамидатом составила более 98%. Твердые подложки, несущие олигонуклеотид, нагревали с помощью водного раствора аммиака/этанола (3 : 1) при 55°C в течение 8 ч для снятия нестабильных в щелочной среде защитных групп.

[0214] Конъюгированные с холестерином и токоферолом олигонуклеотиды получали путем запуска твердофазного синтеза с присоединения холестерина и токоферола к подложке на линкере TEG и конечного присоединения фосфорамидата к прикрепленному к подложке олигонуклеотиду. Конъюгированные с GalNAc ASO синтезировали из твердой подложки гидроксипролинол-GalNAc. GalNAc привязывали к транс-4-гидроксипролинолу посредством 6-аминогексаноатной связи с получением функциональной группы гидроксипролинол-GalNAc, которую впоследствии присоединяли к функционализированному стеклу с заданным размером пор (CPG) с получением твердой подложки.

[0215] Неконъюгированные и GalNAc-модифицированные олигонуклеотиды очищали с помощью анионообменной ВЭЖХ. Буферные растворы представляли собой 20 мМ фосфат натрия в 10% CH₃CN, pH 8,5 (буферный раствор A) и 20 мМ фосфат натрия в 10% CH₃CN, 1,8 M NaBr, pH 8,5 (буферный раствор B). Фракции, содержащие полноразмерные олигонуклеотиды, объединяли, обессоливали и лиофилизировали.

[0216] Последовательности, конъюгированные с холестерином и токоферолом, очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонке с обращенной фазой RPC-Source15, заполненной самостоятельно. Буферные растворы представляли собой 20 мМ NaOAc в 10% CH₃CN (буферный раствор A) и 20 мМ NaOAc в 70% CH₃CN (буферный раствор B). Посредством аналитической ВЭЖХ и жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией и электроионизацией (ES LC-MS) устанавливали целостность олигонуклеотидов.

Синтез фосфорамидатных (NP) и тиофосфорамидатных (NPS) модифицированных олигонуклеотидов

[0217] Модифицированные NP и NPS олигонуклеотиды синтезировали на синтезаторе ABI-394 с использованием 93-стадийного цикла, измененного в отношении стадий разблокировки, сочетания и ожидания. Твердая подложка представляла собой 3'-NHTR-5'-LCAA-CPG. Каждый олигонуклеотид отдельно синтезировали с использованием 3'-NH-TR-5'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил) ДНК фосфорамидитных мономеров 6-N-бензоиладенозина (A^Bz), 4-N-бензилцитидина (C^Bz), 2-N-изобутирилгуанозина (G^iBu) и тимидина (T) согласно стандартным протоколам твердофазной химии фосфорамидита, используя процедуру, описанную в публикации Nucleic Acids Research, 1995, Vol. 23, No. 14 2661-2668.

Строительные блоки 3'-NHTR-ДНК для синтеза олигомеров

[0218] 2'-F 3'-NH-MMTR-5'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил) уридин (U) и 4-N-бензоилцитидин (C^Bz) фосфорамидитные мономеры) синтезировали, используя процедуру, описанную в публикации Nucleic Acids Research, 1996, Vol. 24, No. 15, 2966-2973

2'-F 3'-NH-MMTR-5'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил) 6-N-бензоиладенозин (A^Bz), 2-N-изобутирилгуанозин (G^iBu) синтезировали согласно описанной ниже процедуре.

**

Получение PH–1

[0219] К раствору (2R,3S,4S,5R)-2-(6-амино-9H–пурин-9-ил)-5-(гидроксиметил)оксолан-3,4-диола (300 г, 1,123 моль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (7 500 мл) в инертной атмосфере азота добавляли трифенилфосфин (735 г, 2,802 моль, 2,50 экв.). Оставшийся раствор перемешивали в течение 15 мин при 0°C. Впоследствии по каплям добавляли раствор диэтилазодикарбоксилата (449,4 г, 2,581 моль, 2,54 экв.) в N,N-диметилформамиде (7500 мл) при перемешивании при 0°C в течение 60 мин. Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 25°C. Полученную смесь концентрировали под пониженным давлением. Продукт осаждали добавлением эфира. Твердые вещества собирали фильтрованием. Неочищенный продукт очищали посредством повторной кристаллизации из метанола. Твердое вещество сушили в печи под пониженным давлением. В результате получали 186 г (66%) PH–1 в виде белого твердого вещества. 1H–ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц): 8,34-8,07 (м, 2H), 7,44-7,26 (м, 2H), 6,30-6,21 (м, 1H), 5,07-4,95 (м, 1H), 4,33-4,20 (м, 1H), 4,15-4,03 (м, 2H), 3,71-3,50 (м, 2H).

Получение PH–2

[0220] К раствору PH–1 (100 г, 401,2 ммоль, 1,00 экв.) в пиридине (1000 мл) в инертной атмосфере азота по каплям добавляли бензоилхлорид (175 г, 1,245 моль, 3,10 экв.) при перемешивании при 0°C в течение 30 мин. Полученный раствор перемешивали в течение 3 ч при 25°C. Полученный раствор разводили 400 мл этилацетата. Полученную смесь промывали 3×300 мл воды и 2×300 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия соответственно. Полученную смесь промывали 1×300 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Смесь сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью этилацетата/петролейного эфира (2/1). В результате получали 157 г (70%) PH–2 в виде белого твердого вещества.

Получение PH–3

[0221] К раствору PH–2 (30 г, 53,42 ммоль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (300 мл) в инертной атмосфере азота по порядку добавляли хлорид аммония (5,7 г, 106,56 ммоль, 2,00 экв.) и азид натрия (34,8 г, 535,30 ммоль, 10,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 5 ч при 50°C. Полученный раствор разводили 2000 мл дихлорметана. Полученную смесь промывали 3×2000 мл воды, 1×2000 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 1×2000 мл насыщенного раствора хлорида натрия соответственно. Смесь сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. В результате получали 24 г (90%) PH–3 и PH–3S (5 : 1) в виде белого твердого вещества.

Получение PH–4

[0222] К раствору PH–3 и PH–3S (5 : 1) (10 г, 19,98 ммоль, 1,00 экв.) в тетрагидрофуране (100 мл) в инертной атмосфере азота добавляли 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена (10,69 г, 70,22 ммоль, 3,50 экв.). Впоследствии по каплям добавляли перфторбутилсульфонилфторид (12,69 г, 2,10 экв.) при перемешивании при 0°C в течение 10 мин. Полученный раствор перемешивали в течение 1,5 ч при 0°C. Полученный раствор разводили 200 мл дихлорметана. Полученную смесь промывали 3×200 мл воды, 1×200 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 1×200 мл насыщенного раствора хлорида натрия соответственно. Смесь сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный продукт повторно кристаллизовали из смеси этилацетата/петролейного эфира в соотношении 1 : 1. В результате получали 6 г (60%) PH–4 и PH–4S (5 : 1) в виде белого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 503.

[0223] К раствору PH–4 и PH–4S (5 : 1) (10 г, 19,90 ммоль, 1,00 экв.) в тетрагидрофуране (150 мл) добавляли 10% палладиевый углерод (3,0 г). Колбу вакуумировали и три раза продували азотом с последующей продувкой водородом. Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Твердые вещества фильтровали. Полученную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный продукт (10 г) очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ в следующих условиях (IntelFlasH–1): колонка, C18; подвижная фаза, вода и ацетонитрил (30% ацетонитрил до 50% за 30 мин); детектор, УФ 254 нм. В результате получали 7 г (74%) PH–5 в виде белого твердого вещества и 1,0 г PH–5S в виде белого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 477.

Получение PH–6

[0224] К раствору PH–5 (4 г, 8,40 ммоль, 1,00 экв.) в пиридине (40 мл) в инертной атмосфере азота по порядку добавляли 4-диметиламинопиридин (1,5 г, 12,28 ммоль, 1,50 экв.) и 4-метокситрифенилметилхлорид (10,3 г, 4,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 25°C. Полученный раствор разводили 300 мл дихлорметана. Полученную смесь промывали 1×300 мл воды и 3×300 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Полученную смесь промывали 1×300 мл насыщенного раствора хлорида натрия соответственно. Смесь сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью дихлорметан/метанол (100/1). В результате получали 5,7 г (91%) PH–6 в виде белого твердого вещества.

Получение PH–7

[0225] К раствору PH–6 (5 г, 6,68 ммоль, 1,00 экв.) в смеси пиридин/метанол/вода (32,2/14,7/2,4 мл) по каплям добавляли гидроксид натрия (2 моль/л) (7,2 мл, 1,10 экв.) при перемешивании при 0°C в течение 5 мин. Полученный раствор перемешивали в течение 20 мин при 0°C. Впоследствии реакцию гасили добавлением 200 мл воды со льдом. Полученный раствор экстрагировали 400 мл дихлорметана и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали 1×300 мл воды и 1×300 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Смесь сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью метанол/дихлорметан (1 : 100). В результате получали 4,3 г (100%) PH–7 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 645.

Получение PH–8

[0226] К раствору PH–7 (19,4 г, 35,89 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (200 мл) в инертной атмосфере азота добавляли 3-([бис[бис(пропан-2-ил)амино]фосфанил]окси)пропаннитрил (11,79 г, 39,12 ммоль, 1,30 экв.). После этого добавляли 4,5-дицианоимидазол (4,26 г, 1,20 экв.) при 0°C. Полученный раствор перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Полученный раствор разводили 1000 мл дихлорметана. Полученную смесь промывали 3×800 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 1×800 мл раствора хлорида натрия соответственно. Смесь сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ в следующих условиях: колонка, C18; подвижная фаза, вода и ацетонитрил (40% ацетонитрил до 80% за 6 мин); детектор, УФ 254 нм. В результате получали 15,2 г (50%) PH–8 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 845.

Получение PH–11

[0227] К раствору 2-амино-9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)оксолан-2-ил]-6,9-дигидро-1H–пурин-6-он (700 г, 2,47 моль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (7 л) в инертной атмосфере азота добавляли имидазол (504 г, 7,41 моль, 3,00 экв.). После этого по каплям добавляли 1,3-дихлор-1,1,3,3-тетраизопропилдисилоксан (770 г, 2,44 моль, 1,00 экв.) при перемешивании при 20°C. Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 20°C. Впоследствии реакционный раствор вливали в 70 л смеси вода/лед. Твердые вещества собирали фильтрованием. В результате получали 1200 г (92%) PH–11 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 526.

Получение PH–12

[0228] К раствору PH–11 (530 г, 1,01 моль, 1,00 экв.) в дихлорметане (5000 мл) в инертной атмосфере азота по порядку добавляли пиридин (725 г, 9,17 моль, 9,00 экв.) и 4-диметиламинопиридин (147 г, 1,20 моль, 1,20 экв.). После этого по каплям добавляли трифторметансульфоновый ангидрид (426 г, 1,51 моль, 1,20 экв.) при перемешивании при 0°C. Полученный раствор перемешивали в течение 15 мин при 0°C. Впоследствии полученный раствор оставляли для протекания реакции при перемешивании в течение дополнительных 2 ч при 20°C. Полученный раствор разводили 5000 мл дихлорметана. Полученный раствор промывали 2×3000 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 1×3000 мл насыщенного раствора хлорида натрия соответственно. Раствор сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. В результате получали 600 г (90%) PH–12 в виде коричневого твердого вещества.

Продукт использовали на следующей стадии непосредственно без дополнительной очистки.

Получение PH–13

[0229] К раствору PH–12 (200 г, 304,04 ммоль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (1000 мл) в инертной атмосфере азота добавляли нитрит натрия (115 г, 1,67 ммоль, 5,00 экв.). Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при 25°C. Полученный раствор вливали в 5000 мл смеси вода/лед. Твердые вещества собирали фильтрованием. Неочищенный продукт повторно кристаллизовали из смеси дихлорметан/ацетонитрил в соотношении 1/4 (50 мл/г). Это привело к получению 78 г (49% за последние две стадии) PH–13 в виде твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 526.

Получение PH–14

[0230] К раствору PH–13 (50 г, 95,10 ммоль, 1,00 экв.) в тетрагидрофуране (500 мл) в инертной атмосфере азота добавляли тетрабутиламмония фторид (95 мл, 1,00 экв., 1 н. раствор в тетрагидрофуране). Полученную смесь перемешивали в течение 12 ч при 20°C. Полученную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал трижды повторно кристаллизовали из смеси метанол/этилацетат в соотношении 1/5 (20 мл/г). Твердые частицы собирали фильтрованием и впоследствии очищали с помощью флэш-хроматографии в следующих условиях: колонка, силикагелевая C18; подвижная фаза, вода и ацетонитрил (2% ацетонитрил до 10% за 10 мин); детектор, УФ 254 нм. В результате получали 16 г (59%) PH–14 в виде белого твердого вещества. 1H–ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц): 10,44 (с, 1H), 6,49 (с, 2H), 6,02 (с, 1H), 5,55-5,65 (м, 2H), 5,10 (с, 1H), 4,08 (м, 2H), 3,76 (м, 1H), 3,64 (м, 1H).

Получение PH–15

[0231] К раствору PH–14 (220 г, 776,72 ммоль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (2000 мл) в инертной атмосфере азота добавляли трифенилфосфин (509 г, 1,94 ммоль, 2,50 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1,5 ч при 0°C. К нему по каплям добавляли диэтилазодикарбоксилат (338 г, 1,94 моль, 2,50 экв.) при перемешивании при 0°C. Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь вливали в 20 л холодного этилового эфира. Твердые частицы собирали путем фильтрации, а затем повторно кристаллизовали из смеси метанол/этилацетат в соотношении 1/10 (10 мл/г). В результате получали 100 г (49%) PH–15 в виде коричневого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 266.

Получение PH–16

[0232] К раствору PH–15 (100 г, 377,0 ммоль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (1000 мл) в инертной атмосфере азота добавляли имидазол (77 г, 1,131 моль, 3,00 экв.). После этого по каплям добавляли трет-бутилдиметилсилилхлорид (142 г, 942 моль, 1,50 экв.) при перемешивании при 0°C. Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Впоследствии реакцию гасили добавлением метанола. Полученную смесь концентрировали под пониженным давлением. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью дихлорметан/метанол (100 : 1 ~ 15 : 1). В результате получали 80 г (85%) PH–16 в виде твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 380.

Получение PH–17

[0233] К раствору PH–16 (73 г, 192,37 ммоль, 1,00 экв.) в пиридине (730 мл) в инертной атмосфере азота добавляли 4-диметиламинопиридин (23,5 г, 192,35 ммоль, 0,50 экв.). После этого по каплям добавляли ангидрид изомасляной кислоты (213 г, 1,35 моль, 5,00 экв.) при перемешивании. Полученный раствор перемешивали в течение 3 ч при 50°C. Впоследствии реакцию гасили добавлением воды со льдом. Полученный раствор экстрагировали 3×2000 мл дихлорметана и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали 3×2000 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 3×2000 мл воды и 3×2000 мл насыщенного раствора хлорида натрия соответственно. Органические слои сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью дихлорметан/метанол (100 : 1 ~ 20 : 1). В результате получали 52 г (60%) PH–17 в виде желтого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 450.

Получение PH–18

[0234] К раствору PH–17 (20 г, 44,4 ммоль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (100 мл) в инертной атмосфере азота добавляли азид натрия (18 г, 267 ммоль, 6,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 80°C. Полученную смесь разводили 1000 мл дихлорметана. Полученный раствор промывали 3×1000 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 3×1000 мл воды и 3×1000 мл насыщенного раствора хлорида натрия соответственно. Раствор сушили безводным сульфатом натрия и концентрировали под пониженным давлением. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью дихлорметан/метанол (100/1 ~ 40/1) с получением 11 г (50%) PH–18/PH–18S (5,2 : 1) в виде желтого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 493

Получение PH–19

[0235] К раствору PH–18/PH–18S (5,2 : 1) (16 г, 37,87 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (160 мл) добавляли пиридин (23 г, 290,77 ммоль, 9,00 экв.) и диметиламинопиридин (4,35 г, 35,66 ммоль, 1,20 экв.). После этого по каплям добавляли 1,3-бис(трифторметансульфонил)триоксидан (11,9 г, 37,88 ммоль, 1,20 экв.) при перемешивании при 0°C. Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 20°C. Реакцию гасили добавлением воды со льдом. Полученную смесь экстрагировали 2×1000 мл дихлорметана и органические слои объединяли. Полученный раствор промывали 1×1000 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Полученный раствор концентрировали под пониженным давлением. В результате получали 16 г (68%) PH–19/PH–19S в виде коричневого твердого вещества. Продукт использовали на следующей стадии непосредственно без дополнительной очистки.

Получение PH–20

[0236] К раствору PH–19/PH–19S (16 г, 25,61 ммоль, 1,00 экв.) в тетрагидрофуране (160 мл) в инертной атмосфере аргона по каплям добавляли тетрабутиламмония фторид (100 мл, 5,00 экв.) при перемешивании при 0°C. Полученный раствор перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. Полученный раствор разводили 1000 мл дихлорметана. Полученный раствор промывали 1×500 мл воды и 1×500 мл насыщенного раствора хлорида натрия соответственно. Полученный раствор концентрировали под пониженным давлением. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью дихлорметан/метанол (100/1 ~ 20/1). В результате получали 8 г (85%) PH–20/PH–20S (7 : 1) в виде желтого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 381.

Получение PH–21

[0237] К раствору PH–20/PH–20S (3,4 г, 8,94 ммоль, 1,00 экв.) в метаноле (50 мл) добавляли 10% палладиевый углерод (1,7 г). Колбу вакуумировали и три раза продували азотом с последующей продувкой водородом. Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученный раствор разводили 100 мл метанола. Твердые вещества фильтровали. Полученный раствор концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ в следующих условиях: колонка, силикагелевая C18; подвижная фаза, вода и ацетонитрил (5% ацетонитрил до 50% за 35 мин); детектор, УФ 254 нм. В результате получали 1,7 г (54%) PH–21 в виде белого твердого вещества. 1H–ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц): 12,13 (с, 1H), 11,91 (с, 1H), 8,91 (с, 2H), 8,23 (с, 2H), 7,25 (м, 1H), 5,78 (м, 1H), 4,62-3,72 (м, 4H), 2,92 (м, 1H), 1,13 (с, 6H).

Получение PH–22

[0238] К раствору PH–21 (6,0 г, 16,95 ммоль, 1,00 экв.) в смеси пиридин/N,N-диизопропилэтиламин (100/20 мл) с инертной атмосферой аргона добавляли 1-(хлордифенилметил)-4-метоксибензол (6,24 г, 20,34 ммоль, 1,20 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Полученный раствор разводили 1000 мл дихлорметана. Полученный раствор промывали 1×250 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 1×250 мл воды и 1×250 мл насыщенного раствора хлорида натрия соответственно. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью дихлорметан/метанол (100/1 ~ 50/1). В результате получали 13 г (74%) PH–22 в виде белого твердого вещества. 1H–ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц): 12,15 (с, 1H), 11,70 (с, 1H), 8,14 (с, 1H), 7,49 (м, 4H), 7,24 (м, 6H), 7,15 (м, 2H), 6,72 (м, 2H), 5,82 (м, 1H), 5,30 (м, 1H), 4,04 (м, 3H), 3,62 (с, 3H), 3,45 (м, 1H), 2,83-2,62 (м, 3H), 1,10 (м, 6H).

Получение PH–23

[0239] К раствору PH–22 (7,8 г, 12,45 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (80 мл) в инертной атмосфере аргона по порядку добавляли 3-(бис[бис(пропан-2-ил)амино]фосфанилокси)пропаннитрил (7,5 г, 24,92 ммоль, 2,00 экв.) и 4,5-дицианоимидазол (2,2 г, 18,63 ммоль, 1,50 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь разводили 1000 мл дихлорметана. Полученный раствор промывали 3×250 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, 3×250 мл воды и 3×250 мл насыщенного раствора хлорида натрия соответственно. Полученный раствор концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ в следующих условиях: колонка, силикагелевая C18; подвижная фаза, вода и ацетонитрил (40% ацетонитрил до 95% за 35 мин); детектор, УФ 254 нм. В результате получали 8,06 г (78%) PH–23 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 827.

Строительные блоки 2'-F-3'-NHTr для синтеза олигомеров

[0240] 2'-O-Me 3'-NH-MMTR-5'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил) фосфорамидитные мономеры 6-N-бензоиладенозина (A^Bz), 4-N-бензилцитидина (C^Bz), 2-N-изобутирилгуанозина (G^iBu) и уридина (U), показанные ниже, синтезировали, используя процедуру, описанную в международной заявке на патент WO 200118015 A1.

Строительные блоки 2'-O-Me-3'-NHTr для синтеза олигомеров

[0241] Примеры фосфорамидатов включают в себя следующие.

Описание исходного материала 3'-NHTR-dA(Bz) 3'-NHTR-dC(Bz) 3'-NHTR-dG(iBu) 3'-NHTR-T: 3'-NHMMTR-2'-F-A(NH-Bz) 3'-NHMMTR-2'-F-C(NH-Bz) 3'-NHMMTR-2'-F-G(NH-iBu) 3'-NHMMTR-2'-F-U: 3'-NHMMTR-2'-OMe-A(NH-Bz) 3'-NHMMTR-2'-OMe-C(NH-Bz) 3'-NHMMTR-2'-OMe-G(NH-iBu) 3'-NHMMTR-2'-OMe U: 3'-NHTr (dA, dC, dG и dT)-CPG 500Å:
Загрузка: 64-83 мкмоль/г

Обратный фосфорамидит 3'-O-DMT-дезоксиаденозин (NH-Bz), 5'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил фосфорамидит, 3'-O-DMT-дезоксигуанозин (NH-ibu), 5'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропилфосфорамидит, 3'-O-DMT-дезоксицитозин (NH-Bz), 5'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропилфосфорамидит, 3'-O-DMT-дезокситимидин (NH-Bz), 5'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропилфосфорамидит и обратные твердые положки приобретали у доступных на рынке источников (Chemgenes).

Строительные блоки обратной ДНК для синтеза олигомеров

[0242] Примеры обратных фосфорамидитов, используемых в настоящем описании, включают следующие.

Описание исходного материала 3'-O-DMTR-2'-OMe-A(NH-Bz) 3'-O-DMTR-2'-OMe-C(NH-Bz) 3'-O-DMTR-2'-OMe-G(NH-iBu) 3'-O-DMTR-2'-OMe-U: 3'-ODMTr (dA, dC, dG и dT)-CPG 500Å:
Загрузка: 64-83 мкмоль/г

[0243] Для получения олигомеров со следующими модификациями: 2'-F-NPS-PS-2'-F-NPS; 2'-F-NP-PS-2'–F-NP; 2'-OMe-NP-PS-2'-OMe-NP; 2'-OMe-NPS-DNA-PS-2'-OMe-NPS, синтез выполняли в количестве 1 мкМ в направлении от 5' к 3' с 5'-фосфорамидитными мономерами, разведенными до концентрации 0,1 М в безводном CH₃CN в присутствии 5-(бензилтио)-1H–тетразольного активатора (время сочетания 2,0-4,0 мин) с твердым связанным олигонуклеотидом с последующим стандартным блокированием, окислением и снятием защиты с получением модифицированных олигонуклеотидов. Эффективность постадийного связывания всех модифицированных фосфорамидатом составила более 98%. DDTT (диметиламинометилиден)амино)-3H–1,2,4-дитиазолин-3-тион использовали в качестве агента переноса серы для синтеза фосфоротиоатов олигорибонуклеотида. Твердые подложки, несущие олигонуклеотиды, выдерживали при комнатной температуре с водным раствором аммиака/метиламина (1 : 1) в течение 3 ч в шейкере для отсоединения от подложки и удаления нестабильных в щелочной среде защитных групп.

Примеры 1-4

[0244] Надлежащим образом защищенные 2'-O-метоксиэтил-3'-аминонуклеозид-5'-фосфорамидитные строительные блоки (примеры 1-4 получали после химических преобразований, показанных на схемах 1-4).

[0245] Сначала для синтеза урациловых 3'-NH-MMTR-2'-O-метоксиэтилфосфорамидитов (пример 5) получали ключевое промежуточное соединение 3 3'-азидо-2'-метоксиэтил с низким выходом посредством безводного промежуточного соединения 2, как показано на схеме 1.

[0246] Из-за алкилирования с низким выходом 3-1 вступал в реакцию с BOMCl/DBU с получением N-3-защищенного промежуточного соединения 3-4, которое алкилировали с использованием смеси 2-бромэтилметиловый эфир/Ag₂O/NaI/DMF, с получением производного 2'-O-метоксиэтила 3-5, как показано ниже на схеме 1. Удаление группы N-3-BOM с использованием условия гидрогенизации (Pd/C/H₂) привело к получению 10-20% желаемого 3'-амино промежуточного соединения 3-6a, а также значительного количества избыточно окисленного побочного продукта 3-6b.

Схема 1

[0247] Выполнено 2'-O-алкилирование с высоким выходом, как показано ниже на схеме 2. Для этого 3-1 обрабатывали PMBCl/DBU/DMF с получением N-3-защищенного промежуточного соединения 4-2, которое подвергали 2'-O-алкилированию с использованием 2-бромэтилметилового эфира/Ag₂O/NAI/DMF, с получением 2'-O-метоксиэтилового производного 4-3. Впоследствии 5'-детритилирование 4-3 и повторное введение 5'-гидроксильной группы с использованием бензоилхлорида приводили к получению 4-5.

Схема 2

[0248] Удаление группы PMB с промежуточного соединения 4-5 в мягких условиях приводит к образованию 4-6. 3'-Азидную группу промежуточного соединения 4-6 восстанавливали до амина, который впоследствии немедленно защищали, например посредством реакции с 4-монометокситритилхлоридом, с получением 4-8. Впоследствии 5'-бензиловый эфир расщепляли с использованием щелочного раствора с последующим фосфитилированием с использованием известных протоколов с получением желаемого 2'-O-метоксиэтоксиуридинфосфорамидитного мономера 4-10.

[0249] Получение (4-2). К раствору 3-1 (45,30 г, 88,56 ммоль) в DMF (120,00 мл) добавляли PMBCl (20,80 г, 132,84 ммоль) и DBU (44,61 г, 177,12 ммоль) и смесь перемешивали при комн. темп. в течение 2 ч. Добавляли воду и экстрагировали с использованием EA. Органический слой концентрировали и очищали на колонке с образованием 4-2 (52,00 г, 82,32 ммоль) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z 632,3 [M+H]+.

[0250] Получение (4-3). К раствору 4-2 (50,00 г, 79,15 ммоль) в DMF (120,00 мл) добавляли 2-бромэтилметиловый эфир (16,50 г, 118,73 ммоль) и Ag₂O (18,34 г, 79,15 ммоль, 2,57 мл), после чего добавляли NaI (5,93 г, 39,58 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комн. темп. в течение 12 ч. ЖХМС показала, что реакция прошла успешно. Фильтровали и добавляли воду и EA, органический слой концентрировали и очищали на колонке с образованием 4-3 (52,00 г, 75,39 ммоль) в виде бесцветного масла. ИЭР-МС: m/z 690,4 [M+H]+.

[0251] Получение (4-4). К раствору 4-3 (52,00 г, 75,39 ммоль) в ДХМ (200,00 мл) добавляли ТФУ (150,00 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь медленно добавляли к холодному NH₄OH, экстрагировали ДХМ. Органический слой концентрировали и очищали с образованием 4-4 (31,00 г, 69,28 ммоль) в виде бесцветного масла. ИЭР-МС: m/z 448,2 [M+H]+. ¹H–ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц): δ ч/млн 8,02 (д, J=8,12 Гц, 1H), 7,26-7,23 (м, 2H), 6,87-6,84 (м, 2H), 5,87-5,81 (м, 2H), 5,38 (т, J=5,0 Гц, 1H), 4,96-4,85 (м, 2H), 4,36-4,34 (м, 1H), 4,17-4,14 (м, 1H), 4,00-3,97 (м, 1H), 3,83-3,77 (м, 1H), 3,75-3,72 (м, 1H), 3,71 (с, 3H), 3,70-3,68 (м, 1H), 3,61-3,56 (м, 1H), 3,45-3,43 (м, 2H), 3,18 (с, 3H).

[0252] Получение (4-5). К раствору 4-4 (31,00 г, 69,28 ммоль) в пиридине (200,00 мл) добавляли BzCl (13,14 г, 93,87 ммоль), реакционную смесь перемешивали при комн. темп. в течение 15 мин и концентрировали и очищали на колонке с получением 4-5 (35,10 г, 63,8 ммоль) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z 552,2 [M+H]+.

[0253] Получение (4-6). К раствору 4-5 (35,10 г, 63,8 ммоль) в ацетонитриле (300,00 мл) и воде (100,00 мл) добавляли аммоний-церия нитрат (105 г, 191,40 ммоль), реакционную смесь перемешивали при комн. темп. в течение 12 ч, концентрировали и экстрагировали с использованием EA. Органический слой концентрировали и очищали на колонке с образованием 4-6 (27,5 г, 63,75 ммоль) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z 432,2 [M+H]+.

[0254] Получение (4-7). К раствору 4-6 (27,50 г, 63,75 ммоль) в ТГФ (500,00 мл) добавляли Pd/C (3,00 г), реакционную смесь перемешивали при комн. темп. в течение 12 ч, фильтровали и концентрировали с получением 4-7 (25,00 г, 61,67 ммоль) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z 406,2 [M+H]+.

[0255] Получение (4-8). К раствору 4-7 (25,00 г, 61,67 ммоль) в ДХМ (300,00 мл) добавляли MMTrCl (28,49 г, 92,51 ммоль) и коллидин (14,95 г, 123,34 ммоль), впоследствии AgNO₃ (15,7 г, 92,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комн. Темп. в течение 1 ч, фильтровали и органический слой промывали водой, сушили Na₂SO₄ и очищали на силикагелевой колонке с получением 4-8 (33,00 г, 48,69 ммоль) в виде желтого твердого вещества.

[0256] Получение (4-9). К раствору 4-8 (14,50 г, 21,39 ммоль) добавляли 1 н. NaOH в метаноле (200 мл) в воде (20 мл) и реакционную смесь перемешивали при комн. темп. в течение 1 ч и концентрировали и экстрагировали ДХМ, органический слой концентрировали и очищали на силикагелевой колонке с получением 4-9 (11,50 г, 20,05 ммоль) в виде белого твердого вещества. ¹H–ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц): δ ч/млн 11,26 (с, 1H), 7,95 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,47-7,44 (м, 4H), 7,34-7,17 (м, 8H), 6,82 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,50-5,48 (м, 2H), 5,13 (т, J=3,6 Гц, 1H), 4,05-3,98 (м, 3H), 3,78 (с, 3H), 3,52-3,49 (м, 1H), 3,34-3,32 (м, 2H), 3,14 (с, 3H), 3,08-3,04 (м, 1H), 2,89-2,86 (м, 1H), 2,70 (д, J=10,0 Гц, 1H), 1,51 (д, J=4,4 Гц, 1H).

[0257] Получение (4-10). К раствору 4-9 (11,50 г, 20,05 ммоль) в ДХМ (100,00 мл) добавляли DMAP (489,85 мг, 4,01 ммоль) и DIPEA (10,36 г, 80,19 ммоль, 14,01 мл). Впоследствии к раствору добавляли CEPCl (5,70 г, 24,06 ммоль). Смесь перемешивали при комн. темп. в течение 30 мин. Реакцию гасили насыщенным NaHCO_3. Органический слой промывали солевым раствором, сушили Na₂SO₄, концентрировали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ. Продукт растворяли в безводном толуоле и трижды концентрировали. Впоследствии продукт растворяли в безводном ацетонитриле и трижды концентрировали. Это приводило к получению 13 г 4-10 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M-H] ^- (ИЭР): 772,3; ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц): 9,01(с, 1H), 8,07-7,61(м, 1H), 7,53-7,41(м, 6H), 7,29-7,15 (м, 5H), 6,79-6,76 (м, 2H), 5,63-5,57 (м, 2H), 4,27-4,15 (м, 2H), 4,06-3,95 (м, 1H), 3,85-3,77 (м, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,69-3,35 (м, 7H), 3,23 (д, J=4 Гц, 1H), 2,26-2,91 (м, 3H), 2,59 (т, J=6,4 Гц, 1H), 1,75-1,39 (м, 1H), 1,21-1,11 (м, 12H). ³¹иЯМР (162 МГц, CDCl₃): 149,10; 148,26.

Пример 5

[0258] Соединение 2'-O-метоксиэтокси-NH-бензоилцитозинфосфорамидита 5-4 получали путем превращения промежуточного соединения уридина 4-8 в 3'-аминоцитидиновый аналог 5-1 с последующим фосфитилированием с использованием известных протоколов с получением желаемого мономера 2'-O-метоксиэтоксицитидинфосфорамидита 5-4, как показано ниже на схеме 3.

Схема 3

[0259] Получение (5-1). К раствору 4-8 (18,50 г, 27,30 ммоль) в ацетонитриле (250,00 мл) добавляли TPSCl (16,49 г, 54,60 ммоль) и DMAP (6,67 г, 54,60 ммоль), впоследствии к раствору добавляли TEA (5,52 г, 54,60 ммоль, 7,56 мл). Реакционную смесь перемешивали при комн. темп. в течение 5 ч в атмосфере N₂. К реакционной смеси добавляли NH₄OH (50,00 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. Раствор концентрировали и экстрагировали с использованием EA. Органический слой промывали солевым раствором и сушили Na₂SO₄. Органический слой концентрировали и очищали на силикагелевой колонке с образованием 5-1 (16,00 г, 23,64 ммоль) в виде желтого твердого вещества.

[0260] Получение (5-2). К раствору 5-1 (16,00 г, 23,64 ммоль) в пиридине (100,00 мл) добавляли BzCl (4,96 г, 35,46 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали при комн. темп. в течение 1 ч. Раствор концентрировали и очищали на силикагелевой колонке с получением 5-2 (17,40 г, 22,28 ммоль) в виде белого твердого вещества.

[0261] Получение (5-3). Соединение 5-2 (17,40 г, 22,28 ммоль) добавляли к 180 мл 1 н. раствора NaOH в смеси пиридин/MeOH/H₂O (65/30/5) при 0°C. Суспензию перемешивали при 0°C в течение 15 мин. Реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного раствора NH₄Cl. Раствор экстрагировали EA и объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NaHCO₃, солевым раствором, сушили Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали на колонке с получением 5-3 (12,50 г, 18,47 ммоль) в виде белого твердого вещества. 1H–ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц): δ ч/млн 12,25 (с, 1H), 8,53 (д, J=7,6 Гц, 1H), 8,01 (д, J=5,2 Гц, 2H), 7,64-7,60 (м, 1H), 7,52-7,42 (м, 6H), 7,31 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,26-7,14 (м, 7H), 6,79 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,55 (с, 1H), 5,23 (т, J=3,6 Гц, 1H), 4,09-3,97 (м, 3H), 3,73 (с, 3H), 3,70-3,66 (м, 1H), 3,38-3,34 (м, 2H), 3,17 (с, 3H), 3,11-3,05 (м, 1H), 2,96-2,91 (м, 1H), 2,68 (д, J=10,8 Гц, 1H), 1,49 (д, J=4 Гц, 1H).

[0262] Получение (5-4). К раствору 5-3 (12,50 г, 18,47 ммоль) в ДХМ (100,00 мл) добавляли DMAP (451,30 мг, 3,69 ммоль) и DIPEA (9,55 г, 73,88 ммоль, 12,90 мл), впоследствии добавляли CEPCl (5,25 г, 22,16 ммоль). Смесь перемешивали при комн. темп. в течение 30 мин. Реакцию гасили насыщенным NaHCO₃. Органический слой промывали солевым раствором, сушили Na₂SO₄, концентрировали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ. Продукт растворяли в безводном толуоле и трижды концентрировали. Впоследствии продукт растворяли в безводном ацетонитриле и трижды концентрировали. В результате получали 13 г с образованием 5-4 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M–H] ^– (ИЭР): 875,4. ¹H–ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ ч/млн 8,64-8,20 (м, 2H), 7,90-7,88 (м, 2H), 7,62-7,58 (м, 1H), 7,53-7,39 (м, 8H), 7,25-7,15 (м, 6H), 6,78-6,74 (м, 2H), 5,69 (д, J=1,72 Гц, 1H), 4,37-4,21 (м, 2H), 4,10-4,03 (м, 1H), 3,90-3,79 (м, 2H), 3,75 (д, J=1,64 Гц, 3H), 3,68-3,52 (м, 3H), 3,46-3,42 (м, 2H), 3,26 (д, J=1,2 Гц, 3H), 3,17-2,97 (м, 2H), 2,94-2,87 (м, 1H), 2,67-2,48 (м, 2H), 1,79-1,51(м, 1H),1,26-1,18 (м, 12H). ³¹иЯМР (162 МГц, CDCl₃): 148,93; 148,03.

Пример 6

[0263] Синтез аналога 2'-O-метоксиэтиладенозина 6-10 выполняли, как показано ниже на схеме 6. Обработка промежуточного соединения 6-2 в щелочных условиях (NH₃/MeOH) приводила к получению диола 6-3, который после этого, защитив 5'-гидрокси группу с помощью TBDPSCl, превращали в промежуточное соединение 6-4. Впоследствии выполняли 2'-O-алкилирование 6-4 с использованием смеси 2-бромэтилметиловый эфир/NaH/DMF с получением 2'-O-метоксиэтилового производного 6-5 без защиты C-6-экзоциклического амина 6-4. Способом настоящего изобретения выполняли селективное алкилирование 2'-OH–группы промежуточного соединения 6-4.

Схема 4

[0264] 3'-Азидную группу промежуточного соединения 6-5 восстанавливали до амина 6-7, который впоследствии немедленно защищали, например посредством реакции с 4-монометокситритилхлоридом, с получением предшественника 6-8 после удаления защитной группы 5'-OTBDPS с использованием TBAF/ТГФ. Проводят фосфитилирование 6-9 с использованием известных протоколов с получением желаемого мономера 2'-O-метоксиэтоксиаденин-NH-бензоилфосфорамидита 6-10.

[0265] Получение (6-2). К раствору соединения 1 (79,50 г, 210,68 ммоль) в сухом ACN (1,20 л) добавляли N-(5H–пурин-6-ил)бензамид (100,80 г, 421,36 ммоль) и бычий сывороточный альбумин (BSA) (180,07 г, 884,86 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 50°C, пока она не становилась прозрачной. Впоследствии смесь охлаждали до -20°C и добавляли TMSOTf (93,54 г, 421,36 ммоль) с помощью шприца. Впоследствии смесь перемешивали при 70°C в течение 72 ч в атмосфере N₂, гасили насыщенным раствором NaHCO₃ и экстрагировали ДХМ. Органический слой сушили Na₂SO₄, впоследствии выпаривали растворитель и остаток очищали на силикагеле с получением соединения 6-2 (107,50 г, 192,26 ммоль, выход 91,26%) в виде желтого твердого вещества. ¹H–ЯМР (400 МГц, DMSO): δ=11,28 (с, 1H), 8,64 (д, J=6,4 Гц, 2H), 8,05 (д, J=8,0 Гц, 2H), 7,84 (д, J=8,0 Гц, 2H), 7,66 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,56 (т, J=8,0 Гц, 2H), 7,33 (д, J=8,0 Гц, 2H), 6,37 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,17 (дд, J=6,0 Гц, 1H), 5,09 (т, J=6,8 Гц, 1H), 4,69-4,56 (м, 2H), 4,40-4,38 (м, 1H), 2,39 (с, 3H), 2,17 (с, 3H). ИЭР-МС: m/z 557,2 [M+H]+.

[0266] Получение (6-3). К раствору соединения 6-2 (107,50 г, 192,26 ммоль), растворенного в 33% масс. метиламина в этаноле (600,00 мл), впоследствии смесь перемешивали при 20°C в течение 16 ч, после чего растворитель выпаривали, промывали 50% EtOAc в петролейном эфире (1,5 л), фильтровали с получением соединения 6-3 (52,50 г, 179,64 ммоль, выход 93,44%) в виде светло–желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z 293,1 [M+H]+.

[0267] Получение (6-4). Раствор соединения 6-3 (52,50 г, 179,64 ммоль), имидазола (18,32 г, 269,46 ммоль) и TBDPS-Cl (54,34 г, 197,60 ммоль) в пиридине (500,00 мл) перемешивали при 20°C в течение 2 ч. ЖХМС показала, что 6-3 израсходовано. Впоследствии гасили MeOH (30 мл), концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали на силикагеле с получением соединения 6-4 (72,60 г, 136,81 ммоль, выход 76,16%) в виде белого твердого вещества. ¹H–ЯМР (400 МГц, DMSO): δ=8,29 (с, 1H), 8,10 (с, 1H), 7,63-7,59 (м, 4H), 7,48-7,33 (м, 8H), 6,36 (д, J=5,6 Гц, 1H), 5,97 (д, J=4,4 Гц, 1H), 5,10-5,06 (м, 1H), 4,47 (т, J=5,6 Гц, 1H), 4,14-4,11 (м, 1H), 3,94 (дд, J=11,2 Гц, 1H), 3,83 (дд, J=11,6 Гц, 1H), 0,99 (с, 9H). ИЭР-МС: m/z 531,3 [M+H]+.

[0268] Получение (6-5). К раствору 6-4 (35,00 г, 65,96 ммоль) и 1-бром-2-метоксиэтана (18,33 г, 131,91 ммоль) в сухом DMF (400,00 мл) добавляли NaI (19,77 г, 131,91 ммоль) и Ag₂O (15,29 г, 65,96 ммоль), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Впоследствии реакционную смесь вливали в ледяную воду, экстрагировали EA, промывали солевым раствором и сушили безводным Na₂SO₄. Растворитель выпаривали и остаток очищали на силикагеле с получением 6-5 (23,70 г, 40,26 ммоль, выход 61,04%) в виде белого твердого вещества и побочного продукта TBDPS (5,20 г, 9,81 ммоль, выход 14,87%) в виде белого твердого вещества. ¹H–ЯМР (400 МГц, DMSO): δ=8,31 (с, 1H), 8,11 (с, 1H), 7,63-7,60 (м, 4H), 7,47-7,44 (м, 2H), 7,40-7,36 (м, 6H), 6,10 (д, J=4,4 Гц, 1H), 5,02 (т, J=4,8 Гц, 1H), 4,69 (т, J=5,6 Гц, 1H), 4,18-4,14 (м, 1H), 3,95 (дд, J=11,6 Гц, 1H), 3,84 (дд, J=11,6 Гц, 1H), 3,78-3,75 (м, 2H), 3,45 (т, J=4,8 Гц, 1H), 3,16 (с, 3H), 0,99 (с, 9H). ИЭР-МС: m/z 589,5 [M+H]+.

[0269] Получение (6-6). К раствору 6-5 (31,23 г, 53,04 ммоль) в пиридине (300,00 мл) при 0°C по каплям добавляли BzCl (11,22 г, 79,56 ммоль). Смесь перемешивали при комн. темп. в течение 2 ч. Впоследствии раствор охлаждали до температуры 0°C и добавляли гидроксид аммония (20 мл, 30%) и смеси позволяли прогреться до комн. темп., после чего растворитель выпаривали, 300 мл H₂O и 600 мл EA добавляли отдельно в раствор, водный слой экстрагировали с помощью EA, объединяли органические слои и промывали солевым раствором, сушили безводным Na₂SO₄, растворитель удаляли, а остаток очищали на силикагеле с получением 6-6 (28,70 г, 41,42 ммоль, выход 78,09%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z 693,4 [M+H]+.

[0270] Получение (6-7). Раствор 6-6 (28,70 г, 41,42 ммоль) в EA (150,00 мл) добавляли Pd/C (3,00 г) и MeOH (150,00 мл) в атмосфере H₂. Смесь перемешивали при комн. темп. в течение 5 ч. Впоследствии реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали с получением 6-7 (25,49 г, 38,22 ммоль, выход 92,27%) в виде серого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z 667,3 [M+H]+.

[0271] Получение (6-8). К раствору 6-7 (25,49 г, 38,22 ммоль) и AgNO₃ (12,98 г, 76,44 ммоль) в ДХМ (300,00 мл) добавляли коллидин (13,89 г, 114,66 ммоль) и MMTrCl (19,43 г, 57,33 ммоль) и смесь перемешивали при комн. темп. в течение 2 ч. Впоследствии реакционную смесь вливали в воду со льдом, органический слой экстрагировали ДХМ, промывали солевым раствором и сушили безводным Na₂SO₄, растворитель удаляли и остаток очищали на силикагеле с получением 6-8 (32,79 г, 34,92 ммоль, выход 91,36%) в виде серого твердого вещества.

[0272] Получение (6-9). Раствор 6-8 (32,79 г, 34,92 ммоль) в ТГФ (300,00 мл) добавляли TBAF (1 M, 35,00 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Впоследствии растворитель удаляли и остаток очищали на силикагеле, используя EA, с получением 6-9 (22,22 г, 31,71 ммоль, выход 90,82%) в виде белого твердого вещества. ¹H–ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ=8,68 (с, 1H), 8,32 (с, 1H), 8,04 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,61-7,57 (м, 1H), 7,53-7,48 (м, 6H), 7,40 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,21-7,12 (м, 6H), 6,73 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,09 (д, J=2,4 Гц, 2H), 4,08-4,02 (м, 2H), 3,93-3,87 (м, 1H), 3,72 (с, 3H), 3,58-3,53 (м, 1H), 3,43-3,39 (м, 3H), 3,24-3,19 (м, 4H), 2,19 (уш., 1H).

[0273] Получение (6-10). К раствору 6-9 (14,00 г, 19,98 ммоль), DMAP (488,19 мг, 4,00 ммоль) и DIPEA (6,46 г, 49,95 ммоль, 8,73 мл) в сухом ДХМ (100,00 мл) по каплям добавляли CEPCl (5,68 г, 23,98 ммоль) в атмосфере аргона. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Впоследствии реакционную смесь промывали 10% раствором NaHCO₃ (водн.) и солевым раствором, сушили Na₂SO₄, растворитель удаляли и остаток очищали посредством колоночной хроматографии с использованием смеси PE/EA, после чего концентрировали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт (10 г, растворенный в 10 мл ACN) очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ с получением 6-10 (12,60 г, 13,98 ммоль, выход 69,99%) в виде белого твердого вещества. Впоследствии продукт растворяли в сухом толуоле (15 мл), трижды концентрировали и трижды промывали сухим ACN. ¹H–ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ=9,12 (д, J=46,8 Гц, 1H), δ=8,71 (д, J=11,6 Гц, 1H), 8,50 (с, 0,6H), 8,22 (с, 0,4H), 8,04 (т, J=7,2 Гц, 2H), 7,63-7,59 (м, 1H), 7,55-7,46 (м, 6H), 7,40-7,37 (м, 2H), 7,19-7,06 (м, 6H), 6,69 (дд, J=8,8 Гц, 2H), 6,03 (д, J=3,2 Гц, 1H), 4,36-4,24 (м, 2H), 3,92-3,78 (м, 2H), 3,71 (д, J=11,6 Гц, 3H), 3,67-3,33 (м, 7H), 3,29 (д, J=11,2 Гц, 3H), 3,17-3,10 (м, 1H), 2,88 (дд, J=27,2 Гц, 1H), 2,65-2,50 (м, 2H), 2,38 (д, J=4,4 Гц, 0,4H), 1,80 (д, J=4,0 Гц, 0,6H), 1,23-1,15 (м, 12H). ³¹иЯМР (400 МГц, CDCl₃): 148,86; 148,22. ИЭР-МС: m/z 901,3 [M+H]+.

Пример 7

[0274] Надлежащим образом защищенный 2'-O-этил-3'-амино-5'-фосфорамидит (примеры 9, 10, 11, 12) получали после химических преобразований, показанных на схемах 8-12.

[0275] Сначала для синтеза тиминовых 3'-NH-MMtR-2'-O-этилфосфорамидитов (пример 9) промежуточное соединение 2 защищали, например, метилпропиолатом, в присутствии диметиламинопиридина (схема 8) с получением щелочного N-3-защищенного промежуточного соединения 8-4 для увеличения выхода при 2'-O-алкилировании. Дальнейшее деацетилирование 8-4 с получением C-2'-гидрокси промежуточного соединения 8-5.

Схема 5

[0276] Дополнительное алкилирование с использованием иодэтана приводило к получению 2'O-этилнуклеозида 8-6. Промежуточное соединение 8-6 преобразовывали в тиминовый 2'-O-этил-3'-амино-5'-фосфорамидит 8-11 посредством химической реакции, аналогичной приведенной для соединения 4-10, показанного на предыдущей схеме 4.

[0277] Получение (8-4). К раствору 8-2 (22,0 г, 49,62 ммоль) в MeCN (400 мл) добавляли DMAP (1,2 г, 9,92 ммоль). Впоследствии добавляли 3 (5,8 г, 419,5 ммоль), смесь перемешивали при комн. темп. в течение 2 ч в атмосфере N₂. ТСХ показала, что 8-2 израсходовано. Концентрировали и очищали на силикагелевой колонке, используя смесь (PE : EA=6 : 1), с получением 8-4 (22,0 г, 40,63 ммоль, выход 81,9%) в виде желтого масла. ИЭР-МС: m/z 564 [M+Na]+.

[0278] Получение (8-5). К раствору 8-4 (28,0 г, 51,71 ммоль) в MeOH (400 мл) добавляли конц. водный раствор NH₄OH (28 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1,5 ч. ТСХ показала, что 8-4 израсходовано. Концентрировали и очищали на силикагелевой колонке, используя смесь (PE : EA=10 : 1 ~ 2 : 1), с получением 8-5 (21,0 г, 42,04 ммоль, выход 81,3%) в виде желтого масла. ИЭР-МС: m/z 522 [M+Na]+.

[0279] Получение (8-6). К раствору 8-5 (20,0 г, 40,04 ммоль) в иодэтане (100 мл) добавляли Ag₂O (18,6 г, 80,08 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 5 ч, после того как ЖХМС показала, что 8-5 полностью израсходовано, смесь фильтровали диатомитом и концентрировали с получением 8-6 (16,0 г, 30,33 ммоль, выход 75,7%) в виде желтого масла, которое использовали непосредственно на следующей стадии. ИЭР-МС: m/z 528 [M+H]+.

[0280] Получение (8-7). К раствору 8-6 (16,0 г, 30,33 ммоль) в MeCN (400 мл) добавляли пирролидин (8,63 г, 121,32 моль, 12 мл), реакционную смесь перемешивали при комн. темп. в течение ночи. ТСХ показала, что 8-6 полностью израсходовано. Концентрировали и очищали на силикагелевой колонке, используя смесь (ДХМ : MeOH=100 : 1 ~ 50 : 1), с получением 7 (12,0 г, 27,94 ммоль, выход 92,1%) в виде желтого масла. ИЭР-МС: m/z 430 [M+H]+.

Получение ( 8-8 ). К раствору 8-7 (12,0 г, 27,94 ммоль) в ТГФ (200 мл) добавляли Pd/C (1,2 г), смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере H₂ в течение ночи. ЖХМС показала, что 7 полностью израсходовано. Фильтровали и промывали ДХМ (100 мл * 3), впоследствии концентрировали с получением 8-8 (11,0 г, 27,27 ммоль, выход 97,6%) в виде серого твердого вещества, которое использовали непосредственно на следующей стадии. ИЭР-МС: m/z 404 [M+H]+.

[0281] Получение (8-9). К раствору 8-8 (10,0 г, 24,79 ммоль) в ДХМ (80 мл) добавляли MMTrCl (11,4 г, 37,18 ммоль), 2,4,6-коллидин (2,0 г, 16,61 ммоль, 6,5 мл) и AgNO₃ (6,3 г, 37,18 ммоль), смесь перемешивали при комн. темп. в течение 1,5 ч. ТСХ показала, что 8-8 полностью израсходован. Фильтровали и органический слой промывали водой и сушили Na₂SO₄, после чего концентрировали и очищали на силикагелевой колонке посредством смеси (PE : EA=5 : 1 ~ 1 : 1) с получением 8-9 (16,0 г, 23,68 ммоль, выход 95,5%) в виде светло-желтого твердого вещества.

[0282] Получение (8-10). 8-9 (4,0 г, 5,92 ммоль) добавляли к 1,0 н. раствору NaOH (20 мл, MeOH/H₂O=9 : 1). Реакционную смесь перемешивали при 40°C в течение 2 ч. ТСХ показала, что 8-9 израсходовано. Смесь концентрировали и экстрагировали ДХМ (20 мл * 2), органический слой сушили Na₂SO₄ и концентрировали, остаток очищали на силикагелевой колонке, используя смесь (ДХМ : MeOH=200 : 1 ~ 50 : 1), с получением 8-10 (3,0 г, 53,8 ммоль, выход 90,9) в виде белого твердого вещества.

[0283] Получение (8-11). К раствору 8-10 (2,36 г, 4,23 ммоль) в ДХМ (2,0 мл) добавляли DMAP (103 мг, 0,8 ммоль) и DIPEA (2,2 г, 16,92 ммоль, 2,96 мл). Впоследствии добавляли CEPCl (1,0 г, 4,23 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комн. темп. в течение 1 ч. ТСХ показала, что 8-10 израсходовано. Смесь промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (5 мл), отделяли органический слой и промывали водный слой ДХМ (10 мл * 2). Объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили Na₂SO₄, концентрировали и очищали посредством препаративной флеш-хроматографии с получением 8-11 (2,45 г, 3,23 ммоль, выход 76,36%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,62 (с, 1H), 7,74 (дд, J=1,4 Гц, 0,5H), 7,60-7,50 (м, 4H), 7,51-7,41 (м, 2H), 7,34-7,16 (м, 7H), 7,12 (д, J=1,4 Гц, 0,5H), 6,88-6,76 (м, 2H), 5,66 (с, 1H), 4,37-4,23 (м, 1H), 4,16-4,05 (м, 1H), 4,05-3,94 (м, 0,5H), 3,88-3,74 (м, 4,5H), 3,72-3,35 (м, 3H), 3,22 (тд, J=10,3, 4,7 Гц, 0,5H), 3,03-2,89 (м, 1,5H), 2,80-2,69 (м, 1H), 2,61 (т, J=6,5 Гц, 1H), 2,37 (тд, J=6,6, 1,3 Гц, 1H), 1,97 (д, J=3,5 Гц, 0,5H), 1,91 (дд, J=11,4, 1,2 Гц, 3H), 1,52 (д, J=4,7 Гц, 0,5H), 1,29-1,17 (м, 12H), 1,08 (тд, J=7,0, 4,9 Гц, 3H). ³¹P ЯМР (162 МГц, CDCl₃) δ 149,31, 147,14. ИЭР-МС: m/z 576 [M+H]+.

Синтез GalNAc

Синтез G-1

[0284] К раствору оксан-2,6-диона (1000 г, 8,76 моль, 1,00 экв.), 4-диметиламинопиридин (53,5 г, 437,9 ммоль, 0,05 экв.) в дихлорметане (10 000 мл) в инертной атмосфере азота по каплям добавляли фенилметанол (900 г, 8,32 моль, 0,95 экв.) при перемешивании при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия. Показатель pH водной фазы доводили до 1 с помощью 10% раствора соляной кислоты. Полученный раствор экстрагировали 3×2000 мл этилацетата и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали 2×3000 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Органический слой сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. В результате получали 1240 г (64%) G-1 в виде бесцветного масла. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 223.

Синтез G-2

[0285] К раствору G-1 (58,5 г, 263,23 ммоль, 1,20 экв.), N,N-диизопропилэтиламина (34 г, 263,57 ммоль, 1,20 экв.) в N,N-диметилформамиде (600 мл) в инертной атмосфере азота добавляли O-бензотриазол-N,N,N',N'-тетраметилуронийгексафторфосфат (100 г, 263,69 ммоль, 1,20 экв.) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Впоследствии добавляли (2R)-3-аминопропан-1,2-диол (20 г, 219,52 ммоль, 1,00 экв.) при комнатной температуре. Полученный раствор оставляли для протекания реакция при перемешивании в течение ночи при комнатной температуре. Полученный раствор разводили 2000 мл этилацетата. Полученную смесь промывали 2×1000 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Смесь сушили безводным сульфатом натрия и концентрировали под пониженным давлением. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью дихлорметан/метанол (1 : 100-1 : 10). В результате получали 38,7 г (60%) G-2 в виде светло-желтого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 296.

Синтез G-3

[0286] К раствору G-2 (10 г, 33,86 ммоль, 1,00 экв.) в пиридине (100 мл) в инертной атмосфере азота при комнатной температуре добавляли 1-[хлор(4-метоксифенил)бензил]-4-метоксибензол (12,63 г, 37,28 ммоль, 1,10 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Впоследствии реакцию гасили добавлением метанола (10 мл). Полученную смесь концентрировали под пониженным давлением. Полученный раствор разводили 1000 мл этилацетата. Полученную смесь промывали 2×500 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Смесь сушили безводным сульфатом натрия и концентрировали под пониженным давлением. Остаток наносили на силикагелевую колонку со смесью дихлорметан/метанол (1 : 100-1 : 50). В результате получали 10,2 г (50%) G-3 в виде светло-желтого масла. МС m/z [M+Na]+ (ИЭР): 620.

Синтез G-4

[0287] К раствору G-3 (10 г, 16,73 ммоль, 1,00 экв.) в метаноле (100 мл) при комнатной температуре добавляли 10% палладий на активированном угле (1 г). Колбу вакуумировали и пять раз продували водородом. Полученный раствор перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Твердые вещества фильтровали. Полученную смесь концентрировали под пониженным давлением. В результате получали 7,6 г (89%) G-4 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M+Na]+ (ИЭР): 530.

Синтез G-5

[0288] К раствору G-4 (8,90 г, 17,53 ммоль, 1,05 экв.) в N,N-диметилформамиде (300 мл) в инертной атмосфере азота при комнатной температуре добавляли N,N-диизопропилэтиламин (6,47 г, 50,16 ммоль, 3,00 экв.). К этой смеси добавляли O-бензотриазол-N,N,N-тетраметилуронийгексафторфосфат (7,10 г, 18,73 ммоль, 1,12 экв.) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали в течение 15 мин при комнатной температуре. К смеси добавляли G-5 Ref (Nucleic Acids Research, 2014, 42, (13) 8796-8807), (30 г, 16,72 ммоль, 1,00 экв.) при комнатной температуре. Полученный раствор оставляли для протекания реакция при перемешивании в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ в следующих условиях (IntelFlasH–1): колонка, силикагелевая C18; подвижная фаза, ацетонитрил/вода и 0,04% NH4HCO3 (20% ацетонитрил до 70% за 15 мин); детектор, УФ 210 нм. В результате получали 20,1 г (53%) G-6 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M+H]⁺ (ИЭР): 2283.

Синтез G-7

[0289] К раствору G-6 (25 г, 10,96 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (750 мл) в инертной атмосфере азота при комнатной температуре добавляли триэтиламин (4,98 г, 49,21 ммоль, 4,49 экв.). К этой смеси при комнатной температуре добавляли 4-диметиламинопиридин (1,33 г, 10,89 ммоль, 0,99 экв.). К смеси при комнатной температуре добавляли оксолан-2,5-дион (3,29 г, 32,88 ммоль, 3,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ в следующих условиях: колонка, силикагелевая C18; подвижная фаза, ацетонитрил/вода и 0,04% NH₄HCO₃ (20% ацетонитрил до 50% за 20 мин); детектор, УФ 230 нм. В результате получали 15,83 г (61%) G-7 виде белого твердого вещества в виде аммониевой соли. МС m/z [M/2+NH4]+ (ИЭР): 1210.

Синтез GalNAc-2-твердая подложка-GPG

[0290] G-7 загружали на CPG в соответствии со следующими процедурами, описанными в публикации Biotechniques.,1988 Sep; 6(8):768-75, используя HBTU/TEA, с получением GalNAc-2-CPG (53 мкмоль/г).

Синтез GalNAc-6

Синтез G-8

[0291] К раствору октандикарбоновой кислоты (100 г, 494,4 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (2000 мл) при комнатной температуре добавляли 4-диметиламинопиридин (18,1 г, 148,2 ммоль, 0,30 экв.). К этой смеси при комнатной температуре добавляли N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида гидрохлорид (114 г, 594,7 ммоль, 1,20 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. К смеси по каплям добавляли бензиловый спирт (64,1 г) при перемешивании при 0°C. Полученный раствор оставляли для протекания реакция при перемешивании в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия. Смесь сушили безводным сульфатом натрия и концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный продукт (100 г) очищали посредством препаративной флэш-ВЭЖХ в следующих условиях (IntelFlasH–1): колонка, силикагелевая C18; подвижная фаза, вода и ацетонитрил (60% ацетонитрил до 100% за 12 мин и выдерживание при 100% в течение 5 мин); детектор, УФ 210 нм. В результате получали 60,7 г (42%) G-8 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M+H]+ (ИЭР): 293.

Синтез G-10

[0292] К раствору G-8 (4,48 г, 15,32 ммоль, 1,50 экв.) в ацетонитриле (320 мл) добавляли O-бензотриазол-N,N,N-тетраметилуронийгексафторфосфат (5,84 г, 15,40 ммоль, 1,50 экв.), N,N-диизопропилэтиламин (3,96 г, 30,64 ммоль, 3,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при 25°C. Впоследствии добавляли G-9 (18,4 г, 10,26 ммоль, 1,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 25°C, после чего концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии в следующих условиях: колонка, силикагелевая C18; подвижная фаза, ацетонитрил в воде = 10%, с повышением до 70% в течение 15 мин; детектор, УФ 210 нм. В результате получали 12 г (57%) G-10 в виде белого твердого вещества. H–ЯМР (DMSO, 400 МГц, ч/млн): 7,74-7,83 (м, 9H), 7,31-7,37 (м, 5H), 6,97 (с, 1H), 5,21 (д, J=3,3 Гц, 3H), 5,07 (с, 2H), 4,98 (дд, J=11,2 Гц, 3,4 Гц, 3H), 4,49 (д, J=8,4 Гц, 3H), 4,04 (с, 9H), 3,83-3,99 (м, 3H), 3,67-3,72 (м, 3H), 3,52-3,55 (м, 12H), 3,37-3,43 (м, 3H), 2,99-3,05 (м, 12H), 2,25-2,35 (м, 8H), 2,12 (с, 9H), 1,99-2,11 (м, 17H), 1,92 (с, 9H), 1,77 (с, 9H), 1,40-1,53 (м, 22H), 1,19-1,25 (м, 8H).

Синтез G-11

[0293] К раствору G-10 (5 г, 2,45 ммоль, 1,00 экв.) в метаноле/этилацетате (100 мл, об./об. = 1 : 1) добавляли 10% палладиевый углерод (1,5 г, 10%). Колбу вакуумировали и пять раз продували водородом. Смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре в атмосфере водорода. Твердые вещества фильтровали. Полученную смесь концентрировали в вакууме. В результате получали 4 г (82%) G-11 в виде белого твердого вещества.

Синтез GalNAc-6

[0294] К раствору G-11 (6,3 г, 3,18 ммоль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (63 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (1,0 г, 7,95 ммоль, 2,50 экв.). После этого по каплям при перемешивании добавляли пентафторфенил-2,2,2-трифторацетат (1,33 г, 4,77 ммоль, 1,50 экв.) при 0°C. Полученный раствор перемешивали в течение 3 ч при 25°C. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии в следующих условиях: колонка с гелем C18, элюент A вода, элюент B ацетонитрил; градиент: 20% до 80% в течение 15 мин, 100% в течение 3 мин; детектор, УФ 210 нм. В результате получали 5 г (73%) GalNAc-6 в виде белого твердого вещества. МС m/z [M/2+H]⁺ (ИЭР): 1073; H–ЯМР (DMSO, 300 МГц, ч/млн): 7,71-7,80 (м, 9H), 6,98 (с, 1H), 5,22 (д, J=3,3 Гц, 3H), 4,99 (дд, J=11,1 Гц, 3,3 Гц, 3H), 4,50 (д, J=8,4 Гц, 3H), 4,02 (с, 9H), 3,82-3,92 (м, 3H), 3,69-3,74 (м, 3H), 3,52-3,56 (м, 12H), 3,39-3,44 (м, 3H), 3,03 (с, 12H), 2,75-2,79 (м, 2H), 2,28 (т, J=6,3 Гц, 6H), 2,00-2,10 (м, 26H), 1,89 (с, 9H), 1,77 (с, 9H), 1,64-1,68 (м, 2H), 1,25-1,53 (м, 28H); F-ЯМР (DMSO, 162 МГц, ч/млн): -153,60; -153,67; -153,68; -153,69; -158,05; -158,14; -158,22; -162,53; -162,60; -162,62; -162,69; -162,70.

Конъюгация с GalNAc

[0295] Для получения 5'-GalNAc-конъюгированного олигомера со следующими модификациями: 2'-F-NPS-PS-2'-F-NPS; 2'-F-NP-PS-2'-F-NP; 2'-OMe-NP-PS-2'-OMe-NP; 2'-OMe-NPS-DNA-PS-2'-OMe-NPS, 2'-OET-NPS-DNA-PS-2'-OET-NPS и 2'-MOE-NPS-DNA-PS-2'-MOE-NPS, синтез выполняли в количестве 10-200 мкМ в направлении от 5' к 3' с 5'-фосфорамидитными мономерами, разведенными до концентрации 0,1 М в безводном CH₃CN в присутствии 5-(бензилтио)-1H–тетразольного активатора (время сочетания 2,0-4,0 мин) с получением GalNAc 2-CPG. Выполнение цикла соединения согласно модифицированным протоколам с последующими стандартными блокированием, окислением и снятием защиты приводило к получению модифицированных олигонуклеотидов. Эффективность постадийного соединения составляла более 98%. DDTT (диметиламинометилиден)амино)-3H–1,2,4-дитиазолин-3-тион использовали в качестве агента переноса серы для синтеза фосфоротиоатов олигорибонуклеотида. В качестве сульфитирующего агента при крупномасштабном синтезе использовали 0,2 М фенилацетилдисульфид (PADS) в смеси лутидин : ацетонитрил (1 : 1) (Akta OP-100). Твердые подложки, несущие олигонуклеотиды, выдерживали при комнатной температуре с водным раствором аммиака/метиламина (1 : 1) в течение 3 ч в шейкере для отсоединения от подложки и удаления нестабильных в щелочной среде защитных групп.

Синтез 3'-C6NH2-NPS-PS-NPS-(предшественник)

[0296] Для получения 3'-GalNAc-конъюгированных олигомеров со следующими модификациями: 2'-F-NPS-PS-2'-F-NPS; 2'-F-NP-PS-2'-F-NP; 2'-OMe-NP-PS-2'-OMe-NP; 2'-OMe-NPS-DNA-PS-2'-OMe-NPS, 2'-OET-NPS-DNA-PS-2'-OET-NPS и 2'-MOE-NPS-DNA-PS-2'-MOE-NPS, антисмысловые олигонуклеотиды (ASO) синтезировали в количестве 10 мкмоль, используя универсальную подложку (загрузка 65 мкмоль/г). Процедура синтеза аналогична описанной выше. На 3'-конце для введения линкера C6-NH2 использовали 6-(4-монометокситритиламино)гексил-(2-цианоэтил)-(N,N-диизопропил)-фосфорамидит в 0,1 M ацетонитриле. Время соединения составляло 10 мин. Твердые подложки, несущие олигонуклеотид, выдерживали при комнатной температуре в водном растворе аммиака/метиламина (1 : 1) в течение 3 ч в шейкере для отсоединения от подложки и снятия нестабильных в щелочной среде защитных групп. После очистки IEX и обессоливания C6-NH2-модифицированные ASO можно использовать для проведения постсинтетической конъюгации.

Синтез 3'-GalNAc NPS-PS-NPS-ASO (постсинтетическая конъюгация)

[0297] 3'-C6-NH_2-модифицированные ASO растворяли в 0,2 M буферном растворе бикарбоната натрия, pH 8,5 (0,015 мМ), и добавляли 5-7 мол. эквивалента GalNAc-6 эфира, растворенного в DMSO. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Образец анализировали, чтобы подтвердить присутствие любых непрореагировавших аминомодифицированных ASO. К этой смеси добавляли водный раствор аммиака (28% масс.) (5× реакционный объем) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2-3 ч. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением и остаток растворяли в воде и очищали посредством ВЭЖХ на мощной анионообменной колонке.

Конъюгация с 3'-GalNAc6

Конц. олигонуклеотидов Эквивалент эфира GalNAc 6 PFP Темп. (°C) % преобразования в 3' GalNAc ASO 0,015 мМ 5 25 75 0,0076 мМ 7 25 80 0,0076 мМ 4 25 65

Количественное определение неочищенного олигомера или анализ неочищенного материала

[0298] Пробы растворяли в деионизированной воде (1,0 мл) и выполняли количественную оценку следующим образом. Сначала измеряли холостую пробу, используя только воду (1,0 мл). 20 мкл пробы и 980 мкл воды хорошо перемешивали в микроцентрифужной пробирке, переносили в кювету и измеряли поглощательную способность при 260 нм. Исходный материал сушили и хранили при -20°C.

Анализ неочищенного материала посредством ВЭЖХ/ЖХМС

[0299] Для анализа неочищенного материала посредством МС использовали пробы неочищенного материала с 0,1 OD. После подтверждения данных посредством ЖХМС выполняли стадию очистки.

Очистка посредством ВЭЖХ

[0300] Фосфорамидат- (NP) и тиофосфорамидат- (NPS) модифицированные олигонуклеотиды, содержащие и не содержащие конъюгаты GalNAc, очищали посредством анионообменной ВЭЖХ. Буферные растворы представляли собой 20 мМ фосфат натрия в 10% CH₃CN, pH 8,5 (буферный раствор A) и 20 мМ фосфат натрия в 10% CH₃CN, 1,8 M NaBr, pH 8,5 (буферный раствор B). Фракции, содержащие полноразмерные олигонуклеотиды, объединяли, обессоливали и лиофилизировали.

Обессоливание очищенного олигомера

[0301] Впоследствии очищенный сухой олигомер обессоливали с помощью Sephadex G-25 M (Amersham Biosciences). Картридж трижды кондиционировали 10 мл деионизированной воды. Наконец, очищенный олигомер, тщательно растворенный в 2,5 мл воды, не содержащей РНКазы, наносили на картридж с очень медленным элюированием по каплям. Не содержащий соли олигомер элюировали, используя 3,5 мл деионизированной воды, непосредственно во флакон с винтовой крышкой.

Анализ посредством ионообменной ВЭЖХ и ЖХМС с электрораспылением

[0302] Приблизительно 0,10 OD олигомера растворяют в воде, после чего пипетируют в специальные флаконы для ионообменной ВЭЖХ и ЖХМС. Посредством аналитической ВЭЖХ и жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией и электроионизацией (ES LC-MS) устанавливали целостность олигонуклеотидов. Чистоту и молекулярную массу определяли с помощью анализа ВЭЖХ (60°C, IEX - Thermo DNAPac PA-100, A- 25 мМ фосфат натрия 10% ацетонитрил pH 11, B- 1,8 M NaBr 25 мМ фосфат натрия 10% ацетонитрил pH 11; RPIP- Waters XBridge OST C18, A- 100 мМ HFIP 7 мМ TEA B- 7 : 3 метанол/ацетонитрил) и анализа ИЭР-МС с использованием Promass Deconvolution for Xcalibur (Novatia, г. Ньютаун, штат Пенсильвания). Синтезировали все олигонуклеотиды, представленные в приведенных ниже таблицах, и ссылка на молекулярные массы в таблицах представляет собой реальные измеренные массы, которые могут иметь ошибку ММ, а. е. м. +/- 2.

Испытание на стабильность комплексных олигонуклеотидов

В вариантах осуществления описанные олигонуклеотиды проявляют повышенную аффинность к целевой нуклеотидной последовательности по сравнению с немодифицированным олигонуклеотидами с той же последовательностью. Например, в некоторых последовательностях описанные олигонуклеотиды имеют последовательность нуклеотидных оснований, которая комплементарна целевой нуклеотидной последовательности с более высокой аффинностью, чем немодифицированный олигонуклеотид с той же последовательностью, или гибридизируется с ней. В вариантах осуществления описанный олигонуклеотид в комплексе с комплементарной целевой нуклеотидной последовательностью имеет температуру плавления T_m > 37°C. Комплекс может быть образован в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, таких как фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). В вариантах осуществления Tm комплекса составляет > 50°C. В вариантах осуществления Tm комплекса составляет 50-100°C. В вариантах осуществления Tm описанного олигонуклеотида, спаренного с целевой нуклеотидной последовательностью в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, составляет > 50°C.

[0303] В определенных вариантах осуществления целевая нуклеотидная последовательность может быть выбрана из нуклеотидной последовательности, представляющей собой известную последовательность вирусной ДНК или РНК, такую как геном ВГВ.

[0304] В вариантах осуществления описанные олигонуклеотиды проявляют аффинность по меньшей мере к одной из следующих шести последовательностей генома ВГВ или их РНК-эквивалентов и/или демонстрируют стабильность в комплексе по меньшей мере с одной из следующих шести последовательностей генома ВГВ (таблица E) или их РНК-эквивалентов (таблица F). В вариантах осуществления олигонуклеотид в комплексе с комплементарной последовательностью генома ВГВ имеет температуру плавления (Tm) > 37°C. Геном ВГВ может представлять собой последовательность РНК, такую как последовательность РНК DR-1 и/или DR-2. Комплекс может быть образован в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, таких как фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). В вариантах осуществления Tm комплекса составляет > 50°C. В вариантах осуществления Tm комплекса составляет 50-100°C. В вариантах осуществления Tm описанного олигонуклеотида, спаренного с РНК ВГВ в физиологических условиях или в практически физиологических условиях, составляет > 50°C.

Испытание олигонуклеотидов in vitro

[0305] Для оценки активности олигонуклеотидов in vitro использовали две клеточные линии ВГВ: HepG2.2.15 (2215) и HepG2.117 (2117). Снижение HBsAg в супернатанте (sup) тканевой культуры, а также цитотоксичность измеряли с использованием клетки HepG2.2.15. Снижение ДНК ВГВ в sup, а также внутриклеточную фракцию измеряли в клетке HepG2.117.

[0306] Клеточная линия HepG2.2.15 представляет собой стабильную клеточную линию с четырьмя встроенными геномами ВГВ. Клетки выращивали при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла, обогащенной 10% FCS, 100 МЕ/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2% глутамина. За сутки до дозирования 2,5×104 клеток/лунку высевали на покрытые коллагеном 96-луночные планшеты и инкубировали в течение ночи. На сутки дозирования последовательно разведенные олигомеры трансфицировали в клетки реактивом Lipofectamine RNAiMax (Thermo Fisher, г. Уолтем, штат Массачусетс) в соответствии с протоколом производителя. Каждую концентрацию лекарственного средства получали в двух повторениях и для каждого олигонуклеотида измеряли EC50 и CC50. Через трое суток после трансфекции собирали супернатант (sup) и использовали в твердофазном ИФА HBsAg (AutoBio, Китай) для расчета EC50. Для измерения CC50 в анализе использовали клетки CellTiteR-Glo® (Promega, г. Мадисон, штат Висконсин) в соответствии с инструкциями производителя.

[0307] HepG2.117 представляет собой стабильную клеточную линию гепатомы, содержащую интегрированную копию 1.05 генома ВГВ (подтип ayw), регулируемую TetOFF (индукция транскрипции в отсутствие тетрациклина или его гомолога доксициклина). Клетки выращивали при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в среде DMEM/F12, обогащенной 10% FCS, 100 МЕ/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2% глутамина, 250 мкг/мл G418 и 2 мкг/мл тетрациклина. За сутки до дозирования клеточную среду, содержащую тетрациклин, удаляли, клетки промывали для удаления остаточного тетрациклина и высевали в количестве 2,5×104 клеток/лунку со средой для обработки (среда DMEM/F12, содержащая одобренную для применения с системой Tet 2% FBS, 100 МЕ/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2% глутамина) в покрытых коллагеном 96-луночных планшетах. Впоследствии клетки инкубировали в течение ночи. На сутки эксперимента последовательно разведенные олигомеры трансфицировали в клетки реактивом Lipofectamine RNAiMax (Thermo Fisher, г. Уолтем, штат Массачусетс) в соответствии с протоколом производителя. Каждую концентрацию лекарственного средства получали в двух повторениях и для каждого олигонуклеотида измеряли EC50 и CC50. Через четверо суток после трансфекции собирали sup, который использовали непосредственно для количественной ПЦР ДНК ВГВ. ДНК ВГВ из клеток выделяли с помощью набора для выделения нуклеиновых кислот MagMAX™ Total (Thermo Fisher), после чего использовали в кПЦР в качестве матрицы. Последовательность ДНК ВГВ подтипа ayw (учетный номер V01460) использовали для создания (Primer Express, Thermo Fisher) прямого праймера (5'-TTG CCT TCT GAC TTC TTT CCT TCT-3′), обратного праймера (5'-TGC CTG AGT GCT GTA TGG TGA G-3′) и флуорогенного зонда TaqMan® (5'-TCG GGA AGC CTT AGA GTC TCC TGA-3′), помеченного FAM (6-карбоксифлуоресцеин) на 5'-конце и TAMRA (6-карбокситетраметилродамин) на 3'-конце. Эти праймеры и зонд использовали для проведения количественной ПЦР в реальном времени с ДНК-полимеразой AmpliTaq Gold (Perkin Elmer Life Science, г. Уолтем, штат Массачусетс). Условия для этой реакции были следующими: 1 цикл, горячий запуск при 95°C на 10 мин, впоследствии 50 циклов денатурации (95°C в течение 15 с) и отжиг/полимеризация (59°C в течение 1 мин).

Инфекционная система ВГВ в первичном человеческом гепатоците

[0308] Криосохраненные первичные человеческие гепатоциты (PHH) размораживали и высевали в 24-луночные планшеты с плотностью 200 000 клеток/лунку. Клеткам позволяли восстановиться в течение ночи при 37°C 5% CO₂. Клетки инфицировали в течение ночи (37°C/5% CO₂) ВГВ с множественностью инфекции (MOI) 50-100. После инфицирования в течение ночи вирусный посевной материал удаляли и клетки трижды промывали предварительно нагретой промывочной средой. Впоследствии заливали свежую культуральную среду PHH. Среду заменяли на 450 мкл свежей среды. Добавляли 50 мкл смеси для трансфекции. Разводили олигомеры в среде Opti MEM I (Life Technology, кат. №31985-070) до конечной концентрации 20x, смешивали с равным объемом среды Opti-MEM I, содержащей Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen, кат. № 13778-150), пипетировали 3 раза и инкубировали в течение 10-20 мин при комнатной температуре. В лунки добавляли 50 мкл смеси олигонуклеотид : RNAiMAX, после чего несколько раз постукивали по планшетам рукой. Планшеты возвращали обратно в инкубатор. На сутки анализа супернатант собирали для твердофазного ИФА HBsAg и HBeAg, а клетки для анализа жизнеспособности клеток. Твердофазный ИФА HBsAg описан в разделе выше. В отношении HBeAg использовали способ компании Autobio Diagnostics (CL0312-2).

Испытание олигонуклеотидов in vivo

[0309] AAV/HBV представляет собой рекомбинантный AAV, несущий реплицируемый геном ВГВ. Используя высокую гепатотропность генотипа 8 AAV, геном ВГВ можно эффективно доставлять в мышиные клетки печени. Инфицирование иммунокомпетентной мыши AAV/HBV может привести к длительной виремии ВГВ, что имитирует хроническую инфекцию ВГВ у пациентов. Модель AAV/HBV может быть использована для оценки активности in vivo различных типов агентов против ВГВ. Мышей инфицировали AAV-HBV на 28 сутки исследования. Испытуемое изделие или отрицательный контроль (PBS) вводили подкожно (если не указано иное) три раза на 0, 2 и 4 сутки с указанными уровнями дозы. Или их можно вводить в виде однократной дозы с указанными уровнями дозы на 0 сутки. Положительный контроль, энтекавир (ETV), для ДНК ВГВ, но не для антигенов ВГВ, вводили перорально каждые сутки. Сывороточный антиген S (HBsAg) и антиген E (HBeAg) ВГВ анализировали посредством твердофазного ИФА, а ДНК ВГВ посредством ПЦР в реальном времени. Способы твердофазного ИФА и способ количественной ПЦР были описаны выше в разделах, относящихся к анализу in vitro.

[0310] В приведенном ниже описании указано, как были получены данные из таблицы 1-43. Для всех данных по EC50 и CC50 для HBsAg в клеточной линии в условиях in vitro использовали способ для HepG2.2.15 и, соответственно, в столбцах или строках, в которых показаны данные, ставили отметку 2215. Для всех данных по EC50 и CC50 для ДНК ВГВ в клеточной линии в условиях in vitro использовали способ для HepG2.117 и, соответственно, в столбцах или строках, в которых показаны данные, ставили отметку 2117. Для всех данных по EC50 для HBsAg, а также для HBeAg, полученных в инфекционной системе HBV/PHH, использовали способ PHH и, соответственно, в столбцах или строках, в которых показаны данные, ставили отметку PHH. В отношении результатов по мышиной модели AAV-HBV в условиях in vivo применяли способ, описанный выше в разделе, относящемся к исследованию in vivo. Максимальное снижение HBsAg (или HBeAg) описывалось как «низшая точка» (единицы: логарифмическое уменьшение), и в столбцах или строках, в которых показаны данные, ставили отметку «низшая точка». Два ASO часто сравнивали по их низшей точке. Если сравнивали другое значение, а не «низшую точку», то это указано в тексте.

Способ лечения

[0311] Взрослому человеку, страдающему инфекцией ВГВ, вводят внутривенно терапевтически эффективное соединение настоящего описания, например соединение, выбранное из таблицы 1-43. Лечение продолжают до тех пор, пока не наступит облегчение одного или более симптомов ВГВ, или, например, не произойдет снижение концентрации сывороточного антигена ВГВ S (HBsAg) и/или антигена E (HBeAg).

[0312] Взрослому человеку, страдающему инфекцией ВГВ, вводят подкожно терапевтически эффективное соединение настоящего описания, например соединение, выбранное из таблицы 1-43. Лечение продолжают до тех пор, пока не наступит облегчение одного или более симптомов ВГВ, или, например, не произойдет снижение концентрации сывороточного антигена ВГВ S (HBsAg) и/или антигена E (HBeAg).

[0313] В приведенных ниже таблицах буквы A-J соответствуют следующим значениям:

A) 0,05-10 нМ;

B) 10-100 нМ;

C) более 100 нМ;

D) 0,1-5,0 нМ;

E) 5,1-10,0 нМ;

F) 10,1-21 нМ;

G) 20-100

H) 10-1000

I) > 1000

J) > 10 000.

Таблица 1. Химерный олигонуклеотид с модификациями PS и 2'-O-Me

[0314] На ФИГ. 1A-C показаны результаты 2-недельного тестирования соединения настоящего описания in vivo в мышиной модели AAV/HBV. AAV/HBV представляет собой рекомбинантный аденоассоциированный вирус (AAV), несущий реплицируемый геном ВГВ. Используя высокую гепатотропность генотипа 8 AAV, геном ВГВ можно эффективно доставлять в мышиные клетки печени. Инфицирование иммунокомпетентной мыши AAV/HBV может привести к длительной виремии ВГВ, что имитирует хроническую инфекцию ВГВ у пациентов. Модель AAV/HBV может быть использована для оценки активности in vivo различных типов агентов против ВГВ. Мышей инфицировали AAV-HBV на 28 сутки исследования. Испытуемое изделие или отрицательный контроль (PBS) вводили подкожно (если не указано иное) три раза на 0, 2 и 4 сутки с указанными уровнями дозы. Положительный контроль, энтекавир (ETV, для ДНК ВГВ, но не для антигенов ВГВ), вводили перорально каждые сутки. Серии образцов крови собирали на сутки, указанные на фигурах. Сывороточный антиген S (HBsAg) и антиген E (HBeAg) ВГВ анализировали посредством твердофазного ИФА, а ДНК ВГВ посредством ПЦР в реальном времени. Как показано на ФИГ. 1, исследовали три испытываемых изделия №101, №102 (3'-холестерин-конъюгированная форма № 101) и № 103 (3'-GalNAc-конъюгированная форма №101), а также ETV.

[0315] На ФИГ. 1A показаны сывороточные концентрации HBsAg. Известно, что ETV снижает ДНК ВГВ, но не влияет ни на HBsAg, ни на HBeAg. GalNAc-конъюгированный №101 уменьшал HBsAg на ~2 log, тогда как неконъюгированный №101 и конъюгированный с холестерином № 102 оказывали очень небольшое влияние.

[0316] На ФИГ. 1B показаны сывороточные концентрации HBeAg; и на ФИГ. 1C показаны сывороточные концентрации ДНК. Графики для этих трех олигомеров в отношении HBeAg были очень схожими с таковыми для HBsAg. Максимальное падение HBeAg в случае №103 составляло ~ 0,7 log.

[0317] На ФИГ. 1C показаны сывороточные концентрации ДНК. Все три олигомера уменьшали ДНК ВГВ в мышиной сыворотке, при этом конъюгированный с GalNAc №103 оказался наиболее активным соединением (максимальное снижение ДНК ВГВ на 14 сутки составило ~ 3 log по сравнению с исходным уровнем (0 сутки)). Положительный контроль ETV также приводил к максимальному уменьшению ДНК ВГВ, равному 3 log.

[0318] На ФИГ. 2A-B показаны сывороточные концентрации HBsAg при п/к и в/в введении конъюгированного с GalNAc соединения настоящего описания в мышиной модели в условиях in vivo. На ФИГ. 2A представлены результаты при в/в введении; на ФИГ. 2B представлены результаты при п/к введении. При п/к доставке наблюдали несколько более высокую концентрацию HBsAg, чем при в/в введении в одной и той же дозе.

Таблица 2

[0319] На ФИГ. 3 показаны степени уменьшения HBsAg после введения конъюгированных с GalNAc соединений настоящего описания (№106, № 09, №162 и №159) посредством подкожной доставки в мышиную модель AAV-HBV в условиях in vivo. Максимальное уменьшение HBsAg для этих ASO было аналогично ~1 log.

Таблица 3

Таблица 4

Ид. номер 2215 HbsAg EC₅₀ (нМ) 2117 sup ДНК ВГВ (EC₅₀ нМ) 2117 Intra ДНК ВГВ EC₅₀ (нМ) 2215 CC₅₀ (нМ) ММ 110 B F F J 7305,95 111 B E E J 7320,96 112 B D D J 7350,99 113 B D D J 7350,99 114 A D D J 7381,02

115 B D E J 7275,92 116 B F E J 7290,94 117 A D D J 7320,97 118 B E D J 7320,97 119 A D D J 7351,00 Ид. номер Последовательность (5'-3') 110 5' mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG 3' 111 5' mGpsmApsmUpsmUpsmApsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmDAPpsmDAPpsmmDAPpsmG 3' 112 5' mGpsmApsmUpsmUpsmApsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG 3' 113 5' mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG 3' 114 5' mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsmGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG 3' 115 5' mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmApsmApsmApsmG 3' 116 5' mGpsmApsmUpsmUpsmApsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG 3' 117 5' mGpsmApsmUpsmUpsmApsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG 3' 118 5' mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmApsmApsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG 3' 119 5' mGpsmDAPpsmUpsmUpsmDAPpsGpsGpsCpsApsGpsApsGpsGpsTpsmGpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmDAPpsmG 3'

Таблица 5

Таблица 6

[0320] На ФИГ. 3 показаны степени уменьшения HBsAg после введения конъюгированных с GalNAc соединений настоящего описания (№106, №109, №162 и №159) посредством подкожной доставки в мышиную модель AAV-HBV в условиях in vivo. Максимальное уменьшение HBsAg для этих ASO было аналогично ~1 log.

[0321] На ФИГ. 4A-C показаны данные о HBsAg, HBeAg и сывороточной ДНК ВГВ, полученные in vivo в мышиной модели AAV-HBV, для соединений настоящего описания. Соединения №103, №164 и №165 при п/к доставке привели к значительному снижению HBsAg, HBeAg и сывороточной ДНК ВГВ в мышиной модели AAV-HBV. Соединение №103 также продемонстрировало дозозависимую реакцию при дозировании в двух различных уровнях дозы. На ФИГ. 4A показаны сывороточные концентрации HBsAg. На ФИГ. 4B показаны сывороточные концентрации HBeAg. На ФИГ. 4C показаны концентрации ДНК ВГВ.

[0322] На ФИГ. 4A-C показаны данные о HBsAg, HBeAg и сывороточной ДНК ВГВ, полученные in vivo в мышиной модели AAV-HBV, для соединений настоящего описания. На ФИГ. 4A показаны сывороточные концентрации HBsAg. На ФИГ. 4B показаны сывороточные концентрации HBeAg. На ФИГ. 4C показаны концентрации ДНК ВГВ.

[0323] На ФИГ. 5A-C показаны данные о HBsAg, HBeAg и сывороточной ДНК ВГВ, полученные in vivo в мышиной модели AAV-HBV, для соединений настоящего описания. Соединения № 160, №161, №163, №166, №213 и №176 значительно снижали HBsAg, HBeAg и сывороточную ДНК ВГВ в мышиной модели AAV-HBV. На ФИГ. 5A показаны сывороточные концентрации HBsAg. На ФИГ. 5B показаны сывороточные концентрации HBeAg. На ФИГ. 5C показаны концентрации ДНК ВГВ.

Таблица 7

Таблица 8

Таблица 9

Ид. номер Последовательность (5'-3') HBsAg 2215 EC₅₀ (нМ) HBsAg 2215 CC₅₀ (нМ) ММ 173 5' GnpsafCnpsafAnpsGnspafAnpsGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsafCnpsGnpsafAnpsafAnpsGnpsafUnpsGnpsafC A J 6677,43 174 5' GnpafCnpafAnpGnpafAnpGnpGpsTpsGpsApsApsGpsafCnpGnpafAnpafAnpGnpafUnpGnpafC A J 6468,57 175 5' GnpafCnpafAnpGnpafAnpGnpGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGnpafAnpafAnpGnpafUnpGnpafC A J 6466,65

Таблица 10. Гэпмер (2'Ome, 5MeC) с 5' GalNAc

Ид. номер Последовательность (5'-3') 2215 HBsAg EC₅₀ (нМ) Максимальное логарифмическое уменьшение HbsAg (низшая точка)* 204 5'-GalNAc-NHC6-psmUpsm5meCpsm5meCpsmGpsm5meCpsApsGpsTpsApsTpsGpsGpsApsTps5meCpsmGpsmGpsm5meCpsmApsmG 3' C 1 205 5'-GalNAc-NHC6-psm5meCpsmUpsmApsmGpsmGpsApsGpsTpsTps5meCps5meCpsGps5meCpsApsGpsmUpsmApsmUpsmGpsmG 3' B 1

206 5'-GalNAc-NHC6-psmApsmApsmGpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5meCps5meCpsm5meCpsmGpsmUpsmGpsmG 3' B 1 207 5' GalNAc-NHC6-psmApsmGpsmApsmGpsmGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5meCps5meCps5meCpsGpsTpsmGpsmGpsmUpsm5meCpsmG 3' B 0,5 208 5' GalNAc-NHC6-psmUpsmGpsm5meCpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps5meCpsGpsmApsmApsmGpsmUpsmG 3' 1,4

* Логарифмическое уменьшение после п/к введения 3×30 мг/кг.

[0324] На ФИГ. 6A-C показаны данные о HBsAg, HBeAg и сывороточной ДНК ВГВ, полученные in vivo в мышиной модели AAV-HBV, для соединений настоящего описания. Соединения №204, №205, №206, №207, №208 и №212 значительно снижали HBsAg, HBeAg и сывороточную ДНК ВГВ в мышиной модели AAV-HBV. На ФИГ. 56 показаны сывороточные концентрации HBsAg. На ФИГ. 6B показаны сывороточные концентрации HBeAg. На ФИГ. 6C показаны концентрации ДНК ВГВ.

Таблица 11. Pre-Poly-A

Таблица 12

Таблица 13

Таблица 14

Ид. номер Последовательность (5'-3') 2215 HBsAg EC₅₀ (нМ) 2215 HBsAg CC₅₀ (нМ) ММ 231 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-3 A I 6967,62 232 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-Chol-3 A I 7723,58 233 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH_2-Gps (5m)mC-TocO-3 A I 7666,53 234 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH_2-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH_2-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-GalNAc-3 A I 8728,52 235 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-3 A I 6937,59 236 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH_2-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-Chol-3 A I 7693,55

237 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH_2-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-TocO-3 A I 7636,50 238 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-GalNAc-3 A I 8698,50 239 5-mGps2-4-OCH₂-(5m)CpsmAps 2-4-OCH₂-GpsmAps2-4-OCH₂-GpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsmGps2-4-OCH₂-ApsmAps2-4-OCH₂-GpsmUps2-4-OCH₂-Gps (5m)mC-3 A I 6881,57

Таблица 15

Ид. номер Последовательность (5'-3') 2215 HBsAg EC₅₀ (нМ) 2215 CC₅₀ (нМ) ММ 240 5dTnpsGnpsCnpsAnpsGnpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAnpsAnpsGnpsTnpsGN-3 A I 6566,49 241 5dTnpsfGnpsCnpsfAnpsfGnpsApsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnpsfGn 3' A I 6700,35

Таблица 16

Ид. номер Последовательность (5'-3') 2215 HBsAg EC₅₀ 2215 CC₅₀ ММ

243 5fGnpsCnpsfAnpsfGnpsfAnpsfGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCnpsfGnpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnpsfGnpsCn-3' A I 6731,41 242 5fGnpsCnpsfAnpsfGnpsfAnpsfGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsfAnpsfAnpsfGnpsfUnpsfGnpsCn-3' A I 6715,39

Таблица 17

Ид. номер Размер домена Y Последовательность (5'-3') 2215 EC₅₀ 2215 CC₅₀ (нМ) ММ 244 6 5'dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpmGnpGpsTpsGpsApsApsGpsmCnpmGnpmAnpmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' A I 6714,98 245 7 5'dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpmGnpGpsTpsGpsApsApsGpsCpsmGnpmAnpmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' A I 6702,01 246 8 5'dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpmGnpGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsmAnpsmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' A G 6689,03 247 8 5'dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsmGnpmAnpmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' A I 6689,03 248 9 5'dGnpmCnpmAnpmGnpmAnpGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsmAnpmAnpmGnpmUnpmGnpmCnp-3' A I 6676,06

Таблица 18

Ид. номер Последовательность (5'-3') 2215 HBsAg EC₅₀ 2215 HBsAg CC₅₀ ММ 142 5'mApsmApsmGpsmApsmGpsApsGpsGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5meCps5meCps5memCpsmGpsmUpsmGpsmG 3' A I 6869,64 196 5'mApsmApsmGpsmApsmGpsmApsGpsGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5meCps5memCps5memCpsmGpsmUpsmGpsmG 3' A I 6929,69 197 5'mApsmApsmGpsmApsmGpsmApsmGpsGpsTpsGps5meCpsGps5meCps5memCps5memCps5memCpsmGpsmUpsmGpsmG 3' A I 6989,74 143 5'mGpsmGpsmUpsmGpsmApsApsGps5meCpsGpsApsApsGpsTpsGps5mCpsmAps5memCpsmAps5memeCpsmG 3' A I 6863,64 198 5'mGpsmGpsmUpsmGpsmApsmApsGps5meCpsGpsApsApsGpsTpsGps5memCpsmAps5memCpsmAps5memeCpsmG 3' A I 6923,69 199 5'mGpsmGpsmUpsmGpsmApsmApsmGps5meCpsGpsApsApsGpsTpsGps5memCpsmAps5memCpsmAps5memeCpsmG 3' A I 6953,72 146 5'mUpsmGpsmGps5memCpsmAps5meCpsTpsApsGpsTpsApsApsAps5meCpsTpsmGpsmApsmGps5memCps5memC 3' A I 6987,62 200 5'mUpsmGpsmGps5memCpsmAps5memCpsTpsApsGpsTpsApsApsAps5meCpsTpsmGpsmApsmGps5memCps5memC 3' A I 6817,64 201 5'mUpsmGpsmGps5memCpsmAps5meCpsTpsApsGpsTpsApsApsAps5meCpsTpsmGpsmApsmGps5memCps5memC 3' A I 147 5'5memCpsmUpsmApsmGmGpsApsGpsTpsTps5meCps5meCpsGps5meCpsApsGpsmUpsmApsmUpsmGpsmG 3' A I 6792,55 202 5'5memCpsmUpsmApsmGmGpsmApsGpsTpsTps5meCps5meCpsGps5meCpsApsmGpsmUpsmApsmUpsmGpsmG 3' A I 6852,60

203 5'5memCpsmUpsmApsmGmGpsmApsmGpsTpsTps5meCps5meCpsGps5meCpsApsmGpsmUpsmApsmUpsmGpsmG 3' A I 6882,62

Таблица 19

Ид. номер Последовательность (5'-3') 2215 HBsAg EC₅₀ 2215 CC₅₀ ММ 128 5'GnpsCnpsAnpsGnpsApsGpsGpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnps-3-NH₂-G-3' B J 4577,86 129 5'CnpsGnpsTnpsGnpsCnpsApsGpsApsGpsGpsTnpsGnpsAnpsAnpsGnps-3-NH₂-C-3' B J 5201,40 130 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGpsApsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' A J 6543,60 131 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' B J 6543,60 132 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGnpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' B J 6543,60 133 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsApsApsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' B J 6543,60 134 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsAnpsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' B J 6543,60 135 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' B J 6544,58 136 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGpsApsApsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' B J 6544,58 137 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTpsGpsApsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' A J 6544,58 138 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' B J 6544,58 139 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' A J 6545,57 140 5'GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTpsGpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3 NH₂-C-3' A J 6546,55

Таблица 20

Ид. номер 2215
HBsAg EC₅₀ (нМ) 2215 CC₅₀ (нМ) 2217 sup ДНК ВГВ (EC₅₀ нМ) 2117 intra ДНК ВГВ EC₅₀ (нМ) 177 B J D F 178 B J E F 179 B J F F 180 A J D F 181 B J D F 182 A J D E 183 A J D E 184 A J D D 185 A J D E 186 B J D D 187 B J E E 188 B J E F 189 A J D F 190 C J E F

191 B J E F 192 B J D D 193 B J E D 194 C J E E 195 B J E D

Таблица 21

Ид. номер 2215 HBsAg EC₅₀ (нМ) 2215 CC₅₀ (нМ) 2217 sup ДНК ВГВ (EC₅₀ нМ) 2217 intra ДНК ВГВ (EC₅₀ нМ) 124 B J B B 125 B J B B 126 J B A 127 A J A A 128 B J C B 129 B J B B

Таблица 22

2215 HBsAg EC₅₀ (нМ) 2215 CC₅₀ (нМ) 2217 sup ДНК ВГВ
(EC₅₀ нМ) 2217 intra
ДНК ВГВ
(EC₅₀ нМ) 249 C G F F 250 B G F E 251 B G F F 252 B G E E

253 B G E E 254 G E D 255 A G D D 256 B G F E 257 B G E E

Таблица 23

HBsAg 2215 EC₅₀ (мкМ) 2215 CC₅₀ (мкМ) Последовательность (5'-3') ММ A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGpsApsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6543,60 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6543,60 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGnpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6543,60 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsApsApsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6543,60 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsAnpsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6543,60 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGpsAnpsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6544,58

A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGpsApsApsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6544,58 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTpsGpsApsAnpsGnpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6544,58 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGnpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6544,58 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTnpsGpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6545,57 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGnpsTpsGpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6546,55 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6548,52 A E-F GnpsCnpsApsGnpsAnpsGpsGnpsTnpsGpsAnpsAnpsGpsCnpsGnpsApsAnpsGnpsTpsGnps-3nh2-C 6547,54 A E-F GpsCnpsAnpsGpsAnpsGnpsGpsTnpsGnpsApsAnpsGnpsCpsGnpsAnpsApsGnpsTnpsGps-3nh2-C 6548,52 A E-F GnpsCpsAnpsGnpsApsGnpsGnpsTpsGnpsAnpsApsGnpsCnpsGpsAnpsAnpsGpsTnpsGnps-3nh2-C 6547,54 A E-F GnpsCnpsAnpsGnpsAnpsGnpsGpsTpsGpsApsApsGpsCnpsGnpsAnpsAnpsGnpsTnpsGnps-3nh2-C 6547,54

[0325] Два олигонуклеотида (первый содержит модификации 2'MOE PS, а второй содержит 2'MOE NPS) исследовали in vitro и in vivo. Результаты исследования приведены ниже в таблицах 24-26.

[0326] На ФИГ. 9(a) показаны результаты по HBsAg для олигомеров 1 и 2 в мышиной модели ВГВ, полученные с дозой 3 х 10 мг/кг на 0, 2, 4 сутки. На Фиг. 9 (b) показаны результаты по HBeAg.

[0327] Как можно видеть выше, олигомеры MOE NPS были более активными, чем MOE PS в условиях in vivo, а активность OMe NPS была аналогичной таковой у олигомеров MOE PS.

[0328] Два олигонуклеотида (первый содержит замену OEt NPS, а второй содержит MOE NPS) исследовали in vitro и in vivo. Результаты исследования приведены ниже в таблице 27.

[0329] Как можно видеть выше, олигомеры MOE NPS обладали аналогичной активностью с олигомерами OEt NPS.

[0330] Четыре олигонуклеотида (первый содержит замену MOE PS, второй содержит имеет замену MOE NPS, третий имеет замену OME PS, четвертый имеет замену OME NPS) исследовали in vitro. Результаты исследования приведены ниже в таблице 28. По сравнению с последовательностью №9 (MOE PS) последовательность №10 (MOE NPS) в 7 раз более активна in vitro. По сравнению с последовательностью №11 (OME PS) последовательность №12 (OME NPS) в 6 раз более активна.

[0331] Два олигонуклеотида (первый содержит замену 5'GalNAc-2'-MOE NPS, второй имеет замену 5'-GalNAc-6: MOE PS) исследовали in vivo. Результаты исследования приведены в таблице 29 и на ФИГ. 8. Максимальное уменьшение HBsAg (низшая точка) показано в таблице 29. В определенные моменты улучшение составляло 0,8 log (6x), и преимущество MOE NPS по сравнению с MOE PS сохранялось в течение большей части 42-суточного периода исследования.

[0332] Два олигонуклеотида (первый содержит замену 3'GalNAc-2'-MOE NPS, второй имеет замену 3'-GalNAc2'-MOE PS) исследовали in vivo. Результаты исследования приведены ниже в таблице 30.

[0333] Два олигонуклеотида (первый содержит замену OME NPS, второй имеет замену OME PS) исследовали in vivo. Результаты исследования приведены ниже в таблице 31 и на ФИГ. 10. OME NPS имеет гораздо большую активность in vivo, чем OME PS.

[0334] Следующие последовательности исследовали в мышиной модели ВГВ. Результаты представлены на ФИГ. 11. Как показано на ФИГ. 11A, при дозе 1×10 мг/кг 3' GalNac MOE NPS поддерживал улучшение эффективности до 0,8 log (в 6 раз) по сравнению с 5' GalNac MOE PS, при этом преимущество сохранялось в течение большей части 21-суточного периода исследования. 5'GalNac MOE NPS поддерживал улучшение эффективности до 0,4 log (в 2,5 раза) по сравнению с 5' GalNac MOE PS, при этом преимущество сохранялось в течение большей части 21-суточного периода исследования. Как показано на ФИГ. 11B, при дозе 3×3,3 мг/кг 3' GalNac MOE NPS и 5'GalNac MOE NPS имели одинаковую активность, обеспечивая улучшение эффективности до 0,6 log (в 4 раза) по сравнению с 5' GalNac MOE PS, при этом преимущества сохранялись в течение большей части 21-суточного периода исследования.

Таблица 32

№ Химический состав Последовательность (5'-3') ММ 276 MOE PS 5'-GalNaC6-NH-C6-moeGps(5m)moeCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGps(5m)moeC-3' 9105,14 280 MOE NPS 5'-GalNAc2-moeGnpsmoeCnpsmoeAnps moeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps (5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnps moeGnpsmoeCn-3' 8957,00

[0335] Следующие последовательности исследовали в мышиной модели ВГВ. Результаты показаны на ФИГ. 11A для режима дозирования, включающего в себя однократную дозу 10 мг/кг, и на ФИГ. 11B для режима дозирования, включающего в себя 3 х 3,3 мг/кг на 0, 2, 4 сутки.

Таблица 33

№ Химический состав Последовательность (5'-3') ММ 276 MOE PS 5'-GalNaC6-NH-C6-moeGps(5m)moeCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGps(5m)moeC-3' 9105,14

281 MOE NPS 5'moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCnp-C6-NH-GalNAC6-3' 9053,85 282 MOE NPS 5'GalNAc2moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnps moeGnpsmoeCn-3' 8957,00

[0336] Следующие последовательности исследовали в мышиной модели ВГВ. Значения в правой колонке показывают максимальное уменьшение HBsAg в LOG при введении дозы 3×10 мг/кг на 0, 2, 4 сутки.

Таблица 34

[0337] Следующие последовательности исследовали в мышиной модели ВГВ. Значения в правой колонке показывают максимальное уменьшение HBsAg в LOG при введении дозы 3×10 мг/кг на 0, 2, 4 сутки.

Таблица 35

[0338] Следующие олигомеры, имеющие замену MOE/NPS и MOE/PS, исследовали путем (1) сравнения степени уменьшения HBsAg в HepG2.2.15, (2) сравнения степени уменьшения ДНК ВГВ в HepG2.117, (3) сравнения степени уменьшения HBsAg в первичных гепатоцитах человека (PHH), (4) сравнения степени уменьшения HBeAg в первичных гепатоцитах человека (PHH).

Таблица 36

1 2 3 4 № Последовательность (5'-3') 2215 HBsAg EC₅₀ (нМ) 2117 ДНК ВГВ EC₅₀ (нМ) PHH HBsAg EC₅₀ (нМ) PHH HBeAg EC₅₀ (нМ) ММ 292 5'-moeGps(5m)moeCpsmoeApsmoeGpsmoeApsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeApsmoeGpsmoeTpsmoeGps(5m)moeC-3' 5,1 11,4 16,2 20,1 7344,19 293 5'-moeGnpsmoeCnpsmoeAnpsmoeGnpsmoeAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsmoeAnpsmoeGnpsmoeUnpsmoeGnpsmoeCn-3' 0,43 1,9 1,7 2,5 7292,26

Таблица 37

№ Химический состав ММ Последовательность 294 F NPS с OPO-связью с 3'GalNac 8507,3 5'-fGnps(5m)fCnpsfAnpsfGnpsfAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsApsfAnpsfGnpsfTnpsfGnpsfC-C6-NH-GalNaC6-3'

295 F NPS с NPO-связью с 3'GalNac 8492,29 5'-fGnpsfCnpsfAnpsfGnpsfAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGps(5m)CpsGpsApsfAnpsfGnpsfUnpsfGnpsfCnp-C6-NH-GalNAC6-3'

[0339] Как показано на ФИГ. 12A, при дозе 1×10 мг/кг F NPS с OPO-связью с 3'GalNac значительно превзошел F NPS с NPO-связью, т.е. оказался до 1,2 log (в 16 раз) лучше в определенные моменты времени.

Таблица 38

№ Химический состав ММ Последовательность 296 OME NPS с NPO-связью с 3'GalNac 8614,39 5-mGnpsmCnpsmAnps mGnpsmAnpsGps GpsTpsGps ApsApsGps (5m)CpsGpsAps mAnpsmGnpsmUnps mGnpsmCnp-C6-NH-GalNAC6-3 297 OME NPS с OPO-связью с 3'GalNac 8614,43 5-mGnpsmCnpsmAnps mGnpsmAnpsGps GpsTpsGps ApsApsGps (5m)CpsGpsAps mAnpsmGnpsmUnps mGnpsmC-C6-NH-GalNAC6-3

[0340] Как показано на ФИГ. 12B, при дозе 1×10 мг/кг OME NPS с OPO-связью с 3'GalNac значительно превзошел OME NPS с NPO-связью, т.е. оказался до 0,7 log (в 5 раз) лучше в определенные моменты времени.

Таблица 39

№ Химический состав ММ Последовательность 298 MOE NPS с NPO-связью с 3'GalNac 9054,52 5'-moeGnpsmoeCnpsmoeAnps moeGnpsmoeAnpsGps GpsTpsGps ApsApsGps (5m)CpsGpsAps moeAnpsmoeGnpsmoeUnps moeGnpsmoeCnp-C6-NH-GalNAC6-3'

299 MOE NPS с OPO-связью с 3'GalNac 9069,62 5'-moeGnpsmoeCnpsmoeAnps moeGnpsmoeAnpsGps GpsTpsGps ApsApsGps (5m)CpsGpsAps moeAnpsmoeGnpsmoeUnps moeGnps(5m)moeC-C6-NH-GalNAC6-3'

Таблица 40

№ Химический состав ММ Последовательность 300 5' GalNac MOE NPS 8955,48 5-GalNAc2-moeGnpsmoeCnpsmoeAnps moeGnpsmoeAnpsGps GpsTpsGps ApsApsGps (5m)CpsGpsAps moeAnpsmoeGnpsmoeUnps moeGnpsmoeCn-3 301 5' GalNac OEt NPS 8697,6 5-GalNAc2-etoGnpseto(5m)CnpsetoAnps etoGnpsetoAnpsGps GpsTpsGps ApsApsGps (5m)CpsGpsAps etoAnpsetoGnpsetoTnps etoGnpseto(5m)Cn-3'

[0341] Как показано на ФИГ. 12C, при дозе 1×10 мг/кг эффективность OEt NPS аналогична таковой MOE NPS.

Таблица 41

№ Последовательность 5'-3' Модификация ММ 2215 HBsAg EC₅₀ (мкМ) 2215 HBsAg CC₅₀ (мкМ) 302 5-mGnpsmCnps2-4-OCH₂AnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAps2-4-OCH₂AnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC-3 Анти-DR-1 с x2 3'-NH-LNA-A 6835,3 0,0008 0,0148 303 5-mGnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmAnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC-3 Анти-DR-1 с x2 3'-NH-ENA-A 6862,0 0,00067 0,0256

304 5-mGnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnps2-4OCH₂CH₂AnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC-3 Анти-DR-1 с x3 3'-NH-ENA-A 6874,7 0,0009 0,0214 305 5-mGnpsmCnpsmAnpsmGnps2-4-OCH₂CH₂AnpsGpsGpsTpsGpsApsApsGpsCpsGpsAps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmUnpsmGnps3-NH₂mC-3 Анти-DR-1 с x2 3'-NH-ENA-A 6863,3 0,00029 0,0226 306 5-mGnpsmCnpsmUnpsmCnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTps mAnpsmUnpsmAnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmGnpsmGnps3-NH₂mG-3 Pre Poly A с x2 3'-NH-ENA-A 7116,0 0,0005 > 1,00 307 5-mGnpsmCnpsmUnpsmCnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTps2-4-OCH₂CH₂AnpsmUnpsmAnps2-4-OCH₂ CH₂AnpsmGnpsmGnps3-NH₂mG-3 Pre Poly A с x3 3'-NH-ENA-A 7128,6 0,00055 > 1,00 308 5-mGnpsmCnpsmUnpsmCnpsmCnps2-4-OCH₂CH₂AnpsApsApsTpsTpsCpsTpsTpsTps2-4-OCH₂ CH₂AnpsmUnps2-4-OCH₂CH₂AnpsmAnpsmGnpsmGnps3-NH₂mG-3 Pre Poly A с x3 3'-NH-ENA-A 7127,9 0,0006 > 1,00

Таблица 42

Таблица 43

[0342] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид настоящего описания также включает в себя олигонуклеотид, который выбран из последовательностей нуклеотидных оснований, перечисленных в таблицах 1-43, независимо от модификаций последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43. Олигонуклеотиды настоящего описания также включают в себя олигонуклеотид, содержащий последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности нуклеотидных оснований, выбранной из последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43, независимо от модификаций последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43. В некоторых вариантах осуществления 1, 2, 3, 4, 5 нуклеотидных оснований отличны от последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43, независимо от модификаций последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43.

[0343] В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды настоящего описания также включают в себя олигонуклеотид, который выбран из нуклеотидных последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43, независимо от последовательностей нуклеотидных оснований, перечисленных в таблицах 1-43. Олигонуклеотиды настоящего описания также включают в себя олигонуклеотид, содержащий последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43, независимо от нуклеотидных оснований последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43. В некоторых вариантах осуществления 1, 2, 3, 4, 5 нуклеотидных оснований отличны от последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43, независимо от модификаций последовательностей, перечисленных в таблицах 1-43.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ALIOS BIOPHARMA, INC.

<120> МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

<130> ALP0039WO1

<140> PCT/US2017/051644

<141> 14-09-2017 г.

<150> 62/394,739

<151> 14-09-2016 г.

<150> 62/394,738

<151> 14-09-2016 г.

<160> 598

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 1

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 2

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 2

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 3

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 3

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 4

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 4

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 5

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 5

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 6

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 6

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 7

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 7

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 8

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 8

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 9

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 9

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 10

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 10

gnuunggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 11

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 11

gauuaggcag aggtgaannn g 21

<210> 12

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 12

gauuaggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 13

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 13

gnuunggcag aggtgaannn g 21

<210> 14

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 14

gnuunggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 15

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 15

gnuunggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 16

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 16

gauuaggcag aggtgaannn g 21

<210> 17

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 17

gauuaggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 18

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 18

gnuunggcag aggtgaannn g 21

<210> 19

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 19

gnuunggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 20

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 20

gcagaggtga agcgangugc 20

<210> 21

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 21

gcagaggtga agcgnngugc 20

<210> 22

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 22

gcagnggtga agcgnngugc 20

<210> 23

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (3)..(3)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 23

gcngnggtga agcgnngugc 20

<210> 24

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 24

cgtgcagagg tgaagc 16

<210> 25

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 25

gcagaggtga agcgaa 16

<210> 26

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 26

cgacgtgcag aggtgaag 18

<210> 27

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 27

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 28

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 28

gcagaggtga agc 13

<210> 29

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 29

cgtgcagagg tgaag 15

<210> 30

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 30

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 31

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 31

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 32

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 32

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 33

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 33

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 34

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 34

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 35

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 35

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 36

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 36

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 37

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 37

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 38

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 38

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 39

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 39

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 40

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 40

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 41

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 41

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 42

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 42

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 43

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 43

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 44

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 44

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 45

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 45

cgugcagagg tgaagcgaag 20

<210> 46

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 46

agaggtgaag cgaagugcac 20

<210> 47

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 47

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 48

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 48

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 49

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 49

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 50

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 50

gaggugcgcc ccgtggucgg 20

<210> 51

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 51

gaaagcccta cgaaccacug 20

<210> 52

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 52

guuccgcagt atggaucggc 20

<210> 53

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 53

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 54

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 54

accactgaac aaatggcacu 20

<210> 55

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 55

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 56

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 56

acugaacaaa tggcacuagu 20

<210> 57

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 57

aguccaccac gagtcuagac 20

<210> 58

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 58

cacugaacaa atggcacuag 20

<210> 59

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 59

cagaggtgaa gcgaagugca 20

<210> 60

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 60

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 61

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 61

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 62

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 62

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 63

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 63

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 64

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 64

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 65

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 65

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 66

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 66

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 67

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 67

aguccaccac gagtcuagac 20

<210> 68

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 68

gcgggtgaag cggug 15

<210> 69

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 69

gcgggtgaag cggug 15

<210> 70

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 70

gcgggtgaag cggug 15

<210> 71

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 71

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 72

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 72

gcagaggtga agcgagtg 18

<210> 73

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 73

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 74

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 74

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 75

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 75

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 76

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 76

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 77

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 77

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 78

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 78

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 79

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 79

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 80

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 80

cgugcagagg tgaagcgaag 20

<210> 81

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 81

gugaagcgaa gtgcacacgg 20

<210> 82

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 82

agaggtgaag cgaagugcac 20

<210> 83

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 83

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 84

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 84

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 85

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 85

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 86

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 86

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 87

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 87

gaggugcgcc ccgtggucgg 20

<210> 88

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 88

gaaagcccta cgaaccacug 20

<210> 89

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 89

guuccgcagt atggaucggc 20

<210> 90

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 90

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 91

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 91

accactgaac aaatggcacu 20

<210> 92

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 92

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 93

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 93

acugaacaaa tggcacuagu 20

<210> 94

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 94

aguccaccac gagtcuagac 20

<210> 95

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 95

cacugaacaa atggcacuag 20

<210> 96

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 96

cagaggtgaa gcgaagugca 20

<210> 97

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 97

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 98

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 98

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 99

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 99

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 100

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 100

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 101

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 101

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 102

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 102

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 103

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 103

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 104

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 104

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 105

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 105

gcagaggtga agcgaag 17

<210> 106

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 106

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 107

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 107

cgtgcagagg tgaagcg 17

<210> 108

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 108

gcagaggtga agcgaag 17

<210> 109

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 109

cgacgtgcag aggtgaagc 19

<210> 110

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 110

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 111

<211> 14

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 111

gcagaggtga agcg 14

<210> 112

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 112

cgtgcagagg tgaagc 16

<210> 113

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 113

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 114

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 114

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 115

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 115

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 116

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 116

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 117

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 117

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 118

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 118

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 119

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 119

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 120

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 120

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 121

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 121

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 122

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 122

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 123

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 123

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 124

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 124

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 125

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 125

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 126

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 126

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 127

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 127

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 128

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 128

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 129

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 129

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 130

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 130

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 131

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 131

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 132

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 132

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 133

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 133

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 134

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 134

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 135

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 135

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 136

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 136

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 137

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 137

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 138

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 138

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 139

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 139

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 140

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 140

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 141

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 141

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 142

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 142

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 143

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 143

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 144

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 144

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 145

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 145

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 146

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 146

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 147

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 147

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 148

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 148

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 149

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 149

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 150

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 150

tgcagaggtg aagcgaagtg 20

<210> 151

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 151

tgcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 152

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 152

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 153

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 153

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 154

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 154

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 155

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 155

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 156

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 156

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 157

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 157

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 158

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 158

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 159

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 159

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 160

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 160

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 161

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 161

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 162

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 162

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 163

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 163

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 164

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 164

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 165

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 165

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 166

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 166

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 167

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 167

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 168

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 168

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 169

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 169

gnuunggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 170

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 170

gauuaggcag aggtgaannn g 21

<210> 171

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 171

gauuaggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 172

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 172

gnuunggcag aggtgaannn g 21

<210> 173

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 173

gnuunggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 174

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 174

gnuunggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 175

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 175

gauuaggcag aggtgaannn g 21

<210> 176

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 176

gauuaggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 177

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 177

gnuunggcag aggtgaannn g 21

<210> 178

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 178

gnuunggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 179

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 179

gcagaggtga agcgangugc 20

<210> 180

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 180

gcagaggtga agcgnngugc 20

<210> 181

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 181

gcagnggtga agcgnngugc 20

<210> 182

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (3)..(3)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 182

gcngnggtga agcgnngugc 20

<210> 183

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 183

cgtgcagagg tgaagc 16

<210> 184

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 184

gcagaggtga agcgaa 16

<210> 185

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 185

cgacgtgcag aggtgaag 18

<210> 186

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 186

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 187

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 187

gcagaggtga agc 13

<210> 188

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 188

cgtgcagagg tgaag 15

<210> 189

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 189

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 190

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 190

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 191

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 191

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 192

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 192

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 193

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 193

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 194

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 194

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 195

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 195

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 196

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 196

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 197

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 197

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 198

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 198

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 199

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 199

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 200

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 200

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 201

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 201

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 202

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 202

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 203

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 203

cgugcagagg tgaagcgaag 20

<210> 204

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 204

agaggtgaag cgaagugcac 20

<210> 205

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 205

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 206

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 206

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 207

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 207

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 208

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 208

gaggugcgcc ccgtggucgg 20

<210> 209

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 209

gaaagcccta cgaaccacug 20

<210> 210

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 210

guuccgcagt atggaucggc 20

<210> 211

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 211

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 212

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 212

accactgaac aaatggcacu 20

<210> 213

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 213

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 214

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 214

acugaacaaa tggcacuagu 20

<210> 215

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 215

aguccaccac gagtcuagac 20

<210> 216

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 216

cacugaacaa atggcacuag 20

<210> 217

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 217

cagaggtgaa gcgaagugca 20

<210> 218

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 218

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 219

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 219

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 220

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 220

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 221

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 221

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 222

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 222

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 223

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 223

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 224

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 224

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 225

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 225

aguccaccac gagtcuagac 20

<210> 226

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 226

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 227

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 227

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 228

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 228

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 229

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 229

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 230

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 230

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 231

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 231

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 232

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 232

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 233

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 233

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 234

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 234

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 235

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 235

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 236

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 236

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 237

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 237

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 238

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 238

cgugcagagg tgaagcgaag 20

<210> 239

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 239

gugaagcgaa gtgcacacgg 20

<210> 240

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 240

agaggtgaag cgaagugcac 20

<210> 241

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 241

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 242

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 242

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 243

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 243

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 244

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 244

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 245

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 245

gaggugcgcc ccgtggucgg 20

<210> 246

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 246

gaaagcccta cgaaccacug 20

<210> 247

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 247

guuccgcagt atggaucggc 20

<210> 248

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 248

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 249

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 249

accactgaac aaatggcacu 20

<210> 250

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 250

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 251

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 251

acugaacaaa tggcacuagu 20

<210> 252

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 252

aguccaccac gagtcuagac 20

<210> 253

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 253

cacugaacaa atggcacuag 20

<210> 254

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 254

cagaggtgaa gcgaagugca 20

<210> 255

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 255

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 256

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 256

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 257

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 257

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 258

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 258

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 259

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 259

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 260

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 260

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 261

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 261

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 262

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 262

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 263

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 263

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 264

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 264

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 265

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 265

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 266

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 266

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 267

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 267

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 268

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 268

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 269

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 269

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 270

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 270

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 271

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 271

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 272

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 272

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 273

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 273

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 274

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 274

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 275

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 275

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 276

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 276

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 277

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 277

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 278

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 278

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 279

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 279

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 280

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 280

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 281

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 281

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 282

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 282

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 283

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 283

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 284

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 284

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 285

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 285

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 286

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 286

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 287

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 287

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 288

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 288

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 289

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 289

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 290

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 290

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 291

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 291

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 292

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 292

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 293

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 293

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 294

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 294

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 295

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 295

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 296

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 296

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 297

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 297

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 298

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 298

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 299

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 299

tgcagaggtg aagcgaagtg 20

<210> 300

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 300

tgcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 301

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 301

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 302

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 302

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 303

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 303

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 304

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 304

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 305

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 305

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 306

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 306

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 307

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 307

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 308

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 308

gcagaggtga agcgaag 17

<210> 309

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 309

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 310

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 310

cgtgcagagg tgaagcg 17

<210> 311

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 311

cgtgcagagg tgaagcg 17

<210> 312

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 312

gcagaggtga agcgaag 17

<210> 313

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 313

cgacgtgcag aggtgaagc 19

<210> 314

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 314

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 315

<211> 14

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 315

gcagaggtga agcg 14

<210> 316

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 316

cgtgcagagg tgaagc 16

<210> 317

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 317

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 318

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 318

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 319

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 319

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 320

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 320

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 321

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 321

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 322

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 322

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 323

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 323

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 324

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 324

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 325

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 325

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 326

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 326

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 327

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 327

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 328

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 328

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 329

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 329

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 330

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 330

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 331

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 331

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 332

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 332

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 333

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 333

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 334

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 334

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 335

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 335

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 336

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 336

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 337

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 337

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 338

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 338

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 339

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 339

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 340

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 340

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 341

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 341

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 342

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 342

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 343

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 343

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 344

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 344

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 345

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 345

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 346

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 346

tgcagaggtg aagcgaagt 19

<210> 347

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 347

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 348

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 348

ugcagaggtg aagcgaagu 19

<210> 349

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 349

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 350

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 350

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 351

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 351

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 352

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 352

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 353

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 353

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 354

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 354

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 355

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 355

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 356

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 356

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 357

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 357

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 358

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 358

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 359

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 359

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 360

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 360

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 361

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 361

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 362

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 362

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 363

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 363

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 364

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 364

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 365

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 365

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 366

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 366

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 367

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 367

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 368

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 368

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 369

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 369

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 370

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 370

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 371

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 371

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 372

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 372

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 373

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 373

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 374

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 374

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 375

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 375

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 376

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 376

gctccaaatt ctttataagg 20

<210> 377

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 377

gcuccaaatt ctttataagg 20

<210> 378

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

primer

<400> 378

ttgccttctg acttctttcc ttct 24

<210> 379

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

primer

<400> 379

tgcctgagtg ctgtatggtg ag 22

<210> 380

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

primer

<400> 380

tcgggaagcc ttagagtctc ctga 24

<210> 381

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 381

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 382

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 382

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 383

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 383

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 384

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 384

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 385

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 385

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 386

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 386

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 387

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 387

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 388

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 388

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 389

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 389

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 390

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 390

gnuunggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 391

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 391

gauuaggcag aggtgaannn g 21

<210> 392

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 392

gauuaggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 393

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 393

gnuunggcag aggtgaannn g 21

<210> 394

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 394

gnuunggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 395

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 395

gnuunggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 396

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 396

gauuaggcag aggtgaannn g 21

<210> 397

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 397

gauuaggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 398

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (18)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 398

gnuunggcag aggtgaannn g 21

<210> 399

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (2)..(2)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(20)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 399

gnuunggcag aggtgnnnnn g 21

<210> 400

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (16)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 400

gcagaggtga agcgangugc 20

<210> 401

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 401

gcagaggtga agcgnngugc 20

<210> 402

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 402

gcagnggtga agcgnngugc 20

<210> 403

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (3)..(3)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (5)..(5)

<223> 2,6-диаминопурин

<220>

<221> модифицированное основание

<222> (15)..(16)

<223> 2,6-диаминопурин

<400> 403

gcngnggtga agcgnngugc 20

<210> 404

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 404

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 405

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 405

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 406

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 406

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 407

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 407

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 408

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 408

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 409

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 409

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 410

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 410

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 411

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 411

aguccaccac gagtcuagac 20

<210> 412

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 412

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 413

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 413

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 414

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 414

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 415

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 415

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 416

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 416

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 417

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 417

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 418

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 418

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 419

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 419

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 420

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 420

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 421

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 421

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 422

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 422

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 423

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 423

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 424

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 424

uccgcagtat ggatcggcag 20

<210> 425

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 425

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 426

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 426

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 427

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 427

agaggtgcgc cccgtggucg 20

<210> 428

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 428

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 429

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 429

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 430

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 430

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 431

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 431

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 432

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 432

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 433

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 433

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 434

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 434

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 435

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 435

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 436

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 436

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 437

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 437

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 438

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 438

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 439

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 439

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 440

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 440

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 441

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 441

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 442

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 442

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 443

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 443

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 444

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 444

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 445

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 445

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 446

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 446

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 447

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 447

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 448

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 448

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 449

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 449

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 450

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 450

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 451

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 451

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 452

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 452

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 453

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 453

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 454

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 454

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 455

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 455

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 456

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 456

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 457

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 457

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 458

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 458

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 459

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 459

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 460

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 460

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 461

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 461

tgcagaggtg aagcgaagtg 20

<210> 462

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 462

tgcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 463

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 463

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 464

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 464

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 465

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 465

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 466

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 466

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 467

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 467

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 468

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 468

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 469

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 469

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 470

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 470

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 471

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 471

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 472

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 472

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 473

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 473

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 474

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 474

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 475

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 475

ggugaagcga agtgcacacg 20

<210> 476

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 476

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 477

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 477

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 478

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 478

uggcactagt aaactgagcc 20

<210> 479

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 479

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 480

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 480

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 481

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 481

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 482

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 482

gcagaggtga agc 13

<210> 483

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 483

cgtgcagagg tgaag 15

<210> 484

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 484

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 485

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 485

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 486

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 486

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 487

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 487

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 488

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 488

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 489

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 489

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 490

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 490

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 491

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 491

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 492

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 492

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 493

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 493

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 494

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 494

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 495

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 495

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 496

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 496

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 497

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 497

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 498

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 498

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 499

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 499

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 500

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 500

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 501

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 501

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 502

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 502

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 503

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 503

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 504

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 504

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 505

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 505

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 506

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 506

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 507

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 507

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 508

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 508

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 509

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 509

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 510

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 510

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 511

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 511

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 512

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 512

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 513

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 513

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 514

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 514

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 515

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 515

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 516

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 516

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 517

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 517

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 518

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 518

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 519

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 519

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 520

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 520

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 521

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 521

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 522

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 522

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 523

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 523

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 524

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 524

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 525

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 525

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 526

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 526

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 527

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 527

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 528

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 528

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 529

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 529

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 530

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 530

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 531

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 531

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 532

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 532

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 533

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 533

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 534

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 534

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 535

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 535

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 536

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 536

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 537

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 537

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 538

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 538

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 539

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 539

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 540

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 540

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 541

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 541

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 542

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 542

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 543

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 543

tgcagaggtg aagcgaagt 19

<210> 544

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 544

ugcagaggtg aagcgaagug 20

<210> 545

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 545

ugcagaggtg aagcgaagu 19

<210> 546

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 546

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 547

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 547

gcuccaaatt ctttauaagg g 21

<210> 548

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 548

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 549

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 549

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 550

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 550

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 551

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 551

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 552

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 552

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 553

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 553

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 554

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 554

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 555

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 555

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 556

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 556

gcagaggtga agcgaagugc 20

<210> 557

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 557

gcagaggtga agcgaagtgc 20

<210> 558

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 558

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 559

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 559

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 560

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 560

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 561

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 561

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 562

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 562

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 563

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 563

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 564

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 564

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 565

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 565

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 566

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 566

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 567

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 567

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 568

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 568

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 569

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 569

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 570

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 570

gcuccaaatt ctttauaagg 20

<210> 571

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 571

gcagaggtga agcgaagug 19

<210> 572

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 572

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 573

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 573

gcagaggtga agcgaagtg 19

<210> 574

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 574

gctccaaatt ctttataagg 20

<210> 575

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 575

gcuccaaatt ctttataagg 20

<210> 576

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 576

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 577

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 577

gauuaggcag aggtgaaaaa g 21

<210> 578

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 578

aagagaggtg cgccccgugg 20

<210> 579

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 579

cuaggagttc cgcaguaugg 20

<210> 580

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 580

agtctagact cgtggtggac tt 22

<210> 581

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 581

tggctcagtt tactagtgcc atttgttcag tggttcgtag ggctttcc 48

<210> 582

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 582

tctgccgatc catactgcgg aactcctagc 30

<210> 583

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 583

gccgaccacg gggcgcacct ctcttt 26

<210> 584

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 584

ccgtgtgcac ttcgcttcac ctctgcacgt cgc 33

<210> 585

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 585

actttttcac ctctgcctaa tca 23

<210> 586

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 586

acccttataa agaatttgga gct 23

<210> 587

<211> 22

<212> ДНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 587

agtctagact cgtggtggac tt 22

<210> 588

<211> 48

<212> ДНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 588

tggctcagtt tactagtgcc atttgttcag tggttcgtag ggctttcc 48

<210> 589

<211> 30

<212> ДНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 589

tctgccgatc catactgcgg aactcctagc 30

<210> 590

<211> 26

<212> ДНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 590

accgaccacg gggcgcacct ctcttt 26

<210> 591

<211> 38

<212> ДНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 591

ccgtgtgcac ttcgcttcac ctctgcacgt cgcatgga 38

<210> 592

<211> 34

<212> ДНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 592

actttttcac ctctgcctaa tcatctcttg ttca 34

<210> 593

<211> 22

<212> РНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 593

agucuagacu cgugguggac uu 22

<210> 594

<211> 48

<212> РНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 594

uggcucaguu uacuagugcc auuuguucag ugguucguag ggcuuucc 48

<210> 595

<211> 30

<212> РНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 595

ucugccgauc cauacugcgg aacuccuagc 30

<210> 596

<211> 26

<212> РНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 596

accgaccacg gggcgcaccu cucuuu 26

<210> 597

<211> 38

<212> РНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 597

ccgugugcac uucgcuucac cucugcacgu cgcaugga 38

<210> 598

<211> 34

<212> РНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 598

acuuuuucac cucugccuaa ucaucucuug uuca 34

<---