ПРОИЗВОДНОЕ ЦИКЛИЧЕСКОГО АМИНА В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА СТИМУЛИРОВАНИЯ ДЕЙСТВИЯ АДВИЛЛИНА И НОВОЕ ПРОИЗВОДНОЕ ЦИКЛИЧЕСКОГО АМИНА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В ФАРМАЦЕВТИКЕ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/454 A61K31/496 A61K31/5377 A61P25/02 A61P3/00 A61P43/00 C07D401/06 

Область техники, к которой относится изобретение

[0001]

Настоящее изобретение относится к производному циклического амина в качестве средства стимулирования действия адвиллина и новому производному циклического амина и его применению в фармацевтике.

Уровень техники

[0002]

Адвиллин в основном экспрессируется в периферических нервах и играет значительную роль в роста аксонов (непатентная литература 1 и 2). Установлено, что у мышей с дефицитом адвиллина имеется дисфункция роста аксонов при регенерации рефлекторной дуги и они обладают более короткими аксонами (непатентная литература 2). Кроме того, если у мышей с дефицитом адвиллина вызвать повреждение аксона путем перевязки нерва, противораковым лечением и т. п., то симптомы, связанные с повреждением аксона, обостряются по сравнению с наблюдающимися у здоровой мыши (непатентная литература 2 и 3). С другой стороны, в нейронах, в которые сверхэкспрессируется адвиллин, количество и длина нейритов, включая аксоны, увеличиваются (непатентная литература 3). Другими словами, известно, что адвиллин влияет на стимулирование роста аксона при регенерации нерва.

[0003]

Для роста аксона необходимо нормально регулировать полимеризацию актинового мономера и деполимеризацию актинового филамента (ниже в настоящем изобретении называющиеся, как оборот актиновых филаментов) в конусе роста на конце аксона (непатентная литература 4). Известно, что адвиллин содержится в конусе роста на конце аксона (непатентная литература 3). Также известно, что адвиллин действует, как связывающий актин белок для регуляции оборота актиновых филаментов (непатентная литература 5).

[0004]

Повреждение аксона периферического нерва, также называющееся, как поражение периферического нерва, вызывается хирургической операцией, токсичным веществом, нарушением циркуляции крови, наружной раной, вызванной дорожным происшествием, и т. п., лучевой терапией и т. п., и приводит к двигательному параличу, потере чувствительности или поражению вегетативного нерва и т. п. Известно, что регенерация аксона происходит после повреждения аксона периферического нерва, но во многих случаях происходит неполное восстановление функции, включая аномальность. Одной из причин является следующая: Для реальной регенерации аксона необходимо время, в течение которого регенерируются ткани вокруг аксона и целевая ткань, связанная с концом аксона. Поэтому конец аксона невозможно точно повторно соединить с целевой тканью или целевой клеткой и поэтому невозможна эффективная и нормальная реиннервация. Неточное повторное соединение происходит не только между нервом и целевой тканью, такой как мышечная ткань, но и между чувствительными нервами и двигательными нервами и приводит к аномальному ощущению, происходящему между чувствительными нервами, и непроизвольным аномальным движениям, происходящим между двигательными нервами (непатентная литература 6). В частности, нельзя ожидать, что самопроизвольно восстановится полный анатомический перерыв нерва, при котором разрушается оболочка аксона и нерва и нет эффективного терапевтического средства. Поэтому используют оперативное лечение, такое как восстановление нерва или функциональная восстановительная хирургия, такое лечение неблагоприятно вследствие большой нагрузки на пациента (непатентная литература 7). Соответственно, желательно использовать эффективное терапевтическое средство для стимулирования роста аксона для лечения и предупреждения неполного функционального восстановления, включая аномалию после повреждения аксона периферического нерва.

[0005]

В патентной литературе 1 и 2 раскрыто, что производные циклического амина обладают анальгетическим воздействием и могут лечить или предупреждать периферическое невропатии, но не раскрыта способность стимулировать действие адвиллина и обеспечивать лечение повреждения аксона. Кроме того, не имеется известных соединений, которые стимулируют действие адвиллина.

Список литературы

Патентная литература

[0006]

Патентная литература 1: International Publication No. WO2016/136944

Патентная литература 2: International Publication No. WO2018/181860

Непатентная литература

[0007]

Непатентная литература 1: Ravenall et al., European Journal of Neuroscience, 2002, vol. 15, pp. 281-290

Непатентная литература 2: Hasegawa et al., The Journal of Neuroscience, 2007, vol. 27, pp. 14404-14414

Непатентная литература 3: Chuang et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2018, vol. 115, pp. E8557-E8566

Непатентная литература 4: Blanquie et al., Current Opinion in Neurobiology, 2018, vol. 51, pp. 60-69

Непатентная литература 5: Rao et al., The Journal of Clinical Investigation, 2017, vol. 127, pp. 4257-4269

Непатентная литература 6: Nishiwaki et al., The Japanese Journal of Rehabilitation Medicine, 2002, vol. 39, pp. 257-266

Непатентная литература 7: Kanaya, The Japanese Journal of Rehabilitation Medicine, 2014, vol. 51, pp. 52-60

Сущность изобретения

Техническая задача

[0008]

Соответственно, объектом настоящего изобретения является средство стимулирования действия адвиллина, которое содержит обладающее низкой молекулярной массой соединение и применимо для лечения повреждения аксона.

Решение задачи

[0009]

В результате обширных исследований для решения указанной выше задачи авторы настоящего изобретения установили, что производное циклического амина или его фармакологически приемлемая соль обладает способностью стимулировать действие адвиллина.

[0010]

Точнее, настоящее изобретение относится к средству стимулирования действия адвиллина, включающему производное циклического амина, описывающееся следующей общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

[Формула 1]

где атом углерода, отмеченный значком *, означает асимметрический атом углерода и A означает группу, описывающуюся следующей общей формулой (IIa) или (IIb):

[Формула 2]

где R¹ означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу, 2-этоксиэтильную группу, дифторметильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу, R² означает атом водорода, атом фтора или атом хлора, каждый R³ независимо означает метильную группу или этильную группу и X означает -O- или -N(R³)-.

[0011]

В описанном выше производном циклического амина предпочтительно, если A означает группу, описывающуюся общей формулой (IIa), где R¹ более предпочтительно означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу.

[0012]

В описанном выше производном циклического амина предпочтительно, если A означает группу, описывающуюся общей формулой (IIb), где X более предпочтительно означает -N(R³) и R¹ более предпочтительно означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу.

[0013]

В описанном выше производном циклического амина R² более предпочтительно означает атом водорода или атом хлора.

[0014]

В описанном выше производном циклического амина стереохимической конфигурацией асимметрического атома углерода, отмеченного значком *, более предпочтительной является конфигурация S.

[0015]

Эффект стимулирования действия адвиллина можно дополнительно усилить так, как отмечено выше.

[0016]

Настоящее изобретение относится к средству стимулирования действия адвиллина, для стимулирования действия адвиллина путем связывания с адвиллином и/или комплексом адвиллина, включающим производное циклического амина, описывающееся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

[0017]

Настоящее изобретение также относится к средству стимулирования действия адвиллина, для уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов, включающему производное циклического амина, описывающееся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

[0018]

Настоящее изобретение также относится к средству стимулирования действия адвиллина, для стимулирования роста аксона, включающему производное циклического амина, описывающееся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

[0019]

Настоящее изобретение также относится к средству стимулирования действия адвиллина, для уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов и стимулирования роста аксона путем связывания с адвиллином и/или комплексом адвиллина, включающему производное циклического амина, описывающееся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

[0020]

Настоящее изобретение также относится к средству стимулирования действия адвиллина, которое является терапевтическим средством для лечения повреждения аксона, включающему производное циклического амина, описывающееся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

[0021]

Настоящее изобретение также относится к производному циклического амина, которое представляет собой одно соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих: 3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-пропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-изопропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 3-(5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он и 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он или его фармакологически приемлемая соль.

[0022]

Настоящее изобретение также относится к лекарственному средству, включающему в качестве активного ингредиента производное циклического амина, которое представляет собой одно соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих: 3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-пропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-изопропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 3-(5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он и 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он или его фармакологически приемлемая соль.

[0023]

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения повреждения аксона, включающей производное циклического амина, описывающееся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль и фармакологически приемлемый инертный наполнитель и т. п.

[0024]

Настоящее изобретение также относится к производному циклического амина, описывающемуся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли для применения для лечения повреждения аксона.

[0025]

Настоящее изобретение также относится к применению производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли для лечения повреждения аксона.

[0026]

Настоящее изобретение также относится к применению производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения повреждения аксона.

[0027]

Настоящее изобретение также относится к способу лечения повреждения аксона, включающему введение терапевтически эффективного количества производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли пациенту, нуждающемуся в лечении.

[0028]

Настоящее изобретение также относится к способу лечения повреждения аксона, включающему взаимодействие эффективного количества производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли с нейронами.

[0029]

Настоящее изобретение также относится к способу лечения повреждения аксона, включающему введение эффективного количества производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли нуждающемуся в нем субъекту.

[0030]

Примеры причины повреждения аксона включают, но не ограничиваются только ими: хирургическую операцию, токсичное вещество, нарушение циркуляции крови, наружная рана, вызванная дорожным происшествием, и т. п., и лучевая терапия.

[0031]

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения заболевания, связанного с повреждением аксона, включающей производное циклического амина, описывающееся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль и фармакологически приемлемый инертный наполнитель и т. п.

[0032]

Настоящее изобретение также относится к производному циклического амина, описывающемуся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли для применения для лечения заболевания, связанного с повреждением аксона.

[0033]

Настоящее изобретение также относится к применению производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли для лечения заболевания, связанного с повреждением аксона.

[0034]

Настоящее изобретение также относится к применению производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с повреждением аксона.

[0035]

Настоящее изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с повреждением аксона, включающему введение терапевтически эффективного количества производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли пациенту, нуждающемуся в лечении.

[0036]

Настоящее изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с повреждением аксона, включающему взаимодействие эффективного количества производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли с нейронами.

[0037]

Настоящее изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с повреждением аксона, включающему введение эффективного количества производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли нуждающемуся в нем субъекту.

[0038]

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции для стимулирования действия адвиллина, уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов или стимулирования роста аксона, включающей производное циклического амина, описывающееся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль и фармакологически приемлемый инертный наполнитель и т. п.

[0039]

Настоящее изобретение также относится к производному циклического амина, описывающемуся приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли, для применения для стимулирования действия адвиллина, уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов или стимулирования роста аксона.

[0040]

Настоящее изобретение также относится к применению производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли, для стимулирования действия адвиллина, уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов или стимулирования роста аксона.

[0041]

Настоящее изобретение также относится к применению производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли для получения лекарственного средства для стимулирования действия адвиллина, уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов или стимулирования роста аксона.

[0042]

Настоящее изобретение также относится к способу стимулирования действия адвиллина, уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов или стимулирования роста аксона, включающему введение терапевтически эффективного количества производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли нуждающемуся в нем пациенту.

[0043]

Настоящее изобретение также относится к способу стимулирования действия адвиллина, уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов или стимулирования роста аксона, включающему взаимодействие эффективного количества производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли с нейронами.

[0044]

Настоящее изобретение также относится к способу стимулирования действия адвиллина, уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов или стимулирования роста аксона, включающему введение эффективного количества производного циклического амина, описывающегося приведенной выше общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли нуждающемуся в нем субъекту.

Полезные эффекты изобретения

[0045]

Производное циклического амина, предлагаемое в настоящем изобретении, или его фармакологически приемлемая соль может стимулировать действие адвиллина, который является одной из молекул, регулирующих оборот актиновых филаментов, и можно использовать в качестве лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с повреждением аксона.

[0046]

Это описание включает описание и/или чертежи, описанные в заявке на патент Японии № 2018-243042, которая является литературой предшествующего уровня техники для настоящей заявки.

Краткое описание чертежей

[0047]

[Фиг. 1] На фиг. 1 приведена диаграмма, иллюстрирующая действие адвиллина на филаменты актина.

[Фиг. 2] На фиг. 2 приведена диаграмма, иллюстрирующая специфическое связывание соединения примера 7 с мембранными фракциями, полученными из разных тканей крысы.

[Фиг. 3] На фиг. 3 приведена диаграмма, иллюстрирующая влияние соединения примера 7 на уменьшение аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов в модели перевязки спинномозгового нерва крысы.

[Фиг. 4] На фиг. 4 приведены изображения, иллюстрирующие влияние на рост аксона соединения примера 7 в первичных выращенных клетках ганглия дорзального корня крысы, обладающих индуцированным повреждением аксона, как изменение формы клетки.

[Фиг. 5] На фиг. 5 приведена диаграмма, иллюстрирующая стимулирующее влияние соединения примера 7 на рост аксона в первичных выращенных клетках ганглия дорзального корня крысы, обладающих индуцированным повреждением аксона.

Описание вариантов осуществления

[0048]

Приведенные ниже термины, использующиеся в описании, если не указано иное, определяются следующим образом.

[0049]

Характерно, что производное циклического амина, соответствующее одному варианту осуществления настоящего изобретения, описывается следующей общей формулой (I):

[Формула 3]

где атом углерода, отмеченный значком *, означает асимметрический атом углерода и A означает группу, описывающуюся следующей общей формулой (IIa) или (IIb):

[Формула 4]

где R¹ означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу, 2-этоксиэтильную группу, дифторметильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу, R² означает атом водорода, атом фтора или атом хлора, каждый R³ независимо означает метильную группу или этильную группу и X означает -O- или -N(R³)-.

[0050]

В описанном выше производном циклического амина, предпочтительно, если A означает группу, описывающуюся общей формулой (IIa), где R¹ предпочтительно означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу.

[0051]

В описанном выше производном циклического амина, предпочтительно, если A означает группу, описывающуюся общей формулой (IIb), где X предпочтительно означает -N(R³) и R¹ предпочтительно означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу.

[0052]

В описанном выше производном циклического амина, R² предпочтительно означает атом водорода или атом хлора.

[0053]

В описанном выше производном циклического амина стереохимической конфигурацией асимметрического атома углерода, отмеченного значком *, предпочтительно является конфигурация S.

[0054]

В одном варианте осуществления производного циклического амина, предлагаемого в настоящем изобретении, A означает группу, описывающуюся общей формулой (IIa), R¹ означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу, R² означает атом водорода или атом хлора и R³ означает метильную группу или этильную группу. В этом варианте осуществления стереохимической конфигурацией асимметрического атома углерода, отмеченного значком *, предпочтительно является конфигурация S.

[0055]

В одном варианте осуществления производного циклического амина, предлагаемого в настоящем изобретении, A означает группу, описывающуюся общей формулой (IIb), X означает -N(R³)-, R¹ означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу, R² означает атом водорода или атом хлора и R³ означает метильную группу или этильную группу. В этом варианте осуществления стереохимической конфигурацией асимметрического атома углерода, отмеченного значком *, предпочтительно является конфигурация S.

[0056]

В одном варианте осуществления производного циклического амина, предлагаемого в настоящем изобретении, A означает группу, описывающуюся общей формулой (IIb), X означает -O-, R¹ означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу, R² означает атом водорода или атом хлора и R³ означает метильную группу или этильную группу. В этом варианте осуществления стереохимической конфигурацией асимметрического атома углерода, отмеченного значком *, предпочтительно является конфигурация S.

[0057]

Производное циклического амина соответствующее одному варианту осуществления настоящего изобретения является одно соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих: 3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-пропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-изопропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 3-(5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он и 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он.

[0058]

Конкретные примеры соединения, предпочтительного в качестве производного циклического амина, описывающееся приведенной выше общей формулой (I) (ниже в настоящем изобретении, называющегося производным циклического амина (I)), приведены в таблицах 1 и 2, но настоящее изобретение не ограничивается ими.

[0059]

[Таблица 1]

[0060]

[Таблица 2]

[0061]

Если производное циклического амина (I) обладает изомерами, такими как энантиомеры и стереоизомеры, любой из изомеров и их смесей включен в производное циклического амина (I). Кроме того, если производное циклического амина (I) обладает изомерами, такими как энантиомеры и стереоизомеры, производное циклического амина (I) может быть смесью, включающей любой из изомеров или их смеси. Кроме того, если производное циклического амина (I) обладает конформационными изомерами, производное циклического амина (I) включают любой из изомеров или их смеси. Желательный изомер можно получить по известной методике или аналогичной ей методике. Например, если содержится энантиомер производного циклического амина (I), энантиомер, отделенный от производного циклического амина (I), также включен в производное циклического амина (I).

[0062]

Желательный энантиомер можно получить по известным методикам (например, используют оптически активный синтетический промежуточный продукт или конечную полученную рацемическую смесь обрабатывают по известной методике или аналогичной ей методике (например, оптического разделения)).

[0063]

Также включено пролекарство производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли. Пролекарство производного циклического амина (I) означает соединение, которое ферментативно или химически превращается в производное циклического амина (I) in vivo. Активной формой пролекарства производного циклического амина (I) является производное циклического амина (I); однако само пролекарство производного циклического амина (I) может обладать активностью.

[0064]

В качестве пролекарства производного циклического амина (I) можно отметить, например, соединение, полученное алкилированием, фосфорилированием или борированием гидроксигруппы производного циклического амина (I). Эти соединения можно легко синтезировать из производного циклического амина (I) по известной методике.

[0065]

Пролекарство производного циклического амина (I) может превратиться в производное циклического амина (I) в физиологических условиях, описанных в известных публикациях ("Development of pharmaceutical products", Hirokawa-Shoten Ltd., vol. 7, p. 163 to 198, 1990, и Progress in Medicine, vol. 5, p. 2157 to 2161, 1985).

[0066]

Производное циклического амина (I) можно пометить изотопом. Примеры изотопов для использования при мечении включают ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁵O и/или ¹⁸O.

[0067]

В качестве фармакологически приемлемой соли производного циклического амина (I) можно отметить, например, неорганическую соль, такую как гидрохлорид, сульфат, фосфат и гидробромид; или органическую соль, такую как оксалат, малонат, цитрат, фумарат, лактат, малат, сукцинат, тартрат, ацетат, трифторацетат, малеат, глюконат, бензоат, салицилат, ксинафоат, памоат, аскорбат, адипат, метансульфонат, п-толуолсульфонат и циннамат.

[0068]

Производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемая соль включает его гидрат и сольват.

[0069]

Если производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемая соль обладает кристаллическими полиморфами, производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемая соль включает все кристаллические полиморфы и их смеси.

[0070]

Производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль можно синтезировать по методике, описанной в известной публикации (International Publication No. WO2016/136944), например.

[0071]

Термин "адвиллин" включает изоформу, аналог, вариант, фрагмент и функциональное производное. Адвиллин является продуктом транскрипции гена адвиллина и также обозначается, как p92 или AVIL, и является одним представителем семейства гельсолинов. У человека адвиллин является белком, обладающим двумя изоформами и содержащим 819 аминокислот или 821 аминокислоту.

[0072]

"Адвиллин" является молекулой, которая действует на филаменты актина и разрезает филамент актина, обладающий двуспиральной структурой.

[0073]

Термин "стимулирование действия адвиллина" означает сохранение, пролонгирование или усиление биологической функции адвиллина, и/или нормализацию нарушенной биологической функции. Стимулирование функции адвиллина может представлять собой улучшение и/или нормализацию аномалии регуляции оборота актиновых филаментов. Соответственно, если актиновые филаменты увеличились вследствие повреждения аксона периферического нерва, стимулирование функции адвиллина приводит к укорочению актиновых филаментов и увеличению относительного количества мономеров актина. Стимулирование функции адвиллина также включает стимулирование роста аксона.

[0074]

Термин "комплекс адвиллина" означает агрегат, образованный адвиллином и молекулой белка и т. п., который взаимодействует с адвиллином и/или связывается с адвиллином.

[0075]

Можно установить, например, путем афинной очистки с использованием гранул FG (зарегистрированная торговая марка), что имеются мелкие магнитные частицы, описанные в известной публикации (Aono et al., 2018, Biochemical and Biophysical Research Communications, vol. 505, pp. 1203-1210), что производное циклического амина (I) связывается с адвиллином и/или комплексом адвиллина. Альтернативно, это можно установить путем анализа взаимодействия между молекулами с использованием не только иммунопреципитации или афинной очистки с использованием антител, распознающих адвиллин и/или комплекс адвиллина, но и поверхностного плазмонного резонанса (SPR).

[0076]

Термин "оборот актиновых филаментов" означает двунаправленный оборот, протекающий путем полимеризации актинового мономера и деполимеризации актинового филамента.

[0077]

Термин "аномалия регуляции оборота актиновых филаментов" означает, что утрачен баланс между полимеризацией актина и деполимеризацией актинового филамента в "обороте актиновых филаментов", что делает преобладающим однонаправленный процесс.

[0078]

Термин "уменьшение аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов" означает, что состояние, при котором преобладающим является однонаправленный процесс при "аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов", нормализовано или сделано более близким к нормальному состоянию. Точнее, это означает, что количество актиновых филаментов и отношение количества актиновых филаментов к количеству мономеров актина нормализовано или сделано более близким к нормальному.

[0079]

Можно показать путем использования клеток (таких как первичные выращенные нейроны ганглий дорзального корня человека, первичные выращенные нейроны ганглий дорзального корня, полученные от млекопитающего, такого как крыса или мышь, клетки PC12, полученные из феохромоцитомы надпочечника крысы, или клетки F11, полученные из ганглий дорзального корня крысы) для определения количества актиновых филаментов в клетках, что производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемая соль обеспечивает уменьшение аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов. В качестве методики определения количества актиновых филаментов в клетках определение можно провести, например, путем флуоресцентного окрашивания с использованием связывания флуоресцентно меченого фаллоидина с актиновыми филаментами (Carlson et al., Neuro Toxicology, 2001, vol. 22, pp. 819-827).

[0080]

Термин "эффект уменьшения количества внутриклеточных актиновых филаментов" означает "эффект уменьшения количества внутриклеточных актиновых филаментов по сравнению со случаем, когда лечение для уменьшения количества внутриклеточных актиновых филаментов не проводится, и при этом эффекте количество внутриклеточных актиновых филаментов уменьшается предпочтительно на 5% или более, 10% или более, 20% или более, 30% или более, 40% или более, 50% или более, 60% или более, 70% или более, 80% или более, 90% или более, или 100% по сравнению со случаем, когда лечение для уменьшения количества внутриклеточных актиновых филаментов не проводится.

[0081]

Кроме того, можно показать путем использования образца для заболевания, связанного аномалией регуляции оборота актиновых филаментов, такого как ткань пациента, страдающего от повреждения аксона, или модели на животных для повреждения аксона для определения отношения количества актиновых филаментов к количеству мономеров актина, что производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемая соль обладает эффектом уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов. В качестве модели на животных для повреждения аксона можно отметить, например, модель перевязки спинномозгового нерва крысы (Kim et al., Pain, 1992, vol. 50, pp. 355-363). Отношение количества актиновых филаментов к количеству мономеров актина можно рассчитать путем разделения актиновых филаментов и мономеров актина посредством ультрацентрифугирования ткани или гомогенизата клеток и количественного определения их количеств с помощью вестерн-блоттинга (Kim et al., The journal of Physiology, 2015, vol. 593, pp. 1873-1886).

[0082]

Термин "аксон" означает длинный выступ, идущий от тела клетки нейрона и также называющийся нейритом. Аксон образует нервное волокно. Конец аксона разветвлен для связывания со следующим нейроном или целевой тканью для передачи нейронного возбуждения.

[0083]

Термин "повреждение аксона" означает состояние, в котором аксон частично или полностью разрушен или разрезан и часть аксона на стороне ткани пораженного участка разрушена или утрачена.

[0084]

Термин "рост аксона" означает удлинение нейрона. Стимулирование роста аксона ожидается для присоединения целевой ткани к аксону и/или для восстановления рефлекторной дуги после повреждения аксона.

[0085]

Примеры причины повреждения аксона включают, но не ограничиваются только ими: хирургическую операцию, токсичное вещество, нарушение циркуляции крови, наружная рана, вызванная дорожным происшествием, и т. п., или лучевая терапия.

[0086]

В качестве токсичного вещества можно отметить, например, экзогенные и эндогенные нейротоксины. В качестве экзогенного нейротоксина можно отметить, например, тетродотоксин, батрахотоксин, мауротоксин, агитоксин, чарибдотоксин, маргатоксин, слотоксин, сциллатоксин, нефутоксин, кальцисептин, таикатоксин, или кальциклудин. В качестве эндогенного нейротоксина можно отметить, например, глутаминовую кислоту, N-метил-D-аспарагиновую кислоту (NMDA), или каиновую кислоту. Кроме того, можно отметить газ (такой как монооксид углерода), металл (такой как ртуть), метанол, или этанол. В качестве других токсичных веществ можно отметить, например, сельскохозяйственные химикаты гербициды и инсектициды (такие как ротенон и паракват). Кроме того, перечень токсичных веществ и вредных веществ опубликован в качестве токсичных веществ, вредных для организма человека в Законе о контроле ядовитых и вредных веществ в Японии, и перечисленные в нем токсичные вещества можно отметить в качестве токсичного вещества.

[0087]

Примеры заболевания, связанного с повреждением аксона (включая вызванное им заболевание) включают, но не ограничиваются только ими, туннельный синдром запястья, пронаторный синдром, паралич переднего межкостного нерва предплечья, локтевой туннельный синдром (туннельный синдром Гюйона), локтевой туннельный синдром, паралич заднего межкостного нерва предплечья, паралич лучевого нерва, компрессионный синдром верхней апертуры грудной клетки, паралич подмышечного нерва, паралич надлопаточного нерва, синдром грушевидной мышцы, паралич поясничного сплетения, синдром запястного канала, паралич бедренного нерва, паралич седалищного нерва, паралич большеберцового нерв, паралич общего малоберцового нерва, паралич малоберцового нерва (синдром переднего пердплюсневого канала), паралич подкожного нерва (туннельный синдром Гунтера), стеноз цервикального отдела позвоночного канала, стеноз поясничного отдела позвоночного канала, паралич лицевого нерва, глазодвигательный паралич, паралич блокового нерва, паралич отводящего нерва, гигантоклеточный артериит, артериит Такаясу, нодозный полиартериит, болезнь Кавасаки, гранулематоз с полиангиитом (гранулематоз Вегенера), микроскопический полиангиит, эозинофильный гранулематоз с полиангиитом (аллергический гранулематозный ангиит, синдром Черджа-Штросса), криоглобулинемия, IgA васкулит (пурпура Шенлейнa-Геноха), кожный лейкоцитокластический васкулит, системная красная волчанка, синдром Шегрена, ревматоидный артрит, смешанное заболевание соединительной ткани, полимиозит, дерматомиозит, склеродермия, болезнь Бехчета, паралич Белла, синдром Рамзая Ханта, бактериальные/вирусные инфекционные заболевания (такие как болезнь Лайма, инфекция HIV и проказа), саркоидоз и злокачественные опухоли.

[0088]

Можно показать путем использования ткани, в которой поврежден аксон нейрона человека, модели повреждения аксона на животных или нейрона (такого как нейрон, взятый из коры головного мозга, или клетка, полученная из ганглия дорзального корня) для определения длины, плотности и т. п. увеличенных нейритов, что производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемая соль стимулируют рост аксона (Yang et al., Free Radical Biology and Medicine, 2018, vol. 120, pp. 13-24).

[0089]

Производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль можно использовать в качестве лекарственного средства для лечения или предупреждения повреждения аксона у млекопитающего (например, мыши, крысы, хомяка, кролика, кошки, собаки, коровы, овцы, обезьяны или человека) и в особенности человека.

[0090]

Если производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль используют в качестве лекарственного средства, производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль непосредственно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем можно вводить перорально или парентерально.

[0091]

В качестве дозированной формы, когда лекарственное средство, включающее производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента, вводят перорально, можно отметить, например, таблетки (включая таблетки с покрытием из сахара и таблетки с пленочным покрытием), пилюли, гранулы, порошки, капсулы (включая мягкие капсулы и микрокапсулы), сиропы, эмульсии и суспензии. В качестве дозированной формы, когда лекарственное средство, включающее производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента, вводят парентерально, можно отметить, например, средства для инъекции, вливания, капли, суппозитории, чрескожные линименты и липкие пластыри. Также эффективно готовить препарат пролонгированного высвобождения с использованием производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли в комбинации с подходящим основанием (например, полимером масляной кислоты, полимером гликолевой кислоты, сополимером масляной кислоты - гликолевой кислоты, смесью полимера масляной кислоты, полимера гликолевой кислоты, сополимера масляной кислоты - гликолевой кислоты, смесью полимера масляной кислоты и полимера гликолевой кислоты или эфиром полиглицерина и жирной кислоты).

[0092]

Препараты, обладающие указанными выше дозированными формами, можно приготовить по методикам приготовления, известным в области приготовления лекарственных препаратов. В этом случае при необходимости приготовление можно провести, добавляя инертный наполнитель, связующее, смазывающее вещество, разрыхляющий агент, подсластитель, поверхностно-активное вещество, суспендирующий агент или эмульгирующий агент, которые обычно используют в области приготовления лекарственных препаратов.

[0093]

Таблетки можно приготовить, например, путем добавления инертного наполнителя, связующего, разрыхляющего агента или смазывающего вещества. Пилюли и гранулы можно приготовить путем добавления, например, инертного наполнителя, связующего или разрыхляющего агента. Порошки и капсулы можно приготовить путем добавления, например, инертного наполнителя. Сиропы можно приготовить путем добавления, например, подсластитель. Эмульсии или суспензии можно приготовить, добавляя, например, поверхностно-активное вещество, суспендирующий агент или эмульгатор.

[0094]

В качестве инертного наполнителя можно отметить, например, лактозу, глюкозу, крахмал, сахарозу, микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную солодку, маннит, гидрокарбонат натрия, фосфат кальция и сульфат кальция.

[0095]

В качестве связующего можно отметить, например, раствор крахмальной пасты, раствор гуммиарабика, раствор желатина, раствор трагакантовой камеди, раствор карбоксиметилцеллюлозы, раствор альгината натрия и глицерин.

[0096]

В качестве разрыхляющего агента можно отметить, например, крахмал и карбонат кальция.

[0097]

В качестве смазывающего вещества можно отметить, например, стеарат магния, стеариновую кислоту, стеарат кальция и очищенный тальк.

[0098]

В качестве подсластителя можно отметить, например, глюкозу, фруктозу, инвертный сахар, сорбит, ксилит, глицерин и обычный сироп.

[0099]

В качестве поверхностно-активного вещества можно отметить, например, лаурилсульфат натрия, полисорбат 80, моноэфир сорбитана и жирной кислоты и стеариновую кислоту - полиоксил-40.

[0100]

В качестве суспендирующего агента можно отметить, например, гуммиарабик, альгинат натрия, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, метилцеллюлозу и бентонит.

[0101]

В качестве эмульгатора можно отметить, например, гуммиарабик, трагакантовую камедь, желатин и полисорбат 80.

[0102]

Если лекарственное средство, включающее производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента готовят в виде указанных выше дозированных форм, можно добавить окрашивающий агент, консервирующий агент, отдушку, вкусовое вещество, стабилизатор или загуститель, обычно использующиеся в области приготовления лекарственных препаратов.

[00103]

Суточная доза лекарственного средства, включающего производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента, меняется в зависимости, например, от состояния или массы тела пациента или типа или пути введения соединения, но, например, при пероральном введении взрослому (масса: примерно 60 кг) предпочтительно, чтобы количество производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли, выступающего в качестве активного ингредиента, находилось в диапазоне от 1 до 1000 мг и вводилось в виде от 1 до 3 разделенных доз и при парентеральном введении взрослому (масса: примерно 60 кг) в виде инъекций предпочтительно, чтобы количество производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли, выступающего в качестве активного ингредиента, находилось в диапазоне от 0,01 до 100 мг на 1 кг массы тела при введении с внутривенной инъекций.

[0104]

Производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль можно смешать с другими лекарственными средствами в подходящем отношении или использовать в комбинации с другими лекарственными средствами для дополнения или усиления терапевтического или профилактического эффекта или уменьшения дозы. Производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемую соль можно вводить одновременно с другими лекарственными средствами или можно вводить с ними непрерывно в произвольном порядке. В качестве других лекарственных средств можно отметить, например, но не ограничиваются только ими, терапевтические средства для лечения повреждения аксона.

Примеры

[0105]

Ниже настоящее изобретение специально подробно описано с помощью примеров, сравнительных примеров и эталонного примера, но настоящее изобретение не ограничивается ими.

[0106]

В последующем описании названия растворителей, указанных в данных NMR, означают растворители, использованные в измерениях. Спектры 400 MHz NMR снимали с использованием спектрометра ядерного магнитного резонанса JNM-AL 400 series (выпускает фирма JEOL, Ltd.). Химические сдвиги приведены в δ (единица: част./млн) с использованием тетраметилсилана в качестве стандарта и соответствующие сигналы обладают следующими значениями: s (синглет), d (дублет), t (триплет), q (квартет), quint (квинтет), sept (септет), m (мультиплет), br (широкий), dd (двойной дублет), dt (двойной триплет), ddd (двойной двойной дублет), dq (двойной квартет), td (тройной дублет) и tt (тройной триплет). Спектры ESI-MS снимали с использованием Agilent Technologies 1200 Series, G6130A (выпускает фирма Agilent Technology). Имеющиеся в продаже продукты использовали в качекстве всех растворителей. Для колоночной флэш-хроматографии использовали YFLC W-prep2XY (выпускает фирма YAMAZEN Corporation).

[0107]

Неочищенные материалы и промежуточные продукты для получения производного циклического амина (I) синтезировали по методикам, описанным в эталонных примерах, приведенных ниже. Следует отметить, что имеющиеся в продаже продукты использованы в качестве соединений, которые применялись для синтеза соединений эталонных примеров и методики их синтеза не описаны ниже.

[0108]

(Эталонный пример 1) Синтез бензил-(S)-2-(3-(4-диметиламино)пиперидин-1-ил)-1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропокси)ацетата:

[Формула 5]

Гидрид натрия (55%, 0,0202 мг, 0,464 ммоля) добавляли к раствору (S)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-она (0,100 г, 0,357 ммоля) в тетрагидрофуране (0,800 мл) при 0°C. Полученный продукт перемешивали при такой же температуре в течение 10 мин и бензилбромацетат (0,0620 мл, 0,390 ммоля) добавляли к полученной реакционной жидкости, затем перемешивали в течение еще 15 ч при комнатной температуре. Водный раствор хлорида аммония добавляли к реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали бензил-(S)-2-(3-(4-диметиламино)пиперидин-1-ил)-1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропокси)ацетат (0,568 г, 0,133 ммоля, 37%) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,30-1,57 (2H, m), 1,73-1,90 (2H, m), 2,24-2,37 (7H, m), 2,48-2,58 (1H, m), 2,95-3,13 (2H, m), 3,28-3,36 (1H, m), 3,70 (3H, d, J=1,6 Hz), 3,93-4,17 (3H, m),4,48-4,54 (1H, m), 5,12-5,14 (2H, m), 5,30-5,36 (1H, m), 6,80 (1H, s), 6,96 (1H, s), 7,31-7,39 (5H, m).

ESI-MS: m/z= 429 (M+H)⁺.

[0109]

(Эталонный пример 2) Синтез этил-1-метил-1H-имидазол-2-карбоксилата:

[Формула 6]

Триэтиламин (3,40 мл, 24,4 ммоля) и этилхлорформиат (2,34 мл, 24,4 ммоля) добавляли к раствору 1-метил-1H-имидазола (1,00 г, 12,2 ммоля) в ацетонитриле (4,0 мл) при 0°C и полученную реакционную жидкость перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную жидкость фильтровали через целит и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат) и получали этил-1-метил-1H-имидазол-2-карбоксилат (1,50 г, 9,73 ммоля, 80%) в виде белого твердого вещества.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,42 (3H, t, J=7,2 Hz), 4,01 (3H, s), 4,40 (2H, q, J=7,2 Hz), 7,01-7,03 (1H, m), 7,13-7,15 (1H, m).

ESI-MS: m/z= 155 (M+H)⁺.

[0110]

(Эталонный пример 3) Синтез этил-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропаноата:

[Формула 7]

Водный раствор гидроксида натрия (1,0 н., 14,6 мл, 14,6 ммоля) добавляли к раствору этил-1-метил-1H-имидазол-2-карбоксилата (1,50 г, 9,73 ммоля) в метаноле (15,0 мл) при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при такой же температуре в течение 3 ч. Реакционную жидкость охлаждали до 0°C. Хлористоводородную кислоту (1,0 н.) добавляли к реакционной жидкости для нейтрализации и полученную реакционную жидкость концентрировали при пониженном давлении. Получали азеотроп с толуолом и к нему добавляли этанол. Полученный таким образом осадок отфильтровывали через целит и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Ацетонитрил (7,0 мл) и карбонилдиимидазол (1,54 г, 9,52 ммоля) добавляли к полученному таким образом неочищенному продукту при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при такой же температуре в течение 2,5 ч (реакционная жидкость A). Отдельно хлорид магния (0,997 г, 10,5 ммоля) растворяли в ацетонитриле (7,0 мл) и к нему добавляли этилмалонат калия (1,70 г, 9,99 ммоля) и триэтиламин (2,98 мл, 21,4 ммоля) при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при такой же температуре в течение 2,5 ч (реакционная жидкость B). Реакционную жидкость A добавляли к реакционной жидкости B при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при 80°C в течение 2 ч. Реакционную жидкость охлаждали до комнатной температуры. Хлористоводородную кислоту (1,0 н.) добавляли к реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат) и получали этил-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропаноат (0,721 г, 3,67 ммоля, 38%) в виде белого твердого вещества.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,27 (3H, t, J=7,2 Hz), 4,01 (3H, s), 4,13 (2H, s), 4,21 (2H, q, J=7,2 Hz), 7,05-7,07 (1H, m), 7,15-7,17 (1H, m).

ESI-MS: m/z= 197 (M+H)⁺.

[0111]

(Эталонный пример 4) Синтез 4-(морфолин-4-ил)пиперидина:

[Формула 8]

Морфолин (0,792 г, 9,09 ммоля), триацетоксиборогидрид натрия (1,93 г, 9,09 ммоля) и уксусную кислоту (0,0460 г, 0,758 ммоля) добавляли к раствору 1-трет-бутоксикарбонил-4-пиперидинона (1,51 г, 7,58 ммоля) в дихлорметане (25,0 мл) при 0°C, затем перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Полученную реакционную жидкость охлаждали до 0°C. Насыщенный водный раствор бикарбоната натрия добавляли к реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали дихлорметаном. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в хлористоводородной кислоте (1,0 н.) и полученный продукт экстрагировали этилацетатом. Водный слой подщелачивали путем добавления 48% водного раствора гидроксида натрия и полученный продукт экстрагировали дихлорметаном. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в метаноле (25,0 мл) и добавляли концентрировали хлористоводородную кислоту (5,0 мл), затем перемешивали при 40°C в течение 12 ч. Полученную реакционную жидкость концентрировали досуха и полученный продукт растворяли в дистиллированной воде. Полученный продукт подщелачивали путем добавления 48% водного раствора гидроксида натрия и полученный продукт экстрагировали дихлорметаном. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Таким образом 4-(морфолин-4-ил)пиперидин (1,52 г, 5,63 ммоля, 74%) получали в виде желтого твердого вещества.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,34 (2H, dd, J=12,0, 4,0 Hz), 1,40 (2H, dd, J=12,0, 4,0 Hz), 1,85 (2H, d, J=12,4 Hz), 2,28 (1H, tt, J=11,2, 4,0 Hz), 3,53-3,63 (6H, m), 3,15 (2H, d, J=12,4Hz), 3,73 (4H, t, J=4,4 Hz).

ESI-MS: m/z= 171 (M+H)⁺

[0112]

(Эталонный пример 5) Синтез 1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1,3-диона:

[Формула 9]

4-(Морфолин-4-ил)пиперидин (0,158 г, 0. 928 ммоля) добавляли к раствору этил-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропаноата (0,200 г, 1,02 ммоля) в толуоле (0,460 мл) при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при 110°C в течение 16 ч. Реакционную жидкость концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1,3-дион (0,285 г, 0,890 ммоля, 96%) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,40-1,64 (2H, m), 1,82-1,92 (2H, m), 2,37-2,47 (1H, m), 2,52-2,58 (4H, m), 3,05-3,15 (1H, m), 3,69-3,76 (5H, m), 3,82-3,90 (1H, m), 4,01 (3H, s), 4,16-4,31(2H, m), 4,58-4,65 (1H, m), 7,04-7,06 (1H, m), 7,13-7,15 (1H, m).

ESI-MS: m/z= 321 (M+H)⁺.

[0113]

(Эталонный пример 6) Синтез 1-пропил-1H-имидазол-2-карбальдегида:

[Формула 10]

1-Йодпропан (1,22 мл, 12,5 ммоля) и карбонат калия (2,16 г, 15,6 ммоля) добавляли к раствору 1H-имидазол-2-карбальдегида (1,00 г, 10,4 ммоля) в N, N-диметилформамиде (10,0 мл), затем перемешивали при 60°C в течение 3 ч. К полученной реакционной жидкости добавляли воду и полученный продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат) и получали 1-пропил-1H-имидазол-2-карбальдегид (0,786 г, 5,69 ммоля, 55%) в виде желтого масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 0,93 (3H, t, J=7,4 Hz), 1,77-1,85 (2H, m), 4,37 (2H, t, J=7,2 Hz), 7,16 (1H, s), 7,28 (1H, s), 9,82 (1H, s).

[0114]

(Эталонный пример 7) Синтез 1-изопропил-1H-имидазол-2-карбальдегида:

[Формула 11]

2-Йодпропан (1,26 мл, 12,5 ммоля) и карбонат калия (2,16 г, 15,6 ммоля) добавляли к раствору 1H-имидазол-2-карбальдегида (1,00 г, 10,4 ммоля) в N, N-диметилформамиде (10 мл), затем перемешивали при 60°C в течение 3 ч. К полученной реакционной жидкости добавляли воду и полученный продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат) и получали 1-изопропил-1H-имидазол-2-карбальдегид (0,703 г, 5,09 ммоля, 49%) в виде желтого масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,47 (6H, t, J=6,6 Hz), 5,48 (1H, q, J=6,6 Hz), 7,30 (1H, s), 7,33 (1H, s), 9,83 (1H, s).

[0115]

(Эталонный пример 8) Синтез 5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-карбальдегида:

[Формула 12]

Реагент Десса-Мартина (1,04 г, 2,46 ммоля) добавляли к раствору (5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-ил)метанола (0,300 г, 2,05 ммоля) в дихлорметане (20,0 мл) при 0°C, затем перемешивали при такой же температуре в течение 3 ч. 10% Водный раствор тиосульфата натрия и насыщенный водный раствор бикарбоната натрия добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат) и получали 5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-карбальдегид (0,235 г, 1,62 ммоля, 79%) в виде белого твердого вещества.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 3,98 (3H, s), 7,24 (1H, s), 9,70 (1H, s).

[0116]

(Эталонный пример 9) Синтез 1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-карбальдегида:

[Формула 13]

2-Бромэтилметиловый эфир (1,20 мл, 12,5 ммоля), карбонат калия (2,16 г, 15,6 ммоля) и йодид натрия (0,468 г, 3,12 ммоля) добавляли к раствору 1H-имидазол-2-карбальдегида (1,00 г, 10,4 ммоля) в N, N-диметилформамиде (10,0 мл), затем перемешивали при 60°C в течение 3 ч. К полученной реакционной жидкости добавляли воду и полученный продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат) и получали 1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-карбальдегид (0,535 г, 3,47 ммоля, 33%) в виде белого твердого вещества.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 3,32 (3H, s), 3,67 (2H, t, J=5,0 Hz), 4,59 (2H, t, J=5,0 Hz), 7,23-7,30 (2H, m), 9,81 (1H, s).

[0117]

(Эталонный пример 10) Синтез 1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-карбальдегида:

[Формула 14]

1,1,1-Трифтор-3-йодпропан (0,710 мл, 6,24 ммоля) и карбонат калия (1,08 г, 7,81 ммоля) добавляли к раствору 1H-имидазол-2-карбальдегида (0,500 г, 5,20 ммоля) в N, N-диметилформамиде (5,20 мл), затем перемешивали при 60°C в течение 5 ч. К полученной реакционной жидкости добавляли воду и полученный продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат) и получали 1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-карбальдегид (0,0863 г, 0,449 ммоля, 8,6%) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 2,60-2,72 (2H, m), 4,61 (2H, t, J=6,8 Hz), 7,18 (1H, s), 7,32 (1H, s), 9,83 (1H, s).

[0118]

(Эталонный пример 11) Синтез 1-(4-диметиламино)пиперидин-1-ил)этанона:

[Формула 15]

Пиридин (0,922 мл, 9,75 ммоля) и уксусный ангидрид (0,946 мл, 11,7 ммоля) добавляли к раствору 4-диметиламинопиперидина (1,00 г, 7,79 ммоля) в дихлорметане (7,8 мл) при 0°C и полученную реакционную жидкость перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Насыщенный водный раствор бикарбоната натрия добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)этанон (0,869 г, 6,78 ммоля, 87%) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,30-1,47 (2H, m), 1,79-1,92 (2H, m), 2,10 (3H, s), 2,25-2,40 (7H, m), 2,53-2,63 (1H, m), 3,01-3,11 (1H, m), 3,81-3,90 (1H, m), 4,58-4,66 (1H, m).

ESI-MS: m/z= 171 (M+H)⁺.

[0119]

(Эталонный пример 12) Синтез 4-(1-метилпиперазин-4-ил)пиперидин:

[Формула 16]

1-Метилпиперазин (0,905 г, 9,03 ммоля), уксусную кислоту (0,497 г, 8,28 ммоля), и триацетоксиборогидрид натрия (1,92 г, 9,03 ммоля) добавляли к раствору 1-трет-бутоксикарбонил-4-пиперидинона (1,50 г, 7,53 ммоля) в дихлорметане (25,0 мл) при 0°C и полученную реакционную жидкость перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную жидкость охлаждали до 0°C. Насыщенный водный раствор бикарбоната натрия добавляли к реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали дихлорметаном. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в хлористоводородной кислоте (1,0 н.) и полученный продукт экстрагировали этилацетатом. Водный слой подщелачивали путем добавления 48% водного раствора гидроксида натрия и полученный продукт экстрагировали дихлорметаном. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в метаноле (25,0 мл) и добавляли концентрировали хлористоводородную кислоту (5,0 мл), затем перемешивали при 40°C в течение 12 ч. Полученную реакционную жидкость концентрировали при пониженном давлении и полученный продукт растворяли в дистиллированной воде. Полученный продукт подщелачивали путем добавления 48% водного раствора гидроксида натрия и полученный продукт экстрагировали дихлорметаном. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и получали 4-(1-метилпиперазин-4-ил)пиперидин (0,826 г, 4,51 ммоля, 60%) в виде белого твердого вещества.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,35 (2H, dd, J=12,0, 3,6 Hz), 1,41 (2H, dd, J=12,0, 3,6 Hz), 1,85 (2H, d, J=12,8 Hz), 1,96-2,06 (2H, br), 2,28 (3H, s), 2,32 (1H, tt, J=11,6, 3,6 Hz), 3,37-3,70 (8H, m), 3,14 (2H, d, J=12,8 Hz).

ESI-MS: m/z= 169 (M+H)⁺.

[0120]

(Эталонный пример 13) Синтез неочищенного 4-диэтиламинопиперидина:

[Формула 17]

Диэтиламин (0,276 мл, 2,68 ммоля), уксусную кислоту (0,0120 мл, 0,214 ммоля), и триацетоксиборогидрид натрия (0,681 г, 3,22 ммоля) добавляли к раствору бензил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата (0,500 г, 2,14 ммоля) в дихлорметане (12,0 мл) при 0°C и полученную реакционную жидкость перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную жидкость охлаждали до 0°C. Насыщенный водный раствор бикарбоната натрия добавляли к реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол). Полученный таким образом плохо очищенный продукт растворяли в метаноле (8,0 мл), и палладий/углерод (10% влажность, 0,180 г, 0,169 ммоля) добавляли при комнатной температуре, затем перемешивали в атмосфере водорода в течение 16 ч. Полученную реакционную жидкость фильтровали через целит и фильтрат концентрировали при пониженном давлении и получали неочищенный 4-диэтиламинопиперидин.

[0121]

(Эталонный пример 14) Синтез 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1,3-диона:

[Формула 18]

Раствор диизопропиламида лития в тетрагидрофуране (2,0 M, 7,05 мл, 14,1 ммоля) по каплям добавляли к раствору 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)этанона (1,00 г, 5,87 ммоля) в тетрагидрофуране (20 мл) при -78°C, затем перемешивали при такой же температуре в течение 1 ч. Раствор этил-1-метил-1H-имидазол-2-карбоксилата (1,09 г, 7,05 ммоля) в тетрагидрофуране (9,0 мл) добавляли к полученной реакционной жидкости при такой же температуре и полученный продукт перемешивали в течение 1 ч и затем при 0°C в течение еще 1 ч. Насыщенный водный раствор хлорида аммония и водный раствор карбоната калия последовательно добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, гексан/этилацетат) и получали 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1,3-дион (0,990 г, 3,56 ммоля, 61%) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,32-1,5 (2H, m), 1,80-1,94 (2H, m), 2,22-41 (7H, m), 2,60-2,70 (1H, m), 3,03-3,13 (1H, m), 3,80-3,89 (1H, m), 4,01 (3H, s), 4,23 (2H, dd, J=15,6, 36,8 Hz),4,55-4,67 (1H, m), 7,05 (1H, s), 7,14 (1H, s).

ESI-MS: m/z= 279 (M+H)⁺.

[0122]

(Эталонный пример 15) Синтез 1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)пропан-1,3-дион:

[Формула 19]

4-(1-Метилпиперазин-4-ил)пиперидин (0,170 г, 0,927 ммоля) добавляли к раствору этил-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропаноата (0,200 г, 1,02 ммоля) в толуоле (0,46 мл) при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при 110°C в течение 16 ч. Реакционную жидкость концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)пропан-1,3-дион (0,290 г, 0,870 ммоля, 94%) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,38-1,60 (2H, m), 1,82-1,90 (2H, m), 1,95-2,10 (1H, m), 2,27 (3H, s), 2,36-2,68 (9H, m), 3,02-3,12 (1H, m), 3,79-3,88 (1H, m), 3,98 (3H, s), 4,13-4,28 (2H, m), 4,57-4,90 (1H, m), 7,02-7,04 (1H, m), 7,11-7,13 (1H, m).

ESI-MS: m/z= 334 (M+H)⁺.

[0123]

(Эталонный пример 16) Синтез 1-(4-(диэтиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1,3-диона:

[Формула 20]

Неочищенный 4-диэтиламинопиперидин (0,143 г, 0,917 ммоля) добавляли к раствору этил-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропаноата (0,150 г, 0,765 ммоля) в толуоле (0,38 мл) при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при 110°C в течение 10 ч. Реакционную жидкость концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(4-(диэтиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1,3-дион (0,0750 г, 0,245 ммоля, 32%) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,02 (6H, t, J=6,8 Hz), 1,37-1,58 (2H, m), 1,73-1,98 (2H, m), 2,48-2,78 (6H, m), 3,01-3,11 (1H, m), 3,80-3,88 (1H, m), 4,00 (3H, s), 4,14-4,28 (2H, m), 4,60-4,70 (1H, m), 7,03-7,05 (1H, m), 7,12-7,14 (1H, m).

ESI-MS: m/z= 307 (M+H)⁺.

[0124]

(Эталонный пример 17) Синтез 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-она:

[Формула 21]

Раствор диизопропиламида лития в тетрагидрофуране (2,0 M, 0,162 мл, 0,323 ммоля) по каплям добавляли к раствору 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)этанона (0,0500 г, 0,294 ммоля) в тетрагидрофуране (0,8 мл) при -78°C, затем перемешивали при такой же температуре в течение 1 ч. Раствор 1-метил-1H-имидазол-2-карбальдегида (0,0390 г, 0,352 ммоля) в тетрагидрофуране (0,4 мл) добавляли к полученной реакционной жидкости при такой же температуре и полученный продукт перемешивали в течение 1 ч и затем при 0°C в течение еще 1 ч. Насыщенный водный раствор хлорида аммония и водный раствор карбоната калия последовательно добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-он (0,0220 г, 0,0785 ммоля, 27%) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,32-1,53 (2H, m), 1,82-1,92 (2H, m), 2,27-2,41 (7H, m), 2,60-2,72 (1H, m), 2,98-3,23 (3H, m), 3,77 (3H, s), 3,99-4,08 (1H, m), 4,58-4,82 (2H, m), 5,18-5,26(1H, m), 6,86 (1H, s), 6,93 (1H, s).

ESI-MS: m/z= 281 (M+H)⁺.

[0125]

(Пример 1) Синтез 3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1-она:

[Формула 22]

Борогидрид натрия (0,0370 г, 0,979 ммоля) добавляли к раствору 1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1,3-диона (0,285 г, 0,890 ммоля) в метаноле (4,50 мл) при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при такой же температуре в течение 3 ч. Насыщенный водный раствор бикарбоната натрия добавляли к реакционной жидкости и полученный продукт концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли дистиллированную воду и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, хлороформ/метанол) и получали 3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1-он (0,0711 г, 0,221 ммоля, 25%) (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением примера 1) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 1,08-1,50 (7H, m), 1,60-1,76 (2H, m), 2,36-2,46 (5H, m), 2,75-3,05 (3H, m), 3,64 (3H, s), 3,92-4,02 (1H, m), 4,32-4,42 (1H, m), 4,99-5,08 (1H, m), 5,34-5,49 (1H, m), 6,70-6,72 (1H, m), 7,01-7,03 (1H, m).

ESI-MS: m/z= 323 (M+H)⁺.

[0126]

(Пример 2) Синтез 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-пропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-она:

[Формула 23]

Раствор диизопропиламида лития в тетрагидрофуране (2,0 M, 0,969 мл, 1,94 ммоля) по каплям добавляли к раствору 1-(4-диметиламинопиперидин-1-ил)этанона (0,300 г, 1,76 ммоля) в тетрагидрофуране (6,00 мл) при -78°C, затем перемешивали при такой же температуре в течение 1 ч. Раствор 1-пропил-1H-имидазол-2-карбальдегида (0,292 г, 2,12 ммоля) в тетрагидрофуране (2,8 мл) добавляли к полученной реакционной жидкости при такой же температуре и полученный продукт перемешивали в течение 1 ч и затем при 0°C в течение еще 1 ч. Насыщенный водный раствор хлорида аммония и водный раствор карбоната калия последовательно добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-пропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он (0,296 г, 0,960 ммоля, 55%) (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением примера 2) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 0,85 (3H, t, J=7,4 Hz), 1,00-1,40 (2H, m), 1,61-1,80 (4H, m), 2,10-2,33 (7H, m), 2,45-2,59 (1H, m), 2,73-2,88 (1H, m), 2,93-3,13 (2H, m), 3,86-4,00 (3H, m), 4,25-4,35 (1H, m),4,98-5,05 (1H, m), 5,34-5,40 (1H, m), 6,72 (1H, s), 7,07 (1H, s).

ESI-MS: m/z= 309 (M+H)+.

[0127]

(Пример 3) Синтез 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-изопропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-она:

[Формула 24]

Раствор диизопропиламида лития в тетрагидрофуране (2,0 M, 0,969 мл, 1,94 ммоля) по каплям добавляли к раствору 1-(4-диметиламинопиперидин-1-ил)этанона (0,300 г, 1,76 ммоля) в тетрагидрофуране (6,00 мл) при -78°C, затем перемешивали при такой же температуре в течение 1 ч. Раствор 1-изопропил-1H-имидазол-2-карбальдегида (0,292 г, 2,12 ммоля) в тетрагидрофуране (2,8 мл) добавляли к полученной реакционной жидкости при такой же температуре и полученный продукт перемешивали в течение 1 ч и затем при 0°C в течение еще 1 ч. Насыщенный водный раствор хлорида аммония и водный раствор карбоната калия последовательно добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-изопропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он (0,302 г, 0,979 ммоля, 56%) (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением примера 3) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 1,04-1,41 (8H, m), 1,62-1,80 (2H, m), 2,16 (6H, s), 2,25-2,34 (1H, m), 2,48-2,59 (2H, m), 2,76-2,88 (1H, m), 2,95-3,16 (2H, m), 3,90-4,00 (1H, m), 4,27-4,38 (1H, m), 5,05-5,12 (1H, m), 5,36-5,42 (1H, m), 6,77 (1H, s), 7,20 (1H, s).

ESI-MS: m/z= 309 (M+H)+.

[0128]

(Пример 4) Синтез 3-(5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидроксипропан-1-она:

[Формула 25]

Раствор диизопропиламида лития в тетрагидрофуране (2,0 M, 0,745 мл, 1,49 ммоля) по каплям добавляли к раствору 1-(4-диметиламинопиперидин-1-ил)этанона (0,231 г, 1,36 ммоля) в тетрагидрофуране (5,10 мл) при -78°C, затем перемешивали при такой же температуре в течение 1 ч. Раствор 5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-карбальдегида (0,235 г, 1,63 ммоля) в тетрагидрофуране (1,70 мл) добавляли к полученной реакционной жидкости при такой же температуре и полученный продукт перемешивали в течение 1 ч и затем при 0°C в течение еще 1 ч. Насыщенный водный раствор хлорида аммония и водный раствор карбоната калия последовательно добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 3-(5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидроксипропан-1-он (0,159 г, 0,505 ммоля, 37%) (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением примера 4) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 1,04-1,21 (1H, m), 1,28-1,40 (1H, m), 1,64-1,80 (2H, m), 2,15 (6H, s), 2,24-2,35 (1H, m), 2,44-2,60 (1H, m), 2,78-2,88 (1H, m), 2,95-3,11 (2H, m), 3,59 (3H, s), 3,90-3,98 (1H, m), 4,27-4,35 (1H, m), 5,00-5,10 (1H, m), 5,50-5,58 (1H, m), 6,85 (1H, s).

ESI-MS: m/z= 315 (M+H)+.

[0129]

(Пример 5) Синтез 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-она:

[Формула 26]

Раствор диизопропиламида лития в тетрагидрофуране (2,0 M, 0,969 мл, 1,94 ммоля) по каплям добавляли к раствору 1-(4-диметиламинопиперидин-1-ил)этанона (0,300 г, 1,76 ммоля) в тетрагидрофуране (6,00 мл) при -78°C, затем перемешивали при такой же температуре в течение 1 ч. Раствор 1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-карбальдегида (0,292 г, 2,12 ммоля) в тетрагидрофуране (2,80 мл) добавляли к полученной реакционной жидкости при такой же температуре и полученный продукт перемешивали в течение 1 ч и затем при 0°C в течение еще 1 ч. Насыщенный водный раствор хлорида аммония и водный раствор карбоната калия последовательно добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он (0,193 г, 0,594 ммоля, 34%) (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением примера 5) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 1,04-1,40 (2H, m), 1,62-1,80 (2H, m), 2,10-2,35 (7H, m), 2,46-2,59 (1H, m), 2,80-2,90 (1H, m), 2,95-3,10 (2H, m), 3,24 (3H, s), 3,61 (2H, t, J=5,5 Hz), 3,90-4,00 (1H, m), 4,10-4,38 (3H, m), 5,05-5,11 (1H, m), 5,38-5,42 (1H, m), 6,73 (1H, s), 7,07(1H, s).

ESI-MS: m/z= 325 (M+H)+.

[0130]

(Пример 6) Синтез 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-она:

[Формула 27]

Раствор диизопропиламида лития в тетрагидрофуране (2,0 M, 0,246 мл, 0,492 ммоля) по каплям добавляли к раствору 1-(4-диметиламинопиперидин-1-ил)этанона (0,0760 г, 0,448 ммоля) в тетрагидрофуране (1,80 мл) при -78°C, затем перемешивали при такой же температуре в течение 1 ч. Раствор 1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-карбальдегида (0,0860 г, 0,448 ммоля) в тетрагидрофуране (0,70 мл) добавляли к полученной реакционной жидкости при такой же температуре и полученный продукт перемешивали в течение 1 ч и затем при 0°C в течение еще 1 ч. Насыщенный водный раствор хлорида аммония и водный раствор карбоната калия последовательно добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он (0,0845 г, 0,233 ммоля, 52%) (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением примера 6) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 1,03-1,40 (2H, m), 1,63-1,79 (2H, m), 2,10-2,33 (7H, m), 2,47-2,59 (1H, m), 2,78-2,90 (3H, m), 2,95-3,13 (2H, m), 3,90-3,98 (1H, m), 4,21-4,36 (3H, m), 5,03-5,10 (1H, m), 5,49-5,54 (1H, m), 6,77 (1H, s), 7,17 (1H, s).

ESI-MS: m/z= 363 (M+H)+.

[0131]

(Пример 7) Синтез (S)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-она:

[Формула 28]

1-(4-(Диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-он (3,32 г) разделяли на оптические изомеры путем очистки с помощью HPLC и элюат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали (S)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-он (0,467 г, >99% ee) (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением примера 7) в виде белого твердого вещества.

HPLC время удерживания: 8,4 мин, прибор: LC-10ADvp, производства фирмы Shimadzu Corporation, колонка: CHIRALCEL OZ-H, 4,6×250 мм (выпускает фирма Daicel Corporation), растворитель: 0,01% метанол, содержащий этилендиамин (об./об.), скорость потока: 0,5 мл/мин, методика детектирования: UV 220 нм, температура колонки: 40°C

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,32-1,53 (2H, m), 1,82-1,92 (2H, m), 2,27-2,41 (7H, m), 2,60-2,72 (1H, m), 2,98-3,23 (3H, m), 3,77 (3H, s), 3,99-4,08 (1H, m), 4,58-4,82 (2H, m), 5,18-5,26(1H, m), 6,86 (1H, s), 6,93 (1H, s).

ESI-MS: m/z= 281 (M+H)⁺.

[0132]

(Пример 8) Синтез 3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)пропан-1-она:

[Формула 29]

Борогидрид натрия (0,0360 г, 0,957 ммоля) добавляли к раствору 1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)пропан-1,3-диона (0,290 г, 0,870 ммоля) в метаноле (4,4 мл) при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при такой же температуре в течение 3 ч. Насыщенный водный раствор бикарбоната натрия добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли дистиллированную воду и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)пропан-1-он (0,140 г, 0,417 ммоля, 48%) (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением примера 8) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 1,45-1,66 (4H, m), 1,87-1,95 (2H, m), 2,26-2,30(3H, s), 2,38-2,70 (8H, m), 2,98-3,23 (3H, m), 3,77 (3H, s), 4,00-4,10 (1H, m), 4,60-4,70 (2H, m), 5,17-5,25 (1H, m), 6,85-6,88 (1H, m), 6,92-6,95 (1H, m).

ESI-MS: m/z= 336 (M+H)⁺.

[0133]

(Пример 9) Синтез 1-(4-(диэтиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-она:

[Формула 30]

Борогидрид натрия (0,0109 г, 0,287 ммоля) добавляли к раствору 1-(4-диэтиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1,3-диона (0,0800 г, 0,261 ммоля) в метаноле (1,3 мл) при комнатной температуре и полученную реакционную жидкость перемешивали при такой же температуре в течение 3 ч. Насыщенный водный раствор бикарбоната натрия добавляли к полученной реакционной жидкости и полученный продукт концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли дистиллированную воду и полученный продукт экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали 10% водным раствором хлорида натрия и затем сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (NH силикагель, хлороформ/метанол) и получали 1-(4-(диэтиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-он (0,0561 г, 0,182 ммоля, 70%) (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением примера 9) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 0,94 (6H, t, J=6,8 Hz), 1,05-1,75 (5H, m), 2,42-3,10 (8H, m), 3,64 (3H, s), 3,93-4,02 (1H, m), 4,32-4,43 (1H, m), 5,00-5,08 (1H, m), 5,34-5,42 (1H, m), 6,69-6,71 (1H, m), 7,01-7,03 (1H, m).

ESI-MS: m/z= 309 (M+H)⁺.

[0134]

(Пример 10) Исследование связывания производного циклического амина (I) с мембранными фракциями, полученными из разных тканей крысы:

Исследовали связывание меченого с помощью ³H производного циклического амина (I) с каждой из мембранных фракций, полученных из разных тканей крысы, и таким образом выявляли ткань, содержащую молекулярную мишень производного циклического амина (I).

[0135]

В качестве производного циклического амина (I) использовали соединение примера 7.

[0136]

Использовали самцов крыс SD (поставляет фирма Charles River Laboratories Japan, Inc.) в возрасте 7 недель. Крыс анестезировали изофлураном и умерщвляли путем обескровливания из брюшной аорты с использованием шприца с внутренней поверхностью, обработанной натриевой солью гепарина (выпускает фирма AY Pharmaceuticals Co., Ltd.). В течение 60 мин после умерщвления путем обескровливания отбирали головной мозг, мозжечок, ствол головного мозга, спинной мозг, ганглий дорзального корня, седалищный нерв, кожу, сердце, мышцы, печень, почки и тонкую кишку. В качестве головного мозга отбирали правое и левое полушария головного мозга. Мозжечок отбирали из цельного мозга. Ствол головного мозга отбирали после удаления головного мозга и мозжечка из цельного мозга. Спинной мозг отбирали путем вырезания части торакального спинного мозга и поясничного спинного мозга, отслоения твердой мозговой оболочки и удаления оставшихся нервных корешков. В качестве ганглия дорзального корня отбирали правый и левый поясничные ганглии (L3 - L6). Седалищный нерв отбирали путем вырезания левого и правого седалищного нерва и удаления приросших тканей, таких как жир. В качестве кожи отбирали часть кожи подушечек лап передней или задней конечности. В качестве сердца отбирали цельное вырезанное сердце. В качестве мышц отбирали часть четырехглавых мышц. В качестве печени отбирали левостороннюю долю. В качестве почки отбирали цельную вырезанную почку. В качестве тонкой кишки отбирали часть промытой кишки длиной примерно 5 см около двенадцатиперстной кишки и тонкой кишки. Собранные таким образом ткани сразу замораживали твердым диоксидом углерода и хранили при -80°C. Как и для всех ганглиев дорзального корня, седалищный нерв, мышцы и кожу, отобранные у 9 крыс, смешивали для использования в виде одного образца. Как и для всех других тканей, ткани, отобранные у 3 крыс, смешивали для использования в виде одного образца.

[0137]

Гомогенизат образца каждой отобранной таким образом ткани получали с использованием гомогенизатора путем добавления к отобранной ткани гомогенизирующего буфера (сахароза (1 M), Tris-HCl (0,5 M), и 1× смесь ингибиторов протеазы (выпускает фирма Sigma Aldrich), pH 7,6). Каждый образец гомогенизата центрифугировали при 1000×g при 4°C в течение 10 мин для удаления неразрушенной части ткани. Полученную надосадочную жидкость ультрацентрифугировали при 100000×g при 4°C в течение 60 мин и полученный таким образом осадок суспендировали в бикарбонатном буфере Krebs-Ringer (выпускает фирма Sigma Aldrich) для количественного определения количества белка с использованием набора для анализа белка BCA (выпускает фирма Thermo Fisher Scientific K.K.).

[0138]

Реакцию между мембранной фракцией и меченым посредством ³H соединением примера 7 проводили в микротрубке во всех случаях с использованием бикарбонатного буфера Krebs-Ringer. Все образцы, полученные путем добавления раствора соединения примера 7 (немеченое, 400 мкМ, 100 мкл) к раствору белка мембранной фракции каждой ткани (0,2 мг/мл, 200 мкл), обозначали, как образец группы A, и все образцы, полученные путем добавления бикарбонатного буфера Krebs-Ringer (100 мкл), обозначали, как образец группы B.

[0139]

Меченое посредством ³H соединение примера 7, содержащее октил-β-D-тиоглюкопиранозид (0,4% (мас./об.)) (80 нМ, 100 мкл) добавляли к каждому из образцов групп A и B и полученный продукт быстро переносили в инкубатор при 37°C для запуска реакции. После инкубации в течение 1 ч полученный продукт охлаждали на льду в течение 5 мин или более для остановки реакции. Каждую из полученных реакционных жидкостей помещали в стеклянный фильтр (выпускает фирма Perkin Elmer Co., Ltd.), заранее погруженный в 0,05% раствор полиэтиленимина, и давление быстро снижали для фильтрования с отсасыванием с целью адсорбции мембранной фракции на стеклянном фильтре. Стеклянный фильтр 6 раз промывали бикарбонатным буфером Krebs-Ringer бикарбонат, к полученному продукту добавляли 10 мл Hionic-Fluor (выпускает фирма Perkin Elmer Co., Ltd.) и радиоактивность этого связанного меченого посредством ³H соединения примера 7 измеряли в качестве степени разрушения (ниже в настоящем изобретении, обозначенной, как dpm) с помощью сцинтилляции жидкости. Удельное связывание (dpm/мкг) рассчитывали, как значение (dpm/мкг), полученное делением на количество белка разности средних измеренных значений dpm для образцов группы B и средних измеренных значений dpm для образцов группы A.

[0140]

Мембранные фракции получали из соответствующих тканей крыс и результаты определения связывания меченого посредством ³H соединения примера 7 приведены на фиг. 2. По вертикальной оси на фиг. 2 показано удельное связывание (dpm/мкг) (среднее значение, два образца каждой группы). По горизонтальной оси указаны мембранные фракции, полученные из тканей головного мозга, мозжечка, ствола головного мозга, спинного мозга, ганглия дорзального корня, седалищного нерва, сердца, печени, почек, тонкой кишки, мышц и кожи слева.

[0141]

В результате удельное связывание соединения примера 7 с каждой мембранной фракцией, полученной из соответствующих тканей было значительным для мембранной фракции, полученной из ганглий дорзального корня. Кроме того, удельное связывание с мембранной фракцией, полученной из седалищного нерва, составляло 42% от удельного связывания с мембранной фракцией, полученной из ганглий дорзального корня. Удельное связывание с мембранной фракцией, полученной из спинного мозга, составляло 23% от удельного связывания с мембранной фракцией, полученной из ганглий дорзального корня. Удельное связывание с мембранной фракцией, полученной из ствола головного мозга, составляло 4,2% от удельного связывания с мембранной фракцией, полученной из ганглий дорзального корня, и удельные связывания с мембранными фракциями, полученными из других тканей, включая головной мозг, составляли менее 1% от удельного связывания с мембранной фракцией, полученной из ганглий дорзального корня. Таким образом соединение примера 7 специфически связывалось с мембранными фракциями, полученными периферических нервов, такими как ганглии дорзального корня и седалищного нерва или спинного мозга, и, таким образом, установлено, что молекулярная мишень соединения примера 7 содержится в периферических нервах или спинном мозге, и что производное циклического амина (I) действует путем связывания с мембраной, находящейся в периферических нервах или спинном мозге.

[0142]

(Пример 11) Идентификация связывающей молекулы производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли:

Для идентификации связывающей молекулы производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли проводили афинную очистку с использованием FG гранул с иммобилизованным производным циклического амина (I) и полной идентификацией.

[0143]

Для иммобилизации с помощью амидной связи производного циклического амина (I) с FG на гранулах, содержащий аминогруппу в качестве линкера, синтезировали производное циклического амина, содержащее карбоксигруппу.

[0144]

В качестве производного циклического амина, содержащего карбоксигруппу, (S)-2-(3-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропокси)уксусную кислоту (ниже в настоящем изобретении называющуюся соединением для иммобилизации на гранулах), описывающуюся следующей химической формулой, использовали для проведения синтеза следующим образом:

[0145]

Синтез соединения для иммобилизации на гранулах:

[Формула 31]

Палладий на угле (10% влажность, 14,0 мг) добавляли к раствору бензил-(S)-2-(3-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропокси)ацетата (0,0550 г, 0,128 ммоля) в этаноле (2,50 мл) при комнатной температуре, затем перемешивали в течение 6 ч в атмосфере водорода. Полученную реакционную жидкость фильтровали через целит и фильтрат концентрировали при пониженном давлении и получали (S)-2-(3-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-1-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-3-оксопропокси)уксусную кислоту (0,0404 г, 0,119 ммоля, 93%) в виде бесцветного масла.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1,30-1,69 (2H, m), 1,88-2,10 (2H, m), 2,40-2,63 (7H, m), 2,88-3,20 (3H, m), 3,21-3,41 (1H, m), 3,74-3,98 (5H, m), 4,09-4,27 (1H, m), 4,63-4,78 (1H, m), 5,20-5,26 (1H, m), 6,84 (1H, s), 6,95 (1H, s).

ESI-MS: m/z= 339 (M+H)⁺.

[0146]

Соединение для иммобилизации на гранулах фиксировали на гранулах NH₂ (5 мг, производства фирмы Tamagawa Seiki Co., Ltd.). Сначала раствор соединения для иммобилизации на гранулах (20 мМ, 200 мкл), раствор сукцинимида (200 мМ, 20 мкл) и раствор 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (200 мМ, 20 мкл) добавляли к N, N-диметилформамиду (160 мкл) и полученную смесь вводили в реакцию с использованием смесителя для микротрубочек при комнатной температуре в течение 2 ч для получения активированного раствора соединения для иммобилизации на гранулах. Затем N, N-диметилформамид (900 мкл) и активированный раствор соединения для иммобилизации на гранулах (100 мкл) добавляли к гранулам NH₂ и полученный продукт вводили в реакцию с использованием смесителя для микротрубочек при комнатной температуре в течение ночи. Полученный продукт трижды промывали N, N-диметилформамидом (500 мкл), добавляли уксусный ангидрид и получали концентрацию в 20% и полученный продукт вводили в реакцию с использованием смесителя для микротрубочек при комнатной температуре в течение 2 ч. В заключение полученный продукт трижды промывали с помощью 50% метанола (500 мкл) и получали гранулы с иммобилизованным производным циклического амина.

[0147]

Раствор белка для реакции с гранулами с иммобилизованным производным циклического амина получали из ганглий дорзального корня крысы. Ганглии дорзального корня брали у самцов крыс SD в возрасте 6 недель (поставляет фирма Charles River Laboratories Japan, Inc.). Крыс анестезировали уретаном и умерщвляли путем обескровливания из брюшной аорты. После разрезания задней стороны спинной мозг вырезали и охлаждали на льду. Заднюю сторону позвоночника разрезали и спинной мозг извлекали с задней стороны позвоночника. Затем ганглии дорзального корня (T11 - T13 и L3-6, левые и правые) с пучками нервных волокон вырезали микропинцетом. Вырезанные ганглии дорзального корня погружали в охлажденную льдом среду Leibovitz's L-15 (выпускает фирма Thermo Fisher Scientific) и пучки нервных волокон удаляли под стереомикроскопом для отделения ганглий дорзального корня. Отделенные ганглии дорзального корня замораживали жидким азотом и хранили при -80°C. В качестве ганглий дорзального корня ткани , собранные у 21 крысы, смешивали для использования в виде одного образца.

[0148]

Ганглии дорзального корня гомогенизировали в буфере для анализа (NaCl (140 мМ), KCl (5 мМ), CaCl₂⋅2H₂O (1,2 мМ), MgCl₂⋅6H₂O (2 мМ), D(+)-глюкоза (14 мМ), Hepes (10 мМ) и смесь ингибиторов протеазы (выпускает фирма Sigma Aldrich), pH 7,4) с использованием гомогенизатора Dounce для приготовления гомогенизата ганглии дорзального корня. Поверхностно-активное вещество н-додецил-β-D-мальтопиранозид (выпускает фирма Sigma Aldrich) добавляли к гомогенизату ганглии дорзального корня и получали концентрацию, равную 1%, и полученный продукт инкубировали при 4°C в течение 1 ч. Полученный продукт центрифугировали при 20400×g в течение 30 мин и полученную надосадочную жидкость разбавляли в 40 раз и полученный продукт концентрировали с помощью Amicon Ultra 3 кДа (выпускает фирма Merck Millipore Ltd.).

[0149]

Гранулы с иммобилизованным производным циклического амина и раствор белка смешивали для проведения реакции при 4°C в течение ночи. Полученные гранулы трижды промывали буфером для анализа, затем один раз промывали с помощью PBS(-) и суспендировали в PBS(-). Связывание белка с гранулами тщательно идентифицировали с помощью протеомики дробовика (LC-MS/MS).

[0150]

Белки, не связанные с гранулами, не иммобилизованные соединением, но связанные с гранулами с иммобилизованным производным циклического амина, приведены в таблице 3. Идентификационные номера (крысы) и названия белков приведены в соответствии с базой данным белков Uniprot (http://www.uniprot.org/). Однако белок с идентификационным номером F1LTJ5 в базе данных Uniprot указан, как неохарактеризованный белок, но в системе классификации PANTHER приведен, как ортолог базального мембраноспецифичного гепарансульфатпротеогликанового ядерного белка, и, следовательно, название этого белка приведено в таблице 3, как базальный мембраноспецифичный гепарансульфатпротеогликановый ядерный белок.

[0151]

[Таблица 3]

Идентификационный номер (Uniprot) Название белка F1LTJ5 Базальный мембраноспецифичный гепарансульфатпротеогликановый ядерный белок M0RCA6 Адвиллин Q9QYF3 Нестандартный милзин-Va P19139 Субъединица α казеинкиназы II D3ZN27 DnaJ семейства белка теплового шока (Hsp40) представитель C13 Q925G1 Образованный из гепатомы связанный с фактором роста белок F1LPD0 Коллаген альфа-1(XV) белок цепочечного типа P47853 Бигликан

[0152]

Сообщают, что из шести идентифицированных таким образом молекул адвиллин сильнее экспрессируется в периферической нервной ткани, чем в других тканях (Ravenall et al., European Journal of Neuroscience, 2002, vol. 27, pp,14404-14414). Поскольку в примере 10 показано, что молекулярной мишенью соединения примера 7 является молекула, содержащаяся в большом количестве в периферическом нерве, предполагается, что молекулярной мишенью производного циклического амина (I) может быть адвиллин.

[0153]

Также сообщают, что адвиллин образует комплекс с миозином, идентифицированном в этом примере (Chuang et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2018, vol. 115, pp. E8557-E8566). Соответственно предполагается, что производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемая соль может связываться с адвиллином и/или комплексом адвиллина, содержащим белок, идентифицированный в этом примере и т. п., и регулировать функцию адвиллина.

[0154]

(Пример 12) Эффект уменьшения количества внутриклеточных актиновых филаментов в линии клеток нейронов ганглии дорзального корня крысы:

Исследовано влияние производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли на количество внутриклеточных актиновых филаментов в клетках F11 (линия клеток нейронов ганглии дорзального корня крысы).

[0155]

В качестве исследуемых соединений использовали соединения примеров 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9.

[0156]

В качестве соединений сравнительных примеров использовали 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-этил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением сравнительного примера 1), 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-он (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением сравнительного примера 2), 1-((R)-3-(диметиламино)пирролидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-он (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением сравнительного примера 3), и 1-((R)-3-(3-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)пропан-1-он (ниже в настоящем изобретении называющийся соединением сравнительного примера 4), приведенные в таблице 4. Соединения сравнительных примеров 1, 2, 3 и 4 синтезировали по методике, описанной в известной публикации (International Publication No. WO2016/136944).

[0157]

[Таблица 4]

Соединение Структурная формула Соединение сравнительного примера 1 Соединение сравнительного примера 2 Соединение сравнительного примера 3 Соединение сравнительного примера 4

[0158]

Для отделения клеток F11 от культурального матраца к клеткам добавляли 0,25% трипсин/EDTA (выпускает фирма Thermo Fisher Scientific K.K.), затем инкубировали при комнатной температуре в течение нескольких минут. Затем добавляли среду DMEM, содержащую 10% фетальную бычью сыворотку (выпускает фирма Thermo Fisher Scientific K.K.) для суспендирования и полученный продукт центрифугировали при 1500 об/мин в течение 1 мин. После удаления полученной центрифугированием надосадочной жидкости добавляли среду DMEM, содержащую 0,5% фетальную бычью сыворотку для суспендирования клеток и полученный продукт высевали в покрытый поли-D-лизином 96-луночный планшет (выпускает фирма BD Biosciences) с покрытием из ламинина (2 мкг/см², производства фирмы Sigma Aldrich) для выращивания при 37°C в атмосфере 5% CO₂. Через 2 ч после высевания клеток N, N-дибутиладенозин-3',5'-фосфат (конечная концентрация 1 мМ, выпускает фирма Sigma Aldrich) и рекомбинантный GDNF крысы (конечная концентрация 50 нг/мл, выпускает фирма PeproTech) добавляли к культуре клеток для выращивания при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в течение 7 дней для дифференциации.

[0159]

Через 7 дней после начала выращивания среду заменяли на DMEM, содержащую 0,5% фетальную бычью сыворотку, содержащую оксалиплатин (конечная концентрация 15 мкМ) и полученный продукт выращивали в течение 5 дней для индуцирования повреждения аксона. Каждое из соединений примеров и сравнительных примеров вносили в среду (конечная концентрация 10 мкМ) для лечения таким же образом, как оксалиплатином.

[0160]

Через 5 дней после лечения оксалиплатином и каждым из соединений полученные клетки трижды промывали с помощью PBS(-),добавляли 4% параформальдегид-фосфатный буфер (выпускает фирма Wako Pure Chemical Industries Ltd.) и полученный продукт выдерживали при комнатной температуре в течение 10 мин для фиксации клеток. К ним добавляли Acti-stain 670 фаллоидин (выпускает фирма Cytoskeleton Inc.) и полученный продукт инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин для окрашивания актиновых филаментов. С помощью анализатора клеток IN Cell Analyzer 2200 (выпускает фирма GE Healthcare) получали изображение клеток и изображение анализировали с помощью IN Cell Investigator Developer Toolbox. Количество внутриклеточных актиновых филаментов определяли по степени (интенсивности) флуоресценции флуоресцентно меченого фаллоидина, связанного с филаментами актина.

[0161]

В группе лечения только оксалиплатином (ниже в настоящем изобретении называющейся группой лечения только оксалиплатином) количество внутриклеточных актиновых филаментов увеличилось на 5% по сравнению с количеством в группе без лечения оксалиплатином. Поскольку количество увеличилось статистически значимым образом, было подтверждено, что индуцирована аномалия регуляции оборота актиновых филаментов (p < 0,05, t-критерий Стьюдента). Рассчитывали уменьшение количества внутриклеточных актиновых филаментов, вызванное каждым соединением, по сравнению с количеством внутриклеточных актиновых филаментов в группе лечения только оксалиплатином.

[0162]

Эффект уменьшения количества внутриклеточных актиновых филаментов под действием соответствующих соединений в клетках F11 представлен в таблице 5. В графе таблицы "Степень уменьшения количества внутриклеточных актиновых филаментов" приведенное отношение (%) количества внутриклеточных актиновых филаментов, уменьшенное при лечении каждым соединением по сравнению с количеством внутриклеточных актиновых филаментов в группе лечения только оксалиплатином (среднее значение, каждая группа включала 5 образцов при допущении о том, что один образец соответствует одной лунке). В графе таблицы "Исследуемое соединение" указано соединение, использованное для лечения в каждой группе.

[0163]

[Таблица 5]

Исследуемое соединение
Степень уменьшения количества внутриклеточных актиновых филаментов (%)
Соединение примера 1
5,2
Соединение примера 2
11,8
Соединение примера 3
9,9
Соединение примера 4
8,5
Соединение примера 5
9,6
Соединение примера 6
6,7
Соединение примера 7
9,6
Соединение примера 8
6,4
Соединение примера 9
17,5
Соединение сравнительного примера 1
2,1
Соединение сравнительного примера 2
4,5
Соединение сравнительного примера 3
2,4
Соединение сравнительного примера 4
3,8

[0164]

По сравнению с группой лечения растворителем количество внутриклеточных актиновых филаментов уменьшалось на 5% или более при действии соединений примеров 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9. С другой стороны, уменьшение содержания внутриклеточных актиновых филаментов в случае соединений сравнительных примеров 1, 2, 3 и 4 составляло 5% или менее.

[0165]

(Пример 13) Эффект уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов в модели перевязки спинномозгового нерва крысы:

Исследовали влияние производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли на отношение количества актиновых филаментов к количеству мономеров актина в седалищном нерве в модели перевязки спинномозгового нерва крысы.

[0166]

Использовали самцов крыс SD (поставляет фирма Charles River Laboratories Japan, Inc.) в возрасте 6 недель. В каждой крысе образовывали модель перевязки спинномозгового нерва путем резекции дуги позвоночника посредством иссечения правой нижней части спины при анестезии путем ингаляции изофлураном, полностью перевязывали L5 и L6 нервные корешки спинномозгового нерва и затем зашивали мышечный слой и кожу. В качестве отрицательного контроля (группа с имитацией операции) использовали вскрытие правых нервов L5 и L6 с последующим аналогичным зашиванием мышечного слоя и кожи без перевязки. Через неделю после перевязки нерва крыс использовали для проведения следующего эксперимента.

[0167]

Соединение примера 7 перорально вводили каждой крысе в модели перевязки спинномозгового нерва в любой из трех доз по 6, 20 и 60 мг/кг один раз в сутки в течение 2 дней. Через 3 ч после последнего введения извлекали седалищный нерв при анестезии изофлураном и крысу умерщвляли. Собранный седалищный нерв замораживали и хранили при -80°C. В качестве контролей использовали группу крыс с имитацией операции, которым вводили растворитель - дистиллированную воду, и группу крыс модели перевязки спинномозгового нерва, которым вводили дистиллированную воду (группа с введением дистиллированной воды), и крыс обеих групп подвергали такой же обработке для сбора седалищных и затем умерщвляли.

[0168]

Для количественного определения актиновых филаментов и мономеров актина использовали набор G-актин/F-актин для анализа in vivo (выпускает фирма Cytoskeleton Inc.). Замороженные ткани гомогенизировали с ингибитором протеазы и добавляли содержащий ATP (1 мМ) литический и F-актин стабилизационный буфер (выпускает фирма Cytoskeleton Inc.). Полученный таким образом гомогенизат инкубировали при 37°C в течение 10 мин и полученный продукт центрифугировали при 350×g в течение 5 мин. Полученную надосадочную жидкость центрифугировали при 100000×g при 37°C в течение 1 ч. Надосадочную жидкость, полученную после центрифугирования, использовали в качестве образца мономера актина и осадок использовали в качестве образца актинового филамента. Образец актинового филамента инкубировали на льду в течение 1 ч и каждые 15 мин отбирали пипеткой. Количество актина в каждом образце мономера актина и образце актинового филамента определяли с помощью вестерн-блоттинга. Каждый образец мономера актина и образец актинового филамента подвергали тепловой денатурации путем добавления буфера SDS и полученный продукт наносили на предварительно отлитый гель SDS-PAGE (выпускает фирма Bio-Rad) для электрофореза с отделением белка. Белок, содержащийся в геле, электрическим полем смещали к/фиксировали на мембране PVDF для приготовления блота (мембрана для блоттинга) (Trans-blot Turbo Blotting System, выпускает фирма Bio-Rad). После блокирования мембраны для блоттинга (Block One, выпускает фирма Nacalai Tesque, Inc.) добавляли антитела к актину (поликлональные кроличьи антитела к актину), затем инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. После промывки полученной мембраны для блоттинга добавляли меченые посредством HRP вторичные кроличьи антитела (выпускает фирма GE Healthcare), затем инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин. После промывки полученной мембраны для блоттинга добавляли детектирующий реагент (ECL Prime, выпускает фирма GE Healthcare) для детектирования люминесценции с помощью CCD Imager (выпускает фирма Bio-Rad). Интенсивность люминесценции полосы, соответствующей актину, количественно определяли с использованием программного обеспечения Image Lab (выпускает фирма Bio-Rad).

[0169]

Результаты исследования влияния соединения примера 7 на отношение количество актиновых филаментов/количество мономеров актина в седалищном нерве в модели перевязки спинномозгового нерва крысы приведены на фиг. 3. На фиг. 3a приведены полученные с помощью вестерн-блоттинга изображения актинового белка, содержащегося в образцах актиновых филаментов (верхние изображения) и в образцах актиновых мономеров (нижние изображения), выделенных из седалищного нерва. Количественно определяли интенсивность люминесценции каждой полосы актинового белка и рассчитывали отношение количества актиновых филаментов к количеству мономеров актина (ниже в настоящем изобретении называющееся, как отношение количество актиновых филаментов/количество мономеров актина) и приведены на фиг. 3b. По вертикальной оси на фиг. 3b приведено отношение количество актиновых филаментов/количество мономеров актина (среднее значение ± стандартное отклонение). "Дистиллированная вода-имитация операции" по горизонтальной оси указывает группу с имитацией операции (6 образцов), "Дистиллированная вода" указывает группу введения дистиллированной воды в модели перевязки спинномозгового нерва крысы (7 образцов), "соединение примера 7" указывает группу введения соединение примера 7 в модели перевязки спинномозгового нерва крысы, "6" указывает группу введения соединение примера 7 по 6 мг/кг (6 образцов) в модели перевязки спинномозгового нерва крысы, "20" указывает группу введения соединение примера 7 по 20 мг/кг (6 образцов) в модели перевязки спинномозгового нерва крысы и "60" указывает группу введения соединение примера 7 по 60 мг/кг (7 образцов) в модели перевязки спинномозгового нерва крысы. На этом чертеже "#" показывает, что имеется статистически значимая разность (#: p <0,05, t-критерий Стьюдента) по сравнению с группой с имитацией операции и "*" показывает, что имеется статистически значимая разность (*: p <0,025, множественное сравнение Вильямса, одностороннее) по сравнению с группой введения дистиллированной воды в модели перевязки спинномозгового нерва крысы.

[0170]

В группе модели перевязки спинномозгового нерва крысы с введением дистиллированной воды (группа введения дистиллированной воды) отношение количество актиновых филаментов/количество мономеров актина значительно увеличивается по сравнению с группой с имитацией операции. В группах с введением соединения примера 7 отношение количество актиновых филаментов/количество мономеров актина восстанавливается при увеличении дозы соединения примера 7 и значительно уменьшено в группе введения 60 мг/кг по сравнению с группой введения дистиллированной воды. В частности, показано, что соединение примера 7 влияет на уменьшение аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов седалищного нерва, вызванное перевязкой спинномозгового нерва.

[0171]

В отношение функции адвиллина, т. е. одной из молекулярных мишеней производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли, описанной в примере 11, сообщали о функции регуляции оборота актиновых филаментов путем связывания с актином (Hasegawa et al, The Journal of Neuroscience, 2007, vol. 27, pp. 14404-14414). Соответственно, на основании примеров 11, 12 и 13 показано, что производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемая соль в дополнение к эффекту связывания с адвиллином и/или комплексом адвиллина проявляется эффект стимулирования функции адвиллина и/или комплекса адвиллина для уменьшения аномалии в регуляции оборота актиновых филаментов.

[0172]

(Пример 14) Исследование влияния стимулирования роста аксона в первичных выращенных клетках ганглии дорзального корня крысы:

Исследовано влияние производного циклического амина (I) или его фармакологически приемлемой соли на рост нейрита в первичных выращенных клетках ганглии дорзального корня крысы.

[0173]

Использовали самцов крыс SD (поставляет фирма Charles River Laboratories Japan, Inc.) в возрасте от 4 до 7 недель. Каждую крысу анестезировали путем внутрибрюшинного введения уретана. После подтверждения того, что крыса анестезирована, крысу быстро умерщвляли путем обескровливания из брюшной аорты. После разрезания задней стороны позвоночник вырезали и охлаждали на льду. Заднюю сторону позвоночника разрезали и спинной мозг извлекали с задней стороны позвоночника для выделения ганглий дорзального корня на нижней стороне позвоночника. Ганглии дорзального корня (L3-6, правые и левые) вырезали микропинцетом и погружали в охлажденную льдом среду Leibovitz's L-15 (выпускает фирма Thermo Fisher Scientific) и пучки нервных волокон удаляли под стереомикроскопом. Из ганглий дорзального корня, из которых удалены пучки нервных волокон, делали тонкие срезы глазными ножницами для использования в качестве кусочков ганглий дорзального корня.

[0174]

Кусочки ганглий дорзального корня погружали примерно в 3 мл раствора коллагеназы A (выпускает фирма Roche Molecular Systems, Inc.), затем инкубировали при 37°C в течение 20 мин. После инкубирования полученный продукт центрифугировали при 200×g при 25°C в течение 5 мин для удаления раствора коллагеназы A, соответствующего надосадочной жидкости. Добавляли примерно 1 мл раствора трипсина, затем инкубировали при 37°C в течение 5 мин. Затем к полученному продукту добавляли примерно 3 мл DMEM (выпускает фирма Thermo Fisher Scientific K.K.), содержащей 10% фетальную бычью сыворотку, полученный продукт центрифугировали при 200×g при комнатной температуре в течение 5 мин и затем надосадочную жидкость удаляли. После удаления надосадочной жидкости к осадку добавляли примерно 5 мл Neurobasal-A Medium (ниже в настоящем изобретении называющейся культуральной средой, выпускает фирма Thermo Fisher Scientific K.K.), содержащей 2% добавки B27, и осадок диспергировали микропипеткой. Для сбора клеток использовали сито с отверстиями размером 70 мкм (выпускает фирма BD Falcon) и остатки удаляли, и остатки на сите для клеток смывали с помощью 5 мл культуральной среды для сбора клеток. Собранные таким образом клетки центрифугировали при 200×g при комнатной температуре в течение 5 мин для удаления надосадочной жидкости.

[0175]

После удаления надосадочной жидкости добавляли 5 мл культуральной среды для суспендирования таблеток клеток. Полученную таким образом суспензию клеток высевали в покрытый поли-D-лизином 96-луночный планшет (выпускает фирма BD Biosciences) с покрытием из ламинина (6 мкг/см², производства фирмы Sigma Aldrich) по 100 мкл для выращивания в инкубаторе с CO₂ при 37°C и 5% CO₂.

[0176]

Через 2 ч после начала выращивания среду заменяли культуральной средой, содержащей оксалиплатин (конечная концентрация 3 мкМ) и полученный продукт выращивали в течение 7 дней для индуцирования повреждения аксона. Соединение примера 7 вносили в культуральную среду (конечная концентрация 10, 30 или 100 мкМ) для лечения таким же образом, как оксалиплатином.

[0177]

Через 1 неделю после начала выращивания полученные клетки трижды промывали с помощью PBS(-) и обрабатывали 4% параформальдегид-фосфатным буфером в течение 10 мин. Полученный продукт трижды промывали с помощью PBS(-) и обрабатывали с помощью 20% Blocking One (выпускает фирма Nacalai Tesque, Inc.) и 0,1% Triton X-100/PBS(-) в течение 1 ч. После однократной промывки с помощью PBS(-) полученный продукт при 4°C в течение ночи обрабатывали мышиными моноклональными антителами к βIII тубулину (выпускает фирма Promega Corporation) разбавляли в 500 раз с помощью 0,1% Triton X-100/PBS(-), содержащего 5% Blocking One. После обработки в течение ночи полученный продукт трижды промывали с помощью PBS(-) и при комнатной температуре в течение 1 ч обрабатывали вторичными антителами (антитела осла CF488A к мышиному IgG, выпускает фирма Biotium), разбавленными с помощью 0,1% Triton X-100/PBS(-), содержащего 5% Blocking One. Затем полученный продукт трижды промывали с помощью PBS(-), в течение 5 мин обрабатывали с помощью DAPI (выпускает фирма Dojindo Laboratories), разведенным в 1000 раз помощью PBS(-), и трижды промывали с помощью PBS(-).

[0178]

Изображения полученных клеток получали с помощью анализатора клеток IN Cell Analyzer 2200 (выпускает фирма GE Healthcare) и изображение анализировали с помощью IN Cell Investigator Developer Toolbox. В результате анализа значение, полученное делением длины участка, идентифицированного, как нейрит (длина волокна), на количество нейронов, являлось длиной нейрита на одну клетку, и эффект увеличения длины нейрита рассчитывали, как эффект роста аксона.

[0179]

На фиг. 4 приведены изображения примеров средних размеров клеток, полученных при соответствующих условиях, для группы без лечения (лечение дистиллированной водой), группы с лечением только оксалиплатином и группы с лечением оксалиплатином и 100 мкМ соединения примера 7. Как показано на фиг. 4, видно изображение, на котором длина нейрита восстановилась при лечении только оксалиплатином, и установлено, что длина нейрита увеличилась при лечении соединением примера 7 (100 мкМ) по сравнению с группой с лечением только оксалиплатином.

[0180]

Результаты анализа длин нейритов на соответствующих изображениях приведены на фиг. 5. По вертикальной оси на фиг. 5 указана длина нейрита (мкм/нейрон) (среднее значение ± стандартное отклонение, каждая группа состоит из 5 образцов). "Дистиллированная вода" по горизонтальной оси указывает группу без лечения, "Оксалиплатин+Дистиллированная вода" указывает группу с лечением только оксалиплатином, "Оксалиплатин+соединение примера 7" указывает группу с лечением оксалиплатином и соединением примера 7, "10" указывает группу с лечением оксалиплатином и 10 мкМ соединения примера 7, "30" указывает группу с лечением оксалиплатином и 30 мкМ соединения примера 7 и "100" указывает группу с лечением оксалиплатином и 100 мкМ соединения примера 7. На этом чертеже "#" показывает, что имеется статистически значимая разность (#: p <0,05, t-критерий Стьюдента) по сравнению с группой без лечения и "*" показывает, что имеется статистически значимая разность (*: p <0,025, множественное сравнение Вильямса, одностороннее) по сравнению с группой с лечением только оксалиплатином.

[0181]

Как показано на фиг. 5, хотя длина нейрита значительно уменьшилась при лечении только оксалиплатином, установлено, что длина нейрита увеличивается при лечении соединением (10, 30 или 100 мкМ) примера 7 с увеличением дозы соединения примера 7 по сравнению с группой с лечением только оксалиплатином. В группе с лечением с помощью 100 мкМ соединения примера 7 установлено, что длина нейрита значительно увеличивается по сравнению с группой с лечением только оксалиплатином. Другими словами, показано, что соединение примера 7 стимулирует рост аксона в первичных выращенных клетках ганглий дорзального корня крысы с повреждением аксона, вызванным оксалиплатином.

[0182]

В отношение функции адвиллина, т. е. одной из молекулярных мишеней производного циклического амина (I), описанного в примере 11, сообщали о функции роста аксона (Hasegawa et al, The Journal of Neuroscience, 2007, vol. 27, pp. 14404-14414). Соответственно, на основании примеров 11 и 14 показано, что производное циклического амина (I) или его фармакологически приемлемая соль в дополнение к эффекту связывания с адвиллином и/или комплексом адвиллина проявляется эффект стимулирования роста аксона.

[0183]

На основании этих результатов показано, что производное циклического амина (I), входящее в объем настоящего изобретения, обладает способностью стимулировать действие адвиллина.

Промышленное применение

[0184]

Производное циклического амина или его фармакологически приемлемая соль, предлагаемое в настоящем изобретении, обладает способностью стимулировать действие адвиллина и, следовательно, его можно использовать в качестве лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с повреждением аксона.

Все публикации, патенты и заявки на патенты, цитированные в настоящем изобретении, во всей своей полноте включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Группа изобретений относится к фармацевтике, а именно к применению средства, включающего производное циклического амина или его фармакологически приемлемую соль, для стимулирования действия адвиллина, производному циклического амина и лекарственному средству для уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов. Применение средства, включающего производное циклического амина, описывающееся следующей общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента:

,

где атом углерода, отмеченный значком *, означает асимметрический атом углерода и A означает группу, описывающуюся следующей общей формулой (IIa) или (IIb):

,

где R¹ означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу, R² означает атом водорода или атом хлора, каждый R³ независимо означает метильную группу или этильную группу и X означает -O- или -N(R³)-, для стимулирования действия адвиллина. Производное циклического амина, которое представляет собой одно соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих: 3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-пропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-изопропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 3-(5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он и 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, или его фармакологически приемлемая соль. Лекарственное средство для уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов, включающее вышеуказанное производное циклического амина или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента. Вышеуказанная группа изобретений позволяет стимулировать действие адвиллина и обеспечивать лечение повреждения аксона. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 5 ил., 5 табл., 17 эталонных пр., 14 пр.

1. Применение средства, включающего производное циклического амина, описывающееся следующей общей формулой (I), или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента:

[Формула 1]

где атом углерода, отмеченный значком *, означает асимметрический атом углерода и A означает группу, описывающуюся следующей общей формулой (IIa) или (IIb):

[Формула 2]

где R¹ означает метильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, 2-метоксиэтильную группу или 3,3,3-трифторпропильную группу, R² означает атом водорода или атом хлора, каждый R³ независимо означает метильную группу или этильную группу и X означает -O- или -N(R³)-, для стимулирования действия адвиллина.

2. Применение по п. 1, где A означает группу, описывающуюся общей формулой (IIa).

3. Применение по п. 1, где A означает группу, описывающуюся общей формулой (IIb).

4. Применение по п. 3, где X означает -N(R³)-.

5. Применение по любому из пп. 1-4, где стереохимической конфигурацией асимметрического атома углерода, отмеченного значком *, является конфигурация S.

6. Применение по любому из пп. 1-4, где стимулирование действия адвиллина включает стимулирование действия адвиллина путем связывания производного циклического амина или его фармакологически приемлемой соли с адвиллином и/или комплексом адвиллина.

7. Применение по любому из пп. 1-4, где стимулирование действия адвиллина включает уменьшение аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов.

8. Применение по любому из пп. 1-4, где стимулирование действия адвиллина включает стимулирование роста аксона.

9. Применение по любому из пп. 1-4, где стимулирование действия адвиллина включает уменьшение аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов и стимулирование роста аксона путем связывания производного циклического амина или его фармакологически приемлемой соли с адвиллином и/или комплексом адвиллина.

10. Применение по любому из пп. 1-4, которое является терапевтическим средством для лечения повреждения аксона.

11. Производное циклического амина, которое представляет собой одно соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих: 3-гидрокси-3-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-морфолинопиперидин-1-ил)пропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-пропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-изопропил-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 3-(5-хлор-1-метил-1H-имидазол-2-ил)-1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-гидроксипропан-1-он, 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он и 1-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-3-(1-(3,3,3-трифторпропил)-1H-имидазол-2-ил)-3-гидроксипропан-1-он или его фармакологически приемлемая соль.

12. Лекарственное средство для уменьшения аномалии при регуляции оборота актиновых филаментов, включающее производное циклического амина или его фармакологически приемлемую соль по п. 11 в качестве активного ингредиента.