Способ коррекции микроциркуляторных нарушений 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноатом при экспериментальной NMDA-опосредованной эксайтотоксичности в сетчатке Российский патент 2022 года по МПК A61K31/44 A61P27/02 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки.

Из научных источников известно, что в условиях повышенного глазного давления, возрастает концентрация глутама, что приводит к эксайтотоксичности. При этом наблюдается ухудшение состояния сосудистого слоя сетчатки (Ueda K, Nakahara T, Hoshino M, Mori A, Sakamoto K, Ishii K. Retinal blood vessels are damaged in a rat model of NMDA-induced retinal degeneration. Neurosci Lett. 2010 Nov 12;485(1):55-9. doi: 10.1016/j.neulet.2010.08.061. Epub 2010 Aug 27. PMID: 20801189).

Известно новое соединение – магния бис-(2-аминоэтансульфокислоты)-бутандиоат, обладающий антигипоксической, нейропротекторной и гипокоагуляционной активностью (RU 2671982, публ. 08.11.2018).

Основным недостатком патента является выявление нейропротекторных свойств только центральной нервной системы, а также отсутствие экспериментальных данных о влиянии соединения на процессы эксайтотоксичности в сетчатке, в особенности на микроциркуляторное русло.

Наиболее близким к заявленному решению является способ профилактики эксайтотоксического повреждения сетчатки производным диметиалминоэтанола в эксперименте (RU 2765675, публ. 01.02.2022), который заключается в том, что моделирование патологии осуществляют путём однократного интравитреального введения крысам линии Wistar раствора NMDA объемом 2 мкл в дозе 160 нмоль, а бис-(-2- гидроксиэтил-N-диметиламиния 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтаноата (DMAE 10-19), вводят внутрибрюшинно в дозе 13,8 мг/кг за 40 минут перед введением NMDA. Способ обеспечивает выраженную коррекцию морфологических нарушений в сравнении с моделью патологии.

Основным недостатком способа является то, что данный способ фармакологической коррекции эксайтотоксичности имеет свои ограничения, так как предложен только для оценки морфологической структуры и не отражает влияния соединения на микроциркуляторное русло сетчатки.

Задачей предлагаемого изобретения является создание эффективного способа улучшения микроциркуляции при эксайтотоксическом повреждении сетчатки с использованием нового соединения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата под лабораторным шифром LCHT 6-20 в эксперименте, подтверждаемого результатами лазерной допплеровской флоуметрии.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является эффективный способ коррекции микроциркуляторного русла сетчатки, на фоне эксайтотоксического повреждении сетчатки, с использованием нового соединения – 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата (LCHT 6-20) в эксперименте, подтверждаемого результатами лазерной допплеровской флоуметрии.

Поставленная задача достигается тем, что предложен способ коррекции гемодинамических нарушений микроциркуляторного русла сетчатки 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноатом в эксперименте, включающий моделирование патологии путём однократного интравитреального введения крысам линии Wistar раствора NMDA объемом 2 мкл в дозе 160 нмоль, а 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноат, вводят внутримышечно в дозе 25,5 мг/кг через 60 минут после введения NMDA, и далее производят введение ежедневно одноразово в течение 7 дней. Это приводит к улучшению показателей микроциркуляторного состояния сетчатки, подтверждаемых результатами лазерной допплеровской флоуметрии.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНОГО 5-ГИДРОКСИ-3-ПИРИДИНКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ

Синтез нового соединения осуществляли путем взаимодействия эквимолярных количеств 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина и 5-гидрокси-3-пиридинкарбоновой кислоты.

Пример 1. Синтез 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата.

В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой, термометром и обратным холодильником, загружают 50,0 мл этилового спирта, затем при перемешивании постепенно добавляют 2,74 г (0,02 г/моль) 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина, после растворения к полученному раствору постепенно при перемешивании добавляют 2,78 г (0,02 г/моль) 5-гидрокси-3-пиридинкарбоновой кислоты. Полученный раствор при перемешивании нагревают до 60°С, выдерживают 40 минут, полученный раствор фильтруют, растворитель отгоняют в вакууме. Полученный осадок перекристаллизовывают из 2-пропанола. Получают 4,42 г (80 %) белого с кремоватым оттенком кристаллического порошка, Т_пл. = 135°С.

C₁₄H₁₆N₂O₃ м.м. 276,29

Элементный анализ.

Найдено,%: С 60,81; Н 5,90; N 10,11.

Вычислено,%: С 60,86; Н 5,84; N 10,14; О 23,16.

ИК-спектр, ν см^-1: 3450 (ОН), 2910, 2891 (NH), 2410 (N⁺), 1578 (С=N).

УФ-спектр, нм: 0,001% раствор в воде дистиллированной имеет максимум поглощения при 249 и 297.

Растворимость. Легко растворим в воде, растворим в этиловом спирте.

рН. 6,5 (1,0 % водный раствор, потенциометрически).

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЗАЯВЛЕННОГО СОЕДИНЕНИЯ

Эксперименты проведены на самцах крыс линии Wistar массой 200-250 г. Для исследования взяты крысы без внешних признаков заболевания, прошедшие карантинный режим. Моделирование патологии осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг). Раствор NMDA вводили интравитреально однократно в дозе 160 нмоль в 2 мкл (Lambuk L, Jafri AJA, Iezhitsa I, et al. Dose-dependent effects of NMDA on retinal and optic nerve morphology in rats. Int J Ophthalmol. 2019;12(5):746-753. Published 2019 May 18. doi:10.18240/ijo.2019.05.08). Через 60 минут после моделирования патологии внутримышечно вводили 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноат в дозе 25,5 мг/кг и далее осуществляли его ежедневное однократное введение на протяжении 7 дней.

Каждая группа включала 10 крыс. Первая группа – группа интактных животных, вторая группа – с моделью эксайтотоксического повреждения сетчатки (контроль), третья группа – с коррекцией патологии LCHT 6-20; четвертая группа – с коррекцией патологии эмоксипином (ФГУП «Московский эндокринный завод», Россия (препарат сравнения).

Оценку эффективности коррекции осуществляли по уровню микроциркуляции методом лазерной допплеровской флоуметрии.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Через 7 дней после моделирования патологии осуществляли определение уровня микроциркуляции в сетчатке. Измерение уровня ретинальной микроциркуляции у крыс проводили методом лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ). Регистрацию осуществляли с использованием программно-аппаратного комплекса Biopac-systems MP-150 и датчика игольчатого типа TSD-144 (США), программы AcqKnowledge 4.2.

Результаты определения уровня микроциркуляции в сетчатке приведены в Таблице 1.

Через 7 дней после введения NMDA наблюдается снижение уровня микроциркуляции на 39,5%. В группе с коррекцией LCHT 6-20 в дозе 25,5 мг/кг, показатель возрастал на 48,8% в сравнении с группой контроля и отличался достоверно как от группы интактных животных, так и от группы с препаратом сравнения (р<0,001).

Таким образом, изобретение обеспечивает выраженную коррекцию микроциркуляторных нарушений сетчатки, т.к. применение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата в дозе 25,5 мг/кг внутримышечно через 60 минут после моделирования эксайтотоксического повреждения сетчатки, и далее ежедневно один раз в день на протяжении 7 дней, достоверно улучшает показатель уровня микроциркуляции в сетчатке на 48,8% в сравнении с животными из группы с моделью патологии (р<0,001).

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии. Выполняют внутримышечное введение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата в дозе 25,5 мг/кг через 60 мин после моделирования эксайтотоксического повреждения сетчатки. Далее ежедневно выполняют введение один раз в день на протяжении 7 дней. Изобретение обеспечивает выраженную коррекцию микроциркуляторных нарушений сетчатки. 1 табл., 1 пр.

Способ коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки в эксперименте, включающий внутримышечное введение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата в дозе 25,5 мг/кг через 60 мин после моделирования эксайтотоксического повреждения сетчатки и далее ежедневно одноразово в течение 7 дней.