ПРИМЕНЕНИЕ 8-ХЛОР-1-МЕТИЛ-4,5-ДИГИДРО-6H-ПИРРОЛО[1,2-a][1,4]БЕНЗОДИАЗЕПИН-6-ОНА В КАЧЕСТВЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ Российский патент 2022 года по МПК A61K31/5517 A61P31/04 C07D487/04 

Изобретение относится к области органической химии - новым биологически активным соединениям - замещенным пирроло[1,2-а][1,4]бензодиазепинонам, а именно к 8-хлор-1-метил-4,5-дигидро-6Н-пирроло[1,2-а][1,4]бензодиазепин-6-ону 1 формулы:

соединение 1 обладает антибактериальной активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве потенциального лекарственного средства с антибактериальными свойствами.

Аналогом по структуре заявляемому соединению является 2-этил-9-гидрокси-8-метокси-5H-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-5-он (лимазепин D) 2, обладающий антибактериальной активностью [J. Nat. Prod. 2009, 72, 690-695; doi: 10.1021/np800827w] формулы:

Эталоном сравнения был выбран фенилсалицилат 3 формулы:

который широко применяется в лечебной практике, и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - с. 950].

Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных пирроло[1,2-а][1,4]бензодиазепинонов веществ с выраженным антибактериальным действием.

Поставленная задача достигается получением 8-хлор-1-метил-4,5-дигидро-6Я-пирроло[1,2-а][1,4]бензодиазепин-6-она, который обладает антибактериальной активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют обработкой 2-амино-5-хлор-N-[(5-метил-2-фурил)метил]бензамида ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при комнатной температуре с последующей нейтрализацией соляной кислоты NHCO₃ и выделением целевого продукта стандартными методами синтетической органической химии по схеме:

Пример 1. Получение соединения 1. Смесь 1 г (3.77 ммоль) 2-амино-5-хлор-N-[(5-метил-2-фурил)метил]бензамида, 20 мл ледяной уксусной кислоты и 3 мл концентрированной соляной кислоты выдерживают при комнатной температуре 24 часа. Затем реакционную смесь выливают в 100 мл воды и нейтрализуют гидрокарбонатом натрия до рН ~ 7. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат. Остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента бензол, очищенный продукт 1 перекристаллизовывают из смеси петролейный эфир/бензол. Выход 75%. Т_пл=195-196°С. Найдено, %: С 63.09, Н 4.40, N 11.18. C₁₃H₁₁ClN₂O. Вычислено, %: С 63.29, Н 4.49, N 11.36. ИК спектр, (KBr), v_max, см^-1: 3237, 1619, 1480, 1329, 1205,1124, 938, 896, 832, 796, 730. Спектр ЯМР ¹Н, (300 МГц, CDCl₃), d, м.д.: 8.18 (уш. дд, J=5.7, 6.6 Гц, 1Н, NH), 7.92 (д, J=2.4 Гц, 1H, H_Ar), 7.50 (дд, J=2.4, 8.7 Гц, 1Н, H_Ar), 7.21 (д, J=8.7 Гц, 1H, H_Ar), 6.01 (с, 2Н, H_Pyr), 4.12 (дд, J=6.6,15.6 Гц, 1Н, СН₂), 4.08 (дд, J=5.7,15.6 Гц, 1Н, СН₂), 2.28 (с, 3Н, Me). Спектр ЯМР ¹³С (75 МГц, CDCl₃), d, м.д.: 169.5, 134.4, 132.4, 132.0, 131.5, 131.1, 130.7, 129.4, 126.2, 109.9, 105.4, 37.9, 14.0; m/z (%) (ЭУ, 70 эВ) 248/246 (33/100) [М⁺], 233/231 (24/74), 219/217 (15/47), 204/202 (6/18), 190/188 (8/26), 168 (45), 154 (19), 110 (16), 75 (52), 63 (25), 51 (42). Полученное соединение 1 представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в хлороформе, толуоле, ацетоне, этил ацетате, этаноле.

Пример 2. Для характеристики антибактериальной активности использовали стандартные параметры: минимальная подавляющая концентрация (МПК), которую определяли модифицированным методом двукратных серийных разведений (МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК) [Медицинские лабораторные технологии: Руководство по клинической лабораторной диагностике, п/р Каприщенко, 2013, Т.2, стр. 407]. Тесты проводили с использованием культур модельных микроорганизмов Escherichia coli МС4100 и Staphylococcus epidermidis АТСС29887 на питательной среде Луриа-Бертани в 96-луночных полистироловых планшетах. Конечная концентрация микроорганизмов в лунках составляла 5*10⁵ КОЕ/мл. Культивирование проводили при 37°С без перемешивания. Определение МПК и высевы для определения МБК производили через 24 ч. На первом этапе исследуемое соединение растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО), дальнейшие разведения производили в метаноле. В качестве начальных в тестах использовали концентрации, которые при внесении в питательную среду Луриа-Бертани не образовывали осадка (от 0.2 до 4 мг/мл).

Пример 3. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г. Н. Першина [Першин Г. Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 1971, 109-117]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД₅₀ составляет > 500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к IV классу мало токсичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977, стр. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Антибактериальная активность и острая токсичность соединения 1.

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 превышает по антибактериальной активности препарат сравнения (Фенилсалицилат) в 5 раз по отношению к St. epidermidis. Таким образом, 8-хлор-1-метил-4,5-дигидро-6Н-пирроло[1,2-а][1,4]бензодиазепин-6-он 1 проявляет более высокую активность по сравнению с эталоном сравнения в отношении грамположительных микроорганизмов, что делает возможным его использование для создания новых лекарственных средств, целенаправленного действия.

Изобретение относится к применению 8-хлор-1-метил-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепин-6-она формулы 1 в качестве антибактериального средства в отношении грамположительных микроорганизмов. Технический результат: выраженная антибактериальная активность в отношении грамположительных микроорганизмов, проявляемая соединением формулы 1. 1 табл., 3 пр.

Применение 8-хлор-1-метил-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепин-6-она формулы 1

в качестве антибактериального средства в отношении грамположительных микроорганизмов.