СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ АРТРИТА Российский патент 2019 года по МПК A61K9/10 A61K9/127 A61K31/196 A61K47/10 A61K47/44 A61P19/02 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области медицины и касается способов лечения артрита, включающих введение композиций с замедленным высвобождением, содержащих липосомы, включающие один или несколько фосфолипидов и терапевтическое средство.

Уровень техники

Остеоартрит (OA) является наиболее распространенным типом артрита и ведущей причиной инвалидности. Это невоспалительное, дегенеративное заболевание суставов характеризуется прогрессирующей потерей суставного хряща, склерозом субхондральной кости, образованием остеофитов, изменениями в синовиальной мембране и увеличением объема синовиальной жидкости с пониженной вязкостью и поэтому с измененными смазочными свойствами.

Ревматоидный артрит (RA) является хроническим системным воспалительным заболеванием неизвестной этиологии. Генетические, экологические, гормональные, иммунологические и инфекционные факторы могут играть существенную роль. Отличительной чертой этого заболевания является стойкий симметричный полиартрит, который затрагивает руки и ноги, хотя могут быть поражены любые суставы, выстланные синовиальной мембраной. Это связано с накоплением и распространением воспалительных клеток в синовиальной выстилке, известном как синовит. Вовлечение таких внесуставных органов, как кожа, сердце, легкие и глаза, может быть значительным.

Внутрисуставное (интраартикулярное, IA) введение лекарств является привлекательным подходом к лечению артрита, в том числе OA и RA. Эффективными считаются различные поступающие в продажу препараты стероидов и гиалуроновой кислоты, но они требуют частых IA инъекций и дают лишь краткосрочное облегчение симптомов. Другие препараты в виде суспензий кристаллов, которые требуют иглы большого диаметра для IA инъекций, не подходят для лечения мелких суставов и могут вызывать индуцированный кристаллами синовит. Доступные системные способы лечения также имеют недостатки, прежде всего побочные эффекты.

Ввиду вышеизложенных недостатков существует потребность в способах лечения артрита с менее частыми IA инъекциями и/или с долгосрочным снятием боли. Раскрытые здесь способы отвечают этим потребностям, равно как и другим важным потребностям.

Раскрытие изобретения

Термины "изобретение", "это изобретение", "данное изобретение" и "настоящее изобретение" в описании служат для обозначения в широком смысле всей тематики данной патентной заявки и приведенной ниже формулы изобретения. Утверждения, содержащие эти термины, не следует понимать как ограничивающие описанную здесь тематику либо ограничивающие смысл или объем приведенной ниже формулы изобретения. Данное краткое изложение представляет собой высокоуровневый обзор различных аспектов изобретения и вводит некоторые из тех концепций, которые более подробно описаны в разделе «Осуществление изобретения». Данное краткое изложение не предназначается для идентификации ключевых или существенных признаков заявленного предмета изобретения и не должно использоваться отдельно для определения объема заявленной тематики. Тематику следует постигать с привлечением соответствующих частей из всего описания, всевозможных чертежей и всех пунктов формулы.

Настоящее изобретение касается способов лечения артрита, включающих внутрисуставное введение нуждающимся в таком лечении субъектам композиции с замедленным высвобождением, при этом у субъекта уменьшаются симптомы артрита. Настоящее изобретение особенно применимо для лечения ревматоидного артрита (RA).

Композиции с замедленным высвобождением по настоящему изобретению содержат липосомы, включающие (а) фосфолипид или смесь фосфолипидов и холестерин; и (b) терапевтическое средство или его фармацевтически приемлемую соль, при этом липосомы находятся в водной суспензии. Композиции с замедленным высвобождением могут быть получены путем смешивания липидной массы с терапевтическим средством.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 представлен линейный график, показывающий изменения массы тела у 4 групп крыс после того, как каждая группа подвергалась однократной IA инъекции, соответственно, физиологического раствора, свободного дексаметазона фосфата натрия (DSP) или композиций с замедленным высвобождением.

На фиг. 2 представлен линейный график, показывающий изменения клинического визуального показателя артрита у 4 групп крыс после того, как каждая группа подвергалась однократной IA инъекции, соответственно, физраствора, свободного DSP или композиций с замедленным высвобождением.

На фиг. 3 представлен линейный график, показывающий изменения объема правой лодыжки у 4 групп крыс после того, как каждая группа подвергалась однократной IA инъекции, соответственно, физраствора, свободного DSP или композиций с замедленным высвобождением.

На фиг. 4 представлен линейный график, показывающий изменения объема левой лодыжки у 4 групп крыс после того, как каждая группа подвергалась однократной IA инъекции, соответственно, физраствора, свободного DSP или композиций с замедленным высвобождением.

На фиг. 5 представлен линейный график, показывающий изменения массы тела у 3 групп крыс после того, как каждая группа подвергалась 4 ежедневным IA инъекциям свободного DSP либо композиций с замедленным высвобождением.

На фиг. 6 представлен линейный график, показывающий изменения клинического визуального показателя артрита у 3 групп крыс после того, как каждая группа подвергалась 4 ежедневным IA инъекциям, соответственно, свободного DSP или композиций с замедленным высвобождением.

На фиг. 7 представлен линейный график, показывающий изменения объема правой лодыжки у 3 групп крыс после того, как каждая группа подвергалась 4 ежедневным IA инъекциям, соответственно, свободного DSP или композиций с замедленным высвобождением.

На фиг. 8 представлен линейный график, показывающий изменения объема левой лодыжки у 3 групп крыс после того, как каждая группа подвергалась 4 ежедневным IA инъекциям, соответственно, свободного DSP или композиций с замедленным высвобождением.

На фиг. 9 представлен линейный график, показывающий изменения массы (панель а) и клинического показателя артрита (панель b) у 3 групп крыс после 5 ежедневных IA инъекций свободного индометацина или композиции индометацина с замедленным высвобождением. Первой стрелкой в день 19 обозначено первое ежедневное IA введение индометацина, а второй стрелкой в день 23 обозначено последнее ежедневное IA введение индометацина.

На фиг. 10 представлен линейный график, показывающий изменения массы (панель а) и клинического показателя артрита (панель b) у 3 групп крыс после двух IA инъекций свободного этанерцепта или композиции этанерцепта с замедленным высвобождением. Первой стрелкой в день 23 обозначено первое IA введение этанерцепта, а второй стрелкой в день 26 обозначено второе IA введение этанерцепта.

На фиг. 11 представлен линейный график, показывающий изменения массы (панель а) и клинического показателя артрита (панель b) у 3 групп крыс после двух IA инъекций свободного метотрексата или композиции метотрексата с замедленным высвобождением. Первой стрелкой в день 23 обозначено первое IA введение метотрексата, а второй стрелкой в день 26 обозначено второе IA введение метотрексата.

Осуществление изобретения

Как изложено в настоящем описании, было обнаружено, что IA введение субъекту эффективного количества описанной здесь композиции с замедленным высвобождением может с успехом уменьшить признаки и/или симптомы артрита у субъекта. Также было обнаружено, что описанное здесь лечение артрита требует менее частых IA инъекций, чем у ранее известных способов. К тому же оказалось, что описанное здесь лечение артрита приводит к более продолжительному снятию боли, чем у ранее известных способов. Эти открытия воплощены в описанных здесь способах, композициях и лекарственных средствах для лечения артрита, а также в применении композиций для лечения артрита.

Определения

Следующие термины при их применении выше и во всем описании, если не указано иначе, следует понимать как имеющие следующие значения.

В настоящем описании формы единственного числа включают и значения множественного числа, если из контекста не следует четко иное.

Термины "липосома", "липосомы" и родственные термины в настоящем описании охватывают мультивезикулярные липосомы (МВЛ), многослойные везикулы (MLV) либо мелкие или крупные однослойные везикулы (ULV). Липосомы имеют наноразмеры и содержат образующий частицы компонент и несущий лекарственное средство компонент. Компонент, образующий частицы, образует замкнутый липидный барьер, практически свободный от нейтральных липидов типа триглицеридов. В некоторых воплощениях в образующем частицы компоненте содержится менее 0,1% нейтральных липидов. В других воплощениях в образующем частицы компоненте нет нейтральных липидов. Компонент, несущий лекарственное средство, включает практически водную среду, практически свободную от нейтральных липидов типа триглицеридов, неводную фазу (масляную фазу), эмульсии типа вода в масле или другие смеси, содержащие неводную фазу.

Термин "эффективное количество" в настоящем описании означает такую дозу композиции с замедленным высвобождением, которая достаточна для ослабления таких симптомов и/или признаков артрита, как боль и тугоподвижность суставов.

Термины "лечить", "лечащий" или "лечение" в настоящем описании включают предупредительные (напр., профилактические), паллиативные и лечебные методы, применения или результаты. Термины "лечение" или "лечебные средства" также могут относиться к композициям типа фармацевтических композиций или к лекарственным средствам.

В настоящей заявке под лечением подразумевается способ ослабления или замедления одного или нескольких эффектов или симптомов артрита. Лечение также может означать способ ослабления основной патологии, а не только симптомов. Лечение может означать любое ослабление и может представлять собой, без ограничения, полное устранение артрита, признаков или симптомов артрита. Лечение может включать полное излечение артрита, которое выявляется общепризнанными методами. Для обнаружения артрита и его симптомов имеются общепризнанные методы. Они включают, без ограничения, радиологическое обследование, биопсию суставов, анализы крови (к примеру, выявление ревматоидного фактора или тест на антитела к ССР) или MRI, если назвать хотя бы несколько. Например, приведенный способ считается лечением, если у субъекта отмечается снижение одного или нескольких симптомов артрита на 10% по сравнению с субъектом до начала лечения или контрольными субъектами. Так, уменьшение может составлять 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100% или любую степень снижения между ними.

В настоящей заявке под предотвращением, предупреждением или профилактикой подразумевается способ предупреждения, замедления, предотвращения, устранения, воспрепятствования, прекращения или препятствования возникновению, частоте, тяжести или рецидивам артрита. Например, приведенный способ считается профилактикой, если происходит уменьшение или замедление возникновения, частоты, тяжести или рецидивов артрита либо одного или нескольких симптомов артрита (к примеру, боли, тугоподвижности, жара, воспаления суставов или болезненности суставов) у субъекта, восприимчивого к артриту, по сравнению с контрольными субъектами, восприимчивыми к артриту, но не получавшими описанного здесь лечения. Приведенный способ также считается профилактикой, если происходит снижение или замедление возникновения, частоты, тяжести или рецидивов артрита либо одного или нескольких симптомов артрита у субъекта, восприимчивого к артриту, после проведения описанного здесь лечения, по сравнению с течением болезни до проведения лечения. Так, снижение или замедление возникновения, частоты, тяжести или рецидивов артрита может составлять 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100% или любую степень снижения между ними.

Термин "субъект" может относиться к позвоночным, страдающим артритом, или позвоночным, нуждающимся в лечении артрита. Субъекты включают теплокровных животных, таких как млекопитающие, как-то приматы, более предпочтительно люди. Другие приматы также являются субъектами. Термин "субъект" включает и домашних животных, как-то кошек, собак и др., сельскохозяйственных животных (к примеру, крупный рогатый скот, лошадей, свиней, овец, коз и др.) и лабораторных животных (к примеру, мышей, кроликов, крыс, песчанок, морских свинок и др.). Таким образом, здесь предусматривается ветеринарное применение и лекарственные формы. Термин "артрит" относится к заболеваниям суставов или заболеваниям, включающим воспаление одного или нескольких суставов. Термин "артрит" в настоящем описании охватывает различные типы и подтипы артрита различной этиологии и причин, как известных, так и неизвестных, в том числе, без ограничения, ревматоидный артрит, остеоартрит, инфекционный артрит, псориатический артрит, подагрический артрит и связанный с волчанкой артрит.

Липидная масса

Липидная масса (lipid cake), используемая при описанных здесь способах лечения артрита, содержит смесь твердых липидов в виде комка, пленки или порошка.

В некоторых воплощениях фосфолипиды и холестерин либо смесь фосфолипидов и холестерина предварительно формируются в липосомы перед дальнейшей обработкой в липидную массу.

В некоторых воплощениях фосфолипиды и холестерин либо смесь фосфолипидов и холестерина не формируются предварительно в липосомы перед дальнейшей обработкой в липидную массу.

Липидная масса может быть получена из различных липидов, способных либо образовывать, либо встраиваться в монослойные или бислойные структуры. Предусмотренная здесь липидная масса включает один или несколько фосфолипидов и холестерин, практически свободные от нейтральных липидов типа триглицеридов. Примеры фосфолипидов включают, без ограничения, фосфатидилхолин (PC), фосфатидилглицерин (PG), фосфатидилэтаноламин (РЕ), фосфатидилсерин (PS), фосфатидную кислоту (РА), фосфатидилинозитол (PI), яичный фосфатидилхолин (ЕРС), яичный фосфатидилглицерин (EPG), яичный фосфатидилэтаноламин (ЕРЕ), яичный фосфатидилсерин (EPS), яичную фосфатидную кислоту (ЕРА), яичный фосфатидилинозитол (EPI), соевый фосфатидилхолин (SPC), соевый фосфатидилглицерин (SPG), соевый фосфатидилэтаноламин (SPE), соевый фосфатидилсерин (SPS), соевую фосфатидную кислоту (SPA), соевый фосфатидилинозитол (SPI), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин (DOPC), димиристоилфосфатидилхолин (DMPC), дипальмитоилфосфатидилглицерин (DPPG), диолеоилфосфатидилглицерин (DOPG), димиристоилфосфатидилглицерин (DPPG), гексадецилфосфохолин (НЕРС), гидрогенизированный соевый фосфатидилхолин (HSPC), дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), дистеароилфосфатидилглицерин (DSPG), дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPE), пальмитоилстеароилфосфатидилхолин (PSPC), пальмитоилстеароилфосфатидилглицерин (PSPG), моноолеоилфосфатидилэтаноламин (МОРЕ), 1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин (РОРС), полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (PEG-DSPE), дипальмитоилфосфатидилсерин (DPPS), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилсерин (DOPS), димиристоилфосфатидилсерин (DMPS), дистеароилфосфатидилсерин (DSP), дипальмитоилфосфатидную кислоту (DPPA), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидную кислоту (DOPA), димиристоилфосфатидную кислоту (DMPA), дистеароилфосфатидную кислоту (DSPA), дипальмитоилфосфатидилинозитол (DPPI), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилинозитол (DOPI), димиристоилфосфатидилинозитол (DMPI), дистеароилфосфатидилинозитол (DSPI). Липиды могут представлять собой смеси одного или нескольких из вышеприведенных липидов либо смеси одного или нескольких из вышеприведенных липидов с одним или несколькими другими липидами, не приведенными выше.

В типичном воплощении липидная масса содержит смесь из двух фосфолипидов, таких как DOPC или DOPG. В другом воплощении липидная масса содержит смесь фосфолипидов, выбранных из группы, состоящей из DOPC, РОРС, SPC, ЕРС, PEG-DSPE, DOPG и холестерина. В другом воплощении липидная масса содержит смесь из первого фосфолипида и второго фосфолипида, причем первый фосфолипид представлен DOPC, РОРС, SPC или ЕРС, а второй фосфолипид представлен PEG-DSPE или DOPG. Различные примеры состава липидной массы приведены в U.S. Application No. 12/538435, положения которой включены сюда путем ссылки во всей полноте.

В типичном воплощении смесь в липидной массе включает DOPC, DOPG и холестерин в молярном соотношении 29,5-90%: 3-37,5%: 10-33%. В другом воплощении молярное соотношение DOPC: DOPG: холестерин составляет 56,25-72,5: 7,5-18,75: 20-25%. Для примера, но без ограничения, соотношение DOPC: DOPG: холестерин может составлять 67,5:7,5:25. В другом воплощении смесь в липидной массе содержит от 12 моль% до менее 30 моль% холестерина относительно липидной массы. В другом воплощении смесь в липидной массе содержит от 15 моль% до 29 моль% холестерина относительно липидной массы. В еще одном воплощении смесь в липидной массе содержит от 17,5 моль% до 28 моль% холестерина относительно липидной массы.

В следующем воплощении компонент, образующий частицы, свободен от жирных кислот или катионных липидов (т.е. липидов, несущих общий положительный заряд при физиологическом рН).

В другом воплощении компонент, образующий частицы, включает гидрофильный полимер с длинной цепочкой сильно гидратированного гибкого нейтрального полимера, прикрепленного к молекуле фосфолипида. Не придерживаясь какой-либо теории, полагаем, что гидрофильный полимер стабилизирует липосомы и приводит к увеличению времени циркуляции in vivo. Примеры гидрофильных полимеров включают, без ограничения, полиэтиленгликоль (PEG) с молекулярной массой от 2000 до 5000 дальтон, метокси-PEG (MPEG), ганглиозид GM₁, полисиаловую кислоту, полимолочную кислоту (также именуется полилактидом), полигликолевую кислоту (также именуется полигликолидом), полилакто-полигликолевую кислоту, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полиметоксазолин, полиэтилоксазолин, полигидроксиэтилоксазолин, полигидроксипропилоксазолин, полиаспартамид, полигидроксипропилметакриламид, полиметакриламид, полидиметакриламид, поливинилметиловый эфир, полигидроксиэтилакрилат, производные целлюлозы типа гидроксиметилцеллюлозы или гидроксиэтилцеллюлозы и синтетические полимеры.

Образующий частицы компонент может дополнительно содержать липидный конъюгат антитела или пептида, который действует в качестве направляющей молекулы, способствующей тому, чтобы липосомы могли специфически связываться с клетками мишени, несущими молекулы-мишени. Примеры таких молекул-мишеней включают, без ограничения, рецепторы фактора роста эпидермиса (EGFR), рецепторы фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF), карциноэмбриональный антиген (СЕА) и erbB-2/neu (HER2).

Липосомы, используемые при описанных здесь способах лечения артрита, могут быть получены стандартными методами, используемыми для получения везикул. Эти методы включают метод впрыскивания эфира (Deamer et al., Acad. Sci. (1978) 308: 250), метод детергентов (Brunner et al., Biochim. Biophys. Acta (1976) 455: 322), метод замораживания-оттаивания (Pick et al., Arch. Biochim. Biophys. (1981) 212: 186), метод испарения с обращением фаз (Szoka et al., Biochim. Biophys. Acta (1980) 601: 559-71), метод ультразвуковой обработки (Huang et al., Biochemistry (1969) 8: 344), метод впрыскивания этанола (Kremer et al., Biochemistry (1977) 16: 3932), метод экструзии (Hope et al., Biochim. Biophys. Acta (1985) 812: 55-65), метод пресса Френча (Barenholz et al., FEBS Lett. (1979) 99: 210) и методы, изложенные в Szoka F., Jr., et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9: 467 (1980). Во всех приведенных выше ссылках описаны процессы и стандартные технологии получения липосомных везикул, и описания этих процессов включены сюда путем ссылки.

В типичном воплощении терапевтическое средство инкапсулировано в несущем лекарственное средство компоненте липосом, причем несущий средство компонент включает практически водную среду, практически свободную от нейтральных липидов типа триглицеридов, неводную фазу (масляную фазу), эмульсии типа вода в масле или другие смеси, содержащие неводную фазу. Компонент, несущий лекарственное средство, включающий практически водную среду, обеспечивает более продолжительную терапевтическую эффективность и пролонгированный профиль высвобождения терапевтического средства в суставах. Напротив, терапевтическое средство, инкапсулированное в несущем средство компоненте, включающем практически неводную среду (напр., среду из соевого масла), имеет более быстрый профиль высвобождения и более короткую терапевтическую эффективность (Bias et al., Sustained-release dexamethasone palmitate - Pharmacokinetics and efficacy in patients with activated inflammatory osteoarthritis of the knee. Clin Drug Invest 2001, 21(6): 429-436).

В некоторых воплощениях липидная масса включает один или несколько липидов, не образующих липосомы. Липидная масса может быть получена путем растворения липидов в подходящем органическом растворителе, включая, без ограничения, этанол, метанол, трет-бутиловый спирт, эфир и хлороформ, и высушивания путем нагревания, упаривания под вакуумом, упаривания в атмосфере азота, лиофилизации или другого стандартного способа удаления растворителя.

После стерилизации липидный раствор смешивают с терапевтическим средством и лиофилизируют с образованием порошка или массы. Обычно для эффективной лиофилизации стероид-липидной смеси добавляют по меньшей мере один криопротектор и по меньшей мере один буфер.

Криопротекторы включают, без ограничения, маннит, глицерин, декстрозу, сахарозу и/или трегалозу. Одним из типичных криопротекторов является маннит.

Буферы включают, без ограничения, двухводный одноосновный фосфат натрия и безводный двухосновный фосфат натрия.

Ниже описаны некоторые примеры получения липидной массы для иллюстрации процессов получения липидной массы в той мере, как это имеет отношение к настоящему изобретению.

Терапевтические средства

Терапевтическим средством может быть растворимый стероид, нестероидный противовоспалительный препарат (NSAID) типа индометацина, модифицирующий заболевание противоревматический препарат (DMARD) либо комбинация из двух или нескольких из вышеприведенных, а также комбинация одного или нескольких из вышеприведенных с другими ингредиентами или соединениями, не приведенными здесь конкретно. DMARDs включают средства типа небольших молекул, такие как метотрексат, лефлуномид, сульфасалазин, циклофосфамид, азатиоприн, циклоспорин A, d-пеницилламин, противомалярийные препараты (напр., гидроксихлорохин). DMARDs также включают такие биологические вещества, как антагонисты α-фактора некроза опухолей (TNF-α) (напр., этанерцепт - торговая марка Enbrel, коммерчески доступный от Wyeth Pharmaceuticals, Inc., Collegeville, USA, и адалимумаб - торговая марка HUMIRA, коммерчески доступный от Abbott Laboratories, Abbott Park, Illinois, USA), антагонисты рецепторов интерлейкина-1, антагонисты рецепторов интерлейкина-6, моноклональные антитела против CD20, CTLA-4-Ig, пептид RGD и др.

В типичном воплощении терапевтическим средством является практически водорастворимый стероид типа DSP. В другом типичном воплощении терапевтическим средством является практически водорастворимый NSAID типа фармацевтически приемлемой соли индометацина. В следующем типичном воплощении терапевтическим средством является практически водорастворимый DMARD типа фармацевтически приемлемой соли метотрексата либо антагонист TNF-α. В следующем типичном воплощении терапевтическое средство нековалентно связано с фосфолипидом или жирной кислотой типа пальмитата.

Терапевтическое средство или средства можно сочетать с фармацевтически приемлемыми наполнителями и другими ингредиентами, пригодными для фармацевтических форм (которые включают лекарственные формы для людей и животных и формы для исследований, экспериментов и тому подобных целей). В некоторых воплощениях используется цитратный буфер, предпочтительно цитрат натрия. В других воплощениях используется хелатирующий агент, предпочтительно ЭДТА.

Водорастворимые стероиды включают любые природные стероидные гормоны, синтетические стероиды и их производные. Водорастворимые стероиды включают, без ограничения, кортизон, гидрокортизон, преднизолон, метилпреднизолон, преднизон, дексаметазон фосфат натрия (DSP), гидрокортизон-17-валерат, фторкортизон, флудрокортизон, метилпреднизолон, параметазон и эплеренон. В одном примере, без ограничения, водорастворимым стероидом является DSP. Например, можно использовать раствор от 2 до 100 мг/мл DSP для реконструирования липидной массы.

Фармацевтически приемлемые соли водорастворимых стероидов включают нетоксичные соли, образованные из нетоксичных неорганических или органических оснований. Например, нетоксичные соли могут быть образованы с неорганическими основаниями, такими как гидроксиды щелочных или щелочноземельных металлов, напр., калия, натрия, лития, кальция или магния, либо с органическими основаниями, такими как амины и т.п.

Фармацевтически приемлемые соли водорастворимых стероидов также включают нетоксичные соли, образованные из нетоксичных неорганических или органических кислот. Примеры органических и неорганических кислот - соляная, серная, фосфорная, уксусная, янтарная, лимонная, молочная, малеиновая, фумаровая, пальмитиновая, холевая, памовая, муциновая, D-глутаминовая, глутаровая, гликолевая, фталевая, винная, лауриновая, стеариновая, салициловая, сорбиновая, бензойная кислота и т.п.

Композиции с замедленным высвобождением

Композиции с замедленным высвобождением, используемые в описанных здесь способах лечения артрита, практически свободны от суспензии кристаллов. В типичном воплощении, в композиции с замедленным высвобождением содержится менее 0,1% суспензии кристаллов. В другом воплощении в композиции с замедленным высвобождением нет суспензии кристаллов. Приведенные здесь композиции с замедленным высвобождением включают липосомы, причем липосомы содержат фосфолипид или смесь фосфолипидов, холестерин и одно или несколько терапевтическое средств, при этом липосомы находятся в водной суспензии. Композиции с замедленным высвобождением могут быть получены путем реконструирования лиофилизированной липидной массы, содержащей один или несколько фосфолипидов и холестерин, с водным раствором, содержащим одно или несколько терапевтических средств, с образованием водной суспензии. Композиции с замедленным высвобождением также могут быть получены путем реконструирования лиофилизированной комбинации из одного или нескольких терапевтических средств и липидной массы, содержащей один или несколько фосфолипидов и холестерин, с водным раствором с образованием водной суспензии. В некоторых типичных воплощениях липидная масса в основном состоит из одного или нескольких фосфолипидов и холестерина в качестве липидных компонентов. Подходящие водные растворы или среды для реконструирования включают, без ограничения, буфера, дистиллированную воду, физраствор, раствор сахара, к примеру, раствор декстрозы и т.п. В других типичных воплощениях липидная масса в основном состоит из липидов фосфатидилхолина, фосфатидилглицерина и холестерина. В других типичных воплощениях липидная масса может содержать (наряду с липидами фосфатидилхолином, фосфатидилглицерином и холестерином) консерванты, криопротекторы либо их комбинации. Также предусмотрены композиции с замедленным высвобождением, содержащие липосомы, причем липосомы содержат фосфолипид или смесь фосфолипидов, холестерин и антагонист TNF-α, к примеру, этанерцепт или адалимумаб, при этом липосомы находятся в водной суспензии. Также предусмотрены лиофилизированные формы таких композиций.

В некоторых воплощениях композиции с замедленным высвобождением дополнительно содержат по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель, разбавитель, растворитель, носитель, среду для активного ингредиента, консервант, криопротектор либо их комбинации.

В типичном воплощении композиции с замедленным высвобождением по настоящему изобретению получают путем приготовления липидной массы и реконструирования ее с терапевтическим средством с образованием водной суспензии.

В другом воплощении композиции с замедленным высвобождением по настоящему изобретению получают путем добавления терапевтического средства в липидную смесь во время приготовления липидной массы, а затем лиофилизации совокупности липидной массы и терапевтического средства с одним или несколькими криопротекторами с образованием порошка.

В типичном воплощении композиция с замедленным высвобождением содержит водорастворимый стероид в количестве, эквивалентном дозе от 2 мг до 8 мг дексаметазона. Например, дозировка в 4 мг DSP в композиции с замедленным высвобождением эквивалентна дозировке в 3 мг дексаметазона. Дозировка в 10 мг DSP в композиции с замедленным высвобождением эквивалентна дозировке в 7,6 мг дексаметазона. Точно так же дозировка в 40 мг метилпреднизолона ацетата эквивалентна дозировке в 7,5 мг дексаметазона.

Описанные здесь композиции с замедленным высвобождением могут применяться для лечения субъектов, страдающих артритом, как-то ревматоидным артритом.

В типичном воплощении от 50% до 95% терапевтического средства в композиции с замедленным высвобождением находится в несвязанной форме (то есть от 5% до 50% терапевтического средства находится в связанной форме). В другом воплощении 60-90% терапевтического средства в композиции с замедленным высвобождением находится в несвязанной форме. Термин "терапевтическое средство в несвязанной форме" относится к таким терапевтическим молекулам, которые можно выделить методом гель-фильтрации из фракции фосфолипида/холестерина у композиции с замедленным высвобождением.

В другом воплощении весовое соотношение фосфолипида и холестерина при сочетании с терапевтическим средством составляет 5-80 к 1. В следующем воплощении весовое соотношение фосфолипида и холестерина при сочетании с терапевтическим средством составляет 5-40 к 1. Например, весовое соотношение фосфолипида и холестерина при сочетании с терапевтическим средством может составлять 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 или 80 к 1.

Способы лечения артрита

Изобретение касается способов лечения артрита у субъектов, которые включают введение эффективного количества композиции с замедленным высвобождением, как описано выше, нуждающимся в этом субъектам, при этом у субъектов уменьшаются симптомы и/или признаки артрита.

Композиции с замедленным высвобождением составляются так, чтобы они подходили для IA, внутримышечного или подкожного введения. Внутрисуставное введение включает следующие стадии: 1) определение и маркировка надлежащего места инъекции в подлежащий лечению сустав; 2) стерилизация места инъекции асептическим методом и необязательно обеспечение местной анестезии; 3) ввод иглы в место инъекции в полости сустава; ввод иглы может необязательно выполняться под ультразвуковым контролем; отсасывается небольшое количество синовиальной жидкости, чтобы убедиться, что кончик иглы находится в полости сустава; 4) введение препарата в полость сустава.

Дозировка композиций с замедленным высвобождением по настоящему изобретению может быть определена специалистом в соответствии с воплощениями. Предусмотрены стандартные дозы или множественные дозовые формы, каждая из которых дает преимущества в определенных клинических условиях. В соответствии с настоящим изобретением, фактическое количество вводимой композиции с замедленным высвобождением может варьироваться в соответствии с возрастом, весом, состоянием подлежащего лечению субъекта, типа сустава и находится на усмотрении специалистов в области медицины.

Доза DSP для IA инъекций зависит от состояния пациента и размера сустава. В типичном воплощении доза DPS составляет от 0,2 мг до 6 мг на одну IA инъекцию. В другом типичном воплощении доза DPS составляет от 2 до 4 мг на одну IA инъекцию для больших суставов типа коленного сустава. В следующем типичном воплощении доза DSP составляет от 0,8 до 1 мг на одну IA инъекцию для небольших суставов типа межфаланговых суставов.

В типичном воплощении доза индометацина на одну IA инъекцию составляет от 5 мг до 30 мг. В другом типичном воплощении доза индометацина на одну IA инъекцию составляет от 10 до 25 мг. В следующем типичном воплощении доза индометацина на одну IA инъекцию составляет от 15 до 20 мг.

В типичном воплощении доза метотрексата на одну IA инъекцию составляет от 1 мг до 15 мг. В другом типичном воплощении доза метотрексата на одну IA инъекцию составляет от 5 мг до 12,5 мг. В следующем типичном воплощении доза метотрексата на одну IA инъекцию составляет от 7,5 мг до 10 мг.

Частота IA введения колеблется от ежедневного, раз в три-пять дней, раз в неделю или раз в две-три недели.

Следующие примеры служат для дальнейшего раскрытия настоящего изобретения и в то же время не составляют каких-либо его ограничений. Напротив, следует четко понимать, что можно прибегать к различным его воплощениям, модификациям и эквивалентам, которые, после прочтения настоящего описания, могут представиться специалистам в данной области, не отступая от сущности изобретения. В ходе исследований, описанных в следующих примерах, выполнялись стандартные методики, если не указано иначе. Некоторые из методик описаны ниже с целью иллюстрации.

Приведенные здесь публикации и материалы, в отношении которых они приводятся, включены сюда конкретно путем ссылки во всей полноте. Описан целый ряд воплощений. Тем не менее, следует иметь в виду, что можно делать различные модификации. Соответственно, другие воплощения должны находиться в рамках нижеследующей формулы изобретения.

Примеры

Пример 1. Приготовление липидной массы

Липидную массу готовили методом впрыска растворителя. Липиды, включая DOPC, DOPG и холестерин, смешивали при молярном соотношении 67,5:7,5:25 и растворяли в 99,9% этаноле при 40°С в колбе. Для растворения липидов использовали настольную ультразвуковую ванну.

Раствор растворенных липидов вносили в 1,0 мМ раствор фосфата натрия при 100 мл/мин с помощью перистальтического насоса и смешивали оба раствора. Затем смесь липидов пропускали 6-10 раз через поликарбонатную мембрану с размером пор 0,2 мкм. Образовались липосомы (или крупные многослойные везикулы (MLVs), а средний диаметр везикул составил 120-140 нм (измеряли с помощью Malvern Zetasizer Nano ZS-90, Malvern Instruments Ltd., Worcestershire, UK).

Липосомную смесь диализировали и концентрировали с помощью тангенциальной фильтрационной системы с модулем Millipore Pellicon 2 Mini Ultrafiltration Module Biomax-100C (0,1 м²) (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), а затем стерилизировали с помощью стерильного фильтра на 0,2 мкм.

Концентрацию липидов у отфильтрованной липосомной смеси определяли по фосфору, а липосомную смесь составляли вместе с криопротектором и 2% маннита, а затем опять стерилизировали с помощью стерильного фильтра на 0,2 мкм. Затем простерилизованную липосомную смесь асептически заполняли во флаконы для лиофилизации.

Пример 2. Получение композиций DSP с замедленным высвобождением

Композицию с замедленным высвобождением получали путем смешивания липосомной смеси, описанной в примере 1, с раствором DSP, содержащим DSP (13,2 мг/мл) и цитрат натрия (4 мг/мл), с последующей лиофилизацией.

Лиофилизованную массу DSP-липосомы реконструировали с помощью 300 мкл физраствора, при этом концентрация DSP составляла 6,6 мг/мл. Лиофилизованную массу DSP-липосомы дополнительно разбавляли физраствором, получая композиции с замедленным высвобождением, приведенные в таблице 1, при этом концентрация DSP составляла 1 мг/мл в композиции с замедленным высвобождением №1 и 1,4 мг/мл в композиции с замедленным высвобождением №2.

Пример 3. Однократное введение композиций с замедленным высвобождением для лечения артрита

Оценка эффекта композиций с замедленным высвобождением на артрит in vivo проводилась на крысах Lewis. В исследовании использовали 16 самок крыс в возрасте 8 недель. Средний вес тела крыс составлял от 180 до 200 г.

Для индуцирования артрита каждую крысу иммунизировали с помощью 200 мкг бычьего коллагена типа II (исходный раствор: 4 мг/мл в 10 мМ уксусной кислоты, коммерчески доступный от Elastin Products, Owensville, USA), эмульгированного в неполном адъюванте Фрейнда (коммерчески доступном от Sigma Chemical Co., USA) в день 0, а затем опять в день 7. На 16-й день впервые наблюдались симптомы артрита, поэтому он был установлен как начало возникновения индуцированного артрита.

Все крысы в экспериментальном исследовании имели свободный доступ к питьевой воде и корму на протяжении всего исследования.

Крыс случайным образом разбивали на следующие 4 опытные группы:

группа 1: все 4 крысы получали по 100 мкл физраствора на 1 лапу (отмечены как "Контроль на физраствор" на фиг. 1-8);

группа 2: все 4 крысы получали по 100 мкл свободного DSP на 1 лапу, при этом концентрация DSP составляла 1 мг/мл (отмечены как "Свободный DSP_1 мг/мл" на фиг. 1-8);

группа 3: все 4 крысы получали по 100 мкл композиции с замедленным высвобождением №1 на 1 лапу, при этом концентрация DSP составляла 1 мг/мл (отмечены как "TLC399_1 мг/мл" на фиг. 1-4 и "TLC399_I_1 мг/мл" на фиг. 5-8);

группа 4: все 4 крысы получали по 100 мкл композиции с замедленным высвобождением №2 на 1 лапу, при этом концентрация DSP составляла 1,4 мг/мл (отмечены как "TLC399_1,4 мг/мл" на фиг. 1-4 и "TL399_II_1,4 мг/мл" на фиг. 5-8).

Контроль или композицию DSP вводили в обе задние лапы крыс в виде однократной IA инъекции в день 19. Дозы DSP, вводимые в каждую лапу, представлены в таблице. 2.

В течение 14-дневного периода исследования крыс обследовали 3 раза в неделю по следующим параметрам:

- потеря массы тела, которая является одним из параметров оценки тяжести артрита;

- клинический визуальный показатель артрита, который является визуальным показателем, коррелирующим с тяжестью артрита; его оценивали по суставному индексу у каждой лапы в баллах от 0 до 4 (0 = нет отека или эритемы на подушечке лапы, 1 = незначительный отек и эритема на подушечке лапы, 2 = слабый отек и эритема на подушечке лапы, 3 = умеренный отек и эритема по всей подушечке лапы и лодыжке, 4 = сильный отек и жесткость суставов лодыжки, стопы и пальцев); клинический визуальный показатель артрита для каждой крысы - это сумма суставных индексов у обеих задних лап, с максимальным показателем 8 баллов;

- объем и отечность задних лап; объем задних лап измеряли с помощью измерительной системы UGO Plethysmometer 7149. Данные по конечному объему приводили к средней массе тела (мл/кг), а отек определяли как увеличение объема лапы в день измерения относительно дня 0.

Результаты

На фиг. 1 представлены изменения веса тела у 4 групп крыс. Потеря массы тела наблюдалась на 16-й день у всех 4 групп крыс, что совпадало с началом артрита. Потеря массы тела продолжалась и с 16-го по 19-й день.

После IA инъекции на 19-й день наблюдалась более выраженная потеря массы в группах композиции с замедленным высвобождением №1 и композиции с замедленным высвобождением №2 по сравнению с группами, получавшими физраствор и свободный DSP. Потеря веса могла быть вызвана потерей аппетита, известным побочным эффектом стероидов. Поскольку DSP выделялся из композиций с замедленным высвобождением с меньшей скоростью, то побочный эффект стероидов (потеря аппетита) и длился дольше. Поэтому более заметная потеря веса наблюдалась в группах, получавших композиции с замедленным высвобождением.

На фиг. 2 представлены изменения клинического визуального показателя артрита у 4 групп крыс. Перед IA введением средний балл составлял 3,75 у группы физраствора, 4,0 у группы свободного DSP и группы композиции с замедленным высвобождением №2 и 4,25 у группы композиции с замедленным высвобождением №1.

Через 24 часа после IA введения инъекции показатель упал ниже 1 балла у всех групп, за исключением группы физраствора.

У группы свободного DSP показатель медленно повышался через 48 часов после IA введения. Симптомы артрита стали более тяжелыми и показатель достигал 4,5 баллов на 26-й день.

Крысы в группах композиции с замедленным высвобождением №1 и композиции с замедленным высвобождением №2 не проявляли никаких признаков артрита в течение следующих 4 дней, а показатель равнялся 0 на 23-й и 24-й день. На 26-й день у трех крыс в группе композиции с замедленным высвобождением №1 возникли симптомы слабого артрита со средним показателем в 1,5 балла, тогда как ни одна крыса в группе композиции с замедленным высвобождением №2 не проявляла каких-либо симптомов рецидива, а показатель оставался равным 0. Крысы в группе свободного DSP на 26-й день проявляли симптомы тяжелого артрита с показателем в 4,5 балла. На 30-й день у крыс в группе композиции с замедленным высвобождением №1 развился тяжелый артрит с показателем выше 4 баллов, тогда как у крыс в группе композиции с замедленным высвобождением №2 наблюдался слабый артрит с показателем в 1,5 балла.

Обратимся к фиг. 3 и фиг. 4: после IA введения на 19-й день отечность лап уменьшилась во всех 4 группах на 20-й день. Временное снижение отечности лап в группе физраствора могло быть вызвано разбавлением воспалительных факторов физраствором в суставах.

У группы свободного DSP эффект IA введения длился в течение 3 дней. На 23-й день обе лапы снова опухли, с плотностью около 7,5 мл/кг.

У группы композиции с замедленным высвобождением №1 отечность лап значительно уменьшилась в течение следующих 4 дней. Обе лапы снова опухли на 25-й день, а плотность составила около 7,5 мл/кг.

У группы композиции с замедленным высвобождением №2 отечность лап значительно уменьшилась в течение следующих 10 дней. Обе лапы снова опухли примерно на 34-й день, а плотность составила более 8 мл/кг для правой лодыжки и 7,5 мл/кг для левой лодыжки.

Описанное выше исследование привело к заключению, что однократное IA введение композиций с замедленным высвобождением оказалось более эффективным при лечении артрита у экспериментальных животных, чем свободного DSP.

Пример 4. Многократное введение композиций с замедленным высвобождением для лечения артрита

Схема этого исследования практически аналогична схеме исследования, описанного в примере 3, за исключением того, что (а) не было контрольной группы физраствора; и (b) исследуемые препараты вводили посредством IA инъекций раз в день на протяжении 4 дней (с 26-го по 29-й день).

Результаты

На фиг. 5 представлены изменения веса тела у 3 групп крыс (группа свободного DSP, группа композиции с замедленным высвобождением №1 и группа композиции с замедленным высвобождением №2). Потеря массы тела наблюдалась на 24-й день у всех 3 групп крыс, что совпадало с началом возникновения артрита.

После IA введения с 26-го по 29-й день наблюдалась более выраженная потеря массы у 3 групп. Как уже сказано в примере 3, потеря массы могла быть вызвана потерей аппетита, известным побочным эффектом стероидов.

На фиг. 6 представлены изменения клинического визуального показателя артрита у 3 групп крыс. Перед IA введением средний показатель составлял от 4,5 до 4,7 баллов.

У группы свободного DSP этот показатель упал до 3 баллов на 30-й день, наименьшего балла в этом исследовании. Признаки артрита скоро возобновились и стали серьезными на 33-й день.

У группы композиции с замедленным высвобождением №1 и группы композиции с замедленным высвобождением №2 показатель артрита продолжал уменьшаться после окончания лечения на 29-й день и оставался равным нулю (0) до 37-го дня. В группе композиции с замедленным высвобождением №1 крысы впервые проявили признаки рецидива на 40-й день, тогда как в группе композиции с замедленным высвобождением №2 крысы впервые проявили признаки рецидива на 42-й день.

Обратимся к фиг. 7 и фиг. 8: отечность лап уменьшилась в обеих лапах во всех 3 группах после 4 ежедневных IA инъекций. У группы свободного DSP эффект от IA введения длился в течение 1-2 дней. На 31-й день лапы снова опухли, достигая пика на 40-й день.

У групп композиций с замедленным высвобождением опухание лап значительно снижалось в течение следующих 14 дней. В группе композиции с замедленным высвобождением №1 первые признаки опухания лап отмечались на 40-й день, тогда как в группе композиции с замедленным высвобождением №2 первые признаки опухания лап отмечались на 42-й день.

Описанное выше исследование привело к заключению, что 4 ежедневые IA инъекции DSP с замедленным высвобождением оказались эффективными для лечения артрита у экспериментальных животных.

Пример 5. Композиция с замедленным высвобождением индометацина

Индометацин натрия (Hubei Heng Lu Yuan Technology Co., Ltd., Hubei, Китай) растворяли в физрастворе до конечной концентрации 5 мг/мл. Лиофилизованную липосомную смесь, описанную в примере 1, реконструировали вместе с 0,3 мл раствора индометацина, получая композицию с замедленным высвобождением индометацина в реконструированном объеме 0,3 мл на ампулу, при конечной концентрации 5 мг/мл INN, 71 мг/мл DOPC, 8 мг/мл DOPG, 13 мг/мл холестерина и 50 мг/мл маннита.

Пример 6. Модель коллаген-индуцированного артрита у животных при экспериментальном исследовании композиции с замедленным высвобождением индометацина

Исследование влияния на артрит композиции с замедленным высвобождением индометацина in vivo проводили на 18 самках крыс Lewis (BioLASCO Taiwan Co., Ltd., Taiwan). Схема исследования и индуцирование артрита у крыс были практически аналогичны таковым из исследования в примере 3.

Лечение артрита начинали на пике клинического визуального показателя артрита, что происходило на 19-й день. Восемнадцать крыс случайным образом разбивали на три группы (по 6 крыс в каждой группе): (1) контрольная группа (без какого-либо лечения, отмечена как "Контроль" на фиг. 9); (2) группа свободного индометацина (в дозе 2 мг/кг, отмечена как "Индометацин (2 мг/кг)" на фиг. 9) и (3) группа композиции с замедленным высвобождением индометацина (в дозе 2 мг/кг; отмечена как "Индометацин-BioSeizer (2 мг/кг)" на фиг. 9). Крысы в этих группах либо не получали никакого лечения (контрольная группа), либо получали ежедневные подкожные инъекции свободного индометацина или композиции с замедленным высвобождением индометацина вокруг пораженных артритом суставов, с 19-го по 23-й день. Дозы индометацина во вводимых композициях приведены в таблице 4.

Крысы в этом исследовании набирали вес с начала исследования, достигая пика на 12-й день. Вес тела уменьшался во всех трех группах крыс по мере появления признаков артрита. Показатель артрита достигал максимума на 18-й день, при среднем показателе артрита между 7,2-7,4 баллами, как видно из фиг. 9b.

С 19-го по 23-й день симптомы артрита уменьшались в группах 2 и 3. В группе 2 (группа свободного индометацина) средний показатель артрита упал с 7,4 до 5 баллов, с улучшением двигательной функции и увеличением гибкости коленного сустава на 20-й день. На 25-й день, через 2 дня после прекращения терапии индометацином, признаки артрита (как-то скованность, отечность и эритематоз суставов) возобновились, и показатель артрита достигал 8 баллов.

В группе 3 (группа композиции с замедленным высвобождением индометацина) средний показатель артрита уменьшался с 7,6 до 5,8 баллов на 20-й день. Показатель артрита оставался меньше 7 баллов до 29-го дня при длительной эффективности лечения после прекращения курса лечения. На 30-й день симптомы артрита у группы 3 снова стали серьезными.

Таким образом, за время 5-дневного лечения свободным индометацином (группа 2) или композицией с замедленным высвобождением индометацина (группа 3) симптомы артрита значительно улучшались в обеих группах. Признаки артрита возобновлялись через 2 дня после прекращения лечения свободным индометацином в группе 2, тогда как в группе 3 облегчение признаков артрита продолжалось в течение 6 дней после прекращения лечения. Результаты исследования, приведенные выше, приводят к заключению, что композиция с замедленным высвобождением индометацина сохраняет эффективность индометацина в суставах в течение более длительного времени, чем свободный индометацин.

Пример 7. Композиция с замедленным высвобождением этанерцепта

Лиофилизованную липосомную смесь, описанную в примере 1, реконструировали вместе с 0,3 мл Enbrel (этанерцепт 50 мг/мл, коммерчески доступный от Wyeth Pharmaceuticals, Inc., Collegeville, USA), получая композицию с замедленным высвобождением этанерцепта в реконструированном объеме 0,3 мл на ампулу. Конечные концентрации липидов и этанерцепта в композиции с замедленным высвобождением этанерцепта: 42,8 мг/мл этанерцепта, 70,7 мг/мл DOPC, 8 мг/мл DOPG, 13 мг/мл холестерина и 50 мг/мл маннита.

Пример 8. Модель коллаген-индуцированного артрита у животных при экспериментальном исследовании композиции с замедленным высвобождением этанерцепта

Исследование влияния на артрит композиции с замедленным высвобождением этанерцепта in vivo проводили на 18 самках крыс Lewis (BioLASCO Taiwan Co., Ltd., Taiwan). Схема исследования и индуцирование артрита у крыс были практически аналогичны таковым из исследования в примере 3, только бычий коллаген II типа вводили в день 0, день 7 и день 17.

Лечение артрита начинали на пике клинического визуального показателя артрита, что происходило на 23-й день. Восемнадцать крыс случайным образом разбивали на три группы (по 6 крыс в каждой группе): (1) контрольная группа (без какого-либо лечения, отмечена как "Контроль" на фиг. 10); (2) группа свободного этанерцепта (в дозе 50 мг/кг, отмечена как "Enbrel (50 мг/кг)" на фиг. 10) и (3) группа композиции с замедленным высвобождением индометацина (в дозе 50 мг/кг; отмечена как "Enbrel-BioSeizer (50 мг/кг)" на фиг. 10). Крысы в этих группах либо не получали никакого лечения, либо получали 2 подкожные инъекции свободного этанерцепта или композиции с замедленным высвобождением этанерцепта вокруг пораженных артритом суставов, на 23-й и 26-й день. Дозы этанерцепта во вводимых композициях приведены в таблице 5.

Крысы в этом исследовании приобретали признаки артрита вскоре после иммунизации коллагеном II типа, которые достигали пика на 23-й день, при среднем показателе артрита от 3,6 до 3,8 баллов, как видно из фиг. 10.

Во время периода лечения (с 23-го по 26-й день) признаки артрита уменьшались в группах, получавших лечение (группы 2 и 3). В группе 2 (группа свободного этанерцепта) средний показатель артрита упал до 2,4 баллов на 26-й день, но артрит возобновился через 3 дня после прекращения свободного этанерцепта. На 30-й день показатель артрита достигал 4 баллов и крысы стали неподвижными из-за опухания и жесткости суставов.

В группе 3 (группа композиции с замедленным высвобождением этанерцепта) средний показатель артрита уменьшался до 2,2 баллов на 26-й день и оставался меньше 2,5 баллов до 32-го дня. На 33-й день симптомы артрита у группы 3 снова стали серьезными.

Таким образом, за время 4-дневного лечения свободным этанерцептом (группа 2) или композицией с замедленным высвобождением этанерцепта (группа 3) симптомы артрита значительно улучшались в обеих группах. Признаки артрита возобновлялись после отмены свободного этанерцепта в группе 2, тогда как в группе 3 облегчение признаков артрита продолжалось в течение 5 дней после прекращения лечения. Результаты экспериментального исследования, приведенные выше, приводят к заключению, что композиция с замедленным высвобождением этанерцепта сохраняет эффективность этанерцепта в суставах в течение более длительного времени, чем свободный этанерцепт.

Пример 9. Композиция с замедленным высвобождением метотрексата

Лиофилизованную липосомную смесь, описанную в примере 1, реконструировали вместе с 0,3 мл метотрексата натрия (Pharmachemie BV, Inc.), получая композицию с замедленным высвобождением метотрексата в реконструированном объеме 0,3 мл на ампулу. Конечные концентрации липидов и этанерцепта в композиции с замедленным высвобождением метотрексата: 2,5 мг/мл метотрексата, 70,7 мг/мл DOPC, 8 мг/мл DOPG, 13 мг/мл холестерина и 50 мг/мл маннита.

Пример 10. Модель коллаген-индуцированного артрита у животных при экспериментальном исследовании композиции с замедленным высвобождением метотрексата

Исследование влияния на артрит композиции с замедленным высвобождением метотрексата in vivo проводили на 18 самках крыс Lewis (BioLASCO Taiwan Co., Ltd., Taiwan). Схема исследования и индуцирование артрита у крыс были практически аналогичны таковым из исследования в примере 3, только бычий коллаген II типа вводили в день 0, день 7 и день 17.

Лечение артрита начинали на пике клинического визуального показателя артрита, что происходило на 23-й день. Восемнадцать крыс случайным образом разбивали на три группы (по 6 крыс в каждой группе): (1) контрольная группа (без какого-либо лечения, отмечена как "Контроль" на фиг. 11а); (2) группа свободного метотрексата (в дозе 1 мг/кг, отмечена как "Метотрексат (1 мг/кг)" на фиг. 11а) и (3) группа композиции с замедленным высвобождением метотрексата (в дозе 1 мг/кг; отмечена как "Метотрексат-BioSeizer (1 мг/кг)" на фиг. 11а). Крысы в этих группах либо не получали никакого лечения (контрольная группа), либо получали 2 подкожные инъекции свободного метотрексата или композиции с замедленным высвобождением метотрексата вокруг пораженных артритом суставов, на 23-й и 26-й день. Дозы метотрексата во вводимых композициях приведены в таблице 6.

С 23-го по 26-й день симптомы артрита уменьшались в группах 2 и 3. В группе 2 (группа свободного метотрексата) средний показатель артрита упал с 3,7 до 1,4 баллов на 26-й день. На 30-й день, через 4 дня после прекращения лечения метотрексатом, крысы становились гипоактивными, а показатель артрита достигал 3,5 баллов.

В группе 3 (группа композиции с замедленным высвобождением метотрексата) средний показатель артрита уменьшался с 3,4 до 1,6 баллов на 26-й день. Показатель артрита оставался около 2 баллов до 35-го дня, а после этого возрастал.

Таким образом, лечение метотрексатом приводило к улучшению симптомов артрита в группах 2 и 3. Признаки артрита возобновлялись через 4 дня после отмены свободного метотрексата в группе 2, тогда как в группе 3 облегчение признаков артрита продолжалось в течение 9 дней после прекращения лечения. Результаты экспериментального исследования, приведенные выше, приводят к заключению, что композиция с замедленным высвобождением метотрексата сохраняет эффективность метотрексата в суставах в течение более длительного времени, чем свободный метотрексат.

Возможны различные расстановки и комбинации описанных здесь элементов и признаков. К тому же некоторые признаки и субкомбинации применимы и могут применяться вне связи с другими признаками и субкомбинациями. Например, если способ изложен и обсужден и приведен ряд модификаций, которые могут быть сделаны в отношении композиции, включенной в способ, то специально предусмотрены и всевозможные комбинации и перестановки способа, а также и возможные модификации, если специально не указано обратное. Кроме того, специально предусмотрены и описаны также и любые их подмножества или сочетания. Были описаны различные воплощения изобретения, выполняющие различные цели изобретения. Следует иметь в виду, что эти воплощения служат только для иллюстрации принципов настоящего изобретения. Специалистам в данной области должны быть очевидны различные их модификации и адаптации, не отходящие от сущности и не выходящие за рамки настоящего изобретения.

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для лечения артрита. Для этого вводят композицию с замедленным высвобождением, включающую липидную массу, содержащую смесь первого фосфолипида, второго фосфолипида и холестерина, в которой первый фосфолипид DOPC, РОРС, SPC или EPC, второй фосфолипид PEG-DSPE или DOPG и холестерин присутствует в количестве от 10 до 33 мол.% относительно липидной массы; и одно или несколько терапевтических средств для лечения артрита, при этом композиция с замедленным высвобождением является вводимой внутрисуставно. Изобретение позволяет уменьшить признаки и/или симптомы артрита у субъекта, продолжительному снятию боли при менее частых инъекциях. 17 з.п. ф-лы, 5 табл., 11 ил., 10 пр.

1. Композиция с замедленным высвобождением для применения при изготовлении лекарственного средства для лечения артрита, включающая:

липидную массу, содержащую смесь первого фосфолипида, второго фосфолипида и холестерина, в которой первый фосфолипид DOPC, РОРС, SPC или EPC, второй фосфолипид PEG-DSPE или DOPG и холестерин присутствует в количестве от 10 до 33 мол.% относительно липидной массы; и

одно или несколько терапевтических средств для лечения артрита,

при этом композиция с замедленным высвобождением является вводимой внутрисуставно.

2. Композиция с замедленным высвобождением по п. 1, которая получена путем реконструирования лиофилизованной липидной массы с водным раствором, содержащим одно или несколько терапевтических средств для лечения артрита, с образованием водной суспензии.

3. Композиция с замедленным высвобождением по п. 1, которая получена путем реконструирования лиофилизованной комбинации из одного или нескольких терапевтических средств для лечения артрита и липидной массы с водным раствором с образованием водной суспензии.

4. Композиция с замедленным высвобождением по п. 1, в которой молярное соотношение DOPC:DOPG:холестерин липидной массы составляет 29,5-90:3-37,5:10-33.

5. Композиция с замедленным высвобождением по п. 1, в которой молярное соотношение DOPC:DOPG:холестерин липидной массы составляет 56,25-72,5:7,5-18,75:20-25.

6. Композиция с замедленным высвобождением по п. 1, в которой терапевтическое средство для лечения артрита включает раствор водорастворимого стероида, содержащий эффективное количество водорастворимого стероида или его фармацевтически приемлемой соли.

7. Композиция с замедленным высвобождением по п. 6, в которой водорастворимым стероидом является дексаметазон фосфат натрия.

8. Композиция с замедленным высвобождением по п. 6, в которой раствор водорастворимого стероида обладает активностью, эквивалентной дозе от 2 до 8 мг дексаметазона.

9. Композиция с замедленным высвобождением по п. 1, в которой терапевтическое средство для лечения артрита включает нестероидное противовоспалительное средство или его фармацевтически приемлемую соль.

10. Композиция с замедленным высвобождением по п. 9, в которой нестероидным противовоспалительным средством является индометацин.

11. Композиция с замедленным высвобождением по п. 10, в которой фармацевтически приемлемой солью индометацина является индометацин натрия.

12. Композиция с замедленным высвобождением по п. 9, в которой доза нестероидного противовоспалительного средства или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 4,65 до 5 мг/мл.

13. Композиция с замедленным высвобождением по п. 1, в которой терапевтическое средство для лечения артрита представляет собой модифицирующий заболевание противоревматический препарат (DMARD).

14. Композиция с замедленным высвобождением по п. 13, в которой DMARD представляет собой антагонист TNF-α, или метотрексат, или их фармацевтически приемлемую соль.

15. Композиция с замедленным высвобождением по п. 14, в которой антагонистом TNF-α является этанерцепт или Humira.

16. Композиция с замедленным высвобождением по п. 15, в которой доза этанерцепта составляет от 42,8 до 50 мг/мл.

17. Композиция с замедленным высвобождением по п. 14, в которой фармацевтически приемлемой солью метотрексата является метотрексат натрия.

18. Композиция с замедленным высвобождением по п. 14, в которой доза метотрексата или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 2,3 до 2,5 мг/мл.