СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫХ РОДОВ У ЖЕНЩИН С УГРОЖАЮЩИМ ПОЗДНИМ ВЫКИДЫШЕМ И ПРИВЫЧНЫМ НЕВЫНАШИВАНИЕМ БЕРЕМЕННОСТИ Российский патент 2024 года по МПК G01N33/53 G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования преждевременных родов у беременных женщин с угрожающим поздним выкидышем в сроке гестаци 16 - 21 неделя и 6 дней и привычным невынашиванием беременности.

Актуальность предлагаемого способа определяется высоким риском развития преждевременных родов у женщин с привычным невынашиванием беременности. Частота преждевременных родов в данной группе составляет 35 - 36% [Акушерство: национальное руководство / под ред. Г.М. Савельевой, Г.Т. Сухих, В.Н. Серова, В.Е. Радзинского. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2019. – 608 с.]. Проблема преждевременных родов остается одной из наиболее значимых и не решенных в настоящее время [Преждевременные роды — нерешенная проблема XXI века / В.Е. Радзинский, А.А. Оразмурадов, И.В. Савенкова и др. // Кубанский научный медицинский вестник. – 2020. – Т. 27, № 4. – С. 27–37]. Несмотря на высокие достижения медицины на современном этапе, преждевременные роды определяют высокую частоту неонатальной заболеваемости и смертности, развитие у ребенка в последующие периоды жизни инвалидизирующей соматической и нервно-психической патологии [Евсюкова И.И. Недоношенные дети: актуальные проблемы выхаживания и профилактики неблагоприятных последствий // Журнал акушерства и женских болезней. – 2021. – Т. 70, № 3. – С. 93–102].

Таким образом, прогнозирование преждевременных родов у женщин с угрожающим поздним выкидышем и привычным невынашиванием беременности позволит своевременно провести лечебно-профилактические мероприятия с целью снижения перинатальных осложнений для матери и ребенка.

Известен способ прогнозирования преждевременных родов у пациенток с первичным привычным невынашиванием [Патент № 2485896 Российская Федерация. Способ прогнозирования преждевременных родов у пациенток с первичным привычным невынашиванием / Винокурова Е.А., Башмакова Н.В., Мазуров А.Д. // Изобретения. Полезные модели. – 2013. – № 18]. Сущность способа заключается в том, что у пациенток с первичным привычным невынашиванием выявляют наличие регрессирующей беременности в анамнезе, при обследовании выявляют признаки недифференцированной дисплазии соединительной ткани (НДСТ), хронической внутриматочной инфекции (ХВМИ), не пролеченной до беременности, диагностируют степень тяжести преэклампсии, проводят УЗИ в сроке 20 - 24 недели беременности для выявления плацентарной недостаточности, наличие задержки внутриутробного развития плода и вычисляют прогностический индекс F по формуле:

F=0,631·X1+0,692·X2+0,857·X3-1,538·X4-2,182·X5-0,465·X6-0,465;

где X1 - синдром замершей беременности в анамнезе: в случае наличия - 1, при отсутствии - 0;

Х2 - признаки НДСТ у матерей: если есть - 1, если нет - 0;

Х3 - наличие плацентарной недостаточности: если есть - 1, если нет - 0;

Х4 - наличие ЗВУР плода: если есть - 1, если нет - 0;

Х5 - преэклампсия тяжелой степени: если есть - 1, если нет - 0;

Х6 - хроническая внутриматочная инфекция, санированная при беременности: если есть - 1, если нет - 0;

и при F менее 0 прогнозируют высокую вероятность преждевременных родов, а при F более 0 судят об отсутствии угрозы преждевременных родов.

Способ имеет следующие недостатки:

1. Способ позволяет прогнозировать преждевременные роды только у пациенток с первичным привычным невынашиванием беременности, что ограничивает его применение у женщин с вторичным привычным невынашиванием беременности;

2. Отсутствуют данные о возможности применения способа у женщин с привычным невынашиванием беременности и с угрожающим поздним выкидышем.

3. Способ является трудоемким, так как предполагает оценку большого количества показателей с последующими математическими расчетами;

Известен способ оценки риска преждевременных родов у женщин с привычным невынашиванием беременности [Патент № 2701109 Российская Федерация. Способ оценки риска преждевременных родов у женщин с привычным невынашиванием беременности / Редьков О.В., Дадабаев В.К., Стольникова И.И., Досова С.Ю. // Изобретения. Полезные модели. – 2019. – № 27]. Сущность данного способа заключается в том, что в сроке гестации 8 - 10 недель определяют в сыворотке периферической крови уровень интерлейкина 1 (IL 1), интерлейкина 6 (IL 6), маркера воспаления - лиганд фактора некроза опухолей, вызывающий апоптоз (TRAIL), с последующим внесением этих данных в уравнение для расчета риска преждевременных родов: р (преждевременных родов)=1/1+eZ, где р (преждевременных родов) - величина риска преждевременных родов, е - основание натуральных логарифмов (число Эйлера=2,718), а значение z рассчитывается по формуле: z=1,207*П1+0,723*П2-1,823*П3+5,361, где 1,207, 0,723 и -1,823 - значения коэффициентов для IL 1, IL 6 и TRAIL, 5,361 - константа уравнения, а П1, П2 и П3 - значения уровней IL 1, IL 6 и TRAIL в сыворотке крови и при значении р (преждевременные роды), большем чем 0,470, риск преждевременных родов считается высоким, а при меньшем чем 0,470, риск преждевременных родов считается низким.

Способ имеет следующие недостатки:

1. Отсутствуют данные о возможности применения способа у женщин с привычным невынашиванием беременности и с угрожающим поздним выкидышем;

2. Способ является трудоемким, так как предполагает оценку большого количества показателей с последующими математическими расчетами;

3. Способ является менее чувствительным (80,8%) и специфичным (69,8%) в отличие от заявляемого способа.

Наиболее близким к заявляемому способу является способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе [Патент № 2755269 Российская Федерация. Способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе / Малышкина А.И., Сотникова Н.Ю., Крошкина Н.В., Григушкина Е.В., Таланова И.Е. // Изобретения. Полезные модели. – 2021. – № 26]. Сущность способа заключается в том, что в периферической венозной крови беременных с угрожающим выкидышем и привычным невынашиванием в анамнезе в сроке 5 - 12 недель гестации до назначения сохраняющей терапии определяют относительное содержание IL-4 позитивных моноцитов. При его значении, равном 26,7% или менее, прогнозируют преждевременные роды.

Недостатки способа:

1. Способ позволяет прогнозировать преждевременные роды только у пациенток с угрожающим выкидышем ранних сроков, что ограничивает его применение у женщин с угрожающим поздним выкидышем;

2. Для реализации способа необходимо оборудование, которым оснащены только клинико-диагностические лаборатории 3 уровня [«Об утверждении Правил проведения лабораторных исследований»: Приказ Министерства здравоохранения РФ от 18 мая 2021 г. № 464н. https://legalacts.ru/doc/prikaz-minzdrava-rossii-ot-18052021-n-464n-ob-utverzhdenii/], что ограничивает доступность и широкое использование данного способа.

Технический результат направлен на расширение арсенала прогностических средств и повышение доступности прогнозирования преждевременных родов у женщин с угрожающим поздним выкидышем в сроке гестации 16 - 21 неделя и 6 дней и привычным невынашиванием беременности.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в периферической венозной крови беременных женщин с привычным невынашиванием беременности и с угрожающим поздним выкидышем в сроке гестации 16 - 21 неделя и 6 дней до начала сохраняющей терапии определяют сывороточное содержание гомологичного лимфотоксинам индуцибильного фактора, конкурирующего с гликопротеином D вируса простого герпеса за медиатор проникновения вируса герпеса (LIGHT), и при его значении, равном 44,5 пг/мл или менее, прогнозируют преждевременные роды с точностью 90,0%.

Способ осуществляется следующим образом.

1. У беременной женщины с привычным невынашиванием беременности и угрожающим поздним выкидышем, диагностированным в сроки гестации с 16 по 21 неделю и 6 дней, в те же сроки беременности до начала сохраняющей терапии забирают 1 мл периферической венозной крови из кубитальной вены в сухую пробирку.

2. Кровь отстаивают до образования сгустка, затем центрифугируют в течение 10 минут при скорости 1500 об/мин и получают сыворотку крови.

3. В лунки стрипов с иммобилизированными на внутренней поверхности антителами к LIGHT вносят по 100 мкл стандартов и исследуемых образцов сывороток. Инкубируют стрипы при температуре 25^оС в течение 2,5 часов при осторожном встряхивании на микропланшетном шейкере. По окончании инкубации лунки стрипов промывают четыре раза промывочным буфером.

4. Добавляют во все лунки по 100 мкл биотинилированных антител. Инкубируют стрипы при температуре 25^оС в течение 1 часа со встряхиванием на микропланшетном шейкере. По окончании инкубации лунки стрипов промывают четыре раза промывочным буфером.

5. Вносят во все лунки по 100 мкл конъюгата HRP-стрептавидин и инкубируют стрипы при температуре 25^оС в течение 45 мин при осторожном встряхивании на микропланшетном встряхивателе. По окончании инкубации лунки стрипов промывают четырежды промывочным буфером.

6. Вносят в каждую лунку по 100 мкл субстратного раствора TMB. Инкубируют стрипы в течение 30 мин при комнатной температуре на микроплашетном встряхивателе, избегая прямых солнечных лучей.

7. Для остановки ферментной реакции добавляют во все лунки по 50 мкл «Стоп-реагента».

8. Проводят измерение оптической плотности в лунках при длине волны 450 нм на микропланшетном ридере Multiscan FC (Labsystems, China).

9. На основании калибровочной кривой, построенной микропланшетным ридером Multiscan FC (Labsystems, China), определяют сывороточное содержание гомологичного лимфотоксинам индуцибильного фактора, конкурирующего с гликопротеином D вируса простого герпеса за медиатор проникновения вируса герпеса (LIGHT), и при его значении, равном 44,5 пг/мл или менее, прогнозируют преждевременные роды у женщин с угрожающим поздним выкидышем в сроке гестации 16 - 21 неделя и 6 дней и привычным невынашиванием беременности.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать преждевременные роды у беременных женщин с угрожающим поздним выкидышем в сроке 16 - 21 недели и 6 дней гестации и привычным невынашиванием по определению сывороточного содержания LIGHT в периферической крови.

LIGHT является членом суперсемейства фактора некроза опухоли (TNF). Он связывается с рецепторами лимфотоксина бета (LTbetaR), медиатором проникновения вируса герпеса (HVEM), и рецептором-ловушкой 3 (DcR3). LIGHT через взаимодействие с LTbetaR и HVEM способен вызвать или гибель клеток, или активацию транскрипционного фактора NF-kappaB [Steinberg M.W., Cheung T.C., Ware C.F. The signaling networks of the herpesvirus entry mediator (TNFRSF14) in immune regulation // Immunological reviews. – 2011. – Vol. 244, № 1. – P. 169–187. doi: 10.1111/j.1600-065X.2011.01064.x.; Comprehensive characterization of TNFSF14/LIGHT with implications in prognosis and immunotherapy of human gliomas / M. Han, Y. Sun, W. Zhao et al. // Front. Immunol. – 2022. – Vol. 13. – P. 1025286. doi: 10.3389/fimmu.2022.1025286]. Показано, что LIGHT является провоспалительным цитокином, модулирующим активность Т-звена иммунитета, способствует усилению клеточной пролиферации, продукции провоспалительных цитокинов и активации эндотелиальных клеток. LIGHT также является мощным инициатором T-клеточных костимуляционных сигналов, ведущих к опосредованному цитотоксическими Т-лимфоцитами отторжению опухолей и трансплантатов. [Granger S.W., Rickert S. LIGHT-HVEM signaling and the regulation of T cell-mediated immunity // Cytokine Growth Factor Rev. – 2003. – Vol. 14, № 3–4. – P. 289–296. doi: 10.1016/s1359-6101(03)00031-5]. Установлено, что дисрегуляция активности LIGHT ведет к нарушению Т-клеточного гомеостаза и в конечном итоге к нарушению периферической толерантности. [Wang J., Fu Y.X. The role of LIGHT in T cell-mediated immunity // Immunol. Res. – 2004. – Vol. 30, № 2. – P. 201–214. doi: 10.1385/IR:30:2:201; Immunoregulation by tumor necrosis factor superfamily member LIGHT / Y. Wang, M. Zhu, M. Miller, Y. X. Fu // Immunological reviews. – 2009. – Vol. 229, № 1. – P. 232–243. doi:10.1111/j.1600-065X.2009.00762.x].

По-видимому, снижение концентрации LIGHT в сыворотке крови во втором триместре беременности приводит к нарушению формирования нормального Т-клеточного и врожденного иммунного ответа при беременности, нарушению иммунорегуляции, что может привести к преждевременным родам.

Отличительные признаки способа: у женщин с привычным невынашиванием беременности при развитии угрожающего позднего выкидыша в сроке гестации 16 - 21 неделя и 6 дней определяют сывороточное содержание гомологичного лимфотоксинам индуцибильного фактора, конкурирующего с гликопротеином D вируса простого герпеса за медиатор проникновения вируса герпеса (LIGHT), и при его значении, равном 44,5 пг/мл или менее, прогнозируют преждевременные роды.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1.

Женщина Д., 31 год, беременность четвертая, желанная, наступила самостоятельно. В анамнезе 3 самопроизвольных выкидыша в сроках 5 – 6, 6 - 7 и 8 - 9 недель гестации с выскабливанием полости матки. В сроке 16 недель беременности женщина госпитализирована в стационар с жалобами на тянущие боли внизу живота, кровянистые выделения из половых путей. При влагалищном исследовании: наружные половые органы развиты правильно, влагалище нерожавшей, шейка матки конической формы, длинная, наружный зев сомкнут. Тело матки увеличено до 16 недель беременности, округлой формы, плотное, подвижное, безболезненное. Выделения кровянистые в незначительном количестве. Срок по данным ультразвукового исследования 16 недель, сердцебиение плода регистрируется, отмечен гипертонус матки, данных за ретроплацентарную гематому нет, при цервикометрии - длина цервикального канала 30 мм, форма внутреннего зева Т-образная.

Диагноз: Беременность 16 недель. Угрожающий поздний выкидыш. Привычное невынашивание беременности.

До назначения сохраняющей терапии согласно заявленному способу было определено сывороточное содержание LIGHT, которое составило 18,36 пг/мл.

Заключение: прогноз – преждевременные роды.

Проводилась сохраняющая терапия с положительным эффектом. Женщина выписана из стационара с прогрессирующей беременностью в сроке 18 недель.

В 33 недели 2 дня беременная госпитализирована в стационар акушерской клиники с жалобами на схваткообразные боли внизу живота, повышенные слизистые выделения из половых путей. При влагалищном исследовании: шейка матки длиной до 2 см, неравномерно размягчена, наружный зев пропускает кончик пальца, матка увеличена до 33 недель беременности. Начата токолитическая терапия с эффектом, проведена профилактика респираторного дистресс-синдрома плода. В сроке беременности 34 недели отмечено начало активной родовой деятельности, произошли преждевременные роды. Родилась живая недоношенная девочка массой 1800 г, ростом 45 см, оценка по шкале Апгар 4/5 баллов, ребенок переведен в детское реанимационное отделение.

Диагноз: первые преждевременные роды при беременности 34 недели. Привычное невынашивание беременности.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2.

Больная С., 32 года, беременность третья, желанная, наступила самостоятельно, в первом браке. В анамнезе неразвивающаяся беременность в сроке 6 недель и самопроизвольный выкидыш в сроке 8 недель. В сроке 18 недель и 3 дня беременности госпитализирована в гинекологическое отделение с жалобами на тянущие боли внизу живота, сукровичные выделения из половых путей. При влагалищном исследовании: наружные половые органы развиты правильно, влагалище нерожавшей, шейка матки конической формы, длинная, наружный зев сомкнут. Тело матки увеличено до 18 недель беременности, плотное, подвижное, безболезненное. Выделения сукровичные. По данным ультразвукового исследования выявлен гипертонус матки; сердцебиение плода регистрируется, данных за ретроплацентарную гематому нет, при цервикометрии - длина цервикального канала 28 мм, форма внутреннего зева Т-образная.

Диагноз: Беременность 18 недель 3 дня. Угрожающий поздний выкидыш. Привычное невынашивание беременности.

До назначения сохраняющей терапии согласно предложенному способу было определено сывороточное содержание LIGHT, которое составило 44,5 пг/мл.

Заключение: прогноз – преждевременные роды.

Проводилась сохраняющая терапия с положительным эффектом. Женщина выписана из стационара с прогрессирующей беременностью в сроке 21 неделя.

В 26 недель беременности пациентка поступила в акушерскую клинику с симптомами угрожающих преждевременных родов, дородовым излитием околоплодных вод, после чего развилась родовая деятельность, произошли первые преждевременные роды через естественные родовые пути. Родилась живая недоношенная девочка, массой 900 г, ростом 33 см, оценка по шкале Апгар 3/5 баллов, переведена в детское реанимационное отделение.

Диагноз: первые преждевременные роды в сроке беременности 26 недель. Дородовое излитие околоплодных вод. Привычное невынашивание беременности.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3.

Пациентка Д., 31 год, беременность четвертая, желанная, наступила самостоятельно, в первом браке. В анамнезе одни своевременные роды через естественные родовые пути, без осложнений, один самопроизвольный выкидыш в сроке 15 - 16 недель и одна неразвивающаяся беременность в сроке 10 - 11 недель с выскабливанием полости матки. В сроке беременности 21 неделя и 2 дня госпитализирована в гинекологическое отделение с жалобами на тянущие боли внизу живота, повышенные слизистые выделения из половых путей. При влагалищном исследовании: наружные половые органы развиты правильно, влагалище рожавшей, шейка матки цилиндрической формы, до 2 см, наружный зев сомкнут. Тело матки увеличено до 21 недели беременности, плотное, подвижное, безболезненное. Выделения слизистые. По данным ультразвукового исследования выявлен гипертонус по передней стенке матки, сердцебиение плода регистрируется, данных за ретроплацентарную гематому нет, при цервикометрии - длина цервикального канала 21 мм, форма внутреннего зева Y-образная.

Диагноз: Беременность 21 неделя и 2 дня. Угрожающий поздний выкидыш. Привычное невынашивание беременности.

До назначения сохраняющей терапии согласно предложенному способу было определено сывороточное содержание LIGHT, которое составило 70,34 пг/мл.

Заключение: прогноз – своевременные роды.

Проводилась сохраняющая терапия с положительным эффектом. Женщина выписана из стационара с прогрессирующей беременностью в сроке 23 недели.

В сроке 40 недель беременности пациентка поступила в родильный дом с развитием родовой деятельности. Произошли вторые своевременные роды через естественные родовые пути, родился живой доношенный мальчик массой 3650 г, ростом 53 см, оценка по шкале Апгар 8/9 баллов, ребенок переведен на детское отделение. На 4 сутки женщина с ребенком выписаны домой.

Диагноз: вторые своевременные роды в сроке беременности 40 недель. Привычное невынашивание беременности.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 30 женщин с угрожающим поздним выкидышем в сроке гестации 16 - 21 неделя и 6 дней и привычным невынашиванием беременности.

Результаты исследования приведены в таблице №1.

Таблица 1.

Показатель Количество обследованных Всего женщин 30 истинно-положительный результат 15 ложно-положительный результат 3 истинно-отрицательный результат 12 ложно-отрицательный результат 0 Точность 90,0% Чувствительность 100,0% Специфичность 80%

Преимущества заявляемого способа:

1. Широкая доступность способа обусловлена возможностью его выполнения в клинико-диагностических лабораториях 1 уровня [«Об утверждении Правил проведения лабораторных исследований»: Приказ Министерства здравоохранения РФ от 18 мая 2021 г. № 464н. https://legalacts.ru/doc/prikaz-minzdrava-rossii-ot-18052021-n-464n-ob-utverzhdenii/].

2. Способ может использоваться в качестве скринингового, так как прост в исполнении, имеет высокую точность, чувствительность и специфичность, предполагает исследование одного показателя;

3. Способ позволяет у женщин с привычным невынашиванием беременности и угрожающим поздним выкидышем в сроке гестации 16 - 21 неделя и 6 дней прогнозировать преждевременные роды с целью своевременного проведения лечебно-профилактических мероприятий и снижения перинатальных осложнений для матери и ребенка.

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования преждевременных родов у беременных женщин с угрожающим поздним выкидышем в сроке гестации 16-21 неделя и 6 дней и привычным невынашиванием беременности. Прогнозирование проводится по определению в периферической венозной крови сывороточного содержания гомологичного лимфотоксинам индуцибильного фактора, конкурирующего с гликопротеином D вируса простого герпеса за медиатор проникновения вируса герпеса (LIGHT). При значении LIGHT, равном 44,5 пг/мл или менее, у пациентки прогнозируют преждевременные роды. Способ прост, доступен, имеет высокую точность, позволяет своевременно провести профилактические мероприятия и снизить перинатальные осложнения для матери и ребенка. 1 табл., 3 пр.

Способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с привычным невынашиванием беременности и угрожающим выкидышем путем иммунологического исследования периферической венозной крови до начала сохраняющей терапии, отличающийся тем, что у женщин с привычным невынашиванием беременности при развитии угрожающего позднего выкидыша в сроке гестации 16-21 неделя и 6 дней определяют сывороточное содержание гомологичного лимфотоксинам индуцибильного фактора, конкурирующего с гликопротеином D вируса простого герпеса за медиатор проникновения вируса герпеса (LIGHT), и при его значении, равном 44,5 пг/мл или менее, прогнозируют преждевременные роды.