СПОСОБ ПЕРВИЧНОГО ПОСЕВА ПРИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ У ПАЦИЕНТОК С ПАТОЛОГИЕЙ ШЕЙКИ МАТКИ Российский патент 2022 года по МПК C12Q1/04 G01N33/48 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для первичного посева биоматериала из шейки матки при проведении микробиологического исследования на условно-патогенную микрофлору.

Уровень техники

Известны способы первичного посева биоматериала из шейки матки с использованием различных комбинаций питательных сред и условий культивирования.

Известен способ первичного посева биоматериала, выделенного из урогенитального тракта с использованием различных комбинаций наборов питательных сред: кровяной агар, среда Мак-Конки, среда Сабуро - при подозрении на грибковые поражения. Суть метода заключается в первичном посеве биоматериала на чашки Петри с последующей инкубацией кровяной агар - при 35-37°С, 5-10% СО₂, среда Мак-Конки 35-37°С в аэробных условиях, Сабуро агар 25-30°С в аэробных условиях [Микробиологические методы исследования биологического материала, Министерство здравоохранения Республики Беларусь, 2010 г.]

Недостатком данного способа является посев отделяемого со слизистых оболочек, что не дает возможности выделения микроорганизмов, инвазированных в эпителиоциты и находящиеся в патологически измененных тканях; отсутствие культивирования в анаэробных условиях; использование сред, которые не отвечают ростовым потребностям условно-патогенной микрофлоры, имеющей клиническое значение при развитии хронического воспаления.

Известен способ первичного посева биоматериала, выделенного из урогенитального тракта для выявления Neisseria gonorrhoea агар Тайера-Мартена культивирование при температуре 35°С во влажной атмосфере, богатой углекислым газом, Haemophilus ducreyi среда Мюллера-Хинтона из лошадиной крови с шоколадной добавкой+ванкомицин [Основные методы лабораторных исследований в клинической бактериологии, ВОЗ, Женева, 1994 г.]

Недостатком данного способа является посев отделяемого со слизистых оболочек, что не дает возможности выделения микроорганизмов, инвазированных в эпителиоциты и находящиеся в патологически изменных тканях; ограничение перечня выделяемых микроорганизмов с использованием сред для выделения только двух патогенов.

Известен способ первичного посева биоматериала, выделенного из урогенитального тракта, среды: кровяной агар, среда Эндо, сахарный бульон Посевы инкубируют при температуре 37°С [Приказ Минздрава СССР от 22 апреля 1985 г. №535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений»].

Недостатком данного способа является посев отделяемого со слизистых оболочек, что не дает возможности выделения микроорганизмов, инвазированных в эпителиоциты и находящиеся в патологически измененных тканях; отсутствие культивирования в анаэробных условиях; использование сред, которые не отвечают ростовым потребностям условно-патогенной микрофлоры, имеющей клиническое значение при развитии хронического воспаления.

Известен способ диагностики оппортунистических инфекций влагалища, который содержит этапы лабораторной диагностики, включающие микроскопию, культуральное исследование и оценку критериев оценки микробиоценоза [Анкирская А.С., Муравьева В.В. Опыт диагностики оппортунистических инфекций влагалища // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2001, - Т. 3, №2, - с. 190-194].

Недостатком данного способа является посев отделяемого со слизистых оболочек, что не дает возможности выделения микроорганизмов, инвазированных в эпителиоциты и находящиеся в патологически измененных тканях; предлагаемый комплекс исследований не учитывает особенности микрофлоры при хроническом воспалении, отсутствие данных о возможности его использования при заболеваниях шейки матки.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является улучшение диагностики инфекционных осложнений у пациенток с патологией шейки матки путем получения в первичном посеве биоптата максимального количества условно-патогенных микроорганизмов.

Это достигается тем, что в отличие от известных способов первичного посева при патологии шейки матки в качестве биоматериала используется биоптат слизистой оболочки шейки матки, полученный после взятия шейки матки на пулевые щипцы, удаления стерильным тампоном слизи с шейки матки и с помощью конхотома гинекологического с эндовидеоконтролем из патологического участка проводится отбор ткани шейки матки 2х2 мм, который после сбора помещается в 1 мл жидкой транспортную среду Эймса, в которой он гомогенизируется в условиях лаборатории; полученный гомогенат в объеме 200 мкл засевается на 6 плотных питательных сред методом растирания стерильным шпателем Дригальского: бруцелла агар с 10% дефибринированной бараньей кровью [Atlas, Ronald M., 1946-. Handbook of microbiological media. - Taylor & Francis, 2010-01-01.], универсальную хромогенную среду [1. Pezzlo M (1998), Clinical Microbiology Reviews 1:268-280; 2. Wilkie M.E., Almond M.K., Marsh F.P. (1992), British Medical Journal 305:1137-1141; 3. Friedman M.P. et al (1991), Journal of Clinical Microbiology, 29:2385-2389; 4. Murray P., Traynor P. Hopson D., (1992), Journal of Clinical Microbiology 30:1600-1601; 5. Soriano F., Ponte C., (1992), Journal of Clinical Microbiology 30:3033-3034; 6. Merlino et al (1995) Abstr. Austr. Microbiol. 16(4):17-3.], агар для выделения лактобактерий [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03709], агар для выделения бифидобактерий [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03707], агар для анаэробов [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03707], агар Сабуро с хлорамфениколом; с последующем инкубированием чашек со средой Сабуро в аэробных условиях при температуре 28°С и остальных чашек в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 7 суток.

Осуществление изобретения

Сущность предложенного метода заключается в следующем: биоптат патологического участка шейки матки отбирается после взятия шейки матки на пулевые щипцы, удаления стерильным тампоном слизи с шейки матки и с помощью конхотома гинекологического с эндовидеоконтролем из патологического участка проводится отбор ткани шейки матки 2х2 мм. После сбора биоптат помещается в 1 мл жидкой транспортной среды Эймса. В лаборатории биоптат гомогенизируется непосредственно в транспортной среде с использованием стерильной одноразовой микробиологической петли. Полученный гомогенат в объеме 200 мкл засевается на 6 плотных питательных сред методом растирания стерильным шпателем Дригальского. Для посева используются следующие среды: бруцелла агар с 10% дефибринированной бараньей кровью, универсальную хромогенную среду, агар для выделения лактобактерий, агар для выделения бифидобактерий, агар для анаэробов, агар Сабуро с хлорамфениколом. Полученные посевы на среде Сабуро инкубируются в аэробных условиях при температуре 28°С; на остальных средах в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 7 суток.

Предлагаемый способ позволяет получать качественные и количественные характеристики микрофлоры биопсийного материала при патологии шейки матки, что может быть использовано для этиологической диагностики патологических процессов, обусловленных условно-патогенной бактериальной и грибковой микрофлоры.

Это может быть необходимо для проведения микробиологической диагностики этиологии патологического процесса шейки матки, вызванного условно-патогенной микрофлорой.

Осуществление предлагаемого способа можно продемонстрировать на следующих примерах:

Пример 1.

Пациентка Н. с диагнозом: Дисплазия шейки матки 2 степени

Выделенный микроорганизм Посев из цервикального канала КОЕ/мл Посев биоптата шейки матки КОЕ/мл Lactobacillus gasseri 10⁶ 10⁴ Lactobacillus crispatus 10⁶ 10⁴ Lactobacillus fermentum 10⁵ 10⁴ Enterococcus faecalis 10⁵ 10⁵ Photobacterium iliopiscsrium 10³ - Staphylococcus epidermidis 10³ - Rothia dentocariosa 10⁴ - Streptococcus oralis - 10⁴ Streptococcus mitis - 10⁴ Streptococcus anginosus - 10⁴ Streptococcus sanguinis - 10⁴ Alloscardovia omnicolens - 10⁴

Пример 2.

Пациентка М. с аномальной кольпоскопической картиной

Выделенный микроорганизм Посев из цервикального канала КОЕ/мл Посев биоптата шейки матки КОЕ/мл Lactobacillus crispatus 10⁴ 10³ Lactobacillus jensenii 10³ - Staphylococcus epidermidis 10² - Streptococcus agalactiae 10² - Photobacterium iliopiscsrium 10² - Corynebacterium tuberculostearicum - 10³ Corynebacterium amycolatum - 10³ Corynebacterium simulans - 10³ Haemophilus parainfluenzae - 10² Staphylococcus haemolyticus - 10³

Выявлены различия в качественном и количественном составе микрофлоры между посевом из цервикального канала и посевом биоптата шейки матки.

Таким образом, было проведено обследование 22 пациенток с патологическим процессом шейки матки. В 100% случаев из биопсийного материала была выделена микрофлора, отличающаяся от микрофлоры, полученной в результате микробиологического исследования мазков со слизистой оболочки шейки матки.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен способ первичного посева при микробиологическом исследовании у пациенток с патологией шейки матки, включающий забор ткани шейки матки 2×2 мм, который гомогенизируют в 1 мл жидкой транспортной среде Эймса, гомогенат в объеме 200 мкл засевают на 6 плотных питательных сред: бруцелла агар с 10% дефибринированной бараньей кровью, универсальную хромогенную среду, агар для выделения лактобактерий, агар для выделения бифидобактерий, агар для анаэробов, агар Сабуро с хлорамфениколом; затем инкубируют чашки со средой Сабуро в аэробных условиях при 28°С и остальные чашки в анаэробных условиях при 37°С в течение 7 сут. Изобретение обеспечивает улучшение диагностики инфекционных осложнений у пациенток путем получения в первичном посеве биоптата максимального количества условно-патогенных микроорганизмов. 2 табл., 2 пр.

Способ первичного посева при микробиологическом исследовании у пациенток с патологией шейки матки, включающий взятие шейки матки на пулевые щипцы, удаление стерильным тампоном слизи с шейки матки и с помощью конхотома гинекологического с эндовидеоконтролем из патологического участка проводится забор ткани шейки матки 2×2 мм, отличающийся тем, что после сбора биоптат помещается в 1 мл жидкой транспортной среды Эймса и гомогенизируется непосредственно в транспортной среде с использованием стерильной одноразовой микробиологической петли, после чего полученный гомогенат в объеме 200 мкл засевается на 6 плотных питательных сред методом растирания стерильным шпателем Дригальского: бруцелла агар с 10% дефибринированной бараньей кровью, универсальную хромогенную среду, агар для выделения лактобактерий, агар для выделения бифидобактерий, агар для анаэробов, агар Сабуро с хлорамфениколом; полученные посевы на среде Сабуро инкубируются в аэробных условиях при температуре 28°С; на остальных средах в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 7 сут.