СПОСОБ ПОДГОТОВКИ И ПОСЕВА АТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКОЙ БЛЯШКИ ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ Российский патент 2020 года по МПК A61B10/02 C12N1/38 G01N33/483 

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологической диагностике, и может быть использовано для изучения микрофлоры атеросклеротических бляшек.

Известен метод определения микроорганизмов в атеросклеротической бляшке, основанный на методе культуральной диагностики - посеве на среду Сабуро с пересевом на HiCrome Candida Differential Agar [1].

Недостатком способа является то, что среда для первичного посева исключает выделение значительного количества бактериальной флоры, которая будет ингибироваться селективными добавками, необходимыми для выделения дрожжеподобных грибов.

Известен способ исследования микрофлоры атеросклеротической бляшки с помощью метода полимеразо-цепной реакции (ПЦР) [2].

Недостатками является сложная подготовка клинических образцов к исследованию, которая может увеличивать риск их контаминации; ограничение количества идентифицируемых микроорганизмов набором праймеров для ПЦР.

Известен способ посева атеросклеротической бляшки, при котором проводят разделение биоптата на два фрагмента. Первый фрагмент помещают в сухую стерильную емкость и доставляют в лабораторию, где проводят прямой посев на твердую питательную среду - основу кровяного агара с добавлением 5% крови барана путем нанесения отпечатков кусочком биоптата по поверхности питательной среды в сочетании с штриховым рассевом с помощью микробиологической петли. Посевы инкубируют двое суток при 35°С в СO2-инкубаторе марки МСО 15АС. При наличии роста колоний на твердых питательных средах идентификацию аэробных культур проводят с помощью наборов МИКРО-ЛА-тест. Второй фрагмент бляшки погружают в стерильную пробирку с тиогликолевой средой, доставляют в лабораторию и помещают в термостат при 35°С с ежедневным отсмотром посевов в течение 60 суток. При появлении видимых признаков роста проводят пересев на кровяной агар и агар Шедлера с 5% дефибринированной кровью барана. Посевы инкубируют 48 ч при 35°С в аэробных условиях. Анаэробные культуры идентифицируют с помощью наборов АНАЭРОтест [3]. Данный способ взят за прототип.

Недостатками способа является то, что материал бляшки не гомогенизируют, а осуществляют посев отпечатка бляшки на поверхность плотных питательных сред, что исключает возможность выделения микрофлоры, находящейся во внутренних структурах бляшки; при посеве материала в наборе сред для первичного посева отсутствуют универсальные хромогенные агары, которые позволяют выделять разнообразные группы микроорганизмов.

Целью изобретения является создание способа подготовки и посева атеросклеротической бляшки для микробиологического исследования.

Эта цель достигается тем, что в лаборатории в асептических условиях проводят выделение атеросклеротической бляшки из толщи стенки сосуда, ее механическое измельчение и гомогенизацию стерильным скальпелем; материал помещают в стерильную пробирку с физиологическим раствором и центрифугируют в режиме 3000 об./мин в течение 5 минут с последующим посевом надосадочной жидкости по 200 мкл на две чашки с 5% кровяным агаром и две чашки с универсальной хромогенной средой методом истощающего штриха; культивируют одну пару чашек с разнородными средами в аэробных, а другую пару чашек с разнородными средами в анаэробных условиях в течение 7 суток при температуре 37°С.

Преимуществами способа являются возможность выделения микрофлоры, находящейся во внутренних структурах бляшки, вследствие ее гомогенизации; отделение нерастворимых элементов бляшки от микрофлоры при центрифугировании; выделение разнообразных групп микроорганизмов, вследствие наличия универсальных хромогенных агаров.

Сущность предложенного метода заключается в следующем: хирург в условиях операционной удаляет фрагмент сосуда с атеросклеротической бляшкой и помещает его стерильным пинцетом в пробирку с тиогликолевой средой. Пробирку с собранным материалом доставляют в лабораторию, где в асептических условиях проводят выделение атеросклеротической бляшки из толщи стенки сосуда, ее механическое измельчение и гомогенизацию стерильным скальпелем; материал помещают в стерильную пробирку с физиологическим раствором и центрифугируют в режиме 3000 об/мин в течение 5 минут с последующим посевом надосадочной жидкости по 200 мкл на две чашки с 5% кровяным агаром и две чашки с универсальной хромогенной средой методом истощающего штриха; культивируют одну пару чашек с разнородными средами в аэробных, а другую пару чашек с разнородными средами в анаэробных условиях в течение 7 суток при температуре 37°С.

Предлагаемый способ позволяет получить данные о наличии микроорганизмов в атеросклеротических бляшках у пациентов с атеросклерозом. Использование предлагаемого способа не требует повышенных материальных затрат на проведение исследования, является доступным для лечебно-профилактических учреждений, в которых проводятся бактериологические исследования.

Сущность заявленного способа поясняется клиническими примерами:

Пример 1. Пациент М., 61 год. Поступил в отделение сосудистой хирургии клиник СамГМУ с диагнозом: (I65.3) закупорка и двухсоторонний стеноз внутренних сонных артерий. Проведена операция каротидная эндартерэктомия. В условиях операционной выделенный фрагмент внутренней сонной артерии с атеросклеротической бляшкой помещали стерильным пинцетом в пробирку с жидкой тиоглеколевой средой и транспортировали в микробиологическую лабораторию. Предлагаемым способом была подготовлена и посеяна атеросклеротическая бляшка. По результатам микробиологического исследования в атеросклеротической бляшке выявлены Staphylococcus haemolyticus, Streptococcus parasanguinis, Enterobacter asburiae.

Пример 2. Пациент К., 59 лет. Поступил в отделение сосудистой хирургии клиник СамГМУ с диагнозом: (I65.3) закупорка и двухсоторонний стеноз внутренних сонных артерий. Проведена операция каротидная эндартерэктомия. В условиях операционной фрагмент внутренней сонной артерии с атеросклеротической бляшкой помещали стерильным пинцетом в пробирку с жидкой тиоглеколевой средой и транспортировали в микробиологическую лабораторию. Предлагаемым способом была подготовлена и посеяна атеросклеротическая бляшка. По результатам микробиологического исследования в атеросклеротической бляшке выявлены Microbacterium testaceum и Agromyces fucosus.

Таким образом, в примерах показана возможность выделения предлагаемым способом микроорганизмов с различным типом дыхания.

Способ может быть применен в лабораторных, патологоанатомических, судебно-медицинских отделениях медицинских учреждений.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Нургельдыева М.Д., Ходжакулиев Б.Г. Особенности атерогенеза при сенсибилизации организма к Candida albicans. Евразийский кардиологический журнал. - 2013. - №1. - С. 76-80.

2. Мережко О.Е., Станишевская Н.Б. Микрофлора ротовой полости - один из этиологических факторов в патогенезе развития сердечно-сосудистой патологии. Биологические науки. - 2015.-№2. -С.190-193.

3. Шарифуллина Д.М., Васильева P.M., Яковлева Т.И., Николаева Е.Г., Поздеев O.K., Ложкин А.П., Хайруллин Р.Н. Микробный пейзаж биоптатов атеросклеротических бляшек. Казанский медицинский журнал. - 2015. - №2. - С. 979-982.

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологической диагностике, и может быть использовано для подготовки и посева атеросклеротической бляшки для микробиологического исследования. Проводят забор биоптата, его транспортировку в пробирке с тиогликолевой средой в лабораторию, посев методом истощающего штриха, культивирование в аэробных и анаэробных условиях. В лаборатории в асептических условиях проводят выделение атеросклеротической бляшки из толщи стенки сосуда, ее механическое измельчение и гомогенизацию стерильным скальпелем. Материал помещают в стерильную пробирку с физиологическим раствором и центрифугируют в режиме 3000 об./мин в течение 5 минут с последующим посевом надосадочной жидкости по 200 мкл на две чашки с 5% кровяным агаром и две чашки с универсальной хромогенной средой методом истощающего штриха. Культивируют одну пару чашек с разнородными средами в аэробных, а другую пару чашек с разнородными средами в анаэробных условиях в течение 7 суток при температуре 37°С. Способ обеспечивает возможность выделения предлагаемым способом микроорганизмов с различным типом дыхания за счет возможности выделения микрофлоры, находящейся во внутренних структурах бляшки, вследствие ее гомогенизации, отделения нерастворимых элементов бляшки от микрофлоры при центрифугировании, выделения разнообразных групп микроорганизмов, вследствие наличия универсальных хромогенных агаров. 2 пр.

Способ подготовки и посева атеросклеротической бляшки для микробиологического исследования, включающий забор биоптата, его транспортировку в пробирке с тиогликолевой средой в лабораторию, посев методом истощающего штриха, культивирование в аэробных и анаэробных условиях, отличающийся тем, что в лаборатории в асептических условиях проводят выделение атеросклеротической бляшки из толщи стенки сосуда, ее механическое измельчение и гомогенизацию стерильным скальпелем; материал помещают в стерильную пробирку с физиологическим раствором и центрифугируют в режиме 3000 об./мин в течение 5 минут с последующим посевом надосадочной жидкости по 200 мкл на две чашки с 5% кровяным агаром и две чашки с универсальной хромогенной средой методом истощающего штриха; культивируют одну пару чашек с разнородными средами в аэробных, а другую пару чашек с разнородными средами в анаэробных условиях в течение 7 суток при температуре 37°С.