Способ прогнозирования угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО Российский патент 2022 года по МПК G01N33/577 G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии и может быть использовано для прогнозирования угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов у женщин с беременностью, наступившей в результате экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Актуальность способа обусловлена тем, что беременность, наступившая в результате ЭКО, рассматривается как беременность высокого риска развития акушерских осложнений в различные сроки гестации. [Perinatal outcome of in vitro fertilization singletons - 10 years’ experience of one center / I. Szymusik, K. Kosinska-Kaczynska, M. Krowicka [et al.] // Archives of Medical Science. - 2019. - Vol. 15, № 3. - P. 666-672. https://doi.org/10.5114/aoms.2019.82670]. У женщин с беременностью после ЭКО, по сравнению с женщинами со спонтанной беременностью, выше частота угрозы прерывания беременности, и как следствие выше частота неблагоприятных перинатальных исходов [Факторы риска и прогнозирование нарушений здоровья у детей первого года жизни, родившихся от одноплодной беременности после экстракорпорального оплодотворения / Л.А. Пыхтина, О.М. Филькина, Н.Д. Гаджимурадова [и др.] // Анализ риска здоровью. - 2017. - № 1. - С. 56-65]. Известно, что в 63,9% случаев беременность, наступившая в результате ЭКО, осложняется угрозой прерывания [Иакашвили С.Н., Самчук П.М. Особенности течения и исход одноплодной беременности, наступившей после экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбриона, в зависимости от фактора бесплодия // Современные проблемы науки и образования. - 2017. - № 3. - С. 50], а частота преждевременных родов при ЭКО-беременностях в 1,7 раза выше по сравнению со спонтанно наступившими беременностями [Worldwide prevalence of adverse pregnancy outcomes among singleton pregnancies after in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection: a systematic review and meta-analysis / J.B. Qin, X.Q. Sheng, D. Wu [et al.] // Arch Gynecol Obstet. - 2017. - Vol. 295, № 2. - P. 285-301. doi: 10.1007/s00404-016-4250-3. https://doi.org/10.17116/repro201622265-72 - _blank

В связи с вышеизложенным, разработка способа прогнозирования угрозы прерывания беременности во втором триместре у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО, обеспечит персонифицированный подход к ведению данной категории пациенток, а также своевременное начало проведения профилактических и лечебных мероприятий с целью пролонгирования беременности и улучшения перинатальных исходов.

Известен способ прогнозирования угроз прерывания беременности во втором триместре у пациенток с аномалиями расположения хориона [Патент № 2618403 Российская Федерация. Способ прогнозирования угроз прерывания беременности во втором триместре у пациенток с аномалиями расположения хориона / Колчина В.В., Коротких И.Н. // Изобретения. Полезные модели. - 2017. - № 13]. Сущность способа заключается в том, что у беременных регистрируют: расстояние от внутреннего зева матки до нижнего края хориона в сантиметрах на первом скрининге, возраст беременной в годах, возраст начала половой жизни, наличие в анамнезе миомы матки, аденомиоза, вариант локализации хориона в матке - преимущественно по передней или по задней стенке, наличие бактериального вагиноза, хламидийной и герпетической инфекции, уровень гемоглобина, эритроцитов, тромбина, эозинофилов, палочкоядерных нейтрофилов, тромбиновое время. Затем вычисляют индивидуальный коэффициент прогнозирования вероятности угрозы прерывания беременности (Кпр) по формуле. Если значение Кпр менее или равно 0,48 - у пациентки отсутствуют угрозы прерывания беременности во втором триместре; если значение Кпр лежит в диапазоне от 0,49 до 0,87, прогнозируют один эпизод угрозы прерывания беременности; в диапазоне от 0,88 до 1,42 - два эпизода; более 1,43 - три эпизода.

Данный способ имеет ряд недостатков:

1. Отсутствуют данные о применении данного способа у женщин с беременностью, наступившей после ЭКО, что ограничивает его применение у данной категории пациентов.

2. Способ предполагает оценку большого количества показателей и трудоемкие математические расчеты, что делает его сложным и продолжительным по времени.

Наиболее близким к заявляемому способу является способ прогнозирования угрозы прерывания беременности [Патент № 2407015 Российская Федерация. Способ прогнозирования угрозы прерывания беременности / Боташева Т.Л., Авруцкая В.В., Друккер Н.А., Погорелова Т.Н., Крукиер И.И., Волошина А.В. // Изобретения. Полезные модели. - 2010. - № 35], заключающийся в том, что в сыворотке крови женщины во II триместре беременности определяют содержание эпидермального фактора роста (ЭФР). При величине ЭФР, равной 463 пг/мл и выше у женщин с плодом мужского пола, прогнозируют угрозу прерывания беременности.

Недостатки способа:

1. Отсутствуют данные о применении данного способа у женщин с беременностью, наступившей после ЭКО, что ограничивает его применение у данной категории пациентов.

2. Определение пола по данным ультразвукового исследования не всегда технически возможно, в связи с особенностями положения плода в полости матки.

Техническим результатом заявляемого способа является прогнозирование угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО.

Технический результат достигается путем определения в периферической венозной крови женщины с беременностью, наступившей в результате ЭКО, в сроке гестации 11 - 14 недель содержания васкуло-эндотелиального фактора роста-А (VEGF-A) и трофобластического β1-гликопротеина (ТБГ) с последующим вычислением прогностического индекса D по формуле:

D = 4,016 - 0,0058 × X1 - 0,0001 × Х2, где:

X1 - содержание VEGF-А (пг/мл);

Х2 - содержание ТБГ (нг/мл).

4,016 - CONSTANT

при D менее 0 прогнозируют угрозу прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов, а при D более 0 прогнозируют отсутствие угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов с точностью 75,7%.

Способ осуществляется следующим образом:

У женщин в 11 - 14 недель беременности производят забор периферической венозной крови из кубитальной вены в объеме 1 мл в биохимическую пробирку. Кровь центрифугируют в течение 15 минут при скорости 3000 об/мин для получения сыворотки крови.

Содержание VEGF-А определяют иммуноферментным методом (ИФА) в 0,05 мл сыворотки крови реагентами фирмы ««BIOSOURCE» (США) согласно методике к набору на анализаторе «EL-808» (США). Длительность исследования 1,5 часа, результат выражается в пг/мл.

Содержание ТБГ определяют иммуноферментным методом в 0,02 мл сыворотки крови с использованием набора реагентов фирмы «Вектор Бест» согласно методике к набору на анализаторе «EL-808» (США). Длительность исследования 1 час, результат выражается в нг/мл.

На основании математической обработки полученных данных методом дискриминантного анализа определяют прогностический индекс D по формуле:

D = 4,016 - 0,0058 × X1 - 0,0001 × Х2, где:

X1 - содержание VEGF-А (пг/мл);

Х2 - содержание ТБГ (нг/мл).

4,016 - CONSTANT

Если D менее 0 - прогнозируют угрозу прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО,

Если D более 0 прогнозируют отсутствие угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать угрозу прерывания беременности во втором триместре у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО, по определению в периферической венозной крови содержания VEGF-A и ТБГ.

VEGF-А является одной из 7 изоформ семейства VEGF, является основным индуктором ангиогенеза, необходимым фактором плацентации и инвазии трофобласта. Он стимулирует пролиферацию, миграцию, проницаемость и гомеостаз эндотелиальных клеток сосудов, стимулирует дифференцировку цитотрофобласта. VEGF-A регулирует ангиогенез и сосудистую проницаемость, активируя рецепторы VEGFR-1 (Flt-1) и VEGFR-2. [Shibuya M. Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) and Its Receptor (VEGFR) Signaling in Angiogenesis: A Crucial Target for Anti- and Pro-Angiogenic Therapies // Genes&cancer. - 2011. - Vol. 2, № 12. - P. 1097-1105. https://doi.org/10.1177/1947601911423031]. Продуцируется VEGF-А различными типами клеток, практически во всех тканях. Он изменяется при патологических процессах, ассоциированных с усилением ангиогенеза или увеличением проницаемости сосудов. [Демченко Н.С., Башмакова Н.В., Третьякова Т.Б. Патогенез невынашивания беременности: роль сосудисто-эндотелиального фактора роста (VEGF-A) (обзор литературы) // Уральский медицинский журнал. - 2012. - № 11(103). - С. 1-6]. Определение VEGF-A в крови играет важную роль при синдроме гиперстимуляции яичников [Доброхотова Ю.Э., Боровкова Е.И. Гиперстимуляция яичников: современная тактика ведения пациенток // Гинекология. - 2017. - Т. 19, № 2. - С. 19-22]. Выявлены изменения VEGF A при синдроме поликистозных яичников [Клиническое значение сосудистого эндотелиального фактора роста у больных с синдромом поликистозных яичников / Е.И. Манухина, М.А. Геворкян, И.Б. Манухин, Л.Б. Студеная // Лечащий врач. - 2011. - № 3. - С. 55], при онкозаболеваниях [Прозоровский В. Кровеносные сосуды и рак // Наука и жизнь. - 2006. - № 9. - С. 9-14]. Ингибирование функции VEGF-A может привести к бесплодию из-за блокировки функции желтого тела. [Козырева Е.В., Давидян Л.Ю. Роль факторов роста в патогенезе бесплодия и невынашивания беременности // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 4. - С. 444. URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=20811]. Ранее определение VEGF использовался для диагностики замершей беременности [Роль факторов роста в патогенезе неразвивающейся беременности / А. В. Орлов, И. И. Крукиер, Н. А. Друккер, Л. В. Каушанская // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2005. - № 3. - С. 4-6]. Выявлен низкий уровень белковых продуктов VEGF-A при недостаточном кровоснабжении фетоплацентарного комплекса. [Vascular endothelial growth factor-A gene polymorphisms in women with recurrent pregnancy loss / A.G. Eller, D.W. Branch, L. Nelson [et al.] // Journal of Reproductive Immunology. - 2011. - Vol. 88, № 1. - P. 48-52]. Высокий уровень VEGF диагностирован при неудачной имплантации плодного яйца [Association between vascular endothelial growth factor polymorphism and recurrent pregnancy loss: A systematic review and meta-analysis / Y. Sun, M. Chen, B. Mao [et al.] // Eur J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. - 2017. - Vol. 211. - P. 169-176], у женщин с бесплодием неясного генеза. [Vascular endothelial growth factor gene polymorphisms and idiopathic recurrent pregnancy loss / D. Papazoglou, G. Galazios, K. Papatheodorou.\ [et al.] // Fertil. Steril. - 2005. - Vol. 83, № 4. - P. 959-963]. Для прогнозирования угрозы прерывания беременности, наступившей в результате ЭКО, определение концентрации VEGF-А не использовалось.

Трофобластический β1-гликопротеин (ТБГ) является белком, который синтезируется клетками цито и синцитиотрофобласта, играет важную роль в функционировании системы «мать-плацента-плод». Трофобластический β1-гликопротеин (ТБГ) является маркером беременности, специфическим маркером плодовой части плаценты, определение его в крови используют для диагностики развития плацентарной недостаточности, что позволяет оценить состояние фетоплацентарной системы на ранних этапах патологического процесса [Богданович Р.Н., Чикаловец И.В., Берестовая Т.А. Трофобластический β1 - гликопротеин в клинической практике (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. - № 2. - С. 3-8]. В литературе имеются данные о связи между низкой концентрацией трофобластический β1-гликопротеина в сыворотке крови и развитием задержки роста плода. [Казанцева Е.В. Содержание плацентарных белков у беременных с задержкой роста плода в зависимости от экспозиции к антропогенным химическим веществам // Забайкальский медицинский вестник. - 2016. - № 4. - С. 89-93].

Возможно, повышение содержания VEGF-А и ТБГ в крови у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО, в 1 триместре является компенсаторным, что связано с нарушениями плацентации и инвазии трофобласта. В последствие при отсутствии компенсации и нарастании патологического процесса происходит возникновение плацентарной недостаточности и развитие во втором триместре беременности угрозы ее прерывания.

Отличительные признаки способа:

у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО, определяют в 11 - 14 недель беременности в периферической венозной крови содержание васкуло-эндотелиального фактора роста-А (VEGF-A) и трофобластического β1-гликопротеина (ТБГ) с последующим вычислением прогностического индекса D по формуле:

D = 4,016 - 0,0058 × X1 - 0,0001 × Х2, где:

X1 - содержание VEGF-А (пг/мл);

Х2 - содержание ТБГ (нг/мл).

4,016 - CONSTANT

при D менее 0 прогнозируют угрозу прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов, а при D более 0 прогнозируют отсутствие угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1.

Беременная О, 28 лет, первобеременная. В течении 3 лет проходила обследование и лечение с диагнозом: Распространенный генитальный эндометриоз IV стадии: эндометриоидные кисты обоих яичников, первичное бесплодие. В анамнезе 4 неудачные попытки ЭКО. Данная беременность наступила в результате криопереноса эмбриона.

Согласно заявленному способу в 11 недель беременности у женщины проведен забор периферической венозной крови и определено содержание VEGF-A, которое составило 1107,8 пг/мл, и содержание ТБГ, которое составило 28101 нг/мл.

Рассчитан прогностический индекс D:

D = 4,016 - 0,0058 × 1107,8 - 0,0001 × 28101 = -5,21, то есть D меньше 0, что указывает на вероятное наступление угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего выкидыша и угрожающих преждевременных родов.

В 16 недель пациентка поступила в гинекологический стационар с жалобами на тянущие боли внизу живота, кровянистые выделения. На основании клинических и функциональных методов исследования поставлен диагноз: Беременность 16 недель. ЭКО. Угрожающий поздний выкидыш.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2.

Беременная Д., 39 лет. В анамнезе 1 самопроизвольный выкидыш в 5 - 6 недель беременности и 1 внематочная беременность. Вторичное бесплодие 8 лет. По результатам гистеросальпингографии диагностирована непроходимость единственной маточной трубы. С диагнозом « Вторичное бесплодие, вызванное трубно-перитонеальным фактором, хронический сальпингит» пациентке рекомендовано ЭКО. Две попытки ЭКО были неудачными. Данная беременность наступила в результате переноса «свежего» эмбриона.

Согласно заявленному способу в 12 недель беременности у женщины проведен забор периферической венозной крови и определено содержание VEGF-A, которое составило 697,2 пг/мл, и содержание ТБГ, которое составило 38309 нг/мл.

Рассчитан прогностический индекс D:

D = 4,016 - 0,0058 × 697,2 - 0,0001 × 38309 = -3,86, то есть D меньше 0, что указывает на вероятное наступление угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего выкидыша и угрожающих преждевременных родов.

Пациентка в 27 недель беременности была госпитализирована в акушерский стационар с клиническими признаками угрожающих преждевременных родов. На основании клинических и функциональных методов исследования поставлен диагноз: Беременность 27 недель. ЭКО. Угрожающие преждевременные роды.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3.

Беременная М, 37 лет. В анамнезе 1 самопроизвольный выкидыш в 7 недель беременности. Вторичное бесплодие 5 лет. По результатам диагностической лапароскопии поставлен диагноз: Распространенный генитальный эндометриоз III cтадии: ретроцервикальный эндометриоз с распространением патологического процесса на крестцово-маточные связки. Первая попытка ЭКО закончилась неудачей. Данная беременность наступила в результате переноса «свежего» эмбриона в результате второй попытки ЭКО.

Согласно заявленному способу в 14 недель беременности у женщины проведен забор периферической венозной крови и определено содержание VEGF-A, которое составило 426,0 пг/мл, и содержание ТБГ, которое составило 9192 нг/мл.

Рассчитан прогностический индекс D:

D = 4,016 - 0,0058 × 426,0 - 0,0001 × 9192 = 0,63, то есть D больше 0, что указывает на вероятное отсутствие угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего выкидыша и угрожающих преждевременных родов.

У пациентки беременность протекала во втором триместре без признаков угрожающего выкидыша и угрожающих преждевременных родов.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 45 женщин, беременность которых наступила в результате ЭКО.

Результаты исследования представлены в таблице 1.

Таблица 1. Показатель Количество обследованных Всего обследовано беременных 45 Истинно - положительный результат 24 Ложно - положительный результат 5 Истинно - отрицательный результат 10 Ложно - отрицательный результат 6 Точность заявляемого способа 75,5% Специфичность заявляемого способа 66,7% Чувствительность заявляемого способа 80%

Преимущества способа:

1. Способ позволяет провести раннее прогнозирование развития угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО.

2. Заявляемый способ прост в выполнении: основывается на определении только двух биохимических показателей и не требует сложных математических расчетов.

3. Способ быстр в исполнении: продолжительность 2,5 часа.

4. Способ может использоваться как скрининговый.

5. Способ обеспечивает персонифицированный подход к ведению женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО, а также своевременность начала проведения профилактических и лечебных мероприятий.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии. В периферической венозной крови женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО, в 11-14 недель гестации определяют содержание васкуло-эндотелиального фактора роста-А - VEGF-A и трофобластического β1-гликопротеина - ТБГ с последующим вычислением прогностического индекса D по формуле: D = 4,016 - 0,0058 × X1 - 0,0001 × Х2, где X1 - содержание VEGF-А (пг/мл); Х2 - содержание ТБГ (нг/мл); 4,016 - CONSTANT. При D менее 0 прогнозируют угрозу прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов. При D более 0 прогнозируют отсутствие угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов. Способ позволяет обеспечить персонифицированный подход к ведению женщин с ЭКО беременностью, а также своевременно провести профилактические и лечебные мероприятия с целью пролонгирования беременности и улучшения перинатальных исходов. 3 пр., 1 табл.

Способ прогнозирования угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов у женщин с беременностью, наступившей в результате ЭКО, путем определения в 11-14 недель беременности в периферической венозной крови содержания васкуло-эндотелиального фактора роста-А - VEGF-A и трофобластического β1-гликопротеина - ТБГ с последующим вычислением прогностического индекса D по формуле:

D = 4,016 - 0,0058 × X1 - 0,0001 × Х2,

где X1 - содержание VEGF-А (пг/мл);

Х2 - содержание ТБГ (нг/мл);

4,016 - CONSTANT,

при D менее 0 прогнозируют угрозу прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов, а при D более 0 прогнозируют отсутствие угрозы прерывания беременности во втором триместре в виде угрожающего позднего выкидыша и угрожающих преждевременных родов.