Иммунобиологическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вирусов SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) и SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) (варианты) Российский патент 2022 года по МПК C12N7/00 C12N15/861 A61K39/215 

Описание патента на изобретение RU2779634C1

Область техники.

Изобретение относится к биотехнологии, иммунологии и вирусологии. Предложенное средство может применяться для профилактики заболеваний, вызванных различными вариантами вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2.

Уровень техники.

Эпидемия коронавирусной инфекции COVID-19, которая началась в конце 2019 года в Китайской Народной Республике, за несколько месяцев распространилась по всему миру и бросила беспрецедентный вызов современной системе здравоохранения. В настоящее время число заболевших COVID-19 более 540 млн человек, а число погибших более 6,3 млн человек.

COVID-19 - это острая респираторная инфекция, которая может протекать как в легкой, так и в тяжелой форме. Наиболее частым осложнением заболевания является вирусная пневмония, которая может привести к острому респираторному дистресс-синдрому и последующей острой дыхательной недостаточности. Кроме того, при тяжелом течении болезни могут возникнуть такие осложнения, как полиорганная недостаточность, септический шок и венозная тромбоэмболия. Возбудителем заболевания является одноцепочечный РНК-содержащий вирус SARS-CoV-2, относящийся к семейству Coronaviridae к линии Beta-CoV.

К настоящему времени было разработано несколько вакцин против коронавируса SARS-CoV-2.

Фармацевтическая компания Pfizer при сотрудничестве с биотехнологической компанией BioNTech разработала вакцину BNT162b2 (tozinameran). Данная вакцина представляет собой липидные наночастицы, внутрь которых инкапсулирована мРНК с оптимизированными кодонами, которая кодирует тримеризованный S белок SARS-CoV-2, полученный из изолята Wuhan-Hu-1 (GenBank: QHD43416.1; аминокислоты 1-1273), содержащий стабилизирующие мутации K986P и V987P. (Sahin U, Muik A, Vogler I, Derhovanessian E, Kranz LM, Vormehr M, Quandt J, Bidmon N, Ulges A, Baum A, Pascal KE, Maurus D, Brachtendorf S, Lörks V, Sikorski J, Koch P, Hilker R, Becker D, Eller AK, Grützner J, Tonigold M, Boesler C, Rosenbaum C, Heesen L, Kühnle MC, Poran A, Dong JZ, Luxemburger U, Kemmer-Brück A, Langer D, Bexon M, Bolte S, Palanche T, Schultz A, Baumann S, Mahiny AJ, Boros G, Reinholz J, Szabó GT, Karikó K, Shi PY, Fontes-Garfias C, Perez JL, Cutler M, Cooper D, Kyratsous CA, Dormitzer PR, Jansen KU, Türeci Ö. BNT162b2 vaccine induces neutralizing antibodies and poly-specific T cells in humans. Nature. 2021 Jul;595(7868):572-577. doi: 10.1038/s41586-021-03653-6. Epub 2021 May 27. PMID: 34044428.).

Фармацевтическая компания Moderna в сотрудничестве с Национальным Институтом здоровья (США) разработала вакцину mRNA-1273. Активным компонентом данной вакцины является мРНК с оптимизированными кодонами, кодирующая стабилизированный до слияния полноразмерный S белок SARS-CoV-2 (изолят Wuhan-Hu-1, эталонная последовательность NCBI: NC_045512.2), которая окружена липидной оболочкой (L. A. Jackson et al. An mRNA Vaccine against SARS-CoV-2 - Preliminary Report. N Engl J Med 2020; 383:1920-1931; Corbett KS, Edwards DK, Leist SR, Abiona OM, Boyoglu-Barnum S, Gillespie RA, Himansu S, Schäfer A, Ziwawo CT, DiPiazza AT, Dinnon KH, Elbashir SM, Shaw CA, Woods A, Fritch EJ, Martinez DR, Bock KW, Minai M, Nagata BM, Hutchinson GB, Wu K, Henry C, Bahl K, Garcia-Dominguez D, Ma L, Renzi I, Kong WP, Schmidt SD, Wang L, Zhang Y, Phung E, Chang LA, Loomis RJ, Altaras NE, Narayanan E, Metkar M, Presnyak V, Liu C, Louder MK, Shi W, Leung K, Yang ES, West A, Gully KL, Stevens LJ, Wang N, Wrapp D, Doria-Rose NA, Stewart-Jones G, Bennett H, Alvarado GS, Nason MC, Ruckwardt TJ, McLellan JS, Denison MR, Chappell JD, Moore IN, Morabito KM, Mascola JR, Baric RS, Carfi A, Graham BS. SARS-CoV-2 mRNA vaccine design enabled by prototype pathogen preparedness. Nature. 2020 Oct;586(7830):567-571. doi: 10.1038/s41586-020-2622-0. Epub 2020 Aug 5. PMID: 32756549; PMCID: PMC7581537).

Оксфордский университет в сотрудничестве с фармацевтической компанией AstraZeneca разработал векторную вакцину ChAdOx1 nCoV-19 (AZD1222). Активным компонентном данной вакцины является аденовирус шимпанзе ChAdOx1, содержащий кодон-оптимизированную кодирующую последовательность полноразмерного S белка вируса SARS-CoV-2 (изолят Wuhan-Hu-1, GenBank MN908947) с лидерной последовательностью тканевого активатора плазминогена (M. Voysey et al. Safety and efficacy of the ChAdOx1 nCoV-19 vaccine (AZD1222) against SARS-CoV-2: an interim analysis of four randomised controlled trials in Brazil, South Africa, and the UK. The Lancet. Vol.397, Issue 10269, P99-111, 2021). На данной технологии также основана вакцина Covishiels (производства Serum Institute of India Pvt Ltd).

Компания CanSino разработала векторную вакцину против COVID-19, в основе которой репликативно-дефектный аденовирус человека 5 серотипа (Ad5), экспрессирующий оптимизированный полноразмерный S гликопротеин SARS-CoV-2 (изолят Wuhan-Hu-1, GenBank YP_009724390) (Feng-Cai Zhu et al. Immunogenicity and safety of a recombinant adenovirus type-5-vectored COVID-19 vaccine in healthy adults aged 18 years or older: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 2 trial. The Lancet. Vol.369, Issue 10249, P479-488, 2020).

Исследовательские группы Johnson and Johnson и Janssen Pharmaceutical в сотрудничестве с Медицинским центром Beth Israel Deaconess, с помощью технологии Janssen AdVac® создали несколько кандидатных вакцин. После проведенных исследований безопасности и эффективности была выбрана кандидатная вакцина Ad26.COV2.S (Ad26COVS1). Активным компонентном данной вакцины является рекомбинантный аденовирусный вектор 26 серотипа с делецией Е1 и Е3 области, содержащий ген S белка SARS-CoV-2 изолят Wuhan-Hu-1, с мутацией сайта расщепления фурина и с двумя пролин-стабилизирующими мутациями (Solforosi L, Kuipers H, Jongeneelen M, Rosendahl Huber SK, van der Lubbe JEM, Dekking L, Czapska-Casey DN, Izquierdo Gil A, Baert MRM, Drijver J, Vaneman J, van Huizen E, Choi Y, Vreugdenhil J, Kroos S, de Wilde AH, Kourkouta E, Custers J, van der Vlugt R, Veldman D, Huizingh J, Kaszas K, Dalebout TJ, Myeni SK, Kikkert M, Snijder EJ, Barouch DH, Böszörményi KP, Stammes MA, Kondova I, Verschoor EJ, Verstrepen BE, Koopman G, Mooij P, Bogers WMJM, van Heerden M, Muchene L, Tolboom JTBM, Roozendaal R, Brandenburg B, Schuitemaker H, Wegmann F, Zahn RC. Immunogenicity and efficacy of one and two doses of Ad26.COV2.S COVID vaccine in adult and aged NHP. J Exp Med. 2021 Jul 5;218(7):e20202756. doi: 10.1084/jem.20202756. PMID: 33909009; PMCID: PMC8085771; Sadoff J, Le Gars M, Shukarev G, Heerwegh D, Truyers C, de Groot AM, Stoop J, Tete S, Van Damme W, Leroux-Roels I, Berghmans PJ, Kimmel M, Van Damme P, de Hoon J, Smith W, Stephenson KE, De Rosa SC, Cohen KW, McElrath MJ, Cormier E, Scheper G, Barouch DH, Hendriks J, Struyf F, Douoguih M, Van Hoof J, Schuitemaker H. Interim Results of a Phase 1-2a Trial of Ad26.COV2.S Covid-19 Vaccine. N Engl J Med. 2021 May 13;384(19):1824-1835. doi: 10.1056/NEJMoa2034201. Epub 2021 Jan 13. PMID: 33440088; PMCID: PMC7821985.).

Вакцина CoronaVac (Sinovac Biotech)- жидкая инактивированная цельновирионная вакцина, в основе которой лежит вариант SARS-CoV-2 CN02, выделенный от госпитализированного пациента в начале 2020 г (Zhang Y, Zeng G, Pan H, Li C, Hu Y, Chu K, Han W, Chen Z, Tang R, Yin W, Chen X, Hu Y, Liu X, Jiang C, Li J, Yang M, Song Y, Wang X, Gao Q, Zhu F. Safety, tolerability, and immunogenicity of an inactivated SARS-CoV-2 vaccine in healthy adults aged 18-59 years: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 1/2 clinical trial. Lancet Infect Dis. 2021 Feb;21(2):181-192. doi: 10.1016/S1473-3099(20)30843-4. Epub 2020 Nov 17. PMID: 33217362; PMCID: PMC7832443).

Все вышеперечисленные фармацевтические компании начали разработку вакцин сразу после начала пандемии. Первые кандидатные препараты были получены через несколько месяцев. Однако, период доклинических и клинических исследований вакцин, а также период налаживания их производства занял больше года. За прошедшее время вирус SARS-CoV-2 постепенно мутировал. Поэтому к моменту проведения масштабной кампании вакцинации, эффективность вакцин против новых вариантов SARS-CoV-2 оказалась снижена. При этом чем больше мутаций накапливается в S белке коронавируса, тем ниже становится эффективность вакцинных препаратов, в которых он является основным антигеном. Так, например, эффективность двукратной вакцинации BNT162b2, заявленная производителем составляет 95%, тогда как против варианта SARS-CoV-2 Alpha эффективность вакцинации снижается до 93,7%, а против варианта SARS-CoV-2 Delta - до 88,0% (Bernal et al. Effectiveness of Covid-19 Vaccines against the B.1.617.2 (Delta) Variant. N Engl J Med. 2021 Aug 12;385(7):585-594. doi: 10.1056/NEJMoa2108891. Epub 2021 Jul 21. PMID: 34289274; PMCID: PMC8314739. При этом варианты SARS-CoV-2 не одинаково распространяются в мире. Так варианты, обладающие повышенной трансимиссивностью и способностью ускользать от естественного и искусственного иммунитета распространяются быстрее и постепенно вытесняют остальные варианты вируса.

В настоящее время доминирующим вариантом SARS-CoV-2 в мире является вариант B.1.1.529 (Omicron), имеющий большое количество мутаций в S белке. Результаты исследования, проведенного Andrews N и соавт.показали, что эффективность вакцин против данного варианта SARS-CoV-2 продолжает снижаться. Так, например, вакцина ChAdOx1 nCoV-19 через 20 недель после вакцинации не обладала протективным эффектом против варианта B.1.1.529 (Omicron), а эффективность вакцины BNT162b2 после двух доз составляла 65,5% через 2-4 недели, снижаясь до 8,8% через 25 и более недель (Andrews N. et el. Covid-19 Vaccine Effectiveness against the Omicron (B.1.1.529) Variant. N Engl J Med. 2022 Apr 21;386(16):1532-1546. doi: 10.1056/NEJMoa2119451. Epub 2022 Mar 2. PMID: 35249272; PMCID: PMC8908811).

Таким образом, в настоящий момент необходима разработка нового иммунобиологического средства, которое способно индуцировать иммунный ответ к актуальным вариантам SARS-CoV-2.

Известно техническое решение (патент RU2743963C1), в котором описано создание и использование средства для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 в жидкой форме. Данное изобретение основано на использовании в качестве активных компонентов рекомбинантных аденовирусов человека 26 серотипа и 5 серотипа, а также рекомбинантного аденовируса обезьян 25 серотипа, содержащих один из нескольких вариантов экспрессионной кассеты с геном S антигена вируса SARS-CoV-2. Данное техническое решение было выбрано авторами изобретения за прототип.Недостатком прототипа является использование гена S белка раннего изолята вируса SARS-CoV-2, вследствие чего наблюдается снижение эффективности вакцины против вариантов SARS-CoV-2 B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron)

Таким образом, в уровне техники существует потребность в разработке иммунобиологического средства, лишенного данных недостатков.

Осуществление изобретения.

Технической задачей заявленной группы изобретений является создание средств, обеспечивающих эффективную индукцию иммунного ответа против вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) и вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron).

Технический результат заключается в создании безопасного и эффективного иммунобиологического средства обеспечивающего развитие реакций гуморального и клеточного иммунного ответа против вариантов вируса SARS-CoV-2 B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron) у широких слоев населения.

Указанный технический результат достигается тем, что создано иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащее в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2.

Кроме того, технический результат достигается тем, что создано иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащее в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:3.

Также, технический результат достигается тем, что создано иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, представляющее собой смесь иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 и иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:2.

Также, технический результат достигается тем, что создано иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, представляющее собой смесь иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 и иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:3.

Кроме того, технический результат достигается тем, что создано иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, представляющее собой смесь иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2 и иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:3.

При этом разработанное иммунобиологическое средство может находиться в жидкой или лиофилизированной форме.

Причем буферный раствор фармацевтического средства для жидкой формы содержит, масс. %:

трис от 0,1831 до 0,3432 хлорид натрия от 0,3313 до 0,6212 сахароза от 3,7821 до 7,0915 магния хлорида
гексагидрат
от 0,0154 до 0,0289
ЭДТА от 0,0029 до 0,0054 полисорбат-80 от 0,0378 до 0,0709 этанол 95% от 0,0004 до 0,0007 вода остальное

А буферный раствор восстановленной лиофилизированной формы средства содержит, масс. %:

трис
хлорид натрия
сахароза
магния хлорида
гексагидрат
ЭДТА
полисорбат-80
вода
от 0,0180 до 0,0338
от 0,1044 до 0,1957
от 5,4688 до 10,2539
от 0,0015 до 0,0028
от 0,0003 до 0,0005
от 0,0037 до 0,0070
остальное

Также технический результат достигается за счет того, что предложено применение разработанного иммунобиологического средства для индукции иммунного ответа против вируса SARS-CoV-2, где указанное средство предназначено для интраназального или внутримышечного введения или совместного интраназального и внутримышечного введения.

Причем в частном случае выполнения средство интраназально вводят в дозе от 5*109- 5*1011 вирусных частиц или внутримышечно в дозе от 5*109- 5*1011 вирусных частиц. А совместное введение интраназально и внутримышечно осуществляют в дозе от 5*109 до 5*1011 вирусных частиц внутримышечно, в дозе от 5*109 до 5*1011 вирусных частиц интраназально.

Совместное введение предусматривает интраназальное и внутримышечное введение в рамках одной процедуры вакцинации.

Кроме того, в частном случае выполнения указанное средство может применяться у детей.

Краткое описание фигур.

На фиг.1 представлены результаты оценки эффективности иммунизации разработанным иммунобиологическим средством по оценке доли пролиферирующих CD4+и CD8+лимфоцитов в ответ на стимуляцию антигеном (S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2).

Ось ординат - количество пролиферирующих клеток, %.

Ось абсцисс - экспериментальные группы.

1) Ad26-S-delta, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

2) Ad26-S-omicron, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

3) Ad5-S-delta, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

4) Ad5-S-omicron, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

5) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

6) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл

7) Ad26-null, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

8) Ad5-null, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

9) Ad26-S-delta, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

10) Ad26-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

11) Ad5-S-delta, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

12) Ad5-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

13) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

14) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл

15) Ad26-null, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

16) Ad5-null, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

17) Плацебо (буфер), 200 мкл

На фиг.2 представлены результаты оценки эффективности иммунизации разработанным иммунобиологическим средством по оценке доли пролиферирующих CD4+и CD8+лимфоцитов в ответ на стимуляцию антигеном (S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529).

Ось ординат - количество пролиферирующих клеток, %.

Ось абсцисс - экспериментальные группы.

1) Ad26-S-delta, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

2) Ad26-S-omicron, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

3) Ad5-S-delta, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

4) Ad5-S-omicron, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

5) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

6) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл

7) Ad26-null, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

8) Ad5-null, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

9) Ad26-S-delta, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

10) Ad26-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

11) Ad5-S-delta, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

12) Ad5-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

13) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

14) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл

15) Ad26-null, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

16) Ad5-null, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

17) Плацебо (буфер), 200 мкл

Реализация изобретения.

Для создания безопасного и эффективного иммунобиологического средства для индукции иммунитета против коронавируса SARS-CoV-2 была выбрана векторная система на основе аденовирусов. Аденовирусные векторы обладают целым рядом преимуществ: они не способны размножаться в клетках человека, проникают как в делящиеся, так и неделящиеся клетки, способны индуцировать клеточный и гуморальный иммунный ответ, обеспечивают высокий уровень экспрессии целевого антигена. Авторами патента было выбрано два серотипа аденовирусов - human adenovirus 26-го серотипа и human adenovirus 5-го серотипа. Данные вирусы генетически сильно различаются, что обеспечит преодоление трудностей, связанных с наличием у пациентов предсуществующего иммунного ответа к некоторым серотипам аденовирусов. При этом появляется возможность использования изобретения, по которому вариант фармацевтического средства выбирается после оценки иммунного статуса пациента к серотипам аденовирусных векторов.

В качестве антигена был выбран S белок SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) или S белок SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron). Это трансмембранный гликопротеин I типа, который отвечает за связывание, слияние и проникновение вирусных частиц в клетку. Было показано, что он является основной мишенью вируснейтрализующих антител (Liang M et al, SARS patients-derived human recombinant antibodies to S and M proteins efficiently neutralize SARS-coronavirus infectivity. Biomed Environ Sci. 2005 Dec;18(6):363-74).

Для эффективной экспрессии целевого белка было разработано несколько вариантов экспрессионных кассет:

1. Экспрессионная кассета SEQ ID NO:1, которая содержит:

- CMV-промотор от вируса Human betaherpesvirus 5, последовательность которого в кассетах немного больше, чем CMV-промотор, границы которого очерчены в статье PMID: 2985280 (DOI: 10.1016/s0092-8674(85)80025-8). Таким образом, до CMV-промотора находится фрагмент цитомегаловирусного генома (51 п.о.), который оказывает положительное влияние на вторичную структуру мРНК и экспрессию целевого гена.

- Сайт инициации транскрипции (transcription initiation site+1), который начинается с нуклеотидов TCAGATC, и таким образом, находится за 59 нуклеотидов до стартового кодона, что позволяет увеличить продолжительность и силу трансляции РНК.

- последовательность Козак (GGTACC), которая важна для инициации трансляции.

- открытую рамку считывания гена S белка вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta)

- полный сигнал полиаденилирования вируса SV40 (SV40-PA).

2. Экспрессионная кассета SEQ ID NO:2, которая содержит:

- CMV-промотор от вируса Human betaherpesvirus 5, последовательность которого в кассетах немного больше, чем CMV-промотор, границы которого очерчены в статье PMID: 2985280 (DOI: 10.1016/s0092-8674(85)80025-8). Таким образом, до CMV-промотора находится фрагмент цитомегаловирусного генома (51 п.о.), который оказывает положительное влияние на вторичную структуру мРНК и экспрессию целевого гена.

- Сайт инициации транскрипции (transcription initiation site+1), который начинается с нуклеотидов TCAGATC, и таким образом, находится за 46 нуклеотидов до стартового кодона, что позволяет увеличить продолжительность и силу трансляции РНК.

- последовательность Козак (GGTACC), которая важна для инициации трансляции

- открытую рамку считывания гена S белка вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron).

- полный сигнал полиаденилирования вируса SV40 (SV40-PA).

3. Экспрессионная кассета SEQ ID NO:3, которая содержит:

- CMV-промотор от вируса Human betaherpesvirus 5, последовательность которого в кассетах немного больше, чем CMV-промотор, границы которого очерчены в статье PMID: 2985280 (DOI: 10.1016/s0092-8674(85)80025-8). Таким образом, до CMV-промотора находится фрагмент цитомегаловирусного генома (51 п.о.), который оказывает положительное влияние на вторичную структуру мРНК и экспрессию целевого гена.

- Сайт инициации транскрипции (transcription initiation site+1), который начинается с нуклеотидов TCAGATC, и таким образом, находится за 46 нуклеотидов до стартового кодона, что позволяет увеличить продолжительность и силу трансляции РНК.

- последовательность Козак (GGTACC), которая важна для инициации трансляции.

- открытую рамку считывания гена S белка вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron).

- сайты рестрикции (EcoRV, MspI, XbaI)

- полный сигнал полиаденилирования вируса SV40 (SV40-PA).

Таким образом, были разработаны следующие экспрессионные векторы:

1. Экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad-26-S-delta).

2. Экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:2 (Ad26-S-omicron).

3. Экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad-5-S-delta).

4. Экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:3 (Ad5-S-omicron).

Полученные экспрессионные векторы являются активными компонентами разработанных вариантов иммунобиологического средства.

Осуществление изобретения подтверждается следующими примерами.

Пример 1. Получение иммунобиологического средства по п.1.

Активным компонентом иммунобиологического средства по п.1 является экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2. Кроме активного компонента в состав иммунобиологического средства может входить любой фармацевтически приемлемый буфер или другие вещества, способствующие повышению стабильности и/или эффективности активного компонента.

Для получения активного компонента иммунобиологического средства вначале разработали дизайн экспрессионных кассет: SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2. Синтез генов осуществлялся компанией ЗАО «Евроген» (Москва).

Для получения рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа было использовано две плазмиды, полученные в ФГБУ «НИЦЭМ им Н.Ф.Гамалеи» Минздрава России: плазмида pAd26-Ends, несущая плечи гомологии генома аденовируса 26-го серотипа, и плазмида pAd26-too, несущая геном рекомбинантного аденовируса человека 26 серотипа с открытой рамкой считывания ORF6 аденовируса человека 5-го серотипа и с делецией E1 и Е3-областей.

На первом этапе работы, с помощью методов генной инженерии на основе плазмиды pAd26-Ends, были получены плазмиды pAd26-Ends-S-delta, pAd26-Ends-S-omicron, содержащие экспрессионные кассеты SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2, соответственно, а также несущие плечи гомологии генома аденовируса 26-го серотипа. Далее полученные плазмиды линеаризовали по уникальному сайту гидролиза и каждую плазмиду смешивали с рекомбинантным вектором pAd26-too. В результате гомологичной рекомбинации были получены плазмиды pAd26-too-S-delta, pAd26-too-S-omicron, несущие геном рекомбинантного аденовируса человека 26 серотипа с открытой рамкой считывания ORF6 аденовируса человека 5-го серотипа и с делецией E1 и Е3-областей, с экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1, или SEQ ID NO:2, соответственно.

На следующем этапе плазмиды pAd26-too-S-delta, pAd26-too-S-omicron гидролизовали специфическими эндонуклеазами рестрикции для удаления векторной части. Полученными препаратами ДНК трансфицировали клетки культуры НЕК293.

В результате проведенной работы был получен экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad26-S-delta) или SEQ ID NO:2 (Ad26-S-omicron), который является активным веществом разработанного иммунобиологического средства.

По аналогичной схеме был получен контрольный экспрессионный вектор, не содержащий гена S белка вируса SARS-CoV-2: Ad26-null.

Полученные экспрессионные векторы были очищены методом ВЭЖХ и смешаны с буферным раствором.

Таким образом, в результате проведенной работы было получено иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащее в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad26-S-delta) или SEQ ID NO:2 (Ad26-S-omicron).

Пример 2. Получение иммунобиологического средства по п.2.

Активным компонентом иммунобиологического средства по п.2 является экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:3. Кроме активного компонента в состав иммунобиологического средства может входить любой фармацевтически приемлемый буфер или другие вещества, способствующие повышению стабильности и/или эффективности активного компонента.

Для получения активного компонента иммунобиологического средства вначале разработали дизайн экспрессионных кассет (SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3). Синтез генов осуществлялся компанией ЗАО «Евроген» (Москва).

Для получения рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа было использовано две плазмиды, полученные в ФГБУ «НИЦЭМ им Н.Ф.Гамалеи» Минздрава России:

- плазмида pAd5-Ends, несущая плечи гомологии генома аденовируса 5-го серотипа (одно плечо гомологии представляет собой начало генома аденовируса человека 5-го серотипа (от левого инвертированного концевого повтора до Е1-области) и последовательность вирусного генома, включающую pIX белок; второе плечо гомологии содержит последовательность нуклеотидов после ORF3 Е4-области до конца генома)

- плазмида pAd5-too, несущая геном рекомбинантного аденовируса человека 5 серотипа с делецией E1 и Е3-областей.

На первом этапе работы, с помощью методов генной инженерии на основе плазмиды pAd5-Ends, были получены плазмиды pAd5-Ends-S-delta, pAd5-Ends-S-omicron, содержащие экспрессионные кассеты SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:3, соответственно, а также несущие плечи гомологии генома аденовируса 5-го серотипа. Далее полученные плазмиды линеаризовали по уникальному сайту гидролиза и каждую плазмиду смешивали с рекомбинантным вектором pAd5-too. В результате гомологичной рекомбинации были получены плазмиды pAd5-too-S-delta, pAd5-too-S-omicron, несущие геном рекомбинантного аденовируса человека 5-го с делецией E1 и Е3-областей, с экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:3, соответственно.

На следующем этапе плазмиды pAd5-too-S-delta, pAd5-too-S-omicron гидролизовали специфическими эндонуклеазами рестрикции для удаления векторной части. Полученными препаратами ДНК трансфицировали клетки культуры НЕК293.

В результате проведенной работы был получен экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad5-S-delta) или SEQ ID NO:3 (Ad5-S-omicron), который является активным веществом разработанного иммунобиологического средства.

По аналогичной схеме был получен контрольный экспрессионный вектор, не содержащий гена S белка вируса SARS-CoV-2: Ad5-null.

Полученные экспрессионные векторы были очищены методом ВЭЖХ и смешаны с буферным раствором.

Таким образом, в результате проведенной работы было получено иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащее в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad5-S-delta) или SEQ ID NO:3 (Ad5-S-omicron).

Пример 3. Получение иммунобиологического средства по п.3.

Активными компонентами иммунобиологического средства по п.3 являются:

1) экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1(Ad26-S-delta)

2) экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:2 (Ad26-S-omicron).

Экспрессионные векторы на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа были получены как описано в примере 1.

Активные компоненты могут быть смешаны в любых соотношениях, которые позволяют каждому из компонентов вызывать иммунный ответ в организме млекопитающих.

В качестве примера были использованы следующие соотношения компонентов (вектор, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad26-S-delta) к вектору, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:2 (Ad26-S-omicron)) - 1: 20, 1:10, 1:1, 10:1, 20:1.

Кроме активных компонентов в состав иммунобиологического средства может входить любой фармацевтически приемлемый буфер или другие вещества, способствующие повышению стабильности и/или эффективности активного компонента. В данном случае, был использован буфер для жидкой формы средства: трис(гидроксиметил)аминометан - 1,21 мг, натрия хлорид - 2,19 мг, сахароза - 25,0 мг, полисорбат 80 - 250 мкг, магния хлорида гексагидрат - 102,0 мкг, ЭДТА динатриевая соль дигидрат - 19,0 мкг, этанол 95% - 2,5 мкл, вода для инъекций - до 0,5 мл.

Таким образом, в результате проведенной работы было получено иммунобиологическое средство, содержащее одновременно два активных компонента, представляющих собой экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad26-S-delta) и экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:2 (Ad26-S-omicron).

Пример 4. Получение иммунобиологического средства по п.4.

Активными компонентами иммунобиологического средства по п.4 являются:

1) экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1(Ad5-S-delta);

2) экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:3 (Ad5-S-omicron).

Экспрессионные векторы на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа были получены как описано в примере 2.

Активные компоненты могут быть смешаны в любых соотношениях, которые позволяют каждому из компонентов вызывать иммунный ответ в организме млекопитающих.

В качестве примера были использованы следующие соотношения компонентов (вектор, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad5-S-delta) к вектору, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:3 (Ad5-S-omicron)) - 1: 20, 1:10, 1:1, 10:1, 20:1.

Кроме активных компонентов в состав иммунобиологического средства может входить любой фармацевтически приемлемый буфер или другие вещества, способствующие повышению стабильности и/или эффективности активного компонента. В данном случае, был использован буфер для жидкой формы средства: трис(гидроксиметил)аминометан - 1,21 мг, натрия хлорид - 2,19 мг, сахароза - 25,0 мг, полисорбат 80 - 250 мкг, магния хлорида гексагидрат - 102,0 мкг, ЭДТА динатриевая соль дигидрат - 19,0 мкг, этанол 95% - 2,5 мкл, вода для инъекций - до 0,5 мл.

Таким образом, в результате проведенной работы было получено иммунобиологическое средство, содержащее одновременно два активных компонента, представляющих собой экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad5-S-delta) и экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:3 (Ad5-S-omicron).

Пример 5. Получение иммунобиологического средства по п.5.

Активными компонентами иммунобиологического средства по п.5 являются:

1) экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1(Ad26-S-delta) или SEQ ID NO:2(Ad26-S-omicron);

2) экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1(Ad5-S-delta) или SEQ ID NO:3 (Ad5-S-omicron).

Экспрессионные векторы на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа были получены как описано в примере 1. Экспрессионные векторы на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа были получены как описано в примере 2. Активные компоненты могут быть смешаны в любых соотношениях, которые позволяют каждому из компонентов вызывать иммунный ответ в организме млекопитающих.

Кроме активных компонентов в состав иммунобиологического средства может входить любой фармацевтически приемлемый буфер или другие вещества, способствующие повышению стабильности и/или эффективности активного компонента. В данном случае, был использован буфер для жидкой формы средства: трис(гидроксиметил)аминометан - 1,21 мг, натрия хлорид - 2,19 мг, сахароза - 25,0 мг, полисорбат 80 - 250 мкг, магния хлорида гексагидрат - 102,0 мкг, ЭДТА динатриевая соль дигидрат - 19,0 мкг, этанол 95% - 2,5 мкл, вода для инъекций - до 0,5 мл.

Таким образом, в результате проведенной работы было получено иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, представляющее собой смесь иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1(Ad26-S-delta) или SEQ ID NO:2(Ad26-S-omicron) и иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1(Ad5-S-delta) или SEQ ID NO:3(Ad5-S-omicron).

Пример 6. Разработка буферного раствора для жидкой формы иммунобиологического средства.

Авторами изобретения был подобран буферный раствор на водной основе, обеспечивающий стабильность рекомбинантных аденовирусных частиц. Для поддержания рН раствора в буфер добавили Трис(гидроксиметил)аминометан (Трис). Для достижения необходимой ионной силы и осмолярности был добавлен хлорид натрия. Для криопротекции в буфер добавили сахарозу. Магния хлорида гексагидрат добавили в качестве источника двухвалентных катионов, ЭДТА - в качестве ингибитора свободно-радикального окисления, полисорбат-80 - в качестве поверхностно-активного вещества, этанол 95% - в качестве ингибитора свободно-радикального окисления.

Для определения концентрации веществ, входящих в состав буферного раствора для жидкой формы средства, было получено несколько вариантов экспериментальных групп (таблица 1). В каждый из полученных буферных растворов добавляли одно из средств:

1. иммунобиологическое средство, содержащее одновременно два активных компонента, представляющих собой экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad26-S-delta) и экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5,со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:2 (Ad26-S-omicron), в соотношении 1:1, в концентрации 5*1010 вч:5*1010 вч (итого:1011 вч)).

2. иммунобиологическое средство, содержащее одновременно два активных компонента, представляющих собой экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad5-S-delta) и экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:2 (Ad5-S-omicron), в соотношении 1:1, в концентрации 5*1010 вч:5*1010 вч (итого:1011 вч)).

Полученные средства хранили при температуре -18°С и -70°С в течение 3 месяцев, затем размораживали и оценивали изменение титра рекомбинантных аденовирусов.

Таблица 1 - Состав экспериментальных буферных растворов для жидкой формы средства.
группы
Состав буферного раствора
Трис (мг) Хлорид натрия (мг) Сахароза (мг) Магния хлорида гексагидрат (мг) ЭДТА (мг) Полисорбат-80 (мг) Этанол 95% (мг) Вода 1 0,968 2,19 25 0,102 0,019 0,25 0,0025 до 0,5 мл 2 1,815 2,19 25 0,102 0,019 0,25 0,0025 до 0,5 мл 3 1,21 1,752 25 0,102 0,019 0,25 0,0025 до 0,5 мл 4 1,21 3,285 25 0,102 0,019 0,25 0,0025 до 0,5 мл 5 1,21 2,19 20 0,102 0,019 0,25 0,0025 до 0,5 мл 6 1,21 2,19 37,5 0,102 0,019 0,25 0,0025 до 0,5 мл 7 1,21 2,19 25 0,0816 0,019 0,25 0,0025 до 0,5 мл 8 1,21 2,19 25 0,153 0,019 0,25 0,0025 до 0,5 мл 9 1,21 2,19 25 0,102 0,0152 0,25 0,0025 до 0,5 мл 10 1,21 2,19 25 0,102 0,0285 0,25 0,0025 до 0,5 мл 11 1,21 2,19 25 0,102 0,019 0,2 0,0025 до 0,5 мл 12 1,21 2,19 25 0,102 0,019 0,375 0,0025 до 0,5 мл 13 1,21 2,19 25 0,102 0,019 0,25 0,002 до 0,5 мл 14 1,21 2,19 25 0,102 0,019 0,25 0,00375 до 0,5 мл 15 1,21 2,19 25 0,102 0,019 0,25 0,0025 до 0,5 мл

Результаты проведенного эксперимента показали, что титр рекомбинантных аденовирусов после их хранения в буферном растворе для жидкой формы средства при температурах -18°С и -70 °С в течение 3 месяцев не изменялся.

Таким образом, разработанный буферный раствор для жидкой формы средства обеспечивает стабильность всех компонентов разработанного средства в следующем диапазоне действующих веществ (масс %):

Трис: от 0,1831 масс.% до 0,3432 масс.%;

Хлорид натрия: от 0,3313 масс.% до 0,6212 масс.%;

Сахароза: от 3,7821 масс.% до 7,0915 масс.%;

Магния хлорида гексагидрат: от 0,0154 масс.% до 0,0289 масс.%;

ЭДТА: от 0,0029 масс.% до 0,0054 масс.%;

Полисорбат-80: от 0,0378 масс.% до 0,0709 масс.%;

Этанол 95%: от 0,0004 масс.% до 0,0007 масс.%;

Растворитель: остальное.

Пример 7. Разработка буферного раствора для лиофилизированной формы иммунобиологического средства.

Авторами изобретения был подобран буферный раствор на водной основе, обеспечивающий стабильность рекомбинантных аденовирусных частиц во время лиофилизации и в процессе хранения. Для поддержания рН раствора в буфер добавили Трис(гидроксиметил)аминометан (Трис). Для достижения необходимой ионной силы и осмолярности был добавлен хлорид натрия. Для криопротекции в буфер добавили сахарозу. Магния хлорида гексагидрат добавили в качестве источника двухвалентных катионов, ЭДТА - в качестве ингибитора свободно-радикального окисления, полисорбат-80 - в качестве поверхностно-активного вещества, этанол 95% - в качестве ингибитора свободно-радикального окисления.

Для определения концентрации веществ, входящих в состав буферного раствора для лиофилизированной формы средства, было получено несколько вариантов экспериментальных групп (таблица 2). В каждый из полученных буферных растворов добавляли один из активных компонентов средства:

1. иммунобиологическое средство, содержащее одновременно два активных компонента, представляющих собой экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad26-S-delta) и экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5,со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:2 (Ad26-S-omicron), в соотношении 1:1, в концентрации 5*1010 вч:5*1010 вч (итого:1011 вч)).

2. иммунобиологическое средство, содержащее одновременно два активных компонента, представляющих собой экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:1 (Ad5-S-delta) и экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO:3 (Ad5-S-omicron), в соотношении 1:1, в концентрации 5*1010 вч:5*1010 вч (итого:1011 вч)).

Полученные средства лиофилизировали и хранили при температуре+2 и+8°С в течение 3 месяцев, затем оценивали изменение титра рекомбинантных аденовирусов.

Таблица 2 - Состав экспериментальных буферных растворов для лиофилизированной формы иммунобиологического средства.
группы
Состав буферного раствора
Трис (мг) Хлорид натрия (мг) Сахароза (мг) Магния хлорида гексагидрат (мг) ЭДТА (мг) Полисорбат-80 (мг) Вода 1 0,1936 1,403 73,5 0,0204 0,0038 0,05 до 1 мл 2 0,363 1,403 73,5 0,0204 0,0038 0,05 до 1 мл 3 0,242 1,1224 73,5 0,0204 0,0038 0,05 до 1 мл 4 0,242 2,1045 73,5 0,0204 0,0038 0,05 до 1 мл 5 0,242 1,403 58,8 0,0204 0,0038 0,05 до 1 мл 6 0,242 1,403 110,25 0,0204 0,0038 0,05 до 1 мл 7 0,242 1,403 73,5 0,01632 0,0038 0,05 до 1 мл 8 0,242 1,403 73,5 0,0306 0,0038 0,05 до 1 мл 9 0,242 1,403 73,5 0,0204 0,00304 0,05 до 1 мл 10 0,242 1,403 73,5 0,0204 0,0057 0,05 до 1 мл 11 0,242 1,403 73,5 0,0204 0,0038 0,04 до 1 мл 12 0,242 1,403 73,5 0,0204 0,0038 0,075 до 1 мл 13 0,242 1,403 73,5 0,0204 0,0038 0,05 до 1 мл

Результаты проведенного эксперимента показали, что титр рекомбинантных аденовирусов после их хранения в буферном растворе для лиофилизированной формы средства при температуре+2°С и+8 °С в течение 3 месяцев не изменялся.

Таким образом, разработанный буферный раствор для лиофилизированной формы вакцины обеспечивает стабильность всех компонентов разработанного средства в следующем диапазоне действующих веществ:

Трис: от 0,0180 масс.% до 0,0338 масс.%;

Хлорид натрия: от 0,1044 масс.% до 0,1957 масс.%;

Сахароза: от 5,4688 масс.% до 10,2539 масс.%;

Магния хлорида гексагидрат: от 0,0015 масс.% до 0,0028 масс.%;

ЭДТА: от 0,0003 масс.% до 0,0005 масс.%;

Полисорбат-80: от 0,0037 масс.% до 0,0070 масс.%;

Растворитель: остальное.

Пример 8. Токсичность разработанного средства при однократном введении (острая токсичность) на мышах.

В данном исследовании оценивали острую токсичность разработанных иммунобиологических средств. В исследовании были использованы аутбредные мыши, обоих полов, массой 18-20 грамм, возрастом 6-8 недель.

Расчет дозы средства проводили исходя из иммунизирующей дозы (108в.ч.), полученной в предварительном эксперименте на чувствительном виде животных - сирийских хомячках. Расчет доз для мышей проводили исходя из массы тела. Минимальной дозой для токсикологических экспериментов была выбрана доза для мыши 108в.ч., как наиболее близкая к терапевтической. Для пересчета доз не использовался коэффициент межвидового пересчета, дозы получены путем прямого пересчета на массу тела, согласно рекомендация ВОЗ для вакцинных препаратов.

В результате, для введения мышам в данном эксперименте выбрали следующие дозы средства:

108в.ч. - близкая к эффективной дозе (ЭД) для мышей;

109в.ч. - увеличенная ЭД для мышей в 20 раз;

1010в.ч. - увеличенная ЭД для мышей в 200 раз;

1011в.ч. - увеличенная ЭД для мышей в 2000 раз;

Таким образом, были получены следующие экспериментальные группы животных:

1) Ad26-S-delta, 1*108 в.ч., 20 мышей;

2) Ad26-S-delta, 1*109 в.ч., 20 мышей;

3) Ad26-S-delta, 1*1010 в.ч., 20 мышей;

4) Ad26-S-delta, 1*1011 в.ч., 20 мышей;

5) Ad26-S-omicron, 1*108 в.ч., 20 мышей;

6) Ad26-S-omicron, 1*109 в.ч., 20 мышей;

7) Ad26-S-omicron, 1*1010 в.ч., 20 мышей;

8) Ad26-S-omicron, 1*1011 в.ч., 20 мышей;

9) Ad5-S-delta, 1*108 в.ч., 20 мышей;

10) Ad5-S-delta, 1*109 в.ч., 20 мышей;

11) Ad5-S-delta, 1*1010 в.ч., 20 мышей;

12) Ad5-S-delta, 1*1011 в.ч., 20 мышей;

13) Ad5-S-omicron, 1*108 в.ч., 20 мышей;

14) Ad5-S-omicron, 1*109 в.ч., 20 мышей;

15) Ad5-S-omicron, 1*1010 в.ч., 20 мышей;

16) Ad5-S-omicron, 1*1011 в.ч., 20 мышей;

17) Ad26-S-delta/ Ad26-S-omicron, 1:1, 1*108в.ч., 20 мышей;

18) Ad26-S-delta/ Ad26-S-omicron, 1:1, 1*109 в.ч., 20 мышей;

19) Ad26-S-delta/ Ad26-S-omicron, 1:1, 1*1010 в.ч., 20 мышей;

20) Ad26-S-delta/ Ad26-S-omicron, 1:1, 1*1011 в.ч., 20 мышей;

21) Ad5-S-delta/ Ad5-S-omicron, 1:1, 1*108 в.ч., 20 мышей;

22) Ad5-S-delta/ Ad5-S-omicron, 1:1, 1*109 в.ч., 20 мышей;

23) Ad5-S-delta/ Ad5-S-omicron, 1:1, 1*1010 в.ч., 20 мышей;

24) Ad5-S-delta/ Ad5-S-omicron, 1:1, 1*1011 в.ч., 20 мышей;

25) плацебо (буферный раствор), 20 мышей.

Клинический осмотр каждого животного проводили ежедневно в течение 14 дней, регистрируя признаки интоксикации и число павших животных.

Фиксировали следующие параметры функционального состояния лабораторных животных: активность, передвижение, внешний вид, состояние шерсти, глаз, ушей, зубов, конечностей. Физиологические функции: дыхание, слюноотделение, слюна, моча, экскрет.На протяжении эксперимента все животные оставались живы. Во всех группах животные выглядели здоровыми, активно поедали корм, адекватно реагировали на раздражители, проявляли исследовательский интерес. Шерстный покров густой, ровный и блестящий, плотно прилегал к поверхности тела, выпадения или ломкости шерсти не выявлено. Мышечный тонус не отличался повышенной возбудимостью. Ушные раковины без корок, не воспалены, подергиваний не замечено. Зубы обычного цвета, без поломок. Мыши были средней упитанности, истощением не страдали. Область живота в объеме не увеличена. Дыхание ровное, незатрудненное. Слюноотделение в норме. Частота мочеиспускания, цвет мочи, желудочно-кишечные показатели, мышечный тонус, рефлексы соответствовали физиологической норме. Поведение опытных животных не отличалось от контрольных.

На 14 сутки от начала эксперимента, осуществляли запланированную эвтаназию мышей методом дислокации шейных позвонков. В ходе проведения исследования животные в тяжелом состоянии с признаками неминуемой смерти не наблюдались, гибели животных не было.

Проводили полную некропсию тел всех животных. При некропсии исследовали внешнее состояние тела, внутренние поверхности и проходы, полость черепа, грудную, брюшную и тазовую полости с находящимися в них органами и тканями, шею с органами и тканями и скелетно-мышечную систему.

При макроскопическом исследовании не обнаружено влияния средства на состояние внутренних органов мышей, различий между контрольными и опытными группами не найдено. Статистически достоверных различий в массе органов между опытными и контрольной группами не обнаружено. Набор массы животных в опытных и контрольных группах не отличался.

Таким образом, результаты данного эксперимента показывают, что разработанные варианты иммунобиологического средства в данном диапазоне доз не проявляют токсичности для млекопитающих.

Пример 9. Определение эффективности однократной иммунизации животных разработанными вариантами иммунобиологического средства на основе экспрессионных векторов Ad26-S-delta и Ad5-S-delta по оценке гуморального иммунного ответа против S белка вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta).

В эксперименте использовались млекопитающие - мыши линии BALB/c, самки 18 г.Все животные были разделены на 17 групп по 5 животных, которым однократно вводили различные варианты разработанного средства. Были сформированы следующие группы животных:

1) Ad26-S-delta, внутримышечно, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

2) Ad26-S-delta, внутримышечно, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

3) Ad26-S-delta, интраназально, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

4) Ad26-S-delta, интраназально, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

5) Ad26-null, внутримышечно, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

6) Ad26-null, внутримышечно, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

7) Ad26-null, интраназально, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

8) Ad26-null, интраназально, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

9) Ad5-S-delta, внутримышечно, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

10) Ad5-S-delta, внутримышечно, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

11) Ad5-S-delta, интраназально, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

12) Ad5-S-delta, интраназально, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

13) Ad5-null, внутримышечно, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

14) Ad5-null, внутримышечно, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

15) Ad5-null, интраназально, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

16) Ad5-null, интраназально, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

17) плацебо (буфер), 200 мкл.

Через три недели у животных отбирали кровь из хвостовой вены и выделяли сыворотку крови. Титр антител определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) по следующему протоколу:

1) Антиген - S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta), адсорбировали на лунках 96-луночного планшета для ИФА в течение 16 часов при температуре+4°С.

2) Далее для избавления от неспецифического связывания осуществилась "забивка" планшета 5% молоком, растворенном в буфере для блокирования неспецифического сигнала в объеме 100 мкл на лунку. Инкубировали на шейкере при температуре 37°С на протяжении часа.

3) Образцы сывороток иммунизированных мышей разводили вначале в 100 раз, а затем делали серию двукратных разведений. Всего было приготовлено 12 разведений каждого образца.

4) Добавляли по 50 мкл каждого разведенного образца сыворотки в лунки планшета.

5) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

6) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

7) Затем добавляли вторичные антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена.

8) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

9) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

10) Затем добавили раствор тетраметилбензидина (ТМВ), который является субстратом пероксидазы хрена и в результате реакции превращается в окрашенное соединение. Реакцию останавливали через 15 минут добавлением серной кислоты. Далее с помощью спектрофотометра измеряли оптическую плотность раствора (OD) в каждой лунке при длине волны 450 нм.

Титр антител определяли, как последнее разведение, в котором оптическая плотность раствора была достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля. Полученные результаты (среднее геометрическое значение) представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Титр антител к S белку SARS-CoV-2 в сыворотке крови мышей (среднее геометрическое значение титра антител). Название группы животных Титр антител 1 Ad26-S-delta, внутримышечно,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
1838
2 Ad26-S-delta, внутримышечно,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
3676
3 Ad26-S-delta, интраназально,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
919
4 Ad26-S-delta, интраназально,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
2111
5 Ad26-null, внутримышечно,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
0
6 Ad26-null, внутримышечно,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
0
7 Ad26-null, интраназально,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
0
8 Ad26-null, интраназально,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
0
9 Ad5-S-delta, внутримышечно,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
22286
10 Ad5-S-delta, внутримышечно,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
44572
11 Ad5-S-delta, интраназально,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
8445
12 Ad5-S-delta, интраназально,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
19401
13 Ad5-null, внутримышечно,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
0
14 Ad5-null, внутримышечно,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
0
15 Ad5-null, интраназально,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
0
16 Ad5-null, интраназально,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
0
17 плацебо (буфер), 200 мкл. 0

Как видно из результатов эксперимента однократное введение всех вариантов разработанного средства (как внутримышечное, так и интраназальное) в концентрациях 5*1010 вирусных частиц/дозу до 5*1011 вирусных частиц/дозу обеспечивает образование антител против вакцинного антигена.

Таким образом, можно заключить, что варианты разработанного иммунобиологического средства на основе экспрессионных векторов Ad26-S-delta и Ad5-S-delta вызывают гуморальный иммунный ответ против SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta).

Пример 10. Определение эффективности двукратной иммунизации животных разработанными вариантами иммунобиологического средства на основе экспрессионных векторов Ad26-S-delta и Ad5-S-delta по оценке гуморального иммунного ответа против S белка вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta).

В эксперименте использовались млекопитающие - мыши линии BALB/c, самки 18 г.Все животные были разделены на 13 групп по 5 животных, которым однократно вводили различные варианты разработанного средства. Были сформированы следующие группы животных:

1) Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.

2) Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл.

3) Ad26-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.

4) Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.

5) Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл.

6) Ad5-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.

7) Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.

8) Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл.

9) Ad5-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.

10) Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.

11) Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл.

12) Ad26-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.

13) плацебо (буфер), 200 мкл.

Через три недели у животных отбирали кровь из хвостовой вены и выделяли сыворотку крови. Титр антител определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) по следующему протоколу:

1) Антиген - S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta), адсорбировали на лунках 96-луночного планшета для ИФА в течение 16 часов при температуре+4°С.

2) Далее для избавления от неспецифического связывания осуществилась "забивка" планшета 5% молоком, растворенном в буфере для блокирования неспецифического сигнала в объеме 100 мкл на лунку. Инкубировали на шейкере при температуре 37°C на протяжении часа.

3) Образцы сывороток иммунизированных мышей разводили вначале в 100 раз, а затем делали серию двукратных разведений. Всего было приготовлено 12 разведений каждого образца.

4) Добавляли по 50 мкл каждого разведенного образца сыворотки в лунки планшета.

5) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

6) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

7) Затем добавляли вторичные антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена.

8) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

9) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

10) Затем добавили раствор тетраметилбензидина (ТМВ), который является субстратом пероксидазы хрена и в результате реакции превращается в окрашенное соединение. Реакцию останавливали через 15 минут добавлением серной кислоты. Далее с помощью спектрофотометра измеряли оптическую плотность раствора (OD) в каждой лунке при длине волны 450 нм.

Титр антител определяли, как последнее разведение, в котором оптическая плотность раствора была достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля. Полученные результаты (среднее геометрическое значение) представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Титр антител к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) в сыворотке крови мышей (среднее геометрическое значение титра антител). Название группы животных Титр антител 1 Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.
25600
2 Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл.
22286
3 Ad26-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.
25600
4 Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.
67559
5 Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл.
77605
6 Ad5-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.
77605
7 Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.
89144
8 Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл.
89144
9 Ad5-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.
77605
10 Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.
89144
11 Ad26-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл.
102400
12 Ad26-S-delta, ин, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-delta, в/м, 1011 вч/200 мкл.
89144
13 плацебо (буфер), 200 мкл. 0

Как видно из результатов эксперимента двукратное введение всех тестируемых вариантов разработанного средства обеспечивает образование антител против вакцинного антигена.

Таким образом, можно заключить, что варианты разработанного иммунобиологического средства на основе экспрессионных векторов Ad26-S-delta и Ad5-S-delta вызывают гуморальный иммунный ответ против SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) при двукратном введении.

Пример 11. Определение эффективности однократной иммунизации животных разработанными вариантами иммунобиологического средства на основе экспрессионных векторов Ad26-S-omicron и Ad5-S-omicron по оценке гуморального иммунного ответа против S белка вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron).

В эксперименте использовались млекопитающие - мыши линии BALB/c, самки 18 г.Все животные были разделены на 17 групп по 5 животных, которым однократно вводили различные варианты разработанного средства. Были сформированы следующие группы животных:

1) Ad26-S-omicron, внутримышечно, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

2) Ad26-S-omicron, внутримышечно, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

3) Ad26-S-omicron, интраназально, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

4) Ad26-S-omicron, интраназально, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

5) Ad26-null, внутримышечно, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

6) Ad26-null, внутримышечно, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

7) Ad26-null, интраназально, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

8) Ad26-null, интраназально, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

9) Ad5-S-omicron, внутримышечно, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

10) Ad5-S-omicron, внутримышечно, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

11) Ad5-S-omicron, интраназально, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

12) Ad5-S-omicron, интраназально, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

13) Ad5-null, внутримышечно, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

14) Ad5-null, внутримышечно, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

15) Ad5-null, интраназально, 5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;

16) Ad5-null, интраназально, 5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;

17) плацебо (буфер), 200 мкл.

Через три недели у животных отбирали кровь из хвостовой вены и выделяли сыворотку крови. Титр антител определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) по следующему протоколу:

1) Антиген - S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron), адсорбировали на лунках 96-луночного планшета для ИФА в течение 16 часов при температуре+4°С.

2) Далее для избавления от неспецифического связывания осуществилась "забивка" планшета 5% молоком, растворенном в буфере для блокирования неспецифического сигнала в объеме 100 мкл на лунку. Инкубировали на шейкере при температуре 37°C на протяжении часа.

3) Образцы сывороток иммунизированных мышей разводили вначале в 100 раз, а затем делали серию двукратных разведений. Всего было приготовлено 12 разведений каждого образца.

4) Добавляли по 50 мкл каждого разведенного образца сыворотки в лунки планшета.

5) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

6) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

7) Затем добавляли вторичные антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена.

8) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

9) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

10) Затем добавили раствор тетраметилбензидина (ТМВ), который является субстратом пероксидазы хрена и в результате реакции превращается в окрашенное соединение. Реакцию останавливали через 15 минут добавлением серной кислоты. Далее с помощью спектрофотометра измеряли оптическую плотность раствора (OD) в каждой лунке при длине волны 450 нм.

Титр антител определяли, как последнее разведение, в котором оптическая плотность раствора была достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля. Полученные результаты (среднее геометрическое значение) представлены в таблице 5.

Таблица 5 - Титр антител к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) в сыворотке крови мышей (среднее геометрическое значение титра антител). Название группы животных Титр антител 1 Ad26-S-omicron, внутримышечно,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
2111
2 Ad26-S-omicron, внутримышечно,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
2786
3 Ad26-S-omicron, интраназально,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
1213
4 Ad26-S-omicron, интраназально,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
2111
5 Ad26-null, внутримышечно,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
0
6 Ad26-null, внутримышечно,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
0
7 Ad26-null, интраназально,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
0
8 Ad26-null, интраназально,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
0
9 Ad5-S-omicron, внутримышечно,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
16890
10 Ad5-S-omicron, внутримышечно,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
33779
11 Ad5-S-omicron, интраназально,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
8445
12 Ad5-S-omicron, интраназально,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
16890
13 Ad5-null, внутримышечно,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
0
14 Ad5-null, внутримышечно,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
0
15 Ad5-null, интраназально,
5*1010 вирусных частиц/200 мкл.;
0
16 Ad5-null, интраназально,
5*1011 вирусных частиц/200 мкл.;
0
17 плацебо (буфер) 0

Как видно из результатов эксперимента однократное введение всех вариантов разработанного средства (как внутримышечное, так и интраназальное) в концентрациях 5*1010 вирусных частиц/дозу до 5*1011 вирусных частиц/дозу обеспечивает образование антител против вакцинного антигена.

Таким образом, можно заключить, что варианты разработанного иммунобиологического средства на основе экспрессионных векторов Ad26-S-omicron и Ad5-S-omicron вызывают гуморальный иммунный ответ против SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron).

Пример 12. Определение эффективности двукратной иммунизации животных разработанными вариантами иммунобиологического средства на основе экспрессионных векторов Ad26-S-omicron и Ad5-S-omicron по оценке гуморального иммунного ответа против S белка вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron).

В эксперименте использовались млекопитающие - мыши линии BALB/c, самки 18 г.Все животные были разделены на 13 групп по 5 животных, которым однократно вводили различные варианты разработанного средства. Были сформированы следующие группы животных:

1) Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.

2) Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл.

3) Ad26-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.

4) Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.

5) Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл.

6) Ad5-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.

7) Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.

8) Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл.

9) Ad5-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.

10) Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.

11) Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл.

12) Ad26-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.

13) плацебо (буфер), 200 мкл.

Через три недели у животных отбирали кровь из хвостовой вены и выделяли сыворотку крови. Титр антител определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) по следующему протоколу:

1) Антиген - S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron), адсорбировали на лунках 96-луночного планшета для ИФА в течение 16 часов при температуре+4°С.

2) Далее для избавления от неспецифического связывания осуществилась "забивка" планшета 5% молоком, растворенном в буфере для блокирования неспецифического сигнала в объеме 100 мкл на лунку. Инкубировали на шейкере при температуре 37°C на протяжении часа.

3) Образцы сывороток иммунизированных мышей разводили вначале в 100 раз, а затем делали серию двукратных разведений. Всего было приготовлено 12 разведений каждого образца.

4) Добавляли по 50 мкл каждого разведенного образца сыворотки в лунки планшета.

5) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

6) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

7) Затем добавляли вторичные антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена.

8) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

9) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

10) Затем добавили раствор тетраметилбензидина (ТМВ), который является субстратом пероксидазы хрена и в результате реакции превращается в окрашенное соединение. Реакцию останавливали через 15 минут добавлением серной кислоты. Далее с помощью спектрофотометра измеряли оптическую плотность раствора (OD) в каждой лунке при длине волны 450 нм.

Титр антител определяли, как последнее разведение, в котором оптическая плотность раствора была достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля. Полученные результаты (среднее геометрическое значение) представлены в таблице 6.

Таблица 6 - Титр антител к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) в сыворотке крови мышей (среднее геометрическое значение титра антител). Название группы животных Титр антител 1 Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.
19401
2 Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл.
19401
3 Ad26-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.
16890
4 Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.
51200
5 Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл.
67559
6 Ad5-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.
58813
7 Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.
51200
8 Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл.
67559
9 Ad5-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл;
Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.
58813
10 Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.
67559
11 Ad26-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл.
67559
12 Ad26-S-omicron, ин, 1011 вч/200 мкл;
Ad5-S-omicron, в/м, 1011 вч/200 мкл.
58813
13 плацебо (буфер), 200 мкл 0

Как видно из результатов эксперимента двукратное введение всех тестируемых вариантов разработанного средства обеспечивает образование антител против вакцинного антигена.

Таким образом, можно заключить, что варианты разработанного иммунобиологического средства на основе экспрессионных векторов Ad26-S-omicron и Ad5-S-omicron вызывают гуморальный иммунный ответ против SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) при двукратном введении.

Пример 12. Определение эффективности однократной иммунизации животных разработанным вариантом иммунобиологического средства на основе двух экспрессионных векторов (Ad26-S-delta, Ad26-S-omicron) по оценке гуморального иммунного ответа.

В эксперименте использовались млекопитающие - мыши линии BALB/c, самки 18 г.Все животные были разделены на 11 групп по 5 животных, которым однократно внутримышечно вводили разработанное иммунобиологическое средство, представляющее собой смесь двух экспрессионных векторов (Ad26-S-delta и Ad26-S-omicron) (получение данного средства описано в примере 3). Животным вводили различные варианты средства, которые отличались соотношением активных компонентов (от 1: 20 до 20:1). Специалисту среднего уровня очевидно, что активные компоненты могут быть смешаны в любых соотношениях, которые позволяют каждому из компонентов вызывать иммунный ответ в организме млекопитающих.

Таким образом, были сформированы следующие группы животных:

1) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1: 20, 5*1010 вч/200 мкл;

2) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:10, 5*1010 вч/200 мкл;

3) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, 5*1010 вч/200 мкл;

4) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 10:1, 5*1010 вч/200 мкл;

5) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 20:1, 5*1010 вч/200 мкл;

6) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1: 20, 5 *1011 вч/200 мкл;

7) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:10, 5 *1011 вч/200 мкл;

8) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, 5 *1011 вч/200 мкл;

9) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 10:1, 5 *1011 вч/200 мкл;

10) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 20:1, 5 *1011 вч/200 мкл;

11) плацебо (буфер), 200 мкл.

Через три недели у животных отбирали кровь из хвостовой вены и выделяли сыворотку крови. Титр антител определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) по следующему протоколу:

1) Антиген - S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) или S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron), адсорбировали на лунках 96-луночного планшета для ИФА в течение 16 часов при температуре+4°С.

2) Далее для избавления от неспецифического связывания осуществилась "забивка" планшета 5% молоком, растворенном в буфере для блокирования неспецифического сигнала в объеме 100 мкл на лунку. Инкубировали на шейкере при температуре 37°C на протяжении часа.

3) Образцы сывороток иммунизированных мышей разводили вначале в 100 раз, а затем делали серию двукратных разведений. Всего было приготовлено 12 разведений каждого образца.

4) Добавляли по 50 мкл каждого разведенного образца сыворотки в лунки планшета.

5) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

6) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

7) Затем добавляли вторичные антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена.

8) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

9) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

10) Затем добавили раствор тетраметилбензидина (ТМВ), который является субстратом пероксидазы хрена и в результате реакции превращается в окрашенное соединение. Реакцию останавливали через 15 минут добавлением серной кислоты. Далее с помощью спектрофотометра измеряли оптическую плотность раствора (OD) в каждой лунке при длине волны 450 нм.

Титр антител определяли, как последнее разведение, в котором оптическая плотность раствора была достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля. Полученные результаты (среднее геометрическое значение) представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Титр антител к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 и к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) в сыворотке крови мышей (среднее геометрическое значение титра антител). Название группы животных Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.617.2 (Delta)
Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.1.529 (Omicron)
1 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:20, 5*1010 вч/200 мкл; 264 2425 2 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:10, 5*1010 вч/200 мкл; 1213 1838 3 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, 5*1010 вч/200 мкл; 2111 1838 4 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 10:1, 5*1010 вч/200 мкл; 2425 919 5 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 20:1, 5*1010 вч/200 мкл; 3676 200 6 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:20, 5 *1011 вч/200 мкл; 400 4850 7 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:10, 5 *1011 вч/200 мкл; 1600 2786 8 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, 5 *1011 вч/200 мкл; 2786 2111 9 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 10:1, 5 *1011 вч/200 мкл; 2786 1056 10 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 20:1, 5 *1011 вч/200 мкл; 4850 459 11 плацебо (буфер), 200 мкл. 0 0

Как видно из результатов эксперимента однократное внутримышечное введение всех вариантов разработанного средства (при соотношениях активных компонентов от 1:20 до 20:1) в концентрациях от 5*1010 вирусных частиц/дозу до 5*1011 вирусных частиц/дозу обеспечивает образование антител против обоих антигенов.

Таким образом, можно заключить, что вариант разработанного иммунобиологического средства на основе двух экспрессионных векторов (Ad26-S-delta и Ad26-S-omicron) индуцирует развитие гуморального иммунного ответа против двух вариантов SARS-CoV-2 (B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron)).

Пример 14. Определение эффективности однократной иммунизации животных разработанным вариантом иммунобиологического средства на основе двух экспрессионных векторов (Ad5-S-delta, Ad5-S-omicron) по оценке гуморального иммунного ответа.

В эксперименте использовались млекопитающие - мыши линии BALB/c, самки 18 г.Все животные были разделены на 11 групп по 5 животных, которым однократно внутримышечно вводили разработанное иммунобиологическое средство, представляющее собой смесь двух экспрессионных векторов (Ad5-S-delta и Ad5-S-omicron) (получение данного средства описано в примере 4). Животным вводили различные варианты средства, которые отличались соотношением активных компонентов (от 1:20 до 20:1). Специалисту среднего уровня очевидно, что активные компоненты могут быть смешаны в любых соотношениях, которые позволяют каждому из компонентов вызывать иммунный ответ в организме млекопитающих.

Таким образом, были сформированы следующие группы животных:

1) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1: 20, 5*1010 вч/200 мкл;

2) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:10, 5*1010 вч/200 мкл;

3) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, 5*1010 вч/200 мкл;

4) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 10:1, 5*1010 вч/200 мкл;

5) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 20:1, 5*1010 вч/200 мкл;

6) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1: 20, 5 *1011 вч/200 мкл;

7) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:10, 5 *1011 вч/200 мкл;

8) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, 5 *1011 вч/200 мкл;

9) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 10:1, 5 *1011 вч/200 мкл;

10) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 20:1, 5 *1011 вч/200 мкл;

11) плацебо (буфер), 200 мкл.

Через три недели у животных отбирали кровь из хвостовой вены и выделяли сыворотку крови. Титр антител определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) по следующему протоколу:

1) Антиген - S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) или S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron), адсорбировали на лунках 96-луночного планшета для ИФА в течение 16 часов при температуре+4°С.

2) Далее для избавления от неспецифического связывания осуществилась "забивка" планшета 5% молоком, растворенном в буфере для блокирования неспецифического сигнала в объеме 100 мкл на лунку. Инкубировали на шейкере при температуре 37°С на протяжении часа.

3) Образцы сывороток иммунизированных мышей разводили вначале в 100 раз, а затем делали серию двукратных разведений. Всего было приготовлено 12 разведений каждого образца.

4) Добавляли по 50 мкл каждого разведенного образца сыворотки в лунки планшета.

5) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

6) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

7) Затем добавляли вторичные антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена.

8) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

9) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

10) Затем добавили раствор тетраметилбензидина (ТМВ), который является субстратом пероксидазы хрена и в результате реакции превращается в окрашенное соединение. Реакцию останавливали через 15 минут добавлением серной кислоты. Далее с помощью спектрофотометра измеряли оптическую плотность раствора (OD) в каждой лунке при длине волны 450 нм.

Титр антител определяли, как последнее разведение, в котором оптическая плотность раствора была достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля. Полученные результаты (среднее геометрическое значение) представлены в таблице 8.

Таблица 8 - Титр антител к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 и к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) в сыворотке крови мышей (среднее геометрическое значение титра антител). Название группы животных Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.617.2 (Delta)
Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.1.529 (Omicron)
1 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
1: 20, 5*1010 вч/200 мкл;
800 2425
2 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
1:10, 5*1010 вч/200 мкл;
1838 1838
3 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
1:1, 5*1010 вч/200 мкл;
11143 1838
4 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
10:1, 5*1010 вч/200 мкл;
16890 919
5 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
20:1, 5*1010 вч/200 мкл;
29407 200
6 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
1: 20, 5 *1011 вч/200 мкл;
1213 4850
7 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
1:10, 5 *1011 вч/200 мкл;
2786 2786
8 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
1:1, 5 *1011 вч/200 мкл;
19401 2111
9 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
10:1, 5 *1011 вч/200 мкл;
29407 1056
10 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron,
20:1, 5 *1011 вч/200 мкл;
38802 459
11 плацебо (буфер), 200 мкл. 0 0

Как видно из результатов эксперимента однократное внутримышечное введение всех вариантов разработанного средства (при соотношениях активных компонентов от 1: 20 до 20:1) в концентрациях от 5*1010 вирусных частиц/дозу до 5*1011 вирусных частиц/дозу обеспечивает образование антител против обоих антигенов.

Таким образом, можно заключить, что вариант разработанного иммунобиологического средства на основе двух экспрессионных векторов (Ad5-S-delta и Ad5-S-omicron) индуцирует развитие гуморального иммунного ответа против двух вариантов SARS-CoV-2 (B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron)).

Пример 15. Определение эффективности последовательной иммунизации животных иммунобиологическим средством, содержащим два экспрессионных вектора на основе human adenovirus 26-го серотипа (Ad26-S-delta, Ad26-S-omicron) и иммунобиологическим средством, содержащим два экспрессионных вектора на основе human adenovirus 5-го серотипа (Ad5-S-delta, Ad5-S-omicron) по оценке гуморального иммунного ответа.

В эксперименте использовались млекопитающие - мыши линии BALB/c, самки 18 г.Все животные были разделены на 17 групп по 5 животных, которым последовательно с интервалом в 3 недели вводили один из вариантов разработанного иммунобиологического средства на основе двух экспрессионных векторов (получение данных средств описано в примерах 3,4).

Таким образом, были сформированы следующие группы животных:

1) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, в/м, 1:1, 1011 вч/200 мкл;

2) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл;

3) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл;

4) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл;

5) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл;

6) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл;

7) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл;

8) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл;

9) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл;

10) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл;

11) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл;

12) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл;

13) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл;

14) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл;

15) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл;

16) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл;

17) плацебо (буфер), 200 мкл.

Через три недели после последней иммунизации у животных отбирали кровь из хвостовой вены и выделяли сыворотку крови. Титр антител определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) по следующему протоколу:

1) Антиген - S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) или S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron), адсорбировали на лунках 96-луночного планшета для ИФА в течение 16 часов при температуре+4°С.

2) Далее для избавления от неспецифического связывания осуществилась "забивка" планшета 5% молоком, растворенном в буфере для блокирования неспецифического сигнала в объеме 100 мкл на лунку. Инкубировали на шейкере при температуре 37°С на протяжении часа.

3) Образцы сывороток иммунизированных мышей разводили вначале в 100 раз, а затем делали серию двукратных разведений. Всего было приготовлено 12 разведений каждого образца.

4) Добавляли по 50 мкл каждого разведенного образца сыворотки в лунки планшета.

5) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

6) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

7) Затем добавляли вторичные антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена.

8) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

9) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

10) Затем добавили раствор тетраметилбензидина (ТМВ), который является субстратом пероксидазы хрена и в результате реакции превращается в окрашенное соединение. Реакцию останавливали через 15 минут добавлением серной кислоты. Далее с помощью спектрофотометра измеряли оптическую плотность раствора (OD) в каждой лунке при длине волны 450 нм.

Титр антител определяли, как последнее разведение, в котором оптическая плотность раствора была достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля. Полученные результаты (среднее геометрическое значение) представлены в таблице 9.

Таблица 9 - Титр антител к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 и к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) в сыворотке крови мышей (среднее геометрическое значение титра антител). Название группы животных Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.617.2 (Delta)
Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.1.529 (Omicron)
1 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, в/м, 1:1, 1011 вч/200 мкл; 11143 4850 2 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; 12800 6400 3 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; 7352 5572 4 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; 12800 11143 5 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; 25600 11143 6 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; 19401 9701 7 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; 11143 12800 8 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; 22286 11143 9 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; 44572 22286 10 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; 44572 19401 11 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; 44572 11143 12 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; 38802 19401 13 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; 44572 19401 14 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; 38802 11143 15 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; 38802 11143 16 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, ин, 1011 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, в/м, 1011 вч/200 мкл; 44572 22286 17 плацебо (буфер), 200 мкл. 0 0

Как видно из результатов эксперимента последовательное введение различных вариантов разработанного средства (как внутримышечное, так и интраназальное) обеспечивает образование антител против обоих антигенов.

Таким образом, можно заключить, что все варианты разработанного иммунобиологического средства на основе двух экспрессионных векторов (Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron и Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron) индуцируют развитие гуморального иммунного ответа против двух вариантов SARS-CoV-2 (B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron)).

Пример 16. Определение эффективности иммунизации разработанным иммунобиологическим средством по оценке доли пролиферирующих лимфоцитов.

Пролиферативный анализ позволяет оценивать способность лимфоцитов усиленно делиться после встречи с антигеном. Для того, чтобы оценить пролиферацию авторы использовали окраску лимфоцитов флуоресцентным красителем CFSE. Данный краситель связывается с клеточными белками, и сохраняется долгое время и при этом никогда не передается соседним клеткам в популяции. Однако, флуоресцентная метка передается дочерним клеткам. Концентрация метки, а, следовательно, и интенсивность флуоресценции, снижаются ровно в два раза. Поэтому делящиеся клетки легко отслеживать по уменьшению их флуоресценции.

В эксперименте использовались мыши линии C57BL/6. Все животные были разделены на 17 групп (по 3 животных), которым внутримышечно вводили:

1) Ad26-S-delta, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

2) Ad26-S-omicron, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

3) Ad5-S-delta, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

4) Ad5-S-omicron, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

5) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

6) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл

7) Ad26-null, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

8) Ad5-null, внутримышечно, 1011 вч/200 мкл.

9) Ad26-S-delta, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

10) Ad26-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

11) Ad5-S-delta, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

12) Ad5-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

13) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

14) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, интраназально, 1011 вч/200 мкл

15) Ad26-null, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

16) Ad5-null, интраназально, 1011 вч/200 мкл.

17) плацебо (буфер), 200 мкл

Через две недели животных усыпляли. Из селезенки выделяли лимфоциты методом центрифугирования в градиенте фиколла-урографина. Затем выделенные клетки окрашивали CFSE по методике (B.J. Quah et. al., Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, Nature Protocols, 2007, №2(9), 2049-2056) и культивировали в присутствие антигена. Далее клетки анализировали методом проточной цитофлуориметрии. Полученные результаты представлены на Фиг.1.,2. Как видно из результатов эксперимента, разработанные иммунобиологические средства по п.1, п.2, п.3, п.4 в данной дозе эффективно стимулируют пролиферацию лимфоцитов.

Таким образом, можно заключить, что полученные аденовирусные конструкции индуцируют формирование антиген-специфического иммунного ответа (как CD4+, так и CD8+).

Пример 17. Оценка иммуногенности разработанного средства при совместной внутримышечной и интраназальной иммунизации.

В эксперименте использованы мыши линии C57/Bl6, самки 18-20 г., 5 животных/группе. Были сформированы следующие группы животных:

1) Ad26-S-delta интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad26-S-delta внутримышечно 5*1010 вч/дозу.

2) Ad26-S-omicron интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad26-S-omicron внутримышечно 5*1010 вч/дозу.

3) Ad5-S-delta интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad5-S-delta внутримышечно 5*1010 вч/дозу.

4) Ad5-S-omicron интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad5-S-omicrone внутримышечно 5*1010 вч/дозу.

5) Ad26-S-delta интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad5-S-delta внутримышечно 5*1010 вч/дозу.

6) Ad5-S-delta интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad26-S-delta внутримышечно 5*1010 вч/дозу.

7) Ad26-S-omicron интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad5-S-omicron внутримышечно 5*1010 вч/дозу.

8) Ad5-S-omicron интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad26-S-omicron внутримышечно 5*1010 вч/дозу.

9) плацебо (буфер), 200 мкл

Через три недели у животных отбирали кровь из хвостовой вены и выделяли сыворотку крови. Титр антител определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) по следующему протоколу:

1) Антиген - S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) или S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron), адсорбировали на лунках 96-луночного планшета для ИФА в течение 16 часов при температуре+4°С.

2) Далее для избавления от неспецифического связывания в лунки планшета добавляли 5% молоко в TPBS 100 мкл/лунку. Инкубировали на шейкере при температуре 37°С на протяжении часа.

3) Образцы сывороток иммунизированных мышей разводили вначале в 100 раз, а затем делали серию двукратных разведений.

4) Добавляли по 50 мкл каждого разведенного образца сыворотки в лунки планшета.

5) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

6) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

7) Затем добавляли вторичные антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена.

8) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

9) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером

10) Затем добавили раствор тетраметилбензидина (ТМВ), который является субстратом пероксидазы хрена и в результате реакции превращается в окрашенное соединение. Реакцию останавливали через 15 минут добавлением серной кислоты. Далее с помощью спектрофотометра измеряли оптическую плотность раствора (OD) в каждой лунке при длине волны 450 нм.

Титр антител определяли, как последнее разведение, в котором оптическая плотность раствора была достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля. Полученные результаты (среднее геометрическое значение) представлены в таблице 10.

Таблица 10 - Титр антител к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 и к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) в сыворотке крови мышей (среднее геометрическое значение титра антител). Название группы животных Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.617.2 (Delta)
Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.1.529 (Omicron)
1 Ad26-S-delta интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad26-S-delta внутримышечно 5*1010 вч/дозу. 3200 132 2 Ad26-S-omicrone интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad26-S-omicrone внутримышечно 5*1010 вч/дозу. 115 1838 3 Ad5-S-delta интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad5-S-delta внутримышечно 5*1010 вч/дозу. 29407 115 4 Ad5-S-omicrone интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad5-S-omicrone внутримышечно 5*1010 вч/дозу. 115 19401 5 Ad26-S-delta интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad5-S-delta внутримышечно 5*1010 вч/дозу. 38802 100 6 Ad5-S-delta интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad26-S-delta внутримышечно 5*1010 вч/дозу. 33779 115 7 Ad26-S-omicrone интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad5-S-omicrone внутримышечно 5*1010 вч/дозу. 132 16890 8 Ad5-S-omicrone интраназально, 5*1010 вч/дозу и одновременно Ad26-S-omicrone внутримышечно 5*1010 вч/дозу. 100 19401 9 плацебо (буфер), 200 мкл 0 0

Результаты данного эксперимента подтверждают возможность использования разработанного средства для индукции специфического иммунитета к вирусу SARS-CoV-2 путем совместного и одновременного внутримышечного и интраназального введения.

Пример 18. Оценка способности разработанного средства индуцировать иммунный ответ у молодых животных.

Для данного исследования использовали молодых мышей линии BALB/c (возраст 21-28 дней). Животные были распределены на группы по 10 шт, которым вводили с интервалом в 2 недели следующие средства:

1) Ad26-S-delta, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл.

2) Ad5-S-delta, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл.

3) Ad26-S-omicron, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл.

4) Ad5-S-omicron, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл.

5) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, 5*109 вч/200 мкл.

6) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, 5*109 вч/200 мкл.

7) Ad26-S-delta, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, интраназально, 5*109 вч/200 мкл.

8) Ad5-S-delta, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, интраназально, 5*109 вч/200 мкл.

9) Ad26-S-omicron, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, интраназально, 5*109 вч/200 мкл.

10) Ad5-S-omicron, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, интраназально, 5*109 вч/200 мкл.

11) Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, интраназально, 5*109 вч/200 мкл.

12) Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, интраназально, 5*109 вч/200 мкл.

13) Буфер, внутримышечно, 200 мкл; буфер, внутримышечно, 200 мкл;

14) Буфер, интраназально, 200 мкл; буфер, интраназально, 200 мкл.

Через 14 дней после последней иммунизации определяли титр IgG антител в сыворотке крови животных.

Для этого:

1) Антиген - S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) или S белок вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron), адсорбировали на лунках 96-луночного планшета для ИФА в течение 16 часов при температуре+4°С.

2) Далее для избавления от неспецифического связывания в лунки планшета добавляли 5% молоко в TPBS 100 мкл/лунку. Инкубировали на шейкере при температуре 37°С на протяжении часа.

3) Образцы сыворотки разводили в 25 раз и далее методом 2-х кратных разведений.

4) Добавляли по 50 мкл каждого разведенного образца сыворотки в лунки планшета.

5) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

6) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером.

7) Затем добавляли вторичные антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена.

8) Далее проводили инкубацию в течение 1 часа при 37°С.

9) После инкубации проводилась трехкратная промывка лунок фосфатным буфером

10) Затем добавили раствор тетраметилбензидина (ТМВ), который является субстратом пероксидазы хрена и в результате реакции превращается в окрашенное соединение. Реакцию останавливали через 15 минут добавлением серной кислоты. Далее с помощью спектрофотометра измеряли оптическую плотность раствора (OD) в каждой лунке при длине волны 450 нм.

Титр антител определяли, как последнее разведение, в котором оптическая плотность раствора была достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля. Полученные результаты (среднее геометрическое значение) представлены в таблице 11.

Таблица 11 - Титр антител к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 и к S белку SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) в сыворотке крови молодых мышей (среднее геометрическое значение титра антител). Название группы животных Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.617.2 (Delta)
Титр антител к S белку SARS-CoV-2
вариант B.1.1.529 (Omicron)
1 Ad26-S-delta, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл. 11143 100 2 Ad5-S-delta, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл. 9701 115 3 Ad26-S-omicron, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл. 115 7352 4 Ad5-S-omicron, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, внутримышечно, 5*109 вч/200 мкл. 132 7352 5 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, 5*109 вч/200 мкл. 9701 8445 6 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, 5*109 вч/200 мкл. 11143 9701 7 Ad26-S-delta, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-delta, интраназально, 5*109 вч/200 мкл. 8445 132 8 Ad5-S-delta, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-delta, интраназально, 5*109 вч/200 мкл. 7352 115 9 Ad26-S-omicron, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-omicron, интраназально, 5*109 вч/200 мкл. 152 8445 10 Ad5-S-omicron, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-omicron, интраназально, 5*109 вч/200 мкл. 132 9701 11 Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, интраназально, 5*109 вч/200 мкл. 9701 8445 12 Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron, 1:1, интраназально, 5*109 вч/200 мкл; Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron, 1:1, интраназально, 5*109 вч/200 мкл. 6400 7352 13 Буфер, внутримышечно, 200 мкл; буфер, внутримышечно, 200 мкл; 0 0 14 Буфер, интраназально, 200 мкл; буфер, интраназально, 200 мкл. 0 0

Как видно из результатов эксперимента последовательное введение различных вариантов разработанного средства (как внутримышечное, так и интраназальное) обеспечивает образование антител против обоих антигенов у молодых животных.

Таким образом, можно заключить, что все варианты разработанного иммунобиологического средства на основе двух экспрессионных векторов (Ad26-S-delta:Ad26-S-omicron и Ad5-S-delta:Ad5-S-omicron) индуцируют развитие гуморального иммунного ответа против двух вариантов SARS-CoV-2 (B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron)) у молодых животных.

Промышленная применимость

Все приведенные примеры подтверждают эффективность разработанных вариантов иммунобиологического средства, обеспечивающих эффективную индукцию иммунного ответа против вируса SARS-CoV-2 и промышленную применимость.

--->

- <?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing 1.3//EN"

"ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="последовательности 2.xml"

softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2" productionDate="2022-08-19">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>2022-08</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2022-08-19</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">федеральное государственное бюджетное

учреждение &quot;Национальный исследовательский центр эпидемиологии

и микробиологии имени почетного академика Н.Ф.Гамалеи&quot;

Министерства здравоохранения Российской Федерации</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>The National Research Center for Epidemiology

and Microbiology named after Honorary Academician N.F. Gamaleya of the

Ministry of Health of the Russian Federation </ApplicantNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Иммунобиологическое средство и

способ его использования для индукции специфического иммунитета против

вирусов SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) и SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529

(Omicron) (варианты).</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>3</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>4705</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..4705</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q1">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatatatggagttccgcgtt

acataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatg

ttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggc

agtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattat

gcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtga

tgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattga

cgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacg

caaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctggtttagtgaaccgtcagatccgctaga

gatctggtaccgtcgacgcggccgctcgagcctaagcttggtaccatgtttgtgttccttgtgttattgccactag

tctctagtcagtgtgtgaacctgcgcacaagaacccagctgcctccagcctacaccaacagctttaccagaggcgt

gtactaccccgacaaggtgttcagatccagcgtgctgcactctacccaggacctgttcctgcctttcttcagcaac

gtgacctggttccacgccatccacgtgtccggcaccaatggcaccaagagattcgacaaccccgtgctgcccttca

acgacggggtgtactttgccagcaccgagaagtccaacatcatcagaggctggatcttcggcaccacactggacag

caagacccagagcctgctgatcgtgaacaacgccaccaacgtggtcatcaaagtgtgcgagttccagttctgcaac

gaccccttcctggacgtctactatcacaagaacaacaagagctggatggaaagcggagtgtacagcagcgccaaca

actgcaccttcgagtacgtgtcccagcctttcctgatggacctggaaggcaagcagggcaacttcaagaacctgcg

cgagttcgtgttcaagaacatcgacggctacttcaagatctacagcaagcacacccctatcaacctcgtgcgggat

ctgcctcagggcttctctgctctggaacccctggtggatctgcccatcggcatcaacatcacccggtttcagacac

tgctggccctgcacagaagctacctgacacctggcgatagcagcagcggatggacagctggtgccgccgcttacta

tgtgggctacctgcagcctagaaccttcctgctgaagtacaacgagaacggcaccatcaccgacgccgtggattgt

gctctggatcctctgagcgagacaaagtgcaccctgaagtccttcaccgtggaaaagggcatctaccagaccagca

acttccgggtgcagcccaccgaatccatcgtgcggttccccaatatcaccaatctgtgccccttcggcgaggtgtt

caatgccaccagattcgcctctgtgtacgcctggaaccggaagcggatcagcaattgcgtggccgactactccgtg

ctgtacaactccgccagcttcagcaccttcaagtgctacggcgtgtcccctaccaagctgaacgacctgtgcttca

caaacgtgtacgccgacagcttcgtgatccggggagatgaagtgcggcagattgcccctggacagacaggcaagat

cgccgactacaactacaagctgcccgacgacttcaccggctgtgtgattgcctggaacagcaacaacctggactcc

aaagtcggcggcaactacaattaccggtaccggctgttccggaagtccaatctgaagcccttcgagcgggacatct

ccaccgagatctatcaggccggcagcaaaccttgtaacggcgtggaaggcttcaactgctacttcccactgcagtc

ctacggctttcagcccacaaatggcgtgggctatcagccctacagagtggtggtgctgagcttcgaactgctgcat

gcccctgccacagtgtgcggccctaagaaaagcaccaatctcgtgaagaacaaatgcgtgaacttcaacttcaacg

gcctgaccggcaccggcgtgctgacagagagcaacaagaagttcctgccattccagcagtttggccgggatattgc

cgataccacagacgccgtacgagatccccagacactggaaatcctggacatcaccccttgcagcttcggcggagtg

tctgtgatcacccctggcaccaacaccagcaatcaggtggcagtgctgtaccagggagtgaactgtaccgaagtgc

ccgtggccattcacgccgatcagctgacacctacatggcgggtgtactccaccggcagcaatgtgtttcagaccag

agccggctgtctgatcggagccgagcacgtgaacaatagctacgagtgcgacatccccatcggcgctggcatctgt

gccagctaccagacacagacaaacagccgcagacgggccagatctgtggccagccagagcatcattgcctacacaa

tgtctctgggcgccgagaacagcgtggcctactccaacaactctatcgctatccccaccaacttcaccatcagcgt

gaccacagagatcctgcctgtgtccatgaccaagaccagcgtggactgcaccatgtacatctgcggcgattccacc

gagtgctccaacctgctgctgcagtacggcagcttctgcacccagctgaatagagccctgacagggatcgccgtgg

aacaggacaagaacacccaagaggtgttcgcccaagtgaagcagatctacaagacccctcctatcaaggacttcgg

cggcttcaatttcagccagattctgcccgatcctagcaagcccagcaagcggagcttcatcgaggacctgctgttc

aacaaagtgacactggccgacgccggcttcatcaagcagtatggcgattgtctgggcgacattgccgccagggatc

tgatttgcgcccagaagtttaacggactgacagtgctgccaccactgctgaccgatgagatgatcgcccagtacac

atctgccctgctggccggcacaatcacaagcggctggacatttggagctggcgccgctctgcagatcccctttgct

atgcagatggcctaccggttcaacggcatcggagtgacccagaatgtgctgtacgagaaccagaagctgatcgcca

accagttcaacagcgccatcggcaagatccaggacagcctgagcagcacagcaagcgccctgggaaagctgcagaa

cgtggtcaaccagaatgcccaggcactgaacaccctggtcaagcagctgtcctccaacttcggcgccatcagctct

gtgctgaacgacatcctgagcagactggacaaggtggaagccgaggtgcagatcgacagactgatcaccggaaggc

tgcagtccctgcagacctacgttacccagcagctgatcagagccgccgagattagagcctctgccaatctggccgc

caccaagatgtctgagtgtgtgctgggccagagcaagagagtggacttttgcggcaagggctaccacctgatgagc

ttccctcagtctgcccctcacggcgtggtgtttctgcacgtgacatacgtgcccgctcaagagaagaatttcacca

ccgctccagccatctgccacgacggcaaagcccactttcctagagaaggcgtgttcgtgtccaacggcacccattg

gttcgtgacccagcggaacttctacgagccccagatcatcaccaccgacaacaccttcgtgtctggcaactgcgac

gtcgtgatcggcattgtgaacaataccgtgtacgaccctctgcagcccgagctggacagcttcaaagaggaactgg

ataagtactttaagaaccacacaagccccgacgtggacctgggcgacatcagcggaatcaatgccagcgtcgtgaa

catccagaaagagatcgaccggctgaacgaggtggccaagaatctgaacgagagcctgatcgacctgcaagaactg

gggaagtacgagcagtacatcaagtggccctggtacatctggctgggctttatcgccggactgattgccatcgtga

tggtcacaatcatgctgtgttgcatgaccagctgctgtagctgcctgaagggctgttgtagctgtggcagctgctg

caagttcgacgaggacgattctgagcccgtgctcaaaggagtcaaattacattacacataagatatccgatccacc

ggatctagataactgatcataatcagccataccacatttgtagaggttttacttgctttaaaaaacctcccacacc

tccccctgaacctgaaacataaaatgaatgcaattgttgttgttaacttgtttattgcagcttataatggttacaa

ataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactc

atcaatgtatctta</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="2">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>4689</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..4689</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatatatggagttccgcgtt

acataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatg

ttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggc

agtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattat

gcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtga

tgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattga

cgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacg

caaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctggtttagtgaaccgtcagatccgctaga

gatctggtaccgtcgagcctaagcttggtaccatgtttgtgttccttgtgttattgccactagtctctagtcagtg

tgtgaacctgaccacaagaacccagctgcctccagcctacaccaacagctttaccagaggcgtgtactaccccgac

aaggtgttcagatccagcgtgctgcactctacccaggacctgttcctgcctttcttcagcaacgtgacctggttcc

acgtcatctccggcaccaatggcaccaagagattcgacaaccccgtgctgcccttcaacgacggggtgtactttgc

cagcatcgagaagtccaacatcatcagaggctggatcttcggcaccacactggacagcaagacccagagcctgctg

atcgtgaacaacgccaccaacgtggtcatcaaagtgtgcgagttccagttctgcaacgaccccttcctggatcaca

agaacaacaagagctggatggaaagcgagttccgggtgtacagcagcgccaacaactgcaccttcgagtacgtgtc

ccagcctttcctgatggacctggaaggcaagcagggcaacttcaagaacctgcgcgagttcgtgttcaagaacatc

gacggctacttcaagatctacagcaagcacacccctatcatcgtggaacctgaacgggatctgcctcagggcttct

ctgctctggaacccctggtggatctgcccatcggcatcaacatcacccggtttcagacactgctggcactgcacag

gtcctatctgacacctggcgatagcagcagcggatggacagctggtgccgccgcttactatgtgggctacctgcag

cctagaaccttcctgctgaagtacaacgagaacggcaccatcaccgacgccgtggattgtgctctggatcctctga

gcgagacaaagtgcaccctgaaaagcttcaccgtggaaaagggcatctaccagaccagcaacttcagagttcaacc

caccgagagcattgtgagatttcccaacatcaccaatctgtgtccctttgatgaggtgttcaatgccaccaggttc

gcaagcgtgtatgcctggaacaggaaacgcatctccaactgcgttgcagactacagtgttctgtacaatcttgcac

ccttcttcaccttcaagtgctatggagtgtctcccactaagctgaacgatctgtgcttcaccaatgtgtatgctga

cagctttgtgatcagaggagacgaagtgagacagattgctcctggacagacagggaacatcgcagactacaactac

aaacttccagatgacttcactggctgtgtcattgcctggaactccaacaagctggacagcaaggtgtctgggaact

acaactatctgtacagactgtttcggaagagcaacctgaaaccctttgagagagacatctctacagagatctacca

agctggcaacaaaccctgcaatggcgttgctggcttcaactgctactttccactgaagtcctacagcttcagaccc

acctatggagttggccatcaaccctacagagtggttgttctgagctttgaacttttgcatgcaccagccactgtgt

gtggtcccaagaagtctaccaatctggtgaagaacaagtgtgtgaactttaacttcaacggcctgaaaggcaccgg

cgtgctgacagagagcaacaagaagttcctgccattccagcagtttggccgggatattgccgataccacagacgcc

gtacgagatccccagacactggaaatcctggacatcaccccttgcagcttcggcggagtgtctgtgatcacccctg

gcaccaacaccagcaatcaggtggcagtgctgtaccagggcgtgaactgtaccgaagtgcccgtggccattcacgc

cgatcagctgacacctacatggcgggtgtactccaccggcagcaatgtgtttcagaccagagccggctgtctgatc

ggagccgagtacgtgaacaatagctacgagtgcgacatccccatcggcgctggcatctgtgccagctaccaaacac

agacaaagagccacagacgggccagatctgtggccagccagagcatcattgcctacacaatgtctctgggcgccga

gaacagcgtggcctactccaacaactctatcgctatccccaccaacttcaccatcagcgtgaccacagagatcctg

cctgtgtccatgaccaagaccagcgtggactgcaccatgtacatctgcggcgattccaccgagtgctccaacctgc

tgctgcagtacggcagcttctgcacccagctgaagagagccctgacagggatcgccgtggaacaggacaagaacac

ccaagaggtgttcgcccaagtgaagcagatctacaagacccctcctatcaagtacttcggcggcttcaatttcagc

cagattctgcccgatcctagcaagcccagcaagcggagcttcatcgaggacctgctgttcaacaaagtgacactgg

ccgacgccggcttcatcaagcagtatggcgattgtctgggcgacattgccgccagggatctgatttgcgcccagaa

gtttaagggactgactgtgctgccaccactgctgaccgatgagatgatcgcccagtacacatctgccctgctggcc

ggcacaatcacaagcggctggacatttggagctggcgccgctctgcagatcccctttgctatgcagatggcctacc

ggttcaacggcatcggagtgacccagaatgtgctgtacgagaaccagaagctgatcgccaaccagttcaacagcgc

catcggcaagatccaggacagcctgagcagcacagcaagcgccctgggaaagctgcaggacgtggtcaaccacaat

gcccaggcactgaacaccctggtcaagcagctgtcctccaagttcggagccatcagctctgtgctgaacgacatct

tcagcagactggacaaggtggaagccgaggtgcagatcgacagactgatcaccggaaggctgcagtccctgcagac

ctacgttacccagcagctgatcagagccgccgagattagagcctctgccaatctggccgccaccaagatgtctgag

tgtgtgctgggccagagcaagagagtggacttttgcggcaagggctaccacctgatgagcttccctcagtctgccc

ctcacggcgtggtgtttctgcacgtgacatacgtgcccgctcaagagaagaatttcaccaccgctccagccatctg

ccacgacggcaaagcccactttcctagagaaggcgtgttcgtgtccaacggcacccattggttcgtgacccagcgg

aacttctacgagccccagatcatcaccaccgacaacaccttcgtgtctggcaactgcgacgtcgtgatcggcattg

tgaacaataccgtgtacgaccctctgcagcccgagctggacagcttcaaagaggaactggataagtactttaagaa

ccacacaagccccgacgtggacctgggcgacatcagcggaatcaatgccagcgtcgtgaacatccagaaagagatc

gaccggctgaacgaggtggccaagaatctgaacgagagcctgatcgacctgcaagaactggggaagtacgagcagt

acatcaagtggccctggtacatctggctgggctttatcgccggactgattgccatcgtgatggtcacaatcatgct

gtgttgcatgaccagctgctgtagctgcctgaagggctgttgtagctgtggcagctgctgcaagttcgacgaggac

gattctgagcccgtgctcaaaggagtcaaattacattacacataagatatccgatccaccggatctagataactga

tcataatcagccataccacatttgtagaggttttacttgctttaaaaaacctcccacacctccccctgaacctgaa

acataaaatgaatgcaattgttgttgttaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaatagcatc

acaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactcatcaatgtatctta

</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="3">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>4716</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..4716</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q3">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatatatggagttccgcgtt

acataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatg

ttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggc

agtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattat

gcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtga

tgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattga

cgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacg

caaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctggtttagtgaaccgtcagatccgctaga

gatctggtaccgtcgagcctaagcttggtaccatgtttgtgttccttgtgttattgccactagtctctagtcagtg

tgtgaacctgaccacaagaacccagctgcctccagcctacaccaacagctttaccagaggcgtgtactaccccgac

aaggtgttcagatccagcgtgctgcactctacccaggacctgttcctgcctttcttcagcaacgtgacctggttcc

acgtcatctccggcaccaatggcaccaagagattcgacaaccccgtgctgcccttcaacgacggggtgtactttgc

cagcatcgagaagtccaacatcatcagaggctggatcttcggcaccacactggacagcaagacccagagcctgctg

atcgtgaacaacgccaccaacgtggtcatcaaagtgtgcgagttccagttctgcaacgaccccttcctggatcaca

agaacaacaagagctggatggaaagcgagttccgggtgtacagcagcgccaacaactgcaccttcgagtacgtgtc

ccagcctttcctgatggacctggaaggcaagcagggcaacttcaagaacctgcgcgagttcgtgttcaagaacatc

gacggctacttcaagatctacagcaagcacacccctatcatcgtggaacctgaacgggatctgcctcagggcttct

ctgctctggaacccctggtggatctgcccatcggcatcaacatcacccggtttcagacactgctggcactgcacag

gtcctatctgacacctggcgatagcagcagcggatggacagctggtgccgccgcttactatgtgggctacctgcag

cctagaaccttcctgctgaagtacaacgagaacggcaccatcaccgacgccgtggattgtgctctggatcctctga

gcgagacaaagtgcaccctgaaaagcttcaccgtggaaaagggcatctaccagaccagcaacttcagagttcaacc

caccgagagcattgtgagatttcccaacatcaccaatctgtgtccctttgatgaggtgttcaatgccaccaggttc

gcaagcgtgtatgcctggaacaggaaacgcatctccaactgcgttgcagactacagtgttctgtacaatcttgcac

ccttcttcaccttcaagtgctatggagtgtctcccactaagctgaacgatctgtgcttcaccaatgtgtatgctga

cagctttgtgatcagaggagacgaagtgagacagattgctcctggacagacagggaacatcgcagactacaactac

aaacttccagatgacttcactggctgtgtcattgcctggaactccaacaagctggacagcaaggtgtctgggaact

acaactatctgtacagactgtttcggaagagcaacctgaaaccctttgagagagacatctctacagagatctacca

agctggcaacaaaccctgcaatggcgttgctggcttcaactgctactttccactgaagtcctacagcttcagaccc

acctatggagttggccatcaaccctacagagtggttgttctgagctttgaacttttgcatgcaccagccactgtgt

gtggtcccaagaagtctaccaatctggtgaagaacaagtgtgtgaactttaacttcaacggcctgaaaggcaccgg

cgtgctgacagagagcaacaagaagttcctgccattccagcagtttggccgggatattgccgataccacagacgcc

gtacgagatccccagacactggaaatcctggacatcaccccttgcagcttcggcggagtgtctgtgatcacccctg

gcaccaacaccagcaatcaggtggcagtgctgtaccagggcgtgaactgtaccgaagtgcccgtggccattcacgc

cgatcagctgacacctacatggcgggtgtactccaccggcagcaatgtgtttcagaccagagccggctgtctgatc

ggagccgagtacgtgaacaatagctacgagtgcgacatccccatcggcgctggcatctgtgccagctaccaaacac

agacaaagagccacagacgggccagatctgtggccagccagagcatcattgcctacacaatgtctctgggcgccga

gaacagcgtggcctactccaacaactctatcgctatccccaccaacttcaccatcagcgtgaccacagagatcctg

cctgtgtccatgaccaagaccagcgtggactgcaccatgtacatctgcggcgattccaccgagtgctccaacctgc

tgctgcagtacggcagcttctgcacccagctgaagagagccctgacagggatcgccgtggaacaggacaagaacac

ccaagaggtgttcgcccaagtgaagcagatctacaagacccctcctatcaagtacttcggcggcttcaatttcagc

cagattctgcccgatcctagcaagcccagcaagcggagcttcatcgaggacctgctgttcaacaaagtgacactgg

ccgacgccggcttcatcaagcagtatggcgattgtctgggcgacattgccgccagggatctgatttgcgcccagaa

gtttaagggactgactgtgctgccaccactgctgaccgatgagatgatcgcccagtacacatctgccctgctggcc

ggcacaatcacaagcggctggacatttggagctggcgccgctctgcagatcccctttgctatgcagatggcctacc

ggttcaacggcatcggagtgacccagaatgtgctgtacgagaaccagaagctgatcgccaaccagttcaacagcgc

catcggcaagatccaggacagcctgagcagcacagcaagcgccctgggaaagctgcaggacgtggtcaaccacaat

gcccaggcactgaacaccctggtcaagcagctgtcctccaagttcggagccatcagctctgtgctgaacgacatct

tcagcagactggacaaggtggaagccgaggtgcagatcgacagactgatcaccggaaggctgcagtccctgcagac

ctacgttacccagcagctgatcagagccgccgagattagagcctctgccaatctggccgccaccaagatgtctgag

tgtgtgctgggccagagcaagagagtggacttttgcggcaagggctaccacctgatgagcttccctcagtctgccc

ctcacggcgtggtgtttctgcacgtgacatacgtgcccgctcaagagaagaatttcaccaccgctccagccatctg

ccacgacggcaaagcccactttcctagagaaggcgtgttcgtgtccaacggcacccattggttcgtgacccagcgg

aacttctacgagccccagatcatcaccaccgacaacaccttcgtgtctggcaactgcgacgtcgtgatcggcattg

tgaacaataccgtgtacgaccctctgcagcccgagctggacagcttcaaagaggaactggataagtactttaagaa

ccacacaagccccgacgtggacctgggcgacatcagcggaatcaatgccagcgtcgtgaacatccagaaagagatc

gaccggctgaacgaggtggccaagaatctgaacgagagcctgatcgacctgcaagaactggggaagtacgagcagt

acatcaagtggccctggtacatctggctgggctttatcgccggactgattgccatcgtgatggtcacaatcatgct

gtgttgcatgaccagctgctgtagctgcctgaagggctgttgtagctgtggcagctgctgcaagttcgacgaggac

gattctgagcccgtgctcaaaggagtcaaattacattacacataagatatccgatccaccggatctagataagata

tccgatccaccggatctagataactgatcataatcagccataccacatttgtagaggttttacttgctttaaaaaa

cctcccacacctccccctgaacctgaaacataaaatgaatgcaattgttgttgttaacttgtttattgcagcttat

aatggttacaaataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtt

tgtccaaactcatcaatgtatctta</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Похожие патенты RU2779634C1

название год авторы номер документа
Средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 в лиофилизированной форме (варианты) 2021
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магомедовна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Лубенец Надежда Леонидовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2743962C1
Средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 в жидкой форме (варианты) 2021
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магомедовна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Лубенец Надежда Леонидовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2743963C1
Применение средства для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 у детей 2021
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магомедовна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Лубенец Надежда Леонидовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Чернецов Владимир Александрович
  • Крюков Евгений Владимирович
  • Бабира Владимир Федорович
  • Кутаев Дмитрий Анатольевич
  • Логинова Светлана Яковлевна
RU2761904C1
Иммунобиологическое средство для индукции иммунного ответа против SARS-CoV-2 и способ его применения (варианты) 2021
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Зрелкин Денис Игоревич
  • Воронина Дарья Владимировна
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магометовна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Лубенец Надежда Леонидовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Чернецов Владимир Александрович
  • Крюков Евгений Владимирович
  • Бабира Владимир Федорович
  • Кутаев Дмитрий Анатольевич
  • Логинова Светлана Яковлевна
RU2765729C1
Иммунобиологическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты) 2020
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2720614C1
Применение средства для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 у лиц старше 60 лет и/или имеющих хронические заболевания (варианты) 2021
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магомедовна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Лубенец Надежда Леонидовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
  • Чернецов Владимир Александрович
  • Крюков Евгений Владимирович
  • Бабира Владимир Федорович
  • Кутаев Дмитрий Анатольевич
  • Логинова Светлана Юрьевна
RU2744442C1
Применение средства для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 для ревакцинации населения (варианты) 2021
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магомедовна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Лубенец Надежда Леонидовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Чернецов Владимир Александрович
  • Крюков Евгений Владимирович
  • Бабира Владимир Федорович
  • Кутаев Дмитрий Анатольевич
  • Логинова Светлана Юрьевна
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2744444C1
Фармацевтическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты) 2020
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магометовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2731342C1
Экспрессионный вектор для создания иммунобиологического средства для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты) 2020
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2731356C1
Иммунобиологическое средство для индукции иммунного ответа против вируса Ласса и способ его применения 2024
  • Попова Ольга
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Ковыршина Анна Витальевна
  • Зрелкин Денис Игоревич
  • Воронина Дарья Владимировна
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Карпов Андрей Петрович
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Ковальчук Алексей Валерьевич
  • Сыромятникова Светлана Ивановна
  • Шатохина Ирина Викторовна
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2823965C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 779 634 C1

Реферат патента 2022 года Иммунобиологическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вирусов SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) и SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron) (варианты)

Группа изобретений относится к биотехнологии, иммунологии и вирусологии и касается профилактики заболеваний, вызванных различными вариантами вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2. Предложено средство, содержащее в качестве активного компонента по меньшей мере один экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. Также описано средство, содержащее в качестве активного компонента по меньшей мере один экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. Кроме того, описано средство, представляющее собой смесь средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2 и средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. Технической задачей заявленной группы изобретений является создание средств, обеспечивающих эффективную индукцию иммунного ответа против вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.617.2 (Delta) и вируса SARS-CoV-2 вариант B.1.1.529 (Omicron). 6 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 ил., 11 табл., 18 пр.

Формула изобретения RU 2 779 634 C1

1. Иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащее в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.

2. Иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащее в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3.

3. Иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, представляющее собой смесь иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 и иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 2.

4. Иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, представляющее собой смесь иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 и иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 3.

5. Иммунобиологическое средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, представляющее собой смесь иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 26-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, а область ORF6-Ad26 заменена на ORF6-Ad5, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2 и иммунобиологического средства, содержащего в качестве активного компонента экспрессионный вектор на основе генома рекомбинантного штамма human adenovirus 5-го серотипа, в котором делетированы Е1 и Е3 области, со встроенной экспрессионной кассетой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3.

6. Иммунобиологическое средство по пп. 1-5, отличающееся тем, что средство находится в жидкой или лиофилизированной форме.

7. Иммунобиологическое средство по пп. 1-5, отличающееся тем, что жидкая форма средства содержит буферный раствор, масс. %:

трис от 0,1831 до 0,3432 хлорид натрия от 0,3313 до 0,6212 сахароза от 3,7821 до 7,0915 магния хлорида гексагидрат от 0,0154 до 0,0289 ЭДТА от 0,0029 до 0,0054 полисорбат-80 от 0,0378 до 0,0709 этанол 95% от 0,0004 до 0,0007 вода остальное до 100%

8. Иммунобиологическое средство по пп. 1-5, отличающееся тем, что восстановленная лиофилизированная форма средства содержит, масс. %:

трис от 0,0180 до 0,0338 хлорид натрия от 0,1044 до 0,1957 сахароза от 5,4688 до 10,2539 магния хлорида гексагидрат от 0,0015 до 0,0028 ЭДТА от 0,0003 до 0,0005 полисорбат-80 от 0,0037 до 0,0070 вода остальное до 100%

9. Применение средства по пп. 1-8 для индукции иммунного ответа против вируса SARS-CoV-2.

10. Применение по п. 9, где средство предназначено для интраназального, или внутримышечного введения, или совместного интраназального и внутримышечного введения.

11. Применение по п. 10, отличающееся тем, что средство предназначено для интраназального введения в дозе 5*109-5*1011вирусных частиц.

12. Применение по п. 10, отличающееся тем, что средство предназначено для внутримышечного введения в дозе 5*109-5*1011 вирусных частиц.

13. Применение по п. 10, отличающееся тем, что при совместном введении интраназально и внутримышечно указанное средство внутримышечно вводят в дозе 5*109-5*1011 вирусных частиц, а интраназально в дозе 5*109-5*1011 вирусных частиц.

14. Применение по пп. 9, 10, отличающееся тем, что указанное средство предназначено для применения у детей.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2022 года RU2779634C1

Фармацевтическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты) 2020
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магометовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2731342C1
Приспособление для нанесения меток и надписей на поверхности стеклянных изделий 1933
  • Егоров Б.П.
SU37297A1
Средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 в жидкой форме (варианты) 2021
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магомедовна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Лубенец Надежда Леонидовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2743963C1
Средство для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 в лиофилизированной форме (варианты) 2021
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Ижаева Фатима Магомедовна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Лубенец Надежда Леонидовна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2743962C1
Экспрессионный вектор для создания иммунобиологического средства для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты) 2020
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2731356C1
Экспрессионный вектор для создания иммунобиологического средства для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты) 2020
  • Зубкова Ольга Вадимовна
  • Ожаровская Татьяна Андреевна
  • Должикова Инна Вадимовна
  • Попова Ольга
  • Щебляков Дмитрий Викторович
  • Гроусова Дарья Михайловна
  • Джаруллаева Алина Шахмировна
  • Тухватулин Амир Ильдарович
  • Тухватулина Наталья Михайловна
  • Щербинин Дмитрий Николаевич
  • Есмагамбетов Ильяс Булатович
  • Токарская Елизавета Александровна
  • Ботиков Андрей Геннадьевич
  • Ерохова Алина Сергеевна
  • Никитенко Наталья Анатольевна
  • Семихин Александр Сергеевич
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Народицкий Борис Савельевич
  • Логунов Денис Юрьевич
  • Гинцбург Александр Леонидович
RU2731356C1
WO 2021076010 A1, 22.04.2021
WO 2021076009 A1, 22.04.2021
Е.П
ХАРЧЕНКО, Вакцины против Covid-19: сравнительная оценка рисков аденовирусных векторов, Эпидемиология и Вакцинопрофилактика

RU 2 779 634 C1

Авторы

Зубкова Ольга Вадимовна

Ожаровская Татьяна Андреевна

Должикова Инна Вадимовна

Попова Ольга

Зрелкин Денис Игоревич

Воронина Дарья Владимировна

Щебляков Дмитрий Викторович

Гроусова Дарья Михайловна

Джаруллаева Алина Шахмировна

Тухватулин Амир Ильдарович

Тухватулина Наталья Михайловна

Щербинин Дмитрий Николаевич

Есмагамбетов Ильяс Булатович

Токарская Елизавета Александровна

Ботиков Андрей Геннадьевич

Ерохова Алина Сергеевна

Ижаева Фатима Магометовна

Никитенко Наталья Анатольевна

Лубенец Надежда Леонидовна

Семихин Александр Сергеевич

Гущин Владимир Алексеевич

Народицкий Борис Савельевич

Логунов Денис Юрьевич

Гинцбург Александр Леонидович

Борисевич Сергей Владимирович

Чернецов Владимир Александрович

Крюков Евгений Владимирович

Бабира Владимир Федорович

Кутаев Дмитрий Анатольевич

Логинова Светлана Яковлевна

Даты

2022-09-12Публикация

2022-08-19Подача