Для настоящей заявки испрашивается приоритет в соответствии с предварительной патентной заявкой США 62/271,968, поданной 28 декабря 2015 года, и предварительной патентной заявкой США 62/347,484, поданной 8 июня 2016 года. Содержание этих заявок включено в настоящий документ посредством ссылки во всей их полноте.
СПИСКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
В настоящей заявке содержится список последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и, таким образом, полностью включен в настоящее описание посредством ссылки. Упомянутая копия ASCII, созданная 26 января 2017 года, называется PAT057179-WO-PCT_SL.txt и имеет размер 1,115,217 байт.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
CRISPRs (Clustered Regular Interspaced Short Palindromic Repeats) эволюционировали в бактериях в качестве системы адаптивного иммунитета для защиты от вирусных атак. При контакте с вирусом короткие фрагменты вирусной ДНК встраиваются в локус CRISPR бактериального генома. РНК транскрибируется из части локуса CRISPR, включающей вирусную последовательность. Эта РНК, содержащая последовательность, комплементарную вирусному геному, опосредует нацеливание белка Cas9 на ту же последовательность в вирусном геноме. Белок Cas9 расщепляет и таким образом нейтрализует вирусную мишень.
В настоящее время система CRISPR/Cas адаптирована для редактирования генома в эукариотических клетках. Введение сайт-специфичных одноцепочечных (SSB) или двуцепочечных разрывов (DSB) позволяет вносить изменения в последовательность-мишени, например, с помощью системы репарации по механизму негомологичного соединения концов(NHEJ) или репарации по механизму гомологичной рекомбинации (HDR).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Не ограничиваясь теорией, изобретение частично основывается на обнаружении того, что системы CRISPR, как например, системы Cas9 CRISPR, в качестве примера описанные здесь, могут быть использованы для модификации клеток (например, гемопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников (HSPC)) с целью увеличения экспрессии фетального гемоглобина (HbF) и/или снижения экспрессии бета-глобина (например, гена бета-глобина, несущего болезнетворную мутацию), и такие клетки могут применяться для лечения гемоглобинопатий, например, серповидно-клеточной анемии и бета-талассемии.
Таким образом, в некотором аспекте, изобретение предоставляет системы CRISPR (например, системы Cas CRISPR, а также системы Cas9 CRISPR, а также системы S.pyogenes Cas9 CRISPR), включающие одну или более одной молекулы gРНК, как, например, описано здесь. Любая из молекул gРНК, описанных здесь, может быть использована в таких системах, а также в описанных здесь способах и клетках.
В другом аспекте, изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую в себя tracrРНК и crРНК, где crРНК содержит целевой домен, комплементарный целевой последовательности BCL11A гена, BCL11-энхансера или области HFPH.
В другом аспекте, изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую целевой домен, комплементарный целевой последовательности BCL11A гена, например, комплементарный последовательности-мишени в кодирующей области BCL11a (например, в экзоне BCL11a, например, в экзоне 2 BCL11a). В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен, который включает, например, состоит из любой последовательности от SEQ ID NO: 1 до SEQ ID NO:85 или от SEQ ID NO:400 до SEQ ID NO:1231.
В другом аспекте, изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую целевой домен, комплементарный целевой последовательности энхансера BCL11A.
В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен, который включает, например, состоит из любой из последовательностей от SEQ ID NO: 1232 до SEQ ID NO: 1499.
В вариантах осуществления gРНК (комплементарная) к целевой последовательности энхансера BCL11a представляет собой последовательность мишени в области +58 энхансера BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из, например, любой (последовательности) от SEQ ID NO: 182 до SEQ ID NO: 277 или от SEQ ID NO: 334 до SEQ ID NO: 341. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 341, SEQ ID NO: 246, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 245, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 244, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 334, SEQ ID NO: 185, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 336 или SEQ ID NO: 337. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, SEQ ID NO: 248. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 247. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 245. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из ID NO: 336. В вариантах осуществления, целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 337. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 338. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 335. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 252. В некотором варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК, содержащую crРНК, которая включает, например, состоит, например, от 5’до 3', из (последовательностей) SEQ ID NO:248 - SEQ ID NO:6607 и tracr, который включает, например, состоит, от 5’до 3', например из SEQ ID NO: 6660. В одном варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК, включающую в себя crРНК, которая включает, например, от 5’до 3', SEQ ID NO: 247 - SEQ ID NO: 6607 и tracr, который, включает, например, состоит из, от 5’до 3', например SEQ ID NO: 6660. В варианте осуществления, молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит из, от 5'до 3', SEQ ID NO: 338 - SEQ ID NO: 6604-UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит, например, от 5’до 3', SEQ ID NO: 335 - SEQ ID NO: 6604 - UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит из, например, от 5’до 3', SEQ ID NO: 336 - SEQ ID NO: 6604-UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит из, например, от 5’до 3', SEQ ID NO: 245 - SEQ ID NO: 6604 - UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит например, от 5’до 3', из SEQ ID NO: 337 - SEQ ID NO: 6604 - UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК включает, например, состоит из, например, от 5’до 3', из SEQ ID NO: 252 - SEQ ID NO: 6604 - UUUU.
В вариантах осуществления gРНК к целевой последовательности энхансера BCL11a представляет собой gРНК к целевой последовательности-мишени в области +62 энхансера BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой от SEQ ID NO: 1596 до SEQ ID NO: 1691.В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит например, из любой из SEQ ID NO: 318, SEQ ID NO: 312, SEQ ID NO: 313, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 310, SEQ ID NO: 319, SEQ ID NO: 298, SEQ ID NO: 322, SEQ ID NO: 311, SEQ ID NO: 315, SEQ ID NO: 290, SEQ ID NO: 317, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 289 или SEQ ID NO: 281. В вариантах осуществления целевой домен, включает, например, состоит из SEQ ID NO: 318.
В вариантах осуществления gРНК к целевой последовательности энхансера BCL11a представляет собой gРНК к целевой последовательности-мишени в области +55 энхансера BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой от SEQ ID NO: 1596 до SEQ ID NO: 1691. В вариантах осуществления целевой доменный объект включает, например, любой из SEQ ID NO: 1683, SEQ ID NO: 1638, SEQ ID NO: 1647, SEQ ID NO: 1609, SEQ ID NO: 1621, SEQ ID NO: 1617, SEQ ID NO: 1654, SEQ ID NO: 1631, SEQ ID NO: 1620, SEQ ID NO: 1637, SEQ ID NO: 1612, SEQ ID NO: 1656, SEQ ID NO: 1619, SEQ ID NO: 1675, SEQ ID NO: 1645, SEQ ID NO: 1598, SEQ ID NO: 1599, SEQ ID NO: 1663, SEQ ID NO: 1677 или SEQ ID NO: 1626.
В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую целевой домен, комплементарный целевой последовательности наследственной персистенции области фетального гемоглобина (HPFH). В одном варианте осуществления область HPFH является областью HPFH Френча. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой от SEQ ID NO: 86 до SEQ ID NO: 181 или от SEQ ID NO: 1500 до SEQ ID NO: 1595. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 1580, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 1503, SEQ ID NO: 1589, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 1537, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 1536, SEQ ID NO: 1539, SEQ ID NO: 1585. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из, например, из SEQ ID NO: 100. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 165. В вариантах осуществления целевой доменный адрес включает, например, состоит из SEQ ID NO: 113.
В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления молекула gРНК может дополнительно иметь области и/или свойства, описанные здесь. В одном аспекте молекула gРНК (например, любого из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления) включает целевой домен, который содержит, например, состоит из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена. В вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена представляют собой 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательные нуклеиновые кислоты, расположенные на 3'-конце указанной целевой последовательности домена. В вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена представляют собой 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательные нуклеиновые кислоты, расположенные на 5'-конце указанной последовательности целевого домена. В вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена не включают ни 5’, ни 3' нуклеиновую кислоту указанной последовательности целевого домена. В любом из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления целевой домен может состоять из указанной последовательности целевого домена.
В вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, целевой домен включает в себя 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности), 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена. В других вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, целевой домен состоит из 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности) 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена. В вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любые из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена являются 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 24 (если присутствует в упомянутой последовательности), или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательными нуклеиновыми кислотами расположенными на 3'-конце повторяющейся последовательности целевых доменов. В других вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности) 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности), 24 (если присутствует в упомянутой последовательности), или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена представляют собой 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности), 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 5'-конце указанной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена не включают ни 5', ни 3' нуклеиновых кислот в указанной последовательности целевого домена.
В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, молекула gРНК включает часть crРНК и часть tracr, которые гибридизуются с образованием шпильки, включающей в себя SEQ ID NO: 6584 или 6585. В вариантах осуществления шпилька дополнительно включает в себя первое удлинение шпильки, расположенное на 3'-конце к фрагменту crРНК шпильки, причем указанное первое удлинение шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6586. В вариантах осуществления, где шпилька дополнительно включает второе удлинение шпильки, расположенное на 3'-конце по отношению к части crРНК шпильки и, при наличии первого удлинения шпильки, указанное второе удлинение шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6587.
В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, которая включает в себя tracr, который включает, например, SEQ ID NO: 6660 или SEQ ID NO: 6661. В вариантах осуществления часть crРНК шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6607 или SEQ ID NO: 6608.
В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, которая включает в себя tracr, содержащий SEQ ID NO: 6589 или 6590, и, необязательно, при наличие первого удлинения шпильки, первое удлинение tracr, расположенное на 5'-конце (последовательности) SEQ ID NO: 6589 или 6590, причем указанное первое удлинение tracr включает в себя SEQ ID NO: 6591.
В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, где целевой домен и tracr расположены на отдельных молекулах нуклеиновых кислот (например, dgРНК молекулу).
В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, настоящее изобретение предоставляет молекулу gРНК, в которой целевой домен и tracr расположены на одной молекуле нуклеиновой кислоты (например, sgРНК молекуле), причём tracr расположен 3' (по отношению) к целевому домену. В вариантах осуществления молекула sgРНК включает в себя шпильку, расположенную 3' к целевому домену и 5' (по отношению) к tracr, например, шпильку, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 6588.
В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, настоящее изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую, от 5’до 3', [целевой домен]а:
(а) SEQ ID NO: 6601;
(б) SEQ ID NO: 6602;
(в) SEQ ID NO: 6603;
(г) SEQ ID NO: 6604; или
(д) любой из вышеперечисленных (а)-(г), дополнительно включающий на 3'-конце 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов, например, 4 нуклеотида урацила. В вариантах осуществления нет промежуточных нуклеотидов между целевым доменом и последовательностью любого из (а)-(е).
В другом аспекте изобретение предоставляет системы CRISPR, как, например системы Cas CRISPR, например, системы Cas9 CRISPR, например системы S.pyogenes Cas9 CRISPR, включающие одну или несколько, например, одну молекулу gРНК по любому из вышеупомянутых аспектов и вариантов. В одном аспекте изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, и дополнительно включающую молекулу Cas9. В вариантах осуществления молекула Cas9 представляет собой активную или неактивную Cas9 S. pyogenes. В вариантах осуществления первая молекула gРНК и молекула Cas9 присутствуют в рибонуклеопротеиновом комплексе (RNP).
В другом аспекте изобретение предоставляет композиции, которые включают более одной gРНК, как, например, описано здесь, в любом из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, включающем более одной молекулы gРНК. Таким образом, в следующем аспекте изобретение предоставляет композицию любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, включающих композиции, в которых дополнительно входит вторая молекула gРНК; вторая молекула gРНК и третья молекула gРНК; или вторая молекула gРНК, третья молекула gРНК и четвертая молекула gРНК, где вторая молекула gРНК, третья молекула gРНК (если присутствует) и четвертая молекула gРНК (если присутствует) представляют собой молекулу gРНК, как описано здесь, например, молекулу gРНК любого из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления молекулы gРНК. В одном варианте осуществления каждая молекула gРНК композиции комплементарна отличной от других последовательности-мишени. В одном варианте осуществления каждая молекула gРНК комплементарна целевым последовательностям в пределах одного и того же гена или области. В одном аспекте первая молекула gРНК, вторая молекула gРНК, третья молекула gРНК (если присутствует) и четвертая молекула gРНК (если присутствует) комплементарны целевым последовательностям на расстоянии не более чем 20000 нуклеотидов, не более 10000 нуклеотидов, не более 6000, не более 5000 нуклеотидов, не более 4000, не более 1000 нуклеотидов, не более 500 нуклеотидов, не более 400 нуклеотидов, не более 300 нуклеотидов, не более 200 нуклеотидов, не более 100 нуклеотидов, не более 90 нуклеотидов, не более 80 нуклеотидов, не более 70 нуклеотидов, не более 60 нуклеотидов, не более 50 нуклеотидов, не более 40 нуклеотидов, не более 30 нуклеотидов, не более 20 нуклеотидов или не более 10 нуклеотидов. В другом аспекте каждая молекула gРНК композиции комплементарна целевой последовательности-мишени в пределах разных генов или области.
В данном описании описаны конкретные и предпочтительные комбинации более чем одной молекулы gРНК по изобретению. В одном аспекте композиция включает в себя первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК комплементарны различным целевым последовательностям-мишеням и являются:
(a) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарным гену BCL11a;
(b) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+58 BCL11a энкансера;
(c) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+65 BCL11a энкансера;
(d) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+55 BCL11a энкансера; или
(e) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH.
В одном аспекте композиция включает в себя первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК комплементарны различным целевым последовательностям и:
(a) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), (комплементарных) гену BCL11a, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+58 BCL11a энхансера;
(b) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), (комплементарных) гену BCL11a, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+62 BCL11a энхансера;
(c) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), (комплементарных) гену BCL11a, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+55 BCL11a энхансера;
(d) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), (комплементарных) гену BCL11a, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH;
(e) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области +58 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+62 BCL11a энхансера;
(f) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+58 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+55 BCL11a энхансера;
(g) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+58 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH;
(h) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+62 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+55 BCL11a энхансера;
(i) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+62 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH;
(j) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+55 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH;
В другом аспекте композиция, содержащая первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, включает:
(a) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH, а вторая молекула gРНК включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена бета-глобина; или
(b) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных энхансеру BCL11a, например, области +58 BCL11a энхансера, области +55 BCL11a энхансера или области +62 BCL11a энхансера, а вторая gРНК молекула включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена бета-глобина.
В любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления относительно gРНК компонентов композиции, композиция может состоять из первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК.
В любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления композиции могут быть составлены в среде, подходящей для электропорации.
В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет нуклеиновые кислоты, кодирующие молекулу (молекулы) gРНК и/или Cas молекулы систем CRISPR. Не ограничиваясь теорией, полагают, что доставка таких нуклеиновых кислот в клетки приводит к экспрессии системы CRISPR внутри клетки. В одном аспекте изобретение предоставляет последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота включает промотор, функционально связанный с последовательностью, которая кодирует одну или несколько молекул gРНК. В вариантах осуществления промотор представляет собой промотор, распознаваемый РНК-полимеразой II или РНК-полимеразой III. В вариантах осуществления промотор представляет собой промотор U6 или промотор HI.
В следующих аспектах нуклеиновая кислота дополнительно содержит последовательность, кодирующую молекулу Cas9. В вариантах осуществления, нуклеиновая кислота содержит промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей молекулу Cas9. В вариантах осуществления промотор представляет собой промотор EF-1, промотор гена CMV IE, промотор EF-1, промотор гена убиквитина С или промотор фосфоглицераткиназы (PGK).
В одном аспекте изобретение предоставляет вектор, включающий в себя нуклеиновые кислоты любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления вектор выбирают из группы, состоящей из лентивирусного вектора, аденовирусного вектора, адено-ассоциированного вирусного (AAV) вектора, вектора вируса простого герпеса (HSV), плазмиды, мини-кольца, наноплазмиды и РНК-вектора.
В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, включающую одну или несколько молекул gРНК, как описано здесь, например, в любом из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9.
В другом аспекте, изобретение предоставляет композицию, включающую нуклеиновую кислоту, кодирующую одну или несколько молекул gРНК (например, как описано здесь, в любом из предыдущих аспектов молекулы gРНК и вариантов осуществления) и молекулу Cas9.
В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, например, композицию любого из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, дополнительно включающую матричную нуклеиновую кислоту. В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, например композицию любого из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, включая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту. В вариантах осуществления матричная нуклеиновая кислота включает нуклеотид, который соответствует нуклеотиду целевой последовательности молекулы gРНК. В вариантах осуществления матричная нуклеиновая кислота включает (может представлять собой) нуклеиновую кислоту, кодирующую бета-глобин человека, например бета-глобин человека, несущий одну или несколько мутаций G16D, E22A и T87Q. В вариантах осуществления матричная нуклеиновая кислота включает (может представлять собой) нуклеиновую кислоту, кодирующую человеческий гамма-глобин.
В другом аспекте изобретение предоставляет клетки, содержащие (или который когда-либо содержали) молекулу gРНК, систему CRISPR, композицию или нуклеиновую кислоту (например, как описано здесь, в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления). В данных аспектах изобретение представлено клетками, которые были модифицированы таким включением.
Таким образом, в одном аспекте изобретение предоставляет способ изменения, например, изменения структуры, например целевой последовательности в нуклеиновой кислоте клетки, который включает взаимодействие (нахождение в контакте) данной клетки с:
1) одной или несколькими молекулами gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления и молекулой Cas9 (например, как описано здесь);
2) одной или несколькими молекулами gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления и нуклеиновой кислотой, кодирующей молекулу Cas9 (например, как описано здесь);
3) нуклеиновой кислотой, кодирующей одну или несколько молекул gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, и молекулой Cas9 (например, как описано здесь);
4) нуклеиновой кислотой, кодирующей одну или несколько молекул gРНК вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления gРНК, и нуклеиновой кислотой, кодирующей молекулу Cas9 (например, как описано здесь); или
5) любой из 1)-4) выше и матричной нуклеиновой кислотой (например, как описано здесь);
6) любой из 1)-4) выше и нуклеиновой кислотой, включая последовательность, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту (например, как описано здесь);
7) композицией, описанной здесь (например, по любому из вышеупомянутых аспектов и вариантов композиции); или
8) вектором любого из вышеупомянутых векторных аспектов и вариантов осуществления.
В вариантах осуществления молекула gРНК или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу gРНК, Cas9 молекула или нуклеиновая кислота кодирующая молекулу Cas9, составлены в виде одной композиции. В других вариантах осуществления молекула gРНК или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу gРНК, и молекула Cas9 или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу Cas9, формулируются в более чем одной композиции. В вариантах осуществления композиции в количестве более одной доставляются одновременно или последовательно.
В вариантах осуществления клетка является клеткой животного. В вариантах осуществления клетка является клеткой млекопитающего, примата или человека. В вариантах осуществления клетка представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку, или клетку-предшественник (прогениторную) (HSPC) (например, популяцию клеток HSPC). В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку CD34+. В вариантах осуществления клетка представляет собой CD34+/CD38-/CD90+/CD45RA-клетку. В вариантах осуществления клетка представляет собой CD34+/CD90+/CD49f+ клетку. В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку CD34+/CD38-/CD90+/CD45RA-/CD49f+. В вариантах осуществления способ включает в себя популяцию клеток, которая была обогащена клетками HSPC, например, CD34+ клетками.
В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была получена из костного мозга. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была получена из мобилизованной периферической крови. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была получена из пуповинной крови.
В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) является аутологичной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку (например, популяцию клеток). В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) является аллогенной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку (например, популяция клеток).
В вариантах осуществления способов, описанных здесь, изменение приводит к увеличению экспрессии фетального гемоглобина в клетке. В вариантах осуществления способов, описанных здесь, изменение приводит к уменьшению экспрессии фетального гемоглобина в клетке.
В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, измененную способом, описанным в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления. В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, включающую в себя первую молекулу gРНК (например, как описано здесь), или композицию (например, как описано здесь), или нуклеиновую кислоту, кодирующую первую молекулу gРНК (например, как описано здесь) по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления клетка является клеткой животного. В вариантах осуществления клетка является клеткой млекопитающего, примата или человека. В вариантах осуществления клетка представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку, или клетку-предшественник (HSPC) (например, популяцию HSPC). В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку CD34+. В вариантах осуществления клетка представляет собой CD34+/CD38-/CD90+/CD45RA-клетку. В вариантах осуществления клетка представляет собой CD34+/CD90+/CD49f+ клетку. В вариантах осуществления способ включает в себя популяцию клеток, обогащённую HSPC, например, CD34+ клетками.
В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была выделена из костного мозга. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была выделена из мобилизованной периферической крови. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была выделена из пуповинной крови.
В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) является аутологичной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку (например, популяцию клеток). В вариантах осуществления клетка (например, популяцию клеток) является аллогенной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку (например, популяцию клеток).
В вариантах осуществления клетка включает в себя, включала или будет включать вторую молекулу gРНК, как, например, описано здесь, в любом из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК или нуклеиновую кислоту, кодирующую вторую молекулу gРНК, причем первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают неидентичные целевые домены.
В вариантах осуществления экспрессия фетального гемоглобина в клетке увеличивается, например, по сравнению с клеткой того же типа, которая не была модифицирована включением молекулы gРНК (например, как описано здесь). В вариантах осуществления экспрессия бета-глобина в клетке уменьшена по сравнению с клеткой того же типа, которая не была модифицирована включением молекулы gРНК (например, как описано здесь). В вариантах осуществления экспрессия фетального гемоглобина увеличивается и экспрессия бета-глобина снижается в клетке, по сравнению с клеткой того же типа, которая не была модифицирована включением молекулы gРНК (например, как описано здесь).
В некотором аспекте, клетки по изобретению (или способы, включающие клетку), контактируют с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например, как описано здесь, соединением 1, соединением 2, соединением 3 или Cоединением 4. В одном аспекте клетки (или способы, включающие клетку), контактировали с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, как описано здесь, например, с соединением 1, соединением 2, соединением 3, Cоединением 4 или их комбинацией (например, соединения 1 и Cоединения 4). В одном варианте осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой соединение 4. В варианте осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой комбинацию соединения 1 и Cоединения 4. В вариантах осуществления контакт (с соединением) происходит ex vivo.
В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет способ лечения, например, способ лечения гемоглобинопатий. В одном аспекте изобретение предоставляет способ лечения гемоглобинопатии, который включает введение пациенту клетки (например, популяции клеток) по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления.
В другом аспекте изобретение предоставляет способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у млекопитающего, включая введение пациенту клетки по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В одном варианте осуществления гемоглобинопатия представляет собой бета-талассемию или серповидно-клеточную анемию.
В другом аспекте изобретение предоставляет нацеливающую молекулу gРНК, например, как описано здесь, для применения в качестве лекарственного средства, например, для применения в лечении заболевания. В вариантах осуществления это заболевание представляет собой гемоглобинопатию, например, бета-талассемию или серповидно-клеточную анемию.
В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, например, как описано здесь и как описано в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, в которых, при введении CRISPR-системы, включающей в себя gРНК, в клетку (например, клетку CD34+, например, HSC), по меньшей мере, около 15% полученных инделов включают (а) мутацию сдвига рамки; или (b) большую делецию относительно немодифицированной ДНК-мишени, измеренную при помощи методов геномного секвенирования NGS. В вариантах осуществления, по меньшей мере, около 25% полученных инделов включают (а) мутацию сдвига рамки считывания; или (b) большую делецию относительно немодифицированной ДНК-мишени, измеренную при помощи методов NGS. В вариантах осуществления по меньшей мере, около 40%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 60%, по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере, около 90%, по меньшей мере, около 95%, по меньшей мере, около 96% по меньшей мере, около 97%, по меньшей мере, около 98% или, по меньшей мере, около 99% произведенных инделов включают (а) мутацию сдвига рамки считывания; или (b) большую делецию по отношению к немодифицированной ДНК-мишени, измеренную при помощи методов NGS (геномного секвенирования).
В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет методы ex vivo экспансии и модификации клеток HSPC (например, клеток CD34+). В одном аспекте изобретение предоставляет способ модификации клеток (например, популяции клеток), включающий:
(a) предоставление популяции клеток;
(b) экспансия (культивирование) указанных клеток ex vivo в присутствии соединения, способствующего экспансии стволовых клеток; и
(c) введение в указанные клетки первой молекулы gРНК (как описано здесь, например, в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК), молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей первую молекулу gРНК, или композиции (как, например, описано здесь, в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления);
таким образом, что экспрессия гемоглобина, например, фетального гемоглобина, увеличивается в указанных клетках по сравнению с тем же типом клеток, не подвергавшихся стадии (с).
В вариантах осуществления клетки вводят субъекту, нуждающемуся в этом, например субъекту с гемоглобинопатией, например, серповидно-клеточной анемией или бета-талассемией.
В вариантах осуществления клетки являются или содержат CD34+ клетки. В вариантах осуществления клетки являются или содержат HSPC-клетки. В вариантах осуществления клетки выделяют из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.
В предпочтительном варианте осуществления клетки выделяют из костного мозга. В других вариантах осуществления клетки выделяют из мобилизованной периферической крови. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому вводили G-CSF. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому был назначен агент для мобилизации (периферической крови), отличный от G-CSF, например Plerixafor® (AMD3100). В вариантах осуществления клетки представляют собой обогащенную популяцию клеток.
В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 1, Соединение 2, Соединение 3 или Соединение 4, например, Соединение 4. В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 1, Соединение 2, Соединение 3, Соединение 4 или их комбинацию (например, комбинацию Cоединения 1 и Cоединения 4). В вариантах осуществления клетки контактируют с Cоединением 4 в концентрации от около 1 до около 200 микромолей (мкМ). В одном варианте осуществления концентрация Cоединения 4 составляет около 75 микромолей (мкМ). В вариантах осуществления экспансия указанных клеток ex vivo в присутствии соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, происходит в течение примерно 1-10 дней, например, примерно 1-5 дней, например, около 2-5 дней, например, около 4 дней.
В вариантах осуществления клетки являются аутологичными пациенту, которому назначено введение указанных клеток. В вариантах осуществления клетки являются аллогенными для пациента, которому назначено введение указанных клеток.
В вариантах осуществления экспансия стадии (b) дополнительно проводится в присутствии тромбопоэтина (Tpo), лиганда Flt3 (Flt-3L), фактора стволовых клеток человека (SCF) и человеческого интерлейкина-6 (IL-6). В вариантах осуществления тромбопоэтин (Tpo), лиганд Flt3 (Flt-3L), фактор стволовых клеток человека (SCF) и человеческий интерлейкин-6 (IL-6) находятся в концентрации около 50 нг/мл каждый. В вариантах осуществления тромбопоэтин (Tpo), лиганд Flt3 (Flt-3L), фактор стволовых клеток человека (SCF) и человеческий интерлейкин-6 (IL-6) находятся в концентрации 50 нг/мл каждый.
Дополнительные аспекты и варианты осуществления описаны ниже.
В одном аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, которая включает в себя tracr и crРНК, где crРНК включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена BCL11A ((например, гена BCL11a человека), энхансеру BCL11a (например, энхансеру BCL11a гена человека) или области HFPH (например, области HPFH человека).
В вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит гену BCL11A, а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 1 до SEQ ID NO: 85 или от SEQ ID NO: 400 до SEQ ID NO: 1231. Эти варианты осуществления упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №2.
В других вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит энхансеру BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из, например, любой из от SEQ ID NO: 1232 до SEQ ID NO: 1499. Эти варианты осуществления упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №3. В предпочтительных вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит энхансеру BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 182 до SEQ ID NO: 277 или от SEQ ID NO: 334 до SEQ ID NO: 341. Эти варианты воплощения упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №4. В более предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 341, SEQ ID NO: 246, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 245, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 244, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 334, SEQ ID NO: 185, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 336 или SEQ ID NO: 337. Эти варианты воплощения упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №5. В еще более предпочтительных вариантах осуществления целевая область включает, например, состоит, из любого из SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 335, SEQ ID NO: 336, SEQ ID NO: 337 или SEQ ID NO: 338 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №6), или, например, включает, любую из SEQ ID NO: 248 или SEQ ID NO: 338 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №7). В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 248 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №8). В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 338 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №9).
В других вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит энхансеру BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 278 до SEQ ID NO: 333 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №10). В предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 318, SEQ ID NO: 312, SEQ ID NO: 313, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 310, SEQ ID NO: 319, SEQ ID NO: 298, SEQ ID NO: 322, SEQ ID NO: 311, SEQ ID NO: 315, SEQ ID NO: 290, SEQ ID NO: 317, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 289, или SEQ ID NO: 281 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №11). В одном предпочтительном варианте осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 318 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №12).
В других вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит энхансеру BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 1596 до SEQ ID NO: 1691 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №13). В предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 1683, SEQ ID NO: 1638, SEQ ID NO: 1647, SEQ ID NO: 1609, SEQ ID NO: 1621, SEQ ID NO: 1621 : 1617, SEQ ID NO: 1654, SEQ ID NO: 1631, SEQ ID NO: 1620, SEQ ID NO: 1637, SEQ ID NO: 1612, SEQ ID NO: 1656, SEQ ID NO: 1619, SEQ ID NO: 1675, SEQ ID NO: 1645, SEQ ID NO: 1598, SEQ ID NO: 1599, SEQ ID NO: 1663, SEQ ID NO: 1677 или SEQ ID NO: 1626 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №14).
В других вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит области HFPH (например, области HPFH Френча), а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 86 до SEQ ID NO: 181, SEQ ID NO: от 1500 до SEQ ID NO: 1595 или от SEQ ID NO: 1692 до SEQ ID NO: 1761 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №15). В предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 1580, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 1503, SEQ ID NO: 1589, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 1537, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 1536, SEQ ID NO: 1539, SEQ ID NO: 1585 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №16). В еще более предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 1505, SEQ ID NO: 1589, SEQ ID NO: 1700 или SEQ ID NO: 1750 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №17). В других предпочтительных вариантах осуществления целевой домен, включает, например, состоит из любого из SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 165 или SEQ ID NO: 113 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №18).
В вариантах осуществления молекула gРНК включает целевой домен, который включает, например, состоит из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой описанной здесь последовательности целевого домена, например, любой из последовательностей целевых доменов, представленных в Таблице 1 или Таблице 2. В вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из описанных здесь последовательностей целевых доменов, например последовательностей целевых доменов, представленных в Таблице 1 или Таблице 2, представляют собой 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 3'-конце избранной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевых доменов, представленных в Таблице 1 или Таблице 2, представляют собой 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 5'-конце избранной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевых доменов, представленных в Таблице 1 или Таблице 2, не включают расположенную на 5'- или 3'-конце нуклеиновую кислоту избранной последовательности целевого домена.
В вариантах осуществления молекула gРНК включает целевой домен, который включает, например, состоит из 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20, последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанной здесь, например, последовательностей целевого домена, представленных в Таблице 5, Таблице 6, Таблице 7, Таблице 8 или Таблице 9. В вариантах осуществления 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20, последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевого домена, представленных в Таблице 5, Таблице 6, Таблице 7, Таблицы 8 или Таблицы 9 представляют собой 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 3'-конце избранной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевого домена, представленных в Таблице 5, Таблице 6, Таблице 7, Таблице 8 или Таблице 9 представляет собой 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 5'-конце избранной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевого домена, представленных в Таблице 5, Таблице 6, Таблице 7, Таблице 8 или Таблице 9, не включают расположенную на 5'- или 3'-конце нуклеиновую кислоту избранной последовательности целевого домена.
Следующие аспекты описывают особенности молекулы gРНК, которые могут быть объединены с любым из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления молекула gРНК, включая молекулы gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, включает фрагмент crРНК и фрагмент tracr, гибридизующиеся с образованием шпильки, которая включает в себя SEQ ID NO: 6584 или 6585. В вариантах осуществления шпилька дополнительно включает в себя первое удлинение шпильки, расположенное на 3'-конце по отношению к фрагменту crРНК шпильки, причем указанное первое удлинение шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6586. В вариантах осуществления шпилька дополнительно включает (в дополнение или в качестве альтернативы первому удлинение шпильки) второе удлинение шпильки, расположенное на 3'-конце фрагмента crРНК шпильки, и, при наличии первого удлинения шпильки, указанное второе удлинение шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6587.
В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и варианты осуществления изобретения, tracr включает SEQ ID NO: 6660 или SEQ ID NO: 6661. В вариантах осуществления tracr включает SEQ ID NO: 7812, и необязательно дополнительно включает на 3'-конце добавочные 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловые (U) нуклеотидов. В вариантах осуществления crРНК включает в себя от 5’до 3', [целевой домен]-: а) SEQ ID NO: 6584; b) SEQ ID NO: 6585; c) SEQ ID NO: 6605; d) SEQ ID NO: 6606; e) SEQ ID NO: 6607; f) SEQ ID NO: 6608; или g) SEQ ID NO: 7806.
В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, tracr включает в себя от 5’до 3': а) SEQ ID NO: 6589; b) SEQ ID NO: 6590; c) SEQ ID NO: 6609; d) SEQ ID NO: 6610; e) SEQ ID NO: 6660; f) SEQ ID NO: 6661; g) SEQ ID NO: 7812; h) SEQ ID NO: 7807; i) SEQ ID NO: 7808; j) SEQ ID NO: 7809; k) любой из пунктов а)-j), приведённый выше, дополнительно включающий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов, например 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов; l) любой из пунктов a)-k) приведённый выше, дополнительно включающий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов; или m) любой из пунктов a)-l), приведённых выше, дополнительно включающий 5'(т.е. на 5'-конце), по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов.
В вариантах осуществления целевой домен и tracr расположены на отдельных молекулах нуклеиновых кислот. В вариантах осуществления таких молекул gРНК молекула нуклеиновой кислоты, включающая целевой домен, включает SEQ ID NO: 6607, необязательно расположенную прямо на 3'-конце целевого домена, и молекулу нуклеиновой кислоты, включающую tracr, который включает, например, состоит из SEQ ID NO: 6660.
В вариантах осуществления фрагмент crРНК шпильки включает SEQ ID NO: 6607 или SEQ ID NO: 6608.
В вариантах осуществления tracr включает в себя SEQ ID NO: 6589 или 6590 и, необязательно, при наличии первого удлинения шпильки, первое удлинение tracr, расположенное на 5'-конце SEQ ID NO: 6589 или 6590, причем указанное первое удлинение tracr включает в себя SEQ ID NO: 6591.
В вариантах осуществления, в том числе в вариантах осуществления любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, целевой домен и tracr расположены на отдельных молекулах нуклеиновой кислоты. В других вариантах осуществления, в том числе в вариантах осуществления любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, целевой домен и tracr расположены на одной молекуле нуклеиновой кислоты, например, tracr расположен 3' по отношению к целевому домену.
В вариантах осуществления, когда целевой домен и tracr расположены на одной молекуле нуклеиновой кислоты, молекула gРНК дополнительно включает в себя петлю, расположенную 3' по отношению к целевому домену и 5' по отношению к tracr. В вариантах осуществления петля включает, например, состоит из SEQ ID NO: 6588.
В вариантах осуществления, когда целевой домен и tracr расположены на единственной молекуле нуклеиновой кислоты, молекула gРНК включает от 5’до 3', [целевой домен]-: (a) SEQ ID NO: 6601; (b) SEQ ID NO: 6602; (c) SEQ ID NO: 6603; (d) SEQ ID NO: 6604; (e) SEQ ID NO: 7811; или (f) любой из (а) - (е), приведённых выше, и дополнительно включает на 3'-конце 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов. В вариантах осуществления молекула gРНК включает, например, состоит из указанного целевого домена и SEQ ID NO: 7811, необязательно расположенной сразу на 3'-конце указанного целевого домена.
В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, каждый из нуклеотидов нуклеиновой кислоты молекулы gРНК представляет собой немодифицированный нуклеотид A, U, G или C нуклеиновой кислоты с немодифицированными фосфатными связями между каждым нуклеотидом молекулы нуклеиновой кислоты. В других вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, один или, необязательно, более одной молекул нуклеиновой кислоты, которые составляют молекулу gРНК, включают: а) одну или несколько, например, три фосфоротионатных модификации на 3’-конце указанной молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты; б) одну или несколько, например, три фосфоротионатных модификации на 5'-конце указанной молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты; c) одну или более, например, три 2’O-метил-модификации на 3'-конце молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты; d) одну или несколько, например, три 2’O-метил-модификации на 5'-конце молекулы или молекул нуклеиновой кислоты; e) 2'-О-метильную модификацию на каждом из перечисленных нуклеотидов 3'-конца указанной молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты: 4ом-от конца, 3ем-от-конца, 2ом-от конца; f) 2'-О-метильную модификацию на каждом из перечисленных нуклеотидов 5'-конца указанной молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты: 4-от конца, 3-от-конца, 2-от конца; или f) любую их комбинацию.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 342; (b) SEQ ID NO: 343; или (c) SEQ ID NO: 1762 (упоминаемую в этом описании изобретения как вариант осуществления gРНК молекулы №41).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 344 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 344 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 345 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 345 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения как вариант осуществления молекулы gРНК №42).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 347; (b) SEQ ID NO: 348; или (c) SEQ ID NO: 1763 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №43).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 349 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 349 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из последовательности SEQ ID NO: 350 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 350 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №44).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 351; (b) SEQ ID NO: 352; или (c) SEQ ID NO: 1764 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №45).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 353 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 353 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 354 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 354 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №46).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (а) SEQ ID NO: 355; (b) SEQ ID NO: 356; или (c) SEQ ID NO: 1765 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №47).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (a) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 357 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 357 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 358 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 358 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №48).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 359; (b) SEQ ID NO: 360; или (c) SEQ ID NO: 1766 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №49).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 361 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 361 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 362 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 362 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №50).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 363; (b) SEQ ID NO: 364; или (c) SEQ ID NO: 1767 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №51).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (a) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 365 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 365 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 366 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 366 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №52).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 367; (b) SEQ ID NO: 368; или (c) SEQ ID NO: 1768 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №53).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, SEQ ID NO: 369 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 369 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, последовательность SEQ ID NO: 370 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 370 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №54).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 371; (b) SEQ ID NO: 372; или (c) SEQ ID NO: 1769 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №55).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, SEQ ID NO: 373 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 373 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 374 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 374 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №56).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 375; (b) SEQ ID NO: 376; или (c) SEQ ID NO: 1770 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №57).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 377 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 377 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 378 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 378 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №58).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 379; (b) SEQ ID NO: 380; или (c) SEQ ID NO: 1771 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №59).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, SEQ ID NO: 381 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 381 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, последовательность SEQ ID NO: 382 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 382 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №60).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 383; (b) SEQ ID NO: 384; или (c) SEQ ID NO: 1772 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №61).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, SEQ ID NO: 385 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 385 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 386 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 386 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №62).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (а) SEQ ID NO: 387; (b) SEQ ID NO: 388; или (c) SEQ ID NO: 1773 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №63).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 389 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, последовательность SEQ ID NO: 389 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 390 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 390 и tracr, включающий, например, состоящий из последовательности SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №64).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 391; (b) SEQ ID NO: 392; или (c) SEQ ID NO: 1774 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №65).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (a) crРНК, включающую, например, из SEQ ID NO: 393 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 393 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 394 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 394 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №66).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 395; (b) SEQ ID NO: 396; или (c) SEQ ID NO: 1775 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №67).
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 397 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 397 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 398 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 398 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №68).
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, причём такую, что когда система CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающая молекулу gРНК, вводится в клетку, формируется индел внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК. В вариантах осуществления, в том числе в вариантах осуществления, содержащих целевой домен, комплементарный целевой последовательности +58 области энхансера, индел не включает нуклеотид сайта связывания GATA-1 и/или TAL-1. В вариантах осуществления индел не мешает связыванию GATA-1 и/или TAL-1 с их сайтами связывания. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, где, при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в популяцию клеток, формируется индел внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК, по меньшей мере, примерно в 40%, например, по меньшей мере примерно в 50%, например, по меньшей мере примерно в 60%, например, по меньшей мере примерно в 70%, например, по меньшей мере примерно в 80%, например, по меньшей мере примерно в 90%, например, по меньшей мере примерно в 95%, например, по меньшей мере примерно в 96%, например, по меньшей мере примерно в 97%, например, по меньшей мере примерно в 98%, например, по меньшей мере примерно в 99% % клеток популяции. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, причём такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в популяцию клеток, индел, не включающий нуклеотид сайта связывания GATA-1 и/или TAL-1, образуется внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК, по меньшей мере, примерно в 20%, например, по меньшей мере примерно в 30%, например, по меньшей мере, около 35%, например, по меньшей мере примерно в 40%, например, по меньшей мере примерно в 45%, например, по меньшей мере примерно в 50%, например, по меньшей мере примерно в 55%, например, по меньшей мере примерно в 60%, например, по меньшей мере примерно в 65%, например, по меньшей мере примерно в 70%, например, по меньшей мере примерно в 80%, например, по меньшей мере примерно в 85%, например, по меньшей мере примерно в 90%, например, по меньшей мере примерно в 95%, например, по меньшей мере примерно в 99%, клеток популяции. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, индел является инделом, указанным в любой из Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37. В вариантах осуществления, по меньшей мере, примерно в 30%, например, по меньшей мере примерно в 40%, например, по меньшей мере примерно в 50%, например, по меньшей мере примерно в 60%, например, по меньшей мере примерно в 70%, например, по меньшей мере примерно в 80%, например, по меньшей мере примерно в 90%, например, по меньшей мере примерно в 95% %, например, по меньшей мере примерно в 96%, например, по меньшей мере примерно в 97%, например, по меньшей мере примерно в 98%, например, по меньшей мере примерно в 99% клеток популяции, индел является инделом, указанным в любой из Фиг 25, Таблицы 15, Таблицы 26, Таблицы 27 или Таблицы 37. В вариантах осуществления три наиболее часто обнаруживаемых индела в упомянутой популяции клеток включают инделы, связанные с любой молекулой gРНК из перечисленных в любой из Фиг. 25, Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37. В вариантах осуществления индел (или профиль наиболее часто формируемых инделов) измеряется методами секвенирования следующего поколения (NGS), как, например, как описано в данном уровне техники. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, никаких инделов по неспецифичным сайтам узнавания не образуется в указанной клетке, по крайней мере тех, которые, могли бы быть обнаружены методами секвенирования следующего поколения и/или с помощью нуклеотидного инсерционного анализа, например, в клетке HPCS, например, клетке CD34+. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в популяцию клеток, инделов по неспецифичным сайтам узнавания не обнаруживается в более чем 5%, например, в более чем 1%, например, в более чем 0,1%, например, в более чем 0,01% клеток популяции при проверке методами секвенирования следующего поколения и/или при помощи нуклеотидного инсерционного анализа, как, например, при исследовании популяции клеток HPSC, например, популяции клеток CD34+.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, где, при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, экспрессия фетального гемоглобина увеличивается в указанной клетке или ее потомстве, например, в её потомстве эритроидов, например, в её потомстве эритроцитов. В вариантах осуществления экспрессия фетального гемоглобина увеличивается в указанной клетке или ее потомстве, например, в её потомстве эритроидов, например, в её потомстве эритроцитов, по меньшей мере, примерно на 20%, например, по меньшей мере примерно 30%, например, по меньшей мере примерно на 40%, например, по меньшей мере примерно на 50%, например, по меньшей мере примерно на 60%, например, по меньшей мере примерно на 70%, например, по меньшей мере примерно на 80%, например, по меньшей мере примерно на 90%, например, по меньшей мере примерно на 95% например, по меньшей мере примерно на 96%, например, по меньшей мере примерно на 97%, например, по меньшей мере примерно на 98%, например, по меньшей мере примерно на 99%. В вариантах осуществления указанная клетка или ее потомство, например, ее потомство эритроидов, например, её потомство эритроцитов, вырабатывает по меньшей мере около 6 пикограмм (например, по меньшей мере около 7 пикограмм, по меньшей мере около 8 пикограмм, по меньшей мере около 9 пикограмм, по меньшей мере около 10 пикограмм или от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм) фетального гемоглобина на клетку.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, уровни мРНК фетального гемоглобина (например, гамма-глобина) увеличиваются в указанной клетке или ее потомстве, например, в ее потомстве эритроидов, например, в её потомстве эритроцитов.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, экспрессия мРНК BCL11a уменьшается в указанной клетке или ее потомстве, например, в потомстве эритроидов, например, в потомстве эритроцитов. В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, уровни мРНК BCL11a уменьшаются в указанной клетке или ее потомстве, например, ее потомство эритроидов, например, его потомство эритроцитов.
В любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, которые упоминают клетку, клетка является клеткой млекопитающего, примата или человека (или популяция клеток включает таковые), например, представляет собой человеческую клетку или популяцию клеток человека. В вариантах осуществления клетка является HSPC, например, представляет собой CD34+, например, представляет собой CD34+CD90+ (или популяция клеток включает таковые). В вариантах осуществления клетка (или популяция клеток) является аутологичной по отношению к пациенту, которому будут вводить указанную клетку. В других вариантах осуществления клетка (или популяция клеток) является аллогенной по отношению к пациенту, которому будут вводить указанную клетку.
В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, включающую: 1) одну или несколько молекул gРНК (включая первую молекулу gРНК) описанных здесь, например, одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и молекулу Cas9, например, как описано здесь; 2) одну или несколько молекул gРНК (включая первую молекулу gРНК), описанных здесь, например, одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9 (описанную здесь); 3) нуклеиновую кислоту, кодирующую одну или несколько молекул gРНК (включая первую молекулу gРНК), описанных здесь, например, одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и молекулу Cas9 (описанную здесь); 4) нуклеиновую кислоту, кодирующая одну или несколько молекул gРНК (включая первую молекулу gРНК), описанную здесь, например, одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9 (описанную здесь); или 5) любой из вышеперечисленных пунктов 1)-4), и матричную нуклеиновую кислоту; или 6) ) любой из вышеперечисленных пунктов 1)-4 и нуклеиновую кислоту, включающую последовательность, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет композицию, включающей первую молекулу gРНК (например, описанную здесь, например, первую молекулу gРНК любой из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК), дополнительно включающий молекулу Cas9 (описанную здесь).
В вариантах осуществления молекула Cas9 представляет собой активную или неактивную S.pyogenes Cas9.
В вариантах осуществления молекула Cas9 включает SEQ ID NO: 6611. В вариантах осуществления молекула Cas9 включает, например, состоит из: (a) SEQ ID NO: 7821; (b) SEQ ID NO: 7822; (c) SEQ ID NO: 7823; (d) SEQ ID NO: 7824; (e) SEQ ID NO: 7825; (f) SEQ ID NO: 7826; (g) SEQ ID NO: 7827; (h) SEQ ID NO: 7828; (i) SEQ ID NO: 7829; (j) SEQ ID NO: 7830; или (k) SEQ ID NO: 7831.
В предпочтительных вариантах осуществления первая молекула gРНК и молекула Cas9 присутствуют в рибонуклеопротеиновом комплексе (RNP).
В вариантах осуществления изобретение предоставляет композицию, например, композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления, дополнительно включающую в себя вторую молекулу gРНК; вторую молекулу gРНК и третью молекулу gРНК; или молекулу второй gРНК, и, необязательно, третью молекулу gРНК и, необязательно, четвертую молекулу gРНК, где вторая молекула gРНК, необязательная третья молекула gРНК и необязательная четвертая молекула gРНК представляют собой молекулу gРНК молекулы gРНК, описанной здесь, например, молекулы gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, где каждая молекула gРНК композиции комплементарна различной целевой последовательности.
В вариантах осуществления с двумя и более молекулами gРНК, первая молекула gРНК, вторая молекула gРНК, необязательная третья молекула gРНК и необязательная четвертая молекула gРНК комплементарны целевым последовательностям в пределах одного и того же гена или области. В вариантах осуществления первая молекула gРНК, вторая молекула gРНК, необязательная третья молекула gРНК и необязательная четвертая молекула gРНК комплементарны целевым последовательностям, удалённым друг от друга, не более чем на чем на 20000 нуклеотидов, не более чем на 10000 нуклеотидов, не более чем на 6000, не более чем на 5000 нуклеотидов, не более чем на 4000, не более чем на 1000 нуклеотидов, не более чем на 500 нуклеотидов, не более чем на 400 нуклеотидов, не более чем на 300 нуклеотидов, не более чем на 200 нуклеотидов, не более чем на 100 нуклеотидов, не более чем на 90 нуклеотидов, не более чем на 80 нуклеотидов, не более чем на 70 нуклеотидов, не более чем на чем на 60 нуклеотидов, не более чем на 50 нуклеотидов, не более чем на 40 нуклеотидов, не более чем на 30 нуклеотидов, не более чем на 20 нуклеотидов или не более чем на 10 нуклеотидов.
В вариантах осуществления с двумя и более молекулами gРНК, первая молекула gРНК, вторая молекула gРНК, необязательная третья молекула gРНК и необязательная четвертая молекула gРНК являются комплементарными целевой последовательности в разных генах или областях.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК являются:
(a) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням;
(b) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням;
c) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням; или
(d) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням; или
(e) независимо выбранными из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов её осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК являются:
(a) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10, и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням; или
(b) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11, и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов её осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК являются:
(a) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13 являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням; или
(b) независимо выбранными из молекул gРНК молекулы варианта осуществления молекулы gРНК №14 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК являются:
(a) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням;
(b) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням;
(c) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням; или
(d) независимо выбранными из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:
(1) первая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5, (с) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6, (d) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7, или (e) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56; а также
(2) вторая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10, или (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:
(1) первая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5, (с) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6, (d) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7, или (e) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56 молекулы gРНК; а также
(2) вторая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №14.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления композиции, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:
(1) первая молекула gРНК является: (а выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6, (d) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7, (e) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56; и
(2) вторая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18, или (d) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:
(1) первая молекула gРНК является: (a) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10, или (b), выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11; и
(2) вторая молекула gРНК является собой: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13, (б) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №14.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:
(1) первая молекула gРНК является: (a) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10 или (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11; и (2) вторая молекула gРНК является: (a) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18, или (d) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:
(1) первая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №14; а также
(2) вторая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18 или (d) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:
(1) первая молекула gРНК является: (a) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16 gРНК, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18 или (d) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68; и
(2) вторая молекула gРНК включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена бета-глобина; или
(1) первая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, (б) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5, (с) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6, (d) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7, (e выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56, (f) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10, (g) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11, (h), выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13 или (i) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №14; и
(2) вторая молекула gРНК включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена бета-глобина.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, в которой первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК независимо выбраны из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-68.
В вариантах осуществления композиции, по отношению к компонентам молекулы gРНК композиции, композиция состоит из первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК.
В вариантах осуществления композиции каждая из указанных молекул gРНК находится в рибонуклеопротеиновом комплексе (RNP) с молекулой Cas9, описанной здесь.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов её осуществления, изобретение предоставляет композицию, дополнительно включающую матричную нуклеиновую кислоту, где матричная нуклеиновая кислота включает нуклеотид, соответствующий нуклеотиду внутри или вблизи целевой последовательности первой gРНК молекулы. В вариантах осуществления матричная нуклеиновая кислота включает нуклеиновую кислоту, кодирующую: (а) ген бета-глобина человека, например ген бета-глобина человека, включающий одну или несколько мутаций G16D, E22A и T87Q или его фрагмент; или (b) ген гамма-глобина человека или его фрагмент.
В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, композиция составлена в среде, подходящей для электропорации, например, подходящей для электропорации в клетки HSPC. В вариантах осуществления композиции, включающей одну или несколько молекул gРНК, каждая из указанных молекул gРНК находится в RNP с молекулой Cas9, описанной здесь, причём каждый из указанных RNP находится в концентрации менее чем примерно 10 мкМ, например, менее, чем примерно 3мкM, например, менее чем примерно 1 мкМ, например, менее чем примерно 0,5 мкМ, например, менее чем примерно 0,3 мкМ, например, менее чем примерно 0,1 мкМ.
В другом аспекте изобретение предоставляет последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует одну или несколько молекул gРНК, описанных здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота включает промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей одну или более молекул gРНК, например, промотор, распознаваемый РНК-полимеразой II или РНК-полимеразой III, например, промотор U6 или промотор HI. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота дополнительно кодирует молекулу Cas9, например, описанную здесь, например, молекулу Cas9, включающую (например, состоящую из любой из) SEQ ID NO: 6611, SEQ ID NO: 7821, SEQ ID NO: 7822, SEQ ID NO: 7823, SEQ ID NO: 7824, SEQ ID NO: 7825, SEQ ID NO: 7826, SEQ ID NO: 7827, SEQ ID NO: 7828, SEQ ID NO: 7829, SEQ ID NO: 7830, или SEQ ID NO: 7831. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота включает промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей молекулу Cas9, например, промотор EF-1, промотор гена CMV IE, промотор EF-1, промотор гена убиквитина C или промотор фосфоглицераткиназы (PGK).
В другом аспекте изобретение предоставляет вектор, включающий нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления вектор выбирают из группы, состоящей из лентивирусного вектора, аденовирусного вектора, аденоассоциированного вирусного (AAV) вектора, вектора вируса простого герпеса (HSV), плазмиды, мини-кольца, наноплазмиды и РНК-вектора.
В другом аспекте изобретение предоставляет способ изменения клетки (например, популяции клеток), например, изменение структуры (например, последовательности нуклеиновой кислоты) внутри или вблизи целевой последовательности в указанной клетке, который включает контакт (например, при введении) указанной клетки (например, популяции клеток) с: 1) одной или несколькими молекулами gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК и молекулой Cas9 (например, описанной здесь); 2) одной или несколькими молекулами gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК и нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу Cas9 (например, описанную здесь); 3) нуклеиновой кислотой, кодирующей одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, и молекулой Cas9 (например, описанной здесь); 4) нуклеиновой кислотой, кодирующей одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов молекулы gРНК, и нуклеиновой кислотой, кодирующей молекулу Cas9 (например, описанную здесь); 5) любой из вышеперечисленных пунктов 1)-4) и матричной нуклеиновой кислотой; 6) любой из вышеперечисленных 1)-4) и нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту; 7) композицией любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции; или 8) вектором любого из предыдущих векторных аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления gРНК молекула или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу gРНК и молекула Cas9 или нуклеиновая кислота, кодирующую молекулу Cas9, составлены в виде одной композиции. В других вариантах осуществления gРНК молекула или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу gРНК и молекула Cas9 или нуклеиновая кислота, кодирующую молекулу Cas9, составлены более чем в одной композиции. В вариантах осуществления, включающих более одной композиции, композиции (более одной) доставляются одновременно или последовательно. В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку животного, например, клетку млекопитающего, примата или человека. В вариантах осуществления клетка представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку или клетку-предшественник (HSPC) (например, популяцию HSPC), например, клетку CD34+, например, клетку собой CD34+CD90+. В вариантах осуществления клетка находится в композиции, включающей популяцию клеток, обогащённую CD34+ клетками. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови. В вариантах осуществления клетка является аутологичной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку. В других вариантах осуществления клетка является аллогенной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку. В вариантах осуществления этот способ приводит к образованию индела внутри или вблизи последовательности-мишени геномной ДНК, комплементарной целевому домена одной или нескольких молекул gРНК, например, индела, представленного на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, например, индела, ассоциированного с целевым доменом молекулы gРНК, как показано на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37. В вариантах осуществления индел представляет собой инсерцию или делецию менее 40 нуклеотидов, например, менее 30 нуклеотидов, например, менее 20 нуклеотидов, например, менее 10 нуклеотидов, например, представляет собой делецию одного нуклеотида. В вариантах осуществления способ приводит к популяции клеток, в которой, по меньшей мере около 50%, например, по меньшей мере около 60%, например, по меньшей мере около 70%, например, по меньшей мере около 80%, например, по меньшей мере около 90% (например, по меньшей мере около 95%, по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98% или, по меньшей мере около 99%) клеток популяции были изменены, например, включают индел. В вариантах осуществления способ (например, способ, выполненный на популяции клеток, описанный здесь) приводит к клетке (например, популяции клеток), способной дифференцироваться в дифференцированную клетку эритроидной линии (например, эритроцит), причём указанная дифференцированная клетка показывает повышенный уровень фетального гемоглобина относительно неизмененной клетки (например, популяции клеток). В вариантах осуществления этот способ приводит к популяции клеток, способных дифференцироваться в популяцию дифференцированных клеток, например, в популяцию клеток эритроидной линии (например, в популяцию эритроцитов), причём указанная популяция дифференцированных клетки имеет повышенную фракцию F-клеток (например, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30% или, по меньшей мере, примерно на 40% выше), например, по отношению к популяции неизмененных клеток. В вариантах осуществления способ приводит к клетке, способной дифференцироваться в дифференцированную клетку, например клетку эритроидной линии (например, эритроцит), где указанная дифференцированная клетка производит по меньшей мере около 6 пикограмм (например, по меньшей мере около 7 пикограмм, по меньшей мере около 8 пикограмм, по меньшей мере около 9 пикограмм, по меньшей мере около 10 пикограмм или от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм) фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления способ выполняется ex vivo. В других вариантах осуществления способ выполняется in vivo.
В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, измененную способом изменения клетки любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления способа.
В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, полученную способом изменения клетки любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления способа.
В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, включающую первую молекулу gРНК, например, описанную здесь, например, любого из предыдущих аспектов и вариантов молекулы gРНК, или композицию, например, описанную здесь, например, любого из предыдущих аспектов композиции и вариантов осуществления, нуклеиновая кислоту, например, описанную здесь, например, любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты или вектор, например, описанный здесь, например, любого из предыдущих векторных аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления клетка дополнительно включает молекулу Cas9, например, описанную здесь, например, молекулу Cas9, включающую, например, состоящую из любой из: SEQ ID NO: 6611, SEQ ID NO: 7821, SEQ ID NO: 7822, SEQ ID NO: 7823, SEQ ID NO: 7824, SEQ ID NO: 7825, SEQ ID NO: 7826, SEQ ID NO: 7827, SEQ ID NO: 7828, SEQ ID NO: 7829, SEQ ID NO: 7830 или SEQ ID NO: ID NO: 7831. В вариантах осуществления клетка включает в себя, включала или будет включать вторую молекулу gРНК, например, описанную здесь, например, по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК или нуклеиновую кислоту, кодирующую вторую молекулу gРНК, например, описанную здесь, например, по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают неидентичные целевые домены. В вариантах осуществления экспрессия фетального гемоглобина увеличивается в указанной клетке или ее потомстве (например, в потомстве эритроидов, например, в потомстве эритроцитов) относительно клетки того же типа, не модифицированной включением gРНК, или ее потомства. В вариантах осуществления клетка способна дифференцироваться в дифференцированную клетку, например клетку эритроидной линии (например, эритроцит), причём указанная дифференцированная клетка показывает повышенный уровень фетального гемоглобина, например, относительно клетки того же типа, не модифицированной включением gРНК. В вариантах осуществления дифференцированная клетка (например, клетка эритроидной линии, например эритроцит) производит, по меньшей мере примерно 6 пикограмм (например, по меньшей мере примерно 7 пикограмм, по меньшей мере примерно 8 пикограмм, по меньшей мере примерно 9 пикограмм, по меньшей мере примерно 10 пикограмм, примерно от 8 до 9 пикограмм или примерно от 9 до 10 пикограмм) фетального гемоглобина, например, относительно клетки того же типа, не модифицированной включением gРНК. В вариантах осуществления клетка контактировала, например, ex vivo, с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например, описанным здесь, например, с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, представляющим собой Соединение 1, Соединение 2, Соединение 3, Соединение 4 или их комбинацию (например, соединение 1 и соединение 4), например, с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, представленным Cоединением 4. В вариантах осуществления, включающих любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, клетка включает в себя индел внутри последовательности геномной ДНК или рядом с ней, комплементарной целевому домену введённой молекулы gРНК (как описано здесь, например, молекуле gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления), например, индел, указанный на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, например, индел, представленный на Фигуре 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, и ассоциированный с молекулой gРНК (как описано здесь, например, с молекулой gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления), представленной выше. В вариантах осуществления индел представляет собой инсерцию или делецию менее чем примерно 40 нуклеотидов, например, менее 30 нуклеотидов, например, менее 20 нуклеотидов, например, менее 10 нуклеотидов, и, например, индел представляет собой делецию одного нуклеотида. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления клеток, клетка является клеткой животного, например клетка является клеткой животного, например, млекопитающего, примата или человека. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления клеток, клетка является гемопоэтической стволовый клеткой или клеткой-предшественником (HSPC) (например, популяцией HSPC), например, клетка представляет собой клетку CD34+, например, клетка представляет собой CD34+CD90+ клетку. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления клеток, клетка (например, популяция клеток) выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления клеток, клетка является аутологичной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку. В вариантах осуществления клетка является аллогенной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку. В другом аспекте изобретение предоставляет популяцию клеток, включая клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клеток. В вариантах осуществления, по меньшей мере около 50%, например, по меньшей мере около 60%, например, по меньшей мере около 70%, например, по меньшей мере около 80%, например, по меньшей мере около 90% (например, по меньшей мере около 95%, при по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98% или, по меньшей мере около 99%) клеток популяции являются клетками, соответствующими любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клеток. В вариантах осуществления, популяция клеток способна дифференцироваться в популяцию дифференцированных клеток, например, популяцию клеток эритроидной линии (например, популяцию эритроцитов), причём указанная популяция дифференцированных клеток имеет увеличенную долю F-клеток (например, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30% или, по меньшей мере, около 40% выше), чем, например, популяция немодифицированных клеток того же типа. В вариантах осуществления, F-клетки популяции дифференцированных клеток вырабатывают, по меньшей мере около 6 пикограмм (например, по меньшей мере около 7 пикограмм, по меньшей мере около 8 пикограмм, по меньшей мере около 9 пикограмм, по меньшей мере около 10 пикограмм или от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм) фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления популяция включает в себя: 1) по меньшей мере 1e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому должны вводить клетки; 2) по меньшей мере 2e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо вводить клетки; 3) по меньшей мере 3e6 CD34+ клетки/кг массы тела пациента, которому необходимо вводить клетки; 4) по меньшей мере 4e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо вводить клетки; или 5) от 2e6 до 10e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо вводить клетки. В вариантах осуществления, по меньшей мере около 40%, например, по меньшей мере около 50% (например, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80% или, по меньшей мере около 90%) клеток популяции являются клетками CD34+. В вариантах осуществления, по меньшей мере около 10%, например, по меньшей мере около 15%, например, по меньшей мере около 20%, например, по меньшей мере около 30% клеток популяции являются CD34+CD90+ клетками. В вариантах осуществления популяция клеток получена из костного мозга, периферической крови (например, мобилизованной периферической крови), пуповинной крови или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSCs). В предпочтительном варианте осуществления популяция клеток получена из костного мозга. В вариантах осуществления популяция клеток включает, или, например, состоит из клеток млекопитающего, например человека. В вариантах осуществления популяция клеток является аутологичной по отношению к пациенту, которому она должна быть введена. В других вариантах осуществления популяция клеток является аллогенной по отношению к пациенту, которому она должна быть введена.
В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, включающую в себя клетку любого из предшествующих клеточных аспектов и вариантов осуществления, или популяцию клеток любой из предыдущих популяций аспектов и вариантов осуществления клеток. В вариантах осуществления композиция включает фармацевтически приемлемую среду, например, фармацевтически приемлемую среду, подходящую для криоконсервации.
В другом аспекте изобретение предоставляет способ лечения гемоглобинопатии, включающий введение пациенту клетки любого из предшествующих клеточных аспектов и вариантов осуществления, популяцию клеток любой из предыдущих популяций клеточных аспектов и вариантов осуществления или композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции. В вариантах осуществления гемоглобинопатия представляет собой талассемию, например, бета-талассемию или серповидноклеточную анемию.
В другом аспекте изобретение предоставляет способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у млекопитающего, включающий введение пациенту клетки любого из предшествующих клеточных аспектов и вариантов осуществления, популяцию клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяций клеток, или композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции.
В другом аспекте изобретение предоставляет способ получения клетки (например, популяции клеток), включающий: (a) предоставление клетки (например, популяции клеток) (например, HSPC (например, популяции HSPC)); (b) культивирование указанной клетки (например, указанной популяции клеток) ex vivo в клеточной среде для культивирования клеток, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток; и (c) введение в указанную клетку первой молекулы gРНК (например, описанной здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК), молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей первую молекулу gРНК (например, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК), композицию (например, описанную здесь, например, композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции), нуклеиновую кислоту (например, описанную здесь, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты) или вектор (например, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора). В вариантах осуществления указанного способа после проведения стадии (с) указанная клетка (например, популяция клеток) способна дифференцироваться в дифференцированную клетку (например, популяцию дифференцированных клеток), например клетку эритроидной линии (например, в популяцию клеток эритроидного происхождения), например, в эритроциты (например, в популяцию эритроцитов), причём указанная дифференцированная клетка (например, популяция дифференцированных клеток) приводит к увеличению фетального гемоглобина, например, по отношению к тем же клеткам, которые не проходили стадии (с). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 1, Соединение 2, Соединение 3, Соединение 4 или их комбинацию (например, Соединение 1 и Соединение 4), например, представляет собой Соединение 4. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, среда для культивирования клеток включает в себя тромбопоэтин (Tpo), лиганд Flt3 (Flt-3L) и человеческий фактор роста стволовых клеток (SCF). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, среда для культивирования клеток дополнительно включает человеческий интерлейкин-6 (IL-6). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов способа, среда для культивирования клеток включает в себя тромбопоэтин (Tpo), лиганд Flt3 (Flt-3L) и фактор стволовых клеток человека (SCF) каждый в концентрации от примерно 10 нг/мл до примерно 1000 нг/мл, например, каждый в концентрации около 50 нг/мл, например, в концентрации 50 нг/мл. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, среда для культивирования клеток включает человеческий интерлейкин-6 (IL-6) в концентрации от примерно 10 нг/мл до примерно 1000 нг/мл, например, при концентрация около 50 нг/мл. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, среда для культивирования клеток включает в себя соединение, в концентрации от примерно 1 нМ до примерно 1 мМ, например, в концентрации от примерно 1 мкМ до примерно 100 мкМ, например, в концентрации от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ, например, в концентрации примерно 50 мкМ, например, в концентрации точно 50 мкМ или в концентрации около 75 мкМ, например, в концентрации точно 75 мкМ. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, культивирование на стадии (b) включает период культивирования до проведения стадии (с), например, период культивирования до проведения стадии (с) составляет, по меньшей мере, 12 часов, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 3 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 2 дней, например, в течение примерно 2 дней. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов способа, культивирование на стадии (b) включает период культивирования после проведения стадии (с), например, период культивирования после проведения стадии (с) составляет, по меньшей мере, 12 часов, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 10 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 5 дней, например, в течение периода от примерно 2 дней до примерно 4 дней, например, в течение примерно 2 дней или в течение примерно 3 дней или в течение примерно 4 дней. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, популяция клеток увеличивается, по меньшей мере, в 4 раза, например, по меньшей мере в 5 раз, например, по меньшей мере в 10 раз, например, по отношению к клеткам, которые не подвергаются культивации согласно стадии (b). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, введение этапа (с) включает в себя электропорацию, например, электропорацию, включающую в себя от 1 до 5 импульсов, например, 1 импульс, причем каждый импульс даётся при напряжении от 700 вольт до 2000 вольт при длительности импульса от 10 мс до 100 мс. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, электропорация включает, например, 1 импульс. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, импульсное напряжение составляет от 1500 до 1900 вольт, например, составляет 1700 вольт. В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, длительность импульса составляет от 10 мс до 40 мс, например, 20 мс. В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, клетка (например, популяция клеток), представленная на стадии (а), представляет собой человеческую клетку (например, популяцию клеток человека). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, клетка (например, популяция клеток), представленная на стадии (а), выделена из костного мозга, периферической крови (например, мобилизованной периферической крови), пуповинной крови или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSC), предпочтительно костного мозга. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, клетка (например, популяция клеток), представленная на стадии (а), выделена из костного мозга, например, выделена из костного мозга пациента, страдающего гемоглобинопатией. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, популяция клеток, представленных на этапе (а), обогащена клетками HSPC, например, CD34+ клетками. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, после проведения стадии (с), способствующей экспансии стволовых клеток, клетка (например, популяция клеток) подвергается криоконсервации. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, после проведения стадии (с) клетка (например, популяция клеток) включает в себя индел внутри или вблизи последовательности геномной ДНК, комплементарной целевому домену первой молекулы gРНК, например, индел, указанный на Фигуре 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, например, индел, указанный на Фигуре 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, как соответствующий первой молекуле gРНК. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, после проведения стадии (с), по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере около 95%, по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98% или по меньшей мере около 99% клеток популяции клеток включают индел в последовательности геномной ДНК или вблизи нее, комплементарный целевому домену первой молекулы gРНК, например, индел, указанный на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, например, индел, указанный на Фигуре 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, как соответствующий первой молекуле gРНК.
В другом аспекте изобретение предоставляет клетку (например, популяцию клеток), полученную способом получения клетки любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В другом аспекте изобретение предоставляет способ лечения гемоглобинопатии (например, талассемии (например, бета-талассемии) или серповидно-клеточной анемии, включающий введение пациенту-человеку композиции, включающей указанную клетку (например, популяцию клеток). В другом аспекте изобретение предоставляет способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у пациента-человека, включающий введение указанному пациенту-человеку композиции, включающей указанную клетку (например, популяцию клеток). В вариантах осуществления пациенту-человеку вводят композицию, включающую по меньшей мере примерно 1е6 клеток (например, клетки CD34+, например клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления) на кг массы тела пациента, например, по меньшей мере около 1e6 CD34+ клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления на кг массы тела пациента. В вариантах осуществления пациенту-человеку вводится композиция, включающая по меньшей мере примерно 2е6 клеток (например, клетки CD34+, например, клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления) на кг массы тела пациента, например, по меньшей мере около 2e6 CD34+ например клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления на кг массы тела пациента. В вариантах осуществления пациенту-человеку вводится композиция, включающая от примерно 2e6 до примерно 10e6 клеток (например, клетки CD34+, например, клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления) на кг массы тела человека например, по меньшей мере от примерно 2e6 до примерно 10e6 CD34+ клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления на кг массы тела пациента.
В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, композицию, описанную здесь, например композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции, описанную здесь нуклеиновую кислоту, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты, вектор, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора, клетку, описанную здесь, например, клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клетки или популяцию клеток, описанную здесь, например, популяцию клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяции клеток, для использования в качестве лекарственного средства.
В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, композицию, описанную здесь, например композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции, нуклеиновую кислоту, описанную здесь, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты, вектор, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора, клетку, описанную здесь, например, клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клетки или популяцию клеток, описанную здесь, например, популяцию клеток любой из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяции клеток, для использования при изготовлении лекарственного средства.
В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, композицию, описанную здесь, например композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции, нуклеиновую кислоту, описанную здесь, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты, вектор, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора, клетку, описанную здесь, например, клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клетки или популяцию клеток, описанную здесь, например, популяцию клеток любой из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяции клеток для использования при лечении заболевания.
В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, композицию, описанную здесь, например композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции, нуклеиновую кислоту, описанную здесь, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты, вектор, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора, клетку, описанную здесь, например, клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клетки или популяцию клеток, описанную здесь, например, популяцию клеток любой из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяции клеток для использования при лечении заболевания, где заболевание представляет собой гемоглобинопатию, например талассемию (например, бета-талассемию) или серповидно-клеточную анемию.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1. Редактирование Cas9 в области +58 эритроидного энхансера Bcl11a. Фракция редактирования, обнаруженная способом NGS в HEK-293 Cas9GFP, 24-часа после доставки crРНК, нацеленной на область энхансера +58 и trРНК путем липофекции. Каждая точка указывает на различную crРНК, trРНК сохранялась постоянной. Геномные координаты указывают местоположение на хромосоме 2, например, в отношении hg38. (n=1)
Фиг. 2: Редактирование Cas9 в области +62 эритроидного энхансера Bcl11a. Фракция редактирования, обнаруженная способом NGS в HEK-293 Cas9GFP, через 24 часа после доставки crРНК, нацеленной на область +62 энхансера и trРНК путем липофекции. Каждая точка указывает на различную crРНК, trРНК сохранялась постоянной. Геномные координаты указывают местоположение на хромосоме 2, например, в отношении hg38. (n=1).
Фиг. 3. Стратегия гейтинга для сортировки клеток после введения системы редактирования Cas9.
Фиг. 4. Электрофорез в агарозном геле фрагментов генов из обработанных системой редактирования Cas9 CD34+ клеток (показаны как CD34+CD90+, так и CD34+CD90- популяции клеток вместе с контрольными несортированными клетками). Верхняя полоса представляет собой нерасщепленную гомодуплексную ДНК, а нижние полосы указывают на продукты расщепления гетеродуплексной ДНК. Крайняя левая полоса является ДНК-маркером. Интенсивность полосы была рассчитана путем интеграции пиков необработанных изображений с помощью программы ImageJ. % генной модификации (индел) рассчитан следующим образом: %модификации гена=100 х (1-(расщепление 1 фракцией)1\2) и указан ниже каждой соответствующей полосы геля.
Фиг. 5. Область эритроидного энхансера, показывающая сайты геномной ДНК, на которые нацелены молекулы sgРНК, содержащие целевые домены, комплементарные подчеркнутым нуклеотидам. Фигура раскрывает SEQ ID NO: 2841.
Фиг. 6A/6B. Результаты NGS, показывающие инделы, сформированные sgEH1 (CR00276)(A) или sgEH2 (CR00275)(B) в клетках CD34+ HSC. Инсерции обозначены заглавными буквами. Делеции обозначены пунктирной линией. Области микрогомологии вблизи места разрыва подчернуты толстой линией. Фигура 6A раскрывает SEQ ID NOS 2842-2854, Фигура 6B раскрывает SEQ ID NOS 2855-2867, соответственно, в порядке появления.
Фиг. 6C/6D. Результаты NGS, показывающие инделы, сформированные sgEH8 (CR00273)(C) или sgEH9 (CR00277)(D) в клетках CD34+ HSC. Инсерции обозначены заглавными буквами. Делеции обозначены пунктирной линией. Области микрогомологии вблизи места разрыва подчернуты толстой линией. Фигура 6С раскрывает SEQ ID NOS 2868-2880, Фигура 6D раскрывает SEQ ID NOS 2881-2893, соответственно, в порядке появления.
Фиг. 7. Результаты NGS и формирование профиля инделов у нескольких доноров для g7, g8 и g2. Последовательности превалирующих 3 инделов по двум экспериментам, являющихся биологическими репликами, с использованием g7 и g8 были идентичны, а последовательность превалирующих 3 инделов с использованием g2 идентична последовательности предыдущего эксперимента. Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2894-2911, соответственно, в порядке появления.
Фиг. 8. Результаты NGS и формирование профиля инделов при применении модифицированной в области каркаса (области связывания с белком Cas9) gРНК последовательности (BC). Последовательности 3 (трёх) наиболее часто образующихся инделов этих экспериментов идентичны последовательностям, образующихся при использовании gРНК со стандартным каркасом. Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2912-2921, соответственно, в порядке появления.
Фиг. 9. Сравнение взаиморасположения инделов при разных методах доставки. AVG% является % NGS считываний, демонстрирующих указанный индел (усереднённое значение 2 экспериментов). Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2922-2946, соответственно, в порядке появления.
Фиг. 10. Образование индела путем совместного введения g7 gРНК и g8 gРНК либо с областью шпильки без удлинения («reg»), либо с первым удлинением шпильки и первым удлинением tracr («BC»). Последовательности PAM для обоих gРНК заключены в «коробку». Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2947-2955, соответственно, в порядке появления.
Фиг. 11: Наиболее эффективные последовательности gРНК, нацеленные на +58 область энхансера гена BCL11a в клетках CD34+, как измерено NGS (n=3).
Фиг. 12: Наиболее эффективные последовательности gРНК, нацеленные на +62 область энхансера гена BCL11a в клетках CD34+, как измерено NGS (n=3).
Фиг. 13: Предсказанные размеры вырезаемого участка, при введении 2 (двух) молекул gРНК, нацеленных на +62 область энхансера гена BCL11a, в клетки HEK293_Cas9, причём либо CR00187 (светло-серые полосы), либо CR00202 (темно-серые полосы) постоянны и совместно вводятся в клетки со второй молекулой gРНК, включающей указанный целевой домен.
Фиг. 14: Делеция геномной ДНК в области +62 энхансера BCL11a при добавлении молекул gРНК, включающих целевой домен CR00187 и второй молекулы gРНК, указанной на графике. Знак (*) обозначают делецию, наблюдаемую с частотой 30%; знак (^) указывает на делецию, наблюдаемую с более низкой частотой (<30%). Предсказанные продукты вырезания, приводящие к фрагментам менее 50 нп, не могли быть определены.
Фиг. 15: Делеция геномной ДНК в +62 области энхансера BCL11a при добавлении молекулы gРНК, включающую целевой домен CR00202 и второй молекулы gРНК, указанной на графике. Знак (*) обозначают делецию, наблюдаемую с частотой 30%; знак (^) указывает на делецию, наблюдаемую с более низкой частотой (<30%).
Фиг. 16: % образования инделов молекулами 192 gРНК, нацеленными на область HPFH Френча ((Sankaran VG et al. A functional element necessary for fetal hemoglobin silencing. NEJM (2011) 365:807-814.)
Фиг. 17. Экспериментальная схема доставки Cas9/gРНК рибонуклеопротеина (Cas9-RNP) в первичные человеческие CD34+ HSPC клетки для редактирования генома с последующей генетической и фенотипической характеристикой.
Фиг. 18. Жизнеспособность клеток после “ложной” (обозначена как Моск) (контрольной) электропорации или электропорации комплексов Cas9-RNP в CD34+HSPC. HSPC подвергали экспансии in vitro в течение 48 часов после электропорации комплексов RNP, при этом наблюдали за жизнеспособностью клеток и определяли процент жизнеспособности. Названия gРНКs, используемых для создания комплексов RNP, показаны по оси Х и соответствующие значения жизнеспособности клеток-по оси y. Идентификатор CRxxxx указывает целевой домен молекулы gРНК.
Фиг. 19. Обнаружение несоответствия при помощи метода анализа с помощью эндонуклеазы T7. HSC человека были электропорированы для доставки комплексов RNP для введения инделов в +58 DHS-область эритроидного энхансера BCL11A путем NHEJ (негомологичного соединения концов). ПЦР-ампликоны, охватывающие целевую область, анализировали T7E1-методом и полученные фрагменты анализировали с помощью электрофореза в 2%-ном агарозном геле. Области +58 эритроидного энхансера BCL11A были поражены обоими типами gРНК (как двойной нацеливающей gРНК, так и одиночной нацеливающей (двойная нацеливающая РНК показана черным, одиночная нацеливающая РНК-серым цветом (на нижнем графике g7BCL11a-BC (1) и g7BCL11A-BC (2) на верхнем графике)). Интенсивность полос ДНК оценивалась программой ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/) для определения процента отредактированных аллелей. Названия используемых gРНК и соответствующая им эффективность в редактировании гена, определяемая путём обнаружения неспаренных оснований, также показаны в Таблице ниже изображения геля.
Фиг. 20: Процент отредактированных аллелей, определённый секвенированием следующего поколения NGS. Обозначения соответствуют описанным на Фиг. 18 и 19.
Фиг. 21. Анализ выделения колониеобразующих единиц (КОЕ), показывающий количество колоний и типы колоний, наблюдаемых для пяти выбранных gРНК. Геном-отредактированные клетки HSPC, отредактированные по области +58 эритроидного энхансера, были перенесены на метилцеллюлозу, а образованные колонии классифицировали и подсчитывали по количеству и типам зрелых клеток с использованием морфологических и фенотипических критериев с использованием STEMvision. Колонии были классифицированы на колониеобразующие единицы-эритроиды (КОЕ-Э), бурст-образующие единицы (предшественники эритроидов)-(БОЕ-Э), колониеобразующие единицы-гранулоциты/макрофаги (КОЕ-ГМ) и колониеобразующие единицы-гранулоцит/эритроцит/макрофаг/мегакариоцит (КОЕ-ГЕММ).
Фиг. 22. Кинетика деления клеток при эритроидной дифференцировке. Общее количество клеток, определяемых в день 0, 7, 14 и 21 при эритроидной дифференцировке и расчёт кратности экспансии клеток.
Фиг. 23. Уровни мРНК BCL11A, гамма и бета-глобина в отредактированном геноме эритроидных дифференцированных HSC. Относительная экспрессия мРНК BCL11A, гамма- и бета-глобиновых цепей в культурах мультилинейных эритроидных клеток была количественно определена с помощью ПЦР в реальном времени. Уровни транскрипции были нормализованы по отношению к уровням транскрипции человеческого гена GAPDH.
Фиг. 24A. Эффективное редактирование генома HSC при использовании двойной нацеливающей gРНК/Сas9 системы для разрушения энхансера BCL11a (+58), приводит к высоким уровням индукции HbF. Клетки HSC через 48 часов после электропорации подвергали in vitro эритроидной дифференцировке с измерением экспрессии HbF. Процент HbF-положительных клеток (F-клеток) определяли анализом FACS на 7, 14 и 21 день. Данные, показанные на этой Фигуре, были получены с помощью систем dgРНК, где dgРНК включала указанный целевой домен.
Фиг. 24B. Эффективное редактирование генома HSC при использовании sgРНК/Сas9 системы для разрушения энхансера BCL11a (+58), приводит к высоким уровням индукции HbF. Клетки HSC через 48 часов после электропорации подвергали in vitro эритроидной дифференцировке с измерением экспрессии HbF. Процент HbF-положительных клеток (F-клеток) определяли анализом FACS на 7, 14 и 21 день. Данные, показанные на этом Фигуре, были получены с помощью систем sgРНК, где sgРНК включала указанный целевой домен.
Фиг. 25: Профиль инделов, сформированных в клетках HSPC при использовании gРНКs, включающих указанный целевой домен. Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2956-2968, соответственно, в порядке появления.
Фиг. 26A: Фенотипирование отредактированных и нередактированных культур в CD34+ среде для экспансии клеток путем окрашивания маркеров клеточной поверхности. Все тестированные молекулы gРНК были использованы в dgРНК-формате. Используемый Tracr представляет собой SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат и последовательность с модификациями 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатными связями (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2003), где N являются (нуклеотидными) остатками указанного целевого домена. Показаны репрезентативные точечные диаграммы, показывающие флуоресценцию клеток, окрашенных при применении панели антител, или соответствующего контроля изотипа, как описано в Материалах и Методах. Показанные клетки были предварительно выбраны из жизнеспособной популяции клеток с помощью свойств прямого и бокового рассеяния и DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол). Процент каждой клеточной популяции, указанной в верхней части графика, определялся выбранной для анализа областью (гейтом), обозначенным заштрихованной областью.
Фиг. 26B: Фенотипирование отредактированных и нередактированных культур в CD34+ питательной среде для экспансии путем окрашивания маркеров клеточной поверхности. Все молекулы gРНК тестировались в dgРНК-формате. Используемый Tracr представляет собой SEQ ID NO: 7808, а crРНК имеет следующие структуру и последовательность с модификациями 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатными связями (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2004), где N являются остатками указанного целевого домена. Показан процент каждой указанной популяции клеток в отредактированных и нередактированных культурах. Целевой домен отредактированных культур таков, как обозначен.
Фиг. 27. % F-клеток эритроцитов, дифференцировавшихся из популяций клеток CD34+, отредактированных с помощью RNP, содержащих dgРНК, нацеленные на два сайта в области HPFH. «g2» является положительным контролем (целевой домен кодирующей области гена BCL11a); «Cntrl»-отрицательным контролем (при введении только Cas9).
Фиг. 28A. % редактирование, определяемое NGS в CD34+ HSPC на 2-й день после электропорации RNP, содержащей указанную dgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано). Контроли включают dgРНК, включающую немодифицированный (CR00317-m) целевой домен CR00317, или электропорацию только в буфере (без Cas9 или gРНК; “ложная» или Mock).
Фиг. 28Б. % редактирования, определённый NGS в CD34+ HSPC на 2-й день после электропорации RNP, содержащим указанную dgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано). Контроли включают электропорацию только в буфере (без Cas9 или gРНК, “ложная» или Mock).
Фиг. 29. % редактирования, определённый NGS в CD34+ HSPC на 2-й день после электропорации RNP, содержащим указанную sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано). В каждом случае номер соответствует идентификатору CRxxxxxx целевого домена, например, Unmod sg312 относится к немодифицированной sgРНК, содержащей целевой домен CR00312). Контроль включает электропорацию только белка Cas9 («Cas9»), электропорацию только с буфером (“ложная» или Mock) или без электропорации (None).
Фиг. 30A. Нормализованный % эритроцитов (за вычетом % F клеток в «Ложной»), являющихся HbF+ после электропорации CD34+ HSPC с RNP, включающим указанную dgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано), и индуцированных к дифференцировке в культуре в среде, способствующей дифференцировке эритроидов. Контроли включают электропорацию только в буфере (“ложная» или Mock).
Фиг. 30B. Нормализованный % эритроцитов (за вычетом % F клеток в «Ложной»), являющихся HbF+ после электропорации CD34+ HSPC с RNP, включающим указанную dgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано), и индуцированных к дифференцировке в культуре в среде, способствующей дифференцировке эритроидов. Контроли включают электропорацию только в буфере (“ложная» или Mock).
Фиг. 31. Нормализованный % эритроцитов (за вычетом % F клеток в «Ложной»), являющихся HbF+ после электропорации CD34+ HSPC с RNP, включающим указанную sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано). В каждом случае номер соответствует идентификатору CRxxxxxx целевого домена, например, Unmod sg312 относится к немодифицированной sgРНК, содержащей целевой домен CR00312), и индуцированных к дифференцировке в культуре в среде, способствующей дифференцировке эритроидов. Контроли включает электропорацию только белка Cas9 и только tracr («Cas9+ TracRNA only»), электропорацию только с буфером («только клетки+ импульс»/Cells only+impulse) или без электропорации («Cells only no impulse»).
Фиг. 32. Кратность полной экспансии клеток CD34+ в культуре на 14-й день после эритроидной дифференцировки после электропорации RNP, содержащим указанную sgРНК (в каждом случае число соответствует идентификатору CRxxxxxx целевого домена, например Unmod sg312 относится к немодифицированной sgРНК, содержащей целевой домен CR00312). Контроли включает электропорацию только белка Cas9 и только tracr (только «Cas9+ TracRNA»), электропорацию только с буфером («только клетки+ импульс/Cells only+impulse») или без электропорации («Клетки без импульса»/«Cells only no impulse»).
Фиг. 33. Оценка потенциальных участков неспецифичных разрывов, расщепляемых Cas9, направленной молекулами dgРНК, нацеленными на область энхансера BCL11a. Треугольники представляют собой сайт на целевом участке, в то время как окружности представляют собой потенциальные неспецифичные сайты для каждой тестируемой gРНК.
Фиг. 34. Эффективность редактирования в целевом локусе B2M в CD34+ гематопоэтических стволовых клетках при различных вариантах Cas9 по результатам NGS секвенирования и проточной цитометрии. NLS=SV40 NLS; His6 или His8 относится к 6 или 8 остаткам гистидина, соответственно (SEQ ID NOS 2969 и 2670, соответственно); TEV=сайт расщепления вируса табачной мозаики; Cas9=дикий тип S. pyogenes Cas9, мутации или варианты указаны, как обозначено).
Фиг. 35. Данные показывают кратность увеличения числа клеток после 10 дней культивирования в питательной среде, способствующей экспансии (3 дня культивирования до электропорации и 7 дней культивирования после электропорации). При тестировании всех нацеливающих РНК, включая как одиночные, так и двойные форматы нацеливающих РНК, экспансия клеток варьировалось от 2 до 7 раз. CR00312 и CR001128, обозначенные стрелками, показали увеличение в 3-6 раз после 10 дней экспансии клеток. Обозначения «Crxxxx» относятся к dgРНК, имеющей указанный целевой домен; «Sgxxxx» относятся к sgРНК, имеющей целевой домен идентификатора CRxxxxx с тем же номером (например, sg312 имеет целевой домен CR00312); «Unmod» указывает на отсутствие изменений в РНК(-ах); «O'MePS» при использовании по отношению к dgРНК относится к crРНК, которая имеет три 3’и три 5' модификации 2’OMe и фосфоротиоатные связи, в сочетании с немодифицированным tracr; «O'MePS», при использовании в отношении sgРНК, относится к gРНК, которая имеет три 5'-концевые модификации 2’OMe и фосфоротиоатные связи и три 3'-концевые фосфоротиоатные связи и три модификации 2'O-Me 4ого от 3'-конца, 3-его от 3'-конца и 2ого-от 3'-конца-нуклеотидов.
Фиг. 36. Гэйтинг-стратегия для выделения различных субпопуляций HSPC.
Фиг. 37. Частота каждого гематопоэтической субкультуры после 48 часов ex vivo культуры в указанной питательной среде (STF с добавлением IL6, Cоединения 4 или обоих: IL6 и Cоединения 4), но до электропорации системы CRISPR. STF=StemSpan SFEM.
Фиг. 38. Частота каждой гематопоэтической субкультуры через 7 дней после электропорации/введения системы CRISPR, нацеленной на область +58 энхансера BCL11a, культивированных в указанной среде (STF, с добавлением IL6, Cоединения 4 или обоих: IL6 и Cоединения 4). STF=StemSpan SFEM.
Фиг. 39A. Жизнеспособность клеток при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, при этом RNP содержит dgРНКs, нацеленные на область +58.
Фиг. 39B. Жизнеспособность клеток при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, при этом RNP содержит sgРНКs, нацеленные на область +58.
Фиг. 40A. Эффективность редактирования гена, измеренная NGS секвенированием при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, с RNP, содержащим dgРНКs, нацеленные на область+58.
Фиг. 40B Эффективность редактирования гена, измеренная NGS секвенированием при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, с RNP, содержащим sgРНКs, нацеленные на область+58.
Фиг. 41A. Процент индукции HbF, измеренный проточной цитометрией при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, с RNP, содержащим dgРНКs, нацеленные на область+58.
Фиг. 41B. Процент индукции HbF, измеренный проточной цитометрией при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, с RNP, содержащим sgРНКs, нацеленные на область+58.
Фиг. 42A. Эффективность редактирования гена при использовании RNP с различными белками Cas9. Редактирование гена выполнялось с использованием различных вариантов Cas9 (перечисленных на оси X) в сочетании с либо немодифицированной версией sgРНК CR00312 и sgРНК CR001128, либо с модифицированной версией sgРНК CR00312 и sgРНК CR001128. Отредактированные клетки были исследованы методом NGS для определения % редактирования (ось Y).
Фиг. 42B. Индукция клеток HbF+ при редактировании гена с использованием различных белков Cas9. Редактирование гена выполнялось с использованием различных вариантов Cas9 (перечисленных на оси X) в сочетании как с немодифицированной версией sgРНК CR00312 и sgРНК CR001128, так и с модифицированной версией sgРНК CR00312 и sgРНК CR001128. Отредактированные клетки были дифференцированы в эритроидную линию и результирующие HbF определялись с помощью проточной цитометрии с использованием антитела против HbF, конъюгированного с флуорофором.
Фиг. 43. % редактирования, как определено NGS в CD34+ HSPC, при электропорации RNP, содержащим указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36). Редактирование определяли через 2 дня (черные полосы) или 6 дней (серые полосы) после электропорации. Менее 1,5% редактирования было обнаружено на каждом сайте после контрольной электропорации только белка Cas9 и Tracr («None», данные не показаны). Показано среднее+ стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.
Фиг. 44. Процент жизнеспособных клеток, представляющих собой CD71+ после электропорации в CD34+ HSPC RNP, содержащие указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36) и культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов в течение 7 дней. После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 1 (черные полосы) или по Протоколом 2 (серые полосы), как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию белка Cas9 и только Tracr («None», данные не показаны). Показано среднее стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.
Фиг. 45. Процент эритроидных клеток, которые являются HbF+ после электропорации в CD34+ HSPCs RNP, и содержат указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36) и культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов в течение 7 дней. После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 1 (черные полосы) или по Протоколу 2 (серые полосы), как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию только белка Cas9 и Tracr («None»). Показан среднее+ стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.
Фиг. 46. Процент клеток, которые являются HbF+ после электропорации в CD34+ HSPCs RNP, и содержат указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36) и культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов в течение 14 дней. После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 1 (черные полосы) или по Протоколу 2 (серые полосы), как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию белка Cas9 и Tracr («None»). Показано среднее стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.
Фиг. 47. Процент эритроидных клеток, которые являются HbF+ после электропорации в CD34+ HSPCs RNP, и содержат указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36) и культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов в течение 21 дня. После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 1 (черные полосы) или по Протоколу 2 (серые полосы), как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию белка Cas9 и только Tracr («None»). Показано среднее стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.
Фиг. 48. Кратность общей экспансии клеток культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов на 7 (черные полосы) или 21 день (черные полосы) после электропорации CD34+ HSPCs RNP, содержащие указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36). После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 2, как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию белка Cas9 и только Tracr («None»). Показано среднее стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.
Фиг. 49. Оценка потенциальных неспецифичных участков, расщепленных Cas9, направленной молекулами dgРНК, нацеленными на область HPFH. Треугольники обозначают специфичные сайты на целевом участке, в то время как окружности представляют собой потенциальные неспецифичные сайты для каждой тестируемой gРНК.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Термины «система «CRISPR», «система Cas» или «система CRISPR/Cas» относятся к набору молекул, содержащему РНК-управляемую нуклеазу или другую эффекторную молекулу, и молекулу gРНК, которые вместе являются необходимыми и достаточными для обеспечения направленной модификации нуклеиновой кислоты в целевой последовательности с помощью РНК-направляемой нуклеазы или другой эффекторной молекулы. В одном варианте осуществления система CRISPR содержит gРНК и белок Cas, например белок Cas9. Такие системы, содержащие молекулу Cas9 или модифицированную молекулу Cas9, называются здесь «системами Cas9» или «системами CRISPR/Cas9». В одном варианте осуществления молекула gРНК и молекула Cas могут быть скомбинированы с образованием рибонуклеопротеинового комплекса (RNP).
Термины «направляющая РНК», «направляющая молекула РНК», «молекула gРНК» или «gРНК» используются взаимозаменяемо и относятся к набору молекул нуклеиновой кислоты, с определёнными указаниями, способствующими доставке РНК-управляемой нуклеазы или другой эффекторной молекулы (как правило, в комплексе с молекулой gРНК) к целевой последовательности. В некоторых вариантах осуществления указанное нацеливание осуществляют посредством гибридизации части gРНК с ДНК (например, по целевому домену gРНК), и путем связывания части молекулы gРНК с РНК-управляемой нуклеазой или другой эффекторной молекулой (например, по крайней мере, с помощью gРНК tracr). В вариантах осуществления молекула gРНК состоит из единственной непрерывной молекулы полинуклеотида, называемой здесь как «одиночная нацеливающая РНК» или «sgРНК» и тому подобное. В других вариантах осуществления молекула gРНК состоит из множества, обычно двух, полинуклеотидных молекул, которые сами по себе могут соединяться, как правило, посредством гибридизации, называемой здесь «двойной нацеливающей РНК» или «dgРНК», и тому подобное. Молекулы gРНК описаны более подробно ниже, но в общем случае включают целевой домен и tracr. В вариантах осуществления целевой домен и tracr расположены на одном полинуклеотиде. В других вариантах осуществления целевой домен и tracr расположены на отдельных полинуклеотидах.
Термин «целевой домен» в качестве термина используется в связи с gРНК и является частью молекулы gРНК, которая распознаёт, например, будучи комплементарной, целевую последовательность-мишень, например, целевую последовательность-мишень (далее-«целевая последовательность») в нуклеиновой кислоте клетки, например, внутри гена.
Термин «crРНК» в качестве термина используется в связи с молекулой gРНК, которая представляет собой часть молекулы gРНК, содержащую целевой домен и область, взаимодействующую с tracr для формирования шпильки.
Термин «целевая последовательность» относится к последовательности нуклеиновых кислот, комплементарной, например, полностью комплементарной, целевому домену gРНК. В вариантах осуществления целевая последовательность-мишень расположена на геномной ДНК. В варианте осуществления целевая последовательность прилегает к (находится на той же цепи, либо на комплементарной цепи ДНК) последовательности PAM (protospacer adjacent motif), распознаваемой белком с нуклеазной или другой эффекторной активностью, например, прилегает к последовательности PAM, распознаваемой Cas9, В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность внутри гена или локуса, влияющая на экспрессию гена глобина, например, на экспрессию бета-глобина или фетального гемоглобина (HbF). В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность в локусе глобина. В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность в гене BCL11a. В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность в области энхансера BCL11a. В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность в области HPFH.
Термин «шпилька», используемый здесь всвязи с молекулой gРНК, относится к части gРНК, где crРНК и tracr связываются, или гибридизуются друг с другом.
Термин «tracr», используемый здесь в связи с молекулой gРНК, относится к части gРНК, которая связывается с нуклеазой или другой эффекторной молекулой. В вариантах осуществления tracr включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая специфически связывается с Cas9. В вариантах осуществления tracr содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая формирует часть шпильки.
Термины «Cas9» или «молекула Cas9» относятся к ферменту бактериальной системы типа II CRISPR/Cas, ответственной за расщепление ДНК. Cas9 также включает белок дикого типа, а также его функциональные и нефункциональные мутанты. В вариантах осуществления Cas9 представляет собой Cas9 of S. pyogenes.
Термин «комплементарный», используемый в связи с нуклеиновой кислотой, относится к спариванию оснований A с T или U и G с C. Термин «комплементарный» относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые являются полностью комплементарными, то есть образует пары A-T (или U) и пары G-C по всей указанной последовательности, а также к молекулам, которые по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 99% комплементарны.
Термин «матричная нуклеиновая кислота» используется в связи с репарацией, обусловленной гомологией, или по типу гомологичной рекомбинации, относится к нуклеиновой кислоте, встраиваемой в место модификации системой CRISPR как донорная последовательность для репарации гена (инсерции) в месте разрыва.
Термин «индел», используемый здесь, относится к нуклеиновой кислоте, содержащей одну или несколько вставок нуклеотидов, одну или несколько делеций нуклеотидов или комбинацию вставок и делеций нуклеотидов относительно эталонной нуклеиновой кислоты, образующийся как результат действия композиции, содержащей молекулу gРНК, например, системы CRISPR. Инделы могут быть определены путем секвенирования нуклеиновой кислоты после воздействия композиции, содержащей молекулу gРНК, например, с помощью NGS. По отношению к месту локализации индела, индел считается «внутри или вблизи» эталонной области (например, области, комплементарной целевому домену молекулы gРНК), если он включает, по меньшей мере, одну инсерцию (вставку) или делецию на расстоянии примерно 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотида(ов) от эталонной области или частично или полностью совпадает с ней (например, содержит, по меньшей мере, одну инсерцию или делецию, в пределах 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидов от участка, комплементарного целевому домену молекулы gРНК, например молекулы gРНК, описанной здесь, или совпадает с ней).
Термин «профиль инделов", используемый здесь, относится к комбинации инделов, возникающих после воздействия композиции, содержащей молекулу gРНК. В одном варианте осуществления профиль инделов состоит из трех инделов, статистически наиболее часто представленных в зависимости от частоты формирования. В одном варианте осуществления профиль инделов состоит из пяти инделов с наибольшей частотой формирования. В одном варианте осуществления профиль инделов состоит из инделов, присутствующих с частотой более 5% от общего числа инделов всех отсеквенированных образцов. В одном варианте осуществления профиль инделов состоит из инделов, которые формируются с частотой более примерно 10% от общего количества инделов всех отсеквенированных образцов (то есть тех образцов, которые не состоят из немодифицированной эталонной последовательности нуклеиновой кислоты). В одном варианте осуществления профиль инделов включает в себя любые 3 из пяти наиболее часто встречающихся индексов. Профиль инделов может быть определен, например, путем секвенирования ДНК клеток популяции, подвергнутых воздействию молекулы gРНК.
«Неспецифичный индел» в качестве используемого здесь термина относится к инделу внутри или вблизи участка, не соответствующему целевой последовательности комплементарной целевому домену молекулы gРНК. Такие участки могут содержать, например, 1, 2, 3, 4, 5 или более нуклеотидов, не соответствующих последовательности целевого домена gРНК. В иллюстративных вариантав осуществления такие сайты обнаруживаются при использованием целенаправленного секвенирования участков, предсказанных компьютерным моделированием, которые не являются мишенями, или посредством метода инсерционного анализа, известного в данной области техники.
Термин «a» и «an» (неопределённый артикль, в англоязычном тексте) относится к одному или более чем одному (то есть, по меньшей мере, одного) грамматического объекта статьи. В качестве примера «элемент» (an element) означает один элемент или более одного элемента.
Термин «около, примерно», когда речь идет об измеряемом значении, таком как количество, временная продолжительность и т. д. предназначается для охвата изменений ±20% или в некоторых случаях ±10%, или в некоторых случаях ±5%, или в некоторых случаях ±1%, или в некоторых случаях ±0,1% от указанного значения, поскольку такие изменения подходят для выполнения раскрытых способов.
Термин «антиген» или «Ag» относится к молекуле, вызывающей иммунный ответ. Этот иммунный ответ может вызвать либо продуцирование антител, либо активацию специфических иммунологически компетентных клеток, либо и то и другое. Специалист в данной области поймет, что любая макромолекула, включая практически все белки или пептиды, может служить в качестве антигена. Кроме того, антигены могут быть получены при помощи рекомбинантной или геномной ДНК. Специалист в данной области техники поймет, что любая ДНК, содержащая целиком или частично нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, вызывающий иммунный ответ, таким образом, будет кодировать «антиген», поэтому данный термин используется здесь. Кроме того, специалист в данной области поймет, что антиген необязательно должен кодироваться исключительно полноразмерной нуклеотидной последовательностью гена. Легко увидеть, что настоящее изобретение включает использование частичных нуклеотидных последовательностей более чем одного гена и что эти нуклеотидные последовательности представлены в различных комбинациях для кодирования полипептидов, вызывающих желаемый иммунный ответ, но не ограничивается ими. Более того, квалифицированный специалист поймет, что антиген не обязательно должен кодироваться «геном» вообще. Легко увидеть, что антиген может быть синтезирован или получен из биологического образца или может быть макромолекулой, не являющейся полипептидом. Такой биологический образец может включать образец ткани, клетку или жидкость с другими биологическими компонентами, но не ограничивается ими.
Термин «аутологичный» относится к любому материалу, полученному от того же индивидуума, которому этот материал будет снова введён.
Термин «аллогенный» относится к любому материалу, полученному от другого животного того же вида, что и индивидуум, которому будет вводится материал. Два или более индивидуумов считаются аллогенными друг другу, когда гены в одном или нескольких локусах неидентичны. В некоторых аспектах аллогенный материал от особей одного и того же вида может быть в достаточной степени генетически неодинаковым, так что способен действовать в качестве антигена.
Термин «ксеногенный» относится к трансплантату, полученному от животного другого вида.
«Полученный из», в качестве термина используемого здесь, указывает на связь между первой и второй молекулами. Обычно это относится к структурному сходству между первой молекулой и второй молекулой и не включает ограничение на использование процесса или источника на первую молекулу, которая получена из второй молекулы.
Термин «кодирование» относится к присущему свойству конкретных последовательностей нуклеотидов в полинуклеотиде, таком как ген, кДНК или мРНК, быть использованным в качестве матрицы для синтеза других полимеров и макромолекул в биологических процессах, макромолекул, имеющих либо определенную последовательность нуклеотидов (например, gРНК, trРНК и мРНК) либо определенную последовательность аминокислот и вытекающих из этого биологических свойств. Таким образом, ген, кДНК или РНК кодирует белок, если транскрипция и трансляция мРНК, соответствующей этому гену, приводят к образованию белка в клетке или другой биологической системе. Как кодирующая цепь, нуклеотидная последовательность которой идентична последовательности мРНК и обычно предоставляется в списках последовательностей, так и некодирующая цепь, используемая в качестве матрицы для транскрипции гена или кДНК, может упоминаться как кодирующая белок или другой продукт этого гена или кДНК.
Если не указано иначе, «нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность» включает в себя все нуклеотидные последовательности, являющиеся вырожденными версиями друг друга, которые кодируют ту же самую аминокислотную последовательность. Фраза «нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок или РНК», может также включать интрон(ы) в той степени, в которой нуклеотидная последовательность, кодирующая белок, в некотором варианте включает интрон(ы).
Термины «эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» используются здесь взаимозаменяемо и относятся к количеству соединения, формулы, материала или композиции, как описано здесь, для достижения определенного биологического результата.
Термин «эндогенный» относится к любому материалу который происходит или образуется внутри организма, клетки, ткани или системы.
Термин «экзогенный» относится к любому материалу, введенному или произведенному вне организма, клетки, ткани или системы.
Термин «экспрессия» относится к транскрипции и/или трансляции определенной нуклеотидной последовательности, приводимой в действие промотором.
Термин «вектор трансфекции» относится к композиции материалов, содержащей изолированную нуклеиновую кислоту, причём эта композиция может быть использована для доставки изолированной нуклеиновой кислоты внутрь клетки. Многочисленные векторы, известные в данной области, включают линейные полинуклеотиды, полинуклеотиды, связанные с ионными или амфифильными соединениями, плазмиды и вирусы, но не ограничиваются ими. Таким образом, термин «вектор трансфекции» включает автономно реплицируемую плазмиду или вирус. Этот термин также должен истолкован в дальнейшем как включающий неплазмидные и невирусные соединения, облегчающие перенос нуклеиновой кислоты в клетки, такие как, например, соединения полилизина, липосомы и тому подобное. Примеры вирусных векторов переноса включают аденовирусные векторы, адено-ассоциированные вирусные векторы, ретровирусные векторы, лентивирусные векторы и тому подобное, но не ограничиваются ими.
Термин «вектор экспрессии» относится к вектору, содержащему рекомбинантный полинуклеотид, включающий последовательности контроля экспрессии, функционально связанные с нуклеотидной последовательностью, подлежащей экспрессии. Вектор экспрессии содержит достаточные цис-регуляторные элементы для контроля экспрессии; другие элементы для экспрессии могут быть предоставлены клеткой-хозяином или системой экспрессии in vitro. Экспрессирующие векторы включают в себя все вектора, известные в данной области техники, включая космиды, плазмиды (например, «голые» или содержащиеся в липосомах) и вирусы (например, лентивирусы, ретровирусы, аденовирусы и адено-ассоциированные вирусы), включающие рекомбинантный полинуклеотиды.
Термин «гомологичный» или "идентичный" относится к идентичности последовательности субъединиц между двумя полимерными молекулами, например между двумя молекулами нуклеиновой кислоты, такими как две молекулы ДНК или две молекулы РНК, или между двумя молекулами полипептида. Когда позиция субъединицы в обеих молекулах занято одной и той же мономерной субъединицей; например, если положение в каждой из двух молекул ДНК занято аденином, то они являются гомологичными или идентичными в этой позиции. Гомология между двумя последовательностями является прямой функцией числа совпадающих или гомологичных позиций; например, если половина (например, пять позиций при длине полимера 10 субъединиц) позиций в обоих последовательностях гомологичны, две последовательности гомологичны на 50%; если 90% позиций (например, 9 из 10) совпадают или гомологичны, две последовательности являются гомологичными на 90%.
Термин «изолированный/выделенный/полученный из» означает изменение или удаление из естественного состояния. Например, нуклеиновая кислота или пептид, естественно присутствующие в живом животном, не «изолированы», но одна и та же нуклеиновая кислота или пептид, частично или полностью отделенный от сосуществующих материалов его естественного состояния, является «изолированной/выделенной/полученной из». Выделенная нуклеиновая кислота или белок может существовать в практически очищенной форме или может существовать в неприродной среде, такой как, например, клетка-хозяин.
Термин «функционально связанный» или «контроль транскрипции» относится к функциональной связи между регуляторной последовательностью и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, приводящей к экспрессии последней. Например, первая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана со второй последовательностью нуклеиновой кислоты, когда первая последовательность нуклеиновой кислоты находится в функциональном взаимодействии со второй последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, промотор функционально связан с кодирующей последовательностью, если промотор влияет на транскрипцию или экспрессию кодирующей последовательности. Функционально связанные ДНК-последовательности могут быть смежными друг с другом или, например, если необходимо соединить две кодирующие белок области, находятся в одной и той же рамке считывания.
Термин «парентеральное» введение иммуногенной композиции включает, например, подкожную (sc), внутривенную (iv), внутримышечную (im) или интрастернальную инъекции, интрамуральные или инфузионные способы.
Термин «нуклеиновая кислота» или «полинуклеотид» относится к дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК) или рибонуклеиновой кислоте (РНК) и их полимерам в одно- или двухцепочечной форме. Если нет конкретного ограничения, этот термин охватывает нуклеиновые кислоты, которые содержат известные аналоги природных нуклеотидов и обладающие сходными связывающими свойствами, как эталонная нуклеиновая кислота, и метаболизируются аналогично природным нуклеотидам. Если не указано иначе, подразумевается, что конкретная последовательность нуклеиновой кислоты также неявно охватывает ее консервативно модифицированные варианты (например, замены вырожденных кодонов), аллели, ортологи, однонуклеотидные полиморфизмы (SNPs) и комплементарные последовательности, а также указанную последовательность. В частности, замены вырожденных кодонов могут достигаться путем генерации последовательностей, в которых третье положение одного или нескольких выбранных (или всех) кодонов замещено (случайным образом) любым из канонических нуклеозидов и/или дезоксиинозином (Batzer et al., Nucleic Acid Res., 19: 5081 (1991), Ohtsuka et al., J. Biol., Chem., 260: 2605-2608 (1985) и Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8: 91-98 (1994)).
Термины «пептид», «полипептид» и «белок» используются взаимозаменяемо и относятся к соединению, состоящему из аминокислотных остатков, ковалентно связанных пептидными связями. Белок или пептид должен содержать по меньшей мере две аминокислоты, при этом нет ограничения на максимальное количество аминокислот, входящих в последовательность белка или пептида. Полипептиды включают любой пептид или белок, содержащий две или более аминокислоты, соединенных друг с другом пептидными связями. Используемый здесь термин относится как к коротким последовательностям, обычно упоминаемым в данном уровне техники, например, как пептиды, олигопептиды и олигомеры, так и к более длинным цепям, обычно упоминаются в данном уровне техники как белки, представленные множеством типов. «Полипептиды» включают, например, биологически активные фрагменты, гомологичные в значительной степени полипептиды, олигопептиды, гомодимеры, гетеродимеры, варианты полипептидов, модифицированные полипептиды, производные полипептидов, аналоги, слитые/рекомбинантные белки и другие. Полипептид включает природный пептид, рекомбинантный пептид или их комбинацию.
Термин «промотор» относится к последовательности ДНК, распознаваемой синтетическим аппаратом клетки или принесённым синтетическим аппаратом, которая необходима для инициирования специфической транскрипции полинуклеотидной последовательности.
Термин «промотор/регуляторная последовательность» относится к последовательности нуклеиновой кислоты, необходимой для экспрессии гена, функционально связанного с промоторной/регуляторной последовательностью. В некоторых случаях эта последовательность может быть представлена промоторной последовательностью «кора», а в других случаях может также включать энхансерную последовательность и другие регуляторные элементы, необходимые для экспрессии продукта гена. Промотор/регуляторная последовательность может быть, например, такой, которая экспрессирует продукт гена ткане-специфическим образом.
Термин «конститутивный» промотор относится к нуклеотидной последовательности, которая, будучи функционально связанной с полинуклеотидом, кодирующим или идентифицирующим продукт гена, обеспечивает производство продукта гена при практически всех или всех физиологических условиях клетки.
Термин «индуцируемый» промотор относится к нуклеотидной последовательности, которая, будучи функционально связанной с полинуклеотидом, кодирующим или идентифицирующим продукт гена, обеспечивает производство продукта гена в значительной степени только тогда, когда соответствующий индуктор присутствует в клетке.
Термин «тканеспецифический» промотор относится к нуклеотидной последовательности, которая будучи функционально связанной с полинуклеотидом, кодирующим или идентифицирующим продукт гена, обеспечивает производство продукта гена в значительной степени только тогда, если клетка принадлежит к типу ткани, соответствующей промотору.
Используемый здесь в связи с матричной/информационной РНК (мРНК), РНК 5'-кэп (также называемый РНК-кэп, 7-метилгуанозин РНК кэп или m7G cap), представляет собой модифицированный гуаниновый нуклеотид, добавленный в «начало», или 5'-конец эукариотической матричной РНК сразу после начала транскрипции. 5'-кэп состоит из концевой группы, соединённой с первым транскрибируемым нуклеотидом. Его присутствие имеет решающее значение для распознавания мРНК рибосомой и защиты от РНКаз. Добавление кэпа связано с транскрипцией и происходит во время-транскрипции, причем транскрипция определяет ход кэпирования, а кэпирование влияет на ход транскрипции. Вскоре после начала транскрипции 5'-конец синтезируемой мРНК связывается с комплексом кэп-синтезирующих комплексов, ассоциированных с РНК-полимеразой. Этот ферментативный комплекс катализирует химические реакции, необходимые для кэпирования мРНК. Синтез протекает как многоступенчатая биохимическая реакция. Кэп-фрагмент может быть модифицирован для модуляции функциональных свойств мРНК, таких как её стабильность или эффективность трансляции.
Используемый здесь термин «транскрибируемая in vitro РНК» относится к РНК, предпочтительно к мРНК, которая была синтезирована in vitro. Как правило, транскрибируемую in vitro РНК получают при использовании вектора транскрипции in vitro. Вектор транскрипции in vitro содержит матрицу, используемую для получения транскрибируемой РНК in vitro.
Используемый здесь термин «поли(А)» представляет собой серию аденозинов, присоединенных полиаденилированием к мРНК. В предпочтительном варианте осуществления конструкции для скоротечной временнОй экспрессии, длина поли(А) последовательности составляет от 50 до 5000 (SEQ ID NO: 6596), предпочтительно более 64, более предпочтительно более 100, наиболее предпочтительно более 300 или 400. Поли(А) последовательности могут быть модифицированы химически или ферментативно для модуляции функциональных свойств мРНК, таких как локализация, стабильность или эффективность трансляции.
Используемый здесь термин «полиаденилирование» относится к ковалентному связыванию полиаденильной части или ее модифицированного варианта с молекулой матричной РНК. В эукариотических организмах большинство матричных РНК (мРНК) полиаденилируются на 3'-конце. 3’-поли(А)-хвост представляет собой длинную последовательность адениновых нуклеотидов (часто несколько сотен), добавляемых к пре-мРНК посредством действия фермента, поли(А)-полимеразы. У высших эукариот поли(А) хвост добавляется к транскриптам, которые содержат определенную последовательность, сигнал полиаденилирования. Поли(A)-хвост и связанный с ним белок способствуют защите мРНК от деградации экзонуклеазами. Полиаденилирование также важно для терминации транскрипции, экспорта мРНК из ядра и трансляции. Полиаденилирование происходит в ядре сразу после транскрипции ДНК в РНК, но дополнительно может также произойти позже в цитоплазме. После терминации транскрипции цепь мРНК разрезается под действием эндонуклеазного комплекса, связанного с РНК-полимеразой. Сайт разрезания обычно характеризуется наличием базовой последовательности AAUAAA вблизи сайта разрезания. После разрезания мРНК адезозиновые остатки добавляются к свободному 3'-концу в сайте разрезания.
Используемый здесь термин «кратковременная (transient)» относится к экспрессии неинтегрированного трансгена в течение нескольких часов, дней или недель, причём период экспрессии меньше, чем период времени для экспрессии гена, интегрированного в геном или содержащегося в стабильном репликоне плазмиды в клетке-хозяине.
Используемые здесь термины «лечить», «лечение» и «проводя лечение» относятся к уменьшению или улучшению прогрессирования, тяжести и/или продолжительности расстройства, например гемоглобинопатии, или улучшению одного или нескольких симптомов (предпочтительно одного или нескольких заметных симптомов) расстройства, например гемоглобинопатии, в результате введения одного или нескольких терапевтических агентов (например, одного или нескольких терапевтических агентов, таких как молекула gРНК, системы CRISPR или модифицированной клетки по изобретению). В конкретных вариантах осуществления термины «лечение», «лечение» и «проводя лечение» относятся к улучшению, по меньшей мере, одного измеримого физического параметра расстройства гемоглобинопатии, незаметного пациенту. В других вариантах осуществления термины «лечить», «лечение» и «проводя лечение» относятся к замедлению прогрессирования расстройства либо физически, например, путем стабилизации заметного симптома, либо физиологически, например, путем стабилизации физического параметра, или к обоим случаям. В других вариантах осуществления термины «лечить», «лечение» и «проводя лечение» относятся к восстановлению или стабилизации симптома гемоглобинопатии, например, серповидно-клеточной анемии или бета-талассемии.
Термин «сигнальный каскад/путь передачи сигнала» относится к биохимической взаимосвязи между различными молекулами передачи сигнала, которые играют роль в передаче сигнала от одной части клетки к другой части клетки. Фраза «рецептор клеточной поверхности» включает молекулы и комплексы молекул, способных принимать сигнал и передавать сигнал через мембрану клетки.
Термин «субъект» предназначен для включения живых организмов, в которых может быть выявлен иммунный ответ (например, млекопитающих, человека).
Термин «практически чистая клетка» (или популяция клеток) относится к клетке (популяции), которая практически не содержит других типов клеток. «Практически чистая клетка» также относится к клетке, которая была отделена от других типов клеток, с которыми она обычно ассоциирована в естественном состоянии. В некоторых случаях практически чистая популяция относится к гомогенной популяции клеток. В других случаях этот термин относится просто к клетке, которая была отделена от клеток, с которыми она естественным образом ассоциирована в их естественном состоянии. В некоторых аспектах клетки были культивированы in vitro. В других аспектах клетки не были культивированы in vitro.
Используемый здесь термин «терапевтический» означает лечение/лечебный. Терапевтический эффект достигается путем восстановления, подавления, ремиссии или искоренения болезненного состояния.
Используемый здесь термин «профилактика» означает предотвращение или предварительное лечение заболевания или состояния болезни.
Термин «трансфицированный» или «трансформированный» или «трансдуцированный» относится к способу, посредством которого экзогенная нуклеиновая кислота и/или белок переносится или вводится в клетку-хозяина. «Трансфицированная» или «трансформированная» или «трансдуцированная» клетка представляет собой трансфицированную, трансформированную или трансдуцированную клетку, содержащую экзогенную нуклеиновую кислоту и/или белок. Клетка включает в себя первоначальную материнскую клетку и ее потомство.
Термин «специфически связывается» относится к молекуле, распознающей и связывающейся с ее партнером по связыванию (например, белком или нуклеиновой кислотой), присутствующей в образце, при этом такая молекула практически не распознает или не связывает другие молекулы в образце.
Термин «биоэквивалент» относится к количеству агента, отличному от эталонного соединения, необходимого для получения эффекта, эквивалентного эффекту, полученному посредством эталонной дозы или эталонного количества эталонного соединения.
«Невосприимчивый», используемый здесь, относится к заболеванию, например гемоглобинопатии, которая не реагирует на лечение. В вариантах осуществления невосприимчивая гемоглобинопатия может быть устойчивой к лечению до или в начале лечения. В других вариантах невосприимчивая гемоглобинопатия может стать устойчивой во время лечения. Невосприимчивую гемоглобинопатию называют также устойчивой гемоглобинопатией.
«Рецидив», как используется здесь, относится к возобновлению болезни (например, гемоглобинопатии) или возобновлению признаков и симптомов заболевания, такого как гемоглобинопатия, после периода улучшения, например, после предшествующего терапевтического лечения, например, терапии гемоглобинопатии.
«Диапазоны»: во всем этом раскрытии различные аспекты изобретения могут быть представлены в формате диапазонов (от и до). Следует понимать, что описание в формате диапазона представлено для удобства и краткости и не должно истолковываться как негибкое ограничение объема изобретения. Соответственно, описание диапазона следует рассматривать как конкретно раскрывающее все возможные поддиапазоны, а также отдельные числовые значения в этом диапазоне. Например, описание диапазона, такого как от 1 до 6, следует рассматривать как специально раскрытые поддиапазоны, такие как от 1 до 3, от 1 до 4, от 1 до 5, от 2 до 4, от 2 до 6, от 3 до 6 и т. д., а также отдельные номера в этом диапазоне, например, 1, 2, 2,7, 3, 4, 5, 5,3 и 6. В качестве другого примера диапазон, такой как идентификация 95-99%, включает в себя значения с 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью и включает поддиапазоны, такие как 96-99%, 96-98%, 96-97%, 97-99%, 97-98% и 98-99% идентичности. Это правило применимо вне зависимости от ширины диапазона.
Термин «BCL11a» относится к ДНК-связывающему белку B-клеточной лимфомы/лейкемии 11A, специфичному к последовательности проксимального района «кора» промотора РНК-полимеразы II, гену, кодирующему указанный белок вместе со всеми интронами и экзонами. Этот ген кодирует белок с «цинковыми пальцами» типа C2H2. Было установлено, что BCL11A играет роль в подавлении продукции фетального гемоглобина. BCL11a также известен как B-Cell CLL/лимфома 11A (белок с «цинковыми пальцами»), CTIP1, EVI9, белковый гомолог сайта экотропной вирусной интеграции 9, COUP-TF-взаимодействующий белок 1, белок «с цинковыми пальцами» 856, KIAA1809, BCL-11A, ZNF856, EVI-9 и белок B-Cell CLL/лимфомы 11A. Термин охватывает все изоформы и варианты сплайсинга BLC11a. Ген человека, кодирующий BCL11a, картирован в хромосомной позиции 2p16.1 (Ensembl). Человеческие и мышиные аминокислотные и нуклеотидные последовательности можно найти в публичной базе данных, такой как GenBank, UniProt и Swiss-Prot, а геномная последовательность BCL11a человека может быть найдена в GenBank в NC_000002.12. Ген BCL11a, включая все интроны и экзоны, указывается по отношению к этой позиции в геноме. Существует несколько известных изотипов BCL11a. Последовательность мРНК, кодирующая изоформу 1 человеческого BCL11a, можно найти в NM_022893. Пептидная последовательность изоформы 1 BCL11a человека такова:
10 20 30 40 50
MSRRKQGKPQ HLSKREFSPE PLEAILTDDE PDHGPLGAPE GDHDLLTCGQ
60 70 80 90 100
CQMNFPLGDI LIFIEHKRKQ CNGSLCLEKA VDKPPSPSPI EMKKASNPVE
110 120 130 140 150
VGIQVTPEDD DCLSTSSRGI CPKQEHIADK LLHWRGLSSP RSAHGALIPT
160 170 180 190 200
PGMSAEYAPQ GICKDEPSSY TCTTCKQPFT SAWFLLQHAQ NTHGLRIYLE
210 220 230 240 250
SEHGSPLTPR VGIPSGLGAE CPSQPPLHGI HIADNNPFNL LRIPGSVSRE
260 270 280 290 300
ASGLAEGRFP PTPPLFSPPP RHHLDPHRIE RLGAEEMALA THHPSAFDRV
310 320 330 340 350
LRLNPMAMEP PAMDFSRRLR ELAGNTSSPP LSPGRPSPMQ RLLQPFQPGS
360 370 380 390 400
KPPFLATPPL PPLQSAPPPS QPPVKSKSCE FCGKTFKFQS NLVVHRRSHT
410 420 430 440 450
GEKPYKCNLC DHACTQASKL KRHMKTHMHK SSPMTVKSDD GLSTASSPEP
460 470 480 490 500
GTSDLVGSAS SALKSVVAKF KSENDPNLIP ENGDEEEEED DEEEEEEEEE
510 520 530 540 550
EEEELTESER VDYGFGLSLE AARHHENSSR GAVVGVGDES RALPDVMQGM
560 570 580 590 600
VLSSMQHFSE AFHQVLGEKH KRGHLAEAEG HRDTCDEDSV AGESDRIDDG
610 620 630 640 650
TVNGRGCSPG ESASGGLSKK LLLGSPSSLS PFSKRIKLEK EFDLPPAAMP
660 670 680 690 700
NTENVYSQWL AGYAASRQLK DPFLSFGDSR QSPFASSSEH SSENGSLRFS
710 720 730 740 750
TPPGELDGGI SGRSGTGSGG STPHISGPGP GRPSSKEGRR SDTCEYCGKV
760 770 780 790 800
FKNCSNLTVH RRSHTGERPY KCELCNYACA QSSKLTRHMK THGQVGKDVY
810 820 830
KCEICKMPFS VYSTLEKHMK KWHSDRVLNN DIKTE
SEQ ID NO: 2005 (Идентификатор Q9H165-1 и NM_022893.3, а также ADL14508.1).
Последовательности других изоформ белков BCL11a представлены в:
Изоформа 2: Q9H165-2
Изоформа 3: Q9H165-3
Изоформа 4: Q9H165-4
Изоформа 5: Q9H165-5
Изоформа 6: Q9H165-6
Как термин, используемый здесь, белок BCL11a человека также включает белки, имеющие по всей своей длине по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с изоформами 1-6 BCL11a, если такие белки по-прежнему имеют по меньшей мере одну из функций BCL11a.
Используемый здесь термин «локус глобина» относится к области хромосомы человека 11, содержащей гены эмбрионального (ε), фетальных (G (γ) и A (γ)), взрослых (γ и β) типов глобина, областей контроля локуса и сайтов гиперчувствительности ДНКазы I.
Термин «комплементарный», используемый в связи с нуклеиновой кислотой, относится к спариванию оснований А с Т или U и С с С. Термин «комплементарный» относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые являются полностью комплементарными, то есть образуют А T (А U) пары и G C пары по всей эталонной последовательности, а также молекулы, которые являются по меньшей мере, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% комплементарными.
Термин «HPFH» относится к наследственной персистенции фетального гемоглобина и характеризуется повышенным фетальным гемоглобином в эритроцитах взрослого. Термин «область HPFH» относится к сайту генома, который при модификации (например, мутированный или имеющий делецию) вызывает увеличение продукции HbF во взрослых эритроцитах и включает в себя сайты HPFH, описанные в литературе (см., например, Online Mendelian Inheritance in Man: http://www.omim.org/entry/141749)). В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой областью внутри кластера гена бета-глобина на хромосоме 11p15 или включает его. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH находится внутри или охватывает, по меньшей мере, часть гена дельта-глобина. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область промотора HBG1. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область промотора HBG1. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область, описанную в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой точку область HPFH Френча (с делецией), как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой алжирскую HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой Шри-Ланка HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой HPFH-3, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой HPFH-2, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH-1 представляет собой HPFH-3, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой HPFH Шри-Ланка (δβ)0- талассемию HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой сицилийскую (δβ)0-талассемию HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой македонскую (δβ) 0-талассемию HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой курдскую β0-талассемию HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область, расположенную в Chr11: 5213874-5214400 (hg18). В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область, расположенную в Chr11: 5215943-5215046 (hg18). В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область, расположенную в Chr11: 5234390-5238486 (hg38).
Термин «энхансер BCL11a», используемый здесь, относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая влияет, например, увеличивает экспрессию или функцию BCL11a, как описано, например, в Bauer et al., Science, vol. 342, 2013, стр. 253-257. Энхансер BCL11a может работать, например, только в определенных типах клеток, например, клетках эритроидной линии. Одним из примеров энхансера BCL11a является последовательность нуклеиновой кислоты между экзоном 2 и экзоном 3 гена гена BCL11a (например, нуклеиновая кислота в данных позициях или им соответствующих +55: Chr2: 60497676- 60498941; +58: Chr2: 60494251- 60495546; +62: Chr2: 60490409- 60491734, как указано в hg38). В одном варианте осуществления BCL11a энхансер представляет собой область +62 последовательности нуклеиновой кислоты между экзоном 2 и экзоном 3 гена BCL11a. В одном варианте осуществления BCL11a энхансер является областью +58 последовательности нуклеиновой кислоты между экзоном 2 и экзоном 3 гена BCL11a. В одном варианте осуществления BCL11a Энхансер является областью +55 последовательности нуклеиновой кислоты между экзоном 2 и экзоном 3 гена BCL11a.
Термины «гемопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники» или «HSPC» используются взаимозаменяемо и относятся к популяции клеток, содержащих как гемопоэтические стволовые клетки («HSCs»), так и гемопоэтические клетки-предшественники («HPCs»). Такие клетки характеризуются, например, как CD34+клетки. В примерных вариантах осуществления HSPC выделяют из костного мозга. В других примерных вариантах осуществления HSPC изолированы от периферической крови. В других примерных вариантах осуществления HSPC выделяют из пуповинной крови.
Термин «соединение, способствующее экспансии стволовых клеток», используемый здесь, относится к соединению, вызывающему пролиферацию клеток, например HSPC, HSC и/или HPC, например, возрастание численности клеток с более высокой скоростью относительно тех же типов клеток, но при отсутствии указанного агента. В одном иллюстративном аспекте соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, является ингибитором сигнального каскада арил-гидрокарбонового рецептора. Дополнительные примеры соединений, способствующих экспансии стволовых клеток, приведены ниже. В вариантах осуществления пролиферация, например, увеличение численности, выполняется ex vivo.
«Трансплантация» или «трансплантант» относится к включению клетки или ткани, например популяции HSPC, в организм реципиента, например, млекопитающего или человека. В одном примере трансплантатция включает в себя рост, экспансию и/или дифференцировку привитых клеток у реципиента. В одном примере, трансплантация HSPC включает рост, экспансию и дифференцировку указанных HSPC в эритроидные клетки в организме реципиента.
Термин «гемопоэтические клетки-предшественники» (или прогениторные клетки) (HSC), используемый здесь, относится к примитивным гематопоэтическим клеткам, обладающим ограниченной способностью к самовоспроизведению и плюрипотентностью - потенциалом к дифференцировке в клетки разных линий (например, миелоидной, лимфоидной), в клетки монолинии (например, миелоидной или лимфоидной) или ограниченной дифференцировке клеточного типа (например, в эритроидный предшественника) в зависимости от позиции внутри гемопоэтической иерархии (Doulatov et al., Cell Stem Cell 2012).
Термин «гемопоэтические стволовые клетки» (HSC), используемый здесь, относится к незрелым клеткам крови, обладающим способностью к самообновлению и дифференцировке в более зрелые клетки крови, включающие гранулоциты (например, промиелоциты, нейтрофилы, эозинофилы, базофилы), эритроциты (например, ретикулоциты, эритроциты), тромбоциты (например, мегакариобласты, тромбоциты, продуцирующие мегакариоциты, тромбоциты) и моноциты (например, моноциты, макрофаги). HSCs взаимозаменяемо описываются как стволовые клетки во всем описании. В данной области техники известно, что такие клетки могут включать или не включать CD34+ клетки. CD34+ клетки являются незрелыми клетками, экспрессирующими маркер поверхности клетки CD34. Считается, что клетки CD34+ включают субпопуляцию клеток с указанными выше свойствами стволовых клеток. В данной области техники хорошо известно, что HSC представляют собой мультипотентные клетки, которые могут давать начало примитивным клеткам-предшественникам (например, мультипотентным клеткам-предшественникам) и/или клеткам-предшественникам, связанным с определенными гематопоэзными линиями (например, лимфоидными клетками-предшественниками). Стволовые клетки, дающие начало специфическим гематопоэтическим линиям, могут быть линиями Т-клеток, линиями В-клеток, линиями дендритных клеток, линиями клеток Лангерганса и/или лимфоидной тканеспецифической линией макрофагов. Кроме того, HSC также могут принадлежать к долгосрочным HSC (LT-HSC) и краткосрочным HSC (ST-HSC). ST-HSC являются более активными и более пролиферирующими, чем LT-HSC. Тем не менее, LT-HSC обладают неограниченным самовоспроизведением (то есть, они могут находится в зрелом состоянии неограниченное время), тогда как ST-HSC обладают ограниченным самовоспроизведением (то есть они выживают только в течение ограниченного периода времени). Любая из этих HSC может использоваться в любом из способов, описанных здесь. Необязательно, ST-HSC могут быть использованы, поскольку они являются высокопролиферативными и, таким образом, быстро увеличивают численность HSC и их потомства. Гематопоэтические стволовые клетки необязательно получают из продуктов крови. Продукт крови включает продукт, полученный из организма или органа, содержащего клетки гемопоэтического происхождения. К таким источникам относятся нефракционированный костный мозг, пуповина, периферическая кровь (например, мобилизованная периферическая кровь, например, мобилизованная мобилизационным агентом, таким как G-CSF или Plerixafor® (AMD3100)), печень, тимус, лимфа и селезенка. Все вышеупомянутые сырые или нефракционированные продукты крови могут быть обогащены клетками, обладающими характеристиками гемопоэтических стволовых клеток, с помощью способов, известным специалистам в данной области техники. В одном варианте осуществления HSC характеризуются как CD34+/CD38-/CD90+/CD45RA-. В вариантах осуществления клетки HSC характеризуются как CD34+/CD90+/CD49f+ клетки.
«Экспансия» или «увеличиться» в контексте клеток относится к увеличению численности определённого типа\типов клеток из первоначальной клеточной популяции, который(ые) может быть или не быть идентичным(и) первоначальному. Исходные клетки, подвергнутые экспансии, могут быть не такими, как клетки, полученные при экспансии.
«Клеточная популяция» относится к эукариотическом клеткам млекопитающего, предпочтительно человека, выделенным из биологических источников, например, выделеннам из крови или ткани и происходящим из более чем одной клетки.
«Обогащенный» при использовании в контексте клеточной популяции относится к популяции клеток, выбранной на основе наличия одного или нескольких маркеров, например CD34+.
Термин «CD34+ клетки» относится к клеткам, экспрессирующим на своей поверхности CD34 маркер. CD34+ клетки могут быть обнаружены и подсчитаны с использованием, например, проточной цитометрии и флуоресцентно меченых анти-CD34-антител.
«Обогащенная клетками CD34+» означает, что популяция клеток была выбрана на основе наличия маркера CD34. Соответственно, процент клеток CD34+ в популяции клеток после отбора выше, чем был процент CD34+ клеток в начальной популяции клеток, до того этапа, на котором была проведена селекция на основе маркеров CD34. Например, клетки CD34+ могут представлять собой по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80% или по меньшей мере 90% клеток в популяции клеток, обогащенной клетками CD34+.
Термины «F клетка» и «F-клетка» относятся к клеткам, обычно эритроцитам (например, красным кровяным клеткам), которые содержат и/или производят (например, экспрессируют) фетальный гемоглобин. Например, F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или продуцирует обнаруживаемые уровни фетального гемоглобина. Например, F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает не менее 5 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 6 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 7 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 8 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 9 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина. Уровни фетального гемоглобина могут быть измерены с использованием анализа, описанного здесь, или другим способом, известным в данной области техники, например, проточной цитометрией с использованием реагента для обнаружения фетального гемоглобина, высокоэффективной жидкостной хроматографии, масс-спектрометрии или ферментного иммуносорбентного анализа.
Если не указано иначе, все координаты генома или хромосомы соответствуют hg38.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Молекулы, композиции и способы gРНК, описанные здесь, относятся к редактированию генома в эукариотических клетках с использованием системы CRISPR/Cas9. В частности, молекулы, композиции и способы, описанные здесь, относятся к регуляции уровней глобина и применимы, например, для регуляции экспрессии и белкового синтеза генов глобина. Молекулы gРНК, композиции и способы могут быть применимы для лечения гемоглобинопатий.
I. Молекулы gРНК
Молекула gРНК может иметь несколько доменов, как описано ниже более подробно, но молекула gРНК обычно содержит, по меньшей мере, домен crРНК (содержащий целевой домен) и tracr. Молекулы gРНК по изобретению, используемые в качестве компонента системы CRISPR, применимы для модификации (например, модификации последовательности) ДНК внутри или вблизи целевого сайта. Такие модификации включают делеции и/или инсерции, приводящие, например, к уменьшению или прекращению экспрессии функционального продукта гена, последовательность которого содержит целевой сайт. Такие применения и дополнительные применения описаны ниже.
В одном варианте осуществления одиночная нацеливающая, или sgРНК содержит предпочтительно от 5’до 3': crРНК (содержащую целевой домен, комплементарный целевой последовательности, и область, формирующую часть шпильки (то есть области шпильки crРНК)); петлю; и tracr (содержащий домен, комплементарный области шпильки crРНК, и домен, который дополнительно связывает нуклеазу или другую эффекторную молекулу, например молекулу Cas, например молекулу aCas9) и может принимать следующий формат (от 5' до 3'):
[целевой домен]-[область шпильки crРНК]-[первое необязательное удлинение области шпильки]-[петля]-[первое необязательное удлинение tracr]-[область шпильки tracr]-[связывающий домен посадки нуклеазы tracr].
В вариантах осуществления связывающий нуклеазу домен tracr связывается с белком Cas, например, с белком Cas9.
В одном варианте осуществления двойная нацеливающая или dgРНК содержит два полинуклеотида; первый, предпочтительно от 5’до 3': crРНК (содержащая целевой домен, комплементарный целевой последовательности, и область, формирующую часть шпильки (то есть области шпильки crРНК), и второй, предпочтительно от 5’до 3': tracr (содержащий домен, комплементарный области шпильки crРНК, и домен, который дополнительно связывает нуклеазу или другую эффекторную молекулу, например молекулу Cas, например молекулу Cas9) и может принимать следующий формат (от 5' до 3'):
Полинуклеотид 1 (crРНК): [целевой домен]-[область шпильки crРНК]-[первое необязательное удлинение области шпильки]-[второе необязательное удлинение области шпильки]
Полинуклеотид 2 (tracr): [первое необязательное удлинение области tracr]-[область шпильки tracr]-[tracr домен связывания с нуклеазой].
В вариантах осуществления tracr, домен связывания с нуклеазой связывается с белком Cas, например, с белком Cas9. В некоторых аспектах целевой домен содержит или состоит из последовательности целевого домена, описанной здесь, например, целевого домена, описанного в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6 или целевого домена, включающего или состоящего из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 (предпочтительно 20) последовательных нуклеотидов целевого домена последовательности, описанной в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
В некоторых аспектах шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит от 5’до 3': GUUUUAGAGCUA (SEQ ID NO: 6584).
В некоторых аспектах шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит от 5’до 3': GUUUAAGAGCUA (SEQ ID NO: 6585).
В некоторых аспектах петля содержит от 5’до 3': GAAA (SEQ ID NO: 6588).
В некоторых аспектах tracr содержит от 5’до 3': UAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6589) и предпочтительно используется в молекуле gРНК, содержащей SEQ ID NO 6584.
В некоторых аспектах tracr содержит от 5’до 3': UAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6590) и предпочтительно используется в молекуле gРНК, содержащей SEQ ID NO 6585.
В некоторых аспектах, gРНК также может содержать на 3'-конце дополнительные U (урацил-содержащие) нуклеиновые кислоты. Например, gРНК может содержать дополнительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 урацил-нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2006). В одном варианте осуществления gРНК содержит дополнительные 4 урациловые нуклеиновые кислоты на 3'-конце. В случае dgРНК один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий целевой домен и полинуклеотид, содержащий tracr), могут включать на 3'-конце дополнительные U нуклеиновые кислоты. Например, в случае dgРНК, один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий нацеливающий домен и полинуклеотид, содержащий tracr), может содержать дополнительные 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 U нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2006). В одном варианте осуществления в случае dgРНК один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, включающий целевой домен и полинуклеотид, содержащий tracr), содержат дополнительные 4 U-нуклеиновые кислоты на 3'-конце. В варианте осуществления dgРНК только полинуклеотид, содержащий tracr, содержит дополнительную U-нуклеиновую кислоту (кислоты), например, 4 U-нуклеиновых кислот. В варианте осуществления dgРНК только полинуклеотид, содержащий целевой домен, содержит дополнительную U-нуклеиновую кислоту (кислоты). В варианте осуществления dgРНК оба полинуклеотида, как содержащий целевой домен так и полинуклеотид, содержащий tracr, содержат дополнительные U-нуклеиновые кислоты, например, 4 U нуклеиновых кислоты.
В некоторых аспектах gРНК также может содержать на 3'-конце дополнительные А (аденин)-нуклеиновые кислоты. Например, gРНК может содержать дополнительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 А-нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2007). В одном варианте осуществления gРНК содержит дополнительные 4 A-нуклеиновые кислоты на 3'-конце. В случае dgРНК, один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий целевой домен и полинуклеотид, содержащий tracr), могут содержать на 3'-конце дополнительные А-нуклеиновые кислоты. Например, в случае dgРНК, один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий нацеливающий домен и полинуклеотид, содержащий tracr), может содержать дополнительные 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2007). В одном варианте осуществления, в случае dgРНК, один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий целевой домен и полинуклеотид, содержащий tracr) содержит дополнительные 4 A-нуклеиновые кислоты на 3'-конце. В варианте осуществления dgРНК только полинуклеотид, содержащий tracr, содержит дополнительную нуклеиновую кислоту(ы), например, 4 А-нуклеиновых кислот. В предположении dgРНК только полинуклеотид, содержащий целевой домен, содержит дополнительную нуклеиновую кислоту(ы). В одном из вариантов осуществления dgРНК оба полинуклеотида, как содержащий целевой домен, так и полинуклеотид, содержащий tracr, содержат дополнительные A-нуклеиновые кислоты, например 4 А-нуклеиновых кислоты.
В вариантах осуществления один или несколько полинуклеотидов молекулы gРНК могут содержать кэп на 5'-конце.
В одном варианте осуществления мономолекулярная или sgРНК содержит предпочтительно от 5'до 3': crРНК (которая содержит целевой домен, комплементарный целевой последовательности, область шпильки crРНК, первое удлинение шпильки, петля, первое удлинение tracr (который содержит домен, комплементарный, по меньшей мере, части первого удлинения шпильки) и tracr (который содержит домен, комплементарный области шпильки crРНК, и домен, который дополнительно связывает молекулу Cas9). В некоторых аспектах целевой домен содержит описанную здесь последовательность целевого домена, например целевой домен, описанный в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6, или целевой домен, включающий или состоящий из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 (предпочтительно 20) последовательных нуклеотидов последовательности целевого домена, описанной в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6, например 3' 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 (предпочтительно 20) последовательных нуклеотидов последовательности целевого домена, описанной в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
В аспектах, включающих в себя первое удлинение шпильки и/или первое удлинение tracr, последовательности шпильки, петли и tracr могут быть такими, как описано выше. В общем случае, может быть использовано любое первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr при условии, что они являются комплементарными. В вариантах осуществления первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr состоят из 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более комплементарных нуклеотидов.
В некоторых аспектах первое удлинение шпильки содержит от 5'до 3': UGCUG (SEQ ID NO: 6586). В некоторых аспектах первое удлинение шпильки состоит из SEQ ID NO: 6586.
В некоторых аспектах первое удлинение tracr содержит от 5’до 3': CAGCA (SEQ ID NO: 6591). В некоторых аспектах первое удлинение tracr состоит из SEQ ID NO: 6591.
В одном варианте осуществления dgРНК содержит две молекулы нуклеиновой кислоты. В некоторых аспектах dgРНК содержит первую нуклеиновую кислоту, включающую предпочтительно от 5’до 3': целевой домен, комплементарный целевой последовательности; область шпильки crРНК; возможно, первое удлинение шпильки; и, необязательно, второе удлинение шпильки; и вторую нуклеиновую кислоту (которая может упоминаться здесь как tracr) которая содержит по меньшей мере домен, связывающий молекулу Cas, например, молекулу Cas9, и содержащую предпочтительно от 5'до 3': необязательное первое удлинение tracr; и tracr (который содержит домен, комплементарный области шпильки crРНК, и домен, который дополнительно связывает молекулу Cas, например, Cas9). Вторая нуклеиновая кислота может дополнительно содержать на 3'-конце (например, 3' к tracr) дополнительные U-нуклеиновые кислоты. Например, tracr может содержать дополнительные 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 U-нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2006) (например, 3' к tracr). Вторая нуклеиновая кислота может дополнительно или альтернативно содержать на 3'-конце (например, 3' к tracr) дополнительные А-нуклеиновыех кислоты. Например, tracr может содержать дополнительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 A-нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2007) (например, 3’к tracr). В некоторых аспектах целевой домен включает последовательность целевого домена, описанную здесь, например, целевой домен, представленный в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6, или целевой домен, содержащий или состоящий из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 (предпочтительно 20) последовательных нуклеотидов последовательности целевого домена, описанной в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
В аспектах, связанных с dgРНК, crРНК область шпильки, необязательное первое удлинение шпильки, необязательное первое удлинения tracr и последовательности tracr могут быть такими, как описано выше.
В некоторых аспектах необязательное второе удлинение шпильки содержит от 5’до 3': UUUUG (SEQ ID NO: 6587).
В вариантах осуществления 3'-концевые 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов, 5'-концевые 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов или 3'- и 5'-концевые 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов молекулы gРНК (а также в случае молекулы dgРНК, полинуклеотида содержащего целевой домен и/или полинуклеотида, содержащего tracr), являются модифицированными нуклеиновыми кислотами, как описано более подробно в разделе XIII ниже. Домены кратко обсуждаются ниже.
1) Целевой домен:
Руководство по выбору целевых доменов можно найти, например, в Fu Y el al. NAT BIOTECHNOL 2014 (doi: 10.1038/ nbt.2808) и Sternberg SH el al. NATURE 2014 (doi: 10.1038/ naturel3011).
Целевой домен содержит комплементарную нуклеотидную последовательность, например, по меньшей мере 80, 85, 90, 95 или 99% комплементарную, или, например, полностью комплементарную целевой последовательности-мишени нуклеиновой кислоты. Целевой домен является частью молекулы РНК и поэтому содержит основание урацил (U), тогда как любая ДНК, кодирующая молекулу gРНК, содержит основание тимин (T). Не ограничиваясь теорией, считается, что комплементарность целевого домена с целевой последовательностью вносит свой вклад в специфику взаимодействия молекулы gРНК/Cas9 с целевой нуклеиновой кислотой-мишенью. Понятно, что при спаривании целевого домена и целевой последовательности основания урацила в целевом домене будут связываться с основаниями аденина в целевой последовательности.
В варианте осуществления длина целевого домена составляет от 5 до 50, например, от 10 до 40, например, от 10 до 30, например, от 15 до 30, например от 15 до 25 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 16 нуклеотидов. В одном из вариантов осуществления длина целевого домена составляет 17 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 18 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 19 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 20 нуклеотидов. В одном из вариантов осуществления длина целевого домена составляет 21 нуклеотид. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 22 нуклеотида. В варианте осуществления длина целевого домена составляет 23 нуклеотида. В варианте осуществления длина целевого домена составляет 24 нуклеотида по длине. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 25 нуклеотидов. В вариантах осуществления вышеупомянутые 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов содержат 5'-16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов целевого домена, описанного в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6. В вариантах осуществления вышеупомянутые 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов содержат 3'-16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов из целевого домена, описанного в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6. Не ограничиваясь теорией, считается, что 8, 9, 10, 11 или 12 нуклеиновых кислот целевого домена, расположенных на 3'-конце целевого домена, важны для нацеливания на целевую последовательность и, таким образом, могут называться «кором» (core), «основной нацеливающей» областью целевого домена. В одном варианте осуществления «кор», основная нацеливающая область целевого домена полностью комплементарна целевой последовательности.
Цепь целевой нуклеиновой кислоты, к которой комплементарен целевой домен, обозначается здесь как целевая последовательность (или последовательность-мишень). В некоторых аспектах целевая последовательность расположена на хромосоме, например, находится внутри гена. В некоторых аспектах целевая последовательность расположена внутри экзона гена. В некоторых аспектах целевая последовательность расположена внутри интрона гена. В некоторых аспектах целевая последовательность или расположена вблизи (например, в пределах 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или 1000 нуклеиновых кислот) от сайта связывания регуляторного элемента, например промотора или сайта связывания фактора транскрипции, или представляющего интерес гена. Некоторые или все нуклеотиды домена могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную в разделе XIII настоящего документа.
2) Область шпильки crРНК:
Шпилька формируется из частей как crРНК, так и tracr. Область шпильки crРНК комплементарна части tracr и в вариантах осуществления комплементарна в достаточной степени части tracr для образования дуплексной области по меньшей мере в некоторых физиологических условиях, например, в нормальных физиологических условиях. В одном варианте осуществления область шпильки crРНК имеет длину от 5 до 30 нуклеотидов. В одном варианте осуществления область шпильки crРНК имеет длину от 5 до 25 нуклеотидов. Область шпильки crРНК может быть гомологична естественной последовательности повторов бактериальной системы CRISPR или быть её производной. В одном из вариантов осуществления область шпильки, описанная здесь, имеет, по меньшей мере, 50% гомологии с областью шпильки crРНК S. pyogenes или S. thermophilus.
В одном варианте осуществления шпильки, например область шпильки crРНК, содержит SEQ ID NO: 6584. В одном варианте осуществления шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80 %, 85%, 90%, 95% или 99% гомологии с SEQ ID NO: 6584. В одном варианте осуществления шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10, или 11 нуклеотидов SEQ ID NO: 6584. В одном варианте осуществления шпилька, например область шпильки crРНК, содержит SEQ ID NO: 6585. В одном варианте осуществления шпилька содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% гомологии с SEQ ID NO: 6585. В одном варианте осуществления шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 нуклеотидов SEQ ID NO: 6585.
Некоторые или все нуклеотиды домена могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную здесь в разделе XIII.
3) первое удлинение шпильки
При использовании tracr, содержащего первое удлинение tracr, crРНК может содержать первое удлинение шпильки. В общем случае, может быть использовано любое первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr при условии, что они являются комплементарными. В вариантах осуществления первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr состоят из 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более комплементарных нуклеотидов.
Первое удлинение шпильки может содержать нуклеотиды, которые комплементарны, например, на 80%, 85%, 90%, 95% 99%, или, например, полностью комплементарны нуклеотидам первого удлинения tracr. В некоторых аспектах первые нуклеотиды удлинения шпильки, гибридизующиеся с комплементарными нуклеотидами первого удлинения tracr, являются смежными. В некоторых аспектах первые нуклеотиды удлинения шпильки, которые гибридизуются с комплементарными нуклеотидами первого удлинения tracrа, являются прерывистыми, например, содержат две или более областей гибридизации, разделенных нуклеотидами, которые не образуют попарного спаривания с нуклеотидами первого удлинения tracr. В некоторых аспектах первое удлинение шпильки содержит по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более нуклеотидов. В некоторых аспектах первое удлинение шпильки содержит от 5’до 3': UGCUG (SEQ ID NO: 6586). В некоторых аспектах первое удлинение шпильки состоит из SEQ ID NO: 6586. В некоторых аспектах первое удлинение шпильки включает нуклеиновую кислоту, которая обладает, по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95% или 99% гомологией к SEQ ID NO: 6586.
Некоторые или все нуклеотиды первого удлинения tracr могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную здесь в разделе XIII.
3) Петля
Петля служит для соединения области шпильки crРНК (или, при необходимости, первого удлинения шпильки, если оно присутствует) с tracr (или, возможно, первым удлинением tracr, если оно присутствует) в sgРНК. Петля может соединять область шпильки crРНК и tracr ковалентно или нековалентно. В одном варианте осуществления связь является ковалентной. В одном варианте осуществления петля ковалентно соединяет область шпильки crРНК и tracr. В одном варианте осуществления петля ковалентно соединяет первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr. В одном из вариантов осуществления петля представляет собой или содержит ковалентную связь, расположенную между областью шпильки crРНК и доменом tracr, который гибридизуется с областью шпильки crРНК. Как правило, петля содержит один или несколько, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов.
В молекулах dgРНК две молекулы могут быть связаны при гибридизации между по меньшей мере частью crРНК (например, областью шпильки crРНК) и по меньшей мере частью tracr (например, доменом tracr, комплементарным области шпильки crРНК).
Широкое разнообразие петель подходит для использования в sgРНКs. Петли могут состоять из ковалентной связи или быть короткими, один или несколько нуклеотидов в длину, например, 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов. В одном варианте осуществления петля представляет собой 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 или 25 или более нуклеотидов. В одном варианте осуществления петля представляет собой от 2 до 50, от 2 до 40, от 2 до 30, от 2 до 20, от 2 до 10 или от 2 до 5 нуклеотидов. В одном варианте осуществления петля гомологична естественной последовательности или является ее производной. В одном из вариантов осуществления изобретения петля имеет гомологию не менее 50% с петлёй, описанной здесь. В одном варианте осуществления петля содержит SEQ ID NO: 6588.
Некоторые или все нуклеотиды домена могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную здесь в разделе XIII.
4) Второе удлинение шпильки
В одном варианте осуществления dgРНК может содержать дополнительную последовательность, 3' по отношению к области шпильки crРНК или, если присутствует, к первому удлинению шпильки, упоминаемую здесь как второе удлинение шпильки. В варианте осуществления второе удлинение шпильки имеет длину 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5 или 2-4 нуклеотидов. В одном варианте осуществления второе удлинение шпильки имеет длину 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более нуклеотидов. В варианте осуществления второе удлинение шпильки содержит SEQ ID NO: 6587.
5) Tracr:
Tracr представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, необходимую для связывания нуклеазы, например, Cas9. Не ограничиваясь теорией, считается, что каждый вид Cas9 связывается с определенной последовательностью tracr. Последовательности tracr используются как в sgРНК, так и в dgРНК системах. В одном варианте осуществления tracr содержит последовательность соответствующую или происходящую из S. pyogenes tracr. В некоторых аспектах tracr имеет область, которая гибридизуется с областью шпильки crРНК, например, при достаточной комплементарности области шпильки crРНК для образования дуплексной области, по меньшей мере, в некоторых физиологических условиях (эти области упоминаются здесь как области шпильки tracr или домен tracr, комплементарный области шпильки crРНК). В вариантах осуществления домен tracr, гибридизующийся с областью шпильки crРНК, содержит по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидов, гибридизующихся с комплементарными нуклеотидами области шпильки crРНК. В некоторых аспектах, tracr-нуклеотиды, которые гибридизуются с комплементарными нуклеотидами области шпильки crРНК, являются смежными. В некоторых аспектах tracr нуклеотиды, гибридизующиеся с комплементарными нуклеотидами области шпильки crРНК, являются прерывистыми, например, содержат две или более областей гибридизации, разделенных нуклеотидами, которые не спариваются с нуклеотидами области шпильки crРНК. В некоторых аспектах часть tracr, которая гибридизуется с областью шпильки crРНК, содержит от 5'до 3': UAGCAAGUUAAAA (SEQ ID NO: 6597). В некоторых аспектах часть tracr, которая гибридизуется с областью шпилькаов crРНК, содержит от 5'до 3': UAGCAAGUUUAAA (SEQ ID NO: 6598). В вариантах осуществления последовательность, которая гибридизуется с областью шпильки crРНК, расположена в tracr 5' позиции по отношению к последовательности tracr, дополнительно связывающей нуклеазу, например молекулу Cas, например, молекулу Cas9.
Tracr дополнительно содержит домен, который дополнительно связывается с нуклеазой, например молекулой Cas, например, молекулой Cas9. Не ограничиваясь теорией, считается, что Cas9 разных видов связывается с разными tracr последовательностями. В некоторых аспектах tracr включает последовательность, которая связывается с молекулой Cas9 S. pyogenes. В некоторых аспектах tracr содержит последовательность, которая связывается с молекулой Cas9, описанной здесь. В некоторых аспектах домен, который дополнительно связывает молекулу Cas9, содержит от 5’до 3': UAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6599). В некоторых аспектах домен, который дополнительно связывает молекулу Cas9, содержит от 5’до 3': UAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 6600).
В некоторых вариантах осуществления tracr содержит SEQ ID NO: 6589. В некоторых вариантах осуществления tracr содержит SEQ ID NO: 6590. Некоторые или все нуклеотиды tracr могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную в разделе XIII настоящего документа.
В вариантах осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и или crРНК входящая в dgРНК), например, любой из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, содержит модификацию, представляющую собой инвертированный абазивный остаток на 5'-конце, 3'-конце или как на 5', так и 3' концах gРНК. В вариантах осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, содержит одну или несколько фосфоротиоатных связей между остатками на 5'-конце полинуклеотида, например, фосфоротиоатную связь между первыми двумя 5'-остатками, между каждым из первых трех 5'-остатков, между каждым из первых четырех 5'-остатков или между каждым из первых пяти 5'-остатков. В вариантах осуществления компонент gРНК или gРНК может альтернативно или дополнительно содержать одну или более фосфоротиоатных связей между остатками на 3'-конце полинуклеотида, например, фосфоротиоатную связь между первыми двумя 3'-остатками, между каждым из первых трех 3'-остатков, между каждым из первых четырех 3'-остатков, или между каждым из первых пяти 3'-остатков. В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК входящая в dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, содержит фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырех 5'-остатков (например, включает в себя, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце), и фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырех 3'-остатков (включает, или, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 3'-конце). В одном варианте осуществления любой из описанных выше фосфоротиоатных модификаций дополнена модификацией, представляющей собой абазивный инвертированныйостаток на 5'-конце, 3'-конце или на обоих 5’и 3'-концах полинуклеотида. В таких вариантах осуществления модификация, представляющая собой абазивный инвертированныйостаток может быть связана с 5'- и/или 3'-нуклеотидом фосфатной или фосфоротиоатной связью. В вариантах осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК входящей в dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, содержит один или несколько нуклеотидов, которые включают 2’O-метильную модификацию. В вариантах осуществления каждый из первых 1, 2, 3 или более 5'-остатков содержит 2’O-метильную модификацию. В вариантах осуществления каждый из первых 1, 2, 3 или более из 3'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию. В вариантах осуществления 4ый от конца, 3ий от конца и 2ой от конца 3'-остатки содержат 2'O-метильную модификацию. В вариантах осуществления каждый из первых 1, 2, 3 или более 5'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию, и каждый из первых 1, 2, 3 или более из 3'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию. В одном варианте осуществления каждый из первых 3ёх 5'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию, и каждый из первых 3ёх 3'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию. В вариантах осуществления каждый из первых 3ёх 5'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию, а 4ый от конца, 3ий от конца и 2ой от конца 3'-остатки содержат 2'O-метильную модификацию. В вариантах осуществления любая из 2'О-метильных модификаций, например, как описано выше, может быть объединена с одной или несколькими модификациями фосфоротиоата, например, как описано выше, и/или с одной или несколькими модификациями, представляющими собой инвертированный абазивный остаток, например, как описано выше. В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК входящая в dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, включает, например, соединение фосфоротиоатной связи между каждым из первых четырёх 5'-остатков (содержит, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 5'-конце полинуклеотида(ов), фосфоротиоатных связей между каждым из первых четырех 3'-остатков (например, включает, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце полинуклеотида(ов)), 2'О-метильную модификацию в каждом из первых трех 5'-остатков и 2’O-метильную модификацию в каждом из трех первых 3'-остатков.
В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК, входящей в dgРНК), например, любой из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, включает, например, наличие фосфоротиоатной связи между каждым из первых четырёх 5'-остатков (содержит, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 5'-конце полинуклеотида(ов)), наличие фосфоротиоатной связи между каждым из первых четырех 3'-остатков (например, включает, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце полинуклеотида(ов)), 2'О-метильную модификацию в каждом из первых трех 5'-остатков и 2'-метильную модификацию на каждом из 4-х-концевых, 3-к-концевой и 2-к-концевой 3'-остаткам.
В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК dgРНК), например, любой из компонентов gРНК или gРНК, описанных выше, включает, например, фосфоротиоатной связ между каждым из первых четырёх 5'-остатка (включает, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 5'-конце полинуклеотида(ов), фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырех 3'-остатков (включает, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце полинуклеотида(ов)), 2'О-метильную модификацию в каждом из первых трех 5'-остатков, 2’O-метильную модификацию в каждом из первых трех 3'-остатков, и дополнительный инвертирванный абазивный остаток на каждом из 5'и 3' концов.
В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК входящая в dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, включает, например, фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырёх 5'-остатков (содержит, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 5'-конце полинуклеотида(ов), фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырех 3'-остатков (например, включает, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце полинуклеотида(ов)), 2’O-метил модификацию в каждом из первых трех 5' остатков и 2'O-метил-модификацию в каждом из остатков: 4ого-от конца, 3его от конца, и 2ого от конца 3' остатков, и модификацию, представляющую собой инвертированный абазивный остаток на каждом из 5' и 3'-концов.
В одном варианте осуществления gРНК является dgРНК и включает, например, состоит из:
crРНК:
mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2008), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце); и
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660) (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце).
В одном варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК и включает, например:
crРНК:
mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2009), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце); и
tracr:
mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 346), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце).
В одном из вариантов осуществления gРНК представляет собой dgРНК и включает, например, состоит из:
crРНК:
mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO: 2010), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце); и
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660) (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце).
В одном варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК и включает, например, состоит из:
crРНК:
mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO: 2011), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце); и
tracr:
mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 346), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).
В одном варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК и включает, например, состоит из:
crРНК:
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 2012), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце); и
tracr:
mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 346), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).
В одном варианте осуществления gРНК представляет собой sgРНК и включает, например, состоит из:
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 2013), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).
В одном варианте осуществления gРНК представляет собой sgРНК и включает, например, состоит из:
mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 2014), где m обозначает основание с 2’O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).
В одном варианте осуществления gРНК представляет собой sgРНК и включает, например, состоит из:
mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO: 2015), где m обозначает основание с 2’O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).
6) Первое удлинение Tracr
Если gРНК содержит первое удлинение шпильки, tracr может содержать первое удлинение tracr. Первое удлинение tracr может содержать нуклеотиды, комплементарные, например, на 80%, 85%, 90%, 95% или 99%, или, например, полностью комплементарные нуклеотидам первого удлинения шпильки. В некоторых аспектах нуклеотиды первого удлинения tracr, гибридизующиеся с комплементарными нуклеотидами первого удлинения шпильки, являются смежными. В некоторых аспектах, нуклеотиды первого удлинения tracr, гибридизующиеся с комплементарными нуклеотидами первого удлинения шпильки, не являются смежными, например, включают в себя две или более областей гибридизации, разделенной нуклеотидами, не образующими пар оснований с нуклеотидами первого удлинения шпильки. В некоторых аспектах первое удлинение tracr содержит, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более нуклеотидов. В некоторых аспектах первое удлинение tracr содержит SEQ ID NO: 6591. В некоторых аспектах первое удлинение tracr включает нуклеиновую кислоту, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95% или 99% гомологична SEQ ID NO: 6591.
Некоторые или все нуклеотиды первого удлинения tracr могут быть модифицированы, например иметь модификации, описанные в разделе XIII настоящего описания.
В некоторых вариантах осуществления sgРНК может содержать от 5'до 3', 3’ к целевому домену:
a) GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6601);
b)
GUUUAAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6602);
c)
GUUUUAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6603);
d)
GUUUAAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6604);
e) любую из вышерасположенных а) -d), дополнительно содержащую на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов;
f) любую из вышерасположенных а) -d), дополнительно содержащую на 3'-конце, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов; или
g) любую из вышерасположенных а) -f), дополнительно содержащую на 5'-конце (например 5' по отношению к целевому домену), по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов. В вариантах осуществления любая из последовательностей из вариантов выше а) -g) расположена непосредственно 3' по отношению к целевому домену.
В одном варианте осуществления sgРНК по изобретению включает, например, состоит из, от 5’ к 3’: [целевой домен] - GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 7811).
В одном варианте осуществления sgРНК по изобретению включает, например, состоит из, от 5’ к 3’: [целевой домен] - GUUUAAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 7807).
В некоторых вариантах осуществления dgРНК может содержать:
crРНК, содержащую от 5’до 3', предпочтительно расположенную непосредственно 3’к целевому домену:
a) GUUUUAGAGCUA (SEQ ID NO: 6584);
b) GUUUAAGAGCUA (SEQ ID NO: 6585);
c) GUUUUAGAGCUAUGCUG (SEQ ID NO: 6605);
d) GUUUAAGAGCUAUGCUG (SEQ ID NO: 6606);
e) GUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 6607);
f) GUUUAAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 6608); или
g) GUUUUAGAGCUAUGCU (SEQ ID NO: 7806):
и tracr, содержащий от 5' к 3' :
a) UAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6589);
b) UAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6590);
c) CAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6609);
d) CAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6610);
e) AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660);
f) AACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6661);
g) AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 7812)
h) GUUUAAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 7807);
i) AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU (SEQ ID NO: 7808);
j) GUUGGAACCAUUCAAAACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU (SEQ ID NO: 7809);
k) любой вариант из вышерасположенных a)-j), дополнительно содержащий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов;
l) любой вариант из вышерасположенных a)-j), дополнительно содержащий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов; или
m) любой вариант из вышерасположенных a)-l), дополнительно содержащий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов.
В одном варианте осуществления последовательность k), приведённая выше, содержит 3'-последовательность UUUUUUU, например, если промотор U6 используется для транскрипции. В варианте осуществления последовательность k), приведенная выше, содержит 3'-последовательность UUUU, например, если для транскрипции используется промотор HI. В варианте осуществления последовательность k), приведённая выше, содержит различное количество 3' U, зависящее, например, от сигнала терминации используемого промотора полимеразы-III. В варианте осуществления последовательность k), приведенная выше, содержит 3'-последовательность различной длины, полученную на ДНК-матрице, если используется промотор T7. В варианте осуществления последовательность k), приведенная выше, содержит 3'-последовательность различной длины, полученную на ДНК-матрице, если для генерации молекулы РНК используется транскрипция in vitro. В варианте осуществления последовательность k), приведенная выше, содержит 3'-последовательность различной длины, полученную на ДНК-матрице, если для управления транскрипцией используется промотор полимеразы-II.
В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенной 3' к целевому домену (например, расположенной непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из SEQ ID NO: 6607 а tracr включает, например, AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660).
В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенной 3' к целевому домену (например, расположенной непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из SEQ ID NO: 6608, а tracr включает, например, состоит из AACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6661).
В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенный 3' к целевому домену (например, расположенной непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из GUUUUAGAGCUAUGCU (SEQ ID NO: 7806), а tracr включает, например, состоит из GUUUAAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 7807).
В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенной 3' к целевому домену (например, расположенному непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из GUUUUAGAGCUAUGCU (SEQ ID NO: 7806), и tracr включает, например, состоит из AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU (SEQ ID NO: 7808).
В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенной 3' к целевому домену (например, расположенной непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из GUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 6607), а tracr включает, например, состоит из GUUGGAACCAUUCAAAACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU (SEQ ID NO: 7809).
II. Целевые домены, используемые для изменения экспрессии генов глобина
В приведенных ниже таблицах указаны целевые домены для молекул gРНК для использования в различных аспектах настоящего изобретения, например, для изменении экспрессии генов глобина, например гена фетального гемоглобина или гена бета-гемоглобина.
Таблица 1: целевые домены gРНК, нацеленные на области экзонов BLC11a гена.
Таблица 2. Целевые домены gРНК, нацеленные на области интрона 2 BLC11a гена (т.е. на область энхансера BLC11a гена.
В вариантах осуществления целевой домен gРНК состоит из 20 3'нп любой из последовательностей в таблице выше.
Типичные предпочтительные целевые домены gРНК, применимые в композициях и способах по изобретению, описаны в приведенных ниже таблицах.
Таблица 5. Предпочтительные целевые домены нацеливающих РНК, направленные на кодирующие области гена BCL11a.
Таблица 6: Предпочтительные целевые домены нацеливающих РНК, направленные на область HPFH Френча (French HPFH; Sankaran VG et al. A functional element necessary for fetal hemoglobin silencing. NEJM (2011) 365:807-814.)
В некоторых аспектах изобретения предпочтительно, чтобы молекула gРНК, нацеленная на область HPFH, включала, например, состояла из целевого домена gРНК, способного привести по меньшей мере примерно к 20% повышению численности F-клеток относительно контроля, например, с помощью способа, описанного в примере 4. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 113. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 99. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 112. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 98. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1580. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 106. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий например, состоящий из SEQ ID NO: 1589. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1503. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 160. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1537. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 159. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 101. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из, SEQ ID NO: 162. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 104. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: ID NO: 138. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1536. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1539. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1585.
В некоторых аспектах изобретения, например, как указано здесь, может оказаться выгодным включать молекулы gРНК, нацеленные более чем на один, например, на два целевых сайта (например, первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК). В некоторых вариантах осуществления оба целевых сайта расположены в области HPFH. В таких аспектах может быть использована любая комбинация из нескольких, например, двух молекул gРНК (например, первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК), содержащих целевые домены, перечисленные в Таблице 6. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1 00 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая gРНК молекула включает целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1589, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включает целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 159, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают целевые домены содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1589, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая gРНК mo лекула и вторая молекула gРНК включают целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая gРНК включают целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспектепервая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте, первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1539 соответственно.
Таблица 7: Предпочтительные целевые домены нацеливающей gРНК, направленные на область +58 энхансера гена BCL11a (т.е. на BCL11a энхансер).
В некоторых аспектах изобретения предпочтительно, чтобы молекула gРНК в области +58 энхансера BCL11a содержала целевой домен gРНК, представленный на Фиг. 11. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 341. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 246. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 248. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 247. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 245. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 249. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 244. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 199. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 251. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 250. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 334. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 185. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 186. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 336. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 337.
В некоторых аспектах изобретения, например, как указано здесь, может оказаться выгодно включать молекулы gРНК, нацеленные на более чем один, например, на два целевых сайта (например, первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК). В некоторых вариантах осуществления два целевых сайта расположены в области +58 энхансера BCL11a. В таких аспектах может быть использована любая комбинация из нескольких, например, двух молекул рРНК (например, первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК), содержащей целевые домены, перечисленные в таблице 7. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК cule и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 199 соответственно.
В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включаюткоторые содержат, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 199 соответственно, В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК, включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 247, соответствующие LY. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают таргетирующие домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 336 соответственно.
В вариантах осуществления аспекты изобретения включают или относятся к молекуле gРНК, которая комплементарна целевой последовательности-мишени в области +58 энхансера гена BCL11a, расположенной 3' по отношению к сайту связывания GATA-1, например, 3' по отношению к сайту связывания GATA1 и сайту связывания TAL-1. В вариантах осуществления система CRISPR, содержащая молекулу gРНК, описанную здесь, индуцирует один или несколько инделов внутри или вблизи целевого сайта. В вариантах осуществления индел не содержит нуклеотидов сайта связывания GATA-1 и/или нуклеотидов сайта связывания TAL-1. В вариантах осуществления система CRISPR индуцирует один или более инделов сдвига рамки считывания внутри или вблизи участка последовательности-мишени, например, по меньшей мере примерно в 10%, по меньшей мере примерно в 20%, по меньшей мере примерно в 30%, по меньшей мере примерно в 40 % или, по меньшей мере, примерно в 50% от общего числа инделов, вызывающих сдвиг рамки считывания, например, как определено NGS. В вариантах осуществления общий % формирования инделов составляет по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95%, например, как определено методами NGS.
Таблица 8: Предпочтительные целевые домены нацеливающей РНК (gРНК), нацеленной на область +62 область энхансера гена BCL11a (т.е. BCL11a энхансера).
В некоторых аспектах изобретения предпочтительно, чтобы молекула gРНК, нацеленная на область +62 энхансера гена BCL11a, содержала целевой домен gРНК, представленный на Фиг. 12. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 318. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 312. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 313. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 294. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 310. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 319. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 298. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 322. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 311. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 315. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 290. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 317. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 309. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из, SEQ ID NO: 289. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 281.
В некоторых аспектах изобретения, например, как указано здесь, может быть выгодно включить молекулы gРНК, нацеленные на более чем один целевой сайт, например, на два целевых сайта (например, первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК). В некоторых вариантах осуществления оба целевых сайта расположены в области энхансера +62 BCL11a. В таких аспектах может быть использована любая комбинация из нескольких, например, двух молекул gРНК (например, первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК), содержащих целевые домены, перечисленные в Таблице 8. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первый монокристалл gРНК cule и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 319, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 317 соответственно, В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают которые включают, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 289 соответственно.
Таблица 9: Предпочтительные целевые домены нацеливающей РНК (gРНК), нацеленной на область +55 область энхансера гена BCL11a (т.е. BCL11a энхансера).
Целевого Домена
В некоторых аспектах изобретения предпочтительно, чтобы молекула gРНК, нацеленная на область +55 энхансера гена BCL11a, включала целевой домен, содержащий, например, или состоящий из последовательности целевого домена, выбранной из SEQ ID NO:1683, SEQ ID NO:1638, SEQ ID NO:1647, SEQ ID NO:1609, SEQ ID NO:1621, SEQ ID NO:1617, SEQ ID NO:1654, SEQ ID NO:1631, SEQ ID NO:1620, SEQ ID NO:1637, SEQ ID NO:1612, SEQ ID NO:1656, SEQ ID NO:1619, SEQ ID NO:1675, SEQ ID NO:1645, SEQ ID NO:1598, SEQ ID NO:1599, SEQ ID NO:1663, SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1626.
В некоторых аспектах изобретения, например, как указано здесь, может быть выгодно включать молекулы gРНК, нацеленные на более чем один целевой сайт, например, на два целевых сайта (например, первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК). В некоторых вариантах осуществления оба целевых сайта расположены в области энхансера +55 BCL11a. В таких аспектах может быть использована любая комбинация из нескольких, например, двух молекул gРНК (например, первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК), включающая, например, состоящих из целевых доменов, перечисленных в Таблице 9, нацеленных на различные целевые последовательности сайтов области энхансера +55 BCL11a. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящий из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1621, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SE Q ID NO:1645, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте, первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, составляющие например, состоящей из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1637, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 a й SEQ ID NO:1626, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте, первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и seco nd молекула gРНК включает в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены включающий, например, состоящий из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1645, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1612, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включает в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1677 соответственно.
III. Способы дизайна последовательностей gРНК.
Способы проектирования последовательностей gРНК описаны здесь, включая способы выбора, дизайна и тестирования целевых последовательностей. Типичные целевые домены также представлены здесь. Целевые домены, обсуждаемые здесь, могут быть включены в gРНК, описанные здесь.
Способы отбора и тестирования целевых последовательностей-мишеней, а также анализ неспецифических сайтов описаны, например, в Mali el al., 2013 SCIENCE 339 (6121): 823-826; Hsu et al, 2013 NAT BIOTECHNOL, 31 (9): 827-32; Fu et al., 2014 NAT BIOTECHNOL, doi: 10.1038/nbt.2808. PubMed PM ID: 24463574; Heigwer et al, 2014 NAT METHODS ll (2): 122-3. doi: 10.1038/nmeth.2812. PubMed PMID: 24481216; Bae el al, 2014 BIOINFORMATICS PubMed PMID: 24463181; Xiao A el al, 2014 BIOINFORMATICS PubMed PMID: 24389662.
Например, сервис или програмное обеспечение может быть использован(о) для оптимизации выбора gРНК к целевой последовательности предложенной пользователем, например, для сведения к минимуму общей неспецифической активности в пределах всего генома. Неспецифическая активность может состоять не только в образовании разрывов ДНК. Для каждой потенциально возможной последовательности gРНК, например, для использования в системе S. pyogenes Сas9, эта программа способна определить все неспецифичные последовательности (например, предшествующие NAG или NGG PAM) генома, которые содержат до определенного числа (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) неспаренных оснований. Эффективность разрыва каждой неспецифичной последовательности может быть предсказана, например, при использованием экспериментально обоснованной схемы расчёта. Каждая потенциальная gРНК ранжируется в соответствии с ее общим количеством предсказанных неспецифических разрывов; gРНК высшей категории представляют собой те, которые, наиболее вероятно, будут иметь наибольшее количество разрывов на целевом участке и наименьшее количество неспецифических разрывов. Другие функции, например, автоматический выбор реагента для конструкции CRISPR, выбор праймера для анализа целевого домена методом Surveyor и выбор праймера для высокоточного обнаружения и количественного определения неспецифических разрывов с помощью методов NGS (методами секвенирования нового поколения), также могут быть сделаны с помощью программы/сервиса. Молекулы-кандидаты gРНК могут быть оценены известными способами или описанными здесь.
Хотя программные алгоритмы могут использоваться для создания исходного списка потенциальных молекул gРНК, эффективность внесения разрывов и их специфичность не обязательно будут отражать предсказанные значения, и молекулы gРНК обычно требуют скрининга в конкретных клеточных линиях, например, в первичных клеточных линиях человека, например в HSPC человека, например, в клетках CD34+ человека, для определения, например, эффективности внесения разрывов, формирования индела, специфичности разрывов и изменения желаемого фенотипа. Эти свойства могут быть проанализированы описанными здесь способами.
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR00312 (SEQ ID NO:248, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, например, описанной здесь:
sgРНК CR00312 #1:
GUUUGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:342)
sgРНК CR00312 #2:
mG*mU*mU*UGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:343)
sgРНК CR00312 #3:
mG*mU*mU*UGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1762))
dgРНК CR00312 #1:
crРНК: GUUUGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:344)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR00312 #2:
crРНК:
mG*mU*mU*UGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:345)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR00312 #3:
crРНК:
mG*mU*mU*UGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:345)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001128 (SEQ ID NO:338, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR001128 #1:
AUCAGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:347)
sgРНК CR001128 #2:
mA*mU*mC*AGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:348)
sgРНК CR001128 #3:
mA*mU*mC*AGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1763)
dgРНК CR001128 #1:
crРНК: AUCAGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:349)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR001128 #2:
crРНК: mA*mU*mC*AGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:350)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR001128 #3:
crРНК: mA*mU*mC*AGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:350)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001126 (SEQ ID NO:336, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR001126 #1:
UUUAUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:351)
sgРНК CR001126 #2:
mU*mU*mU*AUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:352)
sgРНК CR001126 #3:
mU*mU*mU*AUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1764)
dgРНК CR001126 #1:
crРНК: UUUAUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:353)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR001126 #2:
crРНК: mU*mU*mU*AUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:354)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR001126 #3:
crРНК: mU*mU*mU*AUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:354)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR00311 (SEQ ID NO:247, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR00311 #1:
UUUGGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:355)
sgРНК CR00311 #2:
mU*mU*mU*GGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:356)
sgРНК CR00311 #3:
mU*mU*mU*GGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1765)
dgРНК CR00311 #1:
crРНК: UUUGGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:357)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR00311 #2:
crРНК: mU*mU*mU*GGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:358)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR00311 #3:
crРНК: mU*mU*mU*GGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:358)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR00309 (SEQ ID NO:245, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR00309 #1:
CACGCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:359)
sgРНК CR00309 #2:
mC*mA*mC*GCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:360)
sgРНК CR00309 #3:
mC*mA*mC*GCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1766)
dgРНК CR00309 #1:
crРНК: CACGCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:361)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR00309 #2:
crРНК: mC*mA*mC*GCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:362)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR00309 #3:
crРНК: mC*mA*mC*GCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:362)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001127 (SEQ ID NO:337, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR001127 #1:
CACAGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:363)
sgРНК CR001127 #2:
mC*mA*mC*AGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:364)
sgРНК CR001127 #3:
mC*mA*mC*AGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1767)
dgРНК CR001127 #1:
crРНК: CACAGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:365)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR001127 #2:
crРНК: mC*mA*mC*AGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:366)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR001127 #3:
crРНК: mC*mA*mC*AGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:366)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR00316 (SEQ ID NO:252, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR00316 #1:
UUGCUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:367)
sgРНК CR00316 #2:
mU*mU*mG*CUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:368)
sgРНК CR00316 #3:
mU*mU*mG*CUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1768)
dgРНК CR00316 #1:
crРНК: UUGCUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:369)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR00316 #2:
crРНК: mU*mU*mG*CUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:370)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR00316 #3:
crРНК: mU*mU*mG*CUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:370)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001125 (SEQ ID NO:335,, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR001125 #1:
UUUUAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:371)
sgРНК CR001125 #2:
mU*mU*mU*UAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:372)
sgРНК CR001125 #3:
mU*mU*mU*UAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1769)
dgРНК CR001125 #1:
crРНК: UUUUAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:373)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR001125 #2:
crРНК: mU*mU*mU*UAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:374)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR001125 #3:
crРНК: mU*mU*mU*UAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:374)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001030 (SEQ ID NO:100, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR001030 #1:
ACUGCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:375)
sgРНК CR001030 #2:
mA*mC*mU*GCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:376)
sgРНК CR001030 #3:
mA*mC*mU*GCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1770)
dgРНК CR001030 #1:
crРНК: ACUGCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:377)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR001030 #2:
crРНК: mA*mC*mU*GCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:378)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR001030 #3:
crРНК: mA*mC*mU*GCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:378)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001028 (SEQ ID NO:98, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR001028 #1:
UGCGGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:379)
sgРНК CR001028 #2:
mU*mG*mC*GGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:380)
sgРНК CR001028 #3:
mU*mG*mC*GGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1771)
dgРНК CR001028 #1:
crРНК: UGCGGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:381)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR001028 #2:
crРНК: mU*mG*mC*GGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:382)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR001028 #3:
crРНК: mU*mG*mC*GGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:382)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001221 (SEQ ID NO:1589, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как, например, описано здесь.
sgРНК CR001221 #1:
GAAACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 383)
sgРНК CR001221 #2:
mG*mA*mA*ACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:384)
sgРНК CR001221 #3:
mG*mA*mA*ACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1772)
dgРНК CR001221 #1:
crРНК: GAAACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:385)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR001221 #2:
crРНК: mG*mA*mA*ACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:386)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR001221 #3:
crРНК: mG*mA*mA*ACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:386)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001137 (SEQ ID NO:1505, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR001137 #1:
GUAAGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:387)
sgРНК CR001137 #2:
mG*mU*mA*AGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:388)
sgРНК CR001137 #3:
mG*mU*mA*AGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1773)
dgРНК CR001137 #1:
crРНК: GUAAGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:389)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR001137 #2:
crРНК: mG*mU*mA*AGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:390)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR001137 #3:
crРНК: mG*mU*mA*AGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:390)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR003035 (SEQ ID NO:1505, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR003035 #1:
AGGCACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:391)
sgРНК CR003035 #2:
mA*mG*mG*CACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:392)
sgРНК CR003035 #3:
mA*mG*mG*CACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1774)
dgРНК CR003035 #1:
crРНК: AGGCACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:393)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR003035 #2:
crРНК: mA*mG*mG*CACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:394)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR003035 #3:
crРНК: mA*mG*mG*CACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:394)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR003085 (SEQ ID NO:1750, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.
sgРНК CR003085 #1:
AUGGUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 395)
sgРНК CR003085 #2:
mA*mU*mG*GUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:396)
sgРНК CR003085 #3:
mA*mU*mG*GUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1775)
dgРНК CR003085 #1:
crРНК: AUGGUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:397)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)
dgРНК CR003085 #2:
crРНК: mA*mU*mG*GUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:398)
tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)
dgРНК CR003085 #3:
crРНК: mA*mU*mG*GUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:398)
tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).
В каждой из молекул gРНК, описанных выше, «*» обозначает фосфоротиоатную связь между соседними нуклеотидами, а «mN» (где N=A, G, C или U) обозначает модифицированный нуклеотид 2'-OMe. В вариантах осуществления любая из молекул gРНК, описанных здесь, например, описанная выше, скомбинирована с молекулой Сas9, например, как описано здесь, с образованием рибонуклеопротеинового комплекса (RNP). Такие RNP в высшей степени применимы в способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, например, описанных здесь.
IV. Молекулы Cas
Молекулы Сas9
В предпочтительных вариантах осуществления молекула Cas представляет собой молекулу Сas9. Молекулы Сas9 различных видов могут быть использованы в описанных здесь способах и композициях. В то время как молекула S. pyogenes Сas9 раскрыта здесь в наибольшей степени, молекулы Сas9, полученные из или на основе белков Сas9 других видов, перечисленных здесь, также могут быть использованы. Другими словами, в системах, способах, и композициях, описанных здесь, могут быть использованы другие молекулы Сas9, например, S. thermophilus, Staphylococcus aureus и/или Neisseria meningitidis Сas9. Дополнительные виды Сas9 включают::Acidovorax avenae, Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus succinogenes, Actinobacillus suis, Actinomyces sp., cycliphilus denitrificans, Aminomonas paucivorans, Bacillus cereus, Bacillus smithii, Bacillus thuringiensis, Bacteroides sp., Blastopirellula marina, Bradyrhiz' obium sp., Brevibacillus latemsporus, Campylobacter coli, Campylobacter jejuni, Campylobacter lad, Candidatus Puniceispirillum, Clostridiu cellulolyticum, Clostridium perfringens, Corynebacterium accolens, Corynebacterium diphtheria, Corynebacterium matruchotii, Dinoroseobacter sliibae, Eubacterium dolichum, gamma proteobacterium, Gluconacetobacler diazotrophicus, Haemophilus parainfluenzae, Haemophilus sputorum, Helicobacter canadensis, Helicobacter cinaedi, Helicobacter mustelae, Ilyobacler polytropus, Kingella kingae, Lactobacillus crispatus, Listeria ivanovii, Listeria monocytogenes, Listeriaceae bacterium, Methylocystis sp., Methylosinus trichosporium, Mobiluncus mulieris, Neisseria bacilliformis, Neisseria cinerea, Neisseria flavescens, Neisseria lactamica. Neisseria sp., Neisseria wadsworthii, Nitrosomonas sp., Parvibaculum lavamentivorans, Pasteurella multocida, Phascolarctobacterium succinatutens, Ralstonia syzygii, Rhodopseudomonas palustris, Rhodovulum sp., Simonsiella muelleri, Sphingomonas sp., Sporolactobacillus vineae, Staphylococcus lugdunensis, Streptococcus sp., Subdoligranulum sp., Tislrella mobilis, Treponema sp. или Verminephrobacter eiseniae.
Молекула Сas9, как термин, используемый здесь, относится к молекуле, способной взаимодействовать с молекулой gРНК (например, последовательность домена tracr) и, в сочетании с молекулой gРНК, способной локализовать (например, нацелиться на или двигаться по направлению к) сайт(у), содержащему целевую последовательность-мишень и последовательность PAM.
В варианте осуществления, если молекула Сas9 способна разрезать молекулу целевой нуклеиновой кислоты, то в этом случае на неё ссылаются как на активную молекулу Сas9. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 содержит один или несколько из следующих видов активности: активность никазы, то есть способность разрезать одну цепь дуплексной молекулы ДНК, например, некомплементарную или комплементарную цепь, двухцепочечную нуклеазную активность, то есть способность разрезать обе нити дуплексной нуклеиновой кислоты и создавать двухцепочечный разрыв, который в одном варианте осуществления рассматривается как наличие двух активностей никазы; активность эндонуклеазы; активность экзонуклеазы; и активность хеликазы, то есть способность раскручивать спиральную структуру двухцепочечной нуклеиновой кислоты.
В одном варианте осуществления ферментативно активная молекула Сas9 разрезает обе цепи ДНК и приводит к двухцепочному разрыву. В одном варианте осуществления молекула Сas9 расщепляет только одну цепь, например, цепь, с которой гибридизуется gРНК, или цепь, комплементарную цепи, с которой гибридизуется gРНК. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 обладает ферментативной активность расщепления, ассоциированной с HNH-подобным доменом. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 обладает ферментативной активностью расщепления, ассоциированной с N-концевым RuvC-подобным доменом. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 обладает ферментативной активность расщепления, ассоциированной с HNH-подобным доменом и активностью расщепления, ассоциированной с N-концевым доменом, подобным RuvC. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 обладает активным, или способным вносить разрывы HNH-подобным доменом и неактивным, или неспособным к внесению разрывов N-концевым RuvC-подобным доменом. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 содержит неактивный или неспособный к внесению разрывов HNH-подобный домен и активный, или способный вносить разрывы N-концевой RuvC-подобный домен.
В одном варианте осуществления способность активной молекулы Сas9 взаимодействовать с нуклеиновой кислотой-мишенью и расщеплять ее (вносить разрывы) зависит от последовательности PAM. Последовательность PАМ представляет собой последовательность в нуклеиновой кислоте-мишени. В одном варианте осуществления расщепление нуклеиновой кислоты-мишени происходит выше по течению (впереди) от последовательности PAM. Активные молекулы Сas9 разных видов бактерий могут распознавать различные последовательности мотивов ДНК (например, последовательности PAM). В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 S. pyogenes распознает мотив последовательности NGG и способствует расщеплению последовательности нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Mali el ai, SCIENCE 2013; 339 (6121): 823- 826. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 S. thermophilus распознает мотив последовательности NGGNG и NNAG AAW (W=A или T) и способствует расщеплению последовательности кора нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Horvath et al., SCIENCE 2010; 327 (5962): 167-170 и Deveau et al., J BACTERIOL 2008; 190 (4): 1390-1400. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 S. mulans распознает мотив последовательности NGG или NAAR (R-A или G) и способствует расщеплению последовательности кора нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Deveau et al., J BACTERIOL 2008; 190 (4): 1 390-1400. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 S. aureus распознает мотив последовательности NNGRR (R=A или G) и способствует расщеплению последовательности нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Ran F. et al., NATURE, vol. 520, 2015, стр. 186-191. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 N. meningitidis распознает мотив последовательности NNNNGATT и способствует расщеплению последовательности нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Hou et al., PNAS EARLY EDITION 2013, 1-6. Способность молекулы Сas9 распознавать последовательность PAM может быть определена, например, методом трансформации, описанным в Jinek et al, SCIENCE 2012, 337: 816.
Некоторые молекулы Сas9 обладают способностью взаимодействовать с молекулой gРНК и, в сочетании с молекулой gРНК, двигаться целенаправленно (например, к мишени или к её локализации) к основному целевому домену, но не способны расщеплять нуклеиновую кислоту-мишень вообще или с достаточной степенью эффективности. Молекулы Сas9, не обладающие активностью расщепления вообще или не имеющие активности расщепления в достаточной степени, могут упоминаться здесь как неактивные Сas9 (ферментативно неактивные Сas9), мертвые Сas9 молекулы или молекулы dСas9. Например, неактивная молекула Сas9 может не иметь активности расщепления или иметь её в существенно меньшей степени, например, менее 20, 10, 5, 1 или 0,1% от активности расщепления стандартной молекулы Сas9, как определено при помощи описанного здесь анализа.
Примеры встречающихся в природе молекул Сas9 описаны в Chylinski et al., RNA Biology 2013; 10: 5, 727-737. Такие молекулы Сas9 включают в себя молекулы Сas9 бактериального сообщества кластера 1, бактериального сообщества кластера 2, бактериального сообщества кластера 3, бактериального сообщества кластера 4, бактериального сообщества кластера 5, бактериального сообщества кластера 6, бактериального сообщества кластера 7, бактериального сообщества кластера 8, бактериального сообщества кластера 9, бактериального сообщества кластера 10, бактериального сообщества кластера 11, бактериального сообщества кластера 12, бактериального сообщества кластера 13, бактериального сообщества кластера 14, бактериального сообщества кластера 15, бактериального сообщества кластера 16, бактериального сообщества кластера 17, бактериального сообщества кластера 18, бактериального сообщества кластера 19, бактериального сообщества кластера 20, бактериального сообщества кластера 21, бактериального сообщества кластера 22, бактериального сообщества кластера 23, бактериального сообщества кластера 24, бактериального сообщества кластера 25, бактериального сообщества кластера 26, бактериального сообщества кластера 27, бактериального сообщества кластера 28, бактериального сообщества кластера 29, бактериального сообщества кластера 30, бактериального сообщества кластера 31, бактериального сообщества кластера 32, бактериального сообщества кластера 33, бактериального сообщества кластера 34, бактериального сообщества кластера 35, бактериального сообщества кластера 36, бактериального сообщества кластера 37, бактериального сообщества кластера 38, бактериального сообщества кластера 39, бактериального сообщества кластера 40, бактериального сообщества кластера 41, бактериального сообщества кластера 42, бактериального сообщества кластера 43, бактериального сообщества кластера 44, бактериального сообщества кластера 45, бактериального сообщества кластера 46, бактериального сообщества кластера 47, бактериального сообщества кластера 48, бактериального сообщества кластера 49, бактериального сообщества кластера 50, бактериального сообщества кластера 51, бактериального сообщества кластера 52, бактериального сообщества кластера 53, бактериального сообщества кластера 54, бактериального сообщества кластера 55, бактериального сообщества кластера 56, бактериального сообщества кластера 57, бактериального сообщества кластера 58, бактериального сообщества кластера 59, бактериального сообщества кластера 60, бактериального сообщества кластера 61, бактериального сообщества кластера 62, бактериального сообщества кластера 63, бактериального сообщества кластера 64, бактериального сообщества кластера 65, бактериального сообщества кластера 66, бактериального сообщества кластера 67, бактериального сообщества кластера 68, бактериального сообщества кластера 69, бактериального сообщества кластера 70, бактериального сообщества кластера 71, бактериального сообщества кластера 72, бактериального сообщества кластера 73, бактериального сообщества кластера 74, бактериального сообщества кластера 75, бактериального сообщества кластера 76, бактериального сообщества кластера 77, бактериального сообщества кластера 78.
Примеры встречающихся в природе молекулы Сas9 включают молекулу Сas9 бактериального сообщества кластера 1. Примеры включают молекулу Сas9 следующих видов: S. pyogenes (например, штамм SF370, MGAS 10270, MGAS 10750, MGAS2096, MGAS315, MGAS5005, MGAS6180, MGAS9429, NZ131 и SSI-1), S. thermophilus (например, штамм LMD-9), S. pseudoporcinus (например, штамм SPIN 20026), S. mutans (например, штамм UA 159, NN2025), S. macacae (например, штамм NCTC1 1558), S. gallolylicus (например, штамм UCN34, ATCC BAA-2069), S. equines (например, штамм ATCC 9812, MGCS 124), S. dysdalactiae (например, штамм GGS 124), S. bovis (например, штамм ATCC 700338), S. anginosus (например, штамм F021 1), S. agalactia* (например, штамм NEM316, A909), Listeria monocytogenes (например, штамм F6854), Listeria innocua (L. innocua, например штамм Clip l 1262), Enterococcus italicus (например, штамм DSM 15952) или Enterococcus faecium (например, штамм 1,231,408). Дополнительными примерами молекул Сas9 являются молекула Сas9 Neisseria meningitidis (Hou et al. PNAS Early Edition 2013, 1 -6) и молекула Сas9 S. aureus.
В одном варианте осуществления молекула Сas9, например, активная молекула Сas9 или неактивная молекула Сas9, содержит аминокислотную последовательность содержащую 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% гомологии с; различающуюся не более чем на 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30% или 40% аминокислотных остатков по сравнению с; различающуюся по меньшей мере 1, 2, 5, 10 или 20 аминокислотами, но не более чем на 100, 80, 70, 60, 50, 40 или 30 аминокислот; или идентичную любой описанной здесь последовательности молекулы Сas9, а также встречающейся в природе последовательности молекулы Сas9, например молекулы Сas9, из вида, перечисленного здесь, или описанного в Chylinski et al., RNA Biology 2013, 10: 5, Ί2Ί-Τ, 1 Hou et al. PNAS Early Edition 2013, 1-6.
В одном варианте осуществления молекула Сas9 содержит аминокислотную последовательность, имеющую 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% гомологии с; различающуюся не более чем на 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30% или 40% аминокислотных остатков по сравнению с; различающуюся по меньшей мере 1, 2, 5, 10 или 20 аминокислотами, но не более чем на 100, 80, 70, 60, 50, 40 или 30 аминокислот или идентичную молекуле Сas9 S. Pyogenes.
--->
Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val
1 5 10 15
Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe
20 25 30
Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu
50 55 60
Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser
85 90 95
Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys
100 105 110
His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr
115 120 125
His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp
130 135 140
Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His
145 150 155 160
Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro
165 170 175
Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr
180 185 190
Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala
195 200 205
Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn
210 215 220
Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn
225 230 235 240
Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe
245 250 255
Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp
260 265 270
Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp
275 280 285
Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp
290 295 300
Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser
305 310 315 320
Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys
325 330 335
Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe
340 345 350
Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser
355 360 365
Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp
370 375 380
Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg
385 390 395 400
Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu
405 410 415
Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe
420 425 430
Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile
435 440 445
Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp
450 455 460
Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu
465 470 475 480
Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr
485 490 495
Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser
500 505 510
Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys
515 520 525
Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln
530 535 540
Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr
545 550 555 560
Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp
565 570 575
Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly
580 585 590
Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp
595 600 605
Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr
610 615 620
Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala
625 630 635 640
His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr
645 650 655
Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp
660 665 670
Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe
675 680 685
Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe
690 695 700
Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu
705 710 715 720
His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly
725 730 735
Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly
740 745 750
Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln
755 760 765
Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile
770 775 780
Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro
785 790 795 800
Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu
805 810 815
Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg
820 825 830
Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys
835 840 845
Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg
850 855 860
Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys
865 870 875 880
Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys
885 890 895
Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp
900 905 910
Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr
915 920 925
Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp
930 935 940
Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser
945 950 955 960
Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg
965 970 975
Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val
980 985 990
Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe
995 1000 1005
Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys
1010 1015 1020
Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser
1025 1030 1035 1040
Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu
1045 1050 1055
Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile
1060 1065 1070
Val Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser
1075 1080 1085
Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly
1090 1095 1100
Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile
1105 1110 1115 1120
Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser
1125 1130 1135
Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly
1140 1145 1150
Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile
1155 1160 1165
Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu Ala
1170 1175 1180
Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys
1185 1190 1195 1200
Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser
1205 1210 1215
Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr
1220 1225 1230
Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser
1235 1240 1245
Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His
1250 1255 1260
Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val
1265 1270 1275 1280
Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys
1285 1290 1295
His Arg Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu
1300 1305 1310
Phe Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp
1315 1320 1325
Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp
1330 1335 1340
Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile
1345 1350 1355 1360
Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp
1365
<---
(SEQ ID NO:6611)
В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант Сas9 S. pyogenes SEQ ID NO:6611, включающий одну или несколько мутаций замещения положительно заряженных аминокислот (например, лизина, аргинина или гистидина), на незаряженную или неполярную аминокислоту, например, аланин, в указанную позициях. В вариантах осуществления мутация изменяет одну или несколько положительно заряженным аминокислот, расположенным в бороздке неспецифичного связывания (или nt-groove) Сas9. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант S. pyogenes Сas9 SEQ ID NO:6611, содержащий мутацию в позиции 855 SEQ ID NO:6611, например, мутацию замещения на аминокислоту, не несущую заряда, например аланин, в позиции 855 SEQ ID NO:6611. В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 855 SEQ ID NO:6611 по отношению к SEQ ID NO:6611, например, мутацию замещения на аминокислоту, не несущую заряда, например аланин. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант Сas9 S. pyogenes SEQ ID NO:6611, который включает мутацию в позиции 810, мутацию в позиции 1003 и/или мутацию в позиции 1060 SEQ ID NO:6611, например мутацию замещения аланином в позиции 810, в позиции 1003 и/или в позиции 1060 SEQ ID NO:6611. В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 810, позиции 1003 и позиции 1060 SEQ ID NO:6611, относительно SEQ ID NO:6611, например, где каждая мутация представляет собой мутацию замещения на аминокислоту не несущую заряда, например аланин. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант Сas9 S. pyogenes SEQ ID NO:6611, который включает мутацию в позиции 848, мутацию в позиции 1003 и/или мутацию в позиции 1060 SEQ ID NO:6611, например мутацию замещения на аланин в позиции 848, в позиции 1003 и/или в позиции 1060 SEQ ID NO:6611. В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 848, в позиции 1003 и в позиции 1060 SEQ ID NO:6611, относительно SEQ ID NO:6611, например, где каждая мутация является замещением на аминокислоту не несущую заряда, например аланин. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой молекулу Сas9, как описано в Slaymaker et al., Science Express, доступной онлайн 1 декабря 2015 года в Science DOI: 10.1126/science.aad5227.
В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант S. pyogenes Сas9 SEQ ID NO:6611, который включает одну или несколько мутаций. В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 80 SEQ ID NO:6611, например, содержит лейцин в позиции 80 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, SEQ ID NO:6611 с мутацией C80L). В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 574 SEQ ID NO:6611, например, включает глутаминовую кислоту в позиции 574 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, SEQ ID NO:6611 с мутацией C574E). В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 80 и мутацию в позиции 574 SEQ ID NO:6611, например, содержит лейцин в позиции 80 SEQ ID NO:6611 и глутаминовую кислоту в позиции 574 SEQ ID NO:6611 (например, содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией C80L и мутацией C574E). Не ограничиваясь теорией, считается, что такие мутации улучшают свойства раствора молекулы Сas9.
В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант S. pyogenes Сas9 SEQ ID NO:6611, который включает одну или несколько мутаций. В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 147 SEQ ID NO:6611, например, включает тирозин в позиции 147 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией D147Y). В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 411 SEQ ID NO:6611, например, включает треонин в позиции 411 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией P411T). В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 147 и мутацию в позиции 411 SEQ ID NO:6611, например, включает тирозин в позиции 147 SEQ ID NO:6611 и треонин в позиции 411 SEQ ID NO:6611 (например, содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией D147Y и мутацией P411T). Не ограничиваясь теорией, считается, что такие мутации улучшают эффективность нацеливания молекулы Сas9, например, в дрожжах.
В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант S. pyogenes Сas9 SEQ ID NO:6611, который включает одну или несколько мутаций. В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 1135 SEQ ID NO:6611, например, включает глутаминовую кислоту в позиции 1135 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией D1135E). Не ограничиваясь теорией, считается, что такие мутации улучшают селективность молекулы Сas9 для последовательности NGG PAM по сравнению с последовательностью PAM NAG.
В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 855 SEQ ID NO:6611 по отношению к SEQ ID NO:6611, например, мутацию замещения на аминокислоту, не несущую заряда, например аланин. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант Сas9 S. pyogenes SEQ ID NO:6611, который включает мутацию в позиции 497, мутацию в позиции 661, мутацию в позиции 695 и/или мутацию в позиции 926 SEQ ID NO:6611, например мутацию замещения на аланин в позиции 497, позиции 661, позиции 695 и/или позиции 926 SEQ ID NO:6611. В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 497, позиции 661, позиции 695 и позиции 926 SEQ ID NO:6611 по отношению к SEQ ID NO:6611, например, где каждая мутация является мутацией замещения на аминокислоту, не несущую заряда, например, аланин. Не ограничиваясь теорией, считается, что такие мутации уменьшают разрезание ДНК молекулой Сas9 в неспецифичных участках.
Понятно, что мутации, описанные здесь для молекулы Сas9, могут быть объединены, и могут сочетаться с любым из слитых белков или другими модификациями, описанными здесь, и с молекулой Сas9, тестированной методами, описанными здесь.
Различные типы молекул Cas могут применяться для осуществления раскрытых здесь изобретений. В некоторых вариантах осуществления используются молекулы Cas систем Cas типа II. В других вариантах осуществления используют молекулы Cas других систем Cas. Например, могут быть использованы молекулы Cas типа I или типа III. Примеры молекул Cas (и систем Cas) описаны, например, в Haft et al, PLoS COMPUTATION BIOLOGY 2005, 1(6): e60 и Makarova et al., MICROBIOLOGY NATURE REVIEW 201 1, 9: 467-477, при этом содержание обоих включены в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте.
В одном варианте осуществления молекула Сas9 содержит один или несколько следующих видов активности: активность никазы; активность внесения двуцепочечных разрывов (например, активность эндонуклеазы и/или экзонуклеазы); активность хеликазы; или способность, вместе с молекулой gРНК, нацеливаться на нуклеиновую кислоту-мишень.
Модифицированные молекулы Сas9.
Встречающиеся в природе молекулы Сas9 обладают рядом свойств, включая активность никазы, активность нуклеазы (например, активность эндонуклеазы и/или экзонуклеазы); активность хеликазы; способность функционально связываться с молекулой gРНК; и способность нацеливаться (или локализовать) сайт на нуклеиновой кислоте (например, способность распознать PAM и способность распознать его специфично). В одном варианте осуществления молекулы Сas9 могут включать все или некоторые из этих свойств. В типичных вариантах осуществления молекулы Сas9 обладают способностью взаимодействовать с молекулой gРНК и, совместно с молекулой gРНК, связываться с сайтом на нуклеиновой кислоте. Другие активности, например, специфичное распознавание PAM, нуклеазная активность или активность хеликазы, могут варьироваться в широких пределах в молекулах Сas9. Молекулы Сas9 с желаемыми свойствами могут быть получены несколькими способами, например, путем изменения первоначальных, например, существующих в природе молекул Сas9, для получения измененной молекулы Сas9, имеющей требуемое свойство. Например, можно ввести одну или несколько мутаций или отличий по отношению к первоначальной молекуле Сas9. Такие мутации и отличия включают: замены (например, замены консервативных или неконсервативных аминокислот), вставки или делеции. В одном варианте осуществления молекула Сas9 может содержать одну или несколько мутаций или отличий, например, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40 или 50 мутаций, но менее 200, 100 или 80 мутаций относительно стандартной молекулы Сas9.
В одном варианте осуществления мутация или мутации не оказывают существенного влияния на активность Сas9, например на активность Сas9, описанную здесь. В одном варианте осуществления мутация или мутации оказывают существенное влияние на активность Сas9, например, на активность Сas9, описанную здесь. В одном варианте приведённые активности включают одну или более таких как: специфичность к распознаванию PAM, нуклеазную активность и активность хеликазы. Мутация(и) может присутствовать, например, в: одном или более RuvC-подобном домене, например N-концевом RuvC-подобном домене; HNH-подобном домене; области вне RuvC-подобных доменов и HNH-подобных доменов. В некоторых вариантах осуществления мутация(и) присутствует в N-концевом RuvC-подобном домене. В некоторых вариантах осуществления мутация(ии) присутствует(ют) в HNH-подобном домене. В некоторых вариантах осуществления мутации присутствуют как в N-концевом RuvC-подобном домене, так и в HNH-подобном домене.
Предсказать, будет ли конкретная (аминокислотная) последовательность, например, с заменой, влиять на одну или несколько активностей, таких как активность нацеливания, нуклеазная активность и т.д., и оценить степень влияния можно, например, путем оценки того, является ли мутация консервативной или способом, описанным в Разделе ΠΙ. В варианте осуществления «несущественный» аминокислотный остаток, используемый в контексте молекулы Сas9, представляет собой остаток, который может быть изменен по отношению к последовательности дикого типа молекулы Сas9, например, природной молекулы Сas9, например, активной молекулы Сas9 без потери или, более предпочтительно, без существенного изменения активности Сas9 (например, нуклеазной активности), тогда как изменение «существенного» аминокислотного остатка (консервативная замена) приводит к значительной потере активности (например, нуклеазной активности).
Молекулы Сas9 с измененным распознаванием PAM или без распознавания PAM.
Встречающиеся в природе молекулы Сas9 могут распознавать специфические последовательности PAM, например, распознавать PAM последовательности, описанные выше для S. pyogenes, S. thermo Philus, S. mutans, S. aureus и N. meningitidis.
В одном варианте осуществления молекула Сas9 имеет ту же PAM-специфичность, что и природная молекула Сas9. В других вариантах осуществления молекула Сas9 обладает специфичностью PAM, не связанной с природной молекулой Сas9, или специфичностью PAM, не связанной с природной молекулой Сas9, последовательности которой она наиболее гомологична. Например, встречающаяся в природе молекула Сas9 может быть изменена, например, для изменения распознавания PAM, например, для изменения последовательности PAM, которую молекула Сas9 распознает, с целью уменьшить количество неспецифичного связывания и/или улучшить специфичность; или устранить распознавание PAM в целом. В одном варианте осуществления молекула Сas9 может быть изменена, например, при увеличении длины последовательности, распознающей PAM, для достижения высокого уровня идентичности и специфичности Сas9, что приводит к уменьшению неспецифичного связывания и повышению специфичности. В варианте осуществления длина распознающей ПАМ последовательности составляет по меньшей мере 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 15 аминокислот в длину. Молекулы Сas9, которые распознают различные последовательности PAM и/или уменьшают неспецифичное связывание, могут быть получены с использованием направленной эволюции.
Типовые методы и системы, которые могут быть использованы для направленной эволюции молекул Сas9, описаны, например, в Esvelt el al, Nature 2011, 472 (7344): 499-503. Молекулы-кандидаты Сas9 могут быть оценены, например, описанными здесь способами.
Молекулы Сas9 без активности расщепления или с модифицированной активностью расщепления.
В одном варианте осуществления молекула Сas9 обладает нуклеазной активностью, отличающейся от активности природных молекул Сas9, например, отличающейся от активности природной наиболее гомологичной молекулы Сas9. Например, молекула Сas9 может отличаться от природных молекул Сas9, например молекулы Сas9 S. pyogenes, следующим образом: по ее способности модулировать, например, уменьшать или увеличивать, внесение двунитевого разрыва (эндонуклеазная и/или экзонуклеазная активность), например, по сравнению с природной молекулой Сas9 (например, молекулой Сas9 S. pyogenes); по её способности модулировать, например, уменьшать или увеличивать, расщепление одной цепи нуклеиновой кислоты, например некомплементарной цепи молекулы нуклеиновой кислоты или комплементарной цепи молекулы нуклеиновой кислоты (активность никазы), например, по сравнению с природной молекулой Сas9 (например, молекулой Сas9 S. pyogenes); или по её способности расщеплять молекулу нуклеиновой кислоты, например, двухцепочечную или одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты. Эти активности могут быть убраны.
Модифицированные активные молекулы Сas9 с активностью расщепления.
В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 содержит один или несколько следующих видов активности: активность расщепления, связанная с N-концевым доменом, подобным RuvC; активность расщепления, связанная с HNH-подобным доменом; активность расщепления, связанной с доменом HNH, и активность расщепления, связанной с N-концевым доменом, подобным RuvC.
В одном варианте осуществления молекула Сas9 представляет собой никазу Сas9, например, расщепляет только одну цепь ДНК. В одном варианте осуществления никаза Сas9 включает мутацию в позиции 10 и/или мутацию в позиции 840 SEQ ID NO:6611, например, содержит мутацию D10A и/или H840A до SEQ ID NO:6611.
Неактивные Сas9 Молекулы без активности расщепления.
В варианте осуществления измененная молекула Сas9 представляет собой неактивную молекулу Сas9, которая не расщепляет молекулу нуклеиновой кислоты (двуцепочечную или одноцепочечную), либо расщепляет молекулу нуклеиновой кислоты со значительно меньшей эффективностью, например, менее 20, 10, 5, 1 или 0,1% активности расщепления исходной молекулы Сas9, измеренной с помощью описанного здесь анализа. Исходная молекула Сas9 может быть встречающаяся в природе немодифицированная молекула Сas9, например, природная молекула Сas9, такая как Сas9 S. pyogenes, S. thermophilus, S. aureus или N. meningitidis. В одном варианте исходная молекула Сas9 представляет собой природную молекулу Сas9, имеющую самую близкую по структуре последовательность или гомологию. В одном варианте осуществления неактивная молекула Сas9 не обладает значительной активностью расщепления, связанной с N-концевым RuvC-подобным доменом и активностью расщепления, связанной с HNH-подобным доменом. В одном варианте осуществления молекула Сas9 представляет собой dСas9. Tsai et al. (2014), Nat. Biotech. 32: 569-577.
Каталитически неактивная молекула Сas9 может быть слита с транскрипционным репрессором. Неактивные рекомбинантные белковые комплексы Сas9 и gРНК нацеливаются на последовательность ДНК, указанную целевым доменом gРНК, но, в отличие от активного Сas9, комплекс не расщепляет ДНК-мишень. Сшивка эффекторного домена, такого как домен, репрессирующий транскрипцию, с неактивным Сas9 позволяет вводить эффектор на любой участок ДНК, определяемый gРНК. Сайт-специфичное нацеливание рекомбинантного белка Сas9 в промоторную область гена может блокировать или влиять на связывание полимеразы с промоторной областью, например, сшивка Сas9 с транскрипционным фактором (например, активатором транскрипции) и/или энхансером транскрипции связывающимися с нуклеиновой кислотой для увеличения или ингибирования активации транскрипции. В качестве альтернативы, сайт-специфичное нацеливание Сas9, слитого с репрессором транскрипции, на район промотора может использоваться для уменьшения активации транскрипции.
Репрессоры транскрипции или домены репрессора транскрипции, которые могут быть слиты с неактивной молекулой Сas9, могут включать Круппель-подобный домен (KRAB или SKD домен), домен взаимодействия Mad mSIN3 или домен репрессора ERF (ERD). В другом варианте осуществления неактивная молекула Сas9 может быть слита с белком, модифицирующим хроматин. Например, неактивная молекула Сas9 может быть слита с белком гетерохроматина 1(HPl), метилтрансферазой лизинов гистонов (например, SUV39H1, SUV39H2, G9A, ESET/SETDBl, Pr-SET7/8, SUV4-20H1, RIZ1), деметилазой лизинов гистонов (например, LSD1/BHC1 10, SpLsdl/Sw, l/Safl10, Su(var)3-3, JMJD2A/JHDM3A, JMJD2B, JMJD2C/GASC1, JMJD2D, Rphl, JARID 1 A/RНП2, JARI DIB/PLU-I, JAR1D 1C/SMCX, JARID1 D/SMCY, Lid, Jhn2, Jmj2), деацетилазой гистонов (например, HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC8, Rpd3, Hos l, Cir6, HDAC4, HDAC5, HDAC7, HDAC9, Hdal, Cir3, SIRT 1, SIRT2, Sir2, Hst1, Hst2, Hst3, Hst4, HDAC1 1), и ДНК-метилазой (DNMT1, DNMT2a/DMNT3b, MET1). Неактивный слитый белок модифицированной молекулы Сas9 можно использовать для изменения статуса хроматина, для уменьшения экспрессии гена-мишени.
Гетерологичная последовательность (например, домен репрессора транскрипции) может быть слита с N- или С-концом неактивного белка Сas9. В альтернативном варианте осуществления гетерологичная последовательность (например, домен репрессора транскрипции) может быть слита с внутренней частью (то есть частью, отличной от N-конца или С-конца) неактивного белка Сas9.
Способность молекулы Сas9/gРНК связываться и расщеплять нуклеиновую кислоту-мишень можно оценить, например, способами, описанными здесь в разделе ΠΙ. Активность молекулы Сas9, например либо активной, либо неактивной Сas9 молекулы, отдельно или в комплексе с молекулой gРНК, также может быть определена методами, хорошо известными в данной области техники, включая методы анализа экспрессии генов и методы анализа на основе хроматина, например, иммунопреципитация хроматина (ChiP) и анализ хроматина in vivo (CiA).
Другие слитые молекулы Cas9
В вариантах осуществления молекула Сas9, например Сas9 S. pyogenes, может дополнительно содержать одну или несколько аминокислотных последовательностей с дополнительную активностью.
В некоторых аспектах молекула Сas9 может содержать одну или несколько последовательностей сигналов ядерной локализации (NLS), например, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более NLS. В некоторых вариантах осуществления молекула Сas9 содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более NLS на N-конце или около него, по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более NLS на C-конце или около него или их комбинации (например, один или несколько NLS на N-оконце и один или несколько NLS на C-конце). При использовании более одного NLS, каждый может быть выбран независимо от других, так что один NLS может присутствовать более чем в одной копии и/или в сочетании с одним или несколькими другими NLS, присутствующими в одной или нескольких копиях. В некоторых вариантах осуществления NLS считается как расположенный вблизи N- или С-конца, если ближайшая аминокислота NLS находится в пределах примерно 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, или больше аминокислот вдоль полипептидной цепи из N- или С-конца. Как правило, NLS состоит из одной или нескольких коротких последовательностей из положительно заряженных лизинов или аргининов, выступающих на поверхности белка, однако известны другие типы NLS. Неограничивающие примеры NLS включают последовательность NLS, содержащую или производную от: NLS большого T-антигена вируса SV40, имеющего аминокислотную последовательность PKKKRKV (SEQ ID NO:6612); NLS нуклеоплазмина (например, двойного NLS нуклеоплазмина с последовательностью KRPAATKKAGQAKKKK (SEQ ID NO:6613), c-myc NLS, имеющей аминокислотную последовательность PAAKRVKLD (SEQ ID NO:6614) или RQRRNELKRSP (SEQ ID NO:6615); hLNPA1 M9 NLS, имеющей последовательность NQSSNFGPMKGGNFGGRSSGPYGGGGYFAKPRNQGGY (SEQ ID NO:6616), последовательность RMRIZFKNKGKDTAELRRRVEVSVELRKAKKDEQILKRRNV (SEQ ID NO:6617) домена IBB импортина-альфа, последовательности VSRKRPRP (SEQ ID NO:6618) и PPKKARED (SEQ ID) NO: 6619) белка myoma T, последовательность PQPKKKPL (SEQ ID NO:6620) p53 гена человека, последовательность SALIKKKKKMAP (SEQ ID NO:6621) мышиного c-ab1 IV, последовательности DRLRR (SEQ ID NO:6622) ) и PKQKKRK (SEQ ID NO:6623) вируса гриппа NS1, последовательность RKLKKKIKKL (SEQ ID NO:6624) дельта-антигена вируса гепатита, последовательность REKKKFLKRR (SEQ ID NO:6625) белка Mx1 мыши; последовательность KRKGDEVDGVDEVAKKKSKK (SEQ ID NO:6626) полимеразы поли(ADP-рибозы) человека; и последовательность RKCLQAGMNLEARKTKK (SEQ ID NO:6627) рецепторов глюкокортикоидных стероидных гормонов (человека). Другие подходящие последовательности NLS известны в данной области (например, Sorokin, Biochemistry (Moscow) (2007) 72:13, 1439-1457; Lange, J Biol Chem. (2007) 282: 8, 5101-5).
В одном варианте осуществления, молекула Сas9, например молекула S. pyogenes Сas9, содержит NLS-последовательность SV40, например, расположенную на N-конце по отношению к молекуле Сas9. В одном варианте осуществления молекула Сas9, например молекула Сas9 S. pyogenes, содержит NLS-последовательность SV40, расположенную на N-конце по отношению к молекуле Сas9, и NLS-последовательность SV40, расположенную на C-конце по отношению к молекуле Сas9. В одном варианте осуществления молекула Сas9, например молекула Сas9 S. pyogenes, содержит NLS-последовательность SV40, расположенную на N-конце по отношению к молекуле Сas9, и NLS-последовательность нуклеоплазмина, расположенную на C-конце молекулы Сas9. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления молекула может дополнительно содержать маркер, например, тег His, например His(6)-тег или His(8)-тег (SEQ ID NOS 2969 и 2970, соответственно), например, на N-конце или C-конце.
В некоторых аспектах молекула Сas9 может содержать одну или несколько аминокислотных последовательностей, которые позволяют специфически распознавать молекулу Сas9, например тег. В одном варианте осуществления тег представляет собой гистидиновую метку, например гистидиновую метку, содержащую по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более гистидиновых аминокислот (SEQ ID NO: 2971). В вариантах осуществления гистидиновая метка является тегом His6 (шесть гистидинов) (SEQ ID NO: 2969). В других вариантах осуществления гистидиновый маркер является тегом His8 (восемь гистидинов) (SEQ ID NO: 2970). В вариантах осуществления гистидиновый тег может быть отделён от одной или нескольких других частей молекулы Сas9 линкером. В вариантах осуществления линкер представляет собой GGS. Примером такой сшивки является молекула Сas9 iProt106520.
В некоторых аспектах молекула Сas9 может содержать одну или несколько аминокислотных последовательностей, которые распознаются протеазой (например, содержат сайт расщепления протеазой). В вариантах осуществления сайт расщепления представляет собой сайт расщепления вируса табачной мозаики (TEV), например, содержит последовательность ENLYFQG (SEQ ID NO:7810). В некоторых аспектах сайт расщепления протеазы, например сайт расщепления TEV, расположен между тегом, например тегом His, например тегом His6 или His8 (SEQ ID NOS 2969 и 2970, соответственно), и остальной частью молекулы Сas9. Не ограничиваясь теорией, считается, что такое введение позволит использовать тег для, например, очистки молекулы Сas9, с последующем отщепление тега, чтобы тег не мешал функции молекулы Сas9.
В вариантах осуществления Сas9 молекула (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую NLS и C-концевую NLS (например, содержит от N- до C-терминала NLS-Сas9-NLS), например, где каждая NLS представляет собой SV40 NLS (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую NLS, C-терминальную NLS и C-концевой His6-тег (SEQ ID NO: 2969) (например, содержит от N- до C-конца NLS-Сas9-NLS-His-тег), например, где каждый NLS представляет собой NLS SV40 (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую His-метку (например, His6-тег (SEQ ID NO: 2969)), N-концевую NLS и C-концевую NLS (например, содержит, из N- к C-концу His-тег-NLS-Сas9-NLS), например, где каждый NLS представляет собой NLS SV40 (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую NLS и C-концевой His-тег (например, His6-тег (SEQ ID NO: 2969)) (например, содержит от N- до C-конца His-тег-Сas9-NLS), например, где NLS представляет собой NLS SV40 (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую NLS и C-концевой His-тег (например, His6-тег (SEQ ID NO: 2969)) (например, содержит от N- к C-концу NLS-Сas9-His тег), например, где NLS представляет собой NLS SV40 (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевой His-тег (например, His8-тег (SEQ ID NO: 2970)), N-концевой домен расщепления (например, домен расщепления вируса табачной мозаики (TEV) (например, содержит последовательность ENLYFQG (SEQ ID NO:7810)), N-концевую NLS (например, SV40 NLS, SEQ ID NO:6612) и C-концевую NLS (например, NLS SV40, SEQ ID NO:6612) (например, содержит от N- до С-конца His-тег-TEV-NLS-Сas9-NLS). В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления изобретения Сas9 имеет последовательность SEQ ID NO:6611. Альтернативно, в любом из вышеупомянутых вариантов осуществления изобретения Сas9 имеет последовательность варианта Сas9 SEQ ID NO:6611, например, как описано здесь. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления молекула Сas9 содержит линкер между тегами His и другой частью молекулы, например GGS-линкер. Ниже приведены аминокислотные последовательности приведенных выше примеров молекул Сas9, описанных выше. Идентификаторы «iProt» соответствуют показанным на Фиг. 60.
iProt105026 (также обозначенный как iProt106154, iProt106331, iProt106545 и PID426303, в зависимости от получения белка) (SEQ ID NO:7821):
MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH
iProt106518 (SEQ ID NO:7822):
MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRILYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI EEFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH
iProt106519 (SEQ ID NO:7823):
MGSSHHHHHH HHENLYFQGS MDKKYSIGLD IGTNSVGWAV ITDEYKVPSK KFKVLGNTDR HSIKKNLIGA LLFDSGETAE ATRLKRTARR RYTRRKNRIC YLQEIFSNEM AKVDDSFFHR LEESFLVEED KKHERHPIFG NIVDEVAYHE KYPTIYHLRK KLVDSTDKAD LRLIYLALAH MIKFRGHFLI EGDLNPDNSD VDKLFIQLVQ TYNQLFEENP INASGVDAKA ILSARLSKSR RLENLIAQLP GEKKNGLFGN LIALSLGLTP NFKSNFDLAE DAKLQLSKDT YDDDLDNLLA QIGDQYADLF LAAKNLSDAI LLSDILRVNT EITKAPLSAS MIKRYDEHHQ DLTLLKALVR QQLPEKYKEI FFDQSKNGYA GYIDGGASQE EFYKFIKPIL EKMDGTEELL VKLNREDLLR KQRTFDNGSI PHQIHLGELH AILRRQEDFY PFLKDNREKI EKILTFRIPY YVGPLARGNS RFAWMTRKSE ETITPWNFEE VVDKGASAQS FIERMTNFDK NLPNEKVLPK HSLLYEYFTV YNELTKVKYV TEGMRKPAFL SGEQKKAIVD LLFKTNRKVT VKQLKEDYFK KIECFDSVEI SGVEDRFNAS LGTYHDLLKI IKDKDFLDNE ENEDILEDIV LTLTLFEDRE MIEERLKTYA HLFDDKVMKQ LKRRRYTGWG RLSRKLINGI RDKQSGKTIL DFLKSDGFAN RNFMQLIHDD SLTFKEDIQK AQVSGQGDSL HEHIANLAGS PAIKKGILQT VKVVDELVKV MGRHKPENIV IEMARENQTT QKGQKNSRER MKRIEEGIKE LGSQILKEHP VENTQLQNEK LYLYYLQNGR DMYVDQELDI NRLSDYDVDH IVPQSFLKDD SIDNKVLTRS DKNRGKSDNV PSEEVVKKMK NYWRQLLNAK LITQRKFDNL TKAERGGLSE LDKAGFIKRQ LVETRQITKH VAQILDSRMN TKYDENDKLI REVKVITLKS KLVSDFRKDF QFYKVREINN YHHAHDAYLN AVVGTALIKK YPKLESEFVY GDYKVYDVRK MIAKSEQEIG KATAKYFFYS NIMNFFKTEI TLANGEIRKR PLIETNGETG EIVWDKGRDF ATVRKVLSMP QVNIVKKTEV QTGGFSKESI LPKRNSDKLI ARKKDWDPKK YGGFDSPTVA YSVLVVAKVE KGKSKKLKSV KELLGITIME RSSFEKNPID FLEAKGYKEV KKDLIIKLPK YSLFELENGR KRMLASAGEL QKGNELALPS KYVNFLYLAS HYEKLKGSPE DNEQKQLFVE QHKHYLDEII EQISEFSKRV ILADANLDKV LSAYNKHRDK PIREQAENII HLFTLTNLGA PAAFKYFDTT IDRKRYTSTK EVLDATLIHQ SITGLYETRI DLSQLGGDGG GSPKKKRKV
iProt106520 (SEQ ID NO:7824):
MAHHHHHHGG SPKKKRKVDK KYSIGLDIGT NSVGWAVITD EYKVPSKKFK VLGNTDRHSI KKNLIGALLF DSGETAEATR LKRTARRRYT RRKNRICYLQ EIFSNEMAKV DDSFFHRLEE SFLVEEDKKH ERHPIFGNIV DEVAYHEKYP TIYHLRKKLV DSTDKADLRL IYLALAHMIK FRGHFLIEGD LNPDNSDVDK LFIQLVQTYN QLFEENPINA SGVDAKAILS ARLSKSRRLE NLIAQLPGEK KNGLFGNLIA LSLGLTPNFK SNFDLAEDAK LQLSKDTYDD DLDNLLAQIG DQYADLFLAA KNLSDAILLS DILRVNTEIT KAPLSASMIK RYDEHHQDLT LLKALVRQQL PEKYKEIFFD QSKNGYAGYI DGGASQEEFY KFIKPILEKM DGTEELLVKL NREDLLRKQR TFDNGSIPHQ IHLGELHAIL RRQEDFYPFL KDNREKIEKI LTFRIPYYVG PLARGNSRFA WMTRKSEETI TPWNFEEVVD KGASAQSFIE RMTNFDKNLP NEKVLPKHSL LYEYFTVYNE LTKVKYVTEG MRKPAFLSGE QKKAIVDLLF KTNRKVTVKQ LKEDYFKKIE CFDSVEISGV EDRFNASLGT YHDLLKIIKD KDFLDNEENE DILEDIVLTL TLFEDREMIE ERLKTYAHLF DDKVMKQLKR RRYTGWGRLS RKLINGIRDK QSGKTILDFL KSDGFANRNF MQLIHDDSLT FKEDIQKAQV SGQGDSLHEH IANLAGSPAI KKGILQTVKV VDELVKVMGR HKPENIVIEM ARENQTTQKG QKNSRERMKR IEEGIKELGS QILKEHPVEN TQLQNEKLYL YYLQNGRDMY VDQELDINRL SDYDVDHIVP QSFLKDDSID NKVLTRSDKN RGKSDNVPSE EVVKKMKNYW RQLLNAKLIT QRKFDNLTKA ERGGLSELDK AGFIKRQLVE TRQITKHVAQ ILDSRMNTKY DENDKLIREV KVITLKSKLV SDFRKDFQFY KVREINNYHH AHDAYLNAVV GTALIKKYPK LESEFVYGDY KVYDVRKMIA KSEQEIGKAT AKYFFYSNIM NFFKTEITLA NGEIRKRPLI ETNGETGEIV WDKGRDFATV RKVLSMPQVN IVKKTEVQTG GFSKESILPK RNSDKLIARK KDWDPKKYGG FDSPTVAYSV LVVAKVEKGK SKKLKSVKEL LGITIMERSS FEKNPIDFLE AKGYKEVKKD LIIKLPKYSL FELENGRKRM LASAGELQKG NELALPSKYV NFLYLASHYE KLKGSPEDNE QKQLFVEQHK HYLDEIIEQI SEFSKRVILA DANLDKVLSA YNKHRDKPIR EQAENIIHLF TLTNLGAPAA FKYFDTTIDR KRYTSTKEVL DATLIHQSIT GLYETRIDLS QLGGDSRADP KKKRKV
iProt106521 (SEQ ID NO:7825):
MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD HHHHHH
iProt106522 (SEQ ID NO:7826):
MAHHHHHHGG SDKKYSIGLD IGTNSVGWAV ITDEYKVPSK KFKVLGNTDR HSIKKNLIGA LLFDSGETAE ATRLKRTARR RYTRRKNRIC YLQEIFSNEM AKVDDSFFHR LEESFLVEED KKHERHPIFG NIVDEVAYHE KYPTIYHLRK KLVDSTDKAD LRLIYLALAH MIKFRGHFLI EGDLNPDNSD VDKLFIQLVQ TYNQLFEENP INASGVDAKA ILSARLSKSR RLENLIAQLP GEKKNGLFGN LIALSLGLTP NFKSNFDLAE DAKLQLSKDT YDDDLDNLLA QIGDQYADLF LAAKNLSDAI LLSDILRVNT EITKAPLSAS MIKRYDEHHQ DLTLLKALVR QQLPEKYKEI FFDQSKNGYA GYIDGGASQE EFYKFIKPIL EKMDGTEELL VKLNREDLLR KQRTFDNGSI PHQIHLGELH AILRRQEDFY PFLKDNREKI EKILTFRIPY YVGPLARGNS RFAWMTRKSE ETITPWNFEE VVDKGASAQS FIERMTNFDK NLPNEKVLPK HSLLYEYFTV YNELTKVKYV TEGMRKPAFL SGEQKKAIVD LLFKTNRKVT VKQLKEDYFK KIECFDSVEI SGVEDRFNAS LGTYHDLLKI IKDKDFLDNE ENEDILEDIV LTLTLFEDRE MIEERLKTYA HLFDDKVMKQ LKRRRYTGWG RLSRKLINGI RDKQSGKTIL DFLKSDGFAN RNFMQLIHDD SLTFKEDIQK AQVSGQGDSL HEHIANLAGS PAIKKGILQT VKVVDELVKV MGRHKPENIV IEMARENQTT QKGQKNSRER MKRIEEGIKE LGSQILKEHP VENTQLQNEK LYLYYLQNGR DMYVDQELDI NRLSDYDVDH IVPQSFLKDD SIDNKVLTRS DKNRGKSDNV PSEEVVKKMK NYWRQLLNAK LITQRKFDNL TKAERGGLSE LDKAGFIKRQ LVETRQITKH VAQILDSRMN TKYDENDKLI REVKVITLKS KLVSDFRKDF QFYKVREINN YHHAHDAYLN AVVGTALIKK YPKLESEFVY GDYKVYDVRK MIAKSEQEIG KATAKYFFYS NIMNFFKTEI TLANGEIRKR PLIETNGETG EIVWDKGRDF ATVRKVLSMP QVNIVKKTEV QTGGFSKESI LPKRNSDKLI ARKKDWDPKK YGGFDSPTVA YSVLVVAKVE KGKSKKLKSV KELLGITIME RSSFEKNPID FLEAKGYKEV KKDLIIKLPK YSLFELENGR KRMLASAGEL QKGNELALPS KYVNFLYLAS HYEKLKGSPE DNEQKQLFVE QHKHYLDEII EQISEFSKRV ILADANLDKV LSAYNKHRDK PIREQAENII HLFTLTNLGA PAAFKYFDTT IDRKRYTSTK EVLDATLIHQ SITGLYETRI DLSQLGGDSR ADPKKKRKV
iProt106658 (SEQ ID NO:7827):
MGSSHHHHHH HHENLYFQGS MDKKYSIGLD IGTNSVGWAV ITDEYKVPSK KFKVLGNTDR HSIKKNLIGA LLFDSGETAE ATRLKRTARR RYTRRKNRIC YLQEIFSNEM AKVDDSFFHR LEESFLVEED KKHERHPIFG NIVDEVAYHE KYPTIYHLRK KLVDSTDKAD LRLIYLALAH MIKFRGHFLI EGDLNPDNSD VDKLFIQLVQ TYNQLFEENP INASGVDAKA ILSARLSKSR RLENLIAQLP GEKKNGLFGN LIALSLGLTP NFKSNFDLAE DAKLQLSKDT YDDDLDNLLA QIGDQYADLF LAAKNLSDAI LLSDILRVNT EITKAPLSAS MIKRYDEHHQ DLTLLKALVR QQLPEKYKEI FFDQSKNGYA GYIDGGASQE EFYKFIKPIL EKMDGTEELL VKLNREDLLR KQRTFDNGSI PHQIHLGELH AILRRQEDFY PFLKDNREKI EKILTFRIPY YVGPLARGNS RFAWMTRKSE ETITPWNFEE VVDKGASAQS FIERMTNFDK NLPNEKVLPK HSLLYEYFTV YNELTKVKYV TEGMRKPAFL SGEQKKAIVD LLFKTNRKVT VKQLKEDYFK KIECFDSVEI SGVEDRFNAS LGTYHDLLKI IKDKDFLDNE ENEDILEDIV LTLTLFEDRE MIEERLKTYA HLFDDKVMKQ LKRRRYTGWG RLSRKLINGI RDKQSGKTIL DFLKSDGFAN RNFMQLIHDD SLTFKEDIQK AQVSGQGDSL HEHIANLAGS PAIKKGILQT VKVVDELVKV MGRHKPENIV IEMARENQTT QKGQKNSRER MKRIEEGIKE LGSQILKEHP VENTQLQNEK LYLYYLQNGR DMYVDQELDI NRLSDYDVDH IVPQSFLKDD SIDNKVLTRS DKNRGKSDNV PSEEVVKKMK NYWRQLLNAK LITQRKFDNL TKAERGGLSE LDKAGFIKRQ LVETRQITKH VAQILDSRMN TKYDENDKLI REVKVITLKS KLVSDFRKDF QFYKVREINN YHHAHDAYLN AVVGTALIKK YPKLESEFVY GDYKVYDVRK MIAKSEQEIG KATAKYFFYS NIMNFFKTEI TLANGEIRKR PLIETNGETG EIVWDKGRDF ATVRKVLSMP QVNIVKKTEV QTGGFSKESI LPKRNSDKLI ARKKDWDPKK YGGFDSPTVA YSVLVVAKVE KGKSKKLKSV KELLGITIME RSSFEKNPID FLEAKGYKEV KKDLIIKLPK YSLFELENGR KRMLASAGEL QKGNELALPS KYVNFLYLAS HYEKLKGSPE DNEQKQLFVE QHKHYLDEII EQISEFSKRV ILADANLDKV LSAYNKHRDK PIREQAENII HLFTLTNLGA PAAFKYFDTT IDRKRYTSTK EVLDATLIHQ SITGLYETRI DLSQLGGDGG GSPKKKRKV
iProt106745 (SEQ ID NO:7828):
MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNAVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH
iProt106746 (SEQ ID NO:7829):
MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEALY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP ALESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKAPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH
iProt106747 (SEQ ID NO:7830):
MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLADDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP ALESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKAPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH
iProt106884 (SEQ ID NO:7831):
MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTAFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGAL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMALIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRAITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH
Нуклеиновые кислоты, кодирующие молекулы Сas9
Нуклеиновые кислоты, кодирующие молекулы Сas9, например, активную молекулу Сas9 или неактивную молекулу Сas9, приведены здесь.
Примеры нуклеиновых кислот, кодирующих молекулы Сas9, описаны в Cong et al., SCIENCE 2013, 399 (6121): 819-823; Wang et al, CELL 2013, 153 (4): 910-918; Mali et al., Science 2013, 399 (6121): 823-826; Jinek et al, SCIENCE 2012, 337 (6096): 816-821.
В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу Сas9, может быть синтетической последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, молекула синтетической нуклеиновой кислоты может быть химически модифицирована, например, как описано в разделе XIII. В одном варианте осуществления мРНК Сas9 имеет одно или несколько, например, следующих свойств: она имеет кэп, полиаденилирована, имеет замещения 5-метилцитидином и/или псевдоуридином.
Кроме того, или альтернативно, последовательность синтетической нуклеиновой кислоты может быть кодон-оптимизирована, например, по меньшей мере, один нераспространённый кодон или не очень распространённый кодон может быть заменен часто встречающимся кодоном. Например, синтетическая нуклеиновая кислота может направлять синтез оптимизированной информационной мРНК, например, оптимизированной для экспрессии в системе экспресии млекопитающих, например, описанной здесь.
Ниже представлена примерная последовательность нуклеиновой кислоты, кодон-оптимизированная, кодирующая молекулу Сas9 S.pyogenes.
atggataaaa agtacagcat cgggctggac atcggtacaa actcagtggg gtgggccgtg 60
attacggacg agtacaaggt accctccaaa aaatttaaag tgctgggtaa cacggacaga 120
cactctataa agaaaaatct tattggagcc ttgctgttcg actcaggcga gacagccgaa 180
gccacaaggt tgaagcggac cgccaggagg cggtatacca ggagaaagaa ccgcatatgc 240
tacctgcaag aaatcttcag taacgagatg gcaaaggttg acgatagctt tttccatcgc 300
ctggaagaat cctttcttgt tgaggaagac aagaagcacg aacggcaccc catctttggc 360
aatattgtcg acgaagtggc atatcacgaa aagtacccga ctatctacca cctcaggaag 420
aagctggtgg actctaccga taaggcggac ctcagactta tttatttggc actcgcccac 480
atgattaaat ttagaggaca tttcttgatc gagggcgacc tgaacccgga caacagtgac 540
gtcgataagc tgttcatcca acttgtgcag acctacaatc aactgttcga agaaaaccct 600
ataaatgctt caggagtcga cgctaaagca atcctgtccg cgcgcctctc aaaatctaga 660
agacttgaga atctgattgc tcagttgccc ggggaaaaga aaaatggatt gtttggcaac 720
ctgatcgccc tcagtctcgg actgacccca aatttcaaaa gtaacttcga cctggccgaa 780
gacgctaagc tccagctgtc caaggacaca tacgatgacg acctcgacaa tctgctggcc 840
cagattgggg atcagtacgc cgatctcttt ttggcagcaa agaacctgtc cgacgccatc 900
ctgttgagcg atatcttgag agtgaacacc gaaattacta aagcacccct tagcgcatct 960
atgatcaagc ggtacgacga gcatcatcag gatctgaccc tgctgaaggc tcttgtgagg 1020
caacagctcc ccgaaaaata caaggaaatc ttctttgacc agagcaaaaa cggctacgct 1080
ggctatatag atggtggggc cagtcaggag gaattctata aattcatcaa gcccattctc 1140
gagaaaatgg acggcacaga ggagttgctg gtcaaactta acagggagga cctgctgcgg 1200
aagcagcgga cctttgacaa cgggtctatc ccccaccaga ttcatctggg cgaactgcac 1260
gcaatcctga ggaggcagga ggatttttat ccttttctta aagataaccg cgagaaaata 1320
gaaaagattc ttacattcag gatcccgtac tacgtgggac ctctcgcccg gggcaattca 1380
cggtttgcct ggatgacaag gaagtcagag gagactatta caccttggaa cttcgaagaa 1440
gtggtggaca agggtgcatc tgcccagtct ttcatcgagc ggatgacaaa ttttgacaag 1500
aacctcccta atgagaaggt gctgcccaaa cattctctgc tctacgagta ctttaccgtc 1560
tacaatgaac tgactaaagt caagtacgtc accgagggaa tgaggaagcc ggcattcctt 1620
agtggagaac agaagaaggc gattgtagac ctgttgttca agaccaacag gaaggtgact 1680
gtgaagcaac ttaaagaaga ctactttaag aagatcgaat gttttgacag tgtggaaatt 1740
tcaggggttg aagaccgctt caatgcgtca ttggggactt accatgatct tctcaagatc 1800
ataaaggaca aagacttcct ggacaacgaa gaaaatgagg atattctcga agacatcgtc 1860
ctcaccctga ccctgttcga agacagggaa atgatagaag agcgcttgaa aacctatgcc 1920
cacctcttcg acgataaagt tatgaagcag ctgaagcgca ggagatacac aggatgggga 1980
agattgtcaa ggaagctgat caatggaatt agggataaac agagtggcaa gaccatactg 2040
gatttcctca aatctgatgg cttcgccaat aggaacttca tgcaactgat tcacgatgac 2100
tctcttacct tcaaggagga cattcaaaag gctcaggtga gcgggcaggg agactccctt 2160
catgaacaca tcgcgaattt ggcaggttcc cccgctatta aaaagggcat ccttcaaact 2220
gtcaaggtgg tggatgaatt ggtcaaggta atgggcagac ataagccaga aaatattgtg 2280
atcgagatgg cccgcgaaaa ccagaccaca cagaagggcc agaaaaatag tagagagcgg 2340
atgaagagga tcgaggaggg catcaaagag ctgggatctc agattctcaa agaacacccc 2400
gtagaaaaca cacagctgca gaacgaaaaa ttgtacttgt actatctgca gaacggcaga 2460
gacatgtacg tcgaccaaga acttgatatt aatagactgt ccgactatga cgtagaccat 2520
atcgtgcccc agtccttcct gaaggacgac tccattgata acaaagtctt gacaagaagc 2580
gacaagaaca ggggtaaaag tgataatgtg cctagcgagg aggtggtgaa aaaaatgaag 2640
aactactggc gacagctgct taatgcaaag ctcattacac aacggaagtt cgataatctg 2700
acgaaagcag agagaggtgg cttgtctgag ttggacaagg cagggtttat taagcggcag 2760
ctggtggaaa ctaggcagat cacaaagcac gtggcgcaga ttttggacag ccggatgaac 2820
acaaaatacg acgaaaatga taaactgata cgagaggtca aagttatcac gctgaaaagc 2880
aagctggtgt ccgattttcg gaaagacttc cagttctaca aagttcgcga gattaataac 2940
taccatcatg ctcacgatgc gtacctgaac gctgttgtcg ggaccgcctt gataaagaag 3000
tacccaaagc tggaatccga gttcgtatac ggggattaca aagtgtacga tgtgaggaaa 3060
atgatagcca agtccgagca ggagattgga aaggccacag ctaagtactt cttttattct 3120
aacatcatga atttttttaa gacggaaatt accctggcca acggagagat cagaaagcgg 3180
ccccttatag agacaaatgg tgaaacaggt gaaatcgtct gggataaggg cagggatttc 3240
gctactgtga ggaaggtgct gagtatgcca caggtaaata tcgtgaaaaa aaccgaagta 3300
cagaccggag gattttccaa ggaaagcatt ttgcctaaaa gaaactcaga caagctcatc 3360
gcccgcaaga aagattggga ccctaagaaa tacgggggat ttgactcacc caccgtagcc 3420
tattctgtgc tggtggtagc taaggtggaa aaaggaaagt ctaagaagct gaagtccgtg 3480
aaggaactct tgggaatcac tatcatggaa agatcatcct ttgaaaagaa ccctatcgat 3540
ttcctggagg ctaagggtta caaggaggtc aagaaagacc tcatcattaa actgccaaaa 3600
tactctctct tcgagctgga aaatggcagg aagagaatgt tggccagcgc cggagagctg 3660
caaaagggaa acgagcttgc tctgccctcc aaatatgtta attttctcta tctcgcttcc 3720
cactatgaaa agctgaaagg gtctcccgaa gataacgagc agaagcagct gttcgtcgaa 3780
cagcacaagc actatctgga tgaaataatc gaacaaataa gcgagttcag caaaagggtt 3840
atcctggcgg atgctaattt ggacaaagta ctgtctgctt ataacaagca ccgggataag 3900
cctattaggg aacaagccga gaatataatt cacctcttta cactcacgaa tctcggagcc 3960
cccgccgcct tcaaatactt tgatacgact atcgaccgga aacggtatac cagtaccaaa 4020
gaggtcctcg atgccaccct catccaccag tcaattactg gcctgtacga aacacggatc 4080
gacctctctc aactgggcgg cgactag 4107
Коррекция, обусловленная двухцепочечным разрывом.
В одном варианте осуществления двухцепочечный разрыв осуществляют молекулой Сas9, обладающей активностью расщепления, ассоциированной с HNH-подобным доменом, или активностью расщепления, ассоциированной с RuvC-подобным доменом, например с N-концевым RuvC-подобный доменом, например, Сas9 молекулы дикого типа. Такие варианты осуществления требуют только одиночной gРНК.
Коррекция, обусловленная одноцепочечным разрывом.
В других вариантах осуществления два одноцепочечных разрыва нитей, или два ника (nick) осуществляются молекулой Сas9, обладающей активностью никазы, например активностью расщепления, связанной с HNH-подобным доменом или связанной с N-концевым RuvC-подобным доменом. Для таких вариантов осуществления требуются две gРНК, по одной для осуществления каждого одноцепочечного разрыва. В одном варианте осуществления молекула Сas9, обладающая активностью никазы, расщепляет цепь, с которой гибридизуется gРНК, но не цепь, комплементарную цепи, с которой гибридизуется gРНК. В одном варианте осуществления молекула Сas9, имеющая активность никазы, не расщепляет цепь, с которой гибридизуется gРНК, а расщепляет цепь, комплементарную цепи, с которой гибридизуется gРНК.
В одном варианте осуществления никаза обладает активностью HNH, т.е. представлена молекулой Сas9, в которой инактивирована активность RuvC, например, молекулой Сas9 с мутацией D10, например, с мутацией D10A. D10A инактивирует RuvC; поэтому никаза Сas9 имеет (только) активность HNH и будет вносить разрыв в ту цепь, с которой гибридизуется gРНК (например, в комплементарная цепь, не имеющую NGG PAM).
В других вариантах осуществления молекула Сas9, имеющая H840, например, мутацию H840A, может быть использована в качестве никазы. H840A инактивирует HNH; поэтому никаза Сas9 имеет (только) активность RuvC и может вносить разрывы в некомплементарную цепь (например, цепь, имеющую NGG PAM и последовательность которой идентична gРНК).
В варианте осуществления, в котором никаза и две gРНК используются для размещения двух одноцепочечных разрывов (ников), один разрыв находится на «+»цепи, а другой разрыв находится на «-»цепи целевой нуклеиновой кислоты-мишени. PAM обращены наружу. gGРНК могут быть выбраны таким образом, чтобы gРНК разделялись на примерно от 0-50, 0-100 или 0-200 нуклеотидов. В одном варианте осуществления не существует перекрывания между целевой последовательностью, которая комплементарна целевым доменам двух gРНК. В одном варианте осуществления gРНК не перекрываются и разделяются на целых 50, 100 или 200 нуклеотидов. В одном варианте осуществления использование двух gРНК может повысить специфичность, например, путем уменьшения нецелевого связывания (Ran el cil., CELL 2013).
В одном варианте осуществления один одноцепочечный разрыв может применяться для индуцирования HDR. Здесь предполагается, что один одноцепочечный разрыв может быть использован для увеличения соотношения эффективности систем HDR, HR или NHEJ на данном участке расщепления.
Размещение двухцепочечного разрыва двойной нити или одноцепочечного разрыва относительно целевого положения.
Двухцепочечный разрыв дуплексой молекулы ДНК или одноцепочечный разрыв любой из цепей должен находится достаточно близко к целевому положению для осуществления коррекции. В одном варианте осуществления расстояние составляет не более 50, 100, 200, 300, 350 или 400 нуклеотидов. Не ограничиваясь теорией, считается, что разрыв должен быть достаточно близок к целевому положению, так чтобы разрыв находится в пределах области, которая подлежит удалению при помощи экзонуклеазы при внесении второго концевого разрыва (края резекции). Если расстояние между целевым положением и первым разрывом слишком велико, мутация не может быть включена в последовательность, и, следовательно, не может быть исправлена, так как донорская последовательность может использоваться для коррекции последовательности только в области резекции.
В одном варианте осуществления, в котором gРНК (мономолекулярная (или «химерная)» или модульная) и нуклеаза Сas9 осуществляют двухцепочечный разрыв с целью активации репарации по типу гомологичной рекомбинации (HDR) или HR-опосредованной коррекции (по типу гомологичной рекомбинации), участок расщепления находится в пределах 0-200 нп (например, от 0 до 175, от 0 до 150, от 0 до 125, от 0 до 100, от 0 до 75, от 0 до 50, от 0 до 25, от 25 до 200, от 25 до 175, от 25 до 150, от 25 до 125, от 25 до 100, 25 до 75, от 25 до 50, от 50 до 200, от 50 до 175, от 50 до 150, от 50 до 125, от 50 до 100, от 50 до 75, от 75 до 200, от 75 до 175, от 75 до 150, от 75 до 125, от 75 до 100 нп) от целевой позиции. В одном варианте осуществления сайт расщепления находится в пределах 0-100 нп (например, от 0 до 75, от 0 до 50, от 0 до 25, от 25 до 1 00, от 25 до 75, от 25 до 50, от 50 до 100, от 50 до 75 или от 75 до 100 нп) от целевого положения.
В одном варианте осуществления, в котором две gРНК (независимые, мономолекулярные (или «химерные)» или модульные) в комплексе с никазой Сas9 осуществляют два одноцепочечных разрыва с целью коррекции путём репарации по типу гомологичной рекомбинации (HDR), более близкий одночепочный разрыв находится в пределах 0-200 нп (например, от 0 до 175, от 0 до 150, от 0 до 125, от 0 до 100, от 0 до 75, от 0 до 50, от 0 до 25, от 25 до 200, от 25 до 175, от 25 до 150, от 25 до 125, от 25 до 100, 25 до 75, от 25 до 50, от 50 до 200, от 50 до 175, от 50 до 150, от 50 до 125, от 50 до 100, от 50 до 75, от 75 до 200, от 75 до 175, от 75 до 150, от 75 до 125, от 75 до 100 нп) от целевого положения и оба одноцепочечных разрыва в идеале будут находиться в пределах 25-55 нп друг от друга (например, от 25 до 50, от 25 до 45, от 25 до 40, от 25 до 35, от 25 до 30, от 30 до 55, 30 до 50, от 30 до 45, от 30 до 40, от 30 до 35, от 35 до 55, от 35 до 50, от 35 до 45, от 35 до 40, от 40 до 55, от 40 до 50, от 40 до 45 пар оснований) и не более чем 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 или 5 нп друг от друга). В одном варианте осуществления сайт расщепления находится от 0 до 100 нп. (например, от 0 до 75, от 0 до 50, от 0 до 25, от 25 до 100, от 25 до 75, от 25 до 50, от 50 до 100, от 50 до 75 или от 75 до 100 нп) от целевой позиции.
В одном варианте осуществления две gРНК (независимые, мономолекулярные (или «химерные») или модульные), скомбинированы так, чтобы осуществить двухцепочечный разрыв по обеим сторонам целевого положения. В альтернативном варианте осуществления три gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК, скомбинированы так, чтобы расположить двухцепочечный разрыв (то есть одним комплексом gРНК с нуклеазой Сas9) и два одиночных одноцепочечных разрыва либо два парных одноцепочечных разрыва (т. е. два комплекса gРНК с никазами Сas9) по обе стороны от целевого положения (например, первая gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т.е. 5') от целевого положения, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т.е. 3') от целевого положения). В другом варианте осуществления четыре gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК), скомбинированы так, чтобы осуществить две пары одноцепочечных разрывов (т.е. двух пар комплексов из gРНК с никазами Cas) причём первая пара gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т.е. 5') от целевого положения, а вторая пара gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т. е. 3') от целевого положения. Двухцепочные разрыв(ы) или ближайшая пара двойных одноцепочечных разрывов в идеале должны находиться в пределах 0-500 нп от в целевого положения (например, не более 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, l00, 50 или 25 нп от целевого положения). При использовании никаз, оба парных одноцепочечных разрыва (ника) находятся в пределах 25-55 нп друг от друга (например, между 25 и 50, 25 и 45, 25 и 40, 25 и 35, 25 и 30, 50 и 55, 45 и 55, 40 и 55, 35 и 55, 30 и 55, 30 и 50, 35 и 50, 40 и 50, 45 и 50, 35 и 45 или 40 и 45 нп) и не более 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 нп).
В одном варианте осуществления, две gРНК (независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК), скомбинированы так, чтобы осуществить двухцепочечный разрыв по обеим сторонам целевого положения. В альтернативном варианте осуществления три gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК, скомбинированы так, чтобы расположить двухцепочечный разрыв (то есть одним комплексом gРНК с нуклеазой Сas9) и два одиночных одноцепочечных разрыва либо два парных одноцепочечных разрыва (т. е. два комплекса gРНК с никазами Сas9) на двух целевых последовательностях (например, первая gРНК используется для нацеливания на целевую последовательность вверх по течению (т.е. 5'), а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т.е. 3') от целевой последовательности сайта инсерции. В другом варианте осуществления четыре gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК), скомбинированы так, чтобы осуществить две пары одноцепочечных разрывов (т.е. с помощью двух пар комплексов из gРНК с никазами Cas) по обе стороны от сайта инсерции (т.е. первая gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т. е. 5') от целевой последовательности, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т.е. 3') от целевой последовательности, описанной здесь). Двухцепочные разрыв(ы) или ближайший из одноцепочечных разрывов в паре в идеале должны находиться в пределах 0-500 нп от в целевого положения (например, не более 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50 или 25 п.н. от целевого положения). При использовании никаз, два парных одноцепочечных разрыва (ника) находятся в пределах (например, между 25 и 50, 25 и 45, 25 и 40, 25 и 35, 25 и 30, 50 и 55, 45 и 55, 40 и 55, 35 и 55, 30 и 55, 30 и 50, 35 и 50, 40 и 50, 45 и 50, 35 и 45 или 40-45 нп) и не более 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 нп).
Длина (последовательностей) «плеч» гомологии.
Плечо гомологии должно доходить, по меньшей мере, до области, в которой может находится край резекции, например, для того, чтобы образовавшийся при разрыве одноцепочечный конец ДНК мог найти комплементарную область, принадлежащую матрице-донору. Общая длина может быть ограничена такими параметрами, как размер плазмиды или размер вируса, ограниченный упаковочным капсидом. В одном варианте осуществления гомологичное плечо не распространяется на повторяющиеся элементы, например ALU повторы, LINE повторы. Матрица может иметь два плеча гомологии одинаковой или разной длины.
Примерные длины плеч гомологии включают по меньшей мере 25, 50, 100, 250, 500, 750 или 1000 нуклеотидов.
Целевое положение, как используется здесь, относится к местонахождению на нуклеиновой кислоте-мишени (например, хромосоме), которое модифицируется в процессе, опосредованным Cas молекулой. Например, целевое положение может подвергаться модификации при расщеплении молекулой Cas целевой нуклеиновой кислоты-мишени и модификации, обусловленной нуклеиновой кислотой-матрицей, например, являющейся коррекцией целевого положения. В одном варианте осуществления целевое положение может быть сайтом между двумя нуклеотидами, например смежными нуклеотидами, на нуклеиновой кислоте-мишени, в которую добавляется один или несколько нуклеотидов. Целевое положение может содержать один или несколько нуклеотидов, которые изменены, например, скорректированы с помощью нуклеиновой кислоты-матрицы. В варианте осуществления целевое положение находится в пределах целевой последовательности (например, последовательности, с которой связывается gРНК). В одном варианте осуществления целевое положение находится выше или ниже по течению последовательности-мишени (например, последовательности, к которой связывается gРНК).
Как правило, последовательность матрицы подвергается обусловленной разрывом или катализированной рекомбинации с целевой последовательностью. В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота-матрица включает последовательность, соответствующую участку на целевой последовательности, который расщепляется в результате действия молекулы Сas9. В варианте осуществления нуклеиновая кислота-матрица включает в себя последовательность, которая соответствует как первому сайту, расщепляемому в результате действия молекулы Сas9, так и второму сайту на целевой последовательности, расщепляемому в результате действия молекулы Сas9.
В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота-матрица может включать в себя последовательность, которая приводит к изменению кодирующей последовательности, подвергающейся трансляции, например, такому, которое приводит к замене одной аминокислоты на другую в белковом продукте, например, изменяя мутантный аллель на аллель дикого типа, изменяя аллель дикого типа в мутантный аллель и/или к приводит к введению стоп-кодона, представляет собой инсерцию аминокислотного остатка, делецию аминокислотного остатка или нонсенс-мутацию.
В других вариантах осуществления нуклеиновая кислота-матрица может включать в себя последовательность, которая приводит к изменению некодирующей последовательности, например, к изменению в экзоне или в 5'или 3' нетранслируемой или нетранскрибируемой области. Такие изменения включают в себя изменения в регуляторном элементе, например, промоторе, энхансере и элементе регуляции с цис-или транс-действием. Нуклеиновая кислота-матрица может включать последовательность, которая при интеграции приводит к:
уменьшению активности положительного регуляторного элемента;
увеличению активности положительного регуляторного элемента;
уменьшению активности отрицательного регуляторного элемента;
увеличению активности отрицательного регуляторного элемента;
уменьшению экспрессии гена; увеличению экспрессии гена;
повышению устойчивости к расстройству или заболеванию;
повышение устойчивости к вирусному проникновению;
коррекции мутации или изменению нежелательного аминокислотного остатка;
коррекции, увеличению, устранению или уменьшению биологического свойства продукта гена, например увеличению ферментативной активности фермента или увеличению способности продукта гена взаимодействовать с другой молекулой.
Нуклеиновая кислота-матрица может включать последовательность, которая приводит к изменению 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или более нуклеотидов последовательности-мишени.
В варианте осуществления нуклеиновая кислота-матрица составляет 20+/-10, 30+/-10, 40+/-10, 50+/-10, 60+/-10, 70+/-10, 80+/-10, 90+/-10, 100+/-10, 1 10+/-10, 120+/-10, 130+/-10, 140+/-10, 150+/-10, 160+/-10, 170+/-10, 1 80+/-10, 190+/-10, 200+/-10, 210+/-10, 220+/-10, 200-300, 300-400, 400-500, 500 -600, 600-700, 700-800, 800-900, 900-1000, 1000-2000, 2000-3000 или более 3000 нуклеотидов длиной.
Нуклеиновая кислота-матрица содержит следующие компоненты:
[5'-плечо гомологии]-[последовательность инсерции]-[3'-плечо гомологии].
Плечи гомологии обеспечивают рекомбинацию при встраивании в хромосому для замены нежелательного элемента, например мутации или её остатков (mutational signature) с помощью замещающей последовательности. В одном варианте осуществления плечи гомологиии находятся по краям самых дальних сайтов расщепления. В варианте осуществления 3'-конец 5'-плеча гомологии находится рядом с 5'-концом последовательности замены. В варианте осуществления 5'-плечо гомологии может распространяться на, по меньшей мере, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 180, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500 или 2000 нуклеотидов, находящихся в 5' позиции от 5'-конца замещающей последовательности.
В варианте осуществления 5'-конец 3'-плеча гомологии находится рядом с 3'-концом замещающей последовательности. В одном варианте осуществления 3'-плечо гомологии распространяться на, по меньшей мере, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 180, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500 или 2000 нуклеотидов, находящихся в 3' позиции от 3'-конца замещающей последовательности.
В настоящем описании предполагается, что одно или оба плеча гомологии могут быть сокращены, чтобы избежать включения последовательностиопределенных повторяющихся элементов, например, Alu повторов, LINE повторов. Например, 5'-плечо гомологии может быть укорочено, чтобы избежать включения последовательности повторяющегося элемента. В других вариантах осуществления 3'-плечо гомологии может быть укорочено, чтобы избежать включения последовательности повторяющегося элемента. В некоторых вариантах осуществления как 5'-, так и 3'-плечи гомологии могут быть укорочены, чтобы избежать включения последовательностей определенных повторяющихся элементов.
В настоящем описании предполагается, что матричные нуклеиновые кислоты для коррекции мутации могут быть спроектированы для использования в виде одноцепочечного олигонуклеотида (ssODN). При использовании ssODN 5'- и 3'-плечи гомологии могут иметь длину до 200 пар оснований (нп-нуклеотидных пар) в длину, например, по меньшей мере 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175 или 200 нп в длину. Кроме того, более длинные плечи гомологии для ssODN могут быть рассмотрены по мере улучшения технологий олигонуклеотидного синтеза.
Подходы основанные на NHEJ для направленного изменения генов (таргетинга генов).
Как описано здесь, индуцированное нуклеазой негомологичное соединение концов (NHEJ) может применяться для осуществления ген-специфичных «нокаутов». Индуцированное нуклеазой негомологичное соединение концов (NHEJ) также может быть использовано для удаления (например, при делеции) последовательности в представляющем интерес гене.
Не ограничиваясь теорией, считается, что в одном из вариантов осуществления, геномные изменения, осуществлённые описанными здесь способами, сделаны с помощью репарации по типу негомологичного соединения концов (NHEJ), характеризующимся высокой вероятностью ошибок. NHEJ восстанавливает двухцепочечный разрыв ДНК, соединяя оба конца; однако, как правило, исходная последовательность восстанавливается только в том случае, если два комплементарных конца, в том же состоянии, как они были сформированы двунитевым разрывом, лигируются без ошибок. Концы ДНК двухцепочечного разрыва часто являются предметом ферментативной обработки, что приводит к добавлению или удалению нуклеотидов на одной или обеих нитях до воссоединения концов. Это приводит к наличию мутаций инсерции и/или делеции (индела) в последовательности ДНК в месте соединения концов путём NHEJ. Две трети этих мутаций могут изменить рамку считывания и, следовательно, создать нефункциональный белок. Кроме того, мутации, которые сохраняют рамку считывания, но вводят или удаляют значительную часть последовательности, могут свести к нулю функциональность белка. Это зависит от местоположения мутации, поскольку мутации в критических функциональных доменах, вероятно, менее переносимы, чем мутации в некритических областях белка.
Мутации-инделы, созданные путём NHEJ, непредсказуемы по своей природе; однако на конкретном сайте разрыва предпочтение отдается некоторым последовательностям инделов, такие инделы хорошо представлены в популяции. Длина делеций может сильно варьироваться; чаще всего они находятся в диапазоне 1-50 нп, но делеции могут легко достигать более 100-200 нп. Инсерции, как правило, короче и часто включают короткие дупликации последовательностей, непосредственно связанных с местом разрыва. Однако, можно получить большие инсерции, и в этих случаях последовательность инсерции часто происходит из других областей генома или плазмидной ДНК, присутствующей в клетках.
Поскольку NHEJ является мутагенным процессом, его также можно использовать для удаления небольшой последовательности ДНК, если не требуется формирования определенной конечной последовательности. Если разрыв обоих цепей ДНК спланирован вблизи короткой целевой последовательности, то делеционные мутации, возникающие при репарации по типу негомологичного соединения концов (NHEJ), часто охватывают и, следовательно, удаляют нежелательные нуклеотиды. Для удаления более крупных сегментов ДНК, введение двух двуцепочных разрывов, по одному с каждой стороны последовательности, может приводить к репарации концов по типу NHEJ с удалением всей промежуточной последовательности. Оба этих подхода могут быть использованы для удаления определенных последовательностей ДНК; однако большая вероятность ошибок в ходе NHEJ может все же производить мутации-инделы по сайту репарации.
В способах и композициях, описанных здесь, могут быть использованы обе молекулы Сas9, как с активностью расщепления дуплексной (двуцепочечной ДНК) так и с никазной активностью внесения одноцепочечного разрыва для образования NHEJ-опосредованных инделей. NHEJ-опосредованные инделы, нацеленные на ген, например кодирующую область, например раннюю кодирующую область представляющего интерес гена, могут быть использованы для нокаута (то есть устранения экспрессии) представляющего интерес гена. Ранняя кодирующая область представляющего интерес гена, например, включает в себя последовательность сразу после сайта начала транскрипции, в пределах первого экзона кодирующей последовательности или в пределах 500 пар оснований после начала транскрипции (например, менее 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100 или 50 нп).
Размещение двуцепочечных или одноцепочечных разрывов относительно целевого положения.
В одном варианте осуществления, в котором нуклеаза gРНК и Сas9 осуществляют разрыв двойной цепи с целью индуцирования NHEJ-опосредованных инделей, gРНК, например, мономолекулярная (или химерная) или модульная молекула gРНК, спроектирована так, чтобы произвести один двухцепочечный разрыв в непосредственной близости от нуклеотида целевой позиции. В одном варианте осуществления участок расщепления находится между 0-500 п.п. от целевого положения (например, менее 500, 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нп от целевой позиции).
В одном варианте осуществления, в котором две gРНК в комплексе с Сas9 индуцируют два одноцепочечных разрыва с целью формирования NHEJ-опосредованных инделов, две gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярная (или химерная) или модульная gРНК, спроектированы так, чтобы обеспечить NHEJ-опосредованное восстановление нуклеотида целевого положения. В одном варианте осуществления gРНК спроектированы для размещения разрезов в том же самом положении или в нескольких нуклеотидах друг от друга на разных нитях, в принципе имитирующих двухцепочечный разрыв ДНК. В варианте осуществления более близкий одноцепочечный разрыв находится в пределах 0-30 нп. от целевой позиции (например, менее 30, 25, 20, 1, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нп от целевой позиции), и два одноцепочечных разрыва находятся в пределах 25-55 нп друг от друга (например, от 25 до 50, от 25 до 45, от 25 до 40, от 25 до 35, от 25 до 30, от 50 до 55, 45 до 55, от 40 до 55, от 35 до 55, от 30 до 55, от 30 до 50, от 35 до 50, от 40 до 50, от 45 до 50, от 35 до 45, или от 40 до 45 пар оснований) и не более чем на 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 пар оснований). В одном варианте осуществления gРНК спроектированы таким образом, чтобы поместить одноцепочечные разрывы по обе стороны от нуклеотида целевой позиции.
Обе Cas-молекулы, как Cas-молекула, создающая двухцепочечный разрыв, так и Cas-молекула с никазной активностью, создающая одноцепочечный разрыв, могут быть использованы в способах и композициях, описанных здесь, для внесения разрывов с обеих сторон целевого положения. Двухцепочечные или спаренные одноцепочечные разрывы могут быть внесены с обеих сторон целевого положения для удаления последовательности нуклеиновой кислоты между двумя разрывами (так, например, происходит делеция области между двумя разрывами). В одном варианте осуществления две gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярная (или химерная) или модульная gРНК, спроектированы так, чтобы расположить двухцепочные разрывы по обеим сторонам целевого положения (например, первая gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т.е. 5') от мутации в гене или молекулярном каскаде, описанных здесь, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т.е. 3') мутации в гене или каскаде реакций, описанных здесь). В альтернативном варианте осуществления три gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК, спроектированые для внесения двухцепочечного разрыва (т.е. осуществляемого одним комплексом gРНК с нуклеазой Сas9) и двух независимых одноцепочечных разрывов или парных одноцепочечных разрывов (т. е. осуществляемых двумя другими комплексами gРНК с никазами Сas9) по обе стороны от целевого положения (например, первая gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т. е. 5') от мутации в гене или в молекулярном каскаде, описанных здесь, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т. е. 3') от мутации в гене или в молекулярном каскаде, описанных здесь). В другом варианте осуществления четыре gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярная (или химерная) или модульная gРНК, спроектированы для внесения двух пар однонитевых разрывов (т.е. путём двух пар комплексов gРНК с никазами Сas9) по обе стороны от целевого положения (например, первая gРНК используется для нацеливания вверх по потоку (т. е. 5') мутации в гене или в молекулярном каскаде, описанных здесь, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т. е. 3') мутации в гене или в молекулярном каскаде, описанных здесь). Двухцепочные разрыв(ы) нити или ближайшие друг к другу одноцепочечные разрывы в парных одноцепочечных разрывах в идеале должны находиться в пределах 0-500 нп от целевого положения (например, не более 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50 или 25 нп от целевой позиции). При использовании никаз, два парных одноцепочечных разрыва находятся в пределах 25-55 нп друг от друга (например, между 25 и 50, между 25 и 45, между 25 и 40, между 25 и 35, между 25 и 30, между 50 и 55, между 45 и 55, между 40 и 55, между 35 и 55, между 30 и 55, между 30 и 50, между 35 и 50, между 40 и 50, между 45 и 50, между 35 и 45 или между 40 и 45 нп) и не более 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 пар оснований). В других вариантах осуществления введение нуклеиновой кислоты-матрицы может быть опосредовано присоединением конца микрогомологии (MMEJ). См., например, статью Saksuma et al., “MMEJ-assisted gene knock-in using TALENs and CRISPR-Сas9 with the PITCh systems.” Nature Protocols 11, 118-133 (2016) doi:10.1038/nprot.2015.140, опубликованую онлайн 17 декабря 2015, содержание которой включено в настоящий документ в полном объеме посредством ссылки.
VIII. Системы, содержащие более одной молекулы gРНК.
Хотя и не ограничено теорией, здесь было неожиданно продемонстрировано, что нацеливание сразу на две целевые последовательности (например, при использовании двух молекул gРНК в комплексе с Сas9-молекуламы, где каждый комплекс индуцируют одно- или двухцепочечный разрыв внутри или вблизи соответствующей им последовательности-мишени), расположенные в непосредственной близости на непрерывной нуклеиновой кислоте, приводит к удалению (например, делеции) последовательности нуклеиновой кислоты (или по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% последовательности нуклеиновой кислоты), расположенной между двумя целевыми последовательностями. В некоторых аспектах настоящее раскрытие предусматривает использование двух или более молекул gРНК, содержащих нацеливающие домены, нацеленные на целевые последовательности, расположенные в непосредственной близости на непрерывной нуклеиновой кислоте, например на хромосоме, например на нуклениновой кислоте гена или генетического локуса, включая его интроны, экзоны и регуляторные элементы. Это достигается, например, путём введения двух или более молекул gРНК вместе с одной или несколькими молекулами Сas9 (или нуклеиновой кислоты, кодирующей две или более молекулы gРНК и/или одну или более молекул Сas9) в клетку.
В некоторых аспектах целевые последовательности двух или более молекул gРНК расположены на расстоянии по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10 000, 11 000, 12 000, 13 000, 14 000 или 15000 нуклеотидов друг от друга на непрерывной нуклеиновой кислоте, но не более 25000 нуклеотидов на непрерывной нуклеиновой кислоте. В одном варианте осуществления целевые последовательности расположены примерно на расстоянии 4000 нуклеотидов. В одном варианте осуществления последовательности-мишени расположены примерно на расстоянии 6000 нуклеотидов.
В некоторых аспектах используется множество молекул gРНК где каждая нацелена на свою последовательность-мишень в пределах одного и того же гена или генетического локуса. В другом аспекте используется множество молекул gРНК где каждая нацелена на свою последовательность-мишень в двух или более различных генах.
В некоторых аспектах изобретение предоставляет композиции и клетки, содержащие множество, например, 2 или более, например, 2, молекулы gРНК по изобретению, в которых множество целевых последовательностей расположены на расстоянии менее 15 000, менее 14000, меньше, чем 13 000, менее 12 000, менее 11 000, менее 10 000, менее 9 000, менее 8 000, менее 7 000, менее 6 000, менее 5000, менее 4000, менее 3000, менее 2000, менее 800, менее 700, менее 700, менее 700, менее 600, менее 500, менее 400, менее 300, менее 200, менее 100, менее 90, менее 80, менее 70, 60, менее 50, менее 40 или менее 30 нуклеотидов друг от друга. В одном варианте осуществления целевые последовательности находятся на одной и той же цепи дуплексной нуклеиновой кислоты. В одном варианте осуществления целевые последовательности находятся на разных цепях дуплексной нуклеиновой кислоты.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет способ вырезания (например, делетирование) нуклеиновой кислоты, расположенной между двумя сайтами связывания gРНК, расположенными менее чем 25 000, менее чем 20 000, менее 15 000, менее 14 000, менее 13 000, менее 12 000, менее 11 000, менее 10 000, менее 9 000, менее 8 000, менее 7 000, менее 6 000, менее 5000, менее 4000, менее 3000, менее 2000, менее 1000, менее 900, менее 800, менее 700, менее 600, менее 500, менее 400, менее 300, менее 200, менее 100, менее 90, менее 80, менее 70, менее 60, менее 50, менее чем 40 или менее 30 нуклеотидов друг от друга на той же самой или разных цепях дуплексной нуклеиновой кислоты. В одном варианте осуществления способ предусматривает делецию более 50%, более 60%, более 70%, более 80%, более 85%, более 86%, более 87%, более 88%, более 89%, более 90%, более 91%, более 92%, более 93%, более 94%, более 95%, более 96%, более 97%, более 98% более 99% или 100% нуклеотидов, расположенных между участками PAM, ассоциированными с каждым сайтом связывания gРНК. В вариантах осуществления делеция дополнительно включает один или несколько нуклеотидов в одном или более из сайтов PAM, ассоциированных с каждым сайтом связывания gРНК. В вариантах осуществления делеция также включает один или несколько нуклеотидов вне области между участками PAM, ассоциированными с каждым сайтом связывания gРНК.
В одном аспекте две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, нацеленные на целевые последовательности, расположенные по краям регуляторного элемента гена, например сайта связывания промотора, области энхансера или области репрессора, так что удаление промежуточной последовательности (или части промежуточной последовательности) вызывает усиление или ослабление регуляции представляющего интерес гена.
В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, последовательности целевого домена, представленные в Таблице 1 или Таблице 5. В аспектах две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, комплементарные последовательностям того же гена. В аспектах две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, комплементарные последовательностям разных генов. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, состоящие, например, из последовательности целевых доменов, представленных в Таблице 6. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, состоящие, например, из последовательности целевых доменов, представленных в Таблице 2, Таблице 7, Таблице 8 и/или Таблице 9. В аспектах две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, комплементарные последовательностям в того же гена. В аспектах две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, комплементарные последовательностям разных генов. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК выбраны из молекул gРНК Таблицы 7, Таблицы 8 и/или Таблицы 9. В одном варианте осуществления первая и вторая молекулы gРНК содержат целевые домены, содержащие, например, состоящие из последовательностей целевых доменов, выбранных из Таблиц 1-9, причём они выбираются из разных таблиц, т.е. содержат целевые домены, комплементарные последовательностям разных генов.
В одном аспекте две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, нацеленные на целевые последовательности, расположенные по краям регуляторного элемента гена, например сайта связывания промотора, области энхансера или области репрессора, так что удаление промежуточной последовательности (или части промежуточной последовательности) вызывает увеличене или уменьшение регуляции представляющего интерес гена. В качестве примера, две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, нацеленные на целевые последовательности, расположенные по краям сайта связывания GATA1 (или его фрагмента) или сайта связывания TAL1 (или его фрагмента), области эритроидного энхансера гена BCL11a (например, +55, +58 или +62 области). В других вариантах осуществления молекула или молекулы gРНК не приводят к нарушению сайта связывания GATA1 или сайта связывания TAL1 в энхансере гена BCL11a.
В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 1. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 2. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 3. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 4. В одном варианте осуществления две или более gРНК молекулы содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 5. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 6. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 7. В одном варианте осуществления две или более gРНК молекулы содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 8. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 9.
В аспектах, две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, включающие, например, состоящие из парных последовательностей целевых доменов, перечисленных выше в разделе II.
Не ограничиваясь теорией, считается, что увеличение экспрессии фетального гемоглобина (например, гамма-глобина), с одновременным уменьшением или прекращением экспрессии бета-глобина (например, бета-глобина, содержащим мутацию серповидно-клеточной анемии), приводит к повышению эффективности в лечении гемоглобинопатии, например, серповидно-клеточной анемии. Таким образом, в одном аспекте две или более молекулы gРНК содержат первую молекулу gРНК, приводящую к увеличению экспрессии гамма-глобина и вторую молекулу gРНК, приводящую к уменьшению или прекращению экспрессии бета-глобина, например бета-глобина, несущего мутацию серповидно-клеточной анемии. В вариантах осуществления две или более молекулы gРНК содержат первую молекулу gРНК, которая нацелена на последовательность в области энхансера BCL11a, например, как описано здесь, например, молекулу gРНК, содержащую целевой домен, включающий, например, состоящий из целевого домена представленного в Таблице 7, Таблице 8 или Таблице 9 и вторую молекула gРНК, нацеленую на последовательность гена глобина при серповидно-клеточной анемии, (т.е. гена, несущего мутацию серповидно-клеточной анемии).
IX. Свойства gРНК.
Далее, как показано в настоящем документе, неожиданно было обнаружено, что молекулы gРНК и CRISPR-системы, содержащие указанные молекулы gРНК, приводят к образованию одинаковых или идентичных профилей инделов в нескольких экспериментах с использованием одного и того же типа клеток, способа доставки и компонентов crРНК/tracr. Не ограничиваясь теорией, считается, что некоторые профили инделов могут быть более выгодными, чем другие. Например, инделы, преимущественно включающие в себя инсерции и/или делеции, приводящие к «мутации сдвига рамки считывания» (например, инсерция или делеция 1 или 2ух пар оснований, а также или любая инсерция или делеция, где n/3 не является целым числом (где n = количество нуклеотидов, соответствующих инсерции или делеции)) может способствовать уменьшению или прекращению экспрессии функционального белка. Подобным образом инделы, преимущественно состоящие из «больших делеций» (делеции более 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25 или 30 нуклеотидов), также могут оказаться полезными, например, для удаления критических регуляторных последовательностей, таких как сайты связывания промотора, что может оказывать благоприятный эффект на экспрессию функционального белка. Хотя, как неожиданно было обнаружено, профили инделов, индуцированные данной системой gРНК/CRISPR, последовательно воспроизводятся в типах клеток, как описано здесь, не следует ожидать, что любой отдельно взятый индел будет неизбежно сформирован в данной клетке при введении системы gРНК/CRISPR.
Таким образом, изобретение предоставляет молекулы gРНК, которые создают, например, профили (или структуру) инделов, преимущественно состоящие из мутаций сдвига рамки считывания и/или больших делеций. Такие молекулы gРНК могут быть выбраны при оценке (методом секвенирования NGS) структуры или профиля инделов, созданной молекулой-кандидатом-gРНК в тестовой клетке (например, клетке HEK293), или в интересующей нас клетке, например клетке HSPC, как описано здесь.
Как показано на примерах, были обнаружены молекулы gРНК, которые при введении в желаемую клеточную популяцию приводят к популяции клеток, содержащих значительную порцию клеток, имеющих мутацию сдвига рамки в целевом гене. В некоторых случаях частота мутаций со сдвигом рамки считывания достигает 75%, 80%, 85%, 90% и более. Таким образом, изобретение предоставляет популяции клеток, которые содержат по меньшей мере около 40% клеток (например, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65% по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95% или, по меньшей мере, около 99%), имеющих мутацию сдвига рамки считывания, как описано здесь, внутри или вблизи целевого сайта молекулы gРНК, описанной здесь. Изобретение также предоставляет популяции клеток, которые содержат по меньшей мере около 50% клеток (например, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75% по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере, около 85%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95% или, по меньшей мере, около 99%), имеющих мутацию сдвига рамки считывания, например, как описано здесь, внутри или вблизи целевого сайта молекулы gРНК.
Изобретение предоставляет способы выбора молекул gРНК для использования в терапевтических способах по изобретению, которые включают: 1)обеспечение множества молекул gРНК для мишени, представляющей интерес 2) оценку структуры или профиля инделов, сформированного с использованием указанных молекул gРНК, 3) выбор молекулы gРНК, которая приводит к образованию структуры или профиля инделов, состоящих преимущественно из мутаций сдвига рамки считывания, больших делеций или их комбинации и 4) применение указанной выбранной gРНК в способах по изобретению.
Далее, изобретение предоставляет способы изменения клеток и сами измененные клетки, в которых определённый профиль инделов формируется постоянно при использовании определённой системы gРНК/CRISPR в этом типе клеток. Профили инделов, состоящие из 5 наиболее часто встречающихся инделов, наблюдаемых в системах gРНК/CRISPR, описанных здесь, раскрыты, например, в разделе Примеры. Как показано на примерах, образуются популяции клеток, в которых значительная фракция клеток содержит один из 5 наиболее часто встречающихся инделов (например, популяции клеток, в которых один из 5 наиболее часто встречающихся инделов присутствует более чем в 30%, больше, чем в 40%, более чем в 50%, более чем в 60% или более клеток популяции. Таким образом, настоящее изобретение предоставляет клетки, например HSPC (как описано здесь), которые содержат индел любого из 5 наиболее часто встречающихся инделов, наблюдаемых с определённой системой gРНК/CRISPR. Кроме того, изобретение предоставляет популяции клеток, например HSPC (как описано здесь), которые, при оценке, например, методами NGS, содержат высокий процент клеток, включающий один из 5 наиболее часто встречающихся инделов, описанных выше, для данной системы gРНК/CRISPR. При использовании в связи с анализом профиля инделов, «высокий процент» относится, по меньшей мере, к примерно 50% (например, по меньшей мере, примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или, по меньшей мере, примерно 99%) клеток популяции, содержащих один из 5 наиболее часто встречающихся инделов, описанных здесь для данной системы gРНК/CRISPR. В других вариантах популяция клеток содержит по меньшей мере примерно 25% (например, от примерно 25% до примерно 60%, например, от примерно 25% до примерно 50%, например, от примерно 25% до примерно 40%, например, от примерно 25% до примерно 35%) клеток, которые имеют один из 5 наиболее часто встречающихся инделов, описанных здесь для данной системы gРНК/CRISPR. В вариантах осуществления превалирующие инделы, например, 5 наиболее часто встречающихся инделов для данной системы gРНК/CRISPR, нацеленной на область +58 энхансера BCL11a, представлены в Таблице 15, на Фиг. 25 и в Таблице 37. В вариантах осуществления превалирующие инделы, например, 5 наиболее часто встречаемых инделов для определённой gРНК/CRISPR, нацеленной на область HPFH, приведены в Таблице 26, Таблице 27 и Таблице 37.
Также было обнаружено, что некоторые молекулы gРНК не формируют инделов на неспецифичных последовательностях в геноме клеток-мишенией или формируют их на неспецифичных участках с очень низкой частотой (например, в <5% клеток популяции) по сравнению с частотой формирования инделов на целевом сайте. Таким образом, изобретение предоставляет молекулы gРНК и системы CRISPR, которые либо не способствуют формированию инделов на неспецифичных сайтах в типах клеткок-мишеней, либо имеют частоту формирования неспецифичных инделов <5%. В вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулы gРНК и системы CRISPR, которые не обнаруживают неспецифичных инделов, сформированных в типах клеток-мишеней. Таким образом, изобретение дополнительно предоставляет клетку, например, популяцию клеток, например HSPCs, например, как описано здесь, содержащую индел внутри или вблизи целевого сайта-мишени молекулы gРНК, описанной здесь (например, индел сдвига рамки считывания или любой из 5-ти наиболее часто встречаемых инделов, полученных с помощью данной системы gРНК/CRISPR, например, как описано здесь), но не содержит инделы в любом из неспецифичных сайтов молекулы gРНК. В других вариантах осуществления изобретение дополнительно предоставляет популяцию клеток, например HSPCs, например, как описано здесь, которая содержит >50% клеток, имеющих которые имеют индел внутри или вблизи целевого сайта молекулы gРНК, описанной здесь (например, индел сдвига рамки считывания или любой из 5-ти наиболее часто встречаемых инделов, полученных с помощью данной системы gРНК/CRISPR, например, как описано здесь), но которая содержит менее 5%, например, менее 4%, менее 3%, менее 2 % или менее 1% клеток, содержащих индел в любом нецелевом сайте молекулы gРНК.
В вариантах осуществления индел, сформированный системой CRISPR, описанной здесь (например, системой CRISPR, содержащей молекулу gРНК, описанную здесь), не включает нуклеотид связующего сайта GATA-1 и/или не включает нуклеотид сайта связывания TAL-1 (например, не включает нуклеотид сайта связывания GATA-1 и/или сайта связывания TAL-1, описанные на Фиг. 25).
X. Доставка/Конструкции
Компоненты, например, молекула Сas9 или молекула gРНК, или оба могут быть доставлены, составлены или введены в различных формах. В качестве неограничивающего примера молекула gРНК и молекула Сas9 могут быть составлены (в одной или нескольких композициях), непосредственно доставлены или введены в клетку, в которой желательно провести редактирование генома. Альтернативно, нуклеиновая кислота, кодирующая один или несколько компонентов, например молекулу Сas9 или молекулу gРНК, или обе молекулы, может входить в состав одной или нескольких композиций, быть доставленной или введеной в клетку. В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде ДНК, кодирующей молекулу gРНК, также как и молекула Сas9 предоставляется в виде ДНК, кодирующей молекулу Сas9. В одном варианте осуществления молекула gРНК и молекула Сas9 кодируются на отдельных молекулах нуклеиновой кислоты. В одном варианте осуществления молекула gРНК и молекула Сas9 кодируются той же молекулой нуклеиновой кислоты. В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде РНК, а молекула Сas9 предоставляется в виде ДНК, кодирующей молекулу Сas9. В одном варианте осуществления молекула gРНК несёт одну или несколько модификаций, например, как описано здесь. В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде РНК, а молекула Сas9 представлена в виде мРНК, кодирующей молекулу Сas9. В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде РНК, а молекула Сas9 представлена в виде белка. В одном варианте осуществления молекулы gРНК и Сas9 предоставлены в виде рибонуклеопротеинового комплекса (RNP). В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде ДНК, кодирующей молекулу gРНК, а молекула Сas9 предоставляется в виде белка.
Доставка, например, доставка RNP (например, в клетки HSPC, как описано здесь), может быть выполнена, например, путём электропорации (например, как известно в данной области техники) или другим методом, делающим клеточную мембрану проницаемой для молекул нуклеиновой кислоты и/или полипептида. В вариантах осуществления система CRISPR, например, в виде RNP, как описано здесь, доставляется электропорацией с использованием 4D-нуклеофектора (Lonza), например, при использовании программы CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). В вариантах осуществления система CRISPR, например RNP, как описано здесь, доставляется электропорацией с использованием напряжения от примерно 800 вольт до примерно 2000 вольт, например, от примерно 1000 вольт до примерно 1800 вольт, например, от примерно 1200 вольт до примерно 1800 вольт, например, от примерно 1400 вольт до примерно 1800 вольт, например, от примерно 1600 вольт до примерно 1800 вольт, например, примерно 1700 вольт, например, при напряжении 1700 вольт. В вариантах осуществления ширина/длина импульса составляет от примерно 10 мс до примерно 50 мс, например, от примерно 10 мс до примерно 40 мс, например, от примерно 10 мс до примерно 30 мс, например, от примерно 15 мс до примерно 25 мс, например, около 20 мс, например, 20 мс. В вариантах осуществления используются 1, 2, 3, 4, 5 или более импульсов, например, 2, например, 1 импульс. В одном варианте осуществления система CRISPR, например RNP, как описано здесь, доставляется электропорацией с использованием напряжения примерно 1700 вольт (например, 1700 вольт), ширина импульса примерно 20 мс (например, 20 мс), при подаче одного (1) импульса. В вариантах осуществления электропорация осуществляется с использованием электропоратора Neon. Дополнительные способы повышения мембранной проницаемости известны в данной области техники и включают, например, сжатие клеток (например, как описано в WO2015/023982 и WO2013/059343, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте), наноструктуры, такие как нанотрубки и наноканалы (как, например, описано в Chiappini et al., Nat. Mat., 14, 532-39 или US2014/0295558, содержание которого включено сюда посредством ссылки во всей своей полноте) и как, например, описано в Xie, ACS Nano, 7 (5); 4351-58, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте).
Когда компонент доставляется в виде кодируещей ДНК, ДНК, как правило, включает регуляторную область, например, содержащую промотор, для осуществления экспрессии. Промоторы, применимые для последовательностей молекул Сas9 включают промоторы CMV, EF-1alpha, MSCV, PGK, CAG. Промоторы, применимые для gРНК, включают промоторы H1, EF-1a и U6. Промотеры с подобными или разнородными свойствами могут быть подобраны для настройки экспрессии компонентов. Последовательности, кодирующие молекулу Сas9, могут содержать сигнал ядерной локализации (NLS), например NLS SV40. В одном варианте осуществления промотор для молекулы Сas9 или молекулы gРНК может быть, независимо, индуцибельным, ткане-специфичным или клетко-специфичным.
Доставка молекул Сas9 и молекул gРНК, предоставленных в виде ДНК.
ДНК, кодирующая молекулы Сas9 и/или молекулы gРНК, может вводиться субъектам или доставляться в клетки уже известными способами или способами, описанными здесь. Например, ДНК, кодирующую Сas9 и/или ДНК, кодирующую gРНК, можно доставлять, например, векторами (например,, вирусными или невирусными векторами), и методами, не связанными с вектором (например, с использованием депротеизированной («голой») ДНК или комплексов ДНК), или их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующая Сas9- и/или gРНК, доставляется вектором (например, вирусным вектором/вирусом, плазмидой, мини-кольцом или наноплазмидой).
Вектор может содержать последовательность, которая кодирует молекулу Сas9 и/или молекулу gРНК. Вектор также может содержать последовательность, кодирующую сигнальный пептид (например, для ядерной локализации, ядрышковой локализации, митохондриальной локализации), слитую, например, с последовательностью молекулы Сas9. Например, вектор может содержать одну или более последовательностей ядерной локализации (например, принадлежащую SV40), слитую с последовательностью, кодирующей молекулу Сas9. Один или несколько регуляторных/контролирующих элементов, например промотор, энхансер, интрон, сигнал полиаденилирования, консенсусная последовательность Козак, внутренние места входа рибосомы (IRES), последовательность 2А и последовательности точек донорного или акцепторного сайтов сплайсинга могут быть включены в векторы. В некоторых вариантах осуществления промотор распознается РНК-полимеразой II (например, промотор CMV). В других вариантах осуществления промотор распознается РНК-полимеразой III (например, промотор U6). В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой регулируемый промотор (например, индуцируемый промотор). В других вариантах осуществления промотор представляет собой конститутивный промотор. В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой тканеспецифический промотор. В некоторых вариантах осуществления промотор является вирусным промотором. В других вариантах осуществления промотор является невирусным промотором.
В некоторых вариантах осуществления вектором или средством доставки является мини-кольцо. В некоторых вариантах осуществления вектором или средством доставки является наноплазмида.
В некоторых вариантах осуществления вектором или средством доставки является вирусный вектор (например, с целью образования рекомбинантных вирусов). В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой ДНК вирус (например, вирус dsДНК или ssДНК). В других вариантах осуществления вирус представляет собой РНК-вирус (например, вирус ssРНК). Иллюстративные вирусные векторы/вирусы включают, например, ретровирусы, лентивирусы, аденовирус, аденоассоциированный вирус (AAV), вирусы вакцинии, поксвирусы и вирусы простого герпеса. Технология создания вирусных векторов хорошо известна в данной области техники и описана, например, в Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1 -4, Cold Spring Harbor Press, NY), а также в других протоколах вирусологии и молекулярной биологии.
В некоторых вариантах осуществления вирус заражает делящиеся клетки. В других вариантах осуществления вирус заражает клетки, которые не делятся. В некоторых вариантах осуществления вирус заражает как делящиеся, так и неделящиеся клетки. В некоторых вариантах осуществления вирус может интегрироваться в геном хозяина. В некоторых вариантах осуществления вирус сконструирован так, чтобы снижать иммунитет хозяина, например, человека. В некоторых вариантах осуществления вирус спосбоен реплицироваться. В других вариантах осуществления вирус является дефектным по репликации, при этом одна или несколько областей вируса, кодирующая гены, необходимые для дополнительных раундов репликации вируса и/или упаковки, заменена другими генами или удалена. В некоторых вариантах осуществления вирус вызывает временную экспрессию молекулы Сas9 и/или молекулы gРНК. В других вариантах осуществления вирус вызывает длительные, например, в течение по меньшей мере 1 недели, 2 недель, 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 6 месяцев, 9 месяцев, 1 года, 2 лет или постоянную экспрессию молекулы Сas9 и/или молекулы gРНК. Емкость упаковки вирусов может варьироваться, например, от по меньшей мере от примерно 4 кб до примерно 30 кб, например, по меньшей мере примерно 5 кб, 10 кб, 15 кб, 20 кб, 25 кб, 30 кб, 35 кб, 40 кб, 45 кб, или 50 кб. В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующую Сas9- и/или gРНК, доставку осуществляют рекомбинантным ретровирусом. В некоторых вариантах осуществления ретровирус (например, вирус мышиного лейкоза Молони) содержит обратную транскриптазу, которая, например, позволяет интегрироваться в геном хозяина. В некоторых вариантах осуществления ретровирус способен к репликации. В других вариантах осуществления ретровирус является дефектным по репликации, при этом одна или несколько областей вируса, кодирующая гены, необходимые для дополнительных раундов репликации вируса и/или упаковки, заменена другими генами или удалена.
В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующую Сas9- и/или gРНК, доставку осуществляют рекомбинантным лентивирусом. Например, лентивирус является дефектным по репликации, например, не содержит одного или нескольких генов, необходимых для репликации вируса.
В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующую Сas9- и/или gРНК, доставку осуществляют рекомбинантным аденовирусом. В некоторых вариантах осуществления аденовирус сконструирован так, чтобы вызывать снижение иммунитета у человека.
В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующую Сas9- и/или gРНК, доставку осуществляют рекомбинантным AAV. В некоторых вариантах осуществления AAV может доставлять свой геном в клетку-хозяина, например клетку-мишень, как описано здесь. В некоторых вариантах осуществления AAV представляет собой самокомплементарный адено-ассоциированный вирус (scAAV), например scAAV, в который упаковано обе комплементарные цепи ДНК, которые гибридизуются с образованием дуплекса ДНК. Серотипы AAV, которые могут быть использованы в раскрытых способах, включают, например, AAV l, AAV2, модифицированный AAV2 (например, модификации Y444F, Y500F, Y730F и/или S662V), AAV3, модифицированный AAV3 (например, модификации Y705F, Y73 1 F и/или T492V), AAV4, AAV5, AAV6, модифицированный AAV6 (например, с модификациями в S663V и/или T492V), AAV8. AAV 8.2, AAV9, AAV rh 10 и псевдотипированные AAV, такие как AAV2/8, AAV2/5 и AAV2/6 также могут использоваться в раскрытых здесь способах.
В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующая Сas9- и/или gРНК, доставляется гибридным вирусом, например гибридом одного или нескольких вирусов, описанных здесь.
Для получения вирусных частиц, которые способны инфицировать клетки-хозяев используют упаковывающие клетки. Такие клетки включают клетки 293, которые упаковывают аденовирус, и клетки ψ2 или клетки PA317, которые упаковывают ретровирус. Вирусные векторы, применяемые в генной терапии, обычно генерируются клеточной линией-продуцентом, которая упаковывает нуклеиновокислотный вектор в вирусную частицу.
Векторы обычно содержат минимальные вирусные последовательности, необходимые для упаковки и последующей интеграции в хозяина или клетку-мишень (если применимо), другие вирусные последовательности заменяются экспрессионной кассетой, кодирующей белок, подвергаемый экспрессии. Например, векторы AAV, обычно применяемые в генной терапии, имеют только последовательности инвертированных концевых повторов (ITR) из генома AAV, необходимые для упаковки и интеграции в геном хозяина. Отсутствующие вирусные функции предоставляются упаковочной линией клеток посредством транс-взаимодействия. Вирусную ДНК упаковывают в клеточной линии, которая содержит хелперную плазмиду, кодирующую другие гены AAV, а именно rep и cap, но не содержит ITR последовательности. Клеточную линию также инфицируют аденовирусом в качестве хелпера. Хелперный вирус способствует репликации вектора AAV и экспрессии генов AAV из хелперной плазмиды. Хелперная плазмида не упаковывается в значительных количествах из-за отсутствия ITR последовательностей. Заражение аденовирусом можно снизить, например, посредством термообработки, к которой аденовирус более чувствителен, чем AAV.
В одном варианте осуществления вирусный вектор обладает способностью к распознаванию типа клеток и/или типа ткани. Например, вирусный вектор может быть псевдотипирован с другим/альтернативным гликопротеином вирусной оболочки; сконструирован с использованием специфичного для типа клеток рецептора (например, с генетической модификацией гликопротеинов вирусной оболочки для включения целевых лигандов, таких как пептидный лиганд, одноцепочечное антитело, фактор роста); и/или сконструированы так, чтобы иметь молекулярный мостик с двойной специфичностью, где один конец распознаёт вирусный гликопротеин, а другой конец распознает фрагмент поверхности клетки-мишени (например, лиганд-рецептор, моноклональное антитело, авидин-биотин и химические конъюгаты).
В одном варианте осуществления вирусный вектор обеспечивает экспрессию, соответствующую конкретному типу клетки. Например, тканеспецифический промотор может быть сконструирован чтобы позволить экспрессию трансгена (Cas9 и gРНК) только в клетке-мишени. Специфика вектора также может быть опосредована микроРНК-зависимым механизмом контроля экспрессии трансгена. В одном варианте осуществления вирусный вектор повышает эффективность слияния вирусного вектора и мембраны клеток-мишеней. Например, для увеличения проникновения вируса в клетки можно включить (в вектор) слитый белок, такой как грамотрицательный гемагглютин (НА). В одном варианте осуществления вирусный вектор обладает способностью к ядерной локализации. Например, вирус, для проникновения которого необходимо разрушение клеточной стенки (во время деления клеток), и который, следовательно, не будет заражать неделящиеся клетки, можно изменить, есливключить пептид ядерной локализации в матриксный белок вируса, тем самым делая возможной трансдукцию непролиферирующих клеток.
В некоторых вариантах осуществления доставку ДНК, кодирующей Сas9- и/или gРНК осуществляяют с помощью невекторного метода (например, с использованием депротеинизированной (голой) ДНК или комплексов ДНК). Например, доставка ДНК может быть осуществлена, например, с помощью органически модифицированного диоксида кремния или силиката (Ormosil), электропорации, генной пушки, сонопорации (обработки ультразвуком), магнитофикации, опосредованной липидами трансфекции (с помощью липосом), дендримеров, неорганических наночастиц, фосфата кальция или их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления доставка ДНК, кодирующей Сas9 и/или gРНК, осуществляется с помощью комбинации вектора и метода, не связанного с вектором. Например, виросома содержит липосому в сочетании с инактивированным вирусом (например, вирусом ВИЧ или вирусом гриппа), что может привести к более эффективному переносу гена, например, в респираторную эпителиальную клетку, по сравнению с вирусным или липосомальным методом по отдельности.
В одном варианте осуществления средство доставки является невирусным вектором. В одном варианте осуществления невирусным вектором является неорганическая наночастица (например, c желаемым грузом (payload), закреплённым на поверхности наночастицы). Примеры неорганических наночастиц включают, например, магнитные наночастицы (например, Fe lvln02) или диоксид кремния. Внешняя поверхность наночастицы может быть конъюгирована с положительно заряженным полимером (например, полиэтиленимином, полилизином, полисерином), который позволяет связывать (например, путём конъюгации или захвата) желаемый полезный груз. В одном варианте осуществления невирусный вектор представляет собой органическую наночастицу (например, с захватом желаемого груза внутри наночастицы). Примеры органических наночастиц включают, например, липосомы SNALP, содержащие катионные липиды в комплексе с нейтральными вспомогательными липидами, и покрытые полиэтиленгликолем (PEG) и комплекс протамина и нуклеиновой кислоты с липидным покрытием.
Проиллюстративные липиды и/или полимеры для доставки систем CRISPR или нуклеиновой кислоты, например вектора, кодирующие системы CRISPR или их компоненты, включают, например, те, которые описаны в WO2011/076807, WO2014/136086, WO2005/060697, WO2014/140211, WO2012/031046, WO2013/103467, WO2013/006825, WO2012/006378, WO2015/095340 и WO2015/095346, содержание каждого из вышеперечисленных здесь полностью включено в настоящее описание посредством ссылки. В одном варианте осуществления средство доставки имеет целевые модификации, для увеличения обновления клеток-мишеней наночастицами и липосомами, такие как, например, клетко-специфичные антигены, моноклональные антитела, одноцепочечные антитела, аптамеры, полимеры, сахара и проникающие в клетки пептиды. В одном варианте осуществления средство доставки использует фузогенные (способствующие слиянию мембран клеток) и эндосомно-дестабилизирующие пептиды/полимеры. В одном варианте осуществления средство доставки подвергается конформационным изменениям, вызванным кислотой (например, для ускорения эндосомального высвобождения груза). В одном варианте осуществления используют расщепляемый под воздействием стимулов полимер, например, для высвобождения груза в клеточное пространство. Например, можно использовать дисульфидные катионные полимеры, расщепляемые в восстановительной клеточной среде.
В одном варианте осуществления средство доставки является биологическим невирусным средством доставки. В одном варианте осуществления транспортное средство представляет собой ослабленную бактерию (например, инвазивную, встречающуюся в природе или искусственно сконструированную, но ослабленную для предотвращения патогенеза, и экспрессирующую трансген (например, Listeria monocytogenes, определенные штаммы Salmonella, Bifidobacterium longum и модифицированные Escherichia coli), бактерии, имеющие питательный и тканеспецифический тропизм для нацеливания на специфические ткани, бактерии с модифицированными поверхностными белками для изменения целевой тканеспецифичности). В одном варианте осуществления средство доставки представляет собой генетически модифицированный бактериофаг (например, сконструированные фаги, обладающие большой упаковочной способностью, менее иммуногенные, содержащие последовательности поддерживающие плазмиды млекопитающих и включающие нацеливающие лиганды). В одном варианте осуществления транспортное средство представляет собой вирусоподобную частицу млекопитающих. Например, могут быть получены модифицированные вирусные частицы (например, путем очистки «пустых» частиц с последующей сборкой вируса ex vivo с желаемым грузом). Средство доставки также может быть сконструировано с включением целевых лигандов для изменения целевой тканеспецифичности. В одном варианте осуществления средство доставки представляет собой биологические липосомы. Например, биологическая липосома представляет собой частицу с фосфолипидной основой, происходящая из клеток человека (например, из эритроцитарных носителей (erythrocyte ghosts), которые представляют собой полученные от субъекта красные кровяные клетки, преобразованные в сферические структуры, (например, нацеливание на ткань может быть достигнуто путем прикрепления различных ткане- или клеточно-специфических лигандов) или секреторную экзосому-выделенную из субъекта (пациента), связанную с мембраной наночастицу-средство доставки (30-100 нм) эндоцитозного происхождения (которые, например, могут быть образованы разными типами клеток, и поэтому могут быть захвачены клетками без необходимости в нацеливающих лигандах).
В одном варианте осуществления одна или несколько молекул нуклеиновой кислоты (например, молекул ДНК), отличных от компонентов системы Cas, например, компонента молекулы Сas9 и/или компонента молекулы gРНК, описанного здесь, подлежат доставке. В одном варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты доставляют одновременно с одним или несколькими компонентами системы Cas. В одном варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты доставляют до или после доставки одного или нескольких компонентов системы Сas9 (например, менее примерно 30 минут, 1 часа, 2 часов, 3 часов, 6 часов, 9 часов, 12 часов, 1 дня, 2 дней, 3 дней, 1 недели, 2 недель или 4 недель). В одном варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты доставляют другим способом, чем применяемый для одного или нескольких компонентов системы Сas9, например компонента молекулы Сas9 и/или компонента молекулы gРНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть доставлена любым из способов доставки, описанных здесь. Например, молекула нуклеиновой кислоты может быть доставлена вирусным вектором, например, лентивирусом, неспособным к интеграции, или компонент молекулы Сas9 и/или компонент молекулы gРНК могут быть доставлены электропорацией, например, так, чтобы токсичность, вызываемая нуклеиновыми кислотами (например, ДНК) могла бы быть уменьшена. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует терапевтический белок, например, описанный здесь белок. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует молекулу РНК, например молекулу РНК, описанную здесь.
Доставка РНК, кодирующей молекулу Сas9
РНК, кодирующая молекулы Сas9 (например, активные молекулы Сas9, неактивные молекулы Сas9 или неактивные слитые белки Сas9) и/или молекулы gРНК, может быть доставлена в клетки, например, клетки-мишени, описанные здесь, методами, известными в данном уровне техники или описанными здесь. Например, РНК, кодирующую Сas9 и/или кодирующую gРНК, вводят, например, с помощью микроинъекции, электропорации, опосредованной липидами трансфекции, пептид-опосредованной доставки или их комбинации.
Доставка молекулы Сas9 в виде белка
Молекулы Сas9 (например, активные молекулы Сas9, неактивные молекулы Сas9 или неактивные слитые белки Сas9) в клетки может осуществляться методами, известными в данном уровне техники, или описанными здесь. Например, молекулы белка Сas9 могут быть доставлены, например, с помощью микроинъекции, электропорации, опосредованной липидами трансфекции, пептид-опосредованной доставки, метода сжатия или протыкания клеток (например, нанотрубочками) или их комбинации. Доставка может сопровождаться доставкой ДНК, кодирующей gРНК или доставкой gРНК, например, при заблаговременном создании рибонуклеопротеинового комплекса gРНК и белка Сas9 (RNP).
В одном аспекте молекула Сas9, например, как описано здесь, поставляется в виде белка, а молекула gРНК поставляется в виде одной или нескольких РНК (например, в виде dgРНК или sgРНК, как описано здесь). В вариантах осуществления белок Сas9 скомбинирован с молекулой gРНК до доставки в клетку, например, как описано здесь, в виде рибонуклеопротеинового комплекса («RNP»). В вариантах осуществления RNP может быть доставлен в клетки, например, описанные здесь, любым известным в данной области техники способом, например электропорацией. Как описано здесь, не ограничиваясь теорией, может оказаться предпочтительным использовать молекулу gРНК и молекулу Сas9, которые приводят к высокой степени (%) редактирования в целевой последовательности клетке-мишени (например,> 85%,> 90%,> 95%,> 98 %, или> 99%), например, описанной здесь, даже при уменьшении концентрации RNP, доставляемого в клетку. Опять же, не ограничиваясь теорией, доставка RNP в уменьшенной или низкой концентрации, содержащего молекулу gРНК, осбеспечивающую высокий % редакирования в целевой последовательности клетки-мишени (в том числе при низкой концентрации RNP), может быть выгодной, поскольку уменьшается частота и количество сайтов неспецифичного редактирования. В одном аспекте, при необходимости применения низкой или пониженной концентрации RNP, для получения RNP с молекулой dgРНК возможно использование следующей типовой процедуры:
1. Приготовьте раствор молекулы Сas9 и tracr в высокой концентрации (например, концентрации, превышающей конечную концентрацию RNP для доставки в клетку), позвольте компонентам достигнуть эквилибриума;
2. Добавьте молекулу crРНК и позвольте компонентам достигнуть динамического равновесия (эквилибриума) (тем самым образуя высококонцентрированный раствор RNP);
3. Разбавьте раствор RNP до желаемой концентрации;
4. Доставьте указанный RNP в указанной желаемой концентрации в клетки-мишени, например, путем электропорации.
Вышеописанная процедура может быть модифицирована для использования молекул sgРНК, для этого надо пропустить стадию 2 выше и обеспечить высокие концентраций молекулы Сas9 и молекулы sgРНК в растворе на стадии 1, при этом позволить компонентам достичь динамического равновесия (эквилибриума). В вариантах осуществления молекула Сas9 и каждый компонент gРНК находятся в растворе с соотношением 1:2 (Сas9: gРНК), например с молярным соотношением 1:2 молекулы Сas9:gРНК. Когда используют молекулы dgРНК, соотношение, например, молярное отношение, составляет 1:2:2 (Сas9: tracr: crРНК). В вариантах осуществления RNP образуется при концентрации 20 мкМ или выше, например, от примерно 20 мкМ до примерно 50 мкМ. В вариантах осуществления RNP образуется при концентрации 10 мкМ или выше, например, от примерно 10 мкМ до примерно 30 мкМ. В вариантах осуществления RNP разбавляют до конечной концентрации 10 мкМ или менее (например, до концентрации от примерно 0,01 мкМ до примерно 10 мкМ) в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP разбавляют до конечной концентрации 3 мкМ или менее (например, от примерно 0,01 мкМ до примерно 3 мкМ) в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP разбавляют до конечной концентрации 1 мкМ или менее (например, концентрацию от примерно 0,01 мкМ до примерно 1 мкМ) в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP разбавляют до конечной концентрации 0,3 мкМ или менее (например, от примерно 0,01 мкМ до примерно 0,3 мкМ) в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 3 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется при конечной концентрации около 1 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется при конечной концентрации около 0,3 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 0,1 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 0,05 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 0,03 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 0,01 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP составлен в среде, подходящей для электропорации. В вариантах осуществления RNP доставляется в клетки, например, клетки HSPC, например, как описано здесь, посредством электропорации, например, с использованием описанных здесь условий электропорации.
Бимодальная или дифференциальная доставка компонентов.
Доставка компонентов системы Cas по отдельности, например, молекулы Сas9 и молекулы gРНК как отдельных компонентов, и, более конкретно, доставка компонентов различными режимами, может повысить эффективность, например, путем улучшения тканевой специфичности и безопасности.
В одном варианте осуществления молекула Сas9 и молекула gРНК доставляются различными режимами, что иногда упоминается здесь как дифференциальные режимы. Различные или дифференциальные режимы, используемые здесь, относятся к способам доставки, которые добавляют различные фармакодинамические или фармакокинетические свойства молекулам данного компонента, например молекуле Сas9, молекуле gРНК или матричной нуклеиновой кислоте. Например, способы доставки могут приводить к различному распределению по тканям, изменённому периоду полураспада или другому временному распределению, например, в избранном компартменте, ткани или органе.
Некоторые способы доставки, например, доставка вектором состоящим из нуклеиновой кислоты, сохраняющимся в клетке, или в потомстве клетки, например, путем автономной репликации или введения в клеточную нуклеиновую кислоту, приводят к более стойкому проявлению и присутствию компонента.
XI. Способы лечения.
Системы Сas9, например, одна или несколько молекул gРНК и одна или несколько молекул Сas9, описанных здесь, применимы для лечения заболевания у млекопитающего, например у человека. Термины «лечить», «обработанный», «обрабатывая» и «лечение» включают в себя введение систем Сas9, например, одной или нескольких молекул gРНК и одной или нескольких молекул Сas9, в клетки для предотвращения или замедления наступления симптомов, осложнений или биохимических признаков заболевания, облегчение симптомов или прекращение или замедление дальнейшего развития болезни, состояния или расстройства. Лечение может также включать введение одной или нескольких (например, популяции) клеток, например HSPC, модифицированных путем введения молекулы gРНК (или более чем одной молекулы gРНК) по настоящему изобретению или посредством введения системы CRISPR, как описано здесь, или любым из способов получения указанных клеток, описанных здесь, для предотвращения или замедления появления симптомов, осложнений или биохимических признаков заболевания, облегчения симптомов или прекращения или замедления дальнейшего развития болезни, состояния или расстройства. Лечение может быть профилактическим (для предотвращения или отсрочки начала заболевания или для предотвращения проявления клинических или субклинических симптомов) или терапевтическим подавлением или облегчением симптомов после проявления заболевания. Лечение может быть оценено терапевтическими способами, описанными здесь. Таким образом, способы «лечения» по настоящему изобретению также включают введение клеток, измененных введением системы Сas9 (например, одной или более молекул gРНК и одной или более молекул Сas9) в указанные клетки, субъекту, с целью излечения, уменьшения тяжести или улучшения одного или нескольких симптомов заболевания или состояния, для того, чтобы продлить здоровое состояние или способствовать выживанию субъекта, с превышением ожидаемого в отсутствие такого лечения. Например, «лечение» включает в себя облегчение симптома заболевания у субъекта по меньшей мере на 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15 %, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 80%, 85%, 90%, 95% или более.
Саs9-системы, включающие молекулы gРНК, содержащие целевые домены, описанные здесь, например, в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и/или 9, применимы для лечения гемоглобинопатий.
Гемоглобинопатии.
Гемоглобинопатии охватывают ряд анемий генетического происхождения, приводящих к снижению воспроизводства и/или увеличению распада (гемолизу) эритроцитов (RBCs). Они также включают генетические дефекты, приводящие к образованию аномальных гемоглобинов с сопутствующей нарушенной способностью поддержания концентрации кислорода. Некоторые из таких расстройств связаны с неспособностью продуцировать нормальный β-глобин в достаточных количествах, в то время как другие связаны с полной неспособностью производить нормальный β-глобин. Эти расстройства, связанные с β-глобиновым белком, обычно называются β-гемоглобинопатиями. Например, β-таласемия возникает в результате частичного или полного дефекта экспрессии гена β-глобина, что приводит к дефициту или отсутствию HbA. Серповидноклеточная анемия является результатом точечной мутации в структурном гене β-глобина, что приводит к образованию аномального (серповидного) гемоглобина (HbS). HbS подвержен полимеризации, особенно в дезоксигенированных условиях. Эритроциты с HbS более склонны к распаду, чем нормальные эритроциты, и легце подвергаются гемолизу, приводя в конечном итоге к анемии. В одном варианте осуществления генетический дефект альфа-глобина или бета-глобина корректируется, например, путем гомологичной рекомбинации при использовании молекул Сas9 и молекул gРНК, например, систем CRISPR, описанных здесь. В одном варианте осуществления ген, кодирующий копию альфа-глобина или бета-глобина дикого типа (например, не несущего мутации), вводится в геном клетки, например, в сайт «безопасной гавани», например, в сайте «безопасной гавани» AAVS1, путем гомологичной рекомбинации, с использованием системы CRISPR и способов, описанных здесь.
В одном варианте осуществления нацеливаются на ген, связанный с гемоглобинопатией, с помощью молекулы Сas9 и молекулы gРНК, описанных здесь. Подобные примеры генов-мишеней включают, например, гены, связанные с регуляцией генов гамма-глобина. В варианте осуществления мишенью является BCL11A. В варианте осуществления мишенью является энхансер BCL11a. В варианте осуществления мишенью является область HPFH.
Фетальный гемоглобин (также гемоглобин F или HbF или α2γ2) представляет собой тетрамер двух альфа-глобиновых полипептидов взрослого и двух фетальных бета-подобных гамма-глобиновых полипептидов. HbF является основным переносчиком кислорода человеческого плода в течение последних семи месяцев развития матки и новорожденного до примерно 6 месяцев. Функционально фетальный гемоглобин отличается от взрослого гемоглобина тем, что он способен связывать кислород с большей силой, чем взрослая форма, что дает развивающемуся плоду лучше доступ к кислороду из кровотока матери.
У новорожденных фетальный гемоглобин почти полностью заменен взрослой формой гемоглобина примерно к 6 месяцу после рождения. У взрослых производство фетального гемоглобина может быть реактивировано фармакологически, что применимо при лечении таких заболеваний, как гемоглобинопатии. Например, у некоторых пациентов с гемоглобинопатиями более высокие уровни экспрессии гамма-глобина могут частично компенсировать дефектное или поврежденное производство гена бета-глобина, что может улучшить клиническую картину этих заболеваний. Повышение количества HbF или F-клеток (HbF-содержащих эритроцитов) может уменьшить тяжесть заболевания гемоглобинопатий, например, таких как большой бета-талассемии и серповидно-клеточной анемии.
Повышенные уровни HbF или F-клеток могут быть связаны с уменьшением экспрессии BCL11A в клетках. Ген BCL11A кодирует фактор транскрипции с множественными доменами типа «цинковые пальцы». В одном варианте осуществления экспрессия BCL11A модулируется, например, уменьшается. В одном варианте осуществления ген BCL11A отредактирован. В одном варианте осуществления функция BCL11a, например, в клетках эритроидной линии, нарушена или снижена. В одном варианте осуществления клетка представляет собой кроветворную стволовую клетку или клетку-предшественник (прогениторную).
Серповидно-клеточные болезни.
Серповидно-клеточные болезни представляет собой группу расстройств, связанных с гемоглобином. Люди с этим расстройством имеют атипичные молекулы гемоглобина (гемоглобин S), которые изменяют форму эритроцитов на серповидную или полумесяца. Характерными особенностями этого расстройства являются низкое количество эритроцитов (анемия), повторяющиеся инфекции и периодические болевые эпизоды.
Мутации в гене HBB вызывают серповидно-клеточные болезни, т.е. HBB ген содержит инструкции для создания бета-глобина. Различные версии бета-глобина являются результатом различных мутаций в гене HBB. Одна конкретная мутация гена HBB вызывает аномальную версию бета-глобина, известную как гемоглобин S (HbS). Другие мутации в гене HBB приводят к дополнительным аномальным версиям бета-глобина, таким как гемоглобин C (HbC) и гемоглобин E (HbE). Генетические мутации HBB также могут приводить к необычно низкому уровню бета-глобина, т. е. бета-талассемии. У людей с серповидно-клеточной болезнью, по крайней мере, одна из бета-глобиновых субъединиц в гемоглобине заменена гемоглобином S. При серповидно-клеточной анемии, являющейся распространенной формой болезни серповидно-клеточной болезни, гемоглобин S заменяет обе бета-глобиновые субъединицы в молекуле гемоглобина. При других типах заболеваний серповидно-клеточной анемии только одна бета-глобиновая субъединица в гемоглобине заменяется гемоглобином S. Другая субъединица бета-глобина заменена другим аномальным вариантом, таким как гемоглобин С. Например, люди с гемоглобином С (HbSC) серповидно-клеточной анемии имеют молекулы гемоглобина с гемоглобином S и гемоглобином C замещающие молекулы бета-глобина. Если мутации, отвечающие за продукцию гемоглобина S и бета-талассемии, встречаются вместе, у индивидуумов присутствует заболевание S-бета-талассемии. (HbSBetaThal).
Бета-талассемия.
Бета-талассемия-это расстройство крови, снижающее выработку гемоглобина. У людей с бета-талассемией низкий уровень гемоглобина приводит к недостатку кислорода во многих частях тела. У пораженных людей также наблюдается дефицит эритроцитов (анемия), что вызывает бледность кожи, слабость, усталость и более серьезные осложнения. Люди с бета-талассемией подвергаются повышенному риску развития аномальных тромбов.
Бета-талассемия подразделяется на два типа в зависимости от тяжести симптомов: большая талассемия (также известная как анемия Кули) и средняя талассемия. Из двух типов большая талассемия является наиболее серьезной.
Мутации в гене HBB вызывают бета-талассемию. Ген HBB содержит инструкции для создания бета-глобина. Некоторые мутации в гене HBB предотвращают образование любого бета-глобина. Отсутствие бета-глобина называют бета-ноль (В°) талассемией. Другие мутации гена HBB позволяют продуцировать некоторый бета-глобин, но в меньших количествах, что приводит к бета-плюс (В +) талассемии. Люди с обоими типами талассемии диагностируются как имеющие большую талассемию, так и среднюю талассемию.
В одном варианте осуществления комплекс молекул gРНК/Сas9, нацеленный на первый ген, применяется для лечения расстройства, характеризующегося вторым геном, например вызванного мутацией во втором гене. В качестве примера, нацеливание на первый ген, например, путем редактирования или доставки полезной нагрузки, может компенсировать или ингибировать дальнейшее повреждение от влияния второго гена, например мутантного второго гена. В варианте осуществления аллель(и) первого гена субъекта не является причиной расстройства.
В одном аспекте изобретение относится к лечению млекопитающего, например человека, нуждающегося в увеличении фетального гемоглобина (HbF).
В одном аспекте изобретение относится к лечению млекопитающего, например человека, диагностированному или подверженному риску развития гемоглобинопатии.
В одном аспекте гемоглобинопатия представляет собой бета-гемоглобинопатию. В одном аспекте гемоглобинопатия является серповидно-клеточной болезнью. В одном аспекте гемоглобинопатия представляет собой бета-талассемию.
Способы лечения гемоглобинопатий.
В другом аспекте изобретение относится к способам лечения. В аспектах молекулы gРНК, системы CRISPR и/или клетки по изобретению используются для лечения пациента, нуждающегося в этом. В аспектах пациент является млекопитающим, например человеком. В аспектах пациент имеет гемоглобинопатию. В вариантах осуществления пациент имеет серповидно-клеточную болезнь. В вариантах осуществления пациент имеет бета-талассемию. В одном аспекте способ лечения включает введение млекопитающему, например человеку, одной или нескольким молекул gРНК, например, одну или более молекул gРНК, содержащих целевой домен, описанный в Таблице 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 и одну или несколько молекул Сas9, описанных здесь. В одном аспекте способ лечения включает введение млекопитающему популяции клеток, где популяция клеток представляет собой популяцию клеток млекопитающего, например человека, которому вводили одну или несколько молекул gРНК, например одну или несколько молекул gРНК, содержащих целевой домен, описанный в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9, и одну или несколько молекул Сas9, описанных здесь, например, систему CRISPR, как описано здесь. В одном варианте осуществления введение одной или более молекул gРНК или систем CRISPR в клетку осуществляют in vivo. В одном варианте осуществления введение одной или более молекул gРНК или систем CRISPR в клетку осуществляют ex vivo.
В одном аспекте способ лечения включает введение млекопитающему, например человеку, эффективного количества клеточной популяции, содержащей клетки, которые содержат или в одно время содержали одну или несколько молекул gРНК, например одну или несколько молекул gРНК, включающих целевой домен, представленный в Таблице 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 и одну или несколько молекул Сas9, описанных здесь, или потомство указанных клеток. В одном варианте осуществления клетки являются аллогенными млекопитающему. В одном варианте осуществления клетки являются аутологичными млекопитающему. В одном варианте осуществления млекопитающее является донором клеток, клетки обрабатывают ex vivo и возвращают млекопитающему.
В аспектах клетки, которые содержат или в одно время содержали одну или несколько молекул gРНК, например одну или несколько молекул gРНК, включающих целевой домен, представленный в Таблице 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9, и одну или несколько молекул Сas9, описанных здесь, или потомство указанных клеток, содержат стволовые клетки или клетки-предшественники. В одном аспекте стволовыми клетками являются гемопоэтические стволовые клетки. В одном аспекте клетки-предшественники представляют собой гемопоэтические клетки-предшественники. В одном аспекте клетки включают как гемопоэтические стволовые клетки, так и гемопоэтические клетки-предшественники, например HSPC. В одном аспекте клетки включают, например, состоят из CD34+ клеток. В одном аспекте клетки совершенно не содержат CD34- клеток. В одном аспекте клетки содержат, например, состоят из CD34+/CD90+ стволовых клеток. В одном аспекте клетки содержат, например, состоят из CD34+/CD90- клеток. В одном аспекте клетки представляют собой популяцию, включающую один или несколько типов клеток, описанных выше или описанных здесь.
В одном варианте осуществления раскрытие предоставляет способ лечения гемоглобинопатии, например серповидно-клеточной болезни или бета-талассемии, или способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у млекопитающего, например человека, нуждающегося в этом, способа, включающего:
a) предоставление, например, сбор или выделение популяции HSPC (например, CD34+ клеток) из млекопитающего;
b) предоставление указанных клеток ex vivo, например, в клеточной культуральной среде, необязательно в присутствии эффективного количества композиции, содержащей, по меньшей мере, одно соединение, спосбоствующее экспонсии стволовых клеток, в результате чего указанная популяция HSPC (например, CD34+ клеток) подвергается экпансии в большей степени, чем необработанная популяция;
c) контактирование популяции HSPC (например, CD34+ клеток) с эффективным количеством композиции, содержащей, по меньшей мере, одну молекулу gРНК, содержащую описанный здесь целевой домен, например, целевой домен, описанный в Таблицах 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8 или 9 или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанную молекулу gРНК, и по меньшей мере одну молекулу Сas9, например, описанную здесь, или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанную молекулу Сas9, т.е.,например, один или несколько RNP, описанных здесь, например, с системой CRISPR, описанной здесь;
d) образование по меньшей мере одной модификации, по меньшей мере, в части клеток популяции (например, по меньшей мере, в части клеток HSPC популяции, например в CD34+ клетках популяции), причём, например, при диффиренцировке указанных HSPC в клетки эритроидной линии, например в эритроциты, экспрессия фетального гемоглобина увеличивается, например, относительно клеток, не подвергавшихся контактированию на стадии с); и
f) возвращение популяции клеток, содержащих указанные модифицированные клетки HSPC (например, CD34+ клетки) млекопитающему.
В одном аспекте HSPC являются аллогенными для млекопитающего, которому они возвращаются. В одном аспекте HSPC аутологичны млекопитающему, к которому они возвращаются. В аспектах HSPC выделены из костного мозга. В аспектах HSPC выделены из от периферической крови, например, мобилизованной периферической крови. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому вводили G-CSF. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому был назначен агент для мобилизации, отличный от G-CSF, например Plerixafor® (AMD3100). В аспектах HSPC выделяют из пуповинной крови.
В дополнительных вариантах осуществления способа, способ далее включает в себя, после предоставления популяции HSPC (например, клеток CD34+), например, из источника, описанного выше, стадию обогащения популяция клеток по HSPC (например, CD34+ клетками). В вариантах осуществления способа после указанного обогащения популяция клеток, например, HSPC, в значительной степени не содержит CD34- клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 70% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 75% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 80% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 85% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 90% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 95% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 99% жизнеспособных клеток. Жизнеспособность может быть определена путем окрашивания репрезентативной части популяции клеток по маркеру жизнеспособности клеток, например, как известно из уровня техники.
В другом варианте осуществления раскрытие представляет способ лечения гемоглобинопатии, например, серповидно-клеточной болезни или бета-талассемии или способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у млекопитающего, например человека, нуждающегося в этом, способ, включающий стадии:
a) предоставления, например, сбора или выделения популяции HSPC (например, клеток CD34+), например, из млекопитающего, например, из костного мозга млекопитающего,
b) выделение CD34+ клеток из популяции клеток стадии а),
c) предоставление указанных CD34+ клеток ex vivo и культивирование указанных клеток, например, в клеточной культуральной среде, в присутствии эффективного количества композиции, содержащей, по меньшей мере, одно соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например Соединение 4, например Соединение 4 в концентрации от примерно 0,5 до примерно 0,75 микромоля, при этом указанная популяция клеток CD34+ подвергается экспансии в большей степени, чем необработанная популяция,
d) введение в клетки популяции CD34+ клеток эффективного количества композиции, содержащей молекулу Сas9, например, как описано здесь, и молекулу gРНК, например, как описано здесь, при том, например, необязательно, чтобы молекула Сas9 и молекула gРНК находились в форме RNP, например, как описано здесь, и, необязательно, чтобы указанное введение происходило путем электропорации указанного RNP в указанные клетки, например, как описано здесь,
e) образование по меньшей мере одной генетической модификации по крайней мере, в (например, по меньшей мере, в части клеток популяции HSPCs, например CD34+ клеток популяции), в результате чего, например, индел, например, как описано здесь, создается внутри или вблизи геномного сайта, комплементарного целевому домену gРНК, введенной на стадии г);
f) необязательное дополнительное культивирование указанных клеток после указанного введения, например, в клеточной культуральной среде, в присутствии эффективного количества композиции, содержащей, по меньшей мере, одно соединение, способствуюшее экспансии стволовых клеток, например, Соединение 4, например, Соединение 4 в концентрации от примерно 0,5 до около 0,75 микромоля, что вызывает, по меньшей мере, 2-х кратную экспансию клеток, например, по меньшей мере, 4-х кратную экспансию, например, по меньшей мере, 5-ти кратную экспансию клеток;
g) криоконсервация указанных клеток; и
h) возвращение клеток млекопитающему, причем клетки, возвращаемые млекопитающему, содержат клетки, которые
1) сохраняют способность дифференцироваться в клетки эритроидной линии, например эритроциты;
2) будучи дифференцированы в эритроциты, продуцируют повышенный уровень фетального гемоглобина, например, по отношению к клеткам, не модифицированным с помощью gРНК на стадии e),
3. продуцируют, например, по меньшей мере 6 пикограмм фетального гемоглобина на клетку.
В одном аспекте HSPC являются аллогенными млекопитающему, которыму они возвращаются. В одном аспекте HSPC аутологичны млекопитающему, которому они возвращаются. В аспектах HSPC выделены из костного мозга. В аспектах HSPC выделены из периферической крови, например, мобилизованной периферической крови. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому вводили G-CSF. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому вводили агент мобилизации, отличный от G-CSF, например Plerixafor® (AMD3100). В аспектах HSPC выделяют из пуповинной крови.
В вариантах осуществления вышеописанного способа, указанная стадия b) приводит к популяции клеток, которая, по-существу, не содержит CD34- клеток. В других вариантах осуществления способа, способ дополнительно включает, после получения популяции HSPC (например, CD34+ клеток), например, из источника, описанного выше, стадию обогащения популяции клеток по HSPC (например, CD34+ клеток).
В других вариантах осуществления данных способов популяция модифицированных HSPC (например, CD34+ стволовых клеток), обладающих способностью дифференцироваться и имеющая повышенную экспрессию фетального гемоглобина, подвергается криоконсервации и хранится до введения/возвращения млекопитающему. В вариантах осуществления криоконсервированная популяция HSPC, обладающая способностью дифференцироваться в клетки эритроидной линии, например эритроциты, и/или будучи дифференцирована в клетки эритроидной линии, например эритроциты, приводящая к повышению уровня фетального гемоглобина, размораживается, а затем вводится/возвращается млекопитающему. В следующем варианте осуществления этих способов, способ включает химиотерапию и/или лучевую терапию для удаления или уменьшения эндогенного гемопоэтического предшественника или стволовых клеток у млекопитающего. В следующем варианте осуществления этих способов, способ не включает стадии химиотерапии и/или лучевой терапии для удаления или уменьшения эндогенного гемопоэтического предшественника или стволовых клеток у млекопитающего. В следующем варианте осуществления этих способов, способ включает химиотерапию и/или лучевую терапию для удаления или уменьшения (например, при частичнуй лимфодеплеции) эндогенного гемопоэтического предшественника или стволовых клеток у млекопитающего. В вариантах осуществления пациент обрабатвается дозой бусульфана, вызывающей полную лимфодеплецию, перед введением/возвращением модифицированных HSPC млекопитающему. В вариантах осуществления пациент обрабатвается дозой бусульфана, вызывающей частичную лимфодеплецию, перед введением/возвращением модифицированных HSPC млекопитающему.
В вариантах осуществления клетки контактируют с RNP, содержащим молекулу Сas9, например, как описано здесь, в комплексе с gРНК, комплементарной области +58 энхансера BCL11a. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR000312. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR000311. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001128. В вариантах осуществления g РНК включает целевой домен CR001125. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001126. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001127. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO:248-SEQ ID NO:6607, и tracr, содержащий, например, состоящий из [SEQ ID NO:7812], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, ID NO:248]-[SEQ ID NO:6601, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:248]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:247]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:247]-[SEQ ID NO:6601, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:247]-[SEQ ID NO:7811], В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:338]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:338]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:338]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двунаправленную РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:335]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:335]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:335]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:336]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:336]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:336]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO:337-SEQ ID NO:6607, и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:337]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:337]-[SEQ ID NO:7811]. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления любые или все РНК-компоненты gРНК могут быть модифицированы в одном или нескольких нуклеотидах, например, как описано здесь. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:342. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:343. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1762. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:344 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:344 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:345 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:345 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:347. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:348. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1763. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:350 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:350 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:351. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:352. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1764. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:353 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:353 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:354 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:354 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:355 В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:356. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1765. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:357 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:357 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:358 и SEQ ID NO:6660. В варианты осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:358 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:359. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:360. В вариантах осуществления, молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1766. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:361 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления, молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:361 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:362 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:362 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:363. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:364. В вариантах осуществления, молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1767. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:365 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:365 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:366 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:366 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:367. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:36 8. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1768. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:369 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:369 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:370 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:370 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:371. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:372. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1769. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:373 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:373 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:374 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой dgРНК молекула, которая состоит из SEQ ID NO:374 и SEQ ID NO:346.
В вариантах осуществления изобретения клетки контактируют с RNP, содержащим молекулу Сas9, например, как описано здесь, в комплексе с gРНК, комплементарной области HPFH. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001030. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001028. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001221. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001137. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR003035. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR003085. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:98]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:98]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:98]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:100]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:100]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урацилнуклеотидами, например [SEQ ID NO:100]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO:1589-SEQ ID NO:6607, и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SE Q ID NO:1589]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:1589]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1505]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1505]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:1505]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1700]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1700]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:1700]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1750]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1750]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:1750]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:375. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:376. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1770. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:377 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:377 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NOO:378 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:378 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:379. В вариантах осуществления, молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:380. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1771. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:381 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:381 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, который состоит из SEQ ID NO:382 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:382 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:383. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:384. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1772. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:385 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:385 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:386 и SEQ ID NO:6660 В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:386 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:387. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:388 В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1773. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:389 и SEQ I D NO: 6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:389 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:390 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:390 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:391. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:392. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1774. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:393 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:393 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:394 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:394 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:395. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:396. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1775. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:397 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:397 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК le представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:398 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:398 и SEQ ID NO:346.
В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 1. В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 2. В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 3. В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 4. В вариантах осуществления где соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 4 и присутствует в концентрации 2-0,1 микромоля, например, 1-0,25 микромоля, например 0,75-0,5 микромоля. В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой молекулу, описанную в WO2010/059401 (например, молекулу, описанную в примере 1 WO2010/059401).
В вариантах осуществления клетки, например HSPC, например, как описано здесь, культивируют ex vivo в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 15 дней, например, в течение периода от примерно 12 часов до примерно 12 дней, например, в течение периода от примерно 12 часов до примерно 4 дней, например в течение периода от примерно 1 дня до примерно 4 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 2 дней, например, в течение периода примерно 1 дня до примерно 2 дней, до этапа контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь. В вариантах осуществления указанное культивирование до указанной стадии контактирования находится в композиции (например, клеточной культуральной среде), содержащей соединение, способстующее экспансии стволовых клеток, например, описанное здесь, например, Соединение 4, например Соединение 4, в концентрации около 0,25 мкМ до около 1 мкМ, например, Соединение 4 при концентрации около 0,75-0,5 микромоля. В вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo в течение периода времени, не превышающего примерно 1 день, например, не более 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 часа после стадии контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь, например, в клеточной культуральной среде, содержащей содержит соединение, способстующее экспансии стволовых клеток, описанное здесь, например Соединение 4, например Соединение 4, в концентрации от около 0,25 мкМ до около 1 мкМ, например Соединение 4 в концентрации около 0,75-0,5 микромоля. В других вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 15 дней, например, в течение периода от примерно 12 часов до примерно 10 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 10 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 5 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 4 дней, например, в течение периода от примерно 2 дней до примерно 4 дней, например, в течение периода от примерно 2 дней, примерно 3 дней или примерно 4 дней после стадии контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь, в клеточной культуральной среде, например, которая содержит соединение, способстующее экспансии стволовых клеток, например, описанное здесь, например Соединение 4, например Соединение 4 в концентрации от около 0,25 мкМ до около 1 мкМ, например, Соединение 4 в концентрации около 0,75-0,5 микромоля. В вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo (например, культивируют до указанной стадии контактирования и/или культивируют после указанной стадии контактирования) в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 20 дней, например, в течение периода примерно 6-12 дней, например, в течение периода примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11 или примерно 12 дней.
В вариантах воплощения популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 1 миллиона клеток (например, по меньшей мере около 1 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 2 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 2 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит, по меньшей мере, около 3 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 3 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 4 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 4 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 5 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 5 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 6 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 6 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 1 миллион клеток (например, по меньшей мере 1 миллион клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 2 миллиона клеток (например, по меньшей мере 2 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 3 миллиона клеток (например, по меньшей мере 3 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 4 миллиона клеток (например, по меньшей мере 4 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах воплощения популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращенные млекопитающему, содержит по меньшей мере 5 миллионов c (например, по меньшей мере 5 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 6 миллионов клеток (например, по меньшей мере 6 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 1 миллиона клеток (например, около 1 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращенные млекопитающему, содержит около 2 миллионов клеток (например, около 2 миллионов CD34+ клеток) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 3 миллионов клеток (например, около 3 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 4 миллионов клеток (например, около 4 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 5 миллионов клеток (например, около 5 миллионов CD34+ клеток) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 6 миллионов клеток (например, около 6 миллионов CD34+ клеток) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, включающих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит примерно 2×106 клеток на кг массы тела пациента.В вариантах воплощения популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 2×106 клеток на кг массы тела пациента.
В вариантах осуществления любой из способов, описанных выше, приводит к тому, что по меньшей мере 80% циркулирующих CD34+ клеток пациента, содержат индел внутри или вблизи участка генома, комплементарного целевому домену молекулы gРНК, используемой в способе, например, как измерено по меньшей мере через 15, например по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40 по меньшей мере 50 или по меньшей мере через 60 дней после введения/возвращения клеток млекопитающему.
В вариантах осуществления любой из способов, описанных выше, приводит к тому, что, по меньшей мере 20% клеток CD34+ костного мозга пациента содержат индел внутри или вблизи участка генома, комплементарного целевому домену молекулы gРНК, используемой в способе, например, как измерено по меньшей мере через 15, например по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40 по меньшей мере 50 или по меньшей мере через 60 дней после введения/возвращения клеток млекопитающему.
В вариантах осуществления, HSPC, которые вводятся/возвращаются млекопитающему, способны дифференцироваться in vivo в клетки эритроидной линии, например, эритроциты, а указанные дифференцированные клетки демонстрируют повышенный уровень фетального гемоглобина, например, продуцируют по меньшей мере 6 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, например, по меньшей мере 7 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, по меньшей мере 8 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, по меньшей мере 9 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, например, между примерно 9 и примерно 10 пикограммами фетального гемоглобина на клетку, например, таким образом, что гемоглобинопатия млекопитающего считается излеченной.
Следует иметь в виду, что, когда клетка характеризуется как имеющая повышенный уровень фетального гемоглобина, она включает те варианты осуществления, в которых потомство этой клетки, например дифференцированные клетки потомства, имеет повышенный уровень фетального гемоглобина. Например, в способах, описанных здесь, измененная или модифицированная клетка CD34+ (или популяция клеток) может не показывать повышенный уровень фетального гемоглобина, но при дифференцировке в клетки эритроидной линии, например в эритроциты, клетки показывают повышенный уровень фетального гемоглобин, например, повышенный уровень фетального гемоглобина по сравнению с немодифицированной или неизменной клеткой в аналогичных условиях.
XII. Способы культивирования клеток и способы воспроизводства клеток.
В раскрытии представлены способы культивирования клеток, например HSPC, например гемопоэтических стволовых клеток, например CD34+ клеток, модифицированных или подготовленных для модификации молекулами gРНК, описанными здесь.
Ингибиторы пути восстановления ДНК
Не ограничиваясь теорией, считается, что профиль инделов, формируемых данной молекулой gРНК в конкретной целевой последовательности, является результатом каждого из активных клеточных механизмов репарации ДНК (например, негомологичное соединение концов, опосредованное микрогомологией соединение концов и т. д.). Не ограничиваясь теорией, считается, что особенно благоприятный индел можно сформировать или увеличить его количество путем контактирования клеток, подлежащих редактированию, с ингибитором того механизма репарации ДНК, который не способствует формированию желаемого индела. Таким образом, молекулы gРНК, системы CRISPR, способы и другие аспекты изобретения могут быть реализованы в комбинации с такими ингибиторами. Примеры таких ингибиторов включают те, которые описаны, например, в WO2014/130955, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки во всей его полноте. В варианте осуществления ингибитор представляет собой ингибитор DNAPKc, например NU7441.
Соединения, способствующие экспансии стволовых клеток
В одном аспекте изобретение относится к культивированию клеток, например HSPCs, например, CD34+ клеток, модифицированных или подготовленных к модификации молекулами gРНК, описанными здесь, с одним или несколькими агентами, приводящими к увеличению скорости экспансии (экспансия-деление/размножение клеток на стадии экспоненциального роста, далее «экспансия»), увеличению уровня экспансии, или увеличению приживаемости при трансплантации по сравнению с клетками, не обработанными агентом. Такие агенты упоминаются здесь как соединения, способствующие экспансии стволовых клеток.
В одном аспекте один или несколько агентов, которые приводят к увеличению скорости экспансии или повышению уровню экспансии по сравнению с клетками, не обработанными агентом, например соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, содержат агент, который является ингибитором каскада арильного углеводородного рецептора (AHR). В аспектах соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой соединение, раскрытое в WO2013/110198, или соединение, раскрытое в WO2010/059401, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте.
В одном аспекте один или несколько агентов, которые приводят к увеличению скорости экспансии или повышенному уровню экспансии по сравнению с клетками, не обработанными агентом, являются производным пиримидо[4,5-b]индола, например, как описано в WO2013/110198, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте. В одном варианте осуществления агент представляет собой соединение 1((1r,4r)-N1-(2-бензил-7-(2-метил-2H-тетразол-5-ил)-9H-пиримидо[4,5-b] индол-4-ил)циклогексан-1,4-диамин):
Соединение 1
Compound 1
В другом аспекте агент представляет собой соединение 2 (метил-4-(3-пиперидин-1-илпропиламино)-9Н-пиримидо [4,5-b] индол-7-карбоксилат):
Соединение 2:
В другом аспекте один или несколько агентов, приводящие к увеличению скорости экспансии или повышенному уровню экспансии по сравнению с клетками, не обработанными агентом, являются агентом, описанным в WO2010/059401, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.
В одном варианте осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой 4-(2-(2-(бензо[b]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-ил амино)этил)фенол, т.е. представляет собой соединение из примера 1 WO2010/059401, имеющего следующую структуру:
Соединение 3:
В другом аспекте соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 4((S)-2-(6-(2- (1Н-индол-3-ил) этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол, то есть представляет собой соединение 157S согласно WO2010/059401), имеющего следующую структуру:
Соединение 4:
В вариантах осуществления популяция HSPC контактирует с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например соединением 1, соединением 2, соединением 3, соединением 4 или их комбинациями (например, комбинацией соединения 1 и соединения 4) перед введением системы CRISPR (например, молекулы gРНК и/или молекулы Cas9 по изобретению) в указанные HSPC. В вариантах осуществления популяция HSPC контактирует с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например с соединением 1, соединением 2, соединением 3, соединением 4 или их комбинациями (например, комбинацией соединения 1 и соединения 4), после введения CRISPR (например, молекулы gРНК и/или молекулы Cas9 по изобретению) в указанные HSPC. В вариантах осуществления популяция HSPC контактирует с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например соединением 1, соединением 2, соединением 3, соединением 4 или их комбинациями (например, комбинацией соединения 1 и соединения 4), как до, так и после введения системы CRISPR (например, молекулы gРНК и/или молекулы Cas9 по изобретению) в указанные HSPC.
В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, присутствует в эффективном количестве для увеличения уровня экспансии HSPC по сравнению с клетками HSPC в той же среде, но в отсутствие соединения, способствующего экспансии стволовых клеток. В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток присутствует в концентрации от примерно 0,01 до примерно 10 мкМ, например, от примерно 0,1 мкМ до примерно 1 мкМ. В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, присутствует в среде культивирования клеток в концентрации примерно 1 мкМ, примерно 950 нМ, примерно 900 нМ, примерно 850 нМ, примерно 800 нМ, примерно 750 нМ, примерно 700 нМ, примерно 650 нМ, примерно 600 нМ, примерно 550 нМ, примерно 500 нМ, примерно 450 нМ, примерно 400 нМ, примерно 350 нМ, примерно 300 нМ, примерно 250 нМ, примерно 200 нМ, примерно 150 нМ, примерно 100 нМ, примерно 50 нМ, примерно 25 нМ или примерно 10 нМ. В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, присутствует в концентрации от примерно 500 нМ до примерно 750 нМ.
В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 4, и присутствует в среде культивирования клеток в концентрации от примерно 0,01 до примерно 10 мкмоль (мкМ). В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 4, которое присутствует в среде культивирования клеток в концентрации от примерно 0,1 до примерно 1 микромолей (мкМ). В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 4, которое присутствует в среде культивирования клеток в концентрации примерно 0,75 микромолей (мкМ). В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 4, которое присутствует в среде культивирования клеток в концентрации примерно 0,5 микромоля (мкМ). В любом из вышеперечисленных вариантах осуществления среда для культивирования клеток дополнительно содержит соединение 1.
В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой смесь соединений 1 и 4.
В вариантах осуществления клетки по изобретению контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать увеличение экспансии клеток CD34+ в 2-10 000 раз, например, увеличение экспансии клеток CD34+ в 2-1000 раз, например, увеличение экспансии клеток CD34+ в 2-100 раз, например, 20-200-кратное увеличение экспансии клеток CD34+. Как описано здесь, контактирование с одним или несколькими соединениями, способствующими экспансии стволовых клеток, может быть проведено до того, как клетки контактируют с системой CRISPR, например, как описано здесь, или после того, как клетки контактировали с системой CRISPR, например, как описано здесь, или их комбинации. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, например соединением 4, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать, по меньшей мере, 2-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток, например CD34+ клеток, содержащих индел внутри или вблизи целевого участка, комплементарного целевому домену gРНК системы CRISPR/Cas9, введенной в указанную клетку. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, например, с соединением 4, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 4-кратное увеличение экспансии клеток CD34+, например CD34+ клеток, содержащих индел внутри или вблизи целевого участка, комплементарного целевому домену gРНК системы CRISPR/Cas9, введенной в указанную клетку. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток например, с соединением 4, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать, по меньшей мере, 5-кратное увеличение экспансии клеток CD34+, например CD34+ клеток, содержащих индел внутри или вблизи целевого участка, комплементарного целевому домену gРНК системы CRISPR/Cas9, введенной в указанную клетку. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 10-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 20-кратное увеличение экспансии клеток CD34+. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 30-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать, по меньшей мере, 40-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 50-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать, по меньшей мере, 60-кратное увеличение экспансии клеток CD34+. В вариантах осуществления клетки контактируют с одним или несколькими соединениями, способствующими экспансии стволовых клеток, в течение примерно 1-60 дней, например, примерно 1-50 дней, например, примерно 1-40 дней, например, примерно 1-30 дней, например, 1-20 дней, например, примерно 1-10 дней, например, примерно 7 дней, например, примерно 1-5 дней, например, примерно 2-5 дней, например, примерно 2-4 дня, например, примерно 2 дня или, например, примерно 4 дня.
В вариантах осуществления клетки, например HSPC, например, как описано здесь, культивируют ex vivo в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 10 дней, например, в течение периода времени от примерно 12 часов до примерно 5 дней, например, в течение периода времени примерно 12 часов до 4 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 4 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 2 дней, например, в течение периода времени примерно 1 дня или в течение периода времени примерно 2 дней, перед стадией контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь. В вариантах осуществления указанное культивирование перед указанной стадией контактирования происходит при добавлении композиции (например, в среде культивирования клеток), содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например, описанное здесь, например Соединение 4, например, Соединение 4 в концентрации от примерно 0,25 мкМ до примерно 1 мкМ, например, Соединение 4 в концентрации примерно 0,75-0,5 мкмоль. В вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo в течение периода времени, не превышающего примерно 1 день, например, не более 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 часа(ов) после стадии контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь, например, в среде культивирования клеток, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, описанные здесь, например Соединение 4, например Соединение 4, в концентрации от примерно 0,25 мкМ до примерно 1 мкМ, например Соединение 4 при концентрации примерно 0,75-0,5 микромоля. В других вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 14 дней, например, в течение периода времени от примерно 12 часов до примерно 10 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 10 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 5 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 4 дней, например, в течение периода времени от примерно 2 дней до примерно 4 дней, например, в течение периода времени примерно 2 дней, примерно 3 дней или примерно 4 дней после стадии контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь, в среде культивирования клеток, например, которая содержит соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например, описанное здесь, например Соединение 4, например Соединение 4 при концентрации от примерно 0,25 мкМ до примерно 1 мкМ, например, Соединение 4 в концентрации примерно 0,75-0,5 микромоля.
В вариантах осуществления среда для культивирования клеток представляет собой химически определенную среду. В вариантах осуществления среда для культивирования клеток может дополнительно содержать, например, StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat № 09650). В вариантах осуществления среда для культивирования клеток может альтернативно или дополнительно содержать, например, HSC Brew, GMP (Miltenyi). В вариантах осуществления среда может быть дополнена тромбопоэтином (TPO), лигандом Flt3 человека (Flt-3L), фактором стволовых клеток человека (SCF), человеческим интерлейкином-6, L-глутамином и/или пенициллином/стрептомицином. В вариантах осуществления среда дополнена тромбопоэтином (TPO), лигандом Flt3 человека (Flt-3L), фактором стволовых клеток человека (SCF), человеческим интерлейкином-6 и L-глутамином. В других вариантах осуществления среда дополнена тромбопоэтином (TPO), лигандом Flt3 человека (Flt-3L), человеческим стволовым клеточным фактором (SCF) и человеческим интерлейкином-6. В других вариантах осуществления среда дополнена тромбопоэтином (TPO), лигандом Flt3 человека (Flt-3L) и фактором стволовых клеток человека (SCF), но не содержит человеческого интерлейкина-6. Когда в среде присутствуют тромбопоэтин (TPO), лиганд Flt3 человека (Flt-3L), фактор стволовых клеток человека (SCF), человеческий интерлейкин-6 и/или L-глутамин, то они присутствуют в концентрации от примерно 1 нг/мл до примерно 1000 нг/мл, например, в концентрации в пределах от примерно 10 нг/мл до примерно 500 нг/мл, например в концентрации от примерно 10 нг/мл до примерно 100 нг/мл, например в концентрации от примерно 25 нг/мл до примерно 75 нг/мл, например, в концентрации примерно 50 нг/мл. В вариантах осуществления каждый из дополнительных компонентов находится в одной и той же концентрации. В других вариантах осуществления каждый из дополненных компонентов находится в разных концентрациях. В одном варианте осуществления среда включает StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat No. 09650), 50 нг/мл тромбопоэтина (Tpo), 50 нг/мл Flt3 лиганда человека (Flt-3L), 50 нг/мл фактора стволовых клеток человека (SCF) и 50 нг/мл человеческого интерлейкина-6 (IL-6). В одном варианте осуществления среда включает StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat No. 09650), 50 нг/мл тромбопоэтина (Tpo), 50 нг/мл Flt3 лиганда человека (Flt-3L) и 50 нг/мл фактора стволовых клеток человека (SCF) и не содержит IL-6. В вариантах осуществления среда дополнительно содержит соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например Соединение 4, например Соединение 4 в концентрации 0,75 мкМ. В вариантах осуществления среда дополнительно содержит соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например Соединение 4, например Соединение 4, в концентрации 0,5 мкМ. В вариантах осуществления среда дополнительно содержит 1% L-глутамина и 2% пенициллина/стрептомицина. В вариантах осуществления среда для культивирования клеток не содержит сыворотки.
XII. Комбинированная терапия.
Настоящее раскрытие рассматривает применение описанных здесь молекул gРНК или клеток (например, гемопоэтических стволовых клеток, например клеток CD34+), модифицированных молекулами gРНК, описанных здесь, в сочетании с одним или несколькими другими терапевтическими средствами и/или агентами. Таким образом, помимо применения молекул gРНК или клеток, модифицированных молекулами gРНК, описанных здесь, также возможно использование одной или несколько «стандартных» терапий для лечения гемоглобинопатии субъекта.
Одна или несколько дополнительных терапий для лечения гемоглобинопатий могут включать, например, дополнительную трансплантацию стволовых клеток, например трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток. Трансплантация стволовых клеток может быть аллогенной или аутологичной.
Одна или несколько дополнительных терапий для лечения гемоглобинопатии могут включать, например, переливание крови и/или хелирование железа (т.е. удаление железа). Известные агенты для хелирования железа включают, например, дефероксамин и деферазирокс. Одна или несколько дополнительных терапий для лечения гемоглобинопатий могут включать, например, добавки фолиевой кислоты или гидроксимочевины (например, 5-гидроксимочевину). Одной или несколькими дополнительными терапиями для лечения гемоглобинопатии может быть гидроксимочевина. В вариантах осуществления гидроксимочевину можно вводить в дозе, например, 10-35 мг/кг в день, например 10-20 мг/кг в день. В вариантах осуществления гидроксимочевину вводят в дозе 10 мг/кг в день. В вариантах осуществления гидроксимочевину вводят в дозе 10 мг/кг в день. В вариантах осуществления гидроксимочевину вводят в дозе 20 мг/кг в день. В вариантах осуществления гидроксимочевину вводят до и/или после (введения) клетки (или популяции клеток), например CD34+ клетки (или популяции клеток) по изобретению, например, как описано здесь.
Один или несколько дополнительных терапевтических агентов могут включать, например, анти-р-селектин антитело, например SelG1 (Selexys). Антитела к P-селектину описаны, например, в публикации PCT WO1993/021956, публикации PCT WO1995/34324, публикации РСТ WO2005/100402, публикации PCT WO2008/069999, публикации патентной заявки США US2011/0293617, патенте США №5800815, патенте США №6667036, патенте США №8945565, патенте США №8377440 и патенте США №9068001, содержание каждого из которых включено в настоящий документ полностью посредством ссылки.
Один или несколько дополнительных агентов могут включать, например, небольшую молекулу, активирующую фетальный гемоглобин. Примеры таких молекул включают TN1 (например, как описано в Nam, T. et al., ChemMedChem 2011, 6, 777-780, DOI: 10.1002/cmdc.201000505, содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки).
Одна или несколько дополнительных терапий могут также включают в себя облучение или другую абляционную терапию костного мозга, известную в данной области техники. Примером такой терапии является бусульфан. Такая дополнительная терапия может быть проведена перед введением в субъекта клеток по изобретению. В одном варианте осуществления способы лечения, описанные здесь (например, способы лечения, которые включают введение клеток (например, HSPC), модифицированных описанными здесь способами (например, модифицированными с помощью системы CRISPR, описанной здесь, например, для увеличения продукции HbF)), не включают стадию абляции костного мозга. В вариантах осуществления способы включают стадию частичной абляции абсорбции костного мозга.
Терапии, описанные здесь (например, включающие введение популяции HSPC, например HSPC, модифицированных с использованием системы CRISPR, описанной здесь), также могут быть объединены с дополнительным терапевтическим агентом. В одном варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой ингибитор HDAC, например, панобиностат. В одном варианте осуществления дополнительным терапевтическим агентом является соединение, описанное в публикации PCT № WO2014/150256, например, соединение, описанное в Таблице 1 WO2014/150256, например GBT440. Другие примеры ингибиторов HDAC включают, например, субероиланилид-гидроксамовую кислоту (SAHA). Один или несколько дополнительных агентов могут включать, например, ингибитор метилирования ДНК. Было показано, что такие агенты увеличивают индукцию HbF в клетках, имеющих пониженную активность BCL11a (например, Jian Xu et al., Science 334, 993 (2011), DOI: 0.1126/science.1211053, содержание которого включено в настоящий документ полностью посредством ссылки). Другие ингибиторы HDAC включают любой ингибитор HDAC, известный в данной области техники, например, трихостатин A, HC-токсин, DACI-2, FK228, DACI-14, депудицин, DACI-16, тубацин, NK57, MAZ1536, NK125, Scriptaid, Pyroxamide, MS-275, ITF-2357, MCG-D0103, CRA-024781, CI-994 и LBH589 (см., например, Bradner JE и др., PNAS, 2010 (том 107: 28), 12617-12622 содержание которого включено в настоящий документ полностью посредством ссылки).
Молекулы gРНК, описанные здесь, или клетки (например, гематопоэтические стволовые клетки, например клетки CD34+), модифицированные молекулами gРНК, описанными здесь, и сопутствующий терапевтический агент или совместная терапия могут быть введены совместно в общем составе или по отдельности. В случае отдельного введения молекулы gРНК, описанные здесь, или клетки, модифицированные молекулами gРНК, описанные здесь, могут вводиться до, после или одновременно с сопутствующим терапевтическим агентом или совместной терапией. Один агент может предшествовать или следовать введению другого агента с интервалами в пределах от минут до нескольких недель. В вариантах осуществления, где два или более различных видов терапевтических агентов вводятся субъекту по отдельности, в общем случае, нужно убедиться, что бы между введениями не было значительного промежутка времени, для того чтобы эти различные виды агентов все еще могли оказывать полезное комбинированное воздействие на ткани или клетки-мишени.
XIII. Модифицированные нуклеозиды, нуклеотиды и нуклеиновые кислоты
Модифицированные нуклеозиды и модифицированные нуклеотиды могут присутствовать в нуклеиновых кислотах, например, в частности gРНК, но также и других формах РНК, например мРНК, iРНК или siРНК. Как описано здесь, «нуклеозид» определяется как соединение, содержащее молекулу сахара с пятью углеродами (пентозу или рибозу) или её производное, и органическое основание, пурин или пиримидин или его производное. Как описано здесь, «нуклеотид» определяется как нуклеозид, дополнительно содержащий фосфатную группу.
Модифицированные нуклеозиды и нуклеотиды могут включать одно или несколько из списка:
(i) изменения, например, замещения одного или обоих несвязанных атомов кислорода фосфата и/или одного или нескольких связанных атомов кислорода в фосфодиэфирной цепи остова;
(ii) изменение, например, замещение составляющих кольца рибозы, например, 2'-гидроксила кольца рибозы;
(iii) замену большинства фосфатных фрагментов линкерами «дефосфо»;
(iv) модификация или замещение естественных нуклеотидных оснований, в том числе неканоническим нуклеотидным основанием;
(v) замену или модификацию рибозо-фосфатного остова;
(vi) модификацию 3'-конца или 5'-конца олигонуклеотида, например удаление, модификацию или замещение концевой фосфатной группы или конъюгацию фрагмента, кэпа или линкера; и
(vii) модификацию или замена сахара.
Перечисленные выше модификации могут быть скомбинированы для создания модифицированных нуклеозидов и нуклеотидов, которые могут иметь две, три, четыре или более модификаций. Например, модифицированный нуклеозид или нуклеотид может иметь модифицированный сахар и модифицированную нуклеотидное основание. В варианте осуществления каждое основание gРНК модифицировано, например, все основания имеют модифицированную фосфатную группу, например, все имеют фосфоротиоатную группу. В одном варианте осуществления все или практически все фосфатные группы одноцепочечной или модульной молекулы gРНК заменяются фосфоротиоатными группами. В вариантах осуществления один или несколько из пяти 3'-концевых оснований и/или одного или нескольких из пяти 5'-концевых оснований gРНК модифицируются фосфоротиоатной группой.
В одном варианте осуществления модифицированные нуклеотиды, например нуклеотиды, имеющие модификации, как описано здесь, могут быть включены в нуклеиновую кислоту, например «модифицированную нуклеиновую кислоту». В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеиновые кислоты включают один, два, три или более модифицированных нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере примерно 5% (например, по меньшей мере, примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 45%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или примерно 100%) положений в модифицированной нуклеиновой кислоте являются модифицированными нуклеотидами.
Немодифицированные нуклеиновые кислоты могут быть подвержены деградации, например, клеточными нуклеазами. Например, нуклеазы могут гидролизовывать фосфодиэфирные связи нуклеиновых кислот. Соответственно, в одном аспекте модифицированные нуклеиновые кислоты, описанные здесь, могут содержать один или несколько модифицированных нуклеозидов или нуклеотидов, например, для придания стабильности к нуклеазам.
В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды, модифицированные нуклеотиды и модифицированные нуклеиновые кислоты, описанные здесь, могут приводить к сниженному врожденному иммунному ответу при введении в популяцию клеток как in vivo, так и ex vivo. Термин «врожденный иммунный ответ» обозначает клеточный ответ на экзогенные нуклеиновые кислоты, включая одноцепочечные нуклеиновые кислоты, как правило, вирусного или бактериального происхождения, который выражается в индукции экспрессии и высвобождении цитокинов, в частности интерферонов, и гибели клеток. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды, модифицированные нуклеотиды и модифицированные нуклеиновые кислоты, описанные здесь, могут нарушать связывание нуклеиновой кислоты с основным партнером, взаимодействующим с канавкой. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды, модифицированные нуклеотиды и модифицированные нуклеиновые кислоты, описанные здесь, могут вызывать пониженный врожденный иммунный ответ при введении в популяцию клеток как in vivo, так и ex vivo, а также нарушать связывание нуклеиновой кислоты с основным партнером, взаимодействующим с канавкой.
Определения химических групп
Используемый здесь термин «алкил» означает ссылку на насыщенную углеводородную группу, линейную или разветвленную. Примеры алкильных групп включают метил (Me), этил (Et), пропил (например, n-пропил и изопропил), бутил (например, n-бутил, изобутил, трет-бутил), пентил (например, n-пентил, изопентил, неопентил) и так далее. Алкильная группа может содержать от 1 до примерно 20, от 2 до примерно 20, от 1 до примерно 12, от 1 до примерно 8, от 1 до примерно 6, от 1 до примерно 4 или от 1 до примерно 3 атомов углерода.
Используемый здесь термин «арил» относится к моноциклическим или полициклическим (например, имеющим 2, 3 или 4 конденсированных кольца) ароматическим углеводородам, таким как, например, фенил, нафтил, антраценил, фенантренил, инданил, инденил и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления арильные группы имеют от 6 до 20 атомов углерода.
Используемый здесь термин «алкенил» относится к алифатической группе, содержащей по меньшей мере одну двойную связь.
Используемый здесь термин «алкинил» относится к линейной или разветвленной углеводородной цепи, содержащей 2-12 атомов углерода и характеризующейся наличием одной или нескольких тройных связей. Примеры алкинильных групп включают этинил, пропаргил и 3-гексинил, но не ограничиваются ими.
Используемый здесь термин «арилалкил» или «аралкил» относится к алкильной группе, в которой атом алкильного водорода замещен арильной группой. Аралкил включает группы, в которых более одного атома водорода замещено арильной группой. Примерами «арилалкила» или «аралкила» являются бензил, 2-фенилэтил, 3-фенилпропил, 9-флуоренил, бензгидрил и тритил - группы.
Используемый здесь термин «циклоалкил» относится к циклическим, бициклическим, трициклическим или полициклическим неароматическим углеводородным группам, имеющим от 3 до 12 атомов углерода. Примеры циклоалкильных групп включают циклопропил, циклопентил и циклогексил, но не ограничиваются ими.
Используемый здесь термин «гетероциклил» относится к моновалентному радикалу гетероциклической кольцевой системы. Типичные гетероциклилы включают тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, пирролидинил, пирролидонил, пиперидинил, пирролинил, пиперазинил, диоксанил, диоксоланил, диазепинил, оксазепинил, тиазепинил и морфолинил, но не ограничиваются ими.
Используемый здесь термин «гетероарил» относится к моновалентному радикалу гетероароматической кольцевой системы. Примеры гетероарильных групп включают имидазолил, оксазолил, тиазолил, триазолил, пирролил, фуранил, индолил, тиофенилпиразолил, пиридинил, пиразинил, пиридазинил, пиримидинил, индолизинил, пуринил, нафтиридинил, хинолил и птеридинил, но не ограничиваются ими.
Модификации фосфатного остова
Фосфатная группа.
В некоторых вариантах осуществления фосфатная группа модифицированного нуклеотида может быть модифицирована заменой одного или нескольких атомов кислорода другим заместителем. Кроме того, модифицированный нуклеотид, например модифицированный нуклеотид, присутствующий в модифицированной нуклеиновой кислоте, в значительной степени может включать замену немодифицированной фосфатной части модифицированным фосфатом, как описано здесь. В некоторых вариантах осуществления модификация фосфатного остова может включать в себя изменения, которые приводят либо к незаряженному линкеру, либо к заряженному линкеру с несимметричным распределением заряда.
Примеры модифицированных фосфатных групп включают фосфоротиоат, фосфороселенаты, боранофосфаты, сложные эфиры боранофосфата, гидрофосфонаты, фосфорамидаты, алкил- или арилфосфонаты и фосфортриэфиры. В некоторых вариантах осуществления один из атомов кислорода фосфатного остова, не входящий в состав мостиков, может быть заменен на любой из следующих групп: сера (S), селен (Se), BR3 (где R может быть, например, водородом, алкилом, или арилом), C (например, алкильная группа, арильная группа и тому подобное), H, NR2 (где R может быть, например, водородом, алкилом или арилом) или OR (где R может быть, например, алкилом или арилом). Атом фосфора в немодифицированной фосфатной группе является ахиральным. Однако замена одного из атомов кислорода фосфатного остова, не входящих в состав мостиков, одним из вышеуказанных атомов или групп атомов может привести к хиральному атому фосфора; то есть атом фосфора в фосфатной группе, модифицированной таким образом, представляет собой стереогенный центр. Стереогенный атом фосфора может иметь либо конфигурацию «R» (обозначенную здесь Rp), либо конфигурацию «S» (обозначенную здесь Sp).
В фосфордитиоатах оба атома кислорода, не входящие в состав мостика, замещены серой. Центр фосфора в фосфородитиоатах является ахиральным, что препятствует образованию олигорибонуклеотидных диастереомеров. В некоторых вариантах осуществления модификации одного или обоих атомов кислорода, не входящих в состав мостиков, могут также включать замену атомов кислорода, не входящих в состав мостиков, группой, независимо выбранной из S, Se, B, C, H, N и OR (где R, например, представляетт собой алкил или арил).
Фосфатный линкер также может быть модифицирован путем замены атома кислорода, входящего в состав мостика (то есть кислорода, который связывает фосфат с нуклеозидом), азотом (мостиковые фосфорамидаты), серой (мостиковые фосфоротионаты) и углеродом (мостиковые метиленфосфонаты). Может быть произведена замена любого из связывающих атомов кислорода, либо сразу обоих атомов кислорода линкера.
Замена фосфатной группы.
Фосфатную группу можно заменить коннекторами, не содержащими фосфора. В некоторых вариантах осуществления заряженная фосфатная группа может быть заменена нейтральным фрагментом.
Примеры фрагментов, которые могут заменить фосфатную группу, могут включать, без ограничения, например, метилфосфонат, гидроксиламино, силоксаны, карбонаты, карбоксиметил, карбамат, амид, тиоэфир, этиленоксидный линкер, сульфонат, сульфонамид, тиоформальцеталь, формацеталь, оксим, метиленимино, метиленметилимино, метиленгидразо, метилендиметилгидразо и метиленоксиметилимино.
Замена рибозно-фосфатного остова
Структуры, имитирующие нуклеиновые кислоты, также могут быть сконструированы при замещении фосфатного линкера и сахара рибозы нуклеозидным или нуклеотидным суррогатом, устойчивым к нуклеазе. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидные основания могут быть привязаны суррогатным остовом. Примеры могут включать такие суррогаты нуклеиновых кислот как морфолино, циклобутил, пирролидин и пептид нуклеиновой кислоты (PNA), но не ограничиваться ими.
Модификации рибозы
Модифицированные нуклеозиды и модифицированные нуклеотиды могут включать одну или несколько модификаций рибозной группы. Например, 2'-гидроксильная группа (OH) может быть модифицирована или заменена несколькими различными «окси» или «дезокси» заместителями. В некоторых вариантах осуществления модификации 2'-гидроксильной группы могут повысить стабильность нуклеиновой кислоты, поскольку гидроксил больше не может подвергаться депротонизации с образованием 2'-алкоксидного иона. 2'-алкоксид может катализировать деградацию путем внутримолекулярной нуклеофильной атаки на линкерный атом фосфора.
Примеры модификаций типа «окси» по 2'-гидроксильной группе могут включать алкокси или арилокси (OR, где «R» может быть, например, алкилом, циклоалкилом, арилом, аралкилом, гетероарилом или сахаром); полиэтиленгликоли (ПЭГ), 0(CH2CH20)nCH2CH2OR, где R может быть, например, H или необязательно замещенным алкилом, и n может быть целым числом от 0 до 20 (например, от 0 до 4, от 0 до 8, от 0 до 10, от 0 до 16, от 1 до 4, от 1 до 8, от 1 до 10, от 1 до 16, от 1 до 20, от 2 до 4, от 2 до 8, от 2 до 10, от 2 до 16, от 2 до 20, от 4 до 8, от 4 до 10, от 4 до 16 и от 4 до 20). В некоторых вариантах осуществления модификация типа «окси» по 2' гидроксильной группе может включать «закрытые» нуклеиновые кислоты ("locked" nucleic acids LNA), в которых 2'-гидроксил может быть связан, например, с помощью Ci-6-алкиленового или Cj-6 гетероалкиленового мостика, c 4'-углеродом того же рибозного сахара, где типичные мостики могут включать метиленовые, пропиленовые, эфирные или амино-мостики; O-амино (где амино может быть, например, NH2, алкиламино, диалкиламино, гетероциклилом, ариламино, диариламино, гетероариламино или дигетероариламино, этилендиамин или полиамино) и аминоалкокси, 0(CH2)n-амино, (где амино может быть, например, NH2, алкиламино, диалкиламино, гетероциклил, ариламино, диариламино, гетероариламино или дигетероариламино, этилендиамин или полиамино). В некоторых вариантах осуществления модификация типа «окси» по 2'-гидроксильной группе может включать метоксиэтильную группу (MOЭ), (OCH2CH2OCH3, например, производное ПЭГ).
Модификации типа «дезокси» могут включать водород (то есть дезоксирибозные сахара, например, на выступающих участках неполной dsРНК); галоген (например, бром, хлор, фтор или иод); амино (где амино может быть, например, NH2, алкиламино, диалкиламино, гетероциклилом, ариламино, диариламино, гетероариламино, дигетероариламино или аминокислотой); NH(CH2CH2NH)nCH2CH2-амино (где амино может быть, например, как описано здесь), -NHC(0)R (где R может быть, например, алкилом, циклоалкилом, арилом, аралкилом, гетероарилом или сахаром), циано; меркапто; алкил-тио-алкил; тиоалкокси; и алкил, циклоалкил, арил, алкенил и алкинил, который может быть необязательно замещен, например, аминогруппой, как описано здесь.
Группа сахара также может содержать один или несколько атомов углерода, которые имеют противоположную стереохимическую конфигурацию, чем таковая соответствующего углерода в рибозе. Таким образом, модифицированная нуклеиновая кислота может включать нуклеотиды, содержащие, например, арабинозу, в качестве сахара. Нуклеотидный «мономер» может иметь альфа-связь в положении 1’ сахара, например, быть альфа-нуклеозидом. Модифицированные нуклеиновые кислоты могут также включать «абазивные» сахара, которые не имеют азотистого основания при С-. Эти абазивные сахара также могут быть дополнительно модифицированы по одному или нескольким атомам каркаса сахара. Модифицированные нуклеиновые кислоты могут также включать один или несколько сахаров в L-форме, например, L-нуклеозиды.
Как правило, РНК включает в себя сахар рибозу, которая представляет собой 5-членное кольцо, имеющее кислород. Типичные модифицированные нуклеозиды и модифицированные нуклеотиды могут включать, без ограничения, замещение атома кислорода в рибозе (например, серой (S), селеном (Se) или алкиленом, таким как, например, метилен или этилен); введение двойной связи (например, при замене рибозы циклопентенилом или циклогексенилом); сокращение кольца рибозы (например, с образованием 4-членного кольца циклобутана или оксетана); удлинение кольца рибозы (например, для образования 6- или 7-членного кольца, имеющего дополнительный углерод или гетероатом, такой как, например, ангидрид, альтритол, маннитол, циклогексанил, циклогексенил и морфолино, который также имеет фосфорамидатный остов). В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды могут включать в себя мульти-циклические формы (например, трициклические и «раскрытые/разблокированные» формы, такие как гликолевая нуклеиновая кислота (GNA) (например, R-GNA или S-GNA, где рибоза заменена гликолевыми единицами, присоединенными по фосфодиэфирным связям), треозо-нуклеиновая кислота (TNA, где рибоза замещена α-L-треофуранозил-(3'→2')).
Модификации азотистых оснований
Модифицированные нуклеозиды и модифицированные нуклеотиды, описанные здесь, которые могут быть включены в модифицированную нуклеиновые кислоты, могут содержать модифицированное азотистое основание нуклеотида (далее по тексту упоминается как «нуклеотидное основание»). Примеры оснований включают аденин (А), гуанин (G), цитозин (C) и урацил (U), но не ограничиваются ими. Эти нуклеотидные основания могут быть модифицированы или полностью заменены, для получения модифицированных нуклеозидов и модифицированных нуклеотидов, которые могут быть включены в модифицированные нуклеиновые кислоты. Нуклеотидное основание нуклеотида может быть независимо выбрано из пурина, пиримидина, пуринового или пиримидинового аналога. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидная основа может включать, например, природные или синтетические производные основания.
Урацил
В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный урацил. Иллюстративные нуклеотиды и нуклеозиды, имеющие модифицированный урацил, включают без ограничения псевдоуридин (ψ), пиридин-4-он-рибонуклеозид, 5-аза-уридин, 6-аза-уридин, 2-тио-5-аза-уридин, 2-тиоуридин ((s2U), 4-тио-уридин (s4U), 4-тио-псевдоуридин, 2-тио-псевдоуридин, 5-гидрокси-уредин (ho5U), 5-аминоаллил-уридин, 5-галогенуридин (например, 5-йод-уридин или 5-бром-уридин), 3-метил-уридин (m3U), 5-метокси-уридин (mo5U), уридин-5-оксиуксусная кислота (cmo5U), метиловый эфир уридина 5- оксиуксусной кислоты (mcmo5U), 5-карбоксиметил-уридин (cmsU ), 1-карбоксиметил-псевдоуридин, 5-карбоксигидроксиметил-уридин (chm5U), метиловый эфир 5-карбоксигидроксиметил-уридина (mchm5U), 5-метоксикарбонилметил-уридин (mcm5U), 5- метоксикарбонилметил-2-тио-уридин (mcm5s2U) 5-аминометил-2-тиоуридин (nm5s2U), 5-метиламинометил-уридин (mnm5U), 5-метиламинометил-2-тио-уридин (mnm5s2U), 5-метиламинометил-2-селеноуридин (mnm5se2U), 5-карбамоилметил-уридин (ncm5U), 5-карбоксиметиламинометил-уридин (cmnm5U), 5-карбоксиметиламинометил-2-тио-уридин (cmnm \s2U), 5-пропинил-уридин, 1-пропинил-псевдуридин, 5-тауринометил-уридин (xcm5U), 1-тауринометил-псевдоуридин, 5-тауринометил-2-тио-уридин (Trn5s2U), 1-тауринометил-4-тио-псевдоуридин, 5-метил-уридин (Trn5s2U, то есть нуклеотидное основание дезокситимин), 1-метил-псевдоуридин (ιτι'ψ). 5-метил-2-тиоуридин (m5s2U), 1-метил-4-тио-псевдоуридин (m's\|/), 4-тио-1-метил-псевдоуридин, 3-метил-псевдоуридин (m'V), 2-тио-1-метил-псевдоуридин, 1-метил-1-деаза-псевдоуридин, 2-тио-1-метил-1-деаза-псевдоуридин, дигидроуридин (D), дигидропсевдоуридин, 5,6-дигидроуридин, 5-метилдигидроуридин (m5D), 2-тиодигидроуридин, 2-тиодигидропсевдоуридин, 2-метоксиуридин, 2-метокси-4-тиоуридин, 4-метокси-псевдоуридин, 4-метокси-2-тио-псевдоуридин, N-метил-псевдоуридин, 3-(3-амино-3-карбоксипропил)уридин (acp3U), 1-метил-3-(3-амино-3-карбоксипропиловый псевдоуридин 5-(изопентениламинометил)уридин (inm5U), 5- (изопентениламинометил)) - 2-тио-уридин ((inm5s2U), а-тиоуридин, 2'-0-метил-уридина (Urn), 5,2'-0-диметил-уридин (m5Um), 2'-0-метил-псевдоуридин (ψπι), 2-тио-2'-0-метил-уридин (s2Um), 5-метоксикарбонилметил-2'-O-метил-уридин (mcm 5Um), 5-карбамоилметил-2'- 0-метил-уридина (ncm 5Um), 5-карбоксиметиламинометил-2'-0-метил-уридин (cmnm 5Um), 3,2'-0-диметил-уридин (m3Um), 5- (изопентениламинометил)-2'-0-метил-уридин (inm 5Um), 1-тио-уридин, дезокситимидин, 2'-F-ара-уридин, 2'-F-уридин, 2'-OH-ара-уридин, 5-(2-карбометоксивинил)уридин, 5-[3-(1E-пропениламино) уридин, пиразоло[3,4-d] пиримидины, ксантин и гипоксантин.
Цитозин
В некоторых вариантах осуществления модифицированная нуклеотидная основа представляет собой модифицированный цитозин. Примеры нуклеотидов и нуклеозидов, имеющих модифицированный цитозин, включают 5-азацитидин, 6-аза-цитидин, псевдоизоцитидин, 3-метилцитидин (m3C), N4-ацетил-цитидин (действие), 5- формилцитидин (f5C), N4-метилцитидин (m4C), 5-метилцитидин (m5C), 5-галогенцитидин (например, 5-йод-цитидин), 5-гидроксиметилцитидин (hm5C), 1-метил-псевдоизоцитидин, пирролоцитидин, пирролопсевдоизоцитидин, 2-тиоцитидин (s2C), 2-тио-5-метилцитидин, 4-тиопсевдоизоцитидин, 4-тио-1-метил-псевдоизоцитидин, 4-тио-1-метил-1-деаза-псевдоцитидин, 1-метил-1-деаза-псевдоизоцитидин, зебуларин, 5-аза-зебуларин, 5-метилзебуларин, 5-аза-2-тио-зебуларин, 2-тио-зебуларин, 2-метокси-цитидин, 2-метокси-5-метилцитидин, 4-метокси-псевдоизоцитидин, 4-метокси-1-метил-псевдоизоцитидин, лизидин (k2C), а-тиоцитидин, 2'-0-метилцитидин (Cm), 5,2'-O-диметилцитидин (m5Cm), N4-ацетил-2'-0-метилцитидин (ac4Cm), N4,2'-0-диметилцитидин (m4Cm), 5 -формил-2'-О-метилцитидин (f 5Cm), N4, N4,2'-0-триметилцитидин (m42Cm), 1-тиоцитидин, 2'-F-арацитидин, 2'-F-цитидин и 2'-OH-ара-цитидин, но не ограничиваются ими.
Аденин
В некоторых вариантах осуществления модифицированная нуклеотидная основа представляет собой модифицированный аденин. Иллюстративные нуклеотидные основания и нуклеозиды, имеющие модифицированный аденин, включают 2-аминопурин, 2,6-диаминопурин, 2-амино-6-гало-пурин (например, 2-амино-6-хлорпурин), 6-галоген-пурин (например, 6-хлор-пурин), 2-амино-6-метил-пурин, 8-азидоаденозин, 7-деаза-аденин, 7-деаза-8-аза-аденин, 7-деаза-2-амино-пурин, 7-деаза-8-аза-2-аминопурин, 7-дезаза-2,6-диаминопурин, 7-деаза-8-аза-2,6-диаминопурин, 1-метиладенозин (m'A), 2-метил-аденин (m A), N6-метиладенозин (m6A), 2-метилтио-N6-метиладенозин (ms2i6A), N6-изопентенил-аденозин (i6A), 2-метилтио-N6-изопентенил -аденозин (ms2i6A), N6- (цис-гидроксиизопентенил)аденозин (io6A), 2-метилтио-N6- (цис-гидроксиизопентенил)аденозин (ms2io6A), N6-глицинилкарбамоил-аденозин (g6A), N6-треонилкарбамоил-аденозин (t6A), N6-метил-N6-треонилкарбамоил-аденозин (m6t6A), 2-метилтио-N6-треонилкарбамоил-аденозин (ms2g6A), N6, N6-диметиладенозин (m62A), N6-гидроксинорвалилкарбамоиладенозин (hn6A), 2-метил тио-N6-гидроксинорвалилкарбамоиладенозин (ms2hn6A), N6-ацетиладенозин (ac6A), 7-метил-аденин, 2-метилтиоаденин, 2-метоксиаденин, a-тиоаденозин, 2'-0-метиладенозин (Am), N6,2'-0-диметиладенозин (m5Am), N6-метил-2'-дезоксиаденозин, N6, N6,2'-0-триметиладенозин (m62Am), 1,2'-O-диметиладенозин (m' Am), 2'-0-рибозиладенозин (фосфат) ((Ar(p)), 2-амино-N6-метилпурин, 1-тиоаденозин, 8-азидоаденозин, 2'-F-ара-аденозин, 2'-F-аденозин, 2'-OH-ара-аденозин и N6-(19-аминопентаоксанадецил)-аденозин, но не ограничиваются ими.
Гуанин
В некоторых вариантах осуществления модифицированная нуклеотидная основа представляет собой модифицированный гуанин. Типичные нуклеотиды и нуклеозиды, имеющие модифицированный гуанин, включают инозин (I), 1-метил-инозин (m 'l), виозин (imG), метилвиозин (mimG), 4-диметил-виозин ((imG- 14), изовиозин (imG2), вибутозин (yW), пероксивибутозин (o2yW), гидроксивибутозин (OHyW), недостаточно модифицированный гидроксивибутозин (OHyW*), 7-деаза-гуанозин, куозин(Q), эпоксикуозин (oQ), галактозил-куозин (galQ), маннозил-куозин (manQ), 7-циано-7-деаза-гуанозин (preQ0), 7-аминометил-7-деаза-гуанозин (preQi), археозин (G+), 7-деаза-8-аза-гуанозин, 6-тиогуанозин, 6-тио-7-дезаза-гуанозин, 6-тио-7-деаза-8-аза-гуанозин, 7-метилгуанозин (m7G), 6-тио-7-метилгуанозин, 7-метил-инозин, 6-метокси-гуанозин, 1-метил-гуанозин (m'G), N2-метилгуанозин (m2G), N2,N2-диметилгуанозин (m2 2G), N2,7-диметилгуанозин (m2,7G), N2,N2,7-диметилгуанозин (m2,2,7G), 8-оксогуанозин, 7-метил-8-оксогуанозин, 1-тиогуанозин, N2-метил-6-тиогуазин, N2,N2-диметил-6-тио-гуанозин, а-тиогуанозин, 2'-0-метилгуанозин (Gm), N2-метил-2'-0-метилгуанозин (m¾m), N2,N2-диметил-2'-O-метил-гуанозин (m22Gm), 1-метил-2'-0-метилгуанозин (m'Gm), N2,7-диметил-2'-O-метилгуанозин (m2,7Gm), 2'-0-метил-инозин (Im), 1,2'-O-диметил-инозин (m'lm), 06-фенил-2'-дезоксиинозин, 2'-0-рибозилгуанозин (фосфат) (Gr(p)), 1 -тиогуанозин, 06-метил] гуанозин, 06-метил-2'-дезоксигуанозин, 2'-F-арагуанозин и 2'-F-гуанозин, но не ограничиваются ими.
Модифицированные gРНК
В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеиновые кислоты могут представлять собой модифицированные gРНК. В некоторых вариантах осуществления gРНК могут быть модифицированы на 3'-конце. В этом варианте осуществления gРНК могут быть модифицированы по 3'-концевой U-рибозе. Например, две концевые гидроксильные группы U-рибозы могут быть окислены до альдегидных групп и сопутствующего открытия рибозного кольца с получением модифицированного нуклеозида, где U может быть немодифицированным или модифицированным уридином.
В другом варианте осуществления 3'-концевой U может быть модифицирован 2'3'-циклическим фосфатом, где U может быть немодифицированным или модифицированным уридином. В некоторых вариантах осуществления молекулы gРНК могут содержать 3'-нуклеотиды, стабилизированные против деградации, то есть, например, содержать один или нескольких модифицированных нуклеотидов, описанных здесь. В этом варианте осуществления, например, уридины могут быть заменены модифицированными уридинами, например 5-(2-амино) пропил-уридином и 5-бром-уридином, или любым из модифицированных уридинов, описанных здесь; аденозины и гуанозины могут быть заменены модифицированными аденозинами и гуанозинами, например, с модификациями в 8-положении, например 8-бромгуанозином, или любыми из модифицированных аденозинов или гуанозинов, описанных здесь. В некоторых вариантах осуществления деаза-нуклеотиды, например, 7-деаза-аденозин, могут быть включены в gРНК. В некоторых вариантах осуществления O-и N-алкилированные нуклеотиды, например N6-метиладенозин, могут быть включены в gРНК. В некоторых вариантах осуществления могут быть включены рибонуклеотиды с модифицированным сахаром, например, в котором 2'-OH-группа замещена группой, выбранной из списка: H, -OR, -R (где R может быть, например, метилом, алкилом, циклоалкилом, арилом, аралкилом, гетероарилом или сахаром), галоген, -SH, -SR (где R может быть, например, алкилом, циклоалкилом, арилом, аралкилом, гетероарилом или сахаром), амино (где амино может быть, например, NH2, алкиламино, диалкиламино, гетероциклил, ариламино, диариламино, гетероариламино, дигетероариламино или аминокислота); или циано (-CN). В некоторых вариантах осуществления фосфатный остов может быть модифицирован, как описано здесь, например, фосфоротиоатной группой. В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды в выступающей части gРНК могут независимо друг от друга быть модифицированными или немодифицированными, включая модифицикации по 2'-сахару, такие как 2-F 2'-0-метил, тимидин (T), 2'-O-метоксиэтил-5-метилуридин (Teo), 2'-O-метоксиэтиладенозин (Aeo), 2'-O-метоксиэтил-5-метилцитидин (m5Ceo) и любые их комбинации, но не ограничиваясь ими.
В одном варианте осуществления один или несколько или все нуклеотиды в одноцепочечном выступе молекулы РНК, например молекулы gРНК, являются дезоксинуклеотидами.
Фармацевтические композиции
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут содержать описанную здесь молекулу gРНК, например, множество молекул рРНК, как описано здесь, или клетку (например, популяцию клеток, например, популяцию гемопоэтических стволовых клеток, например CD34+ клеток), содержащие одну или более клеток, модифицированных одной или несколькими молекулами gРНК, описанными здесь, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически или физиологически приемлемыми носителями, разбавителями или эксципиентами. Такие композиции могут содержать буферы, такие как нейтральный забуференный физиологический раствор, фосфатный забуференный физиологический раствор и тому подобное; углеводы, такие как глюкоза, манноза, сахароза или декстраны, маннит; белки; полипептиды или аминокислоты, такие как глицин; антиоксиданты; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА или глутатион; адъюванты (например, гидроксид алюминия); и консерванты. Композиции по настоящему изобретению в одном аспекте составлены для внутривенного введения.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить способом, соответствующим заболеванию, подлежащему лечению (или предотвращению). Количество и частота введения будут определяться такими факторами, как состояние пациента, тип и тяжесть заболевания пациента, хотя соответствующие дозы могут быть определены клиническими испытаниями.
В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция по существу не содержит примесей, например,, нет регистрируемых уровней примеси, например, выбранной из группы, состоящей из эндотоксина, микоплазмы, мышиных антител, объединенной человеческой сыворотки, альбумина бычьей сыворотки, бычьей сыворотки, компонентов среды для культивирования клеток, нежелательных компонентов системы CRISPR, бактерий и грибков. В одном варианте осуществления бактерия принадлежит по меньшей мере, к одному виду, выбранному из группы, состоящей из Alcaligenes faecalis, Candida albicans, Escherichia coli, Haemophilus influenza, Neisseria meningitides, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumonia, и Streptococcus pyogenes группы A.
Введение надлежащих композиций может быть выполнено любым удобным способом, в том числе путем аэрозольной ингаляции, инъекции, приема внутрь, трансфузии, имплантации или трансплантации. Композиции, описанные здесь, могут вводиться пациенту с помощью трансартериального, подкожного, внутрикожного, внутриматочного, интранодального, внутримедулярного, внутримышечного введения, внутривенной (i.v.) инъекцией или внутрибрюшинно. В одном аспекте композиции по настоящему изобретению вводят пациенту путем внутрикожной или подкожной инъекции. В одном аспекте клеточные композиции по настоящему изобретению вводят с помощью внутривенной инъекции.
Дозировка для вышеуказанных составов, подлежащих введению пациенту, варьируется в зависимости от деталей конкретного состояния, подлежащего лечению и субъекта лечения. Подбор дозировки для введения человеку может осуществляться в соответствии с практикой, принятой в данной области техники.
Клетки.
Изобретение также относится к клеткам, содержащим молекулу gРНК по изобретению, или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанные молекулы gРНК.
В одном аспекте клетки представляют собой клетки, полученные способом, описанным здесь.
В вариантах осуществления клетки представляют собой гематопоэтические стволовые клетки (например, гемопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники (прогениторные) HSPC), например, стволовые клетки CD34+. В вариантах осуществления клетки представляют собой стволовые клетки CD34+/CD90+. В вариантах осуществления клетки представляют собой CD34+/CD90-стволовые клетки. В вариантах осуществления клетки представляют собой гемопоэтические стволовые клетки человека. В вариантах осуществления клетки являются аутологичными. В вариантах осуществления клетки являются аллогенными.
В вариантах осуществления клетки получены из костного мозга, например, аутологичного костного мозга. В вариантах осуществления клетки получают из периферической крови, например, мобилизованной периферической крови, например аутологичной мобилизованной периферической крови. В вариантах осуществления, использующих мобилизованную периферическую кровь, клетки выделяют от пациентов, которым вводили мобилизирующий агент. В вариантах осуществления мобилизирующим агентом является G-CSF. В вариантах осуществления мобилизирующим агентом является Plerixafor® (AMD3100). В вариантах осуществления клетки получают из пуповинной крови, например, аллогенной пуповинной крови.
В вариантах осуществления клетки являются клетками млекопитающего. В вариантах осуществления клетки являются клетками человека.
В одном аспекте изобретение предоставляет клетку, содержащую модификацию или изменение, например, индел, внутри или вблизи (например, в пределах 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотида(ов)) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной молекуле gРНК или молекулам gРНК, например, как описано здесь, например, как часть системы CRISPR, как описано здесь. В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку CD34+. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, сохраняет способность дифференцироваться в клетки нескольких линий, например, сохраняет способность дифференцироваться в клетки эритроидной линии. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, прошла или может пройти по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9 или, по меньшей мере, 10 или более раундов удвоений в культуре, например, в культуре, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например, Соединение 4. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, прошла или может пройти по меньшей мере 5, например, примерно 5, раундов удвоения в культуре, например, в культуре, содержащей молекулы соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, например, как описано здесь, например, Соединения 4. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, проявляет и/или может дифференцироваться в клетку, например, в клетку эритроидной линии, например, в эритроцит, которая проявляет повышенный уровень фетального гемоглобина плода (например, на уровне экспрессии и/или уровне белка), например, по меньшей мере, на 20% увеличение уровня белка гемоглобина плода по сравнению с аналогичной немодифицированной или неизменённой клеткой. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, проявляет и/или может дифференцироваться в клетку, например, в клетку эритроидной линии, например, в эритроцит, который проявляет повышенный уровень гемоглобина плода ( например, на уровне экспрессии и/или уровне белка) по сравнению с аналогичной немодифицированной или неизменённой клеткой, например, производит не менее 6 пикограмм, например, по меньшей мере 7 пикограмм, по меньшей мере 8 пикограмм, по меньшей мере 9 пикограмм или по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, проявляет и/или может дифференцироваться в клетку, например, в клетку эритроидной линии, например, в эритроцит, которая проявляет повышенный уровень фетального гемоглобина (например, на уровне экспрессии и/или уровне белка) по сравнению с аналогичной немодифицированной или неизменённой клеткой, и, например, составляет от примерно 6 до примерно 12, от примерно 6 до примерно 7, от примерно 7 до примерно 8, от примерно 8 до примерно 9, от примерно 9 до примерно 10, от примерно 10 до примерно 11 или от примерно 11 до примерно 12 пикограмм фетального гемоглобина.
В одном аспекте изобретение предоставляет популяцию клеток, содержащих клетки, имеющие модификацию или изменение, например, индел, внутри или вблизи (например, в пределах 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидов) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной молекуле gРНК или молекулам gРНК, например, как описано здесь, введенным в указанные клетки, например, как часть системы CRISPR, как описано здесь. В вариантах осуществления по меньшей мере 50%, например, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или по меньшей мере 90% клеток популяции имеют модификацию или изменение (например, имеют по меньшей мере одну модификацию или изменение), например, как определено NGS, например, как описано здесь, например, на второй день после введения системы gРНК и/или CRISPR по изобретению. В вариантах осуществления по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере, 99% клеток популяции имеют модификацию или изменение (например, имеют по меньшей мере одну модификацию или изменение), например, как определено NGS, например, как описано здесь, например, на второй день после введения gРНК и/или системы CRISPR по изобретению. В вариантах осуществления популяция клеток включает клетки CD34+, например, включает по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 98% CD34+ клеток. В вариантах воплощения популяция клеток, включающих измененные или модифицированные клетки, например CD34+ клетки, сохраняет способность развиваться в, например, дифференцироваться в клетки множественных линий, например, сохраняет способность развиваться в, например, дифференцироваться в клетки эритроидной линии. В вариантах осуществления популяция клеток, например, популяция CD34+ клеток, прошла или может пройти по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9 или, по меньшей мере, 10 или более раундов удвоения популяции в культуре, например, в культуре, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например Соединение 4. В вариантах осуществления популяция измененных или модифицированных клеток, например, популяция CD34+ клеток, прошла или способна пройти, по меньшей мере, 5, например, примерно 5, раундов удвоения популяции в культуре, например, в культуре, содержащей молекулы соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, например, как описано здесь, например, Соединение 4. В вариантах осуществления количество клеток, содержащих измененные или модифицированные клетки, например, клетки CD34+, демонстрируют и/или могут дифференцироваться в популяцию клеток, например, в популяцию клеток эритроидной линии, например, в популяцию эритроцитов, которая демонстрирует повышенный уровень фетального гемоглобина плода (например, уровень экспрессии и/или уровень белка), например, по меньшей мере на 20% повышение уровня белка фетального гемоглобина плода по сравнению с аналогичными немодифицированными или неизменёнными клетками. В вариантах осуществления количество клеток, содержащих изменённые или модифицированные клетки, например, клетки CD34+, демонстрируют и/или могут дифференцироваться в популяцию клеток, например, в популяцию клеток эритроидной линии, например, в популяцию эритроцитов, которая демонстрирует повышенный уровень фетального гемоглобина плода (например, уровень экспрессии и/или уровень белка) по сравнению с аналогичными немодифицированными или неизменёнными клетками, например, содержат клетки, которые производят по меньшей мере 6 пикограмм, например, по меньшей мере 7 пикограмм, по меньшей мере 8 пикограмм, не менее 9 пикограмм или по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления количество клеток, содержащих измененные или модифицированные клетки, например, клетки CD34+, демонстрируют и/или могут дифференцироваться в популяцию клеток, например, в популяцию клеток эритроидной линии, например, в популяцию эритроцитов, которая демонстрирует повышенный уровень фетального гемоглобина плода (например, уровень экспрессии и/или уровень белка) по сравнению с аналогичными немодифицированными или неизменёнными клетками, например, содержит клетки, которые производят от примерно 6 до примерно 12, от примерно 6 до примерно 7, от примерно 7 до примерно 8, от примерно 8 до примерно 9, примерно 9 до примерно 10, от примерно 10 до примерно 11 или от примерно 11 до примерно 12 пикограмм фетального гемоглобина на клетку.
В вариантах воплощения популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e3 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e4 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e5 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1е6 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e7 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e8 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1е9 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e10 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e11 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e12 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1е13 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 6е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 7е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 8е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 9е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 6е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 7е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 8е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 9е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1е8 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществлений совокупность клеток может содержать по меньшей мере примерно 50% (например, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или, по меньшей мере, примерно 99%) HSPC, например, CD34+ клеток. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления популяция клеток может содержать примерно 60% HSPC, например, CD34+ клеток. В одном варианте осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 3e7 клеток и содержит примерно 2e7 HSPC, например, CD34+ клеток.
В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1e6 HSPC, например, CD34+ клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1,5e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 6e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 7e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 8e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 9e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, приблизительно 1e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 6e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 7e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 8e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 9e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2е8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4e8 HSPC, например, CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5e8 HSPC, например, CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены.
В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 1e6 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 1,5e6 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 2e6 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 3e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 4e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 5e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 6e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 7e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 8e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 9e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 1e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 2e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 3e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 4e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 5e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 6e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 7e7 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 8e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 9e7 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 1е8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 2е8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 3e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 4e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 5e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены.
В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описанный здесь, включает от примерно 2e6 до примерно 10e6 HSPC, например, CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит от 2e6 до 10e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены.
Клетки по изобретению могут содержать gРНК молекулу по настоящему изобретению или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанную молекулу gРНК, и молекулу Cas9 по настоящему изобретению или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанную молекулу Cas9. В одном варианте осуществления клетки по настоящему изобретению могут содержать комплекс рибонуклеопротеина (RNP), содержащего молекулу gРНК по изобретению и молекулу Cas9 по изобретению. Клетки по изобретению предпочтительно модифицируются с целью включения молекулы gРНК по изобретению ex vivo, например, способом, описанным здесь, например, путем электропорации.
Клетки по изобретению включают клетки, в которых экспрессия одного или нескольких генов была изменена, например, снижена или ингибирована путем введения системы CRISPR, содержащей gРНК по изобретению. Например, клетки по настоящему изобретению могут иметь пониженный уровень экспрессии BCL11a по сравнению с немодифицированными клетками. В качестве другого примера клетки по настоящему изобретению могут иметь повышенный уровень экспрессии фетального гемоглобина по сравнению с немодифицированными клетками. В качестве другого примера, клетки по настоящему изобретению могут иметь пониженный уровень экспрессии бета-глобина по сравнению с немодифицированными клетками. Альтернативно, или, кроме того, клетки по изобретению может вызвать, например, дифференцировку в другой тип клетки, например эритроцит, который имеет пониженный уровень экспрессии BCL11a по сравнению с клетками, дифференцированными от немодифицированных клеток. Альтернативно, или, кроме того, клетка по изобретению может создавать, например, дифференцироваться в другой тип клетки, например эритроцит, который имеет повышенный уровень экспрессии гемоглобина плода по сравнению с клетками, дифференцированными от немодифицированных клеток. Альтернативно, или, кроме того, клетки по изобретению может создавать, например, дифференцироваться в другой тип клеток, например эритроциты, который имеет сниженный уровень экспрессии бета-глобина по сравнению с дифференцированными клетками, происходящими от немодифицированных клеток.
Клетки по изобретению включает клетки, в которых экспрессия одного или нескольких генов была изменена, например, снижена или ингибирована путем введения системы CRISPR, содержащей gРНК по изобретению. Например, клетки по настоящему изобретению могут иметь пониженный уровень бета-гемоглобина, например, мутантного или бета-гемоглобина дикого типа, по отношению к экспрессии гена в немодифицированных клетках. В другом аспекте изобретение относится к клеткам, полученных, например, от клеток, в которые вводилась система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению. В таких аспектах клетки, в которые была введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению, могут не проявлять пониженный уровень бета-гемоглобина, например мутантного или бета-гемоглобина дикого типа, но клетки, происходящие, например, дифференцированные от указанных клеток проявляют сниженный уровень бета-гемоглобина, например мутантного или бета-гемоглобина дикого типа. В вариантах осуществления формирование клеток, т.е. дифференцировка, выполняется in vivo (например, у пациента). В вариантах осуществления клетки, в которые была введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению, представляют собой клетки CD34+, а клетки, полученные, например, дифференцированные из них, принадлежат к эритроидной линии, например эритроциты (красные кровяные клетки).
Клетки по изобретению включают клетки, в которых экспрессия одного или нескольких генов была изменена, например, увеличена или улучшена путем введения системы CRISPR, содержащей gРНК по изобретению. Например, клетки по настоящему изобретению могут иметь повышенный уровень экспрессии фетального гемоглобина по сравнению с немодифицированными клетками. В другом аспекте изобретение относится к клеткам, которые получены, например, из клеток, в которых введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению. В таких аспектах клетки, в которые была введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению, не могут проявлять повышенный уровень фетального гемоглобина, но клетки, происходящие от них, например, дифференцированные от указанных клеток, проявляют повышенный уровень фетального гемоглобина. В вариантах осуществления деривация, например, дифференцировка, выполняется in vivo (например, у пациента). В вариантах осуществления клетки, в которые была введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению, представляют собой клетки CD34+, а клетки, полученные, например, дифференцированные из них, принадлежат к эритроидной линии, например красные кровяные клетки.
В другом аспекте изобретение относится к клеткам, которые включают индел (например, внутри) или вблизи (например, в пределах 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотида(ов)) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной молекуле gРНК или молекулам gРНК, введенным в указанную клетку. В вариантах осуществления индел представляет собой индел сдвига рамки считывания. В вариантах осуществления индел представляет собой индел, указанный в Таблице 15. В вариантах осуществления индел представляет собой индел, указанный в Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37. В вариантах осуществления изобретение относится к популяции клеток, например, как описано здесь, при этом совокупность клеток содержит клетки, имеющие индел, представленный в Таблице 15. В вариантах осуществления изобретение относится к популяции клеток, например, как описано здесь, при этом популяция клеток включает клетки, имеющие инделы, перечисленные в Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37.
В одном аспекте изобретение относится к популяции клеток, например, к популяции HSPC, которая содержит клетки, которые включают в себя индел, например, как описано здесь, например, индел или профиль инделов, описанных на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, внутри или вблизи (например, в пределах 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидов) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной молекуле gРНК или молекулам gРНК, например, как описано здесь, вводимой в указанные клетки, например, как описано здесь. В вариантах осуществления индел представляет собой индел сдвига рамки считывания. В вариантах осуществления 20%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 30%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 40%-100% клеток указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 50-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 60%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 70%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 80%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 90%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления популяция клеток сохраняет способность дифференцироваться в несколько типов клеток, например, сохраняет способность дифференцироваться в клетки эритроидной линии, например в эритроциты. В вариантах осуществления отредактированные и дифференцированные клетки (например, красные кровяные клетки) сохраняют способность к воспроизводству, например, к увеличению численности по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 15 раз, по меньшей мере в 20 раз, по меньшей мере В 25 раз, по меньшей мере в 30 раз, по меньшей мере в 35 раз, по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 45 раз, по меньшей мере в 50 раз или более через 7 дней в среде, способствующей дифференцировке эритроидов (EDM), например, как описано в Примерах и/или увеличивать численность по меньшей мере в 30 раз, по меньшей мере в 35 раз, по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 45 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 55 раз, по меньшей мере в 60 раз, по меньшей мере в 65 раз, по меньшей мере в 70 раз, по меньшей мере в 75 раз, по меньшей мере в 80 раз, по меньшей мере в 85 раз, по меньшей мере в 90 раз, по меньшей мере в 95 раз, по меньшей мере в 100 раз, при по меньшей мере в 110 раз, по меньшей мере в 120 раз, по меньшей мере в 130 раз, по меньшей мере в 140 раз, по меньшей мере в 150 раз, по меньшей мере в 200 раз, по меньшей мере в 300 раз, по меньшей мере в 400 раз, по меньшей мере 500 по меньшей мере в 600 раз, по меньшей мере в 700 раз, по меньшей мере в 800 раз, по меньшей мере в 900 раз, по меньшей мере в 1000 раз, по меньшей мере в 1100 раз, по меньшей мере 1200 по меньшей мере в 1300 раз, по меньшей мере в 1400 раз, по меньшей мере в 1500 раз или более после 21 дня в среде, способствующей дифференцировке эритроидов (EDM), например, как описано в Примерах.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет популяцию клеток, например, CD34+ клеток, из которых по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 98%, клеток популяции содержат индел, например, как описано здесь (не ограничиваясь теорией, считается, что введение молекулы gРНК или системы CRISPR, как описано здесь, в популяцию клеток, создает профиль инделов в указанной популяции, и, таким образом, каждая клетка популяции содержит индел, хотя и не тот же самый индел), внутри или вблизи участка, комплементарного целевому домену молекулы gРНК, описанной здесь; в то время как указанные клетки поддерживают способность дифференцироваться в клетки эритроидной линии, например в эритроциты; и/или где указанные клетки, дифференцированные из популяции клеток, имеют повышенный уровень фетального гемоглобина (например, популяция имеет более высокий % F-клеток) по сравнению с клетками, дифференцированными от аналогичной популяции немодифицированных клеток. В вариантах осуществления популяция клеток претерпела по меньшей мере 5-кратное увеличение экспансии ex vivo, например, в среде, содержащей Соединение 4.
В вариантах осуществления индел составляет менее примерно примерно 50 нуклеотидов, например, менее примерно 45, менее примерно 40, менее примерно 35, менее примерно 30 или менее примерно 25 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно примерно 25 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно примерно 20 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно примерно 15 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 10 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 9 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 9 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 7 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 6 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 5 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 4 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 3 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 2 нуклеотидов. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления индел представляет собой по меньшей мере 1 нуклеотид. В вариантах осуществления изобретения индел представляет собой 1 нуклеотид.
В одном аспекте изобретение предоставляет популяцию модифицированных HSPC или эритроидных клеток, дифференцированных от указанных HSPC (например, дифференцированных ex vivo или у пациента), например, как описано здесь, где по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65 %, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% клеток представлено F-клетками. В вариантах осуществления популяция клеток содержит (или способна дифференцироваться, например, in vivo, в популяцию эритроцитов, которая содержит) более высокий процент F-клеток, чем в аналогичной популяции клеток, в которую не вводилось молекулы gРНК или молекул gРНК, например, как описано здесь, как вводились в указанные клетки. В вариантах осуществления популяция клеток имеет (или способна дифференцироваться, например, in vivo, в популяцию эритроцитов, которая имеет), по меньшей мере, на 20% больше, например, по меньшей мере на 21% больше, по меньшей мере на 22% больше по меньшей мере на 24% больше, по крайней мере на 24 больше %, по крайней мере на 25%, по крайней мере на 26%, по крайней мере на 27%, по крайней мере на 28% больше или по меньшей мере на 29% больше F клеток, чем в аналогичной популяции клеток, в которую не вводилось молекулы gРНК или молекул gРНК, например, как описано здесь, как вводились в указанные клетки. В вариантах осуществления популяция клеток имеет (или способна дифференцироваться, например, in vivo, в популяцию эритроцитов, которая имеет), по меньшей мере, на 30% больше, например, по меньшей мере на 35% больше, по меньшей мере на 40% больше, по меньшей мере на 45% больше, по меньшей мере на 50% больше, по меньшей мере на 55% больше, по меньшей мере на 60% больше, по меньшей мере на 65% больше, по меньшей мере на 70% больше, по меньшей мере на 75% больше, по меньшей мере, на 80% больше, по меньшей мере на 85% больше, по меньшей мере на 90% больше или, по меньшей мере, на 95% больше F клеток, чем в аналогичной популяции клеток, в которую не вводилось молекулы gРНК или молекул gРНК, например, как описано здесь, как вводились в указанные клетки. В вариантах осуществления популяция клеток имеет (или способна дифференцироваться, например, in vivo, в популяцию эритроцитов, которая имеет), на 10-90%, 20%-80%, 20%-70%, 20%-60%, 20%-50%, 20%-40%, 20%-30%, 25%-80%, 25%-70%, 25%-60%, 25%-50%, 25%-40%, 25%-35%, 25%-30%, 30%-80%, 30%-70%, 30%-60%, 30%-50%, 30%-40% или 30%-35% больше F клеток, чем аналогичная популяция клеток, в которую не вводилось молекулы gРНК или молекул gРНК, например, как описано здесь, как вводились в указанные клетки. В вариантах осуществления популяция клеток, например, полученная описанным здесь способом, содержит достаточное количество клеток и/или достаточный % увеличения численности F клеток для лечения гемоглобинопатии, например, как описано здесь, например, серповидно-клеточной болезни и/или бета-талассемии у пациента, нуждающегося в этом, при введении их в указанного пациента, например, в терапевтически эффективном количестве. В вариантах осуществления увеличение F клеток измеряется методом анализа дифференцировки эритроидов, например, как описано здесь.
В вариантах осуществления, включая любой из вариантов осуществления и аспектов, описанных здесь, изобретение относится к клетке, например, к популяции клеток, например, модифицированный любой из gРНК, способом и/или системой CRISPR, описанных здесь, и содержащий F клетки, которые продуцируют по меньшей мере 6 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют по меньшей мере 7 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют по меньшей мере 8 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют по меньшей мере 9 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют в среднем от 6,0 до 7,0 пикограмм от 7,0 до 8,0, от 8,0 до 9,0, от 9,0 до 10,0, от 10,0 до 11,0 или от 11,0 до 12,0 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых вариантов осуществления, клетка и/или популяция клеток по изобретению включает, например, состоит из клеток, которые не содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9.
Способы лечения
Сроки введения
В одном варианте осуществления доставляется одна или несколько молекул нуклеиновой кислоты (например, молекул ДНК), отличных от компонентов системы Cas, например, компонента молекулы Cas9 и/или компонента молекулы gРНК, описанного здесь. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты доставляется одновременно с доставкой одного или нескольких компонентов системы Cas. В одном варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты доставляют до или после (например, менее примерно 30 минут, 1 часа, 2 часов, 3 часов 6 часов, 9 часов, 12 часов, 1 дня, 2 дней, 3 дней, 1 недели, 2 недель или 4 недель) введения одного или нескольких компонентов системы Cas. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты доставляется другим способом, чем один или несколько компонентов системы Cas, например, молекула Cas9 компонент и/или молекула gРНК компонент. Молекула нуклеиновой кислоты может быть доставлена любым из способов доставки, описанных здесь. Например, молекула нуклеиновой кислоты может быть доставлена вирусным вектором, например, лентивирусом с дефектом интеграции, или компоненты такие как молекула Cas9 и/или молекула gРНК могут быть доставлены электропорацией, например так, чтобы токсичность, вызываемая нуклеиновой кислотой (например, ДНК) была уменьшена. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует терапевтический белок, например, описанный здесь белок. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует молекулу РНК, например молекулу РНК, описанную здесь.
Бимодальная или дифференциальная доставка компонентов
Доставка компонентов системы Cas по-отдельности, например компонента молекулы Cas9 и компонента молекулы gРНК, и, более конкретно, доставка компонентов различными способами может повысить эффективность, например, путем улучшения тканевой специфичности и надёжности. В одном варианте осуществления молекула Cas9 и молекула gРНК доставляются различными, или разнородными способами. Различными, или разнородные способы, используемые здесь, относятся к способам доставки, которые придают различные фармакодинамические или фармакокинетические свойства молекуле данного компонента, например молекуле Cas9, молекуле gРНК, матричной нуклеиновой кислоте или доставляемому полезному грузу. Например, способы доставки могут приводить к различному распределению по тканиям, изменённому периоду полураспада или другому временному распределению, например, в выбранной области, ткани или органе.
Некоторые способы доставки, например, доставка вектором, состоящим из нуклеиновой кислоты, который сохраняется в клетке или в потомстве клетки, например, путем автономной репликации или интеграции в клеточную нуклеиновую кислоту, приводят к более стойкому проявлению и присутствию компонента. Примеры включают доставку вирусными векторами, например, адено-ассоциированным вирусом или лентивирусом.
В качестве примера, компоненты, например молекула Cas9 и молекула gРНК, могут быть доставлены способами, которые различаются времененем полураспада или персистенцией доставляемого компонента тела или в определенной области, ткани или органе. В одном варианте осуществления молекула gРНК может быть доставлена такими способами. Компонент молекулы Cas9 может быть доставлен способом, который приводит к меньшей персистенции или меньшему воздействию на организм или конкретную область, ткань или орган.
В более общем плане в варианте осуществления один способ доставки используется для доставки первого компонента, а второй способ доставки используется для доставки второго компонента. Первый способ доставки придает первое фармакодинамическое или фармакокинетическое свойство. Первым фармакодинамическим свойством может быть, например, распределение, персистенция или воздействие первого компонента или нуклеиновой кислоты, кодирующей компонент, в организме, области, ткани или органе. Второй способ доставки дает второе фармакодинамическое или фармакокинетическое свойство. Вторым фармакодинамическим свойством может быть, например, распределение, персистенция или воздействие второго компонента или нуклеиновой кислоты, которая кодирует компонент, в организме, области, ткани или органе.
В одном варианте осуществления первое фармакодинамическое или фармакокинетическое свойство, например распределение, персистенция или воздействие, является более ограниченным, чем второе фармакодинамическое или фармакокинетическое свойство.
В варианте осуществления первый способ доставки выбирается для оптимизации, например, минимизации, фармакодинамического или фармакокинетического свойства, например распределения, персистенции или времени воздействия.
В варианте осуществления второй способ доставки выбран для оптимизации, например, максимизации, фармакодинамического или фармакокинетического свойства, например распределения, стойкости или времени воздействия.
В одном варианте осуществления первый способ доставки включает использование относительно стойкого элемента, например нуклеиновой кислоты, например плазмиды или вирусного вектора, например AAV или лентивируса. Поскольку такие векторы являются относительно устойчивыми, то продукт их транскрипции будет относительно устойчивым.
В варианте осуществления второй способ доставки содержит относительно короткоживущий элемент, например, РНК или белок.
В одном варианте осуществления первый компонент содержит gРНК, а средство доставки является относительно устойчивым, например, gРНК транскрибируется с плазмиды или вирусного вектора, например AAV или лентивируса. Транскрипция этих генов будет иметь незначительные физиологические последствия, поскольку эти гены не кодируют белковый продукт, а gR As неспособны действовать изолированно. Второй компонент, молекула Cas9, доставляется в скоротечном режиме, например, в виде мРНК или в виде белка, гарантируя, что полный Cas9/gРНК комплекс присутствует только в течение короткого периода времени.
Более того, компоненты могут поставляться в разных молекулярных формах или различными векторами доставки, которые дополняют друг друга для усиления тканеспецифичности и безопасности препарата.
Использование разнородных способов доставки может повысить производительность, безопасность и эффективность. Например, вероятность возможной неспецифической модификации может быть уменьшена. Доставка иммуногенных компонентов, например молекул Cas9, способами, снижающими её персистенцию, может снизить иммуногенность препарата, поскольку пептиды фермента Cas как полученного из бактерий, выставляются поверхности клетки молекулами MHC. Двумодальная система доставки помогает преодолеть эти недостатки.
Разнородные способы доставки могут использоваться для доставки компонентов в разные, но перекрывающиеся целевые области. Формирование активного комплекса минимизируется за пределами перекрывания целевых областей. Таким образом, в одном варианте осуществления первый компонент, например молекула gРНК, доставляется первым способом доставки, который приводит к первому пространственному, например, тканеспецифичному распределению. Второй компонент, например молекула Cas9, доставляется вторым способом доставки, который приводит к (другому) пространственному, например, тканеспецифичному распределению. В одном варианте осуществления первый способ доставки включает один из элементов, выбранный из липосомы, наночастицы, например полимерной наночастицы, и нуклеиновой кислоты, например вирусного вектора. Второй способ содержит другой элемент, выбранный из этой группы. В одном варианте осуществления первый способ доставки содержит первый элемент целевой доставки, например, специфичный для клетки рецептор или антитело, а второй способ доставки не включает этот элемент. В варианте осуществления второй способ доставки содержит другой элемент целевой доставки, например, второй клеточный специфический рецептор или второе антитело.
Если молекула Cas9 доставляется в вирусном векторе доставки, липосоме или полимерной наночастице, то присутствует возможность доставки и наличия терапевтической активности в нескольких тканях, в то время как может быть желательна доставка только в одну ткань. Двухкомпонентная система доставки может повысить тканеспецифичность и разрешить эту проблему. Если молекула gРНК и молекула Cas9 упаковываются в раздельные средства доставки с четким, но перекрывающимся тканевым тропизмом, полностью функциональный комплекс образуется только в ткани, на которую нацелены оба вектора.
Потенциальные молекулы Cas, например молекулы Cas9, потенциальные молекулы gРНК, потенциальные молекулы комплекса Cas9/gРНК и потенциальные системы CRISPR могут быть оценены известными методами или методами, описанными здесь. Например, примеры методов оценки активности эндонуклеазы молекулы Cas9 описаны, например, в Jinek el al., SCIENCE 2012; 337 (6096): 8 16-821.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Выбор нацеливающих (РНК) и дизайн
Предварительный выбор нацеливающих (gРНК) выполнялся in silico с использованием стандартного человеческого генома и определенных пользователем геномных областей, представляющих интерес (например, ген, экзон гена, некодирующий регуляторный участок, и т.д.) для идентификации PAM в интересующих регионах. Для каждого идентифицированного PAM проводился статистический анализ. Далее выбранные молекулы gРНК были и ранжированы в порядке их эффективности и действенности при применении методов анализа, например, как описанно здесь.
В каждом из примеров экспериментов ниже использовались как молекулы sgРНК, так и молекулы dgРНК. Если не указано иначе, в случаях использования молекул dgРНК, gРНК включает следующее
crРНК: [целевой домен]-[SEQ ID NO: 6607]
tracr (trРНК): SEQ ID NO: 6660
Если не указано иначе, в экспериментах с использованием молекулы sgРНК, была использована следующая последовательность:
[целевой домен]-[SEQ ID NO: 6601]-UUUU.
Если не указано иначе, в экспериментах с использованием молекулы sgРНК обозначенной “BC”, была использована следующая последовательность:
[целевой домен]-[SEQ ID NO: 6604]-UUUU
Трансфекция клеток HEK-293_Cas9GFP для первичного скрининга нацеливающих (РНК)
Трансфекция клеток, экспрессирующих Cas9GFP HEK293 (HEK-293_Cas9GFP), была использована для первичного скрининга целевых специфических crРНК. В этом примере целевые специфические crРНК были разработаны и выбраны для первичного скрининга с использованием определенных критериев, в том числе для обнаружения неспецифичного связывания in silico, например, как описано здесь. Отобранные crРНК были химически синтезированы и помещены в плашку на 96 ячеек. Клетки HEK-293-Cas9GFP трансфицировали целевыми crРНК и стандартным (стоковым)trРНК в соотношении 1:1. Трансфекцию проводили с использованием технологии липофекции в соответствии с протоколом производителя (Lipofectamine 2000, Life Technologies). Трансфицированные клетки лизировали через 24 часа после липофекции и редактирование генома (например, расщепление) определялось в лизате с помощью метода T7E1 и/или секвенирования следующего поколения (NGS, ниже).
Метод T7E1
Метод T7E1 использовался для обнаружения мутационных перестроек в геномной ДНК, таких как вставки, делеции и замены, созданные при репарации по типу негомологичного соединения концов (NHEJ), вызванной расщеплением ДНК с помощью Cas9 (см. Cho et al., Targeted genome engineering in human cells with the Cas9 RNA-guided endonuclease. Nature Biotechnology. 2013; 31, 230-232).
Зоны геномной ДНК, предназначенные для расщепления системой CRISPR/Cas9, амплифицировали с помощью ПЦР, денатурировали при 95° С в течение 10 минут и затем повторно отжигали при снижении температуры от 95°C до 25°C со скоростью 0,5°C в секунду. Если мутации присутствовали в амплифицированной области, ДНК образовывали гетеродуплексов. Повторно отожженные гетеродуплексы затем расщепляли T7E1 (New England Biolabs) при 37°C в течение 25 минут или дольше. Эндонуклеаза T7E1 распознает неспаренные основания ДНК, гетеродуплексы и наличие одночепочных разрывов в ДНК-дуплексе и генерирует двухцепочечный разрыв на этих участках. Полученные фрагменты ДНК анализировали с использованием Fragment Analyzer по количеству для определения эффективности расщепления.
Секвенирование следующего поколения (NGS) и анализ для оценки эффективности расщепления по целевым сайтам и формирование инделов
Для определения эффективности редактирования генома (например, расщепления) по целевым сайтам, многократное секвенирование было применено для определения наличия вставок и делеций, сформированных с помощью негомологичного соединения концов.
Для начала, ПЦР-праймеры были сконструированы по краям целевого сайта, и геномная область, представляющая интерес, амплифицировалась ПЦР. Дополнительная ПЦР выполнялась в соответствии с протоколами производителя (Illumina) для получения количества, необходимого для секвенирования. Полученные ампликоны секвенировали на приборе Illumina MiSeq. Результаты считывания сопоставляли со стандартной последовательностью человеческого генома (например, hg38) после удаления низкокачественных результатов считывания. Из результирующих файлов, содержащих данные считывания, сопоставленных со стандартным эталонным геномом (файлы BAM), были выбраны результаты считывания, перекрывающие интересующую нас область генома, и подсчитано количество прочитанных последовательностей дикого типа по сравнению с количеством последовательностей, содержащих инсерцию или делецию. Процент редактирования определялся как общее число считываний с инсерциями или делециями к общему числу прочитанных последовательностей, включая дикий тип. Для определения профиля инсерций или делеций, полученных в результате редактирования, были выбраны результаты сравнения, содержащие инделы, и просуммировано число считываний для каждого индела. Информация была представлена в виде списка, а также визуализирована в форме гистограмм, представляющих частоту каждого индела.
Формирование RNP
Добавление crРНК и trРНК к белку Cas9 приводит к образованию активного рибонуклеопротеинового комплекса Cas9 (RNP), способствующего связыванию с целевой областью, заданной crРНК, и специфическому расщеплению целевой геномной ДНК. Этот комплекс образуется при загрузке trРНК и crРНК в Cas9, что, как полагают, вызывает конформационные изменения в Cas9, что позволяет ей связывать и расщеплять dsDNA.
crРНК и trРНК денатурировали отдельно при 95°С в течение 2 минут и оставляли до комнатной температуры. Белок Cas9 (10мг/мл) разбавляли в 5X CCE-буфере (20 мМ HEPES, 100 мМ KCl, 5 мМ MgCl2, 1 мМ DTT, 5% глицерин), а затем добавляли trРНК и различные crРНК (в отдельных реакциях) и инкубировали при 37°C в течение 10 минут для образования активного комплекса RNP. Комплекс был доставлен электропорацией и другими методами в широкий спектр клеток, включая клетки HEK-293 и CD34+ гематопоэтические клетки.
Доставка RNP в CD34+ HSCs
Cas9 RNP доставлялись в клетки CD34+ HSC. Клетки CD34+ HSC оттаивали и культивировали (при ~500000 клеток/мл) в течение ночи в среде StemSpan SFEM (StemCell Technologies) с добавками IL12, SCF, TPO, Flt3L и Pen/Strep. Примерно 90000 клеток были разделены на аликвоты и отцентрифугированы для каждой реакции доставки RNP. Затем клетки ресуспендировали в 60 мкл буферного раствора P3 (Lonza), к которому затем добавляли активный RNP. Клетки HSC затем электропорировали (например, подвергали нуклеофекции с использованием программы CA-137 на аппарате Lonza Nucleofector) в трех повторах (20 мкл/электропорация). После электропорации к клеткам HSC немедленно добавляли среду StemSpan SFEM (с IL12, SCF, TPO, Flt3L и Pen/Strep), и культивировали в течение по меньшей мере 24 часов. Затем HSC собирали и анализировали помощью методов T7E1, NGS и/или анализа экспрессии маркера клеточной поверхности.
Функциональный анализ клеток HSC
Клетки CD34+ HSC можно анализировать на фенотип стволовых клеток с использованием известных методов, таких как проточная цитометрия или метод выделения колониеобразующих единиц in vitro. В качестве примера, клетки анализировали методом подсчёта колоний in vitro (CFC) с использованием набора Optoc Methocult H4034 Optimum (StemCell Technologies) с использованием протокола производителя. Вкратце, 500-2000 CD34+ клеток в объеме <100 мкл добавляли к 1-1,25 мл MethoCult. Смесь интенсивно перемешивали на приборе Vortex в течение 4-5 секунд для тщательного перемешивания, затем оставляли на при комнатной температуре в течение по меньшей мере 5 минут. Используя шприц, 1-1,25 мл клеток в MethoCult переносили в 35-миллиметровую чашку или лунку на плашке из 6 ячеек. Число колоний и морфологию оценивали через 12-14 дней в соответствии с протоколом изготовителя.
Ксенотрансплантация in vivo
Клетки HSC функционально определяется их способностью к самообновлению и дифференцировке в клетки многих линий. Эта функциональность может быть оценена только in vivo. Золотым стандартом для определения функции HSC человека является ксенотрансплантация в гамма-мышь NOD-SCID (NSG), которая обладает ослабленным иммунитетом вследствие серии мутаций и, таким образом, может служить реципиентом клеток человека. Клетки HSC после редактирования трансплантируются в мышей линии NSG, для подтверждения того, что индуцированное редактирование не влияет на функцию HSC. Ежемесячный анализ периферической крови проводился для оценки степени химеризма и развития линии, а вторичная трансплантация через 20 недель проводилась для установления наличия функциональных клеток HSC.
Результаты.
Результаты редактирования с использованием молекул gРНК (например, молекул dgРНК, описанных выше), описанных здесь, в клетках HEK293_Cas9GFP, по результатам анализа T7E1 («T7») и/или NGS, суммированы на Фиг. 1 (молекулы gРНК в области энхансера +58 BCL11a) и Фиг. 2 (молекулы gРНК в области энхансера +62 BCL11a), а также в приведенных ниже таблицах, как указано. Среднестатистическое редактирование в CD34+ HSPC представлено, например, в Таблице 10 (молекулы gРНК в области энхансера +58 BCL11a), Таблице 11 (молекулы gРНК в области энхансера +62 BCL11a), Таблице 12B (молекулы gРНК в области энхансера +55 BCL11a), и Таблице 13 (молекулы gРНК в области HPFH Френча), ниже. В результатах анализа методом T7E1, «2» указывает на высокую эффективность расщепления; «1» указывает на низкую эффективность расщепления, а «0» означает отсутствие расщепления. В общем случае, результаты T7E1 коррелируют с количественной характеристикой расщеплений, определяемой по методу NGS. 15 наиболее представленных gРНК (имеющих наивысший % редактирования в CD34+ клетках) показаны на Фиг. 11 (+58 область энхансера BCL11a) и на Фиг. 12 (+62 область энхансера BCL11a).
Таблица 10: Результаты первичного скрининга crРНК к +58 области энхансера Bcl11a в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).
Таблица 11: Результаты первичного скриининга crРНК к +62 области энхансера Bcl11a в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).
Таблица 12A: Результаты первичного скрининга crРНК к +55 области энхансера Bcl11a в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).
n/a=не проводилось
После эксперимента, описанного выше, те же самые молекулы нацеливающих РНК были снова троекратно протестированы как в клетках HEK-293-Cas9, так и в клетках CD34+ с использованием нового набора праймеров разработанного для анализа NGS. Результаты приведены ниже в Таблице 12B.
Таблица 12B: Результаты скрининга crРНК к +55 области энхансера Bcl11a в клетках HEK-293-Cas9 и в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).
(n=3)
(n=3)
n.d..=не определён
Таблица 13: Результаты скрининга crРНК к области HPFH Френча в клетках HEK-293-Cas9 и в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).
n/a = не измерялся; nd = не определён
Редактирование генома в области энсансера BCL11a
Были заказаны синтетические молекулы sgРНК, содержащие целевые домены, специфичные для геномной ДНК в областях +58 или +62 эритроидного энхансера гена BCL11a. На Фиг. 5 показана геномная ДНК, на которую нацелены молекулы sgРНК, обозначенные как sgEH1-sgEH9.
sgEH1 Целевой домен (CR00276): AUCACAUAUAGGCACCUAUC (SEQ ID NO: 212)
sgEH2 Целевой домен (CR00275): CACAGUAGCUGGUACCUGAU (SEQ ID NO: 211)
sgEH8 Целевой домен (CR00273): CAGGUACCAGCUACUGUGUU (SEQ ID NO: 209)
sgEH9 Целевой домен (CR00277): UGAUAGGUGCCUAUAUGUGA (SEQ ID NO: 213)
RNP, содержащие sgEH[X], предварительно введённые в комплекс с Cas9, были введены в клетки CD34+ костного мозга (клетки костного мозга CD34+, заказанные у Lonza, Cat#2M-101C, Lot# 466977, 30y, F, B (96,8%)) с использованием электропорации (электропоратор NEON). Расщепление в стволовых клетках CD34+ определяли с использованием T7E1 и NGS. Результаты суммированы на Фиг. 6A-D, где показано обобщённое формирование инделов по четырем экспериментах (по два эксперимента от двух разных доноров), а также наиболее часто представленные профили инделов. sgEH1, 2 и 9 были способны направлять расщепление с высокой эффективностью.
Неожиданно было обнаружено, что в нескольких экспериментах, в том числе с использованием клеток от разных доноров, профиль инделов остаётся постоянным (см. Фиг. 6A-D). То есть, каждая gРНК приводит к определённому профилю формирования инделов. Кроме того, делеции, по-видимому, коррелируют с областями микрогомологии вблизи места расщепления.
Для дополнительного исследования этого явления, молекулы gРНК к локусу BCL11a были спроектированы и тестированы с использованием различных биологических образцов, а также разных способов доставки и Cas-связывающих (каркасных) последовательностей gРНК. Для этого эксперимента использовались gРНК со следующими целевыми доменами:
G7 (также обозначаемый g7) Целевой домен: GUGCCAGAUGAACUUCCCAU (SEQ ID NO: 2016) (т.е., 3' 20 нп SEQ ID NO: 1191);
G8 (также обозначаемый g8) Целевой домен: CACAAACGGAAACAAUGCAA (SEQ ID NO: 2017) (т.е., 3' 20 нп SEQ ID NO: 1186).
В первом эксперименте g7 и g8 тестировали на двух разных биологических образцах. Как показано на Фиг. 7, профили, состоящие из 3 наиболее часто встречаемых инделов для каждой gРНК были идентичными. Затем молекулы gРНК, содержащие домены G7 и G8, были протестированы с использованием другого компонента tracrРНК. В предыдущих экспериментах SEQ ID NO: 6601 с добавленной -UUUU непосредственно добавляли к целевому домену gРНК с образованием sgРНК. В следующей серии экспериментов SEQ ID NO: 6604 с добавленной -UUUU непосредственно присоединяли к g7 и g8 целевым доменам gРНК, для создания молекул sgРНК с другой Cas-связывающей последовательностью (молекулы gРНК, обозначенные как g7BC или g8BC). Как показано на Фиг. 8, профиль инделов сохраняется постоянным, даже при использовании различных sgРНК каркасных последовательностей для посадки Cas. Наконец, профиль инделов сравнивался при использовании разных методов доставки. Результаты исследования при доставке g7 в клетки-293 путём электропорации RNP и доставке g7-кодирующей плазмиды с помощью аппарата Lipofectamine 2000 представлены на Фиг. 9. Как показано, профиль инделов остаётся постоянным. Эти результаты, вместе взятые, свидетельствуют о том, что формирование профиля инделов зависит от последовательности (молекулы gРНК). Молекулы gРНК, нацеленые на последовательности, в которых результаты расщепления приводят к большим делециям и/или делециях сдвига рамки считывания могут применяться для обеспечения потери функции.
Удаление участка при использовании нескольких нацеливающих РНК.
Вышеперечисленные G7 и g8 нацелены на геномную ДНК в проксимальных участках (последовательности PAM находятся в пределах 50 нуклеотидов друг от друга в гене BCL11a). Для определения эффекта одновременного нацеливания на два проксимальных участка, проведена трансфекция клеток CD34+ с использованием RNP, содержащими gРНКs с целевым доменом G7, а также RNP, содержащим gРНКs с целевым доменом G8. Эффективность расщепления и профиль инделов определялись с помощью NGS. Как показано на Фиг. 10, первичный индел представляет собой делецию нуклеотидов между двумя сайтами связывания gРНК. Эти результаты показывают, что несколько, например, 2, нацеливающих РНК, которые связываются в непосредственной близости, могут быть использованы для удаления ДНК, расположенной между двумя сайтами связывания.
Редактирование генома в стволовых клетках CD34+
Редактирование генома в локусе BCL11a было продемонстрировано в CD34+ первичных гемопоэтических стволовых клетках. Вкратце, CD34+ клетки были выделены из мобилизованной периферической крови G-CSF у взрослых доноров (AllCells) с использованием иммуноселекции (на системе Miltenyi) в соответствии с инструкциями производителя. Гэйтинг клеток показан на Фиг.3. Клетки были разделены на аликвоты и криоконсервированы. Размороженные клетки высевали в количестве 2x105/ml in SFEM (StemCell Technologies) + 1X антибиотик/антимикотик+50 нг/мл каждого цитокина (TPO, FLT3L, IL6 и SCF) + 500нМ Соединения 4 и культивировали в течение 5 дней при 37°C, в присутствии 5% CO2 в увлажненном инкубаторе. Концентрация клеток через 5 дней составляла 1x106/мл.
Предварительно инкубированный комплекс RNP, состоящий из 150 нг каждого компонента: Cas9 (Genscript #265425-7) и sgРНК (TriLink, включающий целевой домен sgBCL11A_7 (т.е. целевой домен g7): GTGCCAGATGAACTTCCCATGTTTAAGAGCTATGCTGGAAACAGCATAGCAAGTTTAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTT) (SEQ ID NO: 2000) добавляли к 2x105 клеткам с последующей электропорацией на системе Neon (L ifetechnologies) при параметрах импульсов: 1600 V, 20 мс, 1 импульс, согласно протоколу производителя. Проводились повторные электропорации. Были проведены контрольные (Mock) электропорации, без комплекса RNP. После электропорации клетки высевали в 1 мл среды и культивировали в течение ночи.
На следующий день после электропорации 1/20 несортированной культуры клеток высевали в SFEM (StemCell Technologies) +1X антибиотик/антимикотик + 50 нг/мл каждого из TPO, FLT3L, IL6, SCF, IL3 и GCSF и культивировали в течение 6 дней. Оставшиеся клетки окрашивали антителами к CD34 человека и CD90 человека и сортировали методом проточной цитометрии для получения CD34+CD90+ и CD34+CD90-популяций. Известно, что клетки CD34+CD90+ содержат гемопоэтические стволовые клетки, как показано долгосрочным культивированием мульти-линейного клеточного трансплантанта в иммунодефицитных мышах (см. Majeti et al., 2007 Cell Stem Cell 1, 635-645). Клеточные популяции, выбранные для сортировки, обозначены на представленной точечной гистограмме (графике дот-плот) на Фиг.3. Сортированные клетки культивировали в SFEM (StemCell Technologies) + 1X антибиотик/антимикотик + 50 нг/мл каждого из TPO, FLT3L, IL6, SCF, IL3 и GCSF в течение 6 дней, после чего все культуры собирали для анализа степени редактирования генома.
Геномная ДНК выделялась из собранных клеток и целевая область амплифицировалась следующими праймерами: BCL11A-7 F, gcttggctacagcacctctga (SEQ ID NO: 2018); BCL11A-7R, ggcatggggttgagatgtgct (SEQ ID NO: 2019). Продукт ПЦР подвергали денатурации и повторному отжигу с последующей инкубацией с T7E1 (New England Biolabs) в соответствии с рекомендациями производителя. Затем продукты реакции анализировали электрофорезом в агарозном геле (Фиг. 4). Верхняя полоса представляет собой нерасщепленную гомодуплексную ДНК, а нижние полосы указывают на продукты расщепления, полученные в результате гетеродуплексной ДНК. Крайняя левая дорожка представляет собой стандартный маркер длины ДНК. Интенсивность полосы была рассчитана путем пиковой интеграции необработанных изображений с помощью программного обеспечения ImageJ. % модификации гена (индел) рассчитывали следующим образом: % генной модификации=100 x (1- (1-расщепленная фракция)1/2), что указано ниже каждой соответствующей дорожке геля.
Результаты показаны на Фиг 4. Эффективность редактирования гена в популяции CD34+CD90+, содержащей гематопоэтические стволовые клетки, была эквивалентна таковой CD34+CD90-клеток или несортированых клеток. Эти эксперименты показывают, что редактирование гена может быть выполнено в CD34+HSPC и CD34+CD90+ клетках, дополнительно обогащённых по HSC.
Пример 3. Редактирование эритроидного энхансера гена BCL11A в гемопоэтических стволовых клетках и клетках-предшественниках (HSPC) с использованием CRISPR-Cas9 для возобновления экспрессии фетального глобина в эритроидных клетках взрослого.
Методы:
CD34+ культура клеток человека. Человеческие клетки CD34+ костного мозга человека были приобретены либо в AllCells (Cat#ABM017F), либо Lonza (Cat#2M-101C) и подращивались в течение 2-3 дней с использованием среды StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat#09650) в которую добавляли 50 нг/мл тромбопоэтина (Tpo, Peprotech, Cat#300-18), 50 нг/мл Flt3-лиганда человека (Flt-3L, Peprotech, Cat#300-19), 50 нг/мл фактора стволовых клеток человека (SCF, Peprotech; Cat#300-07), человеческий интерлейкин-6 (IL-6, Peprotech, Cat#200-06), 1% L-глутамин; 2% пенициллин/стрептомицин и Cоединение 4 (0,75 мкМ). Через 2-3 дня разгонки культуры, её численность увеличилась в 2-3 раза по сравнению с начальным количеством клеток, приобретенных у AllCells, и в 1-1,5 раза от Lonza. Эти условия культивирования использовались для всех этапов экспансии/подращивания культуры CD34+, включая как до, так и после введения систем CRISPR/Cas, как описано здесь.
Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов из Cas9 и направляющих РНК, подготовка HSC и электропорация RNP в HSC. Рибонуклеопротеиновые комплексы (RNP), состоящие из Cas9 и нацеливающих РНК были приготовлены непосредственно перед электропорацией. Для образования RNP с использованием двойных направляющих РНК (dgРНКs) 3 мкг каждой из crРНК (в 2,24 мкл) и tracr (в 1,25 мкл) сначала денатурировали при 95оC в течение 2 мин в отдельных пробирках, а затем охлаждали до комнатной температуры. Для приготовления белка Cas9 7,3 мкг белка Cas9 (в 1,21 мкл) смешивали с 0,52 мкл буфера 5хCCE (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприготовленного 1 мМ DTT). tracr сначала смешивали с препаратом Cas9 и инкубировали при 37oC в течение 5 мин. Затем crРНК добавляли к комплексам, инкубировали в течение 5 мин при 37oC. HSC собирали центрифугированием при 200×g в течение 15 мин и ресуспендировали в T-буфере, который поставляется в комплекте для электропорации Neon (Invitrogen; Cat#MPK1096) до плотности клеток 2x107/мл. RNP смешивали с 12 мкл клеток путем осторожного пипетирования вверх и вниз 3 раза. Для получения комплексов Cas9 с одиночной нацеливающей РНК (sgРНК) 2,25 мкг sgРНК (в 1,5 мкл) смешивали с 2,25 мкг белка Cas9 (в 3 мкл) и инкубировали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем комплекс sgРНК/Cas9 смешивали с 10,5 мкл клеток 2 x 107/мл путем осторожного пипетирования вверх и вниз несколько раз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клеток (10 мкл) переносили в камеру электропоратора. Электропорацию проводили с помощью системы трансфекции Neon (Invitrogen, MPK5000S) с использованием 1700 вольт/20 миллисекунд и 1 импульса. После электропорации клетки переносили в 0,5 мл предварительно нагретой среды StemSpan SFEM, дополненной факторами роста и цитокинами, как описано выше, и культивировали при 37oC в течение 2 дней.
Подготовка геномной ДНК. Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных клеток HSC через 48 часов после электропорации. Клетки лизировали в 10 мМ Трис-HCl, pH 8,0; 0,05% SDS со свежедобавленной протеиназой K в концентрации 25мкг/мл и инкубировали при 37oC в течение 1 часа с последующей дополнительной инкубацией при 85oC в течение 15 минут для инактивации протеиназы K.
Анализ T7E1. Для определения эффективности редактирования HSC, был проведён анализ по методу T7E1. ПЦР проводили с использованием Phusion Hot Start II High-Fidelity kit (Thermo Scientific; Cat#: F-549L) со следующим протоколом циклов: 98оC 30 сек; 35 циклов 98оC 5сек, 68оC для 20 мин, 72 оC 30сек; 72 оC в течение 5 мин. Использовали следующие праймеры: прямой праймер: 5'-AGCTCCAAACTCTCAAACCACAGGG-3 '(SEQ ID NO: 2001) и обратный праймер: 5'-TACAATTTTGGGAGTCCACACGGCA-3' (SEQ ID NO: 2002). Продукты ПЦР денатурировали и повторно отжигали, используя следующие условия: 95оC в течение 5 мин, 95-85оC при -2оC/сек, 85-25оC при -0,1оC/сек, завершение/удерживание при 4 оC. После отжига 1 мкл чувствительной к рассогласованию нуклеазы T7E1 (NEB, Cat#M0302L) добавляли к 10 мкл продукта ПЦР выше, дополнительно инкубировали при 37оC в течение 15 минут для переваривания гетеродуплексов и полученные фрагменты ДНК анализировали с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. Эффективность редактирования была определена количественно с помощью программного обеспечения ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/).
Секвенирование следующего поколения (NGS). Для более точного определения эффективности редактирования и профиля инсерций и делеций (инделов), продукты ПЦР подвергались секвенированию следующего поколения (NGS). ПЦР проводили в двух репликах с использованием Titanium Taq PCR kit (Clontech Laboratories; Cat#: 639210) по следующему протоколу: 98оC в течение 5 мин; 30 циклов 95оC в течение 15 секунд, 68оC в течение 15 секунд, 72оC 1 мин; 72оC в течение 7 мин. Использовали следующие праймеры: прямой праймер: 5'-AGCTCCAAACTCTCAAACCACAGGG-3 '(SEQ ID NO: 2001) и обратный праймер: 5'-TACAATTTTGGGAGTCCACACGGCA-3' (SEQ ID NO: 2002). Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 2% агарозном геле и подготавливали для многократного секвенирования.
Анализ культуры клеток HSPC методом проточной цитометрии. Для того, чтобы охарактеризовать популяции стволовых клеток и клеток-предшественников, клетки HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии. Процент CD34+, CD34+CD90+ клеточных субкультур, до и после редактирования генома, определяли на аликвотах клеточных культур. Клетки инкубировали с анти-CD34 (BD Biosciences, Cat#555824), анти-CD90 (Biolegend, Cat#328109) в окрашивающем буфере, содержащем PBS, с добавлением 0,5% BSA при 4°C, в темноте в течение 30 мин. Жизнеспособность клеток определялась по 7ААД. Клетки промывали окрашивающим буфером и анализировали методом Multicolor FACS на FACSCanto (Becton Dickinson). Результаты проточной цитометрии анализировали с использованием Flowjo, данные представлены как процент клеток CD34+, CD34+CD90+ от общей популяции клеток. Абсолютные числа популяции каждой клеточной группы в культуре были рассчитаны исходя из общего числа клеток, умноженных на процент каждой популяции.
Эритропоэз in vitro и FACS анализ эритроидных клеток, содержащих HbF. Клетки HSC с отредактированным геномом, подвергали эритроидной дифференцировке in vitro через 48 часов после электропорации. Вкратце, клетки HSC с отредактированным геномом культивировали в среде дифференцировки эритроидов (EDM), состоящей из IMDM (Invitrogen, Cat#31980-097), с добавлением голотрансферрина человека 330 мкг/мл (Sigma, Cat#T0665), 10 мкг/мл рекомбинантного инсулина человека (Sigma, Cat#I3536), 2 МЕ/мл гепарина (Sigma, Cat#H3149), 5% плазму человека (Sigma, Cat#P9523), 3 МЕ/мл человеческого эритропоэтина (R&D, Cat#287-TC) 1% L-глутамина и 2% пенициллина/стрептомицина. В течение 0-7 дней культивирования в EDM дополнительно добавляли 10-6M гидрокортизоном (Sigma, Cat#H0888), 100 нг/мл человеческого SCF (Peprotech, Cat#300-07) и 5 нг/мл IL-3 человека (Peprotech, Cat#200-03) в течение 7 дней. В течение 7-11 дней культивирования в EDM добавляли только 100 нг/мл человеческого SCF. В течение 11-21 дней культивирования в EDM не добавляли дополнительных добавок. На 7, 14 и 21 дни культивирования клетки (2-10) ×105) анализировали внутриклеточным окрашиванием для обнаружения экспрессии HbF. Вкратце, клетки собирали центрифугированием при 350×g в течение 5 мин и один раз промывали окрашивающим буфером (Biolegend, Cat#420201). Затем клетки фиксировали добавлением 5 мл буфера для фиксации (Biolegend, Cat#420801) и три раза промывали 2 мл 1х внутриклеточного промывочного буфера для пермеализации (Biolegend, Cat#421002) центрифугированием при 350×g в течение 5 мин. Затем клетки инкубировали с 5 мкл анти-HbF-антитела (Life technologies, Cat#MHFH01) в 100мкл 1х внутриклеточного окрашивающего промывочного буфера в течение 20 мин при комнатной температуре. Клетки дважды промывали 2 мл 1х внутриклеточного окрашивающего Perm/Wash буфера для промывания и ресуспендировали в 200 мкл окрашивающего буфера а затем проверяли на FACS Canto (Becton Dickinson) на экспрессию HbF. Результаты, проанализированные с использованием Flowjo и данных, были представлены в виде % HbF-положительных клеток (F клеток) от общей популяции плеток.
Методы анализы экспрессии генов. ~1×106 клеток использовали для получения РНК с использованием набора RNeasy mini (Qiagen. Cat#74104). От 200 до 400 нг РНК использовали для синтеза 1-й цепи с использованием набора для синтеза кДНК qScript (Quanta, Cat#95047-500). Taq-man ПЦР была выполнена с использованием Taq-Man Fast Advance PR Mix (Life technologies, Cat#4444963) и GAPDH (Life technologies, ID#Hs02758991_g1), HbB (Life technologies, ID #: Hs00747223_g1), HbG2/HbG1 (Life technologies, ID#Hs00361131_g1) и BCL11A (Life technologies, ID #: Hs01093197_m1) в соответствии с протоколом производителя. Относительная экспрессия каждого гена была нормирована по экспрессии GAPDH.
Метод выявления колониеобразующих единиц (КОЕ). Для подсчёта колониеобразующих клеток (КОЕ) 300 клеток в 1,1 мл на чашку Methocult/35 мм в двух повторах помещали в метилцеллюлозную среду Methocult H4434, содержащую SCF, GM-CSF, IL-3 и эритропоэтин (StemCell Technologies). Пенициллин/Стрептомицин был добавлен в среду Methocult. Чашки инкубировали во увлажняющем инкубаторе при 37°С. Колонии, содержащие по меньшей мере 30 клеток, подсчитывали на 14 день после высева на чашки с использованием StemVision (StemCell Technologies), для получения изображения чашки целиком. Общее количество колоний, количество КОЕ-ГЕММ (гранулоцит, эритроцит, макрофаг, мегакариоцит), КОЕ-ГМ (гранулоцит, макрофаг), КОЕ-М (макрофаг), КОЕ-Е (эритроид) и БОЕ-Е (бурст-образующие единичные эритроиды), затем подсчитывали с помощью программного обеспечения анализатора изображений StemVision и подтверждалось вручную с помощью программного обеспечения StonyVision Colony Marker.
Изучение трансплантации in vivo. Исследования трансплантации in vivo проводились по протоколу, одобренному IACUC. Фракцию культуры геном-отредактированных клеток HSC, эквивалентную 30000 исходных клеток, вводили внутривенно через хвостовую вену в сублетально облученных (200 cGY) 6-8-недельных мышей линии NSG. Трансплантация проводилась в течение 24 ч после облучения. Трансплантация контролировалась проточным цитометрическим анализом крови, собираемой через 4, 8 и 12 недель после инфузии с использованием анти-CD45 человеческих и анти-45 мышиных антител. Мышей умерщвляли через 13 недель после трансплантации, а костный мозг, селезенку и тимус собирали для анализа методом проточной цитометрии и методом выявления колониеобразующих единиц. Для второй (последующей) трансплантации 50% костного мозга от каждой мыши-реципиента пересаживали в одну вторичную сублетально облученную мышь линии NSG. Трансплантацию контролировали проточным цитометрическим анализом крови, собираемой через 4, 8 и 12 недель после инфузии с использованием маркера панлейкоцитов и маркеров CD45 с использованием анти-человеческих CD45 и анти-мышиных CD45-антител. Через 15 недель после трансплантации костный мозг и селезенку собирали у вторичных мышей и анализировали с помощью проточной цитометрии и методом выявления колониеобразующих единиц.
Результаты:
Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение эритроидного энхансера BCL11A в клетках HSC будет приводить к уменьшению экспрессии BCL11A избирательно в линии эритроидных клеток и уменьшать ингибирование подавления экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный уровень HbF белка, или F-клеток. Повышенный уровень белка HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и будет терапевтическим/лечебным средством для пациентов как с β-талассемией, так и с серповидно-клеточной анемией. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) с экспрессией HSCT, т.е. трансплантация отредактированных клеток HSC от пациентов с серповидно-клеточной анемией (далее SCD) ex vivo, была также объединена с технологией усиления клеточной экспансии стволовых клеток, например, с помощью ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки во всей полноте), например, с помощью Соединения 4 для увеличения экспансии клеток ex vivo и увеличения доставляемой дозы модифицированного гена HSC.
Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы, Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет важное значение. Недавние сообщения продемонстрировали, что комплексы рибонуклеопротеинов c Cas9 (RNP), доставляемые в клетки-мишени электропорацией, могут осуществлять эффективное и специфическое редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего побочные эффекты, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно упростило бы перевод редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белковые и gРНКомплексы с Cas9 (RNPs) были доставлены в культивированные клетки HSPC, а общие схемы экспериментов показаны на Фиг.17.
Рекомбинантный белок Cas9 очищали от Escherichia coli и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr или полноразмерной однонаправленной РНК (sgРНК) для формирования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список и последовательности gРНК, использованные в исследовании, показаны в Таблице 14. Комплексы RNP были электропорированы в клетки костного мозга CD34+HSPC здорового или SCD-пациента путём электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки подвергали экспансии в течение 2 дней в среде способствующей экспании клеток HSC, содержащей Cоединение 4, до доставки комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП при электропорации. Чтобы облегчить восстановление клеток после процесса трансфекции, клетки культивировали в течение двух дополнительных дней в модифицированной среде экспансии клеток, содержащей Cоединение 4. Жизнеспособность клеток через 48 часов после электропорации определялась проточной цитометрией с использованием 7AAD. Жизнеспособность была относительно высокой, при этом >80% клеток были жизнеспособны (Фиг. 18), что позволяло предположить, что клетки HSPC допускает электропорацию комплексов RNP относительно хорошо по сравнению с другими методами доставки системы Cas9 и gРНК, описанными в литературе.
Таблица 14. Список gРНКs, нацеленных на эритроидный специфичный энхансер BCL11A, используемых в данном исследовании.
Метод T7E1 удобен для оценки редактирования определенных сайтов генома. Геномную ДНК выделяли из клеток HSPC через 2 дня после электропорации. Целевую область энхансера гена BCL11A амплифицировали с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Продукты ПЦР подвергали анализу методом T7E1. Конечные продукты анализа T7E1 подвергали электрофорезу в 2%-ном агарозном геле, а проценты отредактированных аллелей определяли с помощью imageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/). Ожидаемые размеры ПЦР-продуктов и приблизительные ожидаемые размеры фрагментов, расщепленных T7E1, показаны на Фиг 19. Общие частоты редактирования указаны как процент от общего количества изменений ниже изображения агарозного геля. Редактирование генома в локусе BCL11A наблюдалось в клетках, обработанных BCL11A Cas9 RNP, но не в ложно-электропорированных контрольных клетках (Фиг. 19).
Геномные ПЦР-продукты области эритроидного энхансера +58 гена BCL11A также подвергались секвенированию следующего поколения (NGS). NGS облегчает одновременный мониторинг большого количества образцов, позволяя общий обзор аллелей. Кроме того, NGS предоставляет информацию о гетерогенности инсерций и делеций (инделов). Последовательности сравнивали с последовательностями из контрольных (Mock) обработанных клеток. Результаты анализа последовательности показали, что CRISPR-Cas9-индуцированные двухцепочные разрывы восстанавливались по типу NHEJ, что приводило к вариабельным частотам небольших делеций и инсерций (инделов) вблизи участка расщепления Cas9, расположенного в области эритроидного энхансера +58 BCL11A (Фиг. 20 и Таблица 15). В целом, наблюдаемая эффективность редактирования была выше для sgРНКs по сравнению с dgРНКs, нацеленными на одну и ту же последовательность, причем 12 из 14 sgРНК обеспечивали редактирование более чем в 50% аллелей (Фиг. 20 и Таблица 15), хотя (не ограничиваясь теорией) различия в эффекте между sgРНК и dgРНК могут зависеть от источника материалов.
Таблица 15. Генотипы, идентифицированные NGS в HSPC, отредактированные с помощью Cas9-RNP. Дана нуклеотидная последовательность для каждой популяции. Целевая последовательность, на которую нацелена каждая gРНК, указана выше каждой группы инделов, причем последовательности PAM указаны строчными буквами. Прочерки обозначают делетированные основания, а строчные буквы-вставки. В описании gРНК dgРНК относится к двойным молекулам gРНК, содержащим указанный целевой домен. sgРНК обозначает отдельные молекулы gРНК, содержащие указанный целевой домен. В тех случаях, когда несколько экспериментов проводились с той же самой dgРНК или sgРНК, последовательные эксперименты были помечены как «dgРНК», «d1gРНК», «d2gРНК» и т.д.
CTAACAGTTGCTTTTATCACagg
ATCAGAGGCCAAACCCTTCCacc
TTGCTTTTATCACAGGCTCCagg
GAAGGGTTTGGCCTCTGATTagg
AGGCTCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGA
AAGGGTTTGGCCTCTGATTAggg
ATTAGGGTGGGGGCGTGGGTggg
TGTAACTAATAAATACCagg
TCAGTGAGATGAGATATCAAagg
Чтобы определить, сохранили ли CD34+ HSPC свой мультилинейный потенциал к дифференцировке в эффекторные клетки после манипуляций ex vivo, включая редактирование генома, для выборочных gРНК проводили анализ методом выявления колониеобразующих единиц (КОЕ) in vitro. Геном-отредактированные клетки суспендировали в метилцеллюлозе, дополненной цитокинами, и выдерживали в течение 14 дней при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% СО2. Выросшие дискретные колонии были классифицированы и подсчитано их количество, определены типы зрелых клеток с использованием морфологических и фенотипических критериев (STEMvision), и подсчитаны вклады различных фракций колонии-образующих единиц, таких как: колониеобразующая единица-эритроид (КОЕ-Э), бурст-образующие единичные эритроиды (БОЕ-Е), колониеобразующий блок-гранулоцит/макрофаг (КОЕ-ГМ), и колониеобразующая единица-гранулоцит/эритроцит/макрофаг/мегакариоцит (колониеобразующая единица-ГЕММ, Фиг. 21). Потенциал формирования колоний из ложных трансфицированных клеток был самым высоким, за ним следуют gРНК, нацеленные на область +58 эритроидного энхансера BCL11A. Аналогичное количество и типы колоний наблюдалось для gРНК, нацеленных на эритроидный энхансер BCL11A. Нацеливающая РНК, нацеленная на экзон 2 BCL11A, давала наименьшее количество колоний (Фиг. 22).
Относительные уровни экспрессии мРНК BCL11A, гамма- и бета-глобиновых цепей в унилинейной эритроидной культуре определяли количественно с помощью ПЦР в реальном времени. Уровни транскрипта были нормализованы по отношению к уровням транскрипта GAPDH человека. Уровни мРНК BCL11A были уменьшены в геном-редактированных клетках HSPC. Напротив, уровни мРНК BCL11A оставались неизмёнными в нередактированных или отредактированных по экзону 2 BCL11A клетках HSPC на 7 и 14 дни эритроидной дифференцировки (Фиг 23). Уровни мРНК гамма-глобина увеличивались, и, соответственно, мРНК бета-глобина постепенно уменьшались в отредактированных клетках HSPC при эритроидной дифференцировке (Фиг. 23). Увеличение уровня HbF и снижение уровня бета-глобина (серповидного глобина) в эритроцитах, полученных из геном-отредактированных клеток может иметь терапевтические последствия, выраженные в уменьшении выработки серповидно-клеточных эритроцитов.
Геном-отредактированные и нередактированные клетки HSPC на разных стадиях (7, 14 и 21 день) эритроидной дифференцировки анализировали с помощью проточной цитометрии по уровням экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки, рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a), используя антитела, конъюгированные с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали и подвергали гейтингу, исключая 7AAD. Редактирование генома не оказывало отрицательного влияния на эритроидную дифференцировку, поскольку культивируемые клетки показали одинаковые уровни CD71 и CD235A, положительно коррелирующими с эритробластами на поздних стадиях развития. Редактирование генома в области +58 эритроидного энхансера привело к большему увеличению содержащихся в клетках (до 67%) HbF по сравнению с другими gРНК и контрольными клетками с ложной электропорацией (Фиг. 24). Наблюдалась очень высокая индукция HbF-положительных клеток при использовании g7 gРНК, нацеленной на экзон 2 BCL11A. Тем не менее, клеточная пролиферация и колониеобразующий потенциал клеток, отредактированных по экзону 2 были резко снижены (Фиг. 21 и 22).
При многократном секвенировании последовательности целевой района, мы заметили, что связывающие GATA1 и TAL1 последовательности были неповреждёнными в измененном целевом районе генома (Фиг. 25). Недавно опубликованные статьи указывают на важность сайта связывания GATA1 в регуляции экспрессии BCL11A и снятия репрессии фетального глобина. Viestra et al., Nature Methods. 2015, 12: 927. В отличие от опубликованных отчетов, в которых показана важность двух этих мотивов для поддержания уровней BCL11A во взрослых эритроидных клетках, наши результаты показывают, что последовательности, расположенные выше двух сайтов связывания транскрипционных факторов, также важны для регуляции экспрессии гена BCL11a и редактирование генома исключительно на этих вышерасположенных сайтах приводит к усилению экспрессии HbF, даже если сайты связывания GATA1 и TAL1 остаются незатронутыми.
Пример 3.1.
Методы:
CD34+ культура клеток человека. Человеческие CD34+ клетки были выделены из мобилизованной периферической крови G-CSF у взрослых доноров (AllCells) при использованием иммуноселекции (Miltenyi) в соответствии с инструкциями производителя и подращивались в течение 3 дней с использованием StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat#09650) с добавлением 50 нг/мл каждого из тромбопоэтина (Tpo), лиганда Flt3 (Flt-3L, Life Technologies, Cat.#PHC9413), человеческого фактора стволовых клеток (SCF, Life Technologies, Cat.#PHC2113) и человеческого интерлейкина-6 (IL-6, Life Технологии, Cat.#PHC0063), а также 1x антибиотика/антимикотика (Gibco, Cat.#10378-016) и 500 нМ Соединения 4.
Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP)комплексов из Cas9 и нацеливающих РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в клетки HSPC. Рибонуклеопротеиновые комплексы (RNP), состоящие из Cas9 и нацеливающих РНК были приготовлены непосредственно перед электропорацией. Для образования RNP с использованием двойных направляющих РНК (dgРНКs) 3 мкг каждой из crРНК (в 2,24 мкл) и tracr (в 1,25 мкл) сначала денатурировали при 95оC в течение 2 мин в отдельных пробирках, а затем охлаждали до комнатной температуры. Для приготовления белка Cas9 7,3 мкг белка Cas9 (в 1,21 мкл) смешивали с 0,5 мкл буфера 5хCCE (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприготовленного 1 мМ DTT). tracr сначала смешивали с препаратом Cas9 и инкубировали при 37oC в течение 5 мин. Затем crРНК добавляли к комплексам, инкубировали в течение 5 мин при 37oC. Для создания контрольной точки None в комплексы tracr/CAS9 добавляли транспортное средство, а не crРНК. HSPC собирали центрифугированием и ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza cat. No. PBP3-00675) до плотности клеток 2,5×106/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). Все 20 мкл электропорации были продублированы. Для экспериментов в этом примере 3.1 использовали tracr SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующую структуру и последовательность, с обозначенными модификациями: 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатная связь(*):
mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2298), где N являются нуклеотидами указанного целевого домена (т.е. как указано идентификатором CRxxxxx).
Эритропоэз in vitro и FACS анализ эритроидных клеток, содержащих HbF. После электропорации клетки сразу же переносили в 250 мкл предварительно нагретой среды дифференцировки эритроидов (EDM), состоящей из IMDM (Hyclone, Cat#SH30228.01), 330 мкг/мл человеческого голотрансферрина (Invitria Cat#777TRF029), 10 мкг/мл рекомбинантного человеческого инсулина (Gibco Cat#A1138211), 2 МЕ/мл гепарина (Sigma, Cat#H3393), 5% человеческой AB-сыворотки (Sigma, Cat#H4522), 125 нг/мл человеческого эритропоэтина (Peprotech#10779- 058) и 1x антибиотик/антимикотик (Gibco, Cat.#10378-016). В среду EDM дополнительно добавляли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779-598). Через 2 дня культуру клеток разбавляли свежей средой. Культуры поддерживали в общей сложности 7 дней, и в это время клетки анализировали внутриклеточным окрашиванием на экспрессию HbF. Вкратце, клетки один раз промывали PBS, ресуспендировали в LIVE/DEAD® Fixable Violet Dead Cell Stain (ThermoFisher L34963, 1: 1000 в PBS) и инкубировали в течение 30 мин. Затем клетки промывали и окрашивали анти-CD71-BV711 (Fisher Scientific Company Llc. BDB563767) и антителами против CD235a-APC (BD 551336) в течение 30 мин. Затем клетки промывали, а затем фиксировали буфером фиксации (Biolegend, Cat#420801) и пермеабилизировали 1х пермеабилизирующим внутриклеточным окрашивающим буфером (Biolegend, Cat#421002) в соответствии с инструкциями производителя. Затем клетки инкубировали с 0,5 мкл анти-HbF-PE-антитела (Life Technologies, часть № MHFH04) в 50 мкл 1х внутриклеточного окрашивающего перм-промывочного буфера в течение 20 мин при комнатной температуре. Клетки дважды промывали 2 мл 1х внутриклеточного окрашивающего Perm/Wash буфера, ресуспендировали в буфере для окрашивания и анализировали на проточном цитометре LSRFortessa (BD Biosciences) экспрессию HbF. Результаты анализировали с использованием Flowjo, данные были представлены в виде % HbF-положительных клеток (F клеток) в жизнеспособной эритроидной популяции клеток CD71
Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных клеток HSPC через 48 часов после электропорации с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050)). Для определения эффективности редактирования и профилей инсерций и делеций (инделов) проводилась ПЦР с использованием праймеров, фланкирующих целевые сайты, и продукты ПЦР затем подвергали секвенированию следующего поколения (NGS). % редактирования соответствующих последовательностей в образцах, не подвергавшихся редактированию, в большинстве случаев случае был менее 1% и никогда не превышал 3%.
Результаты:
Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области эритроидного энхансера BCL11A снижает репрессию экспрессии γ-глобина, позволяя продукцию эритроцитов, содержащих повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, например, экспрессирующие повышенные уровни фетального гемоглобина, иногда упоминаются здесь как «F клетки». В вариантах осуществления клетка считается F клеткой, если она производит как минимум 6 пикограмм фетального гемоглобина на клетку). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.
Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9/RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.
Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 17 (например, gРНКs, содержащие целевой домен идентификатора CRxxxxxx). Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.
Таблица 17. Список gРНКs, нацеленных на область специфического энхансера эритроидов BCL11A, используемух в текущем исследовании. Все молекулы gРНК тестировали в двух репликах в формате dgРНК, как описано в Материалах и Методах.
Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии по уровню экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Нацеливание на область специфичного эритроидного энхансера BCL11A привело к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF (до 50,7%) по сравнению с ложно-электропорированными клетками (22,4%) (Таблица 17). Также параллельно наблюдалась индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей целевой домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A. Также, геномные ПЦР-продукты эритроидного энхансера BCL11A были подвергнуты секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. dgРНК, используемые в исследовании, приводили к получению более чем 40% HbF+ клеток с диапазоном редактирования от 74,8 до 94,0% (Таблица 17). Имея тот же самый целевой домен, dgРНК в этом Примере отличалась в последовательностях tracr и crРНК от последовательностей, описанных в примере 3; однако, редактирование и индукция HbF были одинаковыми для всех структурных вариаций (форматов) dgРНК для большинства целевых доменов. Следует отметить, что CR000317_EH4 в формате dgРНК в текущем исследовании привел к высокой индукции HbF, до 50,7% HbF+ клеток. Увеличение HbF содержащих эритроцитов, полученных из геном-отредактированных клеток, вероятно, будет иметь положительные терапевтические последствия за счёт уменьшения выработки серповидно-клеточных эритроцитов.
Пример 3.2. Оптимизация редактирования генома с помощью gРНК и положительная регуляция фетального гемоглобина при применении gРНК, нацеленных на область +58 энхансера BCL11a HSPC.
Основываясь на % редактирования являющегося детального скрининга молекул gРНКs, нацеленных на область +58 энхансера BCL11a, для дальнейшего изучения и оптимизации были отобраны 8 целевых доменов gРНК. Для выяснения влияния модификаций, внесённых в молекулы gРНК на% редактирования генома, дифференцировку эритроидов и экспрессию фетального гемоглобина, были разработаны различные версии восьми молекул gРНК, нацеленных на сайты в области +58 области энхансера BCL11a. Были созданы следующие версии gРНК, содержащие целевой домен: CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR01125, CR01126, CR01127 и CR01128:
dgРНК (все последовательности, отличные от последовательностей целевого домена, описанных в примере 1):
1. Немодифицированная crРНК и немодифицированный tracr («Unmodified» или «Unmod»)
2. Немодифицированная crРНК и немодифицированный tracr, но имеющий на 5'-конце 18 нп указанного целевого домена (вместо полных 20 нп) («18nt»)
3. crРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями, и немодифицированный tracr («PS»)
4. crРНК, имеющая дополнительные перевернутые абазивные остатоки как на 5'-, так и на 3'-конце и немодифицированный tracr («Invd»)
5. crРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями и 2'-О-метильными группами, и немодифицированный tracr («OMePS»)
6. crРНК, имеющая три 3'нп и три 5' нп, модифицированные 2'-фторгруппой, и немодифицированный tracr («F»)
7. crРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями и 2'-фторгруппой, и немодифицированный tracr («F-PS»)
sgРНК (все последовательности, отличные от последовательностей целевого домена, являются такими, как описаные в примере 1):
1. Немодифицированная sgРНК («Unmodified» или «Unmod»)
2. Немодифицированная sgРНК, но имеющая на 5'-конце 18 нп указанного целевого домена (вместо полных 20 нп) («18nt»)
3. sgРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями («PS»)
4. sgРНК, имеющая дополнительные перевернутые абазивные остатки как на 5'-, так и на 3'-конце («Invd»)
5. sgРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями и 2'-О-метильными группами («OMePS»)
6. sgРНК, имеющая три 3'нп и три 5' нп, модифицированные 2'-фторгруппой («F»)
7. sgРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями и 2'-фторгруппой («F-PS»)
Все остальные реагенты и способы были такими, как описано в Примере 3. Все результаты были выполнены в двух репликах, и результаты представлены на Фиг. 28-32. На Фиг. 28А и Фиг.28В показан % редактирования, определённый NGS в клетках CD34+ через 2 дня после электропорации RNP, содержащего указанные двойные нацеливающие РНК (dgРНКs). На Фиг. 29 показано показан % редактирования, определённый NGS в клетках CD34+ через 2 дня после электропорации RNP, содержащего указанные одиночные нацеливающие РНК (sgРНКs). На Фиг. 30 показан % положительных клеток HbF, определённый методом проточной цитометрией на 14-й день после переноса отредактированных CD34+ клеток в среду дифференцировки эритроидов после электропорации RNP, содержащего указанные двойные нацеливающие РНК (dgРНКs). На Фиг. 31 показан % положительных клеток HbF, определённый методом проточной цитометрией на 14-й день после переноса отредактированных CD34+ клеток в среду дифференцировки эритроидов после электропорации RNP, содержащего указанные одиночные нацеливающие РНК (sgРНКs). На Фиг. 32 показано кратность экспансии отредактированных клеток через 14 дней в среде дифференцировки эритроидов. Эти результаты показывают, что многие из выбранных молекул gРНК, как в форматах dgРНК, так и в sgРНК, способны достигать редактирования генома в целевом сайте с эффективностью более 90%, а в некоторых случаях, с эффективностью более 98% при доставке в CD34+ клетки в виде RNP путём электропорации. Также, многие из выбранных gРНК способны к увеличения на 20% F-клеток по сравнению с немодифицированными клетками («ложными» или “mock”). Наконец, хотя редактирование генома эритроидного энхансера BCL11A в HSPC снижало возможности экспансии эритроидных клеток, и этот эффект был более заметен у одних gРНК (например, CR00309) по сравнению с другими gРНК (например, CR00312), большинство отредактированных клеточных популяций, дифференцированных в эритроциты, не смотря ни на что, были способны проходить 500-1500 удвоений популяции за 14 дней в среде дифференцировки эритроидов ex vivo, что указывает на то, что отредактированные клетки могут быть полезны терапевтически при лечении гемоглобинопатий, таких как серповидноклеточная анемия или бета-талассемия у пациентов.
Пример 4. Редактирование HPFH области в гематопоэтических стволовых и прогениторных клетках с использованием CRISPR-Cas9 для де-репрессии экспрессии фетального глобина в эритроидных клетках взрослого.
Методы:
Культура клеток CD34+ человека. Человеческие CD34+ клетки были выделены из мобилизованной периферической крови G-CSF у взрослых доноров (AllCells) с использованием иммуно-магнитной сепарации (Miltenyi) в соответствии с инструкциями производителя и культивировались в течение 4-6 дней с использованием среды StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat#09650), дополненной 50 нг/мл каждого из тромбопоэтина (Tpo), лиганда Flt3 (Flt-3L, Life Technologies, Cat.#PHC9413), человеческого фактора стволовых клеток (SCF, Life Technologies, Cat.#PHC2113) и человеческого интерлейкина-6 (IL-6, Life Technologies, Cat.#PHC0063), а также 1x антибиотик/антимикотик (Gibco, Cat.#10378-016) и 500 нМ соединения 4. На протяжении всего исследования описанного в этом примере (включая его подпункты), при любом указании в протоколе на процесс клеточной «экспансии», эта среда была использована. Эта среда также упоминается как «среда для культивирования стволовых клеток» или «культивирующая среда» на протяжении всего этого примера (включая подпункты этого примеры).
Сборка рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP) состоящих из Cas9 и нацеливающих РНК (RNP), подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. Рибонуклеопротеиновые комплексы (RNP), состоящие из Cas9 и нацеливающих РНК были получены непосредственно перед электропорацией. Для образования RNP с использованием двойных РНК (dgРНКs) 3 мкг каждой из crРНК (в 2,24 мкл) и tracr (в 1,25 мкл) сначала денатурировали при 95oC в течение 2 мин в отдельных пробирках, а затем охлаждали до комнатной температуры. Для приготовления белка Cas9 6 мкг белка CAS9 (от 0,8 до 1 мкл) смешивали с 0,5 мкл 5×CCE-буфера (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприготовленного 1 мМ DTT). Tracr сначала смешивали с препаратом Cas9 и инкубировали при 37oC в течение 5 мин. Затем crРНК добавляли к комплексам Tracr/CAS9 и инкубировали в течение 5 мин при 37oC. В качестве контроля (отсутствия нацеливания) в комплексы Tracr/CAS9 добавляли транспортное средство, а не crРНК. HSPC собирали центрифугированием и ресуспендировали в T-буфере, предоставленным в комплектем Neon для электропорации (Invitrogen, Cat#MPK1096) до плотности клеток 5×106/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клеток (10 мкл) переносили в камеру электропоратора. Электропорацию проводили с помощью Neon transfection system (Invitrogen; MPK5000S) при режиме 1700 вольт/20 миллисекунд и 1 импульса. Электропорации 10 мкл были дублированы.
Эритропоэз in vitro и анализ FACS для HbF, содержащих эритроидные клетки. После электропорации клетки сразу же переносили в 250 мкл предварительно нагретой среды дифференцировки эритроидов (EDM), состоящей из IMDM (Hyclone, Cat. #SH30228.01), 330 мкг/мл человеческого голотрансферрина ((Invitria Cat# 777TRF029), 10 мкг/мл рекомбинантного человеческого инсулина ((Gibco Cat#A1138211)), 2 МЕ/мл гепарина (Sigma, part #H3393), 5% человеческой AB-сыворотки (Sigma, Cat# H4522), 125 нг/мл человеческого эритропоэтина (Peprotech #10779-058) и 1x антибиотик/антимикотик (Gibco, Cat. #10378-016). EDM дополнительно дополняли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat. #PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech #10779-598). Через 2 дня культуру клеток разбавляли в свежей средой. Культуры поддерживали в общей сложности 7 дней, и в это время клетки анализировали внутриклеточным окрашиванием для обнаружения экспрессии HbF. Вкратце, клетки один раз промывали PBS, ресуспендировали в LIVE/DEAD® Fixable Violet Dead Cell Stain (ThermoFisher L34963; 1:1000 в PBS) и инкубировали в течение 30 мин.Затем клетки промывали и окрашивали анти-CD71-BV711 (Fisher Scientific Company Llc. BDB563767) и антиi-CD235a-APC (BD 551336) антителами в течение 30 мин. Затем клетки промывали, а затем фиксировали фиксирующим буфером ((Biolegend, Cat# 420801)) и пермеабилизировали 1x внутриклеточным пермеабилизирующим промывочным буфером для окрашивания (Biolegend, Cat# 421002) в соответствии с инструкциями производителя. Затем клетки инкубировали с добавлением 0,5 мкл анти-HbF-PE антитела ((Life Technologies, part #MHFH04) в 50 мкл 1х внутриклеточного окрашивающего PERM/WASH буфера в течение 20 мин при комнатной температуре Юр. Клетки дважды промывали 2 мл 1х внутриклеточного окрашивающего PERM/WASH буфера, ресуспендировали в буфере для окрашивания и анализировали на проточном цитометре LSRFortessa (BD Biosciences) для обнаружения экспрессии HbF. Результаты анализировали с использованием Flowjo, и данные были представлены как % HbF-положительных клеток (F клеток) в жизнеспособной позитивной эритроидной популяции клеток CD71.
Анализ экспрессии генов. После 7 дней эритропоэза in vitro, приблизительно 1×105 клеток было использовано для очистки РНК с помощью Zymo Research ZR-96 quick RNA Kit (Zymo Cat# R1053). До 1 мкг РНК использовали для синтеза 1-й цепи с использованием Quantiscript Reverse Transcription Kit (Qiagen, Cat# 205313). ТакМан (Taq-man) количественная ПЦР в реальном времени была проведена с 2x Taq-Man Fast Advance PR Mix (Life technologies, Cat# 4444963) и Taq-Man Gene Expression Assays for GAPDH (Life technologies, ID# Hs02758991_g1, VIC), HBB (Life technologies, ID# Hs00747223_g1, VIC) и HBG2/HBG1 (Life technologies, ID# Hs00361131_g1, FAM) согласно протоколу производителя. Относительная экспрессия каждого гена была нормализована по экспрессии GAPDH и представлена в виде кратности по отношению к экспресии None/контроль образцов, получаемых из RNP, доставленных методом ΔΔCt. Альтернативно, после преобразования в нормализованное по GAPDH относительное количество транскрипта (2 ^ -ΔCt), уровень экспрессии HBG2/HBG1 определяли как процент от суммы экспрессии HBB и HBG2/HBG1.
Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS).
Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных HSPC через 48 часов после электропорации с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050). Для определения эффективности редактирования и профилей инсерций и делеций (инделов) проводилась ПЦР с использованием праймеров, фланкирующих целевые сайты, и продукты ПЦР затем подвергались секвенированию следующего поколения (NGS). % редактирования соответствующих последовательностей в образцах, не подвергавшихся редактированию, в большинстве случаев случае был менее 1% и никогда не превышал 3%.
Результаты:
Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH уменьшает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный белок HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F-клетками»). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.
Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что Cas9 комплексы рибонуклеопротеинов (RNP), когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.
Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 16 (например, gРНКs, содержащие целевой домен идентификатора CRxxxxxx). Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.
Таблица 16. Список gРНКs, нацеленных на область HPFH, используемых в текущем исследовании. Все молекулы gРНК тестировали в двух репликах в формате dgРНК, описанном выше, за исключением g8 (crРНК, состоящей из mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU, где N являются остатками целевого домена, а модификации указаны следующим образом: 2'O-метил (m), фосфоротиоатная связь (*); последовательность track SEQ ID NO: 7808) и None/контроль, которые были протестрированы каждый в 16 репликах.
Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии по уровню экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Редактирование генома не оказало отрицательного влияния на эритроидную дифференцировку, поскольку культивируемые клетки показали процентное содержание CD71+ клеток, соответствующих эритробластам, сходное с таковым из неотредактированных клеток.
Нацеливание на область HPFH привело к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF (до 51,4,7%) по сравнению с ложно-электропорированными клетками (21,0%) (Таблица 16). Также, параллельно наблюдалась индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей целевой домен g8, нацеленный на область HPFH. Также, геномные ПЦР-продукты области HPFH были подвергнуты секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Высокие проценты редактирования генома в области HFPH наблюдались во многих культурах клеток, которые были подвергнуты электропорации с RNP, содержащими Cas9, crРНК данного целевого домена и Tracr (таблица 16), но не в контрольных клетках без доставляемого целевого домена (RNP, содержащие только Cas9 и Tracr). В частности, использование dgРНК, приводящей к более чем 40% HbF+ клеток, имела диапазон от 43,0 до 91,7% отредактированных аллелей (таблица 16).
Таблица 18. Анализ экспрессии генов выбранных культур, отредактированных с помощью gРНК, нацеленных на область HPFH в текущем исследовании. Все молекулы gРНК тестировали в двух репликах в формате dgРНК. Экспрессия генов фетальных гамма-глобинов (гены γ-глобина, HBG2/HBG1), бета-глобина взрослого (β-глобин, ген HBB) и гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH) была определена, результаты представлены как описано в Материалах и Методах.
γ/(γ + β)
(среднее по репликам)
Некоторые культуры в этом исследовании также были проанализированы на экспрессию гемоглобина. При применении этих целевых доменов индуцированная экспрессия гена фетального гамма-глобина была в 1,6-3,8 раза выше, чем в клетках None/контроль, что сопровождалось умеренным снижением экспрессии бета-глобина у взрослых (до 0,58-0,91-кратного к None/контроль) (Таблица 18). Эти эффекты, вместе взятые, приводили к уровням экспрессии гамма-глобина в диапазоне от 13,8% до 26,6% от общего количества глобинов бета-типа (γ/[γ+β]) в популяции клеток (Таблица 17) и относительная индукция фетального глобина у всех целевых доменов была похожа на ту, что наблюдается при индукции белка HbF (Таблица 16). Либо увеличение HbF/гамма-глобин, либо увеличение HbF/гамма-глобин при уменьшении уровней бета-глобина (серповидного глобина) в эритроцитах, полученных из отредактированных по геному клеток, вероятно, будут иметь терапевтические последствия, приводя к уменьшению выработки серповидно-клеточных эритроцитов.
Пример 4.2.
Методы: Методы являются такими, как в Примере 4, со следующими исключениями.
Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 2,5×106/ мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza).
Результаты:
Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH уменьшает ингибирование экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F-клетками»). Повышенный уровень HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.
Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.
Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 16 (например, gРНКs, содержащие целевой домен идентификатора CRxxxxxx). Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, доставляемых электропорацией.
Таблица 19. Список gРНКs, нацеленных на область HPFH, используемых в текущем исследовании. Все молекулы gРНК тестировали в формате dgРНК (за исключением g8, который был протестирован в формате dgРНК с использованием: crРНК, состоящей из mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2300), где N являются остатками целевого домена, а модификации указаны следующим образом: 2'O-метил (m) и фосфоротиоатсвязь (*), и tracr с последовательностью SEQ ID NO: 7808).
Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии по уровню экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Редактирование генома не оказало отрицательного влияния на эритроидную дифференцировку, поскольку культивируемые клетки показали процентное содержание CD71+ клеток, соответствующих эритробластам, сходное с таковым из нередактированных клеток.
Нацеливание на область HPFH привело к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF (до 46,7%) по сравнению с ложно-электропорированными клетками (18,9 и 21,1%) (Таблица 19). Также, параллельно наблюдалась индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей целевой домен g8, нацеленный на область экзона 2 BCL11A.
В заключение, методом NGS определяли профиль инделов, сформированных внутри или вблизи целевого сайта, на который была нацелена dgРНК, содержащая целевые домены CR003031, CR003033, CR003035, CR003037, CR003038, CR003052, CR003085. 5 наиболее часто встречающихся инделов для каждой локализации показаны в Таблице 27.
Таблица 27. 5 наиболее часто встречающихся инделов для каждой целевой последовательности после воздействия RNP, включающего указанную молекулу gРНК. Каждая gРНК тестировалась как dgРНК. Заглавные буквы являются естественными нуклеотидами внутри или вблизи последовательности-мишени. Делеции относительно немодифицированной целевой последовательности показаны как «-»; инсерции обозначены строчными буквами.
Эти результаты подтверждают вывод из более ранних экспериментов, описанных здесь, что небольшие инделы (например, в данном случае, инделы от 1-20 нуклеотидов) в области HPFH, на которую нацелены указанные молекулы gРНК, могут оказать значительное влияние на экспрессию и продукцию HbF. Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных по геному клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия путём уменьшения выработки серповидно-клеточных эритроцитов.
Пример 4.3.
Методы: Методы являются такими, как в Примере 4, со следующими исключениями.
Культура клеток CD34+ человека. Человеческие клетки CD34+ были культивированы 3 дня до доставки RNP в среду расширения.
Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 6,4×106/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). Электропорации выполняли в двух экземплярах. Tracr был SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат с модификациями, включающими 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатные связи (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2341), где N представляют собой нуклеотиды целевого домена.
Эритропоэз in vitro и анализ FACS для HbF, содержащих эритроидные клетки. После электропорации клетки сразу же переносили в 250 мкл предварительно нагретой среды EDM и добавок. В течение дней 0-7 культурирования клеток, в EDM дополнительно добавляли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779 -598). В течение 7-11 дней культуры в EDM добавляли только 100 нг/мл человеческого SCF. В течение 11-21 дней культуры в EDM не вносили никаких дополнительных добавок. Клеточные культуры инициировали при 2,6 ×104 клеток на мл в день 0, доводили до 4,0×104 клеток на мл на 7-й день и выравнивали до 1,0x106 клеток на мл в день 11. На 14 и 19 день среда пополнялась. Жизнеспособные клетки подсчитывали через 1, 4, 7, 11, 14 и 21 сутки после доставки RNP. Все подсчёты жизнеспособные клетки проводили с помощью проточной цитометрии с использованием счетчиков AccuCheck Counting Beads (ThermoFisher cat. No. PCB100), где нежизнеспособные клетки выявлялись путём окрашивания DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole). На 7, 16 и 21 день культуры клетки ((1 x 105) анализировали внутриклеточным окрашиванием для обнаружения экспрессии HbF. На 16 и 21 день внутриклеточное окрашивание для обнаружения экспрессии HbF не включало анти-CD71 и анти-CD235a антител, и определялся % положительных клеток HbF (F клеток) во всей жизнеспособной популяции клеток. На 21 день для окрашивания жизнеспособных клеток для жизнедеятельности использовался краситель LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain (ThermoFisher L34975).
Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных клеток HSPC через 7 дней после электропорации с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050)).
Результаты:
Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH уменьшает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный белок HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F клетками»). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.
Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что Cas9 комплексы рибонуклеопротеинов (RNP), когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.
Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 20. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.
Таблица 20. Относительная пролиферация жизнеспособных клеток в текущем исследовании. Показаны индивидуальные реплики электропорации. Все молекулы gРНК тестировались в формате dgРНК с использованием tracr SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат со следующими модификациями: 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатные связи (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2342), где N представляют собой нуклеотиды целевого домена. (n.d.- не определено)
Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали на пролиферацию в соответствии с трёхстадийным протоколом дифференцировки эритроидов в клеточной культуре. Процент восстановления клеток через 1 день после электропорации варьировался от 58% до 96% и был одинаковым в разных условиях, включая нередактированный, подвергнутый электропорации контроль (Таблица 20). Пролиферация подавлялась в клетках, отредактированных с помощью dgРНК, включая целевой домен g8, нацеленный на экзон 2 гена BCL11A (10-12% от нередактированного контроля на 21-й день, таблица 20), но пролиферация клеток, отредактированных с помощью dgРНК нацеленных на область HPFH, была сопоставима с контролем (47-99% нередактированного контроля на 21-й день, Таблица 20).
Таблица 21. Индукция HbF в текущем исследовании. Показаны индивидуальные реплики электропорации. Все молекулы gРНК тестировали в формате dgРНК. Все молекулы gРНК были испытаны в формате dgРНК с использованием tracr SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат со следующими модификациями: 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатные связи (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2343), где N представляет собой нуклеотиды целевого домена. (n.d.-не определено)
Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии для обнаружения экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали и подвергали гэйтингу путем исключения с помощью Live/Dead Fixable Dead Cell Stain. Редактирование генома не оказало отрицательного влияния на эритроидную дифференцировку, поскольку культивируемые клетки показали процентное содержание CD71+ клеток, соответствующих эритробластам, сходное с таковым из неотредактированных клеток на 7-ой день дифференцировки. Культуры, обработанные dgРНК с целевым доменом, нацеленным на область HPFH, показывали увеличенный процент эритроидных клеток, содержащих HbF, по сравнению с ложными электропорированными клетками в течение 21-дневного периода культивирования (Таблица 21). Параллельно наблюдалась также индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, содержащей нацеливающий домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A. Геномные продукты ПЦР области HPFH также подвергались секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Редактирование генома в локусе HFPH наблюдалось в культурах клеток, электропорированных с RNP, содержащих Cas9, crРНК данного целевого домена и Tracr (Таблица 21), но не в контрольных клетках без доставки целевого домена (RNP, содержащие только Cas9 и Tracr). Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из геном-отредактированных клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия при уменьшении выработки серповидно-клеточных эритроцитов.
Пример 4.4.
Методы: Методы являются такими, как в Примере 4, со следующими исключениями. CD34+ культура клеток человека. В зависимости от исследования CD34+ клетки человека культивировались в течение 3-6 дней до осуществления доставки RNP в среде культивирования.
Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC.
Для некоторых исследований комплексы RNP были доставлены при использовании 4D-Nucleofector (Lonza). В этих исследованиях HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) при плотности клеток от 2,2x106/мл до 6,4x106/мл в зависимости от исследования. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). Электропорации выполняли в двух репликах. Формат dgРНК варьировался между исследованиями и указан в Таблице 22 с помощью следующих обозначений. Форма А представляет собой формат dgРНК, описанный выше в Примере 1, с указанием последовательности целевого домена. Форма B представляет собой формат dgРНК с использованием crРНК rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArUrGrCrU (SEQ ID NO: 2344), где r указывает основание РНК, а N соответствует указанной последовательности целевого домена, и tracr, состоящий из SEQ ID NO: 7808. Форма C представляет собой формат dgРНК с использованием crРНК с последовательностью mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2345), где r обозначает основание РНК, N соответствует указанной последовательности доменов целевого домена, а tracr состоит из SEQ ID NO: 7808.
Эритропоэз in vitro и анализ FACS для HbF, содержащих эритроидные клетки. В одном исследовании клеточные культуры инициировали при 2,6x104 клеток на мл в день 0. Для тех культур, которые инициировали посевом непосредственно в 250 мкл (как описано в примере 4), культуру клеток разбавляли в свежей средой через 1-3 дня, в зависимости от исследования.
Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных HSPC в течение 24 часов до 7 дней после электропорации, в зависимости от исследования, используя Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050).
Результаты:
Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH уменьшает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный белок HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F клетками»). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.
Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.
Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 22. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов RNP, поставляемых электропорацией.
Таблица 22. Обобщённые данные для нескольких исследований, в которых оцениваются указанные gРНК, нацеленные на область HPFH и контроли. Все молекулы gРНК тестировали в форматах dgРНК. Детали форматов dgРНК в указанных исследованиях указаны, как описано выше. Обратите внимание, что тестирования 4 и 5 выполнялись параллельно и, таким образом, имеют те же самые контрольные условия.
Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии по уровню экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Нацеливание на область HPFH приводило к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF, по сравнению с ложными (Mock) электропорированными клетками, результат, подтверждённый при разных способах оценки и форматах dgРНК (Таблица 22). В некоторых случаях увеличение количества HbF + клеток ассоциировалось с конкретной структурой dgРНК, например Формой C для CR001028 (Таблица 22). Параллельно наблюдалась также индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей нацеливающий домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A. Геномные продукты ПЦР области HPFH также подвергались секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Редактирование генома в локусе HFPH наблюдалось в культурах клеток, подвергнутых электропорации комплексами RNP, содержащими Cas9, crРНК с данного целевым доменом и Tracr (Таблица 22), но не в контрольных клетках, подвергнутых электропорации без доставки целевого домена (RNP, содержащие только Cas9 и Tracr).
В заключение, методом NGS определялся профиль инделов для каждой gРНК а также частота каждого отдельного индела. Наиболее часто встречающиеся инделы для каждой целевой последовательности показаны в Таблице 26.
Таблица 26. 5 наиболее часто представленных инделов для каждой целевой последовательности после воздействия RNP, включающего указанную молекулу gРНК. Каждая gРНК была протестирована в формате dgРНК в двух отдельных экспериментах, и результаты показаны отдельно для каждого эксперимента. Заглавные буквы являются естественными нуклеотидами внутри или вблизи целевой последовательности-мишени. Делеции относительно немодифицированной целевой последовательности показаны как «-»; инсерции показаны строчными буквами.
Хотя в некоторых случаях относительное преобладание наиболее частых инделов варьировалось от эксперимента к эксперименту, наиболее представленные инделы были в основном одинаковыми в обоих экспериментах для любой выбранной gРНК. Это указывает на то, что для этих dgРНКs профиль инделов, формирующийся в клетках HSC, остается постоянным. Кроме того, данные результаты подтверждают неожиданный вывод из предыдущих экспериментов о том, что небольншие инделы (например, в данном случае, инделы длиной 1-20 нуклеотидов) в областях HPFH, на которую нацелены на эти gРНК, могут привести к значительному повышению фетального гемоглобина. Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных по геному клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия при уменьшении выработки серповидноклеточных эритроцитов.
Пример 4.5.
Методы: Методы являются такими, как в Примере 4.1, со следующими исключениями.
Культура клеток CD34+ человека. Человеческие CD34+ клетки были получены из костного мозга (Hemacare Corporation, Cat. No. BM34C-3). CD34+ клетки оттаивали и разгоняли в среде культивирования клеток в течение 1 дня до доставки RNP. После доставки RNP клетки сразу же переносили обратно в 200 мкл среды для культивирования клеток и оставляли на ночь. На следующий день делали подсчёт клеток культуры и приводили к 2,0x105 жизнеспособных клеток на мл. Процент восстановления рассчитывали как количество жизнеспособных клеток через 1 день после доставки RNP от общего количества жизнеспособных клеток, подвергнутых электропорации. Через 7 дней в среде культивирования (через 8 дней после доставки RNP) снова определяли количество жизнеспособных клеток. Кратность пролиферации определялась как количество как количество жизнеспособных клеток через 7 дней в среде культивирования, разделенное на 2,0x105 клеток на мл. Все подсчеты жизнеспособных клеток измеряли с помощью проточной цитометрии с использованием счетчиков AccuCheck Counting Beads (ThermoFisher cat. No. PCB100), где нежизнеспособные клетки были отсеяны с помощью окрашивания по DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол). После дополнительного 1 дня в среде культивирования (через 9 дней после доставки RNP) культуры клеток были фенотипированы проточной цитометрией, как описано в разделе «Фенотипирование клеток».
Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 5.4x106/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). Электропорации выполняли в двух экземплярах. crРНК имела последовательность mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2466), где r представляет собой основание РНК, m-основание с модификацией 2’О-метил, а * обозначает фосфоротиоатную связь. В качестве последовательност tracr была использована SEQ ID NO: 7808.
Метод выявления колониеобразующих единиц. На следующий день после доставки RNP жизнеспособные клетки подсчитывали, как описано в разделе «Культура клеток CD34+ человека». Для анализа гранулоцитов/макрофагов-предшественников колониеобразующей единицы (КОЕ) 227 клеток на 1 мл метилцеллюлозной среды Metocult H4035 (StemCell Technologies) высевали на чашку в двух экземплярах. В Methocult был добавлен 1x антибиотик/антимикотик (Gibco, Cat.#10378-016). Чашки с культурами инкубировали во влажном инкубаторе при 37° С. Колонии, содержащие по меньшей мере 50 клеток, подсчитывали на 15-й день после высева. Количество колоний на мл Methocult было разделено на 227 и умножено на 1000 для получения частоты КОЕ на 1000 клеток.
Фенотипирование клеток. Клетки анализировали на экспрессию маркеров поверхности после окрашивания с помощью следующих панелей антител. Панель 1: антитела специфичные CD38 (FITC-коньюгат, BD Biosciences #340926, клон HB7), CD133 epitope 1 (PE-коньюгат, Miltenyi #130-080-801, клон AC133), CD34 (PerCP-коньюгат, BD Biosciences #340666, клон 8G12), CD90 (APC-коньюгат, BD Biosciences #598695, клон E10), CD45RA (Pe-Cy7-коньюгат, eBioscience #25-0458-42, клон HI100). Панель 2: CD34 (PerCP-коньюгат, BD Biosciences #340666, клон 8G12), CD33 (PE-Cy7-коньюгат, BD Biosciences #333946, клон P67.6), CD14 (APC-H7-коньюгат, BD Biosciences #560270, клон MφP9), CD15 (PE-коньюгат, Biolegend #301905, клон HI98). Панель 3: CD34 (PerCP-коньюгат, BD Biosciences #340666, клон 8G12), CD41a (APC-H7-коньюгат, BD Biosciences #561422, клон HIP8), CD71 (FITC-коньюгат, BD Biosciences #555536, клон M-A712), CD19 (PE-коньюгат, BD Biosciences #340720, клон SJ25C1), CD56 (APC-коньюгат, Biolegend #318310, клон HCD56). Соответствующие панели с контрольными изотипами были параллельно использованы для окрашивания культур, за исключением того, что анти-CD45RA был включен вместо его изотипного контроля. Нежизнеспособные клетки отсеивались с помощью окрашивания DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол). Окрашенные образцы анализировали на проточном цитометре LSRFortessa (BD Biosciences) на экспрессию белков клеточной поверхности. Результаты были проанализированы с использованием Flowjo, и данные были представлены как % DAPI-отрицательной жизнеспособной клеточной популяции.
Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных клеток HSPC на 1 и 8 день после электропорации с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050)).
Результаты:
Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH или облпсти эритроидного энхансера BCL11A уменьшает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продукцию эритроцитов, содержащих повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F клетками»). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.
Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.
Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 23. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.
Таблица 23. Относительное восстановление жизнеспособных клеток, пролиферация в CD34+ среде культивирования и частота образования колоний прогениторных клеток гранулоцитов/макрофагов (КОЕ) для отредактированных и нередактированных культур клеток в текущем исследовании. Процент восстановления, кратность пролиферации и частоту КОЕ рассчитывали, как описано в Материалах и Методах. Показаны индивидуальные реплики электропорации. Все молекулы gРНК тестировали в формате dgРНК. Последовательность Tracr была представлена SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат с модификациями 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатными связями (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2467), где N являются остатками указанного целевого домена.
Процент восстановления клеток через 1 сутки после электропорации варьировалось от 72,5% до 89,8% и был одинаковым в разных условиях, включая нередактированный, но подвергнутый электропорации контроль (Таблица 23). Геном-отредактированные и нередактированные HSPC, анализировали на пролиферацию в среде культивирования CD34+ клеток. Пролиферация варьировала от 4,8 до 17,3 раз в течение 7 дней для отредактированных культур клеток и от 19,3 до 20,5 раз для нередактированных клеток (Таблица 22). Редактирование с помощью dgРНК в этом исследовании, нацеленных на районы эритроидного энхансера HPFH или BCL11A, не изменяло композицию типов клеток в культуре по сравнению с нередактированным контролем, как определено экспрессией поверхностного маркера, указывающей на то, что нацеливание на эти сайты не изменяет судьбу HSPC в этих условиях (Фиг. 26A-B). Напротив, редактирование с помощью dgРНК с доменом g8, нацеленным на экзон BCL11A привело к умеренному снижению пролиферации, но к значительному изменению композиции типов клеток, в частности уменьшению процента всех подтипов CD34+ HSPC, а также популяции эритроидов CD71 + и увеличение процента CD14+ моноцитов и CD15+ гранулоцитов (Таблица 23 и Фиг. 26A-B). Частота колониеобразующих единиц прогениторных клеток гранулоцитов/макрофагов (КОЕ) была сходной во всех отредактированных культурах, причем при наличии только небольшого снижения КОЕ в отредактированных культурах (от 95 до 145 КОЕ на 1000 клеток) по сравнению с необработанными культурами (от 154 до 185 КОЕ на 1000 клеток), позволяет предполагать, что прогениторная функция гранулоцитов/макрофагов не изменяется значительно при редактировании генома по этим двум сайтам (Таблица 23).
Пример 4.6.
Методы: Методы являются такими, как в Примере 4, со следующими исключениями.
Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. В некоторых случаях crРНК, содержащие два разных целевых домена, были доставлены в одну и ту же культуру клеток. В этих случаях общий RNP, доставляемый в клетки, содержал 6 мкг Cas9, 3 мкг crРНК и 3 мкг tracr, как в подпункте 4.1; однако две crРНК, содержащие по 1,5 мкг, независимо друг от друга представляли собой комплексные смеси tracr/CAS9, содержащие 1,5 мкг tracr и 3 мкг Cas9, их объединяли только при добавлении в клетки. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 2,5×106/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-нуклеоформере (Lonza). Электропорации выполняли в двух репликах. Для dgРНК использовался tracr, имеющий SEQ ID NO: 7808, и crРНК с последовательностью mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2468), где r обозначает основание РНК, m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * указывает на фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки указанного целевого домена.
Эритропоэз in vitro и FACS анализ эритроидных клеток, содержащих HbF. Культуру клеток разбавляли свежей средой через 3 дня.
Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК выделяли из отредактированных по геному и нередактированных HSPC на 3 день после электропорации, с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat # QE09050).
Результаты:
Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH и области эритроидного энхансера BCL11A снижает репрессию экспрессии γ-глобина, позволяя продукцию эритроцитов, содержащих повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, например, экспрессирующие повышенные уровни фетального гемоглобина, иногда упоминаются здесь как «F клетки. Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD была также объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.
Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая проявление побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, присущие системе. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.
Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, использованных в исследовании представлен в Таблице 24. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки находились на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.
Таблица 24. Индукция HbF путем одновременного нацеливания на область эритроидного энхансера BCL11A и область HPFH. Все молекулы gРНК тестировали в формате dgРНК в двух экземплярах. Используемый tracr имеет последовательность SEQ ID NO: 7808, а crРНК имеет следующий формат, где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * указывает на фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки указанного целевого домена: mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2469).
Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии для обнаружения экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали и подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Нацеливание на область HPFH и область эритроидного энхансера BCL11A приводило к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF, по сравнению с ложными электропорированными клетками, результат, подтверждённый при разных способах оценки и форматах dgРНК (Таблица 24. Параллельно наблюдалась также индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей нацеливающий домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A. При одновременном нацеливании на область HPFH и область эритроидного энхансера гена BCL11A в одной и той же популяции клеток, процент клеток, содержащих HbF, превышал процент, соответствующий независимому нацеливанию на каждую область (Таблица 24). Таким образом, увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных клеток, может быть достигнуто путем нацеливания либо на область HPFH, либо на эритроидный энхансер BCL11A, а также в большей степени путем одновременного нацеливания на оба района.
Геномные продукты ПЦР обоих областей подвергались секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Редактирование генома наблюдалось в культурах клеток, подвергнутых электропорации комплексами RNP, содержащими Cas9, crРНК с определённым целевым доменом и Tracr (Таблица 24), но не в контрольных клетках, подвергнутых электропорации без доставки целевого домена (RNP, содержащие только Cas9 и Tracr). При доставке RNP нацеленных на оба домена в ту же самую клеточную популяцию, редактирование наблюдалось по обоим сайтам (Таблица 24). В некоторых примерах процент клеток, редактированных по конкретном сайте был незначительно уменьшен, при доставке двух (типов) RNP вместо одного, возможно, из-за более низкой концентрации RNP, нацеленного на данный сайт в первом случае. Более высокие процентные значения редактирования и потенциально более высокий процент HbF содержащих клеток могут быть достигнуты путем увеличения каждой отдельной концентрации RNP, когда два RNP доставляются одновременно. Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных геном клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия при уменьшении выработки серповидноклеточных эритроцитов.
Пример 4.7.
Методы: Методы являются такими как в Примере 4, со следующими исключениями.
Культура клеток CD34+ человека. Человеческие CD34+ клетки были получены из костного мозга (Lonza, Cat. No. 2M-101D). Клетки CD34+ оттаивали и разгоняли до стадии экспоненциального роста в течение 2 дней в среде культивирования до доставки RNP.
Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. Для образования RNP с использованием однонаправленных РНК (sgРНКs) 6 мкг sgРНК добавляли к 6 мкг белка CAS9 (от 0,8 до 1 мкл) и 0,5 мкл 5×CCE-буфера (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприготовленный 1 мМ DTT) в общем объеме 5 мкл и инкубировали в течение 5 мин при 37оC. HSPC собирали центрифугированием, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 6,4×106/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на нуклеофекторе 4D-Nucleofector (Lonza). Электропорации выполняли в двух репликах. Для dgРНК, dgРНК-PS и dgРНК-OMePS tracr был SEQ ID NO: 6660, за исключением g8, который использовался с tracr SEQ ID NO: 7808. Форматы для всех gРНК, используемых в этом эксперименте, показаны в Таблице 36, за исключением dgРНК g8 OMePS, которая включала crРНК с последовательностью mC*mA*mC*AAACGGAAACAAUGCAAGUUUUAGAGCUAU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2470) и tracr, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7808.
Эритропоэз in vitro и FACS анализ эритроидных клеток, содержащих HbF. После доставки RNP клетки поддерживались в соответствии с Протоколом 1 или Протоколом 2. По протоколу 1, клетки немедленно переносили в предварительно нагретую среду, состоящую из EDM и добавок. В течение дней 0-7 культивирования в EDM дополнительно дополняли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779-598). В течение 7-11 дней культивирования в EDM добавляли только 100 нг/мл человеческого SCF. В течение 11-21 дней культивирования в EDM не добавляли никаких дополнительных добавок. Клеточные культуры доводили до 4,0×104 клеток на мл в день 7. В дни 11, 14 и 19 среду пополняли. По протоколу 2, клетки немедленно переносили обратно в 200 мкл среды для культивирования и оставляли расти еще 2 дня. Культуры подсчитывались через 2 дня после доставки RNP. Затем клетки осаждали и ресуспендировали в предварительно нагретой среде, состоящей из EDM и добавок. В течение дней 0-7 культивирования в EDM дополнительно дополняли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779-598). В течение 7-11 дней культивирования в EDM дополняли 100 нг/мл человеческого SCF. В течение 11-21 культивирования в EDM не добавляли никаких дополнительных добавок. Клеточные культуры инициировали при 4,0×104 клеток на мл в день 0, разводили в 4 раза свежей средой на 4-й день и доводили до 2,0×105 клеток на мл в день 7. В дни 11, 14 и 19 среду пополняли. Жизнеспособные клетки подсчитывали на 7, 18 и 21 день в среде культивирования EDM. Все подсчеты жизнеспособных клеток проводили с помощью проточной цитометрии с использованием счетчиков AccuCheck Counting Beads (ThermoFisher cat. No. PCB100) с вычетом нежизнеспособных клеток, подвергнутых окрашиванию DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол). По обоим протоколам, на 7, 14 и 21 день культивирования дифференцирующихся эритроидов, клетки анализировали внутриклеточным окрашиванием для обнаружения экспрессии HbF. В дни 14 и 21 внутриклеточное окрашивание для обнаружения экспрессии HbF не включало анти-CD71 и анти-CD235a антитела, и определялся % HbF-положительных клеток (F клеток) во всей жизнеспособной популяции клеток. LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain (ThermoFisher L34975) использовался в качестве красителя для определения жизнеспособности клеток.
Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных по геному и нередактированных HSPC на 2 и 6 день после электропорации, культивированных по протоколу 2, с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat# QE09050).
Результаты.
Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH снижает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продукцию эритроцитов, содержащих повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, например, экспрессирующие повышенные уровни фетального гемоглобина, иногда упоминаются здесь как «F клетки. Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD была также объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.
Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая проявление побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, присущие системе. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.
Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими одиночными (sgРНК) или двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Форматы gРНК, использованные в исследовании представлены в Таблице 36. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки находились на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.
Геномные продукты ПЦР области HPFH подвергали секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Редактирование генома в области HFPH наблюдалось в культурах клеток, электропорированных с RNP, содержащих Cas9, crРНК с определённым целевым доменом и tracr (Фиг. 43), но не в контрольных клетках без доставки домена (электропорированных с RNP, содержащих только Cas9 и Tracr). В некоторых случаях редактирование на данном целевом сайте было больше при использовании модифицированных sgРНКs по сравнению с другими форматами gРНК (Фиг. 43). Наконец, профиль инделов также как и частота каждого индела были определены с помощью NGS для каждой gРНК. Профиль инделов для нескольких повторов-реплик с использованием той же самой gРНК/Cas9 сохранялся постоянным. Репрезентативные, наиболее часто встречающиеся инделы для каждого целевом сайта-мишени показаны в Таблице 37.
Таблица 36. gРНК-последовательности, используемые в экспериментах, описанных в этом примере. N обозначает остатки указанных целевых доменов; mN обозначает 2'-OMe-модифицированную нуклеиновую кислоту; * указывает на модификацию фосфоротиоата.
и
AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660)
и
AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660)
и
AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660)
Таблица 37. Наиболее часто встречающиеся инделы, определённые для каждой gРНК (целевой домен и формат) методом секвенирования NGS на 6-ой день после введения RNP. Последовательности gРНК представлены в Таблице 36. Заглавные буквы представляют собой исходные (природные) нуклеотиды в последовательности-мишени и вблизи нее. Делеции относительно немодифицированной целевой последовательности показаны как «-»; инсерции показаны строчными буквами.
Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали на пролиферацию и усиление экспрессии HbF в трехстадийном протоколе эритроидного дифференцирования клеточной культуры. Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии для обнаружения экспрессии фетального глобина и, на 7-ой день, двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали и подвергали гэйтингу путем исключения Live/Dead Fixable Dead Cell Stain. Редактирование генома с включением gРНК, нацеленнных на область HPFH и область эритроидного энхансером BCL11A, не оказало отрицательного влияния на дифференцировку эритроидов, поскольку культивируемые клетки показали процентное содержание CD71+ клеток, соответствующих эритробластам, сходными с нередактированными клетками на 7-й день дифференцировки, хотя Протокол 1 и Протокол 2 отличались по процентам CD71+ в разных условиях. (Фиг. 44). Культуры, обработанные с включением gРНК, нацеленнным на область HPFH и область эритроидного энхансером BCL11A нацеливающимся на gРНК, приводили к аналогичным закономерностям относительных изменений процентного содержания эритроидных клеток, содержащих HbF, по сравнению с ложными электропорированными клетками на протяжение 21-дневного периода культивирования и между двумя протоколами (Фиг. 45, Фиг. 46 и Фиг. 47). HbF индуцировался в клетках, подвергнутых воздействию RNP и поддерживаемых как в Протоколе 1, так и в Протоколе 2, однако процент клеток, которые были HbF-положительными, как правило, был ниже в при всех условиях и временных интервалах Протокола 2 (Фиг. 45, Фиг. 46 и Фиг. 47). Индукция HbF наиболее заметна при использовании gРНК, состоящих из целевых доменов CR001030, CR00312 и CR001128, особенно на более поздних временных точках (Фиг. 45, Фиг. 46 и Фиг. 47). По сравнению со всеми целевыми доменами sgРНКs имели тенденцию к более высокой индукции HbF, чем dgРНКs, в частности, модифицированные OMePS sgРНКs (Фиг. 45, Фиг. 46 и Фиг. 47). Относительно низкая индукция HbF целевым доменом CR001137 может быть объяснена более низким уровнем редактирования на этом целевом сайте (Фиг.43, Фиг.45-Фиг.47). Параллельно наблюдалась также индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей целевой домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A (Фиг. 45-Фиг. 47). Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных по геному клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия при уменьшии выработки серповидно-клеточных эритроцитов. Отредактированные клетки были способны к пролиферации в условиях дифференцировки эритроидов (от 9 до 53 кратной на 7-й день и от 36 до 143 кратной на день 21, Фиг. 48), однако в некоторых случаях пролиферация была подавлена относительно нередактированных контрольных клеток (14- 83% от нередактированного контроля на 7-й день и 18-95% от неотредактированного контроля на 21-й день) (Фиг. 48). Наименьшая пролиферация наблюдалась с клетками, отредактированными с помощью dgРНК, включая нацеливающий домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A (30% от нередактированного контроля на 7-й день и 18% от нередактированного контроля на 21-й день) и со многими модифицированными OMePS sgРНКs (Фиг. 48).
Пример 5. Делеция при использовании двух gРНК нацеленных на область HPFH.
Первичные человеческие клетки CD34+HSPC были электропорированы с RNP, содержащим два разных молекулы gРНК, нацеленные на разные сайты в области HPFH. Для каждого RNP использовали молекулы dgРНК, как описано выше. Вкратце, RNP, содержащий dgРНК, нацеленную на первый сайт в области HPFH Френча и RNP, содержащий dgРНК, нацеленную на второй сайт в области HPFH Френча, объединяли и электропорировали в CD34+HSPCs в следующих соотношениях: 0,5X первая dgРНК RNP + 0,5X второй dgРНК RNP; 1,0X g2 dgРНК («g2»=положительный контроль, содержащий целевой домен CR000088, нацеленный на кодирующую последовательность гена BCL11a); без RNP («контроль»). Клетки культивировали, как описано выше, и дифференцировали в эритроциты с использованием протокола, описанного выше (см. Фиг. 17). Оценивалась экспрессия фетального гемоглобина. Результаты показаны на Фиг. 27 и Фиг.25. Не ограничиваясь теорией, считается, что одновременное введение RNP, содержащих молекулы gРНК нацеленные на две последовательности-мишени, приведет к делеции (т.е. удалению) ДНК между двумя разрывами по сайтам (например, всю или большую часть ДНК между двумя участками с внесёнными разрывами), включая любые регуляторные или кодирующие последовательности, содержащиеся в этом регионе. Эти результаты показывают, что RNP, нацеленные на два отдельных региона в области HPFH, могут быть доставлены одновременно в клетки CD34+ HSPC путем электропорации и индуцировать экспрессию фетального гемоглобина в отредактированных клетках, дифференцированных в эритроциты.
Таблица 25.
Пример 6. Оценка возможного неспецифического редактирования для gРНКs, нацеленных на энхансер BCL11a
Метод анализа на основе инсерций олигонуклеотидов (см., например, Tsai et al. Nature Biotechnology, 33, 187-197, 2015) был использован для определения потенциальных неспецифических геномных сайтов, расщепляемых Cas9, нацеленной на энхансер BCL11a. В общей сложности 28 нацеливающих РНК (двойных нацеливающих РНК, содержащих указанный целевой домен), предназначенные для энхансера BCL11a и 10 gРНК, нацеленных на область HPFH, были скринированы в экспрессирующих Cas9 клетках HEK293, описанных выше, и результаты представлены на графиках Фиг. 33 (энхансер BCL11a) и Фиг. 49 (HPFH). Относительно gРНК, нацеленной на энхансер BCL11a, анализ идентифицировал потенциальные сайты с неспецифическими мишенями для некоторых нацеливающих молекул, однако многократное секвенирование целевых сайтов использовалось для того, чтобы понять, являются ли эти потенциальные сайты bona fide неспецифическими сайтами, расщепляемыми Cas9. Используя праймеры, фланкирующие потенциальные неспецифичные сайты, выделенную геномную ДНК амплифицировали и ампликоны секвенировали. Если потенциальный неспецифичный участок был расщеплен Cas9, на сайте должны быть обнаружены инделы. В этих последующих исследованиях потенциальных неспецифичных сайтов не было обнаружено инделов на потенциальных неспецифичных сайтов по меньшей мере для трех из нацеливающих gРНК: CR000311, CR000312, CR001128. Что касается gРНКs, нацеленных на энхансер BCL11a, анализ не выявил потенциальных неспецифичных сайтов по меньшей мере для gРНКs CR001137, CR001212 и CR001221. Многократное секвенирование последовательности ещё будет выполнено для определения того, являются ли потенциальные неспецифичные сайты, идентифицированные для других молекул gРНК, bona-fide неспецифичными сайтами, расщепляемыми Cas9.
Пример 7: Тестирование и оценка вариантов Cas9
Тестирование в CD34+ гематопоэтических стволовых клетках
Мы оценивали 14 очищенных Cas9 белков Streptococcus pyogenes (SPyCas9), измеряя их эффективность для нокаута гена бета-2-микроглобулина (B2M) в первичных гемопоэтических стволовых клетках человека (HSCs). Эти белки были разделены на 3 группы: первая группа состояла из вариантов SPyCas9 с улучшенной селективностью (Slaymaker et al., 2015, Science 351: 84 (e1.0, e1.1 и K855A), Kleinstiver et al., 2016, Nature 529: 490 (HF)). Вторая группа состояла из дикого типа SPyCas9 с различным количеством копий и/или положениями сигнала ядерной локализации SV40 (NLS) и тега-хвоста из 6 или 8 гистидинов ((His6) или (His8) (SEQ ID NOS 2969 и 2970, соответственно)) с расщепляемым сайтом TEV или без него, и белка SPyCas9 с двумя цистеиновыми заменами (C80L, C574E), которые, как сообщается, стабилизируют Cas9 для структурных исследований (Nishimasu et al., 2014, Cell 156: 935). Третья группа состояла из одного и того же рекомбинантного SPyCas9, полученного различными способами (Фиг. 60). Нокаут B2M определялся FACS а также методом секвенирования следующего поколения (NGS).
Методы
Материалы
1. Аппарат для электропорации Neon (Invitrogen, MPK5000)
2. Набор для электропорации Neon (Invitrogen, MPK1025)
3. crРНК (последовательность целевого домена: GGCCACGGAGCGAGACAUCU (SEQ ID NO: 2811), комплементарная последовательности в гене B2M, слитая с SEQ ID NO: 6607)
4. tracrРНК (SEQ ID NO: 6660)
5. Буфер для хранения Cas9: 20 мМ Трис-Cl, pH 8,0, 200 мМ KCl, 10 мМ MgCl2
6. CD34+HSC изолированные из костного мозга (Lonza, 2M-101C)
7. Среда для культивирования клеток (Stemcell Technologies, StemSpam SFEM II with StemSpam CC-100)
8. FACS буфер для промывки: 2% FCS в PBS
9. FACS блокирующий буфер: на мл PBS, добавляют 0,5 мкг мышиного IgG, 150 мкг Fc- блока, 20 мкл FCS
10. Суспензия 10% Chelex 100 (BioRad, Cat# 142-1253) in H2O
11. Анти-B2M-антитело: Biolegend, Cat#316304
Технологический Процесс:
Разморозить и подрастить клетки в соответствии с рекомендациями Lonza, добавляя среду каждые 2-3 дня. На 5-й день клетки осаждить при 200g в течение 15 мин, один раз промыть PBS, ресуспендировать клетки с T-буфером из набора NEON до 2x104/мкл, поставить на на лед. Разбавить белок Cas9 буфером для хранения Cas9 до 5 мг/мл. Довести crРНК и tracrРНК до 100 мкМ с H2O.
Рибонуклеопротеиновый комплекс (RNP) получают при смешивании 0,8 мкл каждого белка CAS9, crРНК и tracrРНК с 0,6 мкл буфера для хранения Cas9, инкубируют при комнатной температуре в течение 10 мин. Далее-смешать 7 мкл HSC с комплексом RNP в течение двух минут и перенести все 10 мкл в капилляр-камеру пипетки Neon, провести электропорацию при 1700v, 20 мс и 1 импульсе. После электропорации немедленно перенести клетки в лунки 24-луночного планшета, содержащего 1 мл среды, предварительно отмеренной при 37oC, 5% CO2. Собрать клетки через 72 часа после электропорации для проведения анализа FACS и NGS.
FACS: перенести 250 мкл клеток из каждой лунки 24-луночного планшета, в лунки 96-луночного планшета с U- округлым дном и осадить клетки. Промыть один раз с помощью 2% FCS (эмбриональная бычья сыворотка) в PBS. Добавить 50 мкл блокирующего буфера FACS к клеткам и инкубироывать на льду в течение 10 минут, добавить 1 мкл FITC-меченого B2M-антитела и инкубировать в течение 30 минут. Промыть клетки FACS буфером для промывки (150 мкл) один раз, а затем еще один раз с 200 мкл FACS буфера для промывки. Клетки ресуспендировать в 200 мкл FACS-буфера для FACS анализа.
Подготовка образцов NGS: перенести 250 мкл клеточной суспензии из каждой лунки 24-луночного планшета в 1,5-миллилитровую пробирку Эппендорфа, добавить 1 мл PBS и осадить клетки. Добавить 100 мкл суспензии Chelex, инкубировать при 99oC в течение 8 минут и перемешать на вортексе 10 секунд, после чего инкубировать при 99oC в течение 8 минут, перемешать на вортексе 10 секунд. Осадить гранулы суспензии центрифугированием при 10000×g в течение 3 минут и использовать супернатант-лизат для ПЦР. Взять 4 мкл лизата и провести реакцию ПЦР с праймерами b2m (b2mg67F: CAGACAGCAAACTCACCCAGT (SEQ ID NO: 2812), b2mg67R: CTGACGCTTATCGACGCCCT (SEQ ID NO: 2813)) с использованием набора Titanium (Clonetech, cat# 639208), следуя инструкциям производителя. ПЦР проводится при следующих условиях: 5 минут при 98oC в течение 1 цикла; 15 секунд при 95oC, 15 секунд при 62oC и 1 минуту при 72oC в течение 30 циклов; и, наконец, 3 минуты при 72oC в течение 1 цикла. Продукты ПЦР используются для NGS.
Статистический анализ: процент клеток B2M KO, определённый путём FACS и процентное отношение инделов, определённое путём NGS, были использованы для оценки эффективности расщепления CAS 9. Эксперимент был разработан с использованием Cas9 как предиктора фиксированного эффекта. Результаты каждого эксперимента вложены в рамках «донора», в качестве вложенных случайных эффектов. Таким образом, для анализа данных FACS и NGS была применена смешанная линейная модель.
Результаты
Для нормализации экспериментальных и донорных вариаций, мы сопоставляли относительную активность каждого белка с белком iProt105026, спроектированным изначально с двумя SVL NLS, фланкирующими SPyCas9 дикого типа и хвостом-тегом His6 (SEQ ID NO: 2969) на С’-конце белка (Фиг. 34). Статистический анализ показывает, что по сравнению со стандартным белком Cas9 iProt105026, белки iProt106331, iProt106518, iProt106520 и iProt106521 существенно не отличаются по эффективности нокаута B2M в HSC, тогда как другие тестируемые варианты (PID426303, iProt106519, iProt106522, iProt106545, iProt106658, iProt106745, iProt106746, iProt106747, iProt106884) существенно отличаются от стандартного iProt105026 по эффективности нокаута B2M в HSC. Мы обнаружили, что перемещение хвоста His6 (SEQ ID NO: 2969) с C'-конца на N’-конец (iProt106520) не влияло на активность белка (Фиг. 34). Одной из NLS было достаточно для поддержания активности только тогда, когда она была помещена на С’-конец белка (iProt106521 по сравнению с iProt106522, Фиг.34). Белки, очищенные в соответствии с Процессом 1, имели более высокую эффективность нокаута, чем белки, очищенные в соответствии с Процессами 2 и 3 (iProt106331 по сравнению с iProt106545 & PID426303, Фиг.34). В общем, варианты SPyCas9 с улучшенной селективностью не были такими активными, как SPYCas9 дикого типа (iProt106745, iProt106746 и iProt106747, Фиг. 34). Интересно, что iProt106884 не расщеплял целевой сайт-мишень. Это согласуется с сообщением Kleinstiver и соавторов о том, что такая вариация не расщепляет до 20% легитимных целевых сайтов-мишений в клетках млекопитающих (Kleinstiver et al., 2016, Nature 529: 490). Наконец, вариант Cas9 с двумя цистеиновыми заменами (iProt106518) сохранял высокий уровень ферментативной активности (Фиг. 34).
Далее, эффективность редактирования c помощью RNP, содержащих различные варианты Cas9, тестировали либо с модифицированными, либо с немодифицированными gРНК, нацеленными на область +58 энхансера. Молекулы sgРНК, содержащие целевые домены cr00312 и cr1128, тестировали либо без модификаций (CR00312 = SEQ ID NO: 342; CR001128 = SEQ ID NO: 347), либо модифицированными (OMePS CR00312 = SEQ ID NO: 1762; OMePS CR001128 = SEQ ID NO: 1763), молекулы были предварительно введены в комплекс с вариантами Cas9, показанными в Таблице 35.
Таблица 35. Варианты белка Cas9, тестированные на биологическую функцию с молекулами gРНК, нацеленными на область +58.
RNP, сформированный как описано выше, доставляли в клетки HSPC, как описано выше, и клетки оценивали на % редактирования (путём NGS) и % HbF индукции после дифференцировки эритроидов, как описано в этих примерах. Результаты показаны на Фиг. 42A (% редактирования) и на Фиг. 42B (индукция HbF). Результаты показывают, что варианты компонента Cas9 в тестируемых вариантах не влияют на эффективность редактирования генов как немодифицированных, так и модифицированных версий sgРНК CR00312 и CR001128, а также варианты Cas9 не влияют на способность эритроидных дифференцированных геном-отредактированных клеток продуцировать HbF.
Пример 8: Экспансия геном-отредактированных HSPC Ex Vivo и анализ редактирования в субпопуляциях HSPC.
Экспансия клеток перед редактированием генома
Человеческие клетки CD34+ костного мозга человека были приобретены в AllCells (Cat#ABM017F), или Lonza (Cat#2M-101C) и подрощены до фазы экспоненциального роста в течение 2-3 дней с использованием среды StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat#09650) с добавлением 50 нг/мл тромбопоэтина (Tpo, Peprotech, Cat#300-18), 50 нг/мл человеческого Flt3-лиганда (Flt-3L, Peprotech, Cat#300-19), 50 нг/мл фактора стволовых клеток человека (SCF, Peprotech; Cat#300-07), человеческого интерлейкина-6 (IL-6, Peprotech, Cat#200-06), 1% L-глутамина; 2% пенициллина/стрептомицина и Соединения 4 (0,75 мкМ).
Электропорация рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP), содержащих Cas9 и нацеливающую RNA, в клетки.
Рибонуклеопротеиновые комплексы (RNP), содержащие Cas9 и нацеливающие РНК, были получены непосредственно перед электропорацией. Для образования RNP с использованием двойных нацеливающих РНК, 3 мкг каждой из crРНК (в 2,24 мкл) и tracrРНК (в 1,25 мкл) сначала денатурировали при 95oC в течение 2 мин в отдельных пробирках, а затем охлаждали до комнатной температуры. Для приготовления белка Cas9 7,3 мкг белка CAS9 (в 1,21 мкл) смешивали с 0,52 мкл буфера 5×CCE (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприведенного 1 мМ DTT). TracrРНК сначала смешивали с препаратом Cas9 и инкубировали при 37oC в течение 5 мин. Затем сrРНК добавляли к комплексам TracrРНК/CAS9 и инкубировали в течение 5 мин при 37oC. HSPC собирали путем центрифугирования при 200×g в течение 15 мин и ресуспендировали в T-буфере, предоставленным набором для электропорации Neon electroporation kit (Invitrogen; Cat#: MPK1096) до плотности клеток 2×107/мл. RNP смешивали с 12 мкл клеток путем осторожного пипетирования вверх и вниз 3 раза. Для получения комплексов Cas9 с одиночной направляющей РНК (sgРНК), 2,25 мкг sgРНК (в 1,5 мкл) смешивали с 2,25 мкг белка Cas9 (в 3 мкл) и инкубировали при комнатной тепературе в течение 5 мин. Затем комплекс sgРНК/Cas9 смешивали с 10,5 мкл клеток 2×107/мл путем осторожного пипетирования вверх и вниз несколько раз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетки (10 мкл) переносили в капилляр-камеру электропоратора Neon. Электропорацию проводили на аппарате Neon transfection system (Invitrogen; MPK5000S) с использованием 1700 вольт/20 миллисекунд и 1 импульса.
Экспансия клеток после редактирования генома.
После электропорации клетки переносили в 0,5 мл предварительно нагретой среды StemSpan SFEM, дополненной факторами роста, цитокинами и Соединением 4, как описано выше, и культивировали при 37oC в течение 3 дней. После 10-дневной экспансии, за 3 дня до электропорации и через 7 дней после электропорации общее число клеток увеличилось в 2-7 раз по сравнению с численностью исходной культуры (Фиг. 35).
Подготовка геномной ДНК
Геномную ДНК получали из геном-отредактированных и нередактированныхо HSPC через 48 часов после электропорации. Клетки лизировали в 10 мМ Трис-HCl, pH 8,0; 0,05% SDS и 25 мкг/мл свежедобавленной протеиназой K и инкубировали при 37oC в течение 1 часа с последующей дополнительной инкубацией при 85oC в течение 15 мин дл инактивации протеиназы K.
T7E1 анализ
Для определения эффективности редактирования HSPC был проведен анализ T7E1. ПЦР проводили с использованием Phusion Hot Start II High-Fidelity kit (Thermo Scientific; Cat#: F-549L) по следующей программе: 98oC 30 сек; 35 циклов 98oC 5 сек; 68oC для 20 мин, 72oC для 30 сек; 72oC в течение 5 мин. Использовали следующие праймеры: прямой праймер: 5’-AGCTCCAAACTCTCAAACCACAGGG-3’ (SEQ ID NO: 2814) и обратный праймер: 5’-TACAATTTTGGGAGTCCACACGGCA-3’ (SEQ ID NO: 2815). Продукты ПЦР денатурировали и повторно отжигали, используя следующие условия: 95oC в течение 5 мин, 95-85oC при -2oC/с, 85-25oC при -0,1oC/с, сохранение при 4oC. После отжига 1 мкл чувствительной к гетеродуплексам нуклеазы T7 E1 (NEB, Cat#M0302L) добавляли в 10 мкл продукта ПЦР выше и дополнительно инкубировали при 37oC в течение 15 минут для переваривания гетеродуплексов и полученные фрагменты ДНК анализировали с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. Эффективность редактирования была количественно определена с помощью программного обеспечения ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/).
Подготовка ПЦР-продуктов для секвенирования следующего поколения (NGS)
Чтобы более точно определить эффективность редактирования и профили инсерций и делеций (инделы), продукты ПЦР подвергались секвенированию следующего поколения (NGS). ПЦР проводили в двух репликах с использованием набора Titanium Taq PCR kit (Clontech Laboratories; Cat#: 639210) со следующей программой циклов: 98oC в течение 5 мин; 30 циклов 95oC в течение 15 секунд, 68oC в течение 15 секунд, 72oC 1 мин; 72oC в течение 7 мин. Использовались следующие праймеры: прямой праймер: 5’-AGCTCCAAACTCTCAAACCACAGGG-3’ (SEQ ID NO: 2816) и обратный праймер: 5’-TACAATTTTGGGAGTCCACACGGCA-3’ (SEQ ID NO: 2817). Продукты ПЦР анализировались с помощью электрофореза в 2% агарозном геле и подвергались многократному секвенированию.
Анализ эффективности редактирования в субпопуляциях гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток методом проточной цитометрии.
Клетки анализировали методом проточной цитометрии для характеристики эффективности редактирования в субпопуляциях стволовых и прогениторных клеток (HSPC). Частоты субпопуляций HSPC, включая CD34+ клетки, CD34+CD90+ клетки, CD34+CD90+ CD45RA-клетки и CD34+CD90+CD45RA-CD49f+ клетки, перед (48 часов культивирования) и после процедуры редактирования генома (10 дней культивирования, 3 дня после редактирования генома) определяли по выборочным аликвотам клеточных культур (Фиг. 36, Фиг. 37, Фиг. 38). Клетки инкубировали с анти-CD34 (BD Biosciences, Cat#555824), анти-CD38 (BD Biosciences, Cat#560677), анти-CD90 (BD Biosciences, Cat#555596), анти-CD45RA (BD Biosciences, Cat#563963), анти-CD49f (BD Biosciences, Cat#562582) в модифицированном буфере FACS, содержащем PBS, дополненном 0,5% BSA, 2 мМ EDTA, pH 7,4, при 4°C, в темноте в течение 30 мин. Жизнеспособность клеток определялась по 7ААД. Клетки промывали модифицированным буфером FACS, и многопараметрический (многоцветный) анализ FACS проводили на Fortessa (BD Biosciences). Результаты проточной цитометрии анализировали с использованием программного обеспечения Flowjo. Геном-отредактированные клетки, выращенные в присутствии Соединения 4 (только его одного), демонстрировали обнаруживаемые уровни всех субпопуляций клеток HSPC, включая CD34+, CD34+CD90+, CD34+CD90+ CD45RA- и CD34+CD90+ CD45RA-CD49f +, что указывает на то, что долгоживущие популяции HSC сохраняются в культуре клеток в присутствии Соединения 4 (только его одного) после редактирования генома (Фиг.38).
Через четыре часа после процедуры редактирования гена были отобраны аликвоты клеточных культур и клетки были сортированы по популяциям HSPC (CD34+, CD34+ CD38 +, CD34+ CD38 +, CD34+ CD38 +, CD34+ CD38 +, CD34+ CD38 + CD34+ CD38-, CD34+ CD38-CD45RA-, CD34+ CD38-CD45RA-CD90 + CD49f-, CD34+ CD38-CD45RA-CD90-CD49f- и CD34+ CD38-CD45RA-CD90-CD49f +) обработаны методами NGS для измерения эффективности редактирования (Таблица 28). Важно отметить, что все гематопоэтические субпопуляции, включая субпопуляции, обогащенные долгоживущими HSC популяциями, демонстрировали аналогичную высокую эффективность редактирования гена (> 95%). Эта высокая эффективность редактирования гена в долгоживущих HSC обладает значительным терапевтическим воздействием, поскольку эти клетки способны приживаться у пациентов в долгосрочной перспективе и поддерживать регенерацию множественных гематопоэтических линий клеток в течение всей жизни.
Таблица 28. Эффективность редактирования в каждой субпопуляции HSPC, определённая с помощью NGS.
Пример 9 Оценка возможного неспецифичного редактирования
Культура HSPC и редактирование генома с помощью CRISPR/Cas9
Методы формирования RNP и операции с клетками приведены в примере 4 со следующими исключениями.
Культура клеток CD34+ человека. Клетки CD34+ человека были либо изолированы от G-CSF мобилизованной периферической крови взрослых доноров (AllCells, Кат. Номер mPB025-Reg.E) с использованием иммуно-магнитной сепарации (иммуноселекции) (Miltenyi) в соответствии с инструкциями производителя или получены из костного мозга ((Hemacare Corporation, Cat. No. BM34C-3). Клетки CD34+ оттаивали и разгоняли/культивировали в течение 2 или 5 дней до доставки RNP. После доставки RNP клетки либо подращивали в течение дополнительных 13 дней в среде способствующей экспансии, либо культивировали в среде дифференцировки эритроидов в течение 7 или 11 дней следующим образом. В течение дней 0-7 культивирования в EDM дополнительно дополняли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779 -598). В течение 7-11 дней культивирования в EDM добавляли только 100 нг/мл человеческого SCF. По окончании периода культивирования клетки собирали для выделения и анализа геномной ДНК.
Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675). RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетки (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на нуклеофекторе 4D-Nucleofector (Lonza). Были использованы молекулы dgРНК, содержащие crРНК, имеющую последовательность NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 2818), (где N обозначает остаток указанного нацеливающего домена) и tracr, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6660.
Выделение геномной ДНК
Геномную ДНК выделяли из RNP обработанных и необработанных HSPC с использованием DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen, Cat # 69506) в соответствии с рекомендациями производителя.
In silico идентификация потенциальных неспецифичных локусов gРНК
Потенциальные неспецифичные локусы для молекул gРНК CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128, нацеленных на +58 область BCL11A и для молекул gРНК CR001028, CR001030, CR001137, CR001221, CR003035 и CR003085, нацеленных на HPFH область, были определены следующим образом. Для каждойо gРНК, 20 нуклеотидная последовательность gРНК протоспейсера была приведена в соответствие со стандартной последовательностью генома человека (стандарт GRCh38) с использованием программы выравнивания последовательностей Bfast (version 0.6.4f, Homer et al, PLoS One, 2009, 4(11), e7767, PMID: 19907642) с использованием стандартных параметров, допускающих до 5 нуклеотидных гетеродуплексов. Из локусов определенных таким образом, были выделены те сайты, которые являются 5' прилегающими к Cas9 канонической 5'-NGG-3' PAM последовательности (т.е. 5'-неспецифичный сайт-PAM-3 '). При использовании протокола BEDTools (version 2.11.2, Quinlan and Hall, Bioinformatics, 2010 26(6):841-2, PMID: 20110278), сайты с 5 нуклеотидными несовпадениями были дополнительно отобраны в соответствии с аннотацией RefSeq ((Pruitt et al, Nucleic Acids Res., 2014 42(Database issue):D756-63, PMID: 24259432)), чтобы содержать только локусы, аннотированные как экзоны. Количество посчитанных потенциальных неспецифичных сайтов, идентифицированных для области BCL11A +58 и gРНК области HPFH представлены в Таблицах 1 и 2.
Таблица 29. Количество посчитанных in silico потенциальных неспецифичных сайтов, идентифицированных для молекул gРНКs BCL11A +58 CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128 с несоответствиями длиной 0, 1, 2, 3 и 4 нуклеотидов длиной и длиной в 5 нуклеотидов в пределах экзонов (RefSeq).
Таблица 30. Количество посчитанных in silico потенциальных неспецифических сайтов, идентифицированных для молекул gРНКs HPFH, CRR101028, CR001030, CR001137, CR001221, CR003035 и CR003085 с несоответствиями 0, 1, 2, 3 и 4 нуклеотидов длиной и длиной в 5 нуклеотидов в пределах экзонов (RefSeq)
Выбор ПЦР-праймеров для целенаправленного усиления амплификации потенциальных неспецифических сайтов
ПЦР-ампликоны потенциальных неспецифичных локусов (и целевых локусов-мишеней), идентифицированные для gРНК области +58 BCL11A (CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128) и gРНК области HPFH (CR001028, CR001030, CR001137, CR001221, CR003035 и CR003085) были выбраны с использованием Primer3 (версия 2.3.6, Untergasser et al., Nucleic Acids Res., 2012 40 (15): e115, PMID: 22730293) с использованием параметров по умолчанию, таких, чтобы размер ампликона находился в диапазоне приблизительно 160-300 пар оснований длиной и при этом последовательность протоспейсера в gРНК была расположенна в центре ампликона. Для gРНК CR001127 подбор ПЦР-праймеров проводился только для сайтов с несоответствиями в 0-4 нуклеотидов, а для сайтов с 5 нуклеотидными несоответствиями в экзонах RefSeq подбор праймеров не проводился. Полученные парные праймеры ПЦР и последовательности ампликонов были проверены на уникальность с помощью BLAST (version 2.2.19, Altschul et al, J Mol Biol., 1990, 215(3):403-10, PMID: 2231712) при сравнении последовательностей со стандартной последовательностью генома чеовека (стандарт GRCh38). Пары праймеров, приводящие к более чем одной последовательности ампликона, были отброшены и праймеры подбирались заново. В Таблицах 3 и 5 показано количество подобранных пар праймеров ПЦР, предназначенных для области +58 BCL11A и области HPFH соответственно.
Illumina-секвенирование: подготовка, упорядочивание и секвенирование библиотеки с помощью генетического анализатора Illumina.
Геномную ДНК из обработанных RNP (2 реплики на 1 gРНК) и необработанных (1 реплика на 1 gРНК) клеток HSPC квантифицировали с использованием набора Quant-iT PicoGreen dsDNA kit (Thermo Fisher, Cat # P7581) в соответствии с инструкциями производителя. Библиотеки Illumina (секвенирование синтезом), предназначенные для отдельных неспецифических локусов (и целевых локусов-мишеней), были сделаны для каждого образца с использованием двух последовательных реакций ПЦР. Первая ПЦР амплифицировала целевой локус с использованием целевых специфических ПЦР-праймеров (разработанных выше), которые были слиты с совместимыми универсальными последовательностями секвенирования Illumina. Вторая ПЦР добавляла дополнительные, совместимые с секвенированием, последовательности Illumina, включающие штрих-коды образцов для обеспечения мультиплексирования во время секвенирования, к ампликонам первой ПЦР. ПЦР-1 проводили в конечном объеме 10 мкл, причём каждая реакция содержала 3-6 нг gДНК (что эквивалентно приблизительно 500-1000 клеткам), пары праймеров ПЦР 1 (Integrated DNA Technologies) при конечной концентрации 0,25 мкМ и 1х конечной концентрации Q5 Hot Start Master Mix (New England BioLabs, Cat # 102500-140). В ПЦР-1 левые праймеры имели 5'-хвост (т.е. 5'-хвост-целевой специфический левый праймер-3’) в виде последовательности 5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’ (SEQ ID NO: 2819), а правые праймеры имели 5'-хвост (т.е. 5'-хвост-целевой специфичный правый праймер -3') в виде последовательностью 5’- GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3’ (SEQ ID NO: 2820). ПЦР 1 проводили на термоциклере, используя следующую программу: 1 цикл 98oC в течение 1 мин; 25 циклов 98oC в течение 10 секунд, 63oC в течение 20 секунд и 72oC в течение 30 секунд; 1 при 72oC в течение 2 мин. ПЦР 1 затем разбавляли 1:100 с использованием свободной от нуклеазы воды (Ambion, Cat#AM9932) и использовали как матрицу для ПЦР 2. ПЦР 2 выполняли в конечном объеме 10 мкл для каждой реакции, содержащей 2 мкл разбавленного продукта ПЦР 1, пары праймеров для ПЦР 2 ((Integrated DNA Technologies) при конечной концентрации 0,5 мкМ и 1х конечной концентрации Q5 Hot Start Master Mix (New England BioLabs, Cat # 102500-140). ПЦР-2 последовательность левого праймера была 5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACNNNNNNNNTCGTCGGCAGCGTC-3’ (SEQ ID NO: 2821), а используемая последовательность правого праймера ПЦР-2 представляла собой 5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATNNNNNNNNGTCTCGTGGGCTCGG-3’ (SEQ ID NO: 2822), где NNNNNNNN обозначает последовательность нуклеотидных штрих-кодов, используемую для мультиплексирования образца, как часть стандартного процесса секвенирования Illumina. ПЦР 2 проводили на термоциклере, используя следующую программу циклов: 1 цикл 72oC в течение 3 мин; 1 цикл 98oC в течение 2 мин; 15 циклов 98oC в течение 10 секунд, 63oC в течение 30 секунд и 72oC в течение 2 мин. ПЦР-2-ампликоны, а ныне жизнеспособные библиотеки секвенирования Illumina, были очищены с использованием гранул Agencourt AMPure XP beads (Beckman Coulter, Cat # A63882) в соответствии с рекомендациями производителя. Затем очищенные библиотеки секвенирования Illumina квантифицировали путём стандартных методов количественного определения qПЦР с использованием Power SYBR Green PCR master mix (Life Technologies, Cat#4367660) и праймеров, специфичных к концам (последовательностей) библиотеки секвенирования Illumina (последовательность прямого праймера: 5’- CAAGCAGAAGACGGCATACGA-3’ (SEQ ID NO: 2823) и обратного праймера: 5’-AATGATACGGCGACCACCGAGA-3’ (SEQ ID NO: 2824)). Библиотеки секвенирования последовательности Illumina затем объединяли эквимолярно и подвергали секвенированию Illumina на секвенаторе MiSeq ((Illumina, Cat # SY-410-1003) со считываниями в 300 нуклеотидных пар при использованием набора реагентов MiSeq Reagent Kit v3 (Illumina, Cat # MS-102-3003), следуя рекомендациям производителя. Как минимум, 1000-кратное покрытие последовательности было сделано для каждого локуса по меньшей мере в одной обработанной реплике. ПЦР, очистку, объединение и секвенирование обработанных (отредактированных) и необработанных (нередактированных) образцов проводили отдельно, чтобы избежать любой возможности перекрестного загрязнения между обработанными и необработанными образцами или ампликонами ПЦР, полученными из них.
QC-данные секвенирования Illumina и вариационный анализ.
Используя параметры по умолчанию и программное обеспечение анализа Illumina MiSeq (MiSeq reporter, version 2.6.2, Illumina) для создания ампликон-специфичных FASTQ файлов данных секвенирования (Cock et al, Nucleic Acids Res. 2010, 38(6):1767-71, PMID: 20015970). Затем FASTQ файлы обрабатывались с помощью разработанного в лаборатории вариационного анализа, состоящего из ряда пакетов программного обеспечения общего пользования, объединенных вместе с использованием стандартной оболочки скрипта Perl. Используемый рабочий процесс был разделен на пять этапов.
Этап 1, PCR-праймер и специфичные и неспецифичные последовательности QC:
Для обоих типов сайтов, как целевых сайтов-мишеней, так и для неспецифичных сайтов, 20-нуклеотидная последовательность протоспейсера gРНК плюс последовательность PAM и целевые специфические последовательности праймеров PCR (левого и правого, без дополнительных последовательностей Illumina) были выровнены со стандартной последовательностью генома человека (стандарт GRCh38) с использованием программы поиска BLAST ((version 2.2.29+, Altschul et al, J Mol Biol., 1990, 215(3):403-10, PMID: 2231712). Были помечены сайты (как целевые, так и неспецифичные) имеющие множественные локазизации в геноме.
Этап 2, декомпрессия файла секвенсера
Файлы секвенирования FASTQ.GZ, сгенерированные Illumina, были распакованы в файлы FASTQ с использованием gzip-скрипта (version 1.3.12), и рассчитано количество считываний на файл. Файлы без считываний были исключены из дальнейшего анализа.
Этап 3, выравнивание последовательности и качественная обработка.
Считывания секвенирования файлов FASTQ были выровнены со стандартной последовательностью генома человека (стандарт GRCh38) с использованием алгоритма выравнивателя BWA-MEM (version 0.7.4-r385, Li and Durbin, Bioinformatics, 2009, 25(14):1754-60, PMID: 19451168) с использованием «жесткого отсечения» для удаления считываний 3’-концевых дополнительных последовательностей Illumina и низкокачественных оснований. Полученные выровненные считывания в формате файла BAM Li et al, Bioinformatics, 2009 25(16):2078-9, PMID: 19505943), были преобразованы в файлы FASTQ с использованием скрипта SAMtools (version 0.1.19-44428cd, Li et al, Bioinformatics, 2009 25(16):2078-9, PMID). Затем файлы FASTQ были снова выровнены по стандартной последовательности генома человека (стандарт GRCh38) с помощью алгоритма выравнивателя BWA-MEM, на этот раз без «жесткого отсечения».
Этап 4, вариационный анализ (SNP (снипов) и инделов)).
Файлы BAM выровненных считваний обрабатывались с использованием VarDict variant caller (version 1.0 ‘Cas9 aware’ modified by developer ZhangWu Lia, Lai et al, Nucleic Acids Res., 2016, 44(11): e108, PMID: 27060149) с пределом обнаружения частоты аллеля, установленным при >=0,0001 для определения вариантов снипов(SNP) и инделов. Cas9 aware VarDict caller основан на пакете паблик-домена, но способен перемещать неоднозначные варианты, возникающие из-за повторяющихся последовательностей в области выравнивания в различных вариантах событий, к потенциальному месту разреза нуклеазы Cas9 в последовательности протоспейсера gРНК, расположенного в 3нп от 5'последовательности PAM. Скрипт SAMtools использовался для вычисления охвата считывания на образец ампликона для определения того, были ли целевые и неспецифичные сайты представлены 1000-кратной отсеквенированной последовательностью. Были отмечены сайты с <1000-кратным охватом.
Этап 5, dbSNP-фильтрация и дифференциальный анализ обработанных/необработанных образцов.
Из идентифицированных вариантов были отобраны известные варианты снипов(SNP) и инделов, представленные в dbSNP (build 142, Shery et al, Nucleic Acids Res. 2001, 29(1):308-11, PMID: 11125122). Варианты обработанных образцов дополнительно фильтровали, чтобы исключить: 1) варианты, идентифицированные в необработанных контрольных образцах; 2) варианты VarDict strand bias of 2:1 (где количество прямых и обратных считываний по стандартной последовательности сбалансировано, но несбалансировано для нестандартной); 3) варианты, расположенные за пределами окна 100bp по обе стороны потенциального участка расщепления Cas9; 4) одиночные нуклеотидные варианты в пределах 100нп «окошка» от потенциального участка расщепления Cas9. Наконец, были рассмотрены только сайты с комбинированной частотой индела >2% (редактирование произошло более чем в 10-20 клетках) в пределах 100нп “окошка” от потенциального участка срасщепления Cas9. Потенциальные активные сайты редактирования были дополнительно исследованы при выравнивании считываний с помощью программы Integrative Genome Viewer (IGV version 2.3, Robinson et al, Nat Biotechnol. 2011, 9(1):24-6, PMID: 21221095), которая позволяет осуществлять визуальный контроль выравнивания считываний по стандартной последовательности генома.
Результаты анализов целевых и неспецифичных сайтов. Для целевых сайтов gРНК, нацеленных на область +58 BCL11A и область HPFH показано надёжное редактирование на предполагаемом участке расщепления среза Cas9 в обработанных образцах с частотой образования инделов, превышающей 88% для всех gРНК. В Таблицах 3 и 5 показано количество неспецифичных сайтов, характеризующихся, по меньшей мере, одной биологической репликой. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке.
Результаты анализа in silico целевых сайтов для области +58 BCL11A.
gРНК CR00309: На целевом сайте для gРНК CR00309 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 92%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов было идентифицировало четыре неспецифичных сайта в пределах 100нп “окошка” от предполагаемого сайта расщепления Cas9 e в обоих обработанных репликах. Сайт 1 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 18%, имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспасера gРНК (5’-CtCaCCtCCACCCTAATCAG-PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2825)) и находится в интроне 1 гена аноктамина 5 (ANO5), на хромосоме 11 в положении 22,195,800-22,195,819 нп, примерно на 2,3 килобаз от экзона 1. Участок 2 имеет среднюю частоту инделов, составляющую приблизительно 18%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспейсера gРНК (5’- CACGCCCaCACCtTAATCAG -PAM-3’, PAM = GGG(SEQ ID NO: 2826)) и находится в межгенной области хромосомы 12 в позиции 3,311,901-3,311,926 нп. Участок 3 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 80%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспасера gРНК (5’-CACGaCCCaACCCTAATCAG-PAM-3’, PAM=AGG (SEQ ID NO: 2827)) и находится в GenBank (Clark et al., Nucleic Acids Res. 2016 Jan 4; 44(Database issue): D67-D72, PMID: 26590407) (BC012501, не аннотированный в RefSeq) на хромосоме 1 в позиции 236,065,415-236,065,434 нп. Участок 4 имеет среднюю частоту инделов, составляющую приблизительно 2%, имеет 4 несоответствия относительно последовательности протоспасера gРНК (5’-CtaGCCCCtACCCTAATaAG- PAM-3’, PAM = TGG (SEQ ID NO: 2828)) и расположен в интроне 1 аннотированной последовательности GenBank, называемого полихомеотическим белком 2 (не аннотированный в RefSeq) на хромосоме 1 в позиции 33, 412, 659-33, 412, 678 нп.
gРНК CR00311: На целевом сайте для gРНК gРНК CR00311 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 95%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.
gРНК CR000312: На целевом сайте для gРНК gРНК CR00012 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 98%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.
РНК CR000316: На целевом сайте для gРНК gРНК CR000316 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 91%, однако большинство из неспецифичных сайтов еще предстоит охарактеризовать.
gРНК CR001125: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001125 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 91%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.
gРНК CR001126: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001126 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 92%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов было идентифицировало два неспецифичных сайта в пределах 100нп “окошка” от предполагаемого сайта расщепления Cas9 в обоих обработанных репликах. Первый сайт имеет среднюю частоту инделов приблизительно 2%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспасера целевой gРНК (5’-TTTATaACAGGCTCCAGaAA -PAM-3’, PAM = TGG (SEQ ID NO: 2829)) и расположен в межгенной области на хромосоме 4 в позиции 35,881,815-35,881,834 нп, примерно на 9,5 килобаз от ближайшего транскрипта GenBank (не аннотированного в RefSeq). Второй сайт имеет среднюю частоту инделов, составляющую приблизительно 1.7%, имеет 4 несоответствия относительно последовательности протоспейсера gРНК (5’ caTATCACAGGCcCCAGGAg -PAM-3’, PAM = GGG (SEQ ID NO: 2830)) и находится в интроне 6 гена аиаксина 1 (ATXN1), на хромосоме 6 в позиции 16519907-16519926 нп, примерно на 2,7 килобаз от экзона 6.
gРНК CR001127: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001127 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 97%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.
gРНК CR001128: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001128 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 94%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.
Ручная проверка всех идентифицированных неспецифичных сайтов при активном редактировании области +58 BCL11 показала типичные профили инделов, окружающие предполагаемый участок расщепления Cas9, типичный для репарации путём негомологичного соединения концов, опосредованной двуцепочным разрывом опоры, вносимым Cas9. Остаётся неясным, оказывает ли редактирование на идентифицированных сайтах негативное воздействие на экспрессию генов или жизнеспособность клеток, для чего необходим дальнейший анализ.
Таблица 31. Количество in silico идентифицированных неспецифичных сайтов, хорошо охарактеризованных по меньшей мере в одний обработанной репликате и сайтов, демонстрирующих редактирование по области +58 BCL11A молекулами gРНК CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128. *-означает, что были исследованы только сайты с 0-4 нуклеотидными несоответствиями.
Результаты проверки неспецифичных сайтов расщепления при редактировании области +58 BCL11A с помощью GUIDE-Seq
Потенциальные неспецифичные сайты расщепления, представленные в GUIDE-seq (Tsai et al, Nat Biotechnol. 2015, 33(2):187-97, PMID: 25513782), были охарактеризованы в RNP-обработанных и необработанных HSPC с использованием методов секвенирования сайтов, описанных выше для for in silico найденных сайтов. С помощью GUIDE-seq выявлены потенциально возможные сайты расщепления для gРНКs CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128. Для gРНК CR00311 и CR001128 не было обнаружено потенциальных сайтов расщепления. Когда потенциальные сайты расщепления были исследованы в HSPC с использованием целенаправленного секвенирования, ни один из потенциальных сайтов расщепления не был обнаружен в обработанных HSPC для gРНК CR00312, CR001125 и CR001127. Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный для gРНК CR001126, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico в интроне 6 ATXN1 (хромосома 6: 16 519 907-16 519 926 нп). Подтверждение потенциальных сайтов расщепления для gРНКs CR00309 и CR00316 все еще продолжается.
Результаты анализа in silico целевых сайтов для области HPFH.
gRNA CR001028: На целевом сайте для gРНК CR001028 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 91%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов было идентифицировало два неспецифичных сайта в пределах 100нп «окошка» от предполагаемого сайта расщепления Cas9 e в обоих обработанных репликах. Сайт 1 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 2.8%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспейсера целевой gРНК (5’- TGgGGTGGGGAGATATGaAG -PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2831)) и расположен в интроне 2 некодирующей РНК (LF330410, не аннотированной в RefSeq), расположенный на хромосоме 4 в позиции 58,169,308-58,169,327 нп. Сайт 2 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 3,5%, имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспасера целевой gРНК (5’- gGaGGTGGGGAGAgATGTAG-PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2832)) и находится в интроне 1 члена A2, субсемейства 3 бутирофилина (BTN3A2), расположенного на хромосоме 6 в позиции 26,367,733-26,366,752 нп, приблизительно 1,3 килобаз от экзона 2.
gРНК CR001030: На целевом сайте для gРНК CR001030 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 89%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов на сегодняшний день был идентифицирован один неспецифичный сайт со средней частотой инделов 57% в пределах 100 нп «окошка» от предполагаемого сайта расщепления Cas9 в обоих обработанных репликах. Сайт имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспейсера целевой gРНК (5’-caTGCgGAAAGAGATGCGGT-PAM-3’, PAM = TGG (SEQ ID NO: 2833)) и расположен в экзоне 4 гена 3 пируватдегидрогеназного комплекса (PDK3), расположенном на Х-хромосоме в позиции 24,503,476-24,503,495 нп.
gРНК CR001137: на целевом сайте для gРНК CR0001037 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов около 84%. В Таблице 32 показано, что количество неспецифичных сайтов успешно характеризуется. Нехарактерные сайты не удались в конструкции праймера ПЦР или амплификации ПЦР и остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день не наблюдалась значительная нецелевая активность на исследуемых участках.
gРНК CR001221: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001121 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 95%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.
gРНК CR003035: На целевом сайте для gРНК CR003035 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 89%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов было идентифицировало два неспецифичных сайта в пределах 100нп “окошка” от предполагаемого сайта расщепления Cas9 e в обоих обработанных репликах. Сайт 1 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 20%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспейсера целевой gРНК (5’- AGGtACCTCAaACTCAGCAT-PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2834)) и расположен в межгенной области на хромосоме 2 в позиции 66,281,781-66,281,800 нп и составляет приблизительно 7,1 килобаз от ближайшего транскрипта (JD432564, не аннотированного в RefSeq). Сайт 2 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 2,5%, имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспасера целевой gРНК (5’-AGagACCcCAGACTCAGCAT-PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2835)) и находится в межгенной области на хромосоме 10 в позиции 42,997,289-42,997,308 нп, что составляет приблизительно 0,3 килобаз от MicroRNA 5100 (MIR5100).
gРНК CR003085: На целевом сайте для gРНК CR003085 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 94%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов на сегодняшний день был идентифицирован один неспецифичный сайт со средней частотой инделов 2% в пределах 100нп “окошка” от предполагаемого сайта расщепления Cas9 в обоих обработанных репликах. Сайт имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспейсера целевой gРНК (5’-ATGGTATGaGAaaTATACTA-PAM-3’, PAM = TGG (SEQ ID NO: 2836)) и расположен в интроне 2 гена-члена 12 семейства 25 переносчиков (транспортеров) растворов (Solute Carrier Family 25 (SLC25A12), расположенного на хромосоме 2 в позиции 171,872,630-171,872,649 нп, что составляет примерно 3,8 килобаз от экзона. 3.
Ручная проверка всех идентифицированных неспецифичных сайтов при активном редактировании области HPFH показала типичные профили инделов, окружающие предполагаемый участок расщепления Cas9, типичный для репарации путём негомологичного соединения концов, опосредованной двуцепочным разрывом, вносимым Cas9. Остаётся неясным, оказает ли редактирование на идентифицированных сайтах негативное воздействие на экспрессию генов или жизнеспособность клеток, для чего необходим дальнейший анализ.
Таблица 32. Количество in silico идентифицированных неспецифичных сайтов, которые успешно характеризующиеся, по меньшей мере, в одний обработанной репликате и сайтов, демонстрирующих редактирование по области HPFH молекулами gРНК CR001028, CR001030, CR001137, CR001221, CR003035 и CR003085.
Результаты проверки неспецифичных сайтов расщепления при редактировании области HPFH с помощью GUIDE-Seq
Потенциальные неспецифичные сайты расщепления, представленные в GUIDE-seq (Tsai et al, Nat Biotechnol. 2015, 33(2):187-97, PMID: 25513782), были охарактеризованы в RNP-обработанных и необработанных HSPC с использованием методов секвенирования сайтов, описанных выше для in silico найденных сайтов. С помощью GUIDE-seq выявлены потенциально возможные сайты расщепления для gРНКs CR001028, CR001030, CR003035 и CR003085 (на сегодняшний день). Для gРНК CR001137 и CR001221 не было обнаружено потенциальных сайтов расщепления на сегодняшний день. Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный в HSPC для gРНК CR001028, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico на хромосоме 4 в позиции 58,169,308-58,169,327 нп). Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный в HSPC для gРНК CR001030, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico в экзоне 4 гена ПДК-3 (PDK3). Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный в HSPC для gРНК CR001035, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico в межгенной области на хромосоме 2 в позиции 66,281,781-66,281,800 нп. Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный в HSPC для gРНК CR001085, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico в межгенной области на хромосоме 2 в позиции 171,872,630-171,872,649 нп.
Анализ целевых сайтов для выявления эффективности редактирования gРНК.
ПЦР-ампликоны, соответствующие сайтам-мишеням gРНК, очищали с использованием гранул Agencourt AMPure XP beads (Beckman Coulter, Cat # A63882) в соответствии с рекомендациями изготовителя. Образцы квантифицировали с использованием набора Quant-iT PicoGreen dsDNA kit (Thermo Fisher, Cat # P7581) в соответствии с рекомендаций производителя. Ампликоны были преобразованы в библиотеки секвенирования Illumina с использованием набора для подготовки библиотеки ДНК Nextera DNA Library Preparation Kit (Illumina, Cat# FC-121-1031) в соответствии с рекомендациями производителя. Результирующие библиотеки последовательности были очищены AMPure, обработаны qPCR, объединены и секвенированы с помощью аппарата Illumina MiSeq, при использовании спаренных концевых фрагментов длиной в 150 нп (Illumina, Cat#MS-102-2002) или в 250 нп (Illumina, Cat#MS-102-2003), как описано в разделе анализа неспецифичных сайтов. Каждая библиотека была создана при, как минимум, 1000-кратном секвенировании, и варианты были выбраны с использованием серии разработанных нами алгоритмов. Короче говоря, данные секвенирования, охватывающие окно 80-100 нуклеотидных пар, с центром в последовательности gРНК, были идентифицированы с использованием поиска последовательности путём использования SAM-алгоритма (a string-based search algorithm), сравнены с последовательностью ампликона, сортированы по различию последовательностей и была подсчитана частота вариантов. Дополнительно, отсеквенированные последовательности были выровнены с последовательностью ампликона, используя программное обеспечение Illumina MiSeq reporter (Illumina version 2.6.1), и полученные выровненные последовательности были исследованы с использованием Integrative Genome Viewer (IGV version 2.3, Robinson et al, Nat Biotechnol. 2011, 9(1):24-6, PMID: 21221095).
Пример 10: Оценка (влияния) концентрации RNP на редактирование генома и индукцию HbF.
Анализ разведения RNP для определения оптимальной концентрации RNP для редактирования генома
Редактирование гена проводили с использованием серийного разведения концентраций Cas9 (iProt: 106331) и нацеливающих рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP) (Таблица 33). Различные используемые gРНК, их форматы и модификации, применяемые в этом исследовании, перечислены в Таблице 34.
Таблица 33: Разбавление RNP, используемое для исследования влияния концентрации RNP на редактирование генов и индукцию HbF.
RNP-1
RNP-2
RNP-3
RNP-4
RNP-5
Таблица 34: Список молекул gРНКs, в формате одиночной или двойной нацеливающей РНК, с или без химической модификации, используемых в исследовании RNP разбавления. «OMePS» модификация по отношению к формату dgРНК, относится к модифицированным crРНК, имеющим следующую структуру: mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO: 2837) в паре с немодифицированным tracr (т.е. tracrРНК) имеющим SEQ ID NO: 6660; и, по отношению к sgРНК, относится к gРНК, имеющей следующую структуру: mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO: 2838), где N=нуклеотид нацеливающего домена, mN относится к 2'-ОМе-модифицированному нуклеотиду, и * относится к фосфоротиоатной связи. «Немодифицированная» обозначает gРНК, не имеющую каких-либо изменений РНК: dgРНК состоят из NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 2839) в паре с SEQ ID NO: 6660; sgРНК относится к NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 2840), где N=нуклеотиды указанного нацеливающего домена.
CD34+ клетки электропорировали, как описано ранее, и измеряли жизнеспособность клеток, эффективность редактирования генов и способность продуцировать HbF. При оценке жизнеспособности клеток результаты показали, что различная концентрация RNP не влияла на жизнеспособность клеток при электропорации при использовании любого формата, с одиночной или двойной нацеливающей РНК (Фиг.39A и Фиг.39B). При редактировании генов CD34+ клеток данные NGS показали, что концентрации RNP не ниже 1,47 мкМ обеспечивают максимальный % эффективности редактирования гена для неумодифицированных CR00312 и CR001128 и модифицированного CR00312, тогда как максимальный % эффективности редактирования гена для модифицированной CR001228 был достигнут при концентрациях RNP как минимум 2,94 мкМ (Фиг. 40А). Для форматов sgРНК все тестируемые gРНК достигали максимального % редактирования при концентрациях RNP не ниже 0,48 мкМ (Фиг. 40B). При изменении способности отредактированных генов клеток дифференцироваться в эритроидную линию и продуцировать HbF, наши данные показали, что концентрация RNP не ниже 2,94 мкМ для dgРНК-содержащего RNP (Фиг. 41A) и не ниже 0,97 мкМ для sgРНК-содержащего RNP (Фиг. 41B) приводят к максимальным уровням индукции HbF.
Эта заявка подается со списками последовательностей. При наличии расхождений между списками последовательностей и любой последовательностью, указанной в спецификации, последовательность, указанная в спецификации, должна считаться правильной последовательностью. Если не указано иначе, все геномные местоположения обозначены в соответствии с hg38.
ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ
Все публикации, патенты и патентные заявки, упомянутые здесь, включены в настоящее описание посредстом ссылки во всей их полноте, как если бы каждая отдельная публикация, патент или патентная заявка были специально и индивидуально указаны для включения в качестве ссылки. В случае конфликта настоящая заявка, включая любые определения в настоящем документе, должна считаться приоритетной.
ЭКВИВАЛЕНТЫ
Специалисты в данной области техники распознают или будут способны осуществить, используя не более чем обычные эксперименты, многие варианты конкретных вариантов осуществления изобретения, описанных здесь. Хотя настоящее изобретение раскрыто со ссылкой на конкретные аспекты, очевидно, что другие аспекты и варианты настоящего изобретения могут быть разработаны другими специалистами в данной области техники без отхода от истинной сущности и объема изобретения. Прилагаемая формула изобретения должна толковаться как включающая все подобные аспекты и эквивалентные варианты.
--->
СПИСКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> НОВАРТИС АГ
ИНТЕЛЛИЯ ТЕРАПЮТИК, ИНК.
<120> КОМПОЗИЦИИ И МЕТОДЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНОПАТИЙ
<130> PAT057179-WO-PCT
<140> PCT/IB2016/058007
<141> 2016-12-26
<150> 62/347,484
<151> 2016-06-08
<150> 62/271,968
<151> 2015-12-28
<160> 7831
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1
acaggccgug aaccuaagug 20
<210> 2
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2
uagagggggg aaauuauagg 20
<210> 3
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 3
cgagcgguaa auccuaaaga 20
<210> 4
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 4
agacaaauuc aaauccugca 20
<210> 5
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 5
gcuuuuggug gcuaccaugc 20
<210> 6
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6
aauuuaugcc aucugauaag 20
<210> 7
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 7
uguuccuccu acccacccga 20
<210> 8
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 8
auaaauguug gagcuuuagg 20
<210> 9
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 9
caaccuaauu accuguauug 20
<210> 10
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 10
cgcugucaug agugaugccc 20
<210> 11
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 11
ggcaucacuc augacagcga 20
<210> 12
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 12
agucccauag agagggcccg 20
<210> 13
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 13
acugauucac uguuccaaug 20
<210> 14
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 14
aggacucugu cuucgcacaa 20
<210> 15
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 15
ccacgcugac gucgacuggg 20
<210> 16
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 16
guucuucaca cacccccauu 20
<210> 17
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 17
gcgcuucucc acaccgcccg 20
<210> 18
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 18
gucuggaguc uccgaagcua 20
<210> 19
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 19
aaagaucccu uccuuagcuu 20
<210> 20
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 20
ucgccggcua cgcggccucc 20
<210> 21
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 21
cggagaacgu guacucgcag 20
<210> 22
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 22
gagcuugaug cgcuuagaga 20
<210> 23
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 23
ccccccgagg ccgacucgcc 20
<210> 24
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 24
caccaugccc ugcaugacgu 20
<210> 25
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 25
gagagcgaga ggguggacua 20
<210> 26
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 26
cacggacuug agcgcgcugc 20
<210> 27
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 27
gcccaccaag ucgcuggugc 20
<210> 28
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 28
cccaccaagu cgcuggugcc 20
<210> 29
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 29
ggcgguggag agaccgucgu 20
<210> 30
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 30
gccgcagaac ucgcaugacu 20
<210> 31
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 31
ccgcccccag gcgcucuaug 20
<210> 32
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 32
ugggggucca agugaugucu 20
<210> 33
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 33
cucaacuuac aaauacccug 20
<210> 34
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 34
agugcagaau augccccgca 20
<210> 35
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 35
gcauauucug cacucauccc 20
<210> 36
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 36
gagcucuaau ccccacgccu 20
<210> 37
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 37
agagcuccau gugcagaacg 20
<210> 38
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 38
gauaaacuuc ugcacuggag 20
<210> 39
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 39
uagcuguagu gcuugauuuu 20
<210> 40
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 40
uauccaaauu cauacaauag 20
<210> 41
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 41
augcccugag uaucccaaca 20
<210> 42
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 42
uaguaacaga cccaugugcu 20
<210> 43
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 43
auacuucaag gccucaauga 20
<210> 44
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 44
gacuagguag accuucauug 20
<210> 45
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 45
cugagcuagu gggggcucuu 20
<210> 46
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 46
cugagcacau ucuuacgccu 20
<210> 47
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> исходная
<223> /note="Description of Combined ДНК/РНК Molecule: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 47
uuuauaagac auuaggguat 20
<210> 48
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 48
ugauaggugc cuauauguga 20
<210> 49
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 49
uccacccauc caucacauau 20
<210> 50
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 50
cuucaaaguu guauugaccc 20
<210> 51
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 51
aaaccagacu aguuuauagg 20
<210> 52
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 52
uuugagacag uuaccccuuc 20
<210> 53
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 53
aaccugaggg cuaguuucua 20
<210> 54
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 54
gccuggaccc accgcuucau 20
<210> 55
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 55
aaaccaguga ggucaucuau 20
<210> 56
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 56
accugcuaug uguuccuguu 20
<210> 57
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 57
uagaggaauu ugccccaaac 20
<210> 58
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 58
gauaaacaau cgucauccuc 20
<210> 59
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 59
uggcauccag gucacgccag 20
<210> 60
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 60
gaccuggaug ccaaccucca 20
<210> 61
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 61
aaaagcaucc aaucccgugg 20
<210> 62
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 62
gaugcuuuuu ucaucucgau 20
<210> 63
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 63
ccacagcuuu uucuaagcag 20
<210> 64
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 64
cccccaaugg gaaguucauc 20
<210> 65
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 65
aucaugaccu ccucaccugu 20
<210> 66
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 66
aggaggucau gauccccuuc 20
<210> 67
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 67
ccccuucugg agcucccaac 20
<210> 68
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 68
gcucccaacg ggccgugguc 20
<210> 69
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 69
acagaugaug aaccagacca 20
<210> 70
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 70
ucuguaagaa uggcuucaag 20
<210> 71
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 71
caauuauuag agugccagag 20
<210> 72
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 72
gccuugcuug cggcgagaca 20
<210> 73
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 73
accaugucuc gccgcaagca 20
<210> 74
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 74
gagucuccuu cuuucuaacc 20
<210> 75
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 75
gaauuguggg agagccguca 20
<210> 76
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 76
aaaauagagc gagagugcac 20
<210> 77
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 77
gccccuggcg uccacacgcg 20
<210> 78
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 78
cuccucguuc uuuauuccuc 20
<210> 79
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 79
gacugcccgc gcuuuguccu 20
<210> 80
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 80
uucccaggga cugggacucc 20
<210> 81
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 81
uggcuccugg gugugcgccu 20
<210> 82
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 82
ugaagcccgc uuuuugacag 20
<210> 83
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 83
aggguggaga cgggucgcca 20
<210> 84
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 84
gcucaggguc ucgcgggcca 20
<210> 85
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 85
ugaguccgag cagaagaaga 20
<210> 86
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 86
ucuuaaacca accugcucac 20
<210> 87
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 87
cagguugguu uaagauaagc 20
<210> 88
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 88
agguugguuu aagauaagca 20
<210> 89
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 89
uuaagggaau aguggaauga 20
<210> 90
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 90
agggcaaguu aagggaauag 20
<210> 91
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 91
cccuuaacuu gcccugagau 20
<210> 92
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 92
ccaaucucag ggcaaguuaa 20
<210> 93
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 93
gccaaucuca gggcaaguua 20
<210> 94
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 94
ugacagaaca gccaaucuca 20
<210> 95
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 95
augacagaac agccaaucuc 20
<210> 96
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 96
gagauaugua gaggagaaca 20
<210> 97
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 97
ggagauaugu agaggagaac 20
<210> 98
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 98
ugcggugggg agauauguag 20
<210> 99
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 99
cugcugaaag agaugcggug 20
<210> 100
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 100
acugcugaaa gagaugcggu 20
<210> 101
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 101
aacugcugaa agagaugcgg 20
<210> 102
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 102
aacaacugcu gaaagagaug 20
<210> 103
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 103
ucugcaaaaa ugaaacuagg 20
<210> 104
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 104
acuucugcaa aaaugaaacu 20
<210> 105
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 105
cauuuuugca gaaguguuuu 20
<210> 106
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 106
aguguuuuag gcuaauauag 20
<210> 107
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 107
uuggagacaa aaaucucuag 20
<210> 108
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 108
ucuagagauu uuugucucca 20
<210> 109
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 109
cuagagauuu uugucuccaa 20
<210> 110
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 110
gucuccaagg gaauuuugag 20
<210> 111
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 111
ccaagggaau uuugagaggu 20
<210> 112
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 112
ccaaccucuc aaaauucccu 20
<210> 113
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 113
ggaauuuuga gagguuggaa 20
<210> 114
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 114
ugcuugcuuc cuccuucuuu 20
<210> 115
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 115
aagaauuuac caaaagaagg 20
<210> 116
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 116
aggaagaauu uaccaaaaga 20
<210> 117
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 117
aaaaauuaga guuuuauuau 20
<210> 118
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 118
uuuuuuaaau auucuuuuaa 20
<210> 119
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 119
uauuuaccag uuauugaaau 20
<210> 120
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 120
ccaguuauug aaauagguuc 20
<210> 121
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 121
ccagaaccua uuucaauaac 20
<210> 122
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 122
uucuggaaac augaauuuua 20
<210> 123
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 123
auuuugaaug uuuaaaauua 20
<210> 124
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 124
aaauuuaauc uggcugaaua 20
<210> 125
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 125
gaacuucguu aaauuuaauc 20
<210> 126
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 126
auuaaauuua acgaaguucc 20
<210> 127
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 127
uuaaauuuaa cgaaguuccu 20
<210> 128
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 128
uucuguacua gcauauuccc 20
<210> 129
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 129
uguguucuua aaaaaaaaug 20
<210> 130
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 130
aaaaaugugg aauuagaccc 20
<210> 131
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 131
cuacugggau cuucauuccu 20
<210> 132
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 132
acuacuggga ucuucauucc 20
<210> 133
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 133
gaaaagagug aaaaacuacu 20
<210> 134
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 134
agaaaagagu gaaaaacuac 20
<210> 135
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 135
gaauucaaau aaugccacaa 20
<210> 136
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 136
uguguauuug ucugccauug 20
<210> 137
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 137
cacccaugag cauauccaaa 20
<210> 138
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 138
uuccuuuugg auaugcucau 20
<210> 139
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 139
cuuccuuuug gauaugcuca 20
<210> 140
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 140
caugagcaua uccaaaagga 20
<210> 141
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 141
uauccaaaag gaaggauuga 20
<210> 142
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 142
uuuccuucaa uccuuccuuu 20
<210> 143
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 143
aaggaaggau ugaaggaaag 20
<210> 144
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 144
gaaggauuga aggaaagagg 20
<210> 145
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 145
gaggaggaag aaauggagaa 20
<210> 146
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 146
aggaagaaau ggagaaagga 20
<210> 147
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 147
gaaggaagag gggaagagag 20
<210> 148
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 148
gaagagggga agagagagga 20
<210> 149
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 149
aggggaagag agaggaugga 20
<210> 150
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 150
ggggaagaga gaggauggaa 20
<210> 151
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 151
aagagagagg auggaaggga 20
<210> 152
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 152
agagaggaug gaagggaugg 20
<210> 153
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 153
ggaagggaug gaggagaaga 20
<210> 154
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 154
gaagaaggaa aaauaaauaa 20
<210> 155
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 155
aggaaaaaua aauaauggag 20
<210> 156
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 156
aaauaaauaa uggagaggag 20
<210> 157
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 157
uggagaggag aggagaaaaa 20
<210> 158
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 158
agaggagagg agaaaaaagg 20
<210> 159
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 159
gaggagagga gaaaaaagga 20
<210> 160
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 160
aggagaggag aaaaaaggag 20
<210> 161
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 161
aggagaaaaa aggaggggag 20
<210> 162
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 162
gagaggagag gagaagggau 20
<210> 163
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 163
agaggagagg agaagggaua 20
<210> 164
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 164
gaagagaaag agaaagggaa 20
<210> 165
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 165
aagagaggaa agaagagaag 20
<210> 166
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 166
gagagaaaag aaacgaagag 20
<210> 167
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 167
agagaaaaga aacgaagaga 20
<210> 168
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 168
gagaaaagaa acgaagagag 20
<210> 169
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 169
aaagaaacga agagagggga 20
<210> 170
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 170
aagaaacgaa gagaggggaa 20
<210> 171
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 171
ggaagggaag gaaaaaaaag 20
<210> 172
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 172
aagacugaca guucaaauuu 20
<210> 173
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 173
acugacaguu caaauuuugg 20
<210> 174
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 174
uucaaauuuu gguggugaua 20
<210> 175
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 175
aauagaaacu caaacucugu 20
<210> 176
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 176
guacaauagu auaaccccuu 20
<210> 177
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 177
cuauuaaagg uuuuccaaag 20
<210> 178
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 178
acuauuaaag guuuuccaaa 20
<210> 179
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 179
uacuauuaaa gguuuuccaa 20
<210> 180
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 180
gcauuugugg auacuauuaa 20
<210> 181
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 181
uuaauaguau ccacaaaugc 20
<210> 182
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 182
uaugcaauuu uugccaagau 20
<210> 183
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 183
uuuugccaag augggaguau 20
<210> 184
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 184
uuugccaaga ugggaguaug 20
<210> 185
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 185
ucagugagau gagauaucaa 20
<210> 186
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 186
cagugagaug agauaucaaa 20
<210> 187
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 187
ccaucucccu aaucuccaau 20
<210> 188
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 188
ccaauuggag auuagggaga 20
<210> 189
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 189
gcuuugccaa uuggagauua 20
<210> 190
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 190
ggcuuugcca auuggagauu 20
<210> 191
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 191
aauuggcaaa gccagacuug 20
<210> 192
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 192
agucuguauu gccccaaguc 20
<210> 193
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 193
agacuugggg caauacagac 20
<210> 194
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 194
acauuuggug auaaaucauu 20
<210> 195
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 195
ccaaauguuc uuucuucagc 20
<210> 196
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 196
auaauaguau augcuucaua 20
<210> 197
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 197
cggagcacuu acucugcucu 20
<210> 198
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 198
agcauuuuag uucacaagcu 20
<210> 199
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 199
uguaacuaau aaauaccagg 20
<210> 200
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 200
agguguaacu aauaaauacc 20
<210> 201
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 201
ucugacccaa acuaggaauu 20
<210> 202
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 202
aaggaaaaga auaugacguc 20
<210> 203
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 203
aggaaaagaa uaugacguca 20
<210> 204
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 204
ggaaaagaau augacgucag 20
<210> 205
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 205
gaaaagaaua ugacgucagg 20
<210> 206
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 206
ucagggggag gcaagucagu 20
<210> 207
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 207
cagggggagg caagucaguu 20
<210> 208
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 208
aucacauaua ggcaccuauc 20
<210> 209
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 209
cagguaccag cuacuguguu 20
<210> 210
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 210
acuauccacg gauauacacu 20
<210> 211
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 211
cacaguagcu gguaccugau 20
<210> 212
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 212
aucacauaua ggcaccuauc 20
<210> 213
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 213
ugauaggugc cuauauguga 20
<210> 214
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 214
aggugccuau augugaugga 20
<210> 215
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 215
ggugccuaua ugugauggau 20
<210> 216
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 216
uccacccauc caucacauau 20
<210> 217
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 217
acagcccgac agaugaaaaa 20
<210> 218
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 218
augaaaaaug gacaauuaug 20
<210> 219
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 219
aaaaauggac aauuaugagg 20
<210> 220
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 220
aaaauggaca auuaugagga 20
<210> 221
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 221
aaauggacaa uuaugaggag 20
<210> 222
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 222
gaggagggga gagugcagac 20
<210> 223
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 223
aggaggggag agugcagaca 20
<210> 224
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 224
cuucaccucc uuuacaauuu 20
<210> 225
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 225
uucaccuccu uuacaauuuu 20
<210> 226
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 226
gacucccaaa auuguaaagg 20
<210> 227
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 227
guggacuccc aaaauuguaa 20
<210> 228
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 228
uuuugggagu ccacacggca 20
<210> 229
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 229
aauuuguaug ccaugccgug 20
<210> 230
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 230
ccaagagagc cuuccgaaag 20
<210> 231
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 231
ccaggggggc cucuuucgga 20
<210> 232
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 232
ccuuccgaaa gaggcccccc 20
<210> 233
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 233
cuuccgaaag aggccccccu 20
<210> 234
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 234
aagaggcccc ccugggcaaa 20
<210> 235
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 235
cgguggccgu uugcccaggg 20
<210> 236
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 236
ucgguggccg uuugcccagg 20
<210> 237
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 237
aucgguggcc guuugcccag 20
<210> 238
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 238
caucgguggc cguuugccca 20
<210> 239
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 239
ccugggcaaa cggccaccga 20
<210> 240
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 240
ccaucggugg ccguuugccc 20
<210> 241
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 241
gcaaacggcc accgauggag 20
<210> 242
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 242
cuggcagacc ucuccaucgg 20
<210> 243
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 243
ggacuggcag accucuccau 20
<210> 244
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 244
ucugauuagg gugggggcgu 20
<210> 245
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 245
cacgccccca cccuaaucag 20
<210> 246
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 246
uuggccucug auuagggugg 20
<210> 247
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 247
uuuggccucu gauuagggug 20
<210> 248
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 248
guuuggccuc ugauuagggu 20
<210> 249
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 249
gguuuggccu cugauuaggg 20
<210> 250
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 250
aaggguuugg ccucugauua 20
<210> 251
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 251
gaaggguuug gccucugauu 20
<210> 252
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 252
uugcuuuuau cacaggcucc 20
<210> 253
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 253
cuaacaguug cuuuuaucac 20
<210> 254
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 254
cuucaaaguu guauugaccc 20
<210> 255
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 255
acucuuagac auaacacacc 20
<210> 256
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 256
uagaugccau aucucuuuuc 20
<210> 257
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 257
cauaggccag aaaagagaua 20
<210> 258
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 258
ggccuauguu auuaccugua 20
<210> 259
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 259
guccauacag guaauaacau 20
<210> 260
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 260
uaccuguaug gacuuugcac 20
<210> 261
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 261
uuccagugca aaguccauac 20
<210> 262
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 262
ugcucuuacu uaugcacacc 20
<210> 263
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 263
gcucuuacuu augcacaccu 20
<210> 264
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 264
cucuuacuua ugcacaccug 20
<210> 265
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 265
cagggcuggc ucuaugcccc 20
<210> 266
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 266
gcugaaaagc gauacagggc 20
<210> 267
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 267
gauggcugaa aagcgauaca 20
<210> 268
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 268
agauggcuga aaagcgauac 20
<210> 269
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 269
gggaguuauc uguagugaga 20
<210> 270
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 270
aaggcagcua gacaggacuu 20
<210> 271
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 271
gaaggcagcu agacaggacu 20
<210> 272
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 272
gauaaggaag gcagcuagac 20
<210> 273
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 273
cuagcugccu uccuuaucac 20
<210> 274
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 274
ugggugcuau uccugugaua 20
<210> 275
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 275
uaucacagga auagcaccca 20
<210> 276
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 276
cugagguacu gauggaccuu 20
<210> 277
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 277
ucugagguac ugauggaccu 20
<210> 278
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 278
agcucuggaa ugauggcuua 20
<210> 279
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 279
auuguggagc ucuggaauga 20
<210> 280
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 280
cuggaauaga aaauuggagu 20
<210> 281
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 281
uggguacggg gaacuaagac 20
<210> 282
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 282
uuaguucccc guacccauca 20
<210> 283
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 283
uauuuuccuu gauggguacg 20
<210> 284
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 284
auauuuuccu ugauggguac 20
<210> 285
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 285
aauauuuucc uugaugggua 20
<210> 286
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 286
ggaaggaaau gagaacggaa 20
<210> 287
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 287
aggaaggaaa ugagaacgga 20
<210> 288
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 288
auacuucaag gccucaauga 20
<210> 289
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 289
gacuagguag accuucauug 20
<210> 290
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 290
uucuucuugc uaaggugacu 20
<210> 291
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 291
gagauugauu cuucuugcua 20
<210> 292
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 292
guguucuaug agguuggaga 20
<210> 293
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 293
ggaugagugu ucuaugaggu 20
<210> 294
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 294
caugggauga guguucuaug 20
<210> 295
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 295
ugagucaggg aguggugcau 20
<210> 296
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 296
augagucagg gaguggugca 20
<210> 297
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 297
ccacucccug acucauaucu 20
<210> 298
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 298
uaaggccuag auaugaguca 20
<210> 299
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 299
guaaggccua gauaugaguc 20
<210> 300
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 300
auaucuaggc cuuacauugc 20
<210> 301
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 301
aaauuaauua gaggcauaga 20
<210> 302
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 302
gaaauuaauu agaggcauag 20
<210> 303
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 303
gaacacauga aauuaauuag 20
<210> 304
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 304
ccaaugaguu ucuucaauac 20
<210> 305
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 305
caaauauaau agaagcaagu 20
<210> 306
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 306
aaauaacuuc ccuuuuagga 20
<210> 307
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 307
ggaaaaauaa cuucccuuuu 20
<210> 308
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 308
uuuugaacag aaaugauauu 20
<210> 309
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 309
aguucaagua gauaucagaa 20
<210> 310
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 310
aaguucaagu agauaucaga 20
<210> 311
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 311
ggguggcugu uuaaagaggg 20
<210> 312
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 312
gugggguggc uguuuaaaga 20
<210> 313
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 313
uguggggugg cuguuuaaag 20
<210> 314
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 314
ugccaaccag acugugcgcc 20
<210> 315
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 315
aaccuggcgc acagucuggu 20
<210> 316
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 316
aaccagacug ugcgccaggu 20
<210> 317
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 317
uaccaaccug gcgcacaguc 20
<210> 318
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 318
ucugucagac uuuaccaacc 20
<210> 319
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 319
auaugugaag cccaacuacg 20
<210> 320
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 320
aguugcacaa ccacguaguu 20
<210> 321
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 321
gaguugcaca accacguagu 20
<210> 322
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 322
cuauagcuga cuuucaacca 20
<210> 323
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 323
aacuucuuug cagaugacca 20
<210> 324
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 324
uugcauugag gaugcgcagg 20
<210> 325
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 325
uuuuugcauu gaggaugcgc 20
<210> 326
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 326
gaccucauuu ugaugccaga 20
<210> 327
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 327
ugcccucugg caucaaaaug 20
<210> 328
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 328
augccagagg gcagcaaaca 20
<210> 329
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 329
cuguacuuaa uagcugaagg 20
<210> 330
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 330
acuguacuua auagcugaag 20
<210> 331
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 331
cagcuauuaa guacaguaaa 20
<210> 332
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 332
gagcauuuca aaugauaguu 20
<210> 333
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 333
cauuugaaau gcucccggcc 20
<210> 334
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 334
uuaggguggg ggcgugggug 20
<210> 335
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 335
uuuuaucaca ggcuccagga 20
<210> 336
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 336
uuuaucacag gcuccaggaa 20
<210> 337
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 337
cacaggcucc aggaaggguu 20
<210> 338
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 338
aucagaggcc aaacccuucc 20
<210> 339
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 339
cucugauuag ggugggggcg 20
<210> 340
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 340
gauuagggug ggggcguggg 20
<210> 341
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 341
auuagggugg gggcgugggu 20
<210> 342
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 342
guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 343
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 343
guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 344
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 344
guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 345
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 345
guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 346
<211> 74
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 346
aacagcauag caaguuaaaa uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag 60
ucggugcuuu uuuu 74
<210> 347
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 347
aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 348
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 348
aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 349
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 349
aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 350
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 350
aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 351
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 351
uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 352
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 352
uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 353
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 353
uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 354
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 354
uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 355
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 355
uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 356
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 356
uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 357
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 357
uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 358
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 358
uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 359
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 359
cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 360
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 360
cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 361
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 361
cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 362
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 362
cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 363
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 363
cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 364
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 364
cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 365
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 365
cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 366
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 366
cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 367
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 367
uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 368
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 368
uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 369
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 369
uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 370
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 370
uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 371
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 371
uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 372
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 372
uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 373
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 373
uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 374
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 374
uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 375
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 375
acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 376
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 376
acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 377
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 377
acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 378
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 378
acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 379
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 379
ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 380
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 380
ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 381
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 381
ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 382
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 382
ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 383
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 383
gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 384
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 384
gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 385
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 385
gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 386
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 386
gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 387
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 387
guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 388
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 388
guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 389
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 389
guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 390
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 390
guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 391
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 391
aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 392
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 392
aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 393
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 393
aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 394
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 394
aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 395
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 395
augguauggg agguauacua guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 396
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 396
augguauggg agguauacua guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 397
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 397
augguauggg agguauacua guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 398
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 398
augguauggg agguauacua guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 399
<400> 399
000
<210> 400
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 400
cagucauuau uuauuaugaa uaagc 25
<210> 401
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 401
ggaaauaauu cacaugccaa uuauu 25
<210> 402
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 402
uauuuggcua ucuuuucacu aagcu 25
<210> 403
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 403
cacuaagcua gguaaucuag ccaga 25
<210> 404
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 404
uaagcuaggu aaucuagcca gaagg 25
<210> 405
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 405
uagguaaucu agccagaagg uggau 25
<210> 406
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 406
uaaucuagcc agaaggugga uaggu 25
<210> 407
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 407
uggauaggua ggauuuuccc cacuu 25
<210> 408
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 408
guaggauuuu ccccacuuag guuca 25
<210> 409
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 409
gccuguaugu gaaucuacag cacac 25
<210> 410
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 410
ugcuauguug uuucuaauuc ucuuc 25
<210> 411
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 411
ugagaaaagu ucugugcaaa uuaac 25
<210> 412
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 412
gagaaaaguu cugugcaaau uaacu 25
<210> 413
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 413
ccuguuugua gauguaacuu auuug 25
<210> 414
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 414
aacuuauuug uggcacuaau uucua 25
<210> 415
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 415
gucugcauua agauauauuu ccuga 25
<210> 416
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 416
cauuaagaua uauuuccuga agguu 25
<210> 417
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 417
auuaagauau auuuccugaa gguuu 25
<210> 418
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 418
acuacugaca uuuaucaccu ucuuu 25
<210> 419
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 419
uuaaaagaca aauucaaauc cugca 25
<210> 420
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 420
caccaaaagc auauauuuga aaaac 25
<210> 421
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 421
aagcauauau uugaaaaaca ggauu 25
<210> 422
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 422
gcgugccaua uuaugcauua uuuaa 25
<210> 423
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 423
uaugcaaauu auaagucaga caguu 25
<210> 424
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 424
uugaaaauuu augccaucug auaag 25
<210> 425
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 425
aaaucuguuc cuccuaccca cccga 25
<210> 426
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 426
aaucuguucc uccuacccac ccgau 25
<210> 427
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 427
uccuacccac ccgaugggug ucugu 25
<210> 428
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 428
cacccgaugg gugucuguag gaaac 25
<210> 429
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 429
agacaacaua gaauguauag aaaca 25
<210> 430
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 430
gacaacauag aauguauaga aacaa 25
<210> 431
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 431
acaacauaga auguauagaa acaag 25
<210> 432
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 432
cauagaaugu auagaaacaa ggggu 25
<210> 433
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 433
auagaaugua uagaaacaag ggguu 25
<210> 434
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 434
uagaauguau agaaacaagg gguug 25
<210> 435
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 435
ggacucaugc gcauuuccac aauac 25
<210> 436
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 436
gcgcauuucc acaauacagg uaauu 25
<210> 437
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 437
auuuccacaa uacagguaau uaggu 25
<210> 438
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 438
ccacaauaca gguaauuagg uuggc 25
<210> 439
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 439
gguaauuagg uuggcugguu ucaga 25
<210> 440
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 440
guaauuaggu uggcugguuu cagaa 25
<210> 441
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 441
uagguuggcu gguuucagaa gggcc 25
<210> 442
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 442
agguuggcug guuucagaag ggcca 25
<210> 443
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 443
gccagggcau cacucaugac agcga 25
<210> 444
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 444
caucacucau gacagcgaug gucca 25
<210> 445
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 445
aucacucaug acagcgaugg uccac 25
<210> 446
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 446
agcgaugguc cacgggcccu cucua 25
<210> 447
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 447
gcgauggucc acgggcccuc ucuau 25
<210> 448
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 448
augggacuga uucacuguuc caaug 25
<210> 449
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 449
ugggacugau ucacuguucc aaugu 25
<210> 450
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 450
uuuuuauuaa aaaauauaaa uaaaa 25
<210> 451
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 451
aaaaauauaa auaaaauggc gcugc 25
<210> 452
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 452
auaaauaaaa uggcgcugca ggccu 25
<210> 453
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 453
auaaaauggc gcugcaggcc uaggc 25
<210> 454
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 454
aauggcgcug caggccuagg cugga 25
<210> 455
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 455
caggccuagg cuggaaggac ucugc 25
<210> 456
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 456
ucugcaggac ucugucuucg cacaa 25
<210> 457
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 457
acucugucuu cgcacaacgg cuucu 25
<210> 458
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 458
cugucuucgc acaacggcuu cuugg 25
<210> 459
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 459
cugucagaaa acaucacaaa cuagc 25
<210> 460
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 460
gaugacagac cacgcugacg ucgac 25
<210> 461
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 461
augacagacc acgcugacgu cgacu 25
<210> 462
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 462
acagaccacg cugacgucga cuggg 25
<210> 463
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 463
gggcggcacg cguccacccc acccc 25
<210> 464
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 464
ggcggcacgc guccacccca ccccu 25
<210> 465
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 465
gcggcacgcg uccaccccac cccug 25
<210> 466
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 466
cggcacgcgu ccaccccacc ccugg 25
<210> 467
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 467
gggcuucaaa uuuucucaga acuua 25
<210> 468
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 468
ggcuucaaau uuucucagaa cuuaa 25
<210> 469
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 469
aaacugccac acaucuugag cucuc 25
<210> 470
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 470
aacugccaca caucuugagc ucucu 25
<210> 471
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 471
ugagcucucu ggguacuacg ccgaa 25
<210> 472
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 472
gagcucucug gguacuacgc cgaau 25
<210> 473
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 473
agcucucugg guacuacgcc gaaug 25
<210> 474
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 474
gcucucuggg uacuacgccg aaugg 25
<210> 475
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 475
gggggugugu gaagaaccua gaaag 25
<210> 476
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 476
gugugugaag aaccuagaaa gaggu 25
<210> 477
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 477
gaaccuagaa agagguugga gacag 25
<210> 478
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 478
cuuagugaaa agauagccaa auaau 25
<210> 479
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 479
gggaaaaucc uaccuaucca ccuuc 25
<210> 480
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 480
cacauacagg ccgugaaccu aagug 25
<210> 481
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 481
ucacauacag gccgugaacc uaagu 25
<210> 482
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 482
uucacauaca ggccgugaac cuaag 25
<210> 483
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 483
accugugugc uguagauuca cauac 25
<210> 484
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 484
uagaaacaac auagcaaauu aaaau 25
<210> 485
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 485
ucucaguuug guauuuuuua cugcu 25
<210> 486
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 486
aauuugcaca gaacuuuucu caguu 25
<210> 487
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 487
acaaacaggu gguaaaaauu cuuuc 25
<210> 488
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 488
caaauaaguu acaucuacaa acagg 25
<210> 489
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 489
ccacaaauaa guuacaucua caaac 25
<210> 490
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 490
gauuuuagag gggggaaauu auagg 25
<210> 491
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 491
gcagauuuua gaggggggaa auuau 25
<210> 492
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 492
gaaauuuggg gcagauuuua gaggg 25
<210> 493
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 493
ggaaauuugg ggcagauuuu agagg 25
<210> 494
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 494
aggaaauuug gggcagauuu uagag 25
<210> 495
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 495
caggaaauuu ggggcagauu uuaga 25
<210> 496
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 496
ucaggaaauu uggggcagau uuuag 25
<210> 497
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 497
uuuaguacuu acaucaggaa auuug 25
<210> 498
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 498
cuuuaguacu uacaucagga aauuu 25
<210> 499
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 499
ucuuuaguac uuacaucagg aaauu 25
<210> 500
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 500
auaaaacuuc uuuaguacuu acauc 25
<210> 501
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 501
ucuaauuuua gguucccaaa ccuuc 25
<210> 502
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 502
guuucuuauu aaauauucua auuuu 25
<210> 503
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 503
cugggcgagc gguaaauccu aaaga 25
<210> 504
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 504
uuaggaaaga acaucacugg gcgag 25
<210> 505
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 505
auuuagcuua ggaaagaaca ucacu 25
<210> 506
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 506
aauuuagcuu aggaaagaac aucac 25
<210> 507
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 507
uugaauuugu cuuuuaauuu agcuu 25
<210> 508
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 508
uauaugcuuu ugguggcuac caugc 25
<210> 509
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 509
cuguuuuuca aauauaugcu uuugg 25
<210> 510
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 510
auccuguuuu ucaaauauau gcuuu 25
<210> 511
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 511
gcauaccauu aaauaaugca uaaua 25
<210> 512
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 512
auugcuguuu auuaaugcug aagug 25
<210> 513
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 513
caaggagaau caaaaugcaa aacuu 25
<210> 514
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 514
ucaaggagaa ucaaaaugca aaacu 25
<210> 515
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 515
gcuuaucaga uggcauaaau uuuca 25
<210> 516
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 516
gggaacuagg uuaccgcuua ucaga 25
<210> 517
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 517
gggcaggaga uguaggaggg gaacu 25
<210> 518
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 518
gagaaauggg caggagaugu aggag 25
<210> 519
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 519
ugagaaaugg gcaggagaug uagga 25
<210> 520
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 520
uugagaaaug ggcaggagau guagg 25
<210> 521
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 521
gauuugagaa augggcagga gaugu 25
<210> 522
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 522
ggaggaacag auuugagaaa ugggc 25
<210> 523
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 523
gguaggagga acagauuuga gaaau 25
<210> 524
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 524
ggguaggagg aacagauuug agaaa 25
<210> 525
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 525
uacagacacc caucgggugg guagg 25
<210> 526
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 526
uccuacagac acccaucggg ugggu 25
<210> 527
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 527
uguuuccuac agacacccau cgggu 25
<210> 528
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 528
cuguuuccua cagacaccca ucggg 25
<210> 529
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 529
uaccuguuuc cuacagacac ccauc 25
<210> 530
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 530
guaccuguuu ccuacagaca cccau 25
<210> 531
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 531
aauuuuuaau gcuuauaaga caaug 25
<210> 532
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 532
acacaauaaa uguuggagcu uuagg 25
<210> 533
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 533
uugacacaau aaauguugga gcuuu 25
<210> 534
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 534
ugcuuaacau ugacacaaua aaugu 25
<210> 535
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 535
ccagccaacc uaauuaccug uauug 25
<210> 536
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 536
accaucgcug ucaugaguga ugccc 25
<210> 537
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 537
gaaucagucc cauagagagg gcccg 25
<210> 538
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 538
gaacagugaa ucagucccau agaga 25
<210> 539
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 539
ggaacaguga aucaguccca uagag 25
<210> 540
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 540
uaaaaacaaa aaaacagacc cacau 25
<210> 541
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 541
gaguccugca gaguccuucc agccu 25
<210> 542
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 542
gcgugccgcc cagucgacgu cagcg 25
<210> 543
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 543
aaauuugaag cccccagggg ugggg 25
<210> 544
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 544
agaaaauuug aagcccccag gggug 25
<210> 545
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 545
gagaaaauuu gaagccccca ggggu 25
<210> 546
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 546
ugagaaaauu ugaagccccc agggg 25
<210> 547
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 547
uucugagaaa auuugaagcc cccag 25
<210> 548
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 548
guucugagaa aauuugaagc cccca 25
<210> 549
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 549
aguucugaga aaauuugaag ccccc 25
<210> 550
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 550
cucaagaugu guggcaguuu ucgga 25
<210> 551
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 551
agagcucaag auguguggca guuuu 25
<210> 552
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 552
uaguacccag agagcucaag augug 25
<210> 553
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 553
ucuagguucu ucacacaccc ccauu 25
<210> 554
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 554
uuaauuuuuu uuauuuuuuc aauaa 25
<210> 555
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 555
uaauuuuuuu uauuuuuuca auaaa 25
<210> 556
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 556
uuauuuuuuc aauaaaggga caaaa 25
<210> 557
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 557
uauuuuuuca auaaagggac aaaau 25
<210> 558
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 558
aaagggacaa aaugggugua ugaac 25
<210> 559
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 559
acaacugcca aaaaaacaca gacag 25
<210> 560
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 560
ccagaaacaa auacaauaaa aagcc 25
<210> 561
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 561
uaaaaagcca gguuguaaug accuu 25
<210> 562
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 562
caaauuaagu gccucuguuu ugaac 25
<210> 563
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 563
aaauuaagug ccucuguuuu gaaca 25
<210> 564
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 564
aguuacgaca aacagcuuuc auuac 25
<210> 565
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 565
acagcuuuca uuacaggaau agaaa 25
<210> 566
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 566
auuuacaaaa aaguauugac uaaag 25
<210> 567
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 567
uuuacaaaaa aguauugacu aaagc 25
<210> 568
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 568
uaaauauaaa gcaccauuua guuuu 25
<210> 569
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 569
ggcaaugaaa aaaacugcaa aacau 25
<210> 570
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 570
ucuuucuuuc uuuuacugca uauga 25
<210> 571
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 571
uuuacugcau augaagguaa gaugc 25
<210> 572
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 572
auaugaaggu aagaugcugg aaugu 25
<210> 573
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 573
uaugaaggua agaugcugga augua 25
<210> 574
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 574
agaugcugga auguagggug auaga 25
<210> 575
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 575
cuggaaugua gggugauaga aggaa 25
<210> 576
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 576
uggaauguag ggugauagaa ggaaa 25
<210> 577
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 577
uuagcuugca guacugcaua cagua 25
<210> 578
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 578
gcaguacugc auacaguaug gcagc 25
<210> 579
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 579
ugcauacagu auggcagcag gaaaa 25
<210> 580
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 580
uggcagcagg aaaaaggaac aaaaa 25
<210> 581
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 581
acagccaucc augugacauu cuagc 25
<210> 582
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 582
caggcucccc caaaccgcca uuaua 25
<210> 583
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 583
ccugccaaau uaaaaaaaua uacug 25
<210> 584
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 584
ucuuuuuuuu uuccacuacc aaaaa 25
<210> 585
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 585
aaagaccaua aauguauuuu agcau 25
<210> 586
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 586
uuuuuuuuuu uuacaaccug aagag 25
<210> 587
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 587
caaccugaag agcggugugu aucca 25
<210> 588
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 588
uagaauuucc acuaccauuu uuaaa 25
<210> 589
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 589
aagucuugua acaccaccaa gacaa 25
<210> 590
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 590
uaaguaagcu caauagucaa guaaa 25
<210> 591
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 591
uaagcucaau agucaaguaa auggc 25
<210> 592
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 592
uucccuuaag uauagaccug uaaac 25
<210> 593
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 593
ucccuuaagu auagaccugu aaacu 25
<210> 594
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 594
gugcacuuaa uuguccuauc ugagc 25
<210> 595
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 595
auuagagaaa agauacagau aucac 25
<210> 596
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 596
agucaagugc uauuugaaca ccaac 25
<210> 597
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 597
gucaagugcu auuugaacac caacu 25
<210> 598
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 598
ucaagugcua uuugaacacc aacug 25
<210> 599
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 599
guuaacacaa auagcacaca gugua 25
<210> 600
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 600
ggaaaagaaa ugaaguacaa cuuuu 25
<210> 601
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 601
gaaaagaaau gaaguacaac uuuua 25
<210> 602
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 602
cuuauauacc uguucuaguu uuaaa 25
<210> 603
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 603
uauugucagc cucuuccuuu caaua 25
<210> 604
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 604
ccucuuccuu ucaauauggu auaca 25
<210> 605
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 605
uguccacuug acaaccaagu agauc 25
<210> 606
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 606
caaguagauc uggaucuauu ucuuu 25
<210> 607
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 607
uuacuagugu auuuaauugc guucc 25
<210> 608
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 608
uacuagugua uuuaauugcg uucca 25
<210> 609
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 609
ucauuguuua aaaaaaauaa aacuu 25
<210> 610
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 610
cauuguuuaa aaaaaauaaa acuuu 25
<210> 611
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 611
agcccauuuc uuuuaagcuc ucacc 25
<210> 612
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 612
accaggagca aaguagcuuu uauac 25
<210> 613
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 613
aguuuuguuu auaaaauuaa acuaa 25
<210> 614
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 614
acuaaaggaa aaaugaugau uaacu 25
<210> 615
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 615
aaaaugauga uuaacuagga cauaa 25
<210> 616
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 616
aaaugaugau uaacuaggac auaau 25
<210> 617
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 617
cuaggacaua augggucauc uuuuu 25
<210> 618
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 618
auauagaauu auaugcuagu uccua 25
<210> 619
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 619
uaacaaguag aaagaaccau cgaug 25
<210> 620
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 620
caucgaugug guuuuaauag aucca 25
<210> 621
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 621
guuuuucugu uaauuuguca auuca 25
<210> 622
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 622
ucagugcuau cuauucuguc uauag 25
<210> 623
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 623
cagugcuauc uauucugucu auaga 25
<210> 624
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 624
uauguauuac agaauguaug cagca 25
<210> 625
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 625
cucucucucu cuuuuucucu cagaa 25
<210> 626
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 626
cucucuuuuu cucucagaac ggaac 25
<210> 627
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 627
caacauguuu gcucagcaac gaauu 25
<210> 628
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 628
aacauguuug cucagcaacg aauua 25
<210> 629
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 629
acauguaaau uauugcacaa gagaa 25
<210> 630
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 630
gccccauaca gaucaugcau ucaaa 25
<210> 631
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 631
augcauucaa acggugagaa cauaa 25
<210> 632
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 632
aaagaaaaag aaaaagaaaa aaaac 25
<210> 633
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 633
agaaaaagaa aaaaaacagg ugugc 25
<210> 634
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 634
uguuuguuug uuuguuuaaa ucaca 25
<210> 635
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 635
guuuguuugu uuguuuaaau cacau 25
<210> 636
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 636
acaugggacu agaaaaaaau ccuac 25
<210> 637
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 637
caugggacua gaaaaaaauc cuaca 25
<210> 638
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 638
gacuagaaaa aaauccuaca gggag 25
<210> 639
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 639
acuagaaaaa aauccuacag ggagu 25
<210> 640
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 640
cuagaaaaaa auccuacagg gagug 25
<210> 641
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 641
aaaaaaaucc uacagggagu ggggc 25
<210> 642
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 642
aaaauccuac agggaguggg gcugg 25
<210> 643
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 643
aaauccuaca gggagugggg cugga 25
<210> 644
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 644
uacagggagu ggggcuggag ggcga 25
<210> 645
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 645
acagggagug gggcuggagg gcgau 25
<210> 646
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 646
cagggagugg ggcuggaggg cgaug 25
<210> 647
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 647
gaguggggcu ggagggcgau gggga 25
<210> 648
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 648
aguggggcug gagggcgaug gggaa 25
<210> 649
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 649
guggggcugg agggcgaugg ggaag 25
<210> 650
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 650
gcuggagggc gauggggaag gggag 25
<210> 651
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 651
cgauggggaa ggggaguggu gaaaa 25
<210> 652
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 652
gauggggaag gggaguggug aaaaa 25
<210> 653
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 653
auggggaagg ggagugguga aaaag 25
<210> 654
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 654
uggggaaggg gaguggugaa aaagg 25
<210> 655
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 655
ggggaguggu gaaaaagggg guguc 25
<210> 656
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 656
gaguggugaa aaagggggug ucagg 25
<210> 657
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 657
aguggugaaa aagggggugu caggu 25
<210> 658
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 658
aaaaaggggg ugucaggugg gagug 25
<210> 659
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 659
aaaagggggu gucagguggg aguga 25
<210> 660
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 660
aggggguguc aggugggagu gaggg 25
<210> 661
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 661
ggggguguca ggugggagug aggga 25
<210> 662
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 662
ggggugucag gugggaguga gggag 25
<210> 663
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 663
gugccauuuu uucauguguu ucucc 25
<210> 664
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 664
ugccauuuuu ucauguguuu cucca 25
<210> 665
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 665
ucuccagggu acuguacacg cuaaa 25
<210> 666
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 666
acauuuguaa acguccuucc ccacc 25
<210> 667
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 667
accuggccau gcguuuucau gugcc 25
<210> 668
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 668
caugugccug gugagcuugc uacuc 25
<210> 669
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 669
augugccugg ugagcuugcu acucu 25
<210> 670
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 670
cuggugagcu ugcuacucug ggcac 25
<210> 671
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 671
cauaguugca cagcucgcau uuaua 25
<210> 672
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 672
gcauuuauaa ggccuuucgc ccgug 25
<210> 673
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 673
ccuuucgccc guguggcuuc uccug 25
<210> 674
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 674
ucgcugcguc ugcccucuuu ugagc 25
<210> 675
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 675
cgcugcgucu gcccucuuuu gagcu 25
<210> 676
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 676
ugcccucuuu ugagcugggc cugcc 25
<210> 677
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 677
gcccucuuuu gagcugggcc ugccc 25
<210> 678
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 678
cuuuugagcu gggccugccc gggcc 25
<210> 679
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 679
ccugcccggg cccggaccac uaaua 25
<210> 680
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 680
cugcccgggc ccggaccacu aauau 25
<210> 681
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 681
ugcccgggcc cggaccacua auaug 25
<210> 682
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 682
cccgagaucc cuccguccag cuccc 25
<210> 683
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 683
ccgagauccc uccguccagc ucccc 25
<210> 684
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 684
agaucccucc guccagcucc ccggg 25
<210> 685
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 685
ccuccgucca gcuccccggg cggug 25
<210> 686
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 686
gagaagcgca aacucccguu cuccg 25
<210> 687
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 687
ccguucuccg aggagugcuc cgacg 25
<210> 688
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 688
uucuccgagg agugcuccga cgagg 25
<210> 689
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 689
aggagugcuc cgacgaggag gcaaa 25
<210> 690
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 690
gacgaggagg caaaaggcga uuguc 25
<210> 691
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 691
cgauugucug gagucuccga agcua 25
<210> 692
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 692
ugucuggagu cuccgaagcu aagga 25
<210> 693
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 693
gucuggaguc uccgaagcua aggaa 25
<210> 694
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 694
cuaaggaagg gaucuuugag cugcc 25
<210> 695
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 695
aggaagggau cuuugagcug ccugg 25
<210> 696
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 696
uugagcugcc uggaggccgc guagc 25
<210> 697
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 697
cacugcgagu acacguucuc cgugu 25
<210> 698
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 698
acugcgagua cacguucucc guguu 25
<210> 699
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 699
uacacguucu ccguguuggg caucg 25
<210> 700
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 700
cguucuccgu guugggcauc gcggc 25
<210> 701
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 701
guucuccgug uugggcaucg cggcc 25
<210> 702
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 702
uucuccgugu ugggcaucgc ggccg 25
<210> 703
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 703
ucuccguguu gggcaucgcg gccgg 25
<210> 704
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 704
cguguugggc aucgcggccg ggggc 25
<210> 705
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 705
uucucgagcu ugaugcgcuu agaga 25
<210> 706
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 706
ucucgagcuu gaugcgcuua gagaa 25
<210> 707
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 707
cucgagcuug augcgcuuag agaag 25
<210> 708
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 708
cgcuuagaga aggggcucag cgagc 25
<210> 709
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 709
gcuuagagaa ggggcucagc gagcu 25
<210> 710
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 710
cuuagagaag gggcucagcg agcug 25
<210> 711
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 711
cuggggcugc ccagcagcag cuuuu 25
<210> 712
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 712
gcugcccagc agcagcuuuu uggac 25
<210> 713
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 713
agcagcuuuu uggacaggcc ccccg 25
<210> 714
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 714
acaggccccc cgaggccgac ucgcc 25
<210> 715
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 715
caggcccccc gaggccgacu cgccc 25
<210> 716
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 716
aggccccccg aggccgacuc gcccg 25
<210> 717
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 717
ggccgacucg cccggggagc agccg 25
<210> 718
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 718
gccauuaaca gugccaucgu cuaug 25
<210> 719
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 719
ccaucgucua ugcgguccga cucgc 25
<210> 720
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 720
cgagucuucg ucgcaagugu cccug 25
<210> 721
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 721
ucgucgcaag ugucccugug gcccu 25
<210> 722
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 722
caaguguccc uguggcccuc ggccu 25
<210> 723
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 723
gucccugugg cccucggccu cggcc 25
<210> 724
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 724
ccuguggccc ucggccucgg ccagg 25
<210> 725
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 725
guggccgcgc uuaugcuucu cgccc 25
<210> 726
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 726
gcgcuuaugc uucucgccca ggacc 25
<210> 727
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 727
cuuaugcuuc ucgcccagga ccugg 25
<210> 728
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 728
ugcuucucgc ccaggaccug gugga 25
<210> 729
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 729
uggaaggccu cgcugaagug cugca 25
<210> 730
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 730
cugagcacca ugcccugcau gacgu 25
<210> 731
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 731
ugagcaccau gcccugcaug acguc 25
<210> 732
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 732
caccaugccc ugcaugacgu cgggc 25
<210> 733
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 733
accaugcccu gcaugacguc gggca 25
<210> 734
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 734
gcccugcaug acgucgggca gggcg 25
<210> 735
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 735
gaccgcgccc cgcgagcugu ucucg 25
<210> 736
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 736
cgcgccccgc gagcuguucu cgugg 25
<210> 737
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 737
guucucgugg uggcgcgccg ccucc 25
<210> 738
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 738
ccucuuccuc cucguccccg uucuc 25
<210> 739
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 739
cucuuccucc ucguccccgu ucucc 25
<210> 740
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 740
cuccucgucc ccguucuccg ggauc 25
<210> 741
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 741
ucguccccgu ucuccgggau caggu 25
<210> 742
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 742
cguccccguu cuccgggauc agguu 25
<210> 743
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 743
guccccguuc uccgggauca gguug 25
<210> 744
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 744
uuggggucgu ucucgcucuu gaacu 25
<210> 745
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 745
uucucgcucu ugaacuuggc cacca 25
<210> 746
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 746
gccaccacgg acuugagcgc gcugc 25
<210> 747
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 747
cugcuggcgc ugcccaccaa gucgc 25
<210> 748
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 748
gcgcugccca ccaagucgcu ggugc 25
<210> 749
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 749
cgcugcccac caagucgcug gugcc 25
<210> 750
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 750
ccaccaaguc gcuggugccg gguuc 25
<210> 751
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 751
caccaagucg cuggugccgg guucc 25
<210> 752
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 752
accaagucgc uggugccggg uuccg 25
<210> 753
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 753
ucgcuggugc cggguuccgg ggagc 25
<210> 754
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 754
cuggugccgg guuccgggga gcugg 25
<210> 755
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 755
gugccggguu ccggggagcu ggcgg 25
<210> 756
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 756
gagcuggcgg uggagagacc gucgu 25
<210> 757
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 757
agaccgucgu cggacuugac cguca 25
<210> 758
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 758
gaccgucguc ggacuugacc gucau 25
<210> 759
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 759
accgucgucg gacuugaccg ucaug 25
<210> 760
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 760
ccgucgucgg acuugaccgu caugg 25
<210> 761
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 761
cgauuugugc augugcgucu ucaug 25
<210> 762
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 762
gucuucaugu ggcgcuucag cuugc 25
<210> 763
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 763
cauguggcgc uucagcuugc uggcc 25
<210> 764
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 764
auguggcgcu ucagcuugcu ggccu 25
<210> 765
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 765
cagcuugcug gccugggugc acgcg 25
<210> 766
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 766
ggccugggug cacgcguggu cgcac 25
<210> 767
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 767
gcguggucgc acagguugca cuugu 25
<210> 768
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 768
cguggucgca cagguugcac uugua 25
<210> 769
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 769
gcacuuguag ggcuucucgc ccgug 25
<210> 770
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 770
gggcuucucg cccguguggc ugcgc 25
<210> 771
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 771
cguguggcug cgccggugca ccacc 25
<210> 772
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 772
gucuugccgc agaacucgca ugacu 25
<210> 773
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 773
agaacucgca ugacuuggac uugac 25
<210> 774
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 774
gaacucgcau gacuuggacu ugacc 25
<210> 775
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 775
aacucgcaug acuuggacuu gaccg 25
<210> 776
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 776
acucgcauga cuuggacuug accgg 25
<210> 777
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 777
gcaugacuug gacuugaccg ggggc 25
<210> 778
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 778
caugacuugg acuugaccgg gggcu 25
<210> 779
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 779
gacuuggacu ugaccggggg cuggg 25
<210> 780
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 780
acuuggacuu gaccgggggc uggga 25
<210> 781
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 781
uggacuugac cgggggcugg gaggg 25
<210> 782
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 782
acuugaccgg gggcugggag ggagg 25
<210> 783
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 783
cuugaccggg ggcugggagg gagga 25
<210> 784
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 784
uugaccgggg gcugggaggg aggag 25
<210> 785
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 785
accgggggcu gggagggagg agggg 25
<210> 786
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 786
gggagggagg aggggcggau ugcag 25
<210> 787
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 787
agggaggagg ggcggauugc agagg 25
<210> 788
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 788
gggaggaggg gcggauugca gagga 25
<210> 789
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 789
aggaggggcg gauugcagag gaggg 25
<210> 790
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 790
ggaggggcgg auugcagagg aggga 25
<210> 791
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 791
gaggggcgga uugcagagga gggag 25
<210> 792
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 792
aggggcggau ugcagaggag ggagg 25
<210> 793
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 793
ggggcggauu gcagaggagg gaggg 25
<210> 794
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 794
gggcggauug cagaggaggg agggg 25
<210> 795
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 795
cagaggaggg agggggggcg ucgcc 25
<210> 796
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 796
ggagggaggg ggggcgucgc cagga 25
<210> 797
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 797
gagggagggg gggcgucgcc aggaa 25
<210> 798
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 798
ggaggggggg cgucgccagg aaggg 25
<210> 799
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 799
ucgccaggaa gggcggcuug cuacc 25
<210> 800
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 800
caggaagggc ggcuugcuac cuggc 25
<210> 801
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 801
agggcggcuu gcuaccuggc uggaa 25
<210> 802
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 802
ggaaugguug caguaaccuu ugcau 25
<210> 803
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 803
gaaugguugc aguaaccuuu gcaua 25
<210> 804
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 804
gguugcagua accuuugcau agggc 25
<210> 805
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 805
guugcaguaa ccuuugcaua gggcu 25
<210> 806
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 806
caguaaccuu ugcauagggc ugggc 25
<210> 807
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 807
accuuugcau agggcugggc cggcc 25
<210> 808
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 808
ccuuugcaua gggcugggcc ggccu 25
<210> 809
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 809
cuuugcauag ggcugggccg gccug 25
<210> 810
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 810
uagggcuggg ccggccuggg gacag 25
<210> 811
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 811
ggcugggccg gccuggggac agcgg 25
<210> 812
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 812
gcugggccgg ccuggggaca gcggu 25
<210> 813
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 813
ucucuaaguc uccuagagaa aucca 25
<210> 814
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 814
cuaagucucc uagagaaauc caugg 25
<210> 815
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 815
uaagucuccu agagaaaucc auggc 25
<210> 816
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 816
gucuccuaga gaaauccaug gcggg 25
<210> 817
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 817
ccauggcggg aggcuccaua gccau 25
<210> 818
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 818
ggauucaacc gcagcacccu gucaa 25
<210> 819
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 819
accgcagcac ccugucaaag gcacu 25
<210> 820
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 820
ccgcagcacc cugucaaagg cacuc 25
<210> 821
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 821
cacccuguca aaggcacucg gguga 25
<210> 822
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 822
acccugucaa aggcacucgg gugau 25
<210> 823
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 823
cugucaaagg cacucgggug auggg 25
<210> 824
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 824
aaaggcacuc gggugauggg uggcc 25
<210> 825
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 825
aaggcacucg ggugaugggu ggcca 25
<210> 826
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 826
ggccagggcc aucucuuccg ccccc 25
<210> 827
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 827
cucuuccgcc cccaggcgcu cuaug 25
<210> 828
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 828
uuccgccccc aggcgcucua ugcgg 25
<210> 829
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 829
uccgccccca ggcgcucuau gcggu 25
<210> 830
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 830
ccgcccccag gcgcucuaug cggug 25
<210> 831
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 831
cgcccccagg cgcucuaugc ggugg 25
<210> 832
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 832
ugcggugggg guccaaguga ugucu 25
<210> 833
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 833
gguggggguc caagugaugu cucgg 25
<210> 834
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 834
ggggguccaa gugaugucuc ggugg 25
<210> 835
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 835
gugaugucuc ggugguggac uaaac 25
<210> 836
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 836
ugaugucucg gugguggacu aaaca 25
<210> 837
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 837
gaugucucgg ugguggacua aacag 25
<210> 838
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 838
augucucggu gguggacuaa acagg 25
<210> 839
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 839
ugucucggug guggacuaaa caggg 25
<210> 840
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 840
gucucggugg uggacuaaac agggg 25
<210> 841
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 841
ggugguggac uaaacagggg gggag 25
<210> 842
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 842
gugguggacu aaacaggggg ggagu 25
<210> 843
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 843
guggacuaaa caggggggga guggg 25
<210> 844
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 844
agugggugga aagcgcccuu cugcc 25
<210> 845
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 845
gguggaaagc gcccuucugc caggc 25
<210> 846
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 846
cggaagccuc ucucgauacu gaucc 25
<210> 847
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 847
cgauacugau ccugguauuc uuagc 25
<210> 848
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 848
gauccuggua uucuuagcag guuaa 25
<210> 849
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 849
auccugguau ucuuagcagg uuaaa 25
<210> 850
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 850
uccugguauu cuuagcaggu uaaag 25
<210> 851
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 851
guuauugucu gcaauaugaa uccca 25
<210> 852
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 852
ugucugcaau augaauccca uggag 25
<210> 853
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 853
cugcaauaug aaucccaugg agagg 25
<210> 854
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 854
aauaugaauc ccauggagag guggc 25
<210> 855
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 855
auaugaaucc cauggagagg uggcu 25
<210> 856
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 856
gaaucccaug gagagguggc uggga 25
<210> 857
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 857
aaggacauuc ugcaccuagu ccuga 25
<210> 858
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 858
aggacauucu gcaccuaguc cugaa 25
<210> 859
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 859
cuaguccuga agggauacca acccg 25
<210> 860
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 860
uaguccugaa gggauaccaa cccgc 25
<210> 861
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 861
aguccugaag ggauaccaac ccgcg 25
<210> 862
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 862
ugaagggaua ccaacccgcg ggguc 25
<210> 863
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 863
gaagggauac caacccgcgg gguca 25
<210> 864
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 864
aagggauacc aacccgcggg gucag 25
<210> 865
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 865
gcguguugca agagaaacca ugcac 25
<210> 866
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 866
gcaagagaaa ccaugcacug gugaa 25
<210> 867
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 867
uugcaaguug uacaugugua gcugc 25
<210> 868
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 868
ugcaaguugu acauguguag cugcu 25
<210> 869
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 869
ggaaaaacca cugucugugu uuuuu 25
<210> 870
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 870
guuucugguc uuuguuaagu ucuau 25
<210> 871
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 871
ccuggcuuuu uauuguauuu guuuc 25
<210> 872
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 872
aagaugacca aaggucauua caacc 25
<210> 873
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 873
aaaaaaaaaa auaaaagaug accaa 25
<210> 874
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 874
ugcuuaugug cccuguucaa aacag 25
<210> 875
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 875
aacuugaaau uuuaucuuuu acuau 25
<210> 876
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 876
uaacuugaaa uuuuaucuuu uacua 25
<210> 877
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 877
auggcaaugc agaauauuuu guuau 25
<210> 878
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 878
gcuuuaguca auacuuuuuu guaaa 25
<210> 879
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 879
acuaaauggu gcuuuauauu uagau 25
<210> 880
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 880
guuuuuuuca uugccaaaaa cuaaa 25
<210> 881
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 881
augcaguacu gcaagcuaau aacgu 25
<210> 882
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 882
aaugucacau ggauggcugu cauag 25
<210> 883
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 883
gaaugucaca uggauggcug ucaua 25
<210> 884
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 884
agaaugucac auggauggcu gucau 25
<210> 885
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 885
ggagccugcu agaaugucac augga 25
<210> 886
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 886
ugggggagcc ugcuagaaug ucaca 25
<210> 887
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 887
gagaagccau auaauggcgg uuugg 25
<210> 888
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 888
ugagaagcca uauaauggcg guuug 25
<210> 889
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 889
augagaagcc auauaauggc gguuu 25
<210> 890
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 890
gaugagaagc cauauaaugg cgguu 25
<210> 891
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 891
uuacagauga gaagccauau aaugg 25
<210> 892
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 892
acauuacaga ugagaagcca uauaa 25
<210> 893
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 893
ccacaguaua uuuuuuuaau uuggc 25
<210> 894
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 894
gcugccacag uauauuuuuu uaauu 25
<210> 895
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 895
uuuugguagu ggaaaaaaaa aagac 25
<210> 896
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 896
gguaucaaug uaccuuuuuu gguag 25
<210> 897
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 897
uuaaaaggua ucaauguacc uuuuu 25
<210> 898
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 898
uuuaacuguu gcuuguucuc uuaaa 25
<210> 899
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 899
uugaauuaaa uguucaucua guguu 25
<210> 900
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 900
uggucuuuuu ucuguauuuc uagaa 25
<210> 901
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 901
ugauuccuau gcuaaaauac auuua 25
<210> 902
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 902
uuaagauuau auaguacuua aauau 25
<210> 903
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 903
aaaaaaaaaa acauacauug gggaa 25
<210> 904
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 904
uuguaaaaaa aaaaaacaua cauug 25
<210> 905
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 905
guuguaaaaa aaaaaaacau acauu 25
<210> 906
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 906
gguuguaaaa aaaaaaaaca uacau 25
<210> 907
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 907
augccuugga uacacaccgc ucuuc 25
<210> 908
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 908
aaaugguagu ggaaauucua ugccu 25
<210> 909
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 909
cuuguuaucc auuuaaaaau gguag 25
<210> 910
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 910
acaagacuug uuauccauuu aaaaa 25
<210> 911
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 911
gcauuuuagg guuccauugu cuugg 25
<210> 912
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 912
acugcauuuu aggguuccau ugucu 25
<210> 913
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 913
auguuuaggg gggaacugca uuuua 25
<210> 914
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 914
uauguuuagg ggggaacugc auuuu 25
<210> 915
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 915
aaaaaacacu ucauuauguu uaggg 25
<210> 916
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 916
uaaaaaacac uucauuaugu uuagg 25
<210> 917
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 917
uuaaaaaaca cuucauuaug uuuag 25
<210> 918
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 918
uuuaaaaaac acuucauuau guuua 25
<210> 919
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 919
uuuuaaaaaa cacuucauua uguuu 25
<210> 920
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 920
ugauugcuuu cgcuucuaca gugca 25
<210> 921
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 921
gacgcaacau ugcaagcgcu gugaa 25
<210> 922
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 922
uacuugacua uugagcuuac uuacu 25
<210> 923
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 923
aaaaaaauug aacacaaucu cauug 25
<210> 924
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 924
ucccaguuua caggucuaua cuuaa 25
<210> 925
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 925
uucccaguuu acaggucuau acuua 25
<210> 926
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 926
gcacuguaca auuuucccag uuuac 25
<210> 927
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 927
gaguauaaaa uaaaccugcu cagau 25
<210> 928
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 928
aucuuuucuc uaaucagaga uacag 25
<210> 929
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 929
aauaaaagcu agcaucugcc ccagu 25
<210> 930
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 930
ugugcuauuu guguuaacau ggaag 25
<210> 931
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 931
acacugugug cuauuugugu uaaca 25
<210> 932
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 932
acuauuugcc auuuaaaacu agaac 25
<210> 933
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 933
aauaauauga uuuauuagca caacg 25
<210> 934
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 934
aggcugacaa uaagguuuga cagag 25
<210> 935
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 935
gaggcugaca auaagguuug acaga 25
<210> 936
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 936
agaggcugac aauaagguuu gacag 25
<210> 937
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 937
uauugaaagg aagaggcuga caaua 25
<210> 938
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 938
ccuuguauac cauauugaaa ggaag 25
<210> 939
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 939
uuaagaccuu guauaccaua uugaa 25
<210> 940
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 940
gauccagauc uacuugguug ucaag 25
<210> 941
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 941
caaaagaaau agauccagau cuacu 25
<210> 942
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 942
uuuaauaaug ucuuuuuaaa aauac 25
<210> 943
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 943
uggaacgcaa uuaaauacac uagua 25
<210> 944
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 944
uugaaugugu aaugugcaaa agccc 25
<210> 945
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 945
cuccugguga gagcuuaaaa gaaau 25
<210> 946
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 946
gcuccuggug agagcuuaaa agaaa 25
<210> 947
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 947
accaguauaa aagcuacuuu gcucc 25
<210> 948
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 948
uucuauauug uauuucucac aacaa 25
<210> 949
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 949
agcauugggu gagguaauaa accuu 25
<210> 950
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 950
uuguagcuua auucagcauu gggug 25
<210> 951
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 951
uaaacuugua gcuuaauuca gcauu 25
<210> 952
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 952
auaaacuugu agcuuaauuc agcau 25
<210> 953
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 953
cuuggaucua uuaaaaccac aucga 25
<210> 954
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 954
auuugguuuu aaaauaugag ugccu 25
<210> 955
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 955
aacagaacaa guuuauucua ucauu 25
<210> 956
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 956
uguaucaauu ggaaaggaag aaaaa 25
<210> 957
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 957
aaaggguuaa auguaucaau uggaa 25
<210> 958
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 958
ucucuaaagg guuaaaugua ucaau 25
<210> 959
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 959
uaugagcuaa augucugucu cuaaa 25
<210> 960
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 960
cuaugagcua aaugucuguc ucuaa 25
<210> 961
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 961
uaacgugagg aggaaaaaca gucuu 25
<210> 962
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 962
uacaguuuua uuuuauaacg ugagg 25
<210> 963
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 963
auguacaguu uuauuuuaua acgug 25
<210> 964
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 964
cuuagacagc auguauggua uguua 25
<210> 965
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 965
uuuuuuuaaa cuuagacagc augua 25
<210> 966
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 966
accguuugaa ugcaugaucu guaug 25
<210> 967
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 967
caccguuuga augcaugauc uguau 25
<210> 968
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 968
ucaccguuug aaugcaugau cugua 25
<210> 969
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 969
aucgcccucc agccccacuc ccugu 25
<210> 970
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 970
gaauaaugau auaaaaacug aauag 25
<210> 971
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 971
uacccuggag aaacacauga aaaaa 25
<210> 972
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 972
augccuuuua gcguguacag uaccc 25
<210> 973
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 973
augaaaacgc auggccaggu gggga 25
<210> 974
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 974
gcacaugaaa acgcauggcc aggug 25
<210> 975
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 975
ggcacaugaa aacgcauggc caggu 25
<210> 976
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 976
aggcacauga aaacgcaugg ccagg 25
<210> 977
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 977
accaggcaca ugaaaacgca uggcc 25
<210> 978
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 978
agcucaccag gcacaugaaa acgca 25
<210> 979
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 979
cugugcccag aguagcaagc ucacc 25
<210> 980
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 980
ccacaggaga agccacacgg gcgaa 25
<210> 981
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 981
ucacugucca caggagaagc cacac 25
<210> 982
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 982
cucacugucc acaggagaag ccaca 25
<210> 983
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 983
gaacuguagc aaucucacug uccac 25
<210> 984
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 984
acgcagcgac acuugugagu acugu 25
<210> 985
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 985
gacgcagcga cacuugugag uacug 25
<210> 986
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 986
gcccgggcag gcccagcuca aaaga 25
<210> 987
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 987
ggcccgggca ggcccagcuc aaaag 25
<210> 988
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 988
ccauauuagu gguccgggcc cgggc 25
<210> 989
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 989
cgccccauau uagugguccg ggccc 25
<210> 990
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 990
acgccccaua uuaguggucc gggcc 25
<210> 991
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 991
ggagcacgcc ccauauuagu ggucc 25
<210> 992
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 992
gggagcacgc cccauauuag ugguc 25
<210> 993
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 993
guggagggag cacgccccau auuag 25
<210> 994
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 994
ggggcgcagc ggcacgggaa gugga 25
<210> 995
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 995
cggggcgcag cggcacggga agugg 25
<210> 996
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 996
ucucggggcg cagcggcacg ggaag 25
<210> 997
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 997
gagggaucuc ggggcgcagc ggcac 25
<210> 998
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 998
ggagggaucu cggggcgcag cggca 25
<210> 999
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 999
uggacggagg gaucucgggg cgcag 25
<210> 1000
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1000
cggggagcug gacggaggga ucucg 25
<210> 1001
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1001
ccggggagcu ggacggaggg aucuc 25
<210> 1002
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1002
cccggggagc uggacggagg gaucu 25
<210> 1003
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1003
cacaccgccc ggggagcugg acgga 25
<210> 1004
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1004
ccacaccgcc cggggagcug gacgg 25
<210> 1005
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1005
ucuccacacc gcccggggag cugga 25
<210> 1006
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1006
cgcuucucca caccgcccgg ggagc 25
<210> 1007
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1007
aguuugcgcu ucuccacacc gcccg 25
<210> 1008
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1008
gaguuugcgc uucuccacac cgccc 25
<210> 1009
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1009
ggaguuugcg cuucuccaca ccgcc 25
<210> 1010
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1010
cucgucggag cacuccucgg agaac 25
<210> 1011
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1011
ccucgucgga gcacuccucg gagaa 25
<210> 1012
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1012
uuugccuccu cgucggagca cuccu 25
<210> 1013
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1013
agacaaucgc cuuuugccuc cucgu 25
<210> 1014
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1014
agcucaaaga ucccuuccuu agcuu 25
<210> 1015
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1015
guggcucgcc ggcuacgcgg ccucc 25
<210> 1016
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1016
uacucgcagu ggcucgccgg cuacg 25
<210> 1017
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1017
agaacgugua cucgcagugg cucgc 25
<210> 1018
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1018
caacacggag aacguguacu cgcag 25
<210> 1019
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1019
cugcccccgg ccgcgaugcc caaca 25
<210> 1020
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1020
cucgagaagg aguucgaccu gcccc 25
<210> 1021
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1021
uucucuaagc gcaucaagcu cgaga 25
<210> 1022
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1022
ggggccuguc caaaaagcug cugcu 25
<210> 1023
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1023
gggggccugu ccaaaaagcu gcugc 25
<210> 1024
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1024
gcuccccggg cgagucggcc ucggg 25
<210> 1025
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1025
ugcuccccgg gcgagucggc cucgg 25
<210> 1026
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1026
cugcuccccg ggcgagucgg ccucg 25
<210> 1027
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1027
gcugcucccc gggcgagucg gccuc 25
<210> 1028
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1028
ggcugcuccc cgggcgaguc ggccu 25
<210> 1029
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1029
ggccgcggcu gcuccccggg cgagu 25
<210> 1030
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1030
cuguuaaugg ccgcggcugc ucccc 25
<210> 1031
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1031
acuguuaaug gccgcggcug cuccc 25
<210> 1032
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1032
uagacgaugg cacuguuaau ggccg 25
<210> 1033
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1033
accgcauaga cgauggcacu guuaa 25
<210> 1034
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1034
ccggcgaguc ggaccgcaua gacga 25
<210> 1035
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1035
gacgaagacu cgguggccgg cgagu 25
<210> 1036
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1036
acacuugcga cgaagacucg guggc 25
<210> 1037
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1037
agggacacuu gcgacgaaga cucgg 25
<210> 1038
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1038
cacagggaca cuugcgacga agacu 25
<210> 1039
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1039
caccuggccg aggccgaggg ccaca 25
<210> 1040
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1040
ccaccuggcc gaggccgagg gccac 25
<210> 1041
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1041
agcgcggcca ccuggccgag gccga 25
<210> 1042
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1042
aagcgcggcc accuggccga ggccg 25
<210> 1043
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1043
aagcauaagc gcggccaccu ggccg 25
<210> 1044
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1044
ggcgagaagc auaagcgcgg ccacc 25
<210> 1045
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1045
agguccuggg cgagaagcau aagcg 25
<210> 1046
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1046
ucagcgaggc cuuccaccag guccu 25
<210> 1047
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1047
uucagcgagg ccuuccacca ggucc 25
<210> 1048
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1048
cagcacuuca gcgaggccuu ccacc 25
<210> 1049
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1049
cucagcucca ugcagcacuu cagcg 25
<210> 1050
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1050
gcccugcccg acgucaugca gggca 25
<210> 1051
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1051
gccgcgcccu gcccgacguc augca 25
<210> 1052
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1052
agccgcgccc ugcccgacgu caugc 25
<210> 1053
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1053
gcucgcgggg cgcggucgug ggcgu 25
<210> 1054
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1054
agcucgcggg gcgcggucgu gggcg 25
<210> 1055
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1055
agaacagcuc gcggggcgcg gucgu 25
<210> 1056
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1056
gagaacagcu cgcggggcgc ggucg 25
<210> 1057
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1057
caccacgaga acagcucgcg gggcg 25
<210> 1058
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1058
cgcgccacca cgagaacagc ucgcg 25
<210> 1059
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1059
gcgcgccacc acgagaacag cucgc 25
<210> 1060
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1060
ggcgcgccac cacgagaaca gcucg 25
<210> 1061
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1061
uacggcuucg ggcugagccu ggagg 25
<210> 1062
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1062
gacuacggcu ucgggcugag ccugg 25
<210> 1063
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1063
cuggacuacg gcuucgggcu gagcc 25
<210> 1064
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1064
cucgcucucc cuggacuacg gcuuc 25
<210> 1065
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1065
ucucgcucuc ccuggacuac ggcuu 25
<210> 1066
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1066
acugccucuc gcucucccug gacua 25
<210> 1067
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1067
cuccucgacu gccucucgcu cuccc 25
<210> 1068
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1068
gccagcagcg cgcucaaguc cgugg 25
<210> 1069
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1069
agcgccagca gcgcgcucaa guccg 25
<210> 1070
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1070
cggaacccgg caccagcgac uuggu 25
<210> 1071
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1071
ccggaacccg gcaccagcga cuugg 25
<210> 1072
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1072
uccccggaac ccggcaccag cgacu 25
<210> 1073
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1073
ucuccaccgc cagcuccccg gaacc 25
<210> 1074
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1074
gacggucucu ccaccgccag cuccc 25
<210> 1075
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1075
cccccaugac ggucaagucc gacga 25
<210> 1076
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1076
cacaugcaca aaucgucccc cauga 25
<210> 1077
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1077
aaccugugcg accacgcgug caccc 25
<210> 1078
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1078
ugguggugca ccggcgcagc cacac 25
<210> 1079
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1079
cugguggugc accggcgcag ccaca 25
<210> 1080
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1080
auuucagagc aaccuggugg ugcac 25
<210> 1081
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1081
acguucaaau uucagagcaa ccugg 25
<210> 1082
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1082
aagacguuca aauuucagag caacc 25
<210> 1083
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1083
ucaaguccaa gucaugcgag uucug 25
<210> 1084
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1084
uccgccccuc cucccuccca gcccc 25
<210> 1085
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1085
cagccaggua gcaagccgcc cuucc 25
<210> 1086
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1086
aaagguuacu gcaaccauuc cagcc 25
<210> 1087
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1087
cccaggccgg cccagcccua ugcaa 25
<210> 1088
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1088
gucuagccca ccgcuguccc caggc 25
<210> 1089
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1089
acacgucuag cccaccgcug ucccc 25
<210> 1090
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1090
cucuaggaga cuuagagagc uggca 25
<210> 1091
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1091
ucucuaggag acuuagagag cuggc 25
<210> 1092
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1092
gauuucucua ggagacuuag agagc 25
<210> 1093
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1093
ggagccuccc gccauggauu ucucu 25
<210> 1094
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1094
ccaauggcua uggagccucc cgcca 25
<210> 1095
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1095
gugcugcggu ugaauccaau ggcua 25
<210> 1096
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1096
gacagggugc ugcgguugaa uccaa 25
<210> 1097
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1097
cccgagugcc uuugacaggg ugcug 25
<210> 1098
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1098
acccaucacc cgagugccuu ugaca 25
<210> 1099
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1099
cacccaucac ccgagugccu uugac 25
<210> 1100
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1100
cgccuggggg cggaagagau ggccc 25
<210> 1101
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1101
auagagcgcc ugggggcgga agaga 25
<210> 1102
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1102
ccccaccgca uagagcgccu ggggg 25
<210> 1103
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1103
gacccccacc gcauagagcg ccugg 25
<210> 1104
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1104
ggacccccac cgcauagagc gccug 25
<210> 1105
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1105
uggaccccca ccgcauagag cgccu 25
<210> 1106
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1106
uuggaccccc accgcauaga gcgcc 25
<210> 1107
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1107
uuuaguccac caccgagaca ucacu 25
<210> 1108
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1108
gagagaggcu uccggccugg cagaa 25
<210> 1109
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1109
cgagagaggc uuccggccug gcaga 25
<210> 1110
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1110
ucaguaucga gagaggcuuc cggcc 25
<210> 1111
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1111
caggaucagu aucgagagag gcuuc 25
<210> 1112
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1112
agaauaccag gaucaguauc gagag 25
<210> 1113
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1113
accccuuuaa ccugcuaaga auacc 25
<210> 1114
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1114
auguccuucc cagccaccuc uccau 25
<210> 1115
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1115
aauguccuuc ccagccaccu cucca 25
<210> 1116
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1116
cgcggguugg uaucccuuca ggacu 25
<210> 1117
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1117
ugaccccgcg gguugguauc ccuuc 25
<210> 1118
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1118
acggaagucc ccugaccccg cgggu 25
<210> 1119
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1119
gaacacggaa guccccugac cccgc 25
<210> 1120
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1120
cgaacacgga aguccccuga ccccg 25
<210> 1121
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1121
uaagaaucua cuuagaaagc gaaca 25
<210> 1122
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1122
ucuugcaaca cgcacagaac acuca 25
<210> 1123
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1123
uugcaaacag ccauucacca gugca 25
<210> 1124
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1124
uaaggcucaa cuuacaaaua cccug 25
<210> 1125
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1125
aaggcucaac uuacaaauac ccugc 25
<210> 1126
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1126
aggcucaacu uacaaauacc cugcg 25
<210> 1127
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1127
gcggggcaua uucugcacuc auccc 25
<210> 1128
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1128
gcauauucug cacucauccc aggcg 25
<210> 1129
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1129
cauauucugc acucauccca ggcgu 25
<210> 1130
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1130
auauucugca cucaucccag gcgug 25
<210> 1131
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1131
ggauuagagc uccaugugca gaacg 25
<210> 1132
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1132
gauuagagcu ccaugugcag aacga 25
<210> 1133
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1133
auuagagcuc caugugcaga acgag 25
<210> 1134
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1134
agagcuccau gugcagaacg agggg 25
<210> 1135
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1135
uccaugugca gaacgagggg aggag 25
<210> 1136
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1136
ggaugagugc agaauaugcc ccgca 25
<210> 1137
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1137
gggaugagug cagaauaugc cccgc 25
<210> 1138
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1138
acauggagcu cuaaucccca cgccu 25
<210> 1139
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1139
cacauggagc ucuaaucccc acgcc 25
<210> 1140
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1140
gccucuccuc cccucguucu gcaca 25
<210> 1141
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1141
ucacagauaa acuucugcac uggag 25
<210> 1142
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1142
uucacagaua aacuucugca cugga 25
<210> 1143
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1143
uuucacagau aaacuucugc acugg 25
<210> 1144
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1144
uucuuucaca gauaaacuuc ugcac 25
<210> 1145
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1145
cauuuaccug cuauguguuc cuguu 25
<210> 1146
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1146
auuuaccugc uauguguucc uguuu 25
<210> 1147
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1147
uuuaccugcu auguguuccu guuug 25
<210> 1148
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1148
acguugauaa acaaucguca uccuc 25
<210> 1149
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1149
acaaucguca uccucuggcg ugacc 25
<210> 1150
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1150
ggcgugaccu ggaugccaac cucca 25
<210> 1151
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1151
gcgugaccug gaugccaacc uccac 25
<210> 1152
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1152
accuggaugc caaccuccac gggau 25
<210> 1153
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1153
gauuggaugc uuuuuucauc ucgau 25
<210> 1154
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1154
augcuuuuuu caucucgauu gguga 25
<210> 1155
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1155
ugcuuuuuuc aucucgauug gugaa 25
<210> 1156
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1156
gcuuuuuuca ucucgauugg ugaag 25
<210> 1157
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1157
uuuucaucuc gauuggugaa gggga 25
<210> 1158
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1158
ucaucucgau uggugaaggg gaagg 25
<210> 1159
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1159
cuuauccaca gcuuuuucua agcag 25
<210> 1160
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1160
cgauaaaaau aagaaugucc cccaa 25
<210> 1161
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1161
gauaaaaaua agaauguccc ccaau 25
<210> 1162
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1162
aauguccccc aaugggaagu ucauc 25
<210> 1163
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1163
gggaaguuca ucuggcacug cccac 25
<210> 1164
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1164
guucaucugg cacugcccac aggug 25
<210> 1165
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1165
caucuggcac ugcccacagg ugagg 25
<210> 1166
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1166
aggugaggag gucaugaucc ccuuc 25
<210> 1167
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1167
caugaucccc uucuggagcu cccaa 25
<210> 1168
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1168
augauccccu ucuggagcuc ccaac 25
<210> 1169
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1169
cccuucugga gcucccaacg ggccg 25
<210> 1170
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1170
cuggagcucc caacgggccg ugguc 25
<210> 1171
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1171
uggucugguu caucaucugu aagaa 25
<210> 1172
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1172
caucaucugu aagaauggcu ucaag 25
<210> 1173
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1173
ucuguaagaa uggcuucaag aggcu 25
<210> 1174
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1174
agaauggcuu caagaggcuc ggcug 25
<210> 1175
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1175
uggcuucaag aggcucggcu guggu 25
<210> 1176
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1176
acacauagca gguaaaugag aagca 25
<210> 1177
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1177
uuugccccaa acaggaacac auagc 25
<210> 1178
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1178
ucaucuagag gaauuugccc caaac 25
<210> 1179
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1179
acgauuguuu aucaacguca ucuag 25
<210> 1180
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1180
gagguuggca uccaggucac gccag 25
<210> 1181
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1181
uccaaucccg uggagguugg caucc 25
<210> 1182
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1182
aaaaagcauc caaucccgug gaggu 25
<210> 1183
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1183
augaaaaaag cauccaaucc cgugg 25
<210> 1184
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1184
gagaugaaaa aagcauccaa ucccg 25
<210> 1185
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1185
ggcagccucu gcuuagaaaa agcug 25
<210> 1186
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1186
ucgagcacaa acggaaacaa ugcaa 25
<210> 1187
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1187
cauucuuauu uuuaucgagc acaaa 25
<210> 1188
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1188
cagugccaga ugaacuuccc auugg 25
<210> 1189
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1189
gcagugccag augaacuucc cauug 25
<210> 1190
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1190
ggcagugcca gaugaacuuc ccauu 25
<210> 1191
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1191
gggcagugcc agaugaacuu cccau 25
<210> 1192
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1192
aggggaucau gaccuccuca ccugu 25
<210> 1193
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1193
aaggggauca ugaccuccuc accug 25
<210> 1194
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1194
cacggcccgu ugggagcucc agaag 25
<210> 1195
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1195
ccacggcccg uugggagcuc cagaa 25
<210> 1196
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1196
accacggccc guugggagcu ccaga 25
<210> 1197
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1197
augaugaacc agaccacggc ccguu 25
<210> 1198
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1198
gaugaugaac cagaccacgg cccgu 25
<210> 1199
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1199
uucuuacaga ugaugaacca gacca 25
<210> 1200
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1200
cgagaauucc cguuugcuua agugc 25
<210> 1201
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1201
gagaauuccc guuugcuuaa gugcu 25
<210> 1202
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1202
agaauucccg uuugcuuaag ugcug 25
<210> 1203
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1203
uaagugcugg gguuugccuu gcuug 25
<210> 1204
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1204
gguuugccuu gcuugcggcg agaca 25
<210> 1205
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1205
uugccuugcu ugcggcgaga caugg 25
<210> 1206
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1206
ugccuugcuu gcggcgagac auggu 25
<210> 1207
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1207
gcuugcggcg agacauggug ggcug 25
<210> 1208
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1208
cuugcggcga gacauggugg gcugc 25
<210> 1209
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1209
uugcggcgag acaugguggg cugcg 25
<210> 1210
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1210
cggcggcggc ggcggcggcg gcggg 25
<210> 1211
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1211
ggcggcggcg gcggcgggcg gacga 25
<210> 1212
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1212
cggcggcggc gggcggacga cggcu 25
<210> 1213
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1213
gggcggacga cggcucgguu cacau 25
<210> 1214
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1214
ggcggacgac ggcucgguuc acauc 25
<210> 1215
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1215
acggcucggu ucacaucggg agagc 25
<210> 1216
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1216
cggcucgguu cacaucggga gagcc 25
<210> 1217
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1217
caucgggaga gccggguuag aaaga 25
<210> 1218
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1218
aaauaaauua gaaauaauac aaaga 25
<210> 1219
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1219
auuagaaaua auacaaagau ggcgc 25
<210> 1220
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1220
uuagaaauaa uacaaagaug gcgca 25
<210> 1221
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1221
aagauggcgc agggaagaug aauug 25
<210> 1222
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1222
agauggcgca gggaagauga auugu 25
<210> 1223
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1223
aagaugaauu gugggagagc cguca 25
<210> 1224
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1224
ggcaaacccc agcacuuaag caaac 25
<210> 1225
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1225
aggcaaaccc cagcacuuaa gcaaa 25
<210> 1226
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1226
agcccaccau gucucgccgc aagca 25
<210> 1227
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1227
cucuggaguc uccuucuuuc uaacc 25
<210> 1228
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1228
aaggcacuga ugaagauauu uucuc 25
<210> 1229
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1229
uuucuaauuu auuuuggaug ucaaa 25
<210> 1230
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1230
ucuuuguauu auuucuaauu uauuu 25
<210> 1231
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1231
aaaaaagcuu aaaaaaaagc cauga 25
<210> 1232
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1232
gggaguuugg cuucucaucu gugca 25
<210> 1233
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1233
ucucaucugu gcauggccuc uaaac 25
<210> 1234
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1234
cucaucugug cauggccucu aaacu 25
<210> 1235
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1235
uggccucuaa acugggcagu gacca 25
<210> 1236
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1236
ucuaaacugg gcagugacca uggcc 25
<210> 1237
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1237
ccauggccug gucaccuccc cacuc 25
<210> 1238
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1238
ccuggucacc uccccacucu ggacc 25
<210> 1239
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1239
cuggucaccu ccccacucug gaccu 25
<210> 1240
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1240
gaccuggguu gccccucugu aaaca 25
<210> 1241
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1241
cuggguugcc ccucuguaaa caagg 25
<210> 1242
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1242
aaaucuuaug caauuuuugc caaga 25
<210> 1243
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1243
aaucuuaugc aauuuuugcc aagau 25
<210> 1244
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1244
ugcaauuuuu gccaagaugg gagua 25
<210> 1245
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1245
gcaauuuuug ccaagauggg aguau 25
<210> 1246
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1246
caauuuuugc caagauggga guaug 25
<210> 1247
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1247
agaugggagu auggggagag aagag 25
<210> 1248
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1248
gaguaugggg agagaagagu ggaaa 25
<210> 1249
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1249
agagcucagu gagaugagau aucaa 25
<210> 1250
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1250
gagcucagug agaugagaua ucaaa 25
<210> 1251
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1251
agcucaguga gaugagauau caaag 25
<210> 1252
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1252
ucauuccauc ucccuaaucu ccaau 25
<210> 1253
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1253
aaucuccaau uggcaaagcc agacu 25
<210> 1254
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1254
aucuccaauu ggcaaagcca gacuu 25
<210> 1255
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1255
ucuccaauug gcaaagccag acuug 25
<210> 1256
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1256
aagccagacu uggggcaaua cagac 25
<210> 1257
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1257
uaucaccaaa uguucuuucu ucagc 25
<210> 1258
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1258
cuuucuucag cuggaauuua aaaua 25
<210> 1259
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1259
uaaaauaugg acucauccgu aaaau 25
<210> 1260
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1260
ggaauaauaa uaguauaugc uucau 25
<210> 1261
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1261
gaauaauaau aguauaugcu ucaua 25
<210> 1262
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1262
gcuugugaac uaaaaugcug ccucc 25
<210> 1263
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1263
acaccucagc agaaacaaag uuauc 25
<210> 1264
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1264
caggcccuuu ccccaauucc uaguu 25
<210> 1265
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1265
aggcccuuuc cccaauuccu aguuu 25
<210> 1266
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1266
aauuccuagu uugggucaga agaaa 25
<210> 1267
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1267
auuccuaguu ugggucagaa gaaaa 25
<210> 1268
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1268
aguuuggguc agaagaaaag ggaaa 25
<210> 1269
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1269
guuuggguca gaagaaaagg gaaaa 25
<210> 1270
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1270
ggucagaaga aaagggaaaa gggag 25
<210> 1271
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1271
agaaaaggga aaagggagag gaaaa 25
<210> 1272
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1272
ggaaaaagga aaagaauaug acguc 25
<210> 1273
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1273
gaaaaaggaa aagaauauga cguca 25
<210> 1274
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1274
aaaaaggaaa agaauaugac gucag 25
<210> 1275
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1275
aaaaggaaaa gaauaugacg ucagg 25
<210> 1276
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1276
aggaaaagaa uaugacguca ggggg 25
<210> 1277
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1277
ugacgucagg gggaggcaag ucagu 25
<210> 1278
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1278
gacgucaggg ggaggcaagu caguu 25
<210> 1279
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1279
ggaacacaga uccuaacaca guagc 25
<210> 1280
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1280
ccuaacacag uagcugguac cugau 25
<210> 1281
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1281
guaccugaua ggugccuaua uguga 25
<210> 1282
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1282
cugauaggug ccuauaugug augga 25
<210> 1283
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1283
ugauaggugc cuauauguga uggau 25
<210> 1284
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1284
uaggugccua uaugugaugg auggg 25
<210> 1285
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1285
gguggacagc ccgacagaug aaaaa 25
<210> 1286
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1286
gacagaugaa aaauggacaa uuaug 25
<210> 1287
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1287
agaugaaaaa uggacaauua ugagg 25
<210> 1288
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1288
gaugaaaaau ggacaauuau gagga 25
<210> 1289
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1289
augaaaaaug gacaauuaug aggag 25
<210> 1290
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1290
auuaugagga ggggagagug cagac 25
<210> 1291
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1291
uuaugaggag gggagagugc agaca 25
<210> 1292
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1292
uaugaggagg ggagagugca gacag 25
<210> 1293
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1293
ggaagcuuca ccuccuuuac aauuu 25
<210> 1294
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1294
gaagcuucac cuccuuuaca auuuu 25
<210> 1295
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1295
uccuuuacaa uuuugggagu ccaca 25
<210> 1296
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1296
uacaauuuug ggaguccaca cggca 25
<210> 1297
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1297
caucaccaag agagccuucc gaaag 25
<210> 1298
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1298
gagagccuuc cgaaagaggc ccccc 25
<210> 1299
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1299
agagccuucc gaaagaggcc ccccu 25
<210> 1300
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1300
uccgaaagag gccccccugg gcaaa 25
<210> 1301
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1301
gccccccugg gcaaacggcc accga 25
<210> 1302
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1302
ccugggcaaa cggccaccga uggag 25
<210> 1303
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1303
ccacccacgc ccccacccua aucag 25
<210> 1304
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1304
cccuaaucag aggccaaacc cuucc 25
<210> 1305
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1305
acuagcuuca aaguuguauu gaccc 25
<210> 1306
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1306
aagaguagau gccauaucuc uuuuc 25
<210> 1307
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1307
uuucuggccu auguuauuac cugua 25
<210> 1308
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1308
guuauuaccu guauggacuu ugcac 25
<210> 1309
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1309
cuaucugcuc uuacuuaugc acacc 25
<210> 1310
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1310
uaucugcucu uacuuaugca caccu 25
<210> 1311
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1311
aucugcucuu acuuaugcac accug 25
<210> 1312
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1312
ccugucuagc ugccuuccuu aucac 25
<210> 1313
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1313
uuccuuauca caggaauagc accca 25
<210> 1314
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1314
gaguagaacc cccuauaaac uaguc 25
<210> 1315
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1315
ccuauaaacu agucugguuu gccca 25
<210> 1316
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1316
cuauaaacua gucugguuug cccau 25
<210> 1317
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1317
uauaaacuag ucugguuugc ccaug 25
<210> 1318
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1318
ucugguuugc ccauggggca caguc 25
<210> 1319
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1319
auggggcaca gucaggcugu uuucc 25
<210> 1320
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1320
uggggcacag ucaggcuguu uucca 25
<210> 1321
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1321
ggcacaguca ggcuguuuuc caggg 25
<210> 1322
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1322
gcacagucag gcuguuuucc agggu 25
<210> 1323
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1323
cacagucagg cuguuuucca gggug 25
<210> 1324
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1324
acacacguau guguugugau cccug 25
<210> 1325
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1325
uugugauccc ugugguuuga gaguu 25
<210> 1326
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1326
ucccuaaaag ucaaaauauu cucaa 25
<210> 1327
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1327
cccuaaaagu caaaauauuc ucaau 25
<210> 1328
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1328
cccucaauca gcacauacac acaaa 25
<210> 1329
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1329
ucagcacaua cacacaaaag guacc 25
<210> 1330
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1330
uguaauucuu uuccugcuca aagac 25
<210> 1331
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1331
ccccaaccaa aaacccuugc cacca 25
<210> 1332
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1332
cccaaccaaa aacccuugcc accau 25
<210> 1333
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1333
aaaaacccuu gccaccaugg gagcc 25
<210> 1334
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1334
aaaacccuug ccaccauggg agccu 25
<210> 1335
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1335
aaacccuugc caccauggga gccug 25
<210> 1336
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1336
ccaccauggg agccuggggc agaga 25
<210> 1337
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1337
cacagugaag ucaaacugua auucc 25
<210> 1338
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1338
ucaaacugua auuccaggcu cuaaa 25
<210> 1339
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1339
uuuuucugag agucucuaaa uuaca 25
<210> 1340
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1340
uuuucugaga gucucuaaau uacaa 25
<210> 1341
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1341
acaccuaaga aacauacugc agcuc 25
<210> 1342
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1342
aaagagaaca aacaaaccaa agaga 25
<210> 1343
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1343
aagagaacaa acaaaccaaa gagaa 25
<210> 1344
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1344
aacaaaccaa agagaaggga uccag 25
<210> 1345
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1345
uaugugaaaa gucaauugau aauga 25
<210> 1346
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1346
aaagucaauu gauaaugaag gcuuu 25
<210> 1347
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1347
uugauaauga aggcuuuagg auaac 25
<210> 1348
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1348
auaaugaagg cuuuaggaua accgg 25
<210> 1349
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1349
uaaugaaggc uuuaggauaa ccgga 25
<210> 1350
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1350
aaugaaggcu uuaggauaac cggag 25
<210> 1351
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1351
augauugaaa gcaaugcacc ugugc 25
<210> 1352
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1352
gaaagcaaug caccugugca ggaaa 25
<210> 1353
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1353
augcaccugu gcaggaaaug gauua 25
<210> 1354
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1354
ugugcaggaa auggauuacg gaaac 25
<210> 1355
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1355
gugcaggaaa uggauuacgg aaaca 25
<210> 1356
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1356
ucaugaaauc ccagaaaacc agaac 25
<210> 1357
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1357
caugaaaucc cagaaaacca gaacc 25
<210> 1358
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1358
cagaaaacca gaaccgggaa aguuc 25
<210> 1359
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1359
ccagaaccgg gaaaguucug gaagu 25
<210> 1360
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1360
gaaaaacaaa ucaugacuua agcaa 25
<210> 1361
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1361
cguuuacaga augccuuguc ccacg 25
<210> 1362
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1362
aggccauggu cacugcccag uuuag 25
<210> 1363
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1363
ccagaguggg gaggugacca ggcca 25
<210> 1364
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1364
ccagguccag aguggggagg ugacc 25
<210> 1365
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1365
ggggcaaccc agguccagag ugggg 25
<210> 1366
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1366
agaggggcaa cccaggucca gagug 25
<210> 1367
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1367
cagaggggca acccaggucc agagu 25
<210> 1368
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1368
acagaggggc aacccagguc cagag 25
<210> 1369
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1369
cuccuuguuu acagaggggc aaccc 25
<210> 1370
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1370
uauuacaacc uccuuguuua cagag 25
<210> 1371
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1371
uuauuacaac cuccuuguuu acaga 25
<210> 1372
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1372
uuuauuacaa ccuccuuguu uacag 25
<210> 1373
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1373
uaagauuuau aagacauuag gguau 25
<210> 1374
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1374
auugcauaag auuuauaaga cauua 25
<210> 1375
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1375
aauugcauaa gauuuauaag acauu 25
<210> 1376
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1376
cucuucucuc cccauacucc caucu 25
<210> 1377
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1377
uugauaucuc aucucacuga gcucu 25
<210> 1378
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1378
uuugauaucu caucucacug agcuc 25
<210> 1379
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1379
cuuugccaau uggagauuag ggaga 25
<210> 1380
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1380
gucuggcuuu gccaauugga gauua 25
<210> 1381
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1381
agucuggcuu ugccaauugg agauu 25
<210> 1382
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1382
uugccccaag ucuggcuuug ccaau 25
<210> 1383
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1383
gaaccagucu guauugcccc aaguc 25
<210> 1384
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1384
ggugauaaau cauuaggaau gagcu 25
<210> 1385
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1385
aaagaacauu uggugauaaa ucauu 25
<210> 1386
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1386
aaauuccagc ugaagaaaga acauu 25
<210> 1387
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1387
auauacuauu auuauuccua uuuua 25
<210> 1388
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1388
aagcucggag cacuuacucu gcucu 25
<210> 1389
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1389
gaggcagcau uuuaguucac aagcu 25
<210> 1390
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1390
ugagguguaa cuaauaaaua ccagg 25
<210> 1391
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1391
ugcugaggug uaacuaauaa auacc 25
<210> 1392
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1392
gggccugaua acuuuguuuc ugcug 25
<210> 1393
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1393
ugacccaaac uaggaauugg ggaaa 25
<210> 1394
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1394
cugacccaaa cuaggaauug gggaa 25
<210> 1395
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1395
uucuucugac ccaaacuagg aauug 25
<210> 1396
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1396
uuucuucuga cccaaacuag gaauu 25
<210> 1397
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1397
uuuucuucug acccaaacua ggaau 25
<210> 1398
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1398
uuucccuuuu cuucugaccc aaacu 25
<210> 1399
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1399
ccuaucaggu accagcuacu guguu 25
<210> 1400
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1400
cauccaucac auauaggcac cuauc 25
<210> 1401
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1401
ggcuguccac ccauccauca cauau 25
<210> 1402
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1402
cauaauuguc cauuuuucau cuguc 25
<210> 1403
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1403
ucauaauugu ccauuuuuca ucugu 25
<210> 1404
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1404
guguggacuc ccaaaauugu aaagg 25
<210> 1405
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1405
gccgugugga cucccaaaau uguaa 25
<210> 1406
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1406
gaaauaauuu guaugccaug ccgug 25
<210> 1407
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1407
ggagaauugg auuuuauuuc ucaau 25
<210> 1408
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1408
uggagaauug gauuuuauuu cucaa 25
<210> 1409
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1409
gaaggcucuc uuggugaugg agaau 25
<210> 1410
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1410
cucuuucgga aggcucucuu gguga 25
<210> 1411
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1411
gggggccucu uucggaaggc ucucu 25
<210> 1412
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1412
uuugcccagg ggggccucuu ucgga 25
<210> 1413
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1413
gccguuugcc caggggggcc ucuuu 25
<210> 1414
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1414
uccaucggug gccguuugcc caggg 25
<210> 1415
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1415
cuccaucggu ggccguuugc ccagg 25
<210> 1416
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1416
ucuccaucgg uggccguuug cccag 25
<210> 1417
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1417
cucuccaucg guggccguuu gccca 25
<210> 1418
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1418
ccucuccauc gguggccguu ugccc 25
<210> 1419
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1419
gaggacuggc agaccucucc aucgg 25
<210> 1420
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1420
gaagaggacu ggcagaccuc uccau 25
<210> 1421
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1421
gggcgugggu gggguagaag aggac 25
<210> 1422
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1422
ggugggggcg uggguggggu agaag 25
<210> 1423
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1423
ucugauuagg gugggggcgu gggug 25
<210> 1424
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1424
cucugauuag ggugggggcg ugggu 25
<210> 1425
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1425
ccucugauua gggugggggc guggg 25
<210> 1426
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1426
uggccucuga uuaggguggg ggcgu 25
<210> 1427
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1427
uuggccucug auuagggugg gggcg 25
<210> 1428
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1428
aggguuuggc cucugauuag ggugg 25
<210> 1429
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1429
aaggguuugg ccucugauua gggug 25
<210> 1430
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1430
gaaggguuug gccucugauu agggu 25
<210> 1431
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1431
ggaaggguuu ggccucugau uaggg 25
<210> 1432
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1432
ccaggaaggg uuuggccucu gauua 25
<210> 1433
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1433
uccaggaagg guuuggccuc ugauu 25
<210> 1434
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1434
uuuaucacag gcuccaggaa ggguu 25
<210> 1435
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1435
uugcuuuuau cacaggcucc aggaa 25
<210> 1436
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1436
guugcuuuua ucacaggcuc cagga 25
<210> 1437
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1437
aacaguugcu uuuaucacag gcucc 25
<210> 1438
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1438
gcaagcuaac aguugcuuuu aucac 25
<210> 1439
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1439
aucuacucuu agacauaaca cacca 25
<210> 1440
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1440
caucuacucu uagacauaac acacc 25
<210> 1441
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1441
aauaacauag gccagaaaag agaua 25
<210> 1442
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1442
gcaaagucca uacagguaau aacau 25
<210> 1443
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1443
gcugauucca gugcaaaguc cauac 25
<210> 1444
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1444
cgauacaggg cuggcucuau gcccc 25
<210> 1445
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1445
agauggcuga aaagcgauac agggc 25
<210> 1446
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1446
agugagaugg cugaaaagcg auaca 25
<210> 1447
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1447
uagugagaug gcugaaaagc gauac 25
<210> 1448
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1448
gacuugggag uuaucuguag ugaga 25
<210> 1449
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1449
uaaggaaggc agcuagacag gacuu 25
<210> 1450
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1450
auaaggaagg cagcuagaca ggacu 25
<210> 1451
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1451
ccugugauaa ggaaggcagc uagac 25
<210> 1452
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1452
uugggugcua uuccugugau aagga 25
<210> 1453
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1453
gaccuugggu gcuauuccug ugaua 25
<210> 1454
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1454
cuacucugag guacugaugg accuu 25
<210> 1455
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1455
ucuacucuga gguacugaug gaccu 25
<210> 1456
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1456
aggggguucu acucugaggu acuga 25
<210> 1457
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1457
cuaguuuaua ggggguucua cucug 25
<210> 1458
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1458
ugggcaaacc agacuaguuu auagg 25
<210> 1459
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1459
augggcaaac cagacuaguu uauag 25
<210> 1460
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1460
caugggcaaa ccagacuagu uuaua 25
<210> 1461
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1461
ccaugggcaa accagacuag uuuau 25
<210> 1462
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1462
ggaaaacagc cugacugugc cccau 25
<210> 1463
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1463
uggaaaacag ccugacugug cccca 25
<210> 1464
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1464
ggcagagaau gucugcaccc caccc 25
<210> 1465
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1465
ugacguuaua uguaagcauc acaac 25
<210> 1466
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1466
ggaagcucca aacucucaaa ccaca 25
<210> 1467
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1467
gggaagcucc aaacucucaa accac 25
<210> 1468
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1468
cccauugaga auauuuugac uuuua 25
<210> 1469
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1469
gcccauugag aauauuuuga cuuuu 25
<210> 1470
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1470
ccuuuugugu guaugugcug auuga 25
<210> 1471
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1471
accuuuugug uguaugugcu gauug 25
<210> 1472
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1472
agcaggaaaa gaauuacagu uuucc 25
<210> 1473
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1473
gguauugaau ugccugucuu ugagc 25
<210> 1474
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1474
ggcaaggguu uuugguuggg ggaag 25
<210> 1475
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1475
uggcaagggu uuuugguugg gggaa 25
<210> 1476
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1476
guggcaaggg uuuuugguug gggga 25
<210> 1477
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1477
caugguggca aggguuuuug guugg 25
<210> 1478
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1478
ccaugguggc aaggguuuuu gguug 25
<210> 1479
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1479
cccauggugg caaggguuuu ugguu 25
<210> 1480
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1480
ucccauggug gcaaggguuu uuggu 25
<210> 1481
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1481
aggcucccau gguggcaagg guuuu 25
<210> 1482
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1482
cugccccagg cucccauggu ggcaa 25
<210> 1483
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1483
ucugccccag gcucccaugg uggca 25
<210> 1484
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1484
ccuucucugc cccaggcucc caugg 25
<210> 1485
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1485
gugccuucuc ugccccaggc uccca 25
<210> 1486
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1486
gacuucacug ugccuucucu gcccc 25
<210> 1487
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1487
aaaaaugaca gcaccauuua gagcc 25
<210> 1488
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1488
uuuccagagc ugcaguaugu uucuu 25
<210> 1489
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1489
gggugaccuc uggaucccuu cucuu 25
<210> 1490
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1490
acuuuucaca uaugagggug accuc 25
<210> 1491
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1491
uuaucaauug acuuuucaca uauga 25
<210> 1492
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1492
auuaucaauu gacuuuucac auaug 25
<210> 1493
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1493
gcauugcuuu caaucaucuc cccuc 25
<210> 1494
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1494
uguuuccgua auccauuucc ugcac 25
<210> 1495
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1495
agaacuuucc cgguucuggu uuucu 25
<210> 1496
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1496
cagaacuuuc ccgguucugg uuuuc 25
<210> 1497
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1497
ccgacuucca gaacuuuccc gguuc 25
<210> 1498
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1498
guuuuuccga cuuccagaac uuucc 25
<210> 1499
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1499
gacaaggcau ucuguaaacg uguau 25
<210> 1500
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1500
uaucaagcau ccagcauuug 20
<210> 1501
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1501
uaucuaaaaa uguaauugcu 20
<210> 1502
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1502
agcauuucua uacaugucuu 20
<210> 1503
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1503
uaaucauaaa aaccucaaac 20
<210> 1504
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1504
uuuaaguggc uaccgguuug 20
<210> 1505
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1505
guaagcauuu aaguggcuac 20
<210> 1506
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1506
acuguuggua agcauuuaag 20
<210> 1507
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1507
uaauuuauca auucuacugu 20
<210> 1508
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1508
acaguagaau ugauaaauua 20
<210> 1509
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1509
caaaugcauu uuacagcauu 20
<210> 1510
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1510
gguugauuaa aaguaaccag 20
<210> 1511
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1511
auauaguuug aacucaccuc 20
<210> 1512
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1512
uuuauuugua uauagaaaga 20
<210> 1513
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1513
ugccugagau ucugaucaca 20
<210> 1514
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1514
gccugagauu cugaucacaa 20
<210> 1515
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1515
ccugagauuc ugaucacaag 20
<210> 1516
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1516
ccccuuguga ucagaaucuc 20
<210> 1517
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1517
aaggggaaau guuauaaaau 20
<210> 1518
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1518
aggggaaaug uuauaaaaua 20
<210> 1519
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1519
uguuauaaaa uaggguagag 20
<210> 1520
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1520
caaaguuuaa aggucauuca 20
<210> 1521
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1521
uaacuuguaa caaaguuuaa 20
<210> 1522
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1522
caaguuauuu uucuguaacc 20
<210> 1523
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1523
aauaucuuuc guuggcuucc 20
<210> 1524
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1524
aauuauucaa uaucuuucgu 20
<210> 1525
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1525
gauauugaau aauucaagaa 20
<210> 1526
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1526
auugaauaau ucaagaaagg 20
<210> 1527
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1527
gaauaauuca agaaaggugg 20
<210> 1528
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1528
auucaagaaa ggugguggca 20
<210> 1529
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1529
uauuuuagaa guagagaaaa 20
<210> 1530
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1530
auuuuagaag uagagaaaau 20
<210> 1531
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1531
gaaaauggga gacaaauagc 20
<210> 1532
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1532
aaaaugggag acaaauagcu 20
<210> 1533
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1533
agcugggcuu cuguugcagu 20
<210> 1534
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1534
gcugggcuuc uguugcagua 20
<210> 1535
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1535
gccauuucua uuaucagacu 20
<210> 1536
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1536
uccaagucug auaauagaaa 20
<210> 1537
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1537
uuaucagacu uggaccauga 20
<210> 1538
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1538
cacgacugac aucaccguca 20
<210> 1539
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1539
ucagucguga acacaagaau 20
<210> 1540
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1540
cagucgugaa cacaagaaua 20
<210> 1541
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1541
ggccacauuu gugaguuuag 20
<210> 1542
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1542
uaccacuaaa cucacaaaug 20
<210> 1543
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1543
uaaaaucaga aauacagucu 20
<210> 1544
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1544
aaaagaugua cuuagauaug 20
<210> 1545
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1545
uguacuuaga uauguggauc 20
<210> 1546
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1546
agcucagaaa gaauacaacc 20
<210> 1547
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1547
accaggucaa gaauacagaa 20
<210> 1548
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1548
uccauucugu auucuugacc 20
<210> 1549
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1549
cugucauuuu uaacagguag 20
<210> 1550
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1550
caucaucugu cauuuuuaac 20
<210> 1551
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1551
aaacacauuc uaagauuuua 20
<210> 1552
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1552
aaucuuagaa uguguuugug 20
<210> 1553
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1553
aucuuagaau guguuuguga 20
<210> 1554
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1554
uuagaaugug uuugugaggg 20
<210> 1555
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1555
caauuuucuu auauaugaau 20
<210> 1556
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1556
uugauucuaa aaaaaauguu 20
<210> 1557
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1557
aaauguuagg uaaauucuua 20
<210> 1558
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1558
gguaaauucu uaaggccaug 20
<210> 1559
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1559
agaucaaaua acaguccuca 20
<210> 1560
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1560
gucuguuaau uccaaagacu 20
<210> 1561
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1561
aaagugaaaa gccaagucuu 20
<210> 1562
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1562
ccugaaauga uuuuacacau 20
<210> 1563
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1563
ccaaugugua aaaucauuuc 20
<210> 1564
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1564
cugaaaugau uuuacacauu 20
<210> 1565
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1565
auuuuacaca uugggagauc 20
<210> 1566
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1566
gguuacaugu uuauucuaua 20
<210> 1567
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1567
ucuauaugga uugcauugag 20
<210> 1568
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1568
aggauuugua uaacagaaua 20
<210> 1569
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1569
uuuucuuuuc ucuucugaga 20
<210> 1570
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1570
gcacucuagc uugggcaaua 20
<210> 1571
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1571
ugcacucuag cuugggcaau 20
<210> 1572
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1572
ugcaccauug cacucuagcu 20
<210> 1573
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1573
gcuauucagg uggcugaggc 20
<210> 1574
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1574
accugaauag cugggacugc 20
<210> 1575
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1575
gcaggcaugc accacacgcc 20
<210> 1576
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1576
uacaaaauca gccgggcgug 20
<210> 1577
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1577
ggcuuguaaa cccagcacuu 20
<210> 1578
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1578
cuggcuggau gcgguggcuc 20
<210> 1579
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1579
cugagccacc gcauccagcc 20
<210> 1580
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1580
cuuauccugg cuggaugcgg 20
<210> 1581
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1581
caccgcaucc agccaggaua 20
<210> 1582
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1582
gaccuuaucc uggcuggaug 20
<210> 1583
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1583
cuuuuagacc uuauccuggc 20
<210> 1584
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1584
gccaggauaa ggucuaaaag 20
<210> 1585
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1585
uccacuuuua gaccuuaucc 20
<210> 1586
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1586
aauagcaucu acucuuguuc 20
<210> 1587
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1587
cucuuguuca ggaaacaaug 20
<210> 1588
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1588
ggaaacaaug aggaccugac 20
<210> 1589
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1589
gaaacaauga ggaccugacu 20
<210> 1590
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1590
accugacugg gcaguaagag 20
<210> 1591
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1591
accacucuua cugcccaguc 20
<210> 1592
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1592
aagaguggug auuaauagau 20
<210> 1593
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1593
agagugguga uuaauagaua 20
<210> 1594
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1594
agaaucgaac uguugauuag 20
<210> 1595
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1595
ucgaacuguu gauuagaggu 20
<210> 1596
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1596
ccuggcagac ccucaagagc 20
<210> 1597
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1597
ccuggcagac ccucaagagc 20
<210> 1598
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1598
cuggcagacc cucaagagca 20
<210> 1599
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1599
uggcagaccc ucaagagcag 20
<210> 1600
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1600
cccucaagag caggggucuu 20
<210> 1601
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1601
ccucaagagc aggggucuuc 20
<210> 1602
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1602
uaaggccagu ggaaagaauu 20
<210> 1603
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1603
aagagcaggg gucuucucuu 20
<210> 1604
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1604
agagcagggg ucuucucuuu 20
<210> 1605
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1605
gagcaggggu cuucucuuug 20
<210> 1606
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1606
agcagggguc uucucuuugg 20
<210> 1607
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1607
aggggucuuc ucuuuggggg 20
<210> 1608
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1608
gggaggacau cacucuuagc 20
<210> 1609
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1609
ggaggacauc acucuuagca 20
<210> 1610
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1610
gccagacucc aaguucugcc 20
<210> 1611
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1611
gacaucacuc uuagcagggc 20
<210> 1612
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1612
acaucacucu uagcagggcu 20
<210> 1613
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1613
caucacucuu agcagggcug 20
<210> 1614
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1614
gcugggguga gucaaaaguc 20
<210> 1615
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1615
cuggggugag ucaaaagucu 20
<210> 1616
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1616
gagucaaaag ucugggagaa 20
<210> 1617
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1617
ucaaaagucu gggagaaugg 20
<210> 1618
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1618
agucugggag aauggaggug 20
<210> 1619
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1619
cugggagaau ggaggugugg 20
<210> 1620
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1620
ugggagaaug gaggugugga 20
<210> 1621
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1621
gggagaaugg agguguggag 20
<210> 1622
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1622
ggaggugugg aggggauaac 20
<210> 1623
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1623
ggcagcgagg aguccacagu 20
<210> 1624
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1624
gaggugugga ggggauaacu 20
<210> 1625
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1625
aacuggguca gaccccaagc 20
<210> 1626
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1626
gggucagacc ccaagcagga 20
<210> 1627
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1627
ggucagaccc caagcaggaa 20
<210> 1628
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1628
ccccaagcag gaagggccuc 20
<210> 1629
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1629
cccaagcagg aagggccucu 20
<210> 1630
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1630
ccaagcagga agggccucua 20
<210> 1631
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1631
aggaagggcc ucuauguaga 20
<210> 1632
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1632
ggaagggccu cuauguagac 20
<210> 1633
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1633
ccucuaugua gacgggugug 20
<210> 1634
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1634
ccucuaugua gacgggugug 20
<210> 1635
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1635
gacgggugug uggcuccuua 20
<210> 1636
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1636
ccuuaaggug acccagcagc 20
<210> 1637
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1637
uuaaggugac ccagcagccc 20
<210> 1638
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1638
uaaggugacc cagcagcccu 20
<210> 1639
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1639
cccagcagcc cugggcacag 20
<210> 1640
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1640
ccagcagccc ugggcacaga 20
<210> 1641
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1641
gccagacucc aaguucugcc 20
<210> 1642
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1642
agcagcccug ggcacagaag 20
<210> 1643
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1643
cccugggcac agaaguggug 20
<210> 1644
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1644
ccugggcaca gaaguggugc 20
<210> 1645
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1645
cugggcacag aaguggugcg 20
<210> 1646
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1646
ugccaacagu gauaaccagc 20
<210> 1647
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1647
gccaacagug auaaccagca 20
<210> 1648
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1648
uaaggccagu ggaaagaauu 20
<210> 1649
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1649
ccaacaguga uaaccagcag 20
<210> 1650
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1650
ccagcagggc cugucagaag 20
<210> 1651
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1651
ccagcagggc cugucagaag 20
<210> 1652
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1652
gggccuguca gaagaggccc 20
<210> 1653
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1653
ccugucagaa gaggcccugg 20
<210> 1654
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1654
gaagaggccc uggacacuga 20
<210> 1655
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1655
aggcccugga cacugaaggc 20
<210> 1656
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1656
ggcccuggac acugaaggcu 20
<210> 1657
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1657
ucuuuccacu ggccuuaacc 20
<210> 1658
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1658
cccuggacac ugaaggcugg 20
<210> 1659
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1659
ccuggacacu gaaggcuggg 20
<210> 1660
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1660
cugaaggcug ggcacagccu 20
<210> 1661
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1661
ugaaggcugg gcacagccuu 20
<210> 1662
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1662
gaaggcuggg cacagccuug 20
<210> 1663
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1663
cagccuuggg gaccgcucac 20
<210> 1664
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1664
ccuuggggac cgcucacagg 20
<210> 1665
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1665
ccgcucacag gacaugcagc 20
<210> 1666
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1666
ccgacaacuc ccuaccgcga 20
<210> 1667
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1667
cccuaccgcg accccuauca 20
<210> 1668
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1668
ccuaccgcga ccccuaucag 20
<210> 1669
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1669
ccgcgacccc uaucagugcc 20
<210> 1670
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1670
ccccuaucag ugccgaccaa 20
<210> 1671
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1671
cccuaucagu gccgaccaag 20
<210> 1672
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1672
ccuaucagug ccgaccaagc 20
<210> 1673
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1673
ccgaccaagc acacaagaug 20
<210> 1674
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1674
ccaagcacac aagaugcaca 20
<210> 1675
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1675
agcacacaag augcacaccc 20
<210> 1676
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1676
cacaagaugc acacccaggc 20
<210> 1677
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1677
acaagaugca cacccaggcu 20
<210> 1678
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1678
ucuuuccacu ggccuuaacc 20
<210> 1679
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1679
gaugcacacc caggcugggc 20
<210> 1680
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1680
acccaggcug ggcuggacag 20
<210> 1681
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1681
cccaggcugg gcuggacaga 20
<210> 1682
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1682
cccaggcugg gcuggacaga 20
<210> 1683
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1683
ccaggcuggg cuggacagag 20
<210> 1684
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1684
ccaggcuggg cuggacagag 20
<210> 1685
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1685
gagggguccc acaagaucac 20
<210> 1686
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1686
agggguccca caagaucaca 20
<210> 1687
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1687
cccacaagau cacagggugu 20
<210> 1688
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1688
ggcagcgagg aguccacagu 20
<210> 1689
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1689
ccacaagauc acagggugug 20
<210> 1690
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1690
ucacagggug ugcccugaga 20
<210> 1691
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1691
cagggugugc ccugagaagg 20
<210> 1692
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1692
cgaacuguug auuagaggua 20
<210> 1693
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1693
augauuuuaa ucugugaccu 20
<210> 1694
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1694
uaaucuguga ccuuggugaa 20
<210> 1695
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1695
aaucugugac cuuggugaau 20
<210> 1696
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1696
agcuacuugc ccauucacca 20
<210> 1697
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1697
uagcuaucua augacuaaaa 20
<210> 1698
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1698
augacuaaaa uggaaaacac 20
<210> 1699
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1699
aaauacccau gcugagucug 20
<210> 1700
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1700
aggcaccuca gacucagcau 20
<210> 1701
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1701
uaggcaccuc agacucagca 20
<210> 1702
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1702
gcugagucug aggugccuau 20
<210> 1703
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1703
uauuuauaua gauguccuau 20
<210> 1704
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1704
cauauaucaa acaauguacu 20
<210> 1705
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1705
ccaguacauu guuugauaua 20
<210> 1706
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1706
ccauauauca aacaauguac 20
<210> 1707
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1707
caguacauug uuugauauau 20
<210> 1708
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1708
cauuguuuga uauauggguu 20
<210> 1709
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1709
gauauauggg uuuggcacug 20
<210> 1710
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1710
uauggguuug gcacugaggu 20
<210> 1711
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1711
ggguuuggca cugagguugg 20
<210> 1712
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1712
gcacugaggu uggaggucag 20
<210> 1713
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1713
cagagguuag aaaucagagu 20
<210> 1714
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1714
agagguuaga aaucagaguu 20
<210> 1715
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1715
uagaaaucag aguugggaau 20
<210> 1716
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1716
agaaaucaga guugggaauu 20
<210> 1717
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1717
guugggaauu gggauuauac 20
<210> 1718
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1718
cuuuguauuc aucacacucu 20
<210> 1719
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1719
augaauacaa aguuaaauga 20
<210> 1720
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1720
uaaauguugg uguucauuaa 20
<210> 1721
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1721
ugagauuuca cauuaaaugu 20
<210> 1722
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1722
acauuuaaug ugaaaucuca 20
<210> 1723
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1723
uaaaaucauc ggggauuuug 20
<210> 1724
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1724
cuaaaaucau cggggauuuu 20
<210> 1725
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1725
ucuaaaauca ucggggauuu 20
<210> 1726
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1726
acugaguucu aaaaucaucg 20
<210> 1727
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1727
uacugaguuc uaaaaucauc 20
<210> 1728
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1728
auacugaguu cuaaaaucau 20
<210> 1729
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1729
uaauuagugu aaugccaaug 20
<210> 1730
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1730
aauuagugua augccaaugu 20
<210> 1731
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1731
aaugccaaug uggguuagaa 20
<210> 1732
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1732
acuuccauuc uaacccacau 20
<210> 1733
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1733
aauggaaguc aacuugcugu 20
<210> 1734
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1734
cuugcuguug guuucagagc 20
<210> 1735
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1735
cuguugguuu cagagcaggu 20
<210> 1736
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1736
uucagagcag guaggagaua 20
<210> 1737
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1737
agugaaaagc ugaaacaaaa 20
<210> 1738
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1738
aagcugaaac aaaaaggaaa 20
<210> 1739
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1739
ugaaacaaaa aggaaaaggu 20
<210> 1740
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1740
gaaacaaaaa ggaaaaggua 20
<210> 1741
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1741
ggaaaaggua gggugaaaga 20
<210> 1742
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1742
gaaaagguag ggugaaagau 20
<210> 1743
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1743
aaagauggga aauguaugua 20
<210> 1744
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1744
gaugggaaau guauguaagg 20
<210> 1745
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1745
uguaaggagg augagccaca 20
<210> 1746
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1746
ggaggaugag ccacauggua 20
<210> 1747
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1747
gaggaugagc cacaugguau 20
<210> 1748
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1748
gaugagccac augguauggg 20
<210> 1749
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1749
aguauaccuc ccauaccaug 20
<210> 1750
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1750
augguauggg agguauacua 20
<210> 1751
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1751
ggagguauac uaaggacucu 20
<210> 1752
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1752
gagguauacu aaggacucua 20
<210> 1753
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1753
acucuagggu cagagaaaua 20
<210> 1754
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1754
cucuaggguc agagaaauau 20
<210> 1755
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1755
aagaauguga auuuuguaga 20
<210> 1756
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1756
uucuacaaaa uucacauucu 20
<210> 1757
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1757
acaaaauuca cauucuuggc 20
<210> 1758
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1758
caaaauucac auucuuggcu 20
<210> 1759
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1759
uucacauucu uggcugggug 20
<210> 1760
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1760
aggguggauc accugauguu 20
<210> 1761
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 1761
gaucucgaac uccuaacauc 20
<210> 1762
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1762
guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1763
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1763
aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1764
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1764
uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1765
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1765
uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1766
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1766
cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1767
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1767
cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1768
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1768
uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1769
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1769
uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1770
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1770
acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1771
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1771
ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1772
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1772
gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1773
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1773
guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1774
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1774
aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1775
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 1775
augguauggg agguauacua guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 1776
<400> 1776
000
<210> 1777
<400> 1777
000
<210> 1778
<400> 1778
000
<210> 1779
<400> 1779
000
<210> 1780
<400> 1780
000
<210> 1781
<400> 1781
000
<210> 1782
<400> 1782
000
<210> 1783
<400> 1783
000
<210> 1784
<400> 1784
000
<210> 1785
<400> 1785
000
<210> 1786
<400> 1786
000
<210> 1787
<400> 1787
000
<210> 1788
<400> 1788
000
<210> 1789
<400> 1789
000
<210> 1790
<400> 1790
000
<210> 1791
<400> 1791
000
<210> 1792
<400> 1792
000
<210> 1793
<400> 1793
000
<210> 1794
<400> 1794
000
<210> 1795
<400> 1795
000
<210> 1796
<400> 1796
000
<210> 1797
<400> 1797
000
<210> 1798
<400> 1798
000
<210> 1799
<400> 1799
000
<210> 1800
<400> 1800
000
<210> 1801
<400> 1801
000
<210> 1802
<400> 1802
000
<210> 1803
<400> 1803
000
<210> 1804
<400> 1804
000
<210> 1805
<400> 1805
000
<210> 1806
<400> 1806
000
<210> 1807
<400> 1807
000
<210> 1808
<400> 1808
000
<210> 1809
<400> 1809
000
<210> 1810
<400> 1810
000
<210> 1811
<400> 1811
000
<210> 1812
<400> 1812
000
<210> 1813
<400> 1813
000
<210> 1814
<400> 1814
000
<210> 1815
<400> 1815
000
<210> 1816
<400> 1816
000
<210> 1817
<400> 1817
000
<210> 1818
<400> 1818
000
<210> 1819
<400> 1819
000
<210> 1820
<400> 1820
000
<210> 1821
<400> 1821
000
<210> 1822
<400> 1822
000
<210> 1823
<400> 1823
000
<210> 1824
<400> 1824
000
<210> 1825
<400> 1825
000
<210> 1826
<400> 1826
000
<210> 1827
<400> 1827
000
<210> 1828
<400> 1828
000
<210> 1829
<400> 1829
000
<210> 1830
<400> 1830
000
<210> 1831
<400> 1831
000
<210> 1832
<400> 1832
000
<210> 1833
<400> 1833
000
<210> 1834
<400> 1834
000
<210> 1835
<400> 1835
000
<210> 1836
<400> 1836
000
<210> 1837
<400> 1837
000
<210> 1838
<400> 1838
000
<210> 1839
<400> 1839
000
<210> 1840
<400> 1840
000
<210> 1841
<400> 1841
000
<210> 1842
<400> 1842
000
<210> 1843
<400> 1843
000
<210> 1844
<400> 1844
000
<210> 1845
<400> 1845
000
<210> 1846
<400> 1846
000
<210> 1847
<400> 1847
000
<210> 1848
<400> 1848
000
<210> 1849
<400> 1849
000
<210> 1850
<400> 1850
000
<210> 1851
<400> 1851
000
<210> 1852
<400> 1852
000
<210> 1853
<400> 1853
000
<210> 1854
<400> 1854
000
<210> 1855
<400> 1855
000
<210> 1856
<400> 1856
000
<210> 1857
<400> 1857
000
<210> 1858
<400> 1858
000
<210> 1859
<400> 1859
000
<210> 1860
<400> 1860
000
<210> 1861
<400> 1861
000
<210> 1862
<400> 1862
000
<210> 1863
<400> 1863
000
<210> 1864
<400> 1864
000
<210> 1865
<400> 1865
000
<210> 1866
<400> 1866
000
<210> 1867
<400> 1867
000
<210> 1868
<400> 1868
000
<210> 1869
<400> 1869
000
<210> 1870
<400> 1870
000
<210> 1871
<400> 1871
000
<210> 1872
<400> 1872
000
<210> 1873
<400> 1873
000
<210> 1874
<400> 1874
000
<210> 1875
<400> 1875
000
<210> 1876
<400> 1876
000
<210> 1877
<400> 1877
000
<210> 1878
<400> 1878
000
<210> 1879
<400> 1879
000
<210> 1880
<400> 1880
000
<210> 1881
<400> 1881
000
<210> 1882
<400> 1882
000
<210> 1883
<400> 1883
000
<210> 1884
<400> 1884
000
<210> 1885
<400> 1885
000
<210> 1886
<400> 1886
000
<210> 1887
<400> 1887
000
<210> 1888
<400> 1888
000
<210> 1889
<400> 1889
000
<210> 1890
<400> 1890
000
<210> 1891
<400> 1891
000
<210> 1892
<400> 1892
000
<210> 1893
<400> 1893
000
<210> 1894
<400> 1894
000
<210> 1895
<400> 1895
000
<210> 1896
<400> 1896
000
<210> 1897
<400> 1897
000
<210> 1898
<400> 1898
000
<210> 1899
<400> 1899
000
<210> 1900
<400> 1900
000
<210> 1901
<400> 1901
000
<210> 1902
<400> 1902
000
<210> 1903
<400> 1903
000
<210> 1904
<400> 1904
000
<210> 1905
<400> 1905
000
<210> 1906
<400> 1906
000
<210> 1907
<400> 1907
000
<210> 1908
<400> 1908
000
<210> 1909
<400> 1909
000
<210> 1910
<400> 1910
000
<210> 1911
<400> 1911
000
<210> 1912
<400> 1912
000
<210> 1913
<400> 1913
000
<210> 1914
<400> 1914
000
<210> 1915
<400> 1915
000
<210> 1916
<400> 1916
000
<210> 1917
<400> 1917
000
<210> 1918
<400> 1918
000
<210> 1919
<400> 1919
000
<210> 1920
<400> 1920
000
<210> 1921
<400> 1921
000
<210> 1922
<400> 1922
000
<210> 1923
<400> 1923
000
<210> 1924
<400> 1924
000
<210> 1925
<400> 1925
000
<210> 1926
<400> 1926
000
<210> 1927
<400> 1927
000
<210> 1928
<400> 1928
000
<210> 1929
<400> 1929
000
<210> 1930
<400> 1930
000
<210> 1931
<400> 1931
000
<210> 1932
<400> 1932
000
<210> 1933
<400> 1933
000
<210> 1934
<400> 1934
000
<210> 1935
<400> 1935
000
<210> 1936
<400> 1936
000
<210> 1937
<400> 1937
000
<210> 1938
<400> 1938
000
<210> 1939
<400> 1939
000
<210> 1940
<400> 1940
000
<210> 1941
<400> 1941
000
<210> 1942
<400> 1942
000
<210> 1943
<400> 1943
000
<210> 1944
<400> 1944
000
<210> 1945
<400> 1945
000
<210> 1946
<400> 1946
000
<210> 1947
<400> 1947
000
<210> 1948
<400> 1948
000
<210> 1949
<400> 1949
000
<210> 1950
<400> 1950
000
<210> 1951
<400> 1951
000
<210> 1952
<400> 1952
000
<210> 1953
<400> 1953
000
<210> 1954
<400> 1954
000
<210> 1955
<400> 1955
000
<210> 1956
<400> 1956
000
<210> 1957
<400> 1957
000
<210> 1958
<400> 1958
000
<210> 1959
<400> 1959
000
<210> 1960
<400> 1960
000
<210> 1961
<400> 1961
000
<210> 1962
<400> 1962
000
<210> 1963
<400> 1963
000
<210> 1964
<400> 1964
000
<210> 1965
<400> 1965
000
<210> 1966
<400> 1966
000
<210> 1967
<400> 1967
000
<210> 1968
<400> 1968
000
<210> 1969
<400> 1969
000
<210> 1970
<400> 1970
000
<210> 1971
<400> 1971
000
<210> 1972
<400> 1972
000
<210> 1973
<400> 1973
000
<210> 1974
<400> 1974
000
<210> 1975
<400> 1975
000
<210> 1976
<400> 1976
000
<210> 1977
<400> 1977
000
<210> 1978
<400> 1978
000
<210> 1979
<400> 1979
000
<210> 1980
<400> 1980
000
<210> 1981
<400> 1981
000
<210> 1982
<400> 1982
000
<210> 1983
<400> 1983
000
<210> 1984
<400> 1984
000
<210> 1985
<400> 1985
000
<210> 1986
<400> 1986
000
<210> 1987
<400> 1987
000
<210> 1988
<400> 1988
000
<210> 1989
<400> 1989
000
<210> 1990
<400> 1990
000
<210> 1991
<400> 1991
000
<210> 1992
<400> 1992
000
<210> 1993
<400> 1993
000
<210> 1994
<400> 1994
000
<210> 1995
<400> 1995
000
<210> 1996
<400> 1996
000
<210> 1997
<400> 1997
000
<210> 1998
<400> 1998
000
<210> 1999
<400> 1999
000
<210> 2000
<211> 110
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 2000
gtgccagatg aacttcccat gtttaagagc tatgctggaa acagcatagc aagtttaaat 60
aaggctagtc cgttatcaac ttgaaaaagt ggcaccgagt cggtgctttt 110
<210> 2001
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2001
agctccaaac tctcaaacca caggg 25
<210> 2002
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2002
tacaattttg ggagtccaca cggca 25
<210> 2003
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2003
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2004
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2004
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2005
<211> 835
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 2005
Met Ser Arg Arg Lys Gln Gly Lys Pro Gln His Leu Ser Lys Arg Glu
1 5 10 15
Phe Ser Pro Glu Pro Leu Glu Ala Ile Leu Thr Asp Asp Glu Pro Asp
20 25 30
His Gly Pro Leu Gly Ala Pro Glu Gly Asp His Asp Leu Leu Thr Cys
35 40 45
Gly Gln Cys Gln Met Asn Phe Pro Leu Gly Asp Ile Leu Ile Phe Ile
50 55 60
Glu His Lys Arg Lys Gln Cys Asn Gly Ser Leu Cys Leu Glu Lys Ala
65 70 75 80
Val Asp Lys Pro Pro Ser Pro Ser Pro Ile Glu Met Lys Lys Ala Ser
85 90 95
Asn Pro Val Glu Val Gly Ile Gln Val Thr Pro Glu Asp Asp Asp Cys
100 105 110
Leu Ser Thr Ser Ser Arg Gly Ile Cys Pro Lys Gln Glu His Ile Ala
115 120 125
Asp Lys Leu Leu His Trp Arg Gly Leu Ser Ser Pro Arg Ser Ala His
130 135 140
Gly Ala Leu Ile Pro Thr Pro Gly Met Ser Ala Glu Tyr Ala Pro Gln
145 150 155 160
Gly Ile Cys Lys Asp Glu Pro Ser Ser Tyr Thr Cys Thr Thr Cys Lys
165 170 175
Gln Pro Phe Thr Ser Ala Trp Phe Leu Leu Gln His Ala Gln Asn Thr
180 185 190
His Gly Leu Arg Ile Tyr Leu Glu Ser Glu His Gly Ser Pro Leu Thr
195 200 205
Pro Arg Val Gly Ile Pro Ser Gly Leu Gly Ala Glu Cys Pro Ser Gln
210 215 220
Pro Pro Leu His Gly Ile His Ile Ala Asp Asn Asn Pro Phe Asn Leu
225 230 235 240
Leu Arg Ile Pro Gly Ser Val Ser Arg Glu Ala Ser Gly Leu Ala Glu
245 250 255
Gly Arg Phe Pro Pro Thr Pro Pro Leu Phe Ser Pro Pro Pro Arg His
260 265 270
His Leu Asp Pro His Arg Ile Glu Arg Leu Gly Ala Glu Glu Met Ala
275 280 285
Leu Ala Thr His His Pro Ser Ala Phe Asp Arg Val Leu Arg Leu Asn
290 295 300
Pro Met Ala Met Glu Pro Pro Ala Met Asp Phe Ser Arg Arg Leu Arg
305 310 315 320
Glu Leu Ala Gly Asn Thr Ser Ser Pro Pro Leu Ser Pro Gly Arg Pro
325 330 335
Ser Pro Met Gln Arg Leu Leu Gln Pro Phe Gln Pro Gly Ser Lys Pro
340 345 350
Pro Phe Leu Ala Thr Pro Pro Leu Pro Pro Leu Gln Ser Ala Pro Pro
355 360 365
Pro Ser Gln Pro Pro Val Lys Ser Lys Ser Cys Glu Phe Cys Gly Lys
370 375 380
Thr Phe Lys Phe Gln Ser Asn Leu Val Val His Arg Arg Ser His Thr
385 390 395 400
Gly Glu Lys Pro Tyr Lys Cys Asn Leu Cys Asp His Ala Cys Thr Gln
405 410 415
Ala Ser Lys Leu Lys Arg His Met Lys Thr His Met His Lys Ser Ser
420 425 430
Pro Met Thr Val Lys Ser Asp Asp Gly Leu Ser Thr Ala Ser Ser Pro
435 440 445
Glu Pro Gly Thr Ser Asp Leu Val Gly Ser Ala Ser Ser Ala Leu Lys
450 455 460
Ser Val Val Ala Lys Phe Lys Ser Glu Asn Asp Pro Asn Leu Ile Pro
465 470 475 480
Glu Asn Gly Asp Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Glu Glu Glu Glu Glu
485 490 495
Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Leu Thr Glu Ser Glu Arg Val Asp
500 505 510
Tyr Gly Phe Gly Leu Ser Leu Glu Ala Ala Arg His His Glu Asn Ser
515 520 525
Ser Arg Gly Ala Val Val Gly Val Gly Asp Glu Ser Arg Ala Leu Pro
530 535 540
Asp Val Met Gln Gly Met Val Leu Ser Ser Met Gln His Phe Ser Glu
545 550 555 560
Ala Phe His Gln Val Leu Gly Glu Lys His Lys Arg Gly His Leu Ala
565 570 575
Glu Ala Glu Gly His Arg Asp Thr Cys Asp Glu Asp Ser Val Ala Gly
580 585 590
Glu Ser Asp Arg Ile Asp Asp Gly Thr Val Asn Gly Arg Gly Cys Ser
595 600 605
Pro Gly Glu Ser Ala Ser Gly Gly Leu Ser Lys Lys Leu Leu Leu Gly
610 615 620
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Pro Phe Ser Lys Arg Ile Lys Leu Glu Lys
625 630 635 640
Glu Phe Asp Leu Pro Pro Ala Ala Met Pro Asn Thr Glu Asn Val Tyr
645 650 655
Ser Gln Trp Leu Ala Gly Tyr Ala Ala Ser Arg Gln Leu Lys Asp Pro
660 665 670
Phe Leu Ser Phe Gly Asp Ser Arg Gln Ser Pro Phe Ala Ser Ser Ser
675 680 685
Glu His Ser Ser Glu Asn Gly Ser Leu Arg Phe Ser Thr Pro Pro Gly
690 695 700
Glu Leu Asp Gly Gly Ile Ser Gly Arg Ser Gly Thr Gly Ser Gly Gly
705 710 715 720
Ser Thr Pro His Ile Ser Gly Pro Gly Pro Gly Arg Pro Ser Ser Lys
725 730 735
Glu Gly Arg Arg Ser Asp Thr Cys Glu Tyr Cys Gly Lys Val Phe Lys
740 745 750
Asn Cys Ser Asn Leu Thr Val His Arg Arg Ser His Thr Gly Glu Arg
755 760 765
Pro Tyr Lys Cys Glu Leu Cys Asn Tyr Ala Cys Ala Gln Ser Ser Lys
770 775 780
Leu Thr Arg His Met Lys Thr His Gly Gln Val Gly Lys Asp Val Tyr
785 790 795 800
Lys Cys Glu Ile Cys Lys Met Pro Phe Ser Val Tyr Ser Thr Leu Glu
805 810 815
Lys His Met Lys Lys Trp His Ser Asp Arg Val Leu Asn Asn Asp Ile
820 825 830
Lys Thr Glu
835
<210> 2006
<211> 10
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(10)
<223> /note="This Последовательность may encompass 1-10 nucleotides"
<400> 2006
uuuuuuuuuu 10
<210> 2007
<211> 10
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(10)
<223> /note="This Последовательность may encompass 1-10 nucleotides"
<400> 2007
aaaaaaaaaa 10
<210> 2008
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2008
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2009
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2009
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2010
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2010
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 2011
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2011
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 2012
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2012
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 2013
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2013
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 2014
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2014
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 2015
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2015
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 2016
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2016
gugccagaug aacuucccau 20
<210> 2017
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2017
cacaaacgga aacaaugcaa 20
<210> 2018
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2018
gcttggctac agcacctctg a 21
<210> 2019
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2019
ggcatggggt tgagatgtgc t 21
<210> 2020
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2020
tcagtgagat gagatatcaa 20
<210> 2021
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2021
cagtgagatg agatatcaaa 20
<210> 2022
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2022
tgtaactaat aaataccagg 20
<210> 2023
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2023
ttagggtggg ggcgtgggtg 20
<210> 2024
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2024
attagggtgg gggcgtgggt 20
<210> 2025
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2025
cacgccccca ccctaatcag 20
<210> 2026
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2026
tctgattagg gtgggggcgt 20
<210> 2027
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2027
ttggcctctg attagggtgg 20
<210> 2028
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2028
tttggcctct gattagggtg 20
<210> 2029
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2029
gtttggcctc tgattagggt 20
<210> 2030
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2030
ggtttggcct ctgattaggg 20
<210> 2031
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2031
aagggtttgg cctctgatta 20
<210> 2032
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2032
gaagggtttg gcctctgatt 20
<210> 2033
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2033
atcagaggcc aaacccttcc 20
<210> 2034
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2034
cacaggctcc aggaagggtt 20
<210> 2035
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2035
tttatcacag gctccaggaa 20
<210> 2036
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2036
ttttatcaca ggctccagga 20
<210> 2037
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2037
ttgcttttat cacaggctcc 20
<210> 2038
<211> 20
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2038
ctaacagttg cttttatcac 20
<210> 2039
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2039
ctaacagttg cttttatcac agg 23
<210> 2040
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2040
tagtgcaagc taacaggctc caggaagggt ttggcctctg attag 45
<210> 2041
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2041
tagtgcaagc taacagttgc ttttattcac aggctccagg aagggtttgg cctctgatta 60
g 61
<210> 2042
<211> 47
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2042
tagtgcaagc taacagttgc tccaggaagg gtttggcctc tgattag 47
<210> 2043
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2043
tagtgcaagc taacagttgc ttttatcagg ctccaggaag ggtttggcct ctgattag 58
<210> 2044
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2044
tagtgcaagc taacagttgc ttttacacag gctccaggaa gggtttggcc tctgattag 59
<210> 2045
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2045
tagtgcaagc taacagttgc ttttcacagg ctccaggaag ggtttggcct ctgattag 58
<210> 2046
<211> 37
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2046
tagtgcaagc tccaggaagg gtttggcctc tgattag 37
<210> 2047
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2047
atcagaggcc aaacccttcc acc 23
<210> 2048
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2048
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt agggtgggg 59
<210> 2049
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2049
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg tgggg 55
<210> 2050
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2050
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60
g 61
<210> 2051
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2051
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg gtgggg 56
<210> 2052
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2052
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaggtttgg cctctgatta gggtgggg 58
<210> 2053
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2053
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt agggtgggg 59
<210> 2054
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2054
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaggtttg gcctctgatt agggtgggg 59
<210> 2055
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2055
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60
g 61
<210> 2056
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2056
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaggtttgg cctctgatta gggtgggg 58
<210> 2057
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2057
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagtttgg cctctgatta gggtgggg 58
<210> 2058
<211> 50
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2058
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggcctctgat tagggtgggg 50
<210> 2059
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2059
agctaacagt tgcttttatc acaggcctct gattagggtg ggg 43
<210> 2060
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2060
agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagtttggc ctctgattag ggtgggg 57
<210> 2061
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2061
ttgcttttat cacaggctcc agg 23
<210> 2062
<211> 53
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2062
agctaacagt tgcttttatc acaggaaggg tttggcctct gattagggtg ggg 53
<210> 2063
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2063
agctaacagt tgcttttatc acaggcttcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60
g 61
<210> 2064
<211> 52
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2064
agctaacagt tgcttttatc caggaagggt ttggcctctg attagggtgg gg 52
<210> 2065
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2065
agctaacagt tgcttttatc acaggcctcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60
g 61
<210> 2066
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2066
agctaacagt tgcttttatc acaggcccag gaagggtttg gcctctgatt agggtgggg 59
<210> 2067
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2067
agctaacagt tgcttttatc acaggccagg aagggtttgg cctctgatta gggtgggg 58
<210> 2068
<211> 53
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2068
agctaacagt tgcttttatc acaggaaggg tttggcctct gattagggtg ggg 53
<210> 2069
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2069
agctaacagt tgcttttatc acaggcttcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60
g 61
<210> 2070
<211> 52
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2070
agctaacagt tgcttttatc caggaagggt ttggcctctg attagggtgg gg 52
<210> 2071
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2071
agctaacagt tgcttttatc acaggcctcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60
g 61
<210> 2072
<211> 53
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2072
agctaacagt tgcttttatc acaggaaggg tttggcctct gattagggtg ggg 53
<210> 2073
<211> 52
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2073
agctaacagt tgcttttatc caggaagggt ttggcctctg attagggtgg gg 52
<210> 2074
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2074
agctaacagt tgcttttatc acaggcttcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60
g 61
<210> 2075
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2075
agctaacagt gattagggtg ggg 23
<210> 2076
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2076
agctaacagt tgcttttatc acaggcccag gaagggtttg gcctctgatt agggtgggg 59
<210> 2077
<211> 53
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2077
agctaacagt tgcttttatc acaggaaggg tttggcctct gattagggtg ggg 53
<210> 2078
<211> 52
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2078
agctaacagt tgcttttatc caggaagggt ttggcctctg attagggtgg gg 52
<210> 2079
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2079
agctaacagt tgcttttatc acaggcttcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60
g 61
<210> 2080
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2080
agctaacagt tgcttttatc acaggcctcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60
g 61
<210> 2081
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2081
agctaacagt tgcttttatc acaggcgaag ggtttggcct ctgattaggg tgggg 55
<210> 2082
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2082
ttttatcaca ggctccagga agg 23
<210> 2083
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2083
aacagttgct tttatcacag gctccaagga agggtttggc ctctgattag ggtgggggcg 60
t 61
<210> 2084
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2084
aacagttgct tttatcacag gcctctgatt agggtggggg cgt 43
<210> 2085
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2085
aacagttgct tttatcacag ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgt 49
<210> 2086
<211> 53
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2086
aacagttgct tttatcacag gaagggtttg gcctctgatt agggtggggg cgt 53
<210> 2087
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2087
aacagttgct tttggtgggg gcgt 24
<210> 2088
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2088
aacagttgct tttatcacag gctccaagga agggtttggc ctctgattag ggtgggggcg 60
t 61
<210> 2089
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2089
aacagttgct tttatcacag ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgt 49
<210> 2090
<211> 53
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2090
aacagttgct tttatcacag gaagggtttg gcctctgatt agggtggggg cgt 53
<210> 2091
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2091
aacagttgct tttatcacag gcctctgatt agggtggggg cgt 43
<210> 2092
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2092
aacagttgct tttatcacag gcttggcctc tgattagggt gggggcgt 48
<210> 2093
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2093
aacagttgct tttatcacag gctccggaag ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgt 59
<210> 2094
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2094
tttatcacag gctccaggaa ggg 23
<210> 2095
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2095
acagttgctt ttatcacagg ctccagaagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 59
<210> 2096
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2096
acagttgctt ttatcacagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 49
<210> 2097
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2097
acagttgctt ttatcacagg ctccagggaa gggtttggcc tctgattagg gtgggggcgt 60
g 61
<210> 2098
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2098
acagttgctt ttatcacagg cctctgatta gggtgggggc gtg 43
<210> 2099
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2099
acagttgctt ttgggggcgt g 21
<210> 2100
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2100
acagttgctt tgggggcgtg 20
<210> 2101
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2101
acagttgctt ttatcacagg ctccagaagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 59
<210> 2102
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2102
acagttgctt ttatcacagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 49
<210> 2103
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2103
acagttgctt ttatcacagg ctccagggaa gggtttggcc tctgattagg gtgggggcgt 60
g 61
<210> 2104
<211> 42
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2104
acagttgctt ttatcacagg ctccagataa ggtgggggcg tg 42
<210> 2105
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2105
acagttgctt ttatcacagg cctctgatta gggtgggggc gtg 43
<210> 2106
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2106
acagttgctt ttatcacagg ctccagggtt tggcctctga ttagggtggg ggcgtg 56
<210> 2107
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2107
acagttgctt ttatcacagg ctccagcgaa gggtttggcc tctgattagg gtgggggcgt 60
g 61
<210> 2108
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2108
acagttgctt ttatcacagg ctccggaagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 59
<210> 2109
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2109
cacaggctcc aggaagggtt tgg 23
<210> 2110
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2110
tgcttttatc acaggctcca ggaaggtttg gcctctgatt agggtggggg cgtgggtgg 59
<210> 2111
<211> 31
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2111
tgcttttatc acaggcctgg ggcgtgggtg g 31
<210> 2112
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2112
tgcttttatc acaggcgtgg gtgg 24
<210> 2113
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2113
tgcttttatc acaggcctct gattagggtg ggggcgtggg tgg 43
<210> 2114
<211> 54
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2114
tgcttttatc acaggctcca ggaaggcctc tgattagggt gggggcgtgg gtgg 54
<210> 2115
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2115
tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt agggtggggg cgtgggtgg 59
<210> 2116
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2116
tgcttttatc acaggctcca ggaaggtttg gcctctgatt agggtggggg cgtgggtgg 59
<210> 2117
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2117
tgcttttatc acaggcctct gattagggtg ggggcgtggg tgg 43
<210> 2118
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2118
tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga ttagggtggg ggcgtgggtg 60
g 61
<210> 2119
<211> 32
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2119
tgcttttatc acaggctcca gggcgtgggt gg 32
<210> 2120
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2120
tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgtg ggtgg 55
<210> 2121
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2121
tgcttttatc acaggcgtgg gtgg 24
<210> 2122
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2122
tgcttttatc acaggctcca ggaagtttgg cctctgatta gggtgggggc gtgggtgg 58
<210> 2123
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2123
tgcttttatc acaggctcca ggaaggtccg tttgcgtggg tgg 43
<210> 2124
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2124
cacgccccca ccctaatcag agg 23
<210> 2125
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2125
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag a 41
<210> 2126
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2126
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgaattaggg tgggggcgtg ggtggggtag 60
a 61
<210> 2127
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2127
tatcacaggc tccaggaagg gcgtgggtgg ggtaga 36
<210> 2128
<211> 38
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2128
tatcacaggc tccaggaagg gggcgtgggt ggggtaga 38
<210> 2129
<211> 42
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2129
tatcacaggc tccaggaagg gtttgggcgt gggtggggta ga 42
<210> 2130
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2130
tatcacaggc tccaggaagg gtttgggtgg ggtaga 36
<210> 2131
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2131
tatcacaggc tccaggggcg tgggtggggt aga 33
<210> 2132
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2132
gaagggtttg gcctctgatt agg 23
<210> 2133
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2133
aggctccagg aagggtttgg cgtgggtggg gtagaagagg a 41
<210> 2134
<211> 42
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2134
aggctccagg aagggtttgg gcgtgggtgg ggtagaagag ga 42
<210> 2135
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2135
aggctccagg ggcgtgggtg gggtagaaga gga 33
<210> 2136
<211> 30
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2136
aggctccagg aagggtgggg tagaagagga 30
<210> 2137
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2137
aggctccagg aagggtttgg cctctggcgt gggtggggta gaagagga 48
<210> 2138
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2138
aggctccagg aagggcgtgg gtggggtaga agagga 36
<210> 2139
<211> 38
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2139
aggctccagg aagggtttgg cctctgcgta gaagagga 38
<210> 2140
<211> 35
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2140
aggctccagg aagggttggg tggggtagaa gagga 35
<210> 2141
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2141
aggctccagg aagggtttgg cgtgggtggg gtagaagagg a 41
<210> 2142
<211> 42
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2142
aggctccagg aagggtttgg gcgtgggtgg ggtagaagag ga 42
<210> 2143
<211> 30
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2143
aggctccagg aagggtgggg tagaagagga 30
<210> 2144
<211> 32
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2144
aggctccagg aagggtttgg ggtagaagag ga 32
<210> 2145
<211> 38
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2145
aggctccagg aagggggcgt gggtggggta gaagagga 38
<210> 2146
<211> 31
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2146
aggctccagg cgtgggtggg gtagaagagg a 31
<210> 2147
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2147
aggctccagg aagggcgtgg gtggggtaga agagga 36
<210> 2148
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2148
aggctccagg gtagaagagg a 21
<210> 2149
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2149
aggctccagg aagggtttgg gtggggtaga agagga 36
<210> 2150
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2150
aagggtttgg cctctgatta ggg 23
<210> 2151
<211> 64
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2151
ggctccagga agggtttggc ctctgattcc ccattgtggg ggcgtgggtg gggtagaaga 60
ggac 64
<210> 2152
<211> 35
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2152
ggctccagga agggtttggt ggggtagaag aggac 35
<210> 2153
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2153
ggctccagga agggtttggc gtgggtgggg tagaagagga c 41
<210> 2154
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2154
ggctccagga agggcgtggg tggggtagaa gaggac 36
<210> 2155
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2155
ggctccagga agggtttggg tggggtagaa gaggac 36
<210> 2156
<211> 51
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2156
ggctccagga agggtttggc ctctgagggc gtgggtgggg tagaagagga c 51
<210> 2157
<211> 42
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2157
ggctccagga agggtttggc cgtgggtggg gtagaagagg ac 42
<210> 2158
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2158
ggctccagga agggtttggc ctctgaatta gggtgggggc gtgggtgggg tagaagagga 60
c 61
<210> 2159
<211> 40
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2159
ggctccagga agggtttgcg tgggtggggt agaagaggac 40
<210> 2160
<211> 32
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2160
ggctccagga agggtttggg gtagaagagg ac 32
<210> 2161
<211> 34
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2161
ggctccagga agggtgggtg gggtagaaga ggac 34
<210> 2162
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2162
ggtttggcct ctgattaggg tgg 23
<210> 2163
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2163
tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg g 41
<210> 2164
<211> 30
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2164
tccaggaagg gtggggtaga agaggactgg 30
<210> 2165
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2165
tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa gaggactgg 59
<210> 2166
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2166
tccaggaagg gtagaagagg actgg 25
<210> 2167
<211> 38
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2167
tccaggaagg gggcgtgggt ggggtagaag aggactgg 38
<210> 2168
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2168
tccaggaagg gcgtgggtgg ggtagaagag gactgg 36
<210> 2169
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2169
tccaggaagg gtttgggtgg ggtagaagag gactgg 36
<210> 2170
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2170
tccaggaagg gtttggcctc tgattgggtg ggggcgtggg tggggtagaa gaggactgg 59
<210> 2171
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2171
tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg g 41
<210> 2172
<211> 38
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2172
tccaggaagg gggcgtgggt ggggtagaag aggactgg 38
<210> 2173
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2173
tccaggaagg gtttgggtgg ggtagaagag gactgg 36
<210> 2174
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2174
tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa gaggactgg 59
<210> 2175
<211> 31
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2175
tccaggaagg gttggggtag aagaggactg g 31
<210> 2176
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2176
tccaggaagg gtttggcctg ggtggggtag aagaggactg g 41
<210> 2177
<211> 30
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2177
tccaggaagg gtttggtaga agaggactgg 30
<210> 2178
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2178
gtttggcctc tgattagggt ggg 23
<210> 2179
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2179
ccaggaaggg tttggcctct gattaggtgg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggc 59
<210> 2180
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2180
ccaggaaggg tttggcgtgg gtggggtaga agaggactgg c 41
<210> 2181
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2181
ccaggaaggg tttggcctct gattggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58
<210> 2182
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2182
ccaggaaggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 36
<210> 2183
<211> 38
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2183
ccaggaaggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 38
<210> 2184
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2184
ccaggaaggg tttgggtggg gtagaagagg actggc 36
<210> 2185
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2185
ccaggaaggg tttggcctct gaggtggggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 56
<210> 2186
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2186
ccaggaaggg tttggcctct gattaggtgg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggc 59
<210> 2187
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2187
ccaggaaggg tttggcgtgg gtggggtaga agaggactgg c 41
<210> 2188
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2188
ccaggaaggg tttgggtggg gtagaagagg actggc 36
<210> 2189
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2189
ccaggaaggg tttggcctct gattggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58
<210> 2190
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2190
ccaggaaggg tttggcctct gattaggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggc 55
<210> 2191
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2191
ccaggaaggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 36
<210> 2192
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2192
ccaggaaggg tttggcctct gattagaggt gggggcgtgg gtggggtaga agaggactgg 60
c 61
<210> 2193
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2193
ccaggaaggg tttggcctct gattaggtgg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggc 59
<210> 2194
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2194
ccaggaaggg tttggcctct gattggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58
<210> 2195
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2195
ccaggaaggg tttgggtggg gtagaagagg actggc 36
<210> 2196
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2196
ccaggaaggg tttggcgtgg gtggggtaga agaggactgg c 41
<210> 2197
<211> 44
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2197
ccaggaaggg tttgggggcg tgggtggggt agaagaggac tggc 44
<210> 2198
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2198
ccaggaaggg tttggcctct gattagtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58
<210> 2199
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2199
ccaggaaggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 36
<210> 2200
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2200
ccaggaaggg tttggcctct gattaggtgg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggc 59
<210> 2201
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2201
ccaggaaggg tttggcgtgg gtggggtaga agaggactgg c 41
<210> 2202
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2202
ccaggaaggg tttggcctct gattggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58
<210> 2203
<211> 37
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2203
ccaggaaggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggc 37
<210> 2204
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2204
ccaggaaggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 36
<210> 2205
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2205
ccaggaaggg tttggcctct gattagtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58
<210> 2206
<211> 44
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2206
ccaggaaggg tttgggggcg tgggtggggt agaagaggac tggc 44
<210> 2207
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2207
tttggcctct gattagggtg ggg 23
<210> 2208
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2208
caggaagggt ttggcctctg attaggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggca 59
<210> 2209
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2209
caggaagggt ttggcgtggg tggggtagaa gaggactggc a 41
<210> 2210
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2210
caggaagggt ttggcctctg attagtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggca 58
<210> 2211
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2211
caggaagggt ttggcctctg attaggggcg tgggtggggt agaagaggac tggca 55
<210> 2212
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2212
caggaagggt ttgggtgggg tagaagagga ctggca 36
<210> 2213
<211> 47
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2213
caggaagggt ttggtggggg cgtgggtggg gtagaagagg actggca 47
<210> 2214
<211> 53
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2214
caggaagggt ttggcctctg tgggggcgtg ggtggggtag aagaggactg gca 53
<210> 2215
<211> 30
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2215
caggaagggt ggggtagaag aggactggca 30
<210> 2216
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2216
caggaagggt ttggcctctg attaggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggca 59
<210> 2217
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2217
caggaagggt ttggcgtggg tggggtagaa gaggactggc a 41
<210> 2218
<211> 30
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2218
caggaagggt ggggtagaag aggactggca 30
<210> 2219
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2219
caggaagggt ttggcctctg attagtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggca 58
<210> 2220
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2220
caggaagggt ttggcctctg attagggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggca 56
<210> 2221
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2221
caggaagggt ttggcctctg attaggggcg tgggtggggt agaagaggac tggca 55
<210> 2222
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2222
caggaagggt ttggcctctg attaggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggca 59
<210> 2223
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2223
caggaagggt ttggcctctg attagtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggca 58
<210> 2224
<211> 30
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2224
caggaagggt ttggcctaag aggactggca 30
<210> 2225
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2225
caggaagggt ttgggaggac tggca 25
<210> 2226
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2226
caggaagggt ttagaagagg actggca 27
<210> 2227
<211> 29
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2227
caggaagggt ttggcctcga ggactggca 29
<210> 2228
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2228
caggaagggt ttggcctctg attagggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggca 56
<210> 2229
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2229
caggaagggt ttggcctctg attagggggg cgtgggtggg gtagaagagg actggca 57
<210> 2230
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2230
caggaagggt ttggcctctg attaggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggca 59
<210> 2231
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2231
caggaagggt ttggcgtggg tggggtagaa gaggactggc a 41
<210> 2232
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2232
caggaagggt ttggcctctg attagtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggca 58
<210> 2233
<211> 32
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2233
caggaagggt ttggggtaga agaggactgg ca 32
<210> 2234
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2234
caggaagggt ttggcctctg attaggggcg tgggtggggt agaagaggac tggca 55
<210> 2235
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2235
caggaagggt ttggcctctg attagggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggca 56
<210> 2236
<211> 44
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2236
caggaagggt ttgggggcgt gggtggggta gaagaggact ggca 44
<210> 2237
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2237
ttggcctctg attagggtgg ggg 23
<210> 2238
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2238
aggaagggtt tggcctctga ttagggggcg tgggtggggt agaagaggac tggcag 56
<210> 2239
<211> 54
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2239
aggaagggtt tggcctctga ttagggcgtg ggtggggtag aagaggactg gcag 54
<210> 2240
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2240
aggaagggtt tggcctctga ttaggggcgt gggtggggta gaagaggact ggcag 55
<210> 2241
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2241
aggaagggtt tggcctctga ttaggtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggcag 59
<210> 2242
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2242
aggaagggtt tggcctctga ttagtggggg cgtgggtggg gtagaagagg actggcag 58
<210> 2243
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2243
aggaagggtt tggcctctga ttgggggcgt gggtggggta gaagaggact ggcag 55
<210> 2244
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2244
aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg ggcgtgggtg ggtagaagag gactggcag 59
<210> 2245
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2245
tctgattagg gtgggggcgt ggg 23
<210> 2246
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2246
ggtttggcct ctgattaggg tggggtagaa gaggactggc agacctct 48
<210> 2247
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2247
ggtttggcct ctgattaggg tgggggtaga agaggactgg cagacctct 49
<210> 2248
<211> 52
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2248
ggtttggcct ctgattaggg tgggtggggt agaagaggac tggcagacct ct 52
<210> 2249
<211> 42
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2249
ggtttggcct ctgatggggt agaagaggac tggcagacct ct 42
<210> 2250
<211> 31
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2250
ggtttggcct ctgatttact ggcagacctc t 31
<210> 2251
<211> 53
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2251
ggtttggcct ctgattggcc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc tct 53
<210> 2252
<211> 44
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2252
ggtttggcct ctgattaggg gtagaagagg actggcagac ctct 44
<210> 2253
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2253
ggtttggcct ctgatccaag agcccgtggg tggggtagaa gaggactggc agacctct 58
<210> 2254
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2254
ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgtg ggtgggtaga agaggactgg cagacctct 59
<210> 2255
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2255
attagggtgg gggcgtgggt ggg 23
<210> 2256
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2256
tggcctctga ttagggtggg gtagaagagg actggcagac ctctccat 48
<210> 2257
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2257
tggcctctga ttagggtggg ggtagaagag gactggcaga cctctccat 49
<210> 2258
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2258
tggcctctga ttagggtggg ggcgtggtgg ggtagaagag gactggcaga cctctccat 59
<210> 2259
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2259
tggcctctga ttagggtggg ggcgaagagg actggcagac ctctccat 48
<210> 2260
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2260
ttagggtggg ggcgtgggtg ggg 23
<210> 2261
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2261
ggcctctgat tagggtgggg tagaagagga ctggcagacc tctccatc 48
<210> 2262
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2262
ggcctctgat tagggtgggg gcgtggtggg gtagaagagg actggcagac ctctccatc 59
<210> 2263
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2263
ggcctctgat tagggtgggg gtagaagagg actggcagac ctctccatc 49
<210> 2264
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2264
tgtaactaat aaataccagg 20
<210> 2265
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2265
ctgctgaggt gtaactaata aataccggag gcagcatttt agttcacaag ctcggagca 59
<210> 2266
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2266
ctgctgaggt gtaactaata aatacaggag gcagcatttt agttcacaag ctcggagca 59
<210> 2267
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2267
ctgctgaggt gtaactaata aatacccagg aggcagcatt ttagttcaca agctcggagc 60
a 61
<210> 2268
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2268
ctgctgaggt gtaactaata aataccgagg cagcatttta gttcacaagc tcggagca 58
<210> 2269
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2269
ctgctgaggt gtaactaata aatcaggagg cagcatttta gttcacaagc tcggagca 58
<210> 2270
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2270
ctgctgaggt gtaactaata aataggaggc agcattttag ttcacaagct cggagca 57
<210> 2271
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2271
cagtgagatg agatatcaaa ggg 23
<210> 2272
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2272
gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttggatatct catctcactg agctctgggc 60
c 61
<210> 2273
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2273
gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttgatctcat ctcactgagc tctgggcc 58
<210> 2274
<211> 54
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2274
gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttgcatctca ctgagctctg ggcc 54
<210> 2275
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2275
gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttctcatctc actgagctct gggcc 55
<210> 2276
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2276
gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttatatctca tctcactgag ctctgggcc 59
<210> 2277
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2277
gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttgtctcatc tcactgagct ctgggcc 57
<210> 2278
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2278
gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct tttatctcat ctcactgagc tctgggcc 58
<210> 2279
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2279
gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttgtatctca tctcactgag ctctgggcc 59
<210> 2280
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2280
tcagtgagat gagatatcaa agg 23
<210> 2281
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2281
ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgaatatctc atctcactga gctctgggcc 60
g 61
<210> 2282
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2282
ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgaatctcat ctcactgagc tctgggccg 59
<210> 2283
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2283
ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgatctcatc tcactgagct ctgggccg 58
<210> 2284
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2284
ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgtatctcat ctcactgagc tctgggccg 59
<210> 2285
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2285
ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt atatctcatc tcactgagct ctgggccg 58
<210> 2286
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2286
ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgacatctca ctgagctctg ggccg 55
<210> 2287
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2287
gtgccagatg aacttcccat tgg 23
<210> 2288
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2288
ctgtgggcag tgccagatga acttccattg ggggacattc ttatttttat cgagcacaa 59
<210> 2289
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2289
ctgtgggcag tgccagatga acttcattgg gggacattct tatttttatc gagcacaa 58
<210> 2290
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2290
ctgtgggcag tgccagatga acttccccat tgggggacat tcttattttt atcgagcaca 60
a 61
<210> 2291
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2291
ctgtgggcag tgccagatga acattggggg acattcttat ttttatcgag cacaa 55
<210> 2292
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2292
ctgtgggcag tgccagatga acttccttgg gggacattct tatttttatc gagcacaa 58
<210> 2293
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2293
ctgtgggcag tgccagatga acttccattg ggggacattc ttatttttat cgagcacaa 59
<210> 2294
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2294
ctgtgggcag tgccagatga acttcattgg gggacattct tatttttatc gagcacaa 58
<210> 2295
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2295
ctgtgggcag tgccagatga acttccccat tgggggacat tcttattttt atcgagcaca 60
a 61
<210> 2296
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2296
ctgtgggcag tgccagatga acttccttgg gggacattct tatttttatc gagcacaa 58
<210> 2297
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2297
ctgtgggcag tgccagatga actcattggg ggacattctt atttttatcg agcacaa 57
<210> 2298
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2298
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2299
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2299
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2300
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2301
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2301
actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgac cttgggcaag tagctatcta 60
atgactaaaa tgg 73
<210> 2302
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2302
actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgac cttggttgaa tgggcaagta 60
gctatctaat gactaaaatg g 81
<210> 2303
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2303
actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgac cttgaatggg caagtagcta 60
tctaatgact aaaatgg 77
<210> 2304
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2304
actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgac cttgtgaatg ggcaagtagc 60
tatctaatga ctaaaatgg 79
<210> 2305
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2305
actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgaa tgggcaagta gctatctaat 60
gactaaaatg g 71
<210> 2306
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2306
atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaagagaaa cagttttagt ataacaagtg 60
aaatacccat 70
<210> 2307
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2307
atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaaaaacac tggaagagaa acagttttag 60
tataacaagt gaaataccca t 81
<210> 2308
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2308
atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaacactgg aagagaaaca gttttagtat 60
aacaagtgaa atacccat 78
<210> 2309
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2309
atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaaaactgg aagagaaaca gttttagtat 60
aacaagtgaa atacccat 78
<210> 2310
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2310
atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaaaaccac tggaagagaa acagttttag 60
tataacaagt gaaataccca t 81
<210> 2311
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2311
cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac ccatgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaa 77
<210> 2312
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2312
cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac ccatctgagt ctgaggtgcc 60
tataggacat ctatataaa 79
<210> 2313
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2313
cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac ccactgagtc tgaggtgcct 60
ataggacatc tatataaa 78
<210> 2314
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2314
cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac ccatggagtc tgaggtgcct 60
ataggacatc tatataaa 78
<210> 2315
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2315
cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac cctgagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaa 76
<210> 2316
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2316
taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggacatctat ataaataagc ccagtacatt 60
gtttgatata 70
<210> 2317
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2317
taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggtgccatag gacatctata taaataagcc 60
cagtacattg tttgatata 79
<210> 2318
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2318
taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggtgccctat aggacatcta tataaataag 60
cccagtacat tgtttgatat a 81
<210> 2319
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2319
taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggtgccttat aggacatcta tataaataag 60
cccagtacat tgtttgatat a 81
<210> 2320
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2320
taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggtgctatag gacatctata taaataagcc 60
cagtacattg tttgatata 79
<210> 2321
<211> 69
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2321
tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctatataaat aagcccagta 60
cattgtttg 69
<210> 2322
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2322
tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctatagacat ctatataaat 60
aagcccagta cattgtttg 79
<210> 2323
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2323
tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctatggacat ctatataaat 60
aagcccagta cattgtttg 79
<210> 2324
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2324
tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctatagggac atctatataa 60
ataagcccag tacattgttt g 81
<210> 2325
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2325
tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctataaggac atctatataa 60
ataagcccag tacattgttt g 81
<210> 2326
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2326
tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggattacagg ctgtatttaa gagtttagat 60
ataactgtga atccaaga 78
<210> 2327
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2327
tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggattaatac aggctgtatt taagagttta 60
gatataactg tgaatccaag a 81
<210> 2328
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2328
tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggatttacag gctgtattta agagtttaga 60
tataactgtg aatccaaga 79
<210> 2329
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2329
tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggattattac aggctgtatt taagagttta 60
gatataactg tgaatccaag a 81
<210> 2330
<211> 82
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2330
tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggattaaata caggctgtat ttaagagttt 60
agatataact gtgaatccaa ga 82
<210> 2331
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2331
tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ggtatctaag gactctaggg tcagagaaat 60
atgggttata tccttctac 79
<210> 2332
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2332
tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ggactctagg gtcagagaaa tatgggttat 60
atccttctac 70
<210> 2333
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2333
tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60
cttctac 67
<210> 2334
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2334
tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ggtataacta aggactctag ggtcagagaa 60
atatgggtta tatccttcta c 81
<210> 2335
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2335
tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ggtaaggact ctagggtcag agaaatatgg 60
gttatatcct tctac 75
<210> 2336
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2336
gatgagccac atggtatggg aggtatacta aggacttcta gggtcagaga aatatgggtt 60
atatccttct acaaaattca c 81
<210> 2337
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2337
gatgagccac atggtatggg aggtatacta gggtcagaga aatatgggtt atatccttct 60
acaaaattca c 71
<210> 2338
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2338
gatgagccac atggtatggg aggtatacta agggtcagag aaatatgggt tatatccttc 60
tacaaaattc ac 72
<210> 2339
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2339
gatgagccac atggtatggg aggtatacta aggactaggg tcagagaaat atgggttata 60
tccttctaca aaattcac 78
<210> 2340
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2340
gatgagccac atggtatggg aggtatacta aggtcagaga aatatgggtt atatccttct 60
acaaaattca c 71
<210> 2341
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2341
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2342
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2342
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2343
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2343
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2344
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2344
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2345
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2345
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2346
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2346
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60
ctctttcagc agttgtttc 79
<210> 2347
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2347
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2348
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2348
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60
tttcagcagt tgtttc 76
<210> 2349
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2349
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60
tctttcagca gttgtttc 78
<210> 2350
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2350
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2351
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2351
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2352
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2352
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60
ctctttcagc agttgtttc 79
<210> 2353
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2353
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60
tctttcagca gttgtttc 78
<210> 2354
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2354
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60
tttcagcagt tgtttc 76
<210> 2355
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2355
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2356
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2356
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2357
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2357
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2358
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2358
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60
tttctaaaaa tatcctcc 78
<210> 2359
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2359
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60
ttgtttctaa aaatatcctc c 81
<210> 2360
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2360
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60
ctaaaaatat cctcc 75
<210> 2361
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2361
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2362
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2362
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2363
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2363
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60
tttctaaaaa tatcctcc 78
<210> 2364
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2364
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60
ttgtttctaa aaatatcctc c 81
<210> 2365
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2365
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acgcatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2366
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2366
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaattagt ggaatgtatc ttagagttta 60
acttatttgt ttctgtcac 79
<210> 2367
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2367
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaatagtg gaatgtatct tagagtttaa 60
cttatttgtt tctgtcac 78
<210> 2368
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2368
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag tggaatgtat cttagagttt aacttatttg 60
tttctgtcac 70
<210> 2369
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2369
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaataata gtggaatgta tcttagagtt 60
taacttattt gtttctgtca c 81
<210> 2370
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2370
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaataagt ggaatgtatc ttagagttta 60
acttatttgt ttctgtcac 79
<210> 2371
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2371
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaatagtg gaatgtatct tagagtttaa 60
cttatttgtt tctgtcac 78
<210> 2372
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2372
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaattagt ggaatgtatc ttagagttta 60
acttatttgt ttctgtcac 79
<210> 2373
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2373
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag tggaatgtat cttagagttt aacttatttg 60
tttctgtcac 70
<210> 2374
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2374
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaataagt ggaatgtatc ttagagttta 60
acttatttgt ttctgtcac 79
<210> 2375
<211> 68
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2375
cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gaatgtatct tagagtttaa cttatttgtt 60
tctgtcac 68
<210> 2376
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2376
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttgaat ggacaaatct attgctgcag 60
tttaaacttg cttgcttcc 79
<210> 2377
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2377
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttggac aaatctattg ctgcagttta 60
aacttgcttg cttcc 75
<210> 2378
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2378
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga atggacaaat ctattgctgc agtttaaact 60
tgcttgcttc c 71
<210> 2379
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2379
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggacaaat ctattgctgc agtttaaact 60
tgcttgcttc c 71
<210> 2380
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2380
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttggga atggacaaat ctattgctgc 60
agtttaaact tgcttgcttc c 81
<210> 2381
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2381
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttgaat ggacaaatct attgctgcag 60
tttaaacttg cttgcttcc 79
<210> 2382
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2382
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggacaaat ctattgctgc agtttaaact 60
tgcttgcttc c 71
<210> 2383
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2383
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttggac aaatctattg ctgcagttta 60
aacttgcttg cttcc 75
<210> 2384
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2384
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttggga atggacaaat ctattgctgc 60
agtttaaact tgcttgcttc c 81
<210> 2385
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2385
tagagatttt tgtctccaag ggaattttga atggacaaat ctattgctgc agtttaaact 60
tgcttgcttc c 71
<210> 2386
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2386
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatgaag ggatggagga gaagaaggaa 60
aaataaataa tggagagga 79
<210> 2387
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2387
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatggag gagaagaagg aaaaataaat 60
aatggagagg a 71
<210> 2388
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2388
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gagggatgga ggagaagaag gaaaaataaa 60
taatggagag ga 72
<210> 2389
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2389
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatggga agggatggag gagaagaagg 60
aaaaataaat aatggagagg a 81
<210> 2390
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2390
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggaaggga tggaggagaa gaaggaaaaa 60
taaataatgg agagga 76
<210> 2391
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2391
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatggag gagaagaagg aaaaataaat 60
aatggagagg a 71
<210> 2392
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2392
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatgaag ggatggagga gaagaaggaa 60
aaataaataa tggagagga 79
<210> 2393
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2393
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga agggatggag gagaagaagg aaaaataaat 60
aatggagagg a 71
<210> 2394
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2394
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggaaggga tggaggagaa gaaggaaaaa 60
taaataatgg agagga 76
<210> 2395
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2395
gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gagggatgga ggagaagaag gaaaaataaa 60
taatggagag ga 72
<210> 2396
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2396
gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaagag gagagaaaag aaacgaagag 60
aggggaaggg aaggaaaa 78
<210> 2397
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2397
gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaggag agaaaagaaa cgaagagagg 60
ggaagggaag gaaaa 75
<210> 2398
<211> 65
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2398
gagaaagaga aagggaaggg aagagaggag agaaaagaaa cgaagagagg ggaagggaag 60
gaaaa 65
<210> 2399
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2399
gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaaacgaag agaggggaag ggaaggaaaa 60
<210> 2400
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2400
gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaggagaga aaagaaacga agagagggga 60
agggaaggaa aa 72
<210> 2401
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2401
gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaggag agaaaagaaa cgaagagagg 60
ggaagggaag gaaaa 75
<210> 2402
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2402
gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaagag gagagaaaag aaacgaagag 60
aggggaaggg aaggaaaa 78
<210> 2403
<211> 65
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2403
gagaaagaga aagggaaggg aagagaggag agaaaagaaa cgaagagagg ggaagggaag 60
gaaaa 65
<210> 2404
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2404
gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaggaa gaggagagaa aagaaacgaa 60
gagaggggaa gggaaggaaa a 81
<210> 2405
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2405
gagaaagaga aagggaaggg aggagagaaa agaaacgaag agaggggaag ggaaggaaaa 60
<210> 2406
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2406
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2407
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2407
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2408
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2408
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2409
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2409
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcagccac ttaaatgctt accaacagta 60
gaattgataa at 72
<210> 2410
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2410
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa ccacttaaat gcttaccaac agtagaattg 60
ataaat 66
<210> 2411
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2411
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2412
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2412
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2413
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2413
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2414
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2414
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60
gaattgataa at 72
<210> 2415
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2415
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2416
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2416
aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagtaaccca gaggtgagtt caaactatat 60
gactttattt gtatatagaa a 81
<210> 2417
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2417
aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagaggtgag ttcaaactat atgactttat 60
ttgtatatag aaa 73
<210> 2418
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2418
aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagtaacaga ggtgagttca aactatatga 60
ctttatttgt atatagaaa 79
<210> 2419
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2419
aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aaggtgagtt caaactatat gactttattt 60
gtatatagaa a 71
<210> 2420
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2420
aaatgcattt tacagcattt ggttgagttc aaactatatg actttatttg tatatagaaa 60
<210> 2421
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2421
aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagtaaccca gaggtgagtt caaactatat 60
gactttattt gtatatagaa a 81
<210> 2422
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2422
aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagaggtgag ttcaaactat atgactttat 60
ttgtatatag aaa 73
<210> 2423
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2423
aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagtaacaga ggtgagttca aactatatga 60
ctttatttgt atatagaaa 79
<210> 2424
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2424
aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aaggtgagtt caaactatat gactttattt 60
gtatatagaa a 71
<210> 2425
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2425
aaatgcattt tacagcattt ggttgagttc aaactatatg actttatttg tatatagaaa 60
<210> 2426
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2426
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaaaag gtggtggcat ggtttgattt 60
gtgtctttaa aagattattc t 81
<210> 2427
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2427
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaaggtggt ggcatggttt gatttgtgtc 60
tttaaaagat tattct 76
<210> 2428
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2428
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaaggt ggtggcatgg tttgatttgt 60
gtctttaaaa gattattct 79
<210> 2429
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2429
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaggtg gtggcatggt ttgatttgtg 60
tctttaaaag attattct 78
<210> 2430
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2430
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaggtggtg gcatggtttg atttgtgtct 60
ttaaaagatt attct 75
<210> 2431
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2431
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaaaag gtggtggcat ggtttgattt 60
gtgtctttaa aagattattc t 81
<210> 2432
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2432
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaaggtggt ggcatggttt gatttgtgtc 60
tttaaaagat tattct 76
<210> 2433
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2433
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaaggt ggtggcatgg tttgatttgt 60
gtctttaaaa gattattct 79
<210> 2434
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2434
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaggtg gtggcatggt ttgatttgtg 60
tctttaaaag attattct 78
<210> 2435
<211> 82
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2435
cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaacaa ggtggtggca tggtttgatt 60
tgtgtcttta aaagattatt ct 82
<210> 2436
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2436
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ggataaggtc taaaagtgga 60
aagaata 67
<210> 2437
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2437
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca cccatccagc caggataagg 60
tctaaaagtg gaaagaata 79
<210> 2438
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2438
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca tccagccagg ataaggtcta 60
aaagtggaaa gaata 75
<210> 2439
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2439
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccgatccagc caggataagg 60
tctaaaagtg gaaagaata 79
<210> 2440
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2440
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccagccagga taaggtctaa 60
aagtggaaag aata 74
<210> 2441
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2441
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ggataaggtc taaaagtgga 60
aagaata 67
<210> 2442
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2442
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca cccatccagc caggataagg 60
tctaaaagtg gaaagaata 79
<210> 2443
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2443
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccgatccagc caggataagg 60
tctaaaagtg gaaagaata 79
<210> 2444
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2444
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccgtccagcc aggataaggt 60
ctaaaagtgg aaagaata 78
<210> 2445
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2445
ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccagccagga taaggtctaa 60
aagtggaaag aata 74
<210> 2446
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2446
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggtctaaaag tggaaagaat 60
agcatctact cttg 74
<210> 2447
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2447
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggattaaggt ctaaaagtgg 60
aaagaatagc atctactctt g 81
<210> 2448
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2448
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggaataaggt ctaaaagtgg 60
aaagaatagc atctactctt g 81
<210> 2449
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2449
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggaaaggtct aaaagtggaa 60
agaatagcat ctactcttg 79
<210> 2450
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2450
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggatctaaaa gtggaaagaa 60
tagcatctac tcttg 75
<210> 2451
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2451
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggtctaaaag tggaaagaat 60
agcatctact cttg 74
<210> 2452
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2452
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggattaaggt ctaaaagtgg 60
aaagaatagc atctactctt g 81
<210> 2453
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2453
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggaataaggt ctaaaagtgg 60
aaagaatagc atctactctt g 81
<210> 2454
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2454
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggaaaggtct aaaagtggaa 60
agaatagcat ctactcttg 79
<210> 2455
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2455
aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggatctaaaa gtggaaagaa 60
tagcatctac tcttg 75
<210> 2456
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2456
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60
gatagggaca aattga 76
<210> 2457
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2457
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60
atagataggg acaaattga 79
<210> 2458
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2458
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60
atagggacaa attga 75
<210> 2459
<211> 69
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2459
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60
acaaattga 69
<210> 2460
<211> 68
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2460
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatgg gcagtaagag tggtgattaa tagataggga 60
caaattga 68
<210> 2461
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2461
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60
gatagggaca aattga 76
<210> 2462
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2462
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60
atagataggg acaaattga 79
<210> 2463
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2463
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60
atagggacaa attga 75
<210> 2464
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2464
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60
gacaaattga 70
<210> 2465
<211> 69
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2465
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60
acaaattga 69
<210> 2466
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2466
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2467
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2467
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2468
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2468
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2469
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2469
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2470
<211> 36
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2470
cacaaacgga aacaaugcaa guuuuagagc uaugcu 36
<210> 2471
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2471
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 2472
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2472
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 2473
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2473
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 2474
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2474
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 2475
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2475
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 2476
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2476
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 2477
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2477
acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatggca gcctctgctt agaaaaagct 60
gtggataagc cacct 75
<210> 2478
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2478
acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatgaat ggcagcctct gcttagaaaa 60
agctgtggat aagccacct 79
<210> 2479
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2479
acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatgatg gcagcctctg cttagaaaaa 60
gctgtggata agccacct 78
<210> 2480
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2480
acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatgcag cctctgctta gaaaaagctg 60
tggataagcc acct 74
<210> 2481
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2481
acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatcaat ggcagcctct gcttagaaaa 60
agctgtggat aagccacct 79
<210> 2482
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2482
acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaaatgca atggcagcct ctgcttagaa 60
aaagctgtgg ataagccacc t 81
<210> 2483
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2483
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2484
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2484
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60
tctctttcag cagttgtttc 80
<210> 2485
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2485
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60
ctctttcagc agttgtttc 79
<210> 2486
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2486
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2487
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2487
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60
tttcagcagt tgtttc 76
<210> 2488
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2488
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60
tctttcagca gttgtttc 78
<210> 2489
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2489
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2490
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2490
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60
tctctttcag cagttgtttc 80
<210> 2491
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2491
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2492
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2492
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60
ctctttcagc agttgtttc 79
<210> 2493
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2493
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60
tttcagcagt tgtttc 76
<210> 2494
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2494
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60
tctttcagca gttgtttc 78
<210> 2495
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2495
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2496
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2496
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60
tctctttcag cagttgtttc 80
<210> 2497
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2497
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60
tttcagcagt tgtttc 76
<210> 2498
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2498
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2499
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2499
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60
ctctttcagc agttgtttc 79
<210> 2500
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2500
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ttgttctcct ctacatatct ccccaccgca 60
tctctttcag cagttgtttc 80
<210> 2501
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2501
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2502
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2502
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60
tctctttcag cagttgtttc 80
<210> 2503
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2503
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60
ctctttcagc agttgtttc 79
<210> 2504
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2504
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2505
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2505
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60
tttcagcagt tgtttc 76
<210> 2506
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2506
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60
tctttcagca gttgtttc 78
<210> 2507
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2507
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2508
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2508
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2509
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2509
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60
tctctttcag cagttgtttc 80
<210> 2510
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2510
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60
tttcagcagt tgtttc 76
<210> 2511
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2511
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60
tctttcagca gttgtttc 78
<210> 2512
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2512
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60
ctctttcagc agttgtttc 79
<210> 2513
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2513
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2514
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2514
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60
tctctttcag cagttgtttc 80
<210> 2515
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2515
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60
ctctttcagc agttgtttc 79
<210> 2516
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2516
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60
tctttcagca gttgtttc 78
<210> 2517
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2517
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60
ttgtttc 67
<210> 2518
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2518
ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60
tttcagcagt tgtttc 76
<210> 2519
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2519
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2520
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2520
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60
tgtttctaaa aatatcctcc 80
<210> 2521
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2521
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60
ctaaaaatat cctcc 75
<210> 2522
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2522
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2523
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2523
tcttgactca gaaaccttgt tctcctctac atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60
tgtttctaaa aatatcctcc 80
<210> 2524
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2524
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60
tttctaaaaa tatcctcc 78
<210> 2525
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2525
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2526
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2526
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60
ttgtttctaa aaatatcctc c 81
<210> 2527
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2527
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acgcatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2528
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2528
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60
tttctaaaaa tatcctcc 78
<210> 2529
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2529
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60
ctaaaaatat cctcc 75
<210> 2530
<211> 65
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2530
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctttca gcagttgttt ctaaaaatat 60
cctcc 65
<210> 2531
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2531
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2532
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2532
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60
ttgtttctaa aaatatcctc c 81
<210> 2533
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2533
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2534
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2534
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60
tttctaaaaa tatcctcc 78
<210> 2535
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2535
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60
tgtttctaaa aatatcctcc 80
<210> 2536
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2536
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60
ctaaaaatat cctcc 75
<210> 2537
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2537
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2538
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2538
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2539
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2539
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60
ttgtttctaa aaatatcctc c 81
<210> 2540
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2540
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accgtctttc agcagttgtt 60
tctaaaaata tcctcc 76
<210> 2541
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2541
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc actctttcag cagttgtttc 60
taaaaatatc ctcc 74
<210> 2542
<211> 65
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2542
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctttca gcagttgttt ctaaaaatat 60
cctcc 65
<210> 2543
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2543
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2544
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2544
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60
tgtttctaaa aatatcctcc 80
<210> 2545
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2545
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60
ttgtttctaa aaatatcctc c 81
<210> 2546
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2546
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acgcatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2547
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2547
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60
ctaaaaatat cctcc 75
<210> 2548
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2548
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2549
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2549
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2550
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2550
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60
tgtttctaaa aatatcctcc 80
<210> 2551
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2551
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60
ttgtttctaa aaatatcctc c 81
<210> 2552
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2552
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60
ctaaaaatat cctcc 75
<210> 2553
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2553
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2554
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2554
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60
tttctaaaaa tatcctcc 78
<210> 2555
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2555
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2556
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2556
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2557
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2557
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60
ttgtttctaa aaatatcctc c 81
<210> 2558
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2558
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60
tttctaaaaa tatcctcc 78
<210> 2559
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2559
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60
ctaaaaatat cctcc 75
<210> 2560
<211> 65
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2560
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atctctttca gcagttgttt ctaaaaatat 60
cctcc 65
<210> 2561
<211> 54
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2561
tcttgactca gaaaccctgt tctctttcag cagttgtttc taaaaatatc ctcc 54
<210> 2562
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2562
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60
atcctcc 67
<210> 2563
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2563
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2564
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2564
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60
ttgtttctaa aaatatcctc c 81
<210> 2565
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2565
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60
ctaaaaatat cctcc 75
<210> 2566
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2566
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acgcatctct ttcagcagtt 60
gtttctaaaa atatcctcc 79
<210> 2567
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2567
tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc actctttcag cagttgtttc 60
taaaaatatc ctcc 74
<210> 2568
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2568
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2569
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2569
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2570
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2570
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2571
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2571
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60
gaattgataa at 72
<210> 2572
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2572
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2573
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2573
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaagcc acttaaatgc ttaccaacag 60
tagaattgat aaat 74
<210> 2574
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2574
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtgccactta aatgcttacc 60
aacagtagaa ttgataaat 79
<210> 2575
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2575
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2576
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2576
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2577
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2577
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaagcca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2578
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2578
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60
gaattgataa at 72
<210> 2579
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2579
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2580
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2580
aaatgcttat gacagcaata attaccaaca gtagaattga taaat 45
<210> 2581
<211> 64
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2581
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaatgc ttaccaacag tagaattgat 60
aaat 64
<210> 2582
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2582
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2583
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2583
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2584
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2584
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60
gaattgataa at 72
<210> 2585
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2585
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2586
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2586
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2587
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2587
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaagcca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2588
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2588
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcagccac ttaaatgctt accaacagta 60
gaattgataa at 72
<210> 2589
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2589
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2590
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2590
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2591
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2591
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60
gaattgataa at 72
<210> 2592
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2592
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2593
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2593
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gccacttaaa tgcttaccaa 60
cagtagaatt gataaat 77
<210> 2594
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2594
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaactt aaatgcttac caacagtaga 60
attgataaat 70
<210> 2595
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2595
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2596
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2596
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2597
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2597
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2598
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2598
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtagaattga taaat 55
<210> 2599
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2599
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtgccactta aatgcttacc 60
aacagtagaa ttgataaat 79
<210> 2600
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2600
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2601
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2601
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaccactta aatgcttacc 60
aacagtagaa ttgataaat 79
<210> 2602
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2602
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaacttaaa tgcttaccaa 60
cagtagaatt gataaat 77
<210> 2603
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2603
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2604
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2604
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2605
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2605
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2606
<211> 73
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2606
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60
agaattgata aat 73
<210> 2607
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2607
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60
gaattgataa at 72
<210> 2608
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2608
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtacttaaat gcttaccaac 60
agtagaattg ataaat 76
<210> 2609
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2609
aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtatgccact taaatgctta 60
ccaacagtag aattgataaa t 81
<210> 2610
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2610
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60
gatagggaca aattga 76
<210> 2611
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2611
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60
atagataggg acaaattga 79
<210> 2612
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2612
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60
atagggacaa attga 75
<210> 2613
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2613
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga gggcagtaag agtggtgatt aatagatagg 60
gacaaattga 70
<210> 2614
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2614
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60
gacaaattga 70
<210> 2615
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2615
tagcatctac tcttgttcag gtaagagtgg tgattaatag atagggacaa attga 55
<210> 2616
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2616
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggaccttact gggcagtaag agtggtgatt 60
aatagatagg gacaaattga 80
<210> 2617
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2617
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60
gatagggaca aattga 76
<210> 2618
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2618
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60
atagataggg acaaattga 79
<210> 2619
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2619
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60
atagggacaa attga 75
<210> 2620
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2620
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtgg gcagtaagag tggtgattaa 60
tagataggga caaattga 78
<210> 2621
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2621
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtac tgggcagtaa gagtggtgat 60
taatagatag ggacaaattg a 81
<210> 2622
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2622
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60
gacaaattga 70
<210> 2623
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2623
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgaac tgggcagtaa gagtggtgat 60
taatagatag ggacaaattg a 81
<210> 2624
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2624
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60
gatagggaca aattga 76
<210> 2625
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2625
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60
atagataggg acaaattga 79
<210> 2626
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2626
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60
atagggacaa attga 75
<210> 2627
<211> 69
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2627
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60
acaaattga 69
<210> 2628
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2628
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga gggcagtaag agtggtgatt aatagatagg 60
gacaaattga 70
<210> 2629
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2629
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtac tgggcagtaa gagtggtgat 60
taatagatag ggacaaattg a 81
<210> 2630
<211> 68
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2630
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatgg gcagtaagag tggtgattaa tagataggga 60
caaattga 68
<210> 2631
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2631
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60
gatagggaca aattga 76
<210> 2632
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2632
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60
atagataggg acaaattga 79
<210> 2633
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2633
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60
atagggacaa attga 75
<210> 2634
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2634
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60
gacaaattga 70
<210> 2635
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2635
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtac tgggcagtaa gagtggtgat 60
taatagatag ggacaaattg a 81
<210> 2636
<211> 68
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2636
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatgg gcagtaagag tggtgattaa tagataggga 60
caaattga 68
<210> 2637
<211> 69
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2637
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60
acaaattga 69
<210> 2638
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2638
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60
gatagggaca aattga 76
<210> 2639
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2639
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60
atagataggg acaaattga 79
<210> 2640
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2640
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60
atagggacaa attga 75
<210> 2641
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2641
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtac tgggcagtaa gagtggtgat 60
taatagatag ggacaaattg a 81
<210> 2642
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2642
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggaccactgg gcagtaagag tggtgattaa 60
tagataggga caaattga 78
<210> 2643
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2643
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60
gacaaattga 70
<210> 2644
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2644
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctggta agagtggtga ttaatagata 60
gggacaaatt ga 72
<210> 2645
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2645
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60
gatagggaca aattga 76
<210> 2646
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2646
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60
atagataggg acaaattga 79
<210> 2647
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2647
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60
atagggacaa attga 75
<210> 2648
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2648
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60
gacaaattga 70
<210> 2649
<211> 69
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2649
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60
acaaattga 69
<210> 2650
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2650
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtaa gagtggtgat taatagatag 60
ggacaaattg a 71
<210> 2651
<211> 68
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2651
tagcatctac tcttgttcag gaaacaatgg gcagtaagag tggtgattaa tagataggga 60
caaattga 68
<210> 2652
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2652
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2653
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2653
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgctgagtc tgaggtgcct 60
ataggacatc tatataaata 80
<210> 2654
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2654
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2655
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2655
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaata 79
<210> 2656
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2656
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgagtctgag gtgcctatag gacatctata 60
taaata 66
<210> 2657
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2657
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2658
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2658
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaatactg agtctgaggt gcctatagga 60
catctatata aata 74
<210> 2659
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2659
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2660
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2660
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2661
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2661
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaata 79
<210> 2662
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2662
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2663
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2663
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgagtctgag gtgcctatag gacatctata 60
taaata 66
<210> 2664
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2664
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2665
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2665
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgtgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaata 79
<210> 2666
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2666
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2667
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2667
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgctgagtc tgaggtgcct 60
ataggacatc tatataaata 80
<210> 2668
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2668
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2669
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2669
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaata 79
<210> 2670
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2670
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2671
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2671
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgagtctgag gtgcctatag gacatctata 60
taaata 66
<210> 2672
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2672
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaatacct gagtctgagg tgcctatagg 60
acatctatat aaata 75
<210> 2673
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2673
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2674
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2674
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2675
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2675
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgctgagtc tgaggtgcct 60
ataggacatc tatataaata 80
<210> 2676
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2676
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaata 79
<210> 2677
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2677
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2678
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2678
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2679
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2679
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaata 79
<210> 2680
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2680
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaata 79
<210> 2681
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2681
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2682
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2682
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2683
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2683
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2684
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2684
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaata 79
<210> 2685
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2685
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc tgagtctgag gtgcctatag 60
gacatctata taaata 76
<210> 2686
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2686
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaatacct gagtctgagg tgcctatagg 60
acatctatat aaata 75
<210> 2687
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2687
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2688
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2688
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60
ggacatctat ataaata 77
<210> 2689
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2689
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60
taggacatct atataaata 79
<210> 2690
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2690
ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgctgagtc tgaggtgcct 60
ataggacatc tatataaata 80
<210> 2691
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2691
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2692
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2692
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60
aggacatcta tataaata 78
<210> 2693
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2693
ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc tgagtctgag gtgcctatag 60
gacatctata taaata 76
<210> 2694
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2694
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt 60
agggtggggg cgtgggtgg 79
<210> 2695
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2695
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg 60
gtgggggcgt gggtgg 76
<210> 2696
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2696
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga 60
ttagggtggg ggcgtgggtg g 81
<210> 2697
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2697
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg 60
tgggggcgtg ggtgg 75
<210> 2698
<211> 44
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2698
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggcgtgg gtgg 44
<210> 2699
<211> 52
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2699
gtctagtgca agctaacaac atcacaggct ccaggatagg gggcgtgggt gg 52
<210> 2700
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2700
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaggtttgg cctctgatta 60
gggtgggggc gtgggtgg 78
<210> 2701
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2701
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtgggggcg tgggtgg 57
<210> 2702
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2702
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg 60
gtgggggcgt gggtgg 76
<210> 2703
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2703
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg 60
tgggggcgtg ggtgg 75
<210> 2704
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2704
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt 60
agggtggggg cgtgggtgg 79
<210> 2705
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2705
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga 60
ttagggtggg ggcgtgggtg g 81
<210> 2706
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2706
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggcctctgat tagggtgggg 60
gcgtgggtgg 70
<210> 2707
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2707
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt 60
agggtggggg cgtgggtgg 79
<210> 2708
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2708
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg 60
tgggggcgtg ggtgg 75
<210> 2709
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2709
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg 60
gtgggggcgt gggtgg 76
<210> 2710
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2710
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga 60
ttagggtggg ggcgtgggtg g 81
<210> 2711
<211> 53
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2711
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggggcgtggg tgg 53
<210> 2712
<211> 50
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2712
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gcgtgggtgg 50
<210> 2713
<211> 63
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2713
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggcctct gattagggtg ggggcgtggg 60
tgg 63
<210> 2714
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2714
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg 60
tgggggcgtg ggtgg 75
<210> 2715
<211> 76
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2715
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg 60
gtgggggcgt gggtgg 76
<210> 2716
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2716
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt 60
agggtggggg cgtgggtgg 79
<210> 2717
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2717
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga 60
ttagggtggg ggcgtgggtg g 81
<210> 2718
<211> 82
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2718
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagagggt ttggcctctg 60
attagggtgg gggcgtgggt gg 82
<210> 2719
<211> 64
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2719
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggattagggt gggggcgtgg 60
gtgg 64
<210> 2720
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2720
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaggtttgg cctctgatta 60
gggtgggggc gtgggtgg 78
<210> 2721
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2721
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa 60
gaggactggc agacctctc 79
<210> 2722
<211> 64
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2722
tatcacaggc tccaggaagg gtttgggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc 60
tctc 64
<210> 2723
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2723
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg gcagacctct 60
c 61
<210> 2724
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2724
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattggtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60
aggactggca gacctctc 78
<210> 2725
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2725
tatcacaggc tccaggaagg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggcag acctctc 57
<210> 2726
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2726
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tggtgggggc gtgggtgggg tagaagagga 60
ctggcagacc tctc 74
<210> 2727
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2727
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgggggcgtg ggtggggtag aagaggactg 60
gcagacctct c 71
<210> 2728
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2728
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa 60
gaggactggc agacctctc 79
<210> 2729
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2729
tatcacaggc tccaggaagg gtttggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggcag 60
acctctc 67
<210> 2730
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2730
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattggtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60
aggactggca gacctctc 78
<210> 2731
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2731
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg gcagacctct 60
c 61
<210> 2732
<211> 64
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2732
tatcacaggc tccaggaagg gtttgggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc 60
tctc 64
<210> 2733
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2733
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagagg tgggggcgtg ggtggggtag 60
aagaggactg gcagacctct c 81
<210> 2734
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2734
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60
aggactggca gacctctc 78
<210> 2735
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2735
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60
aggactggca gacctctc 78
<210> 2736
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2736
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa 60
gaggactggc agacctctc 79
<210> 2737
<211> 51
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2737
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgaaggactg gcagacctct c 51
<210> 2738
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2738
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagagg tgggggcgtg ggtggggtag 60
aagaggactg gcagacctct c 81
<210> 2739
<211> 64
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2739
tatcacaggc tccaggaagg gtttgggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc 60
tctc 64
<210> 2740
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2740
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgggggcgtg ggtggggtag aagaggactg 60
gcagacctct c 71
<210> 2741
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2741
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagggc gtgggtgggg tagaagagga 60
ctggcagacc tctc 74
<210> 2742
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2742
tatcacaggc tccaggaagg gtttggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggcag 60
acctctc 67
<210> 2743
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2743
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa 60
gaggactggc agacctctc 79
<210> 2744
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2744
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattggtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60
aggactggca gacctctc 78
<210> 2745
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2745
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgggggcgtg ggtggggtag aagaggactg 60
gcagacctct c 71
<210> 2746
<211> 64
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2746
tatcacaggc tccaggaagg gtttgggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc 60
tctc 64
<210> 2747
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2747
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg gcagacctct 60
c 61
<210> 2748
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2748
tatcacaggc tccaggaagg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggca gacctctc 58
<210> 2749
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2749
tatcacaggc tccaggaagg gtttggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggcag 60
acctctc 67
<210> 2750
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2750
tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60
aggactggca gacctctc 78
<210> 2751
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2751
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60
tatccttcta 70
<210> 2752
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2752
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2753
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2753
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60
aatatgggtt atatccttct a 81
<210> 2754
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2754
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60
ccttcta 67
<210> 2755
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2755
atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60
cttcta 66
<210> 2756
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2756
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60
ggttatatcc ttcta 75
<210> 2757
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2757
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60
tgggttatat ccttcta 77
<210> 2758
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2758
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2759
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2759
atgtaaggag gatgagccac atggtatggt aaggactcta gggtcagaga aatatgggtt 60
atatccttct a 71
<210> 2760
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2760
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataaag gactctaggg tcagagaaat 60
atgggttata tccttcta 78
<210> 2761
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2761
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60
aatatgggtt atatccttct a 81
<210> 2762
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2762
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60
tatccttcta 70
<210> 2763
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2763
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60
ccttcta 67
<210> 2764
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2764
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2765
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2765
atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60
cttcta 66
<210> 2766
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2766
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60
ggttatatcc ttcta 75
<210> 2767
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2767
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60
tgggttatat ccttcta 77
<210> 2768
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2768
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60
atgggttata tccttcta 78
<210> 2769
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2769
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2770
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2770
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg ttatatcctt cta 43
<210> 2771
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2771
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60
aatatgggtt atatccttct a 81
<210> 2772
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2772
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60
tatccttcta 70
<210> 2773
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2773
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2774
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2774
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60
ccttcta 67
<210> 2775
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2775
atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60
cttcta 66
<210> 2776
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2776
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60
ggttatatcc ttcta 75
<210> 2777
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2777
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60
atgggttata tccttcta 78
<210> 2778
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2778
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60
tgggttatat ccttcta 77
<210> 2779
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2779
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2780
<211> 46
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2780
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggttatatc cttcta 46
<210> 2781
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2781
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60
tatccttcta 70
<210> 2782
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2782
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2783
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2783
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60
aatatgggtt atatccttct a 81
<210> 2784
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2784
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60
ccttcta 67
<210> 2785
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2785
atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60
cttcta 66
<210> 2786
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2786
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60
ggttatatcc ttcta 75
<210> 2787
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2787
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60
tgggttatat ccttcta 77
<210> 2788
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2788
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60
atgggttata tccttcta 78
<210> 2789
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2789
atgtaaggag gatgagccac atggtatgga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60
cttcta 66
<210> 2790
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2790
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2791
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2791
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2792
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2792
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60
aatatgggtt atatccttct a 81
<210> 2793
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2793
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60
tatccttcta 70
<210> 2794
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2794
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60
ccttcta 67
<210> 2795
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2795
atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60
cttcta 66
<210> 2796
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2796
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60
tgggttatat ccttcta 77
<210> 2797
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2797
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60
atgggttata tccttcta 78
<210> 2798
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2798
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2799
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2799
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60
ggttatatcc ttcta 75
<210> 2800
<211> 68
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2800
atgtaaggag gatgagccac atggtataag gactctaggg tcagagaaat atgggttata 60
tccttcta 68
<210> 2801
<211> 70
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2801
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60
tatccttcta 70
<210> 2802
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2802
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2803
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2803
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60
aatatgggtt atatccttct a 81
<210> 2804
<211> 67
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2804
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60
ccttcta 67
<210> 2805
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2805
atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60
cttcta 66
<210> 2806
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2806
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60
ggttatatcc ttcta 75
<210> 2807
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2807
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60
tgggttatat ccttcta 77
<210> 2808
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2808
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60
atgggttata tccttcta 78
<210> 2809
<211> 79
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2809
atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60
tatgggttat atccttcta 79
<210> 2810
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2810
atgtaaggag gatgagccac atggtatgga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60
cttcta 66
<210> 2811
<211> 20
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2811
ggccacggag cgagacaucu 20
<210> 2812
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2812
cagacagcaa actcacccag t 21
<210> 2813
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2813
ctgacgctta tcgacgccct 20
<210> 2814
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2814
agctccaaac tctcaaacca caggg 25
<210> 2815
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2815
tacaattttg ggagtccaca cggca 25
<210> 2816
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2816
agctccaaac tctcaaacca caggg 25
<210> 2817
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2817
tacaattttg ggagtccaca cggca 25
<210> 2818
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2818
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 2819
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2819
tcgtcggcag cgtcagatgt gtataagaga cag 33
<210> 2820
<211> 34
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2820
gtctcgtggg ctcggagatg tgtataagag acag 34
<210> 2821
<211> 51
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<220>
<221> modified_base
<222> (30)..(37)
<223> a, c, t, g, неизвестно или другое
<400> 2821
aatgatacgg cgaccaccga gatctacacn nnnnnnntcg tcggcagcgt c 51
<210> 2822
<211> 47
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<220>
<221> modified_base
<222> (25)..(32)
<223> a, c, t, g, неизвестно или другое
<400> 2822
caagcagaag acggcatacg agatnnnnnn nngtctcgtg ggctcgg 47
<210> 2823
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2823
caagcagaag acggcatacg a 21
<210> 2824
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 2824
aatgatacgg cgaccaccga ga 22
<210> 2825
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2825
ctcacctcca ccctaatcag agg 23
<210> 2826
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2826
cacgcccaca ccttaatcag ggg 23
<210> 2827
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2827
cacgacccaa ccctaatcag agg 23
<210> 2828
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2828
ctagccccta ccctaataag tgg 23
<210> 2829
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2829
tttataacag gctccagaaa tgg 23
<210> 2830
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2830
catatcacag gccccaggag ggg 23
<210> 2831
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2831
tggggtgggg agatatgaag agg 23
<210> 2832
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2832
ggaggtgggg agagatgtag agg 23
<210> 2833
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2833
catgcggaaa gagatgcggt tgg 23
<210> 2834
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2834
aggtacctca aactcagcat agg 23
<210> 2835
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2835
agagacccca gactcagcat agg 23
<210> 2836
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2836
atggtatgag aaatatacta tgg 23
<210> 2837
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2837
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 2838
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2838
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 2839
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2839
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42
<210> 2840
<211> 100
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(20)
<223> a, c, u, g, неизвестно или другое
<400> 2840
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60
cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100
<210> 2841
<211> 93
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2841
ctgtccaccc atccatcaca tataggcacc tatcaggtac cagctactgt gttaggatct 60
gtgttcccaa ctgacttgcc tccccctgac gtc 93
<210> 2842
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2842
cacccatcca tcacatatag gcacctatca ggtaccagct actgtgttag gatctg 56
<210> 2843
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2843
cacccatcca tcacatatag gcaccttatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57
<210> 2844
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2844
cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2845
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2845
cacccatcca tcacatatag gcaccatcag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55
<210> 2846
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2846
cacccatcca tcacatatag gcaccttatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57
<210> 2847
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2847
cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2848
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2848
cacccatcca tcacatatag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2849
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2849
cacccatcca tcacatatag gcaccttatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57
<210> 2850
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2850
cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2851
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2851
cacccatcca tcacatatag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2852
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2852
cacccatcca tcacatatag gcaccttatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57
<210> 2853
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2853
cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2854
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2854
cacccatcca tcacatatag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2855
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2855
cacccatcca tcacatatag gcacctatca ggtaccagct actgtgttag gatctg 56
<210> 2856
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2856
cacccatcca tcacatatag gcacctatca aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57
<210> 2857
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2857
cacccatcca tcacatatag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2858
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2858
cacccatcca tcacatatag gcacctatcg gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55
<210> 2859
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2859
cacccatcca tcacatatag gcacctatca aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57
<210> 2860
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2860
cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2861
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2861
cacccatcca tcacatatag gcacctatcg gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55
<210> 2862
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2862
cacccatcca tcacatatag gcacctatca aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57
<210> 2863
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2863
cacccatcca tcacatatag gcacctatcg gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55
<210> 2864
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2864
cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2865
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2865
cacccatcca tcacatatag gcacctatca aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57
<210> 2866
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2866
cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45
<210> 2867
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2867
cacccatcca tcacatatag gcacctatcg gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55
<210> 2868
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2868
ggcacctatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctgtgt tcccaactga cttgcctccc 60
<210> 2869
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2869
ggcacctatc aggtaccagc tactgttgtt aggatctgtg ttcccaactg acttgcctcc 60
c 61
<210> 2870
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2870
ggcacctatc aggtaccagc tactgttagg atctgtgttc ccaactgact tgcctccc 58
<210> 2871
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2871
ggcacctatc aggtaccagc tactgtgttc ccaactgact tgcctccc 48
<210> 2872
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2872
ggcacctatc aggtaccagc tactgttgtt aggatctgtg ttcccaactg acttgcctcc 60
c 61
<210> 2873
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2873
ggcacctatc aggtaccagc tactgttagg atctgtgttc ccaactgact tgcctccc 58
<210> 2874
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2874
ggcacctatc aggtaccagc tactgtgttc ccaactgact tgcctccc 48
<210> 2875
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2875
ggcacctatc aggtaccagc tactgttgtt aggatctgtg ttcccaactg acttgcctcc 60
c 61
<210> 2876
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2876
ggcacctatc aggtaccagc tactgttagg atctgtgttc ccaactgact tgcctccc 58
<210> 2877
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2877
ggcacctatc aggtaccagc tactgtgttc ccaactgact tgcctccc 48
<210> 2878
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2878
ggcacctatc aggtaccagc tactgttgtt aggatctgtg ttcccaactg acttgcctcc 60
c 61
<210> 2879
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2879
ggcacctatc aggtaccagc tactgttagg atctgtgttc ccaactgact tgcctccc 58
<210> 2880
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2880
ggcacctatc aggtaccagc tactgtgttc ccaactgact tgcctccc 48
<210> 2881
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2881
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcacatatag gcacctatca ggtaccagct 60
<210> 2882
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2882
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcatataggc acctatcagg taccagct 58
<210> 2883
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2883
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tataggcacc tatcaggtac cagct 55
<210> 2884
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2884
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcaggtacca gct 43
<210> 2885
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2885
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcatataggc acctatcagg taccagct 58
<210> 2886
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2886
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tataggcacc tatcaggtac cagct 55
<210> 2887
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2887
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcaggtacca gct 43
<210> 2888
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2888
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcatataggc acctatcagg taccagct 58
<210> 2889
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2889
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcaggtacca gct 43
<210> 2890
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2890
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tataggcacc tatcaggtac cagct 55
<210> 2891
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2891
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcatataggc acctatcagg taccagct 58
<210> 2892
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2892
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tataggcacc tatcaggtac cagct 55
<210> 2893
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2893
ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcaggtacca gct 43
<210> 2894
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2894
cctgtgggca gtgccagatg aacttcccat tgggggacat tcttattttt atcgagcaca 60
<210> 2895
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2895
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2896
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2896
cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2897
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2897
cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60
a 61
<210> 2898
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2898
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2899
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2899
cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2900
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2900
cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60
a 61
<210> 2901
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2901
ttttatcgag cacaaacgga aacaatgcaa tggcagcctc tgcttagaaa aagctgtgga 60
<210> 2902
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2902
ttttatcgag cacaaacgga aacaatggca gcctctgctt agaaaaagct gtgga 55
<210> 2903
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2903
ttttatcgag cacaaacgga aacaatgaat ggcagcctct gcttagaaaa agctgtgga 59
<210> 2904
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2904
ttttatcgag cacaaacgga aacaatcaat ggcagcctct gcttagaaaa agctgtgga 59
<210> 2905
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2905
ttttatcgag cacaaacgga aacaatggca gcctctgctt agaaaaagct gtgga 55
<210> 2906
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2906
ttttatcgag cacaaacgga aacaatgaat ggcagcctct gcttagaaaa agctgtgga 59
<210> 2907
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2907
ttttatcgag cacaaacgga aacaatcaat ggcagcctct gcttagaaaa agctgtgga 59
<210> 2908
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2908
atgagtgcag aatatgcccc gcagggtatt tgtaagttga gccttatttc ttctacgaaa 60
<210> 2909
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2909
atgagtgcag ggtatttgta agttgagcct tatttcttct acaaa 45
<210> 2910
<211> 54
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2910
atgagtgcag aatatgcagg gtatttgtaa gttgagcctt atttcttcta caaa 54
<210> 2911
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2911
atgagtgcag aatatgcccg cagggtattt gtaagttgag ccttatttct tctacgaaa 59
<210> 2912
<211> 78
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2912
gggcagtgcc agatgaactt cccattgggg gacattctta tttttatcga gcacaaacgg 60
aaacaatgca atggcagc 78
<210> 2913
<211> 80
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2913
gttttagagc tagaaatagc aagttaaaat aaggctagtc cgttatcaac ttgaaaaagt 60
ggcaccgagt cggtgctttt 80
<210> 2914
<211> 90
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2914
gtttaagagc tatgctggaa acagcatagc aagtttaaat aaggctagtc cgttatcaac 60
ttgaaaaagt ggcaccgagt cggtgctttt 90
<210> 2915
<211> 42
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2915
agtgccagat gaacttccca ttgggggaca ttcttatttt ta 42
<210> 2916
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2916
agtgccagat gaacttccat tgggggacat tcttattttt a 41
<210> 2917
<211> 40
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2917
agtgccagat gaacttcatt gggggacatt cttattttta 40
<210> 2918
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2918
agtgccagat gaacttcccc attgggggac attcttattt tta 43
<210> 2919
<211> 41
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2919
agtgccagat gaacttccat tgggggacat tcttattttt a 41
<210> 2920
<211> 40
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2920
agtgccagat gaacttcatt gggggacatt cttattttta 40
<210> 2921
<211> 43
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2921
agtgccagat gaacttcccc attgggggac attcttattt tta 43
<210> 2922
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2922
cctgtgggca gtgccagatg aacttcccat tgggggacat tcttattttt atcgagcaca 60
<210> 2923
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2923
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2924
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2924
cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2925
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2925
cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60
a 61
<210> 2926
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2926
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2927
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2927
cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2928
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2928
cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60
a 61
<210> 2929
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2929
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2930
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2930
cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2931
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2931
cctgtgggca gtgccagatg aacattgggg gacattctta tttttatcga gcaca 55
<210> 2932
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2932
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2933
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2933
cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2934
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2934
cctgtgggca gtgccagatg aacattgggg gacattctta tttttatcga gcaca 55
<210> 2935
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2935
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2936
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2936
cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60
a 61
<210> 2937
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2937
cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2938
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2938
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2939
<211> 61
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2939
cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60
a 61
<210> 2940
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2940
cctgtgggca gtgccagatg aacttccttg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2941
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2941
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2942
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2942
cctgtgggca gtgccagatg aacattgggg gacattctta tttttatcga gcaca 55
<210> 2943
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2943
cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2944
<211> 59
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2944
cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59
<210> 2945
<211> 55
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2945
cctgtgggca gtgccagatg aacattgggg gacattctta tttttatcga gcaca 55
<210> 2946
<211> 58
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2946
cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58
<210> 2947
<211> 95
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2947
gggcagtgcc agatgaactt cccattgggg gacattctta tttttatcga gcacaaacgg 60
aaacaatgca atggcagcct ctgcttagaa aaagc 95
<210> 2948
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2948
gggcagtgcc agatgaactt cccaatggca gcctctgctt agaaaaagc 49
<210> 2949
<211> 89
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2949
gggcagtgcc agatgaactt cccattgggg gacattctta tttttatcga gcacaaacaa 60
tgcaatggca gcctctgctt agaaaaagc 89
<210> 2950
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2950
gggcagtgcc agatgaactt cccaatggca gcctctgctt agaaaaagc 49
<210> 2951
<211> 89
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2951
gggcagtgcc agatgaactt cccattgggg gacattctta tttttatcga gcacaaacaa 60
tgcaatggca gcctctgctt agaaaaagc 89
<210> 2952
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2952
gggcagtgcc agatgaactt cccaatggca gcctctgctt agaaaaagc 49
<210> 2953
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2953
gggcagtgcc agatgaactt ccaatggcag cctctgctta gaaaaagc 48
<210> 2954
<211> 49
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2954
gggcagtgcc agatgaactt cccaatggca gcctctgctt agaaaaagc 49
<210> 2955
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2955
gggcagtgcc agatgaactt ccaatggcag cctctgctta gaaaaagc 48
<210> 2956
<211> 90
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2956
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcctctgat 60
tagggtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag 90
<210> 2957
<211> 89
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2957
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcctctgat 60
taggtggggg cgtgggtggg gtagaagag 89
<210> 2958
<211> 81
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2958
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcctctggg 60
ggcgtgggtg gggtagaaga g 81
<210> 2959
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2959
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcgtgggtg 60
gggtagaaga g 71
<210> 2960
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2960
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcgtgggtg 60
gggtagaaga g 71
<210> 2961
<211> 89
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2961
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcctctgat 60
taggtggggg cgtgggtggg gtagaagag 89
<210> 2962
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2962
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggcgt gggtggggta 60
gaagag 66
<210> 2963
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2963
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcgtgggtg 60
gggtagaaga g 71
<210> 2964
<211> 77
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2964
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggtgggggcg 60
tgggtggggt agaagag 77
<210> 2965
<211> 74
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2965
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt gggggcgtgg 60
gtggggtaga agag 74
<210> 2966
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2966
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcgtgggtg 60
gggtagaaga g 71
<210> 2967
<211> 72
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2967
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt gggcgtgggt 60
ggggtagaag ag 72
<210> 2968
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 2968
gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt gggtggggta 60
gaagag 66
<210> 2969
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
6xHis tag"
<400> 2969
His His His His His His
1 5
<210> 2970
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
8xHis tag"
<400> 2970
His His His His His His His His
1 5
<210> 2971
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
peptide"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(10)
<223> /note="This Последовательность may encompass 3-10 residues"
<400> 2971
His His His His His His His His His His
1 5 10
<210> 2972
<400> 2972
000
<210> 2973
<400> 2973
000
<210> 2974
<400> 2974
000
<210> 2975
<400> 2975
000
<210> 2976
<400> 2976
000
<210> 2977
<400> 2977
000
<210> 2978
<400> 2978
000
<210> 2979
<400> 2979
000
<210> 2980
<400> 2980
000
<210> 2981
<400> 2981
000
<210> 2982
<400> 2982
000
<210> 2983
<400> 2983
000
<210> 2984
<400> 2984
000
<210> 2985
<400> 2985
000
<210> 2986
<400> 2986
000
<210> 2987
<400> 2987
000
<210> 2988
<400> 2988
000
<210> 2989
<400> 2989
000
<210> 2990
<400> 2990
000
<210> 2991
<400> 2991
000
<210> 2992
<400> 2992
000
<210> 2993
<400> 2993
000
<210> 2994
<400> 2994
000
<210> 2995
<400> 2995
000
<210> 2996
<400> 2996
000
<210> 2997
<400> 2997
000
<210> 2998
<400> 2998
000
<210> 2999
<400> 2999
000
<210> 3000
<400> 3000
000
<210> 3001
<400> 3001
000
<210> 3002
<400> 3002
000
<210> 3003
<400> 3003
000
<210> 3004
<400> 3004
000
<210> 3005
<400> 3005
000
<210> 3006
<400> 3006
000
<210> 3007
<400> 3007
000
<210> 3008
<400> 3008
000
<210> 3009
<400> 3009
000
<210> 3010
<400> 3010
000
<210> 3011
<400> 3011
000
<210> 3012
<400> 3012
000
<210> 3013
<400> 3013
000
<210> 3014
<400> 3014
000
<210> 3015
<400> 3015
000
<210> 3016
<400> 3016
000
<210> 3017
<400> 3017
000
<210> 3018
<400> 3018
000
<210> 3019
<400> 3019
000
<210> 3020
<400> 3020
000
<210> 3021
<400> 3021
000
<210> 3022
<400> 3022
000
<210> 3023
<400> 3023
000
<210> 3024
<400> 3024
000
<210> 3025
<400> 3025
000
<210> 3026
<400> 3026
000
<210> 3027
<400> 3027
000
<210> 3028
<400> 3028
000
<210> 3029
<400> 3029
000
<210> 3030
<400> 3030
000
<210> 3031
<400> 3031
000
<210> 3032
<400> 3032
000
<210> 3033
<400> 3033
000
<210> 3034
<400> 3034
000
<210> 3035
<400> 3035
000
<210> 3036
<400> 3036
000
<210> 3037
<400> 3037
000
<210> 3038
<400> 3038
000
<210> 3039
<400> 3039
000
<210> 3040
<400> 3040
000
<210> 3041
<400> 3041
000
<210> 3042
<400> 3042
000
<210> 3043
<400> 3043
000
<210> 3044
<400> 3044
000
<210> 3045
<400> 3045
000
<210> 3046
<400> 3046
000
<210> 3047
<400> 3047
000
<210> 3048
<400> 3048
000
<210> 3049
<400> 3049
000
<210> 3050
<400> 3050
000
<210> 3051
<400> 3051
000
<210> 3052
<400> 3052
000
<210> 3053
<400> 3053
000
<210> 3054
<400> 3054
000
<210> 3055
<400> 3055
000
<210> 3056
<400> 3056
000
<210> 3057
<400> 3057
000
<210> 3058
<400> 3058
000
<210> 3059
<400> 3059
000
<210> 3060
<400> 3060
000
<210> 3061
<400> 3061
000
<210> 3062
<400> 3062
000
<210> 3063
<400> 3063
000
<210> 3064
<400> 3064
000
<210> 3065
<400> 3065
000
<210> 3066
<400> 3066
000
<210> 3067
<400> 3067
000
<210> 3068
<400> 3068
000
<210> 3069
<400> 3069
000
<210> 3070
<400> 3070
000
<210> 3071
<400> 3071
000
<210> 3072
<400> 3072
000
<210> 3073
<400> 3073
000
<210> 3074
<400> 3074
000
<210> 3075
<400> 3075
000
<210> 3076
<400> 3076
000
<210> 3077
<400> 3077
000
<210> 3078
<400> 3078
000
<210> 3079
<400> 3079
000
<210> 3080
<400> 3080
000
<210> 3081
<400> 3081
000
<210> 3082
<400> 3082
000
<210> 3083
<400> 3083
000
<210> 3084
<400> 3084
000
<210> 3085
<400> 3085
000
<210> 3086
<400> 3086
000
<210> 3087
<400> 3087
000
<210> 3088
<400> 3088
000
<210> 3089
<400> 3089
000
<210> 3090
<400> 3090
000
<210> 3091
<400> 3091
000
<210> 3092
<400> 3092
000
<210> 3093
<400> 3093
000
<210> 3094
<400> 3094
000
<210> 3095
<400> 3095
000
<210> 3096
<400> 3096
000
<210> 3097
<400> 3097
000
<210> 3098
<400> 3098
000
<210> 3099
<400> 3099
000
<210> 3100
<400> 3100
000
<210> 3101
<400> 3101
000
<210> 3102
<400> 3102
000
<210> 3103
<400> 3103
000
<210> 3104
<400> 3104
000
<210> 3105
<400> 3105
000
<210> 3106
<400> 3106
000
<210> 3107
<400> 3107
000
<210> 3108
<400> 3108
000
<210> 3109
<400> 3109
000
<210> 3110
<400> 3110
000
<210> 3111
<400> 3111
000
<210> 3112
<400> 3112
000
<210> 3113
<400> 3113
000
<210> 3114
<400> 3114
000
<210> 3115
<400> 3115
000
<210> 3116
<400> 3116
000
<210> 3117
<400> 3117
000
<210> 3118
<400> 3118
000
<210> 3119
<400> 3119
000
<210> 3120
<400> 3120
000
<210> 3121
<400> 3121
000
<210> 3122
<400> 3122
000
<210> 3123
<400> 3123
000
<210> 3124
<400> 3124
000
<210> 3125
<400> 3125
000
<210> 3126
<400> 3126
000
<210> 3127
<400> 3127
000
<210> 3128
<400> 3128
000
<210> 3129
<400> 3129
000
<210> 3130
<400> 3130
000
<210> 3131
<400> 3131
000
<210> 3132
<400> 3132
000
<210> 3133
<400> 3133
000
<210> 3134
<400> 3134
000
<210> 3135
<400> 3135
000
<210> 3136
<400> 3136
000
<210> 3137
<400> 3137
000
<210> 3138
<400> 3138
000
<210> 3139
<400> 3139
000
<210> 3140
<400> 3140
000
<210> 3141
<400> 3141
000
<210> 3142
<400> 3142
000
<210> 3143
<400> 3143
000
<210> 3144
<400> 3144
000
<210> 3145
<400> 3145
000
<210> 3146
<400> 3146
000
<210> 3147
<400> 3147
000
<210> 3148
<400> 3148
000
<210> 3149
<400> 3149
000
<210> 3150
<400> 3150
000
<210> 3151
<400> 3151
000
<210> 3152
<400> 3152
000
<210> 3153
<400> 3153
000
<210> 3154
<400> 3154
000
<210> 3155
<400> 3155
000
<210> 3156
<400> 3156
000
<210> 3157
<400> 3157
000
<210> 3158
<400> 3158
000
<210> 3159
<400> 3159
000
<210> 3160
<400> 3160
000
<210> 3161
<400> 3161
000
<210> 3162
<400> 3162
000
<210> 3163
<400> 3163
000
<210> 3164
<400> 3164
000
<210> 3165
<400> 3165
000
<210> 3166
<400> 3166
000
<210> 3167
<400> 3167
000
<210> 3168
<400> 3168
000
<210> 3169
<400> 3169
000
<210> 3170
<400> 3170
000
<210> 3171
<400> 3171
000
<210> 3172
<400> 3172
000
<210> 3173
<400> 3173
000
<210> 3174
<400> 3174
000
<210> 3175
<400> 3175
000
<210> 3176
<400> 3176
000
<210> 3177
<400> 3177
000
<210> 3178
<400> 3178
000
<210> 3179
<400> 3179
000
<210> 3180
<400> 3180
000
<210> 3181
<400> 3181
000
<210> 3182
<400> 3182
000
<210> 3183
<400> 3183
000
<210> 3184
<400> 3184
000
<210> 3185
<400> 3185
000
<210> 3186
<400> 3186
000
<210> 3187
<400> 3187
000
<210> 3188
<400> 3188
000
<210> 3189
<400> 3189
000
<210> 3190
<400> 3190
000
<210> 3191
<400> 3191
000
<210> 3192
<400> 3192
000
<210> 3193
<400> 3193
000
<210> 3194
<400> 3194
000
<210> 3195
<400> 3195
000
<210> 3196
<400> 3196
000
<210> 3197
<400> 3197
000
<210> 3198
<400> 3198
000
<210> 3199
<400> 3199
000
<210> 3200
<400> 3200
000
<210> 3201
<400> 3201
000
<210> 3202
<400> 3202
000
<210> 3203
<400> 3203
000
<210> 3204
<400> 3204
000
<210> 3205
<400> 3205
000
<210> 3206
<400> 3206
000
<210> 3207
<400> 3207
000
<210> 3208
<400> 3208
000
<210> 3209
<400> 3209
000
<210> 3210
<400> 3210
000
<210> 3211
<400> 3211
000
<210> 3212
<400> 3212
000
<210> 3213
<400> 3213
000
<210> 3214
<400> 3214
000
<210> 3215
<400> 3215
000
<210> 3216
<400> 3216
000
<210> 3217
<400> 3217
000
<210> 3218
<400> 3218
000
<210> 3219
<400> 3219
000
<210> 3220
<400> 3220
000
<210> 3221
<400> 3221
000
<210> 3222
<400> 3222
000
<210> 3223
<400> 3223
000
<210> 3224
<400> 3224
000
<210> 3225
<400> 3225
000
<210> 3226
<400> 3226
000
<210> 3227
<400> 3227
000
<210> 3228
<400> 3228
000
<210> 3229
<400> 3229
000
<210> 3230
<400> 3230
000
<210> 3231
<400> 3231
000
<210> 3232
<400> 3232
000
<210> 3233
<400> 3233
000
<210> 3234
<400> 3234
000
<210> 3235
<400> 3235
000
<210> 3236
<400> 3236
000
<210> 3237
<400> 3237
000
<210> 3238
<400> 3238
000
<210> 3239
<400> 3239
000
<210> 3240
<400> 3240
000
<210> 3241
<400> 3241
000
<210> 3242
<400> 3242
000
<210> 3243
<400> 3243
000
<210> 3244
<400> 3244
000
<210> 3245
<400> 3245
000
<210> 3246
<400> 3246
000
<210> 3247
<400> 3247
000
<210> 3248
<400> 3248
000
<210> 3249
<400> 3249
000
<210> 3250
<400> 3250
000
<210> 3251
<400> 3251
000
<210> 3252
<400> 3252
000
<210> 3253
<400> 3253
000
<210> 3254
<400> 3254
000
<210> 3255
<400> 3255
000
<210> 3256
<400> 3256
000
<210> 3257
<400> 3257
000
<210> 3258
<400> 3258
000
<210> 3259
<400> 3259
000
<210> 3260
<400> 3260
000
<210> 3261
<400> 3261
000
<210> 3262
<400> 3262
000
<210> 3263
<400> 3263
000
<210> 3264
<400> 3264
000
<210> 3265
<400> 3265
000
<210> 3266
<400> 3266
000
<210> 3267
<400> 3267
000
<210> 3268
<400> 3268
000
<210> 3269
<400> 3269
000
<210> 3270
<400> 3270
000
<210> 3271
<400> 3271
000
<210> 3272
<400> 3272
000
<210> 3273
<400> 3273
000
<210> 3274
<400> 3274
000
<210> 3275
<400> 3275
000
<210> 3276
<400> 3276
000
<210> 3277
<400> 3277
000
<210> 3278
<400> 3278
000
<210> 3279
<400> 3279
000
<210> 3280
<400> 3280
000
<210> 3281
<400> 3281
000
<210> 3282
<400> 3282
000
<210> 3283
<400> 3283
000
<210> 3284
<400> 3284
000
<210> 3285
<400> 3285
000
<210> 3286
<400> 3286
000
<210> 3287
<400> 3287
000
<210> 3288
<400> 3288
000
<210> 3289
<400> 3289
000
<210> 3290
<400> 3290
000
<210> 3291
<400> 3291
000
<210> 3292
<400> 3292
000
<210> 3293
<400> 3293
000
<210> 3294
<400> 3294
000
<210> 3295
<400> 3295
000
<210> 3296
<400> 3296
000
<210> 3297
<400> 3297
000
<210> 3298
<400> 3298
000
<210> 3299
<400> 3299
000
<210> 3300
<400> 3300
000
<210> 3301
<400> 3301
000
<210> 3302
<400> 3302
000
<210> 3303
<400> 3303
000
<210> 3304
<400> 3304
000
<210> 3305
<400> 3305
000
<210> 3306
<400> 3306
000
<210> 3307
<400> 3307
000
<210> 3308
<400> 3308
000
<210> 3309
<400> 3309
000
<210> 3310
<400> 3310
000
<210> 3311
<400> 3311
000
<210> 3312
<400> 3312
000
<210> 3313
<400> 3313
000
<210> 3314
<400> 3314
000
<210> 3315
<400> 3315
000
<210> 3316
<400> 3316
000
<210> 3317
<400> 3317
000
<210> 3318
<400> 3318
000
<210> 3319
<400> 3319
000
<210> 3320
<400> 3320
000
<210> 3321
<400> 3321
000
<210> 3322
<400> 3322
000
<210> 3323
<400> 3323
000
<210> 3324
<400> 3324
000
<210> 3325
<400> 3325
000
<210> 3326
<400> 3326
000
<210> 3327
<400> 3327
000
<210> 3328
<400> 3328
000
<210> 3329
<400> 3329
000
<210> 3330
<400> 3330
000
<210> 3331
<400> 3331
000
<210> 3332
<400> 3332
000
<210> 3333
<400> 3333
000
<210> 3334
<400> 3334
000
<210> 3335
<400> 3335
000
<210> 3336
<400> 3336
000
<210> 3337
<400> 3337
000
<210> 3338
<400> 3338
000
<210> 3339
<400> 3339
000
<210> 3340
<400> 3340
000
<210> 3341
<400> 3341
000
<210> 3342
<400> 3342
000
<210> 3343
<400> 3343
000
<210> 3344
<400> 3344
000
<210> 3345
<400> 3345
000
<210> 3346
<400> 3346
000
<210> 3347
<400> 3347
000
<210> 3348
<400> 3348
000
<210> 3349
<400> 3349
000
<210> 3350
<400> 3350
000
<210> 3351
<400> 3351
000
<210> 3352
<400> 3352
000
<210> 3353
<400> 3353
000
<210> 3354
<400> 3354
000
<210> 3355
<400> 3355
000
<210> 3356
<400> 3356
000
<210> 3357
<400> 3357
000
<210> 3358
<400> 3358
000
<210> 3359
<400> 3359
000
<210> 3360
<400> 3360
000
<210> 3361
<400> 3361
000
<210> 3362
<400> 3362
000
<210> 3363
<400> 3363
000
<210> 3364
<400> 3364
000
<210> 3365
<400> 3365
000
<210> 3366
<400> 3366
000
<210> 3367
<400> 3367
000
<210> 3368
<400> 3368
000
<210> 3369
<400> 3369
000
<210> 3370
<400> 3370
000
<210> 3371
<400> 3371
000
<210> 3372
<400> 3372
000
<210> 3373
<400> 3373
000
<210> 3374
<400> 3374
000
<210> 3375
<400> 3375
000
<210> 3376
<400> 3376
000
<210> 3377
<400> 3377
000
<210> 3378
<400> 3378
000
<210> 3379
<400> 3379
000
<210> 3380
<400> 3380
000
<210> 3381
<400> 3381
000
<210> 3382
<400> 3382
000
<210> 3383
<400> 3383
000
<210> 3384
<400> 3384
000
<210> 3385
<400> 3385
000
<210> 3386
<400> 3386
000
<210> 3387
<400> 3387
000
<210> 3388
<400> 3388
000
<210> 3389
<400> 3389
000
<210> 3390
<400> 3390
000
<210> 3391
<400> 3391
000
<210> 3392
<400> 3392
000
<210> 3393
<400> 3393
000
<210> 3394
<400> 3394
000
<210> 3395
<400> 3395
000
<210> 3396
<400> 3396
000
<210> 3397
<400> 3397
000
<210> 3398
<400> 3398
000
<210> 3399
<400> 3399
000
<210> 3400
<400> 3400
000
<210> 3401
<400> 3401
000
<210> 3402
<400> 3402
000
<210> 3403
<400> 3403
000
<210> 3404
<400> 3404
000
<210> 3405
<400> 3405
000
<210> 3406
<400> 3406
000
<210> 3407
<400> 3407
000
<210> 3408
<400> 3408
000
<210> 3409
<400> 3409
000
<210> 3410
<400> 3410
000
<210> 3411
<400> 3411
000
<210> 3412
<400> 3412
000
<210> 3413
<400> 3413
000
<210> 3414
<400> 3414
000
<210> 3415
<400> 3415
000
<210> 3416
<400> 3416
000
<210> 3417
<400> 3417
000
<210> 3418
<400> 3418
000
<210> 3419
<400> 3419
000
<210> 3420
<400> 3420
000
<210> 3421
<400> 3421
000
<210> 3422
<400> 3422
000
<210> 3423
<400> 3423
000
<210> 3424
<400> 3424
000
<210> 3425
<400> 3425
000
<210> 3426
<400> 3426
000
<210> 3427
<400> 3427
000
<210> 3428
<400> 3428
000
<210> 3429
<400> 3429
000
<210> 3430
<400> 3430
000
<210> 3431
<400> 3431
000
<210> 3432
<400> 3432
000
<210> 3433
<400> 3433
000
<210> 3434
<400> 3434
000
<210> 3435
<400> 3435
000
<210> 3436
<400> 3436
000
<210> 3437
<400> 3437
000
<210> 3438
<400> 3438
000
<210> 3439
<400> 3439
000
<210> 3440
<400> 3440
000
<210> 3441
<400> 3441
000
<210> 3442
<400> 3442
000
<210> 3443
<400> 3443
000
<210> 3444
<400> 3444
000
<210> 3445
<400> 3445
000
<210> 3446
<400> 3446
000
<210> 3447
<400> 3447
000
<210> 3448
<400> 3448
000
<210> 3449
<400> 3449
000
<210> 3450
<400> 3450
000
<210> 3451
<400> 3451
000
<210> 3452
<400> 3452
000
<210> 3453
<400> 3453
000
<210> 3454
<400> 3454
000
<210> 3455
<400> 3455
000
<210> 3456
<400> 3456
000
<210> 3457
<400> 3457
000
<210> 3458
<400> 3458
000
<210> 3459
<400> 3459
000
<210> 3460
<400> 3460
000
<210> 3461
<400> 3461
000
<210> 3462
<400> 3462
000
<210> 3463
<400> 3463
000
<210> 3464
<400> 3464
000
<210> 3465
<400> 3465
000
<210> 3466
<400> 3466
000
<210> 3467
<400> 3467
000
<210> 3468
<400> 3468
000
<210> 3469
<400> 3469
000
<210> 3470
<400> 3470
000
<210> 3471
<400> 3471
000
<210> 3472
<400> 3472
000
<210> 3473
<400> 3473
000
<210> 3474
<400> 3474
000
<210> 3475
<400> 3475
000
<210> 3476
<400> 3476
000
<210> 3477
<400> 3477
000
<210> 3478
<400> 3478
000
<210> 3479
<400> 3479
000
<210> 3480
<400> 3480
000
<210> 3481
<400> 3481
000
<210> 3482
<400> 3482
000
<210> 3483
<400> 3483
000
<210> 3484
<400> 3484
000
<210> 3485
<400> 3485
000
<210> 3486
<400> 3486
000
<210> 3487
<400> 3487
000
<210> 3488
<400> 3488
000
<210> 3489
<400> 3489
000
<210> 3490
<400> 3490
000
<210> 3491
<400> 3491
000
<210> 3492
<400> 3492
000
<210> 3493
<400> 3493
000
<210> 3494
<400> 3494
000
<210> 3495
<400> 3495
000
<210> 3496
<400> 3496
000
<210> 3497
<400> 3497
000
<210> 3498
<400> 3498
000
<210> 3499
<400> 3499
000
<210> 3500
<400> 3500
000
<210> 3501
<400> 3501
000
<210> 3502
<400> 3502
000
<210> 3503
<400> 3503
000
<210> 3504
<400> 3504
000
<210> 3505
<400> 3505
000
<210> 3506
<400> 3506
000
<210> 3507
<400> 3507
000
<210> 3508
<400> 3508
000
<210> 3509
<400> 3509
000
<210> 3510
<400> 3510
000
<210> 3511
<400> 3511
000
<210> 3512
<400> 3512
000
<210> 3513
<400> 3513
000
<210> 3514
<400> 3514
000
<210> 3515
<400> 3515
000
<210> 3516
<400> 3516
000
<210> 3517
<400> 3517
000
<210> 3518
<400> 3518
000
<210> 3519
<400> 3519
000
<210> 3520
<400> 3520
000
<210> 3521
<400> 3521
000
<210> 3522
<400> 3522
000
<210> 3523
<400> 3523
000
<210> 3524
<400> 3524
000
<210> 3525
<400> 3525
000
<210> 3526
<400> 3526
000
<210> 3527
<400> 3527
000
<210> 3528
<400> 3528
000
<210> 3529
<400> 3529
000
<210> 3530
<400> 3530
000
<210> 3531
<400> 3531
000
<210> 3532
<400> 3532
000
<210> 3533
<400> 3533
000
<210> 3534
<400> 3534
000
<210> 3535
<400> 3535
000
<210> 3536
<400> 3536
000
<210> 3537
<400> 3537
000
<210> 3538
<400> 3538
000
<210> 3539
<400> 3539
000
<210> 3540
<400> 3540
000
<210> 3541
<400> 3541
000
<210> 3542
<400> 3542
000
<210> 3543
<400> 3543
000
<210> 3544
<400> 3544
000
<210> 3545
<400> 3545
000
<210> 3546
<400> 3546
000
<210> 3547
<400> 3547
000
<210> 3548
<400> 3548
000
<210> 3549
<400> 3549
000
<210> 3550
<400> 3550
000
<210> 3551
<400> 3551
000
<210> 3552
<400> 3552
000
<210> 3553
<400> 3553
000
<210> 3554
<400> 3554
000
<210> 3555
<400> 3555
000
<210> 3556
<400> 3556
000
<210> 3557
<400> 3557
000
<210> 3558
<400> 3558
000
<210> 3559
<400> 3559
000
<210> 3560
<400> 3560
000
<210> 3561
<400> 3561
000
<210> 3562
<400> 3562
000
<210> 3563
<400> 3563
000
<210> 3564
<400> 3564
000
<210> 3565
<400> 3565
000
<210> 3566
<400> 3566
000
<210> 3567
<400> 3567
000
<210> 3568
<400> 3568
000
<210> 3569
<400> 3569
000
<210> 3570
<400> 3570
000
<210> 3571
<400> 3571
000
<210> 3572
<400> 3572
000
<210> 3573
<400> 3573
000
<210> 3574
<400> 3574
000
<210> 3575
<400> 3575
000
<210> 3576
<400> 3576
000
<210> 3577
<400> 3577
000
<210> 3578
<400> 3578
000
<210> 3579
<400> 3579
000
<210> 3580
<400> 3580
000
<210> 3581
<400> 3581
000
<210> 3582
<400> 3582
000
<210> 3583
<400> 3583
000
<210> 3584
<400> 3584
000
<210> 3585
<400> 3585
000
<210> 3586
<400> 3586
000
<210> 3587
<400> 3587
000
<210> 3588
<400> 3588
000
<210> 3589
<400> 3589
000
<210> 3590
<400> 3590
000
<210> 3591
<400> 3591
000
<210> 3592
<400> 3592
000
<210> 3593
<400> 3593
000
<210> 3594
<400> 3594
000
<210> 3595
<400> 3595
000
<210> 3596
<400> 3596
000
<210> 3597
<400> 3597
000
<210> 3598
<400> 3598
000
<210> 3599
<400> 3599
000
<210> 3600
<400> 3600
000
<210> 3601
<400> 3601
000
<210> 3602
<400> 3602
000
<210> 3603
<400> 3603
000
<210> 3604
<400> 3604
000
<210> 3605
<400> 3605
000
<210> 3606
<400> 3606
000
<210> 3607
<400> 3607
000
<210> 3608
<400> 3608
000
<210> 3609
<400> 3609
000
<210> 3610
<400> 3610
000
<210> 3611
<400> 3611
000
<210> 3612
<400> 3612
000
<210> 3613
<400> 3613
000
<210> 3614
<400> 3614
000
<210> 3615
<400> 3615
000
<210> 3616
<400> 3616
000
<210> 3617
<400> 3617
000
<210> 3618
<400> 3618
000
<210> 3619
<400> 3619
000
<210> 3620
<400> 3620
000
<210> 3621
<400> 3621
000
<210> 3622
<400> 3622
000
<210> 3623
<400> 3623
000
<210> 3624
<400> 3624
000
<210> 3625
<400> 3625
000
<210> 3626
<400> 3626
000
<210> 3627
<400> 3627
000
<210> 3628
<400> 3628
000
<210> 3629
<400> 3629
000
<210> 3630
<400> 3630
000
<210> 3631
<400> 3631
000
<210> 3632
<400> 3632
000
<210> 3633
<400> 3633
000
<210> 3634
<400> 3634
000
<210> 3635
<400> 3635
000
<210> 3636
<400> 3636
000
<210> 3637
<400> 3637
000
<210> 3638
<400> 3638
000
<210> 3639
<400> 3639
000
<210> 3640
<400> 3640
000
<210> 3641
<400> 3641
000
<210> 3642
<400> 3642
000
<210> 3643
<400> 3643
000
<210> 3644
<400> 3644
000
<210> 3645
<400> 3645
000
<210> 3646
<400> 3646
000
<210> 3647
<400> 3647
000
<210> 3648
<400> 3648
000
<210> 3649
<400> 3649
000
<210> 3650
<400> 3650
000
<210> 3651
<400> 3651
000
<210> 3652
<400> 3652
000
<210> 3653
<400> 3653
000
<210> 3654
<400> 3654
000
<210> 3655
<400> 3655
000
<210> 3656
<400> 3656
000
<210> 3657
<400> 3657
000
<210> 3658
<400> 3658
000
<210> 3659
<400> 3659
000
<210> 3660
<400> 3660
000
<210> 3661
<400> 3661
000
<210> 3662
<400> 3662
000
<210> 3663
<400> 3663
000
<210> 3664
<400> 3664
000
<210> 3665
<400> 3665
000
<210> 3666
<400> 3666
000
<210> 3667
<400> 3667
000
<210> 3668
<400> 3668
000
<210> 3669
<400> 3669
000
<210> 3670
<400> 3670
000
<210> 3671
<400> 3671
000
<210> 3672
<400> 3672
000
<210> 3673
<400> 3673
000
<210> 3674
<400> 3674
000
<210> 3675
<400> 3675
000
<210> 3676
<400> 3676
000
<210> 3677
<400> 3677
000
<210> 3678
<400> 3678
000
<210> 3679
<400> 3679
000
<210> 3680
<400> 3680
000
<210> 3681
<400> 3681
000
<210> 3682
<400> 3682
000
<210> 3683
<400> 3683
000
<210> 3684
<400> 3684
000
<210> 3685
<400> 3685
000
<210> 3686
<400> 3686
000
<210> 3687
<400> 3687
000
<210> 3688
<400> 3688
000
<210> 3689
<400> 3689
000
<210> 3690
<400> 3690
000
<210> 3691
<400> 3691
000
<210> 3692
<400> 3692
000
<210> 3693
<400> 3693
000
<210> 3694
<400> 3694
000
<210> 3695
<400> 3695
000
<210> 3696
<400> 3696
000
<210> 3697
<400> 3697
000
<210> 3698
<400> 3698
000
<210> 3699
<400> 3699
000
<210> 3700
<400> 3700
000
<210> 3701
<400> 3701
000
<210> 3702
<400> 3702
000
<210> 3703
<400> 3703
000
<210> 3704
<400> 3704
000
<210> 3705
<400> 3705
000
<210> 3706
<400> 3706
000
<210> 3707
<400> 3707
000
<210> 3708
<400> 3708
000
<210> 3709
<400> 3709
000
<210> 3710
<400> 3710
000
<210> 3711
<400> 3711
000
<210> 3712
<400> 3712
000
<210> 3713
<400> 3713
000
<210> 3714
<400> 3714
000
<210> 3715
<400> 3715
000
<210> 3716
<400> 3716
000
<210> 3717
<400> 3717
000
<210> 3718
<400> 3718
000
<210> 3719
<400> 3719
000
<210> 3720
<400> 3720
000
<210> 3721
<400> 3721
000
<210> 3722
<400> 3722
000
<210> 3723
<400> 3723
000
<210> 3724
<400> 3724
000
<210> 3725
<400> 3725
000
<210> 3726
<400> 3726
000
<210> 3727
<400> 3727
000
<210> 3728
<400> 3728
000
<210> 3729
<400> 3729
000
<210> 3730
<400> 3730
000
<210> 3731
<400> 3731
000
<210> 3732
<400> 3732
000
<210> 3733
<400> 3733
000
<210> 3734
<400> 3734
000
<210> 3735
<400> 3735
000
<210> 3736
<400> 3736
000
<210> 3737
<400> 3737
000
<210> 3738
<400> 3738
000
<210> 3739
<400> 3739
000
<210> 3740
<400> 3740
000
<210> 3741
<400> 3741
000
<210> 3742
<400> 3742
000
<210> 3743
<400> 3743
000
<210> 3744
<400> 3744
000
<210> 3745
<400> 3745
000
<210> 3746
<400> 3746
000
<210> 3747
<400> 3747
000
<210> 3748
<400> 3748
000
<210> 3749
<400> 3749
000
<210> 3750
<400> 3750
000
<210> 3751
<400> 3751
000
<210> 3752
<400> 3752
000
<210> 3753
<400> 3753
000
<210> 3754
<400> 3754
000
<210> 3755
<400> 3755
000
<210> 3756
<400> 3756
000
<210> 3757
<400> 3757
000
<210> 3758
<400> 3758
000
<210> 3759
<400> 3759
000
<210> 3760
<400> 3760
000
<210> 3761
<400> 3761
000
<210> 3762
<400> 3762
000
<210> 3763
<400> 3763
000
<210> 3764
<400> 3764
000
<210> 3765
<400> 3765
000
<210> 3766
<400> 3766
000
<210> 3767
<400> 3767
000
<210> 3768
<400> 3768
000
<210> 3769
<400> 3769
000
<210> 3770
<400> 3770
000
<210> 3771
<400> 3771
000
<210> 3772
<400> 3772
000
<210> 3773
<400> 3773
000
<210> 3774
<400> 3774
000
<210> 3775
<400> 3775
000
<210> 3776
<400> 3776
000
<210> 3777
<400> 3777
000
<210> 3778
<400> 3778
000
<210> 3779
<400> 3779
000
<210> 3780
<400> 3780
000
<210> 3781
<400> 3781
000
<210> 3782
<400> 3782
000
<210> 3783
<400> 3783
000
<210> 3784
<400> 3784
000
<210> 3785
<400> 3785
000
<210> 3786
<400> 3786
000
<210> 3787
<400> 3787
000
<210> 3788
<400> 3788
000
<210> 3789
<400> 3789
000
<210> 3790
<400> 3790
000
<210> 3791
<400> 3791
000
<210> 3792
<400> 3792
000
<210> 3793
<400> 3793
000
<210> 3794
<400> 3794
000
<210> 3795
<400> 3795
000
<210> 3796
<400> 3796
000
<210> 3797
<400> 3797
000
<210> 3798
<400> 3798
000
<210> 3799
<400> 3799
000
<210> 3800
<400> 3800
000
<210> 3801
<400> 3801
000
<210> 3802
<400> 3802
000
<210> 3803
<400> 3803
000
<210> 3804
<400> 3804
000
<210> 3805
<400> 3805
000
<210> 3806
<400> 3806
000
<210> 3807
<400> 3807
000
<210> 3808
<400> 3808
000
<210> 3809
<400> 3809
000
<210> 3810
<400> 3810
000
<210> 3811
<400> 3811
000
<210> 3812
<400> 3812
000
<210> 3813
<400> 3813
000
<210> 3814
<400> 3814
000
<210> 3815
<400> 3815
000
<210> 3816
<400> 3816
000
<210> 3817
<400> 3817
000
<210> 3818
<400> 3818
000
<210> 3819
<400> 3819
000
<210> 3820
<400> 3820
000
<210> 3821
<400> 3821
000
<210> 3822
<400> 3822
000
<210> 3823
<400> 3823
000
<210> 3824
<400> 3824
000
<210> 3825
<400> 3825
000
<210> 3826
<400> 3826
000
<210> 3827
<400> 3827
000
<210> 3828
<400> 3828
000
<210> 3829
<400> 3829
000
<210> 3830
<400> 3830
000
<210> 3831
<400> 3831
000
<210> 3832
<400> 3832
000
<210> 3833
<400> 3833
000
<210> 3834
<400> 3834
000
<210> 3835
<400> 3835
000
<210> 3836
<400> 3836
000
<210> 3837
<400> 3837
000
<210> 3838
<400> 3838
000
<210> 3839
<400> 3839
000
<210> 3840
<400> 3840
000
<210> 3841
<400> 3841
000
<210> 3842
<400> 3842
000
<210> 3843
<400> 3843
000
<210> 3844
<400> 3844
000
<210> 3845
<400> 3845
000
<210> 3846
<400> 3846
000
<210> 3847
<400> 3847
000
<210> 3848
<400> 3848
000
<210> 3849
<400> 3849
000
<210> 3850
<400> 3850
000
<210> 3851
<400> 3851
000
<210> 3852
<400> 3852
000
<210> 3853
<400> 3853
000
<210> 3854
<400> 3854
000
<210> 3855
<400> 3855
000
<210> 3856
<400> 3856
000
<210> 3857
<400> 3857
000
<210> 3858
<400> 3858
000
<210> 3859
<400> 3859
000
<210> 3860
<400> 3860
000
<210> 3861
<400> 3861
000
<210> 3862
<400> 3862
000
<210> 3863
<400> 3863
000
<210> 3864
<400> 3864
000
<210> 3865
<400> 3865
000
<210> 3866
<400> 3866
000
<210> 3867
<400> 3867
000
<210> 3868
<400> 3868
000
<210> 3869
<400> 3869
000
<210> 3870
<400> 3870
000
<210> 3871
<400> 3871
000
<210> 3872
<400> 3872
000
<210> 3873
<400> 3873
000
<210> 3874
<400> 3874
000
<210> 3875
<400> 3875
000
<210> 3876
<400> 3876
000
<210> 3877
<400> 3877
000
<210> 3878
<400> 3878
000
<210> 3879
<400> 3879
000
<210> 3880
<400> 3880
000
<210> 3881
<400> 3881
000
<210> 3882
<400> 3882
000
<210> 3883
<400> 3883
000
<210> 3884
<400> 3884
000
<210> 3885
<400> 3885
000
<210> 3886
<400> 3886
000
<210> 3887
<400> 3887
000
<210> 3888
<400> 3888
000
<210> 3889
<400> 3889
000
<210> 3890
<400> 3890
000
<210> 3891
<400> 3891
000
<210> 3892
<400> 3892
000
<210> 3893
<400> 3893
000
<210> 3894
<400> 3894
000
<210> 3895
<400> 3895
000
<210> 3896
<400> 3896
000
<210> 3897
<400> 3897
000
<210> 3898
<400> 3898
000
<210> 3899
<400> 3899
000
<210> 3900
<400> 3900
000
<210> 3901
<400> 3901
000
<210> 3902
<400> 3902
000
<210> 3903
<400> 3903
000
<210> 3904
<400> 3904
000
<210> 3905
<400> 3905
000
<210> 3906
<400> 3906
000
<210> 3907
<400> 3907
000
<210> 3908
<400> 3908
000
<210> 3909
<400> 3909
000
<210> 3910
<400> 3910
000
<210> 3911
<400> 3911
000
<210> 3912
<400> 3912
000
<210> 3913
<400> 3913
000
<210> 3914
<400> 3914
000
<210> 3915
<400> 3915
000
<210> 3916
<400> 3916
000
<210> 3917
<400> 3917
000
<210> 3918
<400> 3918
000
<210> 3919
<400> 3919
000
<210> 3920
<400> 3920
000
<210> 3921
<400> 3921
000
<210> 3922
<400> 3922
000
<210> 3923
<400> 3923
000
<210> 3924
<400> 3924
000
<210> 3925
<400> 3925
000
<210> 3926
<400> 3926
000
<210> 3927
<400> 3927
000
<210> 3928
<400> 3928
000
<210> 3929
<400> 3929
000
<210> 3930
<400> 3930
000
<210> 3931
<400> 3931
000
<210> 3932
<400> 3932
000
<210> 3933
<400> 3933
000
<210> 3934
<400> 3934
000
<210> 3935
<400> 3935
000
<210> 3936
<400> 3936
000
<210> 3937
<400> 3937
000
<210> 3938
<400> 3938
000
<210> 3939
<400> 3939
000
<210> 3940
<400> 3940
000
<210> 3941
<400> 3941
000
<210> 3942
<400> 3942
000
<210> 3943
<400> 3943
000
<210> 3944
<400> 3944
000
<210> 3945
<400> 3945
000
<210> 3946
<400> 3946
000
<210> 3947
<400> 3947
000
<210> 3948
<400> 3948
000
<210> 3949
<400> 3949
000
<210> 3950
<400> 3950
000
<210> 3951
<400> 3951
000
<210> 3952
<400> 3952
000
<210> 3953
<400> 3953
000
<210> 3954
<400> 3954
000
<210> 3955
<400> 3955
000
<210> 3956
<400> 3956
000
<210> 3957
<400> 3957
000
<210> 3958
<400> 3958
000
<210> 3959
<400> 3959
000
<210> 3960
<400> 3960
000
<210> 3961
<400> 3961
000
<210> 3962
<400> 3962
000
<210> 3963
<400> 3963
000
<210> 3964
<400> 3964
000
<210> 3965
<400> 3965
000
<210> 3966
<400> 3966
000
<210> 3967
<400> 3967
000
<210> 3968
<400> 3968
000
<210> 3969
<400> 3969
000
<210> 3970
<400> 3970
000
<210> 3971
<400> 3971
000
<210> 3972
<400> 3972
000
<210> 3973
<400> 3973
000
<210> 3974
<400> 3974
000
<210> 3975
<400> 3975
000
<210> 3976
<400> 3976
000
<210> 3977
<400> 3977
000
<210> 3978
<400> 3978
000
<210> 3979
<400> 3979
000
<210> 3980
<400> 3980
000
<210> 3981
<400> 3981
000
<210> 3982
<400> 3982
000
<210> 3983
<400> 3983
000
<210> 3984
<400> 3984
000
<210> 3985
<400> 3985
000
<210> 3986
<400> 3986
000
<210> 3987
<400> 3987
000
<210> 3988
<400> 3988
000
<210> 3989
<400> 3989
000
<210> 3990
<400> 3990
000
<210> 3991
<400> 3991
000
<210> 3992
<400> 3992
000
<210> 3993
<400> 3993
000
<210> 3994
<400> 3994
000
<210> 3995
<400> 3995
000
<210> 3996
<400> 3996
000
<210> 3997
<400> 3997
000
<210> 3998
<400> 3998
000
<210> 3999
<400> 3999
000
<210> 4000
<400> 4000
000
<210> 4001
<400> 4001
000
<210> 4002
<400> 4002
000
<210> 4003
<400> 4003
000
<210> 4004
<400> 4004
000
<210> 4005
<400> 4005
000
<210> 4006
<400> 4006
000
<210> 4007
<400> 4007
000
<210> 4008
<400> 4008
000
<210> 4009
<400> 4009
000
<210> 4010
<400> 4010
000
<210> 4011
<400> 4011
000
<210> 4012
<400> 4012
000
<210> 4013
<400> 4013
000
<210> 4014
<400> 4014
000
<210> 4015
<400> 4015
000
<210> 4016
<400> 4016
000
<210> 4017
<400> 4017
000
<210> 4018
<400> 4018
000
<210> 4019
<400> 4019
000
<210> 4020
<400> 4020
000
<210> 4021
<400> 4021
000
<210> 4022
<400> 4022
000
<210> 4023
<400> 4023
000
<210> 4024
<400> 4024
000
<210> 4025
<400> 4025
000
<210> 4026
<400> 4026
000
<210> 4027
<400> 4027
000
<210> 4028
<400> 4028
000
<210> 4029
<400> 4029
000
<210> 4030
<400> 4030
000
<210> 4031
<400> 4031
000
<210> 4032
<400> 4032
000
<210> 4033
<400> 4033
000
<210> 4034
<400> 4034
000
<210> 4035
<400> 4035
000
<210> 4036
<400> 4036
000
<210> 4037
<400> 4037
000
<210> 4038
<400> 4038
000
<210> 4039
<400> 4039
000
<210> 4040
<400> 4040
000
<210> 4041
<400> 4041
000
<210> 4042
<400> 4042
000
<210> 4043
<400> 4043
000
<210> 4044
<400> 4044
000
<210> 4045
<400> 4045
000
<210> 4046
<400> 4046
000
<210> 4047
<400> 4047
000
<210> 4048
<400> 4048
000
<210> 4049
<400> 4049
000
<210> 4050
<400> 4050
000
<210> 4051
<400> 4051
000
<210> 4052
<400> 4052
000
<210> 4053
<400> 4053
000
<210> 4054
<400> 4054
000
<210> 4055
<400> 4055
000
<210> 4056
<400> 4056
000
<210> 4057
<400> 4057
000
<210> 4058
<400> 4058
000
<210> 4059
<400> 4059
000
<210> 4060
<400> 4060
000
<210> 4061
<400> 4061
000
<210> 4062
<400> 4062
000
<210> 4063
<400> 4063
000
<210> 4064
<400> 4064
000
<210> 4065
<400> 4065
000
<210> 4066
<400> 4066
000
<210> 4067
<400> 4067
000
<210> 4068
<400> 4068
000
<210> 4069
<400> 4069
000
<210> 4070
<400> 4070
000
<210> 4071
<400> 4071
000
<210> 4072
<400> 4072
000
<210> 4073
<400> 4073
000
<210> 4074
<400> 4074
000
<210> 4075
<400> 4075
000
<210> 4076
<400> 4076
000
<210> 4077
<400> 4077
000
<210> 4078
<400> 4078
000
<210> 4079
<400> 4079
000
<210> 4080
<400> 4080
000
<210> 4081
<400> 4081
000
<210> 4082
<400> 4082
000
<210> 4083
<400> 4083
000
<210> 4084
<400> 4084
000
<210> 4085
<400> 4085
000
<210> 4086
<400> 4086
000
<210> 4087
<400> 4087
000
<210> 4088
<400> 4088
000
<210> 4089
<400> 4089
000
<210> 4090
<400> 4090
000
<210> 4091
<400> 4091
000
<210> 4092
<400> 4092
000
<210> 4093
<400> 4093
000
<210> 4094
<400> 4094
000
<210> 4095
<400> 4095
000
<210> 4096
<400> 4096
000
<210> 4097
<400> 4097
000
<210> 4098
<400> 4098
000
<210> 4099
<400> 4099
000
<210> 4100
<400> 4100
000
<210> 4101
<400> 4101
000
<210> 4102
<400> 4102
000
<210> 4103
<400> 4103
000
<210> 4104
<400> 4104
000
<210> 4105
<400> 4105
000
<210> 4106
<400> 4106
000
<210> 4107
<400> 4107
000
<210> 4108
<400> 4108
000
<210> 4109
<400> 4109
000
<210> 4110
<400> 4110
000
<210> 4111
<400> 4111
000
<210> 4112
<400> 4112
000
<210> 4113
<400> 4113
000
<210> 4114
<400> 4114
000
<210> 4115
<400> 4115
000
<210> 4116
<400> 4116
000
<210> 4117
<400> 4117
000
<210> 4118
<400> 4118
000
<210> 4119
<400> 4119
000
<210> 4120
<400> 4120
000
<210> 4121
<400> 4121
000
<210> 4122
<400> 4122
000
<210> 4123
<400> 4123
000
<210> 4124
<400> 4124
000
<210> 4125
<400> 4125
000
<210> 4126
<400> 4126
000
<210> 4127
<400> 4127
000
<210> 4128
<400> 4128
000
<210> 4129
<400> 4129
000
<210> 4130
<400> 4130
000
<210> 4131
<400> 4131
000
<210> 4132
<400> 4132
000
<210> 4133
<400> 4133
000
<210> 4134
<400> 4134
000
<210> 4135
<400> 4135
000
<210> 4136
<400> 4136
000
<210> 4137
<400> 4137
000
<210> 4138
<400> 4138
000
<210> 4139
<400> 4139
000
<210> 4140
<400> 4140
000
<210> 4141
<400> 4141
000
<210> 4142
<400> 4142
000
<210> 4143
<400> 4143
000
<210> 4144
<400> 4144
000
<210> 4145
<400> 4145
000
<210> 4146
<400> 4146
000
<210> 4147
<400> 4147
000
<210> 4148
<400> 4148
000
<210> 4149
<400> 4149
000
<210> 4150
<400> 4150
000
<210> 4151
<400> 4151
000
<210> 4152
<400> 4152
000
<210> 4153
<400> 4153
000
<210> 4154
<400> 4154
000
<210> 4155
<400> 4155
000
<210> 4156
<400> 4156
000
<210> 4157
<400> 4157
000
<210> 4158
<400> 4158
000
<210> 4159
<400> 4159
000
<210> 4160
<400> 4160
000
<210> 4161
<400> 4161
000
<210> 4162
<400> 4162
000
<210> 4163
<400> 4163
000
<210> 4164
<400> 4164
000
<210> 4165
<400> 4165
000
<210> 4166
<400> 4166
000
<210> 4167
<400> 4167
000
<210> 4168
<400> 4168
000
<210> 4169
<400> 4169
000
<210> 4170
<400> 4170
000
<210> 4171
<400> 4171
000
<210> 4172
<400> 4172
000
<210> 4173
<400> 4173
000
<210> 4174
<400> 4174
000
<210> 4175
<400> 4175
000
<210> 4176
<400> 4176
000
<210> 4177
<400> 4177
000
<210> 4178
<400> 4178
000
<210> 4179
<400> 4179
000
<210> 4180
<400> 4180
000
<210> 4181
<400> 4181
000
<210> 4182
<400> 4182
000
<210> 4183
<400> 4183
000
<210> 4184
<400> 4184
000
<210> 4185
<400> 4185
000
<210> 4186
<400> 4186
000
<210> 4187
<400> 4187
000
<210> 4188
<400> 4188
000
<210> 4189
<400> 4189
000
<210> 4190
<400> 4190
000
<210> 4191
<400> 4191
000
<210> 4192
<400> 4192
000
<210> 4193
<400> 4193
000
<210> 4194
<400> 4194
000
<210> 4195
<400> 4195
000
<210> 4196
<400> 4196
000
<210> 4197
<400> 4197
000
<210> 4198
<400> 4198
000
<210> 4199
<400> 4199
000
<210> 4200
<400> 4200
000
<210> 4201
<400> 4201
000
<210> 4202
<400> 4202
000
<210> 4203
<400> 4203
000
<210> 4204
<400> 4204
000
<210> 4205
<400> 4205
000
<210> 4206
<400> 4206
000
<210> 4207
<400> 4207
000
<210> 4208
<400> 4208
000
<210> 4209
<400> 4209
000
<210> 4210
<400> 4210
000
<210> 4211
<400> 4211
000
<210> 4212
<400> 4212
000
<210> 4213
<400> 4213
000
<210> 4214
<400> 4214
000
<210> 4215
<400> 4215
000
<210> 4216
<400> 4216
000
<210> 4217
<400> 4217
000
<210> 4218
<400> 4218
000
<210> 4219
<400> 4219
000
<210> 4220
<400> 4220
000
<210> 4221
<400> 4221
000
<210> 4222
<400> 4222
000
<210> 4223
<400> 4223
000
<210> 4224
<400> 4224
000
<210> 4225
<400> 4225
000
<210> 4226
<400> 4226
000
<210> 4227
<400> 4227
000
<210> 4228
<400> 4228
000
<210> 4229
<400> 4229
000
<210> 4230
<400> 4230
000
<210> 4231
<400> 4231
000
<210> 4232
<400> 4232
000
<210> 4233
<400> 4233
000
<210> 4234
<400> 4234
000
<210> 4235
<400> 4235
000
<210> 4236
<400> 4236
000
<210> 4237
<400> 4237
000
<210> 4238
<400> 4238
000
<210> 4239
<400> 4239
000
<210> 4240
<400> 4240
000
<210> 4241
<400> 4241
000
<210> 4242
<400> 4242
000
<210> 4243
<400> 4243
000
<210> 4244
<400> 4244
000
<210> 4245
<400> 4245
000
<210> 4246
<400> 4246
000
<210> 4247
<400> 4247
000
<210> 4248
<400> 4248
000
<210> 4249
<400> 4249
000
<210> 4250
<400> 4250
000
<210> 4251
<400> 4251
000
<210> 4252
<400> 4252
000
<210> 4253
<400> 4253
000
<210> 4254
<400> 4254
000
<210> 4255
<400> 4255
000
<210> 4256
<400> 4256
000
<210> 4257
<400> 4257
000
<210> 4258
<400> 4258
000
<210> 4259
<400> 4259
000
<210> 4260
<400> 4260
000
<210> 4261
<400> 4261
000
<210> 4262
<400> 4262
000
<210> 4263
<400> 4263
000
<210> 4264
<400> 4264
000
<210> 4265
<400> 4265
000
<210> 4266
<400> 4266
000
<210> 4267
<400> 4267
000
<210> 4268
<400> 4268
000
<210> 4269
<400> 4269
000
<210> 4270
<400> 4270
000
<210> 4271
<400> 4271
000
<210> 4272
<400> 4272
000
<210> 4273
<400> 4273
000
<210> 4274
<400> 4274
000
<210> 4275
<400> 4275
000
<210> 4276
<400> 4276
000
<210> 4277
<400> 4277
000
<210> 4278
<400> 4278
000
<210> 4279
<400> 4279
000
<210> 4280
<400> 4280
000
<210> 4281
<400> 4281
000
<210> 4282
<400> 4282
000
<210> 4283
<400> 4283
000
<210> 4284
<400> 4284
000
<210> 4285
<400> 4285
000
<210> 4286
<400> 4286
000
<210> 4287
<400> 4287
000
<210> 4288
<400> 4288
000
<210> 4289
<400> 4289
000
<210> 4290
<400> 4290
000
<210> 4291
<400> 4291
000
<210> 4292
<400> 4292
000
<210> 4293
<400> 4293
000
<210> 4294
<400> 4294
000
<210> 4295
<400> 4295
000
<210> 4296
<400> 4296
000
<210> 4297
<400> 4297
000
<210> 4298
<400> 4298
000
<210> 4299
<400> 4299
000
<210> 4300
<400> 4300
000
<210> 4301
<400> 4301
000
<210> 4302
<400> 4302
000
<210> 4303
<400> 4303
000
<210> 4304
<400> 4304
000
<210> 4305
<400> 4305
000
<210> 4306
<400> 4306
000
<210> 4307
<400> 4307
000
<210> 4308
<400> 4308
000
<210> 4309
<400> 4309
000
<210> 4310
<400> 4310
000
<210> 4311
<400> 4311
000
<210> 4312
<400> 4312
000
<210> 4313
<400> 4313
000
<210> 4314
<400> 4314
000
<210> 4315
<400> 4315
000
<210> 4316
<400> 4316
000
<210> 4317
<400> 4317
000
<210> 4318
<400> 4318
000
<210> 4319
<400> 4319
000
<210> 4320
<400> 4320
000
<210> 4321
<400> 4321
000
<210> 4322
<400> 4322
000
<210> 4323
<400> 4323
000
<210> 4324
<400> 4324
000
<210> 4325
<400> 4325
000
<210> 4326
<400> 4326
000
<210> 4327
<400> 4327
000
<210> 4328
<400> 4328
000
<210> 4329
<400> 4329
000
<210> 4330
<400> 4330
000
<210> 4331
<400> 4331
000
<210> 4332
<400> 4332
000
<210> 4333
<400> 4333
000
<210> 4334
<400> 4334
000
<210> 4335
<400> 4335
000
<210> 4336
<400> 4336
000
<210> 4337
<400> 4337
000
<210> 4338
<400> 4338
000
<210> 4339
<400> 4339
000
<210> 4340
<400> 4340
000
<210> 4341
<400> 4341
000
<210> 4342
<400> 4342
000
<210> 4343
<400> 4343
000
<210> 4344
<400> 4344
000
<210> 4345
<400> 4345
000
<210> 4346
<400> 4346
000
<210> 4347
<400> 4347
000
<210> 4348
<400> 4348
000
<210> 4349
<400> 4349
000
<210> 4350
<400> 4350
000
<210> 4351
<400> 4351
000
<210> 4352
<400> 4352
000
<210> 4353
<400> 4353
000
<210> 4354
<400> 4354
000
<210> 4355
<400> 4355
000
<210> 4356
<400> 4356
000
<210> 4357
<400> 4357
000
<210> 4358
<400> 4358
000
<210> 4359
<400> 4359
000
<210> 4360
<400> 4360
000
<210> 4361
<400> 4361
000
<210> 4362
<400> 4362
000
<210> 4363
<400> 4363
000
<210> 4364
<400> 4364
000
<210> 4365
<400> 4365
000
<210> 4366
<400> 4366
000
<210> 4367
<400> 4367
000
<210> 4368
<400> 4368
000
<210> 4369
<400> 4369
000
<210> 4370
<400> 4370
000
<210> 4371
<400> 4371
000
<210> 4372
<400> 4372
000
<210> 4373
<400> 4373
000
<210> 4374
<400> 4374
000
<210> 4375
<400> 4375
000
<210> 4376
<400> 4376
000
<210> 4377
<400> 4377
000
<210> 4378
<400> 4378
000
<210> 4379
<400> 4379
000
<210> 4380
<400> 4380
000
<210> 4381
<400> 4381
000
<210> 4382
<400> 4382
000
<210> 4383
<400> 4383
000
<210> 4384
<400> 4384
000
<210> 4385
<400> 4385
000
<210> 4386
<400> 4386
000
<210> 4387
<400> 4387
000
<210> 4388
<400> 4388
000
<210> 4389
<400> 4389
000
<210> 4390
<400> 4390
000
<210> 4391
<400> 4391
000
<210> 4392
<400> 4392
000
<210> 4393
<400> 4393
000
<210> 4394
<400> 4394
000
<210> 4395
<400> 4395
000
<210> 4396
<400> 4396
000
<210> 4397
<400> 4397
000
<210> 4398
<400> 4398
000
<210> 4399
<400> 4399
000
<210> 4400
<400> 4400
000
<210> 4401
<400> 4401
000
<210> 4402
<400> 4402
000
<210> 4403
<400> 4403
000
<210> 4404
<400> 4404
000
<210> 4405
<400> 4405
000
<210> 4406
<400> 4406
000
<210> 4407
<400> 4407
000
<210> 4408
<400> 4408
000
<210> 4409
<400> 4409
000
<210> 4410
<400> 4410
000
<210> 4411
<400> 4411
000
<210> 4412
<400> 4412
000
<210> 4413
<400> 4413
000
<210> 4414
<400> 4414
000
<210> 4415
<400> 4415
000
<210> 4416
<400> 4416
000
<210> 4417
<400> 4417
000
<210> 4418
<400> 4418
000
<210> 4419
<400> 4419
000
<210> 4420
<400> 4420
000
<210> 4421
<400> 4421
000
<210> 4422
<400> 4422
000
<210> 4423
<400> 4423
000
<210> 4424
<400> 4424
000
<210> 4425
<400> 4425
000
<210> 4426
<400> 4426
000
<210> 4427
<400> 4427
000
<210> 4428
<400> 4428
000
<210> 4429
<400> 4429
000
<210> 4430
<400> 4430
000
<210> 4431
<400> 4431
000
<210> 4432
<400> 4432
000
<210> 4433
<400> 4433
000
<210> 4434
<400> 4434
000
<210> 4435
<400> 4435
000
<210> 4436
<400> 4436
000
<210> 4437
<400> 4437
000
<210> 4438
<400> 4438
000
<210> 4439
<400> 4439
000
<210> 4440
<400> 4440
000
<210> 4441
<400> 4441
000
<210> 4442
<400> 4442
000
<210> 4443
<400> 4443
000
<210> 4444
<400> 4444
000
<210> 4445
<400> 4445
000
<210> 4446
<400> 4446
000
<210> 4447
<400> 4447
000
<210> 4448
<400> 4448
000
<210> 4449
<400> 4449
000
<210> 4450
<400> 4450
000
<210> 4451
<400> 4451
000
<210> 4452
<400> 4452
000
<210> 4453
<400> 4453
000
<210> 4454
<400> 4454
000
<210> 4455
<400> 4455
000
<210> 4456
<400> 4456
000
<210> 4457
<400> 4457
000
<210> 4458
<400> 4458
000
<210> 4459
<400> 4459
000
<210> 4460
<400> 4460
000
<210> 4461
<400> 4461
000
<210> 4462
<400> 4462
000
<210> 4463
<400> 4463
000
<210> 4464
<400> 4464
000
<210> 4465
<400> 4465
000
<210> 4466
<400> 4466
000
<210> 4467
<400> 4467
000
<210> 4468
<400> 4468
000
<210> 4469
<400> 4469
000
<210> 4470
<400> 4470
000
<210> 4471
<400> 4471
000
<210> 4472
<400> 4472
000
<210> 4473
<400> 4473
000
<210> 4474
<400> 4474
000
<210> 4475
<400> 4475
000
<210> 4476
<400> 4476
000
<210> 4477
<400> 4477
000
<210> 4478
<400> 4478
000
<210> 4479
<400> 4479
000
<210> 4480
<400> 4480
000
<210> 4481
<400> 4481
000
<210> 4482
<400> 4482
000
<210> 4483
<400> 4483
000
<210> 4484
<400> 4484
000
<210> 4485
<400> 4485
000
<210> 4486
<400> 4486
000
<210> 4487
<400> 4487
000
<210> 4488
<400> 4488
000
<210> 4489
<400> 4489
000
<210> 4490
<400> 4490
000
<210> 4491
<400> 4491
000
<210> 4492
<400> 4492
000
<210> 4493
<400> 4493
000
<210> 4494
<400> 4494
000
<210> 4495
<400> 4495
000
<210> 4496
<400> 4496
000
<210> 4497
<400> 4497
000
<210> 4498
<400> 4498
000
<210> 4499
<400> 4499
000
<210> 4500
<400> 4500
000
<210> 4501
<400> 4501
000
<210> 4502
<400> 4502
000
<210> 4503
<400> 4503
000
<210> 4504
<400> 4504
000
<210> 4505
<400> 4505
000
<210> 4506
<400> 4506
000
<210> 4507
<400> 4507
000
<210> 4508
<400> 4508
000
<210> 4509
<400> 4509
000
<210> 4510
<400> 4510
000
<210> 4511
<400> 4511
000
<210> 4512
<400> 4512
000
<210> 4513
<400> 4513
000
<210> 4514
<400> 4514
000
<210> 4515
<400> 4515
000
<210> 4516
<400> 4516
000
<210> 4517
<400> 4517
000
<210> 4518
<400> 4518
000
<210> 4519
<400> 4519
000
<210> 4520
<400> 4520
000
<210> 4521
<400> 4521
000
<210> 4522
<400> 4522
000
<210> 4523
<400> 4523
000
<210> 4524
<400> 4524
000
<210> 4525
<400> 4525
000
<210> 4526
<400> 4526
000
<210> 4527
<400> 4527
000
<210> 4528
<400> 4528
000
<210> 4529
<400> 4529
000
<210> 4530
<400> 4530
000
<210> 4531
<400> 4531
000
<210> 4532
<400> 4532
000
<210> 4533
<400> 4533
000
<210> 4534
<400> 4534
000
<210> 4535
<400> 4535
000
<210> 4536
<400> 4536
000
<210> 4537
<400> 4537
000
<210> 4538
<400> 4538
000
<210> 4539
<400> 4539
000
<210> 4540
<400> 4540
000
<210> 4541
<400> 4541
000
<210> 4542
<400> 4542
000
<210> 4543
<400> 4543
000
<210> 4544
<400> 4544
000
<210> 4545
<400> 4545
000
<210> 4546
<400> 4546
000
<210> 4547
<400> 4547
000
<210> 4548
<400> 4548
000
<210> 4549
<400> 4549
000
<210> 4550
<400> 4550
000
<210> 4551
<400> 4551
000
<210> 4552
<400> 4552
000
<210> 4553
<400> 4553
000
<210> 4554
<400> 4554
000
<210> 4555
<400> 4555
000
<210> 4556
<400> 4556
000
<210> 4557
<400> 4557
000
<210> 4558
<400> 4558
000
<210> 4559
<400> 4559
000
<210> 4560
<400> 4560
000
<210> 4561
<400> 4561
000
<210> 4562
<400> 4562
000
<210> 4563
<400> 4563
000
<210> 4564
<400> 4564
000
<210> 4565
<400> 4565
000
<210> 4566
<400> 4566
000
<210> 4567
<400> 4567
000
<210> 4568
<400> 4568
000
<210> 4569
<400> 4569
000
<210> 4570
<400> 4570
000
<210> 4571
<400> 4571
000
<210> 4572
<400> 4572
000
<210> 4573
<400> 4573
000
<210> 4574
<400> 4574
000
<210> 4575
<400> 4575
000
<210> 4576
<400> 4576
000
<210> 4577
<400> 4577
000
<210> 4578
<400> 4578
000
<210> 4579
<400> 4579
000
<210> 4580
<400> 4580
000
<210> 4581
<400> 4581
000
<210> 4582
<400> 4582
000
<210> 4583
<400> 4583
000
<210> 4584
<400> 4584
000
<210> 4585
<400> 4585
000
<210> 4586
<400> 4586
000
<210> 4587
<400> 4587
000
<210> 4588
<400> 4588
000
<210> 4589
<400> 4589
000
<210> 4590
<400> 4590
000
<210> 4591
<400> 4591
000
<210> 4592
<400> 4592
000
<210> 4593
<400> 4593
000
<210> 4594
<400> 4594
000
<210> 4595
<400> 4595
000
<210> 4596
<400> 4596
000
<210> 4597
<400> 4597
000
<210> 4598
<400> 4598
000
<210> 4599
<400> 4599
000
<210> 4600
<400> 4600
000
<210> 4601
<400> 4601
000
<210> 4602
<400> 4602
000
<210> 4603
<400> 4603
000
<210> 4604
<400> 4604
000
<210> 4605
<400> 4605
000
<210> 4606
<400> 4606
000
<210> 4607
<400> 4607
000
<210> 4608
<400> 4608
000
<210> 4609
<400> 4609
000
<210> 4610
<400> 4610
000
<210> 4611
<400> 4611
000
<210> 4612
<400> 4612
000
<210> 4613
<400> 4613
000
<210> 4614
<400> 4614
000
<210> 4615
<400> 4615
000
<210> 4616
<400> 4616
000
<210> 4617
<400> 4617
000
<210> 4618
<400> 4618
000
<210> 4619
<400> 4619
000
<210> 4620
<400> 4620
000
<210> 4621
<400> 4621
000
<210> 4622
<400> 4622
000
<210> 4623
<400> 4623
000
<210> 4624
<400> 4624
000
<210> 4625
<400> 4625
000
<210> 4626
<400> 4626
000
<210> 4627
<400> 4627
000
<210> 4628
<400> 4628
000
<210> 4629
<400> 4629
000
<210> 4630
<400> 4630
000
<210> 4631
<400> 4631
000
<210> 4632
<400> 4632
000
<210> 4633
<400> 4633
000
<210> 4634
<400> 4634
000
<210> 4635
<400> 4635
000
<210> 4636
<400> 4636
000
<210> 4637
<400> 4637
000
<210> 4638
<400> 4638
000
<210> 4639
<400> 4639
000
<210> 4640
<400> 4640
000
<210> 4641
<400> 4641
000
<210> 4642
<400> 4642
000
<210> 4643
<400> 4643
000
<210> 4644
<400> 4644
000
<210> 4645
<400> 4645
000
<210> 4646
<400> 4646
000
<210> 4647
<400> 4647
000
<210> 4648
<400> 4648
000
<210> 4649
<400> 4649
000
<210> 4650
<400> 4650
000
<210> 4651
<400> 4651
000
<210> 4652
<400> 4652
000
<210> 4653
<400> 4653
000
<210> 4654
<400> 4654
000
<210> 4655
<400> 4655
000
<210> 4656
<400> 4656
000
<210> 4657
<400> 4657
000
<210> 4658
<400> 4658
000
<210> 4659
<400> 4659
000
<210> 4660
<400> 4660
000
<210> 4661
<400> 4661
000
<210> 4662
<400> 4662
000
<210> 4663
<400> 4663
000
<210> 4664
<400> 4664
000
<210> 4665
<400> 4665
000
<210> 4666
<400> 4666
000
<210> 4667
<400> 4667
000
<210> 4668
<400> 4668
000
<210> 4669
<400> 4669
000
<210> 4670
<400> 4670
000
<210> 4671
<400> 4671
000
<210> 4672
<400> 4672
000
<210> 4673
<400> 4673
000
<210> 4674
<400> 4674
000
<210> 4675
<400> 4675
000
<210> 4676
<400> 4676
000
<210> 4677
<400> 4677
000
<210> 4678
<400> 4678
000
<210> 4679
<400> 4679
000
<210> 4680
<400> 4680
000
<210> 4681
<400> 4681
000
<210> 4682
<400> 4682
000
<210> 4683
<400> 4683
000
<210> 4684
<400> 4684
000
<210> 4685
<400> 4685
000
<210> 4686
<400> 4686
000
<210> 4687
<400> 4687
000
<210> 4688
<400> 4688
000
<210> 4689
<400> 4689
000
<210> 4690
<400> 4690
000
<210> 4691
<400> 4691
000
<210> 4692
<400> 4692
000
<210> 4693
<400> 4693
000
<210> 4694
<400> 4694
000
<210> 4695
<400> 4695
000
<210> 4696
<400> 4696
000
<210> 4697
<400> 4697
000
<210> 4698
<400> 4698
000
<210> 4699
<400> 4699
000
<210> 4700
<400> 4700
000
<210> 4701
<400> 4701
000
<210> 4702
<400> 4702
000
<210> 4703
<400> 4703
000
<210> 4704
<400> 4704
000
<210> 4705
<400> 4705
000
<210> 4706
<400> 4706
000
<210> 4707
<400> 4707
000
<210> 4708
<400> 4708
000
<210> 4709
<400> 4709
000
<210> 4710
<400> 4710
000
<210> 4711
<400> 4711
000
<210> 4712
<400> 4712
000
<210> 4713
<400> 4713
000
<210> 4714
<400> 4714
000
<210> 4715
<400> 4715
000
<210> 4716
<400> 4716
000
<210> 4717
<400> 4717
000
<210> 4718
<400> 4718
000
<210> 4719
<400> 4719
000
<210> 4720
<400> 4720
000
<210> 4721
<400> 4721
000
<210> 4722
<400> 4722
000
<210> 4723
<400> 4723
000
<210> 4724
<400> 4724
000
<210> 4725
<400> 4725
000
<210> 4726
<400> 4726
000
<210> 4727
<400> 4727
000
<210> 4728
<400> 4728
000
<210> 4729
<400> 4729
000
<210> 4730
<400> 4730
000
<210> 4731
<400> 4731
000
<210> 4732
<400> 4732
000
<210> 4733
<400> 4733
000
<210> 4734
<400> 4734
000
<210> 4735
<400> 4735
000
<210> 4736
<400> 4736
000
<210> 4737
<400> 4737
000
<210> 4738
<400> 4738
000
<210> 4739
<400> 4739
000
<210> 4740
<400> 4740
000
<210> 4741
<400> 4741
000
<210> 4742
<400> 4742
000
<210> 4743
<400> 4743
000
<210> 4744
<400> 4744
000
<210> 4745
<400> 4745
000
<210> 4746
<400> 4746
000
<210> 4747
<400> 4747
000
<210> 4748
<400> 4748
000
<210> 4749
<400> 4749
000
<210> 4750
<400> 4750
000
<210> 4751
<400> 4751
000
<210> 4752
<400> 4752
000
<210> 4753
<400> 4753
000
<210> 4754
<400> 4754
000
<210> 4755
<400> 4755
000
<210> 4756
<400> 4756
000
<210> 4757
<400> 4757
000
<210> 4758
<400> 4758
000
<210> 4759
<400> 4759
000
<210> 4760
<400> 4760
000
<210> 4761
<400> 4761
000
<210> 4762
<400> 4762
000
<210> 4763
<400> 4763
000
<210> 4764
<400> 4764
000
<210> 4765
<400> 4765
000
<210> 4766
<400> 4766
000
<210> 4767
<400> 4767
000
<210> 4768
<400> 4768
000
<210> 4769
<400> 4769
000
<210> 4770
<400> 4770
000
<210> 4771
<400> 4771
000
<210> 4772
<400> 4772
000
<210> 4773
<400> 4773
000
<210> 4774
<400> 4774
000
<210> 4775
<400> 4775
000
<210> 4776
<400> 4776
000
<210> 4777
<400> 4777
000
<210> 4778
<400> 4778
000
<210> 4779
<400> 4779
000
<210> 4780
<400> 4780
000
<210> 4781
<400> 4781
000
<210> 4782
<400> 4782
000
<210> 4783
<400> 4783
000
<210> 4784
<400> 4784
000
<210> 4785
<400> 4785
000
<210> 4786
<400> 4786
000
<210> 4787
<400> 4787
000
<210> 4788
<400> 4788
000
<210> 4789
<400> 4789
000
<210> 4790
<400> 4790
000
<210> 4791
<400> 4791
000
<210> 4792
<400> 4792
000
<210> 4793
<400> 4793
000
<210> 4794
<400> 4794
000
<210> 4795
<400> 4795
000
<210> 4796
<400> 4796
000
<210> 4797
<400> 4797
000
<210> 4798
<400> 4798
000
<210> 4799
<400> 4799
000
<210> 4800
<400> 4800
000
<210> 4801
<400> 4801
000
<210> 4802
<400> 4802
000
<210> 4803
<400> 4803
000
<210> 4804
<400> 4804
000
<210> 4805
<400> 4805
000
<210> 4806
<400> 4806
000
<210> 4807
<400> 4807
000
<210> 4808
<400> 4808
000
<210> 4809
<400> 4809
000
<210> 4810
<400> 4810
000
<210> 4811
<400> 4811
000
<210> 4812
<400> 4812
000
<210> 4813
<400> 4813
000
<210> 4814
<400> 4814
000
<210> 4815
<400> 4815
000
<210> 4816
<400> 4816
000
<210> 4817
<400> 4817
000
<210> 4818
<400> 4818
000
<210> 4819
<400> 4819
000
<210> 4820
<400> 4820
000
<210> 4821
<400> 4821
000
<210> 4822
<400> 4822
000
<210> 4823
<400> 4823
000
<210> 4824
<400> 4824
000
<210> 4825
<400> 4825
000
<210> 4826
<400> 4826
000
<210> 4827
<400> 4827
000
<210> 4828
<400> 4828
000
<210> 4829
<400> 4829
000
<210> 4830
<400> 4830
000
<210> 4831
<400> 4831
000
<210> 4832
<400> 4832
000
<210> 4833
<400> 4833
000
<210> 4834
<400> 4834
000
<210> 4835
<400> 4835
000
<210> 4836
<400> 4836
000
<210> 4837
<400> 4837
000
<210> 4838
<400> 4838
000
<210> 4839
<400> 4839
000
<210> 4840
<400> 4840
000
<210> 4841
<400> 4841
000
<210> 4842
<400> 4842
000
<210> 4843
<400> 4843
000
<210> 4844
<400> 4844
000
<210> 4845
<400> 4845
000
<210> 4846
<400> 4846
000
<210> 4847
<400> 4847
000
<210> 4848
<400> 4848
000
<210> 4849
<400> 4849
000
<210> 4850
<400> 4850
000
<210> 4851
<400> 4851
000
<210> 4852
<400> 4852
000
<210> 4853
<400> 4853
000
<210> 4854
<400> 4854
000
<210> 4855
<400> 4855
000
<210> 4856
<400> 4856
000
<210> 4857
<400> 4857
000
<210> 4858
<400> 4858
000
<210> 4859
<400> 4859
000
<210> 4860
<400> 4860
000
<210> 4861
<400> 4861
000
<210> 4862
<400> 4862
000
<210> 4863
<400> 4863
000
<210> 4864
<400> 4864
000
<210> 4865
<400> 4865
000
<210> 4866
<400> 4866
000
<210> 4867
<400> 4867
000
<210> 4868
<400> 4868
000
<210> 4869
<400> 4869
000
<210> 4870
<400> 4870
000
<210> 4871
<400> 4871
000
<210> 4872
<400> 4872
000
<210> 4873
<400> 4873
000
<210> 4874
<400> 4874
000
<210> 4875
<400> 4875
000
<210> 4876
<400> 4876
000
<210> 4877
<400> 4877
000
<210> 4878
<400> 4878
000
<210> 4879
<400> 4879
000
<210> 4880
<400> 4880
000
<210> 4881
<400> 4881
000
<210> 4882
<400> 4882
000
<210> 4883
<400> 4883
000
<210> 4884
<400> 4884
000
<210> 4885
<400> 4885
000
<210> 4886
<400> 4886
000
<210> 4887
<400> 4887
000
<210> 4888
<400> 4888
000
<210> 4889
<400> 4889
000
<210> 4890
<400> 4890
000
<210> 4891
<400> 4891
000
<210> 4892
<400> 4892
000
<210> 4893
<400> 4893
000
<210> 4894
<400> 4894
000
<210> 4895
<400> 4895
000
<210> 4896
<400> 4896
000
<210> 4897
<400> 4897
000
<210> 4898
<400> 4898
000
<210> 4899
<400> 4899
000
<210> 4900
<400> 4900
000
<210> 4901
<400> 4901
000
<210> 4902
<400> 4902
000
<210> 4903
<400> 4903
000
<210> 4904
<400> 4904
000
<210> 4905
<400> 4905
000
<210> 4906
<400> 4906
000
<210> 4907
<400> 4907
000
<210> 4908
<400> 4908
000
<210> 4909
<400> 4909
000
<210> 4910
<400> 4910
000
<210> 4911
<400> 4911
000
<210> 4912
<400> 4912
000
<210> 4913
<400> 4913
000
<210> 4914
<400> 4914
000
<210> 4915
<400> 4915
000
<210> 4916
<400> 4916
000
<210> 4917
<400> 4917
000
<210> 4918
<400> 4918
000
<210> 4919
<400> 4919
000
<210> 4920
<400> 4920
000
<210> 4921
<400> 4921
000
<210> 4922
<400> 4922
000
<210> 4923
<400> 4923
000
<210> 4924
<400> 4924
000
<210> 4925
<400> 4925
000
<210> 4926
<400> 4926
000
<210> 4927
<400> 4927
000
<210> 4928
<400> 4928
000
<210> 4929
<400> 4929
000
<210> 4930
<400> 4930
000
<210> 4931
<400> 4931
000
<210> 4932
<400> 4932
000
<210> 4933
<400> 4933
000
<210> 4934
<400> 4934
000
<210> 4935
<400> 4935
000
<210> 4936
<400> 4936
000
<210> 4937
<400> 4937
000
<210> 4938
<400> 4938
000
<210> 4939
<400> 4939
000
<210> 4940
<400> 4940
000
<210> 4941
<400> 4941
000
<210> 4942
<400> 4942
000
<210> 4943
<400> 4943
000
<210> 4944
<400> 4944
000
<210> 4945
<400> 4945
000
<210> 4946
<400> 4946
000
<210> 4947
<400> 4947
000
<210> 4948
<400> 4948
000
<210> 4949
<400> 4949
000
<210> 4950
<400> 4950
000
<210> 4951
<400> 4951
000
<210> 4952
<400> 4952
000
<210> 4953
<400> 4953
000
<210> 4954
<400> 4954
000
<210> 4955
<400> 4955
000
<210> 4956
<400> 4956
000
<210> 4957
<400> 4957
000
<210> 4958
<400> 4958
000
<210> 4959
<400> 4959
000
<210> 4960
<400> 4960
000
<210> 4961
<400> 4961
000
<210> 4962
<400> 4962
000
<210> 4963
<400> 4963
000
<210> 4964
<400> 4964
000
<210> 4965
<400> 4965
000
<210> 4966
<400> 4966
000
<210> 4967
<400> 4967
000
<210> 4968
<400> 4968
000
<210> 4969
<400> 4969
000
<210> 4970
<400> 4970
000
<210> 4971
<400> 4971
000
<210> 4972
<400> 4972
000
<210> 4973
<400> 4973
000
<210> 4974
<400> 4974
000
<210> 4975
<400> 4975
000
<210> 4976
<400> 4976
000
<210> 4977
<400> 4977
000
<210> 4978
<400> 4978
000
<210> 4979
<400> 4979
000
<210> 4980
<400> 4980
000
<210> 4981
<400> 4981
000
<210> 4982
<400> 4982
000
<210> 4983
<400> 4983
000
<210> 4984
<400> 4984
000
<210> 4985
<400> 4985
000
<210> 4986
<400> 4986
000
<210> 4987
<400> 4987
000
<210> 4988
<400> 4988
000
<210> 4989
<400> 4989
000
<210> 4990
<400> 4990
000
<210> 4991
<400> 4991
000
<210> 4992
<400> 4992
000
<210> 4993
<400> 4993
000
<210> 4994
<400> 4994
000
<210> 4995
<400> 4995
000
<210> 4996
<400> 4996
000
<210> 4997
<400> 4997
000
<210> 4998
<400> 4998
000
<210> 4999
<400> 4999
000
<210> 5000
<400> 5000
000
<210> 5001
<400> 5001
000
<210> 5002
<400> 5002
000
<210> 5003
<400> 5003
000
<210> 5004
<400> 5004
000
<210> 5005
<400> 5005
000
<210> 5006
<400> 5006
000
<210> 5007
<400> 5007
000
<210> 5008
<400> 5008
000
<210> 5009
<400> 5009
000
<210> 5010
<400> 5010
000
<210> 5011
<400> 5011
000
<210> 5012
<400> 5012
000
<210> 5013
<400> 5013
000
<210> 5014
<400> 5014
000
<210> 5015
<400> 5015
000
<210> 5016
<400> 5016
000
<210> 5017
<400> 5017
000
<210> 5018
<400> 5018
000
<210> 5019
<400> 5019
000
<210> 5020
<400> 5020
000
<210> 5021
<400> 5021
000
<210> 5022
<400> 5022
000
<210> 5023
<400> 5023
000
<210> 5024
<400> 5024
000
<210> 5025
<400> 5025
000
<210> 5026
<400> 5026
000
<210> 5027
<400> 5027
000
<210> 5028
<400> 5028
000
<210> 5029
<400> 5029
000
<210> 5030
<400> 5030
000
<210> 5031
<400> 5031
000
<210> 5032
<400> 5032
000
<210> 5033
<400> 5033
000
<210> 5034
<400> 5034
000
<210> 5035
<400> 5035
000
<210> 5036
<400> 5036
000
<210> 5037
<400> 5037
000
<210> 5038
<400> 5038
000
<210> 5039
<400> 5039
000
<210> 5040
<400> 5040
000
<210> 5041
<400> 5041
000
<210> 5042
<400> 5042
000
<210> 5043
<400> 5043
000
<210> 5044
<400> 5044
000
<210> 5045
<400> 5045
000
<210> 5046
<400> 5046
000
<210> 5047
<400> 5047
000
<210> 5048
<400> 5048
000
<210> 5049
<400> 5049
000
<210> 5050
<400> 5050
000
<210> 5051
<400> 5051
000
<210> 5052
<400> 5052
000
<210> 5053
<400> 5053
000
<210> 5054
<400> 5054
000
<210> 5055
<400> 5055
000
<210> 5056
<400> 5056
000
<210> 5057
<400> 5057
000
<210> 5058
<400> 5058
000
<210> 5059
<400> 5059
000
<210> 5060
<400> 5060
000
<210> 5061
<400> 5061
000
<210> 5062
<400> 5062
000
<210> 5063
<400> 5063
000
<210> 5064
<400> 5064
000
<210> 5065
<400> 5065
000
<210> 5066
<400> 5066
000
<210> 5067
<400> 5067
000
<210> 5068
<400> 5068
000
<210> 5069
<400> 5069
000
<210> 5070
<400> 5070
000
<210> 5071
<400> 5071
000
<210> 5072
<400> 5072
000
<210> 5073
<400> 5073
000
<210> 5074
<400> 5074
000
<210> 5075
<400> 5075
000
<210> 5076
<400> 5076
000
<210> 5077
<400> 5077
000
<210> 5078
<400> 5078
000
<210> 5079
<400> 5079
000
<210> 5080
<400> 5080
000
<210> 5081
<400> 5081
000
<210> 5082
<400> 5082
000
<210> 5083
<400> 5083
000
<210> 5084
<400> 5084
000
<210> 5085
<400> 5085
000
<210> 5086
<400> 5086
000
<210> 5087
<400> 5087
000
<210> 5088
<400> 5088
000
<210> 5089
<400> 5089
000
<210> 5090
<400> 5090
000
<210> 5091
<400> 5091
000
<210> 5092
<400> 5092
000
<210> 5093
<400> 5093
000
<210> 5094
<400> 5094
000
<210> 5095
<400> 5095
000
<210> 5096
<400> 5096
000
<210> 5097
<400> 5097
000
<210> 5098
<400> 5098
000
<210> 5099
<400> 5099
000
<210> 5100
<400> 5100
000
<210> 5101
<400> 5101
000
<210> 5102
<400> 5102
000
<210> 5103
<400> 5103
000
<210> 5104
<400> 5104
000
<210> 5105
<400> 5105
000
<210> 5106
<400> 5106
000
<210> 5107
<400> 5107
000
<210> 5108
<400> 5108
000
<210> 5109
<400> 5109
000
<210> 5110
<400> 5110
000
<210> 5111
<400> 5111
000
<210> 5112
<400> 5112
000
<210> 5113
<400> 5113
000
<210> 5114
<400> 5114
000
<210> 5115
<400> 5115
000
<210> 5116
<400> 5116
000
<210> 5117
<400> 5117
000
<210> 5118
<400> 5118
000
<210> 5119
<400> 5119
000
<210> 5120
<400> 5120
000
<210> 5121
<400> 5121
000
<210> 5122
<400> 5122
000
<210> 5123
<400> 5123
000
<210> 5124
<400> 5124
000
<210> 5125
<400> 5125
000
<210> 5126
<400> 5126
000
<210> 5127
<400> 5127
000
<210> 5128
<400> 5128
000
<210> 5129
<400> 5129
000
<210> 5130
<400> 5130
000
<210> 5131
<400> 5131
000
<210> 5132
<400> 5132
000
<210> 5133
<400> 5133
000
<210> 5134
<400> 5134
000
<210> 5135
<400> 5135
000
<210> 5136
<400> 5136
000
<210> 5137
<400> 5137
000
<210> 5138
<400> 5138
000
<210> 5139
<400> 5139
000
<210> 5140
<400> 5140
000
<210> 5141
<400> 5141
000
<210> 5142
<400> 5142
000
<210> 5143
<400> 5143
000
<210> 5144
<400> 5144
000
<210> 5145
<400> 5145
000
<210> 5146
<400> 5146
000
<210> 5147
<400> 5147
000
<210> 5148
<400> 5148
000
<210> 5149
<400> 5149
000
<210> 5150
<400> 5150
000
<210> 5151
<400> 5151
000
<210> 5152
<400> 5152
000
<210> 5153
<400> 5153
000
<210> 5154
<400> 5154
000
<210> 5155
<400> 5155
000
<210> 5156
<400> 5156
000
<210> 5157
<400> 5157
000
<210> 5158
<400> 5158
000
<210> 5159
<400> 5159
000
<210> 5160
<400> 5160
000
<210> 5161
<400> 5161
000
<210> 5162
<400> 5162
000
<210> 5163
<400> 5163
000
<210> 5164
<400> 5164
000
<210> 5165
<400> 5165
000
<210> 5166
<400> 5166
000
<210> 5167
<400> 5167
000
<210> 5168
<400> 5168
000
<210> 5169
<400> 5169
000
<210> 5170
<400> 5170
000
<210> 5171
<400> 5171
000
<210> 5172
<400> 5172
000
<210> 5173
<400> 5173
000
<210> 5174
<400> 5174
000
<210> 5175
<400> 5175
000
<210> 5176
<400> 5176
000
<210> 5177
<400> 5177
000
<210> 5178
<400> 5178
000
<210> 5179
<400> 5179
000
<210> 5180
<400> 5180
000
<210> 5181
<400> 5181
000
<210> 5182
<400> 5182
000
<210> 5183
<400> 5183
000
<210> 5184
<400> 5184
000
<210> 5185
<400> 5185
000
<210> 5186
<400> 5186
000
<210> 5187
<400> 5187
000
<210> 5188
<400> 5188
000
<210> 5189
<400> 5189
000
<210> 5190
<400> 5190
000
<210> 5191
<400> 5191
000
<210> 5192
<400> 5192
000
<210> 5193
<400> 5193
000
<210> 5194
<400> 5194
000
<210> 5195
<400> 5195
000
<210> 5196
<400> 5196
000
<210> 5197
<400> 5197
000
<210> 5198
<400> 5198
000
<210> 5199
<400> 5199
000
<210> 5200
<400> 5200
000
<210> 5201
<400> 5201
000
<210> 5202
<400> 5202
000
<210> 5203
<400> 5203
000
<210> 5204
<400> 5204
000
<210> 5205
<400> 5205
000
<210> 5206
<400> 5206
000
<210> 5207
<400> 5207
000
<210> 5208
<400> 5208
000
<210> 5209
<400> 5209
000
<210> 5210
<400> 5210
000
<210> 5211
<400> 5211
000
<210> 5212
<400> 5212
000
<210> 5213
<400> 5213
000
<210> 5214
<400> 5214
000
<210> 5215
<400> 5215
000
<210> 5216
<400> 5216
000
<210> 5217
<400> 5217
000
<210> 5218
<400> 5218
000
<210> 5219
<400> 5219
000
<210> 5220
<400> 5220
000
<210> 5221
<400> 5221
000
<210> 5222
<400> 5222
000
<210> 5223
<400> 5223
000
<210> 5224
<400> 5224
000
<210> 5225
<400> 5225
000
<210> 5226
<400> 5226
000
<210> 5227
<400> 5227
000
<210> 5228
<400> 5228
000
<210> 5229
<400> 5229
000
<210> 5230
<400> 5230
000
<210> 5231
<400> 5231
000
<210> 5232
<400> 5232
000
<210> 5233
<400> 5233
000
<210> 5234
<400> 5234
000
<210> 5235
<400> 5235
000
<210> 5236
<400> 5236
000
<210> 5237
<400> 5237
000
<210> 5238
<400> 5238
000
<210> 5239
<400> 5239
000
<210> 5240
<400> 5240
000
<210> 5241
<400> 5241
000
<210> 5242
<400> 5242
000
<210> 5243
<400> 5243
000
<210> 5244
<400> 5244
000
<210> 5245
<400> 5245
000
<210> 5246
<400> 5246
000
<210> 5247
<400> 5247
000
<210> 5248
<400> 5248
000
<210> 5249
<400> 5249
000
<210> 5250
<400> 5250
000
<210> 5251
<400> 5251
000
<210> 5252
<400> 5252
000
<210> 5253
<400> 5253
000
<210> 5254
<400> 5254
000
<210> 5255
<400> 5255
000
<210> 5256
<400> 5256
000
<210> 5257
<400> 5257
000
<210> 5258
<400> 5258
000
<210> 5259
<400> 5259
000
<210> 5260
<400> 5260
000
<210> 5261
<400> 5261
000
<210> 5262
<400> 5262
000
<210> 5263
<400> 5263
000
<210> 5264
<400> 5264
000
<210> 5265
<400> 5265
000
<210> 5266
<400> 5266
000
<210> 5267
<400> 5267
000
<210> 5268
<400> 5268
000
<210> 5269
<400> 5269
000
<210> 5270
<400> 5270
000
<210> 5271
<400> 5271
000
<210> 5272
<400> 5272
000
<210> 5273
<400> 5273
000
<210> 5274
<400> 5274
000
<210> 5275
<400> 5275
000
<210> 5276
<400> 5276
000
<210> 5277
<400> 5277
000
<210> 5278
<400> 5278
000
<210> 5279
<400> 5279
000
<210> 5280
<400> 5280
000
<210> 5281
<400> 5281
000
<210> 5282
<400> 5282
000
<210> 5283
<400> 5283
000
<210> 5284
<400> 5284
000
<210> 5285
<400> 5285
000
<210> 5286
<400> 5286
000
<210> 5287
<400> 5287
000
<210> 5288
<400> 5288
000
<210> 5289
<400> 5289
000
<210> 5290
<400> 5290
000
<210> 5291
<400> 5291
000
<210> 5292
<400> 5292
000
<210> 5293
<400> 5293
000
<210> 5294
<400> 5294
000
<210> 5295
<400> 5295
000
<210> 5296
<400> 5296
000
<210> 5297
<400> 5297
000
<210> 5298
<400> 5298
000
<210> 5299
<400> 5299
000
<210> 5300
<400> 5300
000
<210> 5301
<400> 5301
000
<210> 5302
<400> 5302
000
<210> 5303
<400> 5303
000
<210> 5304
<400> 5304
000
<210> 5305
<400> 5305
000
<210> 5306
<400> 5306
000
<210> 5307
<400> 5307
000
<210> 5308
<400> 5308
000
<210> 5309
<400> 5309
000
<210> 5310
<400> 5310
000
<210> 5311
<400> 5311
000
<210> 5312
<400> 5312
000
<210> 5313
<400> 5313
000
<210> 5314
<400> 5314
000
<210> 5315
<400> 5315
000
<210> 5316
<400> 5316
000
<210> 5317
<400> 5317
000
<210> 5318
<400> 5318
000
<210> 5319
<400> 5319
000
<210> 5320
<400> 5320
000
<210> 5321
<400> 5321
000
<210> 5322
<400> 5322
000
<210> 5323
<400> 5323
000
<210> 5324
<400> 5324
000
<210> 5325
<400> 5325
000
<210> 5326
<400> 5326
000
<210> 5327
<400> 5327
000
<210> 5328
<400> 5328
000
<210> 5329
<400> 5329
000
<210> 5330
<400> 5330
000
<210> 5331
<400> 5331
000
<210> 5332
<400> 5332
000
<210> 5333
<400> 5333
000
<210> 5334
<400> 5334
000
<210> 5335
<400> 5335
000
<210> 5336
<400> 5336
000
<210> 5337
<400> 5337
000
<210> 5338
<400> 5338
000
<210> 5339
<400> 5339
000
<210> 5340
<400> 5340
000
<210> 5341
<400> 5341
000
<210> 5342
<400> 5342
000
<210> 5343
<400> 5343
000
<210> 5344
<400> 5344
000
<210> 5345
<400> 5345
000
<210> 5346
<400> 5346
000
<210> 5347
<400> 5347
000
<210> 5348
<400> 5348
000
<210> 5349
<400> 5349
000
<210> 5350
<400> 5350
000
<210> 5351
<400> 5351
000
<210> 5352
<400> 5352
000
<210> 5353
<400> 5353
000
<210> 5354
<400> 5354
000
<210> 5355
<400> 5355
000
<210> 5356
<400> 5356
000
<210> 5357
<400> 5357
000
<210> 5358
<400> 5358
000
<210> 5359
<400> 5359
000
<210> 5360
<400> 5360
000
<210> 5361
<400> 5361
000
<210> 5362
<400> 5362
000
<210> 5363
<400> 5363
000
<210> 5364
<400> 5364
000
<210> 5365
<400> 5365
000
<210> 5366
<400> 5366
000
<210> 5367
<400> 5367
000
<210> 5368
<400> 5368
000
<210> 5369
<400> 5369
000
<210> 5370
<400> 5370
000
<210> 5371
<400> 5371
000
<210> 5372
<400> 5372
000
<210> 5373
<400> 5373
000
<210> 5374
<400> 5374
000
<210> 5375
<400> 5375
000
<210> 5376
<400> 5376
000
<210> 5377
<400> 5377
000
<210> 5378
<400> 5378
000
<210> 5379
<400> 5379
000
<210> 5380
<400> 5380
000
<210> 5381
<400> 5381
000
<210> 5382
<400> 5382
000
<210> 5383
<400> 5383
000
<210> 5384
<400> 5384
000
<210> 5385
<400> 5385
000
<210> 5386
<400> 5386
000
<210> 5387
<400> 5387
000
<210> 5388
<400> 5388
000
<210> 5389
<400> 5389
000
<210> 5390
<400> 5390
000
<210> 5391
<400> 5391
000
<210> 5392
<400> 5392
000
<210> 5393
<400> 5393
000
<210> 5394
<400> 5394
000
<210> 5395
<400> 5395
000
<210> 5396
<400> 5396
000
<210> 5397
<400> 5397
000
<210> 5398
<400> 5398
000
<210> 5399
<400> 5399
000
<210> 5400
<400> 5400
000
<210> 5401
<400> 5401
000
<210> 5402
<400> 5402
000
<210> 5403
<400> 5403
000
<210> 5404
<400> 5404
000
<210> 5405
<400> 5405
000
<210> 5406
<400> 5406
000
<210> 5407
<400> 5407
000
<210> 5408
<400> 5408
000
<210> 5409
<400> 5409
000
<210> 5410
<400> 5410
000
<210> 5411
<400> 5411
000
<210> 5412
<400> 5412
000
<210> 5413
<400> 5413
000
<210> 5414
<400> 5414
000
<210> 5415
<400> 5415
000
<210> 5416
<400> 5416
000
<210> 5417
<400> 5417
000
<210> 5418
<400> 5418
000
<210> 5419
<400> 5419
000
<210> 5420
<400> 5420
000
<210> 5421
<400> 5421
000
<210> 5422
<400> 5422
000
<210> 5423
<400> 5423
000
<210> 5424
<400> 5424
000
<210> 5425
<400> 5425
000
<210> 5426
<400> 5426
000
<210> 5427
<400> 5427
000
<210> 5428
<400> 5428
000
<210> 5429
<400> 5429
000
<210> 5430
<400> 5430
000
<210> 5431
<400> 5431
000
<210> 5432
<400> 5432
000
<210> 5433
<400> 5433
000
<210> 5434
<400> 5434
000
<210> 5435
<400> 5435
000
<210> 5436
<400> 5436
000
<210> 5437
<400> 5437
000
<210> 5438
<400> 5438
000
<210> 5439
<400> 5439
000
<210> 5440
<400> 5440
000
<210> 5441
<400> 5441
000
<210> 5442
<400> 5442
000
<210> 5443
<400> 5443
000
<210> 5444
<400> 5444
000
<210> 5445
<400> 5445
000
<210> 5446
<400> 5446
000
<210> 5447
<400> 5447
000
<210> 5448
<400> 5448
000
<210> 5449
<400> 5449
000
<210> 5450
<400> 5450
000
<210> 5451
<400> 5451
000
<210> 5452
<400> 5452
000
<210> 5453
<400> 5453
000
<210> 5454
<400> 5454
000
<210> 5455
<400> 5455
000
<210> 5456
<400> 5456
000
<210> 5457
<400> 5457
000
<210> 5458
<400> 5458
000
<210> 5459
<400> 5459
000
<210> 5460
<400> 5460
000
<210> 5461
<400> 5461
000
<210> 5462
<400> 5462
000
<210> 5463
<400> 5463
000
<210> 5464
<400> 5464
000
<210> 5465
<400> 5465
000
<210> 5466
<400> 5466
000
<210> 5467
<400> 5467
000
<210> 5468
<400> 5468
000
<210> 5469
<400> 5469
000
<210> 5470
<400> 5470
000
<210> 5471
<400> 5471
000
<210> 5472
<400> 5472
000
<210> 5473
<400> 5473
000
<210> 5474
<400> 5474
000
<210> 5475
<400> 5475
000
<210> 5476
<400> 5476
000
<210> 5477
<400> 5477
000
<210> 5478
<400> 5478
000
<210> 5479
<400> 5479
000
<210> 5480
<400> 5480
000
<210> 5481
<400> 5481
000
<210> 5482
<400> 5482
000
<210> 5483
<400> 5483
000
<210> 5484
<400> 5484
000
<210> 5485
<400> 5485
000
<210> 5486
<400> 5486
000
<210> 5487
<400> 5487
000
<210> 5488
<400> 5488
000
<210> 5489
<400> 5489
000
<210> 5490
<400> 5490
000
<210> 5491
<400> 5491
000
<210> 5492
<400> 5492
000
<210> 5493
<400> 5493
000
<210> 5494
<400> 5494
000
<210> 5495
<400> 5495
000
<210> 5496
<400> 5496
000
<210> 5497
<400> 5497
000
<210> 5498
<400> 5498
000
<210> 5499
<400> 5499
000
<210> 5500
<400> 5500
000
<210> 5501
<400> 5501
000
<210> 5502
<400> 5502
000
<210> 5503
<400> 5503
000
<210> 5504
<400> 5504
000
<210> 5505
<400> 5505
000
<210> 5506
<400> 5506
000
<210> 5507
<400> 5507
000
<210> 5508
<400> 5508
000
<210> 5509
<400> 5509
000
<210> 5510
<400> 5510
000
<210> 5511
<400> 5511
000
<210> 5512
<400> 5512
000
<210> 5513
<400> 5513
000
<210> 5514
<400> 5514
000
<210> 5515
<400> 5515
000
<210> 5516
<400> 5516
000
<210> 5517
<400> 5517
000
<210> 5518
<400> 5518
000
<210> 5519
<400> 5519
000
<210> 5520
<400> 5520
000
<210> 5521
<400> 5521
000
<210> 5522
<400> 5522
000
<210> 5523
<400> 5523
000
<210> 5524
<400> 5524
000
<210> 5525
<400> 5525
000
<210> 5526
<400> 5526
000
<210> 5527
<400> 5527
000
<210> 5528
<400> 5528
000
<210> 5529
<400> 5529
000
<210> 5530
<400> 5530
000
<210> 5531
<400> 5531
000
<210> 5532
<400> 5532
000
<210> 5533
<400> 5533
000
<210> 5534
<400> 5534
000
<210> 5535
<400> 5535
000
<210> 5536
<400> 5536
000
<210> 5537
<400> 5537
000
<210> 5538
<400> 5538
000
<210> 5539
<400> 5539
000
<210> 5540
<400> 5540
000
<210> 5541
<400> 5541
000
<210> 5542
<400> 5542
000
<210> 5543
<400> 5543
000
<210> 5544
<400> 5544
000
<210> 5545
<400> 5545
000
<210> 5546
<400> 5546
000
<210> 5547
<400> 5547
000
<210> 5548
<400> 5548
000
<210> 5549
<400> 5549
000
<210> 5550
<400> 5550
000
<210> 5551
<400> 5551
000
<210> 5552
<400> 5552
000
<210> 5553
<400> 5553
000
<210> 5554
<400> 5554
000
<210> 5555
<400> 5555
000
<210> 5556
<400> 5556
000
<210> 5557
<400> 5557
000
<210> 5558
<400> 5558
000
<210> 5559
<400> 5559
000
<210> 5560
<400> 5560
000
<210> 5561
<400> 5561
000
<210> 5562
<400> 5562
000
<210> 5563
<400> 5563
000
<210> 5564
<400> 5564
000
<210> 5565
<400> 5565
000
<210> 5566
<400> 5566
000
<210> 5567
<400> 5567
000
<210> 5568
<400> 5568
000
<210> 5569
<400> 5569
000
<210> 5570
<400> 5570
000
<210> 5571
<400> 5571
000
<210> 5572
<400> 5572
000
<210> 5573
<400> 5573
000
<210> 5574
<400> 5574
000
<210> 5575
<400> 5575
000
<210> 5576
<400> 5576
000
<210> 5577
<400> 5577
000
<210> 5578
<400> 5578
000
<210> 5579
<400> 5579
000
<210> 5580
<400> 5580
000
<210> 5581
<400> 5581
000
<210> 5582
<400> 5582
000
<210> 5583
<400> 5583
000
<210> 5584
<400> 5584
000
<210> 5585
<400> 5585
000
<210> 5586
<400> 5586
000
<210> 5587
<400> 5587
000
<210> 5588
<400> 5588
000
<210> 5589
<400> 5589
000
<210> 5590
<400> 5590
000
<210> 5591
<400> 5591
000
<210> 5592
<400> 5592
000
<210> 5593
<400> 5593
000
<210> 5594
<400> 5594
000
<210> 5595
<400> 5595
000
<210> 5596
<400> 5596
000
<210> 5597
<400> 5597
000
<210> 5598
<400> 5598
000
<210> 5599
<400> 5599
000
<210> 5600
<400> 5600
000
<210> 5601
<400> 5601
000
<210> 5602
<400> 5602
000
<210> 5603
<400> 5603
000
<210> 5604
<400> 5604
000
<210> 5605
<400> 5605
000
<210> 5606
<400> 5606
000
<210> 5607
<400> 5607
000
<210> 5608
<400> 5608
000
<210> 5609
<400> 5609
000
<210> 5610
<400> 5610
000
<210> 5611
<400> 5611
000
<210> 5612
<400> 5612
000
<210> 5613
<400> 5613
000
<210> 5614
<400> 5614
000
<210> 5615
<400> 5615
000
<210> 5616
<400> 5616
000
<210> 5617
<400> 5617
000
<210> 5618
<400> 5618
000
<210> 5619
<400> 5619
000
<210> 5620
<400> 5620
000
<210> 5621
<400> 5621
000
<210> 5622
<400> 5622
000
<210> 5623
<400> 5623
000
<210> 5624
<400> 5624
000
<210> 5625
<400> 5625
000
<210> 5626
<400> 5626
000
<210> 5627
<400> 5627
000
<210> 5628
<400> 5628
000
<210> 5629
<400> 5629
000
<210> 5630
<400> 5630
000
<210> 5631
<400> 5631
000
<210> 5632
<400> 5632
000
<210> 5633
<400> 5633
000
<210> 5634
<400> 5634
000
<210> 5635
<400> 5635
000
<210> 5636
<400> 5636
000
<210> 5637
<400> 5637
000
<210> 5638
<400> 5638
000
<210> 5639
<400> 5639
000
<210> 5640
<400> 5640
000
<210> 5641
<400> 5641
000
<210> 5642
<400> 5642
000
<210> 5643
<400> 5643
000
<210> 5644
<400> 5644
000
<210> 5645
<400> 5645
000
<210> 5646
<400> 5646
000
<210> 5647
<400> 5647
000
<210> 5648
<400> 5648
000
<210> 5649
<400> 5649
000
<210> 5650
<400> 5650
000
<210> 5651
<400> 5651
000
<210> 5652
<400> 5652
000
<210> 5653
<400> 5653
000
<210> 5654
<400> 5654
000
<210> 5655
<400> 5655
000
<210> 5656
<400> 5656
000
<210> 5657
<400> 5657
000
<210> 5658
<400> 5658
000
<210> 5659
<400> 5659
000
<210> 5660
<400> 5660
000
<210> 5661
<400> 5661
000
<210> 5662
<400> 5662
000
<210> 5663
<400> 5663
000
<210> 5664
<400> 5664
000
<210> 5665
<400> 5665
000
<210> 5666
<400> 5666
000
<210> 5667
<400> 5667
000
<210> 5668
<400> 5668
000
<210> 5669
<400> 5669
000
<210> 5670
<400> 5670
000
<210> 5671
<400> 5671
000
<210> 5672
<400> 5672
000
<210> 5673
<400> 5673
000
<210> 5674
<400> 5674
000
<210> 5675
<400> 5675
000
<210> 5676
<400> 5676
000
<210> 5677
<400> 5677
000
<210> 5678
<400> 5678
000
<210> 5679
<400> 5679
000
<210> 5680
<400> 5680
000
<210> 5681
<400> 5681
000
<210> 5682
<400> 5682
000
<210> 5683
<400> 5683
000
<210> 5684
<400> 5684
000
<210> 5685
<400> 5685
000
<210> 5686
<400> 5686
000
<210> 5687
<400> 5687
000
<210> 5688
<400> 5688
000
<210> 5689
<400> 5689
000
<210> 5690
<400> 5690
000
<210> 5691
<400> 5691
000
<210> 5692
<400> 5692
000
<210> 5693
<400> 5693
000
<210> 5694
<400> 5694
000
<210> 5695
<400> 5695
000
<210> 5696
<400> 5696
000
<210> 5697
<400> 5697
000
<210> 5698
<400> 5698
000
<210> 5699
<400> 5699
000
<210> 5700
<400> 5700
000
<210> 5701
<400> 5701
000
<210> 5702
<400> 5702
000
<210> 5703
<400> 5703
000
<210> 5704
<400> 5704
000
<210> 5705
<400> 5705
000
<210> 5706
<400> 5706
000
<210> 5707
<400> 5707
000
<210> 5708
<400> 5708
000
<210> 5709
<400> 5709
000
<210> 5710
<400> 5710
000
<210> 5711
<400> 5711
000
<210> 5712
<400> 5712
000
<210> 5713
<400> 5713
000
<210> 5714
<400> 5714
000
<210> 5715
<400> 5715
000
<210> 5716
<400> 5716
000
<210> 5717
<400> 5717
000
<210> 5718
<400> 5718
000
<210> 5719
<400> 5719
000
<210> 5720
<400> 5720
000
<210> 5721
<400> 5721
000
<210> 5722
<400> 5722
000
<210> 5723
<400> 5723
000
<210> 5724
<400> 5724
000
<210> 5725
<400> 5725
000
<210> 5726
<400> 5726
000
<210> 5727
<400> 5727
000
<210> 5728
<400> 5728
000
<210> 5729
<400> 5729
000
<210> 5730
<400> 5730
000
<210> 5731
<400> 5731
000
<210> 5732
<400> 5732
000
<210> 5733
<400> 5733
000
<210> 5734
<400> 5734
000
<210> 5735
<400> 5735
000
<210> 5736
<400> 5736
000
<210> 5737
<400> 5737
000
<210> 5738
<400> 5738
000
<210> 5739
<400> 5739
000
<210> 5740
<400> 5740
000
<210> 5741
<400> 5741
000
<210> 5742
<400> 5742
000
<210> 5743
<400> 5743
000
<210> 5744
<400> 5744
000
<210> 5745
<400> 5745
000
<210> 5746
<400> 5746
000
<210> 5747
<400> 5747
000
<210> 5748
<400> 5748
000
<210> 5749
<400> 5749
000
<210> 5750
<400> 5750
000
<210> 5751
<400> 5751
000
<210> 5752
<400> 5752
000
<210> 5753
<400> 5753
000
<210> 5754
<400> 5754
000
<210> 5755
<400> 5755
000
<210> 5756
<400> 5756
000
<210> 5757
<400> 5757
000
<210> 5758
<400> 5758
000
<210> 5759
<400> 5759
000
<210> 5760
<400> 5760
000
<210> 5761
<400> 5761
000
<210> 5762
<400> 5762
000
<210> 5763
<400> 5763
000
<210> 5764
<400> 5764
000
<210> 5765
<400> 5765
000
<210> 5766
<400> 5766
000
<210> 5767
<400> 5767
000
<210> 5768
<400> 5768
000
<210> 5769
<400> 5769
000
<210> 5770
<400> 5770
000
<210> 5771
<400> 5771
000
<210> 5772
<400> 5772
000
<210> 5773
<400> 5773
000
<210> 5774
<400> 5774
000
<210> 5775
<400> 5775
000
<210> 5776
<400> 5776
000
<210> 5777
<400> 5777
000
<210> 5778
<400> 5778
000
<210> 5779
<400> 5779
000
<210> 5780
<400> 5780
000
<210> 5781
<400> 5781
000
<210> 5782
<400> 5782
000
<210> 5783
<400> 5783
000
<210> 5784
<400> 5784
000
<210> 5785
<400> 5785
000
<210> 5786
<400> 5786
000
<210> 5787
<400> 5787
000
<210> 5788
<400> 5788
000
<210> 5789
<400> 5789
000
<210> 5790
<400> 5790
000
<210> 5791
<400> 5791
000
<210> 5792
<400> 5792
000
<210> 5793
<400> 5793
000
<210> 5794
<400> 5794
000
<210> 5795
<400> 5795
000
<210> 5796
<400> 5796
000
<210> 5797
<400> 5797
000
<210> 5798
<400> 5798
000
<210> 5799
<400> 5799
000
<210> 5800
<400> 5800
000
<210> 5801
<400> 5801
000
<210> 5802
<400> 5802
000
<210> 5803
<400> 5803
000
<210> 5804
<400> 5804
000
<210> 5805
<400> 5805
000
<210> 5806
<400> 5806
000
<210> 5807
<400> 5807
000
<210> 5808
<400> 5808
000
<210> 5809
<400> 5809
000
<210> 5810
<400> 5810
000
<210> 5811
<400> 5811
000
<210> 5812
<400> 5812
000
<210> 5813
<400> 5813
000
<210> 5814
<400> 5814
000
<210> 5815
<400> 5815
000
<210> 5816
<400> 5816
000
<210> 5817
<400> 5817
000
<210> 5818
<400> 5818
000
<210> 5819
<400> 5819
000
<210> 5820
<400> 5820
000
<210> 5821
<400> 5821
000
<210> 5822
<400> 5822
000
<210> 5823
<400> 5823
000
<210> 5824
<400> 5824
000
<210> 5825
<400> 5825
000
<210> 5826
<400> 5826
000
<210> 5827
<400> 5827
000
<210> 5828
<400> 5828
000
<210> 5829
<400> 5829
000
<210> 5830
<400> 5830
000
<210> 5831
<400> 5831
000
<210> 5832
<400> 5832
000
<210> 5833
<400> 5833
000
<210> 5834
<400> 5834
000
<210> 5835
<400> 5835
000
<210> 5836
<400> 5836
000
<210> 5837
<400> 5837
000
<210> 5838
<400> 5838
000
<210> 5839
<400> 5839
000
<210> 5840
<400> 5840
000
<210> 5841
<400> 5841
000
<210> 5842
<400> 5842
000
<210> 5843
<400> 5843
000
<210> 5844
<400> 5844
000
<210> 5845
<400> 5845
000
<210> 5846
<400> 5846
000
<210> 5847
<400> 5847
000
<210> 5848
<400> 5848
000
<210> 5849
<400> 5849
000
<210> 5850
<400> 5850
000
<210> 5851
<400> 5851
000
<210> 5852
<400> 5852
000
<210> 5853
<400> 5853
000
<210> 5854
<400> 5854
000
<210> 5855
<400> 5855
000
<210> 5856
<400> 5856
000
<210> 5857
<400> 5857
000
<210> 5858
<400> 5858
000
<210> 5859
<400> 5859
000
<210> 5860
<400> 5860
000
<210> 5861
<400> 5861
000
<210> 5862
<400> 5862
000
<210> 5863
<400> 5863
000
<210> 5864
<400> 5864
000
<210> 5865
<400> 5865
000
<210> 5866
<400> 5866
000
<210> 5867
<400> 5867
000
<210> 5868
<400> 5868
000
<210> 5869
<400> 5869
000
<210> 5870
<400> 5870
000
<210> 5871
<400> 5871
000
<210> 5872
<400> 5872
000
<210> 5873
<400> 5873
000
<210> 5874
<400> 5874
000
<210> 5875
<400> 5875
000
<210> 5876
<400> 5876
000
<210> 5877
<400> 5877
000
<210> 5878
<400> 5878
000
<210> 5879
<400> 5879
000
<210> 5880
<400> 5880
000
<210> 5881
<400> 5881
000
<210> 5882
<400> 5882
000
<210> 5883
<400> 5883
000
<210> 5884
<400> 5884
000
<210> 5885
<400> 5885
000
<210> 5886
<400> 5886
000
<210> 5887
<400> 5887
000
<210> 5888
<400> 5888
000
<210> 5889
<400> 5889
000
<210> 5890
<400> 5890
000
<210> 5891
<400> 5891
000
<210> 5892
<400> 5892
000
<210> 5893
<400> 5893
000
<210> 5894
<400> 5894
000
<210> 5895
<400> 5895
000
<210> 5896
<400> 5896
000
<210> 5897
<400> 5897
000
<210> 5898
<400> 5898
000
<210> 5899
<400> 5899
000
<210> 5900
<400> 5900
000
<210> 5901
<400> 5901
000
<210> 5902
<400> 5902
000
<210> 5903
<400> 5903
000
<210> 5904
<400> 5904
000
<210> 5905
<400> 5905
000
<210> 5906
<400> 5906
000
<210> 5907
<400> 5907
000
<210> 5908
<400> 5908
000
<210> 5909
<400> 5909
000
<210> 5910
<400> 5910
000
<210> 5911
<400> 5911
000
<210> 5912
<400> 5912
000
<210> 5913
<400> 5913
000
<210> 5914
<400> 5914
000
<210> 5915
<400> 5915
000
<210> 5916
<400> 5916
000
<210> 5917
<400> 5917
000
<210> 5918
<400> 5918
000
<210> 5919
<400> 5919
000
<210> 5920
<400> 5920
000
<210> 5921
<400> 5921
000
<210> 5922
<400> 5922
000
<210> 5923
<400> 5923
000
<210> 5924
<400> 5924
000
<210> 5925
<400> 5925
000
<210> 5926
<400> 5926
000
<210> 5927
<400> 5927
000
<210> 5928
<400> 5928
000
<210> 5929
<400> 5929
000
<210> 5930
<400> 5930
000
<210> 5931
<400> 5931
000
<210> 5932
<400> 5932
000
<210> 5933
<400> 5933
000
<210> 5934
<400> 5934
000
<210> 5935
<400> 5935
000
<210> 5936
<400> 5936
000
<210> 5937
<400> 5937
000
<210> 5938
<400> 5938
000
<210> 5939
<400> 5939
000
<210> 5940
<400> 5940
000
<210> 5941
<400> 5941
000
<210> 5942
<400> 5942
000
<210> 5943
<400> 5943
000
<210> 5944
<400> 5944
000
<210> 5945
<400> 5945
000
<210> 5946
<400> 5946
000
<210> 5947
<400> 5947
000
<210> 5948
<400> 5948
000
<210> 5949
<400> 5949
000
<210> 5950
<400> 5950
000
<210> 5951
<400> 5951
000
<210> 5952
<400> 5952
000
<210> 5953
<400> 5953
000
<210> 5954
<400> 5954
000
<210> 5955
<400> 5955
000
<210> 5956
<400> 5956
000
<210> 5957
<400> 5957
000
<210> 5958
<400> 5958
000
<210> 5959
<400> 5959
000
<210> 5960
<400> 5960
000
<210> 5961
<400> 5961
000
<210> 5962
<400> 5962
000
<210> 5963
<400> 5963
000
<210> 5964
<400> 5964
000
<210> 5965
<400> 5965
000
<210> 5966
<400> 5966
000
<210> 5967
<400> 5967
000
<210> 5968
<400> 5968
000
<210> 5969
<400> 5969
000
<210> 5970
<400> 5970
000
<210> 5971
<400> 5971
000
<210> 5972
<400> 5972
000
<210> 5973
<400> 5973
000
<210> 5974
<400> 5974
000
<210> 5975
<400> 5975
000
<210> 5976
<400> 5976
000
<210> 5977
<400> 5977
000
<210> 5978
<400> 5978
000
<210> 5979
<400> 5979
000
<210> 5980
<400> 5980
000
<210> 5981
<400> 5981
000
<210> 5982
<400> 5982
000
<210> 5983
<400> 5983
000
<210> 5984
<400> 5984
000
<210> 5985
<400> 5985
000
<210> 5986
<400> 5986
000
<210> 5987
<400> 5987
000
<210> 5988
<400> 5988
000
<210> 5989
<400> 5989
000
<210> 5990
<400> 5990
000
<210> 5991
<400> 5991
000
<210> 5992
<400> 5992
000
<210> 5993
<400> 5993
000
<210> 5994
<400> 5994
000
<210> 5995
<400> 5995
000
<210> 5996
<400> 5996
000
<210> 5997
<400> 5997
000
<210> 5998
<400> 5998
000
<210> 5999
<400> 5999
000
<210> 6000
<400> 6000
000
<210> 6001
<400> 6001
000
<210> 6002
<400> 6002
000
<210> 6003
<400> 6003
000
<210> 6004
<400> 6004
000
<210> 6005
<400> 6005
000
<210> 6006
<400> 6006
000
<210> 6007
<400> 6007
000
<210> 6008
<400> 6008
000
<210> 6009
<400> 6009
000
<210> 6010
<400> 6010
000
<210> 6011
<400> 6011
000
<210> 6012
<400> 6012
000
<210> 6013
<400> 6013
000
<210> 6014
<400> 6014
000
<210> 6015
<400> 6015
000
<210> 6016
<400> 6016
000
<210> 6017
<400> 6017
000
<210> 6018
<400> 6018
000
<210> 6019
<400> 6019
000
<210> 6020
<400> 6020
000
<210> 6021
<400> 6021
000
<210> 6022
<400> 6022
000
<210> 6023
<400> 6023
000
<210> 6024
<400> 6024
000
<210> 6025
<400> 6025
000
<210> 6026
<400> 6026
000
<210> 6027
<400> 6027
000
<210> 6028
<400> 6028
000
<210> 6029
<400> 6029
000
<210> 6030
<400> 6030
000
<210> 6031
<400> 6031
000
<210> 6032
<400> 6032
000
<210> 6033
<400> 6033
000
<210> 6034
<400> 6034
000
<210> 6035
<400> 6035
000
<210> 6036
<400> 6036
000
<210> 6037
<400> 6037
000
<210> 6038
<400> 6038
000
<210> 6039
<400> 6039
000
<210> 6040
<400> 6040
000
<210> 6041
<400> 6041
000
<210> 6042
<400> 6042
000
<210> 6043
<400> 6043
000
<210> 6044
<400> 6044
000
<210> 6045
<400> 6045
000
<210> 6046
<400> 6046
000
<210> 6047
<400> 6047
000
<210> 6048
<400> 6048
000
<210> 6049
<400> 6049
000
<210> 6050
<400> 6050
000
<210> 6051
<400> 6051
000
<210> 6052
<400> 6052
000
<210> 6053
<400> 6053
000
<210> 6054
<400> 6054
000
<210> 6055
<400> 6055
000
<210> 6056
<400> 6056
000
<210> 6057
<400> 6057
000
<210> 6058
<400> 6058
000
<210> 6059
<400> 6059
000
<210> 6060
<400> 6060
000
<210> 6061
<400> 6061
000
<210> 6062
<400> 6062
000
<210> 6063
<400> 6063
000
<210> 6064
<400> 6064
000
<210> 6065
<400> 6065
000
<210> 6066
<400> 6066
000
<210> 6067
<400> 6067
000
<210> 6068
<400> 6068
000
<210> 6069
<400> 6069
000
<210> 6070
<400> 6070
000
<210> 6071
<400> 6071
000
<210> 6072
<400> 6072
000
<210> 6073
<400> 6073
000
<210> 6074
<400> 6074
000
<210> 6075
<400> 6075
000
<210> 6076
<400> 6076
000
<210> 6077
<400> 6077
000
<210> 6078
<400> 6078
000
<210> 6079
<400> 6079
000
<210> 6080
<400> 6080
000
<210> 6081
<400> 6081
000
<210> 6082
<400> 6082
000
<210> 6083
<400> 6083
000
<210> 6084
<400> 6084
000
<210> 6085
<400> 6085
000
<210> 6086
<400> 6086
000
<210> 6087
<400> 6087
000
<210> 6088
<400> 6088
000
<210> 6089
<400> 6089
000
<210> 6090
<400> 6090
000
<210> 6091
<400> 6091
000
<210> 6092
<400> 6092
000
<210> 6093
<400> 6093
000
<210> 6094
<400> 6094
000
<210> 6095
<400> 6095
000
<210> 6096
<400> 6096
000
<210> 6097
<400> 6097
000
<210> 6098
<400> 6098
000
<210> 6099
<400> 6099
000
<210> 6100
<400> 6100
000
<210> 6101
<400> 6101
000
<210> 6102
<400> 6102
000
<210> 6103
<400> 6103
000
<210> 6104
<400> 6104
000
<210> 6105
<400> 6105
000
<210> 6106
<400> 6106
000
<210> 6107
<400> 6107
000
<210> 6108
<400> 6108
000
<210> 6109
<400> 6109
000
<210> 6110
<400> 6110
000
<210> 6111
<400> 6111
000
<210> 6112
<400> 6112
000
<210> 6113
<400> 6113
000
<210> 6114
<400> 6114
000
<210> 6115
<400> 6115
000
<210> 6116
<400> 6116
000
<210> 6117
<400> 6117
000
<210> 6118
<400> 6118
000
<210> 6119
<400> 6119
000
<210> 6120
<400> 6120
000
<210> 6121
<400> 6121
000
<210> 6122
<400> 6122
000
<210> 6123
<400> 6123
000
<210> 6124
<400> 6124
000
<210> 6125
<400> 6125
000
<210> 6126
<400> 6126
000
<210> 6127
<400> 6127
000
<210> 6128
<400> 6128
000
<210> 6129
<400> 6129
000
<210> 6130
<400> 6130
000
<210> 6131
<400> 6131
000
<210> 6132
<400> 6132
000
<210> 6133
<400> 6133
000
<210> 6134
<400> 6134
000
<210> 6135
<400> 6135
000
<210> 6136
<400> 6136
000
<210> 6137
<400> 6137
000
<210> 6138
<400> 6138
000
<210> 6139
<400> 6139
000
<210> 6140
<400> 6140
000
<210> 6141
<400> 6141
000
<210> 6142
<400> 6142
000
<210> 6143
<400> 6143
000
<210> 6144
<400> 6144
000
<210> 6145
<400> 6145
000
<210> 6146
<400> 6146
000
<210> 6147
<400> 6147
000
<210> 6148
<400> 6148
000
<210> 6149
<400> 6149
000
<210> 6150
<400> 6150
000
<210> 6151
<400> 6151
000
<210> 6152
<400> 6152
000
<210> 6153
<400> 6153
000
<210> 6154
<400> 6154
000
<210> 6155
<400> 6155
000
<210> 6156
<400> 6156
000
<210> 6157
<400> 6157
000
<210> 6158
<400> 6158
000
<210> 6159
<400> 6159
000
<210> 6160
<400> 6160
000
<210> 6161
<400> 6161
000
<210> 6162
<400> 6162
000
<210> 6163
<400> 6163
000
<210> 6164
<400> 6164
000
<210> 6165
<400> 6165
000
<210> 6166
<400> 6166
000
<210> 6167
<400> 6167
000
<210> 6168
<400> 6168
000
<210> 6169
<400> 6169
000
<210> 6170
<400> 6170
000
<210> 6171
<400> 6171
000
<210> 6172
<400> 6172
000
<210> 6173
<400> 6173
000
<210> 6174
<400> 6174
000
<210> 6175
<400> 6175
000
<210> 6176
<400> 6176
000
<210> 6177
<400> 6177
000
<210> 6178
<400> 6178
000
<210> 6179
<400> 6179
000
<210> 6180
<400> 6180
000
<210> 6181
<400> 6181
000
<210> 6182
<400> 6182
000
<210> 6183
<400> 6183
000
<210> 6184
<400> 6184
000
<210> 6185
<400> 6185
000
<210> 6186
<400> 6186
000
<210> 6187
<400> 6187
000
<210> 6188
<400> 6188
000
<210> 6189
<400> 6189
000
<210> 6190
<400> 6190
000
<210> 6191
<400> 6191
000
<210> 6192
<400> 6192
000
<210> 6193
<400> 6193
000
<210> 6194
<400> 6194
000
<210> 6195
<400> 6195
000
<210> 6196
<400> 6196
000
<210> 6197
<400> 6197
000
<210> 6198
<400> 6198
000
<210> 6199
<400> 6199
000
<210> 6200
<400> 6200
000
<210> 6201
<400> 6201
000
<210> 6202
<400> 6202
000
<210> 6203
<400> 6203
000
<210> 6204
<400> 6204
000
<210> 6205
<400> 6205
000
<210> 6206
<400> 6206
000
<210> 6207
<400> 6207
000
<210> 6208
<400> 6208
000
<210> 6209
<400> 6209
000
<210> 6210
<400> 6210
000
<210> 6211
<400> 6211
000
<210> 6212
<400> 6212
000
<210> 6213
<400> 6213
000
<210> 6214
<400> 6214
000
<210> 6215
<400> 6215
000
<210> 6216
<400> 6216
000
<210> 6217
<400> 6217
000
<210> 6218
<400> 6218
000
<210> 6219
<400> 6219
000
<210> 6220
<400> 6220
000
<210> 6221
<400> 6221
000
<210> 6222
<400> 6222
000
<210> 6223
<400> 6223
000
<210> 6224
<400> 6224
000
<210> 6225
<400> 6225
000
<210> 6226
<400> 6226
000
<210> 6227
<400> 6227
000
<210> 6228
<400> 6228
000
<210> 6229
<400> 6229
000
<210> 6230
<400> 6230
000
<210> 6231
<400> 6231
000
<210> 6232
<400> 6232
000
<210> 6233
<400> 6233
000
<210> 6234
<400> 6234
000
<210> 6235
<400> 6235
000
<210> 6236
<400> 6236
000
<210> 6237
<400> 6237
000
<210> 6238
<400> 6238
000
<210> 6239
<400> 6239
000
<210> 6240
<400> 6240
000
<210> 6241
<400> 6241
000
<210> 6242
<400> 6242
000
<210> 6243
<400> 6243
000
<210> 6244
<400> 6244
000
<210> 6245
<400> 6245
000
<210> 6246
<400> 6246
000
<210> 6247
<400> 6247
000
<210> 6248
<400> 6248
000
<210> 6249
<400> 6249
000
<210> 6250
<400> 6250
000
<210> 6251
<400> 6251
000
<210> 6252
<400> 6252
000
<210> 6253
<400> 6253
000
<210> 6254
<400> 6254
000
<210> 6255
<400> 6255
000
<210> 6256
<400> 6256
000
<210> 6257
<400> 6257
000
<210> 6258
<400> 6258
000
<210> 6259
<400> 6259
000
<210> 6260
<400> 6260
000
<210> 6261
<400> 6261
000
<210> 6262
<400> 6262
000
<210> 6263
<400> 6263
000
<210> 6264
<400> 6264
000
<210> 6265
<400> 6265
000
<210> 6266
<400> 6266
000
<210> 6267
<400> 6267
000
<210> 6268
<400> 6268
000
<210> 6269
<400> 6269
000
<210> 6270
<400> 6270
000
<210> 6271
<400> 6271
000
<210> 6272
<400> 6272
000
<210> 6273
<400> 6273
000
<210> 6274
<400> 6274
000
<210> 6275
<400> 6275
000
<210> 6276
<400> 6276
000
<210> 6277
<400> 6277
000
<210> 6278
<400> 6278
000
<210> 6279
<400> 6279
000
<210> 6280
<400> 6280
000
<210> 6281
<400> 6281
000
<210> 6282
<400> 6282
000
<210> 6283
<400> 6283
000
<210> 6284
<400> 6284
000
<210> 6285
<400> 6285
000
<210> 6286
<400> 6286
000
<210> 6287
<400> 6287
000
<210> 6288
<400> 6288
000
<210> 6289
<400> 6289
000
<210> 6290
<400> 6290
000
<210> 6291
<400> 6291
000
<210> 6292
<400> 6292
000
<210> 6293
<400> 6293
000
<210> 6294
<400> 6294
000
<210> 6295
<400> 6295
000
<210> 6296
<400> 6296
000
<210> 6297
<400> 6297
000
<210> 6298
<400> 6298
000
<210> 6299
<400> 6299
000
<210> 6300
<400> 6300
000
<210> 6301
<400> 6301
000
<210> 6302
<400> 6302
000
<210> 6303
<400> 6303
000
<210> 6304
<400> 6304
000
<210> 6305
<400> 6305
000
<210> 6306
<400> 6306
000
<210> 6307
<400> 6307
000
<210> 6308
<400> 6308
000
<210> 6309
<400> 6309
000
<210> 6310
<400> 6310
000
<210> 6311
<400> 6311
000
<210> 6312
<400> 6312
000
<210> 6313
<400> 6313
000
<210> 6314
<400> 6314
000
<210> 6315
<400> 6315
000
<210> 6316
<400> 6316
000
<210> 6317
<400> 6317
000
<210> 6318
<400> 6318
000
<210> 6319
<400> 6319
000
<210> 6320
<400> 6320
000
<210> 6321
<400> 6321
000
<210> 6322
<400> 6322
000
<210> 6323
<400> 6323
000
<210> 6324
<400> 6324
000
<210> 6325
<400> 6325
000
<210> 6326
<400> 6326
000
<210> 6327
<400> 6327
000
<210> 6328
<400> 6328
000
<210> 6329
<400> 6329
000
<210> 6330
<400> 6330
000
<210> 6331
<400> 6331
000
<210> 6332
<400> 6332
000
<210> 6333
<400> 6333
000
<210> 6334
<400> 6334
000
<210> 6335
<400> 6335
000
<210> 6336
<400> 6336
000
<210> 6337
<400> 6337
000
<210> 6338
<400> 6338
000
<210> 6339
<400> 6339
000
<210> 6340
<400> 6340
000
<210> 6341
<400> 6341
000
<210> 6342
<400> 6342
000
<210> 6343
<400> 6343
000
<210> 6344
<400> 6344
000
<210> 6345
<400> 6345
000
<210> 6346
<400> 6346
000
<210> 6347
<400> 6347
000
<210> 6348
<400> 6348
000
<210> 6349
<400> 6349
000
<210> 6350
<400> 6350
000
<210> 6351
<400> 6351
000
<210> 6352
<400> 6352
000
<210> 6353
<400> 6353
000
<210> 6354
<400> 6354
000
<210> 6355
<400> 6355
000
<210> 6356
<400> 6356
000
<210> 6357
<400> 6357
000
<210> 6358
<400> 6358
000
<210> 6359
<400> 6359
000
<210> 6360
<400> 6360
000
<210> 6361
<400> 6361
000
<210> 6362
<400> 6362
000
<210> 6363
<400> 6363
000
<210> 6364
<400> 6364
000
<210> 6365
<400> 6365
000
<210> 6366
<400> 6366
000
<210> 6367
<400> 6367
000
<210> 6368
<400> 6368
000
<210> 6369
<400> 6369
000
<210> 6370
<400> 6370
000
<210> 6371
<400> 6371
000
<210> 6372
<400> 6372
000
<210> 6373
<400> 6373
000
<210> 6374
<400> 6374
000
<210> 6375
<400> 6375
000
<210> 6376
<400> 6376
000
<210> 6377
<400> 6377
000
<210> 6378
<400> 6378
000
<210> 6379
<400> 6379
000
<210> 6380
<400> 6380
000
<210> 6381
<400> 6381
000
<210> 6382
<400> 6382
000
<210> 6383
<400> 6383
000
<210> 6384
<400> 6384
000
<210> 6385
<400> 6385
000
<210> 6386
<400> 6386
000
<210> 6387
<400> 6387
000
<210> 6388
<400> 6388
000
<210> 6389
<400> 6389
000
<210> 6390
<400> 6390
000
<210> 6391
<400> 6391
000
<210> 6392
<400> 6392
000
<210> 6393
<400> 6393
000
<210> 6394
<400> 6394
000
<210> 6395
<400> 6395
000
<210> 6396
<400> 6396
000
<210> 6397
<400> 6397
000
<210> 6398
<400> 6398
000
<210> 6399
<400> 6399
000
<210> 6400
<400> 6400
000
<210> 6401
<400> 6401
000
<210> 6402
<400> 6402
000
<210> 6403
<400> 6403
000
<210> 6404
<400> 6404
000
<210> 6405
<400> 6405
000
<210> 6406
<400> 6406
000
<210> 6407
<400> 6407
000
<210> 6408
<400> 6408
000
<210> 6409
<400> 6409
000
<210> 6410
<400> 6410
000
<210> 6411
<400> 6411
000
<210> 6412
<400> 6412
000
<210> 6413
<400> 6413
000
<210> 6414
<400> 6414
000
<210> 6415
<400> 6415
000
<210> 6416
<400> 6416
000
<210> 6417
<400> 6417
000
<210> 6418
<400> 6418
000
<210> 6419
<400> 6419
000
<210> 6420
<400> 6420
000
<210> 6421
<400> 6421
000
<210> 6422
<400> 6422
000
<210> 6423
<400> 6423
000
<210> 6424
<400> 6424
000
<210> 6425
<400> 6425
000
<210> 6426
<400> 6426
000
<210> 6427
<400> 6427
000
<210> 6428
<400> 6428
000
<210> 6429
<400> 6429
000
<210> 6430
<400> 6430
000
<210> 6431
<400> 6431
000
<210> 6432
<400> 6432
000
<210> 6433
<400> 6433
000
<210> 6434
<400> 6434
000
<210> 6435
<400> 6435
000
<210> 6436
<400> 6436
000
<210> 6437
<400> 6437
000
<210> 6438
<400> 6438
000
<210> 6439
<400> 6439
000
<210> 6440
<400> 6440
000
<210> 6441
<400> 6441
000
<210> 6442
<400> 6442
000
<210> 6443
<400> 6443
000
<210> 6444
<400> 6444
000
<210> 6445
<400> 6445
000
<210> 6446
<400> 6446
000
<210> 6447
<400> 6447
000
<210> 6448
<400> 6448
000
<210> 6449
<400> 6449
000
<210> 6450
<400> 6450
000
<210> 6451
<400> 6451
000
<210> 6452
<400> 6452
000
<210> 6453
<400> 6453
000
<210> 6454
<400> 6454
000
<210> 6455
<400> 6455
000
<210> 6456
<400> 6456
000
<210> 6457
<400> 6457
000
<210> 6458
<400> 6458
000
<210> 6459
<400> 6459
000
<210> 6460
<400> 6460
000
<210> 6461
<400> 6461
000
<210> 6462
<400> 6462
000
<210> 6463
<400> 6463
000
<210> 6464
<400> 6464
000
<210> 6465
<400> 6465
000
<210> 6466
<400> 6466
000
<210> 6467
<400> 6467
000
<210> 6468
<400> 6468
000
<210> 6469
<400> 6469
000
<210> 6470
<400> 6470
000
<210> 6471
<400> 6471
000
<210> 6472
<400> 6472
000
<210> 6473
<400> 6473
000
<210> 6474
<400> 6474
000
<210> 6475
<400> 6475
000
<210> 6476
<400> 6476
000
<210> 6477
<400> 6477
000
<210> 6478
<400> 6478
000
<210> 6479
<400> 6479
000
<210> 6480
<400> 6480
000
<210> 6481
<400> 6481
000
<210> 6482
<400> 6482
000
<210> 6483
<400> 6483
000
<210> 6484
<400> 6484
000
<210> 6485
<400> 6485
000
<210> 6486
<400> 6486
000
<210> 6487
<400> 6487
000
<210> 6488
<400> 6488
000
<210> 6489
<400> 6489
000
<210> 6490
<400> 6490
000
<210> 6491
<400> 6491
000
<210> 6492
<400> 6492
000
<210> 6493
<400> 6493
000
<210> 6494
<400> 6494
000
<210> 6495
<400> 6495
000
<210> 6496
<400> 6496
000
<210> 6497
<400> 6497
000
<210> 6498
<400> 6498
000
<210> 6499
<400> 6499
000
<210> 6500
<400> 6500
000
<210> 6501
<400> 6501
000
<210> 6502
<400> 6502
000
<210> 6503
<400> 6503
000
<210> 6504
<400> 6504
000
<210> 6505
<400> 6505
000
<210> 6506
<400> 6506
000
<210> 6507
<400> 6507
000
<210> 6508
<400> 6508
000
<210> 6509
<400> 6509
000
<210> 6510
<400> 6510
000
<210> 6511
<400> 6511
000
<210> 6512
<400> 6512
000
<210> 6513
<400> 6513
000
<210> 6514
<400> 6514
000
<210> 6515
<400> 6515
000
<210> 6516
<400> 6516
000
<210> 6517
<400> 6517
000
<210> 6518
<400> 6518
000
<210> 6519
<400> 6519
000
<210> 6520
<400> 6520
000
<210> 6521
<400> 6521
000
<210> 6522
<400> 6522
000
<210> 6523
<400> 6523
000
<210> 6524
<400> 6524
000
<210> 6525
<400> 6525
000
<210> 6526
<400> 6526
000
<210> 6527
<400> 6527
000
<210> 6528
<400> 6528
000
<210> 6529
<400> 6529
000
<210> 6530
<400> 6530
000
<210> 6531
<400> 6531
000
<210> 6532
<400> 6532
000
<210> 6533
<400> 6533
000
<210> 6534
<400> 6534
000
<210> 6535
<400> 6535
000
<210> 6536
<400> 6536
000
<210> 6537
<400> 6537
000
<210> 6538
<400> 6538
000
<210> 6539
<400> 6539
000
<210> 6540
<400> 6540
000
<210> 6541
<400> 6541
000
<210> 6542
<400> 6542
000
<210> 6543
<400> 6543
000
<210> 6544
<400> 6544
000
<210> 6545
<400> 6545
000
<210> 6546
<400> 6546
000
<210> 6547
<400> 6547
000
<210> 6548
<400> 6548
000
<210> 6549
<400> 6549
000
<210> 6550
<400> 6550
000
<210> 6551
<400> 6551
000
<210> 6552
<400> 6552
000
<210> 6553
<400> 6553
000
<210> 6554
<400> 6554
000
<210> 6555
<400> 6555
000
<210> 6556
<400> 6556
000
<210> 6557
<400> 6557
000
<210> 6558
<400> 6558
000
<210> 6559
<400> 6559
000
<210> 6560
<400> 6560
000
<210> 6561
<400> 6561
000
<210> 6562
<400> 6562
000
<210> 6563
<400> 6563
000
<210> 6564
<400> 6564
000
<210> 6565
<400> 6565
000
<210> 6566
<400> 6566
000
<210> 6567
<400> 6567
000
<210> 6568
<400> 6568
000
<210> 6569
<400> 6569
000
<210> 6570
<400> 6570
000
<210> 6571
<400> 6571
000
<210> 6572
<400> 6572
000
<210> 6573
<400> 6573
000
<210> 6574
<400> 6574
000
<210> 6575
<400> 6575
000
<210> 6576
<400> 6576
000
<210> 6577
<400> 6577
000
<210> 6578
<400> 6578
000
<210> 6579
<400> 6579
000
<210> 6580
<400> 6580
000
<210> 6581
<400> 6581
000
<210> 6582
<400> 6582
000
<210> 6583
<400> 6583
000
<210> 6584
<211> 12
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6584
guuuuagagc ua 12
<210> 6585
<211> 12
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6585
guuuaagagc ua 12
<210> 6586
<211> 5
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6586
ugcug 5
<210> 6587
<211> 5
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6587
uuuug 5
<210> 6588
<211> 4
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6588
gaaa 4
<210> 6589
<211> 60
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6589
uagcaaguua aaauaaggcu aguccguuau caacuugaaa aaguggcacc gagucggugc 60
<210> 6590
<211> 60
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6590
uagcaaguuu aaauaaggcu aguccguuau caacuugaaa aaguggcacc gagucggugc 60
<210> 6591
<211> 5
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6591
cagca 5
<210> 6592
<400> 6592
000
<210> 6593
<400> 6593
000
<210> 6594
<400> 6594
000
<210> 6595
<400> 6595
000
<210> 6596
<211> 5000
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(5000)
<223> /note="This Последовательность may encompass 50-5000 nucleotides"
<400> 6596
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 60
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 120
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 180
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 240
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 300
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 360
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 420
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 480
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 540
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 600
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 660
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 720
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 780
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 840
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 900
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 960
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1020
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1080
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1140
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1200
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1260
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1320
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1380
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1440
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1500
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1620
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1680
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1740
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1860
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2040
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2160
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2220
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2280
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2340
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2400
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2460
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2520
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2580
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2640
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2700
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2760
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2820
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2880
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2940
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3000
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3060
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3120
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3180
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3240
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3300
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3360
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3420
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3480
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3540
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3600
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3660
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3720
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3780
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3840
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3900
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3960
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4020
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4080
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4140
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4200
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4260
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4320
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4380
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4440
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4500
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4560
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4620
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4680
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4740
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4800
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4860
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4920
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4980
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 5000
<210> 6597
<211> 13
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6597
uagcaaguua aaa 13
<210> 6598
<211> 13
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6598
uagcaaguuu aaa 13
<210> 6599
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6599
uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag ucggugc 47
<210> 6600
<211> 51
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6600
uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag ucggugcuuu u 51
<210> 6601
<211> 76
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6601
guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc cguuaucaac uugaaaaagu 60
ggcaccgagu cggugc 76
<210> 6602
<211> 76
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6602
guuuaagagc uagaaauagc aaguuuaaau aaggcuaguc cguuaucaac uugaaaaagu 60
ggcaccgagu cggugc 76
<210> 6603
<211> 86
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6603
guuuuagagc uaugcuggaa acagcauagc aaguuaaaau aaggcuaguc cguuaucaac 60
uugaaaaagu ggcaccgagu cggugc 86
<210> 6604
<211> 86
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6604
guuuaagagc uaugcuggaa acagcauagc aaguuuaaau aaggcuaguc cguuaucaac 60
uugaaaaagu ggcaccgagu cggugc 86
<210> 6605
<211> 17
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6605
guuuuagagc uaugcug 17
<210> 6606
<211> 17
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6606
guuuaagagc uaugcug 17
<210> 6607
<211> 22
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6607
guuuuagagc uaugcuguuu ug 22
<210> 6608
<211> 22
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6608
guuuaagagc uaugcuguuu ug 22
<210> 6609
<211> 65
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6609
cagcauagca aguuaaaaua aggcuagucc guuaucaacu ugaaaaagug gcaccgaguc 60
ggugc 65
<210> 6610
<211> 65
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6610
cagcauagca aguuuaaaua aggcuagucc guuaucaacu ugaaaaagug gcaccgaguc 60
ggugc 65
<210> 6611
<211> 1368
<212> БЕЛОК
<213> Streptococcus pyogenes
<400> 6611
Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val
1 5 10 15
Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe
20 25 30
Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu
50 55 60
Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser
85 90 95
Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys
100 105 110
His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr
115 120 125
His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp
130 135 140
Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His
145 150 155 160
Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro
165 170 175
Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr
180 185 190
Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala
195 200 205
Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn
210 215 220
Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn
225 230 235 240
Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe
245 250 255
Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp
260 265 270
Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp
275 280 285
Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp
290 295 300
Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser
305 310 315 320
Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys
325 330 335
Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe
340 345 350
Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser
355 360 365
Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp
370 375 380
Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg
385 390 395 400
Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu
405 410 415
Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe
420 425 430
Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile
435 440 445
Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp
450 455 460
Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu
465 470 475 480
Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr
485 490 495
Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser
500 505 510
Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys
515 520 525
Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln
530 535 540
Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr
545 550 555 560
Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp
565 570 575
Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly
580 585 590
Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp
595 600 605
Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr
610 615 620
Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala
625 630 635 640
His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr
645 650 655
Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp
660 665 670
Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe
675 680 685
Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe
690 695 700
Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu
705 710 715 720
His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly
725 730 735
Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly
740 745 750
Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln
755 760 765
Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile
770 775 780
Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro
785 790 795 800
Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu
805 810 815
Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg
820 825 830
Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys
835 840 845
Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg
850 855 860
Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys
865 870 875 880
Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys
885 890 895
Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp
900 905 910
Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr
915 920 925
Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp
930 935 940
Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser
945 950 955 960
Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg
965 970 975
Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val
980 985 990
Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe
995 1000 1005
Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala
1010 1015 1020
Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe
1025 1030 1035
Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala
1040 1045 1050
Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu
1055 1060 1065
Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val
1070 1075 1080
Arg Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr
1085 1090 1095
Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys
1100 1105 1110
Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro
1115 1120 1125
Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val
1130 1135 1140
Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys
1145 1150 1155
Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser
1160 1165 1170
Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys
1175 1180 1185
Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu
1190 1195 1200
Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly
1205 1210 1215
Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val
1220 1225 1230
Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser
1235 1240 1245
Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys
1250 1255 1260
His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys
1265 1270 1275
Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala
1280 1285 1290
Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn
1295 1300 1305
Ile Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala
1310 1315 1320
Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser
1325 1330 1335
Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr
1340 1345 1350
Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp
1355 1360 1365
<210> 6612
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> SV40 вирус
<400> 6612
Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val
1 5
<210> 6613
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> неизвестно
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание неизвестного:
Последовательность двойного NLS-сигнала нуклеоплазмина"
<400> 6613
Lys Arg Pro Ala Ala Thr Lys Lys Ala Gly Gln Ala Lys Lys Lys Lys
1 5 10 15
<210> 6614
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> неизвестно
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание неизвестного:
C-myc NLS Последовательность"
<400> 6614
Pro Ala Ala Lys Arg Val Lys Leu Asp
1 5
<210> 6615
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> неизвестно
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание неизвестного:
C-myc NLS Последовательность"
<400> 6615
Arg Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Pro
1 5 10
<210> 6616
<211> 38
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 6616
Asn Gln Ser Ser Asn Phe Gly Pro Met Lys Gly Gly Asn Phe Gly Gly
1 5 10 15
Arg Ser Ser Gly Pro Tyr Gly Gly Gly Gly Gln Tyr Phe Ala Lys Pro
20 25 30
Arg Asn Gln Gly Gly Tyr
35
<210> 6617
<211> 42
<212> БЕЛОК
<213> неизвестно
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание неизвестного:
Последовательность IBB домена импортина-альфа"
<400> 6617
Arg Met Arg Ile Glx Phe Lys Asn Lys Gly Lys Asp Thr Ala Glu Leu
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Val Glu Val Ser Val Glu Leu Arg Lys Ala Lys Lys
20 25 30
Asp Glu Gln Ile Leu Lys Arg Arg Asn Val
35 40
<210> 6618
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> неизвестно
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание неизвестного:
Myoma T белковая Последовательность"
<400> 6618
Val Ser Arg Lys Arg Pro Arg Pro
1 5
<210> 6619
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> неизвестно
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание неизвестного:
Myoma T белковая Последовательность"
<400> 6619
Pro Pro Lys Lys Ala Arg Glu Asp
1 5
<210> 6620
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 6620
Pro Gln Pro Lys Lys Lys Pro Leu
1 5
<210> 6621
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Mus musculus
<400> 6621
Ser Ala Leu Ile Lys Lys Lys Lys Lys Met Ala Pro
1 5 10
<210> 6622
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Вирус гриппа
<400> 6622
Asp Arg Leu Arg Arg
1 5
<210> 6623
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Вирус гриппа
<400> 6623
Pro Lys Gln Lys Lys Arg Lys
1 5
<210> 6624
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Вирус гепатита дельта
<400> 6624
Arg Lys Leu Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu
1 5 10
<210> 6625
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Mus musculus
<400> 6625
Arg Glu Lys Lys Lys Phe Leu Lys Arg Arg
1 5 10
<210> 6626
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 6626
Lys Arg Lys Gly Asp Glu Val Asp Gly Val Asp Glu Val Ala Lys Lys
1 5 10 15
Lys Ser Lys Lys
20
<210> 6627
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 6627
Arg Lys Cys Leu Gln Ala Gly Met Asn Leu Glu Ala Arg Lys Thr Lys
1 5 10 15
Lys
<210> 6628
<211> 4107
<212> ДНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
polynucleotide"
<400> 6628
atggataaaa agtacagcat cgggctggac atcggtacaa actcagtggg gtgggccgtg 60
attacggacg agtacaaggt accctccaaa aaatttaaag tgctgggtaa cacggacaga 120
cactctataa agaaaaatct tattggagcc ttgctgttcg actcaggcga gacagccgaa 180
gccacaaggt tgaagcggac cgccaggagg cggtatacca ggagaaagaa ccgcatatgc 240
tacctgcaag aaatcttcag taacgagatg gcaaaggttg acgatagctt tttccatcgc 300
ctggaagaat cctttcttgt tgaggaagac aagaagcacg aacggcaccc catctttggc 360
aatattgtcg acgaagtggc atatcacgaa aagtacccga ctatctacca cctcaggaag 420
aagctggtgg actctaccga taaggcggac ctcagactta tttatttggc actcgcccac 480
atgattaaat ttagaggaca tttcttgatc gagggcgacc tgaacccgga caacagtgac 540
gtcgataagc tgttcatcca acttgtgcag acctacaatc aactgttcga agaaaaccct 600
ataaatgctt caggagtcga cgctaaagca atcctgtccg cgcgcctctc aaaatctaga 660
agacttgaga atctgattgc tcagttgccc ggggaaaaga aaaatggatt gtttggcaac 720
ctgatcgccc tcagtctcgg actgacccca aatttcaaaa gtaacttcga cctggccgaa 780
gacgctaagc tccagctgtc caaggacaca tacgatgacg acctcgacaa tctgctggcc 840
cagattgggg atcagtacgc cgatctcttt ttggcagcaa agaacctgtc cgacgccatc 900
ctgttgagcg atatcttgag agtgaacacc gaaattacta aagcacccct tagcgcatct 960
atgatcaagc ggtacgacga gcatcatcag gatctgaccc tgctgaaggc tcttgtgagg 1020
caacagctcc ccgaaaaata caaggaaatc ttctttgacc agagcaaaaa cggctacgct 1080
ggctatatag atggtggggc cagtcaggag gaattctata aattcatcaa gcccattctc 1140
gagaaaatgg acggcacaga ggagttgctg gtcaaactta acagggagga cctgctgcgg 1200
aagcagcgga cctttgacaa cgggtctatc ccccaccaga ttcatctggg cgaactgcac 1260
gcaatcctga ggaggcagga ggatttttat ccttttctta aagataaccg cgagaaaata 1320
gaaaagattc ttacattcag gatcccgtac tacgtgggac ctctcgcccg gggcaattca 1380
cggtttgcct ggatgacaag gaagtcagag gagactatta caccttggaa cttcgaagaa 1440
gtggtggaca agggtgcatc tgcccagtct ttcatcgagc ggatgacaaa ttttgacaag 1500
aacctcccta atgagaaggt gctgcccaaa cattctctgc tctacgagta ctttaccgtc 1560
tacaatgaac tgactaaagt caagtacgtc accgagggaa tgaggaagcc ggcattcctt 1620
agtggagaac agaagaaggc gattgtagac ctgttgttca agaccaacag gaaggtgact 1680
gtgaagcaac ttaaagaaga ctactttaag aagatcgaat gttttgacag tgtggaaatt 1740
tcaggggttg aagaccgctt caatgcgtca ttggggactt accatgatct tctcaagatc 1800
ataaaggaca aagacttcct ggacaacgaa gaaaatgagg atattctcga agacatcgtc 1860
ctcaccctga ccctgttcga agacagggaa atgatagaag agcgcttgaa aacctatgcc 1920
cacctcttcg acgataaagt tatgaagcag ctgaagcgca ggagatacac aggatgggga 1980
agattgtcaa ggaagctgat caatggaatt agggataaac agagtggcaa gaccatactg 2040
gatttcctca aatctgatgg cttcgccaat aggaacttca tgcaactgat tcacgatgac 2100
tctcttacct tcaaggagga cattcaaaag gctcaggtga gcgggcaggg agactccctt 2160
catgaacaca tcgcgaattt ggcaggttcc cccgctatta aaaagggcat ccttcaaact 2220
gtcaaggtgg tggatgaatt ggtcaaggta atgggcagac ataagccaga aaatattgtg 2280
atcgagatgg cccgcgaaaa ccagaccaca cagaagggcc agaaaaatag tagagagcgg 2340
atgaagagga tcgaggaggg catcaaagag ctgggatctc agattctcaa agaacacccc 2400
gtagaaaaca cacagctgca gaacgaaaaa ttgtacttgt actatctgca gaacggcaga 2460
gacatgtacg tcgaccaaga acttgatatt aatagactgt ccgactatga cgtagaccat 2520
atcgtgcccc agtccttcct gaaggacgac tccattgata acaaagtctt gacaagaagc 2580
gacaagaaca ggggtaaaag tgataatgtg cctagcgagg aggtggtgaa aaaaatgaag 2640
aactactggc gacagctgct taatgcaaag ctcattacac aacggaagtt cgataatctg 2700
acgaaagcag agagaggtgg cttgtctgag ttggacaagg cagggtttat taagcggcag 2760
ctggtggaaa ctaggcagat cacaaagcac gtggcgcaga ttttggacag ccggatgaac 2820
acaaaatacg acgaaaatga taaactgata cgagaggtca aagttatcac gctgaaaagc 2880
aagctggtgt ccgattttcg gaaagacttc cagttctaca aagttcgcga gattaataac 2940
taccatcatg ctcacgatgc gtacctgaac gctgttgtcg ggaccgcctt gataaagaag 3000
tacccaaagc tggaatccga gttcgtatac ggggattaca aagtgtacga tgtgaggaaa 3060
atgatagcca agtccgagca ggagattgga aaggccacag ctaagtactt cttttattct 3120
aacatcatga atttttttaa gacggaaatt accctggcca acggagagat cagaaagcgg 3180
ccccttatag agacaaatgg tgaaacaggt gaaatcgtct gggataaggg cagggatttc 3240
gctactgtga ggaaggtgct gagtatgcca caggtaaata tcgtgaaaaa aaccgaagta 3300
cagaccggag gattttccaa ggaaagcatt ttgcctaaaa gaaactcaga caagctcatc 3360
gcccgcaaga aagattggga ccctaagaaa tacgggggat ttgactcacc caccgtagcc 3420
tattctgtgc tggtggtagc taaggtggaa aaaggaaagt ctaagaagct gaagtccgtg 3480
aaggaactct tgggaatcac tatcatggaa agatcatcct ttgaaaagaa ccctatcgat 3540
ttcctggagg ctaagggtta caaggaggtc aagaaagacc tcatcattaa actgccaaaa 3600
tactctctct tcgagctgga aaatggcagg aagagaatgt tggccagcgc cggagagctg 3660
caaaagggaa acgagcttgc tctgccctcc aaatatgtta attttctcta tctcgcttcc 3720
cactatgaaa agctgaaagg gtctcccgaa gataacgagc agaagcagct gttcgtcgaa 3780
cagcacaagc actatctgga tgaaataatc gaacaaataa gcgagttcag caaaagggtt 3840
atcctggcgg atgctaattt ggacaaagta ctgtctgctt ataacaagca ccgggataag 3900
cctattaggg aacaagccga gaatataatt cacctcttta cactcacgaa tctcggagcc 3960
cccgccgcct tcaaatactt tgatacgact atcgaccgga aacggtatac cagtaccaaa 4020
gaggtcctcg atgccaccct catccaccag tcaattactg gcctgtacga aacacggatc 4080
gacctctctc aactgggcgg cgactag 4107
<210> 6629
<400> 6629
000
<210> 6630
<400> 6630
000
<210> 6631
<400> 6631
000
<210> 6632
<400> 6632
000
<210> 6633
<400> 6633
000
<210> 6634
<400> 6634
000
<210> 6635
<400> 6635
000
<210> 6636
<400> 6636
000
<210> 6637
<400> 6637
000
<210> 6638
<400> 6638
000
<210> 6639
<400> 6639
000
<210> 6640
<400> 6640
000
<210> 6641
<400> 6641
000
<210> 6642
<400> 6642
000
<210> 6643
<400> 6643
000
<210> 6644
<400> 6644
000
<210> 6645
<400> 6645
000
<210> 6646
<400> 6646
000
<210> 6647
<400> 6647
000
<210> 6648
<400> 6648
000
<210> 6649
<400> 6649
000
<210> 6650
<400> 6650
000
<210> 6651
<400> 6651
000
<210> 6652
<400> 6652
000
<210> 6653
<400> 6653
000
<210> 6654
<400> 6654
000
<210> 6655
<400> 6655
000
<210> 6656
<400> 6656
000
<210> 6657
<400> 6657
000
<210> 6658
<400> 6658
000
<210> 6659
<400> 6659
000
<210> 6660
<211> 74
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6660
aacagcauag caaguuaaaa uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag 60
ucggugcuuu uuuu 74
<210> 6661
<211> 74
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 6661
aacagcauag caaguuuaaa uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag 60
ucggugcuuu uuuu 74
<210> 6662
<400> 6662
000
<210> 6663
<400> 6663
000
<210> 6664
<400> 6664
000
<210> 6665
<400> 6665
000
<210> 6666
<400> 6666
000
<210> 6667
<400> 6667
000
<210> 6668
<400> 6668
000
<210> 6669
<400> 6669
000
<210> 6670
<400> 6670
000
<210> 6671
<400> 6671
000
<210> 6672
<400> 6672
000
<210> 6673
<400> 6673
000
<210> 6674
<400> 6674
000
<210> 6675
<400> 6675
000
<210> 6676
<400> 6676
000
<210> 6677
<400> 6677
000
<210> 6678
<400> 6678
000
<210> 6679
<400> 6679
000
<210> 6680
<400> 6680
000
<210> 6681
<400> 6681
000
<210> 6682
<400> 6682
000
<210> 6683
<400> 6683
000
<210> 6684
<400> 6684
000
<210> 6685
<400> 6685
000
<210> 6686
<400> 6686
000
<210> 6687
<400> 6687
000
<210> 6688
<400> 6688
000
<210> 6689
<400> 6689
000
<210> 6690
<400> 6690
000
<210> 6691
<400> 6691
000
<210> 6692
<400> 6692
000
<210> 6693
<400> 6693
000
<210> 6694
<400> 6694
000
<210> 6695
<400> 6695
000
<210> 6696
<400> 6696
000
<210> 6697
<400> 6697
000
<210> 6698
<400> 6698
000
<210> 6699
<400> 6699
000
<210> 6700
<400> 6700
000
<210> 6701
<400> 6701
000
<210> 6702
<400> 6702
000
<210> 6703
<400> 6703
000
<210> 6704
<400> 6704
000
<210> 6705
<400> 6705
000
<210> 6706
<400> 6706
000
<210> 6707
<400> 6707
000
<210> 6708
<400> 6708
000
<210> 6709
<400> 6709
000
<210> 6710
<400> 6710
000
<210> 6711
<400> 6711
000
<210> 6712
<400> 6712
000
<210> 6713
<400> 6713
000
<210> 6714
<400> 6714
000
<210> 6715
<400> 6715
000
<210> 6716
<400> 6716
000
<210> 6717
<400> 6717
000
<210> 6718
<400> 6718
000
<210> 6719
<400> 6719
000
<210> 6720
<400> 6720
000
<210> 6721
<400> 6721
000
<210> 6722
<400> 6722
000
<210> 6723
<400> 6723
000
<210> 6724
<400> 6724
000
<210> 6725
<400> 6725
000
<210> 6726
<400> 6726
000
<210> 6727
<400> 6727
000
<210> 6728
<400> 6728
000
<210> 6729
<400> 6729
000
<210> 6730
<400> 6730
000
<210> 6731
<400> 6731
000
<210> 6732
<400> 6732
000
<210> 6733
<400> 6733
000
<210> 6734
<400> 6734
000
<210> 6735
<400> 6735
000
<210> 6736
<400> 6736
000
<210> 6737
<400> 6737
000
<210> 6738
<400> 6738
000
<210> 6739
<400> 6739
000
<210> 6740
<400> 6740
000
<210> 6741
<400> 6741
000
<210> 6742
<400> 6742
000
<210> 6743
<400> 6743
000
<210> 6744
<400> 6744
000
<210> 6745
<400> 6745
000
<210> 6746
<400> 6746
000
<210> 6747
<400> 6747
000
<210> 6748
<400> 6748
000
<210> 6749
<400> 6749
000
<210> 6750
<400> 6750
000
<210> 6751
<400> 6751
000
<210> 6752
<400> 6752
000
<210> 6753
<400> 6753
000
<210> 6754
<400> 6754
000
<210> 6755
<400> 6755
000
<210> 6756
<400> 6756
000
<210> 6757
<400> 6757
000
<210> 6758
<400> 6758
000
<210> 6759
<400> 6759
000
<210> 6760
<400> 6760
000
<210> 6761
<400> 6761
000
<210> 6762
<400> 6762
000
<210> 6763
<400> 6763
000
<210> 6764
<400> 6764
000
<210> 6765
<400> 6765
000
<210> 6766
<400> 6766
000
<210> 6767
<400> 6767
000
<210> 6768
<400> 6768
000
<210> 6769
<400> 6769
000
<210> 6770
<400> 6770
000
<210> 6771
<400> 6771
000
<210> 6772
<400> 6772
000
<210> 6773
<400> 6773
000
<210> 6774
<400> 6774
000
<210> 6775
<400> 6775
000
<210> 6776
<400> 6776
000
<210> 6777
<400> 6777
000
<210> 6778
<400> 6778
000
<210> 6779
<400> 6779
000
<210> 6780
<400> 6780
000
<210> 6781
<400> 6781
000
<210> 6782
<400> 6782
000
<210> 6783
<400> 6783
000
<210> 6784
<400> 6784
000
<210> 6785
<400> 6785
000
<210> 6786
<400> 6786
000
<210> 6787
<400> 6787
000
<210> 6788
<400> 6788
000
<210> 6789
<400> 6789
000
<210> 6790
<400> 6790
000
<210> 6791
<400> 6791
000
<210> 6792
<400> 6792
000
<210> 6793
<400> 6793
000
<210> 6794
<400> 6794
000
<210> 6795
<400> 6795
000
<210> 6796
<400> 6796
000
<210> 6797
<400> 6797
000
<210> 6798
<400> 6798
000
<210> 6799
<400> 6799
000
<210> 6800
<400> 6800
000
<210> 6801
<400> 6801
000
<210> 6802
<400> 6802
000
<210> 6803
<400> 6803
000
<210> 6804
<400> 6804
000
<210> 6805
<400> 6805
000
<210> 6806
<400> 6806
000
<210> 6807
<400> 6807
000
<210> 6808
<400> 6808
000
<210> 6809
<400> 6809
000
<210> 6810
<400> 6810
000
<210> 6811
<400> 6811
000
<210> 6812
<400> 6812
000
<210> 6813
<400> 6813
000
<210> 6814
<400> 6814
000
<210> 6815
<400> 6815
000
<210> 6816
<400> 6816
000
<210> 6817
<400> 6817
000
<210> 6818
<400> 6818
000
<210> 6819
<400> 6819
000
<210> 6820
<400> 6820
000
<210> 6821
<400> 6821
000
<210> 6822
<400> 6822
000
<210> 6823
<400> 6823
000
<210> 6824
<400> 6824
000
<210> 6825
<400> 6825
000
<210> 6826
<400> 6826
000
<210> 6827
<400> 6827
000
<210> 6828
<400> 6828
000
<210> 6829
<400> 6829
000
<210> 6830
<400> 6830
000
<210> 6831
<400> 6831
000
<210> 6832
<400> 6832
000
<210> 6833
<400> 6833
000
<210> 6834
<400> 6834
000
<210> 6835
<400> 6835
000
<210> 6836
<400> 6836
000
<210> 6837
<400> 6837
000
<210> 6838
<400> 6838
000
<210> 6839
<400> 6839
000
<210> 6840
<400> 6840
000
<210> 6841
<400> 6841
000
<210> 6842
<400> 6842
000
<210> 6843
<400> 6843
000
<210> 6844
<400> 6844
000
<210> 6845
<400> 6845
000
<210> 6846
<400> 6846
000
<210> 6847
<400> 6847
000
<210> 6848
<400> 6848
000
<210> 6849
<400> 6849
000
<210> 6850
<400> 6850
000
<210> 6851
<400> 6851
000
<210> 6852
<400> 6852
000
<210> 6853
<400> 6853
000
<210> 6854
<400> 6854
000
<210> 6855
<400> 6855
000
<210> 6856
<400> 6856
000
<210> 6857
<400> 6857
000
<210> 6858
<400> 6858
000
<210> 6859
<400> 6859
000
<210> 6860
<400> 6860
000
<210> 6861
<400> 6861
000
<210> 6862
<400> 6862
000
<210> 6863
<400> 6863
000
<210> 6864
<400> 6864
000
<210> 6865
<400> 6865
000
<210> 6866
<400> 6866
000
<210> 6867
<400> 6867
000
<210> 6868
<400> 6868
000
<210> 6869
<400> 6869
000
<210> 6870
<400> 6870
000
<210> 6871
<400> 6871
000
<210> 6872
<400> 6872
000
<210> 6873
<400> 6873
000
<210> 6874
<400> 6874
000
<210> 6875
<400> 6875
000
<210> 6876
<400> 6876
000
<210> 6877
<400> 6877
000
<210> 6878
<400> 6878
000
<210> 6879
<400> 6879
000
<210> 6880
<400> 6880
000
<210> 6881
<400> 6881
000
<210> 6882
<400> 6882
000
<210> 6883
<400> 6883
000
<210> 6884
<400> 6884
000
<210> 6885
<400> 6885
000
<210> 6886
<400> 6886
000
<210> 6887
<400> 6887
000
<210> 6888
<400> 6888
000
<210> 6889
<400> 6889
000
<210> 6890
<400> 6890
000
<210> 6891
<400> 6891
000
<210> 6892
<400> 6892
000
<210> 6893
<400> 6893
000
<210> 6894
<400> 6894
000
<210> 6895
<400> 6895
000
<210> 6896
<400> 6896
000
<210> 6897
<400> 6897
000
<210> 6898
<400> 6898
000
<210> 6899
<400> 6899
000
<210> 6900
<400> 6900
000
<210> 6901
<400> 6901
000
<210> 6902
<400> 6902
000
<210> 6903
<400> 6903
000
<210> 6904
<400> 6904
000
<210> 6905
<400> 6905
000
<210> 6906
<400> 6906
000
<210> 6907
<400> 6907
000
<210> 6908
<400> 6908
000
<210> 6909
<400> 6909
000
<210> 6910
<400> 6910
000
<210> 6911
<400> 6911
000
<210> 6912
<400> 6912
000
<210> 6913
<400> 6913
000
<210> 6914
<400> 6914
000
<210> 6915
<400> 6915
000
<210> 6916
<400> 6916
000
<210> 6917
<400> 6917
000
<210> 6918
<400> 6918
000
<210> 6919
<400> 6919
000
<210> 6920
<400> 6920
000
<210> 6921
<400> 6921
000
<210> 6922
<400> 6922
000
<210> 6923
<400> 6923
000
<210> 6924
<400> 6924
000
<210> 6925
<400> 6925
000
<210> 6926
<400> 6926
000
<210> 6927
<400> 6927
000
<210> 6928
<400> 6928
000
<210> 6929
<400> 6929
000
<210> 6930
<400> 6930
000
<210> 6931
<400> 6931
000
<210> 6932
<400> 6932
000
<210> 6933
<400> 6933
000
<210> 6934
<400> 6934
000
<210> 6935
<400> 6935
000
<210> 6936
<400> 6936
000
<210> 6937
<400> 6937
000
<210> 6938
<400> 6938
000
<210> 6939
<400> 6939
000
<210> 6940
<400> 6940
000
<210> 6941
<400> 6941
000
<210> 6942
<400> 6942
000
<210> 6943
<400> 6943
000
<210> 6944
<400> 6944
000
<210> 6945
<400> 6945
000
<210> 6946
<400> 6946
000
<210> 6947
<400> 6947
000
<210> 6948
<400> 6948
000
<210> 6949
<400> 6949
000
<210> 6950
<400> 6950
000
<210> 6951
<400> 6951
000
<210> 6952
<400> 6952
000
<210> 6953
<400> 6953
000
<210> 6954
<400> 6954
000
<210> 6955
<400> 6955
000
<210> 6956
<400> 6956
000
<210> 6957
<400> 6957
000
<210> 6958
<400> 6958
000
<210> 6959
<400> 6959
000
<210> 6960
<400> 6960
000
<210> 6961
<400> 6961
000
<210> 6962
<400> 6962
000
<210> 6963
<400> 6963
000
<210> 6964
<400> 6964
000
<210> 6965
<400> 6965
000
<210> 6966
<400> 6966
000
<210> 6967
<400> 6967
000
<210> 6968
<400> 6968
000
<210> 6969
<400> 6969
000
<210> 6970
<400> 6970
000
<210> 6971
<400> 6971
000
<210> 6972
<400> 6972
000
<210> 6973
<400> 6973
000
<210> 6974
<400> 6974
000
<210> 6975
<400> 6975
000
<210> 6976
<400> 6976
000
<210> 6977
<400> 6977
000
<210> 6978
<400> 6978
000
<210> 6979
<400> 6979
000
<210> 6980
<400> 6980
000
<210> 6981
<400> 6981
000
<210> 6982
<400> 6982
000
<210> 6983
<400> 6983
000
<210> 6984
<400> 6984
000
<210> 6985
<400> 6985
000
<210> 6986
<400> 6986
000
<210> 6987
<400> 6987
000
<210> 6988
<400> 6988
000
<210> 6989
<400> 6989
000
<210> 6990
<400> 6990
000
<210> 6991
<400> 6991
000
<210> 6992
<400> 6992
000
<210> 6993
<400> 6993
000
<210> 6994
<400> 6994
000
<210> 6995
<400> 6995
000
<210> 6996
<400> 6996
000
<210> 6997
<400> 6997
000
<210> 6998
<400> 6998
000
<210> 6999
<400> 6999
000
<210> 7000
<400> 7000
000
<210> 7001
<400> 7001
000
<210> 7002
<400> 7002
000
<210> 7003
<400> 7003
000
<210> 7004
<400> 7004
000
<210> 7005
<400> 7005
000
<210> 7006
<400> 7006
000
<210> 7007
<400> 7007
000
<210> 7008
<400> 7008
000
<210> 7009
<400> 7009
000
<210> 7010
<400> 7010
000
<210> 7011
<400> 7011
000
<210> 7012
<400> 7012
000
<210> 7013
<400> 7013
000
<210> 7014
<400> 7014
000
<210> 7015
<400> 7015
000
<210> 7016
<400> 7016
000
<210> 7017
<400> 7017
000
<210> 7018
<400> 7018
000
<210> 7019
<400> 7019
000
<210> 7020
<400> 7020
000
<210> 7021
<400> 7021
000
<210> 7022
<400> 7022
000
<210> 7023
<400> 7023
000
<210> 7024
<400> 7024
000
<210> 7025
<400> 7025
000
<210> 7026
<400> 7026
000
<210> 7027
<400> 7027
000
<210> 7028
<400> 7028
000
<210> 7029
<400> 7029
000
<210> 7030
<400> 7030
000
<210> 7031
<400> 7031
000
<210> 7032
<400> 7032
000
<210> 7033
<400> 7033
000
<210> 7034
<400> 7034
000
<210> 7035
<400> 7035
000
<210> 7036
<400> 7036
000
<210> 7037
<400> 7037
000
<210> 7038
<400> 7038
000
<210> 7039
<400> 7039
000
<210> 7040
<400> 7040
000
<210> 7041
<400> 7041
000
<210> 7042
<400> 7042
000
<210> 7043
<400> 7043
000
<210> 7044
<400> 7044
000
<210> 7045
<400> 7045
000
<210> 7046
<400> 7046
000
<210> 7047
<400> 7047
000
<210> 7048
<400> 7048
000
<210> 7049
<400> 7049
000
<210> 7050
<400> 7050
000
<210> 7051
<400> 7051
000
<210> 7052
<400> 7052
000
<210> 7053
<400> 7053
000
<210> 7054
<400> 7054
000
<210> 7055
<400> 7055
000
<210> 7056
<400> 7056
000
<210> 7057
<400> 7057
000
<210> 7058
<400> 7058
000
<210> 7059
<400> 7059
000
<210> 7060
<400> 7060
000
<210> 7061
<400> 7061
000
<210> 7062
<400> 7062
000
<210> 7063
<400> 7063
000
<210> 7064
<400> 7064
000
<210> 7065
<400> 7065
000
<210> 7066
<400> 7066
000
<210> 7067
<400> 7067
000
<210> 7068
<400> 7068
000
<210> 7069
<400> 7069
000
<210> 7070
<400> 7070
000
<210> 7071
<400> 7071
000
<210> 7072
<400> 7072
000
<210> 7073
<400> 7073
000
<210> 7074
<400> 7074
000
<210> 7075
<400> 7075
000
<210> 7076
<400> 7076
000
<210> 7077
<400> 7077
000
<210> 7078
<400> 7078
000
<210> 7079
<400> 7079
000
<210> 7080
<400> 7080
000
<210> 7081
<400> 7081
000
<210> 7082
<400> 7082
000
<210> 7083
<400> 7083
000
<210> 7084
<400> 7084
000
<210> 7085
<400> 7085
000
<210> 7086
<400> 7086
000
<210> 7087
<400> 7087
000
<210> 7088
<400> 7088
000
<210> 7089
<400> 7089
000
<210> 7090
<400> 7090
000
<210> 7091
<400> 7091
000
<210> 7092
<400> 7092
000
<210> 7093
<400> 7093
000
<210> 7094
<400> 7094
000
<210> 7095
<400> 7095
000
<210> 7096
<400> 7096
000
<210> 7097
<400> 7097
000
<210> 7098
<400> 7098
000
<210> 7099
<400> 7099
000
<210> 7100
<400> 7100
000
<210> 7101
<400> 7101
000
<210> 7102
<400> 7102
000
<210> 7103
<400> 7103
000
<210> 7104
<400> 7104
000
<210> 7105
<400> 7105
000
<210> 7106
<400> 7106
000
<210> 7107
<400> 7107
000
<210> 7108
<400> 7108
000
<210> 7109
<400> 7109
000
<210> 7110
<400> 7110
000
<210> 7111
<400> 7111
000
<210> 7112
<400> 7112
000
<210> 7113
<400> 7113
000
<210> 7114
<400> 7114
000
<210> 7115
<400> 7115
000
<210> 7116
<400> 7116
000
<210> 7117
<400> 7117
000
<210> 7118
<400> 7118
000
<210> 7119
<400> 7119
000
<210> 7120
<400> 7120
000
<210> 7121
<400> 7121
000
<210> 7122
<400> 7122
000
<210> 7123
<400> 7123
000
<210> 7124
<400> 7124
000
<210> 7125
<400> 7125
000
<210> 7126
<400> 7126
000
<210> 7127
<400> 7127
000
<210> 7128
<400> 7128
000
<210> 7129
<400> 7129
000
<210> 7130
<400> 7130
000
<210> 7131
<400> 7131
000
<210> 7132
<400> 7132
000
<210> 7133
<400> 7133
000
<210> 7134
<400> 7134
000
<210> 7135
<400> 7135
000
<210> 7136
<400> 7136
000
<210> 7137
<400> 7137
000
<210> 7138
<400> 7138
000
<210> 7139
<400> 7139
000
<210> 7140
<400> 7140
000
<210> 7141
<400> 7141
000
<210> 7142
<400> 7142
000
<210> 7143
<400> 7143
000
<210> 7144
<400> 7144
000
<210> 7145
<400> 7145
000
<210> 7146
<400> 7146
000
<210> 7147
<400> 7147
000
<210> 7148
<400> 7148
000
<210> 7149
<400> 7149
000
<210> 7150
<400> 7150
000
<210> 7151
<400> 7151
000
<210> 7152
<400> 7152
000
<210> 7153
<400> 7153
000
<210> 7154
<400> 7154
000
<210> 7155
<400> 7155
000
<210> 7156
<400> 7156
000
<210> 7157
<400> 7157
000
<210> 7158
<400> 7158
000
<210> 7159
<400> 7159
000
<210> 7160
<400> 7160
000
<210> 7161
<400> 7161
000
<210> 7162
<400> 7162
000
<210> 7163
<400> 7163
000
<210> 7164
<400> 7164
000
<210> 7165
<400> 7165
000
<210> 7166
<400> 7166
000
<210> 7167
<400> 7167
000
<210> 7168
<400> 7168
000
<210> 7169
<400> 7169
000
<210> 7170
<400> 7170
000
<210> 7171
<400> 7171
000
<210> 7172
<400> 7172
000
<210> 7173
<400> 7173
000
<210> 7174
<400> 7174
000
<210> 7175
<400> 7175
000
<210> 7176
<400> 7176
000
<210> 7177
<400> 7177
000
<210> 7178
<400> 7178
000
<210> 7179
<400> 7179
000
<210> 7180
<400> 7180
000
<210> 7181
<400> 7181
000
<210> 7182
<400> 7182
000
<210> 7183
<400> 7183
000
<210> 7184
<400> 7184
000
<210> 7185
<400> 7185
000
<210> 7186
<400> 7186
000
<210> 7187
<400> 7187
000
<210> 7188
<400> 7188
000
<210> 7189
<400> 7189
000
<210> 7190
<400> 7190
000
<210> 7191
<400> 7191
000
<210> 7192
<400> 7192
000
<210> 7193
<400> 7193
000
<210> 7194
<400> 7194
000
<210> 7195
<400> 7195
000
<210> 7196
<400> 7196
000
<210> 7197
<400> 7197
000
<210> 7198
<400> 7198
000
<210> 7199
<400> 7199
000
<210> 7200
<400> 7200
000
<210> 7201
<400> 7201
000
<210> 7202
<400> 7202
000
<210> 7203
<400> 7203
000
<210> 7204
<400> 7204
000
<210> 7205
<400> 7205
000
<210> 7206
<400> 7206
000
<210> 7207
<400> 7207
000
<210> 7208
<400> 7208
000
<210> 7209
<400> 7209
000
<210> 7210
<400> 7210
000
<210> 7211
<400> 7211
000
<210> 7212
<400> 7212
000
<210> 7213
<400> 7213
000
<210> 7214
<400> 7214
000
<210> 7215
<400> 7215
000
<210> 7216
<400> 7216
000
<210> 7217
<400> 7217
000
<210> 7218
<400> 7218
000
<210> 7219
<400> 7219
000
<210> 7220
<400> 7220
000
<210> 7221
<400> 7221
000
<210> 7222
<400> 7222
000
<210> 7223
<400> 7223
000
<210> 7224
<400> 7224
000
<210> 7225
<400> 7225
000
<210> 7226
<400> 7226
000
<210> 7227
<400> 7227
000
<210> 7228
<400> 7228
000
<210> 7229
<400> 7229
000
<210> 7230
<400> 7230
000
<210> 7231
<400> 7231
000
<210> 7232
<400> 7232
000
<210> 7233
<400> 7233
000
<210> 7234
<400> 7234
000
<210> 7235
<400> 7235
000
<210> 7236
<400> 7236
000
<210> 7237
<400> 7237
000
<210> 7238
<400> 7238
000
<210> 7239
<400> 7239
000
<210> 7240
<400> 7240
000
<210> 7241
<400> 7241
000
<210> 7242
<400> 7242
000
<210> 7243
<400> 7243
000
<210> 7244
<400> 7244
000
<210> 7245
<400> 7245
000
<210> 7246
<400> 7246
000
<210> 7247
<400> 7247
000
<210> 7248
<400> 7248
000
<210> 7249
<400> 7249
000
<210> 7250
<400> 7250
000
<210> 7251
<400> 7251
000
<210> 7252
<400> 7252
000
<210> 7253
<400> 7253
000
<210> 7254
<400> 7254
000
<210> 7255
<400> 7255
000
<210> 7256
<400> 7256
000
<210> 7257
<400> 7257
000
<210> 7258
<400> 7258
000
<210> 7259
<400> 7259
000
<210> 7260
<400> 7260
000
<210> 7261
<400> 7261
000
<210> 7262
<400> 7262
000
<210> 7263
<400> 7263
000
<210> 7264
<400> 7264
000
<210> 7265
<400> 7265
000
<210> 7266
<400> 7266
000
<210> 7267
<400> 7267
000
<210> 7268
<400> 7268
000
<210> 7269
<400> 7269
000
<210> 7270
<400> 7270
000
<210> 7271
<400> 7271
000
<210> 7272
<400> 7272
000
<210> 7273
<400> 7273
000
<210> 7274
<400> 7274
000
<210> 7275
<400> 7275
000
<210> 7276
<400> 7276
000
<210> 7277
<400> 7277
000
<210> 7278
<400> 7278
000
<210> 7279
<400> 7279
000
<210> 7280
<400> 7280
000
<210> 7281
<400> 7281
000
<210> 7282
<400> 7282
000
<210> 7283
<400> 7283
000
<210> 7284
<400> 7284
000
<210> 7285
<400> 7285
000
<210> 7286
<400> 7286
000
<210> 7287
<400> 7287
000
<210> 7288
<400> 7288
000
<210> 7289
<400> 7289
000
<210> 7290
<400> 7290
000
<210> 7291
<400> 7291
000
<210> 7292
<400> 7292
000
<210> 7293
<400> 7293
000
<210> 7294
<400> 7294
000
<210> 7295
<400> 7295
000
<210> 7296
<400> 7296
000
<210> 7297
<400> 7297
000
<210> 7298
<400> 7298
000
<210> 7299
<400> 7299
000
<210> 7300
<400> 7300
000
<210> 7301
<400> 7301
000
<210> 7302
<400> 7302
000
<210> 7303
<400> 7303
000
<210> 7304
<400> 7304
000
<210> 7305
<400> 7305
000
<210> 7306
<400> 7306
000
<210> 7307
<400> 7307
000
<210> 7308
<400> 7308
000
<210> 7309
<400> 7309
000
<210> 7310
<400> 7310
000
<210> 7311
<400> 7311
000
<210> 7312
<400> 7312
000
<210> 7313
<400> 7313
000
<210> 7314
<400> 7314
000
<210> 7315
<400> 7315
000
<210> 7316
<400> 7316
000
<210> 7317
<400> 7317
000
<210> 7318
<400> 7318
000
<210> 7319
<400> 7319
000
<210> 7320
<400> 7320
000
<210> 7321
<400> 7321
000
<210> 7322
<400> 7322
000
<210> 7323
<400> 7323
000
<210> 7324
<400> 7324
000
<210> 7325
<400> 7325
000
<210> 7326
<400> 7326
000
<210> 7327
<400> 7327
000
<210> 7328
<400> 7328
000
<210> 7329
<400> 7329
000
<210> 7330
<400> 7330
000
<210> 7331
<400> 7331
000
<210> 7332
<400> 7332
000
<210> 7333
<400> 7333
000
<210> 7334
<400> 7334
000
<210> 7335
<400> 7335
000
<210> 7336
<400> 7336
000
<210> 7337
<400> 7337
000
<210> 7338
<400> 7338
000
<210> 7339
<400> 7339
000
<210> 7340
<400> 7340
000
<210> 7341
<400> 7341
000
<210> 7342
<400> 7342
000
<210> 7343
<400> 7343
000
<210> 7344
<400> 7344
000
<210> 7345
<400> 7345
000
<210> 7346
<400> 7346
000
<210> 7347
<400> 7347
000
<210> 7348
<400> 7348
000
<210> 7349
<400> 7349
000
<210> 7350
<400> 7350
000
<210> 7351
<400> 7351
000
<210> 7352
<400> 7352
000
<210> 7353
<400> 7353
000
<210> 7354
<400> 7354
000
<210> 7355
<400> 7355
000
<210> 7356
<400> 7356
000
<210> 7357
<400> 7357
000
<210> 7358
<400> 7358
000
<210> 7359
<400> 7359
000
<210> 7360
<400> 7360
000
<210> 7361
<400> 7361
000
<210> 7362
<400> 7362
000
<210> 7363
<400> 7363
000
<210> 7364
<400> 7364
000
<210> 7365
<400> 7365
000
<210> 7366
<400> 7366
000
<210> 7367
<400> 7367
000
<210> 7368
<400> 7368
000
<210> 7369
<400> 7369
000
<210> 7370
<400> 7370
000
<210> 7371
<400> 7371
000
<210> 7372
<400> 7372
000
<210> 7373
<400> 7373
000
<210> 7374
<400> 7374
000
<210> 7375
<400> 7375
000
<210> 7376
<400> 7376
000
<210> 7377
<400> 7377
000
<210> 7378
<400> 7378
000
<210> 7379
<400> 7379
000
<210> 7380
<400> 7380
000
<210> 7381
<400> 7381
000
<210> 7382
<400> 7382
000
<210> 7383
<400> 7383
000
<210> 7384
<400> 7384
000
<210> 7385
<400> 7385
000
<210> 7386
<400> 7386
000
<210> 7387
<400> 7387
000
<210> 7388
<400> 7388
000
<210> 7389
<400> 7389
000
<210> 7390
<400> 7390
000
<210> 7391
<400> 7391
000
<210> 7392
<400> 7392
000
<210> 7393
<400> 7393
000
<210> 7394
<400> 7394
000
<210> 7395
<400> 7395
000
<210> 7396
<400> 7396
000
<210> 7397
<400> 7397
000
<210> 7398
<400> 7398
000
<210> 7399
<400> 7399
000
<210> 7400
<400> 7400
000
<210> 7401
<400> 7401
000
<210> 7402
<400> 7402
000
<210> 7403
<400> 7403
000
<210> 7404
<400> 7404
000
<210> 7405
<400> 7405
000
<210> 7406
<400> 7406
000
<210> 7407
<400> 7407
000
<210> 7408
<400> 7408
000
<210> 7409
<400> 7409
000
<210> 7410
<400> 7410
000
<210> 7411
<400> 7411
000
<210> 7412
<400> 7412
000
<210> 7413
<400> 7413
000
<210> 7414
<400> 7414
000
<210> 7415
<400> 7415
000
<210> 7416
<400> 7416
000
<210> 7417
<400> 7417
000
<210> 7418
<400> 7418
000
<210> 7419
<400> 7419
000
<210> 7420
<400> 7420
000
<210> 7421
<400> 7421
000
<210> 7422
<400> 7422
000
<210> 7423
<400> 7423
000
<210> 7424
<400> 7424
000
<210> 7425
<400> 7425
000
<210> 7426
<400> 7426
000
<210> 7427
<400> 7427
000
<210> 7428
<400> 7428
000
<210> 7429
<400> 7429
000
<210> 7430
<400> 7430
000
<210> 7431
<400> 7431
000
<210> 7432
<400> 7432
000
<210> 7433
<400> 7433
000
<210> 7434
<400> 7434
000
<210> 7435
<400> 7435
000
<210> 7436
<400> 7436
000
<210> 7437
<400> 7437
000
<210> 7438
<400> 7438
000
<210> 7439
<400> 7439
000
<210> 7440
<400> 7440
000
<210> 7441
<400> 7441
000
<210> 7442
<400> 7442
000
<210> 7443
<400> 7443
000
<210> 7444
<400> 7444
000
<210> 7445
<400> 7445
000
<210> 7446
<400> 7446
000
<210> 7447
<400> 7447
000
<210> 7448
<400> 7448
000
<210> 7449
<400> 7449
000
<210> 7450
<400> 7450
000
<210> 7451
<400> 7451
000
<210> 7452
<400> 7452
000
<210> 7453
<400> 7453
000
<210> 7454
<400> 7454
000
<210> 7455
<400> 7455
000
<210> 7456
<400> 7456
000
<210> 7457
<400> 7457
000
<210> 7458
<400> 7458
000
<210> 7459
<400> 7459
000
<210> 7460
<400> 7460
000
<210> 7461
<400> 7461
000
<210> 7462
<400> 7462
000
<210> 7463
<400> 7463
000
<210> 7464
<400> 7464
000
<210> 7465
<400> 7465
000
<210> 7466
<400> 7466
000
<210> 7467
<400> 7467
000
<210> 7468
<400> 7468
000
<210> 7469
<400> 7469
000
<210> 7470
<400> 7470
000
<210> 7471
<400> 7471
000
<210> 7472
<400> 7472
000
<210> 7473
<400> 7473
000
<210> 7474
<400> 7474
000
<210> 7475
<400> 7475
000
<210> 7476
<400> 7476
000
<210> 7477
<400> 7477
000
<210> 7478
<400> 7478
000
<210> 7479
<400> 7479
000
<210> 7480
<400> 7480
000
<210> 7481
<400> 7481
000
<210> 7482
<400> 7482
000
<210> 7483
<400> 7483
000
<210> 7484
<400> 7484
000
<210> 7485
<400> 7485
000
<210> 7486
<400> 7486
000
<210> 7487
<400> 7487
000
<210> 7488
<400> 7488
000
<210> 7489
<400> 7489
000
<210> 7490
<400> 7490
000
<210> 7491
<400> 7491
000
<210> 7492
<400> 7492
000
<210> 7493
<400> 7493
000
<210> 7494
<400> 7494
000
<210> 7495
<400> 7495
000
<210> 7496
<400> 7496
000
<210> 7497
<400> 7497
000
<210> 7498
<400> 7498
000
<210> 7499
<400> 7499
000
<210> 7500
<400> 7500
000
<210> 7501
<400> 7501
000
<210> 7502
<400> 7502
000
<210> 7503
<400> 7503
000
<210> 7504
<400> 7504
000
<210> 7505
<400> 7505
000
<210> 7506
<400> 7506
000
<210> 7507
<400> 7507
000
<210> 7508
<400> 7508
000
<210> 7509
<400> 7509
000
<210> 7510
<400> 7510
000
<210> 7511
<400> 7511
000
<210> 7512
<400> 7512
000
<210> 7513
<400> 7513
000
<210> 7514
<400> 7514
000
<210> 7515
<400> 7515
000
<210> 7516
<400> 7516
000
<210> 7517
<400> 7517
000
<210> 7518
<400> 7518
000
<210> 7519
<400> 7519
000
<210> 7520
<400> 7520
000
<210> 7521
<400> 7521
000
<210> 7522
<400> 7522
000
<210> 7523
<400> 7523
000
<210> 7524
<400> 7524
000
<210> 7525
<400> 7525
000
<210> 7526
<400> 7526
000
<210> 7527
<400> 7527
000
<210> 7528
<400> 7528
000
<210> 7529
<400> 7529
000
<210> 7530
<400> 7530
000
<210> 7531
<400> 7531
000
<210> 7532
<400> 7532
000
<210> 7533
<400> 7533
000
<210> 7534
<400> 7534
000
<210> 7535
<400> 7535
000
<210> 7536
<400> 7536
000
<210> 7537
<400> 7537
000
<210> 7538
<400> 7538
000
<210> 7539
<400> 7539
000
<210> 7540
<400> 7540
000
<210> 7541
<400> 7541
000
<210> 7542
<400> 7542
000
<210> 7543
<400> 7543
000
<210> 7544
<400> 7544
000
<210> 7545
<400> 7545
000
<210> 7546
<400> 7546
000
<210> 7547
<400> 7547
000
<210> 7548
<400> 7548
000
<210> 7549
<400> 7549
000
<210> 7550
<400> 7550
000
<210> 7551
<400> 7551
000
<210> 7552
<400> 7552
000
<210> 7553
<400> 7553
000
<210> 7554
<400> 7554
000
<210> 7555
<400> 7555
000
<210> 7556
<400> 7556
000
<210> 7557
<400> 7557
000
<210> 7558
<400> 7558
000
<210> 7559
<400> 7559
000
<210> 7560
<400> 7560
000
<210> 7561
<400> 7561
000
<210> 7562
<400> 7562
000
<210> 7563
<400> 7563
000
<210> 7564
<400> 7564
000
<210> 7565
<400> 7565
000
<210> 7566
<400> 7566
000
<210> 7567
<400> 7567
000
<210> 7568
<400> 7568
000
<210> 7569
<400> 7569
000
<210> 7570
<400> 7570
000
<210> 7571
<400> 7571
000
<210> 7572
<400> 7572
000
<210> 7573
<400> 7573
000
<210> 7574
<400> 7574
000
<210> 7575
<400> 7575
000
<210> 7576
<400> 7576
000
<210> 7577
<400> 7577
000
<210> 7578
<400> 7578
000
<210> 7579
<400> 7579
000
<210> 7580
<400> 7580
000
<210> 7581
<400> 7581
000
<210> 7582
<400> 7582
000
<210> 7583
<400> 7583
000
<210> 7584
<400> 7584
000
<210> 7585
<400> 7585
000
<210> 7586
<400> 7586
000
<210> 7587
<400> 7587
000
<210> 7588
<400> 7588
000
<210> 7589
<400> 7589
000
<210> 7590
<400> 7590
000
<210> 7591
<400> 7591
000
<210> 7592
<400> 7592
000
<210> 7593
<400> 7593
000
<210> 7594
<400> 7594
000
<210> 7595
<400> 7595
000
<210> 7596
<400> 7596
000
<210> 7597
<400> 7597
000
<210> 7598
<400> 7598
000
<210> 7599
<400> 7599
000
<210> 7600
<400> 7600
000
<210> 7601
<400> 7601
000
<210> 7602
<400> 7602
000
<210> 7603
<400> 7603
000
<210> 7604
<400> 7604
000
<210> 7605
<400> 7605
000
<210> 7606
<400> 7606
000
<210> 7607
<400> 7607
000
<210> 7608
<400> 7608
000
<210> 7609
<400> 7609
000
<210> 7610
<400> 7610
000
<210> 7611
<400> 7611
000
<210> 7612
<400> 7612
000
<210> 7613
<400> 7613
000
<210> 7614
<400> 7614
000
<210> 7615
<400> 7615
000
<210> 7616
<400> 7616
000
<210> 7617
<400> 7617
000
<210> 7618
<400> 7618
000
<210> 7619
<400> 7619
000
<210> 7620
<400> 7620
000
<210> 7621
<400> 7621
000
<210> 7622
<400> 7622
000
<210> 7623
<400> 7623
000
<210> 7624
<400> 7624
000
<210> 7625
<400> 7625
000
<210> 7626
<400> 7626
000
<210> 7627
<400> 7627
000
<210> 7628
<400> 7628
000
<210> 7629
<400> 7629
000
<210> 7630
<400> 7630
000
<210> 7631
<400> 7631
000
<210> 7632
<400> 7632
000
<210> 7633
<400> 7633
000
<210> 7634
<400> 7634
000
<210> 7635
<400> 7635
000
<210> 7636
<400> 7636
000
<210> 7637
<400> 7637
000
<210> 7638
<400> 7638
000
<210> 7639
<400> 7639
000
<210> 7640
<400> 7640
000
<210> 7641
<400> 7641
000
<210> 7642
<400> 7642
000
<210> 7643
<400> 7643
000
<210> 7644
<400> 7644
000
<210> 7645
<400> 7645
000
<210> 7646
<400> 7646
000
<210> 7647
<400> 7647
000
<210> 7648
<400> 7648
000
<210> 7649
<400> 7649
000
<210> 7650
<400> 7650
000
<210> 7651
<400> 7651
000
<210> 7652
<400> 7652
000
<210> 7653
<400> 7653
000
<210> 7654
<400> 7654
000
<210> 7655
<400> 7655
000
<210> 7656
<400> 7656
000
<210> 7657
<400> 7657
000
<210> 7658
<400> 7658
000
<210> 7659
<400> 7659
000
<210> 7660
<400> 7660
000
<210> 7661
<400> 7661
000
<210> 7662
<400> 7662
000
<210> 7663
<400> 7663
000
<210> 7664
<400> 7664
000
<210> 7665
<400> 7665
000
<210> 7666
<400> 7666
000
<210> 7667
<400> 7667
000
<210> 7668
<400> 7668
000
<210> 7669
<400> 7669
000
<210> 7670
<400> 7670
000
<210> 7671
<400> 7671
000
<210> 7672
<400> 7672
000
<210> 7673
<400> 7673
000
<210> 7674
<400> 7674
000
<210> 7675
<400> 7675
000
<210> 7676
<400> 7676
000
<210> 7677
<400> 7677
000
<210> 7678
<400> 7678
000
<210> 7679
<400> 7679
000
<210> 7680
<400> 7680
000
<210> 7681
<400> 7681
000
<210> 7682
<400> 7682
000
<210> 7683
<400> 7683
000
<210> 7684
<400> 7684
000
<210> 7685
<400> 7685
000
<210> 7686
<400> 7686
000
<210> 7687
<400> 7687
000
<210> 7688
<400> 7688
000
<210> 7689
<400> 7689
000
<210> 7690
<400> 7690
000
<210> 7691
<400> 7691
000
<210> 7692
<400> 7692
000
<210> 7693
<400> 7693
000
<210> 7694
<400> 7694
000
<210> 7695
<400> 7695
000
<210> 7696
<400> 7696
000
<210> 7697
<400> 7697
000
<210> 7698
<400> 7698
000
<210> 7699
<400> 7699
000
<210> 7700
<400> 7700
000
<210> 7701
<400> 7701
000
<210> 7702
<400> 7702
000
<210> 7703
<400> 7703
000
<210> 7704
<400> 7704
000
<210> 7705
<400> 7705
000
<210> 7706
<400> 7706
000
<210> 7707
<400> 7707
000
<210> 7708
<400> 7708
000
<210> 7709
<400> 7709
000
<210> 7710
<400> 7710
000
<210> 7711
<400> 7711
000
<210> 7712
<400> 7712
000
<210> 7713
<400> 7713
000
<210> 7714
<400> 7714
000
<210> 7715
<400> 7715
000
<210> 7716
<400> 7716
000
<210> 7717
<400> 7717
000
<210> 7718
<400> 7718
000
<210> 7719
<400> 7719
000
<210> 7720
<400> 7720
000
<210> 7721
<400> 7721
000
<210> 7722
<400> 7722
000
<210> 7723
<400> 7723
000
<210> 7724
<400> 7724
000
<210> 7725
<400> 7725
000
<210> 7726
<400> 7726
000
<210> 7727
<400> 7727
000
<210> 7728
<400> 7728
000
<210> 7729
<400> 7729
000
<210> 7730
<400> 7730
000
<210> 7731
<400> 7731
000
<210> 7732
<400> 7732
000
<210> 7733
<400> 7733
000
<210> 7734
<400> 7734
000
<210> 7735
<400> 7735
000
<210> 7736
<400> 7736
000
<210> 7737
<400> 7737
000
<210> 7738
<400> 7738
000
<210> 7739
<400> 7739
000
<210> 7740
<400> 7740
000
<210> 7741
<400> 7741
000
<210> 7742
<400> 7742
000
<210> 7743
<400> 7743
000
<210> 7744
<400> 7744
000
<210> 7745
<400> 7745
000
<210> 7746
<400> 7746
000
<210> 7747
<400> 7747
000
<210> 7748
<400> 7748
000
<210> 7749
<400> 7749
000
<210> 7750
<400> 7750
000
<210> 7751
<400> 7751
000
<210> 7752
<400> 7752
000
<210> 7753
<400> 7753
000
<210> 7754
<400> 7754
000
<210> 7755
<400> 7755
000
<210> 7756
<400> 7756
000
<210> 7757
<400> 7757
000
<210> 7758
<400> 7758
000
<210> 7759
<400> 7759
000
<210> 7760
<400> 7760
000
<210> 7761
<400> 7761
000
<210> 7762
<400> 7762
000
<210> 7763
<400> 7763
000
<210> 7764
<400> 7764
000
<210> 7765
<400> 7765
000
<210> 7766
<400> 7766
000
<210> 7767
<400> 7767
000
<210> 7768
<400> 7768
000
<210> 7769
<400> 7769
000
<210> 7770
<400> 7770
000
<210> 7771
<400> 7771
000
<210> 7772
<400> 7772
000
<210> 7773
<400> 7773
000
<210> 7774
<400> 7774
000
<210> 7775
<400> 7775
000
<210> 7776
<400> 7776
000
<210> 7777
<400> 7777
000
<210> 7778
<400> 7778
000
<210> 7779
<400> 7779
000
<210> 7780
<400> 7780
000
<210> 7781
<400> 7781
000
<210> 7782
<400> 7782
000
<210> 7783
<400> 7783
000
<210> 7784
<400> 7784
000
<210> 7785
<400> 7785
000
<210> 7786
<400> 7786
000
<210> 7787
<400> 7787
000
<210> 7788
<400> 7788
000
<210> 7789
<400> 7789
000
<210> 7790
<400> 7790
000
<210> 7791
<400> 7791
000
<210> 7792
<400> 7792
000
<210> 7793
<400> 7793
000
<210> 7794
<400> 7794
000
<210> 7795
<400> 7795
000
<210> 7796
<400> 7796
000
<210> 7797
<400> 7797
000
<210> 7798
<400> 7798
000
<210> 7799
<400> 7799
000
<210> 7800
<400> 7800
000
<210> 7801
<400> 7801
000
<210> 7802
<400> 7802
000
<210> 7803
<400> 7803
000
<210> 7804
<400> 7804
000
<210> 7805
<400> 7805
000
<210> 7806
<211> 16
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 7806
guuuuagagc uaugcu 16
<210> 7807
<211> 90
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 7807
guuuaagagc uaugcuggaa acagcauagc aaguuuaaau aaggcuaguc cguuaucaac 60
uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 90
<210> 7808
<211> 67
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 7808
agcauagcaa guuaaaauaa ggcuaguccg uuaucaacuu gaaaaagugg caccgagucg 60
gugcuuu 67
<210> 7809
<211> 85
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 7809
guuggaacca uucaaaacag cauagcaagu uaaaauaagg cuaguccguu aucaacuuga 60
aaaaguggca ccgagucggu gcuuu 85
<210> 7810
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Tobacco etch virus
<400> 7810
Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly
1 5
<210> 7811
<211> 80
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 7811
guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc cguuaucaac uugaaaaagu 60
ggcaccgagu cggugcuuuu 80
<210> 7812
<211> 67
<212> РНК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
олигонуклеотид"
<400> 7812
aacagcauag caaguuaaaa uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag 60
ucggugc 67
<210> 7813
<400> 7813
000
<210> 7814
<400> 7814
000
<210> 7815
<400> 7815
000
<210> 7816
<400> 7816
000
<210> 7817
<400> 7817
000
<210> 7818
<400> 7818
000
<210> 7819
<400> 7819
000
<210> 7820
<400> 7820
000
<210> 7821
<211> 1393
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7821
Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly
1 5 10 15
Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu
20 25 30
Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg
35 40 45
His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly
50 55 60
Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr
65 70 75 80
Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn
85 90 95
Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser
100 105 110
Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly
115 120 125
Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr
130 135 140
His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe
165 170 175
Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu
180 185 190
Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro
195 200 205
Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu
210 215 220
Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu
245 250 255
Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu
260 265 270
Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala
275 280 285
Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu
290 295 300
Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile
305 310 315 320
Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His
325 330 335
His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro
340 345 350
Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala
355 360 365
Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile
370 375 380
Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys
385 390 395 400
Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly
405 410 415
Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg
420 425 430
Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile
435 440 445
Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala
450 455 460
Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr
465 470 475 480
Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala
485 490 495
Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn
500 505 510
Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val
515 520 525
Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys
530 535 540
Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu
545 550 555 560
Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr
565 570 575
Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu
580 585 590
Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile
595 600 605
Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu
610 615 620
Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile
625 630 635 640
Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met
645 650 655
Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg
660 665 670
Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu
675 680 685
Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu
690 695 700
Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln
705 710 715 720
Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala
725 730 735
Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val
740 745 750
Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val
755 760 765
Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn
770 775 780
Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly
785 790 795 800
Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn
805 810 815
Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val
820 825 830
Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His
835 840 845
Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val
850 855 860
Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser
865 870 875 880
Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn
885 890 895
Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu
900 905 910
Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln
915 920 925
Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp
930 935 940
Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu
945 950 955 960
Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys
965 970 975
Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala
980 985 990
His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys
995 1000 1005
Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val
1010 1015 1020
Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly
1025 1030 1035
Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe
1040 1045 1050
Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg
1055 1060 1065
Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp
1070 1075 1080
Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro
1085 1090 1095
Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe
1100 1105 1110
Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile
1115 1120 1125
Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp
1130 1135 1140
Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu
1145 1150 1155
Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly
1160 1165 1170
Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp
1175 1180 1185
Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile
1190 1195 1200
Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg
1205 1210 1215
Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu
1220 1225 1230
Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser
1235 1240 1245
His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys
1250 1255 1260
Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile
1265 1270 1275
Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala
1280 1285 1290
Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys
1295 1300 1305
Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu
1310 1315 1320
Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr
1325 1330 1335
Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala
1340 1345 1350
Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile
1355 1360 1365
Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys
1370 1375 1380
Lys Arg Lys Val His His His His His His
1385 1390
<210> 7822
<211> 1393
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7822
Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly
1 5 10 15
Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu
20 25 30
Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg
35 40 45
His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly
50 55 60
Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr
65 70 75 80
Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Leu Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn
85 90 95
Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser
100 105 110
Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly
115 120 125
Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr
130 135 140
His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe
165 170 175
Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu
180 185 190
Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro
195 200 205
Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu
210 215 220
Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu
245 250 255
Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu
260 265 270
Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala
275 280 285
Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu
290 295 300
Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile
305 310 315 320
Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His
325 330 335
His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro
340 345 350
Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala
355 360 365
Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile
370 375 380
Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys
385 390 395 400
Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly
405 410 415
Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg
420 425 430
Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile
435 440 445
Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala
450 455 460
Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr
465 470 475 480
Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala
485 490 495
Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn
500 505 510
Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val
515 520 525
Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys
530 535 540
Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu
545 550 555 560
Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr
565 570 575
Phe Lys Lys Ile Glu Glu Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu
580 585 590
Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile
595 600 605
Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu
610 615 620
Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile
625 630 635 640
Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met
645 650 655
Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg
660 665 670
Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu
675 680 685
Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu
690 695 700
Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln
705 710 715 720
Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala
725 730 735
Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val
740 745 750
Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val
755 760 765
Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn
770 775 780
Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly
785 790 795 800
Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn
805 810 815
Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val
820 825 830
Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His
835 840 845
Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val
850 855 860
Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser
865 870 875 880
Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn
885 890 895
Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu
900 905 910
Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln
915 920 925
Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp
930 935 940
Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu
945 950 955 960
Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys
965 970 975
Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala
980 985 990
His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys
995 1000 1005
Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val
1010 1015 1020
Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly
1025 1030 1035
Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe
1040 1045 1050
Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg
1055 1060 1065
Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp
1070 1075 1080
Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro
1085 1090 1095
Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe
1100 1105 1110
Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile
1115 1120 1125
Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp
1130 1135 1140
Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu
1145 1150 1155
Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly
1160 1165 1170
Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp
1175 1180 1185
Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile
1190 1195 1200
Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg
1205 1210 1215
Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu
1220 1225 1230
Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser
1235 1240 1245
His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys
1250 1255 1260
Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile
1265 1270 1275
Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala
1280 1285 1290
Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys
1295 1300 1305
Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu
1310 1315 1320
Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr
1325 1330 1335
Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala
1340 1345 1350
Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile
1355 1360 1365
Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys
1370 1375 1380
Lys Arg Lys Val His His His His His His
1385 1390
<210> 7823
<211> 1399
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7823
Met Gly Ser Ser His His His His His His His His Glu Asn Leu Tyr
1 5 10 15
Phe Gln Gly Ser Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly
20 25 30
Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro
35 40 45
Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys
50 55 60
Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu
65 70 75 80
Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys
85 90 95
Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys
100 105 110
Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu
115 120 125
Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp
130 135 140
Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys
145 150 155 160
Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu
165 170 175
Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly
180 185 190
Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu
195 200 205
Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser
210 215 220
Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg
225 230 235 240
Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly
245 250 255
Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe
260 265 270
Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys
275 280 285
Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp
290 295 300
Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile
305 310 315 320
Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro
325 330 335
Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu
340 345 350
Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys
355 360 365
Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp
370 375 380
Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu
385 390 395 400
Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu
405 410 415
Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His
420 425 430
Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp
435 440 445
Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu
450 455 460
Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser
465 470 475 480
Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp
485 490 495
Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile
500 505 510
Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu
515 520 525
Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu
530 535 540
Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu
545 550 555 560
Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn
565 570 575
Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile
580 585 590
Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn
595 600 605
Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys
610 615 620
Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val
625 630 635 640
Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu
645 650 655
Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys
660 665 670
Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn
675 680 685
Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys
690 695 700
Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp
705 710 715 720
Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln
725 730 735
Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala
740 745 750
Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val
755 760 765
Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala
770 775 780
Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg
785 790 795 800
Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu
805 810 815
Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr
820 825 830
Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu
835 840 845
Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln
850 855 860
Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser
865 870 875 880
Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val
885 890 895
Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile
900 905 910
Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu
915 920 925
Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr
930 935 940
Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn
945 950 955 960
Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile
965 970 975
Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe
980 985 990
Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr
995 1000 1005
Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys
1010 1015 1020
Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val
1025 1030 1035
Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr
1040 1045 1050
Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr
1055 1060 1065
Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile
1070 1075 1080
Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg
1085 1090 1095
Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn
1100 1105 1110
Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu
1115 1120 1125
Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys
1130 1135 1140
Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr
1145 1150 1155
Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys
1160 1165 1170
Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile
1175 1180 1185
Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu
1190 1195 1200
Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu
1205 1210 1215
Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met
1220 1225 1230
Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu
1235 1240 1245
Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu
1250 1255 1260
Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe
1265 1270 1275
Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile
1280 1285 1290
Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp
1295 1300 1305
Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg
1310 1315 1320
Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu
1325 1330 1335
Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg
1340 1345 1350
Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile
1355 1360 1365
His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser
1370 1375 1380
Gln Leu Gly Gly Asp Gly Gly Gly Ser Pro Lys Lys Lys Arg Lys
1385 1390 1395
Val
<210> 7824
<211> 1396
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7824
Met Ala His His His His His His Gly Gly Ser Pro Lys Lys Lys Arg
1 5 10 15
Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser
20 25 30
Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys
35 40 45
Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu
50 55 60
Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg
65 70 75 80
Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile
85 90 95
Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp
100 105 110
Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys
115 120 125
Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala
130 135 140
Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val
145 150 155 160
Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala
165 170 175
His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn
180 185 190
Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr
195 200 205
Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp
210 215 220
Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu
225 230 235 240
Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly
245 250 255
Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn
260 265 270
Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr
275 280 285
Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala
290 295 300
Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser
305 310 315 320
Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala
325 330 335
Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu
340 345 350
Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe
355 360 365
Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala
370 375 380
Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met
385 390 395 400
Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu
405 410 415
Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His
420 425 430
Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro
435 440 445
Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg
450 455 460
Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala
465 470 475 480
Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu
485 490 495
Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met
500 505 510
Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His
515 520 525
Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val
530 535 540
Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu
545 550 555 560
Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val
565 570 575
Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe
580 585 590
Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu
595 600 605
Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu
610 615 620
Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu
625 630 635 640
Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr
645 650 655
Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg
660 665 670
Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg
675 680 685
Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly
690 695 700
Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr
705 710 715 720
Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser
725 730 735
Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys
740 745 750
Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met
755 760 765
Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn
770 775 780
Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg
785 790 795 800
Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His
805 810 815
Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr
820 825 830
Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn
835 840 845
Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu
850 855 860
Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn
865 870 875 880
Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met
885 890 895
Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg
900 905 910
Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu
915 920 925
Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile
930 935 940
Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr
945 950 955 960
Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys
965 970 975
Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val
980 985 990
Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala
995 1000 1005
Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser
1010 1015 1020
Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met
1025 1030 1035
Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr
1040 1045 1050
Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr
1055 1060 1065
Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn
1070 1075 1080
Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala
1085 1090 1095
Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys
1100 1105 1110
Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu
1115 1120 1125
Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys Lys Asp Trp
1130 1135 1140
Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr Val Ala Tyr
1145 1150 1155
Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys Ser Lys Lys
1160 1165 1170
Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile Met Glu Arg
1175 1180 1185
Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu Ala Lys Gly
1190 1195 1200
Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys Tyr
1205 1210 1215
Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser
1220 1225 1230
Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys
1235 1240 1245
Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys
1250 1255 1260
Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln
1265 1270 1275
His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe
1280 1285 1290
Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu
1295 1300 1305
Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala
1310 1315 1320
Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro
1325 1330 1335
Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr
1340 1345 1350
Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile His Gln Ser
1355 1360 1365
Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser Gln Leu Gly
1370 1375 1380
Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val
1385 1390 1395
<210> 7825
<211> 1386
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7825
Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly
1 5 10 15
Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu
20 25 30
Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg
35 40 45
His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly
50 55 60
Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr
65 70 75 80
Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn
85 90 95
Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser
100 105 110
Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly
115 120 125
Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr
130 135 140
His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe
165 170 175
Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu
180 185 190
Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro
195 200 205
Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu
210 215 220
Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu
245 250 255
Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu
260 265 270
Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala
275 280 285
Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu
290 295 300
Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile
305 310 315 320
Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His
325 330 335
His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro
340 345 350
Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala
355 360 365
Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile
370 375 380
Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys
385 390 395 400
Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly
405 410 415
Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg
420 425 430
Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile
435 440 445
Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala
450 455 460
Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr
465 470 475 480
Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala
485 490 495
Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn
500 505 510
Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val
515 520 525
Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys
530 535 540
Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu
545 550 555 560
Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr
565 570 575
Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu
580 585 590
Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile
595 600 605
Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu
610 615 620
Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile
625 630 635 640
Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met
645 650 655
Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg
660 665 670
Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu
675 680 685
Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu
690 695 700
Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln
705 710 715 720
Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala
725 730 735
Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val
740 745 750
Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val
755 760 765
Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn
770 775 780
Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly
785 790 795 800
Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn
805 810 815
Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val
820 825 830
Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His
835 840 845
Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val
850 855 860
Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser
865 870 875 880
Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn
885 890 895
Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu
900 905 910
Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln
915 920 925
Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp
930 935 940
Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu
945 950 955 960
Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys
965 970 975
Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala
980 985 990
His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys
995 1000 1005
Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val
1010 1015 1020
Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly
1025 1030 1035
Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe
1040 1045 1050
Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg
1055 1060 1065
Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp
1070 1075 1080
Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro
1085 1090 1095
Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe
1100 1105 1110
Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile
1115 1120 1125
Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp
1130 1135 1140
Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu
1145 1150 1155
Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly
1160 1165 1170
Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp
1175 1180 1185
Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile
1190 1195 1200
Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg
1205 1210 1215
Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu
1220 1225 1230
Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser
1235 1240 1245
His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys
1250 1255 1260
Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile
1265 1270 1275
Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala
1280 1285 1290
Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys
1295 1300 1305
Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu
1310 1315 1320
Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr
1325 1330 1335
Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala
1340 1345 1350
Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile
1355 1360 1365
Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp His His His
1370 1375 1380
His His His
1385
<210> 7826
<211> 1389
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7826
Met Ala His His His His His His Gly Gly Ser Asp Lys Lys Tyr Ser
1 5 10 15
Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr
20 25 30
Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr
35 40 45
Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp
50 55 60
Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg
65 70 75 80
Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe
85 90 95
Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu
100 105 110
Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile
115 120 125
Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr
130 135 140
Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly
165 170 175
His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp
180 185 190
Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu
195 200 205
Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala
210 215 220
Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro
225 230 235 240
Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu
245 250 255
Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala
260 265 270
Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu
275 280 285
Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys
290 295 300
Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr
305 310 315 320
Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp
325 330 335
Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln
340 345 350
Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly
355 360 365
Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys
370 375 380
Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu
385 390 395 400
Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp
405 410 415
Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile
420 425 430
Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu
435 440 445
Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro
450 455 460
Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu
465 470 475 480
Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala
485 490 495
Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu
500 505 510
Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe
515 520 525
Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met
530 535 540
Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp
545 550 555 560
Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu
565 570 575
Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly
580 585 590
Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu
595 600 605
Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp
610 615 620
Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu
625 630 635 640
Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys
645 650 655
Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu
660 665 670
Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr
675 680 685
Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met
690 695 700
Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys
705 710 715 720
Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn
725 730 735
Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys
740 745 750
Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn
755 760 765
Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln
770 775 780
Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu
785 790 795 800
Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu
805 810 815
Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met
820 825 830
Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val
835 840 845
Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn
850 855 860
Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val
865 870 875 880
Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu
885 890 895
Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys
900 905 910
Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys
915 920 925
Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile
930 935 940
Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile
945 950 955 960
Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe
965 970 975
Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His
980 985 990
His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile
995 1000 1005
Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr
1010 1015 1020
Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu
1025 1030 1035
Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met
1040 1045 1050
Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg
1055 1060 1065
Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val
1070 1075 1080
Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser
1085 1090 1095
Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly
1100 1105 1110
Gly Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys
1115 1120 1125
Leu Ile Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly
1130 1135 1140
Phe Asp Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys
1145 1150 1155
Val Glu Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu
1160 1165 1170
Leu Gly Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro
1175 1180 1185
Ile Asp Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp
1190 1195 1200
Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn
1205 1210 1215
Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly
1220 1225 1230
Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu
1235 1240 1245
Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu
1250 1255 1260
Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu
1265 1270 1275
Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala
1280 1285 1290
Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg
1295 1300 1305
Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe
1310 1315 1320
Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp
1325 1330 1335
Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu
1340 1345 1350
Asp Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr
1355 1360 1365
Arg Ile Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro
1370 1375 1380
Lys Lys Lys Arg Lys Val
1385
<210> 7827
<211> 1399
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7827
Met Gly Ser Ser His His His His His His His His Glu Asn Leu Tyr
1 5 10 15
Phe Gln Gly Ser Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly
20 25 30
Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro
35 40 45
Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys
50 55 60
Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu
65 70 75 80
Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys
85 90 95
Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys
100 105 110
Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu
115 120 125
Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp
130 135 140
Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys
145 150 155 160
Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu
165 170 175
Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly
180 185 190
Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu
195 200 205
Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser
210 215 220
Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg
225 230 235 240
Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly
245 250 255
Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe
260 265 270
Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys
275 280 285
Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp
290 295 300
Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile
305 310 315 320
Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro
325 330 335
Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu
340 345 350
Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys
355 360 365
Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp
370 375 380
Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu
385 390 395 400
Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu
405 410 415
Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His
420 425 430
Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp
435 440 445
Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu
450 455 460
Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser
465 470 475 480
Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp
485 490 495
Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile
500 505 510
Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu
515 520 525
Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu
530 535 540
Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu
545 550 555 560
Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn
565 570 575
Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile
580 585 590
Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn
595 600 605
Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys
610 615 620
Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val
625 630 635 640
Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu
645 650 655
Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys
660 665 670
Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn
675 680 685
Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys
690 695 700
Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp
705 710 715 720
Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln
725 730 735
Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala
740 745 750
Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val
755 760 765
Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala
770 775 780
Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg
785 790 795 800
Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu
805 810 815
Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr
820 825 830
Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu
835 840 845
Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln
850 855 860
Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser
865 870 875 880
Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val
885 890 895
Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile
900 905 910
Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu
915 920 925
Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr
930 935 940
Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn
945 950 955 960
Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile
965 970 975
Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe
980 985 990
Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr
995 1000 1005
Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys
1010 1015 1020
Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val
1025 1030 1035
Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr
1040 1045 1050
Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr
1055 1060 1065
Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile
1070 1075 1080
Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg
1085 1090 1095
Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn
1100 1105 1110
Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu
1115 1120 1125
Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys
1130 1135 1140
Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr
1145 1150 1155
Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys
1160 1165 1170
Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile
1175 1180 1185
Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu
1190 1195 1200
Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu
1205 1210 1215
Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met
1220 1225 1230
Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu
1235 1240 1245
Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu
1250 1255 1260
Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe
1265 1270 1275
Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile
1280 1285 1290
Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp
1295 1300 1305
Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg
1310 1315 1320
Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu
1325 1330 1335
Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg
1340 1345 1350
Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile
1355 1360 1365
His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser
1370 1375 1380
Gln Leu Gly Gly Asp Gly Gly Gly Ser Pro Lys Lys Lys Arg Lys
1385 1390 1395
Val
<210> 7828
<211> 1393
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7828
Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly
1 5 10 15
Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu
20 25 30
Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg
35 40 45
His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly
50 55 60
Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr
65 70 75 80
Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn
85 90 95
Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser
100 105 110
Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly
115 120 125
Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr
130 135 140
His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe
165 170 175
Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu
180 185 190
Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro
195 200 205
Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu
210 215 220
Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu
245 250 255
Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu
260 265 270
Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala
275 280 285
Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu
290 295 300
Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile
305 310 315 320
Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His
325 330 335
His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro
340 345 350
Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala
355 360 365
Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile
370 375 380
Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys
385 390 395 400
Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly
405 410 415
Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg
420 425 430
Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile
435 440 445
Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala
450 455 460
Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr
465 470 475 480
Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala
485 490 495
Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn
500 505 510
Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val
515 520 525
Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys
530 535 540
Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu
545 550 555 560
Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr
565 570 575
Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu
580 585 590
Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile
595 600 605
Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu
610 615 620
Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile
625 630 635 640
Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met
645 650 655
Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg
660 665 670
Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu
675 680 685
Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu
690 695 700
Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln
705 710 715 720
Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala
725 730 735
Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val
740 745 750
Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val
755 760 765
Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn
770 775 780
Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly
785 790 795 800
Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn
805 810 815
Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val
820 825 830
Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His
835 840 845
Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Ala Val
850 855 860
Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser
865 870 875 880
Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn
885 890 895
Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu
900 905 910
Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln
915 920 925
Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp
930 935 940
Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu
945 950 955 960
Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys
965 970 975
Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala
980 985 990
His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys
995 1000 1005
Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val
1010 1015 1020
Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly
1025 1030 1035
Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe
1040 1045 1050
Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg
1055 1060 1065
Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp
1070 1075 1080
Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro
1085 1090 1095
Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe
1100 1105 1110
Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile
1115 1120 1125
Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp
1130 1135 1140
Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu
1145 1150 1155
Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly
1160 1165 1170
Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp
1175 1180 1185
Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile
1190 1195 1200
Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg
1205 1210 1215
Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu
1220 1225 1230
Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser
1235 1240 1245
His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys
1250 1255 1260
Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile
1265 1270 1275
Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala
1280 1285 1290
Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys
1295 1300 1305
Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu
1310 1315 1320
Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr
1325 1330 1335
Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala
1340 1345 1350
Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile
1355 1360 1365
Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys
1370 1375 1380
Lys Arg Lys Val His His His His His His
1385 1390
<210> 7829
<211> 1393
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7829
Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly
1 5 10 15
Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu
20 25 30
Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg
35 40 45
His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly
50 55 60
Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr
65 70 75 80
Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn
85 90 95
Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser
100 105 110
Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly
115 120 125
Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr
130 135 140
His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe
165 170 175
Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu
180 185 190
Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro
195 200 205
Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu
210 215 220
Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu
245 250 255
Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu
260 265 270
Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala
275 280 285
Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu
290 295 300
Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile
305 310 315 320
Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His
325 330 335
His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro
340 345 350
Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala
355 360 365
Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile
370 375 380
Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys
385 390 395 400
Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly
405 410 415
Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg
420 425 430
Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile
435 440 445
Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala
450 455 460
Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr
465 470 475 480
Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala
485 490 495
Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn
500 505 510
Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val
515 520 525
Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys
530 535 540
Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu
545 550 555 560
Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr
565 570 575
Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu
580 585 590
Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile
595 600 605
Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu
610 615 620
Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile
625 630 635 640
Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met
645 650 655
Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg
660 665 670
Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu
675 680 685
Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu
690 695 700
Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln
705 710 715 720
Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala
725 730 735
Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val
740 745 750
Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val
755 760 765
Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn
770 775 780
Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly
785 790 795 800
Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn
805 810 815
Glu Ala Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val
820 825 830
Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His
835 840 845
Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val
850 855 860
Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser
865 870 875 880
Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn
885 890 895
Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu
900 905 910
Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln
915 920 925
Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp
930 935 940
Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu
945 950 955 960
Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys
965 970 975
Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala
980 985 990
His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys
995 1000 1005
Tyr Pro Ala Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val
1010 1015 1020
Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly
1025 1030 1035
Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe
1040 1045 1050
Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Ala
1055 1060 1065
Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp
1070 1075 1080
Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro
1085 1090 1095
Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe
1100 1105 1110
Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile
1115 1120 1125
Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp
1130 1135 1140
Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu
1145 1150 1155
Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly
1160 1165 1170
Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp
1175 1180 1185
Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile
1190 1195 1200
Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg
1205 1210 1215
Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu
1220 1225 1230
Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser
1235 1240 1245
His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys
1250 1255 1260
Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile
1265 1270 1275
Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala
1280 1285 1290
Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys
1295 1300 1305
Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu
1310 1315 1320
Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr
1325 1330 1335
Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala
1340 1345 1350
Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile
1355 1360 1365
Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys
1370 1375 1380
Lys Arg Lys Val His His His His His His
1385 1390
<210> 7830
<211> 1393
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7830
Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly
1 5 10 15
Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu
20 25 30
Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg
35 40 45
His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly
50 55 60
Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr
65 70 75 80
Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn
85 90 95
Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser
100 105 110
Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly
115 120 125
Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr
130 135 140
His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe
165 170 175
Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu
180 185 190
Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro
195 200 205
Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu
210 215 220
Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu
245 250 255
Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu
260 265 270
Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala
275 280 285
Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu
290 295 300
Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile
305 310 315 320
Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His
325 330 335
His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro
340 345 350
Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala
355 360 365
Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile
370 375 380
Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys
385 390 395 400
Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly
405 410 415
Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg
420 425 430
Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile
435 440 445
Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala
450 455 460
Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr
465 470 475 480
Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala
485 490 495
Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn
500 505 510
Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val
515 520 525
Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys
530 535 540
Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu
545 550 555 560
Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr
565 570 575
Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu
580 585 590
Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile
595 600 605
Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu
610 615 620
Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile
625 630 635 640
Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met
645 650 655
Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg
660 665 670
Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu
675 680 685
Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu
690 695 700
Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln
705 710 715 720
Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala
725 730 735
Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val
740 745 750
Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val
755 760 765
Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn
770 775 780
Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly
785 790 795 800
Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn
805 810 815
Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val
820 825 830
Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His
835 840 845
Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Ala Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val
850 855 860
Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser
865 870 875 880
Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn
885 890 895
Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu
900 905 910
Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln
915 920 925
Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp
930 935 940
Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu
945 950 955 960
Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys
965 970 975
Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala
980 985 990
His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys
995 1000 1005
Tyr Pro Ala Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val
1010 1015 1020
Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly
1025 1030 1035
Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe
1040 1045 1050
Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Ala
1055 1060 1065
Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp
1070 1075 1080
Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro
1085 1090 1095
Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe
1100 1105 1110
Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile
1115 1120 1125
Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp
1130 1135 1140
Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu
1145 1150 1155
Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly
1160 1165 1170
Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp
1175 1180 1185
Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile
1190 1195 1200
Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg
1205 1210 1215
Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu
1220 1225 1230
Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser
1235 1240 1245
His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys
1250 1255 1260
Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile
1265 1270 1275
Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala
1280 1285 1290
Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys
1295 1300 1305
Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu
1310 1315 1320
Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr
1325 1330 1335
Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala
1340 1345 1350
Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile
1355 1360 1365
Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys
1370 1375 1380
Lys Arg Lys Val His His His His His His
1385 1390
<210> 7831
<211> 1393
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная Последовательность
<220>
<221> исходная
<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический
полипептид"
<400> 7831
Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly
1 5 10 15
Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu
20 25 30
Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg
35 40 45
His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly
50 55 60
Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr
65 70 75 80
Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn
85 90 95
Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser
100 105 110
Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly
115 120 125
Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr
130 135 140
His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe
165 170 175
Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu
180 185 190
Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro
195 200 205
Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu
210 215 220
Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu
245 250 255
Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu
260 265 270
Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala
275 280 285
Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu
290 295 300
Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile
305 310 315 320
Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His
325 330 335
His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro
340 345 350
Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala
355 360 365
Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile
370 375 380
Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys
385 390 395 400
Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly
405 410 415
Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg
420 425 430
Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile
435 440 445
Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala
450 455 460
Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr
465 470 475 480
Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala
485 490 495
Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Ala Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn
500 505 510
Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val
515 520 525
Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys
530 535 540
Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu
545 550 555 560
Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr
565 570 575
Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu
580 585 590
Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile
595 600 605
Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu
610 615 620
Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile
625 630 635 640
Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met
645 650 655
Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Ala Leu Ser Arg
660 665 670
Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu
675 680 685
Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Ala Leu
690 695 700
Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln
705 710 715 720
Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala
725 730 735
Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val
740 745 750
Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val
755 760 765
Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn
770 775 780
Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly
785 790 795 800
Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn
805 810 815
Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val
820 825 830
Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His
835 840 845
Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val
850 855 860
Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser
865 870 875 880
Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn
885 890 895
Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu
900 905 910
Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln
915 920 925
Leu Val Glu Thr Arg Ala Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp
930 935 940
Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu
945 950 955 960
Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys
965 970 975
Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala
980 985 990
His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys
995 1000 1005
Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val
1010 1015 1020
Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly
1025 1030 1035
Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe
1040 1045 1050
Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg
1055 1060 1065
Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp
1070 1075 1080
Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro
1085 1090 1095
Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe
1100 1105 1110
Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile
1115 1120 1125
Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp
1130 1135 1140
Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu
1145 1150 1155
Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly
1160 1165 1170
Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp
1175 1180 1185
Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile
1190 1195 1200
Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg
1205 1210 1215
Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu
1220 1225 1230
Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser
1235 1240 1245
His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys
1250 1255 1260
Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile
1265 1270 1275
Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala
1280 1285 1290
Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys
1295 1300 1305
Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu
1310 1315 1320
Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr
1325 1330 1335
Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala
1340 1345 1350
Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile
1355 1360 1365
Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys
1370 1375 1380
Lys Arg Lys Val His His His His His His
1385 1390
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ИММУНООНКОЛОГИИ | 2016 |
|
RU2771624C2 |
| СПОСОБЫ ТЕРАПИИ НА ОСНОВЕ CAR Т-КЛЕТОК С ПОВЫШЕННОЙ ЭФФЕКТИВНОСТЬЮ | 2016 |
|
RU2788131C2 |
| АНТИТЕЛА К ТАУ И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2018 |
|
RU2787779C2 |
| РЕЖИМ ДОЗИРОВАНИЯ ИНГИБИТОРА WNT И МОЛЕКУЛЫ АНТИТЕЛА К PD-1 В КОМБИНАЦИИ | 2018 |
|
RU2767533C2 |
| ЛЕЧЕНИЕ РАКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ХИМЕРНОГО АНТИГЕННОГО РЕЦЕПТОРА CLL-1 | 2015 |
|
RU2741120C2 |
| АНТИТЕЛА, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТ ОПУХОЛЕВУЮ ТКАНЬ, ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ | 2020 |
|
RU2806915C2 |
| АНТИТЕЛА К ENTPD2, ВИДЫ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ АНТИТЕЛ И ВИДОВ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ | 2019 |
|
RU2790991C2 |
| ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА | 2017 |
|
RU2826270C2 |
| АНТИТЕЛА, СПЕЦИФИЧЕСКИЕ В ОТНОШЕНИИ CD70, И ПУТИ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2801093C2 |
| РЕЖИМЫ ДОЗИРОВАНИЯ АНТИТЕЛ АНТИ-LAG-3 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2018 |
|
RU2801208C2 |
Группа изобретений относится к области генной инженерии, в частности к системам редактирования генома и способам лечения гемоглобинопатий. Предложена нацеливающая молекула РНК для редактирования области энхансера BCL11a. gРНК содержит tracr и crРНК, где crРНК содержит целевой домен с SEQ ID NO: 253. Также предложены нуклеиновая кислота, которая кодирует молекулу gРНК, экспрессионный вектор, способ изменения последовательности-мишени в CD34+ клетке, модифицированная CD34+ клетка и композиции для применения при лечении гемоглобинопатии. Изобретения приводят к высокой индукции фетального гемоглобина (HbF) и индукции HbF-положительных клеток, что способствует лечению гемоглобинопатии. 12 н. и 48 з.п. ф-лы, 49 ил., 34 табл., 10 пр.
1. Нацеливающая молекула РНК (gРНК) для редактирования области энхансера BCL11a, содержащая tracr и crРНК, где crРНК содержит целевой домен, содержащий SEQ ID NO: 253.
2. Молекула gРНК по п.1, содержащая от 5' до 3': [целевой домен]-SEQ ID NO: 7811.
3. Молекула gРНК по п.1 или 2, где одна или более одной молекул нуклеиновой кислоты, составляющих молекулу gРНК, содержат:
(a) одну или несколько модификаций фосфоротиоата на 3'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;
(b) одну или несколько модификаций фосфоротиоата на 5'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;
(c) одну или несколько 2'-О-метил-модификаций на 3'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;
(d) одну или несколько 2'-O-метил-модификаций на 5'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;
(e) 2'-O-метильную модификацию на каждом из 4-ого от конца, 3-ого от конца и 2-ого от конца 3'- остатков указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;
(f) 2'-метильную модификацию на каждом из: 4-ого от конца, 3-ого от конца и 2-ого от конца 5'-остатков указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты; или
(g) любую их комбинацию.
4. Нацеливающая молекула РНК (gРНК) для редактирования области энхансера BCL11a, содержащая от 5'до 3': [целевой домен]-SEQ ID NO: 7811, где указанный целевой домен содержит последовательность SEQ ID NO: 253, и где указанная последовательность SEQ ID NO: 7811 расположена непосредственно на 3'-конце указанного целевого домена.
5. Композиция для редактирования области энхансера BCL11a, включающая:
a) молекулу gРНК по любому из пп.1-4 и молекулу Cas9;
b) молекулу gРНК по любому из пп.1-4 и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу Cas9;
c) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу gРНК по любому из пп.1-4, и молекулу Cas9;
d) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу gРНК по любому из пп.1-4, и нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9;
e) любой из вышеперечисленных a)-d), и матричную нуклеиновую кислоту; или
f) любой из вышеперечисленных a)-d), и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту.
6. Композиция по п.5, где молекула Cas9 содержит SEQ ID NO: 6611 или последовательность, гомологичную ей по меньшей мере на 95%.
7. Композиция по п.5, в которой молекула Cas9 содержит:
(a) SEQ ID NO: 7821;
(b) SEQ ID NO: 7822;
(c) SEQ ID NO: 7823;
(d) SEQ ID NO: 7824;
(e) SEQ ID NO: 7825;
(f) SEQ ID NO: 7825, далее содержащую лейцин в позиции 88 (C88L) в последовательности SEQ ID NO: 7825, и содержащую глутаминовую кислоту в позиции 582 (C582E) в последовательности SEQ ID NO: 7825;
(g) SEQ ID NO: 7826;
(h) SEQ ID NO: 7827;
(i) SEQ ID NO: 7828;
(j) SEQ ID NO: 7829;
(k) SEQ ID NO: 7830; или
(l) SEQ ID NO: 7831.
8. Композиция по любому из пп.5-7, в которой молекула gРНК и молекула Cas9 присутствуют в рибонуклеопротеиновом комплексе (RNP).
9. Композиция по любому из пп.5-8, составленная в среде, пригодной для электропорации.
10. Композиция по любому из пп.5-9, где молекула gРНК находится в RNP с молекулой Cas9, и где RNP находится в концентрации менее чем примерно 10 мкМ.
11. Нуклеиновая кислота, которая кодирует молекулу gРНК по любому из пп.1-4.
12. Экспрессионный вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует молекулу gРНК по любому из пп. 1-4.
13. Способ изменения последовательности-мишени в CD34+ клетке, включающий введение в указанную клетку:
(a) молекулы gРНК по любому из пп.1-4 и молекулы Cas9;
(b) молекулы gРНК по любому из пп.1-4 и последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу Cas9;
(c) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу gРНК по любому из пп.1-4, и молекулы Cas9;
(d) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу gРНК по любому из пп.1-4, и последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу Cas9;
(e) любого из вышеперечисленных (a)-(b) и матричной нуклеиновой кислоты;
(f) любого из вышеперечисленных (a)-(b) и последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей матричную нуклеиновую кислоту;
(g) композиции по любому из пп.5-10; или
(h) вектора по п.12,
где последовательность-мишень представляет собой энхансер BCL11A.
14. Способ по п.13, где клетка представляет собой клетку млекопитающего, примата или человека.
15. Способ по п.13 или 14, в котором клетка является гематопоэтической стволовой клеткой или клеткой-предшественником (HSPC).
16. Способ по любому из пп.13-15, в котором клетка представляет собой CD34+CD90+ клетку.
17. Способ по любому из пп.13-16, в котором клетка находится в композиции, содержащей популяцию клеток, которая была обогащена CD34+ клетками.
18. Способ по любому из пп.13-17, в котором клетка была выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.
19. Способ по любому из пп.13-18, где изменение приводит к инделу в клетке внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК.
20. Способ по любому из пп.13-19, в котором способ приводит к популяции клеток, где по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95%, по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98% или по меньшей мере около 99% клеток популяции изменены.
21. Способ по любому из пп.13-20, в котором изменение приводит к популяции клеток, которая способна дифференцироваться в популяцию дифференцированных клеток эритроидной линии, где указанная популяция дифференцированных клеток проявляет повышенный уровень фетального гемоглобина по сравнению с популяцией неизмененных клеток.
22. Способ по п.21, где указанная популяция дифференцированных клеток имеет увеличенную фракцию F клеток по сравнению с популяцией неизмененных клеток.
23. Способ по п.21 или 22, в котором популяция дифференцированных клеток продуцирует в среднем по меньшей мере примерно 6 пикограмм, по меньшей мере примерно 7 пикограмм, по меньшей мере примерно 8 пикограмм, по меньшей мере примерно 9 пикограмм, по меньшей мере примерно 10 пикограмм, от примерно 8 до примерно 9 пикограмм, или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку.
24. CD34+ клетка для применения при лечении гемоглобинопатии, где клетка содержит индел внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК по любому из пп.1-4.
25. CD34+ клетка для применения при лечении гемоглобинопатии, содержащая молекулу gРНК по любому из пп.1-4, композицию по любому из пп.5-10, нуклеиновую кислоту по п.11 или вектор по п.12.
26. Клетка по п.25, где экспрессия фетального гемоглобина увеличивается в указанной клетке или ее потомстве по сравнению с клеткой того же типа клеток или потомством такой клетки, которая не содержит молекулу gРНК или композицию, или нуклеиновую кислоту, или вектор.
27. Клетка по п.26, где клетка или ее потомство продуцирует, по меньшей мере, примерно 6 пикограмм, по меньшей мере примерно 7 пикограмм, по меньшей мере примерно 8 пикограмм, по меньшей мере примерно 9 пикограмм, по меньшей мере примерно 10 пикограмм, от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм фетального гемоглобина.
28. Клетка по любому из пп.25-27, находившаяся в контакте с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток.
29. Клетка по п.28, где соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой (1r,4r)-N1-(2-бензил-7-(2-метил-2H-тетразол-5-ил)-9H-пиримидо[4,5-b]индол-4-ил)циклогексан-1,4-диамин, метил 4-(3-пиперидин-1-илпропиламино)-9H-пиримидо[4,5-b]индол-7-карбоксилат, 4-(2-(2-(бензо[b]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9H-пурин-6-иламино)этил)фенол или (S)-2-(6-(2-(1H-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9H-пурин-9-ил)пропан-1-ол или их комбинацию.
30. Клетка по любому из пп.24-29, где клетка представляет собой клетку млекопитающего, примата или человека.
31. Клетка по любому из пп.24-30, в котором клетка является гематопоэтической стволовой клеткой или клеткой-предшественником (HSPC).
32. Клетка по любому из пп.24-31, в котором клетка представляет собой CD34+CD90+ клетку.
33. Клетка по любому из пп.24-32, в котором клетка была выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.
34. Популяция CD34+ клеток для применения при лечении гемоглобинопатии, содержащая клетку по любому из пп.24-33.
35. Популяция клеток по п.34, где по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере, примерно 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере, примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98% или, по меньшей мере примерно 99% клеток популяции являются клеткой по любому из пп.24-33.
36. Популяция клеток по п.34 или 35, где популяция клеток способна дифференцироваться в популяцию дифференцированных клеток, где указанная популяция дифференцированных клеток имеет увеличенную фракцию F клеток по сравнению с популяцией немодифицированных клеток того же типа.
37. Популяция клеток по п.36, где F клетки популяции дифференцированных клеток продуцируют в среднем по меньшей мере примерно 6 пикограмм, по меньшей мере примерно 7 пикограмм, по меньшей мере примерно 8 пикограмм, по меньшей мере примерно 9 пикограмм, по меньшей мере примерно 10 пикограмм, от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку.
38. Популяция клеток по любому из пп.34-37, включающая:
(a) по меньшей мере 1e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо ввести клетки;
(b) по меньшей мере 2e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациенту, которому необходимо ввести клетки;
(c) по крайней мере 3e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо ввести клетки;
(d) по меньшей мере 4e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо ввести клетки; или
(e) от 2e6 до 10e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо ввести клетки.
39. Популяция клеток по любому из пп.34-38, где по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 30% клеток популяции являются CD34+CD90+ клетками.
40. Популяция клеток по любому из пп.34-39, где популяция клеток выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.
41. Популяция клеток по любому из пп.34-40, где популяция клеток выделена из пациента, страдающего гемоглобинопатией.
42. Композиция для редактирования области энхансера BCL11a, содержащая популяцию клеток по любому из пп.34-41 и фармацевтически приемлемую среду.
43. Способ лечения гемоглобинопатии, включающий введение пациенту, в этом нуждающемуся, терапевтически эффективного количества клеток по любому из пп.24-33, популяции клеток по любому из пп.34-41 или композиции по п.42.
44. Способ по п.43, где гемоглобинопатия представляет собой бета-талассемию или серповидно-клеточную болезнь.
45. Способ получения популяции CD34+ клеток, включающий:
(a) предоставление популяции CD34+ клеток;
(b) культивирование указанной популяции CD34+ клеток ex vivo в среде для культивирования клеток, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток; и
(c) введение в клетки указанной популяции CD34+ клеток молекулы gРНК по любому из пп.1-4, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу gРНК по любому из пп.1-4, композиции по любому из пп.5-10, нуклеиновой кислоты по п.11 или вектора по п.12.
46. Способ по п.45, где соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой (1r,4r)-N1-(2-бензил-7-(2-метил-2H-тетразол-5-ил)-9H-пиримидо[4,5-b]индол-4-ил)циклогексан-1,4-диамин, метил 4-(3-пиперидин-1-илпропиламино)-9H-пиримидо[4,5-b]индол-7-карбоксилат, 4-(2-(2-(бензо[b]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9H-пурин-6-иламино)этил)фенол или (S)-2-(6-(2-(1H-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9H-пурин-9-ил) пропан-1-ол или их комбинацию.
47. Способ по п. 45 или 46, в котором среда для культивирования клеток содержит соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, в концентрации от примерно 1 нМ до примерно 1 мМ.
48. Способ по любому из пп. 45-47, в котором культивирование на стадии (b) включает период культивирования перед осуществлением стадии (с).
49. Способ по п.48, в котором период культивирования перед осуществлением стадии (с) составляет по меньшей мере 12 часов, является периодом примерно от 1 дня до примерно 3 дней, является периодом примерно от 1 дня до 2 дней, является периодом примерно 2 дня.
50. Способ по любому из пп.45-49, в котором культивирование на стадии (b) включает период культивирования после осуществления стадии (с).
51. Способ по п.50, в котором период культивирования после осуществления стадии (с) составляет по меньшей мере 12 часов, является периодом от примерно 1 дня до примерно 10 дней, является периодом от примерно 1 дня до примерно 5 дней, является периодом от примерно 2 дней до примерно 4 дней, является периодом примерно 2 дня, является периодом примерно 3 дня, или является периодом примерно 4 дня.
52. Способ по любому из пп.45-51, в котором популяция клеток увеличивает численность по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз по сравнению с популяцией клеток, которая не была культивирована в соответствии со стадией (b).
53. Способ по любому из пп.45-52, в котором осуществление стадии (с) содержит электропорацию.
54. Способ по любому из пп.45-53, в котором популяция клеток, предоставленная на стадии (а), представляет собой популяцию клеток человека.
55. Способ по п.54, в котором популяция клеток, предоставленная на стадии (а), выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.
56. Способ по п.54, в котором популяция клеток, предоставленная на стадии (а), выделена из пациента, страдающего гемоглобинопатией.
57. Способ по любому из пп.45-56, в котором после осуществления стадии (с) популяция клеток подвергается криоконсервации.
58. Способ по любому из пп.45-57, в котором, после осуществления стадии (с), по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 90% по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98% или по меньшей мере примерно 99% клеток популяции содержат индел внутри или вблизи последовательности геномной ДНК, комплементарной целевому домену молекулы gРНК.
59. Молекула gРНК по любому из пп.1-4, композиция по любому из пп.5-10 или 42, нуклеиновая кислота по п.11, вектор по п.12, клетка по любому из пп.24-33 или популяция клеток по любому из пп. 34-41 для применения в качестве лекарственного средства.
60. Молекула gРНК по любому из пп.1-4, композиция по любому из пп.5-10 или 42, нуклеиновая кислота по п.11, вектор по п.12, клетка по любому из пп.24-33 или популяция клеток по любому из пп.34-41 для применения при изготовлении лекарственного средства.
| WO2015148860 A1, 01.10.2015 | |||
| CANVER M.C | |||
| et al | |||
| Походная разборная печь для варки пищи и печения хлеба | 1920 |
|
SU11A1 |
| Приспособление для получения световых декораций на прозрачном экране | 1920 |
|
SU527A1 |
| Электромагнитный телефон, могущий служить и микрофоном | 1926 |
|
SU7577A1 |
| BAUER D.E | |||
| et al | |||
| Походная разборная печь для варки пищи и печения хлеба | 1920 |
|
SU11A1 |
| Трепальная машина для обработки лубовых растений | 1923 |
|
SU342A1 |
