ПРИМЕНЕНИЕ 1-МЕТИЛ-8,9-ДИМЕТОКСИ-4,5-ДИГИДРО-6H-ПИРРОЛО[1,2-a][1,4]БЕНЗОДИАЗЕПИН-6-ОНА В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОГРИБКОВОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ ДРОЖЖЕВЫХ ГРИБОВ Российский патент 2023 года по МПК C07D487/04 C07D243/14 A61K31/5517 A61P31/10 

Изобретение относится к области органической химии - новым биологически активным соединениям - замещенным пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепинам, а именно к 1-метил-8,9-диметокси-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепин-6-ону 1 формулы:

соединение 1 обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве потенциального лекарственного средства с антимикотическими свойствами.

Аналогом по структуре заявляемому соединению является 7-хлор-4-(4-этилфенил)-5,6-дигидро-4H-бензо[ƒ]пирроло[1,2-a][1,4]диазепин 2, обладающий антимикотической активностью [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 75, 3453-3458; doi: 10.1016/j.bmcl.2005.05.007] формулы:

Эталоном сравнения был выбран кетоконазол 3 формулы:

который широко применяется в лечебной практике, и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - с. 918; Med. Chem. Res. 2013, 22, 211-218; doi: 10.1007/s00044-012-0021-2].

Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепинов веществ с выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 1-метил-8,9-диметокси-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-а][1,4]бензодиазепин-6-она, который обладает антимикотической активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют обработкой 2-амино-4,5-диметокси-N-[(5-метилфуран-2-ил)метил]бензамида ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при комнатной температуре с последующей нейтрализацией соляной кислоты NaHCO₃ и выделением целевого продукта стандартными методами синтетической органической химии по схеме:

Пример 1. Получение соединения 1. Смесь 1 г 2-амино-4,5-диметокси-N-[(5-метилфуран-2-ил)метил]бензамида, 20 мл ледяной уксусной кислоты и 3 мл концентрированной соляной кислоты выдерживают при комнатной температуре 24 часа. Затем реакционную смесь выливают в 100 мл воды и нейтрализуют гидрокарбонатом натрия до рН~7. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат. Остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента бензол, очищенный продукт 1 перекристаллизовывают из смеси петролейный эфир/бензол. Выход 78%. Найдено, %: С 66.10, Н 5.99, N 10.23. C₁₅H₁₆N₂O₃. Вычислено, %: С 66.16, Н 5.92, N 10.29. Спектр ЯМР ¹Н, (300 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 2.32 (с, 3Н, СН₃), 3.91 (с, 3Н, ОСН₃), 3.96 (с, 3Н, ОСН₃), 4.08 (д, ³J=6.3, 2Н, СН₂), 5.97 (д, V=3.3, 1H, H_Pyr), 6.01 (д, V=3.3, 1H, H_Pyr), 6.75 (с, 1H, H_Ar), 7.42 (с, 1H, H_Ar), 7.68 (уш.т, ³J=6.3, 1H, NH). Спектр ЯМР ¹³С (75 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 14.3, 38.1, 56.1(2С), 104.5, 108.1, 109.4,112.6, 121.3, 128.9, 130.0, 132.8, 147.0, 150.9, 170.3. Полученное соединение 1 представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в хлороформе, толуоле, ацетоне, этилацетате, этаноле.

Пример 2. Для характеристики антимикотической активности соединений использовали стандартные параметры: минимальная подавляющая концентрация (МПК), которую определяли модифицированным методом двукратных серийных разведений (Методические рекомендации: Грибы рода Candida. Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам, Москва, 2009; МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и минимальная фунгицидная концентрация (МФК).

Тесты проводили с использованием культуры модельных микроорганизмов Candida albicans АТСС 10231 на питательной среде Мюллера-Хинтона с добавлением 2% глюкозы в 96-луночных полистироловых планшетах. Концентрация микроорганизмов в лунках перед началом культивирования составляла 2,5*10⁵ КОЕ/мл. Культивирование проводили при 37°С без перемешивания. Определение МПК и высевы для определения МФК производили через 24 ч. Исследуемые соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до полного растворения в концентрации 20 мг/мл и ниже, в зависимости от растворимости. Вносили в питательную среду так, чтобы количество ДМСО не превышало 5%.

Пример 3. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г.Н. Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 1971, 109-117]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД₅₀ составляет >1500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977, стр. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Антимикотическая активность и острая токсичность соединения 1.

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 сопоставимо по антимикотической активности с препаратом сравнения (Кетоконазол) по отношению к С. albicans. Таким образом, это делает возможным использование 1-метил-8,9-диметокси-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепин-6-она 1 для создания новых лекарственных средств в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.

Изобретение относится к применению 1-метил-8,9-диметокси-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепин-6-она 1 формулы:

в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов. Технический результат: предложено применение 1-метил-8,9-диметокси-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепин-6-она, обладающего выраженной антимикотической активностью в отношении дрожжевых грибов, а также низкой токсичностью. 3 пр., 1 табл.

Применение 1-метил-8,9-диметокси-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепин-6-она:

в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.